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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-17
(45)【発行日】2024-09-26
(54)【発明の名称】ＧＬＵＴ１発現促進剤
(51)【国際特許分類】
A61K 8/9789 20170101AFI20240918BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20240918BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240918BHJP
A61K 36/355 20060101ALI20240918BHJP
A61K 36/35 20060101ALI20240918BHJP
A61K 36/185 20060101ALI20240918BHJP
A61K 36/38 20060101ALI20240918BHJP
A23L 33/105 20160101ALN20240918BHJP
【ＦＩ】
A61K8/9789
A61Q19/00
A61P17/00
A61K36/355
A61K36/35
A61K36/185
A61K36/38
A23L33/105
【請求項の数】
4
(21)【出願番号】P 2020109962
(22)【出願日】2020-06-25
(65)【公開番号】P2021091652
(43)【公開日】2021-06-17
【審査請求日】2023-05-08
(31)【優先権主張番号】P 2019215966
(32)【優先日】2019-11-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】000113470
【氏名又は名称】ポーラ化成工業株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100137338
【弁理士】
【氏名又は名称】辻田 朋子
(72)【発明者】
【氏名】笠原 薫
(72)【発明者】
【氏名】大島 宏
(72)【発明者】
【氏名】諸隈 亜佑美
【審査官】伊藤 真明
(56)【参考文献】
【文献】米国特許出願公開第２０１４／０１２８３３３（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特開２００７－２７７１４９（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００８－００７４１２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００９－１８４９５５（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００９－２５６２４４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１７－０７５１１７（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０２１－０１９５３２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１３－１７３７３０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１４－０８４３０４（ＪＰ，Ａ）
【文献】Yueru Li et al.，Suppression of adipocyte differentiation and lipid accumulation by stearidonic acid (SDA) in 3T3-L1 cells，Lipids in Health and Disease，2017年，Vol. 16: 181，p. 1-10
【文献】Angela Bulotta et al.，The Role of GLP-1 in the Regulation of Islet Cell Mass，Cell Biochemistry and Biophysics，2004年，Vol. 40, Issue 3 supplement，p. 65-77
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ８／００ － ８／９９
Ａ６１Ｑ １／００ －９０／００
Ａ６１Ｋ ３５／００ －３６／９０６８
Ａ６１Ｐ １７／００ －１７／１８
Ａ２３Ｌ ３３／１０５－３３／１１
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記Ａ群から選ばれる少なくとも１種の生物由来抽出物、及び、下記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物を含む、ＧＬＵＴ１発現促進剤。［Ａ群］
スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）、レンプクソウ科（Ａｄｏｘａｃｅａｅ）ニワトコ属（Ｓａｍｂｕｃｕｓ）セイヨウニワトコ（Ｓ．ｎｉｇｒａ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ属（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ（Ｓ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）イブキジャコウソウ属（Ｔｈｙｍｕｓ）タチジャコウソウ（Ｔ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）、オトギリソウ科（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ）オトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ）オトギリソウ（Ｈ．ｅｒｅｃｔｕｍ）
［Ｂ群］
アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏ．ｂｉｅｎｎｉｓ）
【請求項2】
前記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物が、スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）由来の抽出物を少なくとも含むことを特徴とする、請求項１に記載のＧＬＵＴ１発現促進剤。
【請求項3】
インボルクリン発現促進のための、請求項１又は２に記載のＧＬＵＴ１発現促進剤。
【請求項4】
オクルーディン発現促進のための、請求項１～３の何れか一項に記載のＧＬＵＴ１発現促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＧＬＵＴ１発現促進剤に関する。
【背景技術】
【0002】
グルコーストランスポーター（Ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ：以下、ＧＬＵＴと略すこともある）は、ヘキソースを主体とした様々な物質の細胞内への取り込みを担うことが知られており、これまでに１４種のアイソフォームが見出されている。
例えばＧＬＵＴ１は赤血球や脳などの多くの組織に普遍的に存在し、特に、胎盤や脳（特に脳血管関門画分）で最も強く発現されており、定常状態でのグルコースの取り込みに関わっている。（非特許文献１、非特許文献２）。また、正常皮膚の細胞膜においても、分布が認められている（非特許文献３）。
グルコースは、ほとんどの細胞の代謝に不可欠な基質であることから、体内におけるＧＬＵＴ１の発現量を維持することが重要である。
例えばＧＬＵＴ１は赤血球や脳などの多くの組織に普遍的に存在し、特に、胎盤や脳（特に脳血管関門画分）で最も強く発現されており、定常状態でのグルコースの取り込みに関わっている。（非特許文献１、非特許文献２）。また、正常皮膚の細胞膜においても、分布が認められている（非特許文献３）。
グルコースは、ほとんどの細胞の代謝に不可欠な基質であることから、体内におけるＧＬＵＴ１の発現量を維持することが重要である。
【0003】
ところで、インボルクリンは、表皮のうち角層を形成する角質細胞に存在するタンパク質であり、コーニファイドエンベロープを形成するタンパク質の１つである。コーニファイドエンベロープは、角層の物理的あるいは化学的な強靭性に寄与していることから、体内（特に、皮膚組織）におけるインボルクリンの発現量を維持することが重要である（例えば、非特許文献４）。
【0004】
また、オクルーディンは、タイトジャンクションを形成するタンパク質の１つである。タイトジャンクションは、上皮細胞の結合に寄与し、分子の細胞間での移動を制御するものであるから、体内におけるオクルーディンの発現量を維持することが重要である（例えば、非特許文献５）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【文献】ポリフェノールによるグルコーストランスポーターの機能調節、山下陽子、山本憲朗、芦田均、ビタミン、８６巻３号（３月）、２０１２
【文献】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｇｌｕｃｏｓｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ， Ｏｈｔａ Ｔｓｕｎｅｔａｋａ、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ．４ Ｎｏ．１５（Ｊａｎｕａｒｙ １９９２）， ｐｐ．９９－１０５
【文献】Ｇｈｅｒｚｉ， Ｒ．， Ｍｅｌｉｏｌｉ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ．： “ＨｅｐＧ ２／ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ／ｂｒａｉｎ” ｔｙｐｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ （ＧＬＵＴ １ ） ｉｓ ｈｉｇｈｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ： ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｆｆｅｃｔｓ ＧＬＵＴ １ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ １５０： ４６３－４７４ １９９２
【文献】北島康雄 皮膚バリア機能とその制御 Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ ２２－４，ｐ４２４－４３２，２００７
【文献】山本明美、長津有祐 皮膚のタイトジャンクションとは ＣＯＳＭＥＴＩＣ ＳＴＡＧＥ Ｖｏｌ．１１， Ｎｏ．１ ｐ６１－６６，２０１６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明は、体内、特に皮膚組織中のＧＬＵＴ１の発現量を増加させる組成物を提供することを、課題とする。
【0007】
また、本発明者らは、研究を進める中で、ＧＬＵＴ１の発現量が減少すると、インボルクリン及びオクルーディンの発現量も減少することを、明らかにした。
そこで本発明は、インボルクリン及びオクルーディンの発現量を増加させる組成物を提供することを、さらなる課題とする。
そこで本発明は、インボルクリン及びオクルーディンの発現量を増加させる組成物を提供することを、さらなる課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0008】
上記課題を解決する、本発明に係るＧＬＵＴ１発現促進剤は、下記Ａ群から選ばれる少なくとも１種の生物由来抽出物、及び／又は下記Ｂ群から選ばれる少なくとも１種の生物由来抽出物を含む、ＧＬＵＴ１発現促進剤。
［Ａ群］
スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）、レンプクソウ科（Ａｄｏｘａｃｅａｅ）ニワトコ属（Ｓａｍｂｕｃｕｓ）セイヨウニワトコ（Ｓ．ｎｉｇｒａ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ属（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ（Ｓ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）イブキジャコウソウ属（Ｔｈｙｍｕｓ）タチジャコウソウ（Ｔ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）、オトギリソウ科（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ）オトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ）オトギリソウ（Ｈ．ｅｒｅｃｔｕｍ）
［Ｂ群］
アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏ．ｂｉｅｎｎｉｓ）、ローヤルゼリー
［Ａ群］
スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）、レンプクソウ科（Ａｄｏｘａｃｅａｅ）ニワトコ属（Ｓａｍｂｕｃｕｓ）セイヨウニワトコ（Ｓ．ｎｉｇｒａ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ属（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ（Ｓ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）イブキジャコウソウ属（Ｔｈｙｍｕｓ）タチジャコウソウ（Ｔ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）、オトギリソウ科（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ）オトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ）オトギリソウ（Ｈ．ｅｒｅｃｔｕｍ）
［Ｂ群］
アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏ．ｂｉｅｎｎｉｓ）、ローヤルゼリー
【0009】
本発明によれば、皮膚組織において、ＧＬＵＴ１の発現を促進することができる。
【0010】
好ましくは、上記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物は、スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）由来の抽出物を少なくとも含む。
本発明によれば、特に表皮層において、高いＧＬＵＴ１発現促進効果を得ることができる。
本発明によれば、特に表皮層において、高いＧＬＵＴ１発現促進効果を得ることができる。
【0011】
好ましくは、上記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物は、アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏ．ｂｉｅｎｎｉｓ）由来の抽出物を少なくとも含む。
本発明によれば、特に真皮層において、高いＧＬＵＴ１発現促進効果を得ることができる。
本発明によれば、特に真皮層において、高いＧＬＵＴ１発現促進効果を得ることができる。
【0012】
好ましくは、上記ＧＬＵＴ１発現促進剤は、インボルクリン発現促進のためのものである。
また好ましくは、上記ＧＬＵＴ１発現促進剤は、オクルーディン発現促進のためのものである。
本発明によれば、インボルクリン及び／又はオクルーディンの発現量を増加させることができる。
また好ましくは、上記ＧＬＵＴ１発現促進剤は、オクルーディン発現促進のためのものである。
本発明によれば、インボルクリン及び／又はオクルーディンの発現量を増加させることができる。
【発明の効果】
【0013】
本発明によれば、皮膚組織において、ＧＬＵＴ１の発現量を増加させる組成物を提供することができる。
また本発明によれば、皮膚組織において、インボルクリン及び／又はオクルーディンの発現量を増加させることができる。
また本発明によれば、皮膚組織において、インボルクリン及び／又はオクルーディンの発現量を増加させることができる。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1】試験例１において、正常ヒト表皮層角化細胞におけるＧＬＵＴ１の発現量を測定した結果を表すグラフである。（Ａ）はスイカズラエキス、（Ｂ）はセイヨウニワトコエキス、（Ｃ）はユキノシタエキス、（Ｄ）はオトギリソウエキス、（Ｅ）はタイムエキスを用いたときの実験結果をそれぞれ示す。
【図2】スイカズラエキスが正常ヒト表皮層角化細胞においてＧＬＵＴ１の発現量を増加させることを示す、免疫染色の結果である。（Ａ）はスイカズラエキス非添加、（Ｂ）はスイカズラエキス添加の実験結果をそれぞれ示す。
【図3】試験例２において、正常ヒト真皮層線維芽細胞におけるＧＬＵＴ１の発現量を測定した結果を表すグラフである。（Ａ）はメマツヨイグサ抽出液、（Ｂ）はローヤルゼリーエキスを用いたときの実験結果をそれぞれ示す。
【図4】メマツヨイグサエキスが正常ヒト真皮線維芽細胞においてＧＬＵＴ１の発現量を増加させることを示す、免疫染色の結果である。（Ａ）はメマツヨイグサエキス非添加、（Ｂ）はメマツヨイグサエキス添加の実験結果をそれぞれ示す。
【図5】ｓｉＲＮＡ法により測定した、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンしていない細胞におけるＧＬＵＴ１のｍＲＮＡ発現量と、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンした細胞におけるＧＬＵＴ１のｍＲＮＡ発現量を比較したグラフである。（Ａ）は正常ヒト表皮層角化細胞、（Ｂ）は正常ヒト真皮層線維芽細胞を用いたときの実験結果をそれぞれ示す。
【図6】ｓｉＲＮＡ法により測定した、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンしていない細胞におけるコラーゲンの発現量と、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンした細胞におけるコラーゲンの発現量を比較したグラフである。
【図7】ｓｉＲＮＡ法により測定した、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンしていない細胞におけるインボルクリンのｍＲＮＡ発現量と、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンした細胞におけるインボルクリンのｍＲＮＡ発現量を比較したグラフである。
【図8】ｓｉＲＮＡ法により測定した、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンしていない細胞におけるオクルーディンのｍＲＮＡ発現量と、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンした細胞におけるオクルーディンのｍＲＮＡ発現量を比較したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0015】
以下、本発明の好ましい実施形態について説明するが、本発明の技術的範囲は、以下の実施形態に限定されない。
【0016】
本発明に係るＧＬＵＴ１発現促進剤は、下記Ａ群から選ばれる少なくとも１種の生物由来抽出物、及び／又は下記Ｂ群から選ばれる少なくとも１種の生物由来抽出物を含む、ＧＬＵＴ１発現促進剤。
［Ａ群］
スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）、レンプクソウ科（Ａｄｏｘａｃｅａｅ）ニワトコ属（Ｓａｍｂｕｃｕｓ）セイヨウニワトコ（Ｓ．ｎｉｇｒａ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ属（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ（Ｓ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）イブキジャコウソウ属（Ｔｈｙｍｕｓ）タチジャコウソウ（Ｔ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）、オトギリソウ科（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ）オトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ）オトギリソウ（Ｈ．ｅｒｅｃｔｕｍ）
［Ｂ群］
アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏ．ｂｉｅｎｎｉｓ）、ローヤルゼリー
［Ａ群］
スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）、レンプクソウ科（Ａｄｏｘａｃｅａｅ）ニワトコ属（Ｓａｍｂｕｃｕｓ）セイヨウニワトコ（Ｓ．ｎｉｇｒａ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ属（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ（Ｓ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）イブキジャコウソウ属（Ｔｈｙｍｕｓ）タチジャコウソウ（Ｔ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）、オトギリソウ科（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ）オトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ）オトギリソウ（Ｈ．ｅｒｅｃｔｕｍ）
［Ｂ群］
アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏ．ｂｉｅｎｎｉｓ）、ローヤルゼリー
【0017】
上記Ａ群に属する生物由来抽出物は、特に表皮層において、高いＧＬＵＴ１発現促進効果を発揮する。
また、上記Ｂ群に属する生物由来抽出物は、特に真皮層において、高いＧＬＵＴ１発現促進効果を発揮する。
したがって、本発明は、表皮層及び／又は真皮層におけるＧＬＵＴ１の発現を促進することができる。
また、上記Ｂ群に属する生物由来抽出物は、特に真皮層において、高いＧＬＵＴ１発現促進効果を発揮する。
したがって、本発明は、表皮層及び／又は真皮層におけるＧＬＵＴ１の発現を促進することができる。
【0018】
ここで、ＧＬＵＴ１の発現量が減少すると、細胞内に糖が取り込まれにくくなる（例えば、Ｎ Ｎａｋａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ， （１９９５） ４４（４） ： ５４３－５４８）。例えば真皮層において、細胞内に糖が取り込まれにくくなると、真皮層におけるコラーゲンの産生能が低下することが予想される（例えば、Ｍ Ｃｅｃｈｏｗｓｋａ－Ｐａｓｋｏ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ， （２００７） ３０５ ： ７９－８５）。
特に上記Ｂ群に属する生物由来抽出物は、真皮層において高いＧＬＵＴ１発現促進効果を発揮するので、コラーゲン産生促進剤としても使用することができる。
特に上記Ｂ群に属する生物由来抽出物は、真皮層において高いＧＬＵＴ１発現促進効果を発揮するので、コラーゲン産生促進剤としても使用することができる。
【0019】
好ましくは、上記ＧＬＵＴ１発現促進剤に含まれる、上記Ａ群から選ばれる生物由来抽出物は、スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）由来の抽出物を少なくとも含む。
【0020】
また好ましくは、上記ＧＬＵＴ１発現促進剤に含まれる、上記Ｂ群から選ばれる生物由来抽出物は、アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏ．ｂｉｅｎｎｉｓ）由来の抽出物を少なくとも含む。
【0021】
また好ましくは、上記ＧＬＵＴ１発現促進剤は、スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌ．Ｊａｐｏｎｉｃａ）由来の抽出物と、アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏ．ｂｉｅｎｎｉｓ）由来の抽出物を少なくとも含む。
本形態とすれば、表皮層と真皮層の両方におけるＧＬＵＴ１の発現を促進するので、より高いＧＬＵＴ１発現促進効果を得ることができる。
本形態とすれば、表皮層と真皮層の両方におけるＧＬＵＴ１の発現を促進するので、より高いＧＬＵＴ１発現促進効果を得ることができる。
【0022】
好ましくは、上記ＧＬＵＴ１発現促進剤は、インボルクリン発現促進のための剤である。
インボルクリンの発現量は、ＧＬＵＴ１の発現量と相関があることが、本発明者らによって明らかにされた。
よって、本発明によれば、ＧＬＵＴ１発現効果とともに、インボルクリン発現促進効果を得ることができる。
インボルクリンの発現量は、ＧＬＵＴ１の発現量と相関があることが、本発明者らによって明らかにされた。
よって、本発明によれば、ＧＬＵＴ１発現効果とともに、インボルクリン発現促進効果を得ることができる。
【0023】
好ましくは、上記ＧＬＵＴ１発現促進剤は、オクルーディン発現促進のための剤である。
オクルーディンの発現量は、ＧＬＵＴ１の発現量と相関があることが、本発明者らによって明らかにされた。
よって、本発明によれば、ＧＬＵＴ１発現効果とともに、オクルーディン発現促進効果を得ることができる。
オクルーディンの発現量は、ＧＬＵＴ１の発現量と相関があることが、本発明者らによって明らかにされた。
よって、本発明によれば、ＧＬＵＴ１発現効果とともに、オクルーディン発現促進効果を得ることができる。
【0024】
ここで、上記Ａ群及び上記Ｂ群に属する生物由来抽出物は、上記生物由来の抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物の総称を意味するものとし、植物由来の抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等が挙げられる。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３－ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１～３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却した後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３－ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１～３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却した後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
【0025】
本発明に係る、ＧＬＵＴ１発現促進剤は、製剤化に用いられる任意の成分と適宜組み合わせて、経口剤や皮膚外用剤の形態をとることができる。
ＧＬＵＴ１発現促進剤は、上記Ａ群から選ばれる少なくとも１つの生物由来抽出物と、上記Ｂ群から選ばれる少なくとも１つの生物由来抽出物を組み合わせることが好ましい。
経口剤とする場合、上記Ａ群及び／又はＢ群に属する生物由来抽出物を、有効成分として含む食品用組成物の形態とすることが好ましい。具体的には、一般食品、錠剤、顆粒剤、ドリンク剤等の剤形を有するサプリメントの形態とすることが好ましい。
ＧＬＵＴ１発現促進剤は、上記Ａ群から選ばれる少なくとも１つの生物由来抽出物と、上記Ｂ群から選ばれる少なくとも１つの生物由来抽出物を組み合わせることが好ましい。
経口剤とする場合、上記Ａ群及び／又はＢ群に属する生物由来抽出物を、有効成分として含む食品用組成物の形態とすることが好ましい。具体的には、一般食品、錠剤、顆粒剤、ドリンク剤等の剤形を有するサプリメントの形態とすることが好ましい。
【0026】
経口剤における、上記Ａ群及び／又はＢ群に属する生物由来抽出物の含有量は、剤形に応じて、１回あたりの摂取量が抽出物の乾燥質量として、通常、０．１ｍｇ以上、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは１０ｍｇ以上である。
また、通常、２０００ｍｇ以下、好ましくは１０００ｍｇ以下、より好ましくは５００ｍｇ以下である。
また、通常、２０００ｍｇ以下、好ましくは１０００ｍｇ以下、より好ましくは５００ｍｇ以下である。
【0027】
皮膚外用剤とする場合、例えば化粧料、医薬部外品、皮膚外用医薬等の形態を例示することができる。また、それらの剤形は特に限定されない。
中でも、皮膚組織におけるＧＬＵＴ１の発現量を増加させるという用途との関係から、継続的に使用可能な化粧料の形態が好ましい。具体的には、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ジェル、サンケア品等の形態が好ましい。
上記範囲とすることで、効果的にＧＬＵＴ１の発現量を増加させることができる。
中でも、皮膚組織におけるＧＬＵＴ１の発現量を増加させるという用途との関係から、継続的に使用可能な化粧料の形態が好ましい。具体的には、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ジェル、サンケア品等の形態が好ましい。
上記範囲とすることで、効果的にＧＬＵＴ１の発現量を増加させることができる。
【0028】
皮膚外用剤における、上記Ａ群及び／又はＢ群に属する生物由来抽出物の含有量（乾燥重量）は、通常、０．００００１質量％以上、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上である。
また、通常８０質量％以下、好ましくは３０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下である。
上記範囲とすることで、効果的にＧＬＵＴ１の発現量を増加させることができる。
また、通常８０質量％以下、好ましくは３０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下である。
上記範囲とすることで、効果的にＧＬＵＴ１の発現量を増加させることができる。
【0029】
上記Ａ群及び／又はＢ群に属する生物由来抽出物を、化粧料に配合する場合、ＧＬＵＴ１発現促進効果を損ねない範囲で、美白成分、しわ改善成分、抗炎症成分、動植物由来の抽出物、有効成分以外に通常化粧料で使用される成分を、任意成分として配合してもよい。
これらの任意成分は、市販されているものを入手して配合してもよく、公知の方法で合成したものを配合してもよい。
これらの任意成分は、市販されているものを入手して配合してもよく、公知の方法で合成したものを配合してもよい。
【0030】
美白成分としては、一般的に化粧料で用いられている成分を、特に制限なく使用することができる。ただし、ＧＬＵＴ１の発現促進以外のメカニズムで美白効果を有する成分を用いることが、各成分の作用効果を存分に生かす観点から好ましい。
例えば、４－ｎ－ブチルレゾルシノール、アスコルビン酸グルコシド、３－О－エチルアスコルビン酸、トラネキサム酸、アルブチン、１－トリフェニルメチルピペリジン、１－トリフェニルメチルピロリジン、２－（トリフェニルメチルオキシ）エタノール、２－（トリフェニルメチルアミノ）エタノール、２－（トリフェニルメチルオキシ）エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタン及びアミノジフェニルメタン、Ｎ－（ｏ－トルオイル）システイン酸、Ｎ－（ｍ－トルオイル）システイン酸、Ｎ－（ｐ－トルイル）システイン酸、Ｎ－（ｐ－メトキシベンゾイル）システイン酸、Ｎ－ベンゾイル－セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－エチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メトキシベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－フルオロベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－トリフルオロメチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（２－ナフトイル）セリン、Ｎ－（４－フェニルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン メチルエステル、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン エチルエステル、Ｎ－（２－ナフトイル）セリン メチルエステル、Ｎ－ベンゾイル－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－アセチルセリン、Ｎ－（２－ナフトイル）－Ｏ－メチルセリン等が挙げられる。
例えば、４－ｎ－ブチルレゾルシノール、アスコルビン酸グルコシド、３－О－エチルアスコルビン酸、トラネキサム酸、アルブチン、１－トリフェニルメチルピペリジン、１－トリフェニルメチルピロリジン、２－（トリフェニルメチルオキシ）エタノール、２－（トリフェニルメチルアミノ）エタノール、２－（トリフェニルメチルオキシ）エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタン及びアミノジフェニルメタン、Ｎ－（ｏ－トルオイル）システイン酸、Ｎ－（ｍ－トルオイル）システイン酸、Ｎ－（ｐ－トルイル）システイン酸、Ｎ－（ｐ－メトキシベンゾイル）システイン酸、Ｎ－ベンゾイル－セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－エチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メトキシベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－フルオロベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－トリフルオロメチルベンゾイル）セリン、Ｎ－（２－ナフトイル）セリン、Ｎ－（４－フェニルベンゾイル）セリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン メチルエステル、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）セリン エチルエステル、Ｎ－（２－ナフトイル）セリン メチルエステル、Ｎ－ベンゾイル－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－メチルセリン、Ｎ－（ｐ－メチルベンゾイル）－Ｏ－アセチルセリン、Ｎ－（２－ナフトイル）－Ｏ－メチルセリン等が挙げられる。
【0031】
化粧料における美白成分の含有量は、通常０．０００１～３０質量％であり、０．００１～１０質量％が好ましく、０．０１～５質量％がより好ましい（抽出物の場合は乾燥質量）。
【0032】
しわ改善成分としては、一般的に化粧料で用いられている成分を、特に制限なく使用することができる。
例えば、ビタミンＡ又はその誘導体としてレチノール、レチナール、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロール、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノールが挙げられる。また、ウルソール酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステルが挙げられる。
例えば、ビタミンＡ又はその誘導体としてレチノール、レチナール、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロール、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノールが挙げられる。また、ウルソール酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステルが挙げられる。
【0033】
化粧料におけるしわ改善成分の含有量は、通常０．０００１～３０質量％であり、０．００１～１０質量％が好ましく、０．０１～５質量％がより好ましい（抽出物の場合は乾燥質量）。
【0034】
抗炎症成分としては、例えば、クラリノン、グラブリジン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、パントテニルアルコール等が挙げられ、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸アルキル及びその塩、並びに、グリチルレチン酸及びその塩が好ましく挙げられる。
化粧料中における抗炎症成分の含有量は、通常０．０１～３０質量％であり、０．１～１０質量％が好ましく、１～５質量％がより好ましい（抽出物の場合は乾燥質量）。
化粧料中における抗炎症成分の含有量は、通常０．０１～３０質量％であり、０．１～１０質量％が好ましく、１～５質量％がより好ましい（抽出物の場合は乾燥質量）。
【0035】
動植物由来の抽出物としては、例えば、アケビエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス、アボガドエキス、アマチャエキス、アーモンドエキス、アルニカエキス、アロニアエキス、アンズエキス、イチョウエキス、ウイキョウエキス、ウドエキス、エゾウコギエキス、エンメイソウエキス、オウバクエキス、オタネニンジンエキス、オドリコソウエキス、カキョクエキス、カッコンエキス、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カンゾウエキス、キウイエキス、キューカンバーエキス、グアバエキス、クチナシエキス、クマザサエキス、クルミエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ケイケットウエキス、ゲットウヨウエキス、ゲンチアナエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、ショウキョウエキス、ショウブ根エキス、スギナエキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タンポポエキス、チョウジエキス、トウガラシエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、バーチエキス、ハマメリスエキス、ヒキオコシエキス、ヒノキエキス、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ヘチマエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、マツエキス、ミズバショウエキス、メリッサエキス、モズクエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、リンゴエキス、ルイボス茶エキス、レイシエキス、レタスエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ワレモコウエキス等のエキスが好ましいものとして挙げられる。
【0036】
化粧料中における前記任意の動植物由来抽出物の含有量（乾燥質量）は、通常０．０１～３０質量％であり、０．１～１０質量％が好ましく、０．３～３質量％がより好ましい。
【0037】
有効成分以外に通常化粧料で使用される成分としては、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３－ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２－ペンタンジオール、２，４－ヘキシレングリコール、１，２－ヘキサンジオール、１，２－オクタンジオール等のポリオール、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、イミダゾリン系両性界面活性剤（２－ココイル－２－イミダゾリニウムヒドロキサイド－１－カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ－グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２－オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック（登録商標）型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２－デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類、表面処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面処理されていても良い、酸化コバルト、群青、紺青、酸化亜鉛の無機顔料類、表面処理されていても良い、酸化鉄二酸化チタン焼結体等の複合顔料、表面処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ６塩酸塩，ビタミンＢ６トリパルミテート，ビタミンＢ６ジオクタノエート，ビタミンＢ２又はその誘導体，ビタミンＢ１２，ビタミンＢ１５又はその誘導体等のビタミンＢ類、α－トコフェロール，β－トコフェロール，γ－トコフェロール，ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類が挙げられる。
【実施例】
【0038】
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲は、以下の実施形態に限定されない。
【0039】
＜試験例１＞表皮層における、生物由来抽出物のＧＬＵＴ１発現促進効果の測定
正常ヒト表皮角化細胞において、ＧＬＵＴ１の発現量を増加させる成分をスクリーニングした。
（１）ＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地（倉敷紡績株式会社製）を用い、正常ヒト表皮角化細胞を、２４ウェルプレートに５．０×１０４個／ウェルになるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で２４時間培養した。
（２）培養後、培地を除去し、被験対象の植物エキス又は溶媒対照を０．５％含むＨｕＭｅｄｉａ－ＫＢ２培地（倉敷紡績株式会社製）を加え、３７℃、５％ＣＯ２環境下で、２４時間培養した。以下、被験対象の植物エキスを含む培地を加えた細胞を植物エキス添加群、溶媒対照を含む培地を加えた細胞を溶媒対照群とする。
（３）培養後、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）のプロトコルに従って、培養した正常ヒト表皮角化細胞の回収、及び、ｍＲＮＡの抽出を行った。
（４）ＧＬＵＴ１のｍＲＮＡ発現量を、リアルタイムｑＰＣＲ法で測定した。また、内在性コントロールであるβ－アクチンのｍＲＮＡ発現量も、同時に測定した。
測定には、Ｆａｓｔ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社製）を用いた。またプライマーは、Ｈｓ＿ＳＬＣ２Ａ１＿１＿ＳＧ ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｉｍｅｒ Ａｓｓａｙ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いた。
（５）植物エキス添加群及び溶媒対照群におけるＧＬＵＴ１のｍＲＮＡ発現量を、β－アクチンのｍＲＮＡ発現量で補正した。溶媒対照群におけるＧＬＵＴ１の補正後のｍＲＮＡ発現量を１とした場合の、植物エキス添加群におけるＧＬＵＴ１の補正後のｍＲＮＡ発現量を算出した。結果を図１に示す。
正常ヒト表皮角化細胞において、ＧＬＵＴ１の発現量を増加させる成分をスクリーニングした。
（１）ＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地（倉敷紡績株式会社製）を用い、正常ヒト表皮角化細胞を、２４ウェルプレートに５．０×１０４個／ウェルになるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で２４時間培養した。
（２）培養後、培地を除去し、被験対象の植物エキス又は溶媒対照を０．５％含むＨｕＭｅｄｉａ－ＫＢ２培地（倉敷紡績株式会社製）を加え、３７℃、５％ＣＯ２環境下で、２４時間培養した。以下、被験対象の植物エキスを含む培地を加えた細胞を植物エキス添加群、溶媒対照を含む培地を加えた細胞を溶媒対照群とする。
（３）培養後、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）のプロトコルに従って、培養した正常ヒト表皮角化細胞の回収、及び、ｍＲＮＡの抽出を行った。
（４）ＧＬＵＴ１のｍＲＮＡ発現量を、リアルタイムｑＰＣＲ法で測定した。また、内在性コントロールであるβ－アクチンのｍＲＮＡ発現量も、同時に測定した。
測定には、Ｆａｓｔ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社製）を用いた。またプライマーは、Ｈｓ＿ＳＬＣ２Ａ１＿１＿ＳＧ ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｉｍｅｒ Ａｓｓａｙ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いた。
（５）植物エキス添加群及び溶媒対照群におけるＧＬＵＴ１のｍＲＮＡ発現量を、β－アクチンのｍＲＮＡ発現量で補正した。溶媒対照群におけるＧＬＵＴ１の補正後のｍＲＮＡ発現量を１とした場合の、植物エキス添加群におけるＧＬＵＴ１の補正後のｍＲＮＡ発現量を算出した。結果を図１に示す。
【0040】
図１（Ａ）～（Ｅ）に示すように、スイカズラエキス、セイヨウニワトコエキス、ユキノシタエキス、タイムエキス、及びオトギリソウエキスは、正常ヒト表皮角化細胞において、ＧＬＵＴ１の発現量を増加させることがわかった。
以上より、スイカズラエキス、セイヨウニワトコエキス、ユキノシタエキス、タイムエキス、及びオトギリソウエキスは、本発明のＧＬＵＴ１発現促進剤に適用することができることが示された。
以上より、スイカズラエキス、セイヨウニワトコエキス、ユキノシタエキス、タイムエキス、及びオトギリソウエキスは、本発明のＧＬＵＴ１発現促進剤に適用することができることが示された。
【0041】
また、上記５種のエキスのうち、スイカズラエキスを添加した細胞について、細胞の免疫染色を行い、ＧＬＵＴ１の発現量について観察した。
【0042】
（Ｉ）細胞培養
（１）９６ウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＃６０５５３００）に、１ウェルあたり１×１０４個／１００μＬとなるように正常ヒト表皮角化細胞を播種し、完全培地（Ｈｕｍｅｄｉａ－ＫＧ２）にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で、一晩培養し、７０－９０％コンフルエントにした（Ｎ＝３－４）。
（２）培地を除去し、０．５％ＦＢＳ／専用培地（Ｈｕｍｅｄｉａ－ＫＧ２、グルコールは１／５．５量分を添加）を１ウェルあたり２００μＬ加え、３７℃、５％ＣＯ２条件下で、一晩培養した。
（３）スイカズラエキス入り専用培地又はスイカズラエキスが入っていない専用培地を、１ウェルあたり１００μＬ加え、３７℃、５％ＣＯ２条件下で、２４時間又は４８時間培養した。
（１）９６ウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＃６０５５３００）に、１ウェルあたり１×１０４個／１００μＬとなるように正常ヒト表皮角化細胞を播種し、完全培地（Ｈｕｍｅｄｉａ－ＫＧ２）にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で、一晩培養し、７０－９０％コンフルエントにした（Ｎ＝３－４）。
（２）培地を除去し、０．５％ＦＢＳ／専用培地（Ｈｕｍｅｄｉａ－ＫＧ２、グルコールは１／５．５量分を添加）を１ウェルあたり２００μＬ加え、３７℃、５％ＣＯ２条件下で、一晩培養した。
（３）スイカズラエキス入り専用培地又はスイカズラエキスが入っていない専用培地を、１ウェルあたり１００μＬ加え、３７℃、５％ＣＯ２条件下で、２４時間又は４８時間培養した。
【0043】
（ＩＩ）免疫染色
（１）顕微鏡下で細胞毒性がないことを確認し、上記（Ｉ）（３）で培養していた培地を除去した。そこに、０．１％ ＣｅｌｌＭａｓｋ ＤｅｅｐＲｅｄ Ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｓｔａｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃Ｃ１００４６）／０．１％ Ｃｅｌｌ ｓｔａｉｎ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（ＤＯＪＩＮＤＯ ＃３４６－０７９５１）／ＰＢＳ（３７℃予温）を、１ウェルあたり１２０μＬ加え、３７℃で１５分間、遮光してインキュベートし、細胞膜染色及び核染色を行った。その後、１ウェルあたり２００μＬのＰＢＳで３回洗浄した。
（２）４％ パラホルムアルデヒド溶液（ＦＵＪＩＦＩＬＭ Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＃１６１－２０１４１）を１ウェルあたり１２０μＬ加え、室温で２０分間、遮光してインキュベートし、細胞固定を行った。その後、１ウェルあたり２００μＬのＰＢＳで２回洗浄した。
（３）１０％ Ｎｏｒｍａｌ Ｇｏａｔ Ｓｅｒｕｍ（ａｂｃａｍ ＃ａｂ７４８１）／ＰＢＳを、１ウェルあたり１００μＬ加え、３７℃で３０分間、遮光してインキュベートし、ブロッキングを行った。その後、１ウェルあたり２００μＬの０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０（ＢＩＯ ＲＡＤ ＃１６１－０７８１）／ＰＢＳで３回洗浄した。
（４）１．５ｎｇ／ｍＬ Ａｎｔｉ－ＧＬＵＴ１抗体［ＥＰＲ３９１５］， ｒａｂｂｉｔ（Ａｂｃａｍ ＃ａｂ１１５７３０）又は、Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ Ｉｓｏｔｙｐｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃１０５０００Ｃ）／１％ Ｎｏｒｍａｌ Ｇｏａｔ Ｓｅｒｕｍ／ＰＢＳを、１ウェルあたり１００μＬ加え、３７℃で６０分間、遮光してインキュベートし、１次抗体反応を行った。その後、１ウェルあたり２００μＬの０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳで３回洗浄した。
（５）０．４％ Ｇｏａｔ ａｎｔｉ－Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ） Ｃｒｏｓｓ－Ａｄｓｏｒｂｅｄ Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ Ａｎｔｉｂｏｄｙ， Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃Ａ－１１００８）／１％ Ｎｏｒｍａｌ Ｇｏａｔ Ｓｅｒｕｍ／ＰＢＳを、１ウェルあたり１００μＬ加え、３７℃で３０分間、遮光してインキュベートし、２次抗体反応を行った。その後、１ウェルあたり２００μＬの０．０５％ Ｔｗｅｅｍ２０／ＰＢＳで３回洗浄し、１ウェルあたり１００μＬのＰＢＳで２回洗浄した後、１ウェルあたり１００μＬのＰＢＳを加えた。
（６）Ｏｐｅｒｅｔｔａ ＣＬＳ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＃ＨＨ１６００００００）を用いて写真撮影（４０倍）を行った。
結果を図２に示す。
（１）顕微鏡下で細胞毒性がないことを確認し、上記（Ｉ）（３）で培養していた培地を除去した。そこに、０．１％ ＣｅｌｌＭａｓｋ ＤｅｅｐＲｅｄ Ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｓｔａｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃Ｃ１００４６）／０．１％ Ｃｅｌｌ ｓｔａｉｎ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（ＤＯＪＩＮＤＯ ＃３４６－０７９５１）／ＰＢＳ（３７℃予温）を、１ウェルあたり１２０μＬ加え、３７℃で１５分間、遮光してインキュベートし、細胞膜染色及び核染色を行った。その後、１ウェルあたり２００μＬのＰＢＳで３回洗浄した。
（２）４％ パラホルムアルデヒド溶液（ＦＵＪＩＦＩＬＭ Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＃１６１－２０１４１）を１ウェルあたり１２０μＬ加え、室温で２０分間、遮光してインキュベートし、細胞固定を行った。その後、１ウェルあたり２００μＬのＰＢＳで２回洗浄した。
（３）１０％ Ｎｏｒｍａｌ Ｇｏａｔ Ｓｅｒｕｍ（ａｂｃａｍ ＃ａｂ７４８１）／ＰＢＳを、１ウェルあたり１００μＬ加え、３７℃で３０分間、遮光してインキュベートし、ブロッキングを行った。その後、１ウェルあたり２００μＬの０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０（ＢＩＯ ＲＡＤ ＃１６１－０７８１）／ＰＢＳで３回洗浄した。
（４）１．５ｎｇ／ｍＬ Ａｎｔｉ－ＧＬＵＴ１抗体［ＥＰＲ３９１５］， ｒａｂｂｉｔ（Ａｂｃａｍ ＃ａｂ１１５７３０）又は、Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ Ｉｓｏｔｙｐｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃１０５０００Ｃ）／１％ Ｎｏｒｍａｌ Ｇｏａｔ Ｓｅｒｕｍ／ＰＢＳを、１ウェルあたり１００μＬ加え、３７℃で６０分間、遮光してインキュベートし、１次抗体反応を行った。その後、１ウェルあたり２００μＬの０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳで３回洗浄した。
（５）０．４％ Ｇｏａｔ ａｎｔｉ－Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ） Ｃｒｏｓｓ－Ａｄｓｏｒｂｅｄ Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ Ａｎｔｉｂｏｄｙ， Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃Ａ－１１００８）／１％ Ｎｏｒｍａｌ Ｇｏａｔ Ｓｅｒｕｍ／ＰＢＳを、１ウェルあたり１００μＬ加え、３７℃で３０分間、遮光してインキュベートし、２次抗体反応を行った。その後、１ウェルあたり２００μＬの０．０５％ Ｔｗｅｅｍ２０／ＰＢＳで３回洗浄し、１ウェルあたり１００μＬのＰＢＳで２回洗浄した後、１ウェルあたり１００μＬのＰＢＳを加えた。
（６）Ｏｐｅｒｅｔｔａ ＣＬＳ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＃ＨＨ１６００００００）を用いて写真撮影（４０倍）を行った。
結果を図２に示す。
【0044】
【0045】
＜試験例２＞真皮層における、生物由来抽出物のＧＬＵＴ１発現促進効果の測定
正常ヒト真皮線維芽細胞において、ＧＬＵＴ１の発現量を増加させる成分をスクリーニングした。
（１）１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地（ＳＩＧＭＡ社製）を用い、正常ヒト真皮線維芽細胞を、２４ウェルプレートに７．０×１０４個／ウェルになるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で２４時間培養した。
（２）培養後、培地を除去し、被験対象の植物エキス又は溶媒対照を０．５％と、ＦＢＳを１％含むＤＭＥＭ培地を加え、３７℃、５％ＣＯ２環境下で、２４時間培養した。以下、被験対象の植物エキスを含む培地を加えた細胞を植物エキス添加群、溶媒対照を含む培地を加えた細胞を溶媒対照群とする。
以降は、上記＜試験例１＞の（３）以降と同様にして、正常ヒト真皮線維芽細胞におけるＧＬＵＴ１の発現量を算出した。結果を図３に示す。
正常ヒト真皮線維芽細胞において、ＧＬＵＴ１の発現量を増加させる成分をスクリーニングした。
（１）１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地（ＳＩＧＭＡ社製）を用い、正常ヒト真皮線維芽細胞を、２４ウェルプレートに７．０×１０４個／ウェルになるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で２４時間培養した。
（２）培養後、培地を除去し、被験対象の植物エキス又は溶媒対照を０．５％と、ＦＢＳを１％含むＤＭＥＭ培地を加え、３７℃、５％ＣＯ２環境下で、２４時間培養した。以下、被験対象の植物エキスを含む培地を加えた細胞を植物エキス添加群、溶媒対照を含む培地を加えた細胞を溶媒対照群とする。
以降は、上記＜試験例１＞の（３）以降と同様にして、正常ヒト真皮線維芽細胞におけるＧＬＵＴ１の発現量を算出した。結果を図３に示す。
【0046】
図３（Ａ）及び（Ｂ）に示すように、メマツヨイグサエキス及びローヤルゼリーエキスは、正常ヒト真皮線維芽細胞において、ＧＬＵＴ１の発現量を増加させることがわかった。
以上より、メマツヨイグサエキス及びローヤルゼリーエキスは、本発明のＧＬＵＴ１発現促進剤に適用することができることが示された。
以上より、メマツヨイグサエキス及びローヤルゼリーエキスは、本発明のＧＬＵＴ１発現促進剤に適用することができることが示された。
【0047】
また、上記２種のうち、メマツヨイグサエキスを添加した細胞について、細胞の免疫染色を行い、ＧＬＵＴ１の発現量について観察した。
完全培地としてＤＭＥＭ、１％ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、１０％ ＦＢＳを、専用培地としてＤＭＥＭ－ｌｏｗ ｇｌｕｃｏｓｅを用い、評価エキスをメマツヨイグサエキスとした以外は、試験例１と同様にして、細胞の免疫染色及び撮影を行った。
結果を図４に示す。
完全培地としてＤＭＥＭ、１％ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、１０％ ＦＢＳを、専用培地としてＤＭＥＭ－ｌｏｗ ｇｌｕｃｏｓｅを用い、評価エキスをメマツヨイグサエキスとした以外は、試験例１と同様にして、細胞の免疫染色及び撮影を行った。
結果を図４に示す。
【0048】
【0049】
＜試験例３＞ＧＬＵＴ１の発現量と、インボルクリンの発現量及びオクルーディンの発現量の関係
ＧＬＵＴ１の発現量と、インボルクリンの発現量及びオクルーディンの発現量の関係を試験した。
ＧＬＵＴ１の発現量と、インボルクリンの発現量及びオクルーディンの発現量の関係を試験した。
【0050】
（Ｉ）細胞の培養
細胞はヒト線維芽細胞（ＮＨＤＦ）とヒト角化細胞（ＮＨＥＫ）を用いた。それぞれの細胞種において若齢ドナー由来（１８才及び２８才）及び高齢ドナー由来（５４才）を試験に用いた。
細胞はそれぞれメーカー推奨方法にて培養を行った。
細胞培養用フラスコ２５０（住友ベークライト ＃ ＭＳ－２１２５０）に播種し、６０－９０％コンフルエントに達した細胞はトリプシン中和液（ＫＵＲＡＢＯ ＃ＨＫ－３２２０）を用い剥離し、継代した。
継代数は、ヒト線維芽細胞については、Ｐ＋２－８、ヒト角化細胞については、Ｐ＋２－５とした。
細胞はヒト線維芽細胞（ＮＨＤＦ）とヒト角化細胞（ＮＨＥＫ）を用いた。それぞれの細胞種において若齢ドナー由来（１８才及び２８才）及び高齢ドナー由来（５４才）を試験に用いた。
細胞はそれぞれメーカー推奨方法にて培養を行った。
細胞培養用フラスコ２５０（住友ベークライト ＃ ＭＳ－２１２５０）に播種し、６０－９０％コンフルエントに達した細胞はトリプシン中和液（ＫＵＲＡＢＯ ＃ＨＫ－３２２０）を用い剥離し、継代した。
継代数は、ヒト線維芽細胞については、Ｐ＋２－８、ヒト角化細胞については、Ｐ＋２－５とした。
【0051】
（ＩＩ）ｓｉＲＮＡの導入によるＣＬＵＴ１発現遺伝子のノックダウン
（１）プレートに細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で、一晩完全培地にて培養し、７０－９０％コンフルエントにした（Ｎ＝３－４）。なお、２４ウェルプレートにおいては、１ウェルあたり６．０－７．０×１０４個／５００μＬになるように細胞を播種し、４８ウェルプレートにおいては、１ウェルあたり３．０－３．５×１０４個／２５０μＬになるように細胞を播種した。表１に、使用細胞と、これを培養する際に使用した培地の組み合わせを示す。
（１）プレートに細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で、一晩完全培地にて培養し、７０－９０％コンフルエントにした（Ｎ＝３－４）。なお、２４ウェルプレートにおいては、１ウェルあたり６．０－７．０×１０４個／５００μＬになるように細胞を播種し、４８ウェルプレートにおいては、１ウェルあたり３．０－３．５×１０４個／２５０μＬになるように細胞を播種した。表１に、使用細胞と、これを培養する際に使用した培地の組み合わせを示す。
【0052】
【表1】
【0053】
（２）Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を、各細胞に対応する専用培地（表１に記載）に混和し、１～２：５０の割合で希釈した。
（３）導入するｓｉＲＮＡは、ＯＮ－ＴＡＲＧＥＴ ｐｌｕｓ ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）試薬を用い、専用培地及びＰＢＳにて希釈（細胞最終添加濃度２５ｎＭ）し、希釈済みＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ Ｒｅａｇｅｎｔと１：１の割合で混和した。その後、室温で１５分間インキュベートし、ｓｉＲＮＡ複合導入試薬を作成した。
なお、ｓｉＲＮＡは、下記表２に記載のものを使用した。
（３）導入するｓｉＲＮＡは、ＯＮ－ＴＡＲＧＥＴ ｐｌｕｓ ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）試薬を用い、専用培地及びＰＢＳにて希釈（細胞最終添加濃度２５ｎＭ）し、希釈済みＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ Ｒｅａｇｅｎｔと１：１の割合で混和した。その後、室温で１５分間インキュベートし、ｓｉＲＮＡ複合導入試薬を作成した。
なお、ｓｉＲＮＡは、下記表２に記載のものを使用した。
【0054】
【表2】
【0055】
（４）培養細胞の培地を除去し、培地と等量のＰＢＳで１回洗浄した。
（５）１ウェルあたり２００－４００μＬの専用培地を添加した後、上記（３）で調製したｓｉＲＮＡ複合導入試薬を５０－１００μＬ添加し、プレートを穏やかに揺すり、細胞毒性がないことを顕微鏡下で確認した後に、３７℃、５％ＣＯ２環境下で、８－４８時間培養した。
（５）１ウェルあたり２００－４００μＬの専用培地を添加した後、上記（３）で調製したｓｉＲＮＡ複合導入試薬を５０－１００μＬ添加し、プレートを穏やかに揺すり、細胞毒性がないことを顕微鏡下で確認した後に、３７℃、５％ＣＯ２環境下で、８－４８時間培養した。
【0056】
（ＩＩＩ）細胞からのＲＮＡ抽出、ｃＤＮＡ合成及びｑＰＣＲ
（１）上記（ＩＩ）（５）で培養した培養細胞について、培地を除去した後、除去した培地と等量のＰＢＳで１回洗浄した。氷上にて、１ウェルあたり３５０μＬのＢｕｆｆｅｒ ＲＬＴで懸濁し、細胞懸濁液を回収した。
（２）上記（１）で得た細胞懸濁液はＱＩＡｃｕｂｅ（ＱＩＡＧＥＮ ＃９００１２９３）にてＲＮＡを抽出した。溶出量は、１サンプル当たり３０μＬとした。
（３）ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（ライフテクノロジーズ ＃１１７５４２５０）を用い、サーマルサイクラー（ＢＩＯ ＲＡＤ ＃Ｔ１００）にて、メーカー推奨プロトコルにてｃＤＮＡを合成した。サンプルＲＮＡは２０－５０ｎｇ／２０μＬ、スタンダード用ＲＮＡは、５０－１００ｎｇ／２０μＬ使用した。
（４）リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ， ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ５）にて、スタンダード法によりｑＰＣＲを行い、コラーゲン、インボルクリン及びオクルーディンのｍＲＮＡ発現量を測定した。各サンプルは、イオン交換水：２．５μＬ， プライマー：０．５μＬ， ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ：５μＬ， １０－３０倍希釈ｃＤＮＡサンプル又は５－３０倍希釈スタンダードｃＤＮＡサンプル：２μＬで調製した。また、サイクル数は４５－５０とした。
上記測定は３回行い、３回の平均値を算出した。プライマーは、下記表３に示すＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｉｍｅｒ Ａｓｓａｙ（ＱＩＡＧＥＮ ＃２４９９００）を用いた。
（１）上記（ＩＩ）（５）で培養した培養細胞について、培地を除去した後、除去した培地と等量のＰＢＳで１回洗浄した。氷上にて、１ウェルあたり３５０μＬのＢｕｆｆｅｒ ＲＬＴで懸濁し、細胞懸濁液を回収した。
（２）上記（１）で得た細胞懸濁液はＱＩＡｃｕｂｅ（ＱＩＡＧＥＮ ＃９００１２９３）にてＲＮＡを抽出した。溶出量は、１サンプル当たり３０μＬとした。
（３）ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（ライフテクノロジーズ ＃１１７５４２５０）を用い、サーマルサイクラー（ＢＩＯ ＲＡＤ ＃Ｔ１００）にて、メーカー推奨プロトコルにてｃＤＮＡを合成した。サンプルＲＮＡは２０－５０ｎｇ／２０μＬ、スタンダード用ＲＮＡは、５０－１００ｎｇ／２０μＬ使用した。
（４）リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ， ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ５）にて、スタンダード法によりｑＰＣＲを行い、コラーゲン、インボルクリン及びオクルーディンのｍＲＮＡ発現量を測定した。各サンプルは、イオン交換水：２．５μＬ， プライマー：０．５μＬ， ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ：５μＬ， １０－３０倍希釈ｃＤＮＡサンプル又は５－３０倍希釈スタンダードｃＤＮＡサンプル：２μＬで調製した。また、サイクル数は４５－５０とした。
上記測定は３回行い、３回の平均値を算出した。プライマーは、下記表３に示すＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｉｍｅｒ Ａｓｓａｙ（ＱＩＡＧＥＮ ＃２４９９００）を用いた。
【0057】
【表3】
【0058】
（５）コラーゲン、インボルクリン及びオクルーディンのｍＲＮＡの発現量を、β－アクチンのｍＲＮＡの発現量で除算した。
表皮角化細胞及び真皮線維芽細胞において、ＧＬＵＴ１発現遺伝子をノックダウンした場合の、ＧＬＵＴ１のｍＲＮＡの発現量の変化を、表４及び図５に示す。
表皮角化細胞においてＧＬＵＴ１発現遺伝子をノックダウンした場合の、ＧＬＵＴ１のｍＲＮＡの発現量の変化を、図６に示す。
表皮角化細胞において、ＧＬＵＴ１発現遺伝子をノックダウンした場合の、インボルクリンのｍＲＮＡの発現量の変化を、表４及び図７に示す。
表皮角化細胞において、ＧＬＵＴ１発現遺伝子をノックダウンした場合の、オクルーディンのｍＲＮＡの発現量の変化を、表４、及び図８に示す。
表皮角化細胞及び真皮線維芽細胞において、ＧＬＵＴ１発現遺伝子をノックダウンした場合の、ＧＬＵＴ１のｍＲＮＡの発現量の変化を、表４及び図５に示す。
表皮角化細胞においてＧＬＵＴ１発現遺伝子をノックダウンした場合の、ＧＬＵＴ１のｍＲＮＡの発現量の変化を、図６に示す。
表皮角化細胞において、ＧＬＵＴ１発現遺伝子をノックダウンした場合の、インボルクリンのｍＲＮＡの発現量の変化を、表４及び図７に示す。
表皮角化細胞において、ＧＬＵＴ１発現遺伝子をノックダウンした場合の、オクルーディンのｍＲＮＡの発現量の変化を、表４、及び図８に示す。
【0059】
【表4】
【0060】
表４及び図５に示されるように、何れの遺伝子もノックダウンしてない群（ｓｉＲＮＡとしてｓｉ ｎｏｎ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇを使用した群）と比較して、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンした群（ｓｉＲＮＡとしてｓｉ ＧＬＵＴ１を使用した群）においては、ＧＬＵＴ１のｍＲＮＡの発現量が減少していた。
また、コラーゲンの産生遺伝子のｍＲＮＡの発現量も減少していた（図６）。
また、コラーゲンの産生遺伝子のｍＲＮＡの発現量も減少していた（図６）。
【0061】
ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンした群においては、インボルクリンのｍＲＮＡの発現量及びオクルーディンのｍＲＮＡの発現量が、ＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子をノックダウンしていない群と比較して、減少していた（表４、図７及び図８）。
以上より、皮膚組織において、ＧＬＵＴ１の発現量が減少すると、インボルクリンの発現量及びオクルーディンの発現量が減少することが、明らかになった。
以上より、皮膚組織において、ＧＬＵＴ１の発現量が減少すると、インボルクリンの発現量及びオクルーディンの発現量が減少することが、明らかになった。
【0062】
この結果から、ＧＬＵＴ１の発現量を増加させることで、インボルクリン及びオクルーディンの発現量を増加させることができることがわかる。
したがって、上記試験例１及び２においてＧＬＵＴ１発現促進効果を有することが明らかになった、スイカズラエキス、セイヨウニワトコエキス、ユキノシタエキス、タイムエキス、オトギリソウエキス、メマツヨイグサエキス及びローヤルゼリーエキスは、インボルクリン及び／又はオクルーディン発現促進のための、ＧＬＵＴ１発現促進剤に適用することができる。
したがって、上記試験例１及び２においてＧＬＵＴ１発現促進効果を有することが明らかになった、スイカズラエキス、セイヨウニワトコエキス、ユキノシタエキス、タイムエキス、オトギリソウエキス、メマツヨイグサエキス及びローヤルゼリーエキスは、インボルクリン及び／又はオクルーディン発現促進のための、ＧＬＵＴ１発現促進剤に適用することができる。
【0063】
以下に、本発明に係るＧＬＵＴ１発現促進剤の製造例を示す。各製造例は、本発明の属する分野において通常行われている方法によって、製造することができる。
＜製造例１＞化粧水
＜製造例１＞化粧水
【0064】
【表5】
【0065】
＜製造例２＞乳液
【0066】
【表6】
【0067】
＜製造例３＞洗顔料
【0068】
【表7】
【産業上の利用可能性】
【0069】
本発明のＧＬＵＴ１発現促進剤は、経口剤や皮膚外用剤に利用することができる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
