特許 7562502 免疫を調節するための組成物およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-09-27

(45)【発行日】2024-10-07

(54)【発明の名称】免疫を調節するための組成物およびその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/747 20150101AFI20240930BHJP

   A61K 31/716 20060101ALI20240930BHJP

   A61K 35/20 20060101ALI20240930BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240930BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240930BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20240930BHJP

   A23L 33/125 20160101ALI20240930BHJP

   A23L 33/19 20160101ALI20240930BHJP

【ＦＩ】

A61K35/747

A61K31/716

A61K35/20

A61P37/02

A61P43/00 121

A23L33/135

A23L33/125

A23L33/19

【請求項の数】 10

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2021201970

(22)【出願日】2021-12-13

(65)【公開番号】P2022093325

(43)【公開日】2022-06-23

【審査請求日】2022-12-27

(31)【優先権主張番号】63/124,295

(32)【優先日】2020-12-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【微生物の受託番号】NRRL  NRRL B-50327

(73)【特許権者】

【識別番号】510341189

【氏名又は名称】リトーン・エンタープライズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｌｙｔｏｎｅ Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ， Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】ホゥ，チア－シン

(72)【発明者】

【氏名】チャン，ウェイ－ティン

(72)【発明者】

【氏名】ツェン，ウェイ－ティン

(72)【発明者】

【氏名】チャン，ティエン－フン

【審査官】柴原 直司

(56)【参考文献】

【文献】特開２０１１－１４２９０７（ＪＰ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１１０１５０３８４（ＣＮ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１０８０６５４００（ＣＮ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１０９２２１８６４（ＣＮ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３５／００－３５／７６８

Ａ６１Ｋ ３１／７１６

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

腫瘍壊死因子アルファ(TNF-α)、インターロイキン-6(IL-6)、およびトランスフォーミング増殖因子β1(TGF-β1)の発現を増強する比率で、ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)（寄託番号：NRRL B-50327）、β-グルカン(BG)およびウシ初乳粉末(BCP)を含む、免疫を調節するための、抗アレルギー活性を有する組成物。

【請求項2】

組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、0.5%～20%のラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)（寄託番号：NRRL B-50327）、0.5%～25%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および0.05%～10%のウシ初乳粉末(BCP)からなる、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、1%～10%のラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)（寄託番号：NRRL B-50327）、1%～12%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および0.05%～5%のウシ初乳粉末(BCP)からなる、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、1%～5%のラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)（寄託番号：NRRL B-50327）、1%～6%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および1%～4%のウシ初乳粉末(BCP)からなる、請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、2%～4%のラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)（寄託番号：NRRL B-50327）、4%～5%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および1%～2%のウシ初乳粉末(BCP)からなる、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

組成物が、マクロファージの生存率に影響を及ぼさない、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

β-グルカンが、β-1,3/1,6-グルカンである、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

薬学的に許容される担体、ならびに腫瘍壊死因子α(TNF-α)、インターロイキン-6(IL-6)、およびトランスフォーミング増殖因子β1(TGF-β1)の発現を増強する比率で、ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)（寄託番号：NRRL B-50327）、β-グルカン(BG)、およびウシ初乳粉末(BCP)を含む、免疫を調節するための、抗アレルギー活性を有する医薬組成物。

【請求項9】

食品的に許容される担体、ならびに腫瘍壊死因子α(TNF-α)、インターロイキン-6(IL-6)、およびトランスフォーミング増殖因子β1(TGF-β1)の発現を増強する比率で、ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)（寄託番号：NRRL B-50327）、β-グルカン(BG)、およびウシ初乳粉末(BCP)を含む、免疫を調節するための、抗アレルギー活性を有する栄養補助食品。

【請求項10】

免疫を調節するための、抗アレルギー活性を有する薬剤または栄養補助食品の製造における、請求項１～７のいずれか1つに記載の組成物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、2020年12月11日出願の米国仮出願第63/124,295号に対する優先権を主張する。上記出願の開示の全体は、参照することにより本出願に組み込まれる。
技術分野
本発明は、免疫を調節するための組成物または方法に関する。

【背景技術】

【0002】

ほとんどのインフルエンザウイルスまたは病原菌の感染パターンでは、宿主の免疫系が弱まっている場合、病原体は宿主に感染してコロニーを形成する。感染後に病原体を排除するために、宿主はサイトカインストームを起こす可能性があり、これは免疫過剰反応であり、免疫系が過負荷になると炎症を引き起こし、臓器や組織の損傷(肺炎など)を引き起こす。したがって、免疫力が強すぎたり弱すぎたりすると、病気を引き起こす可能性がある。免疫系を強化して、感染時に微生物およびウイルスなどの異物と戦うことができ、また、免疫系を低下させて、因子の感作によって引き起こされるサイトカインストーム中の炎症を緩和することができるように、免疫系のバランスをとることが重要である。このような双方向の免疫調節は、免疫系のバランスを取り、健康を維持することができる。

【0003】

初期の段階では、自然免疫は主に人間の免疫系に侵入する病原体に対する防御の第一線である。迅速な抗感染作用である自然免疫応答は、病原体を非特異的に特定して作用し、病原体と直接戦い、外部感染に抵抗する。センチネル自然免疫細胞は、病原体に対する自然免疫と獲得免疫を活性化する役割を果たす。マクロファージは、病原体の食作用による宿主防御の重要な指標である。異なるシグナル伝達経路を介した活性化は、異なる機能を持つ2種類のマクロファージをもたらす：炎症誘発性(古典的活性化マクロファージ、M1)と抗炎症性(代替活性化マクロファージ、M2)。分極したM1およびM2マクロファージは、それぞれ、炎症誘発性および抗炎症性マクロファージに可逆的に機能的に再分化することができる。M1マクロファージの役割は、炎症誘発性サイトカインとケモカイン、主にIL-6、IL-12、TNF-αを分泌し、抗原を提示することにより、免疫応答に関与し、抗原特異的なTh1細胞の炎症反応を促進することである。さらに、M1表現型の分極化は、肺における効果的な抗ウイルス免疫応答に不可欠であると考えられている。M2マクロファージは主に、炎症を抑え、腫瘍増殖および免疫抑制機能に寄与するアルギナーゼ-I、IL-10およびTGF-βならびに他の抗炎症性サイトカインを分泌する。要するに、M1およびM2マクロファージは特定の微小環境で互いに変換することができる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

健康を維持するために、ウイルス感染を引き起こす免疫力の低下を防ぐ方法は、厳重に保護されるべき最初の防衛線である。今日、栄養補助食品は、感染症やアレルギーの発生を防ぐための一般的な方法の1つである。しかしながら、ほとんどの栄養補助食品は、免疫力を高めるかアレルギーを減らすかのいずれかである一方向の免疫調節に焦点を合わせている。

【0005】

したがって、双方向の免疫調節効果を有する製品を開発することが望ましい。

【課題を解決するための手段】

【0006】

発明の概略
本発明において、LT12、BGおよびBCPの3つの機能性成分の組み合わせが、TNF-α、IL-6、およびTGF-β1の産生を効率的に誘導できることが意外にも見出され、そのことから、3つの成分の間の相乗効果または相加効果が示唆される。したがって、本発明は、多機能相乗効果を提供する免疫を調節するための組成物、およびその使用を提供する。

【0007】

したがって、本発明の1つの態様は、特に腫瘍壊死因子α(TNF-α)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-10(IL-10)およびトランスフォーミング増殖因子β1(TGF-β1)の発現を増強することにおいて、免疫を調節するための多機能相乗効果を提供する比率で、ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)、β-グルカン(BG)、およびウシ初乳粉末(BCP)を含む、免疫を調節するための組成物を提供することである。

【0008】

本発明の1つの実施態様では、組成物は、組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、0.5%～20%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、0.5%～25%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および0.05%～10%のウシ初乳粉末(BCP)からなる。

【0009】

本発明の特定の実施態様では、組成物は、組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、1%～10%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、1%～12%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および0.05%～5%のウシ初乳粉末(BCP)からなる。

【0010】

本発明の特定の実施態様では、組成物は、組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、1%～5%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、1%～6%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および1%～4%のウシ初乳粉末(BCP)からなる。

【0011】

本発明の特定の実施態様では、組成物は、組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、2%～4%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、4%～5%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および1%～2%のウシ初乳粉末(BCP)からなる。

【0012】

本発明の特定の実施態様では、組成物は、組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、約3.13%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、約4.00%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および約1.50%のウシ初乳粉末(BCP)からなる。

【0013】

本発明の1つの実施態様では、β-グルカンは酵母β-1,3/1,6-グルカンである。

【0014】

本発明の1つの実施態様では、組成物は、薬学的に許容されるか、または食用の担体をさらに含む。

【0015】

本発明のもう1つの態様は、薬学的に許容される担体、ならびに腫瘍壊死因子α(TNF-α)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-10(IL-10)およびトランスフォーミング増殖因子β1(TGF-β1)の発現を増強することにおいて相乗効果を提供する比率で、ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)、β-グルカン(BG)、およびウシ初乳粉末(BCP)を含む、免疫を調節するための医薬組成物を提供することである。

【0016】

本発明のもう1つの態様は、食品的に許容される担体、ならびに腫瘍壊死因子α(TNF-α)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-10(IL-10)およびトランスフォーミング増殖因子β1(TGF-β1)の発現を増強することにおいて相乗効果を提供する比率で、ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)、β-グルカン(BG)、およびウシ初乳粉末(BCP)を含む、免疫を調節するための栄養補助食品を提供することである。

【0017】

本発明の1つの特定の例では、組成物は、有効成分として、本質的に、0.5%～20%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、0.5%～25%のベータグルカン(BG)、および0.05%～10%のウシ初乳粉末(BCP)からなる。

【0018】

本発明の1つの特定の例では、組成物は、組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、1%～10%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、1%～5%のベータグルカン(BG)、および2%～4%のウシ初乳粉末(BCP)からなる。

【0019】

本発明の1つの特定の例では、組成物は、組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、0.5%～5%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、1%～6%のベータグルカン(BG)、および4%～5%のウシ初乳粉末(BCP)からなる。

【0020】

本発明の1つの特定の例では、組成物は、組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、0.5%～5%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、3%～4%のベータグルカン(BG)、および1%～2%のウシ初乳粉末(BCP)からなる。

【0021】

本発明のさらに別の態様は、必要とする対象に、治療有効量の本発明組成物を投与することを含む、免疫を調節するための方法を提供することである。

【0022】

さらなる態様では、本発明は、免疫を調節するための薬剤または栄養補助食品の製造における、ラクトバチルス・パラカゼイLT12、β-グルカン、およびウシ初乳粉末を含む組成物の使用を提供する。

【0023】

本発明によれば、組成物は、マクロファージの生存率に影響を及ぼさない。

【0024】

前述の一般的な説明および以下の詳細な説明の両方は、例示的かつ説明的なものにすぎず、本発明を限定するものではないことを理解すべきである。

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1】図1は、培地中のラクトバチルス・パラカゼイLT12の増殖状態を示す。

【図2】図2は、マクロファージRAW264.7細胞の生存率に対するサンプルの単一成分と複合配合物の効果を示す。

【図3A-3D】図3A-3Dは、マクロファージRAW264.7によるさまざまなサイトカインの分泌に対するサンプルの単一成分と複合配合物の効果を示す。図3Aは、TNF-αの分泌に対するサンプルの効果を示す。図3Bは、IL-6の分泌に対するサンプルの効果を示す。図3Cは、TGF-β1の分泌に対するサンプルの効果を示す。図3Dは、IL-10の分泌に対するサンプルの効果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0026】

発明の詳細な記載
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

【0027】

本明細書で使用される場合、「a」または「an」という用語は、単数形の意味のみでの物品の特定の使用において他に明確にされない限り、物品の文法的目的語の1つまたは複数(すなわち、少なくとも1つ)を意味する。

【0028】

本発明は、ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)、β-グルカン(BG)およびウシ初乳粉末(BCP)の3つの単一成分を含む、免疫を調節するための組成物、およびその使用を提供する。

【0029】

ラクトバチルス種は、消化器系および女性の生殖器系など、多くの身体の部位でヒトおよび動物の微生物叢の重要な構成要素を構成する。ラクトバチルス種の中で、ラクトバチルス・パラカゼイの新規菌株、LT12(本明細書において以下、LT12)が開発され、米国特許第8,372,392号および欧州特許第2,338,977号など、多くの国で特許を取得している。研究は、LT12がヒト末梢血単核細胞(PBMC)を刺激して大量のIFN-γを分泌することができ、アレルギー反応も効果的に抑制することを示した。サイトカイン抗体アレイ分析の結果は、LT12がIL-1、IL-6、IL-10、MCP-2およびTNF-αを含む複数のサイトカインの発現を同時に増強できることを示し、これは、LT12が免疫系および双方向免疫調節を調整する効果があることを示した。ブダペスト条約に従い、本開示で使用される菌株LT12は、2009年9月21日に米国農務省農業研究局菌株保存機関(American Agricultural Research Culture Collection)、International Depositary Authority、1815 N. University Street、Peoria、Ill.、61601、USAに寄託され、その寄託番号はNRRL-B50327あった。

【0030】

本明細書で使用される場合、「β-グルカン」または「BG」という用語は、典型的には1～3個のβ-グリコシド結合を有する直鎖骨格を形成するβ-D-グルコース多糖の群を示す。β-グルカン分子はまた、たとえば、1-6側鎖を有するβ-1,3/1,6-グルカンなどの、主なD-グルコース鎖の他の位置に結合した分岐グルコース側鎖を有することができる。本発明において、β-グルカンは、利用可能な任意の資源、たとえば、穀物、細菌、および真菌の細胞壁に天然に存在するβ－グルカンから誘導することができる。β-グルカンの1つの例は、β-1,3/1,6-グルカンである。本発明の1つの例では、酵母から作製されたベータグルカン、たとえば、酵母β-グルカンまたは酵母β-1,3/1,6-グルカンなどである。

【0031】

初乳は、哺乳動物が分娩後に生産する最初の乳であり、成乳とは組成が異なる。本明細書で使用される「ウシ初乳粉末」という用語は、ウシ初乳の乾燥粉末であり、ウシ初乳は、新生子牛の出産直後に牛の乳腺によって産生される最初の形態の乳である。

【0032】

本明細書で使用される「組成物」という用語は、複数の有効成分の混合または組み合わせから得られる製品を示す。それは、複数の有効成分を薬学的に許容されるか、または食用の担体と混合することによって調製することができ、これは、当技術分野で一般的に使用されるか、または標準的な方法に従って調製することができる。

【0033】

本明細書で使用される「有効量」または「治療有効量」という用語は、治療される疾患または状態の1つまたは複数の症状をある程度緩和する、投与される十分な量の薬剤または化合物を示す。結果は、疾患の徴候、症状、または原因の減少および／または緩和、あるいは生物学的システムの他の所望の変化でありうる。たとえば、治療用途のための「有効量」は、免疫の調節に対して臨床的に有意な効果を提供するために必要とされる、本明細書に開示される組成物の量である。個々の症例における適切な「有効」量は、用量漸増試験などの既知の技術を使用して決定することができる。

【0034】

本発明の1つの態様は、ラクトバチルス・パラカゼイLT12、β－グルカン、およびウシ初乳粉末を含む、免疫を調節するための組成物を提供することである。実施例によれば、本発明の組成物は、IL-6、IL-10、TNF-α、およびTGF-β1の発現を増強したが、マクロファージの生存率には影響を及ぼさないことが確認された。

【0035】

有効性実験を実施するために、組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、約3.13％のLT12、約4％のＢＧおよび1.5％のBCPからなる、本発明の組成物の一例を調製した。

【0036】

本発明において、組成物の免疫調節効果は、以下の方法によって評価される。MTTアッセイ(3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド)を使用して、細胞の生存率を決定し、細胞に対する組成物の安全性と有効濃度を分析した。酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)を使用して、炎症に関連するTNF-αおよびIL-6(炎症誘発性サイトカイン)および抗炎症に関連するTGF-β1およびIL-10(抗炎症性サイトカイン)などの、組成物の免疫調節効果を分析した。

【0037】

本発明において、組成物は、IL-6サイトカインの分泌を大量に誘導することができ、サイトカインの濃度もまた、比例関係で時間とともに増加することが見出された。また、対照(刺激なし)と比較して、組成物は、8～24時間で誘導量を約25～75倍に増加させる；単一成分の群および2つの成分の組み合わせと比較して、組成物は誘導量を約4～40倍に増加させ、これは、組成物の有意な相乗効果が示す。さらに、他の群と比較して、組成物はTNF-αの分泌を約1～10倍増加させることができ、これもまた、組成物の相乗効果を示す。さらに、抗炎症性サイトカインであるTGF-β1の分析では、対照(刺激なし)と比較して、組成物は、短時間(2～4時間)で誘導量を約20～30倍増加させる；BG、BCP、および2つの成分の組み合わせの群と比較して、組成物は、誘導量を約1～20倍増加させ、これは、組成物の有意な相乗効果を示す。

【0038】

本発明において、組成物は、本質的に、有効成分として、LT12、BGおよびBCPからなり、これは、免疫を相乗的に誘導および調節する。本発明の組成物は、IL-6分泌の誘導に対して非常に有意な相乗効果を有し、同時に、Th1およびTh2関連サイトカインを誘導し、これは、この配合物が、単一成分または2つの成分の組み合わせを含む群などの、すべての試験群の中で最良の双方向免疫調節効果を有することを示す。ウイルスの可能性がある病原性メカニズムを考慮して、本発明の組成物はまた、免疫効果を増強することが確認された。本発明は、抗アレルギーおよび免疫強化活性を有する免疫調節促進のための包括的な製品であり、病原体の感染を防ぐための毎日の栄養補助食品として適している。

【0039】

本発明は、限定ではなく実証の目的で提供される以下の実施例によってさらに説明される。

【実施例】

【0040】

実施例1：ラクトバチルス・パラカゼイLT12の増殖状態
LT12の増殖曲線を、表1と図1の両方に示す。活性化されたラクトバチルス・パラカゼイLT12を10¹ CFU/mLに希釈して培養した。最初の4時間については、細菌の増殖は遅滞期であり、培養開始後6時間からは、細菌数は約2時間ごとに1 log CFU/mL増加した(対数期)。細菌の増殖は、22時間で静止期に入り、36時間で死滅期に達していない。結果は、この期間(静止期)の細菌がその後の実験に使用されうることを示す。増殖曲線に基づいて、実験計画用に10³、10⁵、10⁷、10⁸、および10⁹ CFU/mLの細菌を必要とするその後の実験のために、8時間(3.46±0.01 log CFU/mL)、14時間(5.56±0.12 log CFU/mL)、20時間(7.34±0.08 log CFU/mL)、22時間(8.65±0.06 log CFU/mL)、および36時間(9.15±0.09 log CFU/mL)の細菌培養物を集めた。

【0041】

表1：MRS培地でのラクトバチルス・パラカゼイLT12の増殖状態。

【表1】

注：5x10³=3.70 Log CFU/mL；5x10⁵=5.70 Log CFU/mL；5x10⁷=7.70 Log/CFU/mL

【0042】

実施例2：マクロファージRAW264.7細胞の生存率におけるサンプルの単一成分および複合配合物の毒性試験
まず第一に、一定濃度のサンプルがマクロファージRAW264.7に毒性作用を及ぼさないことを確認した。細胞毒性試験の結果に基づいて、BCPとLT12の両方がマクロファージRAW264.7の増殖を刺激し、BGは4～12時間以内に細胞を増殖させたが、24時間で細胞生存率をわずかに低下させたことがわかった。さらに、本発明の配合物は、マクロファージRAW264.7に対して細胞毒性を示さなかった。一般的に言えば、単一成分も複合組み合わせも毒性作用を示さず、すべての群のマクロファージRAW264.7の生存率は90％以上である。これらの単一成分および複合組み合わせは、マクロファージの損傷を引き起こさず、それらのいくつかはマクロファージの増殖をわずかに促進することさえできる(図2)。

【0043】

実施例3：マクロファージRAW264.7におけるサンプルの単一成分および複合配合物の免疫調節効果
配合物がマクロファージRAW264.7に毒性作用を及ぼさないことを確認した後、サイトカインの含有量をELISAによって決定した。免疫応答の初期段階で重要な役割を果たす炎症誘発性因子(TNF-α、IL-6)および抗炎症性因子(TGF-β1、IL-10)を測定した。結果は、図3A-3Dに示すとおりである。

【0044】

図3Aに示すように、24時間以内では、刺激時間が長くなるほど、誘導されるTNF-α含有量が高くなる。非刺激群(対照)と比較して、各単一成分によって誘導されたTNF-α含有量の最高倍率は、それぞれ、LT12刺激の24時間後の9.59倍の増加、BCP刺激の24時間後の1.93倍の増加、およびBG刺激の12時間後の7.96倍の増加であった。BG刺激の24時間後、TNF-αの誘導量の増加はなく、この濃度でのBGの最良の作用時間は12時間であると推測される。12時間の時点での誘導を比較すると、BGは、TNF-α分泌を誘導する能力が最も高く、次に、LT12が続き、BCPは、比較的弱い誘導能力を有する。BGを含む複合組み合わせの群は、12時間でTNF-αの誘導量が最も高かった。12時間の時点での誘導を比較すると、3つの成分すべてを含む複合組み合わせが最も多くの誘導量(14.81倍)を有し、相乗効果を示した。

【0045】

図3Bに示すように、IL-6は、TNF-αと同様の傾向を示し、刺激時間が長くなるにつれて両方のサイトカインの誘導量が増加した。非刺激群(対照)と比較して、各単一成分によって誘導されたIL-6含有量の最高倍率は、それぞれ、LT12刺激の24時間後の2.70倍の増加、BCP刺激の24時間後の7.53倍の増加、およびBG刺激の12時間後の5.56倍の増加であった。BG刺激の24時間後、IL-6の誘導量の増加はなく、この濃度でのBGの最良の作用時間は12時間であると推測される。24時間の時点での誘導を比較すると、BCPは、IL-6分泌を誘導する能力が最も高く、次に、BGが続き、LT12は、比較的弱い誘導能力を有する。LT12+BGの群を除く複合組み合わせの群は、24時間でIL-6の誘導量が最も高かった。他の群と比較して、3つの成分すべてを含む複合組み合わせは、8時間の刺激後に26.76倍のIL-6分泌の増加を誘導し、24時間の刺激後に最も多くの誘導量(72.92倍)を示し、有意な相乗効果を示した。

【0046】

図3Cの結果は、非刺激群(対照)と比較して、刺激時間が増加するにつれてTGF-β1分泌も増加したが、TGF-β1分泌の最高誘導倍率に短期間で到達したことを示す(4時間)。非刺激群(対照)と比較して、各単一成分によって誘導されたTGF-β1含有量の最高倍率は、それぞれ、LT12刺激の4時間後の35.26倍の増加、BCP刺激の4時間後の3.25倍の増加、およびBG刺激の24時間後の1.97倍の増加であった。24時間の時点での誘導を比較すると、LT12はTGF-β1分泌を誘導する能力が最も高く、次に、BCPが続き、BGは、比較的弱い誘導能力を有する。具体的には、単一成分であるLT12によって誘導されるTGF-β1の分泌量は、他の単一成分よりもはるかに高い。複合組み合わせによって誘導されるTGF-β1分泌の最高の誘導倍率もまた、4時間で達成された。他の複合組み合わせと比較して、3つの成分すべてを含む複合組み合わせは、最も多くのTGF-β1分泌(30.51倍)を誘導し、相乗効果を示した。

【0047】

IL-10に関して、図3Dは、非刺激群(対照)と比較して、刺激時間が増加してもIL-10の含有量が有意に増加しなかったことを示す。非刺激群(対照)と比較して、各単一成分によって誘導されたIL-10含有量の最高倍率は、それぞれ、LT12刺激の12時間後の1.11倍の増加、BCP刺激の12時間後の1.13倍の増加、およびBG刺激の12時間後の1.61倍の増加であった。複合組み合わせによって誘導されるIL-10分泌の最高の誘導倍率は、12時間で達成された。他の複合組み合わせと比較して、3つの成分すべてを含む複合組み合わせは、最も多くのIL-10分泌を誘導した(2.36倍)。一般的に言えば、特定の濃度での各単一成分およびそれらの組み合わせは、RAW264.7におけるIL-10分泌を有意に増加させない。

【0048】

結論として、本発明は、式LT12、BCP、およびBGの3つの主要成分に基づいて免疫調節のために設計された栄養補助食品用の配合物に関する。本発明において、3つの成分の組み合わせが、TNF-α、IL-6、およびTGF-β1の産生を効率的に誘導できることが予想外に見出され、これは、配合物の免疫調節効果を示す。3つの成分すべてが最良の免疫調節効果に不可欠であり、これは、3つの成分間の相乗効果または相加効果を示唆する。一般に、本発明の設計された配合物は、免疫調節を改善する可能性があり、病原体感染の予防および保護の効果を達成するための毎日および長期の消費に適している。
本発明には、次の態様が含まれる。
［項１］ ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)、β-グルカン(BG)およびウシ初乳粉末(BCP)を含む、免疫を調節するための組成物であって、前記3つの組み合わせが、免疫の調節において多機能相乗効果を提供する、組成物。
［項２］ 組成物が、腫瘍壊死因子アルファ(TNF-α)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-10(IL-10)およびトランスフォーミング増殖因子β1(TGF-β1)の発現を増強することができる、項１に記載の組成物。
［項３］ 組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、0.5%～20%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、0.5%～25%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および0.05%～10%のウシ初乳粉末(BCP)からなる、項１または２に記載の組成物。
［項４］ 組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、1%～10%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、1%～12%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および0.05%～5%のウシ初乳粉末(BCP)からなる、項３に記載の組成物。
［項５］ 組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、1%～5%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、1%～6%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および1%～4%のウシ初乳粉末(BCP)からなる、項４に記載の組成物。
［項６］ 組成物の総重量に対するパーセンテージにおいて、有効成分として、本質的に、2%～4%のラクトバチルス・パラカゼイ菌株LT12(LT12)、4%～5%のβ-グルカン(ベータグルカン、BG)、および1%～2%のウシ初乳粉末(BCP)からなる、項５に記載の組成物。
［項７］ 組成物が、マクロファージの生存率に影響を及ぼさない、項１に記載の組成物。
［項８］ β-グルカンが、β-1,3/1,6-グルカンである、項１に記載の組成物。
［項９］ 薬学的に許容される担体、ならびに腫瘍壊死因子α(TNF-α)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-10(IL-10)およびトランスフォーミング増殖因子β1(TGF-β1)の発現を増強することにおいて相乗効果を提供する比率で、ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)、β-グルカン(BG)、およびウシ初乳粉末(BCP)を含む、免疫を調節するための医薬組成物。
［項１０］ 食品的に許容される担体、ならびに腫瘍壊死因子α(TNF-α)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-10(IL-10)およびトランスフォーミング増殖因子β1(TGF-β1)の発現を増強することにおいて相乗効果を提供する比率で、ラクトバチルス・パラカゼイLT12(LT12)、β-グルカン(BG)、およびウシ初乳粉末(BCP)を含む、免疫を調節するための栄養補助食品。
［項１１］ 免疫を調節するための薬剤または栄養補助食品の製造における、項１～８のいずれか1つに記載の組成物の使用。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】