特許 7582970 Ｗｅｅ１阻害剤化合物の結晶形及びその応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-05

(45)【発行日】2024-11-13

(54)【発明の名称】Ｗｅｅ１阻害剤化合物の結晶形及びその応用

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/22 20060101AFI20241106BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241106BHJP

【ＦＩ】

C07D487/22

A61K31/519

A61P35/00

A61P43/00 111

【請求項の数】 33

(21)【出願番号】P 2021564588

(86)(22)【出願日】2020-04-30

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-01

(86)【国際出願番号】 CN2020088451

(87)【国際公開番号】W WO2020221358

(87)【国際公開日】2020-11-05

【審査請求日】2023-02-06

(31)【優先権主張番号】201910364694.X

(32)【優先日】2019-04-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】522048993

【氏名又は名称】ウーシー・バイオシティ・バイオファーマシューティクス・カンパニー・リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】▲銭▼ 文▲遠▼

(72)【発明者】

【氏名】▲楊▼ ▲純▼道

(72)【発明者】

【氏名】李 正▲偉▼

(72)【発明者】

【氏名】李 ▲ジエ▼

(72)【発明者】

【氏名】黎 健

(72)【発明者】

【氏名】▲陳▼ 曙▲輝▼

【審査官】薄井 慎矢

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１８／１７１６３３（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．７１±０．２°、１２．６８±０．２°、１５．３２±０．２°、２３．６１±０．２°及び２５．６８±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形物。

【化1】

【請求項2】

Ｘ線粉末回折パターンは、２θ角：５．７１±０．２°、１２．６８±０．２°、１５．３２±０．２°、１８．０４±０．２°、１９．７２±０．２°、２１．４４±０．２°、２３．６１±０．２°及び２５．６８±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項１に記載のＡ結晶形物。

【請求項3】

以下のＸＲＰＤパターン分析データ：

【表1】

を有する、請求項２に記載のＡ結晶形物。

【請求項4】

示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、３４．９５±３℃、１７４．７５±３℃及び２１９．１２±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する、請求項１～３のいずれか１項に記載のＡ結晶形物。

【請求項5】

熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、７０．３３±３℃で重量減少が０．７３６７％に達し、２０９．４２±３℃で重量減少が３．１２３％に達する、請求項１～３のいずれか１項に記載のＡ結晶形物。

【請求項6】

Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．５８±０．２°、１１．７１±０．２°、１２．４４±０．２°、１８．６４±０．２及び２２．１６±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）の化合物のＢ結晶形物。

【化2】

【請求項7】

Ｘ線粉末回折パターンは、２θ角：５．５８±０．２°、１１．７１±０．２°、１２．４４±０．２°、１４．４８±０．２°、１５．１３±０．２°、１８．６４±０．２°、２２．１６±０．２°及び２６．３３±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項６に記載のＢ結晶形物。

【請求項8】

以下のＸＲＰＤパターン分析データ：

【表2】

を有する、請求項７に記載のＢ結晶形物。

【請求項9】

示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、４２．８８±３℃、１９８．７９±３℃及び２２２．３６±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する、請求項６～８のいずれか１項に記載のＢ結晶形物。

【請求項10】

熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、６４．２１±３℃で重量減少が３．２６５％に達し、２４３．０５±３℃で重量減少が１．５１６％に達する、請求項６～８のいずれか１項に記載のＢ結晶形物。

【請求項11】

Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．０５±０．２°、５．５８±０．２°及び１２．４４±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）の化合物のＣ結晶形物。

【化3】

【請求項12】

Ｘ線粉末回折パターンは、２θ角：５．０５±０．２°、５．５８±０．２°、１２．４４±０．２°、１５．９１±０．２°、１６．６８±０．２°、１７．６１±０．２°、２２．１９±０．２°及び２６．３７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項１１に記載のＣ結晶形物。

【請求項13】

以下のＸＲＰＤパターン分析データ：

【表3】

を有する、請求項１２に記載のＣ結晶形物。

【請求項14】

示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、３７．０６±３℃、１８９．１６±３℃及び２１８．６１±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する、請求項１１～１３のいずれか１項に記載のＣ結晶形物。

【請求項15】

熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、６４．９８±３℃で重量減少が２．２１１％に達し、２２４．７１±３℃で重量減少が１．１２７％に達する、請求項１１～１３のいずれか１項に記載のＣ結晶形物。

【請求項16】

Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．２２±０．２°、１５．９９±０．２°、１６．５７±０．２°、１７．０８±０．２°及び２１．２２±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）の化合物のＤ結晶形物。

【化4】

【請求項17】

Ｘ線粉末回折パターンは、２θ角：５．２２±０．２°、１５．１８±０．２°、１５．９９±０．２°、１６．５７±０．２°、１７．０８±０．２°、１８．６０±０．２°、２１．２２±０．２°及び２１．８９±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項１６に記載のＤ結晶形物。

【請求項18】

以下のＸＲＰＤパターン分析データ：

【表4】

を有する、請求項１７に記載のＤ結晶形物。

【請求項19】

示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、５６．０７±３℃、１９３．９３±３℃及び２１６．５４±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する、請求項１６～１８のいずれか１項に記載のＤ結晶形物。

【請求項20】

熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、７９．３５±３℃で重量減少が１．９７７％に達し、２２３．６６±３℃で重量減少が１．５８９％に達する、請求項１６～１８のいずれか１項に記載のＤ結晶形物。

【請求項21】

Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：８．６５±０．２°、１４．２２±０．２°及び２４．５８±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）の化合物のＥ結晶形物。

【化5】

【請求項22】

Ｘ線粉末回折パターンは、２θ角：８．６５±０．２°、１１．４１±０．２°、１３．１３±０．２°、１４．２２±０．２°、１７．３５±０．２°、１８．３４±０．２°、２０．３９±０．２°、２０．９４±０．２°及び２４．５８±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項２１に記載のＥ結晶形物。

【請求項23】

以下のＸＲＰＤパターン分析データ：

【表5】

を有する、請求項２２に記載のＥ結晶形物。

【請求項24】

示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、１２１．５７±３℃、１９７．２６±３℃及び２１７．２３±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有し、１６８．３１±３℃及び２１２．９５±３℃でそれぞれ１つの発熱ピークのピーク値を有する、請求項２１～２３のいずれか１項に記載のＥ結晶形物。

【請求項25】

熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、１４３．３１±３℃で重量減少が６．７７５％に達し、２１３．６２±３℃で重量減少が０．３１８４％に達する、請求項２１～２３のいずれか１項に記載のＥ結晶形物。

【請求項26】

Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．０６±０．２°、１０．９８±０．２°、１５．１３±０．２°、１５．９１±０．２°、１６．６８±０．２°及び１７．６３±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）の化合物のＦ結晶形物。

【化6】

【請求項27】

Ｘ線粉末回折パターンは、２θ角：５．０６±０．２°、８．３４±０．２°、１０．９８±０．２°、１５．１３±０．２°、１５．９１±０．２°、１６．６８±０．２°、１７．６３±０．２°及び１８．８７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項２６に記載のＦ結晶形物。

【請求項28】

以下のＸＲＰＤパターン分析データ：

【表6】

を有する、請求項２７に記載のＦ結晶形物。

【請求項29】

示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、４８．６９±３℃と２２５．２６±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する、請求項２６～２８のいずれか１項に記載のＦ結晶形物。

【請求項30】

熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、１００±３℃で重量減少が３．４０４％に達する、請求項２６～２８のいずれか１項に記載のＦ結晶形物。

【請求項31】

請求項１～５のいずれか１項に記載のＡ結晶形物、請求項６～１０のいずれか１項に記載のＢ結晶形物、請求項１１～１５のいずれか１項に記載のＣ結晶形物、請求項１６～２０のいずれか１項に記載のＤ結晶形物、請求項２１～２５のいずれか１項に記載のＥ結晶形物又は請求項２６～３０のいずれか１項に記載のＦ結晶形物を含む、Ｗｅｅ１関連疾患を治療するための組成物。

【請求項32】

式（Ｉ）の化合物を、メタノールであるアルコール系溶媒に添加し撹拌して油浴の５５～６５℃まで加熱するステップ（ａ）と、
４７℃～５３℃で７２時間撹拌するステップ（ｂ）と、
加熱を停止し、撹拌しながら１時間自然冷却して２７℃に達するステップ（ｃ）と、
１８時間静置し、濾過して、メタノールで濾過ケーキを洗浄するステップ（ｄ）と、
６０℃で４８時間真空乾燥させるステップ（ｅ）と
を、ステップ（ａ）～（ｅ）の順番で含む、請求項２６～３０のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物のＦ結晶形物の製造方法。

【請求項33】

請求項１～５のいずれか１項に記載のＡ結晶形物、請求項６～１０のいずれか１項に記載のＢ結晶形物、請求項１１～１５のいずれか１項に記載のＣ結晶形物、請求項１６～２０のいずれか１項に記載のＤ結晶形物、請求項２１～２５のいずれか１項に記載のＥ結晶形物又は請求項２６～３０のいずれか１項に記載のＦ結晶形物を含む医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
ＣＮ２０１９１０３６４６９４．Ｘ、出願日：２０１９年４月３０日。

【0002】

本発明は、式（Ｉ）の化合物の結晶形、及びＷｅｅ１関連疾患を治療するための医薬品の製造におけるその結晶形の応用を開示する。

【背景技術】

【0003】

細胞周期のプロセスは、一連の細胞周期の制御システムにより制御された複雑なプロセスであり、細胞周期の調整制御システムのコア成分は、サイクリン依存性キナーゼ（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅｓ、ＣＤＫｓ）とサイクリン（Ｃｙｃｌｉｎｓ）を結合して形成されたＣＤＫｓ／Ｃｙｃｌｉｎｓ複合体であり、これらの複合体は、細胞が増殖周期に入ることを促進することができ、ＣＤＫ１（ヒト相同体は、ＣＤＣ２とも呼ばれる）／Ｃｙｃｌｉｎ Ｂの複合体は、細胞がＭ期に入ることを制御することに対して重要な役割を果たす。

【0004】

細胞がＭ期に入る前にＤＮＡの複製を完了する必要があり、様々な内因性及び外因性因子の干渉によりＤＮＡは、常に突然変異又は損傷が発生し、これらの異常が発生したＤＮＡは、修復を完了しなければならず、そうでなければ有糸分裂崩壊を引き起こし、細胞死をもたらす。

【0005】

細胞周期チェックポイントの主な機能は、細胞周期を一時停止し、細胞がＤＮＡの修復を完了してＭ期に入ることである。Ｇ１末期のＧ１／Ｓチェックポイント及びＧ２期のＧ２／Ｍチェックポイントは、２つの主な細胞周期チェックポイントであり、ＤＮＡ損傷の識別及び修復機能を共に担う。正常細胞は、Ｇ１／ＳチェックポイントによりＧ１期にＤＮＡの修復を完了することができるが、約５０％の癌化細胞に癌抑制遺伝子ｐ５３欠陥が存在し、これも同時にそれらにＧ１／Ｓチェックポイントの機能を欠失させ、それらはＤＮＡの修復を完了するためにＧ２／Ｍチェックポイントに大きく依存する必要がある。Ｇ２／Ｍチェックポイントに突然変異が発生することが少なく、それがあるため、癌細胞は、ＤＮＡ損傷剤及び放射線の治療を逃れることができる。

【0006】

Ｗｅｅ１プロテインキナーゼは、細胞周期調節因子であり、核内のセリン及びスレオニンプロテインキナーゼファミリーの一員に属し、Ｇ２／Ｍチェックポイントの重要なキナーゼである。ヒトの「Ｗｅｅ」プロテインキナーゼファミリーは、主にＷｅｅ１及びＭｙｔ１の２種類を含み、いずれもＣＤＣ２のＴｙｒ１５部位をリン酸化させて、ＣＤＣ２／ＣｙｃｌｉｎＢ複合体の活性化を阻害し、ＤＮＡの修復を完了するまで細胞がＭ期に入ることを阻止し、また、Ｍｙｔ１は、ＣＤＣ２のＴｈｒ１４部位をリン酸化することができ、これもＣＤＣ２活性に対して負の調節を行うことである。複数の癌化細胞においてＷｅｅ１キナーゼが高発現し、Ｗｅｅ１キナーゼを阻害することにより、腫瘍細胞がＧ２期のＤＮＡ修復を直接スキップし、有糸分裂に進み、腫瘍細胞死を引き起こし、癌を治療するという目的を達成することができる。

【0007】

現在、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのＷｅｅ１阻害剤ＡＺＤ１７７５は、臨床ＩＩ期に入り、３０項以上の臨床実験が開発され、かつ良好な治療効果を示す。ＡＺＤ１７７５は、最も早くＭｅｒｃｋにより開発されるため、ＭＫ－１７７５とも呼ばれ、２０１３年９月にＭｅｒｃｋは、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａへ該化合物を世界的に譲渡し、それに関連する特許は、主にＵＳ２００７０２５４８９２、ＷＯ２００７１２６１２２、ＥＰ２２１３６７３、ＷＯ２００８１３３８６６、ＷＯ２０１１０３４７４３等である。Ａｂｂｏｔｔ及びＡｂｂｖｉｅは、Ｗｅｅ１阻害剤についても研究し、関連特許は、主にＵＳ２０１２２２０５７２、ＷＯ２０１３１２６６５６、ＷＯ２０１３０１２６８１、ＷＯ２０１３０５９４８５、ＷＯ２０１３０１３０３１、ＷＯ２０１３１２６６５６等である。Ａｌｍａｃ社のＷｅｅ１阻害剤に関する特許は、ＷＯ２０１４１６７３４７、ＷＯ２０１５０１９０３７、ＷＯ２０１５０９２４３１を含む。

【0008】

ＷＯ２００８１３３８６６は、化合物ＡＺＤ１７７５を開示しており、構造は以下に示すとおりである：

【化1】

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【文献】米国特許出願公開第２００７０２５４８９２号明細書

【文献】国際公開第２００７１２６１２２号

【文献】欧洲特許第２２１３６７３号明細書

【文献】国際公開第２００８１３３８６６号

【文献】国際公開第２０１１０３４７４３号

【文献】米国特許出願公開第２０１２２２０５７２号明細書

【文献】国際公開第２０１３１２６６５６号

【文献】国際公開第２０１３０１２６８１号

【文献】国際公開第２０１３０５９４８５号

【文献】国際公開第２０１３０１３０３１号

【文献】国際公開第２０１４１６７３４７号

【文献】国際公開第２０１５０１９０３７号

【文献】国際公開第２０１５０９２４３１号

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明は、式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形を提供し、そのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．７１±０．２°、１２．６８±０．２°及び１５．３２±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0011】

【化2】

【0012】

本発明のいくつかの態様では、上記Ａ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．７１±０．２°、１２．６８±０．２°、１５．３２±０．２°、１９．７２±０．２°、２１．４４±０．２°、２３．６１±０．２°及び２５．６８±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0013】

本発明のいくつかの態様では、上記Ａ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．７１±０．２°、１２．６８±０．２°、１５．３２±０．２°、１８．０４±０．２°、１９．７２±０．２°、２１．４４±０．２°、２３．６１±０．２°及び２５．６８±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0014】

本発明のいくつかの態様では、上記Ａ結晶形のＸＲＰＤパターンは、図１に示される。

【0015】

本発明のいくつかの態様では、上記Ａ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データは、表１に示される。

【0016】

表１：Ａ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データ

【表1】

【0017】

本発明のいくつかの態様では、上記Ａ結晶形の示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、３４．９５±３℃、１７４．７５±３℃及び２１９．１２±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する。

【0018】

本発明のいくつかの態様では、上記Ａ結晶形のＤＳＣパターンは、図２に示される。

【0019】

本発明のいくつかの態様では、上記Ａ結晶形の熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、７０．３３±３℃で重量減少が０．７３６７％に達し、２０９．４２±３℃で重量減少が３．１２３％に達する。

【0020】

本発明のいくつかの態様では、上記Ａ結晶形のＴＧＡパターンは、図３に示される。

【0021】

本発明は、式（Ｉ）の化合物のＢ結晶形を提供し、そのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．５８±０．２°、１２．４４±０．２°及び２２．１６±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0022】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｂ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．５８±０．２°、１１．７１±０．２°、１２．４４±０．２°、１４．４８±０．２°、１５．１３±０．２°、１８．６４±０．２°、２２．１６±０．２°及び２６．３３±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0023】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｂ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．５８±０．２°、１１．７１±０．２°、１２．４４±０．２°、１４．４８±０．２°、１５．１３±０．２°、１７．５７±０．２°、１８．６４±０．２°、２２．１６±０．２°及び２６．３３±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0024】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｂ結晶形のＸＲＰＤパターンは、図４に示される。

【0025】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｂ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データは、表２に示される。

【0026】

表２：Ｂ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データ

【表2】

【0027】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｂ結晶形の示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、４２．８８±３℃、１９８．７９±３℃及び２２２．３６±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する。

【0028】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｂ結晶形のＤＳＣパターンは、図５に示される。

【0029】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｂ結晶形の熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、６４．２１±３℃で重量減少が３．２６５％に達し、２４３．０５±３℃で重量減少が１．５１６％に達する。

【0030】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｂ結晶形のＴＧＡパターンは、図６に示される。

【0031】

本発明は、式（Ｉ）の化合物のＣ結晶形を提供し、そのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．０５±０．２°、５．５８±０．２°及び１２．４４±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0032】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｃ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．０５±０．２°、５．５８±０．２°、１２．４４±０．２°、１５．９１±０．２°、１６．６８±０．２°、１７．６１±０．２°、２２．１９±０．２°及び２６．３７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0033】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｃ結晶形のＸＲＰＤパターンは、図７に示される。

【0034】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｃ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データは、表３に示される。

【0035】

表３：Ｃ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データ

【表3】

【0036】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｃ結晶形の示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、３７．０６±３℃、１８９．１６±３℃及び２１８．６１±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する。

【0037】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｃ結晶形のＤＳＣパターンは、図８に示される。

【0038】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｃ結晶形の熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、６４．９８±３℃で重量減少が２．２１１％に達し、２２４．７１±３℃で重量減少が１．１２７％に達する。

【0039】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｃ結晶形のＴＧＡパターンは、図９に示される。

【0040】

本発明は、式（Ｉ）の化合物のＤ結晶形を提供し、そのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．２２±０．２°、１５．９９±０．２°及び１６．５７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0041】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．２２±０．２°、１５．９９±０．２°、１６．５７±０．２°及び２１．２２±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0042】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．２２±０．２°、１５．１８±０．２°、１５．９９±０．２°、１６．５７±０．２°、１７．０８±０．２°、１８．６０±０．２°、２１．２２±０．２°及び２１．８９±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0043】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．２２±０．２°、１５．１８±０．２°、１５．９９±０．２°、１６．５７±０．２°、１７．０８±０．２°、１７．９０±０．２°、１８．６０±０．２°、２１．２２±０．２°、２１．８９±０．２°、２５．２４±０．２°及び２７．００±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0044】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形のＸＲＰＤパターンは、図１０に示される。

【0045】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データは、表４に示される。

【0046】

表４：Ｄ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データ

【表4】

【0047】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形の示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、５６．０７±３℃、１９３．９３±３℃及び２１６．５４±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する。

【0048】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形の示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、５６．０７±３℃、１９３．９３±３℃及び２１６．５４±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有し、２０６．８２±３℃で１つの発熱ピークのピーク値を有する。

【0049】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形のＤＳＣパターンは、図１１に示される。

【0050】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形の熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、７９．３５±３℃で重量減少が１．９７７％に達し、２２３．６６±３℃で重量減少が１．５８９％に達する。

【0051】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｄ結晶形のＴＧＡパターンは、図１２に示される。

【0052】

本発明は、式（Ｉ）の化合物のＥ結晶形を提供し、そのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：８．６５±０．２°、１４．２２±０．２°及び２４．５８±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0053】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｅ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：８．６５±０．２°、１１．４１±０．２°、１３．１３±０．２°、１４．２２±０．２°、１７．３５±０．２°、１８．３４±０．２°、２０．３９±０．２°、２０．９４±０．２°及び２４．５８±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0054】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｅ結晶形のＸＲＰＤパターンは、図１３に示される。

【0055】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｅ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データは、表５に示される。

【0056】

表５：Ｅ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データ

【表5】

【0057】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｅ結晶形の示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、１２１．５７±３℃、１９７．２６±３℃及び２１７．２３±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有し、１６８．３１±３℃及び２１２．９５±３℃でそれぞれ１つの発熱ピークのピーク値を有する。

【0058】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｅ結晶形のＤＳＣパターンは、図１４に示される。

【0059】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｅ結晶形の熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、１４３．３１±３℃で重量減少が６．７７５％に達し、２１３．６２±３℃で重量減少が０．３１８４％に達する。

【0060】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｅ結晶形のＴＧＡパターンは、図１５に示される。

【0061】

本発明は、式（Ｉ）の化合物のＦ結晶形を提供し、そのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、２θ角：５．０６±０．２°、１５．９１±０．２°及び１６．６８±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0062】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｆ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．０６±０．２°、８．３４±０．２°、１０．９８±０．２°、１５．１３±０．２°、１５．９１±０．２°、１６．６８±０．２°、１７．６３±０．２°及び１８．８７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0063】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｆ結晶形のＸ線粉末回折パターンは、２θ角：５．０６±０．２°、８．３４±０．２°、１０．９８±０．２°、１５．１３±０．２°、１５．９１±０．２°、１６．６８±０．２°、１７．６３±０．２°、１８．８７±０．２°、２０．３３±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．０１±０．２°、２４．０４±０．２°、２５．３２±０．２°及び２５．６６±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。

【0064】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｆ結晶形のＸＲＰＤパターンは、図１６に示される。

【0065】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｆ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データは、表６に示される。

【0066】

表６ Ｆ結晶形のＸＲＰＤパターンの解析データ

【表6】

【0067】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｆ結晶形の示差走査熱量曲線（ＤＳＣ）は、４８．６９±３℃及び２２５．２６±３℃でそれぞれ１つの吸熱ピークの開始点を有する。

【0068】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｆ結晶形のＤＳＣパターンは、図１７に示される。

【0069】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｆ結晶形の熱重量分析曲線（ＴＧＡ）は、１００±３℃で重量減少が３．４０４％に達する。

【0070】

本発明のいくつかの態様では、上記Ｆ結晶形のＴＧＡパターンは、図１８に示される。

【0071】

本発明に係る式（Ｉ）の化合物のＦ結晶形の製造方法は、
式（Ｉ）の化合物をアルコール系溶媒に添加し撹拌して油浴の５５～６５℃まで加熱するステップ（ａ）と、
４７℃－５３℃で７２時間撹拌するステップ（ｂ）と、
加熱を停止し、撹拌しながら１時間自然冷却して２７℃に達するステップ（ｃ）と、
１８時間静置し、濾過して、メタノールで濾過ケーキを洗浄するステップ（ｄ）と、
６０℃で４８時間真空乾燥させるステップ（ｅ）と、を含む。

【0072】

本発明のいくつかの態様では、上記アルコール系溶媒は、メタノールである。

【0073】

本発明は、Ｗｅｅ１関連疾患を治療するための医薬品の製造における、上記Ａ結晶形、上記Ｂ結晶形、上記Ｃ結晶形、上記Ｄ結晶形、上記Ｅ結晶形又は上記Ｆ結晶形の応用をさらに提供する。

【発明の効果】

【0074】

本発明の化合物のＡ結晶形、Ｂ結晶形、Ｃ結晶形、Ｄ結晶形、Ｅ結晶形及びＦ結晶形は、安定し、光熱湿度による影響が小さく、溶解性が非常に高く、医薬品の製造が将来有望である。
定義及び説明

【0075】

特に説明しない限り、本明細書で使用される以下の用語及び語句は、以下の意味を含むものとする。特定の語句や用語は、特別な定義がない限り、不明確又は不明瞭であるとみなされるべきではなく、通常の意味で理解されるべきである。本明細書で商品名が現れる場合、その対応する商品又はその活性成分を指すものとする。

【0076】

本発明の中間体化合物は、以下に列挙する具体的な実施形態、それらを他の化学合成方法と組み合わせることによって形成される実施形態、及び当業者に周知の均等置換形態を含む、当業者に周知の様々な合成方法によって製造でき、好ましい実施形態は、本発明の実施例を含むが、これらに限定されるものではない。

【0077】

本発明の具体的な実施形態における化学反応は、適切な溶媒中で完成し、上記溶媒は、本発明の化学変化及びそれに必要な試薬と材料に適するべきである。本発明の化合物を取得するために、当業者が既存の実施形態に基づいて合成ステップ又は反応フローを変更するか又は選択する必要がある場合がある。

【0078】

以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は、本発明を何ら限定するものではない。

【0079】

本発明で使用される全ての溶媒は、市販されており、さらに精製することなく使用することができる。

【0080】

本発明で使用される溶媒は、市販品として入手可能である。本発明は、以下の略語を使用する。ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ＥｔＯＨ：エタノール；ＭｅＯＨ：メタノール；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴｓＯＨ：ｐ－トルエンスルホン酸；ｍｐ：融点；ＥｔＳＯ_３Ｈ：エタンスルホン酸；ＭｅＳＯ_３Ｈ：メタンスルホン酸；ＡＴＰ：アデノシン三リン酸；ＨＥＰＥＳ：４－ヒドロキシエチルピペラジン；ＥＧＴＡ：エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）四酢酸；ＭｇＣｌ_２：二塩化マグネシウム；ＭｎＣｌ_２：二塩化マンガン；ＤＴＴ：ジチオスレイトール；ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン；ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン；ｗｔ％：質量百分率；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン。
機器及び分析方法

【0081】

１．１ Ｘ線粉末回折（Ｘ－ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、 ＸＲＰＤ）
機器型番：ブルカーＤ８ ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折装置
試験方法：約１０～２０ｍｇのサンプルは、ＸＲＰＤ検出に用いられる。
詳細なＸＲＰＤパラメータは、以下のとおりである：
Ｘ線管：Ｃｕ、ｋα、（λ＝１．５４０５６Å）
Ｘ線管の電圧：４０ｋＶ、Ｘ線管の電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
検出器側スリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４～４０ｄｅｇ
ステップ径：０．０２ｄｅｇ
ステップサイズ：０．１２秒
サンプル受け皿の回転数：１５ｒｐｍ
１．２ 示差走査熱量曲線（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）
機器型番：ＴＡＱ２０００示差走査熱量計
試験方法：サンプル（～１ｍｇ）をＤＳＣアルミニウムパンに入れて試験を行い、５０ｍＬ／ｍｉｎのＮ_２の条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、サンプルを３０℃から３００℃まで加熱する。
１．３ 熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）
機器型番：ＴＡ Ｑ５０００熱重量分析装置
試験方法：サンプル（２～５ｍｇ）をＴＧＡ白金パン内に入れて試験を行い、２５ｍＬ／ｍｉｎのＮ_２の条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、サンプルを、３０℃（室温）から３００℃に又は重量減少が２０％となるように加熱する。

【図面の簡単な説明】

【0082】

【図1】（Ｉ）化合物のＡ結晶形のＣｕ－Ｋα放射によるＸＲＰＤパターンである。

【図2】（Ｉ）化合物のＡ結晶形のＤＳＣパターンである。

【図3】（Ｉ）化合物のＡ結晶形のＴＧＡパターンである。

【図4】（Ｉ）化合物のＢ結晶形のＣｕ－Ｋα放射によるＸＲＰＤパターンである。

【図5】（Ｉ）化合物のＢ結晶形のＤＳＣパターンである。

【図6】（Ｉ）化合物のＢ結晶形のＴＧＡパターンである。

【図7】（Ｉ）化合物のＣ結晶形のＣｕ－Ｋα放射によるＸＲＰＤパターンである。

【図8】（Ｉ）化合物のＣ結晶形のＤＳＣパターンである。

【図9】（Ｉ）化合物のＣ結晶形のＴＧＡパターンである。

【図10】（Ｉ）化合物のＤ結晶形のＣｕ－Ｋα放射によるＸＲＰＤパターンである。

【図11】（Ｉ）化合物のＤ結晶形のＤＳＣパターンである。

【図12】（Ｉ）化合物のＤ結晶形のＴＧＡパターンである。

【図13】（Ｉ）化合物のＥ結晶形のＣｕ－Ｋα放射によるＸＲＰＤパターンである。

【図14】（Ｉ）化合物のＥ結晶形のＤＳＣパターンである。

【図15】（Ｉ）化合物のＥ結晶形のＴＧＡパターンである。

【図16】（Ｉ）化合物のＦ結晶形のＣｕ－Ｋα放射によるＸＲＰＤパターンである。

【図17】（Ｉ）化合物のＦ結晶形のＤＳＣパターンである。

【図18】（Ｉ）化合物のＦ結晶形のＴＧＡパターンである。

【発明を実施するための形態】

【0083】

以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明を不利に限定するものではない。本明細書は、本発明を詳細に説明し、具体的な実施形態をも開示しているが、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく本発明の実施形態に対して様々な変更及び改良を行うのは、当業者にとって自明である。

【0084】

中間体１：

【化3】

特許ＷＯ２００７１２６１２２における合成方法を参照して製造する。

【0085】

実施例１：式（Ｉ）の化合物：

【化4】

合成経路：

【化5】

【0086】

ステップ１：化合物１－Ａの合成
０～１５℃で、窒素雰囲気下で２－アセチル－６－ブロモピリジン（７．３５ｇ、３６．７４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液に３－ブテニルマグネシウムブロミド（１Ｍ、５５．１２ｍＬ）を滴下して、この反応液を１０～２０℃で３時間撹拌する。飽和塩化アンモニウム溶液を１００ｍＬ添加して反応をクエンチし、分液して有機層を得て、さらに５０ｍＬの飽和塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し回転乾燥させて褐色油状物を得る。この褐色油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーでさらに精製して（ＰＥ／ＥＡ＝７／１）１－Ａを得る。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．７３（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．４６（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．７８～５．７（ｍ、１Ｈ）、４．９４～４．８５（ｍ、２Ｈ）、２．０７～２．０１（ｍ、１Ｈ）、１．９０～１．７１（ｍ、３Ｈ）、１．４１（ｓ、３Ｈ）。

【0087】

ステップ２：化合物１－Ｂの合成
１－Ａ（３．４７ｇ、１３．５５ｍｍｏｌ）及び１－Ｃ（３．０１ｇ、１３．５５ｍｍｏｌ）のジオキサン（１５０ｍＬ）の混合物にＮ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン（１．３１ｇ、１４．９０ｍｍｏｌ、１．６０ｍＬ）、ヨウ化銅（２．５８ｇ、１３．５５ｍｍｏｌ、）及び炭酸カリウム（２．６２ｇ、１８．９７ｍｍｏｌ）を添加し、窒素で三回置換して、この混合物を窒素雰囲気下で９５℃で１．５時間撹拌し、アンモニア水（２８％）２００ｍＬを添加して、酢酸エチルで抽出し（３００ｍＬ×２）、有機層を合わせ、飽和食塩水で２００ｍＬ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧して乾燥まで濃縮する。混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝３／１）で精製して１－Ｂを得る。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ９．０２（ｓ、１Ｈ）、８．０４（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．７６（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．６４（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．７７～５．６７（ｍ、２Ｈ）、５．０１～４．７９（ｍ、６Ｈ）、２．５６（ｓ、３Ｈ）、２．１５～２．１１（ｍ、１Ｈ）、１．８５～１．７５（ｍ、２Ｈ）、１．７０～１．６０（ｍ、１Ｈ）、１．４６（ｓ、３Ｈ）。

【0088】

ステップ３：化合物１－Ｄの合成
１－Ｂ（２．０６ｇ、５．１８ｍｍｏｌ）のトルエン（７００ｍＬ）溶液にＧｒｕｂｂｓの第２世代触媒（１．３２ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）を添加して、この混合物を８０℃及び窒素雰囲気下で６時間撹拌する。Ｇｒｕｂｂｓの第２世代触媒（０．６５ｇ、０．７７５ｍｍｏｌ）を追加して、この混合物を８０℃及び窒素雰囲気で３時間撹拌する。室温まで冷却し、濾過し、濾液を乾燥まで濃縮して褐色残留物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して（ＰＥ／ＥＡ＝１／１）１－Ｄを得る。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ９．０７（ｓ、１Ｈ）、８．０６（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．３９～５．２５（ｍ、３Ｈ）、４．６６（ｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．６２（ｓ、３Ｈ）、２．４０～１．９５（ｍ、３Ｈ）、１．８５～１．６５（ｍ、１Ｈ）１．６４（ｓ、３Ｈ）。

【0089】

ステップ４：化合物１－Ｅの合成
化合物１－Ｄ（３６０ｍｇ、９７４．４５μｍｏｌ）のトルエン（３５ｍＬ）溶液にメタクロロ過安息香酸（２６５．０９ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ、８５％純度）を添加し、反応を２５℃で２時間撹拌する。反応液に４－（４－メチル－１－ピペラジニル）アニリン（２４２．３０ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５０３．７６ｍｇ、３．９０ｍｍｏｌ）を添加する。反応液を２５℃で１２時間撹拌する。反応液に水を２５ｍＬ添加して、撹拌し、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３０ｍＬ）及び飽和食塩水（３０ｍＬ）でそれぞれ１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。濾過し、真空で濃縮して粗生成物を得て、粗生成物を、液相（中性）を調製して分離して１－Ｅを得る。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ １．７０（ｓ、３Ｈ）１．７８（ｂｒｄ、Ｊ＝１３．５４Ｈｚ、２Ｈ）２．０４（ｂｒｄ、Ｊ＝６．５４Ｈｚ、１Ｈ）２．０８～２．２３（ｍ、２Ｈ）２．３９（ｓ、３Ｈ）２．６２～２．６４（ｍ、４Ｈ）３．２１～３．２４（ｍ、４Ｈ）４．２４（ｂｒｓ、１Ｈ）４．５１（ｂｒｄ、Ｊ＝１３．５４Ｈｚ、１Ｈ）５．６１～５．８８（ｍ、２Ｈ）６．９５（ｄ、Ｊ＝９．０４Ｈｚ、２Ｈ）７．４９（ｄ、Ｊ＝９．０４Ｈｚ、３Ｈ）７．８１～７．９０（ｍ、２Ｈ）８．８７（ｓ、１Ｈ）、ＭＳ ｍ／ｚ： ５１３．１ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0090】

ステップ５：式（Ｉ）の化合物の合成
化合物１－Ｅ（１００ｍｇ、１９５．０８μｍｏｌ）に対して、ＳＦＣキラル分割を行って（クロマトグラフィーカラム：ＡＤ ２５０×５０ｍｍ Ｉ．Ｄ．、１０μｍ移動相：Ａ：超臨界ＣＯ_２、Ｂ：ＥｔＯＨ（０．１％ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ）、Ａ：Ｂ＝５５：４５ ａｔ ２００ｍＬ／ｍｉｎ）、保持時間を２１ｍｉｎとして、式（Ｉ）の化合物を得る。 ^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ ｐｐｍ １．６０（ｓ、３Ｈ）１．６８（ｂｒｓ、２Ｈ）１．９４（ｂｒｄ、Ｊ＝７．０４Ｈｚ、１Ｈ）２．００～２．２０（ｍ、２Ｈ）２．３０（ｓ、３Ｈ）２．５２～２．５５（ｍ、４Ｈ）３．１２～３．１５（ｍ、４Ｈ）４．２４（ｂｒｓ、１Ｈ）４．４２（ｂｒｄ、Ｊ＝９．５４Ｈｚ、１Ｈ）５．６５（ｂｒｓ、２Ｈ）６．８５（ｄ、Ｊ＝９．０４Ｈｚ、２Ｈ）７．１７（ｓ、１Ｈ）７．４０（ｄ、Ｊ＝９．０４Ｈｚ、２Ｈ）７．６９～７．８１（ｍ、２Ｈ）８．７７（ｓ、１Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ： ５１３．１ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0091】

実施例２：式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形の製造
約５０ｍｇの式（Ｉ）の化合物をそれぞれ異なるガラス瓶に添加し、それぞれアセトンを０．５ｍＬ添加して懸濁液になる。上記懸濁液サンプルを恒温振とう器（４０℃）に置いて試験を行う。懸濁液サンプルを４０℃で２日間振とうして遠心分離し、上層液体を除去して、残留サンプルを真空オーブン（４０℃）に置いて一晩乾燥させて、式（Ｉ）の化合物Ａの結晶形を得る。

【0092】

実施例３：式（Ｉ）の化合物のＢ結晶形の製造
約５０ｍｇの式（Ｉ）の化合物をそれぞれ異なるガラス瓶に添加し、それぞれエタノールを０．３ｍＬ添加して懸濁液になる。上記懸濁液サンプルを恒温振とう器（４０℃）に置いて試験を行う。懸濁液サンプルを４０℃で２日間振とうして遠心分離し、上層液体を除去して、残留サンプルを真空オーブン（４０℃）に置いて一晩乾燥させて、式（Ｉ）の化合物Ｂの結晶形を得る。

【0093】

実施例４：式（Ｉ）の化合物のＣ結晶形の製造
約５０ｍｇの式（Ｉ）の化合物をそれぞれ異なるガラス瓶に添加し、それぞれメタノールを０．２ｍＬ添加して懸濁液になる。上記懸濁液サンプルを恒温振とう器（４０℃）に置いて試験を行う。懸濁液サンプルを４０℃で２日間振とうして遠心分離し、上層液体を除去して、残留サンプルを真空オーブン（４０℃）に置いて一晩乾燥させて、式（Ｉ）の化合物Ｃの結晶形を得る。

【0094】

実施例５：式（Ｉ）の化合物のＤ結晶形の製造
約５０ｍｇの式（Ｉ）の化合物をそれぞれ異なるガラス瓶に添加し、それぞれメタノール／水（１／１）を０．４ｍＬ添加して懸濁液になる。上記懸濁液サンプルを恒温振とう器（４０℃）に置いて試験を行う。懸濁液サンプルを４０℃で２日間振とうして遠心分離し、上層液体を除去して、残留サンプルを真空オーブン（４０℃）に置いて一晩乾燥させて、式（Ｉ）の化合物Ｄの結晶形を得る。

【0095】

実施例６：式（Ｉ）の化合物のＥ結晶形の製造
約５０ｍｇの式（Ｉ）の化合物をそれぞれ異なるガラス瓶に添加し、それぞれアセトニトリルを０．５ｍＬ添加して懸濁液になる。上記懸濁液サンプルを恒温振とう器（４０℃）に置いて試験を行う。懸濁液サンプルを４０℃で２日間振とうして遠心分離し、上層液体を除去して、残留サンプルを真空オーブン（４０℃）に置いて一晩乾燥させて、式（Ｉ）の化合物Ｅの結晶形を得る。

【0096】

実施例７：式（Ｉ）の化合物のＦ結晶形の製造
２５～２６℃で、５６０ｍＬのＭｅＯＨが充填された１Ｌの三口フラスコに式（Ｉ）の化合物１３４．１９ｇ）を添加し、撹拌し、油浴の５５～６５℃まで加熱し、２０分間後に内部温度を４７℃～５３℃に保持する。保温して７２時間撹拌する。加熱を停止し、撹拌しながら１時間自然冷却して２７℃に達する。１８時間静置し、濾過し、３０ｍＬのＭｅＯＨで濾過ケーキをさらに洗浄する。濾過ケーキを６０℃で４８時間真空乾燥させる。式（Ｉ）の化合物Ｆの結晶形を得る。

【0097】

実験例１：式（Ｉ）の化合物のＦ結晶形の高温、高湿及び照明条件下での固体の安定性試験
影響因子及び加速試験条件に基づいて、約５ｍｇの式（Ｉ）の化合物のＦ結晶形を正確に秤量して、乾燥した清潔なガラス瓶に置き、二重で薄層に広げ、正式な試験サンプルとして、影響因子の試験条件（６０℃、９２．５％ＲＨ（相対湿度））及び加速条件（４０℃／７５％ＲＨ及び６０℃／７５％ＲＨ）に置き、そのサンプルを完全に露出して置き、アルミ箔紙でカバーし、小孔を刺す。また、それぞれ少量のサンプルを４０ｍＬのガラスサンプル瓶に置いて同じ条件で結晶形の状態を測定する。５日目、１０日目、１カ月目にサンプリング分析を行い、分析方法を表７に示し、分析結果を表８に示す。光照射（可視光１２０００００Ｌｕｘ、紫外線２００Ｗ）条件下で置かれたサンプルは、室温で完全に露出して置かれるサンプルである。

【0098】

表７：関連物質の高速液体クロマトグラフィー分析方法

【表7】

表８：式（Ｉ）の化合物のＦ結晶形の固体の安定性サンプルの含有量及び関連物質の分析結果（５日目、１０日目、１ヶ月目）

【表8】

【0099】

結論：式（Ｉ）の化合物Ｆの結晶形は、１ヶ月間の固体影響因子及び加速試験において、原料化合物の結晶形が変化せず、良好な物理的安定性を有する。関連物質分析において不純物は、高温（６０℃）及び加速条件（６０℃／７５％ＲＨ）でわずかに増加し、他の条件で不純物の総量がほとんど変化せず、温度にわずかに敏感である。

【0100】

実験結論：本発明は、結晶形の安定性が高く、医薬品を製造しやすい。

【0101】

実験例２：式（Ｉ）の化合物のインビトロ酵素学的阻害活性
実験試験は、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ社で行われ、実験結果は、同社により提供される。

【0102】

試験体系において、２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．５、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、５００μＭのポリペプチド基質（ＬＳＮＬＹＨＱＧＫＦＬＱＴＦＣＧＳＰＬＹＲＲＲ）、１０ｍＭの酢酸マグネシウム及び１０μＭの［γ－^３３Ｐ］－ＡＴＰ（強度が約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌである）を添加する。Ｍｇ^２＋及びＡＴＰ混合液を添加した後、反応を開始し、室温で４０ｍｉｎインキュベートする。３％リン酸緩衝液を添加して、反応を停止する。１０μＬの反応液を連続濾過機Ｐ３０で濾過し、７５ｍＭのリン酸緩衝液で３回洗浄し、メタノールで１回洗浄し、毎回５ｍｉｎ洗浄する。乾燥後にシンチレーションカウント法で値を読み取る。試験結果を表９に示す。

【0103】

表９ 本発明の化合物のインビトロスクリーニング試験結果（ＩＣ_５０）

【表9】

【0104】

試験例３ 本発明の化合物のインビトロ透過性試験
研究においてオランダ癌研究所Ｐｉｅｔ Ｂｏｒｓｔの実験室で許可されたＭＤＲ１－ＭＤＣＫ ＩＩ細胞が用いられ、ヒトの多耐性遺伝子（ＭＤＲ１）をトランスフェクトしたＭａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎細胞であり、該細胞は、排出輸送体のＰ糖タンパク質（Ｐ－ｇｐ）を安定的に発現することができるため、Ｐ－ｇｐ基質又は阻害剤のスクリーニングに適用され、かつ十二指腸、血液脳関門、肝細胞核及び腎ユニットなどに化合物の排出作用関門の透過性が高いことを予測する。本発明者らは、第５－３５世代のＭＤＲ１－ＭＤＣＫＩＩ細胞を浸透性研究に用いる。

【0105】

ＭＤＲ１－ＭＤＣＫＩＩ細胞をα－ＭＥＭ培地（α－Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉａ）で培養し、培養条件は、３７±１℃、５％ＣＯ_２及び飽和相対湿度である。その後に細胞をＢＤ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ－９６細胞ウェルプレートに接種し、接種密度が２．３×１０^５個の細胞／ｃｍ^２であり、その後に細胞を二酸化炭素インキュベータに置いて４～７日間培養した後に輸送実験に用いる。そのα－ＭＥＭ培地の調製方法は、以下のとおりである。

【0106】

液体培地は、粉末（α－ＭＥＭ ｐｏｗｄｅｒがＧｉｂｃｏ、Ｃａｔ＃：１１９００から由来する）を純水に溶解して調製し、Ｌ－（Ｌ－グルタミン）及びＮａＨＣＯ_３を添加して得られるものである。その後に使用する時に１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１％ＰＳ（二重抗体）及び１％ＮＥＡＡを添加して完全培地になる。α－ＭＥＭ培地の配合材料を表１０に示す。

【0107】

表１０ αＭＥＭ（１Ｌ×）原料配合表

【表10】

【0108】

ＡＺＤ１７７５（又は本発明の化合物）及びジゴキシン（Ｄｉｇｏｘｉｎ）の投与濃度は、２μＭであり、二方向（Ａ－Ｂ及びＢ－Ａ方向）に投与し、いずれも２つの二重ウェルを行う。フェノテロール（Ｆｅｎｏｔｅｒｏｌ）及びプロプラノロール（Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）の試験濃度は、いずれも２μＭであり、単方向（Ａ－Ｂ方向）に投与し、いずれも２つの二重ウェルを行う。

【0109】

使用される溶液を３７±１℃の水浴中に置いて３０分間を予めインキュベートする。投与液と受容液をそれぞれ対応する細胞ウェルプレートのウェル位置（各頂端及び底端のウェルにそれぞれ７５と２５０μＬのサンプルを添加する）に添加し、双方向輸送実験を開始する。サンプルを添加した後、細胞ウェルプレートを３７±１℃、５％ＣＯ_２及び飽和相対湿度のインキュベータに置いて１５０分間インキュベートする。サンプル収集情報を表１１に示す。

【0110】

表１１ サンプル収集情報

【表11】

【0111】

注釈：Ｔ_０は、最初の投与液サンプルを示す。

【0112】

全てのサンプルをボルテックスした後に３２２０ｇで１０分間遠心分離し、適量の体積の上澄液をサンプル分析プレートに転移し、プレートを密封した後にサンプルを直ちに分析しなければ２－８℃に貯蔵し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳの方法で分析する。

【0113】

輸送実験が終了した後、蛍光イエロー測定アッセイ（Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ）によりＭＤＲ１－ＭＤＣＫＩＩ細胞の完全性を試験する。蛍光イエロー溶液で３０分間インキュベートした後、蛍光イエローサンプルを収集し、２ｅプレートリーダーは４２５／５２８ｎｍ（励起／発射）スペクトルでサンプル中の蛍光イエローの相対蛍光強度（ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｕｎｉｔ、ＲＦＵ）を検出する。

【0114】

半定量により供試品のＡＺＤ１７７５（又は本発明の化合物）、対照品のフェノテロール（Ｆｅｎｏｔｅｒｏｌ）、プロプラノロール（Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）及びジゴキシン（Ｄｉｇｏｘｉｎ）を分析し、被分析物と内部標準のピーク面積との比を対照品の濃度とする。

【0115】

実験結果を表１２に示す。

【0116】

表１２ 透過速度（１０^－６ｃｍ／ｓ）

【表12】

実験結論：
式（Ｉ）の化合物の透過特性は、ＡＺＤ１７７５に対して大幅に向上し、生体の医薬品への利用に役立つ。

【0117】

実験例４：化合物薬物動態評価
本実験は、ＡＺＤ１７７５（又は本発明の化合物）の単回静脈を研究し、単回経口投与した後、雌性Ｂａｌｂ／ｃ Ｎｕｄｅマウスの血漿における薬物動態学的状況を研究することを目的とする。

【0118】

１２匹のマウス（霊暢によって提供される）を２群にランダムに分け、各組に６匹の雌性を有し、交互採血方式によりサンプルを収集する。静脈群の全ての動物に１ｍｇ／ｋｇのＡＺＤ１７７５（又は本発明の化合物）を静脈注射し、溶媒調製製剤は、０．２ｍｇ／ｍＬのＡＺＤ１７７５（又は本発明の化合物）を含有する５％ＨＰ－ｂｅｔａＣＤ（崑山瑞斯克化工原料有限公司）の清澄溶液である。経口群の動物に１０ｍｇ／ｋｇのＡＺＤ１７７５（又は本発明の化合物）を胃内投与し、溶媒調製製剤は、１ｍｇ／ｍＬのＡＺＤ１７７５（又は本発明の化合物）を含有する０．５％メチルセルロースの均一な懸濁液である。

【0119】

静脈群の動物に対して、投与後の５分間、１５分間、３０分間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間及び２４時間の９つの時点で血漿サンプルを収集する；経口組に対して、投与後の１５分間、３０分間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間及び２４時間の８つの時点で血漿サンプルを収集する；サンプルは、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析によりＡＺＤ１７７５（又は本発明の化合物）の血漿の濃度データを取得し、かつ薬物動態パラメータ、例えばピーク濃度、ピーク到達時間、除去率、半減期、薬物時間曲線下面積、生物学的利用率等を計算する。

【0120】

実験結果を表１３に示す。

【0121】

表１３ 薬物動態の試験結果

【表13】

実験結論：式（Ｉ）の化合物は、ＡＺＤ１７７５と比較してマウス薬物動態の複数の指標を顕著に向上させることができ、インビボ除去率、半減期、インビボ濃度積分及び生物学的利用率は、いずれも明らかな利点を有する。

【0122】

実験例５：インビボ研究
（１）ヒト結腸癌ＬｏＶｏ細胞の皮下異種移植腫瘍ＢＡＬＢ／ｃのヌードマウスモデルに対する化合物のインビボ薬力学的研究
実験方法：選択された実験動物（上海西普尓－必凱実験動物有限公司によって提供される）は、体重が１８～２２ｇである６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスである。

【0123】

ヒト結腸癌ＬｏＶｏ細胞を、インビトロで単層培養し、培養条件は、Ｈａｍ’ｓ Ｆ－１２培地に１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン及び２ｍＭのグルタミン、３７℃で５％ＣＯ_２で培養することである。膵酵素－ＥＤＴＡで週２回通常消化処理して継代した。細胞飽和度が８０％～９０％になると、細胞を受け取り、計数し、接種した。０．１ｍＬ（１０×１０^６個）のＬｏＶｏ細胞を、各ヌードマウスの右背部に皮下接種し、腫瘍の平均体積が２１３ｍｍ^３に達すると、群分け投与を開始した。胃内投与量：４０ミリグラム／キログラムであり、毎日２回である。実験指標は、腫瘍成長が阻害、遅延又は治癒されるか否かを考察することである。カーソルスケールで週２回腫瘍径を測定した。腫瘍体積の計算式は、Ｖ＝０．５ａ×ｂ^２であり、ここで、ａとｂはそれぞれ腫瘍の長径と短径を表す。

【0124】

化合物の腫瘍阻害効果を、ＴＧＩ（％）又は相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）で評価した。ＴＧＩ（％）は、腫瘍成長阻害率を反映するものである。ＴＧＩ（％）の計算：ＴＧＩ（％）＝［１－（ある処理群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該処理群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。

【0125】

最終的に１６日間投与した実験結果を表１４に示す。

【0126】

表１４ ヒト結腸癌ＬｏＶｏ細胞の異種移植腫瘍のマウスモデルの薬効試験結果

【表14】

【0127】

結論：本発明の化合物は、ＡＺＤ１７７５と比較してマウス体内の腫瘍に対する阻害作用を顕著に向上させることができ、かつ化合物のキラルは、インビボ薬効に予期せぬ影響を与える。

【0128】

（２）化合物のヒト膵臓癌のＢｘＰＣ－３ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの皮下移植腫瘍モデルに対するインビボ薬力学的研究
実験方法：選択された実験動物は、体重が１８～２２ｇである６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスである。

【0129】

ＢｘＰＣ－３細胞の第１０世代を、インビトロで単層培養し、培養条件は、ＲＰＭＩ１６４０培地（メーカー：ｇｉｂｃｏ、品番：２２４００－０８９）に１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加し、３７℃で５％ＣＯ_２培養し、４回継代することである。継代法は、膵酵素－ＥＤＴＡで週２回通常消化処理して継代することである。細胞飽和度が８０％～９０％に達する場合、細胞をパンクレアチン－ＥＤＴＡで消化し、カウントし、ＰＢＳに再懸濁させ、密度は、５×１０^７個の細胞／ｍＬである。各動物に対して、右背部に０．１ｍＬ（５×１０^６個）のＢｘＰＣ－３細胞を接種し、腫瘍の平均体積が１５３ｍｍ^３に達すると、腫瘍の体積に基づいてランダムに群分けし、かつ投与を開始する。胃内投与量：２５ミリグラム／キログラムであり、毎日１回である。

【0130】

実験指標は、腫瘍成長が阻害、遅延又は治癒されるか否かを考察することである。カーソルスケールで週２回腫瘍径を測定した。化合物の腫瘍阻害効果を、ＴＧＩ（％）又は相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）で評価した。ＴＧＩ（％）は、腫瘍成長阻害率を反映するものである。ＴＧＩ（％）の計算：ＴＧＩ（％）＝［１－（ある処理群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該処理群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。

【0131】

最終的に２７日間投与した実験結果を表１５に示す。

【0132】

表１５ ヒト膵臓癌ＢｘＰＣ－３細胞の異種移植腫瘍のマウスモデルの薬効試験結果

【表15】

【0133】

結論：表１５から分かるように、式（Ｉ）の化合物は、ＡＺＤ１７７５と比較してマウス体内の腫瘍に対する阻害作用を顕著に向上させることができる。

【0134】

（３）ＣＴ２６マウス結腸癌細胞の動物移植腫瘍モデルに対する化合物のインビボ抗腫瘍薬効研究
実験方法：選択された実験動物は、体重が１６～２０ｇである７週齢の雌性のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスである。

【0135】

細胞：マウス結腸癌ＣＴ２６細胞（中国科学院の典型的培養物保蔵委員会細胞バンク）をインビトロで単層培養し、培養条件は、１０％ウシ胎児血清ＲＰＭＩ－１６４０を含有する培地を使用し、３７℃で５％ＣＯ_２インキュベータで培養することである。膵酵素－ＥＤＴＡで通常消化処理して継代した。細胞が指数増殖期にあり、細胞飽和度が８０％～９０％になると、細胞を受け取り、計数し、接種した。０．１ｍＬのＤＰＢＳ（３×１０^５個のＣＴ２６細胞を含む）を各マウスの右背部に皮下接種し、腫瘍の平均体積が５０～７０ｍｍ^３に達すると、腫瘍体積に基づいてランダムに群分けし投与する。胃内投与量：３０ミリグラム／キログラムであり、毎日２回である。

【0136】

実験指標は、腫瘍成長が阻害、遅延又は治癒されるか否かを考察することである。カーソルスケールで週２回腫瘍径を測定した。化合物の腫瘍阻害効果を、ＴＧＩ（％）又は相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）で評価した。ＴＧＩ（％）は、腫瘍成長阻害率を反映するものである。ＴＧＩ（％）の計算：ＴＧＩ（％）＝［１－（ある処理群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該処理群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。

【0137】

最終的に１８日間投与した実験結果を表１６に示す。

【0138】

表１６ マウス結腸癌ＣＴ２６細胞の同種移植腫瘍のモデルのインビボ薬効試験結果

【表16】

【0139】

結論：表１６から分かるように、式（Ｉ）の化合物は、ＡＺＤ１７７５と比較してマウス体内の腫瘍に対する阻害作用を顕著に向上させることができる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】