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▶ シャンハイ ミラコーケン インコーポレイティドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-24
(45)【発行日】2024-10-02
(54)【発明の名称】抗体－薬物コンジュゲート及びその調製物
(51)【国際特許分類】
A61K 47/68 20170101AFI20240925BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240925BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20240925BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240925BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240925BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240925BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240925BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240925BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240925BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240925BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240925BHJP
A61K 38/07 20060101ALI20240925BHJP
【ＦＩ】
A61K47/68
A61K9/08
A61K47/18
A61K47/26
A61P35/00
A61P37/02
A61P35/02
A61P29/00 101
A61P19/02
A61P25/00
A61K39/395 L
A61K39/395 N
A61K38/07
【請求項の数】
7
(21)【出願番号】P 2022567138
(86)(22)【出願日】2020-05-03
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-06-02
(86)【国際出願番号】 CN2020088564
(87)【国際公開番号】W WO2021223048
(87)【国際公開日】2021-11-11
【審査請求日】2023-02-07
(73)【特許権者】
【識別番号】519058745
【氏名又は名称】シャンハイ ミラコーケン インコーポレイティド
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(74)【代理人】
【識別番号】100150810
【弁理士】
【氏名又は名称】武居 良太郎
(72)【発明者】
【氏名】チャオホン フー
(72)【発明者】
【氏名】リー フー
(72)【発明者】
【氏名】シアオ リーリー
(72)【発明者】
【氏名】リウ ウェンチャオ
【審査官】長谷川 茜
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１９／２１７４５５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／１８３４３８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／１９７４２８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】ARTIFICIAL CELLS, NANOMEDICINE, AND BIOTECHNOLOGY，2018年，Vol.46, No,S2，pp.S1-S8，https://doi.org/10.1080/21691401.2018.1449119
【文献】HAN AQ, et al.，“Next-Generation Antibody-Drug Conjugate Technologies”，Antibody‐Drug Conjugates Future Perspectives in Antibody‐Drug Conjugate Development，pp.473-503，2016年，https://doi.org/10.1002/9781119060727.ch18
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下を含む抗体－薬物コンジュゲート調製物であって、１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する抗体－薬物コンジュゲート；
５～１５ｍＭの濃度を有するヒスチジン緩衝液、及び５．８～６．２のｐＨ；
濃度が３％～９％であるスクロース；
濃度が０．０２％～０．０６％であるＴｗｅｅｎ－８０（登録商標）；
抗体－薬物コンジュゲートは、式ＩＩ：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｑ 式ＩＩ：
に示される構造を有し、式中、
Ａｂは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を表し、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、リツキシマブ又はそのバイオシミラーであり；
Ｄは、細胞毒性剤であり、細胞毒性剤はモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり；
Ｌは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を細胞毒性剤とリンキングするためのリンカーを表し、リンカーは、６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）であり；
ｑは３．３～４．３である、上記抗体－薬物コンジュゲート調製物。
【請求項2】
５ｍｇ／ｍＬの濃度を有する抗体－薬物コンジュゲート；
ｐＨ５．８の１０ｍＭヒスチジン緩衝液；
６％スクロース；および
０．０３５％のＴｗｅｅｎ－８０（登録商標）
を含む、請求項１に記載の抗体－薬物コンジュゲート調製物。
【請求項3】
請求項１又は２に規定される抗体－薬物コンジュゲート調製物の調製方法であって、工程１：抗ＣＤ２０モノクローナル抗体及び還元剤の還元反応を行い、還元された抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を得る工程であって、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体がリツキシマブ又はそのバイオシミラーである工程；
工程２：還元された抗ＣＤ２０モノクローナル抗体とｖｃ－ＭＭＡＥの間でカップリング反応を行う工程；
工程３：カップリング反応を停止する工程；
工程４：停止されたカップリング反応生成物の緩衝液置換を行い、抗体－薬物コンジュゲート調製物を得る工程であって、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、
１～１０ｍｇ／ｍＬの抗体－薬物コンジュゲート；
５～１５ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｐＨ５．０～６．２；
３～９％のスクロース；及び
０．０２％～０．０６％のＴｗｅｅｎ－８０（登録商標）
を含む工程
を含む、上記調製方法。
【請求項4】
前記方法が、１）抗ＣＤ２０モノクローナル抗体１０ｍｇを採取し、１５ｍＬの３０ＫＤ限外濾過装置を用いて還元緩衝液に置換し、計３回の置換を行い、約１ｍＬの最終体積を得、得られた溶液を新しいエッペンドルフ遠心管に移し、タンパク質濃度を検出し、総タンパク質量を算出し；
２）ＤＴＴを抗体に２．０～３．０倍モルで添加し、室温で２時間インキュベートし、連続的に混合した後、１５ｍＬの３０ＫＤ限外ろ過装置を用いてカップリング緩衝液中に置換し、３回の置換を行い、濃縮液を採取し、タンパク質濃度をＡ２８０ で検出し、質量を量り、総タンパク質量を求め、試料１０μＬを採取し、エルマン法により遊離スルフヒドリル基数を求め；
遊離スルフヒドリル基のモル濃度は、次式：
【数1】
ｂ：キュベットの光路長
遊離スルフヒドリル基のモル数は、遊離スルフヒドリル基のモル濃度及び全タンパク質溶液の体積に従って計算され；
３）ｖｃ－ＭＭＡＥを、遊離スルフヒドリル基のモル数の１．０～１．５倍の数で還元された抗体に添加し、十分に混合し、次に、室温で２時間、間欠撹拌しながら反応させ；反応系に、Ｎ－アセチルシステインを、ｖｃ－ＭＭＡＥモル数の２０倍で反応溶液に添加し、よく混合し、５分間放置し；
４）工程３で得られた溶液を１５ｍＬの３０ＫＤ限外濾過装置を用いてコンジュゲート原液に置換し、計３回の置換を行い、抗体－薬物コンジュゲート調製物を得て４℃で保存し、原液は１０ｍＭヒスチジン、６％スクロース、０．０３５％ Ｔｗｅｅｎ－８０（登録商標）、ｐＨ５．８で構成される
ことを含む、請求項３に記載の調製方法。
【請求項5】
ＣＤ２０発現がん又は免疫疾患を予防及び／又は治療するための組成物であって、該組成物は、請求項１又は２に規定される抗体－薬物コンジュゲート調製物を含み、任意に、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤をさらに含む上記組成物。
【請求項6】
ＣＤ２０発現がんまたは免疫疾患がリンパ腫、関節リウマチ、多発血管炎を伴う肉芽腫症、ウェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎または多発性硬化症である、請求項５に記載の組成物。
【請求項7】
対象がヒトである場合、それを必要とする対象に投与される用量は、０．１～５ｍｇ／ｋｇであり；あるいは、対象がＮＨＬ ＰＤＸモデルである場合、それを必要とする対象に投与される用量は、０．３～１０ｍｇ／ｋｇである、請求項５に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、生物医学の分野、特に抗体－薬物コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲートを含む調製物、抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物、及び抗体－薬物コンジュゲートの医薬用途に関する。
【背景技術】
【0002】
現在、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療には、従来の手術、化学療法、放射線療法、骨髄又は造血幹細胞移植、免疫療法及び標的療法が含まれる。従来の化学療法は、ＮＨＬ患者に対してある種の治癒効果を有するが、重篤な全身性副作用、不良な耐性、及び容易な再発を有し、患者への適用を制限する。標的薬、特に抗体医薬は、その顕著な治癒効果と治療介入中の最小の全身性副作用のために、大きな注目を集めている。
【0003】
近年、多くのＣＤ２０標的モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ、リツキサン（登録商標））が開発され、それらの抗腫瘍活性が臨床試験で検証されている。
【0004】
しかしながら、臨床応用が深まるにつれて、リツキシマブ治療の限界が次第に明らかになってきており、すなわち、治療プロセス中にリツキシマブに対する原発性及び獲得耐性を有する患者が存在し、その結果、リツキシマブの治療効果が低下又は無効となる。さらに、既存のＣＤ２０標的モノクローナル抗体は、腫瘍を治療する有効率に関して理想的ではなく、抗腫瘍効果を改善するために化学療法薬との併用が必要であり、これは疑いなく毒性のリスクを増加させる。この観点から、リツキシマブに代表される市販のＣＤ２０標的モノクローナル抗体は、再発又は難治性Ｂ細胞ＮＨＬ（ＤＬＢＣＬ及びＦＬなど）の治療のための臨床診療の必要性を満たすにはほど遠い。
【0005】
既存のＣＤ２０標的モノクローナル抗体の上述の問題点を考慮すると、ＣＤ２０標的ＡＤＣ薬剤ＡＤＣ－１の開発の主な目的は、より良好な有効性、より低い毒性及び副作用、及びより少ない薬剤耐性を有する治療方法を提供することである。
【発明の概要】
【0006】
本発明の内容
本発明者らは、多くの実験及び創造的研究を通して抗ＣＤ２０抗体－薬物コンジュゲートを調製し、良好な生物学的活性及び製剤安定性を有することを確認し、それによって本発明を完成させた。
本発明者らは、多くの実験及び創造的研究を通して抗ＣＤ２０抗体－薬物コンジュゲートを調製し、良好な生物学的活性及び製剤安定性を有することを確認し、それによって本発明を完成させた。
【0007】
この目的のため、本発明の第１の態様において、本発明は、式Ｉに示される構造：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｐ 式Ｉ
を有する抗体－薬物コンジュゲートを提供し、式中、
Ａｂは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を表し、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、リツキシマブ又はそのバイオシミラーのようなＣＤ２０を標的とする任意の抗体であり；
Ｄは、細胞毒性剤であり、細胞毒性剤はモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり；
Ｌは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を細胞毒性剤とリンキングするためのリンカーを表し、リンカーは、６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）であり；
ｐは３．６～４．０である。
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｐ 式Ｉ
を有する抗体－薬物コンジュゲートを提供し、式中、
Ａｂは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を表し、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、リツキシマブ又はそのバイオシミラーのようなＣＤ２０を標的とする任意の抗体であり；
Ｄは、細胞毒性剤であり、細胞毒性剤はモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり；
Ｌは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を細胞毒性剤とリンキングするためのリンカーを表し、リンカーは、６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）であり；
ｐは３．６～４．０である。
【0008】
いくつかの実施形態において、ｐは３．７～３．９である。
いくつかの実施形態において、ｐは３．８である。
いくつかの実施形態において、ｐは３．８である。
【0009】
いくつかの実施形態において、式ＩのＬ－Ｄはｖｃ－ＭＭＡＥであり、次の式に示される構造を有する。
【0010】
【化1】
【0011】
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートの構造は、以下の式に示される構造を有する。
【0012】
【化2】
【0013】
式中、
Ａｂは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を表し、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体はＣＤ２０を標的とする抗体、例えばリツキシマブ又はそのバイオシミラーである。
ｐは３．６～４．０である。
Ａｂは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を表し、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体はＣＤ２０を標的とする抗体、例えばリツキシマブ又はそのバイオシミラーである。
ｐは３．６～４．０である。
【0014】
いくつかの実施形態において、ｐは３．７～３．９である。
いくつかの実施形態において、ｐは３．８である。
いくつかの実施形態において、ｐは３．８である。
【0015】
本発明の第２の態様において、本発明は、以下を含む抗体－薬物コンジュゲート調製物を提供する：
１～６０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、又は６０ｍｇ／ｍＬ）の濃度を有する抗体－薬物コンジュゲート；
５～３５ｍＭ（例えば、５ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭ）の濃度、及び５．０～６．２（例えば、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１～６．２）のｐＨを有するヒスチジン緩衝液；
２％～１０％（例えば、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％）の濃度を有するスクロース；
０．０１％～０．１％（例えば、０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、０．０３％、０．０３１％、０．０３２％、０．０３３％、０．０３４％、０．０３５％、０．０３６％、０．０３７％、０．０３８％、０．０３９％、０．０４％、０．０４５％、０．０５％、０．０５５％、０．０６％、０．０６５％、０．０７％、０．０８％、０．０９％又は０．１％）の濃度を有するＴｗｅｅｎ－８０；
抗体－薬物コンジュゲートは、式ＩＩに示される構造：：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｑ 式ＩＩ
を有し、式中、
Ａｂは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を表し、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、リツキシマブ又はそのバイオシミラーのようなＣＤ２０を標的とする任意の抗体であり；
Ｄは、細胞毒性剤であり、細胞毒性剤はモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり；
Ｌは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を細胞毒性剤とリンキングするためのリンカーを表し、リンカーは、６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）であり；
ｑは、３．３～４．３（例えば、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２ｏｒ４．３）である。
１～６０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、又は６０ｍｇ／ｍＬ）の濃度を有する抗体－薬物コンジュゲート；
５～３５ｍＭ（例えば、５ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭ）の濃度、及び５．０～６．２（例えば、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１～６．２）のｐＨを有するヒスチジン緩衝液；
２％～１０％（例えば、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％）の濃度を有するスクロース；
０．０１％～０．１％（例えば、０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、０．０３％、０．０３１％、０．０３２％、０．０３３％、０．０３４％、０．０３５％、０．０３６％、０．０３７％、０．０３８％、０．０３９％、０．０４％、０．０４５％、０．０５％、０．０５５％、０．０６％、０．０６５％、０．０７％、０．０８％、０．０９％又は０．１％）の濃度を有するＴｗｅｅｎ－８０；
抗体－薬物コンジュゲートは、式ＩＩに示される構造：：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｑ 式ＩＩ
を有し、式中、
Ａｂは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を表し、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、リツキシマブ又はそのバイオシミラーのようなＣＤ２０を標的とする任意の抗体であり；
Ｄは、細胞毒性剤であり、細胞毒性剤はモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり；
Ｌは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を細胞毒性剤とリンキングするためのリンカーを表し、リンカーは、６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）であり；
ｑは、３．３～４．３（例えば、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２ｏｒ４．３）である。
【0016】
いくつかの実施形態において、ｑは３．６～４．０である。
いくつかの実施形態において、ｑは３．７～３．９である。
いくつかの実施形態において、ｑは３．８である。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、１～２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ｑは３．７～３．９である。
いくつかの実施形態において、ｑは３．８である。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、１～２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
【0017】
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、３～７ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、５ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５～１５ｍＭの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、８～１２ｍＭの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、１０ｍＭの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、５ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５～１５ｍＭの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、８～１２ｍＭの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、１０ｍＭの濃度を有する。
【0018】
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．８～６．２のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．６～６．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．４～６．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．４～６．２のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、３％～９％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．６～６．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．４～６．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．４～６．２のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、３％～９％の濃度を有する。
【0019】
いくつかの実施形態において、スクロースは、４％～８％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、５％～７％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、６％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０２％～０．０６％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０２％～０．０５％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、５％～７％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、６％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０２％～０．０６％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０２％～０．０５％の濃度を有する。
【0020】
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０３％～０．０４％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０３５％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０３５％の濃度を有する。
【0021】
いくつかの実施形態において、調製物は、以下：
５ｍｇ／ｍＬの濃度を有する抗体－薬物コンジュゲート；
１０ｍＭの濃度及び５．８のｐＨを有するヒスチジン緩衝液；
６％スクロース；及び
０．０３５％のＴｗｅｅｎ－８０
を含む。
５ｍｇ／ｍＬの濃度を有する抗体－薬物コンジュゲート；
１０ｍＭの濃度及び５．８のｐＨを有するヒスチジン緩衝液；
６％スクロース；及び
０．０３５％のＴｗｅｅｎ－８０
を含む。
【0022】
なお、「２～１０％スクロース」は質量体積濃度（ｗ／ｖ％）を表し、抗体－薬物コンジュゲート調製物の１０００ｍＬあたりのスクロース質量が２０～１００ｇであること意味し、「０．０１～０．１％のＴｗｅｅｎ－８０」は質量体積濃度（ｗ／ｖ％）を表し、その意味は、前述の「２～１０％スクロース」と同様に理解することができる。
【0023】
さらに、「ヒスチジン緩衝液」の濃度とは、ヒスチジン及び塩酸ヒスチジンの濃度を指し、そのｐＨは、ヒスチジン対ヒスチジン塩酸塩の比を調整することによって得られる。
【0024】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、２５±２℃／６０％±５％ＲＨの条件下で６週間安定である。
【0025】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、２５℃で６週間放置されると、無色で透明な外観を呈する。
【0026】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、それが６週間２５℃で放置されると、ｐＨにおいて変化しない。
【0027】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、それが６週間２５℃で放置されると、濃度変化しない。
【0028】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、６週間２５℃で放置すると、２％未満（又は１％未満）のＳＥＣモノマー％含量の減少を有する。
【0029】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、６週間２５℃で放置されると、２％以下（又は１％以下）のＳＥＣポリマー％含有量の増加を有する。
【0030】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、それが６週間２５℃で放置されると、ＤＡＲ値に有意な変化を有さない。
【0031】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、４０℃で４週間放置されると、無色で外観上透明である。
【0032】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、４０℃で４週間放置されたとき、ｐＨにおいて変化しない。
【0033】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、４０℃で４週間放置された場合、濃度変化しない。
【0034】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、４０℃で４週間放置すると、５％未満（又は４％未満）のＳＥＣモノマー％含量の減少を有する。
【0035】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、４０℃で４週間放置されると、５％未満（又は４％未満）のＳＥＣポリマー％含有量の増加を有する。
【0036】
いくつかの実施形態において、ｐＨが５．０～６．２（例えば、５．６～６．０）である場合、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、４０℃で４週間放置された場合、ＤＡＲ値に有意な変化を有さない。
【0037】
なお、「有意な変化なし」又は「変化なし」とは、統計学的に有意な変化がないことを指す。
【0038】
さらに、上述の「抗体－薬物コンジュゲート」は、同じ又は異なるＤＡＲ値を有するＡＤＣ分子を含有する組成物を指すことに留意されたい。
【0039】
具体的には、本発明は、複数の抗ＣＤ２０ ＡＤＣ分子を含む組成物を提供する。ある例では、本明細書に記載される組成物中の各ＡＤＣは、同一数の１つ以上の薬物分子を含む。他の例では、本明細書に記載される組成物中の各ＡＤＣは、異なる数の１つ以上の薬物分子を含む。
【0040】
本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲートにおいて、各抗ＣＤ２０抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８個またはそれ以上（好ましくは２、４、６または８個、より好ましくは２または４個）の薬物分子とコンジュゲートすることができる。
【0041】
上記の薬物－抗体比（ＤＡＲ）は、抗ＣＤ２０抗体に結合した抗がん剤の分子数を指す。本明細書に記載されるＡＤＣに含まれる抗がん剤の分子数は、通常、整数であり、本明細書中に記載されるＡＤＣに含まれる抗がん剤の分子数（例えば、式Ｉ中のｐ、又は式ＩＩ中のｑ）が画分である場合、画分は、複数のＡＤＣ分子を含む組成物中の各抗ＣＤ２０抗体に結合した抗がん剤の平均分子数を指す。
【0042】
本発明の第３の態様において、本発明は、前記抗体－薬物コンジュゲート調製物を調製する方法を提供し、以下を含む：
還元型抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を得るために、還元剤を用いて抗ＣＤ２０モノクローナル抗体の還元反応を実施し、ここで、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、ＣＤ２０を標的とする任意の抗体（例えば、リツキシマブ又はそのバイオシミラー）であること；
還元された抗ＣＤ２０モノクローナル抗体とｖｃ－ＭＭＡＥとの間でカップリング反応を行うこと；
カップリング反応を停止すること；
停止されたカップリング反応生成物が緩衝液置換を受けて抗体－薬物コンジュゲート調製物を得ることを可能にし、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、以下を含む：
１～６０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、又は６０ｍｇ／ｍＬ）の濃度を有する抗体－薬物コンジュゲート；
５～３５ｍＭ（例えば、５ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭ）の濃度、及び５．０～６．２（例えば、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１～６．２）のｐＨを有するヒスチジン緩衝液；
２％～１０％（例えば、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％）の濃度を有するスクロース；
０．０１％～０．１％（例えば、０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、０．０３％、０．０３１％、０．０３２％、０．０３３％、０．０３４％、０．０３５％、０．０３６％、０．０３７％、０．０３８％、０．０３９％、０．０４％、０．０４５％、０．０５％、０．０５５％、０．０６％、０．０６５％、０．０７％、０．０８％、０．０９％又は０．１％）の濃度を有するＴｗｅｅｎ－８０。
還元型抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を得るために、還元剤を用いて抗ＣＤ２０モノクローナル抗体の還元反応を実施し、ここで、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、ＣＤ２０を標的とする任意の抗体（例えば、リツキシマブ又はそのバイオシミラー）であること；
還元された抗ＣＤ２０モノクローナル抗体とｖｃ－ＭＭＡＥとの間でカップリング反応を行うこと；
カップリング反応を停止すること；
停止されたカップリング反応生成物が緩衝液置換を受けて抗体－薬物コンジュゲート調製物を得ることを可能にし、抗体－薬物コンジュゲート調製物は、以下を含む：
１～６０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１３ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１７ｍｇ／ｍＬ、１９ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、又は６０ｍｇ／ｍＬ）の濃度を有する抗体－薬物コンジュゲート；
５～３５ｍＭ（例えば、５ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭ）の濃度、及び５．０～６．２（例えば、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１～６．２）のｐＨを有するヒスチジン緩衝液；
２％～１０％（例えば、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％）の濃度を有するスクロース；
０．０１％～０．１％（例えば、０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、０．０３％、０．０３１％、０．０３２％、０．０３３％、０．０３４％、０．０３５％、０．０３６％、０．０３７％、０．０３８％、０．０３９％、０．０４％、０．０４５％、０．０５％、０．０５５％、０．０６％、０．０６５％、０．０７％、０．０８％、０．０９％又は０．１％）の濃度を有するＴｗｅｅｎ－８０。
【0043】
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、１～２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、３～７ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、５ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５～１５ｍＭの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、３～７ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、５ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５～１５ｍＭの濃度を有する。
【0044】
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、８～１２ｍＭの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、１０ｍＭの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．８～６．２のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．６～６．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．４～６．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、１０ｍＭの濃度を有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．８～６．２のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．６～６．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．４～６．０のｐＨを有する。
【0045】
いくつかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、５．４～６．２のｐＨを有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、３％～９％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、４％～８％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、５％～７％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、６％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、３％～９％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、４％～８％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、５％～７％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、スクロースは、６％の濃度を有する。
【0046】
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０２％～０．０６％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０２％～０．０５％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０３％～０．０４％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０３５％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、還元剤はＤＴＴである。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０２％～０．０５％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０３％～０．０４％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、Ｔｗｅｅｎ－８０は、０．０３５％の濃度を有する。
いくつかの実施形態において、還元剤はＤＴＴである。
【0047】
いくつかの実施形態において、調製方法は、
１）１０ｍｇの抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を採取し、１５ｍＬの３０ＫＤ限外濾過装置を用いて還元緩衝液（２５ｍＭホウ酸ナトリウム、ｐＨ８．０、２５ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に置換し、計３回の置換を行い、約１ｍＬの最終体積を得て、得られた溶液を新しいエッペンドルフ遠心分離管に移し（秤量）、タンパク質濃度を検出し、総タンパク質量を算出すること；
２）モル数２．０～３．０倍のＤＴＴを抗体に加え、室温で２時間インキュベートし、連続混合した後、１５ｍＬの３０ＫＤ限外ろ過装置を用いてカップリング緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に置換し、３回の置換を行い、濃縮液を採り、タンパク質濃度をＡ２８０（波長２８０ｎｍにおける吸光度）で検出し、質量を量り、総タンパク質量を求め、１０μＬの試料を採取し、エルマン法により遊離スルフヒドリル基数を求め、
遊離スルフヒドリル基のモル濃度は、次式で計算され（ここで、Ａ４１２は波長４１２ｎｍにおける吸光度を表す）：
１）１０ｍｇの抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を採取し、１５ｍＬの３０ＫＤ限外濾過装置を用いて還元緩衝液（２５ｍＭホウ酸ナトリウム、ｐＨ８．０、２５ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に置換し、計３回の置換を行い、約１ｍＬの最終体積を得て、得られた溶液を新しいエッペンドルフ遠心分離管に移し（秤量）、タンパク質濃度を検出し、総タンパク質量を算出すること；
２）モル数２．０～３．０倍のＤＴＴを抗体に加え、室温で２時間インキュベートし、連続混合した後、１５ｍＬの３０ＫＤ限外ろ過装置を用いてカップリング緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に置換し、３回の置換を行い、濃縮液を採り、タンパク質濃度をＡ２８０（波長２８０ｎｍにおける吸光度）で検出し、質量を量り、総タンパク質量を求め、１０μＬの試料を採取し、エルマン法により遊離スルフヒドリル基数を求め、
遊離スルフヒドリル基のモル濃度は、次式で計算され（ここで、Ａ４１２は波長４１２ｎｍにおける吸光度を表す）：
【0048】
【数1】
【0049】
ｂ：キュベットの光路長（通常１ｃｍ）
遊離スルフヒドリル基のモル数は、遊離スルフヒドリル基のモル濃度及び全タンパク質溶液の体積に従って計算すること；
３）ｖｃ－ＭＭＡＥ（ＤＭＳＯに溶解）を、遊離スルフヒドリル基のモル数の１．０～１．５倍の数で還元された抗体に添加し、十分に混合し、次に、室温で２時間、間欠撹拌しながら反応させ；反応系に、Ｎ－アセチルシステインを、ｖｃ－ＭＭＡＥモル数の２０倍で反応溶液に添加し、よく混合し、５分間放置すること；
４）工程３で得られた溶液を、１５ｍＬの３０ＫＤ限外濾過装置を用いて、コンジュゲート原液（１０ｍＭヒスチジン、６％スクロース、０．０３５％ＰＳ８０、ｐＨ５．８）に置換し、計３回の置換を行い、抗体－薬物コンジュゲート調製物を得て、４℃で保存することを含む。
遊離スルフヒドリル基のモル数は、遊離スルフヒドリル基のモル濃度及び全タンパク質溶液の体積に従って計算すること；
３）ｖｃ－ＭＭＡＥ（ＤＭＳＯに溶解）を、遊離スルフヒドリル基のモル数の１．０～１．５倍の数で還元された抗体に添加し、十分に混合し、次に、室温で２時間、間欠撹拌しながら反応させ；反応系に、Ｎ－アセチルシステインを、ｖｃ－ＭＭＡＥモル数の２０倍で反応溶液に添加し、よく混合し、５分間放置すること；
４）工程３で得られた溶液を、１５ｍＬの３０ＫＤ限外濾過装置を用いて、コンジュゲート原液（１０ｍＭヒスチジン、６％スクロース、０．０３５％ＰＳ８０、ｐＨ５．８）に置換し、計３回の置換を行い、抗体－薬物コンジュゲート調製物を得て、４℃で保存することを含む。
【0050】
本発明の第４の態様において、本発明は、前記抗体－薬物コンジュゲート、又は前記抗体－薬物コンジュゲート調製物、又は前記方法によって調製される抗体－薬物コンジュゲート調製物を含む組成物を提供する。
【0051】
いくつかの実施形態において、組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤をさらに含む。
【0052】
いくつかの実施形態において、組成物は、腫瘍の治療のための既知の化学療法薬をさらに含み、化学療法剤は、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シクロホスファミドおよびタキサン［パクリタキセル（タキソール）およびドセタキセル（タキソテール）］、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）、タモキシフェン、アロマターゼ阻害剤（Ａｒｉｍｉｄｅｘ、Ｆｅｍａｒａ、Ａｒｏｍａｓｉｎ）、５－ＦＵ／ロイコボリン、イリノテカン（カンプトサール）、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、エストラムスチン、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）、プレドニゾン、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）、ドキソルビシン、プレドニゾンなど、またはそれらの組み合わせであり得る。
【0053】
いくつかの実施形態において、組成物は、（１）コルチゾン及びプレドニゾンのようなグルココルチコイド；（２）シクロスポリン及びタクロリムスなどの微生物代謝産物；（３）アザチオプリン及び６－メルカプトプリンなどのような抗代謝産物；（４）抗リンパ球グロブリン及びＯＫＴ３などのようなポリクローナル及びモノクローナル抗リンパ球抗体；（５）シクロホスファミドなどのアルキル化剤から選択される免疫抑制剤をさらに含む。具体的には、免疫抑制剤は、例えば、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、アザチオプリン、Ｐｒｏｇｒａｆ、Ｚｅｎａｐａｘ、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ、シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ミゾリビン、シクロホスファミド、Ｆｉｎｇｏｌｉｍｏｄなどである。
【0054】
本発明の第５の態様において、本発明は、ＣＤ２０発現がん又は免疫疾患を予防及び／又は治療するための薬剤の製造における、前記抗体－薬物コンジュゲート、又は前記抗体－薬物コンジュゲート調製物、前記方法によって調製された前記抗体－薬物コンジュゲート調製物、又は前記組成物の使用を提供する。
【0055】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０発現がんは、リンパ腫又は白血病である。
【0056】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、濾胞性非ホジキンリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0057】
いくつかの実施形態において、白血病は、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、又は急性リンパ球性白血病である。
【0058】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０発現免疫疾患は、関節リウマチ、多発血管炎を伴う肉芽腫症、ヴェーゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎、又は多発性硬化症である。
【0059】
いくつかの実施形態において、関節リウマチは、少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニストによる治療が失敗した重度の活動性関節リウマチである。
【0060】
好ましくは、いくつかの実施形態において、ＣＤ２０発現がんは、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞リンパ腫である。
【0061】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞リンパ腫は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）耐性ＣＤ２０陽性Ｂ細胞リンパ腫である。
【0062】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。
【0063】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）耐性非ホジキンリンパ腫である。
【0064】
いくつかの実施形態において、非ホジキンリンパ腫はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0065】
いくつかの実施形態において、非ホジキンリンパ腫は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）耐性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0066】
本発明の第６の態様において、本発明は、ＣＤ２０発現がん又は免疫疾患を予防及び／又は治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、予防的及び／又は治療的に有効な量の前記抗体－薬物コンジュゲート、又は前記抗体－薬物コンジュゲート調製物、又は前記方法によって調製された前記抗体－薬物コンジュゲート調製物、又は前記組成物を投与することを含む。
【0067】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０発現がんは、リンパ腫又は白血病である。
【0068】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、濾胞性非ホジキンリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0069】
いくつかの実施形態において、白血病は、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、又は急性リンパ球性白血病である。
【0070】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０発現免疫疾患は、関節リウマチ、多発血管炎を伴う肉芽腫症、ヴェーゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎、又は多発性硬化症である。
【0071】
いくつかの実施形態において、関節リウマチは、少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニストによる治療が失敗した重度の活動性関節リウマチである。
【0072】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０発現がんは、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞リンパ腫であることが好ましい。
【0073】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞リンパ腫は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）耐性ＣＤ２０陽性Ｂ細胞リンパ腫である。
【0074】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。
【0075】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）耐性非ホジキンリンパ腫である。
【0076】
いくつかの実施形態において、非ホジキンリンパ腫はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0077】
いくつかの実施形態において、非ホジキンリンパ腫は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）耐性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0078】
いくつかの実施形態において、対象がＮＨＬ ＰＤＸモデルである場合、それを必要とする対象に投与される用量は、０．３～１０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ）である。
【0079】
いくつかの実施形態において、対象がＮＨＬ ＰＤＸモデルである場合、それを必要とする対象に投与される用量は、０．３～３ｍｇ／ｋｇ、１～３ｍｇ／ｋｇ、１～１０ｍｇ／ｋｇ、又は３～１０ｍｇ／ｋｇである。
【0080】
いくつかの実施形態において、対象がヒトである場合、それを必要とする対象に投与される用量は、０．１～５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇ）である。
【0081】
いくつかの実施形態では、予防的および／または治療的に有効な量の前述の抗体－薬物コンジュゲート、または前述の抗体－薬物コンジュゲート調製物、または前述の方法によって調製された抗体－薬物コンジュゲート調製物、または前述の組成物が、それを必要とする対象に１、２、３、４、５、または６週間ごとに１回投与される。
【0082】
いくつかの実施形態において、予防的及び／又は治療的に有効な量の前記抗体－薬物コンジュゲート、又は前記方法によって調製された前記抗体－薬物コンジュゲート調製物、又は前記方法によって調製された抗体－薬物コンジュゲート調製物、又は前記組成物が、それを必要とする対象に１８～２４日に１回投与される。
【0083】
いくつかの実施形態において、本方法は、さらに、腫瘍の治療のための追加の化学療法剤又は免疫抑制剤を、それを必要とする対象に投与することを含む。
【0084】
いくつかの実施形態において、組成物は、化学療法剤は、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シクロホスファミドおよびタキサン［パクリタキセル（タキソール）およびドセタキセル（タキソテール）］、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）、タモキシフェン、アロマターゼ阻害剤（Ａｒｉｍｉｄｅｘ、Ｆｅｍａｒａ、Ａｒｏｍａｓｉｎ）、５－ＦＵ／ロイコボリン、イリノテカン（カンプトサール）、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、エストラムスチン、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）、プレドニゾン、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）、ドキソルビシン、プレドニゾンなど、またはそれらの組み合わせである。
【0085】
いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、（１）コルチゾン及びプレドニゾンのようなグルココルチコイド；（２）シクロスポリン及びタクロリムスなどの微生物代謝産物；（３）アザチオプリン及び６－メルカプトプリンなどのような抗代謝産物；（４）抗リンパ球グロブリン及びＯＫＴ３などのようなポリクローナル及びモノクローナル抗リンパ球抗体；（５）シクロホスファミドなどのアルキル化剤から選択される。具体的には、免疫抑制剤は、例えば、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、アザチオプリン、Ｐｒｏｇｒａｆ、Ｚｅｎａｐａｘ、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ、シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ミゾリビン、シクロホスファミド、Ｆｉｎｇｏｌｉｍｏｄなどである。
【0086】
本発明の第７の態様において、本発明は、ＣＤ２０発現がん又は免疫疾患の予防及び／又は治療に使用するための、前記抗体－薬物コンジュゲート、又は前記抗体－薬物コンジュゲート調製物、又は前記方法によって調製された前記抗体－薬物コンジュゲート調製物、又は前記組成物を提供する。
【0087】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０発現がんは、リンパ腫又は白血病である。
【0088】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、濾胞性非ホジキンリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0089】
いくつかの実施形態において、白血病は、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、又は急性リンパ球性白血病である。
【0090】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０発現免疫疾患は、関節リウマチ、多発血管炎を伴う肉芽腫症、ヴェーゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎、又は多発性硬化症である。
【0091】
いくつかの実施形態において、関節リウマチは、少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニストによる治療が失敗した重度の活動性関節リウマチである。
【0092】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０発現がんは、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞リンパ腫であることが好ましい。
【0093】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞リンパ腫は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）耐性ＣＤ２０陽性Ｂ細胞リンパ腫である。
【0094】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。
【0095】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）耐性非ホジキンリンパ腫である。
【0096】
いくつかの実施形態において、非ホジキンリンパ腫はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0097】
いくつかの実施形態において、非ホジキンリンパ腫は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）耐性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【0098】
いくつかの実施形態において、対象がＮＨＬ ＰＤＸモデルである場合、投与される用量は、０．３～１０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ）である。
【0099】
いくつかの実施形態において、対象がＮＨＬ ＰＤＸモデルである場合、投与される用量は、０．３～３ｍｇ／ｋｇ、１～３ｍｇ／ｋｇ、１～１０ｍｇ／ｋｇ、又は３～１０ｍｇ／ｋｇである。
【0100】
いくつかの実施形態において、対象がヒトである場合、投与される用量は、０．１～５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、又は５ｍｇ／ｋｇ）である。
【0101】
有益な効果
１．ＡＤＣ－１は、リツキシマブバイオシミラーＭＡＢ８０１をｖｃ－ＭＭＡＥとカップリングさせることによって形成されるＡＤＣであり、腫瘍細胞の表面上のＣＤ２０受容体に結合し、エンドサイトーシス及びＭＭＡＥの放出を行い、それによって腫瘍増殖を制御し、腫瘍退縮を引き起こすことによって、ＣＤ２０陽性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞を死滅させる。
２．ＡＤＣ－１は、種々のＣＤ２０を発現するＮＨＬ細胞株及び種々のＣＤ２０を発現するヒトＮＨＬ ＰＤＸ腫瘍モデルにおいて、腫瘍細胞増殖を阻害する有意な薬力学的効果を示し、特に、それは、リツキサン（登録商標）耐性ＮＨＬ ＰＤＸモデルにおいて、腫瘍細胞増殖に対しても有意な阻害効果を示す。
３．ＡＤＣ－１の調製工程では、中間精製工程を経ずに１つの容器で反応工程全体を順次完了させるだけで、他の調製工程よりも優れている。
４．ＡＤＣ－１の調製工程では、工程全体に１段階の限外ろ過精製工程しか必要とせず、他の調製工程よりも優れたクロマトグラフィー工程を必要としない。
５．ＡＤＣ－１は良好な製剤安定性を有する。
１．ＡＤＣ－１は、リツキシマブバイオシミラーＭＡＢ８０１をｖｃ－ＭＭＡＥとカップリングさせることによって形成されるＡＤＣであり、腫瘍細胞の表面上のＣＤ２０受容体に結合し、エンドサイトーシス及びＭＭＡＥの放出を行い、それによって腫瘍増殖を制御し、腫瘍退縮を引き起こすことによって、ＣＤ２０陽性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞を死滅させる。
２．ＡＤＣ－１は、種々のＣＤ２０を発現するＮＨＬ細胞株及び種々のＣＤ２０を発現するヒトＮＨＬ ＰＤＸ腫瘍モデルにおいて、腫瘍細胞増殖を阻害する有意な薬力学的効果を示し、特に、それは、リツキサン（登録商標）耐性ＮＨＬ ＰＤＸモデルにおいて、腫瘍細胞増殖に対しても有意な阻害効果を示す。
３．ＡＤＣ－１の調製工程では、中間精製工程を経ずに１つの容器で反応工程全体を順次完了させるだけで、他の調製工程よりも優れている。
４．ＡＤＣ－１の調製工程では、工程全体に１段階の限外ろ過精製工程しか必要とせず、他の調製工程よりも優れたクロマトグラフィー工程を必要としない。
５．ＡＤＣ－１は良好な製剤安定性を有する。
【図面の簡単な説明】
【0102】
【発明を実施するための形態】
【0103】
本発明を実施するための具体的なモデル
本発明の実施形態は、実施例を参照して以下に詳細に説明されるが、当業者は、以下の実施例は本発明を例示するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではないことを理解するであろう。実施例に特定の条件が記載されていない場合は、従来の条件、又はメーカーが提示する条件に従って実施する。メーカーの指示なしに使用される試薬又は器具は、市場から入手可能な従来品である。
本発明の実施形態は、実施例を参照して以下に詳細に説明されるが、当業者は、以下の実施例は本発明を例示するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではないことを理解するであろう。実施例に特定の条件が記載されていない場合は、従来の条件、又はメーカーが提示する条件に従って実施する。メーカーの指示なしに使用される試薬又は器具は、市場から入手可能な従来品である。
【0104】
本発明では、特に断らない限り、本明細書で使用される科学用語及び技術用語は、当業者に一般的に理解される意味を有する。さらに、本明細書で使用されるタンパク質及び核酸の化学、分子生物学、細胞及び組織培養、微生物学、免疫学関連用語及び実験手順は、対応する分野で広く使用される用語及びルーチン手順である。一方、本発明をよりよく理解するために、関連用語の定義及び説明を以下に提供する。
【0105】
本発明では、特に断らない限り、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲又は数値範囲は、記載された範囲内の任意の整数値、及び、適宜、範囲内の任意の分数値を含むと理解されるべきである。
【0106】
本発明において、用語「抗体」は、一般に２つの同一のポリペプチド鎖対から構成される免疫グロブリン分子を指し、各対は１つの「軽」（Ｌ）鎖及び１つの「重」（Ｈ）鎖を有する。抗体の軽鎖は、κとλの２つのカテゴリーに分けられる。重鎖は、μ、δ、γ、α、εの５種類に分けられ、抗体は重鎖の違いに応じてＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥの５種類に分けられる。軽鎖及び重鎖内では、可変領域及び定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖はまた、約３個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）からなる。重鎖定常部は３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）及び補体系の成分Ｃ１ｑを含む宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる高い可変性を有する領域に細分することもでき、それらはフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域と散在している。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へのＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。各重鎖／軽鎖対の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）は、それぞれ抗体結合部位を形成する。アミノ酸の領域又はドメインへの割り当ては、免疫学的関心のあるタンパク質のＫａｂａｔ配列の定義に従う（National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)、又はChothia & Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al. (1989) Nature 342:878-883）。
【0107】
本発明での使用に適した抗体は、ＣＤ２０を標的とする抗体であり、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、リツキシマブ又はそのバイオシミラーのような、ＣＤ２０を標的とする任意の抗体である。これらのうち、バイオシミラーとは、リツキシマブと同じ配列、同じ物理化学的特性及び生物学的活性、ならびにリツキシマブと同じ臨床的安全性及び有効性を有する抗体産物をいう。
【0108】
本発明において、ＭＭＡＥの構造は、以下のとおりである。
【0109】
【化3】
【0110】
本発明において、薬物：抗体比（ＤＡＲ）又は薬物負荷（負荷）は、ｐ又はｑ、すなわち、整数又は画分のいずれかであり得る、式Ｉ：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｐ又は式ＩＩ：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｑの分子における抗体当たりの薬物モジュール（すなわち、細胞毒性剤）の平均数によって表される。式ＩのＡＤＣは、範囲（３．６～４．０）の薬物モジュールと結合された抗体のコレクションを含み、式ＩＩのＡＤＣは、範囲（３．３～４．３）の薬物モジュールと結合された抗体のコレクションを含む。コンジュゲーション反応からのＡＤＣ調製物中の抗体当たりの薬物モジュールの平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＨＩＣ及びＨＰＬＣのような従来の手段によって確認することができる。ｐ又はｑに関するＡＤＣの定量的分布も決定することができる。場合によっては、ｐ又はｑが他の薬物負荷を伴うＡＤＣからのある値である均質ＡＤＣの分離、精製及び検証は、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動のような手段によって達成することができる。
【0111】
いくつかの実施形態において、理論的最大未満の量の薬物モジュールは、コンジュゲート化反応において抗体に結合される。一般に、抗体は、薬物モジュールを結合することができる多くの遊離及び反応性システインチオール基を含まない；実際、抗体中のシステインチオール基の大部分は、ジスルフィド架橋として存在する。いくつかの実施形態において、抗体は、反応性システインチオール基を生成するための部分的又は完全な還元条件下で、還元剤、例えばジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）で還元することができる。
【0112】
本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、腫瘍の治療のために既知の化学療法薬または免疫抑制剤と組み合わせて使用することができ、化学療法薬は、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シクロホスファミドおよびタキサン［パクリタキセル（タキソール）およびドセタキセル（タキソテール）］、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）、タモキシフェン、アロマターゼ阻害剤（Ａｒｉｍｉｄｅｘ、Ｆｅｍａｒａ、Ａｒｏｍａｓｉｎ）、５－ＦＵ／ロイコボリン、イリノテカン（カンプトサール）、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、エストラムスチン、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）、プレドニゾン、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ）、ドキソルビシン、プレドニゾンなど、またはそれらの組み合わせであり得る；免疫抑制剤は、（１）コルチゾン及びプレドニゾンのようなグルココルチコイド；（２）シクロスポリン及びタクロリムスなどの微生物代謝産物；（３）アザチオプリン及び６－メルカプトプリンなどのような抗代謝産物；（４）抗リンパ球グロブリン及びＯＫＴ３などのようなポリクローナル及びモノクローナル抗リンパ球抗体；（５）シクロホスファミドなどのアルキル化剤から選択される。具体的には、免疫抑制剤は、例えば、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、アザチオプリン、Ｐｒｏｇｒａｆ、Ｚｅｎａｐａｘ、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ、シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ミゾリビン、シクロホスファミド、Ｆｉｎｇｏｌｉｍｏｄなどである。
【0113】
本発明において、「治療」とは、予防のために、又は臨床病理学の過程において、治療される個体又は細胞の自然経過を変化させることを試みる臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患の発生又は再発の予防、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的結果の減弱、転移の予防、疾患進行速度の遅延、疾患状態の改善又は軽減、及び予後の緩和又は改善が含まれる。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又は抗体－薬物コンジュゲートは、疾患又は障害の発症を遅延させるため、又は疾患又は障害の進行を遅延させるために使用される。治療の成功及び疾患の改善を評価するために使用される上記パラメータは、医師によく知られた日常的な手順によって容易に測定することができる。がん治療については、効力は、例えば、疾患の進行までの時間（ＴＴＰ）を評価することによって、及び／又は奏効率（ＲＲ）を決定することによって測定することができる。
【0114】
本発明において、「対象」とは、脊椎動物をいう。ある種の実施形態において、脊椎動物は、哺乳動物を指す。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ）、ペット（例えば、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類、マウス、およびラットが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、哺乳動物は、ヒトを指す。
【0115】
本発明において、「有効量」とは、所望の治療効果又は予防効果を達成するのに必要な用量及び時間で有効な量を指す。本発明の物質／分子の「治療有効量」は、病態、個体の年齢、性別及び体重、ならびに個体において所望の応答を引き出す物質／分子の能力などの因子に依存して変化し得る。治療上有効な量はまた、物質／分子の毒性又は有害な結果が治療上有益な効果によって打ち消される量を含む。「予防的に有効な量」とは、所望の予防効果を達成するために必要な用量及び時間で有効な量を指す。予防的投与量は、疾患の発症前又は疾患の初期段階で対象に投与されるので、通常、しかし必ずしもそうではないが、予防的に有効な量は、治療的に有効な量よりも少ないであろう。がんの場合、治療的に有効な量の薬物は、がん細胞の数を減少させる；腫瘍サイズを縮小させる；がん細胞の周囲臓器への浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅く、好ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度遅く、好ましくは停止させる）；腫瘍増殖をある程度阻害する；及び／又はがんに関連する１以上の症状をある程度低減することができる。
【0116】
疾患の予防又は治療のために、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの適切な用量（単独で使用される場合、又は化学療法剤のような１以上のさらなる治療剤と組み合わせて使用される場合）は、治療される疾患のタイプ、抗体－薬物コンジュゲートのタイプ、疾患の重症度及び経過、予防又は治療目的のために抗体－薬物コンジュゲートが投与されるかどうか、以前の治療、患者の臨床歴及び抗体－薬物コンジュゲートに対する反応性、ならびに主治医の判断に依存するであろう。抗体－薬物コンジュゲートは、一度に、又は一連の治療を通して患者に投与されることが適切である。抗体－薬物コンジュゲートの例示的用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。従って、抗体－薬物コンジュゲートの約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、又は５ｍｇ／ｋｇ（又はそれらの任意の組み合わせ）の１つ以上の用量を患者に投与することができる。
【0117】
本発明で使用される「薬学的に許容される担体」には、薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤が含まれ、これらは、それらが曝露される細胞又は哺乳動物に使用される投与量及び濃度において無毒性である。典型的には、生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例には、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝液が含まれ、例えば、アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリンなどのタンパク質：ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、スクロース、トレハロースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトール又はソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭなどの非イオン性界面活性剤が含まれる。
【0118】
本発明では、２０の慣用的なアミノ酸及びその略語は、慣用的な用法に従う。参照により本明細書に組み込まれるImmunology-A Synthesis (2nd Edition, E.S. Golub and D.R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Massを参照されたい。
【0119】
本発明は、具体的な実施例と共に、以下にさらに説明される。
【0120】
実施例１：抗体ＭＡＢ８０１（抗体－薬物コンジュゲートＡＤＣ－１の裸の抗体部分に使用される）のための生産細胞株の構築
市販薬Ｍａｂｔｈｅｒａ（リツキサン（登録商標）、リツキシマブ）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析し、抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列を決定した。軽鎖及び重鎖の全遺伝子配列は、特許（Ａｎｄｅｒｓｏｎ－１９９８、特許番号：ＵＳ５７３６１３７Ａ）の配列情報に従ってさらに確認され、ＭＡＢ８０１の軽鎖及び重鎖遺伝子ＤＮＡ配列は、それぞれ、遺伝子合成により得られ、次に、軽鎖（軽鎖、ＬＣ）及び重鎖（重鎖、ＨＣ）遺伝子発現プラスミドは、二重プラスミドベクター発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｍｐａｎｙからの）を用いて別々に構築され、２つのプラスミドは、哺乳類宿主細胞ＣＨＯ ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｍｐａｎｙからの）に同時トランスフェクトされ、２段階ストレススクリーニング後、軽鎖及び重鎖遺伝子配列と同時に統合された細胞集団が得られた。細胞集団の抗体発現能を評価し、必要条件を満たすことを見出した。単一細胞クローンを半固体培地を用いてスクリーニングし、得られた単一細胞クローンを、最も高い発現レベルの抗体を有するクローン化細胞株を選択するために、供給バッチ実験によりスクリーニングし、この細胞株に基づいて、ＭＡＢ８０１の生産細胞バンクを調製した。
市販薬Ｍａｂｔｈｅｒａ（リツキサン（登録商標）、リツキシマブ）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析し、抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列を決定した。軽鎖及び重鎖の全遺伝子配列は、特許（Ａｎｄｅｒｓｏｎ－１９９８、特許番号：ＵＳ５７３６１３７Ａ）の配列情報に従ってさらに確認され、ＭＡＢ８０１の軽鎖及び重鎖遺伝子ＤＮＡ配列は、それぞれ、遺伝子合成により得られ、次に、軽鎖（軽鎖、ＬＣ）及び重鎖（重鎖、ＨＣ）遺伝子発現プラスミドは、二重プラスミドベクター発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｍｐａｎｙからの）を用いて別々に構築され、２つのプラスミドは、哺乳類宿主細胞ＣＨＯ ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｍｐａｎｙからの）に同時トランスフェクトされ、２段階ストレススクリーニング後、軽鎖及び重鎖遺伝子配列と同時に統合された細胞集団が得られた。細胞集団の抗体発現能を評価し、必要条件を満たすことを見出した。単一細胞クローンを半固体培地を用いてスクリーニングし、得られた単一細胞クローンを、最も高い発現レベルの抗体を有するクローン化細胞株を選択するために、供給バッチ実験によりスクリーニングし、この細胞株に基づいて、ＭＡＢ８０１の生産細胞バンクを調製した。
【0121】
遺伝子配列決定をモノクローナル細胞株で行い、配列決定の結果、ＭＡＢ８０１の軽鎖及び重鎖をコードする配列は市販のリツキシマブと完全に一致することが示された。
【0122】
実施例２：抗体ＭＡＢ８０１の調製（抗体－薬物コンジュゲートＡＤＣ－１の裸の抗体部分について）
ＭＡＢ８０１は、抗体分野で広く使用されているフィードバッチ細胞培養プロセスによって調製された。このプロセスは、ワーキングセルバンクの細胞シードの回収から始まり、以下の主なステップで構成された：振とうフラスコ接種、振とうフラスコ細胞増殖、リアクター内での段階的な細胞増殖培養、およびフェドバッチ培養用の生産リアクターへの接種、続いて、以下を含む精製プロセス：発酵ブロス清澄化（深層ろ過）、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、低ｐＨウイルス不活化および深層ろ過、ＰＢインキュベーション、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、ウイルス除去ろ過、接線流限外ろ過および透析ろ過などの工程を経て、製品を得るためにろ過と包装が行われる。
ＭＡＢ８０１は、抗体分野で広く使用されているフィードバッチ細胞培養プロセスによって調製された。このプロセスは、ワーキングセルバンクの細胞シードの回収から始まり、以下の主なステップで構成された：振とうフラスコ接種、振とうフラスコ細胞増殖、リアクター内での段階的な細胞増殖培養、およびフェドバッチ培養用の生産リアクターへの接種、続いて、以下を含む精製プロセス：発酵ブロス清澄化（深層ろ過）、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、低ｐＨウイルス不活化および深層ろ過、ＰＢインキュベーション、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、ウイルス除去ろ過、接線流限外ろ過および透析ろ過などの工程を経て、製品を得るためにろ過と包装が行われる。
【0123】
検出結果から、産生されたリツキシマブの生物学的類似性は、分子量及び他の物理的及び化学的指標に関してリツキシマブと非常に類似していることが示された。
【0124】
実施例３：ＡＤＣ－１、ＣＤ２０標的化抗体－薬物コンジュゲートの調製方法
１）ＭＡＢ８０１抗体１０ｍｇを採取し、１５ｍＬ ３０ＫＤ限外濾過装置を用いて還元緩衝液（ホウ酸ナトリウム２５ｍＭ、ｐＨ８．０、２５ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に置換し、合計３回の置換を行い、最終体積を約１ｍＬとし、得られた溶液を新たなＥｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離管に移し（秤量）、タンパク質濃度を検出し、総タンパク質濃度を算出した。
２）２．５倍モルのＤＴＴを抗体に添加し、室温で２時間インキュベートし、連続的に混合した；得られた溶液を、１５ｍＬ ３０ＫＤ限外濾過装置を用いてカップリング緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）中に置換し、合計３回の置換を行った。濃縮液を採り、Ａ２８０を用いてタンパク質濃度を測定し、秤量して総タンパク質量を算出し、１０μＬの試料を採取し、エルマン法により遊離スルフヒドリル基数を測定した。遊離スルフヒドリル基のモル濃度を次式で計算した。
１）ＭＡＢ８０１抗体１０ｍｇを採取し、１５ｍＬ ３０ＫＤ限外濾過装置を用いて還元緩衝液（ホウ酸ナトリウム２５ｍＭ、ｐＨ８．０、２５ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に置換し、合計３回の置換を行い、最終体積を約１ｍＬとし、得られた溶液を新たなＥｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離管に移し（秤量）、タンパク質濃度を検出し、総タンパク質濃度を算出した。
２）２．５倍モルのＤＴＴを抗体に添加し、室温で２時間インキュベートし、連続的に混合した；得られた溶液を、１５ｍＬ ３０ＫＤ限外濾過装置を用いてカップリング緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）中に置換し、合計３回の置換を行った。濃縮液を採り、Ａ２８０を用いてタンパク質濃度を測定し、秤量して総タンパク質量を算出し、１０μＬの試料を採取し、エルマン法により遊離スルフヒドリル基数を測定した。遊離スルフヒドリル基のモル濃度を次式で計算した。
【0125】
【数2】
【0126】
ｂ：キュベットの光路長（通常１ｃｍ）
遊離スルフヒドリル基のモル数を遊離スルフヒドリル基のモル濃度と総タンパク質溶液体積に基づいて計算した。
３）ｖｃ－ＭＭＡＥ（ＤＭＳＯに溶解）を、遊離スルフヒドリル基のモルの１．１倍で還元抗体に添加し、十分に混合し、次に、室温で２時間間欠攪拌しながら反応させた。反応系に、Ｎ－アセチルシステインを反応溶液中にｖｃ－ＭＭＡＥのモル数の２０倍で添加し、十分に混合し、５分間放置した。
４）工程３で得られた溶液を、１５ｍＬの３０ＫＤ限外濾過装置を用いてコンジュゲート原液（１０ｍＭヒスチジン、６％スクロース、０．０３５％ＰＳ８０、ｐＨ５．８）に置換し、合計３回の置換を行い、４℃で保存した抗体－薬物コンジュゲートＡＤＣ－１を得、活性成分抗体－薬物コンジュゲートの濃度は５ｍｇ／ｍＬであった。
遊離スルフヒドリル基のモル数を遊離スルフヒドリル基のモル濃度と総タンパク質溶液体積に基づいて計算した。
３）ｖｃ－ＭＭＡＥ（ＤＭＳＯに溶解）を、遊離スルフヒドリル基のモルの１．１倍で還元抗体に添加し、十分に混合し、次に、室温で２時間間欠攪拌しながら反応させた。反応系に、Ｎ－アセチルシステインを反応溶液中にｖｃ－ＭＭＡＥのモル数の２０倍で添加し、十分に混合し、５分間放置した。
４）工程３で得られた溶液を、１５ｍＬの３０ＫＤ限外濾過装置を用いてコンジュゲート原液（１０ｍＭヒスチジン、６％スクロース、０．０３５％ＰＳ８０、ｐＨ５．８）に置換し、合計３回の置換を行い、４℃で保存した抗体－薬物コンジュゲートＡＤＣ－１を得、活性成分抗体－薬物コンジュゲートの濃度は５ｍｇ／ｍＬであった。
【0127】
実施例４：ＡＤＣ－１における薬物／抗体比の決定
調製された抗体－薬物コンジュゲートＡＤＣ－１をＨＩＣ－ＨＰＬＣ（Ｏｕｙａｎｇ－２０１３）により分析し、薬物／抗体比（ＤＡＲ）を決定し、その結果を図１に示し、その中で、スペクトルのピーク面積の計算により、平均薬物負荷ＤＡＲは３．８であった。
調製された抗体－薬物コンジュゲートＡＤＣ－１をＨＩＣ－ＨＰＬＣ（Ｏｕｙａｎｇ－２０１３）により分析し、薬物／抗体比（ＤＡＲ）を決定し、その結果を図１に示し、その中で、スペクトルのピーク面積の計算により、平均薬物負荷ＤＡＲは３．８であった。
【0128】
実施例５：ＣＤ２０発現ＮＨＬ細胞上のＡＤＣ－１のインビトロ死滅活性
ＣＤ２０発現ＮＨＬ細胞に対するＡＤＣ－１の殺傷効果を調べるために、４種類のＣＤ２０発現ＮＨＬ細胞株Ｄａｕｄｉ、Ｊｅｋｏ－１、Ｒａｊｉ、及びＲａｍｏｓを選択し、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ（商標）検出試薬を採用して、上記の４つの細胞株に対するＡＤＣ－１および市販の参照薬Ｒｉｔｕｘａｎ（登録登録商標）の死滅効果を測定し、結果を表２および図２、図３、図４および図５に示した。
ＣＤ２０発現ＮＨＬ細胞に対するＡＤＣ－１の殺傷効果を調べるために、４種類のＣＤ２０発現ＮＨＬ細胞株Ｄａｕｄｉ、Ｊｅｋｏ－１、Ｒａｊｉ、及びＲａｍｏｓを選択し、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ（商標）検出試薬を採用して、上記の４つの細胞株に対するＡＤＣ－１および市販の参照薬Ｒｉｔｕｘａｎ（登録登録商標）の死滅効果を測定し、結果を表２および図２、図３、図４および図５に示した。
【0129】
【表1】
【0130】
注釈：ＣＤ２０発現レベルの参照はＢａｒｔｈ－２０１５、Ｌａｗ－２００４であった。
ＩＣ５０値は、２つの９６ウェルプレートについて計算されたＩＣ５０の平均値であり、ＮＤは、増殖阻害の最高パーセンテージ（阻害％）が５０％未満であることを示し、ＩＣ５０値は計算できなかった。
ＩＣ５０値は、２つの９６ウェルプレートについて計算されたＩＣ５０の平均値であり、ＮＤは、増殖阻害の最高パーセンテージ（阻害％）が５０％未満であることを示し、ＩＣ５０値は計算できなかった。
【0131】
実験結果は、ＡＤＣ－１が４つのＣＤ２０発現ＮＨＬ細胞株に対して有意な細胞殺傷効果を有し、その効果は市販の基準薬リツキサン（登録商標）よりも有意に良好であることを示した。
【0132】
実施例６：ＮＨＬ ＰＤＸモデルにおけるＡＤＣ－１の抗腫瘍効果
ヒト由来腫瘍組織異種移植片モデル（ＰＤＸモデル）は、ヒト原発腫瘍組織を用いて免疫不全マウスで確立された腫瘍モデルであり、原発腫瘍の不均一性、分子多様性及び組織学的特徴を最大限に保持する。薬物の臨床的治療効果に対する高い予測値を有し、近年、がん研究（Ｈｉｄａｌｇｏ、２０１４年）においてますます使用されている。将来の臨床適応におけるＡＤＣ－１の有効性を効果的に評価するために、３つのＣＤ２０発現ヒトリンパ腫細胞がん（ＮＨＬ）ＰＤＸモデルで実験を行った。すべての実験において、市販されているＣＤ２０標的モノクローナル抗体リツキサン（登録商標）を参照薬として使用し、腫瘍抑制活性を比較した。これら３つのＮＨＬ ＰＤＸモデルのうち、２つはリツキサン（登録商標）に耐性を示した。
ヒト由来腫瘍組織異種移植片モデル（ＰＤＸモデル）は、ヒト原発腫瘍組織を用いて免疫不全マウスで確立された腫瘍モデルであり、原発腫瘍の不均一性、分子多様性及び組織学的特徴を最大限に保持する。薬物の臨床的治療効果に対する高い予測値を有し、近年、がん研究（Ｈｉｄａｌｇｏ、２０１４年）においてますます使用されている。将来の臨床適応におけるＡＤＣ－１の有効性を効果的に評価するために、３つのＣＤ２０発現ヒトリンパ腫細胞がん（ＮＨＬ）ＰＤＸモデルで実験を行った。すべての実験において、市販されているＣＤ２０標的モノクローナル抗体リツキサン（登録商標）を参照薬として使用し、腫瘍抑制活性を比較した。これら３つのＮＨＬ ＰＤＸモデルのうち、２つはリツキサン（登録商標）に耐性を示した。
【0133】
本研究で使用した３つのＰＤＸモデルの情報を表３に示した。
【0134】
【表2】
【0135】
１．ＣＤ２０陽性ＮＨＬ ＰＤＸモデルＬＹＭ＃００４におけるＡＤＣ－１の有効性に関する研究
ＬＹＭ＃００４はリツキサン（登録商標）耐性ＤＬＢＣＬ ＰＤＸモデルであり、実験結果を図６に示した。ＡＤＣ－１を１、３及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、１８日目にＴ／Ｃ（％）はそれぞれ４５．９０％（Ｐ＞０．０５）、４．４６％（Ｐ＜０．００１）及び２．０５％（Ｐ＜０．００１）であり、ＴＧＩ％はそれぞれ５４．１０％、９５．５４％及び９７．９５％であった。ＡＤＣ－１を３ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、全ての腫瘍は１８日目に部分的に退縮し、ＡＤＣ－１を１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、５／８の腫瘍は部分的に退縮し、３／８の腫瘍はそれぞれ１８日目に完全に退縮した。３及び１０ｍｇ／ｋｇのリツキサン（登録商標）投与後、１８日目のＴ／Ｃ（％）はそれぞれ５０．７６％（Ｐ＞０．０５）及び５１．５０％（Ｐ＞０．０５）であり、ＴＧＩ％はそれぞれ４９．２４％及び４８．５０％であった。
ＬＹＭ＃００４はリツキサン（登録商標）耐性ＤＬＢＣＬ ＰＤＸモデルであり、実験結果を図６に示した。ＡＤＣ－１を１、３及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、１８日目にＴ／Ｃ（％）はそれぞれ４５．９０％（Ｐ＞０．０５）、４．４６％（Ｐ＜０．００１）及び２．０５％（Ｐ＜０．００１）であり、ＴＧＩ％はそれぞれ５４．１０％、９５．５４％及び９７．９５％であった。ＡＤＣ－１を３ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、全ての腫瘍は１８日目に部分的に退縮し、ＡＤＣ－１を１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、５／８の腫瘍は部分的に退縮し、３／８の腫瘍はそれぞれ１８日目に完全に退縮した。３及び１０ｍｇ／ｋｇのリツキサン（登録商標）投与後、１８日目のＴ／Ｃ（％）はそれぞれ５０．７６％（Ｐ＞０．０５）及び５１．５０％（Ｐ＞０．０５）であり、ＴＧＩ％はそれぞれ４９．２４％及び４８．５０％であった。
【0136】
実験結果から、ＡＤＣ－１（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）は腫瘍増殖に対して有意な阻害活性を有し、ＡＤＣ－１（１ｍｇ／ｋｇ）及び参照薬リツキサン（登録商標）（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）は有意な抗腫瘍活性を示さなかった。ＡＤＣ－１及びリツキサン（登録商標）はいずれも、担がんマウスで良好な忍容性を示した。
【0137】
２．ＣＤ２０陽性ＮＨＬ ＰＤＸモデルＬＹＭ＃０１３におけるＡＤＣ－１の有効性の検討
ＬＹＭ＃０１３はリツキサン（登録商標）耐性ＤＬＢＣＬ ＰＤＸモデルであり、実験結果を図７に示した。ＡＤＣ－１を０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、２８日目のＴ／Ｃ（％）はそれぞれ３１．９０％（Ｐ＜０．０５）、０．００％（Ｐ＜０．００１）、０．００％（Ｐ＜０．００１）であった；ＴＧＩ％はそれぞれ６８．１０％、１００．００％、１００．００％であった。それぞれ、２／８、０／８、および０／８の腫瘍が部分的に退縮し、０／８、８／８、および８／８の腫瘍が完全に退行した。リツキサン（登録商標）を３ｍｇ／ｋｇで投与した場合、２８日目のＴ／Ｃ（％）は７９．８６％（Ｐ＞０．０５）、ＴＧＩ％は２０．１４％であった。
ＬＹＭ＃０１３はリツキサン（登録商標）耐性ＤＬＢＣＬ ＰＤＸモデルであり、実験結果を図７に示した。ＡＤＣ－１を０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、２８日目のＴ／Ｃ（％）はそれぞれ３１．９０％（Ｐ＜０．０５）、０．００％（Ｐ＜０．００１）、０．００％（Ｐ＜０．００１）であった；ＴＧＩ％はそれぞれ６８．１０％、１００．００％、１００．００％であった。それぞれ、２／８、０／８、および０／８の腫瘍が部分的に退縮し、０／８、８／８、および８／８の腫瘍が完全に退行した。リツキサン（登録商標）を３ｍｇ／ｋｇで投与した場合、２８日目のＴ／Ｃ（％）は７９．８６％（Ｐ＞０．０５）、ＴＧＩ％は２０．１４％であった。
【0138】
実験結果は、ＡＤＣ－１（０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇ）が用量依存的に腫瘍増殖を有意に阻害できることを示したが、対照薬リツキサン（登録商標）（３ｍｇ／ｋｇ）は有意な抗腫瘍活性を示さなかった。ＡＤＣ－１及びリツキサン（登録商標）はいずれも、担がんマウスで良好な忍容性を示した。
【0139】
３．ＣＤ２０陽性ＮＨＬ ＰＤＸモデルＬＹＭ＃０１６におけるＡＤＣ－１の有効性に関する研究
ＬＹＭ＃０１６はＤＬＢＣＬ ＰＤＸモデルであり、実験結果を図８に示した。ＡＤＣ－１を０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、１４日目のＴ／Ｃ（％）はそれぞれ３７．７６％（Ｐ＞０．０５）、４．２７％（Ｐ＜０．０１）及び１．９１％（Ｐ＜０．０１）であり、ＴＧＩ％はそれぞれ６２．２４％、９５．７３％及び９８．０９％であった。ＡＤＣ－１を１ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、全ての腫瘍は１４日目に部分的に退縮し、３ｍｇ／ｋｇの用量でＡＤＣ－１を投与した後、それぞれ６／８の腫瘍は部分的に退縮し、２／８の腫瘍は１４日目に完全に退縮した。リツキサン（登録商標）３ｍｇ／ｋｇを投与した場合、１４日目にＴ／Ｃ（％）は３０．９８％（Ｐ＞０．０５）、ＴＧＩ％は６９．０２％であった。
ＬＹＭ＃０１６はＤＬＢＣＬ ＰＤＸモデルであり、実験結果を図８に示した。ＡＤＣ－１を０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、１４日目のＴ／Ｃ（％）はそれぞれ３７．７６％（Ｐ＞０．０５）、４．２７％（Ｐ＜０．０１）及び１．９１％（Ｐ＜０．０１）であり、ＴＧＩ％はそれぞれ６２．２４％、９５．７３％及び９８．０９％であった。ＡＤＣ－１を１ｍｇ／ｋｇの用量で投与した後、全ての腫瘍は１４日目に部分的に退縮し、３ｍｇ／ｋｇの用量でＡＤＣ－１を投与した後、それぞれ６／８の腫瘍は部分的に退縮し、２／８の腫瘍は１４日目に完全に退縮した。リツキサン（登録商標）３ｍｇ／ｋｇを投与した場合、１４日目にＴ／Ｃ（％）は３０．９８％（Ｐ＞０．０５）、ＴＧＩ％は６９．０２％であった。
【0140】
実験結果は、ＡＤＣ－１（１及び３ｍｇ／ｋｇ）が腫瘍増殖に対して有意な阻害効果を有する一方で、ＡＤＣ－１（０．３ｍｇ／ｋｇ）及び基準薬物リツキサン（３ｍｇ／ｋｇ）は有意な抗腫瘍活性を持たないことを示した。ＡＤＣ－１及びリツキサン（登録商標）はいずれも、担がんマウスで良好な忍容性を示した。
【0141】
３つのＣＤ２０陽性ヒト由来リンパ腫（ＮＨＬ）ＰＤＸモデルにおけるＡＤＣ－１のインビボ有効性実験結果を表４に示した。
【0142】
【表3】
【0143】
注釈：「／」は「利用不可」を表す。腫瘍体積（ＴＶ）を計算する公式は、ＴＶ＝ｌ×ｗ２／２であり、ここで、ｌ及びｗは、それぞれ、腫瘍の測定された長さ及び幅を表す。相対腫瘍体積（ＲＴＶ）は、測定結果ＲＴＶ＝Ｖｆ／Ｖ０に従って計算した。ここで、Ｖ０は、グループ化及び投与時（すなわち、０日目）に測定された腫瘍体積を表し、Ｖｆは、最終日に測定された腫瘍体積を表した。相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝（投与群のＲＴＶ／溶媒群のＲＴＶ）×１００％。腫瘍増殖抑制率ＴＧＩ％＝（溶媒群の平均腫瘍体積－投与群の平均腫瘍体積）／溶媒群の平均腫瘍体積×１００％。＋＋＋＋はＴ／Ｃを表し（％０以上１０％以下）、「＋＋＋」はＴ／Ｃを表し（％１０％以上２０％以下）、「＋＋」はＴ／Ｃを表し（％２０％以上４０％以下）、「＋」はＴ／Ｃを表す（％４０％以上）。ＡＤＣ－１及びリツキサン（登録商標）の抗腫瘍活性の分割は、モデルの最高用量でのＴ／Ｃ（％）値に基づいた。
【0144】
結論として、インビボ有効性実験の結果は、ＡＤＣ－１が３つのヒトリンパ腫（ＮＨＬ）ＰＤＸモデル（全てのモデルはＤＬＢＣＬ）において有意な腫瘍増殖阻害効果を示し、腫瘍担持マウスにおいて非常に良好な耐性を示すことを示した。これら３つのＤＬＢＣＬ ＰＤＸモデルのうち２つがリツキサン（登録商標）に耐性であったことは指摘に値する。
【0145】
実施例７：ＡＤＣ－１製剤の安定性に及ぼすｐＨの影響
ＡＤＣ－１の調製に関する研究及びこれまでの経験に基づいて、本出願の発明者らは、調製物が５ｍｇ／ｍＬ抗体－薬物コンジュゲート（緩衝液及び他の成分を含まない裸の抗体－薬物コンジュゲート）、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．８）、６％スクロース、及び０．０３５％Ｔｗｅｅｎ－８０（ＰＳ８０）であることを最終的に決定した。
ＡＤＣ－１の調製に関する研究及びこれまでの経験に基づいて、本出願の発明者らは、調製物が５ｍｇ／ｍＬ抗体－薬物コンジュゲート（緩衝液及び他の成分を含まない裸の抗体－薬物コンジュゲート）、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．８）、６％スクロース、及び０．０３５％Ｔｗｅｅｎ－８０（ＰＳ８０）であることを最終的に決定した。
【0146】
ＡＤＣ－１の品質に対する１０ｍＭヒスチジン緩衝液中の異なるｐＨの影響を調べるために、ＡＤＣ－１の溶液を調べる製剤Ｆ１からＦ４（ｐＨ：５．８～７．０）に変更し、それぞれ６週間及び４週間、調査のために２５±２℃／６０％±５％ＲＨ及び４０±２℃／７５％±５％ＲＨで放置し、試料を設定した時点で分析のために採取した。検出項目は外観、ｐＨ、タンパク質濃度、ＳＥＣ、ｉＣＩＥＦ及びＨＩＣであった。試料に明らかな乳濁が認められた場合は、その後の関連解析は実施しない。具体的な実験計画を表５に示した。
【0147】
【表4】
【0148】
注釈：Ｗは週を表し、２Ｗは２週間を表し、チェックは検出されたことを表す。
【0149】
実験結果は、ＡＤＣ－１が１０ｍＭヒスチジン緩衝液中にある場合、その安定性はｐＨの増加と共に低下することを示した。
【0150】
２５℃で６週間放置した後、全ての試料は無色で、ｐＨと濃度に変化のない透明な溶液であった；ｉＣＩＥＦの純度は減少し、酸性ピークの含有量は増加し、変化速度はｐＨの増加と共に増加した；ＳＥＣの純度は減少傾向を示し、ポリマー（ＨＭＷ）の含有量は増加し、変化速度はｐＨの増加と共に増加した；ＤＡＲ値は有意に変化しなかった。
【0151】
４０℃で４週間放置した後、試料の安定性は同じ傾向を示したが、変化の程度は悪化した。ｐＨが６．７と７．０の場合、試料の外観は４０℃で１週間以内に変化し、乳光が現れ、乳光の程度はｐＨの上昇とともに増加し、粒子状物質の存在によりＵＶ検出結果が歪められた（タンパク光）。計算されたタンパク質含有量が実際の値から逸脱した。ＳＥＣの純度が低下し、ポリマーと低分子量断片（ＬＭＷ）の含有量が増加し、変化速度がｐＨの増加とともに増加した。ｉＣＩＥＦの純度は低下し、酸性ピークの含有量は増加し、塩基性ピークの含有量は減少し、変化速度はｐＨの増加とともに増加した。
【0152】
ｐＨの関数としての試料のＳＥＣ純度の傾向図を図９に示した。
【0153】
本発明の特定の実施形態を詳細に説明したが、当業者であれば、開示されたすべての教示に照らして、これらの詳細の様々な修正及び置換が行われ得、これらの変更は本発明の範囲内であることを理解するであろう。本発明の全範囲は、添付の特許請求の範囲及びそれらの同等物によって与えられる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
