(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-10-15
(45)【発行日】2024-10-23
(54)【発明の名称】可溶化剤および可溶化溶液
(51)【国際特許分類】
G01N 33/48 20060101AFI20241016BHJP
G01N 33/82 20060101ALI20241016BHJP
G01N 33/92 20060101ALI20241016BHJP
【ＦＩ】
G01N33/48 A
G01N33/82
G01N33/92
【請求項の数】
2
(21)【出願番号】P 2022516969
(86)(22)【出願日】2021-04-13
(86)【国際出願番号】 JP2021015253
(87)【国際公開番号】W WO2021215293
(87)【国際公開日】2021-10-28
【審査請求日】2023-11-07
(31)【優先権主張番号】P 2020074983
(32)【優先日】2020-04-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】000004341
【氏名又は名称】日油株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100136629
【弁理士】
【氏名又は名称】鎌田 光宜
(74)【代理人】
【識別番号】100080791
【弁理士】
【氏名又は名称】高島 一
(74)【代理人】
【識別番号】100125070
【弁理士】
【氏名又は名称】土井 京子
(74)【代理人】
【識別番号】100121212
【弁理士】
【氏名又は名称】田村 弥栄子
(74)【代理人】
【識別番号】100174296
【弁理士】
【氏名又は名称】當麻 博文
(74)【代理人】
【識別番号】100137729
【弁理士】
【氏名又は名称】赤井 厚子
(74)【代理人】
【識別番号】100151301
【弁理士】
【氏名又は名称】戸崎 富哉
(74)【代理人】
【識別番号】100152308
【弁理士】
【氏名又は名称】中 正道
(74)【代理人】
【識別番号】100201558
【弁理士】
【氏名又は名称】亀井 恵二郎
(74)【代理人】
【識別番号】100122345
【弁理士】
【氏名又は名称】高山 繁久
(72)【発明者】
【氏名】小林 滉
(72)【発明者】
【氏名】松田 将
(72)【発明者】
【氏名】野田 朋澄
【審査官】白形 優依
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１６／０２１６７８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２００３－５０７４９０（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１６／０３９３１９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特開２０１５－１１９６８７（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００３－１３７８１６（ＪＰ，Ａ）
【文献】松野亮介 ほか，マイケル付加を用いたホスホリルコリン型両性界面活性剤の合成と可溶化特性評価，高分子学会予稿集，2009年，第58巻，第2号，p.4609
【文献】MATSUNO, R. et al.，Simple Synthesis of a Library of Zwitterionic Surfactants via Michael-Type Addition of Methacrylate and Alkane Thiol Compounds，Langmuir，2010年，Vol.26, No.16，pp.13028-13032
【文献】BISSETTE, A. J. et al.，Physical autocatalysis driven by a bond-forming thiol-ene reaction，nature communications，2014年09月02日，Vol.5, Article number: 4607，pp.1-8
【文献】松野亮介 ほか，マイケル付加を利用したホスホリルコリン化合物ライブラリの構築，高分子学会予稿集，2010年，第59巻，第2号，p.4892
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｇ０１Ｎ ３３／４８ － ３３／９８
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（１）：【化1】
【請求項2】
請求項１に記載の可溶化剤および水を含む、難水溶性物質のための可溶化溶液であって、難水溶性物質が、脂溶性ビタミン、ステロイドおよび脂肪酸からなる群から選ばれる少なくとも一つである可溶化溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、難水溶性物質のための可溶化剤、および難水溶性物質のための可溶化溶液に関する。本発明の可溶化剤および可溶化溶液は、例えば、血漿、血清および血液などの検体中に存在する難水溶性物質を水または水溶液（例えば緩衝液）に溶解させるために用いることができる。
【背景技術】
【0002】
疾病の早期発見を目指し、臨床検査、診断薬の分野において、免疫反応を利用する測定方法が広く行われている。その中で、検査対象の拡大や測定感度の向上が求められており、その中でも難水溶性物質の検出は大きな課題になっている。
【0003】
免疫反応を利用する測定方法では、検体である血清、血漿、細胞抽出物および尿に含まれる物質（例えば、ペプチド、蛋白質、核酸、抗体、抗原など）を検査対象として検出する。しかし、検査対象が脂質、脂溶性ビタミン、ステロイドなどのように難水溶性物質であった場合、それらの水に対する溶解性が低いため、免疫反応を担う抗体または酵素が反応しない、或いは測定時に沈殿や白濁が生じ、その検出は困難となる。
【0004】
従来、これらの難水溶性物質の溶解性を上げる際には、界面活性剤が広く用いられている。界面活性剤は、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤および非イオン界面活性剤に分類され、その種類も非常に多い。この点、特許文献１に記載されているように、非イオン界面活性剤およびアニオン界面活性剤を組み合わて用いる場合、界面活性剤の種類が多いため、その組み合わせの検討は非常に煩雑となる。加えて、免疫反応や酵素反応を応用する診断薬では、界面活性剤による蛋白質変性に伴い、抗体や酵素の活性が低下してしまうため、使用できる界面活性剤の選択と、その添加濃度の検討に多大な労力が必要であった。
【0005】
特許文献２および３には、２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン重合体を用いた膜蛋白質や難水溶性物質の可溶化方法が記載されている。しかし、２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン重合体を溶液に添加すると、その重合体の濃度次第では溶液の粘性が高くなり、ハンドリング性が低下する可能性がある。
【0006】
非特許文献１には、ホスホリルコリン界面活性剤の合成が記載されている。しかし、非特許文献１では、そのホスホリルコリン界面活性剤を用いた難水溶性物質の可溶化試験は行われていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【文献】特開平５－３１２８０７号公報
【文献】特開２００７－３１４５２６号公報
【文献】特開２００３－１３７８１６号公報
【非特許文献】
【0008】
【文献】Ryosuke Matsumoto, Kimiaki Takami, Kazuo Ishihara, "Simple Synthesis of a Zwitterionic Surfactants via Michael-Type Addition of Mathacrylate and Alkane Thiol Compounds", Langmuir Letter, 第26巻, 第16号, p. 13028-13032, 2010年7月16日
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
上記特許文献１～３に開示の方法により、ある程度、難水溶性物質を溶解させることは可能だが、いまだ十分ではない。また特許文献２および３に記載される重合体は、高分子量であるため、その濃度次第では、得られる溶液の粘性が高くなり、その溶液のハンドリング性が低下する可能性もある。そこで、本発明の課題は、脂溶性ビタミン、脂肪酸などの難水溶性物質を、水または水溶液（例えば緩衝液）に溶解させることができる可溶化剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討した結果、下記式（１）で示される化合物（以下「化合物（１）」と略称することがある）が、脂溶性ビタミンなどの難水溶性物質のための可溶化剤として有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【0011】
上記知見に基づく本発明は、以下の通りである。
［１］ 式（１）：
［１］ 式（１）：
【0012】
【化1】
【0013】
（式中、Ｘは、水素原子またはメチル基を示し、およびｎは、５～１５の整数を示す。）で示される化合物を含む、難水溶性物質のための可溶化剤。
［２］ 難水溶性物質が、脂溶性ビタミン、ステロイドおよび脂肪酸からなる群から選ばれる少なくとも一つである前記［１］に記載の可溶化剤。
［３］ 前記［１］または［２］に記載の可溶化剤および水を含む、難水溶性物質のための可溶化溶液。
［２］ 難水溶性物質が、脂溶性ビタミン、ステロイドおよび脂肪酸からなる群から選ばれる少なくとも一つである前記［１］に記載の可溶化剤。
［３］ 前記［１］または［２］に記載の可溶化剤および水を含む、難水溶性物質のための可溶化溶液。
【発明の効果】
【0014】
本発明の可溶化剤の有効成分である化合物（１）は、難水溶性物質の水への溶解性を向上させ得る。さらに化合物（１）は、低分子量であるため、化合物（１）を含む溶液の粘度上昇を抑えることができ、ハンドリング性が良好な難水溶性物質のための可溶化溶液を調製することができる。
【発明を実施するための形態】
【0015】
以下、本発明を詳細に説明する。本発明において「難水溶性物質」とは、その水溶性が、第十七改正日本薬局方に記載される「やや溶けにくい」、「溶けにくい」、「極めて溶けにくい」、「ほとんど溶けない」のいずれかにあてはまる物質を意味する。なお、第十七改正日本薬局方での上記水溶性は、次の基準により判定される。即ち、対象物が固形の場合は粉末とした後、水中に入れ、２０±５℃で５分ごとに強く３０秒間振り混ぜて、３０分以内に溶ける度合を検討し、対象物１ｇまたは１ｍＬを溶かすのに要する水の量が３０ｍＬ以上１００ｍＬ未満のものを「やや溶けにくい」、１００ｍＬ以上１，０００ｍＬ未満のものを「溶けにくい」、１，０００ｍＬ以上１０，０００ｍＬ未満のものを「極めて溶けにくい」、１０，０００ｍＬ以上のものを「ほとんど溶けない」と判定する。また、「難水溶性物質のための可溶化剤」とは、難水溶性物質を、水または水溶液（例えば緩衝液）に溶解させるために用いられる剤を意味する。また、「難水溶性物質のための可溶化溶液」とは、難水溶性物質を溶解させるために用いられる溶液を意味する。
【0016】
本発明の可溶化剤は、酵素反応または抗原抗体反応を利用して測定する免疫学的測定法等において使用可能である。具体的には、本発明の可溶化剤は、公知の放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、ラテックス比濁法等、特に好ましくは酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、ラテックス比濁法、ウェスタンブロッティング等に使用することができる。
【0017】
本発明の可溶化剤の有効成分は、下記式（１）で示される化合物である。
【0018】
【化2】
【0019】
式（１）中のＸは、水素原子またはメチル基を示し、好ましくはメチル基である。式（１）中のｎは、５～１５の整数を示す。ｎが５より小さいと、化合物（１）の可溶化性能が低下するおそれがあり、１５を超えると、化合物（１）自体の水溶性が低下するおそれがある。ｎは、好ましくは７～１５である。
【0020】
本発明の可溶化剤中の化合物（１）の含有量は、可溶化剤全体に対して、好ましくは５０～１００質量％である。本発明の可溶化剤は、より好ましくは化合物（１）からなる。
【0021】
化合物（１）は、例えば、２－（メタ）アクリロイルオキシエチル－２－トリメチルアンモニオエチルホスフェートと１－アルカンチオールとを、例えば、アルコール溶媒中、ジイソプロピルアミン等のアミン系触媒を用いて、室温下に１０～５０時間反応させることによって合成することができる。１－アルカンチオールとしては、炭素数が６～１６の１－アルカンチオールが好ましい。
【0022】
本発明の可溶化溶液は、本発明の可溶化剤（即ち、化合物（１）を含む可溶化剤）および水を含有する。本発明の可溶化溶液は、化合物（１）および水以外の成分（以下「他の成分」と記載する）を含有していてもよい。他の成分としては、例えばグリシン、アラニン、セリン、トレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン、アスパラギン、リジン、ヒスチジン等のアミノ酸およびその塩；グリシルグリシン等のペプチド類；リン酸およびその塩、ホウ酸およびその塩、塩酸およびその塩（例えば、塩化ナトリウム、塩酸とトリスヒドロキシメチルアミノメタンとの塩）、硫酸塩等の無機酸およびその塩；フラビン類；酢酸およびその塩、クエン酸およびその塩、リンゴ酸およびその塩、マレイン酸およびその塩、グルコン酸およびその塩等の有機酸およびその塩；グルコース、フルクトース、スクロース、ラクトース等の糖；メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール；測定に用いられる試薬等が挙げられる。
【0023】
本発明の可溶化溶液のために使用する水としては、例えば、精製水、純水、イオン交換水等が挙げられる。また、本発明の可溶化溶液は、緩衝液（例えば、免疫学的測定方法に使用することができる緩衝液）であってもよい。緩衝液の具体例としては、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、ＨＥＰＥＳ衝液が挙げられる。
【0024】
本発明の可溶化溶液中の化合物（１）の含有量（濃度）は、可溶化性能の観点から、可溶化溶液全体に対して、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．０２５質量％以上、さらに好ましくは０．０５質量％以上、特に好ましくは０．１０質量％以上である。化合物（１）の含有量の上限は、化合物（１）が可溶化溶液に溶解する限り特に制限はない。本発明の可溶化溶液中の化合物の含有量は、好ましくは２０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下、さらに好ましくは５質量％以下、特に好ましくは１質量％以下である。
【0025】
本発明の可溶化溶液中の水の含有量は、抗体、酵素など蛋白質の活性保持または変性防止の観点から、可溶化溶液全体に対して、好ましくは８０質量％以上、より好ましくは９０質量％以上、さらに好ましくは９５質量％以上、特に好ましくは９９質量％以上であり、好ましくは９９．９９質量％以下、より好ましくは９９．９７５質量％以下、さらに好ましくは９９．９５質量％以下、特に好ましくは９９．９０質量％以下である。
【0026】
次に、難水溶性物質について説明する。難水溶性物質としては、例えば脂溶性ビタミン（ビタミンＤ、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫなど）、ステロイド（コルチゾール（別名：ハイドロコルチゾン）、ノルアドレナリンなどのホルモン、コレステロールなど）、脂肪酸（ラウリン酸、ミリスチン酸、リノール酸、リノレン酸など）を挙げることができる。難水溶性物は、好ましくは脂溶性ビタミン、ステロイドおよび脂肪酸からなる群から選ばれる少なくとも一つであり、より好ましくは脂溶性ビタミンおよび脂肪酸からなる群から選ばれる少なくとも一つである。
【0027】
本発明の可溶化剤または可溶化溶液を用いて、難水溶性物質を水に溶解させる方法について説明する。前記方法としては、例えば、難水溶性物質または難水溶性物質を含む混合物（例えば、難水溶性物質を含む検体）、本発明の可溶化剤および水を混合し、得られた混合物を攪拌することによって、難溶性物質を水に溶解させる方法が挙げられる。
【0028】
難溶性物質、本発明の可溶化剤および水の混合方法に特に限定はなく、例えば、下記方法が挙げられる：
（ａ）本発明の可溶化剤と水とを混合して可溶化溶液を調製し、得られた可溶化溶液と難水溶性物質または難水溶性物質を含む混合物（例えば、難水溶性物質を含む検体）とを混合する方法、
（ｂ）難水溶性物質または難水溶性物質を含む混合物と水とを混合し、得られた難水溶性物質および水を含む混合物と、本発明の可溶化剤または本発明の可溶化水溶液とを混合する方法、
（ｃ）難水溶性物質を含む混合物が水を含む場合（例えば、難水溶性物質を含む混合物が、難水溶性物質の水性分散液である場合）、前記混合物と本発明の可溶化剤または本発明の可溶化水溶液とを混合する方法。
（ａ）本発明の可溶化剤と水とを混合して可溶化溶液を調製し、得られた可溶化溶液と難水溶性物質または難水溶性物質を含む混合物（例えば、難水溶性物質を含む検体）とを混合する方法、
（ｂ）難水溶性物質または難水溶性物質を含む混合物と水とを混合し、得られた難水溶性物質および水を含む混合物と、本発明の可溶化剤または本発明の可溶化水溶液とを混合する方法、
（ｃ）難水溶性物質を含む混合物が水を含む場合（例えば、難水溶性物質を含む混合物が、難水溶性物質の水性分散液である場合）、前記混合物と本発明の可溶化剤または本発明の可溶化水溶液とを混合する方法。
【0029】
難溶性物質、本発明の可溶化剤および水を含む混合物を攪拌する際の温度は、例えば４～３７℃である。本発明の可溶化剤または可溶化溶液を用いて、難水溶性物質を水に溶解させる方法における、可溶化剤（特に化合物（１））、可溶化溶液および難水溶性物質の説明は上述の通りである。
【0030】
可溶化剤、水および難水溶性物質を含む混合物中の化合物（１）の含有量は、前記混合物全体に対して、好ましくは０．０２５～５．０質量％、より好ましくは０．０５～５．０質量％である。可溶化剤、水および難水溶性物質を含む混合物中の水の含有量は、前記混合物全体に対して、好ましくは８５．００～９９．９７４質量％、より好ましくは９０．００～９９．９４質量％である。可溶化剤、水および難水溶性物質を含む混合物中の難水溶性物質の含有量は、前記混合物全体に対して、好ましくは０．００１～１０．０質量％、より好ましくは０．０１～５．０質量％である。
【0031】
つづいて、本発明の可溶化剤の用途について説明する。その用途としては、例えば、難水溶性物質を測定するために、本発明の可溶化剤を用いて当該難水溶性物質を水または水溶液（例えば緩衝液）に溶解させることが挙げられる。
【0032】
上述のような難水溶性物質の測定において、測定用試薬、測定対象である難水溶性物質、水および化合物（１）を含む混合物中の化合物（１）の含有量は、前記混合物全体に対して、好ましくは０．０２５～５．０質量％、より好ましくは０．０５～５．０質量％である。
【実施例】
【0033】
以下の実施例および比較例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。下記実施例においては、下記合成例１～３で得られた化合物を各可溶化剤として用いた。
【0034】
化合物（１）の合成
合成例１
２－メタクリロイルオキシエチル－２－トリメチルアンモニオエチルホスフェート（ＭＰＣ）１４．７６３５ｇ（０．０５０ｍｏｌ）および１－オクタンチオール８．０４６０ｇ（０．０５５ｍｏｌ）をエタノール８１．００ｇに溶解させ、触媒としてジイソプロピルアミン０．２２２６ｇ（０．００２２ｍｏｌ）を加え、室温で２４時間反応させた。反応終了後、反応溶液を濃縮し、濃縮物を酢酸エチルに添加して、析出した沈殿物をろ過で回収し、真空乾燥機で乾燥することによって、２－［３－（オクチルスルファニル）－２－メチルプロピオニルオキシ］エチル－２－（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート（式（１）のＸがメチル基であり、且つｎが７である化合物）を白色粉末として得た（１２ｇ、収率：５０％）。
合成例１
２－メタクリロイルオキシエチル－２－トリメチルアンモニオエチルホスフェート（ＭＰＣ）１４．７６３５ｇ（０．０５０ｍｏｌ）および１－オクタンチオール８．０４６０ｇ（０．０５５ｍｏｌ）をエタノール８１．００ｇに溶解させ、触媒としてジイソプロピルアミン０．２２２６ｇ（０．００２２ｍｏｌ）を加え、室温で２４時間反応させた。反応終了後、反応溶液を濃縮し、濃縮物を酢酸エチルに添加して、析出した沈殿物をろ過で回収し、真空乾燥機で乾燥することによって、２－［３－（オクチルスルファニル）－２－メチルプロピオニルオキシ］エチル－２－（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート（式（１）のＸがメチル基であり、且つｎが７である化合物）を白色粉末として得た（１２ｇ、収率：５０％）。
【0035】
合成例２
１－オクタンチオールの代わりに１－ドデカンチオールを用い、原料のモル比が合成例１と等しくなるように仕込み量を変更したこと以外は合成例１と同様にして、２－［３－（ドデシルスルファニル）－２－メチルプロピオニルオキシ］エチル－２－（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート（式（１）のＸがメチル基であり、且つｎが１１である化合物）を白色粉末として得た（１２ｇ、収率：５０％）。
１－オクタンチオールの代わりに１－ドデカンチオールを用い、原料のモル比が合成例１と等しくなるように仕込み量を変更したこと以外は合成例１と同様にして、２－［３－（ドデシルスルファニル）－２－メチルプロピオニルオキシ］エチル－２－（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート（式（１）のＸがメチル基であり、且つｎが１１である化合物）を白色粉末として得た（１２ｇ、収率：５０％）。
【0036】
合成例３
１－オクタンチオールの代わりに１－ヘキサデカンチオールを用い、原料のモル比が合成例１と等しくなるように仕込み量を変更したこと以外は合成例１と同様にして、２－［３－（ヘキサデシルスルファニル）－２－メチルプロピオニルオキシ］エチル－２－（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート（式（１）のＸがメチル基であり、且つｎが１５である化合物）を白色粉末として得た（１４ｇ、収率：５０％）。
１－オクタンチオールの代わりに１－ヘキサデカンチオールを用い、原料のモル比が合成例１と等しくなるように仕込み量を変更したこと以外は合成例１と同様にして、２－［３－（ヘキサデシルスルファニル）－２－メチルプロピオニルオキシ］エチル－２－（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート（式（１）のＸがメチル基であり、且つｎが１５である化合物）を白色粉末として得た（１４ｇ、収率：５０％）。
【0037】
可溶化溶液の調製
調製例１－１－１
合成例１で得られた化合物を、その濃度が５．０００質量％となるように、リン酸緩衝生理食塩水（以下「ＰＢＳ」と記載する）に溶解させて、可溶化溶液を調製した。
調製例１－１－１
合成例１で得られた化合物を、その濃度が５．０００質量％となるように、リン酸緩衝生理食塩水（以下「ＰＢＳ」と記載する）に溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0038】
調製例１－１－２
合成例１で得られた化合物を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例１で得られた化合物を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0039】
調製例１－１－３
合成例１で得られた化合物を、その濃度が０．０５０質量％となるようにＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例１で得られた化合物を、その濃度が０．０５０質量％となるようにＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0040】
調製例１－１－４
合成例１で得られた化合物を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例１で得られた化合物を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0041】
調製例１－１－５
合成例１で得られた化合物を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例１で得られた化合物を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0042】
調製例１－２－１
合成例２で得られた化合物を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例２で得られた化合物を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0043】
調製例１－２－２
合成例２で得られた化合物を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例２で得られた化合物を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0044】
調製例１－２－３
合成例２で得られた化合物を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例２で得られた化合物を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0045】
調製例１－２－４
合成例２で得られた化合物を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例２で得られた化合物を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0046】
調製例１－２－５
合成例２で得られた化合物を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例２で得られた化合物を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0047】
調製例１－３－１
合成例３で得られた化合物を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例３で得られた化合物を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0048】
調製例１－３－２
合成例３で得られた化合物を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例３で得られた化合物を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0049】
調製例１－３－３
合成例３で得られた化合物を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例３で得られた化合物を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0050】
調製例１－３－４
合成例３で得られた化合物を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例３で得られた化合物を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0051】
調製例１－３－５
合成例３で得られた化合物を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
合成例３で得られた化合物を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0052】
調製例１－４－１
バイオ・ラッド ラボラトリーズ社製のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
バイオ・ラッド ラボラトリーズ社製のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0053】
調製例１－４－２
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0054】
調製例１－４－３
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0055】
調製例１－４－４
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0056】
調製例１－４－５
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0057】
調製例１－５－１
ナカライテスク社製のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
ナカライテスク社製のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0058】
調製例１－５－２
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0059】
調製例１－５－３
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0060】
調製例１－５－４
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0061】
調製例１－５－５
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0062】
調製例１－６－１
ナカライテスク社製のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
ナカライテスク社製のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が５．０００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0063】
調製例１－６－２
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が０．５００質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0064】
調製例１－６－３
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が０．０５０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0065】
調製例１－６－４
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が０．０２５質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0066】
調製例１－６－５
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－４０５を、その濃度が０．０１０質量％となるように、ＰＢＳに溶解させて、可溶化溶液を調製した。
【0067】
コレカルシフェロール（ビタミンＤ
３
）の可溶化試験
実施例１－１－１および実施例１－１－２
コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）を、その濃度が２０ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、コレカルシフェロール溶液を調製した。９６ウェルプレートに、調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液を、１００μＬ／ｗｅｌｌの量で分注した。コレカルシフェロール溶液を１μＬ／ｗｅｌｌの量で分注した。各ウェル中の混合物を１分間攪拌した後に、混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、コレカルシフェロールを含まないＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。可溶化溶液およびコレカルシフェロール溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差を、「可溶化溶液およびコレカルシフェロール溶液の混合物の濁度」とした。濁度が小さいほど、溶解している難水溶性物質量が多いことを示す。
実施例１－１－１および実施例１－１－２
コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）を、その濃度が２０ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、コレカルシフェロール溶液を調製した。９６ウェルプレートに、調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液を、１００μＬ／ｗｅｌｌの量で分注した。コレカルシフェロール溶液を１μＬ／ｗｅｌｌの量で分注した。各ウェル中の混合物を１分間攪拌した後に、混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、コレカルシフェロールを含まないＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。可溶化溶液およびコレカルシフェロール溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差を、「可溶化溶液およびコレカルシフェロール溶液の混合物の濁度」とした。濁度が小さいほど、溶解している難水溶性物質量が多いことを示す。
【0068】
可溶化溶液の代わりにＰＢＳを用いたこと以外は上記と同様にして、「ＰＢＳおよびコレカルシフェロール溶液の混合物の濁度」（即ち、ＰＢＳおよびコレカルシフェロール溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
【0069】
コレカルシフェロールは、ＰＢＳに対して不溶である。そこで、コレカルシフェロールが溶解しているか否かを評価する指標として、下記式：
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびコレカルシフェロール溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびコレカルシフェロール溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、コレカルシフェロールが溶解していると評価した。
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびコレカルシフェロール溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびコレカルシフェロール溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、コレカルシフェロールが溶解していると評価した。
【0070】
実施例１－２－１および実施例１－２－２
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－２－３または調製例１－２－４で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして、可溶化試験を行った。
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－２－３または調製例１－２－４で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして、可溶化試験を行った。
【0071】
実施例１－３－１および実施例１－３－２
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－３－３または調製例１－３－４で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行った。
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－３－３または調製例１－３－４で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行った。
【0072】
比較例１－１－１
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－４－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行った。
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－４－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行った。
【0073】
比較例１－２－１
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行った。
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行った。
【0074】
比較例１－３－１
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－６－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行った。
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－６－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行った。
【0075】
表１に、使用した可溶化溶液、使用した可溶化剤、可溶化溶液中の可溶化剤の濃度（表１では「可溶化剤の濃度」と記載）、可溶化溶液およびコレカルシフェロール溶液の混合物の濁度（表１では「濁度」と記載）、ＰＢＳおよびコレカルシフェロール溶液の混合物の濁度（表１では「ＰＢＳの濁度」と記載）、ＰＢＳに対する濁度割合を示す。なお、表１の「－ｍ」の記載は、各実施例および各比較例の末尾を表す。例えば、「実施例１－１」の「－１」の行は「実施例１－１－１」を表す。また、可溶化溶液の列には、可溶化溶液を調製した調製例を記載する。また、可溶化剤の列には、可溶化剤を合成した合成例または界面活性剤の商品名を記載する。
【0076】
【表1】
【0077】
表１に示すとおり、実施例１－１－１～実施例１－３－２では、ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満であることから、難水溶性物質であるコレカルシフェロールが溶解したことが分かる。一方、比較例１－１～比較例１－３ではＰＢＳに対する濁度割合が１０％以上である。これらの結果から、実施例１－１－１～実施例１－３－２で使用した可溶化剤および可溶化溶液は、比較例１－１～比較例１－３で使用したものと比べて、難水溶性物質であるコレカルシフェロールを可溶化する性能が優れていることが分かる。
【0078】
ＤＬ－α－トコフェロール（ビタミンＥ）の可溶化試験
実施例２－１－１および実施例２－１－２
ＤＬ－α－トコフェロール（ビタミンＥ）を、その濃度が２０ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、ＤＬ－α－トコフェロール溶液を調製し、これをコレカルシフェロール溶液の代わりに使用したこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行い、「可溶化溶液およびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の濁度」（即ち、可溶化溶液およびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
実施例２－１－１および実施例２－１－２
ＤＬ－α－トコフェロール（ビタミンＥ）を、その濃度が２０ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、ＤＬ－α－トコフェロール溶液を調製し、これをコレカルシフェロール溶液の代わりに使用したこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行い、「可溶化溶液およびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の濁度」（即ち、可溶化溶液およびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
【0079】
可溶化溶液の代わりにＰＢＳを用いたこと以外は上記と同様にして、「ＰＢＳおよびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の濁度」（即ち、ＰＢＳおよびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
【0080】
ＤＬ－α－トコフェロールは、ＰＢＳに対して不溶である。そこで、ＤＬ－α－トコフェロールが溶解しているか否かを評価する指標として、下記式：
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、ＤＬ－α－トコフェロールが溶解していると評価した。
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、ＤＬ－α－トコフェロールが溶解していると評価した。
【0081】
実施例２－２－１
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－２－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例２－１－１および実施例２－１－２と同様にして、可溶化試験を行った。
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－２－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例２－１－１および実施例２－１－２と同様にして、可溶化試験を行った。
【0082】
比較例２－２－１
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例２－１－１および実施例２－１－２と同様にして、可溶化試験を行った。
調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例２－１－１および実施例２－１－２と同様にして、可溶化試験を行った。
【0083】
表２に、使用した可溶化溶液、使用した可溶化剤、可溶化溶液中の可溶化剤の濃度（表２では「可溶化剤の濃度」と記載）、可溶化溶液およびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の濁度（表２では「濁度」と記載）、ＰＢＳおよびＤＬ－α－トコフェロール溶液の混合物の濁度（表２では「ＰＢＳの濁度」と記載）、ＰＢＳに対する濁度割合を示す。なお、表２の「－ｍ」の記載は、各実施例および各比較例の末尾を表す。また、可溶化溶液の列には、可溶化溶液を調製した調製例を記載する。また、可溶化剤の列には、可溶化剤を合成した合成例または界面活性剤の商品名を記載する。
【0084】
【表2】
【0085】
表２に示すとおり、実施例２－１－１～実施例２－２－１では、ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満であることから、難水溶性物質であるＤＬ－α－トコフェロールが溶解したことが分かる。一方、比較例２－２－１では、ＰＢＳに対する濁度割合が１０％以上である。これらの結果から、実施例２－１－１～実施例２－２－１で使用した可溶化剤および可溶化溶液は、比較例２－２－１で使用したものと比べて、難水溶性物質であるＤＬ－α－トコフェロールを可溶化する性能が優れていることが分かる。
【0086】
ハイドロコルチゾンの可溶化試験
実施例３－３
ハイドロコルチゾンを、その濃度が２０ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、ハイドロコルチゾン溶液を調製し、これをコレカルシフェロール溶液の代わりに使用したこと、ハイドロコルチゾン溶液を１２５μＬ／ｗｅｌｌの量で分注したこと、および調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに、調製例１－３－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行い、「可溶化溶液およハイドロコルチゾン溶液の混合物の濁度」（即ち、可溶化溶液およびハイドロコルチゾン溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
実施例３－３
ハイドロコルチゾンを、その濃度が２０ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、ハイドロコルチゾン溶液を調製し、これをコレカルシフェロール溶液の代わりに使用したこと、ハイドロコルチゾン溶液を１２５μＬ／ｗｅｌｌの量で分注したこと、および調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに、調製例１－３－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行い、「可溶化溶液およハイドロコルチゾン溶液の混合物の濁度」（即ち、可溶化溶液およびハイドロコルチゾン溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
【0087】
可溶化溶液の代わりにＰＢＳを用いたこと以外は上記と同様にして、「ＰＢＳおよびハイドロコルチゾン溶液の混合物の濁度」（即ち、ＰＢＳおよびハイドロコルチゾン溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を測定した。
【0088】
ハイドロコルチゾンは、ＰＢＳに対して不溶である。そこで、ハイドロコルチゾンが溶解しているか否かを評価する指標として、下記式：
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびハイドロコルチゾン溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびハイドロコルチゾン溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、ハイドロコルチゾンが溶解していると評価した。
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびハイドロコルチゾン溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびハイドロコルチゾン溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、ハイドロコルチゾンが溶解していると評価した。
【0089】
比較例３－１
調製例１－３－３で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－４－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例３－３と同様にして、可溶化試験を行った。
調製例１－３－３で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－４－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例３－３と同様にして、可溶化試験を行った。
【0090】
比較例３－２
調製例１－３－３で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例３－３と同様にして、可溶化試験を行った。
調製例１－３－３で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例３－３と同様にして、可溶化試験を行った。
【0091】
比較例３－３
調製例１－３－３で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－６－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例３－３と同様にして、可溶化試験を行った。
調製例１－３－３で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－６－３で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例３－３と同様にして、可溶化試験を行った。
【0092】
表３に、使用した可溶化溶液、使用した可溶化剤、可溶化溶液中の可溶化剤の濃度（表３では「可溶化剤の濃度」と記載）、可溶化溶液およびハイドロコルチゾン溶液の混合物の濁度（表３では「濁度」と記載）、ＰＢＳおよびハイドロコルチゾン溶液の混合物の濁度（表３では「ＰＢＳの濁度」と記載）、ＰＢＳに対する濁度割合を示す。また、可溶化溶液の列には、可溶化溶液を調製した調製例を記載する。また、可溶化剤の列には、可溶化剤を合成した合成例または界面活性剤の商品名を記載する。
【0093】
【表3】
【0094】
表３に示すとおり、実施例３－３では、ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満であることから、難水溶性物質であるハイドロコルチゾンが溶解したことが分かる。一方、比較例３－１～比較例３－３ではＰＢＳに対する濁度割合が１０％以上である。これらの結果から、実施例３－３で使用した可溶化剤および可溶化溶液は、比較例３－１～比較例３－３で使用したものと比べて、難水溶性物質であるハイドロコルチゾンを可溶化する性能が優れていることが分かる。
【0095】
ラウリン酸の可溶化試験
実施例４－１
ラウリン酸を、その濃度が１００ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、ラウリン酸溶液を調製し、これをコレカルシフェロール溶液の代わりに使用したこと、ラウリン酸溶液を３μＬ／ｗｅｌｌの量で分注したこと、および調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに、調製例１－１－１で得られた可溶化溶液を使用したこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行い、「可溶化溶液およラウリン酸溶液の混合物の濁度」（即ち、可溶化溶液およびラウリン酸溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
実施例４－１
ラウリン酸を、その濃度が１００ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、ラウリン酸溶液を調製し、これをコレカルシフェロール溶液の代わりに使用したこと、ラウリン酸溶液を３μＬ／ｗｅｌｌの量で分注したこと、および調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに、調製例１－１－１で得られた可溶化溶液を使用したこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行い、「可溶化溶液およラウリン酸溶液の混合物の濁度」（即ち、可溶化溶液およびラウリン酸溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
【0096】
可溶化溶液の代わりにＰＢＳを用いたこと以外は上記と同様にして、「ＰＢＳおよびラウリン酸溶液の混合物の濁度」（即ち、ＰＢＳおよびラウリン酸溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
【0097】
ラウリン酸は、ＰＢＳに対して不溶である。そこで、ラウリン酸が溶解しているか否かを評価する指標として、下記式：
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびラウリン酸溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびラウリン酸溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、ラウリン酸が溶解していると評価した。
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびラウリン酸溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびラウリン酸溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、ラウリン酸が溶解していると評価した。
【0098】
比較例４－１
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－４－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例４－１と同様にして可溶化試験を行った。
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－４－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例４－１と同様にして可溶化試験を行った。
【0099】
比較例４－２
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例４－１と同様にして可溶化試験を行った。
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例４－１と同様にして可溶化試験を行った。
【0100】
比較例４－３
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－６－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例４－１と同様にして可溶化試験を行った。
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－６－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例４－１と同様にして可溶化試験を行った。
【0101】
表４に、使用した可溶化溶液、使用した可溶化剤、可溶化溶液中の可溶化剤の濃度（表４では「可溶化剤の濃度」と記載）、可溶化溶液およびラウリン酸溶液の混合物の濁度（表４では「濁度」と記載）、ＰＢＳおよびラウリン酸溶液の混合物の濁度（表４では「ＰＢＳの濁度」と記載）、ＰＢＳに対する濁度割合を示す。なお、可溶化溶液の列には、可溶化溶液を調製した調製例を記載する。また、可溶化剤の列には、可溶化剤を合成した合成例または界面活性剤の商品名を記載する。
【0102】
【表4】
【0103】
表４に示すとおり、実施例４－１では、ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満であることから、難水溶性物質であるラウリン酸が溶解したことが分かる。一方、比較例４－３ではＰＢＳに対する濁度割合が１０％以上である。これらの結果から、実施例４－１で使用した可溶化剤および可溶化溶液は、比較例４－３で使用したものと比べて、難水溶性物質であるラウリン酸を可溶化する性能が優れていることが分かる。また、実施例４－１のＰＢＳに対する濁度は、比較例４－１および比較例４－２のものと同等またはそれ以下であった。これらの結果から、実施例４－１で使用した可溶化剤および可溶化溶液のラウリン酸を可溶化する性能は、比較例４－１または比較例４－２で使用した可溶化剤（即ち、市販のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０またはＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００）および可溶化溶液のものと同等またはそれ以上であることが分かる。
【0104】
ミリスチン酸の可溶化試験
実施例５－１
ミリスチン酸を、その濃度が１００ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、ミリスチン酸溶液を調製し、これをコレカルシフェロール溶液の代わりに使用したこと、ミリスチン酸溶液を３μＬ／ｗｅｌｌの量で分注したこと、および調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに、調製例１－１－１で得られた可溶化溶液を使用したこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行い、「可溶化溶液およミリスチン酸溶液の混合物の濁度」（即ち、可溶化溶液およびミリスチン酸溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
実施例５－１
ミリスチン酸を、その濃度が１００ｍｇ／ｍＬとなるようにエタノールに溶解させて、ミリスチン酸溶液を調製し、これをコレカルシフェロール溶液の代わりに使用したこと、ミリスチン酸溶液を３μＬ／ｗｅｌｌの量で分注したこと、および調製例１－１－３または調製例１－１－４で得られた可溶化溶液の代わりに、調製例１－１－１で得られた可溶化溶液を使用したこと以外は実施例１－１－１および実施例１－１－２と同様にして可溶化試験を行い、「可溶化溶液およミリスチン酸溶液の混合物の濁度」（即ち、可溶化溶液およびミリスチン酸溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
【0105】
可溶化溶液の代わりにＰＢＳを用いたこと以外は上記と同様にして、「ＰＢＳおよびミリスチン酸溶液の混合物の濁度」（即ち、ＰＢＳおよびミリスチン酸溶液の混合物の波長４５０ｎｍにおける吸光度と、ＰＢＳのみの波長４５０ｎｍにおける吸光度との差）を算出した。
【0106】
ミリスチン酸は、ＰＢＳに対して不溶である。そこで、ミリスチン酸が溶解しているか否かを評価する指標として、下記式：
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびミリスチン酸溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびミリスチン酸溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、ミリスチン酸が溶解していると評価した。
ＰＢＳに対する濁度割合（％）＝１００×（可溶化溶液およびミリスチン酸溶液の混合物の濁度）／（ＰＢＳおよびミリスチン酸溶液の混合物の濁度）
から、ＰＢＳに対する濁度割合を算出した。ＰＢＳに対する濁度割合が１０％未満である場合、ミリスチン酸が溶解していると評価した。
【0107】
比較例５－１
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－４－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例５－１と同様にして、可溶化試験を行った。
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－４－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例５－１と同様にして、可溶化試験を行った。
【0108】
比較例５－２
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例５－１と同様にして可溶化試験を行った。
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－５－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例５－１と同様にして可溶化試験を行った。
【0109】
比較例５－３
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－６－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例５－１と同様にして可溶化試験を行った。
調製例１－１－１で得られた可溶化溶液の代わりに調製例１－６－１で得られた可溶化溶液を用いたこと以外は実施例５－１と同様にして可溶化試験を行った。
【0110】
表５に、使用した可溶化溶液、使用した可溶化剤、可溶化溶液中の可溶化剤の濃度（表５では「可溶化剤の濃度」と記載）、可溶化溶液およびミリスチン酸溶液の混合物の濁度（表５では「濁度」と記載）、ＰＢＳおよびミリスチン酸溶液の混合物の濁度（表５では「ＰＢＳの濁度」と記載）、ＰＢＳに対する濁度割合を示す。なお、可溶化溶液の列には、可溶化溶液を調製した調製例を記載する。また、可溶化剤の列には、可溶化剤を合成した合成例または界面活性剤の商品名を記載する。
【0111】
【表5】
【0112】
表５に示すとおり、実施例５－１では、ＰＢＳに対する濁度が１０％未満であることから、難水溶性物質であるミリスチン酸が溶解したことが分かる。一方、比較例５－１～比較例５－３ではＰＢＳに対する濁度割合が１０％以上である。これらの結果から、実施例５－１で使用した可溶化剤および可溶化溶液は、比較例５－１～比較例５－３で使用したものと比べて、難水溶性物質であるミリスチン酸を可溶化する性能が優れていることが分かる。
【0113】
以上の結果から、本発明の可溶化剤を使用することにより、難水溶性物質を可溶化することができることが示された。
【産業上の利用可能性】
【0114】
本発明の可溶化剤は、例えば、難水溶性物質の測定のために利用することができる。
【0115】
本願は、日本で出願された特願２０２０－０７４９８３号を基礎としており、その内容は本願明細書に全て包含される。