特許 7582189 多層培養容器

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-05

(45)【発行日】2024-11-13

(54)【発明の名称】多層培養容器

(51)【国際特許分類】

   C12M 1/00 20060101AFI20241106BHJP

   C12M 1/14 20060101ALI20241106BHJP

   C12M 3/00 20060101ALI20241106BHJP

   C12M 3/04 20060101ALI20241106BHJP

【ＦＩ】

C12M1/00 A

C12M1/00 C

C12M1/14

C12M3/00 A

C12M3/04 A

【請求項の数】 12

(21)【出願番号】P 2021530707

(86)(22)【出願日】2020-07-07

(86)【国際出願番号】 JP2020026595

(87)【国際公開番号】W WO2021006278

(87)【国際公開日】2021-01-14

【審査請求日】2023-05-19

(31)【優先権主張番号】P 2019127121

(32)【優先日】2019-07-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000135036

【氏名又は名称】ニプロ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100100158

【弁理士】

【氏名又は名称】鮫島 睦

(74)【代理人】

【識別番号】100165892

【弁理士】

【氏名又は名称】坂田 啓司

(72)【発明者】

【氏名】吉川 義洋

(72)【発明者】

【氏名】竹内 誠亮

(72)【発明者】

【氏名】八尾 理文

(72)【発明者】

【氏名】山元 秀晃

(72)【発明者】

【氏名】我妻 裕介

(72)【発明者】

【氏名】中村 亮介

【審査官】市島 洋介

(56)【参考文献】

【文献】特開平１１－２５３１５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１１－５２８２２６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００９－５０２１６５（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２００８／１０６０１２（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｍ １／００－３／１０

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

培養容器部と、前記培養容器部に取り付けられたリザーバー部と、を備えた多層培養容器であって、
前記培養容器部が、積み重ねられている少なくとも２つの培養トレーおよび前記少なくとも２つの培養トレーに積み重ねられているカバープレートを含み、
前記培養トレーが、底壁部及び前記底壁部を囲む周壁部を含み、
前記リザーバー部が、内部空間を画定する囲壁部及び前記内部空間と連通したポートを含み、
前記囲壁部が、前記ポートが設けられた第一の囲壁部及び前記第一の囲壁部と対向する第二の囲壁部を含み、
前記培養容器部が、前記少なくとも２つの培養トレーの各培養トレーと前記リザーバー部の前記内部空間とを連通する開口部を有し、及び、
前記培養容器部の前記開口部が、前記第一の囲壁部が前記培養容器部と当接する第一の当接部に向かって、前記第二の囲壁部が前記培養容器部と当接する第二の当接部から延在しており、前記開口部の下端が、前記周壁部の高さの２分の１以上の位置にある、多層培養容器。

【請求項2】

前記ポートが、その軸と、少なくとも２つの培養トレーが積み重ねられている積層方向とのなす角が７０度以上９０度以下となるように、前記リザーバー部に設けられている、請求項１に記載の多層培養容器。

【請求項3】

前記ポートが、前記少なくとも２つの培養トレーと前記リザーバー部とが対向する対向面と、前記ポートの軸とのなす角が０度以上５０度以下となるように、前記リザーバー部に設けられている、請求項１又は２に記載の多層培養容器。

【請求項4】

前記培養容器部の前記開口部が、前記第一の当接部と前記第二の当接部との間の直線距離の３分の２以下の長さで、前記第一の当接部に向かって前記第二の当接部から延在している、請求項１～３のいずれか一項に記載の多層培養容器。

【請求項5】

前記積み重ねられている少なくとも２つの培養トレーの周壁部が、前記培養容器部の側壁部を構成している、請求項１～４のいずれか一項に記載の多層培養容器。

【請求項6】

前記カバープレートが、カバー壁部を含み、
前記各培養トレーの周壁部に形成された前記開口部が、前記各培養トレーの周壁部に設けられた切欠き部と前記各培養トレーに積み重ねられている前記培養トレーの前記底壁部とで形成された空間であるか、又は前記切欠き部と前記カバープレートの前記カバー壁部とで形成された空間である、請求項５に記載の多層培養容器。

【請求項7】

前記培養容器部が、前記第一の囲壁部と第二の囲壁部とが対向する第一の方向に沿って互いに対向する第一の側壁部及び第二の側壁部を有し、 前記ポートが、前記第一の方向において、第一の側壁部の前記第一の方向における位置と第二の側壁部の前記第一の方向における位置との間に位置する、請求項１～６のいずれか一項に記載の多層培養容器。

【請求項8】

前記第一の方向における、第一の側壁部と第二の側壁部との間の距離が１４０ｍｍ以下である、請求項７に記載の多層培養容器。

【請求項9】

前記リザーバー部が、前記第一の囲壁部と第二の囲壁部とが対向する第一の方向及び少なくとも２つの培養トレーが積み重ねられている積層方向のいずれとも直交する第二の方向に沿って互いに対向する第三の囲壁部及び第四の囲壁部を有し、
前記ポートが、前記第二の方向において、第三の囲壁部の前記第二の方向における位置と第四の囲壁部の前記第二の方向における位置との間に位置する、請求項１～８のいずれか一項に記載の多層培養容器。

【請求項10】

培養容器部と、前記培養容器部に取り付けられたリザーバー部と、を備えた多層培養容器であって、
前記培養容器部が、積み重ねられている少なくとも２つの培養トレーおよび前記少なくとも２つの培養トレーに積み重ねられているカバープレートを含み、
前記培養トレーが、底壁部及び前記底壁部を囲む周壁部を含み、
前記リザーバー部が、内部空間及び前記内部空間と連通したポートを含み、
前記培養容器部が、前記少なくとも２つの培養トレーの各培養トレーと前記リザーバー部の前記内部空間とを連通する開口部を有し、
前記開口部の下端が、前記周壁部の高さの２分の１以上の位置にあり、及び、
前記ポートが、そのポートの軸と、少なくとも２つの培養トレーが積み重ねられている積層方向とのなす角が７０度以上９０度以下となり、及び、前記ポートの軸と前記少なくとも２つの培養トレーと前記リザーバー部とが対向する対向面とのなす角が０度以上５０度以下となるように、前記リザーバー部に設けられている、多層培養容器。

【請求項11】

前記リザーバー部が、その内部空間を画定し、前記ポートが設けられた囲壁部を含み、
前記囲壁部が、前記ポートが設けられた第一の囲壁部及び前記第一の囲壁部と対向する第二の囲壁部を含み、
前記培養容器部の前記開口部が、前記第一の囲壁部が前記培養容器部と当接する第一の当接部に向かって、前記第二の囲壁部が前記培養容器部と当接する第二の当接部から延在している、請求項１０に記載の多層培養容器。

【請求項12】

医薬組成物の製造方法であって、
請求項１～１１のいずれか一項に記載の多層培養容器を用いて細胞を培養する工程、
培養した細胞を、又は培養細胞から分泌された成分を含む培養培地を、前記多層培養容器から回収する工程、及び
回収した培養細胞又は回収した培養細胞から分離及び精製された成分、或いは回収した分泌成分を含有する医薬組成物を製造する工程、
を含む、製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、細胞を培養するための培養容器に関する。より具体的には、本発明は多層培養容器に関する。本発明はまた、前記多層培養容器を用いた医薬組成物の製造方法にも関する。

【背景技術】

【0002】

細胞医薬品などの医薬分野及び細胞科学などの研究分野を含む様々な技術分野で、細胞の培養が行われている。細胞培養では、一般に、滅菌処理済みの培養容器が用いられる。培養容器は、クリーンベンチ内などの無菌環境下で、そのポート部から細胞懸濁液が培養容器の内部空間に導入される。ポート部は内部空間の無菌状態を維持するために蓋がされ、培養容器は細胞を培養するために温度などが管理された培養装置に移される。細胞の状態に応じて、培養容器では、再びクリーンベンチ内で培養培地の交換及び細胞の回収などの操作が行われる。

【0003】

医薬分野では特に、細胞を培養する施設内部も可能な限り、クリーンな状態とすることが要求され、そのような状態の管理及び維持に多大な労力及び費用が要されている。そのような施設内のスペースを有効に利用するために、効率的に細胞を培養可能な培養容器が利用されている。例えば、浮遊性の細胞や接着性の細胞を大量に培養する場合には、培養バッグ（特許文献１）や細胞培養フラスコ内で平坦で硬質な面を積み重ねて多層化した培養フラスコが利用されてきた（特許文献２及び特許文献３）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【文献】特開２００６－２６２８７６号公報

【文献】特表２０１１－５２８２２６号公報

【文献】特表２００９－５０２１６５号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

細胞培養の状態は、培養トレーに播種する細胞数及び培養溶液の分量を含む培養条件によって変動する。多層培養容器では、各層で独立して培地交換及び細胞継代を行うことは容易ではない。各層で培養条件が異なると、１つの培養トレーで培養培地の交換が必要になった場合又は細胞の継代が必要になった場合には、その他の培養トレーではその必要がなくても、同様に培養培地の交換又は細胞継代を行う必要があり、試薬の浪費に繋がっていた。細胞培養には、比較的高価な試薬が用いられるため、試薬の浪費は比較的大きな経済的な不利益をもたらしていた。

【0006】

特許文献２のように、再封可能ポートがポートの軸と培養トレーのトレー面とが垂直となるように配置された多層培養容器では、一般に、細胞懸濁液を再封可能ポートから導入すると、底面の培養トレー付近に溜まることとなる。この導入操作の間に、細胞は懸濁液中で沈み始め、細胞懸濁液は不均一になる。全ての細胞懸濁液を導入した後に、底面の培養トレー付近に溜まった細胞懸濁液は、多層培養容器を傾けることによって各培養トレーに分配される。この分配操作で不均一となった細胞懸濁液を均一化したうえで各培養トレーに分配することは難しく、全ての培養トレーで培養条件を揃えることは難しかった。従って、本発明の１つの目的は、少なくとも２つの培養トレーを含む多層培養容器において、各培養トレーにおける細胞培養で培養条件を揃えることが容易な多層培養容器を提供することである。

【0007】

特許文献３は、フィルターで覆われた複数の培養チャンバーを、支持体を利用して前記培養チャンバーと気体管層とが交互に積層されるにした多層培養容器が開示されている。フィルターで覆われた培養チャンバーには、液体の供給を可能にし、培養チャンバー内の空気を排出させることを可能にするマニフォールドが設けられ、前記培養チャンバー内は培養溶液で満たされることとなる。特許文献３記載の多層培養容器は、構造が複雑であり、当該分野には、シンプルな多層培養容器に対する要求が存在した。

【0008】

細胞医薬品の製造は、クリーンベンチなどの装置中で扱われるため、操作しやすい形状であることが有利であり、当該分野には、操作しやすい形状の多層培養容器に対する要求が存在した。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明は、以下の多層培養容器、及び前記多層培養容器を用いた医薬組成物の製造方法に関する。
［項１］ 培養容器部と、前記培養容器部に取り付けられたリザーバー部と、を備えた多層培養容器であって、前記培養容器部が、積み重ねられている少なくとも２つの培養トレーを含み、前記リザーバー部が、内部空間を画定する囲壁部及び前記内部空間と連通したポートを含み、前記囲壁部が、前記ポートが設けられた第一の囲壁部及び前記第一の囲壁部と対向する第二の囲壁部を含み、前記培養容器部が、前記少なくとも２つの培養トレーの各培養トレーと前記リザーバー部の前記内部空間とを連通する開口部を有し、及び、前記培養容器部の前記開口部が、前記第一の囲壁部が前記培養容器部と当接する第一の当接部に向かって、前記第二の囲壁部が前記培養容器部と当接する第二の当接部から延在している、多層培養容器。
［項２］ 培養容器部と、前記培養容器部に取り付けられたリザーバー部と、を備えた多層培養容器であって、前記培養容器部が、積み重ねられている少なくとも２つの培養トレーを含み、前記リザーバー部が、内部空間及び前記内部空間と連通したポートを含み、前記培養容器部が、前記少なくとも２つの培養トレーの各培養トレーと前記リザーバー部の前記内部空間とを連通する開口部を有し、及び、前記ポートが、そのポートの軸と、少なくとも２つの培養トレーが積み重ねられている積層方向とのなす角が７０度以上９０度以下となり、及び、前記ポートの軸と前記少なくとも２つの培養トレーと前記リザーバー部とが対向する対向面とのなす角が０度以上５０度以下となるように、前記リザーバー部に設けられている、多層培養容器。
［項３］ 項１又は項２に記載の多層培養容器を用いて細胞を培養する工程、培養した細胞を、又は培養細胞から分泌された成分を含む培養培地を、前記多層培養容器から回収する工程、及び、回収した培養細胞又は回収した培養細胞から分離及び精製された成分、或いは回収した分泌成分を含有する医薬組成物を製造する工程を含む、医薬組成物の製造方法。

【発明の効果】

【0010】

本発明の１つの実施形態に係る多層培養容器によれば、少なくとも２つの培養トレーを含む多層培養容器において、各培養トレーで培養条件を揃えることが容易であり、その結果、試薬の浪費を抑制することができる。本発明の他の実施形態に係る多層培養容器によれば、シンプルな構造で及び／又は操作しやすい形状であり便利である。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】図１は実施形態１に係る多層培養容器の分解斜視図である。

【図2】図２の（ａ）は実施形態１に係る多層培養容器の縮尺表示による正面図である。図２の（ｂ）は図２の（ａ）中のＡ－Ａの縮尺表示による断面図である。図２の（ｃ）は図２の（ｂ）中の破線で囲われた部分の拡大図である。図２の（ｄ）は図２の（ａ）中のＤ－Ｄの縮尺表示による断面図である。

【図3】図３の（ａ）は第一姿勢の多層培養容器における図２の（ａ）中のＥ－Ｅの縮尺表示による断面図である。図３の（ｂ）は第一姿勢の多層培養容器における図２の（ｂ）中のＢ－Ｂの縮尺表示による断面図である。図３の（ｃ）は第二姿勢の多層培養容器における図２の（ｂ）中のＢ－Ｂの縮尺表示による断面図である。図３の（ｄ）は第三姿勢の多層培養容器における図２の（ａ）中のＡ－Ａの縮尺表示による断面図である。

【図4】図４は実施形態２に係る多層培養容器の斜視図である。

【発明を実施するための形態】

【0012】

本明細書において「多層培養容器」は、少なくとも２つの培養トレーを含む培養容器を意味する。多層培養容器は、限定するものではないが、透明、半透明又は非透明ガラス又はプラスチック材料で形成される。多層培養容器の材料としては、限定するものではないが、医薬分野又は研究分野で慣用されるプラスチック、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン及びポリエチレンテレフタレートが挙げられる。多層培養容器は、限定するものではないが、複数の部材を組み立てて製造されてよい。多層培養容器は、公知の方法に従って製造することができる。一例において、多層培養容器は、それを構成する複数の部材を個別に射出成形により調製し、各部材を組み立てることにより製造することができる。

【0013】

多層培養容器を組み立てるための部材は、すべて同じ材料で形成されてもよく、少なくとも１つの部材が異なる材料で形成されてもよく、又は全ての部材が異なる材料で形成されてもよい。多層培養容器は、例えば透明又は半透明の全て同じ材料で形成される。各部材は、例えば、その厚みが１～５ｍｍとなるように調製される。多層培養容器は、限定するものではないが、滅菌処理が施されてもよい。滅菌処理としては、例えば、放射線滅菌処理、エチレンオキサイドガス滅菌処理、γ線滅菌処理、高圧蒸気滅菌処理などが挙げられる。

【0014】

本明細書において「培養トレー」は、培養層として利用され得る収容空間を有するトレーを意味する。培養トレーの収容空間は、底壁部と前記底壁部を囲む周壁部によって画定される。培養トレーの底壁部は、前記収容空間に面するトレー面を含む。前記トレー面は、細胞接着性を向上させる処理が施されていてもよい。細胞接着性を向上させる処理としては、例えば、プラズマ処理、酸化剤処理、親水性物質コーティング処理などが挙げられる。培養トレーの周壁部は、限定するものではないが、その底壁部と一体成形され、その外周から伸長した壁部であってもよく、又は、その底壁部に取り付けられた壁部であってもよく、或いはそれらの組合せであってもよい。

【0015】

本明細書において「積層方向」は、培養トレーの底壁部のトレー面が積み重ねられている方向を意味する。積層方向は、例えば、培養するのに適した多層培養容器の姿勢において、培養トレーに導入された流体試料の液面が積み重ねられている方向に相当する。培養するのに適した多層培養容器の姿勢は、限定するものではないが、培養トレーに導入された流体試料の液面の面積が最大となる姿勢である。

【0016】

本明細書において「ポートの軸」は、ポートの開口面の幾何中心から、前記開口面と垂直方向に延びる軸を意味する。ポートの開口面が円形である場合、ポートの軸は、ポートの開口面の中心を通って、前記開口面に垂直方向に延びる軸である。

【0017】

本明細書において「流体試料」は、溶媒及び溶液を意味する。流体試料は、例えば、培養培地、緩衝液、細胞懸濁液、水、トリプシンなどの生化学試薬を含む水溶液などが挙げられる。培養培地又は緩衝液は、公知の試薬から調製することができ、又は商業的に入手できる。細胞懸濁液は、細胞培地又は緩衝液中に細胞を含む液体である。トリプシンなどの生化学試薬は、公知の方法を用いて調製することができ、又は商業的に入手できる。

【0018】

本明細書において「医薬組成物」は、有効成分及び医薬上許容される担体を含む組成物を意味する。医薬上許容される担体は、公知のものを用いることができ、有効成分の種類、投与経路、剤形に応じて適宜設定することができる。医薬組成物は、公知の方法に従って製造することができる。有効成分は、限定するものではないが、細胞を培養することで分泌させる成分、又は細胞内に蓄積される成分、或いは、細胞そのものであってよい。

【0019】

本明細書において「細胞を培養する」又は「細胞培養」は、多層培養容器を用いて細胞を増殖させること又は細胞内で所望の成分を産生させることを意味する。細胞培養は、限定するものではないが、温度、湿度及び／又は二酸化炭素濃度などの条件が調整された環境下に、細胞を含む多層培養容器を置くことを含む。細胞培養は、さらに、細胞を培養した培地を交換すること、培養細胞を継代することを含んでもよい。細胞は、例えば、樹立された細胞株、遺伝子工学的に改変された細胞、生体から取得された細胞等を含む。

【0020】

本明細書において「回収」は、多層培養容器から流体試料を取り出すことを意味する。多層培養容器から回収される流体試料は、例えば、培養した細胞を含む細胞懸濁液、細胞を培養した培養培地などが挙げられる。多層培養容器からの回収は、公知の方法を用いて適宜実施することができる。例えば、ピペットなどの分注器具を用いて、多層培養容器から流体試料を取り出すことができる。培養した細胞を含む細胞懸濁液は、例えば、ピペットなどの分注器具を用いてトリプシンなどの試薬溶液を、接着性細胞を培養した多層培養容器に注入し、培養トレーに接着した細胞を剥離することで得ることができる。このようにして得られた細胞懸濁液は、上記と同様にして、多層培養容器から取り出すことができる。

【0021】

本明細書において「分離」は、所望の成分を、前記成分を含む状態から取り出すことを意味する。例えば、培養細胞中に産生された成分を分離する場合、フレンチプレス、超音波破砕などの物理的手法、又は界面活性剤などを含む破砕液を用いた化学的手法を含む公知の方法を用いることができる。

【0022】

本明細書において「精製」は、所望の成分の含有率を高める操作を意味する。精製方法は、公知の方法を特に制限なく用いることができる。公知の精製方法としては、限定するものではないが、液体クロマトグラフィー、遠心分離、磁気ビーズ、フローサイトメーターなどが挙げられる。

【0023】

以下、図面を参照しつつ、本発明の態様に係る実施形態について説明するが、これらの実施形態は本発明の例示であり、添付する特許請求の範囲に記載の発明をいかようにも限定するものではない。

【0024】

［実施形態１］
図１は、本発明の１つの実施形態（以下「実施形態１」）に係る多層培養容器の分解斜視図を示す。実施形態１に係る多層培養容器１は、培養容器部２と、前記培養容器部２に取り付けられたリザーバー部５とを備える。

【0025】

実施形態１に係る培養容器部２は、培養トレー３ａと、前記培養トレー３ａに積み重ねられた培養トレー３ｂと、前記培養トレー３ｂに積み重ねられた培養トレー３ｃと、前記培養トレー３ｃに積み重ねられた培養トレー３ｄと、前記培養トレー３ｄに積み重ねられた培養トレー３ｅと、前記培養トレー３ｅに積み重ねられたカバープレート４とで構成される。リザーバー部５は、培養容器部２と、前記培養トレー３及び前記カバープレート４に取り付けられ、内部空間及び前記内部空間と連通したネジ式ポート５５を有する。培養トレー３とカバープレート４とリザーバー部５とは、後述する嵌合部又は当接部で、ヒートボンド、溶融ボンド、超音波融着又は接着剤等により液密に接着される。

【0026】

培養トレー３は、実質的に平坦な略長方形のトレー面を含む底壁部３１、及び前記底壁部３１と一体成形され、前記底壁部を囲む周壁部３２を含む。培養トレーの周壁部３２は、底壁部３１の各周辺から実質的に垂直に上方に所定の長さで伸長された周壁を含む。培養トレー３は、前記底壁部３１及び前記底壁部３１を囲む周壁部３２で画定される収容空間を含む。前記５つの培養トレー３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄ及び３ｅは、互いに実質的に同じ形状を有する。

【0027】

培養トレー３ａの周壁部３２は、培養トレー３ｂとの適切な配置での積み重ねを容易にする凸部３３を有する。培養トレー３ｂの底壁部３１の外面は、培養トレー３ａの周壁部３２上の凸部３３に嵌合する凹部３４を有する。培養トレー３ｂは、培養トレー３ｂの凹部３４と培養トレー３ａの凸部３３とを嵌合させることで、培養トレー３ａに対して適切な配置での積み重ねが容易となる。培養トレー３ｃ～３ｅの底壁部３１の外面も、培養トレー３ｂと同様、培養トレーの凸部３３に嵌合する凹部３４を有する。培養トレー３ｃ～３ｅも、前記した凸部３３及び凹部３４との嵌合により、適切な配置での積み重ねが容易となる。積み重ねられた培養トレー３の周壁部３２が、培養容器部２の側壁部２２を構成する。積み重ねられた培養トレー３ａの底壁部３１が、培養容器部２の底面部を構成する。なお、培養トレー３ａ～３ｅの各周壁部３２に凹部を設け、培養トレー３ｂ～３ｅの底壁部の外面及びカバープレート４のカバー壁部４１の培養とレートに対向する面に凸部を設けてもよい。

【0028】

培養容器部２は、略直方体であり、培養トレー３ａの底壁部３１と、培養トレー３ｅに積み重ねられた、前記底壁部３１に対向するカバー壁部４１と、前記底壁部３１と前記カバー壁部４１とを接続する側壁部２２とで画定される内部空間を有する。図２で後述するように、側壁部２２は、リザーバー部５が取り付けられる側壁部２２ｄと、側壁部２２ｄに対向する側壁部２２ｂと、側壁部２２ｂと側壁部２２ｄとを接続する互いに対向する側壁部２２ａ及び側壁部２２ｃとを有する。培養容器部２の内部空間は、培養トレー３により区分けされている。各培養トレーは、区分けされた培養容器部２の内部空間を培養トレーの内部空間として有する。培養トレーの内部空間は、培養トレー３ｂが積み重ねられた培養トレー３ａは、培養トレー３ａの底壁部及び周壁部と、培養トレー３ｂの底壁部とで画定された空間である。培養トレー３ｂ～３ｄも、それらの底壁部３１及び周壁部３２と積み重ねた培養トレー３ｃ～３ｅの底壁部３１とで画定された内部空間をそれぞれ有する。培養トレー３ｅは、その底壁部３１及び周壁部３２と積み重ねたカバープレート４の第一のカバー壁部４１ａとで画定された内部空間を有する。培養トレー３の内部空間は、培養層として利用され得る。実施形態１における培養トレー３の内部空間は、培養トレー３の底壁部３１及び前記底壁部３１を囲む周壁部３２で画定される。

【0029】

カバープレート４は、培養トレー３ａ～３ｅが積み重ねられている積層方向（Ｄ１）に沿って、培養トレー３ｅに積み重ねられている。カバープレート４は、実質的に平坦なカバー壁部４１を含む。カバー壁部４１は、培養トレー３ｅに積み重ねられた第一のカバー壁部４１ａ及びリザーバー部５に取り付けられた第二のカバー壁部４１ｂを含む。リザーバー部５を、カバープレート４において第一のカバー壁部４１ａと一体成形された第二のカバー壁部４１ｂに取り付けることで、組み立て後の多層培養容器１の強度を高めることができる。積み重ねられている少なくとも培養トレー３ａ～３ｅに積み重ねられたカバープレートは、培養容器部２の上面部を構成する。

【0030】

第一のカバー壁部４１ａは、実質的に平坦で、培養トレー３のトレー面と実質的に同一形状の略長方形のカバー面を含む。第一のカバー壁部４１ａは、培養トレー３ｅの周壁部３２上の凸部３３に嵌合する凹部４４ａを、培養トレー３ｅに対向するカバー面に有する。カバープレート４は、第一のカバー壁部４１ａの凹部４４ａと培養トレー３ｅの凸部３３とを嵌合させることで、培養トレー３ｅに対して適切な配置での積み重ねが容易となる。

【0031】

第二のカバー壁部４１ｂは、実質的に平坦で、後述するリザーバー容器５０の囲壁部５２ａの内面と実質的に同一形状の略長方形のカバー面を含む。第二のカバー壁部４１ｂは、後述するリザーバー容器５０の４つの囲壁部５２ｂ、５２ｃ、５２ｄ及び５２ｅ上の凸部５３に嵌合する凹部４４ｂを、リザーバー部５に対向するカバー面に有する。カバープレート４は、第二のカバー壁部４１ｂの凹部４４ｂとリザーバー容器５０の凸部５３とを嵌合させることで、リザーバー部５に対して適切な配置での取付けが容易となる。

【0032】

カバープレート４は、その縁を囲むようにリッジ４３が形成されている。リッジ４３は、多層培養容器１の積み重ねを容易にするために用いられる。多層培養容器１を、リッジ４３を有するカバープレート４を含む多層培養容器１に積み重ねる場合、積み重ねる多層培養容器１の底面部を構成する培養トレー３の底壁部３１は、リッジ４３に係合する位置決め突起を有してもよい。リッジ４３と前記位置決め突起とを係合することにより、積み重ねた多層培養容器１の位置ずれを防止することができる。

【0033】

リザーバー部５は、内部空間を有する略直方体のリザーバー容器５０を含み、前記リザーバー容器５０は、前記培養トレー３ａ～３ｅ及びカバープレート４に取り付けられている。リザーバー容器５０の内部空間は、カバープレート４１の第二のカバー壁部４１ｂ及び囲壁部５２により画定される。囲壁部５２は、培養容器部２の底面部の一部を構成し、培養トレー３ａの底壁部３１のトレー面（内面）と平行な、略長方形の内面を有する囲壁部５２ａを含む。囲壁部５２は、更に、囲壁部５２ａの各辺から実質的に垂直に上方に所定の長さで伸長された４つの囲壁部５２ｂ、５２ｃ、５２ｄ及び５２ｅを更に含む。

【0034】

囲壁部５２ｂ～５２ｅは、リザーバー部５とカバープレートと４との適切な配置での取付けを容易にする凸部５３を有する。上記したように、リザーバー容器５０の凸部５３を第二のカバー壁部４１ｂの凹部に嵌合させることで、リザーバー部５をカバープレート４に対して適切な配置で取付けることが容易となる。なお、リザーバー部５に凹部を設け、第二のカバー壁部４１ｂに凸部５３を設けてもよい。

【0035】

リザーバー容器５０の囲壁部５２ｅは、リザーバー部５と培養トレー３との適切な配置での取付けを容易にする受け口５４を有する。リザーバー容器５０と対向する培養トレー３の周壁部３２の周壁は、受け口５４に嵌る係止凸部３５を有する。リザーバー容器５０の受け口５４と培養トレー３の係止凸部３５とを嵌合させることで、リザーバー部５は培養トレー３に対して適切な配置での取付けが容易となる。

【0036】

リザーバー容器５０の囲壁部５２ｅは、それと対向する培養トレー３の周壁部３２の周壁に設けられた当接部３６と当接する。当接部３６を、例えば、ヒートボンド、溶融ボンド、超音波融着又は接着剤を用いて接着することで、組み立て後の多層培養容器１の強度を高めることができる。

【0037】

ネジ式ポート５５は、対応するネジ蓋５６により開閉自在なポートを構成する。ネジ式ポート５５は、そのポートの軸Ｄ２と積層方向Ｄ１とのなす角が約９０度で前記リザーバー容器５０の囲壁部５２ｂに設けられている。ネジ式ポート５５を備えた囲壁部５２ｂを、第一の囲壁部５２ｂとも称し、囲壁部５２ｂに対向する囲壁部５２ｄを、第二の囲壁部５２ｄとも称する。また、ネジ式ポート５５は、前記ポートの軸Ｄ２と培養トレー３とリザーバー容器５０とが対向する対向面とが略平行となるように、前記リザーバー部５に設けられている。

【0038】

リザーバー部５の内部空間と培養トレー３の内部空間とを連通させる開口部が、培養トレー３の周壁部３２に設けられている。培養トレー３ａの開口部は、培養トレー３ａの係止凸部３５の、底壁部３１から遠位に設けられた切欠き部３８と、培養トレー３ａに積み重ねられた培養トレー３ｂの底壁部３１とで形成されたスリット状の空間である。培養トレー３ｂ～３ｄの開口部は、各培養トレー３ｂ～３ｄの係止凸部３５に設けられた切欠き部３８と積み重ねられた培養トレー３ｃ～３ｅの底壁部３１とで形成されたスリット状の空間である。また、培養トレー３ｅの開口部は、積み重ねられたカバープレート４の第一のカバー壁部４１ａとで形成されたスリット状の空間である。

【0039】

図２ｄで後述するように、ネジ式ポート５５が設けられた囲壁部５２ｂは、培養容器部２の側壁部２２ｄと第一の当接部Ｐ１で当接している。前記囲壁部５２ｂと対向する囲壁部５２ｄは、培養容器部２の側壁部２２ｄと第二の当接部Ｐ２で当接している。第一の当接部Ｐ１及び／又は第二の当接部Ｐ２を、例えば、ヒートボンド、溶融ボンド、超音波融着又は接着剤を用いて接着することにより、培養容器部２とリザーバー部５とを液密に接着することができる。

【0040】

図２を参照しつつ、培養トレー３の周壁部３２に設けられた開口部を詳述する。図２ａは、図１で示される各部品を組み立てた実施形態１に係る多層培養容器１を示す。多層培養容器１では、積み重ねられた５つの培養トレー３の周壁部３２で構成される側壁部２２が形成され、その１つの側壁部２２ｄに、リザーバー部５が取り付けられている。培養容器部２は第一の囲壁部５２ｂと第二の囲壁部５２ｄとが対向する第一の方向に沿って互いに対向する第一の側壁部及び第二の側壁部を有する。図２ａにおいて、第一の側壁部は、側壁部２２ａであり、第二の側壁部は、側壁部２２ｃである。ネジ式ポート５０及びネジ蓋５６を含むポートは、第一の方向において、側壁部２２ａの第一の方向における位置と側壁部２２ｃの第一の方向における位置との間に位置する。即ち、前記ポートは、図２ａにおいて側壁部２２ａを下とした場合、側壁部２２ｃを含む平面よりも下方にあり、側壁部２２ａを含む平面よりも上方にある。リザーバー部５は第一の方向及び積層方向Ｄ１のいずれとも直交する第二の方向に沿って互いに対向する囲壁部５２ｃ及び囲壁部５２ｅを有し、前記ポートは、第二の方向において、囲壁部５２ｃの第二の方向における位置と囲壁部５２ｅの第二の方向における位置との間に位置する。即ち、前記ポートは、図２ａにおいて側壁部２２ｂを左とした場合、囲壁部５２ｃを含む平面よりも左側にあり、囲壁部５２ｅを含む平面よりも右側にある。ポート部が前記した位置にある場合、ポート部は多層培養容器２及びリザーバー部５の外周面よりも内側に配置されるために効率的に輸送可能である。また、培養作業時に作業者の手又は作業器具が、ポートに触れるリスクを軽減でき、操作性が良好である。

【0041】

図２ｂは、図２ａ中のＡ－Ａの断面図を示す。図２ｂに示されるように、多層培養容器１の培養容器部２の内部空間は、５つの培養トレー３ａ～３ｅにより５つに区分けされる。前記５つの内部空間はそれぞれ、培養トレー３の係止凸部３５を含む培養容器部２の側壁部２２ｄを介して、リザーバー部５のリザーバー容器５０の内部空間と隣接している。Ａ－Ａ断面において、リザーバー容器５０の内部空間は、第二のカバー壁部４１ｂと囲壁部５２ａ～５２ｃと側壁部２２ｄとに囲まれている。

【0042】

図２ｃは、図２ｂ中の破線で囲われた部分の拡大図である。図２ｃを参照しつつ、上記した培養トレー３で区分けされた内部空間が、培養容器部２の側壁部２２ｄに形成された開口部３９を通じて、リザーバー容器５０の内部空間と連通されていることを説明する。上述したように、側壁部２２ｄに形成される開口部３９は、係止凸部３５に底壁部３１から遠位に形成された切欠き部３８と、培養トレー３に積み重ねられたカバープレート４の第一のカバー壁部４１ａと又は積み重ねられた培養トレー３の底壁部３１とで形成される空間である。図２ｃで示されるように、培養トレー３で区分けされた各内部空間は、各培養トレー３に対して形成された開口部３９を通じて、リザーバー容器５０の内部空間と連通されている。

【0043】

図２ｄは、図２ａ中のＤ－Ｄの断面図を示し、前記Ｄ－Ｄの断面は、多層培養容器１の培養容器部２の側壁部２２ｄとリザーバー容器５０とが対向する対向面に対応する。上述したように、培養容器部の側壁部２２ｄに形成された開口部３９は、培養容器部の側壁部２２ｄと囲壁部５２ｂが当接する第一の当接部Ｐ１と、囲壁部５２ｄが当接する第二の当接部Ｐ２との間に形成される。図２ｄにおいて、側壁部２２ｄに形成された開口部３９は、第一の当接部Ｐ１に向かって、第二の当接部Ｐ２から、Ｐ２とＰ１との直線距離の約３分の１の長さで延在している。前記した側壁部２２ｄに形成された開口部３９の長さは、実施形態１の多層培養容器１では、囲壁部５２ｅ（断面が示されている）の受け口の内壁５４ａ、５４ｂに嵌められた係止凸部３５の幅の長さに相当する。開口部３９の長さが、Ｐ２とＰ１との直線距離の３分の２以下の長さとすることで、培養容器部２とリザーバー容器５０とを含む多層培養容器１の機械強度が強くなり好ましい。

【0044】

図２を参照しつつ、実施形態１の多層培養容器１のサイズを説明する。図２ａにおいて、多層培養容器１の短辺の長さＬ１を１００～１５０ｍｍとした場合、多層培養容器１の長辺の長さＬ２は、例えば２００～３００ｍｍであり、培養容器部２の長辺の長さＬ８は、例えば１８０～２１０ｍｍである。図２ａで示されるように、リザーバー容器５０は、多層培養容器１の側壁部２２ａの水平位置から上方に段差が設けられて、側壁部２２ｄに取り付けられている。その段差の距離Ｌ３は、多層培養容器１の短辺の長さＬ１を１００～１５０ｍｍとした場合、例えば８～１３ｍｍである。この段差により、図３ｂの第一姿勢において側壁部２２ｂを上方に持ち上げて、多層培養容器１をリザーバー部５の斜め下方向に傾けることが容易となり、使用者は、ポートを通じた流体試料の導入又は排出を容易に行うことができる。クリーンベンチ内での限られた作業空間において、比較的大きい多層培養容器を用いる場合、作業者の指などがポート部に接触するおそれが高くなり、その結果、多層培養容器内を汚染する危険が高まる。また、ピペットなどの比較的短い器具を用いて多層培養容器内の流体試料を回収する場合、多層培養容器が比較的大きいと、リザーバー部から試料を回収することが難しくなり、試料の無駄が生じやすくなる。多層培養容器の長さＬ１は、作業効率や試料の無駄を回避するために、１４０ｍｍ以下であることが好ましい。

【0045】

図２ｂにおいて、培養トレー３で区分けされた内部空間の高さＬ４は、多層培養容器１の短辺の長さＬ１を１００～１５０ｍｍとした場合、例えば５～１０ｍｍである。多層培養容器１の厚みＬ５は、多層培養容器１の短辺の長さＬ１を１００～１５０ｍｍとした場合、例えば４５～５５ｍｍである。実施形態１の多層培養容器１において、培養トレー３の底壁部３１及びカバープレート４のカバー壁部４１の厚みは、例えばそれぞれ１．５～２．５ｍｍである。

【0046】

図２ｄにおいて、培養容器部２とリザーバー容器５０とが当接する当接部のうち、ネジ式ポート５５が設けられている囲壁部５２ｂと当接する上端の当接部（第一の当接部Ｐ１）と下端の当接部（第二の当接部Ｐ２）との間の距離を７５～９０ｍｍとした場合、側壁部２２ｄに形成された開口部３９は、第一の当接部Ｐ１に向かって第二の当接部Ｐ２から、例えば２５～３５ｍｍ（Ｌ６）の長さで延在している。側壁部２２ｄに形成された開口部３９は、開口部３９の長手方向の長さＬ６を２５～３５ｍｍとした場合、その開口部３９の幅Ｌ７は、例えば１～２ｍｍである。開口部３９は、培養容器部２の側壁部２２ａから、距離Ｌ１０にて、第一の当接部Ｐ１に向かって第二の当接部Ｐ２から延在している。距離Ｌ１０は、開口部３９の短辺の開口端のうち第一の当接部Ｐ１側の開口端までの、培養容器部２の側壁部２２ａからの距離である。後述する実施形態２に係る多層培養容器では、リザーバー容器は第一の側壁部２２ａ’と同じレベルとなるよう、培養容器部に取付けられているため、距離Ｌ６と距離Ｌ１０とは同じ値となる。実施形態１に係る多層培養容器において、開口部３９の長手方向の長さＬ６を２５～３５ｍｍとした場合、距離Ｌ１０は、例えば３３～４８ｍｍである。

【0047】

図２ｃにおいて、開口部３９の幅Ｌ７は、開口部の下端３９ａと上端３９ｂとの間の距離である。開口部の上端３９ｂは、積み重ねられたカバープレートのカバー壁部４１又は培養トレーの底壁部３１の外面に対応する。培養トレー３で区分けされた内部空間の高さＬ４を５～１０ｍｍとした場合、培養トレーの底壁部３１から開口部の下端３９ａまでの距離Ｌ９は、例えば３～９ｍｍである。

【0048】

図３を参照しつつ、流体試料（例えば培養培地）が導入された後の多層培養容器１の使用方法を説明する。図３ａは、図２中のＥ－Ｅの断面図示し、流体試料が導入された後の第一姿勢の多層培養容器１を示す。多層培養容器１の第一姿勢は、培養容器部２の側壁部２２ａが底面となるように多層培養容器１を配置し、培養容器部２に取り付けられたリザーバー部５に備えられたポート５５が上向きとなる姿勢である。第一姿勢の多層培養容器１は、使用者が、ポート５５を通じて、培養容器部２の培養トレーで画定される内部空間に流体試料を導入又は排出を容易に行うことができる姿勢である。

【0049】

図３ａに示されるように、第一姿勢におけるリザーバー容器５０内の流体試料の液面は、側壁部２２ｄに形成された各開口部３９に対して揃っている。上述したように、側壁部２２ｄに形成された開口部３９を通じて、培養トレー３で区分けされた培養容器部２の各内部空間とリザーバー容器５０の内部空間とは連通している。流体試料がポート５５を通じてリザーバー容器５０の内部空間に導入されると、その導入された流体試料は側壁部２２ｄに形成された各開口部３９を通じて、培養容器部２内の各内部空間に導入される。

【0050】

図３ｂは、第一姿勢における多層培養容器１における図２ｂ中のＢ－Ｂの断面を示す。図３ｂに示されるように、培養容器部２の側壁部２２ｄに設けられた開口部を通じて培養容器部２の各内部空間に流入した流体試料の液面は、リザーバー容器５０内の流体試料の液面と同じになる。図３ａ及び図３ｂから理解されるように、多層培養容器１によれば、導入された流体試料は、導入作業を行うだけで、培養容器部２内の培養トレー３で区分けされた各内部空間に均等に配分される。

【0051】

図３ｃは、培養容器部２の側壁部２２ｂが底面となるように置いた第二姿勢の多層培養容器１を示す。第二姿勢は、第一姿勢の多層培養容器１を図３ｂの矢印Ｒの方向に９０度回転させた姿勢である。第一姿勢から第二姿勢に移行させる間に、リザーバー容器５０の内部空間に溜められていた流体試料は、側壁部２２ｄに形成された開口部３９を通じて、培養容器部２の培養トレー３で区分けされた各内部空間に流入することとなる。この結果、リザーバー容器５０に導入された流体試料は基本的にすべて、培養容器部２の培養トレーで区分けされた前記内部空間に配分され、流体試料の無駄をなくすことが可能である。

【0052】

図３ｄは、図３ｃで示す第２姿勢から、側壁部２２ｂを軸にして奥方向に９０度倒し、培養トレー３ａの底壁部３１が底面となるように置いた第三姿勢の多層培養容器１を示す。図３ａ～ｄで示されるように、多層培養容器１を、第一姿勢から第二姿勢を経て第三姿勢とすることで、流体試料が、培養容器部２を構成する各培養トレー３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄ及び３ｅに均一に配分された状態を容易に作り出すことができる。各培養トレーに配分された流体試料の液面は、各培養トレーの開口部３９を形成する切欠き部よりも低い位置にある。上記したように、多層培養容器１によれば、第一姿勢にて流体試料を導入するだけで、培養容器部２の培養トレー３で区分けされた内部空間に流体試料が均等に配分されるため、培養条件を容易に揃えることができる。これにより、細胞の培養状態の不均一性から生じる、試薬の浪費を抑制し得る。

【0053】

培養容器を用いた細胞培養での汚染は、一般に、培養容器内の内部空間と外部空間との連通をもたらすポート付近で生じやすい。このため、細胞培養操作では、ポート部分に触れた流体試料が培養容器内部に侵入しないように操作することが一般的である。実施形態１に係る多層培養容器１では、図３で示されるように、ポート５５から導入された流体試料を培養容器部２の培養トレー３で区分けされた各内部構造に分配するまでに、導入した流体試料がポート５５と接触することは基本的になく、実施形態１に係る多層培養容器１は汚染のリスクの観点からも有利である。

【0054】

実施形態１では、培養容器部２の側壁部２２は、積み重ねられた少なくとも２つの培養トレー３の周壁部３２により構成されているが、これに限定されない。培養容器部の側壁部は、例えば、培養容器部を構成する容器の側壁部であってよい。この例において、多層培養容器の少なくとも２つの培養トレーは、培養容器部の容器の側壁部の内壁面と、培養トレーの底壁部の外周面又は周壁部の外壁面とを接着することにより積み重ねられていてよい。従って、本発明に係る実施形態１は、以下の変形例を含む。

【0055】

［変形例］
収容容器を含む培養容器部と、前記培養容器部に取り付けられたリザーバー部と、を備えた多層培養容器であって、前記収容容器が、積み重ねられている少なくとも２つの培養トレーを含み、前記リザーバー部が、内部空間を画定する囲壁部及び前記内部空間と連通したポートを含み、前記囲壁部が、前記ポートが設けられた第一の囲壁部及び前記第一の囲壁部と対向する第二の囲壁部を含み、前記培養容器部が、前記少なくとも２つの培養トレーの各培養トレーと前記リザーバー部の前記内部空間とを連通する開口部を有し、及び、前記培養容器部の前記開口部が、前記第一の囲壁部が前記培養容器部と当接する第一の当接部に向かって、前記第二の囲壁部が前記培養容器部と当接する第二の当接部から延在している、多層培養容器。

【0056】

実施形態１では、積み重ねられている少なくとも２つの培養トレー３は、１つの培養トレー３の周壁部３２に、他の培養トレー３の底壁部を当接させて積み重ねられているが、これに限定されない。例えば、実施形態１の変形例のように、培養容器部を構成する収容容器の側壁部の内壁面と、培養トレーの底壁部の外周面とを接着することで又は周壁部の外壁面とを接着することで、１つの培養トレーの周壁部と他の培養トレーの底壁部とを当接させることなく、培養トレーの底壁部のトレー面を積み重ねることができる。

【0057】

実施形態１では、多層培養容器１は、積み重ねられている少なくとも２つの培養トレー３を培養トレー３ａに培養トレー３ｂ、３ｃ、３ｄ及び３ｅの順で積み重ねて組み立てられているが、これに限定されない。例えば、実施形態１の変形例のように、培養容器部を構成する収容容器の側壁部の内壁面と培養トレーの周壁部の外壁面とを接着する場合、培養トレーを積み重ねる順序、即ち、培養トレーの底壁部の外周面又は周壁部の外壁面と培養容器部を構成する容器の側壁部の内壁面とを接着する順序は、特に制限さない。

【0058】

実施形態１では、培養トレー３は、底壁部３１の外周から前記底壁部３１と一体成形され、前記底壁部の外周から伸長した周壁で構成される周壁部３２を含んだが、これに限定されない。例えば、実施形態１の変形例では、培養トレーの底壁部の外周面が培養容器部を構成する収容容器の側壁部と接着され、前記培養トレーは、その底壁部及び前記底壁部の外周に取り付けられた壁を周壁部として含む。培養トレーの周壁部は、限定するものではないが、その底壁部から伸長した周壁で構成されるか、その底壁部に取り付けられた壁で構成されるか、又はその底壁部から伸長した周壁及び前記底壁部に取り付けられた壁を含んで構成される。

【0059】

実施形態１では、培養トレー３の周壁部３２は、その底壁部の外周から実質的に垂直に上方に伸長された周壁を含んだが、これに限定されない。培養トレーの周壁部は、その底壁部の外周から斜め上方に伸長された周壁を含んでもよい。

【0060】

実施形態１では、培養トレー３の底壁部３１は実質的に平坦な略長方形のトレー面を含んだが、これに限定されず、三角形、正方形、５角形、６角形、楕円形、円形のトレー面を含んでもよい。培養トレーの底壁部のトレー面は、限定するものではないが、多層培養容器を培養するのに適した姿勢に置いた場合に、培養層の底面を構成する。

【0061】

実施形態１では、積み重ねられている少なくとも培養トレー３は、５つの培養トレー３ａ～３ｅを含んだが、これに限定されない。積み重ねられている少なくとも培養トレーのトレー数は、目的に応じて当業者により適宜設定されてよく、限定するものではないが、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上であってよい。

【0062】

実施形態１では、積み重ねられている少なくとも２つの培養トレー３は、互いに実質的に同じ形状を有しているが、これに限定されない。例えば、多層培養容器を培養するのに適した姿勢に置いた場合に、多層培養容器の底面を構成する培養トレーは、それに積み重ねられている他の培養トレーとは異なる形状であってよい。例えば、前記培養容器部の底面を構成する培養トレーは、培養装置内に置かれたときに、多層培養容器の底面部が培養装置に直接触れないようにするための突起が設けられていてよい。

【0063】

実施形態１では、カバープレート４は、実質的に平坦なカバー壁部４１を含んだが、これに限定されない。実施形態１では、カバープレート４は、培養トレー３ｅに積み重ねられた第一のカバー壁部４１ａ及びリザーバー部５に取り付けられた第二のカバー壁部４１ｂを含んだが、これに限定されない。カバープレートは、培養トレーに積み重ねられる第一のカバー壁部から構成されてよい。

【0064】

実施形態１では、カバープレート４は、積み重ねられている少なくとも２つの培養トレー３の周壁部３２に積み重ねられているがこれに限定されない。例えば、実施形態１の変形例のように、培養容器部がそれを構成する収容容器を含む場合、その収容容器の上面部がカバープレートに相当する。

【0065】

実施形態１では、リザーバー部５は、培養容器部の側壁部２２ｄ及びカバープレート４の第二のカバー壁部４１ｂに取り付けられているが、これに限定されない。例えば、リザーバー部が、カバープレート４に代えて第二のカバー壁部４１ｂに対応する囲壁部を有する場合、リザーバー部は、培養容器部の側壁部２２ｄにだけ取り付けられていてもよい。他の例において、培養トレー３の底壁部３１に、リザーバー部に代えて囲壁部５２ａに対応する更なる底壁部が一体形成されている場合、リザーバー部は、培養容器部の側壁部２２ｄ、カバープレート４の第二のカバー壁部４１ｂ及び培養トレー３の前記した更なる底壁部に取り付けられていてもよい。この例では、組み立て後の多層培養容器１は、その機械強度が比較的高くなり、好ましい。

【0066】

実施形態１では、リザーバー部５は、略直方体のリザーバー容器５０を含んだが、これに限定されない。リザーバー部５の形状は、例えば、正六面体、円錐台、５角柱を含む多角柱などであってよい。

【0067】

実施形態１では、培養容器部２とリザーバー部５との取付けは、培養トレー３の周壁部３２に形成された係止凸部３５とリザーバー容器５０に形成された受け口５４とを嵌合させ、且つ、リザーバー容器５０の囲壁部５２ｅと培養トレーの周壁部３２との当接部３６とを接着させることによって行われたが、これに限定されない。前記取付けは、例えば、係止凸部と受け口との嵌合又は当接部での接着のいずれか一方であってよい。他の例では、培養容器部２とリザーバー部５とは一体成形されていてもよい。

【0068】

実施形態１では、リザーバー容器５０を構成する囲壁部５２のうち、ポート５５が設けられた第一の囲壁部５２ｂと、第一の囲壁部５２ｂと対向する第二の囲壁部５２ｄとは略平行、即ち、第一の囲壁部５２ｂと対向する第二の囲壁部５２ｄとがなす角は約０度であるが、これに限定されない。ポートが設けられた第一の囲壁部と、それと対向する第２の囲壁部とがなす角は、限定するものではないが、０度以上５０度以下であってよく、例えば、０度以上４５度以下、０度以上４０度以下、０度以上３５度以下、０度以上３０度以下、０度以上２０度以下、０度以上１０度以下、又は０度以上５度以下であってよい。ポートが設けられた第一の囲壁部とそれと対向する第２の囲壁部とがなす角は、例えば、０度、１０度、２０度、３０度、３５度、４０度、４５度、又は５０度であってよい。

【0069】

実施形態１では、ポート５５の形状は、円柱状の凸管であるが、これに限定されない。ポートの形状は、限定するものではないが、ピペットなどの分注器具を用いて流体試料の導入及び排出を行うことができる形状であれば、特に制限されない。ポートの形状は、例えば、凸管、凹管又は孔であってよい。ポートは、限定するものではないが、円形、楕円形、又は多角形（例えば六角形）の開口面を有する。

【0070】

実施形態１では、ポート５５は、ネジ式ポートであり、ネジ蓋５６を用いて開閉することができる開口部であるが、これに限定されない。ポートは、例えば、ヒンジキャップを備えた開口部であってよい。ポートに用いられる蓋の材料は、限定するものではないが、医薬分野又は研究分野で慣用される金属又はプラスチック、例えばステンレススチール又はポリエチレンが挙げられる。蓋は、限定するものではないが、ガスの交換を可能にするために、細孔を有するフィルター又は疎水性メンブレンを備えたベントキャップであってよい。細孔は、限定するものではないが、細菌、ウイルスなどの汚染から容器内の細胞を保護することができるサイズであってよい。細孔は、例えば、０．６５ミクロン未満、０．４ミクロン、又は０.２２ミクロンであってよい。

【0071】

実施形態１では、ポート５５の軸Ｄ２と積層方向Ｄ１とがなす角は約９０度であるが、これに限定されない。ポートの軸Ｄ２と積層方向Ｄ１とがなす角は、限定するものではないが、７０度以上９０度以下、７５度以上９０度以下、８０度以上９０度以下、８５度以上９０度以下であってよい。ポートの軸Ｄ２と積層方向Ｄ１とがなす角は、例えば、９０度、８５度、８０度、７５度、又は７０度であってよい。

【0072】

実施形態１では、ポート５５は、その軸Ｄ２と、培養容器部２の側壁部２２ｄとリザーバー容器５０の囲壁部５２ｅとが対向する対向面とが略平行、即ち、ポート５５の軸Ｄ２と、培養容器部２の側壁部２２ｄとリザーバー容器５０の囲壁部５２ｅとが対向する対向面とのなす角が約０度となるように、リザーバー容器５０の囲壁部５２ｂに設けられているが、これに限定されない。ポートの軸Ｄ２と、培養容器部の側壁部とリザーバー容器の囲壁部とが対向する対向面とがなす角は、限定するものではないが、０度以上５０度以下であってよく、例えば、０度以上４５度以下、０度以上４０度以下、０度以上３５度以下、０度以上３０度以下、０度以上２０度以下、０度以上１０度以下、又は０度以上５度以下であってよい。ポートが設けられた第一の囲壁部とそれと対向する第２の囲壁部とがなす角は、例えば、０度、１０度、２０度、３０度、３５度、４０度、４５度、又は５０度であってよい。

【0073】

培養容器部２の側壁部２２ｄとリザーバー容器５０の側壁部５２ｅとが対向する対向面は、例えば、第二の当接部Ｐ２の両端の２点と、前記ポート５５の軸Ｄ２と第一の当接部Ｐ１との最近傍点とを含む平面であってよい。

【0074】

実施形態１では、培養容器部２の開口部３９は、培養トレー３の周壁部３２に設けられた切欠き部３８により形成されているが、これに限定されるものではない。培養容器部の開口部は、例えば、その底壁部から伸長された周壁に設けられた孔又は開口であってよい。他の例では、実施形態１の変形例においてに１つの培養トレーの周壁部と他の培養トレーの底壁部とを当接させずに培養トレーを積み重ねた場合に形成される、培養トレー間の空間を、培養容器部の開口部としてもよい。

【0075】

実施形態１では、培養容器部２の開口部３９は、培養トレー３を、その周壁部３２に形成された切欠き部３８が培養容器部２の側壁部２２ｄとリザーバー容器５０の囲壁部５５ｅとの対向面に整列するように積み重ねることで形成されているが、これに限定されない。培養トレーの開口部は、例えば、異なる突出長さの係止凸部を周壁部に有する培養トレーを、積層方向に進むにつれ突出長さが小さくなるように培養トレーを積み重ねることで、積層方向に開口面を有する開口部を形成させてもよい。

【0076】

実施形態１では、培養容器部２の開口部３９は培養トレー３につき１つ設けられているが、これに限定されるものではなく、培養トレーの開口部は培養トレーにつき２つ以上設けられてもよい。図３ａで示されるように多層培養容器１が第一姿勢に置かれるとき、ポート５５を通じて培養容器部２内部に流体試料を導入しようとしても、導入された流体試料の液面がリザーバー容器５０の囲壁部５２ｅを上回ると、流体試料は培養容器部２の培養トレーの内部空間に残存する空気のために培養容器部２内部に配分されなくなる。流体試料の液面がリザーバー容器５０の囲壁部５２ｅを上回っても培養容器部２内部に流体試料を配分させるために、培養容器部２は、その側壁部２２ｄに残存する空気を逃がすための更なる開口部を含んでよい。そのような更なる開口部は、多層培養容器１の第一姿勢を示す図３ａにおいて、開口部３９より上方に形成される。

【0077】

上記した培養容器部２に残存する空気を逃がすために更なる開口部を含まない場合、多層培養容器１のリザーバー容器５０の囲壁部５２ｅは、培養容器部２に配分される流体試料の量を制限して、培養トレー内に所定の比率で流体試料の容積と空間容積とが含まれるようにするための調節機構として機能し得る。

【0078】

実施形態１では、培養容器部２の開口部３９は、培養トレー３の周壁部３２に、その高さの約５分の４の位置が前記開口部の下端３９ａとなるように形成されているが、これに限定されるものではなく、例えば、培養容器部２の開口部は、培養トレーの周壁部に、その高さの２分の１以上、５分の３以上、３分の２以上、４分の３以上、５分の４以上の位置がその開口部の下端３９ａとなるように形成されてよい。

【0079】

図３ｄで示されるように、多層培養容器を培養するのに適した姿勢（第三姿勢）に置いた場合、培養容器部２の各培養トレー３の底壁部３１のトレー面から、各培養トレー３の周壁部３２に設けられた開口部の下端３９ａまでの距離Ｌ９が、その培養トレーに収容可能な流体試料の液面の上限を規定することとなる。例えば、培養容器部の開口部の下端３９ａが、培養トレーの周壁部３２の高さの２分の１の位置に設けられている場合、培養トレーの内部空間に液面が２分の１を超える分量で流体試料が配分されると、その流体試料の一部は前記開口部から溢れだすことになる。従って、培養トレー３で区分けされた培養容器部２の内部空間のうち、培養トレー３の底壁部３１のトレー面と開口部の下端３９ａまでの距離Ｌ９とで形成される空間が、培養層として利用され得る収容空間に相当する。多層培養容器１を第一姿勢から第二姿勢を経て第三姿勢とした場合に、流体試料の一部が培養トレーの内部空間から開口部３９を通じてリザーバー容器５０へと溢れだすこれを防止するため、多層培養容器１が第一姿勢における適切な流体試料の量を示す目印が、培養容器部２及び／又はリザーバー部５に付されていてもよい。そのような目印は、プリント、エンボス加工又はシールであってよい。

【0080】

多層培養容器１を第三姿勢に置いたときの培養容器部２が収容可能な最大容積は、例えば、培養トレーの底壁部３１のトレー面の面積Ｌ１×Ｌ８（図２ａ参照）に、底壁部３１から開口部の下端３９ａまでの距離Ｌ９を乗じて得られる容積（１つの培養トレー３が収容可能な最大収容容積）に、培養容器部２を構成する培養トレー３のトレー数を乗じることによって算出することができる（Ｌ１×Ｌ８×Ｌ９×［培養トレーのトレー数］）。上記した第一姿勢における適切な流体試料の量を示す目印は、例えば、培養容器部２が収容可能な最大容積以下となる位置に付すことができる。特に第三姿勢に置いたとき収納可能な最大容積まで液体試料を収納していた場合は、振動などにより液体試料が培養トレー３からリザーバー容器５０（５０’）へ溢れだす危険性がある。その為、好適にはＬ９の５０％より下の容積になるよう、収納させる液体試料の量または培養トレー３のトレー面積を適宜設定すればよい。培養容器部に収容する適切な容積は、（Ｌ１×Ｌ８×Ｌ９×０．５×［培養トレーのトレー数］）で表すことができる。

【0081】

流体試料中に気泡が形成されると、流体試料を回収する際に回収量が低下する。また、気泡が弾けた際に飛散する流体試料は汚染の原因ともなる。多層培養容器の内部構造によっても、流体試料中に気泡が形成されやすくなる。例えば、第三姿勢の多層培養容器に収容された培養培地を排出するために、多層培養容器１を第一姿勢としたときの流体試料の液面の位置が、各培養トレーの周壁部に設けられた開口部の、第一の当接部Ｐ１側の短辺の開口端の位置よりも高くなる場合、気泡が形成されやすくなる。気泡の形成を抑制するためには、多層培養容器が第一姿勢にあるときに、培養容器部２が収容する適切な容積が示す液面の位置よりも、各培養トレーの周壁部に設けられた開口部の、第一の当接部Ｐ１側の短辺の開口端の位置が高いことが好ましい。即ち、第一姿勢のときの多層培養容器の底面の面積に、第一の当接部Ｐ１側の開口端までの距離を乗じて得られる容積が、培養容器部２に収容する適切な容積よりも大きいことが好ましい。そのような多層培養容器は、例えば、以下の関係を有する：
［第一姿勢のときの多層培養容器の底面の面積に、第一の当接部Ｐ１側の開口端までの距離を乗じて得られる容積］ ≧ ［培養容器部に収容する適切な容積］ （１）。

【0082】

不等式（１）において、左辺の容積は、第一の当接部Ｐ１側の開口端までの側壁部２２ａからの距離Ｌ１０に（図２ｄ参照）、側壁部２２ａを底面とした多層培養容器の長辺の長さＬ２と厚みＬ５とを乗じた面積（図２ｂ参照）を掛け合わせることで得ることができる。即ち、左辺の容積は、Ｌ１０×Ｌ２×Ｌ５で表せる。右辺の容積は、上記のとおり、Ｌ１×Ｌ８×Ｌ９×［培養トレーのトレー数］で表すことができる。これらを不等式（１）に代入することで、以下の式（２）が得られる：
Ｌ１０×Ｌ２×Ｌ５ ≧ Ｌ１×Ｌ８×Ｌ９×［培養トレーのトレー数］ （式２）。

【0083】

図２で示されるように、多層培養容器の厚みＬ５は、培養トレーの内部空間の高さＬ４に、多層培養容器を構成する培養トレーのトレー数を乗じた値にほぼ等しい。即ち、Ｌ５≒Ｌ４×［培養トレーのトレー数］と表すことができる。これを不等式（２）に代入すると、以下の式（３）が得られる：
Ｌ１０×Ｌ２×Ｌ４×［培養トレーのトレー数］ ≧ Ｌ１×Ｌ８×（Ｌ９×０．５）×［培養トレーのトレー数］ （式３）。

【0084】

不等式３の両辺を、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ４、及び［培養トレーのトレー数］で除すると、以下の式（４）が得られる：
Ｌ１０／Ｌ１ ≧ （Ｌ９×０．５）／Ｌ４×Ｌ８／Ｌ２ （式４）。
［式中、Ｌ１０／Ｌ１は、図２ｄで示されるように、多層培養容器の短辺の長さＬ１に対する、第一の当接部Ｐ１側の開口端までの側壁部２２ａからの長さＬ１０の比を示す。Ｌ９／Ｌ４は、図２ｃで示されるように、培養層として利用される内部空間の高さＬ４に対する、培養トレーに収容可能な流体試料の液面の上限を規定する開口部の下端３９ａまでの距離Ｌ９の比を示す。Ｌ８／Ｌ２は、図２ａで示されるように、多層培養容器１の長辺の長さＬ２に対する、培養容器部２の長辺の長さＬ８の比を示す。

【0085】

実施形態１では、培養容器部２の開口部３９は、培養トレー３の周壁部３２に形成されているが、これに限定されない。例えば、実施形態１の変形例のように、培養容器部がそれを構成する収容容器を含む場合、培養容器部の開口部は、前記収容容器の側壁部に形成されていてもよい。他の例において、培養容器部とリザーバー部との取り付け面部において開口部が形成されている場合、その取付け面部が多層培養容器を組み立てる際に、リザーバー部の囲壁部に形成された開口部であったとしても、多層培養容器において、当該開口部は、培養容器部の開口部とみなされる。

【0086】

実施形態１では、培養トレー３の開口部３９の形状は、スリット状の空間であるが、これに限定されるものではなく、培養トレーの開口部の形状は、例えば、三角形、楕円形などであってよい。前記開口部は、限定するものではないが、複数の空間が断続的に設けられていてもよい。

【0087】

［実施形態２］
図４は、本発明の他の実施形態（以下「実施形態２」）に係る多層培養容器の斜視図を示す。以下、図４を参照して、実施形態２について説明するが、前述した実施形態１との相違点を中心に説明し、同様の事項はその説明を省略する。
実施形態１に係る多層培養容器１の培養トレーは５個であったのに対して、実施形態２に係る多層培養容器１’は６つの培養トレー３ａ’～３ｆ’を含む。

【0088】

実施形態１に係るリザーバー部５に備えられたポートは、ネジ式ポート５５がネジ蓋５６により開閉されるものであるが、実施形態２に係るリザーバー部５’に備えられたキャップ式ポート５５’はヒンジキャップ５６’により開閉される。ヒンジキャップ５６’は、リザーバー部５’の前記内部空間と外部空間との連通をもたらす開口部を有するガス交換部を備え、前記開口部は細孔を有するフィルター又は疎水性メンブレンにより覆われている。図４に示される実施形態２では、ヒンジキャップ５６’は、例えば、８個のガス交換部を備える。前記８個のガス交換部は、ヒンジキャップ５６’の厚さ方向から見た中心点の周りに間隔をあけて配置され、隣接するガス交換部の間でリブが放射状に中心点から延在している。ガス交換部は、ネジ蓋に設けられてもよい。蓋又はキャップに設けられるガス交換部は、１個であってもよく、複数個であってもよい。一例において、蓋又はキャップは、３個のガス交換部を備え、前記ガス交換部は前記蓋又はキャップの厚さ方向から見た中心点の周りに間隔をあけて、好ましくは等角度で配置されている。

【0089】

実施形態１に係る多層培養容器１のリザーバー部５は、リザーバー容器５０の囲壁部５２ｄが培養容器部２の側壁部２２ａの水平位置から上方の位置で側壁部２２ｄに取り付けられていたのに対して、実施形態２に係る多層培養容器１’では、リザーバー部５’は、リザーバー容器５０’の囲壁部５２ｅ’が培養容器部２’の側壁部２２ａ’と同じレベルとなるよう、側壁部２２ｄ’に取付けられている。これにより、多層培養容器１’を、第一姿勢に配置した場合の安定性が向上する。また、リザーバー容器５０’の囲壁部５２ｅ’と培養トレー３’の側壁部２２ｄ’との当接部から延在する培養トレー３’の開口部によって、第一姿勢にて流体試料を排出する場合、流体試料の取残しを少なくすることが可能である。

【0090】

実施形態２に係る多層培養容器１’は、リザーバー容器５０’の囲壁部５２ｃ’及び囲壁部５２ｄ’に引出部５８を有する。引出部５８は、培養装置内で細胞培養した後に、多層培養容器１’を前記培養装置から取り出す際に、使用者が手指を入れて多層培養容器１’を引出すのに便利である。引出部５８に手指を入れることができる空間を形成するために、リザーバー容器５０’の囲壁部５２ｂ’は囲壁部５２ａ'に対して傾斜が設けられている。

【0091】

実施形態１の多層培養容器の培養トレー、カバープレート、リザーバー容器、培養トレーの開口部などの構成に関する説明は、実施形態２の多層培養容器の各種の構成についても適用される。

【0092】

本発明の他の態様は、本発明の実施形態に係る多層培養容器を用いて、細胞を培養する工程；培養した細胞を又は培養細胞から分泌された成分を含む培養培地を、前記多層培養容器から回収する工程；及び回収した培養細胞又は回収した培養細胞から分離及び精製された成分、或いは回収した分泌成分を含有する医薬組成物を製造する工程、を含む医薬組成物の製造方法を提供する。

【符号の説明】

【0093】

１、１’ 多層培養容器
２、２’ 培養容器部
３、３’、３ａ～３ｅ、３ａ’～３ｆ’ 培養トレー
４、４’ カバープレート
５、５’ リザーバー部
２２、２２ａ～２２ｄ、２２ａ’～２２ｄ’ 側壁部
３１ 底壁部
３２ 周壁部
３３ 凸部
３４ 凹部
３５ 係止凸部
３６ 当接部
３８ 切欠き部
３９ 開口部
３９ａ、３９ｂ 開口部の下端、上端
４１ カバー壁部
４１ａ、４１ｂ 第一、第二のカバー壁部
４３ リッジ
４４ａ 凹部
４４ｂ 凹部
５０、５０’ リザーバー容器
５２、５２ａ～５２ｅ、５２ａ’～５２ｅ’ 囲壁部
５３ 凸部
５４ 受け口
５５ ネジ式ポート
５５’ キャップ式ポート
５６ ネジ蓋
５６’ ヒンジキャップ
５８ 引出部
Ｄ１ 積層方向
Ｄ２ ポート軸

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】