特許 7568644 チオ―ルまたはジスルフィド含有メイタンシノイドエステルおよびその中間体の調製のためのジアステロ選択的方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-10-07

(45)【発行日】2024-10-16

(54)【発明の名称】チオ―ルまたはジスルフィド含有メイタンシノイドエステルおよびその中間体の調製のためのジアステロ選択的方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 498/18 20060101AFI20241008BHJP

   A61K 31/537 20060101ALN20241008BHJP

   A61P 43/00 20060101ALN20241008BHJP

【ＦＩ】

C07D498/18 CSP

A61K31/537

A61P43/00 105

A61P43/00 111

【請求項の数】 9

(21)【出願番号】P 2021561939

(86)(22)【出願日】2020-04-09

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-06-16

(86)【国際出願番号】 EP2020060214

(87)【国際公開番号】W WO2020212256

(87)【国際公開日】2020-10-22

【審査請求日】2023-03-28

(31)【優先権主張番号】19170052.5

(32)【優先日】2019-04-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】591092198

【氏名又は名称】インデナ エッセ ピ ア

(74)【代理人】

【識別番号】100123788

【弁理士】

【氏名又は名称】宮崎 昭夫

(74)【代理人】

【識別番号】100127454

【弁理士】

【氏名又は名称】緒方 雅昭

(72)【発明者】

【氏名】フォンタナ、 ガブリエル

(72)【発明者】

【氏名】ベレッタ、 ルッジェロ

(72)【発明者】

【氏名】タッデイ、 マウリツィオ

(72)【発明者】

【氏名】プリンチョット、 サルヴァトーレ

【審査官】鳥居 福代

(56)【参考文献】

【文献】特表２００８－５２８４９３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００９－５０４６５５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１６－５００６５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】Angewandte Chemie, International Edition，2016年，Vol.55，pp.13263-13266

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＣＡＳＲＥＡＣＴ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｖ）で表されるメイタンシノイドエステルの製造方法であって、

【化1】

（式中、Ｒは水素または直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１－Ｃ_５のアルキル、アリール、ヘテロアリール、または直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１－Ｃ_５のアルカノイル、アリールオイルまたはヘテロアリールオイルであり、
Ｒ^４はＣ_１－Ｃ_５の直鎖若しくは分岐鎖のアルキルであり、
Ｒ^５は水素または直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１－Ｃ_５のアルキルであり、
アスタリスクは炭素原子がＬ－またはＤ－コンフィギュレーションのいずれかであることを示し、）
前記方法は、以下の工程、
ａ）式（ＩＩ）の化合物

【化2】

（式中、Ｒは先の定義のとおりであり）
を式（ＩＩＩ）のα－アジド酸と反応させ、

【化3】

（式中、Ｒ^４およびアスタリスクは先の定義のとおりであり）
式（ＩＶ）のメイタンシノイドα－アジドエステルを得る工程と、

【化4】

（式中、Ｒ、Ｒ^４およびアスタリスクは先の定義のとおりであり）
ｂ）式（ＩＶ）のメイタンシノイドα－アジドエステル中のアジド基を還元して、式（Ｖ）のメイタンシノイドα－アミノエステルを得る工程と、
を含む製造方法。

【請求項2】

Ｒがメチルである請求項１に記載の方法。

【請求項3】

Ｒ^４がメチルである請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

Ｒ^５がメチルである請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

Ｒ ^４ がメチルであり、Ｒ ^５ が水素である請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

工程ａ）が、脱水剤、ルイス酸および有機溶媒の存在下で行われる請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

式（Ｉ）で表されるメイタンシノイドエステルの製造方法であって、

【化5】

（式中、Ｒ、Ｒ^４、Ｒ^５およびアスタリスクは先に定義したとおりであり、Ｒ^１は－Ｘ－Ｓ－Ｒ^２であり、ここでＸは直鎖または分岐鎖のＣ_１－Ｃ_５アルキレンであり、Ｒ^２は水素、直鎖若しくは分岐鎖のアルキルであるか、またはＲ^１は－Ｘ－Ｓ－Ｓ－Ｒ^３であり、ここでＲ^３は直鎖または分岐鎖のアルキルであり）、
前記方法は、請求項１に記載の方法に従って調製された、式（Ｖ）のメイタンシノイドα－アミノエステルの、

【化6】

（式中、Ｒ、Ｒ^４、Ｒ^５およびアスタリスクは先に定義したとおりであり）、
式（ＩＸ）のカルボン酸またはその反応性誘導体と一緒の反応を含み、
（ＩＸ） Ｒ^３－Ｓ－Ｓ－Ｘ－ＣＯＯＨ
（式中、ＸおよびＲ^３は先に定義されたとおりであり）、
メイタンシノイドエステル（Ｉ）を得る（式中、Ｒ^１は先に定義されたとおりの－Ｘ－Ｓ－Ｓ－Ｒ^３基である）、
および任意選択で、ジスルフィド含有メイタンシノイドエステル（Ｉ）を還元して、メイタンシノイドエステル（Ｉ）（式中、Ｒ^１は－Ｘ－ＳＨ基であり、Ｘは先に定義されたとおりである）を得る製造方法。

【請求項8】

Ｒ^３がメチルである請求項７に記載の方法。

【請求項9】

下式（ＩＶ）のメイタンシノイドα－アジドエステル：

【化7】

（式中、Ｒは、直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１－Ｃ_５ のアルキル、アリール、ヘテロアリール、直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１－Ｃ_５のアルカノイル、アリールオイルまたはヘテロアリールオイルであり、
Ｒ^４はＣ_１－Ｃ_５ の直鎖または分岐鎖のアルキルであり、アスタリスクは、炭素原子がＬ－またはＤ－コンフィギュレーションのいずれかであることを示す）。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明はメイタンシノイドエステルの調製のためのジアステレオ選択的方法、特に、Ｃ－３側鎖にチオール－またはジスルフィド基を含むメイタンシノイドエステルの調製のためのジアステレオ選択的方法に関する。

【背景技術】

【0002】

メイタンシノイドは、細胞傷害活性を与えられた天然の大環状化合物（「アンサマクロライド」とも呼ばれる）である。特に、メイタンシノイドは、β－チューブリン上の特異的部位に結合する抗有糸分裂化合物およびチューブリン重合阻害剤である（Ballantyneら、Drugs 2013 73 755－765）（Protaら、PNAS 2014 111（38）13817－13821）。

【0003】

これらの大環状化合物の先導である、下式のメイタンシン：

【0004】

【化1】

【0005】

(式中、Ｃ－３ヒドロキシル基は、Ｎ－アシル－Ｎ－メチルアラニンでエステル化されている)は、1972年にアフリカ低木Maytenus ovatusから最初に単離された(Kupchan S.M.ら、J.Am.Chem.Soc.,1972, 94（4）, pp 1354）。その後の研究により、メイタンシンのより良好な単離および特性化、ならびにＣ－３側鎖においてメイタンシンとは異なる他のメイタンシノイドの同定がもたらされた。例えば、他のメイタンシノイドは、Maytenus buchananii (Kupchan S. M. ら、J. Chem. Commun., 1972, （19） 1065; US 3,896,111）、Putterlickia verrucose (Kupchan S. M. ら、J. Am. Chem. Soc., 1975, 18）、Maytenus serrata (Kupchan S. M. ら、J. Org. Chem. 1977 42 2349）、Maytenus rothiana(Myllymaki R. W.ら、J. Nat. Prod., 1981, 44 （3）, pp 340－347）、Maytenus ilicifolia Journal of Natural Products (1982）, 45（4）, 509－10）。

【0006】

さらなる研究により、メイタンシノイドもまた、主にNocardia spp.に属する微生物を使用する発酵方法によって産生され得るという発見がなされた（US 4,151,042; Asai. M. ら、Tetrahedron 1979 35 9 1079; Nakahama K.ら、J. Antibiot. 1981, 34（5）489; US 4,162,940; US 4,225,494; US 4,320,200）; US 4,360,462; U.S.Pat. No.4,356,265; Hatano K.ら、Agr. Biol. Chem. 1984 48 （7） 1721；US 6,573,074; US 6,790,954; US 7,192,750）。

【0007】

しかし、メイタンシノイドがナノモル濃度でさえ細胞毒性活性を発揮する能力は、抗体薬物結合体（ＡＤＣ）複合体の出現まで、抗癌剤としてのそれらの治療的使用が制限されてきた(Chiari R. V. J.ら、J. Med. Chem. 2006, 49, 4392）。

【0008】

抗体に結合させるために、メイタンシンのＣ－３ Ｎ－アシル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニルエステル側鎖が、次式のチオールまたはジスルフィド含有Ｎ－アシル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニルエステル側鎖に変換される：

【0009】

【化2】

【0010】

(式中、Ｘは直鎖または分枝鎖アルキレンであり、Ｒは水素または－Ｓ－Ｒ’であり、ここで、Ｒ’は直鎖または分枝鎖低級アルキルであり、波線は、メイタンシンの式の残りが特定されていないことを示す)。得られた化合物（以下、「チオールまたはジスルフィド含有メイタンシノイドエステル」という）は、次に抗体と結合される。

【0011】

チオール含有メイタンシノイドエステルの例は、下式のメイタンシノイドＭＤ１：

【0012】

【化3】

【0013】

および下式のＭＤ４：

【0014】

【化4】

【0015】

である。

【0016】

チオール－またはジスルフィド－含有メイタンシノイドエステルの調製のための最初の合成アプローチ（US 5,208,020、US 5,416,064; US 6,333,410; US 7,276,497）は、下式のメイタンシノールから開始する。

【0017】

【化5】

【0018】

これは、例えば、US 4,151,042およびUS 7,411,063に開示されているような天然メイタンシノイドから得ることができる。

【0019】

この方法によれば、メイタンシノールは活性化剤［ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）］およびルイス酸（ＺｎＣｌ_２）の存在下で、Ｎ－メチル－Ｌ－アラニンジスルフィド含有化合物でエステル化され、反応の完了時に、対応するジスルフィド含有メイタンシノールエステルが得られる。ジスルフィド含有メイタンシノイドエステルの対応するチオール含有メイタンシノイドエステルへの転化は、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）による還元によって達成することができる。この合成アプローチの主な欠点は、Ｎ－メチル－Ｌ－アラニンジスルフィド含有化合物のα－炭素の異性化である。実際、マイタンシノールとのエステル化反応のためにエナンチオプル化合物を使用しても、メイタンシノイドエステルのジアステレオマー混合物が得られる。所望のＬ－ジアステレオ純粋なメイタンシノイドエステルは時間がかかり、高価なクロマトグラフィー分離プロセスの後にのみ得ることができ、これはメイタンシノイドエステルの極端な毒性のために、高い封じ込め環境で実施しなければならない。

【0020】

このような課題を克服するために、メイタンシノールをジスルフィド含有Ｎ－メチル－Ｌ－アラニン無水物、例えば下式の無水物と反応させることが提案されている（US 7,301,019）。

【0021】

【化6】

【0022】

【化7】

【0023】

これは、下式のＮ－メチル－Ｌ－アラニンジスルフィド含有誘導体から調製される。

【0024】

次いで、この無水物を、メイタンシノールをＺｎ（ＮＳｉＭｅ_３）_２（亜鉛ビス［ビス（トリメチルシリル）アミド］）で処理することによって生成したメイタンシノールアニオンと反応させて、下式のメイタンシノールエステルを得る。

【0025】

【化8】

【0026】

しかしながら、この方法は、Ｎ－メチル－Ｌ－アラニンジスルフィド含有誘導体の半分が対称無水物の合成のために浪費されるという欠点を有する。

【0027】

US 7,301,019によれば、ジスルフィド含有アミノ酸を最初にフッ化アシルとして活性化し、次いでメイタンシノールアニオンと反応させて、対応するメイタンシノイドエステルを得る。所望のメイタンシノイドエステルに有利な転化率の向上にもかかわらず、この方法は不安定性および／または副反応を被る危険な、毒性および腐食性試薬の管理などのフッ化アシルの調製に関連する課題に依然として影響される(Schoenebeck F.ら、Org. Lett. 2017, 19, 5740－5743）。

【0028】

N－メチル－L－アラニン側鎖の完全またはほぼ完全なα－異性化を回避するメイタンシノイドエステルのさらなる調製方法は、２つの工程からなる：第１の工程が次式の環状無水物によるメイタンシノールのアシル化であり：

【0029】

【化9】

【0030】

(式中、Ｖは水素若しくは直鎖または分枝鎖アルキルである)
下式のメイタンシノイドα－アミノエステルを与える：

【0031】

【化10】

【0032】

(式中、Ｖは先に定義したとおりである)
第２の工程は、脱水剤の存在下での上記メイタンシノイドα－アミノエステルと適当なジスルフィド含有カルボン酸との反応である。第１の工程において、メイタンシノールの転化率は所望のＬ－メイタンシノイドαアミノエステルは有利には50％であり、望ましくないＤ－メイタンシノイドαアミノエステルは5％であり、残りの45％は未反応出発物質である。第２の工程では、得られる生成物がクロマトグラフィー精製後に単一ジアステレオ異性体として得られるＬ－ジスルフィド含有メイタンシノイドエステルは有利には95：5混合物である。

【0033】

この手順の第１の改良（US 7,598,375）では、第１の反応工程におけるルイス酸の添加が対応するＬ－α－アミノメイタンシノイドエステルへのメイタンシノールの転化率を71％まで増加させた。第２の改良（US 9，012，629）において、モレキュラーシーブのような乾燥剤の添加は、第１の工程において、80％の転化率に達することを可能にした。

【0034】

これまでに達成された全ての改善にもかかわらず、メイタンシノールアニオンを介したメイタンシノールのアシル化は湿度に対するアニオンの極端な感受性のために、スケールアップするための困難な手順のままである。この理由のために、側鎖におけるキラル中心の異性化を回避し、同時に、試薬としてのメイタンシノールイオンの使用を回避する、メイタンシノイドエステルのジアステレオ選択的調製のための新規で、強固で、容易に再現可能な手順を開発する必要性が依然として感じられている。

【発明を実施するための形態】

【0035】

メイタンシノイドリング状のＣ－３炭素原子上に下式（ＭＯ-Ｉ）の部分を含むメイタンシノイドエステルの合成におけるキラル中心の異性化の課題が見出された：

【0036】

【化11】

【0037】

ここで、＊はＬまたはＤコンフィギュレーションのキラル炭素原子を表し、メイタンシノールまたはその類似体をエナンチオピュアα－アジド酸と反応させ、続いてアジド基を還元することによって都合よく克服することができる。メイタンシノールまたはその類似体とα－アジド酸との反応は、メイタンシノイド環のＣ－３炭素原子上に、下式（ＭＯ－ＩＩ）の部分を有するメイタンシノイド誘導体（以下、「メイタンシノイドα－アジドエステル」と呼ぶ）を与える：

【0038】

【化12】

【0039】

また、アルファアジドエステルの還元により、メイタンシノイド環のC－３炭素原子上に、下式（MO－III）の部分を有するメイタンシノイド誘導体（以下、「メイタンシノイドアルファ－アミノエステル」という）が提供される：

【0040】

【化13】

【0041】

疑義を避けるために、波線（すなわち曲がりくねった線）は、メイタンシノイド化合物の式の特定されていない部分を示す。

【0042】

また、疑義を避けるために、本明細書において、「エナンチオピュアの」または「鏡像体的に純粋である」α－アジド酸は、鏡像体過剰％（Ｌ／ＤまたはＤ／Ｌ、式ＭＯ－ＩＩの部分におけるキラル炭素原子に関して）が95％以上、好ましくは96％以上、より好ましくは97％以上、さらにより好ましくは98％以上、最も好ましくは99％以上であるものである。好ましい実施形態によれば、高光学純度のα－アジド酸は、ＬエナンチオマーがＤエナンチオマーより優勢であり、％エナンチオマー過剰率が95％以上、好ましくは96％以上、より好ましくは97％以上、さらにより好ましくは98％以上、最も好ましくは99％以上であるものである。

【0043】

本明細書において、メイタンシノール類似体は、20位のメトキシ基が、ヒドロキシ、アルコキシ、ヘテロ（アリールオイル）、アリールオイル、アルカノイル、アシルオキシ、（ヘテロ）アロイルオキシで置換されているメイタンシノール誘導体である。

【0044】

第1の態様において、本発明は、下式（Ｖ）のメイタンシノイドエステルの調製方法に関する。

【0045】

【化14】

【0046】

(式中、Ｒは水素または直鎖若しくは分岐鎖のＣ₁－Ｃ₅のアルキル、アリール、ヘテロアリール、または直鎖若しくは分岐鎖のＣ₁－Ｃ₅のアルカノイル、アリールオイルまたはヘテロアリールオイルであり、
Ｒ⁴はＣ₁－Ｃ₅の直鎖または分岐鎖のアルキルであり、
Ｒ⁵は水素または直鎖若しくは分岐鎖のＣ₁－Ｃ₅のアルキルであり、
アスタリスクは炭素原子がＬ－またはＤ－コンフィギュレーションのいずれかであること、好ましくはＬ－コンフィギュレーションを示す。)
前記方法は、以下の工程、
前記方法は、以下の工程を含む：
a) 式IIの化合物を、

【0047】

【化15】

【0048】

(式中、Ｒは先の定義のとおりであり)
式IIIのα－アジド酸と反応させ、

【0049】

【化16】

【0050】

(式中、Ｒ^４およびアスタリスクは先の定義のとおりであり)
式（IV）のメイタンシノイドα－アジドエステルを得る工程と、

【0051】

【化17】

【0052】

(式中、Ｒ、Ｒ^４およびアスタリスクは先の定義のとおりであり)
b) 式（IV）のメイタンシノイドα－アジドエステル中のアジド基を還元して、式（V）のメイタンシノイドα－アミノエステルを得る工程と、
を含む製造方法。

【0053】

一態様では、式（III）、（ＩＶ）および（Ｖ）において、Ｒ⁴は好ましくはメチルであり、式（Ｖ）において、Ｒ⁵は好ましくはＣ₁－Ｃ₅アルキル、より好ましくはメチルである。

【0054】

疑義を避けるために、本明細書で報告されるすべての構造式において、アステリスクは炭素原子がＬ-またはＤ-コンフィギュレーションのいずれかにあり、％鏡像体過剰率（Ｌ／ＤまたはＤ／Ｌ）が95％以上、好ましくは96％以上、より好ましくは97％以上、さらにより好ましくは98％以上、最も好ましくは99％以上であることを示す。好ましい実施形態によれば、炭素原子はＬ－コンフィギュレーションにあり、％エナンチオマー過剰率は95％以上、好ましくは96％以上、より好ましくは97％以上、さらにより好ましくは98％以上、最も好ましくは99％以上である。

【0055】

第２の態様において、本発明は、メイタンシノイドαアミノエステル（Ｖ）を、下式（Ｉ）のジスルフィドまたはチオール含有メイタンシノイドエステルに転化するための方法に関する。

【0056】

【化18】

【0057】

(式中、Ｒ、Ｒ⁴およびＲ⁵およびアスタリスクは先に定義したとおりであり、Ｒ¹は－Ｘ－Ｓ－Ｒ²であり、ここでＸは直鎖または分岐鎖のＣ₁－Ｃ₅アルキレンであり、Ｒ²は水素、直鎖若しくは分岐鎖アルキル、好ましくは水素、または－Ｓ－Ｒ³であり、ここでＲ³は、水素または直鎖若しくは分岐鎖アルキル、好ましくはメチルである。

【0058】

式（IV）のメイタンシノイドα－アジドエステルおよび式（V）のメイタンシノイドα－アミノエステルは、本発明のさらなる態様を表す。好ましくは、式（IV）のメイタンシノイドアルファ－アジドエステルおよび式（V）のメイタンシノイドアルファ－アミノエステルにおいて、Ｃ－３側鎖上のキラル炭素原子はＬ－コンフィギュレーションにあり、95％以上の鏡像異性体純度％を有し、先に定義された好ましい純度範囲を含む。

【0059】

本発明によれば、メイタンシノイドα－アジドエステル（IV）は、下式（II）の化合物を、

【0060】

【化19】

【0061】

(式中、Rは先の定義のとおりである)
下式（III）のα－アジド酸と、

【0062】

【化20】

【0063】

(式中、Ｒ⁴およびアスタリスクは、先の定義のとおりである。)
脱水剤、ルイス酸および有機溶剤の存在下で反応させることによって得られる。

【0064】

好ましい態様によれば、式（II）の化合物は、マイタンシノール、すなわち、Ｒがメチルである式（ＩＩ）の化合物である。好ましい態様によれば、アジドは、Ｒ⁴がメチル、すなわちアジドアラニン、最も好ましくはＬ－アジドアラニンである式（III）のエナンチオピュアアジドである。特に好ましい態様によれば、メイタンシノールをＬ－アジドアラニンと反応させて、ＲおよびＲ⁴が両方ともメチルであり、アジドアラニン残基のキラル炭素がＬ-コンフィギュレーションを有する式（ＩＶ）の化合物を与える。式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）のアジドとの間のモル比は、典型的には1：1～1：10、好ましくは1：1～1：6であり、より好ましくは、モル比は1：4である。

【0065】

ルイス酸は、ＺｎＣｌ_２、ＺｎＴｆＯ_２、ＳｃＴｆＯ_３、ＦｅＣｌ_３、ＩｎＣｌ_３、ＩｎＴｆＯ_３、ＡｌＣｌ_３、ＴｉＣｌ₄およびＣｕＴｆＯ₃から選択できる。推奨される観点からは、ルイス酸はＺｎＣｌ₂である。

【0066】

有機溶媒は典型的には塩化メチレン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、２－メチルテトラヒドロフラン（２－Ｍｅ－ＴＨＦ）、酢酸メチル（ＡｃＯＭｅ）、酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）から選択され、好ましい態様によれば、有機溶媒は塩化メチレン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）である。

【0067】

反応は、周囲温度および周囲圧力で実施される。本出願では、周囲温度は20℃～25℃を意味し、周囲圧は90kPa～110kPaを意味する。

【0068】

典型的には、薄層クロマトグラフィー（好ましくは溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ 9：1を用いる）によって、反応の進行をモニターする。反応の完了時（典型的には4～18時間）、典型的には適当な有機溶剤、典型的には塩化メチレン（ＣＨ₂Ｃl₂）を加えることによって反応液をクエンチし、次いで濾過し、ＮａＨＣＯ₃およびブラインで洗浄し、乾燥させる。反応粗物は、当技術分野で公知の方法に従って、典型的にはカラムクロマトグラフィーによって精製に供することができる。特に、RおよびR₄の両方がメチルである式（IV）の化合物は、溶離剤としてメタノール（ＭｅＯＨ）および塩化メチレン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって単離することができる。しかしながら、本発明の特に好都合な態様によれば、メイタンシノイドアルファ－アジドエステルは精製に供されないが、本明細書中以下に記載されるように、式（V）のメイタンシノイドアルファ－アミノ酸エステルに直接変換される。

【0069】

本発明によれば、式（V）のメイタンシノイドαアミノエステルの調製は、式（IV）のメイタンシノイドα－アジドエステル中のアジド基の還元を含む。従って、本発明によれば、式（V）のメイタンシノイドα－アミノエステルの製造方法は、以下の工程を含む：
a) 先に定義した式（ＩＩ）の化合物を先に定義した式（ＩＩＩ）のα－アジド酸と反応させて、先に定義した式（ＩＶ）のメイタンシノイドアルファ－アジドエステルを得、b）式（IV）のメイタンシノイドアルファ－アジドエステル中のアジド基を還元して、式（V）のメイタンシノイドアルファ－アミノエステルを得る。

【0070】

Ｒ⁵が水素である式（V）の化合物を調製するために、工程b）は、式（IV）の化合物を当技術分野で公知の方法に従って水素化することによって、または式（V）の化合物をシュタウディンガー反応に供することによって達成することができる。好都合には工程a）で得られる式（IV）のα－アジドエステルは精製されないが、直接工程b）に供される；最も好都合には工程a）およびb）がワンポットで実施され、すなわち、α－アジドエステルは反応容器から取り出されず、工程a）が実施され、工程b）を実施するための試薬が同じ容器に添加される。より詳細には、シュタウディンガー反応を達成するために、式（IV）の化合物を極性非プロトン性有機溶剤、好ましくはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解し、次いでトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ₃）をモル量1：1～1：5、好ましくは1：2および水（好ましくはＴＨＦの体積に対して7％～8％体積の水）の範囲で添加し、反応が完了するまで（典型的には24～48時間）周囲温度および圧力で攪拌下に維持し；反応は典型的には溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂およびＭｅＯＨを用いて、ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ体積比9：1で薄層クロマトグラフィーによってモニターすることができ、次いで反応混合物を減圧下で蒸発させ、溶離剤としてメタノール（ＭｅＯＨ）および塩化メチレン（ＣＨ₂Cl₂）を使用するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによって精製する。

【0071】

Ｒ⁵がＣ₁－Ｃ₅直鎖若しくは分枝鎖アルキルである式（Ｖ）の化合物を調製するために、工程b）は、式（IV）の化合物を、
式（ＶI）のアルデヒドの存在下で、
Ｒ⁶ＣＨＯ (VI)
(式中、Ｒ⁶は互いに独立して、直鎖若しくは分枝鎖のＣ₁－Ｃ₄アルキルである)
または式（ＶＩＩ）のケトンとともに、
Ｒ⁷Ｃ（Ｏ）Ｒ⁸の （VII）
(式中、Ｒ⁷およびＲ⁸は、直鎖若しくは分枝鎖のＣ₁－Ｃ₄のアルキルである)
アザ－ウィッティヒ反応に供することによって達成することができる。

【0072】

好ましい態様によれば、工程b）は、アルデヒドを使用して実施され；より好ましくは工程b）が式（ＶＩ）のアルデヒドとしてホルムアルデヒドを使用して実施される。より詳細には、工程a）で得られた式（IV）のメイタンシノイドα－アジドエステルを、典型的には塩化メチレン（ＣＨ₂Cl₂）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、2－メチルテトラヒドロフラン（２－Ｍｅ－ＴＨＦ）、酢酸メチル（ＡｃＯＭｅ）、酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）、好ましくは塩化メチレン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）から選択される有機溶剤に、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ₃）を1：1～1：5、好ましくは1：2の範囲のモル量で添加し、室温および常圧で一晩攪拌し続ける。その後、アルデヒド（ＶＩ）を、式（ＩＶ）の化合物に対して典型的には2：1～10：1、好ましくは5：1の範囲のモル量で添加し、反応混合物を、式（ＩＶ）の化合物が完全に消失するまで、室温および加圧下で攪拌しながら放置する（反応は、典型的にはＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ体積比9：1で、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂₂およびＭｅＯＨを用いた薄層クロマトグラフィによってモニターする）。次いで、0℃に冷却し、適当な溶剤、典型的にはメタノール（ＭｅＯＨ）に溶解した還元剤、典型的にはＮａＢＨ₄を加える。還元反応が完了したとき（典型的には約1～2時間）、反応混合物を、通常はＮａ₂ＣＯ₃水溶液を加え、洗浄することによって後処理し、次いで得られた有機相を乾燥し、得られた残渣を公知の方法に従って、典型的にはシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、メイタンシノイドα－アミノエステル（V）を得る。

【0073】

あるいはＲ⁵がＣ₁－Ｃ₅直鎖または分枝鎖アルキルである式（Ｖ）のメイタンシノイドαアミノエステルを調製するために、工程b）はＲ⁵が水素である式（V）のメイタンシノイドαアミノエステルを式（ＶＩＩＩ）の化合物と公知の方法により反応させることによって達成される：
Ｒ⁵－Ｌ (VIII)
(式中、Ｒ⁵は先に定義したとおりであり、Ｌは脱離基を表す)
典型的には、脱離基Ｌは、アルキルスルホニルまたはアリールスルホニル基であり、好ましくはハロゲン原子、最も好ましくはフッ素原子で置換されたアルキルスルホニルまたはアリールスルホニル基である。好ましい脱離基Ｌは、とりわけＲ⁵がメチルである場合、トリフルオロメチルスルホニル基（トリフラート）である。

【0074】

別法として、Ｒ⁵がメチルである式（Ｖ）のメイタンシノイドアルファアミノエステルを製造するために、アルキル化反応は以下の化合物：ＭｅＩ、Ｍｅ₂ＳＯ₄、（Ｍｅ₃Ｏ）ＢＦ₄のいずれか１つを用いて、Lebleuら、Chem. Commun. 2014, 50 1836に開示されている方法に従って行うことができる。.
本発明によれば、メイタンシノイドα－アミノエステル（V）の、C－3側鎖にジスルフィド基を含むメイタンシノイドエステルへの転化は、メイタンシノイドα－アミノエステル（V）と、ジスルフィド部分を含むカルボン酸またはその反応性誘導体との反応によって達成することができる。特に、Ｒ¹が－Ｘ－Ｓ－Ｓ－R³基(ＸおよびR³がは先に定義された通り)であるメイタンシノイドエステル（I）への転化は、化合物（V）と式（ＩＸ）のカルボン酸、
(ＩＸ) Ｒ³－Ｓ－Ｓ－Ｘ－ＣＯＯＨ
(式中、ＸおよびＲ³は、先に定義した通りである)か、またはその反応性誘導体を有する。
またはその反応性誘導体との反応により達成される。

【0075】

式（IX）の好ましい酸には、式（ＩＸａ）および（ＩＸｂ）の化合物およびその反応性誘導体が含まれる：
(ＩＸａ) Ｒ³－Ｓ－Ｓ－ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ
（ＩＸｂ) Ｒ³－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ₃）₂ＣＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ
(式中、Ｒ³は先に定義したとおりである)
好都合には、式（ＩＸ）の酸において、Ｒ³はメチルである。

【0076】

従って、本発明によれば、Ｒ¹が－Ｘ－Ｓ－Ｓ－Ｒ³部分であり、ＸおよびＲ³が先に定義したとおりであるメイタンシノイドエステル（Ｉ）の製造方法は、以下の工程を含む：
a) 先に定義した式（ＩＩ）の化合物を、先に先に定義した式（ＩＩＩ）のα－アジド酸と反応させて、先に定義した式（ＩＶ）のメイタンシノイドα－アジドエステルを得る；
b) 式（IV）のメイタンシノイドアルファ－アジドエステル中のアジド基を還元して式（Ｖ）のメイタンシノイドアルファ－アミノエステルを得る、
c） 式（Ｖ）のメイタンシノイドアルファ－アミノエステルを、式（ＩＸ）のカルボン酸またはその反応性誘導体と反応させる。

【0077】

本明細書において、式（ＩＸ）のカルボン酸の「反応性誘導体」は、ハロゲン化物、好ましくはフッ化物または塩化物、無水物または尿素である。

【0078】

工程c）は、典型的にはメイタンシノイドα－アミノエステル（Ｖ）を式（ＩＸ）の酸と1：1～1：5の範囲のモル比で、好ましくは1：2のモル比で、好ましくはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、２－メチルテトラヒドロフラン（２－Ｍｅ－ＴＨＦ）、酢酸メチル（ＡｃＯＭｅ）、酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）および塩化メチレン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）から好ましくは選択される有機溶剤の存在下、室温および常圧で、脱水剤の存在下で反応させることによって実施される。モレキュラーシーブは、穏やかな条件下で反応を行うことができるので、脱水剤として使用するのが好都合である。

【0079】

反応が完了すると、反応混合物は所望のジスルフィド含有メイタンシノイドエステル（I）を単離するために、当技術分野で公知の方法に従って後処理することができ、これもまた、ガスクロマトグラフィー、例えば分取ＴＬＣまたはカラムガスクロマトグラフィーによる精製に供することができる。

【0080】

メイタンシノイドアルファアミノ酸エステル（V）のメイタンシノイドエステル（Ｉ）（ここで、Ｒ¹はＸが先に定義される－Ｘ－ＳＨ基である）への転換が公知の方法に従って、メイタンシノイドエステル（I）（ここで、Ｒ¹は先に定義される－Ｘ－Ｓ－Ｓ-Ｒ³基である）の還元によって達成され得る。

【0081】

従って、本発明によれば、チオール基を含むメイタンシノイドエステル（I）の製造方法は、以下の工程を含む：
a) 先に定義した式（II）の化合物を、先に定義した式（III）のα－アジド酸と反応させて、先に定義した式（IV）のメイタンシノイドα－アジドエステルを得る；
b) 式（IV）のメイタンシノイドアルファ－アジドエステル中のアジド基を還元して、式（V）のメイタンシノイドアルファ－アミノエステルを得る；
c) 式（V）のメイタンシノイドα－アミノエステルを式（ＩＸ）のカルボン酸またはその反応性誘導体と反応させて、Ｒ¹が先に定義した－Ｘ－Ｓ－Ｓ－Ｒ³基であるメイタンシノイドエステル（I）を得る、
d） ジスルフィド含有メイタンシノイドエステル（I）を還元して、Ｒ¹が先に定義した－Ｘ－ＳＨ基であるメイタンシノイドエステル（I）を得る。

【0082】

以下の実施例は、本発明をより詳細に開示する。

【0083】

実験の部
材料及び方法
メイタンシノール（II）は、市販のアンサミトシンＰ３(BrightGene Bio-Medical Technology Co、Ltd．）を、Chari et al、J. Med. Chem 2006, 49, 4392によって開示された手順に従って還元することによって得た。

【0084】

L－アジド－アラニンはGoddard-Borgerら、Org. Lett. 2007, 9, 19, 3797によって開示された手順に従って、市販のL－アラニン(Honeywell Fluka)から出発して調製した。

【0085】

モレキュラーシーブ（4Å、ペレット、1．6mm）はアルドリッチから購入した。

【0086】

NMRスペクトルは、アルドリッチから購入した重水素化溶媒中、Bruker 400分光計で記録した。

【0087】

HPLC分析は、INERTSIL ODS－3Vカラム（4．6×250mm、5μm）を有するVARIAN PROSTAR 325 HPLCシステムで行った。

【実施例】

【0088】

実施例１ ３－O－（２’Ｓ－アジドプロピオニル）－マイタンシノールの調製

【0089】

【化21】

【0090】

丸底フラスコ中で、乾燥ジクロロメタンＣＨ₂Ｃｌ₂（5mL）中のジシクロヘキシルカルボジイミドＤＣＣ(2700mg、13mmol）および２-Ｍｅ-ＴＨＦ（0．76mL、1．44mmol）中の1．9M ＺｎＣｌ₂を、乾燥ジクロロメタン（15mL）中のメイタンシノール（680mg、1．20mmol）および２-（Ｓ）－アジドプロピオン酸（1350mg、12mmol）の溶液に滴下した。一晩撹拌した後、反応混合物を酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）で希釈し、濾過した。得られた透明液を飽和食ＮａＨＣＯ₃ 及びブラインで洗浄した。集めた有機相を硫酸ナトリウムＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、溶剤を減圧除去した。シリカゲルクロマトグラフィー(ＭｅＯＨ：ＣＨ₂Ｃｌ₂ 98：2）による粗生成物の精製により、3－O－（2’S－アジドプロピオニル）－マイタンシノールを白色固体として得た（370mg、0．56ミリモル、Y＝66％、マイタンシノールの残留15％を考慮）。

【0091】

¹Ｈ－ＮＭＲ (400 MHz, CDCl₃) δ 7.10 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.42 (dd, J = 15.3, 11.1 Hz, 1H), 6.33 (s, 1H), 6.19 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 15.3, 8.8 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 4.95 (dd, J = 11.9, 2.6 Hz, 1H), 4.19 (t, J = 10.6 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.94 - 3.81 (m, 2H), 3.50 (m, 4H), 3.34 (s, 3H), 3.16 (s, 3H), 2.82 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 2.57 (dd, J = 14.0, 12.1 Hz, 1H), 2.20 (dd, J = 14.1, 2.5 Hz, 1H), 1.90 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 1.77 (d, J = 13.2 Hz, 3H), 1.66 (s, 5H), 1.54 (d, J = 6.8 Hz, 4H), 1.25 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.83 (s, 3H).
粗生成物（C18カラム、ＭｅＣＮ：Ｈ₂Ｏ直線勾配55％～62％で45分間溶出）の高速液体クロマトグラフィーにより、ジアステレオ異性体過剰率95％（97．5：2．5d．r．）で、標題化合物のほとんど排他的な存在が明らかになった。

【0092】

R_t＝12．91分。

【0093】

実施例２ Ｎ－メチル－Ｌ－アラニンメイタンシノールエステルの調製

【0094】

【化22】

【0095】

丸底フラスコ中で、乾燥ジクロロメタン（1ml）中の3－O－（2’S－アジドプロピオニル）－マイタンシノール（30mg、0．04mmol）をトリフェニルホスフィンＰＰｈ₃（25mg、0．09mmol）で処理した。一晩撹拌した後、パラホルムアルデヒド（7mg、0．23mmol）を添加し、出発物質が完全に転化するまで混合物を撹拌し（ＴＬＣでモニター）、次いでそれを0℃に冷却し、メタノール（ＭｅＯＨ、0．5ml）およびNaBH₄（9mg、0．24mmol）で処理した。還元の完了時に、飽和ＮａＨＣＯ₃でクエンチし、ジクロロメタン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）で希釈した。有機相を収集し、飽和ＮａＨＣＯ₃およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー（直線勾配0～10%ＭｅＯＨ：ＣＨ₂Ｃｌ₂）による粗生成物の精製により、N－メチル－L－アラニンメイタンシノールエステル（7mg、0．01mmol、Y＝27％）およびL－アラニンメイタンシノールエステル（17mg、0．03mmol、Y＝67％）を得た。

【0096】

N－メチル－L－アラニンメイタンシノールエステル
¹Ｈ－ＮＭＲ (400 MHz, CDCl₃) δ 6.87 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.43 (dd, J = 15.1, 11.1 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 5.49 (dd, J = 15.6, 9.0 Hz, 1H), 5.00 - 4.91 (m, 1H), 4.24 (t, J = 10.9 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.13 (s, 3H), 2.84 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 2.63 - 2.51 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.23 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 1.86 (s, 3H), 1.67 (s, 3H), 1.37 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.84 (s, 3H)。

【0097】

Ｌ－アラニンメイタンシノールエステル
¹Ｈ－ＮＭＲ (400 MHz, CDCl₃) δ 6.83 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.40 (dd, J = 18.4, 7.9 Hz, 2H), 6.16 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 5.52 (dd, J = 15.4, 8.9 Hz, 1H), 4.92 (dd, J = 11.9, 3.0 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.66 (m, 1H), 3.54 - 3.41 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 3.14 (s, 3H), 2.86 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.57 (dd, J = 14.0, 12.1 Hz, 1H), 2.21 (dd, J = 14.1, 2.9 Hz, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.46 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.26 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.83 (s, 3H)。

【0098】

生成物のＨＰＬＣ解析（Ｃ18列Inertsil(商標) ODS－3v、250mm x 5μm、ＭＥＣＮ：Ｈ₂O、45分で55％から75％の線形勾配）により、対応するプライマリミンに対してR_t ＝ 4．34分とR_t ＝ 6．08分が明らかになった。

【0099】

実施例３ ３－O－（２’Ｓ－アジドプロピオニル）－マイタンシノールのシュタウディンガー還元

【0100】

【化23】

【0101】

丸底フラスコ中で、THF(1mL）中の3－O－（2’S－アジドプロピオニル）－マイタンシノール（28mg、0．04mmol）を、水（0．03mL）の存在下でトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ₃、20mg、0．08mmol）で処理した。混合物を約24～48時間撹拌し、次いで減圧下で蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィーによる粗生成物の精製
(1:9 MeOH：CH₂ Cl₂）により、L－アラニンメイタンシノールエステル（20mg，0．03ミリモル、Y＝87％）を得た。

【0102】

¹Ｈ－ＮＭＲ (400 MHz, CDCl₃) δ 6.83 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.40 (dd, J = 18.4, 7.9 Hz, 2H), 6.16 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 5.52 (dd, J = 15.4, 8.9 Hz, 1H), 4.92 (dd, J = 11.9, 3.0 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.66 (m, 1H), 3.54 - 3.41 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 3.14 (s, 3H), 2.86 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.57 (dd, J = 14.0, 12.1 Hz, 1H), 2.21 (dd, J = 14.1, 2.9 Hz, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.46 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.26 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.83 (s, 3H)。

【0103】

実施例４ Ｎ－メチル－Ｌ－アラニンメイタンシノールエステルの調製

【0104】

【化24】

【0105】

0℃で、メチルトリフラートＭｅＯＴｆ(10μL、0．09mmol）を、1，1，1－3，3，3－ヘキサフルオロ－2－プロパノール（HFIP； 1mL）中のL－アラニンマイタンシノールエステル（40mg、0．063mmol）の溶液に滴下した。反応混合物を50分間撹拌し、温度を安定に維持した。次に、エタノール中2．0M ＮＨ₃（60μL、0．13ミリモル）を加えて反応を停止させ、減圧乾燥した。シリカゲルクロマトグラフィー（直線勾配0～10% ＭｅＯＨ：ＣＨ₂Ｃｌ₂）による粗生成物の精製により、Ｎ-メチル-Ｌ-アラニンマイタンシノールエステル（21mg、0．03ミリモル、Y＝51％）を得た。副産物としてＮ，Ｎ－ジメチル－Ｌ－アラニンマイタンシノールを単離した。

【0106】

¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.87 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.43 (dd, J = 15.1, 11.1 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 5.49 (dd, J = 15.6, 9.0 Hz, 1H), 5.00 - 4.91 (m, 1H), 4.24 (t, J = 10.9 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.13 (s, 3H), 2.84 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 2.63 - 2.51 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.23 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 1.86 (s, 3H), 1.67 (s, 3H), 1.37 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.84 (s, 3H)。

【0107】

実施例５ Ｎ－メチル－Ｌ－アラニンメイタンシノールエステル（ＤＭ１-ＳＭｅ）の調製

【0108】

【化25】

【0109】

S－メチルプロパン酸ジスルフィド（11mg、0．046mmol）を、モレキュラーシーブ（4A）の存在下で、乾燥ジクロロメタンＣＨ₂Ｃｌ₂（2mL）混合物Ｎ-メチル-Ｌ-アラニンマイタンシノールエステル（15mg、0．023mmol）の溶液に添加し、ＥＤＣ ＨＣＬ(5mg、0．025mmol）を一晩撹拌した。反応終了後、ジクロロメタンＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、飽和食ＮａＨＣＯ₃、ブラインで洗浄した。集めた有機相を硫酸ナトリウムＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、加圧蒸発させた。ＤＭ１-ＳＭｅを、さらに精製することなく得た。

【0110】

生成物のＨＰＬＣ解析（Ｃ18列；ＣＨ₃ＣＮ：Ｈ₂Ｏ線形勾配55％～80％、30分）R_t＝13．27分。

【0111】

¹Ｈ－ＮＭＲ (CDCl₃) δ 6.85 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 11 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.47 (dd, J = 15, 11 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 5.69 (dd, J = 15, 9 Hz, 1H), 5.45 (q, J = 7 Hz, 1H), 4.82 (dd, J = 12, 3 Hz, 1H), 4.31 (t, J = 11 Hz, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.72 (d, J = 13 Hz, 1H), 3.54 (d, J = 9 Hz, 1H), 3.39 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.14 (d, J = 12 Hz, 1H), 3.08 (d, J = 9 Hz, 1H), 3.03 - 2.92 (m, 2H), 2.90 (s, 3H), 2.86 - 2.73 (m, 2H), 2.65 (dd, J = 15, 12 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.24 (dd, J = 15, 12 Hz, 1H), 1.97 (d, J = 9 Hz, 1H), 1.68 (s, 3H), 1.52 - 1.46 (m, 1H), 1.35 (d, J = 6 Hz, 3H), 1.31 (d, J = 6 Hz, 3H), 1.23 - 1.11 (m, 1H), 0.84 (s, 3H).