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特許7587505多機能性融合タンパク質及びその使用

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-12

(45)【発行日】2024-11-20

(54)【発明の名称】多機能性融合タンパク質及びその使用

(51)【国際特許分類】

C07K 19/00 20060101AFI20241113BHJP

C07K 16/00 20060101ALI20241113BHJP

C07K 14/705 20060101ALI20241113BHJP

C07K 14/005 20060101ALI20241113BHJP

C12P 21/02 20060101ALI20241113BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20241113BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20241113BHJP

A61P 35/02 20060101ALI20241113BHJP

C12N 15/62 20060101ALN20241113BHJP

C12N 15/13 20060101ALN20241113BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

C07K16/00

C07K14/705

C07K14/005

C12P21/02 C

A61K39/395 D

A61P35/00

A61P35/02

C12N15/62 Z

C12N15/13

【請求項の数】 11

(21)【出願番号】P 2021539880

(86)(22)【出願日】2020-01-07

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-06-08

(86)【国際出願番号】 US2020012624

(87)【国際公開番号】W WO2020146423

(87)【国際公開日】2020-07-16

【審査請求日】2022-12-16

(31)【優先権主張番号】62/789,212

(32)【優先日】2019-01-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】597177242

【氏名又は名称】トーマス・ジェファーソン・ユニバーシティ

【氏名又は名称原語表記】ＴｈｏｍａｓＪｅｆｆｅｒｓｏｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

(74)【代理人】

【識別番号】110001519

【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】テュコシンスキー、マークエル．

(72)【発明者】

【氏名】ヴェーバー、マシューシー．

(72)【発明者】

【氏名】スミス、カーメラロメオ

【審査官】上條のぶよ

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／１６２７９７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１３－５１１９６６（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１４／１２１０８５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１８／０８３２０４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／０９３４０８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１８－５１６９６９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１６－５２７３０３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００３－５２１５２１（ＪＰ，Ａ）

【文献】Protein Expression and Purification，2013年，Vol.87, No.1，p.47-54

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ１９／００

Ｃ０７Ｋ１６／００

Ｃ０７Ｋ１４／００

Ｃ１２Ｐ２１／０２

Ａ６１Ｋ３９／３９５

Ｃ１２Ｎ１５／６２

Ｃ１２Ｎ１５／１３

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

構成要素Ａ、構成要素Ｂ、及び構成要素Ｃを含む融合タンパク質であって、
構成要素Ａが、配列番号１４～配列番号１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、
構成要素Ｂが、配列番号４９～配列番号５５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、
構成要素Ｃが、配列番号５７～配列番号６３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、
構成要素Ａはジスルフィド結合を介して構成要素Ｂと結合しており、構成要素Ｂはジスルフィド結合を介して構成要素Ｃと結合しており、
前記融合タンパク質は、（ｉ）ＰＤ－Ｌ１、（ｉｉ）ＣＸＣＲ４、及び（ｉｉｉ）Ｆｃ受容体に結合可能である、前記融合タンパク質。

【請求項2】

前記融合タンパク質が、（ｉ）がん細胞上のＰＤ－Ｌ１、（ｉｉ）前記がん細胞上のＣＸＣＲ４、及び（ｉｉｉ）免疫ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上のＦｃ受容体に結合可能である、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項3】

前記構成要素Ａが、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、
前記構成要素Ｂが、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、
前記構成要素Ｃが、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、
請求項１又は請求項２に記載の融合タンパク質。

【請求項4】

前記構成要素Ａが、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、
前記構成要素Ｂが、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、
前記構成要素Ｃが、配列番号６１のアミノ酸配列を含む、
請求項１又は請求項２に記載の融合タンパク質。

【請求項5】

哺乳類細胞中で第１の核酸の発現を指示するための制御エレメントに機能可能に結合している前記構成要素Ａをコードする第１の核酸；
哺乳類細胞中で第２の核酸の発現を指示するための制御エレメントに機能可能に結合している前記構成要素Ｂをコードする第２の核酸；及び
哺乳類細胞中で第３の核酸の発現を指示するための制御エレメントに機能可能に結合している前記構成要素Ｃをコードする第３の核酸
を含む、請求項１～請求項４のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする、核酸系。

【請求項6】

哺乳類細胞に、請求項５に記載の核酸系をインビトロで付与すること、
前記付与後に、前記哺乳類細胞を培養すること、及び
前記培養後に、前記融合タンパク質を精製すること
を含む、請求項１～請求項４のいずれか一項に記載の融合タンパク質をインビトロで製造する方法。

【請求項7】

増殖性障害の治療が必要な患者における増殖性障害の治療に使用される、請求項１～請求項４のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項8】

前記増殖性障害ががんである、請求項７に記載の融合タンパク質。

【請求項9】

前記がんが固形腫瘍である、請求項８に記載の融合タンパク質。

【請求項10】

前記がんが、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、膀胱がん、黒色腫、神経膠芽腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、又は結腸がんである、請求項８に記載の融合タンパク質。

【請求項11】

前記がんが黒色腫である、請求項８に記載の融合タンパク質。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１月７日に出願された米国仮特許出願第６２／７８９２１２号の米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく優先権を主張するものであり、その仮特許出願の全体は参照により本明細書に援用される。

【背景技術】

【0002】

複数の経路によって、感染細胞及びがん細胞の生存、並びにＴ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの免疫系細胞の活性化又は抑制が制御される。Ｔ細胞に対して共刺激性及び抑制性第２シグナルを伝える１つの経路はプログラムド・デス１（ＰＤ－１、ＣＤ２７９としても知られる）受容体並びにそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１；ＣＤ２７４）及びＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ；ＣＤ２７３）によって代表される。ＰＤ－１は、休止Ｔ細胞ではなく、活性化を受けたＴ細胞の上で発現されるＣＤ２８／ＣＴＬ４ファミリーメンバーである（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら著、（１９９６年）、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第８巻：７７３頁）。リガンドのＰＤ－１への結合は、サイトカイン生産の低下及びＴ細胞の生存率低下を引き起こす抑制シグナルを成立させる（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら著、（１９９９年）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ誌、第１１巻：１４１頁、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら著、（２００１年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２９１巻：３１９頁、Ｃｈｅｍｉｔｚら著、（２００４年）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第１７３巻：９４５頁）。

【0003】

ウイルスマクロファージ炎症タンパク質－ＩＩ（ｖＭＩＰ－ＩＩ）は、ＣＣＲ５ケモカイン受容体及びＣＸＣＲ４ケモカイン受容体を含むＣＣケモカイン受容体及びＣＸＣケモカイン受容体と相互作用するヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ－８）によってコードされるケモカインである。ＨＩＶ－１侵入のｖＭＩＰ－ＩＩによる阻害は、標的細胞内へＨＩＶ－１が侵入するためのＨＩＶ－１受容体であるＣＣＲ３、ＣＣＲ５、及びＣＸＣＲ４を介して行われる。

【0004】

Ｔ細胞の活性化及びＴ細胞のエフェクター機能の維持は、正と負のシグナルの複雑な相互作用によって制御されている。ＴＮＦリガンド／ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーがこのシグナル集団において重要な位置を占めており、シグナルの免疫系細胞間での橋渡し並びに免疫系細胞と他の器官系の細胞との間での橋渡しを行っている。このようにして、ＴＮＦスーパーファミリーメンバーは、細胞生存と細胞死、細胞分化、及び炎症に対する作用を介して恒常性及び発病の両方に寄与している。

【0005】

がんなどの疾患の治療用の治療薬には改善の必要性がある。本発明はこの必要性に取り組む。

【発明の概要】

【0006】

本明細書に記載されるように、本発明は、多点分子付着能（ｍｕｌｔｉｐｏｉｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒａｔｔａｃｈｍｅｎｔｃａｐａｂｉｌｉｔｙ）を有する融合タンパク質、及びその融合タンパク質の使用に関する。

【0007】

本発明の１つの態様は、構成要素Ａ及び／又は構成要素Ｂを含む融合タンパク質を含む。構成要素Ａは、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含む。構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む。

【0008】

本発明の別の態様は、構成要素Ａ、構成要素Ｂ、及び構成要素Ｃを含む融合タンパク質を含む。構成要素Ａは、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含む。構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む。構成要素Ｃは、構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ’_Ｌを含む。構成要素ＹはＰＤ－１の少なくとも一部を含み、構成要素Ｚ２及び構成要素Ｚ２’はヒトＦｃのＣＨ２ドメインを含み、構成要素Ｚ３及び構成要素Ｚ３’はヒトＦｃのＣＨ３ドメインを含む。構成要素Ｘ’及び構成要素ＸはｖＭＩＰ－ＩＩの少なくとも一部を含み、構成要素ＣＬ’はヒトＩｇＧ１κの少なくとも１つのＣＨ１ドメインを含む。

【0009】

本発明のさらに別の態様は、融合タンパク質を生成する方法を含む。上記方法は、ヒトＰＤ－１－ｈＦｃＡをコードする第１核酸、ｖＭＩＰＩＩ－ＣＨ’－ｈＦｃＢをコードする第２核酸、及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’をコードする第３核酸を細胞に投与することを含む。

【0010】

本発明のさらに別の態様は、配列番号１４、配列番号４９、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む融合タンパク質を含む。

【0011】

本発明の別の態様は、薬学的に許容可能な担体と、本明細書に開示される融合タンパク質のいずれかと、を含む医薬組成物を含む。

【0012】

本発明の別の態様は、患者の増殖性障害を治療する方法を含む。上記方法は、そのような治療が必要な患者に、治療有効量の本明細書に開示される融合タンパク質のいずれかを投与することを含む。

【0013】

上記態様の様々な実施形態又は本明細書において詳述される本発明の他のいずれかの態様では、構成要素Ｂは構成要素Ｚ_１’をさらに含む。ある特定の実施形態では、構成要素Ａは構成要素Ｚ_１をさらに含む。

【0014】

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質は構成要素Ｃをさらに含み、構成要素Ｃは構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌ’を含む。

【0015】

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質は構成要素Ｄをさらに含み、構成要素Ｄは構成要素Ｑ及び構成要素Ｃ_Ｌを含む。

【0016】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｙはリガンドドメイン、受容体ドメイン、ｓｃＦｖドメイン、又はリポカリンドメインを含む。ある特定の実施形態では、構成要素ＹはＰＤ－１、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、又はＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）の少なくとも一部を含む。

【0017】

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に結合する。

【0018】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’はウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む。

【0019】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’はｖＭＩＰ－ＩＩの少なくとも一部を含む。ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’はＶ１又はＶ１Δを含む。

【0020】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘはウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む。ある特定の実施形態では、構成要素ＸはＶ１又はＶ１Δを含む。

【0021】

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質はＣＸＣＲ４に結合する。

【0022】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｙ及び構成要素Ｚ_２はヒンジを介して接続されている。ある特定の実施形態では、構成要素Ｚ_１’及び構成要素Ｚ_２’はヒンジを介して接続されている。

【0023】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’及び構成要素Ｚ_１’はリンカーを介して接続されている。ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌはリンカーを介して接続されている。ある特定の実施形態では、構成要素Ｑ及び構成要素Ｃ_Ｌはリンカーを介して接続されている。

【0024】

ある特定の実施形態では、融合タンパク質は免疫細胞上の受容体又はリガンドに結合する。ある特定の実施形態では、上記受容体はＦｃ受容体である。

【0025】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’はＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

【0026】

ある特定の実施形態では、構成要素ＹはＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

【0027】

ある特定の実施形態では、構成要素ＸはＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

【0028】

ある特定の実施形態では、構成要素ＱはＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

【0029】

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号１４～配列番号２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0030】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号３２～配列番号３５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号４９～配列番号５５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0031】

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号１４～配列番号２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、構成要素Ｂは配列番号３２～配列番号３５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0032】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｃは配列番号５７～配列番号６３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0033】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号４９～配列番号５５のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、構成要素Ｃは配列番号５７～配列番号６３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0034】

ある特定の実施形態では、上記融合タンパク質は、（ｉ）ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２、（ｉｉ）ＣＸＣＲ４、及び（ｉｉｉ）免疫細胞上のＦｃ受容体又はリガンドに結合可能である。

【0035】

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号２９のアミノ酸配列を含み、構成要素Ｂは配列番号３０のアミノ酸配列を含む。

【0036】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｙは配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含む。

【0037】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｚ_２は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、且つ／又は構成要素Ｚ_３は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。

【0038】

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号１４又は配列番号１５のアミノ酸配列を含む。

【0039】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号４９のアミノ酸配列を含む。

【0040】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｘ’は配列番号３７のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、構成要素Ｘは配列番号３７のアミノ酸配列を含む。

【0041】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｚ_２’は配列番号１２を含み、且つ／又は構成要素Ｚ_３’は配列番号４８を含む。

【0042】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｃ_Ｌ’は配列番号６４のアミノ酸配列を含む。

【0043】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｂは配列番号５３のアミノ酸配列を含む。

【0044】

ある特定の実施形態では、構成要素Ｃは配列番号６１のアミノ酸配列を含む。

【0045】

ある特定の実施形態では、構成要素Ａは配列番号１４のアミノ酸配列を含み、構成要素Ｂは配列番号５３のアミノ酸配列を含み、構成要素Ｃは配列番号６１のアミノ酸配列を含む。

【0046】

ある特定の実施形態では、上記方法は、上記第１核酸が配列番号１４のアミノ酸配列をコードし、且つ／又は上記第２核酸が配列番号４９のアミノ酸配列をコードし、且つ／又は上記第３核酸が配列番号５７のアミノ酸配列をコードすることを含む。

【0047】

ある特定の実施形態では、上記増殖性障害はがんである。ある特定の実施形態では、上記がんは固形腫瘍である。ある特定の実施形態では、上記がんは、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、膀胱がん、黒色腫、神経膠芽腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、又は結腸がんである。

【0048】

添付図面と併せて読むと以下の本発明の好ましい実施形態の詳細な説明がより良く理解されることになる。目下の好ましい実施形態が本発明を例示する目的で添付図面に示されている。しかしながら、本発明はこれら図面に示されている実施形態の正確な構成及び手段に限定されないことを理解されたい。

【図面の簡単な説明】

【0049】

【図1A】図１Ａは、融合タンパク質プラットフォームの幾つかの実施形態の概略図である。

【図1B】図１Ｂは、融合タンパク質プラットフォームの幾つかの実施形態の概略図である。

【図2】図２は、融合タンパク質プラットフォームの幾つかの実施形態の概略図である。この図では、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と腫瘍細胞との間の接触面を標的とする融合タンパク質が例示されている。

【図3】図３は、ＣＸＣＲ４、ＰＤ－Ｌ１、及びＦｃγＲＩＩＩａに結合する融合タンパク質の概略図である。

【図4】図４は、ＣＸＣＲ４、ＰＤ－Ｌ１、及びＦｃγＲＩＩＩａに結合する融合タンパク質のがん細胞との及びＮＫ細胞との相互作用の概略図である。

【図5】図５は、ＣＸＣＲ４、ＰＤ－Ｌ１、及びＦｃγＲＩＩＩａに結合する融合タンパク質と様々な種類の細胞とに生じ得る相互作用の概略図である。

【図6】図６は、様々な融合タンパク質と様々な種類の細胞とに生じ得る相互作用の概略図である。

【図7】図７は、様々な融合タンパク質と様々な種類の細胞とに生じ得る相互作用の概略図である。

【図8】図８は、様々な融合タンパク質と腫瘍随伴マクロファージ（Ｍ１）とに生じ得る相互作用の概略図である。

【図9】図９は、ｈＰＤ－１－ＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）のクマシーブルー染色（還元）ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。

【図10】図１０は、ｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。

【図11】図１１は、ｈＭＩＣＡ－ＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２２及び配列番号３６）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。

【図12】図１２は、ｈＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１５５－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３２）、ｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）、及びｈＭＩＣＡ－ＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号２２及び配列番号３３）のクマシーブルー染色（還元）ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。

【図13】図１３は、ｈＣＤ１１２Ｒ－ＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号１６及び配列番号３６）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。

【図14】図１４は、ＨＡ－ＰＤ－１－ＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号１５及び配列番号３５）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。

【図15】図１５は、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３３）及びＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３５）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。

【図16】図１６は、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１５５－ＦｃＢ（配列番号２３及びと配列番号３２）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。

【図17】図１７は、ｈＦｃＡ／ＴＩＭ－３－ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３４）及びＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＴＩＭ－３－ｈＦｃＢ（配列番号１４と配列番号３４）のクマシーブルー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。

【図18】図１８は、ｈＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３３）がヒトＣＤ１５５発現細胞に結合することを示す図である。

【図19】図１９は、ｈＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号２３及びと配列番号３３）がヒトＣＤ１１２発現細胞に結合することを示す図である。

【図20】図２０は、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１５５－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３２）がヒトＴＩＧＩＴ発現細胞に結合することを示す図である。

【図21】図２１は、ｈＦｃＡ／ｈＴＩＧＩＴ－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３３）及びｈＦｃＡ／ｈＣＤ１５５－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３２）がＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａ）発現細胞に結合することを示す図である。

【図22】図２２は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ時に分離及び還元（Ｒ）され、クマシーゲル染色された融合タンパク質を示す図である。示されているように、「Ａ」はｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）を指し、「Ｂ」はＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）を指し、「Ｃ」はｈＦｃＡ／ＶｐＩ－ＣＨ’－ＦｃＢ／ＶｐＩ－ＣＬ（配列番号２３に加えて配列番号５３及び配列番号６１）を指し、「Ｄ」はＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＶｐＩ－ＣＨ’－ＦｃＢ／ＶｐＩ－ＣＬ（配列番号１４に加えて配列番号５３及び配列番号６１）を指す。

【図23A】図２３Ａ～図２３Ｄは、一連のウエスタンブロットを示す図である。図２２に示されている発現コンストラクトを形質移入されたＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞の調整培地から精製されたプロテインＡ精製融合タンパク質に対してウエスタンブロット分析を実施した。観察されたバンドはＰＤ－１－ｈＦｃＡ（配列番号１４）及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’（配列番号５７）の予測サイズと一致した。非還元（ＮＲ）試料については１２５ｋＤａであり、還元（Ｒ）試料についてはそれぞれ６０ｋＤａと２０ｋＤａである。抗ＰＤ１抗体（図２３Ａ）、抗ＩｇＧκ軽鎖抗体（図２３Ｂ）、抗ＩｇＧ重鎖抗体（図２３Ｃ）、及び抗ｖＭＩＰ－ＩＩ抗体（図２３Ｄ）をウエスタンブロットのプローブとして使用した。

【図23B】図２３Ａ～図２３Ｄは、一連のウエスタンブロットを示す図である。図２２に示されている発現コンストラクトを形質移入されたＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞の調整培地から精製されたプロテインＡ精製融合タンパク質に対してウエスタンブロット分析を実施した。観察されたバンドはＰＤ－１－ｈＦｃＡ（配列番号１４）及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’（配列番号５７）の予測サイズと一致した。非還元（ＮＲ）試料については１２５ｋＤａであり、還元（Ｒ）試料についてはそれぞれ６０ｋＤａと２０ｋＤａである。抗ＰＤ１抗体（図２３Ａ）、抗ＩｇＧκ軽鎖抗体（図２３Ｂ）、抗ＩｇＧ重鎖抗体（図２３Ｃ）、及び抗ｖＭＩＰ－ＩＩ抗体（図２３Ｄ）をウエスタンブロットのプローブとして使用した。

【図23C】図２３Ａ～図２３Ｄは、一連のウエスタンブロットを示す図である。図２２に示されている発現コンストラクトを形質移入されたＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞の調整培地から精製されたプロテインＡ精製融合タンパク質に対してウエスタンブロット分析を実施した。観察されたバンドはＰＤ－１－ｈＦｃＡ（配列番号１４）及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’（配列番号５７）の予測サイズと一致した。非還元（ＮＲ）試料については１２５ｋＤａであり、還元（Ｒ）試料についてはそれぞれ６０ｋＤａと２０ｋＤａである。抗ＰＤ１抗体（図２３Ａ）、抗ＩｇＧκ軽鎖抗体（図２３Ｂ）、抗ＩｇＧ重鎖抗体（図２３Ｃ）、及び抗ｖＭＩＰ－ＩＩ抗体（図２３Ｄ）をウエスタンブロットのプローブとして使用した。

【図23D】図２３Ａ～図２３Ｄは、一連のウエスタンブロットを示す図である。図２２に示されている発現コンストラクトを形質移入されたＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞の調整培地から精製されたプロテインＡ精製融合タンパク質に対してウエスタンブロット分析を実施した。観察されたバンドはＰＤ－１－ｈＦｃＡ（配列番号１４）及びｖＭＩＰＩＩ－ＣＬ’（配列番号５７）の予測サイズと一致した。非還元（ＮＲ）試料については１２５ｋＤａであり、還元（Ｒ）試料についてはそれぞれ６０ｋＤａと２０ｋＤａである。抗ＰＤ１抗体（図２３Ａ）、抗ＩｇＧκ軽鎖抗体（図２３Ｂ）、抗ＩｇＧ重鎖抗体（図２３Ｃ）、及び抗ｖＭＩＰ－ＩＩ抗体（図２３Ｄ）をウエスタンブロットのプローブとして使用した。

【図24】図２４は、融合タンパク質が細胞表面上にＰＤ－Ｌ１及びＣＸＣＲ４又はＣＸＣＲ７を発現するＢ１６黒色腫細胞株に結合することを示す図である。試験した融合タンパク質は（上から下へ順に）ｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）、ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）、ｈＦｃＡ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＬ’（配列番号２３に加えて配列番号５２及び配列番号６０）、ｈＦｃＡ／Ｖ１Δ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号２３に加えて配列番号５１及び配列番号５９）、ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＬ’（配列番号１４と配列番号５２及び配列番号６０）、及びＰＤ－１－ｈＦｃＡ／Ｖ１Δ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号１４に加えて配列番号５１及び配列番号５９）である。

【図25】図２５は、黒色腫細胞の細胞移動に対する融合タンパク質の阻害効果を評価するトランスウェルアッセイを示す図である。移動したＢ１６－Ｆ１０細胞を１００ｎｇ／ｍＬのＣＸＣＬ１２及び融合タンパク質で処理する一回のトランスウェル移動アッセイの代表的画像が示されている。試験した融合タンパク質は（上から下へ順に）ｈＦｃＡ／ｈＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３６）、ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＦｃＢ（配列番号１４及び配列番号３６）、ｈＦｃＡ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＬ’（配列番号２３に加えて配列番号５２及び配列番号６０）、ｈＦｃＡ／Ｖ１Δ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号２３に加えて配列番号５１及び配列番号５９）、ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δｍｕｔ－ＣＬ’（配列番号１４に加えて配列番号５２及び配列番号６０）、及びＰＤ－１－ｈＦｃＡ／Ｖ１Δ－ＣＨ’－ＦｃＢ／Ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号１４と配列番号５１及び配列番号５９）である。２％クリスタルバイオレットを使用して上記アッセイを染色した。

【図26A】図２６Ａは、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫皮下モデルにおける融合タンパク質（ＦＰ）ＰＤ１－ｈＦｃＡ／ｖ１Δ－ＣＨ’－ｈＦｃＢ／ｖ１Δ－ＣＬ’（配列番号１４に加えて配列番号５１及び配列番号５９）が媒介する腫瘍増殖の阻害を示す図である。１×１０^５個のＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞の皮下接種後１３日目、１４日目、１５日目、１６日目、及び２１日目にＣ５７ＢＬ／６マウスを１００μｌのＰＢＳ中の（１０μｇ／ｍＬ）ＦＰ（マウスＲ、マウス２Ｌ、及びマウス２Ｒ）又はＰＢＳのみ（マウスＸ又はマウスＬ）で処理した。経時的腫瘍サイズを測定し、各マウスについて図２６Ａにプロットした。

【図26B】図２６Ｂは、ＰＢＳのみの処理群の１匹のマウス（上）及びＰＤ１－ｈＦｃＡ／ｖ１Δ－ＣＨ’－ｈＦｃＢ／ｖ１Δ－ＣＬ’（ＦＰ）処理群の１匹のマウス（下）の代表像を示す図である。

【図27】図２７は、ＮＫ細胞介在性ＡＤＣＣが多機能性融合タンパク質の添加により増大することを示す図である。ＳＫＯＶ－３卵巣細胞株［標的細胞（Ｔ）］を９６ウェルプレート中に３０００細胞／ウェルの割合で播種して接着させ、そしてセルトラッカー・レッドＣＭＴＰＸ試薬を使用して標識した。その後、緑色蛍光カスパーゼ－３試薬を使用してＳＫＯＶ－３細胞を標識した。ＣＤ１６．ＮＫ－９２細胞株［Ｖ１５８変異体；エフェクター細胞（Ｅ）である］を５：１のエフェクター：標的比率で上記ウェルに２５ｍｇ／ｍｌの濃度の様々な融合タンパク質と共に添加するか、又はタンパク質無しで添加し、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ生細胞分析システムを使用して蛍光二重陽性（赤色＋緑色）細胞の数を測定して分析した。示されている結果は２０時間の時点での結果を示している。試験した融合タンパク質は高親和性（ＨＡ）－ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ＦｃＢ（配列番号１５及び配列番号３６）、ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号２３及び配列番号３５）及び高親和性（ＨＡ）－ＰＤ－１－ｈＦｃＡ／ｈＣＤ１１３－ＦｃＢ（配列番号１５及び配列番号３５）である。

【発明を実施するための形態】

【0050】

定義
別途定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語と科学用語は本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載される方法及び材料と類似又は同等のどの方法及び材料も本発明の試験の実施に使用可能であるが、本明細書に記載される材料及び方法は好ましい材料及び方法である。本発明の説明と請求では以下の用語が使用される。

【0051】

本明細書において使用される用語は特定の実施形態を説明することだけを目的としており、限定することを目的としてはいないことも理解されたい。

【0052】

冠詞「ａ」及び「ａｎ」はその冠詞の文法上の目的語の１つ又は１つより多く（すなわち少なくとも１つ）を指すために本明細書において使用される。例として、「要素（ａｎｅｌｅｍｅｎｔ）」は１つの要素又は１つより多くの要素を意味する。

【0053】

量、時間等のような測定可能な値に言及するときに本明細書において使用される「約」は、明示されている値からの±２０％又は±１０％の変動、より好ましくは±５％の変動、さらにより好ましくは±１％の変動、及びさらにより好ましくは±０．１％の変動のような本開示の方法の実施にとって適切である変動を包含することを意味する。

【0054】

本明細書において使用される場合、「活性化」とは、充分に刺激を受けることにより、サイトカイン生産、検出可能なエフェクター機能、及び細胞増殖のうちの１以上が誘導されているＴ細胞の状態を指す。「活性化Ｔ細胞」という用語は、特に、これらの活性化の特徴のうちの１以上を示しているＴ細胞を指す。

【0055】

本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、天然起源又は組換え起源の完全免疫グロブリンであり得、完全免疫グロブリンの免疫反応性部分であり得る。抗体は四量体免疫グロブリン分子であることが典型的であり、このような四量体から成るさらに高次の多量体として存在してもよい。本発明の抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、及びＦ（ａｂ）_２、並びに単鎖抗体（ｓｃＦｖ）及びヒト化抗体を含む様々な形態で存在する場合がある（Ｈａｒｌｏｗら著、１９９９年、ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ内、コールドスプリングハーバーラボラトリー・プレス、ニューヨーク州、Ｈａｒｌｏｗら著、１９８９年、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ内、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州、Ｈｏｕｓｔｏｎら著、１９８８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、第８５巻：５８７９～５８８３頁、Ｂｉｒｄら著、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２４２巻：４２３～４２６頁）。

【0056】

「抗体断片」という用語は、完全抗体の一部を指し、完全抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片、直鎖抗体、ｓｃＦｖ抗体、及び抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられるがこれらに限定されない。

【0057】

本明細書において使用される場合、「抗体重鎖」は、自然と生じる立体構造の状態において全ての抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖のうちの大きい方のポリペプチド鎖を指す。ガンマ（γ）重鎖、ミュー（μ）重鎖、デルタ（δ）重鎖、アルファ（α）重鎖、及びイプシロン（ε）重鎖が５種類の主要抗体重鎖アイソタイプである。

【0058】

本明細書において使用される場合、「抗体軽鎖」は、自然と生じる立体構造の状態において全ての抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖のうちの小さい方のポリペプチド鎖を指す。カッパ（κ）軽鎖及びラムダ（λ）軽鎖が２種類の主要抗体軽鎖アイソタイプである。

【0059】

本明細書において使用される「合成抗体」という用語は、組換えＤＮＡ技術を使用して生成される抗体、例えば、本明細書に記載されているバクテリオファージによって発現される抗体等を意味する。この用語は、抗体をコードし、且つ、抗体タンパク質をコードするＲＮＡを発現するＤＮＡ分子の合成、又は上記抗体を規定するアミノ酸配列の合成によって生成される抗体を意味するとも解釈されるべきであり、上記ＤＮＡ、ＲＮＡ又はアミノ酸配列は当技術分野において利用可能且つよく知られている核酸配列合成技術又はアミノ酸配列合成技術を使用して得られたものである。

【0060】

本明細書において使用される「抗原」又は「Ａｇ」という用語は、免疫応答を引き起こす分子又はＴ細胞受容体などの免疫認識部分に結合する分子として定義される。この免疫応答は、抗体の生産又は特定の免疫適格細胞の活性化のどちらか又は両方を伴う場合がある。当業者は、実質的に全てのタンパク質又はペプチドを含むいずれの巨大分子も抗原として働き得ることを理解するであろう。さらに、抗原は組換えＤＮＡ又はゲノムＤＮＡから導出され得る。当業者は、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分ヌクレオチド配列を含むいずれのＤＮＡもそれ故に本明細書において使用される用語としての「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者は、抗原が必ずしも遺伝子の全長ヌクレオチド配列だけによってコードされるわけではないことを理解するであろう。本発明が、限定されるものではないが、１つより多くの遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用を含むこと、及び所望の免疫応答を誘発するためにこれらのヌクレオチド配列が様々な組合せで編成されることは容易に理解できる。また、当業者は、抗原が必ずしも全て「遺伝子」によってコードされるわけではないことを理解するであろう。抗原は、生成可能であること、合成可能であること、又は生物試料から導出可能であることが容易に理解できる。このような生物試料には、組織試料、腫瘍試料、細胞試料、又は生体液が含まれ得るが、これらに限定されない。

【0061】

本明細書において使用される「抗腫瘍作用」という用語は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移巣数の減少、余命の増加、又はがん症状に付随する様々な生理的症状の改善によって明白になり得る生物作用を指す。「抗腫瘍作用」は、まず何よりも腫瘍発生の防止における本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞、及び抗体の能力によっても明白になる場合がある。

【0062】

本発明によると、「自己抗原」という用語は、免疫系によって外来性であると認識されるあらゆる自己抗原を意味する。自己抗原には、細胞表面受容体をはじめとして細胞タンパク質、リンタンパク質、細胞表面タンパク質、細胞脂質、核酸、糖タンパク質が含まれるがこれらに限定されない。

【0063】

本明細書において使用される「自己免疫疾患」という用語は、自己免疫応答の結果生じる障害として定義される。自己免疫疾患は自己抗原に対する不適切且つ過剰な応答の結果である。自己免疫疾患の例には、特に、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、自己免疫肝炎、自己免疫耳下腺炎、クローン病、糖尿病（Ｉ型）、栄養障害型表皮水疱症、精巣上体炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、乾癬、リューマチ熱、リウマチ性関節炎、サルコイドーシス、強皮病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、甲状腺炎、脈管炎、尋常性白斑、粘液水腫、悪性貧血、潰瘍性大腸炎が挙げられるがこれらに限定されない。

【0064】

本明細書において使用される場合、「自己（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ）」という用語は、ある個体から導出され、後に同じ個体に再導入されることになるあらゆる物質を意味する。

【0065】

「同種異系間（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ）」とは、同じ種の異なる動物に由来する移植片を指す。

【0066】

「異種間（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ）」とは、異なる種の動物に由来する移植片を指す。

【0067】

本明細書において使用される「がん（ｃａｎｃｅｒ）」という用語は、異常な細胞の急速且つ制御されていない増殖及び／又は蓄積を特徴とする疾患として定義される。がん細胞は局所的に広がるか、又は血流及びリンパ系を介して体の他の部分に広がり得る。様々ながんの例には、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸部がん、皮膚がん、膵臓がん、大腸がん、腎臓がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病、肺がん等が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、がんは甲状腺髄様がんである。

【0068】

「切断（ｃｌｅａｖａｇｅ）」という用語は、共有結合の切断、例えば核酸分子の骨格の切断を指す。切断は様々な方法によって開始可能であり、それらの方法にはホスホジエステル結合の酵素加水分解又は化学加水分解が含まれるが、これらに限定されない。一本鎖切断と二本鎖切断の両方が可能である。二本鎖切断は２回の別々の一本鎖切断イベントの結果として生じる場合がある。ＤＮＡ切断は平滑末端又は突出末端のどちらかを生じさせ得る。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドは切断された二本鎖ＤＮＡを標的とするために使用される場合がある。

【0069】

本明細書において使用される場合、「保存的配列改変（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｅｑｕｅｎｃｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」という用語は、そのアミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に大きくは影響しない、又はその結合特性を大きくは変えないアミノ酸改変を指すものとされる。そのような保存的改変には、アミノ酸の置換、付加、及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的変異形成及びＰＣＲ介在性変異形成などの当技術分野において知られている標準的技法によって本発明の抗体に導入され得る。保存的アミノ酸置換は、同様の側鎖を有するアミノ酸残基でアミノ酸残基を置き換える改変である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当技術分野において明らかになっている。これらのファミリーには塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族性側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、抗体のＣＤＲ領域内の１以上のアミノ酸残基は同じ側鎖ファミリーの他のアミノ酸残基で置換可能であり、その改変抗体は本明細書に記載される機能アッセイを用いて抗原への結合能について検査され得る。

【0070】

「疾患（ｄｉｓｅａｓｅ）」とは、恒常性を維持できていない動物の健康状態であって、その疾患が改善されないと当該動物の健康が悪化し続ける健康状態である。一方、動物の「障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」とは、恒常性を維持できているが、その障害が存在しない場合よりも健康状態が好ましくない動物の健康状態である。障害は治療されずにいても必ずしもその動物の健康状態をさらに悪化させるわけではない。

【0071】

「有効量」又は「治療有効量」とは、本明細書において互換的に使用され、特定の生物学的成果を達成するため、又は治療若しくは予防利益を実現するために有効な本明細書に記載されるような化合物、製剤、物質、又は組成物の量を指す。そのような成果には、当技術分野において適切ないずれかの手段によって判定されるような抗腫瘍活性が挙げられる場合があるが、これに限定されない。

【0072】

「コードする（ｅｎｃｏｄｉｎｇ）」とは、規定のヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）又は規定のアミノ酸配列のいずれかを有し、且つ、その配列から生じる生物学的特性を有する他の重合体及び巨大分子の生物学的過程における合成用の鋳型として働くための、ポリヌクレオチド中の特定のヌクレオチド配列（遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなど）の固有の特性を指す。したがって、遺伝子に対応するｍＲＮＡへの転写とｍＲＮＡの翻訳によって細胞内又は他の生物学的系内でタンパク質が生じる場合に、上記遺伝子は上記タンパク質をコードしている。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、且つ、配列表内に提示されることが通常であるコード鎖と遺伝子の転写又はｃＤＮＡの鋳型として使用される非コード鎖の両方が、上記遺伝子又はｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードしていると言及され得る。

【0073】

本明細書において使用される場合、「内在性（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ）」とは、生物、細胞、組織、又は系の内側に由来する、又は内側で生産されるあらゆる物質を指す。

【0074】

本明細書において使用される場合、「外来性（ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ）」という用語は、生物、細胞、組織、又は系の外側から導入される、又は外側で生産されるあらゆる物質を指す。

【0075】

本明細書において使用される「拡大（ｅｘｐａｎｄ）」という用語は、Ｔ細胞数の増加のように、数の増加を指す。１つの実施形態では、生体外で拡大したＴ細胞は、培養時に元々存在した数と比較して数が増えている。別の実施形態では、生体外で拡大したＴ細胞は、培養時に他の種類の細胞と比較して数が増えている。本明細書において使用される場合、「生体外（ｅｘｖｉｖｏ）」という用語は、生体（例えばヒト）から取り出され、上記生体の外部で（例えば、培養皿、試験管、又はバイオリアクターの中で）繁殖された細胞を指す。

【0076】

本明細書において使用される「発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」という用語は、プロモーターなどの、制御エレメントによって誘導される特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳として定義される。

【0077】

「発現ベクター」とは、発現されるヌクレオチド配列に機能的に結合されている発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現にとって充分なｃｉｓ作用性エレメントを含み、発現用の他のエレメントは宿主細胞又はインビトロ発現系に供給される場合がある。発現ベクターには、上記組換えポリヌクレオチドが組み込まれている当技術分野において知られている全てのベクター、例えばコスミド、プラスミド（例えば、裸又はリポソームに含有されている）及びウイルス（例えば、センダイウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）が挙げられる。

【0078】

本明細書において使用される「相同な（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）」とは、２つの高分子間の小単位配列同一性、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子などの２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間の小単位配列同一性を指す。上記２分子の両方の小単位位置が同じ単量体小単位によって占められている場合、例えば２つのＤＮＡ分子のそれぞれのある位置がアデニンによって占められている場合に、上記分子は上記位置において相同である。２つの配列間の相同性はマッチする位置又は相同な位置の数の一次関数である。例えば、２つの配列内の位置の半分（例えば、長さが１０小単位の高分子内の５か所の位置）が相同である場合に上記２つの配列は５０％相同であり、上記位置の９０％（例えば、１０のうちの９か所）がマッチする、又は相同である場合に上記２つの配列は９０％相同である。

【0079】

「ヒト化（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）」型の非ヒト（例えばマウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片（例えば抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は他の抗原結合小配列）である。大部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体はレシピエント抗体にも移入されたＣＤＲ配列又はフレームワーク配列にも見られない残基を含む場合がある。抗体の性能をさらに洗練されたものにし、且つ、最適化するためにこれらの改変が行われる。一般に、ヒト化抗体は少なくとも１つ、典型的に２つの可変ドメインのうちの実質的に全てを含み、上記可変ドメインではＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である。上記ヒト化抗体は免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むことが最適である。さらに詳細についてはＪｏｎｅｓら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３２１巻：５２２～５２５頁、１９８６年、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３３２巻：３２３～３２９頁、１９８８年、Ｐｒｅｓｔａ著、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．誌、第２巻：５９３～５９６頁、１９９２年を参照されたい。

【0080】

「完全にヒト（ｆｕｌｌｙｈｕｍａｎ）」とは、分子全体がヒト起源である抗体又は分子全体がヒト型の上記抗体と同じアミノ酸配列から成る抗体などの免疫グロブリンを指す。

【0081】

本明細書において使用される「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」とは、２つの高分子間、特に２つのアミノ酸分子間、例えば２つのポリペプチド分子間の小単位配列同一性を指す。２つのアミノ酸配列が同じ位置において同じ残基を有する場合、例えば２つのポリペプチド分子のそれぞれのある位置がアルギニンによって占められている場合に、上記分子は上記位置において同一である。同一性、又は２つのアミノ酸配列が整列した中で同じ位置に同じ残基を有する程度はパーセンテージで表されることが多い。２つのアミノ酸配列間の同一性はマッチする位置又は同一の位置の数の一次関数である。例えば、２つの配列内の位置の半分（例えば、長さが１０アミノ酸の高分子内の５か所の位置）が同一である場合に、上記２つの配列は５０％同一であり、上記位置の９０％（例えば、１０のうちの９か所）がマッチする、又は同一である場合に上記２つのアミノ酸配列は９０％同一である。

【0082】

本明細書において使用される場合、「免疫グロブリン」又は「Ｉｇ」という用語は、抗体として機能するタンパク質のクラスとして定義される。Ｂ細胞が発現する抗体は、時にＢＣＲ（Ｂ細胞受容体）又は抗原受容体と呼ばれることがある。このクラスのタンパク質に含まれる５つのメンバーはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥである。ＩｇＧは最も一般的な循環抗体である。ＩｇＭは大半の対象の初期免疫応答において生産される主要な免疫グロブリンである。この免疫グロブリンは凝集、補体結合、及び他の抗体応答において最も効率的な免疫グロブリンであり、細菌とウイルスに対する防御において重要である。ＩｇＤは抗体機能が知られていないが、抗原受容体として働く可能性がある免疫グロブリンである。ＩｇＡは、唾液、涙液、母乳、胃腸分泌液、並びに呼吸器及び生殖器の粘性分泌液の中に存在する主要な抗体である。ＩｇＥは、アレルゲンに曝露されると肥満細胞及び好塩基球からメディエーターの放出を引き起こすことにより即時過敏症を成立させる免疫グロブリンである。

【0083】

本明細書において使用される「免疫応答」という用語は、リンパ球が抗原分子を外来性と認識し、上記抗原を除去するために抗体の形成を誘導し、且つ／又はリンパ球を活性化するときに生じる抗原に対する細胞応答として定義される。

【0084】

本明細書において使用される「リポカリン」という用語は、天然の設定ではステロイド、ビリン、レチノイド、及び脂質などの疎水性小分子を輸送するように機能するタンパク質のクラスとして定義される。上記タンパク質は、限定的な配列相動性領域を共有し、且つ、内部リガンド結合部位を取り囲む反復＋１トポロジーを有する８重鎖アンチパラレルβバレルを含む共通の三次構造を共有する。リポカリンはグラム陰性細菌、脊椎動物細胞、無脊椎動物細胞、及び植物に見られ、多数の生物学的過程、何よりも免疫応答、フェロモン輸送、プロスタグランジン生合成、レチノイド結合、及びがん細胞相互作用と関連付けられている。リポカリンは、結合特性を変更又は強化するために、例えば細胞表面分子に結合し、こうして機能特性を妨害、強化、又はそれ以外には改変するために抗体の改変について記載された同じ方法のうちの多くの方法で改変可能である。

【0085】

本明細書において使用される場合、「説明資料」には、本発明の組成物及び方法の有用性を伝えるために使用可能な刊行物、記録物、図表、又は他のあらゆる表現手段が含まれる。本発明のキットの説明資料は、例えば、本発明の核酸、ペプチド、及び／又は組成物を含んでいる容器に貼り付けられても、上記核酸、ペプチド、及び／又は組成物を含んでいる容器と共に出荷されてもよい。あるいは、この説明資料は、受領者がこの説明資料とこの化合物を協同的に使用するものとして容器とは別に出荷されてもよい。

【0086】

「単離（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」とは、天然の状態からの変更又は移動を意味する。例えば、生きている動物に天然状態で存在する核酸又はペプチドは「単離」されていないが、その天然の状態で共に存在する物質から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは「単離」されている。単離された核酸又はタンパク質は実質的に精製された形で存在する場合もあれば、例えば宿主細胞などの天然とは異なる環境の中に存在する場合もある。

【0087】

本明細書において使用される「レンチウイルス」とは、レトロウイルス科の属を指す。レンチウイルスは非分裂細胞に感染可能である点でレトロウイルスの中でも独特であり、レンチウイルスは耐量の遺伝情報を宿主細胞のＤＮＡ中に送達することができるのでレンチウイルスは最も効率的な遺伝子送達ベクター方法のうちの１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びＦＩＶは全てがレンチウイルスの例である。レンチウイルスに由来するベクターはインビボで高レベルの遺伝子移入を達成するための手段になる。

【0088】

本明細書において使用される場合、「改変（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）」という用語は、本発明の分子又は細胞の状態又は構造の変化を意味する。分子は化学、構造、及び機能をはじめとする多くの面で改変される場合がある。細胞は核酸の導入を介して改変される場合がある。

【0089】

本明細書において使用される場合、「調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）」という用語は、対象の応答レベルが、治療又は化合物が存在しない状態での上記対象の応答レベル及び／又は治療されていないが他の面では同一の対象の応答レベルと比較して検出可能なレベルに上昇又は低下させることを意味する。この用語は元来のシグナル又は応答を混乱させ、且つ／又は作用することにより対象、好ましくはヒトにおいて有益な治療反応を成立させることを包含する。

【0090】

本発明の中では以下の一般に生じる核酸塩基の略語が使用される。「Ａ」はアデノシンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアノシンを指し、「Ｔ」はチミジンを指し、「Ｕ」はウリジンを指す。

【0091】

別途指定されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、お互いに縮重型であり、且つ、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列が含まれる。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という言葉は、上記タンパク質をコードする上記ヌクレオチド配列がイントロンを含む種類の配列である場合に限りイントロンを含んでもよい。

【0092】

「機能可能であるように結合されている」という用語は、異種核酸配列の発現を引き起こす調節性配列と上記異種核酸配列との間の機能的結合を指す。例えば、第１核酸配列が第２核酸配列と機能的に関係する状態で配置されている場合、上記第１核酸配列は上記第２核酸配列と機能可能であるように結合している。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響する場合、上記プロモーターは上記コード配列に機能可能であるように結合している。機能可能であるように結合されたＤＮＡ配列は連続しており、２つのタンパク質コード領域を連結することが必要である場合には同じリーディングフレームにあることが一般的である。

【0093】

「過剰発現した」腫瘍抗原、又は腫瘍抗原の「過剰発現」という用語は、患者の特定の組織又は器官内の固形腫瘍のような疾患領域に由来する細胞における腫瘍抗原の発現レベルがその組織又は器官に由来する正常細胞における発現レベルと比較して異常であることを示すものとされる。腫瘍抗原の過剰発現を特徴とする固形腫瘍又は血液悪性腫瘍を有する患者は当技術分野において知られている標準的アッセイによって判定され得る。

【0094】

免疫原性組成物の「非経口」投与の例には、皮下（ｓ．ｃ．）注射、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、筋肉内（ｉ．ｍ．）注射、又は胸骨内注射、又は輸液技術が含まれる。

【0095】

本明細書において使用される「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチド鎖として定義される。さらに、核酸はヌクレオチドの重合体である。したがって、本明細書において使用される核酸及びポリヌクレオチドは置き換え可能である。当業者は核酸がポリヌクレオチドであり、単量体の「ヌクレオチド」に加水分解可能であるという一般的知識を有している。上記単量体ヌクレオチドはヌクレオシドに加水分解可能である。本明細書において使用される場合、ポリヌクレオチドには、限定されないが、組換え技術、すなわち通常のクローニング技術及びＰＣＲ（商標）等を用いる組換えライブラリー又は細胞ゲノムからの核酸配列のクローニング、及び合成技術をはじめとする当技術分野において利用可能なあらゆる手段によって得られる全ての核酸配列が含まれるがこれらに限定されない。

【0096】

本明細書において使用される場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合しているアミノ酸残基から構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは少なくとも２つのアミノ酸を含有していなくてはならず、タンパク質又はペプチドの配列を構成し得るアミノ酸の最大数には制限がない。ポリペプチドにはペプチド結合によって連結している２つ以上のアミノ酸を含むあらゆるペプチド又はタンパク質が含まれる。本明細書において使用される場合、この用語は短鎖と長鎖の両方を指し、短鎖は当技術分野では一般的にペプチド、オリゴペプチド、及びオリゴマー等とも呼ばれ、長鎖は多くの種類が存在するタンパク質と当技術分野では一般的に呼ばれる。「ポリペプチド」には何よりも、例えば、生物学的活性断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチド変異体、改変ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が含まれる。上記ポリペプチドには天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、又はそれらの組合せが含まれる。

【0097】

本明細書において使用される場合、「融合タンパク質」及び「キメラタンパク質」という用語は互換的に使用され、２つ以上のポリペプチドから構成される化合物を指す。幾つかの実施形態では、２つ以上のポリペプチドは共有結合している。その他の実施形態では、２つ以上のポリペプチドはペプチド結合、リンカー、又はジスルフィド結合によって共有結合している。融合タンパク質は当業者によく知られた多数の方法によって作製可能であり、最も一般的には融合タンパク質アミノ酸配列をコード又は指定する核酸配列を含むベクターを細胞に導入することにより作製可能である。その他の機能的特性、例えば安定性、半減期、多量体化、精製しやすさを引き出すために追加のアミノ酸又はポリペプチドを融合タンパク質に組み込むことが可能である。そのような要素の一例はポリペプチドリンカーである。

【0098】

本明細書において使用される「プロモーター」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するために必要とされ、細胞の合成装置によって認識される、又は合成装置に導入されるＤＮＡ配列として定義される。

【0099】

本明細書において使用される場合、「プロモーター／調節性配列」という用語は、プロモーター／調節性配列に機能可能であるように結合している遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を意味する。幾つかの例では、この配列はコアプロモーター配列である場合があり、他の例ではこの配列はエンハンサー配列及び上記遺伝子産物の発現に必要な他の調節性エレメントを含む場合もある。このプロモーター／調節性配列は、例えば、組織特異的に上記遺伝子産物を発現させるものであってよい。

【0100】

「構成的（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ）」プロモーターとは、遺伝子産物をコード又は指定するポリヌクレオチドと機能可能であるように結合している場合に、細胞のほとんど又は全ての生理的条件下において、当該細胞中で上記遺伝子産物を生産させるヌクレオチド配列である。

【0101】

「誘導性（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ）」プロモーターとは、遺伝子産物をコード又は指定するポリヌクレオチドと機能可能であるように結合している場合に、実質的にはプロモーターに対応する誘導物質が細胞中に存在する場合にのみ、上記細胞中で上記遺伝子産物を生産させるヌクレオチド配列である。

【0102】

「組織特異的（ｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」プロモーターとは、遺伝子産物をコード又は指定するポリヌクレオチドと機能可能であるように結合している場合、実質的には細胞がプロモーターに対応する種類の組織の細胞である場合にのみ、上記細胞中で上記遺伝子産物を生産させるヌクレオチド配列である。

【0103】

「シグナル伝達経路」とは、細胞の１つの部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達に役割を果たす様々なシグナル伝達分子の間の生化学的関係を指す。「細胞表面受容体」という言葉には、細胞の原形質膜を越えてシグナルを受信及び伝達することが可能である分子及び分子の複合体が含まれる。

【0104】

抗体に関して本明細書において使用される場合、「特異的に結合する」という用語は、試料中の特定の抗原を認識するが、他の分子を実質的に認識又は結合しない抗体を意味する。例えば、１つの種の抗原に特異的に結合する抗体は１又は複数の種のその抗原にも結合する場合がある。しかしながら、そのような異種間交差反応性自体は特異的であるとの抗体の分類を変更しない。別の例では抗原に特異的に結合する抗体は、抗原の異なるアレル型にも結合する場合がある。しかしながら、そのような交差反応性自体は特異的であるとの抗体の分類を変更しない。幾つかの例では「特異的結合」又は「特異的に結合する」という用語は、抗体、タンパク質、又はペプチドの第２の化学種との相互作用を参照する場合、上記相互作用が上記化学種上の特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存していることを意味するために使用され得る。例えば、抗体はタンパク質全体よりもむしろ特定のタンパク質構造を認識し、結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、エピトープＡを含む分子（又は遊離した無標識のＡ）の存在は標識された「Ａ」と上記抗体を含む反応において上記抗体に結合する標識されたＡの量を減少させる。

【0105】

「対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）」という用語は、免疫応答を誘発させることが可能な生物（例えば哺乳類動物）を含むものとされる。本明細書において使用される場合、「対象」又は「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」とは、ヒト又は非ヒト哺乳類動物であってよい。非ヒト哺乳類動物の例には、家畜及びペット、例えばヒツジ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、及びマウス哺乳類動物が含まれる。この対象はヒトであることが好ましい。

【0106】

本明細書において使用される場合、「実質的に精製された」細胞とは、基本的に他の種類の細胞を含まない細胞である。実質的に精製された細胞は、通常ではその天然の状態で結合している他の種類の細胞から分離された細胞も指す。幾つかの例では、実質的に精製された細胞の集団は同種の細胞集団を指す。他の例では、この言葉は単に、通常ではその天然の状態で結合している細胞から分離された細胞を指す。幾つかの実施形態では、上記細胞はインビトロ培養されている。他の実施形態では、上記細胞はインビトロ培養されていない。

【0107】

「標的部位（ｔａｒｇｅｔｓｉｔｅ）」又は「標的配列（ｔａｒｇｅｔｓｅｑｕｅｎｃｅ）」とは、結合が起こるために充分な条件下で結合分子が特異的に結合し得る核酸の一部を規定するゲノム核酸配列を指す。

【0108】

本明細書において使用される「治療（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」という用語は、治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）及び／又は予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）を意味する。治療効果は、疾患状態の抑制、寛解、又は根絶によって得られる。

【0109】

本明細書において使用される「形質移入される（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ）」又は「形質転換される（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ）」又は「形質導入される（ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ）」という用語は、外来性核酸を宿主細胞に移入又は導入するための処理を指す。「形質移入された」又は「形質転換された」又は「形質導入された」細胞は外来性核酸で形質移入、形質転換、又は形質導入された細胞である。上記細胞には初期対象細胞及びその子孫細胞が含まれる。

【0110】

「導入遺伝子（ｔｒａｎｓｇｅｎｅ）」という用語は、動物、具体的には哺乳類動物、より具体的には生きている哺乳類動物細胞のゲノムに人工的に挿入された、又は挿入されようとしている遺伝物質を指す。

【0111】

本明細書において使用される場合、疾患を「治療する（ｔｒｅａｔ）」ことは、対象が経験している疾患又は障害の少なくとも１つの徴候又は症状の頻度又は重症度を低下させることを意味する。

【0112】

本明細書において使用される「転写制御下」又は「機能的に結合している」という言葉は、ＲＮＡポリメラーゼによる転写の開始及びポリヌクレオチドの発現を制御するためのポリヌクレオチドに関してプロモーターが正しい場所及び方向にあることを意味する。

【0113】

「ベクター」は、単離核酸を含み、且つ、この単離核酸を細胞内部に送達するために使用可能な組成物である。直鎖状ポリヌクレオチド、イオン化合物又は両親媒性化合物と結合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスを含むがこれらに限定されない多数のベクターが当技術分野において知られている。したがって、「ベクター」という用語には、自律複製性プラスミド又はウイルスが含まれる。また、この用語は、例えばポリリシン化合物、リポソーム等のような細胞中への核酸の移入を促進する非プラスミド化合物及び非ウイルス化合物を含むと解釈されるべきである。プラスミドベクターの一例は、ウイルス、例えばエプスタイン・バールウイルス及びＢＫウイルスに由来する調節性エレメントによって自己複製が引き起こされる、又は引き立てられるエピソーム性ベクターである。ウイルスベクターの例には、センダイウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0114】

範囲
本開示を通じて、範囲形式で本発明の様々な態様が提示され得る。範囲形式での記述は、単に簡便性及び簡潔性を理由としていることが理解されるべきであり、その記述は本発明の範囲を確固として限定することと解釈されるべきではない。よって、範囲の記述は、その範囲内の個々の数値と同様に全ての可能な小範囲を具体的に開示していると考えられるべきである。例えば、１～６などの範囲の記述は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６等のような小範囲、並びにその範囲内の個々の数（例えば１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６）を具体的に開示していると考えられるべきである。このことは、範囲の大きさと無関係に適用される。

【0115】

任意のアミノ酸配列がＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号によって具体的に参照されている場合、この配列は、一部及び／又は全体が参照により本明細書に援用される。受入番号に付随するシグナルペプチド、細胞外ドメイン、経膜ドメイン、プロモーター配列、及び翻訳開始部位の特定などの情報も一部及び／又は全体が参照により本明細書に援用される。

【0116】

本開示の組成物及び方法に関して本発明において想定されているように、１つの態様では、本発明の実施形態は本明細書において開示される構成要素及び／又は工程を含む。別の態様では、本発明の実施形態は本明細書において開示される構成要素及び／又は工程から基本的に成る。さらに別の態様では、本発明の実施形態は本明細書において開示される構成要素及び／又は工程から成る。

【0117】

説明
融合タンパク質が提供される。幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の上記第１構成要素は（融合タンパク質内のｖＭＩＰＩＩペプチド又はＶ１ペプチド又はそれらの誘導体の結合を介して）ケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ４及び／又はＣＸＣＲ７）を妨害し、この妨害が腫瘍細胞を動けないようにし、その移動性、浸潤性、転移性、及び他の腫瘍原性特性に支障をきたすように働く。上記融合タンパク質の上記第２構成要素は（融合タンパク質内のＰＤ１又はその誘導体の結合を介して）上記腫瘍細胞上のチェックポイント阻害因子（例えば、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２）を妨害し、この妨害が腫瘍指向性免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の阻害に支障をきたすように働く。上記融合タンパク質の上記第３構成要素は、（融合タンパク質内のＦｃ_γ又はその誘導体の結合を介して）同じ免疫エフェクター細胞上の活性化受容体、例えばＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体を刺激し、それによりＮＫ細胞の活性化を引き起こし、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰを促進する。

【0118】

幾つかの例示的な実施形態では、融合タンパク質の１つの構成要素が腫瘍細胞又は他の細胞上のチェックポイント阻害因子を妨害し、他の２つの構成要素がそれぞれ免疫エフェクター細胞上の別個の活性化受容体を刺激する。幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、チェックポイント阻害因子が腫瘍細胞上に存在する場合に、免疫エフェクター細胞と標的腫瘍細胞に分子架橋を形成する。さらに、チェックポイント阻害経路の妨害と活性化受容体の刺激の連携である融合タンパク質の３つの相互作用が互いを機能的に補強するように働き、それらの３つの相互作用の全てが協同して上記免疫エフェクター細胞、例えばＮＫ細胞の活性化を引き起こす。好ましい実施形態では、融合タンパク質により妨害されるチェックポイント阻害因子は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５、又はＣＤ１１１から成り、融合タンパク質が共刺激する２つの活性化受容体は、ＮＫ細胞上の４－１ＢＢ及びＦｃ_γＲＩＩＩａ受容体である。

【0119】

融合タンパク質
構成要素Ａ及び／又は構成要素Ｂを含む融合タンパク質であって、
構成要素Ａが、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含み、
構成要素Ｂが、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む上記融合タンパク質が提供される。幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは構成要素Ｚ_１’をさらに含む。したがって、幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは、構成要素Ｘ’、構成要素Ｚ_１’、構成要素Ｚ_２’、及び構成要素Ｚ_３’を含む。

【0120】

幾つかの実施形態では、構成要素Ａは構成要素Ｚ_１をさらに含む。したがって、幾つかの実施形態では、構成要素Ａは、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_１、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含む。

【0121】

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｃをさらに含み、構成要素Ｃは構成要素Ｘ及び構成要素Ｃ_Ｌ’を含む。その他の実施形態では、構成要素Ｃ_Ｌ’は免疫グロブリン軽鎖の少なくとも一部を含む。幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｄをさらに含み、構成要素Ｄは構成要素Ｑ及び構成要素Ｃ_Ｌを含む。その他の実施形態では、構成要素Ｃ_Ｌは免疫グロブリン軽鎖の少なくとも一部を含む。

【0122】

幾つかの実施形態では、構成要素Ａはリーダー配列をさらに含む。その他の実施形態では、上記リーダー配列はヒトアルブミンリーダー配列である。

【0123】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｂはリーダー配列をさらに含む。その他の実施形態では、上記リーダー配列はヒトアルブミンリーダー配列である。

【0124】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｙは、リガンドドメイン、受容体ドメイン、ｓｃＦｖドメイン、又はリポカリンドメインを含む。その他の実施形態では、構成要素Ｙは、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。さらにその他の実施形態では、融合タンパク質はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に結合する。

【0125】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_１は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ１ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

【0126】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_２は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ２ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

【0127】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_３は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ３ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

【0128】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_１’は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ１ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

【0129】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_２’は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ２ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

【0130】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_３’は、免疫グロブリンのドメイン、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ－Ｌスーパーファミリーメンバー、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ヒト血清アルブミン、又はリポカリンを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンのドメインはＣＨ３ドメインである。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。さらにその他の実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＥである。

【0131】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’は、ウイルス由来ペプチド、リガンド由来、受容体由来ペプチド、又はハイスループットスクリーン（ＨＴＳ）選択ペプチドを含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’は、ケモカイン受容体、サイトカイン受容体、機能リガンドのカウンター受容体、インテグリン、リガンド、又は膜シグナル伝達複合体の一部に結合するペプチド配列を含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’はＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。その他の実施形態では、構成要素Ｘ’はｖＭＩＰ－ＩＩの少なくとも一部を含む。その他の実施形態では、構成要素Ｘ’はＶ１ポリペプチド又はＶ１Δポリペプチドを含む。さらにその他の実施形態では、融合タンパク質はＣＸＣＲ４に結合する。

【0132】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｑは、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

【0133】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｘは、ウイルス由来ペプチド、リガンド由来ペプチド、受容体由来ペプチド、又はＨＴＳ選択ペプチドを含む。その他の実施形態では、構成要素ＸはＶ１ポリペプチド又はＶ１Δポリペプチドを含む。その他の実施形態では、融合タンパク質はＣＸＣＲ４に結合する。

【0134】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｙと構成要素Ｚ_２とはヒンジ（例えばＩｇＧヒンジ）を介して接続されている。幾つかの実施形態では、構成要素Ｚ_１’と構成要素Ｚ_２’とはヒンジ（例えばＩｇＧヒンジ）を介して接続されている。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘ’と構成要素Ｚ_１’とはリンカーを介して接続されている。幾つかの実施形態では、構成要素Ｘと構成要素Ｃ_Ｌとはリンカーを介して接続されている。

【0135】

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ａ及びＦｃを含む。その他の実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ａ及びヒトＦｃＢ（ｈＦｃＢ）を含む。

【0136】

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｂ及びＦｃを含む。その他の実施形態では、融合タンパク質は構成要素Ｂ及びヒトＦｃＡ（ｈＦｃＡ）を含む。

【0137】

幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｂとは共有結合している。幾つかの実施形態では、共有結合はジスルフィド結合又はリンカーを介している。

【0138】

幾つかの実施形態では、構成要素Ａは構成要素Ｂと共有結合していない。幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｂとは、ノブ・イントゥ・ホール相互作用を介してつなぎ合わせられている。幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｂとは、ノブ・イントゥ・ホール変異及びジスルフィド結合を介した共有結合を含む。幾つかの実施形態では、構成要素Ａは変異Ｙ３４９Ｃ及び変異Ｔ３６６Ｗを含み、構成要素Ｂは変異Ｄ３５６Ｃ、変異Ｔ３６６Ｓ、変異Ｌ３６８Ａ、及び変異Ｙ４０７Ｖ（「ノブ・イントゥ・ホール」変異）を含む。これらの構成要素鎖内の変異及び変化の位置はＫａｂａｔ番号付与法（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇ及びＷｕ，ＴＴ著、（２００１年）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．誌、第２８巻（第１号）、２１４～１８頁）によって規定される。

【0139】

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、構成要素Ａ及び免疫グロブリンのドメインを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンドメインはＦｃドメインである。

【0140】

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、構成要素Ｂ及び免疫グロブリンのドメインを含む。幾つかの実施形態では、免疫グロブリンドメインはＦｃドメインである。

【0141】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｂと構成要素Ｃとは共有結合している。幾つかの実施形態では、共有結合はジスルフィド結合を介している。

【0142】

幾つかの実施形態では、構成要素Ｂは構成要素Ｃと共有結合していない。

【0143】

幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｄとは共有結合している。幾つかの実施形態では、共有結合はジスルフィド結合を介している。

【0144】

幾つかの実施形態では、構成要素Ａと構成要素Ｄとは共有結合していない。

【0145】

幾つかの実施形態では、融合タンパク質は免疫細胞上の受容体又はリガンドに結合する。

【0146】

幾つかの実施形態では、受容体はＦｃ受容体である。

【0147】

薬学的に許容可能な担体と、上述の実施形態のうちのいずれか１つの融合タンパク質と、を含む医薬組成物も提供される。

【0148】

増殖性障害の治療が必要な患者に、上述の実施形態のうちのいずれか１つの融合タンパク質の治療有効量を投与することを含む、患者の増殖性障害を治療する方法も提供される。幾つかの実施形態では、増殖性障害はがんである。その他の実施形態では、がんは固形腫瘍である。さらにその他の実施形態では、がんは、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、膀胱がん、黒色腫、神経膠芽腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、結腸がん、肺がん、肝臓がん、又はいずれかの固形若しくは液性腫瘍種である。

【0149】

本発明は、がんなどの増殖性障害の治療に有用な新規融合タンパク質を提供する。構成要素Ｙの受容体又はリガンド及び構成要素Ｘ’の受容体又はリガンドを発現する細胞上で、本発明の融合タンパク質は一方又は両方の受容体又はリガンドを妨害することが可能である。したがって、構成要素Ｙの受容体又はリガンド及び構成要素Ｘ’の受容体又はリガンドを共発現する細胞上で、本発明の融合タンパク質は腫瘍細胞の細胞死、不動化、及びクリアランスを引き起こすことが可能である。さらに、構成要素Ｚ_３又は構成要素Ｚ_３’の受容体又はリガンドを発現する細胞上、例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で、本発明の融合タンパク質は上記受容体又はリガンドを刺激する場合があり、上記細胞の活性化を引き起こす場合がある。したがって、本発明の融合タンパク質は、２つの隣接する細胞に及ぶことによりその活性を成立させる場合がある。さらに、本発明の融合タンパク質は、細胞上の３つ以上の異なる分子に結合する場合がある。幾つかの実施形態では、融合タンパク質は、ある特定の細胞の阻害又は減少の原因となることにより、又はある特定の細胞の活性化若しくは増加の原因となることにより、がんなどの疾患を治療するように作用する場合がある。

【0150】

構成要素Ａ
構成要素Ａは、構成要素Ｙ、構成要素Ｚ_２、及び構成要素Ｚ_３を含む。

【0151】

構成要素Ｙ
幾つかの実施形態では、構成要素Ｙは、リガンドドメイン、受容体ドメイン、ｓｃＦｖドメイン、又はリポカリンドメインを含む。その他の実施形態では、構成要素Ｙは、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１３、ＣＤ１５５、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＮＫＧ２Ａ（ＣＤ９４）、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１～５、ＴＩＭ－３、ＣＤ２２６、ＮＥＣＬ２、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ８０、ＣＴＬＡ－４、ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３、又はＣＤ４８の少なくとも一部を含む。

【0152】

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱ
（配列番号１）ヒトＰＤ－１細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿００５０１８．３

【0153】

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＨＶＶＷＨＲＥＳＰＳＧＱＴＤＴＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＶＣＧＶＩＳＬＡＰＫＩＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱ
（配列番号２）高親和性ヒトＰＤ－１細胞外ドメイン

【0154】

構成要素Ｙの例示的な配列は以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲＦＱＩＰ
（配列番号３）ヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿１７３７９９．４

【0155】

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＶＷＥＫＴＶＮＴＥＥＮＶＹＡＴＬＧＳＤＶＮＬＴＣＱＴＱＴＶＧＦＦＶＱＭＱＷＳＫＶＴＮＫＩＤＬＩＡＶＹＨＰＱＹＧＦＹＣＡＹＧＲＰＣＥＳＬＶＴＦＴＥＴＰＥＮＧＳＫＷＴＬＨＬＲＮＭＳＣＳＶＳＧＲＹＥＣＭＬＶＬＹＰＥＧＩＱＴＫＩＹＮＬＬＩＱＴＨＶＴＡＤＥＷＮＳＮＨＴＩＥＩＥＩＮＱＴＬＥＩＰＣＦＱＮＳＳＳＫＩＳＳＥＦＴＹＡＷＳＶＥＮＳＳＴＤＳＷＶＬＬＳＫＧＩＫＥＤＮＧＴＱＥＴＬＩＳＱＮＨＬＩＳＮＳＴＬＬＫＤＲＶＫＬＧＴＤＹＲＬＨＬＳＰＶＱＩＦＤＤＧＲＫＦＳＣＨＩＲＶＧＰＮＫＩＬＲＳＳＴＴＶＫＶＦＡＫＰＥＩＰＶＩＶＥＮＮＳＴＤＶＬＶＥＲＲＦＴＣＬＬＫＮＶＦＰＫＡＮＩＴＷＦＩＤＧＳＦＬＨＤＥＫＥＧＩＹＩＴＮＥＥＲＫＧＫＤＧＦＬＥＬＫＳＶＬＴＲＶＨＳＮＫＰＡＱＳＤＮＬＴＩＷＣＭＡＬＳＰＶＰＧＮＫＶＷＮＩＳＳＥＫＩＴＦＬＬＧＳＥＩＳＳＴＤＰＰＬＳＶＴＥＳＴＬＤＴＱＰＳＰＡＳＳＶＳＰＡＲＹＰＡＴＳＳＶＴＬＶＤＶＳＡＬＲＰＮＴＴＰＱＰＳＮＳＳＭＴＴＲＧＦＮＹＰＷＴＳＳＧＴＤＴＫＫＳＶＳＲＩＰＳＥＴＹＳＳＳＰＳＧＡＧＳＴＬＨＤＮＶＦＴＳＴＡＲＡＦＳＥＶＰＴＴＡＮＧＳＴＫＴＮＨＶＨＩＴＧＩＶＶＮＫＰＫＤＧＭ
（配列番号４）ヒトＣＤ９６細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿１９８１９６．２

【0156】

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＧＨＲＴＬＶＬＰＷＶＬＬＴＬＣＶＴＡＧＴＰＥＶＷＶＱＶＲＭＥＡＴＥＬＳＳＦＴＩＲＣＧＦＬＧＳＧＳＩＳＬＶＴＶＳＷＧＧＰＮＧＡＧＧＴＴＬＡＶＬＨＰＥＲＧＩＲＱＷＡＰＡＲＱＡＲＷＥＴＱＳＳＩＳＬＩＬＥＧＳＧＡＳＳＰＣＡＮＴＴＦＣＣＫＦＡＳＦＰＥＧＳＷＥＡＣＧＳＬＰＰＳＳＤＰＧＬＳＡＰＰＴＰＡＰＩＬＲＡＤ
（配列番号５）ヒトＣＤ１１２Ｒ細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿０２４０７０．３

【0157】

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＥＥＶＬＷＨＴＳＶＰＦＡＥＮＭＳＬＥＣＶＹＰＳＭＧＩＬＴＱＶＥＷＦＫＩＧＴＱＱＤＳＩＡＩＦＳＰＴＨＧＭＶＩＲＫＰＹＡＥＲＶＹＦＬＮＳＴＭＡＳＮＮＭＴＬＦＦＲＮＡＳＥＤＤＶＧＹＹＳＣＳＬＹＴＹＰＱＧＴＷＱＫＶＩＱＶＶＱＳＤＳＦＥＡＡＶＰＳＮＳＨＩＶＳＥＰＧＫＮＶＴＬＴＣＱＰＱＭＴＷＰＶＱＡＶＲＷＥＫＩＱＰＲＱＩＤＬＬＴＹＣＮＬＶＨＧＲＮＦＴＳＫＦＰＲＱＩＶＳＮＣＳＨＧＲＷＳＶＩＶＩＰＤＶＴＶＳＤＳＧＬＹＲＣＹＬＱＡＳＡＧＥＮＥＴＦＶＭＲＬＴＶＡＥＧＫＴＤＮＱＹＴＬＦＶＡ
（配列番号６）ヒトＣＤ２２６細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿００６５６６．３

【0158】

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＱＮＬＦＴＫＤＶＴＶＩＥＧＥＶＡＴＩＳＣＱＶＮＫＳＤＤＳＶＩＱＬＬＮＰＮＲＱＴＩＹＦＲＤＦＲＰＬＫＤＳＲＦＱＬＬＮＦＳＳＳＥＬＫＶＳＬＴＮＶＳＩＳＤＥＧＲＹＦＣＱＬＹＴＤＰＰＱＥＳＹＴＴＩＴＶＬＶＰＰＲＮＬＭＩＤＩＱＫＤＴＡＶＥＧＥＥＩＥＶＮＣＴＡＭＡＳＫＰＡＴＴＩＲＷＦＫＧＮＴＥＬＫＧＫＳＥＶＥＥＷＳＤＭＹＴＶＴＳＱＬＭＬＫＶＨＫＥＤＤＧＶＰＶＩＣＱＶＥＨＰＡＶＴＧＮＬＱＴＱＲＹＬＥＶＱＹＫＰＱＶＨＩＱＭＴＹＰＬＱＧＬＴＲＥＧＤＡＬＥＬＴＣＥＡＩＧＫＰＱＰＶＭＶＴＷＶＲＶＤＤＥＭＰＱＨＡＶＬＳＧＰＮＬＦＩＮＮＬＮＫＴＤＮＧＴＹＲＣＥＡＳＮＩＶＧＫＡＨＳＤＹＭＬＹＶＹＤＰＰＴＴＩＰＰＰＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＩＬＴＩＩＴＤＳＲＡＧＥＥＧＳＩＲＡＶＤＨ
（配列番号７）ヒトＮＥＣＬ２細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿０１４３３３．３

【0159】

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＰＩＩＶＥＰＨＶＴＡＶＷＧＫＮＶＳＬＫＣＬＩＥＶＮＥＴＩＴＱＩＳＷＥＫＩＨＧＫＳＳＱＴＶＡＶＨＨＰＱＹＧＦＳＶＱＧＥＹＱＧＲＶＬＦＫＮＹＳＬＮＤＡＴＩＴＬＨＮＩＧＦＳＤＳＧＫＹＩＣＫＡＶＴＦＰＬＧＮＡＱＳＳＴＴＶＴＶＬＶＥＰＴＶＳＬＩＫＧＰＤＳＬＩＤＧＧＮＥＴＶＡＡＩＣＩＡＡＴＧＫＰＶＡＨＩＤＷＥＧＤＬＧＥＭＥＳＴＴＴＳＦＰＮＥＴＡＴＩＩＳＱＹＫＬＦＰＴＲＦＡＲＧＲＲＩＴＣＶＶＫＨＰＡＬＥＫＤＩＲＹＳＦＩＬＤＩＱＹＡＰＥＶＳＶＴＧＹＤＧＮＷＦＶＧＲＫＧＶＮＬＫＣＮＡＤＡＮＰＰＰＦＫＳＶＷＳＲＬＤＧＱＷＰＤＧＬＬＡＳＤＮＴＬＨＦＶＨＰＬＴＦＮＹＳＧＶＹＩＣＫＶＴＮＳＬＧＱＲＳＤＱＫＶＩＹＩＳＤＰＰＴＴＴＴＬＱＰＴＩＱＷＨＰＳＴＡＤＩＥＤＬＡＴＥＰＫＫＬＰＦＰＬＳＴＬＡＴＩＫＤＤ
（配列番号８）ヒトＣＤ１１３細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿０１５４８０．３

【0160】

構成要素Ｙの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＡＥＰＨＳＬＲＹＮＬＴＶＬＳＷＤＧＳＶＱＳＧＦＬＴＥＶＨＬＤＧＱＰＦＬＲＣＤＲＱＫＣＲＡＫＰＱＧＱＷＡＥＤＶＬＧＮＫＴＷＤＲＥＴＲＤＬＴＧＮＧＫＤＬＲＭＴＬＡＨＩＫＤＱＫＥＧＬＨＳＬＱＥＩＲＶＣＥＩＨＥＤＮＳＴＲＳＳＱＨＦＹＹＤＧＥＬＦＬＳＱＮＬＥＴＫＥＷＴＭＰＱＳＳＲＡＱＴＬＡＭＮＶＲＮＦＬＫＥＤＡＭＫＴＫＴＨＹＨＡＭＨＡＤＣＬＱＥＬＲＲＹＬＫＳＧＶＶＬＲＲＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＧＦＹＰＷＮＩＴＬＳＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＱＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳＧＫＶＬＶＬＱＳＨＷ
（配列番号９）ヒトＭＩＣＡ（ＭＨＣ－Ｉポリペプチド関連配列Ａ）細胞外ドメイン、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿０００２４７．３

【0161】

リーダー配列
リーダー配列の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ
（配列番号１０）ヒトアルブミンリーダー配列

【0162】

ヒンジ
ヒンジの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
（配列番号１１）ヒトＩｇＧヒンジ

【0163】

構成要素Ｚ_２
構成要素Ｚ_２の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ
（配列番号１２）ＩｇＧ１

【0164】

構成要素Ｚ_３
構成要素Ｚ_３の例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。
ＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＳＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号１３）ＩｇＧ１

【0165】

構成要素Ａの例示的な配列は、以下の配列を含むか、又は以下の配列から成る。

【化1】