特許 7565287 抗ナロキソンおよび抗ナルトレキソンモノクローナル抗体ならびにその作製方法および使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-10-02

(45)【発行日】2024-10-10

(54)【発明の名称】抗ナロキソンおよび抗ナルトレキソンモノクローナル抗体ならびにその作製方法および使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/00 20060101AFI20241003BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20241003BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241003BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241003BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241003BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241003BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241003BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241003BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20241003BHJP

   G01N 33/536 20060101ALI20241003BHJP

【ＦＩ】

C07K16/00

C12P21/08

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

G01N33/53 G

G01N33/536 A

【請求項の数】 31

(21)【出願番号】P 2021544533

(86)(22)【出願日】2020-01-30

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-03-24

(86)【国際出願番号】 US2020015773

(87)【国際公開番号】W WO2020160199

(87)【国際公開日】2020-08-06

【審査請求日】2021-10-08

(31)【優先権主張番号】62/799,399

(32)【優先日】2019-01-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/820,400

(32)【優先日】2019-03-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】508147326

【氏名又は名称】シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】マノジ・シャーマ

(72)【発明者】

【氏名】タティアナ・レベデヴァ

(72)【発明者】

【氏名】タティアナ・マリーヴァ

(72)【発明者】

【氏名】ユリィ・スミルノフ

(72)【発明者】

【氏名】ボグダン・ドラギチ

(72)【発明者】

【氏名】ヂュー・テン

(72)【発明者】

【氏名】イー・フェン・ヂァン

(72)【発明者】

【氏名】フンイェン・ヤウ

(72)【発明者】

【氏名】ニーマット・モルジャナ

(72)【発明者】

【氏名】ウィリアム・ベドツィク

(72)【発明者】

【氏名】アリソン・ドミノウスキー

【審査官】井関 めぐみ

(56)【参考文献】

【文献】仏国特許出願公開第０２８５９６３３（ＦＲ，Ａ１）

【文献】The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，1976年，Vol.195, No.3，p.499-504

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／１３

Ｃ１２Ｐ ２１／０８

Ｃ１２Ｎ ５／１６

Ｃ１２Ｎ １５／０６

Ｃ１２Ｎ １５／６３

Ｃ１２Ｎ ５／１０

Ｃ１２Ｎ １／１５

Ｃ１２Ｎ １／１９

Ｃ１２Ｎ １／２１

Ｃ０７Ｋ １６／００

Ｇ０１Ｎ ３３／５３

Ｇ０１Ｎ ３３／５３６

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ナロキソンおよびナルトレキソンに特異的に結合することができる抗体またはその機能的断片であって、該抗体は：
（１）配列番号２２、２３、および２４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号２６、２７、および２８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；
（２）配列番号６２、６３、および６４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号６６、６７、および６８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；または
（３）配列番号１２２、１２３、および１２４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号１２６、１２７、および１２８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、前記抗体またはその機能的断片。

【請求項2】

モノクローナル抗体またはその機能的断片としてさらに定義される、請求項１に記載の抗体またはその機能的断片。

【請求項3】

（１）抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号３７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号３８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（２）抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号７７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号７８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；または（３）抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号１３７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号１３８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体またはその機能的断片。

【請求項4】

（１）抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号３７および３８のアミノ酸配列を有する；
（２）抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号７７および７８のアミノ酸配列を有する；または
（３）抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１３７および１３８のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体またはその機能的断片。

【請求項5】

（１）抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号２１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号２５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（２）抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号６１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号６５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；または
（３）抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号１２１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１２５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体またはその機能的断片。

【請求項6】

（１）抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号２１および２５のアミノ酸配列を有する；
（２）抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号６１および６５のアミノ酸配列を有する；または
（３）抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号１２１および１２５のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体またはその機能的断片。

【請求項7】

完全長免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、およびそれらの組合せから選択されるものとしてさらに定義される、請求項１に記載の抗体またはその機能的断片。

【請求項8】

（１）重鎖は、配列番号２９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または軽鎖は、配列番号３３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；
（２）重鎖は、配列番号６９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または軽鎖は、配列番号７３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；または
（３）重鎖は、配列番号１２９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または軽鎖は、配列番号１３３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１に記載の抗体または機能的断片。

【請求項9】

精製された抗体またはその機能的断片としてさらに定義される、請求項１に記載の抗体またはその機能的断片。

【請求項10】

組成物であって：
請求項１～９のいずれか１項に記載の少なくとも１つの抗体またはその機能的断片と；該少なくとも１つの抗体またはその機能的断片に付着した検出可能な標識と
を含む前記組成物。

【請求項11】

組成物であって：
固体支持体と；
該固体支持体に結合された請求項１～９のいずれか１項に記載の少なくとも１つの抗体またはその機能的断片と
を含む前記組成物。

【請求項12】

請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその機能的断片をコードするポリヌクレオチド。

【請求項13】

請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその機能的断片をコードするポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項14】

請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその機能的断片をコードするポリヌクレオチドを含む組換え宿主細胞。

【請求項15】

ナロキソンおよびナルトレキソンに特異的に結合することができる抗体またはその機能的断片を作製する方法であって：
（ａ）ポリヌクレオチドによってコードされた抗体またはその機能的断片の発現を可能にする条件下の細胞培養で、請求項１４に記載の組換え宿主細胞を培養する工程と；
（ｂ）該細胞培養から該抗体またはその機能的断片を単離する工程と
を含む前記方法。

【請求項16】

生体試料中に存在するナロキソンおよび／またはナルトレキソンを検出する方法であって：
生体試料中で抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体が形成される条件下で、生体試料を請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその機能的断片と接触させる工程と；
形成された抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体の量が、生体試料中に存在するナロキソンおよび／またはナルトレキソンの量に正比例する、形成されたいずれかの抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体を検出する工程と
を含む前記方法。

【請求項17】

抗体またはその機能的断片は、それに付着した、抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体の検出で使用される標識を有する、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

生体試料の少なくとも１つのオピエートアッセイからナロキソンおよびナルトレキソン干渉を実質的に低減する方法であって、ここで、アッセイされるオピエートは、コデイン、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、モルヒネ、オキシコドン、オキシモルフォン、ヘロイン（６－アセチルモルヒネ）、およびそれらの組合せからなる群から選択され：
ナロキソンおよび／またはナルトレキソンがそれぞれ試料中に存在するならば、抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体が形成される条件下で、生体試料を請求項１～９のいずれか１項に記載の少なくとも１つの抗体またはその機能的断片と接触させる工程と；
形成されたいずれかの抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体を除去する工程と；および
ナロキソンおよび／またはナルトレキソンが実質的に低減されている生体試料で少なくとも１つのオピエートアッセイを行う工程と
を含む前記方法。

【請求項19】

オピエートアッセイは、ＥＬＩＳＡ、チップアッセイ、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ、免疫測定法、酵素免疫測定法、酵素増幅免疫測定法、蛍光偏光免疫測定法、およびそれらの組合せか
らなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

少なくとも１つの抗体またはその機能的断片は、ナロキソンおよびナルトレキソンに特異的に結合する少なくとも１つの抗体またはその機能的断片を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項21】

生体試料の少なくとも１つのオピエートアッセイからナロキソンおよびナルトレキソン干渉を実質的に低減する方法であって、
ここで、アッセイされるオピエートは、コデイン、モルヒネ、ヘロイン（６－アセチルモルヒネ）、およびそれらの組合せからなる群から選択され：
ナロキソンおよび／またはナルトレキソンがそれぞれ試料中に存在するならば、抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体が形成される条件下で、生体試料を少なくとも１つの抗体またはその機能的断片と接触させる工程と；
形成されたいずれかの抗体／ナロキソン、および／または抗体／ナルトレキソン複合体を除去する工程と；および
ナロキソンおよび／またはナルトレキソンが実質的に低減されている生体試料で少なくとも１つのオピエートアッセイを行う工程と
を含む前記方法であって；
前記抗体またはその機能的断片は：
（１）配列番号２、３、および４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号６、７、および８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；
（２）配列番号４２、４３、および４４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４６、４７、および４８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；
（３）配列番号８２、８３、および８４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号８６、８７、および８８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；
（４）配列番号１０２、１０３、および１０４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号１０６、１０７、および１０８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；
（５）配列番号１４２、１４３、および１４４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号１４６、１４７、および１４８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；
（６）配列番号１６２、１６３、および１６４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号１６６、１６７、および１６８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；
（７）配列番号１８２、１８３、および１８４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号１８６、１８７、および１８８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；
（８）配列番号２０２、２０３、および２０４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号２０６、２０７、および２０８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；
（９）配列番号２２２、２２３、および２２４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号２２６、２２７、および２
２８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３；または
（１０）配列番号２４２、２４３、および２４４のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに配列番号２４６、２４７、および２４８のアミノ酸配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、前記方法。

【請求項22】

前記抗体またはその機能的断片は、モノクローナル抗体またはその機能的断片としてさらに定義される、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

（１）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号１７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号１８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（２）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号５７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号５８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（３）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号９７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号９８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（４）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号１１７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号１１８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（５）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号１５７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号１５８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（６）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号１７７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号１７８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（７）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号１９７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号１９８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（８）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号２１７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号２１８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（９）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号２３７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号２３８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
または
（１０）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域は、配列番号２５７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域は、配列番号２５８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を
有する、請求項２１に記載の方法。

【請求項24】

（１）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１７および１８のアミノ酸配列を有する；
（２）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号５７および５８のアミノ酸配列を有する；
（３）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号９７および９８のアミノ酸配列を有する；
（４）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１１７および１１８のアミノ酸配列を有する；
（５）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１５７および１５８のアミノ酸配列を有する；
（６）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１７７および１７８のアミノ酸配列を有する；
（７）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１９７および１９８のアミノ酸配列を有する；
（８）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２１７および２１８のアミノ酸配列を有する；
（９）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２３７および２３８のアミノ酸配列を有する；または
（１０）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２５７および２５８のアミノ酸配列を有する、請求項２１に記載の方法。

【請求項25】

（１）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（２）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号４１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号４５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（３）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号８１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号８５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（４）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号１０１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１０５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（５）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号１４１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１４５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（６）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号１６１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１６５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（７）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号１８１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１８５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（８）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号２０１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号２０５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；
（９）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号２２１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号２２５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する；または
（１０）前記抗体もしくはその機能的断片の重鎖は、配列番号２４１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有し、および／または前記抗体もしくはその機能的断片の軽鎖は、配列番号２４５と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項２１に記載の方法。

【請求項26】

（１）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号１および５のアミノ酸配列を有する；
（２）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号４１および４５のアミノ酸配列を有する；
（３）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号８１および８５のアミノ酸配列を有する；
（４）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号１０１および１０５のアミノ酸配列を有する；
（５）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号１４１および１４５のアミノ酸配列を有する；
（６）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号１６１および１６５のアミノ酸配列を有する；
（７）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号１８１および１８５のアミノ酸配列を有する；
（８）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号２０１および２０５のアミノ酸配列を有する；
（９）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号２２１および２２５のアミノ酸配列を有する；または
（１０）前記抗体またはその機能的断片の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号２４１および２４５のアミノ酸配列を有する、請求項２１に記載の方法。

【請求項27】

前記抗体またはその機能的断片は、完全長免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、およびそれらの組合せから選択されるものとしてさらに定義される、請求項２１に記載の方法。

【請求項28】

（１）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；
（２）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号４９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号５３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；
（３）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号８９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号９３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；
（４）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号１０９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１１３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；
（５）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号１４９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１５３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；
（６）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号１６９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１７３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；
（７）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号１８９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号１９３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；
（８）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号２０９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号２１３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；
（９）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号２２９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号２３３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる；または
（１０）前記抗体またはその機能的断片の重鎖は、配列番号２４９と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされ、および／または前記抗体またはその機能的断片の軽鎖は、配列番号２５３と少なくとも約９０％同一であるポリヌクレオチド配列によってコードされる、請求項２１に記載の方法。

【請求項29】

前記抗体またはその機能的断片は、精製された抗体またはその機能的断片としてさらに定義される、請求項２１に記載の方法。

【請求項30】

該オピエートアッセイは、ＥＬＩＳＡ、チップアッセイ、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ、免疫測定法、酵素免疫測定法、酵素増幅免疫測定法、蛍光偏光免疫測定法、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。

【請求項31】

少なくとも１つの抗体またはその機能的断片は、ナロキソンおよびナルトレキソンに特異的に結合する少なくとも１つの抗体またはその機能的断片を含む、請求項２１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照／参照による援用の記載
該当なし

【0002】

連邦政府による資金提供を受けた研究または開発に関する陳述
該当なし

【背景技術】

【0003】

ナロキソンは、典型的には薬物過剰摂取例において乱用オピオイドの拮抗薬として一般的に使用されている。ナロキソンは、オピエートをオピエート受容体から取り去ることによってオピエート過剰摂取から患者を脱却させる救命用短時間作用薬である。患者はナロキソン（ＮＡＲＣＡＮ（登録商標）（ナロキソンＨＣｌ）、ＡＤＡＰＴ Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．、Ｒａｄｎｏｒ、ＰＡ．）の反復注射を与えられて薬物受容体を飽和させ、その結果、乱用オピオイドに対する薬理学的応答は最小化される。ナロキソンは数分以内に作用し、約１時間持続する。

【0004】

ナルトレキソンは、アルコール中毒例においても使用される、別の一般的に使用されるオピオイド拮抗薬である；ナルトレキソンは、過去３０年間使用されてきたオピエート／アルコール遮断剤である。ナルトレキソンはゆっくり作用し、ナロキソンより長く持続する。ＶＩＶＩＴＲＯＬ（登録商標）（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｄｕｂｌｉｎ、Ｉｒｅｌａｎｄ）は持続放出形態のナルトレキソンである。毎日使用する必要がないことから、ＶＩＶＩＴＲＯＬ（登録商標）の持続放出特性は患者のコンプライアンスを支援する。

【0005】

ナロキソンおよびナルトレキソンは両方ともアルコールの影響も鈍らせ、それ故に、これらは居住型治療プログラムからの退院後にアルコール再発を予防するのにしばしば使用される。

【0006】

ナロキソンは全身への迅速な分布を有する。平均血清半減期は３０～８１分に及ぶことが示されている。これは、一部のオピエートの平均半減期より短く、オピオイド受容体がトリガーするのを長期間阻止しなければならない場合に反復投与を必要とする。ナロキソンは肝臓によって主に代謝される；その主要な代謝生成物はナロキソン－３－グルクロニドであり、尿中に排泄される。

【0007】

ナルトレキソンは、酵素ジヒドロジオールデヒドロゲナーゼによって肝臓で主に６β－ナルトレキソールに代謝される。他の代謝生成物には、２－ヒドロキシ－３－メトキシ－６β－ナルトレキソールおよび２－ヒドロキシ－３－メトキシ－ナルトレキソンが挙げられる。これらの中間体は、次いでグルクロニドとコンジュゲートしてさらに代謝される。ナルトレキソンおよびその代謝生成物６β－ナルトレキソールの血漿中半減期は、それぞれ約４時間および１３時間である。

【0008】

Ｒａｎｄｏｘ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（Ｃｒｕｍｌｉｎ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）の原理に基づいたＢｉｏＣｈｉｐ Ａｒｒａｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＢＡＴ）に基づくナロキソンアッセイを提供している。Ｂｉｏｃｈｉｐ Ａｒｒａｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙは、単一試料から広範囲の分析物を同時に定量的または定性的に検出できるようにする高精度マルチプレックス検査プラットフォームである。Ｂｉｏｃｈｉｐは、種々の薬物化合物に特異的な抗体が固定化され、安定化されている個別の検査部位を備えた固体状態のデバイスである。競合的化学発光免疫測定法（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）が次いで使用され、高感度スクリーニングを提供する。しかし、このアッセイに関して、ナルトレキソン交差反応性のレベルは１２．５％であり、ナロキソン３－Ｂ－Ｄグルクロニド交差反応性のレベルは７０．６％である。

【0009】

Ｉｍｍｕｎａｌｙｓｉｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｐｏｍｏｎａ、ＣＡ）は、口腔液および法医学用で同様にＥＬＩＳＡ原理に基づくＥＬＩＳＡナルトレキソンアッセイを提供している（例えば、カタログ番号２３９－００９６および２３９－０４８０を参照）。

【0010】

Ｎｅｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｌａｎｓｉｎｇ、ＭＩ）は、ナルトレキソン、ナルブフィン、および／または他の代謝生成物の検出用スクリーニングデバイスとしての使用のために設計された定性的ワンステップキットである、ナルトレキソン／ナルブフィンＥＬＩＳＡキットを提供している。しかし、この検査は、ナロキソンに対する交差反応性は４％のみである（例えば、カタログ番号１３３０１５および１３３０１９を参照）。

【0011】

ナロキソンおよびナルトレキソンを検出する他の方法は、高速液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）分析を含む。例えば、ＮＭＳ Ｌａｂｓ（Ｗｉｌｌｏｗ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）は、尿中のナルトレキソン（合計）および代謝生成物６－ベータ－ナルトレキソール（合計）に関するＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を提供している（例えば、検査コード３１１６Ｕ、検査名 ナルトレキソンおよび代謝生成物－合計（コンジュゲート／非コンジュゲート型）、尿中を参照）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

しかし、これら２つの薬物のいずれかまたは両方に利用可能な均一免疫測定法は現在のところ知られていない。したがって、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに特異的に結合するモノクローナル抗体、ならびに生体試料中のこれらの薬物の存在を検出し、ならびに／またはその定性的スクリーニングおよび／もしくは定量的臨床測定を提供するのに利用することができる均一免疫測定法に対するニーズが当技術分野にはある。

【0013】

さらに、ナロキソンおよびナルトレキソンの、様々なオピエートに類似した構造を考えると（図１を参照）、これらの薬物は様々なオピエートアッセイで交差反応する可能性がある。特に、様々なオピエートアッセイは、ナロキソン／ナルトレキソン処置を受けている患者に対して偽陽性結果を示すことが一般的に観察されている。したがって、生体試料中に存在するナロキソンおよびナルトレキソンを中和して、それによりいかなる偽陽性または偽性高オピエート測定も防ぎ、したがって臨床オピエートアッセイにおいてより正確な定性的スクリーニングおよび定量的測定を提供するニーズも当技術分野にはある。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】ナロキソンおよびナルトレキソン、ならびに様々なオピエートアッセイにおいてナロキソンおよびナルトレキソンが交差反応する様々なオピエートの化学構造を示す図である。

【図2】Ｃ－３位結合によるナルトレキソンハプテン、ＫＬＨ免疫原、およびオボアルブミンおよびＧ６ＰＤＨコンジュゲートの合成の概略図である。

【図3】Ｃ－３位結合によるナロキソンハプテン、ＫＬＨ免疫原、およびオボアルブミンおよびＧ６ＰＤＨコンジュゲートの合成の概略図である。

【図4】Ｃ－６位結合によるナルトレキソンハプテン、ＫＬＨ免疫原、およびオボアルブミンおよびＧ６ＰＤＨコンジュゲートの合成の概略図である。

【図5】Ｃ－６位結合によるナロキソンハプテン、ＫＬＨ免疫原、およびオボアルブミンおよびＧ６ＰＤＨコンジュゲートの合成の概略図である。

【図6-1】ナロキソンまたはナルトレキソン－ＫＬＨコンジュゲートで免疫化した選択されたマウスから得られた様々な出血を使用して行われた様々なオピエートに関するＥＬＩＳＡ阻害アッセイを示すグラフである。

【図6-2】図６－１の続き。

【図6-3】図６－２の続き。

【図6-4】図６－３の続き。

【図7-1】８つの主要なオピオイド（図の右下に示された免疫原）を使用した５つの選択された抗ナロキソンモノクローナル抗体に関するＥＬＩＳＡ阻害アッセイを示すグラフである。

【図7-2】図７－１の続き。

【図7-3】図７－２の続き。

【図8-1】８つの主要なオピオイド（図の下側パネルに示された免疫原）を使用した８つの選択された抗ナルトレキソンモノクローナル抗体に関するＥＬＩＳＡ阻害アッセイを示すグラフである。

【図8-2】図８－１の続き。

【図8-3】図８－２の続き。

【図8-4】図８－３の続き。

【図8-5】図８－４の続き。

【図9】モノクローナル抗体１７９Ａ ６Ｈ６（ナロキソン含有免疫原を使用して作製された）を使用した組合せナロキソンおよびナルトレキソン特異的アッセイを示すグラフである。

【図10】モノクローナル抗体１８０Ｃ ２Ａ１２（ナルトレキソン含有免疫原を使用して作製された）を使用した組合せナロキソンおよびナルトレキソン特異的アッセイを示すグラフである。

【図11】オピエート酵素増幅免疫測定法におけるモノクローナル抗体１８０Ａ ３Ｄ３の評価を説明する図である。

【図12】オピエート酵素増幅免疫測定法におけるモノクローナル抗体１７９Ａ ６Ｈ６の評価を説明する図である。

【図13】オピエート酵素増幅免疫測定法におけるモノクローナル抗体１８０Ｃ ２Ａ１２の評価を説明する図である。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本開示の少なくとも１つの実施形態を例示的な表現および結果として詳細に説明する前に、本開示は、その応用において、以下の説明に記載される構成の詳細および構成要素の配置に限定されないことが理解されるべきである。本開示は、他の実施形態が可能であり、または様々な方法で実施もしくは実行することができる。そのため、本明細書で使用される表現は、最も広い可能性のある範囲および意味を与えることが意図され；ならびに実施形態は、例示的である－網羅的でないことが意図される。また、本明細書で使用される表現および用語は説明の目的のためであり、限定として見なされるべきではないことが理解されるべきである。

【0016】

特に本明細書で定義されない限り、本開示と関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって特に要求されない限り、単数用語は複数形を含むものとし、複数用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載された細胞および組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質およびオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド化学ならびにハイブリダイゼーションと関連して利用される命名法、およびそれらの手法は、当技術分野で周知であり一般的に使用されるものである。標準的な手法が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換に使用される（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）。酵素反応および精製手法は製造者の仕様書に従って、または当技術分野で一般的に達成されるようにもしくは本明細書に記載されているように行われる。上述の手法および手順は一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、ならびに本明細書全体にわたって引用され、論じられている様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されているように行われる。例えば、参照によって本明細書に組み入れるＳａｍｂｒｏｏｋら Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）およびＣｏｌｉｇａｎら Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９９４））を参照。本明細書に記載された分析化学、合成有機化学、および医薬化学と関連して利用される命名法、ならびにそれらの実験手順および手法は、当技術分野で周知であり一般的に使用されるものである。標準的な手法は、化学合成、化学分析、医薬品、製剤、および送達、ならびに患者の処置に使用される。

【0017】

本明細書中に言及される全ての特許、公開特許出願、および非特許刊行物は、本開示が属する技術分野の当業者の技能のレベルを示している。本出願の任意の部分で参照される全ての特許、公開特許出願、および非特許刊行物は、個々の特許または刊行物が参照によって組み入れられると具体的および個別に示される場合と同程度に、その全体が参照によって明示的に組み入れられる。

【0018】

本明細書に開示される組成物、キット、および／または方法の全ては、本開示に照らして過度の実験をすることなく作成され、実行される。組成物、キット、および／または方法は特定の実施形態に関して記載されているが、本開示の概念、趣旨、および範囲から逸脱することなく変形形態が組成物、キット、および／または方法に適用され、ならびに本明細書に記載された方法の工程または一連の工程において適用されることが当業者に明らかとなろう。当業者に明らかな全てのそのような類似した代替物および変更形態は、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の趣旨、範囲、および概念内であると見なされる。

【0019】

本開示により利用されるとき、以下の用語は、特に指示のない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする：

【0020】

用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」の使用は、特許請求の範囲および／または本明細書において用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と合わせて使用される場合「１つ」を意味し得るが、「１つまたはそれ以上」、「少なくとも１つの」、および「１つまたは１つを超える」の意味とも一致する。そのため、用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が特に明らかに指示しない限り複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「化合物」への言及は、１つもしくはそれ以上の化合物、２つ以上の化合物、３つ以上の化合物、４つ以上の化合物、またはより大きい数の化合物を指すことがある。用語「複数」は、「２つ以上」を指す。

【0021】

用語「少なくとも１つ」の使用は、２、３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、１００などを含むがこれらに限定されない１つおよび１つを超える任意の量を含むと理解されるであろう。用語「少なくとも１つ」は、それが接続する用語に応じて１００または１０００またはそれ以上まで拡大し得；さらに、より高い上限値が満足のいく結果を生むこともあることため、１００／１０００の量は限定と見なされるべきではない。さらに、用語「Ｘ、Ｙ、およびＺの少なくとも１つ」の使用は、Ｘのみ、Ｙのみ、およびＺのみ、ならびにＸ、Ｙ、およびＺの任意の組合せを含むと理解されるであろう。序数の用語（すなわち、「第１の」、「第２の」、「第３の」、「第４の」など）の使用は、２つ以上の項目間を区別するためのみであり、例えば、別の項目と比べて１つの項目の任意の順序（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｒ ｏｒｄｅｒ）もしくは重要性、または追加の任意の順序を示唆することを意味するものではない。

【0022】

特許請求の範囲の用語「または」の使用は、代替物のみを指すと明示的に示されない限り、または代替物が相互に排他的でない限り、包括的な「および／または」を意味するのに使用される。例えば、条件「ＡまたはＢ」は、以下のいずれかによって満たされる：Ａは真である（または存在する）およびＢは偽である（または存在しない）、Ａは偽である（または存在しない）およびＢは真である（または存在する）、ならびにＡおよびＢは両方とも真である（または存在する）。

【0023】

本明細書で使用される場合、「１つの実施形態（ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「実施形態（ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「いくつかの実施形態（ｓｏｍｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔｓ）」、「１つの例（ｏｎｅ ｅｘａｍｐｌｅ）」、「例えば」、または「例（ａｎ ｅｘａｍｐｌｅ）」への任意の言及は、実施形態と関連して記載される特定の要素、構成、構造、または特徴が少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。本明細書の様々な箇所における語句「いくつかの実施形態では」または「１つの例」の出現は、必ずしも全てが例えば同じ実施形態を指しているわけではない。さらに、１つまたはそれ以上の実施形態または例への言及は全て、特許請求の範囲への限定として解釈されるべきではない。

【0024】

本出願全体を通して、用語「約」は、値が組成物／装置／デバイスに関する固有の誤差の変動、値を決定するのに使用される方法、または試験対象の間に存在する変動を含むことを示すのに使用される。例えば、ただし限定の目的ではなく、用語「約」が利用されるとき、指定された値は、そのような変動が開示された方法を実施するのに適切であり、当業者に理解されることから、明記された値からプラスまたはマイナス２０パーセント、もしくは１５パーセント、もしくは１２パーセント、もしくは１１パーセント、もしくは１０パーセント、もしくは９パーセント、もしくは８ペーセント、もしくは７パーセント、もしくは６パーセント、もしくは５パーセント、もしくは４パーセント、もしくは３パーセント、もしくは２パーセント、もしくは１パーセント異なってもよい。

【0025】

本明細書および請求項で使用される場合、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などの、含むの任意の形態）、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」（ならびに「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」などの、有するの任意の形態）、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」などの、含むの任意の形態）、または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」などの、含有するの任意の形態）は包括的またはオープンエンドであり、追加の引用されていない要素または方法工程を排除しない。

【0026】

用語「またはそれらの組合せ」は本明細書で使用される場合、該用語に先行して列挙された項目の全ての順列および組合せを指す。例えば、「Ａ、Ｂ、Ｃ、またはそれらの組合せ」は：Ａ、Ｂ、Ｃ、ＡＢ、ＡＣ、ＢＣ、またはＡＢＣの少なくとも１つを含むことが意図され、特定の文脈において順序が重要であるならば、ＢＡ、ＣＡ、ＣＢ、ＣＢＡ、ＢＣＡ、ＡＣＢ、ＢＡＣ、またはＣＡＢも含むことが意図される。この例を続けると、ＢＢ、ＡＡＡ、ＡＡＢ、ＢＢＣ、ＡＡＡＢＣＣＣＣ、ＣＢＢＡＡＡ、ＣＡＢＡＢＢなどの、１つまたはそれ以上の項目または用語の反復を含有する組合せが明示的に含まれる。当業者は、文脈から特に明らかでない限り、いかなる組合せにおいても典型的には項目または用語の数に制限はないことを理解するであろう。

【0027】

本明細書で使用される場合、用語「実質的に」は、その後に記載される事象もしくは状況が完全に生じること、またはその後に記載される事象もしくは状況がかなりの範囲もしくは程度まで生じることを意味する。例えば、特定の事象または状況と関連する場合、用語「実質的に」は、その後に記載される事象または状況が少なくとも８０％の割合、または少なくとも８５％の割合、または少なくとも９０％の割合、または少なくとも９５％の割合で生じることを意味する。用語「実質的に隣接する」は、２つの項目が互いに１００％隣接すること、または２つの項目が互いに近接内にあるが、互いに１００％隣接はしていないこと、または２つの項目の一方の一部は他方の項目に１００％隣接はしていないが、他方の項目の近接内にあることを意味し得る。

【0028】

用語「類似体」および「誘導体」は本明細書で互換的に使用され、所与の化合物と同じ基本的炭素骨格および炭素官能性をその構造中に含むが、それに加えて１つまたはそれ以上の置換を含有することもできる物質を指す。用語「置換」は本明細書で使用される場合、化合物の少なくとも１つの置換基の残基Ｒとの置き換えを指すと理解されるであろう。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｒは、Ｈ、ヒドロキシル、チオール、ハロゲン化物（フッ化物、塩化物、臭化物またはヨウ化物から選択される）、Ｃ１～Ｃ４化合物（以下の１つ：場合により置換された直鎖、分枝または環状アルキル、および直鎖、分枝または環状アルケニルから選択され、任意選択の置換基は、１つまたはそれ以上のアルケニルアルキル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロアルキル、場合により置換されたヘテロシクロアルケニルアルキル、アリールシクロアルキル、およびアリールヘテロシクロアルキルから選択される）を含んでもよく、これらの各々は場合により置換され、任意選択の置換基は、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリールアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロアルキル、場合により置換されたヘテロシクロアルケニルアルキル、アリールシクロアルキル、およびアリールヘテロシクロアルキル、フェニル、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、アリール、シクロアルキル、シアノ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノ、－ＮＨ（アルキル）、－ＮＨ（シクロアルキル）_２、カルボキシ、および－Ｃ（Ｏ）－アルキルの１つまたはそれ以上から選択される。

【0029】

用語「試料」は本明細書で使用される場合、本開示により利用される任意のタイプの生体試料を含むと理解されるであろう。利用される流体生体試料の例には、全血またはその任意の部分（すなわち、血漿または血清）、尿、唾液、喀痰、脳脊髄液（ＣＳＦ）、皮膚、腸液、腹腔内液、嚢胞液、汗、間質液、細胞外液、涙、粘液、膀胱洗浄液、精液、糞便、胸水、鼻咽頭液、それらの組合せなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0030】

用語「特異的結合パートナー」は、本明細書で使用される場合、マクロフィリン結合医薬品の検出の目的でこれと特異的に結合することができる任意の分子を指すと理解されるであろう。例えば、ただし限定としてではなく、特異的結合パートナーは、抗体、受容体、リガンド、アプタマー、分子インプリントポリマー（すなわち、無機マトリックス）、またはそれらの任意の組合せおよび／または誘導体、ならびにマクロフィリン結合医薬品に特異的に結合することができる任意の他の分子であってもよい。

【0031】

用語「抗体」は、最も広い意味で本明細書で使用され、例えば、インタクトなモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、結合している分析物の所望の生物活性を示すそれらの抗体断片およびコンジュゲート（例えば、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ダイアボディ、一本鎖抗体、ならびにインタクトな抗体の可変領域の少なくとも一部を保持するそれらの他の抗体断片およびコンジュゲートなど）、抗体代替タンパク質またはペプチド（すなわち、操作された結合タンパク質／ペプチド）、ならびにそれらの組合せまたは誘導体を指す。抗体は、任意のタイプまたはクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）もしくはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）であってもよい。

【0032】

用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書で使用される。用語「ポリペプチド」は本明細書で使用される場合、ポリペプチド配列の天然のタンパク質、タンパク質断片、または類似体を指す総称である。したがって、天然のタンパク質、タンパク質断片、および類似体はポリペプチド属の種である。用語「単離されたペプチド／ポリペプチド／タンパク質」は本明細書で使用される場合、ｃＤＮＡ、組換えＲＮＡ、またはそれらの合成起源もしくは一部の組合せのペプチド／ポリペプチド／タンパク質を指し、その起源、または派生元によって、「単離されたペプチド／ポリペプチド／タンパク質」は：（１）天然に見出されるペプチド／ポリペプチド／タンパク質と結合していない、（２）同じ供給源由来の他のペプチド／ポリペプチド／タンパク質を含まない、例えば、マウスタンパク質を含まない、（３）異なる種由来の細胞によって発現される、および／または（４）天然には生じない。

【0033】

本明細書で使用される場合、用語「アミノ酸」は、アミノ官能性および酸官能性の両方を含み、天然に存在するアミノ酸のポリマーに含まれ得る、天然であれ合成であれ全ての分子を包含する。例示的なアミノ酸には、天然に存在するアミノ酸；その類似体、誘導体、および同類物；バリアント側鎖を有するアミノ酸類似体；ならびに上述のいずれかの全ての立体異性体が挙げられる。

【0034】

用語「ポリヌクレオチド」および「核酸」は互換的に使用される。これらは、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドのいずれか、またはその類似体である、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子または遺伝子断片のコードまたは非コード領域、連鎖解析から定義された遺伝子座、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾はポリマーの組み立ての前または後で与えられる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断される。ポリヌクレオチドは、標識成分との結合などによってさらに修飾することができる。用語「単離された核酸」および「単離されたポリヌクレオチド」は互換的に使用される；核酸またはポリヌクレオチドは、これが：（１）「単離されたポリヌクレオチド」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全部もしくは一部と結合していない、（２）天然には連結されないポリヌクレオチドに連結されている、または（３）より長い配列の一部として天然には生じないならば、「単離された」と見なされる。

【0035】

用語「ベクター」は、本明細書で使用される場合、これが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図される。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、追加のＤＮＡセグメントがライゲートされる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別のタイプは、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲートされるウイルスベクターである。ある特定のベクターは、これが導入される宿主細胞中で自律複製することができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込み、それにより宿主ゲノムと一緒に複製することができる。さらに、ある特定のベクターは、遺伝子の発現を駆動することができる。そのようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単純に、「発現ベクター」）と呼ばれる。

【0036】

用語「天然に存在する」は対象に適用されるように本明細書で使用される場合、対象が天然に見出されるという事実を指す。例えば、天然の供給源から単離することができる生物（ウイルスを含む）中に存在し、実験室で人によって意図的にまたはその他の方法で修飾されていないポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、天然に存在する。用語「天然に存在する」は、本明細書では用語「天然（ｎａｔｉｖｅ）」と互換的に使用される。

【0037】

本明細書で言及される用語「選択的にハイブリダイズする」は、検出可能におよび特異的に結合することを意味する。本発明の概念によりペプチド／ポリペプチド／タンパク質をコードするポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびそれらの断片は、非特異的な核酸への大量の検出可能な結合を最小化するハイブリダイゼーションおよび洗浄条件下で核酸鎖に選択的にハイブリダイズする。高ストリンジェンシー条件は、当技術分野で公知のおよび本明細書で論じられる選択的ハイブリダイゼーション条件を達成するのに使用される。一般に、本発明の概念のポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、および断片と、目的とする核酸配列の間の核酸配列相同性は、少なくとも８０％、より典型的には、相同性の増加と共に少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％、および１００％となるであろう。２つのアミノ酸配列は、それらの配列間に部分的または完全な同一性があれば相同である。例えば、８５％の相同性は、２つの配列が最大一致で整列された場合、アミノ酸の８５％が同一であることを意味する。ギャップ（マッチされている２つの配列のいずれかの）は最大一致で許され；ギャップ長５以下が好ましく（ただし非限定的である）、２以下がより好ましい（ただし非限定的である）。あるいは、２つのタンパク質配列（またはそれらに由来する、少なくとも３０アミノ酸長のポリペプチド配列）が、変異データマトリックスおよびギャップペナルティー６以上でプログラムＡＬＩＧＮを使用して（標準偏差単位で）５を超えるアライメントスコアを有するならば、該配列は相同（この用語が本明細書で使用される場合の）である。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、１０１～１１０頁（第５巻、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（１９７２））およびこの巻の補遺２、１～１０頁を参照。２つの配列またはその部分は、ＡＬＩＧＮプログラムを使用して最適に整列された場合、それらのアミノ酸が５０％以上同一であるならば、より好ましくは相同である。用語「～に対応する」は、ポリヌクレオチド配列が参照ポリヌクレオチド配列の全部もしくは一部と相同である（すなわち、厳密には進化的に関係のない同一である）こと、またはポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列と同一であることを意味するために本明細書で使用される。対照的に、用語「～に相補的な」は、相補的配列が参照ポリヌクレオチド配列の全部または一部と相同であることを意味するために本明細書で使用される。例示のために、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ」は参照配列「ＴＡＴＡＣ」に対応し、参照配列「ＧＴＡＴＡ」に相補的である。

【0038】

以下の用語は、２つ以上のポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の配列関係を記載するのに使用される：「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセンテージ」、および「実質的な同一性」。「参照配列」は、配列比較のための基準として使用される定義された配列である；参照配列は、より大きな配列のサブセットであってもよく（例えば、配列表に示された完全長ｃＤＮＡまたは遺伝子配列のセグメントとして）、または完全なｃＤＮＡもしくは遺伝子配列を含んでもよい。一般に、参照配列は、少なくとも１８ヌクレオチド長または６アミノ酸長、頻繁には少なくとも２４ヌクレオチド長または８アミノ酸長、およびしばしば少なくとも４８ヌクレオチド長または１６アミノ酸長である。２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、それぞれ（１）２つの分子間で類似した配列（すなわち、完全なポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の一部）を含んでもよく、（２）２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列間で異なる配列をさらに含んでもよいため、２つ（またはそれ以上）の分子間の配列比較は、典型的には、「比較ウィンドウ」にわたって２つの分子の配列を比較して、配列類似性の局所領域を同定および比較することによって行われる。「比較ウィンドウ」は、本明細書で使用される場合、少なくとも１８個の隣接ヌクレオチド位置または６個のアミノ酸の概念上のセグメントを指し、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、少なくとも１８個の隣接ヌクレオチドまたは６個のアミノ酸配列の参照配列と比較され、比較ウィンドウ中のポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適アライメントの参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して２０パーセント以下の付加、欠失、置換など（すなわち、ギャップ）を含み得る。比較ウィンドウを整列するための配列の最適アライメントは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．、２：４８２頁（１９８１））の局所相同性アルゴリズム、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８：４４３頁（１９７０））の相同性アライメントアルゴリズム、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）、８５：２４４４頁（１９８８））の類似性検索法、これらのアルゴリズムのコンピュータ実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ７．０（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｗｏｒｋｓ、もしくはＭａｃＶｅｃｔｏｒソフトウェアパッケージ、またはインスペクションによって行うことができ、様々な方法によって生成された最良のアライメント（すなわち、比較ウィンドウにわたって最も高いパーセンテージの相同性をもたらす）が選択される。

【0039】

用語「配列同一性」は、比較ウィンドウにわたって２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列が同一である（すなわち、ヌクレオチドごとまたは残基ごとに）ことを意味する。用語「配列同一性のパーセンテージ」は、比較ウィンドウにわたって２つの最適に整列された配列を比較し、両方の配列で同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ、またはＩ）または残基が生じる位置の数を決定してマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を比較ウィンドウ中の位置の合計数（すなわち、ウィンドウサイズ）で除し、該結果に１００を乗じて配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出される。用語「実質的な同一性」は本明細書で使用される場合、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の特徴を示し、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸は、少なくとも１８個のヌクレオチド（６個のアミノ酸）位置の比較ウィンドウ、頻繁には少なくとも２４～４８個ヌクレオチド（８～１６個のアミノ酸）位置のウィンドウにわたって、参照配列と比較して少なくとも８５パーセント配列同一性、例えば少なくとも９０～９５パーセント配列同一性、または少なくとも９９パーセント配列同一性を有する配列を含み、配列同一性のパーセンテージは、比較ウィンドウにわたって参照配列の合計２０パーセント以下となる欠失または付加を含み得る配列と参照配列を比較することによって算出される。参照配列はより大きな配列のサブセットであってもよい。

【0040】

本明細書で使用される場合、２０個の従来のアミノ酸およびそれらの略号は従来の使用法に従う。参照によって本明細書に組み入れる、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－－Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編、Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照。２０個の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ－アミノ酸）は、α，α－二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸などの非天然アミノ酸、乳酸、および他の非従来型アミノ酸もまた、本開示のポリペプチドの適切な成分となり得る。非従来型アミノ酸の例には：４－ヒドロキシプロリン、α－カルボキシグルタミン酸、ε－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルリジン、ε－Ｎ－アセチルリジン、Ｏ－ホスホセリン、Ｎ－アセチルセリン、Ｎ－ホルミルメチオニン、３－メチルヒスチジン、５－ヒドロキシリジン、σ－Ｎ－メチルアルギニン、ならびに他の類似のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４－ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書で使用されるポリペプチド表記では、標準的な使用法および慣例に従って左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシ末端方向である。

【0041】

ポリペプチドに適用されるとき、用語「実質的な同一性」は、２つのペプチド配列が、デフォルトギャップ重量を使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列された場合、少なくとも８０パーセント配列同一性、例えば少なくとも９０パーセント配列同一性、または少なくとも９５パーセント配列同一性、または少なくとも９９パーセント配列同一性を共有することを意味する。ある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、同一でない残基位置は保存的アミノ酸置換によって異なる。保存的アミノ酸置換は、類似した側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンであり；脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリンおよびスレオニンであり；アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり；塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、およびヒスチジンであり；硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システインおよびメチオニンである。特定の保存的アミノ酸置換基は：バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、およびアスパラギン－グルタミンである。

【0042】

参照ポリペプチドの「バリアント」という用語は、参照ポリペプチドと比べて１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、欠失または挿入を有するポリペプチドを指す。アミノ酸置換は、「保存的」または「非保存的」であってもよい。「保存的」アミノ酸置換は、例えば、限定されるものではないがサイズおよび電荷などの類似した特性を有する別のアミノ酸による、ポリペプチド中のアミノ酸置換を指す。保存的置換は、側鎖に関連したアミノ酸のファミリー内で起こるものである。遺伝的にコードされたアミノ酸は、一般に、ファミリー：（１）酸性＝アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性＝リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非電荷極性＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシンに分類される。より具体的にはファミリーは：セリンおよびスレオニンは脂肪族ヒドロキシファミリーであり；アスパラギンおよびグルタミンはアミド含有ファミリーであり；アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンは脂肪族ファミリーであり；フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは芳香族ファミリーである。例えば、ロイシンとイソロイシンもしくはバリンとの、アスパラギン酸とグルタミン酸との、スレオニンとセリンとの単離された置換、または構造的に関連したアミノ酸とのアミノ酸の類似した置換は、特に置換がフレームワーク部位内のアミノ酸を含まない場合、得られた分子の結合または特性に重大な影響を与えないと予想することは妥当である。アミノ酸変化が機能性ペプチドをもたらすかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性をアッセイすることによって容易に決定することができる。抗体または免疫グロブリン分子の断片または類似体は、当業者によって容易に製造される。断片または類似体の好ましいアミノおよびカルボキシ末端は、機能ドメインの境界近くに生じる。構造ドメインおよび機能ドメインは、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列データを公開または専用配列データベースと比較して同定することができる。特定の（ただし非限定的な）実施形態では、構造および／または機能が公知の他のタンパク質に生じる配列モチーフまたは予測されるタンパク質コンフォメーションドメインを同定するのに、コンピュータ比較法が使用される。公知の三次元構造に折り畳まれるタンパク質配列を同定する方法は公知である（Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５３：１６４頁（１９９１））。したがって、上述の例は、本開示による構造ドメインおよび機能ドメインを定義するのに使用される配列モチーフおよび構造的コンフォメーションを当業者が認識できることを実証するものである。

【0043】

好ましいアミノ酸置換は：（１）タンパク質分解に対する感受性を低減する、（２）酸化に対する感受性を低減する、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる、（４）結合親和性を変化させ、および（５）そのような類似体の他の物理化学的または機能的特性を与えるまたは修飾するものである。類似体は、天然に存在するペプチド配列以外の配列の様々な変異を含むことができる。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（例えば、限定されるものではないが、保存的アミノ酸置換など）は、天然に存在する配列（例えば、限定されるものではないが、分子間接触を形成するドメインの外側のポリペプチドの部分など）で行われる。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変えるべきではない（例えば、置換アミノ酸は、親配列に生じるヘリックスを壊す傾向があるべきではなく、または親配列を特徴付ける他のタイプの二次構造を破壊する傾向があるべきではない）。当技術分野で認識されているポリペプチド二次および三次構造の例は、それぞれ参照によって本明細書に組み入れる、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（著作権）（ＢｒａｎｄｅｎおよびＪ．Ｔｏｏｚｅ編、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９１））；およびＴｈｏｒｎｔｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ ３５４：１０５頁（１９９１））に記載されている。

【0044】

用語「ポリペプチド断片」は本明細書で使用される場合、アミノ末端および／またはカルボキシ末端欠失を有するが、残りのアミノ酸配列は天然に存在する配列中の対応する位置と同一であるポリペプチドを指す。ポリペプチド断片は、参照ポリペプチドの長さに満たない任意の長さであってもよい。

【0045】

用語「抗体」は最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および所望の生物活性を示す限り抗体断片を包含する。したがって、用語「抗体」または「抗体ペプチド」は、完全長免疫グロブリン分子（すなわち、インタクトな抗体）、または特異的な抗原結合を巡ってインタクトな抗体と競合するその結合断片を指す。結合断片は、組換えＤＮＡ法、またインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作製される。結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｆｄ、ダイアボディ、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、限定されるものではないが、ＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳ（登録商標）など）およびインタクトな抗体の可変領域の少なくとも一部を保持する他の抗体断片が挙げられる。例えば、Ｈｕｄｓｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．、９：１２９～１３４頁（２００３））を参照。

【0046】

抗体の「抗原結合断片」または「抗原結合部分」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原に結合する能力を保持する抗体の１つまたはそれ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、インタクトな抗体の断片によって果たされる。抗体の「抗原結合断片」という用語内に包含される結合断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｆｄ、ダイアボディ、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、限定されるものではないが、ＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳ（登録商標）など）、単離ＣＤＲＨ３、およびインタクトな抗体の可変領域の少なくとも一部を保持する他の抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない。これらの抗体断片は、従来の組換え法および／または酵素法を使用して得られ、インタクトな抗体と同じように抗原結合についてスクリーニングされる。

【0047】

「抗体重鎖」は、本明細書で使用される場合、その天然に存在するコンフォメーションで全ての抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のより大きい方を指す。

【0048】

「抗体軽鎖」は、本明細書で使用される場合、その天然に存在するコンフォメーションで全ての抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のより小さい方を指す。カッパおよびラムダ軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。

【0049】

用語「ＣＤＲ」、およびその複数形「ＣＤＲｓ」は、抗体または抗体断片の相補性決定領域（ＣＤＲ）を指し、抗体または抗体断片の結合特性を決定する。ほとんどの場合、３つのＣＤＲが軽鎖可変領域（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３）に存在し、３つのＣＤＲが重鎖可変領域（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）に存在する。ＣＤＲは抗体分子の機能活性に寄与し、足場またはフレームワーク領域を含むアミノ酸配列によって分離される。様々なＣＤＲのうち、ＣＤＲ３配列、特にＣＤＲＨ３は最も多様であり、したがって抗体特異性に最も強く寄与する。ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの手法がある：（１）異種間配列多様性に基づくアプローチ（すなわち、その全体を参照によって組み入れる、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７））；および（２）抗原－抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（その全体を参照によって組み入れる、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７頁（１９８９））。

【0050】

用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的結合することができるいかなるタンパク質決定基も含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、抗体によって特異的に結合される抗原の領域である。エピトープ決定基は通常、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの化学的に活性な表面分子群を含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、特異的三次元構造特徴（例えば、「コンフォメーショナルエピトープ」）、および特異的電荷特徴を有し得る。

【0051】

エピトープは、特定の抗体が両方のエピトープに特異的に結合するならば、もう１つのエピトープと「同一」として定義される。ある特定の実施形態では、異なる一次アミノ酸配列を有するポリペプチドが同一であるエピトープを含み得る。ある特定の実施形態では、同一であるエピトープが異なる一次アミノ酸配列を有し得る。同一のエピトープへの特異的結合を巡って異なる抗体が競合する場合、異なる抗体は同一のエピトープに結合すると言われる。

【0052】

抗体がタンパク質および／または高分子の複合混合物中の抗原を優先的に認識する場合、抗体は抗原を「特異的に結合する」。ある特定の実施形態では、抗体は、特定のエピトープに特異的に結合する抗原結合部位を含む。ある特定のそのような実施形態では、異なる抗原がその特定のエピトープまたは近縁のエピトープを含む限り、抗体は異なる抗原を結合することができる。ある特定の場合では、例えば、異なる種由来の相同タンパク質が同一のエピトープを含み得る。ある特定の実施形態では、抗体は、１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍまたは１０^－９Ｍ以下の解離定数で抗原に特異的に結合する。抗体が受容体またはリガンド（すなわち、カウンター受容体）に特異的に結合する場合、抗体はリガンドへの受容体の接着を実質的に阻害し得る。本明細書で使用される場合、過剰な抗体が、リガンドに結合された受容体の量を少なくとも約２０％、４０％、６０％または８０％、８５％、または９０％低減するとき（インビトロ競合的結合アッセイで測定された場合）、抗体はリガンドへの受容体の接着を実質的に阻害する。

【0053】

「単離された」抗体は、産生された環境の成分から分離および／または回収されたものである。その産生環境の汚染成分は、診断的または治療的使用の妨げとなる物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。ある特定の実施形態では、抗体は、測定可能なものとして少なくとも３つの異なる方法によって：１）ローリー法によって決定される抗体の５０重量％超、例えば７５重量％超、または８５重量％超、または９５重量％超、または９９重量％超まで；２）スピニングカップシークエネーターの使用によりＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１０残基、例えば配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで；または３）クマシーブルーもしくは、あるいは、銀染色を使用して還元もしくは非還元条件下のＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均一になるまで精製されるであろう。単離された抗体は、抗体が産生される環境の少なくとも１つの成分は存在しないため、組換え細胞内にインサイチュで抗体を含む。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製工程によって製造されるであろう。さらに、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない。しかし、単離された抗体は、他の関連する抗原に対して一部の交差反応性を有する可能性がある。

【0054】

用語「抗体変異体」は、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が修飾されている抗体のアミノ酸配列バリアントを指す。そのような変異体は、抗体の重鎖または軽鎖可変ドメインのいずれかのアミノ酸配列と少なくとも７５％、例えば少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列と１００％未満の配列同一性または類似性を必然的に有する。

【0055】

用語「モノクローナル抗体」は本明細書で使用される場合、同一のエピトープに特異的に結合する実質的に均一な抗体集団から得られた抗体を指す。すなわち、該集団を含む個々の抗体は、微量で存在し得る天然に存在する可能性がある変異を除いて同一である。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的には含む従来の（ポリクローナル）抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基を対象とする。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、１つの作製方法でハイブリドーマ培養によって合成され、したがって他の免疫グロブリンによって汚染されないという点で有利である。修飾語句「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の作製を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、１つの実施形態では、本開示により作製されるモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５頁（１９７５））によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができる。

【0056】

本開示により利用されるモノクローナル抗体は、意図的な免疫化プロトコルの結果；疾患またはがんの過程で天然に抗体の産生をもたらす免疫応答の結果；ファージ由来抗体などを含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の任意の方法論によって作製することができる。上記に挙げたハイブリドーマ作製方法に加えて、本開示のモノクローナル抗体は、例えば、限定されるものではないが、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）；ファージディスプレイライブラリーからの抗体断片の単離（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４～６２８頁（１９９１）；およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１～５９７頁（１９９１）を参照）；および様々な他のモノクローナル抗体作製手法（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．）を参照）などの他の様々な方法によって産生することができる。

【0057】

抗体が得られると、例えば、個々のＢ細胞が同定され、および／またはモノクローナル抗体が産生されると、これらの抗体の可変領域をコードする配列が得られる。可変領域配列は、例えば、ハイブリドーマ、Ｂ細胞またはファージによって産生される抗体タンパク質を最初に配列決定し、コード核酸配列を決定して得ることができる。１つの実施形態では、免疫グロブリン可変領域（ＶＨおよびＶＬ）ＤＮＡまたはｃＤＮＡが代わりに配列決定される。抗体がハイブリドーマ細胞株または単離されたＢ細胞に由来する場合、可変領域をコードするｃＤＮＡは、例えば、Ｂａｂｃｏｏｋら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３：７８４３～７８４８頁（１９９６））、およびＰＣＴ公開第ＷＯ ９２／０２５５１号に記載された方法によってＰＣＲを使用して増幅することができる。両方の参考文献の内容は、その全体を参照によって本明細書に組み入れる。

【0058】

用語「中和抗体」または「中和する抗体」は、抗体が特異的に結合するエピトープを含むポリペプチドの少なくとも１つの活性を低減する抗体を指す。ある特定の実施形態では、中和抗体は活性をインビトロおよび／またはインビボで低減する。

【0059】

用語「抗原結合部位」は、抗原を特異的に結合することができる抗体の一部を指す。ある特定の実施形態では、抗原結合部位は１つまたはそれ以上の抗体可変領域によって提供される。

【0060】

本明細書で使用される場合、「実質的に純粋な」は、対象種が、存在する優勢な種である（すなわち、モル基準で、対象種が組成物中の任意の他の個々の種より豊富である）ことを意味する。一般に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての高分子種の約５０％超、例えば約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、および９９％超を含むであろう。１つの実施形態では、対象種は、本質的に均一になる（従来の検出方法によって汚染種が組成物中に検出されない）まで精製され、組成物は本質的に単一の高分子種からなる。

【0061】

用語「薬剤」は、化学物質、化学物質の混合物、生体高分子、または生体物質から作られた抽出物を指す。ある特定の実施形態では、「薬剤」は本開示によるモノクローナル抗体であってもよい。

【0062】

用語「拮抗薬」は、タンパク質／酵素の活性を低減する薬剤を指す。

【0063】

用語「作動薬」は、タンパク質／酵素の活性を増加させる薬剤を指す。

【0064】

用語「担体タンパク質」は本明細書で使用される場合、小分子に対する抗体を産生する形で免疫系応答を刺激する目的のために、典型的には免疫原性でない小分子（（限定されるものではないが）分子量が２～５ｋＤａ未満の薬物、有機化合物、ならびにペプチドおよびオリゴ糖などの）に付着することができる免疫原性タンパク質を指すと理解されるであろう。

【0065】

ここで、本発明の概念に移ると、本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関する。これらの２つの化合物は、それぞれ式ＩおよびＩＩとして以下に示される。

【化1】

【0066】

特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、担体タンパク質に結合されたナロキソンおよび／またはナルトレキソンを含むコンジュゲートに特異的に結合する。コンジュゲートは、担体タンパク質が：（１）ナロキソンおよび／またはナルトレキソンにコンジュゲートすることができる；（２）免疫原性である；ならびに（３）ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに対する抗体を産生する形で免疫系応答を刺激するように機能することができる限り、当技術分野で公知の、またはさもなければ本明細書で企図される任意の担体タンパク質を含有してもよい。本開示により利用される担体タンパク質の非限定的な例には、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）、オボアルブミン、ＢＴＧ（ウシサイログロブリン）、およびＢＧＧ（ウシガンマグロブリン）が挙げられる。

【0067】

ある特定の非限定的な実施形態では、担体タンパク質は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンの特定の炭素位置に付着する。例えば（ただし限定の目的ではなく）、担体タンパク質は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンの１－炭素、２－炭素、３－炭素、６－炭素、７－炭素、または８－炭素位置に付着する。これらのコンジュゲート免疫原の非限定的な例は、以下の式ＩＩＩ～ＶＩＩＩに示される。これらの式の各々はナロキソンおよびナルトレキソンの両方を対象にしていること、ならびに担体タンパク質は、各式の異なる炭素（式ＩＩＩ：３－炭素；式ＩＶ：１－炭素；式Ｖ：２－炭素；式ＶＩ：６－炭素；式ＶＩＩ：８－炭素；および式ＶＩＩＩ：７－炭素）に付着するものとして図示されることに留意されたい。

【0068】

【化2】

式ＩＩＩ中：Ａはヘテロ原子であり（例えば、限定されるものではないが：－Ｏ－、－Ｎ－、または－Ｓ－など）；Ｂは官能基であり（例えば、限定されるものではないが：－ＣＯ－、低級アルキル（Ｃ_０～Ｃ_１０）、－ＣＯＮＨ－、－ＳＯ_２－、－ＰＯ_４－など）；Ｃは担体タンパク質であり（例えば、限定されるものではないが：ＫＬＨ、ＢＳＡ、ＯＶＡ、ＢＧＧ、Ｇ６ＰＤＨ、またはポリ（アミノ酸）など）；およびＲ_２はＨ、アルキル、アリル、またはメチレンシクロプロピルである。

【0069】

【化3】

式ＩＶ中：Ｄはヘテロ原子であり（例えば、限定されるものではないが：Ｏ－、Ｓ－、ＣＯ－、またはＣＨ_２－など）；Ｅは低級アルキル、ＣＯ_２－、ＣＯＮＨ－、ＳＯ_２－、またはＰＯ_４－であり；Ｆは担体タンパク質であり（例えば、限定されるものではないが：ＫＬＨ、ＢＳＡ、ＯＶＡ、ＢＧＧ、Ｇ６ＰＤＨ、またはポリ（アミノ酸）など）；Ｒ_２はＨ、アルキル、アリル、またはメチレンシクロプロピルであり；Ｒ_１はＨまたはＣＨ_３である。

【0070】

【化4】

式Ｖ中：Ｄはヘテロ原子であり（例えば、限定されるものではないが：Ｏ－、Ｓ－、ＣＯ－、またはＣＨ_２－など）；Ｅは低級アルキル、ＣＯ_２－、ＣＯＮＨ－、ＳＯ_２－、またはＰＯ_４－であり；Ｆは担体タンパク質であり（例えば、限定されるものではないが：ＫＬＨ、ＢＳＡ、ＯＶＡ、ＢＧＧ、Ｇ６ＰＤＨ、またはポリ（アミノ酸）など）；Ｒ_２はＨ、アルキル、アリル、またはメチレンシクロプロピルであり；Ｒ_１はＨまたはＣＨ_３である）。

【0071】

【化5】

式ＶＩ中：Ｇは以下：低級アルキル鎖、ＣＯ_２－、ＣＯＮＨ－、ＳＯ_２－、およびＰＯ_４－の少なくとも２つを含む連結基であり；Ｈは担体タンパク質であり（例えば、限定されるものではないが：ＫＬＨ、ＢＳＡ、ＯＶＡ、ＢＧＧ、Ｇ６ＰＤＨ、またはポリ（アミノ酸）など）；Ｒ_１はＨまたはＣＨ_３であり；Ｒ_２はＨ、アルキル、アリル、またはメチレンシクロプロピルである。

【0072】

【化6】

式ＶＩＩ中：Ｉはヘテロ原子であり（例えば、限定されるものではないが：Ｏ－、Ｓ－、ＣＯ－、またはＣＨ_２－など）；Ｊは低級アルキル鎖、ＣＯ_２－、ＣＯＮＨ－、ＳＯ_２－、またはＰＯ_４－であり；Ｋは担体タンパク質であり（例えば、限定されるものではないが：ＫＬＨ、ＢＳＡ、ＯＶＡ、ＢＧＧ、Ｇ６ＰＤＨ、またはポリ（アミノ酸）など）；Ｒ_１はＨまたはＣＨ_３であり；Ｒ_２はＨ、アルキル、アリル、またはメチレンシクロプロピルである。

【0073】

【化7】

式ＶＩＩ中：Ｌはヘテロ原子であり（例えば、限定されるものではないがＯ、Ｓ、ＣＯ、またはＣＨ_２など）；Ｍは低級アルキル鎖、ＣＯ_２－、ＣＯＮＨ－、ＳＯ_２－、またはＰＯ_４－であり；Ｎは担体タンパク質であり（例えば、限定されるものではないが：ＫＬＨ、ＢＳＡ、ＯＶＡ、ＢＧＧ、Ｇ６ＰＤＨなど）；Ｒ_１はＨまたはＣＨ_３であり；Ｒ_２はＨ、アルキル、アリル、またはメチレンシクロプロピルである。

【0074】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンの３－炭素位置および／または６－炭素位置に付着したＯＶＡを含むコンジュゲートに特異的に結合する。

【0075】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がアリルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0076】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号２７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0077】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0078】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0079】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号８６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号８７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0080】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１０６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１０７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0081】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１２３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0082】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１４４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１４６のアミノ酸配列を有す軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0083】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１６６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１６７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１６８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0084】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１８６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１８７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１８８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0085】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号２０２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２０３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号２０４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２０６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号２０７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号２０８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0086】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号２２２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２２３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号２２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２２６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号２２７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号２２８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0087】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソンに特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号２４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２４３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号２４４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２４６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号２４７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号２４８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0088】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、表２～１４に概説された重鎖可変領域アミノ酸配列（すなわち、配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、または２５７）のいずれかと少なくとも約７０％同一、例えば（限定されるものではないが）配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、または２５７と少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９１％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。

【0089】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、または２５７とアミノ酸約２５個未満、アミノ酸約２４個未満、アミノ酸約２３個未満、アミノ酸約２２個未満、アミノ酸約２１個未満、アミノ酸約２０個未満、アミノ酸約１９個未満、アミノ酸約１８個未満、アミノ酸約１７個未満、アミノ酸約１６個未満、アミノ酸約１５個未満、アミノ酸約１４個未満、アミノ酸約１３個未満、アミノ酸約１２個未満、アミノ酸約１１個未満、アミノ酸約１０個未満、アミノ酸約９個未満、アミノ酸約８個未満、アミノ酸約７個未満、アミノ酸約６個未満、アミノ酸約５個未満、アミノ酸約４個未満、アミノ酸約３個未満、アミノ酸約２個未満、またはアミノ酸約１個未満異なるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。

【0090】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、上記の実施形態の代わりに、および／またはそれに加えて、抗体またはその機能的断片は、表２～１４に概説された軽鎖可変領域アミノ酸配列（すなわち、配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、または２５８）のいずれかと少なくとも約７０％同一、例えば（限定されるものではないが）配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、または２５８と少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９１％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。

【0091】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、または２５８とアミノ酸約２１個未満、アミノ酸約２０個未満、アミノ酸約１９個未満、アミノ酸約１８個未満、アミノ酸約１７個未満、アミノ酸約１６個未満、アミノ酸約１５個未満、アミノ酸約１４個未満、アミノ酸約１３個未満、アミノ酸約１２個未満、アミノ酸約１１個未満、アミノ酸約１０個未満、アミノ酸約９個未満、アミノ酸約８個未満、アミノ酸約７個未満、アミノ酸約６個未満、アミノ酸約５個未満、アミノ酸約４個未満、アミノ酸約３個未満、アミノ酸約２個未満、またはアミノ酸約１個未満異なるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。

【0092】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体もしくはその機能的断片は、配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、もしくは２５７と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有し、および／または抗体もしくはその機能的断片は、配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、もしくは２５８と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、もしくは２５７とアミノ酸約１２個未満異なるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有し、および／または配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、もしくは２５８とアミノ酸約１２個未満異なるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。

【0093】

別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号１７、３７、５７、７７、９７、１１７、１３７、１５７、１７７、１９７、２１７、２３７、もしくは２５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１８、３８、５８、７８、９８、１１８、１３８、１５８、１７８、１９８、２１８、２３８、もしくは２５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。

【0094】

別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、表２～１４に概説された重鎖アミノ酸配列（すなわち、配列番号１、２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、または２４１）のいずれかと少なくとも約７０％同一、例えば（限定されるものではないが）配列番号１、２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、または２４１と少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９１％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を有する。

【0095】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号１、２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、または２４１とアミノ酸約１００個未満、アミノ酸約９０個未満、アミノ酸約８０個未満、アミノ酸約７５個未満、アミノ酸約７０個未満、アミノ酸約６５個未満、アミノ酸約６０個未満、アミノ酸約５５個未満、アミノ酸約５０個未満、アミノ酸約４５個未満、アミノ酸約４０個未満、アミノ酸約３５個未満、アミノ酸約３０個未満、アミノ酸約２５個未満、アミノ酸約２４個未満、アミノ酸約２３個未満、アミノ酸約２２個未満、アミノ酸約２１個未満、アミノ酸約２０個未満アミノ酸、約１９個未満、アミノ酸約１８個未満、アミノ酸約１７個未満、アミノ酸約１６個未満、アミノ酸約１５個未満、アミノ酸約１４個未満、アミノ酸約１３個未満、アミノ酸約１２個未満、アミノ酸約１１個未満、アミノ酸約１０個未満、アミノ酸約９個未満、アミノ酸約８個未満、アミノ酸約７個未満、アミノ酸約６個未満、アミノ酸約５個未満、アミノ酸約４個未満、アミノ酸約３個未満、アミノ酸約２個未満、またはアミノ酸約１個未満異なるアミノ酸配列を含む重鎖を有する。

【0096】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、ならびにあるいはおよび／または上記の実施形態に加えて、抗体またはその機能的断片は、表２～１４に概説された軽鎖アミノ酸配列（すなわち、配列番号５、２５、４５、６５、８５、１０５、１２５、１４５、１６５、１８５、２０５、２２５、または２４５）のいずれかと少なくとも約７０％同一、例えば（限定されるものではないが）配列番号５、２５、４５、６５、８５、１０５、１２５、１４５、１６５、１８５、２０５、２２５、または２４５と少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９１％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。

【0097】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号５、２５、４５、６５、８５、１０５、１２５、１４５、１６５、１８５、２０５、２２５、または２４５とアミノ酸約４５個未満、アミノ酸約４０個未満、アミノ酸約３５個未満、アミノ酸約３０個未満、アミノ酸約２５個未満、アミノ酸約２４個未満、アミノ酸約２３個未満、アミノ酸約２２個未満、アミノ酸約２１個未満、アミノ酸約２０個未満、アミノ酸約１９個未満、アミノ酸約１８個未満、アミノ酸約１７個未満、アミノ酸約１６個未満、アミノ酸約１５個未満、アミノ酸約１４個未満、アミノ酸約１３個未満、アミノ酸約１２個未満、アミノ酸約１１個未満、アミノ酸約１０個未満、アミノ酸約９個未満、アミノ酸約８個未満、アミノ酸約７個未満、アミノ酸約６個未満、アミノ酸約５個未満、アミノ酸約４個未満、アミノ酸約３個未満、アミノ酸約２個未満、またはアミノ酸約１個未満異なるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。

【0098】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体もしくはその機能的断片は、配列番号１、２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、もしくは２４１と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を有し、および／または抗体もしくはその機能的断片は、配列番号５、２５、４５、６５、８５、１０５、１２５、１４５、１６５、１８５、２０５、２２５、または２４５と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号１、２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、もしくは２４１とアミノ酸約４６個未満異なるアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号５、２５、４５、６５、８５、１０５、１２５、１４５、１６５、１８５、２０５、２２５、もしくは２４５とアミノ酸約２４個未満異なるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。

【0099】

別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号１、２１、４１、６１、８１、１０１、１２１、１４１、１６１、１８１、２０１、２２１、もしくは２４１のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号５、２５、４５、６５、８５、１０５、１２５、１４５、１６５、１８５、２０５、２２５、もしくは２４５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。

【0100】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体または機能的断片は、配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、または２４９と少なくとも約７０％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた重鎖（および／または配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９と少なくとも約７０％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた重鎖可変領域）、例えば（限定されるものではないが）配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、もしくは２４９および／または配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９と少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９１％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた重鎖を有する。

【0101】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、ならびにあるいはおよび／または上記の実施形態に加えて、抗体または機能的断片は、配列番号１３、３３、５３、７３、９３、１１３、１３３、１５３、１７３、１９３、２１３、２３３、または２５３と少なくとも約７０％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた軽鎖（および／または配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０と少なくとも約７０％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた軽鎖可変領域）、例えば（限定されるものではないが）配列番号１３、３３、５３、７３、９３、１１３、１３３、１５３、１７３、１９３、２１３、２３３、もしくは２５３および／または配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０と少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９１％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一、または少なくとも約９９％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた軽鎖を有する。

【0102】

さらなる特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体もしくは機能的断片は、配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、もしくは２４９と少なくとも約７０％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた重鎖を有し、および／または抗体もしくは機能的断片は、配列番号１３、３３、５３、７３、９３、１１３、１３３、１５３、１７３、１９３、２１３、２３３、もしくは２５３と少なくとも約７０％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた軽鎖を有する。

【0103】

さらなる特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体もしくは機能的断片は、配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９と少なくとも約７０％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた重鎖可変領域を有し、および／または抗体もしくは機能的断片は、配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０と少なくとも約７０％同一であるポリヌクレオチドによってコードされた軽鎖可変領域を有する。

【0104】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、または２４９とヌクレオチド約１００個未満、ヌクレオチド約９０個未満、ヌクレオチド約８０個未満、ヌクレオチド約７５個未満、ヌクレオチド約７０個未満、ヌクレオチド約６０個未満、ヌクレオチド約５０個未満、ヌクレオチド約４５個未満、ヌクレオチド約４０個未満、ヌクレオチド約３５個未満、ヌクレオチド約３０個未満、ヌクレオチド約２５個未満、ヌクレオチド約２０個未満、ヌクレオチド約１５個未満、ヌクレオチド約１０個未満、ヌクレオチド約９個未満、ヌクレオチド約８個未満、ヌクレオチド約７個未満、ヌクレオチド約６個未満、ヌクレオチド約５個未満、ヌクレオチド約４個未満、ヌクレオチド約３個未満、ヌクレオチド約２個未満、またはヌクレオチド約１個未満異なる配列によってコードされた重鎖（および／または配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９とヌクレオチド約１００個未満、ヌクレオチド約９０個未満、ヌクレオチド約８０個未満、ヌクレオチド約７５個未満、ヌクレオチド約７０個未満、ヌクレオチド約６０個未満、ヌクレオチド約５０個未満、ヌクレオチド約４５個未満、ヌクレオチド約４０個未満、ヌクレオチド約３５個未満、ヌクレオチド約３０個未満、ヌクレオチド約２５個未満、ヌクレオチド約２０個未満、ヌクレオチド約１５個未満、ヌクレオチド約１０個未満、ヌクレオチド約９個未満、ヌクレオチド約８個未満、ヌクレオチド約７個未満、ヌクレオチド約６個未満、ヌクレオチド約５個未満、ヌクレオチド約４個未満、ヌクレオチド約３個未満、ヌクレオチド約２個未満、もしくはヌクレオチド約１個未満異なる配列によってコードされた重鎖可変領域）を有する。

【0105】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、ならびにあるいはおよび／または上記の実施形態に加えて、抗体またはその機能的断片は、配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、または２４９と約１００個未満、ヌクレオチド約９０個未満、ヌクレオチド約８０個未満、ヌクレオチド約７５個未満、ヌクレオチド約７０個未満、ヌクレオチド約６０個未満、ヌクレオチド約５０個未満、ヌクレオチド約４５個未満、ヌクレオチド約４０個未満、ヌクレオチド約３５個未満、ヌクレオチド約３０個未満、ヌクレオチド約２５個未満、ヌクレオチド約２０個未満、ヌクレオチド約１５個未満、ヌクレオチド約１０個未満、ヌクレオチド約９個未満、ヌクレオチド約８個未満、ヌクレオチド約７個未満、ヌクレオチド約６個未満、ヌクレオチド約５個未満、ヌクレオチド約４個未満、ヌクレオチド約３個未満、ヌクレオチド約２個未満、またはヌクレオチド約１個未満異なる配列によってコードされた軽鎖（および／または配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０とヌクレオチド約１００個未満、ヌクレオチド約９０個未満、ヌクレオチド約８０個未満、ヌクレオチド約７５個未満、ヌクレオチド約７０個未満、ヌクレオチド約６０個未満、ヌクレオチド約５０個未満、ヌクレオチド約４５個未満、ヌクレオチド約４０個未満、ヌクレオチド約３５個未満、ヌクレオチド約３０個未満、ヌクレオチド約２５個未満、ヌクレオチド約２０個未満、ヌクレオチド約１５個未満、ヌクレオチド約１０個未満、ヌクレオチド約９個未満、ヌクレオチド約８個未満、ヌクレオチド約７個未満、ヌクレオチド約６個未満、ヌクレオチド約５個未満、ヌクレオチド約４個未満、ヌクレオチド約３個未満、ヌクレオチド約２個未満、もしくはヌクレオチド約１個未満異なる配列によってコードされた軽鎖可変領域）を有する。

【0106】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、もしくは２４９とヌクレオチド約１００個未満異なる配列によってコードされた重鎖、および／または配列番号１３、３３、５３、７３、９３、１１３、１３３、１５３、１７３、１９３、２１３、２３３、もしくは２５３とヌクレオチド約７０個未満異なる配列によってコードされた軽鎖を有する。

【0107】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は、配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９とヌクレオチド約３５個未満異なる配列によってコードされた重鎖可変領域、および／または配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０とヌクレオチド約３４個未満異なる配列によってコードされた軽鎖可変領域を有する。

【0108】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0109】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号３０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号３１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号３２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号３４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号３５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号３６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0110】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号５０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号５１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号５２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号５４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号５５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号５６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0111】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号７０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号７１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号７２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号７４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号７５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号７６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0112】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号９０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号９１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号９２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号９４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号９５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号９６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0113】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１１０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１１１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１１２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１１４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１１５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１１６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0114】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１３０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１３１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１３２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１３４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１３５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１３６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0115】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナルトレキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１５０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１５１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１５２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１５４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１５５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１５６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0116】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１７０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１７１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１７２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１７４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１７５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１７６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0117】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号１９０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１９１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１９２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１９４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１９５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１９６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0118】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号２１０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２１１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号２１２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２１４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号２１５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号２１６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0119】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号２３０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２３１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号２３２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２３４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号２３５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号２３６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0120】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソン（およびある特定の（ただし非限定的な）実施形態では、Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩのコンジュゲート）に特異的に結合する抗体またはその機能的断片に関し、抗体は：（ｉ）配列番号２５０の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２５１の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号２５２の配列によってコードされた重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２５４の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号２５５の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号２５６の配列によってコードされた軽鎖可変領域ＣＤＲ３の１つまたはそれ以上を含む。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、上記の（ｉ）～（ｖｉ）の２つ、３つ、４つ、または５つを含む。別の特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は上記の（ｉ）～（ｖｉ）の全てを含む。

【0121】

抗体またはその機能的断片は、モノクローナル抗体またはその機能的断片であってもよい。あるいは、抗体またはその機能的断片は、ポリクローナル抗体またはその機能的断片であってもよい。

【0122】

ある特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は、完全長免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、およびそれらの組合せから選択されるものとしてさらに定義される。

【0123】

ある特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は単離される。特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片は精製される。

【0124】

本開示はまた、上記本明細書に記載された抗体または機能的断片のいずれかと同一のエピトープに結合する抗体またはその機能的断片にも関する。

【0125】

本開示のある特定の非限定的な実施形態はまた、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに特異的に結合することができる抗体またはその機能的断片を作製する方法にも関する。方法は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに付着した担体タンパク質のコンジュゲートを含む抗原性化合物でヒト以外の動物を免疫化する工程；ならびにヒト以外の動物の血漿から抗体またはその機能的断片を回収する工程を含む。

【0126】

本開示のある特定の非限定的な実施形態はまた、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに特異的に結合することができる抗体またはその機能的断片を作製する方法にも関する。方法は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに付着した担体タンパク質のコンジュゲートを含む抗原性化合物でヒト以外の動物を免疫化し、それによりコンジュゲートに結合する抗体を産生するＢ細胞を誘導する工程；ならびにＢ細胞によって産生された抗体またはその機能的断片を得る工程を含む。抗体またはその機能的断片は、当技術分野で公知の様々な手段、例えば（限定されるものではないが）ハイブリドーマ技術またはＢ細胞ＰＣＲ技術などによって得ることができる。方法は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに対する結合に基づき抗体またはその機能的断片をさらに選択する任意選択の工程をさらに含んでもよい。

【0127】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、上記本明細書に記載された抗体またはその機能的断片のいずれかを産生するハイブリドーマに関する。

【0128】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに特異的に結合することができる抗体またはその機能的断片を作製する方法に関する。該方法では、本明細書に記載またはさもなければ企図される抗体またはその機能的断片のいずれかを産生することができるハイブリドーマが培養されて、上記本明細書に記載された抗体またはその機能的断片のいずれかを産生する。特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその機能的断片は回収される。

【0129】

本開示のある特定の非限定的な実施形態はまた、検出可能な標識に付着した、本明細書に開示またはさもなければ企図される抗体またはその機能的断片のいずれかを含むコンジュゲートにも関する。開示により利用される検出可能な標識の非限定的な例には、酵素標識、放射性標識、蛍光標識、化学発光標識、生物発光標識、および微粒子標識、ならびにそれらの任意の組合せが挙げられる。さらに、検出可能な標識は、直接的または間接的結合を介して抗体または機能的断片に付着することができる。

【0130】

本開示のある特定の非限定的な実施形態はまた、固体支持体に付着した、本明細書に開示またはさもなければ企図される抗体またはその機能的断片のいずれかを含むコンジュゲートにも関する。固体支持体への抗体／機能断片の付着（直接的または間接的コンジュゲートを介した）は、例えばカラムなどの親和性精製クロマトグラフィー基質をもたらす。

【0131】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、本明細書に開示またはさもなければ企図される抗体またはその機能的断片のいずれかをコードするポリヌクレオチドに関する。

【0132】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体またはその機能的断片の重鎖をコードするポリヌクレオチドの一部は、配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、または２４９と少なくとも約７０％同一（および／または抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドの一部は、配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９と少なくとも約７０％同一である）、例えば（限定されるものではないが）配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、もしくは２４９、および／または配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９と少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９１％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一である、または少なくとも約９９％同一である。

【0133】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、ならびにあるいはおよび／または上記の実施形態に加えて、抗体またはその機能的断片の軽鎖をコードするポリヌクレオチドの一部は、配列番号１３、３３、５３、７３、９３、１１３、１３３、１５３、１７３、１９３、２１３、２３３、または２５３と少なくとも約７０％同一（および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドの一部は、配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０と少なくとも約７０％同一である）、例えば（限定されるものではないが）配列番号１３、３３、５３、７３、９３、１１３、１３３、１５３、１７３、１９３、２１３、２３３、もしくは２５３、および／または配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０と少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９１％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９３％同一、少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９６％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一である、または少なくとも約９９％同一である。

【0134】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体もしくはその機能的断片の重鎖をコードするポリヌクレオチドの一部は、配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、もしくは２４９と少なくとも約９０％同一であり、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖をコードするポリヌクレオチドの一部は、配列番号１３、３３、５３、７３、９３、１１３、１３３、１５３、１７３、１９３、２１３、２３３、もしくは２５３と少なくとも約９０％同一である。

【0135】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドの一部は、配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９と少なくとも約９０％同一であり、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドの一部は、配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０と少なくとも約９０％同一である。

【0136】

別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体もしくはその機能的断片の重鎖に対応する配列の一部、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖に対応する配列の一部は、それぞれ配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、もしくは２４９、または配列番号１３、３３、５３、７３、９３、１１３、１３３、１５３、１７３、１９３、２１３、２３３、もしくは２５３と、（ならびに／または抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域に対応する配列の一部、および／もしくは抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域に対応する配列の一部は、それぞれ配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９、もしくは配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０と）約１００個未満、ヌクレオチド約９０個未満、ヌクレオチド約８０個未満、ヌクレオチド約７５個未満、ヌクレオチド約７０個未満、ヌクレオチド約６０個未満、ヌクレオチド約５０個未満、ヌクレオチド約４５個未満、ヌクレオチド約４０個未満、ヌクレオチド約３５個未満、ヌクレオチド約３０個未満、ヌクレオチド約２５個未満、ヌクレオチド約２０個未満、ヌクレオチド約１５個未満、ヌクレオチド約１０個未満、ヌクレオチド約９個未満、ヌクレオチド約８個未満、ヌクレオチド約７個未満、ヌクレオチド約６個未満、ヌクレオチド約５個未満、ヌクレオチド約４個未満、ヌクレオチド約３個未満、ヌクレオチド約２個未満、またはヌクレオチド約１個未満異なる。

【0137】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体もしくはその機能的断片の重鎖に対応する配列の一部は、配列番号９、２９、４９、６９、８９、１０９、１２９、１４９、１６９、１８９、２０９、２２９、もしくは２４９とヌクレオチド約１００個未満異なり、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖に対応する配列の一部は、配列番号１３、３３、５３、７３、９３、１１３、１３３、１５３、１７３、１９３、２１３、２３３、もしくは２５３とヌクレオチド約７０個未満異なる。

【0138】

さらに別の特定の（ただし非限定的な）実施形態では、抗体もしくはその機能的断片の重鎖可変領域に対応する配列の一部は、配列番号１９、３９、５９、７９、９９、１１９、１３９、１５９、１７９、１９９、２１９、２３９、もしくは２５９とヌクレオチド約３５個未満異なり、および／または抗体もしくはその機能的断片の軽鎖可変領域に対応する配列の一部は、配列番号２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、もしくは２６０とヌクレオチド約３４個未満異なる。

【0139】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、本明細書に記載またはさもなければ企図される抗体またはその機能的断片をコードするポリヌクレオチドのいずれかを含むベクターに関する。

【0140】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、本明細書に記載またはさもなければ企図される抗体またはその機能的断片をコードするポリヌクレオチドのいずれかを含む組換え宿主細胞に関する。本開示のある特定の非限定的な実施形態は、本明細書に記載またはさもなければ企図されるベクターのいずれかを含む組換え宿主細胞に関する。

【0141】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンに特異的に結合することができる抗体またはその機能的断片を作製する方法に関する。方法は：（ａ）ポリヌクレオチドによってコードされた抗体またはその機能的断片の発現を可能にする条件下の細胞培養で、本明細書に記載またはさもなければ企図される組換え宿主細胞のいずれかを培養する工程と；（ｂ）細胞培養から抗体またはその機能的断片を単離する工程とを含む。

【0142】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、生体試料中に存在するナロキソンおよび／またはナルトレキソンを検出する方法に関する。方法は：ナロキソンおよび／またはナルトレキソンがそれぞれ試料中に存在するならば、抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体が形成される条件下で、企図された本明細書に開示またはさもなければ企図される抗体またはその機能的断片のいずれかと生体試料を接触させる工程と；形成された抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体の量が、試料中に存在するナロキソンおよび／またはナルトレキソンの量にそれぞれ正比例する、形成されたいずれかの抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体を検出する工程とを含む。

【0143】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、上記本明細書に記載された標識は、抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体の検出において使用するための抗体／機能的断片に付着する。

【0144】

本開示のある特定の非限定的な実施形態は、生体試料のオピエートアッセイからナロキソンおよび／またはナルトレキソン干渉を実質的に低減する（または実質的に除去する）方法に関する。方法は、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンがそれぞれ試料中に存在するならば、抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体が形成される条件下で、本明細書に開示またはさもなければ企図される抗体またはその機能的断片のいずれかの１つまたはそれ以上と生体試料を接触させる工程と；形成されたいずれかの抗体／ナロキソンおよび／または抗体／ナルトレキソン複合体を除去する工程と；ナロキソンおよび／またはナルトレキソンが実質的に低減／除去されている生体試料でオピエートアッセイを行う工程とを含む。この方法は、任意のオピエートに関するアッセイ、および任意のオピエートアッセイフォーマットを用いて利用することができる。例えば（ただし限定の目的ではなく）、アッセイされるオピエートは、コデイン、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、モルヒネ、オキシコドン、オキシモルフォン、ヘロイン（６－アセチルモルヒネ）、それらの組合せなどであってもよい。オピエートアッセイフォーマットの非限定的な例には、ＥＬＩＳＡ、チップアッセイ、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ、免疫測定法、酵素免疫測定法、酵素増幅免疫測定法、蛍光偏光免疫測定法、それらの組合せなどが挙げられる。オピエートアッセイの様々なタイプは当技術分野で周知であり、よく使用される。したがって、当業者が本明細書に開示される方法を行えるようにするのに、さらなるその説明は不要に思われる。

【0145】

特定の（ただし非限定的な）実施形態では、オピエートアッセイからナロキソンおよび／またはナルトレキソン干渉を実質的に低減する（または実質的に除去する）方法で使用される少なくとも１つの抗体またはその機能的断片には、少なくとも２つの抗体またはその機能的断片が挙げられる：（１）ナロキソンに特異的に結合する少なくとも１つの抗体またはその機能的断片、および（２）ナルトレキソンに特異的に結合する少なくとも１つの抗体またはその機能的断片。

【0146】

本開示のある特定の非限定的な実施形態はまた、本明細書に開示またはさもなければ企図される抗体／機能的断片および／または組成物（検出可能な標識または固体支持体に付着した抗体／機能的断片を含む組成物など）のいずれか、ならびに本明細書に記載されたアッセイ／方法で利用される任意の他の試薬を含有するキットも含む。例えば（ただし限定の目的ではなく）、キットは、上記本明細書に記載されたオピエートアッセイの１つまたはそれ以上の成分をさらに含んでもよい。例えば（ただし限定の目的ではなく）、キットは、オピエート免疫測定法において使用するための、本明細書に記載またはさもなければ企図されるオピエートのいずれかに結合する抗体またはその機能的断片を含んでもよい。

【0147】

組成物／キット／方法のアッセイ成分／試薬は、それらを本開示により機能できるようにする任意の形態で提供される。例えば、ただし限定の目的ではなく、試薬のそれぞれは液体形態で提供され、キット内にバルクおよび／または単一のアリコート形態で配置される。あるいは、特定の（ただし非限定的な）実施形態では、試薬の１つまたはそれ以上は、単一のアリコート凍結乾燥試薬の形態でキット中に配置される。マイクロ流体デバイスでの乾燥試薬の使用は、その全体を参照によって本明細書に明示的に組み入れる、米国特許第９，２４４，０８５号（Ｓａｍｐｒｏｎｉ）に詳細に記載されている。

【0148】

上記本明細書に詳細に記載されたアッセイ成分／試薬に加えて、キットは、本明細書に記載またはさもなければ企図される特定のアッセイのいずれかを実施するための他の試薬をさらに含有してもよい。これらの追加の試薬の性質は特定のアッセイフォーマットに依存し、その同定は十分に当業者の技能の範囲内であり；したがって、さらなるその説明は不要に思われる。また、キット中に存在する成分／試薬は、それぞれ別々の容器／コンパートメントに入っていてもよく、または成分／試薬の交差反応性および安定性に応じて、様々な成分／試薬が１つまたはそれ以上の容器／コンパートメントで組み合わされる。さらに、キットは、成分／試薬が配置されるマイクロ流体デバイスを含んでもよい。

【0149】

キット中の様々な成分／試薬の相対量は、アッセイ方法中に生じる必要がある反応を実質的に最適化する成分／試薬の濃度を提供するために、およびさらにアッセイの感度を実質的に最適化するために大きく異なり得る。適切な条件下で、キット中の１つまたはそれ以上の成分／試薬は、凍結乾燥粉末などの乾燥粉末として提供することができ、キットは、乾燥試薬を溶解するための賦形剤をさらに含んでもよい；この方法で、本開示による方法またはアッセイを行うための適切な濃度を有する試薬溶液は、これらの成分から得ることができる。陽性および／または陰性対照も、キットと共に含めることができる。さらに、キットは、キットの使い方を説明する書面による指示書のセットをさらに含んでもよい。こうした性質のキットは、本明細書に記載またはさもなければ企図される方法のいずれかにおいて使用することができる。

【実施例】

【0150】

実施例が以下に示される。しかし、本開示は、本明細書に開示される特定の実験、結果、および実験手順への適用に限定されるべきではないことが理解されるべきである。むしろ、実施例は、様々な実施形態の１つとして単純に提供され、例示的であり、網羅的ではないことが意図される。

【実施例1】

【0151】

ナロキソンおよびナルトレキソンコンジュゲートを含む免疫原の作製
この実施例は、複数のＣ位結合を通じてナロキソンまたはナルトレキソンを含有する様々なコンジュゲートの作製を説明する。

【0152】

材料および装置：化合物は、シリカ結合Ｃ１８逆相カラムを備えたＳｈｉｍａｄｚｕ ＨＰＬＣシステムで精製した。化学反応は、Ａｎａｌｔｅｃｈ Ｉｎｃ．（Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）製シリカゲルプレートを使用するＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）によって監視した。シリカゲルプレートは、ＵＶ短波（２５４ｎｍ）を使用して視覚化した。全ての化学物質はＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、Ｆｌｕｋａ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）、およびＶＷＲ（Ｒａｄｎｏｒ、ＰＡ）から入手し、受け取ったときに使用した。^１Ｈ ＮＭＲは、Ｂｒｕｋｅｒ ＵＬＴＲＡＳＨＩＥＬＤ（商標）６００ＭＨｚ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）で記録した。化学シフトは、内部基準としてテトラメチルシランに関連させ、または重溶媒を用いて、百万分の一（ｐｐｍ、δ）で報告した。使用したＮＭＲ略号は：ｓ（シングレット）、ｂｒ ｓ（ブロードシングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｑ（カルテット）、ｄｄ（ダブレットのダブレット）、ｄｔ（トリプレットのダブレット）、ｔｄ（ダブレットのトリプレット）、ｄｄｄ（ダブレットのダブレットのダブレット）、Ｊ（結合定数）、Ｈｚ（ヘルツ）である。ＥＳＩ－ＭＳスペクトルは、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｉｎｅｅｒｓ解析施設（Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）の６１３０質量検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ １２９０シングルクアッドシステムで記録した。ＵＶ：ＯＤ２８０およびＢＣＡ濃度測定にＣａｒｒｙ ６０を使用した。

【0153】

以下の略号は、下記に記載する意味を有する：
ＢＣＡアッセイ － ビシンコニン酸アッセイ
ｅｑ． － 当量
ｇ － グラム
ｍｇ － ミリグラム
ｍｍｏｌ、ｍＭ － ミリモル
ｎｍ － ナノメートル
ＣＶ － カラム容量
ｃｍ^２ － 平方センチメートル
ＤＣＭ － ジクロロメタン
ＭｅＯＨ － メタノール
ＭｅＯＤ－ｄ_４ － ４個の重水素原子を有する重水素化メタノール（ＮＭＲスペクトル用）
ＤＭＦ － Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＳｕＯＨ － Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド
ＮａＯＡｃ － 酢酸ナトリウム
ＡｃＯＨ － 酢酸
ＡｃＯ^－ － 酢酸塩
ＥＤＡＣ・ＨＣｌ － Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩
ＴＦＡ － トリフルオロ酢酸
ＴＬＣ － 薄層クロマトグラフィー
Ｒｆ － ＴＬＣ分析での保持係数
ＵＶ － 紫外線
ｖ／ｖ － 容量比
ＥＳＩ－ＭＳ － エレクトロスプレーイオン化質量分析
ｍ／ｚ － 質量電荷比
ＮＭＲ － 核磁気共鳴
ＭＨｚ － メガヘルツ
ｎＧ６ＰＤＨ － 未変性グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ酵素
β－ＮＡＤＨ － ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
Ｇ_６ＰＤＮａ_２ － グルコース－６－リン酸二ナトリウム塩
ＯＶＡ － ニワトリ卵白から単離されたオボアルブミン
ｍｃＫＬＨ － マリカルチャーキーホールリンペットヘモシアニン（Ｍａｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｋｅｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐｅｔ Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）
ＴＲＩＳ － トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
ＫＵ － ｎＧ_６ＰＤＨの二量体タンパク質複合体
ＲＰＭ － 毎分回転数
ＣＦＡ － 完全フロイントアジュバント
ＩＦＡ － 不完全フロイントアジュバント
ＥＬＩＳＡ － 酵素結合免疫吸着測定法
ＥＩＡ － 酵素免疫測定法
ＰＢＳ － リン酸緩衝食塩水
ＨＲＰ － 西洋ワサビペルオキシダーゼ
ＴＭＢ － ３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン
μＬ － マイクロリットル
μｇ－マイクログラム
Ｖ_Ｈ － 可変重鎖
Ｖ_Ｌ － 可変軽鎖
Ｃ_Ｈ － 定常重鎖
Ｃ_Ｌ － 定常軽鎖
ＮＡＤ^＋ － 酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
ＮＡＤＨ － 還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド

【0154】

図２は、以下に本明細書でさらに詳細に記載される、Ｃ－３位結合によるナルトレキソンハプテン、ＫＬＨ免疫原、およびＧ６ＰＤＨコンジュゲートの合成の概略図である。

【0155】

化合物（２）の製造：マグネチックスターラーバーを備えたオーブン乾燥５０ｍＬ丸底フラスコで、ナルトレキソン塩酸塩（１）（３３０ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、その後ＤＭＦ（５ｍＬ）、アセトン（５ｍＬ）、および炭酸カリウム（５７５ｍｇ、４．１６ｍｍｏｌ、４．７８当量）をフラスコに添加した。得られた反応混合物を窒素流下、室温（ｒｔ．）で５分間撹拌し；次いで、エチル－５－ブロモ吉草酸（３７５μＬ、４９５ｍｇ、２．３６ｍｍｏｌ、約２．７１当量）を混合物に添加した。得られた反応混合物を油浴に入れ、コンデンサを丸底フラスコに取り付けた。反応混合物を撹拌下６０℃で加熱し、ＴＬＣ［（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８／２ ｖ／ｖ）Ｒｆ_（１）＝０．３６、Ｒｆ_（２）＝０．８０］によって４時間後に反応を完了した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去して白色沈殿物を得、アセトニトリル（２×１０ｍＬ）に懸濁させ、濾過した。有機抽出物をロータリーエバポレーターで濃縮し、油ポンプで一晩（１６時間）さらに乾燥させて微量の揮発性物質を除去した。生成物をアセトニトリル／水（０．１％酢酸を含有する３０／７０ ｖ／ｖ）に懸濁させ、精製のためにＳｈｉｍａｄｚｕ ＨＰＬＣシステムに注入した。所望の生成物を含有する画分をプールし、ロータリーエバポレーターで濃縮し、一晩（１６～２０時間）凍結乾燥させて、収率９３％で無色の粉末として化合物（２）４７４．８ｍｇを得た。化合物（２）：ESI-MS m/z calcd. for: [C₂₇H₃₆NO₆]⁺470.3, found [M+H]⁺ = 470.3; ¹H NMR (600 MHz, MeOD-d₄) δ: 6.86 (d, J = 8.28 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.28 Hz, 1H), 4.97 (br s, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.18-4.16 (m, 2H), 4.11 (q, J = 7.14 Hz, 3H), 3.45 (d, J = 19.74 Hz, 1H), 3.40 (dd, J = 13.62; 7.20 Hz, 1H), 3.25 (dd, J = 12.69, 4.35 Hz, 1H), 3.19 (dd, J = 19.77, 6.27 Hz, 1H), 3.08 - 3.01 (m, 2H), 2.84 (td, J = 13.28, 4.68 Hz, 1H), 2.74 (td, J = 12.93, 3.86 Hz, 1H), 2.41 - 2.38 (m, 2H), 2.25 (dt, J = 14.64, 3.00 Hz, 1H), 2.12 - 2.09 (m, 1H), 1.78 - 1.74 (m, 4H), 1.72 - 1.68 (m, 2H), 1.24 (t, J = 7.14 Hz, 3H), 1.18 - 1.15 (m, 1H), 0.86 - 0.83 (m, 1H), 0.79 - 0.75 (m, 1H), 0.59 - 0.50 (m, 2H).

【0156】

化合物（３）の製造：化合物（２）（４７４．８ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し；次いで、水酸化ナトリウム１０Ｎ溶液を添加し（０．５３ｍＬ）、得られた反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了をＴＬＣ［（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８／２ ｖ／ｖ）、Ｒｆ_（２）＝０．８０ Ｒｆ_（３）＝０．２０］によってチェックして確認した。反応混合物を氷浴でＨＣｌ（１２Ｎ、０．５ｍＬ）を用いて酸性化した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた白色ケーキをアセトニトリル（２ｍＬ）に懸濁させ、濾過した。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮した。次いで０．１％ＴＦＡを含有する水を添加し、得られた試料を一晩（１６～２０時間）凍結乾燥させた。凍結乾燥後、表題化合物４７１ｍｇを収率１００％で無色の粉末として得た。化合物（３）：ESI-MS m/z calcd. for: [C₂₅H₃₂NO₆]⁺442.2, found [M+H]⁺ = 442.2; ¹H NMR (600 MHz, MeOD-d₄) δ: 6.85 (d, J = 8.28 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.28 Hz, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.20 - 4.18 (m, 2H), 3.91 (d, J = 6.06 Hz, 1H), 3.37 (d, J = 19.54 Hz, 1H), 3.19 (dd, J = 13.32, 7.08 Hz, 1H), 3.11 (dd, J = 12.66, 4.74 Hz, 1H), 3.07 - 3.06 (m, 1H), 3.02 (dd, J = 14.55, 5.13 Hz, 1H), 2.89 (dd, J = 13.38, 7.32 Hz, 1H), 2.76 (td, J = 13.16, 4.90 Hz, 1H), 2.61 (td, J = 12.82, 4.00 Hz, 1H), 2.34 - 2.32 (m, 2H), 2.26 (dt, J = 14.61, 3.14 Hz, 1H), 2.04 - 2.02 (m, 1H), 1.81 - 1.76 (m, 4H), 1.70 (td, J = 14.31, 3.52 Hz, 1H), 1.65 (dd, J = 13.44, 3.00 Hz, 1H), 1.28 - 1.10 (m, 1H), 0.81 - 0.78 (m, 1H), 0.75 - 0.71 (m, 1H), 0.51 - 0.44 (m, 2H).

【0157】

化合物（４）の製造：化合物（３）（１０．６ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を脱気ＤＭＦ（１．０６ｍＬ）に溶解して１０ｍｇ／ｍＬハプテン－ＤＭＦ溶液を作製し；次いで、Ｈ－ヒドロキシスクシンイミド（６．５８ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ、３当量）を添加した。得られた反応混合物を均一になるまで撹拌し、次いでＥＤＡＣ・ＨＣｌ（７．３０ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。得られた反応混合物を室温で２０時間撹拌し、ＴＬＣ［（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８／２ ｖ／ｖ）、Ｒｆ_（３）＝０．８０、Ｒｆ_（４）＝０．２０）］によって監視した。化合物（４）の形成を、ＴＬＣおよびＭＳダイレクトループによって確認した：［Ｃ_２９Ｈ_３５Ｎ_２Ｏ_８］^＋についての計算値ＥＳＩ ｍ／ｚ＝５３９．２、実測値［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５３９．３および［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝５６１．３。この化合物（４）を、それ以上精製することなく次の反応に使用した。

【0158】

ナルトレキソンＯＶＡ（５）の製造：ＯＶＡ、（１２ｍｇ、２．８１×１０^－４ｍｍｏｌ）を５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．４１（２ｍＬ）に溶解した。得られたタンパク質溶液を、均一になるまで穏やかにボルテックスし；次いで、氷浴を使用して０～４℃に冷却した。前もって製造した化合物（４）－ＤＭＦ溶液（０．５０１ｍＬ、４０当量）を穏やかな旋回流下でタンパク質溶液に滴下添加した。得られた反応混合物を４℃で２０時間（一晩）振動させ、次いでＧ－２５Ｍ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）（ＣＶ＝７０ｃｍ^３、２ＣＶの５０ｍＭリン酸緩衝液 ｐＨ７．００で予め平衡化）で精製した。コンジュゲート溶出をＯＤ_２８０で監視した。所望のナルトレキソンＯＶＡコンジュゲートを含有する鋭いピークを、インターバル６７～９０ｍＬで溶出した。ナルトレキソンＯＶＡ（５）を回収し、濃縮した。コンジュゲートの濃度をＯＤ_２８０によって０．８９ｍｇ／ｍｌに決定した。ＯＶＡコンジュゲート（５）を収率７５％で合計９ｍｇ得た。

【0159】

ナルトレキソンＫＬＨ免疫原（６）の製造：ナルトレキソンＫＬＨ免疫原（６）は、ナルトレキソンＯＶＡ（５）の製造に関する記載と同じプロトコルを使用して製造した。この場合、化合物（４）－ＤＭＦ溶液（０．４８８ｍＬ、７×１０^－３ｍｍｏｌ）で処理したｍｃＫＬＨ ２０ｍｇを使用した。精製後、コンジュゲートの濃度をＢＣＡアッセイによって０．９６ｍｇ／ｍｌに決定した。ＫＬＨ免疫原（６）を収率７６．８％で１５．３５ｍｇ得た。

【0160】

バイオコンジュゲーションのための未変性Ｇ６ＰＤＨの製造：未変性Ｇ６ＰＤＨ酵素エマルジョン（５．５ｍＬ、５．５ＫＵ、６４．３５ｍｇ）を１８，０００ＲＰＭ、４℃で３０分間遠心分離した。得られた透明な水層を捨て、残りの白色ケーキを５５ｍＭ ＴＲＩＳ緩衝液 ｐＨ８．００（２．００ｍＬ）に懸濁させた。懸濁液を溶解するまで穏やかに旋回させ；次いで、５５ｍＭ ＴＲＩＳ緩衝液 ｐＨ８．００で予め平衡化したＧ－２５Ｍ Ｓｅｐｈａｄｅｘカラム（ＣＶ＝１９６ｍＬ）に充填した。酵素をインターバル７５～１１６ｍＬで溶出した。酵素の濃度を、Ａｍｉｃｏｎ撹拌細胞濃縮器（３０，０００ＭＷカットオフ）を使用して５ｍｇ／ｍＬに調節し；次いで、氷浴を使用して０～４℃に冷却した。グルコース－６－リン酸二ナトリウム塩［Ｇ６ＰＤＮａ_２］２４０ｍｇを次いで添加した。得られた反応混合物を１分まで穏やかに旋回させ；次いで、β－ＮＡＤＨ（１２０ｍｇ）を添加し、得られた反応混合物を１分間再び撹拌した。この酵素溶液を３つのプラスチックチューブに等分した（１チューブあたり酵素９．５０ｍｇに相当する１．９０ｍＬ）。未変性Ｇ６ＰＤＨを含有するチューブ１～３を氷浴で保存し、化合物（４）添加に備えた。

【0161】

バイオコンジュゲーションのための化合物（４）の製造：化合物（３）（９．７１ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を脱気ＤＭＦ（０．２４２ｍＬ）に溶解して４０ｍｇ／ｍＬハプテン－ＤＭＦ溶液を作製し；次いで、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（６．２０ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、約３当量）を添加した。得られた反応混合物を均一になるまで撹拌し、次いでＥＤＡＣ・ＨＣｌ（７．３０ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。得られた反応混合物を室温で２２時間撹拌し、ＴＬＣ［（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８／２ ｖ／ｖ）、Ｒｆ_（４）＝０．８０、Ｒｆ_（３）＝０．２０］によって監視した。化合物（４）の形成後、脱気ＤＭＦ（０．２４２μＬ）を添加して２０ｍｇ／ｍＬ化合物（４）－ＤＭＦ溶液を作成した。［Ｃ_２９Ｈ_３５Ｎ_２Ｏ_８］^＋についての計算値ＥＳＩ ｍ／ｚ＝５３９．３、実測値［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５３９．３、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝５６１．３；この化合物（４）を、それ以上精製することなくバイオコンジュゲーションに使用した。

【0162】

ナルトレキソンｎＧ６ＰＤＨ酵素（７ａ～ｃ）の製造：チューブ１に、化合物（４）（２４３μＬ－ＤＭＦ溶液）を添加した［ｎＧ６ＰＤＨに対して１０×モル過剰の化合物（４）］。反応混合物を２～８℃で１時間振動させ；次いで、Ｌ－リジン［１Ｍ溶液、９μＬ、各化合物（４）に対して１０×モル過剰のＬ－リジン］でクエンチした。反応混合物を次いで室温で２０分間振動させた。このコンジュゲートを、５５ｍＭ ＴＲＩＳ緩衝液 ｐＨ７．００（２ＣＶ）で予め平衡化したＧ－５０Ｍ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）カラム（ＣＶ＝６７ｃｍ^３）によって精製した。コンジュゲートをインターバル４５～６０ｍＬで鋭いピークとして溶出した。所望のコンジュゲートを含有する全ての画分を回収し、濃縮した。コンジュゲートの濃度をＯＤ_２８０によって１．１６ｍｇ／ｍＬに決定した。Ｇ６ＰＤＨコンジュゲート（７ａ）を収率８３％で７．９３ｍｇ得た。

【0163】

チューブ２に、化合物（４）（４８５μＬ －ＤＭＦ溶液）を添加し（ｎＧ６ＰＤＨに対して２０×モル過剰の化合物（４））；反応混合物を２～８℃で１時間振動させ；次いで、Ｌ－リジン［１Ｍ溶液、１８μＬ、化合物（４）に対して１０×モル過剰のＬ－リジン］でクエンチした。反応混合物を次いで室温で２０分間振動させた。このコンジュゲートを、５５ｍＭ ＴＲＩＳ緩衝液 ｐＨ７．００（２ＣＶ）で予め平衡化したＧ－５０Ｍ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）カラム（ＣＶ＝６７ｃｍ^３）によって精製した。コンジュゲートをインターバル４５～６０ｍＬで鋭いピークとして溶出した。所望のコンジュゲートを含有する全ての画分を回収し、濃縮した。コンジュゲートの濃度をＯＤ_２８０によって１．２５ｍｇ／ｍＬに決定した。Ｇ６ＰＤＨコンジュゲート（７ｂ）を８５％の収率で８．０９ｍｇ得た。

【0164】

チューブ３に、化合物（４）（７２９μＬ －ＤＭＦ溶液）を添加した［ｎＧ６ＰＤＨに対して３０×モル過剰の化合物（４）］。反応混合物を２～８℃で１時間振動させ；次いで、Ｌ－リジン［１Ｍ溶液、２７μＬ、化合物（４）に対して１０×モル過剰Ｌ－リジン］でクエンチした。反応混合物を次いで室温で２０分間振動させた。このコンジュゲートを、５５ｍＭ ＴＲＩＳ緩衝液 ｐＨ７．００（２ＣＶ）で予め平衡化したＧ－５０Ｍ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）カラム（ＣＶ＝６７ｃｍ^３）によって精製した。コンジュゲートをインターバル４５～６０ｍＬで鋭いピークとして溶出した。所望のコンジュゲートを含有する全ての画分を回収し、濃縮した。コンジュゲートの濃度をＯＤ_２８０によって１．２８ｍｇ／ｍＬに決定した。Ｇ６ＰＤＨコンジュゲート（７ｃ）を収率８７％で８．２７ｍｇ得た。

【0165】

図３は、以下に本明細書でさらに詳細に記載される、Ｃ－３位結合によるナロキソンハプテン、ＫＬＨ免疫原、およびＧ６ＰＤＨコンジュゲートの合成の概略図である。

【0166】

化合物（９）の製造：この化合物は、化合物（２）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。凍結乾燥後、化合物（９）（４６５．５ｍｇ）を収率９９％で無色の粉末として得た。化合物（９）：ESI-MS m/z calcd. for: [C₂₆H₃₄NO₆]⁺456.2, found [M+H]⁺ = 456.2; ¹H NMR (600 MHz, MeOD-d₄) δ: 6.87 (d, J = 8.28 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.28 Hz, 1H), 6.03 - 5.96 (m, 1H), 5.71 (d, J = 16.98 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 10.26 Hz, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.20 - 4.16 (m, 2H), 4.11 (q, J = 7.14 Hz, 2H), 3.98 (dd, J = 13.59, 8.62 Hz, 1H), 3.89 (dd, J = 13.62, 5.64 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 6.00 Hz, 1H), 3.48 (d, J = 19.80 Hz, 1H), 3.31 - 3.28 (m, 1H), 3.10 ( dd, J = 19.80, 6.18 Hz, 1H), 3.03 (td, J = 14.65, 4.97 Hz, 1H), 2.87 - 2.75 (m, 2H), 2.40 (m, 2H), 2.24 (dt, J = 14.70, 3.00 Hz, 1H), 2.06 - 2.02 (m, 1H), 1.78 - 1.76 (m, 4H), 1.73 - 1.66 (m, 2H), 1.25 (t, J = 7.14 Hz, 3H).

【0167】

化合物（１０）の製造：この化合物は、化合物（３）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。凍結乾燥後、化合物（１０）（４４７ｍｇ）を収率ほぼ１００％で無色の粉末として得た。化合物（１０）：ESI-MS m/z calcd. for: [C₂₄H₃₀NO₆]⁺ = 428.2, found [M+H]⁺ = 428.2; ¹H NMR (600 MHz, MeOD-d₄) δ: 6.82 (d, J = 8.22 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.22 Hz, 1H), 5.99 - 5.91 (m, 1H), 5.48 (dd, J = 17.13, 1.17 Hz, 1H), 5.43 - 5.41 (m, 2H), 4.82 (s 1H), 4.18 - 4.16 (m, 2H), 3.60 (dd, J = 13.60, 7.53 Hz, 1H), 3.55 (dd, J = 13.59, 6.03 Hz, 1H), 3.42 (d, J = 5.88 Hz, 1H), 3.30 (s, 1H), 3.03 (td, J = 14.55, 5.10 Hz, 1H), 2.96 (dd, J = 12.48, 4.80 Hz, 1H), 2.85 (dd, J = 19.32, 6.06 Hz, 1H), 2.65 (td, J = 12.99, 5.04 Hz, 1H), 2.46 (td, J = 12.63, 3.92 Hz, 1H), 2.36 - 2.33 (m, 2H), 2.22 (dt, J = 14.52, 3.12 Hz, 1H), 1.97 - 1.94 (m, 1H), 1.80 - 1.76 (m, 4H), 1.65 (dd, J = 14.25, 3.45 Hz, 1H), 1.61 - 1.58 (m, 1H).

【0168】

化合物（１１）の製造：この化合物は、化合物（４）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0169】

ナロキソンＯＶＡ（１２）の製造：このコンジュゲートは、ＯＶＡコンジュゲート（５）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0170】

ナロキソンＫＬＨ免疫原（１３）の製造：この免疫原は、ＫＬＨ免疫原（６）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0171】

ナロキソンｎＧ６ＰＤＨ［１４（ａ～ｃ）］の製造：これらのｎＧ６ＰＤＨコンジュゲートは、ｎＧ６ＰＤＨｓ［７（ａ～ｃ）］の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0172】

図４は、以下に本明細書で詳細に記載される、Ｃ－６位結合によるナルトレキソンハプテン、ＫＬＨ免疫原、およびＧ６ＰＤＨコンジュゲートの合成の概略図である。

【0173】

化合物（１５）の製造：ナルトレキソン塩酸塩（１）（１１８ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（７ｍＬ）に溶解し；次いで、ＮａＯＡｃ（２９２ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を室温で５分間撹拌し；次いで、Ｏ－（カルボキシメチル）ヒドロキシルアミンヘミ塩酸塩（２１０．７ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を混合物に添加した。得られた反応混合物を室温で一晩（２０時間）撹拌した。反応混合物のＴＬＣ分析は、反応の完了を示した［（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８／２ ｖ／ｖ）Ｒ_ｆ（１）＝０．４、Ｒ_{ｆ（１５）}＝０．０２］。溶媒をロータリーエバポレーターで除去して白色懸濁液を得た。次いで、０．１％ ＡｃＯＨを含有する水／アセトニトリル（１．４ｍＬ／０．６ｍＬ ｖ／ｖ）を添加した。粗反応混合物を、次いで精製のために分取Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＨＰＬＣシステムに注入した。所望の生成物を含有する画分を一緒にプールし、ロータリーエバポレーターで濃縮し、一晩（１６～２０時間）凍結乾燥させた。これにより、化合物（１５）（１２４ｍｇ）を収率７５％で無色の粉末として得た。化合物（１５）：ESI-MS m/z calcd. for: [C₂₂H₂₇NO₆]⁺415.2, found [M+H]⁺ = 415.2, and [M+Na]⁺ = 429.2; ¹H NMR (600 MHz, MeOD-d₄) δ: 6.76 (d, J = 8.10 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.22 Hz, 1H), 5.06 (s, 1H), 4.66 (s, 2H), 3.99 (d, J = 6.60 Hz, 1H), 3.42 (d, J = 19.74 Hz, 1H), 3.38 (dd, J = 13.32, 7.03 Hz, 1H), 3.17 (dd, J =12.99, 5.01 Hz, 1H), 3.12 (dd, J = 19.86, 6.84 Hz, 1H), 2.97 (dd, J = 13.62, 7.50 Hz, 1H), 2.91 (td, J = 13.05, 4.04 Hz, 1H), 2.82 (ddd, J = 17.76, 6.54, 1.86 Hz, 1H), 2.68 (td, J = 13.43, 5.00 Hz, 1H), 2.65 - 2.59 (m, 1H), 1.80 - 1.76 (m, 2H), 1.51 (ddd, J = 14.25, 12.09, 6.54 Hz, 1H), 1.17 - 1.10 (m, 1H), 0.88 - 0.84 (m, 1H), 0.80 - 0.75 (m, 1H), 0.57 - 0.50 (m, 2H).

【0174】

化合物（１６）の製造：この化合物は、化合物（４）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0175】

ナルトレキソンＯＶＡ（１７）の製造：このコンジュゲートは、ＯＶＡコンジュゲート（５）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0176】

ナルトレキソンＫＬＨ免疫原（１８）の製造：この免疫原は、ＫＬＨ免疫原（６）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0177】

ナルトレキソンｎＧ６ＰＤＨ［１９（ａ～ｃ）］の製造：これらのｎＧ６ＰＤＨコンジュゲートは、ｎＧ６ＰＤＨ［７（ａ～ｃ）］の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0178】

図５は、以下に本明細書で詳細に記載される、Ｃ－６位結合によるナロキソンハプテン、ＫＬＨ免疫原、およびＧ６ＰＤＨコンジュゲートの合成の概略図である。

【0179】

化合物（２０）の製造：ナロキソン塩酸塩（８）（１１０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（７ｍＬ）に溶解し；次いで、ＮａＯＡｃ（２６０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を室温で５分間撹拌し；次いで、Ｏ－（カルボキシメチル）ヒドロキシルアミンヘミ塩酸塩（１８６ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ分析は、反応の完了を示した（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８／２ ｖ／ｖ Ｒｆ_（１）＝０．４０、Ｒｆ_（２０）＝０．０２）。反応混合物は白色沈殿物を形成した。反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮して白色懸濁液を得、０．１％ ＡｃＯＨを含有する水に溶解し、精製のためにＳｈｉｍａｄｚｕ ＨＰＬＣに注入した。所望の生成物を含有する画分を一緒にプールし、ロータリーエバポレーターで濃縮し、一晩（１６～２０時間）凍結乾燥させた。これにより、化合物（２０）（１２５ｍｇ）を収率８７％で得た。化合物（２０）：ESI-MS m/z calcd. for: [C₂₁H₂₅NO₆]⁺401.2, found [M+H]⁺ = 401.2, [M+Na]⁺ = 423.2; ¹H NMR (600 MHz, MeOD-d₄) δ: 6.74 (d, J = 8.17 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.22 Hz, 1H), 5.98 - 5.90 (m, 1H), 5.68 (d, J = 17.16 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 10.38 Hz, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.64 (s, 2H), 3.95 (dd, J = 13.65, 8.67 Hz, 1H), 3.81 (dd, J = 13.68, 5.58 Hz, 1H), 3.63 (d, J = 6.54 Hz, 1H), 3.43 (d, J = 19.74 Hz, 1H), 3.22 (dd, J = 12.93, 4.95 Hz, 1H), 3.02 (dd, J = 19.80, 6.60 Hz, 1H), 2.92 (td, J = 13.13, 4.10 Hz, 1H), 2.80 (ddd, J = 17.73, 6.39, 1.89 Hz, 1H), 2.65 (td, J = 13.47, 5.04 Hz, 1H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 1.77 (dd, J = 13.68, 3.30 Hz, 1H), 1.71 (ddd, J = 14.26, 6.67, 2.38 Hz, 1H), 1.45 (ddd, J = 14.26, 12.20, 6.43 Hz, 1H).

【0180】

化合物（２１）の製造：この化合物は、化合物（４）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0181】

ナロキソンＯＶＡ（２２）の製造：このコンジュゲートは、ＯＶＡコンジュゲート（５）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0182】

ナロキソンＫＬＨ免疫原（２３）の製造：この免疫原は、ＫＬＨ免疫原（６）の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【0183】

ナロキソンｎＧ６ＰＤＨ［２４（ａ～ｃ）］の製造：これらのｎＧ６ＰＤＨコンジュゲートは、ｎＧ６ＰＤＨ［７（ａ～ｃ）］の製造に関する記載と同じ合成方法を使用して製造した。

【実施例2】

【0184】

抗ナロキソンおよび抗ナルトレキソンモノクローナル抗体の産生
この実施例は、ナロキソンおよびナルトレキソンに対する特異的モノクローナル抗体の産生を説明する。これらのモノクローナル抗体は、それぞれナロキソンおよびナルトレキソン特異的アッセイで使用することができる。

【0185】

さらに、これらのモノクローナル抗体は、オピエートアッセイ（限定されるものではないが、ヒドロコドンアッセイなどの）でブロッカー抗体として使用することができる。様々なオピエートアッセイは、ナロキソン／ナルトレキソン治療を受けている患者に関して偽陽性結果を示すことが一般的に観察されている。そのような場合、本明細書に開示されるナロキソン／ナルトレキソン特異的アッセイを使用して患者をスクリーニングして、いかなる偽陽性も除外することができる。さらに（および／またはあるいは）、様々なオピエートアッセイで利用される生体試料を、これらのナロキソン／ナルトレキソン特異的モノクローナル抗体による前処理工程に供して、試料中に存在するあらゆるナロキソン／ナルトレキソンを除去し、したがって、定量的臨床オピエートアッセイで観察されるあらゆるナロキソン／ナルトレキソン干渉を防ぐ、または実質的に低減することができる。

【0186】

この実施例では、様々な位置でＫＬＨに付着したナロキソンまたはナルトレキソンを含む様々な免疫原を製造し、マウス（例えば、ＢＡＬＢ／ｃマウス、スイスウェブスターマウス、またはマウスのＡＪ株）を腹腔内で免疫する免疫原として使用した。マウスを３回以上免疫して、高力価免疫応答を生成した。一次免疫は、ＣＦＡのようなアジュバント（ＣＦＡを使用して乳化した免疫原）を使用し、それに続くその後の追加免疫は、ＩＦＡのようなアジュバントを使用して行った。免疫後、マウスを出血させ、遠心分離法を使用して血清試料を単離した。これらのマウスからの血清試料を、ナロキソンおよび／またはナルトレキソンとオボアルブミンとのコンジュゲート（オボアルブミンコンジュゲート）を使用して、抗ナロキソンおよび抗ナルトレキソン抗体についてテストした。マイクロタイタープレートＥＬＩＳＡを使用し、阻害ＥＬＩＳＡを使用してオボアルブミンコンジュゲートへの結合と、その後、遊離薬物分子への結合について抗体を調べた。図６は、８つの重要なオピオイド薬物を使用した阻害ＥＬＩＳＡ結果を示している。図６に示されたマウス出血を得るのに使用した免疫原は、次の通りである。上の列、左から：ナルトレキソン３－ＫＬＨ（Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩ）；ナルトレキソン６－ＫＬＨ（Ｒ_２がシクロプロピルである式ＶＩ、）；ナロキソン３－ＫＬＨ（Ｒ_２がアリルである式ＩＩＩ）；およびナロキソン３－ＫＬＨ。下の列、左から右：ナルトレキソン３－ＫＬＨ；ナルトレキソン６－ＫＬＨ；ナロキソン６－ＫＬＨ（Ｒ_２がアリルである式ＶＩ）；およびナロキソン６－ＫＬＨ。

【0187】

ＥＬＩＳＡ阻害アッセイで抗薬物抗体価および遊離薬物への結合が良好なマウスを選択して、米国特許第９，８１５，９０７号（２０１７年１１月１４日にＳｈａｒｍａらに対して発行された）に記載されたものと類似した方法でモノクローナル抗体の生成を続けた。特に、力価が最も高く特異性が最も良いマウスに、融合の３日前にブーストした。融合当日、脾臓細胞をこれらのマウスから回収し、ＰＥＧアシスト融合プロトコルを使用して骨髄腫細胞株Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３と融合させた。約１０日後、ハイブリドーマ上清を、抗ナロキソンおよび抗ナルトレキソン抗体についてプレートＥＬＩＳＡ（特異性に関する直接結合および阻害ＥＬＩＳＡ）を使用してスクリーニングした。陽性クローンをさらに拡大し、サブクローニングし、プロテインＡ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）カラムを使用して上清を精製した。精製抗体試料を、免疫原（すなわち、薬物－担体タンパク質のコンジュゲート）および遊離オピオイドへの結合についてＥＬＩＳＡを使用してテストした。

【0188】

表１は、本明細書に記載のナロキソンおよびナルトレキソン薬物分子に対して生成された選択したハイブリドーマクローンのいくつかに関する名称を列挙している。

【0189】

【表1】

【0190】

抗体溶液（免疫マウス出血またはハイブリドーマクローン上清または精製抗体）を、以下のプロトコルに従って阻害ＥＬＩＳＡ方を使用してスクリーニングした。１ウェルあたり５０μＬのリン酸緩衝食塩水中１μｇ／ｍＬのナロキソン３－オボアルブミン、ナロキソン６－オボアルブミン、ナルトレキソン３－オボアルブミン、またはナルトレキソン６－オボアルブミンでプレートをコーティングした。プレートコーティングは、室温で１時間以上、または約２℃～８℃で一晩行った。プレートを次いで軽く叩いて乾燥させ、ブロッキング緩衝液（０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０界面活性剤（Ｃｒｏｄａ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＰＬＣ、Ｓｎａｉｔｈ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を含有するＰＢＳ中０．５％カゼイン溶液）１ウェルあたり２００μＬでブロックした。プレートブロッキングは、プレート振とうによる室温で３０分間以上のインキュベーションによって行った。プレートを、洗浄緩衝液が０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０を含有するＭＩＬＬＩＱ（登録商標）水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）であるプレートスタッカーを備えたプレート洗浄器（ＢｉｏＴｅｋ（登録商標）、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）を使用して洗浄した。スクリーニングするべきモノクローナル抗体を、次いで遊離薬物と一緒に各ウェルに次の通りに添加した：適切に希釈した培養上清（または抗体溶液）１ウェルあたり２５μＬ、および遊離薬物２０μｇ／ｍＬの追加の２５μＬ。インキュベーションは、プレート振とうにより室温で約１時間行った。プレートを洗浄した。酵素コンジュゲート（１：３０００に希釈したブロッキング緩衝液に希釈したＨＲＰに結合したヤギ抗マウスＩｇＧ）を１ウェルあたり５０μＬで添加した。インキュベーションは、振とうにより室温で約１時間行った。プレートを次いで洗浄し、発色溶液（Ｍｏｓｓ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ、Ｐａｓａｄｅｎａ ＭＤ製のＴＭＢ）を１ウェルあたり１００μＬの容量で添加した。所望の抗体がハイブリドーマ上清に存在した場合、次いで光学密度の減少を、遊離薬物を含有するウェルと比較して観察した。ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＳａｎＪｏｓｅ、ＣＡ）を使用して、プレートを６５０ｎｍ波長で読み取った。注：抗体溶液の適切な希釈は、滴定ＥＬＩＳＡを行って決定した。おおよそ１．０の光学密度が観察された場合、抗体希釈を選択した。

【0191】

図７に示したように、１７９Ｂ ９Ｇ１．１、１７９Ｂ ９Ｅ１２、１７９Ｂ １０Ａ７、１７９Ａ ６Ｈ６、および１７９Ｂ ９Ｅ７と名付けられたモノクローナル抗体は、ナロキソン－３－Ｖａｌ－ｍｃＫＬＨ（Ｒ_２がアリルである式ＩＩＩ）を使用して生成され、阻害ＥＬＩＳＡアッセイでテストした８個の他の主なオピオイドに比べてナロキソンに対する良好な特異性を有した。図８に示したように、１８０Ｂ １３Ｆ７、１８０Ｃ １Ｆ８、１８０Ｃ ７Ｇ８、１８０Ｃ ８Ａ１０、１８０Ｃ ９Ｄ５、１８０Ｃ ９Ｇ８、１８０Ｃ ２Ａ１２、および１８０Ａ ３Ｄ３と名付けられたモノクローナル抗体は、ナルトレキソン－３－Ｖａｌ－ｍｃＫＬＨ（Ｒ_２がシクロプロピルである式ＩＩＩ）を使用して生成され、阻害ＥＬＩＳＡアッセイでテストした８個の他の主なオピオイドに比べてナルトレキソンに対する良好な特異性を有した。これらの結果に基づき、以下にさらに詳細に記載するように、モノクローナル抗体を、次いで、ナロキソン／ナルトレキソン特異的免疫測定法において、および他のオピエートアッセイでのナロキソン／ナルトレキソン干渉を防ぐ、または実質的に低減する方法において使用した。

【実施例3】

【0192】

モノクローナル抗体配列決定
実施例２のように作製したハイブリドーマ細胞を、様々なモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖を配列決定するのに使用した。種々のクローンの配列を整列させ、コンセンサス配列を得た。各モノクローナル抗体について得られた様々な配列を、以下の表２～１４に示す。

【0193】

【表2】

【0194】

【表3】

【0195】

【表4】

【0196】

【表5】

【0197】

【表6】

【0198】

【表7】

【0199】

【表8】

【0200】

【表9】

【0201】

【表10】

【0202】

【表11】

【0203】

【表12】

【0204】

【表13】

【0205】

【表14】

【実施例4】

【0206】

ナロキソンおよびナルトレキソン特異的アッセイにおけるモノクローナル抗体の使用
この実施例では、実施例２で作製したモノクローナル抗体をナロキソンおよびナルトレキソン特異的免疫測定法で利用して、臨床免疫測定法で一方または両方の薬物を検出するこれらのモノクローナル抗体の能力を実証した。

【0207】

図９は、抗ナロキソンモノクローナル抗体１７９Ａ ６Ｈ６を使用したナロキソンおよびナルトレキソン特異的アッセイをグラフで示した図である。見てわかるように、抗ナロキソンモノクローナル抗体は、ナロキソンおよびナルトレキソンの両方を実質的に同じ特異性で検出する。類似した結果は、抗ナロキソンモノクローナル抗体１７９Ｂ １０Ａ７、１７９Ｂ ９Ｇ１、１７９Ｂ ９Ｅ１２、および１７９Ｂ ９Ｅ７でも得られた。したがって、これらの抗体は、どちらかのまたは両方の薬物に関する臨床検出免疫測定法で使用することができるであろう。

【0208】

図１０は、抗ナルトレキソンモノクローナル抗体１８０Ｃ ２Ａ１２を使用したナロキソンおよびナルトレキソン特異的アッセイをグラフで示した図である。この抗ナルトレキソンモノクローナル抗体も、ナルトレキソンと比べて低い特異性ではあるが、ナルトレキソンに加えてナロキソンを検出することができた。しかし、この抗体は、それでもやはりどちらかのまたは両方の薬物に関する臨床検出免疫測定法で使用することができるであろう。

【0209】

これらの結果に基づき、これらの抗体は、次のようなアッセイ構造で利用することができる。ＥＭＩＴ（登録商標）ＩＩ（酵素増幅免疫測定法、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｉｎｅｅｒｓ、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）に加えてナロキソンおよび／またはナルトレキソンアッセイは、ヒト尿中の特定の化合物の分析に使用される均一酵素免疫測定法である。アッセイは、検体中の薬物と、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ（ｒＧ６ＰＤＨ）で標識した薬物との間の抗体結合部位を巡る競合に基づく。酵素活性は抗体に結合すると減少し、そのため検体の薬物濃度は、酵素活性に関して測定することができる。活性な酵素は、グルコース－６－リン酸塩（Ｇ６Ｐ）の存在下でニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）をＮＡＤＨに変換し、分光光度法で測定される吸光度変化をもたらす。内因性血清Ｇ６ＰＤＨは干渉しない。その理由は、補酵素ＮＡＤが、アッセイで使用される細菌（ロイコノストック・メセントロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ））酵素とのみ機能するためである。

【0210】

ＥＭＩＴ（登録商標）アッセイフォーマットは、試薬１として公知の抗体／基質試薬を含む。この試薬は、抗体ならびにアッセイ用の緩衝液、保存料、および安定剤を含む。ＥＭＩＴ（登録商標）アッセイフォーマットは、試薬２として公知の酵素試薬も含む。この試薬は、コンジュゲートならびにアッセイ用の緩衝液、保存料、および安定剤を含む。

【実施例5】

【0211】

オピオイドアッセイにおけるナロキソン／ナルトレキソン干渉の低減
この実施例では、実施例２で作製したモノクローナル抗体をオピエート酵素増幅免疫測定法で利用して、これらのアッセイにおけるナロキソン／ナルトレキソン干渉を低減する能力を実証した。

【0212】

図１１は、ナルトレキソン抗体ブロッカー３Ｄ３の存在下、ナロキソンおよびナルトレキソンの交差反応性が陽性応答から陰性応答へとカットオフ（３００ｎｇ／ｍＬ）まで変化することを実証するものである。同様に、図１２は、ナロキソン抗体ブロッカー６Ｈ６の存在下、ナロキソンの交差反応性が、はるかに低い濃度でのみ陽性応答から陰性応答へとカットオフ（３００ｎｇ／ｍＬ）まで変化することを実証するものである。

【0213】

図１３では、抗ナルトレキソンモノクローナル抗体２Ａ１２をヒドロコドンアッセイでブロッカーとして使用して、カットオフ（３００ｎｇ／ｍｌ）までの陰性応答をもたらすナロキソンおよびナルトレキソンの量を増加させた。

【0214】

したがって、本開示により、上に記載された目的および利点を十分に満たす組成物ならびにこれを産生および使用する方法が提供された。本開示は、上に記載された特定の図面、実験、結果、および言語と併せて記載されてきたが、多くの代替、変更、および変形が当業者には明らかであることは明白である。したがって、本開示の趣旨および広い範囲内に入る全てのそのような代替、変更、および変形を包含することが意図される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図6-3】

【図6-4】

【図7-1】

【図7-2】

【図7-3】

【図8-1】

【図8-2】

【図8-3】

【図8-4】

【図8-5】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【配列表】

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