特許 7579795 ＮＫｐ３０に結合する抗体分子およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-10-30

(45)【発行日】2024-11-08

(54)【発明の名称】ＮＫｐ３０に結合する抗体分子およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20241031BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20241031BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20241031BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241031BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20241031BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241031BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241031BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241031BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241031BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241031BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20241031BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241031BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241031BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20241031BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241031BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K19/00

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P37/02

A61P29/00

【請求項の数】 22

(21)【出願番号】P 2021549484

(86)(22)【出願日】2020-02-21

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-04-13

(86)【国際出願番号】 US2020019329

(87)【国際公開番号】W WO2020172605

(87)【国際公開日】2020-08-27

【審査請求日】2023-02-21

(31)【優先権主張番号】62/808,582

(32)【優先日】2019-02-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】521131317

【氏名又は名称】マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100122644

【弁理士】

【氏名又は名称】寺地 拓己

(72)【発明者】

【氏名】レーウ，アンドレアス

(72)【発明者】

【氏名】マルホトラ，ニディ

(72)【発明者】

【氏名】カトラガッダ，マダン

(72)【発明者】

【氏名】バシュ，ブライアン・エドワード

(72)【発明者】

【氏名】マイオッコ，ステファニー・ジェイ

【審査官】吉門 沙央里

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／１６５４６４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１１－５２４７４３（ＪＰ，Ａ）

【文献】M. Draghi, et al.，Immunotherapy of Caner，2018年，Vol.6, Issue Suppl1, P530

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）ＮＫｐ３０に結合してＮＫ細胞を活性化する抗体分子またはその抗原結合性断片；および
（ｉｉ）サイトカイン分子
を含む、多特異性分子であって、
抗体分子またはその抗原結合性断片が、
（ａ）各々、配列番号７３１３，配列番号６００１，および配列番号７３１５の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＶＨＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＶＨＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および各々、配列番号７３２６，配列番号７３２７，および配列番号７３２９の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＶＬＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＶＬＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｂ）各々、配列番号７３１３，配列番号６００８，および配列番号６００９のＶＨＣＤＲ１，ＶＨＣＤＲ２，およびＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；および各々、配列番号６０７０，配列番号６０７１，および配列番号６０７２のＶＬＣＤＲ１，ＶＬＣＤＲ２，およびＶＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または
（ｃ）各々、配列番号７３１３，配列番号７３８５，および配列番号７３１５のＶＨＣＤＲ１，ＶＨＣＤＲ２，およびＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；および各々、配列番号６０７０，配列番号６０６４，および配列番号７３２１のＶＬＣＤＲ１，ＶＬＣＤＲ２，およびＶＬＣＤＲ３を含むＶＬ
を含む、多特異性分子。

【請求項2】

抗体分子またはその抗原結合性断片が、
（ｉ）配列番号：６１２２の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：６１３６の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉ）配列番号：６１２９の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：６１４２の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉｉ）配列番号：６１３０の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：６１４３の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｖ）配列番号：６１３１の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：６１４４の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖ）配列番号：６１３２の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：６１４５の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖｉ）配列番号：６１３３の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：６１４６の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖｉｉ）配列番号：６１３４の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：６１４７の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖｉｉｉ）配列番号：７２９５の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：７２９６の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｘ）配列番号：７２９８の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：７２９９の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘ）配列番号：７３００の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：７３０５の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｉ）配列番号：７３０１の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：７３０６の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｉｉ）配列番号：７３０２の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：７３０７の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｉｉｉ）配列番号：７３０３の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：７３０８の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｉｖ）配列番号：７３０４の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号：７３０９の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
を含む、請求項１に記載の多特異性分子。

【請求項3】

抗体分子またはその抗原結合性断片が、
（ｉ）配列番号：６１２２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：６１３６のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉ）配列番号：６１２９のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：６１４２のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉｉ）配列番号：６１３０のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：６１４３のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｖ）配列番号：６１３１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：６１４４のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖ）配列番号：６１３２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：６１４５のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖｉ）配列番号：６１３３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：６１４６のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖｉｉ）配列番号：６１３４のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：６１４７のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖｉｉｉ）配列番号：７２９５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：７２９６のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｘ）配列番号：７２９８のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：７２９９のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘ）配列番号：７３００のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：７３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｉ）配列番号：７３０１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：７３０６のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｉｉ）配列番号：７３０２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：７３０７のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｉｉｉ）配列番号：７３０３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：７３０８のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｘｉｖ）配列番号：７３０４のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号：７３０９のアミノ酸配列を含むＶＬ；
を含む、請求項２に記載の多特異性分子。

【請求項4】

抗体分子またはその抗原結合性断片が、
（ｉ）配列番号６１５１の配列または配列番号６１５２の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖；および
（ｉｉ）配列番号６１５３の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の多特異性分子。

【請求項5】

抗体分子またはその抗原結合性断片が、配列番号６１５１の配列または配列番号６１５２の配列を含む重鎖；および配列番号６１５３の配列を含む軽鎖
を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の多特異性分子。

【請求項6】

抗体分子またはその抗原結合性断片が、配列番号７３１０の配列または配列番号７３１１の配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む一本鎖Ｆｖを含む、請求項１に記載の多特異性分子。

【請求項7】

抗体分子またはその抗原結合性断片が、配列番号７３１０の配列または配列番号７３１１の配列を含む一本鎖Ｆｖを含む、請求項１または６に記載の多特異性分子。

【請求項8】

抗体分子またはその抗原結合性断片が、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、単一ドメイン抗体分子またはその単一ドメインバリアント、ダイアボディ、二価抗体、または二重特異性抗体分子、またはラクダ抗体である、請求項１～７のいずれか１項に記載の多特異性分子。

【請求項9】

腫瘍標的化部分、Ｔ細胞エンゲージャー、またはウイルスまたは細菌感染細胞に結合する結合特異性の一つまたはそれ以上をさらに含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の多特異性分子。

【請求項10】

（ｉ）ＩｇＧ１またはその断片、ＩｇＧ２またはその断片、ＩｇＧ３またはその断片、およびＩｇＧ４またはその断片からなる群から選択される、重鎖定常領域；
（ｉｉ）カッパ軽鎖定常領域またはその断片、またはラムダ軽鎖定常領域またはその断片；または
（ｉｉｉ）それらの任意の組合せ
を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の多特異性分子。

【請求項11】

多特異性分子が第１の免疫グロブリン鎖定常領域および第２の免疫グロブリン鎖定常領域を含み、
抗体分子またはその抗原結合性断片が第１の免疫グロブリン鎖定常領域に連結し、
第１の免疫グロブリン鎖定常領域が第１のＦｃ領域であり、および第２の免疫グロブリン鎖定常領域が第２のＦｃ領域であり、
第１のＦｃ領域および第２のＦｃ領域が二量体化する、
請求項１～１０のいずれか１項に記載の多特異性分子。

【請求項12】

第１のＦｃ領域および第２のＦｃ領域の二量体化が、第１のＦｃ領域および第２のＦｃ領域のＦｃ境界部に、対になった孔と突起、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つまたは複数を提供することにより増強され、操作されていない境界部と比較して、より高い比のヘテロ多量体：ホモ多量体が形成される、請求項１１に記載の多特異性分子。

【請求項13】

第１のＦｃ領域が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖからなる群から選択されるアミノ酸置換を含み、第２のＦｃ領域が、Ｔ３６６Ｗのアミノ酸置換を含む、または第１のＦｃ領域が、Ｔ３６６Ｗのアミノ酸置換を含み、第２のＦｃ領域が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１２に記載の多特異性分子。

【請求項14】

サイトカイン分子が、インターロイキン－２（ＩＬ－２）またはその機能的バリアント、インターロイキン－７（ＩＬ－７）またはその機能的バリアント、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）またはその機能的バリアント、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）またはその機能的バリアント、インターロイキン－１８（ＩＬ－１８）またはその機能的バリアント、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）またはその機能的バリアント、およびインターフェロンガンマまたはその機能的バリアントからなる群から選択される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の多特異性分子。

【請求項15】

抗体分子またはその抗原結合性断片とサイトカイン分子との間のリンカー、腫瘍標的化部分とサイトカイン分子との間のリンカー、サイトカイン分子とＴ細胞エンゲージャーとの間のリンカー、サイトカイン分子と第１の免疫グロブリン鎖定常領域との間のリンカー、サイトカイン分子と第２の免疫グロブリン鎖定常領域との間のリンカー、腫瘍標的化部分と第１の免疫グロブリン鎖定常領域との間のリンカー、腫瘍標的化部分と第２の免疫グロブリン鎖定常領域との間のリンカー、Ｔ細胞エンゲージャーと第１の免疫グロブリン鎖定常領域との間のリンカー、またはＴ細胞エンゲージャーと第２の免疫グロブリン鎖定常領域との間のリンカーのうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の多特異性分子。

【請求項16】

リンカーが、切断性リンカー、非切断性リンカー、ペプチドリンカー、可撓性リンカー、剛性リンカー、ヘリックスリンカー、および非ヘリックスリンカーからなる群から選択される、請求項１５に記載の多特異性分子。

【請求項17】

請求項１～１６のいずれか１項に記載の多特異性分子のポリペプチド鎖をコードする配列を含む、ポリヌクレオチド。

【請求項18】

請求項１～１６のいずれか１項に記載の多特異性分子の作製方法であって、遺伝子発現、ホモもしくはヘテロ二量体化、またはそれらの組合せのために適した条件で、請求項１７に記載の組換えポリヌクレオチドを含む宿主細胞を培養することを含む、方法。

【請求項19】

請求項１～１６のいずれか１項に記載の多特異性分子、および薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤を含む医薬。

【請求項20】

がん、自己免疫障害、または炎症性障害、または感染症の処置において使用するための、請求項１～１６のいずれか１項に記載の多特異性分子を含む医薬組成物。

【請求項21】

（ｉ）がんが固形腫瘍がんまたは転移性病変である；または
（ｉｉ）がんが血液がんである
請求項２０に記載の医薬組成物。

【請求項22】

対象に第２の治療処置と組み合わせて投与され、第２の治療処置が、治療剤、放射線、または外科手術を含む、請求項２０または２１に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０１９年２月２１日に出願された米国仮出願第６２／８０８，５８２号に対する優先権を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている配列表を含む。２０２０年２月２０日に作製された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｅ２０７０－７０２５ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、サイズは５１７，５６７バイトである。

【背景技術】

【0003】

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、抗体非依存性の方式で腫瘍およびウイルス感染細胞を認識および破壊する。ＮＫ細胞の調節は、ＮＫ細胞表面上の受容体を活性化および阻害することによって媒介される。活性化受容体の１つのファミリーは、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４およびＮＫｐ４６を含む天然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）である。

【0004】

免疫応答の制御における免疫チェックポイント経路の重要性を考慮すると、免疫抑制タンパク質、例えば、ＰＤ－１の活性をモジュレートし、それにより免疫系の活性化をもたらす新規薬剤を開発する必要がある。このような薬剤は、例えば、がん免疫療法、および他の状態、例えば、慢性感染症の処置に使用することができる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

高い親和性および特異性でＮＫｐ３０に結合する抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）が本明細書に開示される。抗体分子をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞、および抗体分子を作製する方法もまた提供される。抗体分子を含む多特異性もしくは二重特異性または多機能性抗体分子および医薬組成物もまた提供される。本明細書に開示される抗ＮＫｐ３０抗体分子は、がん性障害（例えば、固形腫瘍および軟部組織腫瘍）、ならびに自己免疫疾患および感染症などの障害を処置、予防および／または診断するために（単独で、または他の薬剤もしくは治療モダリティと組み合わせて）使用することができる。したがって、抗ＮＫｐ３０抗体分子を用いて、ＮＫｐ３０を検出するための組成物および方法、ならびにがん、自己免疫疾患および／または感染症を含む種々の障害を処置する方法が、本明細書に開示される。

【0006】

したがって、一態様では、本発明は、以下の列挙された実施形態に従って、１つまたは複数の配列を含む抗体分子（例えば、単離されたまたは組換え抗体分子）を特徴とする。開示される抗体分子、多機能性分子、核酸、ベクター、宿主細胞、または方法のいずれかのさらなる特徴は、以下の列挙された実施形態のうちの１つまたは複数を含む。

【0007】

当業者であれば、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多数の同等物を、日常的な実験のみを使用して認識するかまたは確認することができる。このような同等物は、以下の列挙された実施形態によって包含されることが意図される。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】図１は、ＮＫ９２細胞に対するＮＫｐ３０抗体の結合を示すグラフである。パーセント－ＡＦ７４７陽性集団としてデータを算出した。

【図2】図２は、ＮＫｐ３０抗体によるＮＫ９２細胞の活性化を示すグラフである。ハムスター抗ＮＫｐ３０ ｍＡｂを使用してデータを生成した。

【発明を実施するための形態】

【0009】

列挙された実施形態
１．ＮＫｐ３０に結合する単離された抗体分子であって、
（ｉ）配列番号７３１３の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号７３１５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに／あるいは
（ｉｉ）配列番号７３２６の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号７３２７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号７３２９のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、抗体分子。

【0010】

２．抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号７２９８もしくは７３００～７３０４のいずれかのアミノ酸配列（または配列番号７２９８もしくは７３００～７３０４のいずれかと少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および／または
（ｉｉ）配列番号７２９９もしくは７３０５～７３０９のいずれかのアミノ酸配列（または配列番号７２９９もしくは７３０５～７３０９のいずれかと少なくとも約９３％、９５％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ
を含む、実施形態１の抗体分子。

【0011】

３．抗原結合性ドメインが、
（ｉ））配列番号７３０２のアミノ酸配列（または７３０２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および配列番号７３０５のアミノ酸配列（または７３０５と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ；または
（ｉｉ）配列番号７３０２のアミノ酸配列（または７３０２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および配列番号７３０９のアミノ酸配列（または７３０９と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ
を含む、実施形態２の抗体分子。

【0012】

４．抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号７３１０のアミノ酸配列（または７３１０と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）；または
（ｉｉ）配列番号７３１１のアミノ酸配列（または７３１１と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）
を含む、実施形態１から３のいずれかの抗体分子。

【0013】

５．ＮＫｐ３０に結合する単離された抗体分子であって、
（ｉ）配列番号６０００の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００２のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに
（ｉｉ）配列番号６０６３の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号７２９３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、抗体分子。

【0014】

６．抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号６０００の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列、配列番号６００１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６００２のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに
（ｉｉ）配列番号６０６３の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０６４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号７２９３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、実施形態５の抗体分子。

【0015】

７．抗原結合性ドメインが、
（１）配列番号６００３の重鎖可変領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６００６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および／あるいは
（２）配列番号６０６６の軽鎖可変領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６７のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号７２９２のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０６９のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、実施形態５または６の抗体分子。

【0016】

８．抗原結合性ドメインが、
（１）配列番号６００３の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６００４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６００５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６００６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（３）配列番号６０６６の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０６７のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号７２９２のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０６９のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、実施形態７の抗体分子。

【0017】

９．抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号６１２１のアミノ酸配列（または配列番号６１２１と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および／または
（ｉｉ）配列番号７２９４のアミノ酸配列（または配列番号７２９４と少なくとも約９３％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ
を含む、実施形態５から８のいずれか１つの抗体分子。

【0018】

１０．抗原結合性ドメインが，配列番号６１４８または６１４９のアミノ酸配列（または配列番号６１４８もしくは６１４９と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む重鎖を含む、実施形態５から９のいずれか１つの抗体分子。

【0019】

１１．抗原結合性ドメインが、配列番号６１５０のアミノ酸配列（または配列番号６１５０と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む軽鎖を含む、実施形態５から１０のいずれかの抗体分子。

【0020】

１２．抗原結合性ドメインが、配列番号６１４８または６１４９のアミノ酸配列（または配列番号６１４８もしくは６１４９と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む重鎖、および配列番号６１５０のアミノ酸配列（または配列番号６１５０と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む軽鎖を含む、実施形態５から１１のいずれかの抗体分子。

【0021】

１３．抗原結合性ドメインが、配列番号６０１４の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１５のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１６のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０１７のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態５から１２のいずれかの抗体分子。

【0022】

１４．抗原結合性ドメインが、配列番号６０１４の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０１５のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０１６のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０１７のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態１３の抗体分子。

【0023】

１５．抗原結合性ドメインが、配列番号６１２３のアミノ酸配列（または配列番号６１２３と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態１４の抗体分子。

【0024】

１６．抗原結合性ドメインが、配列番号６０１８の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１９のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２０のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０２１のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態５から１５のいずれかの抗体分子。

【0025】

１７．抗原結合性ドメインが、配列番号６０１８の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０１９のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０２０のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０２１のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態１６の抗体分子。

【0026】

１８．抗原結合性ドメインが、配列番号６１２４のアミノ酸配列（または配列番号６１２４と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態１７の抗体分子。

【0027】

１９．抗原結合性ドメインャーが、配列番号６０２２の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２３のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２４のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０２５のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態５から１８のいずれかの抗体分子。

【0028】

２０．抗原結合性ドメインが、配列番号６０２２の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０２３のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０２４のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０２５のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態１９の抗体分子。

【0029】

２１．抗原結合性ドメインが、配列番号６１２５のアミノ酸配列（または配列番号６１２５と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態２０の抗体分子。

【0030】

２２．抗原結合性ドメインが、配列番号６０２６の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２７のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２８のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０２９のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態５から２１のいずれかの抗体分子。

【0031】

２３．抗原結合性ドメインが、配列番号６０２６の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０２７のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０２８のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０２９のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態２２の抗体分子。

【0032】

２４．抗原結合性ドメインが、配列番号６１２６のアミノ酸配列（または配列番号６１２６と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態２３の抗体分子。

【0033】

２５．抗原結合性ドメインが、配列番号６０３０の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０３２のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０３３のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０３４のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態５から２４のいずれかの抗体分子。

【0034】

２６．抗原結合性ドメインが、配列番号６０３０の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０３２のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０３３のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０３４のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態２５の抗体分子。

【0035】

２７．抗原結合性ドメインが、配列番号６１２７のアミノ酸配列（または配列番号６１２７と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態２６の抗体分子。

【0036】

２８．抗原結合性ドメインが、配列番号６０３５の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０３６のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０３７のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０３８のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態５から２７のいずれかの抗体分子。

【0037】

２９．抗原結合性ドメインが、配列番号６０３５の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０３６のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０３７のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０３８のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態２８の抗体分子。

【0038】

３０．抗原結合性ドメインが、配列番号６１２８のアミノ酸配列（または配列番号６１２８と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態２９の抗体分子。

【0039】

３１．抗原結合性ドメインが、配列番号６０７７の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０８０のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態５、６、または１３から３０のいずれかの抗体分子。

【0040】

３２．抗原結合性ドメインが、配列番号６０７７の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０７８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０７９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０８０のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態３１の抗体分子。

【0041】

３３．抗原結合性ドメインが、配列番号６１３７のアミノ酸配列（または配列番号６１３７と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態３２の抗体分子。

【0042】

３４．抗原結合性ドメインが、配列番号６０８１の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０８２のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０８３のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０８４のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態５、６、または１３から３０のいずれかの抗体分子。

【0043】

３５．抗原結合性ドメインが、配列番号６０８１の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０８２のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０８３のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０８４のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態３４の抗体分子。

【0044】

３６．抗原結合性ドメインが、配列番号６１３８のアミノ酸配列（または配列番号６１３８と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態３５の抗体分子。

【0045】

３７．抗原結合性ドメインが、配列番号６０８５の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０８６のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０８７のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０８８のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態５、６、または１３から３０のいずれかの抗体分子。

【0046】

３８．抗原結合性ドメインが、配列番号６０８５の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０８６のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０８７のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０８８のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態３７の抗体分子。

【0047】

３９．抗原結合性ドメインが、配列番号６１３９のアミノ酸配列（または配列番号６１３９と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態３８の抗体分子。

【0048】

４０．抗原結合性ドメインが、配列番号６０８９の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０９０のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０９１のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０９２のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態５、６、または１３から３０のいずれかの抗体分子。

【0049】

４１．抗原結合性ドメインが、配列番号６０８９の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０９０のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０９１のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０９２のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態４０の抗体分子。

【0050】

４２．抗原結合性ドメインが、配列番号６１４０のアミノ酸配列（または配列番号６１４０と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態４１の抗体分子。

【0051】

４３．抗原結合性ドメインが、配列番号６０９３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０９４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０９５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０９６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれから１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態５、６、または１３から３０のいずれかの抗体分子。

【0052】

４４．抗原結合性ドメインが、配列番号６０９３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０９４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０９５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０９６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む、実施形態４３の抗体分子。

【0053】

４５．抗原結合性ドメインが、配列番号６１４１のアミノ酸配列（または配列番号６１４１と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態４４の抗体分子。

【0054】

４６．ＮＫｐ３０に結合する単離された抗体分子であって、
（ｉ）配列番号６００７の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに
（ｉｉ）配列番号６０７０の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０７２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、抗体分子。

【0055】

４７．抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号６００７の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列、配列番号６００８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６００９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
（ｉｉ）配列番号６０７０の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０７１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６０７２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、実施形態４６の抗体分子。

【0056】

４８．抗原結合性ドメインが、
（１）配列番号６０１０の重鎖フレームワーク変域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０１１のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０１２のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６０１３のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／あるいは
（２）配列番号６０７３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０７４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０７５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６０７６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、
を含む、実施形態４６または４７の抗体分子。

【0057】

４９．抗原結合性ドメインが、
（１）配列番号６０１０の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０１１のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０１２のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０１３のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および
（３）配列番号６０７３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０７４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０７５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０７６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、実施形態４８の抗体分子。

【0058】

５０．抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号６１２２のアミノ酸配列（または配列番号６１２２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および／または
（ｉｉ）配列番号６１３６のアミノ酸配列（または配列番号６１３６と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ
を含む、実施形態４６から４９のいずれか１つの抗体分子。

【0059】

５１．抗原結合性ドメインが、配列番号６１５１または６１５２のアミノ酸配列（または配列番号６１５１もしくは６１５２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む重鎖を含む、実施形態４６から５０のいずれかの抗体分子。

【0060】

５２．抗原結合性ドメインが，配列番号６１５３のアミノ酸配列（または配列番号６１５３と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む軽鎖を含む、実施形態４６から５１のいずれかの抗体分子。

【0061】

５３．抗原結合性ドメインが、配列番号６１５１または６１５２のアミノ酸配列（または配列番号６１５１もしくは６１５２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む重鎖、および配列番号６１５３のアミノ酸配列（または配列番号６１５３と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む軽鎖を含む、実施形態４６から５１のいずれかの抗体分子。

【0062】

５４．抗原結合性ドメインが、配列番号６０３９の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０４０のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０４１のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６０４２のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態４６または４７の抗体分子。

【0063】

５５．抗原結合性ドメインが、配列番号６０３９の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０４０のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０４１のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０４２のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態５４の抗体分子。

【0064】

５６．抗原結合性ドメインが、配列番号６１２９のアミノ酸配列（または配列番号６１２９と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態５５の抗体分子。

【0065】

５７．抗原結合性ドメインが、配列番号６０４３の重鎖可変領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０４４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０４５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６０４６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態４６または４７の抗体分子。

【0066】

５８．抗原結合性ドメインが、配列番号６０４３の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０４４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０４５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０４６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態５７の抗体分子。

【0067】

５９．抗原結合性ドメインが、配列番号６１３０のアミノ酸配列（または配列番号６１３０と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態５８の抗体分子。

【0068】

６０．抗原結合性ドメインが、配列番号６０４７の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０４８のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０４９のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６０５０のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態４６または４７の抗体分子。

【0069】

６１．抗原結合性ドメインが、配列番号６０４７の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０４８のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０４９のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０５０のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態６０の抗体分子。

【0070】

６２．抗原結合性ドメインが、配列番号６１３１のアミノ酸配列（または配列番号６１３１と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態６１の抗体分子。

【0071】

６３．抗原結合性ドメインが、配列番号６０５１の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０５２のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０５３のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６０５４のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態４６または４７の抗体分子。

【0072】

６４．抗原結合性ドメインが、配列番号６０５１の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０５２のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０５３のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０５４のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態６３の抗体分子。

【0073】

６５．抗原結合性ドメインが、配列番号６１３２のアミノ酸配列（または配列番号６１３２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態６４の抗体分子。

【0074】

６６．抗原結合性ドメインが、配列番号６０５５の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０５６のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０５７のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６０５８のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態４６または４７の抗体分子。

【0075】

６７．抗原結合性ドメインが、配列番号６０５５の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０５６のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０５７のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０５８のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態６６の抗体分子。

【0076】

６８．抗原結合性ドメインが、配列番号６１３３のアミノ酸配列（または配列番号６１３３と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態６７の抗体分子。

【0077】

６９．抗原結合性ドメインが、配列番号６０５９の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０６０のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０６１のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６０６２のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態４６または４７の抗体分子。

【0078】

７０．抗原結合性ドメインが、配列番号６０５９の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０６０のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０６１のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６０６２のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態６９の抗体分子。

【0079】

７１．抗原結合性ドメインが、配列番号６１３４のアミノ酸配列（または配列番号６１３４と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む、実施形態７０の抗体分子。

【0080】

７２．抗原結合性ドメインが、配列番号６０９７の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０９８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０９９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６１００のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態４６、４７、または５４から７１のいずれかの抗体分子。

【0081】

７３．抗原結合性ドメインが、配列番号６０９７の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０９８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０９９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６１００のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７２の抗体分子。

【0082】

７４．抗原結合性ドメインが、配列番号６１４２のアミノ酸配列（または配列番号６１４２と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態７３の抗体分子。

【0083】

７５．抗原結合性ドメインが、配列番号６１０１の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１０２のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１０３のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６１０４のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態４６、４７、または５４から７４のいずれかの抗体分子。

【0084】

７６．抗原結合性ドメインが、配列番号６１０１の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１０２のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１０３のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６１０４のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７５の抗体分子。

【0085】

７７．抗原結合性ドメインが、配列番号６１４３のアミノ酸配列（または配列番号６１４３と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態７６の抗体分子。

【0086】

７８．抗原結合性ドメインが、配列番号６１０５の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１０６のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１０７のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６１０８のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態４６、４７、または５４から７７のいずれかの抗体分子。

【0087】

７９．抗原結合性ドメインが、配列番号６１０５の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１０６のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１０７のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６１０８のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７８の抗体分子。

【0088】

８０．抗原結合性ドメインが、配列番号６１４４のアミノ酸配列（または配列番号６１４４と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態７９の抗体分子。

【0089】

８１．抗原結合性ドメインが、配列番号６１０９の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１０のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１１のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６１１２のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態４６、４７、または５４から８０のいずれかの抗体分子。

【0090】

８２．抗原結合性ドメインが、配列番号６１０９の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１１０のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１１１のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６１１２のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態８１の抗体分子。

【0091】

８３．抗原結合性ドメインが、配列番号６１４５のアミノ酸配列（または配列番号６１４５と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態７８の抗体分子。

【0092】

８４．抗原結合性ドメインが、配列番号６１１３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６１１６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態４６、４７、または５４から８３のいずれかの抗体分子。

【0093】

８５．抗原結合性ドメインが、配列番号６１１３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１１４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１１５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６１１６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態８４の抗体分子。

【0094】

８６．抗原結合性ドメインが、配列番号６１４６のアミノ酸配列（または配列番号６１４６と少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態８５の抗体分子。

【0095】

８７．抗原結合性ドメインが、配列番号６１１７の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、または配列番号６１２０のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態４６、４７、または５４から８６のいずれかの抗体分子。

【0096】

８８．抗原結合性ドメインが、配列番号６１１７の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１１８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１１９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、または配列番号６１２０のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態８７の抗体分子。

【0097】

８９．抗原結合性ドメインが、配列番号６１４７のアミノ酸配列（または配列番号６１４７と少なくとも約９３％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む、実施形態８８の抗体分子。

【0098】

９０．抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号６１２２のアミノ酸配列（または配列番号６１２２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および／または
（ｉｉ）配列番号６１３６のアミノ酸配列（または配列番号６１３６と少なくとも約９３％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ
を含む、先行する実施形態のいずれか１つの抗体分子。

【0099】

９１．実施形態１から９０のいずれかの抗体分子を含む多特異性分子。
９２．ａ．例えば、本明細書に記載される腫瘍標的化部分；
ｂ．例えば、本明細書に記載されるサイトカイン分子；
ｃ．例えば、本明細書に記載されるＴ細胞エンゲージャー；または
ｄ．例えば、本明細書に記載される間質改変部分
のうちの１つ、２つ、３つ、４つまたはそれ以上をさらに含む、実施形態９１の多特異性分子。

【0100】

９３．自己反応性Ｔ細胞、例えば、炎症性障害または自己免疫障害に関連する自己反応性Ｔ細胞の表面に存在する抗原に結合する結合特異性をさらに含む、実施形態９１の多特異性分子。

【0101】

９４．感染細胞、例えば、ウイルスまたは細菌感染細胞に結合する結合特異性をさらに含む、実施形態９１の多特異性分子。
９５．単一特異性抗体分子、二特異性抗体分子、または三特異性抗体分子である、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性分子。

【0102】

９６．一価抗体分子、二価抗体分子、または三価抗体分子である、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性分子。
９７．全長抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全重鎖と、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全軽鎖とを含む抗体）、または抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）、二価抗体、または二重特異性抗体もしくはその断片、その単一ドメインバリアント、またはラクダ抗体）である、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性分子。

【0103】

９８．ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域、またはその断片を含む、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性分子。
９９．カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域、またはその断片を含む、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性分子。

【0104】

１００．免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つまたは複数を増加または減少させるために、変更、例えば、突然変異される、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性分子。

【0105】

１０１．第１および第２の免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の境界部が、例えば、操作されていない境界部と比較して、二量体化を増加または減少させるために、変更、例えば、突然変異される、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性分子。

【0106】

１０２．免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の二量体化が、第１および第２のＦｃ領域のＦｃ境界部に、対になった孔と突起（「ノブ・イン・ホール」）、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つまたは複数を提供し、それによって、例えば、操作されていない境界部と比較して、より高い比のヘテロ多量体：ホモ多量体が形成されることにより、増強される、実施形態１０１の抗体分子または多特異性分子。

【0107】

１０３．免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、例えば、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つまたは複数から選択される位置にアミノ酸置換を含む、実施形態１０１または１０２の抗体分子または多特異性分子。

【0108】

１０４．免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、もしくはＹ４０７Ｖ（例えば、孔またはホールに対応する）、またはＴ３６６Ｗ（例えば、突起またはノブに対応する）、あるいはそれらの組合せから選択されるアミノ酸置換を含む、実施形態１０３の抗体分子または多特異性分子。

【0109】

１０５．リンカー、例えば、標的化部分とサイトカイン分子もしくは間質改変部分、標的化部分と免疫細胞エンゲージャー、サイトカイン分子もしくは間質改変部分、および免疫細胞エンゲージャー、サイトカイン分子もしくは間質改変部分と免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）、標的化部分と免疫グロブリン鎖定常領域、または免疫細胞エンゲージャーと
免疫グロブリン鎖定常領域のうちの１つまたは複数の間にリンカーをさらに含む、実施形態１から１０４のいずれかの抗体分子または多特異性分子。

【0110】

１０６．リンカーが、切断性リンカー、非切断性リンカー、ペプチドリンカー、可撓性リンカー、剛性リンカー、ヘリックスリンカー、または非ヘリックスリンカーから選択される、実施形態１０５の抗体分子または多特異性分子。

【0111】

１０７．リンカーがペプチドリンカーである、実施形態１０６の抗体分子または多特異性分子。
１０８．ペプチドリンカーがＧｌｙおよびＳｅｒを含む、実施形態１０７の抗体分子または多特異性分子。

【0112】

１０９．本明細書に記載される抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子のいずれかをコードするヌクレオチド配列、あるいはそれらに対して実質的に相同である（例えば、それらに対して少なくとも９５％～９９．９％同一である）ヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。

【0113】

１１０．実施形態１から１０８のいずれかの抗体分子または多特異性分子をコードする単離された核酸。
１１１．実施形態１０９または１１０のいずれかの核酸分子のうちの１つまたは複数を含む、ベクター、例えば、発現ベクター。

【0114】

１１２．実施形態１１１の核酸分子またはベクターを含む宿主細胞。
１１３．実施形態１から１０８のいずれかの抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドを作製する、例えば、産生する方法であって、適切な条件、例えば、遺伝子発現および／またはホモもしくはヘテロ二量体化に適した条件下で、実施形態１１２の宿主細胞を培養するステップを含む、方法。

【0115】

１１４．実施形態１から１０８のいずれかの抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドと、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤とを含む医薬組成物。

【0116】

１１５．がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、先行する実施形態の抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドを投与するステップを含み、多特異性抗体ががんを処置するのに有効な量で投与される、方法。

【0117】

１１６．がんを処置する際における使用のための、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチド。
１１７．がんが固形腫瘍がんまたは転移性病変である、実施形態１１５の方法または実施形態１１６の使用。

【0118】

１１８．固形腫瘍がんが、膵臓がん（例えば、膵臓腺癌）、乳がん、結腸直腸がん、肺がん（例えば、小細胞もしくは非小細胞肺がん）、皮膚がん、卵巣がん、または肝臓がんのうちの１つまたは複数である、実施形態１１７の方法または実施形態１１７の使用。

【0119】

１１９．がんが血液がんである、実施形態１１５の方法または実施形態１１６の使用。
１２０．第２の治療処置を施すステップをさらに含む、実施形態１１５もしくは１１６から１１９のいずれかの方法または実施形態１１６から１１９のいずれかの使用。

【0120】

１２１．第２の治療処置が、治療剤（例えば、化学療法剤、生物剤、ホルモン療法）、放射線、または外科手術を含む、実施形態１２０の方法または実施形態１２０の使用。
１２２．治療剤が、化学療法剤または生物剤から選択される、実施形態１２１の方法または実施形態１２１の使用。

【0121】

１２３．自己免疫障害または炎症性障害を処置する方法であって、それを必要とする対象に、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドを投与するステップを含み、多特異性抗体が自己免疫障害または炎症性障害を処置するのに有効な量で投与される、方法。

【0122】

１２４．自己免疫障害または炎症性障害を処置する際における使用のための、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチド。
１２５．感染性障害を処置する方法であって、それを必要とする対象に、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドを投与するステップを含み、多特異性抗体が感染性障害を処置するのに有効な量で投与される、方法。

【0123】

１２６．感染性障害を処置する際における使用のための、先行する実施形態のいずれかの抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチド。
定義
特定の用語を以下に定義する。

【0124】

本明細書で使用される場合、冠詞「ある（ａ）」および「ある（ａｎ）」は、冠詞の文法的対象物の１つまたは複数、例えば、少なくとも１つを指す。用語「ある（ａ）」または「ある（ａｎ）」の使用は、本明細書における用語「含んでいる」と共に使用される場合、「１つ」を意味し得るが、「１つまたは複数」、「少なくとも１つ」および「１または１を超える」の意味とも一致する。

【0125】

本明細書で使用される場合、「約」および「ほぼ」は、一般に、測定の性質または精度を与えられて測定された量についての許容可能な誤差の程度を意味する。誤差の例示的な程度は、所定の範囲の値の２０パーセント（％）以内であり、典型的には１０％以内であり、より典型的には５％以内である。

【0126】

本明細書で使用される場合、例えば、抗体分子、サイトカイン分子、受容体分子において使用される用語「分子」は、改変されていない（例えば、天然に存在する）分子の少なくとも１つの機能および／または活性化が残る限り、全長の天然に存在する分子、ならびにバリアント、例えば、機能性バリアント（例えば、切断、断片、突然変異（例えば、実質的に類似の配列）またはその誘導体化された形態）を含む。

【0127】

本明細書で使用される「抗体分子」とは、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、タンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖またはその断片を指す。抗体分子は、抗体（例えば、全長抗体）および抗体断片を包含する。ある実施形態では、抗体分子は、全長抗体の抗原結合もしくは機能的断片、または全長免疫グロブリン鎖を含む。例えば、全長抗体は、天然に存在するか、または正常な免疫グロブリン遺伝子断片の組換えプロセスによって形成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（例えば、ＩｇＧ抗体）である。実施形態では、抗体分子は、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な抗原結合部分、例えば、抗体断片を指す。抗体断片、例えば、機能性断片は、抗体の一部、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）_２、可変断片（Ｆｖ）、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、または一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。機能性抗体断片は、インタクトな（例えば、全長）抗体によって認識されるものと同じ抗原に結合する。用語「抗体断片」または「機能性断片」はまた、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、または軽鎖および重鎖の可変領域がペプチドリンカーによって連結されている組換え一本鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）などの可変領域からなる単離された断片を含む。一部の実施形態では、抗体断片は、抗原結合活性を有さない抗体の部分、例えば、Ｆｃ断片または単一アミノ酸残基を含まない。例示的な抗体分子は、全長抗体および抗体断片、例えば、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、一本鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）_２断片、ならびに一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。

【0128】

本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン可変ドメイン配列」とは、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成することができるアミノ酸配列を指す。例えば、配列は、天然に存在する可変ドメインのアミノ酸配列の全部または一部を含み得る。例えば、配列は、１個、２個、もしくはそれ以上のＮ末端またはＣ末端アミノ酸を含むかまたは含まない場合があり、あるいはタンパク質構造の形成に適合する他の改変を含む場合がある。

【0129】

実施形態では、抗体分子は、単一特異性であり、例えば、単一のエピトープに対する結合特異性を含む。一部の実施形態では、抗体分子は、多特異性であり、例えば、それは、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対して結合特異性を有し、第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対して結合特異性を有する。一部の実施形態では、抗体分子は、二特異性抗体分子である。「二特異性抗体分子」とは、本明細書で使用される場合、１を超える（例えば、２、３、４、またはそれを超える）エピトープおよび／または抗原に対する特異性を有する抗体分子を指す。

【0130】

本明細書で使用される「抗原」（Ａｇ）とは、例えば、ある種の免疫細胞の活性化および／または抗体生成を伴う、免疫応答を引き起こすことができる分子を指す。ほとんどすべてのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子は、抗原であり得る。抗原はまた、ゲノム組換え体またはＤＮＡから誘導され得る。例えば、免疫応答を誘導することができるタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分的ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡは、「抗原」をコードする。実施形態では、抗原は、遺伝子の全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はなく、また、抗原は、遺伝子によって全くコードされる必要もない。実施形態では、抗原は、合成され得るか、または他の生体成分を有する生体試料、例えば、組織試料、腫瘍試料、細胞、もしくは流体に由来し得る。本明細書で使用される場合、「腫瘍抗原」または同義的に「がん抗原」は、がん、例えば、がん細胞もしくは免疫応答を引き起こすことができる腫瘍微小環境上に存在するか、またはそれと関連する任意の分子を含む。本明細書で使用される場合、「免疫細胞抗原」とは、免疫応答を引き起こすことができる免疫細胞上に存在するか、またはそれと関連する任意を含む。

【0131】

抗体分子の「抗原結合部位」または「結合部位」とは、抗原結合に関与する抗体分子、例えば、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の一部を指す。実施形態では、抗原結合部位は、重鎖（Ｈ）および軽鎖（Ｌ）の可変領域（Ｖ）のアミノ酸残基によって形成される。超可変領域と呼ばれる、重鎖および軽鎖の可変領域内の３つの高度に分岐ストレッチは、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された隣接領域間に配置される。ＦＲは、免疫グロブリン中の超可変領域の間で、およびそれに隣接して天然に見出されるアミノ酸配列である。実施形態では、抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、三次元空間において互いに対して配置されて、結合抗原の三次元表面に相補的な抗原結合表面を形成する。重鎖および軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。フレームワーク領域およびＣＤＲは、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ公開番号９１－３２４２、およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら（１９８７年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１～９１７ページにおいて定義され、記載されている。各可変鎖（例えば、可変重鎖および可変軽鎖）は、典型的には、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ酸の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配列される。

【0132】

本明細書で使用される場合、「がん」は、すべてのタイプの発がんプロセスおよび／またはがん性増殖を包含することができる。実施形態では、がんは、原発性腫瘍、ならびに転移性組織、または悪性に形質転換された細胞、組織、もしくは臓器を含む。実施形態では、がんは、がんのすべての組織病理学および病期、例えば、浸潤性／重症度の病期を包含する。実施形態では、がんは、再発がんおよび／または抵抗性がんを含む。用語「がん」および「腫瘍」は、互換的に使用することができる。例えば、両方の用語は、固形腫瘍および液性腫瘍を包含する。本明細書で使用される場合、用語「がん」または「腫瘍」は、前がん、ならびに悪性がんおよび腫瘍を含む。

【0133】

本明細書で使用される場合、「免疫細胞」とは、免疫系において機能する、例えば、感染および異物の作用物質に対して防御する、種々の細胞のいずれかを指す。実施形態では、この用語は、白血球、例えば、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球、および単球を含む。先天性白血球には、食細胞（例えば、マクロファージ、好中球、および樹状細胞）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、およびナチュラルキラー細胞が含まれる。先天性白血球は、接触を通じてより大きな病原体を攻撃するか、微生物を飲み込んで殺滅させることによって病原体を特定し、排除し、適応免疫応答の活性化のメディエーターである。適応免疫系の細胞は、リンパ球と呼ばれる特殊なタイプの白血球である。Ｂ細胞およびＴ細胞は、重要なタイプのリンパ球であり、骨髄の造血幹細胞に由来する。Ｂ細胞は、体液性免疫応答に関与し、Ｔ細胞は、細胞性免疫応答に関与する。用語「免疫細胞」は、免疫エフェクター細胞を含む。

【0134】

「免疫エフェクター細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、免疫応答、例えば、免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例は、限定されないが、Ｔ細胞、例えば、アルファ／ベータＴ細胞およびガンマ／デルタＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、および肥満細胞を含む。

【0135】

用語「エフェクター機能」または「エフェクター応答」は、細胞の特殊化された機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性、またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。

【0136】

本発明の組成物および方法は、特定の配列、またはそれに対して実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、特定の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％同一である、またはそれ以上同一である配列を有するポリペプチドおよび核酸を包含する。アミノ酸配列との関連で、用語「実質的に同一」が本明細書において使用され、第１および第２のアミノ酸配列が共通の構造ドメインおよび／または共通の機能活性を有し得るように、ｉ）第２のアミノ酸配列と同一であるか、あるいはｉｉ）第２アミノ酸配列における整列されたアミノ酸残基の保存的置換である、十分な数または最小限の数のアミノ酸残基を含有する第１アミノ酸を指す。例えば、共通の構造ドメインを含有するアミノ酸配列は、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する。

【0137】

ヌクレオチド配列との関連で、用語「実質的に同一」が本明細書において使用され、第１および第２ヌクレオチド配列が、共通の機能活性を有するポリペプチドをコードする、または共通のポリペプチド構造ドメインまたは共通のポリペプチド機能活性をコードするように、第２核酸配列におけるアラインされたヌクレオチドと同一である、十分な数または最小限の数のヌクレオチドを含有する第１核酸配列を指す。例えば、参照配列、例えば本明細書で提供される配列に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列。

【0138】

用語「バリアント」とは、参照アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、または実質的に同一のヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、バリアントは、機能的バリアントである。

【0139】

用語「機能的バリアント」とは、参照アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド、または実質的に同一のヌクレオチド配列によりコードされ、参照アミノ酸配列の１つまたは複数の活性化を有し得るポリペプチドを指す。

【0140】

配列間の相同性または配列同一性（これらの用語は本明細書において互換的に使用される）の計算は以下のように行われる。
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するため、最適な比較目的のために配列がアラインメントされる（例えば、最適アラインメントのために、第１および第２アミノ酸または核酸配列の１つまたは両方にギャップが導入され得、非相同配列は比較目的のために無視され得る）。好ましい実施形態では、比較目的のためにアラインされた参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、さらに好ましくは少なくとも５０％、６０％、なおさらに好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１配列の位置が、第２配列での対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、分子は、その位置にて同一である（本明細書で使用される場合、アミノ酸または核酸「同一性」は、アミノ酸または核酸「相同性」と等しい）。

【0141】

２つの配列間の同一性パーセントは、配列によって共有される同一位置の数の関数であり、２つの配列の最適アラインメントのために導入する必要がある、ギャップ数および各ギャップの長さが考慮に入れられる。

【0142】

配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックス、および１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップの重みおよび１、２、３、４、５、または６の長さの重みのいずれかを用いて、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて入手可能である）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（（１９７０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８巻：４４４～４５３ページ）アルゴリズムを用いて決定される。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて入手可能である）のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスおよび４０、５０、６０、７０、または８０のギャップの重みおよび１、２、３、４、５、または６の長さの重みを用いて決定される。特に好ましいセットのパラメーター（および別段の指定がない限り使用されるべきであるもの）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸張ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を有するＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアマトリックスである。

【0143】

２つのアミノ酸配列間またはヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０残基重み付け表、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を用いて、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９年）ＣＡＢＩＯＳ、４巻：１１～１７ページ）のアルゴリズムを使用して決定することができる。

【0144】

本明細書に記載される核酸およびタンパク質配列は、例えば、他のファミリーメンバーまたは関連配列を同定するために、公開データベースに対する検索を行うための「クエリー配列」として用いることができる。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５巻：４０３～１０ページのＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を用いて行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明の核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワードレングス＝１２を用いて行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワードレングス＝３を用いて行うことができる。比較目的のためのギャップドアラインメントを得るために、ギャップドＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５巻：３３８９～３４０２ページに記載されているように利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびギャップドＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照。

【0145】

本発明の分子は、それらの機能に実質的な影響を及ぼさない、さらなる保存的または非必須アミノ酸置換を有し得ることが理解される。
用語「アミノ酸」は、天然または合成のいずれであっても、アミノ官能性と酸官能性の両方を含み、天然に存在するアミノ酸のポリマーに含まれ得るすべての分子を包含することを意図する。例示的なアミノ酸には、天然に存在するアミノ酸；そのアナログ、誘導体および同族体；バリアント側鎖を有するアミノ酸アナログ；ならびに先述のいずれかのすべての立体異性体が含まれる。本明細書で使用される場合、用語「アミノ酸」は、ＤまたはＬ光学異性体とペプチド模倣体の両方を含む。

【0146】

「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。

【0147】

用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」（一本鎖の場合）は、本明細書において互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖状または分枝鎖状であり得て、修飾アミノ酸を含み得、非アミノ酸により割り込まれ得る。これらの用語はまた、修飾されているアミノ酸ポリマー；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作を包含する。ポリペプチドは、天然源から単離することができ、真核生物もしくは原核生物宿主からの組換え技術により産生することができ、または合成手法の産生物であり得る。

【0148】

用語「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、または「ポリヌクレオチド配列」、および「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用される。それらは、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、またはそれらのアナログのいずれかの長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖のいずれかであり得、一本鎖である場合、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログなどの修飾ヌクレオチドを含み得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって割り込まれ得る。ポリヌクレオチドは、重合後、例えば、標識成分とのコンジュゲーションによってさらに修飾され得る。核酸は、組換えポリヌクレオチド、またはゲノム、ｃＤＮＡ、天然に存在しないかもしくは非天然配列で別のポリヌクレオチドに連結されている半合成、または合成起源のポリヌクレオチドであり得る。

【0149】

用語「単離された」とは、本明細書で使用される場合、その元の環境または天然の環境（例えば、天然に存在する場合には自然環境）から取り出される材料を指す。例えば、生きている動物に存在する天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されないが、天然系の共存物質の一部または全部からヒトの介入によって分離された同一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが単離される。このようなポリヌクレオチドは、ベクターの一部であり得、および／またはこのようなポリヌクレオチドもしくはポリペプチドは、組成物の一部であり得、このようなベクターまたは組成物は、天然に見出される環境の一部ではないという点で依然として単離され得る。

【0150】

本発明の種々の態様を以下にさらに詳細に説明する。追加の定義は、明細書全体にわたって記載される。
ナチュラルキラー細胞エンゲージャー
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、抗体非依存性の方式で腫瘍およびウイルス感染細胞を認識および破壊する。ＮＫ細胞の調節は、ＮＫ細胞表面上の受容体を活性化および阻害することによって媒介される。活性化受容体の１つのファミリーは、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４およびＮＫｐ４６を含む天然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）である。ＮＣＲは、がん細胞上のヘパラン硫酸の認識によって腫瘍標的化を開始させる。ＮＫＧ２Ｄは、活性化キラー（ＮＫ）細胞において刺激性および共刺激性の両方の自然免疫応答を提供する受容体であり、細胞傷害活性に繋がる。ＤＮＡＭ１は、細胞間接着、リンパ球シグナル伝達、細胞傷害性ならびに細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）およびＮＫ細胞によって媒介されるリンホカイン分泌に関与する受容体である。ＤＡＰ１０（ＨＣＳＴとしても公知）は、リンパ球様および骨髄性細胞においてＫＬＲＫ１と会合して活性化受容体ＫＬＲＫ１－ＨＣＳＴを形成する膜貫通アダプタータンパク質であり、この受容体は、ＭＨＣクラスＩ鎖関連ＭＩＣＡおよびＭＩＣＢ、ならびにＵ（必要に応じてＬ１）６結合性タンパク質（ＵＬＢＰ）などの細胞表面リガンドを発現する標的細胞に対する細胞傷害性の誘発において大きな役割を果たし、ＫＬＲＫ１－ＨＣＳＴ受容体は、腫瘍に対する免疫サーベイランスにおいて役割を果たし、腫瘍細胞の細胞溶解のために要求され、実際に、ＫＬＲＫ１リガンドを発現しない黒色腫細胞は、ＮＫ細胞によって媒介される免疫サーベイランスを免れる。ＣＤ１６は、ＩｇＧのＦｃ領域に対する受容体であり、複合体化または凝集ＩｇＧ、そして単量体ＩｇＧにも結合し、それによって、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）およびファゴサイトーシスなどの他の抗体依存性応答を媒介する。

【0151】

本開示は、特に、ＮＫ細胞への結合および／またはＮＫ細胞の活性化を媒介する１つまたは複数のＮＫ細胞エンゲージャーを含有するように操作された抗体分子、例えば、多特異性（例えば、二、三、四特異性）または多機能性分子を提供する。したがって、一部の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ１、ＤＡＰ１０、ＣＤ１６（例えば、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、または両方）、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＮＫｐ８０、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４または２Ｂ４としても公知である）、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ７、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、またはＣＤ１６０に結合する（例えば、活性化する）抗原結合性ドメインまたはリガンドから選択される。

【0152】

一部の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメイン（例えば、ＮＫ細胞の表面上に存在する、例えば、発現するかまたは提示されるＮＫｐ３０）であり、表７～１０に開示される任意のＣＤＲアミノ酸配列、フレームワーク領域（ＦＷＲ）アミノ酸配列、または可変領域アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメイン（例えば、ＮＫ細胞の表面上に存在する、例えば、発現するかまたは提示されるＮＫｐ３０）であり、米国特許第６，９７９，５４６号、米国特許第９，４４７，１８５号、ＰＣＴ出願公開第２０１５／１２１３８３Ａ１号、ＰＣＴ出願公開第２０１６／１１０４６８Ａ１号、ＰＣＴ出願公開第２００４／０５６３９２Ａ１号、または米国出願公開第２００７０２３１３２２Ａ１号に開示される任意のＣＤＲアミノ酸配列、フレームワーク領域（ＦＷＲ）アミノ酸配列、または可変領域アミノ酸配列を含み、それらの配列は参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャー、例えば、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインの、ＮＫ細胞への結合は、ＮＫ細胞を活性化する。ＮＫｐ３０（例えば、ＮＫ細胞の表面上に存在する、例えば、発現するかまたは提示される、ＮＫｐ３０）に結合する抗原結合性ドメインは、ＮＫｐ３０、ＮＫ細胞、またはその両方を標的化すると言うことができる。

【0153】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインは、表７、表１８、または表８に開示される１つまたは複数のＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／またはＶＬＣＤＲ３）、またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインは、表７、表１８、または表８に開示される１つまたは複数のフレームワーク領域（例えば、ＶＨＦＷＲ１、ＶＨＦＷＲ２、ＶＨＦＷＲ３、ＶＨＦＷＲ４、ＶＬＦＷＲ１、ＶＬＦＷＲ２、ＶＬＦＷＲ３、および／またはＶＬＦＷＲ４）、またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインは、表９に開示されるＶＨおよび／もしくはＶＬ、またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、表９に開示されるＶＨドメインのいずれかは、表９に開示されるＶＬドメインのいずれかと対を形成して、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインを形成することができる。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインは、表１０に開示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。

【0154】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。

【0155】

一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、６００１、および７３１５のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、６００１、および６００２のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、６００８、および６００９のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、７３８５、および７３１５のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、７３１８、および６００９のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。

【0156】

一部の実施形態では、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３２６、７３２７、および７３２９のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号６０６３、６０６４、および７２９３のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号６０７０、６０７１、および６０７２のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号６０７０、６０６４、および７３２１のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。

【0157】

一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、６００１、７３１５、７３２６、７３２７、および７３２９のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、６００１、６００２、６０６３、６０６４、および７２９３のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、６００８、６００９、６０７０、６０７１、および６０７２のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、７３８５、７３１５、６０７０、６０６４、および７３２１のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７３１３、７３１８、６００９、６０７０、６０６４、および７３２１のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。

【0158】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７２９８もしくは７３００～７３０４からなる群から選択されるアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含み、および／またはＶＬは、配列番号７２９９もしくは７３０５～７３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号７３０２および７３０５のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号７３０２および７３０９のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。

【0159】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号６１２１または６１２３～６１２８からなる群から選択されるアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含み、および／またはＶＬは、配列番号７２９４または６１３７～６１４１からなる群から選択されるアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号６１２２または６１２９～６１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含み、および／またはＶＬは、配列番号６１３６または６１４２～６１４７からなる群から選択されるアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号７２９５および７２９６のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号７２９７および７２９６のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号６１２２および６１３６のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。

【0160】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインは、配列番号７３１０のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインは、配列番号７３１１のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の同一性を有する配列）を含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０に結合する抗原結合性ドメインは、配列番号６１８７、６１８８、６１８９または６１９０のアミノ酸配列（またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、もしくは９９％同一性を有する配列）を含む。

【0161】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０００の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００２のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０抗原結合性ドメインは、配列番号６０００のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６００１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６００２のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0162】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０６３の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号７２９３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０６３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６０６４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号７２９３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0163】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０００の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００２のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含むＶＨ、ならびに配列番号６０６３の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号７２９３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０抗原結合性ドメインは、配列番号６０００のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６００１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６００２のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６０６３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６０６４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号７２９３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0164】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６００７の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０抗原結合性ドメインは、配列番号６００７のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６００８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６００９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0165】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０７０の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０７２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば置換、付加、または欠失を有する配列）を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０７０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６０７１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号６０７２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0166】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６００７の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含むＶＨ、ならびに配列番号６０７０の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０７２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０抗原結合性ドメインは、配列番号６００７のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６００８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６００９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６０７０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６０７１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号６０７２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0167】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６００３の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６００４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６００５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６００６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0168】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０６６の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０６７のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号７２９２のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０６９のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0169】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６００３の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６００４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６００５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６００６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６０６６の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０６７のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号７２９２のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０６９のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0170】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６００３のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0171】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０６６のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６７のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号７２９２のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６０６９のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0172】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６００３のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしく１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６０６６のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６７のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号７２９２のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６０６９のＶＬＦＷＲ４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0173】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０１０の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０１１のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０１２のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０１３のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0174】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０７３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０７４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０７５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０７６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0175】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０１０の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０１１のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０１２のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０１３のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６０７３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０７４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０７５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０７６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0176】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０１０のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１１のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１２のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０１３のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0177】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０７３のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０７５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または、１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６０７６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0178】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０１０のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１１のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１２のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしく１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０１３のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６０７３のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０７５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６０７６のＶＬＦＷＲ４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0179】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０１４の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０１５のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０１６のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０１７のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0180】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０１４のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１５のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１６のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０１７のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0181】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０７７の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０７８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０７９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０８０のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0182】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０７７のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０７９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６０８０のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0183】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０１８の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０１９のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０２０のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０２１のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0184】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０１８のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１９のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２０のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０２１のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0185】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０８１の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０８２のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０８３のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０８４のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0186】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０８１のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０８２のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０８３のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６０８４のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0187】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０２２の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０２３のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０２４のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０２５のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0188】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０２２のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２３のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２４のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０２５のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0189】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０８５の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０８６のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０８７のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０８８のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0190】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０８５のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０８６のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０８７のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６０８８のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0191】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０２６の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０２７のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０２８のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０２９のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0192】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０２６のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２７のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０２８のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０２９のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0193】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０８９の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０９０のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０９１のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０９２のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0194】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０８９のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０９０のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０９１のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６０９２のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0195】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０３０の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０３２のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０３３のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０３４のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0196】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０３０のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０３２のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０３３のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０３４のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0197】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０９３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０９４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０９５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０９６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0198】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０９３のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０９４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０９５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６０９６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0199】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０３５の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０３６のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０３７のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０３８のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0200】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０３５のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０３６のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０３７のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０３８のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0201】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０３９の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０４０のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０４１のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０４２のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0202】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０３９のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０４０のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０４１のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０４２のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0203】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０９７の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０９８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０９９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６１００のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0204】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０９７のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０９８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６０９９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６１００のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0205】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０４３の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０４４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０４５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０４６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0206】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０４３のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０４４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０４５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０４６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0207】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６１０１の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１０２のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１０３のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６１０４のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0208】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６１０１のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６１０２のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１０３のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６１０４のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0209】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０４７の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０４８のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０４９のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０５０のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0210】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０４７のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０４８のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０４９のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０５０のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0211】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６１０５の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１０６のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１０７のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６１０８のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0212】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６１０５のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６１０６のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１０７のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６１０８のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0213】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０５１の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０５２のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０５３のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０５４のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0214】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０５１のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０５２のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０５３のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０５４のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0215】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６１０９の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１１０のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１１１のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６１１２のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0216】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６１０９のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６１１０のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１１のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６１１２のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0217】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０５５の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０５６のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０５７のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０５８のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0218】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０５５のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０５６のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０５７のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０５８のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0219】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６１１３の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１１４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１１５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６１１６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0220】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６１１３のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（または１、２、もしくは３個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６１１４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（または１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６１１６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0221】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０５９の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６０６０のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６０６１のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６０６２のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0222】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的とする抗原結合性ドメインは、配列番号６０５９のＶＨＦＷＲ１アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６０のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６１のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０６２のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＨを含む。

【0223】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１１７の軽鎖フレームワーク領域１（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列、配列番号６１１８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列、配列番号６１１９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列、および／または配列番号６１２０のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0224】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１１７のＶＬＦＷＲ１アミノ酸配列（もしくは１つ、２つ、もしくは３つだけの突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１８のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（もしくは１つだけの突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、配列番号６１１９のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（もしくは１つだけの突然変異、例えば、置換、付加、もしくは欠失を有する配列）、および／または配列番号６１２０のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0225】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１４８のアミノ酸配列（または配列番号６１４８に対して少なくとも約７７％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１４９のアミノ酸配列（または配列番号６１４９に対して少なくとも約７７％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５０のアミノ酸配列（または配列番号６１５０に対して少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１４９のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0226】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１４８のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６１５０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１４９のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６１５０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0227】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５１のアミノ酸配列（または配列番号６１５１に対して少なくとも約７７％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５２のアミノ酸配列（または配列番号６１５２に対して少なくとも約７７％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５３のアミノ酸配列（または配列番号６１５３に対して少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0228】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５１のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６１５３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインは、配列番号６１５２のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６１５３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0229】

一部の実施形態では、ＮＫｐ３０を標的化する抗原結合性ドメインはｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号：６１８７～６１９０から選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも約９３％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0230】

【表1-1】

【0231】

【表1-2】

【0232】

【表2-1】

【0233】

【表2-2】

【0234】

【表2-3】

【0235】

【表3-1】

【0236】

【表3-2】

【0237】

【表3-3】

【0238】

【表4-1】

【0239】

【表4-2】

【0240】

【表4-3】

【0241】

【表4-4】

【0242】

【表4-5】

【0243】

【表5-1】

【0244】

【表5-2】

【0245】

一部の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＮＫｐ４６（例えば、ＮＫ細胞の表面上に存在する、例えば、発現または提示されるＮＫｐ４６）に結合する抗原結合性ドメインであり、表１５において開示される任意のＣＤＲアミノ酸配列、フレームワーク領域（ＦＷＲ）アミノ酸配列、または可変領域アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＮＫ細胞へのＮＫ細胞エンゲージャー、例えば、ＮＫｐ４６に結合する抗原結合性ドメインの結合はＮＫ細胞を活性化させる。ＮＫｐ４６（例えば、ＮＫ細胞の表面上に存在する、例えば、発現または提示されるＮＫｐ４６）に結合する抗原結合性ドメインは、ＮＫｐ４６、ＮＫ細胞、または両方を標的化すると言及され得る。

【0246】

一部の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＮＫＧ２Ｄ（例えば、ＮＫ細胞の表面上に存在する、例えば、発現または提示されるＮＫＧ２Ｄ）に結合する抗原結合性ドメインであり、表１５において開示される任意のＣＤＲアミノ酸配列、フレームワーク領域（ＦＷＲ）アミノ酸配列、または可変領域アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＮＫ細胞へのＮＫ細胞エンゲージャー、例えば、ＮＫＧ２Ｄに結合する抗原結合性ドメインの結合はＮＫ細胞を活性化させる。ＮＫＧ２Ｄ（例えば、ＮＫ細胞の表面上に存在する、例えば、発現または提示されるＮＫＧ２Ｄ）に結合する抗原結合性ドメインは、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫ細胞、または両方を標的化すると言及され得る。

【0247】

一部の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＣＤ１６（例えば、ＮＫ細胞の表面上に存在する、例えば、発現または提示されるＣＤ１６）に結合する抗原結合性ドメインであり、表１５において開示される任意のＣＤＲアミノ酸配列、フレームワーク領域（ＦＷＲ）アミノ酸配列、または可変領域アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＮＫ細胞へのＮＫ細胞エンゲージャー、例えば、ＣＤ１６に結合する抗原結合性ドメインの結合はＮＫ細胞を活性化させる。ＣＤ１６（例えば、ＮＫ細胞の表面上に存在する、例えば、発現または提示されるＣＤ１６）に結合する抗原結合性ドメインは、ＣＤ１６、ＮＫ細胞、または両方を標的化すると言及され得る。

【0248】

【表6-1】

【0249】

【表6-2】

【0250】

一実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーはＮＫｐ３０のリガンドであり、例えば、Ｂ７－６であり、例えば、
ＤＬＫＶＥＭＭＡＧＧＴＱＩＴＰＬＮＤＮＶＴＩＦＣＮＩＦＹＳＱＰＬＮＩＴＳＭＧＩＴＷＦＷＫＳＬＴＦＤＫＥＶＫＶＦＥＦＦＧＤＨＱＥＡＦＲＰＧＡＩＶＳＰＷＲＬＫＳＧＤＡＳＬＲＬＰＧＩＱＬＥＥＡＧＥＹＲＣＥＶＶＶＴＰＬＫＡＱＧＴＶＱＬＥＶＶＡＳＰＡＳＲＬＬＬＤＱＶＧＭＫＥＮＥＤＫＹＭＣＥＳＳＧＦＹＰＥＡＩＮＩＴＷＥＫＱＴＱＫＦＰＨＰＩＥＩＳＥＤＶＩＴＧＰＴＩＫＮＭＤＧＴＦＮＶＴＳＣＬＫＬＮＳＳＱＥＤＰＧＴＶＹＱＣＶＶＲＨＡＳＬＨＴＰＬＲＳＮＦＴＬＴＡＡＲＨＳＬＳＥＴＥＫＴＤＮＦＳ（配列番号７２３３）のアミノ酸配列、その断片、またはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２３３のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0251】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ウイルスＨＡである、ＮＫｐ４４またはＮＫｐ４６のリガンドである。ウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）は、ウイルスの表面上にある糖タンパク質である。ＨＡタンパク質は、シアル酸糖部分を介してウイルスが細胞の膜に結合することを可能とし、これは細胞膜とのウイルス膜の融合に寄与する（例えば、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００１ Ｓｅｐ；３１（９）：２６８０～９ページ、「Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓ ｂｙ ＮＫｐ４４ ｂｕｔ ｎｏｔ ｂｙ ＮＫｐ３０」；およびＮａｔｕｒｅ ２００１ Ｆｅｂ ２２；４０９（６８２３）：１０５５～６０ページ、「Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓ ｏｎ ｖｉｒｕｓ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ＮＫｐ４６ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｌｙｓｉｓ ｂｙ ｈｕｍａｎ ＮＫ ｃｅｌｌｓ」（これらのそれぞれの内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）を参照）。

【0252】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、またはＵＬＢＰ１から選択されるＮＫＧ２Ｄのリガンドであり、例えば、
（ｉ）ＭＩＣＡは、
ＥＰＨＳＬＲＹＮＬＴＶＬＳＷＤＧＳＶＱＳＧＦＬＴＥＶＨＬＤＧＱＰＦＬＲＣＤＲＱＫＣＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＮＫＴＷＤＲＥＴＲＤＬＴＧＮＧＫＤＬＲＭＴＬＡＨＩＫＤＱＫＥＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＮＳＴＲＳＳＱＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＫＥＷＴＭＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＲＮＦＬＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＨＡＭＨＡＤＣＬＱＥＬＲＲＹＬＫＳＧＶＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷ（配列番号７２３４）のアミノ酸配列、その断片、もしくはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２３４のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列
を含み、
（ｉｉ）ＭＩＣＢは、
ＡＥＰＨＳＬＲＹＮＬＭＶＬＳＱＤＥＳＶＱＳＧＦＬＡＥＧＨＬＤＧＱＰＦＬＲＹＤＲＱＫＲＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＡＫＴＷＤＴＥＴＥＤＬＴＥＮＧＱＤＬＲＲＴＬＴＨＩＫＤＱＫＧＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＳＳＴＲＧＳＲＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＱＥＳＴＶＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＴＮＦＷＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＲＡＭＱＡＤＣＬＱＫＬＱＲＹＬＫＳＧＶＡＩＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＣＳＥＶＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＳＦＹＰＲＮＩＴＬＴＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＮＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＲＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＧＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＱＲＴＤ（配列番号７２３５）のアミノ酸配列、その断片、もしくはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２３５のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列
を含み、または
（ｉｉｉ）ＵＬＢＰ１は、
ＧＷＶＤＴＨＣＬＣＹＤＦＩＩＴＰＫＳＲＰＥＰＱＷＣＥＶＱＧＬＶＤＥＲＰＦＬＨＹＤＣＶＮＨＫＡＫＡＦＡＳＬＧＫＫＶＮＶＴＫＴＷＥＥＱＴＥＴＬＲＤＶＶＤＦＬＫＧＱＬＬＤＩＱＶＥＮＬＩＰＩＥＰＬＴＬＱＡＲＭＳＣＥＨＥＡＨＧＨＧＲＧＳＷＱＦＬＦＮＧＱＫＦＬＬＦＤＳＮＮＲＫＷＴＡＬＨＰＧＡＫＫＭＴＥＫＷＥＫＮＲＤＶＴＭＦＦＱＫＩＳＬＧＤＣＫＭＷＬＥＥＦＬＭＹＷＥＱＭＬＤＰＴＫＰＰＳＬＡＰＧ（配列番号７２３６）のアミノ酸配列、その断片、もしくはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２３６のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列
を含む。

【0253】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＮＥＣＴＩＮ２またはＮＥＣＬ５から選択されるＤＮＡＭ１のリガンドであり、例えば、
（ｉ）ＮＥＣＴＩＮ２は、
ＱＤＶＲＶＱＶＬＰＥＶＲＧＱＬＧＧＴＶＥＬＰＣＨＬＬＰＰＶＰＧＬＹＩＳＬＶＴＷＱＲＰＤＡＰＡＮＨＱＮＶＡＡＦＨＰＫＭＧＰＳＦＰＳＰＫＰＧＳＥＲＬＳＦＶＳＡＫＱＳＴＧＱＤＴＥＡＥＬＱＤＡＴＬＡＬＨＧＬＴＶＥＤＥＧＮＹＴＣＥＦＡＴＦＰＫＧＳＶＲＧＭＴＷＬＲＶＩＡＫＰＫＮＱＡＥＡＱＫＶＴＦＳＱＤＰＴＴＶＡＬＣＩＳＫＥＧＲＰＰＡＲＩＳＷＬＳＳＬＤＷＥＡＫＥＴＱＶＳＧＴＬＡＧＴＶＴＶＴＳＲＦＴＬＶＰＳＧＲＡＤＧＶＴＶＴＣＫＶＥＨＥＳＦＥＥＰＡＬＩＰＶＴＬＳＶＲＹＰＰＥＶＳＩＳＧＹＤＤＮＷＹＬＧＲＴＤＡＴＬＳＣＤＶＲＳＮＰＥＰＴＧＹＤＷＳＴＴＳＧＴＦＰＴＳＡＶＡＱＧＳＱＬＶＩＨＡＶＤＳＬＦＮＴＴＦＶＣＴＶＴＮＡＶＧＭＧＲＡＥＱＶＩＦＶＲＥＴＰＮＴＡＧＡＧＡＴＧＧ（配列番号７２３７）のアミノ酸配列、その断片、もしくはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２３７のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含み、または
（ｉｉ）ＮＥＣＬ５は、
ＷＰＰＰＧＴＧＤＶＶＶＱＡＰＴＱＶＰＧＦＬＧＤＳＶＴＬＰＣＹＬＱＶＰＮＭＥＶＴＨＶＳＱＬＴＷＡＲＨＧＥＳＧＳＭＡＶＦＨＱＴＱＧＰＳＹＳＥＳＫＲＬＥＦＶＡＡＲＬＧＡＥＬＲＮＡＳＬＲＭＦＧＬＲＶＥＤＥＧＮＹＴＣＬＦＶＴＦＰＱＧＳＲＳＶＤＩＷＬＲＶＬＡＫＰＱＮＴＡＥＶＱＫＶＱＬＴＧＥＰＶＰＭＡＲＣＶＳＴＧＧＲＰＰＡＱＩＴＷＨＳＤＬＧＧＭＰＮＴＳＱＶＰＧＦＬＳＧＴＶＴＶＴＳＬＷＩＬＶＰＳＳＱＶＤＧＫＮＶＴＣＫＶＥＨＥＳＦＥＫＰＱＬＬＴＶＮＬＴＶＹＹＰＰＥＶＳＩＳＧＹＤＮＮＷＹＬＧＱＮＥＡＴＬＴＣＤＡＲＳＮＰＥＰＴＧＹＮＷＳＴＴＭＧＰＬＰＰＦＡＶＡＱＧＡＱＬＬＩＲＰＶＤＫＰＩＮＴＴＬＩＣＮＶＴＮＡＬＧＡＲＱＡＥＬＴＶＱＶＫＥＧＰＰＳＥＨＳＧＩＳＲＮ（配列番号７２３８）のアミノ酸配列、その断片、もしくはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２３８のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0254】

さらに他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＮＫＧ２Ｄのアダプターである、ＤＡＰ１０のリガンドである（例えば、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． ２００５ Ｍａｙ ２４；１０２（２１）：７６４１～７６４６ページ；およびＢｌｏｏｄ、１５ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１１ Ｖｏｌｕｍｅ １１８、Ｎｕｍｂｅｒ １１（これらのそれぞれの全内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）を参照）。

【0255】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＣＤ１６ａ／ｂリガンドである、ＣＤ１６のリガンド、例えば、抗体Ｆｃ領域をさらに含むＣＤ１６ａ／ｂリガンドである（例えば、Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１３；４：７６を参照；これは、ＣＤ１６を通じてＮＫ細胞を誘発するために抗体がＦｃをどのように使用するのかを議論しており、その内容の全体は本明細書に組み込まれる）。

【0256】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＮＥＣＬ２である、ＣＲＴＡＭのリガンドであり、例えば、ＮＥＣＬ２は、アミノ酸配列：
ＱＮＬＦＴＫＤＶＴＶＩＥＧＥＶＡＴＩＳＣＱＶＮＫＳＤＤＳＶＩＱＬＬＮＰＮＲＱＴＩＹＦＲＤＦＲＰＬＫＤＳＲＦＱＬＬＮＦＳＳＳＥＬＫＶＳＬＴＮＶＳＩＳＤＥＧＲＹＦＣＱＬＹＴＤＰＰＱＥＳＹＴＴＩＴＶＬＶＰＰＲＮＬＭＩＤＩＱＫＤＴＡＶＥＧＥＥＩＥＶＮＣＴＡＭＡＳＫＰＡＴＴＩＲＷＦＫＧＮＴＥＬＫＧＫＳＥＶＥＥＷＳＤＭＹＴＶＴＳＱＬＭＬＫＶＨＫＥＤＤＧＶＰＶＩＣＱＶＥＨＰＡＶＴＧＮＬＱＴＱＲＹＬＥＶＱＹＫＰＱＶＨＩＱＭＴＹＰＬＱＧＬＴＲＥＧＤＡＬＥＬＴＣＥＡＩＧＫＰＱＰＶＭＶＴＷＶＲＶＤＤＥＭＰＱＨＡＶＬＳＧＰＮＬＦＩＮＮＬＮＫＴＤＮＧＴＹＲＣＥＡＳＮＩＶＧＫＡＨＳＤＹＭＬＹＶＹＤＰＰＴＴＩＰＰＰＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＩＬＴＩＩＴＤＳＲＡＧＥＥＧＳＩＲＡＶＤＨ（配列番号７２３９）、その断片、またはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２３９のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0257】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＣＤ７０である、ＣＤ２７のリガンドであり、例えば、ＣＤ７０は、アミノ酸配列：
ＱＲＦＡＱＡＱＱＱＬＰＬＥＳＬＧＷＤＶＡＥＬＱＬＮＨＴＧＰＱＱＤＰＲＬＹＷＱＧＧＰＡＬＧＲＳＦＬＨＧＰＥＬＤＫＧＱＬＲＩＨＲＤＧＩＹＭＶＨＩＱＶＴＬＡＩＣＳＳＴＴＡＳＲＨＨＰＴＴＬＡＶＧＩＣＳＰＡＳＲＳＩＳＬＬＲＬＳＦＨＱＧＣＴＩＡＳＱＲＬＴＰＬＡＲＧＤＴＬＣＴＮＬＴＧＴＬＬＰＳＲＮＴＤＥＴＦＦＧＶＱＷＶＲＰ（配列番号７２４０）、その断片、またはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２４０のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0258】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）である、ＰＳＧＬ１のリガンドであり、例えば、Ｌ－セレクチンは、アミノ酸配列：
ＷＴＹＨＹＳＥＫＰＭＮＷＱＲＡＲＲＦＣＲＤＮＹＴＤＬＶＡＩＱＮＫＡＥＩＥＹＬＥＫＴＬＰＦＳＲＳＹＹＷＩＧＩＲＫＩＧＧＩＷＴＷＶＧＴＮＫＳＬＴＥＥＡＥＮＷＧＤＧＥＰＮＮＫＫＮＫＥＤＣＶＥＩＹＩＫＲＮＫＤＡＧＫＷＮＤＤＡＣＨＫＬＫＡＡＬＣＹＴＡＳＣＱＰＷＳＣＳＧＨＧＥＣＶＥＩＩＮＮＹＴＣＮＣＤＶＧＹＹＧＰＱＣＱＦＶＩＱＣＥＰＬＥＡＰＥＬＧＴＭＤＣＴＨＰＬＧＮＦＳＦＳＳＱＣＡＦＳＣＳＥＧＴＮＬＴＧＩＥＥＴＴＣＧＰＦＧＮＷＳＳＰＥＰＴＣＱＶＩＱＣＥＰＬＳＡＰＤＬＧＩＭＮＣＳＨＰＬＡＳＦＳＦＴＳＡＣＴＦＩＣＳＥＧＴＥＬＩＧＫＫＫＴＩＣＥＳＳＧＩＷＳＮＰＳＰＩＣＱＫＬＤＫＳＦＳＭＩＫＥＧＤＹＮ（配列番号７２４１）、その断片、またはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２４１のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0259】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＮＥＣＬ５である、ＣＤ９６のリガンドであり、例えば、ＮＥＣＬ５は、アミノ酸配列：
ＷＰＰＰＧＴＧＤＶＶＶＱＡＰＴＱＶＰＧＦＬＧＤＳＶＴＬＰＣＹＬＱＶＰＮＭＥＶＴＨＶＳＱＬＴＷＡＲＨＧＥＳＧＳＭＡＶＦＨＱＴＱＧＰＳＹＳＥＳＫＲＬＥＦＶＡＡＲＬＧＡＥＬＲＮＡＳＬＲＭＦＧＬＲＶＥＤＥＧＮＹＴＣＬＦＶＴＦＰＱＧＳＲＳＶＤＩＷＬＲＶＬＡＫＰＱＮＴＡＥＶＱＫＶＱＬＴＧＥＰＶＰＭＡＲＣＶＳＴＧＧＲＰＰＡＱＩＴＷＨＳＤＬＧＧＭＰＮＴＳＱＶＰＧＦＬＳＧＴＶＴＶＴＳＬＷＩＬＶＰＳＳＱＶＤＧＫＮＶＴＣＫＶＥＨＥＳＦＥＫＰＱＬＬＴＶＮＬＴＶＹＹＰＰＥＶＳＩＳＧＹＤＮＮＷＹＬＧＱＮＥＡＴＬＴＣＤＡＲＳＮＰＥＰＴＧＹＮＷＳＴＴＭＧＰＬＰＰＦＡＶＡＱＧＡＱＬＬＩＲＰＶＤＫＰＩＮＴＴＬＩＣＮＶＴＮＡＬＧＡＲＱＡＥＬＴＶＱＶＫＥＧＰＰＳＥＨＳＧＩＳＲＮ（配列番号７２３８）、その断片、またはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２３８のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0260】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＣＤ７２である、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）のリガンドであり、例えば、ＣＤ７２は、アミノ酸配列：
ＲＹＬＱＶＳＱＱＬＱＱＴＮＲＶＬＥＶＴＮＳＳＬＲＱＱＬＲＬＫＩＴＱＬＧＱＳＡＥＤＬＱＧＳＲＲＥＬＡＱＳＱＥＡＬＱＶＥＱＲＡＨＱＡＡＥＧＱＬＱＡＣＱＡＤＲＱＫＴＫＥＴＬＱＳＥＥＱＱＲＲＡＬＥＱＫＬＳＮＭＥＮＲＬＫＰＦＦＴＣＧＳＡＤＴＣＣＰＳＧＷＩＭＨＱＫＳＣＦＹＩＳＬＴＳＫＮＷＱＥＳＱＫＱＣＥＴＬＳＳＫＬＡＴＦＳＥＩＹＰＱＳＨＳＹＹＦＬＮＳＬＬＰＮＧＧＳＧＮＳＹＷＴＧＬＳＳＮＫＤＷＫＬＴＤＤＴＱＲＴＲＴＹＡＱＳＳＫＣＮＫＶＨＫＴＷＳＷＷＴＬＥＳＥＳＣＲＳＳＬＰＹＩＣＥＭＴＡＦＲＦＰＤ（配列番号７２４２）、その断片、またはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２４２のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0261】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＣＬＥＣ２Ｂ（ＡＩＣＬ）である、ＮＫｐ８０のリガンドであり、例えば、ＣＬＥＣ２Ｂ（ＡＩＣＬ）は、アミノ酸配列：
ＫＬＴＲＤＳＱＳＬＣＰＹＤＷＩＧＦＱＮＫＣＹＹＦＳＫＥＥＧＤＷＮＳＳＫＹＮＣＳＴＱＨＡＤＬＴＩＩＤＮＩＥＥＭＮＦＬＲＲＹＫＣＳＳＤＨＷＩＧＬＫＭＡＫＮＲＴＧＱＷＶＤＧＡＴＦＴＫＳＦＧＭＲＧＳＥＧＣＡＹＬＳＤＤＧＡＡＴＡＲＣＹＴＥＲＫＷＩＣＲＫＲＩＨ（配列番号７２４３）、その断片、またはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２４３のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0262】

他の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーは、ＣＤ４８である、ＣＤ２４４のリガンドであり、例えば、ＣＤ４８は、アミノ酸配列：
ＱＧＨＬＶＨＭＴＶＶＳＧＳＮＶＴＬＮＩＳＥＳＬＰＥＮＹＫＱＬＴＷＦＹＴＦＤＱＫＩＶＥＷＤＳＲＫＳＫＹＦＥＳＫＦＫＧＲＶＲＬＤＰＱＳＧＡＬＹＩＳＫＶＱＫＥＤＮＳＴＹＩＭＲＶＬＫＫＴＧＮＥＱＥＷＫＩＫＬＱＶＬＤＰＶＰＫＰＶＩＫＩＥＫＩＥＤＭＤＤＮＣＹＬＫＬＳＣＶＩＰＧＥＳＶＮＹＴＷＹＧＤＫＲＰＦＰＫＥＬＱＮＳＶＬＥＴＴＬＭＰＨＮＹＳＲＣＹＴＣＱＶＳＮＳＶＳＳＫＮＧＴＶＣＬＳＰＰＣＴＬＡＲＳ（配列番号７２４４）、その断片、またはそれに対して実質的に同一の（例えば、それに対して９５％～９９．９％同一、もしくは配列番号７２４４のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５個、１０個もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失、もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含む。

【0263】

一部の実施形態では、ＮＫ細胞エンゲージャーはウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）であり、ＨＡは、インフルエンザウイルスの表面上に見出される糖タンパク質である。それは、上気道中の細胞または赤血球などの膜上にシアル酸を有する細胞へのウイルスの結合の原因となる。ＨＡは、少なくとも１８の異なる抗原を有する。これらのサブタイプは、Ｈ１～Ｈ１８と命名されている。ＮＣＲはウイルスタンパク質を認識することができる。ＮＫｐ４６は、インフルエンザのＨＡならびにセンダイウイルスおよびニューカッスル病ウイルスを含むパラミクソウイルスのＨＡ－ＮＡと相互作用できることが示されている。ＮＫｐ４６の他に、ＮＫｐ４４もまた、異なるインフルエンザサブタイプのＨＡと機能的に相互作用することができる。

【0264】

抗体分子
ある実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子は、単一特異性抗体分子であり、ＮＫｐ３０上の単一のエピトープに結合する。例えば、単一特異性抗体分子は、それぞれが同じエピトープに結合する複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を有する。

【0265】

別の実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子は、多特異性または多機能性抗体分子であり、例えば、それは複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列のうちの第１のものは第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列のうちの第２のものは第２のエピトープに対する結合特異性を有する。一実施形態では、第１および第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１および第２のエピトープはオーバーラップする。一実施形態では、第１および第２のエピトープはオーバーラップしない。一実施形態では、第１および第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。一実施形態では、多特異性抗体分子は、第３、第４または第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。一実施形態では、多特異性抗体分子は、二特異性抗体分子、三特異性抗体分子、または四特異性抗体分子である。

【0266】

一実施形態では、多特異性抗体分子は二特異性抗体分子である。二特異性抗体は、２つだけの抗原に対して特異性を有する。二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列および第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列により特徴付けられる。一実施形態では、第１および第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１および第２のエピトープはオーバーラップする。一実施形態では、第１および第２のエピトープはオーバーラップしない。一実施形態では、第１および第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。一実施形態では、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列ならびに第２のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を含む。一実施形態では、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体および第２のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体を含む。一実施形態では、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体、またはその断片、および第２のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体、またはその断片を含む。一実施形態では、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖもしくはＦａｂ、またはその断片、および第２のエピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖもしくはＦａｂ、またはその断片を含む。

【0267】

一実施形態では、抗体分子は、ダイアボディ、および一本鎖分子の他に、抗体の抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）を含む。例えば、抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列（本明細書でＶＨと略記される）、および軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列（本明細書でＶＬと略記される）を含むことができる。一実施形態では、抗体分子は、重鎖および軽鎖を含むかまたはからなる（本明細書で半抗体と称される。別の例では、抗体分子は、２つの重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列および２つの軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列を含み、それによって、２つの抗原結合性部位、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、単一可変ドメイン抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価および二特異性）、ならびにキメラ（例えば、ヒト化）抗体を形成し、これらは全長抗体の修飾によって産生されるか、または組換えＤＮＡ技術を使用してｄｅ ｎｏｖｏで合成されるものであってもよい。これらの機能的抗体断片は、それらの各々の抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持する。抗体および抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥが挙げられるがそれに限定されない抗体の任意のクラスから、ならびに抗体の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）からのものであり得る。抗体分子の調製物は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体分子はまた、ヒト、ヒト化、ＣＤＲグラフト化、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで生成された抗体であり得る。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有し得る。抗体はまた、例えば、カッパまたはラムダから選択される軽鎖を有し得る。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書で「抗体」という用語と交換可能に使用される。

【0268】

抗体分子の抗原結合性断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる、Ｆｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなる、Ｆｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなる、ダイアボディ（ｄＡｂ）断片、（ｖｉ）ラクダまたはラクダ化可変ドメイン、（ｖｉｉ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、例えば、Ｂｉｒｄら、（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３～４２６ページ；およびＨｕｓｔｏｎら、（１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９～５８８３ページを参照）、（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体が挙げられる。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、インタクトな抗体と同じ方式で有用性についてスクリーニングされる。

【0269】

抗体分子としては、インタクトな分子の他に、その機能的断片が挙げられる。抗体分子の定常領域は、抗体の特性を修飾するため（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つまたは複数を増加または減少させるため）に変更、例えば、突然変異され得る。

【0270】

抗体分子はまた単一ドメイン抗体であり得る。単一ドメイン抗体は、その相補性（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）決定領域が単一ドメインポリペプチドの部分である抗体を含むことができる。例としては、重鎖抗体、軽鎖を天然に欠いている抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体および抗体に由来するもの以外の単一ドメインスキャフォールドが挙げられるがそれに限定されない。単一ドメイン抗体は、当該技術分野における任意のもの、または任意の将来的な単一ドメイン抗体であってもよい。単一ドメイン抗体は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、魚、サメ、ヤギ、ウサギ、およびウシが挙げられるがそれに限定されない任意の種に由来してもよい。本発明の別の態様によれば、単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠いている重鎖抗体として公知の天然に存在する単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体は、例えば、ＷＯ９４０４６７８に開示されている。明確性の理由から、軽鎖を天然に欠いている重鎖抗体に由来するこの可変ドメインは、４鎖免疫グロブリンの従来のＶＨからそれを区別するためにＶＨＨまたはナノボディとして本明細書で知られる。そのようなＶＨＨ分子は、ラクダ科の種、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびグアナコにおいて産生された抗体に由来することができる。ラクダ科以外の他の種が、軽鎖を天然に欠いている重鎖抗体を産生することがあり、そのようなＶＨＨは本発明の範囲内である。

【0271】

ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲまたはＦＷ）と称されるより保存された領域が差し挟まれた、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに分割することができる。

【0272】

フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、多数の方法によって精密に定義されている（Ｋａｂａｔ， Ｅ． Ａ．ら、（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ９１－３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ， Ｃ．ら、（１９８７） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１～９１７ページ；およびＯｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されるＡｂＭの定義を参照。一般に、例えば、「Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ」、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌ（Ｄｕｅｂｅｌ， Ｓ．およびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ， Ｒ．編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照）。

【0273】

「相補性決定領域」、および「ＣＤＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。一般に、各重鎖可変領域中に３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）および各軽鎖可変領域中に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。

【0274】

所与のＣＤＲの精密なアミノ酸配列の境界は、Ｋａｂａｔら、（１９９１）、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、（１９９７） ＪＭＢ ２７３、９２７～９４８ページ（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）に記載のものを含む、多数の公知のスキームのいずれかを使用して決定することができる。本明細書で使用される場合、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号スキームに従って定義されるＣＤＲは、「超可変ループ」と称されることもある。

【0275】

例えば、Ｋａｂａｔの下で、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、３１～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、および９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と番号付けされ、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、および８９～９７（ＬＣＤＲ３）と番号付けされる。Ｃｈｏｔｈｉａの下で、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸は、２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）、および９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と番号付けされ、ＶＬ中のアミノ酸残基は、２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）、および９１～９６（ＬＣＤＲ３）と番号付けされる。

【0276】

各ＶＨおよびＶＬは、典型的には、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端へと並んだ３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。

【0277】

抗体分子は、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。
「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、本明細書で使用される場合、単一の分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を表し示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によって、またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組換え法）によって作製することができる。

【0278】

抗体は、組換えによって産生することができ、例えば、ファージディスプレイまたはコンビナトリアル法によって産生することができる。
抗体を生成するためのファージディスプレイおよびコンビナトリアル法は、当該技術分野において公知である（例えば、Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら、国際公開ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら、国際公開ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒら、国際公開ＷＯ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄら、国際公開ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら、国際公開ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、国際公開ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄら、国際公開ＷＯ９２／０９６９０；Ｌａｄｎｅｒら、国際公開ＷＯ９０／０２８０９；Ｆｕｃｈｓら、（１９９１） Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７０～１３７２ページ；Ｈａｙら、（１９９２） Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３：８１～８５ページ；Ｈｕｓｅら、（１９８９） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５～１２８１ページ；Ｇｒｉｆｆｔｈｓら、（１９９３） ＥＭＢＯ Ｊ １２：７２５～７３４ページ；Ｈａｗｋｉｎｓら、（１９９２） Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２６：８８９～８９６ページ；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、（１９９１） Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４～６２８ページ；Ｇｒａｍら、（１９９２） ＰＮＡＳ ８９：３５７６～３５８０ページ；Ｇａｒｒａｄら、（１９９１） Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７３～１３７７ページ；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、（１９９１） Ｎｕｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９：４１３３～４１３７ページ；およびＢａｒｂａｓら、（１９９１） ＰＮＡＳ ８８：７９７８～７９８２ページ（これらのすべての内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）に記載される通りである）。

【0279】

一実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体（例えば、ヒト免疫グロブリン配列からの抗体を産生するように遺伝子操作されたマウスにおいて作製される抗体）、または非ヒト抗体、例えば、齧歯動物（マウスもしくはラット）、ヤギ、霊長動物（例えば、サル）、ラクダ抗体である。好ましくは、非ヒト抗体は齧歯動物（マウスまたはラット抗体）である。齧歯動物抗体を産生する方法は当該技術分野において公知である。

【0280】

ヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫グロブリン遺伝子を持つトランスジェニックマウスを使用して生成することができる。目的の抗原を用いて免疫化されたこれらのトランスジェニックマウスからの脾臓細胞を使用して、ヒトタンパク質からのエピトープに対して特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマが産生される（例えば、Ｗｏｏｄら、国際出願ＷＯ９１／００９０６、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら、ＰＣＴ国際公開ＷＯ９１／１０７４１；Ｌｏｎｂｅｒｇら、国際出願ＷＯ９２／０３９１８；Ｋａｙら、国際出願９２／０３９１７；Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ．ら、１９９４ Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６～８５９ページ；Ｇｒｅｅｎ， Ｌ．Ｌ．ら、１９９４ Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ． ７：１３～２１ページ；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓ．Ｌ．ら、１９９４ Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１：６８５１～６８５５ページ；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら、１９９３ Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：３３～４０ページ；Ｔｕａｉｌｌｏｎら、１９９３ ＰＮＡＳ ９０：３７２０～３７２４ページ；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら、１９９１ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１：１３２３～１３２６ページを参照）。

【0281】

抗体分子は、可変領域、またはその部分、例えば、ＣＤＲが、非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスにおいて生成されたものであり得る。キメラ、ＣＤＲグラフト化、およびヒト化抗体は、本発明の範囲内である。非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスにおいて生成され、次に、ヒトにおける抗原性を減少させるために、例えば、可変フレームワークまたは定常領域において修飾された抗体分子は、本発明の範囲内である。

【0282】

「有効ヒト」タンパク質は、中和抗体応答、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を実質的に誘起しないタンパク質である。ＨＡＭＡは、多数の状況において、例えば、例えば慢性または再発性の疾患状態の処置において、抗体分子が繰り返し投与される場合に、問題となり得る。ＨＡＭＡ応答は、血清からの抗体クリアランスの増加（例えば、Ｓａｌｅｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３２：１８０～１９０ページ（１９９０）を参照）のため、そしてまた潜在的なアレルギー性反応（例えば、ＬｏＢｕｇｌｉｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、５：５１１７～５１２３ページ（１９８６）を参照）のため、繰返しの抗体投与を潜在的に有効でないものとさせることがある。

【0283】

キメラ抗体は、当該技術分野において公知の組換えＤＮＡ技術によって産生することができる（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａら、欧州特許出願第１８４，１８７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．、欧州特許出願第１７１，４９６号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願第１７３，４９４号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、国際出願ＷＯ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許出願第１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒら、（１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１～１０４３ページ）；Ｌｉｕら、（１９８７） ＰＮＡＳ ８４：３４３９～３４４３ページ；Ｌｉｕら、１９８７、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３９：３５２１～３５２６ページ；Ｓｕｎら、（１９８７） ＰＮＡＳ ８４：２１４～２１８ページ；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、１９８７、Ｃａｎｃ． Ｒｅｓ． ４７：９９９～１００５ページ；Ｗｏｏｄら、（１９８５） Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６～４４９ページ；およびＳｈａｗら、１９８８、Ｊ． Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． ８０：１５５３～１５５９ページを参照）。

【0284】

ヒト化またはＣＤＲグラフト化抗体は、ドナーＣＤＲで置き換えられた（重およびまたは軽免疫グロブリン（ｉｍｍｕｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）鎖のうちの）少なくとも１つまたは２つであるが一般に３つすべてのレシピエントＣＤＲを有する。抗体は、非ヒトＣＤＲの少なくとも部分で置き換えられていてもよく、またはＣＤＲの一部のみが非ヒトＣＤＲで置き換えられていてもよい。抗原への結合のために要求されるＣＤＲの数を置き換えることのみが必要である。好ましくは、ドナーは、齧歯動物抗体、例えば、ラットまたはマウス抗体であり、レシピエントは、ヒトフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークである。典型的には、ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供する免疫グロブリンは「アクセプター」と呼ばれる。一実施形態では、ドナー免疫グロブリンは非ヒト（例えば、齧歯動物）である。アクセプターフレームワークは、天然に存在する（例えば、ヒト）フレームワークもしくはコンセンサスフレームワーク、またはそれに対して約８５％もしくはより高い、好ましくは、９０％、９５％、９９％もしくはそれ以上同一である配列である。

【0285】

本明細書で使用される場合、「コンセンサス配列」という用語は、関連配列のファミリーにおいて最も頻繁に生じるアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ １９８７）を参照。タンパク質のファミリーにおいて、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリーにおいてその位置において最も頻繁に生じるアミノ酸によって占有される。２つのアミノ酸が等しく頻繁に生じる場合、いずれかをコンセンサス配列に含めることができる。「コンセンサスフレームワーク」は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。

【0286】

抗体分子は、当該技術分野において公知の方法によってヒト化させることができる（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓ． Ｌ．、１９８５、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２～１２０７ページ、Ｏｉら、１９８６、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４、ならびにＱｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号および米国特許第５，６９３，７６２号（これらのすべての内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）を参照）。

【0287】

ヒト化またはＣＤＲグラフト化抗体分子は、ＣＤＲグラフト化またはＣＤＲ置換によって産生することができ、それにおいて免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、またはすべてのＣＤＲを置き換えることができる。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら、１９８６ Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２～５２５ページ；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒら、１９８８ Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４１：４０５３～４０６０ページ；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号（これらのすべての内容はこれにより明示的に参照により本明細書に組み込まれる）を参照。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために使用され得るＣＤＲグラフト化方法を記載する（１９８７年３月２６日に出願された英国特許出願第２１８８６３８Ａ号；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号）（その内容は明示的に参照により本明細書に組み込まれる）。

【0288】

具体的なアミノ酸が置換、欠失または付加されたヒト化抗体分子もまた本発明の範囲である。ドナーからのアミノ酸を選択する基準は、米国特許第５，５８５，０８９号、例えば、米国特許第５，５８５，０８９号の第１２～１６欄、例えば、米国特許第５，５８５，０８９号の第１２～１６欄に記載されている（その内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）。抗体をヒト化する他の技術は、１９９２年１２月２３日に公開されたＰａｄｌａｎら、ＥＰ５１９５９６Ａ１に記載されている。

【0289】

抗体分子は一本鎖抗体であり得る。一本鎖抗体（ｓｃＦＶ）は操作されていてもよい（例えば、Ｃｏｌｃｈｅｒ， Ｄ．ら、（１９９９） Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８８０：２６３～８０ページ；およびＲｅｉｔｅｒ， Ｙ．、（１９９６） Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２：２４５～５２ページを参照）。一本鎖抗体は、二量体化または多量体化して、同じ標的タンパク質の異なるエピトープに対して特異性を有する多価抗体を生成することができる。

【0290】

さらに他の実施形態では、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥの重鎖定常領域から選択される、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域を有する。別の実施形態では、抗体分子は、例えば、カッパまたはラムダの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。定常領域は、抗体の特性を修飾するため（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、および／または補体機能のうちの１つまたは複数を増加または減少させるため）に変更、例えば、突然変異され得る。一実施形態では、抗体は、エフェクター機能を有し、かつ補体を固定することができる。他の実施形態では、抗体は、エフェクター細胞をリクルートせず、かつ補体を固定しない。別の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体に結合する低減した能力を有し、または該能力を有しない。例えば、それは、Ｆｃ受容体への結合をサポートしないアイソタイプまたはサブタイプ、断片または他の突然変異体であり、例えば、それは、突然変異誘発されたＦｃ受容体結合性領域を有し、またはそれを欠失している。

【0291】

抗体定常領域を変更する方法は当該技術分野において公知である。変更された機能、例えば、エフェクターリガンド、例えば、細胞上のＦｃＲ、または補体のＣ１成分に対する変更された親和性を有する抗体は、抗体の定常部分中の少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基で置き換えることによって産生することができる（例えば、ＥＰ３８８，１５１Ａ１、米国特許第５，６２４，８２１号および米国特許第５，６４８，２６０号（これらのすべての内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）を参照）。マウス、または他の種の免疫グロブリンに応用された場合にこれらの機能を低減または排除する類似の種類の変更が記載され得る。

【0292】

抗体分子は、誘導体化または別の機能分子（例えば、別のペプチドもしくはタンパク質）に連結させることができる。本明細書で使用される場合、「誘導体化」された抗体分子は、修飾された抗体分子である。誘導体化の方法としては、蛍光部分、放射性ヌクレオチド、毒素、酵素または親和性リガンド、例えば、ビオチンの付加が挙げられるがそれに限定されない。よって、本発明の抗体分子は、免疫接着分子を含む、本明細書に記載の抗体の誘導体化および他に修飾された形態を含むことが意図される。例えば、抗体分子は、１つまたは複数の他の分子実体、例えば、別の抗体（例えば、二特異性抗体もしくはダイアボディ）、検出可能な剤、細胞傷害剤、医薬剤、および／または抗体もしくは抗体部分の別の分子（例えば、ストレプトアビジンコア領域もしくはポリヒスチジンタグ）との会合を媒介することができるタンパク質もしくはペプチドに（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的会合またはその他によって）機能的に連結させることができる。

【0293】

１つの種類の誘導体化された抗体分子は、（例えば、二特異性抗体を作出するために、同じ種類または異なる種類の）２つまたはより多くの抗体を架橋することによって産生される。好適なクロスリンカーとしては、適切なスペーサー（例えば、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）またはホモ二官能性（例えば、スベリン酸ジサクシンイミジル）によって分離された２つの別個に反応性の基を有するヘテロ二官能性のものが挙げられる。そのようなリンカーは、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌから入手可能である。

【0294】

多特異性または多機能性抗体分子
本明細書で定義される多特異性および多機能性分子の例示的な構造は、全体を通じて記載されている。例示的な構造は、Ｗｅｉｄｌｅ Ｕら、（２０１３） Ｔｈｅ Ｉｎｔｒｉｇｕｉｎｇ Ｏｐｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｏｒｍａｔｓ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ． Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ＆ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １０： １～１８ページ（２０１３）；およびＳｐｉｅｓｓ Ｃら、（２０１５） Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７： ９５～１０６ページ（これらのそれぞれの全内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）にさらに記載されている。

【0295】

実施形態では、多特異性抗体分子は、異なる部位が異なる抗原に特異的である１つより多くの抗原結合性部位を含むことができる。実施形態では、多特異性抗体分子は、同じ抗原上の１つより多く（例えば、２つまたはより多く）のエピトープに結合することができる。実施形態では、多特異性抗体分子は、標的細胞（例えば、がん細胞）に特異的な抗原結合性部位、および免疫エフェクター細胞に特異的な異なる抗原結合性部位を含む。一実施形態では、多特異性抗体分子は二特異性抗体分子である。二特異性抗体分子は、５つの異なる構造群：（ｉ）二特異性免疫グロブリンＧ（ＢｓＩｇＧ）、（ｉｉ）追加の抗原結合性部分を付加されたＩｇＧ、（ｉｉｉ）二特異性抗体断片、（ｉｖ）二特異性融合タンパク質、および（ｖ）二特異性抗体コンジュゲートに分類することができる。

【0296】

ＢｓＩｇＧは、各抗原について一価のフォーマットである。例示的なＢｓＩｇＧフォーマットとしては、ｃｒｏｓｓＭａｂ、ＤＡＦ（ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ）、ＤＡＦ（ｆｏｕｒ－ｉｎ－ｏｎｅ）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎ－ｈｏｌｅｓ）共通ＬＣ、ノブ・イン・ホールアセンブリー、電荷対、Ｆａｂアーム交換、ＳＥＥＤボディ、ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ－Ｙ、Ｆｃａｂ、κλボディ、直交Ｆａｂが挙げられるがそれに限定されない。Ｓｐｉｅｓｓら、Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６７（２０１５）：９５～１０６ページを参照。例示的なＢｓＩｇＧとしては、抗ＣＤ３アームおよび抗ＥｐＣＡＭアームを含有するカツマキソマブ（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ、Ｎｅｏｐｈａｒｍ）、ならびにＣＤ３およびＨＥＲ２を標的化するエルツマキソマブ（Ｎｅｏｖｉｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）が挙げられる。一部の実施形態では、ＢｓＩｇＧは、ヘテロ二量体化のために操作された重鎖を含む。例えば、重鎖は、「ノブ・イントゥー・ホール」（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）戦略、ＳＥＥＤプラットフォーム、（例えば、κλボディ中の）共通重鎖、およびヘテロ二量体Ｆｃ領域の使用を使用してヘテロ二量体化のために操作することができる。Ｓｐｉｅｓｓら、Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６７（２０１５）：９５～１０６ページを参照。ＢｓＩｇＧにおけるホモ二量体の重鎖対合を回避するために使用されてきた戦略としては、ノブ・イン・ホール、デュオボディ（ｄｕｏｂｏｄｙ）、アジメトリック（ａｚｙｍｅｔｒｉｃ）、電荷対、ＨＡ－ＴＦ、ＳＥＥＤボディ、および差次的なプロテインＡ親和性が挙げられる。同文献を参照。ＢｓＩｇＧは、異なる宿主細胞中での成分抗体の別々の発現およびその後の精製／ＢｓＩｇＧへのアセンブリーによって産生することができる。ＢｓＩｇＧはまた、単一の宿主細胞中での成分抗体の発現によって産生することができる。ＢｓＩｇＧは、例えば、プロテインＡおよび逐次的ｐＨ溶出を使用する、親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができる。

【0297】

追加の抗原結合性部分を付加されたＩｇＧは、二特異性抗体分子の別のフォーマットである。例えば、単一特異性ＩｇＧは、例えば、重鎖または軽鎖のいずれかのＮまたはＣ末端において、追加の抗原結合性単位を単一特異性ＩｇＧに付加することによって二特異性を有するように操作することができる。例示的な追加の抗原結合性単位としては、単一ドメイン抗体（例えば、可変重鎖または可変軽鎖）、操作されたタンパク質スキャフォールド、および対合した抗体可変ドメイン（例えば、単鎖可変断片または可変断片）が挙げられる。同文献を参照。付加されたＩｇＧフォーマットの例としては、二重可変ドメインＩｇＧ（ＤＶＤ－Ｉｇ）、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、ザイボディ（ｚｙｂｏｄｙ）、およびＤＶＩ－ＩｇＧ（４－ｉｎ－１）が挙げられる。Ｓｐｉｅｓｓら、Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６７（２０１５）：９５～１０６ページを参照。ＩｇＧ－ｓｃＦｖの例は、ＩＧＦ－１ＲおよびＨＥＲ３に結合するＭＭ－１４１（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）である。ＤＶＤ－Ｉｇの例としては、ＩＬ－１αおよびＩＬ－１βに結合するＡＢＴ－９８１（ＡｂｂＶｉｅ）、ならびにＴＮＦおよびＩＬ－１７Ａに結合するＡＢＴ－１２２（ＡｂｂＶｉｅ）が挙げられる。

【0298】

二特異性抗体断片（ＢｓＡｂ）は、抗体定常ドメインの一部またはすべてを欠いた二特異性抗体分子のフォーマットである。例えば、一部のＢｓＡｂはＦｃ領域を欠いている。実施形態では、二特異性抗体断片は、単一の宿主細胞中でのＢｓＡｂの効率的な発現を許容するペプチドリンカーによって接続された重鎖および軽鎖領域を含む。例示的な二特異性抗体断片としては、ナノボディ、ナノボディ－ＨＡＳ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ－ＣＨ３、ダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃ、およびイントラボディが挙げられるがそれに限定されない。同文献を参照。例えば、ＢｉＴＥフォーマットはタンデムｓｃＦｖｓを含み、成分ｓｃＦｖｓは、Ｔ細胞上のＣＤ３、およびがん細胞上の表面抗原に結合する。

【0299】

二特異性融合タンパク質としては、例えば、追加の特異性および／または機能性を加えるために、他のタンパク質に連結された抗体断片が挙げられる。二特異性融合タンパク質の例は、ＨＬＡ提示ペプチドを認識する親和性成熟したＴ細胞受容体に連結された抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含むｉｍｍＴＡＣである。実施形態では、より高い価数を有する二特異性抗体分子を生成するためにドック－アンド－ロック（ｄｏｃｋ－ａｎｄ－ｌｏｃｋ）（ＤＮＬ）法を使用することができる。また、アルブミン結合性タンパク質またはヒト血清アルブミンへの融合は、抗体断片の血清半減期を延長させることができる。同文献を参照。

【0300】

実施形態では、ＢｓＡｂ分子を作出するために化学的コンジュゲーション、例えば、抗体および／または抗体断片の化学的コンジュゲーションを使用することができる。同文献を参照。例示的な二特異性抗体コンジュゲートとしては、ＣｏｖＸボディフォーマットが挙げられ、該フォーマットでは、低分子量薬物が、各Ｆａｂアームまたは抗体もしくはその断片中の単一の反応性リシンに部位特異的にコンジュゲートしている。実施形態では、コンジュゲーションは、低分子量薬物の血清半減期を向上させる。例示的なＣｏｖＸボディは、ＶＥＧＦまたはＡｎｇ２のいずれかを阻害する２つの短いペプチドにコンジュゲートした抗体を含むＣＶＸ－２４１（ＮＣＴ０１００４８２２）である。同文献を参照。

【0301】

抗体分子は、例えば、宿主系中での少なくとも１つまたは複数の成分の、組換え発現によって産生することができる。例示的な宿主系としては、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞、または昆虫細胞、例えば、ＳＦ９もしくはＳ２細胞）および原核細胞（例えば、Ｅ． ｃｏｌｉ）が挙げられる。二特異性抗体分子は、異なる宿主細胞中での成分の別々の発現およびその後の精製／アセンブリーによって産生することができる。代替的に、抗体分子は、単一の宿主細胞中での成分の発現によって産生することができる。二特異性抗体分子の精製は、例えば、プロテインＡおよび逐次的ｐＨ溶出を使用する、親和性クロマトグラフィーなどの、様々な方法によって行うことができる。他の実施形態では、親和性タグ、例えば、ヒスチジン含有タグ、ｍｙｃタグ、またはストレプトアビジンタグを精製のために使用することができる。

【0302】

ＣＤＲグラフト化スキャフォールド
実施形態では、抗体分子は、ＣＤＲグラフト化スキャフォールドドメインである。実施形態では、スキャフォールドドメインは、フィブロネクチンドメイン、例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインに基づく。フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）ドメインの全体的なフォールドは、最小の機能的抗体断片、抗体重鎖の可変ドメインのそれに密接に関係する。Ｆｎ３の末端には３つのループがあり、ＢＣ、ＤＥおよびＦＧループの位置は、抗体のＶＨドメインのＣＤＲ１、２および３のそれにおおよそ対応する。Ｆｎ３はジスルフィド結合を有さず、したがって、Ｆｎ３は、抗体およびそれらの断片とは異なり、還元条件下で安定である（例えば、ＷＯ９８／５６９１５、ＷＯ０１／６４９４２、ＷＯ００／３４７８４を参照）。Ｆｎ３ドメインは、例えば、本明細書に記載の抗原／マーカー／細胞に結合するドメインを選択するために、（例えば、本明細書に記載のＣＤＲまたは超可変ループを使用して）修飾または変更することができる。

【0303】

実施形態では、スキャフォールドドメイン、例えば、フォールディングしたドメインは、抗体、例えば、モノクローナル抗体の重鎖可変ドメインから３つのベータ鎖を欠失させることにより作出される「ミニボディ」スキャフォールドに基づく（例えば、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏら、１９９４、Ｊ Ｍｏｌ． Ｒｅｃｏｇｎｉｔ． ７：９、およびＭａｒｔｉｎら、１９９４、ＥＭＢＯ Ｊ． １３：５３０３～５３０９ページを参照）。「ミニボディ」は、２つの超可変ループを提示するために使用することができる。実施形態では、スキャフォールドドメインは、Ｖ様ドメイン（例えば、Ｃｏｉａら、ＷＯ９９／４５１１０を参照）、または２つのジスルフィド結合によって一緒に保持された７４残基の６鎖ベータシートサンドイッチであるテンダミスタチン（ｔｅｎｄａｍｉｓｔａｔｉｎ）に由来するドメインである（例えば、ＭｃＣｏｎｎｅｌｌおよびＨｏｅｓｓ、１９９５、Ｊ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２５０：４６０を参照）。例えば、テンダミスタチンのループは、例えば、本明細書に記載のマーカー／抗原／細胞に結合するドメインを選択するために、（例えば、ＣＤＲまたは超可変ループを使用して）修飾または変更することができる。別の例示的なスキャフォールドドメインは、ＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインに由来するベータ－サンドイッチ構造である（例えば、ＷＯ００／６００７０を参照）。

【0304】

他の例示的なスキャフォールドドメインとしては、Ｔ細胞受容体、ＭＨＣタンパク質、細胞外ドメイン（例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型リピート、ＥＧＦリピート）、プロテアーゼ阻害剤（例えば、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、エコチン、およびＢＰＴＩなど）、ＴＰＲリピート、トリフォイル（ｔｒｉｆｏｉｌ）構造、ジンクフィンガードメイン、ＤＮＡ結合性タンパク質、特に、単量体ＤＮＡ結合性タンパク質、ＲＮＡ結合性タンパク質、酵素、例えば、プロテアーゼ（特に、不活性化プロテアーゼ）、ＲＮａｓｅ、シャペロン、例えば、チオレドキシン、および熱ショックタンパク質、ならびに細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＳＨ２およびＳＨ３ドメイン）が挙げられるがそれに限定されない。例えば、米国特許出願公開第２００４０００９５３０号および米国特許第７，５０１，１２１号（参照により本明細書に組み込まれる）を参照。

【0305】

実施形態では、スキャフォールドドメインは、例えば、以下の基準：（１）アミノ酸配列、（２）いくつかの相同ドメインの配列、（３）三次元構造、および／または（４）ｐＨ、温度、塩分、有機溶媒、酸化剤濃度の範囲にわたる安定性データのうちの１つまたは複数によって評価および選択される。実施形態では、スキャフォールドドメインは、小さい、安定なタンパク質ドメイン、例えば、１００個、７０個、５０個、４０個または３０個未満のアミノ酸のタンパク質である。ドメインは、１つもしくは複数のジスルフィド結合を含んでもよく、または金属、例えば、亜鉛をキレートしてもよい。

【0306】

抗体ベースの融合物
抗体のＮまたはＣ末端に取り付けられた追加の結合性実体を含有する様々なフォーマットを生成することができる。単鎖またはジスルフィド安定化ＦｖもしくはＦａｂを有するこれらの融合物は、各抗原に対して二価の結合特異性を有する四価分子の生成をもたらす。ＩｇＧとのｓｃＦｖおよびｓｃＦａｂの組合せは、３つまたはより多くの異なる抗原を認識することができる分子の産生を可能にする。

【0307】

抗体－Ｆａｂ融合物
抗体－Ｆａｂ融合物は、第１の標的に対する伝統的な抗体および抗体重鎖のＣ末端に融合した第２の標的に対するＦａｂを含む二特異性抗体である。一般的に、抗体およびＦａｂは共通の軽鎖を有する。抗体融合物は、（１）標的融合物のＤＮＡ配列を操作すること、および（２）標的ＤＮＡを好適な宿主細胞にトランスフェクトして融合タンパク質を発現させることにより産生させることができる。Ｃｏｌｏｍａ， Ｊら、（１９９７） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １５：１５９によって記載されるように、抗体－ｓｃＦｖ融合物は、ＣＨ３ドメインのＣ末端とｓｃＦｖのＮ末端との間の（Ｇｌｙ）－Ｓｅｒリンカーによって連結されてもよいようである。

【0308】

抗体－ｓｃＦｖ融合物
抗体－ｓｃＦｖ融合物は、伝統的な抗体および抗体重鎖のＣ末端に融合した特有の特異性のｓｃＦｖを含む二特異性抗体である。ｓｃＦｖは、直接的にまたはリンカーペプチドを通じてｓｃＦｖの重鎖を通じてＣ末端に融合させることができる。抗体融合物は、（１）標的融合物のＤＮＡ配列を操作すること、および（２）標的ＤＮＡを好適な宿主細胞にトランスフェクトして融合タンパク質を発現させることにより産生させることができる。Ｃｏｌｏｍａ， Ｊら、（１９９７） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １５：１５９によって記載されるように、抗体－ｓｃＦｖ融合物は、ＣＨ３ドメインのＣ末端とｓｃＦｖのＮ末端との間の（Ｇｌｙ）－Ｓｅｒリンカーによって連結されてもよいようである。

【0309】

可変ドメイン免疫グロブリンＤＶＤ
関連するフォーマットは、より短いリンカー配列によってＶドメインのＮ末端に配置された第２の特異性のＶＨおよびＶＬドメインから構成される二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ）である。

【0310】

他の例示的な多特異性抗体フォーマットとしては、例えば、以下：米国特許出願公開第２０１６０１１４０５７Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３０２４３７７５Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４００５１８３３号、米国特許出願公開第２０１３００２２６０１号、米国特許出願公開第２０１５００１７１８７Ａ１号、米国特許出願公開第２０１２０２０１７４６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１５０１３３６３８Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３０２６６５６８Ａ１号、米国特許出願公開第２０１６０１４５３４０Ａ１号、ＷＯ２０１５１２７１５８Ａ１、米国特許出願公開第２０１５０２０３５９１Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４０３２２２２１Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３０３０３３９６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１１０２９３６１３号、米国特許出願公開第２０１３００１７２００Ａ１号、米国特許出願公開第２０１６０１０２１３５Ａ１号、ＷＯ２０１５１９７５９８Ａ２、ＷＯ２０１５１９７５８２Ａ１、米国特許第９３５９４３７号、米国特許出願公開第２０１５００１８５２９号、ＷＯ２０１６１１５２７４Ａ１、ＷＯ２０１６０８７４１６Ａ１、米国特許出願公開第２００８００６９８２０Ａ１号、米国特許第９１４５５８８Ｂ号、米国特許第７９１９２５７号、および米国特許出願公開第２０１５０２３２５６０Ａ１号に記載のものが挙げられる。全長抗体－Ｆａｂ／ｓｃＦａｂフォーマットを利用する例示的な多特異性分子としては、以下：米国特許第９３８２３２３Ｂ２号、米国特許出願公開第２０１４００７２５８１Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４０３０８２８５Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３０１６５６３８Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３０２６７６８６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４０３７７２６９Ａ１号、米国特許第７７４１４４６Ｂ２号、およびＷＯ１９９５００９９１７Ａ１に記載のものが挙げられる。ドメイン交換フォーマットを利用する例示的な多特異性分子としては、以下：米国特許出願公開第２０１５０３１５２９６Ａ１号、ＷＯ２０１６０８７６５０Ａ１、米国特許出願公開第２０１６００７５７８５Ａ１号、ＷＯ２０１６０１６２９９Ａ１、米国特許出願公開第２０１６０１３０３４７Ａ１号、米国特許出願公開第２０１５０１６６６７０号、米国特許第８７０３１３２Ｂ２号、米国特許出願公開第２０１００３１６６４５号、米国特許第８２２７５７７Ｂ２号、米国特許出願公開第２０１３００７８２４９号に記載のものが挙げられる。

【0311】

Ｆｃ含有実体（ミニ抗体）
ミニ抗体としても公知のＦｃ含有実体は、ｓｃＦｖを定常重鎖領域ドメイン３のＣ末端（ＣＨ３－ｓｃＦｖ）および／または異なる特異性を有する抗体のヒンジ領域（ｓｃＦｖ－ヒンジ－Ｆｃ）に融合させることにより生成することができる。ＩｇＧのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合した（ペプチドリンカーを有さない）ジスルフィド安定化可変ドメインを有する三価の実体もまた作製することができる。

【0312】

Ｆｃ含有多特異性分子
一部の実施形態では、本明細書に開示される多特異性分子は、免疫グロブリン定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を含む。例示的なＦｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の重鎖定常領域、より特には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択することができる。

【0313】

一部の実施形態では、免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つまたは複数を増加または減少させるために、変更、例えば、突然変異される。

【0314】

他の実施形態では、第１および第２の免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、第１および第２のＦｃ領域）の境界部は、例えば、操作されていない境界部、例えば、天然に存在する境界部と比較して、二量体化を増加または減少させるために、変更、例えば、突然変異される。例えば、免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の二量体化は、第１および第２のＦｃ領域のＦｃ境界部に、対になった孔と突起（「ノブ・イン・ホール」）、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つまたは複数を提供し、それによって、例えば、操作されていない境界部と比較して、より高い比のヘテロ多量体：ホモ多量体が形成されることにより、増強させることができる。

【0315】

一部の実施形態では、多特異性分子は、例えば、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つまたは複数から選択される位置において、対になったアミノ酸置換を含む。例えば、免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、またはＹ４０７Ｖ（例えば、孔またはホールに対応する）、およびＴ３６６Ｗ（例えば、突起またはノブに対応する）から選択される対になったアミノ酸置換を含むことができる。

【0316】

他の実施形態では、多機能性分子は、半減期延長剤、例えば、ヒト血清アルブミンまたはヒト血清アルブミンに対する抗体分子を含む。
ヘテロ二量体化抗体分子および作製方法
正しくない重鎖対合の問題に対処するために多特異性抗体を産生する様々な方法が開示されてきた。例示的な方法は以下に記載される。例示的な多特異性抗体フォーマットおよび前記多特異性抗体を作製する方法もまた、例えば、Ｓｐｅｉｓｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２０１５）９５～１０６ページ、およびＫｌｅｉｎら、ｍＡｂ ４：６、６５３～６６３ページ、２０１２年１１月／１２月（これらのそれぞれの内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。

【0317】

ヘテロ二量体化二特異性抗体は天然のＩｇＧ構造に基づき、２つの結合性アームが異なる抗原を認識する。定義された一価（および同時の）抗原結合を可能にするＩｇＧ由来のフォーマットは、軽鎖誤対合を最小化する技術（例えば、共通軽鎖）と組み合わせた強制的な重鎖ヘテロ二量体化により生成される。強制的な重鎖ヘテロ二量体化は、例えば、ノブ・イン・ホールまたは鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）を使用して、得ることができる。

【0318】

ノブ・イン・ホール
米国特許第５，７３１，１１６号、米国特許第７，４７６，７２４号およびＲｉｄｇｗａｙ， Ｊら、（１９９６）Ｐｒｏｔ． Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９（７）：６１７～６２１ページに記載されるノブ・イン・ホールは、概して、（１）１つまたは両方の抗体のＣＨ３ドメインを突然変異させてヘテロ二量体化を促進すること、および（２）ヘテロ二量体化を促進する条件下で突然変異した抗体を組み合わせることを伴う。「ノブ」または「突起」は、典型的には、親抗体中の小さいアミノ酸をより大きいアミノ酸で置き換えること（例えば、Ｔ３６６ＹまたはＴ３６６Ｗ）により作出され、「ホール」または「孔」は、親抗体中のより大きい残基をより小さいアミノ酸で置き換えること（例えば、Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ）により作出される。

【0319】

Ｆｃドメインを含む二特異性抗体のために、Ｆｃ部分の正しいヘテロ二量体化を促進するための重鎖の定常領域への特定の突然変異の導入を利用することができる。いくつかのそのような技術は、Ｋｌｅｉｎら（ｍＡｂ（２０１２）４：６、１～１１ページ）（その内容はこれにより参照により全体が本明細書に組み込まれる）において総説されている。これらの技術としては、抗体重鎖のうちの１つのＣＨ３ドメインのうちの１つへのバルク残基の導入を伴う「ノブ・イントゥー・ホール」（ＫｉＨ）アプローチが挙げられる。このバルク残基は、対になった重鎖の他のＣＨ３ドメイン中の相補的な「ホール」にフィットし、それによって、重鎖の正しい対合が促進される（例えば、米国特許第７６４２２２８号を参照）。

【0320】

例示的なＫｉＨ突然変異としては、「ノブ」重鎖中のＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗおよび「ホール」重鎖中のＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖが挙げられる。他の例示的なＫｉＨ突然変異は、追加の必要に応じた安定化性Ｆｃシステイン突然変異と共に、表１において提供される。

【0321】

【表7】

【0322】

他のＦｃ突然変異はＩｇａｗａおよびＴｓｕｎｏｄａにより提供されており、彼らは、他の鎖のＣＨ３ドメイン中の３つの正に荷電した残基と対合する１つの鎖のＣＨ３ドメイン中の３つの負に荷電した残基を同定した。これらの特定の荷電した残基対は、Ｅ３５６－Ｋ４３９、Ｅ３５７－Ｋ３７０、Ｄ３９９－Ｋ４０９およびその逆である。単独でまたは新たに同定されたジスルフィド架橋と組み合わせて、以下の３つの鎖Ａ中の突然変異：Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７ＫおよびＤ３９９Ｋの他に、鎖Ｂ中のＫ３７０Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４３９Ｅのうちの少なくとも２つを導入することにより、それらは、同時にホモ二量体化を抑制しながら非常に効率的なヘテロ二量体化に有利に働くことができた（Ｍａｒｔｅｎｓ Ｔら、「Ａ ｎｏｖｅｌ ｏｎｅ－ａｒｍｅｄ ａｎｔｉｃ－ Ｍｅｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｖｉｖｏ．」、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；１２：６１４４～５２ページ；ＰＭＩＤ：１７０６２６９１）。Ｘｅｎｃｏｒは、構造算出および配列情報の組合せに基づいて４１個のバリアント対を定義し、それをその後に最大のヘテロ二量体化についてスクリーニングして、鎖Ａ上のＳ３６４Ｈ、Ｆ４０５Ａ（ＨＡ）および鎖Ｂ上のＹ３４９Ｔ、Ｔ３９４Ｆ（ＴＦ）の組合せを定義した（Ｍｏｏｒｅ ＧＬら、「Ａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒｍａｔ ｅｎａｂｌｅｓ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｂｉｖａｌｅｎｔ ａｎｄ ｍｏｎｏｖａｌｅｎｔ ｃｏ－ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｔａｒｇｅｔ ａｎｔｉｇｅｎｓ．」、ＭＡｂｓ ２０１１；３：５４６～５７ページ；ＰＭＩＤ：２２１２３０５５）。

【0323】

多特異性抗体のヘテロ二量体化を促進するための他の例示的なＦｃ突然変異としては、以下の参考文献（これらのそれぞれの内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）：ＷＯ２０１６０７１３７７Ａ１、米国特許出願公開第２０１４００７９６８９Ａ１号、米国特許出願公開第２０１６０１９４３８９Ａ１号、米国特許出願公開第２０１６０２５７７６３号、ＷＯ２０１６０７１３７６Ａ２、ＷＯ２０１５１０７０２６Ａ１、ＷＯ２０１５１０７０２５Ａ１、ＷＯ２０１５１０７０１５Ａ１、米国特許出願公開第２０１５０３５３６３６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４０１９９２９４Ａ１号、米国特許第７７５０１２８Ｂ２号、米国特許出願公開第２０１６０２２９９１５Ａ１号、米国特許出願公開第２０１５０３４４５７０Ａ１号、米国特許第８００３７７４Ａ１号、米国特許出願公開第２０１５０３３７０４９Ａ１号、米国特許出願公開第２０１５０１７５７０７Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４０２４２０７５Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３０１９５８４９Ａ１号、米国特許出願公開第２０１２０１４９８７６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４０２００３３１Ａ１号、米国特許第９３０９３１１Ｂ２号、米国特許第８５８６７１３号、米国特許出願公開第２０１４００３７６２１Ａ１号、米国特許出願公開第２０１３０１７８６０５Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４０３６３４２６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１４００５１８３５Ａ１号および米国特許出願公開第２０１１００５４１５１Ａ１号に記載のものが挙げられる。

【0324】

安定化性システイン突然変異もまた、ＫｉＨおよび他のＦｃヘテロ二量体化促進性バリアントと組み合わせて使用されている（例えば、米国特許第７１８３０７６号を参照）。他の例示的なシステイン修飾としては、例えば、米国特許出願公開第２０１４０３４８８３９Ａ１号、米国特許第７８５５２７５Ｂ２号、および米国特許第９０００１３０Ｂ２号に開示されるものが挙げられる。

【0325】

鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）
鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）Ｃ（Ｈ）３ヘテロ二量体を工作することによって二特異性かつ非対称性の融合タンパク質の設計をサポートするヘテロ二量体Ｆｃプラットフォームが公知である。ヒトＩｇＧおよびＩｇＡ Ｃ（Ｈ）３ドメインのこれらの誘導体は、ヒトＩｇＡおよびＩｇＧ Ｃ（Ｈ）３配列の交互のセグメントから構成される相補的なヒトＳＥＥＤ Ｃ（Ｈ）３ヘテロ二量体を作出する。もたらされるＳＥＥＤ Ｃ（Ｈ）３ドメインの対は、哺乳動物細胞中で発現された場合に優先的に会合してヘテロ二量体を形成する。ＳＥＥＤボディ（Ｓｂ）融合タンパク質は、１つまたは複数の融合パートナーに遺伝子連結されていてもよい［ＩｇＧ１ヒンジ］－Ｃ（Ｈ）２－［ＳＥＥＤ Ｃ（Ｈ）３］からなる（例えば、Ｄａｖｉｓ ＪＨら、「ＳＥＥＤｂｏｄｉｅｓ： ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｓｔｒａｎｄ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｄｏｍａｉｎ （ＳＥＥＤ） ＣＨ３ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｓ ｉｎ ａｎ Ｆｃ ａｎａｌｏｇｕｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｂｉｎｄｅｒｓ ｏｒ ｉｍｍｕｎｏｆｕｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．」、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ ２０１０；２３：１９５～２０２ページ；ＰＭＩＤ：２０２９９５４２および米国特許第８８７１９１２号（これらのそれぞれの内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）を参照）。

【0326】

デュオボディ
正しい重鎖対合を有する二特異性抗体を産生するための「デュオボディ」技術は公知である。デュオボディ技術は、産生後交換反応において安定な二特異性ヒトＩｇＧ１抗体を生成するための３つの基本的なステップを伴う。第１のステップにおいて、第３の定常（ＣＨ３）ドメイン中に単一のマッチした突然変異をそれぞれ含有する２つのＩｇＧ１が、標準的な哺乳動物組換え細胞系を使用して別々に産生される。その後に、これらのＩｇＧ１抗体は、回収および精製のための標準的な方法に従って精製される。産生および精製後（産生後）、２つの抗体は調整された実験室条件下で組み換えられて、非常に高い収率（典型的には＞９５％）で二特異性抗体産物をもたらす（例えば、Ｌａｂｒｉｊｎら、ＰＮＡＳ ２０１３；１１０（１３）：５１４５～５１５０ページおよびＬａｂｒｉｊｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ２０１４；９（１０）：２４５０～６３ページ（これらのそれぞれの内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）を参照）。

【0327】

静電相互作用
ホモ二量体形成が静電気的に不都合であるように荷電性アミノ酸を有するＣＨ３アミノ酸変化を使用して多特異性抗体を作製する方法が開示されている。ＥＰ１８７０４５９およびＷＯ２００９０８９００４は、宿主細胞中での異なる抗体ドメインの共発現の際のヘテロ二量体形成に有利に働くための他の戦略を記載する。これらの方法において、重鎖定常ドメイン３（ＣＨ３）、両方のＣＨ３ドメイン中のＣＨ３－ＣＨ３境界部を作り上げる１つまたは複数の残基は、ホモ二量体形成が静電気的に不都合であり、かつヘテロ二量体化が静電気的に好都合であるように荷電性アミノ酸で置き換えられる。静電相互作用を使用して多特異性分子を作製する追加の方法は、米国特許出願公開第２０１０００１５１３３号、米国特許第８５９２５６２Ｂ２号、米国特許第９２０００６０Ｂ２号、米国特許出願公開第２０１４０１５４２５４Ａ１号、および米国特許第９３５８２８６Ａ１号を含む参考文献（これらのそれぞれの内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

【0328】

共通軽鎖
軽鎖誤対合は、二特異性ＩｇＧの均質な調製物を生成するために回避される必要がある。これを達成する１つのやり方は、共通軽鎖の原理、すなわち、１つの軽鎖を共有するが依然として別々の特異性を有する２つのバインダーを組み合わせることの使用を通じたものである。単量体の混合物からの所望の二特異性抗体の形成を増強する例示的な方法は、二特異性抗体のヘテロマー可変重鎖領域のそれぞれと相互作用するための共通の可変軽鎖を提供することによる。共通軽鎖を有する二特異性抗体の組成物およびその産生方法は、例えば、米国特許第７１８３０７６Ｂ２号、米国特許出願公開第２０１１０１７７０７３Ａ１号、ＥＰ２８４７２３１Ａ１、ＷＯ２０１６０７９０８１Ａ１、およびＥＰ３０５５３２９Ａ１（これらのそれぞれの内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。

【0329】

ＣｒｏｓｓＭａｂ
軽鎖誤対合を低減するための別のオプションはＣｒｏｓｓＭａｂ技術であり、これは、二特異性抗体の１つの半分のＦａｂ中のＣＨ１およびＣＬドメインを交換することによって非特異的Ｌ鎖誤対合を回避する。そのようなクロスオーバーバリアントは結合特異性および親和性を保持するが、Ｌ鎖誤対合が予防されるように２つのアームを異なるものとさせる。（Ｋｌｅｉｎら、上掲に総説されるように）ＣｒｏｓｓＭａｂ技術は、正しい対合の形成を促進するように重鎖と軽鎖との間のドメインスワッピングを伴う。簡潔に述べれば、２つの別個の軽鎖－重鎖対を使用することによって２つの抗原に結合し得る二特異性ＩｇＧ様ＣｒｏｓｓＭａｂ抗体を構築するために、２ステップ修飾プロセスが応用される。最初に、二量体化境界部は、ヘテロ二量体化アプローチ、例えば、ノブ・イントゥー・ホール（ＫｉＨ）技術を使用して各重鎖のＣ末端中に操作されて、１つの抗体（例えば、抗体Ａ）および第２の抗体（例えば、抗体Ｂ）からの２つの別個の重鎖のヘテロ二量体のみが効率的に形成されることが確実にされる。次に、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを一貫したままに保って、１つの抗体の定常重鎖１（ＣＨ１）および定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが交換される（抗体Ａ）。ＣＨ１およびＣＬドメインの交換は、修飾抗体（抗体Ａ）軽鎖は修飾抗体（抗体Ａ）重鎖とのみ効率的に二量体化し、非修飾抗体（抗体Ｂ）軽鎖は非修飾抗体（抗体Ｂ）重鎖とのみ効率的に二量体化するため、所望の二特異性ＣｒｏｓｓＭａｂのみが効率的に形成されることを確実にした（例えば、Ｃａｉｎ， Ｃ．、ＳｃｉＢＸ ４（２８）；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｃｉｂｘ．２０１１．７８３（その内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）を参照）。

【0330】

共通重鎖
単量体の混合物からの所望の二特異性抗体の形成を増強する例示的な方法は、二特異性抗体のヘテロマー可変軽鎖領域のそれぞれと相互作用するための共通の可変重鎖を提供することによる。共通重鎖を有する二特異性抗体の組成物およびその産生方法は、例えば、米国特許出願公開第２０１２０１８４７１６号、米国特許出願公開第２０１３０３１７２００号、および米国特許出願公開第２０１６０２６４６８５Ａ１号（これらのそれぞれの内容はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。

【0331】

アミノ酸修飾
正しい軽鎖対合を有する多特異性抗体の代替的な組成物およびその産生方法としては、様々なアミノ酸修飾が挙げられる。例えば、Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓは、軽鎖と重鎖との間の境界部の部分であり、各重鎖と所望の軽鎖との優先的な対合を作製する、ＣＨ１および／もしくはＣＬドメイン中の１つもしくは複数のアミノ酸修飾、ＶＨおよび／もしくはＶＬドメイン中の１つもしくは複数のアミノ酸修飾、またはこれらの組合せを有し、それによって、ヘテロ二量体対の２つの重鎖および２つの軽鎖が細胞中で共発現された場合に、第１のヘテロ二量体の重鎖が、他のものよりも軽鎖の１つと優先的に対合する、ヘテロ二量体を記載する（例えば、ＷＯ２０１５１８１８０５を参照）。他の例示的な方法は、ＷＯ２０１６０２６９４３（Ａｒｇｅｎ－Ｘ）、米国特許出願公開第２０１５０２１１００１号、米国特許出願公開第２０１４００７２５８１Ａ１号、米国特許出願公開第２０１６００３９９４７Ａ１号、および米国特許出願公開第２０１５０３６８３５２号に記載されている。

【0332】

ラムダ／カッパフォーマット
ラムダ軽鎖ポリペプチドおよびカッパ軽鎖ポリペプチドを含む多特異性分子（例えば、多特異性抗体分子）は、ヘテロ二量体化を可能とするために使用することができる。ラムダ軽鎖ポリペプチドおよびカッパ軽鎖ポリペプチドを含む二特異性抗体分子を生成する方法は、２０１７年９月２２日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１７／５３０５３（これにより参照により全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている。

【0333】

実施形態では、多特異性分子は、多特異性抗体分子、例えば、２つの結合特異性を含む抗体分子、例えば、二特異性抗体分子を含む。多特異性抗体分子は、
第１のエピトープに特異的なラムダ軽鎖ポリペプチド１（ＬＬＣＰ１）、
第１のエピトープに特異的な重鎖ポリペプチド１（ＨＣＰ１）、
第２のエピトープに特異的なカッパ軽鎖ポリペプチド２（ＫＬＣＰ２）、および
第２のエピトープに特異的な重鎖ポリペプチド２（ＨＣＰ２）
を含む。

【0334】

「ラムダ軽鎖ポリペプチド１（ＬＬＣＰ１）」は、その用語が本明細書で使用される場合、コグネイト重鎖可変領域と組み合わせられた場合に、そのエピトープへの特異的結合を媒介し、ＨＣＰ１と複合体化することができる十分な軽鎖（ＬＣ）配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、それは、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＬＬＣＰ１は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、ＬＣ－ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、およびＣＨ１、またはそのエピトープの特異的結合を媒介し、ＨＣＰ１と複合体化するために十分なこれらからの配列を含む。ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１と共に、第１のエピトープに対する特異性を提供する（ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２と共に、第２のエピトープに対する特異性を提供する）。本明細書の他の箇所に記載されるように、ＬＬＣＰ１は、ＨＣＰ２に対してよりもＨＣＰ１に対してより高い親和性を有する。

【0335】

「カッパ軽鎖ポリペプチド２（ＫＬＣＰ２）」は、その用語が本明細書で使用される場合、コグネイト重鎖可変領域と組み合わせられた場合に、そのエピトープへの特異的結合を媒介し、ＨＣＰ２と複合体化することができる十分な軽鎖（ＬＣ）配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、それは、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＫＬＣＰ２は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、ＬＣ－ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、およびＣＨ１、またはそのエピトープの特異的結合を媒介し、ＨＣＰ２と複合体化するために十分なこれらからの配列を含む。ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２と共に、第２のエピトープに対する特異性を提供する（ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１と共に、第１のエピトープに対する特異性を提供する）。

【0336】

「重鎖ポリペプチド１（ＨＣＰ１）」は、その用語が本明細書で使用される場合、コグネイトＬＬＣＰ１と組み合わせられた場合に、そのエピトープへの特異的結合を媒介し、ＨＣＰ１と複合体化することができる十分な重鎖（ＨＣ）配列、例えば、ＨＣ可変領域配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、それは、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、それは、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＨＣＰ１は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３、または（ｉ）そのエピトープの特異的結合を媒介し、ＬＬＣＰ１と複合体化し、（ｉｉ）本明細書に記載されるように、ＫＬＣＰ２とは対照的にＬＬＣＰ１に対して優先的に複合体化し、かつ（ｉｉｉ）本明細書に記載されるように、ＨＣＰ１の別の分子とは対照的にＨＣＰ２に対して優先的に複合体化するために十分なこれらからの配列を含む。ＨＣＰ１は、そのＬＬＣＰ１と共に、第１のエピトープに対する特異性を提供する（ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２と共に、第２のエピトープに対する特異性を提供する）。

【0337】

「重鎖ポリペプチド２（ＨＣＰ２）」は、その用語が本明細書で使用される場合、コグネイトＬＬＣＰ１と組み合わせられた場合に、そのエピトープへの特異的結合を媒介し、ＨＣＰ１と複合体化することができる十分な重鎖（ＨＣ）配列、例えば、ＨＣ可変領域配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、それは、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、それは、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＨＣＰ１は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３、または（ｉ）そのエピトープの特異的結合を媒介し、ＫＬＣＰ２と複合体化し、（ｉｉ）本明細書に記載されるように、ＬＬＣＰ１とは対照的にＫＬＣＰ２に対して優先的に複合体化し、かつ（ｉｉｉ）本明細書に記載されるように、ＨＣＰ２の別の分子とは対照的にＨＣＰ１に対して優先的に複合体化するために十分なこれらからの配列を含む。ＨＣＰ２は、そのＫＬＣＰ２と共に、第２のエピトープに対する特異性を提供する（ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１と共に、第１のエピトープに対する特異性を提供する）。

【0338】

本明細書に開示される多特異性抗体分子の一部の実施形態では、
ＬＬＣＰ１は、ＨＣＰ２に対してよりもＨＣＰ１に対してより高い親和性を有し、かつ／または
ＫＬＣＰ２は、ＨＣＰ１に対してよりもＨＣＰ２に対してより高い親和性を有する。

【0339】

実施形態では、ＨＣＰ１に対するＬＬＣＰ１の親和性は、ＨＣＰ２に対するその親和性より十分に高く、それによって、予め選択された条件下、例えば、例えばｐＨ７の水性緩衝液中、例えばｐＨ７の生理食塩水中、または生理的条件下で、多特異性抗体分子の少なくとも７５、８０、９０、９５、９８、９９、９９．５、または９９．９％は、ＨＣＰ１と複合体化した、または結び付けられたＬＬＣＰ１を有する。

【0340】

本明細書に開示される多特異性抗体分子の一部の実施形態では、
ＨＣＰ１は、ＨＣＰ１の第２の分子に対してよりもＨＣＰ２に対してより高い親和性を有し、かつ／または
ＨＣＰ２は、ＨＣＰ２の第２の分子に対してよりもＨＣＰ１に対してより高い親和性を有する。

【0341】

実施形態では、ＨＣＰ２に対するＨＣＰ１の親和性は、ＨＣＰ１の第２の分子に対するその親和性より十分に高く、それによって、予め選択された条件下、例えば、例えばｐＨ７の水性緩衝液中、例えばｐＨ７の生理食塩水中、または生理的条件下で、多特異性抗体分子の少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９ ９９．５または９９．９％は、ＨＣＰ２と複合体化した、または結び付けられたＨＣＰ１を有する。

【0342】

別の態様では、多特異性抗体分子を作製、または産生する方法が本明細書に開示される。方法は、（ｉ）～（ｉｖ）が会合する条件下で、
（ｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖可変領域（第１のＶＨ）、第１のＣＨ１、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２、第１のＣＨ３、または両方）のうちの１つ、２つ、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）を提供するステップ、
（ｉｉ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖可変領域（第２のＶＨ）、第２のＣＨ１、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２、第２のＣＨ３、または両方）のうちの１つ、２つ、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）を提供するステップ、
（ｉｉｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１のＶＨ）と優先的に会合するラムダ鎖ポリペプチド（例えば、ラムダ軽鎖可変領域（ＶＬλ）、ラムダ軽鎖定常鎖（ＶＬλ）、または両方）を提供するステップ、および
（ｉｖ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２のＶＨ）と優先的に会合するカッパ鎖ポリペプチド（例えば、ラムダ軽鎖可変領域（ＶＬκ）、ラムダ軽鎖定常鎖（ＶＬκ）、または両方）を提供するステップ
を含む。

【0343】

実施形態では、第１および第２の重鎖ポリペプチドは、ヘテロ二量体化を増強するＦｃ境界部を形成する。
実施形態では、（ｉ）～（ｉｖ）（例えば、（ｉ）～（ｉｖ）をコードする核酸）は、単一の細胞、例えば、単一の哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞に導入される。実施形態では、（ｉ）～（ｉｖ）は、細胞中で発現される。

【0344】

実施形態では、（ｉ）～（ｉｖ）（例えば、（ｉ）～（ｉｖ）をコードする核酸）は、異なる細胞、例えば、異なる哺乳動物細胞、例えば、２つまたはより多くのＣＨＯ細胞に導入される。実施形態では、（ｉ）～（ｉｖ）は、細胞中で発現される。

【0345】

一実施形態では、方法は、例えば、ラムダおよび／またはカッパ特異的精製、例えば、親和性クロマトグラフィーを使用して、細胞発現抗体分子を精製するステップをさらに含む。

【0346】

実施形態では、方法は、細胞発現多特異性抗体分子を評価することをさらに含む。例えば、精製された細胞発現多特異性抗体分子は、質量分析を含む、当該技術分野において公知の技術によって分析することができる。一実施形態では、精製された細胞発現抗体分子は、切断、例えば、パパインを用いて消化されて、Ｆａｂ部分をもたらし、質量分析を使用して評価される。

【0347】

実施形態では、方法は、高い収率、例えば、少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９ ９９．５または９９．９％で、正しく対になったカッパ／ラムダ多特異性の、例えば、二特異性の抗体分子を産生する。

【0348】

他の実施形態では、多特異性の、例えば、二特異性の、抗体分子は、
（ｉ）第１の重鎖ポリペプチド（ＨＣＰ１）（例えば、第１の重鎖可変領域（第１のＶＨ）、第１のＣＨ１、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２、第１のＣＨ３、または両方）のうちの１つ、２つ、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）であって、例えば、第１のエピトープに結合する、ＨＣＰ１、
（ｉｉ）第２の重鎖ポリペプチド（ＨＣＰ２）（例えば、第２の重鎖可変領域（第２のＶＨ）、第２のＣＨ１、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２、第２のＣＨ３、または両方）のうちの１つ、２つ、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）であって、例えば、第２のエピトープに結合する、ＨＣＰ２、
（ｉｉｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１のＶＨ）と優先的に会合するラムダ軽鎖ポリペプチド（ＬＬＣＰ１）（例えば、ラムダ軽鎖可変領域（ＶＬｌ）、ラムダ軽鎖定常鎖（ＶＬｌ）、または両方）であって、例えば、第１のエピトープに結合する、ＬＬＣＰ１、および
（ｉｖ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２のＶＨ）と優先的に会合するカッパ軽鎖ポリペプチド（ＫＬＣＰ２）（例えば、ラムダ軽鎖可変領域（ＶＬｋ）、ラムダ軽鎖定常鎖（ＶＬｋ）、または両方）であって、例えば、第２のエピトープに結合する、ＫＬＣＰ２
を含む。

【0349】

実施形態では、第１および第２の重鎖ポリペプチドは、ヘテロ二量体化を増強するＦｃ境界部を形成する。実施形態では、多特異性抗体分子は、Ｆｃ定常、ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン（ノブ修飾を有する）に接続された第１の重鎖可変領域にヘテロ二量体化したハイブリッドＶＬｌ－ＣＬｌを含む第１の結合特異性、およびＦｃ定常、ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン（ホール修飾を有する）に接続された第２の重鎖可変領域にヘテロ二量体化したハイブリッドＶＬｋ－ＣＬｋを含む第２の結合特異性を有する。

【0350】

リンカー
本明細書に開示される多特異性または多機能性分子は、リンカー、例えば、抗原結合性ドメインとサイトカイン分子との間、抗原結合性ドメインと免疫細胞エンゲージャーとの間、抗原結合性ドメインと間質改変部分との間、サイトカイン分子と免疫細胞エンゲージャーとの間、サイトカイン分子と間質改変部分との間、免疫細胞エンゲージャーと間質改変部分との間、抗原結合性ドメインと免疫グロブリン鎖定常領域との間、サイトカイン分子と免疫グロブリン鎖定常領域との間、免疫細胞エンゲージャーと免疫グロブリン鎖定常領域との間、または間質改変部分と免疫グロブリン鎖定常領域との間のうちの１つまたは複数におけるリンカーをさらに含み得る。実施形態では、リンカーは、切断性リンカー、非切断性リンカー、ペプチドリンカー、可撓性リンカー、剛性リンカー、ヘリックスリンカー、もしくは非ヘリックスリンカー、またはこれらの組合せから選択される。

【0351】

一実施形態では、多特異性分子は、１つ、２つ、３つ、または４つのリンカー、例えば、ペプチドリンカーを含み得る。一実施形態では、ペプチドリンカーは、ＧｌｙおよびＳｅｒを含む。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号４２）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４３）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４４）；およびＤＶＰＳＧＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４５）から選択される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号６１５４）ファミリーのリンカー（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． （２００１） １４ （８）： ５２９－５３２に記載される）である。これらは、ｎが２～５の範囲である剛直なヘリックスリンカーである。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号７５）；ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号７６）；ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号７７）；およびＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＡＡ（配列番号７８）から選択される。

【0352】

標的化部分
一実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子は、がん抗原、例えば、腫瘍抗原または間質抗原に結合する第２の抗原結合性部分、例えば、腫瘍標的化部分をさらに含む。一部の実施形態では、がん抗原は、例えば、哺乳動物の、例えば、ヒトの、がん抗原である。他の実施形態では、抗体分子は、免疫細胞抗原、例えば、哺乳動物の、例えば、ヒトの、免疫細胞抗原に結合する第２の結合性部分をさらに含む。他の実施形態では、抗体分子は、ウイルス抗原に結合する第２の結合性部分をさらに含む。例えば、抗体分子は、がん抗原、免疫細胞抗原上のエピトープ、例えば、線状または立体構造エピトープに特異的に結合する。

【0353】

一部の実施形態では、多特異性（例えば、二、三、四特異性）分子は、例えば、分子を腫瘍細胞に指向させる１つまたは複数の腫瘍特異的標的化部分を含有するように操作される。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される多特異性分子は、腫瘍－標的化部分を含む。腫瘍標的化部分は、抗体分子（例えば、本明細書に記載される抗原結合性ドメイン）、受容体もしくは受容体断片、またはリガンドもしくはリガンド断片、またはこれらの組合せから選択され得る。一部の実施形態では、腫瘍標的化部分は、腫瘍細胞（例えば、腫瘍細胞の表面上に存在する分子、例えば、抗原）と会合する、例えば、それに結合する。ある特定の実施形態では、腫瘍標的化部分は、例えば、本明細書に開示される多特異性分子を、がん（例えば、がんまたは腫瘍細胞）へと標的化する、例えば、指向させる。一部の実施形態では、がんは、血液がん、固形がん、転移がん、またはこれらの組合せから選択される。

【0354】

一部の実施形態では、多特異性分子、例えば、腫瘍標的化部分は、固形腫瘍抗原または間質抗原に結合する。固形腫瘍抗原または間質抗原は、固形腫瘍、またはその転移性病変上に存在し得る。一部の実施形態では、固形腫瘍は、膵臓がん（例えば、膵臓腺癌）、乳がん、結腸直腸がん、肺がん（例えば、小細胞がんもしくは非小細胞肺がん）、皮膚がん、卵巣がん、または肝臓がんのうちの１つまたは複数から選択される。一実施形態では、固形腫瘍は、線維性または線維形成性の固形腫瘍である。例えば、固形腫瘍抗原または間質抗原は、腫瘍、例えば、限定された腫瘍潅流、血管の圧縮、または線維性腫瘍間質のうちの１つまたは複数を有することが典型的なクラスの腫瘍上に存在し得る。

【0355】

ある特定の実施形態では、固形腫瘍抗原は、ＰＤＬ１、ＣＤ４７、メソセリン、ガングリオシド２（ＧＤ２）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｒｏｎキナーゼ、ｃ－Ｍｅｔ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化塩化物チャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、メラン－Ａ／ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１／－２、ＭＣ１Ｒ、β－カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－Ｂ受容体、ＡＦＰ、ＥＴＡ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ－１、ＣＡ－１２５、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、β－カテニン、ＣＤＫ４、ＣＤＣ２７、ＣＤ４７、αアクチニン－４、ＴＲＰ１／ｇｐ７５、ＴＲＰ２、ｇｐ１００、メラン－Ａ／ＭＡＲＴ１、ガングリオシド、ＷＴ１、ＥｐｈＡ３、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ２０、ＭＡＲＴ－２、ＭＡＲＴ－１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭＵＭ２、ＭＵＭ３、ＮＡ８８－１、ＮＰＭ、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＲＣＣ、ＲＵＩ１、ＲＵＩ２、ＳＡＧＥ、ＴＲＧ、ＴＲＰ１、ＴＳＴＡ、葉酸受容体アルファ、Ｌ１－ＣＡＭ、ＣＡＩＸ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｇｐＡ３３、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（インテグリンアルファＶベータ３、インテグリンアルファ５ベータ１）、炭水化物（Ｌｅ）、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、またはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、固形腫瘍抗原は、ＰＤＬ１、メソテリン、ＣＤ４７、ＧＤ２、ＰＭＳＡ、ＰＳＣＡ、ＣＥＡ、Ｒｏｎキナーゼ、またはｃ－Ｍｅｔから選択される。腫瘍標的化部分の例示的なアミノ酸およびヌクレオチド配列は、参照により本明細書に組み込まれＷＯ２０１７／１６５４６４に開示され、例えば、１０２～１０８頁、１７２～２９０頁を参照されたい。

【0356】

一部の実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子（例えば、多特異性抗体分子）は、自己反応性Ｔ細胞、例えば、炎症性障害または自己免疫障害に関連する自己反応性Ｔ細胞の表面に存在する抗原に結合する標的化部分、例えば、結合特異性をさらに含む。

【0357】

一部の実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子（例えば、多特異性抗体分子）は、感染細胞、例えば、ウイルス感染細胞に結合する標的化部分、例えば、結合特異性をさらに含む。

【0358】

Ｔ細胞エンゲージャー
他の実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子（例えば、多特異性抗体分子）は、Ｔ細胞への結合および／またはＴ細胞の活性化を媒介する１つまたは複数のＴ細胞エンゲージャーをさらに含む。したがって、一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲζ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、またはＣＤ２２６のうちの１つまたは複数に結合する（例えば、一部の実施形態では、活性化する）抗原結合性ドメインまたはリガンドから選択される。他の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲζ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、またはＣＤ２２６のうちの１つまたは複数に結合し、活性化しない抗原結合性ドメインまたはリガンドから選択される。

【0359】

例示的なＴ細胞エンゲージャーは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１７／１６５４６４号に開示される。
サイトカイン分子
他の実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子（例えば、多特異性抗体分子）は、１つまたは複数のサイトカイン分子、例えば、免疫調節性（例えば、炎症促進性）サイトカインおよびそのバリアント、例えば、機能的バリアントをさらに含む。よって、一部の実施形態では、サイトカイン分子は、インターロイキンまたはそのバリアント、例えば、機能的バリアントである。一部の実施形態では、インターロイキンは炎症促進性インターロイキンである。一部の実施形態では、インターロイキンは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、インターロイキン－１８（ＩＬ－１８）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、またはインターフェロンガンマから選択される。一部の実施形態では、サイトカイン分子は炎症促進性サイトカインである。ある特定の実施形態では、サイトカインは一本鎖サイトカインである。ある特定の実施形態では、サイトカインは、多鎖サイトカインである（例えば、サイトカインは、２つまたはより多くの（例えば、２つの）ポリペプチド鎖を含む。例示的な多鎖サイトカインはＩＬ－１２である。

【0360】

有用なサイトカインの例としては、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α、およびＴＮＦβが挙げられるがそれに限定されない。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１βおよびＴＧＦ－βの群から選択されるサイトカインである。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＦＮ－α、およびＩＦＮ－γの群から選択されるサイトカインである。ある特定の実施形態では、サイトカインは、Ｎ－および／またはＯ－グリコシル化部位を除去するために突然変異される。グリコシル化の排除は、組換え産生において得られ得る製造物の均質性を増加させる。

【0361】

一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインはＩＬ－２である。詳細な実施形態では、ＩＬ－２サイトカインは、活性化Ｔリンパ球細胞の増殖、活性化Ｔリンパ球細胞の分化、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）活性、活性化Ｂ細胞の増殖、活性化Ｂ細胞の分化、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖、ＮＫ細胞の分化、活性化Ｔ細胞またはＮＫ細胞によるサイトカイン分泌、およびＮＫ／リンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）抗腫瘍細胞傷害性からなる群から選択される細胞応答のうちの１つまたは複数を誘発することができる。別の特定の実施形態では、ＩＬ－２サイトカインは、ＩＬ－２受容体のアルファ－サブユニットに対して低減した結合親和性を有する突然変異体ＩＬ－２サイトカインである。ベータおよびガンマ－サブユニット（それぞれＣＤ１２２およびＣＤ１３２として公知）と共に、アルファ－サブユニット（ＣＤ２５としても公知）は、ヘテロ三量体の高親和性ＩＬ－２受容体を形成するが、β－およびγ－サブユニットのみからなる二量体受容体は、中親和性ＩＬ－２受容体と称される。ＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５１９９１（これにより参照により全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ＩＬ－２受容体のアルファ－サブユニットに対して低減した結合を有する突然変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、制御性Ｔ細胞中でＩＬ－２シグナル伝達を誘導する低減した能力を有し、Ｔ細胞中でより少ない活性化誘導性細胞死（ＡＩＣＤ）を誘導し、かつｉｎ ｖｉｖｏでの低減した毒性プロファイルを有する。低減した毒性を有するそのようなサイトカインの使用は、Ｆｃドメインの存在に起因して長い血清半減期を有する本発明による多特異性または多機能性ポリペプチドにおいて特に有利である。一実施形態では、本発明による多特異性または多機能性ポリペプチドの突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、突然変異されていないＩＬ－２サイトカインと比較して、ＩＬ－２受容体のアルファ－サブユニット（ＣＤ２５）に対する突然変異体ＩＬ－２サイトカインの親和性を低減しまたは消失させるが、中親和性ＩＬ－２受容体（ＩＬ－２受容体のβおよびγサブユニットからなる）に対する突然変異体ＩＬ－２サイトカインの親和性を保存する少なくとも１つのアミノ酸突然変異を含む。一実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸突然変異はアミノ酸置換である。詳細な実施形態では、突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ヒトＩＬ－２の残基４２、４５、および７２に対応する位置から選択される１つ、２つまたは３つの位置における１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を含む。より詳細な実施形態では、突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ヒトＩＬ－２の残基４２、４５および７２に対応する位置における３つのアミノ酸置換を含む。よりいっそう詳細な実施形態では、突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、アミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇを含むヒトＩＬ－２である。一実施形態では、突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ヒトＩＬ－２の３位に対応する位置におけるアミノ酸突然変異を追加的に含み、これはＩＬ－２のＯ－グリコシル化部位を排除する。特に、前記追加のアミノ酸突然変異は、スレオニン残基をアラニン残基によって置き換えるアミノ酸置換である。本発明において有用な特定の突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ヒトＩＬ－２の残基３、４２、４５および７２に対応する位置における４つのアミノ酸置換を含む。特定のアミノ酸置換は、Ｔ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇである。ＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５１９９１および付加された実施例において実証されるように、前記四重突然変異体ＩＬ－２ポリペプチド（ＩＬ－２ ｑｍ）は、ＣＤ２５への検出可能な結合を呈さず、Ｔ細胞においてアポトーシスを誘導する低減した能力を呈し、制御性Ｔ細胞（Ｔ．ｓｕｂ．ｒｅｇ ｃｅｌｌｓ）においてＩＬ－２シグナル伝達を誘導する低減した能力を呈し、かつｉｎ ｖｉｖｏでの低減した毒性プロファイルを呈する。しかしながら、それは、エフェクター細胞においてＩＬ－２シグナル伝達を活性化させ、エフェクター細胞の増殖を誘導し、かつＮＫ細胞により二次的なサイトカインとしてＩＦＮ－γを生成させる能力を保持する。

【0362】

上記の実施形態のいずれかによるＩＬ－２または突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、発現または安定性の増加などのさらなる利点を提供する追加の突然変異を含んでもよい。例えば、１２５位におけるシステインは、ジスルフィド架橋によるＩＬ－２二量体の形成を回避するために、アラニンなどの中性アミノ酸で置き換えられてもよい。そのため、ある特定の実施形態では、本発明による多特異性または多機能性ポリペプチドのＩＬ－２または突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ヒトＩＬ－２の残基１２５に対応する位置における追加のアミノ酸突然変異を含む。一実施形態では、前記追加のアミノ酸突然変異はアミノ酸置換Ｃ１２５Ａである。

【0363】

例示的なサイトカイン分子は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／１６５４６４に開示され、例えば、１０８～１１８頁、１６９～１７２頁を参照されたい。
ＴＧＦ－β阻害剤
他の実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子（例えば、多特異性抗体分子）は、ＴＧＦ－βの１つまたは複数のモジュレーター（例えば、ＴＧＦ－β阻害剤）をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦ－βに結合し、それを阻害する、例えば、ＴＧＦ－βの活性を低減させる。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦ－β１を阻害する（例えば、その活性を低減する）。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦ－β２を阻害する（例えば、その活性を低減する）。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦ－β３を阻害する（例えば、その活性を低減する）。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦ－β１およびＴＧＦ－β３を阻害する（例えば、それらの活性を低減する）。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、およびＴＧＦ－β３を阻害する（例えば、それらの活性を低減する）。

【0364】

一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦ－β、またはその機能的断片もしくはバリアントを阻害する（例えば、その活性の低減する）ことができるＴＧＦ－β受容体（例えば、ＴＧＦ－β受容体の細胞外ドメイン）の一部を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）およびＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）およびＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）およびＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。

【0365】

ＴＧＦ－β阻害剤として使用され得る例示的なＴＧＦ－β受容体ポリペプチドは、ＵＳ８９９３５２４、ＵＳ９６７６８６３、ＵＳ８６５８１３５、ＵＳ２０１５００５６１９９、ＵＳ２００７０１８４０５２、およびＷＯ２０１７０３７６３４において開示されており、これらのすべては参照により全体が本明細書に組み込まれる。

【0366】

一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３０９５の細胞外ドメイン、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３０９６の細胞外ドメイン、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３０９７の細胞外ドメイン、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３１０４のアミノ酸配列、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３１０５のアミノ酸配列、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。

【0367】

一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３０９８の細胞外ドメイン、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３０９９の細胞外ドメイン、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３１００のアミノ酸配列、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３１０１のアミノ酸配列、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３１０２のアミノ酸配列、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３１０３のアミノ酸配列、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。

【0368】

一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３１０６の細胞外ドメイン、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３１０７の細胞外ドメイン、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、配列番号３１０８のアミノ酸配列、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一の配列）を含む。

【0369】

一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、１つだけのＴＧＦ－β受容体細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、例えば、リンカーを介して、連結された、２つまたはそれより多く（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれより多く）のＴＧＦ－β受容体細胞外ドメインを含む。

【0370】

【表8-1】

【0371】

【表8-2】

【0372】

【表8-3】

【0373】

【表8-4】

【0374】

【表8-5】

【0375】

【表8-6】

【0376】

【表8-7】

【0377】

【表8-8】

【0378】

【表8-9】

【0379】

間質改変部分
他の実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子（例えば、多特異性抗体分子）は、１つまたは複数の間質改変部分をさらに含む。本明細書に記載される間質改変部分には、間質の成分、例えば、ＥＣＭ成分、例えば、グリコサミノグリカン、例えば、ヒアルロナン（ヒアルロン酸またはＨＡとしても公知である）、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸、ヘパリン硫酸、ヘパリン、エンタクチン、テナシン、アグリカンおよびケラチン硫酸を分解することができる部分（例えば、タンパク質、例えば、酵素）；または細胞外タンパク質、例えば、コラーゲン、ラミニン、エラスチン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、およびビトロネクチンが含まれる。

【0380】

一部の実施形態では、間質改変部分は酵素である。例えば、間質改変部分としては、ヒアルロニダーゼ、コラゲナーゼ、コンドロイチナーゼ、マトリックスメタロプロテイナーゼ（例えば、マクロファージメタロエラスターゼ）を挙げることができるが、これらに限定されない。

【0381】

間質改変部分についての例示的なアミノ酸配列よびヌクレオチド配列は、参照により本明細書にに組み込まれるＷＯ２０１７／１６５４６４に開示され、例えば、１３１～１３６頁、１８８～１９３頁を参照されたい。

【0382】

核酸
前述の抗体分子、例えば、多特異性または多機能性分子をコードする核酸もまた開示される。

【0383】

ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体分子の重鎖および軽鎖可変領域およびＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を特徴とする。例えば、本発明は、本明細書に開示される抗体分子のうちの１つまたは複数から選択される抗体分子の、重鎖および軽鎖可変領域をそれぞれコードする、第１および第２の核酸を特徴とする。核酸は、本明細書の表に記載されるヌクレオチド配列、またはそれに対して実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上同一であるか、または３個、６個、１５個、３０個、もしくは４５個以下のヌクレオチドが、本明細書の表に示される配列と異なる配列を含む。

【0384】

ある特定の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲもしくは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、またはそれに対して実質的に相同である配列（例えば、それに対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上同一である、かつ／または１つもしくは複数の置換、例えば、保存的置換を有する配列）を含み得る。他の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲもしくは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、またはそれに対して実質的に相同である配列（例えば、それに対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上同一である、かつ／または１つもしくは複数の置換、例えば、保存的置換を有する配列）を含み得る。なおも別の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つのＣＤＲもしくは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、またはそれに対して実質的に相同である配列（例えば、それに対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上同一である、かつ／または１つもしくは複数の置換、例えば、保存的置換を有する配列）を含み得る。

【0385】

ある特定の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されるヌクレオチド配列を有する重鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲもしくは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、それに対して実質的に相同である配列（例えば、それに対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上同一である、かつ／または本明細書に記載されるストリンジェンシー条件下においてハイブリダイズすることができる配列）を含み得る。別の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されるヌクレオチド配列を有する軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲもしくは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、またはそれに対して実質的に相同である配列（例えば、それに対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上同一である、かつ／または本明細書に記載されるストリンジェンシー条件下においてハイブリダイズすることができる配列）を含み得る。なおも別の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されるヌクレオチド配列を有する重鎖および軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つのＣＤＲもしくは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、またはそれに対して実質的に相同である配列（例えば、それに対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上同一である、かつ／または本明細書に記載されるストリンジェンシー条件下においてハイブリダイズすることができる配列）を含み得る。

【0386】

ある特定の実施形態では、核酸は、本明細書に開示されるサイトカイン分子、免疫細胞エンゲージャー、または間質改変部分をコードするヌクレオチド配列を含み得る。
別の態様では、本出願は、本明細書に記載される核酸を含む宿主細胞およびベクターを特徴とする。核酸は、本明細書において以下により詳細に記載されるように、同じ宿主細胞または別個の宿主細胞に存在する単一のベクターまたは別個のベクターに存在し得る。

【0387】

ベクター
さらに、本明細書に記載される多特異性または多機能性分子をコードするヌクレオチド配列を含むベクターが本明細書で提供される。一実施形態では、ベクターは、本明細書に記載の多特異性または多機能性分子をコードするヌクレオチドを含む。一実施形態では、ベクターは、本明細書に記載のヌクレオチド配列を含む。ベクターとしては、ウイルス、プラスミド、コスミド、ラムダファージ、または酵母人工染色体（ＹＡＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0388】

多数のベクター系を用いることができる。例えば、１つのクラスのベクターは、動物ウイルス、例えば、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶ、もしくはＭＯＭＬＶ）、またはＳＶ４０ウイルスなどに由来するＤＮＡエレメントを利用する。別のクラスのベクターは、ＲＮＡウイルス、例えば、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、およびフラビウイルスに由来するＲＮＡエレメントを利用する。

【0389】

加えて、ＤＮＡが染色体に安定に組み込まれた細胞を、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つまたは複数のマーカーを導入することによって、選択することができる。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主に対するプロトトロピー、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、または重金属、例えば、銅に対する耐性などを提供し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、発現させようとするＤＮＡ配列に直接的に連結させるか、または共形質転換によって同じ細胞に導入するかのいずれかを行うことができる。最適なｍＲＮＡの合成には、追加のエレメントも必要とされ得る。これらのエレメントとしては、スプライスシグナル、ならびに転写プロモーター、エンハンサー、および終結シグナルを挙げることができる。

【0390】

構築物を含む発現ベクターまたはＤＮＡ配列を、発現のために調製した後、発現ベクターを、適切な宿主細胞にトランスフェクトまたは導入することができる。例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈降、エレクトロポレーション、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、遺伝子銃、脂質に基づくトランスフェクション、または他の従来的な技法など、様々な技法を用いてこれを達成することができる。プロトプラスト融合の場合、細胞を、培地において成長させ、適切な活性に関してスクリーニングする。

【0391】

結果として得られたトランスフェクトした細胞の培養、および産生される抗体分子の回収のための方法および条件は、当業者に公知であり、本明細書に基づいて、用いられる具体的な発現ベクターおよび哺乳動物宿主細胞に応じて変更または最適化することができる。

【0392】

細胞
別の態様では、本出願は、本明細書に記載される核酸を含む宿主細胞およびベクターを特徴とする。核酸は、同じ宿主細胞または別個の宿主細胞に存在する単一のベクターまたは別個のベクターに存在し得る。宿主細胞は、真核生物細胞、例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、または原核生物細胞、例えば、大腸菌であってもよい。例えば、哺乳動物細胞は、培養した細胞または細胞系であり得る。例示的な哺乳動物細胞としては、リンパ球細胞系（例えば、ＮＳＯ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＣＯＳ細胞、卵母細胞、およびトランスジェニック動物に由来する細胞、例えば、乳腺上皮細胞が挙げられる。

【0393】

本発明はまた、本明細書に記載される抗体分子をコードする核酸を含む宿主細胞も提供する。
一実施形態では、宿主細胞は、抗体分子をコードする核酸を含むように遺伝子操作されている。

【0394】

一実施形態では、宿主細胞は、発現カセットを使用することによって遺伝子操作されている。「発現カセット」という語句は、ヌクレオチド配列を指し、そのような配列と適合性のある宿主における遺伝子の発現を達成することができる。そのようなカセットとしては、プロモーター、イントロンありまたはなしのオープンリーディングフレーム、終結シグナルを挙げることができる。例えば、誘導性プロモーターなど、発現を達成するのに必要であるかまたは役に立つ追加の因子もまた、使用することができる。

【0395】

本発明はまた、本明細書に記載されるベクターを含む宿主細胞も提供する。
細胞は、真核生物細胞、細菌細胞、昆虫細胞、またはヒト細胞であり得るが、これらに限定されない。好適な真核生物細胞としては、Ｖｅｒｏ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、およびＭＤＣＫＩＩ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。好適な昆虫細胞としては、Ｓｆ９細胞が挙げられるが、これに限定されない。

【0396】

使用
本明細書に記載される方法は、例えば、本明細書に記載される医薬組成物を用いて、抗ＮＫｐ３０抗体分子、例えば、本明細書に記載される多特異性分子を使用して、対象における障害、例えば、がん、自己免疫障害もしくは炎症性障害、または感染性障害を処置するステップを含む。また、対象における障害、例えば、がん、自己免疫障害もしくは炎症性障害、または感染性障害の症状を低減するかまたは改善する方法、ならびに疾患細胞、例えば、がん細胞の増殖を阻害する方法、および／または１つまたは複数の疾患細胞、例えば、がん細胞を殺滅もしくは枯渇させる方法もまた提供される。実施形態では、本明細書に記載される方法は、本明細書に記載されるものまたは本明細書に記載される医薬組成物が投与される対象において、腫瘍のサイズを減少させ、かつ／またはがん細胞の数を減少させる。

【0397】

実施形態では、抗体分子、例えば、多特異性分子または医薬組成物は、対象に非経口投与される。実施形態では、抗体分子または医薬組成物は、静脈内、皮下、腫瘍内、節内、筋肉内、皮内、または腹腔内で、対象に投与される。実施形態では、細胞は、腫瘍またはリンパ節に直接的に、投与される、例えば、注射される。実施形態では、細胞は、注入（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ． ｏｆ Ｍｅｄ． ３１９：１６７６， １９８８に記載される）または静脈内プッシュ（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｐｕｓｈ）として投与される。実施形態では、細胞は、注射可能なデポー製剤として投与される。

【0398】

実施形態では、対象は、哺乳動物である。実施形態では、対象は、ヒト、サル、ブタ、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、またはマウスである。実施形態では、対象は、ヒトである。実施形態では、対象は、例えば、１８歳未満、例えば、１７歳未満、１６歳未満、１５歳未満、１４歳未満、１３歳未満、１２歳未満、１１歳未満、１０歳未満、９歳未満、８歳未満、７歳未満、６歳未満、５歳未満、４歳未満、３歳未満、２歳未満、１歳未満、またはそれ未満の小児対象である。実施形態では、対象は、成人、例えば、少なくとも１８歳、例えば、少なくとも１９歳、２０歳、２１歳、２２歳、２３歳、２４歳、２５歳、２５～３０歳、３０～３５歳、３５～４０歳、４０～５０歳、５０～６０歳、６０～７０歳、７０～８０歳、または８０～９０歳である。

【0399】

がん
実施形態では、がんは、血液がん、固形腫瘍またはその転移性病変である。一部の実施形態では、がんを処置するために使用される抗ＮＫｐ３０抗体分子は、腫瘍標的化部分、例えば、本明細書に記載される腫瘍標的化部分をさらに含む。

【0400】

実施形態では、血液がんは、白血病またはリンパ腫である。本明細書で使用される場合、「血液がん」は、造血系またはリンパ系組織の腫瘍、例えば、血液、骨髄、またはリンパ節に罹患する腫瘍を指す。例示的な血液悪性腫瘍としては、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、もしくは大顆粒リンパ球性白血病）、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫（例えば、古典的なホジキンリンパ腫もしくは結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫））、菌状息肉腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ））、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、もしくはマントル細胞リンパ腫）、またはＴ細胞非ホジキンリンパ腫（菌状息肉腫、未分化大細胞リンパ腫、もしくは前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫））、原発性中枢神経系リンパ腫、セザリー症候群、ワルデンワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症）、慢性骨髄増殖性新生物、ランゲルハンス細胞組織球症、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、骨髄異形成症候群、または骨髄異形成／骨髄増殖性新生物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0401】

実施形態では、がんは、固形がんである。例示的な固形がんとしては、卵巣がん、直腸がん、胃がん、精巣がん、肛門領域のがん、子宮がん、結腸がん、直腸がん、腎細胞癌、肝臓がん、肺の非小細胞癌、小腸のがん、食道のがん、黒色腫、カポジ肉腫、内分泌系のがん、甲状腺のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚もしくは眼球の悪性黒色腫、子宮がん、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、類表皮がん、頸部扁平上皮がんの癌、卵管の癌、子宮内膜の癌、膣の癌、軟部組織の肉腫、尿道のがん、外陰部の癌、陰茎のがん、膀胱のがん、腎臓もしくは尿管のがん、腎盂の癌、脊髄軸腫瘍、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、前記がんの転移性病変、またはこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0402】

ある特定の実施形態では、がんは、上皮性、間葉性または血液性の悪性腫瘍である。ある特定の実施形態では、処置されるがんは、固形腫瘍（例えば、カルチノイド、癌または肉腫）、軟部組織腫瘍（例えば、ヘム悪性腫瘍）、および転移性病変、例えば、本明細書に開示されるがんのいずれかの転移性病変である。一実施形態では、処置されるがんは、線維性または線維形成性の固形腫瘍、例えば、限定された腫瘍潅流、血管の圧縮、線維性腫瘍間質、または増加した間質液圧のうちの１つまたは複数を有する腫瘍である。一実施形態では、固形腫瘍は、膵臓がん（例えば、膵臓腺癌または膵管腺癌）、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、肺がん（例えば、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）もしくは非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、皮膚がん、卵巣がん、肝臓がん、食道がん、子宮内膜がん、胃がん、頭頸部がん、腎臓がん、または前立腺がんのうちの１つまたは複数から選択される。

【0403】

がんの例としては、限定されないが、癌、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられる。このようながんのより特定の例が下記に記載され、扁平上皮細胞がん（例えば、上皮扁平上皮細胞がん）、小細胞肺がんを含む肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、消化管がんを含む胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がんまたは胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がん、膵臓がん、神経膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝腫、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がんまたは子宮癌、唾液腺癌、腎臓がんまたは腎がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝がん種、肛門癌、および陰茎癌、ならびに頭頸部がんが含まれる。用語「がん」は、原発性悪性細胞または腫瘍（例えば、細胞が、元の悪性腫瘍または腫瘍の部位以外に対象の身体の部位に移動していないもの）、および二次性悪性細胞または腫瘍（例えば、転移、悪性細胞または腫瘍細胞の、元の腫瘍の部位とは異なる二次部位への移動から生じるもの）を含む。

【0404】

がんまたは悪性腫瘍の他の例としては、限定されないが、急性小児リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、成人（原発性）肝細胞がん、成人（原発性）肝がん、成人急性リンパ性白血病、成人急性骨髄性白血病、成人ホジキン病、成人ホジキンリンパ腫、成人リンパ球性白血病、成人非ホジキンリンパ腫、成人原発性肝がん、成人軟部組織肉腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＩＤＳ関連悪性腫瘍、肛門がん、星状細胞腫、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳がん、腎盂および尿管のがん、中枢神経系（原発性）リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫、頸部がん、小児（原発性）肝細胞がん、小児（原発性）肝臓がん、小児急性リンパ芽球性白血病、小児急性骨髄性白血病、小児脳幹神経膠腫、小児小脳星状細胞腫、小児脳星状細胞腫、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、小児ホジキン病、小児ホジキンリンパ腫、小児視床下部および視覚経路神経膠腫、小児リンパ芽球性白血病、小児髄芽腫、小児非ホジキンリンパ腫、小児松果体およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児原発性肝臓がん、小児横紋筋肉腫、小児軟部肉腫、小児視覚経路および視床下部神経膠腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、内分泌膵臓膵島細胞癌、子宮内膜がん、上衣腫、上皮がん、食道がん、ユーイング肉腫および関連腫瘍、外分泌膵臓がん、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼がん、女性乳がん、ゴーシェ病、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管腫瘍、生殖細胞腫瘍、妊娠性栄養芽細胞性腫瘍、毛細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞がん、ホジキン病、ホジキンリンパ腫、高ガンマグロブリン血症、下咽頭がん、腸がん、眼内黒色腫、膵島細胞癌、膵島細胞膵臓がん、カポジ肉腫、腎臓がん、喉頭がん、唇および口腔がん、肝臓がん、肺がん、リンパ増殖性疾患、マクログロブリン血症、球男性乳がん、悪性中皮腫、悪性胸腺腫、髄芽細胞腫、メラノーマ、中皮腫、転移性潜在性原発性扁平上皮頚部がん、転移性原発性扁平上皮頚部がん、転移性扁平上皮頚部がん、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病（Ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ Ｌｅｕｋｅｍｉａ）、骨髄性白血病（Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ）、骨髄増殖性障害、鼻腔および傍鼻洞がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、妊娠中の非ホジキンリンパ腫、非黒色腫皮膚がん、非小細胞肺がん、潜在性原発性転移性扁平上皮頸部がん、中咽頭がん、骨／悪性線維性肉腫、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣上皮がん、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性腫瘍、膵臓がん、傍タンパク血症、紫斑病、副甲状腺がん、陰茎がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、形質細胞新生物／多発性骨髄腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性肝臓がん、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、腎盂および尿管がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、サルコイドーシス肉腫、セザリー症候群、皮膚がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟組織肉腫、扁平上皮頸部がん、胃がん、テント上原始神経外胚葉性および松果体腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、胸腺腫、甲状腺がん、腎盂および尿管の移行細胞がん、移行性腎盂および尿管がん、栄養芽細胞性腫瘍、尿管および腎盂細胞がん、尿道がん、子宮がん、子宮肉腫、膣がん、視覚経路および視床下部神経膠腫、外陰がん、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、および上記で列挙された臓器系にある新生物以外の任意の他の過剰増殖性疾患が挙げられる。

【0405】

他の実施形態では、多特異性分子は、上記され、本明細書に記載されるように、過剰増殖性障害、例えば、過剰増殖性結合組織障害（例えば、過剰増殖性線維性疾患）を処置するために使用される。一実施形態では、過剰増殖性線維性疾患は、多臓器特異的または臓器特異的である。例示的な過剰増殖性線維性疾患は、限定されないが、多臓器特異的障害（例えば、全身性硬化症、多巣性線維硬化症、骨髄移植レシピエントにおける硬化性移植片対宿主疾患、腎性全身性線維症、強皮症）および臓器特異的障害（例えば、眼、肺、肝臓、心臓、腎臓、膵臓、皮膚および他の臓器の線維症）を含む。他の実施形態では、障害は、肝硬変または結核から選択される。他の実施形態では、障害はハンセン病である。

【0406】

実施形態では、多特異性分子（または医薬組成物）は、処置または予防しようとする疾患にとって適切な方式で投与される。投与の回数および頻度は、患者の状態、ならびに患者の疾患の種類および重症度などの因子によって決定される。適切な投薬量は、臨床試験によって決定され得る。例えば、「有効量」または「治療有効量」が示される場合、投与される医薬組成物（または多特異性分子）の正確な量は、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、対象の年齢、体重、および状態における個人差を考慮して、医師によって決定され得る。実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、１０^４～１０^９個の細胞／体重ｋｇ、例えば、１０^５～１０^６個の細胞／体重ｋｇの投薬量で投与され得、これらの範囲内のすべての整数値が含まれる。実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、これらの投薬量で複数回投与されてもよい。実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、免疫療法において説明されている注入技法を使用して投与してもよい（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ． ｏｆ Ｍｅｄ． ３１９：１６７６， １９８８を参照されたい）。

【0407】

実施形態では、がんは骨髄増殖性新生物、例えば、原発性または特発性骨髄線維症（ＭＦ）、本態性血小板増加症（ＥＴ）、真性赤血球増加症（ＰＶ）、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。実施形態では、対象は骨髄線維症を有する。実施形態では、対象は、カルレティキュリン突然変異、例えば、本明細書に開示されるカルレティキュリン突然変異を有する。実施形態では、対象はＪＡＫ２－Ｖ６１７Ｆ突然変異を有さない。実施形態では、対象は、ＪＡＫ２－Ｖ６１７Ｆ突然変異を有する。実施形態では、対象はＭＰＬ突然変異を有する。実施形態では、対象はＭＰＬ突然変異を有さない。

【0408】

実施形態では、がんは、固形がんである。例示的な固形がんとしては、卵巣がん、直腸がん、胃がん、精巣がん、肛門領域のがん、子宮がん、結腸がん、直腸がん、腎細胞癌、肝臓がん、肺の非小細胞癌、小腸のがん、食道のがん、黒色腫、カポジ肉腫、内分泌系のがん、甲状腺のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚もしくは眼球の悪性黒色腫、子宮がん、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、類表皮がん、頸部扁平上皮がんの癌、卵管の癌、子宮内膜の癌、膣の癌、軟部組織の肉腫、尿道のがん、外陰部の癌、陰茎のがん、膀胱のがん、腎臓もしくは尿管のがん、腎盂の癌、脊髄軸腫瘍、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、前記がんの転移性病変、これらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。

【0409】

炎症性および自己免疫障害
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗ＮＫｐ３０抗体分子、例えば多特異性抗体分子は、炎症性疾患および自己免疫疾患、ならびに移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）を処置するために使用することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体分子、例えば、多特異性抗体分子は、例えば、ＮＫ細胞、例えば、ＮＫｐ３０発現細胞を自己反応性Ｔ細胞に指向させることによって、自己反応性自己Ｔ細胞を枯渇させる。一部の実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子は、自己反応性Ｔ細胞、例えば、炎症性障害または自己免疫障害に関連する自己反応性Ｔ細胞の表面に存在する抗原に結合する結合特異性をさらに含む。

【0410】

本明細書で使用される場合、用語「自己免疫」疾患、障害、または状態は、身体の免疫系が自身の細胞または組織を攻撃する疾患を指す。自己免疫疾患は、自身の抗原または自己抗原に対して不適切に産生され、および／または過剰に産生される自己抗体の産生をもたらすことがある。自己免疫疾患としては、心臓血管疾患、リウマチ性疾患、腺疾患、胃腸疾患、皮膚疾患、肝臓疾患、神経学的疾患、筋肉疾患、腎臓疾患、生殖に関する疾患、結合組織疾患および全身性疾患が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、自己免疫疾患は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、先天免疫細胞（例えば、マクロファージ、好酸球、もしくはナチュラルキラー細胞）、または補体媒介性経路により媒介される。

【0411】

本発明の抗体を投与することによって処置され得る自己免疫障害の例としては、限定円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アディソン病、副腎腺の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵胞炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、腹腔スプルー皮膚炎、慢性疲労免疫機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、チャーグ－ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本質的な混合クリオグロブリン血症、原発性線維筋痛症、糸球体腎炎、グレイブス病、ギラン－バール、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ神経障害、若年性関節炎、扁平苔癬、全身性エリテマトーデス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、１型または免疫介在性糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多慢性炎、多腺症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフマン症候群、全身性エリテマトーデス、紅斑性狼瘡、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、横脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、疱疹状皮膚炎血管炎などの血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、自己免疫障害は、ＳＬＥまたは１型糖尿病である。

【0412】

本発明の方法に従って予防するか、処置するかまたは管理することができる炎症性障害の例には、限定されないが、喘息、脳炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー性障害、敗血症性ショック、肺線維症、未分化脊椎関節症、未分化関節症、関節炎、炎症性骨溶解、および慢性ウイルス感染または細菌感染に起因する慢性炎症が含まれる。

【0413】

したがって、本発明の抗ＮＫｐ３０抗体分子、例えば、多特異性分子は、炎症性疾患および自己免疫疾患の処置における有用性を有する。
感染症
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗ＮＫｐ３０抗体分子、例えば、多特異性抗体分子は、感染症を処置するために使用することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体分子、例えば、多特異性抗体分子は、ウイルス抗原または細菌抗原を発現する細胞を枯渇させる。一部の実施形態では、抗ＮＫｐ３０抗体分子は、感染細胞、例えば、ウイルス感染細胞の表面に存在する抗原に結合する結合特異性をさらに含む。

【0414】

方法によって処置可能な感染症を引き起こす病原性ウイルスのいくつかの例は、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、Ｂ、またはＣ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩ、およびＣＭＶ、エプスタインバーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウイルス性脳炎ウイルスを含む。一実施形態では、感染はインフルエンザ感染である。

【0415】

別の実施形態では、感染は、肝炎感染、例えば、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎感染である。
処置することができる例示的なウイルス性疾患としては、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ＳＩＶ、結核、マラリアおよびＨＣＭＶが含まれる。本発明の方法によって処置可能な感染症を引き起こす病原性細菌のいくつかの例には、梅毒、クラミジア、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、レンサ球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌およびコノコッキ（ｃｏｎｏｃｏｃｃｉ）、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、桿菌、コレラ、破傷風、ボツリヌス、炭疽、レプトスピラ、およびライム病細菌が挙げられるが、これらに限定されない。抗ＮＫｐ３０抗体分子は、前述の感染のための既存の処置法と組み合わせて使用することができる。例えば、梅毒の処置には、ペニシリン（例えば、ペニシリンＧ）、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、セフトリアキソンおよびアジスロマイシンが含まれる。

【0416】

診断的使用
一態様では、本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば、組織生検などの生体試料）、例えば、がん性組織由来のもの）またはｉｎ ｖｉｖｏ（例えば、対象におけるインビボイメージング）におけるＮＫｐ３０タンパク質の存在を検出するための診断方法を提供する。本方法は、（ｉ）試料を本明細書に記載される抗体分子と接触させるステップ、または抗体分子を対象に投与するステップ；（必要に応じて）（ｉｉ）参照試料、例えば、対照試料（例えば、血漿、組織、生検などの対照生体試料）または対照となる対象）と接触させるステップ；および（ｉｉｉ）抗体分子と試料もしくは対象、または対照飼料もしくは対照との間の複合体の形成を検出するステップを含み、対称試料または対照に対する、試料または対象における複合体の形成における変化、例えば、実質的に有意な変化は、試料中のＮＫｐ３０の存在を示す。抗体分子は、結合または非結合抗体の検出を容易にするために、検出可能な物質で直接的または間接的に標識することができる。適切な検出可能な物質には、上記され、より詳細には下記に記載されるように、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光材料および放射性材料が含まれる。

【0417】

用語「試料」は、ポリペプチドを検出するために使用される試料を指す場合、限定されないが、細胞、細胞溶解物、細胞のタンパク質もしくは膜抽出物、体液、または組織試料を含む。

【0418】

抗体分子とＮＫｐ３０との間の複合体形成は、ＮＫｐ３０抗原に結合した結合分子もしくは結合していない結合分子のいずれかを測定または可視化することによって検出することができる。従来の検出アッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学を用いることができる。抗体分子を標識する代わりに、ＮＫｐ３０の存在は、検出可能な物質および非標識抗体分子で標識された標準を利用する競合免疫アッセイによって、試料中でアッセイすることができる。このアッセイでは、生体試料、標識された標準および抗体分子を組み合わせ、標識されていない結合分子に結合した標識された標準の量を決定する。試料中のＮＫｐ３０の量は、抗体分子に結合した標識された標準の量に反比例する。

【実施例】

【0419】

以下の実施例は、本発明の理解を助けるために記載されるが、いかなる意味においてもその範囲を限定することを意図するものではなく、またそのように解釈されるべきではない。

【0420】

実施例１：抗ＮＫｐ３０抗体を生成するためのアルメニアンハムスターの免疫化
簡潔に述べれば、完全フロイントアジュバント中のヒトＮＫｐ３０タンパク質の細胞外ドメインを用いてアルメニアンハムスターを免疫化し、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のＮＫｐ３０を用いて１４日目および２８日目に２回ブーストした。５６日目にさらに１回のＩＦＡ中のブーストを与え、３日後に動物を回収した。脾臓を収集し、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞系と融合させた。１２５ｕｌ中の０．９×１０＾５細胞／ウェルを９６ウェルプレートに入れ、選択用のＨＡＴまたはＨＴ、ならびに必要に応じて７日目、１１日目およびその後のＨｙｂｒｉｄｏｍａ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ（最終１％）の非存在または存在下で２０％のウシ胎仔血清、４ｍＭのＬ－グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５０Ｕのペニシリン、５０μｇのストレプトマイシンおよび５０μＭの２－ＭＥを補足した１２５μｌのＩ－２０＋２ＭＥ＋ＨＡＴ（ＩＭＤＭ（４ｇ／Ｌグルコース）を与えた。融合の約２週後（細胞は約５０％コンフルエント）に上清を収集し、結合についてアッセイした。

【0421】

実施例２：ＮＫｐ３０ ｍＡｂについてのハイブリドーマスクリーニング
Ｅｘｐｉ２９３細胞にＢＧ１６０（ｈＮＫｐ３０細胞抗原）をトランスフェクトし、１８時間後にスクリーニングを行った。スクリーニングの日に、トランスフェクトされた細胞を０．０５×１０^＾６／ｍＬに希釈し、抗アルメニアンハムスターＦｃ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８を０．４ｕｇ／ｍＬの最終濃度まで加えた。５０ｕＬ（２，５００細胞）のこの混合物を３８４ウェルプレートの各ウェルに加えた。二次（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）と共に同じ密度の非トランスフェクト２９３細胞を陰性対照として使用した。５ｕＬのハイブリドーマ上清を細胞混合物に加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを次にＭｉｒｒｏｒｂａｌｌ上でイメージングした。陽性クローンを同定し、段階希釈によりサブクローニングしてクローン選択ハイブリドーマを得た。同じプロトコールを使用した再確認後にハイブリドーマ細胞を回収し、対応する重鎖および軽鎖配列を取得した。対応する抗体のその後の発現およびさらなる検証のためにＤＮＡをｐｃＤＮＡ３．４にサブクローニングした。

【0422】

実施例３：ＮＫ９２細胞へのＮＫｐ３０抗体の結合
０．５％のＢＳＡおよび０．１％のアジ化ナトリウムを含有するＰＢＳ（染色緩衝液）を用いてＮＫ－９２細胞を洗浄し、２００，０００細胞／ウェルで９６ウェルＶ底プレートに加えた。ハムスターＮＫｐ３０抗体を２．０倍段階希釈で細胞に加え、室温で１時間インキュベートした。染色緩衝液を用いてプレートを２回洗浄した。ＡＦ６４７に共役したハムスターＦｃに対する二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ、１２７－６０５－１６０）を１：１００希釈（１．４ｍｇ／ｍｌストック）で加え、細胞と共に４℃で３０分間インキュベートし、続いて染色緩衝液を用いて洗浄した。細胞をその後に、４％のパラホルムアルデヒドを用いて室温で１０分間固定した。プレートをＣｙｔｏＦＬＥＸ ＬＳ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）上で読み取った。パーセント－ＡＦ７４７陽性集団としてデータを算出した（図１）。

【0423】

実施例４：ＮＫ９２細胞系を使用するＮＫｐ３０抗体の活性を測定するためのバイオアッセイ
ＮＫｐ３０抗体をＰＢＳ中で３倍段階希釈し、平底９６ウェルプレート中２～８℃で終夜インキュベートした。プレートをＰＢＳ中で２回洗浄し、ＩＬ－２を含有する増殖培地に４０，０００個のＮＫ－９２細胞を加えた。３７℃、５％のＣＯ２の加湿されたインキュベーターでプレートを１６～２４時間インキュベートした後に上清を収集した。ＭＳＤアッセイの使用説明書に従って上清中のＩＦＮγレベルを測定した（図２）。ハムスターアイソタイプＩｇＧとインキュベートされた細胞から収集した上清を陰性対照として使用し、ＮＫｐ３０モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ、クローン２１０８４７）とインキュベートされた細胞からの上清を陽性対照として利用した。ハムスター抗ＮＫｐ３０ ｍＡＢを使用してデータを生成した。

【0424】

実施例５：ヒト化抗ＮＫｐ３０抗体の生成および特徴付け
一連のハムスター抗ＮＫｐ３０抗体を選択した。これらの抗体は、ヒトＮＫｐ３０およびカニクイザルＮＫｐ３０に結合し、ＮＫ－９０細胞からのＩＦＮγ産生を誘導することが示された（データ示さず）。例示的なハムスター抗ＮＫｐ３０抗体１５Ｅ１、９Ｇ１、１５Ｈ６、９Ｄ９、３Ａ１２、および１２Ｄ１０のＶＨおよびＶＬ配列を表９に開示する。１５Ｅ１、９Ｇ１、および１５Ｈ６に基づく例示的なヒト化抗ＮＫｐ３０抗体のＶＨおよびＶＬ配列も表９に開示する。これらの抗体のＫａｂａｔ ＣＤＲを表１８および表８に開示する。

【0425】

１５Ｅ１に基づく２つのヒト化された構築物を選択した。第１の構築物ＢＪＭ０４０７は、配列番号７３０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７３０５のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を含むＦａｂである。その対応するｓｃＦｖ構築物ＢＪＭ０８５９は配列番号７３１０のアミノ酸配列を含む。第２の構築物ＢＪＭ０４１１は、配列番号７３０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７３０９のアミノ酸配列を含むカッパ軽鎖可変領域を含むＦａｂである。その対応するｓｃＦｖ構築物ＢＪＭ０８６０は配列番号７３１１のアミノ酸配列を含む。ＢＪＭ０４０７およびＢＪＭ０４１１は、同等の生物物理学的特徴、例えば、ＮＫｐ３０に対する結合親和性および熱安定性を示した。ｓｃＦｖ構築物ＢＪＭ０８５９およびＢＪＭ０８６０もまた同等の生物物理学的特性を示した。

【0426】

参考文献による組み込み
本明細書に言及されるすべての刊行物、特許、および受入番号は、個々の刊行物または特許が、参照により組み入れられるように具体的であり、個別に示されているかのように、それらの全体が参照により本明細書に組み入れられる。

【0427】

同等物
本発明の特定の実施形態について検討してきたが、上記の明細書は例示的なものであり、制限的なものではない。本発明の多数のバリエーションは、本明細書および以下の特許請求の範囲を考察することにより、当業者に明らかになる。本発明の全範囲は、特許請求の範囲、それらの同等物の全範囲、および本明細書を、このような変形とともに参照することによって決定されるべきである。本明細書は以下の発明の開示を包含する。
［項目１］ＮＫｐ３０に結合する単離された抗体分子であって、
（ｉ）配列番号７３１３の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号７３１５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに／あるいは
（ｉｉ）配列番号７３２６の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号７３２７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号７３２９のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、抗体分子。
［項目２］抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号７２９８もしくは７３００～７３０４のいずれかのアミノ酸配列（または配列番号７２９８もしくは７３００～７３０４のいずれかと少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および／または
（ｉｉ）配列番号７２９９もしくは７３０５～７３０９のいずれかのアミノ酸配列（または配列番号７２９９もしくは７３０５～７３０９のいずれかと少なくとも約９３％、９５％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ
を含む、項目１に記載の抗体分子。
［項目３］抗原結合性ドメインが、
（ｉ））配列番号７３０２のアミノ酸配列（または７３０２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および配列番号７３０５のアミノ酸配列（または７３０５と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ；または
（ｉｉ）配列番号７３０２のアミノ酸配列（または７３０２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および配列番号７３０９のアミノ酸配列（または７３０９と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ
を含む、項目２に記載の抗体分子。
［項目４］抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号７３１０のアミノ酸配列（または７３１０と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）；または
（ｉｉ）配列番号７３１１のアミノ酸配列（または７３１１と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）
を含む、項目１から３のいずれかに記載の抗体分子。
［項目５］ＮＫｐ３０に結合する単離された抗体分子であって、
（ｉ）配列番号６０００の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００２のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに
（ｉｉ）配列番号６０６３の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号７２９３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、抗体分子。
［項目６］抗原結合性ドメインが、
（１）配列番号６００３の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００４のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００５のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６００６のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および／あるいは
（２）配列番号６０６６の軽鎖フレームワーク領域（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０６７のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号７２９２のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０６９のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、項目５に記載の抗体分子。
［項目７］抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号６１２１のアミノ酸配列（または配列番号６１２１と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および／または
（ｉｉ）配列番号７２９４のアミノ酸配列（または配列番号７２９４と少なくとも約９３％、９５％、もしく９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ
を含む、項目５または６に記載の抗体分子。
［項目８］抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号６００７の重鎖相補性決定領域１（ＶＨＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６００８のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６００９のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然
変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに
（ｉｉ）配列番号６０７０の軽鎖相補性決定領域１（ＶＬＣＤＲ１）アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、および／または配列番号６０７２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（または１、２、３、もしくは４個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、項目５から７のいずれかに記載の抗体分子。
［項目９］抗原結合性ドメインが、
（１）配列番号６０１０の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１１のＶＨＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０１２のＶＨＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０１３のＶＨＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および／あるいは
（２）配列番号６０７３の軽鎖フレームワーク領域（ＶＬＦＷＲ１）アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７４のＶＬＦＷＲ２アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、配列番号６０７５のＶＬＦＷＲ３アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）、または配列番号６０７６のＶＬＦＷＲ４アミノ酸配列（またはそれからの１、２、３、４、５、もしくは６個以下の突然変異、例えば、置換、付加、または欠失を有する配列）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、項目５から８のいずれかに記載の抗体分子。
［項目１０］抗原結合性ドメインが、
（ｉ）配列番号６１２２のアミノ酸配列（または配列番号６１２２と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＨ、および／または
（ｉｉ）配列番号６１３６のアミノ酸配列（または配列番号６１３６と少なくとも約９３％、９５％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含むＶＬ
を含む、項目５から９のいずれか１項に記載の抗体分子。
［項目１１］項目１から１０のいずれかに記載の抗体分子を含む多特異性分子。
［項目１２］ａ．例えば、本明細書に記載される腫瘍標的化部分；
ｂ．例えば、本明細書に記載されるサイトカイン分子；
ｃ．例えば、本明細書に記載されるＴ細胞エンゲージャー；または
ｄ．例えば、本明細書に記載される間質改変部分
のうちの１つ、２つ、３つ、４つまたはそれ以上をさらに含む、項目１１に記載の多特異性分子。
［項目１３］自己反応性Ｔ細胞、例えば、炎症性障害または自己免疫障害に関連する自己反応性Ｔ細胞の表面に存在する抗原に結合する結合特異性をさらに含む、項目１１に記載の多特異性分子。
［項目１４］感染細胞、例えば、ウイルスまたは細菌感染細胞に結合する結合特異性をさらに含む、項目１１に記載の多特異性分子。
［項目１５］単一特異性抗体分子、二特異性抗体分子、または三特異性抗体分子である、項目１から１０のいずれかに記載の抗体分子または項目１１から１４のいずれかに記載の多特異性分子。
［項目１６］一価抗体分子、二価抗体分子、または三価抗体分子である、項目１から１０のいずれかに記載の抗体分子または項目１１から１４のいずれかに記載の多特異性分子。
［項目１７］全長抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全重鎖と、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全軽鎖とを含む抗体）、または抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）、二価抗体、または二重特異性抗体もしくはその断片、その単一ドメインバリアント、またはラクダ抗体）である、項目１から１０、１５もしくは１６のいずれかに記載の抗体分子または項目１１から１５のいずれかに記載の多特異性分子。
［項目１８］ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域、またはその断片を含む、項目１から１７のいずれかに記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目１９］カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域、またはその断片を含む、項目１から１８のいずれかに記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２０］免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つまたは複数を増加または減少させるために、変更、例えば、突然変異される、項目１から１９のいずれかに記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２１］第１および第２の免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の境界部が、例えば、操作されていない境界部と比較して、二量体化を増加または減少させるために、変更、例えば、突然変異される、項目１から２０のいずれかに記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２２］免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の二量体化が、第１および第２のＦｃ領域のＦｃ境界部に、対になった孔と突起（「ノブ・イン・ホール」）、静電相互作用、または鎖交換のうちの１つまたは複数を提供し、それによって、例えば、操作されていない境界部と比較して、より高い比のヘテロ多量体：ホモ多量体が形成されることにより、増強される、項目２１に記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２３］免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、例えば、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７、または４０９のうちの１つまたは複数から選択される位置にアミノ酸置換を含む、項目２１または２２に記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２４］免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、もしくはＹ４０７Ｖ（例えば、孔またはホールに対応する）、またはＴ３６６Ｗ（例えば、突起またはノブに対応する）、またはそれらの組合せから選択されるアミノ酸置換を含む、項目２１に記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２５］リンカー、例えば、標的化部分とサイトカイン分子もしくは間質改変部分、標的化部分と免疫細胞エンゲージャー、サイトカイン分子もしくは間質改変部分、および免疫細胞エンゲージャー、サイトカイン分子もしくは間質改変部分と免疫グロブリン鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）、標的化部分と免疫グロブリン鎖定常領域、または免疫細胞エンゲージャーと免疫グロブリン鎖定常領域のうちの１つまたは複数の間にリンカーをさらに含む、項目１から２４のいずれかに記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２６］リンカーが、切断性リンカー、非切断性リンカー、ペプチドリンカー、可撓性リンカー、剛性リンカー、ヘリックスリンカー、または非ヘリックスリンカーから選択される、項目２５に記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２７］リンカーがペプチドリンカーである、項目２６に記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２８］ペプチドリンカーがＧｌｙおよびＳｅｒを含む、項目２７に記載の抗体分子または多特異性分子。
［項目２９］本明細書に記載される抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子のいずれかをコードするヌクレオチド配列、あるいはそれらに対して実質的に相同である（例えば、それらに対して少なくとも９５％～９９．９％同一である）ヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
［項目３０］項目１から２９のいずれかに記載の抗体分子または多特異性分子をコードする単離された核酸。
［項目３１］項目２９または３０に記載の核酸分子のうちの１つまたは複数を含むベクター、例えば、発現ベクター。
［項目３２］項目２９から３１のいずれか１項に記載の核酸分子またはベクターを含む宿主細胞。
［項目３３］項目１から２８のいずれかに記載の抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドを作製する、例えば、産生する方法であって、適切な条件、例えば、遺伝子発現および／またはホモもしくはヘテロ二量体化に適した条件下で、項目３２に記載の宿主細胞を培養するステップを含む、方法。
［項目３４］項目１から２８のいずれかに記載の抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドと、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤とを含む医薬組成物。
［項目３５］がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、項目１から１２または１５から２８のいずれかに記載の抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドを投与するステップを含み、多特異性抗体ががんを処置するのに有効な量で投与される、方法。
［項目３６］がんを処置する際における使用のための、項目１から１２または１５から２８のいずれかに記載の抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチド。
［項目３７］がんが固形腫瘍がんまたは転移性病変である、項目３５に記載の方法または項目３６に記載の使用。
［項目３８］固形腫瘍がんが、膵臓がん（例えば、膵臓腺癌）、乳がん、結腸直腸がん、肺がん（例えば、小細胞もしくは非小細胞肺がん）、皮膚がん、卵巣がん、または肝臓がんのうちの１つまたは複数である、項目３７に記載の方法または項目３７に記載の使用。
［項目３９］がんが血液がんである、項目３５に記載の方法または項目３６に記載の使用。
［項目４０］第２の治療処置を施すステップをさらに含む、項目３５もしくは３７から３９のいずれかに記載の方法または項目３６から３９のいずれかに記載の使用。
［項目４１］第２の治療処置が、治療剤（例えば、化学療法剤、生物剤、ホルモン療法）、放射線、または外科手術を含む、項目４０に記載の方法または項目４０に記載の使用。
［項目４２］治療剤が、化学療法剤または生物剤から選択される、項目４１に記載の方法または項目４１に記載の使用。
［項目４３］自己免疫障害または炎症性障害を処置する方法であって、それを必要とする対象に、項目１から１１、１３、または１５から２８のいずれかに記載の抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドを投与するステップを含み、多特異性抗体が自己免疫障害または炎症性障害を処置するのに有効な量で投与される、方法。
［項目４４］自己免疫障害または自己炎症性障害を処置する際における使用のための、項目１から１１、１３または１５から２８のいずれかに記載の抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチド。
［項目４５］感染性障害を処置する方法であって、それを必要とする対象に、項目１から１１または１４から２８のいずれかに記載の抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチドを投与するステップを含み、多特異性抗体が感染性障害を処置するのに有効な量で投与される、方法。
［項目４６］感染性障害を処置する際における使用のための、項目１から１１または１４から２８のいずれかに記載の抗体分子または多特異性もしくは多機能性分子ポリペプチド。

【図1】

【図2】

【配列表】

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