特許 7580872 アガー又はアガロースビーズを製造する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-01

(45)【発行日】2024-11-12

(54)【発明の名称】アガー又はアガロースビーズを製造する方法

(51)【国際特許分類】

   C08B 37/12 20060101AFI20241105BHJP

   B01J 2/10 20060101ALI20241105BHJP

   B01F 25/40 20220101ALI20241105BHJP

   B01F 23/41 20220101ALI20241105BHJP

   C08J 3/16 20060101ALI20241105BHJP

【ＦＩ】

C08B37/12 A

B01J2/10 A

B01F25/40

B01F23/41

C08J3/16 CEP

【請求項の数】 25

(21)【出願番号】P 2021564360

(86)(22)【出願日】2020-04-28

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-06-30

(86)【国際出願番号】 EP2020061790

(87)【国際公開番号】W WO2020221762

(87)【国際公開日】2020-11-05

【審査請求日】2023-03-28

(31)【優先権主張番号】1905919.5

(32)【優先日】2019-04-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(73)【特許権者】

【識別番号】516105833

【氏名又は名称】サイティバ・バイオプロセス・アールアンドディ・アクチボラグ

(74)【代理人】

【識別番号】100188558

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100154922

【弁理士】

【氏名又は名称】崔 允辰

(74)【代理人】

【識別番号】100207158

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 研二

(72)【発明者】

【氏名】スサンナ・リンドベリ

(72)【発明者】

【氏名】ヨーナス・グスタフソン

(72)【発明者】

【氏名】リン・カールソン

(72)【発明者】

【氏名】アンデルシュ・ハグヴァール

(72)【発明者】

【氏名】エーリク・リングベリ

(72)【発明者】

【氏名】ダーヴィド・ヤンソン

【審査官】土橋 敬介

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１０－５２５１３８（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第８９／０１１４９３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】中国特許出願公開第１０３１９４００８（ＣＮ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０８Ｂ

Ｃ０８Ｊ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ）４０～１００℃の温度でアガー又はアガロースの水性溶液を含む水相を提供する工程；
ｂ）４０～１００℃の温度で水非混和性溶媒及び乳化剤を含む油相を提供する工程；
ｃ）前記油相中で前記水相を乳化して、油中水型エマルションを形成する工程；
ｄ）前記油中水型エマルションを前記アガー又はアガロースのゲル化温度未満の温度まで冷却して、固化したアガー又はアガロースビーズの分散体を形成する工程；及び
ｅ）前記分散体からアガー又はアガロースビーズを回収する工程
を含む、アガー又はアガロースビーズを製造する方法であって、
前記乳化剤は、アルコキシル化脂肪アルコールのリン酸エステルを含む、方法。

【請求項2】

前記水非混和性溶媒が、トルエン又はキシレンを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記油相が、０．１質量％未満のアルキルフェノール又はアルキルフェノール誘導体を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記油相が、アルキルフェノール及びアルキルフェノール誘導体を含まない、又は実質的に含まない、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記乳化剤が、前記アルコキシル化脂肪アルコールのリン酸モノエステル及びリン酸ジエステルの混合物を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記脂肪アルコールが、一つ又は複数のＣ１０～Ｃ２０直鎖状若しくは分岐状の、第一級若しくは第二級、アルカノール又はアルケノールを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記アルコキシル化脂肪アルコールが、構造
Ｒ_１－Ｏ－（Ｒ_２－Ｏ）_ｎ－Ｈ （Ｉ）
（式中：
Ｒ_１は、飽和若しくは不飽和の、直鎖状若しくは分岐状、脂肪族Ｃ_１０～Ｃ_２０炭化水素であり、
Ｒ_２は、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－及び－ＣＨ_２（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－の混合物であり、
ｎは２～２０である）
を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記乳化剤が、
Ｒ_１－Ｏ－（Ｒ_２－Ｏ）_ｎ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－ＯＨ 及び （ＩＩ）
Ｒ_１－Ｏ－（Ｒ_２－Ｏ）_ｎ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－（Ｏ－Ｒ_２）_ｎ－Ｏ－Ｒ_１ （ＩＩＩ）
（式中：
Ｒ_１は、飽和若しくは不飽和の、直鎖状若しくは分岐状、脂肪族Ｃ_１０～Ｃ_２０炭化水素であり、
Ｒ_２は、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－及び－ＣＨ_２（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－の混合物であり、
ｎは２～２０である）
の混合物を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

式中、Ｒ_１は、飽和又は不飽和の直鎖状脂肪族Ｃ_１０～Ｃ_１８炭化水素である、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

式中、ｎは２～１０（例えば２～５）である、請求項８に記載の方法。

【請求項11】

前記乳化剤が、Ｃ_１０～Ｃ_１６アルカノールの混合エチレンオキシド＋プロピレンオキシド付加物のリン酸モノエステル及びリン酸ジエステルの混合物を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

前記乳化剤が、オレス－３－リン酸を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記アガー又はアガロースの水性溶液は、１～８質量％のアガー又はアガロースを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

前記油相は、０．０１～２質量％の前記乳化剤を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項15】

工程ｃ）が、攪拌槽内で前記水相及び前記油相を混合して、油中水型エマルションを形成する工程を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項16】

工程ｃ）が、ローターステーターミキサーを介して前記油中水型エマルションを通過させて、前記油中水型エマルションの液滴径を低減させる工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

工程ｃ）が、スタティックミキサーを介して前記油中水型エマルションを通過させて、前記油中水型エマルションの液滴径を低減させる工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

工程ｃ）が、多孔質膜を介して前記油中水型エマルションを通過させて、前記油中水型エマルションの液滴径を低減させる工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項19】

工程ｃ）が、多孔質膜を介して前記水相を前記油相中に通過させて、油中水型エマルションを形成する工程を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項20】

工程ｄ）が、攪拌槽内で実行される、請求項１に記載の方法。

【請求項21】

工程ｄ）が、縦方向に減少する温度勾配を有する導管を介して前記油中水型エマルションを通過させることにより実行される、請求項１に記載の方法。

【請求項22】

工程ｅ）が、前記分散体に水又は水性溶液を添加する工程、前記油相を注ぎ移す工程、及び前記アガー又はアガロースビーズを沈殿物として回収する工程を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項23】

工程ｅ）が、水又は水性溶液で前記アガー又はアガロースビーズを洗浄して、残留する乳化剤を回収する工程を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項24】

工程ｅ）の後、前記アガー又はアガロースビーズを架橋する工程ｆ）をさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項25】

工程ｅ）の後、リガンドを前記アガー又はアガロースビーズにカップリングする工程ｇ）をさらに含む、請求項１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、アガー／アガロースビーズ、より詳細にはアガー又はアガロースビーズを製造する方法に関する。また、本発明は、本方法での使用に好適な乳化剤にも関する。

【背景技術】

【0002】

アガロースビーズは、数十年間、タンパク質及び他の生体マクロ分子のクロマトグラフ分離での固定相として使用されている。それらは、典型的には、逆懸濁ゲル化によって調製され、そこではアガロース又はアガーの高温の水性溶液が高温の油相中で乳化され、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルションが形成される。その後、エマルションはアガロース／アガーのゲル化温度未満に冷却されて、ゲルビーズが作られ、その後それらは回収されて分離目的のために使用され得る。このようのプロセスは、例えば、S HjertenによるBiochim Biophys Acta 79(2)、393-398頁、1964年、国際公開第1989011493号及び米国特許第20180171484号において記載されており、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれている。ゲル化後の硫酸基の加水分解によりアガービーズがアガロースビーズに変換されている変形例（variant）は、米国特許第20100084345号に記載されており、これもまた、参照によりその全体が組み込まれている。

【0003】

プロセスにおいて、乳化剤を使用することがＷ／Ｏエマルションの安定化のために不可欠である。また、乳化剤は、得られるビーズのサイズ分布及びそれらの形状にとっても重要であることがある。さらに、乳化剤は、洗浄によりビーズから容易に取り除かれる必要があり、環境への負担が小さく、ビーズを医薬品の製造に使用する場合、有毒な浸出物を生み出さないことが必要である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【文献】国際公開第1989011493号

【文献】米国特許第20180171484号

【文献】米国特許第20100084345号

【非特許文献】

【0005】

【文献】S Hjerten : Biochim Biophys Acta 79(2)、393-398頁、1964年

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

前述した乳化剤は、これらの態様のうちのいくつかが欠けており、したがって、さらなる乳化剤の必要性がある。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明の一態様は、アガー又はアガロースビーズを製造する方法を提供することである。これは、
ａ）４０～１００℃の温度でアガー又はアガロースの水性溶液を含む水相を提供する工程；
ｂ）４０～１００℃の温度で水非混和性溶媒及び乳化剤を含む油相を提供する工程；
ｃ）油相中で水相を乳化して、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルションを形成する工程；
ｄ）Ｗ／Ｏエマルションをアガー又はアガロースのゲル化温度未満の温度まで冷却して、固化したアガー又はアガロースビーズの分散体を形成する工程；及び
ｅ）分散体からアガー又はアガロースビーズを回収する工程
を含む方法であって、
乳化剤は、アルコキシル化脂肪アルコールのリン酸エステルを含む、方法で達成される。

【0008】

一つの利点は、工程ｄ）の間のビーズの凝集が防止されることであり、その結果、真球度が高く十分に分散されたビーズが製造される。さらなる利点は、乳化剤が水溶性であり、水洗浄による除去を容易にすること、及びそれがアルキルフェノール誘導体等の内分泌かく乱物質を含まないことである。

【0009】

本発明のさらなる態様は、上述の方法により得られるアガー又はアガロースビーズを提供することである。

【0010】

本発明のさらに好適な実施形態は、従属請求項に記載されている。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】図１は、十分に安定化されたＷ／Ｏアガロースエマルションから形成された十分に分散した球状のアガロースビーズの一例を示す。

【図2】図２は、Ｗ／Ｏアガロースエマルションの冷却の間に形成される可能性がある凝集体（矢印で指し示されている）を有するアガロースビーズの一例を示す。

【図3】図３は、非球形で、部分的に融合したビーズ（矢印で指し示されている）を有するアガロースビーズの一例を示す。

【図4】図４は、О／Ｗ／О二重エマルションの形成により生じた、ビーズ内の球形の内包物（矢印で指し示されている）を有するアガロースビーズの一例を示す。

【発明を実施するための形態】

【0012】

一態様において、本発明は、アガー又はアガロースビーズを製造する方法を開示する。本方法は、以下の工程を含む。

【0013】

ａ）４０～１００℃の温度でアガー又はアガロースの水性溶液を含む水相を提供する工程。水相は、例えば、１～８質量％のアガー又はアガロース、例えば２～７質量％、例えば約２質量％、約４質量％、又は約６質量％のアガー又はアガロースを含んでもよい。水相は、弱塩基等の一つ又は複数のバッファー成分をさらに含み得る。アガー又はアガロースは、天然（native）アガー、天然アガロース又はアガー若しくはアガロースの誘導体、例えば、アリルアガロース若しくはヒドロキシエチルアガロース、さらには米国特許第6602990号及び米国特許第7396467号に記載されているものであってもよく、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれている。

【0014】

ｂ）４０～１００℃の温度（好適には溶媒の沸点未満の温度）で水非混和性溶媒及び乳化剤を含む油相を提供する工程。水非混和性溶媒は、例えば炭化水素、エステル又はケトンであり得る。効率的な溶媒回収を容易にするために、溶媒は、大気圧下で、約９０～１７０℃の範囲、例えば９０～１５０℃、又は１００～１２０℃の沸点を有してもよい。それは、例えばトルエン（沸点１１１℃）又はキシレン（沸点約１４０℃：ｍ－キシレンについて１３９℃及びｏ－キシレンについて１４４℃）であり得る。あるいは、それは環状ケトン、例えば２－メチルシクロヘキサノン（沸点１６２～１６３℃）であり得る。また、鉱油又は植物油等の高沸点溶媒を使用することも可能であるが、その場合、溶媒の回収がより困難になることがある。乳化剤の特性は、以下でさらに記載する。乳化剤は単独の乳化剤であってもよく、油相はいくつかの乳化剤の混合物を含んでもよい。油相中の乳化剤の濃度（又は全乳化剤の濃度）は、例えば０．０１～２質量％、例えば０．０１５～１質量％であってもよい。好適には、乳化剤のいずれも、アルキルフェノール又はアルキルフェノール誘導体を含まない。油相は、例えば、０．１質量％未満、例えば、０．０１質量％未満、又は０．００１質量％未満のアルキルフェノール又はアルキルフェノール誘導体を含み得る。アルキルフェノール及びアルキルフェノール誘導体を含まないことさえもあり得る。

【0015】

ｃ）油相中で水相を乳化して、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルションを形成する工程。乳化は、攪拌槽内で水相及び油相を混合して、Ｗ／Ｏエマルションを形成する工程を含んでもよい。工程はさらに、ローターステーターミキサー、スタティックミキサー又は多孔質膜を介してＷ／Ｏエマルションを通過させて、Ｗ／Ｏエマルションの液滴径を低減させる工程をさらに含んでもよい。エマルションを形成する代替的方法において、水相を多孔質膜又はふるい板を介して油相中に通過させ、Ｗ／Ｏエマルションを形成し得る。

【0016】

ｄ）Ｗ／Ｏエマルションをアガー又はアガロースのゲル化温度未満の温度まで冷却して、固化したアガー又はアガロースビーズの分散体を形成する工程。この工程は、攪拌槽内でエマルションを徐々に冷却することにより実行され得るか、又は、縦方向に減少する温度勾配を有する導管を介してＷ／Ｏエマルションを通過させることにより連続モードで実行され得る。

【0017】

ｅ）分散体からアガー又はアガロースビーズを回収する工程。回収は、工程ｄ）で得た分散体に水又は水性溶液を添加する工程、油相を注ぎ移す工程、及びアガー又はアガロースビーズを沈殿物として回収する工程を含んでもよい。ビーズは、さらに水又は水性溶液で洗浄され、残留する乳化剤及び／又はその他の物質を取り除いてもよい。有機溶媒での洗浄もまた、乳化剤の残留物及びその他の浸出物（leachable）の除去に適用され得る。

【0018】

工程ｅ）の後、架橋剤、例えばエピクロロヒドリンを添加することにより、ビーズは工程ｆ）で架橋されてもよい。それらはさらに、当業者に知られる方法を用いて、工程ｇ）においてリガンドで官能化されてもよく、ここでリガンドは共有結合している。工程ｇ）は工程ｆ）の後に好適に実行され得るが、非架橋のビーズ上でリガンドを結合することも可能である。

【0019】

本プロセスにより調製されるビーズは、クロマトグラフ分離プロセスにおいて、又はバッチ吸着プロセスにおいて使用され得る。それらは例えば、５～５００μｍ、例えば１０～３５０μｍ、又は３０～１２０μｍの範囲の直径（体積加重メジアン径ｄ５０、ｖとして表される）を有してもよい。

【0020】

上述した乳化剤は、アルコキシル化脂肪アルコールのリン酸エステルを含む。典型的には、それは、アルコキシル化脂肪アルコールのリン酸モノエステル及びリン酸ジエステルの混合物を含み得る。脂肪アルコールは、一つ又は複数のＣ_１０～Ｃ_２０直鎖状若しくは分岐状の、第一級若しくは第二級、アルカノール又はアルケノールを含んでもよく、及び／又はエトキシル化脂肪アルコールは、構造Ｉ
Ｒ_１－Ｏ－（Ｒ_２－Ｏ）_ｎ－Ｈ （Ｉ）
（式中：
Ｒ_１は、飽和若しくは不飽和の、直鎖状若しくは分岐状、脂肪族Ｃ_１０～Ｃ_２０炭化水素、例えば飽和又は不飽和の直鎖状脂肪族Ｃ_１０～Ｃ_１８炭化水素であり、
Ｒ_２は、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－及び－ＣＨ_２（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－の混合物であり、
ｎは２～２０、例えば２～１０又は２～５である）
を有してもよい。

【0021】

この構造は、平均アルコキシル化度がｎである、エトキシル化又は混合エトキシル化／プロポキシル化脂肪アルコールを表す。次に、アルコキシル化脂肪アルコールは、構造ＩＩ及びＩＩＩのリン酸エステルに変換され、ここでＩＩはリン酸モノエステルであり、ＩＩＩはリン酸ジエステルである：
Ｒ_１－Ｏ－（Ｒ_２－Ｏ）_ｎ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－ＯＨ （ＩＩ）
Ｒ_１－Ｏ－（Ｒ_２－Ｏ）_ｎ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－（Ｏ－Ｒ_２）_ｎ－Ｏ－Ｒ_１ （ＩＩＩ）
（式中：
Ｒ_１は、飽和若しくは不飽和の、直鎖状若しくは分岐状、脂肪族Ｃ_１０～Ｃ_２０炭化水素、例えば、飽和又は不飽和の直鎖状脂肪族Ｃ_１０～Ｃ_１８炭化水素であり、
Ｒ_２は、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－又は－ＣＨ_２－ＣＨ_２－及び－ＣＨ_２（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－の混合物であり、
ｎは２～２０、例えば２～１０又は２～５である）。

【0022】

リン酸モノエステルＩＩ及びジエステルＩＩＩの両方は、解離され得る酸性水素を有する酸性化合物である。したがって、本発明のリン酸エステル乳化剤は、酸性の形態で或いは中和された形態で（例えば、ナトリウム塩として、又は代替的にはカリウム塩若しくはアンモニウム塩として）供給され得る。酸性の形態の乳化剤が使用される場合、アガー及びアガロースは、酸性条件下での分解に敏感であるため、塩基を水相に好適に添加して、ｐＨを中性付近に調整してもよい。モノエステルＩＩおよびジエステルＩＩＩに加えて、乳化剤はまた、アルコキシル化脂肪アルコール及び遊離の非エステル化アルコキシル化脂肪アルコールの対応するリン酸トリエステルを含んでもよい。これらの化合物は両方とも非酸性であり、例えば、乳化剤の２５質量％未満又は１５質量％未満等の少量で通常は存在する。

【0023】

特に、乳化剤は、Ｃ_１０～Ｃ_１６アルカノールの混合エチレンオキシド＋プロピレンオキシド付加物のリン酸モノエステル及びリン酸ジエステルの混合物を含んでもよい。そのような製品は、Ｌｕｂｒｈｏｐｈｏｓ（登録商標）ＬＦ－８００（Ｓｏｌｖａｙ）の名前で市販されている。あるいは、乳化剤は、ｎ＝３（オレイルアルコールあたりのエチレングリコール単位の平均数）を有するエトキシル化オレイルアルコールのリン酸モノエステル及びリン酸ジエステルの混合物を含んでもよい。そのような製品は、オレス－３－リン酸のＩＮＣＩ（化粧品成分の国際命名法（International Nomenclature of Cosmetic Ingredients））名の名前で通常知られており、Ｃｒｏｄａｆｏｓ（登録商標）Ｏ３Ａ（Ｃｒｏｄａ）の商品名で市販されている。

【実施例】

【0024】

乳化方法
４９０ｍｌの水中の３５ｇのアガロースの溶液を９５℃で調製し、続いて７．０ｍＭのリン酸塩（phosphate）を添加した後７０℃に冷却して、ｐＨ７．０とした。８５０ｍｌトルエン中の乳化剤の溶液を調製して、３Ｌの恒温ジャケット付き円筒状ガラスリアクター内で６０℃に加熱した。オーバーヘッド撹拌機での攪拌の下、８０ｒｐｍで攪拌しながらアガロース溶液をリアクターに添加し、６０℃でｒｐｍを段階的に増加させながら攪拌を続け、取り出したサンプルから評価し、レーザー回折により分析したアガロースの液滴径が約１００μｍになるまで撹拌した。これらのサンプルは、分析前の融合（coalescence）／凝集を防ぐために、氷で急速に冷却した。次に、リアクタージャケットの温度を２０℃に下げ、アガロースの液滴を固化した。得られたアガロースビーズをトルエン及び／又は水で洗浄し、洗浄液を注ぎ移し、アガロースビーズを沈殿物として回収した。

【0025】

評価方法
分散剤としてエチルセルロースを用いたエタノール分散液中のアガロースビーズに対して、マスターサイザー３０００レーザー回析機器（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を用いて、粒子径分布を測定した。分布は、体積対直径の示差曲線としてプロットされ、各分布のモード（mode）を機器により計算した。モードは分布のピーク、すなわち分布曲線において見られる最も高いピークである。したがって、モードは、分布の中で最も一般的に見いだされる粒子径を表す。エマルションの冷却の前後の両方でサンプルを取り、冷却後のモードと冷却前のモードの間の差をΔモードで示した。これは、冷却の間の粒子径の増加の尺度であり、感度の高い冷却段階の間に発生する融合及び／又は凝集を示す。

【0026】

ビーズはまた、ビーズ中の内包物（油中水中油型（oil-in-water-in-oil）二重エマルションの形成に起因する可能性がある）及び球形の形状（球形からのずれは、液滴の部分的な融合に起因する可能性がある）に関して顕微鏡で視覚的に評価した。凝集、非球形ビーズ、及び内包物を有するビーズの例は、図２～４に示される。

【0027】

乳化剤

【0028】

【表1】

【0029】

実施例１－乳化剤の比較

【0030】

【表2-A】

【表2-B】

【0031】

基本的に、試験した材料の全てが乳化剤として機能する。しかしながら、それらの間に差がある。３つのソルビタンエステルで例示されるように、非イオン性乳化剤は、良好な結果を得るためには２％の濃度で使用する必要がある。これは、回収の間にビーズから大量の乳化剤を洗い流す必要があることを意味し、それは、特にこれらの乳化剤は水溶性でなく溶媒を用いて洗い流さなければならないため、望ましくない。リン酸エステルは低い濃度（０．２％未満）で使用することができ、一般的に水溶性である。Ｌｕｂｒｈｏｐｈ ＬＦ－８００、Ｌｕｂｒｈｏｐｈ ＬＢ－４００、Ｒｈｏｄａｆａｃ ＰＡ／３５、Ｃｒｏｄａｆｏｓ ＣＳ２Ａ及びＣｒｏｄａｆｏｓ Ｏ３Ａで特に良好な結果が得られ、Ｌｕｂｒｈｏｐｈｏｓ ＬＦ－８００及びＣｒｏｄａｆｏｓ Ｏ３Ａが最有力候補として選択された。Ｒｈｏｄａｆａｃ ＲＭ－５１０もまた、良好な結果を与えたが、アルキルフェノールエトキシレートをベースとしているため、環境上の理由のために除外された。

【0032】

実施例２－溶媒としての２－メチルシクロヘキサノン

【0033】

上述のように２つの実験を行ったが、トルエンの代わりに２－メチルシクロヘキサノンを用いた。乳化剤はＬｕｂｒｈｏｐｈｏｓ ＬＦ－８００であり、乳化剤の量はそれぞれ０．０１７ｗｔ．／ｖｏｌ．％及び０．２３ｗｔ．／ｖｏｌ．％であった。１００μｍの目的粒子径に達し、ビーズの外観は良好であった。しかし、いくつかの凝集が冷却の間に起こった。

【0034】

この明細書は、最良の態様を含む本発明を開示するために、また、任意の装置又はシステムの作成及び使用、並びに任意の組み込まれた方法の実行することを含めて、当業者が本発明を実施できるようにするために、実施例を使用するものである。本発明の特許性のある範囲は、特許請求の範囲に記載されており、当業者が思いつく他の実施例を含んでもよい。そのような他の実施例は、それらが特許請求の範囲の文字通りの言葉とは異なっていない構造要素を有する場合、又はそれらが特許請求の範囲の文字通りの言葉と実質的に異なる同等の構造要素を含む場合、特許請求の範囲に含まれることを意図している。本文中で述べられている全ての特許及び特許出願は、個別で組み込まれているかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】