(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-20
(45)【発行日】2024-10-01
(54)【発明の名称】多価肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン
(51)【国際特許分類】
A61K 47/64 20170101AFI20240924BHJP
A61K 39/09 20060101ALI20240924BHJP
A61K 39/385 20060101ALI20240924BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240924BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240924BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240924BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20240924BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20240924BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20240924BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20240924BHJP
A61K 47/14 20170101ALI20240924BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20240924BHJP
C12N 15/31 20060101ALI20240924BHJP
C07K 1/14 20060101ALI20240924BHJP
C07K 1/20 20060101ALI20240924BHJP
C07K 14/195 20060101ALI20240924BHJP
C07K 14/31 20060101ALI20240924BHJP
C07K 14/33 20060101ALI20240924BHJP
C12P 21/02 20060101ALN20240924BHJP
【ＦＩ】
A61K47/64
A61K39/09
A61K39/385
A61P37/04
A61P31/04
A61P11/00
A61K47/20
A61K47/10
A61K47/02
A61K47/12
A61K47/14
A61K9/10
C12N15/31
C07K1/14
C07K1/20
C07K14/195
C07K14/31
C07K14/33
C12P21/02 C
【請求項の数】
27
(21)【出願番号】P 2021534169
(86)(22)【出願日】2019-10-11
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-05-17
(86)【国際出願番号】 IN2019050761
(87)【国際公開番号】W WO2020075201
(87)【国際公開日】2020-04-16
【審査請求日】2022-09-09
(31)【優先権主張番号】201841038835
(32)【優先日】2018-10-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IN
(73)【特許権者】
【識別番号】517176375
【氏名又は名称】バイオロジカル イー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100106080
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 晶子
(72)【発明者】
【氏名】ブルキ，ラジェンダー
(72)【発明者】
【氏名】スリラマン，ラジャン
(72)【発明者】
【氏名】マトゥール，ラメシュ ベンカト
(72)【発明者】
【氏名】マンテナ，ナレンダー デーブ
(72)【発明者】
【氏名】ダトラ，マヒマ
(72)【発明者】
【氏名】マシラマニ，バラムラリ
(72)【発明者】
【氏名】カンディマラ，ビベーク・バブ
(72)【発明者】
【氏名】サンガレッディ，ベーラパンドゥ
【審査官】堂畑 厚志
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１８／０６４４４４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】米国特許第０８１９２７４６（ＵＳ，Ｂ２）
【文献】米国特許第０８８０８７０８（ＵＳ，Ｂ２）
【文献】米国特許出願公開第２０１０／００７４９２２（ＵＳ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２０１２／０３２１６５８（ＵＳ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１３／１９１４５９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１４／０９２３７７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１４／０９２３７８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１６／２０７９０５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】中国特許出願公開第１０１５９０２２４（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０３６２３４０１（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０３６５６６３１（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０３６５６６３２（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０４０６９４８８（ＣＮ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型由来の莢膜多糖類を含む２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含み、各血清型由来の多糖類が、個別に、ＰｓａＡ及びＣＲＭ１９７から選択されるキャリヤータンパク質にコンジュゲートしている、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項2】
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、請求項１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項3】
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされている、請求項１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項4】
ワクチン組成物が、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であり、少なくとも１３種の血清型由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされ、残りの血清型由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされている、請求項１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項5】
血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされ、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされている、請求項４に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項6】
１種又は複数の肺炎球菌多糖類が、断片化され、各断片化された肺炎球菌多糖類が、天然肺炎球菌多糖類の平均分子量よりも小さい平均分子量を有し、５０～１０００ｋＤａの範囲である、請求項１～５のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項7】
肺炎球菌多糖類が、１００～１０００、２００～８００、２５０～６００、又は３００～４００、７０～１５０、又は７５～１２５ｋＤａの分子量を有する、請求項６に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項8】
多糖類－タンパク質コンジュゲートが、下記範囲の分子量：５００ｋＤａ～５０００ｋＤａ、１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ、１，５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ、２，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、２，５００ｋＤａ～２５，０００ｋＤａ、又は３，０００ｋＤａ～３０，０００ｋＤａを有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項9】
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 ２．２μｇ、並びに血清型６Ｂ由来の多糖類 ４．４μｇを含む２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の各莢膜多糖類が、ＣＲＮ１９７キャリヤータンパク質 ２５～４０μｇにコンジュゲートされ、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類が、ＰｓａＡ ２５～４０μｇにコンジュゲートされている、請求項１に記載の２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項10】
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 ２．２～２．４μｇ、並びに６Ｂ由来の莢膜多糖類 ４．４μｇを含む、２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、各莢膜多糖類が、ＰｓａＡ ４０～８０μｇにコンジュゲートされている、請求項１に記載の２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項11】
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 ２．２～２．４μｇ、並びに６Ｂ由来の莢膜多糖類 ４．４μｇを含む、２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、各莢膜多糖類が、ＣＲＭ１９７ ４０～８０μｇにコンジュゲートされている、請求項１に記載の２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項12】
血清型１５Ａ由来の莢膜多糖類が、５～１８％の範囲のグリセロール含有量を有する、請求項９～１１のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項13】
血清型３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、２～１０％の範囲のグリセロール含有量を有する、請求項９～１１のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項14】
下記：医薬的に許容できるキャリヤー、医薬的に許容できる希釈剤、緩衝剤、保存剤、安定剤、アジュバント、及び／又は凍結乾燥用賦形剤の内の１つ又は複数をさらに含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項15】
アジュバントが、リン酸アルミニウムである、請求項１４に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項16】
侵襲性肺炎球菌疾患（ＩＰＤ）等の肺炎連鎖球菌により媒介される疾患を有する対象を予防又は処置するための請求項１～１５のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項17】
対象が、ヒトである、請求項１６に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項18】
対象に非経口又は粘膜投与される、請求項１７に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項19】
ワクチン組成物の各用量が、各肺炎球菌多糖類 ０．１μｇ～５０μｇ、各キャリヤータンパク質 １．５μｇ～７０μｇを含む、各キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、各肺炎球菌多糖類 ０．１μｇ～１０μｇ、又は１μｇ～５μｇを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項20】
タンパク質対多糖類（タンパク質／ＰＳ）のパーセント比が、０．３～２．０タンパク質／ＰＳである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項21】
請求項２に記載の２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を調製する方法であって、（ａ）２４種の活性化された肺炎球菌多糖類の内の１種又は複数を、ＣＲＭ１９７キャリヤータンパク質に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ａ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を製剤化して、２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を調製するステップ
を含む、方法。
【請求項22】
請求項４に記載の２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を調製する方法であって、（ａ）２４種の活性化された肺炎球菌多糖類の内の１種又は複数を、ＰｓａＡ及びＣＲＭ１９７を含む群から選択される免疫原性キャリヤータンパク質に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ａ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を製剤化して、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を調製するステップ
を含む、方法。
【請求項23】
ワクチン組成物が、単位用量バイアル、複数回用量バイアル又はプレフィルドシリンジに製剤化される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項24】
ワクチン組成物が、４ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬの範囲の量で、チオメルサール、２－フェノキシエタノールから選択される１種又は複数の保存剤をさらに含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
【請求項25】
ＣＲＭ１９７にそれぞれ個別にコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の肺炎球菌莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、前記組成物が、４～７のｐＨを有し、４．４μｇ／０．５ｍＬの６Ｂ由来の莢膜多糖類；２．２～４μｇ／０．５ｍＬの全ての他の血清型由来の莢膜多糖類；４０～８０μｇ／０．５ｍＬのＣＲＭ１９７；０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬのリン酸アルミニウム；１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；０．５～２．５％ｗ／ｖの塩化ナトリウム；並びに０．００２～０．２％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含む、免疫原性組成物。
【請求項26】
ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の肺炎球菌莢膜多糖類、並びにＰｓａＡにコンジュゲートした、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、前記組成物が、４～７のｐＨを有し、４．４μｇ／０．５ｍＬの６Ｂ由来の莢膜多糖類；２．２～４μｇ／０．５ｍＬの全ての他の血清型由来の莢膜多糖類；２０～４０μｇ／０．５ｍＬのＣＲＭ１９７；２０～４０μｇ／０．５ｍＬのＰｓａＡ；０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬのリン酸アルミニウム；１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；０．５～２．５％ｗ／ｖの塩化ナトリウム；並びに０．００２～０．２％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含む、免疫原性組成物。
【請求項27】
ＰｓａＡにそれぞれ個別にコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の肺炎球菌莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、前記組成物が、４～７のｐＨを有し、４．４μｇ／０．５ｍＬの６Ｂ由来の莢膜多糖類；２．２～４μｇ／０．５ｍＬの全ての他の血清型由来の莢膜多糖類；４０～８０μｇ／０．５ｍＬのＰｓａＡ；０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬのリン酸アルミニウム；１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；０．５～２．５％ｗ／ｖの塩化ナトリウム；並びに０．００２～０．２％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含む、免疫原性組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、１種又は複数のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした１種又は複数の肺炎連鎖球菌血清型の肺炎球菌莢膜多糖類を含む多価肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
肺炎連鎖球菌（「肺炎球菌」）は、肺炎、菌血症及び髄膜炎等の侵襲性疾患、並びに急性中耳炎（例えば、中耳の細菌叢）等の細菌叢に関連する疾患を引き起こすグラム陽性菌である。これらの肺炎球菌が誘導する疾患は、特に２４カ月齢未満及び６０歳を超える人において、病的状態及び多数の死者をもたらす。米国における６０歳を超える人についての肺炎球菌性肺炎の割合は、１００，０００人当たり３～８人であると推定される。２０％の症例において、肺炎球菌性肺炎は、抗生物質処置にもかかわらず、合わせて３０％に近い死亡率を有する菌血症及び髄膜炎を引き起こす。
【0003】
肺炎球菌ワクチンは、感染を予防するために投与され得る。現在のワクチンとして、多価肺炎球菌多糖類ワクチン（２種以上の血清型由来の肺炎球菌多糖類を含む）、及び肺炎球菌コンジュゲートワクチンが挙げられる。肺炎球菌多糖類ワクチンの予防効果は、莢膜多糖類に対して産生される抗体の濃度に関連していることが既知である。肺炎球菌細胞は、９０種超の異なる肺炎球菌血清型を生じさせる多糖類で被膜化されている。この被膜は、肺炎球菌の主要な病原性決定基であり、これは、細胞溶解を媒介する補体から細胞の内面を保護するだけでなく、これはまた、免疫原性に乏しい。
【0004】
ＭｅｒｃｋのＰｎｅｕｍｏｖａｘ（登録商標）２３は、多価肺炎球菌多糖類ワクチンであり、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ｆ、１９Ａ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆを含む２３種の肺炎球菌血清型由来の非コンジュゲート莢膜多糖類を含む。Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ（登録商標）２３に加えて、認可されている多価肺炎球菌多糖類ワクチンは、今までのところ、成人、特に高齢者及び高リスク者での肺炎球菌疾患の予防で有用であることが証明された。しかしながら、乳児及び幼児は、この非コンジュゲート肺炎球菌多糖類ワクチンに反応しにくい。
【0005】
Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）－７は、肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチンであり、７種の最も高い頻度で単離された多糖類血清型（例えば、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、及び２３Ｆ）を含む。Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）－７が２０００年に米国で使用され始めてから、子供での侵襲性肺炎球菌疾患（ＩＰＤ）は大幅に減少している。世界のある特定の領域では、Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）－７による血清型適用範囲に限界があるため、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした１３種の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、及び２３Ｆを含む１３価のコンジュゲートワクチンＰｒｅｖｅｎａｒ－１３（登録商標）が開発され、承認された。
【0006】
Ｓｙｎｆｌｏｒｉｘ（登録商標）は、１０種の、プロテイン質Ｄ(protein D)（ＰＤ）にコンジュゲートした多糖類血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、２３Ｆ、破傷風トキソイド（ＴＴ）にコンジュゲートした血清型１８Ｃ、及びジフテリアトキソイド（ＤＴ）にコンジュゲートした血清型１９Ｆを含む、肺炎球菌ワクチンである。血清型多糖類のそれぞれは、制御されたｐＨ下で１－シアノ－４－ジメチルアミノ－ピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）を使用して結合されている。
【0007】
米国特許第５，３６０，８９７号明細書では、肺炎球菌ワクチンであって、免疫原性コンジュゲートが、少なくとも２つのカルボニル基を有する、細菌病原体である肺炎連鎖球菌のインタクトな莢膜高分子の還元的アミノ化生成物、及び細菌毒素又はトキソイドを含み、前記コンジュゲートが、莢膜高分子及び毒素又はトキソイドの間に直接共有結合が存在する架橋コンジュゲートを含む、肺炎球菌ワクチンが開示されている。
【0008】
米国特許第５，６９３，３２６号明細書では、コンジュゲートワクチンを調製する一般化された方法であって、ウイルス、真菌又は細菌多糖類を活性化するために、１－シアノ－４－（ジメチルアミノ）－ピリジニウムテトラフルオロボレート、Ｎ－シアノトリエチル－アンモニウムテトラフルオロボレート、及びｐ－ニトロフェニルシアネートの群から選択される有機シアニル化剤を使用して、活性化された炭水化物を形成し、その後にタンパク質又はキャリヤータンパク質と結合される、方法を提供している。
【0009】
米国特許第５，８５４，４１６号明細書では、ＰｓａＡ（肺炎球菌表面接着Ａ）として既知の肺炎連鎖球菌由来の３７ｋＤａのタンパク質のアミノ酸及びＤＮＡ配列が開示されている。
【0010】
米国特許第７，８６２，８２３号明細書では、少なくとも２種の異なるキャリヤータンパク質、例えばＤＴ及びＴＴを有する肺炎球菌莢膜多糖類を含む多価コンジュゲートワクチン組成物が開示されている。
【0011】
米国特許第８，１９２，７４６号明細書では、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類を有する１５価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物が開示されている。
【0012】
米国特許第８，５５７，２５０Ｂ２号明細書では、複数のシアネートで活性化された免疫原性の別個の多糖類の混合物を少なくとも１種のヒドラジドで活性化されたタンパク質と接触させるステップを含む方法が開示されている。
【0013】
米国特許第８，８０８，７０８号明細書及び米国特許第８，６０３，４８４号明細書では、血清型が１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、及び２３Ｆ、並びにキャリヤータンパク質ＣＲＭ１９７からなる、多糖類－タンパク質コンジュゲートからなる１３価の免疫原性組成物が説明されている。
【0014】
米国特許出願公開第２０１０／００７４９２２Ａ１号明細書では、１０種以上の血清型を含む免疫原性組成物であって、１９Ｆ莢膜サッカライドが、ＤＴにコンジュゲートされ、血清型１８Ｃ莢膜サッカライドが、破傷風トキソイドにコンジュゲートされ、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、及び２３Ｆ莢膜サッカライドが、インフルエンザ菌から単離されたタンパク質Ｄにコンジュゲートされる、免疫原性組成物が開示されている。
【0015】
米国特許出願公開第２０１０／０２３９６０４号明細書では、血清型１９Ａ及び１９Ｆ由来の多価肺炎連鎖球菌莢膜サッカライドコンジュゲートを含む免疫原性組成物であって、血清型１９Ａが、第１の細菌トキソイドにコンジュゲートされ、１９Ｆが、第２の細菌トキソイドにコンジュゲートされ、２～９種の肺炎連鎖球菌莢膜サッカライドが、タンパク質Ｄにコンジュゲートされる、免疫原性組成物が開示されている。
【0016】
米国特許出願公開第２０１２／３２１６５８Ａ１号明細書では、免疫原性組成物であって、血清型１、３、１９Ａ、及び１９Ｆが、還元的アミノ化以外の化学によって直接的又は間接的のいずれかで、タンパク質キャリヤーに連結され、１種又は複数の異なるサッカライドが、還元的アミノ化によりタンパク質キャリヤーに連結される血清型４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、及び２３Ｆからなる第２の群から選択される、免疫原性組成物が開示されている。
【0017】
印国１４０／ＤＥＬ／２０１１号明細書では、ＤＴ、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、及び破傷風トキソイドを含む群から選択される少なくとも２種以上のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、血清型由来の（ａ）７種以上、（ｂ）１０種以上の多糖類のいずれかを含む肺炎連鎖球菌ワクチンを提供している。
【0018】
国際公開第２０１３／１９１４５９Ａ１号パンフレットでは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、莢膜多糖類１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｎ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、及び２３Ｆに由来する異なる血清型の肺炎連鎖球菌を含む、１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物が開示されている。
【0019】
国際公開第２０１４／０９２３７７Ａ１号パンフレットでは、１２種の血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、及び２３Ｆから選択され、最後の血清型が、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、２又は９Ｎのいずれかである、１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物が開示されている。
【0020】
国際公開第２０１４／０９２３７８Ａ１号パンフレットでは、１２種の血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、及び２３Ｆから選択され、残りが、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、２２Ｆ又は３３Ｆ由来の１種である、免疫原性肺炎球菌コンジュゲート組成物が開示されている。
【0021】
国際公開第２０１６／２０７９０５Ａ２号パンフレットでは、１）ＣＤＡＰで活性化され、キャリヤータンパク質ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｎ、９Ｖ、１５Ｂ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆから選択される少なくとも１２種の莢膜多糖類、並びに２）医薬的に許容できるキャリヤーを含む、多価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）組成物であって、組成物が、血清型６Ａ由来の莢膜多糖類を含まない、多価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）組成物が開示されている。
【0022】
本出願人の国際公開第２０１８／０６４４４４Ａ１号パンフレットでは、肺炎球菌ワクチン組成物であって、組成物が、キャリヤータンパク質の肺炎球菌表面接着タンパク質Ａ（ＰｓａＡ）、又はＰｓａＡ及びＣＲＭ１９７の組合せにそれぞれ個別にコンジュゲートした、２種以上の莢膜肺炎球菌多糖類血清型を含む、肺炎球菌ワクチン組成物が説明されている。
【0023】
中国特許出願公開第１０１５９０２２４号明細書では、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、血清型１、２、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｎ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、及び２３Ｆを含む、１４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチンが説明されている。
【0024】
中国特許出願公開第１０３６２３４０１号明細書では、１４価の肺炎球菌莢膜多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物であって、前記１４種の異なる血清型が、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆである、１４価の肺炎球菌莢膜多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物が開示されている。
【0025】
中国特許出願公開第１０３６５６６３１号明細書では、多価肺炎球菌莢膜多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物及びその調製方法を提供している。そのコンジュゲート組成物は、２４種の異なる血清型の肺炎球菌の莢膜多糖類、及びキャリヤータンパク質から共有結合様式で調製され、ここで、２４種の異なる血清型は、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆである。
【0026】
中国特許出願公開第１０３６５６６３２号明細書では、血清型６Ａ、並びにＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆからなる群から選択される少なくとも１種の追加の血清型を含む、多価肺炎球菌莢膜多糖類組成物が開示されている。
【0027】
中国特許出願公開第１０４０６９４８８号明細書では、１４種の異なる血清型及びキャリヤータンパク質の多価肺炎球菌莢膜多糖類ワクチンであって、１４種の血清型が、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした、１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆを含む、多価肺炎球菌莢膜多糖類ワクチンが開示されている。
【0028】
Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００３，Ｖａｃｃｉｎｅ；２１（１３－１４）：１５５４－９）では、各多糖類型６Ａ、１４、１９Ｆ、及び２３Ｆが、破傷風トキソイド若しくはジフテリアＣＲＭ１９７に別々に結合するか、又は半分用量の多糖類型６Ａ、１４、１９Ｆ、及び２３Ｆの混合物が破傷風トキソイド及びジフテリアＣＲＭ１９７に別々に結合した、４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチンの比較研究が開示されている。
【0029】
Ｎｕｒｋｋａ ｅｔ ａｌ．，（２００４，Ｐｅｄ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．Ｊ．，２３：１００８－１０１４） では、１１価の肺炎球菌タンパク質Ｄコンジュゲートワクチンの免疫原性及び安全性の研究が開示され、ここで、そのワクチンの３投与量を受け、続いて同じワクチン又は肺炎球菌多糖類ワクチンのいずれかのブースター用量を受けた乳児において、血清型３についてプライミング効果は観察されなかった。
【0030】
上記で述べた参照文献では、他の組成物、方法等の中で、１種又は複数の血清型由来の多糖類、及びこれらの多糖類のキャリヤータンパク質とのコンジュゲーションを含む、多価肺炎球菌コンジュゲートワクチンが開示されている。様々な地域にわたって広く行き渡っている異なる血清型を考慮して、改善された免疫応答を有する多糖類血清型の新規コンジュゲートを含むさらなる多価肺炎球菌ワクチンに対する必要性、及びその簡単で効率的な製造を開発する必要性が存在する。
【0031】
驚くべきことに、本発明の多価肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物は、天然の多価肺炎球菌ワクチン及び既存の肺炎球菌コンジュゲートワクチンより高い改善された免疫応答を提供する。
【発明の概要】
【0032】
本発明は、１種又は複数のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした１種又は複数の肺炎連鎖球菌血清型を含む２４価の肺炎球菌多糖類タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0033】
別の実施形態では、本発明は、１種又は複数のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型由来の莢膜多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含む、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0034】
さらに別の実施形態では、本発明は、１種又は複数のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型由来の莢膜多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含み、キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ１９７、又はＣＲＭ１９７及びＰｓａＡの組合せ、又はＣＲＭ１９７及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＰｓａＡ及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＣＲＭ１９７、ＰｓａＡ、及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＣＲＭ１９７、ＰｓａＡ、タンパク質Ｄ、ジフテリアトキソイド（ｔｏｘｉｄ）、及び破傷風トキソイドの組合せから選択される、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物も提供する。
【0035】
ある実施形態では、本発明は、キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型由来の莢膜多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含み、キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ１９７である、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0036】
ある実施形態では、本発明は、キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型由来の莢膜多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含み、キャリヤータンパク質が、ＰｓａＡである、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0037】
ある実施形態では、本発明は、１種又は複数のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型由来の莢膜多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含み、キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ１９７、ＰｓａＡ、又はこれらの組合せである、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0038】
ある実施形態では、本発明は、１種又は複数のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型由来の莢膜多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含み、キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ１９７、ＰｓａＡ、破傷風トキソイド、又はこれらの組合せである、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0039】
【図1】（Ａ）血清型３、及び（Ｂ）血清型６ＢとＰｓａＡとのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図2】（Ａ）血清型６Ａ－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型６ＡとＰｓａＡとのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図3】（Ａ）血清型８－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型８－ＰｓａＡのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図4】（Ａ）血清型１０Ａ－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型１０Ａ－ＰｓａＡのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図5】（Ａ）血清型１１Ａ－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型１１Ａ－ＰｓａＡのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図6】（Ａ）血清型１２Ｆ－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型１２Ｆ－ＰｓａＡのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図7】（Ａ）血清型１５Ａ－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型１５Ａ－ＰｓａＡのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図8】（Ａ）血清型２３Ａ－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型２３Ａ－ＰｓａＡのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図9】（Ａ）血清型２３Ｂ－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型２３Ｂ－ＰｓａＡのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図10】（Ａ）血清型２４Ｆ－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型２４Ｆ－ＰｓａＡのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【図11】（Ａ）血清型３５Ｂ－ＣＲＭ１９７、及び（Ｂ）血清型３５Ｂ－ＰｓａＡのコンジュゲーション反応速度論を示すＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラム。
【発明を実施するための形態】
【0040】
定義
本発明全体を通して、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別途文脈が明確に示さない限り、複数の参照対象を含む。同様に、単語「又は」が、２つ以上の項目のリストに関して他の項目を除外する単一の項目のみを意味するように明確に限定されない限り、そのようなリストにおける「又は」の使用は、（ａ）このリスト中の任意の単一の項目、（ｂ）このリスト中の全ての項目、又は（ｃ）このリスト中の項目の任意の組合せを含むと解釈すべきである。加えて、「含む」という用語、及び同類のものは、本発明全体を通して、同一の特徴の任意のより多くの数、及び／又は１種若しくは複数の追加の種類の特徴が除外されないように、列挙された特徴を少なくとも含むことを意味するために使用される。本明細書における「一実施形態」、「ある実施形態」又は類似の語句への言及は、その実施形態に関連して説明される組成物の特定の特徴、組成物、方法、又は特性が、本技術の少なくとも１つの実施形態に含まれ得ることを意味する。従って、本明細書におけるそのような語又は語句の出現は、必ずしも同じ実施形態を全て指すわけではない。さらに、様々な特定の特徴、組成物、方法、又は特性を、１つ又は複数の実施形態において、任意の適切な方法で組み合わせ得る。
本発明全体を通して、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別途文脈が明確に示さない限り、複数の参照対象を含む。同様に、単語「又は」が、２つ以上の項目のリストに関して他の項目を除外する単一の項目のみを意味するように明確に限定されない限り、そのようなリストにおける「又は」の使用は、（ａ）このリスト中の任意の単一の項目、（ｂ）このリスト中の全ての項目、又は（ｃ）このリスト中の項目の任意の組合せを含むと解釈すべきである。加えて、「含む」という用語、及び同類のものは、本発明全体を通して、同一の特徴の任意のより多くの数、及び／又は１種若しくは複数の追加の種類の特徴が除外されないように、列挙された特徴を少なくとも含むことを意味するために使用される。本明細書における「一実施形態」、「ある実施形態」又は類似の語句への言及は、その実施形態に関連して説明される組成物の特定の特徴、組成物、方法、又は特性が、本技術の少なくとも１つの実施形態に含まれ得ることを意味する。従って、本明細書におけるそのような語又は語句の出現は、必ずしも同じ実施形態を全て指すわけではない。さらに、様々な特定の特徴、組成物、方法、又は特性を、１つ又は複数の実施形態において、任意の適切な方法で組み合わせ得る。
【0041】
本発明は、網羅的であることが意図されておらず、本技術を本明細書で開示されている詳細な形態に限定することも意図されていない。本明細書では、説明を目的として具体的な実施形態が開示されているが、関連分野の当業者が認識するように、本技術から逸脱することなく様々な等価の改変が可能である。一部の場合では、本技術の実施形態の説明を不必要に不明瞭にすることを避けるために、周知の構造及び機能は示されておらず、及び／又は詳細には説明されてない。本明細書では、方法のステップを特定の順序で示す場合があるが、代替実施形態では、このステップは別の適切な順序を有し得る。同様に、特定の実施形態の文脈で開示されている本技術のある特定の実施形態を、他の実施形態で組み合わせてもよいし、他の実施形態において除外してもよい。さらに、ある特定の実施形態と関連する利点が、この実施形態の文脈で開示され得るが、他の実施形態もそのような利点を示し得、全ての実施形態は、本技術の範囲に含まれるために、本明細書で開示されているそのような利点又は他の利点を示す必要はない。従って、この開示及び関連技術は、本明細書で明示的に示されていない及び／又は説明されていない他の実施形態を包含し得る。
【0042】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本方法が属する分野の当業者により一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で説明されている免疫原性組成物、ワクチン組成物、若しくは方法と類似又は等価な任意の免疫原性組成物、ワクチン組成物、若しくは方法は、本発明の実施形態の実施又は試験においても使用され得るが、代表的な例示的方法及び組成物がここで説明される。
【0043】
値の範囲が記載されている場合には、この範囲の上限と下限との間の各介在値、並びにこの規定の範囲内の任意の他の規定の又は介在する値は、本方法及び本組成物に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、独立して、これらのより小さい範囲に含まれ得、この規定の範囲中で任意の特に除外された限界を条件として、本方法及び本組成物にも包含される。この規定の範囲が限界の一方又は両方を含む場合には、これらの含まれる限界のいずれか又は両方を除外する範囲も、本方法、本組成物、及び本組合せに含まれる。
【0044】
本明細書で使用される場合、「莢膜多糖類」という用語は、肺炎連鎖球菌血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂの細胞壁の外側でこの細胞壁と連続する多糖類の層を指す。
【0045】
「サイジングされた」又は「サイジング」という用語は、本明細書で使用される場合、様々な方法により天然多糖類のサイズを減少させることを指す。この方法として、均質化等の機械的方法が挙げられ得る。天然多糖類のサイズを減少させること、又は「サイジング」により、下記を含む様々な利点が得られる：（１）天然多糖類と比較して、高い免疫原性を付与する、（２）コンジュゲート中における多糖類対タンパク質の比を変更し得る、（３）サイジングされた多糖類は、組成物により高い安定性を付与し得る。
【0046】
多糖類の「分子量」、又は「分子サイズ」、又は「平均分子サイズ」、又は「平均分子量」という用語は、本明細書で使用される場合、ＭＡＬＬＳ（多角度レーザー光散乱）で測定した多糖類の重量平均分子量（Ｍｗ）を指す。
【0047】
本明細書で使用される場合、「免疫原性組成物」及び「ワクチン組成物」という用語は、互換的に使用される。
本明細書で使用される場合、「キャリヤータンパク質」という用語は、典型的には免疫系による抗原の検出を強化するか又は促進する目的で、ハプテン（弱い抗原）が結合するか、付着するか、又はコンジュゲートするあらゆるタンパク質又はその断片を指す。キャリヤータンパク質の例として、ＣＲＭ１９７、ＰｓａＡ、破傷風トキソイド、及びこれらの断片が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「キャリヤータンパク質」という用語は、典型的には免疫系による抗原の検出を強化するか又は促進する目的で、ハプテン（弱い抗原）が結合するか、付着するか、又はコンジュゲートするあらゆるタンパク質又はその断片を指す。キャリヤータンパク質の例として、ＣＲＭ１９７、ＰｓａＡ、破傷風トキソイド、及びこれらの断片が挙げられるが、これらに限定されない。
【0048】
「コンジュゲート」又は「コンジュゲートした」という用語は、本明細書で使用される場合、肺炎連鎖球菌莢膜多糖類がキャリヤータンパク質に共有結合していることを意味するために使用される。
【0049】
本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、抗原に対して生じる免疫応答の種類及び性質に影響を与えることによって抗原と免疫系との間の接触を促進することによりワクチンの抗原の免疫応答を強化するワクチンの非抗原性成分を指す。アジュバントは、抗原に対する長期の免疫応答を引き起こし、ある特定の抗原の毒性を低下させるか、又はある特定の抗原に対する溶解性を提供する働きもし得る。
【0050】
本明細書で使用される場合、「医薬的に許容できるキャリヤー」という用語は、組成物を受けた個体に有害な抗体の産生をそれ自身は誘導せず、過度の毒性なく投与され得る、抗原及び／又はウイルスの投与のためのワクチン製剤に添加され得る１種又は複数の任意選択的な成分を指す。適切なキャリヤーは、タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、及び不活性ウイルス粒子等の大きく、ゆっくりと代謝される巨大分子であり得る。この用語は、１種又は複数の賦形剤、安定剤、希釈剤、緩衝剤、若しくは界面活性剤、凍結乾燥用賦形剤、又はこれらの組合せを含む。医学的に許容できる又は薬理学的に許容されるとは、生物学的又は他の方法で望ましくない材料を意味し、即ち、材料は、任意の望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、又はそれが含まれる組成物の成分のいずれかと有害な方法で相互作用することなく、製剤又は組成物で個体に投与され得る。
本発明の詳細な説明
本発明は、１種又は複数のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の２４種の異なる血清型由来の多糖類を含む２４価の肺炎球菌多糖－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
本発明の詳細な説明
本発明は、１種又は複数のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の２４種の異なる血清型由来の多糖類を含む２４価の肺炎球菌多糖－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0051】
ある実施形態では、本発明は、キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の２４種の異なる血清型由来の莢膜多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含み、キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ１９７、又はＣＲＭ１９７及びＰｓａＡの組合せ、又はＣＲＭ１９７及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＰｓａＡ及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＣＲＭ１９７、ＰｓａＡ、及び破傷風トキソイドの組合せから選択される、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物も提供する。
【0052】
ある実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂから選択される２４価の肺炎球菌多糖－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であって、少なくとも１３種の血清型が、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされ、残りの血清型が、ＰｓａＡにコンジュゲートされる、２４価の肺炎球菌多糖－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0053】
好ましい実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類を含む２４価の肺炎球菌多糖－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＮ１９７キャリヤータンパク質にコンジュゲートされ、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされる、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0054】
ある実施形態では、本発明は、ＣＲＭ１９７キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂから選択される異なる血清型由来の莢膜多糖類を含む、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0055】
ある実施形態では、本発明は、ＰｓａＡキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂから選択される異なる血清型由来の莢膜多糖類を含む、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0056】
好ましい実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類を含む２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされ、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ１９７及び破傷風トキソイドの組合せにコンジュゲートされる、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0057】
ある実施形態では、本発明は、肺炎球菌多糖類を含む肺炎球菌ワクチン組成物であって、１種又は複数の肺炎球菌多糖類が、天然肺炎球菌多糖類である、肺炎球菌ワクチン組成物を提供する。
【0058】
別の実施形態では、本発明は、肺炎球菌多糖類を含む肺炎球菌ワクチン組成物であって、１種又は複数の肺炎球菌多糖類が、断片化され、各断片化された肺炎球菌多糖類が、天然肺炎球菌多糖類の平均分子量よりも小さい平均分子量を有し、５０～１０００ｋＤａの範囲であり得る、肺炎球菌ワクチン組成物を提供する。
【0059】
さらに別の実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の単離及び精製された莢膜多糖類であって、各多糖類が、約５０～１０００ｋＤａの分子量を有し、好ましくは１００～１０００、２００～８００、２５０～６００、又は３００～４００、７０～１５０、又は７５～１２５ｋＤａの平均サイズ（Ｍｗ）を有する、単離及び精製された莢膜多糖類を提供する。
【0060】
さらに他の実施形態では、本発明は、ＣＲＭ１９７、又はＣＲＭ１９７及びＰｓａＡの組合せ、又はＣＲＭ１９７及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＰｓａＡ及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＣＲＭ１９７、ＰｓａＡ、及び破傷風トキソイドの組合せから選択されるキャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の２４種の異なる血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の多糖類を含む肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であって、多糖類－タンパク質コンジュゲートが、約５００ｋＤａ～約５０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～約１０，０００ｋＤａ；約１，５００ｋＤａ～約１５，０００ｋＤａ；約２，０００ｋＤａ～約２０，０００ｋＤａ；約２，５００ｋＤａ～約２５，０００ｋＤａ；又は約３，０００ｋＤａ～約３０，０００ｋＤａの範囲の分子量を有する、肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0061】
さらに別の好ましい実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 約２．２～２．４μｇ、並びに６Ｂ 約４．４μｇを含む２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の各莢膜多糖類が、ＣＲＭ１９７キャリヤータンパク質 約３０～３５μｇにコンジュゲートされ、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類が、ＰｓａＡ 約２０～３０μｇにコンジュゲートされる、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0062】
さらに別の好ましい実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 約２．２～２．４μｇ、並びに６Ｂ 約４．４μｇを含む、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であって、各莢膜多糖類が、ＰｓａＡ 約４０～８０μｇにコンジュゲートされる、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0063】
さらに別の好ましい実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 約２．２～２．４μｇ、並びに６Ｂ 約４．４μｇを含む、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であって、各莢膜多糖類が、ＣＲＭ１９７ 約４０～８０μｇにコンジュゲートされる、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0064】
さらなる態様では、本開示は、５０～１０００ｋＤａの平均分子量、及び５～１８％の範囲のグリセロール含有量を有する、単離された肺炎連鎖球菌血清型１５Ａを提供する。
フッ化水素酸（ＨＦ）による多糖類の処理によるグリセロールの放出後のパルスアンペロメトリック検出付きの高性能陰イオン交換クロマトグラフイー（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）を使用するグリセロールの測定により、グリセロールリン酸側鎖の存在を決定し得る。
フッ化水素酸（ＨＦ）による多糖類の処理によるグリセロールの放出後のパルスアンペロメトリック検出付きの高性能陰イオン交換クロマトグラフイー（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）を使用するグリセロールの測定により、グリセロールリン酸側鎖の存在を決定し得る。
【0065】
さらなる態様では、本開示は、５０～１０００ｋＤａの平均分子量、及び２～１０％、好ましくは２～８％の範囲のアセテート含有量を有する、単離された肺炎連鎖球菌血清型３５Ｂ莢膜多糖類を提供する。
【0066】
別の実施形態では、本発明は、肺炎球菌多糖類のそれぞれが、キャリヤータンパク質へのコンジュゲーションの前に、１－シアノ－４－ジメチルアミノ－ピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）で活性化されて、シアン酸エステルを形成する、肺炎球菌多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0067】
別の実施形態では、本発明は、１種又は複数の肺炎球菌多糖類が、キャリヤータンパク質のアミノ基に直接結合されるか、又はスペーサーによってアミノ基に結合される、肺炎球菌多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0068】
別の実施形態では、本発明は、肺炎球菌多糖類を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、スペーサーが、シスタミン、システアミン、ヘキサンジアミン、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、ＥＤＡＣ、又はＥＤＣである、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0069】
本発明に係るＰｓａＡキャリヤータンパク質は、改変されたＰｓａＡであり、野生型疎水性Ｎ末端リーダーペプチドを含まない。
本発明は、１種又は複数の血清型の肺炎球菌多糖類及びキャリヤータンパク質を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、ＰｓａＡキャリヤータンパク質が、２９０個のアミノ酸を含む、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
本発明は、１種又は複数の血清型の肺炎球菌多糖類及びキャリヤータンパク質を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、ＰｓａＡキャリヤータンパク質が、２９０個のアミノ酸を含む、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0070】
キャリヤータンパク質にそれぞれ個別にコンジュゲートした莢膜肺炎球菌多糖類血清型を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物は、本明細書で多糖類－タンパク質コンジュゲート及び／又はコンジュゲートと称される。本明細書で説明されている肺炎球菌ワクチン組成物に含まれる場合、多価肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン（本明細書で多価コンジュゲートワクチン、コンジュゲートワクチン、及び／又は多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチンとも称される）である。多価コンジュゲートワクチンに加えて、本発明は、それを調製する方法、及び／又はそれを必要とする対象にそれを投与する方法を提供する。
【0071】
キャリヤータンパク質は、十分な量及び純度で得られる非毒性かつ非反応性のタンパク質である。一部の実施形態では、本発明は、１種又は複数の肺炎連鎖球菌多糖類（本明細書で「肺炎球菌多糖類」とも称される）にコンジュゲートした１種又は複数のキャリヤータンパク質を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。肺炎球菌多糖類をキャリヤータンパク質にコンジュゲートさせることにより、肺炎球菌多糖類は、コンジュゲートされていない肺炎球菌多糖類より高い増加した免疫原性を有する。
【0072】
本発明の一部の実施形態では、使用されるキャリヤータンパク質の組合せは、ＰｓａＡ、ＣＲＭ１９７、タンパク質Ｄ、ジフテリアトキソイド、及び破傷風トキソイド（ＴＴ）等の２種以上のキャリヤータンパク質を含む。
【0073】
別の実施形態では、本発明の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物は、下記の内の１つ又は複数：医薬的に許容できるキャリヤー、医薬的に許容できる希釈剤、緩衝剤、保存剤、安定剤、アジュバント、界面活性剤、溶剤、及び／又は凍結乾燥用賦形剤をさらに含む。適切な緩衝剤として、トリス（トリメタミン（ｔｒｉｍｅｔｈａｍｉｎｅ））、リン酸塩、酢酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、グリシン、ヒスチジン、及びコハク酸塩等が挙げられるが、これらに限定されない。適切な界面活性剤として、約０．００１％～約２％の濃度の、ポリソルベート－２０、ポリソルベート－４０、ポリソルベート－６０（Ｔｗｅｅｎ ６０）、ポリソルベート－８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、エチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）、及び／又はブチレンオキシド（Ｂ０）のコポリマー、ポロクサマー１２４、ポロクサマー１８８、ポロクサマー２３７、ポロクサマー３３８、及びポロクサマー４０７、オクトキシノール、トリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ８５）、並びにモノラウリン酸ソルビタン等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0074】
本発明の組成物は、５．０～８．０の範囲のｐＨを有する緩衝生理食塩溶液中で製剤化される。
一部の実施形態では、肺炎球菌多糖類は、従来の方法に従って１種又は複数の微生物（例えば、肺炎連鎖球菌）から抽出され得る。例えば、肺炎球菌多糖類は、既知の手順に従って調製され得る。さらに、肺炎球菌多糖類の精製は、国際公開第２０１６／１７４６８３Ａ１号パンフレットで説明されている手順に従って行われ得る。
一部の実施形態では、肺炎球菌多糖類は、従来の方法に従って１種又は複数の微生物（例えば、肺炎連鎖球菌）から抽出され得る。例えば、肺炎球菌多糖類は、既知の手順に従って調製され得る。さらに、肺炎球菌多糖類の精製は、国際公開第２０１６／１７４６８３Ａ１号パンフレットで説明されている手順に従って行われ得る。
【0075】
抽出された肺炎球菌多糖類は、従来の方法に従って精製され得、その天然形態で使用され得る。他の実施形態では、抽出及び精製された肺炎球菌多糖類は、断片化されて、肺炎球菌多糖類の１つ又は複数の部分が得られ得、肺炎球菌多糖類の各部分は、抽出及び精製された肺炎球菌多糖類の平均分子量よりも小さい平均分子量を有する。
【0076】
他の実施形態では、抽出及び精製された肺炎球菌多糖類を、１種又は複数のキャリヤータンパク質へのコンジュゲーション前に活性化し得る。例えば、抽出及び精製された肺炎球菌多糖類を、１種又は複数のキャリヤータンパク質へのコンジュゲーション前に、（例えば化学的に）活性化し得る。各活性化された肺炎球菌多糖類を、多糖類－タンパク質コンジュゲート（例えば糖コンジュゲート）を形成するキャリヤータンパク質に、それぞれ個別にコンジュゲートさせ得る。他の実施形態では、１種又は複数の活性化された肺炎球菌多糖類を、個々のキャリヤータンパク質にコンジュゲートさせ得る。コンジュゲートは、既知の技術によって調製され得る。
【0077】
一部の実施形態では、既知の技術、例えば、米国特許第４，３６５，１７０号明細書、同第４，６７３，５７４号明細書、及び同第４，９０２，５０６号明細書で説明されている技術に従って、肺炎球菌多糖類を、化学的に活性化してその後にキャリヤータンパク質にコンジュゲートさせ得る。例えば、炭水化物の１つ又は複数の隣接ヒドロキシル基のランダム酸化開裂による、過ヨウ素酸塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム、又は過ヨウ素酸）等の酸化剤を使用する末端ヒドロキシル基のアルデヒドへの酸化、及び１つ又は複数の反応性アルデヒド基の形成により、肺炎球菌多糖類を活性化し得る。
【0078】
肺炎球菌多糖類はまた、ＣＤＡＰ（１－シアノ－４－ジメチルアミノ－ピリジニウムテトラフルオロボレート）により活性化し、その後に１種又は複数のキャリヤータンパク質、例えば、ＰｓａＡ、ＣＲＭ１９７、ＰｓｐＡ、又はこれらの組合せにコンジュゲートさせ得る。他の実施形態では、ＣＤＡＰにより活性化されてシアン酸エステルを形成する肺炎球菌多糖類を、１種又は複数のキャリヤータンパク質に直接コンジュゲートさせてもよいし、スペーサー（例えばリンカー）を使用してコンジュゲートさせてもよい。このスペーサーは、キャリヤータンパク質上のアミノ基に結合し得る。一部の実施形態では、このスペーサーは、シスタミン又はシステアミンであり得、これらはチオール化多糖類を生成し、このチオール化多糖類は、マレイミド活性化キャリヤータンパク質へのチオエーテル結合を介して（例えばＧＭＢＳを使用する）、又はハロアセチル化キャリヤータンパク質へのチオエーテル結合を介して（例えば、ヨードアセチミド（ｉｏｄｏａｃｅｔｉｍｉｄｅ）、ヨードアセチミドエチルＨＣｌ、ＳＩＡＢ、ＳＩＡ、ＳＢＡＰ、及び／又はＮ－スクシンイミジルブロモアセテートを使用する）、キャリヤータンパク質に結合し得る。他の実施形態では、ヘキサンジアミン又はアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）を使用してシアン酸エステルを結合させ、カルボジイミド（例えばＥＤＡＣ又はＥＤＣ）化学を使用して、アミノ誘導体化サッカライドを、キャリヤータンパク質上のカルボキシル基を介してキャリヤータンパク質にコンジュゲートさせる。そのようなコンジュゲートは、国際公開第９３／１５７６０号パンフレット、同第９５／０８３４８号パンフレット、同第９６／２９０９４号パンフレット、及びＣｈｕ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４０：２４５－２５６で説明されている。
【0079】
本発明の多糖類－タンパク質コンジュゲート及びワクチン組成物での使用に適した他の活性化及び／又は結合技術として、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ－ニトロ安息香酸、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ－ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵ、及び国際公開第９８／４２７２１号パンフレットで説明されている他の方法の使用が挙げられる。例えば、コンジュゲーションは、サッカライドの遊離ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応（Ｂｅｔｈｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４：２５７２－４；Ｈｅａｒｎ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２１８：５０９－１８）、その後のタンパク質との結合によるカルバメート結合の形成により形成され得るカルボニルリンカーを伴い得る。一部の実施形態では、アノマー末端を第１級ヒドロキシル基へと還元させ、この第１級ヒドロキシル基の任意選択的な保護／脱保護、この第１級ヒドロキシル基とＣＤＩとの、ＣＤＩカルバメート中間体を形成する反応、及びＣＤＩカルバメート中間体とタンパク質上のアミノ基との結合を行うことができる。
【0080】
例えば、本発明の多糖類－タンパク質コンジュゲート及びワクチン組成物での使用に適した別の活性化及び／又は結合技術として、下記の方法が挙げられる：サイジングされた肺炎球菌多糖類（例えば、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度での約６ｍＬのサイジングされた多糖類）及びＣＤＡＰ（例えば、アセトニトリル中に約１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））を、（例えば、約１分にわたり撹拌することにより）ガラスバイアル中において約１：約１の比で混合し得る。多糖類溶液のｐＨを、必要に応じて調整し得る（例えば、約０．２Ｍのトリエチルアミンで約９．２５に調整し、室温にて３分にわたり撹拌し得る）。加えて、活性化された肺炎球菌多糖類に、ＰｓａＡ（例えば濃度が約１５ｍｇ／ｍＬである溶液 約４ｍＬ）を（例えば約１：約１（Ｐｓ：キャリヤータンパク質）の比で）緩やかに添加し得る。この反応物のｐＨを（例えば、０．２Ｍのトリメチルアミンを使用して約９．０５に）調整し得、この反応を（例えば、室温で５時間にわたり撹拌することにより）継続させ得る。この反応混合物を、（例えば、過剰な濃度のグリシンの添加により）クエンチし得る。
【0081】
一部の実施形態では、この反応混合物を、膜（例えば１００ Ｋ ＭＷＣＯ膜）を使用して透析ろ過し得、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製し得る。透析ろ過及び精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ及びアントロン法を使用して分析し得る。コンジュゲートを含む分析画分を、プールして（例えば０．２μｍフィルターを使用して）無菌ろ過し得る。
【0082】
１種又は複数のキャリヤータンパク質への肺炎球菌多糖類のコンジュゲーション後に、様々な技術により多糖類－タンパク質コンジュゲートを精製し得る（例えば、多糖類－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化させ得る）。これらの技術として、濃縮／透析ろ過操作、沈殿／溶出、カラムクロマトグラフィー、及び深層ろ過が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、このコンジュゲートを精製した後、このコンジュゲートを配合して、ワクチンとして使用され得る本発明の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を製剤化し得る。
【0083】
一部の実施形態では、本発明は、本明細書で説明されている肺炎球菌ワクチン組成物の多糖類－タンパク質コンジュゲートを調製する方法であって、この多糖類－タンパク質コンジュゲートを、アジュバント、賦形剤、及び緩衝剤を含む肺炎球菌ワクチン組成物に製剤化するステップをさらに含む方法を提供する。
【0084】
一部の実施形態では、本発明は、本明細書で説明されている肺炎球菌ワクチン組成物の多糖類－タンパク質コンジュゲートを調製する方法であって、アジュバントが、リン酸アルミニウムである、方法を提供する。
【0085】
一部の実施形態では、本発明は、予防又は処置が必要な対象を予防又は処置する方法であって、この予防又は処置が必要な対象に、本明細書で説明されている肺炎球菌ワクチン組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【0086】
一部の実施形態では、この対象は、肺炎連鎖球菌により媒介される疾患、例えば侵襲性肺炎球菌疾患（ＩＰＤ）を有する。
一実施形態では、この対象はヒトであり、例えば、乳児（約１歳未満）、幼児（約１２カ月齢～約２４カ月齢）、小児（約２歳～約５歳）、年長児（約５歳～約１３歳）、青年（約１３歳～約１８歳）、成人（約１８歳～約６５歳）、又は高齢者（約６５歳超）である。
一実施形態では、この対象はヒトであり、例えば、乳児（約１歳未満）、幼児（約１２カ月齢～約２４カ月齢）、小児（約２歳～約５歳）、年長児（約５歳～約１３歳）、青年（約１３歳～約１８歳）、成人（約１８歳～約６５歳）、又は高齢者（約６５歳超）である。
【0087】
一部の実施形態では、本開示は、免疫反応を誘発する方法であって、対象に、本明細書で説明されている肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物の免疫学的に有効な量を投与するステップを含む方法を提供する。
【0088】
一実施形態では、免疫反応を誘発する方法であって、対象に、本明細書で説明されている肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を全身投与し、皮下投与し、及び／又は粘膜投与するステップを含む方法を提供する。
【0089】
一部の実施形態では、本発明のワクチン組成物の用量中における各コンジュゲートの量は、免疫保護反応、例えば、顕著な副作用を引き起こさない免疫保護反応を誘発するのに十分な量である。各コンジュゲートの量は、肺炎球菌血清型に応じて異なり得るが、ワクチン組成物の各用量は、キャリヤータンパク質 約１．５μｇ～約５μｇを含む各キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、各肺炎球菌多糖類 約０．１μｇ～約５０μｇ、各肺炎球菌多糖類 約０．１μｇ～約１０μｇ又は約１μｇ～約５μｇを含み得る。
【0090】
別の実施形態では、本発明は、肺炎球菌多糖類及びキャリヤータンパク質を含む肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物が、約０．３～約２．０のタンパク質対多糖類（タンパク質／ＰＳ）、好ましくは０．５～１．５のタンパク質／ＰＳのパーセント比を有する、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0091】
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の精製された多糖類は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、多糖類は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａの分子量を有する。
【0092】
他の実施形態では、本発明は、約１，０００ｋＤａ～約１０，０００ｋＤａ、約１，５００ｋＤａ～約１５，０００ｋＤａ、約２，０００ｋＤａ～約２０，０００ｋＤａ、約２，５００ｋＤａ～約２５，０００ｋＤａ、又は約３，０００ｋＤａ～約３０，０００ｋＤａの範囲の分子量を有する１種又は複数の多糖類－タンパク質コンジュゲートを含む肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を提供する。
【0093】
本発明の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物は、既知の方法を使用して製造し得る。例えば、肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物を、医薬的に許容できる希釈剤又はビヒクル、例えば、水又は生理食塩水により製剤化し得る。加えて、肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物は、下記の内の１つ又は複数をさらに含み得る：緩衝剤、保存剤若しくは安定剤、ポリソルベート、アジュバント、例えばアルミニウム化合物（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、若しくはヒドロキシリン酸アルミニウム）、及び／又は凍結乾燥用賦形剤。本発明の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物中での上記化合物のいずれか１つの含有は、それを必要とする対象への投与様式及び投与経路の作用として選択することができ、さらには標準的な医薬慣習に基づくことができる。
【0094】
さらに別の好ましい実施形態では、本発明は、ＣＲＭ１９７にそれぞれ個別にコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の肺炎球菌莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、組成物が、４～７のｐＨを有し、６Ｂ 約４．４μｇ／０．５ｍＬ；全ての他の多糖類 約２．２～４μｇ／０．５ｍＬ；ＣＲＭ１９７ 約４０～８０μｇ／０．５ｍＬ；リン酸アルミニウム ０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬ；約１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；約０．５～２５％の塩化ナトリウム；０．００２～０．２％のポリソルベート８０；並びに２－フェノキシエタノール ４ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／０．５ｍＬを含む、２４価の免疫原性組成物を提供する。
【0095】
さらに別の好ましい実施形態では、本発明は、ＣＲＭ１９７キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の肺炎球菌莢膜多糖類、並びにＰｓａＡにコンジュゲートした、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、組成物が、４～７のｐＨを有し、６Ｂ 約４．４μｇ／０．５ｍＬ；全ての他の多糖類 約２．２～４μｇ／０．５ｍＬ；ＣＲＭ１９７ 約２０～４０μｇ／０．５ｍＬ；ＰｓａＡ ２０～４０μｇ／０．５ｍＬ；リン酸アルミニウム ０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬ；約１～１０ｍＭのナトリウム緩衝液；約０．５～２５％の塩化ナトリウム；０．００２～０．２％のポリソルベート８０；並びに２－フェノキシエタノール ４ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／０．５ｍＬを含む、２４価の免疫原性組成物を提供する。
【0096】
さらに別の好ましい実施形態では、本発明は、ＰｓａＡにそれぞれ個別にコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の肺炎球菌莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、組成物が、４～７のｐＨを有し、６Ｂ 約４．４μｇ／０．５ｍＬ；全ての他の多糖類 約２．２～４μｇ／０．５ｍＬ；ＰｓａＡ 約４０～８０μｇ／０．５ｍＬ；リン酸アルミニウム ０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬ；約１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；約０．５～２５％の塩化ナトリウム；０．００２～０．２％のポリソルベート８０；並びに２－フェノキシエタノール ４ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／０．５ｍＬを含む、２４価の免疫原性組成物を提供する。
【0097】
一部の実施形態では、本発明は、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂから選択される莢膜多糖類を含む、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製する方法であって、キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ１９７である、方法を提供する。２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製する方法は、
（ａ）２４種の活性化された肺炎球菌多糖類のそれぞれをＣＲＭ１９７キャリヤータンパク質に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ｃ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を製剤化して、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製するステップ
を含む。
（ａ）２４種の活性化された肺炎球菌多糖類のそれぞれをＣＲＭ１９７キャリヤータンパク質に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ｃ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を製剤化して、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製するステップ
を含む。
【0098】
一部の実施形態では、本発明は、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂから選択される肺炎球菌多糖類を含む２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製する方法であって、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされ、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる、方法を提供する。２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製する方法は、
（ａ）血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の多糖類をＰｓａＡに、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類をＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ａ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物に製剤化するステップ
を含む。
（ａ）血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の多糖類をＰｓａＡに、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類をＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ａ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物に製剤化するステップ
を含む。
【0099】
一部の実施形態では、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物をろ過し得る（例えば、無菌で）。
一実施形態では、肺炎球菌多糖類は、ＣＤＡＰを使用して活性化される。別の実施形態では、使用されるアジュバントは、リン酸アルミニウムである。
一実施形態では、肺炎球菌多糖類は、ＣＤＡＰを使用して活性化される。別の実施形態では、使用されるアジュバントは、リン酸アルミニウムである。
【0100】
２４価の各コンジュゲートは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム等のアルミニウム塩上の混合物、又は水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウム両方の混合物として、別々又は一緒に吸着され得る。吸着剤は、インサイチュで調製され得るか、又は製造プロセスの間に添加され得る。２４価のコンジュゲートの調製は、各コンジュゲートを容器（ｖｅｓｓｅｌ）又は容器（ｃｏｎｔａｉｎｅｒ）に連続して添加することによって、又はＣＲＭ１９７コンジュゲート（部分１）及びＰｓａＡコンジュゲート（部分２）を含む別々の溶液を調製し、部分１を部分２に添加するか、若しくはその逆によって、実行され得る。
【0101】
本発明の組成物は、単位用量、例えば単位用量バイアル、複数回用量、例えば複数回用量バイアル、又はプレフィルドシリンジに製剤化され得る。本発明の組成物は、約４ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの範囲であり得る量で、チオメルサール、２－フェノキシエタノール等から選択される１つ又は複数の保存剤をさらに含み得る。
【0102】
一部の実施形態では、本発明は、少なくとも以下：２種以上の肺炎球菌多糖類血清型 約２．２～４．４μｇ、ＰｓａＡ 血清型当たり約１μｇ～約１０μｇ、ＣＲＭ１９７ 各血清型について約２μｇ～約５μｇ、アジュバント（例えば、リン酸アルミニウム） 約０．２ｍｇ～約１ｍｇ、及び１つ又は複数の賦形剤（例えば、塩化ナトリウム及び／又は緩衝剤）を含有するように製剤化された約０．５ｍＬの単回用量として投与される、肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物等の免疫原性組成物（例えば、ワクチン）も提供する。
【0103】
本発明の組成物は、ワクチンの分野で使用される任意の数の従来の経路によって、それを必要とする対象に投与され得る。例えば、本発明の組成物は、全身に、例えば非経口（例えば、皮下、筋肉内、皮内及び／又は静脈内）、又は粘膜（例えば、経口及び／又は経鼻）投与され得る。
【0104】
一部の実施形態では、本発明は、１種又は複数のキャリヤータンパク質にコンジュゲートした１種又は複数の肺炎連鎖球菌莢膜多糖類に対するそれを必要とする対象における免疫応答を誘発する方法も提供する。免疫応答を誘発する方法は、本明細書で説明されている組成物の免疫学的に有効な量を、それを必要とする対象に投与するステップを含む。
【0105】
本発明の方法によれば、本明細書で説明されている組成物の対象はヒトであり、例えば、乳児（約１歳未満）、幼児（約１２カ月齢～約２４カ月齢）、小児（約２歳～約５歳）、年長児（約５歳～約１３歳）、青年（約１３歳～約１８歳）、成人（約１８歳～約６５歳）、又は高齢者（約６５歳超）である。
【0106】
本明細書で使用される場合、本開示で説明されている組成物の「有効な量」は、組成物が投与される対象における免疫応答を引き出すために必要な量を指す。免疫応答は、その後の負荷の間に肺炎連鎖球菌の感染の可能性又は重症度を顕著に低下させる、宿主中の１つ又は複数の肺炎連鎖球菌抗原特異的抗体の存在によって特徴付けられる。
【実施例】
【0107】
下記の実施例は、本発明を説明するために記載されており、単に説明目的のみにすぎず、本発明の範囲を限定すると解釈すべきではない。
実施例１：肺炎球菌莢膜多糖類－ＣＲＭ１９７コンジュゲートの調製
肺炎球菌血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆに関する肺炎球菌莢膜多糖類－ＣＲＭ１９７コンジュゲートを、国際公開第２０１６／２０７９０５号パンフレットで説明されている手順により調製した。
実施例１：肺炎球菌莢膜多糖類－ＣＲＭ１９７コンジュゲートの調製
肺炎球菌血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆに関する肺炎球菌莢膜多糖類－ＣＲＭ１９７コンジュゲートを、国際公開第２０１６／２０７９０５号パンフレットで説明されている手順により調製した。
【0108】
肺炎球菌血清型６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂに関する多糖類ＣＲＭ１９７コンジュゲートを、下記に示す手順により調製した。
ａ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型６ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型６Ａ １０００ｍｇ（１４．６ｍｇ／ｍＬ濃度 ６８．５ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ａ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型６ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型６Ａ １０００ｍｇ（１４．６ｍｇ／ｍＬ濃度 ６８．５ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0109】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．０ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図２Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0110】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２μｍフィルターで無菌ろ過した。
ｂ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型８とＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型８ １０００ｍｇ（５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ２００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．４（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ７．７ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ｂ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型８とＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型８ １０００ｍｇ（５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ２００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．４（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ７．７ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0111】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．５ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図３Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0112】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２μｍフィルターで無菌ろ過した。
ｃ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型１０ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１０Ａ １０００ｍｇ（７．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４２．８ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））８．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．８（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １３．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ９００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６０．０ｍＬ）を、１．０：０．９（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ｃ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型１０ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１０Ａ １０００ｍｇ（７．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４２．８ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））８．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．８（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １３．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ９００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６０．０ｍＬ）を、１．０：０．９（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0113】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ２．５ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図４Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0114】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２μｍフィルターで無菌ろ過した。
ｄ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型１１ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１１Ａ １０００ｍｇ（８．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １２５．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １０．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ｄ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型１１ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１１Ａ １０００ｍｇ（８．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １２５．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １０．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0115】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ２．５ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図５Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0116】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２μｍフィルターで無菌ろ過した。
ｅ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型１２ＦとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１２Ｆ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １０．６ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ｅ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型１２ＦとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１２Ｆ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １０．６ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0117】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．０ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図６Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0118】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２μｍフィルターで無菌ろ過した。
ｆ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型１５ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１５Ａ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１０．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：１．０（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １８．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ｆ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型１５ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１５Ａ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１０．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：１．０（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １８．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0119】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．０ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図７Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0120】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
ｇ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型２３ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２３Ａ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ８３．３ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１０．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：１．０（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １４．９ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ｇ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型２３ＡとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２３Ａ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ８３．３ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１０．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：１．０（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １４．９ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0121】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．７ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図８Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0122】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
ｈ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型２３ＢとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２３Ｂ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））２．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．２（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ３．５ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ｈ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型２３ＢとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２３Ｂ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））２．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．２（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ３．５ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0123】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ２．２ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図９Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0124】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
ｉ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型２４ＦとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２４Ｆ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １０．６ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ｉ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型２４ＦとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２４Ｆ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １０．６ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0125】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．０ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図１０Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0126】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
ｊ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型３５ＢとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型３５Ｂ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ５．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
ｊ）ＣＤＡＰ化学を使用する肺炎球菌多糖類血清型３５ＢとＣＲＭ１９７タンパク質との活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型３５Ｂ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））５．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ５．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＣＲＭ１９７ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．７ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0127】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．６ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図１１Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0128】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
【0129】
実施例２：肺炎球菌莢膜多糖類－ＰｓａＡコンジュゲートの調製
Ａ）ＰｓａＡの調製：
ＰｓａＡ遺伝子を、疎水性リーダーペプチド配列を使用することなく、肺炎連鎖球菌血清型４からＰＣＲ増幅させた。この遺伝子配列を検証し、高発現用にインハウスで構築したベクター（ｐＢＥ６６）を使用して大腸菌（Escherichia coli）にクローニングした。
Ａ）ＰｓａＡの調製：
ＰｓａＡ遺伝子を、疎水性リーダーペプチド配列を使用することなく、肺炎連鎖球菌血清型４からＰＣＲ増幅させた。この遺伝子配列を検証し、高発現用にインハウスで構築したベクター（ｐＢＥ６６）を使用して大腸菌（Escherichia coli）にクローニングした。
【0130】
ＰＳａＡ遺伝子をコードするグリセロールストック培養物を、１５０ｍＬの三角フラスコ中において、グリセロールストック １ｍＬを含むＬＢ培地 ２０ｍＬで回復させた。この培養物を、２００ｒｐｍ下で３７℃にて約６時間にわたり３．５ＯＤの最終ＯＤ６００ｎｍまでインキュベートした。この回復培養物を、５Ｌの三角フラスコ中の播種培養物１Ｌに移した。この培養物を、２００ｒｐｍ下で３７℃にて約１０時間にわたり３の最終ＯＤ６００ｎｍまで増殖させた。この播種培養物を、下記の培養成分が入った２０Ｌの発酵槽に無菌的に移した：ＨｙＰｅｐｔｏｎｅ ６ｇ／Ｌ、酵母抽出物 １２／Ｌ、オルトリン酸水素二カリウム １３．５ｇ／Ｌ、リン酸アンモニウム二塩基性 ４ｇ／Ｌ、クエン酸 １．７ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ １．２ｇ／Ｌ、グルコース ４ｇ／Ｌ、チアミン ＨＣＬ １０ｍｇ／Ｌ、及び１ｍＬ／Ｌの微量元素（例えば、１００ｍＬ組成物の場合の微量元素、ＦｅＣｌ３ ２．７ｇ、ＺｎＣｌ２ ０．２ｇ、ＣｏＣｌ２．６Ｈ２Ｏ ０．２ｇ、Ｎａ２ＭｏＯ４．２Ｈ２Ｏ ０．２ｇ、ＣｕＳＯ４ ５Ｈ２Ｏ ０．１ｇ、ホウ酸 ０．０５ｇ、ＣａＣｌ２ ２Ｈ２Ｏ ０．１ｇ、濃ＨＣＬ １０ｍＬ）。最初の発酵を、ＯＤ６００ｎｍ ０．２ＯＤで開始した。２０％のオルトリン酸及び１２．５％の水酸化アンモニウムを使用して、この発酵全体を通してｐＨを７±０．２で維持した。グルコースレベルが０．５ｇ／Ｌを下回ると、３～４ｇ／Ｌ／時間の安定した速度で供給バッチを開始し、酸素富化により、この発酵全体を通してＤＯ％を＞２０％に維持した。発酵槽中で細胞を増殖させ、遠心分離により細胞ペレットを回収した。細胞を、細胞破壊装置（Ｐａｎｄａ）を使用して溶解させた。溶解物を１００００ｇで遠心分離し、清澄な上清を精製に供した。
【0131】
ＰｓａＡの精製を、Ｌａｒｅｎｔｉｓ ｅｔ ａｌ，２０１１（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ７８（２０１１）３８）で説明されている手順と同様に実施した。ＤＥＡＥ後に混合モードクロマトグラフィー（Ｃｅｒａｍｉｃ Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ Ｔｙｐｅ－ＩＩ）を使用することにより精製をさらに最適化して、ＰｓａＡのより高い純度を達成した。
【0132】
陰イオン交換クロマトグラフィー：ＤＥＡＥセファロース（ＧＥ）樹脂 ３０ｍＬを、ＸＫ１６／２０カラムに充填した。この樹脂を、５カラム体積の無菌蒸留水で洗浄し、続いて１０カラム体積の２０ｍＭのＴｒｉｓ、１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ８．０（平衡緩衝液）で洗浄した。上清 ３０ｍＬを平衡緩衝液で１００ｍＬまで希釈し、カラムにローディングし、フロースルーを回収した。このカラムを、５体積の平衡緩衝液で洗浄した。（０～１００％Ｂ）の１２体積の直線勾配でＰｓａＡを溶出させた。（２０ｍＭのＴｒｉｓ、１ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ８．０を含む緩衝液Ａ；２０ｍＭのＴｒｉｓ、１ｍＭのＥＤＴＡ、２５０ｍＭのＮａＣｌ ｐＨ８．０を含む緩衝液Ｂ）。この後、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０でカラムを洗浄した。
【0133】
混合モードクロマトグラフィー：Ｃｅｒａｍｉｃ Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ Ｔｙｐｅ ＩＩ（ＣＨＴ－ＩＩ） ２５ｍｌを、カラムに充填した。この樹脂を、所定体積の無菌蒸留水で洗浄し、続いて１０体積の２０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ６．８で洗浄した。ＳＤＳ ＰＡＧＥでＰｓａＡの約３７ＫＤの良好な濃度の主要な可視バンドを明確に示す、ＤＥＡＥ樹脂からの溶出画分を、プールし、ＣＨＴ－ＩＩ樹脂にローディングした。フロースルーを回収し、このカラムを、５カラム体積の平衡緩衝液で洗浄した。（１５％Ｂ、２０％Ｂ、５０％Ｂ、及び１００％Ｂ）の５カラム体積の段階勾配でタンパク質を溶出させた。緩衝液Ａは、２０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ６．８を含み、緩衝液Ｂは、２５０ｍＭのリン酸緩衝液ｐＨ６．８を含む。
【0134】
ＰｓａＡの予想されるサイズで明確なバンドを示す溶出画分を全てプールし、１０ｋＤａ ＭＷＣＯカセットで濃縮し、２０ｍＭのリン酸緩衝液ｐＨ７．５で透析ろ過した。精製されたタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにローディングして、純度を評価した。
【0135】
Ｂ）肺炎球菌多糖類血清型３とＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
サイズが減少した血清型３の多糖類（５ｍｇ／ｍＬ濃度）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１．５ｍＬを、ガラス瓶中において１：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ３．５ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ２１０ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４．０ｍＬ）を、１：０．７（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
サイズが減少した血清型３の多糖類（５ｍｇ／ｍＬ濃度）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１．５ｍＬを、ガラス瓶中において１：０．５（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ３．５ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ２１０ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４．０ｍＬ）を、１：０．７（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0136】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ０．７ｍＬで約９．０１に調整し、この反応を、室温での５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図１Ａ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0137】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２μｍフィルターで無菌ろ過した。
【0138】
Ｃ）肺炎球菌多糖類血清型６ＡとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
サイズが減少した多糖類型６Ａ（１４．６ｍｇ／ｍＬ濃度）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４００μＬを、ガラス瓶中において１：１（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８００μＬで９．５に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ４０ｍｇ（１１．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ３．７８ｍＬ）を、１：１（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
サイズが減少した多糖類型６Ａ（１４．６ｍｇ／ｍＬ濃度）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４００μＬを、ガラス瓶中において１：１（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８００μＬで９．５に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ４０ｍｇ（１１．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ３．７８ｍＬ）を、１：１（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0139】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ０．７ｍＬで約９．０１に調整し、この反応を、室温での５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図２Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0140】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２μｍフィルターで無菌ろ過した。
【0141】
Ｄ）肺炎球菌多糖類血清型６ＢとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
サイズが減少した多糖類型６Ｂ（１４．９７ｍｇ／ｍＬ濃度）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４．０ｍＬを、ガラス瓶中において１：２（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８．０ｍＬで９．１に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ３４０ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ２２．６６ｍＬ）を、１：１．７（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
サイズが減少した多糖類型６Ｂ（１４．９７ｍｇ／ｍＬ濃度）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４．０ｍＬを、ガラス瓶中において１：２（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８．０ｍＬで９．１に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ３４０ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ２２．６６ｍＬ）を、１：１．７（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0142】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ０．７ｍＬで約９．０１に調整し、この反応を、室温での５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図１Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0143】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
【0144】
Ｅ）肺炎球菌多糖類血清型８とＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型８ １０００ｍｇ（５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ２００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．４（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
機械的にサイズが減少した多糖類血清型８ １０００ｍｇ（５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ２００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．４（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0145】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ０．１ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図３Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0146】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
【0147】
Ｆ）肺炎球菌多糖類血清型１０ＡとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１０Ａ １０００ｍｇ（７．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４２．８ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））６．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．６（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１０Ａ １０００ｍｇ（７．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４２．８ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））６．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．６（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ８．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0148】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．３ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図４Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0149】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
【0150】
Ｇ）肺炎球菌多糖類血清型１１ＡとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１１Ａ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））８．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．８（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １４．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１１Ａ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））８．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．８（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １４．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ８００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ５３．３ｍＬ）を、１．０：０．８（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0151】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．１ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図５Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0152】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
【0153】
Ｈ）肺炎球菌多糖類血清型１２ＦとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１２Ｆ １０００ｍｇ（７．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４２．８ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．４（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ９．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ７００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ４６．６ｍＬ）を、１．０：０．７（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１２Ｆ １０００ｍｇ（７．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４２．８ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））４．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．４（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ９．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ７００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ４６．６ｍＬ）を、１．０：０．７（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0154】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．７ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図６Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0155】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
【0156】
Ｉ）肺炎球菌多糖類血清型１５ＡとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１５Ａ １０００ｍｇ（１４．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ７１．４ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１０．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：１．０（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ２０．５ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．６ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
機械的にサイズが減少した多糖類血清型１５Ａ １０００ｍｇ（１４．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ７１．４ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１０．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：１．０（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ２０．５ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．６ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0157】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ０．９ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図７Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0158】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
Ｊ）肺炎球菌多糖類血清型２３ＡとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２３Ａ １０００ｍｇ（１２．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ８３．３ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１０．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：１．０（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ２０．３ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ６００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ４０．０ｍＬ）を、１．０：０．６（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
Ｊ）肺炎球菌多糖類血清型２３ＡとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２３Ａ １０００ｍｇ（１２．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ８３．３ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））１０．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：１．０（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ２０．３ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ６００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ４０．０ｍＬ）を、１．０：０．６（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0159】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １．１ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図８Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0160】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
Ｋ）肺炎球菌多糖類血清型２３ＢとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２３Ｂ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））２．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．２（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ３．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．６ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
Ｋ）肺炎球菌多糖類血清型２３ＢとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２３Ｂ １０００ｍｇ（１０．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １００．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））２．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．２（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ３．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．６ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＣＲＭ）の比で緩やかに添加した。
【0161】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ２．４ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図９Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0162】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
Ｌ）肺炎球菌多糖類血清型２４ＦとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２４Ｆ １０００ｍｇ（８．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １２５．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））３．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．３（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １０．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ６００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ４０．０ｍＬ）を、１．０：０．６（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
Ｌ）肺炎球菌多糖類血清型２４ＦとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型２４Ｆ １０００ｍｇ（８．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １２５．０ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））３．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．３（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン １０．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ ６００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ４０．０ｍＬ）を、１．０：０．６（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0163】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ３．５ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図１０Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0164】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
Ｍ）肺炎球菌多糖類血清型３５ＢとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型３５Ｂ １０００ｍｇ（７．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４２．８ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））６．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．６（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ７．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．６ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
Ｍ）肺炎球菌多糖類血清型３５ＢとＰｓａＡとの活性化及びコンジュゲーション
機械的にサイズが減少した多糖類血清型３５Ｂ １０００ｍｇ（７．０ｍｇ／ｍＬ濃度 １４２．８ｍＬ）、及びＣＤＡＰ（アセトニトリル中に１００ｍｇ／ｍＬ（ｗ／ｖ））６．０ｍＬを、ガラス瓶中において１．０：０．６（ＰＳ：ＣＤＡＰ）の比で混合し、１分にわたり撹拌した。この多糖類溶液のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ７．０ｍＬで９．０に調整し、室温（ＲＴ）で１分にわたり撹拌した。この活性化された多糖類に、ＰｓａＡ １０００ｍｇ（１５．０ｍｇ／ｍＬ濃度 ６６．６ｍＬ）を、１．０：１．０（ＰｎＰ：ＰｓａＡ）の比で緩やかに添加した。
【0165】
この反応物のｐＨを０．２Ｍのトリエチルアミン ２．２ｍＬで９．０に調整し、この反応を、室温での３～５時間にわたる撹拌下で継続させ、続いて、過剰な濃度のグリシン（１００ｍＭ）を添加することにより、この反応をクエンチした。反応のコンジュゲーション反応速度論（図１１Ｂ）を、この反応の各時間でＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用してモニタリングした。
【0166】
反応混合物を透析ろ過し、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＴＦＦ膜を使用して濃縮した。濃縮液を、サイズ排除クロマトグラフィーで精製した。画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、アントロン法により分析し、コンジュゲートを含む画分をプールして、０．２ｐｍフィルターで無菌ろ過した。
【0167】
実施例３：２４価の肺炎球菌莢膜多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物（製剤Ｉ）
ＣＲＭ１９７ 約３５μｇにコンジュゲートした、血清型１、４、５、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の各肺炎球菌多糖類 ２．２μｇ、並びに血清型６Ｂ ４．４μｇ；並びにＰｓａＡ 約２５μｇにコンジュゲートした、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の各肺炎球菌多糖類 ２．２μｇを含む２４価のコンジュゲートワクチン（０．５ｍＬ）を、５ｍＭのコハク酸及び約０．０７％ｗ／ｖのポリソルベート２０中、ブレンド容器に各コンジュゲートを連続して添加することにより調製した。このブレンド溶液に、０．５ｍＬの用量当たり０．５ｍｇ Ａｌ３＋に等しいリン酸アルミニウムゲルを添加した。製剤のｐＨを、１Ｎの塩酸を使用して、一定撹拌下、６．０に調整した。ブレンドの２時間後、製剤化されたブレンドを、１つのバイアル当たり０．５８ｍＬの充填量で３ｍＬの無菌非シリコン処理バイアルに無菌的に充填し、無菌の１３ｍｍゴム栓で閉じ、１３ｍｍの無菌のピンク色のフリップオフアルミニウムシールで密閉し、続いて光学的に検査し、充填されたバイアルにラベルを貼った。このロットから、いくつかのバイアルを無作為にピックアップし、外観、ｐＨ、重量オスモル濃度、全多糖類（poly）及びタンパク質含有量（μｇ／ＳＨＤ）、吸着％、アルミニウム含有量（ｍｇ／ＳＨＤ）（単回ヒト用量）を分析するために送った。
ＣＲＭ１９７ 約３５μｇにコンジュゲートした、血清型１、４、５、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の各肺炎球菌多糖類 ２．２μｇ、並びに血清型６Ｂ ４．４μｇ；並びにＰｓａＡ 約２５μｇにコンジュゲートした、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の各肺炎球菌多糖類 ２．２μｇを含む２４価のコンジュゲートワクチン（０．５ｍＬ）を、５ｍＭのコハク酸及び約０．０７％ｗ／ｖのポリソルベート２０中、ブレンド容器に各コンジュゲートを連続して添加することにより調製した。このブレンド溶液に、０．５ｍＬの用量当たり０．５ｍｇ Ａｌ３＋に等しいリン酸アルミニウムゲルを添加した。製剤のｐＨを、１Ｎの塩酸を使用して、一定撹拌下、６．０に調整した。ブレンドの２時間後、製剤化されたブレンドを、１つのバイアル当たり０．５８ｍＬの充填量で３ｍＬの無菌非シリコン処理バイアルに無菌的に充填し、無菌の１３ｍｍゴム栓で閉じ、１３ｍｍの無菌のピンク色のフリップオフアルミニウムシールで密閉し、続いて光学的に検査し、充填されたバイアルにラベルを貼った。このロットから、いくつかのバイアルを無作為にピックアップし、外観、ｐＨ、重量オスモル濃度、全多糖類（poly）及びタンパク質含有量（μｇ／ＳＨＤ）、吸着％、アルミニウム含有量（ｍｇ／ＳＨＤ）（単回ヒト用量）を分析するために送った。
【0168】
【表1】
【0169】
実施例４：２４価の肺炎球菌莢膜多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物（製剤ＩＩ）
ＣＲＭ１９７ ６０μｇにコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各肺炎球菌多糖類 ２．２μｇ、並びに６Ｂ ４．４μｇを含む２４価のコンジュゲートワクチン（０．５ｍＬ）を、５ｍＭのコハク酸及び約０．０７％ｗ／ｖのポリソルベート２０中、ブレンド容器に各コンジュゲートを連続して添加することにより調製した。このブレンド溶液に、０．５ｍＬの用量当たり０．５ｍｇ Ａｌ３＋に等しいリン酸アルミニウムゲルを添加した。製剤のｐＨを、１Ｎの塩酸を使用して、一定撹拌下、６．０に調整した。ブレンドの２時間後、製剤化されたブレンドを、１つのバイアル当たり０．５８ｍＬの充填量で３ｍＬの無菌非シリコン処理バイアルに無菌的に充填し、無菌の１３ｍｍゴム栓で閉じ、１３ｍｍの無菌のピンク色のフリップオフアルミニウムシールで密閉し、続いて光学的に検査し、充填されたバイアルにラベルを貼った。このロットから、いくつかのバイアルを無作為にピックアップし、外観、ｐＨ、重量オスモル濃度、全多糖類（poly）及びタンパク質含有量（μｇ／ＳＨＤ）、吸着％、アルミニウム含有量（ｍｇ／ＳＨＤ）（単回ヒト用量）を分析するために送った。
ＣＲＭ１９７ ６０μｇにコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各肺炎球菌多糖類 ２．２μｇ、並びに６Ｂ ４．４μｇを含む２４価のコンジュゲートワクチン（０．５ｍＬ）を、５ｍＭのコハク酸及び約０．０７％ｗ／ｖのポリソルベート２０中、ブレンド容器に各コンジュゲートを連続して添加することにより調製した。このブレンド溶液に、０．５ｍＬの用量当たり０．５ｍｇ Ａｌ３＋に等しいリン酸アルミニウムゲルを添加した。製剤のｐＨを、１Ｎの塩酸を使用して、一定撹拌下、６．０に調整した。ブレンドの２時間後、製剤化されたブレンドを、１つのバイアル当たり０．５８ｍＬの充填量で３ｍＬの無菌非シリコン処理バイアルに無菌的に充填し、無菌の１３ｍｍゴム栓で閉じ、１３ｍｍの無菌のピンク色のフリップオフアルミニウムシールで密閉し、続いて光学的に検査し、充填されたバイアルにラベルを貼った。このロットから、いくつかのバイアルを無作為にピックアップし、外観、ｐＨ、重量オスモル濃度、全多糖類（poly）及びタンパク質含有量（μｇ／ＳＨＤ）、吸着％、アルミニウム含有量（ｍｇ／ＳＨＤ）（単回ヒト用量）を分析するために送った。
【0170】
【表2】
【0171】
実施例５：異なるキャリヤータンパク質を有する２種のコンジュゲートワクチンで免疫化されたウサギにおける免疫応答
免疫原性を評価するために、ウサギを製剤Ｉ及びＩＩで免疫化した。この研究デザインは、それぞれ７匹のウサギの２つの群からなった。動物を、各製剤の３回の投与量で免疫化した。群の詳細と一緒に放血及び免疫化スケジュールを下記の表に示す。
免疫原性を評価するために、ウサギを製剤Ｉ及びＩＩで免疫化した。この研究デザインは、それぞれ７匹のウサギの２つの群からなった。動物を、各製剤の３回の投与量で免疫化した。群の詳細と一緒に放血及び免疫化スケジュールを下記の表に示す。
【0172】
【表3】
【0173】
この免疫化ウサギからの血清を、指定の間隔で採取した。血清型特異的ＩｇＧ力価レベルをＥＬＩＳＡで推定し、このＥＬＩＳＡは、ヒト血清中での血清抗体価を評価するために、ＷＨＯ推奨ＥＬＩＳＡから適合されている。抗体価を、カットオフ限界を超えるＯＤ４５０ｎｍ値が得られる血清の最大希釈として推定した。ワクチン接種前の動物のＩｇＧ力価値を使用して、血清ＩｇＧ力価の幾何平均倍数上昇（ＧＭＦＲ）を算出した。ＧＭＦＲ力価値を、グラフにプロットした（図１２Ａ及び１２Ｂ）。
【0174】
力価を、カットオフ値（免疫前血清で観察されるＯＤ４５０ｎｍの２倍；約０．１のＯＤ値）を超えるＥＬＩＳＡ ＯＤ４５０ｎｍ（４５０ｎｍの波長での光学密度）を生じた最大血清希釈として推定する。各血清型に関する幾何平均倍数上昇（ＧＭＦＲ）をプロットした。３回の投与量の免疫化後（用量３の後）に得られた血清を使用して、免疫原性を評価した。黒一色の棒は、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートした肺炎球菌多糖類を示し、色付きの棒は、ＰｓａＡにコンジュゲートした肺炎球菌多糖類を示す。
【0175】
ＰＣＶ２４（製剤Ｉ）又はＰＣＶ２４（製剤ＩＩ）のいずれかでワクチン接種されたウサギにおける血清ＩｇＧ力価が非常に小さいことが見出された。製剤Ｉにおける血清型２３Ａ及び２３Ｂを除いて、免疫された群は、製剤ＩＩと比較した場合に、わずかに低いＧＭＦＲ応答を有していた。最も重要なことには、１種のキャリヤータンパク質（ＣＲＭ１９７；製剤ＩＩ）又は２種のキャリヤータンパク質（ＣＲＭ１９７＋ＰｓａＡ；製剤Ｉ）を含むポリソルベートのいずれかで免疫された全てのウサギは、ＧＭＦＲの４倍を超える上昇を示した。抗体濃度の４倍の上昇は、肺炎球菌ワクチンに関するＷＨＯにより定められた承認基準である。そのため、この研究は、ワクチン製剤における別のキャリヤータンパク質の存在中で免疫応答における負の影響がないことを示す。
【0176】
本発明の態様には、下記も含まれる。
態様１
キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型由来の莢膜多糖類を含む２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含む、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２
キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ １９７ 、又はＣＲＭ １９７ 及びＰｓａＡの組合せ、又はＣＲＭ １９７ 及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＰｓａＡ及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＣＲＭ １９７ 、ＰｓａＡ、及び破傷風トキソイドの組合せから選択される、態様１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様３
キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ １９７ 、ＰｓａＡ、又はそれらの組合せである、態様１又は２に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様４
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ １９７ にコンジュゲートされている、態様１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様５
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされている、態様１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様６
ワクチン組成物が、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であり、少なくとも１３種の血清型が、ＣＲＭ １９７ にコンジュゲートされ、残りの血清型が、ＰｓａＡにコンジュゲートされている、態様１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様７
血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ １９７ にコンジュゲートされ、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされている、態様６に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様８
血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされ、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ １９７ 及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＣＲＭ １９７ 、ＰｓａＡ、及び破傷風トキソイドの組合せにコンジュゲートされている、態様１又は２に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様９
１種又は複数の肺炎球菌多糖類が、断片化され、各断片化された肺炎球菌多糖類が、天然肺炎球菌多糖類の平均分子量よりも小さい平均分子量を有し、５０～１０００ｋＤａの範囲である、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌ワクチン組成物。
態様１０
肺炎球菌多糖類が、約５０～１０００ｋＤａの分子量を有し、好ましくは１００～１０００、２００～８００、２５０～６００、又は３００～４００、７０～１５０、又は７５～１２５ｋＤａの平均サイズ（Ｍｗ）を有する、態様９に記載の肺炎球菌ワクチン組成物。
態様１１
多糖類－タンパク質コンジュゲートが、下記範囲の分子量：５００ｋＤａ～５０００ｋＤａ、１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ、１，５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ、２，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、２，５００ｋＤａ～２５，０００ｋＤａ、又は３，０００ｋＤａ～３０，０００ｋＤａを有する、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌ワクチン組成物。
態様１２
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 約２．２μｇ、並びに血清型６Ｂ由来の多糖類 約４．４μｇを含む２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の各莢膜多糖類が、ＣＲＮ １９７ キャリヤータンパク質 約２５～４０μｇにコンジュゲートされ、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類が、ＰｓａＡ 約２５～４０μｇにコンジュゲートされている、２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１３
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 約２．２～２．４μｇ、並びに６Ｂ 約４．４μｇを含む、２４価の肺炎球菌コジュゲートワクチン組成物であって、各莢膜多糖類が、ＰｓａＡ 約４０～８０μｇにコンジュゲートされている、２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１４
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 約２．２～２．４μｇ、並びに６Ｂ 約４．４μｇを含む、２４価の肺炎球菌コジュゲートワクチン組成物であって、各莢膜多糖類が、ＣＲＭ １９７ 約４０～８０μｇにコンジュゲートされている、２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１５
血清型１５Ａが、５～１８％の範囲のグリセロール含有量を有する、態様１２～１４のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１６
血清型３５Ｂが、２～１０％、好ましくは２～８％の範囲のグリセロール含有量を有する、態様１２～１４のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１７
下記：医薬的に許容できるキャリヤー、医薬的に許容できる希釈剤、緩衝剤、保存剤、安定剤、アジュバント、及び／又は凍結乾燥用賦形剤の内の１つ又は複数をさらに含む、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１８
アジュバントが、リン酸アルミニウムである、態様１７に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１９
予防又は処置が必要な対象を予防又は処置する方法であって、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌ワクチン組成物を投与するステップを含み、対象が、侵襲性肺炎球菌疾患（ＩＰＤ）等の肺炎連鎖球菌により媒介される疾患を有する、方法。
態様２０
対象が、ヒトであり、例えば、乳児（約１歳未満）、幼児（約１２カ月齢～約２４カ月齢）、小児（約２歳～約５歳）、年長児（約５歳～約１３歳）、青年（約１３歳～約１８歳）、成人（約１８歳～約６５歳）、又は高齢者（約６５歳超）である、態様１９に記載の対象を予防又は処置する方法。
態様２１
肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を対象に非経口（例えば、皮下、筋肉内、皮内及び／又は静脈内）又は粘膜（例えば、経口及び／又は経鼻）投与するステップを含む、態様２０に記載の対象を予防又は処置する方法。
態様２２
ワクチン組成物の各用量が、各肺炎球菌多糖類 ０．１μｇ～５０μｇ、各キャリヤータンパク質 １．５μｇ～約７０μｇを含む、より好ましくは各キャリヤータンパク質 １．５μｇ～約５μｇを含む各キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、各肺炎球菌多糖類 ０．１μｇ～１０μｇ、又は１μｇ～５μを含む、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２３
タンパク質対多糖類（タンパク質／ＰＳ）のパーセント比が、０．３～２．０タンパク質／ＰＳ、好ましくは０．５～１．５タンパク質／ＰＳである、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２４
態様４に記載の２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製する方法であって、
（ａ）２４種の活性化された肺炎球菌多糖類の内の１種又は複数を、ＣＲＭ １９７ キャリヤータンパク質に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ａ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を製剤化して、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製するステップ
を含む、方法。
態様２５
態様５に記載の２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製する方法であって、
（ａ）２４種の活性化された肺炎球菌多糖類の内の１種又は複数を、ＰｓａＡ及びＣＲＭ １９７ を含む群から選択される免疫原性キャリヤータンパク質に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ａ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を製剤化して、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製するステップ
を含む、方法。
態様２６
ワクチンが、単位用量バイアル、複数回用量バイアル又はプレフィルドシリンジに製剤化される、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２７
ワクチンが、約４ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの範囲の量で、チオメルサール、２－フェノキシエタノールから選択される１種又は複数の保存剤をさらに含む、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２８
ＣＲＭ １９７ にそれぞれ個別にコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の肺炎球菌莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、前記組成物が、４～７のｐＨを有し、約４．４μｇ／０．５ｍＬの６Ｂ；約２．２～４μｇ／０．５ｍＬの全ての他の血清型；約４０～８０μｇ／０．５ｍＬのＣＲＭ １９７ ；０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬのリン酸アルミニウム；約１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；約０．５～２．５％ｗ／ｖの塩化ナトリウム；０．００２～０．２％ｗ／ｖのポリソルベート８０；並びに２－フェノキシエタノール ４ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／０．５ｍＬを含む、免疫原性組成物。
態様２９
ＣＲＭ １９７ にコンジュゲートした、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の肺炎球菌莢膜多糖類、並びにＰｓａＡにコンジュゲートした、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、前記組成物が、４～７のｐＨを有し、約４．４μｇ／０．５ｍＬの６Ｂ；約２．２～４μｇ／０．５ｍＬの全ての他の血清型；２０～４０μｇ／０．５ｍＬのＣＲＭ １９７ ；２０～４０μｇ／０．５ｍＬのＰｓａＡ；０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬのリン酸アルミニウム；約１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；約０．５～２．５％ｗ／ｖの塩化ナトリウム；０．００２～０．２％ｗ／ｖのポリソルベート８０；並びに２－フェノキシエタノール ４ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／０．５ｍＬを含む、免疫原性組成物。
態様３０
ＰｓａＡにそれぞれ個別にコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の肺炎球菌莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、前記組成物が、４～７のｐＨを有し、約４．４μｇ／０．５ｍＬの６Ｂ；約２．２～４μｇ／０．５ｍＬの全ての他の血清型；約４０～８０μｇ／０．５ｍＬのＰｓａＡ；０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬのリン酸アルミニウム；約１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；約０．５～２．５％ｗ／ｖの塩化ナトリウム；０．００２～０．２％ｗ／ｖのポリソルベート８０；並びに２－フェノキシエタノール ４ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／０．５ｍＬを含む、免疫原性組成物。
本発明は、網羅的であることが意図されておらず、本技術を本明細書で開示されている詳細な形態に限定することも意図されていない。本明細書では、説明を目的として具体的な実施形態が開示されているが、関連分野の当業者が認識するように、本技術から逸脱することなく様々な等価の改変が可能である。一部の場合では、本技術の実施形態の説明を不必要に不明瞭にすることを避けるために、周知の構造及び機能は示されておらず、及び／又は詳細には説明されてない。本明細書では、方法のステップを特定の順序で示す場合があるが、代替実施形態では、このステップは別の適切な順序を有し得る。同様に、特定の実施形態の文脈で開示されている本技術のある特定の実施形態を、他の実施形態で組み合わせてもよいし、他の実施形態において除外してもよい。さらに、ある特定の実施形態と関連する利点が、この実施形態の文脈で開示され得るが、他の実施形態もそのような利点を示し得、全ての実施形態は、本技術の範囲に含まれるために、本明細書で開示されているそのような利点又は他の利点を示す必要はない。従って、この開示及び関連技術は、本明細書で明示的に示されていない及び／又は説明されていない他の実施形態を包含し得る。
態様１
キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、肺炎連鎖球菌の血清型由来の莢膜多糖類を含む２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型が、１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂを含む、肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２
キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ １９７ 、又はＣＲＭ １９７ 及びＰｓａＡの組合せ、又はＣＲＭ １９７ 及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＰｓａＡ及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＣＲＭ １９７ 、ＰｓａＡ、及び破傷風トキソイドの組合せから選択される、態様１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様３
キャリヤータンパク質が、ＣＲＭ １９７ 、ＰｓａＡ、又はそれらの組合せである、態様１又は２に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様４
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ １９７ にコンジュゲートされている、態様１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様５
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされている、態様１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様６
ワクチン組成物が、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートワクチン組成物であり、少なくとも１３種の血清型が、ＣＲＭ １９７ にコンジュゲートされ、残りの血清型が、ＰｓａＡにコンジュゲートされている、態様１に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様７
血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ １９７ にコンジュゲートされ、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされている、態様６に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様８
血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類が、ＰｓａＡにコンジュゲートされ、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の莢膜多糖類が、ＣＲＭ １９７ 及び破傷風トキソイドの組合せ、又はＣＲＭ １９７ 、ＰｓａＡ、及び破傷風トキソイドの組合せにコンジュゲートされている、態様１又は２に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様９
１種又は複数の肺炎球菌多糖類が、断片化され、各断片化された肺炎球菌多糖類が、天然肺炎球菌多糖類の平均分子量よりも小さい平均分子量を有し、５０～１０００ｋＤａの範囲である、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌ワクチン組成物。
態様１０
肺炎球菌多糖類が、約５０～１０００ｋＤａの分子量を有し、好ましくは１００～１０００、２００～８００、２５０～６００、又は３００～４００、７０～１５０、又は７５～１２５ｋＤａの平均サイズ（Ｍｗ）を有する、態様９に記載の肺炎球菌ワクチン組成物。
態様１１
多糖類－タンパク質コンジュゲートが、下記範囲の分子量：５００ｋＤａ～５０００ｋＤａ、１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ、１，５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ、２，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ、２，５００ｋＤａ～２５，０００ｋＤａ、又は３，０００ｋＤａ～３０，０００ｋＤａを有する、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌ワクチン組成物。
態様１２
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 約２．２μｇ、並びに血清型６Ｂ由来の多糖類 約４．４μｇを含む２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物であって、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の各莢膜多糖類が、ＣＲＮ １９７ キャリヤータンパク質 約２５～４０μｇにコンジュゲートされ、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類が、ＰｓａＡ 約２５～４０μｇにコンジュゲートされている、２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１３
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 約２．２～２．４μｇ、並びに６Ｂ 約４．４μｇを含む、２４価の肺炎球菌コジュゲートワクチン組成物であって、各莢膜多糖類が、ＰｓａＡ 約４０～８０μｇにコンジュゲートされている、２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１４
肺炎連鎖球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の各莢膜多糖類 約２．２～２．４μｇ、並びに６Ｂ 約４．４μｇを含む、２４価の肺炎球菌コジュゲートワクチン組成物であって、各莢膜多糖類が、ＣＲＭ １９７ 約４０～８０μｇにコンジュゲートされている、２４価の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１５
血清型１５Ａが、５～１８％の範囲のグリセロール含有量を有する、態様１２～１４のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１６
血清型３５Ｂが、２～１０％、好ましくは２～８％の範囲のグリセロール含有量を有する、態様１２～１４のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１７
下記：医薬的に許容できるキャリヤー、医薬的に許容できる希釈剤、緩衝剤、保存剤、安定剤、アジュバント、及び／又は凍結乾燥用賦形剤の内の１つ又は複数をさらに含む、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１８
アジュバントが、リン酸アルミニウムである、態様１７に記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様１９
予防又は処置が必要な対象を予防又は処置する方法であって、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌ワクチン組成物を投与するステップを含み、対象が、侵襲性肺炎球菌疾患（ＩＰＤ）等の肺炎連鎖球菌により媒介される疾患を有する、方法。
態様２０
対象が、ヒトであり、例えば、乳児（約１歳未満）、幼児（約１２カ月齢～約２４カ月齢）、小児（約２歳～約５歳）、年長児（約５歳～約１３歳）、青年（約１３歳～約１８歳）、成人（約１８歳～約６５歳）、又は高齢者（約６５歳超）である、態様１９に記載の対象を予防又は処置する方法。
態様２１
肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物を対象に非経口（例えば、皮下、筋肉内、皮内及び／又は静脈内）又は粘膜（例えば、経口及び／又は経鼻）投与するステップを含む、態様２０に記載の対象を予防又は処置する方法。
態様２２
ワクチン組成物の各用量が、各肺炎球菌多糖類 ０．１μｇ～５０μｇ、各キャリヤータンパク質 １．５μｇ～約７０μｇを含む、より好ましくは各キャリヤータンパク質 １．５μｇ～約５μｇを含む各キャリヤータンパク質にコンジュゲートした、各肺炎球菌多糖類 ０．１μｇ～１０μｇ、又は１μｇ～５μを含む、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２３
タンパク質対多糖類（タンパク質／ＰＳ）のパーセント比が、０．３～２．０タンパク質／ＰＳ、好ましくは０．５～１．５タンパク質／ＰＳである、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２４
態様４に記載の２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製する方法であって、
（ａ）２４種の活性化された肺炎球菌多糖類の内の１種又は複数を、ＣＲＭ １９７ キャリヤータンパク質に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ａ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を製剤化して、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製するステップ
を含む、方法。
態様２５
態様５に記載の２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製する方法であって、
（ａ）２４種の活性化された肺炎球菌多糖類の内の１種又は複数を、ＰｓａＡ及びＣＲＭ １９７ を含む群から選択される免疫原性キャリヤータンパク質に個別にコンジュゲートさせるステップ、
（ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを透析ろ過及び精製するステップ、
（ｃ）精製された画分を、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して分析し、２４種のコンジュゲートのそれぞれを含む画分をプールし、１価コンジュゲート画分をろ過滅菌するステップ、並びに
（ｄ）ステップ（ａ）において得られた２４種のコンジュゲート、アジュバント、１種又は複数の賦形剤、及び緩衝剤を製剤化して、２４価の肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート組成物を調製するステップ
を含む、方法。
態様２６
ワクチンが、単位用量バイアル、複数回用量バイアル又はプレフィルドシリンジに製剤化される、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２７
ワクチンが、約４ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの範囲の量で、チオメルサール、２－フェノキシエタノールから選択される１種又は複数の保存剤をさらに含む、前記態様のいずれかに記載の肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物。
態様２８
ＣＲＭ １９７ にそれぞれ個別にコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の肺炎球菌莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、前記組成物が、４～７のｐＨを有し、約４．４μｇ／０．５ｍＬの６Ｂ；約２．２～４μｇ／０．５ｍＬの全ての他の血清型；約４０～８０μｇ／０．５ｍＬのＣＲＭ １９７ ；０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬのリン酸アルミニウム；約１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；約０．５～２．５％ｗ／ｖの塩化ナトリウム；０．００２～０．２％ｗ／ｖのポリソルベート８０；並びに２－フェノキシエタノール ４ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／０．５ｍＬを含む、免疫原性組成物。
態様２９
ＣＲＭ １９７ にコンジュゲートした、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、及び３３Ｆ由来の肺炎球菌莢膜多糖類、並びにＰｓａＡにコンジュゲートした、血清型３、６Ａ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、及び３５Ｂ由来の莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、前記組成物が、４～７のｐＨを有し、約４．４μｇ／０．５ｍＬの６Ｂ；約２．２～４μｇ／０．５ｍＬの全ての他の血清型；２０～４０μｇ／０．５ｍＬのＣＲＭ １９７ ；２０～４０μｇ／０．５ｍＬのＰｓａＡ；０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬのリン酸アルミニウム；約１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；約０．５～２．５％ｗ／ｖの塩化ナトリウム；０．００２～０．２％ｗ／ｖのポリソルベート８０；並びに２－フェノキシエタノール ４ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／０．５ｍＬを含む、免疫原性組成物。
態様３０
ＰｓａＡにそれぞれ個別にコンジュゲートした、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、３３Ｆ、及び３５Ｂ由来の肺炎球菌莢膜多糖類を含む２４価の免疫原性組成物であって、前記組成物が、４～７のｐＨを有し、約４．４μｇ／０．５ｍＬの６Ｂ；約２．２～４μｇ／０．５ｍＬの全ての他の血清型；約４０～８０μｇ／０．５ｍＬのＰｓａＡ；０．２～２ｍｇ／０．５ｍＬのリン酸アルミニウム；約１～１０ｍＭのコハク酸緩衝液；約０．５～２．５％ｗ／ｖの塩化ナトリウム；０．００２～０．２％ｗ／ｖのポリソルベート８０；並びに２－フェノキシエタノール ４ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／０．５ｍＬを含む、免疫原性組成物。
本発明は、網羅的であることが意図されておらず、本技術を本明細書で開示されている詳細な形態に限定することも意図されていない。本明細書では、説明を目的として具体的な実施形態が開示されているが、関連分野の当業者が認識するように、本技術から逸脱することなく様々な等価の改変が可能である。一部の場合では、本技術の実施形態の説明を不必要に不明瞭にすることを避けるために、周知の構造及び機能は示されておらず、及び／又は詳細には説明されてない。本明細書では、方法のステップを特定の順序で示す場合があるが、代替実施形態では、このステップは別の適切な順序を有し得る。同様に、特定の実施形態の文脈で開示されている本技術のある特定の実施形態を、他の実施形態で組み合わせてもよいし、他の実施形態において除外してもよい。さらに、ある特定の実施形態と関連する利点が、この実施形態の文脈で開示され得るが、他の実施形態もそのような利点を示し得、全ての実施形態は、本技術の範囲に含まれるために、本明細書で開示されているそのような利点又は他の利点を示す必要はない。従って、この開示及び関連技術は、本明細書で明示的に示されていない及び／又は説明されていない他の実施形態を包含し得る。
【0177】
上述から、本発明の具体的な実施形態は説明を目的として本明細書で説明されているが、本発明の範囲を逸脱することなく様々な改変を行うことができることが理解されるだろう。
【0178】
本発明の多価肺炎球菌コンジュゲートワクチン組成物は、天然の多価肺炎球菌ワクチン及び既存の肺炎球菌コンジュゲートワクチンより高い改善された免疫応答を提供する。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
