特許 7576463 抗ＬＡＧ－３抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-10-23

(45)【発行日】2024-10-31

(54)【発明の名称】抗ＬＡＧ－３抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20241024BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241024BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241024BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20241024BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61K45/00

A61K47/68

A61P35/00

A61P31/00

A61P43/00 121

A61P1/00

A61P17/00

【請求項の数】 36

(21)【出願番号】P 2020535990

(86)(22)【出願日】2018-12-27

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-03-11

(86)【国際出願番号】 CN2018124315

(87)【国際公開番号】W WO2019129137

(87)【国際公開日】2019-07-04

【審査請求日】2021-12-02

(31)【優先権主張番号】201711449486.7

(32)【優先日】2017-12-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】201811561512.X

(32)【優先日】2018-12-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】518049935

【氏名又は名称】イノベント バイオロジックス （スウツォウ） カンパニー，リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100091487

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 行孝

(74)【代理人】

【識別番号】100105153

【弁理士】

【氏名又は名称】朝倉 悟

(74)【代理人】

【識別番号】100120617

【弁理士】

【氏名又は名称】浅野 真理

(74)【代理人】

【識別番号】100126099

【弁理士】

【氏名又は名称】反町 洋

(72)【発明者】

【氏名】ミャオ、シャオニウ

(72)【発明者】

【氏名】フ、ホアチン

(72)【発明者】

【氏名】ツン、アンディー

(72)【発明者】

【氏名】リウ、ジュンジャン

(72)【発明者】

【氏名】リウ、シャオリン

【審査官】斉藤 貴子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／１９８７４１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／０６２８８８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１２－５００００６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１６－５３１８４９（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１７／１０６１２９（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ

Ｃ０７Ｋ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、ＬＡＧ－３と結合する抗体又はその抗原結合断片であって、
前記重鎖可変領域は配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、
前記軽鎖可変領域は配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる、抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

（ｉ）配列番号３０で表されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、又は
（ｉｉ）配列番号３０で表されるアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる、重鎖を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

（ｉ）配列番号３４で表されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、又は
（ｉｉ）配列番号３４で表されるアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項１又は２に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項4】

配列番号３０で表されるアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる重鎖、及び
配列番号３４で表されるアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項5】

ＩｇＧ４形態の抗体又はその抗原結合断片であり且つ／又はκ軽鎖定常領域を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項6】

前記κ軽鎖定常領域がヒトκ軽鎖定常領域である、請求項５に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項8】

前記抗体がヒト抗体である、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項9】

前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）_２断片、ダイアボディ（ｄＡｂ）及び線形抗体から選択される抗体断片である、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項10】

二重特異性抗体又は多重特異性抗体である、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項11】

前記二重特異性抗体はＬＡＧ－３及びＰＤ－１と結合するか、ＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１と結合するか、又はＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ２と結合し、又は、前記多重特異性抗体は、ＬＡＧ－３に対する第１結合特異性と、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２から選択される１種以上の分子に対する第２及び第３結合特異性とを含む、請求項１０に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離された核酸。

【請求項13】

請求項１２に記載の核酸を含み、且つ、発現ベクターである、ベクター。

【請求項14】

請求項１２に記載の核酸又は請求項１３に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項15】

抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片の製造方法であって、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸の発現に適する条件において、請求項１４に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。

【請求項16】

請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と、他の物質とを含む、免疫複合体。

【請求項17】

請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片又は請求項１６に記載の免疫複合体と、医薬品添加物とを含む、医薬組成物。

【請求項18】

請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片又は請求項１６に記載の免疫複合体と、他の治療剤と、医薬品添加物とを含む医薬組成物。

【請求項19】

請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片又は請求項１６に記載の免疫複合体又は請求項１７もしくは１８に記載の医薬組成物を含む、対象又は個体における腫瘍又は感染性疾患の治療用組成物であって、前記腫瘍はLAG-３を発現するがんであり、前記感染性疾患は慢性感染である、組成物。

【請求項20】

前記腫瘍が、消化管がん又は皮膚がんである、請求項１９に記載の組成物。

【請求項21】

前記腫瘍が結腸がんである、請求項２０に記載の組成物。

【請求項22】

１以上の他の療法と組み合わせて使用するための、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項23】

前記療法が治療方式又は他の治療剤の使用を含む、請求項２２に記載の組成物。

【請求項24】

前記治療剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体である、請求項１８または２３に記載の組成物。

【請求項25】

前記抗ＰＤ－１抗体がヒト化された抗ヒトＰＤ－１抗体であり、前記抗ＰＤ－L１抗体がヒト化された抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体であり、前記抗ＰＤ－L２抗体がヒト化された抗ヒトＰＤ－Ｌ２抗体である、請求項２４に記載の組成物。

【請求項26】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、
（ｉ）配列番号５７に示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、及び
（ｉｉ）配列番号５８に示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項２４又は２５に記載の組成物。

【請求項27】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨが、相補性決定領域（ＣＤＲ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は配列番号５１のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、前記ＨＣＤＲ２が配列番号５２のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、前記ＨＣＤＲ３が配列番号５３のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、且つ、
（ｉｉ）前記ＶＬが、相補性決定領域（ＣＤＲ）のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は配列番号５４のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５５のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、前記ＬＣＤＲ３が配列番号５６のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる、請求項２４又は２５に記載の組成物。

【請求項28】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、
（ｉ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、
（ｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる軽鎖可変領域
を含む、請求項２４又は２５に記載の組成物。

【請求項29】

対象又は個体における腫瘍又は感染性疾患の予防又は治療用薬物の製造における、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片又は請求項１６に記載の免疫複合体又は請求項１７もしくは１８に記載の医薬組成物の有効量の使用であって、前記腫瘍はＬＡＧ－３を発現するがんであり、前記感染性疾患は慢性感染である、使用。

【請求項30】

対象又は個体における腫瘍又は感染性疾患の治療用薬物の製造における、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片又は請求項１６に記載の免疫複合体又は請求項１７もしくは１８に記載の医薬組成物の有効量と、ＰＤ－１軸結合拮抗剤又は該ＰＤ－１軸結合拮抗剤を含む活性化剤の使用であって、前記ＰＤ－１軸結合拮抗剤は、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体であり、前記腫瘍はＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１を発現するがんであり、前記感染性疾患は慢性感染である、使用。

【請求項31】

前記腫瘍が、消化管がん又は皮膚がんである、請求項２９又は３０に記載の使用。

【請求項32】

前記腫瘍が結腸がんである、請求項３１に記載の使用。

【請求項33】

前記抗ＰＤ－１抗体がヒト化された抗ヒトＰＤ－１抗体であり、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体がヒト化された抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体であり、前記抗ＰＤ－Ｌ２抗体がヒト化された抗ヒトＰＤ－Ｌ２抗体である、請求項３０に記載の使用。

【請求項34】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、
（ｉ）配列番号５７に示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、及び
（ｉｉ）配列番号５８に示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項３０又は３３に記載の使用。

【請求項35】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
（ｉ）前記ＶＨが、相補性決定領域（ＣＤＲ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は配列番号５１のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、前記ＨＣＤＲ２が配列番号５２のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、前記ＨＣＤＲ３が配列番号５３のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、且つ、
（ｉｉ）前記ＶＬが、相補性決定領域（ＣＤＲ）のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は配列番号５４のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５５のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなり、前記ＬＣＤＲ３が配列番号５６のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる、請求項３０又は３３に記載の使用。

【請求項36】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、
（ｉ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、
（ｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むかもしくは該アミノ酸配列からなる軽鎖可変領域
を含む、請求項３０又は３３に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＬＡＧ－３と特異的に結合する新規な抗体、抗体断片、前記抗体又は抗体断片を含有する組成物に関する。また、本発明は、前記抗体又はその抗体断片をコードする核酸、前記核酸を含む宿主細胞、関連の使用に関する。また、本発明は、これらの抗体及び抗体断片の治療・診断のための使用に関する。特に、本発明は、これらの抗体及び抗体断片と、他の療法、例えば、治療方式又は抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体などの治療剤とによる併用療法に関する。

【背景技術】

【0002】

リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）は、ＣＤ２２３とも呼ばれ、ＬＡＧ３遺伝子が人体においてコードするＩ型膜貫通タンパク質である。ＬＡＧ－３の分子特性、生物学的機能については、例えば、Ｓｉｅｒｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ（２０１１）１５（１）：９１－１０１に記載されるとおり、すでに十分な特性評価と説明が行われている。ＬＡＧ－３は１種のＣＤ４様タンパク質であり、Ｔ細胞（特に、活性化されたＴ細胞）、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、形質細胞様樹状細胞の表面に発現されている。ＬＡＧ－３が負の共刺激受容体、即ち抑制性受容体であることが既に判明している。

【0003】

ＬＡＧ－３はＭＨＣクラスＩＩ分子と結合し（Ｂａｉｘｅｒａｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：３２７－３３７；Ｈｕａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２６：１１８０－１１８６）、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞の表面に分子ファミリーを高レベルに構成的発現する。ＬＡＧ－３の機能はＭＨＣクラスＩＩ分子との結合とその細胞質ドメインによるシグナル伝達に依存している。なお、ＬＡＧ－３とＭＨＣクラスＩＩ分子の直接的な結合はＣＤ４＋ Ｔリンパ球の抗原依存性刺激の下方調節において役割を果たすことが報告されている（Ｈｕａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：３２１６－３２２１）。さらに、ＬＡＧ３とＭＨＣクラスＩＩ分子の間の相互作用は樹状細胞の機能調節において役割を果たすと考えられる（Ａｎｄｒｅａｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６８：３８７４－３８８０，２００２）。最近の前臨床研究において、ＣＤ８ Ｔ－細胞の疲弊に対するＬＡＧ－３の役割が記録されている（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０：２９－３７，２００９）。

【0004】

関連の研究により、慢性ウイルス感染により疲弊したＣＤ８＋Ｔ細胞が複数種の抑制性受容体（例えば、ＰＤ－１、ＣＤ１６０、２Ｂ４）を発現することが判明している。ＬＣＭＶ感染後にＬＡＧ－３が高レベルで発現され、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の遮断とＬＡＧ－３の遮断により慢性感染マウスにおけるウイルス量が顕著に低減することが示されている（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００９）１０：２９－３７）。さらに、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の遮断とＬＡＧ－３遮断剤による共同抑制により、抗腫瘍効果がもたらされることも示されている（Ｊｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（２０１５）３：２）。

【0005】

ＬＡＧ－３が上記の重要な役割を有することから、その活性を調節する新規な抗ＬＡＧ－３抗体、特にヒト化抗体又はヒト抗体を開発する必要がある。かかる抗体は、腫瘍及び感染などの他の疾患の治療により効果的に利用できる。さらに、他の療法（例えば、抗ＰＤ－１又抗体は抗ＰＤ－Ｌ１抗体などの治療剤）と併用して腫瘍、特に転移性腫瘍もしくは難治性腫瘍の治療、又は慢性感染などの感染の治療に用いる新規な抗ＬＡＧ－３抗体を得ることも望まれる。また、生体内における抗体の生理活性を研究するために、マウスモデルに用いられる抗マウスＬＡＧ－３抗体が必要である。

【発明の概要】

【0006】

本発明は、ＬＡＧ－３と結合する抗体分子、例えば、完全ヒト抗体分子又はヒト化抗体分子を開示する。さらに、前記抗体又はその抗体断片をコードする核酸、及び、抗体分子を生成する発現ベクター、宿主細胞と方法を提供する。さらに、抗ＬＡＧ－３抗体分子を含む免疫複合体、多重特異性抗体分子又は二重特異性抗体分子、及び医薬組成物を提供する。本発明に係る抗ＬＡＧ－３抗体分子は、単独で、又は他の療法、例えば、治療剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体）又は治療方式と併用して、腫瘍疾患及び感染性疾患の治療、予防及び／又は診断に用いることができる。さらに、本発明は、ＬＡＧ－３を検出する組成物と方法、及び抗ＬＡＧ－３抗体分子による複数種の疾患（腫瘍及び／又は感染性疾患を含む）の治療方法を開示する。

【0007】

したがって、いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片はＬＡＧ－３と（特異的に）結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片はヒトＬＡＧ－３又はマウスＬＡＧ－３と（特異的に）結合する。

【0008】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、ＬＡＧ－３（例えば、ヒトＬＡＧ－３）と高い親和性で結合し、例えば、約１００ｎＭ未満、好ましくは約５０ｎＭ以下、より好ましくは約２０ｎＭ以下、さらに好ましくは約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下又は約２ｎＭ以下、最も好ましくは約１ｎＭ以下、約０．９ｎＭ以下、約０．８ｎＭ以下又は約０．７ｎＭ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）でＬＡＧ－３と結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は、０．１－２０ｎＭ、好ましくは０．５－２０ｎＭ、より好ましくは０．５－１０ｎＭ、０．５－８ｎＭ、０．５－５ｎＭ、最も好ましくは０．５－１ｎＭ、０．５－０．８ｎＭ、０．５－０．７ｎＭ、０．６－０．７ｎＭのＫ_ＤでＬＡＧ－３と結合する。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３はヒトＬＡＧ－３である。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３はマウスＬＡＧ－３である。いくつかの実施形態において、抗体の結合親和性が光干渉による生体測定法（例えば、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ親和性計測）の測定手法により測定される。

【0009】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、例えば、約３．３ｎＭ、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１．５ｎＭ以下、約１．４ｎＭ以下、約１．３ｎＭ以下、約１．２ｎＭ以下、約１．１ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．９ｎＭ以下、約０．８ｎＭ以下、約０．７ｎＭ以下、約０．６ｎＭ以下又は約０．５ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトＬＡＧ－３を発現する細胞と結合する。いくつかの実施形態において、前記結合がフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）により測定される。いくつかの実施形態において、ヒトＬＡＧ－３を発現する細胞は、ヒトＬＡＧ－３を発現する２９３細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）である。

【0010】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、例えば、約１５０００ｎＭ以下、約１４０００ｎＭ以下又は約１３０００ｎＭ以下のＥＣ５０で、マウスＬＡＧ－３を発現する細胞と結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、約５０ｎＭ以下のＥＣ５０で、例えば、約４０－５０ｎＭのＥＣ５０、約４０－４５ｎＭのＥＣ５０又は約４２ｎＭのＥＣ５０で、マウスＬＡＧ－３を発現する細胞と結合する。いくつかの実施形態において、前記結合がフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）により測定される。いくつかの実施形態において、マウスＬＡＧ－３を発現する細胞は、マウスＬＡＧ－３を発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。

【0011】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、例えば、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下又は約５ｎＭ以下のＩＣ_５０で、好ましくは約１－６ｎＭ、約１－５ｎＭ、約４ｎＭ、約４．５ｎＭ、約５ｎＭ、約５．１ｎＭ、約５．２ｎＭ、約５．３ｎＭ、約５．４ｎＭ、約５．５ｎＭ、約５．６ｎＭ、約５．７ｎＭ、約５．８ｎＭ、約５．９ｎＭ又は６ｎＭのＩＣ_５０でＬＡＧ－３の関連の活性を抑制する。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３の関連の活性は、ＭＨＣクラスＩＩ分子とＬＡＧ－３の結合である。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下又は５ｎＭ以下のＩＣ_５０で、好ましくは約１－６ｎＭ、約１－５ｎＭ、約４ｎＭ、約４．５ｎＭ、約５ｎＭ、約５．１ｎＭ、約５．２ｎＭ、約５．３ｎＭ、約５．４ｎＭ、約５．５ｎＭ、約５．６ｎＭ、約５．７ｎＭ、約５．８ｎＭ、約５．９ｎＭ又は６ｎＭのＩＣ_５０でＬＡＧ－３と、ＭＨＣクラスＩＩ分子を発現する細胞におけるＭＨＣクラスＩＩ分子との結合を抑制する。いくつかの実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩ分子はＨＬＡ－ＤＲである。いくつかの実施形態において、前記細胞はＣＨＯ細胞である。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３の関連の活性に対する本発明の前記抗体又はその断片の抑制がフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）により測定される。

【0012】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、例えば、約３５ｐＭ以下、約３０ｐＭｎＭ以下、約２５ｐＭ以下、約２０ｐＭ以下、約１５ｐＭ以下、約１４ｐＭ以下又は約１３ｐＭ以下のＥＣ_５０で、好ましくは約１－２０ｐＭ、約５－２０ｐＭ、約５－１５ｐＭ、約１０－１５ｐＭ、約１１－１３ｐＭ、約１０ｐＭ、約１１ｐＭ、約１２ｐＭ又は約１３ｐＭのＥＣ_５０で、活性化されたＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋ Ｔ細胞の表面における内因性ＬＡＧ－３と結合する。いくつかの実施形態において、活性化された前記ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、前記結合がフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）により測定される。いくつかの実施形態において、フローサイトメトリーがＡｃｃｕｒｉ Ｃ６システムにおいて行われる。

【0013】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、例えば、ＣＤ４＋ Ｔリンパ球の抗原依存性刺激の増加、Ｔ細胞の増殖増加、活性化抗原（例えば、ＣＤ２５）の発現増加、サイトカイン（例えば、インターフェロン－インターフェロンの増加、サイトカイン、インターロイキン－２（ＩＬ－２）又はインターロイキン－４（ＩＬ－４））の発現増加、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４又はＣＣＬ５）の発現増加、Ｔｒｅｇ細胞の阻害活性低減、Ｔ細胞のホメオスタシス向上、腫瘍浸潤リンパ球の増加、又はがん細胞の免疫回避低減の１種以上が生じるように、ＬＡＧ－３の１種以上の活性を抑制する。

【0014】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、抗体依存性細胞が介在する細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発できる。

【0015】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は、単独で、又は他の療法（例えば、治療方式及び／又は治療剤）と組み合わせて腫瘍（例えば、がん）又は感染性疾患（例えば、慢性感染）を効果的に治療できる。好ましくは、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体と併用して、腫瘍、特に転移性腫瘍又は難治性腫瘍を治療できる。いくつかの実施形態において、前記腫瘍はがんである。いくつかの実施形態において、前記腫瘍は消化器がんである。いくつかの実施形態において、前記がんは結腸がんである。

【0016】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片の重鎖及び／又は軽鎖は、シグナルペプチド配列、例えば、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号４８）をさらに含む。

【0017】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、抗ＬＡＧ－３抗体のアミノ酸配列の変異体、及び、上記の任意の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片と同じエピトープを結合する抗体をさらに含む。

【0018】

いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３又はその断片と結合する抗体又は抗体断片（好ましくは、抗原結合断片）を提供し、前記抗体又は抗体断片はＬＡＧ－３内のエピトープと結合する。

【0019】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ又はＩｇＥの形態の抗体である。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥの重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域、より具体的には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４の重鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む。１つの実施形態において、前記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域である。１つの実施形態において、前記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域である。別の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、例えば、κ軽鎖定常領域又はλ軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域、好ましくはκ（例えば、ヒトκ）軽鎖定常領域を有する。

【0020】

別の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＩｇＧ４（例えば、ヒトＩｇＧ４）の重鎖定常領域を含む。１つの実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、ＥＵ番号の位置２２８における置換（例えば、ＳｅｒからＰｒｏへの置換）を含む。別の実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、第１１４－１１５位（ＥＵ番号）においてＡＡに突然変異されている（Ａｒｍｏｕｒ ＫＬ１，Ｃｌａｒｋ ＭＲ，Ｈａｄｌｅｙ ＡＧ，Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ ＬＭ，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９ Ａｕｇ；２９（８）：２６１３－２４，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｌａｃｋｉｎｇ Ｆｃｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｉ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ）。１つの実施形態において、重鎖定常領域は、配列番号４６に示されるアミノ酸配列、又は前記配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％以上の同一性を有する配列を含み、又は前記配列より構成される。

【0021】

別の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、κ軽鎖定常領域、例えば、ヒトκ軽鎖定常領域を含む。１つの実施形態において、軽鎖定常領域は、配列番号４７のアミノ酸配列、又は前記配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％以上の同一性を有する配列を含み、又は前記配列より構成される。

【0022】

別の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＩｇＧ４の重鎖定常領域（例えば、ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域）、κ軽鎖定常領域（例えば、ヒトκ軽鎖定常領域）を含む。１つの実施形態において、定常領域は突然変異されているＩｇＧ４、例えば、突然変異されているヒトＩｇＧ４である（例えば、ＥＵ番号の位置２２８における突然変異（例えば、Ｓ２２８Ｐ突然変異）を有する）。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域は、配列番号４６に示されるアミノ酸配列、又は前記配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％以上の同一性を有する配列を含み、又は前記配列より構成される。１つの実施形態において、ヒトκ軽鎖定常領域は、配列番号４７のアミノ酸配列、又は前記配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％以上の同一性を有する配列を含み、又は前記配列より構成される。

【0023】

１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、単離されたもの、又は組換えにより得たものである。

【0024】

いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体は、モノクローナル抗体又は単一特異性を有する抗体である。また、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ヒト化された抗体分子、キメラ抗体分子、ラクダ科（ｃａｍｅｌｉｄ）由来の抗体分子、サメ由来の抗体分子又はインビトロにおいて生成された抗体分子であってもよい。いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体はヒト化されたものである。いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体のフレームワーク配列の少なくとも一部は、ヒトに共有するフレームワーク配列である。１つの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は、その抗体断片、好ましくは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）又は（Ｆａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）又は線形抗体から選択される抗体断片をさらに含む。

【0025】

いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、二重特異性抗体分子の形態、又は多重特異性抗体分子の形態である。１つの実施形態において、二重特異性抗体分子は、ＬＡＧ－３に対する第１結合特異性と、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に対する第２結合特異性とを有する。１つの実施形態において、二重特異性抗体分子はＬＡＧ－３及びＰＤ－１と結合する。別の実施形態において、二重特異性抗体分子はＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ１と結合する。別の実施形態において、二重特異性抗体分子はＬＡＧ－３及びＰＤ－Ｌ２と結合する。多重特異性抗体分子において、前記分子の任意の組み合わせを生成できる。多重特異性抗体分子、例えば、三重特異性抗体分子は、ＬＡＧ－３に対する第１結合特異性と、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の１種以上の分子に対する第２結合特異性及び第３結合特異性とを含む。

【0026】

他の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子はＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の１種以上を含む二重特異性分子と組み合わせて使用される。

【0027】

本発明の別の態様において、上記の任意の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片をコードする核酸を提供する。１つの実施形態において、前記核酸を含むベクターを提供する。１つの実施形態において、前記ベクターは発現ベクターである。１つの実施形態において、前記核酸又は前記ベクターを含む宿主細胞を提供する。１つの実施形態において、前記宿主細胞は真核細胞である。別の実施形態において、前記宿主細胞は、酵母細胞、哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ細胞もしくは２９３細胞）又は抗体もしくはその抗原結合断片の製造に適する他の細胞から選択される。別の実施形態において、前記宿主細胞は原核細胞であり、例えば、大腸菌細胞である。

【0028】

本発明の１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片（好ましくは、抗原結合断片）の製造方法を提供する。前記方法は、前記抗体又はその断片（好ましくは、抗原結合断片）をコードする核酸の発現に適する条件において前記宿主細胞を培養することを含み、好ましくは、前記抗体又はその断片（好ましくは、抗原結合断片）を単離することをさらに含む。１つの実施形態において、前記方法は、前記宿主細胞から抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片（好ましくは、抗原結合断片）を回収することをさらに含む。

【0029】

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る任意の抗ＬＡＧ－３抗体と、細胞傷害剤又は標識などの他の物質とを含む免疫複合体を提供する。いくつかの実施形態において、前記免疫複合体は、腫瘍（例えば、がん）又は感染性疾患の予防又は治療に用いられる。好ましくは、前記腫瘍は、消化器がん（例えば、がん）、例えば、結腸がんである。好ましくは、前記感染性疾患は、慢性感染である。

【0030】

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る任意の抗ＬＡＧ－３抗体もしくはその断片（好ましくは、その抗原結合断片）又はその免疫複合体を含む組成物を提供する。好ましくは、前記組成物は医薬組成物である。１つの実施形態において、前記組成物は、医薬品添加物をさらに含む。１つの実施形態において、前記組成物、例えば、医薬組成物は、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体もしくはその断片又はその免疫複合体と、１種以上の他の治療剤（例えば、化学療法剤、細胞傷害剤、ワクチン、他の抗体、抗感染症剤又は免疫調節剤（例えば、共刺激分子の作動剤もしくは免疫チェックポイント分子の抑制剤）、好ましくは抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体）の組み合わせとを含む。

【0031】

いくつかの実施形態において、前記医薬組成物は、腫瘍（例えば、がん）又は感染の予防又は治療に用いられる。好ましくは、前記腫瘍は、消化器がん（例えば、がん）、例えば、結腸がんである。好ましくは、前記感染性疾患は、慢性感染である。

【0032】

別の態様において、本発明は、対象又は個体における腫瘍（例えば、がん）又は感染性疾患の予防又は治療の方法に関する。前記方法は、有効量の本発明に係る任意の抗ＬＡＧ－３抗体もしくはその断片、医薬組成物又は免疫複合体を前記対象に投与することを含む。１つの実施形態において、前記腫瘍は、消化器がん（例えば、がん）、例えば、結腸がんである。１つの実施形態において、前記感染性疾患は、慢性感染である。本発明の別の態様において、対象における腫瘍（例えば、がん）又は感染の治療薬物を製造するための、本発明に係る任意の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片の用途に関する。１つの実施形態において、前記腫瘍は、消化器がん（例えば、がん）、例えば、結腸がんである。１つの実施形態において、前記感染性疾患は、慢性感染である。

【0033】

本発明の別の態様において、対象又は個体における腫瘍（例えば、がん）又は感染性疾患の予防又は治療の方法に関する。前記方法は、有効量の本発明に係る任意の抗ＬＡＧ－３抗体もしくはその断片、医薬組成物又は免疫複合体と、ＰＤ－１軸結合拮抗剤又は前記ＰＤ－１軸結合拮抗剤を含む薬物もしくは活性化剤とを併用して対象に投与することを含む。１つの実施形態において、前記腫瘍は、消化器がん（例えば、がん）、例えば、結腸がんである。１つの実施形態において、前記感染性疾患は、慢性感染である。本発明の別の態様において、対象における腫瘍（例えば、がん）又は感染性疾患の治療薬物を製造するための、本発明に係る任意の抗ＬＡＧ－３抗体もしくはその断片とＰＤ－１軸結合拮抗剤の組み合わせの用途に関する。１つの実施形態において、前記腫瘍は、消化器がん（例えば、がん）、例えば、結腸がんである。１つの実施形態において、前記感染性疾患は、慢性感染である。

【0034】

いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－１軸結合拮抗剤は、例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体を含む。

【0035】

さらに、いくつかの実施形態において、本発明に係る予防又は治療方法は、対象又は個体に１種以上の療法（例えば、治療方式及び／又は他の治療剤）を適用することを含む。いくつかの実施形態において、前記治療方式は、手術治療及び／又は放射線治療を含む。いくつかの実施形態において、前記他の治療剤は、化学療法剤、細胞傷害剤、ワクチン、他の抗体、抗感染症剤又は免疫調節剤（例えば、共刺激分子の作動剤又は免疫チェックポイント分子の抑制剤）から選択される。

【0036】

いくつかの実施形態において、対象又は個体は、ヒト以外の動物である。いくつかの実施形態において、対象又は個体は、哺乳類であり、好ましくは、ヒトである。

【0037】

本発明の別の態様において、サンプル中のＬＡＧ－３の検出方法に関する。前記方法は、（ａ）サンプルを本発明に係る任意の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片と接触させることと、（ｂ）抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片とＬＡＧ－３における複合物の形成を検出することとを含む。１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体は、検出可能に標識される。

【0038】

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る任意の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片を含む試薬キット又は製品に関する。いくつかの実施形態において、前記試薬キット又は前記製品は、本発明に係る抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片を含み、好ましくは医薬品添加物をさらに含む。いくつかの実施形態において、前記試薬キット又は前記製品は、薬物の投与による腫瘍又は感染の治療に関する取扱説明書をさらに含む。

【0039】

本発明は、本明細書に記載のいずれの実施形態の任意の組み合わせをさらに含む。本発明に係る任意の実施形態又はその任意の組み合わせは、本発明に係る全ての抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片、方法及び用途に適する。

【図面の簡単な説明】

【0040】

【図1】図１は、フローサイトメトリーにより検出された細胞表面のｈＬＡＧ－３に対する親抗体の結合能を示す。

【図2】図２は、フローサイトメトリーにより検出された細胞表面のｈＬＡＧ－３に対する親和性が成熟している抗体の結合能を示す。

【図3】図３は、フローサイトメトリーにより検出されたヒトＭＨＣ ＩＩ（ＨＬＡ－ＤＲ）とＬＡＧ－３の相互作用に対する抗ＬＡＧ－３抗体の遮断を示す。

【図4】図４は、フローサイトメトリーにより検出された活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞に対する抗ＬＡＧ－３抗体の結合能を示す。

【図5】図５は、フローサイトメトリーにより検出された細胞表面のマウスＬＡＧ－３に対する抗ＬＡＧ－３抗体の結合能を示す。

【図6】図６は、ＣＴ２６移植腫瘍モデルにおける抗ＬＡＧ－３抗体と抗ＰＤ－１抗体の併用の腫瘍に対する抑制効果を示す。

【図7】図７は、ＮＯＧモデルにおける抗ＬＡＧ－３抗体と抗ＰＤ－１抗体又はＰＤ－Ｌ１との併用の腫瘍に対する抑制効果を示す。

【図8】図８は、ＩＬ－２標準曲線を示す。

【図9】図９は、活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞によるＩＬ－２の分泌に対する抗体又は抗体の組み合わせの影響を示す。

【発明を実施するための形態】

【0041】

略号
別途説明が行われる場合を除き、本明細書に出現する略号は以下の意味を有する。
以下の略号を使用する。
ＡＤＣＣ 抗体依存性細胞が介在する細胞毒性
ＣＤＣ 補体依存性細胞傷害
ＣＤＲ 免疫グロブリンの可変領域における相補性決定領域
ＣＨＯ チャイニーズハムスター卵巣
ＥＣ５０ ５０％効果又は結合を示すときの濃度
Ｋ_Ｄ 平衡解離定数
ＥＬＩＳＡ 酵素結合免疫吸着測定
ＦＲ 抗体フレームワーク領域
ＩＣ５０ ５０％抑制を示すときの濃度
Ｉｇ 免疫グロブリン
Ｋａｂａｔ Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔ（（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ ｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）により作成された免疫グロブリン比較・番号付けシステム
ｍＡｂ又はＭａｂ又はＭＡｂ モノクローナル抗体
ＰＣＲ ポリメラーゼ連鎖反応
ＩＦＮ インターフェロン
ＶＬ 軽鎖可変領域
ＶＨ 重鎖可変領域
ＬＣ 軽鎖
ＨＣ 重鎖
ＨＣＤＲ 重鎖の相補性決定領域
ＬＣＤＲ 軽鎖の相補性決定領域

【0042】

定義
本発明の詳細な説明を行う前に、本明細書で説明されている特定の方法、方式又は試薬に変更がある可能性があるため、本発明はこれらに限定されるものではないことが理解されたい。なお、本発明で使用されている用語は特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲はこれらによって限定されることは意図されず、特許請求の範囲によって限定される。別途定義が行われる場合を除き、本発明で使用されている技術用語又は科学用語はそのいずれも当業者の通常の理解と同じ意味を有する。

【0043】

本明細書で解釈のために以下の定義を使用する。しかも矛盾がなければ、単数形で使用される用語は複数の場合をも含む。逆の場合については同様である。なお、本発明で使用されている用語は、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、限定を加えるものではない。

【0044】

用語「約」は数値と共に使用されるとき、下限として記載数値より５％小さく上限として記載数値より５％大きい範囲における数値を含むことを意味する。

【0045】

「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合対象（例えば、抗原）の間における全ての非共有相互作用の和の強度を指す。別途説明が行われる場合を除き、本明細書で使用される用語「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原）の間の１：１の相互作用の内部における結合親和性を表すものである。分子Ｘのその結合対象Ｙに対する親和性は、一般に平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で表すことができる。既存の技術として知られる方法や本明細書で説明されている方法を含む本分野の周知の方法により、親和性を計測できる。

【0046】

用語「リンパ球活性化遺伝子－３」又は「ＬＡＧ－３」は、全てのアイソタイプ、哺乳類（例えば、ヒト）のＬＡＧ－３、ヒトＬＡＧ－３の生物種的相同体、ＬＡＧ－３の少なくとも１つの共有するエピトープを含む類似体を含む。ＬＡＧ－３（例えば、ヒトＬＡＧ－３）のアミノ酸配列とヌクレオチド配列は本分野の周知の内容であり、例えば、Ｔｒｉｅｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１：１３９３－１４０５を参照できる。

【0047】

いくつかの実施形態において、用語「ヒトＬＡＧ－３」とは、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００２２７７のヒトＬＡＧ－３の完全なアミノ酸配列などのヒト配列ＬＡＧ－３を指す。いくつかの実施形態において、用語「マウスＬＡＧ－３」とは、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿０３２５０５のマウスＬＡＧ－３の完全なアミノ酸配列などのマウス配列ＬＡＧ－３を指す。既存の技術で、ＬＡＧ－３はＣＤ２２３などとも呼ばれる。ヒトＬＡＧ－３配列は、例えば、保存的な突然変異又は非保存的な領域における突然変異を有することで、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００２２７７のヒトＬＡＧ－３とは異なるものであってもよく、当該ＬＡＧ－３はＧｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿００２２７７のヒトＬＡＧ－３とほぼ同じ生理機能を有する。例えば、ヒトＬＡＧ－３の生理機能はＬＡＧ－３の細胞外ドメインにエピトープを有し、それが本発明の抗体によって特異的に結合されることであり、又はヒトＬＡＧ－３の生理機能はＭＨＣクラスＩＩ分子と結合することである。

【0048】

本発明で使用される用語「抗ＬＡＧ－３抗体」、「抗ＬＡＧ－３」、「ＬＡＧ－３抗体」又は「ＬＡＧ－３と結合する抗体」とは、十分な親和性でＬＡＧ－３タンパク質又はその断片と結合する抗体を指す。１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体の非ＬＡＧ－３タンパク質と結合する程度は、例えば、放射免疫測定（ＲＩＡ）又は光干渉による生体測定法又はＭＳＤ測定により測定された結果、前記抗体のＬＡＧ－３と結合する程度の約１０％未満、約２０％未満、約３０％未満、約４０％未満、約５０％未満、約６０％未満、約７０％未満、約８０％未満、又は約９０％以上未満である。

【0049】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」、「ｍＡｂ」又は「Ｍａｂ」とは、例えば、真核生物、原核生物又はファージクローンのシングルコピーもしくはクローンに由来する抗体を指し、その生成方法を意味しない。モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージディスプレイ技術、ＣＤＲグラフトなどの合成技術、もしくは類似の技術、又は本分野で既知の他の技術の組み合わせにより生成できる。

【0050】

「天然抗体」とは、異なる構造を有しており天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体とは、約１５万ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、二硫化物により化学結合された２本の同一の軽鎖と２本の同一の重鎖により構成される。Ｎ末端からＣ末端にかけて、各重鎖が１つの可変領域（ＶＨ）を有し、当該可変領域は可変重ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる。それに続くのは３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）である。同様に、Ｎ末端からＣ末端にかけて、各軽鎖が１つの可変領域（ＶＬ）を有し、当該可変領域は可変軽ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる。それに続くのは１つの定常軽（ＣＬ）ドメインである。抗体軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列によって、カッパ（κ）とラムダ（λ）のいずれかのタイプに分類することができる。「天然配列のＦｃ領域」は自然界に発見したＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列のヒトＦｃ領域は、天然配列のヒトＩｇＧ１のＦｃ領域（非ＡとＡのアロタイプ）、天然配列のヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、天然配列のヒトＩｇＧ３のＦｃ領域、天然配列のヒトＩｇＧ４のＦｃ領域、天然に存在するその変異体を含む。

【0051】

「抗体断片」とは、完全抗体の一部を含み且つ完全抗体によって結合された抗原と結合する、完全抗体とは異なる分子を指す。抗体断片の非限定的な例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線形抗体、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、二価抗体もしくは二重特異性抗体もしくはその断片、ラクダ科由来の抗体、抗体断片により形成された二重特異性抗体もしくは多重特異性抗体を含む。

【0052】

本明細書で使用される用語「エピトープ」とは、抗原（例えば、ヒトＬＡＧ－３）における抗体分子と特異的に相互作用する部分を指す。当該部分（本明細書でエピトープ決定基と呼ばれる）は一般に、アミノ酸側鎖もしくは糖側鎖又はこれらを構成する部分などの構成要素を含む。本分野で既知の方法又は本明細書で開示されている方法（例えば、結晶学的方法又は水素－重水素交換法）によりエピトープ決定基を限定することができる。抗体分子におけるエピトープ決定基と特異的に相互作用する少なくとも１つ以上の部分は一般にＣＤＲ内に位置する。一般に、エピトープは特定の三次元的構造特徴を有する。一般に、エピトープは特定の電荷上の特徴を有する。エピトープには、線形エピトープと立体配座エピトープがある。

【0053】

参照抗体と「同一の又は重複するエピトープと結合する抗体」とは、競合測定において５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の前記参照抗体とその抗原の結合を遮断する抗体を指す。言い換えれば、参照抗体が競合測定において５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の当該抗体とその抗原の結合を遮断する。

【0054】

参照抗体に対してその抗原と競合的に結合する抗体とは、競合測定において５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の前記参照抗体とその抗原の結合を遮断する抗体を指す。言い換えれば、参照抗体が競合測定において５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の当該抗体とその抗原の結合を遮断する。１種の抗体が別の抗体と競合関係にあるかどうかを決定するためには様々な競合的結合測定を用いることができる。これらの測定の例としては、固相直接放射免疫測定又は間接放射免疫測定（ＲＩＡ）、固相直接酵素免疫測定又は間接酵素免疫測定（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合測定（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３）が挙げられる。

【0055】

参照抗体とその抗原の結合を抑制（例えば、競合的抑制）する抗体とは、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の前記参照抗体とその抗原の結合を抑制する抗体を指す。言い換えれば、参照抗体が５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の当該抗体とその抗原の結合を抑制する。抗体とその抗原の結合は親和性（例えば、平衡解離定数）として計測できる。親和性の測定方法は、本分野で既知の内容である。

【0056】

参照抗体と同じ又は類似の結合親和性及び／又は特異性を示す抗体とは、参照抗体の少なくとも５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の結合親和性及び／又は特異性を有する抗体を指す。これに関しては、本分野の既知の任意の結合親和性及び／又は特異性の測定方法で測定できる。

【0057】

「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ領域」又は「ＣＤＲ」は、抗体可変ドメインでは、配列において超可変であり且つ構造上に形成された所定のループ（「超可変ループ」）及び／又は抗原接触残基（「抗原接触点」）を含む領域である。ＣＤＲは、主に抗原エピトープに結合する役割を果たす。重鎖及び軽鎖のＣＤＲは、通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ－末端から順次番号を付けられる。抗体の重鎖可変ドメイン内に位置するＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の軽鎖可変ドメイン内に位置するＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と呼ばれる。１つの特定の軽鎖可変領域又は重鎖可変領域のアミノ酸配列において、各ＣＤＲにおけるアミノ酸配列の境界は、公知の各種の抗体ＣＤＲ割り当てシステムのいずれか１種又はその組み合わせにより正確に決定できる。前記割り当てシステムの例は、抗体の三次元的構造とＣＤＲリングのトポロジーに基づくＣｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３，Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８（１９９７））、抗体配列の可変性に基づくＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９８７））、ＡｂＭ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ）、Ｃｏｎｔａｃｔ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ）、国際的ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ（ＩＭＧＴ）（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／にて利用可能）、大量の晶体構造が利用されるアフィニティ伝播クラスタリング（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）に基づくＮｏｒｔｈ ＣＤＲ定義を含む。

【0058】

例えば、ＣＤＲの決定方式によって、各ＣＤＲの残基はそれぞれ以下に記載のとおりである。

【表1-1】

【0059】

また、参照ＣＤＲ配列（例えば、本発明の例示的なＣＤＲのいずれか）と同じＫａｂａｔ番号位置を有することでＣＤＲを決定することもできる。

【0060】

別途説明が行われる場合を除き、本発明で用語「ＣＤＲ」又は「ＣＤＲ配列」は、上記のいずれかの方式で決定されるＣＤＲ配列を含む。

【0061】

別途説明が行われる場合を除き、本発明において、抗体可変領域における残基位置（重鎖可変領域の残基及び軽鎖可変領域の残基を含む）が言及される場合は、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））に基づく番号位置を指す。

【0062】

１つの実施形態において、Ｋａｂａｔ規則により本発明の抗体のＣＤＲの境界が決定され、又はＩＭＧＴ規則、ＡｂＭ規則、もしくはこれらの規則の組み合わせにより決定される。例えば、その配列は表１に示されるとおりである。

【0063】

ただし、異なる割り当てシステムから得られた同一抗体の可変領域のＣＤＲの境界には、差異がある可能性があることを認識すべきである。即ち、異なる割り当てシステムで定義された同一抗体の可変領域のＣＤＲ配列には違いがある。したがって、本発明で定義された具体的なＣＤＲ配列により抗体が限定される場合、前記抗体の範囲には、可変領域配列が前記した具体的なＣＤＲ配列を含むが、異なる手段（例えば、異なる割り当てシステムのルール又は組み合わせ）が使用されることにより、かかるＣＤＲ境界が本発明で定義された具体的なＣＤＲ境界と異なるような抗体も含まれる。

【0064】

異なる特異性を有する（即ち、異なる抗原の異なる結合部位を対象とする）抗体は、（同一の割り当てシステムにおいて）異なるＣＤＲを有する。しかしながら、抗体によってＣＤＲに違いがあるものの、ＣＤＲ内において抗原結合に直接関与するアミノ酸位置の数量が限定的である。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ及びＮｏｒｔｈ方法のうちの少なくとも２種を用いて、最小重複領域を決定し、それによって抗原結合用の「最小結合単位」を提供することができる。最小結合単位は、ＣＤＲの１つのサブ部分であってもよい。当業者にとって自明なように、抗体の構造及びタンパク質の折りたたみによって、ＣＤＲ配列の残り部分の残基が特定され得る。したがって、本発明では、本出願に記載の任意のＣＤＲの変異体も考えられる。例えば、１つのＣＤＲの変異体では、最小結合単位のアミノ酸残基は一定に維持できるが、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａで定義される残りのＣＤＲ残基は保存的アミノ酸残基により置換されてもよい。

【0065】

本分野において主に、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭの５つのクラスの抗体が知られる。なお、これらの抗体のいくつかは、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、ＩｇＡ_２のように、さらにサブクラス（アイソタイプ）に分けることができる。重鎖定常ドメインは、その対応する免疫グロブリンのクラスによって、それぞれα、δ、ε、γ、μと呼ばれる。

【0066】

「ＩｇＧ形態の抗体」とは、抗体の重鎖定常領域がＩｇＧ形態を有することを指す。全ての同一のアイソタイプの抗体はその重鎖定常領域が同じであり、異なるアイソタイプの抗体において、その重鎖定常領域が異なる。例えば、ＩｇＧ４形態の抗体とは、その重鎖定常領域のＩｇドメインがＩｇＧ４のＩｇドメインであることを指す。

【0067】

用語「ＰＤ－１軸結合拮抗剤」とは、ＰＤ－１軸結合対象の１種以上のその結合対象との相互作用を抑制することによって、ＰＤ－１シグナル伝達軸上のシグナル伝達によるＴ細胞機能障害を解消し、その結果として例えば、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン生成、標的細胞の殺傷）が回復又は増強されるという分子を指す。本明細書で使用されるＰＤ－１軸結合拮抗剤は、ＰＤ－１結合拮抗剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ２抗体）を含む。

【0068】

用語「ＰＤ－１結合拮抗剤」とは、ＰＤ－１と１種以上のその結合対象（例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２）の相互作用によるシグナル伝達を低減、遮断、抑制、解消又は干渉する分子を指す。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＰＤ－１と１種以上のその結合対象の結合を抑制する分子である。１つの特定の態様において、前記ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２の結合を抑制する。例えば、ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２の相互作用によるシグナル伝達を低減、遮断、抑制、解消又は干渉する抗ＰＤ－１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、他の分子を含む。１つの実施形態において、ＰＤ－１結合拮抗剤が、Ｔリンパ球に発現された細胞表面タンパク質が介在する又は細胞表面タンパク質を介して介在される負の共刺激信号を低減する（ＰＤ－１を介してシグナル伝達を介在する）ことによって、機能障害性Ｔ細胞が機能障害性を示さなくなる（例えば、抗原を認識するエフェクターへの応答が増強される）。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－１結合拮抗剤は抗ＰＤ－１抗体である。具体的に１つの実施形態において、前記ＰＤ－１結合拮抗剤は、世界特許ＷＯ２０１５／０９５４２３に開示されているＭＤＸ－１１０６（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ＭＫ－３４７５（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ＣＴ－０１１（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）又はＡＭＰ－２２４である。具体的に１つの実施形態において、前記抗ＰＤ－１抗体は、世界特許ＷＯ２０１７／１３３５４０に開示されている「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃ」である。具体的に別の実施形態において、前記抗ＰＤ－１抗体は、世界特許ＷＯ２０１７／０２５０１６に開示されている「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄ」である。

【0069】

用語「ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤」とは、ＰＤ－Ｌ１と１種以上のその結合対象（例えば、ＰＤ－１、Ｂ７－１）との相互作用によるシグナル伝達を低減、遮断、抑制、解消又は干渉する分子を指す。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ１とその結合対象の結合を抑制する分子である。１つの特定の態様において、前記ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１及び／又はＢ７－１の結合を抑制する。いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ１と１種以上のその結合対象（例えば、ＰＤ－１、Ｂ７－１）の相互作用によるシグナル伝達を低減、遮断、抑制、解消又は干渉する抗ＰＤ－Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、他の分子を含む。１つの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤が、Ｔリンパ球に発現された細胞表面タンパク質が介在する又は細胞表面タンパク質を介して介在される負の共刺激信号を低減する（ＰＤ－Ｌ１を介してシグナル伝達を介在する）ことによって、機能障害性Ｔ細胞が機能障害性を示さなくなる（例えば、抗原を認識するエフェクターへの応答が増強される）。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。１つの特定の態様において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、世界特許ＷＯ２０１５／０９５４２３に開示されているＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＤＸ－１１０５、ＭＰＤＬ３２８０Ａ又はＭＥＤＩ４７３６である。

【0070】

用語「ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤」とは、ＰＤ－Ｌ２と１種以上のその結合対象（例えば、ＰＤ－１）との相互作用によるシグナル伝達を低減、遮断、抑制、解消又は干渉する分子を指す。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ２と１種以上のその結合対象の結合を抑制する分子である。１つの特定の態様において、前記ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ２とＰＤ－１の結合を抑制する。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－Ｌ２拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ２と１種以上のその結合対象（例えば、ＰＤ－１）の相互作用によるシグナル伝達を低減、遮断、抑制、解消又は干渉する抗ＰＤ－Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、他の分子を含む。１つの実施形態において、前記ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤が、Ｔリンパ球に発現された細胞表面タンパク質が介在する又は細胞表面タンパク質を介して介在される負の共刺激信号を低減する（ＰＤ－Ｌ２を介してシグナル伝達を介在する）ことによって、機能障害性Ｔ細胞が機能障害性を示さなくなる（例えば、抗原を認識するエフェクターへの応答が増強される）。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤はイムノアドヘシンである。

【0071】

「抗体依存性細胞が介在する細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」とは、一部の細胞傷害細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球、マクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）における分泌型免疫グロブリンと結合することによって、これらの細胞傷害エフェクター細胞が抗原を携帯する標的細胞と特異的に結合して、細胞毒素で標的細胞を死滅させるという細胞傷害の形態を指す。ＡＤＣＣを介在する細胞は主に、ＦｃγＲＩＩＩだけを発現するＮＫ細胞である。一方、単核細胞はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩを発現する。Ｒａｖｅｔｃｈ＆Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）．ｐ４６４の表３には、造血細胞におけるＦｃＲの発現がまとめられている。目的分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、例えば、米国特許第５，５００，３６２号又は同第５，８２１，３３７号又は同第６，７３７，０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に記載のとおり、インビトロ的なＡＤＣＣ測定手法を採用できる。かかる測定手法が適用されるエフェクター細胞は、ＰＢＭＣ、ＮＫ細胞を含む。好ましくは／さらに、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）に記載のとおり、動物モデルにおいて、インビボ的に目的分子のＡＤＣＣ活性を評価してもよい。

【0072】

本明細書で使用される用語「細胞傷害剤」又は「細胞傷害因子」とは、細胞機能を抑制又は阻止し且つ／又は細胞死又は破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害剤の例に関しては、世界特許ＷＯ２０１５／１５３５１３、ＷＯ２０１６／０２８６７２又はＷＯ２０１５／１３８９２０の開示が参照される。
本発明で使用される用語「治療剤」は、腫瘍（例えば、がん）と感染（例えば、慢性感染）の予防又は治療に効果的な任意の物質を含み、例えば、世界特許ＷＯ２０１６／０２８６７２又はＷＯ２０１５／１３８９２０に開示されている抗ＬＡＧ－３抗体と併用できる任意の物質など、化学療法剤、細胞傷害剤、ワクチン、他の抗体、抗感染症剤又は免疫調節剤を含む。

【0073】

「化学療法剤」は、がんの治療に効果的な化合物を含む。化学療法剤の例に関しては、世界特許ＷＯ２０１５／１５３５１３、ＷＯ２０１６／０２８６７２又はＷＯ２０１５／１３８９２０の開示が参照される。

【0074】

用語「サイトカイン」は、細胞集団から放出されて、細胞間メディエーターとして別の細胞に作用するタンパク質の通称である。当該サイトカインの例として、リンホカイン、モノカインと、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５などのインターロイキン（ＩＬ）と、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－βなどの腫瘍壊死因子と、ＬＩＦ、ｋｉｔリガンド（ＫＬ）、γ－インターフェロンを含む他のポリペプチド性サイトカインが挙げられる。本出願に使用される用語であるサイトカインは、天然由来又は組換え細胞培養物由来のタンパク質及び天然配列サイトカインの生物学的活性を有する同等物を含み、この同等物には、人工合成による小分子実体、及びその薬学的に許容される誘導体及び塩が含まれる。

【0075】

用語「共刺激分子」とは、Ｔ細胞における共刺激リガンドと特異的に結合することによって、Ｔ細胞が共刺激反応（例えば、増殖）を介在することに関連する結合対象を指す。共刺激分子は効率的な免疫応答に求められる抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子の非限定的な例は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球の活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＮＫ細胞活性化受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含む。

【0076】

用語「作動剤」又は「アゴニスト」は、対象分子（例えば、共刺激分子）のいくつかのパラメータ（例えば、活性）を増加させる物質を含む。例えば、当該用語は、対象分子の活性（例えば、共刺激活性）を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％又は少なくとも７５％以上増加させる物質を含む。

【0077】

用語「免疫チェックポイント分子」とは、ＣＤ４ Ｔ細胞とＣＤ８ Ｔ細胞の細胞表面における１群の分子を指す。これらの分子は、抗腫瘍免疫応答を下方調節又は抑制する「ブレーキ」として効果的に役割を果たすことができる。免疫チェックポイント分子の非限定的な例は、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、ＯＸ－４０、ＣＤ１３７、ＣＤ４０、ＬＡＧ－３を含み、これらが免疫細胞に対して直接的に抑制する。

【0078】

用語「抑制剤」又は「拮抗剤」は、対象分子（例えば、免疫チェックポイント抑制タンパク質）のいくつかのパラメータ（例えば、活性）を低減させる物質を含む。例えば、当該用語は、対象分子の活性（例えば、ＰＤ－１活性又はＰＤ－Ｌ１活性）の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％又は少なくとも４０％以上を抑制する物質を含む。したがって、抑制効果は必ずしも１００％とは限らない。

【0079】

用語「ダイアボディ」とは、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を指す。前記断片は同一のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結されている重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。長さが極めて短いため同一の鎖における２つのドメインの間にペアリングできないリンカーを利用して、前記ドメインを別の鎖の相補性ドメインと強制的にペアリングさせることによって、２つの抗原結合部位を生成する。ダイアボディは、二価又は二重特異性であってもよい。ダイアボディのより詳細な説明に関しては、例えば、欧州特許ＥＰ４０４，０９７、世界特許ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）９０：６４４４－６４４８（１９９３）が参照される。トリアボディ、トラボディに関してはＨｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に同様な説明が行われている。

【0080】

「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」は、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方調節などを含む。かかるエフェクター機能には一般に、Ｆｃ領域と結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）の関連が求められ、それに例えば、本発明に開示されている複数種の測定手法を用いて評価できる。

【0081】

「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域に属し且つ抗体のアイソタイプによって変化する生理活性を指す。抗体のエフェクター機能の例は、Ｃ１ｑ結合と補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞が介在する細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、Ｂ細胞活性化を含む。

【0082】

「ヒトエフェクター細胞」とは、１種以上のＦｃＲを発現しエフェクター機能を行使する白血球を指す。いくつかの実施形態において、当該細胞は少なくともＦｃエフェクターを発現しＡＤＣＣエフェクター機能を行使する。ＡＤＣＣを介在するヒト白血球の例は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単核細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、好中球を含む。エフェクター細胞は、天然由来のものであってもよい。例えば、血液から単離される。

【0083】

用語「有効量」とは、本発明の抗体もしくは断片又は複合体又は組成物の１回分又は複数回分の量を患者に投与した後、治療又は予防が必要な患者に所望の効果が得られるという量又は投与量を指す。有効量は、当業者である主治医が、例えば、哺乳類の生物種、投与対象の大きさ、年齢、健康状態と、適用される疾患、疾患の程度又は重症度、個体患者における応答、投与される抗体、投与方式、投与製剤の生物学的利用能の特徴、選択される投与計画、併用療法の適用の複数種の要因を考慮して容易に決定することができる。

【0084】

「治療的有効量」とは、必要な期間に亘って必要な用量で所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。抗体もしくは抗体断片又はその複合体又は組成物の治療有効量は、例えば、疾患の状態、個体の年齢、性別、重量、抗体又は抗体の部分が個体に所望の反応を起こす能力の複数種の要因によって変化する可能性がある。また治療有効量は、抗体もしくは抗体断片又はその複合体又は組成物の任意の毒性又は有害作用が有益な治療効果に及ばないという量であってもよい。治療を受けていない対象に比べて、「治療有効量」により計測可能なパラメータ（例えば、腫瘍増殖（成長）速度）の少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも約４０％、より好ましくは少なくとも約５０％、少なくとも約６０％又は少なくとも約７０％、さらに好ましくは少なくとも約８０％が抑制されることが好ましい。ヒト腫瘍における効能を示す動物モデルシステムにおいて、計測可能なパラメータ（例えば、がん）に対する化合物の抑制能力を評価できる。好ましくは、化合物の抑制能力を検証することによって組成物の当該特性を評価できる。前記抑制は関連技術に熟練した業者が知っている測定手法によりインビトロにおいて測定される。

【0085】

「予防的有効量」は、必要な期間に亘って必要な用量で所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。一般に、予防目的の投与量は対象における疾患の早期段階よりも前に又は疾患の早期段階に適用されるため、予防有効量が治療有効量を下回る。

【0086】

本発明に適用される「抗体及びその抗原結合断片」の非限定的な例は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、一価抗体、二重特異性抗体、ヘテロ複合体抗体、多重特異性抗体、組換え抗体、ヘテロ抗体、ヘテロ接合抗体、キメラ抗体、ヒト化（特にＣＤＲがグラフトされている）抗体、脱免疫抗体、もしくはヒト由来の抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって生成された断片、Ｆｄ、Ｆｖ、二硫化物によって連結されているＦｖ（ｄｓＦｖ）、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、ダイアボディもしくはトラボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０（１４），６４４４－６４４８）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）（単一ドメイン抗体とも呼ばれる）、抗イディオタイプ抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、上記のいずれか１種のエピトープ結合断片を含む。

【0087】

「Ｆａｂ」断片は、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含み、且つ、軽鎖の定常ドメインと、重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）とをさらに含む。Ｆａｂ’断片は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ基末端にいくつかの残基（抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステインを含む）が追加されているため、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が１つの遊離チオール基を携帯しているＦａｂ’に対する呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、最初に１対のＦａｂ’断片として生成され、Ｆａｂ’断片の間にヒンジシステインがある。抗体断片の他の化学的カップリングも、既知の内容である。

【0088】

本明細書で使用される用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義しており、前記領域は少なくとも一部の定常領域を含む。該用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域がＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボニル基末端に延長している。一方、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在してもよいし、又は存在しなくてもよい。別途説明が行われる場合を除き、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基の番号が、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載のＥＵ番号付けシステム（別称ＥＵインデックス）に準じる。

【0089】

用語「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体と抗原の結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは一般に、各ドメインが４つの保存的なフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含むように、類似の構造を有する。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６^ｔｈｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．ｐ９１（２００７）が参照される）。単一のＶＨドメイン又はＶＬドメインでも、抗原結合特異性を付与することができる。また、特定の抗原と結合する抗体に由来するＶＨドメイン又はＶＬドメインを利用して前記抗原と結合する抗体を単離することによって、相補性のＶＬドメイン又はＶＨドメインのライブラリーをそれぞれスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）が参照される。

【0090】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」とは、相補性決定領域（ＣＤＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般に、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４の４つのＦＲドメインより構成される。したがって、ＣＤＲ配列及びＦＲ配列は一般に、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（又は軽鎖可変ドメイン（ＶＬ））における配列ＦＲ１－ＨＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）－ＦＲ２－ＨＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）－ＦＲ３－ＨＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）－ＦＲ４に出現する。

【0091】

別途説明が行われる場合を除き、抗体の各ドメインにおける残基の番号が、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載のＥＵ番号付けシステム（別称ＥＵインデックス）に準じる。

【0092】

用語「全長抗体」、「完全な抗体」、「完全抗体」は、構造的に天然抗体とほぼ同じであるか、又は本明細書で定義されているＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指すように本明細書で入れ替えて使用される。

【0093】

用語「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部位を含む最小抗体断片である。１つの実施形態において、二本鎖Ｆｖの形態は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインが非共有的に緊密に結合している二量体より構成される。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）の形態において、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインがフレキシブルペプチドリンカーを介して共有連結されることによって、軽鎖と重鎖は二本鎖Ｆｖの形態の「二量体」構造のように結合される。かかる配置において、各可変ドメインの３つのＣＤＲの作用より、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位が限定される。つまり、６つのＣＤＲにより抗体に抗原結合特異性が付与される。一方で、単一の可変ドメイン（又は抗原特異的な３つのＣＤＲの半分だけを含むＦｖ）でも、完全な結合部位よりも親和性が低いものの、抗原を認識してそれと結合する能力を有する。ｓｃＦｖの概要に関しては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ １１３，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ＆Ｍｏｏｒｅ，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４），ｐ２６９－３１５が参照される。

【0094】

用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、「宿主細胞培養物」は、外因性核酸が導入された細胞、かかる細胞の子孫を指すように入れ替えて使用される。宿主細胞は、「形質転換体」、「形質転換細胞」を含み、初代形質転換細胞、及び継代数に関係なくそれに由来する子孫を含む。子孫は、突然変異が含まれる可能性があるため、核酸の内容において親細胞と同じではない。本発明では、初代の形質転換細胞からスクリーニング又は選択された同じ機能又は生理活性を有する突然変異体子孫が含まれる。

【0095】

「ヒト抗体」とは、ヒト又はヒト細胞より生成された又はヒト以外に由来するものであって、ヒト抗体ライブラリー又はヒト抗体をコードする他の配列を利用する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものを指す。ヒト抗体に対する当該定義において、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体が明確に除外されている。

【0096】

「ヒトに共有するフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンのＶＬ又はＶＨフレームワーク配列を選択するに当たり最も頻繁に出現するアミノ酸残基を示すフレームワークを指す。一般に、ヒト免疫グロブリンのＶＬ又はＶＨ配列に対する選択は、可変ドメイン配列のサブタイプに対する選択である。一般に、当該配列のサブタイプは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌ １－３に開示されているサブタイプである。１つの実施形態において、ＶＬにおいて、当該サブタイプはＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記の内容参照）におけるサブタイプκＩである。１つの実施形態において、ＶＨにおいて、当該サブタイプはＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記の内容参照）におけるサブタイプＩＩＩである。

【0097】

「ヒト化」抗体とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基とヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ほぼ全ての可変ドメインの少なくとも１つ、一般に２つを含む。なお、全ての又はほぼ全てのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ）が非ヒト抗体に由来する部分に対応し、全ての又はほぼ全てのＦＲがヒト抗体に由来する部分に対応する。ヒト化抗体は、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含むことが好ましい。抗体（例えば、非ヒト抗体）の「ヒト化形態」とは、ヒト化が行われている抗体を指す。

【0098】

用語「がん」及び「がん性」は、通常、細胞の生長が調節不能になることを特徴とする哺乳動物の生理障害を指す又は説明する。がんの例には、がん、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫や白血病又はリンパ系悪性腫瘍が含まれるが、それらに制限されない。このようながんのより具体的な例には、扁平上皮がん（例えば、上皮系扁平上皮がん）、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、及び肺扁平上皮がんを含む）、腹膜がん、肝細胞がん、胃がん（胃腸がん及び消化管間質がんを含む）、膵臓がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、尿道がん、肝臓がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん又は子宮がん、唾液腺がん、腎臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝がん、肛門がん、陰茎がん、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端黒子型黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、及びファコマトーシス（ｐｈａｋｏｍａｔｏｓｅｓ）、水腫（脳腫瘍に関連するものなど）及びメーグス（Ｍｅｉｇｓ）症候群に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍及び脳がん、ならびに頭頸部がん、及び関連する転移がんが含まれるが、それらに制限されない。

【0099】

用語「細胞増殖性疾患」と「増殖性疾患」とは、ある程度の異常な細胞増殖に関連する疾患を指す。１つの実施形態において、前記細胞増殖性疾患はがんを指す。

【0100】

用語「腫瘍」は、悪性か良性かを問わず、全ての腫瘍性（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ）の細胞の成長及び増殖、すべての前がん（ｐｒｅ－ｃａｎｃｅｒｏｕｓ）及びがん性の細胞や組織を含む。本明細書で言及される用語「がん」、「がん性」、「細胞増殖性疾患」、「増殖性疾患」、「腫瘍」は、互いに矛盾が生じない。

【0101】

用語「感染性疾患」とは、病原体による疾患を指す。例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、又は寄生虫などの原生動物感染を含む。

【0102】

用語「慢性感染」とは、感染源（例えば、ウイルス、細菌、寄生虫などの原生動物、真菌などの病原体）がそれに感染した宿主において免疫応答を誘導しているが、急性感染の場合のように宿主から解消又は解除されている状態ではないことを指す。慢性感染は、持続性もしくは潜伏性を有しており、又は緩慢的である。急性感染は一般に、数日間又は数週間（例えば、インフルエンザ）のうちに免疫系によって解消されるが、持続性の感染の場合は、比較的弱いレベルで数か月、数年、数十年又は生涯にわたって持続する可能性がある（例えば、Ｂ型肝炎）。これに対して、潜伏性の感染は、長期的において特に症状がないものの、時には急激に強くなる高度の感染と病原体の数量増加が生じることを特徴とする（例えば、単純ヘルペス）。なお、緩慢的な感染は、疾患症状の漸次増加又は連続的な増加を特徴とする。例えば、長期の潜伏期間を経て、臨床症状が生じた後に症状の延長と進行が開始する。潜伏性の感染と持続性の感染とは違って、慢性感染はウイルス増殖の急性期より開始しない場合がある（例えば、ピコナウイルス科感染（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、ビスナウイルス（ｖｉｓｎａ ｖｉｒｕｓ）、スクレイピー（ｓｃｒａｐｉｅ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｋｏｂｄｉｓｅａｓｅ））。慢性感染を誘発する感染源の例は、ウイルス（例えば、サイトメガロウイルス、ＥＢウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型及びＩＩ型、ヒト免疫不全ウイルス１型及び２型、ヒトパピローマウイルス、ヒトＴリンパ好性ウイルス１型及び２型、水痘－帯状疱疹ウイルスなど）、細菌（例えば、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、リステリア属菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｐｐ．）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、ボレリア属菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐｐ．）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）など）、寄生虫などの原生動物（例えば、リーシュマニア属菌（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、住血吸虫属（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｓｐｐ．）、トキソプラズマ属（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｓｐｐ．）、トリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｓｐｐ．）、Ｔａｅｎｉａ ｃａｒｓｓｉｃｅｐｓ（タエニア・クラッシケプス）など）、真菌（例えば、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ヒストプラスマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）など）を含む。他の感染源は、プリオン又はミスリフォールディングされたタンパク質を含み、それは組織の中でタンパク質のミスリフォールディングを一層拡散させることによって脳又はニューロンの構造に影響を与え、（細胞死、組織損傷、最終的に死亡を起こす）アミロイドプラークを形成する。プリオン感染による疾患の例は、クロイツフェルト・ヤコブ病とその変異型（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｋｏｂ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ）、Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ－Ｓｔｒａｕｓｓｌｅｒ－Ｓｃｈｅｉｎｋｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＧＳＳ）（ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群）、致死性家族性不眠症（ｆａｔａｌ ｆａｍｉｌｉａｌ ｉｎｓｏｍｎｉａ（ｓＦＩ））、クールー病（ｋｕｒｕ）、スクレイピー（ｓｃｒａｐｉｅ）、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）（別名「狂牛病」）（Ｂｏｖｉｎｅ ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ（ＢＳＥ）ｉｎ ｃａｔｔｌｅ（ａｋａ「ｍａｄ ｃｏｗ」ｄｉｓｅａｓｅ））、動物に生じる他の各種の脳症［例えば、ミンクにおける伝達性海綿状脳症（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｍｉｎｋ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ（ＴＭＥ））、オジロジカ（ｗｈｉｔｅ－ｔａｉｌｅｄ ｄｅｅｒ）、シフゾウ（ｅｌｋ）、ミュールジカ（ｍｕｌｅ ｄｅｅｒ）における慢性消耗性疾患（ｃｈｒｏｎｉｃｗａｓｔｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＷＤ））、猫海綿状脳症（ｆｅｌｉｎｅ ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ）、ニアラ（ｎｙａｌａ）、オリックス（ｏｒｙｘ）、クーズー（ｇｒｅａｔｅｒ ｋｕｄｕ）におけるエキゾチックな有蹄類脳症（ｅｘｏｔｉｃｕｎｇｕｌａｔｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ（ＥＵＥ）、ダチョウにおける海綿状脳症（ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｓｔｒｉｃｈ）］を含む。

【0103】

「免疫複合体」は、１種以上の他の物質（その非限定的な例は細胞傷害剤又は標識を含む）と複合した抗体である。

【0104】

本明細書で使用される用語「標識」とは、試薬（例えば、ポリヌクレオチドプローブもしくは抗体）に直接的又は間接的に複合又は融合され、且つ、複合又は融合の対象試薬による検出を促進する化合物又は組成物を指す。前記標識はそれ自体が検出可能（例えば、放射性同位体標識又は蛍光標識）であるか、又は、酵素触媒によって標識されると検出可能な基質化合物又は組成物の化学的改変を触媒できる。当該用語は、検出可能な物質をプローブ又は抗体にカップリング（即ち、物理的連結）させることによってプローブもしくは抗体を直接標識すること、直接標識されている別の試薬との反応によりプローブもしくは抗体を間接的に標識することを含む。間接的な標識の例は、蛍光標識されている二次抗体による一次抗体の検出、蛍光標識されているストレプトアビジンで検出可能な、ビオチンを有するＤＮＡプローブの末端標識の使用を含む。

【0105】

「個体」又は「対象」は、哺乳類を含む。哺乳類の非限定的な例は、家畜（例えば、ウシ、ヤギ（ヒツジ）、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）を含む。いくつかの実施形態において、前記個体又は前記対象はヒトである。

【0106】

「単離された」抗体とは、その存在する自然環境の成分と単離している抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）によって決定される純度が９５％以上又は９９％以上であるように精製される。抗体純度の評価方法の概要は、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９－８７（２００７）が参照される。

【0107】

「単離された」核酸とは、その存在する自然環境の成分と単離している核酸分子を指す。単離された核酸は、一般に当該核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子を含む。ただし、当該核酸分子は染色体外又はその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。

【0108】

「単離された抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片をコードする核酸」とは、抗体重鎖又は軽鎖（又はその断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は別々のベクター内における当該核酸分子、宿主細胞内の１つの以上の位置に存在する当該核酸分子を含む。

【0109】

用語「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」又は「ポリヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」は入れ替えて使用される。これらは、ポリマーの形態の任意の長さのヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド）又はその類似体を指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖であってもよいし、又は二本鎖であってもよい。一本鎖である場合は、コード鎖又は非コード（鋳型）鎖であってもよい。ポリヌクレオチドは、メチル化されたヌクレオチドなどの修飾されたヌクレオチド、ヌクレオチド類似体を含む。ヌクレオチドの配列に非ヌクレオチド成分が介在してもよい。重合後に、標識成分との複合などによりポリヌクレオチドをさらに修飾してもよい。核酸は、組換えポリヌクレオチドであってもよいし、又は自然界に存在しないポリヌクレオチドもしくは別のポリヌクレオチドと非自然状態の配置で連結されているゲノム由来のポリヌクレオチド、ｃＤＮＡ由来のポリヌクレオチド、半合成されたポリヌクレオチド又は合成されたポリヌクレオチドであってもよい。

【0110】

用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、「タンパク質」（一本鎖である場合）は、本明細書で、任意の長さのアミノ酸のポリマーを意味して入れ替えて使用される。当該ポリマーは、線状であってもよいし、又は分岐状であってもよく、修飾されたアミノ酸を含み、且つ、非アミノ酸が介在してもよい。当該用語は、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は標識成分との複合など任意の他の操作により修飾されているアミノ酸ポリマーを含む。ポリペプチドは、天然由来のものから単離されてもよいし、組換え技術により真核宿主又は原核宿主から生成されてもよく、且つ、合成による生成物であってもよい。

【0111】

以下のとおりに配列間の配列同一性を算出する。
２つのアミノ酸配列又は２つの核酸配列における同一性パーセンテージを決定するために、前記配列を最適化した上で比較を行ってもよい（例えば、比較の最適化のために第１アミノ酸配列と第２アミノ酸配列又は核酸配列のいずれかもしくは両者にギャップを導入するか、又は比較の便宜上、非相同配列を捨ててもよい）。１つの好ましい実施形態において、比較の便宜上、比較配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、少なくとも６０％、さらに好ましくは少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％である。次に、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較する。第１配列の対象位置は第２配列の対応する位置と同一のアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占有されている場合、当該分子は当該位置において同一である。

【0112】

数学的アルゴリズムを用いて、２つの配列間において配列比較と同一性パーセンテージの算出を実現できる。１つの好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間における同一性パーセンテージはＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムに統合されているＮｅｅｄｌｅｍａ＆Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３）アルゴリズム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて利用可能）に、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２行列もしくはＰＡＭ２５０行列、ギャップ重み１６、１４、１２、１０、８、６もしくは４と長さ重み１、２、３、４、５もしくは６を用いて決定される。別の好ましい実施形態において、２つのヌクレオチド配列間における同一性パーセンテージはＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて利用可能）に、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列、ギャップ重み４０、５０、６０、７０もしくは８０、長さ重み１、２、３、４、５もしくは６を用いて決定される。特に好ましくは、パラメータセット（別途説明が行われる場合を除き、１つのパラメータセットを使用する）には、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、フレームシフトギャップペナルティ５のＢｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリング行列を採用する。

【0113】

また、２つのアミノ酸配列又はヌクレオチド配列間における同一性パーセンテージは、ＡＬＩＧＮプログラム（２．０版）に統合されているＥ．ＭｅｙｅｒｓとＷ．Ｍｉｌｌｅｒによるアルゴリズム（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１－１７）にＰＡＭ１２０加重残基表、ギャップ長さペナルティ１２、ギャップペナルティ４を用いて決定されてもよい。

【0114】

より好ましくは、さらに例えば、本発明に記載の核酸配列とタンパク質配列を「参照配列」としてパブリックデータベースにおいて検索を実行することによって、他のメンバー配列又は関連の配列を同定することもできる。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０によるＮＢＬＡＳＴプログラムとＸＢＬＡＳＴプログラムを利用して前記検索を実行してもよい。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索において、得点＝１００、長さ＝１２のＮＢＬＡＳＴプログラムを実行することによって、本発明の核酸分子と同一のヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索において、得点＝５０、長さ＝３のＸＢＬＡＳＴプログラムを実行することによって、本発明のタンパク質分子と同一のアミノ酸配列を得ることができる。比較の目的のためのギャップ付比較結果を得るために、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載のように、ギャップＢＬＡＳＴを用いることができる。ＢＬＡＳＴプログラムとギャップＢＬＡＳＴプログラムを用いるとき、そのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ、ＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメータを用いてもよい。これに関しては、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖが参照される。

【0115】

本明細書で使用される用語「低いストリンジェンシー条件、中等度のストリンジェンシー条件、高いストリンジェンシー条件、又は極めて高いストリンジェンシー条件におけるハイブリダイゼーション」は、ハイブリダイゼーションと洗浄の条件を説明している。ハイブリダイゼーション反応の実行に関する手引きは、援用の形で組み込まれたＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１－６．３．６に記載されている。参考文献には、含水の方法と非含水の方法が説明されており、いずれの方法も利用できる。本明細書で言及される特異性ハイブリダイゼーションの条件は以下のとおりである。１）低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションの条件は約４５℃で６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）において、次に少なくとも５０℃（低いストリンジェンシー条件では、洗浄温度を５５℃に上げることができる）で０．２Ｘ ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳにおいて２回洗浄することである。２）中等度のストリンジェンシーのハイブリダイゼーションの条件は約４５℃で６Ｘ ＳＳＣにおいて、次に６０℃で０．２Ｘ ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳにおいて複数回洗浄することである。３）高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションの条件は約４５℃で６Ｘ ＳＳＣにおいて、次に６５℃で０．２Ｘ ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳにおいて１回以上洗浄することである。好ましくは、４）極めて高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションの条件であり、それは６５℃で０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳにおいて、次に６５℃で０．２Ｘ ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳにおいて１回以上洗浄することである。極めて高いストリンジェンシー条件（４）は好ましい条件であり、別途説明が行われる場合を除き、当該条件が適用される。

【0116】

用語「医薬組成物」とは、それに含まれる活性成分の生理活性が有効な形態で存在し、しかも前記組成物が投与される対象に許容されない毒性がある別の成分を含まない組成物を指す。

【0117】

用語「医薬品添加物」とは、活性物質と共に投与される希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全もしくは不完全））、ベクター、賦形剤又は安定剤などを指す。

【0118】

本明細書で使用される用語「治療」とは、出現している症状、病的状態、病状又は疾患の進行又は重症度に対する軽減、中断、遅延、寛解、停止、低減、又は逆転を指す。

【0119】

本明細書で使用される用語「予防」は、疾患、病的状態、特定の疾患もしくは病的状態に係る症状の発生又は進行に対する抑制を含む。いくつかの実施形態において、がん家族歴がある対象は、予防性計画対象の候補である。一般に、がんが言及される文脈では、用語「予防」はがんに係る病的状態又は症状が生じる前に、特に、がんに罹患するリスクのある対象にがんが生じる前の薬物投与を指す。

【0120】

用語「抗感染症剤」は、その投与濃度と投与間隔において、宿主の命に危険を及ぼすことなく微生物の成長を特異的に抑制又は解消する任意の分子を含む。前記微生物は、例えばウイルス、細菌、真菌、又は寄生虫などの原生動物を含む。本明細書で使用される用語「抗感染症剤」は、抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗原生動物剤を含む。１つの具体的な態様において、前記抗感染症剤は、その投与濃度と投与間隔において宿主に毒性がない。

【0121】

抗細菌用の抗感染症剤又は抗菌剤は、殺菌用（即ち、直接死滅）又は静菌用（即ち、分裂阻止）に大別することができる。抗細菌用の抗感染症剤は狭域抗菌剤（即ち、影響を受けるのはグラム陰性菌など少数の種類の細菌サブタイプだけ）、広域抗菌剤（即ち、幅広い種類に影響を与える）にさらに分類することができる。その例は、アミカシン、ゲンタマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、ムピロシン、ニトロフラントイン、ピラジナミド、キヌプリスチン・ダルホプリスチン、リファンピシン、リファンピン・イソニアジド・ピラジナミド合剤又はチニダゾールなどを含む。

【0122】

用語「抗ウイルス剤」は、ウイルスの成長、病原性及び／又はその生存を抑制又は解消する任意の物質を含む。その例は、アシクロビル、シドフォビル、ジドブジン、ジダノシン（ｄｄＩ、ＶＩＤＥＸ）、ザルシタビン（ｄｄＣ、ＨＩＶＩＤ）、スタブジン（ｄ４Ｔ、ＺＥＲＩＴ）、ラミブジン（３ＴＣ、ＥＰＩＶＩＲ）、アバカビル（ＺＩＡＧＥＮ）、エムトリシタビン（ＥＭＴＲＩＶＡ）などを含む。

【0123】

用語「抗真菌剤」は、真菌の成長、病原性及び／又はその生存を抑制又は解消する任意の物質を含む。その例は、ナタマイシン、リモシジン、フィリピン、ナイスタチン、アムホテリシンＢ、カンディシン、パチョリ（ｐａｔｃｈｏｕｌｉ）、ニームシードオイル（ｎｅｅｍ ｓｅｅｄ ｏｉｌ）、ココナッツオイル（Ｃｏｃｏｎｕｔ Ｏｉｌ）などを含む。

【0124】

用語「抗原生動物剤」は、原生動物種（例えば、寄生虫）の成長、病原性及び／又はその生存を抑制又は解消する任意の物質を含む。抗原生動物剤の例は、キニーネ、キニジンなどの抗マラリア薬を含む。

【0125】

例示的な抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗原生動物剤は、例えば、世界特許ＷＯ２０１０／０７７６３４などが参照される。抗感染症剤の例としては、世界特許ＷＯ２０１４／００８２１８、ＷＯ２０１６／０２８６７２、又はＷＯ２０１５／１３８９２０も参照される。

【0126】

本明細書で使用される用語「ベクター」とは、それに連結された別の核酸を増殖させる核酸分子を指す。当該用語は、核酸の自己複製が可能な構造としてのベクター、それを導入していた宿主細胞のゲノムに結合されたベクターを含む。一部のベクターは、それに操作可能に連結された核酸の発現をガイドすることができる。本明細書で、かかるベクターは「発現ベクター」と呼ばれる。

【0127】

「対象／患者サンプル」とは、患者又は対象より得た細胞又は液体の集まりである。組織又は細胞サンプルの由来としては、新鮮な、冷凍された及び／又は保存された器官、組織サンプル、生検サンプルもしくは穿刺サンプルなどの固形組織、血液もしくは任意の血液成分、脳脊髄液、羊膜液（羊水）、腹腔内液（腹水）もしくは間質液などの体液、対象における妊娠もしくは発育の任意の段階に由来する細胞が挙げられる。組織サンプルは、防腐剤、抗凝固剤、緩衝剤、固定剤、栄養素、抗生物質などの自然界に存在する組織に溶けない化合物を含んでもよい。本明細書に言及される腫瘍サンプルの非限定的な例は、腫瘍生検サンプル、吸引物、気管支肺胞洗浄液、胸膜腔内液（胸水）、痰、尿、手術標本、遊走する腫瘍細胞、血清、血漿、遊走する血漿タンパク質、腹水、腫瘍から誘導されたもしくは腫瘍様の特性を示す初代細胞培養物又は細胞株、又はホルマリンで固定されたもしくはパラフィンで包埋された腫瘍サンプルもしくは冷凍された腫瘍サンプルなどの保存された腫瘍サンプルを含む。

【0128】

用語「包装付加頁」とは、一般に治療用途の商品の包装とともに提供された、特定の治療製品の用途に適する適応症、用法、投与量、投与、併用療法、禁忌症及び／又は注意事項などの情報を含む取扱説明書。

【0129】

本発明の抗体
したがって、いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片はＬＡＧ－３と結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、ヒトＬＡＧ－３又はマウスＬＡＧ－３などの哺乳類由来のＬＡＧ３と結合する。例えば、抗体分子はＬＡＧ－３におけるエピトープ（例えば、線形エピトープ又は立体配座エピトープ）と特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体分子はＬＡＧ－３の１つ以上の細胞外Ｉｇ様ドメイン（例えば、ＬＡＧ－３の第１、第２、第３又は第４の細胞外Ｉｇ様ドメイン）と結合する。

【0130】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は以下の１種以上の特性を有する。
（１）本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、ＬＡＧ－３（例えば、ヒトＬＡＧ－３）と高い親和性で結合し、例えば、約１００ｎＭ未満、好ましくは約５０ｎＭ以下、より好ましくは約２０ｎＭ以下、さらに好ましくは約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下又は約２ｎＭ以下、最も好ましくは約１ｎＭ以下、約０．９ｎＭ以下、約０．８ｎＭ以下又は約０．７ｎＭ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）でＬＡＧ－３と結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は、０．１－２０ｎＭ、好ましくは０．５－２０ｎＭ、より好ましくは０．５－１０ｎＭ、０．５－８ｎＭ、０．５－５ｎＭ、最も好ましくは０．５－１ｎＭ、０．５－０．８ｎＭ、０．５－０．７ｎＭ、０．６－０．７ｎＭのＫ_ＤでＬＡＧ－３と結合する。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３はヒトＬＡＧ－３である。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３はマウスＬＡＧ－３である。いくつかの実施形態において、抗体の結合親和性が光干渉による生体測定法（例えば、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ親和性計測）の測定手法により測定される。

【0131】

（２）本発明の抗体又はその断片は、例えば、約３．３ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１．５ｎＭ以下、約１．４ｎＭ以下、約１．３ｎＭ以下、約１．２ｎＭ以下、約１．１ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．９ｎＭ以下、約０．８ｎＭ以下、約０．７ｎＭ以下、約０．６ｎＭ以下又は約０．５ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトＬＡＧ－３を発現する細胞と結合する。いくつかの実施形態において、前記結合がフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）により測定される。いくつかの実施形態において、ヒトＬＡＧ－３を発現する細胞は、ヒトＬＡＧ－３を発現する２９３細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）である。

【0132】

（３）本発明の抗体又はその断片は、例えば、約１５０００ｎＭ以下、約１４０００ｎＭ以下又は約１３０００ｎＭ以下のＥＣ５０で、マウスＬＡＧ－３を発現する細胞と結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、約５０ｎＭ以下のＥＣ５０で、例えば、約４０－５０ｎＭのＥＣ５０、約４０－４５ｎＭのＥＣ５０又は約４２ｎＭのＥＣ５０で、マウスＬＡＧ－３を発現する細胞と結合する。いくつかの実施形態において、前記結合がフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）により測定される。いくつかの実施形態において、マウスＬＡＧ－３を発現する細胞は、マウスＬＡＧ－３を発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。

【0133】

（４）本発明の抗体又はその断片は、例えば、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ又は約５ｎＭ以下のＩＣ_５０で、好ましくは約１－６ｎＭ、約１－５ｎＭ、約４ｎＭ、約４．５ｎＭ、約５ｎＭ、約５．１ｎＭ、約５．２ｎＭ、約５．３ｎＭ、約５．４ｎＭ、約５．５ｎＭ、約５．６ｎＭ、約５．７ｎＭ、約５．８ｎＭ、約５．９ｎＭ又は約６ｎＭのＩＣ_５０でＬＡＧ－３の関連の活性を抑制する。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３の関連の活性は、ＭＨＣクラスＩＩ分子とＬＡＧ－３の結合である。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ又は約５ｎＭ以下のＩＣ_５０で、好ましくは約１－６ｎＭ、約１－５ｎＭ、約４ｎＭ、約４．５ｎＭ、約５ｎＭ、約５．１ｎＭ、約５．２ｎＭ、約５．３ｎＭ、約５．４ｎＭ、約５．５ｎＭ、約５．６ｎＭ、約５．７ｎＭ、約５．８ｎＭ、約５．９ｎＭ又は約６ｎＭのＩＣ_５０でＬＡＧ－３と、ＭＨＣクラスＩＩ分子を発現する細胞におけるＭＨＣクラスＩＩ分子との結合を抑制する。いくつかの実施形態において、ＭＨＣクラスＩＩ分子はＨＬＡ－ＤＲである。いくつかの実施形態において、前記細胞はＣＨＯ細胞である。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ－３の関連の活性に対する本発明の前記抗体又はその断片の抑制がフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）により測定される。

【0134】

（５）本発明の抗体又はその断片は、例えば、約３５ｐＭ以下、約３０ｐＭｎＭ以下、約２５ｐＭ以下、約２０ｐＭ以下、約１５ｐＭ以下、約１４ｐＭ又は１３ｐＭのＥＣ_５０で、好ましくは約１－２０ｐＭ、約５－２０ｐＭ、約５－１５ｐＭ、約１０－１５ｐＭ、約１１－１３ｐＭ、約１０ｐＭ、約１１ｐＭ、約１２ｐＭ又は約１３ｐＭのＥＣ_５０で、活性化されたＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋ Ｔ細胞の表面における内因性ＬＡＧ－３と結合する。いくつかの実施形態において、活性化された前記ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、前記結合がフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）により測定される。いくつかの実施形態において、フローサイトメトリーがＡｃｃｕｒｉ Ｃ６システムにおいて行われる。

【0135】

（６）本発明の抗体又はその断片は、例えば、ＣＤ４＋ Ｔリンパ球の抗原依存性刺激の増加、Ｔ細胞の増殖増加、活性化抗原（例えば、ＣＤ２５）の発現増加、サイトカイン（例えば、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）又はインターロイキン－４（ＩＬ－４））の発現増加、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４又はＣＣＬ５）の発現増加、Ｔｒｅｇ細胞の阻害活性低減、Ｔ細胞ホメオスタシスの向上、腫瘍浸潤リンパ球の増加、又はがん細胞の免疫回避低減の１種以上が生じるように、ＬＡＧ－３の１種以上の活性を抑制する。

【0136】

（７）本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、抗体依存性細胞が介在する細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発できる。
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、以下の１つ以上の特性を有する。
（ｉ）ＬＡＧ－３に対して、本発明の抗体（例えば、表３に示されるいずれかの抗体）と同一又は類似の結合親和性及び／又は特異性を示す。
（ｉｉ）本発明の抗体（例えば、表３に示されるいずれかの抗体）とＬＡＧ－３の結合を抑制（例えば、競合的に抑制）する。
（ｉｉｉ）本発明の抗体（例えば、表３に示されるいずれかの抗体）と同一の又は重複するエピトープと結合する。
（ｉｖ）本発明の抗体（例えば、表３に示されるいずれかの抗体）に対して競合的にＬＡＧ－３と結合する。
（ｖ）本発明の抗体（例えば、表３に示されるいずれかの抗体）の１つ以上の生物学的特性を有する。

【0137】

例示的な抗体
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。前記ＶＨは、
（ｉ）表Ｂに示されるいずれかの抗体のＶＨに含まれる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は
（ｉｉ）、（ｉ）の配列に対して、前記３つのＣＤＲ領域に合計で少なくとも１つ、かつ、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）が含まれた配列を含む。
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。前記ＶＬは、
（ｉ）表Ｂに示されるいずれかの抗体のＶＬに含まれる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は
（ｉｉ）、（ｉ）の配列に対して、前記３つのＣＤＲ領域に合計で少なくとも１つ、かつ、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）が含まれた配列を含む。
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
（ａ）前記ＶＨは、
（ｉ）表Ｂに示されるいずれかの抗体のＶＨに含まれる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は
（ｉｉ）、（ｉ）の配列に対して、前記３つのＣＤＲ領域に合計で少なくとも１つ、かつ、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）が含まれた配列を含み、且つ／又は
（ｂ）前記ＶＬは、
（ｉ）表Ｂに示されるいずれかの抗体のＶＬに含まれる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は
（ｉｉ）、（ｉ）の配列に対して、前記３つのＣＤＲ領域に合計で少なくとも１つ、かつ、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）が含まれた配列を含む。
好ましい実施形態において、ＶＨは、配列番号２２、２３、２４又は２５に示されるアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含み、又は前記アミノ酸配列より構成される。
好ましい実施形態において、ＶＬは、配列番号２６、２７、２８又は２９に示されるアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含み、又は前記アミノ酸配列より構成される。
好ましい実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号２２、２３、２４又は２５に示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＨＣＤＲ）と、配列番号２６、２７、２８又は２９に示される軽鎖可変領域の３つ相補性決定領域（ＬＣＤＲ）とを含む。

【0138】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
（ｉ）前記ＶＨは、相補性決定領域（ＣＤＲ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む。前記ＨＣＤＲ１は配列番号１、２、３、４もしくは１７のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、又は前記ＨＣＤＲ１は配列番号１、２、３、４もしくは１７のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、１つの、２つのもしくは３つの改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）を有するアミノ酸配列を含む。前記ＨＣＤＲ２は配列番号５、６、７もしくは１８のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、又は前記ＨＣＤＲ２は配列番号５、６、７もしくは１８のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、１つの、２つのもしくは３つの改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）を有するアミノ酸配列を含む。前記ＨＣＤＲ３は配列番号８、９、１０もしくは１９のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、又は前記ＨＣＤＲ３は配列番号８、９、１０もしくは１９のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、１つの、２つのもしくは３つの改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）を有するアミノ酸配列を含む。
且つ／又は、
（ｉｉ）前記ＶＬは、相補性決定領域（ＣＤＲ）のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。前記ＬＣＤＲ１は配列番号１１、１２もしくは２０のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくは含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、又は前記ＬＣＤＲ１は配列番号１１、１２もしくは２０のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、１つの、２つの又は３つの改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）を有するアミノ酸配列を含む。前記ＬＣＤＲ２は配列番号１３のアミノ酸配列を含むかもしくは含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、又は前記ＬＣＤＲ２は配列番号１３のアミノ酸配列に対して、１つの、２つの又は３つの改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）を有するアミノ酸配列を含む。前記ＬＣＤＲ３は配列番号１４、１５、１６又は２１のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、又は前記ＬＣＤＲ３は配列番号１４、１５、１６もしくは２１のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、１つの、２つのもしくは３つの改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0139】

好ましい実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
（ａ）前記ＶＨは、
（ｉ）表Ａに示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２とＨＣＤＲ３の組み合わせ、又は
（ｉｉ）前記３つのＣＤＲ領域に合計で少なくとも１つ、かつ、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）が含まれた（ｉ）のＨＣＤＲの組み合わせの変異体を含む。
且つ／又は、
（ｉｉ）前記ＶＬは、
（ｉ）表Ａに示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２とＬＣＤＲ３の組み合わせ、又は
（ｉｉ）前記３つのＣＤＲ領域に合計で少なくとも１つ、かつ、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的な置換）が含まれた（ｉ）のＬＣＤＲの組み合わせの変異体を含む。

【0140】

好ましい実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。前記ＶＨは相補性決定領域（ＣＤＲ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、且つ、前記ＶＬは（ＣＤＲ）のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。前記抗体又はその抗原結合断片に含まれるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２とＬＣＤＲ３の組み合わせは下表（表Ａ）に示されるとおりである。

【0141】

【表A】

【0142】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）は、
（ｉ）配列番号２２、２３、２４もしくは２５のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉ）配列番号２２、２３、２４もしくは２５のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉｉ）配列番号２２、２３、２４もしくは２５のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、１つ以上の（好ましくは１０個以下、より好ましくは５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、１つ以下）のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的なアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記アミノ酸改変はＣＤＲ領域に生じない。
且つ／又は、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）は、
（ｉ）配列番号２６、２７、２８もしくは２９のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくはは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又はそれによって構成され、
（ｉｉ）配列番号２６、２７、２８もしくは２９のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉｉ）配列番号２６、２７、２８もしくは２９から選択されるアミノ酸配列に対して、１つ以上（好ましくは１０個以下、より好ましくは５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、１つ以下）のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的なアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記アミノ酸改変はＣＤＲ領域に生じない。

【0143】

好ましい実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。前記抗体又はその抗原結合断片に含まれる重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）の組み合わせは、下表（表Ｂ）に示されるとおりである。

【表B】

【0144】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖及び／又は軽鎖を含む。
（ａ）重鎖は、
（ｉ）配列番号３０、３１、３２もしくは３３のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又はそれによって構成され、
（ｉｉ）配列番号３０、３１、３２もしくは３３のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉｉ）配列番号３０、３１、３２もしくは３３のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、１つ以上（好ましくは２０個以下又は１０個以下、より好ましくは５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、１つ以下）のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的なアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記アミノ酸改変は重鎖のＣＤＲ領域に生じず、より好ましくは、前記アミノ酸改変は重鎖可変領域に生じない。
且つ／又は、
（ｂ）軽鎖は、
（ｉ）配列番号３４、３５、３６もしくは３７のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又はそれによって構成され、
（ｉｉ）配列番号３４、３５、３６もしくは３７のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉｉ）配列番号３４、３５、３６もしくは３７のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列に対して、１つ以上（好ましくは２０個以下もしくは１０個以下、より好ましくは５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、１つ以下）のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的なアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記アミノ酸改変は軽鎖のＣＤＲ領域に生じず、より好ましくは、前記アミノ酸改変は軽鎖可変領域に生じない。

【0145】

好ましい実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖と、軽鎖とを含む。前記抗体又はその抗原結合断片に含まれる重鎖と軽鎖の組み合わせは下表（表Ｃ）に示されるとおりである。

【0146】

【表C】

【0147】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片の重鎖及び／又は軽鎖は、シグナルペプチド配列、例えば、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号４８）をさらに含む。

【0148】

本発明の１つの実施形態において、前記アミノ酸改変は、アミノ酸の置換、挿入又は欠失を含む。好ましくは、本発明において前記アミノ酸改変はアミノ酸置換であり、保存的な置換であることが好ましい。

【0149】

好ましい実施形態において、本発明において前記アミノ酸改変はＣＤＲ外の領域（例えば、ＦＲ）に生じる。より好ましくは、本発明において前記アミノ酸改変は重鎖可変領域外及び／又は軽鎖可変領域外の領域に生じる。

【0150】

好ましくは、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は軽鎖可変領域、重鎖可変領域、軽鎖又は重鎖に対する翻訳後修飾を含む。例示的な翻訳後修飾としては、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は標識成分複合による任意の他の操作が挙げられる。

【0151】

いくつかの実施形態において、前記置換は保存的な置換である。前記保存的な置換とは、１つのアミノ酸が同種の別のアミノ酸によって置換されたことを指す。例えば、１つの酸性アミノ酸が別の酸性アミノ酸によって置換されたこと、１つの塩基性アミノ酸が別の塩基性アミノ酸によって置換されたこと、又は１つの中性アミノ酸が別の中性アミノ酸によって置換されたことを指す。例示的な置換は次の表Ｄに示されるとおりである。

【0152】

【表D】

【0153】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、抗体のグリコシル化の程度が増大又は低減するように改変される。抗体のグリコシル化部位の追加又は欠失は、アミノ酸配列を改変させて１つ以上のグリコシル化部位を生成又は除去することによって容易に実現できる。

【0154】

例えば、１種以上のアミノ酸置換を行って１つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位を解消することによって、当該部位のグリコシル化を解消することができる。このような脱グリコシル化により抗原に対する抗体の親和性を増加させることができる。これに関しては例えば、米国特許第５，７１４，３５０号、第６，３５０，８６１号が参照される。改変を加えたグリコシル化抗体、例えば、フコシル残基の量を減少した低フコシル化抗体又はバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造を追加した抗体を製造することができる。かかる改変を加えたグリコシル化の形態において、抗体のＡＤＣＣ能力の向上が示されている。例えば、改変を加えたグリコシル化系の宿主細胞において、抗体を発現させることによって当該糖鎖修飾を実現できる。改変を加えたグリコシル化系の細胞は本分野で既知の内容であり、且つ、本発明の抗体を発現させることによって改変を加えたグリコシル化抗体を生成する宿主細胞として用いることができる。例えば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、Ｍｓ７０９にフコース転移酵素遺伝子ＦＵＴ８（α（１，６）－フコース転移酵素）が欠失しているため、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、Ｍｓ７０９細胞株において発現された抗体はその糖類にフコースが欠失している。２種の代替的なベクターを使用してＣＨＯ／ＤＧ４４細胞におけるＦＵＴ８遺伝子の標的破壊を行うことによってＭｓ７０４、Ｍｓ７０５、Ｍｓ７０９のＦＵＴ８－／－細胞株を作成することができる（米国特許公開第２００４０１１０７０４号、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ８７：６１４－２２が参照される）。欧州特許ＥＰ１，１７６，１９５では、機能が破壊されたフコース転移酵素をコードするＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株が説明されており、かかる細胞株において発現された抗体でα－１，６結合に関連する酵素に対する低減又は解消により低フコシル化が示される。欧州特許ＥＰ１，１７６，１９５ではさらに、抗体Ｆｃ領域と結合するＮ－アセチルグルコサミンにフコースが追加された低酵素活性の又は当該酵素活性を有しない細胞株、例えば、ラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６６２）が説明されている。世界特許公開第ＷＯ０３／０３５８３５号では、ＣＨＯ細胞株Ｌｅｃ１３細胞の変異体が説明されており、フコースのＡｓｎ（２９７）－連結糖類への付加能力を低減させることによって、当該宿主細胞において発現された抗体に低フコシル化が実現される（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０も参照される）。グリコシル化の修飾を有する抗体は、例えば、世界特許公開第ＷＯ０６／０８９２３１号に記載のとおり、卵において生成することもできる。好ましくは、グリコシル化の修飾を有する抗体は、植物細胞（例えば、アオウキクサ属（Ｌｅｍｎａ））において生成することができる。植物系による抗体の生成方法は、法律事務所Ａｌｓｔｏｎ＆Ｂｉｒｄ ＬＬＰによる代理番号０４０９８９／３１４９１１の２００６年８月１１日に提出された米国特許出願に開示されている。世界特許公開第ＷＯ９９／５４３４２号では、人工操作により糖タンパク質修飾糖転移酵素（例えば、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現する細胞株が説明されている。当該人工細胞株において発現された抗体には、抗体のＡＤＣＣ活性の増加を引き起こす追加のバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造が出現する（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０も参照される）。好ましくは、フコシダーゼを利用して抗体のフコシル残基を切除してもよい。例えば、フコシダーゼα－Ｌ－フコシダーゼを利用して抗体からフコシル残基を除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６－２３）。

【0155】

本発明の１つの実施形態において、本発明の抗体又は断片が人工改変を経た酵母Ｎ－を連結したプロテオグリカン又はＣＨＯ Ｎ－を連結したプロテオグリカンによりグリコシル化される。

【0156】

本発明は、本発明の抗体又はその断片に対する別種の修飾としてペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）を含む。抗体にペグ化を行って、例えば、生体内（例えば、血清）の抗体の半減期を延長することができる。抗体のペグ化は、一般に、抗体又はその断片とポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、ＰＥＧによる反応性のエステル又は反応性のアルデヒド誘導体）を、１つ以上のＰＥＧ官能基が抗体又は抗体断片に付加できる条件において反応させるように行われる。好ましくは、反応性のＰＥＧ分子（又は類似の反応性の水溶性ポリマー）を利用して、アシル化反応又はアルキル化反応を行ってペグ化を実施する。本明細書で使用される用語「ポリエチレングリコール」には、他のタンパク質への誘導に使用されるＰＥＧ的のいずれかの形態、例えば、モノ（Ｃ１－Ｃ１０）アルコキシ－もしくはアリールオキシポリエチレングリコール又はポリエチレングリコール－マレイミドを含むことが意図される。いくつかの実施形態において、ペグ化される抗体は非グリコシル化抗体である。本分野で、タンパク質のペグ化の方法が既知の内容であり、例えば、欧州特許ＥＰ０１５４３１６、ＥＰ０４０１３８４に記載のとおり、それを本発明の抗体に用いることができる。

【0157】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸修飾を導入してＦｃ領域の変異体を生成することによって、がん又は細胞増殖性疾患の治療における抗体の有効性などを増強させることができる。本発明の抗ＬＡＧ－３抗体とその抗原結合断片は、改変されたエフェクター機能を提供できるように修飾された（又はブロッキングされた）Ｆｃ領域を有する抗体と断片をさらに含む。これに関しては、例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、世界特許ＷＯ２００３／０８６３１０、ＷＯ２００５／１２０５７１、ＷＯ２００６／００５７７０２が参照される。かかる修飾を利用して、免疫系の各種の反応を増強又は抑制することができ、これによって診断と治療に有益な効果を得ることができる。Ｆｃ領域に対する修飾は、アミノ酸変更（置換、欠失、挿入）、グリコシル化と脱グリコシル化、複数のＦｃの追加を含む。Ｆｃに対する修飾により治療抗体における抗体の半減期を改変させることもでき、これによってより低い頻度の投与、利便性の向上と材料使用の低減を実現できる。これに関しては、Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ７３４－７３５が参照される。

【0158】

１つの実施形態において、抗体のシステイン残基の数量を改変させて抗体の特性を修飾することができる。例えば、ＣＨ１のヒンジ領域に修飾を行って、ヒンジ領域におけるシステイン残基の数量を変更（例えば、増加又は減少）させる。当該手法に関する詳細な説明は、米国特許第５，６７７，４２５号に記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域におけるシステイン残基の数量を変更することによって、軽鎖及び重鎖の組み立てを促進し又は抗体の安定性を向上もしくは低減させることができる。

【0159】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本分野で既知の事項として容易に得られる他の非タンパク質の部分を含有するように修飾されてもよい。抗体の誘導作用に適する部分の非限定的な例は、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキサン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマー）、デキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセリン）、ポリビニルアルコール、これらの混合物を含む。ポリマーは、任意の分子量を有してもよく、しかも分岐のものであってもよいし、又は非分岐のものであってもよい。抗体に連結しているポリマーの数量が一定ではなく変更されてもよい。１つ以上のポリマーを連結した場合は、同一の分子であってもよいし、又は異なる分子であってもよい。一般には、誘導用のポリマーの数量及び／又はその種類が、非限定的ではあるが、改善したい抗体の特定の特性又は機能、抗体の誘導体が確定した条件において療法に使用されるかどうかなどの要因に基づいて決定されてもよい。

【0160】

いくつかの実施形態において、本発明は、抗ＬＡＧ－３抗体の断片を含む。抗体断片の非限定的な例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ，Ｆ（ａｂ’）_２、ダイアボディ、線形抗体、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片より形成された多重特異性抗体を含む。

【0161】

例えば、抗体分子は、重鎖（ＨＣ）可変ドメイン配列と、軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列とを含んでもよい。１つの実施形態において、抗体分子は、１本の重鎖と、１本の軽鎖とを含み（本発明において半抗体と呼ばれる）、又はそれによって構成される。別の例において、抗体分子は、２つの重鎖可変ドメイン配列と、２つの軽鎖可変ドメイン配列とを含み、これによってＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価又は二重特異性）、キメラ（例えば、ヒト化）抗体のように２つの抗原結合部位が形成されてもよい。これらの抗体分子は、完全抗体の修飾により生成されてもよいし、又はＤＮＡ組換え技術を利用して最初から合成されてもよい。これらの機能性抗体断片には、それに対応する抗原又は受容体と選択的に結合する能力が保持されている。抗体と抗体断片は任意の種類の抗体に由来してもよく、その非限定的な例として、任意の抗体のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥが挙げられる。抗体分子はモノクローナルとして製造されてもよいし、又はポリクローナルとして製造されてもよい。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、又はインビトロで生成された抗体であってもよい。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域を有してもよい。抗体は、κ又はλのいずれかの軽鎖をさらに有してもよい。

【0162】

本発明の抗体は、単一ドメイン抗体であってもよい。当該単一ドメイン抗体は、相補性決定領域が単一ドメインのポリペプチドの構成要素である抗体を含んでもよい。その非限定的な例は、重鎖抗体、天然的に軽鎖が欠失している抗体、通常の４本鎖抗体から誘導された単一ドメイン抗体又は人工抗体を含む。当該単一ドメイン抗体は、既存の技術による任意の抗体であってもよいし、又は将来に開発される任意の単一ドメイン抗体であってもよい。当該単一ドメイン抗体は、非限定的ではあるが、例えば、マウス、ヒト、ラクダ、アルパカ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ、ウシを含む任意の生物種において誘導されてもよい。本発明の別の態様において、当該単一ドメイン抗体は、天然に存在する単一ドメイン抗体であり、軽鎖欠失重鎖抗体と呼ばれる。当該単一ドメイン抗体としては、例えば、世界特許ＷＯ９４／０４６７８に記載の抗体が挙げられる。当該単一ドメイン抗体又はナノボディは、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）の生物種（例えば、ラクダ、アルパカ、ヒトコブラクダ、リャマ、グアナコ）において生成された抗体であってもよい。ラクダ以外の他の生物種において、天然的に軽鎖が欠失している重鎖抗体を生成することができ、かかる単一ドメイン抗体は本発明の範囲に含まれる。

【0163】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体はヒト化抗体である。抗体のヒト化のための各種の方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ＆Ｆｒａｎｓｓｏｎに記載の当該方法の概要は当業者が知っている内容であり、当該内容の全体が本発明に組み込まれる（Ａｌｍａｇｒｏ ＪＣ＆Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｊ，（２００８）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １３：１６１９－１６３３）。Ａｌｍａｇｒｏ＆Ｆｒａｎｓｓｏｎでは、定量的アプローチと経験的アプローチに区別されている。定量的アプローチは、少量の人工抗体の変異体を生成しその結合又は任意の他の対象特性を評価することを特徴とする。設計された変異体に所望の効果が得られない場合は、再度の設計と結合評価を行う。定量的アプローチは、ＣＤＲグラフト、リサーフェイシング（Ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）、超ヒト化（Ｓｕｐｅｒｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ）、ヒト文字列内容の最適化（Ｈｕｍａｎ Ｓｔｒｉｎｇ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ）を含む。これに対して、経験的アプローチは、大量のヒト化変異体ライブラリーを生成し富化技術又はハイスループットスクリーニングを利用して最適なクローンを選択することに基づく。したがって、経験的アプローチは、大量の抗体変異体に対する検索が可能な、確実な選択及び／又はスクリーニングシステムに基づく。例えば、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイなどのインビトロディスプレイ技術は、上記の要件を満たしており、当業者が知っている内容でもある。経験的アプローチは、ＦＲライブラリー、案内選択（Ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）、フレームワークシャッフリング（Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ－ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）、ヒューマニア化（Ｈｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ）を含む。

【0164】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体はヒト抗体である。本分野で既知の様々な技術を利用してヒト抗体を製造できる。当該ヒト抗体に関しては、一般にｖａｎ Ｄｉｊｋ＆ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ５：３６８－７４（２００１）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０：４５０－４５９（２００８）の説明が参照される。例えば、マウス系の免疫グロブリン遺伝子ではなくヒト免疫グロブリン遺伝子を携帯している遺伝子組換えマウスを利用して、ヒトモノクローナル抗体を生成できる（例えば、Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，世界特許出願第ＷＯ９１／００９０６号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ ｅｔ ａｌ．，世界特許公開第ＷＯ９１／１０７４１号、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，世界特許出願第ＷＯ９２／０３９１８号、Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．，世界特許出願第９２／０３９１７号、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ． ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９、Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ． ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３－２１、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ． ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：３３－４０、Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３ ＰＮＡＳ ９０：３７２０－３７２４、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１：１３２３－１３２６が参照される）。

【0165】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は、非ヒト抗体、例えば、げっ歯類（マウス又はラット）に由来する抗体、ヤギに由来する抗体、霊長類（例えば、サル）に由来する抗体、ラクダに由来する抗体である。好ましくは、前記非ヒト抗体はげっ歯類（マウス又はラット）に由来する抗体である。げっ歯類に由来する抗体の生成方法は、本分野で既知の内容である。

【0166】

組み合わせライブラリーにおいて、所望の活性を有する抗体をスクリーニングすることによって本発明の抗体を単離することができる。例えば、本分野において、ファージディスプレイライブラリーを生成しこれらのライブラリーにおいて所望の結合特性を有する抗体をスクリーニングする方法として、いくつかが知られている。これらの方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｏ′Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に記載の内容が参照され、その更なる説明として、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４、Ｃｌａｃｋｓｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ＆Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｌｏ，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）が参照される。

【0167】

１つの実施形態において、抗体分子は単一特異性抗体分子であり、且つ、単一のエピトープと結合する。例えば、単一特異性抗体分子は、それぞれ同一のエピトープと結合する複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を有する。

【0168】

１つの実施形態において、抗体分子は多重特異性抗体分子であり、例えば、それは複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む。複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列の第１免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１エピトープに対する結合特異性を有し、且つ、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列の第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２エピトープに対する結合特異性を有する。１つの実施形態において、第１エピトープと第２エピトープは、同一の抗原（例えば、同一のタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット））に位置する。１つの実施形態において、第１エピトープと第２エピトープは重複する。１つの実施形態において、第１エピトープと第２エピトープは重複しない。１つの実施形態において、第１エピトープと第２エピトープは、異なる抗原（例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット））に位置する。１つの実施形態において、多重特異性抗体分子は、第３、第４又は第５免疫グロブリン可変ドメインを含む。１つの実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子又は四重特異性抗体分子である。

【0169】

１つの実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２種類以内の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対して結合特異性を有する第１免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２エピトープに対して結合特異性を有する第２免疫グロブリン可変ドメイン配列とを特徴とする。１つの実施形態において、第１エピトープと第２エピトープは、同一の抗原（例えば、同一のタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット））に位置する。１つの実施形態において、第１エピトープと第２エピトープは重複する。１つの実施形態において、第１エピトープと第２エピトープは重複しない。１つの実施形態において、第１エピトープと第２エピトープは、異なる抗原（例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット））に位置する。１つの実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列、軽鎖可変ドメイン配列と、第２エピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列、軽鎖可変ドメイン配列とを含む。１つの実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対して結合特異性を有する半抗体と、第２エピトープに対して結合特異性を有する半抗体とを含む。１つの実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対して結合特異性を有する半抗体又はその断片と、第２エピトープに対して結合特異性を有する半抗体又はその断片とを含む。１つの実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１エピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片と、第２エピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖ又はその断片とを含む。１つの実施形態において、第１エピトープはＬＡＧ－３に位置し、且つ、第２エピトープはＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に位置する。好ましい実施形態において、第２エピトープはＰＤ－１に位置する。

【0170】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体はキメラ抗体（例えば、ヒト定常ドメイン／マウス可変ドメイン）であってもよい。本明細書で使用される「キメラ抗体」とは、第１抗体に由来する可変ドメインと、第２抗体に由来する定常ドメインとを有する抗体である。前記第１抗体と前記第２抗体は、異なる生物種に由来する（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５）。一般に、前記可変ドメインは実験動物（例えば、げっ歯類）に由来する抗体（「親抗体」）より得られるものであり、且つ、前記定常ドメイン配列はヒト抗体より得られ、このように得たキメラ抗体は親（例えば、マウス）抗体に比べて、ヒト対象に不良な免疫応答を引き起こす可能性が低い。

【0171】

いくつかの実施形態において、本発明は、例えば、細胞傷害剤もしくは免疫調節剤などの治療用組成物又はマーカーなどの他の物質と複合された抗ＬＡＧ－３モノクローナル抗体（「免疫複合体」）をさらに含む。前記細胞傷害剤は、細胞に対して傷害性を有する任意の薬剤を含む。免疫複合体の生成に適する前記細胞傷害剤（例えば、化学療法剤）としては、例えば、世界特許ＷＯ０５／１０３０８１又はＷＯ２０１５／１３８９２０又は中国特許第ＣＮ１０７００１４７０Ａ号が参照され、本分野で既知の内容である。例えば、前記細胞傷害剤の非限定的な例は、放射性同位体（例えば、ヨウ素（１３１Ｉ又は１２５Ｉ）、イットリウム（９０Ｙ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、アクチニウム（２２５Ａｃ）、プラセオジム、アスタチン（２１１Ａｔ）、レニウム（１８６Ｒｅ）、ビスマス（２１２Ｂｉ又は２１３Ｂｉ）、インジウム（１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９ｍＴｃ）、リン（３２Ｐ）、ロジウム（１８８Ｒｈ）、硫黄（３５Ｓ）、炭素（１４Ｃ）、三重水素（３Ｈ）、クロム（５１Ｃｒ）、塩素（３６Ｃｌ）、コバルト（５７Ｃｏ又は５８Ｃｏ）、鉄（５９Ｆｅ）、セレン（７５Ｓｅ）、ガリウム（６７Ｇａ））を含む。前記細胞傷害剤の例は、化学療法剤又は他の治療薬物、例えば、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エミジン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、例えば、マイタンシノール（米国特許第５，２０８，０２０号参照）、ＣＣ－１０６５（米国特許第５，４７５，０９２号、第５，５８５，４９９号、第５，８４６，５４５号参照）及びその類似体又は相同体をさらに含む。前記細胞傷害剤は、例えば、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシル、ダカルバジン）、アルキル化剤（例えば、窒素マスタード、チオクロラムブシル、ＣＣ－１０６５、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）とロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣとシス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン系（例えば、ダウノマイシン（旧称ダウノルビシン）とドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）（旧称アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ））、有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール、メイタンシノイド））、成長阻害剤、酵素とその断片（例えば、ヌクレアーゼ）、抗生物質、毒素（例えば、低分子毒素、又は細菌、真菌、植物もしくは動物に由来する酵素触媒活性毒素、その断片及び／又は変異体を含む）、従来の各種の抗腫瘍又は抗がん剤をさらに含む。

【0172】

本発明の核酸とそれを含む宿主細胞
本発明の別の態様において、上記の任意の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片をコードする核酸を提供する。前記核酸は、抗体の軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変領域を含むアミノ酸配列、又は抗体の軽鎖及び／又は重鎖を含むアミノ酸配列をコードすることができる。

【0173】

例えば、本発明の例示的な核酸は、配列番号３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４もしくは４５の核酸配列から選択される核酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含み、又は配列番号３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５の核酸配列から選択される核酸配列を含む。例えば、本発明の核酸は、配列番号２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６もしくは３７のいずれかに示されるアミノ酸配列をコードする核酸、又は配列番号２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６もしくは３７のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸を含む。

【0174】

本発明は、配列番号３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５の核酸配列から選択される核酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む核酸、又は配列番号３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５の核酸配列から選択される核酸配列を含む核酸、配列番号２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６もしくは３７のいずれかに示されるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸、又は配列番号２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６もしくは３７のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸と、ストリンジェンシー条件においてハイブリダイゼーションされた、又は、前記核酸に対して１つ以上の置換（例えば、保存的な置換）、欠失もしくは挿入を有する核酸をさらに含む。

【0175】

１つの実施形態において、前記核酸を含む１つ以上のベクターを提供する。１つの実施形態において、前記ベクターは発現ベクターで、例えば、真核発現ベクターである。ベクターの非限定的な例は、ウイルス、プラスミド、コスミド、λファージ又は酵母人工染色体（ＹＡＣ）を含む。様々なベクター系を使用できる。例えば、１種のベクターでは、例えば、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶもしくはＭＯＭＬＶ）又はＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスから誘導されたＤＮＡ構成要素が利用される。他種のベクターでは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、フラビウイルスなどのＲＮＡウイルスから誘導されたＲＮＡ構成要素が利用される。本発明の好ましい実施形態において、前記発現ベクターはｐＴＴ５発現ベクターである。

【0176】

また、トランスフェクションされた宿主細胞に対する選択が可能な１つ以上のマーカーを導入することによって、染色体にＤＮＡが安定的に導入された細胞を選択することができる。前記マーカーは、栄養要求性宿主に原栄養性、殺生物剤（例えば、抗生物質）耐性又は重金属（例えば、銅）耐性などを付与することができる。選択可能な標識遺伝子は発現されるＤＮＡ配列と直接連結することによって、又は同時形質転換により同一の細胞に導入することができる。ｍＲＮＡ合成の最適化のために、他に構成要素を必要とする場合がある。これらの構成要素は、スプライシングシグナル、転写プロモーター、エンハンサー、終結シグナルを含んでもよい。

【0177】

発現用の発現ベクター又はＤＮＡ配列の用意が完了すると、適切な宿主細胞に発現ベクターをトランスフェクション又は導入することができる。上記の目的を達成するためには、例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム共沈殿、エレクトロポレーション、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、パーティクルガン、脂質ベースのトランスフェクション又は他の通常技術など様々な技術を利用できる。プロトプラスト融合を利用する場合、培地において細胞を培養し適切な活性に対してスクリーニングする。生成されたトランスフェクション細胞の培養と生成された抗体分子の回収のための方法と条件は、当業者が知っている内容であり、本明細書に記載の方法と既存の技術により、使用された特定の発現ベクターと哺乳類宿主細胞によって改変又は最適化を行うことができる。

【0178】

１つの実施形態において、本発明の抗体分子をコードする核酸又は本発明に係るベクターを含む宿主細胞を提供する。抗体をコードする核酸又はベクターをクローニング又は発現するための適切な宿主細胞は、本明細書で説明されている原核又は真核細胞を含む。例えば、抗体が細菌において生成され、特に、グリコシル化とＦｃエフェクター機能が不要な場合はそうである。細菌における抗体断片とポリペプチドの発現に関しては、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号，第５，７８９，１９９号、第５，８４０，５２３号、及びＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ ２４８（ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐ２４５－２５４，大腸菌における抗体断片の発現）が参照される。抗体が発現された後、可溶性画分における細菌細胞のペースト状物からそれを単離して、さらに精製することができる。１つの実施形態において、前記宿主細胞は大腸菌細胞である。

【0179】

１つの実施形態において、前記宿主細胞は真核細胞である。別の実施形態において、前記宿主細胞は、酵母細胞、哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）、昆虫細胞、植物細胞又は抗体もしくはその抗原結合断片の製造に適する他の細胞から選択される。例えば、糸状菌又は酵母などの真核微生物は、抗体をコードするベクターに適するクローン又は発現宿主であり、グリコシル化経路の「ヒト化」により部分又は完全のヒトグリコシル化の形態を有する抗体を生成する真菌と酵母菌株を含む。これに関しては、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）が参照される。グリコシル化抗体の発現に適する宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物、脊椎動物）から誘導されてもよい。脊椎動物の細胞も宿主として用いることができる。例えば、懸濁化成長に適するように改変された哺乳類由来の細胞株を使用できる。使用可能な哺乳類由来の宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓由来ＣＶ１系（ＣＯＳ－７）、ヒト胎児腎臓系（２９３ＨＥＫもしくは２９３細胞、例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）の説明）などが挙げられる。使用可能な他の哺乳類由来の宿主細胞株は、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１６（１９８０））などのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞や、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体の生成に適する一部の哺乳類由来の宿主細胞株は、例えば、Ｙａｚａｋｉ＆Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ ２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐ２５５－２６８（２００３）で概略的に説明されている。他に使用可能な宿主細胞の更なる非限定的な例は、Ｖｅｒｏ細胞、Ｈｅｌａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＭＤＣＫＩＩ細胞、ＰｅｒＣ６細胞株（例えば、Ｃｒｕｃｅｌｌ由来のＰＥＲＣ６細胞）、卵母細胞、遺伝子組換え動物由来の細胞、例えば、乳腺上皮細胞を含む。適切な昆虫細胞の非限定的な例はＳｆ９細胞を含む。

【0180】

本発明の抗体及びその抗原結合断片の製造方法
組換えにより本発明の抗ＬＡＧ－３抗体を製造できる。本分野において、組換え抗体の製造方法はいくつかある。組換えによる抗体の製造方法の１つの例は、米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている。

【0181】

１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体の製造方法を提供する。前記方法は、抗体の発現に適する条件において、前述したように、前記抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、好ましくは前記宿主細胞（又は宿主細胞培地）から前記抗体を回収することとを含む。組換えにより抗ＬＡＧ－３抗体を生成するために、抗体（例えば、上記の抗体）をコードする核酸を単離し、宿主細胞におけるクローニング及び／又は発現のために、それを１つ以上のベクターに挿入する。かかる核酸は、通常のプロセスにより単離しシークエンシングすることが可能である（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合するオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって行う）。

【0182】

１つの実施形態において、前記宿主細胞は、抗体のＶＬのアミノ酸配列をコードする核酸と、抗体のＶＨのアミノ酸配列をコードする核酸とを含有するベクターを含む。１つの実施形態において、前記宿主細胞は、抗体のＶＬのアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第１ベクターと、抗体のＶＨのアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第２ベクターとを含む。

【0183】

測定手法
本分野において既知の様々な測定手法を利用して、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体に対して同定、スクリーニング、又はその物理的／化学的特性及び／又は生理活性の特性評価を行うことができる。また、本発明の抗体に対する抗原結合活性の測定は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、抗体分子複合磁気ビーズなどの既知の方法により行われる。本分野において既知の方法を利用してＬＡＧ－３の結合を測定でき、本明細書にはその方法が例示的に開示されている。いくつかの実施形態において、光干渉による生体測定法（例えば、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ親和性計測）、ＭＳＤ測定手法又はフローサイトメトリーが利用される。

【0184】

また、競合測定手法を利用して、本明細書で開示されている任意の抗ＬＡＧ－３抗体に対して競合的にＬＡＧ－３と結合する抗体を同定することができる。いくつかの実施形態において、かかる競合的結合において抗体は、本明細書で開示されている任意の抗ＬＡＧ－３抗体が結合するエピトープと同一のエピトープ（例えば、線形エピトープ又は立体配座エピトープ）と結合する。抗体が結合するエピトープの特定のための例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）で詳細に記載されている。

【0185】

本発明は、上記の１種以上の特性を有する抗ＬＡＧ－３抗体を同定するための測定手法をさらに提供する。インビボ及び／又はインビトロにおいて、上記の生理活性を有する抗体をさらに提供する。

【0186】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体に対して上記の１種以上の特性を測定する。
任意の上記インビトロ測定手法に使用される細胞は、天然的にＬＡＧ－３を発現しもしくはＬＡＧ－３を発現するように改変された細胞又は細胞株を含む。ＬＡＧ－３がいくつかの種類の細胞において発現される。例えば、ＬＡＧ－３が活性化されたＣＤ４＋ Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、形質細胞様樹状細胞（ＤＣ）において発現される。ＬＡＧ－３が腫瘍浸潤リンパ球（例えば、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）の浸潤リンパ球）において発現される。ＬＡＧ－３が高度に抑制性の誘導型Ｔｒｅｇ、天然型Ｔｒｅｇにおいて発現される。例えば、黒色腫又は結腸・直腸がんにおいて高度に抑制性のＦｏｘＰ３＋ ｎＴｒｅｇ、ＦｏｘＰ３－ｉＴｒｅｇはＬＡＧ－３陽性である（Ｃａｍｉｓａｓｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８４（１１）：６５４５－６５５１、Ｓｃｕｒｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｍｕｃｏｓａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（２）：４２８－４３９）。かかる細胞は、ＬＡＧ－３を発現する細胞株、通常の状態においてＬＡＧ－３が発現されないがＬＡＧ－３をコードする核酸によりトランスフェクションされた細胞株をさらに含む。

【0187】

なお、本発明の免疫複合体を利用して抗ＬＡＧ－３抗体を置き換え又はそれを補足して、任意の上記の測定手法を実現できる。
なお、抗ＬＡＧ－３抗体と他の治療剤を利用して、任意の上記の測定手法を実現できる。

【0188】

医薬組成物と薬物製剤
本発明は、抗ＬＡＧ－３抗体もしくはその断片又はその免疫複合体を含む組成物（医薬組成物又は薬物製剤を含む）、抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片をコードする核酸を含む組成物をさらに含む。いくつかの実施形態において、前記組成物は、ＬＡＧ－３と結合する１種以上の抗体、その断片もしくはその免疫複合体、又はＬＡＧ－３と結合する１種以上の抗体もしくはその断片をコードする１種以上の核酸を含む。これらの組成物は、本分野で既知の薬用ベクター、緩衝剤を含む賦形剤などの適切な医薬品添加物をさらに含んでもよい。

【0189】

本発明に適する薬用ベクターは、石油、動物もしくは植物に由来する又は合成された、ピーナッツオイル、大豆油、鉱油、ごま油など、水、油などの滅菌液体であってもよい。医薬組成物を静脉内に投与する場合、水は担体として好ましい。さらに、生理塩水溶液、水性デキストロースとグリセリン溶液を液体担体として、注射溶液に用いることができる。

【0190】

適切な賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセリン、プロピレン、ジオール、水、エタノールなどを含む。賦形剤の使用とその用途に関しては、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」，５ｔｈ ｅｄｉｔｏｎ，Ｒ．Ｃ．Ｒｏｗｅ，Ｐ．Ｊ．Ｓｅｓｋｅｙ、Ｓ．Ｃ．Ｏｗｅｎ，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｃｈｉｃａｇｏが参照される。

【0191】

必要があれば、前記組成物は湿潤剤、乳化剤、又はｐＨ緩衝剤をさらに少量に含有してもよい。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末、徐放剤などの製剤形態を採用できる。経口製剤は、薬用マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンなどの標準的な担体及び／又は賦形剤を含んでもよい。

【0192】

所定の純度を有する本発明の抗ＬＡＧ－３抗体を１種以上の好ましい医薬品添加物（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｏｓｏｌ，Ａ．（１９８０））と混合することによって、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体を含む薬物製剤、好ましくは凍結乾燥製剤又は水性製剤を製造できる。

【0193】

例示的な凍結乾燥抗体製剤に関する説明は、米国特許第６，２６７，９５８号が参照される。水性抗体製剤に関しては、米国特許第６，１７１，５８６号、世界特許ＷＯ２００６／０４４９０８が参照される。当該製剤はヒスチジン－アセテート緩衝剤を含む。

【0194】

本発明の医薬組成物又は製剤は、１種以上の活性成分をさらに含んでもよい。前記活性成分は、特定の適応症の治療に必要であり、好ましくは互いにマイナスの影響を与えない活性的に相補な活性成分を含む。例えば、好ましくは、化学療法剤及び／又はＰＤ－１軸結合拮抗剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体）などの他の抗がん活性成分をさらに提供する。前記活性成分は、目的用途において有効な量で適切に組み合わせた形で存在する。前記活性成分は、化学療法剤、抗体、他の治療剤などの抗ＬＡＧ－３抗体と組み合わせることが可能な本分野で既知の任意の物質であってもよい。これらの活性成分の例としては、世界特許ＷＯ２０１６／０２８６７２、ＷＯ２０１５／０４２２４６、ＷＯ２０１５／１３８９２０などが参照される。

【0195】

いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体は、抗ヒトＰＤ－１抗体、抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ヒトＰＤ－Ｌ２抗体である。例えば、ヒト化された抗ヒトＰＤ－１抗体、抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ヒトＰＤ－Ｌ２抗体である。

【0196】

持続性放出製剤として製造できる。持続性放出製剤の適切な例は、抗体を含有する疎水性固体ポリマーによる半透性マトリックスを含む。前記マトリックスは、フィルム又はマイクロカプセルなどのように一定の形態を有する。

【0197】

抗体の用途
本発明の別の態様において、対象における免疫反応の調節方法に関する。当該方法は、対象における免疫反応が調節されるように、有効量の本発明の抗体分子（例えば、抗ＬＡＧ－３抗体）、医薬組成物又は免疫複合体を対象に投与することを含む。１つの実施形態において、本発明の抗体分子（例えば、治療有効量の抗ＬＡＧ－３抗体分子）、医薬組成物又は免疫複合体が対象における免疫反応を回復、増強、刺激又は増加させる。

【0198】

本発明の別の態様において、対象における腫瘍（例えば、がん）の予防又は治療の方法に関する。前記方法は、有効量の本発明の抗体分子（例えば、抗ＬＡＧ－３抗体）、医薬組成物又は免疫複合体を前記対象に投与することを含む。１つの実施形態において、前記腫瘍は、消化器がん（例えば、がん）、例えば、結腸がんなどである。

【0199】

本発明の別の態様において、対象における感染性疾患の予防又は治療の方法に関する。前記方法は、有効量の本発明の抗体分子（例えば、抗ＬＡＧ－３抗体）、医薬組成物又は免疫複合体を前記対象に投与することを含む。１つの実施形態において、前記感染性疾患は、慢性感染である。

【0200】

本発明の別の態様において、対象に抗体依存性細胞が介在する細胞傷害を引き起こす方法に関する。前記方法は、有効量の本発明の抗体分子（例えば、抗ＬＡＧ－３抗体）、医薬組成物又は免疫複合体を前記対象に投与することを含む。

【0201】

前記対象は、霊長類などの哺乳類であってもよい。好ましくは、人間（例えば、本明細書に記載の疾患に罹患している又は本明細書に記載の疾患に罹患するリスクのある患者）などの高等霊長類である。１つの実施形態において、前記対象において、免疫反応を増強させる必要がある。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体分子が対象における抗原特異性Ｔ細胞反応、例えば、抗原特異性Ｔ細胞反応におけるインターロイキン－２（ＩＬ－２）又はインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）の生成を回復、増強又は刺激させる。いくつかの実施形態において、前記免疫反応は抗腫瘍反応である。１つの実施形態において、前記対象は本明細書に記載の疾患（例えば、本明細書に記載の腫瘍又は感染性疾患）に罹患しており、又は本明細書に記載の疾患に罹患するリスクがある。いくつかの実施形態において、前記対象は免疫不全であり、又は免疫不全になるリスクがある。例えば、前記対象は化学療法治療及び／又は放射線治療を受けるか、又は既に前記治療を受けている。好ましくは、前記対象には感染により免疫不全が生じ、又は感染により免疫不全になるリスクがある。

【0202】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の腫瘍、例えば、がんの非限定的な例は、固形腫瘍、血液系がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）及びその転移性病巣を含む。１つの実施形態において、前記がんは固形腫瘍である。固形腫瘍の例は、悪性腫瘍を含み、例えば、肺、乳腺、リンパ、消化器系又は結腸・直腸、生殖器系と泌尿器系（例えば、腎細胞、膀胱細胞、膀胱細胞）、咽頭、中枢神経系（例えば、脳細胞、神経細胞又は神経膠細胞）、皮膚（例えば、黒色腫）、頭部と頸部（例えば、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＣＣ））と膵臓を侵襲する複数の器官系における肉腫とがん（例えば、腺がん）を含む。例えば、黒色腫、結腸がん、胃がん、直腸がん、腎細胞がん、乳がん（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１種、２種又は全てが発現されない乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がん）、肝がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）（例えば、扁平上皮ＮＳＣＬＣ及び／又は非扁平上皮ＮＳＣＬＣ）又は小細胞性肝がん）、前立腺がん、頭頸部がん（例えば、ＨＰＶ＋扁平上皮がん）、小腸がんと食道がんが挙げられる。血液系がんの非限定的な例は、白血病（例えば、骨髄性白血病、リンパ性白血病又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ））、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、Ｔ細胞リンパ腫又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ））、多発性骨髄腫などの骨髄腫を含む。がんは、早期、中期又は進行期にあるがん又は転移性がんであってもよい。

【0203】

いくつかの実施形態において、前記がんは、結腸・直腸がん（例えば、ＣＲＣ）、末期黒色腫（例えば、ＩＩ－ＩＶ級黒色腫）もしくはＨＬＡ－Ａ２陽性－黒色腫などの黒色腫、末期膵臓がんなどの膵臓がん、転移性乳がんもしくはトリプルネガティブ乳がんなどの乳がん、頭頸部がん（例えば、ＨＮＳＣＣ）、食道がん、腎淡明細胞がん（ｃｃＲＣＣ）もしくは転移性腎細胞がん（ＭＲＣＣ）などの腎細胞がん（ＲＣＣ）、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、子宮頸がん、膀胱がん、又は、白血病（例えば、リンパ球白血病）もしくはリンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）もしくは再発性又は難治性の慢性リンパ性白血病などのＣＬＬ）などの血液系悪性疾患から選択される。

【0204】

本発明の方法と組成物は、前記がんに関連する転移性病巣の治療に用いることができる。
いくつかの実施形態において、前記がんは、ＬＡＧ－３を発現するがんであり、特に転移性がんである。いくつかの実施形態において、前記がんは、ＰＤ－Ｌ１を発現するがんである。いくつかの実施形態において、前記がんは、ＬＡＧ－３とＰＤ－Ｌ１を発現するがんである。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のがんは、結腸がんとその転移性病巣である。
いくつかの実施形態において、前記感染は、急性感染又は慢性感染である。いくつかの実施形態において、前記慢性感染は、持続性、潜伏性を有しており、又は緩慢的である。いくつかの実施形態において、前記慢性感染は、細菌、ウイルス、真菌、原生動物から選択される病原体により生じる。
いくつかの実施形態において、前記感染性疾患は、ウイルス感染によって引き起こされる。病原性ウイルスのいくつかの例は、（Ａ型、Ｂ型及びＣ型）肝炎ウイルス、（Ａ型、Ｂ型及びＣ型）インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩ、ＣＭＶ、エプスタイン・バール（Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒ）ウイルス、アデノウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、乳頭腫、伝染性軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、アルボウイルスを含む。

【0205】

いくつかの実施形態において、前記感染は細菌感染である。感染を引き起こす病原菌のいくつかの例は、梅毒トレポネーマ、クラミジア、リケッチア、マイコバクテリウム、ブドウ球菌、レンサ球菌、肺炎レンサ球菌、髄膜炎菌、淋菌（ｃｏｎｏｃｏｃｃｉ）、クレブシエラ、変形菌、セラチア菌、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア菌、サルモネラ、バシラス属、コレラ菌、破傷風菌、ボツリヌス菌、炭疽菌、ペスト菌、レプトスピラ、ボレリア・ブルグドルフェリを含む。

【0206】

いくつかの実施形態において、前記感染は真菌感染である。病原性真菌のいくつかの例は、カンジダ（カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ目（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）（ケカビ（ｍｕｃｏｒ）、ユミケカビ（ｂｓｉｄｉａ）、クモノスカビ（ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ））、スポロトリックス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ヒストプラスマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）を含む。

【0207】

いくつかの実施形態において、前記感染は、寄生虫などの原生動物による感染である。前記寄生虫のいくつかの例は、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、大腸バランチジウム（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ ｃｏｌｉ）、フォーラーネグレリア（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカントアメーバ属（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ ｓｐ．）、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ．）、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ）、ブルーストリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）、クルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）、ドノバン・リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉ）、ブラジル鉤虫（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）を含む。

【0208】

１つの実施形態において、前記感染性疾患は肝炎（例えば、Ｂ型肝炎感染）である。抗ＬＡＧ－３抗体分子（単独又は抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１などのＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせ）は、治療上のその利点によりＢ型肝炎感染の通常の治療と組み合わせることができる。いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子はＢ型肝炎抗原（例えば、Ｅｎｇｅｒｉｘ Ｂ）又はワクチンと組み合わせて投与され、好ましくは含アルミニウムアジュバントと組み合わせて投与される。

【0209】

別の実施形態において、前記感染性疾患はインフルエンザである。いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子はインフルエンザ抗原又はワクチンと組み合わせて投与される。

【0210】

本発明の抗ＬＡＧ－３抗体もしくはその断片で予防又は治療される疾患に関しては、さらに、世界特許ＷＯ２０１５／１３８９２０、ＷＯ２０１６／０２８６７２、ＷＯ２０１５／０４２２４６などが参照される。

【0211】

本発明の他の態様において、薬物を生産又は製造するための、抗ＬＡＧ－３抗体もしくはその断片又はその免疫複合体の用途を提供する。前記薬物は、上記の関連の疾患又は病的状態の治療に用いられる。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗体断片又は免疫複合体は、病的状態及び／又は病的状態に関連する症状の出現を遅延することができる。

【0212】

併用療法
本発明のいくつかの実施形態において、前記予防又は治療方法は、本発明の抗体分子（例えば、抗ＬＡＧ－３抗体）もしくは医薬組成物又は免疫複合体と、ＰＤ－１軸結合拮抗剤もしくは前記ＰＤ－１軸結合拮抗剤を含む薬物又は免疫複合体を併用して前記対象又は個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－１軸結合拮抗剤は、例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体を含む。

【0213】

いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－１軸結合拮抗剤の非限定的な例は、ＰＤ－１結合拮抗剤、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤、ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤を含む。「ＰＤ－１」の名称候補は、ＣＤ２７９、ＳＬＥＢ２を含む。「ＰＤ－Ｌ１」の名称候補は、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－４、ＣＤ２７４、Ｂ７－Ｈを含む。「ＰＤ－Ｌ２」の名称候補は、Ｂ７－ＤＣ、Ｂｔｄｃ、ＣＤ２７３を含む。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２は、ヒトＰＤ－１、ヒトＰＤ－Ｌ１、ヒトＰＤ－Ｌ２である。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＰＤ－１とそのリガンド結合対象の結合を抑制する分子である。１つの特定の態様において、前記ＰＤ－１のリガンド結合対象は、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２である。別の実施形態において、前記ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ１とその結合対象の結合を抑制する分子である。１つの特定の態様において、前記ＰＤ－Ｌ１の結合対象は、ＰＤ－１及び／又はＢ７．１である。別の実施形態において、前記ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ２とその結合対象の結合を抑制する分子である。１つの特定の態様において、前記ＰＤ－Ｌ２の結合対象はＰＤ－１である。拮抗剤は、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドであってもよい。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－１結合拮抗剤は、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体）である。いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－１抗体は、ＭＤＸ－１１０６（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ、ＯＰＤＩＶＯ）、Ｍｅｒｃｋ ３４７５（ＭＫ－３４７５、ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ＣＴ－０１１（Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）から選択される。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－１結合拮抗剤は、イムノアドヘシンである（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）、ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２の細胞外又はＰＤ－１結合部分に融合されたイムノアドヘシンを含む）。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＡＭＰ－２２４である。いくつかの実施形態において、前記ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌｌ結合拮抗剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＤＸ－１１０５から選択される。ＭＤＸ－１１０５は、ＢＭＳ－９３６５５９とも呼ばれ、世界特許ＷＯ２００７／００５８７４に記載されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（重鎖可変領域配列と軽鎖可変領域配列をそれぞれ配列番号２０、２１に示される）は、世界特許ＷＯ２０１０／０７７６３４（Ａ１）に記載されている抗ＰＤ－Ｌ１である。ＭＤＸ－１１０６は、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８又はｎｉｖｏｌｕｍａｂとも呼ばれ、世界特許ＷＯ２００６／１２１１６８に記載されている抗ＰＤ－１抗体である。Ｍｅｒｃｋ ３４７５は、ＭＫ－３４７５、ＳＣＨ－９００４７５又はｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂとも呼ばれ、世界特許ＷＯ２００９／１１４３３５に記載されている抗ＰＤ－１抗体である。ＣＴ－０１１は、ｈＢＡＴ、ｈＢＡＴ－１又はｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂとも呼ばれ、世界特許ＷＯ２００９／１０１６１１に記載されている抗ＰＤ－１抗体である。ＡＭＰ－２２４は、Ｂ７－ＤＣＩｇとも呼ばれ、世界特許ＷＯ２０１０／０２７８２７、ＷＯ２０１１／０６６３４２に記載されているＰＤ－Ｌ２－Ｆｃ融合可溶性受容体である。いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－１抗体はＭＤＸ－１１０６である。「ＭＤＸ－１１０６」の名称候補は、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８又はｎｉｖｏｌｕｍａｂを含む。いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－１抗体は、ｎｉｖｏｌｕｍａｂ（ＣＡＳ登録番号９４６４１４－９４－４）である。好ましい実施形態において、前記抗ＰＤ－１抗体は、本明細書に記載の「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃ」又はＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｄである。

【0214】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と併用して治療に用いることもできる。

【0215】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＩｇＧ１形態の抗体、ＩｇＧ２形態の抗体又はＩｇＧ４形態の抗体である。いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体はヒト化された抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のフレームワーク配列の少なくとも一部は、ヒトに共有するフレームワーク配列である。１つの実施形態において、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、その抗体断片、好ましくは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）もしくは（Ｆａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）又は線形抗体から選択される抗体断片をさらに含む。
具体的にいくつかの実施形態において、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片は、
（ｉ）配列番号５７に示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、及び／又は
（ｉｉ）配列番号５８に示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
（ｉ）前記ＶＨは、相補性決定領域（ＣＤＲ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１は配列番号５１のアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、前記ＨＣＤＲ２は配列番号５２のアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、前記ＨＣＤＲ３は配列番号５３のアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、
且つ／又は
（ｉｉ）前記ＶＬは、相補性決定領域（ＣＤＲ）のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１は配列番号５４のアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、前記ＬＣＤＲ２は配列番号５５のアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成され、前記ＬＣＤＲ３は配列番号５６のアミノ酸配列を含むかもしくは前記アミノ酸配列より構成される。
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）は、
（ｉ）配列番号５７のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉｉ）配列番号５７のアミノ酸配列に対して、１つ以上（好ましくは１０個以下、より好ましくは５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、１つ以下）のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的なアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記アミノ酸改変はＣＤＲ領域に生じない。
且つ／又は、
（ｂ）軽鎖可変領域（ＶＬ）は、
（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又はそれによって構成され、
（ｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列に対して、１つ以上（好ましくは１０個以下、より好ましくは５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、１つ以下）のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的なアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記アミノ酸改変はＣＤＲ領域に生じない。

【0216】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片は、重鎖及び／又は軽鎖を含む。
（ａ）重鎖は、
（ｉ）配列番号５９のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又はそれによって構成され、
（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列に対して、１つ以上（好ましくは２０個以下もしくは１０個以下、より好ましくは５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、１つ以下）のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的なアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記アミノ酸改変は重鎖のＣＤＲ領域に生じず、より好ましくは、前記アミノ酸改変は重鎖可変領域に生じない。
且つ／又は、
（ｂ）軽鎖は、
（ｉ）配列番号６０のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又はそれによって構成され、
（ｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれによって構成され、又は
（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列に対して、１つ以上（好ましくは２０個以下もしくは１０個以下、より好ましくは５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、１つ以下）のアミノ酸改変（好ましくはアミノ酸置換、より好ましくは保存的なアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記アミノ酸改変は軽鎖のＣＤＲ領域に生じず、より好ましくは、前記アミノ酸改変は軽鎖可変領域に生じない。

【0217】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体に対する修飾は抗ＰＤ－Ｌ１抗体にも適する。

【0218】

さらに、いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、１種以上の他の療法、例えば、治療方式及び／又は他の治療剤と組み合わせて投与することができる。

【0219】

いくつかの実施形態において、前記治療方式は、外科的手術（例えば、腫瘍切除）、放射線治療（例えば、照射領域が設定された三次元原体放射線治療などの外部粒子ビーム療法）、局所照射（例えば、所定の標的もしくは器官に対する照射、又は集中的照射）などを含む。前記集中的照射は、定位放射線手術、分割定位放射線手術、強度変調放射線治療から選ばれてもよい。前記集中的照射は、例えば、世界特許ＷＯ２０１２／１７７６２４に説明されているとおり、粒子ビーム（プロトン）、コバルト－６０（フォトン）、線形加速器（Ｘ線）から選択される放射線源を有してもよい。

【0220】

前記放射線治療は、非限定的ではあるが、外部粒子ビーム療法、内部照射療法、インプラント照射、定位放射線手術、全身照射療法、放射線治療、永久の又は短期の間質性近接照射療法のいずれかの方法で、又はこれらの方法の組み合わせとして行うことができる。用語「近接照射療法」とは、一定の空間範囲に限定された放射性物質によって行われる放射線治療を指す。前記放射性物質は、腫瘍もしくは他の増殖性組織である疾患部位に、又はその近傍より体内に投与される。当該用語は、放射性同位体（例えば、Ａｔ－２１１、Ｉ－１３１、Ｉ－１２５、Ｙ－９０、Ｒｅ－１８６、Ｒｅ－１８８、Ｓｍ－１５３、Ｂｉ－２１２、Ｐ－３２、Ｌｕなどの放射性同位体）への曝露を含むが、これに限定されない。適切な放射線源は、固体、液体を含む。前記放射線源の非限定的な例としては、Ｉ－１２５、Ｉ－１３１、Ｙｂ－１６９、Ｉｒ－１９２など、Ｉ－１２５などの固体放射線源としての放射性同位体、又はフォトン、β粒子、γ線もしくは他の治療用放射線を発射する他の放射性同位体が挙げられる。放射性物質は、任意の放射性同位体の溶液から、例えば、Ｉ－１２５又はＩ－１３１の溶液から調製された液体から、又は放射性同位体（例えば、Ａｕ－１９８、Ｙ－９０）の固体粒子を含有する適切な液体である懸濁液から放射性液体を生成してもよい。また、放射性同位体はゲル又は放射性ミクロスフェアに含まれてもよい。

【0221】

いくつかの実施形態において、治療剤は、化学療法剤、細胞傷害剤、ワクチン、他の抗体、抗感染症剤又は免疫調節剤（例えば、共刺激分子の活性化剤又は免疫チェックポイント分子の抑制剤）から選択される。
細胞傷害剤の非限定的な例は、微小管阻害薬、トポイソメラーゼ抑制剤、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン系、ビンブラスチン系アルカロイド、インターカレーション、シグナル伝達経路に干渉できる活性化剤、アポトーシス誘導剤、プロテアソーム抑制剤、照射（例えば、局所照射又は全身照射（例えば、γ線）を含む。

【0222】

他の抗体の非限定的な例は、免疫チェックポイント抑制剤（例えば、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＴＩＭ－３、抗ＣＥＡＣＡＭ）、免疫細胞刺激抗体（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト抗体又はＣＤ１３７抗体）、抗がん抗体（例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）又はＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））、エプラツズマブ（Ｌｙｍｐｈｏｃｉｄｅ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））などを含む。

【0223】

化学療法剤の非限定的な例は、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、ブレオマイシン硫酸塩（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射剤（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）、Ｎ４－ペンチルオキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン）、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）又はＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射剤（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、ダウノマイシン塩酸塩（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、ダウノマイシンクエン酸塩リポソーム化注射剤（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、フルダラビンリン酸塩（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５－フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、ｔｅｚａｃｉｔｉｂｉｎｅ、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダマイシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ－アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ホリン酸カルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６－メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（ミトキサントロン）、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（ｍｙｌｏｔａｒｇ）、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ｐｈｏｅｎｉｘ（イットリウム９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロサン２０担持カルムスチンインプラント（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、タモキシフェンクエン酸塩（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用トポテカン塩酸塩（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、ビノレルビン（ビノレルビン）、イブルチニブ、イデラリシブ（ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ）和ブレンツキシマブ・ベドチン（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）を含む。

【0224】

ワクチンの非限定的な例はがんワクチンを含む。前記ワクチンとしては、ＤＮＡによるワクチン、ＲＮＡによるワクチン又はウイルス形質導入によるワクチンが挙げられる。前記がんワクチンは、予防用であってもよいし、又は治療用であってもよい。いくつかの実施形態において、前記がんワクチンは、がんペプチドワクチンである。また、いくつかの実施形態において、個別化ペプチドワクチンである。いくつかの実施形態において、前記がんペプチドワクチンは多価長鎖ペプチド、マルチペプチド、ペプチド混合物、ハイブリッドペプチド、又はペプチドパルス樹状細胞ワクチンである（例えば、Ｙａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ，１０４：１４－２１，２０１３が参照される）。

【0225】

抗感染症剤の非限定的な例は、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗原生動物剤、抗菌剤、例えば、上記のヌクレオシド類似体のジドブジン（ＡＳＴ）、ガンシクロビル、ホスカルネット又はｃｉｄｏｖｉｒなどを含む。

【0226】

免疫調節剤は、免疫チェックポイント分子の抑制剤、共刺激型分子活性化剤を含む。
いくつかの実施形態において、前記免疫チェックポイント分子の抑制剤は、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）及び／又はＴＧＦＲの抑制剤である。分子に対する抑制は、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質のレベルにおいて行われてもよい。いくつかの実施形態において、抑制性の核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ）は、免疫チェックポイント分子の発現を抑制するために用いることができる。他の実施形態において、免疫チェックポイント分子の抑制剤は、免疫チェックポイント分子と結合するポリペプチドである。例えば、可溶性リガンド、抗体又は抗体断片である。ＴＩＭ－３抗体分子の非限定的な例は、ＭＢＧ２２０、ＭＢＧ２２７、ＭＢＧ２１９を含む。

【0227】

他の実施形態において、免疫調節剤は、ＣＴＬＡ４の可溶性リガンド（例えば、ＣＴＬＡ－４－Ｉｇ又はＴＩＭ－３－Ｉｇ）、その抗体又は抗体断片である。例えば、抗ＬＡＧ－３抗体分子（単独又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせ）は、ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、イピリムマブ）と組み合わせて投与できる。例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体は、トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）（ファイザー提供のＩｇＧ２モノクローナル抗体、旧称ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ、ＣＰ－６７５、２０６）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ－４抗体、別名ＭＤＸ－０１０、ＣＡＳ登録番号４７７２０２－００－９）を含む。

【0228】

いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、共刺激分子の活性化剤又はアゴニストである。１つの実施形態において、共刺激分子のアゴニストは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３又はＣＤ８３リガンドから選択される分子のアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体もしくはその抗原結合断片、又は可溶性融合物）である。別の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲの共刺激ドメインを含む共刺激分子（例えば、フォワードシグナルに関連するアゴニスト）と組み合わせて投与される。例示的なＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲ融合タンパク質、抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価の抗ＧＩＴＲ抗体）、例えば、米国特許第６，１１１，０９０号、欧州特許第０９０５０５Ｂ１号、米国特許第８，５８６，０２３号、世界特許公開第ＷＯ２０１０／００３１１８号、第２０１１／０９０７５４号に説明されているＧＩＴＲ融合タンパク質を含む。抗ＧＩＴＲ抗体の一例は、ＴＲＸ５１８である。

【0229】

さらに、いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、チロシンキナーゼ抑制剤（例えば、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）抑制剤）と組み合わせて投与されてもよい。チロシンキナーゼ抑制剤の非限定的な例は、上皮成長因子（ＥＧＦ）経路抑制剤（例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抑制剤）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）経路抑制剤（例えば、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）抑制剤（例えば、ＶＥＧＦＲ－１抑制剤、ＶＥＧＦＲ－２抑制剤、ＶＥＧＦＲ－３抑制剤）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）経路抑制剤（例えば、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）抑制剤（例えば、ＰＤＧＦＲ－β抑制剤））、ＲＡＦ－１抑制剤、ＫＩＴ抑制剤、ＲＥＴ抑制剤を含む。

【0230】

いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、ＰＩ３Ｋ抑制剤、ｍＴＯＲ抑制剤、ＢＲＡＦ抑制剤、ＭＥＫ抑制剤及び／又はＪＡＫ２抑制剤などと組み合わせて投与されてもよい。

【0231】

本発明の任意の方法に係るいくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせ投与と、腫瘍抗原の投与とを組み合わせる。抗原は、例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌由来抗原、又は病原体由来抗原である。いくつかの実施形態において、前記腫瘍抗原はタンパク質を含む。いくつかの実施形態において、前記腫瘍抗原は核酸を含む。いくつかの実施形態において、前記腫瘍抗原は腫瘍細胞である。

【0232】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、養子移入によりキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞又はＣＴＬ）を含む治療と併用して投与されてもよい。
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、抗腫瘍剤と併用して投与されてもよい。
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、腫瘍溶解性ウイルスと併用して投与されてもよい。

【0233】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、サイトカインと併用して投与されてもよい。サイトカインは抗ＬＡＧ－３抗体分子との融合分子として投与されてもよいし、又は単独の組成物として投与されてもよい。１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体は、１種、２種、又は３種以上のサイトカイン（例えば、融合分子として、又は単独の組成物として）と組み合わせて投与される。１つの実施形態において、前記サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５又はＩＬ－２１の１種、２種、又は３種以上から選択されるインターロイキン（ＩＬ）である。

【0234】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、本分野の通常の抗がん療法と組み合わせることができる。通常の抗がん療法の非限定的な例は、（ｉ）放射線治療（例えば、放射線治療、Ｘ線療法、照射）又は電離放射線によるがん細胞の死滅と腫瘍の縮小であって、放射線治療は外部照射療法（ＥＢＲＴ）又は内部近接照射療法として行われる抗がん療法、（ｉｉ）化学療法、又は細胞毒性薬の使用であって、一般に迅速に分裂する細胞に影響を与える抗がん療法、（ｉｉｉ）標的療法、又はがん細胞タンパク質が脱調節するように特異的な影響を与える薬剤（例えば、チロシンキナーゼ抑制剤イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、モノクローナル抗体、光線力学療法）、（ｉｖ）免疫療法、又は宿主免疫応答の増強（例えば、ワクチン）、（ｖ）ホルモン療法、又はホルモン系遮断薬（例えば、ホルモン感受性の腫瘍に対して）、（ｖｉ）血管新生抑制剤、又は血管の形成と成長の遮断、（ｖｉｉ）緩和ケア、又はより強烈な治療計画が実施できるように、ケアの質の改善により、痛み、悪心、嘔吐、下痢、出血を軽減する治療であって、痛みを軽減する薬物としてモルヒネ（ｍｏｒｐｈｉｎｅ）、オキシコドン（ｏｘｙｃｏｄｏｎｅ）、制吐薬・催吐薬としてオンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）、アプレピタント（ａｐｒｅｐｉｔａｎｔ）が挙げられる抗がん療法を含む。

【0235】

いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその断片は、単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤との組み合わせとして、宿主の免疫機能を増強するための通常の方法と組み合わせることができる。前記通常の方法の非限定的な例は、（ｉ）ＡＰＣ強化、例えば（ａ）異種ＭＨＣの同種異系抗原をコードするＤＮＡの腫瘍への注射、又は（ｂ）免疫抗原が認識される確率が高くなるように関連の遺伝子（例えば、免疫刺激サイトカイン、ＧＭ－ＣＳＦ、共刺激分子Ｂ７．１、Ｂ７．２）の生検腫瘍細胞へのトランスフェクション、（ｉｉｉ）養子細胞免疫療法、又は活性化された腫瘍特異性Ｔ細胞による治療を含む。前記養子細胞免疫療法は、例えば、ＩＬ－２もしくは腫瘍又は両者の刺激によりインビトロにおいて増幅させることによって、腫瘍が浸潤する宿主Ｔリンパ球を単離することを含む。また、単離された機能障害性のＴ細胞は、インビトロにおいて本発明の抗体を用いて活性化することができ、これにより、活性化されたＴ細胞は宿主に戻すことができる。

【0236】

上記の各種の療法の組み合わせは、治療に際しさらに組み合わせることができる。
抗ＬＡＧ－３抗体と他の治療方式又は治療剤の組み合わせの更なる例は、世界特許ＷＯ２０１５／１３８９２０、ＷＯ２０１６／０２８６７２、ＷＯ２０１５／０４２２４６などが参照される。

【0237】

このような療法の組み合わせは、併用投与（２種以上の治療剤が同一の製剤に含まれ、又は別々の製剤に含まれる）、別々の投与を含む。後者の場合は、本発明の抗体の投与は、別の療法、例えば、治療方式及び／又は治療剤の前に、それと同時に、及び／又はその後に行われる。抗体分子の投与及び／又は他の療法、例えば、治療剤の投与又は治療方式は、活動性疾患の活動期、寛解期、又は活動性が低い非活動期のいずれかにおいて行われる。抗体分子は、他の治療の前に、他の治療と同時に、他の治療後に、又は疾患の寛解期に投与されてもよい。

【0238】

１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体の投与と他の療法（例えば、治療方式又は治療剤の投与）は約１か月間以内、又は約１週間以内、２週間以内もしくは３週間以内、又は約１日間以内、２日間以内、３日間以内、４日間以内、５日間以内、もしくは６日間以内に行われる。
いくつかの実施形態において、本明細書で説明されている抗体の組み合わせは、別々に投与されてもよい。例えば、単独の抗体としてそれぞれ投与され、又は連結させた後に（例えば、二重特異性の又は三重特異性の抗体分子として）投与される。
なお、本発明の免疫複合体で抗ＬＡＧ－３抗体を置き換え又はそれを補足して任意の治療を行うことができる。

【0239】

投与経路と投与量
本発明の抗体（及びそれを含む医薬組成物又は免疫複合体、任意の他の治療剤）は、非経口投与、肺内投与、鼻腔内投与を含む任意の適切な方法により投与されてもよく、且つ、局所治療の場合は、病巣内に投与されてもよい。前記非経口注入は、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与又は皮下投与を含む。なお、投与期間の長さによって、例えば、静脈内注射投与又は皮下注射投与などの注射を含む任意の適切な経路にすることができる。本発明において、非限定的ではあるが、単回投与又は複数の時刻での複数回投与、ボーラス投与、パルス療法などの様々な頻度の投与が含まれる。

【0240】

本発明の抗体は、疾患の予防又は治療に用いられる場合、その適切な投与量（単独で投与される場合又は１種以上の他の治療剤と組み合わせて投与される場合）が、治療対象疾患の種類、抗体のタイプ、疾患の重症度とその経過、前記抗体の投与が予防目的であるか治療目であるか、これまでの治療歴、患者の臨床病歴、前記抗体に対する応答、主治医の判断によって決定される。前記抗体は、単回の治療として、又は一連の治療において患者に適切に投与される。

【0241】

いくつかの実施形態において、所望の反応（例えば、治療反応）が得られるように、投与計画を調整する。例えば、ボーラス投与してもよいし、治療の段階によって異なる投与量で投与されてもよいし、又は疾患の重症度によって、投与量を適宜減少又は増加してもよい。特に、投与量と投与の一様性が保証しやすいように、１回投与量分の形態で非経口組成物として製造されることが好ましい。本明細書で使用される「１回投与量分の形態」とは、治療対象に対する１回の投与量分として適する物理的に分離しているユニットを指す。各ユニットは、所定の量の活性化合物を含有し、前記所定の量は、所定の薬用ベクターと結合すると所望の治療効果が得られるように算出される。本発明における１回投与量分の形態は、その仕様が（ａ）活性化合物の特性と達成したい特定の治療効果、（ｂ）感受性の個体における当該活性化合物の混合による治療に関する特定の制限によって決定される。

【0242】

いくつかの実施形態において、抗体分子の治療有効量又は予防有効量の非限定的な範囲は、０．１－３０ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは１－２５ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは５－１５ｍｇ／ｋｇである。抗ＬＡＧ－３抗体分子の投与量と投与計画は、当業者が決定してもよい。いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、約１－４０ｍｇ／ｋｇ、例えば、１－３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約５－２５ｍｇ／ｋｇ、約１０－２０ｍｇ／ｋｇ、約１－５ｍｇ／ｋｇ、１－１０ｍｇ／ｋｇ、５－１５ｍｇ／ｋｇ、１０－２０ｍｇ／ｋｇ、１５－２５ｍｇ／ｋｇ又は約３ｍｇ／ｋｇの投与量で、注射（例えば、皮下又は静脈内）投与される。投与計画は、例えば、週に１回から２週に１回、３週に1回又は４週に１回に変更してもよい。１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子が約１０－２０ｍｇ／ｋｇの投与量で２週間ごとに投与される。抗体分子は投与量が約３５－４４０ｍｇ／ｍ２、好ましくは約７０－３１０ｍｇ／ｍ２、より好ましくは約１１０－１３０ｍｇ／ｍ２になるよう、２０ｍｇ／ｍｉｎ以上、例えば、２０－４０ｍｇ／ｍｉｎ、好ましくは４０ｍｇ／ｍｉｎ以上の速度で静脈内注入により投与されてもよい。１つの実施形態において、約３ｍｇ／ｋｇの投与量になるよう、約１１０－１３０ｍｇ／ｍ２の速度で注入される。１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子が約３－８００ｍｇ（例えば、約３ｍｇ、２０ｍｇ、８０ｍｇ、２４０ｍｇ又は８００ｍｇ）の投与量で投与（例えば、静脈内投与）される。いくつかの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子が約２０－８００ｍｇ（例えば、約３ｍｇ、２０ｍｇ、８０ｍｇ、２４０ｍｇ又は８００ｍｇ）の投与量で、単独で投与される。他の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子が約３－２４０ｍｇ（例えば、約３ｍｇ、２０ｍｇ、８０ｍｇ又は２４０ｍｇ）の投与量で、第２活性化剤又は治療方式（例えば、本明細書に記載の第２活性化剤又は治療方式）と組み合わせて投与される。１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子が８週間のサイクルごとに、例えば、最大９６週間にわたり２週間ごとに（例えば、１週目、３週目、５週目、７週目）に投与される。

【0243】

いくつかの実施形態において、抗体分子は投与量が約３５－４４０ｍｇ／ｍ２、好ましくは約７０－３１０ｍｇ／ｍ２、より好ましくは約１１０－１３０ｍｇ／ｍ２になるよう、２０ｍｇ／ｍｉｎ以上、例えば、２０－４０ｍｇ／ｍｉｎ、好ましくは４０ｍｇ／ｍｉｎ以上の速度で静脈内注入により投与される。１つの実施形態において、約３ｍｇ／ｋｇの投与量になるよう、約１１０－１３０ｍｇ／ｍ２の速度で注入される。他の実施形態において、抗体分子は投与量が約１－１００ｍｇ／ｍ２、例えば、約５－５０ｍｇ／ｍ２、約７－２５ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、約１０ｍｇ／ｍ２になるよう、１０ｍｇ／ｍｉｎ未満、例えば、５ｍｇ／ｍｉｎ以下の速度で静脈内注入により投与される。いくつかの実施形態において、抗体が約３０ｍｉｎで注入される。

【0244】

別の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子が抗ＰＤ－１抗体分子と組み合わせて投与される。適切な投与量としては、例えば、約１－１０ｍｇ／ｋｇ（例えば、３ｍｇ／ｋｇ）の抗ＰＤ－１抗体分子が挙げられる。抗ＬＡＧ－３抗体分子が約２０－８００ｍｇ、例えば、約２０ｍｇ、８０ｍｇ、２４０ｍｇ又は８００ｍｇの投与量で併用して投与されてもよい。１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、８週間のサイクルごとに（例えば、最大９６週間にわたり）、２週間ごとに（例えば、１週目に、３週目に、５週目に、７週目に）投与される。

【0245】

診断方法、検出方法と組成物
いくつかの実施形態において、本発明の任意の抗ＬＡＧ－３抗体又はその抗原結合断片は、生体サンプルにおけるＬＡＧ－３の存在を検出するために用いることができる。本明細書で使用される用語「検出」は、定量的検出又は定性的検出を含む。例示的な検出方法としては、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）、抗体分子複合磁気ビーズ、ＥＬＩＳＡ測定、ＰＣＲ技術（例えば、ＲＴ－ＰＣＲ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、前記生体サンプルは血、血清又は生体に由来する他の液体サンプルである。いくつかの実施形態において、前記生体サンプルは細胞又は組織を含む。いくつかの実施形態において、前記生体サンプルは過剰増殖性の病巣又はがん性病巣に由来する。

【0246】

１つの実施形態において、診断又は検出方法に用いる抗ＬＡＧ－３抗体を提供する。別の態様において、生体サンプルにおけるＬＡＧ－３の存在を検出する方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記方法は、生体サンプルにおけるＬＡＧ－３タンパク質の存在の検出を含む。いくつかの実施形態において、前記ＬＡＧ－３はヒトＬＡＧ－３である。いくつかの実施形態において、前記方法は、生体サンプルを本発明の抗ＬＡＧ－３抗体と、抗ＬＡＧ－３抗体とＬＡＧ－３が結合できる条件において接触させることと、抗ＬＡＧ－３抗体とＬＡＧ－３が複合物を形成しているかどうかを検出することとを含む。複合物を形成している場合は、ＬＡＧ－３の存在が示される。当該方法は、インビトロで行われてもよいし、又はインビボで行われてもよい。１つの実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体が抗ＬＡＧ－３抗体による治療に適する対象の選択に用いられる。例えば、ＬＡＧ－３は前記対象を選択するバイオマーカーである。

【0247】

１つの実施形態において、本発明の抗体を利用してがん又は腫瘍の診断を行い、例えば、対象における本明細書に記載の疾患（例えば、過剰増殖性の疾患又はがん性疾患）の治療又は進行、その診断及び／又は病期の評価（例えば、監視）を行うことができる。

【0248】

いくつかの実施形態において、標識された抗ＬＡＧ－３抗体を提供する。前記標識の非限定的な例は、直接的に検出される標識又は部分（例えば、蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、放射性標識）と、酵素触媒反応又は分子間の相互作用などにより間接的に検出される部分（例えば、酵素又はリガンド）とを含む。前記標識の非限定的な例は、放射性同位体、例えば、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、１３１Ｉなど、フルオロフォア、例えば、希土類キレートもしくはフルオレセインとその誘導体、ローダミンとその誘導体、ダンシル（ｄａｎｓｙｌ）、ウンベリフェロン（ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ）、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅ）、例えば、ホタル由来ルシフェラーゼ、細菌由来ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、フルオレセイン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、炭水化物オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、複素環オキシダーゼ、例えば、尿酸オキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、過酸化水素染料前駆体からなる酵素、例えば、ＨＲ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼ（ｍｉｃｒｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）、ビオチン／アビジン、スピン標識、ファージ標識、安定的なフリーラジカルなどを含む。

【0249】

本明細書に記載の任意の発明のいくつかの実施形態において、サンプルが抗ＬＡＧ－３抗体による治療前に取得される。いくつかの実施形態において、前記サンプルは抗がん薬による治療前に取得される。いくつかの実施形態において、前記サンプルはがんの転移後に取得される。いくつかの実施形態において、前記サンプルはホルマリンで固定され、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）されている。いくつかの実施形態において、前記サンプルは生検（例えば、コア生検）検体、手術標本（例えば、手術切除による標本）、又は吸引物である。
いくつかの実施形態において、治療前に、例えば、治療の開始前に又は治療間隔後の治療前にＬＡＧ－３を検出する。

【0250】

いくつかの実施形態において、腫瘍又は感染の治療方法を提供する。前記方法は、対象（例えば、サンプル、例えば、がん細胞を有する対象のサンプル）にＬＡＧ－３の存在を検出することによって、ＬＡＧ－３値を決定することと、ＬＡＧ－３値を対照値と比較し、ＬＡＧ－３値が対照値を上回る場合、対象に対し、治療有効量の、好ましくは１種以上の他の療法と組み合わせて、抗ＬＡＧ－３抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＬＡＧ－３抗体）を単独で又はＰＤ－１軸結合拮抗剤と組み合わせて投与することによって、腫瘍又は感染を治療することとを含む。

【0251】

本発明の例示的な抗ＬＡＧ－３抗体の配列

【表1】

【表2】

【表3】

【表4】

【表5】

本発明に係る上記の態様、他の態様及び実施形態は、図面（図面の簡単な説明が添えられる）、本発明の詳細な記載の部分において説明されており、次の実施例においてその例が挙げられる。本発明の上述した特徴、本明細書で説明されているいずれの特徴又は全ての特徴は本発明の様々な実施形態において組み合わせることができる。次に、実施例を用いて本発明のさらなる説明を行うが、これらの実施例は説明目的のものに過ぎず、限定を加えるためのものではない。したがって、当業者は適宜変更を加えることができる。

【実施例】

【0252】

実施例１：酵母ディスプレイ技術による抗ＬＡＧ－３完全ヒト抗体のスクリーニング
従来の方法（世界特許ＷＯ２００９０３６３７９、ＷＯ２０１０１０５２５６、Ｗ０２０１２００９５６８）を用いて、酵母ベースの抗体ディスプレイ（ｙｅａｓｔ－ｂａｓｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）ライブラリーに対して、各ライブラリーの多様性が１×１０^９になるよう増幅させる。簡単に説明すると、最初の２回のスクリーニングにおいて、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社のＭＡＣＳシステムを利用して磁気活性化による細胞選別を行う。最初に、ＦＡＣＳ洗浄緩衝液（リン酸塩緩衝液、０．１％ウシ血清アルブミン含有）において、ライブラリーの酵母細胞（最大１×１０^１０個の細胞／ライブラリー）をそれぞれ室温で１５ｍｉｎインキュベートする。緩衝液が１００ｎＭのビオチンで標識されたヒトＬＡＧ－３抗原（ＡｒｃｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を含有する。予め冷却されたＦＡＣＳ洗浄緩衝液５０ｍｌで洗浄し、次に同洗浄緩衝液４０ｍｌで細胞を再懸濁し、ストレプトマイシンビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳ）５００μｌを加えて４℃で１５ｍｉｎインキュベートする。１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離して上清を捨て、ＦＡＣＳ洗浄緩衝液５ｍｌで細胞を再懸濁し、細胞溶液をＭｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムに加える。サンプルをロードした後、カラムを３回洗浄し、各回にＦＡＣＳ洗浄緩衝液３ｍｌを使用する。磁気領域からＭｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムを取り外し、成長培地５ｍｌで溶出し、溶出された酵母細胞を回収し、３７℃で一晩成長させる。

【0253】

フローサイトメーターを利用して、次回の選別を行う。具体的には、ＭＡＣＳシステムによってスクリーニングされた約１×１０^８の酵母細胞に対してＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、室温で低濃度のビオチン（１００－１ｎＭ）標識を含有するヒトＬＡＧ－３抗原において培養する。培養液を捨て、ＦＡＣＳ洗浄緩衝液で細胞を２回洗浄した後、細胞をＬＣ－ＦＩＴＣ（ＦＩＴＣによって標識されたヤギ抗ヒト免疫グロブリンのＦ（ａｂ’）κ鎖抗体、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）（１：１００希釈）と混合し、ＳＡ－６３３（ストレプトアビジン－６３３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）（１：５００希釈）又はＳＡ－ＰＥ（ストレプトアビジン－フィコエリスリン、Ｓｉｇｍａ）（１：５０希釈）試薬と混合し、４℃で１５ｍｉｎ培養する。予め冷却されたＦＡＣＳ洗浄緩衝液で２回溶出し、緩衝液０．４ｍｌに再懸濁し、フィルターを備える分離管に細胞を移す。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて細胞を選別する。
３０℃で、スクリーニングして得られた抗ヒトＬＡＧ－３抗体を発現する酵母細胞を振とうし４８時間誘導することによって、抗ヒトＬＡＧ－３抗体を発現する。誘導完了後、１３００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心分離して酵母細胞を除去し、上清液を得る。上清液における抗ヒトＬＡＧ－３抗体に対して、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａを用いて精製し、ｐＨ２．０の酢酸溶液で溶出して、抗ヒトＬＡＧ－３抗体を得る。抗体純度は９５％を上回る。
当該スクリーニングにより、抗体ＡＤＩ－２６７８９、抗体ＡＤＩ－２６８６９を得る。

【0254】

実施例２：抗ヒトＬＡＧ－３抗体の親和性の最適化
親和性がより高い抗ヒトＬＡＧ－３抗体を得るために、次の方法により抗体ＡＤＩ－２６７８９、ＡＤＩ－２６８６９に対し最適化を行う。

【0255】

ＶＨｍｕｔスクリーニング
当該方法は、通常のミスマッチＰＣＲ方法により抗体重鎖領域に突然変異を導入することである。ＰＣＲを行う過程で、１μＭの高頻度突然変異の塩基類似体ｄＰＴＰと８－ｏｘｏ－ｄＧＴＰを利用して、塩基ミスマッチの概率を約０．０１ｂｐに上げる。

【0256】

得られたミスマッチＰＣＲ生成物に対し、相同組換えの方法により重鎖定常領域を含有するベクターに導入する。当該方法により、ＬＡＧ－３抗原価を含み、非標識抗原による競合と親抗体競合を用いるスクリーニング条件において、ライブラリーの容量が１×１０^７の二次ライブラリーを得る。ＦＡＣＳ方法により３回のスクリーニングに成功している。

【0257】

ＣＤＲＨ１／ＣＤＲＨ２スクリーニング
ＶＨｍｕｔ方法により得られた子孫抗体のＣＤＲＨ３遺伝子を、多様性が１×１０^８のＣＤＲＨ１／ＣＤＲＨ２遺伝子プールに導入し、それに対し３回のスクリーニングを行う。１回目でＭＡＣＳ方法を用い、２回目、３回目ではＦＡＣＳ方法を用いて、抗体抗原結合物に対し厳格なスクリーニング条件を用いて、親和性が最大の抗体を得る。
上述したように親和性を成熟させることで、親和性がより高い抗ヒトＬＡＧ－３モノクローナル抗体のＡＤＩ－３１８５１とＡＤＩ－３１８５３を得る。

【0258】

実施例３：ＨＥＫ２９３細胞における発現と精製
本発明の例示的な４つの抗体（ＡＤＩ－２６７８９、ＡＤＩ－２６８６９、ＡＤＩ－３１８５１、ＡＤＩ－３１８５３）のＣＤＲ領域、軽鎖可変領域と重鎖可変領域、軽鎖と重鎖のアミノ酸配列、対応する核酸配列とその番号を本明細書の表１－表４に示している。
本分野の通常の方法を利用して、各抗ＬＡＧ－３抗体の軽鎖アミノ酸配列と重鎖アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡをそれぞれ発現ベクターｐＴＴ５にクローニングする。
メーカーが提供する方法に従って、目的抗体遺伝子を含有する上記発現ベクターとトランスフェクション試薬ＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を培養されたヒト胎児腎２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に一過性トランスフェクションし、トランスフェクション完了後、培地を捨て、新鮮なＥＸＰＩ２９３培地（Ｇｉｂｃｏ）で４×１０^６の細胞を／ｍｌに希釈する。３７℃、５％ＣＯ_２の条件において、細胞を７日間培養し、４８時間ごとに新鮮な培地を流加する。７日後に、１３００ｒｐｍで２０ｍｉｎ遠心分離する。上清液を採取し、抗体の純度が９５％を上回るように、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａで上清液を精製する。

【0259】

また、ＨＥＫ２９３細胞において、実施例に使用される下記の対照抗体を発現し精製する。

【表6】

２５Ｆ７は、ＨＥＫ２９３細胞において一過性発現されたヒトＬＡＧ－３抗体である。その配列は米国特許ＵＳ２０１７０１３７５１４Ａ１に記載の抗体「２５Ｆ７」の配列と同じである。ＢＡＰ０５０は、ＨＥＫ２９３細胞において一過性発現された抗ヒトＬＡＧ－３抗体である。その其配列は世界特許ＷＯ２０１５／１３８９２０（Ａ１）に記載の抗体「ＢＡＰ０５０」の配列と同じである。

【0260】

実施例４：本発明の抗ＬＡＧ－３抗体の親和性計測
光干渉による生体測定法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）の測定手法を用いて、ヒトＬＡＧ－３（ｈＬＡＧ－３）に対する本発明の上記４つの例示的な抗体の結合の平衡解離定数（ＫＤ）を測定する。
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性計測は従来の方法（Ｅｓｔｅｐ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ．ＭＡｂｓ，２０１３．５（２）：ｐ．２７０－８）で行う。簡単に説明すると、分析緩衝液においてオフラインでセンサを３０ｍｉｎ平衡化し、次にオンラインで６０秒間検出して基線を作成し、オンラインで上述したように精製された抗体をＡＨＱセンサ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）にロードしてＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性計測を行う。抗体がロードされたセンサを１００ｎＭのヒトＬＡＧ－３抗原（ＡｒｃｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に曝露させて５ｍｉｎ作用させた後、センサを分析緩衝液に移して５ｍｉｎ解離させることで解離速度を計測する。１：１結合モデルを利用して反応速度論的分析を行う。
上記測定手法により実施された実験において、ＡＤＩ－２６７８９、ＡＤＩ－２６８６９、ＡＤＩ－３１８５１、ＡＤＩ－３１８５３及び対照抗体２５Ｆ７とＢＡＰ０５０の親和性は表６に示されるとおりである。

【0261】

【表7】

以上から分かるように、本発明の上記の４つの例示的な抗体はいずれも極めて高い親和性を示している。ＡＤＩ－３１８５１とＡＤＩ－３１８５３は２５Ｆ７より高く、ＢＡＰ０５０と類似の親和性を有する。

【0262】

実施例５：本発明の抗ＬＡＧ－３抗体とヒトＬＡＧ－３との結合
フローサイトメトリーに基づく測定手法で本発明の上記４つの例示的な抗体とヒトＬＡＧ－３との結合を計測する。
マルチクローニングサイト（ＭＣＳ）にクローニングしているヒトＬＡＧ－３ ｃＤＮＡ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を持つｐＣＨＯ１．０ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をヒト胎児腎２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にトランスフェクションすることによって、ヒトＬＡＧ－３を過発現する２９３細胞（２９３－ｈＬＡＧ－３細胞）を生成する。

【0263】

２９３－ｈＬＡＧ－３細胞（０．２×１０^６個の細胞）を上述したように調製された異なる濃度の実験抗体（ＡＤＩ－２６７８９、ＡＤＩ－２６８６９及び対照抗体２５Ｆ７）と混合する（抗体の希釈方法は、最大抗体濃度５００ｎＭから、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳにおいて３倍希釈し、合計で８つの濃度で測定することである）。氷上において３０ｍｉｎインキュベートする。次に細胞を少なくとも２回洗浄して、１：１００に希釈された二次抗体（ＰＥで標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ、最終濃度５μｇ／ｍｌ）を加え、氷上（遮光）において３０ｍｉｎインキュベートする。細胞を少なくとも２回洗浄しフローサイトメトリーにより分析する。Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６システム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）においてフローサイトメトリーにより検出し、ＧｒａｐｈＰａｄを用いてそのＭＦＩから濃度依存性曲線を当てはめする。

【0264】

上記の測定方法で行われる実験において、ＡＤＩ－２６７８９及びＡＤＩ－２６８６９がＨＥＫ２９３細胞で過発現されたｈＬＡＧ－３と結合し、ＥＣ５０値はそれぞれ２．１３７ｎＭ、２．９０９ｎＭで、対照抗体２５Ｆ９のＨＥＫ２９３細胞で過発現されたｈＬＡＧ－３との結合能よりも高い（対照抗体２５Ｆ９のＥＣ５０値は３．３３９ｎＭ）（図１参照）。

【0265】

親和性が最適化された抗ｈＬＡＧ－３抗体ＡＤＩ－３１８５１及びＡＤＩ－３１８５３がＨＥＫ２９３細胞で過発現されたｈＬＡＧ－３と結合し、ＥＣ５０値はそれぞれ０．５０１ｎＭ、０．４３３２ｎＭで、対照抗体２５Ｆ７とＢＡＰ０５０のＨＥＫ２９３細胞で過発現されたｈＬＡＧ－３との結合能よりも高い（ＥＣ５０値はそれぞれ２．５９３ｎＭ、１．４０９ｎＭ）（図２参照）。

【0266】

実施例６：ヒトＬＡＧ－３リガンドＭＨＣ ＩＩとＬＡＧ－３の相互作用に対する本発明の抗ＬＡＧ－３抗体の遮断
フローサイトメトリーにより、ヒトＬＡＧ－３と細胞表面のＭＨＣ ＩＩ（ＨＬＡ）との結合に対するＡＤＩ－３１８５１、ＡＤＩ－３１８５３の遮断能力を計測する。
下記配列を有するＨＬＡ－ＤＲ－α、ＨＬＡ－ＤＲβ１の２つのＤＮＡ断片をｐＣＨＯ１．０ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に同時に導入し、ＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標） Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔ、製品番号：Ａ２９１３３）にトランスフェクションして表面でヒトＨＬＡ－ＤＲを過発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ＤＲ細胞）を生成する。

【0267】

ＨＬＡ－ＤＲβ１
atggtgtgtctgaagctccctggaggctcctgcatgacagcgctgacagtgacactgatggtgctgagctccccactggctttgtctggggacacccgaccacgtttcctgtggcagcctaagagggagtgtcatttcttcaatgggacggagcgggtgcggttcctggacagatacttctataaccaggaggagtccgtgcgcttcgacagcgacgtgggggagttccgggcggtgacggagctggggcggcctgacgctgagtactggaacagccagaaggacatcctggagcaggcgcgggccgcggtggacacctactgcagacacaactacggggttgtggagagcttcacagtgcagcggcgagtccaacctaaggtgactgtatatccttcaaagacccagcccctgcagcaccacaacctcctggtctgctctgtgagtggtttctatccaggcagcattgaagtcaggtggttcctgaacggccaggaagagaaggctgggatggtgtccacaggcctgatccagaatggagactggaccttccagaccctggtgatgctggaaacagttcctcgaagtggagaggtttacacctgccaagtggagcacccaagcgtgacaagccctctcacagtggaatggagagcacggtctgaatctgcacagagcaagatgctgagtggagtcgggggctttgtgctgggcctgctcttccttggggccgggctgttcatctacttcaggaatcagaaaggacactctggacttcagccaacaggattcctgagctga(SEQ ID NO:49)

【0268】

ＨＬＡ－ＤＲ－Ｎ
atggccataagtggagtccctgtgctaggatttttcatcatagctgtgctgatgagcgctcaggaatcatgggctatcaaagaagaacatgtgatcatccaggccgagttctatctgaatcctgaccaatcaggcgagtttatgtttgactttgatggtgatgagattttccatgtggatatggcaaagaaggagacggtctggcggcttgaagaatttggacgatttgccagctttgaggctcaaggtgcattggccaacatagctgtggacaaagccaacctggaaatcatgacaaagcgctccaactatactccgatcaccaatgtacctccagaggtaactgtgctcacaaacagccctgtggaactgagagagcccaacgtcctcatctgtttcatagacaagttcaccccaccagtggtcaatgtcacgtggcttcgaaatggaaaacctgtcaccacaggagtgtcagagacagtcttcctgcccagggaagaccaccttttccgcaagttccactatctccccttcctgccctcaactgaggacgtttacgactgcagggtggagcactggggcttggatgagcctcttctcaagcactgggagtttgatgctccaagccctctcccagagactacagagaacgtggtgtgtgccctgggcctgactgtgggtctggtgggcatcattattgggaccatcttcatcatcaagggattgcgcaaaagcaatgcagcagaacgcagggggcctctgtaa (SEQ ID NO:50)

【0269】

抗原ｒｈＬＡＧ３タンパク質（ｈｕＦｃ）（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を４０ｎＭに希釈し、１ウェルあたり５０μｌを加える。上述したように調製された抗体（ＡＤＩ－３１８５１、ＡＤＩ－３１８５３及び対照抗体２５Ｆ９）に対し最大濃度８０ｎＭより３倍に勾配希釈し、合計で８つの希釈勾配として、１ウェルあたり５０μｌを加える。ＰＢＳにおいて氷上で３０ｍｉｎインキュベートし、抗原の最終濃度は２０ｎＭで、抗体の最大最終濃度は４０ｎＭである。ＣＨＯ－ＤＲ細胞を３×１０^５細胞／ウェルに調整し、１ウェルあたり１００μｌを加える。細胞を３００ｇで５ｍｉｎ遠心分離し、上清を捨て、抗原抗体混合液に再懸濁する。氷上において３０ｍｉｎインキュベートし、１００μｌ／ウェルでＰＢＳを加え、３００ｇで５ｍｉｎ遠心分離し、ＰＢＳで洗浄し、１ウェルあたり１：１００に希釈されたヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＰＥ １００μｌ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）を加え、２０ｍｉｎ氷浴して、１ウェルあたりＰＢＳ １００μｌを加え、３００ｇで５ｍｉｎ遠心分離し、ＰＢＳで洗浄する。ＰＢＳ １００μｌで再懸濁して、フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞蛍光シグナルの強度値を検出する。

【0270】

実験結果から、ＡＤＩ－３１８５１とＡＤＩ－３１８５３がいずれもＬＡＧ－３とそのリガンドＭＨＣ ＩＩ（ＨＬＡ－ＤＲ）との結合を効果的に遮断でき、その遮断能力は対照抗体２５Ｆ９と一致することが示されている。具体的には、ヒトＬＡＧ－３とＭＨＣ ＩＩ（ＨＬＡ－ＤＲ）との結合に対するＡＤＩ－３１８５１及びＡＤＩ－３１８５３の遮断のＩＣ５０はそれぞれ５．８５ｎＭ、４．５３３ｎＭである。ヒトＬＡＧ－３とＭＨＣＩＩ（ＨＬＡ－ＤＲ）との結合に対する対照抗体２５Ｆ９の遮断のＩＣ５０は５．１４ｎＭである（図３参照）。

【0271】

実施例７：抗体と活性化されたＴ細胞の結合実験
活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞はその表面にＬＡＧ－３タンパク質が発現され、本実験ではフローサイトメトリーによりＡＤＩ－３１８５１、ＡＤＩ－３１８５３と活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞との結合能を計測する。

【0272】

ＰＢＭＣの分離：ドナーの新鮮な血液５０ｍｌに２．５倍のＰＢＳを加え、ＦｉＣｏｌｌ（Ｔｈｅｒｍｏ）に添加し、４つの管に分け、１管あたり１２．５ｍｌとして、４００ｇで３０ｍｉｎ遠心分離し、速度が０に低減すると停止する。中間の白色の部分を吸い取りＰＢＳに移し、ＰＢＳで２回洗浄する。

【0273】

ＣＤ４＋ Ｔ細胞の分離：「Ｕｎｔｏｕｃｈｅｄ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ」試薬キット（１１３４６Ｄ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の取扱説明書の記載に従って、当該試薬キットで操作する。ＰＢＭＣを静置して２時間培養し、細胞懸濁液を吸い取り１５ｍｌ遠心分離管に加え、２００ｇで１０ｍｉｎ遠心分離し、沈殿物に分離液５００μｌ、ＡＢ型血清１００μｌ、精製抗体１００μｌを加えて再懸濁し、４℃で２０ｍｉｎインキュベートし、分離液で洗浄して、ビーズバッファ（Ｂｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）５００μｌを加えて１５ｍｉｎインキュベートし、磁場によってビーズを除去し、Ｔ細胞培地を洗浄し、培地８ｍｌで再懸濁して、３７℃、６％ＣＯ_２において培養する。

【0274】

磁気ビーズ：ＣＤ４＋ Ｔ細胞＝１：１の比率で、ＣＤ４＋ Ｔ細胞に抗ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズ（Ｇｉｂｃｏ）を加えて３日間刺激し、細胞密度を１×１０^６個／ｍｌに調整し、１列目のウェルに１５０μｌ／ウェル、残りの列に１００μｌ／ウェルで分注し、１列目のウェルにおいて、上述したように調製された抗体ＡＤＩ－３１８５１、ＡＤＩ－３１８５３及び対照抗体２５Ｆ７をそれぞれ加え、最終濃度は１０ｎＭとする。均一に混合して、５０μｌを吸い取り次の列のウェルに加え、このように繰り返す。各サンプルに対し３つの平行ウェルを設ける。３０ｍｉｎ氷浴し、４００ｇで５ｍｉｎ遠心分離し、ＰＢＳで２回洗浄して、１：１００に希釈されたＰＥ－抗ヒトＦｃ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）５０μｌを追加し、３０ｍｉｎ氷浴し、４００ｇで５ｍｉｎ遠心分離し、ＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ ６０μｌで再懸濁して、フローサイトメトリーにより分析する。Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６システム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）においてフローサイトメトリーを実施し、ＧｒａｐｈＰａｄを用いてそのＭＦＩから濃度依存性曲線を当てはめする。
実験結果から、ＡＤＩ－３１８５１、ＡＤＩ－３１８５３が活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞と結合でき、ＥＣ５０値はそれぞれ０．０１３ｎＭ、０．０１１ｎＭであり、対照抗体２５Ｆ７よりも結合能が高い（対照抗体のＥＣ５０値は０．０３６ｎＭ）ことが示されている（図４参照）。

【0275】

実施例８：本発明の抗ＬＡＧ－３抗体とマウスＬＡＧ－３との結合
フローサイトメトリーに基づく測定手法で、本発明の２つの例示的な抗体ＡＤＩ－３１８５１、ＡＤＩ－３１８５３とマウスＬＡＧ－３との結合を計測する。
マルチクローニングサイトにクローニングしているマウスＬＡＧ－３ ｃＤＮＡ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を持つｐＣＨＯ１．０ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔ、製品番号：Ａ２９１３３）にトランスフェクションすることによって、マウスＬＡＧ－３を過発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｍＬＡＧ－３細胞）を生成する。

【0276】

ＣＨＯ－ｍＬＡＧ－３細胞（０．２×１０^６個の細胞）と、上述したように調製された異なる濃度の実験抗体（ＡＤＩ－３１８５１、ＡＤＩ－３１８５３及び対照抗体２５Ｆ７、ＢＡＰ０５０）と混合する（抗体の希釈方法は、最大抗体濃度５００ｎＭから、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳにおいて３倍希釈し、合計で８つの濃度で測定することである）。氷上において３０ｍｉｎインキュベートする。次に細胞を少なくとも２回洗浄して、１：１００に希釈された二次抗体（ＰＥで標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ、最終濃度５μｇ／ｍｌ）を加え、氷上（遮光）において３０ｍｉｎインキュベートする。細胞を少なくとも２回洗浄しフローサイトメトリーにより分析する。Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６システム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）においてフローサイトメトリーにより検出し、ＧｒａｐｈＰａｄを用いてそのＭＦＩから濃度依存性曲線を当てはめする。

【0277】

上記の測定方法で行われる実験において、親和性が最適化された抗ｈＬＡＧ－３抗体ＡＤＩ－３１８５１及びＡＤＩ－３１８５３がＣＨＯ細胞で過発現されたマウスＬＡＧ－３と結合でき、ＡＤＩ３１８５３は結合能が比較的高く（ＥＣ５０＝４２．３３ｎＭ）、ＡＤＩ－３１８５１は結合能が比較的低い。対照抗体２５Ｆ７、ＢＡＰ０５０はいずれもＣＨＯ細胞で過発現されたマウスＬＡＧ－３と結合できない（図５参照）。

【0278】

実施例９：本発明の抗ＬＡＧ－３抗体の抗腫瘍活性
本実験では、ＣＴ２６移植腫瘍マウスモデルを用いて抗ヒトＬＡＧ－３抗体ＡＤＩ－３１８５３の単独投与及び抗マウスＰＤ－１抗体「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃ」（世界特許ＷＯ２０１７／１３３５４０）との併用投与による抗腫瘍活性について研究する。
マウス：
雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（約８週齢）、北京維通利華実験動物技術有限公司より購入。マウスを受け入れた後、実験開始前に７日間飼育して順応させる。
細胞：
ＡＴＣＣより購入されたマウス結腸がん細胞ＣＴ２６（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ－２６３８）を使用し、ＡＴＣＣの操作ガイドを厳格に遵守して後続のインビボ実験に備え通常の継代培養を行う。遠心分離により細胞を回収し、滅菌ＰＢＳにおいて細胞を再懸濁し、細胞密度を５×１０^６個／ｍｌに調整する。０日目に細胞懸濁液０．２ｍｌをＢＡＬＢ／ｃマウス（北京維通利華実験動物技術有限公司提供）の右腹部に皮下接種することによって担腫瘍マウスモデルを作成する。
投与：
マウスを４群に分け（１群あたり８匹）、各群に対し下記の投与量でそれぞれ抗体を皮下注射する。
（１）マウスＩｇＧ（ｅｑｕｉｔｅｃｈ－Ｂｉｏ） １０ｍｇ／ｋｇ、
（２）ＰＤ－１（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃ） １ｍｇ／ｋｇ、
（３）ＬＡＧ－３（ＡＤＩ－３１８５３） １０ｍｇ／ｋｇ、
（４）ＬＡＧ－３（ＡＤＩ－３１８５３） １０ｍｇ／ｋｇ、ＰＢＳ＋ＰＤ－１（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃ） １ｍｇ／ｋｇ。
試薬注射：
接種後から７日目に、実験基準に合致するマウスに対し、１群あたり８匹でランダムに群分けする。７日目、１０日目、１４日目と１７日目に、上記の４種の試薬をそれぞれ各群のマウスに対し上記の投与量で投与する。
分析：
実験期間にわたり、週に２回腫瘍、体重を計測する。腫瘍が端点まで成長すると（腫瘍体積が２５００ｍｍ^３を上回る）、又はマウスに２０％以上の体重減少が認められると、マウスに安楽死を実施する。ノギスを用いて腫瘍の長径（Ｌ）と短径（Ｗ）を測定し、Ｖ＝Ｌ×Ｗ^２／２により腫瘍体積を算出する。各群のマウスに対し腫瘍サイズと時間のグラフを作成する。分散分析（ＡＮＯＶＡ）により統計的有意性を判定する。Ｐ値＜０．０５である場合は、分析に統計的有意性がある。前記分析はＰｒｉｓｍ ５データ処理ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア社）において行われる。
図６の実験結果から、本発明の抗ＬＡＧ－３モノクローナル抗体ＡＤＩ－３１８５３と抗ＰＤ－１モノクローナル抗体「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃ」の併用投与はＩｇＧ対照（ｅｑｕｉｔｅｃｈ－Ｂｉｏ）、当該２つの抗体のそれぞれの単独投与に比べて、腫瘍の成長が明らかに抑制されることが示されている。

【0279】

実施例１０：本発明の抗ＬＡＧ－３抗体と他の抗体との併用による抗腫瘍活性
本実験では、ヒト化マウスモデルを用いて抗ヒトＬＡＧ－３抗体ＡＤＩ－３１８５３と、抗ＰＤ－１抗体「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄ」（ＩＢＩ３０８、世界特許ＷＯ２０１７／０２５０１６）又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＨＺ３２６６－ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ）との併用投与による抗腫瘍活性について研究する。

【0280】

本実験では、Ａ３７５（ＡＴＣＣ提供）ヒト皮膚がん細胞を用いてＮＯＧマウスにおいて抗ＬＡＧ－３抗体の抗腫瘍活性を測定する。予めヒト由来ＰＢＭＣを静脉注射し（２×１０^６個の細胞／マウス）（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）、次に皮下接種の方式でＡ３７５担腫瘍マウスモデル（ＮＯＧモデル）を作成する。腫瘍が出現すると群分けをし、異なる抗体を投与して治療し、投与期間に各群マウスの腫瘍体積と体重の変化を監視する。投与頻度は週に２回で、２週間にわたり、合計で５回投与する。監視頻度はいずれも週に２回であり、４週間にわたり連続的に監視する。投与量と投与方式は表２に示されるとおりである。投与終了後に、相対腫瘍抑制率（ＴＧＩ％）を算出する。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＨＺ３２６６－ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ）

【0281】

本分野の通常の方法で、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＨＺ３２６６－ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａの軽鎖アミノ酸配列と重鎖アミノ酸配列（表３）をコードするｃＤＮＡをそれぞれ発現ベクターのｐＭＤ２０－Ｔベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）にクローニングすることによって、トランスフェクション用のプラスミドを得る。
所定のトランスフェクション体積の２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を継代培養し、トランスフェクションの前日に細胞密度を１．５×１０^６個の細胞／ｍｌに調整しておく。トランスフェクション当日、細胞密度は約３×１０^６個の細胞／ｍｌである。最終体積の１／１０のＦ１７培地（Ｇｉｂｃｏ、Ａ１３８３５－０１）をトランスフェクション緩衝液として使用し、適切なプラスミドを加えて、均一に混合する。プラスミドに適量のポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、２３９６６）を加え（２９３Ｆ細胞におけるプラスミドとＰＥＩの比率は１：３）、均一に混合してから室温で１０ｍｉｎインキュベートすることによって、ＤＮＡ／ＰＥＩ混合物を得る。ＤＮＡ／ＰＥＩ混合物で細胞を再懸濁して、３６．５℃、８％ＣＯ_２において培養する。２４時間後にトランスフェクション体積の２％でフィード培地（ＦＥＥＤ）（Ｓｉｇｍａ）を追加し、３６．５℃、１２０ｒｐｍと８％ＣＯ_２の条件において培養する。６日目に連続培養し又は細胞活性が６０％以下になると、細胞上清を回収し精製する。

【0282】

精製に使用される重力式カラムに対し０．５Ｍ ＮａＯＨで一晩処理し、ガラス瓶などは蒸留水で洗浄後に１８０℃で４時間乾燥させて、精製カラムを得る。精製前に、回収された培地に対し４５００ｒｐｍで３０ｍｉｎ遠心分離して、細胞を捨てる。次に上清に対し０．２２μｌフィルターで濾過する。１管あたりＰｒｏｔｅｉｎ Ａ １ｍｌを充填し、結合緩衝液１０ｍｌ（リン酸ナトリウム２０ｍＭ・ＮａＣｌ １５０ｍＭ、ｐＨ７．０）で平衡化させる。濾過後の上清を精製カラムに加えて結合緩衝液１５ｍｌで再度平衡化させる。溶出緩衝液５ｍｌ（クエン酸＋クエン酸ナトリウム０．１Ｍ、ｐＨ３．５）を加えて溶出液を回収し、溶出液１ｍｌあたりＴｒｉｓ－ＨＣｌ ８０μｌを加える。回収した抗体に対し限外濾過により濃縮させて、ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、７００１１－０４４）に交換して濃度を検出する。

【0283】

光干渉による生体測定法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＨＺ３２６６－ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ）とヒトＰＤ－Ｌ１との結合の平衡解離定数（ＫＤ）を測定する。従来の方法（Ｅｓｔｅｐ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ．ＭＡｂｓ，２０１３．５（２）：ｐ２７０－８）でＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性計測を行う。
実験開始より半時間前に、サンプルの数量分に応じて、適切な数量のＡＭＱ（Ｐａｌｌ、１５０６０９１）（サンプル検出用）センサ又はＡＨＱ（Ｐａｌｌ、１５０２０５１）（陽性対照検出用）センサを用意し、ＳＤバッファ（ＰＢＳ １×、ＢＳＡ ０．１％、ポリソルベート２０ ０．０５％）に浸漬する。

【0284】

ＳＤ緩衝液、抗体、抗原（ヒトＰＤ－Ｌ１含有、いずれもＡｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより購入）各１００μｌをそれぞれ９６ウェルのブラックポリスチレン半量マイクロプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、６７５０７６）に加える。サンプルの位置に対応するようにプレートを配置し、センサの位置を決定する。次のように機器パラメータを設定する。ステップＢａｓｅｌｉｎｅ、Ｌｏａｄｉｎｇ～１ｎｍ、Ｂａｓｅｌｉｎｅ、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎを実行し、サンプルの結合と解離の速度で各ステップの実行時間を決定し、回転数は４００ｒｐｍで、温度は３０℃である。ＦｏｒｔｅＢｉｏ分析ソフトウェアを用いてＫＤ値を分析する。Ｋ_Ｄの測定値は０．７２４ｎＭである。

【0285】

マウス：ＮＯＧマウス、雌性、７－８週齢（腫瘍細胞接種時のマウス週齢）、体重１７．６－２４．２ｇ、北京維通利華実験動物技術有限公司より購入。マウスを受け入れた後、実験開始前に７日間飼育して順応させる。

【0286】

細胞：ＡＴＣＣより購入されたヒト皮膚がん細胞Ａ３７５（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ－１６１９）を使用し、ＡＴＣＣの操作ガイドを厳格に遵守して後続のインビボ実験に備え通常の継代培養を行う。遠心分離により細胞を回収し、滅菌ＰＢＳにおいて細胞を再懸濁し、細胞密度を３０×１０^６個／ｍｌに調整する。ＮＯＧマウスにヒト由来ＰＢＭＣを静脉注射した後、右背部を剃毛し、０．２ｍｌ／匹でＡ３７５細胞を皮下注射する。腫瘍細胞接種後から７日目に、各マウスの腫瘍体積を検出し、腫瘍の平均体積が７０－７１ｍｍ^３の範囲にあるマウスを選択し腫瘍体積によってランダムに群分けする。
投与：各群に対しそれぞれ下記の投与量で抗体を皮下注射する。
（１）ヒトＩｇＧ（ｅｑｕｉｔｅｃｈ－Ｂｉｏ） ２０ｍｇ／ｋｇ、
（２）ＰＤ－１（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄ、ＩＢＩ３０８） １０ｍｇ／ｋｇ、
（３）ＬＡＧ－３（ＡＤＩ－３１８５３） １０ｍｇ／ｋｇ、
（４）ＬＡＧ－３（ＡＤＩ－３１８５３） １０ｍｇ／ｋｇ＋ＰＤ－１（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄ、ＩＢＩ３０８） １０ｍｇ／ｋｇ、
（５）ＰＤ－Ｌ１（ＨＺ３２６６－ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ） １０ｍｇ／ｋｇ、
（６）ＬＡＧ－３（ＡＤＩ－３１８５３） １０ｍｇ／ｋｇ＋ＰＤ－Ｌ１（ＨＺ３２６６－ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ） １０ｍｇ／ｋｇ。

【0287】

接種後から７日目に、腫瘍の平均体積基準に合致するマウスに対し、１群あたり８匹でランダムに群分けする。７日目、１０日目、１４日目と１７日目に、上記の６種の試薬をそれぞれ各群マウスに対し上記の投与量で投与する。
分析：実験期間にわたり週に２回腫瘍、体重を計測する。腫瘍が端点まで成長すると、又はマウスに２０％以上の体重減少が認められると、マウスに安楽死を実施する。ノギスを用いて腫瘍の長径（Ｌ）と短径（Ｗ）を測定し、Ｖ＝Ｌ×Ｗ^２／２により腫瘍体積を算出する。各群のマウスに対し腫瘍サイズと時間のグラフを作成する。分散分析（ＡＮＯＶＡ）により統計的有意性を判定する。Ｐ値＜０．０５である場合は、分析に統計的有意性がある。

【0288】

図７Ａ、Ｂの実験結果から、本発明の抗ＬＡＧ－３モノクローナル抗体ＡＤＩ－３１８５３（３１８５３）と、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄ」（ＩＢＩ３０８）又は抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体ＨＺ３２６６－ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ（ＨＺ３２６６）との併用投与はＩｇＧ対照（ｅｑｕｉｔｅｃｈ－Ｂｉｏ）（ｈＩｇＧ）、当該２つの抗体のそれぞれの単独投与に比べて、腫瘍の成長が明らかに抑制されることが示されている。

【0289】

実施例１１：抗ＬＡＧ－３抗体と抗ＰＤ－Ｌ１抗体との組み合わせによるヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞の活性化効果に関する研究
本実験ではヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞活性化の方法によりヒトＴ細胞に対するＡＤＩ－３１８５３の活性化効果を検出する。（例えば、実施例７のように）ビーズ刺激によって活性化されたヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞、成熟ＤＣ及び異なる濃度のＡＤＩ－３１８５３、２５Ｆ７単独溶液、ＰＤ－Ｌ１抗体（上述したように調製されたＨＺ３２６６－ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ）単独溶液、及びその組み合わせを、９６ウェルＵ底プレートにおいて３日間インキュベートする。最後に上清中のＩＬ－２濃度を検出し、ＡＤＩ－３１８５３、２５Ｆ７単独、及びＰＤ－Ｌ１抗体（ＨＺ３２６６－ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、上述したように調製）のＴ細胞に対する活性化効果を比較する。

【0290】

実験ステップ：
ＤＣ細胞の調製：
液体窒素タンクからヒト由来ＰＢＭＣ細胞（例えば、実施例７のように調製）を取り出し、３７℃の水浴鍋で急速に解凍させて、２０ｍｌヒトＴ細胞培地（１‰デオキシリボヌクレアーゼ含有（Ｓｉｇｍａ））に移し、４００ｇで１０ｍｉｎ遠心分離する。ヒトＴ細胞培地（１‰デオキシリボヌクレアーゼ含有）２０ｍｌで再懸濁してＴ７５培養瓶に移し、３７℃、５％ＣＯ２の細胞インキュベーターにおいて２４時間培養する。

【0291】

ＤＣ細胞分離：細胞懸濁液を捨て、残りの細胞はＤＣ培地９ｍｌを加え、２日間培養してからＤＣ培地３ｍｌを加え、次にさらに５日間培養した後、ｒＴＮＦａ（１０００Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ－１ｂ（５ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－６（１０ｎｇ／ｍｌ）、１μＭ ＰＧＥ２（Ｔｏｃｒｉｓ）を加え２日間培養して、リンパ球混合培養反応（ＭＬＲ）用のＤＣ細胞を得る。
Ｔ細胞培地、ＤＣ細胞培地はいずれもＣＴＳ ＡＩＭ Ｖ ＳＦＭであり、ＤＣ培地には１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ－４と１０００Ｕ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦが追加されている。製品番号とバッチ番号は以下のとおりである。

【0292】

【表8】

【0293】

ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞の精製
液体窒素タンクからヒト由来ＰＢＭＣ細胞（例えば、実施例７のように調製）を取り出し、３７℃の水浴鍋で急速に解凍させて、次に上述したようにヒトＴ細胞培地（１‰デオキシリボヌクレアーゼ含有）に移し、４００ｇで１０ｍｉｎ遠心分離する。実施例７のＵｎｔｏｕｃｈｅｄ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ試薬キットでヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞の分離と精製を行い、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＤ３／ＣＤ２８ ｆｏｒ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ａｎｄ ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎでヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞を活性化させ、３７℃、５％ＣＯ_２の細胞インキュベーターにおいて３日間培養する。
サンプルローディング：

【0294】

成熟したＤＣ細胞をＣＤ４＋細胞と混合し、１ウェルあたり体積２００μｌ、ＤＣ細胞１００００個、ＣＤ４＋細胞１０００００個として、抗体（２００ｎＭ、４倍シリーズ希釈、ＳＥＥ（Ｔｏｘｉｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）１ｎｇ／ｍｌ）、ＤＣ細胞、ＣＤ４＋細胞、混合細胞を加え陰性対照として、混合して３日間培養する。
使用される抗体濃度は以下のとおりである。
抗ＬＡＧ－３ ＡＤＩ－３１８５３：２００ｎＭより４倍希釈し、合計で１０の濃度とする。
抗ＰＤ－Ｌ１：２００ｎＭより４倍希釈し、合計で１０の濃度とする。
２５Ｆ７：２００ｎＭより４倍希釈し、合計で１０の濃度とする。
抗ＬＡＧ－３（２００ｎＭより４倍希釈し、合計で１０の濃度とする）＋抗ＰＤ－Ｌ１（１２．５ｎＭ）
２５Ｆ７（２００ｎＭより４倍希釈し、合計で１０の濃度とする）＋抗ＰＤ－Ｌ１（１２．５ｎＭ）
ＩＬ－２検出：
Ｃｉｓｂｉｏ Ｈｕｍａｎ ＩＬ－２ ｋｉｔで培地に対しＩＬ－２の濃度を検出する。
（1） 検出液の調製（試薬はいずれもＣｉｓｂｉｏ Ｈｕｍａｎ ＩＬ２ １０００ ｔｅｓｔｓ試薬キットより）
Ｈｕｍａｎ ＩＬ－２ ｄ２ ａｎｔｉｂｏｄｙ ３０μｌ（由来）を検出緩衝液 ５７０μｌ（由来）に、Ｈｕｍａｎ ＩＬ－２ ｃｒｙｐｔａｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ３０μｌ（由来）を検出緩衝液５７０μｌにそれぞれ加えて、１：１で混合する。
（2） 標準溶液の勾配希釈：

【0295】

【表9】

【0296】

（３）検出：
培地上清と標準品の勾配溶液（１０μｌ）を９６ウェルマイクロプレートに加え、１ウェルあたり検出液１０μｌを加え、４００ｇで１ｍｉｎ遠心分離し、遮光条件において、室温で２時間インキュベートする。
多目的マイクロプレートリーダーを使用し、６１６ｎｍと６６５ｎｍにＯＤ値を読み取り、データを分析する。

【数1】

【0297】

実験結果：
標準品の勾配濃度のΔＲａｔｉｏを横軸に、ＩＬ－２レベルを縦軸にして、ＩＬ－２標準曲線を作成する。図８に示されるように、標準曲線より、各群のヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞のＩＬ－２レベルを算出する。図９に示されるように、対照（２５Ｆ７）又は抗ＬＡＧ－３抗体ＡＤＩ３１８５３単独に比べて、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体（ＡＤＩ－３１８５３）と抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＨＺ３２６６）の組み合わせがより明らかにヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞を活性化させている。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

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