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特許7569487二重アミリン及びカルシトニン受容体アゴニスト、並びにその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-10-09
(45)【発行日】2024-10-18
(54)【発明の名称】二重アミリン及びカルシトニン受容体アゴニスト、並びにその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/585 20060101AFI20241010BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20241010BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20241010BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20241010BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20241010BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20241010BHJP
A61K 38/23 20060101ALI20241010BHJP
【ＦＩ】
C07K14/585 ZNA
A61K38/16
A61P3/10
A61P3/04
A61P3/06
A61P1/16
A61K38/23
【請求項の数】
13
(21)【出願番号】P 2023538041
(86)(22)【出願日】2021-12-17
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-04
(86)【国際出願番号】 US2021063990
(87)【国際公開番号】W WO2022133187
(87)【国際公開日】2022-06-23
【審査請求日】2023-07-14
(31)【優先権主張番号】63/127,186
(32)【優先日】2020-12-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(73)【特許権者】
【識別番号】523231129
【氏名又は名称】キーバイオサイエンス・ソチエタ・アノニマ
【氏名又は名称原語表記】ＫＥＹＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ ＳＡ
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(72)【発明者】
【氏名】コスクン，タメル
(72)【発明者】
【氏名】チュイ，ホンチャン
(72)【発明者】
【氏名】カルスダル，モルテン アセル
(72)【発明者】
【氏名】アンドレアッセン，キム フィーツ
(72)【発明者】
【氏名】ヘンリクセン，キム
【審査官】坂井田 京
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０２０／０３９０５１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１７－５３０１０８（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１８／２１１１１１（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２（配列番号２）を含む、化合物、又はその医薬的に許容可能な塩。
【請求項2】
前記化合物が、アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２（配列番号２）からなる、請求項１に記載の化合物、又はその医薬的に許容可能な塩。
【請求項3】
請求項１若しくは２に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩と、少なくとも１つの医薬的に許容可能な賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項4】
請求項１若しくは２に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
【請求項5】
療法における使用のための、請求項３又は４に記載の医薬組成物。
【請求項6】
２型糖尿病の治療における使用のための、請求項３又は４に記載の医薬組成物。
【請求項7】
肥満の治療における使用のための、請求項３又は４に記載の医薬組成物。
【請求項8】
脂質異常症の治療における使用のための、請求項３又は４に記載の医薬組成物。
【請求項9】
ＮＡＳＨの治療における使用のための、請求項３又は４に記載の医薬組成物。
【請求項10】
２型糖尿病の治療のための医薬の製造における、請求項１又は２に記載の化合物の使用。
【請求項11】
肥満の治療のための医薬の製造における、請求項１又は２に記載の化合物の使用。
【請求項12】
脂質異常症の治療のための医薬の製造における、請求項１又は２に記載の化合物の使用。
【請求項13】
ＮＡＳＨの治療のための医薬の製造における、請求項１又は２に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、医学の分野に関する。より詳細には、本開示は、糖尿病、肥満、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、及び／又は脂質異常症の治療の分野である。本開示は、アミリン及びカルシトニン受容体の両方を刺激し、したがって、食物摂取量、体重、グルコース、及び／又はトリグリセリドを低下させることができ、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を治療するために使用することができる、化合物に関する。本開示は、そのような化合物を含有する医薬組成物、並びにそのような化合物及び医薬組成物の治療的使用も含む。
【背景技術】
【0002】
アミリンは、膵臓のβ細胞からインスリンと共分泌されるペプチドホルモンであり、糖尿病を有する人において不足している。これは、グルカゴンの分泌を抑制し、胃内容排出を遅らせ、満腹剤として作用する。アミリン類似体であるプラムリンチドは、血糖レベルを下げることから、インスリンを使用している糖尿病患者を治療するのに利用可能である。この薬の消失半減期は１時間未満であり、この薬は食事時に使用されるため、患者は、この薬を療法に使用するのに、１日に複数回の用量を必要としている。
【0003】
カルシトニンは、甲状腺で産生されるホルモンであり、血液中のカルシウム及びリン酸のレベルを調節する役割を果たす。サケカルシトニンは、高カルシウム血症などの、血液中のカルシウムのレベルが高い状態を治療するのに利用可能である。サケカルシトニンは、２時間未満の短い半減期を有するため、患者は、このペプチドを療法に使用するのに、１日１回又は１日複数回投薬する必要がある。
【0004】
アミリン及びカルシトニン受容体の両方を刺激する化合物は、血液グルコースレベルを低下させること及び体重低下を誘発することなどの有利な効果を有すると示されている。ＷＯ２０１６／０３４６０４、ＷＯ２０１５／０７１２２９、及びＷＯ２０１０／０８５７００を参照されたい。既知のアミリン及びカルシトニン受容体アゴニストの自然の半減期は短いため、長時間の作用が望ましい。しかしながら、活性時間を延長することを意図した化学修飾も、これまでのところ、効力の低下を示している。更に、アミリン及びカルシトニン受容体のアゴニストは、それらの細線維化傾向及び中性ｐＨでの不安定なジスルフィド結合の存在を原因として、安定性の問題を有する。
【0005】
アミリン及びカルシトニン受容体の両方を刺激する代替的な化合物が必要である。更に、延長された作用時間及び保持された効力を有するアミリン及びカルシトニン受容体アゴニストの必要性が存在する。治療的に望ましい化合物は、アミリン及びカルシトニン受容体の両方を刺激し、食物摂取量の低下、体重の低下、血液グルコースレベルの低下、トリグリセリドの低下、及び／又はインスリンレベルの低下などの１つ以上の有利な特性を提供するであろう。更に、治療的に望ましい化合物は、アミリン及びカルシトニン受容体の両方を刺激する効力が保持若しくは改善された長時間の作用、低い免疫原性応答のリスク、中性ｐＨでの化学的安定性、並びに／又は低い細線維化のリスクなどの１つ以上の追加的な有利な特性を有し得る。
【0006】
更に、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症の治療を提供するためには、インクレチン又はインクレチン類似体と任意選択的に組み合わせた、本開示の二重アミリン及びカルシトニン受容体アゴニストの組み合わせが望ましい。そのような組み合わせはまた、好ましくは、いずれかの分子単独よりも有効であろう。例えば、そのような組み合わせによる治療は、単独での各々の分子と比較して、いずれか又は両方の分子のより低い用量の使用を可能にし得、効能を維持しながら、より低い副作用（又は一方若しくは他方の療法のより短い期間）をもたらす可能性がある。本明細書で提供される新規の組み合わせは、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症のための効果的な治療になると考えられる。
【発明の概要】
【0007】
したがって、本開示は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を治療する方法であって、有効量のインクレチン又はインクレチン類似体を有する有効量の二重アミリン及びカルシトニン受容体アゴニストをそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示は、臨床又は前臨床糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を治療する方法であって、有効量のインクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせた有効量の二重アミリン及びカルシトニン受容体アゴニストをそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法を更に提供する。
【0008】
アミリン及びカルシトニン受容体を刺激するある特定の本明細書に開示されている化合物は、食物摂取量及び体重の効果的な減少、並びにグルコース及びインスリンの低下を示す。更に、ある特定の本明細書に開示されている化合物は、免疫原性のリスクの減少及び低い細線維化のレベルを示す。本明細書に開示されているある特定の化合物の薬物動態学的特性は、大幅に延長された半減期を示し、それによって、療法における使用のためにこれらの化合物を週１回投薬することが可能になる。本開示の他の実施形態は、療法における使用のためのそのような化合物を作製するのに有用である。本明細書に開示されている化合物をインクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせるための方法も開示されている。
【発明を実施するための形態】
【0009】
本開示の化合物のうちの１つである化合物Ｉは、以下の配列を含む：アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２（配列番号１）又はその医薬的に許容可能な塩。以下は、残基アセチル－Ａ１、Ａｉｂ１４、及びＰ３２－ＮＨ２を除いて、標準的な１文字アミノ酸コードを使用した化合物Ｉの構造の描写であり、これらのアミノ酸残基の構造は、伸長されている：
【化1】
【0010】
したがって、本開示の化合物のうちの１つは、
又はその医薬的に許容可能な塩である。
【化2】
【0011】
配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩は、化合物の半減期を延長するために、１つ以上の追加的な要素を更に含み得る。リンカーあり又はなしで、かつ配列中の任意の好適な位置で、この目的のために配列番号１を含む化合物に付加され得る要素は、免疫グロブリンのＦｃ部分、免疫グロブリンのＦｃ部分のフラグメント、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＶＨＨ、ＶＨＨ（重鎖抗体の可変ドメイン）ナノボディの変異体、ヒト血清アルブミンのフラグメント、Ｃ１６～Ｃ２０モノ酸、Ｃ１６～Ｃ２０二酸、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分又はＰＥＧ代替物（例えば、ポリサルコシン）を含む。リンカーあり又はなしで、かつ配列中の任意の好適な位置で、この目的のために配列番号１を含む化合物に付加され得る他の要素は、Ｃ１６～Ｃ２２モノ酸若しくはＣ１６～Ｃ２２二酸、Ｃ１８～Ｃ２０モノ酸、又はＣ１８～Ｃ２０二酸も含み得る。
【0012】
本明細書に開示されている化合物の１つの実施形態は、配列番号１を含む化合物であり、この化合物は、リンカーあり又はなしの脂肪酸部分を更に含む。
【0013】
別の実施形態では、本明細書に開示されている化合物は、ペプチドのＮ末端のアラニンアミノ酸残基上にアセチル基（ＣＨ３ＣＯ）を有する。これは、本明細書では、「アセチル」という語句、及びペプチドの説明においてＮ末端アミノ酸残基の前のダッシュによって示される。本明細書に開示されている化合物は、Ｃ末端アミノ酸残基であるプロリン上のアミド基（ＮＨ２）も有する。これは、本明細書では、式「ＮＨ２」、及びペプチドの説明におけるＣ末端アミノ酸残基の後のダッシュによって示される。
【0014】
別の実施形態では、配列番号１を含む化合物は、配列中の任意の好適なアミノ酸においてアシル化されており、結果的に、延長された半減期を有する。別の実施形態では、配列番号１を含む化合物は、リジン側鎖上のイプシロンアミノ基においてアシル化されており、結果的に、延長された半減期を有する。特定の実施形態では、配列番号１を含む化合物は、２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈによるリジン側鎖上のイプシロンアミノ基においてアシル化されている。したがって、本開示の化合物のうちの１つは、以下の配列を含む、化合物ＩＩである：
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２（配列番号２）又はその医薬的に許容可能な塩。
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２（配列番号２）又はその医薬的に許容可能な塩。
【0015】
特定の実施形態では、配列番号１からなる化合物は、式２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈによるリジン側鎖上のイプシロンアミノ基においてアシル化されている。したがって、本開示の化合物のうちの１つは、以下の配列からなる、化合物ＩＩである：
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２（配列番号２）又はその医薬的に許容可能な塩。特定の実施形態では、配列番号１から本質的になる化合物は、式２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈによるリジン側鎖上のイプシロンアミノ基においてアシル化されている。したがって、本開示の化合物のうちの１つは、以下の配列から本質的になる、化合物ＩＩである：
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２（配列番号２）又はその医薬的に許容可能な塩。以下は、残基アセチル－Ａ１、Ｋ１１、Ａｉｂ１４、及びＰ３２－ＮＨ２を除いて、標準的な１文字アミノ酸コードを使用した化合物ＩＩの構造の描写であり、これらのアミノ酸残基の構造は、伸長されている：
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２（配列番号２）又はその医薬的に許容可能な塩。特定の実施形態では、配列番号１から本質的になる化合物は、式２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈによるリジン側鎖上のイプシロンアミノ基においてアシル化されている。したがって、本開示の化合物のうちの１つは、以下の配列から本質的になる、化合物ＩＩである：
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２（配列番号２）又はその医薬的に許容可能な塩。以下は、残基アセチル－Ａ１、Ｋ１１、Ａｉｂ１４、及びＰ３２－ＮＨ２を除いて、標準的な１文字アミノ酸コードを使用した化合物ＩＩの構造の描写であり、これらのアミノ酸残基の構造は、伸長されている：
【化3】
【0016】
したがって、本開示の化合物のうちの１つは、
又はその医薬的に許容可能な塩である。
【化4】
【0017】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩と、１つ以上の医薬的に許容可能な賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩と、１つ以上の医薬的に許容可能な賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。
【0018】
本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療を必要としている患者において糖尿病を治療する方法であって、有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療を必要としている患者において糖尿病を治療する方法であって、有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の好ましい実施形態は、２型糖尿病の治療を必要としている患者において２月糖尿病を治療する方法であって、有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の好ましい実施形態は、２型糖尿病の治療を必要としている患者において２型糖尿病を治療する方法であって、有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療を必要としている患者において糖尿病を治療する方法であって、患者に配列番号１を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療を必要としている患者において糖尿病を治療する方法であって、患者に配列番号２を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の好ましい実施形態は、２型糖尿病の治療を必要としている患者において２型糖尿病を治療する方法であって、患者に配列番号１を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の好ましい実施形態は、２型糖尿病の治療を必要としている患者において２型糖尿病を治療する方法であって、患者に配列番号２を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【0019】
本開示の別の実施形態は、肥満の治療を必要としている患者において肥満を治療する方法であって、有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、肥満の治療を必要としている患者において肥満を治療する方法であって、有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、肥満の治療を必要としている患者において肥満を治療する方法であって、患者に配列番号１を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、肥満の治療を必要としている患者において肥満を治療する方法であって、患者に配列番号２を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【0020】
本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療を必要としている患者において脂質異常症を治療する方法であって、有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療を必要としている患者において脂質異常症を治療する方法であって、有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療を必要としている患者において脂質異常症を治療する方法であって、患者に配列番号１を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療を必要としている患者において脂質異常症を治療する方法であって、患者に配列番号２を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【0021】
本開示の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療を必要としている患者においてＮＡＳＨを治療する方法であって、有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療を必要としている患者においてＮＡＳＨを治療する方法であって、有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療を必要としている患者においてＮＡＳＨを治療する方法であって、患者に配列番号１を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療を必要としている患者においてＮＡＳＨを治療する方法であって、患者に配列番号２を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【0022】
本開示の別の実施形態は、食物摂取量の低下を必要としている患者において食物摂取量を低下させる方法であって、有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、食物摂取量の低下を必要としている患者において食物摂取量を低下させる方法であって、有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、食物摂取量の低下を必要としている患者において食物摂取量を低下させる方法であって、患者に配列番号１を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、食物摂取量の低下を必要としている患者において食物摂取量を低下させる方法であって、患者に配列番号２を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【0023】
本開示の別の実施形態は、体重の低下を必要としている患者において体重を低下させる方法であって、有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、体重の低下を必要としている患者において体重を低下させる方法であって、有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、体重の低下を必要としている患者において体重を低下させる方法であって、患者に配列番号１を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、体重の低下を必要としている患者において体重を低下させる法であって、患者に配列番号２を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【0024】
本開示の別の実施形態は、血液グルコースの低下を必要としている患者において血液グルコースを低下させる方法であって、有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、血液グルコースの低下を必要としている患者において血液グルコースを低下させる方法であって、有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、血液グルコースの低下を必要としている患者において血液グルコースを低下させる方法であって、患者に配列番号１を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、血液グルコースの低下を必要としている患者において血液グルコースを低下させる方法であって、患者に配列番号２を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【0025】
本開示の別の実施形態は、トリグリセリドの低下を必要としている患者においてトリグリセリドを低下させる方法であって、有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、トリグリセリドの低下を必要としている患者においてトリグリセリドを低下させる方法であって、有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、トリグリセリドの低下を必要としている患者においてトリグリセリドを低下させる方法であって、患者に配列番号１を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。本開示の別の実施形態は、トリグリセリドの低下を必要としている患者においてトリグリセリドを低下させる方法であって、患者に配列番号２を含む化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【0026】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物が、週１回投与される、糖尿病の治療を必要としている患者において糖尿病を治療する方法を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物が、週１回投与される、糖尿病の治療を必要としている患者において糖尿病を治療する方法を提供する。
【0027】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物が、週１回投与される、２型糖尿病の治療を必要としている患者において２型糖尿病を治療する方法を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物が、週１回投与される、２型糖尿病の治療を必要としている患者において２型糖尿病を治療する方法を提供する。
【0028】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物が、週１回投与される、肥満の治療を必要としている患者において肥満を治療する方法を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物が、週１回投与される、肥満の治療を必要としている患者において肥満を治療する方法を提供する。
【0029】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物が、週１回投与される、脂質異常症の治療を必要としている患者において脂質異常症を治療する方法を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物が、週１回投与される、脂質異常症の治療を必要としている患者において脂質異常症を治療する方法を提供する。
【0030】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物が、週１回投与される、ＮＡＳＨの治療を必要としている患者においてＮＡＳＨを治療する方法を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物が、週１回投与される、ＮＡＳＨの治療を必要としている患者においてＮＡＳＨを治療する方法を提供する。
【0031】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物が、週１回投与される、食物摂取量の低下を必要としている患者において食物摂取量を低下させる方法を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物が、週１回投与される、食物摂取量の低下を必要としている患者において食物摂取量を低下させる方法を提供する。
【0032】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物が、週１回投与される、体重の低下を必要としている患者において体重を低下させる方法を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物が、週１回投与される、体重の低下を必要としている患者において体重を低下させる方法を提供する。
【0033】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物が、週１回投与される、血液グルコースの低下を必要としている患者において血液グルコースを低下させる方法を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物が、週１回投与される、血液グルコースの低下を必要としている患者において血液グルコースを低下させる方法を提供する。
【0034】
本開示の別の実施形態は、配列番号１を含む化合物が、週１回投与される、トリグリセリドの低下を必要としている患者においてトリグリセリドを低下させる方法を提供する。本開示の別の実施形態は、配列番号２を含む化合物が、週１回投与される、トリグリセリドの低下を必要としている患者においてトリグリセリドを低下させる方法を提供する。
【0035】
本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、療法における使用のための、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、療法における使用のための、配列番号１を含む医薬組成物を提供する。本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、療法における使用のための、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、療法における使用のための、配列番号２を含む医薬組成物を提供する。
【0036】
本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、糖尿病の治療における使用のための、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療における使用のための、配列番号１を含む医薬組成物を提供する。本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、糖尿病の治療における使用のための、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療における使用のための、配列番号２を含む医薬組成物を提供する。
【0037】
本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、２型糖尿病の治療における使用のための、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、２型糖尿病の治療における使用のための、配列番号１を含む医薬組成物を提供する。本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、２型糖尿病の治療における使用のための、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、２型糖尿病の治療における使用のための、配列番号２を含む医薬組成物を提供する。
【0038】
本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、肥満の治療における使用のための、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、肥満の治療における使用のための、配列番号１を含む医薬組成物を提供する。本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、肥満の治療における使用のための、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、肥満の治療における使用のための、配列番号２を含む医薬組成物を提供する。
【0039】
本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、脂質異常症の治療における使用のための、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療における使用のための、配列番号１を含む医薬組成物を提供する。本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、脂質異常症の治療における使用のための、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療における使用のための、配列番号２を含む医薬組成物を提供する。
【0040】
本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療における使用のための、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療における使用のための、配列番号１を含む医薬組成物を提供する。本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療における使用のための、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を提供する。本開示の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療における使用のための、配列番号２を含む医薬組成物を提供する。
【0041】
本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本開示の化合物の好ましい実施形態は、２型糖尿病の治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本開示の別の好ましい実施形態は、糖尿病の治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。
【0042】
本開示の別の実施形態は、肥満の治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本開示の別の実施形態は、肥満の治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。
【0043】
本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。
【0044】
本開示の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本開示の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。
【0045】
本明細書に開示されている化合物の別の実施形態は、半減期（ｔ１／２）が延長されている配列番号１の化合物である。
【0046】
本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症からなる群から選択される状態の治療を必要としている患者において前記状態を治療する方法であって、有効量のインクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法である。本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症からなる群から選択される状態の治療を必要としている患者において前記状態を治療する方法であって、有効量のインクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、方法である。
【0047】
本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症からなる群から選択される状態の治療を必要としている患者において前記状態を治療する方法であって、ＧＬＰ－１アゴニストと組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、化合物ＩＩＩ（配列番号６）、化合物ＶＩＩＩ（配列番号１２）、又は化合物ＩＸ（配列番号１３）を含む化合物からなる群から選択されるＧＬＰ－１アゴニストと組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、ＧＬＰ－１アゴニストと組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、化合物ＩＩＩ（配列番号６）、化合物ＶＩＩＩ（配列番号１２）、又は化合物ＩＸ（配列番号１３）を含む化合物からなる群から選択されるＧＬＰ－１アゴニストと組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。
【0048】
本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、ＧＩＰ／ＧＬＰ－１二重アゴニストと組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、化合物ＶＩ（配列番号９）及び化合物ＶＩＩ（配列番号１０）を含む化合物からなる群から選択されるＧＩＰ／ＧＬＰ－１二重アゴニストと組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、ＧＩＰ／ＧＬＰ－１二重アゴニストと組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、化合物ＶＩ（配列番号９）及び化合物ＶＩＩ（配列番号１０）を含む化合物からなる群から選択されるＧＩＰ／ＧＬＰ－１二重アゴニストと組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。
【0049】
本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、グルカゴン、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１のトリアゴニストと組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、グルカゴン、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１のトリアゴニストと組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、化合物Ｖ（配列番号８）を含む、グルカゴン、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１のトリアゴニストと組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、化合物Ｖ（配列番号８）を含む、グルカゴン、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１のトリアゴニストと組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。
【0050】
本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、オキシントモジュリンの類似体と組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本明細書に開示されている化合物の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、オキシントモジュリンの類似体と組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、化合物ＩＶ（配列番号７）を含むオキシントモジュリンの類似体と組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。本開示の特定の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、化合物ＩＶ（配列番号７）を含むオキシントモジュリンの類似体と組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法である。
【0051】
本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、インクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含み、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩及びインクレチン又はインクレチン類似体を同時に投与する、方法である。本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、インクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含み、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩及びインクレチン又はインクレチン類似体を同時に投与する、方法である。
【0052】
本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、インクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含み、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をインクレチン又はインクレチン類似体の投与前に投与する、方法である。本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、インクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含み、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をインクレチン又はインクレチン類似体の投与前に投与する、方法である。
【0053】
本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、インクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせた有効量の配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含み、インクレチン又はインクレチン類似体を、配列番号１を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の投与前に投与する、方法である。本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、インクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせた有効量の配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要としている患者に投与することを含み、インクレチン又はインクレチン類似体を、配列番号２を含む化合物又はその医薬的に許容可能な塩の投与前に投与する、方法である。
【0054】
本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症の治療のためにインクレチン又はインクレチン類似体と別々に、同時に、又は連続的に組み合わせて使用するための、配列番号１を含む化合物である。本開示の別の実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症の治療のためにインクレチン又はインクレチン類似体と別々に、同時に、又は連続的に組み合わせて使用するための、配列番号２を含む化合物である。
【0055】
本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物の使用を提供する。本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物の使用を提供する。
【0056】
本開示の別の実施形態は、２型糖尿病の治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物の使用を提供する。本開示の別の実施形態は、２型糖尿病の治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物の使用を提供する。
【0057】
本開示の別の実施形態は、肥満の治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物の使用を提供する。本開示の別の実施形態は、肥満の治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物の使用を提供する。
【0058】
本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物の使用を提供する。本開示の別の実施形態は、脂質異常症の治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物の使用を提供する。
【0059】
本開示の別の実施形態は、ＮＡＳＨの治療のための医薬の製造における、配列番号１を含む化合物の使用を提供する。本開示の別の実施形態は、糖尿病の治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物の使用を提供する。
【0060】
別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似又は同等の任意の方法及び材料を二重アミリン及びカルシトニン受容体アゴニスト、医薬組成物、医薬的組み合わせの実践又は試験に使用することができるが、好ましい方法及び材料が本明細書に記載されている。
【0061】
更に、不定冠詞の「ａ」又は「ａｎ」による要素への言及は、文脈から要素が１つだけであることが明確に要求されない限り、１つより多くの要素が存在する可能性を排除することはない。したがって、不定冠詞の「ａ」又は「ａｎ」は、通常、「少なくとも１つ」を意味する。
【0062】
「類似体」という用語は、標的受容体を活性化し、その受容体のための天然アゴニストによって誘発される少なくとも１つのインビボ又はインビトロ効果を誘発する、合成ペプチド又はポリペプチドなどの化合物を指す。
【0063】
本明細書で使用される場合、「組み合わせ」という用語は、本明細書に開示されている化合物が、体重低下の誘導、糖尿病の治療、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症に関連する状態に有用な１つ以上の追加的な治療薬と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて使用され得ることを意味する。特許請求される化合物と組み合わせることができる追加的な治療剤の非限定的な例は、インスリン又はインスリン類似体；グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）若しくはＧＬＰ－１類似体、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）若しくはＧＩＰ類似体、オキシントモジュリン若しくはオキシントモジュリン類似体などのインクレチン化合物又はインクレチン類似体；ＧＩＰ／ＧＬＰ－１二重アゴニスト；Ｇｃｇ／ＧＩＰ／ＧＬＰ－１トリアゴニスト（グルカゴン、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１のトリアゴニスト）；あるいは前述の薬剤のうちのいずれかの組み合わせを含む。特許請求される化合物及び追加的な治療剤は、単一の丸剤、カプセル、錠剤、若しくは注射可能な製剤などの同じ送達経路及びデバイスを介して共投与され得るか、又は別々の送達デバイス若しくは経路のいずれかで同時に別々に投与され得るか、又は連続的に投与され得る。
【0064】
「糖尿病」という用語は、ホルモンのインスリンを産生するか又はこれに応答する体の能力が損なわれ、炭水化物の異常な代謝、並びに血液中及び尿中のグルコースのレベルの上昇をもたらす、疾患を指す。本明細書で使用される場合、糖尿病という用語は、身体が血糖又はグルコースを処理する過程に影響を与える慢性状態、例えば、２型真性糖尿病（Ｔ２ＤＭ）；膵臓がインスリンをほとんど又はまったく産生しない慢性状態、例えば、１型真性糖尿病（Ｔ１ＤＭ）；血糖が高いが２型糖尿病になるほどは高くない状態、例えば、糖尿病予備軍；妊婦に影響を与える高血糖の形態、例えば、妊娠糖尿病を指し得る。
【0065】
本明細書で使用される場合、「脂質異常症」という用語は、リポタンパク質の過剰産生又は欠乏を含む、リポタンパク質代謝の障害を指す。脂質異常症は、血液中における、総コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール及びトリグリセリド濃度の上昇、並びに／又は高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）濃度の低下に現れ得る。脂質異常症は、糖尿病に関連して発症する場合又は発症しない場合がある。
【0066】
本明細書で使用される場合、「インクレチン」という用語は、典型的には食後に分泌されるインスリンの量の調節を介して、血液グルコースの低下を刺激するために胃及び膵臓の腸内分泌細胞から排泄される内因性代謝ホルモンの群を指す。本明細書で使用される場合、「インクレチン類似体」という用語は、生理学的にインクレチンに類似した合成インクレチン模倣体の群を指す。更に、「インクレチン類似体」は、内因性インクレチンと比較して、好ましい薬理学的特性を有し得る。
【0067】
本明細書で使用される場合、「治療」又は「治療すること」という用語は、状態の症状及び合併症に対抗するか又はこれらを緩和する目的でアミリン及びカルシトニン受容体ペプチドアゴニスト投与が適応された状態を有する患者の管理及び看護を指す。治療は、症状若しくは合併症の発症を予防するために、症状若しくは合併症を緩和するために、又は疾患、状態若しくは障害を排除するために、本明細書に開示されている化合物のうちの１つの化合物又はこれを含有する医薬組成物を、この化合物又はこれを含有する医薬組成物を必要とする患者に投与することを含む。好ましくは、治療は、体重の正味低下、食物摂取量の減少、血液グルコースレベルの減少、及び／又はトリグリセリドレベルの減少をもたらすために、本明細書に開示されている化合物のうちの１つの化合物又はこれを含有する医薬組成物を、この化合物又はこれを含有する医薬組成物を必要とする患者に投与することを含む。治療すべき患者は動物であり、好ましくはヒトである。
【0068】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、患者に単回又は複数回の用量で投与すると医療専門家によって求められている生物学的若しくは医学的応答又は望ましい治療的効果を誘発する、本明細書に開示されている化合物のうちの１つの化合物又は本明細書に開示されている化合物を含有する医薬組成物の量又は用量を指す。好ましくは、本明細書に開示されている化合物のうちの１つの化合物又はこれを含有する医薬組成物を必要とする患者に投与される、この化合物又はこれを含有する医薬組成物の有効量は、体重の正味低下、食物摂取量の減少、血液グルコースレベルの減少、及び／又はトリグリセリドレベルの減少をもたらすであろう。用量は、より高い初期負荷用量、続いてより少ない用量を含むことができる。
【0069】
本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、動物を指し、好ましくはヒトを指す。ある特定の実施形態では、患者、好ましくはヒトは、アミリン及びカルシトニン受容体の両方を刺激する化合物の投与から利益を受け得る疾患、障害、又は状態を更に特徴とする。本明細書に開示されている化合物を含む医薬組成物は、そのような治療を必要としている患者に経口又は非経口で投与され得る。非経口投与は、シリンジ、任意選択的にペン様シリンジ、又は機械駆動式注射器を用いた皮下、筋肉内又は静脈内注射によって実施することができる。代替的に、非経口投与は、注入ポンプを用いて行うことができる。本明細書に開示されている化合物の実施形態は、患者への投与に好適な医薬組成物であって、治療有効量の本明細書に開示されている化合物及び１つ以上の医薬的に許容可能な賦形剤をこの医薬組成物を必要としている患者に投与することを含む、医薬組成物を提供する。そのような医薬組成物は、当該技術分野で周知である医薬製品のための従来的な賦形剤を使用する様々な技術のうちのいずれかによって調製され得る。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，ＵＳＡ（２００６））。
【0070】
本明細書で使用される場合、「ＮＡＳＨ」という用語は、非アルコール性脂肪性肝炎、別名、脂肪肝疾患を表す。「ＮＡＳＨ」とは、肝臓に脂肪が蓄積することによって引き起こされる肝臓の炎症及び損傷も指す。「ＮＡＳＨ」は、非アルコール性脂肪肝疾患（「ＮＡＦＬＤ」）のサブタイプも指す。いくつかの実施形態では、「ＮＡＳＨ」は、「ＮＡＦＬＤ」と同義であり得る。
【0071】
本明細書で使用される場合、「肥満」という用語は、健康上の問題のリスクを高める過剰な体脂肪を伴う障害を指す。「肥満」という用語は、所定の高さに対して健康的な重量と考えられるものよりも高い重量も指す。「肥満」という用語は、３０．０超のＢＭＩも指す。本明細書で使用される場合、ボディマス指数（ＢＭＩ）は、キログラムでの人の体重をメートルでの高さの二乗で割ったものを指す。
【0072】
ある特定の略語は、以下のように定義される：「Ａｉｂ」は２－アミノイソ酪酸を指す、「ＡＭＹ１」はアミリン受容体１を指す、「ｃＡＭＰ」は環状アデノシン一リン酸を指す、「ＣＴ」はカルシトニンを指す、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指す、「ＤＩＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを指す、「ＤＩＯ」は食事誘発性肥満を指す、「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指す、「ＦＢＳ」はウシ胎児血清を指す、「ＧＰＣＲ」はＧタンパク質共役受容体を指す、「ＨＥＰＥＳ」は４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸を指す、「ＨＴＲＦ」は均一時間分解蛍光を指す、「ＩＢＭＸ」は１－メチル－３－イソブチルキサンチンを指す、「Ｍｔｔ」は４－メチルトリチルを指す、「ＰＢＭＣ」は末梢血単核細胞を指す、「ＰｙＡＯＰ」は（７－アザベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指す、「ＲＰ－ＨＰＬＣ」は逆相高圧液体クロマトグラフィーを指す、及び「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指す。
【実施例】
【0073】
実施例１：化合物Ｉ及び化合物ＩＩの調製及び精製
化合物Ｉ及び化合物ＩＩは、以下のステップに従って作製する。最初に、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ １２－Ｃｈａｎｎｅｌ Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）でフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）／ｔｅｒｔ－ブチル（ｔ－Ｂｕ）化学を使用して、化合物Ｉを合成する。
化合物Ｉ及び化合物ＩＩは、以下のステップに従って作製する。最初に、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ １２－Ｃｈａｎｎｅｌ Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）でフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）／ｔｅｒｔ－ブチル（ｔ－Ｂｕ）化学を使用して、化合物Ｉを合成する。
【0074】
Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ ＬＬ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，ｓｕｂ：０．３３ｍｅｑ／ｇ，１００－２００メッシュ、カタログ番号８５５０４５）を０．１３ｍｍｏｌスケールでの合成に使用する。標準的な側鎖保護基を使用する。Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）－ＯＨ）を１１位のリジンに使用する。各々のカップリングステップ（２×７分間）の前に、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを使用して、Ｆｍｏｃ基を除去する。アミノ酸カップリングは全て、Ｆｍｏｃアミノ酸（０．３ｍＭ）、ジイソプロピルカルボジイミド（０．９ｍＭ）、及びＯｘｙｍａ（０．９ｍＭ）の等モル比を使用して、理論上ペプチド負荷に対して７．７倍のモル過剰で、５０℃で３０分間実施する。Ｎ末端を、ＤＭＦ中で５％の無水酢酸、５％のＤＩＥＡを用いて、３０分間アセチル化する。以下は、化合物Ｉ（配列番号１）の概略図である。
次いで、樹脂をＤＣＭで６回入念に洗浄して、残留ＤＭＦを除去する。１１位のリジンのＭｔｔ保護基は、ＤＣＭ（２×４０分の処理）中で３０％のヘキサフルオロイソプロパノール（Ｏａｋｗｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）の処理を２回使用してペプチド樹脂から選択的に除去される。
【化5】
【0075】
化合物ＩＩの合成は、以下のステップに従って行う。脂肪酸リンカー部分のその後の結合は、２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－酢酸（Ｆｍｏｃ－ＡＥＥＡ－ＯＨ、ＣｈｅｍＰｅｐ，Ｉｎｃ．）、Ｆｍｏｃ－グルタミン酸α－ｔ－ブチルエステル（Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ、Ａｒｋ Ｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．）、及びモノ－ＯｔＢｕ－エイコサン酸（ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ、Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）のカップリングによって達成される。３倍過剰の試薬（ＡＡ：ＰｙＡＯＰ：ＤＩＥＡ＝１：１：１ｍｏｌ／ｍｏｌ）を１時間の長さの各々のカップリングに使用する。
【0076】
合成が完了したら、ペプチド樹脂をＤＣＭで洗浄し、完全に空気乾燥させる。乾燥樹脂を、室温で２時間、１０ｍＬの切断カクテル（ＴＦＡ：水：トリイソプロピルシラン、９５：２．５：２．５ｖ／ｖ）で処理する。樹脂を濾別し、各々２ｍＬのニートＴＦＡで２回洗浄し、合わせた濾液を４倍冷ジエチルエーテル（－２０℃）で処理して、粗ペプチドを沈殿させる。その後、ペプチド／エーテル懸濁液を３５００ｒｐｍで２分間遠心分離して固体ペレットを形成し、上清を傾瀉し、固体ペレットをエーテルで更に２回粉砕し、真空中で乾燥させる。粗ペプチドを２０％のアセトニトリル／２０％の酢酸／６０％の水に可溶化させ、１００％のアセトニトリル及び０．１％のＴＦＡ／水緩衝液システム（６０分で２０～４０％のアセトニトリル）を使用する線形勾配で、Ｗａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＣＳＨ Ｃ１８ ｐｒｅｐ ｃｏｌｕｍｎ １３０Ａ ５ｕｍ １９×１５０ｍｍ ＰＮ １８６００７０２１においてＲＰ－ＨＰＬＣによって精製する。ペプチドの純度は、分析用ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して評価し、プーリング基準は、９５％超である。化合物Ｉの主要プール純度は、９９．０％超であることが見出されている。最終的な主要生成物プールのその後の凍結乾燥は、凍結乾燥されたペプチドＴＦＡ塩をもたらす。分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される。平均ＭＷ＝３４４７．８Ｄａ。予想される質量：（Ｍ＋３Ｈ）：１１５０．３、実測値１１５０．０。
【0077】
化合物ＩＩの主要プール純度は、９８．０％超であることが見出されている。最終的な主要生成物プールのその後の凍結乾燥は、凍結乾燥されたペプチドＴＦＡ塩をもたらす。分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される。平均ＭＷ＝４１９１．８Ｄａ。予想される質量：（Ｍ＋３Ｈ）：１３９８．２、実測値１３９８．２。以下は、化合物ＩＩ（配列番号２）の概略図である。
【化6】
【0078】
上記及び当業者に既知のものに類似した方法を使用して、ペプチド骨格を合成し、脂肪酸－リンカー部分をコンジュゲートさせ、純度を調べ、本明細書に記載されている本発明の化合物の分子量を確認することができる。
【0079】
実施例２：インビトロ機能活性
ＡＭＹ１及びＣＴ受容体は、Ｇαｓタンパク質に機能的に共役しているＧＰＣＲである。これらの受容体を刺激すると細胞内ｃＡＭＰの産生が増加し、これは、標準的なインビトロ技術を使用して検出することができる。ヒトＡＭＹ１又はＣＴ受容体は、ｐｃＤＮＡ（ＣＡＬＣＲ）又はｐＣＭＶｐｉｇｇｙｂａｃ（ＲＡＭＰ１）発現ベクターの制御下で、ヒト膀胱細胞（ＵＭ－ＵＣ－３）の細胞で安定的に発現される。ＡＭＹ１細胞は、１０％のＦＢＳ、１％の抗生物質／抗真菌溶液、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１Ｘ ＭＥＭ ＮＥＡＡ、１Ｘ ＧｌｕｔａＭＡＸ－Ｉ、２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ、及び０．４μｇ／ｍＬのピューロマイシンを補足したＭＥＭ １Ｘ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で培養する。ＣＴ細胞は、ピューロマイシンを欠いていることを除いて、同じ培地で培養する。培養細胞を７０％の集密度に増殖させ、次いで、新鮮な培地で一晩インキュベートする。
ＡＭＹ１及びＣＴ受容体は、Ｇαｓタンパク質に機能的に共役しているＧＰＣＲである。これらの受容体を刺激すると細胞内ｃＡＭＰの産生が増加し、これは、標準的なインビトロ技術を使用して検出することができる。ヒトＡＭＹ１又はＣＴ受容体は、ｐｃＤＮＡ（ＣＡＬＣＲ）又はｐＣＭＶｐｉｇｇｙｂａｃ（ＲＡＭＰ１）発現ベクターの制御下で、ヒト膀胱細胞（ＵＭ－ＵＣ－３）の細胞で安定的に発現される。ＡＭＹ１細胞は、１０％のＦＢＳ、１％の抗生物質／抗真菌溶液、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１Ｘ ＭＥＭ ＮＥＡＡ、１Ｘ ＧｌｕｔａＭＡＸ－Ｉ、２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ、及び０．４μｇ／ｍＬのピューロマイシンを補足したＭＥＭ １Ｘ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で培養する。ＣＴ細胞は、ピューロマイシンを欠いていることを除いて、同じ培地で培養する。培養細胞を７０％の集密度に増殖させ、次いで、新鮮な培地で一晩インキュベートする。
【0080】
アッセイ日に、１０μＬのアッセイ緩衝液（フェノールレッド不含のＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号１７－３０５－ＣＶ）、０．１％のカゼイン、０．５ｍＭのＩＢＭＸ、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）を白色のポリ－Ｄ－リジンでコーティングされた３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３５４６６１）の各々のウェルに分注する。ＤＭＳＯで希釈したペプチドを、ＥＣＨＯ音響液体ハンドラー（Ｂｅｃｋｍａｎ）を使用して１：３の希釈系列で添加する（２００ｎＬ／ウェル）。培養細胞をＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｇｉｂｃｏ）で剥離し、アッセイ緩衝液に再懸濁し、１２００細胞／ウェル（ｈＣＴ）又は１５００細胞／ウェル（ｈＡＭＹ１）を含む１０μＬを各ウェルに分注する。プレートを室温で１時間インキュベートする。
【0081】
ＨＴＲＦ技術（ホモジニアス時間分解蛍光法、Ｃｉｓｂｉｏ）を販売者の使用説明書に従って使用して、細胞内ｃＡＭＰの量を定量化する。簡潔に述べると、溶解緩衝液中の１０μＬのｃＡＭＰ－ｄ２コンジュゲート及び１０μＬの抗ｃＡＭＰ－クリプテートコンジュゲートを、処理した細胞とともに室温で６０分間インキュベートする。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）を使用してＨＴＲＦ信号を直ちに検出し、６６５～６２０ｎｍで蛍光の比を計算する。生データは、各実験について生成されたｃＡＭＰ標準曲線を使用して、ｃＡＭＰ量（ピコモル／ウェル）に変換する。相対ＥＣ５０値は、４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）ｖ１２．０．４）で、１ｎＭのサケＣＴ（Ｂａｃｈｅｍ）を最大値として、かつ緩衝液のみを最小値として使用して定義された濃度応答曲線の上下範囲から計算する。本出願の化合物は、表１に示されるように、アミリン及びカルシトニン受容体における活性を示す。
【表1】
【0082】
実施例３：正常ラットモデルにおけるインビボ効能
Ｅｎｖｉｇｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからの約３００グラムの重さの雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットを使用して、９６時間の評価研究中に、インビボでの食物摂取量の急激な減少及び体重低下に対する化合物ＩＩの効果を評価する。ラットは、Ｌｉｌｌｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓの承認されたＡｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ下で維持し、午後１０時から午前１０時までの１２時間の逆光サイクルで個別に飼育する。研究の朝に、ベースラインの動物の体及び食物の重量を測定し、ビヒクル（２０ｍＭのトリスｐＨ８、５０ｍｇ／ｍＬのＤ－マンニトール、０．０２％のＰＳ８０）、又はビヒクル（２０ｍＭのトリスｐＨ８、５０ｍｇ／ｍＬのＤ－マンニトール、０．０２％のＰＳ８０）中の単独の化合物ＩＩ（配列番号２）を異なる用量で皮下投与する。
Ｅｎｖｉｇｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからの約３００グラムの重さの雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットを使用して、９６時間の評価研究中に、インビボでの食物摂取量の急激な減少及び体重低下に対する化合物ＩＩの効果を評価する。ラットは、Ｌｉｌｌｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓの承認されたＡｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ下で維持し、午後１０時から午前１０時までの１２時間の逆光サイクルで個別に飼育する。研究の朝に、ベースラインの動物の体及び食物の重量を測定し、ビヒクル（２０ｍＭのトリスｐＨ８、５０ｍｇ／ｍＬのＤ－マンニトール、０．０２％のＰＳ８０）、又はビヒクル（２０ｍＭのトリスｐＨ８、５０ｍｇ／ｍＬのＤ－マンニトール、０．０２％のＰＳ８０）中の単独の化合物ＩＩ（配列番号２）を異なる用量で皮下投与する。
【0083】
投与後の２４時間、４８時間、７２時間、及び９６時間で、動物の体及び食物の重量を測定する。毎日の食物摂取量及び体重のパーセント減少を計算する。これらの結果を以下で表２及び３に列挙する。全てのデータは、毎日の平均食物摂取量及びパーセント体重減少として示されている。結果によって示されるように、化合物ＩＩは、食物消費量を減少させ、体重を急激かつ用量依存的に減少させる効果を有する。また、非常に少ない用量でも、食物摂取量及び体重を下げる効能を示す。
【表2】
【表3】
【0084】
実施例４：食事誘発性肥満（ＤＩＯ）ラットにおけるインビボ効能
この研究は、ＤＩＯラットにおける糖尿病及び／又は肥満状態に対する化合物ＩＩの効果を調査するために実施する。Ｌｉｌｌｙ（ＴＤ９５２１７；Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）に到着してから高カロリー食を維持した２４～３０週齢の食事誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓ（Ｅｎｖｉｇｏ）ラットを以下の研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（２２００点灯）と食物（ＴＤ９５２１７）及び水への自由なアクセスとを有する温度制御された（２４℃）施設で動物を個別に飼育する。
この研究は、ＤＩＯラットにおける糖尿病及び／又は肥満状態に対する化合物ＩＩの効果を調査するために実施する。Ｌｉｌｌｙ（ＴＤ９５２１７；Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）に到着してから高カロリー食を維持した２４～３０週齢の食事誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓ（Ｅｎｖｉｇｏ）ラットを以下の研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（２２００点灯）と食物（ＴＤ９５２１７）及び水への自由なアクセスとを有する温度制御された（２４℃）施設で動物を個別に飼育する。
【0085】
動物の各々の実験群が同様の体重を有するように、ラットをそれらの体重に応じて無作為化する。体重は、５１４～７１０グラムの範囲である。
【0086】
各々の群は、５匹のラットを含む。ビヒクル、及びビヒクル（トリスｐＨ８、（５０ｍｇ／ｍＬのＤ－マンニトール）＋０．０２％のｐｓ８０）に溶解した化合物ＩＩ（０．１及び１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）を、１５日間にわたって３日ごとに暗サイクルの開始の３０～６０分前に、自由にえさを与えたＤＩＯラットに皮下（ＳＣ）注射（１ｍＬ／ｋｇ）によって投与する。１、４、７、１０、及び１３日目にＳＣ注射を行う。研究を通して、体重及び食物摂取量を毎日測定する。体重の絶対変化は、分子の最初の注射の前の同じ動物の体重を差し引くことによって計算する。－１日目（治療の１日前）及び１５日目に、体組成を定量的核磁気共鳴（ＱＭＮＲ、ＥｃｈｏＭＲＩ ＬＬＣ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）によって評価した。
【0087】
研究の最後に、血液を採取して血液グルコース及び血漿インスリンを測定する。血液グルコースは、ＡｃｃｕＣｈｅｋ血糖測定器（Ｒｏｃｈｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）によって測定する。インスリンは、ＥＬＩＳＡ（ＭＳＤ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）によって測定する。
【0088】
全てのデータは、群当たり５匹の動物の平均±ＳＥＭとして提示される。統計分析は、反復測定ＡＮＯＶＡ、続いて多重比較のためのダネットの方法を使用して実施する。有意差は、ｐ＜０．０５で特定される。
【0089】
化合物ＩＩは、用量依存的に雄のＤＩＯラットの体重及び食物摂取量を減少させる。体重の減少は、主に脂肪量の減少によるものと考えられる。表４及び５に示されるように、化合物ＩＩを使用した治療では、実質的な体重低下に加えて、用量依存的に血清グルコースの減少及びインスリンの減少が観察される。
【0090】
体組成の測定は、０日目及び１４日目に行う。最初の測定からの変化は、０日目の測定～１４日目の測定として提示される。全てのデータは、１４日目からの群当たり５匹の動物の平均±ＳＥＭとして提示される。
統計分析は、反復測定ＡＮＯＶＡ、続いて多重比較のためのダネットの方法を使用して実施する。有意差は、ｐ＜０．０５で特定される。
統計分析は、反復測定ＡＮＯＶＡ、続いて多重比較のためのダネットの方法を使用して実施する。有意差は、ｐ＜０．０５で特定される。
【表4】
【表5】
【0091】
実施例５：化合物ＩＩの薬物動態学的挙動
化合物ＩＩの血漿濃度は、Ｑ Ｓｑｕａｒｅｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ ＬＬＣ、Ｉｔｈａｃａ，ＮＹにおいて、認定された液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）法によって決定される。化合物ＩＩ及び内部標準としての類似体は、タンパク質沈殿、続いて固相抽出を使用して、１００％の種特異的血漿から抽出する。ペプチド及びアシル鎖を含む化合物ＩＩのインタクトマスは、Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｏｒｂｉｔｒａｐ（商標）質量分析計によって検出する。
化合物ＩＩの血漿濃度は、Ｑ Ｓｑｕａｒｅｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ ＬＬＣ、Ｉｔｈａｃａ，ＮＹにおいて、認定された液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）法によって決定される。化合物ＩＩ及び内部標準としての類似体は、タンパク質沈殿、続いて固相抽出を使用して、１００％の種特異的血漿から抽出する。ペプチド及びアシル鎖を含む化合物ＩＩのインタクトマスは、Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｏｒｂｉｔｒａｐ（商標）質量分析計によって検出する。
【0092】
サルの薬物動態学的研究では、雄及び雌のカニクイザルに、０．２ｍＬ／ｋｇの体積のトリス－マンニトール緩衝液（ｐＨ８．０）中の２０ｎｍｏｌ／ｋｇ（０．０８４ｍｇ／ｋｇ）の化合物ＩＩの単回皮下用量を投与する。薬物動態学的特性評価のために、投薬前及び投薬後１、３、６、１２、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８、２４０、３３６、４０８、５０４時間に血液を採取する。結果は、表６に示されている。
【表6】
【0093】
ラットの薬物動態学的研究では、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットに、０．２ｍＬ／ｋｇの体積のトリス－マンニトール緩衝液（ｐＨ８．０）中の２０ｎｍｏｌ／ｋｇ（０．０８４ｍｇ／ｋｇ）の化合物ＩＩの単回皮下用量を投与する。薬物動態学的特性評価のために、投薬後１、３、６、１２、２４、４８、７２、９６、１２０、及び１４４時間に血液を採取する。結果は、表７に示されている。
【表7】
【0094】
カニクイザルにおいて化合物ＩＩによって示された半減期の延長は、化合物ＩＩの週１回の用量による治療が患者において可能であることを示す。
【0095】
実施例６：他のインクレチン化合物と組み合わせた化合物ＩＩの食事誘発性肥満（ＤＩＯ）ラットにおけるインビボ効能
この研究は、ＧＬＰ－１アゴニスト（化合物ＩＩＩ）、オキシントモジュリン類似体（化合物ＩＶ）、並びにグルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ（化合物Ｖ）のトリアゴニストを含む他のインクレチン化合物と組み合わせて投与したときの、ＤＩＯラットにおける糖尿病及び／又は肥満状態に対する化合物ＩＩの効果を調査するために実施する。Ｌｉｌｌｙ（ＴＤ９５２１７；Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）に到着してから高カロリー食を維持した食事誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓ（Ｅｎｖｉｇｏ）ラットを以下の研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（２２００点灯）と食物（ＴＤ９５２１７）及び水への自由なアクセスとを有する温度制御された（２４℃）施設で動物を個別に飼育する。
この研究は、ＧＬＰ－１アゴニスト（化合物ＩＩＩ）、オキシントモジュリン類似体（化合物ＩＶ）、並びにグルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ（化合物Ｖ）のトリアゴニストを含む他のインクレチン化合物と組み合わせて投与したときの、ＤＩＯラットにおける糖尿病及び／又は肥満状態に対する化合物ＩＩの効果を調査するために実施する。Ｌｉｌｌｙ（ＴＤ９５２１７；Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）に到着してから高カロリー食を維持した食事誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓ（Ｅｎｖｉｇｏ）ラットを以下の研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（２２００点灯）と食物（ＴＤ９５２１７）及び水への自由なアクセスとを有する温度制御された（２４℃）施設で動物を個別に飼育する。
【0096】
動物の各々の実験群が同様の体重を有するように、ラットをそれらの体重に応じて無作為化する。体重は、５２９～８２３グラムの範囲である。
【0097】
各々の群は、５匹のラットを含む。ビヒクル及び化合物ＩＩ（１ｎｍｏｌ／ｋｇ）を、ビヒクル（４０ｍＭのトリス－ＨＣｌｐＨ８＋０．０２％のＰＳ８０）に溶解させ、１４日間にわたって３日ごとに暗サイクルの開始の３０～９０分前に、自由にえさを与えたＤＩＯラットに皮下（ＳＣ）注射（１ｍＬ／ｋｇ）によって投与する。１、４、７、１０、及び１３日目にＳＣ注射を行う。研究を通して、体重及び食物摂取量を毎日測定する。体重の絶対変化は、分子の最初の注射の前の同じ動物の体重を差し引くことによって計算する。
【0098】
研究の最後に、血液を採取して血液グルコース及び血漿インスリンを測定する。血液グルコースは、ＡｃｃｕＣｈｅｋ血糖測定器（Ｒｏｃｈｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）によって測定する。インスリンは、ＥＬＩＳＡ（ＭＳＤ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）によって測定する。
【0099】
全てのデータは、群当たり５匹の動物の平均±ＳＥＭとして提示される。一方向ＡＮＯＶＡを使用して統計分析を実施し、続いて、Ｔｕｋｅｙの多重比較試験を実施して、治療群をビヒクル群と又は相互に比較する。有意差は、ｐ＜０．０５で特定される。
【表8】
【0100】
実施例７：ＧＩＰ－ＧＬＰのアゴニストと組み合わせた化合物ＩＩの類似体
この研究は、ＧＩＰ及びＧＬＰ－１の二重アゴニストである化合物ＶＩ（配列番号９）とともに投与したときの、ＤＩＯラットにおける糖尿病及び／又は肥満状態に対する化合物ＩＩの類似体の効果を調査するために実施する。Ｌｉｌｌｙ（ＴＤ９５２１７；Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）に到着してから高カロリー食を維持した食事誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓ（Ｅｎｖｉｇｏ）ラットを以下の研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（２２００点灯）と食物（ＴＤ９５２１７）及び水への自由なアクセスとを有する温度制御された（２４℃）施設で動物を個別に飼育する。
この研究は、ＧＩＰ及びＧＬＰ－１の二重アゴニストである化合物ＶＩ（配列番号９）とともに投与したときの、ＤＩＯラットにおける糖尿病及び／又は肥満状態に対する化合物ＩＩの類似体の効果を調査するために実施する。Ｌｉｌｌｙ（ＴＤ９５２１７；Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）に到着してから高カロリー食を維持した食事誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓ（Ｅｎｖｉｇｏ）ラットを以下の研究に使用する。１２時間の明／暗サイクル（２２００点灯）と食物（ＴＤ９５２１７）及び水への自由なアクセスとを有する温度制御された（２４℃）施設で動物を個別に飼育する。
【0101】
動物の各々の実験群が同様の体重を有するように、ラットをそれらの体重に応じて無作為化する。体重は、５４９～６８３グラムの範囲である。
【0102】
各々の群は、５匹のラットを含む。ビヒクル、及びビヒクル（１０ｍＭのトリス－ＨＣｌｐＨ７．５、（５０ｍｇ／ｍＬのＤ－マンニトール）＋０．０２％のＰＳ８０）に溶解した化合物ＩＩ（１ｎｍｏｌ／ｋｇ）を、１４日間にわたって３日ごとに暗サイクルの開始の３０～９０分前に、自由にえさを与えたＤＩＯラットに皮下（ＳＣ）注射（１ｍＬ／ｋｇ）によって投与する。１、４、７、１０、及び１３日目にＳＣ注射を行う。研究を通して、体重及び食物摂取量を毎日測定する。体重の絶対変化は、分子の最初の注射の前の同じ動物の体重を差し引くことによって計算する。
【0103】
研究の最後に、血液を採取して血液グルコース及び血漿インスリンを測定する。血液グルコースは、ＡｃｃｕＣｈｅｋ血糖測定器（Ｒｏｃｈｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）によって測定する。インスリンは、ＥＬＩＳＡ（ＭＳＤ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）によって測定する。
【0104】
全てのデータは、群当たり５匹の動物の平均±ＳＥＭとして提示される。一方向ＡＮＯＶＡを使用して統計分析を実施し、続いて、Ｔｕｋｅｙの多重比較試験を実施して、治療群をビヒクル群と又は相互に比較する。有意差は、ｐ＜０．０５で特定される。
【表9】
【0105】
化合物ＶＩと組み合わせた化合物ＩＩの類似体は、個別の治療よりも多くの体重低下を引き起こしたが、これは主に、併用治療によって誘発された累積食物摂取量の有意な減少に起因すると考えられる。
【0106】
実施例８：免疫原性リスク評価
ＭＡＰＰｓアッセイ（ＭＨＣ関連ペプチドプロテオミクス）
１０人の正常なヒトドナーからの初代ヒト樹状細胞は、記載されているように、ＣＤ１４＋細胞の分離によるバフィーコートから調製し、５％の血清代替物（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ２５９６１０１）を含有する完全ＲＰＭＩ培地で２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４及び４０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦとともに３７℃及び５％のＣＯ２で３日間インキュベートすることによって未成熟樹状細胞に分化させる（Ｋｎｉｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｃｌａｓｓ ＩＩ Ｉｍｍｕｎｏｐｅｐｔｉｄｏｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ”，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，３３，１０８４５４（２０２０））。４日目に３マイクロモルの試験抗体を約５×１０６細胞に添加し、細胞を成熟樹状細胞に形質転換するために５μｇ／ｍＬのＬＰＳを含有する新鮮な培地を５時間のインキュベーション後に交換する。翌日に、成熟細胞を、プロテアーゼ阻害剤及びＤＮＡｓｅを有する１ｍＬのＲＩＰＡ緩衝液中で溶解させる。ライセートを、サンプル分析まで－８０℃で保存する。
ＭＡＰＰｓアッセイ（ＭＨＣ関連ペプチドプロテオミクス）
１０人の正常なヒトドナーからの初代ヒト樹状細胞は、記載されているように、ＣＤ１４＋細胞の分離によるバフィーコートから調製し、５％の血清代替物（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ２５９６１０１）を含有する完全ＲＰＭＩ培地で２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４及び４０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦとともに３７℃及び５％のＣＯ２で３日間インキュベートすることによって未成熟樹状細胞に分化させる（Ｋｎｉｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｃｌａｓｓ ＩＩ Ｉｍｍｕｎｏｐｅｐｔｉｄｏｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ”，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，３３，１０８４５４（２０２０））。４日目に３マイクロモルの試験抗体を約５×１０６細胞に添加し、細胞を成熟樹状細胞に形質転換するために５μｇ／ｍＬのＬＰＳを含有する新鮮な培地を５時間のインキュベーション後に交換する。翌日に、成熟細胞を、プロテアーゼ阻害剤及びＤＮＡｓｅを有する１ｍＬのＲＩＰＡ緩衝液中で溶解させる。ライセートを、サンプル分析まで－８０℃で保存する。
【0107】
自動液体処理システムを使用して、ビオチン化抗汎ＨＬＡクラスＩＩ抗体（クローンＴｕ３９）を使用し、解凍したライセートからＨＬＡ－ＩＩ分子を分離する。結合した受容体－ペプチド複合体を、５％酢酸、０．１％ＴＦＡで溶出する。溶出したＭＨＣ－ＩＩペプチドを、高分子量タンパク質を除去するために、事前に洗浄した１０ｋ ＭＷＣＯフィルターに通す。分離されたＭＨＣ－ＩＩペプチドは、Ｔｈｅｒｍｏ ＬＵＭＯＳ質量分析計を備えたＴｈｅｒｍｏ ｅａｓｙ １２００ ｎＬＣ－ＨＰＬＣシステムを使用して、ナノＬＣ／ＭＳによって分析する。この分離では、７５μｍ×７ｃｍのＹＭＣ－ＯＤＳ Ｃ１８カラムを使用し、流速２５０ｎＬ／分、Ａ溶媒として０．１％ギ酸水溶液、Ｂ溶媒として０．１％ギ酸を含む８０％アセトニトリルで６５分間のグラジエントを行った。質量分析は、解像度２４０，０００のフルスキャンモードで実行し、続いて、ＨＣＤ及びＥＴｈｃＤフラグメンテーションによるイオントラップ型ラピッドスキャンで構成される３秒のデータ依存型ＭＳ／ＭＳサイクルを実行する。
【0108】
ペプチドの同定は、試験抗体配列を含むウシ／ヒトデータベースに対する酵素検索パラメータのない複数の検索アルゴリズムを使用し、内部プロテオミクスパイプライン（Ｈｉｇｇｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｌａｂｅｌ－ｆｒｅｅ ＬＣ－ＭＳ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４２８， ２０９－２３０（２００８））によって生成される。ＫＮＩＭＥワークフローは、サンプルの識別ファイルを処理するために使用される。試験品から同定されたペプチドは、親配列に対して整列される。非生殖細胞残基を表示するドナーの割合、非生殖細胞残基を含むペプチドを表示する異なる領域の数、及び非生殖細胞残基を含む各領域でのペプチド表示の深さを注釈する全てのドナーの要約を作成する。非生殖細胞系ペプチドの表示の程度の増加は、免疫原性のリスクの増加と関連している。化合物ＩＩについての結果は、表９に示されており、化合物ＩＩに関連する低レベルの免疫原性リスクを示唆している。
【表10】
【0109】
Ｔ細胞増殖アッセイ
このアッセイは、記載されているように、細胞増殖を誘導することによるＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する試験候補の能力を評価する（Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｏｓｔ－ｈｏｃ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｒｅｖｅａｌｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｉｍｍｕｎｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ”，ｍＡｂｓ，１２，１７６４８２９（２０２０））。１０人の健康なドナーからの凍結保存したＰＢＭＣを使用し、ＣＤ８＋Ｔ細胞をＰＢＭＣから枯渇させ、１μＭのカルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した。ＰＢＭＣを、５％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ２５９６１０１）を含有するＡＩＭ－Ｖ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１２０５５－０８３）に４×１０６細胞／ｍｌ／ウェルで播種し、様々な試験物質、培地対照、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ；陽性対照）、リキシセナチド（アッセイ陽性対照）、又は化合物ＩＩを含有する２．０ｍＬにおいて３連で試験した。細胞を培養し、５％のＣＯ２、３７℃で７日間インキュベートした。７日目に、ハイスループットサンプラー（ＨＴＳ）を装備したＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）を使用したフローサイトメトリーによる生存率検出のために、サンプルを以下の細胞表面マーカーで染色した：抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ１９、及びＤＡＰＩ。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ、ＬＬＣ、ＴｒｅｅＳｔａｒ）を使用してデータを分析し、細胞分裂指数（ＣＤＩ）を計算した。簡潔に述べると、各々の試験候補のＭＡＰＰｓ由来ペプチドクラスタについてのＣＤＩは、ペプチド刺激されたウェルからの増殖しているＣＦＳＥｄｉｍＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセントを、刺激されていないウェルにおける増殖しているＣＦＳＥｄｉｍＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセントで割ることによって計算した。２．５超のＣＤＩは、陽性応答を表すと考えられた。全てのドナーにわたるドナー頻度の割合を評価した。ドナー全員が、ＫＬＨに対して陽性のＴ細胞応答を示した（１００％）。臨床免疫原性陽性対照リキシセナチドは、この研究でコホートの５０％の陽性Ｔ細胞応答を誘発した。これは、このアッセイの予想範囲内である（４０～９０％の陽性ドナー頻度）。化合物ＩＩについての結果は、表１０に示されており、化合物ＩＩについての低レベルの免疫原性リスクを示唆している。
このアッセイは、記載されているように、細胞増殖を誘導することによるＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する試験候補の能力を評価する（Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｏｓｔ－ｈｏｃ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｒｅｖｅａｌｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｉｍｍｕｎｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ”，ｍＡｂｓ，１２，１７６４８２９（２０２０））。１０人の健康なドナーからの凍結保存したＰＢＭＣを使用し、ＣＤ８＋Ｔ細胞をＰＢＭＣから枯渇させ、１μＭのカルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した。ＰＢＭＣを、５％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ２５９６１０１）を含有するＡＩＭ－Ｖ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１２０５５－０８３）に４×１０６細胞／ｍｌ／ウェルで播種し、様々な試験物質、培地対照、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ；陽性対照）、リキシセナチド（アッセイ陽性対照）、又は化合物ＩＩを含有する２．０ｍＬにおいて３連で試験した。細胞を培養し、５％のＣＯ２、３７℃で７日間インキュベートした。７日目に、ハイスループットサンプラー（ＨＴＳ）を装備したＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）を使用したフローサイトメトリーによる生存率検出のために、サンプルを以下の細胞表面マーカーで染色した：抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ１９、及びＤＡＰＩ。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ、ＬＬＣ、ＴｒｅｅＳｔａｒ）を使用してデータを分析し、細胞分裂指数（ＣＤＩ）を計算した。簡潔に述べると、各々の試験候補のＭＡＰＰｓ由来ペプチドクラスタについてのＣＤＩは、ペプチド刺激されたウェルからの増殖しているＣＦＳＥｄｉｍＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセントを、刺激されていないウェルにおける増殖しているＣＦＳＥｄｉｍＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセントで割ることによって計算した。２．５超のＣＤＩは、陽性応答を表すと考えられた。全てのドナーにわたるドナー頻度の割合を評価した。ドナー全員が、ＫＬＨに対して陽性のＴ細胞応答を示した（１００％）。臨床免疫原性陽性対照リキシセナチドは、この研究でコホートの５０％の陽性Ｔ細胞応答を誘発した。これは、このアッセイの予想範囲内である（４０～９０％の陽性ドナー頻度）。化合物ＩＩについての結果は、表１０に示されており、化合物ＩＩについての低レベルの免疫原性リスクを示唆している。
【表11】
【0110】
配列
化合物Ｉ（配列番号１）
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２
化合物ＩＩ（配列番号２）
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２
プラムリンチド（配列番号３）
ＫＣＮＴＡＴＣＡＴＱＲＬＡＮＦＬＶＨＳＳＮＮＦＧＰＩＬＰＰＴＮＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
Ｃｙｓ２とＣｙｓ７との間にジスルフィド結合を有する
ヒトカルシトニン（配列番号４）
ＣＧＮＬＳＴＣＭＬＧＴＹＴＱＤＦＮＫＦＨＴＦＰＱＴＡＩＧＶＧＡＰ－ＮＨ２
Ｃｙｓ１とＣｙｓ７との間にジスルフィド結合を有する
ヒトアミリン（配列番号５）
ＫＣＮＴＡＴＣＡＴＱＲＬＡＮＦＬＶＨＳＳＮＮＦＧＡＩＬＳＳＴＮＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
Ｃｙｓ２とＣｙｓ７との間にジスルフィド結合を有する
化合物ＩＩＩ（配列番号６）
Ｈ－Ａｉｂ－ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ２Ｈ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
化合物ＩＶ（配列番号７）
Ｈ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ－ＮＨ２
化合物Ｖ（配列番号８）
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＫＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－Ａｉｂ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
化合物ＶＩ（配列番号９）
Ｙ－Ａｉｂ－ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩ－Ａｉｂ－ＬＤＫＩＡＱＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）Ａ－（１Ｎａｌ）－ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
化合物ＶＩＩ（配列番号１０）
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）１－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２ＨでのＫ側鎖のイプシロン－アミノ基へのコンジュゲーションを通じて化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている。
ＣＡＳ登録番号：２０２３７８８－１９－２
リキシセナチド（配列番号１１）
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２
ＣＡＳ登録番号：３２０３６７－１３－３
化合物ＶＩＩＩ（配列番号１２）
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫ（γＧｌｕ－ＣＯ－（ＣＨ２）１４－ＣＨ３）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
ＣＡＳ登録番号：２０４６５６－２０－２
化合物ＩＸ（配列番号１３）
デュラグルチドは、ヒトＧＬＰ－１受容体アゴニストであり、そのＣ末端で、免疫グロブリンのＦｃ部分の類似体のＮ末端にペプチドリンカーを介して融合しているＧＬＰ－ｌ類似体の二量体を含み、ＣＡＳ登録番号９２３９５０－０８－７として同定され、以下の化学名を提供する：免疫グロブリンＧ４（合成ヒトＦｃ断片）を含む、ペプチド（合成１６－アミノ酸リンカー）融合タンパク質を含む、７－３７－グルカゴン様ペプチドＩ［８－グリシン、２２－グルタミン酸、３６－グリシン］（合成ヒト）融合タンパク質、二量体。デュラグルチドの各々のモノマーは、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を有する：
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
化合物Ｉ（配列番号１）
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２
化合物ＩＩ（配列番号２）
アセチル－ＡＳＨＬＳＴＡＶＬＧＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γ－Ｇｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＬＳ－Ａｉｂ－ＥＬＨＫＬＥＤＹＰＲＴＤＶＧＡＥＳＰ－ＮＨ２
プラムリンチド（配列番号３）
ＫＣＮＴＡＴＣＡＴＱＲＬＡＮＦＬＶＨＳＳＮＮＦＧＰＩＬＰＰＴＮＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
Ｃｙｓ２とＣｙｓ７との間にジスルフィド結合を有する
ヒトカルシトニン（配列番号４）
ＣＧＮＬＳＴＣＭＬＧＴＹＴＱＤＦＮＫＦＨＴＦＰＱＴＡＩＧＶＧＡＰ－ＮＨ２
Ｃｙｓ１とＣｙｓ７との間にジスルフィド結合を有する
ヒトアミリン（配列番号５）
ＫＣＮＴＡＴＣＡＴＱＲＬＡＮＦＬＶＨＳＳＮＮＦＧＡＩＬＳＳＴＮＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
Ｃｙｓ２とＣｙｓ７との間にジスルフィド結合を有する
化合物ＩＩＩ（配列番号６）
Ｈ－Ａｉｂ－ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ２Ｈ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
化合物ＩＶ（配列番号７）
Ｈ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ－ＮＨ２
化合物Ｖ（配列番号８）
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＫＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－Ａｉｂ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
化合物ＶＩ（配列番号９）
Ｙ－Ａｉｂ－ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩ－Ａｉｂ－ＬＤＫＩＡＱＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）Ａ－（１Ｎａｌ）－ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
化合物ＶＩＩ（配列番号１０）
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）１－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２ＨでのＫ側鎖のイプシロン－アミノ基へのコンジュゲーションを通じて化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミドとしてアミド化されている。
ＣＡＳ登録番号：２０２３７８８－１９－２
リキシセナチド（配列番号１１）
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ－ＮＨ２
ＣＡＳ登録番号：３２０３６７－１３－３
化合物ＶＩＩＩ（配列番号１２）
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫ（γＧｌｕ－ＣＯ－（ＣＨ２）１４－ＣＨ３）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
ＣＡＳ登録番号：２０４６５６－２０－２
化合物ＩＸ（配列番号１３）
デュラグルチドは、ヒトＧＬＰ－１受容体アゴニストであり、そのＣ末端で、免疫グロブリンのＦｃ部分の類似体のＮ末端にペプチドリンカーを介して融合しているＧＬＰ－ｌ類似体の二量体を含み、ＣＡＳ登録番号９２３９５０－０８－７として同定され、以下の化学名を提供する：免疫グロブリンＧ４（合成ヒトＦｃ断片）を含む、ペプチド（合成１６－アミノ酸リンカー）融合タンパク質を含む、７－３７－グルカゴン様ペプチドＩ［８－グリシン、２２－グルタミン酸、３６－グリシン］（合成ヒト）融合タンパク質、二量体。デュラグルチドの各々のモノマーは、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を有する：
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
【配列表】