特許 7584588 抗ＳＩＲＰＡ抗体およびその使用法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-07

(45)【発行日】2024-11-15

(54)【発明の名称】抗ＳＩＲＰＡ抗体およびその使用法

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20241108BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241108BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241108BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241108BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241108BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241108BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20241108BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20241108BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

A61K39/395 N

A61K45/00

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 121

C07K16/28

C12N15/13

【請求項の数】 57

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2023125540

(22)【出願日】2023-08-01

(62)【分割の表示】P 2020565405の分割

【原出願日】2019-05-24

(65)【公開番号】P2023162190

(43)【公開日】2023-11-08

【審査請求日】2023-08-29

(31)【優先権主張番号】62/676,813

(32)【優先日】2018-05-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】517041235

【氏名又は名称】アレクトル エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ピンセティック， アンドリュー

(72)【発明者】

【氏名】ホー， ウェイ－シャン

(72)【発明者】

【氏名】カルプ， パトリシア

(72)【発明者】

【氏名】ローゼンタール， アーノン

【審査官】福間 信子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１８／０５７６６９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／０６８１６４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／１７８６５３（ＷＯ，Ａ２）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（１）ヒトＳＩＲＰＡに結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；軽鎖可変領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；ならびに配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗体と、
（２）検出用マーカー、毒素、または治療剤と
がコンジュゲートされた、コンジュゲート抗体。

【請求項2】

重鎖可変領域が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、
軽鎖可変領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、
請求項１に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項3】

重鎖可変領域が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、
軽鎖可変領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、
請求項１に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項4】

重鎖可変領域が、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ３、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つまたは４つのフレームワーク領域を含み、かつ／または
軽鎖可変領域が、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ３、および配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つまたは４つのフレームワーク領域を含む、
請求項１から３のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項5】

重鎖可変領域が、配列番号３３、３４、および３５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ／または
軽鎖可変領域が、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、および４４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項6】

（１）ヒトＳＩＲＰＡに結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号３３、３４、および３５から選択されるアミノ酸配列を含み；軽鎖可変領域が、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、および４４から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体と、
（２）検出用マーカー、毒素、または治療剤と
がコンジュゲートされた、コンジュゲート抗体。

【請求項7】

重鎖可変領域が、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項8】

重鎖可変領域が、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項9】

抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１から８のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項10】

抗体が、ヒト化抗体である、請求項１から９のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項11】

抗体が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’－ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、またはｓｃＦｖ断片である、請求項１から１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項12】

抗体が、多価抗体である、請求項１から１１のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項13】

抗体が、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスの抗体である、請求項１から１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項14】

抗体が、ＩｇＧクラスの抗体であり、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１３に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項15】

抗体が、阻害型Ｆｃ受容体に結合する、請求項１から１４のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項16】

阻害型Ｆｃ受容体が、阻害型Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃｇＲＩＩＢ）である、請求項１５に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項17】

抗体が、ＦｃｇＲＩＩＢの細胞内レベルを低下させる、請求項１６に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項18】

抗体が、ヒトまたはマウスのＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｎ３２５Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、Ｆｃ領域内のアミノ酸残基（残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う）における１つもしくは複数のアミノ酸置換を含むか、またはＦｃ領域内のグリシン２３６に対応する位置におけるアミノ酸欠失を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項19】

抗体が、Ｃ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｎ３２５Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、Ｆｃ領域内の残基位置（アミノ酸残基の番号付けは、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けに従う）における１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項20】

抗体が、Ｎ３２５ＳおよびＬ３２８Ｆ置換を含む、請求項１９に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項21】

（１）ヒトＳＩＲＰＡに結合する抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；
（ｂ）重鎖が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；
（ｃ）重鎖が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；
（ｄ）重鎖が配列番号５３のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；
（ｅ）重鎖が配列番号５４のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；
（ｆ）重鎖が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；
（ｇ）重鎖が配列番号５２のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；
（ｈ）重鎖が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；
（ｉ）重鎖が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；または
（ｊ）重鎖が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む；
抗体と、
（２）検出用マーカー、毒素、または治療剤と
がコンジュゲートされた、コンジュゲート抗体。

【請求項22】

抗体が、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低減させるか、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルを低下させるか、ＳＩＲＰＡの全細胞レベルを低下させるか、またはこれらの任意の組合せである、請求項１から２１のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項23】

抗体が、ＳＩＲＰＡの分解を誘導するか、ＳＩＲＰＡの切断を誘導するか、ＳＩＲＰＡの内部移行を誘導するか、ＳＩＲＰＡの放出を誘導するか、ＳＩＲＰＡの発現を下方調節するか、またはこれらの任意の組合せである、請求項１から２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項24】

抗体が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低減させる、請求項１から２３のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項25】

抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低減させる、請求項１から２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項26】

抗体が、ヒト単球内のＳＩＲＰＡの発現を下方調節する、請求項１から２５のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項27】

抗体が、ヒトマクロファージ内のＳＩＲＰＡの発現を下方調節する、請求項１から２６のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項28】

抗体が、ヒトマクロファージ内のＳＩＲＰＡの発現を約７０～９５％下方調節する、請求項２７に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項29】

抗体が、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満の、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対する親和性（Ｋ_Ｄ）を有する、請求項６から２８のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項30】

抗体が、約０．１ｎＭ～２ｎＭの、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対する親和性（Ｋ_Ｄ）を有する、請求項６から２９のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項31】

抗体が、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体の、ヒトＳＩＲＰＡに対する親和性に対し、２分の１以下、３分の１以下、４分の１以下、５分の１以下、６分の１以下、７分の１以下、８分の１以下、９分の１以下、または１０分の１以下であるＫ_Ｄで、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対する親和性を有する、請求項６から２６のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項32】

抗体が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡ ｖ１の細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、約０．０５ｎＭ～２ｎＭの５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、請求項６から３１のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項33】

抗体が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対して約０．０５～０．２０ｎＭ、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２に対して約０．０５～０．１０ｎＭ、および／またはカニクイザルＳＩＲＰＡに対して約０．０５～１ｎＭの５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、請求項６から３２のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項34】

抗体が、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡ ｖ１のＤ３ドメインに結合する、請求項１から３３のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項35】

抗体が、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡ ｖ１のアミノ酸残基Ｒ２８２、Ｑ２８４、およびＧ３３７に結合する、請求項１から３４のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項36】

抗体が、マクロファージ内の腫瘍細胞に対する食作用を増大させ、Ｍ１マクロファージ内の腫瘍細胞に対する食作用を増大させ、Ｍ２マクロファージ内の腫瘍細胞に対する食作用を増大させ、マクロファージ内のＣＤ１４の発現を下方調節し、かつ／またはこれらの任意の組合せである、請求項１から３５のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項37】

抗体が、
（ａ）Ｔ細胞の増殖を増強し、（ｂ） ＳＩＲＰγとＣＤ４７との相互作用を遮断せずに、Ｔ細胞の増殖を増強し、かつ／または（ｃ）単球内のＲＯＳの産生を刺激し、かつ／もしくは単球内のＩＬ－８の発現を増大させる、
請求項１から３６のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項38】

抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍増殖を阻害し、末梢血中のＣＤ１４＋骨髄細胞の数を低減させ、かつ／または腫瘍内のＣＤ１４＋骨髄細胞の数を増大させる、請求項１から３７のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項39】

抗体が、ヒトＳＩＲＰＡに結合するが、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を実質的に遮断しない、請求項１から３８のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項40】

抗体が第１の抗原および第２の抗原を認識し、第１の抗原がＳＩＲＰＡであり、第２の抗原が、
（ａ）血液脳関門を越える輸送を容易とする抗原；
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１および２（ＬＰＲ－１および２）、ならびにジフテリア毒素受容体から選択される、血液脳関門を越える輸送を容易とする抗原；
（ｃ）疾患原因ペプチドまたは疾患原因タンパク質、疾患原因核酸から選択される疾患原因作用物質であって、疾患原因核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、疾患原因タンパク質が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、またはこれらの断片、タウ、ＩＡＰＰ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２マイクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、およびプロリン－アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択される、疾患原因作用物質；ならびに
（ｄ）免疫細胞上で発現されるリガンドおよび／またはタンパク質であって、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、およびホスファチジルセリンから選択されるリガンドおよび／またはタンパク質；ならびに１つまたは複数の腫瘍細胞上で発現される、タンパク質、脂質、多糖類、または糖脂質から選択される、
請求項１から３９のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項41】

検出用マーカーを含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項42】

リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、エチジウムブロマイド、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファサルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、クルシン、クロチン、カリケアマイシン、サボンソウ（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、グルココルチコイド、アウリスタチン、アウロマイシン、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５、およびシスプラチンから選択される毒素を含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項43】

アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、またはこれらの断片、タウ、ＩＡＰＰ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２マイクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、およびプロリン－アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、およびこれらの任意の組合せから選択される疾患原因タンパク質に特異的に結合する治療剤、または
ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３３、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－９、Ｓｉｇｌｅｃ－１１、ホスファチジルセリン、疾患原因核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡ、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される免疫調節タンパク質に結合する、１つもしくは複数の抗体
を含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体。

【請求項44】

請求項１から４３のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体および薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的組成物。

【請求項45】

請求項１から４３のいずれか一項に記載のコンジュゲート抗体を含む、対象におけるがんを治療するための医薬。

【請求項46】

がんが、肉腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎盂がん、白血病、肺がん、小細胞肺がん、メラノーマ、リンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、および線維肉腫、多形神経膠芽腫；腎明細胞癌；副腎皮質癌；膀胱尿路上皮癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、肺腺癌；膵腺癌、腎細胞がん、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、無痛性Ｂ細胞リンパ腫、侵襲性Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性新生物、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮癌、子宮頸部腺癌、胆管癌、結腸腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、腎嫌色素細胞、腎乳頭細胞癌、低悪性度神経膠腫、肝細胞癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵腺癌、クロム親和性細胞腫および傍神経節腫、前立腺癌、直腸腺癌、皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣生殖細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体内膜癌、子宮癌肉腫、ならびにブドウ膜メラノーマから選択される、請求項４５に記載の医薬。

【請求項47】

ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、またはＣＤ７３を阻害するか、またはアゴナイズする治療剤が、対象へさらに投与される、請求項４５または４６に記載の医薬。

【請求項48】

阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、対象へさらに投与される、請求項４５から４７のいずれか一項に記載の医薬。

【請求項49】

阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、および抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ（Ｂ－ ａｎｄ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ）抗体、抗ＫＩＲ（Ｋｉｌｌｅｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ－１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ－４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ－９抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ－１１抗体、アンタゴニスト性抗ＴＲＥＭ１抗体、アンタゴニスト性抗ＴＲＥＭ２抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、ならびにこれらの任意の組合せから選択される、請求項４８に記載の医薬。

【請求項50】

１つもしくは複数の標準的な抗がん治療もしくは治験中の抗がん治療が、対象へさらに投与される、請求項４５から４９のいずれか一項に記載の医薬。

【請求項51】

１つまたは複数の標準的な抗がん治療または治験中の抗がん治療が、放射線療法、細胞傷害性化学療法、ターゲティング療法、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプト療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ－Ｔ）療法、ワクチン療法、およびサイトカイン療法から選択される、請求項５０に記載の医薬。

【請求項52】

阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、対象へさらに投与される、請求項４５から５１のいずれか一項に記載の医薬。

【請求項53】

阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ－１抗体、抗ＩＬ－２抗体、およびこれらの任意の組合せから選択される、請求項５２に記載の医薬。

【請求項54】

刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト性抗体が、対象へさらに投与される、請求項４５から５３のいずれか一項に記載の医薬。

【請求項55】

刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト性抗体が、アゴニストの抗ＣＤ４０抗体、アゴニストの抗ＯＸ４０抗体、アゴニストの抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト性抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト性抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニストの抗ＣＤ１３７／４－１ＢＢ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２７抗体、アゴニストの抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、アゴニストの抗ＣＤ３０抗体、アゴニストの抗ＢＴＬＡ抗体、アゴニストの抗ＨＶＥＭ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２抗体、アゴニストの抗ＣＤ５抗体、およびこれらの任意の組合せから選択される、請求項５４に記載の医薬。

【請求項56】

少なくとも１つの刺激性サイトカインが、対象へさらに投与される、請求項４５から５５のいずれか一項に記載の医薬。

【請求項57】

少なくとも１つの刺激性サイトカインが、ＩＦＮ－α４、ＩＦＮ－β、ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＲＰ、ＩＬ－２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ－γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ－３３、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ベータ、およびこれらの任意の組合せから選択される、請求項５６に記載の医薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、参照により任意の目的で本明細書に組み込まれる、２０１８年５月２５日に出願された、米国特許仮出願第６２／６７６，８１３号の利益を主張する。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットにおいて、電子的に提出され、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０１９年５月１４日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、「４０００４－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔ」と名付けられ、９９，７９８バイトのサイズである。

【0003】

分野
本開示は、抗ＳＩＲＰＡ抗体、およびこのような抗体の治療的使用に関する。

【背景技術】

【0004】

マクロファージ（ＭΦ）および樹状細胞（ＤＣ）などの食作用細胞は、細胞の活性化状態、増殖、および／またはエフェクター機能をモジュレートする、複雑な、一連の細胞表面受容体を介して、健常細胞を、異常細胞から識別する。これらの受容体の多くは、望ましくない細胞を、除去のためにマークする（いわゆる「貪食」シグナル）か、または正常細胞を、破壊から保護する（いわゆる「貪食停止」シグナル）、多様なリガンドを認識する。近年では、ＳＩＲＰα－ＣＤ４７軸が、がん細胞の生存～造血細胞移植の移植成功にわたる、多様な臨床状況下で、マクロファージによるプログラム細胞除去における、極めて重要な決定基として出現している。この経路に影響を与える治療剤は、多種類のヒトがんにおける、特に重要な疾患を改善する、重要な医療的必要を満たす可能性がある。

【0005】

ＳＩＲＰα（シグナル制御タンパク質α）は、主に、骨髄細胞系統（ＭΦ、ＤＣ、顆粒球などを含む）内で発現される、膜貫通型受容体のＳＩＲＰファミリーに属し、膜近位ＩｇＣドメインおよび膜遠位ＩｇＶドメインの２つを含有する細胞外領域により特徴づけられる。ＳＩＲＰαが、細胞内の、細胞質免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有することは、このファミリーの中では、固有なことである。受容体が架橋されると、チロシンがリン酸化されたＴＩＭ部位は、ＳＨＰホスファターゼを動員し、活性化させて、食作用または炎症性サイトカインの放出などの細胞機能を、負に調節する。ＣＤ４７は、ＳＩＲＰαに対する、主要なリガンドとして用いられ、内皮／上皮細胞、白血球、および赤血球を含む、大半の細胞型における、その広範な発現は、それが、「貪食停止」シグナルを媒介して、健常細胞を、食細胞依存性の除去から保護することを示唆する。ＣＤ４７ノックアウトマウスから、野生型レシピエントへの、赤血球または白血球の養子移入が、ＣＤ４７不全細胞の急速な除去を結果としてもたらすことを、いくつかの研究が示すことは、この見方を裏書きする。逆に、ヒト造血細胞を施される免疫障害マウスの複数の株における、遺伝子位置解析は、ＮＯＤマウスにおいて、Ｓｉｒｐα対立遺伝子を、異種移植モデルにおける、移植の成功のための原因因子として同定した。後続の研究は、ＮＯＤマウスだけにおいて発現される、ＳＩＲＰαの対立遺伝子変異体が、ヒト造血幹細胞上で発現される、ヒトＣＤ４７に結合する能力を保持し、したがって、マクロファージ依存性の移植片拒絶を抑制することを裏付けた。

【0006】

ＳＩＲＰαおよびＣＤ４７の発現の調節は、貪食細胞活性をモジュレートする、恒常性制御機構を確立する。例えば、アポトーシス細胞は、ＣＤ４７の発現を下方調節して、常在マクロファージによる貪食を容易とする一方で、生細胞は、無傷を維持する。同様に、ＬＰＳなどの炎症性刺激は、マクロファージ内および樹状細胞（ＤＣ）内のＳＩＲＰα発現を低下させて、炎症時における、それらの活性化を強化する。しかし、ＳＩＲＰαおよびＣＤ４７の発現の調節異常は、がんにおいて見られる通り、免疫関連疾患に寄与する。いくつかの腫瘍は、正常では、悪性細胞を消失させる、免疫監視機構を逃避するために、ＣＤ４７の発現を、非がん性細胞と比べて、顕著に増進する。前臨床研究は、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマなどの同系腫瘍モデルにおける、ＣＤ４７の遺伝子ノックダウンが、免疫適格マウスにおける腫瘍増殖を阻害するのに十分であることを明らかにする。同様の結果は、免疫障害マウスへと移植された、ＣＤ４７ノックダウンヒトがん細胞株に関しても観察されている。代替的に、抗ＣＤ４７抗体など、ＳＩＲＰα－ＣＤ４７間相互作用を破壊する、生物学的薬剤もまた、マウスモデルにおける腫瘍の除去を増強する。トラスツズマブまたはリツキシマブなど、市販の抗腫瘍抗原抗体と組み合わされると、抗ＣＤ４７抗体は、抗腫瘍応答の、標準的な単剤療法と比較した、相乗作用的増大を容易とする。しかし、ＣＤ４７の遍在的発現を踏まえると、抗ＣＤ４７抗体は、オフターゲット作用に起因する、重篤な毒性負荷の危険性を有することから、それらの治療有効性を制限している。しかしながら、これらの研究は、ＳＩＲＰα－ＣＤ４７経路について、がん免疫療法における、潜在的な適用を伴う、骨髄細胞の調節において、極めて重要な役割を確立している。

【0007】

抗ＳＩＲＰＡ抗体については、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０５７６６９号、同第ＷＯ２０１８／０２６６００号、同第ＷＯ２０１７／１７８６５３号、同第ＷＯ２０１７／０６８１６４号、同第ＷＯ２０１６／０６３２３３号、同第ＷＯ２０１６／２０５０４２号、同第ＷＯ２０１５／１３８６００号、同第ＷＯ２０１３／０９５６３５２号、同第ＷＯ２００９／０９１５４７号、同第ＷＯ２００９／１３１４５３号、および同第ＷＯ２００９／０４６５４１号において記載されている。

【発明の概要】

【0008】

したがって、所望されないＳＩＲＰＡ活性と関連する、疾患、障害、および状態を処置するための、抗ＳＩＲＰＡ治療抗体が必要とされている。

【0009】

特許出願および刊行物を含む、本明細書で引用される、全ての参考文献は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。

【0010】

概要
本開示は、一般に、ヒトＳＩＲＰＡに特異的に結合する抗体、例えば、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体断片などを含む組成物、およびこのような組成物の使用法を対象とする。

【0011】

本開示の、ある特定の態様は、少なくとも部分的に、機能的特性の改善および／もしくは増強を伴う（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを伴う、抗ＳＩＲＰＡ抗体と比べた、機能的特性の改善および／もしくは増強であって、例えば、細胞上の、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させる能力の改善および／もしくは増強を含む、機能的特性の改善および／もしくは増強を伴う、抗ＳＩＲＰＡ抗体、ならびに／あるいは結合反応速度値を改善および／もしくは増強し、かつ／またはＫＤ値を改善および／もしくは増強し、かつ／またはＥＣ５０値を改善および／もしくは増強した抗ＳＩＲＰＡ抗体の同定に基づく。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、抗ＳＩＲＰＡ抗体の、２分の１以下、３分の１以下、４分の１以下、５分の１以下、６分の１以下、７分の１以下、８分の１以下、９分の１以下、または１０分の１以下である、ヒトＳＩＲＰＡに対するＫＤを有する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡに対する、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７ｎＭ未満、０．６ｎＭ（ｎｍ）未満、または０．５ｎＭ未満のＫＤを有する。

【0012】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、ＳＩＲＰＡの細胞表面発現レベルを、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、抗ＳＩＲＰＡ抗体より、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％低値のＥＣ５０で低減する。本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを、約０．４ｎＭ～約０．５ｎＭの範囲の５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低下させるので有利である。本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡについて、約０．６ｎＭ～０．７ｎＭの範囲の解離定数（ＫＤ）を有するので有利である。

【0013】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に結合する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２に結合する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＢ（ＳＩＲＰベータ）ｖ３に結合する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＢ ｖ１に結合しない。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マウスＳＩＲＰＡに結合しない。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰγに結合しない。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、カニクイザルＳＩＲＰＡに結合する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、カニクイザルＳＩＲＰＢ１に結合しない。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マーモセットＳＩＲＰＡに結合する。

【0014】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ヒトＳＩＲＰＡ、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２、カニクイザルＳＩＲＰＡ、マーモセットＳＩＲＰＡ、およびヒトＳＩＲＰβ３に結合する抗体を提示する。

【0015】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；ならびに配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、抗体を提示する。

【0016】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；ならびに配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗体を提示する。

【0017】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；ならびに配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗体を提示する。

【0018】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号３３、３４、および３５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、抗体を提示する。

【0019】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域が、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、および４４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、抗体を提示する。

【0020】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ３、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つまたは４つのフレームワーク領域を含む、抗体を提示する。

【0021】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ３、および配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つまたは４つのフレームワーク領域を含む、抗体を提示する。

【0022】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ３、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つまたは４つのフレームワーク領域を含み；軽鎖可変領域が、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ３、および配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つまたは４つのフレームワーク領域を含む、抗体を提示する。

【0023】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号３３、３４、および３５から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体を提示する。

【0024】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域が、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、および４４から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体を提示する。

【0025】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号３３、３４、および３５から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、および４４から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体を提示する。

【0026】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、抗体３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、または３Ｆ９－２５の、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、およびＨＶＲ－Ｈ３（表８に示される）を含む、抗体を提示する。

【0027】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域が、抗体３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、または３Ｆ９－２５の、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、およびＨＶＲ－Ｌ３（表７に示される）を含む、抗体を提示する。

【0028】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、抗体３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、または３Ｆ９－２５のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、およびＨＶＲ－Ｈ３（表８に示される）を含み；軽鎖可変領域が、抗体３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、または３Ｆ９－２５のＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、およびＨＶＲ－Ｌ３（表７に示される）を含む、抗体を提示する。

【0029】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、およびＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、およびＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域とを含み、抗体３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、または３Ｆ９－２５のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、およびＨＶＲ－Ｌ３（表７および８に示される）を含む、抗体を提示する。

【0030】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３（ＶＨ，Ｆｒ３）、およびＶＨ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つ、もしくは４つのフレームワーク領域を含み、ＶＨ ＦＲ１が配列番号２５のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＦＲ２が配列番号２６のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＦＲ３が配列番号２７のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＦＲ４が配列番号２８のアミノ酸配列を含み；かつ／または軽鎖可変領域が、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、およびＶＬ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つ、もしくは４つのフレームワーク領域を含み、ＶＬ ＦＲ１が配列番号２９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＦＲ２が配列番号３０のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＦＲ３が配列番号３１のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＦＲ４が配列番号３２のアミノ酸配列を含む、抗体を提示する。

【0031】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提示する。

【0032】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体を提供する。

【0033】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。

【0034】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。

【0035】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号５３のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。

【0036】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号５４のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。

【0037】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。

【0038】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号５２のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。

【0039】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。

【0040】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。

【0041】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体であって、抗体が重鎖および軽鎖を含み、重鎖が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、軽鎖が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体を提供する。

【0042】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、モノクローナル抗体である抗体を提示する。

【0043】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ヒト化抗体である抗体を提示する。

【0044】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’－ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、またはｓｃＦｖ断片である抗体を提示する。

【0045】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、多価抗体である抗体を提示する。

【0046】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスである抗体を提示する。

【0047】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ＩｇＧクラスの抗体であり、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、またはＩｇＧ４アイソタイプとしての抗体である抗体を提示する。

【0048】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、阻害型Ｆｃ受容体に結合する抗体を提示する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、阻害型Ｆｃ受容体は、阻害型Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。

【0049】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ＦｃγＲＩＩＢの細胞レベルを低下させる抗体を提示する。

【0050】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ヒトまたはマウスのＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ、およびこれらの任意の組合せ（残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う）からなる群から選択される、Ｆｃ領域内のアミノ酸残基における１つもしくは複数のアミノ酸置換を含むか、またはＦｃ領域内のグリシン２３６に対応する位置におけるアミノ酸欠失を含む、抗体を提示する。

【0051】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、Ｃ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、およびこれらの任意の組合せ（アミノ酸残基の番号付けは、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けに従う）からなる群から選択される、Ｆｃ領域内の残基位置における１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、抗体を提示する。

【0052】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させるか、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルを低下させるか、ＳＩＲＰＡの全細胞レベルを低下させるか、またはこれらの任意の組合せである、抗体を提示する。

【0053】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ＳＩＲＰＡの分解を誘導するか、ＳＩＲＰＡの切断を誘導するか、ＳＩＲＰＡの内部移行を誘導するか、ＳＩＲＰＡの放出を誘導するか、ＳＩＲＰＡの発現の下方調節を誘導するか、またはこれらの任意の組合せである、抗体を提示する。

【0054】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低減する抗体を提示する。

【0055】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低減する抗体を提示する。

【0056】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ヒト単球内のＳＩＲＰＡの発現を下方調節する、抗体を提示する。

【0057】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ヒトマクロファージ内のＳＩＲＰＡの発現を下方調節する、抗体を提示する。

【0058】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ヒトマクロファージ内のＳＩＲＰＡの発現を約７０～９５％下方調節する、抗体を提示する。

【0059】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ヒトＳＩＲＰＡに対する６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満の親和性（ＫＤ）を有する、抗体を提示する。

【0060】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ヒトＳＩＲＰＡに対する約０．１ｎＭ～２ｎＭの親和性（ＫＤ）を有する、抗体を提示する。

【0061】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体の、ヒトＳＩＲＰＡに対する親和性の、２分の１以下、３分の１以下、４分の１以下、５分の１以下、６分の１以下、７分の１以下、８分の１以下、９分の１以下、または１０分の１以下であるＫＤで、ヒトＳＩＲＰＡに対する親和性を有する、抗体を提示する。

【0062】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡ ｖ１の細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、約０．０５ｎＭ～２ｎＭまたは約０．４ｎＭ～約０．５ｎＭの５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、抗体を提示する。

【0063】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対して約０．０５～０．２０ｎＭ、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２に対して約０．０５～０．１０ｎＭ、および／またはカニクイザルＳＩＲＰＡに対して約０．０５～１ｎＭの５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、抗体を提示する。

【0064】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡ ｖ１のＤ３ドメインに結合する抗体を提示する。

【0065】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡ ｖ１のアミノ酸残基Ｒ２８２、Ｑ２８４、およびＧ３３７に結合する抗体を提示する。

【0066】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、マクロファージ内の腫瘍細胞に対する食作用を増大させ、Ｍ１マクロファージ内の腫瘍細胞に対する食作用を増大させ、Ｍ２マクロファージ内の腫瘍細胞に対する食作用を増大させ、マクロファージ内のＣＤ１４の発現を下方調節し、かつ／またはこれらの任意の組合せである、抗体を提示する。

【0067】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体がＴ細胞の増殖を増強する、抗体を提示する。

【0068】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ＳＩＲＰＡのサーファクタントプロテインＤ（ＳＰ－Ｄ）との相互作用または結合を遮断する、抗体を提示する。

【0069】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ＳＩＲＰＡのＣＤ４７との相互作用または結合を遮断しない、抗体を提示する。

【0070】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、細胞表面におけるＣＤ３２Ａ／Ｂの発現を下方調節する、抗体を提示する。

【0071】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、細胞表面におけるＣＤ１４の発現を下方調節する、抗体を提示する。

【0072】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ＳＩＲＰγとＣＤ４７との相互作用を遮断せずに、Ｔ細胞の増殖を増強する、抗体を提示する。

【0073】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、単球内のＲＯＳの産生を刺激し、かつ／または単球内のＩＬ－８の発現を増大させる、抗体を提示する。

【0074】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍増殖を阻害する、抗体を提示する。

【0075】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、末梢血中のＣＤ１４＋骨髄細胞の数を低減し、かつ／または腫瘍内のＣＤ１４＋骨髄細胞の数を増大させる、抗体を提示する。

【0076】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ヒトＳＩＲＰＡに結合するが、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を実質的に遮断しない、抗体を提示する。

【0077】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗体が第１の抗原および第２の抗原を認識し、第１の抗原がＳＩＲＰＡであり、第２の抗原が、
（ａ）血液脳関門を越える輸送を容易とする抗原；
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１および２（ＬＰＲ－１および２）、ならびにジフテリア毒素受容体から選択される、血液脳関門を越える輸送を容易とする抗原；
（ｃ）疾患原因ペプチドまたは疾患原因タンパク質、疾患原因核酸から選択される疾患原因作用物質であって、疾患原因核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、疾患原因タンパク質が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、またはこれらの断片、タウ、ＩＡＰＰ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２マイクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、およびプロリン－アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択される、疾患原因作用物質；ならびに
（ｄ）免疫細胞上で発現される、リガンドおよび／またはタンパク質であって、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、およびホスファチジルセリンから選択される、リガンドおよび／またはタンパク質；ならびに１つまたは複数の腫瘍細胞上で発現される、タンパク質、脂質、多糖類、または糖脂質
である、抗体を提示する。

【0078】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、血液脳関門を越える輸送を容易とするペプチドにコンジュゲートしている、抗体を提示する。一部の実施形態では、ペプチドは、ＣＲＭ１９７、タンパク質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、およびＡＮＧ１００５から選択される。

【0079】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体がオプソニン化抗体である、抗体を提示する。

【0080】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体がコンジュゲート抗体である、抗体を提示する。

【0081】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、検出用マーカー、毒素、または治療剤にコンジュゲートしている、抗体を提示する。

【0082】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、エチジウムブロマイド、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファサルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、クルシン、クロチン、カリケアマイシン、サボンソウ（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、グルココルチコイド、アウリスタチン、アウロマイシン、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５、およびシスプラチンから選択される毒素にコンジュゲートしている、抗体を提示する。

【0083】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、またはこれらの断片、タウ、ＩＡＰＰ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２マイクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、およびプロリン－アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、およびこれらの任意の組合せから選択される、疾患原因タンパク質に特異的に結合する、１つもしくは複数の抗体；またはＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３３、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－９、Ｓｉｇｌｅｃ－１１、ホスファチジルセリン、疾患原因核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡ、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、免疫調節タンパク質に結合する１つもしくは複数の抗体と組み合わせて使用される、抗体を提示する。

【0084】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、がんを防止するか、この危険性を低減するか、またはこれを処置する方法であって、それを必要とする個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与して、これによりがんを処置することを含む方法を提示する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本発明は、がんである、疾患、障害、もしくは損傷を防止するか、この危険性を低減するか、またはこれを有する個体を処置する方法であって、個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与して、これにより個体を防止するか、この危険性を低減するか、またはこれを処置することを含む方法を提供する。

【0085】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、がんを処置する方法であって、それを必要とする個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含み、がんが、肉腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎盂がん、白血病、肺がん、小細胞肺がん、メラノーマ、リンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、および線維肉腫、多形神経膠芽腫；腎明細胞癌；副腎皮質癌；膀胱尿路上皮癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、肺腺癌；膵腺癌、腎細胞がん、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、無痛性Ｂ細胞リンパ腫、侵襲性Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性新生物、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮癌、子宮頸部腺癌、胆管癌、結腸腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、腎嫌色素細胞、腎乳頭細胞癌、低悪性度神経膠腫、肝細胞癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵腺癌、クロム親和性細胞腫および傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣生殖細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体内膜癌、子宮癌肉腫、ならびにブドウ膜メラノーマから選択される方法を提示する。

【0086】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、がんを処置する方法であって、それを必要とする個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含み、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、またはＣＤ７３を阻害する治療剤を投与することをさらに含む方法を提示する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、治療剤は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、またはＣＤ７３を阻害する抗体である。

【0087】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、がんを処置する方法であって、それを必要とする個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含み、個体に、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、および／または１つもしくは複数の、標準的な抗がん治療もしくは治験中の抗がん治療を投与することを含む方法を提示する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、および抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ（Ｂ－ ａｎｄ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ）抗体、抗ＫＩＲ（Ｋｉｌｌｅｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ－１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ－４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ－９抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ－１１抗体、アンタゴニスト性抗ＴＲＥＭ１抗体、アンタゴニスト性抗ＴＲＥＭ２抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、およびこれらの任意の組合せから選択される。

【0088】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、１つまたは複数の、標準的な抗がん治療または治験中の抗がん治療は、放射線療法、細胞傷害性化学療法、ターゲティング療法、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプト療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ－Ｔ）療法、ワクチン療法、およびサイトカイン療法から選択される。

【0089】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、がんを処置する方法であって、それを必要とする個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含み、個体に、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与することをさらに含む方法を提示する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ－１抗体、抗ＩＬ－２抗体、およびこれらの任意の組合せから選択される。

【0090】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、がんを処置する方法であって、それを必要とする個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含み、個体に、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト性抗体を投与することをさらに含む方法を提示する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト性抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト性抗体は、アゴニストの抗ＣＤ４０抗体、アゴニストの抗ＯＸ４０抗体、アゴニストの抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト性抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト性抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニストの抗ＣＤ１３７／４－１ＢＢ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２７抗体、アゴニストの抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、アゴニストの抗ＣＤ３０抗体、アゴニストの抗ＢＴＬＡ抗体、アゴニストの抗ＨＶＥＭ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２抗体、アゴニストの抗ＣＤ５抗体、およびこれらの任意の組合せから選択される。

【0091】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、がんを処置する方法であって、それを必要とする個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含み、個体に少なくとも１つの刺激性サイトカインを投与することをさらに含む方法を提示する。一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＩＦＮ－α４、ＩＦＮ－β、ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＲＰ、ＩＬ－２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ－γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ－３３、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ベータ、およびこれらの任意の組合せから選択される。

【0092】

一部の実施形態では、本発明は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体をコードする核酸配列を含む単離された核酸を提供する。一部の実施形態では、本発明は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体をコードする核酸配列を含む単離された核酸を含むベクターを提供する。一部の実施形態では、本発明は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体をコードする核酸配列を含む単離された核酸を含むベクターを含む単離された宿主細胞を提供する。

【0093】

一部の実施形態では、本発明は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する抗体を作製する方法であって、抗体が作製されるように、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体をコードする核酸配列を含む単離された核酸を含むベクターを含む宿主細胞を培養することを含む方法を提供する。本発明は、細胞により産生された抗体を回収することをさらに提供する。

【0094】

一部の実施形態では、本発明は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0095】

【図1】ヒトＳＩＲＰＡ変異型１、および多様な種に由来するＳＩＲＰＡタンパク質の細胞外ドメインの、アミノ酸配列のアライメントを示す図である。記録された同一性パーセントは、細胞外領域内の高相同性を裏付ける。寄託番号は、Ｐ７８３２４（ヒトＳＩＲＰＡ変異型１）、ＸＰ０１５３１３１５３（カニクイザル）、ＪＡＢ５１８９６（マーモセット）、Ｇ１Ｕ０Ｉ５（ウサギ）、およびＸＰ００５６３４９３８（イヌ）である。配列番号５９～６３を、それぞれ、出現順に開示する。

【図2A】抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９の、重鎖可変ドメインの、潜在的なヒト化配列を列挙する図である。ヒト化配列は、ＩＧＨＶ３－２３^＊０１アクセプターフレームワーク、およびＩＧＨＪ４^＊０１接合領域に基づく。配列番号６４～６５、２、６４、および３～４を、それぞれ、出現順に開示する。

【図2B】抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９の、軽鎖可変ドメインの、潜在的なヒト化配列を列挙する図である。ヒト化配列は、ＩＧＨＶ３－２３^＊０１アクセプターフレームワーク、およびＩＧＨＪ４^＊０１接合領域に基づく。配列番号６６～６７、５、６６、および６８～７０を、それぞれ、出現順に開示する。

【図3】マウス抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９抗体およびヒト化抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９抗体による、初代ヒトマクロファージ上における、抗体媒介性の、ＳＩＲＰＡの下方調節を示すデータを明示する図である。

【図4A】抗体媒介性の、受容体の下方調節が、ＦｃのＮ結合型グリカンに依存することを示すデータを明示する図である。

【図4B】腫瘍細胞に対する食作用の、抗体媒介性増強が、ＦｃのＮ結合型グリカンに依存することを示すデータを明示する。

【図5A】ヒト化抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９ ＩｇＧ４抗体変異体が、腫瘍細胞に対する食作用を誘導することができなかったことを示すデータを明示する図である。

【図5B】ヒト化抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９ ＩｇＧ４抗体変異体が、マクロファージ上の、ＣＤ１４の発現を下方調節することができないことを示すデータを明示する図である。

【図6A】抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９ ｍＩｇＧ１による処置が、初代ヒトマクロファージ上の、ＣＤ３２Ａ／Ｂの発現を下方調節することを示す図である。

【図6B】抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９による処置が、初代ヒトマクロファージ上の、ＣＤ３２ＡおよびＣＤ３２Ｂの発現を下方調節することを示す図である。

【図7A】ＣＤ３２Ａ／Ｂの遮断が、初代ヒトマクロファージ上の、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９媒介性の、ＳＩＲＰＡの下方調節を阻害することを示すデータを明示する図である。

【図7B】ＣＤ３２Ａ／Ｂの遮断が、腫瘍細胞に対する食作用の、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９媒介性の増強を阻害することを示すデータを明示する図である。

【図8A】ＣＤ３２Ａアロタイプが、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９媒介性の、ＳＩＲＰＡの下方調節に影響を及ぼしたことを示すデータを明示する図である。ドナー５０７および５０８が、ＣＤ３２Ａ－Ｒ／Ｈ１３１ヘテロ接合性であったことを示す。

【図8B】ＣＤ３２Ａアロタイプが、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９媒介性の、ＳＩＲＰＡの下方調節に影響を及ぼしたことを示すデータを明示する図である。ドナー５１６および５１７が、ＣＤ３２Ａ－Ｈ／Ｈ１３１ホモ接合性であったことを示す。

【図9A-9B】抗体媒介性の、受容体の下方調節が、ＳＩＲＰＡの分解をもたらすことを示すデータを明示する図である。図９Ａでは、５μｇ、１０μｇ、および２０μｇの、細胞全体の溶解物を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥへとロードし、抗ＳＩＲＰＡ細胞質ドメイン（ａ－ＳＩＲＰＡｃｔ）で、免疫ブロットした。図９Ｂでは、２０μｇの、細胞全体の溶解物を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥへとロードし、ａ－ＳＩＲＰＡｃｔおよび抗ＳＨＰ２で、プローブした。

【図10A】抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、異なるＦｃ変異体の貪食活性の増強を比較するデータを明示する図である。初代ヒトマクロファージを、野生型ヒトＩｇＧ１骨格上、またはＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ Ｆｃ突然変異抗体、もしくはアイソタイプコントロール抗体を保有するヒトＩｇＧ１上の、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体で処置した。

【図10B】抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体の、異なるＦｃ変異体の貪食活性の増強を比較するデータを明示する図である。初代ヒトマクロファージを、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８ＦもしくはＡ３３０Ｓ／Ｐ３３１ＳのＦｃ突然変異抗体、またはアイソタイプコントロール抗体を保有するヒトＩｇＧ１骨格上、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体で処置した。

【図11A-11B】抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体の、異なるＦｃ変異体の貪食活性を、Ｍ１マクロファージ（図１１Ｂ）上、およびＭ２マクロファージ（図１１Ａ）上の抗ＣＤ４７と比べて比較するデータを明示する図である。

【図12A-12B】抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２で処置されたマクロファージが、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、固形腫瘍細胞生存率を低減したことを示すデータを明示する図である。

【図13A-13B】２元ＭＬＲアッセイにおける、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、異なるＦｃ変異体による、Ｔ細胞増殖の増強を比較するデータを明示する図である。図１３Ｂは、２元ＭＬＲアッセイにおける、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、異なるＦｃ変異体、および抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－１４による、Ｔ細胞増殖の、抗ＣＤ４７ ＩｇＧ４と比べた増強を比較するデータを明示する。

【図14A】１元ＭＬＲアッセイにおける、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体の、異なるＦｃ変異体による、Ｔ細胞増殖の、抗ＣＤ４７ ＩｇＧ４と比べた増強を比較するデータを明示する図である。

【図14B】１元ＭＬＲアッセイによる、代表的なＦＡＣＳプロットを示す図である。

【図15A-15B】ＬＰＳでプライミングされたマクロファージによるＴＮＦ放出の、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、異なるＦｃ変異体による増強を比較するデータを明示する図である。

【図16】ヒトＳＩＲＰＡのモデルにおける、抗ＳＩＲＰＡ抗体のために「極めて重要な」残基の、同定および可視化を示すデータを明示する図である。

【図17A】同系マウス結腸癌モデルにおける、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、腫瘍増殖阻害に対する効果を示すデータを明示する図である。野生型ＭＣ３８細胞株および操作ＭＣ３８細胞株における、マウスＣＤ４７（上パネル）およびヒトＣＤ４７（下パネル）の発現を示す、ＦＡＣＳヒストグラムを明示する。

【図17B】同系マウス結腸癌モデルにおける、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、腫瘍増殖阻害に対する効果を示すデータを明示する図である。マウスＣＤ４７の発現を欠くように操作され、ヒトＣＤ４７を過剰発現させるＭＣ３８細胞（ＭＣ３８－ｍＣＤ４７ＫＯ／ｈｕＣＤ４７＋）を皮下に植え込まれた、ｈｕＳＩＲＰＡ／ｈｕＣＤ４７ ＢＡＣトランスジェニックマウスについての平均腫瘍増殖曲線を示すデータを明示する。

【図17C-1】同系マウス結腸癌モデルにおける、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、腫瘍増殖阻害に対する効果を示すデータを明示する図である。図１７Ｂの各処置群内の、各個別の動物についてのスパゲッティプロットを明示する。

【図17C-2】同系マウス結腸癌モデルにおける、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、腫瘍増殖阻害に対する効果を示すデータを明示する図である。図１７Ｂの各処置群内の、各個別の動物についてのスパゲッティプロットを明示する。

【図18A】用量を増大させる、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置された、腫瘍を保有するＢＡＣトランスジェニックマウスの骨髄細胞内の、ＳＩＲＰＡの、抗体媒介性下方調節の動態を示すデータを明示する図である。時間経過にわたる、腫瘍浸潤性骨髄細胞上の、ＳＩＲＰＡ発現の相対変化を示すデータを明示する。

【図18B】用量を増大させる、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置された、腫瘍を保有するＢＡＣトランスジェニックマウスの骨髄細胞内の、ＳＩＲＰＡの、抗体媒介性下方調節の動態を示すデータを明示する図である。時間経過にわたる、脾臓骨髄細胞上の、ＳＩＲＰＡ発現の相対変化を示すデータを明示する。

【図19A】Ａ３７５腫瘍を保有する、ヒト化ＮＯＧ－ＥＸＬマウスにおける、ＳＩＲＰＡ研究の、抗ＳＩＲＰＡ抗体媒介性下方調節の処置条件を示す図である。

【図19B】本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体による処置と関連する、ＭＦＩ値（左パネル）または正規化値（右パネル）としての、ヒト腫瘍マクロファージ上のＳＩＲＰＡの発現レベルを示すデータを明示する図である。

【図20A】本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体による処置後における、Ａ３７５腫瘍を保有する、ヒト化ＮＯＧ－ＥＸＬマウスから単離された、ヒト腫瘍マクロファージ上の、Ｍ１マクロファージのマーカーである、ＨＬＡ－ＤＲ／ＭＨＣクラス２の発現レベルを示す図である。それぞれ、ＭＦＩ値（左パネル）または正規化値（右パネル）としての、ＨＬＡ－ＤＲ／ＭＨＣクラス２およびＣＤ８６の発現を示すデータを明示する。

【図20B】本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体による処置後における、Ａ３７５腫瘍を保有する、ヒト化ＮＯＧ－ＥＸＬマウスから単離された、ヒト腫瘍マクロファージ上の、Ｍ１マクロファージのマーカーである、ＣＤ８６の発現レベルを示す図である。それぞれ、ＭＦＩ値（左パネル）または正規化値（右パネル）としての、ＨＬＡ－ＤＲ／ＭＨＣクラス２およびＣＤ８６の発現を示すデータを明示する。

【図21A】本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与と関連する、Ａ３７５腫瘍を保有する、ヒト化ＮＯＧ－ＥＸＬマウスから単離された脾臓単球内の、ヒトＳＩＲＰＡの下方調節を示す図である。ＭＦＩ値（左パネル）または正規化値（右パネル）としての、ヒトＳＩＲＰＡの発現を示すデータを明示する。

【図21B】本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与と関連する、Ａ３７５腫瘍を保有する、ヒト化ＮＯＧ－ＥＸＬマウスから単離された末梢血単球内の、ヒトＳＩＲＰＡの下方調節を示す図である。ＭＦＩ値（左パネル）または正規化値（右パネル）としての、ヒトＳＩＲＰＡの発現を示すデータを明示する。

【図22】抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体の、異なるＦｃ変異体による、初代ヒトマクロファージ上における、抗体媒介性の、ＳＩＲＰＡの下方調節を示すデータを明示する図である。

【図23】抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、異なるＦｃ変異体の貪食活性の、抗ＣＤ４７遮断抗体と比較した増強を比較するデータを明示する図である。

【図24】コントロールＩｇＧ抗体、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＰＳ、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＩｇＧ４、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－ＩｇＧ２、および抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＮＳＬＦを投与されたカニクイザルにおける、赤血球および血小板数を示すデータを明示する図である。

【発明を実施するための形態】

【0096】

本明細書で記載される、多様な実施形態の特性の、１つ、一部または全部は、本発明の他の実施形態を形成するように組み合わされうることが理解されるものとする。当業者には、本発明の、これらの態様および他の態様が明らかとなろう。本発明の、これらの実施形態および他の実施形態は、後続の、「発明を実施するための形態」により、さらに記載される。

【0097】

本開示は、抗ＳＩＲＰＡ抗体（例えば、モノクローナル抗体）；このような抗体を作り、使用する方法；このような抗体を含む薬学的組成物；このような抗体をコードする核酸；およびこのような抗体をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。

【0098】

本明細書で記載または言及される技法および手順は、一般に、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、３版（２００１）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、（２００３））；「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」シリーズ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：「ＰＣＲ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ、およびＧ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ編（１９９５））、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ編（１９８８）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、ならびに「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８７））；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ」（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）、編、１９８７）；「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；「Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ」（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３年８月）、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ」（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；「ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ」（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；「Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；「Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；「Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；「Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）；ならびに「Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ」（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａら編、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９３）において記載されている、広く利用される方法など、当業者により、十分に理解され、常套的な方法を使用して、一般に利用される。

【0099】

Ｉ．定義
本明細書では、「ＳＩＲＰα」または「ＳＩＲＰαポリペプチド」または「ＳＩＲＰＡ」または「ＳＩＲＰＡポリペプチド」という用語は、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒトおよびカニクイザル）、およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物供給源に由来する、任意の天然のＳＩＲＰＡを指すように、互換的に使用される。一部の実施形態では、この用語は、野生型配列および天然に存在する変異体配列、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子変異体の両方を包摂する。一部の実施形態では、この用語は、「全長」の、プロセシングされていないＳＩＲＰＡ、ならびに細胞内のプロセシングから生じる、任意の形態のＳＩＲＰＡを包摂する。一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡは、ヒトＳＩＲＰＡである。一部の実施形態では、例示的なＳＩＲＰＡのアミノ酸配列は、２０１８年４月２５日現在の、Ｕｎｉｐｒｏｔ寄託番号：Ｐ７８３２４である。一部の実施形態では、例示的なヒトＳＩＲＰＡ ｖ１のアミノ酸配列は、配列番号１である。一部の実施形態では、例示的なヒトＳＩＲＰＡ ｖ２のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＡＡ７１４０３である。

【0100】

「抗ＳＩＲＰＡ抗体」、「ＳＩＲＰＡに結合する抗体」、および「ＳＩＲＰＡに特異的に結合する抗体」という用語は、抗体が、ＳＩＲＰＡのターゲティングにおいて、診断剤および／または治療剤として有用であるように、十分な親和性で、ＳＩＲＰＡに結合することが可能な抗体を指す。一実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の、非類縁の、非ＳＩＲＰＡポリペプチドへの結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される通り、抗体の、ＳＩＲＰＡへの結合の、約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰＡに結合する抗体は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または＜０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍもしくはこれ未満、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、異なる種に由来するＳＩＲＰＡの間で保存される、ＳＩＲＰＡのエピトープに結合する。

【0101】

抗体の、標的分子への結合に関して、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープ「への特異的な結合」またはこれら「に特異的に結合する」またはこれら「に特異的である」という用語は、非特異的な相互作用と、測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、分子の結合を、コントロール分子の結合と比較して決定することにより測定されうる。例えば、特異的結合は、標的と類似するコントロール分子、例えば、過剰量の非標識化標的との競合により決定されうる。この場合、標識化標的の、プローブへの結合が、過剰量の非標識化標的により、競合的に阻害されれば、特異的結合が指し示される。本明細書で使用される、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープ「への特異的な結合」またはこれら「に特異的に結合する」またはこれら「に特異的である」という用語は、例えば、標的に対する、約１０^－４Ｍもしくはこれ未満、１０^－５Ｍもしくはこれ未満、１０^－６Ｍもしくはこれ未満、１０^－７Ｍもしくはこれ未満、１０^－８Ｍもしくはこれ未満、１０^－９Ｍもしくはこれ未満、１０^－１０Ｍもしくはこれ未満、１０^－１１Ｍもしくはこれ未満、１０^－１２Ｍもしくはこれ未満のうちのいずれかのＫＤ、または１０^－４Ｍ～１０^－６Ｍ、もしくは１０^－６Ｍ～１０^－１０Ｍ、もしくは１０^－７Ｍ～１０^－９Ｍの範囲のＫＤを有する分子により呈されうる。当業者により察知される通り、親和性とＫＤ値とは、反比例する。抗原に対する高親和性は、低ＫＤ値により測定される。一実施形態では、「特異的結合」という用語は、分子が、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに、他のいかなるポリペプチドまたはポリペプチドエピトープにも、実質的に結合せずに結合する場合の結合を指す。

【0102】

本明細書では、「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、「抗体」と互換的に使用される。本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用されるが、とりわけ、それらが、所望の生物活性を呈する限りにおいて、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体を含む、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を対象とする。

【0103】

「天然抗体」とは、通例、２つの同一な軽（「Ｌ」）鎖と、２つの同一な重（「Ｈ」）鎖とから構成される、約１５０，０００ドルトンの、ヘテロテトラマーの糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有結合によるジスルフィド結合により、重鎖へと連結されるが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で変動する。各重鎖および各軽鎖はまた、規則的に隔てられた、鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有し、それに続いていくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有し、他端に定常ドメインを有し；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと並び、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと並ぶ。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと、重鎖可変ドメインとの接触面を形成すると考えられる。

【0104】

異なるクラスの抗体の、構造および特性については、例えば、「Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、８版、Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ、Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ、およびＴｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ、１９９４、７１頁および６章を参照されたい。

【0105】

任意の脊椎動物種に由来する軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（「κ」）およびラムダ（「λ」）と呼ばれる、２つの、明確に異なる種類のうちの１つへと割り当てられうる。それらの重鎖（ＣＨ）の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプへと割り当てられうる。それぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）、およびミュー（「μ」）と名指される重鎖を有する、免疫グロブリンの５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在する。γクラスおよびαクラスは、ＣＨの配列および機能の、比較的副次的な差違に基づき、サブクラス（アイソタイプ）へと、さらに分けられ、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２を発現させる。免疫グロブリンの、異なるクラスの、サブユニット構造および三次元的立体構成は、周知であり、一般に、例えば、Ａｂｂａｓら、「Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、４版（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．、２０００）において記載されている。

【0106】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体の、「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖の、アミノ末端ドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「Ｖ_Ｈ」および「Ｖ_Ｌ」と称されうる。これらのドメインは、一般に、抗体のうちで、最も可変性の大きな部分（同じクラスの、他の抗体と比べて）であり、抗原結合部位を含有する。

【0107】

「可変」という用語は、可変ドメインの、ある特定のセグメントの配列が、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体間で、広範に異なるという事実を指す。可変ドメインは、抗原への結合を媒介し、特定の抗体の、その特定の抗原に対する特異性を規定する。しかし、可変性は、可変ドメインの全域にわたり、均等に配分されているわけではない。そうではなくて、可変性は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインのいずれにおいても、超可変領域（ＨＶＲ）呼ばれる、３つのセグメントに集約されている。可変ドメインのうちの、より高度に保存的な部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々、ベータシート構造を接続し、場合によって、ベータシート構造の一部を形成する、ループを形成する、３つのＨＶＲにより接続された、ベータシートの立体構造を主に取る、４つのＦＲ領域を含む。各鎖内のＨＶＲは、ＦＲ領域により、他の鎖に由来するＨＶＲと、近接して、一体に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５版、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗体の、抗原への結合に、直接は関与せず、抗体の、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害への参与など、多様なエフェクター機能を呈する。

【0108】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた、本開示の抗ＳＩＲＰＡモノクローナル抗体などの抗体を指す、すなわち、個々の抗体を含む集団は、わずかな量で存在しうる、天然に存在することが可能な突然変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性体化、アミド化など）を除き、同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対して方向付けられて、高度に特異的である。典型的に、異なる決定基（エピトープ）に対する、異なる抗体を含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の、単一の決定基に対して方向付けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが、ハイブリドーマ培養物により合成され、他の免疫グロブリンにより夾雑されない点でも有利である。修飾語である「モノクローナル」とは、抗体の、実質的に均一の集団から得られる抗体の性格を指し示すものであり、任意の特定の方法による抗体の作製を要求するものとは見なされないものとする。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、およびヒト免疫グロブリンの配列をコードする、ヒト免疫グロブリンの遺伝子座または遺伝子の一部または全部を有する動物において、ヒト抗体またはヒト様抗体を作製するための技術を含む、様々な技法により作られうる。例えば、本開示に従い使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４～６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１～５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３３８（２）：２９９～３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３４０（５）：１０７３～１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０１（３４）：１２４６７～４７２（２００４）；およびＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８４（１～２）：１１９～１３２（２００４）を参照されたい、ハイブリドーマ法（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ．、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５～９７（１９７５）；Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１４（３）：２５３～２６０（１９９５）、Ｈａｒｌｏｗら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ」、５６３～６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、酵母提示技術（例えば、ＷＯ２００９／０３６３７９Ａ２；ＷＯ２０１０１０５２５６；ＷＯ２０１２００９５６８、およびＸｕら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．、２６（１０）：６６３～７０（２０１３）を参照されたい、およびヒト免疫グロブリンの配列をコードする、ヒト免疫グロブリンの遺伝子座または遺伝子の一部または全部を有する動物において、ヒト抗体またはヒト様抗体を作製するための技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；ＷＯ１９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５～２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；および同第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９～７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８５６～８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８１２～８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１４：８４５～８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５～９３（１９９５）を参照されたい、を含む、様々な技法により作られうる。

【0109】

「全長抗体」、「インタクトな抗体」、または「全抗体」という用語は、抗体断片と対比されて、その実質的にインタクトな形態にある、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体を指すように、互換的に使用される。具体的に、全抗体は、Ｆｃ領域を含む、重鎖および軽鎖を伴う抗体を含む。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）の場合もあり、このアミノ酸配列の変異体の場合もある。場合によって、インタクトな抗体は、１つまたは複数のエフェクター機能を有しうる。

【0110】

「抗体断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体の部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、およびＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、８（１０）：１０５７～１０６２（１９９５）を参照されたい）；単鎖抗体分子および抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。

【0111】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる、２つの同一な抗原結合性断片と、たやすく結晶化する能力を反映する呼称である、残りの「Ｆｃ」断片とをもたらす。Ｆａｂ断片は、重鎖（Ｖ_Ｈ）の可変領域ドメイン、および１つの重鎖の、第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）を伴う、軽鎖の全体からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原への結合に関して一価である、すなわち、各Ｆａｂ断片は、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有する、ジスルフィド連結された、２つのＦａｂ断片にほぼ対応し、抗原を架橋することがなおも可能な、単一の、大型のＦ（ａｂ’）_２断片をもたらす。Ｆａｂ’断片は、抗体のヒンジ領域に由来する、１つまたは複数のシステインを含む、Ｃ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端において、少数の、さらなる残基を有することにより、Ｆａｂ断片と異なる。本明細書では、Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が、遊離チオール基を保有する、Ｆａｂ’についての呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、元来、それらの間に、ヒンジシステインを有する、Ｆａｂ’断片のペアとしてもたらされた。抗体断片の、他の化学的カップリングもまた、公知である。

【0112】

Ｆｃ断片は、ジスルフィドにより一体に保持された、両方の重鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、ある特定の種類の細胞上で見出される、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）によってもまた認識される領域である、Ｆｃ領域内の配列により決定される。

【0113】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体の「機能的断片」は、一般に、インタクトな抗体の抗原結合性領域もしくは可変領域を含む、インタクトな抗体の部分、またはＦｃＲへの結合能を保持するか、もしくはこれを改変された、抗体のＦｃ領域を含む。抗体断片の例は、直鎖状抗体、単鎖抗体分子および抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。

【0114】

「ダイアボディー」という用語は、可変ドメインの、鎖内ではなく、鎖間のペアリングが達成され、これにより、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片を結果としてもたらすように、Ｖ_Ｈドメインと、Ｖ_Ｌドメインとの間に、短いリンカー（約５～１０）残基）を伴う、ｓＦｖ断片（先行の段落を参照されたい）を構築することにより調製される、小型の抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディーとは、２つの抗体の、Ｖ_Ｈドメインと、Ｖ_Ｌドメインとが、異なるポリペプチド鎖上に存在する、２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。

【0115】

本明細書で使用される、「キメラ抗体」とは、重鎖および／または軽鎖の部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体内の、対応する配列と同一であるか、または相同である一方で、鎖（複数可）の残りの部分は、それらが、所望の生物活性を呈する限りにおいて、別の種に由来するか、または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体内、ならびにこのような抗体の断片内の、対応する配列と同一であるか、または相同である、本開示のキメラ抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体（免疫グロブリン）を指す。本明細書における、目的のキメラ抗体は、抗体の抗原結合性領域が、例えば、マカクザルを、目的の抗原で免疫化することにより産生される抗体に由来する、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体を含む。本明細書で使用される、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。

【0116】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体のヒト化形態など、非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒトＨＶＲに由来するアミノ酸残基と、ヒトＦＲに由来するアミノ酸残基とを含む、キメラ抗体である。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つであり、典型的に２つの可変ドメインの、実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て、または実質的に全ては、非ヒト抗体のＨＶＲに対応し、ＦＲの全て、または実質的に全ては、ヒト抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体は、任意選択で、ヒト抗体に由来する、抗体定常領域の、少なくとも一部を含みうる。抗体の「ヒト化形態」、例えば、非ヒト抗体とは、ヒト化を経た抗体を指す。

【0117】

「ヒト抗体」とは、ヒトにより産生され、かつ／または本明細書で開示される、ヒト抗体を作るための技法のうちのいずれかを使用して作られた、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を所有する抗体である。ヒト抗体についての、この定義は、とりわけ、非ヒト抗原結合性残基を含む、ヒト化抗体を除外する。ヒト抗体は、当技術分野で公知である、多様な技法であって、ファージディスプレイライブラリーおよび酵母ディスプレイライブラリーを含む技法を使用して作製されうる。ヒト抗体は、抗原を、抗原投与に応答して、このような抗体を産生するように改変されているが、その内因性の遺伝子座は、失効化されている、トランスジェニック動物、例えば、免疫化クセノマウスへと投与することにより調製されうるほか、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介しても作出されうる。ヒト抗体は、当技術分野で公知である、多様な技法であって、ファージディスプレイライブラリーを含む技法を使用して作製されうる。ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１（１９９１）。Ｃｏｌｅら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６～９５（１９９１）において記載されている方法もまた、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。また、ｖａｎ Ｄｉｊｋおよびｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、５：３６８～７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原を、抗原投与に応答して、このような抗体を産生するように改変されているが、その内因性の遺伝子座は、失効化されている、トランスジェニック動物、例えば、免疫化クセノマウス（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号を参照されたい）へと投与することにより調製されうる。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して作出されるヒト抗体に関する、Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７～３５６２（２００６）もまた参照されたい。代替的に、ヒト抗体はまた、酵母ライブラリー、ならびに、例えば、ＷＯ２００９／０３６３７９Ａ２；ＷＯ２０１０１０５２５６；ＷＯ２０１２００９５６８；およびＸｕら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．、２６（１０）：６６３～７０（２０１３）において開示されている方法を援用することによっても調製されうる。

【0118】

本明細書で使用される場合の、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、配列内で超可変であり、かつ／または構造的に規定されたループを形成する、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の領域など、抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、Ｖ_Ｈ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）内の３つ、およびＶ_Ｌ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）内の３つである、６つのＨＶＲを含む。天然の抗体では、Ｈ３およびＬ３は、６つのＨＶＲのうちで、最大の多様性を提示し、Ｈ３は、特に、抗体へと、微妙な特異性を付与するのに、固有の役割を果たすと考えられる。重鎖だけからなる、天然に存在するラクダ科の抗体は、軽鎖の非存在下で機能的かつ安定である。

【0119】

本明細書では、多数のＨＶＲ描出が使用され、本明細書に包摂される。一部の実施形態では、ＨＶＲは、配列可変性に基づく、カバットによる相補性決定領域（ＣＤＲ）であることが可能であり、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔら、前出）。一部の実施形態では、ＨＶＲは、コチアによるＣＤＲでありうる。代わって、コチアは、構造ループの位置に言及する（ＣｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１～９１７（１９８７））。一部の実施形態では、ＨＶＲは、ＡｂＭによるＨＶＲでありうる。ＡｂＭによるＨＶＲは、カバットＣＤＲと、コチア構造ループとの折衷を表し、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ製の、ＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェアにより使用されている。一部の実施形態では、ＨＶＲは、「コンタクト」ＨＶＲでありうる。「コンタクト」ＨＶＲは、利用可能な複合体の結晶構造についての解析に基づく。これらのＨＶＲの各々に由来する残基が、下記で言及される。

【0120】

ＨＶＲは、以下：ＶＬにおける、２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、および８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨにおける、２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）、および９３～１０２、９４～１０２、または９５～１０２（Ｈ３）の通りに「拡大されたＨＶＲ」を含みうる。これらの拡大型ＨＶＲの定義の各々については、可変ドメインの残基は、Ｋａｂａｔら、前出に従い番号付けされる。

【0121】

「フレームワーク」残基または「ＦＲ」残基とは、本明細書で規定されるＨＶＲ残基以外の、可変ドメインの残基である。

【0122】

「ＥＵまたはカバットにおける通りの、可変ドメイン残基の番号付け」または「ＥＵまたはカバットにおける通りの、アミノ酸位置の番号付け」という語句、およびこれらの変化形は、ＥＵまたはＫａｂａｔら、前出における、抗体の集成物のうち、重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインについて使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮、またはこれらへの挿入に対応して、より少数のアミノ酸を含有する場合もあり、さらなるアミノ酸を含有する場合もある。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後における、単一のアミノ酸のインサート（カバットに従う、残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後における、残基の挿入（例えば、カバットに従う、残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃなど）を含みうる。残基のＥＵ番号付けまたはカバット番号付けは、抗体配列の相同性を有する領域における、「標準的な」カバット番号付け配列とのアライメントにより、所与の抗体について決定されうる。

【0123】

ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けシステムは、一般に、可変ドメイン内の残基（軽鎖の残基１～１０７および重鎖の残基１～１１３の近傍における）に言及する場合に使用される（例えば、Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ． （１９９１））。「ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けシステム」または「ＥＵインデックス」は、一般に、免疫グロブリンの重鎖定常領域内の残基に言及する場合に使用される（例えば、Ｋａｂａｔら、前出において報告されている、ＥＵインデックス）。「カバットにおける通りのＥＵインデックス」とは、ＥＵによる、ヒトＩｇＧ１抗体の残基番号付けを指す。本明細書において、特に明記しない限り、抗体の可変ドメイン内の残基番号への言及は、カバット番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。特に明記しない限り、抗体の定常ドメイン内の残基番号への言及は、ＥＵ番号付けシステムまたはカバット番号付けシステムによる残基番号付けを意味する（例えば、米国特許公開第２０１０－２８０２２７号を参照されたい）。

【0124】

本明細書で使用される「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク、またはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、Ｖ_ＬフレームワークまたはＶ_Ｈフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク、またはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」、アクセプターヒトフレームワークは、これらと同じアミノ酸配列を含む場合もあり、既存のアミノ酸配列変化を含む場合もある。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０またはこれ未満、９またはこれ未満、８またはこれ未満、７またはこれ未満、６またはこれ未満、５またはこれ未満、４またはこれ未満、３またはこれ未満、または２またはこれ未満である。既存のアミノ酸変化が、ＶＨ内に存在する場合、これらの好ましい変化は、７１Ｈ、７３Ｈ、および７８Ｈ位のうちの３つ、２つ、または１つだけで生じ；例えば、これらの位置におけるアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、および／または７８Ａでありうる。一実施形態では、ＶＬのアクセプターヒトフレームワークは、配列において、Ｖ_Ｌのヒト免疫グロブリンフレームワーク配列、またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。

【0125】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンの、Ｖ_Ｌフレームワーク配列またはＶ_Ｈフレームワーク配列の選択において、最も一般に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンの、Ｖ_Ｌ配列またはＶ_Ｈ配列の選択は、可変ドメイン配列の亜群からの選択である。一般に、配列の亜群は、Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ （１９９１）における亜群である。Ｖ_Ｌについて、亜群は、Ｋａｂａｔら、前出における、Ｋａｂａｔら、前出における、亜群カッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、またはカッパＩＶでありうる。加えて、Ｖ_Ｈについて、亜群は、亜群Ｉ、亜群ＩＩ、または亜群ＩＩＩでありうる。

【0126】

例えば、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の、指定された位置における「アミノ酸修飾」とは、指定された残基の置換もしくは欠失、または指定された残基に隣接する、少なくとも１つのアミノ酸残基の挿入を指す。指定された残基に「隣接する」挿入とは、この残基から、１～２残基以内における挿入を意味する。挿入は、指定された残基に対して、Ｎ末端側の場合もあり、Ｃ末端側の場合もある。本明細書における、好ましいアミノ酸修飾は、置換である。

【0127】

本開示の、親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体などの「親和性成熟」抗体は、その、１つまたは複数のＨＶＲ内に、１つまたは複数の変更を伴い、抗体の、抗原に対する親和性の、これらの変更（複数可）を所有しない親抗体と比較した改善を結果としてもたらす、親和性成熟抗体である。一実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対する、ナノモル単位、なおまたはピコモル単位の親和性を有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の手順により作製される。例えば、Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９～７８３（１９９２）は、Ｖ_Ｈドメインと、Ｖ_Ｌドメインとのシャッフリングによる親和性成熟について記載する。ＨＶＲ残基および／またはフレームワーク残基に対する、ランダム突然変異誘発については、例えば、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：３８０９～３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７～１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４～２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０～９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９～８９６（１９９２）により記載されている。

【0128】

「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む、最低限の抗体断片である。この断片は、緊密な、非共有結合的会合下にある、１つの重鎖可変領域ドメインと、１つの軽鎖可変領域ドメインとのダイマーからなる。これらの２つのドメインのフォールディングから、抗原結合性のためのアミノ酸残基に寄与し、抗原結合特異性を、抗体へと付与する、６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖の各々に由来する、３つずつのループ）が生じる。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な、３つのＨＶＲだけを含む、Ｆｖの半分）であってもなお、全結合部位より低度の親和性においてであるが、抗原を認識し、これに結合する能力を有する。

【0129】

また、「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略記される、「単鎖Ｆｖ」とは、単一ポリペプチド鎖へと接続された、ＶＨ抗体ドメインおよびＶＬ抗体ドメインを含む、抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、Ｖ_Ｈドメインと、Ｖ_Ｌドメインとの間のポリペプチドリンカーであって、ｓＦｖが、抗原への結合に所望の構造を形成することを可能とするポリペプチドリンカーをさらに含む。

【0130】

抗体の「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域、または変異アミノ酸配列のＦｃ領域）に帰せられうる生物学的活性を指し、抗体のアイソタイプにより変動する。

【0131】

本明細書における、「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するのに使用され、天然配列のＦｃ領域および変異Ｆｃ領域を含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は、変動しうるが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、通例、Ｃｙｓ２２６位におけるアミノ酸残基、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端までの連なりであると規定される。Ｆｃ領域の、Ｃ末端のリジン（ＥＵ番号付けシステムに従う、残基４４７）は、例えば、抗体の作製時もしくは精製時に、または抗体の重鎖をコードする核酸の組換え操作により除去されうる。したがって、インタクトな抗体の組成は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、およびＫ４４７残基を伴う抗体と、Ｋ４４７残基を伴わない抗体との混合物を有する抗体集団を含みうる。本開示の抗体における使用に適する、天然配列のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む。

【0132】

「天然配列のＦｃ領域」は、天然において見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一なアミノ酸配列を含む。天然配列の、ヒトＦｃ領域は、天然の配列の、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非ＡアロタイプおよびＡアロタイプ）；天然の配列の、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然の配列の、ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；および天然の配列の、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびに天然に存在する、これらの変異体を含む。

【0133】

「変異Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは、１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）のために、天然配列のＦｃ領域のアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域、または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較した、少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列のＦｃ領域内、または親ポリペプチドのＦｃ領域内の、約１つ～約１０のアミノ酸置換を有し、好ましくは、約１つ～約５つのアミノ酸置換を有する。本明細書の変異Ｆｃ領域は、好ましくは、天然配列のＦｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域との、少なくとも約８０％の相同性を所有し、最も好ましくは、これらとの、少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、これらとの、少なくとも約９５％の相同性を所有する。

【0134】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体について記載する。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲ（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩサブクラス、ＦｃγＲＩＩサブクラス、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体であって、これらの受容体の、対立遺伝子変異体および代替的スプライス形態を含む受容体を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体は、主に、その細胞質ドメイン内で異なる、類似のアミノ酸配列を有する、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化型受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害型受容体」）を含む。活性化型受容体である、ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン内に、免疫受容活性化チロシンモチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含有する。阻害型受容体である、ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン内に、免疫受容阻害チロシンモチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含有する。本明細書では、将来において同定されるＦｃＲを含む、他のＦｃＲも、「ＦｃＲ」という用語により包摂される。ＦｃＲはまた、抗体の血清半減期も延長しうる。

【0135】

ｉｎ ｖｉｖｏにおける、ＦｃＲｎへの結合、およびヒトＦｃＲｎに高親和性で結合するポリペプチドの血清半減期については、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現させる、トランスジェニックマウス、もしくはトランスフェクトされたヒト細胞株、または変異Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類においてアッセイされうる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合を、改善するか、または低下させた、抗体の変異体について記載している。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、９（２）：６５９１～６６０４（２００１）もまた参照されたい。

【0136】

ペプチド配列、ポリペプチド配列、または抗体配列に関して、本明細書で使用される、「アミノ酸配列の同一性パーセント（％）」および「相同性」とは、保存的置換を、配列同一性の一部と考えずに、配列同一性パーセントの最大を達成するように、配列をアライメントし、必要な場合は、ギャップを導入した後で、特異的なペプチド配列内またはポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である、候補配列内のアミノ酸残基の百分率を指す。アミノ酸配列の同一性パーセントを決定することを目的とするアライメントは、当技術分野の技術の範囲内にある、多様な方式で、例えば、ＢＬＡＳＴソフトウェア、ＢＬＡＳＴ－２ソフトウェア、ＡＬＩＧＮソフトウェア、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなど、公開されているコンピュータソフトウェアを使用して達成されうる。当業者は、比較される配列の全長にわたり、最大アライメントを達成するのに必要とされる、当技術分野で公知である、任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するのに適切なパラメータを決定しうる。

【0137】

同じエピトープについて競合する抗体（例えば、中和抗体）の文脈で使用される場合の、「競合する」という用語は、被験抗体が、参照分子（例えば、リガンド、または参照抗体）の、共通の抗原（例えば、ＳＩＲＰＡ、またはこれらの断片）への、特異的な結合を防止または阻害する（例えば、これを低減する）アッセイにより決定される、抗体間の競合を意味する。多数の種類の競合的結合アッセイ、例えば、固体相の、直接的または間接的ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固体相の、直接的または間接的酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉら、１９８３、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、９：２４２～２５３を参照されたい）；固体相の、直接的ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄら、１９８６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３７：３６１４～３６１９を参照されたい）；固体相の、直接的標識化アッセイ、固体相の、直接的標識化サンドイッチアッセイ（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、１９８８、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；Ｉ－１２５標識を使用する、固体相の、直接的ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌら、１９８８、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２５：７～１５を参照されたい）；固体相の、直接的ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇら、１９９０、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１７６：５４６～５５２を参照されたい）；および直接的標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、１９９０、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３２：７７～８２）は、抗体が、別の抗体と競合するのかどうかを決定するのに使用されうる。典型的に、このようなアッセイは、これらの、標識化されていない被験抗体、または標識化された参照抗体を保有する、固体表面または細胞に結合した精製抗原の使用を伴う。競合的阻害は、被験抗体の存在下で、固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することにより測定される。通例、被験抗体は、過剰量で存在する。競合アッセイにより同定される抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体と、参照抗体が結合するエピトープに対して、立体障害が生じる程度に、十分に近位である、隣接するエピトープに結合する抗体とを含む。本明細書では、競合的結合を決定するための方法に関する、さらなる詳細が提示される。通例、競合抗体が、過剰量で存在する場合、参照抗体の、共通の抗原への特異的な結合を、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、および／またはほぼ１００％阻害する（例えば、これを低減する）。

【0138】

本明細書で使用された、ＳＩＲＰＡポリペプチドと、第２のポリペプチドとの「相互作用」は、限定せずに述べると、タンパク質間相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、およびイオン性結合を包摂する。本明細書で使用される抗体は、抗体が、２つのポリペプチドの間の相互作用を破壊するか、低減するか、または完全に消失させる場合に、２つのポリペプチドの間の「相互作用を阻害する」。本開示の抗体は、抗体が、２つのポリペプチドのうちの１つに結合する場合に、２つのポリペプチドの間の「相互作用を阻害する」。一部の実施形態では、相互作用は、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、および／またはほぼ１００％のうちのいずれか阻害されうる。

【0139】

「エピトープ」という用語は、抗体が結合することが可能な任意の決定基を含む。エピトープは、この抗原をターゲティングする抗体が結合する抗原の領域であり、抗原がポリペプチドである場合、抗体に直接接触する、特異的なアミノ酸を含む。エピトープは、ポリペプチド上に存在することがもっと多いが、一部の場合には、核酸など、他の種類の分子上にも存在しうる。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基など、化学的に活性の表面分子群を含むことが可能であり、特異的な三次元構造特性、および／または特異的な荷電特徴を有しうる。一般に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、ポリペプチドおよび／または高分子の複合混合物中で、標的抗原上のエピトープを、優先的に認識するであろう。

【0140】

「アゴニスト」抗体または「活性化」抗体とは、抗体が抗原に結合した後で、抗原の、１つまたは複数の活性または機能を誘導する（例えば、これを増大させる抗体である。

【0141】

「アンタゴニスト」抗体または「遮断」抗体または「阻害性」抗体とは、抗体が抗原に結合した後で、抗原の、１つまたは複数のリガンドへの結合を低減し、阻害し、かつ／もしくはこれを消失させる（例えば、これを低下させる）抗体、および／または抗体が抗原に結合した後で、抗原の、１つまたは複数の活性または機能を低減し、阻害し、かつ／もしくはこれを消失させる（例えば、これを低下させる）抗体である。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体、または遮断抗体、または阻害性抗体は、抗原の、１つもしくは複数のリガンドへの結合、および／または抗原の、１つもしくは複数の活性もしくは機能を、実質的に、または完全に阻害する。

【0142】

本開示の単離抗ＳＩＲＰＡ抗体などの「単離された」抗体とは、その産生環境の成分から、同定、分離、および／または回収された抗体（例えば、天然または組換えである）である。好ましくは、単離された抗体は、その産生環境に由来する、他の全ての夾雑成分との会合から遊離している。組換えトランスフェクト細胞から生じる夾雑成分など、その産生環境に由来する夾雑成分は、典型的に、抗体についての研究使用、診断使用、または治療使用に干渉する材料であり、酵素、ホルモン、および他の、タンパク質性または非タンパク質性の溶質を含みうる。好ましい実施形態では、抗体は、（１）例えば、ローリー法により決定される通り、９５重量％を超える抗体へと精製され、一部の実施形態では、９９重量％を超える抗体へと精製されるか；（２）スピニングカップシークエネーターの使用により、Ｎ末端または内部のアミノ酸配列のうちの、少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで精製されるか、または（３）クーマシーブルー染色、または、好ましくは、銀染色を使用する、非還元条件下または還元条件下におけるＳＤＳ－ＰＡＧＥにより、均質性まで精製されるであろう。抗体の天然環境の、少なくとも１つの成分が、存在しないので、単離された抗体は、組換えＴ細胞内の、ｉｎ ｓｉｔｕにおける抗体を含む。しかし、通常、単離されたポリペプチドまたは単離された抗体は、少なくとも１つの精製工程により調製されるであろう。

【0143】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体をコードする、「単離された」核酸分子とは、同定され、それが産生される環境内で、それが通常会合している、少なくとも１つの夾雑核酸分子から分離された核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、産生環境と関連する、全ての成分との会合から遊離している。本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸分子は、それが天然において見出される形態または状況以外の形態にある。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に、天然で存在する、本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする核酸から識別される。

【0144】

本明細書で使用される、「ベクター」という用語は、それが連結された、別の核酸を運ぶことが可能な核酸分子を指すように意図される。１つの種類のベクターは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされうる、環状二本鎖ＤＮＡを指す、「プラスミド」である。別の種類のベクターは、ファージベクターである。別の種類のベクターは、さらなるＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノムへとライゲーションされうる、ウイルスベクターである。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞内の、自律複製が可能である（例えば、細菌性の複製開始点を有する細菌ベクター、および哺乳動物のエピソームベクター）。他のベクター（例えば、哺乳動物非エピソームベクター）は、宿主細胞への導入時に、宿主細胞のゲノムへと組み込まれる場合があり、これにより、宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが作動的に連結された遺伝子の発現を方向付けることが可能である。本明細書では、このようなベクターは、「組換え発現ベクター」、または、単に、「発現ベクター」と称される。一般に、組換えＤＮＡ法において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。プラスミドは、ベクターの、最も一般に使用される形態であるので、本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」は、互換的に使用されうる。

【0145】

本明細書において互換的に使用される、「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さの、ヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは修飾塩基、および／またはそれらのアナログ、あるいはＤＮＡポリメラーゼもしくはＲＮＡポリメラーゼ、または合成反応により、ポリマーへと組み込まれうる、任意の基質でありうる。

【0146】

「宿主細胞」は、ポリヌクレオチドインサートの組込みのためのベクター（複数可）のレシピエントでありうるか、またはこれらのレシピエントであった、個別の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、元の親細胞と、天然であるか、偶発的であるか、または意図的な突然変異のために、完全に同一（形状またはゲノムＤＮＡの相補性において）ではない場合がある。宿主細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、本発明のポリヌクレオチド（複数可）をトランスフェクトされた細胞を含む。

【0147】

本明細書で使用される「担体」は、利用される投与量および濃度で、これへと曝露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤を含む。生理学的に許容される担体は、水性のｐＨ緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容される担体の例は、ホスフェート、シトレート、および他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む、他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤を含む。

【0148】

本明細書で使用される、「防止する」という用語は、個体における、特定の疾患、障害、または状態の、発生または再発に関する予防をもたらすことを含む。個体は、特定の疾患、障害、または状態にかかりやすい場合もあり、これに対して感受性の場合もあり、このような疾患、障害、または状態を発症する危険性がある場合もあるが、いまだ、疾患、障害、または状態を伴うと診断されていない。

【0149】

本明細書で使用された、特定の疾患、障害、または状態を発症する「危険性がある」個体は、検出可能な、疾患または疾患の症状を有する場合もあり、これを有さない場合もあり、本明細書で記載される処置法の前に、検出可能な、疾患または疾患の症状を提示している場合もあり、これを提示していない場合もある。「危険性がある」とは、個体が、当技術分野で公知の、特定の疾患、障害、または状態の発生と相関する、測定可能なパラメータである、１つまたは複数の危険性因子を有することを表す。これらの危険性因子のうちの１つまたは複数を有する個体は、特定の疾患、障害、または状態を発症する、高い確率であって、これらの危険性因子のうちの１つまたは複数を伴わない個体より高い確率を有する。

【0150】

本明細書で使用される、「処置」という用語は、臨床病理学の経過において、処置される個体の、自然の経過を変更するようにデザインされた、臨床的介入を指す。所望の処置効果は、特定の疾患、障害、または状態の進行速度を低下させること、これらの病理学的状態を、改善または緩和すること、およびこれらの寛解または予後の改善を含む。個体は、例えば、特定の疾患、障害、または状態と関連する、１つまたは複数の症状が、抑制されるか、または消失する場合、「処置」に成功している。

【0151】

「有効量」とは、所望の治療結果または予防結果を達成するのに必要な投与量で、これに必要な時間にわたり有効である、最小の量を指す。有効量は、１回の投与で施される場合もあり、複数回の投与で施される場合もある。本明細書における有効量は、個体の、病状、年齢、性別、および体重、ならびに処置が、個体において、所望の応答を誘発する能力などの因子に従い変動しうる。有効量はまた、処置の、任意の毒性または有害作用が、治療的に有益な効果により凌駕される量でもある。予防的使用では、有益な結果または所望の結果は、疾患の、生化学的、組織学的、および／または行動学的症状、疾患の発生時に存在する、疾患の合併症および中間的な病理学的表現型を含む、疾患の危険性を消失させるか、もしくは低減すること、疾患の重症度を軽減すること、または疾患の発生を遅延させることなどの結果を含む。治療的使用では、有益な結果または所望の結果は、疾患から生じる、１つまたは複数の症状を軽減すること、疾患を患う者の、生活の質を向上させること、疾患を処置するに要求される、他の医薬の用量を減少させること、ターゲティングを介するなど、別の医薬の効果を増強すること、疾患の進行を遅延させること、および／または生存を延長することなどの臨床結果を含む。薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量とは、予防的処置または治療的処置を、直接的に、または間接的に達するのに十分な量である。臨床的文脈で理解される通り、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物と併用して、達成される場合もあり、達成されない場合もある。したがって、「有効量」は、１つまたは複数の治療剤を投与する文脈でも検討される場合があり、１つまたは複数の、他の薬剤と併用して、所望結果が達成されうるか、または達成される場合、単一の薬剤は、有効量で施されることが検討されうる。

【0152】

処置、防止、または危険性の低減を目的とする場合の「個体」とは、哺乳動物として分類される、任意の動物であって、ヒト、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどの、馴致動物および家畜、ならびに動物園動物、競技動物、または愛玩動物を含む、任意の動物を指す。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。

【0153】

本明細書で使用される、別の化合物または組成物との「併用」投与は、同時的投与および／または異なる時点における投与を含む。併用投与はまた、異なる投与頻度または投与間隔において、同じ投与経路または異なる投与経路を使用する投与を含む、共製剤としての投与、または別個の組成物としての投与も包摂する。一部の実施形態では、併用投与とは、同じ治療レジメンの一部としての投与である。

【0154】

本明細書で使用される「約」という用語は、本分野の当業者にたやすく公知である、それぞれの値についての、通例の誤差範囲を指す。本明細書における、「約」の値またはパラメータに対する言及は、この値またはパラメータ自体へと方向付けられた実施形態を含む（かつ、これについて記載する）。

【0155】

本明細書および付属の特許請求の範囲で使用される、単数形の「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その」は、文脈により、そうでないことが明確に指し示されない限りにおいて、複数の指示対象を含む。例えば、ある「抗体」に対する言及は、モル量など、１つ～多くの抗体に対する言及であり、当業者に公知である、その同等物を含むなどである。

【0156】

本明細書で記載される、本開示の態様および実施形態は、態様および実施形態「を含む」、これら「からなる」、およびこれら「から本質的になる」ことを含むことが理解される。

【0157】

抗ＳＩＲＰＡ抗体
抗ＳＩＲＰＡ抗体結合性領域
一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、コンフォメーションエピトープに結合しうる。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、不連続のＳＩＲＰＡエピトープに結合しうる。一部の実施形態では、不連続のＳＩＲＰＡエピトープは、２つもしくはこれを超えるペプチド、３つもしくはこれを超えるペプチド、４つもしくはこれを超えるペプチド、５つもしくはこれを超えるペプチド、６つもしくはこれを超えるペプチド、７つもしくはこれを超えるペプチド、８つもしくはこれを超えるペプチド、９つもしくはこれを超えるペプチド、または１０もしくはこれを超えるペプチドを含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、１つまたは複数のペプチドを含む、ＳＩＲＰＡエピトープに結合しうる。本明細書で開示される通り、ＳＩＲＰＡエピトープは、配列番号１のアミノ酸配列のうちの、５つもしくはこれを超えるか、６つもしくはこれを超えるか、７つもしくはこれを超えるか、８つもしくはこれを超えるか、９つもしくはこれを超えるか、１０もしくはこれを超えるか、１１もしくはこれを超えるか、１２もしくはこれを超えるか、１３もしくはこれを超えるか、１４もしくはこれを超えるか、１５もしくはこれを超えるか、１６もしくはこれを超えるか、１７もしくはこれを超えるか、１８もしくはこれを超えるか、１９もしくはこれを超えるか、または２０もしくはこれを超えるアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸配列に対応する、哺乳動物ＳＩＲＰＡタンパク質上の、５つもしくはこれを超えるか、６つもしくはこれを超えるか、７つもしくはこれを超えるか、８つもしくはこれを超えるか、９つもしくはこれを超えるか、１０もしくはこれを超えるか、１１もしくはこれを超えるか、１２もしくはこれを超えるか、１３もしくはこれを超えるか、１４もしくはこれを超えるか、１５もしくはこれを超えるか、１６もしくはこれを超えるか、１７もしくはこれを超えるか、１８もしくはこれを超えるか、１９もしくはこれを超えるか、または２０もしくはこれを超えるアミノ酸残基を含む、１つまたは複数のペプチドを含みうる。

【0158】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、または配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体が結合するＳＩＲＰＡエピトープと同じであるか、またはこれらと重複する、ヒトＳＩＲＰＡのエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、または配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体が結合する本質的に同じＳＩＲＰＡエピトープに結合する。

【0159】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、または配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体、または配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＳＩＲＰＡ抗体と、ＳＩＲＰＡへの結合について競合する。

【0160】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、表４、５、７、８、および１０に列挙された抗体のうちのいずれかから選択される、少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体の、ＳＩＲＰＡへの結合を、抗ＳＩＲＰＡ抗体の非存在下における、ＳＩＲＰＡへの結合と比較して、約５０％～１００％の範囲の量だけ低減する場合、ＳＩＲＰＡへの結合について、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体と競合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体の、ＳＩＲＰＡへの結合を、抗ＳＩＲＰＡ抗体の非存在下における、ＳＩＲＰＡへの結合と比較して、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％低減する場合、ＳＩＲＰＡへの結合について、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体と競合する。一部の実施形態では、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体の、ＳＩＲＰＡへの結合を、１００％低減する、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体の、ＳＩＲＰＡへの結合を、本質的に、完全に遮断することを指し示す。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体と、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体とは、抗ＳＩＲＰＡ抗体の、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体に対する、１０：１の比、９：１の比、８：１の比、７：１の比、６：１の比、５：１の比、４：１の比、３：１の比、２：１の比、１：１の比、０．７５：１の比、０．５：１の比、０．２５：１の比、０．１：１の比、０．０７５：１の比、０．０５０：１の比、０．０２５：１の比、０．０１：１の比、０．００７５：１の比、０．００５０：１の比、０．００２５：１の比、０．００１：１の比、０．０００７５：１の比、０．０００５０：１の比、０．０００２５：１の比、０．０００１：１の比、１：１０の比、１：９の比、１：８の比、１：７の比、１：６の比、１：５の比、１：４の比、１：３の比、１：２の比、１：０．７５の比、１：０．５の比、１：０．２５の比、１：０．１の比、１：０．０７５の比、１：０．０５０の比、１：０．０２５の比、１：０．０１の比、１：０．００７５の比、１：０．００５０の比、１：０．００２５の比、１：０．００１の比、１：０．０００７５の比、１：０．０００５０の比、１：０．０００２５の比、または１：０．０００１の比に対応する量で存在する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体の量と比較して、約１．５倍～１００倍、または１００倍を超える範囲である量、過剰に存在する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体の量と比較して、約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、または１００倍の過剰である量で存在する。

【0161】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、表４、５、７、８、および１０に列挙された抗体のうちのいずれかから選択される、少なくとも１つの抗体が結合する、ＳＩＲＰＡエピトープと同じであるか、またはこれらと重複する、ヒトＳＩＲＰＡのエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５から選択される少なくとも１つの抗体が結合する、ＳＩＲＰＡエピトープと同じであるか、またはこれらと重複する、ヒトＳＩＲＰＡのエピトープに結合する。

【0162】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、表４、５、７、８、および１０に列挙された抗体のうちのいずれかから選択される、少なくとも１つの抗体が結合する、本質的に同じＳＩＲＰＡエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５から選択される、少なくとも１つの抗体が結合する、本質的に同じＳＩＲＰＡエピトープに結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための、詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）、「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、６６巻（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ）に提示されている。

【0163】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡへの結合について、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体と競合する。

【0164】

ビアコア解析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーなど、当技術分野で公知である、任意の、適切な競合アッセイまたはＳＩＲＰＡ結合アッセイは、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡへの結合について、ｍ３Ｆ９、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ１（１４．７０．１）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ２（１４．７０．２）、ｈ３Ｆ９ Ｈ１／Ｌ３、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ１（１４．７０．４）、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ２、ｈ３Ｆ９ Ｈ２／Ｌ３、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、３Ｆ９－２５、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数の抗体と競合するのかどうかを決定するのに利用されうる。例示的競合アッセイでは、固定化されているＳＩＲＰＡ、または細胞表面上でＳＩＲＰＡを発現させる細胞が、ＳＩＲＰＡに結合する第１の標識化抗体（例えば、ヒト抗体または非ヒト霊長類抗体）、およびＳＩＲＰＡへの結合について、第１の抗体と競合する、その能力について調べられる、第２の非標識化抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在しうる。コントロールとして、固定化されているＳＩＲＰＡ、またはＳＩＲＰＡを発現させる細胞が、第１の標識化抗体は含むが、第２の非標識化抗体は含まない溶液中でインキュベートされる。第１の抗体の、ＳＩＲＰＡへの結合を可能とする条件下における、インキュベーションの後で、過剰量の非結合抗体が除去され、固定化されているＳＩＲＰＡ、またはＳＩＲＰＡを発現させる細胞と関連する標識の量が測定される。固定化されているＳＩＲＰＡ、またはＳＩＲＰＡを発現させる細胞と関連する標識の量が、被験試料中で、コントロール試料中と比べて、実質的に低減される場合、これは、第２の抗体が、ＳＩＲＰＡへの結合について、第１の抗体と競合することを指し示す。ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、１４章（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）を参照されたい。

【0165】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；ならびに（ｆ）配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。

【0166】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；ならびに（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；および（ｆ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。

【0167】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；ならびに（ｃ）配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶ_Ｈ ＨＶＲ配列を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。

【0168】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；ならびに（ｃ）配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶ_Ｌ ＨＶＲ配列を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。

【0169】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、Ｖ_Ｈドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶ_Ｌ ＨＶＲ配列を含む、Ｖ_Ｌドメインとを含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。

【0170】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、Ｖ_Ｈドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されたアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、Ｖ_Ｌドメインとを含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。

【0171】

別の態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号３３、３４、および３５から選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号３３、３４、および３５から選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶ_Ｈ配列は、参照配列と比べた、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、この配列を含む抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号３３、配列番号３４、または配列番号３５において、合計１～１０アミノ酸が、置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号３３、配列番号３４、または配列番号３５において、合計１～５アミノ酸が、置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の領域内（すなわち、ＦＲ内）で生じる。任意選択で、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、この配列の翻訳後修飾を含む、配列番号３３、配列番号３４、または配列番号３５のＶ_Ｈ配列を含む。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。

【0172】

別の態様では、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、および４４から選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提供される。ある特定の実施形態では、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、および４４から選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶ_Ｌ配列は、参照配列と比べた、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、この配列を含む抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡに結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、または配列番号４４において、合計１～１０アミノ酸が、置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、または配列番号４４において、合計１～５アミノ酸が、置換され、挿入され、かつ／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の領域内（すなわち、ＦＲ内）で生じる。任意選択で、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、この配列の翻訳後修飾を含む、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、または配列番号４４のＶ_Ｌ配列を含む。特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。

【0173】

一部の実施形態では、上記で提示された実施形態のうちのいずれかにおける通りのＶ_Ｈと、上記で提示された実施形態のうちのいずれかにおける通りのＶ_Ｌとを含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提供される。一部の実施形態では、本明細書では、上記で提示された実施形態のうちのいずれかにおける通りのＶ_Ｈと、上記で提示された実施形態のうちのいずれかにおける通りのＶ_Ｌとを含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。一実施形態では、抗体は、これらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号３３、３４、または３５、および配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、または４４における、Ｖ_Ｈ配列およびＶ_Ｌ配列を含む。

【0174】

一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含み、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌが、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ならびに配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌからなる群から選択される、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。

【0175】

さらに、本明細書では、（ａ）（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、Ｖ_Ｈドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されたアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、Ｖ_Ｌドメインとを含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体の結合を競合的に阻害し、かつ／または結合について、これらと競合する、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。一部の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号３３、３４、または３５、および配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、または４４における、ＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。

【0176】

本明細書では、（ａ）（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２、２３、および２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインとを含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体が結合するエピトープと同じであるか、またはこれらと重複する、ヒトＳＩＲＰＡのエピトープに結合する、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。一部の実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号３３、３４、または３５、および配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、または４４における、Ｖ_Ｈ配列およびＶ_Ｌ配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳＩＲＰＡのエピトープは、抗ＳＩＲＰＡ抗体が結合するエピトープと同じエピトープである。

【0177】

一部の実施形態では、上記の実施形態のうちのいずれかに従う抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト化抗体および／またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ断片、ダイアボディー断片、またはＦ（ａｂ’）２断片である。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、実質的に、全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または本明細書で規定される、他の抗体クラスもしくは抗体アイソタイプである。

【0178】

一部の実施形態では、上記の実施形態のうちのいずれかに従う抗ＳＩＲＰＡ抗体は、本明細書で記載される特色のうちのいずれかを、単独で組み込む場合もあり、組合せで組み込む場合もある。

【0179】

本明細書では、抗ＳＩＲＰＡ抗体が提示される。提示される抗体は、例えば、ＳＩＲＰＡ媒介性障害の診断または処置に有用である。

【0180】

本開示は、部分的に、例えば、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを低下させることが可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させることが可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体、ＳＩＲＰＡを分解することが可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体、ＣＤ３２Ａ／Ｂの細胞レベルを低下させることが可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体、食作用を増大させるか、もしくは増強することが可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体、マクロファージによる、腫瘍細胞に対する食作用を増大させるか、もしくは増強することが可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体、抗がん治療の抗腫瘍活性を増大させるか、もしくは増強することが可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体、Ｔ細胞の増殖を増大させるか、もしくは増強することが可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体、マクロファージからの、炎症促進性サイトカインの放出を増大させるか、もしくは増強することが可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体、および／または動態を改善／増強した、ヒトＳＩＲＰＡへの結合が可能な抗ＳＩＲＰＡ抗体；このような抗ＳＩＲＰＡ抗体を作り、使用する方法；このような抗ＳＩＲＰＡ抗体を含有する薬学的組成物；このような抗ＳＩＲＰＡ抗体をコードする核酸；ならびにこのような抗ＳＩＲＰＡ抗体をコードする核酸を含有する宿主細胞を含む、１つまたは複数の機能的特性の改善および／または増強（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、抗ＳＩＲＰＡ抗体と比べた）を呈する、抗ＳＩＲＰＡ抗体に関する。

【0181】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの分解、下方調節、切断、受容体の脱感作、および／またはリソソームによるターゲティングを誘導することにより、細胞によるＳＩＲＰＡの発現（例えば、細胞表面発現）を低減する抗体の能力に、少なくとも部分的に起因する、１つまたは複数の活性を有しうる。一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを低下させる、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、以下の特性：（１）１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性を阻害または低減すること；（２）ＳＩＲＰＡ発現細胞内の、ＳＩＲＰＡの発現（ｍＲＮＡレベルおよび／またはタンパク質レベルなどにおける）を低減する能力；（３）ＳＩＲＰＡタンパク質と相互作用するか、これに結合するか、またはこれを認識する能力；（４）ＳＩＲＰＡタンパク質と特異的に相互作用するか、またはこれに特異的に結合する能力；および（５）本明細書で記載または想定される、疾患または障害の、任意の側面を処置、改善する、または防止する能力のうちの１つまたは複数を呈する抗体である。

【0182】

一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、以下の特性：ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する抗ＳＩＲＰＡ抗体のＫＤよりも低い、ヒトＳＩＲＰＡに対する解離定数（ＫＤ）を有すること；ｂ）ヒト単球およびヒトマクロファージなどのヒト細胞に結合すること；ｃ）ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させる（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒトマクロファージ細胞上のＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する抗ＳＩＲＰＡ抗体のＥＣ５０よりも低い、５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低下させる）こと；ｄ）約０．６ｎＭ～約０．７ｎＭの範囲でありうる、ヒトＳＩＲＰＡに対する解離定数（ＫＤ）を有すること；および／またはｅ）ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させる（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒトマクロファージ上のＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、約０．４ｎＭ～約０．５ｎＭの範囲でありうる５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低下させる）ことのうちの１つまたは複数を呈する。本明細書で開示される通り、５０％効果濃度（ＥＣ５０）とは、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体が、細胞上もしくは細胞内におけるＳＩＲＰＡの細胞レベルを、非処置細胞のＳＩＲＰＡの細胞レベルの半分へと低減する場合の濃度、または抗体が、細胞上のＳＩＲＰＡへの最大半量の結合を達成する場合の濃度を指す。

【0183】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、約０．４０ｎＭ～約０．５ｎＭの、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対する５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、抗体を提示する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、約５ｎＭ、約４ｎＭ、約３ｎＭ、約２ｎＭ、約１ｎＭ、約０．９ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．２ｎＭ、または約０．１ｎＭの、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対する５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、抗体を提示する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、約５ｎＭ～１ｎＭ、約１ｎＭ～０．９ｎＭ、約１ｎＭ～０．８ｎＭ、約１ｎＭ～０．７ｎＭ、約１ｎＭ～０．６ｎＭ、約１ｎＭ～０．５ｎＭ、約１ｎＭ～０．４ｎＭ、約１ｎＭ～０．３ｎＭ、約１ｎＭ～０．２ｎＭ、約１ｎＭ～０．１ｎＭ、約０．９ｎＭ～０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ～０．７ｎＭ、約０．９ｎＭ～０．６ｎＭ、約０．９ｎＭ～０．５ｎＭ、約０．９ｎＭ～０．４ｎＭ、約０．９ｎＭ～０．３ｎＭ、約０．９ｎＭ～０．２ｎＭ、約０．９ｎＭ～０．１ｎＭ、約０．８ｎＭ～０．６ｎＭ、約０．８ｎＭ～０．５ｎＭ、約０．８ｎＭ～０．４ｎＭ、約０．８ｎＭ～０．３ｎＭ、約０．８ｎＭ～０．２ｎＭ、約０．８ｎＭ～０．１ｎＭ、約０．７ｎＭ～０．５ｎＭ、約０．７ｎＭ～０．４ｎＭ、約０．７ｎＭ～０．３ｎＭ、約０．７ｎＭ～０．２ｎＭ、約０．７ｎＭ～０．１ｎＭ、約０．６ｎＭ～０．４ｎＭ、約０．６ｎＭ～０．３ｎＭ、約０．６ｎＭ～０．２ｎＭ、約０．６ｎＭ～０．１ｎＭ、約０．５ｎＭ～０．３ｎＭ、約０．５ｎＭ～０．２ｎＭ、約０．５ｎＭ～０．１ｎＭ、約０．４ｎＭ～０．２ｎＭ、約０．４ｎＭ～０．１ｎＭ、または約０．３ｎＭ～０．１ｎＭの範囲の、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対する５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、抗体を提示する。

【0184】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対して約０．０９３ｎＭ、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２に対して約０．０８０ｎＭ、および／またはカニクイザルＳＩＲＰＡに対して約０．８７９ｎＭの５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、抗体を提示する。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、約２ｎＭ～０．０５ｎＭ、約１ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．９ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．８ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．７ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．６ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．５ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．４ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．３ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．２０ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．１５ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．１０ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．０９ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．０８ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．０７ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．０６ｎＭ～０．０５ｎＭ、約０．２０ｎＭ～０．０６ｎＭ、約０．１５ｎＭ～０．０６ｎＭ、約０．１０ｎＭ～０．０６ｎＭ、約０．０９ｎＭ～０．０６ｎＭ、約０．０８ｎＭ～約０．０６ｎＭ、約０．０７ｎＭ～０．０６ｎＭ、約０．２０ｎＭ～０．０７ｎＭ、約０．１５ｎＭ～０．０７ｎＭ、約０．１０ｎＭ～約０．０７ｎＭ、約０．０９ｎＭ～０．０７ｎＭ、約０．０８ｎＭ～０．７ｎＭ、約０．２０ｎＭ～０．０８ｎＭ、約０．１５ｎＭ～０．０８ｎＭ、約０．１０ｎＭ～０．０８ｎＭ、約０．０９ｎＭ～０．０８ｎＭ、約０．２０ｎＭ～０．０９ｎＭ、約０．１５ｎＭ～０．０９ｎＭ、または約０．１０ｎＭ～０．９ｎＭの範囲の、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１またはヒトＳＩＲＰＡ ｖ２に対する５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、抗体を提示する。

【0185】

本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰＡに結合する単離された抗体であって、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、フローサイトメトリーにより測定される、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１に対して約０．１０７ｎＭ、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２に対して約０．０８２ｎＭ、および／またはカニクイザルＳＩＲＰＡに対して約０．１０７ｎＭの５０％効果濃度（ＥＣ５０）で低減する、抗体を提示する。

【0186】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、細胞表面における、ＳＩＲＰＡの発現を、コントロールの抗ＳＩＲＰＡ抗体（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、コントロールの抗ＳＩＲＰＡ抗体）と比較して、より強力に（例えば、低値のＥＣ５０で）低減するので有利である。さらに、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡに対する、コントロールの抗ＳＩＲＰＡ抗体（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、コントロールの抗ＳＩＲＰＡ抗体と比較した、高親和性（例えば、約１００倍以下の高親和性）（例えば、表面プラズモン共鳴により測定される、低値のＫＤ値）を有するので有利である。

【0187】

本開示の、ある特定の態様は、少なくとも部分的に、１つまたは複数の機能的特性の改善および／または増強（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、抗ＳＩＲＰＡ抗体と比べて）であって、細胞上の、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させる能力の改善／増強を含み、限定せずに述べると、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、および／またはミクログリアの細胞増殖の低減；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、および／またはＭ２マクロファージにより誘導される、Ｔ細胞の増殖の低減；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、および／またはＭ２ミクログリアの生存の低下；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、および／またはＭ２ミクログリアの増殖の低下；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、および／またはＭ２ミクログリアの遊走の阻害；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、および／またはＭ２ミクログリアの、１つまたは複数の機能の低下；単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、および／またはミクログリアの増殖の低減；単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、および／またはミクログリアの、全体的な機能性の低減；膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎細胞がん、腎盂がん、白血病、肺がん、メラノーマ、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、線維肉腫、および甲状腺がんから選択される、異なる種類のがんに対する、有益な免疫応答の阻害；認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト－ヤコブ病、正常圧水頭症、筋委縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパシー、那須ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、特発性振戦、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体認知症、多系統委縮症、シャイ－ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性（ｇｒａｎｕｌｏｍａｒｔｏｕｓ）障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性、緑内障、網膜色素変性、網膜変質、および多発性硬化症から選択される、異なる種類の神経障害に対する、有益な免疫応答の阻害；腫瘍細胞上の、ＳＩＲＰＡリガンドへの結合；樹状細胞上の、ＳＩＲＰＡリガンドへの結合、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞、好中球、および／またはマクロファージ；ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数による腫瘍細胞殺滅の阻害；ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の、抗腫瘍細胞増殖活性の阻害；ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の、抗腫瘍細胞転移活性の阻害；ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数上で発現された、ＣＤ８６など、１つまたは複数の炎症性受容体の発現のモジュレート；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制性好中球、および調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の、腫瘍への浸潤の増強；末梢血中、または他のリンパ系器官内の、腫瘍内の、腫瘍促進性骨髄／顆粒球性免疫抑制細胞の数の増大；骨髄由来抑制細胞の、腫瘍促進性活性の増強；腫瘍殺滅可能性を伴う、腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性化の低下；腫瘍殺滅可能性を伴う、腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤の低下；腫瘍増殖速度の増大；腫瘍再発速度の増大；抗腫瘍Ｔ細胞応答をモジュレートする、１つまたは複数の免疫療法であり、任意選択で、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ３９、ＣＤ７０、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－９、Ｓｉｇｌｅｃ－１１、ＳｉｒｐＡ、ＣＤ４４７、ＣＳＦ－１受容体およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数のタンパク質をターゲティングする免疫療法である、１つまたは複数の免疫療法、または１つもしくは複数の化学療法薬剤および／もしくはがんワクチンの有効性の低下を含む、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性の、低減、中和、防止、または抑制を結果としてもたらす、改善および／または増強を呈する、抗ＳＩＲＰＡ抗体の同定に基づく。

【0188】

一部の実施形態では、本明細書で記載される、抗ＳＩＲＰＡ抗体によるがんの処置は、（ｉ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋ Ｔ細胞の数を増大させることが可能であり；（ｉｉ）任意選択で、腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意選択で、血液中に存在する、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞内の、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを低下させることが可能であり；（ｉｉｉ）任意選択で、腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意選択で、血液中に存在する、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を低減することが可能であり；（ｉｖ）任意選択で、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である、１つまたは複数の細胞内の、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ７、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３、および／またはＣＤ２０６のレベルを低減することが可能であり；（ｖ）固形腫瘍の、腫瘍増殖速度を低下させることが可能であり；（ｖｉ）腫瘍体積を低減することが可能であり；（ｖｉｉ）１つまたは複数のＰＤ－１阻害剤の有効性を増大させることが可能であり；（ｖｉｉｉ）任意選択で、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数をターゲティングする、１つまたは複数のチェックポイント阻害剤療法および／または免疫調節療法の有効性を増大させることが可能であり；（ｉｘ）任意選択で、化学療法剤のうちの１つまたは複数が、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標））、エピルビシン（エレンス（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標））、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、およびこれらの任意の組合せである、１つまたは複数の化学療法剤の有効性を増大させることが可能であり；（ｘ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下で、Ｔ細胞の増殖を増大させることが可能であり；（ｘｉ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の、分化、生存、および／または１つもしくは複数の機能を阻害することが可能であり；（ｘｉｉ）化学物質または放射性毒素にコンジュゲートさせると、固形腫瘍内および血管内のＣＤ３３発現免疫抑制非腫瘍形成性骨髄細胞および／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞を死滅させうる。

【0189】

一部の実施形態では、本開示の骨髄細胞は、限定せずに述べると、ＣＤ４５＋ ＣＤ１４＋骨髄細胞、ＣＤ１４＋骨髄細胞、および骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を含む。一部の実施形態では、本開示の骨髄細胞は、非腫瘍形成性骨髄細胞である。免疫抑制細胞はまた、場合によって、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）とも称される。ヒトでは、ＭＤＳＣは、以下のマーカーの組合せ：（１）ＣＤ１４＋ ＨＬＡ－ＤＲｌｏｗ／－、（２）ＣＤ１４＋ ＩＬ４Ｒα＋、（３）ＣＤ１４＋ ＨＬＡ－ＤＲ－ ＩＬ４Ｒα＋、（４）ＣＤ３４＋ ＣＤ１４＋ ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ３３＋、（５）ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１４＋ ＣＤ３３＋、（６）ＣＤ３３＋ ＨＬＡ－ＤＲ－、（７）Ｌｉｎ－ ＨＬＡ－ＤＲ－、（８）Ｌｉｎ－ ＨＬＡ－ＤＲ－ ＣＤ３３＋、（９）Ｌｉｎ－ ＨＬＡ－ＤＲ－ ＣＤ３３＋ ＣＤ１１ｂ＋、（１０）Ｌｉｎ－ ＣＤ３３＋ ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１５＋、（１１）Ｌｉｎ－ ＨＬＡ－ＤＲ－ ＣＤ３３＋ ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１４－ ＣＤ１５＋、（１２）ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１４－ ＣＤ３３＋、（１３）ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１４－ ＨＬＡ－ＤＲ－ ＣＤ３３＋ ＣＤ１５＋、（１４）ＣＤ３３＋ ＨＬＡ－ＤＲ－ ＣＤ１５＋、（１５）ＣＤ１５＋ ＩＬ４Ｒα＋、（１６）ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１５＋ ＣＤ６６ｂ＋、（１７）ＣＤ１５＋ ＦＳＣｌｏｗ ＳＳＣｈｉｇｈ、（１８）ＣＤ１５ｈｉｇｈ ＣＤ３３＋、（１９）ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１４－ ＣＤ１５＋、（２０）ＣＤ６６ｂ＋ ＳＳＣｈｉｇｈ、および（２１）ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１５＋（また、Ｓｏｌｉｔｏ Ｓら、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ＮＹ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２０１４も参照されたい）のうちの１つにより規定されうる。マウスでは、ＭＤＳＣは、表面マーカーの発現である、ＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｇｒ１＋、および／またはＩｌ４Ｒａ＋により規定されうる。さらなる、例示的な、免疫抑制性単球系統は、ＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｇｒ１ｌｏｗ；およびＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｃ＋である。

【0190】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの天然リガンドまたは結合パートナーだけの存在下で、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させるか、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルを低下させるか、ＳＩＲＰＡの全細胞レベルを低下させるか、またはこれらの任意の組合せである。

【0191】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、例えば、ＳＩＲＰＡのリガンドまたは結合パートナーである、ＣＤ４７、サーファクタントプロテインＡ、および／またはサーファクタントプロテインＤを含む、ＳＩＲＰＡのリガンドまたは結合パートナーのＳＩＲＰＡ媒介活性を、防止、低減、または阻害する。

【0192】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、本明細書ではまた、「多型」変異体とも称される、ヒト対立遺伝子変異体であって、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１およびヒトＳＩＲＰＡ ｖ２を含むヒト対立遺伝子変異体を含む、ヒトＳＩＲＰＡに選択的に結合し、ヒトＳＩＲＰβ３に結合し、カニクイザルＳＩＲＰＡに結合し、マーモセットＳＩＲＰＡに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マウス／マウスＳＩＲＰＡに結合せず、ＳＩＲＰＢ ｖ１（ＳＩＲＰβ１）に結合せず、ウサギＳＩＲＰＡに結合せず、ラットＳＩＲＰＡに結合しない。

【0193】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡに選択的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡおよびカニクイザルＳＩＲＰＡに選択的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２、およびカニクイザルＳＩＲＰＡに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２、およびカニクイザルＳＩＲＰＡに結合するが、マウスＳＩＲＰＡに結合しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２、およびカニクイザルＳＩＲＰＡに結合するが、ＳＩＲＰβ１に結合しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２、およびカニクイザルＳＩＲＰＡに結合するが、マウスＳＩＲＰＡに結合せず、ヒトＳＩＲＰβ１に結合しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ２、カニクイザルＳＩＲＰＡ、およびヒトＳＩＲＰＡβ３に結合するが、マウスＳＩＲＰＡに結合せず、ヒトＳＩＲＰβ１に結合しない。上記の実施形態についての、任意の組合せでは、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡとＣＤ４７との結合または相互作用を遮断しない。

【0194】

本開示の、ある特定の態様は、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを下方調節する、すなわち、低下させる、抗ＳＩＲＰＡ抗体に関する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡと、１つまたは複数のＳＩＲＰＡリガンド、例えば、ＣＤ４７との相互作用（例えば、結合）を阻害、遮断、または低減せずに、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを低下させる。

【0195】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの分解、下方調節、切断、受容体の脱感作、および／またはリソソームによるターゲティングを誘導することにより、ＳＩＲＰＡの細胞レベル（例えば、細胞表面発現）を低減する抗体の能力に、少なくとも部分的に起因する、１つまたは複数の活性を有しうる。

【0196】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、細胞内のＳＩＲＰＡの発現を下方調節する。一部の実施形態では、細胞内のＳＩＲＰＡの発現の下方調節は、ＳＩＲＰＡ細胞表面発現の低減である。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、単球（例えば、ヒト単球）内のＳＩＲＰＡの発現を下方調節する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マクロファージ（例えば、ヒトマクロファージ）内のＳＩＲＰＡの発現を下方調節する。一部の実施形態では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マクロファージの細胞表面における、ＳＩＲＰＡの発現を、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置されていないマクロファージ内のＳＩＲＰＡ細胞表面発現のレベルと比較して、７０％を超えて、７５％を超えて、８０％を超えて、８５％を超えて、または９５％を超えて下方調節する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マクロファージの細胞表面における、ＳＩＲＰＡの発現を、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置されていないマクロファージ内のＳＩＲＰＡ細胞表面発現のレベルと比較して、約７０～９０％、約７０～８５％、約７０～８０％であるが、約７０～７５％、約７５～９０％、約７５～８５％、約７５～８０％、約８０～９０％、約８０～８５％、または約８５～９５％下方調節する。一部の実施形態では、マクロファージは、ヒトＭ１マクロファージおよびヒトＭ２マクロファージを含むがこれらに限定されない、ヒトマクロファージである。

【0197】

ＳＩＲＰＡの細胞レベルは、限定せずに述べると、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベル、ＳＩＲＰＡの細胞内レベル、および全ＳＩＲＰＡレベルを指す場合がある。一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルの低下は、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルの低下を含む。本明細書で使用される、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、それが、例えば、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを測定するのに、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）などの、フローサイトメトリーを利用する、本明細書で記載されるか、または当技術分野で公知である、任意の、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、細胞ベースのアッセイ、または適切なｉｎ ｖｉｖｏモデルにより測定される、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルの、２５％またはこれを超える低下を誘導する場合、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させる。一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルの低下は、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルの低下を含む。本明細書で使用される、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、それが、本明細書で記載されるか、または当技術分野で公知である、任意の、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、細胞ベースのアッセイ、または適切なｉｎ ｖｉｖｏモデル、例えば、免疫染色、ウエスタンブロット解析、共免疫沈降法、およびフロー（ｃｅｌｌ）サイトメトリーにより測定される、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルの、２５％またはこれを超える低下を誘導する場合、Ｓｉｇｌｅｃ－９の細胞内レベルを低下させる。一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルの低下は、全ＳＩＲＰＡレベルの低下を含む。本明細書で使用される、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、それが、本明細書で記載されるか、または当技術分野で公知である、任意の、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、細胞ベースのアッセイ、または適切なｉｎ ｖｉｖｏモデル、例えば、免疫染色、ウエスタンブロット解析、共免疫沈降法、およびフロー（ｃｅｌｌ）サイトメトリーにより測定される、全ＳＩＲＰＡレベルの、２５％またはこれを超える低下を誘導する場合、全ＳＩＲＰＡレベルを低下させる。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの分解、ＳＩＲＰＡの切断、ＳＩＲＰＡの内部移行、ＳＩＲＰＡの放出、ＳＩＲＰＡ発現の下方調節、またはこれらの任意の組合せを誘導する。一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルは、ＳＩＲＰＡ細胞アッセイを利用して、初代細胞（例えば、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、およびマクロファージ）上、または細胞株上で測定される。

【0198】

一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の下方調節は、３７℃で、４時間にわたる、ヒトマクロファージの、抗体への曝露の後で、２００ｎＭもしくはこれ未満、典型的に、１００ｎＭまたはこれ未満のＩＣ_５０（細胞表面上で発現されるＳＩＲＰＡのうちの５０％が、下方調節される）を有する。一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡは、本発明の抗体への曝露から、少なくとも２４時間にわたり、下方調節を維持する。細胞は、任意の技術、例えば、フローサイトメトリーを使用して、ＳＩＲＰＡの表面発現について解析されうる。

【0199】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを、抗ＳＩＲＰＡ抗体の非存在下におけるＳＩＲＰＡの細胞レベルと比較して、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはこれを超えて低下させる。

【0200】

先行段落にまとめられた下方調節活性のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、細胞表面における、ＳＩＲＰＡのクラスター化を阻害する。

【0201】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡを下方調節するが、ＳＩＲＰＡリガンド、例えば、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を遮断、阻害、または低減しない。本発明の文脈では、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を遮断しない、ＳＩＲＰＡに対する抗体とは、抗体が、ＣＤ４７およびＳＩＲＰＡを発現させる細胞と共にインキュベートされる場合に、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合の、顕著な低下を結果としてもたらさない抗体を指す。ＣＤ４７の、ＳＩＲＰＡへの結合の文脈における「顕著な低下」とは、ＳＩＲＰＡに結合しない、アイソタイプとマッチさせたコントロール抗体の存在下における、ＣＤ４７の、ＳＩＲＰＡへの結合と比較して、３０％またはこれ未満、典型的に、少なくとも２５％、少なくとも２０％、少なくとも１５％、または少なくとも１０％またはこれ未満の、結合の低下を指す。遮断活性を評価するための、例示的なアッセイは、本明細書の例で明示される。例えば、ヒトＳＩＲＰＡを発現させる細胞、例えば、ヒトマクロファージ、またはヒトＳＩＲＰＡを組換え発現させるように修飾されたＣＨＯ細胞などの細胞を、９６ウェルプレート内に、ウェル１つ当たりの細胞１０^５個で播種し、洗浄し、１．０μｇ／ｍｌのモノクローナル抗体またはアイソタイプコントロールを含有する、蛍光活性化細胞分取のための、１００μｌのバッファー中でインキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、可溶型ヒトＣＤ４７と共に、氷上で３０分間にわたりインキュベートする。次いで、細胞を、表面結合型ＣＤ４７について解析する。

【0202】

一部の実施形態では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、細胞内の、ＣＤ３２Ａ／Ｂ（すなわち、ＦｃγＲＩＩＡ／ＦｃγＲＩＩＢ）の発現を下方調節する。一部の実施形態では、細胞内の、ＣＤ３２Ａ／Ｂ（すなわち、ＦｃγＲＩＩＡ／ＦｃγＲＩＩＢ）の発現の下方調節は、ＣＤ３２Ａ／Ｂ（すなわち、ＦｃγＲＩＩＡ／ＦｃγＲＩＩＢ）の、細胞表面発現の低減である。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マクロファージ（例えば、ヒトマクロファージ）内の、ＣＤ３２Ａ／Ｂの発現を下方調節する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰ抗体は、マクロファージ（例えば、ヒトマクロファージ）内の、ＣＤ３２Ａ（すなわち、ＦｃγＲＩＩＡ）の発現を下方調節する。一部の実施形態では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マクロファージ（例えば、ヒトマクロファージ）内の、ＣＤ３２Ｂ（すなわち、ＦｃγＲＩＩＢ）の発現を下方調節する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトマクロファージ内の、ＣＤ３２Ａ（すなわち、ＦｃγＲＩＩＡ）の、細胞表面発現を、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置されていない、ヒトマクロファージ内の、ＣＤ３２Ａの、細胞表面発現のレベルと比較して、約７５％、約８０％、または約８５％下方調節する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトマクロファージ内の、ＣＤ３２Ａの、細胞表面発現を、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置されていない、ヒトマクロファージ内の、ＣＤ３２Ａの、細胞表面発現のレベルと比較して、約７０～８５％下方調節する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトマクロファージ内の、ＣＤ３２Ｂ（すなわち、ＦｃγＲＩＩＢ）の、細胞表面発現を、検出不能レベルまで下方調節する。

【0203】

一態様では、本開示は、本開示のＳＩＲＰＡタンパク質内のエピトープなどの領域と相互作用するか、またはこれに他の形で結合する、単離（例えば、モノクローナル）抗体などの抗体を提示する。一部の実施形態では、抗体は、本開示のＳＩＲＰＡタンパク質内のエピトープなどの領域と、動態を改善／増強して（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、抗ＳＩＲＰＡ抗体と比べて）、相互作用するか、またはこれに他の形で結合する。一部の実施形態では、抗体は、コントロール抗体のＥＣ_５０より（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、抗ＳＩＲＰＡ抗体と比べて）低値の５０％効果濃度（ＥＣ_５０）で、樹状細胞、骨髄細胞、単球、マクロファージなどのヒト細胞上の、ＳＩＲＰＡタンパク質内のエピトープなどの領域と相互作用するか、またはこれに他の形で結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡタンパク質に結合し、ＳＩＲＰＡタンパク質に結合した後で、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性、例えば、細胞上の、ＳＩＲＰＡの発現と関連する活性をモジュレートする。本開示のＳＩＲＰＡタンパク質は、限定せずに述べると、哺乳動物ＳＩＲＰＡタンパク質、ヒトＳＩＲＰＡタンパク質、マウスＳＩＲＰＡタンパク質、カニクイザルＳＩＲＰＡタンパク質、およびラットＳＩＲＰＡタンパク質を含む。

【0204】

一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＳＩＲＰＡに、ｐＨ依存的に結合しうる。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＳＩＲＰＡに、中性のｐＨで結合することが可能であり、ＳＩＲＰＡタンパク質から解離せずに、内部化されうる。代替的に、酸性のｐＨでは、本開示の抗体は、内部化されると、ＳＩＲＰＡから解離することが可能であり、次いで、エンドソーム／リソソーム経路により分解されうる。ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡに、５．５～８．０、５．５～７．５、５．５～７．０、５．５～６．５、５．５～６．０、６．０～８．０、６．５～８．０、７．０～８．０、７．５～８．０、６．０～７．５、６．０～７．０、６．５～７．５の範囲のｐＨで結合する。ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡから、６．０未満、５．５未満、５．０未満、４．５未満、４．０未満、３．５未満、３．０未満、２．５未満、または２．０未満のｐＨで解離する。

【0205】

ＳＩＲＰＡは、Ｉ型１回膜貫通タンパク質である。ヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸配列（配列番号１）内では、細胞外ドメインは、アミノ酸残基３１～３７３に位置し；膜貫通ドメインは、アミノ酸残基３７４～３９４に位置し；細胞内ドメインは、アミノ酸残基３９５～５０４に位置する。ヒトＳＩＲＰＡは、それぞれ、Ｄ１ドメイン、Ｄ２ドメイン、およびＤ３ドメインと称される、Ｉｇスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）ドメインの、単一のＶセット、および２つのＣ１セットを含む。Ｄ１ドメインは、ヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸残基３２～１３７を含み；Ｄ２ドメインは、ヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸残基１４８～２４７を含み；Ｄ３ドメインは、ヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸残基２５４～３４８を含む。当業者が察知する通り、本開示のドメインの起始残基および終始残基は、使用されるコンピュータモデル化プログラム、またはドメインを決定するために使用される方法に応じて変動しうる。

【0206】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸配列のうちのアミノ酸残基２５４～３４８を含む、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメイン内のエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメイン内のエピトープに結合し、この場合、エピトープは、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸配列のうちのアミノ酸残基２５４～３４８、アミノ酸残基２５４～２７４、アミノ酸残基２６４～２７９、アミノ酸残基２７４～２８９、アミノ酸残基２７３～３３１、アミノ酸残基２８１～３１５、アミノ酸残基２８１～３３７、アミノ酸残基２８４～２９９、アミノ酸残基２９４～３０９、アミノ酸残基３０４～３１９、アミノ酸残基３１４～３２９、アミノ酸残基３２４～３３９、およびアミノ酸残基３３４～３４８から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメイン内のエピトープに結合し、この場合、エピトープは、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１のアミノ酸配列（配列番号１）のうちのアミノ酸残基Ｒ２８２、Ｑ２８４、およびＧ３３７を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメイン内のエピトープに結合し、この場合、エピトープは、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１のアミノ酸配列（配列番号１）のうちのアミノ酸残基Ｑ２８１、Ｒ２８２、Ｑ２８４、Ｌ２８５、Ｗ２８７、Ｒ２９５、Ｅ２９７、Ｖ３０２、およびＷ３１５を含む。

【0207】

一部の実施形態では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、本明細書で記載される通り、ｍ３Ｆ９と名指される抗体のＣＤＲを有する抗体が結合する、同じＳＩＲＰＡエピトープ、またはＳＩＲＰＡエピトープの一部に結合する。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗体は、本明細書で記載される通り、ｍ３Ｆ９と名指される抗体のＣＤＲを有する抗体が結合する、同じＳＩＲＰＡエピトープ、またはＳＩＲＰＡエピトープの一部に結合する。

【0208】

本開示の、ある特定の態様は、少なくとも部分的に、１つまたは複数の機能的特性の改善および／または増強（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、抗ＳＩＲＰＡ抗体と比べた）であって、細胞上の、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させる能力の改善／増強を含み、限定せずに述べると、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、および／またはミクログリアの細胞増殖の低減；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、および／またはＭ２マクロファージにより誘導される、Ｔ細胞の増殖の低減；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１ ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１ ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２ ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、および／またはＭ２ミクログリアの生存の低下；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１ ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１ ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２ ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、および／またはＭ２ミクログリアの増殖の低下または低減；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１ ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１ ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２ ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、および／またはＭ２ミクログリアの遊走の阻害；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１ ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１ ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２ ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、および／またはＭ２ミクログリアの、１つまたは複数の機能の低下または阻害；単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、および／またはミクログリアの増殖の低減；単球、マクロファージ、Ｔ細胞、樹状細胞、好中球、および／またはミクログリアの、全体的な機能性の低減；膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎細胞がん、腎盂がん、白血病、肺がん、メラノーマ、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、線維肉腫、および甲状腺がんから選択される、異なる種類のがんに対する、有益な免疫応答の阻害；認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト－ヤコブ病、正常圧水頭症、筋委縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパシー、那須ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、特発性振戦、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体認知症、多系統委縮症、シャイ－ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性（ｇｒａｎｕｌｏｍａｒｔｏｕｓ）障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性、緑内障、網膜色素変性、網膜変質、および多発性硬化症から選択される、異なる種類の神経障害に対する、有益な免疫応答の阻害；腫瘍細胞上の、ＳＩＲＰＡリガンドへの結合；樹状細胞上の、ＳＩＲＰＡリガンド、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｔ細胞、好中球、および／またはマクロファージへの結合；ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数による腫瘍細胞殺滅の阻害；ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の、抗腫瘍細胞増殖活性の阻害；ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の、抗腫瘍細胞転移活性の阻害；ミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数上で発現された、ＣＤ８６など、１つまたは複数の炎症性受容体の発現のモジュレート；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制性好中球、および調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の、腫瘍への浸潤の増強；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、および調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の機能性の、促進またはレスキュー；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ ＣＤ１４＋骨髄細胞、および調節性Ｔ細胞のうちの１つまたは複数の、腫瘍への浸潤の増大；末梢血中、または他のリンパ系器官内の、腫瘍内の、腫瘍促進性骨髄／顆粒球性免疫抑制細胞の数の増大；骨髄由来抑制細胞の、腫瘍促進性活性の増強；腫瘍殺滅可能性を伴う、腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性化の低下；非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞および／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ ＣＤ１４＋骨髄細胞の生存の延長；腫瘍殺滅可能性を伴う、腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤および／または活性化の低下；腫瘍増殖速度の増大；腫瘍再発速度の増大；抗腫瘍Ｔ細胞応答をモジュレートする、１つまたは複数の免疫療法であり、任意選択で、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ３９、ＣＤ７０、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－９、Ｓｉｇｌｅｃ－１１、ＳＩＲＰＡ、ＣＤ４４７、ＣＳＦ－１受容体およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたは複数のタンパク質をターゲティングする免疫療法である、１つまたは複数の免疫療法、または１つもしくは複数の化学療法薬剤および／もしくはがんワクチンの有効性の低下を含む、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性の、低減、中和、防止、または抑制を結果としてもたらす、改善および／または増強を呈する、抗ＳＩＲＰＡ抗体の同定に基づく。

【0209】

上記の、他の実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、（ｉ）腫瘍浸潤性ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数を増大させること；（ｉｉ）任意選択で、腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意選択で、血液中に存在する、非腫瘍形成性ＣＤ１４^＋骨髄細胞内の、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを低下させること；（ｉｉｉ）任意選択で、腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意選択で、血液中に存在する、非腫瘍形成性ＣＤ１４^＋骨髄細胞の数を低減すること；（ｉｖ）任意選択で、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である、１つまたは複数の細胞内の、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３、および／またはＣＤ２０６のレベルを低減すること；（ｖ）固形腫瘍の、腫瘍増殖速度を低下させること；（ｖｉ）腫瘍体積を低減すること；（ｖｉｉ）１つまたは複数のＰＤ－１阻害剤の有効性を増大させること；（ｖｉｉｉ）任意選択で、ＣＴＬ４、アデノシン経路、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数をターゲティングする、１つまたは複数のチェックポイント阻害剤療法および／または免疫調節療法の有効性を増大させること；（ｉｘ）任意選択で、化学療法剤のうちの１つまたは複数が、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標））、エピルビシン（エレンス（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標））、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、およびこれらの任意の組合せである、１つまたは複数の化学療法剤の有効性を増大させること；（ｘ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下で、Ｔ細胞の増殖を増大させること；（ｘｉ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の、分化、生存、および／または１つもしくは複数の機能を阻害すること；かつ、（ｘｉｉ）化学物質または放射性毒素にコンジュゲートさせると、固形腫瘍内および血管内の、ＣＤ３３発現免疫抑制非腫瘍形成性骨髄細胞および／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞を死滅させることを含む、１つまたは複数の活性を誘導するか、増強するか、またはこれを増大させる。

【0210】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、調節性Ｔ細胞、腫瘍包埋免疫抑制性樹状細胞、腫瘍包埋免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の、活性、機能性、または生存を低下させる。

【0211】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、１つまたは複数の免疫細胞の、生存、成熟、機能性、遊走、または増殖を、誘導または促進し、例えば、１つまたは複数の免疫細胞は、個体における、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、およびこれらの任意の組合せから選択される。

【0212】

抗ＳＩＲＰＡ抗体の結合親和性
本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または＜０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍもしくはこれ未満、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ製のＯｃｔｅｔ Ｓｙｓｔｅｍを参照されたい）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップフロー解析、および比色解析または蛍光性タンパク質溶融解析など、任意の生化学的技法または生物物理的技法を含む、任意の解析法を介して決定されうる。一実施形態では、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。一部の実施形態では、ＲＩＡは、例えば、ＣｈｅｎらＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２９３：８６５～８８１（１９９９））において記載されている通り、目的の抗体のＦａｂ形と、その抗原とにより実施される。一部の実施形態では、Ｋｄは、ビアコア表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定され、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用するアッセイは、約１０反応単位（ＲＵ）で、抗原が固定化されている、ＣＭ５チップにより、２５℃で実施される。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）または全長抗体を使用して決定される。一部の実施形態では、Ｋ_Ｄは、一価形態にある全長抗体を使用して決定される。

【0213】

抗体断片
本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、抗体断片である。抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’－ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、およびｓｃＦｖ断片、ならびに下記で記載される他の断片を含むがこれらに限定されない。ある特定の抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、９：１２９～１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５５７１８９４号および同第５５８７４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏにおける半減期を延長した、Ｆａｂ断片およびＦ（ａｂ’）_２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。

【0214】

ダイアボディーとは、二価または二重特異性でありうる、２つの抗原結合部位を伴う抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、９：１２９～１３４（２００３）を参照されたい。トリアボディーおよびテトラボディーもまた、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、９：１２９～１３４（２００３）において記載されている。単一ドメイン抗体とは、抗体の、重鎖可変ドメインの全部もしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体（例えば、米国特許第６２４８５１６号を参照されたい）である。

【0215】

抗体断片は、本明細書で記載される通り、インタクトな抗体の、タンパク質分解性消化、ならびに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない、多様な技法により作られうる。

【0216】

キメラ抗体およびヒト化抗体
本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体については、例えば、米国特許第４８１６５６７号において記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが、親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した、「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合性断片を含む。

【0217】

本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するように、ヒト化される。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒトにおいて、実質的に非免疫原性である。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、標的に対して、ヒト化抗体が由来する、別の種に由来する抗体と、実質的に同じ親和性を有する。例えば、米国特許第５５３０１０１号、同第５６９３７６１号；同第５６９３７６２号；および同第５５８５０８９号を参照されたい。ある特定の実施形態では、その免疫原性を低減しながら、抗原結合性ドメインの天然の親和性を低下させずに修飾されうる、抗体の可変ドメインのアミノ酸が同定される。例えば、米国特許第５７６６８８６号および同第５８６９６１９号を参照されたい。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（またはその部分）が、非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその部分）が、ヒト抗体配列に由来する、１つまたは複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意選択で、ヒト定常領域の、少なくとも一部も含むであろう。一部の実施形態では、ヒト化抗体内の、一部のＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するように、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）に由来する、対応する残基で置換される。

【0218】

ヒト化抗体、およびそれらを作る方法については、例えば、Ａｌｍａｇｒｏら、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．、１３：１６１９～１６３３（２００８）において総説されており、例えば、米国特許第５８２１３３７号、同第７５２７７９１号、同第６９８２３２１号、および同第７０８７４０９号において、さらに記載されている。ヒト化のために使用されうるヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖可変領域または重鎖可変領域の、特定の亜群の、ヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；およびＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、ＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．、１３：１６１９～１６３３（２００８）を参照されたい）；およびＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７２：１０６７８～１０６８４（１９９７）；およびＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７１：２２６１１～２２６１８（１９９６）を参照されたい）を含むがこれらに限定されない。

【0219】

ヒト抗体
本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知である、多様な技法を使用して作製されうる。ヒト抗体については、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、５：３６８～７４（２００１）；およびＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０：４５０～４５９（２００８）において記載されている。

【0220】

ヒト抗体は、免疫原を、抗原投与に応答して、インタクトなヒト抗体、またはヒト可変領域を伴う、インタクトな抗体を産生するように改変されている、トランスジェニック動物へと投与することにより調製されうる。このようなマウスが、マウス抗体の非存在下で、ヒト抗体を産生することを期待して、マウス抗体の産生を欠損するマウス株であって、ヒトＩｇ遺伝子座の大型断片を伴うマウス株を操作することができる。大型のヒトＩｇ断片は、可変遺伝子の大きな多様性、ならびに抗体の産生および発現の適正な調節を保存しうる。抗体の多様化および選択のためのマウス機構、ならびにヒトタンパク質に対する、免疫寛容の欠如を利用することにより、これらのマウス株において複製された、ヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原を含む、任意の、目的の抗原に対して、高親和性の、完全ヒト抗体をもたらしうる。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を伴う、抗原特異的ヒトｍＡｂが、作製および選択されうる。ある特定の例示的方法については、米国特許第５５４５８０７号、ＥＰ５４６０７３において記載されている。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載する、米国特許第６０７５１８１号および同第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載する、米国特許第５７７０４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載する、米国特許第７０４１８７０号、およびＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載する、米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号もまた参照されたい。このような動物により作出される、インタクトな抗体に由来するヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、さらに改変されうる。

【0221】

ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によっても作られうる。ヒトモノクローナル抗体を作製するための、ヒト骨髄腫細胞株、およびマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株については、記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３：３００１（１９８４）；およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して作出されるヒト抗体もまた、Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７～３５６２（２００６）において記載されている。さらなる方法は、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からの、ヒトＩｇＭモノクローナル抗体の作製について記載する）において記載されている方法を含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）についてもまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓら、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７～９３７（２００５）；およびＶｏｌｌｍｅｒｓら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５～９１（２００５）において記載されている。ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択される、Ｆｖクローンの可変ドメイン配列を単離することによっても作出されうる。次いで、このような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わされうる。ヒト抗体を、抗体ライブラリーから選択するための技法については、下記で記載される。

【0222】

本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法、および／またはコンビナトリアルライブラリーを、１つもしくは複数の、所望の活性を伴う抗体についてスクリーニングすることにより単離されたヒト抗体である。適切な例は、ファージディスプレイ（ＣＡＴ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（ｆｏｒｍｅｒｌｙ Ｐｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）、リボソームディスプレイ（ＣＡＴ）、酵母ディスプレイ（Ａｄｉｍａｂ）などを含むがこれらに限定されない。Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３～４５５（１９９４）において記載されている通り、ある特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ遺伝子およびＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、個別にクローニングされ、ファージライブラリー内で、ランダムに組み換えられ、次いで、これが、抗原結合性ファージについてスクリーニングされうる。例えば、当技術分野では、ファージディスプレイライブラリーの作出、および所望の結合特性を所有する抗体についての、このようなライブラリーのスクリーニングのための、様々な方法が公知である。また、Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３３８（２）：２９９～３１０、２００４；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３４０（５）：１０７３～１０９３、２００４；ＦｅｌｌｏｕｓｅＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０１（３４）：１２４６７～１２４７２（２００４）；およびＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８４（１～２）：１１９～１３２（２００４）も参照されたい。ファージは、典型的に、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片として提示する。免疫化供給源に由来するライブラリーは、ハイブリドーマの構築を要求せずに、免疫原に対する、高親和性の抗体をもたらす。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５～７３４（１９９３）により記載されている通り、免疫化を伴わずに、広範にわたる非自己に対して、また、自己抗原にも対して、抗体の、単一の供給源をもたらすように、ナイーブレパートリーがクローニングされうる（例えば、ヒトから）。最後に、ナイーブライブラリーはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１～３８８、１９９２により記載されている通り、再配列されていないＶ遺伝子セグメントを、幹細胞からクローニングし、高度に可変性のＨＶＲ３領域をコードし、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける再配列を達するように、ランダム配列を含む、ＰＣＲプライマーを使用することを介して、合成によっても作られうる。ヒト抗体ファージライブラリーについて記載する特許公開は、例えば、米国特許第５７５０３７３号、ならびに米国特許公開第２００７／０２９２９３６号および同第２００９／０００２３６０号を含む。ヒト抗体ライブラリーから単離される抗体は、本明細書において検討される、ヒト抗体またはヒト抗体断片である。

【0223】

Ｆｃ領域を含む定常領域
本明細書で提示される抗ＳＩＲＰＡ抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、および／またはＩｇＧ４アイソタイプである。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスの抗体である。

【0224】

本明細書で提示される抗ＳＩＲＰＡ抗体のうちのいずれかについての、ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性を誘導するか、またはこれを、Ｆｃ受容体への結合から独立して誘導する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、阻害型Ｆｃ受容体に結合する。ある特定の実施形態では、阻害型Ｆｃ受容体は、阻害型Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0225】

本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、阻害型Ｆｃ受容体に結合する。ある特定の実施形態では、阻害型Ｆｃ受容体は、阻害型Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0226】

本明細書で提示される抗ＳＩＲＰＡ抗体のうちのいずれかについての、ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、阻害型Ｆｃ受容体に結合する。ある特定の実施形態では、阻害型Ｆｃ受容体は、阻害型Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0227】

本明細書で提示される抗ＳＩＲＰＡ抗体のうちのいずれかについての、ある特定の実施形態では、抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＩｇＧ２の、ＥＵ番号付けに従う、アミノ酸１１８～２６０、およびヒトＩｇＧ４の、ＥＵ番号付けに従う、アミノ酸２６１～４４７を含むアミノ酸配列（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）を含む。

【0228】

一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、アミノ酸置換を含まないＦｃ領域を含む、対応する抗体と比較して、補体を活性化させずに、クラスター化を増大させる。一部の実施形態では、抗体は、抗体が特異的に結合する標的の、１つまたは複数の活性を誘導する。一部の実施形態では、抗体は、ＳＩＲＰＡに結合する。

【0229】

また、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を改変して、エフェクター機能を修飾し、かつ／または抗体の血清半減期を延長することも所望されうる。例えば、定常領域上の、Ｆｃ受容体への結合部位は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＩＩなど、ある特定のＦｃ受容体への結合親和性を除去または低減して、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を低減するように、修飾または突然変異されうる。一部の実施形態では、エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域の（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメイン内の）Ｎ－グリコシル化を除去することにより損なわれる。一部の実施形態では、エフェクター機能は、ＷＯ９９／５８５７２、Ａｒｍｏｕｒら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４０：５８５～５９３（２００３）；Ｒｅｄｄｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６４：１９２５～１９３３（２０００）において記載されている、ヒトＩｇＧの、２３３～２３６、２９７、および／または３２７～３３１などの領域を修飾することにより損なわれる。他の実施形態ではまた、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を改変して、ＩＴＩＭ含有ＦｃｇＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する選択性を増大させて、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、および抗体依存性細胞媒介性食作用を含む、体液性応答を活性化させずに、隣接する細胞上の、ＳＩＲＰＡ抗体のクラスター化を増大させるように、エフェクター機能を修飾することも所望されうる。

【0230】

抗体の血清半減期を延長するために、例えば、米国特許第５７３９２７７号において記載されている通り、サルベージ受容体結合エピトープを、抗体（とりわけ、抗体断片）へと組み込むことができる。本明細書で使用される、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける血清半減期の延長の一因となる、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、またはＩｇＧ_４）のＦｃ領域のエピトープを指す。

【0231】

多重特異性抗体
多重特異性とは、少なくとも２つの、異なるエピトープであって、同じであるか、または別のポリペプチド（例えば、本開示の、１つまたは複数のＳＩＲＰＡポリペプチド）上のエピトープを含むエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体でありうる。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、三重特異性抗体でありうる。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、四重特異性抗体でありうる。このような抗体は、全長抗体に由来する場合もあり、抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２二重特異性抗体）に由来する場合もある。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＳＩＲＰＡ上の第１の部位に結合する、第１の抗原結合性領域を含み、ＳＩＲＰＡ上の第２の部位に結合する、第２の抗原結合性領域を含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＳＩＲＰＡに結合する、第１の抗原結合性領域と、第２のポリペプチドに結合する、第２の抗原結合性領域とを含む。

【0232】

本明細書では、ＳＩＲＰＡに結合する、本明細書で記載される抗体の、６つのＨＶＲを含む、第１の抗原結合性領域と、第２のポリペプチドに結合する、第２の抗原結合性領域とを含む、多重特異性抗体が提示される。一部の実施形態では、第１の抗原結合性領域は、本明細書で記載される抗体のＶ_ＨまたはＶ_Ｌを含む。

【0233】

多重特異性抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、血液脳関門を越える輸送を容易とする抗原である。当技術分野では、血液脳関門を越える輸送を容易とする、多数の抗原およびペプチドが公知である（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ Ｒ．、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．、３７：４８～５７（２０１０）を参照されたい）。このような、第２の抗原およびペプチドは、限定せずに述べると、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１および２（ＬＰＲ－１および２）、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の、非毒性突然変異体）を含む、ジフテリア毒素受容体、ＴＭＥＭ ３０（Ａ）（フリッパーゼ）、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、またはペネトラチンなどのタンパク質移入ドメイン、ポリアルギニン、または、一般に、正に帯電したペプチド、ＡＮＧ１００５（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ、２０１０を参照されたい）などのＡｎｇｉｏｐｅｐペプチド、および血液脳関門内皮細胞上で濃縮される、他の細胞表面タンパク質（例えば、Ｄａｎｅｍａｎら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、５（１０）：ｅ１３７４１（２０１０）を参照されたい）を含む。

【0234】

多重特異性抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、またはこれらの断片、タウ、ＩＡＰＰ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２マイクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、およびプロリン－アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド；（ｄ）免疫細胞上で発現されるリガンドおよび／もしくはタンパク質であって、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ－３、およびホスファチジルセリンから選択されるリガンドおよび／もしくはタンパク質；ならびに／または（ｅ）１つもしくは複数の腫瘍細胞上で発現される、タンパク質、脂質、多糖類、もしくは糖脂質、およびこれらの任意の組合せから選択される、疾患原因タンパク質である。

【0235】

多価抗体は、ＳＩＲＰＡ抗原のほか、限定せずに述べると、Ａβペプチド抗原、α－シヌクレインタンパク質抗原、タウタンパク質抗原、ＴＤＰ－４３タンパク質抗原、プリオンタンパク質抗原、ハンチンチンタンパク質抗原、ＲＡＮ翻訳産物抗原（グリシン－アラニン（ＧＡ）、グリシン－プロリン（ＧＰ）、グリシン－アルギニン（ＧＲ）、プロリン－アラニン（ＰＡ）、またはプロリン－アルギニン（ＰＲ）から構成される、ジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含む）、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、もしくはトランスフェリン受容体、または血液脳関門を越える、抗体の移動を容易とする、他の任意の抗原などさらなる抗原を認識しうる。一部の実施形態では、第２のポリペプチドはトランスフェリンである。一部の実施形態では、第２のポリペプチドはタウである。一部の実施形態では、第２のポリペプチドはＡβである。一部の実施形態では、第２のポリペプチドはＴＲＥＭ２である。一部の実施形態では、第２のポリペプチドはα－シヌクレインである。

【0236】

多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（かつ、好ましくは、２つのポリペプチド鎖）を含有し、この場合、１つまたは複数のポリペプチド鎖は、２つまたはこれを超える可変ドメインを含む。例えば、１つまたは複数のポリペプチド鎖は、ＶＤ１－（Ｘ１）_ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）_ｎ－Ｆｃ［配列中、ＶＤ１は、第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の可変ドメインであり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の、１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１およびＸ２は、アミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは、０または１である］を含みうる。同様に、１つまたは複数のポリペプチド鎖は、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－可撓性リンカー－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｆｃ領域鎖；またはＶ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｆｃ領域鎖を含みうる。本明細書における多価抗体は、好ましくは、少なくとも２つの（かつ、好ましくは、４つの）軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書における多価抗体は、例えば、約２つ～約８つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含みうる。本明細書で想定される、軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、任意選択で、ＣＬドメインをさらに含む。

【0237】

多重特異性抗体を作るための技法は、異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の、組換え共発現（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、ならびにＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、および「ＫＩＨ（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照されたい）を含むがこれらに限定されない。また、ＷＯ２０１３／０２６８３３（ＣｒｏｓｓＭａｂ）も参照されたい。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃのヘテロ二量体分子を作るために、静電ステアリング効果を操作すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つまたはこれを超える抗体を架橋すること（例えば、米国特許第４６７６９８０号を参照されたい）；ロイシンを使用すること；二重特異性抗体断片を作るために、「ダイアボディー」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４～６４４８（１９９３）を参照されたい）；および単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；ならびに、例えば、Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７：６０（１９９１）において記載されている通りに、三重特異性抗体を調製することによっても作られうる。

【0238】

３つまたはこれを超える、機能的な抗原結合部位を伴う操作抗体であって、「オクトパス抗体」を含む操作抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６を参照されたい）。本明細書における抗体はまた、複数のＳＩＲＰＡに結合する抗原結合部位を含む、「二重作用性ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）も含む。

【0239】

抗体の変異体
本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体のアミノ酸配列変異体が想定される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが所望でありうる。

【0240】

置換変異体、挿入変異体、および欠失変異体
本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換を有する、抗体の変異体が提供される。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列へと、適切な修飾を導入することにより調製される場合もあり、ペプチド合成により調製される場合もある。このような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはこれらへの挿入、および／またはこれらの置換を含む。

【0241】

抗体の生物学的特性の、実質的な改変は、（ａ）置換領域内の、ポリペプチド骨格の構造であって、例えば、シート構造またはへリックス構造としての構造、（ｂ）標的部位における、分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のバルクの維持に対する、それらの効果が顕著に異なる置換を選択することにより達せられる。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づく群：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
へと分けられる。

【0242】

例えば、非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーの、別のクラスに由来するメンバーへの交換を伴いうる。このような置換残基は、例えば、ヒト抗体の、非ヒト抗体と相同な領域へと導入される場合もあり、分子の非相同領域へと導入される場合もある。

【0243】

ある特定の実施形態に従い、本明細書で記載されるポリペプチドまたは抗体へと変化を施す場合、アミノ酸の疎水性指数が検討されうる。各アミノ酸は、その疎水性および荷電特徴に基づき、疎水性指数を割り当てられている。疎水性指数は、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；スレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタメート（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リジン（－３．９）；およびアルギニン（－４．５）である。

【0244】

当技術分野では、相互作用性の生物学的機能を、タンパク質に付与する場合における、アミノ酸の疎水性指数の重要性が理解されている。Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５７：１０５～１３１（１９８２）。ある特定のアミノ酸は、同様の疎水性指数または疎水性スコアを有する、他のアミノ酸で置換される場合があり、なおかつ、同様の生物活性を保持することが公知である。疎水性指数に基づき、変化を施す場合、ある特定の実施形態では、それらの疎水性指数が±２内のアミノ酸置換が含まれる。ある特定の実施形態では、それらの疎水性指数が±１内の置換が含まれ、ある特定の実施形態では、それらの疎水性指数が±０．５内の置換が含まれる。

【0245】

当技術分野ではまた、それにより、創出される、生物学的に機能的なタンパク質またはペプチドが、本発明の場合のように、免疫学的実施形態における使用のために意図される場合は特に、類似のアミノ酸による置換が、親水性に基づき、効果的になされうることも理解される。ある特定の実施形態では、その隣接するアミノ酸の親水性により統御される、タンパク質の、最大局所平均親水性は、その免疫原性および抗原性、すなわち、タンパク質の生物学的特性と相関する

【0246】

これらのアミノ酸残基へは、以下の親水性値：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０±１）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタメート（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）、およびトリプトファン（－３．４）が割り当てられている。同様の親水性値に基づき、変化を施す場合、ある特定の実施形態では、それらの親水性値が±２内のアミノ酸置換が含まれ、ある特定の実施形態では、それらの親水性値が±１内の置換が含まれ、ある特定の実施形態では、それらの親水性値が±０．５内の置換が含まれる。エピトープを、親水性に基づき、一次アミノ酸配列からもまた同定することができる。これらの領域はまた、「エピトープコア領域」とも称される。

【0247】

ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、抗体が、抗原に結合する能力を、このような変更が、実質的に低減しない限りにおいて、１つまたは複数のＨＶＲ内で生じうる。例えば、ＨＶＲ内では、結合親和性を、実質的に低減しない保存的変更（例えば、本明細書で提示される、保存的置換）がなされうる。このような変更は、例えば、ＨＶＲ内の、抗原接触残基の外部でありうる。上記で提示された、変異体のＶＨ配列およびＶＬ配列についての、ある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、変更されないか、または１つ、２つ、もしくは３つを超えるアミノ酸置換を含有しない。

【0248】

アミノ酸配列の挿入は、アミノ末端および／またはカルボキシル末端における、１残基～１００またはこれを超える残基を含むポリペプチドの長さの範囲の融合のほか、１つまたは複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、Ｎ末端のメチオニル残基を伴う抗体を含む。抗体分子の、他の挿入変異体は、抗体のＮ末端またはＣ末端の、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのために）、または抗体の血清半減期を延長するポリペプチドへの融合を含む。

【0249】

抗体の、適正なコンフォメーションの維持に関与しない、任意のシステイン残基もまた、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋形成を防止するように、一般に、セリンで置換されうる。逆に、その安定性を改善するように（特に、抗体が、Ｆｖ断片などの抗体断片である場合）、システイン結合（複数可）が、抗体へと付加される場合もある。

【0250】

グリコシル化変異体
本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増大させるか、または低下させるように変更される。グリコシル化部位の、抗体への付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が、創出または除去されるように、アミノ酸配列を変更することにより、簡便に達せられうる。

【0251】

抗体のグリコシル化は、典型的に、Ｎ結合型またはＯ結合型である。Ｎ結合型とは、アスパラギン残基の側鎖への、炭水化物部分の接合を指す。トリペプチド配列である、アスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－スレオニン［Ｘは、プロリンを除く、任意のアミノ酸である］は、炭水化物部分の、アスパラギン側鎖への酵素結合のための認識配列である。したがって、ポリペプチド内の、これらのトリペプチド配列のうちのいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を創出する。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類である、Ｎ－アセチルガラクトサミン（Ｎ－ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリジンもまた使用されうるが、最も一般には、セリンまたはスレオニンである、ヒドロキシアミノ酸への接合を指す。

【0252】

グリコシル化部位の、抗体への付加は、それが、上記で記載されたトリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含有するように、アミノ酸配列を変更することにより簡便に達せられる（Ｎ結合グリコシル化部位の場合）。変更はまた、１つまたは複数のセリンまたはスレオニン残基の、元の抗体の配列への付加によりなされる場合もあり、これらの残基による、元の抗体の配列の置換によりなされる場合もある（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。

【0253】

抗体が、Ｆｃ領域を含む場合、これと接合した炭水化物は、変更されうる。哺乳動物細胞により産生される天然抗体は、典型的に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのカバット番号付けに従う、Ａｓｎ２９７と、一般に、Ｎ結合により接合した、分枝状の、二分岐オリゴ糖を含む。オリゴ糖は、多様な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸のほか、二分岐オリゴ糖構造の「ステム」内の、ＧｌｃＮＡｃと接合したフコースを含みうる。一部の実施形態では、本発明の抗体内の、オリゴ糖の修飾は、ある特定の、改善された特性を伴う、抗体の変異体を創出するためになされうる。

【0254】

一実施形態では、Ｆｃ領域と（直接的にまたは間接的に）接合したフコースを欠く糖鎖構造を有する、抗体の変異体が提供される。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号および同第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体の変異体と関連する刊行物の例は、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９～１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．、８７：６１４（２００４）を含む。脱フコシル化抗体を作製することが可能な細胞株の例は、タンパク質のフコシル化が欠損する、Ｌｅｄ ３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、２４９：５３３～５４５（１９８６）；ＵＳ２００３／０１５７１０８）、およびアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子である、ＦＵＴ８をノックアウトしたＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．、８７：６１４（２００４）；およびＫａｎｄａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０～６８８（２００６）を参照されたい）を含む。

【0255】

修飾定常領域
本明細書で提示される抗ＳＩＲＰＡ抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体のＦｃは、抗体Ｆｃのアイソタイプおよび／または修飾である。一部の実施形態では、抗体Ｆｃのアイソタイプおよび／または修飾は、Ｆｃガンマ受容体への結合が可能である。

【0256】

例示的な、抗体Ｆｃのアイソタイプおよび修飾を、下記の表２に提示する。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体に結合することが可能な、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、下記の表２に列挙されるＦｃアイソタイプを有する。

【0257】

表２に記載されたアイソタイプに加えて、かつ、理論に束縛されずに述べると、ヒトにおけるＦｃｇ受容体Ｉ、Ｆｃｇ受容体ＩＩＡ、Ｆｃｇ受容体ＩＩＣ、Ｆｃｇ受容体ＩＩＩＡ、Ｆｃｇ受容体ＩＩＩＢ、および／またはマウスにおけるＦｃｇ受容体Ｉ、Ｆｃｇ受容体ＩＩＩ、およびＦｃｇ受容体ＩＶに結合する、ヒトＩｇＧ１アイソタイプまたはヒトＩｇＧ３アイソタイプ、およびこれらの突然変異体を伴う抗体（例えば、Ｓｔｒｏｈｌ（２００９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００９、２０：６８５～６９１）はまた、一過性のアゴニスト抗体としても作用しうることが考えられる。

【0258】

一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスの抗体である。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域内の、任意の組合せにおける、Ｃ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ（ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けに従う残基位置）からなる群から選択される残基位置において、１つまたは複数の（例えば、１つもしくはこれを超えるか、２つもしくはこれを超えるか、３つもしくはこれを超えるか、４つもしくはこれを超えるか、５つもしくはこれを超えるか、６つもしくはこれを超えるか、７つもしくはこれを超えるか、８つもしくはこれを超えるか、９つもしくはこれを超えるか、１０もしくはこれを超えるか、１１もしくはこれを超えるか、１２もしくはこれを超えるか、または１３全ての）アミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ４３０Ｇにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３３１Ａにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３３１Ａにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｋ３２２ＡおよびＥ４３０Ｇにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｐ３３１ＳおよびＥ４３０Ｇにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、およびＥ４３０Ｇにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｋ３２２Ａ、Ｐ３３１Ｓ、およびＥ４３０Ｇにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、およびＥ４３０Ｇにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｃ１２７Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０ＧおよびＳ４４０Ｙにおけるアミノ酸置換を含む。

【0259】

ある特定の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、阻害型Ｆｃ受容体に結合する。ある特定の実施形態では、阻害型Ｆｃ受容体は、阻害型Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの、野生型Ｆｃ領域と比べた）を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅら（１９９４）、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、５７：１５３７～１５４３．３１；Ｘｕら（２０００）、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００：１６～２６）、Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅら（１９９９）、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、６８：５６３～５７１）、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７；Ａｒｍｏｕｒら（１９９９）、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９：２６１３～２６２４；Ａｒｍｏｕｒら（２０００）、Ｔｈｅ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（増刊１号）：２７）、Ｃ２３２Ｓ、および／またはＣ２３３Ｓ（Ｗｈｉｔｅら（２０１５）、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２７、１３８～１４８）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕら（２００８）、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、４５：３９２６～３９３３）、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅから選択され、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う。

【0260】

一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、Ｃ１２７Ｓアミノ酸置換を含有する、重鎖定常ドメインを伴う、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う（Ｗｈｉｔｅら（２０１５）、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２７、１３８～１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅら（２０１０）、ＰＲＯＴＥＩＮ ＳＣＩＥＮＣＥ、１９：７５３～７６２；およびＷＯ２００８０７９２４６）。

【0261】

一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含有する、カッパ軽鎖定常ドメインを伴う、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う（Ｗｈｉｔｅら（２０１５）、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２７、１３８～１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅら（２０１０）、ＰＲＯＴＥＩＮ ＳＣＩＥＮＣＥ、１９：７５３～７６２；およびＷＯ２００８０７９２４６）。

【0262】

ある特定の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、阻害型Ｆｃ受容体に結合する。ある特定の実施形態では、阻害型Ｆｃ受容体は、阻害型Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの、野生型Ｆｃ領域と比べた）を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ Ｓら（１９９３）、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２３：４０３～４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１）、Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７６、６５９１～６６０４）、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓら（１９９５）、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、９２：１１９８０～１１９８４；Ａｌｅｇｒｅら（１９９４）、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、５７：１５３７～１５４３；Ｘｕら（２０００）、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００：１６～２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅら（１９９４）、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、５７：１５３７～１５４３．３１；Ｘｕら（２０００）、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００：１６～２６）、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎら（２００７）、Ｂｌｏｏｄ、１０９：１１８５～１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙら（２００８）、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、２００８、１０５：２０１６７～２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、および／またはＴ３９４Ｄから選択され、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う。

【0263】

一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプの重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）およびヒンジ領域を含む（Ｗｈｉｔｅら（２０１５）、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２７、１３８～１４８）。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ２アイソタイプのＣＨ１領域およびヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号５８）のアミノ酸配列を含有する。一部の実施形態では、抗体のＦｃ領域は、Ｓ２６７Ｅのアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆのアミノ酸置換、もしくはこれらの両方、および／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑのアミノ酸置換を含有し、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う。

【0264】

ある特定の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、阻害型Ｆｃ受容体に結合する。ある特定の実施形態では、阻害型Ｆｃ受容体は、阻害型Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの、野生型Ｆｃ領域と比べた）を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙら（２０００）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６４：１９２５～１９３３）、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅから選択され、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う。

【0265】

ある特定の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体結合性抗体は、ヒトＩｇＧ２の、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けに従う、アミノ酸１１８～２６０、およびヒトＩｇＧ４の、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けに従う、アミノ酸２６１～４４７（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）を含有するアミノ酸配列を含む。

【0266】

ある特定の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ４定常領域を含有する（Ｂａｒｔｈｏｌｏｍａｅｕｓら（２０１４）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９２、２０９１～２０９８）。

【0267】

一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付け；およびこれらの任意の組合せに従う、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、およびＰ３３１Ｓから選択される、１つまたは複数の、さらなるアミノ酸置換をさらに含有する。

【0268】

ある特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域内の、Ｃ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、およびこれらの任意の組合せから選択される残基位置において、１つまたは複数のアミノ酸置換を含有し、この場合、残基の番号付けは、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ４３０ＧおよびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ４３０ＧおよびＫ３２２Ａにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、およびＡ３３０Ｓにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｃ１２７Ｓにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０ＧおよびＳ４４０Ｙにおけるアミノ酸置換を含有し、この場合、残基位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

【0269】

一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡタンパク質に結合する抗体は、ＳＩＲＰＡの細胞レベル（例えば、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベル）を低減し、ＳＩＲＰＡ、および／または１つもしくは複数のＳＩＲＰＡリガンドの間の相互作用（例えば、結合）を阻害し、ＳＩＲＰＡタンパク質の、１つまたは複数の活性を阻害する抗体を含みうる。このような抗体は、ＳＩＲＰＡと、１つもしくは複数のＳＩＲＰＡリガンドとの相互作用（例えば、結合）を防止するか、または１つもしくは複数のＳＩＲＰＡリガンドの存在下で、ＳＩＲＰＡの細胞外ドメインから、細胞質へのシグナル伝達を防止することにより、ＳＩＲＰＡタンパク質の、１つまたは複数の活性を阻害する。抗体はまた、ＳＩＲＰＡの分解、ＳＩＲＰＡの脱感作、ＳＩＲＰＡの切断、ＳＩＲＰＡの内部移行、ＳＩＲＰＡの放出、ＳＩＲＰＡの発現の下方調節、および／またはリソソームによるＳＩＲＰＡの分解を誘導することを介して、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させることにより、ＳＩＲＰＡタンパク質の、１つまたは複数の活性も阻害しうる。一部の実施形態では、このような抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡを、一過性に活性化させない場合がある。

【0270】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、本開示の、一過性アゴニストの、抗ＳＩＲＰＡ抗体のエピトープ特異性を有しうるが、Ｆｃｇ受容体に結合することが可能ではないＦｃドメインを有し、したがって、例えば、一過性にクラスター化し、ＳＩＲＰＡを活性化させることが不可能である。

【0271】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、限定せずに述べると、以下の活性：ＳＩＲＰＡタンパク質の、シアル酸含有糖脂質またはシアル酸含有糖タンパク質など、１つまたは複数のＳＩＲＰＡリガンドへの結合を低下させる能力、サイトカインシグナル伝達（ＳＯＣＳ）タンパク質（例えば、ＳＯＣＳ３タンパク質）の抑制因子の、ＳＩＲＰＡタンパク質への結合を低下させる能力、プロテアソームによる、ＳＩＲＰＡタンパク質の分解を増大させる能力、循環する樹状細胞、マクロファージ、単球、Ｔ細胞、および／またはミクログリアの表面における、ＳＩＲＰＡの機能的発現を低減する能力、ＬＣＫおよびＦＹＮなど、Ｓｒｃファミリーのチロシンキナーゼによる、Ｔｙｒ－３４０およびＴｙｒ－３５８のリン酸化を低下させる能力、チロシン特異性タンパク質ホスファターゼであるの動員およびこれへの結合を低下させる能力、ＳＨＰ１およびＳＨＰ２、グアニンヌクレオチドとして作用するＰＬＣ－ｇ１の動員およびこれへの結合を低下させる能力、ダイナミン１の交換因子、Ｃｒｋｌの動員およびこれへの結合を低下させる能力、脾臓チロシンキナーゼであるＳｙｋの動員およびこれへの結合を低下させる能力、ＳＨ３－ＳＨ２－ＳＨ３である、成長因子受容体結合型タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員およびこれへの結合を低下させる能力、複数のＳＨ２含有タンパク質の動員およびこれへの結合を低下させる能力、細胞内カルシウム移動を増大させる能力、炎症促進性サイトカインである、ＩＬ－１β、ＩＬ－８、およびＴＮＦ－αの産生をモジュレートする能力、ホスホイノシチド３キナーゼの活性化を低下させる能力、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、および／またはミクログリアの増殖を増大させる能力、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、および／またはミクログリアの生存を増大させる能力、複数の細胞性タンパク質上の、チロシンのリン酸化を増大させる能力、単球、マクロファージ、樹状細胞、および／またはミクログリアの貪食活性を増大させる能力、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、および／またはミクログリアの細胞増殖を増大させる能力、ＩＴＡＭシグナル伝達を媒介するシグナル伝達分子のリン酸化を増大させる能力、パターン認識受容体の機能を増大させる能力、Ｔｏｌｌ様受容体の機能を増大させる能力、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）受容体の機能を増大させる能力、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現をモジュレートする能力、ならびに細胞破砕物およびタンパク質破砕物の除去を増大させる能力のうちの１つまたは複数を有する。

【0272】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、１つまたは複数のＦｃγ受容体への結合の低減を提示するＦｃ領域を有する。このようなＦｃ領域および修飾の例を、下記の表３に提示する。一部の実施形態では、抗体は、下記の表３に列挙されるＦｃアイソタイプを有する。

【0273】

一部の実施形態では、Ｆｃガンマ受容体への結合が低減された、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、下記の表３に列挙されるＦｃアイソタイプを有する。

【0274】

ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの、野生型Ｆｃ領域と比べた）を含有する。

【0275】

一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ（Ｂｏｌｔ Ｓら（１９９３）、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２３：４０３～４１１）、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎら（２００７）、Ｂｌｏｏｄ、１０９：１１８５～１１９２）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎら（２００７）、Ｂｌｏｏｄ、１０９：１１８５～１１９２）、Ｐ２３８Ｓ（Ｄａｖｉｓら（２００７）、Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ、３４：２２０４～２２１０）、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎら（２００７）、Ｂｌｏｏｄ、１０９：１１８５～１１９２）、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬら（２００１）、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２７６（９）：６５９１～６０４）、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（Ｈｅｚａｒｅｈら（２００１）、Ｊ Ｖｉｒｏｌ、７５、１２１６１～１２１６８；Ｏｇａｎｅｓｙａｎら（２００８）、Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ、６４、７００～７０４）、Ｐ３３１Ｓ（Ｏｇａｎｅｓｙａｎら、（２００８）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ、６４、７００～７０４）、Ｔ３９４Ｄ（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎら（２０１３）、ＭＡｂｓ、５（３）：４０６～４１７）、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅから選択され、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う、グリシン２３６に対応する位置において、アミノ酸欠失をさらに含む。

【0276】

一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う、Ｃ２２０Ｓのアミノ酸置換を含有する、重鎖定常領域を伴うＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、および／またはＰ３３１Ｓから選択される、１つまたは複数の、さらなるアミノ酸置換をさらに含有する。ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの、野生型Ｆｃ領域と比べた）を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅから選択され、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う（Ｖａｆａ Ｏ．ら（２０１４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ、６５：１１４～１２６）。

【0277】

ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つまたは複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの、野生型Ｆｃ領域と比べた）を含有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓら（１９９５）、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、９２：１１９８０～１１９８４）、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ（Ｒｅｄｄｙら（２０００）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６４：１９２５～１９３３；Ａｎｇａｌら（１９９３）、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３０（１）：１０５～８；ＵＳ８６１４２９９Ｂ２；Ｖａｆａ Ｏ．ら（２０１４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ、６５：１１４～１２６）、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、および／またはＮ２９７Ｑから選択され、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有し、残基２２８位における、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換、残基２３４位における、Ｆ２３４Ａのアミノ酸置換、および残基２３５位における、Ｌ２３５Ａのアミノ酸置換（ＥＵ番号付けに従う残基位置）を含む。

【0278】

一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅから選択される、１つまたは複数の、さらなるアミノ酸置換をさらに含有し、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けまたはカバット番号付けの慣例に従う。

【0279】

本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、修飾抗体のＦｃは、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、１つまたは複数の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、１つまたは複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの、野生型Ｆｃ領域と比べた）を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ Ｓら（１９９３）、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２３：４０３～４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１）、Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７６、６５９１～６６０４）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓら（１９９５）、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、９２：１１９８０～１１９８４；Ａｌｅｇｒｅら（１９９４）、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、５７：１５３７～１５４３；Ｘｕら（２０００）、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００：１６～２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅら（１９９４）、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、５７：１５３７～１５４３；Ｘｕら（２０００）、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００：１６～２６）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎら（２００７）、Ｂｌｏｏｄ、１０９：１１８５～１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙら（２００８）、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、２００８、１０５：２０１６７～２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅから選択され、この場合、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付けの慣例に従う。

【0280】

ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｎ２９７Ａの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｄ２６５ＡおよびＮ２９７Ａの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｄ２７０Ａの突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｌ２３４ＡおよびＧ２３７Ａの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒのうちの１つまたは複数（全てを含む）の突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆのうちの１つまたは複数の突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、およびＬ２３５Ａの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、およびＰ３３１Ｓの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｓ２６７Ｅの突然変異を含む。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ１の重鎖定常領域１（ＣＨ１）およびヒンジ領域の、カッパ軽鎖を伴う、ＩｇＧ２のＣＨ１およびヒンジ領域（ＥＵ番号付けに従う、ＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２３０）による置換を含む。

【0281】

ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、２つまたはこれを超えるアミノ酸置換を含まないＦｃ領域を有する、対応する抗体と比較して、補体を活性化させずに、抗体のクラスター化を増大させる、２つまたはこれを超えるアミノ酸置換を含む。したがって、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、Ｆｃ領域を含む抗体であり、この場合、抗体は、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇにおけるアミノ酸置換、ならびにＦｃ領域内の、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓから選択される残基位置における、１つまたは複数のアミノ酸置換およびこれらの任意の組合せを含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０ＧおよびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０ＧおよびＫ３２２Ａにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、およびＡ３３０Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。

【0282】

ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、本明細書におけるＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、補体活性化を消失させるように、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ａ３３０Ｌの突然変異（Ｌａｚａｒら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、１０３：４００５～４０１０（２００６））、またはＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、および／もしくはＰ３３１Ｓの突然変異のうちの１つまたは複数（Ｓａｚｉｎｓｋｙら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、１０５：２０１６７～２０１７２（２００８））、と組み合わされうる。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、および／またはＰ３３１Ｓのうちの１つまたは複数をさらに含みうる。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ヒト血清中の、抗体の半減期を延長する、１つまたは複数の突然変異（例えば、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅの突然変異のうちの、１つまたは複数（全てを含む））をさらに含みうる。ＩｇＧ１の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、ＩｇＧ１の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｅ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、および／またはＳ４４０Ｗのうちの１つまたは複数をさらに含みうる。

【0283】

本開示の、他の態様は、修飾定常領域（すなわち、Ｆｃ領域）を有する抗体に関する。標的受容体を活性化させるのに、ＦｃｇＲ受容体への結合に依存する抗体は、ＦｃｇＲへの結合を消失させるように操作されると、そのアゴニスト活性を喪失しうる（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、１９：１０１～１１３（２０１１）；Ａｒｍｏｕｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４０：５８５～５９３（２００３）；およびＷｈｉｔｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２７：１３８～１４８（２０１５）を参照されたい）。このように、適正なエピトープ特異性を伴う、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプに由来するＦｃドメイン（ＣＨ１領域およびヒンジ領域）、または阻害型０ＦｃｇＲＩＩＢ受容体、もしくはこの変異体（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）に優先的に結合することが可能な、別の種類のＦｃドメインを有する場合、有害作用を最小として、標的抗原を活性化させうることが考えられる。

【0284】

本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、修飾抗体のＦｃは、ＩｇＧ２の修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、ＩｇＧ２の修飾Ｆｃは、１つまたは複数の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、ＩｇＧ２の修飾Ｆｃは、１つまたは複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの、野生型Ｆｃ領域と比べた）を含む。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｖ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、５７：１５３７～１５４３（１９９４）；Ｘｕら、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００：１６～２６（２０００））；Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、６８：５６３～５７１（１９９９））；Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７；Ａｒｍｏｕｒら、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９：２６１３～２６２４（１９９９）；Ａｒｍｏｕｒら、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ、１（増刊１号）：２７（２０００））、Ｃ２１９Ｓ、および／またはＣ２２０Ｓ（Ｗｈｉｔｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２７、１３８～１４８（２０１５））；Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕら、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、４５：３９２６～３９３３（２００８））；ならびにＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅから選択される。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｖ２３４ＡおよびＧ２３７Ａにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｃ２１９ＳまたはＣ２２０Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆにおけるアミノ酸置換を含む。

【0285】

ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｃ１２７Ｓのアミノ酸置換を含む（Ｗｈｉｔｅら（２０１５）、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２７、１３８～１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．、１９：７５３～７６２（２０１０）；およびＷＯ２００８／０７９２４６）。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｃ２１４Ｓのアミノ酸置換を含む、カッパ軽鎖定常ドメインを伴うＩｇＧ２アイソタイプを有する（Ｗｈｉｔｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２７：１３８～１４８（２０１５）；Ｌｉｇｈｔｌｅら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．、１９：７５３～７６２（２０１０）；およびＷＯ２００８／０７９２４６）。

【0286】

ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｃ２２０Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｃ２１４Ｓのアミノ酸置換を含む、カッパ軽鎖定常ドメインを伴うＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【0287】

ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｃ２１９Ｓのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｃ２１４Ｓのアミノ酸置換を含む、カッパ軽鎖定常ドメインを伴うＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【0288】

ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ２アイソタイプの重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）およびヒンジ領域を含む（Ｗｈｉｔｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２７：１３８～１４８（２０１５））。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、ある特定の実施形態では、ＩｇＧ２アイソタイプのＣＨ１領域およびヒンジ領域は、ＥＵ番号付けに従う、１１８～２３０のアミノ酸配列を含む。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体のＦｃ領域は、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｓ２６７Ｅのアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆのアミノ酸置換、もしくはこれらの両方、および／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑのアミノ酸置換を含む。

【0289】

ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、およびＳ４４０Ｗにおける、１つまたは複数のアミノ酸置換をさらに含む。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ヒト血清中の、抗体の半減期を延長する、１つまたは複数の突然変異（例えば、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅの突然変異のうちの、１つまたは複数（全てを含む））をさらに含みうる。ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓをさらに含みうる。

【0290】

ＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃである。一部の実施形態では、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃは、ＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２６０およびＩｇＧ４のアミノ酸２６１～４４７を含む。ＩｇＧ２の、任意の修飾Ｆｃについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓにおける、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。

【0291】

ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付け；およびこれらの任意の組合せに従う、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、またはＰ３３１Ｓから選択される、１つまたは複数の、さらなるアミノ酸置換を含む。

【0292】

ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、ある特定の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｃ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、およびこれらの任意の組合せから選択される残基位置における、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０ＧおよびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０ＧおよびＫ３２２Ａにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、およびＡ３３０Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｃ１２７Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０ＧおよびＳ４４０Ｙにおけるアミノ酸置換を含む。

【0293】

本明細書で提示される抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、修飾抗体のＦｃは、ＩｇＧ４の修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、ＩｇＧ４の修飾Ｆｃは、１つまたは複数の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、ＩｇＧ４の修飾Ｆｃは、１つまたは複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの、野生型Ｆｃ領域と比べた）を含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２９Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６４：１９２５～１９３３（２０００））、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅから選択される。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＥ３１８Ａをさらに含みうる。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅをさらに含みうる。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、ＩｇＧ４の修飾Ｆｃは、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆをさらに含みうる。

【0294】

ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、ＩｇＧ４の修飾Ｆｃは、抗体の安定化を増強するように、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｓ２２８Ｐの突然変異（Ａｎｇａｌら、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３０：１０５～１０８（１９９３））、および／または（Ｐｅｔｅｒｓら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２８７（２９）：２４５２５～３３（２０１２））において記載されている、１つもしくは複数の突然変異と組み合わされうる。

【0295】

ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、ＩｇＧ４の修飾Ｆｃは、ヒト血清中の、抗体の半減期を延長する、１つまたは複数の突然変異（例えば、ＥＵ番号付けの慣例に従う、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅの突然変異のうちの、１つまたは複数（全てを含む））をさらに含みうる。

【0296】

ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｌ２３５Ｅを含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、ある特定の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、Ｃ１２７Ｓ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、およびこれらの任意の組合せから選択される残基位置における、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０ＧおよびＰ３３１Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０ＧおよびＫ３２２Ａにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０におけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ４３０ＧおよびＫ３２２Ａにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｃ１２７Ｓにおけるアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４の修飾Ｆｃのうちのいずれかについての、一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けに従う、位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０ＧおよびＳ４４０Ｙにおけるアミノ酸置換を含む。

【0297】

他の抗体の改変
抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、抗体は、誘導体である。「誘導体」という用語は、アミノ酸（または核酸）の、挿入、欠失、または置換以外の化学修飾を含む分子を指す。ある特定の実施形態では、誘導体は、ポリマー、脂質、または他の有機部分もしくは無機部分との化学結合を含むがこれらに限定されない、共有結合的修飾を含む。ある特定の実施形態では、化学修飾された抗原結合性タンパク質は、化学修飾されていない、抗原結合性タンパク質より長い、循環半減期を有しうる。ある特定の実施形態では、化学修飾された抗原結合性タンパク質は、所望の細胞、組織、および／または臓器に対する、ターゲティング能の改善を有しうる。一部の実施形態では、誘導体の抗原結合性タンパク質は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、またはポリプロピレングリコールを含むがこれらに限定されない、１つまたは複数の水溶性ポリマーの接合を含むように共有結合的に修飾される。例えば、米国特許第４６４０８３５号、同第４４９６６８９号、同第４３０１１４４号、同第４６７０４１７号、同第４７９１１９２号、および同第４１７９３３７号を参照されたい。ある特定の実施形態では、誘導体の抗原結合性タンパク質は、モノメトキシポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ－１、３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物共重合体、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）－ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリ酸化プロピレン／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、およびポリビニルアルコールのほか、このようなポリマーの混合物を含むがこれらに限定されない、１つまたは複数のポリマーを含む。

【0298】

ある特定の実施形態では、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に修飾される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の水溶型ポリマーは、１つまたは複数の特異的な位置、例えば、誘導体のアミノ末端において結合している。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の水溶型ポリマーは、誘導体の、１つまたは複数の側鎖へと、ランダムに接合している。ある特定の実施形態では、ＰＥＧは、抗原結合性タンパク質について、治療能力を改善するのに使用される。ある特定の実施形態では、ＰＥＧは、ヒト化抗体について、治療能力を改善するのに使用される。ある特定のこのような方法については、例えば、参照により任意の目的で本明細書に組み込まれる、米国特許第６１３３４２６号において論じられている。

【0299】

医薬業界では、ペプチドアナログは、一般に、鋳型ペプチドの特性と類似する特性を伴う、非ペプチド薬物として使用される。これらの種類の、非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」または「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と称される。参照により任意の目的で本明細書に組み込まれる、Ｆａｕｃｈｅｒｅ、Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．、１５：２９（１９８６）；およびＥｖａｎｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３０：１２２９（１９８７）。このような化合物は、コンピュータ化された分子モデル化を一助として開発されることが多い。治療的に有用なペプチドと、構造的に類似するペプチド模倣物は、同様の治療効果または予防効果をもたらすのに使用されうる。一般に、ペプチド模倣物は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学特性または薬理活性を有するポリペプチド）と、構造的に類似するが、任意選択で、当技術分野で周知の方法により、－ＣＨ_２ＮＨ－、－ＣＨ_２Ｓ－、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（ｃｉｓおよびｔｒａｎｓ）、－ＣＯＣＨ_２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２－、および－ＣＨ_２ＳＯ－、から選択される結合で置きかえられた、１つまたは複数のペプチド結合を有する。ある特定の実施形態では、より安定なペプチドを作出するのに、コンセンサス配列の、１つまたは複数のアミノ酸の、同じ種類のＤ－アミノ酸（例えば、Ｌ－リジンの代わりに、Ｄ－リジン）による、体系的置換が使用されうる。加えて、コンセンサス配列、または実質的に同一なコンセンサス配列による変動を含む、拘束ペプチドは、当技術分野で公知の方法（参照により任意の目的で本明細書に組み込まれる、ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６１：３８７（１９９２））により；例えば、ペプチドを環化させる、分子内ジスルフィド架橋を形成することが可能な、内部システイン残基を付加することにより作出されうる。

【0300】

薬物コンジュゲーションは、生物学的に活性の、細胞傷害性（抗がん）ペイロードまたは薬物の、ある特定の腫瘍マーカー（例えば、理想的には、腫瘍細胞内または腫瘍細胞上だけで見出されるポリペプチド）を特異的にターゲティングする抗体へのカップリングを伴う。抗体は、体内で、これらのタンパク質を追跡し、自身を、がん細胞の表面へと接合させる。抗体と、標的タンパク質（抗原）との生化学反応は、腫瘍細胞内で、シグナルを誘発し、次いで、腫瘍細胞は、抗体を、細胞毒素と併せて、吸収または内部化する。ＡＤＣが内部化された後、細胞傷害性薬物が放出され、がんを死滅させる。このターゲティングのために、理想的に、薬物は、低度の副作用を有し、他の化学療法剤より広範な治療域をもたらす。抗体をコンジュゲートする技法については、開示されており、当技術分野でも公知である（例えば、Ｊａｎｅ ｄｅ Ｌａｒｔｉｇｕｅ、ＯｎｃＬｉｖｅ、２０１２年７月５日；「ＡＤＣ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」；およびＤｕｃｒｙら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２１（１）：５～１３（２０１０）を参照されたい）。

【0301】

抗体のフレームワーク
本明細書で記載される、抗ＳＩＲＰＡ抗体のうちのいずれかは、フレームワーク（ＦＲ）をさらに含む。一部の実施形態では、フレームワークは、ヒト免疫グロブリンフレームワークである。例えば、一部の実施形態では、抗体（例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体）は、上記の実施形態のうちのいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ヒト免疫グロブリンフレームワークがヒト抗体の一部である場合もあり、１つまたは複数の内因性のフレームワークを、ヒトフレームワーク領域（複数可）で置きかえることにより、非ヒト抗体がヒト化される場合もある。ヒト化のために使用されうるヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖可変領域または重鎖可変領域の、特定の亜群の、ヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；およびＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、ＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．、１３：１６１９～１６３３（２００８）を参照されたい）；およびＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７２：１０６７８～１０６８４（１９９７）、およびＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７１：２２６１１～２２６１８（１９９６）を参照されたい）を含むがこれらに限定されない。

【0302】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、およびＶＨ ＦＲ４（表９に示される）から選択される、１つまたは複数の（例えば、１つもしくはこれを超えるか、２つもしくはこれを超えるか、３つもしくはこれを超えるか、または４つ全ての）フレームワーク領域を含む、重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、ＶＨ ＦＲ１を含む、重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、ＶＨ ＦＲ２を含む、重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、ＶＨ ＦＲ３を含む、重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、ＶＨ ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ３、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含む。

【0303】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、または３Ｆ９－２５の、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、およびＶＨ ＦＲ４を含む、重鎖可変領域を含む。

【0304】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、およびＶＬ ＦＲ４（表９に示される）から選択される、１つまたは複数の（例えば、１つもしくはこれを超えるか、２つもしくはこれを超えるか、３つもしくはこれを超えるか、または４つ全ての）フレームワーク領域を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、ＶＬ ＦＲ１を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、ＶＬ ＦＲ２を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、ＶＬ ＦＲ３を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、ＶＬ ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ３、および配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。

【0305】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、または３Ｆ９－２５の、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、およびＶＬ ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。

【0306】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ３、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ４を含む重鎖可変領域と、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ３、および配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ４を含む軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗体である、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、または３Ｆ９－２５の、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、およびＶＨ ＦＲ４を含む重鎖可変領域と、抗体である、３Ｆ９－１、３Ｆ９－２、３Ｆ９－３、３Ｆ９－４、３Ｆ９－５、３Ｆ９－６、３Ｆ９－７、３Ｆ９－８、３Ｆ９－９、３Ｆ９－１０、３Ｆ９－１１、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－１３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１５、３Ｆ９－１６、３Ｆ９－１７、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１９、３Ｆ９－２０、３Ｆ９－２１、３Ｆ９－２２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－２４、または３Ｆ９－２５の、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、およびＶＬ ＦＲ４を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0307】

一部の実施形態では、本発明は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖が、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体を提供する。

【0308】

一部の実施形態では、本発明は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖が、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体を提供する。

【0309】

一部の実施形態では、本発明は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖が、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体を提供する。

【0310】

一部の実施形態では、本発明は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖が、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体を提供する。

【0311】

一部の実施形態では、本発明は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体を提供する。

【0312】

核酸、ベクター、および宿主細胞
本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号において記載されている、組換え法および組成物を使用して作製されうる。一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体のうちのいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗ＳＩＲＰＡ抗体（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）の、Ｖ_Ｌを含むアミノ酸配列、および／またはＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードしうる。一部の実施形態では、このような核酸を含む、１つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。一部の実施形態では、このような核酸を含む宿主細胞もまた提供される。一部の実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列、および抗体のＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む、第１のベクター、および抗体のＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む、第２のベクターを含む（例えば、これらが形質導入される）。一部の実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。本開示の宿主細胞はまた、限定せずに述べると、単離細胞、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける培養細胞、およびエクスビボにおける培養細胞も含む。

【0313】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を作る方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、抗ＳＩＲＰＡ抗体をコードする核酸を含む、本開示の宿主細胞を、抗体の発現に適する条件下で培養することを含む。一部の実施形態では、抗体は、その後、宿主細胞（または宿主細胞培地）から回収される。

【0314】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の組換え作製のために、抗ＳＩＲＰＡ抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニングおよび／または宿主細胞内の発現のために、１つまたは複数のベクターへと挿入される。このような核酸は、常套的な手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、たやすく単離およびシーケンシングされうる。

【0315】

本明細書で記載される、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体、またはその細胞表面発現断片もしくはポリペプチド（抗体を含む）のうちのいずれかをコードする核酸配列を含む、適切なベクターは、限定せずに述べると、クローニングベクターおよび発現ベクターを含む。適切なクローニングベクターは、標準的な技法に従い構築される場合もあり、当技術分野で利用可能な、多数のクローニングベクターから選択される場合もある。選択されるクローニングベクターは、使用されることが意図される宿主細胞に従い変動しうるが、有用クローニングベクターは、一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼのための、単一の標的を所有することが可能であり、かつ／またはベクターを含むクローンの選択において使用されうるマーカーのための遺伝子を保有しうる。適切な例は、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）、およびこれらの誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターを含む。これらのクローニングベクター、および他の多くのクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの販売元から市販されている。

【0316】

抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に適する宿主細胞は、原核細胞または真核細胞を含む。例えば、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、特に、グリコシル化およびＦｃのエフェクター機能が必要とされない場合は、細菌内で作製されうる。細菌内の、抗体断片およびポリペプチドの発現については（例えば、米国特許第５６４８２３７号、同第５７８９１９９号、および同第５８４０５２３号。発現の後で、抗体は、可溶型画分中の、細菌細胞ペーストから単離され、さらに精製されうる。

【0317】

原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物であって、それらのグリコシル化経路が「ヒト化」されている結果として、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを伴う抗体の作製をもたらす、真菌株および酵母株を含む真核微生物もまた、抗体をコードするベクターに適する、クローニングまたは発現の宿主である（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２２：１４０９～１４１４（２００４）；およびＬｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２４：２１０～２１５（２００６））。

【0318】

グリコシル化抗体の発現に適する宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）にも由来しうる。無脊椎動物細胞の例は、植物細胞および昆虫細胞を含む。特に、ヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのための昆虫細胞と共に使用されうる、多数のバキュロウイルス株が同定されている。植物細胞培養物もまた、宿主として利用されうる（例えば、トランスジェニック植物内で、抗体を作製するための、ＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載する、米国特許第５９５９１７７号、同第６０４０４９８号、同第６４２０５４８号、同第７１２５９７８号、および同第６４１７４２９号）。

【0319】

脊椎動物細胞もまた、宿主として使用されうる。例えば、懸濁液中で増殖するように適応された、哺乳動物細胞株も、有用でありうる。有用な哺乳動物宿主細胞株の、他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）により形質転換された、サル腎臓ＣＶ１細胞株；ヒト胎児腎臓細胞株（例えば、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．、３６：５９（１９７７）において記載されている、２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．、２３：２４３～２５１（１９８０）において記載されている、ＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、３８３：４４～６８（１９８２）において記載されている、ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な、哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ－ ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４２１６（１９８０））；ならびにＹ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体の作製に適する、ある特定の哺乳動物宿主細胞株の総説については、例えば、ＹａｚａｋｉおよびＷｕ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ）、２５５～２６８頁（２００３）を参照されたい。

【0320】

薬学的組成物／製剤
本明細書では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物および／または薬学的製剤が提示される。

【0321】

一部の実施形態では、薬学的に許容される担体は、好ましくは、利用される投与量および濃度で、レシピエントに対して非毒性である。本明細書で記載される抗体は、固体形態、半固体形態、液体形態、または気体形態にある調製物へと製剤化されうる。このような製剤の例は、限定せずに述べると、錠剤、カプセル、粉剤、顆粒剤、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル、マイクロスフェア、およびエアゾールを含む。薬学的に許容される担体は、製剤化に応じて、動物またはヒトへの投与のための薬学的組成物を製剤化するのに、一般に使用されるビヒクルである希釈剤による、所望の、薬学的に許容され、非毒性である担体を含みうる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、例えば、組成物の、ｐＨ、オスモル濃度、粘度、透明性、色、等張性、匂い、無菌状態、安定性、溶解もしくは放出の速度、吸着または浸透を、修飾、維持、または保存するための、製剤材料を含みうる。

【0322】

ある特定の実施形態では、薬学的に許容される担体は、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンなど）；抗微生物剤；抗酸化剤（など、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウム）；バッファー（ボレート、バイカーボネート、トリス－ＨＣｌ、シトレート、ホスフェート、または他の有機酸など）；増量剤（マンニトールまたはグリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピルベータ－シクロデキストリンなど）；充填剤；単糖類；二糖類；および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）；着色剤、芳香剤、および希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（ナトリウムなど）；保存剤（ベンザルコニウムクロライド、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトールまたはソルビトールなど）；懸濁剤；界面活性剤または湿潤剤（プルロニクス、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなど）；安定性増強剤（スクロースまたはソルビトールなど）；等張性増強剤（アルカリ金属のハロゲン化物、好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトール、ソルビトールなど）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤および／または医薬アジュバントを含むがこれらに限定されない。多様な種類の投与に適する製剤の、さらなる例は、「Ｔｈｅ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ２２版（２０１３）において見出されうる。薬物送達のための方法の簡潔な総説については、Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７～１５３３（１９９０）を参照されたい。

【0323】

非経口投与に適する製剤は、抗酸化剤、バッファー、静菌剤、および製剤を、意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含みうる、水性および非水性の、等張の滅菌注射溶液、ならびに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および保存剤を含みうる、水性および非水性の滅菌懸濁液を含む。

【0324】

製剤は、脳または中枢神経系における、保持および安定化のために、最適化されうる。薬剤が、頭蓋内区画へと投与される場合、薬剤は、この区画内に保持されたことが所望され、拡散されたり、他の形で血液脳関門を越えたりしないことが所望される。安定化法は、分子量の増大を達成するための、架橋、マルチマー化、またはポリエチレングリコール、ポリアクリルアミドなどの基、中性タンパク質担体への連結などを含む。

【0325】

保持を増大させるための、他の戦略は、生分解性または生体内分解性のインプラント内の、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体の封入を含む。治療的に活性な薬剤の放出速度は、ポリマーマトリックスを通した輸送速度、およびインプラントの生分解により制御される。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プラーク、線維、マイクロカプセルなどであることが可能であり、選択された挿入部位と適合性である、任意のサイズまたは形状でありうる。利用されうる、生分解性ポリマー組成物は、分解されると、モノマーを含む、生理学的に許容される分解産物を結果としてもたらす、有機エステルまたは有機エーテルでありうる。無水物、アミド、オルトエステルなどは、それら自身で使用される場合もあり、他のモノマーと組み合わせて使用される場合もある。ポリマーは、縮合ポリマーとなるであろう。ポリマーは、架橋される場合もあり、架橋されない場合もある。特に目的のポリマーは、ホモポリマーまたはコポリマーである、ヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー、および多糖である。目的のポリエステルの中には、Ｄ－乳酸、Ｌ－乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトンのポリマー、およびこれらの組合せが含まれる。目的の多糖の中には、アルギン酸カルシウム、および機能化セルロース、特に、水中で不溶性であること、約５ｋＤ～５００ｋＤの分子量などにより特徴づけられる、カルボキシメチルセルロースエステルがある。生分解性ハイドロゲルもまた、対象発明のインプラント内で利用されうる。ハイドロゲルとは、典型的に、液体を吸収する能力により特徴づけられる、共重合体材料である。

【0326】

治療的使用
本明細書で開示される通り、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、疾患および障害を防止するか、この危険性を低減するか、またはこれを処置するために使用されうる。

【0327】

本発明の一態様では、ＳＩＲＰＡを下方調節する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、治療剤として使用される。このような薬剤は、対象における、ＳＩＲＰＡの発現、活性、および／またはシグナル伝達と関連する、疾患または病理を処置し、緩和し、かつ／または防止するように投与される。治療レジメンは、標準法を使用して、ＳＩＲＰＡの発現、活性、および／またはシグナル伝達と関連する疾患または障害、例えば、がんまたは他の腫瘍性障害を患う（またはこれらを発症する危険性がある）対象、例えば、ヒト患者を同定することにより実行される。一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡの発現、活性、および／またはシグナル伝達と関連する病理を有する細胞は、ＳＩＲＰＡリガンド、例えば、ＣＤ４７を発現させる。一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡの発現、活性、および／またはシグナル伝達と関連する病理を有する細胞は、ＳＩＲＰＡを発現させる。

【0328】

下記でさらに詳述される通り、ＳＩＲＰＡを下方調節する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの発現、活性、またはシグナル伝達と関連する、疾患または病理を処置するのに使用される、さらなる治療剤と組み合わせて使用されうる。本開示では、「組み合わせて」および「併用して」という用語は、互換的に使用される。抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される、さらなる治療剤は、ＳＩＲＰＡを下方調節する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体の前に投与される場合もあり、この後で投与される場合もあり、これと共時的に投与される場合もある。

【0329】

本開示の一態様では、例えば、細胞表面上のＳＩＲＰＡの発現を低下させるが、リガンド、例えば、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を実質的に遮断しない抗ＳＩＲＰＡ抗体を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体調製物が、ヒト対象へと投与される。抗体の投与は、リガンドへの結合、例えば、ＣＤ４７への結合により媒介される、ＳＩＲＰＡの発現、活性、および／またはシグナル伝達機能を失効化させうるか、または阻害しうるか、またはこれらに干渉しうる。

【0330】

一実施形態では、ＳＩＲＰＡの発現と関連する、疾患または障害は、がんである。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡを発現させる骨髄細胞の、血液増殖性疾患などのがんを有する患者へと投与される。典型的な実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＣＤ４７を発現させるがんを有する患者へと投与される。

【0331】

ある特定の実施形態では、本開示の方法により防止または処置されるがんは、限定せずに述べると、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）（例えば、扁平上皮癌（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ））、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がん、胃腸がんおよび胃腸間質がんを含む胃（ｇａｓｔｒｉｃまたはｓｔｏｍａｃｈ）がん、腎がん（例えば、明細胞癌）、卵巣がん、肝がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺がん（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、甲状腺がん、神経芽細胞腫、膵臓がん、膠芽細胞腫（多形神経膠芽腫）、子宮頸がん、胃がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸癌、および頭頸部がん（または癌）、胃がん、生殖細胞腫瘍、小児科肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー細胞リンパ腫、メラノーマ（例えば、皮膚悪性メラノーマまたは眼内悪性メラノーマなどの転移性悪性メラノーマ）、骨がん、皮膚がん、子宮がん、肛門領域がん、精巣がん、ファローピウス管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、小児固形腫瘍、尿管がん、腎盂癌、中枢神経系（ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ）（中枢神経系（ＣＮＳ））腫瘍、原発中枢神経系リンパ腫、骨髄異形成症候群、結腸直腸新生物、固形腫瘍、腫瘍血管新生、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘導されたがんを含む、環境誘導性がん、ウイルス関連がん（例えば、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）関連腫瘍）、ならびに全ての種類の白血病、リンパ腫、および骨髄腫など、２つの主要な血液細胞系統、すなわち、骨髄系細胞株（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ、およびマスト細胞を産生する）、またはリンパ系細胞株（Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、および形質細胞を産生する）に由来する血液腫瘍、例えば、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ（Ｍ０）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞の成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３変異型［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４または好酸球増加症を伴うＭ４変異型［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、孤発性顆粒球性肉腫、および緑色腫などの、急性白血病、慢性白血病、リンパ性白血病、および／または骨髄性白血病；ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、無痛性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞血液腫瘍、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例えば、Ｋｉ １＋）大細胞型リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性（ａｎｇｉｏ ｉｍｍｕｎｏｂｌａｓｔｉｃ）Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞性リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性などのリンパ腫；ならびにリンパ腫／白血病（Ｔ－Ｌｂｌｙ／Ｔ－ＡＬＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、真性組織球性リンパ腫、中枢神経系原発リンパ腫、原発滲出性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ系統造血系腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（原発難治性であるか、リツキシマブ不応性であるか、リツキシマブ／ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）に対して不応性であるＤＬＢＣＬ患者、再発性もしくは難治性（Ｒ／Ｒ）ＤＬＢＣＬ患者、および／またはＣＡＲ－Ｔ不適格性ＤＬＢＣＬ患者を含む）、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫（ＣＴＬＣ）（また、菌状息肉症またはセザリー症候群とも呼ばれる）、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（また、無痛性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、および多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞リンパ腫；骨髄系統の造血系腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む、間葉由来の腫瘍；精上皮腫、奇形癌、星状細胞腫、神経鞘腫を含む、中枢神経腫瘍および末梢神経腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫を含む、間葉由来の腫瘍；ならびにメラノーマ、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、精上皮腫、甲状腺濾胞がん、および奇形癌、リンパ系統の造血系腫瘍、例えば、小細胞および脳状細胞型を含む、Ｔ前リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）などのＴ細胞障害を含むがこれらに限定されない、Ｔ細胞腫瘍およびＢ細胞腫瘍を含む、他の腫瘍；好ましくは、Ｔ細胞型の、大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＬ）；成人Ｔ細胞型ＮＨＬ肝脾（ｈｅｐｔａｓｙｌｌａｂｉｃ）リンパ腫；末梢性／成熟Ｔ細胞リンパ腫（多形性亜型および免疫芽球性亜型）；血管中心性（鼻型）Ｔ細胞リンパ腫；頭頸部がん、腎がん、直腸がん、甲状腺がん；急性骨髄性リンパ腫のほか、前記がんの、任意の組合せを含む。本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体もまた、転移性がんを処置するのに使用されうる。

【0332】

一部の実施形態では、がんは、肉腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎盂がん、白血病、肺がん、メラノーマ、リンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、および線維肉腫から選択される。一部の実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳癌である。一部の実施形態では、がんは、早期がんの場合もあり、後期がんの場合もある。一部の実施形態では、がんは、原発腫瘍でありうる。一部の実施形態では、がんは、上記の種類のがんのうちのいずれかに由来する、第２の部位における転移性腫瘍でありうる。

【0333】

一部の実施形態では、がんは、多形神経膠芽腫；腎明細胞癌；副腎皮質癌；膀胱尿路上皮癌；びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫；肺腺癌；膵腺癌、腎細胞がん、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮癌、子宮頸部腺癌、胆管癌、結腸腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、腎嫌色素細胞、腎乳頭細胞癌、低悪性度神経膠腫、肝細胞癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵腺癌、クロム親和性細胞腫および傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣生殖細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体内膜癌、子宮癌肉腫、ならびにブドウ膜メラノーマから選択される。

【0334】

一部の実施形態では、本開示は、個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することにより、がんを防止するか、この危険性を低減するか、またはチェックポイント阻害剤療法に対して難治性である、これを有する個体を処置する方法を提示する。

【0335】

一部の実施形態では、本開示は、個体に、治療的有効量の本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することにより、がんを防止するか、この危険性を低減するか、またはこれを有する個体を処置する方法を提示する。

【0336】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、チェックポイント阻害剤として作用する治療剤と共に投与されうる。一部の実施形態では、方法は、個体に、阻害性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、および／または別の標準的な抗がん治療もしくは治験中の抗がん治療を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、およびＣＤ７３から選択される。典型的な実施形態では、治療剤は、ＰＤ１（Ｄ１）、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ－５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、またはＣＤ７３から選択されるチェックポイント阻害剤に対する抗体である。一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤に対して方向付けられた抗体の組合せは、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体と共に投与される。

【0337】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト性抗体、例えば、アゴニストの抗ＣＤ４０抗体、アゴニストの抗ＯＸ４０抗体、アゴニストの抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト性抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト性抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニストの抗ＣＤ１３７／４－１ＢＢ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２７抗体、アゴニストの抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、アゴニストの抗ＣＤ３０抗体、アゴニストの抗ＢＴＬＡ抗体、アゴニストの抗ＨＶＥＭ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２抗体、アゴニストの抗ＣＤ５抗体、およびこれらの任意の組合せと共に投与されうる。

【0338】

一部の実施形態では、方法は、個体に、阻害性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、および／または別の標準的な抗がん治療もしくは治験中の抗がん治療を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、および抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ（Ｂ－ ａｎｄ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ）抗体、抗ＫＩＲ（Ｋｉｌｌｅｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、ならびにこれらの任意の組合せから選択される。一部の実施形態では、標準的な抗がん治療または治験中の抗がん治療は、放射線療法、細胞傷害性化学療法、ターゲティング療法、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、養子細胞移入（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ－Ｔ）、ワクチン療法、およびサイトカイン療法から選択される、１つまたは複数の治療である。一部の実施形態では、方法は、個体に、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ－１抗体、抗ＩＬ－２抗体、およびこれらの任意の組合せから選択される。

【0339】

一部の実施形態では、方法は、個体に、刺激性免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト性抗体を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト性抗体は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト性抗体は、アゴニストの抗ＣＤ４０抗体、アゴニストの抗ＯＸ４０抗体、アゴニストの抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２８抗体、アゴニストの抗ＣＤ１３７／４－１ＢＢ抗体、アゴニストの抗ＣＤ２７抗体、アゴニストの抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、およびこれらの任意の組合せから選択される。

【0340】

一部の実施形態では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、放射線療法および／または化学療法剤と組み合わせて投与される。化学療法剤は、例えば、以下の群：ピリミジンアナログ（５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン、およびシタラビン）およびプリンアナログ、葉酸アンタゴニストおよび類縁の阻害剤（メトトレキセート、ペメトレキセド、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、および２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））などの代謝拮抗剤／抗がん剤；ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビン）などの天然生成物、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン、エリブリン、およびナベルビンなどの微小管撹乱剤を含む抗増殖剤／抗有糸分裂剤；エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）；ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミン、オキサリプラチン（ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｍｅｌａｍｉｎｅｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、イホスファミド、メルファラン、メルクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ）、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびエトポシド（ＶＰ １６））；ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤（アザシチジン）；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、およびマイトマイシンなどの抗生剤；酵素（Ｌ－アスパラギンを、全身的に代謝し、それら自身のアスパラギンを合成する能力を有さない細胞を欠乏させる、Ｌ－アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミド、およびアナログである、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミンおよびメチルメラミン（ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、スルホン酸アルキル（ブスルファン）、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）、およびアナログである、ストレプトゾシン）、トリアゼン（ダカルバジン（ＤＴＩＣ））などの抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤；葉酸アナログ（メトトレキセート）などの抗増殖／抗有糸分裂代謝拮抗剤；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモンアナログ（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）、およびアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾ－ル）；抗凝固剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩、および他のトロンビン阻害剤）；線溶剤（組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼなど）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗遊走剤；抗分泌剤（ブレフェルディン）；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管新生化合物（ＴＮＰ４７０、ゲニステイン、ポマリドミド）および増殖因子阻害剤（ｚｉｖ－アフリベルセプトなどの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アポトーシスタンパク質阻害剤（ＩＡＰ）アンタゴニスト（ビリナパント）；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤（ボリノスタット、ロミデプシン、チダミド、パノビノスタット、モセチノスタット、アベキシノスタット、ベリノスタット、エンチノスタット、レミノスタット、ジビノスタット、キシノスタット、ＳＢ９３９）；プロテアソーム阻害剤（イキサゾミブ）；アンジオテンシン受容体遮断剤；一酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、アレムツズマブ、アブシキシマブ、アトリズマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エファリズマブ、エロツズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、ウステキヌマブ、ビジリズマブ、ゲムツズマブオゾガミシン、ブレンツキシマブ・ベドチン）；キメラ抗原受容体；細胞周期阻害剤（フラボピリドール、レスコビチン、ブリオスタチン－１）、および分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、およびミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、プレドニゾン、およびプレドニゾロン（ｐｒｅｎｉｓｏｌｏｎｅ））；ＰＡＲＰ阻害剤（ニラパリブ、オラパリブ）；接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤（デファクチニブ（ＶＳ－６０６３）、ＶＳ－４７１８、ＶＳ－６０６２、ＧＳＫ２２５６０９８）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤（セディラニブ、ガルニセルチブ、ロシレチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、ＥＧＦ８１６、ＡＺＤ４５４７）；ｃ－Ｍｅｔ阻害剤（カプマチニブ、ＩＮＣ２８０）；ＡＬＫ阻害剤（セリチニブ、クリゾチニブ）；ミトコンドリア機能不全誘導剤、毒素例えば、コレラ毒素、リシン、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属外毒素、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）アデニル酸シクラーゼ毒素、またはジフテリア毒素、およびカスパーゼ活性化因子；およびクロマチン撹乱剤を含む。一部の実施形態では、化学療法剤は、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗有糸分裂薬剤、またはこれらの任意の組合せである。

【0341】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ－Ｔ）療法、ワクチン療法、および／またはサイトカイン療法と組み合わせて投与される。

【0342】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、阻害性サイトカイン、例えば、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ－１抗体、または抗ＩＬ－２抗体などの阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体と組み合わせて投与される。

【0343】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、少なくとも１つの刺激性サイトカインと組み合わせて投与される。本明細書における実施形態のうちのいずれかと組み合わされうる、一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＩＦＮ－α４、ＩＦＮ－β、ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＲＰ、ＩＬ－２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ－γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ－３３、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ベータ、およびこれらの任意の組合せから選択される。

【0344】

一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡを下方調節する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、神経障害を有する患者へと投与されるか、または神経障害の危険性を低減するか、神経障害の発生を緩徐化させるか、もしくは神経障害を防止するように投与される。一部の実施形態では、神経障害は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、軽度認知障害、パーキンソン病、萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、タウオパシー（Ｔａｕｐａｔｈｙ）、または多発性硬化症を含む認知症である。

【0345】

一部の実施形態では、ＳＩＲＰＡを下方調節する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体が、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパシー（Ｔａｕｐａｔｈｙ）、または多発性硬化症を有する患者へと投与される。一部の実施形態では、薬剤は、クロイツフェルト－ヤコブ病、正常圧水頭症、那須ハコラ病、脳卒中、感染、外傷性脳損傷、進行性核上性麻痺、拳闘家認知症（慢性外傷性脳症）、第１７染色体と連関するパーキンソン病、リティコ－ボディグ病（グアム型パーキンソン－認知症複合）、神経原線維変化型認知症、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性汎脳炎、鉛脳症、結節性硬化症、ハラーフォルデン－シュパッツ病、リポフスチン症、ピック病、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、前頭側頭葉変性、レビー小体認知症、多系統委縮症、シャイ－ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、または大脳皮質基底核変性症を有する患者へと投与される。

【0346】

認知症
認知症とは、かつて身体障害を患ったことのない人における、通常の老化から予測されうる状態を越える、全般的な認知能力の、重篤な喪失として顕在化する、非特異的な症候群（すなわち、徴候および症状のセット）である。認知症は、固有の、全般的な脳損傷の結果として、不変でありうる。代替的に、認知症は、体内の損傷または疾患に起因する、長期にわたる減衰を結果としてもたらす、進行性でありうる。認知症は、高齢者集団において、より一般的であるが、また、６５歳以前でも生じうる。認知症の影響を受ける、認知領域は、限定せずに述べると、記憶、集中力の持続時間、言語、および問題の解決を含む。一般に、個体が、認知症を伴うと診断される前に、少なくとも６カ月間にわたり、症状が存在しなければならない。

【0347】

認知症の例示的形態は、限定せずに述べると、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、意味認知症、およびレビー小体認知症を含む。

【0348】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、認知症を防止し、この危険性を低減し、かつ／またはこれを処置しうる。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、認知症を有する個体における、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性をモジュレートしうる。

【0349】

前頭側頭型認知症
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）とは、脳の前頭葉の進行性劣化から生じる状態である。時間経過にわたり、変性は、側頭葉へと進行しうる。有病率において、アルツハイマー病（ＡＤ）に次ぐＦＴＤは、初老性認知症症例のうちの２０％を占める。ＦＴＤの臨床特徴は、記憶障害、行動の異常、性格の変化、および言語機能障害を含む（Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．およびＶａｎ Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，Ｃ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．、２４：１８６～１９４（２００８）；Ｎｅａｒｙ，Ｄ．ら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、５１：１５４６～１５５４（１９９８）；Ｒａｔｎａｖａｌｌｉ，Ｅ．、Ｂｒａｙｎｅ，Ｃ．、Ｄａｗｓｏｎ，Ｋ．、およびＨｏｄｇｅｓ，Ｊ．Ｒ．、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、５８：１６１５～１６２１（２００２））。

【0350】

ＦＴＤ症例の実質的な部分は、常染色体優性的に受け継がれるが、１つの家族内であってもなお、症状は、行動障害を伴うＦＴＤから、原発進行性失語症、大脳皮質基底核神経節変性症までのスペクトルに及びうる。ＦＴＤは、大半の神経変性疾患と同様に、罹患脳内の、特異的なタンパク質凝集物の、病理学的存在により特徴づけられうる。歴史的に、ＦＴＤの最初の記載は、神経原線維変化における、過リン酸化タウタンパク質の、ニューロン内蓄積、またはピック小体の存在を認識した。微小管と関連するタンパク質である、タウの病原的役割は、いくつかの家族における、タウタンパク質をコードする遺伝子内の、突然変異の同定により裏書きされた（Ｈｕｔｔｏｎ，Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３９３：７０２～７０５（１９９８）。しかし、ＦＴＤ脳の大部分は、過リン酸化タウの蓄積を示さず、ユビキチン（Ｕｂ）およびＴＡＲ ＤＮＡ結合性タンパク質（ＴＤＰ４３）に対する免疫反応性を呈する（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｍ．ら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．６４：１３８８～１３９４（２００７））。Ｕｂの封入を伴うＦＴＤ症例（ＦＴＤ－Ｕ）の大部分は、プログラニュリン遺伝子内に、突然変異を保有することが示された。

【0351】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、ＦＴＤを防止し、この危険性を低減し、かつ／またはこれを処置しうる。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、ＦＴＤを有する個体における、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性をモジュレートしうる。

【0352】

アルツハイマー病
アルツハイマー病（ＡＤ）とは、認知症の、最も一般的な形態である。ＡＤは、治癒することがなく、進行するにつれて増悪し、最終的に、死をもたらす。ＡＤは、６５歳を超える人々において診断されることがもっと多い。しかし、低有病率の、早発性アルツハイマー病は、はるかに若年において生じうる。アルツハイマー病の一般的症状は、最近の出来事を想起することの困難などの行動学的症状；認知症状、意識混濁、易刺激性および攻撃性、気分変動、言語障害、および長期にわたる記憶喪失を含む。疾患が進行するにつれて、身体機能が失われ、最終的に、死がもたらされる。アルツハイマー病は、完全に明白となる前の、未知で可変量の時間にわたり発症し、診断されないまま、多年にわたり進行しうる。

【0353】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、アルツハイマー病を防止し、この危険性を低減し、かつ／またはこれを処置しうる。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、アルツハイマー病を有する個体における、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性をモジュレートしうる。

【0354】

パーキンソン病
特発性パーキンソン病もしくは原発パーキンソン病、運動不全硬直症候群（ＨＲＳ）、または振戦麻痺とも称されうる、パーキンソン病とは、運動系の制御に影響を及ぼす、神経変性脳障害である。脳内の、ドーパミン産生細胞の、進行性の死は、パーキンソン病の、主要な症状をもたらす。パーキンソン病は、５０歳を超える人々において、診断されることがもっと多い。パーキンソン病は、大半の人々において、特発性（公知の原因を有さない）である。しかし、パーキンソン病では、遺伝子的因子もまた、役割を果たしうる。

【0355】

パーキンソン病の症状は、限定せずに述べると、手掌、腕、脚、顎、および顔面の震え、四肢および体幹における、筋肉の硬直、運動の緩慢（動作緩慢）、姿勢の不安定性、歩行困難、神経精神科的問題、発話または行動の変化、うつ病、不安、疼痛、精神症、認知症、幻覚、および睡眠問題を含む。

【0356】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、パーキンソン病を防止し、この危険性を低減し、かつ／またはこれを処置しうる。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、パーキンソン病を有する個体における、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性をモジュレートしうる。

【0357】

萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）
本明細書で使用される、萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または運動ニューロン病、またはルーゲーリック病は、互換的に使用され、急速進行性筋力低下、筋萎縮および筋痙攣、筋痙縮、発話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）、ならびに呼吸困難（呼吸障害）により特徴づけられる、多様な病因を伴う、消耗性疾患を指す。

【0358】

プログラニュリンは、ＡＬＳにおいて、役割を果たし（Ｓｃｈｙｍｉｃｋ，ＪＣら（２００７）、Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．、７８：７５４～６）、ＴＤＰ－４３など、ＡＬＳ原因タンパク質により引き起こされた損傷を、再度保護する（Ｌａｉｒｄ，ＡＳら（２０１０）、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、５：ｅ１３３６８）ことが示されている。また、プロＮＧＦが、脊髄損傷後において、希突起膠細胞および皮質脊髄ニューロンのｐ７５媒介性死を誘導することも裏付けられた（Ｂｅａｔｔｙら、Ｎｅｕｒｏｎ（２００２）、３６、３７５～３８６頁；Ｇｉｅｈｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ（２００４）、１０１、６２２６～３０頁）。

【0359】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、ＡＬＳを防止し、この危険性を低減し、かつ／またはこれを処置しうる。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、筋委縮性側索硬化症を有する個体における、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性をモジュレートしうる。

【0360】

ハンチントン病
ハンチントン病（ＨＤ）とは、ハンチンチン遺伝子（ＨＴＴ）内の、常染色体優性突然変異により引き起こされる、遺伝性の神経変性疾患である。ハンチンチン遺伝子内の、シトシン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）－アデニン－グアニン（ＣＡＧ）トリプレットリピートの拡大は、ＨＴＴ遺伝子によりコードされる、ハンチンチンタンパク質（Ｈｔｔ）の突然変異形態の産生を結果としてもたらす。この、突然変異体のハンチンチンタンパク質（ｍＨｔｔ）は、毒性であり、ニューロンの死に寄与する。ハンチントン病の症状は、最も一般的に、３５～４４歳の間に出現するが、これらは、任意の年齢において出現しうる。

【0361】

ハンチントン病の症状は、限定せずに述べると、運動制御問題、ギクシャクした、ランダムな運動（舞踏病）、眼運動の異常、平衡障害、発作、咀嚼困難、嚥下困難、認知問題、発話の変化、記憶障害、思考困難、不眠、疲労、認知症、性格の変化、うつ病、不安、および強迫性行動を含む。

【0362】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、ハンチントン病（ＨＤ）を防止し、この危険性を低減し、かつ／またはこれを処置しうる。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、ハンチントン病を有する個体における、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性をモジュレートしうる。

【0363】

タウオパシー
タウオパシー（Ｔａｕｏｐａｔｈｙ（Ｔａｕｐａｔｈｙ） ｄｉｓｅａｓｅ）またはタウオパシー（Ｔａｕｏｐａｔｈｙ）とは、脳内の、微小管関連タンパク質である、タウの凝集により引き起こされる、神経変性疾患のクラスである。アルツハイマー病（ＡＤ）は、最もよく知られたタウオパシーであり、不溶性の神経原線維変化（ＮＦＴ）の形態にある、ニューロン内のタウタンパク質の蓄積を伴う。他のタウオパシーおよび障害は、進行性核上性麻痺、拳闘家認知症（慢性外傷性脳症）、第１７染色体と連関する前頭側頭型認知症およびパーキンソン病、リティコ－ボディグ病（グアム型パーキンソン－認知症複合）、神経原線維変化型認知症、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性汎脳炎、鉛脳症、結節性硬化症、ハラーフォルデン－シュパッツ病、リポフスチン症、ピック病、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ハンチントン病、および前頭側頭葉変性を含む。

【0364】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、タウオパシーを防止し、この危険性を低減し、かつ／またはこれを処置しうる。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、タウオパシーを有する個体における、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性をモジュレートしうる。

【0365】

多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）はまた、散在性硬化症または散在性脳脊髄炎とも称される。ＭＳとは、脳および脊髄の、アクソン周囲の、脂肪性の髄鞘が、損傷し、脱髄および瘢痕化、ならびに広範なスペクトルにわたる、徴候および症状をもたらす、炎症性疾患である。ＭＳは、脳内および脊髄内の神経細胞が、互いと、効果的に連絡し合う能力に影響を及ぼす。神経細胞は、ミエリンと呼ばれる絶縁物質内に含有される、アクソンと呼ばれる線維に沿って、活動電位と呼ばれる電気信号を送信することにより連絡する。ＭＳでは、体内の固有の免疫系が、ミエリンを攻撃し、損傷させる。ミエリンが失われると、アクソンは、もはや、効果的に、信号を伝えることができない。ＭＳの発生は通例、若齢の成人において生じ、女性において、より一般的である。

【0366】

ＭＳの症状は、限定せずに述べると、感受性の喪失またはヒリヒリ感など、感覚の変化；感覚麻痺および感覚異常など、チクチクする痛みまたは無感覚；筋力低下；クローヌス；筋痙攣；運動困難；運動失調など、協調運動および平衡に伴う困難；構音障害などの発話問題、または嚥下障害などの嚥下問題；眼振、眼内閃光を含む視神経炎、および複視などの視覚問題；疲労；急性疼痛または慢性疼痛；ならびに膀胱および腸の困難；多様な程度の認知障害；うつ病または気分不安定の情緒症状；常温より高温への曝露に起因する、現存する症状の増悪である、ウートフ現象；ならびに首を曲げると、背筋に走る、電気的感覚である、レミット徴候を含む。

【0367】

一部の実施形態では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、多発性硬化症を防止し、この危険性を低減し、かつ／またはこれを処置しうる。一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、多発性硬化症を有する個体における、１つまたは複数のＳＩＲＰＡ活性をモジュレートしうる。

【0368】

一部の実施形態では、対象または個体は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定せずに述べると、馴致動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒト、およびサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）を含む。一部の実施形態では、対象または個体は、ヒトである。

【0369】

本明細書で提示される抗体（および任意の、さらなる治療剤）は、非経口経路、肺内経路、鼻腔内経路、病巣内投与、脳脊髄内経路、頭蓋内経路、脊髄内経路、滑膜内経路、髄腔内経路、経口経路、局所経路、または吸入経路を含む、任意の、適切な手段により投与されうる。非経口注入は、筋肉内投与、ボーラスとしての、または時間経過にわたる連続的注入による、静脈内投与、動脈内投与、関節内投与、腹腔内投与、または皮下投与を含む。一部の実施形態では、投与は、静脈内投与である。一部の実施形態では、投与は、皮下投与である。投与は、投与が、短期であるのか、長期であるのかに、部分的に応じて、任意の、適切な経路、例えば、静脈内注射または皮下注射などの注射による投与でありうる。本明細書では、単回投与、または多様な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、およびパルス点滴を含むがこれらに限定されない、多様な投与スケジュールが想定される。

【0370】

本明細書で提示される抗体は、医学行動規範と一致した様式で、製剤化、投薬、および投与されるであろう。この文脈における検討のための因子は、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与法、投与スケジュール、および医療従事者に公知の、他の因子を含む。抗体は、問題の障害を防止または処置するのに、現在使用されている、１つまたは複数の薬剤と共に、製剤化される必要はないが、任意選択で、このように製剤化される。このような、他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または処置の種類、および上記で論じられた、他の因子に依存する。これらは、一般に、本明細書で記載されるのと同じ投与量および投与経路で使用されるか、または本明細書で記載される投与量の、約１～９９％で使用されるか、または適切であることが、経験的に／臨床的に決定される、任意の投与量および任意の経路で使用される。

【0371】

疾患を防止または処置するのに適切な、本発明の抗体（単独で、または１つもしくは複数の、他のさらなる治療剤と組み合わせて使用される）の投与量は、処置される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度および経過、抗体が、予防目的で投与されるのか、治療目的で投与されるのか、既往の治療、患者の病歴、および抗体に対する応答、ならびに主治医の熟慮に依存するであろう。抗体は、患者へと、単回で、または一連の処置にわたり、適切に投与される。

【0372】

例えば、１回または複数回にわたる個別の投与によるのであれ、連続的注入によるのであれ、疾患の種類および重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者への投与のための、初期の候補投与量でありうる。１つの、典型的な、毎日の投与量は、上述の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、またはこれを超える範囲にわたりうるであろう。数日間またはこれを超える反復投与では、状態に応じて、処置は、一般に、病徴の、所望の抑制が生じるまで持続されるであろう。抗体の、１つの例示的投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらの任意の組合せ）の、１回または複数回の投与が、患者に対してなされうる。このような用量は、間欠的に、例えば、毎週または３週間ごとに（例えば、患者が、約２～約２０回、または、例えば、約６回の抗体の投与を受けるように）投与されうる。ある特定の実施形態では、投与頻度は、毎日３回、毎日２回、毎日１回、隔日１回、毎週１回、２週間ごとに１回、４週間ごとに１回、５週間ごとに１回、６週間ごとに１回、７週間ごとに１回、８週間ごとに１回、９週間ごとに１回、１０週間ごとに１回、または毎月１回、隔月１回、３カ月ごとに１回、またはこれより長い期間ごとに１回である。初期の高負荷用量に続き、１回または複数回の低用量が投与されうる。しかし、他の投与量レジメンも、有用でありうる。この治療の進行は、常套的な技法およびアッセイにより、容易にモニタリングされる。

【0373】

診断的使用
抗体のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、本明細書で提示される抗ＳＩＲＰＡ抗体のうちのいずれかは、試料または個体における、ＳＩＲＰＡの存在を検出するために有用である。本明細書で使用される、「～を検出すること」という用語は、定量的検出または定性的検出を包摂する。本明細書では、本開示の抗体を、個体または個体に由来する組織試料における、ＳＩＲＰＡの検出などの、診断目的で使用する方法が提示される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。

【0374】

検出法は、抗原に結合した抗体の定量を伴いうる。生物学的試料の、抗体の検出は、免疫蛍光顕微鏡法、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ解析、免疫沈降法、またはマイクロポジトロン断層法を含む、当技術分野で公知である、任意の方法によりなされうる。ある特定の実施形態では、抗体は、例えば、^１８Ｆで放射性標識化され、その後、マイクロポジトロン断層解析を利用して検出される。抗体の結合はまた、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピュータ断層法、単一光子コンピュータ断層法（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ断層法（ＣＴ）、およびコンピュータ断層法（ＣＡＴ）などの非侵襲的技法によっても、患者において定量されうる。

【0375】

製造品
本明細書では、本明細書で記載される、抗ＳＩＲＰＡ抗体を含む、製造品（例えば、キット）が提示される。製造品は、本明細書で記載される抗体を含む、１つまたは複数の容器を含みうる。容器は、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封マイラーまたはプラスチックバッグ）などを含むがこれらに限定されない、任意の、適切な包装でありうる。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回投与用量のパッケージ）、または単位未満用量でありうる。

【0376】

一部の実施形態では、キットは、第２の薬剤をさらに含みうる。一部の実施形態では、第２の薬剤は、静菌性の注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、およびデキストローズ液など、を含むがこれらに限定されない、薬学的に許容されるバッファーまたは希釈剤である。一部の実施形態では、第２の薬剤は、上記で記載した、薬学的に活性の薬剤である。

【0377】

製造品のうちのいずれかについての、一部の実施形態では、製造品は、本開示の方法に従う使用のための指示書をさらに含む。指示書は、一般に、意図された処置のための、投与量、投与スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。一部の実施形態では、これらの指示書は、本開示の任意の方法に従い、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト－ヤコブ病、正常圧水頭症、筋委縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパシー、那須ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性大腸炎および慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、特発性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体認知症、多系統委縮症、シャイ－ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性（ｇｒａｎｕｌｏｍａｒｔｏｕｓ）障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性、緑内障、網膜色素変性、網膜変質、気道感染、敗血症、眼感染症、全身性感染、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、および膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎細胞がん、腎盂がん、白血病、肺がん、メラノーマ、非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発骨髄線維症または特発性骨髄線維症、原発骨髄硬化症または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、ＳＩＲＰＡを発現させる腫瘍、甲状腺がんを含むがん、感染症、中枢神経系ヘルペス、寄生虫感染、トリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｅ））感染、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ（Ｃｒｕｚｉ）感染、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染、ドノバンリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖａｎｉ）感染、Ｂ群連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）感染、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）感染、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ）感染、Ｉ型ＨＩＶ、およびインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）から選択される、疾患、障害、または損傷を防止するか、これらの危険性を低減するか、またはこれらを有する個体を処置するための、本開示の単離抗ＳＩＲＰＡ抗体（例えば、本明細書で記載される、抗ＳＩＲＰＡ抗体）の投与についての記載を含む。一部の実施形態では、指示書は、抗ＳＩＲＰＡ抗体、および第２の薬剤（例えば、第２の、薬学的に活性の薬剤）の使用のための指示書を含む。

【0378】

本開示は、以下の例を参照することにより、より完全に理解されるであろう。しかし、これらの例は、本開示の範囲を限定するものとして見なされるべきではない。本開示を通した、全ての引用は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。

【実施例】

【0379】

以下の例は、例示だけを目的として提示されるものであり、限定を目的として提示されるものではない。当業者は、本質的に同様の結果をもたらすように、変化または改変されうる、様々なパラメータを、たやすく認識するであろう。

【0380】

実施例１
抗ＳＩＲＰＡ抗体の作製
ヒトＳＩＲＰＡタンパク質のアミノ酸配列を、下記の、配列番号１に明示する。ヒトＳＩＲＰＡは、配列番号１のアミノ残基１～３０に位置するシグナルペプチドを含有する。ヒトＳＩＲＰＡは、配列番号１のアミノ残基３２～１３７に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン；配列番号１のアミノ残基１４８～２４７および２５４～３４８に位置する、さらなる、細胞外免疫グロブリン様定常型（ＩｇＣ）ドメイン配列；配列番号１のアミノ残基３７４～３９４に位置する、膜貫通ドメイン；ならびに配列番号１のアミノ残基３９５～５０４に位置する、細胞内ドメインを含有する。

【0381】

ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１のアミノ酸配列（配列番号１）：
10 20 30 40 50
MEPAGPAPGR LGPLLCLLLA ASCAWSGVAG EEELQVIQPD KSVLVAAGET
60 70 80 90 100
ATLRCTATSL IPVGPIQWFR GAGPGRELIY NQKEGHFPRV TTVSDLTKRN
110 120 130 140 150
NMDFSIRIGN ITPADAGTYY CVKFRKGSPD DVEFKSGAGT ELSVRAKPSA
160 170 180 190 200
PVVSGPAARA TPQHTVSFTC ESHGFSPRDI TLKWFKNGNE LSDFQTNVDP
210 220 230 240 250
VGESVSYSIH STAKVVLTRE DVHSQVICEV AHVTLQGDPL RGTANLSETI
260 270 280 290 300
RVPPTLEVTQ QPVRAENQVN VTCQVRKFYP QRLQLTWLEN GNVSRTETAS
310 320 330 340 350
TVTENKDGTY NWMSWLLVNV SAHRDDVKLT CQVEHDGQPA VSKSHDLKVS
360 370 380 390 400
AHPKEQGSNT AAENTGSNER NIYIVVGVVC TLLVALLMAA LYLVRIRQKK
410 420 430 440 450
AQGSTSSTRL HEPEKNAREI TQDTNDITYA DLNLPKGKKP APQAAEPNNH
460 470 480 490 500
TEYASIQTSP QPASEDTLTY ADLDMVHLNR TPKQPAPKPE PSFSEYASVQ
VPRK

【0382】

ＳＩＲＰＡ－ＣＤ４７複合体の結晶構造解析は、ＳＩＲＰＡの、ＩｇＶドメイン内の、β－シート鎖を連結する可変ループへのリガンド結合部位を分解する。ＣＤ４７結合接触面は、ＳＩＲＰＡのアミノ酸残基Ｓ５９～Ｐ６５、Ｌ９６～Ｆ１０４、およびＫ１２３～Ｄ１３０からなる。

【0383】

ヒトでは、ＳＩＲＰＡの、複数の多型が同定されている。配列内の、大半の変動は、ＣＤ４７リガンド結合部位の向こう側にあるので、検討される、大半のＳＩＲＰＡ変異体は、ＣＤ４７に、同様の親和性で結合すると考えられる。ＳＩＲＰファミリーの、別のメンバーである、ＳＩＲＰＢ１は、高度な配列相同性を、ＳＩＲＰＡと共有するが、ＣＤ４７に結合することができない。単一のＡ５７Ｍ置換は、Ｓ５９～Ｐ６５にわたる、リガンド結合性接触面を再配列して、ＳＩＲＰＢ１の、ＣＤ４７への結合を防止するのに十分である。さらに、ＳＩＲＰＡ－ＣＤ４７間相互作用は、高度に種特異的である。ヒトＳＩＲＰＡは、マウスまたはラットまたはウシのＣＤ４７（被験種の中で）に結合することができず、ヒトＣＤ４７だけが、ＮＯＤマウス株により発現される、マウスＳＩＲＰＡの、単一の対立遺伝子変異体を認識する。

【0384】

複数の種に由来するＳＩＲＰＡ配列についての、タンパク質ＢＬＡＳＴ解析は、ヒトＳＩＲＰＡとの、顕著な程度の同一性を示す（図１）。ＳＩＲＰファミリー内の、高配列相同性は、非ヒトＳＩＲＰＡ抗原への交差反応性を、やはり維持しながら、ＳＩＲＰＡ特異性抗体を作出することにおける、顕著な難題を提示する。

【0385】

実施例２
ヒト化抗ＳＩＲＰＡ抗体の特徴づけ
本明細書で論じられる、マウスＳＩＲＰＡ抗体ｍ３Ｆ９は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含有する。

【0386】

下記の表４および５は、マウス抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９、ならびに対応するヒト化配列（「ｈ３Ｆ９」と称される）の、ハイブリドーマ由来の、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を列挙する。抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９の重鎖可変ドメインのための、第１のヒト化抗体配列（ｈ３Ｆ９－Ｈ１）は、ヒトフレームワーク配列を変化させない、「ＣＤＲスワッピング」である。

【0387】

後続のヒト化重鎖可変領域配列（ｈ３Ｆ９－Ｈ２）は、ある特定のＣＤＲ接合部において、フレームワーク残基が変更されている（図２Ａを参照されたい）。図２Ａは、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９の、重鎖可変ドメインの、潜在的なヒト化配列を列挙する。ヒト化配列は、ＩＧＨＶ３－２３^＊０１アクセプターフレームワーク、およびＩＧＨＪ４^＊０１接合領域に基づく。

【0388】

抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９の軽鎖可変ドメインのための、第１のヒト化配列（ｈ３Ｆ９－Ｌ）は、ヒトフレームワーク配列を変化させない、軽鎖可変ドメインの「ＣＤＲスワッピング」である。後続のヒト化軽鎖可変領域配列は、ある特定のフレームワークアミノ酸残基（ｈ３Ｆ９－Ｌ２およびｈ３Ｆ９－Ｌ３）を変更する（図２Ｂを参照されたい）。図２Ｂは、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９の、軽鎖可変ドメインの、潜在的なヒト化配列を列挙する。

【0389】

ヒト化配列は、ＩＧＫＶ３－１１^＊０１アクセプターフレームワーク、およびＩＧＫＪ２^＊０１接合領域に基づく。ＣＤＲ配列は、太字で表記される。ＣＤＲの定義は、ウェブサイトである、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／による、ＡｂＭによる定義である。「ｂ」は、包埋された側鎖を表記し；「ｐ」は、部分的に包埋された側鎖を表記し；「ｉ」は、ＶＨドメインと、ＶＬドメインとの接触面間の側鎖を表す。ヒト生殖系列と、マウス生殖系列との配列差は、アステリスク（^＊）で表記される。フレームワーク内の、潜在的なさらなる突然変異は、配列の下方に表記される。ＣＤＲ配列内の、潜在的な変化は、各ＣＤＲ配列の下方に表記される。これらは、アスパラギン（Ｎ）の脱アミド化を防止しうる。抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９の、６つの異なるヒト化型全て（重鎖可変領域と、軽鎖可変領域との、以下の組合せ：ｈ３Ｆ９－Ｈ１／Ｌ１；ｈ３Ｆ９－Ｈ１／Ｌ２；ｈ３Ｆ９－Ｈ１／Ｌ３；ｈ３Ｆ９－Ｈ２／Ｌ１；ｈ３Ｆ９－Ｈ２／Ｌ２；およびｈ３Ｆ９－Ｈ２／Ｌ３に基づく）を、ＣＨＯ－Ｋ１細胞内で、組換えにより作製された、ヒトＩｇＧ４骨格へとグラフトし、下記でさらに記載される通りに特徴づけた。

【0390】

抗ＳＩＲＰＡ抗体についての親和性の測定は、以下の通りに実施した。バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）データは、Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６測定器上で収集した。データ解析は、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェア、ｖｅｒｓｉｏｎ ９．０を使用して実施した。標準的な反応速度バッファー（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．２）を、アッセイおよび試薬の調製のために使用した。バッファー中における、センサーの平衡化の後、ヒト化３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の各々（２．５μｇ／ｍＬ、ローディング時間を３００秒間とする）を、Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｄｉｐ ａｎｄ Ｒｅａｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）上で捕捉した。次いで、異なる濃度（０～２００ｎＭ）の、ヒスチジンでタグ付けしたヒトＳＩＲＰＡ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ）を、捕捉された抗ＳＩＲＰＡ表面に結合させた（３００秒間の会合時間、６００秒間の解離時間）。結果として得られるＢＬＩシグナルは、参照（２．５μｇ／ｍＬのＩｇＧ＋０ｎＭのＳＩＲＰＡ）センサーからの応答の差違として得た。ゼロリガンドコントロール（０μｇ／ｍＬのＩｇＧ＋２００ｎＭのＳＩＲＰＡ）は、ＳＩＲＰＡの、センサーチップ表面への、測定可能な非特異的結合を示さなかった。親ｍ３Ｆ９抗体に対する親和性の測定は、抗マウスＩｇＧ Ｆｃバイオセンサー上に捕捉された抗体を伴うことを除き、同様の方法を使用して実施した。複数濃度による反応速度解析は、各抗体について、会合速度定数および解離速度定数（それぞれ、ｋａおよびｋｄ）を抽出する、１：１の相互作用モデルを使用して実施した。結合親和性定数（ＫＤ）は、比である、ｋｄ／ｋａから計算した。

【0391】

固定化されている、抗マウスＩｇＧ Ｆｃまたは抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体は、それぞれ、バイオセンサー上の、マウス抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９、およびヒト化抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９を捕捉した。漸増濃度の、ヒスチジンでタグ付けしたｈｕＳＩＲＰＡアイソフォーム１（１０～５００ｎＭ）は、捕捉された抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９の上を流過して、出力波形を記録した。結果として得られるセンサーグラムによる、ベストフィットの出力波形を、解析して、会合速度値、解離速度値、および親和性値を計算した。３つの、被験ヒト化抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９変異体は、ｍＡｂ １４．７０．１（配列番号３の重鎖可変配列、および配列番号６の軽鎖可変配列）、ｍＡｂ １４．７０．２（配列番号３の重鎖可変配列、および配列番号７の軽鎖可変配列）、およびｍＡｂ １４．７０．４（配列番号４の重鎖可変配列、および配列番号６の軽鎖可変配列）であった。ヒト化抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９抗体の、測定された結合反応速度を、下記の表６に、ｋａ値、ｋｄ値、およびＫＤ値の抽出値としてまとめる。作製された、６つのｈ３Ｆ９変異体のうち、３つの抗ＳＩＲＰＡ抗体（ｍＡｂ １４．７０．１：Ｈ１／Ｌ１；ｍＡｂ １４．７０．２：Ｈ１／Ｌ２；ｍＡｂ １４．７０．４：Ｈ２／Ｌ１）は、可溶型ＳＩＲＰＡ抗原に対して、親ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体（配列番号２の重鎖可変配列、および配列番号５の軽鎖可変配列）と同様の親和性を呈した。

【0392】

可溶型抗原への結合に加えて、細胞ベースの親和性の測定もまた実施して、ｈ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の、膜結合型ＳＩＲＰＡ ｖ１抗原に対する、ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体と比べた、見かけの親和性を確認した。ＥＣ５０値は、漸増濃度の抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９抗体を、ヒトＳＩＲＰＡを過剰発現させるＢＷＺ細胞へと添加することにより、相対親和性を割り当てる。受容体に結合した抗体は、細胞を、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ ＡＰＣ、または抗ヒトＩｇＧ ＰＥ二次抗体で染色することにより検出した。モノクローナル抗体の段階希釈液を、ｈｕＳＩＲＰＡを過剰発現させる、１０^５個のＢＷＺ細胞（ＢＷＺ－ｈｕＳＩＲＰＡ）へと添加し、４℃で、結合平衡を達成することを可能とした。蛍光標識化二次抗体の添加、および短い洗浄工程の後で、ＦＡＣＳ解析を介して、滴定された抗体濃度の関数としての、平均値蛍光強度（ＭＦＩ）値を記録した。曲線は、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６ソフトウェアによる非線形回帰分析を使用してフィッティングした。ｈ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍＡｂ １４．７０．１、ｍＡｂ １４．７０．２、およびｍＡｂ １４．７０．４による、細胞ベースの滴定実験は、それぞれ、１．０６５ｎＭ、０．９６８２ｎＭ、および１．６０７ｎＭのＥＣ５０値をもたらした。ヒト化３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体（ＥＣ５０＝２．１ｎＭ）より低値のＥＣ５０値をもたらしたことから、ヒト化抗体の結合親和性の、マウス３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体について決定された結合親和性と比べた改善が示される。

【0393】

漸増濃度の、ヒト化３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体およびマウス３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体を、ＢＷＺ－ｈｕＳＩＲＰＡ ｖ１細胞へと添加して、フルオロフォアで標識化された参照抗体を置きかえる、競合ベースのアッセイもまた実施して、抗ＳＩＲＰＡ抗体のＩＣ５０値を計算した。ＩＣ５０値は、相対親和性についての、別の比較をもたらす。競合ベースのアッセイでは、漸増濃度の抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９抗体を、ｈｕＳＩＲＰＡ発現細胞へと添加して、フルオロフォアで標識化された参照抗体を置きかえた。ＩＣ５０値は、以下の通り：ｍ３Ｆ９＝１１．５４ｎＭ；ｍＡｂ １４．７０．１＝３．３０３ｎＭ；ｍＡｂ １４．７０．２＝２．１８５ｎＭ；ｍＡｂ １４．７０．４＝４．６０６ｎＭ）であると決定された。これらの結果は、本開示のヒト化抗ＳＩＲＰＡ抗体が、参照ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の、ＳＩＲＰＡへの結合に対する、より有効な競合体であることを裏付けた。

【0394】

ｈ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体が、細胞表面における、ＳＩＲＰＡの発現を低減する能力を、初代ヒトマクロファージ（ｈｕＭａｃ）上で査定した。ヒト単球を、健常ドナーの末梢血から単離し、増殖培地に、ヒトＭ－ＣＳＦを補充することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、マクロファージへと分化させた。分化の後、ｈｕＭａｃを採取し、漸増濃度のアイソタイプコントロールまたは可溶型抗ＳＩＲＰＡ抗体と共に、９６ウェル組織培養プレートへと播種し、３７℃で、一晩にわたりインキュベートした。抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９と別個のエピトープビンに属する、ＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲート抗ヒトＳＩＲＰＡ抗体（クローンＳＡ５６）を使用して、フローサイトメトリーにより、ＳＩＲＰＡの表面発現について、細胞を解析した。図３に示される通り、ｈ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の変異体（ｍＡｂ １４．７０．１（７０．１）、ｍＡｂ １４．７０．２（７０．２）、およびｍＡｂ １４．７０．４（７０．４））は、マクロファージ内の、ＳＩＲＰＡ受容体の発現レベルを、用量依存的に下方調節した。しかし、親ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体は、上記で論じられた、同様の抗原結合特性にもかかわらず、ヒト化抗体より大幅な、最大の受容体下方調節を呈した。これらの結果は、抗ＳＩＲＰＡ抗体の特性が、受容体への係合を越えて、マクロファージ上の、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９の機能活性を決定することを示唆した。

【0395】

実施例３
抗ＳＩＲＰＡ抗体は、機能活性のために、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）を要求する
ヒト３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体と、マウス３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体との、主要な差違は、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）に係合する能力である。ヒト化抗ＳＩＲＰＡ抗体を、低度のＦｃγＲ結合特性を所有することが公知の、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ骨格へとグラフトした。ハイブリドーマによる、ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マウスＩｇＧ１抗体であるにもかかわらず、やはり、ある特定のヒトＦｃγＲに対する結合活性を保持する。ＦｃγＲが、抗ＳＩＲＰＡ抗体の機能活性をモジュレートすることを検証するために、ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体を、ＥｎｄｏＳで処理して、ＩｇＧ－ＦｃγＲ間相互作用を媒介する、鍵となる決定基である、Ａｓｎ２９７上のＦｃグリカンを、酵素的に除去した。２例の健常ドナーに由来する、初代ヒトマクロファージを、漸増濃度の、グリコシル化ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体または脱グリコシル化ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体で、一晩にわたり処置した。その後、細胞を、顕著に異なるエピトープビンに結合する、ＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲート抗ＳＩＲＰＡ参照抗体（ＳＡ５６－ＤｙＬ６５０）で染色し、次いで、ＦＡＣＳ解析により、ＳＩＲＰＡの表面発現について解析した。

【0396】

図４Ａに示される通り、ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の、いずれの糖型も、細胞表面における、ＳＩＲＰＡの発現を、顕著に下方調節した。しかし、いずれのドナーにおいても、脱グリコシル化ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の変異体は、最大活性の、抗体のグリコシル化形態について観察される最大活性と比較した低減を呈した。特に、グリコシル化ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ＳＩＲＰＡの発現を、ドナー（Ｄｎｒ）４１３およびドナー４１４において、それぞれ、最大で、９０％および８５％下方調節したのに対し、脱グリコシル化ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体は、同じドナーのマクロファージ内で、それぞれ、７０％および７５％のＳＩＲＰＡ受容体の下方調節を達成したに過ぎなかった。この所見は、抗ＳＩＲＰＡ抗体、とりわけ、ＳＩＲＰＡの、細胞表面における発現の下方調節の増強のために、抗体ｍ３Ｆ９が、ＦｃγＲへの係合を要求することを示唆した。図４Ａ内の結果を、抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置された試料のＭＦＩ値を、アイソタイプコントロールで処置された試料のＭＦＩ値で除することにより、参照抗体の結合に対するパーセントとして提示する。

【0397】

上記で開示された、抗体媒介性の、受容体の下方調節に加えて、腫瘍細胞に対する食作用の、３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体媒介性増強における、ＦｃＲの役割も査定した。腫瘍細胞に対する食作用アッセイは、ｐＨｒｏｄｏ蛍光に基づき開発した。初代ヒトマクロファージを、アイソタイプコントロール抗体（ＭＯＰＣ）、または表示の抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９抗体の変異体で、一晩にわたり処置した。ｐＨｒｏｄｏで標識されたＲａｊｉ細胞染料を、マクロファージへと添加し、３７℃で、２時間にわたりインキュベートした。Ｒｅｄ Ａｖｉｄｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とは、ファゴソームなど、酸性環境内で、蛍光を帯びる、蛍光発光性マーカーである、ｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄ染料とコンジュゲートさせた、ストレプトアビジン分子である。標的腫瘍細胞の標識化のために、５００ｎＭのＲｅｄ Ａｖｉｄｉｎを、１５ｎＭの、ビオチニル化レンズ豆（Ｌｅｎｓ ｃｕｌｉｎａｒｉｓ）アグルチニン（ＬＣＡ；Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）と混合した。次いで、Ｒｅｄ Ａｖｉｄｉｎ－ＬＣＡ複合体を、１：１の体積比で、氷上の、無血清ＲＰＭＩ培地中のＲａｊｉ細胞４００，０００個と混合した。ＬＣＡの糖結合特性は、Ｒｅｄ Ａｖｉｄｉｎを、腫瘍細胞表面上の糖鎖構造へと連結する。短い洗浄工程の後で、Ｒｅｄ Ａｖｉｄｉｎ－ＬＣＡで標識化されたＲａｊｉ細胞を、無血清ＲＰＭＩ培地中で、単球由来ヒトマクロファージと混合し、３７℃で、２時間にわたりインキュベートした。次いで、マクロファージを回収し、氷上の、ＦｃγＲ遮断抗体を含有するＦＡＣＳバッファー中の、抗ＣＤ１４ ＡＰＣで染色した。食作用活性は、ＣＤ１４／ｐＨｒｏｄｏ二重陽性マクロファージのパーセントをカウントすることにより測定した。コントロールとして、標識化されていないＲａｊｉ細胞を、マクロファージと混合して、バックグラウンドの蛍光レベルを確立した。図４Ｂ内の結果を、ｐＨｒｏｄｏ／ＣＤ１４二重陽性マクロファージ集団のパーセントの増大倍数として提示する。

【0398】

図４Ｂに示される通り、グリコシル化ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体で、一晩にわたり処置されたマクロファージは、腫瘍細胞に対する食作用の、アイソタイプコントロール抗体で処置されたマクロファージを使用して観察される食作用と比べた、約２倍の増大を提示した。脱グリコシル化ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置されたマクロファージは、腫瘍細胞に対する食作用の、アイソタイプコントロールで処置されたマクロファージと比べた、約１．５倍の増大を提示した。この、腫瘍細胞に対する食作用の、約１．５倍の増大は、活性の、グリコシル化ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体に関して観察される食作用と比べて、統計学的に有意な約５０％の低下を表す。さらに、ｈ３Ｆ９ ＩｇＧ４（ｍＡｂ １４．７０．１またはｍＡｂ １４．７０．２）で処置されたマクロファージは、腫瘍細胞に対する食作用を、ベースラインレベルを上回って増強する能力を提示しなかった。

【0399】

先行研究は、マクロファージを、３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体で刺激したときの、貪食活性の増大と、ＣＤ１４の下方調節との相関を確立した。この相関がまた、少なくとも部分的に、ＦｃγＲにも依存するのかどうかを決定するために、初代ヒトマクロファージを、グリコシル化されたｍ３Ｆ９またはｈ３Ｆ９ ＩｇＧ４抗ＳＩＲＰＡ抗体の変異体（ｍＡｂ １４．７０．１、ｍＡｂ １４．７０．２、およびｍＡｂ １４．７０．４）で、一晩にわたり処置し、腫瘍細胞に対する食作用およびＣＤ１４の発現についてアッセイした。図５Ａに示される通り、ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置されたマクロファージだけが、Ｒａｊｉ細胞に対する食作用の、アイソタイプコントロール抗体で処置されたマクロファージに関して観察される食作用と比べた増強を示した。結果を、ｐＨｒｏｄｏ／ＣＤ１４二重陽性マクロファージ集団のパーセントの増大倍数として提示する。ヒト化抗ＳＩＲＰＡ ＩｇＧ４抗体は、Ｒａｊｉ細胞に対する食作用を増強することができなかった。同様に、ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体による刺激だけが、マクロファージ上の、ＣＤ１４の発現を下方調節したのに対し、ｈ３Ｆ９ ＩｇＧ４抗ＳＩＲＰＡ抗体の変異体は、ＣＤ１４の発現を変更しなかった（図５Ｂ）。マクロファージ内の、ＣＤ１４の発現レベルと、貪食活性との相関を裏書きすることに加えて、これらの結果は、３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の機能活性が、少なくとも部分的に、ＦｃγＲに依存することを確認した。

【0400】

実施例４
抗ＳＩＲＰＡ抗体による、ＣＤ３２の下方調節
目的の標的抗原に加えて、骨髄系統の細胞はまた、治療抗体のＦｃドメインに結合することが可能な、複数のＦｃ受容体も発現させる。Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）は、Ｆｃ依存的エフェクター機能を媒介する、最もよく特徴づけられ、最も強力な受容体のクラスを構成する。ＦｃγＲは、ＩＴＡＭ関連活性化型受容体（ＣＤ６４／ＦｃγＲＩ、ＣＤ３２Ａ／ＦｃγＲＩＩＡ、およびＣＤ１６Ａ／ＦｃγＲＩＩＩＡ）およびＩＴＩＭ保有阻害型受容体（ＣＤ３２Ｂ／ＦｃγＲＩＩＢ）の両方からなり、活性化型／阻害型受容体の、同じ細胞上の共発現は、細胞活性化の閾値を確立する。一般に、免疫複合体による、活性化型ＦｃγＲへのリガンド結合は、細胞の活性化、および後続のエフェクター機能の誘導をもたらす、いくつかのシグナル伝達カスケードを誘発する。これらの活性は、骨髄細胞型の間で変動するが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、抗体依存性細胞媒介性食作用、ならびにいくつかの炎症促進性サイトカインおよびケモカインの上方調節などを含みうる。これに対し、免疫複合体による、阻害型受容体である、ＦｃγＲＩＩＢへのリガンド結合は、活性化型ＦｃγＲの免疫刺激シグナルに対抗し、組織ホメオスタシスの維持を支援する。例えば、いくつかの研究は、ＦｃγＲＩＩＢの遺伝子ノックアウトが、免疫複合体媒介性炎症についてのマウスモデルにおいて、炎症促進性マクロファージ活性の増強を結果としてもたらすことを確立している。ＦｃγＲＩＩＢは、阻害活性を伴う、唯一のＦｃγＲであるので、骨髄細胞によるＦｃγＲ媒介性炎症の調節において、中心的役割を果たす。腫瘍微小環境の文脈では、ＦｃγＲＩＩＢの発現レベルは、ｉｎ ｖｉｖｏにおける、腫瘍関連マクロファージの極性化状態、およびマクロファージのエフェクター機能の調節を決定しうる。

【0401】

どのＦｃγＲが、３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性に寄与するのかを決定するために、２例の健常ドナーから得られる、単球由来マクロファージを、アイソタイプコントロール抗体、または抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９で、一晩にわたり処置し、次いで、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、およびＦｃγＲＩＩＡ／Ｂ（ＣＤ３２Ａ／Ｂ）の表面発現レベルについて評価した。図６Ａに示される通り、ｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体による処置は、ＣＤ３２Ａ／Ｂの表面発現を、アイソタイプコントロール抗体で処置されたマクロファージ内で観察される、ＣＤ３２Ａ／Ｂの表面発現と比べて、実質的に低減した。ＦｃγＲＩＩ（クローンＦＵＮ－２；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の表面レベルを測定するのに使用される検出抗体は、活性化型受容体である、ＦｃγＲＩＩＡと、阻害型受容体である、ＦｃγＲＩＩＢとを識別しないので、このアッセイを、受容体特異性抗体により繰り返した。既に記載した通り、２例の健常ドナーから得られる、単球由来マクロファージを、アイソタイプコントロール抗体、または表示の、３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の変異体で、一晩にわたり処置した。図６Ｂは、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９が、マクロファージ内のＦｃγＲＩＩＡを、アイソタイプコントロール抗体で処置された細胞内で観察される場合と比べて、顕著に、約７０～８５％下方調節したことを示す。この効果は、ｈ３Ｆ９ ＩｇＧ４変異型（ｍＡｂ １４．７０．２）、およびマウス抗体の脱グリコシル化形態のいずれも、ＦｃγＲＩＩＡ下方調節を失効化させたので、Ｆｃドメインに依存した。

【0402】

ＦｃγＲＩＩＢの表面発現を評価する場合、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９による処置は、阻害型受容体の発現を、アイソタイプコントロール抗体で処置されたマクロファージ内で観察される、阻害型受容体の発現と比べて、ほぼ検出不能レベルまで低減した（図６Ｂ）。これに対し、ＦｃγＲＩ／ＣＤ６４またはＦｃγＲＩＩＩＡ／ＣＤ１６Ａの顕著な下方調節は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９で処置されたマクロファージ上では、アイソタイプコントロールで処置された細胞と比べて明らかではなかったことから、抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９抗体による処置は、初代ヒトマクロファージ上の、ＣＤ１６およびＣＤ６４の発現を変更しないことが指し示される（データは示さない）。

【0403】

ＣＤ３２Ａ／Ｂが、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９の機能活性に要求されることを確認するために、選択的ＦｃγＲ遮断実験を実施して、個別のＦｃγＲの、抗体媒介性の、ＳＩＲＰＡの下方調節、および腫瘍細胞に対する食作用における役割を評価した。遮断実験では、２例の健常ドナーに由来する、初代ヒトマクロファージを、抗ＣＤ１６遮断抗体、または抗ＣＤ３２Ａ／Ｂ遮断抗体と共に、氷上で１５分間にわたりプレインキュベートした。その後、細胞を、アイソタイプコントロール（ＭＯＰＣ２１）またはｍ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体と共に、一晩にわたりインキュベートした。ＳＩＲＰＡの発現は、ＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲート抗ＳＩＲＰＡ参照抗体（ＳＡ５６－ＤｙＬ６５０）により検出した。結果を、抗ＳＩＲＰＡ抗体で処置された試料のＭＦＩ値を、アイソタイプコントロールで処置された試料のＭＦＩ値で除することにより、参照抗体の結合に対するパーセントとして提示する。図７Ａに示される通り、ＣＤ１６の遮断は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９による処置の後における、ＳＩＲＰＡの下方調節を、ＦｃγＲ遮断抗体で処置されなかったマクロファージ内で観察される、ＳＩＲＰＡの下方調節と比べて破壊しなかった。これに対し、ＳＩＲＰＡの、ｍ３Ｆ９媒介性下方調節は、抗ＣＤ３２Ａ／Ｂを遮断抗体と共にプレインキュベートされたマクロファージ内では、顕著に損なわれた。

【0404】

ＣＤ３２Ａ／Ｂの遮断がまた、食作用も妨げるのかどうかを確認するために、初代ヒトマクロファージを、抗ＣＤ３２Ａ／Ｂを遮断抗体と共にプレインキュベートし、アイソタイプコントロール抗体、または抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９で、一晩にわたり処置した。ｐＨｒｏｄｏ染料で標識されたＲａｊｉ細胞を、マクロファージと共に混合し、３７℃で、２時間にわたりインキュベートした。結果を、ｐＨｒｏｄｏ／ＣＤ１４二重陽性マクロファージ集団のパーセントの増大倍数として提示する。図７Ｂに示される通り、ｍ３Ｆ９で処置された、両方ドナーに由来するマクロファージは、Ｒａｊｉ細胞に対する食作用を、アイソタイプコントロール抗体で処置されたマクロファージ内で観察される食作用と比べて、約２倍に増強した。しかし、ＣＤ３２Ａ／Ｂの遮断は、腫瘍細胞に対する食作用の、ｍ３Ｆ９媒介性増強を、部分的にまたは完全に遮断した。まとめると、これらの結果は、ＣＤ３２Ａ／Ｂへの係合が、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９の活性に、機能的に要求されることを確立した。

【0405】

実施例５
ｈ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の親和性成熟
ヒト化ｈ３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の親和性成熟を実施した。略述すると、重鎖内または軽鎖内の、ある特定のアミノ酸残基に、選択的に突然変異誘発し、さらなるスクリーニングラウンドを通して、結合を改善する突然変異体を選択した。この工程は、特異性プロファイル、種間交差反応性プロファイル、および開発可能性プロファイルを、同時に改善し、所望の作用機序、生物学的アッセイにおける力価、および前臨床モデル化に関与する特性の、正確な微調整を可能とする。特徴づけは、ＦｏｒｔｅＢｉｏおよびＭＳＤによる親和性測定アッセイ、細胞結合アッセイ、ならびにいくつかの開発可能性アッセイを含んだ。親和性成熟の第１ラウンドの後、親和性が改善された抗体はまた、抗体の非特異的結合を決定するのに使用される、多重特異的反応性（ＰＳＲ）の改善も提示した。こうして、親和性成熟の第２ラウンドを実施して、ＰＳＲを上昇させずに親和性を改善した。

【0406】

抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン配列
標準的な技法を使用して、本明細書で記載される、親和性成熟抗体の、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を決定した。抗体の軽鎖ＨＶＲ配列を、表７～８に明示する。抗体の軽鎖ＨＶＲ配列を、表７に明示する。抗体の重鎖ＨＶＲ配列を、表８に明示する。抗体の軽鎖および重鎖のフレームワーク（ＦＲ）配列を、表９に明示する。抗体の重鎖の可変領域配列および軽鎖の可変領域配列を、下記の表１０に明示する。

【0407】

実施例６
親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体の特徴づけ
本明細書で開示される、親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体の、初期特徴づけは、Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６測定器上で、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して、抗原親和性の測定値を収集することを含んだ。固定化されている、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ、または抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体は、それぞれ、バイオセンサー上の、マウス抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９抗体、およびヒト化抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９抗体を捕捉した。２５ｎＭのｈｕＳＩＲＰＡ［どの変異型であるのか］または５０ｎＭのｈｕＳＩＲＰＢ１を、捕捉された抗体である、３Ｆ９上に流過させる、単一サイクルの反応速度法を実施して、出力波形を記録した。データ解析は、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェア、ｖｅｒｓｉｏｎ ９．０を使用して実施した。標準的な反応速度バッファー（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．２）を、アッセイおよび試薬の調製のために使用した。バッファー中における、センサーの平衡化の後、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｈ３Ｆ９（２μｇ／ｍＬ、ローディング時間を３００秒間とする）、または抗ＳＩＲＰＡ抗体ｈ３Ｆ９の親和性成熟変異体を、Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｄｉｐ ａｎｄ Ｒｅａｄ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）上で捕捉した。次いで、５０ｎＭのヒスチジンでタグ付けした、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１、またはヒトＳＩＲＰＢ１（Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ、Ｓｕｍｍｉｔ、ＮＪ、ＵＳＡ）を、捕捉された抗ＳＩＲＰＡ抗体でコーティングされた表面に結合させた（２００秒間の会合時間、９００秒間の解離時間）。結果として得られるＢＬＩシグナルは、参照（２μｇ／ｍＬの３Ｆ９＋０ｎＭのＳＩＲＰＡ）センサーからの応答の差違として得た。ゼロリガンドコントロール（０μｇ／ｍＬの３Ｆ９＋２００ｎＭのＳＩＲＰＡ）は、ＳＩＲＰＡの、センサーチップ表面への、測定可能な非特異的結合を示さなかった。単一曲線による反応速度解析は、各抗体について、会合速度定数および解離速度定数（それぞれ、ｋａおよびｋｄ）を抽出する、１：１の相互作用モデルを使用して実施した。結合親和性定数（ＫＤ）は、比である、ｋｄ／ｋａから計算した。可溶型のｈｕＳＩＲＰＡおよびｈｕＳＩＲＰＢ１に結合する、２５の抗ＳＩＲＰＡ子孫抗体、および１つの親抗体についてのセンサーグラムを得、ベストフィットの出力波形を使用して、会合速度値、解離速度値、および親和性値を計算した。これらの実験から得られたセンサーグラムについてのカーブフィッティング解析に由来する、親和性の測定値（ｋａ、ｋｄ、およびＫＤ）を、表１１にまとめる。全ての親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ｈｕＳＩＲＰＢ１に対する、測定可能な交差反応性を欠き（データは示さない）、６つの親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体（３Ｆ９－１８、３Ｆ９－１２、３Ｆ９－２３、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－２２、および３Ｆ９－２０）は、可溶型ｈｕＳＩＲＰＡに対する親和性の、親抗ＳＩＲＰＡ抗体ｈ３Ｆ９に関して観察される親和性と比べた、約１０倍の増大を呈した。

【0408】

細胞ベースの親和性の測定もまた実施して、親和性成熟３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体の、細胞表面発現抗原に対する、見かけの親和性を確認した。抗ＳＩＲＰＡモノクローナル抗体の各々の段階希釈液を、１０^５個のＢＷＺ－ｈｕＳＩＲＰＡ細胞へと添加し、４℃で、結合平衡を達成することを可能とした。蛍光標識化二次抗体の添加、および短い洗浄工程の後で、ＦＡＣＳ解析を介して、滴定された抗体濃度の関数としての、ＭＦＩ値を記録した。ＥＣ５０値（下記で列挙される）は、漸増濃度の３Ｆ９抗体の変異体を、ヒトＳＩＲＰＡを過剰発現させるＢＷＺ細胞へと添加することにより、相対親和性を割り当てる。受容体に結合した抗体は、細胞を、抗ヒトＩｇＧ ＰＥ二次抗体で染色することにより検出した。曲線は、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６ソフトウェアによる非線形回帰分析を使用してフィッティングした。マウス３Ｆ９およびヒト化親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体による、細胞ベースの滴定実験は、ヒト化親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体の、ＥＣ５０値の改善を示し；２つの抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＥＣ５０値（ｍＡｂ３Ｆ９－１４＝０．４２ｎＭ、およびｍＡｂ３Ｆ９－２２＝０．４９ｎＭ）の、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９ ｍＩｇＧ１抗体に関して観察されるＥＣ５０値（０．７２ｎＭ）と比較した、有意な改善を示した。下記の表１２を参照されたい。

【0409】

実施例７
親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体の、ＳＩＲＰＡ抗原の変異体に対する交差反応性
ヒトＳＩＲＰＡのＣＤ４７結合性ドメインは、高度に多型であり、これは、ヒト集団内で発現される、全てのＳＩＲＰＡ対立遺伝子変異体を認識することが可能な、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰＡ抗体の開発を妨げうる。実際に、ヒトＳＩＲＰＡの、２つの最も一般的な対立遺伝子（ｖ１およびｖ２）はまた、配列が最も多様でもあり、ＩｇＶドメイン内で、１３の残基が異なる。ＣＤ４７競合研究は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９が、ＣＤ４７リガンド結合部位と、顕著に異なる領域に結合することを解明したので、ヒトＳＩＲＰＡのｖ１とｖ２との交差反応性のほか、種間反応性も検証して、毒性研究に関与性の動物モデルを決定するように、結合アッセイを実施した。

【0410】

ＥＬＩＳＡアッセイでは、９６ウェルＩｍｍｕｌｏｎ ＨＢＸプレートを、表示の通り、所与の種の、ＨｉｓまたはＦｃでタグ付けしたＳＩＲＰＡにより、４℃（４Ｃ）、ＰＢＳ中に１μｇ／ｍＬで、一晩にわたりコーティングした。プレートを、ＰＢＳ中に５％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンで、１時間にわたりブロックし、この後、ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０（ＰＢＳ／Ｔ）で、３回にわたり洗浄した。希釈系列下の抗ＳＩＲＰＡ抗体を、プレートへと添加し、室温で、２時間にわたりインキュベートし、この後、結合しなかった抗体を、ＰＢＳ／Ｔを伴う洗浄により除去した。次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート抗マウスＩｇＧ、または抗ヒトカッパ軽鎖（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を、ウェルへと添加し、３０分間にわたりインキュベートした。結合しなかった抗体を、ＰＢＳ／Ｔを伴う洗浄により除去し、この後、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を使用して、結合した抗体を検出した。２ＮのＨ_２ＳＯ_４で、反応を停止させ、この後、プレートを、Ａ４５０で読み取った。

【0411】

親のマウス３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡ－Ｆｃのｖ１形およびｖ２形の両方に、同様のＥＣ５０値（それぞれ、０．６９５および０．７８９ｎＭ）で結合する。Ｈｉｓでタグ付けしたヒト抗原に対する、見かけの親和性の、部分的な低下が観察されることから、Ｆｃでタグ付けしたＳＩＲＰＡへの、より大きなアビディティーの結合が示唆される。加えて、親のマウス３Ｆ９抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＦｃおよびＨｉｓでタグ付けした、カニクイザルＳＩＲＰＡに対する、弱い交差反応性も裏付ける（ＥＣ５０＝１．０９ｎＭ）。ラットＳＩＲＰＡに対する、検出可能な結合は、観察されなかった。

【0412】

上記で記載した、親抗体の親和性成熟の後、２つ子孫抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍＡｂ ３Ｆ９－１４およびｍＡｂ ３Ｆ９－２２を、ＳＩＲＰＡ抗原の、同じパネルに対してスクリーニングして、交差反応性を評価した。抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９の場合と同様に、ヒト化抗ＳＩＲＰＡ抗体および親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体のいずれも、ヒトＳＩＲＰＡのｖ１およびｖ２に対する結合活性を保持したが、顕著に低値のＥＣ５０値を示したことから、上記で記載した、バイオセンサーによる測定および細胞結合アッセイにおいて観察された親和性の増大が確認される。ヒトＳＩＲＰＡのｖ１およびｖ２に対する、親和性の増大にもかかわらず、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－１４は、カニクイザルＳＩＲＰＡに対する、弱い交差反応性を呈し；結合曲線は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９に関して観察されるＥＣ５０値と同様のＥＣ５０値（ＥＣ５０＝０．８７９ｎＭ）をもたらした。これに対し、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２は、カニクイザルＳＩＲＰＡに対して、ヒトＳＩＲＰＡの、いずれの変異体と同等の結合活性を裏付けた（ＥＣ５０＝０．１０７ｎＭ）。３Ｆ９－１４抗体も、３Ｆ９－２２抗体も、ラットＳＩＲＰＡに結合しなかった（データは示さない）。結合曲線から計算されたＥＣ５０を、下記に列挙し、全ての抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ヒトＳＩＲＰＡの対立遺伝子変異体のいずれにも結合したことを確立する。抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｈｕ３Ｆ９－２２だけが、カニクイザルＳＩＲＰＡに、ヒトＳＩＲＰＡへの結合と同様の親和性で結合した。下記の表１３は、抗ＳＩＲＰＡ抗体の、多様なＳＩＲＰＡタンパク質に対するＥＣ５０値（ｎＭ）を示す。

同様のＥＬＩＳＡ実験を実施して、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、９Ｃ２（抗ＳＩＲＰＡ抗体である、９Ｃ２のアミノ酸配列については、下記を参照されたい）および３Ｆ９について、異なるＳＩＲＰＡタンパク質およびＳＩＲＰＢタンパク質のパネルに対するＥＣ５０値を決定した。下記の表１４は、これらの抗ＳＩＲＰＡ抗体の、多様なＳＩＲＰＡタンパク質に対するＥＣ５０値（ｎＭ）を示す。

【0413】

図１に示される、複数の種に由来する、ＳＩＲＰＡタンパク質の間の、高度な配列類似性を踏まえ、抗ＳＩＲＰＡ抗体の子孫クローンを、多様な哺乳動物種に由来する、さらなるＳＩＲＰＡ抗原に対する交差反応性についてもまたスクリーニングした。プレートを、Ｆｃでタグ付けしたマーモセットＳＩＲＰＡ（寄託番号：ＪＡＢ５１８９６）またはイヌＳＩＲＰＡ（寄託番号：ＸＰ００５６３４９３８）またはウサギＳＩＲＰＡ（寄託番号：Ｇ１Ｕ０Ｉ５）でコーティングし、漸増濃度の抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｈｕ３Ｆ９－１４およびｈｕ３Ｆ９－２２と共にインキュベートした。抗ＳＩＲＰＡ ｍＡｂ ３Ｆ９－１４およびｍＡｂ ３Ｆ９－２２のいずれも、ヒトＳＩＲＰＡに関して観察される親和性より低値の親和性によってであるが、マーモセットＳＩＲＰＡおよびイヌＳＩＲＰＡを認識した。例えば、３Ｆ９－１４の、マーモセットＳＩＲＰＡおよびイヌＳＩＲＰＡへの結合についてのＥＣ５０値は、それぞれ、１．２ｎＭおよび０．６４ｎＭであった。同様に、３Ｆ９－２２の、マーモセットＳＩＲＰＡおよびイヌＳＩＲＰＡへの結合についてのＥＣ５０値は、それぞれ、４．３ｎＭおよび０．８３ｎＭであった。抗ＳＩＲＰＡ抗体クローンである、３Ｆ９－１４も、３Ｆ９－２２も、ウサギＳＩＲＰＡには結合しなかった。

【0414】

実施例８
親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡおよびＣＤ３２Ａ／Ｂを下方調節する
先行の実験は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９が、ＳＩＲＰＡの表面発現を低減することにより、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を、非競合的にアンタゴナイズし、この結果として、マクロファージによる、腫瘍細胞の貪食を刺激する能力の、ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰＡ抗体と比較した増大をもたらすことを確立した。親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体を、マウス抗体に対する、同様の機能的特性の保持についてアッセイした。

【0415】

抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９（マウスＩｇＧ１骨格上の）は、ＳＩＲＰＡおよびＣＤ３２Ａ／Ｂを、Ｆｃ依存的に下方調節したので、親抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９のＦａｂ配列を、野生型ヒトＩｇＧ１（３Ｆ９ ｈｕＩｇＧ１）、または重鎖内に、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ突然変異（３Ｆ９－ＳＥＬＦ）を保有する、ヒトＩｇＧ１ ＦｃのＦｃドメインと融合させた、キメラ抗体を作製した。ＦｃのＳＥＬＦ突然変異は、ヒトＦｃγＲ２Ｂ／ＣＤ３２Ｂへの結合を、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃと比べて、＞１００倍に増強する。ヒト単球を、健常ドナーの末梢血から単離し、ヒトＭ－ＣＳＦにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、マクロファージへと分化させた。分化の後、ｈｕＭａｃを採取し、漸増濃度のアイソタイプコントロールまたは可溶型抗ＳＩＲＰＡ抗体と共に、９６ウェル組織培養プレートへと播種し、３７℃で、一晩にわたりインキュベートした。ＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲート抗ヒトＳＩＲＰＡ抗体（クローンＳＡ５６）と、ＦＩＴＣで標識化された抗ＣＤ３２Ａ／Ｂ（ＦＵＮ－２）とを使用して、フローサイトメトリーにより、ＳＩＲＰＡおよびＣ３２Ａ／Ｂの表面発現について、細胞を解析した。抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９ ｍＩｇＧ１が、ＳＩＲＰＡおよびＣＤ３２Ａ／Ｂの両方の、頑健な、用量依存的下方調節を呈したことは、かつての観察と符合した。しかし、キメラ抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９ ｈｕＩｇＧ１抗体は、受容体の下方調節力価の、マウス抗体と比較した低下（データは示さない）を示した。これらの結果は、抗体のＦｃドメインが、活性において、重要な役割を果たすことの、さらなる証拠をもたらした。ＳＥＬＦ突然変異を、キメラ３Ｆ９のＦｃドメインへと操作すること（３Ｆ９－ＳＥＬＦ）は、ＳＩＲＰＡおよびＣＤ３２Ａ／Ｂを、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９ ｍＩｇＧ１に関して観察される、同様のレベルまで下方調節する能力を回復させた。この結果は、ＣＤ３２Ａ／Ｂが、マクロファージ上の、ｍ３Ｆ９活性に重要な、共受容体として用いられることを確認する。

【0416】

初期の実験は、ヒトＩｇＧ４骨格へとグラフトされた、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９のヒト化変異体が、機能活性を喪失したことを明らかにした。親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９変異体を、ヒトＩｇＧ１骨格上で作製し、ＳＩＲＰＡおよびＣＤ３２Ａ／Ｂを、親抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ｍ３Ｆ９、およびキメラ抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９ ｈｕＩｇＧ１と比較して下方調節する、それらの能力について査定した。ＳＩＲＰＡおよびＣＤ３２Ａ／Ｂの発現は、抗ＳＩＲＰＡ ＤｙＬｉｇｈｔ６５０（クローンＳＡ５６）、および抗ＣＤ３２Ａ／Ｂ ＦＩＴＣ（クローンＦＵＮ２）により検出した。親和性成熟抗体である、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－２０、および３Ｆ９－２２は、ＳＩＲＰＡを、親抗ＳＩＲＰＡ ｍ３Ｆ９抗体（データは示さない）に関して観察されるレベルと同様のレベルまで下方調節した。しかし、同じ親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＣＤ３２Ａ／Ｂの下方調節を、キメラ抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９ ｈｕＩｇＧ１抗体に関して観察される、ＣＤ３２Ａ／Ｂの下方調節と比較して、わずかに改善したに過ぎなかった。これらの結果は、抗体の、抗原に対する親和性の増強が、Ｆｃの、標的受容体（すなわち、ＳＩＲＰＡ）への依存性の下方調節は補償するが、ＦｃγＲとの、Ｆｃ媒介性相互作用は補償しないことを指し示した。

【0417】

Ｆｃ操作が、親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体による、ＳＩＲＰＡの下方調節をさらに増強するのかどうかを決定するために、ＳＥＬＦ点突然変異を、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１抗体のＦｃドメインへと導入した。４例の健常ドナーに由来する初代ヒトマクロファージを、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ、またはヒトＩｇＧ１ Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ Ｆｃ（ＳＥＬＦ）を保有する、漸増濃度の、ヒト化抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体で、一晩にわたり処置した。ＳＩＲＰＡの発現は、抗ＳＩＲＰＡ ＤｙＬｉｇｈｔ６５０（クローンＳＡ５６）により検出した。血液ドナーを、ｑＰＣＲにより、ＣＤ３２Ａ－Ｒ／Ｈ１３１多型について遺伝子型解析した。図８Ａおよび８Ｂは、両方のＦｃ変異体の活性を比較する、これらの実験の、典型的な結果を例示する。ＣＤ３２Ａ－Ｈ１３１の対立遺伝子について、ホモ接合性の個体の間では（ドナー５１６および５１７を、ｑＰＣＲにより検証した）、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体の、両方のＦｃ変異体は、ＳＩＲＰＡを、ヒトマクロファージ上で観察されるレベルと、同様のレベルへと、下方調節した（図８Ｂ）。この結果は、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の増強が、抗体媒介性の、ＳＩＲＰＡの下方調節を増強することができないことを指し示した。

【0418】

ＣＤ３２Ａ－Ｈ１３１およびＣＤ３２Ａ－Ｒ１３１の、両方の対立遺伝子について、ヘテロ接合性の個体の間では、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２ ｈＩｇＧ１ Ｆｃ変異型は、ＳＥＬＦ Ｆｃ変異型（図８Ａ）に関して観察される、ＳＩＲＰＡの最大下方調節より大きな、ＳＩＲＰＡの最大下方調節を示した。ＳＩＲＰＡの下方調節を増強するよりも、ＳＥＬＦ Ｆｃは、この機能を制限しうる。ＳＥＬＦの突然変異は、Ｆｃの、ＣＤ３２Ｂ、ならびにＣＤ３２Ａ－Ｒ１３１対立遺伝子に対する親和性を増強することに注目されたい。ヒトマクロファージが、ＣＤ３２Ｂより高レベルのＣＤ３２Ａを発現させることを踏まえると、ＣＤ３２Ａ－Ｒ１３１を発現させる個体に由来するマクロファージは、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２を、ＳＩＲＰＡまたはＣＤ３２Ｂから封鎖して、下方調節活性の最大値を制限する可能性がある。

【0419】

下記の表１５は、ヒトマクロファージ細胞株である、Ｕ９３７上の、ＳＩＲＰＡおよびＣＤ３２の抗体媒介性下方調節の結果についての概要を提示する。これらの研究では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を、既に記載されている、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ＫＷＡＲ２３（国際特許出願公開第ＷＯ２０１５／１３８６００号において開示されている）と比較した。表１５に示される通り、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、Ｕ９３７細胞の、細胞表面における、ＳＩＲＰＡの発現を、６８％～７６％の間の、最大下方調節パーセントで、下方調節または低減した。比較のために述べると、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ＫＷＡＲ２３は、細胞表面における、ＳＩＲＰＡの発現を、９％下方調節することができただけであった。

【0420】

表１５はまた、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体が、Ｕ９３７細胞内の、ＣＤ３２の、細胞表面発現の下方調節または低減においても、有効であったことも示す。表に示される通り、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、これらの細胞における、ＣＤ３２細胞表面発現を、４９％～７３％の間の最大下方調節パーセントで、下方調節または低減した。

【0421】

実施例９
親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マクロファージ内のＳＩＲＰＡを分解する
抗体媒介性の、受容体の下方調節を、ＦＡＣＳにより測定することは、抗ＳＩＲＰＡ抗体による標的への係合が、細胞表面発現を低下させることを確認する。内部化された受容体が分解され、その後、細胞表面へとリサイクルされるのかどうかを決定するために、ヒトマクロファージを、以下の通りに、ウエスタンブロット法により、全ＳＩＲＰＡタンパク質レベルについてアッセイした。単球由来初代ヒトマクロファージを、５μｇ／ｍｌのアイソタイプコントロールまたは抗ＳＩＲＰＡ３Ｆ９－２２Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ（ＡＳＰＳ）Ｆｃ変異型で、一晩にわたり処置した。細胞を採取し、低温のＰＢＳで洗浄し、ＨＡＬＴプロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤を補充した、ＲＩＰＡバッファーにより、氷上で１５分間にわたり溶解させた。溶解させた細胞を遠心分離して、膜画分をペレット化させ、全細胞溶解物を包摂する上清画分を回収した。図９Ａに示される通り、アイソタイプコントロール抗体、または抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２で処置されたマクロファージに由来する、漸増量の細胞溶解物画分を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥへとロードし、抗原特異抗体により、ＳＩＲＰＡタンパク質について免疫ブロットした。図９Ａでは、細胞全体の溶解物５μｇ、１０μｇ、および２０μｇを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥへとロードし、抗ＳＩＲＰＡ細胞質ドメイン（ａ－ＳＩＲＰＡｃｔ）により免疫ブロットした。予測される分子量のＳＩＲＰＡを伴うバンドの泳動は、アイソタイプコントロールで処置されたマクロファージ内では検出されるが、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体で処置されたマクロファージ内では観察されない。同様の実験では、アイソタイプコントロールで処置されたマクロファージ、または抗体３Ｆ９－２２ ＡＳＰＳ処置されたマクロファージに由来する細胞溶解物を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥへとロードし、ＳＩＲＰＡと、ＳＩＲＰＡおよび他のＩＴＩＭ受容体と会合しうるチロシンホスファターゼである、ＳＨＰ－２とについて免疫ブロットした。図９Ｂでは、細胞全体の溶解物２０μｇを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥへとロードし、抗ＳＩＲＰＡｃｔおよび抗ＳＨＰ２でプローブした。ブロットは、ＳＩＲＰＡのタンパク質レベルが、ｍＡｂ ３Ｆ９－２２処置により低下することを裏付ける。図９Ｂに示される通り、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２による刺激は、ＳＩＲＰＡの分解はもたらすが、ＳＨＰ２の分解はもたらさない。

【0422】

実施例１０
親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マクロファージ内の、腫瘍細胞に対する食作用を刺激する
先行の実験は、親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ＳＩＲＰＡおよびＣＤ３２Ａ／Ｂを下方調節し、ヒトマクロファージ内のＳＩＲＰＡの分解をもたらす能力を保持することを検証した。本発明の、親和性成熟抗体を、腫瘍細胞に対する食作用を誘導する能力についてアッセイした。初代ヒトマクロファージを、アイソタイプコントロールまたは３Ｆ９－２２ヒトＩｇＧ１または３Ｆ９－２２ ＳＥＬＦで、一晩にわたり処置して、抗体機能に対する、Ｆｃ依存的効果について評価した。ｐＨｒｏｄｏで標識化されたＲａｊｉ細胞を、マクロファージと混合し、３７℃で、２時間にわたりインキュベートした。食作用活性は、ＣＤ１４／ｐＨｒｏｄｏ二重陽性マクロファージのパーセントをカウントすることにより測定した。結果を、ｐＨｒｏｄｏ／ＣＤ１４二重陽性マクロファージ集団のパーセントの増大倍数として提示する。加えて、食作用後における、ＣＤ１４の発現レベルも示す。図１０Ａに示される通り、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、Ｆｃ変異体のいずれも、Ｒａｊｉ細胞に対する食作用を、アイソタイプコントロールで処置されたマクロファージと比べて増強した。抗体である、３Ｆ９－２２ ＳＥＬＦは、抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１と比較して、より大きな食作用を誘導すると考えられたが、この差違は、統計学的有意性に到達しなかった。加えて、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２の、いずれのＦｃ変異体も、ＣＤ１４の発現を、貪食活性およびマクロファージ活性化状態の、同様の誘導を指し示す、同様のレベルまで下方調節した。

【0423】

アンタゴナイズ性の、ＳＩＲＰＡ－ＣＤ４７シグナル伝達軸の顕著な符牒は、オプソニン化された腫瘍細胞に対する、抗体依存的食作用の増強である。図１０Ｂでは、オプソニン化抗ＣＤ２０ ｈｕＩｇＧ１の添加を伴うか、または伴わない、Ｒａｊｉ細胞に対する食作用を、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２で処置されたマクロファージ上で評価した。アイソタイプコントロールで処置されたマクロファージ内では、抗ＣＤ２０ ｈｕＩｇＧ１による、Ｒａｊｉ細胞のオプソニン化は、腫瘍細胞の食作用を、オプソニン化されていないＲａｊｉ細胞と比較して、約５０％増強する。結果を、ｐＨｒｏｄｏ／ＣＤ１４二重陽性マクロファージ集団のパーセントとして提示する。既に示した通り、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＳＥＬＦまたは３Ｆ９－２２ ＡＳＰＳで刺激されたマクロファージは、オプソニン化されていないＲａｊｉ細胞に対する食作用を、アイソタイプコントロールで処置されたマクロファージと比べて、約３０～４０％増強した。同様に、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２で処置されたマクロファージは、オプソニン化されたＲａｊｉ細胞に対する食作用を、抗ＣＤ２０と混合されたコントロールで処置されたマクロファージと比べて、約３０％増強した。抗ＣＤ２０でオプソニン化されたＲａｊｉ細胞の、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２で処置されたマクロファージへの添加は、食作用に対して、オプソニン化されていないＲａｊｉ細胞と混合された、コントロールで処置されたマクロファージに関して観察される食作用と比べて、約２倍の増大を伴う相加効果を示した。抗体である、３Ｆ９－２２の、いずれのＦｃ変異体も、腫瘍細胞に対する食作用を誘導したが、ＳＥＬＦ Ｆｃ変異型は、ＡＳＰＳ Ｆｃ変異型より大きな、統計学的に有意な貪食活性を呈した。これらの結果は、本開示の、親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ＳＩＲＰＡ－ＣＤ４７経路をアンタゴナイズすることにより、マクロファージ内の、腫瘍細胞に対する食作用を増強することを確認した。

【0424】

下記の表１６は、ヒト初代マクロファージ内の、ＳＩＲＰＡおよびＣＤ３２の、抗体媒介性下方調節について決定された、ＩＣ５０値の概要を提示する。加えて、表１６は、ヒト初代マクロファージ内の、本開示の、多様な抗ＳＩＲＰＡ抗体と関連する食作用の増大倍数を示す。これらの研究では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体を、既に記載されている、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ＨＥＦＬＢ（国際特許出願公開第ＷＯ２０１７／１７８６５３号において開示されている）と比較した。表１６に示される通り、本開示の、抗ＳＩＲＰＡ親和性成熟抗体は、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９ ｈｕＩｇＧ１抗体に関して観察されるＩＣ５０値と比較して、低値のＩＣ５０値を有する。加えて、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－１４、３Ｆ９－１８、３Ｆ９－２０、および３Ｆ９－２２は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ＨＥＦＬＢより低値のＩＣ５０値を示した。同様に、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ＨＥＦＬＢと比較して、良好な食作用活性を示した。

【0425】

実施例１１
親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体は、Ｍ１マクロファージ内およびＭ２マクロファージ内の、腫瘍細胞に対する食作用を刺激する
マクロファージは、微小環境のキューに応答して、深甚な表現型の形質転換を経、顕著に異なる、炎症促進性（Ｍ１）表現型、または抗炎症性（Ｍ２）表現型を獲得する。本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を、恒常性（Ｍ２様）マクロファージ内、および炎症性（Ｍ１様）マクロファージ内で、腫瘍細胞に対する食作用を誘導する、それらの能力について査定した。Ｆｉｃｏｌｌ上の密度勾配遠心分離を使用して、健常ボランティアの血液から、単球を単離した。単球を、ＧＭ－ＣＳＦ（８００Ｕ／ｍｌ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）またはＭ－ＣＳＦ（２５ｎｇ／ｍｌ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）の存在下で、６日間にわたり培養することにより、Ｍ１様マクロファージおよびＭ２様マクロファージを作出した。極性化したマクロファージを、アイソタイプコントロール抗体、または抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ Ｆｃ変異体で、一晩にわたり処置した。オプソニン化抗ＣＤ２０ ｈｕＩｇＧ１を伴うか、または伴わない、蛍光標識化されたＲａｊｉ細胞を、３７℃で、２時間にわたり、マクロファージと混合した。代替的に、抗ＣＤ４７ ＩｇＧ４（クローンｈｕ５Ｆ９）単独により、または抗ＣＤ４７ ｈｕＩｇＧ１および抗ＣＤ２０ ｈｕＩｇＧ１により、Ｒａｊｉ細胞をオプソニン化し、非処置マクロファージへと添加した。食作用活性は、ＣＤ１４／ｐＨｒｏｄｏ二重陽性マクロファージのパーセントをカウントすることにより測定した。

【0426】

図１１Ａに示される通り、抗体である、３Ｆ９－２２の、両方のＦｃ変異体で処置されたＭ２様マクロファージは、腫瘍細胞に対する食作用を、コントロールで処置されたマクロファージと比べて増強した。ＳＥＬＦ Ｆｃ変異型抗体が、オプソニン化されていないＲａｊｉ細胞、およびオプソニン化されたＲａｊｉ細胞に対する食作用の、抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１と比較して、統計学的に有意な、より大きな増大を示したことは、前出でなされた観察と符合する。さらに、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＳＥＬＦで処置されたＭ２様マクロファージは、オプソニン化されていないＲａｊｉ細胞、およびオプソニン化されたＲａｊｉ細胞に対する食作用を、抗ＣＤ４７ ＩｇＧ４で処置されたＲａｊｉ細胞と、同様の程度まで増強した。

【0427】

ＧＭ－ＣＳＦの存在下で培養された単球から分化した、Ｍ１様マクロファージは、ＭＣＳＦ由来のＭ２様マクロファージと異なる特性を有する。例えば、ＧＭ－ＣＳＦ由来のＭ１様マクロファージは、ＣＤ１４、ＣＤ３２Ａ／Ｂ、およびＳＩＲＰＡの発現を低下させる。加えて、Ｍ１様マクロファージは、オプソニン化されていないＲａｊｉ細胞を、同じ健常ドナーに由来するＭ２様マクロファージ（図１１Ｂ）より、高比率で貪食すると考えられる。いずれかの抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ Ｆｃ変異体で刺激したところ、Ｍ１様マクロファージは、オプソニン化されていないＲａｊｉ細胞に対する食作用を、コントロールで処置されたマクロファージと比べて、約５０％増大させた。Ｒａｊｉ細胞の、抗ＣＤ２０ ｈｕＩｇＧ１によるオプソニン化は、抗体である、３Ｆ９－２２で処置されたＭ１様マクロファージによる食作用に対する相加効果を示すことができず、これは、Ｍ２様マクロファージに対してなされた観察と対照的である。同様に、抗ＣＤ２０ ｈｕＩｇＧ１を伴うか、または伴わない、抗ＣＤ４７ ＩｇＧ４でオプソニン化されたＲａｊｉ細胞もまた、Ｍ１様マクロファージへと添加された場合、食作用を、ベースラインレベルを上回って増大させることができなかった（図１１Ｂ）。ＧＭ－ＣＳＦ由来のマクロファージは、ＦｃｇＲの発現を下方調節したので、これらの細胞は、抗体依存性食作用を媒介する、低度の可能性を所有しうる。これらの結果はまた、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２が、ＳＩＲＰＡをアンタゴナイズすることにより、Ｍ１マクロファージ内およびＭ２マクロファージ内の両方における食作用を誘導するように機能するのに対し、抗ＣＤ４７抗体は、食作用を誘導するのに、Ｍ２様マクロファージ上の、ＦｃｇＲの係合を要求する、オプソニン化剤として、主に機能することも示唆した。

【0428】

実施例１２
併用療法は、親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体の抗腫瘍活性を増強する
腫瘍始原細胞（ＴＩＣ）またはがん幹細胞（ＣＳＣ）と称する、がん細胞の小さなサブセットは、自己再生し、腫瘍バルクを維持する能力を有する、自律的がん細胞のレザバーを形成する。証拠は、ヒト固形腫瘍細胞およびＣＳＣが、免疫監視機構を逃避ように、ＣＤ４７の発現を上方調節し、腫瘍細胞の増殖および転移を可能とすることを示唆する。がん細胞が、三次元の球状細胞クラスターとして増殖する、腫瘍塊培養モデルは、ＣＳＣの自己再生能を解析し、ｉｎ ｖｉｖｏにおける細胞の増殖状態を、良好にシミュレートするのに、広く使用されている。腫瘍塊の形成は、上皮増殖因子および塩基性線維芽細胞増殖因子などの増殖因子を補充された無血清培地中の、超低付着性プレート上で、がん細胞を培養することに基づく。腫瘍塊の、初代ヒトマクロファージを伴う共培養は、抗ＳＩＲＰＡ抗体の、単剤としての、または他の抗腫瘍治療と組み合わせた、腫瘍細胞の生存についての評価を可能とする。

【0429】

ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞株は、腫瘍塊を形成することが、既に示されている、十分に特徴づけられた、ヒトトリプルネガティブ乳がん細胞株である。共培養アッセイにおいて、腫瘍細胞の生存率を測定するために、ルシフェラーゼおよびＧＦＰの構成的発現のためのレンチウイルスを、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞へと形質導入した（ＭＢ２３１－Ｌｕｃ）。腫瘍塊の形成のために、ウェル１つ当たりのＭＢ２３１－Ｌｕｃ細胞１０，０００個を、９６ウェルプレートの、ヘパリンおよびヒドロコルチゾンを補充された、ＳｔｅｍＸＶｉｖｏ Ｓｅｒｕｍ－Ｆｒｅｅ Ｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｅ Ｍｅｄｉａ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）中に播種した。Ｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｅ培地にはまた、マクロファージの生存を支援するように、ＭＣＳＦも補充した。ＭＢ２３１－Ｌｕｃを、単独で、またはウェル１つ当たりのマクロファージ５０，０００個の存在下で、２～３日間にわたり培養した。腫瘍細胞生存率は、各ウェルへと添加されたＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）により、ルシフェラーゼ活性を測定し、試料を、プレートシェーカー上、室温で、３分間にわたりインキュベートすることにより定量した。発光シグナルは、ＧＥＮ５（商標）２．０４ソフトウェアを使用する、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒにより検出した。

【0430】

ルシフェラーゼを構成的に発現させる、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳がん細胞を、ＭＣＳＦを補充された、無血清Ｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｅ培地中、単独で、またはヒトマクロファージの存在下で培養した。細胞を、３７℃、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２を伴うか、または伴わない、抗ＥＧＦＲ（２ｕｇ／ｍＬ）、抗ＰＤＬ１（２ｕｇ／ｍＬ）、またはパクリタキセル（０．５ｕＭ）で、２日間にわたり処置した。比較として、単独の、またはマクロファージの存在下における腫瘍細胞を、抗ＣＤ４７ ＩｇＧ４で処置した。腫瘍細胞生存率は、ＯｎｅＧｌｏ基質試薬により、ルシフェラーゼ活性を測定することにより定量した。図１２Ａに示される通り、ＭＢ２３１－Ｌｕｃ細胞の、マクロファージを伴うか、または伴わない培養物中の増殖は、発光値に基づいた。ＭＢ２３１－Ｌｕｃ細胞が、マクロファージの存在下で、腫瘍塊を形成したところ、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２だけが、腫瘍細胞の生存を阻害した。この結果は、マクロファージが、腫瘍の生存に最適化された培養条件下で、腫瘍殺滅可能性を保持することを裏付けた。同様の条件下で、抗ＣＤ４７ ＩｇＧ４は、ＭＢ２３１－Ｌｕｃの生存を、顕著に阻害しなかった。

【0431】

この腫瘍塊生存率アッセイにおいて、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、単剤の有効性を検証した後で、組合せ処置の効果を示す、さらなる研究を実施した。腫瘍細胞の生存は、培地中に存在するＥＧＦに依拠するので、ＭＢ２３１－Ｌｕｃ細胞を、単独で培養する場合、抗ＥＧＦＲ遮断抗体の添加は、腫瘍増殖の深甚な阻害を示した。非処置マクロファージの存在下では、抗ＥＧＦＲ抗体の抗腫瘍活性は、増強されなかった。しかし、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２で処置されたマクロファージは、抗ＥＧＦＲ抗体の抗腫瘍活性を、統計学的に有意な程度に強化した。同様の培養条件下で、抗ＰＤＬ１抗体は、マクロファージの存在に関わらず、頑健な腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することにより、予測外の表現型を顕示した。ＭＢ２３１－Ｌｕｃ細胞の生存率はまた、複数のがんを処置するのに、一般に使用される、微小管安定化化学療法剤である、５００ｎＭのパクリタキセルへと曝露された場合にも低減された。パクリタキセルの、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２で処置されたマクロファージとの組合せもまた、腫瘍細胞生存率の、統計学的に有意な低減を示す。これらの結果は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体が、腫瘍細胞のオプソニン化を越えて、多様な作用機構により機能する、抗腫瘍治療の活性を増強することを裏付けた。

【0432】

ルシフェラーゼを構成的に発現させる、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳がん細胞を、ＭＣＳＦを補充された、無血清Ｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｅ培地中、またはＭＣＳＦ＋ＩＬ－４＋ＩＬ－１０中、単独で、またはヒトマクロファージの存在下で培養した。表示の通り、細胞を、３７℃、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２、または抗ＣＤ４７ ＩｇＧ４で、３日間にわたり処置した。腫瘍細胞生存率は、ルシフェラーゼ基質を含有する、ＯｎｅＧｌｏ試薬を添加した後における発光値を測定することにより定量した。状況により、ＭＢ２３１－Ｌｕｃ細胞と共培養された、健常ボランティアに由来する、単球由来マクロファージは、処置を伴わずに、腫瘍細胞の生存を阻害する（図１２Ｂ）。ＭＢ２３１－Ｌｕｃ細胞と共に共培養されたマクロファージが、より腫瘍様の、免疫抑制性の表現型を取ることを確認するために、Ｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｅ培地に、ＩＬ－４およびＩＬ－１０を補充した。図１２Ｂに示される通り、単独で培養された増殖したＭＢ２３１－Ｌｕｃ細胞は、ＭＣＳＦまたはＭＣＳＦ＋ＩＬ－４およびＩＬ－１０を補充された培地中でも、同様に良好に増殖した。しかし、ＭＣＳＦだけを補充された培地中では、ドナー５７０に由来するマクロファージは、腫瘍細胞の生存率を、統計学的に有意な程度に低減した。この阻害は、ＩＬ－４およびＩＬ－１０を添加することにより抑制されたことから、異なる培養戦略が、腫瘍細胞の増殖をモジュレートするように、マクロファージを極性化することが裏付けられる。重要なことは、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２による、マクロファージの処置が、いずれの増殖条件下でも、腫瘍細胞の生存率を顕著に低下させたことである。

【0433】

実施例１３
親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体は、Ｔ細胞の増殖を増強する
Ｔ細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）と共に、免疫シナプスを形成して、Ｔ細胞の活性化および増殖を誘発する。Ｔ細胞上の、ＣＤ４７の発現は、ＳＩＲＰＡを介して、ＡＰＣへと阻害性シグナルを伝達することにより、活性化に対抗しうる。しかし、Ｔ細胞はまた、ＡＰＣ上で発現されたＣＤ４７に結合することが可能な、ＳＩＲＰファミリーの別のメンバーである、ＳＩＲＰＧも発現させる。ＳＩＲＰＧ（Ｔ細胞）－ＣＤ４７（ＡＰＣ）間の相互作用は、免疫シナプスを安定化させ、Ｔ細胞の活性化および増殖を促進することが示されている。抗ＣＤ４７抗体は、ＳＩＲＰＡを介して送達される阻害性シグナルを遮断するが、抗ＣＤ４７抗体はまた、ＳＩＲＰＧの結合に由来する刺激効果も遮断するので、有効な抗腫瘍Ｔ細胞応答を及ぼすのに有害であることが分かる場合がある。したがって、アンタゴニスト性抗ＳＩＲＰＡ抗体は、免疫シナプス内の、極めて重要な相互作用を破壊せずに、ＳＩＲＰＡシグナル伝達を阻害することにより、この潜在的な欠点を回避する。この仮説を検証するために、抗ＳＩＲＰＡ抗体を、１元ＭＬＲアッセイおよび２元ＭＬＲアッセイにおいて査定した。

【0434】

ＭＬＲアッセイの原理は、１つのドナーに由来するＡＰＣ、通例は、ＤＣが、ＭＨＣ分子上において、ペプチドを、別個のドナーから単離されたＴ細胞へと提示することである。Ｔ細胞の小画分は、ＭＨＣ：ペプチド複合体を認識することが可能なＴＣＲを発現させ、共刺激時に増殖するであろう。この１元ＭＬＲでは、１つのドナーに由来する細胞は、抗原提示に関与し、別のドナーに由来する細胞は、増殖することにより応答する。２元ＭＬＲでは、両方のドナーが、ＡＰＣおよび反応するＴ細胞に寄与するので、２つの別個のＴ細胞集団が、増殖することにより応答する。

【0435】

まず、抗ＳＩＲＰＡ抗体の、Ｔ細胞の増殖に対する効果を、２元ＭＬＲアッセイにおいて評価した。ＰＢＭＣを、健常ドナーから単離し、漸増濃度の、３Ｆ９－２２ Ｆｃ変異体またはアイソタイプコントロールの存在下で、３日間にわたり共培養した。Ｔ細胞の増殖は、細胞数の指標としての、代謝的に活性の細胞の存在を定量することにより推定した。代謝活性は、存在するＡＴＰの量に比例する発光シグナルを発生させる、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）により定量した。図１３Ａに示される通り、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２で処置されたＰＢＭＣは、発光の、アイソタイプで処置されたＰＢＭＣと比べた、約１．５倍の増大を示し、これは、Ｔ細胞増殖の増大を示唆した。前出で記載された食作用アッセイに対し、抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ変異型は、Ｔ細胞の増殖を、ＳＥＬＦ Ｆｃ変異型より有効に刺激する傾向にあった。

【0436】

抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２について観察された発光の増大が、抗ＳＩＲＰＡ抗体について特異的であるのかどうかを決定するために、抗ＣＤ４７抗体を伴う、２元ＭＬＲアッセイを繰り返した。２例の健常ドナーに由来するＰＢＭＣを単離し、各ドナーに由来する細胞１００，０００個ずつを、漸増濃度の被験抗体またはアイソタイプコントロール抗体と併せて混合した。細胞増殖は、３日間にわたる共培養物の後で、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬により測定した。図１３Ｂに示される通り、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－１４ ｈｕＩｇＧ１および３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１、ならびにＡＳＰＳ Ｆｃ変異体は、発光シグナルを、アイソタイプコントロール抗体により処置されたＰＢＭＣに関して観察される発光シグナルと比べて、約７０％増大させた。ＳＥＬＦ Ｆｃ上の抗ＳＩＲＰＡ抗体（３Ｆ９－１４ ＳＥＬＦおよび３Ｆ９－２２ ＳＥＬＦ）は、同じ条件下のコントロールと比べて、発光シグナルを増大させることができなかったことから、抗体機能に対する、別のＦｃ依存的効果が確立される。抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１とは対照的に、抗ＣＤ４７処置は、発光の、約１０％という、わずかな増大を示した。まとめると、２元ＭＬＲ実験からの結果は、ＳＩＲＰＡを、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１でアンタゴナイズすることが、Ｔ細胞の増殖を促進することを示唆した。

【0437】

２元ＭＬＲにおける、代謝活性の定量は、Ｔ細胞増殖の、間接的な測定であるので、より従来型の、１元ＭＬＲアッセイを実施して、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１に関して観察される刺激効果を確認した。初代ヒト樹状細胞（ＤＣ）は、健常ドナーの単球から導出し、ＣＦＳＥ染料で標識化された同種異系Ｔ細胞と共に、１：５の比で共培養した。樹状細胞を、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ Ｆｃ変異体、もしくは抗ＣＤ４７（ｈｕ５Ｆ９）、またはアイソタイプコントロール抗体で処置し、３７℃で、５日間にわたりインキュベートした。Ｔ細胞の増殖は、Ｔ細胞を、抗ＣＤ３ ＡＰＣで染色し、ＣＦＳＥ－ｌｏｗ集団についてゲートをかけることにより測定した。図１４Ａは、抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１または３Ｆ９－２２ ＡＳＰＳで処置された、異なるドナーに由来するＤＣが、Ｔ細胞の増殖を、アイソタイプ、または抗ＣＤ４７で処置されたＤＣと比べて、約５０％増大させたことを示す。このＴ細胞増殖の増大は、２元ＭＬＲにおいて、抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１で処置されたＰＢＭＣに関して観察される発光の増大と比例する。図１４Ｂは、図１４Ａに提示されたデータについての、代表的なＦＡＣＳプロットを示す。したがって、１元ＭＬＲおよび２元ＭＬＲからの結果は、ＳＩＲＰＧ－ＣＤ４７間の相互作用を遮断せずに、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１で、ＳＩＲＰＡをアンタゴナイズすることは、Ｔ細胞の増殖を促進することを示唆した。

【0438】

実施例１４
親和性成熟抗ＳＩＲＰＡ抗体は、炎症促進性サイトカインの放出を増強する
抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ Ｆｃ変異体の活性を、さらに差別化するために、２例の健常ボランティアに由来する、初代ヒトマクロファージを、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２またはアイソタイプコントロール抗体と組み合わせた、ある用量のＬＰＳで、一晩にわたり刺激した。図１５Ａでは、２例の健常ドナーに由来する、初代ヒトマクロファージを、３７℃、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ Ｆｃ変異型またはアイソタイプコントロール抗体と組み合わせた、０．５ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで、一晩にわたり刺激した。上清画分を回収し、ＥＬＩＳＡにより、ＴＮＦαレベルについて解析した。図１５Ｂでは、初代ヒトマクロファージを、３７℃、漸増濃度の抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ Ｆｃ変異型またはアイソタイプコントロール抗体と組み合わせた、０．５ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで、一晩にわたり刺激した。上清画分を回収し、ＥＬＩＳＡにより、ＴＮＦαの放出について解析した。図１５Ａおよび図１５Ｂに示される通り、抗体である、３Ｆ９－２２ ＡＳＰＳで共刺激されたマクロファージは、ＴＮＦα分泌の、アイソタイプコントロール抗体、または抗体である、３Ｆ９－２２ ＳＥＬＦで共刺激された細胞と比べた、顕著な増大を呈した。抗体である、３Ｆ９－２２ ＳＥＬＦ Ｆｃ変異型は、最小の共刺激活性を示した。抗ＳＩＲＰＡ抗体の滴定は、抗体である、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１およびＡＳＰＳ変異体が、ＬＰＳでプライミングされたマクロファージによるＴＮＦαの放出を、用量依存的に明白に増進させたのに対し、抗体である、３Ｆ９－２２ ＳＥＬＦは、ＴＮＦα応答の低下を、大きな変動を伴って示すという、同様のパターンを示した。これらの結果は、非ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ＳＩＲＰＡを、Ｆｃ依存的にアンタゴナイズして、ＩＴＩＭシグナル伝達を、阻害から解放することを裏付けた。

【0439】

実施例１５
抗ＳＩＲＰＡ抗体の結合部位についてのエピトープマッピング
抗ＳＩＲＰＡ抗体のエピトープマッピングは、ヒトＳＩＲＰＡ ｃＤＮＡ配列の、ショットガン突然変異誘発により創出された、アラニンスキャニングライブラリーを使用して実施した。Ｃ末端のＶ５エピトープタグをコードする、ＳＩＲＰＡの発現コンストラクトを、ハイスループットアラニンスキャニング突然変異誘発（ＤａｖｉｄｓｏｎおよびＤｏｒａｎｚ、２０１４、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３、１３～２０において概括されている）にかけて、包括的な突然変異ライブラリーを作出した。ＳＩＲＰＡの細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸３１～３７４）を表す残基の各々を、大半は、アラニンへと突然変異させる一方で、アラニンコドンは、セリンへと突然変異させた。

【0440】

ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞に、３８４ウェルマイクロプレート内にアレイ化されたＳＩＲＰＡ突然変異体ライブラリークローンを、個別にトランスフェクトし、２２時間にわたりを発現させた。抗体を消化して、Ｆａｂを作出し、この後、細胞を、１０％の正常ヤギ血清（ＮＧＳ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）中で希釈されたＦａｂと共にインキュベートした。ライブラリースクリーニングの前に、独立の免疫蛍光滴定曲線を、野生型ＳＩＲＰＡを発現させる細胞に対して使用して、シグナルが、直線的な検出範囲内にあることを確認するように、初期Ｆａｂ濃度を決定した。Ｆａｂは、１０％のＮＧＳ中に、７．５μｇ／ｍｌのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔｇｒｏｖｅ、ＰＡ）を使用して検出した。細胞を、ＰＢＳで、２回にわたり洗浄し、０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を伴うＣｅｌｌｓｔｒｉｐｐｅｒ（Ｃｅｌｌｇｒｏ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）中に再懸濁させた。場合によって、ｐＨの増大、温度の上昇、および増大させた解離時間の延長を含む、高厳密性の条件を使用した。平均値細胞蛍光は、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔハイスループットフローサイトメーター（ＨＴＦＣ、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ、Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ、ＮＭ）を使用して検出した。Ｆａｂの、各突然変異体クローンに対する反応性は、モックトランスフェクトコントロールによるシグナルを控除することにより、野生型ＳＩＲＰＡタンパク質の反応性と比べて計算し、野生型ＳＩＲＰＡトランスフェクトコントロールによるシグナルに照らして正規化した。

【0441】

ライブラリークローン内の突然変異残基は、被験Ｆａｂの反応性を支援しないが、市販の参照抗体である、ＭＡＢ４５４６（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはさらなる抗ＳＩＲＰＡ Ｆａｂの反応性を支援する場合、Ｆａｂ結合性エピトープにとって、「極めて重要」であると同定された。この対抗スクリーニング戦略は、局所的にミスフォールドするか、または発現の欠損を示す、ＳＩＲＰＡ突然変異体の除外を容易とした。

【0442】

抗ＳＩＲＰＡ抗体である、９Ｃ２については、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／６５３６６号に記載されている。
ｍＡｂ ９Ｃ２：重鎖可変ドメイン配列
ＥＦＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＬＴＧＹＮＭＮＷＶＫＱＳＲＧＫＳＬＥＷＩＧＮＩＮＰＨＹＧＳＳＴＹＮＱＮＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＡＡＹＭＱＦＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＥＧＹＤＧＶＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号４５）
ｍＡｂ ９Ｃ２：軽鎖可変ドメイン配列
ＱＩＶＬＳＱＳＰＡＩＬＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＰＷＩＹＶＴＳＮＬＡＳＧＶＰＴＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号４６）

【0443】

下記の表１７は、スクリーンにおいて、極めて重要であると同定された、全ての残基について、平均値結合反応性および範囲を描示する。主要な、極めて重要な残基は、突然変異が、被験抗体による結合について陰性である（野生型への結合の３０％未満である）が、コントロール抗体については陽性である（野生型の８０％超である）残基として規定した。図１６は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９および９Ｃ２による結合に、極めて重要な残基を、影を付した球体として強調する、ＳＩＲＰＡについての結晶構造モデル（ＰＤＢ ＩＤ ２ＷＮＧ；Ｈａｔｈｅｒｌｅｙら、２００９、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、２８４：２６６１３～９）を描示する。

【0444】

表１８に表示の通り、抗ＳＩＲＰＡ抗体３Ｆ９による結合に関与する、極めて重要なＳＩＲＰＡ残基は、上記に示された、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１配列のアミノ酸残基Ｒ２８２、Ｑ２８４、およびＧ３３７を含む。抗体９Ｃ２（国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／６５３６６号に開示されている）による結合に関与する、極めて重要なＳＩＲＰＡ残基は、上記で開示された、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１配列のアミノ酸残基Ｑ２８１、Ｒ２８２、Ｑ２８４、Ｌ２８５、Ｗ２８７、Ｒ２９５、Ｅ２９７、Ｖ３０２、およびＷ３１５を含む。これらの残基は、ＳＩＲＰＡについての学術文献では、Ｄ３ドメインと称され、ヒトＳＩＲＰＡ ｖ１配列のアミノ酸２５４～３４８に対応する、ＳＩＲＰＡの膜近位Ｉｇドメイン内にある。複数の、公表された報告は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメインが、コレクチンファミリー内のパターン認識分子、すなわち、サーファクタントプロテインＤおよびサーファクタントプロテインＡ（それぞれ、Ｓｐ－ＤおよびＳｐ－Ａ）に結合することを裏付ける。

【0445】

実施例１６
抗ＳＩＲＰα抗体は、同系腫瘍モデルにおいて、チェックポイント阻害剤の抗腫瘍活性を増強する
ＳＩＲＰＡ－ＣＤ４７経路をターゲティングする治療抗体は、概念実証研究のために、免疫不全ＮＯＤマウスまたは免疫不全ＮＯＧマウスが、植え込まれたヒトがん細胞の増殖を維持する、異種移植腫瘍モデルに依拠しうる。ＮＯＤマウスにより発現される、マウスＳＩＲＰＡの対立遺伝子変異体は、ヒトＣＤ４７に結合するので、この相互作用は、ヒト細胞の、マウス宿主への移植を可能とする。しかし、ＮＯＤ ＳＩＲＰＡは、ヒトＣＤ４７に、ヒトＳＩＲＰＡより大きな親和性で結合するため、これらのマウスはまた、経路の役割を誇張する場合もある。さらに、マウスの免疫不全株内の、Ｐｒｋｄｃ^ＳＣＩＤ突然変異およびＩＬ２Ｒγ^Ｎｕｌｌ突然変異は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞を消失させるので、骨髄細胞および自然免疫系を、腫瘍の増殖を阻害するために利用可能な、唯一のエフェクター細胞とする。腫瘍の異種移植モデルは、抗腫瘍獲得免疫応答をプライミングまたは増強するように、自然免疫細胞をターゲティングする治療についての精査を可能としない。したがって、本開示のヒト抗ＳＩＲＰＡ抗体を、免疫コンピテント動物宿主の文脈で査定するために、ヒトＳＩＲＰＡおよびヒトＣＤ４７のための遺伝子を、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウス株へと導入した。

【0446】

略述すると、ＵＣＳＣゲノムブラウザー、およびＮＣＢＩによるＣｌｏｎｅＤＢを使用して、関与性のヒト遺伝子調節エレメントを含むように、フランキング配列を伴う、ヒトＳＩＲＰＡをコードする核酸、またはヒトＣＤ４７をコードする核酸を保有する、細菌人工染色体（ＢＡＣ）を同定した。ヒトＳＩＲＰＡ遺伝子のコード配列を含有することが予測される、１つのＢＡＣクローン（ＢＡＣＲＰ１１－６３６Ｌ２２８）を同定した。ヒトＣＤ４７遺伝子のコード配列を含有することが予測される、別のＢＡＣクローン（ＢＡＣＲＰ１１－６７１Ｆ８）を同定した。次いで、標準的な前核注入法を使用して、精製ＢＡＣ ＤＮＡを、マウスＣ５７ＢＬ６／Ｊ接合子へと注入することにより、目的のＢＡＣクローンを保有するマウスを作出した。接合子を、雌マウスへと戻し、結果として得られる仔マウスを、所望の導入遺伝子の存在について遺伝子型解析した。次いで、導入遺伝子を含有する初代動物を、非トランスジェニック動物と交配させ、標準的な技法を使用するＰＣＲにより、加えて、動物に由来する末梢血細胞のＦＡＣＳ染色により、子孫を、導入遺伝子の発現についてスクリーニングした。ヒトＳＩＲＰＡおよびヒトＣＤ４７の両方を発現させる「ヒト化」マウスを作製するために、各個別の目的の遺伝子を保有する、ＢＡＣトランスジェニックマウスを交雑させた。

【0447】

上記で記載した通り、ヒトＳＩＲＰＡおよびヒトＣＤ４７を発現させるように操作されたマウスに加えて、また、同系腫瘍細胞株も、マウスＣＤ４７を、ヒトＣＤ４７で置きかえるように操作した。略述すると、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９技術を利用して、Ｃａｓ９／ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）複合体を、ＭＣ３８標的細胞へと導入した。標的領域（マウスＣＤ４７のエクソン２）における、Ｃａｓ９／ｇＲＮＡ媒介性インデル形成は、フレームシフトおよび／または未成熟終止を結果としてもたらし、これにより、内因性のマウスＣＤ４７遺伝子の発現をノックアウトした。ｇＲＮＡおよびＣａｓ９をトランスフェクトした後で、シーケンシングにより、単一細胞由来クローンをスクリーニングし、所望の突然変異を含有する、ホモ接合性クローンを拡大した。図１７Ａ（上パネル）に示される通り、抗マウスＣＤ４７抗体で染色された、親ＭＣ３８細胞およびマウスＣＤ４７ノックアウト細胞株（ＭＣ３８－ｍＣＤ４７ ＫＯ）についてのＦＡＣＳ解析は、これらの操作細胞内の、マウスＣＤ４７の発現の喪失を確認する。その後、ヒトＣＤ４７遺伝子のインサートを含有するレンチウイルスを、ＭＣ３８－ｍＣＤ４７ ＫＯ細胞へと形質導入した。ＭＣ３８－ｍＣＤ４７ ＫＯ－ｈｕＣＤ４７＋細胞を、ピューロマイシンにより選択し、拡大した。図１７Ａ（下パネル）は、選択された細胞集団内の、ヒトＣＤ４７の発現を検証する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。

【0448】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の抗腫瘍効果を、ＭＣ３８－ｍＣＤ４７ ＫＯ－ｈｕＣＤ４７＋細胞を生着させた、ｈｕＳＩＲＰＡ／ｈｕＣＤ４７ ＢＡＣｔｇマウスによるマウス結腸癌モデルを、Ｔ細胞チェックポイント阻害剤と組み合わせて、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて使用して査定した。これらのマウスの右脇腹に、ＭＣ３８細胞５００，０００個を皮下注入した。細胞移植の約１０日後に、マウスを、群へと無作為化するか、または腫瘍が、８０ｍｍ^３の平均体積に達したら、抗体療法を開始した。マウスには、抗ＳＩＲＰＡ抗体（ａｎｔ－ＳＩＲＰＡ ａｎｔｉｂｏｄｙ）である、３Ｆ９ ｍＩｇＧ１、または抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９ ｍＩｇＧ２Ａの、１０ｍｇ／ｋｇで、毎週２回ずつの腹腔内（ＩＰ）注射を、最適未満用量である、５ｍｇ／ｋｇの、抗マウスＰＤＬ１抗体（クローン１０Ｆ．９Ｇ２、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）と組み合わせて、３週間にわたり施された。腫瘍が、約２０００ｍｍ^３の体積に達したら、動物を屠殺した。

【0449】

図１７Ｂは、マウスＣＤ４７の発現を欠き、ヒトＣＤ４７を過剰発現させる（ＭＣ３８－ｍＣＤ４７ＫＯ／ｈｕＣＤ４７＋）ように操作されたＭＣ３８細胞を、皮下に植え込まれた、ｈｕＳＩＲＰａ／ｈｕＣＤ４７ＢＡＣトランスジェニックマウスについての平均腫瘍増殖曲線を示す。マウスを、表示の通りに、アイソタイプコントロール抗体、抗マウスＰＤＬ１抗体、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９ ｍＩｇＧ１＋抗マウスＰＤＬ１抗体、または抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９ ｍＩｇＧ２Ａ＋抗マウスＰＤＬ１抗体で処置した。腫瘍が、８０ｍｍ^３の平均に達したら、処置を開始した。図１７Ｂに示される通り、抗ＰＤＬ１抗体による処置は、腫瘍増殖を、アイソタイプコントロール抗体による処置された動物と比べて、２０％阻害したが、これは、統計学的有意性を達成しなかった。しかし、抗ＰＤＬ１抗体の、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９ ｍＩｇＧ１、または抗ＳＩＲＰＡ抗体（ａｎｔ－ＳＩＲＰＡ ａｎｔｉｂｏｄｙ）である、３Ｆ９ ｍＩｇＧ２Ａとの併用療法は、これらの動物における腫瘍増殖を、それぞれ、４０％および４７％と、さらに阻害した。図１７Ｃは、処置群内の各動物の腫瘍体積についてのスパゲッティプロットを示す。併用療法処置群内の、大半の動物では、少数の応答不良例を除き、腫瘍体積が、１０００ｍｍ^３を超えなかったのに対し、アイソタイプコントロール群内、または抗ＰＤＬ１抗体単剤療法群内の、何匹かの動物の腫瘍は、２０００ｍｍ^３の限界に到達した。

【0450】

これらの結果は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９抗体が、ヒトＳＩＲＰＡ－ＣＤ４７経路をコードする、免疫コンピテント動物モデルにおいて、チェックポイント阻害剤の抗腫瘍活性を増強するのに有効であることを裏付けた。これらの結果は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体が、チェックポイント阻害剤の抗腫瘍活性を増強するために有用であることを指し示した。したがって、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、チェックポイント阻害剤療法と組み合わせて使用される場合に、がんを処置するのに有効である。

【0451】

実施例１７
抗ＳＩＲＰα抗体は、マウス同系腫瘍内の、腫瘍浸潤性骨髄細胞上における、ＳＩＲＰＡの発現を下方調節する
前出の実施例は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の抗腫瘍活性を、ヒトＳＩＲＰＡ／ＣＤ４７ ＢＡＣトランスジェニックマウスにおいて裏付けた。抗腫瘍活性が、腫瘍内のマクロファージ上の、ＳＩＲＰＡの、抗体媒介性下方調節と相関したことを検証するために、薬物投与後において、腫瘍骨髄細胞を特徴づけた。

【0452】

ヒトＳＩＲＰＡ／ｈｕＣＤ４７ ＢＡＣトランスジェニックマウスの右脇腹の皮下に、ＭＣ３８－ｍＣＤ４７ ＫＯ／ｈｕＣＤ４７＋細胞５００，０００個を植え込んだ。マウスにおける腫瘍が、約４００ｍｍ^３の平均体積へと増殖してから、抗体の投与を行った。マウスは、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ｍＩｇＧ２Ａの、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇで、３日間を隔てて、２回にわたる、ＩＰ注射を施された。コントロールマウスは、ｍＩｇＧ２Ａアイソタイプの、１０ｍｇ／ｋｇで、２回にわたるＩＰ注射を施された。腫瘍組織および脾臓は、抗体の、２回目の投与の、１日、４日、および８日後に、マウスから採取した。脾臓は、７０μｍの細胞ストレイナーを介する、機械的解離により、単一細胞懸濁液へと加工した。次いで、細胞を、ＰＢＳで洗浄し、赤血球を、ＡＣＫ溶解バッファーで溶解させた。その後、細胞を、ＰＢＳ／２％ＦＢＳからなるＦＡＣＳバッファー中に再懸濁させ、染色のために調製した。同様に、腫瘍組織も、酵素的解離、およびｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を伴う機械的解離により、単一細胞懸濁液へと加工した。組織ホモジネートを、７０μｍの細胞ストレイナーを通して濾過し、染色のために、ＰＢＳ／２％ＦＢＳからなるＦＡＣＳバッファー中に再懸濁させた。細胞は、以下のパネルに従い染色した。

【0453】

図１８Ａは、時間経過にわたる、腫瘍浸潤性骨髄細胞（単球およびマクロファージ）上の、ＳＩＲＰＡ発現の相対変化を示す。腫瘍関連マクロファージを、ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ Ｆ４／８０＋ Ｌｙ６Ｃ－ Ｌｙ６Ｇ－細胞として規定したのに対し、腫瘍浸潤性単球は、ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ Ｆ４／８０－ Ｌｙ６Ｃ＋ Ｌｙ６Ｇ－細胞として規定した。アイソタイプコントロール抗体を投与された動物と比較して、抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与された動物は、抗体投与の１日後の、腫瘍内の単球上および腫瘍内のマクロファージ上の両方の、細胞表面におけるＳＩＲＰＡの発現の、ほぼ８０％の低減を示した。それぞれ、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ｍＩｇＧ２Ａを投与されたマウスでは、ＳＩＲＰＡの発現は、４日後または８日後に、ベースラインレベルへと戻った。３０ｍｇ／ｋｇの、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ｍＩｇＧ２Ａを投与されたマウスでは、ＳＩＲＰＡの発現レベルは、ベースラインを約５０％下回るレベルへと安定化した。

【0454】

腫瘍微小環境との、何らかの相関が決定されうるのかどうかを決定するように、脾臓区画もまた、免疫プロファイリングした。脾臓内の単球は、抗体媒介性の、受容体の下方調節に対して、腫瘍内の単球で観察される場合と比べて、より抵抗性であると考えられた（図１８Ｂ）。脾臓内の単球は、ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ Ｆ４／８０－ Ｌｙ６Ｃ＋ Ｌｙ６Ｇ－細胞として規定した。脾臓赤脾髄内のマクロファージは、ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ－ Ｆ４／８０＋ Ｌｙ６Ｃ－細胞として規定した。脾臓内の単球は、抗体投与の１日後に、約４０％の、ＳＩＲＰＡの最大下方調節を裏付け、後続の時点において、受容体の発現を、急速に回復させた。他方、脾臓赤脾髄内のマクロファージは、ＳＩＲＰＡ受容体発現の、腫瘍内のマクロファージに関して観察されるパターンと同様のパターンに従った。

【0455】

まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体が、マクロファージ上、特に、腫瘍関連マクロファージ上のＳＩＲＰＡレベルの低減（下方調節）において有効であり、マクロファージ上の、ＳＩＲＰＡレベルの低減または下方調節は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の抗腫瘍活性と相関することを裏付けた。

【0456】

実施例１８
抗ＳＩＲＰａ抗体は、ヒト免疫系（ＨＩＳ）マウス内の、腫瘍浸潤性骨髄細胞上における、ＳＩＲＰＡの発現を下方調節する
抗ＳＩＲＰＡ抗体のＦｃドメインは、受容体の下方調節、および抗体機能において役割を果たすので、ヒト免疫系で再構成されたマウスを利用して、異なるＦｃ変異体の活性を、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体と比較した。ＨＩＳマウスモデルは、臍帯血から得られた、ＣＤ３４＋ヒト造血幹細胞（ｈＨＳＣ）の、致死線量未満の照射で、それらを前処理した後における、免疫不全マウス（すなわち、ＮＯＧ株）への移植を必須とする。ＨＳＣは、広範にわたる細胞系統、とりわけ、リンパ球集団を、末梢血、骨髄、胸腺、および脾臓（ならびに他の組織）において、安定的に発生させる。ヒトＧＭ－ＣＳＦおよびヒトＩＬ－３を発現させるように操作されたＮＯＧマウス（ＮＯＧ－ＥＸＬ；Ｔａｃｏｎｉｃ）は、他のマウス株と比較して、より大きな骨髄細胞の分化を支援する、さらなる利点をもたらす。ＨＩＳマウスは、ヒトがん細胞株を植え込まれたマウスのｉｎ ｖｉｖｏにおいて、ヒト腫瘍－免疫系間相互作用を研究する機会を提供する。加えて、ＨＩＳマウスは、治療抗体候補物質の作用機構を、ｉｎ ｖｉｖｏ状況下で査定する一助ともなる。

【0457】

マウスの脇腹領域の皮下に、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞を、５０％のマトリゲル（型番：３５４２３４；Ｃｏｒｎｉｎｇ）を伴う、マウス１匹当たりの細胞３×１０^６個の細胞密度で接種した。腫瘍が、４００ｍｍ^３の平均体積へと増殖してから、マウスは、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１ Ｐ３３１Ｓ（ＰＳ）、３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１ Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）、またはｈｕＩｇＧ１アイソタイプコントロールの、１０ｍｇ／ｋｇで、３日間を隔てて、２回にわたるＩＰ注射を施された。血液、脾臓、および腫瘍組織は、抗体の、２回目の注射の１日後に採取した。脾臓は、７０μｍの細胞ストレイナーを介する、機械的解離により、単一細胞懸濁液へと加工した。細胞を、ＰＢＳで洗浄し、赤血球を、ＡＣＫ溶解バッファーで溶解させた。その後、細胞を、ＰＢＳ／２％ＦＢＳからなるＦＡＣＳバッファー中に再懸濁させ、染色のために調製した。同様に、腫瘍組織も、酵素的解離、およびｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を伴う機械的解離により、単一細胞懸濁液へと加工した。組織ホモジネートを、７０μｍの細胞ストレイナーを通して濾過し、染色のために、ＰＢＳ／２％ＦＢＳからなるＦＡＣＳバッファー中に再懸濁させた。末梢血細胞を、ＡＣＫ溶解バッファーで処理し、ＲＢＣを溶解させ、ＰＢＳ／２％ＦＢＳからなるＦＡＣＳバッファー中に再懸濁させた。細胞は、以下のパネルに従い染色した。

【0458】

ＮＯＧ－ＥＸＬマウスに、２例の異なるドナー（ドナーＡおよびＢ）からの、ヒト臍帯血由来ＣＤ３４＋造血幹細胞（ＨＳＣ）を生着させた。全てのマウスの皮下に、ヒトメラノーマ細胞株である、Ａ３７５細胞３００万個を植え込んだ。腫瘍が、約４００ｍｍ^３の平均体積へと増殖してから、抗体の投与を行った。マウスは、抗ＳＩＲＰＡ抗体の、１０ｍｇ／ｋｇで、３日間を隔てて、２回にわたるＩＰ注射を施された。コントロールマウスは、ｈｕＩｇＧ１アイソタイプの、１０ｍｇ／ｋｇで、２回にわたるＩＰ注射を施された。腫瘍組織は、抗体の、２回目の投与の１日後に、マウスから採取した。

【0459】

図１９は、研究デザインと、これらの研究の、Ａ３７５腫瘍を保有する、ヒト化ＮＯＧ－ＥＸＬマウスにおける、ＳＩＲＰＡの、抗体媒介性下方調節の結果とを示す。図１９Ａは、８匹のマウスに、ドナーＡに由来するＣＤ３４＋ ＨＳＣを生着させ、２９匹のマウスに、ドナーＢに由来するＣＤ３４＋ ＨＳＣを生着させたことを示す。略述すると、２例の異なるドナーに由来する、ＣＤ３４＋ ＨＳＣを生着した、４０匹のマウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ、ＮＹから入手した。移植の１０週間後である、出荷の前に、マウスは、ヒト白血球の再構成について、フローサイトメトリーによる品質チェックを受けた。大半のマウス（４０匹中３６匹）は、末梢血中に、＞５０％のｈｕＣＤ４５＋細胞を含有した。

【0460】

ＮＯＧ－ＥＸＬマウスにおける腫瘍関連マクロファージは、ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１４＋ ＣＤ１６＋ ＣＤ３－ ＣＤ１９－細胞として規定した。図１９Ｂは、ＭＦＩ値（左パネル）または正規化値（右パネル）として描示された、ヒト腫瘍マクロファージ上のＳＩＲＰＡの発現レベルを示す。抗ＳＩＲＰＡ抗体による処置は、いずれのドナーに由来するヒト腫瘍マクロファージ内でも、ＳＩＲＰＡの、アイソタイプコントロール群と比較して有意な下方調節を結果としてもたらした。ＭＦＩ値を、各ドナーについて正規化することは、ＳＩＲＰＡの発現の、約７０％の低減を明らかにし、これは、ｉｎ ｖｉｔｒｏの単球由来マクロファージ、およびＢＡＣトランスジェニックマウスの、腫瘍内のマクロファージにおいて観察される、下方調節の程度を近似する。これらの実験では、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２ ＰＳＦｃ変異型と、抗ＳＩＲＰＡ抗体のＮＳＬＦ Ｆｃ変異型との間における、活性の有意差は、観察されなかった。

【0461】

ＳＩＲＰＡの発現に加えて、これらの実験による腫瘍内のマクロファージは、Ｍ１マーカーの発現について検討するためにもまたプロファイリングした。腫瘍内のマクロファージは、ｈｕＣＤ４５＋ ｈｕＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１４＋ ｈｕＣＤ１６＋細胞として規定した。図２０Ａに示される通り、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＨＬＡ－ＤＲの発現を上方調節した。ＭＦＩ値を、各ドナーについて正規化することは、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＰＳ Ｆｃ変異型が、ＨＬＡ－ＤＲの発現を、いずれのドナーにおいても、アイソタイプコントロール抗体による処置に関して観察される、ＨＬＡ－ＤＲの発現の、約３倍にすることを裏付けた。これに対し、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＮＳＬＦ Ｆｃ変異型は、ＨＬＡ－ＤＲの発現を、アイソタイプコントロール抗体による処置に関して観察される、ＨＬＡ－ＤＲの発現の、約１．５～２倍にした。ドナーＢのマクロファージ上で測定された増大だけが、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＮＳＬＦ Ｆｃ変異型に関する、統計学的有意性に到達した。同様に、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ドナーＢに由来する、腫瘍内のマクロファージ上だけで、ＣＤ８６の発現を増大させた（図２０Ｂ）。ＰＳ Ｆｃ変異体およびＮＳＬＦ Ｆｃ変異体のいずれも、ＣＤ８６の発現を、アイソタイプコントロール抗体群と比べて、約４０％増大させたが、ＰＳ Ｆｃ変異型だけが、ＣＤ８６の発現の増大について、統計学的有意性を達成した。これらの結果は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、ＰＳ Ｆｃ変異体およびＮＳＬＦ Ｆｃ変異体のいずれもが、ＳＩＲＰＡを下方調節し、ヒト腫瘍マクロファージ上のＭ１マーカーを増大させることを裏付けたが；これらの実験では、ＰＳ変異体は、部分的に、ＮＳＬＦ変異体より強力であると考えられた。

【0462】

本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の活性を、腫瘍内および末梢免疫区画内で比較するために、抗体媒介性の、ＳＩＲＰＡの下方調節を、末梢血単球内および脾臓単球内でもまた評価した。ヒト単球集団は、ＣＤ４５＋ ＣＤ１１ｂ＋ ＣＤ１４＋ ＣＤ１６－ ＣＤ３－ ＣＤ１９－細胞として規定した。マウスは、抗ＳＩＲＰＡ抗体の、１０ｍｇ／ｋｇで、３日間を隔てて、２回にわたるＩＰ注射を施された。コントロールマウスは、ｈｕＩｇＧ１コントロール抗体の、１０ｍｇ／ｋｇで、２回にわたるＩＰ注射を施された。脾臓および血液は、抗体の、２回目の投与の１日後に、マウスから採取した。図２１Ａに示される通り、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＮＳＬＦ Ｆｃ変異型は、脾臓単球内の抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＰＳＦｃ変異型に関して観察される、ＳＩＲＰＡの下方調節と比較して、優れた、ＳＩＲＰＡの下方調節を呈した。しかし、末梢血単球内では、いずれのＦｃ変異体も、同様の活性を提示した（図２１Ｂ）。本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ドナーＢに由来する単球において、ドナーＡに由来する単球より大きな受容体下方調節を示したが、これは、ベースラインの、ドナーＢにおける単球上の、ドナーＡにおける単球上より高度のＳＩＲＰＡの発現と相関しうる。

【0463】

まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体が、末梢血単球ならびに脾臓単球の両方における、ＳＩＲＰＡレベルの下方調節において有効であることを裏付けた。

【0464】

実施例１９
選択的なＦｃＲへの係合のために操作された抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗体媒介性の、受容体の下方調節活性を保持する
本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の活性における、ＦｃＲの役割を、さらに査定するために、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の可変ドメインを、ＦｃＲへの結合プロファイルが顕著に異なる、異なるＦｃドメインと共に発現させた。抗ＳＩＲＰＡ抗体のＦｃ変異体についての、ＦｃＲに対する親和性の測定値は、Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６測定器上で、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して得た。固定化されている抗ヒトＦａｂ－ＣＨ１抗体は、ヒト化抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ Ｆｃ変異体を、バイオセンサー上で捕捉した（１０μｇ／ｍＬ、ローディング時間を３００秒間とする）。１００ｎＭの可溶型ヒトＦｃＲを、捕捉された抗体上に流過させる、単一サイクルの反応速度法を実施して、出力波形を記録した（３００秒間の会合時間、３００秒間の解離時間）。データ解析は、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェア、ｖｅｒｓｉｏｎ ９．０を使用して実施した。標準的な反応速度バッファー（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．２）を、アッセイおよび試薬の調製のために使用した。

【0465】

これらの実験から得られたセンサーグラムについてのカーブフィッティング解析に由来する、相対親和性の測定値を、下記の表１９にまとめる。Ｆｃ変異体は、予測された、ＦｃＲへの結合パターンを提示した。例えば、ＬＡＬＡＰＳのＦｃ突然変異は、高親和性の受容体である、ＦｃｇＲ１を除き、全てのＦｃＲへの結合を失効化させた。Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）のＦｃ突然変異は、ヒトＦｃｇＲ３Ａへの結合を特異的に消失させた。同様に、ＩｇＧ２アイソタイプおよびＩｇＧ４アイソタイプは、ＦｃｇＲ３Ａに結合することができず、ＩｇＧ４だけが、ＦｃｇＲ１への結合を保持する。

【0466】

その後、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ Ｆｃ変異体を、ヒト単球由来マクロファージ内の、ＳＩＲＰＡの発現またはレベルを下方調節する、それらの能力について評価した。既に記載した通り、ヒト単球を、健常ドナーの末梢血から単離し、増殖培地に、ヒトＭ－ＣＳＦを補充することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、マクロファージへと分化させた。分化の後、ヒトマクロファージを採取し、漸増濃度のコントロール抗体、または可溶型抗ＳＩＲＰＡ抗体と共に、９６ウェル組織培養プレートへと播種し、３７℃で、一晩にわたりインキュベートした。抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２と別個のエピトープビンに属する、ＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲート抗ヒトＳＩＲＰＡ抗体を使用して、フローサイトメトリーにより、ＳＩＲＰＡの、細胞表面における発現について、細胞を解析した。

【0467】

図２２に示され、表２０にまとめられる通り、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、大半のＦｃ変異体は、マクロファージ上の、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、同様のＩＣ５０値で、最大限に下方調節した。しかし、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＬＡＬＡＰＳだけは、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを、部分的に下方調節したことから、ＦｃＲへの係合が、抗ＳＩＲＰＡ抗体の、この活性を強化することに関与することが確認される。加えて、ＦｃｇＲ３Ａに結合しないＦｃ変異体も、全てのＦｃＲに結合する、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＰＳと同様の、受容体の下方調節を裏付けるので、ＦｃｇＲ３Ａへの係合は、抗体媒介性の受容体の内部移行に可欠であることが示唆された。

【0468】

実施例２０
選択的なＦｃＲへの係合のために操作された抗ＳＩＲＰＡ抗体は、マクロファージによる、腫瘍細胞に対する食作用を増強する
上記で開示された、抗体媒介性の、受容体の下方調節に加えて、抗ＳＩＲＰＡ ３Ｆ９－２２抗体の、Ｆｃ変異体が異なる場合の、腫瘍細胞に対する食作用の、抗ＳＩＲＰＡ抗体媒介性増強における、ＦｃＲの役割も査定した。加えて、この経路をターゲティングする、他の抗体についても、並行して、貪食活性を評価した。

【0469】

初代ヒトマクロファージを、コントロール抗体または表示の被験抗体で、一晩にわたり処置した。腫瘍細胞を、ＣＦＳＥ染料で標識し、３７℃で、一晩にわたり、マクロファージへと添加した。翌日、マクロファージを回収し、氷上の、ＦｃＲ遮断抗体を含有するＦＡＣＳバッファー中で、抗ＣＤ１４ ＡＰＣにより染色した。食作用活性は、ＣＤ１４／ＣＦＳＥ二重陽性マクロファージのパーセントをカウントすることにより測定した。

【0470】

これらの実験の結果を、図２３に示し、ＣＤ１４／ＣＦＳＥ二重陽性マクロファージ集団パーセントの増大倍数として提示する。図２３に示され、下記の表２１にまとめられる通り、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＰＳ変異体、および抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＮＳＬＦ変異体のいずれも、Ａ３７５メラノーマ細胞に対する食作用を、コントロール抗体で処置されたマクロファージにおいて観察される食作用と比べて、有意に増強した。観察される食作用の増強は、ＣＤ４７発現腫瘍細胞を、ＡＤＣＰのためにオプソニン化することにより、主に機能する、これらの研究における、被験抗ＣＤ４７抗体（抗ＣＤ４７）と同等であると考えられた。これに対し、２つの異なるＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ＫＷＡＲ２３（ＷＯ２０１５／１３８６００を参照されたい）、および１８Ｄ５（ＷＯ２０１７／１７８６５３を参照されたい）は、腫瘍細胞に対する食作用の、いかなる増強も示すことができなかった。これらの結果は、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２の、ＰＳ Ｆｃ変異体およびＮＳＬＦ Ｆｃ変異体のいずれもが、オプソニン化抗腫瘍抗原抗体の非存在下で、腫瘍細胞に対する食作用を増強する特性を保持することを裏付けた。本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡ／ＣＤ４７間相互作用に関して、非遮断性であるので、これらの結果また、本開示の、非遮断性抗ＳＩＲＰＡ抗体が、腫瘍細胞に対する食作用を、非遮断性の抗ＳＩＲＰＡ抗体である、ＫＷＡＲ２３および１８Ｄ５に関して観察される食作用と比較して、増大させるか、または増強することにおいて有効であることも示した。

【0471】

実施例２１
抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２変異体は、赤血球数および血小板数の変化を誘導しない
報告は、非ヒト霊長類へと投与された、抗ＣＤ４７抗体である、５Ｆ９が、貧血を結果としてもたらしたこと（Ｌｉｕら、２０１５、ＰＬＯＳ ＯＮＥ、ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１３７３４５）、および抗ＳＩＲＰＡ Ｆｃである、ＴＴＩ－６２１の、ヒトへの投与が、血小板の用量依存的低下を結果としてもたらしたこと（Ａｎｓｅｌｌら、２０１６、Ｂｌｏｏｄ、１２８：１８１２）を指し示している。本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、赤血球数または血小板数に対して、何らかの効果を及ぼすのかどうかを検討するために、以下の研究を実施した。雌カニクイザルを、５つの群へと割り当て、下記の表２２に表示の通りに、コントロール抗体、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＰＳ、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＩｇＧ４、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ＩｇＧ２、または抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＮＳＬＦを投与した。伏在静脈を介する静脈内注入により、動物に抗体を投与した。

【0472】

赤血球（ＲＢＣ）数および血小板数のために、投与前期中に１回、次いで、抗体投与の約７２、１６８、２４０、４０８、５７６、６７２、および７４４時間後において、大腿静脈を介して、血液を動物から回収した。

【0473】

図２４に示される通り、赤血球数および血小板数は、これらの実験の経過を通して、抗ＳＩＲＰＡ抗体である、３Ｆ９－２２ ＰＳ、３Ｆ９－２２ ＩｇＧ４、３Ｆ９－２２ ＩｇＧ２、および３Ｆ９－２２ ＮＳＬＦのうちのいずれによっても変更されなかった。

【0474】

ある特定の、さらなる、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の配列を、下記に示す。下線を付されたアミノ酸は、以下の抗ＳＩＲＰＡ抗体のアミノ酸配列内で、ある特定の差違を指し示す。
３Ｆ９－２２ － ＩｇＧ１野生型重鎖（配列番号４７）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１ ＰＳ重鎖（配列番号４８）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－２２ ＳＥＬＦ重鎖（配列番号４９）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－２２ ｈＩｇＧ１ ＮＳＬＦ重鎖（配列番号５３）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSSKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－２２ ｈＩｇＧ１ ＬＡＬＡＰＳ重鎖（配列番号５４）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－２２ ｈｕＩｇＧ１軽鎖（配列番号５０）
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKSVSSGGYSYMHWYQQKPGKAPKLLIYLASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQHNRELPVTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
３Ｆ９－１４ ｈｕＩｇＧ１野生型重鎖（配列番号５１）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFRYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－１４ ＰＳ重鎖（配列番号５７）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFRYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－１４ ＳＥＬＦ重鎖（配列番号５２）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFRYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－１４ ＮＳＬＦ重鎖（配列番号５５）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFRYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSSKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－１４ ＬＡＬＡＰＳ重鎖（配列番号５６）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISEYGGSYTYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPPYDDYYGGFRYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
３Ｆ９－１４ ｈｕＩｇＧ１軽鎖（配列番号５０）
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKSVSSGGYSYMHWYQQKPGKAPKLLIYLASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQHNRELPVTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9A-9B】

【図10A】

【図10B】

【図11A-11B】

【図12A-12B】

【図13A-13B】

【図14A】

【図14B】

【図15A-15B】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図17C-1】

【図17C-2】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図20A】

【図20B】

【図21A】

【図21B】

【図22】

【図23】

【図24】

【配列表】

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