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特許7568239幹細胞由来エクソソームを含む組成物及びその製造方法

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-10-07

(45)【発行日】2024-10-16

(54)【発明の名称】幹細胞由来エクソソームを含む組成物及びその製造方法

(51)【国際特許分類】

A61K 35/545 20150101AFI20241008BHJP

A61P 9/04 20060101ALI20241008BHJP

A61P 9/10 20060101ALI20241008BHJP

C12N 5/10 20060101ALN20241008BHJP

C12N 5/0775 20100101ALN20241008BHJP

【ＦＩ】

A61K35/545

A61P9/04

A61P9/10

C12N5/10 ZNA

C12N5/0775

【請求項の数】 2

(21)【出願番号】P 2022574692

(86)(22)【出願日】2021-07-26

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-07-03

(86)【国際出願番号】 KR2021009630

(87)【国際公開番号】W WO2022025559

(87)【国際公開日】2022-02-03

【審査請求日】2022-12-05

(31)【優先権主張番号】10-2020-0094588

(32)【優先日】2020-07-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】521504245

【氏名又は名称】プレクソジェンインコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100107766

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東忠重

(74)【代理人】

【識別番号】100107515

【弁理士】

【氏名又は名称】廣田浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100070150

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東忠彦

(72)【発明者】

【氏名】キム，スゥ

(72)【発明者】

【氏名】ジョン，ソンヨン

【審査官】池上文緒

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１９／１０７９３９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１９／２４１９１０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Adv. Exp. Med. Biol.，2017年，vol.998，p.179-185

【文献】Drug Delivery System，2014年，vol.29, no.2，p.140-151

【文献】Int. J. Mol. Sci.，2018年，vol.19, issue 10，3119, p.1-16

【文献】Thorac. Cardiovasc. Surg. ，2018年，vol.66, supl.1，Abstract number V273，https://www.thieme-connect.com/products/ejournals/html/10.1055/s-0038-1628010

【文献】Circ. Res.，2018年，vol.122, issue 5，p.661-663

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ３５／５４５

Ｃ１２Ｎ５／１０

Ｃ１２Ｎ５／０７７５

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

心疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物の製造方法であって、
人工多能性幹細胞を培地で培養する第１培養段階と、
培養された前記人工多能性幹細胞からＳＳＥＡ－４（－）細胞を分離し、培養してＢｘＣ幹細胞に分化させる選別培養段階と、
前記ＢｘＣ幹細胞を培養して間葉系幹細胞に分化させる第２培養段階と、
前記間葉系幹細胞に、１２時間から３６時間、ヒアルロン酸を前処理する前処理段階と、
前処理された前記間葉系幹細胞を培養してエクソソームを生産する生産段階と、
前記間葉系幹細胞又はその培養物からエクソソームを分離する分離段階と、
を含み、
前記ＢｘＣは、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞の前駆細胞であり、
前記人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞の前駆細胞は、ＳＳＥＡ－４タンパク質を細胞表面に発現しないＳＳＥＡ－４（－）細胞であり、前記ＳＳＥＡ－４（－）細胞は、人工多能性幹細胞由来であり、
前記心疾患は、狭心症（ＡｎｇｉｎａＰｅｃｔｏｒｉｓ）、心筋梗塞（ＭｙｏｃａｒｄｉａｌＩｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、心不全（Ｃａｒｄｉａｃｆａｉｌｕｒｅ）からなる群から選ばれることを特徴とする薬剤学的組成物の製造方法。

【請求項2】

前記生産段階は、エクソソームが除去されたウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）で前記間葉系幹細胞を培養する追加培養段階を含む、請求項１に記載の薬剤学的組成物の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、幹細胞由来エクソソームを含む組成物及びその製造方法に関し、より詳細には、抗炎症、線維化抑制、血管内皮細胞の増殖、血管形成、生存率向上、及び心筋細胞の保護・再生効果に優れた間葉系幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを含む組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

微細小胞体（ＥｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＶｅｓｉｃｌｅｓ）は、マイクロベシクル（Ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅｓ）、エクソソーム（Ｅｘｏｓｏｍｅ）などを含む３０～１０００ｎｍサイズの球状脂質二重層（ｌｉｐｉｄ－ｂｉｌａｙｅｒ）で構成された小胞体（ｖｅｓｉｃｌｅ）である。

【0003】

エクソソームの脂質二重層は、起源細胞（供与細胞）のようなリン脂質二重膜構造となっており、細胞が細胞外に分泌する物質の構成体であり、細胞－細胞間のコミュニケーション及び細胞性免疫介入などの機能的な役割を担うものと知られている。

【0004】

エクソソームは、起源細胞特有の生物学的機能を反映する細胞特異的構成成分を含有し、リン脂質、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの他にも様々な水溶性タンパク質、外在性タンパク質及び膜貫通タンパク質成分などを含む。

【0005】

このようなエクソソームは、肥満細胞、リンパ球、星状細胞、血小板、神経細胞、内皮細胞、上皮細胞などのあらゆる動物細胞から排出され、血液、尿、粘液、唾液、胆汁、腹水、脳脊髄液などの様々な体液から発見される。エクソソームは、血液脳関門（Ｂｌｏｏｄ－ＢｒａｉｎＢａｒｒｉｅｒ；ＢＢＢ）も通過でき、表皮細胞と内皮細胞の細胞膜透過が可能な程度に選択的透過性が高いことから、特定薬物のナノキャリア（ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ）であるＤＤＳ（ｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍ）の開発にも活用されている。

【0006】

間葉系幹細胞から分泌するエクソソーム及びマイクロベシクル（ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅ）は、細胞－細胞間コミュニケーション（ｃｅｌｌ－ｔｏ－ｃｅｌｌｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）に関与し、幹細胞が有する再生医学的な治療効能を示すことが知られている。

【0007】

エクソソームは、長期間生存せずに生体内に移植された幹細胞から分泌されるパラクライン因子（ｐａｒａｃｒｉｎｅｆａｃｔｏｒｓ）に、トロピック効果（ｔｒｏｐｈｉｃｅｆｆｅｃｔ）をもたらすことが知られている。分泌されるそのような因子は、エクソソームのような細胞外小胞体によって分泌される、成長因子（ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）、ケモカイン（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）、サイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）などの低分子であり、そのようなエクソソームは幹細胞に由来する。このことから、エクソソームは、幹細胞の特性を突き止め、その治療的効能を評価するために活用されている。さらに、最近では、間葉系幹細胞自体を用いず、間葉系幹細胞が分泌するエクソソームを用いた様々な疾患の治療効果への研究が活発に行われており、これは、学界及び産業界において既存の幹細胞治療法の限界を克服できる新しい代案になり得ると予想されている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

そこで、本発明者らは、幹細胞又はその培養液から分離された組成物を開発した。本発明に係る組成物は、抗炎症、線維化抑制、血管内皮細胞の増殖、形成又は生存率の向上、及び心筋細胞の保護・再生効果に格段に優れていることを確認した。

【0009】

したがって、本発明の目的は、幹細胞由来のエクソソームを含む組成物を提供することである。

【0010】

本発明の他の目的は、幹細胞由来のエクソソームを含む組成物の製造方法を提供することである。

【0011】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来のエクソソームを含む心疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物を提供することである。

【0012】

本発明のさらに他の目的は、心疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物の製造方法を提供することである。

【0013】

本発明のさらに他の目的は、心疾患の緩和又は治療方法を提供することである。

【0014】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来の組成物の心疾患の緩和、抑制、予防又は治療用途を提供することである。

【0015】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来のエクソソームを含む炎症性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物を提供することである。

【0016】

本発明のさらに他の目的は、炎症性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物の製造方法を提供することである。

【0017】

本発明のさらに他の目的は、炎症性疾患の緩和又は治療方法を提供することである。

【0018】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来の組成物の炎症性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用途を提供することである。

【0019】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来のエクソソームを含む免疫疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物を提供することである。

【0020】

本発明のさらに他の目的は、免疫疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物の製造方法を提供することである。

【0021】

本発明のさらに他の目的は、免疫疾患の緩和又は治療方法を提供することである。

【0022】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来のエクソソームを含む組成物の免疫疾患の緩和、抑制、予防又は治療用途を提供することである。

【0023】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来のエクソソームを含む線維性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物を提供することである。

【0024】

本発明のさらに他の目的は、線維性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物の製造方法を提供することである。

【0025】

本発明のさらに他の目的は、線維性疾患の緩和又は治療方法を提供することである。

【0026】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来の組成物の線維性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用途を提供することである。

【0027】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来のエクソソームを含む血管疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物を提供することである。

【0028】

本発明のさらに他の目的は、血管疾患の緩和、抑制、予防又は治療用組成物の製造方法を提供することである。

【0029】

本発明のさらに他の目的は、血管疾患の緩和又は治療方法を提供することである。

【0030】

本発明のさらに他の目的は、幹細胞由来の組成物の血管疾患の緩和、抑制、予防又は治療用途を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0031】

本発明は、幹細胞由来エクソソームを含む組成物及びその製造方法に関し、本発明に係る組成物は、心疾患、炎症性疾患、免疫疾患、線維性疾患、皮膚欠損及び血管疾患の治療又は予防において優れた効果を奏する。

【0032】

そこで、本発明者らは、本発明に係る組成物が抗炎症、線維化抑制、血管内皮細胞の増殖、形成又は生存率の向上、及び心筋細胞の保護及び再生を可能にすることを確認した。

【0033】

以下、本発明をより詳しく説明する。

【0034】

本発明の一態様は、幹細胞由来のエクソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）を含む組成物である。

【0035】

本明細書上の用語「エクソソーム」は細胞由来性小胞体であり、ほぼ全ての真核生物の体液に存在するものであって、ＬＤＬタンパク質よりは大きいが、赤血球よりははるかに小さい３０～１００ｎｍ程度の直径を有する小胞体を意味する。エクソソームは、多重小胞体（ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒｂｏｄｉｅｓ）が細胞膜と融合する際に細胞から放出されたり、細胞膜から直ちに放出されたりして、凝固、細胞間信号伝達などのような重要ながらも特化した機能を有することがよく知られている。

【0036】

本明細書上の用語「幹細胞（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ）」は、未分化な細胞であり、自己複製能を有し、且つ２つ以上の異なる種類の細胞に分化する能力を有する細胞を意味する。

【0037】

本発明の一具現例において、幹細胞は、自己又は同種由来幹細胞であってよく、ヒト及び非ヒト哺乳類を含む任意類型の動物由来であってよく、成体に由来する幹細胞であってよく、胚芽に由来する幹細胞であってよい。例えば、幹細胞は、胚芽幹細胞、成体幹細胞、人工多能性幹細胞（ｉｎｄｕｃｅｄｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌ；ｉＰＳＣ）、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞、ＢｘＣ幹細胞、ＢｘＣ－Ａ１幹細胞、ＢｘＣ－Ｉ１０幹細胞、ＢｘＣ－Ｇ６３幹細胞、ＢｘＣ－Ｒ１１幹細胞、及びＢｘＣ－Ｒ５６幹細胞からなる群から選ばれるものであってよいが、これに限定されない。

【0038】

本明細書上の用語「成体幹細胞（ａｄｕｌｔｓｔｅｍｃｅｌｌ）」は、臍帯血や成人の骨髄、血液などから抽出される細胞であって、特定の臓器の細胞に分化する直前の細胞を意味し、必要時に身体内組織へと分化可能な能力を保有している未分化状態の細胞を意味する。

【0039】

本発明の一具現例において、成体幹細胞は、ヒト、動物又は動物組織起源の成体幹細胞、ヒト、動物又は動物組織由来間葉系幹細胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ）、及びヒト、動物又は動物組織起源の人工多能性幹細胞に由来する間葉系幹細胞からなる群から選ばれるものであってよいが、これに限定されない。

【0040】

本発明において、ヒト、動物又は動物組織は、臍帯、臍帯血、骨髄、脂肪、筋肉、神経、皮膚、羊膜及び胎盤からなる群から選ばれるものであってよいが、これに限定されない。

【0041】

本発明において、ヒト又は動物の様々な組織起源の幹細胞は、造血幹細胞、乳腺幹細胞、腸管幹細胞、血管内皮前駆細胞、神経幹細胞、嗅覚神経幹細胞、及び精巣幹細胞からなる群から選ばれるものであってよいが、これに限定されない。

【0042】

本明細書において、「胚性幹細胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ）」という用語は、受精卵が子宮に着床する前に形成された胚盤胞の内部細胞塊（ｉｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓ）に由来し、胚発生中に分離され、体外で培養された細胞を意味する。

【0043】

胚性幹細胞は、個体の全ての組織の細胞に分化可能な多能性（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）であるか或いは全能性（ｔｏｔｉｐｏｔｅｎｔ）がある、自己複製能（ｓｅｌｆｒｅｎｅｗａｌ）を有する細胞を意味し、広い意味では、胚性幹細胞に由来する胚様体（ｅｍｂｒｙｏｉｄｂｏｄｉｅｓ）も含むものを意味する。

【0044】

本発明において、幹細胞は、ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ウサギなどのあらゆる由来の胚性幹細胞を含むことができるが、これに限定されるものではない。

【0045】

本明細書上の用語「人工多能性幹細胞（ｉｎｄｕｃｅｄｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌ；ｉＰＳＣ）」は、分化した細胞らから人為的な脱分化過程によって多能性分化能を有するように誘導された細胞を意味し、「脱分化幹細胞」と同じ意味で使われてよい。

【0046】

人為的な脱分化過程は、レトロウイルス、レンチウイルス及びセンダイウイルスを用いたウイルス媒介又は非ウイルス性ベクターの利用、タンパク質及び細胞抽出物などを利用する非ウイルス媒介脱分化因子の導入によって行われるか、或いは幹細胞抽出物、化合物などによる脱分化過程を含むことができる。

【0047】

人工多能性幹細胞は、胚性幹細胞とほぼ同一の特性を有し、具体的には、類似の細胞形状を有し、遺伝子、タンパク質発現が類似しており、ｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏで全分化能を有し、テラトーマ（ｔｅｒａｔｏｍａ）を形成し、マウスの胚盤胞（ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔ）に挿入させた時に、キメラ（ｃｈｉｍｅｒａ）マウスを形成し、遺伝子の生殖線転移（ｇｅｒｍｌｉｎｅｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）が可能である。

【0048】

本発明の一具現例において、幹細胞は、ＢｘＣ幹細胞であってよい。

【0049】

本発明の一具現例において、組成物は、ＢｘＣ幹細胞由来のエクソソームを含むものであってよい。

【0050】

本明細書上の用語「間葉系幹細胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌ；ＭＳＣ）」とは、間葉に由来する幹細胞を意味する。間葉系幹細胞は、造骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞又は筋細胞からなる群から選ばれる一つ以上の細胞に分化してよい。間葉系幹細胞は、あらゆる類型の成体組織から分離されてよく、例えば、骨髄脂肪組織、臍帯又は末梢血液から分離されてよい。間葉系幹細胞の群集（ＭＳＣｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）は、特異的な表現型（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を示すものと定義されてよい。人工多能性幹細胞から分化した間葉系幹細胞の群集は、通常の間葉系幹細胞の群集と同じ表現型特性を示してよく、間葉系幹細胞の群集は、ＣＤ１０５、ＣＤ７３、ＣＤ９０マーカーを９５％以上発現し、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＳＳＥＡ－４を２％以下発現する幹細胞の群集として理解されてよい。

【0051】

本明細書上の用語「ＢｘＣ幹細胞」は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を培養した後、ＳＳＥＡ－４（ｓｔａｇｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ４）タンパク質を発現しない人工多能性幹細胞の群集を分離した後、追加培養して製造されてよい。ＢｘＣ幹細胞は、人工多能性幹細胞から間葉系幹細胞に完全に分化する直前の段階の細胞であり、追加培養によって完全な間葉系幹細胞の性質を有することができる。したがって、ＢｘＣ幹細胞群集の表現型は、間葉系幹細胞群集と完全に同じ表現型を示すわけではなく、間葉系幹細胞群集の表現型と９６％～９９．９％の範囲で類似する表現型を示すことができる。例えば、人工多能性幹細胞群集はＣＤ９０タンパク質を０．３％発現するが、間葉系幹細胞群集はＣＤ９０タンパク質を９９．７％発現し、ＢｘＣ幹細胞群集は、間葉系幹細胞の約９８％である９６．９％発現することができる。これにより、ＢｘＣ幹細胞は、人工多能性幹細胞を培養した後、ＳＳＥＡ－４タンパク質を発現しない人工多能性幹細胞をさらに培養し、間葉系幹細胞に完全に分化させずに９６％～９９．９％分化させた幹細胞と定義されてよい。ＢｘＣ幹細胞は、同一に人工多能性幹細胞から分化した間葉系幹細胞に比べて幹細胞能（ｓｔｅｍｎｅｓｓ）に優れており、機能性に関連したタンパク質を多量分泌できる。具体的に、本発明のＢｘＣ幹細胞は、継代を９回以上繰り返す場合に、同一組織由来の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）と比較して１０倍以上の増殖能差を示し、１２回以上の回数で継代をしても増殖能の減少が観察されない。また、ＢｘＣ幹細胞は、一般の間葉系幹細胞に比べて、細胞増殖能に関連したマーカーであるＫｉ６７の発現量も２倍以上高く示される。そして、ＢｘＣ幹細胞は、同一に人工多能性幹細胞から分化した間葉系幹細胞に比べて、ＡＮＫＲＤ１、ＣＰＥ、ＮＫＡＩＮ４、ＬＣＰ１、ＣＣＤＣ３、ＭＡＭＤＣ２、ＣＬＳＴＮ２、ＳＦＴＡ１Ｐ、ＥＰＢ４１Ｌ３、ＰＤＥ１Ｃ、ＥＭＩＬＩＮ２、ＳＵＬＴ１Ｃ４、ＴＲＩＭ５８、ＤＥＮＮＤ２Ａ、ＣＡＤＭ４、ＡＩＦ１Ｌ、ＮＴＭ、ＳＨＩＳＡ２、ＲＡＳＳＦ４、及びＡＣＫＲ３からなる群から選ばれる１以上の遺伝子をより高いレベルで発現でき、ＤＨＲＳ３、ＢＭＰＥＲ、ＩＦＩ６、ＰＲＳＳ１２、ＲＤＨ１０、及びＫＣＮＥ４からなる群から選ばれる１以上の遺伝子をより低いレベルで発現できる。

【0052】

本明細書上の用語「幹細胞能」とは、あらゆる細胞を生成可能な能力がある多能性（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ）、及び自分に似た細胞を無制限に生成可能な自己複製能（ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ）を意味し、例えば、未分化細胞を、未分化状態を維持しながら幹細胞の増殖能（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を増加させたり、テロメラーゼ活性を増加させたり、幹細胞性因子（ｓｔｅｍｎｅｓｓａｃｔｉｎｇｓｉｇｎａｌｓ）の発現を増加させたり、細胞遊走性を増加させたりすることをいい、それらの特徴のうち一つ以上が見られることを含むことができる。

【0053】

本発明の一具現例において、幹細胞は、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（Ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔｅ；ＰＭＡ）、エキセンジン－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）からなる群から選ばれる一つ以上で前処理されたものであってよい。

【0054】

本明細書上の用語「前処理」とは、間葉系幹細胞の培地に特定物質を添加して培養する過程を意味する。例えば、前処理は、人工多能性幹細胞から分化の完了した間葉系幹細胞を、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（Ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔｅ；ＰＭＡ）、エキセンジン－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、及びレスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）からなる群から選ばれる一つ以上の物質を添加した培地にさらに培養する過程を意味する。

【0055】

本発明の一具現例において、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞は、ピオグリタゾン、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート、エキセンジン－４、ヒアルロン酸、レスベラトロールからなる群から選ばれる一つ以上で前処理されたものであってよい。

【0056】

本発明の一具現例において、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞は、ヒアルロン酸で前処理されたものであってよい。

【0057】

本発明の一具現例において、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞は、ピオグリタゾンで前処理されたものであってよい。

【0058】

本発明の一具現例において、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞は、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテートで前処理されたものであってよい。

【0059】

本発明の一具現例において、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞は、エキセンジン－４で前処理されたものであってよい。

【0060】

本発明の一具現例において、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞は、レスベラトロールで前処理されたものであってよい。

【0061】

本発明において、ピオグリタゾン、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート、エキセンジン－４、ヒアルロン酸、及びレスベラトロールは、幹細胞の幹細胞能（Ｓｔｅｍｎｅｓｓ）及び増殖能（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を増加させ、幹細胞由来エクソソームの数、エクソソーム内タンパク質、及びＲＮＡの含有量を増加させることができる。

【0062】

本発明において、組成物は、ＢｘＣ幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－ｅ）、ＢｘＣ－Ａ１幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ａ１ｅ）、ＢｘＣ－Ｉ１０幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｉ１０ｅ）、ＢｘＣ－Ｇ６３幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｇ６３ｅ）、ＢｘＣ－Ｒ１１幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｒ１１ｅ）、ＢｘＣ－Ｒ５６幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｒ５６ｅ）からなる群から選ばれる一つ以上のエクソソームを含むものであってよい。

【0063】

本発明の一具現例において、組成物は、ＢｘＣ－Ａ１幹細胞由来のエクソソームを含むものであってよい。

【0064】

本明細書上の用語「ＢｘＣ－Ａ１幹細胞」とは、本発明に係るＢｘＣ幹細胞を培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にピオグリタゾンを含めて培養（前処理）した間葉系幹細胞を意味する。例えば、ＢｘＣ－Ａ１幹細胞は、ＢｘＣ幹細胞を追加培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にピオグリタゾンを０．００１～１０００μＭ、例えば、３μＭ含めて１２～４８時間培養することによって得られる。

【0065】

本発明の一具現例において、組成物はＢｘＣ－Ｉ１０幹細胞由来のエクソソームを含むものであってよい。

【0066】

本明細書上の用語「ＢｘＣ－Ｉ１０幹細胞」とは、本発明に係るＢｘＣ幹細胞を培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）を含めて培養（前処理）した間葉系幹細胞を意味する。例えば、ＢｘＣ－Ｉ１０幹細胞は、ＢｘＣ幹細胞を追加培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にホルボール１２－ミリステート１３－アセテートを１～１０００ｎＭ、例えば、５０ｎＭ含めて１２～４８時間培養することによって得られる。ＢｘＣ－Ｉ１０幹細胞はいずれの物質も前処理されていない間葉系幹細胞に比べて細胞の増殖率が約２２０％増加し、エクソソーム生産効率とエクソソーム由来タンパク質の量が５倍以上増加する。

【0067】

本発明の一具現例において、組成物は、ＢｘＣ－Ｇ６３幹細胞由来のエクソソームを含むものであってよい。

【0068】

本明細書上の用語「ＢｘＣ－Ｇ６３幹細胞」とは、本発明に係るＢｘＣ幹細胞を培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にエキセンジン－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）を含めて培養（前処理）した間葉系幹細胞を意味する。例えば、ＢｘＣ－Ｇ６３幹細胞は、ＢｘＣ幹細胞を追加培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にエキセンジン－４を０．０１～１００００ｎＭ、例えば、２０ｎＭ含めて１２～４８時間培養することによって製造されてよい。ＢｘＣ－Ｇ６３幹細胞は、いずれの物質も前処理されていない間葉系幹細胞に比べて細胞の増殖率が約３４０％増加し、エクソソーム生産効率が約６倍増加し、エクソソーム由来タンパク質の量が５倍以上増加する。

【0069】

本発明の一具現例において、組成物は、ＢｘＣ－Ｒ１１幹細胞由来のエクソソームを含むものであってよい。

【0070】

本明細書上の用語「ＢｘＣ－Ｒ１１幹細胞」とは、本発明に係るＢｘＣ幹細胞を培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）を含めて培養（前処理）した間葉系幹細胞を意味する。例えば、ＢｘＣ－Ｒ１１幹細胞は、ＢｘＣ幹細胞を追加培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にヒアルロン酸を０．１～１０００μｇ／ｍｌ、例えば、４０μｇ／ｍｌ含めて１２～４８時間培養することによって製造されてよい。ＢｘＣ－Ｒ１１幹細胞は、いずれの物質も前処理されていない間葉系幹細胞に比べて細胞の増殖率が約３６０％増加し、エクソソーム生産効率が約５倍増加し、エクソソーム由来タンパク質の量が５倍以上増加する。

【0071】

本発明の一具現例において、組成物は、ＢｘＣ－Ｒ５６幹細胞由来のエクソソームを含むものであってよい。

【0072】

本明細書上の用語「ＢｘＣ－Ｒ５６幹細胞」とは、本発明に係るＢｘＣ幹細胞を培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にレスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）を含めて培養（前処理）した間葉系幹細胞を意味する。例えば、ＢｘＣ－Ｒ５６幹細胞は、ＢｘＣ幹細胞を追加培養して間葉系幹細胞に完全に分化させた後、培地にレスベラトロールを０．０１～１００００ｎＭ、例えば、１０ｎＭ含めて１２～４８時間培養することによって製造されてよい。ＢｘＣ－Ｒ５６幹細胞は、いずれの物質も前処理されていない間葉系幹細胞に比べて細胞の増殖率が約１１００％増加し、エクソソーム生産効率が約５倍増加し、エクソソーム由来タンパク質の量が５倍以上増加する。

【0073】

本発明の一具現例において、ピオグリタゾンは、０．００１～１０００μＭ、０．００５～５００μＭ、０．０１～１００μＭ、０．０５～５０μＭ、０．１～２５μＭ、０．５～１５μＭ、１～１０μＭ、２～６μＭの濃度で前処理されるものであってよく、例えば、３μＭの濃度で前処理されるものであってよいが、これに限定されない。

【0074】

本発明の一具現例において、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテートは、１～１０００ｎＭ、５～５００ｎＭ、１０～２５０ｎＭ、１０～１００ｎＭ、１５～８０ｎＭ、２０～７０ｎＭの濃度で前処理されるものであってよく、例えば、５０ｎＭの濃度で前処理されるものであってよいが、これに限定されない。

【0075】

本発明の一具現例において、エキセンジン－４は、０．０１～１００００ｎＭ、０．１～５０００ｎＭ、１～１０００ｎＭ、１～１００ｎＭ、１０～１００ｎＭ、１０～５０ｎＭ、１０～３０ｎＭの濃度で前処理されるものであってよく、例えば、２０ｎＭの濃度で前処理されるものであってよいが、これに限定されない。

【0076】

本発明の一具現例において、ヒアルロン酸は、０．１～１０００μｇ／ｍｌ、０．５～１０００μｇ／ｍｌ、１～５００μｇ／ｍｌ、１～２００μｇ／ｍｌ、１～１００μｇ／ｍｌ、１～８０μｇ／ｍｌ、１～６０μｇ／ｍｌ、１０～６０μｇ／ｍｌの濃度で前処理されるものであってよく、例えば、４０μｇ／ｍｌの濃度で前処理されるものであってよいが、これに限定されない。

【0077】

本発明の一具現例において、レスベラトロールは、０．０１～１００００ｎＭ、０．１～５０００ｎＭ、０．５～１０００ｎＭ、１～５００ｎＭ、１～１００ｎＭ、５～１００ｎＭ、５～３０ｎＭの濃度で前処理されるものであってよく、例えば、１０ｎＭの濃度で前処理されるものであってよいが、これに限定されない。

【0078】

本発明の他の態様は、幹細胞由来のエクソソームを有効成分として含む薬剤学的組成物である。

【0079】

本発明において、薬剤学的組成物は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを有効成分として含むものであってよい。

【0080】

本発明において、薬剤学的組成物は、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（Ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔｅ；ＰＭＡ）、エキセンジン－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）からなる群から選ばれる一つ以上で前処理された幹細胞由来のエクソソームを含むものであってよい。

【0081】

本発明において、薬剤学的組成物は、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（Ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔｅ；ＰＭＡ）、エキセンジン－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）からなる群から選ばれる一つ以上で前処理された人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを含むものであってよい。

【0082】

本発明において、薬剤学的組成物は、ＢｘＣ幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－ｅ）、ＢｘＣ－Ａ１幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ａ１ｅ）、ＢｘＣ－Ｉ１０幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｉ１０ｅ）、ＢｘＣ－Ｇ６３幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｇ６３ｅ）、ＢｘＣ－Ｒ１１幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｒ１１ｅ）、及びＢｘＣ－Ｒ５６幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｒ５６ｅ）からなる群から選ばれる一つ以上のエクソソームを含むものであってよい。

【0083】

本明細書において、用語「有効成分として含む」とは、幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームの特定疾患に対する緩和、抑制、予防又は治療活性を達成するために十分な量を含むことを意味する。

【0084】

本発明において、薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容される担体を含むことができ、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルジネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、滑石、ステアリン酸マグネシウム及びミネラルオイルなどを含むことができるが、これに限定されるものではない。

【0085】

本発明において、薬剤学的組成物は、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などをさらに含むことができる。

【0086】

本発明において、薬剤学的組成物は、経口及び非経口で投与でき、例えば、静脈内注入、皮下注入、筋肉注入、腹腔注入、局所投与、鼻腔内投与、肺内投与、直腸内投与、硬膜内投与、眼球投与、皮膚投与、及び経皮投与などで投与できるが、これに限定されるものではない。

【0087】

本発明において、薬剤学的組成物は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病的状態、食べ物、投与時間、投与経路、排泄速度及び反応感応性のような要因によって様々に投与量が決められてよく、所望する治療又は予防に効果的な投与量と決定又は処方されてよい。例えば、本発明の薬剤学的組成物の１日投与量は、０．０００１～１０００ｍｇ／ｋｇであってよい。

【0088】

本発明において、薬剤学的組成物は、当該発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に実施できる方法によって、薬剤学的に許容される担体及び／又は賦形剤を用いて製剤化することによって単位容量の形態で製造されたり又は多回容量容器内に内入させて製造されたりしてよい。このとき、剤形は、オイル又は水性媒質中の溶液、懸濁液又は乳化液の形態であるか、エキス剤、散剤、坐剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤又はカプセル剤の形態であってもよく、分散剤又は安定化剤をさらに含んでよいが、これに限定されるものではない。

【0089】

本発明の薬剤学的組成物の投与容量は、患者の年齢、体重、性別、投与形態、健康状態及び疾患の程度によって異なってよく、医師又は薬剤師の判断によって一定時間間隔で１日１回～数回に分割投与されてもよい。例えば、有効成分含有量を基準に１日投与量が１～１０００μｇ／ｍｌであってよいが、これは平均的な場合を例示するもので、個人別にその投与量は増減してよい。

【0090】

本発明において、薬剤学的組成物は、心疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物であってよい。

【0091】

本発明に係る薬剤学的組成物は、心疾患の緩和、抑制、予防又は治療の効果に優れ、特に、ＢｘＣ幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－ｅ）、ＢｘＣ－Ａ１幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ａ１ｅ）、ＢｘＣ－Ｉ１０幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｉ１０ｅ）、ＢｘＣ－Ｇ６３幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｇ６３ｅ）、ＢｘＣ－Ｒ１１幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｒ１１ｅ）、及びＢｘＣ－Ｒ５６幹細胞由来のエクソソーム（ＢｘＣ－Ｒ５６ｅ）からなる群から選ばれる一つ以上のエクソソームは、別の物質が前処理されていない幹細胞から分離されたエクソソームに比べて、血管内皮細胞の増殖率、生存率を向上させ、心筋細胞を再生し保護する効果に優れるので、心疾患の緩和、抑制、予防及び治療に利用可能である（図３Ａ～図６Ｃ及び図１３Ａ～図１３Ｄ参照）。

【0092】

本発明において、「心疾患」は、狭心症（ＡｎｇｉｎａＰｅｃｔｏｒｉｓ）、心筋梗塞（ＭｙｏｃａｒｄｉａｌＩｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、心臓弁膜症（Ｖａｌｖｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ）、心不全（Ｃａｒｄｉａｃｆａｉｌｕｒｅ）、心臓肥大（ＣａｒｄｉａｃＨｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ）、不整脈（Ａｒｒｈｙｔｈｍｉａ）、心嚢炎（Ｐｅｒｉｃａｒｄｉｔｉｓ）、心内膜炎（Ｅｎｄｏｃａｒｄｉｔｉｓ）からなる群から選ばれるものであってよいが、これに限定されない。

【0093】

本発明の一具現例において、心疾患は虚血性心疾患であってよい。

【0094】

本明細書上の用語「虚血性心疾患（ｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ）」は、心臓に血液を供給する冠状動脈が狭くなり、心臓筋肉への血液供給が不足する虚血現象が現れることを意味する。代表には狭心症、心筋梗塞症が含まれ、深刻な場合、心停止を誘発してしまう。症状としては胸の疼痛が典型的であるが、多く進行した場合には心臓機能低下による心不全によって呼吸困難、不整脈を誘発することもあり、動脈硬化症が主要原因とされている。

【0095】

本発明の一具現例において、虚血性心疾患は、狭心症、心筋梗塞、心不全からなる群から選ばれてよいが、これに限定されるものではない。

【0096】

本発明において、薬剤学的組成物は、炎症性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物であってよい。

【0097】

本明細書上の用語「炎症性疾患」は、アトピー性皮膚炎、浮腫、皮膚炎、アレルギー、喘息、結膜炎、歯周炎、鼻炎、中耳炎、咽頭炎、扁桃炎、肺炎、胃潰瘍、胃炎、クローン病、大膓炎、痔、痛風、強直性脊椎炎、リウマチ性狼瘡、全身性エリテマトーデス、線維筋痛症（ｆｉｂｒｏｍｙａｌｇｉａ）、乾癬性関節炎、骨関節炎、リウマチ性関節炎、肩関節周囲炎、腱炎、腱鞘炎、筋肉炎、肝炎、膀胱炎、腎臓炎、シェーグレン症候群（ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓｓｙｎｄｒｏｍｅ）、及び多発性硬化症からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であってよいが、これに限定されるものではない。

【0098】

本発明に係る薬剤学的組成物は、炎症性疾患の緩和、抑制、予防又は治療効果に優れ、本発明の具体的な一実施例において、ＬＰＳで刺激して炎症反応が誘導されたマクロファージに本発明に係る薬剤学的組成物を処理してＴＮＦ－α、ＩＬ－１β及びＩＬ－６の発現量を測定した結果、対照群に比べてＴＮＦ－α、ＩＬ－１β及びＩＬ－６の発現量が相対的に大きく減少したことを確認した。（図７Ａ～図８Ｃ参照）

【0099】

また、本発明の具体的な一実施例において、ＩＬ－４、ＩＬ－１３で処理されて誘導された再生性マクロファージに、本発明に係る薬剤学的組成物を処理してＣＤ２０６、ＡＲＧ－１及びＩＬ－１０の発現量を測定した結果、対照群に比べてＣＤ２０６、ＡＲＧ－１及びＩＬ－１０の発現量が大きく減少しないことを確認した（図９Ａ～図９Ｃ）。

【0100】

本発明において、薬剤学的組成物は、免疫疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物であってよい。

【0101】

本明細書上の用語「免疫疾患」は、特定免疫反応が起きる場合に問題になる疾患を意味し、免疫疾患は、自己免疫疾患、移植拒絶反応、移植片対宿主病であってよい。

【0102】

自己免疫疾患は、クローン病、エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、橋本甲状腺炎、悪性貧血、アジソン病、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、慢性疲労症候群、線維筋痛症、甲状腺機能低下症と亢進症、強皮症、ベーチェット病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、重症筋無力症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒｅ’ｓｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ギランバレー症候群（Ｇｕｉｌｉａｎ－Ｂａｒｒｅｓｙｎｄｒｏｍｅ）、シェーグレン症候群（Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓｓｙｎｄｒｏｍｅ）、白斑症、子宮内膜症、乾癬、白斑症、全身性強皮症、喘息又は潰瘍性大膓炎などであってよいが、これに限定されるものではない。

【0103】

本発明に係る薬剤学的組成物は、免疫疾患の緩和、抑制、予防又は治療効果に優れ、本発明の具体的な一実施例において、ＬＰＳで刺激して炎症反応が誘導されたマクロファージに、本発明に係る薬剤学的組成物を処理してＴＮＦ－α、ＩＬ－１β及びＩＬ－６の発現量を測定した結果、対照群に比べてＴＮＦ－α、ＩＬ－１β及びＩＬ－６の発現量が相対的に大きく減少したことを確認した（図７Ａ～図８Ｃ参照）。

【0104】

【0105】

本発明において、薬剤学的組成物は、線維性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物であってよい。

【0106】

本明細書上の用語「線維性疾患」は、様々な原因によって臓器の一部が固まる現象を示す疾患を意味し、例えば、腎繊維症、肝繊維症、肺繊維症などを含むことができるが、これに限定されるものではない。

【0107】

本明細書上の用語「腎繊維症」とは、腎臓組織で発生する過剰の炎症反応、上皮細胞の線維化など、様々な原因によって腎臓組織又は血管が硬く固まって腎臓の機能を喪失する症状を意味する。

【0108】

本発明に係る薬剤学的組成物は、線維性疾患の緩和、抑制、予防又は治療効果に優れ、本発明の具体的な一実施例において、ＴＧＦ－β１で線維化が誘導された線維芽細胞に、本発明に係る薬剤学的組成物を処理してα－ＳＭＡ及びＣＴＧＦの発現量を測定した結果、対照群に比べてα－ＳＭＡ及びＣＴＧＦの発現量が大きく減少したことを確認した（図１０Ａ～図１２Ｂ参照）。

【0109】

本発明において、薬剤学的組成物は、血管疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物であってよい。

【0110】

本明細書上の用語「血管疾患」は、血管組織の損傷が起き、これによって血管内膜が厚くなる症状を有する疾患を意味し、血管疾患は、血管肥大、不安定狭心症（ｕｎｓｔａｂｌｅａｎｇｉｎａ）、急性心筋梗塞（ａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、動脈硬化症、ステント内再狭窄（ｉｎ－ｓｔｅｎｔｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ）であってよいが、これに限定されるものではない。

【0111】

本発明に係る薬剤学的組成物は、血管疾患の緩和、抑制、予防又は治療効果に優れ、本発明の具体的な一実施例において、血管内皮細胞又は過酸化水素によって損傷した血管内皮細胞に、本発明に係る薬剤学的組成物を処理して血管内皮細胞の増殖率、生存率及び血管内皮細胞のチューブ長、ノード、数を測定した結果、対照群に比べて血管内皮細胞の増殖率及び生存率が向上し、血管内皮細胞のチューブ長、ノード、数が全て増加したことを確認した（図４Ａ～図６Ｃ参照）。

【0112】

本発明の他の態様は、幹細胞由来エクソソームを有効成分として含む食品組成物である。

【0113】

本発明に係る食品組成物は、上述した薬剤学的組成物と同一に、本発明に係る幹細胞由来のエクソソームを含むので、これらの両者に共通する内容は、本明細書の過度な複雑性を避けるためにその記載を省略する。

【0114】

本発明に係る食品組成物は、食品の製造時に一般に添加される成分を含むことができ、例えば、タンパク質、炭水化物、脂肪、栄養素、調味剤及び香味剤を含むことができるが、これに限定されるものではない。

【0115】

本発明に係る食品組成物に含有可能な炭水化物としては、ブドウ糖、果糖などのモノサッカライド、マルトース、スクロース、オリゴ糖などのジサッカライド、デキストリン、シクロデキストリンなどのようなポリサッカライド、及びキシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールが含まれてよいが、これに限定されるものではない。

【0116】

本発明に係る食品組成物に含有可能な香味剤は、タウマチン、ステビア抽出物などの天然香味剤、及びサッカリン、アスパルタムなどの合成香味剤を含むことができるが、これに限定されるものではない。

【0117】

本発明において、食品組成物は、心疾患の緩和、抑制又は改善用の食品組成物であってよい。

【0118】

本発明において、食品組成物は、炎症性疾患の緩和、抑制又は改善用の食品組成物であってよい。

【0119】

本発明において、食品組成物は、免疫疾患の緩和、抑制又は改善用の食品組成物であってよい。

【0120】

本発明において、食品組成物は、線維性疾患の緩和、抑制又は改善用の食品組成物であってよい。

【0121】

本発明において、食品組成物は、血管疾患の緩和、抑制又は改善用の食品組成物であってよい。

【0122】

本発明のさらに他の態様は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞を含む細胞治療剤である。

【0123】

本明細書上の用語「細胞治療剤」は、細胞と組織の機能を復元させるために、生きている自己（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ）、同種（ａｌｌｏｇｅｎｉｃ）、異種（ｘｅｎｏｇｅｎｉｃ）細胞を体外で増殖・選別したり、その他の方法で細胞の生物学的特性を変化させたりするなどの一連の行為によって治療、診断及び予防の目的で用いられる医薬品を意味する。

【0124】

本発明の一具現例において、細胞治療剤は、幹細胞治療剤であってよい。

【0125】

本発明の一具現例において、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞は、ＢｘＣ幹細胞、ＢｘＣ－Ａ１幹細胞、ＢｘＣ－Ｉ１０幹細胞、ＢｘＣ－Ｇ６３幹細胞、ＢｘＣ－Ｒ１１幹細胞、及びＢｘＣ－Ｒ５６幹細胞からなる群から選ばれる一つ以上の幹細胞を含んでよい。

【0126】

本発明において、細胞治療剤は、心疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の細胞治療剤であってよい。

【0127】

本発明において、細胞治療剤は、炎症性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の細胞治療剤であってよい。

【0128】

本発明において、細胞治療剤は、免疫疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の細胞治療剤であってよい。

【0129】

本発明において、細胞治療剤は、線維性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の細胞治療剤であってよい。

【0130】

本発明において、細胞治療剤は、血管疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の細胞治療剤であってよい。

【0131】

本発明のさらに他の態様は、次の段階を含む、幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを含む組成物の製造方法である：

【0132】

幹細胞又はその培養物からエクソソームを分離する分離段階。

【0133】

本発明において、方法は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを含む組成物の製造方法であってよい。

【0134】

本発明の一具現例において、分離段階は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞又はその培養物からエクソソームを分離することであってよい。

【0135】

【0136】

分離段階では、幹細胞の培養液を２００～４００×ｇで５～２０分間遠心分離して残存細胞や細胞片を除去し、上清を採取して９０００～１２０００×ｇで６０～８０分間遠心分離し、得られた上清を９００００～１２００００×ｇで８０～１００分間遠心して、ペレットとしてのエクソソームを得ることができる。

【0137】

本発明の一具現例において、方法は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞をピオグリタゾン、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート、エキセンジン－４、ヒアルロン酸、レスベラトロールからなる群から選ばれる一つ以上で前処理する前処理段階をさらに含んでよい。

【0138】

本発明の一具現例において、方法は、培養された人工多能性幹細胞からＳＳＥＡ－４（－）細胞を分離して培養し、ＢｘＣ幹細胞に分化させる選別培養段階をさらに含むことができる。

【0139】

本発明の一具現例において、方法は、細胞培養培地を用いて幹細胞を培養する細胞エクソソーム生産段階をさらに含んでよい。

【0140】

本発明に係るエクソソーム生産段階は、幹細胞からエクソソームの分泌又は生産を誘導する過程であり、本発明において、細胞培養培地は、当該分野で通常用いられるいかなる幹細胞培養用培地も含むことができ、例えば、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ）、ＭＥＭ（ＭｉｎｉｍａｌＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍ）、ＢＭＥ（ＢａｓａｌＭｅｄｉｕｍＥａｇｌｅ）、ＲＰＭＩ１６４０、ＤＭＥＭ／Ｆ－１０（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ：ＮｕｔｒｉｅｎｔＭｉｘｔｕｒｅＦ－１０）、ＤＭＥＭ／Ｆ－１２（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ：ＮｕｔｒｉｅｎｔＭｉｘｔｕｒｅＦ－１２）、α－ＭＥＭ（α－ＭｉｎｉｍａｌｅｓｓｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍ）、Ｇ－ＭＥＭ（Ｇｌａｓｇｏｗ’ｓＭｉｎｉｍａｌＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍ）、ＩＭＤＭ（Ｉｓｏｃｏｖｅ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｅｄｉｕｍ）、ＫｎｏｃｋＯｕｔＤＭＥＭ、Ｅ８（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ８Ｍｅｄｉｕｍ）などの商業的に製造された培地又は人為的に合成した培地が用いられてよいが、これに限定されるものではない。

【0141】

本発明の一具現例において、細胞培養培地は、炭素源、窒素源、微量元素成分、アミノ酸、抗生剤などの成分をさらに含むことができる。

【0142】

本発明の一具現例において、エクソソーム生産段階は、エクソソームが除去されたウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）で幹細胞を培養する追加培養段階を含んでよい。

【0143】

細胞培養培地に、エクソソームを除去したＦＢＳは、ウシ血清由来のエクソソームが多く含まれている一般ＦＢＳとは違い、エクソソームが除去され、幹細胞が分泌するエクソソームの他にＦＢＳに由来するエクソソームが混入することを防止することができる。

【0144】

本発明のさらに他の態様は、次の段階を含む、エクソソームを含む組成物の製造方法である：

【0145】

人工多能性幹細胞を培地で培養する第１培養段階；

【0146】

培養された人工多能性幹細胞からＳＳＥＡ－４（－）細胞を分離し培養してＢｘＣ幹細胞に分化させる選別培養段階；

【0147】

ＢｘＣ幹細胞を培養して間葉系幹細胞に分化させる第２培養段階；

【0148】

間葉系幹細胞に、ピオグリタゾン、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート、エキセンジン－４、ヒアルロン酸、レスベラトロールからなる群から選ばれる一つ以上の物質を前処理する前処理段階；

【0149】

前処理された間葉系幹細胞を培養してエクソソームを生産する生産段階；及び

【0150】

間葉系幹細胞又はその培養物からエクソソームを分離する分離段階。

【0151】

本発明の一具現例において、第１培養段階は、人工多能性幹細胞をＦＢＳ及びｂＦＧＦを含む培地で１～１０日間培養することであってよい。

【0152】

本発明の一具現例において、選別培養段階は、人工多能性幹細胞からＳＳＥＡ－４（－）細胞を分離し、ＦＢＳ及びｂＦＧＦを含む培地で１～１０日間培養してＢｘＣ幹細胞に分化させることであってよい。

【0153】

本発明の一具現例において、前処理段階は、間葉系幹細胞にピオグリタゾンを０．００１～１０００μＭ、０．００５～５００μＭ、０．０１～１００μＭ、０．０５～５０μＭ、０．１～２５μＭ、０．５～１５μＭ、１～１０μＭ、２～６μＭの濃度で前処理することであってよく、例えば、３μＭの濃度で前処理することであってよいが、これに限定されない。

【0154】

本発明の一具現例において、前処理段階は、間葉系幹細胞にホルボール１２－ミリステート１３－アセテートを１～１０００ｎＭ、５～５００ｎＭ、１０～２５０ｎＭ、１０～１００ｎＭ、１５～８０ｎＭ、２０～７０ｎＭの濃度で前処理することであってよく、例えば、５０ｎＭの濃度で前処理することであってよいが、これに限定されない。

【0155】

本発明の一具現例において、前処理段階は、間葉系幹細胞に、エキセンジン－４を０．０１～１００００ｎＭ、０．１～５０００ｎＭ、１～１０００ｎＭ、１～１００ｎＭ、１０～１００ｎＭ、１０～５０ｎＭ、１０～３０ｎＭの濃度で前処理することであってよく、例えば、２０ｎＭの濃度で前処理することであってよいが、これに限定されない。

【0156】

本発明の一具現例において、前処理段階は、間葉系幹細胞にヒアルロン酸を０．１～１０００μｇ／ｍｌ、０．５～１０００μｇ／ｍｌ、１～５００μｇ／ｍｌ、１～２００μｇ／ｍｌ、１～１００μｇ／ｍｌ、１～８０μｇ／ｍｌ、１～６０μｇ／ｍｌ、１０～６０μｇ／ｍｌの濃度で前処理することであってよく、例えば、４０μｇ／ｍｌの濃度で前処理することであってよいが、これに限定されない。

【0157】

本発明の一具現例において、前処理段階は、間葉系幹細胞にレスベラトロールを０．０１～１００００ｎＭ、０．１～５０００ｎＭ、０．５～１０００ｎＭ、１～５００ｎＭ、１～１００ｎＭ、５～１００ｎＭ、５～３０ｎＭの濃度で前処理することであってよく、例えば、１０ｎＭの濃度で前処理することであってよいが、これに限定されない。

【0158】

本発明の一具現例において、生産段階は、エクソソームが除去されたウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）で間葉系幹細胞を培養する追加培養段階を含んでよい。本発明において、方法は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを有効成分として含む心疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物の製造方法であってよい。

【0159】

本発明において、方法は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを有効成分として含む炎症性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物の製造方法であってよい。

【0160】

本発明において、方法は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを有効成分として含む免疫疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物の製造方法であってよい。

【0161】

本発明において、方法は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを有効成分として含む線維性疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物の製造方法であってよい。

【0162】

本発明において、方法は、人工多能性幹細胞由来間葉系幹細胞又はその培養物から分離されたエクソソームを有効成分として含む血管疾患の緩和、抑制、予防又は治療用の薬剤学的組成物の製造方法であってよい。

【0163】

本発明のさらに他の態様は、次の段階を含む、心疾患の緩和又は治療方法である：

【0164】