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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-10-04
(45)【発行日】2024-10-15
(54)【発明の名称】抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体
(51)【国際特許分類】
C07K 16/46 20060101AFI20241007BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241007BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241007BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241007BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241007BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241007BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241007BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20241007BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241007BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241007BHJP
【ＦＩ】
C07K16/46 ZNA
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 T
A61P43/00 105
【請求項の数】
20
(21)【出願番号】P 2021553382
(86)(22)【出願日】2020-03-11
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-04-22
(86)【国際出願番号】 IB2020000342
(87)【国際公開番号】W WO2020183245
(87)【国際公開日】2020-09-17
【審査請求日】2023-03-09
(31)【優先権主張番号】62/816,464
(32)【優先日】2019-03-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】509087759
【氏名又は名称】ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100093676
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 純子
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100153693
【弁理士】
【氏名又は名称】岩田 耕一
(72)【発明者】
【氏名】ガネーシャン，ラージクマール
(72)【発明者】
【氏名】グレワル，イクバル，エス．
(72)【発明者】
【氏名】セプルベダ，マニュエル，アレハンドロ
【審査官】福間 信子
(56)【参考文献】
【文献】特表２００６－５１８７５３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１７－５２９８３８（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５３７４１８（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１８－５２７９５４（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ
ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ
ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片であって、ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２が、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１が、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、Ｖβ１７に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２が、配列番号３４、配列番号３５、及び配列番号３６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２が、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号３９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ１２３に特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位を形成している、
前記単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
【請求項2】
ＨＣ１が、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
【請求項3】
前記Ｖβ１７が、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上にある、請求項１又は２に記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
【請求項4】
前記ＣＤ１２３が、癌細胞又はＣＤ３４＋幹細胞の表面上にある、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
【請求項5】
二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、約０．２ｐＭ未満のＥＣ50でインビトロにおいて癌細胞のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞依存性細胞傷害を誘導する、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
【請求項6】
請求項１～５のいずれか一項に記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記ＨＣ１及びＬＣ１をコードする、単離された核酸。
【請求項7】
請求項１～５のいずれか一項に記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記ＨＣ２及びＬＣ２をコードする、単離された核酸。
【請求項8】
請求項６又は７に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
【請求項9】
請求項８に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項10】
請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を含む、組成物。
【請求項11】
Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を癌細胞に指向させる方法に使用するための組成物であって、請求項１に記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を含む、前記組成物。
【請求項12】
癌細胞の成長又は増殖を阻害するための方法に使用するための組成物であって、請求項１に記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を含む、前記組成物。
【請求項13】
前記癌細胞が、ＣＤ１２３発現癌細胞である、請求項１１又は１２に記載の組成物。
【請求項14】
請求項１～５のいずれか一項に記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、そのための包装とを含む、キット。
【請求項15】
抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、請求項９に記載の宿主細胞を培養して、前記抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成することと、前記抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を前記細胞又は培養物から回収することとを含む、前記方法。
【請求項16】
単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、前記ヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
前記ヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、前記単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項17】
前記ヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項18】
請求項１６又は１７に記載の単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離された核酸。
【請求項19】
請求項１８に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
【請求項20】
請求項１９に記載のベクターを含む、宿主細胞。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１９年３月１１日出願の米国特許仮出願第６２／８１６，４６４号の優先権を主張し、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１９年３月１１日出願の米国特許仮出願第６２／８１６，４６４号の優先権を主張し、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
（発明の分野）
本発明は、モノクローナル抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体、当該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物に関する。抗体を作製する方法、及び癌細胞を殺傷するために抗体を使用する方法も提供される。
本発明は、モノクローナル抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体、当該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物に関する。抗体を作製する方法、及び癌細胞を殺傷するために抗体を使用する方法も提供される。
【0003】
（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ファイル名「ＰＲＤ４０１２ＷＯＰＣＴ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｌｉｓｔｉｎｇ」及び２０２０年３月１１日の作成日で、ＡＳＣＩＩ形式の配列表として、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されている、８５ｋｂのサイズを有する配列表を含有する。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、ファイル名「ＰＲＤ４０１２ＷＯＰＣＴ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｌｉｓｔｉｎｇ」及び２０２０年３月１１日の作成日で、ＡＳＣＩＩ形式の配列表として、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されている、８５ｋｂのサイズを有する配列表を含有する。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0004】
細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を利用して、癌細胞を直接殺傷することができる。細胞傷害性Ｔ細胞を癌細胞に指向させる方式を見出すことは、かかる細胞の殺傷、及び癌細胞の増殖の阻害をもたらし得る。細胞傷害性Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞及び癌細胞の両方に結合する二重特異性抗体を使用して、当該細胞傷害性Ｔ細胞を癌細胞に長期間接近させることによって、癌関連抗原を発現する癌細胞に対して活性化され得ることが実証されている。Ｔ細胞活性化を媒介するＴ細胞及び癌細胞抗原を選択すること、二重特異性抗体の関連で結合を媒介するのに十分な親和性を有する親抗体を選択すること、並びに非特異的Ｔ細胞活性化を誘発するのではなく、癌細胞に対して特異的に作用するようにＴ細胞を活性化させる癌細胞抗原を選択することなど、癌細胞を殺傷するこのアプローチに対する様々な潜在的な厄介な問題が存在する。これらの厄介な問題は、動物対象における癌細胞を破壊するためにＴ細胞を活性化しようと試みる関連のみで構成される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0005】
本明細書では、Ｔ細胞と関連する抗原であるＶβ１７及び癌細胞と関連する抗原であるＣＤ１２３に結合可能な二重特異性抗体が提供される。細胞傷害性Ｔ細胞は、Ｖβ１７などのα及びβ鎖からなるＴ細胞受容体を発現する。Ｖβ１７及びＣＤ１２３などの癌関連抗原に結合する二重特異性抗体は、細胞傷害性Ｔ細胞を抗原発現癌細胞に指向させることができると仮定される。この種の二重特異性抗体を利用して、細胞傷害性Ｔ細胞を抗原発現癌細胞に動員又は再指向させることにより、Ｔ細胞が癌細胞を殺傷することが可能になる。
【0006】
一般的な一態様では、本発明は、Ｖβ１７及びＣＤ１２３に結合する単離二重特異性抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0007】
本明細書では、単離されたＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片が提供される。単離されたＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１は、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、第２の抗原に対する結合部位を形成している。ある特定の実施形態では、第１の抗原に対する結合部位は、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上にあるＶβ１７に結合する。ある特定の実施形態では、第２抗原に対する結合部位は、癌細胞の表面上に存在する腫瘍抗原に結合する。
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１は、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、第２の抗原に対する結合部位を形成している。ある特定の実施形態では、第１の抗原に対する結合部位は、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上にあるＶβ１７に結合する。ある特定の実施形態では、第２抗原に対する結合部位は、癌細胞の表面上に存在する腫瘍抗原に結合する。
【0008】
ある特定の実施形態では、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上に存在するＶβ１７への二重特異性抗体の結合、及び癌細胞の表面上に存在する腫瘍抗原の結合は、癌細胞の殺傷をもたらす。
【0009】
ある特定の実施形態では、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ１２３に結合する。
【0010】
ある特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ４などのアイソタイプである。
【0011】
ある特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、約０．２ｐＭ未満のＥＣ５０でインビトロにおいて癌細胞のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞依存性細胞傷害を誘導する。
【0012】
また、単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片も提供される。抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１は、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、Ｖβ１７に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２は、配列番号３４、配列番号３５、及び配列番号３６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２は、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号３９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ１２３に特異的に結合する第２の抗原に対する二重部位を形成している。ある特定の実施形態では、ＨＣ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβ１７は、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＣＤ１２３は、癌細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、約０．２ｐＭ未満のＥＣ５０でインビトロにおいて癌細胞のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞依存性細胞傷害を誘導する。
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１は、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、Ｖβ１７に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２は、配列番号３４、配列番号３５、及び配列番号３６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２は、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号３９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ１２３に特異的に結合する第２の抗原に対する二重部位を形成している。ある特定の実施形態では、ＨＣ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖβ１７は、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＣＤ１２３は、癌細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、約０．２ｐＭ未満のＥＣ５０でインビトロにおいて癌細胞のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞依存性細胞傷害を誘導する。
【0013】
ある特定の実施形態では、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、部分的にヒト化されている、又は完全にヒト化されているキメラである。
【0014】
単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片も提供される。単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ある特定の実施形態では、単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
【0015】
本明細書に開示されるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片及び二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードする単離された核酸も提供される。
【0016】
本明細書に開示されるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片及び二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードする単離された核酸を含むベクターも提供される。
【0017】
本明細書に開示される単離された核酸を含むベクターを含む宿主細胞も提供される。
【0018】
Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を癌細胞に指向させる方法も提供される。この方法は、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を、本明細書に開示される抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含む。Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることにより、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を癌細胞に指向させることができる。
【0019】
癌細胞の成長又は増殖を阻害するための方法も提供される。この方法は、癌細胞を本明細書に開示される二重特異性抗体と接触させることを含む。癌細胞を記載された抗体と接触させることは、例えば、癌細胞の成長若しくは増殖を阻害するか、又は癌細胞のＴ細胞媒介性殺傷を促進することができる。
【0020】
本明細書に開示される二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法も提供される。この方法は、二重特異性抗体の１つの重鎖と軽鎖の対をコードする核酸を含む細胞を、重鎖及び軽鎖又はその抗原結合断片を生成する条件下で培養することと、二重特異性抗体又はその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖を細胞又は培養物から回収することとを含む。二重特異性抗体の両方のアームの重鎖及び軽鎖の収集後、重鎖と軽鎖の対は、自己組織化を可能にするのに好適な条件で混合され、その後、自己組織化二重特異性抗体が収集される。
【0021】
緩衝組成物又は精製組成物などの、本明細書に開示される二重特異性抗体又は抗原結合断片を含む組成物を生成する方法も提供される。例えば、この方法は、二重特異性抗体又はその抗原結合断片を、二重特異性抗体の保存及び使用に許容可能な緩衝剤と組み合わせることを含み得る。
【0022】
本明細書に開示される二重特異性抗体又はその抗原結合断片を含むキット、及びそのための包装も提供される。
【図面の簡単な説明】
【0023】
上記の概要、及び本出願の好ましい実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むことでより良く理解されるであろう。しかしながら、本出願は、図面に示される実施形態そのものに限定されないことを理解するべきである。
【図1】Ｔ細胞を癌細胞に動員し、癌細胞死を誘発する抗Ｖβ１７／抗腫瘍抗原二重特異性抗体の結合を実証する概略図を示す。
【図2A】Ｖβ１７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞が健康な対象に存在し、Ｍ１ペプチドとの培養時に、これらの細胞をインビトロで増殖させることができることを示す。健康な対象からの細胞表面上でＶβ１７（Ｖβ１７＋）を発現しているＣＤ８＋Ｔ細胞についてのゲートされた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）のＦＡＣＳヒストグラムを示す。
【図2B】Ｖβ１７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞が健康な対象に存在し、Ｍ１ペプチドとの培養時に、これらの細胞をインビトロで増殖させることができることを示す。０日目として同定された、様々なドナーのＨＬＡサブタイプ及びＶβ１７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の存在、並びに１４日間のＭ１ペプチドを用いたインビトロ増殖後（１４日目）を示す。
【図3】Ｖβ１７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞が、キラー細胞傷害性細胞の特徴を有することを示す。棒グラフは、０日目（Ｍ１なし）及びＭ１ペプチド（＋Ｍ１）による刺激後１４日目の細胞表面上でＶβ１７（Ｖβ１７＋）を発現しているＣＤ８＋Ｔ細胞に対するゲートされたＰＢＭＣ上のＣＤ１０７ａ、ＣＤ６９、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ（Ｇｚｂ）、及びインターフェロン－γ（ＩＦＮγ）の発現を示す。
【図4】ＣＤ８＋Ｔ細胞へのＶＢ１１［抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３］二重特異性、並びにＶＢ１３［Ｖβ１７ヌル対照二重特異性］抗体の結合を示す。３人の異なるドナー（Ｄ２０３５１７、ＨＰＵ０９３８１、及びＨＰＵ０８６９４）からのＰＢＭＣから単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞から提示されるデータ。各グラフの下の表は、ｎＭにおける結合のＥＣ５０値を示す。
【図5】ＶΒ１７及びＣＤ１２３二重特異性（ＶＢ１１）、並びにＶβ１７ヌル対照二重特異性（ＶＢ１３）抗体のＡＭＬ癌細胞株への結合を示す。提示されるデータは、Ｋａｓｕｍｉ３ ＡＭＬ細胞株への二重特異性抗体の結合を示す。グラフの下の表は、ｎＭにおける結合のＥＣ５０値を示す。
【図6】ＡＭＬ癌細胞の効率的な殺傷を誘発する、二重特異性抗体によるＶβ１７＋Ｔ細胞の再指向を示す。左のグラフのデータは、エフェクタ対標的（Ｅ：Ｔ）比０．５：１でのＫａｓｕｍｉ３癌細胞の殺傷、及び二重特異性抗体の用量滴定を示す。中央のグラフのデータは、Ｅ：Ｔ比１：１でのＫａｓｕｍｉ３癌細胞の殺傷、及び二重特異性抗体の用量滴定を示す。右のグラフのデータは、Ｅ：Ｔ比５：１でのＫａｓｕｍｉ３癌細胞の殺傷、及び二重特異性抗体の用量滴定を示す。グラフの下の表は、ｐＭで与えられた上記のグラフから計算されたＥＣ５０値を示す。
【図7A】ＰＢＭＣから単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞への抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体（ＶＢ１１）及びＶβ１７ぬる二重特異性抗体（ＶＢ１３）の特異的結合を示す。健康な対象からの細胞表面上でＶβ１７（Ｖβ１７＋）を発現しているＣＤ８＋Ｔ細胞に対するゲートされたＰＢＭＣ（左グラフ、Ｖβ１７非枯渇）、及び陰性選択を使用してＶβ１７＋Ｔ細胞を枯渇させたＰＢＭＣ（右グラフ、Ｖβ１７枯渇）からのＦＡＣＳヒストグラムを示す。
【図7B】ＰＢＭＣから単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞への抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体（ＶＢ１１）及びＶβ１７ぬる二重特異性抗体（ＶＢ１３）の特異的結合を示す。図７ＡからのＣＤ８＋Ｔ細胞への抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体（ＶＢ１１）及びＶβ１７ヌル二重特異性抗体（ＶＢ１３）の特異的結合を示す。二重特異性抗体の用量応答を図に示す。グラフの下の表は、ｎＭで与えられた上記のグラフから計算された結合に対するＥＣ５０値を示す。
【図8】Ｋａｓｕｍｉ３癌細胞の殺傷のためのＶβ１７二重特異性抗体によるＶβ１７ Ｔ細胞の特異的動員を示す。左の図は、エフェクタ細胞が、細胞表面上でＶβ１７（Ｖβ１７＋）を発現しているＣＤ８α＋Ｔ細胞（非接触ＣＤ８ Ｔ細胞）を含有するＰＢＭＣから単離されたときのＫａｓｕｍｉ３ ＡＭＬ細胞株の殺傷を示す。挿入は、エフェクタ細胞集団における１０．１％のＶβ１７＋ＣＤ８ Ｔ細胞の存在を示す。右の図は、エフェクタＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＰＢＭＣから単離されたが、Ｖβ１７＋Ｔ細胞は、陰性選択によって枯渇したときのＫａｓｕｍｉ３ ＡＭＬ細胞株の殺傷を示す。挿入は、エフェクタ細胞集団における小集団（０．０８６％）のＶβ１７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の存在を示す。
【図9A】Ｖβ１７二重特異性抗体を使用するとき、Ｔ細胞のパン活性化が存在しないことを示す。Ｖβ１７＋及びＶβ１７－のゲートされたＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳプロットを示す。Ｔ細胞をＶβ１７二重特異性抗体で活性化させた場合、Ｖβ１７－ＣＤ８＋Ｔ細胞（１．８０％）と比較して、Ｖβ１７＋に対するＣＤ６９の上方調節が高かった（６２．５％）。
【図9B】Ｖβ１７二重特異性抗体を使用するとき、Ｔ細胞のパン活性化が存在しないことを示す。Ｖβ１７二重特異性抗体を使用して活性化されたときのＶβ１７＋及びＶβ１７－のゲートされたＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９の上方調節の棒グラフを示す。
【図10】ＨＬＡ Ａ２陰性ドナーからのＶβ１７＋Ｔ細胞もエフェクタキラー細胞であり、Ｖβ１７＋細胞の事前刺激は必要としないことを示す。Ｋａｓｕｍｉ３癌細胞のＶβ１７二重特異性抗体によって媒介される効率的な細胞傷害は、ＨＬＡ Ａ２陰性ドナー（ＨＰＵ０９３８１）からのＶβ１７＋Ｔ細胞を含有するＰＢＭＣから示される。
【発明を実施するための形態】
【0024】
本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいずれかの発明に対する先行技術の一部を構成することを容認するものではない。
【0025】
特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。
【0026】
特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、「約」という用語によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、典型的には、記載される値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用するとき、数値範囲の使用は、文脈上そうでない旨が明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。
【0027】
別途記載のない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、一連の全ての要素を指すと理解されるべきである。当業者であれば、単なる通常の実験手順を使用するだけで、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態に対して多くの同等物を認識するか、又は確認することができよう。このような等価物は、本発明によって包含されることが意図される。
【0028】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意する必要がある。
【0029】
本明細書で使用するとき、用語「備える（comprises）、「備える（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「有する（has）」、「有する（having）」、「含有する（contains）」、又は「含有する（containing）」あるいはこれらの任意の他の変形形態は、述べられている整数又は整数群を含むことが意図されるが、これら以外の他の整数又は整数群を除外するものではなく、非排他的又は非制限的であることが意図されることが理解されよう。例えば、一連の要素を含む組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置は、必ずしもそれらの要素のみに限定されるものではなく、明示的に列挙されない、又はそのような組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置に本来存在しない他の要素を含んでもよい。更に、明示的に反対に明記されない限り、「又は」は包括的な「又は」を指すものであり、排他的な「又は」を指すものではない。例えば、条件Ａ又はＢは、Ａが真であり（又は存在する）かつＢが偽である（又は存在しない）場合、Ａが偽であり（又は存在しない）かつＢが真である（又は存在する）場合、並びにＡ及びＢの両方が真である（又は存在する）場合、のいずれか１つによって充足される。
【0030】
本明細書で使用するとき、複数の列挙された要素間の接続的な用語「及び／又は」は、個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしに第１の要素が適用可能であることを指す。第２の選択肢は、第１の要素なしに第２の要素が適用可能であることを指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、意味に含まれ、したがって、本明細書で使用されるとき、用語「及び／又は」の要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味に含まれ、したがって、用語「及び／又は」の要件を満たすことが理解される。
【0031】
好ましい発明の構成要素の寸法又は特徴を指すときに本明細書で使用される用語「約」、「およそ」、「概ね」、「実質的に」などの用語は、当業者には理解されるように、記載の寸法／特徴が厳密な境界又はパラメータではなく、機能的に同じ又は類似する、それらからのわずかな相違を除外するものではないことを示すことも理解すべきである。最小値では、数値パラメータを含むこのような参照は、当該技術分野において受け入れられている数学的及び工業的原理（例えば、四捨五入、測定、又は他の系統的誤差、製造公差など）を使用すると、最小有効数字は変化しない変形形態を含むであろう。
【0032】
用語「同一」又は「同一性」パーセントは、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列（例えば、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体及びそれをコードするポリヌクレオチド、Ｖβ１７ポリペプチド及びそれをコードするＶβ１７ポリヌクレオチド、ＣＤ１２３ポリペプチド及びそれをコードするＣＤ１２３ポリヌクレオチド）に関連して、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用してか、又は目視検査によって測定したとき、一致が最大になるように比較及びアラインメントした場合に同じであるか、又は特定のパーセントの同じであるアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを有する２つ以上の配列又はサブ配列を指す。
【0033】
配列比較のために、典型的には、１つの配列は、試験配列が比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて、サブシーケンス座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。
【0034】
比較のための配列の最適なアライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、又は目視検査（全般的には、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ａ ｊｏｉｎｔ ｖｅｎｔｕｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，（１９９５ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）（Ａｕｓｕｂｅｌ）を参照）によって行うことができる。
【0035】
配列同一性及び配列類似性のパーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２にそれぞれ記載されているＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分析を行うソフトウェアは、国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology Information）を通じて公的に入手可能である。このアルゴリズムは、最初に、データベース配列における同じ長さのワードとアラインメントしたときに一致するか、又はいくつかの正の値の閾値スコアＴを満たすかのいずれかの、クエリー配列における長さＷの短いワードを同定することによって、高スコア配列対（high scoring sequence pair、ＨＳＰ）を同定することを含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、上記）と称される。これらの初期隣接ワードヒットは、それを含有するより長いＨＳＰを見つけるための検索を開始するためのシードとして機能する。次いで、累積アラインメントスコアを増加させることができる限り、各配列に沿ってワードヒットを両方向に延長する。
【0036】
ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（一致する残基の対についてのリワードスコア、常に＞０）及びＮ（不一致の残基についてのペナルティスコア、常に＜０）を使用して累積スコアを計算する。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスを使用して累積スコアを計算する。累積アラインメントスコアがその最大獲得値から量Ｘだけ低下したとき、１つ又は２つ以上の負のスコアリング残基のアラインメントの蓄積により、累積スコアがゼロ以下になったとき、又はいずれかの配列の末端に達したときに、各方向におけるワードヒットの延長を停止する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、及びＸが、アライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５（１９８９）を参照）。
【0037】
配列同一性パーセントを計算することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計解析も行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７（１９９３）を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合、参照配列に類似しているとみなされる。
【0038】
２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であることの更なる指標は、以下に記載されるように、第１の核酸によりコードされるポリペプチドが、第２の核酸によりコードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは、典型的には、第２のポリペプチドと実質的に同一であり、例えば、２つのペプチドは保存的置換によってのみ異なる。２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、２つの分子がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。
【0039】
抗体
本明細書には、単離された抗Ｖβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片、当該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物が記載される。本発明は、更に、単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片、当該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該二重特異性抗体を含む組成物に関する。抗体を作製する方法、及び癌を含む疾患を治療するために抗体を使用する方法も提供される。本明細書に開示される抗体は、Ｖβ１７及び／又はＣＤ１２３に対する高親和性結合、Ｖβ１７及び／又はＣＤ１２３に対する高い特異性、並びに単独で又は他の抗癌療法と組み合わせて投与されたときに癌を治療又は予防する能力を含むがこれらに限定されない、１つ又は２つ以上の望ましい機能特性を有する。
本明細書には、単離された抗Ｖβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片、当該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該抗体を含む組成物が記載される。本発明は、更に、単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片、当該抗体をコードする核酸及び発現ベクター、当該ベクターを含有する組換え細胞、並びに当該二重特異性抗体を含む組成物に関する。抗体を作製する方法、及び癌を含む疾患を治療するために抗体を使用する方法も提供される。本明細書に開示される抗体は、Ｖβ１７及び／又はＣＤ１２３に対する高親和性結合、Ｖβ１７及び／又はＣＤ１２３に対する高い特異性、並びに単独で又は他の抗癌療法と組み合わせて投与されたときに癌を治療又は予防する能力を含むがこれらに限定されない、１つ又は２つ以上の望ましい機能特性を有する。
【0040】
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、広義で使用され、免疫グロブリン、又はモノクローナル又はポリクローナルである、ヒト、ヒト化、複合、及びキメラ抗体を含む抗体分子並びに抗体断片を含む。全般的には、抗体とは、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖である。抗体の構造は、周知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ）に割り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。脊椎動物種の抗体軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちκ及びλのうちの一方に割り当てることができる。したがって、本発明の抗体は、κ又はλ軽鎖定常ドメインを含有することができる。特定の実施形態によれば、本明細書に開示される抗体は、マウス又はヒト抗体からの重鎖及び／又は軽鎖定常領域を含む。重及び軽定常ドメインに加えて、抗体は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域からなる抗原結合領域を含有し、これらの各々は３つのドメイン（すなわち相補性決定領域１～３；ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含有する。軽鎖可変領域ドメインは、代替としてＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と称され、重鎖可変領域ドメインは、代替としてＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と称される。
【0041】
本明細書で使用するとき、用語「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、Ｖβ１７に特異的に結合する単離された抗体は、Ｖβ１７に結合しない抗体を実質的に含まない、ＣＤ１２３に特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ１２３に結合しない抗体を実質的に含まない）。更に、単離抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない。
【0042】
本明細書で使用するとき、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在する可能性のある自然発生変異を除いて同一である。本明細書に開示されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ技術、単一リンパ球遺伝子クローニング技術、又は組換えＤＮＡ法によって作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウス又はラットから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成され得、ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する。
【0043】
本明細書で使用するとき、用語「抗原結合断片」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄａｂ）ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ又は２つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片などの抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体断片が結合する同じ抗原に結合することができる。特定の実施形態によれば、抗原結合断片は、軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、及び重鎖のＦｄ断片を含む。他の特定の実施形態によれば、抗原結合断片はＦａｂ及びＦ（ａｂ’）を含む。
【0044】
本明細書で使用するとき、用語「ヒト化抗体」とは、抗体の抗原結合特性が保持されるが、人体における抗原の抗原性が低下するように、改変により配列相同性をヒト抗体のそれに対して増加させた非ヒト抗体を意味する。
【0045】
本明細書で使用するとき、用語「多重特異性抗体」は、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体を指し、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、重複しないか、又は実質的に重複しない。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（又は異なる多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態では、多重特異性抗体は、第３、第４、又は第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。ある実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分岐、又は四重特異性抗体分子である。
【0046】
本明細書で使用するとき、用語「二重特異性抗体」は、２つ以下のエピトープ又は２つ以下の抗原に結合する多重特異性抗体を指す。二重特異性抗体は、第１のエピトープ（例えば、Ｖβ１７抗原上のエピトープ）に対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン重鎖及び軽鎖対、並びに第２のエピトープ（例えば、ＣＤ１２３抗原上のエピトープ）に対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン重鎖及び軽鎖対を特徴とする。ある実施形態では、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（又は異なる多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列とを含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片とを含む。ある実施形態では、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片とを含む。ある実施形態では、第１のエピトープは、Ｖβ１７上に位置し、第２のエピトープは、ＣＤ１２３に位置する。ある実施形態では、第１のエピトープは、Ｖβ１７上に位置し、第２のエピトープは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３、及び／又は他の腫瘍関連免疫抑制因子若しくは表面抗原上に位置する。
【0047】
本明細書で使用するとき、用語「半抗体」は、１つの免疫グロブリン軽鎖と会合した１つの免疫グロブリン重鎖を指す。例示的な半抗体は、配列番号２８に描かれる。当業者であれば、半抗体がその断片を包含することができ、例えば、ラクダ科由来の単一の可変ドメインからなる抗原結合ドメインを有することもできることを容易に理解するであろう。
【0048】
本明細書で使用するとき、用語「Ｖβ１７」は、細胞傷害性Ｔ細胞上での免疫応答に応答して発現されるＴ細胞受容体を指す。Ｖβ１７発現ＣＤ８＋Ｔ細胞は、通常、対象におけるインフルエンザＡウイルス曝露に応答して生成される。Ｖβ１７発現ＣＤ８α＋Ｔ細胞は、対象におけるインフルエンザ曝露に応答して大きなリコールを提供する。用語「Ｖβ１７」は、細胞（Ｔ細胞を含む）により自然に発現されるか、又はポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡがトランスフェクトされた細胞上で発現し得る、任意のＶβ１７変異体、アイソフォーム、及び種間ホモログを含む。特に記載がない限り、Ｖβ１７は、ヒトＶβ１７であることが好ましい。ヒトＶβ１７アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＢ４９７３０．１によって提供される。
【0049】
用語「ＣＤ１２３」は、免疫系において重要な可溶性サイトカインであるインターロイキン－３のシグナルを伝達するのに役立つ、細胞上に見られる分子を指す。ＣＤ１２３は、「インターロイキン－３受容体」とも称され得る。受容体は、Ｉ型サイトカイン受容体ファミリーに属し、共通のベータサブユニット（βｃ又はＣＤ１３１）と対になった固有のアルファ鎖を有するヘテロ二量体である。ＣＤ１２３受容体は、多能性前駆細胞上に見られることがあり、細胞内でチロシンリン酸化を誘導し、造血細胞株内での増殖及び分化を促進することができる。ＣＤ１２３はまた、急性骨髄性白血病（acute myeloid leukemia、ＡＭＬ）サブタイプで発現させることもできる。用語「ＣＤ１２３」は、細胞（Ｔ細胞を含む）により自然に発現するか、又はそれらのポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡがトランスフェクトされた細胞上で発現し得る、任意のＣＤ１２３変異体、アイソフォーム、及び種間ホモログを含み、特に記載がない限り、「ＣＤ１２３」は、ヒトＣＤ１２３であることが好ましい。ヒトＣＤ１２３アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ７８９１０９．１によって提供される。
【0050】
本明細書で使用するとき、「Ｖβ１７に特異的に結合する」抗体は、１×１０－７Ｍ以下、好ましくは１×１０－８Ｍ以下、より好ましくは５×１０－９Ｍ以下、１×１０－９Ｍ以下、５×１０－１０Ｍ以下、又は１×１０－１０Ｍ以下のＫＤを有する、Ｖβ１７、好ましくはヒトＶβ１７に結合する抗体を指す。用語「ＫＤ」は、Ｋｄ対Ｋａ（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）の比から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指す。抗体のＫＤ値は、本開示を考慮して当該技術分野における方法を用いて決定することができる。例えば、抗体のＫＤは、表面プラズモン共鳴を使用することによって、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムのバイオセンサーシステムを使用することなどによって、又はＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６システムなどのバイオレイヤーインターフェロメトリ技術を使用することによって、求めることができる。
【0051】
本明細書で使用するとき、「ＣＤ１２３に特異的に結合する」抗体とは、ＣＤ１２３、好ましくはヒトＣＤ１２３に対し、１×１０－７Ｍ以下、好ましくは１×１０－８Ｍ以下、より好ましくは５×１０－９Ｍ以下、１×１０－９Ｍ以下、５×１０－１０Ｍ以下、又は１×１０－１０Ｍ以下のＫＤで結合する抗体を指す。用語「ＫＤ」は、Ｋｄ対Ｋａ（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）の比から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指す。抗体のＫＤ値は、本開示を考慮して当該技術分野における方法を用いて決定することができる。例えば、抗体のＫＤは、表面プラズモン共鳴を使用することによって、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムのバイオセンサーシステムを使用することなどによって、又はＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６システムなどのバイオレイヤーインターフェロメトリ技術を使用することによって、求めることができる。
【0052】
抗体のＫＤの値が小さいほど、抗体が標的抗原に結合する親和性が高い。
【0053】
特定の態様によれば、本発明は、単離されたＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片に関し、（ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、（ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、（ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）と、（ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、ＨＣ１は、ＬＣ１と会合することができ、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合することができる。ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むことができ、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むことができる。
【0054】
ＨＣ１及びＬＣ１は、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、第２の抗原に対する結合部位を形成する。一例として、第１の抗原に対する結合部位は、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞上にあるＶβ１７に結合することができ、第２の抗原に対する結合部位は、例えば、癌細胞の表面上に存在する腫瘍抗原に結合することができる。ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上に存在するＶβ１７へのＶβ１７二重特異性抗体の結合、及び癌細胞の表面上に存在する腫瘍抗原の結合は、例えば、癌細胞の殺傷をもたらし得る。
【0055】
抗Ｖβ１７抗体又はその抗原結合断片及び抗ＣＤ１２３抗体又はその抗原結合断片を含む、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片も本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、（ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、（ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）と、（ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、ＨＣ１は、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合している。ある特定の実施形態では、ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＨＣ２は、配列番号３４、配列番号３５、及び配列番号３６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２は、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号３９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【0056】
ある特定の実施形態では、ＨＣ１は、例えば、配列番号１３のアミノ酸配列を含むことができ、ＬＣ１は、例えば、配列番号１４のアミノ酸配列を含んで、Ｖβ１７に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成することができる。ＨＣ２は、例えば、配列番号１５のアミノ酸配列を含むことができ、ＬＣ２は、例えば、配列番号１６のアミノ酸配列を含んで、ＣＤ１２３に特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位を形成することができる。
【0057】
ある特定の実施形態では、Ｖβ１７は、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上にある。ある特定の実施形態では、ＣＤ１２３は、癌細胞（例えば、白血病細胞）の表面上にある。
【0058】
一部の実施形態では、本明細書に開示される二重特異性抗体は、本明細書に記載されるように、制御されたＦａｂアーム交換を介して得られるダイアボディ、交差体、又は二重特異性抗体の形態をとることができる。
【0059】
一部の実施形態では、二重特異性抗体には、ヘテロ二量体化を促進する相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子、組換えＩｇＧ様二重標的分子（分子の２つの側が各々、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部を含有する）、ＩｇＧ融合分子（完全長ＩｇＧ抗体が、余分のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部に融合される）、Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化された二ダイアボディが、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合される）、Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂ断片が１つに融合される）、ＳｃＦｖ及びダイアボディ抗体に基づく抗体及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）（異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なるダイアボディ又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）を互いに融合するか、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合する）が挙げられる。
【0060】
一部の実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子には、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整されたもの（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｓｔｒａｎｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｄｏｍａｉｎ ｂｏｄｙ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
【0061】
一部の実施形態では、組換えＩｇＧ様二重標的分子には、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
【0062】
一部の実施形態では、ＩｇＧ融合分子には、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
【0063】
一部の実施形態では、Ｆｃ融合分子には、ＳｃＦｖ／Ｆｃ Ｆｕｓｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及びＤｕａｌ（ＳｃＦｖ）２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－中国）が挙げられ得る。
【0064】
一部の実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異性抗体には、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ又はＢｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ抗体、ダイアボディに基づく抗体、及びドメイン抗体には、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャ（Bispecific T Cell Engager、ＢｉＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、タンデムダイアボディ（Tandem Diabody、Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、二重親和性再標的技術（Dual Affinity Retargeting Technology、ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、一本鎖ダイアボディ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ様抗体（ＡＩＴ、ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合体（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的ナノボディ（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的重鎖のみドメイン抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【0065】
本明細書に開示される完全長二重特異性抗体は、例えば、インビトロでの無細胞環境において又は共発現を使用してかのいずれかで、異なる特異性を有する２つの抗体半分子のヘテロ二量体形成を好むように、各半分子における重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することによって、２つの単一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を使用して生成され得る。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。単一特異的親抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は減少する。単一特異的親抗体のうちの１つについて生じる遊離システインは、第２の単一特異的親抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離－会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりヘテロ二量体形成を好むように操作されてもよい。得られる生成物は、各々が異なるエピトープ、すなわち、Ｖβ１７上のエピトープ及び腫瘍抗原上のエピトープに結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。
【0066】
本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体形成」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
【0067】
本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体形成」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
【0068】
「ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ」戦略（例えば、ＰＣＴ国際公開第２００６／０２８９３６号を参照のこと）を使用して、全長二重特異性抗体を生成することができる。簡潔に、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するために、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）。
【0069】
１つのＣＨ３表面に正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面に負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体形成の促進などの他の戦略を、米国特許公開第ＵＳ２０１０／００１５１３３号、米国特許公開第ＵＳ２００９／０１８２１２７号、米国特許公開第ＵＳ２０１０／０２８６３７号、又は米国特許公開第ＵＳ２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用することができる。他の戦略では、ヘテロ二量体形成は、米国特許公開第ＵＳ２０１２／０１４９８７６号又は米国特許公開第ＵＳ２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５ＡＹ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ Ｋ４０９Ｆ Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗの置換（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表わされる）によって促進され得る。
【0070】
上記の方法に加えて、本明細書に開示される二重特異性抗体は、国際特許公開第Ｗ０２０１１／１３１７４６号に記載された方法に従って、２つの単一特異的ホモ二量体抗体のＣＨ３領域中に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下において、２つの単一特異的ホモ二量体親抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することにより、インビトロにおいて無細胞環境下で生成することができる。この方法では、第１の単一特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ３３抗体）及び第２の単一特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体）は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインに特定の置換を有するように操作され、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させることを可能にするために十分な還元条件下において共にインキュベーションされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、任意に非還元条件に戻されてもよい。使用され得る例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（2-mercaptoethylamine、２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（dithiothreitol、ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（dithioerythritol、ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（tris(2-carboxyethyl)phosphine、ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びβ－メルカプトエタノールであり、好ましくは、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキュベートが使用されてもよい。
【0071】
ある特定の実施形態では、抗Ｖβ１７抗体又はその抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、これらは、
ａ．それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、及び６のポリペプチド配列を有し、
抗ＣＤ１２３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、これらは、
１．それぞれ、配列番号３４、３５、３６、３７、３８、及び３９のポリペプチド配列を有する。
ａ．それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、及び６のポリペプチド配列を有し、
抗ＣＤ１２３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、これらは、
１．それぞれ、配列番号３４、３５、３６、３７、３８、及び３９のポリペプチド配列を有する。
【0072】
別の特定の態様によれば、本発明は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity、ＡＤＣＣ）を誘導する、単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片に関する。二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、例えば、インビトロでＡＤＣＣを誘導することができる。二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、約１ｐＭ未満のＥＣ５０でＡＤＣＣを誘導することができる。ある特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約１ｐＭ未満、約０．９ｐＭ未満、約０．８ｐＭ未満、約０．７ｐＭ未満、約０．６ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．４ｐＭ未満、約０．３００ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１９ｐＭ未満、約０．１８ｐＭ未満、約０．１７ｐＭ未満、約０．１６ｐＭ未満、約０．１５ｐＭ未満、約０．１４ｐＭ未満、約０．１３ｐＭ未満、約０．１２ｐＭ未満、約０．１１ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、約０．０９ｐＭ未満、約０．０８ｐＭ未満、約０．０７ｐＭ未満、約０．０６ｐＭ未満、約０．０５ｐＭ未満、約０．０４ｐＭ未満、約０．０３ｐＭ未満、約０．０２ｐＭ未満、又は約０．０１ｐＭ未満である。ある特定の実施形態では、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４骨格を含む。かかる一実施形態では、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ４アイソタイプの抗体骨格を有する。
【0073】
本明細書に記載される一部の実施形態では、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体の免疫エフェクタ特性は、当業者に既知の技術によりＦｃ改変を介して活性又は抑制させることができる。例えば、Ｆｃエフェクタ機能、例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（complement dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性貪食（antibody-dependent cell-mediated phagocytosis、ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、B cell receptor、ＢＣＲ）のダウンレギュレーション等が、これらの活性を担うＦｃ中の残基を改変することにより提供され、かつ／又は制御され得る。
【0074】
「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（Fc receptor、ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（Natural Killer、ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、続けて、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞介在性反応を指す。
【0075】
ＡＤＣＣを誘導する抗体の能力は、そのオリゴ糖成分を操作することにより増強され得る。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７においてＮ－グリコシル化される。ここで、グリカンの大部分は、周知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２、又はＧ２Ｆの形態である。遺伝子操作されていないＣＨＯ細胞により生成される抗体は、典型的には、少なくとも約８５％のグリカンフコース含量を有する。Ｆｃ領域に付着した二分岐の複雑なタイプのオリゴ糖からコアフコースを除去すると、抗原結合性又はＣＤＣ活性を変化させることなく改善されたＦｃγＲＩＩＩａ結合を介して、抗体のＡＤＣＣが増強される。かかるＡｂｓは、二分岐の複雑なタイプのＦｃオリゴ糖を有する、比較的高い脱フコシル化抗体の成功した発現をもたらすことが報告された異なる方法、例えば、培養浸透圧の制御（Ｋｏｎｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６４：２４９－６５，２０１２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の適用（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２６７３３－２６７４０，２００２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株ＥＢ６６の適用（Ｏｌｉｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４），２０１０、印刷に先立つ電子公開、ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、ラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０の宿主細胞株としての適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３４６６－３４７３，２００３）、α－１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ８８：９０１－９０８，２００４）、又はβ－１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ及びゴルジα－マンノシダーゼＩＩ若しくは強力なα－マンノシダーゼＩ阻害物質であるキフネンシンの共発現（Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ２８１：５０３２－５０３６，２００６、Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ９３：８５１－８６１，２００６、Ｘｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９９；６５２－６５，２００８）を使用して達成され得る。
【0076】
本明細書に記載される一部の実施形態では、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体により惹起されるＡＤＣＣはまた、抗体Ｆｃにおけるある特定の置換によっても活性され得る。例示的な置換は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されるように、アミノ酸２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０位（残基の番号付けは、ＥＵインデックスに準じる）における置換である。
【0077】
別の特定の態様によれば、本発明は、Ｖβ１７発現細胞及びＣＤ１２３発現細胞においてＴ細胞依存性細胞傷害を誘導することが可能な単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片に関する。二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、例えば、約２ｎＭ未満のＥＣ５０値でインビトロにおいてＶβ１７発現細胞／ＣＤ１２３発現細胞でＴ細胞依存性細胞傷害を誘導することができる。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約２．０ｎＭ未満、約１．９ｎＭ未満、約１．８ｎＭ未満、約１．７ｎＭ未満、約１．６ｎＭ未満、約１．５ｎＭ未満、約１．４ｎＭ未満、約１．３ｎＭ未満、約１．２ｎＭ未満、約１．１ｎＭ未満、約１．０ｎＭ未満、約０．９ｎＭ未満、約０．８ｎＭ未満、約０．７ｎＭ未満、約０．６ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．４ｎＭ未満、約０．３ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、及び約０．１ｎＭ未満である。
【0078】
別の特定の態様によれば、本発明は、単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片に関し、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、キメラである。
【0079】
別の特定の態様によれば、本発明は、単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片に関し、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ヒト又はヒト化されている。
【0080】
別の一般的な態様では、本発明は、単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
【0081】
別の一般的な態様では、本発明は、本明細書に開示されるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離された核酸に関する。別の一般的な態様では、本発明は、本明細書に開示される二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離された核酸に関する。タンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、タンパク質のコード配列を変える（例えば置換する、欠失する、挿入するなど）ことができることが、当業者には理解されよう。したがって、タンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、本明細書に開示されるモノクローナル抗体及び／又は二重特異性抗体をコードする核酸配列を変更することができることが、当業者には理解されよう。
【0082】
別の一般的な態様では、本発明は、本明細書に開示される単離された核酸を含むベクターに関する。プラスミド、コスミド、ファージベクター、又はウイルスベクターなどの、本開示の観点から当業者に既知の任意のベクターも使用することができる。一部の実施形態では、ベクターは、プラスミドなどの組換え発現ベクターである。ベクターは、例えば、プロモータ、リボソーム結合エレメント、ターミネータ、エンハンサ、選択マーカー、及び複製起点という、発現ベクターの従来の機能を確立するための任意のエレメントを含むことができる。プロモータは、常時発現型、誘導型、又は再形成可能なプロモータであり得る。細胞に核酸を送達することができる多数の発現ベクターが当該技術分野において知られており、細胞内で抗体又はその抗原結合断片を生成するために、本明細書で使用することができる。従来のクローニング技術又は人工遺伝子合成を使用して、本明細書に開示される実施形態に従って組換え発現ベクターを生成することができる。このような技術は、本開示の観点から、当業者に周知である。
【0083】
別の一般的な態様では、本発明は、本明細書に開示されるモノクローナル抗体及び／若しくは二重特異性抗体、又はこれらの抗原結合断片をコードする単離された核酸を含む宿主細胞に関する。本開示の観点から、当業者に知られている任意の宿主細胞を、本明細書に開示される抗体又は抗原結合断片の組換え発現に使用することができる。一部の実施形態では、宿主細胞は、大腸菌ＴＧ１若しくはＢＬ２１細胞（例えば、ｓｃＦｖ又はＦａｂ抗体の発現の場合）、ＣＨＯ－ＤＧ４４若しくはＣＨＯ－Ｋ１細胞、又はＨＥＫ２９３細胞（例えば、完全長ＩｇＧ抗体の発現の場合）である。特定の実施形態によれば、組換え発現ベクターは、組換え核酸が効果的に発現するように宿主細胞ゲノムに安定的に組み込まれる、化学的トランスフェクション、熱ショック、又はエレクトロポレーションなどの従来の方法によって宿主細胞に形質転換される。
【0084】
別の一般的な態様では、本発明は、本明細書に開示される二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法に関する。この方法は、本明細書に開示される二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で、二重特異性抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を培養することと、細胞又は細胞培養物から（例えば、上清から）抗体又はその抗原結合断片を回収することとを含む。発現した抗体又はその抗原結合断片を細胞から収集し、当該技術分野において既知の従来の技術に従って、そして、本明細書に記載のとおり精製することができる。
【0085】
使用方法
別の一般的態様では、本発明は、癌細胞の表面上にあるＣＤ１２３を標的化する方法に関し、この方法は、癌細胞を抗Ｖβ１７１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片に曝露することを含む。
別の一般的態様では、本発明は、癌細胞の表面上にあるＣＤ１２３を標的化する方法に関し、この方法は、癌細胞を抗Ｖβ１７１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片に曝露することを含む。
【0086】
Ｖβ１７及び／又はＣＤ１２３に結合する二重特異性抗体及びその抗原結合断片の機能活性は、当該技術分野において既知の方法により、そして本明細書に記載のとおり特徴付けることができる。Ｖβ１７及び／又はＣＤ１２３に結合する抗体及びその抗原結合断片を特徴付けるための方法としては、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、及びＯｃｔｅｔＲｅｄを含む親和性及び特異性アッセイ、ＦＡＣＳによる癌細胞上にあるＣＤ１２３への抗体の結合を検出する結合アッセイ、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞上にあるＶβ１７への抗体の結合を検出する結合アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態によれば、Ｖβ１７及び／又はＣＤ１２３に結合する抗体及びその抗原結合断片を特徴付けるための方法としては、以下に記載するものが挙げられる。
【0087】
別の一般的な態様では、本発明は、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を癌細胞に指向させる方法に関する。この方法は、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を、抗Ｖβ１７１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含み、抗体又は抗体断片は、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＣＤ１２３を表面上に有する癌細胞に指向させる。
【0088】
別の一般的態様では、本発明は、癌細胞の成長又は増殖を阻害するための方法に関する。この方法は、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗Ｖβ１７１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含み、癌細胞を抗体又は抗体断片と接触させることは、癌細胞の成長又は増殖を阻害する。
【0089】
本発明の実施形態によれば、記載された抗Ｖβ１７１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、保存又は使用のための緩衝組成物中に提供され得る。記載された抗Ｖβ１７７１／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片の保存のための好適な緩衝剤は、保存されている間の劣化を最小限に抑える、抗体若しくは抗体断片の凝集を促進さない、又は保存容器への接着を最小限に抑えることによって、抗体又は抗体断片の安定性を維持することに役立つ。
【0090】
実施形態
本発明は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
本発明は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
【0091】
実施形態１は、単離されたＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、単離されたＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１は、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、第２の抗原に対する結合部位を形成する。
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１は、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、第２の抗原に対する結合部位を形成する。
【0092】
実施形態２は、実施形態１に記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、第１の抗原に対する結合部位は、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞上にあるＶβ１７に結合する。
【0093】
実施形態３は、実施形態１又は２に記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、第２の抗原に対する結合部位は、癌細胞の表面上に存在する腫瘍抗原に結合する。
【0094】
実施形態４は、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又は抗原結合断片であり、ＨＣ１及びＬＣ１は、ヒト化されている。
【0095】
実施形態５は、実施形態１～４のいずれか１つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ１２３に結合する。
【0096】
実施形態６は、実施形態１～５のいずれか１つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧアイソタイプである。
【0097】
実施形態７は、実施形態１～６のいずれか１つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
【0098】
実施形態８は、実施形態１～７のいずれか１つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、約０．２ｐＭ未満のＥＣ５０でインビトロにおいて癌細胞のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞依存性細胞傷害を誘導する。
【0099】
実施形態９は、実施形態１～８のいずれか１つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片のＨＣ１及びＬＣ１をコードする、単離された核酸である。
【0100】
実施形態１０は、実施形態１～８のいずれか１つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片のＨＣ２及びＬＣ２をコードする、単離された核酸である。
【0101】
実施形態１１は、実施形態９又は実施形態１０に記載の単離された核酸を含む、ベクターである。
【0102】
実施形態１２は、実施形態１１に記載のベクターを含む、宿主細胞である。
【0103】
実施形態１３は、実施形態１～８のいずれか１つに記載の単離されたＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、緩衝溶液とを含む、緩衝組成物である。
【0104】
実施形態１４は、単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１は、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、Ｖβ１７に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２は、配列番号３４、配列番号３５、及び配列番号３６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２は、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号３９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ１２３に特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位を形成する。
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１は、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２は、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、Ｖβ１７に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２は、配列番号３４、配列番号３５、及び配列番号３６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２は、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号３９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ１２３に特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位を形成する。
【0105】
実施形態１５は、実施形態１４に記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、ＨＣ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
【0106】
実施形態１６は、実施形態１４又は１５に記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、Ｖβ１７は、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上にある。
【0107】
実施形態１７は、実施形態１４～１６のいずれか１つに記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、ＣＤ１２３は、癌細胞の表面上にある。
【0108】
実施形態１８は、実施形態１４～１７のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片であり、二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、約０．２ｐＭ未満のＥＣ５０でインビトロにおいてＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞依存性細胞傷害を誘導する。
【0109】
実施形態１９は、実施形態１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片のＨＣ１及びＬＣ１をコードする、単離された核酸である。
【0110】
実施形態２０は、実施形態１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片のＨＣ２及びＬＣ２をコードする、単離された核酸である。
【0111】
実施形態２１は、実施形態１９又は実施形態２０に記載の単離された核酸を含む、ベクターである。
【0112】
実施形態２２は、実施形態２１に記載のベクターを含む、宿主細胞である。
【0113】
実施形態２３は、実施形態１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、緩衝溶液とを含む、緩衝組成物である。
【0114】
実施形態２４は、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を癌細胞に指向させる方法であり、この方法は、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を、実施形態１～８又は１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含み、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることは、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＣＤ１２３を表面上に有する癌細胞に指向させる。
【0115】
実施形態２４（ａ）は、実施形態２４に記載の方法であり、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞は、実施形態１～８又は１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体と接触する。
【0116】
実施形態２４（ｂ）は、実施形態２４に記載の方法であり、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞は、実施形態１～８又は１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体断片と接触する。
【0117】
実施形態２５は、表面上でＣＤ１２３を発現している癌細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であり、その方法は、癌細胞を、実施形態１～８又は１４～１８のいずれか１つと、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその断片と接触させることを含み、癌細胞を該抗体又は抗体断片と接触させることは、癌細胞の成長又は増殖を阻害する。
【0118】
実施形態２５（ａ）は、実施形態２５に記載の方法であり、ＣＤ１２３発現癌細胞は、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋Ｔ細胞の存在下にある一方で、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその断片と接触している。
【0119】
実施形態２５（ｂ）は、実施形態２５又は２５（ａ）に記載の方法であり、ＣＤ１２３発現癌細胞は、実施形態１～８又は１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体と接触する。
【0120】
実施形態２５（ｃ）は、実施形態２５又は２５（ａ）に記載の方法であり、ＣＤ１２３発現癌細胞は、実施形態１～８又は１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体断片と接触する。
【0121】
実施形態２６は、実施形態１～８のいずれか１つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、そのための包装とを含む、キットである。
【0122】
実施形態２７は、実施形態１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、そのための包装とを含む、キットである。
【0123】
実施形態２８は、Ｖβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であり、この方法は、実施形態１２に記載の宿主細胞を、Ｖβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で培養することと、Ｖβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片を細胞又は培養物から回収することとを含む。
【0124】
実施形態２９は、実施形態１４～１８のいずれか１つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であり、この方法は、実施形態２２に記載の宿主細胞を、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で培養することと、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を細胞又は培養物から回収することとを含む。
【0125】
実施形態３０は、単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であり、Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0126】
実施形態３１は、実施形態３０に記載の単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であり、Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
【0127】
実施形態３２は、実施形態３０又は実施形態３１に記載のヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離された核酸である。
【0128】
実施形態３３は、実施形態３２に記載の単離された核酸を含む、ベクターである。
【0129】
実施形態３４は、実施形態３３に記載のベクターを含む、宿主細胞である。
【0130】
実施形態３５は、実施形態３０又は実施形態３１に記載の単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む緩衝組成物である。
【実施例】
【0131】
以下の実施例は、インフルエンザウイルス由来ペプチドＭ１が、Ｔ細胞の選択セットを増殖させることが可能であることを前提とする。これらの細胞は、ＴＣＲハプロタイプＶβ１７を発現し、これらの細胞の大部分は、腫瘍標的細胞の効率的な細胞傷害を示す。次いで、この能力は、１つのアームがＶβ１７構造に結合し、他方のアームが癌細胞によって発現される抗原に結合するように構築された二重特異性抗体を使用して利用される。したがって、二重特異性抗体は、エフェクタ及び標的細胞を一緒に架橋し、癌細胞殺傷をもたらす。この作用機構は、図１に概説される概略図に記載される。
【0132】
次の実施例は、（１）ＣＴＬ上にあるＴ細胞受容体（T-cell receptor、ＴＣＲ）のＶβ１７アームに結合することが可能な二重特異性抗体の生成（実施例１及び２）、並びに（２）インビトロで増殖させたＣＴＬによる二重特異性抗体により可能になった標的細胞殺傷の証拠（実施例３）のカテゴリに分けることができる。
【0133】
実施例１：抗Ｖβ１７ｍＡｂ Ｅ１７．５Ｆのヒトフレームワーク適合
マウスＩｇＧ１抗ヒトＴ細胞受容体Ｖβ１７クローンＥ１７．５ＦをＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ（Ｂｒｅａ，ＣＡ）から得た。試料調製及びＬＣ／ＭＳＭＳ分析を、Ｐｒｏｔｅａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．（Ｍｏｒｇａｎｔｏｗｎ，ＷＶ）で行った。試料を還元し、アルキル化し、７つのアリコートに分割し、トリプシン／ＬｙｓＣ、キモトリプシン、ＬｙｓＣ、ペプシン、及びＡｓｐＮ、エラスターゼ、及びプロテイナーゼＫ酵素でタンパク分解した。得られたペプチドを、ＺｉｐＴｉｐ Ｃ１８ピペットチップを用いて脱塩し、逆相クロマトグラフィを用いてオンラインで分離した。ＨＣＤフラグメンテーションを使用して、Ｔｈｅｒｍｏ Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ分光計で質量分析を行った。ＭＳデータセットを、デノボ配列タグをＩＭＧＴベースの抗体配列データベースにマッチさせることによって、ＰＥＡＫＳソフトウェアを使用して分析した。配列中のギャップは、デノボ同定されたペプチドのＣｏｎｔｉｇ配列アセンブリを使用して割り当てた。全てのＣＤＲ及び超変異は、ＭＳ／ＭＳスペクトルを検査することによって確認された。
マウスＩｇＧ１抗ヒトＴ細胞受容体Ｖβ１７クローンＥ１７．５ＦをＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ（Ｂｒｅａ，ＣＡ）から得た。試料調製及びＬＣ／ＭＳＭＳ分析を、Ｐｒｏｔｅａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．（Ｍｏｒｇａｎｔｏｗｎ，ＷＶ）で行った。試料を還元し、アルキル化し、７つのアリコートに分割し、トリプシン／ＬｙｓＣ、キモトリプシン、ＬｙｓＣ、ペプシン、及びＡｓｐＮ、エラスターゼ、及びプロテイナーゼＫ酵素でタンパク分解した。得られたペプチドを、ＺｉｐＴｉｐ Ｃ１８ピペットチップを用いて脱塩し、逆相クロマトグラフィを用いてオンラインで分離した。ＨＣＤフラグメンテーションを使用して、Ｔｈｅｒｍｏ Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ分光計で質量分析を行った。ＭＳデータセットを、デノボ配列タグをＩＭＧＴベースの抗体配列データベースにマッチさせることによって、ＰＥＡＫＳソフトウェアを使用して分析した。配列中のギャップは、デノボ同定されたペプチドのＣｏｎｔｉｇ配列アセンブリを使用して割り当てた。全てのＣＤＲ及び超変異は、ＭＳ／ＭＳスペクトルを検査することによって確認された。
【0134】
得られた配列を表１及び２に示す。
【0135】
【表1】
【0136】
【表2】
【0137】
二重特異性抗体の調製のための配列において変更を行った（表３）。この変化には、（１）重鎖のフレームワーク突然変異Ａｓｎ１が保存されておらず、そのため、配列をＤＶＱＬＷ配列を有するように改変し、（２）Ｆｃで同定された別の変異、Ｋ３３７Ｙは、特徴的ではないと見なされ、したがって、この変異を有さない構築物を合成し、（３）重鎖上の潜在的な二級グリコシル化部位が観察され、したがって、Ｎ－結合部位（Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けに基づくＮ８２ａ）を有する及び有さないこのｍＡｂの２つのバージョンを合成したこと、が含まれる。
【0138】
【表3】
【0139】
２つの抗体（Ｂ１７Ｂ１及びＢ１７Ｂ２）をＨＥＫ２９３Ｅｘｐｉ細胞で発現させた。上清をＶβ１７結合（Ｂ１７Ｂ１及びＢ１７Ｂ２）について試験し、Ｂ１７Ｂ１のみが結合を示した。したがって、Ｆｃ置換を有するＩｇＧ４定常領域を有するＢ１７Ｂ１を発現させた。
【0140】
抗ヒトＴＣＲ Ｖβ１７マウスｍＡｂ Ｂ１７Ｂ１は、ヒトフレームワーク適応（ＨＦＡ）法（Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１０；３９８：２１４－２３１）を使用してヒト化した。ヒト化重鎖及び軽鎖の最良の組み合わせを見つけるために、いくつかのヒトＶ領域配列を試験のために選択した（表４）。ヒト生殖細胞系列の選択は、フレームワーク（ＦＲ）領域におけるマウス抗体との全体的な配列類似性にのみ基づいた。ＣＤＲ配列も、その長さ又は標準構造も、この選択には考慮しなかった。
【0141】
ＨＦＡで使用されるＣＤＲ定義は、（Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１０；３９８：２１４－２３１））に記載され、Ｍａｒｔｉｎの定義（Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ＫＲ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ ＡＣ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８；４５：３８３２－３８３９）に対応する。ＣＤＲ（表１）は、以下のように定義される（Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム［Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ，ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ａ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９８７；１９６：９０１－９１７．］を使用）
ＨＣＤＲ１（配列番号１） ２６～３５
ＨＣＤＲ２（配列番号２） ５０～５８
ＨＣＤＲ３（配列番号３） ９５～１０２
ＬＣＤＲ１（配列番号４） ２４～３４
ＬＣＤＲ２（配列番号５） ５０～５６
ＬＣＤＲ３（配列番号６） ８９～９７
ＨＣＤＲ１（配列番号１） ２６～３５
ＨＣＤＲ２（配列番号２） ５０～５８
ＨＣＤＲ３（配列番号３） ９５～１０２
ＬＣＤＲ１（配列番号４） ２４～３４
ＬＣＤＲ２（配列番号５） ５０～５６
ＬＣＤＲ３（配列番号６） ８９～９７
【0142】
選択されたヒト生殖細胞系列を表４（ＩＭＧＴ表記で）に提供する。
【0143】
【表4】
【0144】
いくつかの変異体における「復帰突然変異」は、ＶＬ／ＶＨ対形成及びＣＤＲ構造に重要であることが知られているＦＲ位置に導入した。選択されたヒト生殖細胞系列を表５（ＩＭＧＴ表記で）に提供し、復帰突然変異が記載されている。
【0145】
【表5】
【0146】
３つの重鎖及び３つの軽鎖の全９つの対の組み合わせのアミノ酸配列をＤＮＡに逆翻訳し、遺伝子合成技術（米国特許第６，６７０，１２７号；同第６，５２１，４２７号）を使用してｃＤＮＡを調製した。ＣＭＶプロモータを含む自社製発現ベクターを使用し、標準的な分子生物学的手法を使用して、重鎖（ＨＣ）可変領域を、ヒトＩｇＧ４定常領域上にサブクローニングした。ＣＭＶプロモータを含む自社製発現ベクターを使用し、標準的な分子生物学的手法を使用して、軽鎖（ＬＣ）可変領域を、ヒトラムダ（λ）定常領域上にサブクローニングした。得られたプラスミドをＨＥＫ ＥＸＰＩ細胞（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カリフォルニア州カールズバッド）にトランスフェクトし、ｍＡｂを発現させた。プロテインＡカラム（ｈｉＴｒａｐ ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム）を使用する標準的な方法により精製した。溶出後、プールを、Ｄ－ＰＢＳ、ｐＨ７．２の中に透析した。
【0147】
【表6】
【0148】
ヒト化抗体を、ＴＣＲＶβ１７（配列番号２７）／Ｖａ１０．２－Ｆｃ（配列番号４４）融合タンパク質への結合について、ＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。ビオチン化ＴＣＲＶβ１７／Ｖａ１０．２－Ｆｃ融合タンパク質をストレプトアビジンでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに添加した。非結合タンパク質を洗い流し、ｍＡｂを濃度範囲（０．０１～１０μｇ／ｍＬ）で添加した。プレートを洗浄し、抗カッパ：ＨＲＰ検出抗体を添加した。プレートを洗浄し、化学発光検出試薬を添加し、発光についてＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーでプレートを読み取った。Ｂ１７Ｂ２０及びＢ１７Ｂ２１は、ＴＣＲ Ｖβ１７タンパク質への陽性の結合を示した。Ｂ１７Ｂ２２は、このタンパク質への弱い結合を示した。次いで、更なる研究のために、これらの抗体を上記のように精製した。Ｂ１７Ｂ２１は、組換えＴＣＲ Ｖβ１７タンパク質及びＭ１刺激Ｔ細胞への最良の結合を示し、したがって、更なる機能的研究、具体的には、二重特異性抗体としてＴ細胞再指向性癌細胞殺傷のための分子として選択された。
【0149】
したがって、Ｂ１７Ｂ２１（抗Ｖβ１７）及びＩ３ＲＢ２１７（抗ＣＤ１２３抗体）の可変領域配列を使用して、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞のＴ細胞再指向性殺傷について試験される二重特異性抗体を生成した。
【0150】
実施例２．抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体の調製
ＶＢ１１（抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３）及びＶＢ１３（Ｖβ１７×ヌル）二重特異性抗体を、前述のように、ヒトＩｇＧ４として、ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ形式の完全長抗体として生成した（Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６－３５，１９９７）。可変領域をコードする核酸配列を、標準的なＰＣＲ制限酵素ベースのクローニング技術を使用して、ＩｇＧ４発現カセットの定常領域を含有するカスタム哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。二重特異性抗体は、中国ハムスター卵巣細胞株において一過性トランスフェクションによって発現させた。抗体を、Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）（Ｂｒｏｗｎ，Ｂｏｔｔｏｍｌｅｙ ｅｔ ａｌ．１９９８）によって最初に精製した。カラムをｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で平衡化し、２ｍＬ／分の流速で発酵上清を装填した。装填後、カラムをＰＢＳ（４ＣＶ）で洗浄し、続いてｐＨ３．５の３０ｍＭの酢酸ナトリウムで溶出させた。Ａｋｔａ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において２８０ｎｍでの吸収度によって監視したタンパク質ピークを含有する画分を一緒にプールし、ｐＨ９．０の１％の３Ｍ酢酸ナトリウムを添加することによりｐＨ５．０に中和した。研磨工程として、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、予備的サイズ排除クロマトグラフィ（size exclusion chromatography、ＳＥＣ）で抗体を精製した。試料の完全性を、エンドトキシン測定及びＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動により、還元及び非還元条件下で評価した。最終タンパク質濃度は、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３に対して０．４８ｍｇ／ｍｌ、Ｖβ１７×ヌルに対して０．２４ｍｇ／ｍＬであった。これらのタンパク質濃度に基づく抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３及びＶβ１７×ヌルの最終ＥＵ濃度は、それぞれ、２．０５３ＥＵ／ｍｇ及び４．２１９ＥＵ／ｍｇであった。
ＶＢ１１（抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３）及びＶＢ１３（Ｖβ１７×ヌル）二重特異性抗体を、前述のように、ヒトＩｇＧ４として、ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ形式の完全長抗体として生成した（Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６－３５，１９９７）。可変領域をコードする核酸配列を、標準的なＰＣＲ制限酵素ベースのクローニング技術を使用して、ＩｇＧ４発現カセットの定常領域を含有するカスタム哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。二重特異性抗体は、中国ハムスター卵巣細胞株において一過性トランスフェクションによって発現させた。抗体を、Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）（Ｂｒｏｗｎ，Ｂｏｔｔｏｍｌｅｙ ｅｔ ａｌ．１９９８）によって最初に精製した。カラムをｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で平衡化し、２ｍＬ／分の流速で発酵上清を装填した。装填後、カラムをＰＢＳ（４ＣＶ）で洗浄し、続いてｐＨ３．５の３０ｍＭの酢酸ナトリウムで溶出させた。Ａｋｔａ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において２８０ｎｍでの吸収度によって監視したタンパク質ピークを含有する画分を一緒にプールし、ｐＨ９．０の１％の３Ｍ酢酸ナトリウムを添加することによりｐＨ５．０に中和した。研磨工程として、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、予備的サイズ排除クロマトグラフィ（size exclusion chromatography、ＳＥＣ）で抗体を精製した。試料の完全性を、エンドトキシン測定及びＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動により、還元及び非還元条件下で評価した。最終タンパク質濃度は、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３に対して０．４８ｍｇ／ｍｌ、Ｖβ１７×ヌルに対して０．２４ｍｇ／ｍＬであった。これらのタンパク質濃度に基づく抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３及びＶβ１７×ヌルの最終ＥＵ濃度は、それぞれ、２．０５３ＥＵ／ｍｇ及び４．２１９ＥＵ／ｍｇであった。
【0151】
【表7-1】
【0152】
【表7-2】
【0153】
【表7-3】
【0154】
【表7-4】
【0155】
【表8】
【0156】
実施例３．Ｋａｓｕｍｉ－３細胞及びヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を使用する抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体の結合及び細胞傷害性特性の評価
総ＰＢＭＣからのＶβ１７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の刺激及び増殖
Ｖβ１７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させるために、ＨＬＡ Ａ２ドナー（ＨＰＵ－０８６９４）からの全ＰＢＭＣを、１μｇ／ｍＬのＦＬＵ ＭＰ５８ペプチド（ＤＭＳＯ中）で刺激した。総ＣＤ８＋Ｔ細胞間のＶβ１７＋細胞の頻度を、培養期間の８日目及び１４日目に決定した。総ＣＤ８＋Ｔ細胞間でＶβ１７＋細胞の頻度を計数するために、総生ＰＢＭＣを最初にゲートし、ダブレットを除外し、総ＣＤ８＋Ｔ細胞をゲートし、次いでＶβ１７＋細胞をゲートした（図３Ａ）。０日目の総ＣＤ８＋Ｔ細胞間のＶβ１７＋細胞の頻度と比較して、これらの細胞の大幅な増殖が培養期間の８日目に観察された（図３Ｂ）。８日目のＣＤ８＋Ｔ細胞のより大きな画分は、このドナーにおけるＶβ１７＋細胞（図３Ｂ）であった。
総ＰＢＭＣからのＶβ１７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の刺激及び増殖
Ｖβ１７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させるために、ＨＬＡ Ａ２ドナー（ＨＰＵ－０８６９４）からの全ＰＢＭＣを、１μｇ／ｍＬのＦＬＵ ＭＰ５８ペプチド（ＤＭＳＯ中）で刺激した。総ＣＤ８＋Ｔ細胞間のＶβ１７＋細胞の頻度を、培養期間の８日目及び１４日目に決定した。総ＣＤ８＋Ｔ細胞間でＶβ１７＋細胞の頻度を計数するために、総生ＰＢＭＣを最初にゲートし、ダブレットを除外し、総ＣＤ８＋Ｔ細胞をゲートし、次いでＶβ１７＋細胞をゲートした（図３Ａ）。０日目の総ＣＤ８＋Ｔ細胞間のＶβ１７＋細胞の頻度と比較して、これらの細胞の大幅な増殖が培養期間の８日目に観察された（図３Ｂ）。８日目のＣＤ８＋Ｔ細胞のより大きな画分は、このドナーにおけるＶβ１７＋細胞（図３Ｂ）であった。
【0157】
抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体結合アッセイ
Ｋａｓｕｍｉ－３細胞上
抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体の結合動態を理解するために、Ｋａｓｕｍｉ－３細胞を、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体及びＶβ１７×ヌルアーム対照と共に様々な濃度（濃度範囲５μｇ／ｍＬ～０μｇ／ｍＬ）でインキュベートした。細胞結合二重特異性抗体を、マウス抗ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ－ＰＥ二次抗体で検出した。表９は、異なる濃度の二重特異性抗体で処理した場合の、ＰＥ（二次抗体）に対して陽性のＫａｓｕｍｉ－３細胞の頻度を示す。抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３及びヌル×ＣＤ１２３のＥＣ５０をそれぞれ６及び４２．７ｎＭと決定した（表９）。
Ｋａｓｕｍｉ－３細胞上
抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体の結合動態を理解するために、Ｋａｓｕｍｉ－３細胞を、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体及びＶβ１７×ヌルアーム対照と共に様々な濃度（濃度範囲５μｇ／ｍＬ～０μｇ／ｍＬ）でインキュベートした。細胞結合二重特異性抗体を、マウス抗ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ－ＰＥ二次抗体で検出した。表９は、異なる濃度の二重特異性抗体で処理した場合の、ＰＥ（二次抗体）に対して陽性のＫａｓｕｍｉ－３細胞の頻度を示す。抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３及びヌル×ＣＤ１２３のＥＣ５０をそれぞれ６及び４２．７ｎＭと決定した（表９）。
【0158】
【表9】
【0159】
Ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対する二重特異性抗体結合親和性を、フローサイトメトリによって決定した。最大結合（ＰＥ陽性細胞）の５０％を生む二重特異性濃度として、最大半量効果濃度（ＥＣ５０）値を計算した。ＮＤ：未測定。
【0160】
濃縮されたＣＤ８＋Ｔ細胞上
濃縮されたＦＬＵ ＭＰ５８ペプチド刺激ＣＤ８＋Ｔ（１４日目の培養から）を、様々な濃度の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性及びＶβ１７×ヌルアーム対照抗体と共にインキュベートした。マウス抗ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ－ＰＥ二次抗体を使用して、二重特異性抗体を検出した。表１０は、異なる濃度の二重特異性抗体で処理した場合の、ＰＥ（二次抗体）に対して陽性のＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３、Ｖβ１７×ヌルのＥＣ５０を、それぞれ９．０ｎｍ及び１８．７ｎｍと決定した（表１０）。
濃縮されたＦＬＵ ＭＰ５８ペプチド刺激ＣＤ８＋Ｔ（１４日目の培養から）を、様々な濃度の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性及びＶβ１７×ヌルアーム対照抗体と共にインキュベートした。マウス抗ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ－ＰＥ二次抗体を使用して、二重特異性抗体を検出した。表１０は、異なる濃度の二重特異性抗体で処理した場合の、ＰＥ（二次抗体）に対して陽性のＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３、Ｖβ１７×ヌルのＥＣ５０を、それぞれ９．０ｎｍ及び１８．７ｎｍと決定した（表１０）。
【0161】
【表10】
【0162】
ＣＤ８＋Ｔ細胞に対する二重特異性抗体結合親和性を、フローサイトメトリによって決定した。最大結合（ＰＥ陽性細胞）の５０％を生む抗体濃度として、最大半量効果濃度（ＥＣ５０）値を計算した。ＮＤ：未測定
【0163】
二重特異性媒介性細胞傷害アッセイ
抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体媒介性細胞傷害の有効性を分析するために、ＣＦＳＥ標識された標的（Ｋａｓｕｍｉ－３）細胞を、様々な濃度の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性及びＶβ１７×ヌルアーム対照抗体を用いて、０．５：１、１：１、５：１のエフェクタ対標的（ＥＴ）比で１４及び２４時間、培養１４日目から刺激ＣＤ８＋Ｔ細胞と共培養した。市販の抗ＣＤ１２３抗体を使用して、標的Ｋａｓｕｍｉ－３細胞上でのＣＤ１２３発現を調べた。標的細胞（Ｋａｓｕｍｉ－３）をＣＦＳＥで標識して、フローサイトメトリ分析中にＣＦＳＥ＋として同定した。共培養期間後、７－ＡＡＤを添加して、細胞傷害の指標として７－ＡＡＤ＋ＣＦＳＥ＋細胞の割合を分析した。二重特異性抗体の不在下で観察された基礎細胞傷害を減じて、二重特異性抗体に応答して特異的な細胞傷害を得た。アッセイは、単一ドナー（ＨＰＵ－０８６９４）で１回実施した。１４時間の時点で、０．５：１、１：１、及び５：１のＥＴ比での抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体のＥＣ５０は、それぞれ３．７、０．１、及び０．１３３ｐＭであった（表１１）。
抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体媒介性細胞傷害の有効性を分析するために、ＣＦＳＥ標識された標的（Ｋａｓｕｍｉ－３）細胞を、様々な濃度の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性及びＶβ１７×ヌルアーム対照抗体を用いて、０．５：１、１：１、５：１のエフェクタ対標的（ＥＴ）比で１４及び２４時間、培養１４日目から刺激ＣＤ８＋Ｔ細胞と共培養した。市販の抗ＣＤ１２３抗体を使用して、標的Ｋａｓｕｍｉ－３細胞上でのＣＤ１２３発現を調べた。標的細胞（Ｋａｓｕｍｉ－３）をＣＦＳＥで標識して、フローサイトメトリ分析中にＣＦＳＥ＋として同定した。共培養期間後、７－ＡＡＤを添加して、細胞傷害の指標として７－ＡＡＤ＋ＣＦＳＥ＋細胞の割合を分析した。二重特異性抗体の不在下で観察された基礎細胞傷害を減じて、二重特異性抗体に応答して特異的な細胞傷害を得た。アッセイは、単一ドナー（ＨＰＵ－０８６９４）で１回実施した。１４時間の時点で、０．５：１、１：１、及び５：１のＥＴ比での抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体のＥＣ５０は、それぞれ３．７、０．１、及び０．１３３ｐＭであった（表１１）。
【0164】
【表11】
【0165】
２４時間の時点で、０．５：１、１：１、及び５：１のＥＴ比での抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性のＥＣ５０は、それぞれ０．４、０．２、及び１．０ｐＭであった（表１２）。
【0166】
【表12】
【0167】
同様に、抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性媒介性非刺激ＣＤ８＋Ｔ細胞毒性を、１４（表１３）及び２４（表１４）時間、ＥＴ比０．５：１、１：１、５：１で試験した。５ｎｇ／ｍｌの抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性濃度及び１４時間の時点で、０．５：１及び１：１のＥＴ比での非刺激ＣＤ８＋Ｔ細胞は、刺激ＣＤ８＋Ｔ細胞による７７％及び７３％の細胞毒性と比較して、それぞれ２．８％及び９．８％の標的細胞傷害を示した（表１３）。５：１のＥＴ比では、非刺激ＣＤ８＋Ｔ細胞は、刺激ＣＤ８＋Ｔ細胞による７０．９％と比較して、３１．６５％の標的細胞傷害を示した。同様の結果を２４時間の時点から得た（表１２、１５、１６、及び１７）。試験された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性の最も高い濃度（５ｎｇ／ｍｌ）では、非刺激ＣＤ８＋Ｔ細胞は、より高いＥＴ比で標的細胞に対してより高い細胞傷害を示した。
【0168】
【表13】
【0169】
【表14】
【0170】
【表15】
【0171】
最大細胞毒性（ＣＦＳＥ＋７ＡＡＤ＋）細胞の５０％を生む抗体濃度として、最大半量効果濃度（ＥＣ５０）値を計算した。ＮＤ：未測定。
【0172】
【表16】
【0173】
最大細胞毒性（ＣＦＳＥ＋７ＡＡＤ＋）細胞の５０％を生む抗体濃度として、最大半量効果濃度（ＥＣ５０）値を計算した。ＮＤ：未測定
【0174】
【表17】
【0175】
最大細胞毒性（ＣＦＳＥ＋７ＡＡＤ＋）細胞の５０％を生む抗体濃度として、最大半量効果濃度（ＥＣ５０）値を計算した。ＵＤ：検出不可能。
【0176】
当業者は、広い発明概念から逸脱することなく前述の実施形態に変更を行うことができることを理解するであろう。したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に制限されず、本説明によって定義されるように本発明の趣旨及び範囲内の修正を包含することを意図するものと理解される。
【0177】
【表18-1】
【0178】
【表18-2】
【0179】
【表18-3】
【0180】
【表18-4】
【0181】
【表18-5】
【0182】
【表18-6】
【0183】
【表18-7】
【0184】
【表18-8】
【0185】
【表18-9】
【0186】
【表18-10】
［発明１］
単離されたＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２が、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１が、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、第２の抗原に対する結合部位を形成している、
前記単離されたＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明２］
前記第１の抗原に対する前記結合部位が、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞上にあるＶβ１７に結合する、発明１に記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明３］
前記第２の抗原に対する前記結合部位が、癌細胞の表面上に存在する腫瘍抗原に結合する、発明１又は２に記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明４］
ＨＣ１及びＬＣ１が、ヒト化されている、発明１～３のいずれか一つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又は抗原結合断片。
［発明５］
ＨＣ２及びＬＣ２が、ＣＤ１２３に結合する、発明１～４のいずれか一つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明６］
前記二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧアイソタイプである、発明１～５のいずれか一つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明７］
前記二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧ４アイソタイプである、発明１～６のいずれか一つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明８］
前記二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、約０．２ｐＭ未満のＥＣ 50 でインビトロにおいて癌細胞のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞依存性細胞傷害を誘導する、発明１～７のいずれか一つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明９］
発明１～８のいずれか一つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記ＨＣ１及び前記ＬＣ１をコードする、単離された核酸。
［発明１０］
発明１～８のいずれか一つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記ＨＣ２及び前記ＬＣ２をコードする、単離された核酸。
［発明１１］
発明９又は１０に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
［発明１２］
発明１１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
［発明１３］
単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１が、ＬＣ１と会合し、ＨＣ２が、ＬＣ２と会合し、ＨＣ１が、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ１が、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、Ｖβ１７に特異的に結合する第１の抗原に対する結合部位を形成し、ＨＣ２が、配列番号３４、配列番号３５、及び配列番号３６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣ２が、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号３９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含んで、ＣＤ１２３に特異的に結合する第２の抗原に対する結合部位を形成している、
前記単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明１４］
ＨＣ１が、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、発明１３に記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明１５］
前記Ｖβ１７が、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上にある、発明１３又は１４に記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明１６］
前記ＣＤ１２３が、癌細胞又はＣＤ３４＋幹細胞の表面上にある、発明１３～１５のいずれか一つに記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明１７］
二重特異性抗体又はその抗原結合断片が、約０．２ｐＭ未満のＥＣ 50 でインビトロにおいて癌細胞のＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞依存性細胞傷害を誘導する、発明１３～１６のいずれか一つに記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片。
［発明１８］
発明１３～１７のいずれか一つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記ＨＣ１及びＬＣ１をコードする、単離された核酸。
［発明１９］
発明１３～１８のいずれか一つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片の前記ＨＣ２及びＬＣ２をコードする、単離された核酸。
［発明２０］
発明１８又は１９に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
［発明２１］
発明２０に記載のベクターを含む、宿主細胞。
［発明２２］
発明１３～１７のいずれか一つに記載の単離された抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を含む、緩衝組成物。
［発明２３］
Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を癌細胞に指向させる方法であって、Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を、発明１３に記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含み、前記Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を、前記抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることが、前記Ｖβ１７発現ＣＤ８＋又はＣＤ４＋Ｔ細胞を癌細胞に指向させる、前記方法。
［発明２４］
癌細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、前記癌細胞を、発明１３に記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含み、前記癌細胞を前記抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と接触させることが、前記癌細胞の前記成長又は増殖を阻害する、前記方法。
［発明２５］
前記癌細胞が、ＣＤ１２３発現癌細胞である、発明２３又は２４に記載の方法。
［発明２６］
発明１～８のいずれか一つに記載のＶβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、そのための包装とを含む、キット。
［発明２７］
発明１３～１７のいずれか一つに記載の抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片と、そのための包装とを含む、キット。
［発明２８］
Ｖβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、発明１２に記載の宿主細胞を培養して、前記Ｖβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成することと、前記Ｖβ１７二重特異性抗体又はその抗原結合断片を前記細胞又は培養物から回収することとを含む、前記方法。
［発明２９］
抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、発明２１に記載の宿主細胞を培養して、前記抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を生成することと、前記抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体又はその抗原結合断片を前記細胞又は培養物から回収することとを含む、前記方法。
［発明３０］
単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、前記ヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
［発明３１］
前記ヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、発明３０に記載の単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
［発明３２］
発明３０又は３１に記載の単離されたヒト化Ｖβ１７モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離された核酸。
［発明３３］
発明３２に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
［発明３４］
発明３３に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【配列表】