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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-27
(45)【発行日】2024-10-07
(54)【発明の名称】ＡＫＴ阻害剤の単位剤形組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/519 20060101AFI20240930BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240930BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240930BHJP
C07D 498/04 20060101ALN20240930BHJP
C07D 471/04 20060101ALN20240930BHJP
【ＦＩ】
A61K31/519
A61P35/00
A61P43/00 111
C07D498/04 111
C07D471/04 116
【請求項の数】
31
(21)【出願番号】P 2023504140
(86)(22)【出願日】2021-07-22
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-09
(86)【国際出願番号】 CN2021107810
(87)【国際公開番号】W WO2022017446
(87)【国際公開日】2022-01-27
【審査請求日】2023-01-19
(31)【優先権主張番号】202010709847.2
(32)【優先日】2020-07-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】521330404
【氏名又は名称】南京正大天晴制薬有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＪＩＮＧ ＣＨＩＡ ＴＡＩ ＴＩＡＮＱＩＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵ ＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】110001519
【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ミャオ、レイ
(72)【発明者】
【氏名】タン、イン
(72)【発明者】
【氏名】ティエン、ホー
(72)【発明者】
【氏名】マー、チャンヨウ
(72)【発明者】
【氏名】ウー、チエン
(72)【発明者】
【氏名】シュイ、タン
(72)【発明者】
【氏名】チュー、チュンシア
(72)【発明者】
【氏名】ティエン、チョウシャン
【審査官】新熊 忠信
(56)【参考文献】
【文献】特表２０２２－５１７８６６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０２３－５３５７０２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０２３－５３４５５２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００７－５１２３６４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０２１－５０８３１９（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１５－５１８７１５（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００９－５４１３３５（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５０８３８２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１６－５０００６５（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／４４
Ａ６１Ｐ ３５／００
Ａ６１Ｐ ４３／００
Ｃ０７Ｄ ４７１／００－４７１／２２
Ｃ０７Ｄ ４９８／００－４９８／２２
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む単位剤形形態の医薬組成物であって、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が５ｍｇ以上４００ｍｇ以下であり、式（Ｉ－０）で示される化合物は、下記の構造を有する、医薬組成物。【化1】
（式中、Ｒは、Ｃ１～Ｃ４アルキル基又はＣ３～Ｃ６シクロアルキル基から選ばれる。Ｘは、ＣＨ２又はＯから選ばれる。）
【請求項2】
式中、Ｒは、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロプロピル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基から選ばれる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
式中、Ｒは、メチル基、エチル基、イソプロピル基又はシクロプロピル基から選ばれる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項4】
式中、Ｒは、イソプロピル基又はシクロプロピル基から選ばれる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項5】
式中、Ｘは、ＣＨ２
である、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
式（Ｉ－０）で示される化合物は、下記の化合物から選ばれる、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。【化2】
【請求項7】
式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇ以上４００ｍｇ以下である、請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項8】
式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量の医薬組成物総質量に対する割合が、０．１％以上９９．９％以下である、請求項１～７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量の医薬組成物総質量に対する割合が、５％以上９０％以下である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項10】
式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量の医薬組成物総質量に対する割合が、２５％以上６５％以下である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項11】
式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む単位剤形形態の医薬組成物であって、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が５以上４００ｍｇ以下であり、式（Ｉ）で示される化合物は下記の構造を有する、医薬組成物。【化3】
（式中、Ｒは、Ｃ１～Ｃ４アルキル基又はＣ３～Ｃ６シクロアルキル基から選ばれる。Ｘは、ＣＨ２又はＯから選ばれる。）
【請求項12】
式中、Ｒは、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロプロピル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基から選ばれる、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
式中、Ｒは、メチル基、エチル基、イソプロピル基又はシクロプロピル基から選ばれる、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項14】
式中、Ｒは、イソプロピル基又はシクロプロピル基から選ばれる、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項15】
式中、Ｘは、ＣＨ２である、請求項１１～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項16】
式（Ｉ）で示される化合物は、下記の化合物から選ばれる、請求項１１～１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。【化4】
【請求項17】
式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇ以上４００ｍｇ以下である、請求項１１～１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項18】
式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量の医薬組成物総質量に対する割合が、０．１％以上９９．９％以下である、請求項１１～１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項19】
式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量の医薬組成物総質量に対する割合が、５％以上９０％以下である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項20】
式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量の医薬組成物総質量に対する割合が、２５％以上６５％以下である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項21】
１つ又は複数の薬学的に許容可能な担体をさらに含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項22】
前記単位剤形形態の医薬組成物は、経口投与に適する医薬製剤である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項23】
薬物として用いられる、請求項１～２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項24】
ＡＫＴプロテインキナーゼにより媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための、請求項１～２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項25】
ＡＫＴプロテインキナーゼにより媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための薬物の調製に使用するための、請求項１～２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項26】
前記ＡＫＴプロテインキナーゼにより媒介された疾患又は病状は、がんである、請求項２４又は２５に記載の医薬組成物。
【請求項27】
前記がんは、乳がん、前立腺がん又は卵巣がんである、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項28】
前記がんは、前立腺がんである、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項29】
必要がある個体への前記医薬組成物の投与用量は、式（Ｉ－０）で示される化合物又は式（Ｉ）で示される化合物で、０．００１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上１００ｍｇ／ｋｇ体重／日以下である、請求項２３～２８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項30】
必要がある個体への前記医薬組成物の投与用量は、式（Ｉ－０）で示される化合物又は式（Ｉ）で示される化合物で、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上５０ｍｇ／ｋｇ体重／日以下である、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項31】
必要がある個体への前記医薬組成物の投与用量は、式（Ｉ－０）で示される化合物又は式（Ｉ）で示される化合物で、１０ｍｇ／ｋｇ体重／日以上５０ｍｇ／ｋｇ体重／日以下である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、２０２０年０７月２２日に中華人民共和国知的財産局に出願された出願番号２０２０１０７０９８４７．２であり、発明名称「ＡＫＴ阻害剤の単位剤形組成物」である中国特許出願に基づく優先権を主張する。当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。
【0002】
本発明は、医薬品化学の分野に属し、具体的に、ＡＫＴ阻害剤の単位剤形組成物、その調製方法及び医薬的用途に関する。
【背景技術】
【0003】
ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、その下流にあるタンパク質ＡＫＴ（プロテインキナーゼＢ、ＰＫＢとも呼ばれる）及び哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）で構成されるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路は、細胞内の極めて重要なシグナル伝達経路として、細胞の成長、生存、増殖、アポトーシス、血管新生、オートファジーなどの過程において極めて重要な生物学的機能を発揮している。当該経路の異常な活性化は、がん、神経障害、自己免疫疾患及び血液リンパ系疾患を含む一連の疾患を引き起こす。
【0004】
ＡＫＴは、セリン／トレオニンキナーゼであり、その下流にある多くのエフェクターによって細胞の生存、成長、代謝、増殖、移動及び分化に影響を与える。５０％を超えるヒト腫瘍、特に前立腺がん、膵がん、膀胱がん、卵巣がん、乳がんにおいて、ＡＫＴの過剰な活性化が起きている。ＡＫＴの過剰な活性化は、腫瘍の形成、転移及び薬剤耐性をもたらす。
【0005】
ＡＫＴには、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３の３つのサブタイプがある。典型的なプロテインキナーゼとして、各サブタイプは、いずれもアミノ末端のＰＨドメイン（Ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｄｏｍａｉｎ）、中間のＡＴＰ結合キナーゼドメイン及びカルボキシ末端の調節ドメインで構成されている。この３つのサブタイプでは約８０％のアミノ酸配列が相同であり、ただＰＨドメイン及びキナーゼドメインの接続領域では大きな違いがある。
【0006】
現在、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路に対する標的薬物は、主にＰＩ３Ｋ阻害剤及びｍＴＯＲ阻害剤である。しかしながら、ＡＫＴは、当該シグナル伝達経路のコアにある。ＡＫＴの活性を阻害することで、上流のＰＩ３Ｋへの阻害による激しい副作用を避けしつつ、下流のｍＴＯＲへの阻害によるネガティブフィードバック機構の有効性への影響を避けることもできる。従って、効果的かつ選択的なＡＫＴ阻害剤を見つけることは、現在の腫瘍標的薬の開発にとって重要な方向である。ＣＮ１０１６３１７７８Ａには、シクロペンタ［Ｄ］ピリミジン誘導体が、ＣＮ１０１５７８２７３Ａには水酸基化及びメトキシ化されたシクロペンタ［Ｄ］ピリミジン誘導体が、ＣＮ１０１５１１８４２Ａにはジヒドロフロピリミジン誘導体が、ＣＮ１０１９７０４１５Ａには５Ｈ－シクロペンタ［d］ピリミジン誘導体がそれぞれ開示され、これらの化合物は１０μＭ未満のＡＫＴ１阻害ＩＣ５０を有する。
【0007】
従って、新たなＡＫＴ阻害剤を開発し、並びに、それを疾患の治療に用いることは、依然として必要である。
【発明の概要】
【0008】
第１態様において、本発明は、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む単位剤形形態の医薬組成物であって、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が５ｍｇ以上４００ｍｇ以下である、医薬組成物を提供し、
、
式中、Ｒは、Ｃ１～Ｃ４アルキル基又はＣ３～Ｃ６シクロアルキル基から選ばれ、Ｘは、ＣＨ２又はＯから選ばれる。
【化1】
式中、Ｒは、Ｃ１～Ｃ４アルキル基又はＣ３～Ｃ６シクロアルキル基から選ばれ、Ｘは、ＣＨ２又はＯから選ばれる。
【0009】
いくつかの実施形態において、Ｒは、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロプロピル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基から選ばれる。
【0010】
いくつかの典型的な実施形態において、Ｒは、メチル基、エチル基、イソプロピル基又はシクロプロピル基から選ばれる。
【0011】
いくつかのより典型的な実施形態において、Ｒは、イソプロピル基又はシクロプロピル基から選ばれる。
【0012】
いくつかの実施形態において、Ｘは、ＣＨ２から選ばれる。
【0013】
いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｏから選ばれる。
【0014】
いくつかの実施態様において、式（Ｉ－０）で示される化合物は、下記の化合物から選ばれる：
。
【化2】
【0015】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇ以上４００ｍｇ以下である。
【0016】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇ以上２００ｍｇ以下である。
【0017】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇ以上１５０ｍｇ以下である。
【0018】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が２５ｍｇ以上１５０ｍｇ以下である。
【0019】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が２５ｍｇ以上１００ｍｇ以下である。
【0020】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇである。
【0021】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が２５ｍｇである。
【0022】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が５０ｍｇである。
【0023】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が７５ｍｇである。
【0024】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１００ｍｇである。
【0025】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１５０ｍｇである。
【0026】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が２００ｍｇである。
【0027】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が４００ｍｇである。
【0028】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量の医薬組成物総質量に対する割合は、０．１～９９．９％、好ましくは５～９０％、より好ましくは２５～６５％を占める。
【0029】
本発明の別の態様において、本発明は、式（Ｉ）で示される化合物又は又はその薬学的に許容可能な塩を含む単位剤形の医薬組成物であって、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が５ｍｇ以上４００ｍｇ以下である、医薬組成物を提供し、
、
式中、Ｒは、Ｃ１～Ｃ４アルキル基又はＣ３～Ｃ６シクロアルキル基から選ばれ、Ｘは、ＣＨ２又はＯから選ばれる。
【化3】
式中、Ｒは、Ｃ１～Ｃ４アルキル基又はＣ３～Ｃ６シクロアルキル基から選ばれ、Ｘは、ＣＨ２又はＯから選ばれる。
【0030】
いくつかの実施形態において、Ｒは、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロプロピル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基から選ばれる。
【0031】
いくつかの典型的な実施形態において、Ｒは、メチル基、エチル基、イソプロピル基又はシクロプロピル基から選ばれる。
【0032】
いくつかのより典型的な実施形態において、Ｒは、イソプロピル基又はシクロプロピル基から選ばれる。
【0033】
いくつかの実施形態において、Ｘは、ＣＨ２から選ばれる。
【0034】
いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｏから選ばれる。
【0035】
いくつかの実施態様において、式（Ｉ）で示される化合物は、下記の化合物から選ばれる：
。
【化4】
【0036】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）で示される化合物は、下記の化合物である：
。
【化5】
【0037】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）で示される化合物は、下記の化合物である：
。
【化6】
【0038】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）で示される化合物は、下記の化合物である：
。
【化7】
【0039】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇ以上４００ｍｇ以下である。
【0040】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇ以上２００ｍｇ以下であるである。
【0041】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇ以上１５０ｍｇ以下である。
【0042】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が２５ｍｇ以上１５０ｍｇ以下である。
【0043】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が２５ｍｇ以上１００ｍｇ以下である。
【0044】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１０ｍｇである。
【0045】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が２５ｍｇである。
【0046】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が５０ｍｇである。
【0047】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が７５ｍｇである。
【0048】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１００ｍｇである。
【0049】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が１５０ｍｇである。
【0050】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が２００ｍｇである。
【0051】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物で、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量が４００ｍｇである。
【0052】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基で、質量の医薬組成物総質量に対する割合が、０．１％以上９９．９％、好ましくは５％以上９０％以下、より好ましくは２５％以上６５％以下を占める。
【0053】
いくつかの実施態様において、前記単位剤形的医薬組成物は、一種又は複数種の薬学的に許容可能な担体、例えば、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤などをさらに含む。前記薬学的に許容可能な担体の質量パーセント含有量は、０．１％以上９９．９％以下である。好ましくは、１０％以上９５％以下である。より好ましくは、３５％以上７５％以下である。
【0054】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物は、経口投与に適する医薬製剤である。
【0055】
いくつかの実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物は、液体製剤又は固体製剤である。
【0056】
いくつかの典型的な実施形態において、前記単位剤形形態の医薬組成物は、経口投与に適する固体製剤であり、好ましくは、錠剤又はカプセルである。
【0057】
カプセルについて、薬学的に許容可能な担体は、好ましくは、充填材及び潤滑剤から選ばれる。充填材の具体例として、例えば、リン酸水素カルシウム二水和物が挙げられる。潤滑剤の具体例として、例えば、ベヘン酸グリセリルが挙げられる。
【0058】
別の形態において、本発明は、薬物として使用され、本発明に係る式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む単位剤形の医薬組成物をさらに提供する。
【0059】
別の形態において、本発明は、薬物として使用され、式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む単位剤形の医薬組成物をさらに提供する。
【0060】
別の形態において、本発明は、ＡＫＴタンパク質キナーゼにより媒介された病患又は病患状態を予防及び／又は治療する医薬品の調製における、本発明に係る式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩，又は式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩含む単位剤形の医薬組成物の使用をさらに提供する。
【0061】
別の形態において、本発明は、本発明に係る式（Ｉ－０）で示される化合物又は又はその薬学的に許容可能な塩，又は式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩含む単位剤形の医薬組成物の、ＡＫＴタンパク質キナーゼにより媒介された病患又は病患状態を予防及び／又は治療する用途をさらに提供する。
【0062】
別の形態において、本発明は、ＡＫＴタンパク質キナーゼにより媒介された病患又は病患状態を予防及び／又は治療する方法であって、必要がある個体に本発明に係る式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩，又は式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む単位剤形の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法をさらに提供する。
【0063】
別の形態において、本発明は、ＡＫＴタンパク質キナーゼにより媒介された病患又は病患状態を予防及び／又は治療するための、本発明に係る式（Ｉ－０）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩，又は式（Ｉ）で示される化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む単位剤形の医薬組成物をさらに提供する。
【0064】
いくつかの実施形態において、前記ＡＫＴタンパク質キナーゼにより媒介された病患又は病患状態は、がんである。
【0065】
いくつかの典型的な実施形態において、前記がんは、乳がん、前立腺がん、又は卵巣がんである。
【0066】
いくつかの典型的な実施形態において、前記がんは、前立腺がんである。
【0067】
「関連の定義」
特に断らない限り、明細書及び特許請求の範囲で使用する以下の用語は、下記の意味を有する。
本発明における（Ｉ－０）で示される化合物は、互変異性体の形態を含む。互変異性体の形態は、一つの単結合と、それと隣接する二重結合との交換、及びそれに伴う一つのプロトンの転移から由来する。例示的に、式（ｉ）で示される化合物を例として、特定条件で、式（ｉｉ）で示される化合物に変化されると、式（ｉｉ）で示される化合物は、式（ｉ）で示される化合物の互変異性体である。相応的に、式（Ｉ－０）で示される化合物における他の化合物の互変異性体も本発明の保護範囲に入る。
。
特に断らない限り、明細書及び特許請求の範囲で使用する以下の用語は、下記の意味を有する。
本発明における（Ｉ－０）で示される化合物は、互変異性体の形態を含む。互変異性体の形態は、一つの単結合と、それと隣接する二重結合との交換、及びそれに伴う一つのプロトンの転移から由来する。例示的に、式（ｉ）で示される化合物を例として、特定条件で、式（ｉｉ）で示される化合物に変化されると、式（ｉｉ）で示される化合物は、式（ｉ）で示される化合物の互変異性体である。相応的に、式（Ｉ－０）で示される化合物における他の化合物の互変異性体も本発明の保護範囲に入る。
【化8】
【0068】
本発明に係る化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、これらの水和物を含む。具体的には、化合物の水和物、及び、化合物の薬学的に許容可能な塩の水和物を含む。
【0069】
本開示における数値範囲は、所定の範囲内の各整数を指す。例えば、「Ｃ１～Ｃ４」とは、当該基は１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子又は４個の炭素原子を有することを指し、「Ｃ３～Ｃ６」とは、当該基は３個の炭素原子、４個の炭素原子、５個の炭素原子又は６個の炭素原子を有することを指す。
【0070】
「アルキル基」という用語は、直鎖の又は分枝鎖の飽和炭化水素基を含む飽和脂肪族炭化水素基を指し、前記炭化水素基は、示された炭素原子数を有する。例えば、「Ｃ１～Ｃ４アルキル基」という用語は、Ｃ１アルキル基、Ｃ２アルキル基、Ｃ３アルキル基又はＣ４アルキル基を含み、具体例として、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基を含むが、これらに限定されない。
【0071】
「シクロアルキル基」という用語は、ヘテロ原子がなく、二重結合がない単環式飽和炭化水素系を指す。「Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル基」という用語は、具体例として、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基を含むが、これらに限定されない。
【0072】
「単位剤形形態」という用語は、各々単独で存在し、比較的に独立して薬用カートリッジ又は薬物包装に存在する製品の具体的な形態を指す。単位剤形において、一定量の有効成分を含む。例示的に、本発明に係る「単位剤形」として、経口投与用の固体製剤の一枚又は一粒と理解される。一般的に使用される固体製剤に応じて、前記一枚又は一粒の薬物の重量は、当分野に適用するいかなる重量、例えば、１００ｍｇ以上１５００ｍｇ以下などを採用できる。別のいくつかの例示において、本発明に係る「単位剤形」として、経口投与用の液体製剤、例えば、経口溶液の一ビン又は液体を含むカプセルの一粒と理解される。一般的に使用される経口溶液又はカプセルに応じて、前記一ビン又は一粒における液体の体積は、当分野に適用するいかなる体積、例えば、２０μＬ以上１０ｍｌ以下などである。
【0073】
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、特定の化合物の遊離の酸と塩基の生物学の有効性を保ちながら、生物学上の不良作用がない塩を指す。例えば、酸（有機酸と無機酸を含む）付加塩、又は塩基（有機塩基と無機塩基を含む）付加塩である。
【0074】
本発明に係る薬学的に許容可能な塩は、酸基又は塩基を含有している親化合物から通常の化学的方法で合成することができる。一般的に、このような塩は、水又は有機溶媒又は両者の混合物において、それらの化合物の遊離酸又は遊離塩基の形態と化学量論的に適切な塩基又は酸を反応させて調製する。
【0075】
「薬学的に許容可能な担体」という用語は、生体に顕著な刺激がなく、しかも当該活性化合物の生物活性及び性能を損なわないものを指す。担体は、中国国家食品医薬品監督管理局に許可されたいずれのヒト又は動物に用いられる希釈剤、崩壊剤、粘着剤、流動化剤、濡れ剤を含むが、これらに限定されない。
【0076】
特に断らない限り、本発明に用いられる略称の意味は下記である。
Ｍ：ｍｏｌ／Ｌ、ｍＭ：ｍｍｏｌ／Ｌ、ｎＭ：ｎｍｏｌ／Ｌ、Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ＤＣＭ：ジクロロメタン、ＤＥＡ：ジエチルアミン、ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＨＡＴＵ：（２－（７－アザベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート）、ＲＴ：保持時間、ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー、ｈ：時間、ｍｉｎ：分間、ＴＫ：チロシンキナーゼ、ＳＥＢ：蛍光シグナルエンハンサー、ＨＴＲＦ：均一時間分解蛍光、ＤＴＴ：ジチオトレイトール、ＱＤ：１日あたり１回、ｐｏ：経口投与、ＴＶ：腫瘍体積、ＰＧ：１，２－プロパンジオール、Ｔ／Ｃ：相対腫瘍増殖率、ＴＧＩ：腫瘍増殖抑制率。
Ｍ：ｍｏｌ／Ｌ、ｍＭ：ｍｍｏｌ／Ｌ、ｎＭ：ｎｍｏｌ／Ｌ、Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ＤＣＭ：ジクロロメタン、ＤＥＡ：ジエチルアミン、ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＨＡＴＵ：（２－（７－アザベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート）、ＲＴ：保持時間、ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー、ｈ：時間、ｍｉｎ：分間、ＴＫ：チロシンキナーゼ、ＳＥＢ：蛍光シグナルエンハンサー、ＨＴＲＦ：均一時間分解蛍光、ＤＴＴ：ジチオトレイトール、ＱＤ：１日あたり１回、ｐｏ：経口投与、ＴＶ：腫瘍体積、ＰＧ：１，２－プロパンジオール、Ｔ／Ｃ：相対腫瘍増殖率、ＴＧＩ：腫瘍増殖抑制率。
【図面の簡単な説明】
【0077】
本発明の実施例及び従来技術の技術案をより明確的に説明するために、以下、実施例及び従来技術に使用される必要な図面を簡単に解釈する。自明的に、以下に記載の図目は、ただ本発明のいくつかの実施例に過ぎず、当業者であれば、これら図面に基づき、他の図面を得ることもできる。
【発明を実施するための形態】
【0078】
以下、具体的に本発明の医薬組成物、その調製方法及び医薬用途（化合物の調製方法を含む）を説明する。しかしながら、本発明は、こられ具体な説明に一切限定されない。
【0079】
調製実施例
調製例１（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
ａ）２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル
窒素雰囲気で、２０℃でナトリウムメトキシドのメタノール溶液（３０ｗｔ％、５０．３２ｇ）をメタノール（９００ｍＬ）に加えた後、７０℃に昇温し、マロン酸ジメチル（４６１．１２ｇ）及びクロトン酸エチル（３４９．４６ｇ）を均一に混合し、上記ナトリウムメトキシドのメタノール溶液に滴下し、７０℃で３時間反応させた。完全に反応させた後、減圧蒸留により溶媒を除去して、酢酸エチル（１Ｌ）を加え、４Ｍの塩酸でｐＨ７－８に調整し、そして水（５００ｍＬ）を加え、分液して、有機相を減圧蒸留により除去し、黄色の液体７７７．６８ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）３．６７（ｓ，３Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４５－２．５８（ｍ，２Ｈ），２．２３－２．２９（ｍ，１Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
調製例１（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
【化9】
ａ）２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル
窒素雰囲気で、２０℃でナトリウムメトキシドのメタノール溶液（３０ｗｔ％、５０．３２ｇ）をメタノール（９００ｍＬ）に加えた後、７０℃に昇温し、マロン酸ジメチル（４６１．１２ｇ）及びクロトン酸エチル（３４９．４６ｇ）を均一に混合し、上記ナトリウムメトキシドのメタノール溶液に滴下し、７０℃で３時間反応させた。完全に反応させた後、減圧蒸留により溶媒を除去して、酢酸エチル（１Ｌ）を加え、４Ｍの塩酸でｐＨ７－８に調整し、そして水（５００ｍＬ）を加え、分液して、有機相を減圧蒸留により除去し、黄色の液体７７７．６８ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）３．６７（ｓ，３Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４５－２．５８（ｍ，２Ｈ），２．２３－２．２９（ｍ，１Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0080】
ｂ）（Ｒ）－２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル
２５℃でリン酸水素二ナトリウム（４．５ｇ）を脱イオン水１．５Ｌに溶解し、２Ｎの塩酸でｐＨ７．０５に調整し、２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル（１５０．４６ｇ）及びリパーゼ（カンジダ・ルゴサ、６日間にかけて４０ｇを加えた）を入れ、２Ｎの水酸化ナトリウムでｐＨ７．０－７．６に調整し、３５℃で６日間反応させ、キラリティー測定ｅｅ％＞９８％、キラリティー測定条件は、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ、４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、ｎ－ヘキサン：エタノール＝９：１（体積比）である。反応液を１０℃に冷却し、３Ｍの塩酸でｐＨ３－４に調整し、酢酸エチル５００ｍＬを加え、吸引濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル（６００ｍＬ）で洗浄して分液し、飽和重曹水（１００ｍＬ）で洗浄して分液し、有機相を濃縮して、淡黄色の液体２６．８９ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）３．７４（ｓ，６Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），２．７１－２．７９（ｍ，１Ｈ），２．５４（ｄｄ，Ｊ＝１５．６、４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３２（ｄｄ，Ｊ＝１６．０、８．４Ｈｚ，１Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
２５℃でリン酸水素二ナトリウム（４．５ｇ）を脱イオン水１．５Ｌに溶解し、２Ｎの塩酸でｐＨ７．０５に調整し、２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル（１５０．４６ｇ）及びリパーゼ（カンジダ・ルゴサ、６日間にかけて４０ｇを加えた）を入れ、２Ｎの水酸化ナトリウムでｐＨ７．０－７．６に調整し、３５℃で６日間反応させ、キラリティー測定ｅｅ％＞９８％、キラリティー測定条件は、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ、４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、ｎ－ヘキサン：エタノール＝９：１（体積比）である。反応液を１０℃に冷却し、３Ｍの塩酸でｐＨ３－４に調整し、酢酸エチル５００ｍＬを加え、吸引濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル（６００ｍＬ）で洗浄して分液し、飽和重曹水（１００ｍＬ）で洗浄して分液し、有機相を濃縮して、淡黄色の液体２６．８９ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）３．７４（ｓ，６Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），２．７１－２．７９（ｍ，１Ｈ），２．５４（ｄｄ，Ｊ＝１５．６、４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３２（ｄｄ，Ｊ＝１６．０、８．４Ｈｚ，１Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0081】
ｃ）（Ｒ）－３－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－５－イル）酪酸メチル
窒素雰囲気で、２０℃で酢酸ホルムアミジン（１１．３３ｇ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（３０ｗｔ％，５５．６２ｇ）を滴下し、０℃で６０ｍｉｎ反応させて、（Ｒ）－２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル（２４．０７ｇ）のメタノール（６０ｍＬ）溶液を滴下し、２０℃に自然昇温して、１０時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を０℃に冷却し、３Ｎの塩酸を加えてｐＨ５－６になるように調整し、減圧蒸留により溶媒を除去し、その後０℃に冷却し、３Ｎの塩酸を加えてｐＨ３になるように調整し、固体が析出し、吸引濾過で固体を集め、フィルターケーキを氷水（１００ｍＬ）で洗浄した後、真空乾燥させ、白色の固体１８．７９ｇを得て、そのまま次のステップに用いた。
窒素雰囲気で、２０℃で酢酸ホルムアミジン（１１．３３ｇ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（３０ｗｔ％，５５．６２ｇ）を滴下し、０℃で６０ｍｉｎ反応させて、（Ｒ）－２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル（２４．０７ｇ）のメタノール（６０ｍＬ）溶液を滴下し、２０℃に自然昇温して、１０時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を０℃に冷却し、３Ｎの塩酸を加えてｐＨ５－６になるように調整し、減圧蒸留により溶媒を除去し、その後０℃に冷却し、３Ｎの塩酸を加えてｐＨ３になるように調整し、固体が析出し、吸引濾過で固体を集め、フィルターケーキを氷水（１００ｍＬ）で洗浄した後、真空乾燥させ、白色の固体１８．７９ｇを得て、そのまま次のステップに用いた。
【0082】
ｄ）（Ｒ）－３－（４，６－ジクロロピリミジン－５－イル）酪酸メチル
窒素雰囲気で、２２℃で（Ｒ）－３－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－５－イル）酪酸メチル（１４．６３ｇ）をアセトニトリル（７０ｍＬ）に分散し、塩化ホスホリル（２６．４２ｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（１２．５１ｇ）を順に滴下し、反応系は激しく発熱し、そして６０℃に昇温し、固体が徐々に完全に溶けていき、反応を１８時間続けた。完全に反応させた後、反応液を０℃に冷却し、酢酸エチル１００ｍＬを加え、飽和重曹水でｐＨ７－８に調整し、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を減圧蒸留により除去し、黄色の固体１３．８９ｇを得、そのまま次のステップに用いた。
窒素雰囲気で、２２℃で（Ｒ）－３－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－５－イル）酪酸メチル（１４．６３ｇ）をアセトニトリル（７０ｍＬ）に分散し、塩化ホスホリル（２６．４２ｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（１２．５１ｇ）を順に滴下し、反応系は激しく発熱し、そして６０℃に昇温し、固体が徐々に完全に溶けていき、反応を１８時間続けた。完全に反応させた後、反応液を０℃に冷却し、酢酸エチル１００ｍＬを加え、飽和重曹水でｐＨ７－８に調整し、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を減圧蒸留により除去し、黄色の固体１３．８９ｇを得、そのまま次のステップに用いた。
【0083】
ｅ）（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン
２０℃で（Ｒ）－３－（４，６－ジクロロピリミジン－５－イル）酪酸メチル（１３．８９ｇ）及びアンモニア水（２５－２８ｗｔ％、７０ｍＬ）を１００ｍＬのオートクレーブに入れ、５０℃に昇温し、１８時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を０℃に冷却し、吸引濾過して、フィルターケーキを（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１（体積比））３０ｍＬでパルプ化し、淡黄色の固体７．３２ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１９８（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）１．３０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），２．６５－２．６９（ｍ，１Ｈ），２．８６－２．９２（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．５４（ｍ，１Ｈ），８．６４（ｓ，１Ｈ），１０．１０（ｓ，１Ｈ）。
２０℃で（Ｒ）－３－（４，６－ジクロロピリミジン－５－イル）酪酸メチル（１３．８９ｇ）及びアンモニア水（２５－２８ｗｔ％、７０ｍＬ）を１００ｍＬのオートクレーブに入れ、５０℃に昇温し、１８時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を０℃に冷却し、吸引濾過して、フィルターケーキを（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１（体積比））３０ｍＬでパルプ化し、淡黄色の固体７．３２ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１９８（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）１．３０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），２．６５－２．６９（ｍ，１Ｈ），２．８６－２．９２（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．５４（ｍ，１Ｈ），８．６４（ｓ，１Ｈ），１０．１０（ｓ，１Ｈ）。
【0084】
実施例１：（Ｒ）－４－（（１Ｓ，６Ｒ）－５－（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（イソプロピルアミノ）プロピオニル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
反応条件：ａ）２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｎ－メチルピロリドン、４－ジメチルアミノピリジン、ｂ）塩化水素／１，４－ジオキサン（４．０Ｍ）、ジクロロメタン、ｃ）（Ｓ）－３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（イソプロピル）アミノ）－２－（４－クロロフェニル）プロピオン酸、２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、４－ジメチルアミノピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ｄ）トリフルオロ酢酸、ジクロロメタン。
【化10】
反応条件：ａ）２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｎ－メチルピロリドン、４－ジメチルアミノピリジン、ｂ）塩化水素／１，４－ジオキサン（４．０Ｍ）、ジクロロメタン、ｃ）（Ｓ）－３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（イソプロピル）アミノ）－２－（４－クロロフェニル）プロピオン酸、２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、４－ジメチルアミノピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ｄ）トリフルオロ酢酸、ジクロロメタン。
【0085】
ａ）５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
窒素雰囲気で、２２℃で（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（０．２１ｇ）、２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．３１ｇ）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．３９ｇ）をＮ－メチルピロリドン（５ｍＬ）に溶解し、そして、１４０℃に加熱し、３時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を２０℃に冷却して氷水２０ｍＬに注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、飽和食塩水（１０ｍＬ×３）で洗浄し、溶媒を減圧蒸留により除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１～１：１）により分離し、淡黄色の液体０．２８ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３６０（Ｍ＋Ｈ）。
窒素雰囲気で、２２℃で（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（０．２１ｇ）、２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．３１ｇ）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．３９ｇ）をＮ－メチルピロリドン（５ｍＬ）に溶解し、そして、１４０℃に加熱し、３時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を２０℃に冷却して氷水２０ｍＬに注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、飽和食塩水（１０ｍＬ×３）で洗浄し、溶媒を減圧蒸留により除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１～１：１）により分離し、淡黄色の液体０．２８ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３６０（Ｍ＋Ｈ）。
【0086】
ｂ）（５Ｒ）－４－（２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリジン［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩
２０℃で５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．２８ｇ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、塩化水素／１，４－ジオキサン（４．０ｍＬ）を加えて１時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を減圧で蒸留し溶媒を除去し、黄色の固体０．２３ｇを得て、そのまま次のステップに用いた。
２０℃で５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．２８ｇ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、塩化水素／１，４－ジオキサン（４．０ｍＬ）を加えて１時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を減圧で蒸留し溶媒を除去し、黄色の固体０．２３ｇを得て、そのまま次のステップに用いた。
【0087】
ｃ）（２Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－３－オキソプロピル）（イソプロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル
窒素雰囲気で、２０℃で（５Ｒ）－４－（２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの塩酸塩（０．２０ｇ）及び（Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（イソプロピル）アミノ）－２－（４－クロロフェニル）－プロピオン酸（０．２２ｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（０．５９ｇ）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．４８ｇ）を加え、２５℃で４時間反応させた。完全に反応させた後、反応液に水２０ｍｌを加え、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を飽和食塩水（１０ｍＬ×２）で洗浄し、有機相を減圧蒸留により除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５０：１）で分離し、黄色の固体０．１８ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５８３（Ｍ＋Ｈ）。
窒素雰囲気で、２０℃で（５Ｒ）－４－（２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの塩酸塩（０．２０ｇ）及び（Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（イソプロピル）アミノ）－２－（４－クロロフェニル）－プロピオン酸（０．２２ｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（０．５９ｇ）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．４８ｇ）を加え、２５℃で４時間反応させた。完全に反応させた後、反応液に水２０ｍｌを加え、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を飽和食塩水（１０ｍＬ×２）で洗浄し、有機相を減圧蒸留により除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５０：１）で分離し、黄色の固体０．１８ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５８３（Ｍ＋Ｈ）。
【0088】
ｄ）（Ｒ）－４－（（１Ｓ，６Ｒ）－５－（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（イソプロピルアミノ）プロピオニル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン
２０℃で（２Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－３－オキソプロピル）（イソプロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．１８ｇ）を、ジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．８６ｍＬ）を加え、３時間反応させた。完全に反応させた後、反応液にジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、０℃で２Ｍの水酸化ナトリウム溶液を滴下し、ｐＨ１２になるように調整し、分液して、有機相を飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、有機相を減圧蒸留により除去し、黄色の固体０．１０ｇを得た。高速分取液体クロマトグラフィーで光学分割し、異性体１（３ｍｇ）及び異性体２（１２ｍｇ）を得た。高速分取液体クロマトグラフィーの条件：カラム：Ａｇｌｉｅｎｔ ５μｍ ｐｒｅｐ－Ｃ１８５０×２１．２ｍｍ、移動相Ａ：水（０．１％のアンモニア水を含む（２５－２８ｗｔ％））、移動相Ｂ：メタノール。勾配：時間０－１０ｍｉｎ、Ｂ相６０－７０％（体積比）。
２０℃で（２Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－３－オキソプロピル）（イソプロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．１８ｇ）を、ジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．８６ｍＬ）を加え、３時間反応させた。完全に反応させた後、反応液にジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、０℃で２Ｍの水酸化ナトリウム溶液を滴下し、ｐＨ１２になるように調整し、分液して、有機相を飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、有機相を減圧蒸留により除去し、黄色の固体０．１０ｇを得た。高速分取液体クロマトグラフィーで光学分割し、異性体１（３ｍｇ）及び異性体２（１２ｍｇ）を得た。高速分取液体クロマトグラフィーの条件：カラム：Ａｇｌｉｅｎｔ ５μｍ ｐｒｅｐ－Ｃ１８５０×２１．２ｍｍ、移動相Ａ：水（０．１％のアンモニア水を含む（２５－２８ｗｔ％））、移動相Ｂ：メタノール。勾配：時間０－１０ｍｉｎ、Ｂ相６０－７０％（体積比）。
【0089】
異性体１：ＲＴ１＝５．３ｍｉｎ、ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４８３（Ｍ＋Ｈ）。
【0090】
異性体２：ＲＴ＝５．９ｍｉｎ、ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４８３（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．２７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．２７－７．３０（ｍ，４Ｈ），４．２３－４．２９（ｍ，１Ｈ），３．９０－３．９５（ｍ，１Ｈ），３．８１－３．８５（ｍ，１Ｈ），３．６９－３．７２（ｍ，１Ｈ），３．４４－３．５９（ｍ，１Ｈ），３．２０－３．３８（ｍ，３Ｈ），３．０１－３．０５（ｍ，１Ｈ），２．７０－２．８５（ｍ，３Ｈ），２．４７－２．５７（ｍ，１Ｈ），２．２１－２．２５（ｍ，１Ｈ），１．２５－１．２８（ｍ，３Ｈ），１．０３－１．１１（ｍ，６Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，２Ｈ）。
【0091】
単結晶回折に基づき、構造を測定し、異性体２は、本実施例に表題された化合物であると確認される。
単結晶の調製：異性体２ ３０．０ｍｇ、イソプロパノール２．０ｍＬを５ｍＬのスクリュートップガラス瓶に入れ、５ｍｉｎ撹拌し、固体が完全に溶解した。シュウ酸二水和物３．９ｍｇを秤量し、前記ガラス瓶に入れ、ガラス瓶において徐々に白い固体が析出し、室温で３時間撹拌し、ガラス瓶に大量の白い固体が析出した。ガラス瓶にメタノール１．０ｍＬを加え、白い固体が徐々に消え、溶液が透明になり、続いて１時間撹拌した。溶液は、０．２２μｍの微多孔フィルター膜を通過し、３ｍＬのスクリュートップガラス瓶に濾過し、ガラス瓶の口をラップフィルムで覆った。針で瓶の口に８つの穴を開けて、室温で７日間放置し、異性体２化合物のシュウ酸塩の単結晶を得た。
単結晶の調製：異性体２ ３０．０ｍｇ、イソプロパノール２．０ｍＬを５ｍＬのスクリュートップガラス瓶に入れ、５ｍｉｎ撹拌し、固体が完全に溶解した。シュウ酸二水和物３．９ｍｇを秤量し、前記ガラス瓶に入れ、ガラス瓶において徐々に白い固体が析出し、室温で３時間撹拌し、ガラス瓶に大量の白い固体が析出した。ガラス瓶にメタノール１．０ｍＬを加え、白い固体が徐々に消え、溶液が透明になり、続いて１時間撹拌した。溶液は、０．２２μｍの微多孔フィルター膜を通過し、３ｍＬのスクリュートップガラス瓶に濾過し、ガラス瓶の口をラップフィルムで覆った。針で瓶の口に８つの穴を開けて、室温で７日間放置し、異性体２化合物のシュウ酸塩の単結晶を得た。
【0092】
単結晶回折試験：
単結晶Ｘ線回折装置：ＢＲＵＫＥＲ Ｄ８ ＶＥＮＴＵＲＥ ＰＨＯＴＯＮ ＩＩ
波長：ＧａＫα（λ＝１．３４１３９Å）
試験温度：１９０Ｋ
構造解析用コンピュータプログラム：ＳＨＥＬＸＬ－２０１８
単結晶データ：分子式：Ｃ５５Ｈ７２Ｃｌ２Ｎ１２Ｏ９、分子量：１１１６．１４、結晶系：六方晶、空間群：Ｐ ６１、格子定数：ａ＝２５．８４０６（１５）Å、ｂ＝２５．８４０６（１５）Å、ｃ＝４５．９１６（３）Å、α＝９０°、β＝９０°、γ＝１２０°、単位格子の体積：Ｖ＝２６５５２（４）Å３、単位格子に含まれる分子式の数：Ｚ＝１２、計算密度：Ｄｃａｌｃ＝０．８３８ｇ／ｃｍ３、Ｒ（Ｆｏ）：０．０７３０、ＲＷ（Ｆｏ ２）：０．２０６９、適合度（Ｓ）：１．０３４、フラックパラメータ：０．０６６（９）。
単結晶Ｘ線回折装置：ＢＲＵＫＥＲ Ｄ８ ＶＥＮＴＵＲＥ ＰＨＯＴＯＮ ＩＩ
波長：ＧａＫα（λ＝１．３４１３９Å）
試験温度：１９０Ｋ
構造解析用コンピュータプログラム：ＳＨＥＬＸＬ－２０１８
単結晶データ：分子式：Ｃ５５Ｈ７２Ｃｌ２Ｎ１２Ｏ９、分子量：１１１６．１４、結晶系：六方晶、空間群：Ｐ ６１、格子定数：ａ＝２５．８４０６（１５）Å、ｂ＝２５．８４０６（１５）Å、ｃ＝４５．９１６（３）Å、α＝９０°、β＝９０°、γ＝１２０°、単位格子の体積：Ｖ＝２６５５２（４）Å３、単位格子に含まれる分子式の数：Ｚ＝１２、計算密度：Ｄｃａｌｃ＝０．８３８ｇ／ｃｍ３、Ｒ（Ｆｏ）：０．０７３０、ＲＷ（Ｆｏ ２）：０．２０６９、適合度（Ｓ）：１．０３４、フラックパラメータ：０．０６６（９）。
【0093】
構造の説明：単結晶Ｘ線回折及び構造分析は、得られた単結晶が異性体２のシュウ酸塩のイソプロパノール溶媒和物であることを示す。結晶体の非対称構造単位に四つの異性体２分子、二つのシュウ酸分子及び二つのイソプロパノール分子が含まれ、異性体２及びシュウ酸は、シュウ酸塩を形成した。異性体２の単分子の模式図を図１に示し、シュウ酸塩単結晶の非対称構造単位を図２に示す。構造式を以下に示す：
。
【化11】
【0094】
実施例２：（Ｒ）－４－（（１Ｓ，６Ｒ）－５－（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３（シクロプロピルアミノ）プロピオニル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
反応条件：ａ）トリエチルアミン、二炭酸ジーｔｅｒｔ－ブチル、ジクロロメタン、ｂ）ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（２．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液）、ブロモメチルメチルエーテル、２－メチルテトラヒドロフラン、ｃ）（Ｒ）－４－ベンジルオキサゾリジン－２－オン、ジイソプロピルエチルアミン、トリメチルアセチルクロリド、トルエン、ｄ）四塩化チタン（１ｍｏｌ／Ｌトルエン溶液）、ジイソプロピルエチルアミン、ジクロロメタン、ｅ）過酸化水素溶液（３０％）、水酸化リチウム一水和物、テトラヒドロフラン、水、ｆ）２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、４－ジメチルアミノピリジン、Ｎ－メチルピロリドン、ｇ）塩化水素ジオキサン（４．０Ｍ）、ｈ）２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ｉ）塩化水素ジオキサン（４．０Ｍ）。
【化12】
反応条件：ａ）トリエチルアミン、二炭酸ジーｔｅｒｔ－ブチル、ジクロロメタン、ｂ）ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（２．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液）、ブロモメチルメチルエーテル、２－メチルテトラヒドロフラン、ｃ）（Ｒ）－４－ベンジルオキサゾリジン－２－オン、ジイソプロピルエチルアミン、トリメチルアセチルクロリド、トルエン、ｄ）四塩化チタン（１ｍｏｌ／Ｌトルエン溶液）、ジイソプロピルエチルアミン、ジクロロメタン、ｅ）過酸化水素溶液（３０％）、水酸化リチウム一水和物、テトラヒドロフラン、水、ｆ）２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、４－ジメチルアミノピリジン、Ｎ－メチルピロリドン、ｇ）塩化水素ジオキサン（４．０Ｍ）、ｈ）２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ｉ）塩化水素ジオキサン（４．０Ｍ）。
【0095】
ａ）シクロプロピルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル
窒素雰囲気で、２０℃でシクロプロピルアミン（９．３ｇ）及びトリエチルアミン（１９．７ｇ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、０℃で二炭酸ジーｔｅｒｔ－ブチル（３５．４８ｇ）を滴下し、２０℃で１６時間反応させて、反応が完了した後、溶媒を除去し、２４．３ｇの無色の液体を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）０．４７－０．５０（ｍ，２Ｈ），０．６６－０．７２（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），２．５３（ｍ，１Ｈ），４．７９（ｓ，１Ｈ）。
窒素雰囲気で、２０℃でシクロプロピルアミン（９．３ｇ）及びトリエチルアミン（１９．７ｇ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、０℃で二炭酸ジーｔｅｒｔ－ブチル（３５．４８ｇ）を滴下し、２０℃で１６時間反応させて、反応が完了した後、溶媒を除去し、２４．３ｇの無色の液体を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）０．４７－０．５０（ｍ，２Ｈ），０．６６－０．７２（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），２．５３（ｍ，１Ｈ），４．７９（ｓ，１Ｈ）。
【0096】
ｂ）シクロプロピル（メトキシメチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル
窒素雰囲気で、シクロプロピルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２４．３ｇ）を２－メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶解し、０℃でナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（１２０ｍＬ）を滴下し、反応液を０℃で１時間撹拌し、０℃でブロモメチルメチルエーテル（３５．７ｇ）を滴下し、反応液を０℃で６時間撹拌し、反応液を５０ｇの氷水に注ぎ、分液し、酢酸エチル（１００ｍＬ＊２）で抽出し、反応液をそのまま濃縮して、生成物として無色の液体２９．１ｇを得て、精製せずにそのまま次のステップに用いた。
窒素雰囲気で、シクロプロピルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２４．３ｇ）を２－メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶解し、０℃でナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（１２０ｍＬ）を滴下し、反応液を０℃で１時間撹拌し、０℃でブロモメチルメチルエーテル（３５．７ｇ）を滴下し、反応液を０℃で６時間撹拌し、反応液を５０ｇの氷水に注ぎ、分液し、酢酸エチル（１００ｍＬ＊２）で抽出し、反応液をそのまま濃縮して、生成物として無色の液体２９．１ｇを得て、精製せずにそのまま次のステップに用いた。
【0097】
ｃ）（Ｒ）－４－ベンジル－３－（２－（４－（クロロフェニル）アセチル）オキサゾリジン－２－オン
窒素雰囲気で、２－（４－クロロフェニル）酢酸（５０ｇ）、（Ｒ）－４－ベンジルオキサゾリジン－２－オン（４５．５ｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（１２７．３ｇ）をトルエン（６００ｍＬ）に溶解し、１５℃でトリメチルアセチルクロリド（３８．４ｇ）を滴下し、反応液を還流で１６時間撹拌し、そして反応液を水２００ｍＬに注ぎ、分液し、飽和食塩水１２０ｍＬで洗浄し、有機相を乾燥させて濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）で単離、精製し、白い固体３２ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）２．８８－３．０２（ｍ，２Ｈ），４．１２－４．３７（ｍ，４Ｈ），４．６４－４．７０（ｍ，１Ｈ），７．１３－７．１６（ｍ，２Ｈ），７．２３－７．３２（ｍ，５Ｈ），７．３９－７．４２（ｍ，２Ｈ）。
窒素雰囲気で、２－（４－クロロフェニル）酢酸（５０ｇ）、（Ｒ）－４－ベンジルオキサゾリジン－２－オン（４５．５ｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（１２７．３ｇ）をトルエン（６００ｍＬ）に溶解し、１５℃でトリメチルアセチルクロリド（３８．４ｇ）を滴下し、反応液を還流で１６時間撹拌し、そして反応液を水２００ｍＬに注ぎ、分液し、飽和食塩水１２０ｍＬで洗浄し、有機相を乾燥させて濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）で単離、精製し、白い固体３２ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）２．８８－３．０２（ｍ，２Ｈ），４．１２－４．３７（ｍ，４Ｈ），４．６４－４．７０（ｍ，１Ｈ），７．１３－７．１６（ｍ，２Ｈ），７．２３－７．３２（ｍ，５Ｈ），７．３９－７．４２（ｍ，２Ｈ）。
【0098】
ｄ）（（Ｓ）－３－（（Ｒ）－４－ベンジル－２－オキソオキサゾリジン－３－イル）－２－（４－クロロフェニル）－３－オキソプロピル）（シクロプロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル
窒素雰囲気で、（Ｒ）－４－ベンジル－３－（２－（４－（クロロフェニル）アセチル）オキサゾリジン－２－オン（３．４８ｇ）をジクロロメタン（６０ｍＬ）に溶解し、０℃で四塩化チタンのトルエン溶液（１３ｍＬ）を滴下し、反応液を０℃で２時間撹拌し、ＤＩＰＥＡ（１．４９ｇ）を滴下し、反応液を０℃で１．５時間撹拌し、シクロプロピル（メトキシメチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２．７７ｇ）を滴下し、反応液を０℃で６時間撹拌して反応が完了した。そして、反応液を飽和塩化アンモニウム溶液３０ｍＬに注ぎ、分液し、飽和食塩水１２０ｍＬで洗浄し、有機相を乾燥させて濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）で単離、精製し、無色のオイル状の生成物２．５０ｇを得た。
窒素雰囲気で、（Ｒ）－４－ベンジル－３－（２－（４－（クロロフェニル）アセチル）オキサゾリジン－２－オン（３．４８ｇ）をジクロロメタン（６０ｍＬ）に溶解し、０℃で四塩化チタンのトルエン溶液（１３ｍＬ）を滴下し、反応液を０℃で２時間撹拌し、ＤＩＰＥＡ（１．４９ｇ）を滴下し、反応液を０℃で１．５時間撹拌し、シクロプロピル（メトキシメチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２．７７ｇ）を滴下し、反応液を０℃で６時間撹拌して反応が完了した。そして、反応液を飽和塩化アンモニウム溶液３０ｍＬに注ぎ、分液し、飽和食塩水１２０ｍＬで洗浄し、有機相を乾燥させて濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）で単離、精製し、無色のオイル状の生成物２．５０ｇを得た。
【0099】
ｅ）（Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（シクロプロピル）アミノ）－２－（４－クロロフェニル）プロピオン酸
水酸化リチウム一水和物（０．６３ｇ）を水（１８ｍＬ）に溶解し、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）を加え、０℃で過酸化水素溶液（１．６ｍＬ）を滴下し、０℃で（（Ｓ）－３－（（Ｒ）－４－ベンジル－２－オキサゾリジン－３－イル）－２－（４－クロロフェニル）－３－オキソプロピル）（シクロプロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２．５０ｇ）を加え、反応液を０℃で３時間撹拌し、反応液に飽和亜硫酸ナトリウム溶液（１５ｍＬ）を加え、１．５ｈ反応させ、飽和硫酸水素カリウム溶液でｐＨ３～４になるように調整し、酢酸エチル（３０ｍＬ＊２）で抽出し、分液し、有機相を乾燥させて濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：１）で単離、精製し、無色の固体１．２６ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．４５－０．４８（ｍ，２Ｈ），０．６０－０．６４（ｍ，２Ｈ），１．３０（ｓ，９Ｈ），２．１９（ｓ，１Ｈ），３．６１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９５（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝２６．８、８．８Ｈｚ，４Ｈ），１２．７（ｓ，１Ｈ）。
水酸化リチウム一水和物（０．６３ｇ）を水（１８ｍＬ）に溶解し、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）を加え、０℃で過酸化水素溶液（１．６ｍＬ）を滴下し、０℃で（（Ｓ）－３－（（Ｒ）－４－ベンジル－２－オキサゾリジン－３－イル）－２－（４－クロロフェニル）－３－オキソプロピル）（シクロプロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２．５０ｇ）を加え、反応液を０℃で３時間撹拌し、反応液に飽和亜硫酸ナトリウム溶液（１５ｍＬ）を加え、１．５ｈ反応させ、飽和硫酸水素カリウム溶液でｐＨ３～４になるように調整し、酢酸エチル（３０ｍＬ＊２）で抽出し、分液し、有機相を乾燥させて濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：１）で単離、精製し、無色の固体１．２６ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．４５－０．４８（ｍ，２Ｈ），０．６０－０．６４（ｍ，２Ｈ），１．３０（ｓ，９Ｈ），２．１９（ｓ，１Ｈ），３．６１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９５（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝２６．８、８．８Ｈｚ，４Ｈ），１２．７（ｓ，１Ｈ）。
【0100】
ｆ）５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸
窒素雰囲気で、（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリジン［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（３００ｍｇ）、２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４５５ｍｇ）、４－ジメチルアミノピリジン（６００ｍｇ）をＮ－メチルピロリドン（５ｍＬ）に溶解し、１２０℃で１２時間撹拌し、そして、反応液を水５０ｍＬに注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬ＊２）で抽出し、飽和食塩水１５ｍＬで洗浄し、有機相を乾燥させて溶媒を除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：１～１：２）で単離、精製し、黄色の固体４００ｍｇを得た。
窒素雰囲気で、（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリジン［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（３００ｍｇ）、２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４５５ｍｇ）、４－ジメチルアミノピリジン（６００ｍｇ）をＮ－メチルピロリドン（５ｍＬ）に溶解し、１２０℃で１２時間撹拌し、そして、反応液を水５０ｍＬに注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬ＊２）で抽出し、飽和食塩水１５ｍＬで洗浄し、有機相を乾燥させて溶媒を除去し、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：１～１：２）で単離、精製し、黄色の固体４００ｍｇを得た。
【0101】
ｇ）（５Ｒ）－４－（２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン
５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸エステル（４００ｍｇ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、塩化水素ジオキサン溶液（５ｍＬ）を滴下し、２５℃で２時間撹拌して、反応が完了し、反応液をそのまま濃縮し、粗生成物として黄色の固体を得て、そのまま次のステップに用いた。
５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸エステル（４００ｍｇ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、塩化水素ジオキサン溶液（５ｍＬ）を滴下し、２５℃で２時間撹拌して、反応が完了し、反応液をそのまま濃縮し、粗生成物として黄色の固体を得て、そのまま次のステップに用いた。
【0102】
ｈ）ｔｅｒｔ－ブチル（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（（１Ｒ，６Ｓ）－５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－３－オキソプロピル）（シクロプロピル）カルバメート
窒素雰囲気で、（５Ｒ）－４－（２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（２７０ｍｇ）、工程ｅ）の生成物（３８９ｍｇ）、２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４７４ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（６７１ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、反応液を２５℃で３時間撹拌して、反応が完了した。そして、反応液を水５０ｍＬに注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬ＊２）で抽出し、飽和食塩水（１０ｍＬ＊３）で洗浄し、有機相を乾燥させて濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：２）で単離、精製し、黄色の固体３２０ｍｇを得た。
窒素雰囲気で、（５Ｒ）－４－（２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（２７０ｍｇ）、工程ｅ）の生成物（３８９ｍｇ）、２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４７４ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（６７１ｍｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、反応液を２５℃で３時間撹拌して、反応が完了した。そして、反応液を水５０ｍＬに注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬ＊２）で抽出し、飽和食塩水（１０ｍＬ＊３）で洗浄し、有機相を乾燥させて濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：２）で単離、精製し、黄色の固体３２０ｍｇを得た。
【0103】
ｉ）（Ｒ）－４－（（１Ｓ，６Ｒ）－５－（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３（シクロプロピルアミノ）プロピオニル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン
ｔｅｒｔ－ブチル（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（（１Ｒ，６Ｓ）－５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリジル［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－３－オキソプロピル）（シクロプロピル）カルバメート（３２０ｍｇ）をジオキサン（２．５ｍＬ）に溶かし、塩化水素ジオキサン（２．７ｍＬ）を滴下し、反応液を２５℃で１４時間撹拌して、反応が完了した。そして反応液を濃縮して、粗生成物を得、飽和炭酸カリウム溶液でｐＨ１３～１４になるように調整し、ＤＣＭ（１０ｍＬ＊２）で抽出し、水（１０ｍＬ）で洗浄し、溶媒を除去し、生成物を超臨界流体クロマトグラフィーにて光学分割し、異性体１（６１．２ｍｇ）及び異性体２（３１．２ｍｇ）を得た。単結晶回折に基づき、構造を測定し、異性体２は、本実施例に表題された化合物であると確認される。光学分割のための設備及び条件：ｗａｔｅｒｓ ＳＦＣ２００、カラム：Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＡＳ，２５０×３０ｍｍ Ｉ．Ｄ．，５μｍ、移動相：ＡがＣＯ２であり、Ｂがイソプロパノールである（０．１ｖｏｌ％アンモニア水（２５－２８ｗｔ％））、Ａ：Ｂ＝７０：３０（体積比）、流速６０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度３８℃。
ｔｅｒｔ－ブチル（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（（１Ｒ，６Ｓ）－５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリジル［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－３－オキソプロピル）（シクロプロピル）カルバメート（３２０ｍｇ）をジオキサン（２．５ｍＬ）に溶かし、塩化水素ジオキサン（２．７ｍＬ）を滴下し、反応液を２５℃で１４時間撹拌して、反応が完了した。そして反応液を濃縮して、粗生成物を得、飽和炭酸カリウム溶液でｐＨ１３～１４になるように調整し、ＤＣＭ（１０ｍＬ＊２）で抽出し、水（１０ｍＬ）で洗浄し、溶媒を除去し、生成物を超臨界流体クロマトグラフィーにて光学分割し、異性体１（６１．２ｍｇ）及び異性体２（３１．２ｍｇ）を得た。単結晶回折に基づき、構造を測定し、異性体２は、本実施例に表題された化合物であると確認される。光学分割のための設備及び条件：ｗａｔｅｒｓ ＳＦＣ２００、カラム：Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＡＳ，２５０×３０ｍｍ Ｉ．Ｄ．，５μｍ、移動相：ＡがＣＯ２であり、Ｂがイソプロパノールである（０．１ｖｏｌ％アンモニア水（２５－２８ｗｔ％））、Ａ：Ｂ＝７０：３０（体積比）、流速６０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度３８℃。
【0104】
超高性能コンバージェンスクロマトグラフィーの条件：カラム：Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＡＤ，２．１×１５０ｍｍ Ｉ．Ｄ．，３μｍ、移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：イソプロパノール（０．１％ＤＥＡ）、勾配：時間０－８ｍｉｎ、Ｂ相５－４０％（体積比）、流速：１ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度:４０℃。異性体１：ＲＴ＝３．７ｍｉｎ、異性体２：ＲＴ＝４．６ｍｉｎ。
【0105】
異性体１：ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４８１（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．０３－０．１２（ｍ，２Ｈ），０．２５－０．３０（ｍ，２Ｈ），０．６６－０．７０（ｍ，１Ｈ），０．９６－１．０５（ｍ，３Ｈ），１．３５－１．４０（ｍ，１Ｈ），１．９３－２．１１（ｍ，２Ｈ），２．２９－２．３５（ｍ，１Ｈ），２．６７－２．７７（ｍ，２Ｈ），２．８０－２．８６（ｍ，１Ｈ），３．０３－３．２５（ｍ，４Ｈ），３．３９－３．４８（ｍ，１Ｈ），３．６９－３．７９（ｍ，１Ｈ），４．２４－４．３４（ｍ，２Ｈ），７．３４－７．４１（ｍ，４Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），１０．５２（ｓ，１Ｈ）。
【0106】
異性体２：ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４８１（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．１４－０．２１（ｍ，２Ｈ），０．３０－０．３７（ｍ，２Ｈ），０．９３－１．０７（ｍ，４Ｈ），２．０３－２．３４（ｍ，３Ｈ），２．６６－２．８６（ｍ，２Ｈ），３．１０－３．２５（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．９４（ｍ，４Ｈ），４．０７－４．１５（ｍ，１Ｈ），４．４１－４．４５（ｍ，１Ｈ），７．３２－７．４２（ｍ，４Ｈ），８．１９（ｓ，１Ｈ），１０．４８（ｓ，１Ｈ）。
【0107】
実施例３：（Ｓ）－５－（（１Ｓ，６Ｒ）－５－（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（イソプロピルアミノ）プロピオニル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－４－メチル－１，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピリミジニル［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オンの調製
ａ）１－（４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－イル）エタノン（化合物３４－１）
２０℃で１－（４，６－ジクロロピリミジン－５－イル）エタノン（２．５ｇ）をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に溶解し、アンモニア水（２５－２８ｗｔ％、９ｇ）を加え、反応液を２０℃で５時間撹拌し、そして濃縮し、少量の水を加えて希釈し、吸引濾過して白い固体を得、真空乾燥した後白い固体２ｇを得、そのまま次のステップに用いた。
【化13】
ａ）１－（４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－イル）エタノン（化合物３４－１）
２０℃で１－（４，６－ジクロロピリミジン－５－イル）エタノン（２．５ｇ）をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に溶解し、アンモニア水（２５－２８ｗｔ％、９ｇ）を加え、反応液を２０℃で５時間撹拌し、そして濃縮し、少量の水を加えて希釈し、吸引濾過して白い固体を得、真空乾燥した後白い固体２ｇを得、そのまま次のステップに用いた。
【0108】
ｂ）１－（４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－イル）エタン－１－オール（化合物３４－２）
２０℃で１－（４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－イル）エタノン（１．５ｇ）をメタノール（１５ｍＬ）に溶解し、－１０℃に冷却し、更に水素化ホウ素ナトリウム（１ｇ）を分割して加え、添加完了後、反応液をゆっくりに２０℃に昇温し、攪拌を３時間続けた。完全に反応させた後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチした。そして、反応液を濃縮して、酢酸エチル（２０ｍＬ＊２）でパルプ化した。母液を濃縮し、オイル状の粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで単離し、白いオイル状の生成物４００ｍｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１７４（Ｍ＋Ｈ）。
２０℃で１－（４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－イル）エタノン（１．５ｇ）をメタノール（１５ｍＬ）に溶解し、－１０℃に冷却し、更に水素化ホウ素ナトリウム（１ｇ）を分割して加え、添加完了後、反応液をゆっくりに２０℃に昇温し、攪拌を３時間続けた。完全に反応させた後、反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチした。そして、反応液を濃縮して、酢酸エチル（２０ｍＬ＊２）でパルプ化した。母液を濃縮し、オイル状の粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで単離し、白いオイル状の生成物４００ｍｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１７４（Ｍ＋Ｈ）。
【0109】
ｃ）５－クロロ－４－メチル－１，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピリミジン［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン（化合物３４－３）
２０℃で１－（４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－イル）エタン－１－オール（３００ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２８２ｍｇ）をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に溶解し、そして温度を－５℃に低下し、ジ（トリクロロメチル）カーボネート（３００ｍｇ）をゆっくりと加え、－５℃で０．５時間撹拌した。そして、ゆっくりと１８℃に昇温し、１．５時間撹拌した。完全に反応させた後、反応を重曹水でクエンチし、酢酸エチル（１０ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し濾過し、濃縮してオイル状の粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで単離し、精製し、白い固体１０８ｍｇを得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２００（Ｍ＋Ｈ）。
２０℃で１－（４－アミノ－６－クロロピリミジン－５－イル）エタン－１－オール（３００ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２８２ｍｇ）をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に溶解し、そして温度を－５℃に低下し、ジ（トリクロロメチル）カーボネート（３００ｍｇ）をゆっくりと加え、－５℃で０．５時間撹拌した。そして、ゆっくりと１８℃に昇温し、１．５時間撹拌した。完全に反応させた後、反応を重曹水でクエンチし、酢酸エチル（１０ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し濾過し、濃縮してオイル状の粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで単離し、精製し、白い固体１０８ｍｇを得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２００（Ｍ＋Ｈ）。
【0110】
ｄ）（Ｓ）－５－クロロ－４－メチル－１，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピリミジン［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン（化合物３４－４ａ）及び（Ｒ）－５－クロロ－４－メチル－１，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピリミジン［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン（化合物３４－４ｂ）
化合物３４－３をＳＦＣキラルカラムにより光学分割し、所望の目的物の化合物３４－４ａ及び化合物３４－４ｂを得た。
化合物３４－３をＳＦＣキラルカラムにより光学分割し、所望の目的物の化合物３４－４ａ及び化合物３４－４ｂを得た。
【0111】
ＳＦＣキラル分割の条件：装置：ｗａｔｅｒｓ ＳＦＣ２００、分離カラム：Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＡＤ、２５０×５０ｍｍ Ｉ．Ｄ．，１０μｍ、移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：メタノール（０．１ｖｏｌ％アンモニア水（２５～２８ｗｔ％））、Ａ：Ｂ＝６５：３５（体積比）、流速：１５０ｍＬ／ｍｉｎ、圧力：１００ｂａｒ、カラム温度：３８℃、検出波長：２２０ｎｍ、サイクル時間：１４ｍｉｎ、サンプル前処理：１０ｇを３００ｍＬのＭｅＯＨに溶解、注入量：１６ｍＬ。
【0112】
後処理：サンプルを４０℃で濃縮した後、凍結乾燥して化合物３４－４ａ及び化合物３４－４ｂをそれぞれ得た。
【0113】
経路一：異性体１及び異性体４の調製
ｅ）５－（（Ｓ）４－メチル－２－オキソ－１，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－５－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物３４－５ａ）
化合物３４－４ａ（２ｇ）、２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（３．５８ｇ）を無水ＭｅＣＮ（２０ｍＬ）に溶解し、ＤＩＥＡ（３．８９ｇ）を加え、反応液を窒素ガスで吹き払い、そして密閉して９５℃で６時間撹拌し、反応が完了した後、濃縮して、目的物の粗生成物を得た。粗生成物をＤＣＭに溶解し、水で洗浄した後濃縮して粗生成物を得、カラムクロマトグラフィー（ＥＡ：ＰＥ＝１：１）で単離、精製し、淡い茶色の固体３．２ｇを得た。
ｅ）５－（（Ｓ）４－メチル－２－オキソ－１，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－５－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物３４－５ａ）
化合物３４－４ａ（２ｇ）、２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（３．５８ｇ）を無水ＭｅＣＮ（２０ｍＬ）に溶解し、ＤＩＥＡ（３．８９ｇ）を加え、反応液を窒素ガスで吹き払い、そして密閉して９５℃で６時間撹拌し、反応が完了した後、濃縮して、目的物の粗生成物を得た。粗生成物をＤＣＭに溶解し、水で洗浄した後濃縮して粗生成物を得、カラムクロマトグラフィー（ＥＡ：ＰＥ＝１：１）で単離、精製し、淡い茶色の固体３．２ｇを得た。
【0114】
ｆ）（４Ｓ）－５－（２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－４－メチル－１，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オンの塩酸塩（化合物３４－６ａ）
ステップｅ）の生成物（３．２ｇ）をＨＣｌ／ｉ－ＰｒＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、室温で２時間撹拌し、反応が完了した後、濃縮して粗生成物を得て、精製せずにそのまま次のステップに用いた。
ステップｅ）の生成物（３．２ｇ）をＨＣｌ／ｉ－ＰｒＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、室温で２時間撹拌し、反応が完了した後、濃縮して粗生成物を得て、精製せずにそのまま次のステップに用いた。
【0115】
ｇ）化合物３４－７ａ
ステップｆ）の生成物（３．３ｇ）、（Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（イソプロピル）アミノ）－２－（４－クロロフェニル）プロピオン酸（４．９ｇ）、ＨＡＴＵ（６．３２ｇ）、ＤＩＰＥＡ（４．３ｇ）を無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、反応液を室温で１２時間撹拌し、反応が完了した後、反応液を酢酸エチル１００ｍＬに注ぎ、水（２０ｍＬ＊３）及び飽和食塩水１０ｍＬで洗浄し、有機相を乾燥させ、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：１）で単離し、精製し、茶色の固体７．２ｇを得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ： ５８５（Ｍ＋Ｈ）。
ステップｆ）の生成物（３．３ｇ）、（Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（イソプロピル）アミノ）－２－（４－クロロフェニル）プロピオン酸（４．９ｇ）、ＨＡＴＵ（６．３２ｇ）、ＤＩＰＥＡ（４．３ｇ）を無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、反応液を室温で１２時間撹拌し、反応が完了した後、反応液を酢酸エチル１００ｍＬに注ぎ、水（２０ｍＬ＊３）及び飽和食塩水１０ｍＬで洗浄し、有機相を乾燥させ、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：１）で単離し、精製し、茶色の固体７．２ｇを得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ： ５８５（Ｍ＋Ｈ）。
【0116】
ｈ）化合物３４－８ａ
ステップｇ）の生成物（７．２ｇ）をＭｅＯＨ（２５ｍＬ）に溶解し、そしてＨＣｌ／ジオキサン（７０ｍＬ）を加え、反応液を室温で２時間撹拌した後、反応液を濃縮して赤いオイル状の粗生成物を得、更にＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、Ｎａ２ＣＯ３で遊離させた後、濃縮して、粗生成物６ｇを得た。
ステップｇ）の生成物（７．２ｇ）をＭｅＯＨ（２５ｍＬ）に溶解し、そしてＨＣｌ／ジオキサン（７０ｍＬ）を加え、反応液を室温で２時間撹拌した後、反応液を濃縮して赤いオイル状の粗生成物を得、更にＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、Ｎａ２ＣＯ３で遊離させた後、濃縮して、粗生成物６ｇを得た。
【0117】
ｉ）異性体１及び異性体４
化合物３４－８ａをＳＦＣキラルカラムで分割して異性体１及び異性体４を得た。
化合物３４－８ａをＳＦＣキラルカラムで分割して異性体１及び異性体４を得た。
【0118】
ＳＦＣ分割の条件：装置：ｗａｔｅｒｓ ＳＦＣ２００、分離カラム：Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＡＤ、２５０×５０ｍｍ Ｉ．Ｄ．、１０μｍ、移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：ＭｅＯＨ（０．１ｖｏｌ％アンモニア水（２５～２８ｗｔ％））、Ａ：Ｂ＝７５：２５、流速：７０ｍＬ／ｍｉｎ、圧力：１００ｂａｒ、カラム温度：３８℃、検出波長：２５４ｎｍ、サイクル時間：５ｍｉｎ、サンプル前処理：１０ｇを２００ｍＬのＭｅＯＨに溶解、注入量：１６ｍＬ。
【0119】
後処理：サンプルを４０℃で濃縮した後、凍結乾燥して異性体１及び異性体４をそれぞれ得た。
【0120】
経路二：異性体２及び異性体３の調製
化合物３４－４ｂを原料として、経路一に記載された方法と同様にして、異性体２及び異性体３をそれぞれ調製した。
化合物３４－４ｂを原料として、経路一に記載された方法と同様にして、異性体２及び異性体３をそれぞれ調製した。
【0121】
異性体１：ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：４８５（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．７０（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．１３（ｑ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｓ，１Ｈ），４．４２－４．３０（ｍ，１Ｈ），３．５３－３．４５（ｍ，１Ｈ），３．２８－３．０６（ｍ，５Ｈ），３．０１－２．５９（ｍ，３Ｈ），１．５２－１．３４（ｍ，４Ｈ），１．０８－０．９７（ｍ，６Ｈ），０．９３－０．８４（ｍ，１Ｈ）。
【0122】
異性体４：ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：４８５（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．７３（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），７．４１－７．３２（ｍ，４Ｈ），６．１４（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４０－４．３６（ｍ，１Ｈ），４．１９－４．１１（ｍ，１Ｈ），３．６２－３．５１（ｍ，２Ｈ），３．４９－３．３５（ｍ，１Ｈ），３．２４－３．０５（ｍ，４Ｈ），２．７３－２．６３（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），１．１２（ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），０．９５－０．８８（ｍ，６Ｈ），０．２６（ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【0123】
異性体２：ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：４８５（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．８６（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ），７．５４－７．２７（ｍ，４Ｈ），６．３２－６．１８（ｍ，１Ｈ），４．６９－４．５２（ｍ，１Ｈ），４．２７－３．９７（ｍ，２Ｈ），３．６６－３．４３（ｍ，２Ｈ），３．２９－２．９２（ｍ，６Ｈ），２．６１－２．５５（ｍ，１Ｈ），１．６３－１．５８（ｍ，１Ｈ），１．５３－１．２８（ｍ，３Ｈ），１．２８－１．１２（ｍ，６Ｈ）。
【0124】
異性体３：ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：４８５（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．７１（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．４６－７．３９（ｍ，１Ｈ），７．３６－７．２８（ｍ，３Ｈ），６．００（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｓ，１Ｈ），４．４６－４．３３（ｍ，１Ｈ），３．５６－３．４４（ｍ，２Ｈ），３．２６－３．０９（ｍ，５Ｈ），３．００－２．７１（ｍ，２Ｈ），１．４３－１．３８（ｍ，３Ｈ），１．１０－０．９３（ｍ，７Ｈ），－０．０７－－０．１１（ｍ，１Ｈ）。
【0125】
単結晶回折による立体構造の測定：
（１）異性体１の立体構造の測定
単結晶の調製：化合物異性体１（５０．０ｍｇ）、イソプロパノール３．０ｍｌを秤量し、５ｍｌのスクリュートップガラス瓶に加え、５ｍｉｎ撹拌して、固体が完全に溶解した。シュウ酸二水和物１３．０ｍｇを秤量し、前記ガラス瓶に入れ、ガラス瓶には徐々に白い固体が析出し、室温で３時間撹拌し、ガラス瓶に大量の白い固体が析出した。ガラス瓶にメタノール１．５ｍｌ、精製水０．２ｍｌを加えた後、白い固体が徐々に消え、溶液が透明になり、続いて１時間撹拌した。溶液は、０．２２μｍの微多孔フィルター膜を通過し、２０ｍｌのスクリュートップガラス瓶に濾過し、ガラス瓶の口をラップフィルムで覆った。針で瓶の口に８つの穴を開け、室温で１０日間放置し、異性体１化合物のシュウ酸塩の単結晶を得た。
（１）異性体１の立体構造の測定
単結晶の調製：化合物異性体１（５０．０ｍｇ）、イソプロパノール３．０ｍｌを秤量し、５ｍｌのスクリュートップガラス瓶に加え、５ｍｉｎ撹拌して、固体が完全に溶解した。シュウ酸二水和物１３．０ｍｇを秤量し、前記ガラス瓶に入れ、ガラス瓶には徐々に白い固体が析出し、室温で３時間撹拌し、ガラス瓶に大量の白い固体が析出した。ガラス瓶にメタノール１．５ｍｌ、精製水０．２ｍｌを加えた後、白い固体が徐々に消え、溶液が透明になり、続いて１時間撹拌した。溶液は、０．２２μｍの微多孔フィルター膜を通過し、２０ｍｌのスクリュートップガラス瓶に濾過し、ガラス瓶の口をラップフィルムで覆った。針で瓶の口に８つの穴を開け、室温で１０日間放置し、異性体１化合物のシュウ酸塩の単結晶を得た。
【0126】
単結晶回折試験：
単結晶Ｘ線回折装置：ＢＲＵＫＥＲ ＫＡＰＰＡ ＡＰＥＸ－ＩＩ ＣＣＤ
波長：ＣｕＫα（λ＝１．５４１７８Å）
試験温度：２９６Ｋ
構造解析用コンピュータプログラム：ＳＨＥＬＸＬ－２０１８
単結晶データ：分子式：Ｃ５０Ｈ６０Ｃｌ２Ｎ１２Ｏ１０、分子量：１０６０．００、結晶系：斜方晶系、空間群：Ｃ ２ ２ ２、格子定数：ａ＝１５．７１９（２）Å、ｂ＝１７．４１１（２）Å、ｃ＝４８．３３５（６）Å、α＝９０°、β＝９０°、γ＝９０°、単位格子の体積：Ｖ＝１３２２８（３）Å３、単位格子に含まれる分子式の数：Ｚ＝８、計算密度：Ｄｃａｌｃ＝１．０６４ｇ／ｃｍ３、Ｒ（Ｆｏ）：０．０６１２、ＲＷ（Ｆｏ ２）：０．１８５６、適合度（Ｓ）：１．０２３、フラックパラメータ：０．０４０（１１）。
単結晶Ｘ線回折装置：ＢＲＵＫＥＲ ＫＡＰＰＡ ＡＰＥＸ－ＩＩ ＣＣＤ
波長：ＣｕＫα（λ＝１．５４１７８Å）
試験温度：２９６Ｋ
構造解析用コンピュータプログラム：ＳＨＥＬＸＬ－２０１８
単結晶データ：分子式：Ｃ５０Ｈ６０Ｃｌ２Ｎ１２Ｏ１０、分子量：１０６０．００、結晶系：斜方晶系、空間群：Ｃ ２ ２ ２、格子定数：ａ＝１５．７１９（２）Å、ｂ＝１７．４１１（２）Å、ｃ＝４８．３３５（６）Å、α＝９０°、β＝９０°、γ＝９０°、単位格子の体積：Ｖ＝１３２２８（３）Å３、単位格子に含まれる分子式の数：Ｚ＝８、計算密度：Ｄｃａｌｃ＝１．０６４ｇ／ｃｍ３、Ｒ（Ｆｏ）：０．０６１２、ＲＷ（Ｆｏ ２）：０．１８５６、適合度（Ｓ）：１．０２３、フラックパラメータ：０．０４０（１１）。
【0127】
構造の説明：単結晶Ｘ線回折及び構造分析は、得られた単結晶が異性体１のシュウ酸塩であることを示す。結晶体の非対称構造単位には二分子の異性体及び一分子のシュウ酸が含まれる。化合物異性体１の単分子模式図を図３に示し、シュウ酸塩単結晶を図４に示す。構造式を以下に示す：
。
【化14】
【0128】
（２）異性体３の立体構造の測定
単結晶の調製：前記異性体１の単結晶の調製方法に従意、異性体３のシュウ酸塩単結晶を調製した。
単結晶の調製：前記異性体１の単結晶の調製方法に従意、異性体３のシュウ酸塩単結晶を調製した。
【0129】
単結晶回折試験：
単結晶Ｘ線回折装置：ＢＲＵＫＥＲ Ｄ８ ＶＥＮＴＵＲＥ ＰＨＯＴＯＮ ＩＩ
波長：ＧａＫα（λ＝１．３４１３９Å）
試験温度：１７３Ｋ
構造解析用コンピュータプログラム：ＳＨＥＬＸＬ－２０１８
単結晶データ：分子式：Ｃ５２Ｈ６４Ｃｌ２Ｎ１２Ｏ１５、分子量：１１６８．０５、結晶系：単斜晶系、空間群：Ｐ ２１／ｃ、格子定数：ａ＝２０．１５８８（１３）Å、ｂ＝２１．４７４４（１４）Å、ｃ＝１４．４０５５（９）Å、α＝９０°、β＝９８．２５９（３）°、γ＝９０°、単位格子の体積：Ｖ＝６１７１．４（７）Å３、単位格子に含まれる分子式の数：Ｚ＝４、計算密度：Ｄｃａｌｃ＝１．２５７ｇ／ｃｍ３、Ｒ（Ｆｏ）：０．０６３４、ＲＷ（Ｆｏ ２）：０．２０１６、適合度（Ｓ）：１．０５３。
単結晶Ｘ線回折装置：ＢＲＵＫＥＲ Ｄ８ ＶＥＮＴＵＲＥ ＰＨＯＴＯＮ ＩＩ
波長：ＧａＫα（λ＝１．３４１３９Å）
試験温度：１７３Ｋ
構造解析用コンピュータプログラム：ＳＨＥＬＸＬ－２０１８
単結晶データ：分子式：Ｃ５２Ｈ６４Ｃｌ２Ｎ１２Ｏ１５、分子量：１１６８．０５、結晶系：単斜晶系、空間群：Ｐ ２１／ｃ、格子定数：ａ＝２０．１５８８（１３）Å、ｂ＝２１．４７４４（１４）Å、ｃ＝１４．４０５５（９）Å、α＝９０°、β＝９８．２５９（３）°、γ＝９０°、単位格子の体積：Ｖ＝６１７１．４（７）Å３、単位格子に含まれる分子式の数：Ｚ＝４、計算密度：Ｄｃａｌｃ＝１．２５７ｇ／ｃｍ３、Ｒ（Ｆｏ）：０．０６３４、ＲＷ（Ｆｏ ２）：０．２０１６、適合度（Ｓ）：１．０５３。
【0130】
構造説明：単結晶Ｘ線回折及び構造解析は、調製された単結晶が異性体３のシュウ酸塩水和物であることを示す。結晶の非対称構造単位は、２つの異性体３分子、２つのシュウ酸分子及び１つの水分子を含んでおり、異性体３及びシュウ酸がシュウ酸塩を形成している。化合物異性体３の分子模式図を図５に示し、シュウ酸塩単結晶の非対称構造単位を図６に示す。構造式は、下記に示すとおりである：
。
【化15】
【0131】
薬理活性試験：
実施例４：ＡＫＴキナーゼ活性試験
１．材料及び試薬
Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、白色の３８４ウェルプレート（カタログ番号＃２６４７０６、Ｔｈｅｒｍｏ）、ＨＴＲＦ ｋｉｎＥＡＳＥ ＴＫキットに含まれる主な試薬（カタログ番号＃６２ＴＫＯＰＥＣ、Ｃｉｓｂｉｏ）、ＴＫ－ビオチン基質、ストレプトアビジン－ＸＬ６６５、ユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体、５×酵素反応バッファー、ＳＥＢ、ＨＴＲＦアッセイバッファー、ＡＫＴ１（カタログ番号＃０１－１０１、Ｃａｒｎａ）、ＡＫＴ２（カタログ番号＃０１－１０２、Ｃａｒｎａ）、ＡＫＴ３（カタログ番号＃ＰＶ３１８５、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＡＴＰ １０ｍＭ（カタログ番号＃ＰＶ３２２７、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＤＴＴ １Ｍ（カタログ番号＃Ｄ５５４５、Ｓｉｇｍａ）、ＭｇＣｌ２ １Ｍ（カタログ番号＃Ｍ８２６６、Ｓｉｇｍａ）、本発明の実施例１～３の化合物、陽性対照物質：ＧＤＣ－００６８。
実施例４：ＡＫＴキナーゼ活性試験
１．材料及び試薬
Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、白色の３８４ウェルプレート（カタログ番号＃２６４７０６、Ｔｈｅｒｍｏ）、ＨＴＲＦ ｋｉｎＥＡＳＥ ＴＫキットに含まれる主な試薬（カタログ番号＃６２ＴＫＯＰＥＣ、Ｃｉｓｂｉｏ）、ＴＫ－ビオチン基質、ストレプトアビジン－ＸＬ６６５、ユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体、５×酵素反応バッファー、ＳＥＢ、ＨＴＲＦアッセイバッファー、ＡＫＴ１（カタログ番号＃０１－１０１、Ｃａｒｎａ）、ＡＫＴ２（カタログ番号＃０１－１０２、Ｃａｒｎａ）、ＡＫＴ３（カタログ番号＃ＰＶ３１８５、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＡＴＰ １０ｍＭ（カタログ番号＃ＰＶ３２２７、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＤＴＴ １Ｍ（カタログ番号＃Ｄ５５４５、Ｓｉｇｍａ）、ＭｇＣｌ２ １Ｍ（カタログ番号＃Ｍ８２６６、Ｓｉｇｍａ）、本発明の実施例１～３の化合物、陽性対照物質：ＧＤＣ－００６８。
【0132】
２．試験手順
２．１ 試薬の調製
２．１ 試薬の調製
【表1】
【0133】
１×キナーゼ反応バッファー：
１ｍＬのキナーゼＡＫＴ１、２、３の１×キナーゼ反応バッファーには、２００μＬの５×キナーゼ反応バッファー、５μＬの１Ｍ ＭｇＣｌ２、１μＬの１Ｍ ＤＴＴ、７９４μＬの超純水が含まれている。
１ｍＬのキナーゼＡＫＴ１、２、３の１×キナーゼ反応バッファーには、２００μＬの５×キナーゼ反応バッファー、５μＬの１Ｍ ＭｇＣｌ２、１μＬの１Ｍ ＤＴＴ、７９４μＬの超純水が含まれている。
【0134】
５×ＴＫ－ビオチン基質及びＡＴＰ作業溶液：
ＴＫ－ビオチン基質及びＡＴＰの具体的な濃度は、表１を参照する。
１×キナーゼ反応バッファーで基質及びＡＴＰを反応濃度の５倍に希釈した。
ＴＫ－ビオチン基質及びＡＴＰの具体的な濃度は、表１を参照する。
１×キナーゼ反応バッファーで基質及びＡＴＰを反応濃度の５倍に希釈した。
【0135】
５×キナーゼ作業溶液：
酵素のスクリーニング時に適用する濃度は、表１を参照する。１×キナーゼ反応バッファーで５×酵素作業溶液を調製した。
酵素のスクリーニング時に適用する濃度は、表１を参照する。１×キナーゼ反応バッファーで５×酵素作業溶液を調製した。
【0136】
４×ストレプトアビジン－ＸＬ６６５作業溶液：
ストレプトアビジン－ＸＬ６６５の反応中の濃度は、表１を参照する。検出バッファーで４×ストレプトアビジン－ＸＬ６６５作業溶液を調製した。
ストレプトアビジン－ＸＬ６６５の反応中の濃度は、表１を参照する。検出バッファーで４×ストレプトアビジン－ＸＬ６６５作業溶液を調製した。
【0137】
４×ユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体作業溶液：
検出反応バッファーでユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体を１００倍希釈したものを作業溶液とした。
検出反応バッファーでユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体を１００倍希釈したものを作業溶液とした。
【0138】
２．２ 試験プロセス
前記方法で全ての試薬を調製した後、酵素を除いて室温に平衡化させてから、サンプル注入を開始した。
前記方法で全ての試薬を調製した後、酵素を除いて室温に平衡化させてから、サンプル注入を開始した。
【0139】
ａ）まず、ＤＭＳＯで化合物ストック溶液（１０ｍＭのＤＭＳＯ溶液）を１００μＭの化合物溶液に希釈し、次に１×キナーゼ反応バッファーで２．５μＭの化合物作業溶液（ＤＭＳＯを２．５％含む）に希釈した。１×キナーゼ反応バッファーで２．５％のＤＭＳＯ溶液を調製し、次に２．５％のＤＭＳＯ溶液で２．５μＭの化合物作業溶液を希釈し、４倍の比率で７回段階希釈して、合計で８つの濃度（２５００ｎＭ、６２５ｎＭ、１５６ｎＭ、３９ｎＭ、９．８ｎＭ、２．４ｎＭ、０．６ｎＭ、０．１５ｎＭ）の化合物作業溶液を得た。対照ウェルを除いて、全ての反応ウェルに４μＬの希釈した化合物作業溶液を加え、対照ウェルには４μＬの予め調製した２．５％ＤＭＳＯ／キナーゼバッファーを加えた。
【0140】
ｂ）全ての反応ウェルには、予め調製したＴＫ－ビオチン基質溶液２μＬを加えた（酵素スクリーニング時の基質濃度は、表１を参照する）。
【0141】
ｃ）陰性ウェルを除く他の反応ウェルに、予め調製した酵素溶液２μＬを加え（酵素濃度は、表１を参照する）、陰性ウェルは、酵素２μＬで１×キナーゼ反応バッファーに対応して体積を補足した。シーリングフィルムでプレートをカバーし、均一に混合した後、室温で１０分間インキュベートして、化合物を酵素と十分に作用して結合させた。
【0142】
ｄ）全ての反応ウェルにＡＴＰ溶液２μＬを加えてキナーゼ反応を開始した（酵素スクリーニング時のＡＴＰ濃度及び反応時間は、表１を参照する）。
【0143】
ｅ）キナーゼ反応終了前５分間で検出溶液の調製を開始した。キット中の検出バッファーでストレプトアビジン－ＸＬ６６５及びユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体（１：１００）の検出溶液を調製した（酵素スクリーニング時の検出試薬濃度は、表１を参照する）。
【0144】
ｆ）キナーゼ反応が終了した後、全ての反応ウェルに５μＬの希釈したストレプトアビジン－ＸＬ６６５を加え、均一に混合した後、直ちに、希釈したユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体検出溶液を加えた。
【0145】
ｇ）プレートをカバーし、均一に混合し、室温で１時間反応した後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）装置で蛍光シグナル（励起波長：３２０ｎｍ、発光波長：６６５ｎｍ、６１５ｎｍ）を検出した。フルアクティブウェル及びバックグラウンドシグナルウェルから各ウェルの阻害率を計算し、重複したウェルの平均値を算出し、同時に、製図解析ソフトウェアＰＲＩＳＭ ６．０で各被験化合物の半数阻害濃度（ＩＣ５０）をフィッティングした。
【表2】
【0146】
２．３ データ分析
ＥＲ＝６６５ｎｍの蛍光値／６１５ｎｍの蛍光値
阻害率＝（ＥＲ陽性対照－ＥＲサンプル）／（ＥＲ陽性対照－ＥＲ陰性対照）×１００％
ＥＲ＝６６５ｎｍの蛍光値／６１５ｎｍの蛍光値
阻害率＝（ＥＲ陽性対照－ＥＲサンプル）／（ＥＲ陽性対照－ＥＲ陰性対照）×１００％
【0147】
３．試験結果
試験結果は、表３に示す。
試験結果は、表３に示す。
【表3】
【表4】
【表5】
【0148】
実施例５：ＬｎＣａｐヒト前立腺がん皮下移植モデルにおける本発明の化合物の薬力学評価
１．実験材料
１．１ 実験動物
ＮＣＧマウス、雄、８～１０週齢（腫瘍細胞接種時のマウス週齢）。江蘇集萃薬康生物科技株式会社から購入。飼育環境：ＳＰＦ。
１．実験材料
１．１ 実験動物
ＮＣＧマウス、雄、８～１０週齢（腫瘍細胞接種時のマウス週齢）。江蘇集萃薬康生物科技株式会社から購入。飼育環境：ＳＰＦ。
【0149】
１．２ 供試品及び対照薬
供試品：実施例１の異性体２（以下、化合物６２と略称する）
実施例２の異性体２（以下、化合物９８と略称する）
実施例３の異性体４（以下、化合物１０２と略称する）
陽性対照：ＧＤＣ－００６８
供試品：実施例１の異性体２（以下、化合物６２と略称する）
実施例２の異性体２（以下、化合物９８と略称する）
実施例３の異性体４（以下、化合物１０２と略称する）
陽性対照：ＧＤＣ－００６８
【0150】
１．３ 試薬
アンドロゲン錠、その販売者：Ａｌａｄｄｉｎ、カタログ番号：Ａ１９１００９８。
ＦＢＳ、その販売者：Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号：１００９９１４１Ｃ。
ＲＰＭＩ１６４０培養液、その販売者：Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号：Ｃ２２４００５００ＢＴ。
マトリゲル、その販売者：Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号：３５４２３４。
ＰＢＳ、その販売者：Ｃｒｏｗｎｂｉｏ、ロット番号：２０１９０８２８。
アンドロゲン錠、その販売者：Ａｌａｄｄｉｎ、カタログ番号：Ａ１９１００９８。
ＦＢＳ、その販売者：Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号：１００９９１４１Ｃ。
ＲＰＭＩ１６４０培養液、その販売者：Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号：Ｃ２２４００５００ＢＴ。
マトリゲル、その販売者：Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号：３５４２３４。
ＰＢＳ、その販売者：Ｃｒｏｗｎｂｉｏ、ロット番号：２０１９０８２８。
【0151】
２．実験方法及び手順
２．１細胞
ＬｎＣａｐ細胞は、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を１０ｖｏｌ％含んでいるＲＰＭＩ１６４０培養液で培養した。指数増殖期のＬｎＣａｐ細胞を集め、マウスへの皮下腫瘍接種に使用するように、ＰＢＳで適切な濃度に再懸濁した。
２．１細胞
ＬｎＣａｐ細胞は、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を１０ｖｏｌ％含んでいるＲＰＭＩ１６４０培養液で培養した。指数増殖期のＬｎＣａｐ細胞を集め、マウスへの皮下腫瘍接種に使用するように、ＰＢＳで適切な濃度に再懸濁した。
【0152】
２．２ モデリング及び群分け
全ての動物は、細胞接種の１日前に、皮下にアンドロゲン錠を埋め込み、プロセスに亘って無菌で操作した。実験マウスは、１×１０７個のＬｎＣａｐ細胞を皮下接種し、１：１でＰＢＳ及びマトリゲル（０．２ｍＬ／匹）を混合したものに細胞を再懸濁させ、腫瘍の増殖状況を定期的に観察し、腫瘍が、平均体積１７７．７０ｍｍ３まで成長した時に、腫瘍のサイズ及びマウスの体重に基づいて無為に群毎に投与した（表４を参照する）。腫瘍体積の計算式は、（長径×短径２）／２である。
全ての動物は、細胞接種の１日前に、皮下にアンドロゲン錠を埋め込み、プロセスに亘って無菌で操作した。実験マウスは、１×１０７個のＬｎＣａｐ細胞を皮下接種し、１：１でＰＢＳ及びマトリゲル（０．２ｍＬ／匹）を混合したものに細胞を再懸濁させ、腫瘍の増殖状況を定期的に観察し、腫瘍が、平均体積１７７．７０ｍｍ３まで成長した時に、腫瘍のサイズ及びマウスの体重に基づいて無為に群毎に投与した（表４を参照する）。腫瘍体積の計算式は、（長径×短径２）／２である。
【表6】
【0153】
２．３ 薬物の調製
本発明の化合物及び陽性対照を溶媒で溶解し、化合物６２の濃度が１．２５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬである溶液、陽性対照の濃度が２．５ｍｇ／ｍＬである溶液、化合物９８の濃度が５ｍｇ／ｍＬである溶液、化合物１０２の濃度が５ｍｇ／ｍＬである溶液をそれぞれ得た。
本発明の化合物及び陽性対照を溶媒で溶解し、化合物６２の濃度が１．２５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬである溶液、陽性対照の濃度が２．５ｍｇ／ｍＬである溶液、化合物９８の濃度が５ｍｇ／ｍＬである溶液、化合物１０２の濃度が５ｍｇ／ｍＬである溶液をそれぞれ得た。
【0154】
溶媒：溶媒はＰＧ、ＰＥＧ４００と水の混合溶媒であり、ＰＧ：ＰＥＧ４００：水＝２０～４０：２０～３０：３０～５０（Ｖ：Ｖ：Ｖ）であり、当該比率範囲内の任意の比率であってよい。
【0155】
２．４ 投与計画
具体的な投与計画は、表５を参照する。
具体的な投与計画は、表５を参照する。
【表7】
【0156】
２．５ データへの分析
全ての実験結果は、平均腫瘍体積±ＳＥＭ（標準誤差）で示す。独立したサンプルのｔ検定で、治療群の腫瘍体積は、対照群と比べて有意差があるかどうかを比較した。全てのデータは、ＳＰＳＳ １８．０で分析する。ｐ＜０．０５は、有意差があると示す。
Ｔ／Ｃ（％）＝治療群の平均腫瘍体積／対照群の平均腫瘍体積×１００％；
ＴＧＩ（％）＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％。
全ての実験結果は、平均腫瘍体積±ＳＥＭ（標準誤差）で示す。独立したサンプルのｔ検定で、治療群の腫瘍体積は、対照群と比べて有意差があるかどうかを比較した。全てのデータは、ＳＰＳＳ １８．０で分析する。ｐ＜０．０５は、有意差があると示す。
Ｔ／Ｃ（％）＝治療群の平均腫瘍体積／対照群の平均腫瘍体積×１００％；
ＴＧＩ（％）＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％。
【0157】
２．６ 実験結果
各治療群及び対照群の腫瘍増殖状況は、表６を参照する。
各治療群及び対照群の腫瘍増殖状況は、表６を参照する。
【表8】
【0158】
本発明者らは、本発明の式（Ｉ－０）で示される化合物は、ＡＫＴキナーゼの活性に対する阻害効果を有し、特に、本発明の 式（Ｉ）で示される化合物（即ち、実施例１の異性体２、実施例２の異性体２及び実施例３の異性体４）が、インビボ実験で明らかな腫瘍抑制効果を示していることを見出した。従って、本発明の化合物及びそれを含む医薬組成物は、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するために利用することができる。さらに、本発明者らは、前記医薬組成物を必要がある個体への投与用量は、式（Ｉ－０）で示される化合物又は式（Ｉ）で示される化合物で、０．００１～１００ｍｇ／ｋｇ体重／日であり、好ましくは、０．０１～５０ｍｇ／ｋｇ体重／日であり、より好ましくは、１０～５０ｍｇ／ｋｇ体重／日である場合、腫瘍の増殖を明らかに抑制できることを見出している。
【0159】
製剤実施例：
以下、本発明の例示的な製剤を提供する。以下の製剤は、当業者に熟知される当分野の通常の調製方法で調製できると理解すべきである。
以下、本発明の例示的な製剤を提供する。以下の製剤は、当業者に熟知される当分野の通常の調製方法で調製できると理解すべきである。
【0160】
【表9】
ａ）化合物６２、無水リン酸水素カルシウム、ベヘン酸グリセリルをミキサーのホッパーに加えて均一に混合する。
ｂ）混合物をカプセルに充填する。
【0161】
【表10】
製剤１の方法で調製した。
【0162】
【表11】
製剤１の方法で調製した。
【0163】
【表12】
製剤１の方法で調製した。
【0164】
【表13】
製剤１の方法で調製した。
【0165】
【表14】
ａ）化合物６２、リン酸水素カルシウム二水和物、ベヘン酸グリセリルをミキサーのホッパーに加え、均一に混合する。
ｂ）混合物をアルミバッグに充填し、ドライサスペンション剤を形成する。
【0166】
上述したのは、本発明の好ましい実施例に過ぎず、本発明を限定するものではない。本発明の趣旨及び原則において、修正、同等な置換、改良などを行うものであれば、いずれも本発明の保護範囲に含まれるものである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
