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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B1)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-17
(45)【発行日】2024-09-26
(54)【発明の名称】人工アジュバントベクター細胞と免疫賦活化剤との併用
(51)【国際特許分類】
A61K 35/12 20150101AFI20240918BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240918BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240918BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240918BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240918BHJP
A61K 39/00 20060101ALI20240918BHJP
A61K 39/39 20060101ALI20240918BHJP
【ＦＩ】
A61K35/12
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61P43/00 121
A61P37/04
A61P35/00
A61K39/00 H
A61K39/39
【請求項の数】
9
(21)【出願番号】P 2024125691
(22)【出願日】2024-08-01
(62)【分割の表示】P 2021539277の分割
【原出願日】2020-08-07
【審査請求日】2024-08-02
(31)【優先権主張番号】P 2019147019
(32)【優先日】2019-08-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2020086468
(32)【優先日】2020-05-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】503359821
【氏名又は名称】国立研究開発法人理化学研究所
(74)【代理人】
【識別番号】100173185
【弁理士】
【氏名又は名称】森田 裕
(72)【発明者】
【氏名】藤井 眞一郎
(72)【発明者】
【氏名】清水 佳奈子
【審査官】渡邉 潤也
(56)【参考文献】
【文献】特開２０１０－８３８６３（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１０／６１９３０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２００７／９７３７０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１５／６９６９７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１２／２７３２８（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２０１３／２８２３１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１５／１１２７９３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１８－５１６５４８（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１８／６４２５５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】LIU J. et al.，Blockade of TIM3 relieves immunosuppression through reducing regulatory T cells in head and neck cancer，Journal of Experimental & Clinical Cancer Research，2018年，37，44, p.1-8
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
免疫賦活剤と併用される、人工アジュバントベクター細胞を含む医薬組成物であって、人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、抗原を発現し、かつ、免疫賦活剤が、抗ＯＸ４０抗体を含む、医薬組成物。
【請求項2】
人工アジュバントベクター細胞が、ＣＤ１ｄをコードする外来の核酸および腫瘍抗原をコードする外来の核酸の少なくとも１つを有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
ＣＤ１ｄリガンドが、α－ガラクトシルセラミドである、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
人工アジュバントベクター細胞が、ヒト細胞である、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
賦形剤をさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
非経口投与に適した剤型で製剤化された、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項7】
人工アジュバントベクター細胞を含む医薬組成物と併用される、抗ＯＸ４０抗体を含む免疫賦活剤であって、
前記人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、抗原を発現する、免疫賦活剤。
【請求項8】
賦形剤をさらに含む、請求項７に記載の免疫賦活剤。
【請求項9】
（１）人工アジュバントベクター細胞を含む医薬組成物であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、抗原を発現する医薬組成物と、
（２）抗ＯＸ４０抗体を含む免疫賦活化剤と
を含む組合せ製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、免疫チェックポイントに作用して免疫を賦活化する免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤、または免疫活性化剤）を含む、自然免疫を活性化することに用いるための組成物に関する。本発明はまた、人工アジュバントベクター細胞と免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）との併用に関する。
【背景技術】
【0002】
ＣＤ１ｄと標的タンパク質を共発現する細胞をＣＤ１ｄリガンドでパルスして得られる細胞は、人工アジュバントベクター細胞（ａＡＶＣ）と呼ばれ、投与された対象において自然免疫と、当該標的タンパク質に対する獲得免疫を誘発する（特許文献１～３および非特許文献１）。
【0003】
免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）の中で、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイント分子の働きを阻害することによってＴ細胞に対する抑制効果を弱めるまたは解除し、これにより免疫能を向上させて、がんや感染症に対する治療効果を奏することができる。免疫賦活剤は免疫を賦活させる製剤である。より具体的には、免疫チェックポイント阻害剤は、抗原特異的な細胞傷害性Ｔ細胞が免疫チェックポイント分子の働きによって受けた抑制を弱めるまたは解除することによって、抗原特異的な細胞傷害性Ｔ細胞ががん細胞や病原体により感染した細胞を殺傷することを促進することができる（特許文献４）。免疫活性化剤は抗原特異的な細胞傷害性Ｔ細胞の機能を高めることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【文献】ＷＯ２００７／０９７３７０
【文献】ＷＯ２０１０／０６１９３０
【文献】ＷＯ２０１３／０１８７７８
【文献】ＷＯ２００４／００４７７１
【非特許文献】
【0005】
【文献】Ｓｈｉｍｉｚｕ Ｋ． ｅｔ ａｌ．， ２００７， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， Ｖｏｌ． １７８， ｐｐ２８５３－２８６１
【発明の概要】
【0006】
本発明は、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）を含む、自然免疫を活性化することに用いるための組成物を提供する。本発明はまた、人工アジュバントベクター細胞と免疫チェックポイント阻害剤との併用を提供する。
【0007】
本発明者らは、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）が自然免疫に関与するインバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）を増加させ、かつ、抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、またはＣＤ８陽性Ｔ細胞）を増加させることを見出した。本発明者らは、免疫チェックポイント阻害剤と人工アジュバントベクター細胞（ａＡＶＣ）との併用により、ｉＮＫＴ細胞を増加させ、かつ、ａＡＶＣに発現させた抗原に対する抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、またはＣＤ８陽性Ｔ細胞）を増加させることを見出した。本発明は、これらの知見に基づく。
【0008】
本発明によれば、以下の産業上利用可能な発明が提供される。
（１）免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）と併用される、人工アジュバントベクター細胞を含む医薬組成物であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、抗原を発現する、医薬組成物。
（２）人工アジュバントベクター細胞が、ＣＤ１ｄをコードする外来の核酸および腫瘍抗原をコードする外来の核酸の少なくとも１つを有する、上記（１）に記載の医薬組成物。
（３）ＣＤ１ｄリガンドが、α－ガラクトシルセラミドである、上記（１）または（２）に記載の医薬組成物。
（４）免疫賦活剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体（以上、免疫チェックポイント阻害剤）、および抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体（以上、免疫賦活剤）から選択される少なくとも１つの抗体である、上記（１）～（３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（５）免疫賦活剤が、上記（１）～（３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（６）免疫賦活剤が、免疫を活性化するサイトカインである、上記（１）～（３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（７）人工アジュバントベクター細胞または当該細胞を含む医薬組成物と併用される、免疫関連分子に作用して免疫を賦活化する免疫賦活剤であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、抗原を発現する、医薬組成物。
（８）免疫チェックポイントに作用して免疫を賦活化する免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）と人工アジュバントベクター細胞との組合せ製剤であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、抗原を発現する、組合せ製剤。
（９）免疫チェックポイントに作用して免疫を賦活化する免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）を含む、自然免疫を活性化させることに用いるための組成物。
（１）免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）と併用される、人工アジュバントベクター細胞を含む医薬組成物であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、抗原を発現する、医薬組成物。
（２）人工アジュバントベクター細胞が、ＣＤ１ｄをコードする外来の核酸および腫瘍抗原をコードする外来の核酸の少なくとも１つを有する、上記（１）に記載の医薬組成物。
（３）ＣＤ１ｄリガンドが、α－ガラクトシルセラミドである、上記（１）または（２）に記載の医薬組成物。
（４）免疫賦活剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体（以上、免疫チェックポイント阻害剤）、および抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体（以上、免疫賦活剤）から選択される少なくとも１つの抗体である、上記（１）～（３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（５）免疫賦活剤が、上記（１）～（３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（６）免疫賦活剤が、免疫を活性化するサイトカインである、上記（１）～（３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（７）人工アジュバントベクター細胞または当該細胞を含む医薬組成物と併用される、免疫関連分子に作用して免疫を賦活化する免疫賦活剤であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、抗原を発現する、医薬組成物。
（８）免疫チェックポイントに作用して免疫を賦活化する免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）と人工アジュバントベクター細胞との組合せ製剤であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、抗原を発現する、組合せ製剤。
（９）免疫チェックポイントに作用して免疫を賦活化する免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）を含む、自然免疫を活性化させることに用いるための組成物。
【図面の簡単な説明】
【0009】
【図2】図２は、図１によるスキームで抗原としてのオボアルブミン（ＯＶＡ）を発現したａＡＶＣと表示された免疫チェックポイント阻害剤とを併用投与したマウスにおける抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８陽性Ｔ細胞またはＣＬＴ）のフローサイトメトリーを示す。
【発明の具体的内容】
【0010】
本明細書では、「対象」とは、哺乳動物であり得、例えば、ヒトおよび非ヒト哺乳動物が含まれる。
【0011】
本明細書では、「処置」とは、治療的処置および予防的処置を含む意味で用いられる。本明細書では、「治療」とは、疾患もしくは状態の進行の遅延または停止、並びに疾患もしくは状態の改善および治癒を含む意味で用いられる。本明細書では「予防」とは、疾患または状態の発症を抑制すること、および、その発症率を低下させることを含む意味で用いられる。
【0012】
本明細書では、「人工アジュバントベクター細胞」（ａＡＶＣ）とは、ＣＤ１ｄと抗原（例えば、がん抗原、ウイルス抗原、および微生物の抗原等の標的に発現する分子）を発現する細胞であって、ＣＤ１ｄでパルスされた細胞を意味する。ＣＤ１ｄでパルスされた細胞は、ＣＤ１ｄを発現する細胞をＣＤ１ｄリガンドと共に培養することによって得られ得る。培養後、細胞に付着しなかったＣＤ１ｄリガンドは、洗浄によって除去することができる。ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ファミリーのタンパク質であり、ＭＨＣクラスＩ様の糖タンパク質である。ＣＤ１ｄは、糖脂質を提示して、例えば、ｉＮＫＴ細胞を活性化させ得る。ＣＤ１ｄとしては、例えば、ヒトのＣＤ１ｄ、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＡＡＨ２７９２６．１の下で登録されたアミノ酸配列を有するタンパク質が挙げられる。ＣＤ１ｄリガンドは、ＣＤ１ｄに結合する糖脂質を意味する。ＣＤ１ｄリガンドとしては、例えば、α－ＧａｌＣｅｒ（α－ガラクトシルセラミド）、α－Ｃ－ＧａｌＣｅｒ（α－Ｃ－ガラクトシルセラミド）、ｉＧＢ３（イソグロボトリヘキソシルセラミド）、ＧＤ３（ガングリオシド３）、ＧＳＬ－１（α－結合型グルクロン酸）、ＧＳＬ－１’ＳＡ（ガラクツロン酸）が挙げられ、ＣＤ１ｄリガンドとして用いられ得る。ＣＤ１ｄリガンドとしては、例えば、α－ＧａｌＣｅｒ、α－Ｃ－ＧａｌＣｅｒが好ましく用いられ得る。
【0013】
ａＡＶＣは、哺乳動物に投与されると、ｉＮＫＴ細胞を活性化し、樹状細胞を成熟化させ、自然免疫を誘導すると共に獲得免疫を誘導する。ａＡＶＣがタンパク質を発現する場合、当該タンパク質に対する獲得免疫も誘導される。ａＡＶＣは、樹状細胞、がん細胞、およびそれ以外の細胞（例えば、体細胞）のいずれを用いても、自然免疫および獲得免疫を誘導する。ａＡＶＣは、投与対象と同種同系であっても同種異系であっても、対象において自然免疫および獲得免疫を誘導する。ａＡＶＣが同種異系の場合、対象において自然免疫および獲得免疫を誘導した後に、ａＡＶＣ自体は、対象の免疫系により非自己として排除され得る。標的タンパク質をａＡＶＣに発現させることによって、ａＡＶＣを投与された対象において、当該標的タンパク質特異的な獲得免疫を誘導させることができる。標的タンパク質は、ａＡＶＣにおいては、蛋白全長、或いは部分ペプチドである。ａＡＶＣは、ＣＤ１ｄを発現し、かつＣＤ１ｄリガンドによってパルスされている。ａＡＶＣは、制御配列に作動可能に連結したＣＤ１ｄをコードする外来性の遺伝子を有し得る。ａＡＶＣは、制御配列に作動可能に連結した標的タンパク質をコードする外来性の遺伝子を有し得る。ａＡＶＣは、内在性の標的タンパク質を発現し得る。
【0014】
本明細書では、「細胞」は、哺乳動物の細胞であり、例えば、ヒト細胞であり得る。細胞としては、樹状細胞および非樹状細胞が挙げられる。細胞としては、腫瘍細胞および非腫瘍細胞が挙げられる。細胞としては、がん細胞および非がん細胞が挙げられる。細胞としては、不死化細胞および初代細胞が挙げられる。細胞としては、体細胞およびそれ以外の細胞が挙げられる。細胞は、投与対象に対して、同種同系であってもよく、同種異系であってもよい。細胞としては、例えば、ヒト細胞およびヒト細胞株、例えば、ヒト胎児腎細胞株、例えば、ＨＥＫ２９３細胞が挙げられる。
【0015】
本明細書では、「自然免疫」とは、貪食およびパターン認識により、侵入してきた異物や以上が生じた細胞を検知し、排除する仕組みである。自然免疫は、主に、好中球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、および樹状細胞に担われる。これに対して、「獲得免疫」は、異物の特徴を記憶することによって、再侵入する異物を効果的に排除する仕組みである。獲得免疫は、主にＴ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）およびヘルパーＴ細胞）およびＢ細胞などのリンパ球が担う。獲得免疫は自然免疫の後で確立されるため、応答までに時間を要する。自然免疫において、末梢組織内に存在する樹状細胞は、病原体を貪食して取り込み、それらをペプチドに分解する。その後、リンパ節や脾臓への移動と成熟を経て、獲得免疫を司るＴ細胞に抗原ペプチドを提示する。そうすると、獲得免疫が誘導されて、当該抗原に対するキラーＴ細胞やＢ細胞が活性化し、異物への攻撃が始まる。このように、自然免疫は、樹状細胞を介して獲得免疫を誘導する。未成熟な樹状細胞は、抗原提示能を有さず、強力な貪食作用を有し、成熟すると、貪食作用が弱まり、抗原提示能が強まる。また、接着分子や共刺激分子を高発現し、強いＴ細胞活性化能を獲得する。ａＡＶＣは、自然免疫リンパ球であるインバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）の活性化を引き起こし、樹状細胞の成熟化を促すことで自然免疫と獲得免疫の両方を賦活化できるワクチンシステムである。ａＡＶＣは、ｉＮＫＴ細胞リガンド（例えば、α－ＧａｒＣｅｒ）を結合したＣＤ１ｄを介してｉＮＫＴ細胞を活性化させるが、ａＡＶＣ自体は体内で破壊されて樹状細胞に取り込まれる。また、ａＡＶＣは、腫瘍組織などにキラーＴ細胞をリクルートする。
【0016】
本明細書では、「抗体」は、免疫グロブリンを意味し、一対のジスルフィド結合で安定化された２本の重鎖（Ｈ鎖）と２本の軽鎖（Ｌ鎖）が会合した構造をとるタンパク質をいう。重鎖は、重鎖可変領域ＶＨ、重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ１とＣＨ２の間に位置するヒンジ領域からなり、軽鎖は、軽鎖可変領域ＶＬと軽鎖定常領域ＣＬとからなる。この中で、ＶＨとＶＬからなる可変領域断片（Ｆｖ）が、抗原結合に直接関与し、抗体に多様性を与える領域である。また、ＶＬ、ＣＬ、ＶＨ、ＣＨ１からなる抗原結合領域をＦａｂ領域と呼び、ヒンジ領域、ＣＨ２、ＣＨ３からなる領域をＦｃ領域と呼ぶ。
可変領域のうち、直接抗原と接触する領域は特に変化が大きく、相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ： ＣＤＲ）と呼ばれる。ＣＤＲ以外の比較的変異の少ない部分をフレームワーク（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｇｉｏｎ： ＦＲ）と呼ぶ。軽鎖と重鎖の可変領域には、それぞれ３つのＣＤＲが存在し、それぞれＮ末端側から順に、重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３と呼ばれる。本明細書では、「抗Ａ抗体」とは、Ａに結合する抗体を意味する。抗Ａ抗体は、Ａに特異的に結合し得る。本明細書では、「Ａに特異的に結合する」とは、Ａに対してＡ以外の他のタンパク質に対する結合親和性よりも強い結合親和性を有することを意味する。
抗体は、モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であってもよい。また、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥのいずれのアイソタイプであってもよい。マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ニワトリなどの非ヒト動物を免疫して作製したものであってもよいし、組換え抗体であってもよく、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト化抗体等であってもよい。キメラ型抗体とは、異なる種に由来する抗体の断片が連結された抗体をいう。
「ヒト化抗体」とは、非ヒト由来の抗体に特徴的なアミノ酸配列で、ヒト抗体の対応する位置を置換した抗体を意味し、例えば、マウス又はラットを免疫して作製した抗体の重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を有し、重鎖及び軽鎖のそれぞれ４つのフレームワーク領域（ＦＲ）を含むその他のすべての領域がヒト抗体に由来するものが挙げられる。かかる抗体は、ＣＤＲ移植抗体と呼ばれる場合もある。用語「ヒト化抗体」は、ヒトキメラ抗体を含む場合もある。
「ヒトキメラ抗体」は、非ヒト由来の抗体において、非ヒト由来の抗体の定常領域がヒトの抗体の定常領域に置換されている抗体である。ヒトキメラ抗体では、ＡＤＣＣ活性を高める観点では、例えば、定常領域に用いるヒトの抗体のサブタイプはＩｇＧ１とすることができる。
可変領域のうち、直接抗原と接触する領域は特に変化が大きく、相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ： ＣＤＲ）と呼ばれる。ＣＤＲ以外の比較的変異の少ない部分をフレームワーク（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｇｉｏｎ： ＦＲ）と呼ぶ。軽鎖と重鎖の可変領域には、それぞれ３つのＣＤＲが存在し、それぞれＮ末端側から順に、重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３と呼ばれる。本明細書では、「抗Ａ抗体」とは、Ａに結合する抗体を意味する。抗Ａ抗体は、Ａに特異的に結合し得る。本明細書では、「Ａに特異的に結合する」とは、Ａに対してＡ以外の他のタンパク質に対する結合親和性よりも強い結合親和性を有することを意味する。
抗体は、モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であってもよい。また、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥのいずれのアイソタイプであってもよい。マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ニワトリなどの非ヒト動物を免疫して作製したものであってもよいし、組換え抗体であってもよく、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト化抗体等であってもよい。キメラ型抗体とは、異なる種に由来する抗体の断片が連結された抗体をいう。
「ヒト化抗体」とは、非ヒト由来の抗体に特徴的なアミノ酸配列で、ヒト抗体の対応する位置を置換した抗体を意味し、例えば、マウス又はラットを免疫して作製した抗体の重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を有し、重鎖及び軽鎖のそれぞれ４つのフレームワーク領域（ＦＲ）を含むその他のすべての領域がヒト抗体に由来するものが挙げられる。かかる抗体は、ＣＤＲ移植抗体と呼ばれる場合もある。用語「ヒト化抗体」は、ヒトキメラ抗体を含む場合もある。
「ヒトキメラ抗体」は、非ヒト由来の抗体において、非ヒト由来の抗体の定常領域がヒトの抗体の定常領域に置換されている抗体である。ヒトキメラ抗体では、ＡＤＣＣ活性を高める観点では、例えば、定常領域に用いるヒトの抗体のサブタイプはＩｇＧ１とすることができる。
【0017】
本明細書において、「抗原結合フラグメント」とは、抗体のフラグメントであって、抗原への結合親和性を有するフラグメントをいう。具体的には、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１領域からなるＦａｂ；２つのＦａｂがヒンジ領域でジスルフィド結合によって連結されているＦ（ａｂ’）２；ＶＬ及びＶＨからなるＦｖ；ＶＬ及びＶＨを人工のポリペプチドリンカーで連結した一本鎖抗体であるｓｃＦｖのほか、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）型、ｓｃＤｂ型、タンデム（ｔａｎｄｅｍ） ｓｃＦｖ型、ロイシンジッパー型などの二重特異性抗体等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0018】
本明細書では、「免疫チェックポイント阻害剤」は、免疫チェックポイント分子によって引き起こされる免疫細胞の抑制を解除することによって免疫を賦活する薬剤を意味する。本明細書では、「免疫活性化剤」は免疫細胞を活性化する薬剤（例えば、Ｔ細胞を指摘する薬剤、特にＣＴＬを刺激する薬剤、例えば、免疫共刺激分子を刺激する薬剤）を意味する。免疫活性化剤は、標的に対して選択的な薬剤であり得る。本明細書では、免疫チェックポイント阻害剤と免疫活性化剤を合わせて「免疫賦活剤」という。免疫チェックポイント分子としては、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ４；ＣＴＬＡ－４）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン－３（Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ｍｕｃｉｎ ｄｏｍａｉｎ－３、またはＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子３（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｇｅｎｅ ３、またはＬＡＧ－３）、およびＶ型免疫グロブリンドメイン含有Ｔ細胞活性化抑制因子（Ｖ－ｔｙｐｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ、またはＶＩＳＴＡ）が挙げられる。それぞれが担う免疫チェックポイントはＰＤ－１系免疫チェックポイント、ＣＴＬＡ－４系免疫チェックポイント、ＴＩＭ－３系免疫チェックポイント、ＬＡＧ－３系免疫チェックポイント、およびＶＩＳＴＡ系免疫チェックポイントとよばれる。免疫チェックポイント阻害剤は、例えば免疫チェックポイント分子又はそのリガンドに結合して、免疫チェックポイントの機能を阻害し得る。例えば、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２との結合を阻害することにより、ＰＤ－１系免疫チェックポイントを阻害することができる。また、ＣＴＬＡ－４とＣＤ８０又はＣＤ８６との結合を阻害することにより、ＣＴＬＡ－４系免疫チェックポイントを阻害することができる。また、ＴＩＭ－３とガレクチン－９との結合を阻害することにより、ＴＩＭ－３系免疫チェックポイントを阻害することができる。また、ＬＡＧ－３とＭＨＣクラスＩＩ分子との結合を阻害することにより、ＬＡＧ－３系免疫チェックポイントを阻害することができる。また、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ－３／ＩＧＳＦ１１との結合を阻害することにより、ＶＩＳＴＡ系免疫チェックポイントを阻害することができる。このようにして、ＰＤ－１系免疫チェックポイント、ＣＴＬＡ－４系免疫チェックポイント、ＴＩＭ－３系免疫チェックポイント、Ｌａｇ３系免疫チェックポイント、およびＶＩＳＴＡ系免疫チェックポイントからなる群から選択される１以上の免疫チェックポイントを阻害することができる。２つのタンパク質の結合を阻害する抗体は、受容体またはリガンドに結合することができる。例えば、ＰＤ－１系免疫チェックポイントを阻害する抗体は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＰＤ－Ｌ２抗体からなる群から選択される抗体（例えば、ニボルマブ、ペムプロリズマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、およびヂュルバルマブ）であり得る。また、ＣＴＬＡ－４系免疫チェックポイントを阻害する抗体は、抗ＣＤＬＡ－４抗体、抗ＣＤ８０抗体、および抗ＣＤ８６抗体からなる群から選択される抗体（例えば、イピリムマブ、およびトレメリムマブ）であり得る。また、ＴＩＭ－３系免疫チェックポイントを阻害する抗体は、抗ＴＩＭ－３抗体および抗ガレクチン－９抗体からなる群から選択される抗体（例えば、ＭＧＢ４５３）であり得る。また、また、ＶＩＳＴＡ系免疫チェックポイントを阻害する抗体は、抗ＶＩＳＴＡ抗体および抗ＶＳＩＧ－３／ＩＧＳＦ１１抗体からなる群から選択される抗体（例えば、ＪＮＪ－６１６１０５８８）であり得る。
また、免疫共刺激分子としては、ＯＸ４０およびグルココルチコイド誘発ＴＮＦ関連タンパク質（Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＴＮＦ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ、またはＧＩＴＲ）が挙げられる。ＧＩＴＲおよびＯＸ４０などの免疫共刺激分子については、各々のアゴニスト抗体（すなわち、ＧＩＴＲに結合するアゴニスト抗体およびＯＸ４０に結合するアゴニスト抗体）または各々のアゴニストにより刺激すると、キラーＴ細胞は活性化し、制御性Ｔ細胞は機能が抑制される。このようにして、免疫共刺激分子を刺激することができ、例えば、ＧＩＴＲおよびＯＸ４０からなる群から選択される１以上の免疫共刺激分子を刺激することができる。ＧＩＴＲ免疫共刺激分子に対する免疫賦活剤（ＧＩＴＲ免疫共刺激分子のアゴニスト抗体またはアゴニスト）は、抗ＧＩＴＲ抗体およびＧＩＴＲアゴニスト（例えば、ＴＲＸ５１８、およびＭＥＤＩ１８７３）であり得る。また、ＯＸ４０免疫共刺激分子に対する免疫調整剤（ＯＸ４０免疫共刺激分子のアゴニスト抗体またはアゴニスト）は、抗ＯＸ４０抗体およびＯＸ４０アゴニスト（例えば、ＧＳＫ３１７４９９８、ＭＯＸＲ０９１６、ＰＦ－０４５１８６００、およびＭＥＤＩ０５６２）であり得る。その他、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体としては、ＷＯ２０１２０２７３２８Ａ、ＷＯ２０１３０２８２３１Ａ、ＷＯ２０１５１５３５１４Ａ、およびＷＯ２０１５０９５４２３Ａに記載される抗ＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれかを用い得る。
また、免疫共刺激分子としては、ＯＸ４０およびグルココルチコイド誘発ＴＮＦ関連タンパク質（Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＴＮＦ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ、またはＧＩＴＲ）が挙げられる。ＧＩＴＲおよびＯＸ４０などの免疫共刺激分子については、各々のアゴニスト抗体（すなわち、ＧＩＴＲに結合するアゴニスト抗体およびＯＸ４０に結合するアゴニスト抗体）または各々のアゴニストにより刺激すると、キラーＴ細胞は活性化し、制御性Ｔ細胞は機能が抑制される。このようにして、免疫共刺激分子を刺激することができ、例えば、ＧＩＴＲおよびＯＸ４０からなる群から選択される１以上の免疫共刺激分子を刺激することができる。ＧＩＴＲ免疫共刺激分子に対する免疫賦活剤（ＧＩＴＲ免疫共刺激分子のアゴニスト抗体またはアゴニスト）は、抗ＧＩＴＲ抗体およびＧＩＴＲアゴニスト（例えば、ＴＲＸ５１８、およびＭＥＤＩ１８７３）であり得る。また、ＯＸ４０免疫共刺激分子に対する免疫調整剤（ＯＸ４０免疫共刺激分子のアゴニスト抗体またはアゴニスト）は、抗ＯＸ４０抗体およびＯＸ４０アゴニスト（例えば、ＧＳＫ３１７４９９８、ＭＯＸＲ０９１６、ＰＦ－０４５１８６００、およびＭＥＤＩ０５６２）であり得る。その他、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体としては、ＷＯ２０１２０２７３２８Ａ、ＷＯ２０１３０２８２３１Ａ、ＷＯ２０１５１５３５１４Ａ、およびＷＯ２０１５０９５４２３Ａに記載される抗ＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれかを用い得る。
【0019】
免疫活性化剤は、免疫を活性化する医薬であり得る。免疫を活性化する医薬は、免疫を活性化するサイトカイン、例えば、Ｔ細胞を活性化するサイトカイン（例えば、Ｔ細胞を活性化するインターロイキン）を含んでいてもよい。免疫を活性化するサイトカインとしては、ＩＬ－２などのサイトカインが挙げられる。ＩＬ－２は、Ｔｈ１サイトカインと呼ばれるグループに分類されるサイトカインであり、主に活性化したＴ細胞から産生される。ヒトＩＬ－２タンパク質は、例えば、ＮＢＣＩ参照番号：ＮＰ＿０００５７７．２として登録されたアミノ酸配列を有し得る。そして、ヒトＩＬ－２は、例えば、ＮＢＣＩ参照番号：ＮＰ＿０００５７７．２として登録されたアミノ酸配列に対応する配列を有するＩＬ－２であり得る。ＮＢＣＩ参照番号：ＮＰ＿０００５７７．２として登録されたアミノ酸配列のうち、１～２０番目のアミノ酸は、シグナル配列であるとされ、成熟したＩＬ－２は、２１～１５３番目のアミノ酸配列を有する。従って、細胞内で発現させるときには、シグナル配列を含むＩＬ－２をコードする核酸を細胞に導入し、タンパク質として投与するときには、シグナル配列を含まないＩＬ－２を用いることができる。
【0020】
また、免疫を活性化する医薬としては、ＩＬ－２、ＩＬ－２／抗ＩＬ－２抗体複合体、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５／抗ＩＬ１５Ｒα抗体複合体、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、およびＩＬ－２７からなる群から選択される因子が挙げられ、本発明においてａＡＶＣと併用し得る。
【0021】
ＩＬ－２／抗ＩＬ－２抗体複合体は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）と抗ＩＬ－２抗体（すなわち、ＩＬ－２に結合する抗体）との複合体である。ＩＬ－２は、ＩＬ－２受容体に結合して、ＩＬ－２媒介Ｔ細胞増殖などを惹起する因子である。抗ＩＬ－２抗体には、免疫を抑制する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）誘導抗体とエフェクターＴ細胞を誘導する免疫賦活化タイプの２種類がある。前者の抗ＩＬ－２抗体（マウスであればＪＥＳ６－１、ヒトであれば５３４４）の場合は、ＩＬ－２受容体α鎖（ＣＤ２５（ＩＬ－２Ｒα））強発現細胞に結合しやすい抗体であり、その複合体はＴｒｅｇに作用する。後者の抗ＩＬ－２抗体（例えば、マウスであればＳ４Ｂ６、ヒトであればＭＡＢ６０２、或いはＴＣＢ２）の場合は、ＩＬ－２受容体β鎖（ＣＤ１２２（ＩＬ－２Ｒβ））の発現の高い細胞に結合しやすい抗体であり、その複合体は、エフェクターおよびメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞）ならびにＮＫ細胞に作用すると報告されている（ＰＮＡＳ ２０１０，１０７：１１９０６，ＰＮＡＳ ２０１０，１０７：２１７１）。本発明では、ＩＬ－２受容体β鎖を高発現する細胞に対してより強く結合する抗体、例えば、ＩＬ－２受容体β鎖を高発現する細胞に対してより強く結合し、ＩＬ－２機能を増強する抗体（例えば、エフェクターまたはメモリーＴ細胞およびＮＫ細胞から選択される細胞に作用する抗体または当該細胞を誘導する抗体）をＩＬ－２との複合体形成に用いることができる。また、可溶型ＩＬ-２のｉｎ ｖｉｖｏでの半減期は数時間と短いが、ＩＬ－２／抗ＩＬ－２抗体複合体の半減期は延長することも報告されている。よって、ＩＬ－２受容体β鎖に結合する抗体とＩＬ－２との複合体を使用することでＩＬ－２の機能が増強される。特に、ＩＬ－２と抗ＩＬ－２抗体は、あらかじめ複合体形成をさせた形態で投与され得る。このようにＩＬ－２は、抗ＩＬ－２抗体と複合体を形成した形態で投与され得る。ＩＬ－２は、ヒトＩＬ－２であり得、かつ、抗体は、抗ヒトＩＬ－２抗体であり得、ヒトキメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体であり得る。ヒトＩＬ－２は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＡＡＢ４６８８３．１で登録されたアミノ酸配列を有するＩＬ－２またはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－２が挙げられる。本明細書では、「アミノ酸配列Xと対応するアミノ酸配列を有する」とは、アミノ酸配列Xを有するタンパク質の機能を保持する当該タンパク質のホモログ（例えば、天然のホモログ）を含む意味で用いられる。
【0022】
インターロイキン－７（ＩＬ－７）は、Ｔ細胞の発生とナイーブおよびメモリーＣＤ８陽性Ｔ細胞の維持に重要な役割を果たすサイトカインである。ＩＬ－７は、ヒトＩＬ－７であり得る。ヒトＩＬ－７は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＡＡＨ４７６９８．１で登録されたアミノ酸配列を有するＩＬ－７またはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－７が挙げられる。
【0023】
インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）は、ＩＬ－２と同様に、Ｔ細胞活性化および増殖に関与するサイトカインである。ＩＬ－１５は、ヒトＩＬ－１５であり得る。ヒトＩＬ－１５は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＣＡＡ７１０４４．１で登録されたアミノ酸配列を有するＩＬ－１５またはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－１５が挙げられる。
【0024】
ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα複合体について説明する。ＩＬ－１５は、上述の通りＴ細胞活性化するサイトカインである。またＩＬ－１５Ｒａは、ＩＬ－１５が結合する受容体である。ＩＬ－１５はＩＬ－１５Ｒａに結合した状態でエフェクターおよびメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞）ならびにＮＫ細胞に提示されると、これらの細胞に対してより強力に刺激が入る（この現象は“ｔｒａｎｓ－ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ”と呼ばれる）ことが知られている（Ｄｕｂｏｉｓ Ｓ ｅｔ ａｌ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００２， １７：５３７）。また、ＩＬ－１５とＩＬ－１５Ｒａの複合体にすることにより、ＩＬ－１５の半減期が延長するといわれいる（Ｇｕｏ Ｙ ｅｔ ａｌ． Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ ２０１７， ３８：１０）。従って、ＩＬ－１５は、ＩＬ－１５Ｒａとの複合体として対象に投与することができる。このように、ＩＬ－１５は、ＩＬ－１５Ｒａとの複合体の形態で対象に投与され得る。ＩＬ－１５Ｒａは、ヒトＩＬ－１５Ｒａであり得、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＣＡＧ３３３４５．１で登録されたアミノ酸配列を有するＩＬ－１５Ｒａまたはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－１５Ｒａが挙げられる。
【0025】
インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）は、ＩＬ－１２ＡとＩＬ－１２Ｂとのヘテロ二量体である。ＩＬ－１２はＴ細胞とＮＫ細胞の活性化や分化誘導に関与するとされる。ＩＬ－１２は、ヒトＩＬ－１２（すなわち、ヒトＩＬ－１２サブユニットαとヒトＩＬ－１２サブユニットβとのヘテロ二量体）であり得る。ヒトＩＬ－１２Ａは、３５ｋＤａのタンパク質であり得、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＡＡＩ０４９８５．１で登録されたアミノ酸配列を有するＩＬ－１２Ａまたはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－１２Ａが挙げられる。ヒトＩＬ－１２Ｂとしては、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＥＡＷ６１５７６．１で登録されたアミノ酸配列を有するＩＬ－１２Bまたはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－１２Bが挙げられる。ＩＬ－１２は、ＩＬ－１２ＡとＩＬ－１２Ｂとを複合体化することによって提供され得る。
【0026】
インターロイキン－１８（ＩＬ－１８）は、インターフェロンγを誘導するサイトカインである。ＩＬ－１２と機能的な共通性を有するとされる。ＩＬ－１８は、２４ｋＤａの前駆体として細胞内に存在するが、活性型カスパーゼ－１によって切断されると成熟型の１８ｋＤａのサイトカインとして細胞外に放出される。本発明では、ＩＬ－１８としては、この成熟型のＩＬ－１８を用いることができる。ＩＬ－１８は、ヒトＩＬ－１８であり得、ヒトＩＬ－１８としては、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ登録番号：Ｑ１４１１６．１で登録されたアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－１８またはまたはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－１８が挙げられる。
【0027】
インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５と相同性を有するＩ型サイトカインである。ＩＬ－２１は、主に活性化したＴ細胞から産生される。ＩＬ－２１としては、ヒトＩＬ－２１が挙げられる。ヒトＩＬ－２１としては、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＥＡＸ０５２２６．１で登録されたアミノ酸配列を有するＩＬ－２１またはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－２１が挙げられる。
【0028】
インターロイキン－２３（ＩＬ－２３）は、ＩＬ－２３サブユニットαとＩＬ－１２のｐ４０サブユニットから構成されるサイトカインである。ＩＬ－２３は、ＴＨ１７細胞と呼ばれるＴ細胞サブセットの産生と生存を促進するとされる。ＩＬ－２３は、ヒトＩＬ－２３であり得る。ヒトＩＬ－２３Ａとしては、例えば、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５７６６８．１で登録されたヒトＩＬ－２３サブユニットα前駆体（アミノ酸番号１～１８９）のアミノ酸配列の２０～１８９番目のアミノ酸配列またはこれに対応するアミノ酸配列を有するＩＬ－２３サブユニットαであり得る。ＩＬ－２３サブユニットαとＩＬ－１２のｐ４０サブユニットは、複合体として提供され得る。
【0029】
インターロイキン－２７（ＩＬ－２７）は、インターロイキン－３０（ＩＬ－３０）とインターロイキン－２７のエプスタイン・バー・ウイルス誘導遺伝子３（ＥＢＩ３）サブユニットとのヘテロダイマーである。ＩＬ－２７は、抗原特異的なナイーブＣＤ４陽性Ｔ細胞の増殖やＴｈ１表現型への分化促進に関与するとされる。ＩＬ－３０は、ヒトＩＬ－３０であり得、ヒトＩＬ－３０は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ登録番号：Ｑ８ＮＥＶ９．２で登録されるアミノ酸配列（アミノ酸番号１～２８はシグナル配列であるとされている）を有するヒトＩＬ－３０またはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－３０であり得る。また、ＩＬ－２７のＥＢＩ３サブユニットは、ヒトＩＬ－２７のＥＢＩ３サブユニットであり得、ヒトＩＬ－２７のＥＢＩ３サブユニットは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ登録番号：Ｑ８Ｋ３Ｉ６．１で登録されるアミノ酸配列（アミノ酸番号１～２８はシグナル配列であるとされている）を有するヒトＩＬ－２７のＥＢＩ３サブユニットまたはこれに対応するアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－２７のＥＢＩ３サブユニットであり得る。
【0030】
ある態様では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、およびＩＬ－２７からなる群から選択されるサイトカインは、いずれからもシグナルペプチドが切除されていてよい。
【0031】
本発明者らは、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）とａＡＶＣを併用すると、ａＡＶＣが発現する抗原に対する抗原特異的ＣＴＬの数および割合が増加することを見出した。本発明者らはまた、免疫チェックポイント阻害剤とａＡＶＣを併用すると、ｉＮＫＴ細胞の数およびその割合が増加することを見出した。免疫チェックポイント阻害剤の作用は、抗原特異的ＣＴＬの免疫チェックポイントを阻害することにより、ＣＴＬの本来の作用を引き出すことであると考えられる。本発明者によれば、免疫チェックポイント阻害剤は、自然免疫系のリンパ球を増加させ、抗原特異的ＣＴＬを増加させた。
【0032】
本発明によれば、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）は、自然免疫を活性化させることができ、抗原特異的ＣＴＬを誘導することができる。したがって、本発明によれば、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）を含む、自然免疫を活性化させることに用いるための、および／または、抗原特異的ＣＴＬを誘導することに用いるための組成物が提供される。ここで、抗原特異的ＣＴＬを誘導するとは、抗原特異的ＣＴＬの数および割合を増加させることを意味する。
【0033】
本発明によれば、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）は、ａＡＶＣによる抗原特異的ＣＬＴおよびｉＮＫＴ細胞の誘導能を増強することができる。したがって、本発明によれば、
（ａ）免疫チェックポイント阻害剤と併用される、人工アジュバントベクター細胞を含む医薬組成物であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、腫瘍抗原を発現する、医薬組成物；
（ｂ）人工アジュバントベクター細胞または当該細胞を含む医薬組成物と併用される、免疫チェックポイント阻害剤であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、腫瘍抗原を発現する、医薬組成物；
（ｃ）免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）と人工アジュバントベクター細胞との組合せ製剤であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、腫瘍抗原を発現する、組合せ製剤｛ここで、組合せ製剤は、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）と人工アジュバントベクター細胞を含む、医薬組成物であってもよい｝；および
（ｄ）免疫チェックポイント阻害剤を含む、自然免疫を賦活化させることに用いるための医薬組成物、または、免疫チェックポイント阻害剤を含む、抗原特異的ＣＴＬを増加させることに用いるための医薬組成物
が提供される（上記（ａ）～（ｄ）を総称して本発明の医薬ということがある）。
（ａ）免疫チェックポイント阻害剤と併用される、人工アジュバントベクター細胞を含む医薬組成物であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、腫瘍抗原を発現する、医薬組成物；
（ｂ）人工アジュバントベクター細胞または当該細胞を含む医薬組成物と併用される、免疫チェックポイント阻害剤であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、腫瘍抗原を発現する、医薬組成物；
（ｃ）免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）と人工アジュバントベクター細胞との組合せ製剤であって、
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄを発現し、ＣＤ１ｄリガンドによってパルスされており、かつ、腫瘍抗原を発現する、組合せ製剤｛ここで、組合せ製剤は、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）と人工アジュバントベクター細胞を含む、医薬組成物であってもよい｝；および
（ｄ）免疫チェックポイント阻害剤を含む、自然免疫を賦活化させることに用いるための医薬組成物、または、免疫チェックポイント阻害剤を含む、抗原特異的ＣＴＬを増加させることに用いるための医薬組成物
が提供される（上記（ａ）～（ｄ）を総称して本発明の医薬ということがある）。
【0034】
上記（ａ）および（ｂ）の医薬組成物並びに上記（ｃ）に記載の組合せ製剤においては、人工アジュバントベクター細胞は、内在性のＣＤ１ｄを発現することができる。また、人工アジュバントベクター細胞は、外来性のＣＤ１ｄを発現していてもよい。外来性のＣＤ１ｄは、外来のＣＤ１ｄをコードする核酸を導入することによって、人工アジュバントベクター細胞に発現させることができる。核酸が、ＤＮＡである場合には、当該ＤＮＡはプロモーターに作動可能に連結されている。核酸は、ｍＲＮＡであってもよい。内在性のＣＤ１ｄが高発現している場合には、人工アジュバントベクター細胞には、外来性ＣＤ１ｄを導入する必要はない。
人工アジュバントベクター細胞は、抗原を発現していてもよい。抗原としては、腫瘍抗原や侵入してきた異物の抗原が挙げられる。
人工アジュバントベクター細胞は、抗原を発現していてもよい。抗原としては、腫瘍抗原や侵入してきた異物の抗原が挙げられる。
【0035】
腫瘍抗原は、正常細胞と比較して腫瘍において多く発現している抗原である。腫瘍抗原は、好ましくは、腫瘍において、表面分子数において、正常細胞の２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、および１，０００倍以上高く発現している抗原とすることができる。腫瘍抗原としては、上皮性及び非上皮性腫瘍を含む固形腫瘍、造血組織における腫瘍の抗原が挙げられる。腫瘍抗原としては、特に限定されないが例えば、ＭＡＲＴ－１、ＺＭｅｌａｎ－Ａ、Ｍａｇｅ－１、Ｍａｇｅ－３、ｇｐｌ００、チロシナーゼ、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＣＡ－１２５ ｅｒｂ－２、Ｍｕｃ－１、Ｍｕｃ－２、ＴＡＧ－７２、ＡＥＳ、ＦＢＰ、Ｃレクチン、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｇａｌｅｃｔｉｎ－４／ＮＹ－ＣＯ－２７、Ｐｅｃ６０、ＨＥＲ－２／ｅｒｂＢ－２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、Ｇ２５０、Ｈｓｐｌ０５、点変異ｒａｓ癌遺伝子、点変異ｐ５３癌遺伝子、および癌胎児性抗原などのオンコアンチゲン並びにネオアンチゲンが挙げられる（例えば、特開２００５－１３９１１８号公報、特開２００４－１４７６４９号公報、特開２００２－１１２７８０号公報、特開２００４－２２２７２６号公報を参照）。造血組織における腫瘍（例、白血病）の抗原としては特に限定されないが、例えば、ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ３、ＷＴ－１、ｈＴＥＲＴ、ＰＲＡＭＥ、ＰＭＬ／ＲＡＲ－ａ、ＤＥＫ／ＣＡＮ、シクロフイリン、ＴＥＬ－ＭＡＬ１、ＢＣＲ－ＡＢＬ、ＯＦＡ－ｉＬＲＰ、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ｉｄｉｏｔｙｐｅ、Ｓｐｅｒｍ ｐｒｏｔｅｉｎ １７、ＳＰＡＮ－Ｘｂ、ＣＴ２７、およびＭＵＣ１が挙げられる。
【0036】
侵入してきた異物の抗原としては、病原体抗原が挙げられる。病原体抗原は、病原性ウイルス抗原、病原性微生物抗原、又は病原性原生動物抗原であり得る。病原性ウイルス抗原としては特に限定されないが、例えば、ＧＰ－１２０、ｐｌ７、ＧＰ－１６０（以上、ＨＩＶ）、ＮＰ、ＨＡ（以上、インフルエンザウイルス）、ＨＢｓ Ａｇ、ＨＢＶエンベロープタンパク質、コアタンパク質、ポリメラーゼタンパク質、ＮＳ３、ＮＳ５（以上、肝炎ウイルス）、ＨＳＶｄＤ（単純へルぺスウイルス）、ＥＢＮＡ１、２、３Ａ、３Ｂ及び３Ｃ、ＬＭＰ１及び２、ＢＺＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＨＲＦ１（以上、ＥＢウイルス）、Ｔａｘ（ＨＴＬＶ－Ｉ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質（ＳＡＲＳウイルス）、ＣＭＶ ｐｐ５０、ＣＭＶ ｐｐ６５、ＩＥ－１（以上、ＣＭＶ）、Ｅ６、Ｅ７タンパク質（以上、ＨＰＶ）が挙げられる（例えば、特開２００４－２２２７２６号公報参照）。病原性微生物抗原としては、例えば、病原性細菌（例、クラミジァ、ミコバクテリア、レジオネラ）、病原性酵母（例、アスペルギルス、カンジダ）に発現している抗原が挙げられる。病原性原生動物抗原としては、例えば、マラリア、住血吸虫に発現している抗原が挙げられる。
【0037】
人工アジュバントベクター細胞は、単離された細胞または精製された細胞であり得る。人工アジュバントベクター細胞は、細胞株であってもよい。人工アジュバントベクター細胞は、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、非ヒト哺乳動物、および非ヒト霊長類）の細胞であり得る。非ヒト動物としては、サル、チンパンジー、ゴリラ、オランウータン、ボノボ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、およびウサギが挙げられる。人工アジュバントベクター細胞は、投与対象に対して、自己細胞であっても、同種異系細胞であっても、異種細胞であってもよい。最終的には、樹状細胞に貪食されるためである。
【0038】
人工アジュバントベクター細胞は、体細胞であり得る。体細胞としては、胃、小腸 （例、十二指腸、空腸、回腸、結腸）、大腸、直腸、肺、脾臓、腎臓、肝臓、胸腺、脾臓、甲状腺、副腎、前立腺、卵巣、子宮、骨髄、皮膚、末梢血が挙げられる。本発明の細胞はまた、上記組織における特定の細胞種又は上記組織以外の組織に存在する細胞種であり得る。このような細胞種としては、例えば、上皮細胞、内皮細胞、表皮細胞、間質細胞、繊維芽細胞、脂肪細胞、乳腺細胞、メサンギウム細胞、脾臓細胞、神経細胞、グリア細胞、免疫細胞（例、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、ならびにこれら細胞の前駆細胞及び幹細胞が挙げられる。
【0039】
人工アジュバントベクター細胞に発現する抗原は、当該細胞に由来する抗原であってもよいし、外来に導入された抗原であってもよい。人工アジュバントベクター細胞に発現する抗原が、当該細胞に由来する抗原である場合には、人工アジュバントベクター細胞は、例えば、腫瘍細胞、または病原体感染細胞から作成することができる。病原体感染細胞としては、ウイルス感染細胞、微生物感染細胞、および原生生物感染細胞が挙げられる。
【0040】
人工アジュバントベクター細胞は、非形質転換体であっても形質転換体であってもよい。形質転換とは、人為的な遺伝子導入をいう。例えば、ＤＮＡやｍＲＮＡが外来的に導入された細胞は、形質転換体という。人工アジュバントベクター細胞が、ＣＤ１ｄおよび抗原を内在的に発現している場合、人工アジュバントベクター細胞は、形質転換をせずに作成することができる。
【0041】
人工アジュバントベクター細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）または非ＡＰＣから作製することができる。ＡＰＣとしては、例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、ランゲルハンス細胞、および活性化Ｔ細胞が挙げられる。
【0042】
人工アジュバントベクター細胞は、ＣＤ１ｄリガンドでパルスして作成することができる。ＣＤ１ｄリガンドによる細胞のパルスは、培地中でＣＤ１ｄを発現する細胞をＣＤ１ｄリガンド存在下で培養することによって行うことができる。このようにすることによって、標的抗原を発現し、かつＣＤ１ｄを発現する細胞にＣＤ１ｄリガンドを提示させることができる。標的抗原を発現し、かつＣＤ１ｄを発現する細胞がＣＤ１ｄリガンドを提示すると、標的抗原に対する免疫活性化が生体内において生じ得る。
【0043】
培地としては、細胞の培養に用いることができる培地を適宜用いることができる。培地としては、ＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地、αＭＥＭ培地、ハム培地 ＲＰＭＩ１６４０培地、Ｆｉｓｃｈｅｒ’ｓ培地、およびこれらの混合培地が挙げられる。培地は、例えば、血清（例えば、ＦＣＳ）、血清代替物（例えば、ｋｎｏｃｋｏｕｔ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅ ｐｌａｃｅｍｅｎｔ （ＫＳＲ））、脂肪酸又は脂質、アミノ酸、ビタミン、増殖因子、サイトカイン、抗酸化剤、２－メルカプトエタノール、ピルビン酸、緩衝剤、および無機塩類等からなる群から選択される追加の成分を含むことができる。
【0044】
外来性のＣＤ１ｄをコードする核酸、および外来性の抗原をコードする核酸は、遺伝子発現ベクターを用いて細胞に導入することができる。外来性のＣＤ１ｄをコードする核酸、および外来性の抗原をコードする核酸は、１つの遺伝子発現ベクター内に含まれていてもよいし、別々の遺伝子発現ベクター内に含まれていてもよい。外来性のＣＤ１ｄをコードする核酸、および外来性の抗原をコードする核酸が１つの遺伝子発現ベクター内に含まれている場合には、１つのｍＲＮＡとして転写されるようにポリシストロニックにｍＲＮＡに含まれていてもよいし、別々のｍＲＮＡとして転写されるようにモノシストロニックにｍＲＮＡに含まれていてもよい。２つの遺伝子がポリシストロニックにｍＲＮＡに含まれる場合には、それぞれの遺伝子の間に内部リボソームエントリーサイト（ＩＲＥＳ）を介在させることができる。外来性のＣＤ１ｄをコードする核酸、および外来性の抗原をコードする核酸は、細胞内でのｍＲＮＡへの転写に適したプロモーターに作動可能に連結させ得る。プロモーターは、細胞内で転写を誘導するために十分な最小の配列を意味する。プロモーターとしては、ウイルスプロモーター、哺乳動物プロモーター、および酵母プロモーター（例えば、哺乳動物ＣＭＶプロモーター、酵母アルコールオキシダーゼ、ホスホグリセロキナーゼプロモーター、ラクトース誘導性プロモーター、ガラクトシダーゼプロモーター、アデノ随伴ウイルスプロモーター、バキュロウイルスプロモーター、ポックスウイルスプロモーター、レトロウイルスプロモーター、アデノウイルスプロモーター、ＳＶ４０プロモーターＨＭＧ（ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムＡ）プロモーター、ＴＫ（チミジンキナーゼ）プロモーター、７．５ＫまたはＨ５Ｒポックスウイルスプロモーター、アデノウイルス２型ＭＰＣ後期プロモーター、αアントリプシン（ａｎｔｒｙｐｓｉｎｅ）プロモーター、第ＩＸ因子プロモーター、免疫グロブリンプロモーター、ＣＦＴＲサーファクタントプロモーター、アルブミンプロモーター、およびトランスフェリンプロモーター）が挙げられる。外来性のＣＤ１ｄをコードする核酸、および外来性の抗原をコードする核酸は、ｍＲＮＡであり得、例えば、上記ｍＲＮＡであり得る。ｍＲＮＡは、コードするタンパク質の翻訳に必要な要素を含み、細胞に導入されると、コードするタンパク質の翻訳を誘発する。細胞への遺伝子の導入は、常法によって行うことができる。
【0045】
本発明では、免疫賦活剤のうち、免疫チェックポイント阻害剤としては、ＰＤ－１系免疫チェックポイント阻害剤、ＣＴＬＡ－４系免疫チェックポイント阻害剤、ＴＩＭ－３系免疫チェックポイント阻害剤、Ｌａｇ３系免疫チェックポイント阻害剤、およびＶＩＳＴＡ系免疫チェックポイント阻害剤が挙げられる。また、免疫賦活剤のうち、免疫活性化剤としては、ＧＩＴＲに対する免疫活性化剤およびＯＸ４０に対する免疫活性化剤（例えば、各々のアゴニストおよび各々のアゴニスト抗体としてのＧＩＴＲ抗体、およびＯＸ４０抗体から選択される１以上の抗体）が挙げられる。本発明では、より好ましくは、ＯＸ４０に対する免疫活性化剤であるＯＸ４０抗体であり得る。
【0046】
本発明では、ａＡＶＣと免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）は、同時に投与されてもよく、別々に投与されてもよい。本発明では、ａＡＶＣの投与は、単回投与でもよく、複数回投与でもよい。本発明では、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）の投与は、単回投与でもよく、複数回投与でもよい。本発明のある態様では、ａＡＶＣの投与は、単回投与であり、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）の投与は、複数回投与であり得る。
【0047】
本発明では、ａＡＶＣと免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）とは、一つのパッケージにおいて提供されてもよく、別々のパッケージにおいて提供されてもよい。一つのパッケージにおいて提供される場合には、ａＡＶＣと免疫チェックポイント阻害剤とは、同一の医薬組成物中に混合されていてもよく、別々の医薬組成物中に別々に含まれていてもよい。本発明のある態様では、ａＡＶＣと免疫チェックポイント阻害剤とは、別々のパッケージに別々に提供される。本発明のある態様では、ａＡＶＣと免疫チェックポイント阻害剤は、一つのパッケージ内に別々の医薬組成物に別々に含まれる。本発明のある態様では、ａＡＶＣおよび／または免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）と、ａＡＶＣと免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）を併用することについての指示とを含む添付文書と、をさらに含み伴い得る。
【0048】
本発明のある態様では、ａＡＶＣは、凍結状態で提供され得る。本発明のある態様では、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）は、点滴剤または注射剤として提供され得る。本発明のある態様では、ａＡＶＣは、凍結状態でガンマ線滅菌された状態で提供され得る。
【0049】
本発明によればまた、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）を含む、自然免疫（特にｉＮＫＴ細胞）を賦活化させることに用いるための医薬組成物が提供される。自然免疫（特にｉＮＫＴ細胞）を賦活化させると、抗原特異的ＣＴＬが増加しうる。したがって、本発明によれば、また、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）を含む、抗原特異的ＣＴＬを増加させることに用いるための医薬組成物が提供される。本発明によれば、抗原特異的ＣＴＬの増加は、自然免疫の賦活化を介して生じ得る。本発明によれば、この態様において、免疫チェックポイント阻害剤としては、ＰＤ－１系免疫チェックポイント阻害剤、ＣＴＬＡ－４系免疫チェックポイント阻害剤、ＴＩＭ－３系免疫チェックポイント阻害剤、Ｌａｇ３系免疫チェックポイント阻害剤、およびＶＩＳＴＡ系免疫チェックポイント阻害剤からなる群から選択される１以上の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗体）が挙げられる。この態様においてはまた、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０からなる群から選択される１以上の免疫共刺激分子の活性化剤（例えば、ＯＸ４０Ｌ、アゴニストまたはアゴニスト抗体）が挙げられ、特にＯＸ４０の活性化剤（例えば、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０のアゴニストまたはアゴニスト抗体）であり得る。
本発明のある態様では、自然免疫（特にｉＮＫＴ細胞）を賦活化させることに用いるための医薬組成物は、ｉＮＫＴ細胞を増殖させることに用いるための医薬組成物であり得る。本発明のある態様では、自然免疫（特にｉＮＫＴ細胞）を賦活化させることに用いるための医薬組成物またはｉＮＫＴ細胞を増殖させることに用いるための医薬組成物は、抗ＰＤ－１抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＯＸ４０抗体、および抗ＣＴＬＡ４抗体からなる群から選択される免疫賦活化剤（例えば、アゴニスト抗体である抗ＯＸ４０抗体）を含むものであり得る。
本発明のある態様では、抗原特異的ＣＴＬを増加させることに用いるための医薬組成物は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、および抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される免疫賦活化剤（例えば、アゴニスト抗体である抗ＯＸ４０抗体）を含むものであり得る。
ＯＸ４０のアゴニスト抗体は、例えば、ＯＸ４０に結合する抗体を産生するハイブリドーマを、当該ハイブリドーマが産生する抗体のＯＸ４０に対する親和性によってスクリーニングし、その後、得られたＯＸ４０抗体をＮＦ－κＢ応答エレメントの制御下でレポーター（例えば、ルシフェラーゼ）遺伝子を発現するＯＸ４０発現細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）を用いてルシフェラーゼ活性の向上を指標として選択することができる。このような試験系は、例えば、BPS Bioscienceから購入することができる（Ｃａｔａｌｏｇ ＃ ６０４８２）。
本発明のある態様では、自然免疫（特にｉＮＫＴ細胞）を賦活化させることに用いるための医薬組成物は、ｉＮＫＴ細胞を増殖させることに用いるための医薬組成物であり得る。本発明のある態様では、自然免疫（特にｉＮＫＴ細胞）を賦活化させることに用いるための医薬組成物またはｉＮＫＴ細胞を増殖させることに用いるための医薬組成物は、抗ＰＤ－１抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＯＸ４０抗体、および抗ＣＴＬＡ４抗体からなる群から選択される免疫賦活化剤（例えば、アゴニスト抗体である抗ＯＸ４０抗体）を含むものであり得る。
本発明のある態様では、抗原特異的ＣＴＬを増加させることに用いるための医薬組成物は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、および抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される免疫賦活化剤（例えば、アゴニスト抗体である抗ＯＸ４０抗体）を含むものであり得る。
ＯＸ４０のアゴニスト抗体は、例えば、ＯＸ４０に結合する抗体を産生するハイブリドーマを、当該ハイブリドーマが産生する抗体のＯＸ４０に対する親和性によってスクリーニングし、その後、得られたＯＸ４０抗体をＮＦ－κＢ応答エレメントの制御下でレポーター（例えば、ルシフェラーゼ）遺伝子を発現するＯＸ４０発現細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）を用いてルシフェラーゼ活性の向上を指標として選択することができる。このような試験系は、例えば、BPS Bioscienceから購入することができる（Ｃａｔａｌｏｇ ＃ ６０４８２）。
【0050】
本発明の免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）は、賦形剤をさらに含みうる。本発明のａＡＶＣは、賦形剤をさらに含みうる。賦形剤としては、それぞれ適したものを含むことができる。本発明の免疫チェックポイント阻害剤は、静脈内投与、腫瘍内投与、皮下投与、および腹腔内投与などの非経口投与により投与することができ、これらの投与経路に適した剤型で製剤化されうる。本発明のａＡＶＣは、静脈内投与、腫瘍内投与、皮下投与、および腹腔内投与などの非経口投与により投与することができ、これらの投与経路に適した剤型で製剤化されうる。
【0051】
本発明の医薬は、がんおよび／または感染症の処置に用いることができる。がんとしては、例えば、固形腫瘍（例、上皮性腫瘍、非上皮性腫瘍）、造血組織における腫瘍が挙げられる。より詳細には、本発明の医薬により処置され得る固形腫瘍としては、例えば、消化器がん（例、胃がん、結腸がん、大腸がん、直腸がん）、肺がん（例、小細胞がん、非小細胞がん）、脾臓がん、腎臓がん、肝臓がん、胸腺がん、脾臓がん、甲状腺がん、副腎がん、前立腺がん、膀胱がん、卵巣がん、子宮がん（例、子宮内膜がん、子宮頸がん）、骨がん、皮膚がん、肉腫（例、カポジ肉腫）、黒色腫、芽細胞腫（例、神経芽細胞腫）、腺がん、扁平細胞がん、非扁平細胞がん、脳腫瘍、ならびにこれらの固形腫瘍の再発及び転移によるがんが挙げられる。本発明の医薬により処置され得る、造血組織における腫瘍としては、白血病（例、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫（ＡＴＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ））、リンパ腫（例、Ｔリンパ腫、Ｂリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫）、骨髄腫（多発性骨髄腫）、ならびにこれらの腫瘍の再発および転移によるがんが挙げられる。本発明の医薬により処置され得る感染症としては、例えば、上述の病原体により引き起こされる感染症が挙げられる。
【0052】
本発明によれば、その必要のある対象において、がんまたは感染症を処置する方法であって、前記対象に、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）を投与することと、ａＡＶＣを投与することを含む方法が提供される。ａＡＶＣは、処置されるがんまたは感染症（感染症の原因となる異物）に特異的な抗原を発現するものとすることができる。本発明によれば、本発明の医薬を投与することができる。ある態様では、本発明の医薬の投与は、細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加が確認されるまで行うことができる。ある態様では、本発明は、本発明の医薬を投与した後に、細胞傷害性Ｔ細胞の数を測定することをさらに含み得る。ある態様では、本発明は、本発明の医薬を投与した後に、投与対象において細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加を検出することを含み得る。細胞傷害性Ｔ細胞は、ａＡＶＣが発現した抗原に対する抗原特異性を有し得る。ある態様では、治療上有効量は、がんまたは感染症に対して治療上の有効性を示す量であるが、投与対象において細胞傷害性Ｔ細胞を増加させる量とすることができる。
【0053】
本発明によれば、本発明の医薬の製造における、免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）および／またはａＡＶＣの使用が提供される。本発明によれば、本発明の処置方法において使用するための免疫チェックポイント阻害剤および／またはａＡＶＣが提供される。
【実施例】
【0054】
実施例１：人工アジュバントベクター（ａＡＶＣ）と免疫チェックポイント阻害剤の併用
本実施例では、ａＡＶＣと免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）の併用の効果を検証した。
本実施例では、ａＡＶＣと免疫賦活剤（免疫チェックポイント阻害剤または免疫活性化剤）の併用の効果を検証した。
【0055】
マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス、６週齢、ｎ＝２）に対してａＡＶＣと免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせて投与した。投与スキームは図１に示される通りであった。具体的には、オボアルブミン（ＯＶＡ）を発現したａＡＶＣを０日目に投与し、免疫チェックポイント阻害剤（抗体）を０日目、３日目、および５日目にそれぞれ２００μｇ／投与で投与し、７日目に抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の数および割合とｉＮＫＴ細胞の数および割合を調べた。
【0056】
ａＡＶＣ－ＯＶＡは、ＮＩＨ３Ｔ３細胞にＣＤ１ｄをコードする遺伝子と抗原としてＯＶＡをコードする遺伝子を発現させ、その後、０．５ ｍｇ／ｍＬのα－ガラクトシルセラミド（α－ＧａｌＣｅｒ）を培地に添加して得た。投与は、５×１０５細胞／匹の用量で行った。
【0057】
免疫調整剤としては、免疫チェックポイント阻害剤として、抗ＰＤ－１抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ製造者、製品番号：ＢＥ０１４６）、抗Ｌａｇ３抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ製造者、製品番号：ＢＥ０１７４）、抗ＴＩＭ－３抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ製造者、製品番号：Ｂ８．２Ｃ１２）、抗ＶＩＳＴＡ抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ製造者、製品番号：ＢＥ０３１０）、抗ＣＴＬＡ４抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ製造者、製品番号：ＢＥ０１６４）を用いた。免疫賦活剤としては、抗ＯＸ４０抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ製造者、製品番号：ＢＥ００３１）又は抗ＧＩＴＲ抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ製造者、製品番号：ＢＥ００６３）を用いた。投与は、いずれも２００μｇ／匹／投与の用量で行った。
【0058】
ａＡＶＣ－ＯＶＡは、静脈内投与し、免疫調節剤は、腹腔内投与した。
【0059】
ａＡＶＣ－ＯＶＡ投与後７日目にマウスの脾臓を回収し、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞）およびインバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）を分析した。ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、脾臓から脾細胞を単離し、ＣＤ３， ＣＤ８， ＣＤ４４抗体及びＯＶＡ－ｔｅｔｒａｍｅｒで染色し、ＦＡＣＳ（製造者ＢＤ、製品名Ｃａｎｃｔｏ ＩＩ）を用いて解析した。脾細胞をＣＤ３およびＣＤ８陽性細胞により、ＣＤ８ Ｔ細胞をゲートし、ＣＤ４４およびＯＶＡ－ｔｅｔｒａｍｅｒで展開した。ＣＤ４４陽性かつＯＶＡ－ｔｅｔ陽性の細胞をＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞としてその数および細胞の占める割合を測定した。割合は、ＣＤ８Ｔ細胞に占めるＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合（％）である。
【0060】
結果は、図２に示される通りであった。図２に示されるように、ａＡＶＣ－ＯＶＡ単独投与群と比較して、免疫賦活剤併用群では、ＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合が増加している例が認められた。具体的には、抗ＰＤ－１抗体併用群、抗ＴＩＭ－３抗体併用群、抗ＣＴＬＡ４抗体併用群、および抗ＯＸ４０抗体併用群において、ＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合が増加しており、特に、抗ＯＸ４０抗体併用群においてＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合の増加が顕著であった。ＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の数および割合をグラフ化して図３に示した。図３に示されるように、抗ＰＤ－１抗体併用群、抗ＴＩＭ－３抗体併用群、抗ＣＴＬＡ４抗体併用群、および抗ＯＸ４０抗体併用群において、ＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の数および割合が増加しており、特に、抗ＯＸ４０抗体併用群においてＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の数および割合の増加が顕著であった。
【0061】
さらに脾細胞中のｉＮＫＴ細胞についてもその数および割合を分析した。具体的には、細胞投与１４日後に脾臓を単離して、アフィコシアニン（ＡＰＣ）で標識したα－ＧａｌＣｅｒプレロードしたＣＤ１ｄテトラマーであるＣＤ１ｄ－ｔｅｔｒａｍｅｒ／Ｇａｌ－ＡＰＣと、ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５（Ｒ）で標識したＣＤ３であるＣＤ３－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５（Ｒ）で染色し、ＣＤ３＋かつＣＤ１ｄ－ｔｅｔｒａｍｅｒ／Ｇａｌ＋の細胞をｉＮＫＴ細胞として計数した。次に、脾臓中のｉＮＫＴ細胞の頻度を算出した。更にそれぞれ免疫したマウスの脾臓の総細胞数と前記頻度とを掛け合わせ、ｉＮＫＴ細胞数を算出した。その結果、図５に示されるように、抗ＰＤ－１抗体併用群、抗Ｌａｇ３抗体併用群、抗ＶＩＳＴＡ抗体併用群、抗ＯＸ４０抗体併用群、および抗ＣＴＬＡ４抗体併用群においてｉＮＫＴ細胞の数および割合が増加しており、特に、抗ＯＸ４０抗体併用群においてｉＮＫＴ細胞の数および割合が増加していた。
【0062】
ｉＮＫＴ細胞は、自然免疫を担当するナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ細胞）および樹状細胞の活性化、並びに獲得免疫応答を担うＢ細胞およびＴ細胞の活性化を誘導する。免疫チェックポイント阻害剤との併用によって、ａＡＶＣは、自然免疫惹起能および獲得免疫惹起能を高めることが示された。
免疫チェックポイント阻害剤は、獲得免疫を担うＴ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞；ＣＴＬ）の抑制を解除することによってＴ細胞による免疫を強化するものであり、今回用いた免疫活性化剤は直接免疫機能を刺激することによってＴ細胞による免疫を強化するものである。今回の結果は、免疫賦活剤をａＡＶＣと併用することによって、自然免疫の賦活化作用が高まることが示されたものであり、単に、ａＡＶＣによる自然免疫の惹起と免疫チェックポイント阻害剤による獲得免疫の強化との相加効果が奏されたと考えることはできない。
今回の結果によれば、免疫賦活剤が、ａＡＶＣによる自然免疫の惹起能を高め、かつ、細胞傷害性Ｔ細胞の抑制を単に解除するだけではなく、細胞傷害性Ｔ細胞の数を増加させ、より効果的ながん免疫療法を実現する手法となり得ることが明らかになった。
もちろん、免疫チェックポイント阻害剤は、ａＡＶＣによる自然免疫の賦活化能および抗原特異的免疫誘導能を強化することが期待できる。また、免疫賦活剤は、ａＡＶＣによる、がんや感染症の治療効果を強化することが期待できる。
免疫チェックポイント阻害剤は、獲得免疫を担うＴ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞；ＣＴＬ）の抑制を解除することによってＴ細胞による免疫を強化するものであり、今回用いた免疫活性化剤は直接免疫機能を刺激することによってＴ細胞による免疫を強化するものである。今回の結果は、免疫賦活剤をａＡＶＣと併用することによって、自然免疫の賦活化作用が高まることが示されたものであり、単に、ａＡＶＣによる自然免疫の惹起と免疫チェックポイント阻害剤による獲得免疫の強化との相加効果が奏されたと考えることはできない。
今回の結果によれば、免疫賦活剤が、ａＡＶＣによる自然免疫の惹起能を高め、かつ、細胞傷害性Ｔ細胞の抑制を単に解除するだけではなく、細胞傷害性Ｔ細胞の数を増加させ、より効果的ながん免疫療法を実現する手法となり得ることが明らかになった。
もちろん、免疫チェックポイント阻害剤は、ａＡＶＣによる自然免疫の賦活化能および抗原特異的免疫誘導能を強化することが期待できる。また、免疫賦活剤は、ａＡＶＣによる、がんや感染症の治療効果を強化することが期待できる。
【0063】
実施例２：ａＡＶＣと免疫活性化剤の併用
次に、図６に記載のａＡＶＣとサイトカインとを併用するスキームにより、免疫活性化剤とａＡＶＣの併用の効果を確認した。図１と同様にマウスにａＡＶＣ－ＯＶＡを投与した。投与後７日目から毎日５×１０３Ｕ／投与のＩＬ－２を７日間にわたり投与した。１４日目にマウスのマウスの脾臓を回収した。ＣＤ３およびＣＤ８陽性細胞により、脾臓細胞からＣＤ８ Ｔ細胞をゲートし、ＣＤ４４およびＯＶＡ－ｔｅｔｒａｍｅｒで展開した。ＣＤ４４陽性かつＯＶＡ－ｔｅｔ陽性の細胞をＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞としてその数および細胞の占める割合を測定した。割合は、ＣＤ８Ｔ細胞に占めるＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合（％）である。ａＡＶＣ－ＯＶＡは、実施例１の通りに調製した。ａＡＶＣ－ＯＶＡの投与は、実施例１の通りに５×１０５細胞／匹の用量で行った。
次に、図６に記載のａＡＶＣとサイトカインとを併用するスキームにより、免疫活性化剤とａＡＶＣの併用の効果を確認した。図１と同様にマウスにａＡＶＣ－ＯＶＡを投与した。投与後７日目から毎日５×１０３Ｕ／投与のＩＬ－２を７日間にわたり投与した。１４日目にマウスのマウスの脾臓を回収した。ＣＤ３およびＣＤ８陽性細胞により、脾臓細胞からＣＤ８ Ｔ細胞をゲートし、ＣＤ４４およびＯＶＡ－ｔｅｔｒａｍｅｒで展開した。ＣＤ４４陽性かつＯＶＡ－ｔｅｔ陽性の細胞をＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞としてその数および細胞の占める割合を測定した。割合は、ＣＤ８Ｔ細胞に占めるＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合（％）である。ａＡＶＣ－ＯＶＡは、実施例１の通りに調製した。ａＡＶＣ－ＯＶＡの投与は、実施例１の通りに５×１０５細胞／匹の用量で行った。
【0064】
結果は、図７（フローサイトメトリーの結果）および図８（抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の数（左）および割合（右））に示される通りであった。図７および８に示されるように、ａＡＶＣ－ＯＶＡとＩＬ－２を併用した群では、ａＡＶＣ－ＯＶＡ単独投与の場合よりも、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の数および割合が顕著に増加していた。
これにより、免疫活性化剤が、ａＡＶＣとの併用に有用であることが示された。
これにより、免疫活性化剤が、ａＡＶＣとの併用に有用であることが示された。
【0065】
さらに、図９に記載のａＡＶＣとサイトカインとを併用するスキームにより、免疫活性化剤（ＩＬ－２/抗ＩＬ－２抗体複合体、ＩＬ－７、またはＩＬ－１５）とａＡＶＣとの併用の効果を確認した。図１と同様にマウスにａＡＶＣ－ＯＶＡを投与した。投与後７日目から、マウスあたり記載された用量でサイトカインを７日間にわたり毎日投与した。１４日目にマウスのマウスの脾臓を回収した。ＣＤ３およびＣＤ８陽性細胞により、脾臓細胞からＣＤ８ Ｔ細胞をゲートし、ＣＤ４４およびＯＶＡ－ｔｅｔｒａｍｅｒで展開した。ＣＤ４４陽性かつＯＶＡ－ｔｅｔ陽性の細胞をＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞としてその数および細胞の占める割合を測定した。割合は、ＣＤ８Ｔ細胞に占めるＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合（％）である。ａＡＶＣ－ＯＶＡは、実施例１の通りに調製した。ａＡＶＣ－ＯＶＡの投与は、実施例１の通りに５×１０５細胞／匹の用量で行った。
【0066】
結果は、図１０（フローサイトメトリーの結果）、図１１（脾臓における抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞数）、および図１２（抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合）に示される通りであった。図１０～１２に示されるように、いずれのサイトカインを併用した場合であっても、ａＡＶＣ単独投与と比較して、抗原特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞の数および割合は増加したが、ＩＬ－２/抗ＩＬ－２抗体複合体およびＩＬ－１５のいずれかを投与した場合にはその増加が顕著であった。
【0067】
さらに実施例１に記載の通りに脾細胞中のｉＮＫＴ細胞についてもその数および割合を分析した。その結果、図１３（フローサイトメトリーの結果）および図１４（脾臓におけるｉＮＫＴ細胞の数）に示される通りであった。図１３および１４に示されるように、いずれのサイトカインを併用した場合であっても、ａＡＶＣ単独投与と比較して、脾臓におけるｉＮＫＴ細胞の数は増加した。このように、投与した免疫活性化剤は、ａＡＶＣによる自然免疫惹起能を増強することができた。
【要約】
本発明は、免疫賦活剤を含む、自然免疫を活性化することに用いるための組成物を提供する。本発明はまた、人工アジュバントベクター細胞と免疫賦活剤との併用を提供する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】