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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-10-02
(45)【発行日】2024-10-10
(54)【発明の名称】血中の肝酵素レベルを測定するシステム及び方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/50 20060101AFI20241003BHJP
G01N 27/327 20060101ALI20241003BHJP
G01N 27/416 20060101ALI20241003BHJP
G01N 27/333 20060101ALI20241003BHJP
【ＦＩ】
G01N33/50 Z
G01N27/327
G01N27/416 336B
G01N27/333 331A
G01N27/416 336N
【請求項の数】
28
(21)【出願番号】P 2021510731
(86)(22)【出願日】2019-09-17
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-25
(86)【国際出願番号】 US2019051383
(87)【国際公開番号】W WO2021054937
(87)【国際公開日】2021-03-25
【審査請求日】2022-09-16
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】501464761
【氏名又は名称】ノヴァ バイオメディカル コーポレイション
【住所又は居所原語表記】２００ Ｐｒｏｓｐｅｃｔ Ｓｔｒｅｅｔ Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ ０２４５４（ＵＳ）
(74)【代理人】
【識別番号】110000578
【氏名又は名称】名古屋国際弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】ペイ ジァンホン
(72)【発明者】
【氏名】ベダード ジョセフ
(72)【発明者】
【氏名】ウシマンジァン イリヤシ
(72)【発明者】
【氏名】フロリンディ アンソニー
(72)【発明者】
【氏名】ヤン チュン チャン
【審査官】三木 隆
(56)【参考文献】
【文献】米国特許出願公開第２０１７／０１８３７１１（ＵＳ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２０１９／００３８１９６（ＵＳ，Ａ１）
【文献】韓国公開特許第１０－２０１８－０００３０６１（ＫＲ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｇ０１Ｎ ３３／５０
Ｇ０１Ｎ ２７／３２７
Ｇ０１Ｎ ２７／４１６
Ｇ０１Ｎ ２７／３３３
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
血液試料中の１つ以上の肝酵素の濃度を定量するポイント・オブ・ケア分析器で使用する使い捨て検査カートリッジであって、カートリッジ本体と、
取り外し可能なカートリッジカバーと、
検査ストリップモジュールと、を備え、
前記カートリッジ本体は、複数のチャンバを有し、前記複数のチャンバの各々は、前記カートリッジ本体の上部に開口を有し、前記複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、血液試料と組み合わせると化学反応を起こして少なくとも１つの反応生成物を含む反応溶液を形成することができる反応混合物を含み、前記反応混合物が、前記血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのうちの１つによって触媒作用を及ぼされることに特化した化学物質を含み、
前記取り外し可能なカートリッジカバーは、前記カートリッジ本体に接続されて前記複数のチャンバを覆っており、キャピラリ受容開口と、前記カートリッジカバーに取り外し可能に挿入可能なキャピラリ要素と、を有し、前記キャピラリ要素は、血液試料を取得するように構成され、
前記検査ストリップモジュールは、前記カートリッジ本体と一体的に成形されており、前記反応溶液の一部を受容するとともに、前記少なくとも１つの反応生成物である少なくとも１つの検体を測定するように構成された少なくとも１つの検体検査ストリップを含む、使い捨て検査カートリッジ。
【請求項2】
ＡＬＴの定量に特化した化学物質を含む前記反応混合物は、Ｌ－アラニンと、α－ケトグルタル酸と、を含む、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項3】
ＡＳＴの定量に特化した化学物質を含む前記反応混合物は、Ｌ－アスパラギン酸と、α－ケトグルタル酸と、を含む、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項4】
ＡＳＴの定量に特化した化学物質を含む前記反応混合物は、Ｌ－アスパラギン酸と、α－ケトグルタル酸と、オキサロ酢酸デカルボキシラーゼと、を含む、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項5】
ＡＬＰの定量に特化した化学物質を含む前記反応混合物は、フェニルリン酸ナトリウム又はその誘導体を含む、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項6】
ＧＧＴの定量に特化した化学物質を含む前記反応混合物は、Ｌ－グルタミン酸ガンマアニリド又はその誘導体と、グリシルグリシンと、を含む、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項7】
前記複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、肝酵素ＡＬＴ又はＡＳＴのいずれかによって触媒作用を及ぼされることに特化した化学物質を含む場合に、前記検査ストリップモジュールに、ピルビン酸又はＬ－グルタミン酸を測定するように構成された検体検査ストリップが組み込まれる、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項8】
前記複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、肝酵素ＡＬＴによって触媒作用を及ぼされる化学物質を含む場合に、前記検査ストリップモジュールに、フェノールを測定するように構成された検体検査ストリップが組み込まれる、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項9】
前記複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、肝酵素ＧＧＴによって触媒作用を及ぼされる化学物質を含む場合に、前記検査ストリップモジュールに、アニリンを測定するように構成された検体検査ストリップが組み込まれる、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項10】
前記検査ストリップモジュールに、ピルビン酸オキシダーゼ、グルタミン酸オキシダーゼ又はグルタミン酸デヒドロゲナーゼのうちの１つを含む作用電極上に配置された試薬マトリックスを有する検体検査ストリップが組み込まれる、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項11】
前記検査ストリップモジュールに、作用電極上に配置された試薬マトリックスを有する検体検査ストリップが組み込まれ、前記試薬マトリックスは酵素又は媒介物を含まない、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項12】
前記検体検査ストリップが、電気接点端と、試料端と、前記試料端から予め定められた距離を置いた試料受入ポートとを有する、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項13】
前記試料端が、ベント開口部と、前記試料受入ポートと前記ベント開口部との間の試料チャネルとを含む、請求項１２に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項14】
前記検査ストリップモジュールに、２つ以上の検体検査ストリップが組み込まれ、前記２つ以上の検体検査ストリップの少なくとも２つが、同じ検体を測定する、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項15】
前記検査ストリップモジュールに、２つ以上の検体検査ストリップが組み込まれ、前記２つ以上の検体検査ストリップの各々が、異なる検体を測定する、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジ。
【請求項16】
血液試料中の１つ以上の肝酵素の濃度を定量する方法であって、請求項１に記載の使い捨て検査カートリッジを提供することであって、前記複数のチャンバは、前記血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのうちの１つによって触媒作用を及ぼされる予め定められた化学物質を含む反応物チャンバを含み、前記使い捨て検査カートリッジはさらに血液試料受容チャンバを含む、提供することと、
血液試料を取得して、前記血液試料の少なくとも一部を前記血液試料受容チャンバに配置することと、
前記血液試料を希釈して希釈された血液試料を形成することと、
予め定められた量の前記希釈された血液試料を前記反応物チャンバに配置することと、
前記予め定められた化学物質と前記希釈された血液試料との間の反応を予め定められた期間継続させて、少なくとも１つの反応生成物を含む反応溶液を形成することと、
前記反応溶液の一部を、前記反応溶液中の前記少なくとも１つの反応生成物の量を測定可能な前記検体検査ストリップに移すことと、
前記反応溶液中に存在する前記少なくとも１つの反応生成物の量を測定することと、
前記反応溶液中の前記少なくとも１つの反応生成物の量を、前記血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのうちの１つの量に相関させることと、を含む方法。
【請求項17】
前記測定することが、前記反応溶液中のピルビン酸、グルタミン酸、フェノール、又はアニリンのうちの１つの量を測定することをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
前記相関させることが、前記反応溶液中のピルビン酸、グルタミン酸、フェノール、又はアニリンのうちの１つの量を、前記血液試料中のＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴの量にそれぞれ相関させることをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記測定することが、電気化学的測定手法を使って、前記少なくとも１つの反応生成物を測定することをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項20】
前記測定することが、アンペロメトリーを使って、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴの定量のための前記少なくとも１つの反応生成物を測定することをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項21】
前記測定することが、リニアスイープボルタンメトリーを使って、ＡＬＰの定量のための前記少なくとも１つの反応生成物を測定することをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項22】
血液試料中の１つ以上の肝酵素の濃度を定量するポイント・オブ・ケア分析器で使用する使い捨て検査カートリッジキットであって、カートリッジ本体と、
取り外し可能なカートリッジカバーと、
使い捨てピペットチップと、
検査ストリップモジュールと、を備え、
前記カートリッジ本体は、複数のチャンバを有し、前記複数のチャンバの各々は、前記カートリッジ本体の上部に開口を有し、前記複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、血液試料と組み合わせると化学反応を起こして少なくとも１つの反応生成物を含む反応溶液を形成することができる反応混合物を含み、前記反応混合物が、前記血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのうちの１つによって触媒作用を及ぼされることに特化した化学物質を含み、
前記取り外し可能なカートリッジカバーは、前記カートリッジ本体に接続されて前記複数のチャンバを覆っており、キャピラリ受容開口と、前記カートリッジカバーに取り外し可能に挿入可能なキャピラリ要素と、を有し、前記キャピラリ要素は、血液試料を取得するように構成され、
前記使い捨てピペットチップは、前記複数のチャンバのうちの１つに配置され、
前記検査ストリップモジュールは、前記カートリッジ本体と一体的に成形されており、前記反応溶液の一部を受容するとともに、前記少なくとも１つの反応生成物である少なくとも１つの検体を測定するように構成された少なくとも１つの検体検査ストリップを含む、使い捨て検査カートリッジキット。
【請求項23】
前記使い捨て検査カートリッジの使用方法及び前記キャピラリ要素の使用説明書をさらに含む、請求項２２に記載のキット。
【請求項24】
ポイント・オブ・ケア分析器を使用して血液試料中の１つ以上の肝酵素の濃度を電気化学的に定量する方法であって、ポイント・オブ・ケア分析器を提供することと、
前記ポイント・オブ・ケア分析器で使用する使い捨て検査カートリッジを取得することであって、前記使い捨て検査カートリッジが、
カートリッジ本体と、
取り外し可能なカートリッジカバーと、
使い捨てピペットチップと、
検査ストリップモジュールと、を備え、
前記カートリッジ本体は、複数のチャンバを有し、前記複数のチャンバの各々は、前記カートリッジ本体の上部に開口を有し、前記複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、血液試料と組み合わせると化学反応を起こして少なくとも１つの反応生成物を含む反応溶液を形成することができる反応混合物を含み、前記反応混合物が、前記血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのうちの１つによって触媒作用を及ぼされることに特化した化学物質を含み、
前記取り外し可能なカートリッジカバーは、前記カートリッジ本体に接続されて前記複数のチャンバを覆っており、キャピラリ受容開口と、前記カートリッジカバーに取り外し可能に挿入可能な取り外し可能なキャピラリ要素と、を有し、前記キャピラリ要素は、血液試料を取得するように構成され、
前記使い捨てピペットチップは、前記複数のチャンバのうちの１つに配置され、
前記検査ストリップモジュールは、前記カートリッジ本体と一体的に成形されており、前記反応溶液の一部を受容するとともに、前記少なくとも１つの反応生成物である少なくとも１つの検体を測定するように構成された少なくとも１つの検体検査ストリップを含む、前記ポイント・オブ・ケア分析器で使用する使い捨て検査カートリッジを取得することと、
前記キャピラリ要素を前記取り外し可能なカートリッジカバーから取り外し、前記キャピラリ要素内の血液試料を受容して、前記血液試料を含むキャピラリ要素を前記取り外し可能なカートリッジカバーに再配置することと、
前記使い捨て検査カートリッジを前記ポイント・オブ・ケア分析器に配置することと、
前記ポイント・オブ・ケア分析器で検査サイクルを開始することと、を含む、方法。
【請求項25】
前記開始することが、前記血液試料を前記キャピラリ要素から前記キャピラリ要素の真下のチャンバの底に吸引することと、
前記カートリッジカバーを前記カートリッジ本体から取り外すことと、
前記ピペットチップを前記ポイント・オブ・ケア分析器内の自動ピペッタ装置に取り付けることと、
予め定められた量の希釈剤を複数のチャンバのうちの別のチャンバからピペットで移し、前記予め定められた量を前記血液試料を含むチャンバに配置して希釈された血液試料を形成することにより、前記血液試料を希釈することと、
予め定められた量の前記希釈された血液試料を取り出し、前記予め定められた量を、前記血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのうちの１つによって触媒作用を及ぼされることに特化した化学物質の前記反応混合物を含む前記複数のチャンバのうちの別のチャンバにピペットで移して反応溶液を形成することにより、前記予め定められた量の希釈された血液試料を配置することと、
予め定められた反応時間後に、予め定められた量の前記反応溶液を取り出し、前記少なくとも１つの検体検査ストリップ上に配置して、前記少なくとも１つの検体を測定することと、
前記反応溶液中の前記少なくとも１つの検体の量を測定することと、
前記反応溶液中の前記少なくとも１つの検体の量を、前記血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのうちの１つの量に相関させることと、をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記測定することが、前記反応溶液中のピルビン酸、グルタミン酸、フェノール、又はアニリンのうちの１つの量を測定することを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項27】
前記測定することが、アンペロメトリーを用いて、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴの定量のための前記少なくとも１つの反応生成物を測定することを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
前記測定することが、リニアスイープボルタンメトリーを用いて、ＡＬＰの定量のための前記少なくとも１つの反応生成物を測定することを含む、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
［発明の背景］
１．発明の分野
本発明は、主に酵素活性を測定するための検出手法に関する。特に、本発明は、肝酵素活性を測定するための検出手法に関する。
１．発明の分野
本発明は、主に酵素活性を測定するための検出手法に関する。特に、本発明は、肝酵素活性を測定するための検出手法に関する。
【0002】
２．先行技術の説明
アミノトランスフェラーゼは、グリコーゲンを作るために肝臓が使用する酵素である。グリコーゲンは、ブドウ糖の貯蔵型である。すぐに使用されないブドウ糖は、グリコーゲンに変換されて、将来的な使用のために細胞に貯蔵される。大部分は肝臓に貯蔵され、残りは骨格筋、脳のグリア細胞、及び他の器官に貯蔵される。
アミノトランスフェラーゼは、グリコーゲンを作るために肝臓が使用する酵素である。グリコーゲンは、ブドウ糖の貯蔵型である。すぐに使用されないブドウ糖は、グリコーゲンに変換されて、将来的な使用のために細胞に貯蔵される。大部分は肝臓に貯蔵され、残りは骨格筋、脳のグリア細胞、及び他の器官に貯蔵される。
【0003】
肝酵素は、通常、肝臓において高濃度で見られる物質である。いくつかのより重要な肝酵素には、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、γ－グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）が含まれる。血中に見られるこれらの肝酵素レベルのいずれかの上昇は、肝臓の問題の兆候である可能性がある。
【0004】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）は、肝臓の問題の兆候を調べるのに重要な２つの酵素である。両方を使用する場合、ＡＬＴレベルとＡＳＴレベルの比較は、肝毒性、肝疾患、又は肝障害を特定するのに役立つ。
【0005】
ＡＬＴ及びＡＳＴは、主に肝臓に見られる酵素であるが、赤血球、心臓細胞、筋肉組織、及び膵臓や腎臓などの他の臓器にも見られる。特に、ＡＳＴは、肝臓、脳、膵臓、心臓、腎臓、肺、及び骨格筋を含む様々な組織に見られる。これらの組織のいずれかが損傷した場合、ＡＳＴが血流に放出される。ＡＳＴレベルの上昇は、組織損傷を示すが、それは肝臓に特有のものではない。他方で、ＡＬＴは、主に肝臓に見られる。ＡＬＴの上昇は、肝障害の直接的な兆候である。
【0006】
ＡＬＰは、人の血液中の酵素であり、タンパク質を分解するのに役立つ。体は、様々なプロセスにＡＬＰを使用し、肝機能と骨の発達に特に重要な役割を果たす。ＡＬＰ検査を使用することにより、この酵素がどのぐらい人の血液中で循環しているのかを測定できる。ＡＬＰレベルがわずかに不規則であっても、通常は心配する必要はない。ひどく異常なレベルであれば、重度の基礎疾患、通常は、肝臓、骨、又は胆嚢に関連する疾患を示すことがある。ＡＬＰは、骨と肝臓に最も豊富であるため、血中ＡＬＰレベルの上昇は、一般的に、肝臓又は骨の状態の兆候である。肝臓の閉塞又は肝臓の損傷は、ＡＬＰレベルを上昇させる。これは、骨細胞の活動が増加した場合にも起きる。
【0007】
ＡＬＰレベルの異常は、通常、以下の状態の一つを示す：胆石、胆嚢炎（すなわち、胆嚢の炎症）、肝臓がん、肝臓の異常及び非癌性増殖、肝硬変（すなわち、肝臓の瘢痕化）、肝炎（すなわち、多くは感染による肝臓の炎症）、胆汁癌、肝臓に有害な薬物の乱用、アルコールの過剰摂取、栄養失調（特に、ビタミンＤ、カルシウム、タンパク質、マグネシウム、及び亜鉛の欠乏）、及び骨の癌。
【0008】
ＧＧＴは、体中の多くの臓器で見られる酵素であり、肝臓に最も高濃度で見られる。通常、ＧＧＴは、血液中に低いレベルで存在する。ＧＧＴは、通常、肝臓から腸へ胆汁を運ぶ胆管のいずれかが、例えば腫瘍や石によって閉塞されたときに血中で上昇する最初の肝酵素である。このことが、ＧＧＴを胆管の問題を検出するための最も感度の高い肝酵素検査にしている。しかしながら、ＧＧＴ検査は、肝臓がんやウイルス性肝炎などの多くの種類の肝疾患だけでなく、急性冠症候群などの他の非肝疾患でも上昇する可能性があるため、あまり特異的でなく、肝障害の様々な原因を区別するのには役立たない。ＧＧＴテストを単独で日常的に使用することは勧められない。しかしながら、他の検査と組み合わせて、ＡＬＰレベルが高い原因を特定するのに役立つことがある。肝疾患においてはＧＧＴとＡＬＰの両方が増加するが、骨組織に影響する病気ではＡＬＰのみが増加する。したがって、ＧＧＴは、上昇したＡＬＰのフォローアップとして、高ＡＬＰの結果が肝臓又は骨の病気のいずれによるものかを判断するのに使用できる。ＧＧＴ検査の結果が正常なＧＧＴレベルである場合、骨の問題を示している可能性がある。他方で、高いＧＧＴレベルは、肝臓又は胆管の問題を示す可能性がある。ＧＧＴレベルは、少量のアルコールの摂取で増加することがある。高いレベルは、一日２～３杯未満しか飲まない人や、たまにしか大量に飲酒しない人（短時間で大量に飲酒する人）よりも、慢性的な大量飲酒者に多く見られる。ＧＧＴ検査は、誰かについての急性又は慢性のアルコール乱用を評価する際にも使用できる。
【0009】
現在のＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、及びＧＧＴの検査方法は、血液試料を必要とする。血液試料は、瀉血専門医又は看護師が、針と針の端に取り付けられたプラスチックチューブを使用して患者の肘の内側の静脈から、一定量の血液を採取することにより得られる。血液試料は、その後、臨床検査室に送られて分析される。
【0010】
正常ラボ値は、国際単位／リットル（ＩＵ／Ｌ）で測定され、個人のボディマス指数と個々のラボの参照値に基づいて変化する。通常、大人の正常基準範囲は、ＡＳＴで８～４８ＩＵ／Ｌ、ＡＬＴで７～５５ＩＵ／Ｌ、ＡＬＰで２０～１４０ＩＵ／Ｌ、ＧＧＴで０～３０ＩＵ／Ｌである。範囲の上限は、肝酵素がどの程度上昇しているかを確認するために使用される。ＡＳＴやＡＬＴレベルは、主に肝疾患の診断に大いに役立つ。ＡＳＴ／ＡＬＴ比は、何が起こっており、その問題が急性か慢性かについての貴重な手掛かりを提供できる。ＡＳＴ／ＡＬＴ比は、血中のＡＳＴとＡＬＴのレベルを比較する計算である。どちらの値がどの程度上昇しているかは、どの疾患が関与しているかについての強力な指標となる。
【0011】
例えば、ＡＳＴ／ＡＬＴ比が１未満である場合、非アルコール性脂肪性肝疾患を示唆している。ＡＳＴ／ＡＬＴ比が１である場合、急性ウイルス性肝炎又は薬物関連の肝毒性を示唆している。ＡＳＴ／ＡＬＴ比が１より大きい場合、肝硬変を示唆している。ＡＳＴ／ＡＬＴ比が２対１を超える場合は、アルコール性肝疾患を示唆している。比率だけでは不十分である。上昇の大きさが重要である。
【0012】
例えば、アルコール性脂肪性肝疾患では、一般的に、ＡＳＴは、正常上限値の８倍を超え、ＡＬＴは、正常上限値の５倍を超える。ＡＳＴとＡＬＴが両方とも各正常上限値の４倍を超える場合、非アルコール性脂肪性肝疾患を示している。急性ウイルス性肝炎においては、ＡＳＴとＡＬＴの両方が各々の正常上限値の２５倍になる。慢性Ｃ型肝炎では、ＡＳＴ及びＡＬＴは、各正常上限値の２～１０倍になる場合がある。ＡＳＴ及びＡＬＴが各正常上限値の５０倍を超える場合は、虚血性肝障害を示している。
【0013】
ＡＳＴ及びＡＬＴを測定するのに利用できる検出手法はいくつかあり、「アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ／ＧＯＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ／ＧＰＴ）検出手法」（センサ、２００６、６、ｐｐ．７５６－７８２）と題された雑誌記事に記載されている。これらには、比色分析、分光光度分析、化学発光、クロマトグラフィー、蛍光及びＵＶ吸光度、放射化学的分析、及び電気化学的手法が含まれる。
【0014】
比色分析の限界は、検量線を作成し、酵素反応を停止する必要があることである。分光光度分析は、分光光度計、３－Ｔシグマスキャナーなどの追加の機器が必要であり、そのため、ポイント・オブ・ケア用途や家庭用検査システムには適さない。さらに、分光光度法は、血清が黄疸性又は脂肪血症性であるか、又は臨床試料において一般的である溶血の生成物を含む場合、信頼できる結果が出ない。化学発光では、スーパーオキシドジスムターゼやＮ－ニトロ－Ｌ－アルギニンメチルエステル塩酸塩などの化学発光の阻害剤がいくつか存在し、その存在により、検出前にこれらの阻害剤を削減又は排除する必要がある。クロマトグラフィーには、独自の問題がある。反応混合物のクロマトグラフィー分離は、疎水性および電荷が互いに非常に異なっているのに非常に類似するクロマトグラフィー挙動を持つ化合物が存在するため、より複雑である。検査条件の最適化は、単一の血清試料中の両方の酵素の定量に非常に重要である。
【0015】
蛍光及びＵＶ吸光度手法にも問題がある。ｐＨ、イオン強度、非共有相互作用、光強度、温度などを含む多くの環境要因が、これらの手法を使用した結果に影響を与える。厳格な試薬条件、容器条件、機器条件も必要である。そうでない場合、非特異的蛍光又は蛍光消光が結果に影響を与える可能性がある。電気化学的手法は、未修飾金電極を使用した検出、ピルビン酸オキシダーゼ修飾電極を使用した検出、グルタミン酸オキシダーゼ修飾電極を使用した検出、及びＧＯＴ及びＧＰＴ用のＬ－乳酸バイオセンサを使用した検出を含む。しかし、電気化学的測定は、血清試料中に存在する干渉レベルに対する信号分解能が低い傾向があり、これは、電極触媒表面の性質と、電極に固定された酵素のタンパク質負荷が比較的低いことに起因する可能性がある。
【0016】
［発明の概要］
ポイント・オブ・ケアのトランスアミナーゼ検査をするための最新の試みは、２０１３年５月に臨床消化器病学及び肝臓病学（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ）に掲載された、Ｎｉｒａ Ｒ．Ｐｏｌｌｏｃｋらによる「ポイント・オブ・ケアの紙ベースのフィンガスティックトランスアミナーゼ検査:発展途上世界のための低コストの“ラブ・オン・チップ”手法に向けて（Ａ ｐｏｉｎｔ－ｏｆ－ｃａｒｅ ｐａｐｅｒ－ｂａｓｅｄ ｆｉｎｇｅｒｓｔｉｃｋ ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ ｔｅｓｔ：ｔｏｗａｒｄｓ ｌｏｗ－ｃｏｓｔ“ｌａｂ－ｏｎ－ａ－ｃｈｉｐ”ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｗｏｒｌｄ）」と題された国立衛生研究所の研究で説明されている。著者は、パターン化された紙を切手サイズの装置に重ねて作成した３Ｄ装置について説明しており、この装置は、１つの臨床試料に対して１５分で２つの別々の検査を実行し、一方のゾーンはＡＳＴを測定し、他方のゾーンはＡＬＴを測定する。装置はまた、適切な装置パフォーマンスを確保するために３つの制御ゾーンを含む。メチルグリーンのスルホン化に基づくＡＳＴアッセイ作用は、青からピンクへの視覚的変換をもたらす。ペルオキシダーゼの化学的性質に基づくＡＬＴアッセイは、上昇したＡＬＴレベルの存在下で赤色色素を生成する。しかし、この装置は、まだ臨床使用できない。
ポイント・オブ・ケアのトランスアミナーゼ検査をするための最新の試みは、２０１３年５月に臨床消化器病学及び肝臓病学（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ）に掲載された、Ｎｉｒａ Ｒ．Ｐｏｌｌｏｃｋらによる「ポイント・オブ・ケアの紙ベースのフィンガスティックトランスアミナーゼ検査:発展途上世界のための低コストの“ラブ・オン・チップ”手法に向けて（Ａ ｐｏｉｎｔ－ｏｆ－ｃａｒｅ ｐａｐｅｒ－ｂａｓｅｄ ｆｉｎｇｅｒｓｔｉｃｋ ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ ｔｅｓｔ：ｔｏｗａｒｄｓ ｌｏｗ－ｃｏｓｔ“ｌａｂ－ｏｎ－ａ－ｃｈｉｐ”ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｗｏｒｌｄ）」と題された国立衛生研究所の研究で説明されている。著者は、パターン化された紙を切手サイズの装置に重ねて作成した３Ｄ装置について説明しており、この装置は、１つの臨床試料に対して１５分で２つの別々の検査を実行し、一方のゾーンはＡＳＴを測定し、他方のゾーンはＡＬＴを測定する。装置はまた、適切な装置パフォーマンスを確保するために３つの制御ゾーンを含む。メチルグリーンのスルホン化に基づくＡＳＴアッセイ作用は、青からピンクへの視覚的変換をもたらす。ペルオキシダーゼの化学的性質に基づくＡＬＴアッセイは、上昇したＡＬＴレベルの存在下で赤色色素を生成する。しかし、この装置は、まだ臨床使用できない。
【0017】
したがって、肝酵素の測定が可能で、信頼できる正確な結果を提供するポイント・オブ・ケア分析装置の必要性がある。
【0018】
本発明の目的は、血中の肝酵素レベルを測定するポイント・オブ・ケア装置及び方法を提供することである。
【0019】
本発明の別の目的は、電気化学的手法を用いて血中の肝酵素レベルを測定するポイント・オブ・ケアシステム及び方法を提供することである。
【0020】
本発明の更なる目的は、血中のＡＬＴ及び／又はＡＳＴ、及び／又はＡＬＰ、及び／又はＧＧＴを測定するポイント・オブ・ケアシステム及び方法を提供することである。
【0021】
本発明の目的は、血液試料中のＡＬＴ及び／又はＡＳＴ、及び／又はＡＬＰ、及び／又はＧＧＴの定量に電気化学的手法を使用する場合に信頼できる正確な結果を提供することである。
【0022】
本発明は、一実施形態において、血液試料中の１つ以上の肝酵素の濃度を判断するためのポイント・オブ・ケアシステム用の使い捨て検査カートリッジを提供することにより、これら及び他の目的を達成する。
【0023】
本発明の一実施形態において、検査カートリッジは、カートリッジ本体と、取り外し可能なカートリッジカバーと、検査ストリップモジュールとを含む。カートリッジ本体は、複数のチャンバを有し、複数のチャンバの各々が、カートリッジ本体の上部に開口部を有する。複数のチャンバのうちの少なくとも１つは、血液試料と組み合わせると化学反応を起こして少なくとも１つの反応生成物を含む反応溶液を形成することができる反応混合物を含む。反応混合物は、血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのいずれかによって触媒作用を及ぼされることに特化した化学物質を含む。取り外し可能なカートリッジカバーは、カートリッジ本体に取り外し可能に接続され、複数のチャンバを覆う。取り外し可能なカートリッジカバーは、キャピラリ受容開口と、カートリッジカバーに取り外し可能に挿入可能なキャピラリ要素も有する。キャピラリ要素は、取り外し可能なカートリッジカバーがカートリッジ本体に接続されているとき、複数のチャンバのうちの１つのチャンバ内に延びる。キャピラリ要素は、キャピラリ要素が血液試料に触れると、毛細管現象によって血液試料を取得するように構成されている。検査ストリップモジュールは、カートリッジ本体に直接接続され、反応溶液の一部を受容するとともに、少なくとも１つの反応生成物である少なくとも１つの検体を測定するように構成された少なくとも１つの検体検査ストリップを含む。
【0024】
本発明の別の実施形態では、ＡＬＴの定量に特化した化学物質を含む反応混合物が、Ｌ－アラニンとα－ケトグルタル酸とを含む。
【0025】
本発明の別の実施形態では、ＡＳＴの定量に特化した化学物質を含む反応混合物が、Ｌ－アスパラギン酸とα－ケトグルタル酸とを含む。
【0026】
別の実施形態では、ＡＳＴの定量に特化した化学物質を含む反応混合物が、Ｌ－アスパラギン酸と、α－ケトグルタル酸と、オキサロ酢酸デカルボキシラーゼとを含む。
【0027】
別の実施形態では、ＡＬＰの定量に特化した化学物質を含む反応混合物が、フェニルリン酸ナトリウム又はその誘導体を含む。以下の反応は、反応物、すなわち、フェニルリン酸ナトリウム、の誘導体と、反応生成物であるフェノール及びその誘導体の化学構造を表している。
【0028】
【化1】
【0029】
ここで、Ｒ１及びＲ２は、－Ｈ、－Ｒ、－ＯＲ、－ＮＯ２、－ＣＯＯＲ、－ＳＯ３Ｈ、などであってもよい。後述する検査データでは、Ｒ１及びＲ２は、－Ｈである。
【0030】
別の実施形態では、ＧＧＴの定量に特化した化学物質を含む反応混合物が、Ｌ－グルタミン酸ガンマアニリド及びその誘導体とグリシルグリシン及びその誘導体とを含む。以下の反応は、反応物、すなわち、Ｌ－グルタミン酸ガンマアナリド、の誘導体と、反応生成物のアナリン及びその誘導体の化学構造を表している。
【0031】
【化2】
【0032】
ここで、Ｘ１及びＸ２は、－Ｈ、－Ｒ、－ＯＲ、－ＮＯ２、－ＣＯＯＲ、－ＳＯ３Ｈ、などであってもよい。
【0033】
別の実施形態では、複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、肝酵素ＡＬＴ又はＡＳＴの１つによって触媒作用を及ぼされることに特化した化学物質を含む場合に、検査ストリップモジュールに、ピルビン酸又はＬ－グルタミン酸を測定するように構成された検体検査ストリップが組み込まれる。
【0034】
別の実施形態では、複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、肝酵素ＡＬＰによって触媒作用を及ぼされる化学物質を含む場合に、検査ストリップモジュールに、フェノール又はその誘導体を測定するように構成された検体検査ストリップが組み込まれる。
【0035】
別の実施形態では、複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、肝酵素ＧＧＴによって触媒作用を及ぼされる化学物質を含む場合に、検査ストリップモジュールに、アニリン又はその誘導体を測定するように構成された検体検査ストリップが組み込まれる。
【0036】
別の実施形態では、検査ストリップモジュールに、ピルビン酸オキシダーゼ、グルタミン酸オキシダーゼ又はグルタミン酸デヒドロゲナーゼのいずれかを含む作用電極上に配置された試薬マトリックスを有する検体検査ストリップが組み込まれる。
【0037】
別の実施形態では、検査ストリップモジュールに、酵素又は媒介物を含まない作用電極上に配置された試薬マトリックスを有する検体検査ストリップが組み込まれる。
【0038】
別の実施形態では、検体検査ストリップが、電気接点端と、試料端と、試料端から予め定められた距離を置いた試料受入ポートとを有する。
【0039】
一実施形態では、試料端は、ベント開口部と、試料受入ポートとベント開口部との間の試料チャネルとを含む。
【0040】
一実施形態では、検査ストリップモジュールに、２つ以上の検体検査ストリップが組み込まれ、２つ以上の検体検査ストリップの少なくとも２つが同じ検体を測定する。
【0041】
一実施形態では、検査ストリップモジュールに、２つ以上の検体検査ストリップが組み込まれ、２つ以上の検体検査ストリップの各々が異なる検体を測定する。
【0042】
一実施形態では、血液試料中の１つ以上の肝酵素の濃度を定量する方法が開示される。該方法は、血液試料受容チャンバを提供することと、血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのいずれかによって触媒作用を及ぼされる予め定められた化学物質を含む試薬チャンバを提供することと、血液試料を取得して、試料受容チャンバに血液試料の少なくとも一部を配置することと、血液試料を希釈して希釈された血液試料を形成することと、予め定められた量の希釈された血液試料を試薬チャンバに配置することと、予め定められた化学物質と希釈された血液試料との間の反応を予め定められた期間継続させて、少なくとも１つの反応生成物を含む反応溶液を形成することと、反応溶液の一部を反応溶液中の少なくとも１つの反応生成物の量を測定可能な検体検査ストリップに移すことと、反応溶液中に存在する少なくとも１つの反応生成物の量を測定することと、反応溶液中の少なくとも１つの反応生成物の量を血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのいずれかの量に相関させることとを含む。
【0043】
一実施形態では、測定することが、反応溶液中のピルビン酸、グルタミン酸、フェノール（又はその誘導体）、又はアニリン（又はその誘導体）のいずれかの量を測定することをさらに含む。
【0044】
一実施形態では、相関させることが、反応溶液中のピルビン酸、グルタミン酸、フェノール、又はアニリンのいずれかの量を、血液試料中のＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴの量に相関させることをさらに含む。
【0045】
一実施形態では、測定することがさらに、電気化学的測定手法を用いて、少なくとも１つの反応生成物を測定することを含む。
【0046】
一実施形態では、測定することがさらに、アンペロメトリーを用いて、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴの定量のための少なくとも１つの反応生成物を測定することを含む。
【0047】
一実施形態では、測定することが、リニアスイープボルタンメトリーを用いて、ＡＬＰの定量のための少なくとも１つの反応生成物を測定することを含む。
【0048】
別の実施形態では、血液試料中の１つ以上の肝酵素の濃度を定量するためのポイント・オブ・ケア分析器で使用する使い捨て検査カートリッジキットが開示される。キットは、カートリッジ本体と、取り外し可能なカートリッジカバーと、検査ストリップモジュールとを含む。カートリッジ本体は、複数のチャンバを有し、複数のチャンバの各々が、カートリッジ本体の上部に開口部を有する。複数のチャンバのうちの少なくとも１つが、血液試料と組み合わせると化学反応を起こして少なくとも１つの反応生成物を含む反応溶液を形成することができる反応混合物を含む。反応混合物は、血液試料中の肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、又はＧＧＴのいずれかによって触媒作用を及ぼされることに特化した化学物質を含む。使い捨てピペットチップは、複数のチャンバのうちの別のチャンバに配置されている。取り外し可能なカートリッジカバーは、カートリッジ本体に取り外し可能に接続され、複数のチャンバを覆う。取り外し可能なカートリッジカバーは、キャピラリ受容開口と、カートリッジカバーに取り外し可能に挿入可能なキャピラリ要素も有する。キャピラリ要素は、取り外し可能なカートリッジカバーがカートリッジ本体に接続されているとき、複数のチャンバのうちの１つのチャンバ内に延びる。キャピラリ要素は、キャピラリ要素が、使い捨て検査カートリッジから取り外され、血液試料に触れると、毛細管現象によって血液試料を取得するように構成されている。検査ストリップモジュールは、カートリッジ本体に直接接続されており、反応溶液の一部を受容するとともに、少なくとも１つの反応生成物である少なくとも１つの検体を測定するように構成された少なくとも１つの検体検査ストリップを含む。
【0049】
別の実施形態では、キットに、使い捨て検査カートリッジ及びキャピラリ要素の使用説明書が含まれている。
【図面の簡単な説明】
【0050】
【図1】ポイント・オブ・ケア分析器と、ポイント・オブ・ケア分析器のための使い捨て検査カートリッジを示す、本発明の一実施形態の斜視図である。
【図15】使い捨て検査カートリッジの検体センサストリップの別の実施形態の拡大斜視図である。
【図17】表１のデータをグラフ化したものであって、ピルビン酸ストリップセンサを使用したＡＬＴセンサ電流対ＡＬＴ濃度に関する結果を示している。
【図18】表２のデータをグラフ化したものであって、グルタミン酸ストリップセンサを使用したＡＬＴセンサ電流対ＡＬＴ濃度に関する結果を示している。
【図19】表３のデータをグラフ化したものであって、ピルビン酸センサを使用したＡＳＴセンサ電流対ＡＳＴ濃度に関する結果を示している。
【図20】表４のデータをグラフ化したものであって、電流センサを使用したＡＬＰセンサ電流対ＡＬＰ濃度に関する結果を示している。
【図23】表５のデータをグラフ化したものであって、電流センサを使用したＧＧＴセンサ電流対ＧＧＴ濃度に関する結果を示している。
【発明を実施するための形態】
【0051】
図１は、様々な肝酵素の定量のためにポイント・オブ・ケア分析器３００に使用される使い捨て検査カートリッジ１０の一実施形態を示している。検査カートリッジ１０は、カートリッジ本体２０と、カートリッジカバー４０と、キャピラリ要素６０と、キャピラリワイパー８０（図示せず）と、１つ以上の検体検査ストリップ２３０、４３０を有する検査ストリップモジュール２００とを含む。キャピラリ要素６０は、カートリッジカバー４０から取り外し可能である。
【0052】
次に、図２を参照する。図２は、使い捨て検査カートリッジ１０の断面図を示し、キャピラリ要素６０と、キャピラリワイパー８０と、カートリッジカバー４０と、検査ストリップモジュール２００とが示されている。キャピラリ要素６０は、本体上面６４を有するキャピラリ要素本体６２と、キャピラリ要素容積部６８を規定するぶら下がりキャピラリ要素フィンガ６６と、キャピラリ要素容積部６８と連通する本体上部開口７０と、フィンガ端部６６ａから延びる毛細管７２とを含む。キャピラリ要素容積部６８は、本体上部開口７０からフィンガ端部６６ａにかけて断面積が減少している。キャピラリ要素容積部６８は開口しているとともに、本体上部開口７０から毛細管７２を通して連続していると理解される。キャピラリ要素容積部６８は、連続的なテーパ、段差を設けたテーパ、又は同心円状に縮径した複数の径を有していてもよい。キャピラリワイパー８０は、上方部８２とテーパ状下方部８８とを有する。図から分かるように、毛細管７２は、キャピラリワイパー８０のテーパ状下方部８８を貫通してカートリッジ本体２０内の複数のチャンバ２２のうちの１つのチャンバ内に延びる。検査ストリップモジュール２００は、カートリッジ本体２０に接続されている。本実施形態では、検査ストリップモジュール２００は、カートリッジ本体２０の前壁２４に接続されている。検査ストリップモジュール２００は、ファスナー、接着剤コーティング、インターロック構造などによって物理的に接続されてもよいし、あるいは、カートリッジ本体２０の一部として成形されて単一構造を形成してもよい。検査ストリップモジュール２００は、カートリッジ本体２０の側面に沿って接続されてもよいと考えられる。
【0053】
図３及び図４は、図１に示す使い捨て検査カートリッジ１０の分解図である。図３は、正面斜視図であり、図４は検査カートリッジ１０の側方断面図である。カートリッジ本体２０は、カートリッジ本体上面２４下方に延びる複数のチャンバ２２を有し、複数のチャンバ２２の各々は開口２６を有する。複数のチャンバ２２は、カートリッジ本体前壁２４とカートリッジ本体後壁２３との間で前後に一列に並んでいる。ただし、この配置は、重要ではない。複数のチャンバ２２の各々は、検査試料を受容すること、特定の検査に適した化学薬品、一つ以上の較正標準、血液試料を希釈するための溶液を保持すること等の特定の用途を有している。例えば、ポイント・オブ・ケア分析器と併用される使い捨て検査カートリッジ１０は、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、ＧＧＴ、ＨｂＡ１Ｃ、ｅＡＧ、総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、トリグリセリド、ＬＤＬコレステロール、コレステロール／ＨＤＬ比、非ＨＤＬコレステロール、尿中アルブミン、尿中クレアチニン、及びアルブミン／クレアチニン比等の検査結果を提供してもよいが、検査結果はこれらに限定されない。より詳細には、図４を参照する。カートリッジ本体２０の複数のチャンバ２２は、次の順に配置される。チャンバ２２ａは、使い捨てピペットチップ２５を含む。チャンバ２２ｂは、毛細管が挿入されて血液試料が置かれる試料受容用のチャンバである。チャンバ２２ｂは、血液試料が希釈されるチャンバでもある。チャンバ２２ｃから２２ｅは、予め定められた検査結果群を判定するための多様な試薬を含む。チャンバ２２ｆは、通常、チャンバ２２ｂに置かれた血液試料を希釈するための緩衝液又は他の塩溶液を含む。図３及び図４に示されていないのは、ホイルシールであり、ホイルシールは複数のチャンバ２２の全ての開口２６を覆ってチャンバ２２の汚染及び一部のチャンバ内に含まれる試薬の汚染を防ぐ。
【0054】
キャピラリワイパー８０は、上方部８２とテーパ状下方部８８とを有する。上方部８２とテーパ状下方部８８とは筒状である、つまり、キャピラリワイパー８０はキャピラリワイパー容積部９４を規定する。下方容積部９６は、キャピラリフィンガ要素６６の一部と毛細管７２とを受容するように構成されている。
【0055】
カートリッジカバー４０は、カバー凹部４６を形成する複数の下向きカバー側面４４を有するカバー上面４２を備える。カバー上面４２から上方に延びているのはカバー延長部４８であり、カバー延長部４８もまたカバー凹部４６の凹部４６ａを形成している。カバー延長部４８は段差を設けた延長部５０を有し、段差を設けた延長部５０は、延長部上面５２と、カバー凹部４６の凹部４６ａと連通するキャピラリ受容開口５４と、を有する。カバーの管延長部５６は、キャピラリ受容開口５４から凹部４６ａ内へ予め定められた距離だけ延出している。カバーの管延長部５６は、キャピラリワイパー８０の上方部８２に嵌合する。カバー凹部４６は、カートリッジ本体２０の上部２８を受容するとともに、取り外し可能なタブ２８ａにより位置が固定される。本実施形態において、カートリッジカバー４０は、後方延長部端５８ａを有する後方側延長部５８をさらに有する。後方側延長部５８は、カートリッジ本体後壁２３に沿って隣接して延びている。後方延長部端５８ａは、カートリッジ本体２０に設けられたカバー受容スロット２８内に受容される。後方延長部端５８ａは、小さく鋭い先端５８ｂ（図３にてより明確に示している）を有する。先端５８ｂは、ポイント・オブ・ケア分析器３００により、使い捨て検査カートリッジ１０の使用中に複数のチャンバ２２のホイルに覆われた開口２６を突き抜くために使用される。ピペットチップ２５は、分析器３００により、試料を希釈し、試薬との混合のために予め定められた量の希釈試料を選択するために使用され、試薬が予め定められた期間、希釈された血液試料と反応した後、検査品が形成される。ピペットチップ２５は、ストリップモジュール２００の１つ以上の検体ストリップ２３０、４３０（図１３から図１４に示されている）によるその後の測定用の予め定められた量の検査品を取り出すのにも使用される。いったん毛細管７２と試料とがカートリッジカバー４０に挿入されてカートリッジカバー４０と組み付けられ、次いで、使い捨て検査カートリッジ１０が分析器２００に挿入されると、分析器はカートリッジカバー４０を取り外してホイルシールを突き抜くために後方延長部端５８ａを使用すると理解される。
【0056】
先述したように、キャピラリ要素６０は、要素本体６２と、本体上面６４と、キャピラリ要素容積部６８を規定するぶら下がりキャピラリ要素フィンガ６６と、キャピラリ要素容積部６８と連通する本体上部開口７０と、フィンガ端部６６ａから延びる毛細管７２と、を有する。毛細管７２は、任意に先細っていてもよい管遠位端７２ａを有する。
【0057】
センサストリップモジュール２００は、モジュール本体２１０と、１つ以上の検体センサストリップ２３０とを有する。１つ以上の検体センサストリップ２３０は、単回使用で使い捨てである。モジュール本体２１０は、１つ以上の検体センサストリップ２３０を受容するためのモジュール本体プラットフォーム２１２と、本体プラットフォーム２１２上の対応するストリップ受容領域２２４において１つ以上の検体センサストリップ２３０を捕捉して保持する複数の保持装置２１４とを含む。
【0058】
次に、図５を参照する。図５には、カートリッジ本体２０及びストリップモジュール本体２１０の上面図が示されている。本実施形態では、取り外し可能なタブ２８ａが、カートリッジ本体２０の向かい合う側壁２７ａ、２７ｂ上に位置するものとして示され、カバー４０をカートリッジ本体２０に組み付けた後にカバー４０の位置を固定する。取り外し可能なタブ２８ａは、検査カートリッジ１０の挿入前に事前にチャンバ２２に置かれた血液試料を検査するために検査カートリッジ１０が分析器３００に挿入されると、ポイント・オブ・ケア分析器３００が検査カートリッジ１０からカバー４０を取り外すとともに、検査が完了した後に検査カートリッジ１０の取り出しと廃棄のために、カバー４０を再び取り付けられることを可能とするように機能する。本実施形態では、ストリップモジュール本体２１０は、ストリップモジュール本体２１０の第１ストリップモジュール壁２１６に隣接するカートリッジ本体２０のカートリッジ前壁２４に接続している。図６は、図５において楕円Ｃによって囲まれた領域の拡大図である。本実施形態では、ストリップモジュール本体２１０は、第１ストリップモジュール壁２１６と、第２ストリップモジュール壁２１８と、モジュール前壁２２０と、モジュール後壁２２２と、モジュール本体プラットフォーム２１２と、複数のストリップ保持装置２１４とを有する。この図では、モジュール本体プラットフォーム２１２は、３つの領域に分かれている。３つの領域の各々が、検体検査ストリップを受容して保持するように構成されている。ゆえに、本実施形態では、ストリップモジュール本体２１０は、血液試料中のＡＬＴ及び／又はＡＳＴ及び／又はＡＬＰ及び／又はＧＧＴを間接的に測定するための３つの検体検査ストリップを保持できる。
【0059】
図７は、カートリッジ本体２０及びストリップモジュール本体２１０の上面図である。カートリッジ本体２０のこの図においては、複数のチャンバ２２と、第１カートリッジ本体壁２７ａと、第２カートリッジ本体壁２７ｂと、複数のカバー保持タブ２８ａと、カートリッジ本体前壁２４と、第１ストリップモジュール壁２１６と、第２ストリップモジュール壁２１８と、前方ストリップモジュール壁２１１ａと、後方ストリップモジュール壁２１１ｂと、モジュール本体のビューラインＡ及びＢとが示されている。図８は、図７のビューラインＡ－Ａに沿って取られたストリップモジュール本体２１０の拡大断面図である。より明確に示されているように、モジュール本体プラットフォーム２１２は、上部ストリップモジュール面２１０ａから凹んでおり、ストリップ保持装置２１４は、検体センサストリップ２３０の長手方向縁部２３６を受容するように構成されたフックエンド２１４ａを有する。モジュール本体プラットフォーム２１２はまた、複数のプラットフォーム開口２１２ａを含む。プラットフォーム開口２１２ａを通って、複数のストリップ保持装置２１４のうちの対応する１つがモジュール本体プラットフォーム２１２上方に延びる。図９は、図７のビューラインＢ－Ｂに沿って取られたストリップモジュール本体２１０の拡大断面図である。図８に示すフックエンド２１４ａと比較した場合、この図の複数のストリップ保持装置２１４のフックエンド２１４ａが反対方向を向いていることに留意されたい。これは、検体センサストリップ２３０（図１２～図１３に示されている）の対向する長手方向縁部２３６両方を、ストリップ受容領域２２４内でモジュール本体プラットフォーム２１２に固定するためである。１つ以上のストリップ保持装置２１４が、対向する長手方向縁部２３６の一部を捕捉する一方で、各ストリップ受容領域２２４の一方の側が、検体センサストリップ２３０の一方の長手方向縁部２３６の一部を捕捉する隆起（図示せず）を有してもよいと考えられる。
【0060】
図１０は、カートリッジ本体２０の斜視正面図であり、図１１は、図１０における囲まれた領域Ｃの拡大斜視図である。図１１は、プラットフォーム開口２１２ａを通って延びるストリップ保持装置２１４と凹んだ本体プラットフォーム２１２上方のフックエンド２１４ａをより明確に示している。複数のストリップ保持装置２１４全てに弾力性があり、検体センサストリップ２３０をストリップ受容領域２２４に挿入する際の曲げを制限できるため、各ストリップ保持装置２１４は、ストリップ受容領域２２４内のモジュール本体プラットフォーム２１２に対して検体センサストリップ２３０を捕捉する初期位置に戻る。
【0061】
［センサ構造］
次に、図１２及び図１３を参照する。図１２及び図１３では、検体センサストリップ２３０の一実施形態が示されている。検体センサストリップ２３０は、電極端部２３２と、電極端２３２ａと、電気接点端部２３４と、電気接点端２３４ａと、向かい合う長手方向縁部２３６とを有する多層の一体型センサストリップである。本実施形態では、電極端部２３２は、反応溶液の一部を受容するための試料注入口２３８と、ストリップ検査チャンバ２４０と、ベント開口部２４２とを含む。電気接点端部２３４は、ストリップ検査チャンバ２４０内に配置された各電極と電気的に接触する２つ以上の電気結合パッド２４４を有する。本実施形態では、検体センサストリップの長さは約３０．２ｍｍ（１．１インチ）であり、幅は約５．５ｍｍ（０．２２インチ）である。
次に、図１２及び図１３を参照する。図１２及び図１３では、検体センサストリップ２３０の一実施形態が示されている。検体センサストリップ２３０は、電極端部２３２と、電極端２３２ａと、電気接点端部２３４と、電気接点端２３４ａと、向かい合う長手方向縁部２３６とを有する多層の一体型センサストリップである。本実施形態では、電極端部２３２は、反応溶液の一部を受容するための試料注入口２３８と、ストリップ検査チャンバ２４０と、ベント開口部２４２とを含む。電気接点端部２３４は、ストリップ検査チャンバ２４０内に配置された各電極と電気的に接触する２つ以上の電気結合パッド２４４を有する。本実施形態では、検体センサストリップの長さは約３０．２ｍｍ（１．１インチ）であり、幅は約５．５ｍｍ（０．２２インチ）である。
【0062】
図１４は、図１２及び図１３の検体センサストリップ２３０の実施形態の拡大分解斜視図である。図示するように、本実施形態の一体型センサストリップは、４つのストリップ層を有する。検体センサストリップ２３０は、基部層２５０と、絶縁及び電極画定層２７０と、チャネル形成層２９０と、カバー層３１０とを含む。検体センサストリップ２３０の全ての層は、誘電性材料、好ましくはプラスチックから作られる。好ましい誘電性材料の例としては、ポリ塩化ビニル、ポリカーボネート、ポリスルホン、ナイロン、ポリウレタン、硝酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、ポリエステル、ポリイミド、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレンが挙げられる。
【0063】
基部層２５０は、導電層２５２を有し、導電層２５２上には、３つの導電パス２５４、２５６、２５８が画定されている。導電パス２５４、２５６、２５８は、導電層２５２にスクライビング又はスコアリングを行うことにより形成されてもよい。あるいは、基部層２５０は、誘電性材料上に導電パス２５４、２５６、２５８をシルクスクリーン捺染したものであってもよい。一片の金ポリエステルフィルムを使用し、図１４に示す形に切断して、検体センサストリップ２３０の基部層２５０を形成してもよい。
【0064】
導電層２５２のスクライビング又はスコアリングは、少なくとも２つの独立した導電パス２５４、２５６を形成するのに十分なように導電層２５２を機械的にスクライビングすることにより行ってもよく、任意の第３導電パス２５８とを生成するものであってよい。本発明の好ましいスクライビング又はスコアリング法は、炭酸ガスレーザー、ＹＡＧレーザー又はエキシマレーザーを使用して行われる。スコアリング線は非常に細いが２つ以上の別々の電気パスを作成するのに十分である。導電層２５２は、どんな導電材料からできていてもよく、例えば、金、酸化スズ／金、パラジウム、他の貴金属又はそれらの酸化物、又は炭素膜組成物などからできていてもよい。好ましい導電材料は、金又は酸化スズ／金である。雑音信号を発生させ得る静電気の問題を回避するため、追加的なスコアリング線２６４（説明のためだけに拡大されていて実際の寸法にはなっていない）が基部層２５０の外縁に沿って設けられていてもよい。なお、スコアリング線２６４は、検体センサストリップ２３０を機能させるのに必要なものではない。
【0065】
ストリップ絶縁及び電極画定層２７０（試薬保持層２７０とも称される）は、第１導電パス２５８の一部を露出させる第１電極開口２７２と、第２導電パス２５６の一部を露出させる第２電極開口２７４と、任意の第３導電パス２５４の一部を露出させる第３電極開口２７６とを有する。図１４に示すように、電極開口２７２、２７４、２７６は、互いに整列しており、隣接する開口間の間隔は約０．０３インチ（０．６４ｍｍ）であるが、間隔は、重要ではない。円形の開口は、説明のみを目的としている。開口の形やサイズは必ずしも重要ではない。表面積の比率が実質的に一定である限り、円形の開口のサイズを実質的に等しくする必要はない。
【0066】
試薬保持層２７０は、プラスチック材料から作られ、好ましくは、ペンシルベニア州グレンロックのアドヒーシブリサーチ社（Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｉｎｃ．）又はＧｌｏｂａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ＧＩＣ）（台湾）から購入可能な医療用の片面粘着テープから作られる。本発明に適用できるテープの厚さは、約０．００１インチ（０．０２５ｍｍ）から約０．００５インチ（０．１３ｍｍ）の範囲である。好ましい厚さは、約０．００３インチ（０．０７５ｍｍ）である。テープの使用は必ずしも必要ではない。試薬保持層２７０は、プラスチックシートから作られてもよく、上記のポリエステル製テープを使用するのと同じ結果を得るために、感圧接着剤、光硬化性樹脂で覆ってもよいし、基部層２５０に超音波を使って接着してもよいし、基部層２５０にシルクスクリーン捺染してもよいし、基部層２５０に３Ｄ印刷してもよい。
【0067】
３つの電極開口２７２、２７４、２７６は、電極ウェルＷ、Ｒ、Ｂをそれぞれ規定し、作用電極（Ｗ）と、参照電極（Ｒ）と、ブランク電極（Ｂ）とを形成する化学薬品を保持する。ＡＬＴ及びＡＳＴの定量のために、電極ウェルＷには、自らの基質に関わる反応に対して触媒作用を及ぼすことができる酵素又は当該酵素に対して触媒として反応性を有する基質と、酵素触媒反応と作用電極との間で運搬される電子を運搬でき、その結果、酵素又は基質（測定される肝酵素に対応する）の活性に対応した電流を生成することができる媒介物と、少なくとも１つのポリマー結合剤とが充填される。基質電極ウェルＢには電極ウェルＷと同様の化学的性質が充填されるが、酵素は含まない。追加のポリマー、安定剤、及び充填剤などの１つ以上の化学成分を任意に試薬マトリックスに含めてもよい。電極ウェルＲには参照試薬マトリックスが充填される。
【0068】
ＡＬＰ又はＧＧＴの定量のために、電極ウェルＷには、後述する理由により酵素又は媒介物は充填されない。つまり、ＡＬＰ又はＧＧＴの定量では、電極ウェルＷは酵素も媒介物も含まない。
【0069】
参照マトリックスが、還元型のレドックス媒介物、酸化型のレドックス媒介物、又は還元型と酸化型のレドックス媒介物の混合物などの少なくとも１つの化学酸化試薬を含むのが好ましい。例えば、好ましい導電性被覆材を使用する際に参照電極を機能させるために、フェリシアン化カリウム、又はフェロシアン化カリウム、又はフェリシアン化カリウムとフェロシアン化カリウムの混合物を充填してもよい。フェリシアン化カリウムとフェロシアン化カリウムの混合物は、フェリシアン化カリウム濃度が最大約１０％の範囲にあり、フェロシアン化カリウム濃度が最大約５％の範囲にあるように調整してもよい。あるいは、参照電極（電極ウェルＲ）にＡｇ／ＡｇＣｌ層を充填してもよいし（例えば、Ａｇ／ＡｇＣｌインクを塗布するか、又は（ａ）Ａｇ層をスパッタコーティングした後、Ａｇを塩素化するか、又は（ｂ）Ａｇ／ＡｇＣｌ層をスパッタコーティングすることによる）、又は適切に機能するのにレドックス媒介物を必要としない他の参照電極材料を充填してもよい。センサから使用可能な結果を得るのに、チャネルにおける作用電極、参照電極、ブランク電極の配置位置は重要ではないことに留意すべきである。
【0070】
チャネル形成層２９０は、電極端部２３２にチャネルノッチ２９２を有する。チャネルノッチ２９２の長さは、チャネル形成層４０が試薬保持層２７０に積層される際、電極領域Ｗ、Ｒ及びＢがチャネルノッチ２９２によって規定される空間内に納まるような長さである。チャネルノッチ２９２の長さ、幅、厚さは、キャピラリチャンバ容積を規定する。チャネル形成層２９０は、絶縁及び電極画定層２７０に積層される。絶縁及び電極画定層２７０のように、チャネル形成層２９０は、プラスチックシートから作られてもよく、感圧接着剤、光硬化性樹脂で覆うか、絶縁及び電極画定層２７０に超音波接着するか、絶縁及び電極画定層２７０にシルクスクリーン捺染するか、又は絶縁及び電極画定層２７０に３Ｄ印刷してもよい。
【0071】
チャネル形成層２９０は、プラスチック材料から作られ、好ましくは、ペンシルベニア州グレンロックのアドヒーシブリサーチ社（Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．）又はＧｌｏｂａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（台湾）から購入可能な医療用の両面感圧粘着テープから作られる。テープの厚さは、好ましくは約０．００１インチ（０．０２５ｍｍ）から約０．０１０インチ（０．２５ｍｍ）の範囲である。チャネルノッチ２９２は、レーザー又は型抜き（好ましい方法）によって作ることができる。液体試料開口３１２を含まないチャネルノッチ２９２の長さは、約０．２２インチ（５．６８ｍｍ）から約０．２５０インチ（６．３５ｍｍ）であり、幅は、約０．０５インチ（１．２８ｍｍ）から約０．０７インチ（１．７７８ｍｍ）であり、厚さは、約０．００３９インチ（０．１ｍｍ）から約０．００９インチ（０．２２５ｍｍ）である。チャネルノッチ２９２の厚さとサイズは必ずしも重要ではない。
【0072】
チャネル形成層２９０に積層されるカバー層３１０は、検体センサストリップ２３０の電極端２３２ａから距離をおいて設けられた液体試料開口３１２を有する。カバー層３１０は、電極端２３２ａにベント開口部２４２を形成し、反応生成物試料を液体試料開口３１２に入れたときに、ストリップ検査チャンバ２４０内の試料が確実に電極領域Ｗ、Ｒ及びＢを完全に覆うようにしている。カバー３１０の好ましい材料は、ポリエステルフィルムである。検査チャンバ２４０内の試料液の毛細管現象を促進するために、ポリエステルフィルムが、ストリップ検査チャンバ２４０を形成するポリエステルフィルムのその部分に親水性の高い表面を有することが望ましい。３Ｍ又はＧＩＣの透明フィルムを使用してもよい。
【0073】
次に、図１５及び図１６を参照する。図１５及び図１６では、検体センサストリップ４３０の別の実施形態が示されている。本実施形態では、検体センサストリップ４３０は、積層体４３２と、試料受容ウェル４３４と、電気接点端４３６とを有する。積層体４３２は、基部層４５０とカバー４６０とを有する。カバー４６０は、基部層４５０と組み合わせた場合に、試料受容ウェル４３４を形成する試料開口４６２を有する。基部層４５０は、少なくとも３つの電気パス４５２、４５４、４５６を有し、少なくとも３つの電気パス４５２、４５４、４５６は、センサ測定器又はモジュール（図示せず）に接続するための電気接点端４３６で露出される第１の部分と、試料受容ウェル４３４によって露出される第２の部分とを有する。本実施形態のスクライビングされた電気パス（検体検査ストリップ４３０）のレイアウトは、試料受容ウェル４６４内の３つの電極領域Ｗ、Ｒ、Ｂを収容するために先に説明した実施形態の電気パス（検体検査ストリップ２３０）から変更されていることが理解される。このような配置の一例は、一実施形態を描く破線により図１６に示されている。
【0074】
試料受容ウェル４３４によって露出される電気パス４５２、４５４、４５６の第２の部分は、少なくとも作用電極Ｗと、参照／対極電極Ｒと、任意のブランク電極Ｂとを作成する。ＡＬＴ及びＡＳＴの定量について上記に説明したように、第１試薬マトリックス４６０は、自らの基質に関わる反応に対して触媒作用を及ぼすことができる酵素又は当該酵素に対して触媒として反応性を有する基質と、酵素触媒反応と作用電極との間で運搬される電子を運搬でき、その結果、酵素又は基質（測定される肝酵素に対応する）の活性に対応した電流を生成することができる媒介物と、少なくともポリマー結合剤とを含み、作用電極Ｗ上に配置される。第２試薬マトリックス４６２は、任意のブランク電極Ｂ上に配置され、電極ウェルＷに似た化学的性質を備えるが、酵素及び媒介物を有しない。上述したように、追加のポリマー、安定剤、充填剤などの１つ以上の化学成分を、任意に試薬マトリックスに含んでよい。参照／対極電極Ｒは、先に説明した任意の標準物質を含んでよい。
【0075】
ＡＬＰ又はＧＧＴの定量では、電極ウェルＷには、以下に説明する理由により酵素又は媒介物が充填されていない。
【0076】
本発明の本実施形態では、試料受容ウェル４３４が、試料注入口及び反応生成物を受容するための試料チャンバの両方の役割を果たす。
【0077】
本実施例に開示されるいずれの実施形態のコンジットパスも、腐食しない金属からできていてもよいことが理解されるべきである。例えば、カーボンペースト又はカーボンインクなどの炭素堆積物は、当業者にもよく知られているように、コンジットパスとしても使用できる。さらに、ブランク電極Ｂは、ＡＬＴ又はＡＳＴの定量のために任意に検体センサストリップ２３０、４３０に含まれる場合、血液試料中の干渉物質によって生成される任意の電流を修正するために使用されることが理解される。ＡＬＰ又はＧＧＴの定量では、検査チャンバに流れ込む試料中の異常を判断するために主に使用される。
【0078】
［ＡＬＴ又はＡＳＴの定量用の検体検査ストリップの化学薬品］
[酵素]
本発明の検体検査ストリップ２３０は、試薬マトリックスで使用される酵素に応じてピルビン酸又はグルタミン酸のいずれかを消費する作用電極Ｗの試薬マトリックスに少なくとも化学薬品を含む。化学薬品は、使用中に検査カートリッジ１０内で生じた反応溶液に存在するピルビン酸と選択的に反応できるピルビン酸オキシダーゼ、又は使用中に検査カートリッジ１０内で生じた反応溶液に存在するＬ－グルタミン酸と選択的に反応できるグルタミン酸オキシダーゼ又はグルタミン酸デヒドロゲナーゼのうちの１つである。ブランク電極Ｂは、本発明では必要ではなく、センサストリップ２３０、４３０は、電極Ｗと電極Ｒを持つだけでよい。ブランク電極Ｂは、血液試料中の干渉化学種によって引き起こされる可能性のある電気的バックグラウンド電流を排除するために任意に含まれてもよい。上記に説明したように、このようなブランク電極Ｂの使用は、場合によっては、媒介物との組み合わせでピルビン酸又はＬ－グルタミン酸のいずれかによって引き起こされる電流を、反応生成物中の他の酸化可能種によって引き起こされる電流からよりよく区別するのに役立つ。市販のピルビン酸オキシダーゼは、現在ではＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａとして知られているシグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＡＧ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｓｅｋｉｓｕｉ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、及びＴｏｙｏｂａ ＵＳＡ,Ｉｎｃ．を含む様々なソースから購入可能であるがこれらに限定されない。市販のＬ－グルタミン酸オキシダーゼは、シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｃｏｓｍｏ Ｂｉｏ ＵＳＡ、Ｓｏｒａｃｈｉｍ ＳＡを含む様々なソースから購入可能であるがこれらに限定されない。市販のグルタミン酸デヒドロゲナーゼは、シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ、Ｌｅｅ Ｂｉｏｓｏｌｕｔｉｏｎｓ,Ｉｎｃ．、ＢＢＩ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓを含む様々なソースから購入可能であるがこれらに限定されない。センサストリップのための試薬マトリックスにおけるこれらの化学薬品の濃度は、約０．１％から１０％、好ましくは、０．５％から２％の範囲である。
[酵素]
本発明の検体検査ストリップ２３０は、試薬マトリックスで使用される酵素に応じてピルビン酸又はグルタミン酸のいずれかを消費する作用電極Ｗの試薬マトリックスに少なくとも化学薬品を含む。化学薬品は、使用中に検査カートリッジ１０内で生じた反応溶液に存在するピルビン酸と選択的に反応できるピルビン酸オキシダーゼ、又は使用中に検査カートリッジ１０内で生じた反応溶液に存在するＬ－グルタミン酸と選択的に反応できるグルタミン酸オキシダーゼ又はグルタミン酸デヒドロゲナーゼのうちの１つである。ブランク電極Ｂは、本発明では必要ではなく、センサストリップ２３０、４３０は、電極Ｗと電極Ｒを持つだけでよい。ブランク電極Ｂは、血液試料中の干渉化学種によって引き起こされる可能性のある電気的バックグラウンド電流を排除するために任意に含まれてもよい。上記に説明したように、このようなブランク電極Ｂの使用は、場合によっては、媒介物との組み合わせでピルビン酸又はＬ－グルタミン酸のいずれかによって引き起こされる電流を、反応生成物中の他の酸化可能種によって引き起こされる電流からよりよく区別するのに役立つ。市販のピルビン酸オキシダーゼは、現在ではＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａとして知られているシグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＡＧ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｓｅｋｉｓｕｉ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、及びＴｏｙｏｂａ ＵＳＡ,Ｉｎｃ．を含む様々なソースから購入可能であるがこれらに限定されない。市販のＬ－グルタミン酸オキシダーゼは、シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｃｏｓｍｏ Ｂｉｏ ＵＳＡ、Ｓｏｒａｃｈｉｍ ＳＡを含む様々なソースから購入可能であるがこれらに限定されない。市販のグルタミン酸デヒドロゲナーゼは、シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ、Ｌｅｅ Ｂｉｏｓｏｌｕｔｉｏｎｓ,Ｉｎｃ．、ＢＢＩ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓを含む様々なソースから購入可能であるがこれらに限定されない。センサストリップのための試薬マトリックスにおけるこれらの化学薬品の濃度は、約０．１％から１０％、好ましくは、０．５％から２％の範囲である。
【0079】
［化学酸化試薬］
レドックス媒介物などの化学酸化試薬は、参照電極Ｒが、例えば、Ａｇ－ＡｇＣｌ参照電極のような化学酸化試薬を必要としないものでない限り、作用電極Ｗ、任意のブランク電極Ｂ、参照電極Ｒの試薬マトリックスに含まれる。レドックス媒介物を使用する際は、酸化型のレドックス媒介物を使用するのが好ましい。また、媒介物の還元型が、印加電位で電極表面で電気化学的に酸化されることができるのが望ましい。媒介物が、試薬マトリックスで安定していることがさらに望ましい。参照電極で使用する場合、媒介物が参照電極を適切に機能させることができるのがさらに望ましい。レドックス媒介物は、様々な金属化合物及び有機レドックス化合物から選択可能だがそれらに制限されない。許容できるレドックス媒介物の例としては、様々な金属化合物及び有機レドックス化合物が挙げられるがそれらに制限されない。許容できるレドックス媒介物の例としては、カリウム（又はナトリウム）フェリシアニド、フェロセン及びその誘導体、ヘキサアンミンルテニウム（ＩＩＩ）クロリド及びその誘導体などのルテニウム化合物、オスミウム錯体、１，１０－フェナントロリン-５，６－ジオン、メルドラブルー、テトラチアフルバレン７，７．８．８－テトラシアノキノジメタン、テトラチアフルバレン、ＴＣＮＱ、ヒドロキノン、ジクロロフェノールインドフェノール、ｐ－ベノキノン、ｏ－フェニレンジアミン、３，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド、インドフェノール、フェナジン、フェノチアジン、２，６－ジクロロインドフェノール、トルイジンブルーＯなどが挙げられる。好ましい媒介物は、１，１０－フェナントロリン－５，６－ジオンである。試薬マトリックスにおける１，１０－フェナントロリン－５，６－ジオンの濃度は、好ましくは試薬マトリックスの約０．１％から約５％（ｗ／ｗ）で、好ましくは約０．１％から０．５％である。
レドックス媒介物などの化学酸化試薬は、参照電極Ｒが、例えば、Ａｇ－ＡｇＣｌ参照電極のような化学酸化試薬を必要としないものでない限り、作用電極Ｗ、任意のブランク電極Ｂ、参照電極Ｒの試薬マトリックスに含まれる。レドックス媒介物を使用する際は、酸化型のレドックス媒介物を使用するのが好ましい。また、媒介物の還元型が、印加電位で電極表面で電気化学的に酸化されることができるのが望ましい。媒介物が、試薬マトリックスで安定していることがさらに望ましい。参照電極で使用する場合、媒介物が参照電極を適切に機能させることができるのがさらに望ましい。レドックス媒介物は、様々な金属化合物及び有機レドックス化合物から選択可能だがそれらに制限されない。許容できるレドックス媒介物の例としては、様々な金属化合物及び有機レドックス化合物が挙げられるがそれらに制限されない。許容できるレドックス媒介物の例としては、カリウム（又はナトリウム）フェリシアニド、フェロセン及びその誘導体、ヘキサアンミンルテニウム（ＩＩＩ）クロリド及びその誘導体などのルテニウム化合物、オスミウム錯体、１，１０－フェナントロリン-５，６－ジオン、メルドラブルー、テトラチアフルバレン７，７．８．８－テトラシアノキノジメタン、テトラチアフルバレン、ＴＣＮＱ、ヒドロキノン、ジクロロフェノールインドフェノール、ｐ－ベノキノン、ｏ－フェニレンジアミン、３，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド、インドフェノール、フェナジン、フェノチアジン、２，６－ジクロロインドフェノール、トルイジンブルーＯなどが挙げられる。好ましい媒介物は、１，１０－フェナントロリン－５，６－ジオンである。試薬マトリックスにおける１，１０－フェナントロリン－５，６－ジオンの濃度は、好ましくは試薬マトリックスの約０．１％から約５％（ｗ／ｗ）で、好ましくは約０．１％から０．５％である。
【0080】
[酵素補因子]
検体センサストリップ２３０、４３０の試薬マトリックスに含まれる酵素補因子は、有機補因子であるチアミン三リン酸（ＴＰＰ）及びフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）であり、ピルビン酸オキシダーゼを使用する場合は、無機補因子Ｍｇ２＋である。グルタミン酸デヒドロゲナーゼを使用する場合は、ＮＡＤの補因子が使用される。試薬マトリックスにおける各補因子の濃度は約０．２５％（ｗ／ｗ）である。
検体センサストリップ２３０、４３０の試薬マトリックスに含まれる酵素補因子は、有機補因子であるチアミン三リン酸（ＴＰＰ）及びフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）であり、ピルビン酸オキシダーゼを使用する場合は、無機補因子Ｍｇ２＋である。グルタミン酸デヒドロゲナーゼを使用する場合は、ＮＡＤの補因子が使用される。試薬マトリックスにおける各補因子の濃度は約０．２５％（ｗ／ｗ）である。
【0081】
[ポリマー結合剤]
試薬マトリックスにおける結合剤として使用されるポリマーは、十分に水溶性であり、かつ、試薬中の全ての他の化学物質を安定化して電極領域の導電性表面層に結合させることができなければならない。好適なポリマーには、低分子量及び高分子量ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、デンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、及びポリアミノ酸が含まれるがこれらに制限されない。試薬結合剤は、単一のポリマー又はポリマーの組み合わせであってもよく、好ましい濃度は、約０．０２％（ｗ／ｗ）から約７．０％（ｗ／ｗ）である。本発明の試薬マトリックスの好ましい結合剤は、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）とメチルセルロースの組み合わせである。ＰＥＯの分子量は、数千から数百万の範囲であり、米国ニューヨーク州のＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｐｒｏｄｕｃｔｓから購入可能である。試薬マトリックスにおけるＰＥＯの濃度は、好ましくは約０．０４％（ｗ／ｗ）から約２％（ｗ／ｗ）である。メチルセルロースは、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ ６０ＨＧ（Ｃａｔ．Ｎｏ．６４６５５、米国ワイオミング州ミルウォーキーのフルカケミカルズ（Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））のブランド名で購入可能であり、試薬マトリックスにおける好ましい濃度は、約０．０２％（ｗ／ｗ）から約５％（ｗ／ｗ）の範囲である。
試薬マトリックスにおける結合剤として使用されるポリマーは、十分に水溶性であり、かつ、試薬中の全ての他の化学物質を安定化して電極領域の導電性表面層に結合させることができなければならない。好適なポリマーには、低分子量及び高分子量ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、デンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、及びポリアミノ酸が含まれるがこれらに制限されない。試薬結合剤は、単一のポリマー又はポリマーの組み合わせであってもよく、好ましい濃度は、約０．０２％（ｗ／ｗ）から約７．０％（ｗ／ｗ）である。本発明の試薬マトリックスの好ましい結合剤は、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）とメチルセルロースの組み合わせである。ＰＥＯの分子量は、数千から数百万の範囲であり、米国ニューヨーク州のＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｐｒｏｄｕｃｔｓから購入可能である。試薬マトリックスにおけるＰＥＯの濃度は、好ましくは約０．０４％（ｗ／ｗ）から約２％（ｗ／ｗ）である。メチルセルロースは、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ ６０ＨＧ（Ｃａｔ．Ｎｏ．６４６５５、米国ワイオミング州ミルウォーキーのフルカケミカルズ（Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））のブランド名で購入可能であり、試薬マトリックスにおける好ましい濃度は、約０．０２％（ｗ／ｗ）から約５％（ｗ／ｗ）の範囲である。
【0082】
[界面活性剤]
界面活性剤は、試薬マトリックスの電極領域への分注を容易にするために任意に試薬マトリックスに含むことができる。界面活性剤はまた、試料液を検体検査ストリップの試料チャネルに入れたときに、乾燥した化学薬品を素早く溶解させるのに役立つ。界面活性剤の量とタイプは、前述した機能を確保し、酵素への変性効果を避けるように選択される。界面活性剤は、様々なアニオン性、カチオン性、非イオン性、及び両性イオン性洗剤から選択可能だがそれらに制限されない。許容できる界面活性剤の例としては、ポリオキシエチレンエーテル、Ｔｗｅｅｎ ２０、コール酸ナトリウム水和物、ヘキサデシルピリジニウムクロリド一水和物及びＣＨＡＰが挙げられる。好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンエーテルである。より好ましくは、ｔ－オクチルフェノキシポリエトキシエタノールであり、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００のブランド名で購入可能である。試薬マトリックスにおける界面活性剤の濃度は、好ましくは約０．０１％（ｗ／ｗ）から約２％である。
界面活性剤は、試薬マトリックスの電極領域への分注を容易にするために任意に試薬マトリックスに含むことができる。界面活性剤はまた、試料液を検体検査ストリップの試料チャネルに入れたときに、乾燥した化学薬品を素早く溶解させるのに役立つ。界面活性剤の量とタイプは、前述した機能を確保し、酵素への変性効果を避けるように選択される。界面活性剤は、様々なアニオン性、カチオン性、非イオン性、及び両性イオン性洗剤から選択可能だがそれらに制限されない。許容できる界面活性剤の例としては、ポリオキシエチレンエーテル、Ｔｗｅｅｎ ２０、コール酸ナトリウム水和物、ヘキサデシルピリジニウムクロリド一水和物及びＣＨＡＰが挙げられる。好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンエーテルである。より好ましくは、ｔ－オクチルフェノキシポリエトキシエタノールであり、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００のブランド名で購入可能である。試薬マトリックスにおける界面活性剤の濃度は、好ましくは約０．０１％（ｗ／ｗ）から約２％である。
【0083】
［緩衝液］
必要に応じて、本発明のセンサストリップにおいて、緩衝液が乾燥した状態で存在してもよい。緩衝液は、試薬マトリックスのｐＨを実質的に維持するために十分な量存在する。好適な緩衝液の例としては、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液などが挙げられる。緩衝液のｐＨは、好ましくは約５．０から約８．５の範囲である。
必要に応じて、本発明のセンサストリップにおいて、緩衝液が乾燥した状態で存在してもよい。緩衝液は、試薬マトリックスのｐＨを実質的に維持するために十分な量存在する。好適な緩衝液の例としては、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液などが挙げられる。緩衝液のｐＨは、好ましくは約５．０から約８．５の範囲である。
【0084】
［増量試薬］
水溶性で不活性成分である任意の増量剤を、試薬混合物／マトリックスに添加するのが好ましい。電極形成層が試薬マトリックスを含むように使用される場合に、増量剤を使用して、試料液がキャピラリチャネルを満たす際に電極形成層の電極開口が気泡を閉じ込めないようにするのは有利である。例えば、トレハロース、ガラクトース、グルコース、スクロース、ラクトース、マンニトール、マンノース、フルクトース、スクロース、ラクトース、ラクチトール、ソルビトール、キシリトール、ニコチンアミド、マルトースなどの様々な糖は、他の成分と反応せず、電極表面で不活性である限り、試薬混合物／マトリックスに添加可能である。増量剤は、１つの化学物質又は化学物質の組み合わせであってもよい。含まれる場合の試薬混合物／マトリックス中の増量剤の量は、約１％から約１５％（ｗ／ｗ）の範囲である。
水溶性で不活性成分である任意の増量剤を、試薬混合物／マトリックスに添加するのが好ましい。電極形成層が試薬マトリックスを含むように使用される場合に、増量剤を使用して、試料液がキャピラリチャネルを満たす際に電極形成層の電極開口が気泡を閉じ込めないようにするのは有利である。例えば、トレハロース、ガラクトース、グルコース、スクロース、ラクトース、マンニトール、マンノース、フルクトース、スクロース、ラクトース、ラクチトール、ソルビトール、キシリトール、ニコチンアミド、マルトースなどの様々な糖は、他の成分と反応せず、電極表面で不活性である限り、試薬混合物／マトリックスに添加可能である。増量剤は、１つの化学物質又は化学物質の組み合わせであってもよい。含まれる場合の試薬混合物／マトリックス中の増量剤の量は、約１％から約１５％（ｗ／ｗ）の範囲である。
【0085】
［ＡＬＰ又はＧＧＴの定量用の検体検査ストリップの化学薬品］
［ポリマー結合剤、界面活性剤、増量試薬（酵素又は媒介物なし）］
ポリマー結合剤、界面活性剤、及び増量試薬は、ＡＬＴ及びＡＳＴの定量用の検体検査ストリップについて上記にリストされたものと同じである。酵素又は媒介物が、ＡＬＰ及びＧＧＴの定量用の検体センサストリップのための試薬マトリックスに使用されていないことは注目に値する。これは、ＡＬＰ及びＧＧＴの定量のために測定される反応生成物が電極表面で直接酸化可能であるためであり、電流を生成するために反応生成物の基質と媒介物を必要としないからである。
［ポリマー結合剤、界面活性剤、増量試薬（酵素又は媒介物なし）］
ポリマー結合剤、界面活性剤、及び増量試薬は、ＡＬＴ及びＡＳＴの定量用の検体検査ストリップについて上記にリストされたものと同じである。酵素又は媒介物が、ＡＬＰ及びＧＧＴの定量用の検体センサストリップのための試薬マトリックスに使用されていないことは注目に値する。これは、ＡＬＰ及びＧＧＴの定量のために測定される反応生成物が電極表面で直接酸化可能であるためであり、電流を生成するために反応生成物の基質と媒介物を必要としないからである。
【0086】
［緩衝液］
緩衝液は、ＡＬＰの定量用の検体センサストリップの試薬マトリックスに存在し、７から１２のｐＨ範囲を提供する。緩衝液が、１０から１１のｐＨ範囲を提供するのが好ましい。このような緩衝液の例としては、ジエタノールアミン緩衝液、ＡＭＰ（２－アミノ－２－メチル－１－プロパノール）緩衝液などが挙げられる。
緩衝液は、ＡＬＰの定量用の検体センサストリップの試薬マトリックスに存在し、７から１２のｐＨ範囲を提供する。緩衝液が、１０から１１のｐＨ範囲を提供するのが好ましい。このような緩衝液の例としては、ジエタノールアミン緩衝液、ＡＭＰ（２－アミノ－２－メチル－１－プロパノール）緩衝液などが挙げられる。
【0087】
緩衝液は、ＧＧＴの定量用の検体センサストリップの試薬マトリックスにも存在し、７から９のｐＨ範囲を提供する。緩衝液が、８．３のｐＨを提供するのが好ましい。このような緩衝液の例としては、リン酸緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液、クエン酸緩衝液などが挙げられる。好ましい緩衝液は、ＴＲＩＳ緩衝液である。
【0088】
［ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ又はＧＧＴの定量用の使い捨て検査カートリッジのチャンバに配置される化学薬品］
［ＡＬＴ用の試薬］
血液試料中の肝酵素ＡＬＴの量を計測するために、使い捨て検査カートリッジ１０の複数のチャンバ２２のうちの少なくとも１つに試薬を配置し、使い捨て検査カートリッジの組み立て中に反応混合物を形成する。ＡＬＴについては、チャンバ２２が、以下の試薬を含む：Ｌ－アラニン、α－ケトグルタル酸、ポリマー結合剤、界面活性剤、緩衝液、糖などの増量剤、及び防腐剤。
［ＡＬＴ用の試薬］
血液試料中の肝酵素ＡＬＴの量を計測するために、使い捨て検査カートリッジ１０の複数のチャンバ２２のうちの少なくとも１つに試薬を配置し、使い捨て検査カートリッジの組み立て中に反応混合物を形成する。ＡＬＴについては、チャンバ２２が、以下の試薬を含む：Ｌ－アラニン、α－ケトグルタル酸、ポリマー結合剤、界面活性剤、緩衝液、糖などの増量剤、及び防腐剤。
【0089】
Ｌ－アラニン濃度は、０．０１Ｍから２Ｍの範囲である。好ましい濃度は、０．１Ｍから１Ｍの範囲であり、０．２から０．５Ｍの範囲の濃度が最も好ましい。後述する検査データでは、使用される濃度は０．３Ｍである。
【0090】
α－ケトグルタル酸濃度は、０．０１から２Ｍの範囲である。好ましい濃度は、０．０５Ｍから１Ｍの範囲であり、０．１Ｍから０．５Ｍの範囲の濃度が最も好ましい。後述する検査データでは、使用される濃度は０．２Ｍである。
【0091】
反応混合物において結合剤として使用されるポリマーは、十分に水溶性で、かつ、反応混合物中の全ての他の化学物質を安定化して結合させることができなければならない。好適なポリマーには、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、デンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、魚ゼラチン、キトサン、増粘剤及びポリアミノ酸が含まれるが、これらに制限されない。ポリマー結合剤は、単一のポリマー又はポリマーの組み合わせであってもよい。ＰＥＯについては、ＰＥＯの分子量は、数千から数百万の範囲であり、米国ニューヨーク州のＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｐｒｏｄｕｃｔｓから購入可能である。反応混合物中のＰＥＯの濃度は、好ましくは約０．０４％（ｗ／ｗ）から約２％である。メチルセルロースは、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ ６０ＨＧ（Ｃａｔ．Ｎｏ．６４６５５、米国ワイオミング州ミルウォーキーのフルカケミカルズ（Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））のブランド名で購入可能であり、試薬層組成物中の濃度は、好ましくは約０．０２％（ｗ／ｗ）から約５％の範囲である。
【0092】
界面活性剤は、様々なアニオン性、カチオン性、非イオン性、及び両性イオン性洗剤から選択されるがそれらに制限されない。許容できる界面活性剤の例としては、ポリオキシエチレンエーテル、Ｔｗｅｅｎ ２０、コール酸ナトリウム水和物、ヘキサデシルピリジニウムクロリド一水和物及びＣＨＡＰＳ（両性イオン性洗剤である）が挙げられる。好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンエーテルである。より好ましくは、トクチルフェノキシポリエトキシエタノールであり、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００のブランド名で購入可能である。反応混合物中のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００の濃度は、好ましくは約０．０１％（ｗ／ｗ）から約２％である。
【0093】
緩衝液を反応混合物に添加する。許容できるｐＨ範囲は、５から１１である。好ましい範囲は、７から８のｐＨである。後述する検査データでは、７．４のｐＨが使用される。ＡＬＴの定量に適用できる緩衝液は、リン酸緩衝液、トリズマ緩衝液（Ｔｒｉｚｍａ ｂｕｆｆｅｒ）、クエン酸緩衝液などを含む。
【0094】
水溶性であり不活性成分である任意の増量剤を、反応混合物に添加するのが好ましい。増量剤の使用は、血液試料が反応混合物を含むチャンバ２２に添加されると反応混合物中に気泡を閉じ込める傾向を低減するのに有利である。例えば、トレハロース、ガラクトース、スクロース、ラクトース、マンニトール、マンノース、フルクトース、ラクチトール、ソルビトール、キシリトール、ニコチンアミド、マルトース、デンプンなどの様々な糖が、他の成分と反応しない限り、増量剤として反応混合物に添加されてもよい。増量剤は、１つの化学物質又は化学物質の組み合わせであってもよい。反応混合物中の増量剤の量は、約１％から約１５％（ｗ／ｗ）の範囲である。
【0095】
組み立て済み使い捨てカートリッジは、通常、使用前に数か月間保管されるため、少なくとも１つの防腐剤を含めることが推奨される。組み立て済み使い捨てカートリッジにおいて、防腐剤は反応混合物の長期の安定性を提供する。プロリン（タンパク質構成アミノ酸である）などの防腐剤が、０．０５％から２％の範囲の濃度で反応混合物に含まれている。
【0096】
［ＡＳＴ用の試薬］
血液試料中の肝酵素ＡＳＴの量を測定するために、使い捨て検査カートリッジ１０の複数のチャンバ２２のうちの少なくとも１つに試薬を配置し、使い捨て検査カートリッジの組み立て中に反応混合物を形成する。ＡＳＴの場合、チャンバ２２は、以下の試薬を含む:Ｌ－アスパラギン酸、α－ケトグルタル酸、ポリマー結合剤、界面活性剤、緩衝液、糖などの増量剤、緩衝液、防腐剤、及び、任意のオキサロ酢酸デカルボキシラーゼ。
血液試料中の肝酵素ＡＳＴの量を測定するために、使い捨て検査カートリッジ１０の複数のチャンバ２２のうちの少なくとも１つに試薬を配置し、使い捨て検査カートリッジの組み立て中に反応混合物を形成する。ＡＳＴの場合、チャンバ２２は、以下の試薬を含む:Ｌ－アスパラギン酸、α－ケトグルタル酸、ポリマー結合剤、界面活性剤、緩衝液、糖などの増量剤、緩衝液、防腐剤、及び、任意のオキサロ酢酸デカルボキシラーゼ。
【0097】
Ｌ－アスパラギン酸濃度は、０．０１Ｍから２Ｍの範囲である。好ましい濃度は、０．１Ｍから１Ｍの範囲であり、０．２から０．５Ｍの範囲の濃度が最も好ましい。後述する検査データでは、使用される濃度は、０．５Ｍである。
【0098】
α－ケトグルタル酸濃度は、０．０１から２Ｍの範囲である。好ましい濃度は、０．０５Ｍから１Ｍの範囲であり、０．１Ｍから０．５Ｍの範囲の濃度が最も好ましい。後述する検査データでは、使用される濃度は、０．２５Ｍである。
【0099】
オキサロ酢酸デカルボキシラーゼ濃度は、５０ＩＵ／ｍＬから５００ＩＵ／ｍＬの範囲である。後述する検査データでは、使用される濃度は１００ＩＵ／ｍＬから１５０ＩＵ／ｍＬの範囲である。
【0100】
ポリマー結合剤、界面活性剤、任意の増量剤、及び防腐剤は、ＡＬＴの測定用に上記にリストされたものと同じである。
【0101】
緩衝液は、反応混合物に添加される。許容できるｐＨ範囲は、５から１１である。好ましい範囲は、７から９のｐＨである。後述する検査データでは、８のｐＨが使用される。ＡＬＴの定量に適用できる緩衝液は、リン酸緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液、クエン酸緩衝液などを含む。
【0102】
［ＡＬＰ用の試薬］
血液試料中の肝酵素ＡＬＰの量を測定するために、使い捨て検査カートリッジ１０の複数のチャンバ２２のうちの少なくとも１つに試薬を配置し、使い捨て検査カートリッジの組み立て中に反応混合物を形成する。ＡＬＰの場合、チャンバ２２は以下の試薬を含む:フェニルリン酸ナトリウム又はその誘導体、ポリマー結合剤、界面活性剤、緩衝液、糖などの増量剤、緩衝液、及び防腐剤。
血液試料中の肝酵素ＡＬＰの量を測定するために、使い捨て検査カートリッジ１０の複数のチャンバ２２のうちの少なくとも１つに試薬を配置し、使い捨て検査カートリッジの組み立て中に反応混合物を形成する。ＡＬＰの場合、チャンバ２２は以下の試薬を含む:フェニルリン酸ナトリウム又はその誘導体、ポリマー結合剤、界面活性剤、緩衝液、糖などの増量剤、緩衝液、及び防腐剤。
【0103】
フェニルリン酸ナトリウム濃度は、１００ｍＭから３００ｍＭの範囲である。後述する検査データでは、使用される濃度は、２００ｍＭである。
【0104】
ポリマー結合剤、界面活性剤、任意の増量剤、及び防腐剤は、ＡＬＴの定量用に上記にリストされたものと同じである。
【0105】
緩衝液を反応混合物に添加する。許容できるｐＨ範囲は７から１２である。好ましい範囲は、１０から１１のｐＨである。ＡＬＰの定量に適用できる緩衝液は、ジエタノールアミン緩衝液、ＡＭＰ（２－アミノ－２－メチル－１－プロパノール）緩衝液などを含む。
【0106】
［ＧＧＴ用の試薬］
血液試料中の肝酵素ＧＧＴの量を測定するために、使い捨て検査カートリッジ１０の複数のチャンバ２２のうちの少なくとも１つに試薬を配置し、使い捨て検査カートリッジの組み立て中に反応混合物を形成する。ＧＧＴの場合、チャンバ２２は、以下の試薬を含む:Ｌ－グルタミン酸ガンマアニリド又はその誘導体、グリシルグリシン、ポリマー結合剤、界面活性剤、緩衝液、糖などの増量剤、緩衝液、及び防腐剤。
血液試料中の肝酵素ＧＧＴの量を測定するために、使い捨て検査カートリッジ１０の複数のチャンバ２２のうちの少なくとも１つに試薬を配置し、使い捨て検査カートリッジの組み立て中に反応混合物を形成する。ＧＧＴの場合、チャンバ２２は、以下の試薬を含む:Ｌ－グルタミン酸ガンマアニリド又はその誘導体、グリシルグリシン、ポリマー結合剤、界面活性剤、緩衝液、糖などの増量剤、緩衝液、及び防腐剤。
【0107】
Ｌ－グルタミン酸ガンマアニリド濃度は、１０ｍＭから３０ｍＭの範囲である。後述する検査データでは、使用される濃度は、２０ｍＭである。
【0108】
グリシルグリシン濃度は、２００ｍＭから４００ｍＭの範囲である。後述する検査データでは、使用される濃度は、３００ｍＭである。
【0109】
ポリマー結合剤、界面活性剤、任意の増量剤、及び防腐剤は、ＡＬＴの定量用に上記にリストされたものと同じである。
【0110】
緩衝液を反応混合物に添加する。許容できるｐＨ範囲は、５から１１である。好ましい範囲は、７から９のｐＨである。後述する検査データでは、８．３のｐＨを使用する。ＡＬＴの定量に適用できる緩衝液は、リン酸緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液、クエン酸緩衝液などを含む。
【0111】
［血液試料中のＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、及びＧＧＴの定量のための一般化された手順］
ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、及びＧＧＴなどの肝酵素の定量のために、特定の肝酵素を定量するための以下の一般化された検査手順を実行する。この検査では、予め定められた量の毛細血管の血液が取得され、予め定められた量の毛細血管の血液が希釈され、予め定められた量の希釈された毛細血管の血液が特定の肝酵素の定量のための反応混合物を含むチャンバ２２にピペットで移され、希釈された毛細血管の血液で反応混合物を再懸濁し、希釈された毛細血管の血液を反応混合物と混合し、得られた希釈された毛細血管の血液と反応混合物との混合物を予め定められた時間反応させて、反応溶液を形成する。予め定められた反応時間の終わりに、予め定められた量の反応溶液をポイント・オブ・ケア分析器３００の内部のピペットにより抜き出して検査ストリップモジュール２００上の検体検査ストリップ２３０、４３０上に置き、検体検査ストリップ２３０、４３０が定量可能な反応溶液中の特定の肝酵素の定量に直接関係する特定の検体の量を測定する。
ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、及びＧＧＴなどの肝酵素の定量のために、特定の肝酵素を定量するための以下の一般化された検査手順を実行する。この検査では、予め定められた量の毛細血管の血液が取得され、予め定められた量の毛細血管の血液が希釈され、予め定められた量の希釈された毛細血管の血液が特定の肝酵素の定量のための反応混合物を含むチャンバ２２にピペットで移され、希釈された毛細血管の血液で反応混合物を再懸濁し、希釈された毛細血管の血液を反応混合物と混合し、得られた希釈された毛細血管の血液と反応混合物との混合物を予め定められた時間反応させて、反応溶液を形成する。予め定められた反応時間の終わりに、予め定められた量の反応溶液をポイント・オブ・ケア分析器３００の内部のピペットにより抜き出して検査ストリップモジュール２００上の検体検査ストリップ２３０、４３０上に置き、検体検査ストリップ２３０、４３０が定量可能な反応溶液中の特定の肝酵素の定量に直接関係する特定の検体の量を測定する。
【0112】
より具体的には、ランセットを使用して患者の指を穿刺して血液試料を取得する。実行する特定の検査のために使い捨て検査カートリッジ１０を選択する。この場合、４つの肝酵素ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、及びＧＧＴのうちの１つの存在を検査できる使い捨て検査カートリッジ１０である。特定の検査カートリッジ１０は、検体を測定するために検査ストリップモジュール２００に取り付けられた少なくとも１つの検体センサストリップ２３０、４３０を有する。各使い捨て検査カートリッジ１０は、肝酵素定量のタイプ及び検体センサストリップ２３０、４３０のタイプに応じてコーディングされている。
【0113】
キャピラリ要素６０は、使い捨て検査カートリッジ１０から分離されている。キャピラリ要素フィンガ６６のフィンガ端部６６ａは、患者の皮膚を穿刺したことによって生成された指上の血滴に触れさせられる。血滴の一部が、毛細管現象によってキャピラリ要素６０に入る。キャピラリ要素６０は、血液試料を得る前に使い捨て検査カートリッジ１０から取り外された時と同じ向きに、使い捨て検査カートリッジ１０に挿入されて再び取り付けられる。再び取り付けられると、使い捨て検査カートリッジ２０はポイント・オブ・ケア分析器３００に挿入される準備ができる。挿入されると、ポイント・オブ・ケア分析器３００が始動する。
【0114】
ポイント・オブ・ケア分析器３００において、キャピラリ要素６６にある毛細血管の血液の試料が分析器３００によってチャンバ２２内に吸引され、その中でキャピラリ要素６６が吊り下げられている。使い捨て検査カートリッジ２０からカバー４０を取り外し、使い捨て検査カートリッジ１０の別のチャンバ２２にある予め定められた量の予め定められた希釈剤（すなわち、緩衝液又は塩溶液）を取り出し、ピペットによって血液試料を含むチャンバ２２に入れる。血液試料を含むチャンバ２２に十分な量の希釈剤を添加し、希釈率を１:１から１:５０の範囲にする。好ましい希釈率の範囲は、１:２から１:２０の範囲である。最も好ましい分析器３００の希釈率の範囲は１:５から１:１０の範囲である。図示した検査データでは、使用される希釈率は、１:１０である。希釈剤は、希釈率の大きいほうの数であるか又はチャンバ内の毛細血管の血液の量に等しいことが理解される。希釈後、予め定められた量の希釈された血液試料が、希釈された血液試料中の特定の肝酵素活性を定量するための反応混合物を含む使い捨て検査カートリッジ１０のチャンバ２２に、ピペットで移される。各使い捨て検査カートリッジ１０を１つの肝酵素専用にしてもよいが、使い捨て検査カートリッジ１０は、本願で開示される他の肝酵素の検査を含んでもよいと考えられる。さらに、他の肝酵素を定量するための追加の検体検査ストリップを、血液試料中の２つ以上の肝酵素を検査するように構成された使い捨て検査カートリッジ１０に組み込んでもよいと考えられる。
【0115】
［血液試料中のＡＬＴの定量］
触媒としてのＡＬＴの存在下で、Ｌ－アナリン及びα－ケトグルタル酸は、ピルビン酸及びＬ－グルタミン酸を生成する反応を起こす。これは、式１で表される。
触媒としてのＡＬＴの存在下で、Ｌ－アナリン及びα－ケトグルタル酸は、ピルビン酸及びＬ－グルタミン酸を生成する反応を起こす。これは、式１で表される。
【0116】
【化3】
【0117】
希釈後、予め定められた量の希釈された血液試料が、血液試料中のＡＬＴ活性を定量するための反応混合物を含む使い捨て検査カートリッジ１０のチャンバ２２にピペットで移される。予め定められた量の希釈された血液試料の量は、５から１００マイクロリットルの範囲である。予め定められた量の希釈された血液試料が、１０から５０マイクロリットルの範囲であるのが好ましい。得られた検査データでは、予め定められた量の希釈された血液試料は、１５から３０マイクロリットルの範囲である。希釈された毛細血管の血液は、反応混合物と混合し、得られた希釈された毛細血管の血液と反応混合物との混合物を予め定められた時間反応させて、反応溶液を形成する。ＡＬＴ定量の場合、反応時間は、５分から６０分の範囲である。好ましい反応時間は、１０分から３０分の範囲である。より好ましい反応時間は、２０分から３０分の範囲である。以下で得られたデータでは、反応時間は、摂氏４０～４５度の温度で２５分である。
【0118】
検査に使用されるのは、反応溶液中のピルビン酸を測定するための検体検査ストリップ２３０である。ピルビン酸検査ストリップ反応では、センサストリップ試薬マトリックスにピルビン酸オキシダーゼを使用する。反応式は以下のとおりである。
【0119】
【化4】
【0120】
ここで、Ｍｅｄｏｘは、媒介物の酸化型であり、Ｍｅｄｒｅｄは、媒介物の還元型である。
【0121】
ピルビン酸センサの作用電極及び参照電極間のバイアス電位は、１００ｍｖから５００ｍｖの範囲、好ましくは３００ｍＶから４００ｍＶの範囲である。範囲内の電圧値は、重要ではないが、一定でなければならない。作用電極及び参照電極間のバイアス電位は、媒介物を電極表面で還元状態から酸化状態に変化させ、それによって反応生成物におけるピルビン酸の濃度に基づいて電流を生成する。
【0122】
式１からわかるように、ピルビン酸センサストリップの代わりに、グルタミン酸を測定するための検体センサストリップを使用することもできる。グルタミン酸検査ストリップ反応では、センサストリップ試薬マトリックスにグルタミン酸オキシダーゼ又はグルタミン酸デヒドロゲナーゼを使用する。反応式は以下のとおりである。
【0123】
【化5】
【0124】
ここで、Ｍｅｄｏｘは媒介物の酸化型であり、Ｍｅｄｒｅｄは媒介物の還元型である。
【0125】
グルタミン酸センサの作用電極及び参照電極間のバイアス電位は、１００ｍｖから５００ｍｖの範囲、好ましくは３００ｍＶから４００ｍＶの範囲である。ピルビン酸センサと同様に、範囲内の電圧値は、重要ではないが、一定でなければならない。作用電極及び参照電極間のバイアス電位は、媒介物を電極表面で還元状態から酸化状態に変化させ、それによって反応生成物におけるグルタミン酸の濃度に基づいて電流を生成する。
【0126】
ＡＬＴの血液試料の濃度値は、ニューヨーク州タリータウンにあるシーメンヘルスケアダイアグノスティックス社（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）によって販売されているＤｉｍｅｎｓｉｏｎ ＲｘＬ化学分析器として知られている血液分析器を使って取得した。検体検査ストリップからの検査データは、ＣＨ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｏｔｅｎｔｉｏｓｔａｔ、ｍｏｄｅｌ ｎｏ．ＣＨＩ ８１２Ｂ又はｍｏｄｅｌ ｎｏ．ＣＨＩ ６６０Ａを使って取得した。
【0127】
［ピルビン酸センサを使用したＡＬＴ定量のための検査データ］
血中ＡＬＴ濃度とピルビン酸検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するために、検査に３つの異なるＡＬＴ濃度レベルを使用した。それらのレベルは、６１ＩＵ／Ｌ、１３５ＩＵ／Ｌ、４６８ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＡＬＴレベル用に準備され、各ＡＬＴ濃度について電流測定を１０回行った。各測定で、新しいピルビン酸センサストリップを使用した。表１は、ＡＬＴの定量で得られた検査データを示す。
血中ＡＬＴ濃度とピルビン酸検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するために、検査に３つの異なるＡＬＴ濃度レベルを使用した。それらのレベルは、６１ＩＵ／Ｌ、１３５ＩＵ／Ｌ、４６８ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＡＬＴレベル用に準備され、各ＡＬＴ濃度について電流測定を１０回行った。各測定で、新しいピルビン酸センサストリップを使用した。表１は、ＡＬＴの定量で得られた検査データを示す。
【0128】
【表1】
【0129】
図１７は、様々なＡＬＴ濃度に対して測定された作用電極（すなわち、ピルビン酸オキシダーゼベースの電極）の電流応答を示す。電流応答は、検査されたＡＬＴ濃度範囲全体でピルビン酸濃度に対して線形である。ＡＬＴ濃度は、ピルビン酸濃度に正比例する。
【0130】
［グルタミン酸センサを使用したＡＬＴ定量のための検査データ］
血中ＡＬＴ濃度とグルタミン酸検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するため、検査に３つの異なるＡＬＴ濃度レベルを使用した。それらのレベルは、６１ＩＵ／Ｌ、２６９ＩＵ／Ｌ、４６８ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＡＬＴレベル用に準備され、各ＡＬＴ濃度について電流測定を３回行った。各測定で、新しいグルタミン酸センサストリップを使用した。表２は、グルタミン酸センサストリップを使用したＡＬＴの定量で得られた検査データを示す。
血中ＡＬＴ濃度とグルタミン酸検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するため、検査に３つの異なるＡＬＴ濃度レベルを使用した。それらのレベルは、６１ＩＵ／Ｌ、２６９ＩＵ／Ｌ、４６８ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＡＬＴレベル用に準備され、各ＡＬＴ濃度について電流測定を３回行った。各測定で、新しいグルタミン酸センサストリップを使用した。表２は、グルタミン酸センサストリップを使用したＡＬＴの定量で得られた検査データを示す。
【0131】
【表2】
【0132】
図１８は様々なＡＬＴ濃度に対して測定された作用電極（すなわち、グルタミン酸デヒドロゲナーゼベースの電極）の電流応答を示す。電流応答は、検査されたＡＬＴ濃度範囲全体でグルタミン酸濃度に対して線形である。ＡＬＴ濃度は、グルタミン酸濃度に正比例する。
【0133】
［血液試料中のＡＳＴの定量］
触媒としてのＡＳＴの存在下で、Ｌ－アスパラギン酸及びα－ケトグルタル酸は、オキサロ酢酸とＬ－グルタミン酸を生成する反応を起こす。これは、式２で表される。
触媒としてのＡＳＴの存在下で、Ｌ－アスパラギン酸及びα－ケトグルタル酸は、オキサロ酢酸とＬ－グルタミン酸を生成する反応を起こす。これは、式２で表される。
【0134】
【化6】
【0135】
この状況では、グルタミン酸感知検査ストリップは、ＡＳＴの定量に使用され、グルタミン酸検査ストリップの試薬マトリックスにグルタミン酸オキシダーゼ又はグルタミン酸デヒドロゲナーゼを含む前述の反応によって表される。しかしながら、結果がより正確であるために、ピルビン酸センサが好ましい。ピルビン酸検査ストリップを使用するためには、以下で説明するように、追加の化合物が必要である。
【0136】
式２のオキサロ酢酸生成物も、ピルビン酸及び二酸化炭素を生成するオキサロ酢酸デカルボキシラーゼの存在下でさらなる反応を起こすことができる。これは、式３で表される。
【0137】
【化7】
【0138】
したがって、オキサロ酢酸デカルボキシラーゼが、カートリッジチャンバ２２の反応混合物中にある場合、ピルビン酸が形成され、反応溶液に存在するピルビン酸を計測するためにピルビン酸検査ストリップを使用してもよい。血液試料中のＡＳＴの濃度は、測定されたピルビン酸の濃度に正比例する。
【0139】
希釈後、予め定められた量の希釈された血液試料を、血液試料中のＡＳＴ活性を定量するための反応混合物を含む使い捨て検査カートリッジ１０のチャンバ２２にピペットで移す。予め定められた量の希釈された血液試料の量は、５から１００マイクロリットルの範囲である。好ましくは、予め定められた量の希釈された血液試料は、１０から５０マイクロリットルの範囲である。得られた検査データでは、予め定められた量の希釈された血液試料は、１５から３０マイクロリットルの範囲である。希釈された毛細血管の血液は、反応混合物と混合し、得られた希釈された毛細血管の血液と反応混合物との混合物を予め定められた時間反応させて、反応溶液を形成する。ＡＳＴ定量では、反応時間は、５分から６０分の範囲である。好ましい反応時間は、１０分から３０分の範囲である。より好ましい反応時間は、２０分から３０分の範囲である。以下で得られたデータでは、反応時間は、摂氏４０～４５度の温度で２５分である。
【0140】
ＡＳＴの測定について前述したように、反応溶液中のピルビン酸を測定するための検体検査ストリップ２３０は、使い捨て検査カートリッジ１０の反応混合物にオキサロ酢酸デカルボキシラーゼが存在する場合に検査に使用される。ピルビン酸検査ストリップ反応では、センサストリップ試薬マトリックスにピルビン酸オキシダーゼを使用する。反応式は、ピルビン酸検査ストリップについて上述したのと同様である。
【0141】
ＡＬＴ定量について上述したように、ＡＳＴ用の血液試料の濃度値をニューヨーク州タリータウンにあるシーメンヘルスケアダイアグノスティックス社（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）によって販売されているＤｉｍｅｎｓｉｏｎ ＲｘＬ化学分析器として知られている血液分析器を使って取得した。検体検査ストリップからの検査データは、ＣＨ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｏｔｅｎｔｉｏｓｔａｔ、ｍｏｄｅｌ ｎｏ．ＣＨＩ ８１２Ｂ又はｍｏｄｅｌ ｎｏ．ＣＨＩ ６６０Ａを使って取得した。
【0142】
［ピルビン酸センサを使用したＡＳＴ定量のための検査データ］
血中ＡＳＴ濃度とピルビン酸検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するために、検査に３つの異なるＡＳＴ濃度レベルを使用した。それらのレベルは、２５ＩＵ／Ｌ、１９６ＩＵ／Ｌ、６９８ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＡＳＴレベル用に準備され、各ＡＬＴ濃度について電流測定を１０回行った。各測定で、新しいピルビン酸センサストリップを使用した。表３は、ＡＳＴの定量で得られた検査データを示す。
血中ＡＳＴ濃度とピルビン酸検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するために、検査に３つの異なるＡＳＴ濃度レベルを使用した。それらのレベルは、２５ＩＵ／Ｌ、１９６ＩＵ／Ｌ、６９８ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＡＳＴレベル用に準備され、各ＡＬＴ濃度について電流測定を１０回行った。各測定で、新しいピルビン酸センサストリップを使用した。表３は、ＡＳＴの定量で得られた検査データを示す。
【0143】
【表3】
【0144】
図１９は、様々なＡＳＴ濃度に対して測定された作用電極（すなわち、ピルビン酸オキシダーゼベースの電極）の電流応答を示す。電流応答は、検査されたＡＳＴ濃度範囲全体でピルビン酸濃度に対して線形である。ＡＳＴ濃度は、ピルビン酸濃度（又はグルタミン酸オキシダーゼやグルタミン酸デヒドロゲナーゼを使用する場合はグルタミン酸濃度）に正比例する。
【0145】
［血液試料中のＡＬＰの定量］
触媒としてのＡＬＰの存在下で、フェニルリン酸ナトリウム又はその誘導体は、フェノール又はその誘導体及びリン酸塩を生成する反応を起こす。これは、式４で表される。
触媒としてのＡＬＰの存在下で、フェニルリン酸ナトリウム又はその誘導体は、フェノール又はその誘導体及びリン酸塩を生成する反応を起こす。これは、式４で表される。
【0146】
【化8】
【0147】
ＡＬＴ及びＡＳＴ定量について前述したように、希釈後、予め定められた量の希釈された血液試料を、血液試料中のＡＬＰ活性を定量するための反応混合物を含む使い捨て検査カートリッジ１０のチャンバ２２にピペットで移す。予め定められた量の希釈された血液試料の量は、５から１００マイクロリットルの範囲である。好ましくは、予め定められた量の希釈された血液試料は、１０から５０マイクロリットルの範囲である。得られた検査データでは、予め定められた量の希釈された血液試料は１５から３０マイクロリットルの範囲である。希釈された毛細血管の血液は、反応混合物と混合し、得られた希釈された毛細血管の血液と反応混合物との混合物を予め定められた時間反応させる。ＡＬＰ定量では、反応時間は、５分から６０分の範囲である。好ましい反応時間は、１０分から３０分の範囲である。より好ましい反応時間は、２０分から３０分の範囲である。以下で得られたデータでは、反応時間は、摂氏４０～４５度の温度で２５分である。
【0148】
ＡＬＴ及びＡＳＴ定量で使用したセンサストリップとは異なり、作用電極の試薬マトリックスに酵素又は媒介物は必要ない。これは、式４に示す反応物生成物フェノールが、電極表面で直接電気化学的に酸化されるからである。
【0149】
ＡＬＰの血液試料の濃度値を、ニューヨーク州タリータウンにあるシーメンヘルスケアダイアグノスティックス社（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）によって販売されているＤｉｍｅｎｓｉｏｎ ＲｘＬ化学分析器として知られている血液分析器を使って取得した。検体検査ストリップからの検査データは、ＣＨ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｏｔｅｎｔｉｏｓｔａｔ、ｍｏｄｅｌ ｎｏ．ＣＨＩ ８１２Ｂ又はｍｏｄｅｌ ｎｏ．ＣＨＩ ６６０Ａを使って取得した。
【0150】
［電流センサを使用したＡＬＰ定量のための検査データ］
血中ＡＬＰ濃度と電流測定検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するために、検査に３つの異なるＡＬＰ濃度レベルを使用した。それらのレベルは、７２ＩＵ／Ｌ、１７８ＩＵ／Ｌ、４５８ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＡＬＰレベル用に準備され、各ＡＬＰ濃度について電流測定を１０回行った。各測定で、新しいセンサストリップを使用した。表４は、ＡＬＰの定量で得られた検査データを示す。
血中ＡＬＰ濃度と電流測定検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するために、検査に３つの異なるＡＬＰ濃度レベルを使用した。それらのレベルは、７２ＩＵ／Ｌ、１７８ＩＵ／Ｌ、４５８ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＡＬＰレベル用に準備され、各ＡＬＰ濃度について電流測定を１０回行った。各測定で、新しいセンサストリップを使用した。表４は、ＡＬＰの定量で得られた検査データを示す。
【0151】
【表4】
【0152】
図２０は、様々なＡＬＰ濃度に対して測定された作用電極（すなわち、電流感知電極）の電流応答を示す。電流応答は、検査されたＡＬＰ濃度範囲全体でフェノール濃度に対して線形である。ＡＬＰ濃度は、フェノール濃度に正比例する。
【0153】
図２１は、上記の３つのＡＬＰ濃度標準の電流トレースを示す電流センサの線形スキャンボルタモグラムである。線形スキャンボルタモグラムは、電位スキャンが作用電極と参照電極の間で０ｍＶから５００ｍＶであることを示している。これは、未確定の電位センサ手法である。線形スキャンボルタモグラムを使用した全ての電流検査で、検体センサストリップ２３０、４３０は、０ｍＶから５００ｍＶの間の電流スキャンを受ける。この手法を使用しているときの電流測定値が取得されるのは、ＡＬＰの濃度レベル間の最大の電流分離により、スキャンが３５０ｍＶに達したときである。
【0154】
図２２は、３つのＡＬＰ濃度についての電流対時間のアンペロメトリック応答プロットである。このアンペロメトリック手法は、作用電極及び参照電極間の固定電位（すなわち、バイアス電位）を使用する。固定電位は、上述したＡＬＴ又はＡＳＴを測定するための電位と類似する。このプロットは、電流センサストリップへの試料の導入後いつ電流測定を記録するかを判断するために使用される。ＡＬＰを定量するためのアンペロメトリック手法を使用した全ての電流検査について、電流測定は、試料が作用電極と参照電極の両方を覆った後、１０秒間（すなわち、「期間」）記録される。試料が作用電極と参照電極の両方を覆うと、電流測定に大きな変化がある。これが、１０秒の期間の始まりを示す。プロットでは、１０秒の開始時間は、大きな電流変化があった瞬間に始まる。図２２に示すように、これは、約２．５～３秒で現れる。これは、プロットによる電流記録時間が約１２．５～１３秒であることを意味する。実用的な観点から、計器が大きな電流変化を感知するとタイマーが始まり、タイマーの開始から１０秒後に電流記録が記録される。
【0155】
［血液試料中のＧＧＴの定量］
触媒としてのＧＧＴの存在下で、Ｌ－グルタミン酸ガンマアニリド及びグリシルグリシンは、Ｌ－γ－グルタミル－グリシルグリシン及びアニリンを生成する反応を起こす。これは、式５により表される。
触媒としてのＧＧＴの存在下で、Ｌ－グルタミン酸ガンマアニリド及びグリシルグリシンは、Ｌ－γ－グルタミル－グリシルグリシン及びアニリンを生成する反応を起こす。これは、式５により表される。
【0156】
【化9】
【0157】
希釈後、ＡＬＰの定量について上記に説明したように、予め定められた量の希釈された血液試料を、血液試料中のＧＧＴ活性を定量するための反応混合物を含む使い捨て検査カートリッジ１０のチャンバ２２へピペットで移す。予め定められた量の希釈された血液試料の量は、５から１００マイクロリットルの範囲である。好ましくは、予め定められた量の希釈された血液試料は、１０から５０マイクロリットルの範囲である。得られた検査データでは、予め定められた量の希釈された血液試料は、１５から３０マイクロリットルの範囲である。希釈された毛細血管の血液は、反応混合物と混合し、得られた希釈された毛細血管の血液と反応混合物との混合物を予め定められた時間反応させる。ＧＧＴ定量の場合、反応時間は、５分から６０分の範囲である。好ましい反応時間は、１０分から３０分の範囲である。より好ましい反応時間は、２０分から３０分の範囲である。以下で得られたデータでは、反応時間は、摂氏４０～４５の温度で２５分である。
【0158】
ＡＬＰの定量用のセンサストリップと同様に、作用電極の試薬マトリックスに酵素又は媒介物は必要ない。これは、式５に示す反応物生成物アナリンが、電極表面で直接電気化学的に酸化されるからである。
【0159】
ＡＬＰの血液試料の濃度値をニューヨーク州タリータウンにあるシーメンヘルスケアダイアグノスティックス社（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）によって販売されているＤｉｍｅｎｓｉｏｎ ＲｘＬ化学分析器として知られている血液分析器を使って取得した。検体検査ストリップからの検査データは、ＣＨ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｏｔｅｎｔｉｏｓｔａｔ、ｍｏｄｅｌ ｎｏ．ＣＨＩ ８１２Ｂ又はｍｏｄｅｌｎｏ．ＣＨＩ ６６０Ａを使って取得した。
【0160】
［電流センサを使用したＧＧＴ定量のための検査データ］
血中ＧＧＴ濃度と電流測定検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するために、検査に３つの異なるＧＧＴ濃度レベルを使用した。それらのレベルは５２ＩＵ／Ｌ、１５３ＩＵ／Ｌ、４３０ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＧＧＴレベル用に準備され、各ＧＧＴ濃度について電流測定を１０回行った。各測定で、新しいセンサストリップを使用した。表５は、ＡＬＰの定量で得られた検査データを示す。
血中ＧＧＴ濃度と電流測定検査ストリップに基づく応答との間の直線応答性を判定するために、検査に３つの異なるＧＧＴ濃度レベルを使用した。それらのレベルは５２ＩＵ／Ｌ、１５３ＩＵ／Ｌ、４３０ＩＵ／Ｌである。試料は、これらのＧＧＴレベル用に準備され、各ＧＧＴ濃度について電流測定を１０回行った。各測定で、新しいセンサストリップを使用した。表５は、ＡＬＰの定量で得られた検査データを示す。
【0161】
【表5】
【0162】
図２３は、様々なＧＧＴ濃度に対して測定された作用電極（すなわち、電流検出電極）の電流応答を示す。電流応答は、検査されたＧＧＴ濃度範囲全体でアニリン濃度に対して線形である。ＧＧＴ濃度は、アニリン濃度に正比例する。
【0163】
本明細書では、本発明の好ましい実施形態について説明されてきたが、上記の説明は例示にすぎない。当業者であれば、本明細書で開示された発明のさらなる変更に想到することであろう。また、そのようなあらゆる全ての変更は、添付の特許請求の範囲に定義されるように、本発明の範囲内にあると見なされる。
【図1】
【図2】
【図3-4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
