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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-17
(45)【発行日】2024-09-26
(54)【発明の名称】耳内投与用の医薬組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 47/34 20170101AFI20240918BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20240918BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20240918BHJP
A61K 38/18 20060101ALI20240918BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240918BHJP
A61P 27/16 20060101ALI20240918BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240918BHJP
【ＦＩ】
A61K47/34
A61K47/12
A61K47/02
A61K38/18 ZNA
A61K45/00
A61P27/16
A61P43/00 111
【請求項の数】
9
(21)【出願番号】P 2021535442
(86)(22)【出願日】2020-07-30
(86)【国際出願番号】 JP2020029342
(87)【国際公開番号】W WO2021020535
(87)【国際公開日】2021-02-04
【審査請求日】2023-04-11
(31)【優先権主張番号】P 2019140977
(32)【優先日】2019-07-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】000006677
【氏名又は名称】アステラス製薬株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100139594
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 健次郎
(74)【代理人】
【氏名又は名称】森田 憲一
(74)【代理人】
【識別番号】100117846
【弁理士】
【氏名又は名称】鈴木 ▲頼▼子
(74)【代理人】
【識別番号】100137464
【弁理士】
【氏名又は名称】濱井 康丞
(74)【代理人】
【識別番号】100177482
【弁理士】
【氏名又は名称】川濱 周弥
(72)【発明者】
【氏名】吉田 貴恒
(72)【発明者】
【氏名】長田 茉莉
(72)【発明者】
【氏名】松田 顕也
(72)【発明者】
【氏名】島田 謙
(72)【発明者】
【氏名】小島 宏行
(72)【発明者】
【氏名】長倉 晃
【審査官】新熊 忠信
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１３－５０８３８１（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１８－５０９４７３（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ４７／００－４７／６９
Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２
Ａ６１Ｋ ４５／００－４５／０８
Ａ６１Ｋ ３８／００－３８／５８
Ａ６１Ｐ ２７／００
Ａ６１Ｐ ４３／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
薬物１種又は２種以上、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体、及び１種又は２種以上の複素粘度調節剤を含有し、
前記複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択され、
ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度が、医薬組成物に対して１０％（ｗ／ｗ）～２４％（ｗ／ｗ）であり、
複素粘度調節剤の濃度が、医薬組成物に対して０．１％（ｗ／ｖ）～５．０％（ｗ／ｖ）である、耳内投与用の医薬組成物。
【請求項2】
複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、硫酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
さらに溶媒を含有する、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
薬物が、低分子化合物、核酸、及びタンパク質からなる群より選択される１種又は２種以上である、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
薬物がヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物である、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項7】
ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体、及びクエン酸三ナトリウム又はこの水和物を含有し、
ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度が、医薬組成物に対して１０％（ｗ／ｗ）～２４％（ｗ／ｗ）であり、
複素粘度調節剤の濃度が、医薬組成物に対して０．１％（ｗ／ｖ）～５．０％（ｗ／ｖ）である、耳内投与用の医薬組成物。
【請求項8】
薬物１種又は２種以上、及び１種又は２種以上の複素粘度調節剤を含有し、
前記複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択され、
ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度が、医薬組成物に対して１０％（ｗ／ｗ）～２４％（ｗ／ｗ）であり、
複素粘度調節剤の濃度が、医薬組成物に対して０．１％（ｗ／ｖ）～５．０％（ｗ／ｖ）である耳内投与用の医薬組成物の製造のための、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の基剤としての使用。
【請求項9】
薬物１種又は２種以上及びポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有し、
ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度が、医薬組成物に対して１０％（ｗ／ｗ）～２４％（ｗ／ｗ）であり、
複素粘度調節剤の濃度が、医薬組成物に対して０．１％（ｗ／ｖ）～５．０％（ｗ／ｖ）である耳内投与用の医薬組成物の製造のための、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上の複素粘度調節剤としての使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
耳の疾患は未だ薬物治療法が少なく、外科手術に頼る場合が多い。また、治療に有効な薬物が発見されても、経口投与や静脈投与で全身送達させると薬効減退や副作用等のおそれがある。そのため、耳の疾患部位又は近傍に薬物を局所投与するための薬剤又は医薬組成物が開発されている。例えば、耳の粘膜等の抗炎症剤として、抗生物質やステロイド剤を含有した点耳薬や軟膏等がある。薬剤を冷たい状態で耳内に投与すると眩暈を起こす場合があるため、点耳薬を投与する際は、手のひらで薬剤の容器を握って体温程度になるよう温めることが求められる。また、投与時は横向きに寝て指示された回数を点耳し、５～１０分程度そのままの姿勢でいることが求められる。耳は外耳道及び中耳の耳管から液体等の異物をクリアランスする機能を有し、嚥下によりクリアランスが促進されるため、薬剤が患部に浸透するまでは安静かつ嚥下を我慢する必要がある。さらに、内耳に薬物を送達させる場合は、血液内耳関門が存在することから、高濃度の薬剤を局所で持続的に作用させる徐放性が必要である。
【0003】
特許文献１（ＷＯ２００１／０６８０７９）には、粘弾剤であるヒアルロン酸ナトリウムを手術処置の間又はその終了時に滴下し、耳の中に薬剤を維持させることが報告されている。ヒアルロン酸はムコ多糖類の一種で生体において主要な細胞外基質の構成成分であり、バイオマテリアルとして汎用されている。
【0004】
特許文献２（ＷО２０１４／１８６０７５）には、キトサン及びポリラクチドの架橋共重合体ヒドロゲルに含ませて持続放出ゲルを製し、注射筒を用いて鼓膜穿孔上に滞留させる治療法が報告されている。キトサン及び加水分解性架橋剤であるポリラクチドは、投与直前又は投与中の混合により化学的架橋が起き、数分以内に架橋共重合体ヒドロゲルに変化する特性を有する。
【0005】
特許文献３（ＷО２０１１／０４９９５８）には、事前混合又は特殊な投与デバイスを不要とする技術として、熱可逆性ゲルを利用した持続放出ゲル製剤が報告されている。熱可逆性ゲルの構成成分であるポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレントリブロック共重合体を約１４重量％～約２１重量％で溶解させた溶液を、注射針を介して正円窓膜上又はその近傍に投与すると、耳内で温められて（非特許文献１：James M Chamberlain et al., ANNALS OF EMERGENCY MEDICINE, 1995, 25(1), p.15-20では、外耳道内の温度は約３７℃～約３８℃と報告されている。）ゲル化し、正円窓膜上又はその近傍で滞留することが報告されている。前記持続放出ゲル製剤は比較的低い温度でゲル化するため、投与前の製剤は厳密な温度管理が必要である。
【0006】
耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する医薬組成物は複数報告されているが、２液を投与直前若しくは投与中に混合する又は厳密な温度管理をする等の煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する医薬組成物を提供するには更なる検討の余地がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【文献】国際公開第２００１／０６８０７９号
【文献】国際公開第２０１４／１８６０７５号
【文献】国際公開第２０１１／０４９９５８号
【非特許文献】
【0008】
【文献】Ｊａｍｅｓ Ｍ Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＡＮＮＡＬＳ ＯＦ ＥＭＥＲＧＥＮＣＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ，１９９５，２５（１），ｐ．１５－２０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
本発明の課題は、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する医薬組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明者らは、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内で薬物を滞留及び徐放する機能を有する医薬組成物について鋭意検討を行った結果、薬物１種又は２種以上及びポリマーを含有し、特定の複素粘度特性を有する医薬組成物を知見した。加えて、本発明者らは、ポリマーとしてポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を用いることで、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する医薬組成物を提供することができること等を知見し、本発明を完成させるに至った。
【0011】
すなわち、本発明は、
［１］薬物１種又は２種以上及びポリマーを含有する耳内投与用の医薬組成物であって、レオメーターを用いてせん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒の条件及び温度を２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させながら該医薬組成物の複素粘度を測定したときに、２５℃時点で１６５０ｍＰａ・ｓ未満かつ３７℃到達後１０分時点で１６５０ｍＰａ・ｓ以上１０００００ｍＰａ・ｓ以下となる、医薬組成物、
［２］ゾル－ゲル転移点が、３０℃～３８℃である、［１］の医薬組成物、
［３］ポリマーがポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体である、［１］又は［２］の医薬組成物、
［４］さらに１種又は２種以上の複素粘度調節剤を含有する、［１］～［３］のいずれかの医薬組成物、
［５］複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上である、［４］の医薬組成物、
［６］複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、硫酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上である、［４］又は［５］の医薬組成物、
［７］さらに溶媒を含有する、［１］～［６］のいずれかの医薬組成物、
［８］ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度が、医薬組成物に対して１０％（ｗ／ｗ）～２４％（ｗ／ｗ）である、［４］～［７］のいずれかの医薬組成物、
［９］複素粘度調節剤の濃度が、医薬組成物に対して０．１％（ｗ／ｖ）～５．０％（ｗ／ｖ）である、［４］～［８］のいずれかの医薬組成物、
［１０］３７℃±２℃のリン酸緩衝生理食塩水が２ｍＬ入ったマルチウェルプレートに、前記リン酸緩衝生理食塩水を上層及び下層に分けるように薄い半透明のメンブレンのついたインサートを嵌め込み、前記インサート上に医薬組成物を０．５ｍＬ投入し、前記リン酸緩衝生理食塩水の水面が揺れる速度で前記マルチウェルプレートを振とうし、薬物を溶出させたとき、薬物を徐放する、［１］～［９］のいずれかの医薬組成物、
［１１］薬物が、低分子化合物、核酸、及びタンパク質からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１］～［１０］のいずれかの医薬組成物、
［１２］薬物が、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物である、［１］～［１１］のいずれかの医薬組成物、
［１３］ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質を含む、［１２］の医薬組成物、
［１４］薬物１種又は２種以上及びポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有する、耳内投与用の医薬組成物、
［１５］さらに１種又は２種以上の複素粘度調節剤を含有する、［１４］の医薬組成物、
［１６］複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１５］の医薬組成物、
［１７］複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、硫酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１５］又は［１６］の医薬組成物、
［１８］さらに溶媒を含有する、［１４］～［１７］のいずれかの医薬組成物、
［１９］ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度が、医薬組成物に対して１０％（ｗ／ｗ）～２４％（ｗ／ｗ）である、［１５］～［１８］のいずれかの医薬組成物、
［２０］複素粘度調節剤の濃度が、医薬組成物に対して０．１％（ｗ／ｖ）～５．０％（ｗ／ｖ）である、［１５］～［１９］のいずれかの医薬組成物、
［２１］薬物が、低分子化合物、核酸、及びタンパク質からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１４］～［２０］のいずれかの医薬組成物、
［２２］薬物が、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物である、［１４］～［２１］のいずれかの医薬組成物、
［２３］ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質を含む、［２２］の医薬組成物、
［２４］ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体、及びクエン酸三ナトリウム又はこの水和物を含有する、耳内投与用の医薬組成物、
［２５］薬物１種又は２種以上を含有する耳内投与用の医薬組成物の製造のための、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の基剤としての使用、
［２６］薬物１種又は２種以上及びポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有する耳内投与用の医薬組成物の製造のための、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上の複素粘度調節剤としての使用、
に関する。
［１］薬物１種又は２種以上及びポリマーを含有する耳内投与用の医薬組成物であって、レオメーターを用いてせん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒の条件及び温度を２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させながら該医薬組成物の複素粘度を測定したときに、２５℃時点で１６５０ｍＰａ・ｓ未満かつ３７℃到達後１０分時点で１６５０ｍＰａ・ｓ以上１０００００ｍＰａ・ｓ以下となる、医薬組成物、
［２］ゾル－ゲル転移点が、３０℃～３８℃である、［１］の医薬組成物、
［３］ポリマーがポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体である、［１］又は［２］の医薬組成物、
［４］さらに１種又は２種以上の複素粘度調節剤を含有する、［１］～［３］のいずれかの医薬組成物、
［５］複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上である、［４］の医薬組成物、
［６］複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、硫酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上である、［４］又は［５］の医薬組成物、
［７］さらに溶媒を含有する、［１］～［６］のいずれかの医薬組成物、
［８］ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度が、医薬組成物に対して１０％（ｗ／ｗ）～２４％（ｗ／ｗ）である、［４］～［７］のいずれかの医薬組成物、
［９］複素粘度調節剤の濃度が、医薬組成物に対して０．１％（ｗ／ｖ）～５．０％（ｗ／ｖ）である、［４］～［８］のいずれかの医薬組成物、
［１０］３７℃±２℃のリン酸緩衝生理食塩水が２ｍＬ入ったマルチウェルプレートに、前記リン酸緩衝生理食塩水を上層及び下層に分けるように薄い半透明のメンブレンのついたインサートを嵌め込み、前記インサート上に医薬組成物を０．５ｍＬ投入し、前記リン酸緩衝生理食塩水の水面が揺れる速度で前記マルチウェルプレートを振とうし、薬物を溶出させたとき、薬物を徐放する、［１］～［９］のいずれかの医薬組成物、
［１１］薬物が、低分子化合物、核酸、及びタンパク質からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１］～［１０］のいずれかの医薬組成物、
［１２］薬物が、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物である、［１］～［１１］のいずれかの医薬組成物、
［１３］ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質を含む、［１２］の医薬組成物、
［１４］薬物１種又は２種以上及びポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有する、耳内投与用の医薬組成物、
［１５］さらに１種又は２種以上の複素粘度調節剤を含有する、［１４］の医薬組成物、
［１６］複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１５］の医薬組成物、
［１７］複素粘度調節剤が、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、硫酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１５］又は［１６］の医薬組成物、
［１８］さらに溶媒を含有する、［１４］～［１７］のいずれかの医薬組成物、
［１９］ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度が、医薬組成物に対して１０％（ｗ／ｗ）～２４％（ｗ／ｗ）である、［１５］～［１８］のいずれかの医薬組成物、
［２０］複素粘度調節剤の濃度が、医薬組成物に対して０．１％（ｗ／ｖ）～５．０％（ｗ／ｖ）である、［１５］～［１９］のいずれかの医薬組成物、
［２１］薬物が、低分子化合物、核酸、及びタンパク質からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１４］～［２０］のいずれかの医薬組成物、
［２２］薬物が、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物である、［１４］～［２１］のいずれかの医薬組成物、
［２３］ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物が、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質を含む、［２２］の医薬組成物、
［２４］ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体、及びクエン酸三ナトリウム又はこの水和物を含有する、耳内投与用の医薬組成物、
［２５］薬物１種又は２種以上を含有する耳内投与用の医薬組成物の製造のための、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の基剤としての使用、
［２６］薬物１種又は２種以上及びポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有する耳内投与用の医薬組成物の製造のための、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上の複素粘度調節剤としての使用、
に関する。
【発明の効果】
【0012】
本発明によれば、薬物１種又は２種以上及びポリマー、特にポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有する耳内投与用の医薬組成物であって、レオメーターを用いてせん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒の条件及び温度を２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させながら該医薬組成物の複素粘度を測定したときに、２５℃時点で１６５０ｍＰａ・ｓ未満かつ３７℃到達後１０分時点で１６５０ｍＰａ・ｓ以上１０００００ｍＰａ・ｓ以下となる、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する医薬組成物を提供することができる。
また、本発明によれば、薬物１種又は２種以上及びポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有し、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する耳内投与用の医薬組成物を提供することができる。
さらに、本発明によれば、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体、及びクエン酸三ナトリウム又はこの水和物を含有し、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内でヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物を滞留及び徐放する機能を有する、慢性鼓膜穿孔の治癒に優れた耳内投与用の医薬組成物を提供することができる。
また、本発明によれば、薬物１種又は２種以上及びポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有し、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する耳内投与用の医薬組成物を提供することができる。
さらに、本発明によれば、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体、及びクエン酸三ナトリウム又はこの水和物を含有し、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、耳内でヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物を滞留及び徐放する機能を有する、慢性鼓膜穿孔の治癒に優れた耳内投与用の医薬組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図1】試験例３－１で行った、基剤溶液の複素粘度測定において、一部の基剤溶液について複素粘度の経時的推移を示すグラフである。
【図2】試験例５－３で行ったゾル－ゲル転移点と、試験例５－２で行った３７℃到達後１０分時点の複素粘度との関係を示すグラフである。
【図3】試験例７－４で行った、アセトアミノフェンの溶出試験の溶出プロファイルを示すグラフである。
【図4】試験例８で行った、蛍光色素を用いた試験により得られた耳内滞留性の評価結果を示すグラフである。
【図5】試験例９で行った、ＰＥＴ撮像により得られた耳内滞留性の評価結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0014】
本発明は、薬物１種又は２種以上及びポリマーを含有する耳内投与用の医薬組成物であって、レオメーターを用いてせん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒の条件及び温度を２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させながら該医薬組成物の複素粘度を測定したときに、２５℃時点で１６５０ｍＰａ・ｓ未満かつ３７℃到達後１０分時点で１６５０ｍＰａ・ｓ以上１０００００ｍＰａ・ｓ以下となる、医薬組成物に関する。また、本発明は、薬物１種又は２種以上とポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体とを含有する、耳内投与用の医薬組成物に関する。さらに、本発明は、ヘパリン結合性上皮成長因子、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体、及びクエン酸三ナトリウム又はこの水和物を含有する、耳内投与用の医薬組成物に関する。
【0015】
耳は、外耳、中耳、及び内耳に区分される。外耳は、耳介、外耳道、及び鼓膜の外側の膜から構成される。中耳は、鼓膜の内側の膜、耳小骨（ツチ骨、キヌタ骨、アブミ骨）、鼓室、耳小骨筋、耳管、乳突洞、及び乳突蜂巣から構成される。内耳は、卵円（前庭）窓、前庭、半規管、卵形嚢、球形嚢、正円（蝸牛）窓、蝸牛等から構成される。
【0016】
本明細書において「耳内投与」とは、典型的には外耳道内、鼓膜の外側の膜近傍、鼓膜上、鼓膜内側の膜近傍、鼓室内、正円窓膜上、又は正円窓近傍に医薬組成物を投与することを意味するがこれに制限されない。好ましくは鼓膜の外側の膜近傍、鼓膜上、鼓膜内側の膜近傍、又は鼓室内に医薬組成物を投与することである。また、「「耳内投与用の」医薬組成物」とは、典型的には外耳道内、鼓膜の外側の膜近傍、鼓膜上、鼓膜内側の膜近傍、鼓室内、正円窓膜上、又は正円窓近傍に投与するための医薬組成物を意味するがこれに制限されない。好ましくは鼓膜の外側の膜近傍、鼓膜上、鼓膜内側の膜近傍、又は鼓室内に投与するための医薬組成物である。
【0017】
本発明の医薬組成物の形態としては、典型的には固体、粉末、溶液、懸濁液、ペースト、又はローション等を挙げることができるがこれに制限されない。好ましくは溶液、懸濁液、ペースト、又はローションであり、より好ましくは溶液又は懸濁液である。なお、本明細書において、ゾル状態及びゲル状態は溶液に含めることができ、ゾル状態とは液体に微粒子が分散した状態のコロイド溶液のことを意味し、流動性を有する。また、ゲル状態とはゾル状態の粘度が上昇し、流動性がなくなり固形状になることを意味する。
【0018】
本発明の医薬組成物に用いられる「ポリマー」とは、医薬組成物に粘性を生じさせるための医薬品添加物であり、典型的には温度応答性（熱感受性、熱可逆性、又は熱硬化性ともいう）を有する両親媒性ポリマーを挙げることができるがこれに制限されない。両親媒性ポリマーとは、例えば、典型的にはポリビニルカプロラクタム、ポリエチレングリコール、ポリプロピレンオキサイド等の親水ブロック（Ａ）と、ポリビニル酢酸、エチレンオキサイド等の疎水ブロック（Ｂ）とを重合したＡ－Ｂ－Ａ型又はＢ－Ａ－Ｂ型ブロック共重合体を挙げることができるがこれに制限されない。好ましくはＡ－Ｂ－Ａ型ブロック共重合体であり、例えば、典型的にはポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体、ＰＥＧ－ＰＬＧＡ－ＰＥＧトリブロックコポリマー等を挙げることができるがこれに制限されない。好ましくはポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体である。
【0019】
本発明の医薬組成物に用いられる「ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体」は、ポリエチレンカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフトコポリマー、又はＰＶＣａｐ－ＰＶＡｃ－ＰＥＧと呼ぶこともあるが、式（１）の構造式で示される両親媒性で９０，０００－１４０，０００の平均分子量（重量平均分子量；Ｍｗ）を有する。製品としては、例えば、ＳＯＬＵＰＬＵＳ（登録商標）を挙げることができるがこれに制限されない。
【0020】
【化1】
【0021】
本発明の医薬組成物に用いられる「溶媒」又は本発明の医薬組成物を溶解又は分散させる溶媒としては、典型的には精製水、注射用水、その他の製薬学的に許容される水、炭素数１～７のアルカノール等の水混和性溶媒と水との混合物、デキストロース水溶液等を挙げることができるがこれに制限されない。好ましくは精製水、注射用水、その他の製薬学的に許容される水である。
【0022】
本発明に用いられるポリマーは、本発明の所望の効果が達成される範囲内で添加することができる。ポリマー、特にポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度は、溶液状態であれば高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ：ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）又は吸光度計を用いて測定することができる。ポリマー、特にポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度の下限は、医薬組成物に対して、典型的には１９％（ｗ／ｗ）以上であり、好ましくは２０％（ｗ／ｗ）以上であり、より好ましくは２５％（ｗ／ｗ）以上であり、さらに好ましくは２７％（ｗ／ｗ）以上である。なお、ポリマー、特にポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度の上限は２９％（ｗ／ｗ）である。
【0023】
医薬組成物にさらに複素粘度調節剤を含有した場合、ポリマー、特にポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の濃度としては、医薬組成物に対して、典型的には１０％（ｗ／ｗ）～２４％（ｗ／ｗ）であり、好ましくは１１％（ｗ／ｗ）～２３％（ｗ／ｗ）であり、より好ましくは１３％（ｗ／ｗ）～２１％（ｗ／ｗ）であり、さらに好ましくは１５％（ｗ／ｗ）～２０％（ｗ／ｗ）である。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
【0024】
本明細書において「複素粘度」とは、レオメーター（粘弾性測定装置）を用いて動的測定によって得られる粘度（ＳＩ単位はＰａ・ｓ）である。複素粘度を測定する方法としては、例えば、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製のレオメーター（ＭＣＲ３０２）を用いて、プレート（ＭＥＡＳＵＲＩＮＧ ＣＯＮＥ ＣＰ２５－２）、フード（Ｈ－ＰＴＤ２００）、０．３ｍｍのギャップの装備で、０．３ｍＬのサンプル量とし、せん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒、ノーマルフォース０Ｎ、トルク信頼範囲は１μＮ・ｍ以上の条件で測定する方法を挙げることができるがこれに制限されない。なお、医薬組成物が固体又は粉体等の流動性を有さない場合は、精製水、注射用水、その他の製薬学的に許容される水に溶解又は分散させた後、測定するものとする。
【0025】
本発明の医薬組成物は、煩雑な操作なく耳内へ投与できることが好ましい。すなわち、典型的には常温下（１５℃～２５℃）において、好ましくは室温下（１～３０℃）において、医薬組成物の複素粘度は流動性を有する程度に低いことが好ましい。例えば、レオメーターを用いてせん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒の条件及び温度を２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させながら医薬組成物の複素粘度を測定したときに、２５℃時点で、典型的には１６５０ｍＰａ・ｓ未満であり、好ましくは１６００ｍＰａ・ｓ未満であり、より好ましくは１５００ｍＰａ・ｓ未満であり、さらに好ましくは１４００ｍＰａ・ｓ未満であり、さらに好ましくは１２００ｍＰａ・ｓ未満であり、さらに好ましくは１０００ｍＰａ・ｓ未満である。また、例えば、レオメーターを用いてせん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒の条件及び温度を２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させながら医薬組成物の複素粘度を測定したときに、３０℃時点で、典型的には１６５０ｍＰａ・ｓ未満であり、好ましくは１６００ｍＰａ・ｓ未満であり、より好ましくは１５００ｍＰａ・ｓ未満であり、さらに好ましくは１４００ｍＰａ・ｓ未満であり、さらに好ましくは１２００ｍＰａ・ｓ未満であり、さらに好ましくは１０００ｍＰａ・ｓ未満である。なお、複素粘度の下限は０ｍＰａ・ｓである。
【0026】
本発明の医薬組成物は、耳内に投与後、速やかに滞留する特徴を有することが好ましい。すなわち、約３７℃～約３８℃である耳内に投与後は、医薬組成物の複素粘度は速やかに流動性を有さない程度に高くなることが好ましい。例えば、レオメーターを用いてせん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒の条件及び温度を２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させながら医薬組成物の複素粘度を測定したときに、３７℃到達後１分時点、５分時点、又は１０分時点で、典型的には１６５０ｍＰａ・ｓ以上であり、好ましくは１８００ｍＰａ・ｓ以上であり、より好ましくは２０００ｍＰａ・ｓ以上であり、さらに好ましくは２５００ｍＰａ・ｓ以上であり、さらに好ましくは３０００ｍＰａ・ｓ以上である。なお、複素粘度は高すぎると投与後に滞留物が耳内の壁面等から外れ、クリアランスされるおそれがあることから、３７℃における複素粘度は、典型的には１０００００ｍＰａ・ｓ以下であり、好ましくは９００００ｍＰａ・ｓ以下であり、より好ましくは８００００ｍＰａ・ｓ以下であり、さらに好ましくは７００００ｍＰａ・ｓ以下であり、さらに好ましくは６００００ｍＰａ・ｓ以下である。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
【0027】
前述の通り、本発明の医薬組成物は、煩雑な操作なく耳内に投与でき、かつ、投与後は耳内で薬物が滞留する機能を有することが好ましい。すなわち、常温及び／又は室温において、医薬組成物の複素粘度は流動性を有する程度に低く、耳内では、複素粘度は流動性を有さない程度に高いことが好ましい。例えば、レオメーターを用いてせん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒の条件及び温度を２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させながら医薬組成物の複素粘度を測定したときに、複素粘度は、典型的には２５℃時点で１６５０ｍＰａ・ｓ未満かつ３７℃到達後１０分時点で１６５０ｍＰａ・ｓ以上１０００００ｍＰａ・ｓ以下であり、好ましくは２５℃時点で１６００ｍＰａ・ｓ未満かつ３７℃到達後１０分時点で１８００ｍＰａ・ｓ以上１０００００ｍＰａ・ｓ以下であり、より好ましくは２５℃時点で１２００ｍＰａ・ｓ未満かつ３７℃到達後１０分時点で２０００ｍＰａ・ｓ以上８００００ｍＰａ・ｓ以下であり、さらに好ましくは２５℃時点で１０００ｍＰａ・ｓ未満かつ３７℃到達後１０分時点で３０００ｍＰａ・ｓ以上８００００ｍＰａ・ｓ以下である。
【0028】
本明細書において「ゾル－ゲル転移点」とは、医薬組成物がゾル状態からゲル状態になるときの温度を意味する。ゾル－ゲル転移点を評価する方法としては、例えば、レオメーター等を用いた方法を挙げることができるがこれに制限されない。本明細書においては、例えば、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製のレオメーター（ＭＣＲ３０２）を用いて医薬組成物の複素粘度を測定したとき、固体的な要素である貯蔵弾性率（Ｇ’）と液体的な要素である損失弾性率（Ｇ”）が同時に数値化されるが、Ｇ’＜Ｇ”をゾル状態、Ｇ’＞Ｇ”をゲル状態とし、Ｇ’＝Ｇ”となった時点の温度をゾル－ゲル転移点とすることができる。なお、医薬組成物が固体又は粉体等の流動性を有さない場合は、精製水、注射用水、その他の製薬学的に許容される水に溶解又は分散させた後、測定するものとする。本発明における医薬組成物として好ましいゾル－ゲル転移点の範囲は、典型的には３０℃～３８℃であり、好ましくは３１℃～３７℃であり、より好ましくは３２℃～３６℃であり、さらに好ましくは３２℃～３５℃である。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
【0029】
本明細書において「ゲル化」又は「ゲル形成」とは、流動性を有した医薬組成物又は基剤が流動性を有さなくなることを意味し、「ゲル形成能」とは、ゲル化する性質を意味する。流動性を有すると医薬組成物の滞留率が低下する恐れがあることから、医薬組成物又は基剤は耳内投与後速やかにゲル形成することが好ましい。ゲル形成の有無又はゲル形成能を評価する方法としては、医薬組成物又は基剤をプラスチックシャーレ上又は試験管中に０．３ｍＬを滴下して蓋をした後、２５℃又は３７℃に設定したウォーターバスの水面上又はサンプルを２５℃又は３７℃に調温することができるヒートブロック上に静置させ、静置開始から１分後、５分後、１０分後、１５分後、又は３０分後にプラスチックシャーレ等を取り出し、直ちに倒立させ、倒立から１０秒間の医薬組成物又は基剤の挙動を目視確認する方法（以後、ゲル形成能試験と称することもある。）を挙げることができるがこれに制限されない。該ゲル形成能試験を２５℃に設定したウォーターバスの水面上で１分間、５分間、１０分間、１５分間、又は３０分間静置したサンプルは、典型的には倒立から１０秒未満で落下又は横に流れる、好ましくは倒立から５秒未満で落下又は横に流れることが好ましい。また、該ゲル形成能試験を３７℃に設定したウォーターバスの水面上で１分間又は１０分間静置したサンプルは、典型的には倒立から５秒未満は落下又は横に流れることが確認できない、好ましくは倒立から１０秒未満は落下又は横に流れることが確認できない、より好ましくは倒立から１０秒間落下及び横に流れることのいずれも確認できないことが好ましい。
【0030】
本明細書において「基剤」とは、医薬組成物の構成成分のうち、主に複素粘度を付与する機能を有する又は耳内で薬物を滞留・徐放する機能を有する医薬品添加物を意味する。具体的には、本明細書における基剤とは、典型的にはポリマー、好ましくはポリマー及び複素粘度調節剤、より好ましくは医薬組成物から薬物を除いた残りの医薬品添加物を意味する。
【0031】
本明細書において「複素粘度調節剤」とは、医薬組成物の複素粘度を上昇又は下降させる医薬品添加物を意味する。本発明に用いられる複素粘度調節剤としては、製薬学的に許容され、本発明の医薬組成物に含有される１種又は２種以上の薬物の徐放性に影響を及ぼさないものであれば、特に制限されない。典型的にはクエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム若しくはこれらの水和物又はこれらの組み合わせであり、好ましくはクエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム若しくはこれらの水和物又はこれらの組み合わせであり、より好ましくはクエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム若しくはこれらの水和物又はこれらの組み合わせであり、さらに好ましくはクエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、硫酸ナトリウム若しくはこれらの水和物又はこれらの組み合わせであり、さらに好ましくはクエン酸三ナトリウム又はクエン酸三ナトリウムの水和物である。なお、複素粘度調節剤の別の態様としてはジクロロメタン等の有機溶媒を挙げることができるがこれに制限されない。
【0032】
複素粘度調節剤は、本発明の所望の効果が達成される範囲内で１種又は２種以上組み合わせて添加することができる。複素粘度調節剤の医薬組成物中の濃度は溶液状態であれば、ＨＰＬＣ又は吸光度計等を用いて測定することができるがこれに制限されない。複素粘度調節剤の濃度は、医薬組成物に対して、例えば、典型的には０．１％（ｗ／ｖ）～５．０％（ｗ／ｖ）であり、好ましくは０．８％（ｗ／ｖ）～３．１％（ｗ／ｖ）であり、より好ましくは１．０％（ｗ／ｖ）～３．１％（ｗ／ｖ）であり、さらに好ましくは１．０％（ｗ／ｖ）～２．５％（ｗ／ｖ）であり、さらに好ましくは１．４％（ｗ／ｖ）～２．４％（ｗ／ｖ）であり、さらに好ましくは１．５％（ｗ／ｖ）～２．２％（ｗ／ｖ）である。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
【0033】
本発明における医薬組成物の「浸透圧」は、耳への刺激性がない範囲内であることが好ましい。ヒトの耳の外リンパ液の浸透圧は約２８０ｍＯｓｍ～約３００ｍＯｓｍであり、高浸透圧であると副作用のリスクを伴うことから、外リンパ液の浸透圧よりも低いことが好ましい。本発明の医薬組成物の浸透圧は、例えば、ＡＲＫＲＡＹ製の自動浸透圧分析装置ＯＭ－６０５０等を用いて測定したとき、典型的には５０ｍＯｓｍ～３００ｍＯｓｍであり、好ましくは９０ｍＯｓｍ～３００ｍＯｓｍであり、より好ましくは１８０ｍＯｓｍ～３００ｍＯｓｍであり、さらに好ましくは２００ｍＯｓｍ～３００ｍＯｓｍであり、さらに好ましくは２２０ｍＯｓｍ～２９０ｍＯｓｍである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
【0034】
本発明における医薬組成物の「ｐＨ」は、耳への刺激性がなく、又は医薬組成物の安定性に影響を与えない範囲内であることが好ましい。本発明の医薬組成物のｐＨは、典型的には３．０～１０．５であり、好ましくは４．５～９．０であり、より好ましくは５．５～８．５であり、さらに好ましくは６．０～８．０であり、さらに好ましくは６．５～８．０である。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。また、医薬組成物のｐＨとは、医薬組成物の形態が液体状態の場合には、液体状態におけるｐＨを意味し、非液体状態の場合には、溶媒（例えば、精製水、注射用水、又はその他の製薬学的に許容される水）に溶解され液体状態にしたときのｐＨを意味する。
【0035】
本明細書において「薬物を徐放する」又は「徐放性」とは、医薬組成物を投与後、一定期間薬物が溶出し続けること又は溶出し続ける性質を意味する。溶出速度に特に制限はないが、薬物を徐放させる目的は投与回数の低減、及び／又は標的部位の薬物濃度を一定で維持することによる薬効の持続や副作用の低減であることから、薬物を徐放する速度は遅いことが好ましい。
【0036】
薬物の徐放性を測定する方法としては、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいては、例えば、Dose-dependent sustained release of dexamethasone in inner ear cochlear fluids using a novel local delivery Approach（Xiaobo Wang，2009 Audiol Neurotol 14：393-401）に記載の方法を参考につくられた、３７℃±２℃に加温されたリン酸緩衝生理食塩水（以後、ＰＢＳ；Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｔｓと称することもある。）が２ｍＬ入ったマルチウェルプレートに、前記ＰＢＳを上層及び下層に分けるように薄い半透明のメンブレンのついたインサートを嵌め込み、前記インサート上に１種又は２種以上の薬物を含有した医薬組成物を０．５ｍＬ投入し、前記ＰＢＳの水面が揺れる速度（例えば、ＴＡＩＴＥＣ製のクロマトチャンバーＭ－６００ＦＮで１００回転／分の速度）で前記マルチウェルプレートを振とうし、薬物を溶出させる試験（以後、溶出試験と称することもある）を挙げることができるがこれに制限されない。なお、薬物の溶解がｐＨに依存し、適切に溶出性を評価できない場合は、ＰＢＳの代わりに、薬物毎に好ましい試験液（例えば、一定量の薬物を１００％溶解させ得る溶媒等）を用いればよく、例えば、生理食塩水等を挙げることができるがこれに制限されない。
【0037】
溶出試験で本発明の医薬組成物の徐放性を評価するには、例えば、試験開始後１、６、２４時間時点、試験開始後１、４、８時間時点、又は試験開始後１、２４、４８時間時点の最低３時点についてウェルの下側の薬物濃度を定量し、薬物の溶出率の経時的推移を評価することにより行うことができる。薬物の定量方法に特に制限はなく、薬物の定量に最適な分析方法を用いればよい。例えば、ＨＰＬＣ、蛍光光度計等を挙げることができるがこれに制限されない。本明細書において「薬物を徐放する」とは、上記溶出試験において、例えば、溶出試験開始後１時間時点における薬物の溶出率が、典型的には４０％以下であり、好ましくは３０％以下であり、より好ましくは２０％以下であり、さらに好ましくは１５％以下であり、さらに好ましくは１２％以下であることを意味する。また、例えば、溶出試験開始後６時間時点における薬物の溶出率が、典型的には７０％以下であり、好ましくは６０％以下であり、より好ましくは５０％以下であり、さらに好ましくは４０％以下であり、さらに好ましくは３５％以下であることを意味する。また、例えば、溶出試験開始後２４時間時点における薬物の溶出率が、典型的には８５％以下であり、好ましくは７５％以下であり、さらに好ましくは７０％以下であり、さらに好ましくは６０％以下であり、さらに好ましくは５５％以下である。なお、前記溶出試験に使用する試験液はリン酸緩衝生理食塩水に制限されず、薬物毎に好ましい試験液（例えば、一定量の薬物を１００％溶解させ得る溶媒等）を用いればよい。
【0038】
本明細書において「滞留」又は「滞留性」とは、耳内に投与された医薬組成物が、外耳や中耳のクリアランスを回避し、投与部位に留まること又は留まる性質を意味する。滞留性を評価する方法としては特に制限されないが、例えば、ＰＥＴ（Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）撮像、ＳＰＥＣＴ（ｓｉｎｇｌｅ ｐｈｏｔｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）撮像、蛍光色素を用いた試験、ＭＲＩ（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ）等を挙げることができるがこれに制限されない。本明細書においてＰＥＴ撮像又はＳＰＥＣＴ撮像とは、ヒト又はサル若しくげっ歯類等のモデル動物の耳内の投与部位に、放射性同位体がラベルされた薬物を含む医薬組成物を投与し、一定期間後における耳内の放射性同位体の残存量を定量する試験を意味し、投与量と残存量から残存率を算出することができる。本明細書において蛍光色素を用いた試験とは、例えば、蛍光色素を封入した又は標識した薬物を含有した医薬組成物を耳内に投与し、一定期間後における耳内の蛍光色素残存量を定量する試験を意味し、投与量と残存量から残存率を算出することができる。
【0039】
本発明の医薬組成物の残存率は、耳の疾患及び／又は薬物ごとに適切な残存率は異なる。上記の方法で本発明の医薬組成物の滞留性を評価したとき、例えば、投与後の残存率が５０％以下になるまでの期間は、典型的には６時間以上であり、好ましくは１２時間以上であり、より好ましくは１日以上であり、さらに好ましくは２日以上であり、さらに好ましくは３日以上であり、さらに好ましくは５日以上であり、さらに好ましくは６日以上であり、さらに好ましくは７日以上であり、さらに好ましくは１０日以上であり、さらに好ましくは１２日以上であり、さらに好ましくは１４日以上である。また、投与後の残存率が２０％以下になるまでの期間は、典型的には６時間以上であり、好ましくは１２時間以上であり、より好ましくは１日以上であり、さらに好ましくは２日以上であり、さらに好ましくは３日以上であり、さらに好ましくは５日以上であり、さらに好ましくは６日以上であり、さらに好ましくは７日以上であり、さらに好ましくは１０日以上であり、さらに好ましくは１２日以上であり、さらに好ましくは１４日以上であり、さらに好ましくは２１日以上であり、さらに好ましくは２８日以上である。少なくとも上記のような滞留性を示す場合は、本明細書において「滞留性を有する」場合であるがこれに制限されない。
【0040】
本発明の医薬組成物の投与回数は、耳の疾患及び／又は薬物ごとに適切な回数は異なる。典型的には１日につき２回であり、好ましくは１日につき１回であり、より好ましくは２日毎に１回であり、さらに好ましくは３日毎に１回であり、さらに好ましくは４日毎に１回であり、さらに好ましくは５日毎に１回であり、さらに好ましくは６日毎に１回であり、さらに好ましくは７日毎に１回であり、さらに好ましくは１０日毎に１回であり、さらに好ましくは１２日毎に１回であり、さらに好ましくは１４日毎に１回であり、さらに好ましくは２１日毎に１回であり、さらに好ましくは２８日毎に１回であるがこれに制限されない。
【0041】
本発明の医薬組成物の投与量は、ヒトに投与可能であれば特に制限されない。ある態様としては鼓膜との有用な接触を提供するために必要な量、ある態様としては鼓室内に投与可能な量、ある態様としては正円窓との有用な接触を提供するために必要な量であることが好ましい。投与量は、典型的には１μＬ～２０００μＬであり、好ましくは１０μＬ～１５００μＬであり、より好ましくは２０μＬ～１２５０μＬであり、さらに好ましくは３０μＬ～１０００μＬであり、さらに好ましくは５０μＬ～７５０μＬであり、さらに好ましくは７５μＬ～６００μＬであり、さらに好ましくは１００μＬ～５００μＬであり、さらに好ましくは１００μＬ～３００μＬである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
【0042】
本発明の医薬組成物は薬物を１種又は２種以上含有する。本発明に用いられる「薬物」は、典型的には耳の疾患の治療に必要な有効成分であり、好ましくは低分子化合物、核酸、又はタンパク質である。
【0043】
低分子化合物とは、５００未満の分子量を有する化合物であり、代表的な低分子化合物としては、アセトアミノフェン、セレコシキブ、ジクロフェナクナトリウム等の鎮痛薬や、デキサメタゾン、ベクロメタゾン等のステロイド、アジスロマイシン、アモキシシリン、オフロキサシン、ゲンタマイシン等の抗菌薬を挙げることができるがこれに制限されない。核酸とは、塩基と糖、リン酸からなるヌクレオチドがホスホジエステル結合で連なった高分子化合物であり、代表的な核酸としては、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ（プラスミドＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノミックＤＮＡ又は合成ＤＮＡ）、ＲＮＡ、化学修飾を施した核酸、アデノウイルス、レトロウイルス等のウイルス等を挙げることができるがこれに制限されない。タンパク質とは、Ｌ－アミノ酸が鎖状に重合してできた高分子化合物であり、代表的なタンパク質としては、酵素、標的受容体に対するリガンド、受容体そのもの、抗体、ペプチド等を挙げることができるがこれに制限されない。好ましくは標的受容体に対するリガンドであり、例えば、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物である。
【0044】
本発明に用いられるヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物としては、例えば、ＨＢ－ＥＧＦ（Ｈｅｐａｒｉｎ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）、ヒトＨＢ－ＥＧＦ、組換えヒトＨＢ－ＥＧＦ等を挙げることができるがこれに制限されない。典型的にはＨＢ－ＥＧＦであり、好ましくはヒトＨＢ－ＥＧＦであり、より好ましくは組換えヒトＨＢ－ＥＧＦである。
【0045】
本発明に用いられるヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物は、典型的には配列番号１に示されるアミノ酸配列との同一性が９０％以上であるアミノ酸配列を含み、ケラチノサイト及び線維芽細胞に対する分裂促進作用及び／又は移行促進効果を有するタンパク質である。
【0046】
本発明に用いられるヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物は、典型的には以下のタンパク質である：
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ケラチノサイト及び線維芽細胞に対する分裂促進作用及び／若しくは移行促進効果を有するタンパク質、又は、
ｂ）配列番号１に示されるアミノ酸配列において１～１０個、１～５個、１～３個、若しくは１個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、ケラチノサイト及び線維芽細胞に対する分裂促進作用及び／若しくは移行促進効果を有するタンパク質。
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ケラチノサイト及び線維芽細胞に対する分裂促進作用及び／若しくは移行促進効果を有するタンパク質、又は、
ｂ）配列番号１に示されるアミノ酸配列において１～１０個、１～５個、１～３個、若しくは１個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び／若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、ケラチノサイト及び線維芽細胞に対する分裂促進作用及び／若しくは移行促進効果を有するタンパク質。
【0047】
本発明に用いられるヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物は、典型的には配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質であり、好ましくは配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。
【0048】
本発明に用いられるヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物は、本明細書に開示されるタンパク質の配列情報に基づいて、当該分野で公知の方法を使用して、当業者によって容易に作製され得る。
【0049】
ヘパリン結合性上皮成長因子は、ＥＧＦファミリーに属するタンパク質である（Biochimica et Biophysica Acta, 1997, 1333, F179-F199）。ヘパリン結合性上皮成長因子前駆体は膜アンカー型タンパク質であり、タンパク質分解的切断により、成熟可溶型ヘパリン結合性上皮成長因子が放出されることが知られている。本発明に用いられるＨＢ－ＥＧＦは、ケラチノサイト及び線維芽細胞に対する分裂促進作用及び／又は移行促進効果を有する限り、膜型若しくは可溶型又は前駆体若しくは成熟型を問わず、任意の適切なＨＢ－ＥＧＦ又はその変異体若しくはその改変体を選択することが可能である。あるタンパク質がケラチノサイト及び線維芽細胞に対する分裂促進作用及び／又は移行促進効果を有するか否かは、例えば、How to Choose a cell Health Assay.（Riss. T，January, 2014 tpub148）に記載の方法で確認することができる。
【0050】
本発明の医薬組成物は耳の疾患の治療に用いることができ、例えば、典型的には急性外耳炎、慢性外耳炎、先天性耳瘻孔、外傷性鼓膜損傷、慢性鼓膜穿孔等の外耳又は鼓膜の疾患、急性中耳炎、急性乳様突起炎、錐体尖炎、滲出性中耳炎、耳管開放症、慢性中耳炎、中耳真珠腫、耳性頭蓋内合併症、癒着性中耳炎、コレステリン肉芽腫、好酸球性中耳炎、耳小骨連鎖離断、グロームス腫瘍等の中耳の疾患、メニエール病、外リンパ瘻、老人性難聴、薬物による内耳障害、ムンプス難聴、良性発作性頭位等の内耳の疾患に用いることができるがこれに制限されない。好ましくは慢性鼓膜穿孔に用いることができる。
【0051】
慢性鼓膜穿孔とは、鼓膜に穿孔が生じ伝音難聴等の症状が出ることを特徴とする疾患である。鼓膜は中耳炎又は外傷により穿孔が生じうる。鼓膜穿孔は鼓膜が再生することで閉鎖し、自然治癒することが多い。しかし、慢性中耳炎等、鼓膜への細菌感染が持続することにより鼓膜の再生治癒過程が妨害されると、穿孔が閉鎖せず、慢性鼓膜穿孔と診断される。難聴等を訴える患者に対しては外科手術が行われている。
【0052】
ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物の「有効量」又は「治療上有効な量」は、ある期間にわたって適用された場合、慢性鼓膜穿孔の治癒を強化する用量である。本発明の医薬組成物中に含有しうるヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物の量の下限は約１ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ、約２００μｇ／ｍＬ、約５００μｇ／ｍＬ、約７５０μｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、又は約１００ｍｇ／ｍＬである。また、本発明の医薬組成物中に含有しうるＨＢ－ＥＧＦの量の上限は約１０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。また、投与回数を減らすために、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物が徐放する期間をのばした医薬組成物は、反復投与のための医薬組成物より高い初期濃度で提供され得る。
【0053】
慢性鼓膜穿孔を治療する上で、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物と慢性鼓膜穿孔部とを接触させる期間は、典型的には１日以上であり、好ましくは３日以上であり、より好ましくは５日以上であり、さらに好ましくは７日以上であり、さらに好ましくは１０日以上であり、さらに好ましくは２週間以上であり、さらに好ましくは３週間以上であり、さらに好ましくは４週間以上である。
【0054】
慢性鼓膜穿孔を治療する上で、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物の徐放性は、上記溶出試験を実施したときに、例えば、溶出試験開始後１時間時点における薬物の溶出率が、典型的には４０％以下であり、好ましくは３０％以下であり、より好ましくは２０％以下であり、さらに好ましくは１５％以下であり、さらに好ましくは１２％以下であることを意味する。また、例えば、溶出試験開始後６時間時点における薬物の溶出率が、典型的には７０％以下であり、好ましくは６０％以下であり、より好ましくは５０％以下であり、さらに好ましくは４０％以下であり、さらに好ましくは３５％以下であることを意味する。また、例えば、溶出試験開始後２４時間時点における薬物の溶出率が、典型的には８５％以下であり、好ましくは７５％以下であり、さらに好ましくは７０％以下であり、さらに好ましくは６０％以下であり、さらに好ましくは５５％以下である。
【0055】
慢性鼓膜穿孔を治療する上で、本発明の医薬組成物中のヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物の残存率は、例えば、投与後の残存率が５０％以下になるまでの期間は、典型的には６時間以上であり、好ましくは１２時間以上であり、より好ましくは１日以上であり、さらに好ましくは２日以上であり、さらに好ましくは３日以上であり、さらに好ましくは５日以上であり、さらに好ましくは６日以上であり、さらに好ましくは７日以上であり、さらに好ましくは１０日以上であり、さらに好ましくは１２日以上であり、さらに好ましくは１４日以上である。また、投与後の残存率が２０％以下になるまでの期間は、典型的には６時間以上であり、好ましくは１２時間以上であり、より好ましくは１日以上であり、さらに好ましくは２日以上であり、さらに好ましくは３日以上であり、さらに好ましくは５日以上であり、さらに好ましくは６日以上であり、さらに好ましくは７日以上であり、さらに好ましくは１０日以上であり、さらに好ましくは１２日以上であり、さらに好ましくは１４日以上であり、さらに好ましくは２１日以上であり、さらに好ましくは２８日以上である。
【0056】
ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物を用いる場合には、ヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物の凝集又はヘパリン結合性上皮成長因子の生物活性を提供する薬物の構造変化等を抑制するため、薬効が発揮される範囲内で、医薬品添加物を１種又は２種以上組み合わせて適宜適量添加されうる。
【0057】
本発明の医薬組成物においては、所望により本発明の所望の効果が達成される範囲内で、医薬品添加物を１種又は２種以上組み合わせて適宜適量添加することができる。医薬品添加物としては、例えば、マンニトール等の賦形剤、ＰＢＳ等の緩衝剤、希塩酸、水酸化ナトリウム等のｐＨ調整剤、等張化剤、溶解補助剤、酸化防止剤、防腐剤、ポリソルベート２０等の界面活性剤等を挙げることができるがこれに制限されない。
【0058】
ＰＢＳ等の緩衝剤は薬物を調製する工程で、薬物を安定化する理由により添加されうる。ＰＢＳの組成は特に制限されないが、ｐＨが７．４のＰＢＳを調製するには、典型的には精製水にリン酸水素二ナトリウム １．４４ｍｇ／ｍＬ、塩化カリウム ０．２０ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム ８．００ｍｇ／ｍＬ、リン酸二水素カリウム ０．２４ｍｇ／ｍＬの割合で溶解させる方法、精製水にリン酸水素二ナトリウム １．１５ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム ８ｍｇ／ｍＬ、塩化カリウム ０．２ｍｇ／ｍＬ、リン酸二水素カリウム ０．２ｍｇ／ｍＬの割合で溶解させる方法、又は精製水にリン酸水素二ナトリウム・１２水和物 ２．９ｍｇ／ｍＬ、塩化カリウム ０．２ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム ８．０１ｍｇ／ｍＬ、リン酸二水素カリウム ０．２ｍｇ／ｍＬの割合で溶解させる方法等を挙げることができるがこれに制限されない。
【0059】
界面活性剤は、薬物の溶解度を向上する又はタンパク質の凝集を抑制する等の理由により添加されうるがこれに制限されない。
【0060】
本発明の医薬組成物の製造方法について、以下に説明するが、例えば、薬物の調製、基剤の溶解、ｐＨ調節、充填、滅菌、薬物の凍結乾燥、薬物と基剤の最終混合、最終滅菌等の工程を含む公知の方法も含まれる。
【0061】
＜薬物の調製工程＞
薬物の調製工程では、薬物を通常製薬学的に溶解、懸濁、又は分散できる方法であれば、装置、手段とも特に制限されない。例えば、薬物を溶媒としてＰＢＳ等の緩衝剤に溶解、懸濁又は分散させる方法を挙げることができるがこれに制限されない。また、薬物がタンパク質等の場合は、凝集防止及び／又は容器への吸着防止のためにポリソルベート２０等の界面活性剤を添加する場合があるがこれに制限されない。
薬物の調製工程では、薬物を通常製薬学的に溶解、懸濁、又は分散できる方法であれば、装置、手段とも特に制限されない。例えば、薬物を溶媒としてＰＢＳ等の緩衝剤に溶解、懸濁又は分散させる方法を挙げることができるがこれに制限されない。また、薬物がタンパク質等の場合は、凝集防止及び／又は容器への吸着防止のためにポリソルベート２０等の界面活性剤を添加する場合があるがこれに制限されない。
【0062】
＜基剤の溶解、ｐＨ調節工程＞
基剤の溶解工程では、ポリマー、特にポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を通常製薬学的に溶解できる方法であれば、装置、手段とも特に制限されない。例えば、ポリマー、特にポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を精製水等の溶媒に添加し、冷蔵条件下（約４℃）で撹拌機を用いて撹拌して溶解させることにより、基剤溶液を得る方法を挙げることができるがこれに制限されない。なお、該ポリマーを添加する際に、所望により本発明の所望の効果が達成される範囲内で複素粘度調節剤を添加することができるがこれに制限されない。また、所望により本発明の所望の効果が達成される範囲内で希塩酸、水酸化ナトリウム等のｐＨ調整剤を添加し、ｐＨを調整することができるがこれに制限されない。
基剤の溶解工程では、ポリマー、特にポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を通常製薬学的に溶解できる方法であれば、装置、手段とも特に制限されない。例えば、ポリマー、特にポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を精製水等の溶媒に添加し、冷蔵条件下（約４℃）で撹拌機を用いて撹拌して溶解させることにより、基剤溶液を得る方法を挙げることができるがこれに制限されない。なお、該ポリマーを添加する際に、所望により本発明の所望の効果が達成される範囲内で複素粘度調節剤を添加することができるがこれに制限されない。また、所望により本発明の所望の効果が達成される範囲内で希塩酸、水酸化ナトリウム等のｐＨ調整剤を添加し、ｐＨを調整することができるがこれに制限されない。
【0063】
＜充填、滅菌工程＞
充填工程及び滅菌工程では、通常製薬学的に許容される充填及び滅菌できる方法であれば、装置、手段とも特に制限されない。例えば、溶解した基剤溶液を冷蔵条件下において撹拌容器中で加圧ろ過滅菌し、バイアル等の容器やデバイス等に充填する方法を挙げることができるがこれに制限されない。なお、充填量のばらつきを抑えるために０～２５℃の範囲で温度制御するなど、定量充填に適した設備を使用することができるがこれに制限されない。なお、本明細書において、滅菌とは、医薬組成物、容器、又はデバイス等に存在する微生物を死滅又は除去することを意味する。滅菌の方法としては、例えば、乾熱滅菌、加熱滅菌、高圧蒸気滅菌、化学物質による滅菌、放射線滅菌又はろ過滅菌を挙げることができるがこれに制限されない。
充填工程及び滅菌工程では、通常製薬学的に許容される充填及び滅菌できる方法であれば、装置、手段とも特に制限されない。例えば、溶解した基剤溶液を冷蔵条件下において撹拌容器中で加圧ろ過滅菌し、バイアル等の容器やデバイス等に充填する方法を挙げることができるがこれに制限されない。なお、充填量のばらつきを抑えるために０～２５℃の範囲で温度制御するなど、定量充填に適した設備を使用することができるがこれに制限されない。なお、本明細書において、滅菌とは、医薬組成物、容器、又はデバイス等に存在する微生物を死滅又は除去することを意味する。滅菌の方法としては、例えば、乾熱滅菌、加熱滅菌、高圧蒸気滅菌、化学物質による滅菌、放射線滅菌又はろ過滅菌を挙げることができるがこれに制限されない。
【0064】
＜薬物の凍結乾燥工程＞
溶解した薬物溶液は凍結又は凍結乾燥を実施することができる。薬物の凍結乾燥工程では、通常製薬学的に凍結乾燥できる方法であれば、装置、手段とも特に制限されない。凍結乾燥の際、固形分濃度を上げケーキの性状を保持するために、基剤溶液成分の一部を添加して凍結乾燥することができるがこれに制限されない。
溶解した薬物溶液は凍結又は凍結乾燥を実施することができる。薬物の凍結乾燥工程では、通常製薬学的に凍結乾燥できる方法であれば、装置、手段とも特に制限されない。凍結乾燥の際、固形分濃度を上げケーキの性状を保持するために、基剤溶液成分の一部を添加して凍結乾燥することができるがこれに制限されない。
【0065】
＜薬物と基剤の最終混合工程＞
本発明の医薬組成物は薬物と基剤が混合された状態での凍結溶液、冷蔵溶液、若しくは凍結乾燥品として、又は、別容器に充填された薬物の凍結溶液、冷蔵溶液、若しくは凍結乾燥品と基剤溶液として提供されることができるがこれに制限されない。薬物と基剤溶液とが別容器で提供される場合は、例えば、薬物を含むバイアルに基剤溶液を添加し混合する方法又は薬物若しくは基剤溶液を含むバイアルから別の空バイアルへと各々を添加し混合する方法により本発明の医薬組成物とすることができるがこれに限定されない。
本発明の医薬組成物は薬物と基剤が混合された状態での凍結溶液、冷蔵溶液、若しくは凍結乾燥品として、又は、別容器に充填された薬物の凍結溶液、冷蔵溶液、若しくは凍結乾燥品と基剤溶液として提供されることができるがこれに制限されない。薬物と基剤溶液とが別容器で提供される場合は、例えば、薬物を含むバイアルに基剤溶液を添加し混合する方法又は薬物若しくは基剤溶液を含むバイアルから別の空バイアルへと各々を添加し混合する方法により本発明の医薬組成物とすることができるがこれに限定されない。
【0066】
＜最終滅菌工程＞
本発明の医薬組成物は、その製造工程において、感染症を引き起こす微生物を含まない又は安全な医薬組成物を提供することを目的として最終滅菌工程を含むことができる。滅菌の方法としては、例えば、乾熱滅菌、加熱滅菌、高圧蒸気滅菌、化学物質による滅菌、放射線滅菌又はろ過滅菌を挙げることができるがこれに制限されない。好ましくはろ過滅菌である。なお、薬物と基剤溶液とが別容器で提供される場合、最終混合工程及び最終滅菌工程、又は最終混合工程は医療現場において行われる可能性があるが、医療現場の室内の温度が室温（１～３０℃）であれば混合後ただちにゲル化するものではないため、必ずしも投与直前又は投与中に混合する必要はない。
本発明の医薬組成物は、その製造工程において、感染症を引き起こす微生物を含まない又は安全な医薬組成物を提供することを目的として最終滅菌工程を含むことができる。滅菌の方法としては、例えば、乾熱滅菌、加熱滅菌、高圧蒸気滅菌、化学物質による滅菌、放射線滅菌又はろ過滅菌を挙げることができるがこれに制限されない。好ましくはろ過滅菌である。なお、薬物と基剤溶液とが別容器で提供される場合、最終混合工程及び最終滅菌工程、又は最終混合工程は医療現場において行われる可能性があるが、医療現場の室内の温度が室温（１～３０℃）であれば混合後ただちにゲル化するものではないため、必ずしも投与直前又は投与中に混合する必要はない。
【0067】
本発明の医薬組成物を充填するための容器は、使用目的に応じて選択することができる。本明細書において容器とは、密封できるものであれば特に制限されない。例えば、バイアル、アンプル、瓶のような大容量の形状のもの、デバイス等を挙げることができるがこれに制限されない。
【0068】
本発明の医薬組成物は、デバイスを用いて治療部位に送達することができる。本明細書においてデバイスとは、医薬組成物を治療部位に送達する医療機器又は装置を意味し、治療部位に応じて選択することができる。デバイスとしては、例えば、典型的には注射器（ディスポーザブル注射器を含む）等の規定用量の形状のものに医薬組成物を充填し、針、カニューレ、又はカテーテルを装着したもの、マイクロピペット、２種類の溶液等を別々の規定用量の形状のものに充填して耳内で該溶液等を混合させることにより医薬組成物を完成させる二重バレルシリンジ、２種類の溶液等を別々の規定用量の形状のものに充填してインラインで該溶液等を混合させることにより医薬組成物を完成させる二重バレルシリンジ、医薬組成物を噴霧して治療部位に送達させることができるスプレー、ポンプ式で医薬組成物を送達することができる装置等を挙げることができるがこれに制限されない。好ましくは注射器に針を装着したものである。針、カニューレ、又はカテーテルの長さ及び太さは、治療部位や患者に応じて適切なものを選択することができるが、耳の疾患部位又は近傍に薬物を局所投与する際に鼓膜を貫通する投与方法で行う場合は、投与後に鼓膜に穴が開くことから、典型的には２５～３０ゲージ、好ましくは２７～３０ゲージの針、カニューレ、又はカテーテルを選択することが好ましい。
【0069】
デバイスは容器として使用することもできる。例えば、注射器に予め溶液等を充填して、プレフィルドシリンジ液体製剤又はオートインジェクター液体製剤として提供することを挙げることができる。これらは医療現場において、溶解操作等の操作が不要となり、より迅速な対応が可能となりうる。
【0070】
容器又はデバイス等の材質については、例えば、ガラス、プラスチック等を挙げることができるがこれに制限されない。また、容器又はデバイスは表面処理することができ、シリカコート処理、シリコンコート処理、サルファー処理、各種低アルカリ処理等を施すことができるがこれに制限されない。
【0071】
本発明には、薬物１種又は２種以上を含有する耳内投与用の医薬組成物の製造のための、ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体の基剤としての使用、並びに、薬物１種又は２種以上及びポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有する耳内投与用の医薬組成物の製造のための、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素二ナトリウム、クエン酸二水素カリウム、クエン酸水素二アンモニウム、四ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム又はこれらの水和物からなる群より選択される１種又は２種以上の複素粘度調節剤としての使用を含む。
【0072】
本発明の使用で用いられる「耳内投与用の」、「基剤」、「複素粘度調節剤」、「ポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体」、「薬物」については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
【0073】
本発明の使用における各成分の配合量、配合方法については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
【実施例】
【0074】
以下に、実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定解釈されるものではない。
【0075】
以下の実施例においてポリビニルカプロラクタム－ポリビニル酢酸－ポリエチレングリコールグラフト共重合体であるＳＯＬＵＰＬＵＳ（登録商標）はＢＡＳＦ製、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレントリブロック共重合体（ポロキサマー）であるＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ－１２７はＢＡＳＦ製、クエン酸三ナトリウム・２水和物（以後、クエン酸三ナトリウムと称することもある。）はメルク製、クエン酸水素二ナトリウム・１．５水和物（以後、クエン酸水素二ナトリウムと称することもある。）は関東化学製、クエン酸二水素ナトリウムは関東化学製、クエン酸三カリウム・一水和物（以後、クエン酸三カリウムと称することもある。）は和光純薬工業製、クエン酸二水素カリウムは和光純薬工業製、クエン酸三アンモニウムは関東化学製、クエン酸水素二アンモニウムは和光純薬工業製、酢酸アンモニウムは関東化学製、炭酸アンモニウムは和光純薬工業製、硫酸アンモニウムは関東化学製、コハク酸二ナトリウムは和光純薬工業製、酢酸ナトリウムは関東化学製、炭酸ナトリウムは関東化学製、リン酸二水素ナトリウム・二水和物（以後、リン酸二水素ナトリウムと称することもある。）は関東化学製、酒石酸ナトリウム・二水和物（以後、酒石酸ナトリウムと称することもある。）は和光純薬工業製、四ホウ酸ナトリウム・十水和物（以後、四ホウ酸ナトリウムと称することもある。）はメルク製、塩化ナトリウムは関東化学製、硫酸ナトリウムは和光純薬工業製、塩化カリウムは関東化学製、塩化カルシウムは関東化学製、ポリソルベート２０（以後、ＰＳ２０と称することもある。）はＴｗｅｅｎ２０（関東化学製）を、ＦＩＴＣデキストラン（１０ｋＤａ）はＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ－ｄｅｘｔｒａｎ、ａｖｅｒａｇｅ ｍｏｌ ｗｔ １００００でＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製、ＦＩＴＣデキストラン（７０ｋＤａ）はＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ－ｄｅｘｔｒａｎ、ａｖｅｒａｇｅ ｍｏｌ ｗｔ ７００００でＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製、ＦＩＴＣデキストラン（１５０ｋＤａ）はＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ－ｄｅｘｔｒａｎ、ａｖｅｒａｇｅ ｍｏｌ ｗｔ １５００００でＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製、生理食塩水は大塚製薬製、アセトアミノフェンは山本化学工業製、ジクロフェナクナトリウムはＦＵＪＩＦＩＬＭ製、ニカルジピン塩酸塩は東京化成工業製をそれぞれ用いた。ＰＢＳは本実施例において３種類用いており、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（Ｇｉｂｃｏ製）（ＰＢＳの組成はリン酸水素二ナトリウム・７水和物 ０．７９５ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム ９ｍｇ／ｍＬ、リン酸二水素カリウム ０．１４４ｍｇ／ｍＬ）、Ｄ－ＰＢＳ（－）（ＦＵＪＩＦＩＬＭ製）（ＰＢＳの組成はリン酸水素二ナトリウム １．１５ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム ８ｍｇ／ｍＬ、塩化カリウム ０．２ｍｇ／ｍＬ、リン酸二水素カリウム ０．２ｍｇ／ｍＬ）、又は精製水にリン酸水素二ナトリウム・１２水和物（Ｍｅｒｃｋ製）２．９ｍｇ／ｍＬ、塩化カリウム（Ｍｅｒｃｋ製）０．２ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム（Ｍｅｒｃｋ製）８．０１ｍｇ／ｍＬ、及びリン酸カリウム（Ｍｅｒｃｋ製）０．２ｍｇ／ｍＬの割合で溶解させる方法により調製したＰＢＳである。なお、本実施例において、ＳＯＬＵＰＬＵＳ（登録商標）はＳｏｌ．とＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）はＰｌｕ．と称することもある。また、本実施例において、Ｓｏｌ．及びＰｌｕ．の濃度に用いる「％」は「％（ｗ／ｗ）」を意味するものとする。例えば、１８％Ｓｏｌ．は１８％（ｗ／ｗ）ＳＯＬＵＰＬＵＳ（登録商標）を意味する。
【0076】
実験１：基剤の検討
＜調製例１－１＞Ｓｏｌ．基剤溶液の調製
Ｓｏｌ．を３ｇ量り取り、精製水７ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、３０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例１）を調製した。同様にして、Ｓｏｌ．の投入量を変更することにより、２８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例２）、２５％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例３）、２０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例４）、１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例５）、１５％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例６）、及び１０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例７）を調製した。
＜調製例１－１＞Ｓｏｌ．基剤溶液の調製
Ｓｏｌ．を３ｇ量り取り、精製水７ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、３０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例１）を調製した。同様にして、Ｓｏｌ．の投入量を変更することにより、２８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例２）、２５％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例３）、２０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例４）、１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例５）、１５％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例６）、及び１０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例７）を調製した。
【0077】
＜調製例１－２＞Ｐｌｕ．基剤溶液の調製
Ｐｌｕ．を３．４ｇ、３．０ｇ又は２．８ｇ量り取り、それぞれＰＢＳ１６．６ｍＬに投入し、約４℃条件下でＰｌｕ．を溶解させることにより、１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液（実施例８）、１５％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液（実施例９）、及び１４％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液（実施例１０）を調製した。
Ｐｌｕ．を３．４ｇ、３．０ｇ又は２．８ｇ量り取り、それぞれＰＢＳ１６．６ｍＬに投入し、約４℃条件下でＰｌｕ．を溶解させることにより、１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液（実施例８）、１５％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液（実施例９）、及び１４％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液（実施例１０）を調製した。
【0078】
＜試験例１－１＞基剤溶液のゲル形成能試験
調製例１－１及び調製例１－２で調製した基剤溶液（実施例１～１０）について、２５℃又は３７℃におけるゲル形成能を評価した。各基剤溶液をプラスチックシャーレ（１０００－０３５、ＩＷＡＫＩ製）上に０．３ｍＬを滴下して蓋をした後、２５℃又は３７℃に設定したウォーターバス（ＴＲ－２Ａ、アズワン製）の水面上に１０分間静置させた（Ｎ＝２）。静置開始から１０分後に各プラスチックシャーレを取り出し、直ちに倒立させ、倒立から１０秒間の基剤溶液の挙動を目視確認した。評価は以下の３パターンのいずれかで行い、２回とも（１）の場合は「●」、（１）と（２）の組み合わせの場合は「〇」、２回とも（２）の場合は「▲」、（２）と（３）の場合は「△」、２回とも（３）の場合は「×」、試験未実施の場合は「－」のマークを表１に示した。
（１）１０秒間、「落下」及び「横に流れた」のいずれも確認しなかった、
（２）５秒以上～１０秒未満で「落下」及び／又は「横に流れた」を確認した、
（３）倒立直後～５秒未満で「落下」及び／又は「横に流れた」を確認した。
調製例１－１及び調製例１－２で調製した基剤溶液（実施例１～１０）について、２５℃又は３７℃におけるゲル形成能を評価した。各基剤溶液をプラスチックシャーレ（１０００－０３５、ＩＷＡＫＩ製）上に０．３ｍＬを滴下して蓋をした後、２５℃又は３７℃に設定したウォーターバス（ＴＲ－２Ａ、アズワン製）の水面上に１０分間静置させた（Ｎ＝２）。静置開始から１０分後に各プラスチックシャーレを取り出し、直ちに倒立させ、倒立から１０秒間の基剤溶液の挙動を目視確認した。評価は以下の３パターンのいずれかで行い、２回とも（１）の場合は「●」、（１）と（２）の組み合わせの場合は「〇」、２回とも（２）の場合は「▲」、（２）と（３）の場合は「△」、２回とも（３）の場合は「×」、試験未実施の場合は「－」のマークを表１に示した。
（１）１０秒間、「落下」及び「横に流れた」のいずれも確認しなかった、
（２）５秒以上～１０秒未満で「落下」及び／又は「横に流れた」を確認した、
（３）倒立直後～５秒未満で「落下」及び／又は「横に流れた」を確認した。
【0079】
＜試験例１－２＞基剤溶液の複素粘度の確認
調製例１－１及び調製例１－２で調製した各基剤溶液（実施例１～１０）について、レオメーター（ＭＣＲ３０２、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）を用いて、プレート（ＭＥＡＳＵＲＩＮＧ ＣＯＮＥ ＣＰ２５－２）、フード（Ｈ－ＰＴＤ２００）、０．３ｍｍのギャップの装備で、０．３ｍＬのサンプル量とし、せん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒、ノーマルフォース０Ｎ、トルク信頼範囲は１μＮ・ｍ以上の条件で、サンプルを昇温させたときの経時的な複素粘度を測定した（Ｎ＝３）。トルク信頼範囲を超えない場合は定量限界（ＬＯＱ：Ｌｉｍｉｔ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）未満とした。サンプル温度が２５℃を複素粘度の測定開始時点とし、２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させ、３７℃到達後は１０分間測定を継続した。結果はすべて平均±標準偏差で示した。
調製例１－１及び調製例１－２で調製した各基剤溶液（実施例１～１０）について、レオメーター（ＭＣＲ３０２、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）を用いて、プレート（ＭＥＡＳＵＲＩＮＧ ＣＯＮＥ ＣＰ２５－２）、フード（Ｈ－ＰＴＤ２００）、０．３ｍｍのギャップの装備で、０．３ｍＬのサンプル量とし、せん断ひずみ５％、角周波数５０ｒａｄ／秒、ノーマルフォース０Ｎ、トルク信頼範囲は１μＮ・ｍ以上の条件で、サンプルを昇温させたときの経時的な複素粘度を測定した（Ｎ＝３）。トルク信頼範囲を超えない場合は定量限界（ＬＯＱ：Ｌｉｍｉｔ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）未満とした。サンプル温度が２５℃を複素粘度の測定開始時点とし、２５℃から３７℃まで１℃／１０秒の昇温速度で昇温させ、３７℃到達後は１０分間測定を継続した。結果はすべて平均±標準偏差で示した。
【0080】
【表1】
【0081】
結果を表１に示す（実施例８については表５にも示す）。ゲル形成能について、２５％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例３）は２５℃でゲルを形成せず、３７℃でゲルを形成した。２８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例２）は２５℃で徐々にゲルを形成する傾向がみられ、３０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例１）は２５℃でゲルを形成した。１０～２０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例４～７）は、３７℃でゲルを形成しなかった。なお、実施例３及び４について、３７℃に設定したウォーターバスの水面上に３０分間静置させたところ、ゲルを形成した。
【0082】
複素粘度について、２５℃において、１０～２５％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例３～７）は複素粘度が１０００ｍＰa・ｓ未満であり、２８～３０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例１～２）は１０００ｍＰa・ｓ以上であった。３７℃において、１０～２０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例４～７）の複素粘度は２０００ｍＰa・ｓ未満であり、２５～３０％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例１～３）は２０００ｍＰa・ｓ以上であった。
【0083】
実験２：耳内投与に許容される医薬品添加物の検討
耳内投与用の医薬組成物は耳への刺激性がないものが好ましいため、Ｓｏｌ．基剤溶液について、耳への刺激性がない医薬品添加物をさらに検討した。
耳内投与用の医薬組成物は耳への刺激性がないものが好ましいため、Ｓｏｌ．基剤溶液について、耳への刺激性がない医薬品添加物をさらに検討した。
【0084】
＜調製例２－１＞塩溶液（目標浸透圧２００ｍＯｓｍ）の調製
浸透圧が約２００ｍＯｓｍとなる濃度の塩溶液を調製した。具体的には、表２の「添加した塩の種類」に記載した各塩について、それぞれ表２の「塩の添加量（ｇ）」の欄に記載した量を量り取り、精製水２００ｍＬに溶解させることで、２０種類の塩溶液（実施例１１～３０）を調製した。なお、以後の塩溶液の濃度において「％」は「％（ｗ／ｖ）」を意味する。
浸透圧が約２００ｍＯｓｍとなる濃度の塩溶液を調製した。具体的には、表２の「添加した塩の種類」に記載した各塩について、それぞれ表２の「塩の添加量（ｇ）」の欄に記載した量を量り取り、精製水２００ｍＬに溶解させることで、２０種類の塩溶液（実施例１１～３０）を調製した。なお、以後の塩溶液の濃度において「％」は「％（ｗ／ｖ）」を意味する。
【0085】
＜試験例２－１＞塩溶液の浸透圧の測定
調製例２－１で調製した各塩溶液（実施例１１～３０）について、浸透圧を測定した。浸透圧の測定は自動浸透圧分析装置（ＯＭ－６０５０、ＡＲＫＲＡＹ製）を用い、ＡＲＫＲＡＹの校正基準値と薬事関係法に準じた校正法で実施した。
調製例２－１で調製した各塩溶液（実施例１１～３０）について、浸透圧を測定した。浸透圧の測定は自動浸透圧分析装置（ＯＭ－６０５０、ＡＲＫＲＡＹ製）を用い、ＡＲＫＲＡＹの校正基準値と薬事関係法に準じた校正法で実施した。
【0086】
【表2】
【0087】
結果を表２に示す。各塩溶液の浸透圧は１８７～２１０ｍＯｓｍの範囲内であった。
【0088】
＜調製例２－２＞１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液の調製
Ｓｏｌ．を２０ｇ（又は１０ｇ）量り取り、調製例２－１で調製した各塩溶液８０ｇ（又は４０ｇ）に投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－各塩からなる基剤溶液を調製した。次に、ＰＳ２０を１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に溶解させることで調製した０．０５％（ｖ／ｖ）ＰＳ２０含有ＰＢＳを２ｍＬ量り取り、２０％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液から１８ｍＬ量り取ったものと混合し、表３に記載された０．００５％ＰＳ２０含有１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液（実施例３１～５０）を調製した。同様に、上記塩溶液の代わりに精製水又は１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いた０．００５％ＰＳ２０含有１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例５１）及び０．００５％ＰＳ２０含有１８％Ｓｏｌ．－ＰＢＳからなる基剤溶液（実施例５２）を調製した。
Ｓｏｌ．を２０ｇ（又は１０ｇ）量り取り、調製例２－１で調製した各塩溶液８０ｇ（又は４０ｇ）に投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－各塩からなる基剤溶液を調製した。次に、ＰＳ２０を１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に溶解させることで調製した０．０５％（ｖ／ｖ）ＰＳ２０含有ＰＢＳを２ｍＬ量り取り、２０％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液から１８ｍＬ量り取ったものと混合し、表３に記載された０．００５％ＰＳ２０含有１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液（実施例３１～５０）を調製した。同様に、上記塩溶液の代わりに精製水又は１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いた０．００５％ＰＳ２０含有１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例５１）及び０．００５％ＰＳ２０含有１８％Ｓｏｌ．－ＰＢＳからなる基剤溶液（実施例５２）を調製した。
【0089】
＜試験例２－２＞１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液のｐＨの測定
調製例２－２で調製した各基剤溶液（実施例３１～５２）のｐＨを測定した。測定にはｐＨメーター（ＨＭ－２５Ｇ、東亜ディーケーケー製）を用いた。結果を表３に記載する。各基剤溶液のｐＨは４～１０．５の範囲内であった。
調製例２－２で調製した各基剤溶液（実施例３１～５２）のｐＨを測定した。測定にはｐＨメーター（ＨＭ－２５Ｇ、東亜ディーケーケー製）を用いた。結果を表３に記載する。各基剤溶液のｐＨは４～１０．５の範囲内であった。
【0090】
【表3】
【0091】
＜調製例２－３＞１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液の調製
表４の「１８％Ｓｏｌ．に添加した塩及び濃度」に記載された各塩について、それぞれ表４の「塩の添加量（ｍｇ）」の欄に記載した量を量り取り、精製水２０ｍＬに溶解させることで、各塩溶液を調製した。Ｓｏｌ．を４．４ｇ量り取り、前記各塩溶液に投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、表４に記載の各１８％Ｓｏｌ．－塩の基剤溶液を調製した。同様に、塩溶液の代わりに精製水又は１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いて１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例７３）及び１８％Ｓｏｌ．－ＰＢＳからなる基剤溶液（実施例７４）を調製した。
表４の「１８％Ｓｏｌ．に添加した塩及び濃度」に記載された各塩について、それぞれ表４の「塩の添加量（ｍｇ）」の欄に記載した量を量り取り、精製水２０ｍＬに溶解させることで、各塩溶液を調製した。Ｓｏｌ．を４．４ｇ量り取り、前記各塩溶液に投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、表４に記載の各１８％Ｓｏｌ．－塩の基剤溶液を調製した。同様に、塩溶液の代わりに精製水又は１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いて１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例７３）及び１８％Ｓｏｌ．－ＰＢＳからなる基剤溶液（実施例７４）を調製した。
【0092】
＜試験例２－３＞１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液のゲル形成能の評価
調製例２－３で調製した各基剤溶液（実施例５３～７４）について、３７℃におけるゲル形成能を評価した。試験方法及び評価方法は試験例１－１と同じである。結果を表４に示す。
調製例２－３で調製した各基剤溶液（実施例５３～７４）について、３７℃におけるゲル形成能を評価した。試験方法及び評価方法は試験例１－１と同じである。結果を表４に示す。
【0093】
【表4】
【0094】
１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例７３）及び１８％Ｓｏｌ．－ＰＢＳからなる基剤溶液（実施例７４）は３７℃でゲル形成しなかったが、塩溶液を含む基剤溶液の一部はゲル形成（実施例５３～６２、６６～６７）した。実施例５６について、３７℃に設定したウォーターバスの水面上に３０分間静置させたところ、ゲルを形成した。なお、全ての１８％Ｓｏｌ．基剤溶液は２５℃においてゾル状態で流動性を有していることを目視確認できたことから、ゲル形成能試験は実施しなかった。
【0095】
実験３：１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液の複素粘度測定
医薬組成物を耳内に投与した後は、耳内で滞留させるために速やかに粘度上昇することが好ましい。そのため、各基剤溶液について複素粘度を評価した。
医薬組成物を耳内に投与した後は、耳内で滞留させるために速やかに粘度上昇することが好ましい。そのため、各基剤溶液について複素粘度を評価した。
【0096】
＜試験例３－１＞複素粘度の測定
調製例２－３で調製した各基剤溶液（実施例５３～７４）及び調製例１－２で調製した基剤溶液（実施例８）について、試験例１－２と同じ試験方法で経時的な複素粘度を測定した（Ｎ＝３）。各基剤溶液の２５℃及び３０℃、並びに３７℃到達後１分、５分、及び１０分時点における複素粘度を表５に示す。また、図１には一部の基剤溶液について複素粘度の経時的推移を示す。なお、図１のエラーバーは標準誤差を意味する。
調製例２－３で調製した各基剤溶液（実施例５３～７４）及び調製例１－２で調製した基剤溶液（実施例８）について、試験例１－２と同じ試験方法で経時的な複素粘度を測定した（Ｎ＝３）。各基剤溶液の２５℃及び３０℃、並びに３７℃到達後１分、５分、及び１０分時点における複素粘度を表５に示す。また、図１には一部の基剤溶液について複素粘度の経時的推移を示す。なお、図１のエラーバーは標準誤差を意味する。
【0097】
【表5】
【0098】
試験例１－２で実施した１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液は２５℃で５０００ｍＰａ・ｓを超える複素粘度を示し、昇温に伴い複素粘度は増加した。一方で、Ｓｏｌ．を基剤の一部とした基剤溶液はいずれも２５℃においては約１００ｍＰａ・ｓ以下の複素粘度を示した。昇温に伴い、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、クエン酸水素二ナトリウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、又は硫酸ナトリウムを含む基剤溶液は複素粘度が上昇し、３７℃到達後１分時点に、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、及び硫酸ナトリウムが２０００ｍＰａ・ｓ以上となった。クエン酸三アンモニウム、クエン酸水素二ナトリウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、又は酒石酸ナトリウムを含む基剤溶液は３７℃到達後５分時点で複素粘度が２０００ｍＰａ・ｓ以上となった。一部の基剤溶液については３７℃到達後１０分まで複素粘度を測定した。１８％Ｓｏｌ．基剤溶液及び１８％Ｓｏｌ．－ＰＢＳからなる基剤溶液は３７℃到達後１０分時点でも１０００ｍＰａ・ｓ以下であった。また、１８％Ｓｏｌ．に塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、酢酸アンモニウム、又は炭酸アンモニウムを含む基剤溶液に関しても、３７℃到達後１０分時点における複素粘度は１０００ｍＰａ・ｓ以下であった。
【0099】
＜試験例３－２＞３７℃におけるゲル形成能の評価
調製例２－３で調製した各基剤溶液のうち、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、クエン酸水素二ナトリウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、又は硫酸ナトリウムを含む基剤溶液について、３７℃で１分静置したときのゲル形成能を評価した。試験方法及び評価方法については静置時間を１分間に短縮したこと以外は試験例１－１と同じである。
調製例２－３で調製した各基剤溶液のうち、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、クエン酸三アンモニウム、クエン酸水素二ナトリウム、コハク酸二ナトリウム、炭酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、又は硫酸ナトリウムを含む基剤溶液について、３７℃で１分静置したときのゲル形成能を評価した。試験方法及び評価方法については静置時間を１分間に短縮したこと以外は試験例１－１と同じである。
【0100】
結果を表６に示す。１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム基剤溶液、１８％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三カリウム基剤溶液、及び１８％Ｓｏｌ．－１．１％硫酸ナトリウム基剤溶液の３種類はゲル形成が見られた。
【0101】
【表6】
【0102】
実験４：１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液における塩の濃度範囲の検討
実験２及び実験３においては、塩の濃度について、浸透圧が約２００ｍＯｓｍとなるように調製したが、浸透圧が約３００ｍＯｓｍ又は約１００ｍＯｓｍとなる濃度の塩溶液を調製し、ゲル形成能及び複素粘度について評価した。
実験２及び実験３においては、塩の濃度について、浸透圧が約２００ｍＯｓｍとなるように調製したが、浸透圧が約３００ｍＯｓｍ又は約１００ｍＯｓｍとなる濃度の塩溶液を調製し、ゲル形成能及び複素粘度について評価した。
【0103】
＜調製例４－１＞塩溶液（目標浸透圧３００ｍＯｓｍ）の調製
表７に記載した各種塩について、それぞれ表７に記載した「塩の添加量（ｇ）」の欄に記載した量を量り取り、精製水１００ｍＬに溶解させることで、実施例７５～９１の塩溶液を調製した。
表７に記載した各種塩について、それぞれ表７に記載した「塩の添加量（ｇ）」の欄に記載した量を量り取り、精製水１００ｍＬに溶解させることで、実施例７５～９１の塩溶液を調製した。
【0104】
＜調製例４－２＞塩溶液（目標浸透圧１００ｍＯｓｍ）の調製
表７に記載した各種塩について、それぞれ表７に記載した「塩の添加量（ｇ）」の欄に記載した量を量り取り、精製水１００ｍＬに溶解させることで、実施例９２～９５の塩溶液を調製した。
表７に記載した各種塩について、それぞれ表７に記載した「塩の添加量（ｇ）」の欄に記載した量を量り取り、精製水１００ｍＬに溶解させることで、実施例９２～９５の塩溶液を調製した。
【0105】
＜試験例４－１＞塩溶液の浸透圧の測定
調製例４－１及び４－２で調製した実施例７５～９５の塩溶液について、浸透圧を測定した。浸透圧の測定方法は試験例２－１と同じである。結果を表７に示す。各塩溶液の浸透圧は２８１～３０４ｍＯｓｍの範囲内又は９５～１１１ｍＯｓｍの範囲内であった。
調製例４－１及び４－２で調製した実施例７５～９５の塩溶液について、浸透圧を測定した。浸透圧の測定方法は試験例２－１と同じである。結果を表７に示す。各塩溶液の浸透圧は２８１～３０４ｍＯｓｍの範囲内又は９５～１１１ｍＯｓｍの範囲内であった。
【0106】
【表7】
【0107】
＜調製例４－３＞１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液（目標浸透圧３００ｍＯｓｍ）の調製
Ｓｏｌ．を２ｇ量り取り、調製例４－１で調製した各塩溶液８ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液をそれぞれ調製した。前記の各２０％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液１．８ｍＬ（又は１．３５ｍＬ）に対し精製水を０．２ｍＬ（又は０．１５ｍＬ）添加することにより、各種１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液（実施例９６～１０５、１１０～１１６）を調製した。
Ｓｏｌ．を２ｇ量り取り、調製例４－１で調製した各塩溶液８ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液をそれぞれ調製した。前記の各２０％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液１．８ｍＬ（又は１．３５ｍＬ）に対し精製水を０．２ｍＬ（又は０．１５ｍＬ）添加することにより、各種１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液（実施例９６～１０５、１１０～１１６）を調製した。
【0108】
＜調製例４－４＞１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液（目標浸透圧１００ｍＯｓｍ）の調製
Ｓｏｌ．を２ｇ量り取り、調製例４－２で調製した各塩溶液８ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液をそれぞれ調製した。前記の各２０％Ｓｏｌ．溶液１．８ｍＬ（又は１．３５ｍＬ）に対し精製水を０．２ｍＬ（又は０．１５ｍＬ）添加することにより、各種１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液（実施例１０６～１０９）を調製した。
Ｓｏｌ．を２ｇ量り取り、調製例４－２で調製した各塩溶液８ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液をそれぞれ調製した。前記の各２０％Ｓｏｌ．溶液１．８ｍＬ（又は１．３５ｍＬ）に対し精製水を０．２ｍＬ（又は０．１５ｍＬ）添加することにより、各種１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液（実施例１０６～１０９）を調製した。
【0109】
＜試験例４－２＞ゲル形成能の評価
調製例４－３及び４－４で調製した各基剤溶液のうち一部（実施例９６～１０９）について、３７℃におけるゲル形成の有無を評価した（Ｎ＝２）。測定方法及び評価方法は試験例１－１と同じである。結果を表８に示す。
調製例４－３及び４－４で調製した各基剤溶液のうち一部（実施例９６～１０９）について、３７℃におけるゲル形成の有無を評価した（Ｎ＝２）。測定方法及び評価方法は試験例１－１と同じである。結果を表８に示す。
【0110】
【表8】
【0111】
試験例２－３でゲル形成しにくい基剤溶液について、クエン酸二水素ナトリウム（実施例９６）、クエン酸二水素カリウム（実施例９７）、クエン酸水素二アンモニウム（実施例９８）、四ホウ酸ナトリウム（実施例１００）、酢酸ナトリウム（実施例９９）を含む基剤溶液については塩濃度を等張付近まで上げることでゲル形成が見られた。一方、塩化ナトリウム（実施例１０１）、塩化カリウム（実施例１０２）、塩化カルシウム（実施例１０３）、酢酸アンモニウム（実施例１０４）、炭酸アンモニウム（実施例１０５）を含む基剤溶液は塩濃度を等張まで上げてもゲル形成しなかった。なお、クエン酸三ナトリウムを含む基剤溶液（実施例１０６）は塩濃度を下げてもゲル形成が見られた。
【0112】
＜試験例４－３＞複素粘度の測定
調製例４－３で調製した各基剤溶液（実施例９６～１０５、１１０～１１６）について、複素粘度を測定した（Ｎ＝３）。試験方法は３７℃到達後の測定時間以外、試験例１－２と同じである。
調製例４－３で調製した各基剤溶液（実施例９６～１０５、１１０～１１６）について、複素粘度を測定した（Ｎ＝３）。試験方法は３７℃到達後の測定時間以外、試験例１－２と同じである。
【0113】
【表9】
【0114】
結果を表９に示す。複素粘度が比較的速く増加する基剤溶液について、２５℃、及び３７℃到達後５分時点の複素粘度を表９に示す。
【0115】
実施例９６～１０５、１１０～１１６はいずれも２５℃時点における複素粘度が５００ｍＰａ・ｓ未満であり、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、酢酸アンモニウム、炭酸アンモニウムを含有する基剤溶液以外の基剤溶液については３７℃到達後５分時点で複素粘度が１６５０ｍＰａ・ｓ以下であった。クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウムを含有する基剤溶液は３７℃昇温後５分で特に高い複素粘度となった。塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、酢酸アンモニウム、炭酸アンモニウムを含有する基剤溶液については、３７℃到達後１０分時点まで複素粘度を測定したが、いずれも３０００ｍＰａ・ｓ以下であった。
【0116】
実験５：Ｓｏｌ．濃度範囲の検討
Ｓｏｌ．の濃度を変更したときの基剤溶液のゲル形成能、複素粘度、及びゾル－ゲル転移点について評価した。
Ｓｏｌ．の濃度を変更したときの基剤溶液のゲル形成能、複素粘度、及びゾル－ゲル転移点について評価した。
【0117】
＜調製例５＞各濃度のＳｏｌ．－クエン酸三ナトリウム基剤溶液の調製
表１０に記載の基剤溶液（実施例１１７～１３４）を調製した。具体的には、まず１．０％、１．９％、又は２．７％（ｗ／ｖ）のクエン酸三ナトリウム溶液を調製し、表１０に記載の重量比となるようＳｏｌ．を量り取って投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、各濃度のＳｏｌ．－クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。
表１０に記載の基剤溶液（実施例１１７～１３４）を調製した。具体的には、まず１．０％、１．９％、又は２．７％（ｗ／ｖ）のクエン酸三ナトリウム溶液を調製し、表１０に記載の重量比となるようＳｏｌ．を量り取って投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、各濃度のＳｏｌ．－クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。
【0118】
＜試験例５－１＞ゲル形成能評価
調製例５で調製した基剤溶液について、３７℃におけるゲル形成能を検討した（Ｎ＝２）。一部の処方については２５℃におけるゲル形成能も検討した。試験方法は試験例１－１と同じである。
調製例５で調製した基剤溶液について、３７℃におけるゲル形成能を検討した（Ｎ＝２）。一部の処方については２５℃におけるゲル形成能も検討した。試験方法は試験例１－１と同じである。
【0119】
＜試験例５－２＞複素粘度の測定
調製例５で調製した各基剤溶液について複素粘度を測定した。試験方法等は試験例１－２と同じである。
調製例５で調製した各基剤溶液について複素粘度を測定した。試験方法等は試験例１－２と同じである。
【0120】
＜試験例５－３＞ゾル－ゲル転移点の測定
調製例５及び１－１で調製した基剤溶液の一部について、ゾル－ゲル転移点を測定した（Ｎ＝３）。なお、ゾル－ゲル転移点を測定したサンプルについては、測定前に０．０５％ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液を、基剤溶液のＰＳ２０濃度が０．００５％となるように添加されている。ゾル－ゲル転移点の測定には、レオメーター（ＭＣＲ３０２、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）を用い、プレートはＭＥＡＳＵＲＩＮＧ ＣＯＮＥ ＣＰ２５－２、ギャップは０．３ｍｍ、サンプル量は０．３ｍＬ、せん断ひずみは５％、角周波数は５０ｒａｄ／秒、サンプル温度が２５℃（又は１０℃）をゾル－ゲル転移点の測定開始時点とし、１０秒あたり１℃上昇する条件で最高４５℃まで加温した。
調製例５及び１－１で調製した基剤溶液の一部について、ゾル－ゲル転移点を測定した（Ｎ＝３）。なお、ゾル－ゲル転移点を測定したサンプルについては、測定前に０．０５％ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液を、基剤溶液のＰＳ２０濃度が０．００５％となるように添加されている。ゾル－ゲル転移点の測定には、レオメーター（ＭＣＲ３０２、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）を用い、プレートはＭＥＡＳＵＲＩＮＧ ＣＯＮＥ ＣＰ２５－２、ギャップは０．３ｍｍ、サンプル量は０．３ｍＬ、せん断ひずみは５％、角周波数は５０ｒａｄ／秒、サンプル温度が２５℃（又は１０℃）をゾル－ゲル転移点の測定開始時点とし、１０秒あたり１℃上昇する条件で最高４５℃まで加温した。
【0121】
【表10】
【0122】
結果を表１０に示す。Ｓｏｌ．濃度が１０％でクエン酸三ナトリウム濃度が１．０％の基剤溶液（実施例１３４）は３７℃でゲルを形成せず、Ｓｏｌ．濃度を１５％に上げた基剤溶液（実施例１３３）ではゲルの形成が見られたが、複素粘度は３７℃到達後１０分時点で約９５０ｍＰａ・ｓであった。
【0123】
試験例５－２の３７℃到達後１０分時点の複素粘度、試験例５－３のゾル－ゲル転移点との関係を図２に示す。基剤溶液中のＳｏｌ．濃度及びクエン酸三ナトリウム濃度に依存して複素粘度及びゾル－ゲル転移点は変化した。
【0124】
実験６：ヒトＨＢ－ＥＧＦを含有する医薬組成物の複素粘度
薬物が医薬組成物の複素粘度に与える影響を評価した。具体的には、１８％Ｓｏｌ．基剤溶液又は１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム基剤溶液に薬物としてヒトＨＢ－ＥＧＦを含有したときの複素粘度を評価した。
薬物が医薬組成物の複素粘度に与える影響を評価した。具体的には、１８％Ｓｏｌ．基剤溶液又は１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム基剤溶液に薬物としてヒトＨＢ－ＥＧＦを含有したときの複素粘度を評価した。
【0125】
＜調製例６－１＞１８％Ｓｏｌ．基剤溶液及びＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液の調製
Ｓｏｌ．を２ｇ量り取り、精製水８ｇにＳｏｌ．に投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．基剤溶液を調製した。前記溶液１．８ｍＬに精製水０．２ｍＬ又はＨＢ－ＥＧＦ溶液（ヒトＨＢ－ＥＧＦ １５０μｇ／ｍＬ及び０．０５％ＰＳ２０含有ＰＳ２０／ＰＢＳ溶液、旭硝子製）０．２ｍＬを添加し、１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例１３５）及び１５μｇ／ｍＬ ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１３６）を調製した。なお、本調製で使用したＰＢＳは、精製水にリン酸水素二ナトリウム・１２水和物２．９ｍｇ／ｍＬ、塩化カリウム０．２ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム８．０１ｍｇ／ｍＬ、及びリン酸二水素カリウム０．２ｍｇ／ｍＬの割合で溶解させる方法により調製した。
Ｓｏｌ．を２ｇ量り取り、精製水８ｇにＳｏｌ．に投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．基剤溶液を調製した。前記溶液１．８ｍＬに精製水０．２ｍＬ又はＨＢ－ＥＧＦ溶液（ヒトＨＢ－ＥＧＦ １５０μｇ／ｍＬ及び０．０５％ＰＳ２０含有ＰＳ２０／ＰＢＳ溶液、旭硝子製）０．２ｍＬを添加し、１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例１３５）及び１５μｇ／ｍＬ ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１３６）を調製した。なお、本調製で使用したＰＢＳは、精製水にリン酸水素二ナトリウム・１２水和物２．９ｍｇ／ｍＬ、塩化カリウム０．２ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム８．０１ｍｇ／ｍＬ、及びリン酸二水素カリウム０．２ｍｇ／ｍＬの割合で溶解させる方法により調製した。
【0126】
＜調製例６－２＞１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム基剤溶液及びＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液の調製
精製水８ｇにクエン酸三ナトリウムを１６８ｍｇ溶解し、さらにＳｏｌ．を２ｇ量り取って投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。前記溶液１．８ｍＬに精製水０．２ｍＬ又はＨＢ－ＥＧＦ溶液０．２ｍＬを添加し、１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム基剤溶液（実施例１３７）及び１５μｇ／ｍＬ ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１３８）を調製した。
精製水８ｇにクエン酸三ナトリウムを１６８ｍｇ溶解し、さらにＳｏｌ．を２ｇ量り取って投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。前記溶液１．８ｍＬに精製水０．２ｍＬ又はＨＢ－ＥＧＦ溶液０．２ｍＬを添加し、１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム基剤溶液（実施例１３７）及び１５μｇ／ｍＬ ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１３８）を調製した。
【0127】
＜試験例６－１＞複素粘度の測定
調製例６－１及び６－２で調製した各基剤溶液又は各溶液について、複素粘度を測定した（Ｎ＝３）。試験方法は試験例１－２と同じである。結果を表１１に示す。
調製例６－１及び６－２で調製した各基剤溶液又は各溶液について、複素粘度を測定した（Ｎ＝３）。試験方法は試験例１－２と同じである。結果を表１１に示す。
【0128】
【表11】
【0129】
１８％Ｓｏｌ．基剤溶液（実施例１３５）及び１５μｇ／ｍＬ ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１３６）と１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム基剤溶液（実施例１３７）及び１５μｇ／ｍＬ ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１３８）は、いずれも両者で複素粘度に大きな違いは見られなかった。
【0130】
実験７：耳内投与用医薬組成物の薬物徐放性の評価
Ｓｏｌ．基剤溶液又はＳｏｌ．－塩基剤溶液について、薬物徐放性を複数のモデル薬物を用いて評価した。モデル薬物としては、たんぱく質の薬物モデルとして、ＦＩＴＣデキストラン（１０ｋＤａ、７０ｋＤａ、１５０ｋＤａ）（ＦＩＴＣデキストランは以後ＦＩＴＣ－ＤＥＸと称することもある）、分配係数の異なる酸性低分子の薬物モデルとしてアセトアミノフェン及びジクロフェナクナトリウム、塩基性低分子の薬物モデルとしてニカルジピン塩酸塩を用いた。
Ｓｏｌ．基剤溶液又はＳｏｌ．－塩基剤溶液について、薬物徐放性を複数のモデル薬物を用いて評価した。モデル薬物としては、たんぱく質の薬物モデルとして、ＦＩＴＣデキストラン（１０ｋＤａ、７０ｋＤａ、１５０ｋＤａ）（ＦＩＴＣデキストランは以後ＦＩＴＣ－ＤＥＸと称することもある）、分配係数の異なる酸性低分子の薬物モデルとしてアセトアミノフェン及びジクロフェナクナトリウム、塩基性低分子の薬物モデルとしてニカルジピン塩酸塩を用いた。
【0131】
＜調製例７－１＞ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）含有溶液の調製
ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）３０ｍｇを０．０５％（ｖ／ｖ）ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液に溶解して３ｍＬとし、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有溶液を調製した。
ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）３０ｍｇを０．０５％（ｖ／ｖ）ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液に溶解して３ｍＬとし、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有溶液を調製した。
【0132】
また、２２．２％Ｓｏｌ．－２．１％（ｗ／ｖ）クエン酸三ナトリウム基剤溶液１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有２０％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１４３）を調製した。同様に、２２．２％Ｓｏｌ．－１．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液、２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液、１６．７％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液、１１．１％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液、又は１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）各１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、表１２の実施例１３９～１４２及び１４４に記載の０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）含有溶液を調製した。
【0133】
調製例２－２と同様の方法で調製した２０％Ｓｏｌ．基剤溶液１３５０μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを１５０μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１４５）を調製した。
【0134】
調製例２－１で調製したクエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、又はクエン酸二水素ナトリウムを含む塩溶液について、それぞれＳｏｌ．を２０％（ｗ／ｗ）含有する２０％Ｓｏｌ．－各塩溶液の基剤溶液を調製した。前記基剤溶液１３５０μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを１５０μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１８％Ｓｏｌ．－各塩溶液（実施例１４６～１４８）を調製した。
【0135】
Ｐｌｕ．を１８．９ｇ量り取り、ＰＢＳ８１．１ｇに投入し、約４℃条件下でＰｌｕ．を溶解させることにより、１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液を調製した。前記基剤溶液２７００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを３００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１４９）を調製した。
【0136】
＜試験例７－１＞ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）含有溶液の溶出試験
調製例７－１で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。溶出試験はＴｒａｎｓ ｗｅｌｌ（６ｗｅｌｌ、１２ｍｍ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｉｎｓｅｒｔｓ、０．４μｍ ｐｏｒｅ ｓｉｚｅ、Ｃｏｒｎｉｎｇ製）のウェルの下側に１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を２ｍＬ入れ、３７℃に設定したクロマトチャンバー（Ｍ－６００ＦＮ、ＴＡＩＴＥＣ製）でウェルごと加温した後、ウェルの上側に調製例７－１で調製した各溶液を０．５ｍＬ投与し、３７℃±２℃、１００回転／分で振盪することにより実施した。試験開始後１、２、４、６、及び２４時間時点で、ウェルの下側から０．５ｍＬサンプリングし、ウェルの下側にＰＢＳを０．５ｍＬ補液した。蛍光プレートリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ｉ３ｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ製）を用いて、励起波長４９４ｎｍ、測定波長５２２ｎｍでサンプル液のＦＩＴＣ濃度を測定した。
調製例７－１で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。溶出試験はＴｒａｎｓ ｗｅｌｌ（６ｗｅｌｌ、１２ｍｍ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｉｎｓｅｒｔｓ、０．４μｍ ｐｏｒｅ ｓｉｚｅ、Ｃｏｒｎｉｎｇ製）のウェルの下側に１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を２ｍＬ入れ、３７℃に設定したクロマトチャンバー（Ｍ－６００ＦＮ、ＴＡＩＴＥＣ製）でウェルごと加温した後、ウェルの上側に調製例７－１で調製した各溶液を０．５ｍＬ投与し、３７℃±２℃、１００回転／分で振盪することにより実施した。試験開始後１、２、４、６、及び２４時間時点で、ウェルの下側から０．５ｍＬサンプリングし、ウェルの下側にＰＢＳを０．５ｍＬ補液した。蛍光プレートリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ｉ３ｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ製）を用いて、励起波長４９４ｎｍ、測定波長５２２ｎｍでサンプル液のＦＩＴＣ濃度を測定した。
【0137】
【表12】
【0138】
結果を表１２に示す。ポリマーを含有する全ての溶液（実施例１４０～１４９）はＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）を徐放した。Ｓｏｌ．を含有する溶液は、Ｓｏｌ．の濃度上昇に伴い、試験開始後１時間時点における溶出率は低くなる傾向（実施例１４０～１４３）が見られたが、溶出率の差は１０％以下であった。クエン酸三ナトリウムの濃度の違い（実施例１４３及び１４４）による溶出率の差も１０％以下であった。また、１８％Ｓｏｌ．－塩基剤溶液（実施例１４２、１４６～１４８）は塩溶液の種類により溶出速度に多少の違いはあるものの、いずれも徐放性を示し、１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液（実施例１４９）より溶出速度は遅かった。
【0139】
＜調製例７－２＞ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（７０ｋＤａ）含有溶液の調製
ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（７０ｋＤａ）５０ｍｇをＤ－ＰＢＳに溶解し、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを５ｍＬ調製した。Ｄ－ＰＢＳ１８００μＬに、前記１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有ＰＢＳ溶液（実施例１５０）を調製した。
ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（７０ｋＤａ）５０ｍｇをＤ－ＰＢＳに溶解し、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを５ｍＬ調製した。Ｄ－ＰＢＳ１８００μＬに、前記１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有ＰＢＳ溶液（実施例１５０）を調製した。
【0140】
Ｐｌｕ．を５６．７ｇ量り取り、Ｄ－ＰＢＳ２４３．３ｇに投入し、約４℃条件下でＰｌｕ．を溶解させることにより１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液を調製した。前記基剤溶液１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１５１）を調製した。
【0141】
Ｓｏｌ．を６０．０ｇ量り取り、精製水２４０．０ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより２０％Ｓｏｌ．基剤溶液を調製した。前記基剤溶液１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１５２）を調製した。
【0142】
調製例２－１で調製したクエン酸三ナトリウム又はクエン酸三アンモニウムを含む塩溶液について、それぞれ２０％Ｓｏｌ．－各塩溶液の基剤溶液を調製した。前記基剤溶液１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１８％Ｓｏｌ．－各塩溶液（実施例１５３、１５４）を調製した。
【0143】
＜試験例７－２＞ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（７０ｋＤａ）含有溶液の溶出試験
調製例７－２で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は溶出試験液としてＤ－ＰＢＳを用いたこと以外、試験例７－１と同じであるが、測定は蛍光プレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ＰＲＯ、ＴＥＣＡＮ製）を用いて、励起波長４９４ｎｍ、測定波長５２２ｎｍでサンプル液のＦＩＴＣ濃度を測定した。
調製例７－２で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は溶出試験液としてＤ－ＰＢＳを用いたこと以外、試験例７－１と同じであるが、測定は蛍光プレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ＰＲＯ、ＴＥＣＡＮ製）を用いて、励起波長４９４ｎｍ、測定波長５２２ｎｍでサンプル液のＦＩＴＣ濃度を測定した。
【0144】
【表13】
【0145】
結果を表１３に示す。ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）と同様に、ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（７０ｋＤａ）についても、１８％Ｓｏｌ．を含有する溶液（実施例１５２～１５４）はいずれも徐放性を示し、１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１５１）より溶出速度は遅かった。
【0146】
＜調製例７－３＞ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１５０ｋＤａ）含有溶液の調製
ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１５０ｋＤａ）５０ｍｇをＤ－ＰＢＳに溶解し５ｍＬとし、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸとした。Ｄ－ＰＢＳ１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有ＰＢＳ溶液（実施例１５５）を調製した。
ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１５０ｋＤａ）５０ｍｇをＤ－ＰＢＳに溶解し５ｍＬとし、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸとした。Ｄ－ＰＢＳ１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有ＰＢＳ溶液（実施例１５５）を調製した。
【0147】
調製例７－２と同様の方法で調製した１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１５６）を調製した。
【0148】
調製例７－２と同様の方法で調製した２０％Ｓｏｌ．基剤溶液１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１５７）を調製した。
【0149】
調製例２－１で調製したクエン酸三ナトリウム又はクエン酸三アンモニウムを含む塩溶液について、それぞれ２０％Ｓｏｌ．－各塩溶液の基剤溶液を調製した。前記基剤１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１８％Ｓｏｌ．－各塩溶液（実施例１５８、１５９）を調製した。
【0150】
＜試験例７－３＞ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１５０ｋＤａ）含有溶液の溶出試験
調製例７－３で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は試験例７－２と同じである。測定は蛍光プレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ＰＲＯ、ＴＥＣＡＮ製）を用いて、励起波長４９４ｎｍ、測定波長５２２ｎｍでサンプル液のＦＩＴＣ濃度を測定した。
調製例７－３で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は試験例７－２と同じである。測定は蛍光プレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ＰＲＯ、ＴＥＣＡＮ製）を用いて、励起波長４９４ｎｍ、測定波長５２２ｎｍでサンプル液のＦＩＴＣ濃度を測定した。
【0151】
【表14】
【0152】
結果を表１４に示す。ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）及びＦＩＴＣ－ＤＥＸ（７０ｋＤａ）と同様に、１８％Ｓｏｌ．を含有する溶液（実施例１５７～１５９）はいずれも徐放性を示し、１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１５６）より溶出速度は遅かった。
【0153】
＜調製例７－４＞アセトアミノフェン含有溶液の調製
アセトアミノフェン１００ｍｇを０．０５％（ｖ／ｖ）ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液に溶解し１０ｍＬとし、１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェンとした。ＰＢＳ１０８０μＬに、１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェンを１２０μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェン含有ＰＢＳ溶液（実施例１６０）を調製した。
アセトアミノフェン１００ｍｇを０．０５％（ｖ／ｖ）ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液に溶解し１０ｍＬとし、１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェンとした。ＰＢＳ１０８０μＬに、１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェンを１２０μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェン含有ＰＢＳ溶液（実施例１６０）を調製した。
【0154】
調製例７－２で調製した１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液２７００μＬに、１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェンを３００μＬ混合し、０．１％アセトアミノフェン含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１６１）を調製した。
【0155】
調製例２－２と同様の方法で調製した２０％Ｓｏｌ．基剤溶液１０８０μＬに、１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェンを１２０μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェン含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１６２）を調製した。
【0156】
調製例２－１で調製したクエン酸三ナトリウム、クエン酸三アンモニウム、コハク酸二ナトリウム、又はクエン酸二水素ナトリウムを含む塩溶液について、それぞれ２０％Ｓｏｌ．－各塩溶液の基剤溶液を調製した。前記基剤溶液１０８０μＬに、１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェンを１５０μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）アセトアミノフェン含有１８％Ｓｏｌ．－各塩溶液（実施例１６３～１６６）を調製した。
【0157】
＜試験例７－４＞アセトアミノフェン含有溶液の溶出試験
調製例７－４で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は試験例７－１と同じであるが、測定はＨＰＬＣ（ＥＳＰＲＩＭＯ Ｄ５８３／Ｎ、Ｗａｔｅｒｓ製）を用いて、測定波長２５４ｎｍでサンプル液のアセトアミノフェン濃度を測定した。
調製例７－４で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は試験例７－１と同じであるが、測定はＨＰＬＣ（ＥＳＰＲＩＭＯ Ｄ５８３／Ｎ、Ｗａｔｅｒｓ製）を用いて、測定波長２５４ｎｍでサンプル液のアセトアミノフェン濃度を測定した。
【0158】
【表15】
【0159】
結果を表１５及び図３に示す。ポリマーを含有する全ての溶液（実施例１６１～１６６）はアセトアミノフェンを徐放した。１８％Ｓｏｌ．を含有する溶液（実施例１６２～１６６）の溶出速度は、いずれも１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１６１）より遅かった。
【0160】
＜調製例７－５＞ジクロフェナクナトリウム含有溶液の調製
ジクロフェナクナトリウム５０ｍｇをＤ－ＰＢＳに溶解し５ｍＬとし、１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウムとした。Ｄ－ＰＢＳ１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウムを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウム含有ＰＢＳ溶液（実施例１６７）を調製した。
ジクロフェナクナトリウム５０ｍｇをＤ－ＰＢＳに溶解し５ｍＬとし、１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウムとした。Ｄ－ＰＢＳ１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウムを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウム含有ＰＢＳ溶液（実施例１６７）を調製した。
【0161】
調製例７－２と同様の方法で調製した１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウムを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウム含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１６８）を調製した。
【0162】
調製例７－２と同様の方法で調製した２０％Ｓｏｌ．基剤溶液１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウムを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウム含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１６９）を調製した。
【0163】
調製例２－１で調製したクエン酸三ナトリウムの塩溶液を用いて２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。前記基剤溶液１８００μＬに、１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウムを２００μＬ混合し、０．１％（ｗ／ｖ）ジクロフェナクナトリウム含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１７０）を調製した。
【0164】
＜試験例７－５＞ジクロフェナクナトリウム含有溶液の溶出試験
調製例７－５で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は試験例７－２と同じであるが、測定はＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ｅ２６９５、Ｗａｔｅｒｓ製）を用いて、測定波長２４０ｎｍでサンプル液のジクロフェナクナトリウム濃度を測定した。
調製例７－５で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は試験例７－２と同じであるが、測定はＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ｅ２６９５、Ｗａｔｅｒｓ製）を用いて、測定波長２４０ｎｍでサンプル液のジクロフェナクナトリウム濃度を測定した。
【0165】
【表16】
【0166】
結果を表１６に示す。ポリマーを含有する全ての溶液（実施例１６８～１７０）はジクロフェナクナトリウムを徐放した。１８％Ｓｏｌ．を含有する溶液（実施例１６９、１７０）の溶出速度は、いずれも１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１６８）より遅かった。
【0167】
＜調製例７－６＞ニカルジピン塩酸塩含有溶液の調製
ニカルジピン塩酸塩２５ｍｇを精製水に溶解し５ｍＬとし、０．５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩とした。生理食塩水１８００μＬに、０．５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩を２００μＬ混合し、０．０５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩含有生理食塩水（実施例１７１）を調製した。
ニカルジピン塩酸塩２５ｍｇを精製水に溶解し５ｍＬとし、０．５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩とした。生理食塩水１８００μＬに、０．５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩を２００μＬ混合し、０．０５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩含有生理食塩水（実施例１７１）を調製した。
【0168】
調製例７－２と同様の方法で調製した１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液１８００μＬに、０．５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩を２００μＬ混合し、０．０５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１７２）を調製した。
【0169】
調製例７－２と同様の方法で調製した２０％Ｓｏｌ．基剤溶液１８００μＬに、０．５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩を２００μＬ混合し、０．０５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１７３）を調製した。
【0170】
調製例２－１で調製したクエン酸三ナトリウムを含む塩溶液を用いて、２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。前記基剤溶液１８００μＬに、０．５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩を２００μＬ混合し、０．０５％（ｗ／ｖ）ニカルジピン塩酸塩含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１７４）を調製した。
【0171】
＜試験例７－６＞ニカルジピン塩酸塩含有溶液の溶出試験
調製例７－６で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は溶出試験液として生理食塩水を用いたこと以外、試験例７－１と同じであるが、測定はＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ｅ２６９５、Ｗａｔｅｒｓ製）を用いて、測定波長２５４ｎｍでサンプル液のニカルジピン塩酸塩濃度を測定した。
調製例７－６で調製した各溶液について溶出試験を実施した（Ｎ＝２）。試験条件は溶出試験液として生理食塩水を用いたこと以外、試験例７－１と同じであるが、測定はＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ｅ２６９５、Ｗａｔｅｒｓ製）を用いて、測定波長２５４ｎｍでサンプル液のニカルジピン塩酸塩濃度を測定した。
【0172】
【表17】
【0173】
結果を表１７に示す。ポリマーを含有する全ての溶液（実施例１７２～１７４）はニカルジピン塩酸塩を徐放した。１８％Ｓｏｌ．を含有する溶液（実施例１７３、１７４）の溶出速度は、いずれも１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１７２）より遅かった。
【0174】
実験８：蛍光色素を用いた耳内滞留性の評価
Ｐｌｕ.又はＳｏｌ．を基剤とした基剤溶液にモデル薬物としてＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）を含有する各基剤溶液を用いて耳内滞留性を評価した。
Ｐｌｕ.又はＳｏｌ．を基剤とした基剤溶液にモデル薬物としてＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）を含有する各基剤溶液を用いて耳内滞留性を評価した。
【0175】
＜調製例８＞ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）含有溶液の調製
ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）１４ｍｇを精製水に溶解させて１ｍＬとし、１．４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ溶液とした。前記溶液１００μＬと１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）９００μＬとを混合し、０．１４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴ－ＤＥＸ含有ＰＢＳ溶液（実施例１７５：図４のＰＢＳ）を調製した。
ＦＩＴＣ－ＤＥＸ（１０ｋＤａ）１４ｍｇを精製水に溶解させて１ｍＬとし、１．４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ溶液とした。前記溶液１００μＬと１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）９００μＬとを混合し、０．１４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴ－ＤＥＸ含有ＰＢＳ溶液（実施例１７５：図４のＰＢＳ）を調製した。
【0176】
Ｐｌｕ．を１３．６ｇ量り取り、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）６６．４ｇに投入し、約４℃条件下でＰｌｕ．を溶解させることにより、１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液を調製した。ＦＩＴＣ－ＤＥＸ１４ｍｇを前記１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液に溶解させ１０ｍＬとし、０．１４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１７６：図４の１７％Ｐｌｕ．／ＰＢＳ）を調製した。
【0177】
Ｓｏｌ．を４ｇ量り取り、精製水１６ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．基剤溶液を調製した。また、Ｓｏｌ．を２０ｇ量り取り、ＰＢＳ８０ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－ＰＢＳ基剤溶液を調製した。１．４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ溶液１００μＬと前記２０％Ｓｏｌ．基剤溶液又は２０％Ｓｏｌ．－ＰＢＳ基剤溶液９００μＬとを混合し、０．１４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１７７：図４の１８％Ｓｏｌ．）及び０．１４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１８％Ｓｏｌ．－ＰＢＳ溶液（実施例１７８：図４の１８％Ｓｏｌ．／ＰＢＳ）を調製した。
【0178】
＜試験例８＞蛍光色素を用いた耳内滞留性の評価
調製例８で調製した各溶液について、ラット耳内における滞留試験を実施した（Ｎ＝４～６）。イソフルラン（フォーレン、アボット製）吸入麻酔下でラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）、７週齢）の鼓膜にローゼン氏探針（第一医科製）を用いて穴を開けた。この穴から各製剤５０μＬをマイクロピペット（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ２、エッペンドルフ製）を用いて投与した。投与完了と共に吸入麻酔を止め、ラットを覚醒させた。２４時間後にラットを麻酔下で放血処理・断頭し、中耳腔を採取した。採取した中耳腔内のＦＩＴＣ－ＤＥＸを回収し、蛍光プレートリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ｉ３ｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ製）を用いて耳内のＦＩＴＣ－ＤＥＸの残存率を測定した。
調製例８で調製した各溶液について、ラット耳内における滞留試験を実施した（Ｎ＝４～６）。イソフルラン（フォーレン、アボット製）吸入麻酔下でラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）、７週齢）の鼓膜にローゼン氏探針（第一医科製）を用いて穴を開けた。この穴から各製剤５０μＬをマイクロピペット（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ２、エッペンドルフ製）を用いて投与した。投与完了と共に吸入麻酔を止め、ラットを覚醒させた。２４時間後にラットを麻酔下で放血処理・断頭し、中耳腔を採取した。採取した中耳腔内のＦＩＴＣ－ＤＥＸを回収し、蛍光プレートリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ｉ３ｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ製）を用いて耳内のＦＩＴＣ－ＤＥＸの残存率を測定した。
【0179】
結果を図４に示す。なお、図４のエラーバーは標準偏差を意味する。投与２４時間後における残存率は、０．１４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有ＰＢＳ溶液（実施例１７５）は１０％未満であり、０．１４％（ｗ／ｖ）ＦＩＴＣ－ＤＥＸ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１７６）は約１４％、１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１７７及び実施例１７８）は４０～６０％程度であった。
【0180】
実験９：ＰＥＴイメージングによる耳内滞留性の評価
Ｓｏｌ．基剤溶液又はＳｏｌ．－クエン酸三ナトリウム基剤溶液の、耳内における滞留性を評価するため、薬物としてラットＨＢ－ＥＧＦに８９Ｚｒを標識した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦを用いて、ＰＥＴイメージングにより耳内滞留性を評価した。Ｓｏｌ．基剤溶液、Ｓｏｌ．－クエン酸三ナトリウム基剤溶液、キトサン基剤溶液、又はＰｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液に８９Ｚｒ標識ＨＢ－ＥＧＦを含有することにより各種溶液を調製し、前記各溶液をマウスの外耳道に投与し、一定期間放置後にＰＥＴ撮像を行った。得られたＰＥＴ画像からＨＢ－ＥＧＦを定量し、算出された残存量から耳内の放射能の残存率を計算することで、耳内滞留性を評価した。
Ｓｏｌ．基剤溶液又はＳｏｌ．－クエン酸三ナトリウム基剤溶液の、耳内における滞留性を評価するため、薬物としてラットＨＢ－ＥＧＦに８９Ｚｒを標識した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦを用いて、ＰＥＴイメージングにより耳内滞留性を評価した。Ｓｏｌ．基剤溶液、Ｓｏｌ．－クエン酸三ナトリウム基剤溶液、キトサン基剤溶液、又はＰｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液に８９Ｚｒ標識ＨＢ－ＥＧＦを含有することにより各種溶液を調製し、前記各溶液をマウスの外耳道に投与し、一定期間放置後にＰＥＴ撮像を行った。得られたＰＥＴ画像からＨＢ－ＥＧＦを定量し、算出された残存量から耳内の放射能の残存率を計算することで、耳内滞留性を評価した。
【0181】
＜調製例９－１＞２０％Ｓｏｌ．基剤溶液の調製
Ｓｏｌ．を４ｇ量り取り、精製水１６ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．基剤溶液を調製した。
Ｓｏｌ．を４ｇ量り取り、精製水１６ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．基剤溶液を調製した。
【0182】
＜調製例９－２＞２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液の調製
精製水にクエン酸三ナトリウムを４２０ｍｇ溶解し、クエン酸三ナトリウム溶液を２０ｍＬ調製した。Ｓｏｌ．を４ｇ量り取り、前記溶液１６ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。
精製水にクエン酸三ナトリウムを４２０ｍｇ溶解し、クエン酸三ナトリウム溶液を２０ｍＬ調製した。Ｓｏｌ．を４ｇ量り取り、前記溶液１６ｇに投入し、約４℃条件下でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。
【0183】
＜調製例９－３＞１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液の調製
Ｐｌｕ．を３．７８ｇ量り取り、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）１６．２２ｇに投入し、約４℃条件下でＰｌｕ．を溶解させることにより、１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液を調製した。
Ｐｌｕ．を３．７８ｇ量り取り、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）１６．２２ｇに投入し、約４℃条件下でＰｌｕ．を溶解させることにより、１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液を調製した。
【0184】
＜調製例９－４＞キトサン基剤溶液の調製
キトサン－乳酸プレポリマー（Ａｕｒａｔｉｏｎ（Ｓｔａｎｆｏｒｄ大学）製））（Kim et al.,J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 2014 Oct;102(7):1393-1406.）４５５μＬにフィブリノーゲン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂ製）４５μＬを加えて混合し、キトサン基剤溶液を調製した。
キトサン－乳酸プレポリマー（Ａｕｒａｔｉｏｎ（Ｓｔａｎｆｏｒｄ大学）製））（Kim et al.,J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 2014 Oct;102(7):1393-1406.）４５５μＬにフィブリノーゲン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂ製）４５μＬを加えて混合し、キトサン基剤溶液を調製した。
【0185】
＜調製例９－５＞０．２％ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液の調製
ＰＳ２０を４０ｍｇ量り取り、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を加えて溶解させ、０．２％ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液２０ｍＬを調製した。
ＰＳ２０を４０ｍｇ量り取り、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を加えて溶解させ、０．２％ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液２０ｍＬを調製した。
【0186】
＜調製例９－６＞ＤＦＯ－ＨＢ－ＥＧＦの調製
ラットＨＢ－ＥＧＦ（ｃｙｔ－１７０、Ｐｒｏｓｐｅｃ製）５００μｇを０．１ｍｏｌ／Ｌ炭酸水素ナトリウム溶液５００μＬに溶解した後に、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－Ｄｅｆｅｒｏｘａｍｉｎｅ（ＷО２００８／１２４４６７を参考に自社で合成）をＤＭＳＯ（ＤＭＳＯはＤｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅの略称）で溶解することで得た４０ｍｍｏｌ／Ｌのｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－Ｄｅｆｅｒｏｘａｍｉｎｅ溶液１０μＬと混合し、３７℃に設定されたインキュベーター（ＴｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒＣ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ製）内にて３００回転／分の速度で３０分間震盪させることで反応液を得た。反応液をＰＤ－１０カラム（１７０８５１０１、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）に添加した後に１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶液にて溶出し、溶出液を５００μＬずつ回収し、７番目及び８番目のフラクションを回収し、目的のタンパク質であるＤＦＯ－ＨＢ－ＥＧＦを調製した。
ラットＨＢ－ＥＧＦ（ｃｙｔ－１７０、Ｐｒｏｓｐｅｃ製）５００μｇを０．１ｍｏｌ／Ｌ炭酸水素ナトリウム溶液５００μＬに溶解した後に、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－Ｄｅｆｅｒｏｘａｍｉｎｅ（ＷО２００８／１２４４６７を参考に自社で合成）をＤＭＳＯ（ＤＭＳＯはＤｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅの略称）で溶解することで得た４０ｍｍｏｌ／Ｌのｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－Ｄｅｆｅｒｏｘａｍｉｎｅ溶液１０μＬと混合し、３７℃に設定されたインキュベーター（ＴｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒＣ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ製）内にて３００回転／分の速度で３０分間震盪させることで反応液を得た。反応液をＰＤ－１０カラム（１７０８５１０１、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）に添加した後に１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶液にて溶出し、溶出液を５００μＬずつ回収し、７番目及び８番目のフラクションを回収し、目的のタンパク質であるＤＦＯ－ＨＢ－ＥＧＦを調製した。
【0187】
＜調製例９－７＞
８９
Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＢＳ溶液及び
８９
Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＳ２０－ＰＢＳ溶液の調製
［８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｏｘａｌａｔｅの１ｍｏｌ／Ｌシュウ酸溶液２０μＬ（１０．５２－３８．５ＭＢｑ）に１ｍｏｌ／Ｌ炭酸ナトリウム溶液１８μＬを加えた後、０．５ｍｏｌ／Ｌ ＨＥＰＥＳ溶液（ＨＥＰＥＳはヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸を意味する）を８８μＬ加え、混和した。さらに調製例９－６で調製したＤＦＯ－ＨＢ－ＥＧＦ（フラクション７又は８）を５０μＬ加え、これを３７℃に設定したブロックインキュベーター（ＢＩ－５１６ｓ、ＡＳＴＥＣ製）を用いて３０～６０分間インキュベートし、反応させた。反応液を限外濾過膜（ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ ３Ｋ、Ａｍｉｃｏｎ製）に加え、さらにＰＢＳを加えて限外濾過精製を行うことで、目的の８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＢＳ溶液を得た（５．８０－９．０９ＭＢｑ）。さらに、得られた溶液と０．２％ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液とを３：１（ｖ／ｖ）で混合することで、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＳ２０－ＰＢＳ溶液を調製した。
［８９Ｚｒ］Ｚｒ－ｏｘａｌａｔｅの１ｍｏｌ／Ｌシュウ酸溶液２０μＬ（１０．５２－３８．５ＭＢｑ）に１ｍｏｌ／Ｌ炭酸ナトリウム溶液１８μＬを加えた後、０．５ｍｏｌ／Ｌ ＨＥＰＥＳ溶液（ＨＥＰＥＳはヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸を意味する）を８８μＬ加え、混和した。さらに調製例９－６で調製したＤＦＯ－ＨＢ－ＥＧＦ（フラクション７又は８）を５０μＬ加え、これを３７℃に設定したブロックインキュベーター（ＢＩ－５１６ｓ、ＡＳＴＥＣ製）を用いて３０～６０分間インキュベートし、反応させた。反応液を限外濾過膜（ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ ３Ｋ、Ａｍｉｃｏｎ製）に加え、さらにＰＢＳを加えて限外濾過精製を行うことで、目的の８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＢＳ溶液を得た（５．８０－９．０９ＭＢｑ）。さらに、得られた溶液と０．２％ＰＳ２０含有ＰＢＳ溶液とを３：１（ｖ／ｖ）で混合することで、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＳ２０－ＰＢＳ溶液を調製した。
【0188】
＜調製例９－８＞
８９
Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液の調製
調製例９－７で調製した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＳ２０－ＰＢＳ溶液１０～１００μＬと、調製例９－１で調製した２０％Ｓｏｌ．基剤溶液とを１：９の比率で混合し、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１７９）を調製した。前記溶液は投与直前まで氷冷下で保存した。
調製例９－７で調製した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＳ２０－ＰＢＳ溶液１０～１００μＬと、調製例９－１で調製した２０％Ｓｏｌ．基剤溶液とを１：９の比率で混合し、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１７９）を調製した。前記溶液は投与直前まで氷冷下で保存した。
【0189】
＜調製例９－９＞
８９
Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液の調製
調製例９－７で調製した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＳ２０－ＰＢＳ溶液１０～１００μＬと、調製例９－２で調製した２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液とを１：９の比率で混合し、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１８０）を調製した。前記溶液は投与直前まで氷冷下で保存した。
調製例９－７で調製した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＳ２０－ＰＢＳ溶液１０～１００μＬと、調製例９－２で調製した２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液とを１：９の比率で混合し、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１８０）を調製した。前記溶液は投与直前まで氷冷下で保存した。
【0190】
＜調製例９－１０＞
８９
Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液の調製
調製例９－７で調製した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＳ２０－ＰＢＳ溶液１０μＬと、調製例９－３で調製した１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液とを１：９の比率で混合し８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１８１）を調製した。前記溶液は投与直前まで氷冷下で保存した。
調製例９－７で調製した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＳ２０－ＰＢＳ溶液１０μＬと、調製例９－３で調製した１８．９％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ基剤溶液とを１：９の比率で混合し８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１８１）を調製した。前記溶液は投与直前まで氷冷下で保存した。
【0191】
＜調製例９－１１＞
８９
Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有キトサン溶液の調製
調製例９－７で調製した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＢＳ溶液１０μＬを、調製例９－４で調製したキトサン基剤溶液９０μＬと混合し、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有キトサン溶液を調製した。
調製例９－７で調製した８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有ＰＢＳ溶液１０μＬを、調製例９－４で調製したキトサン基剤溶液９０μＬと混合し、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有キトサン溶液を調製した。
【0192】
＜試験例９＞ＰＥＴ撮像
マウス（ＢＡＬＢ／Ｃ、９～１１週齢）をイソフルランで麻酔し、外耳道に調製例９－８、９－９、及び９－１０で得た各溶液３μＬをそれぞれ投与した（８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液：Ｎ＝１５，８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液：Ｎ＝１５、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液：Ｎ＝９）。調製例９－１１で得た８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有キトサン溶液は、２．５５μＬ投与し、さらに０．２ｍｏｌ／Ｌピロ亜硫酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）０．４５μＬを投与して８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有キトサン溶液を耳内で重合させた（実施例１８２）（Ｎ＝９）。投与後０．１５～０．３１時間後、１日後、及び２日後にそれぞれ麻酔下、ＰＥＴ／ＣＴ撮像装置（ＰＥＴ：Ｃｌａｉｒｖｉｖｏ ＰＥＴ、島津製作所製、ＣＴ：Ａｑｕｉｌｉｏｎ、ＴＯＳＨＩＢＡ製）で画像を取得した。得られた画像から、投与直後の耳内の放射能に対する投与１日後及び２日後の放射能残存率を算出した。
マウス（ＢＡＬＢ／Ｃ、９～１１週齢）をイソフルランで麻酔し、外耳道に調製例９－８、９－９、及び９－１０で得た各溶液３μＬをそれぞれ投与した（８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液：Ｎ＝１５，８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液：Ｎ＝１５、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液：Ｎ＝９）。調製例９－１１で得た８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有キトサン溶液は、２．５５μＬ投与し、さらに０．２ｍｏｌ／Ｌピロ亜硫酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）０．４５μＬを投与して８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有キトサン溶液を耳内で重合させた（実施例１８２）（Ｎ＝９）。投与後０．１５～０．３１時間後、１日後、及び２日後にそれぞれ麻酔下、ＰＥＴ／ＣＴ撮像装置（ＰＥＴ：Ｃｌａｉｒｖｉｖｏ ＰＥＴ、島津製作所製、ＣＴ：Ａｑｕｉｌｉｏｎ、ＴＯＳＨＩＢＡ製）で画像を取得した。得られた画像から、投与直後の耳内の放射能に対する投与１日後及び２日後の放射能残存率を算出した。
【0193】
結果を図５に示す。なお、図５のエラーバーは標準誤差を意味する。投与２日後において８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１８０）は他の３溶液と比べて高い放射能の残存率を示した。８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有キトサン溶液（実施例１８２）は、投与１日後から投与２日後までに残存率が約５０％減少し、８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１７％Ｐｌｕ．－ＰＢＳ溶液（実施例１８１）は投与１日後から投与２日後までに残存率が約１８％減少した。８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．溶液（実施例１７９）及び８９Ｚｒ－ＨＢ－ＥＧＦ含有１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（実施例１８０）は、投与１日後から投与２日後に残存率の減少が１０％未満であった。
【0194】
実験１０：慢性鼓膜穿孔モデルを用いたＨＢ－ＥＧＦ含有溶液の薬効評価
慢性鼓膜穿孔モデルマウスを作製し、マウスＨＢ－ＥＧＦを含有した各溶液を投与したときの鼓膜穿孔に対する薬効を評価した。
慢性鼓膜穿孔モデルマウスを作製し、マウスＨＢ－ＥＧＦを含有した各溶液を投与したときの鼓膜穿孔に対する薬効を評価した。
【0195】
＜試験例１０－１＞慢性鼓膜穿孔モデルマウスの作製
イソフルラン（ファイザー製）麻酔下でマウス（雄性ＣＢＡ／ＣａＪ種、９～１３週齢）の鼓膜をローゼン氏探針（５２－１４７－５０、第一医科製）にて全穿孔させた。穿孔部に穿孔化剤として１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＢ－Ｒ７７８５溶液（自社合成）（Hirayama et al., Bioorg Med Chem. 1997, Apr;5(4)765－778）を浸したゼルフォーム（登録商標）（ファイザー製）を留置した。なお、前記ゼルフォーム（登録商標）はマウスの耳内に入るサイズに裁断して使用した。耳内を１日１回観察し、ゼルフォーム（登録商標）が消失していた場合は、新たに穿孔化剤を浸したゼルフォーム（登録商標）を留置した。消失せず留まっている場合は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＢ－Ｒ７７８５溶液の追加投与を行った。穿孔化剤による処置は１週間実施し、その後は約３か月間放置し、顕微鏡下で穿孔を確認した。
イソフルラン（ファイザー製）麻酔下でマウス（雄性ＣＢＡ／ＣａＪ種、９～１３週齢）の鼓膜をローゼン氏探針（５２－１４７－５０、第一医科製）にて全穿孔させた。穿孔部に穿孔化剤として１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＢ－Ｒ７７８５溶液（自社合成）（Hirayama et al., Bioorg Med Chem. 1997, Apr;5(4)765－778）を浸したゼルフォーム（登録商標）（ファイザー製）を留置した。なお、前記ゼルフォーム（登録商標）はマウスの耳内に入るサイズに裁断して使用した。耳内を１日１回観察し、ゼルフォーム（登録商標）が消失していた場合は、新たに穿孔化剤を浸したゼルフォーム（登録商標）を留置した。消失せず留まっている場合は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＢ－Ｒ７７８５溶液の追加投与を行った。穿孔化剤による処置は１週間実施し、その後は約３か月間放置し、顕微鏡下で穿孔を確認した。
【0196】
＜調製例１０－１＞マウスＨＢ－ＥＧＦ溶液の調製
ＨＢ－ＥＧＦとしてマウスＨＢ－ＥＧＦ（ｃｙｔ－０６８、Ｐｒｏｓｐｅｃ製）を用い、精製水で溶解させ、マウスＨＢ－ＥＧＦ溶液を調製した。
ＨＢ－ＥＧＦとしてマウスＨＢ－ＥＧＦ（ｃｙｔ－０６８、Ｐｒｏｓｐｅｃ製）を用い、精製水で溶解させ、マウスＨＢ－ＥＧＦ溶液を調製した。
【0197】
＜調製例１０－２＞キトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ 有／無）の調製
キトサン－乳酸プレポリマー（Ａｕｒａｔｉｏｎ（Ｓｔａｎｆｏｒｄ大学）製））４５５μＬにフィブリノーゲン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂ製）４５μＬを加えて混合し、キトサン基剤とした。調製例１０－１で調製したマウスＨＢ－ＥＧＦ溶液５８．８２４μｇ／ｍＬ又は精製水と前記キトサン基剤とを１：９の割合で混合することにより、キトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ有）（実施例１８３）又はキトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ無）（実施例１８４）を調製した。これらの溶液は４℃下で保管した。
キトサン－乳酸プレポリマー（Ａｕｒａｔｉｏｎ（Ｓｔａｎｆｏｒｄ大学）製））４５５μＬにフィブリノーゲン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂ製）４５μＬを加えて混合し、キトサン基剤とした。調製例１０－１で調製したマウスＨＢ－ＥＧＦ溶液５８．８２４μｇ／ｍＬ又は精製水と前記キトサン基剤とを１：９の割合で混合することにより、キトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ有）（実施例１８３）又はキトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ無）（実施例１８４）を調製した。これらの溶液は４℃下で保管した。
【0198】
＜調製例１０－３＞２０％Ｓｏｌ．溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ 有／無）の調製
Ｓｏｌ．を６．７ｇ量り取り、精製水２３．３ｇに投入し、約４℃でＳｏｌ．を溶解させることにより、２２．３％Ｓｏｌ．基剤溶液を調製した。調製例１０－１で調製したマウスＨＢ－ＥＧＦ溶液５０μｇ／ｍＬ又は精製水と２２．３％Ｓｏｌ．基剤溶液とを１：９の割合で混合することにより、２０％Ｓｏｌ．溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ有）（実施例１８５）又は２０％Ｓｏｌ．溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ無）（実施例１８６）を調製した。
Ｓｏｌ．を６．７ｇ量り取り、精製水２３．３ｇに投入し、約４℃でＳｏｌ．を溶解させることにより、２２．３％Ｓｏｌ．基剤溶液を調製した。調製例１０－１で調製したマウスＨＢ－ＥＧＦ溶液５０μｇ／ｍＬ又は精製水と２２．３％Ｓｏｌ．基剤溶液とを１：９の割合で混合することにより、２０％Ｓｏｌ．溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ有）（実施例１８５）又は２０％Ｓｏｌ．溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ無）（実施例１８６）を調製した。
【0199】
＜調製例１０－４＞１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ 有／無）の調製
クエン酸三ナトリウムを４２０ｍｇ量り取り、精製水に溶解させ、クエン酸三ナトリウム溶液２０ｍＬを調製した。Ｓｏｌ．を２ｇ量り取り、前記溶液８ｇに投入し、約４℃でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。調製例１０－１で調製したマウスＨＢ－ＥＧＦ溶液５０μｇ／ｍＬ又は精製水と２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液とを１：９の割合で混合し、１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ有）（実施例１８７）又は１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ無）（実施例１８８）を調製した。
クエン酸三ナトリウムを４２０ｍｇ量り取り、精製水に溶解させ、クエン酸三ナトリウム溶液２０ｍＬを調製した。Ｓｏｌ．を２ｇ量り取り、前記溶液８ｇに投入し、約４℃でＳｏｌ．を溶解させることにより、２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液を調製した。調製例１０－１で調製したマウスＨＢ－ＥＧＦ溶液５０μｇ／ｍＬ又は精製水と２０％Ｓｏｌ．－２．１％クエン酸三ナトリウム基剤溶液とを１：９の割合で混合し、１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ有）（実施例１８７）又は１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ無）（実施例１８８）を調製した。
【0200】
＜試験例１０－２＞慢性鼓膜穿孔の治療
試験例１０－１で作製した慢性鼓膜穿孔モデルマウスに、調製例１０－２～１０－４で調製した各溶液（実施例１８３～１８８）５μＬを、マイクロマンＥ（Ｍ１０Ｅ、ギルソン製）を用いて鼓膜上に投与した（Ｎ＝１３～１４）。なお、キトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ 有／無）は、それぞれ投与前に室温に戻し、投与時に各キトサン溶液４．２５μＬと０．２ｍｏｌ／Ｌピロ亜硫酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）０．７５μＬとを耳内で重合させた（Ｎ＝１３）。具体的には、まずマイクロマンＥを用いて外耳道よりキトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ 有／無）を鼓膜上に投与し、その後同様にピロ亜硫酸ナトリウムを投与し、製剤が固まる前に素早く耳からマイクロマンＥを引き抜いた。
試験例１０－１で作製した慢性鼓膜穿孔モデルマウスに、調製例１０－２～１０－４で調製した各溶液（実施例１８３～１８８）５μＬを、マイクロマンＥ（Ｍ１０Ｅ、ギルソン製）を用いて鼓膜上に投与した（Ｎ＝１３～１４）。なお、キトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ 有／無）は、それぞれ投与前に室温に戻し、投与時に各キトサン溶液４．２５μＬと０．２ｍｏｌ／Ｌピロ亜硫酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ製）０．７５μＬとを耳内で重合させた（Ｎ＝１３）。具体的には、まずマイクロマンＥを用いて外耳道よりキトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ 有／無）を鼓膜上に投与し、その後同様にピロ亜硫酸ナトリウムを投与し、製剤が固まる前に素早く耳からマイクロマンＥを引き抜いた。
【0201】
投与１か月後に、鼓膜を含む周辺組織をサンプリングし、残渣を除去した後に穿孔の有無を確認し、鼓膜穿孔耳数及び鼓膜完治耳数から鼓膜穿孔治癒率を算出した。
【0202】
【表18】
【0203】
結果を表１８に示す。キトサン溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ有）（実施例１８３）及び２０％Ｓｏｌ．溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ有）（実施例１８５）の鼓膜穿孔治癒率は６９％であった。１８％Ｓｏｌ．－１．９％クエン酸三ナトリウム溶液（マウスＨＢ－ＥＧＦ有）（実施例１８７）の鼓膜穿孔治癒率は８６％であった。
【0204】
以上の結果より、本発明の医薬組成物は投与時の混合が不要であり、室温下でもゲル化しないことから煩雑な操作なく耳内に投与することができ、かつ、耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する医薬組成物を提供することが可能である。
【産業上の利用可能性】
【0205】
本発明によれば、煩雑な操作なく耳内に投与することができ、かつ、耳内で薬物が滞留及び徐放する機能を有する医薬組成物を提供することができる。
以上、本発明を特定の態様に沿って説明したが、当業者に自明の変法や改良は本発明の範囲に含まれる。
以上、本発明を特定の態様に沿って説明したが、当業者に自明の変法や改良は本発明の範囲に含まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【配列表】