(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-11-12
(45)【発行日】2024-11-20
(54)【発明の名称】ＩＡＰ阻害剤としてのＳＭＡＣ模倣物の結晶及びその製造方法
(51)【国際特許分類】
C07D 403/06 20060101AFI20241113BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241113BHJP
A61K 31/404 20060101ALI20241113BHJP
【ＦＩ】
C07D403/06 CSP
A61P35/00
A61K31/404
【請求項の数】
13
(21)【出願番号】P 2021566285
(86)(22)【出願日】2020-05-09
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-07-11
(86)【国際出願番号】 CN2020089437
(87)【国際公開番号】W WO2020228642
(87)【国際公開日】2020-11-19
【審査請求日】2023-04-18
(31)【優先権主張番号】201910389970.8
(32)【優先日】2019-05-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】516089784
【氏名又は名称】チア タイ ティエンチン ファーマシューティカル グループ カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｃｈｉａ Ｔａｉ Ｔｉａｎｑｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．３６９ Ｙｕｚｈｏｕ Ｓｏｕｔｈ Ｒｄ．，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２２０６２ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】110001195
【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】劉 迎 春
(72)【発明者】
【氏名】徐 招 兵
(72)【発明者】
【氏名】胡 利 紅
(72)【発明者】
【氏名】丁 照 中
(72)【発明者】
【氏名】朱 興 訓
(72)【発明者】
【氏名】陳 曙 輝
【審査官】増永 淳司
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１１－５２０７７０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００９－５４４７２７（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１０－５１３５６１（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００７－５３２５０４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１０－５０６８４７（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００８－５０５９０４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００８－５２４３３３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１１－２５１９９０（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ ４０３／０６
Ａ６１Ｐ ３５／００
Ａ６１Ｋ ３１／４０４
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）化合物の結晶。【化1】
【請求項2】
式（Ｉ）化合物の結晶Ａであって、ＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度１２．１°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．３°±０．２００°及び２３．０°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する請求項１に記載の結晶。
【請求項3】
ＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度１２．１°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、１８．８°±０．２００°、１９．２°±０．２００°、１９．８°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．３°±０．２００°、２３．０°±０．２００°、２６．６°±０．２００°及び２７．４°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する請求項２に記載の式（Ｉ）化合物の結晶Ａ。
【請求項4】
ＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度７．０°±０．２００°、８．７°±０．２００°、１２．１°±０．２００°、１３．２°±０．２００°、１３．９°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１６．７°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、１８．８°±０．２００°、１９．２°±０．２００°、１９．８°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．０°±０．２００°、２１．３°±０．２００°、２３．０°±０．２００°、２４．３°±０．２００°、２５．３°±０．２００°、２６．６°±０．２００°及び２７．４°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する請求項３に記載の式（Ｉ）化合物の結晶Ａ。
【請求項5】
ＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度７．０°±０．２００°、８．７°±０．２００°、１２．１°±０．２００°、１３．２°±０．２００°、１３．９°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１６．５°±０．２００°、１６．７°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、１８．８°±０．２００°、１９．２°±０．２００°、１９．８°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．０°±０．２００°、２１．３°±０．２００°、２３．０°±０．２００°、２３．２°±０．２００°、２４．３°±０．２００°、２５．３°±０．２００°、２６．６°±０．２００°、２６．９°±０．２００°、２７．４°±０．２００°及び２９．４°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する請求項４に記載の式（Ｉ）化合物の結晶Ａ。
【請求項6】
ＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度７．０°±０．２００°、８．７°±０．２００°、９．７°±０．２００°、１０．６°±０．２００°、１１．４°±０．２００°、１２．１°±０．２００°、１３．２°±０．２００°、１３．９°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１６．５°±０．２００°、１６．７°±０．２００°、１７．５°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、１８．８°±０．２００°、１９．２°±０．２００°、１９．５°±０．２００°、１９．８°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．０°±０．２００°、２１．３°±０．２００°、２２．５°±０．２００°、２３．０°±０．２００°、２３．２°±０．２００°、２３．８°±０．２００°、２４．３°±０．２００°、２４．６°±０．２００°、２５．３°±０．２００°、２５．８°±０．２００°、２６．６°±０．２００°、２６．９°±０．２００°、２７．４°±０．２００°、２８．１°±０．２００°、２９．１°±０．２００°、２９．４°±０．２００°、３０．１°±０．２００°、３０．６°±０．２００°、３０．８°±０．２００°、３１．３°±０．２００°、３１．８°±０．２００°、３２．２°±０．２００°、３２．８°±０．２００°、３３．７°±０．２００°、３４．０°±０．２００°、３４．８°±０．２００°、３５．５°±０．２００°、３６．６°±０．２００°、３７．６°±０．２００°、３８．６°±０．２００°及び３９．６°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する請求項５に記載の式（Ｉ）化合物の結晶Ａ。
【請求項7】
示差走査熱量測定結果図では、吸収ピークのピーク値が２０２．５℃にある請求項２～６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）化合物の結晶Ａ。
【請求項8】
示差走査熱量測定結果図では、吸収ピークの開始位置が約２００．８℃にある請求項２～６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）化合物の結晶Ａ。
【請求項9】
請求項１に記載の式（Ｉ）化合物結晶が結晶組成物の重量の５０％以上を占める結晶組成物。
【請求項10】
請求項１に記載の式（Ｉ）化合物結晶が結晶組成物の重量の９０％以上を占める、請求項９に記載の結晶組成物。
【請求項11】
請求項１に記載の式（Ｉ）化合物結晶が結晶組成物の重量の９５％以上を占める、請求項９に記載の結晶組成物。
【請求項12】
請求項１に記載の式（Ｉ）化合物の結晶又は請求項９～１１のいずれか１項に記載の結晶組成物を含む医薬組成物。
【請求項13】
ｃＩＡＰ１阻害に関わるがんの治療薬物を製造するための、請求項１に記載の式（Ｉ）化合物結晶、請求項９～１１のいずれか１項に記載の結晶組成物、又は請求項１２に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
［関連出願の相互参照］
本願は２０１９年５月１０日に中国国家知識産権局へ提出された中国特許出願第２０１９１０３８９９７０．８号の優先権を主張し、当該出願の全ての内容が援用で本明細書に組み込まれる。
本願は２０１９年５月１０日に中国国家知識産権局へ提出された中国特許出願第２０１９１０３８９９７０．８号の優先権を主張し、当該出願の全ての内容が援用で本明細書に組み込まれる。
【0002】
［技術分野］
本願は医薬品化学の分野に属し、ＩＡＰ阻害剤としてのＳＭＡＣ模倣物の結晶及びその製造方法、そして、ｃＩＡＰ１阻害に関わるがんの治療薬物を製造するための前記結晶の用途に関する。
本願は医薬品化学の分野に属し、ＩＡＰ阻害剤としてのＳＭＡＣ模倣物の結晶及びその製造方法、そして、ｃＩＡＰ１阻害に関わるがんの治療薬物を製造するための前記結晶の用途に関する。
【背景技術】
【0003】
プログラム細胞死は細胞の数量調節と正常な組織からのストレス細胞又は損傷細胞の除去で重要な役割を果たす。実際には、殆どのタイプの細胞では固有のアポトーシスシグナル伝達ネットワークメカニズムによってヒトがんの発生と悪化を防ぐための主なバリアが提供される。しかし、全てのがん細胞にはアポトーシスプログラムを実行できないという共通点があり、しかも正常なアポトーシスメカニズムの欠如で適切なアポトーシスが欠ける。当面化学療法、放射線療法、免疫療法を含む殆どのがん治療は、がん細胞のアポトーシスの間接的な誘導で効果を発揮する。そのため、がん細胞が正常なアポトーシスメカニズムの欠陥でアポトーシスプログラムを実行できないのは一般に化学療法、放射線療法又は免疫療法から誘導されるアポトーシスの耐性向上に関係がある。したがって、がん細胞のアポトーシスで重要な役割を果たす重要な負の調節因子の直接的な阻害をターゲットとすれば、新規抗がん薬の設計で治療方法を得ることを期待できよう。
【0004】
現在、２種類の重要なアポトーシスの負の調節因子が確認されている。第１種の調節因子はＢｃｌ－２ファミリータンパク質であり、例えば、Ｂｃｌ－２とＢｃｌ－ＸＬタンパク質の２つの効果的な抗アポトーシス分子である。
【0005】
第２種のアポトーシスの重要な負の調節因子はアポトーシスタンパク質阻害剤（ＩＡＰｓ）である。ＩＡＰはＰ３５タンパク質に代わって機能することで最初にバキュロウイルスから発現された。このようなタンパク質は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＭＬ－ＩＡＰ、ＩＬＰ－２、ＮＡＩＰ、アポロン（Ａｐｏｌｌｏｎ）、サバイビン（Ｓｕｒｖｉｖｉｎ）を含む。そのうちＸ染色体連鎖アポトーシス阻害剤（ＸＩＡＰ）はカスパーゼ－３、カスパーゼ－７、カスパーゼ－９を直接的に阻害して、抗アポトーシス効果を果たす。ｃＩＡＰｓは主にデスレセプター経路の遮断でアポトーシスを阻害するもので、ｃＩＡＰｓが分解すると、その基質ＮＩＫ（ＮＦ－κＢ－ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｋｉｎａｓｅ、ＮＦ－κＢ誘導キナーゼ）は分解せず蓄積され、蓄積されるＮＩＫは非古典的経路によってＮＦ－κＢを活性化させ、ＮＦ－κＢの活性化がＴＮＦαの分泌を促し、ＴＮＦαがＴＮＦ－Ｒ１（ＴＮＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ１、ＴＮＦ受容体１）と結合してデスレセプター経路を開始し、ｃＩＡＰｓの分解により、ＲＩＰＫ１（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ １、受容体相互作用プロテインキナーゼ１）の分泌が増加し、それがＦＡＤＤ（Ｆａｓ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｄｅａｔｈ ｄｏｍｉｎ、Ｆａｓ関連デスドメイン）及びｃａｓｐａｓｅ－８（カスパーゼ－８）と共にアポトーシス促進性ＲＩＰＫ１－ＦＡＤＤ－ｃａｓｐａｓｅ－８複合体を形成して、その後カスパーゼ－３の活性化で、アポトーシスを引き起こす。
【0006】
複数種の悪性疾患で１１ｑ２１－ｑ２３領域（２種の遺伝子を含む）の頻繁な染色体増幅によるｃＩＡＰ１及びｃＩＡＰ２の過剰発現が観察され、当該複数種の悪性疾患は神経芽細胞腫、腎細胞がん、結腸直腸がん、胃がんなどを含む。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0007】
本願の一態様では、式（Ｉ）化合物の結晶が提供される。
【0008】
【化1】
【0009】
本願の別の態様では、式（Ｉ）化合物の結晶組成物が提供され、前記式（Ｉ）化合物の結晶が前記結晶組成物の重量の５０％以上を、好ましくは７５％以上を、より好ましくは９０％以上を、最も好ましくは９５％以上を占める。
【0010】
本願の別の態様では、治療有効量の前記式（Ｉ）化合物の結晶又は前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物を含む医薬組成物が提供され、前記医薬組成物は少なくとも１種の薬学的に許容される担体又は他の賦形剤を含んでもよい。
【0011】
本願の別の態様では、ｃＩＡＰ１阻害に関わるがんの治療薬物を製造するための、前記式（Ｉ）化合物の結晶、前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物又は前記医薬組成物の用途が提供される。
【0012】
本願の別の態様では、哺乳動物におけるｃＩＡＰ１阻害に関わるがんを治療するための、前記式（Ｉ）化合物の結晶、前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物又は前記医薬組成物の用途が提供される。
【0013】
本願の別の態様では、哺乳動物におけるｃＩＡＰ１阻害に関わるがんの治療方法であって、必要とする哺乳動物に治療有効量の前記式（Ｉ）化合物の結晶、前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物又は前記医薬組成物を投与することを含む前記方法が提供される。
【0014】
本願の別の態様では、哺乳動物におけるｃＩＡＰ１阻害に関わるがんを治療するための、前記式（Ｉ）化合物の結晶、前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物又は前記医薬組成物が提供される。
【0015】
（発明の内容）
本願の一態様では、式（Ｉ）化合物の結晶が提供される。
本願の一態様では、式（Ｉ）化合物の結晶が提供される。
【0016】
【化2】
【0017】
本願にかかる結晶は非溶媒和物の形態でもよいし、溶媒和物の形態でもよく、例えば、水和物でもよい。
【0018】
本願の一実施形態において、式（Ｉ）化合物の結晶は結晶Ａであり、ＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度１２．１°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．３°±０．２００°及び２３．０°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する。
【0019】
本願の一実施形態において、前記結晶ＡのＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度１２．１°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、１８．８°±０．２００°、１９．２°±０．２００°、１９．８°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．３°±０．２００°、２３．０°±０．２００°、２６．６°±０．２００°及び２７．４°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する。
【0020】
本願の一実施形態において、前記結晶ＡのＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度７．０°±０．２００°、８．７°±０．２００°、１２．１°±０．２００°、１３．２°±０．２００°、１３．９°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１６．７°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、１８．８°±０．２００°、１９．２°±０．２００°、１９．８°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．０°±０．２００°、２１．３°±０．２００°、２３．０°±０．２００°、２４．３°±０．２００°、２５．３°±０．２００°、２６．６°±０．２００°及び２７．４°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する。
【0021】
本願の一実施形態において、前記結晶ＡのＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度７．０°±０．２００°、８．７°±０．２００°、１２．１°±０．２００°、１３．２°±０．２００°、１３．９°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１６．５°±０．２００°、１６．７°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、１８．８°±０．２００°、１９．２°±０．２００°、１９．８°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．０°±０．２００°、２１．３°±０．２００°、２３．０°±０．２００°、２３．２°±０．２００°、２４．３°±０．２００°、２５．３°±０．２００°、２６．６°±０．２００°、２６．９°±０．２００°、２７．４°±０．２００°及び２９．４°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する。
【0022】
本願の一実施形態において、前記結晶ＡのＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンでは、２θ角度７．０°±０．２００°、８．７°±０．２００°、９．７°±０．２００°、１０．６°±０．２００°、１１．４°±０．２００°、１２．１°±０．２００°、１３．２°±０．２００°、１３．９°±０．２００°、１６．１°±０．２００°、１６．５°±０．２００°、１６．７°±０．２００°、１７．５°±０．２００°、１８．５°±０．２００°、１８．８°±０．２００°、１９．２°±０．２００°、１９．５°±０．２００°、１９．８°±０．２００°、２０．２°±０．２００°、２１．０°±０．２００°、２１．３°±０．２００°、２２．５°±０．２００°、２３．０°±０．２００°、２３．２°±０．２００°、２３．８°±０．２００°、２４．３°±０．２００°、２４．６°±０．２００°、２５．３°±０．２００°、２５．８°±０．２００°、２６．６°±０．２００°、２６．９°±０．２００°、２７．４°±０．２００°、２８．１°±０．２００°、２９．１°±０．２００°、２９．４°±０．２００°、３０．１°±０．２００°、３０．６°±０．２００°、３０．８°±０．２００°、３１．３°±０．２００°、３１．８°±０．２００°、３２．２°±０．２００°、３２．８°±０．２００°、３３．７°±０．２００°、３４．０°±０．２００°、３４．８°±０．２００°、３５．５°±０．２００°、３６．６°±０．２００°、３７．６°±０．２００°、３８．６°±０．２００°及び３９．６°±０．２００°に特徴的な回折ピークを有する。
【0023】
本願の一実施形態において、式（Ｉ）化合物の結晶ＡのＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンにおける特徴的なピークのピーク位置と強度は表１に示すとおりである。
【0024】
【表1】
【0025】
本願の一実施形態において、式（Ｉ）化合物の結晶ＡのＣｕＫα線を用いるＸ線粉末回折パターンは図１に示すとおりである。
【0026】
本願の一実施形態において、式（Ｉ）化合物の結晶Ａの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）結果図では、吸収ピークのピーク値が２０２．５℃にある。
【0027】
本願の一実施形態において、式（Ｉ）化合物の結晶Ａの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）結果図では、吸収ピークの開始位置が２００．８℃にある。
【0028】
本願の一実施形態において、式（Ｉ）化合物の結晶Ａの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）結果図は図２に示すとおりである。
【0029】
本願の一実施形態において、式（Ｉ）化合物の結晶Ａの熱重量分析（ＴＧＡ）結果図は図３に示すとおりである。
【0030】
本願の別の態様では、
（ａ）式（Ｉ）化合物を溶媒に入れて、懸濁液又は溶液にするステップと、
（ｂ）前記懸濁液又は溶液を加熱して還流させて、清澄化させるステップと、
（ｃ）前記清澄化液を熱いうちに濾過し、冷却して結晶化し、濾過し、乾燥して、式（Ｉ）化合物の結晶Ａを得るステップとを含む、式（Ｉ）化合物の結晶Ａの製造方法が提供される。
（ａ）式（Ｉ）化合物を溶媒に入れて、懸濁液又は溶液にするステップと、
（ｂ）前記懸濁液又は溶液を加熱して還流させて、清澄化させるステップと、
（ｃ）前記清澄化液を熱いうちに濾過し、冷却して結晶化し、濾過し、乾燥して、式（Ｉ）化合物の結晶Ａを得るステップとを含む、式（Ｉ）化合物の結晶Ａの製造方法が提供される。
【0031】
本願の一実施形態において、前記ステップ（ａ）で溶媒はメタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン、水、水と前記いずれかの溶媒との混合溶媒から選ばれ、好ましくはメタノール、エタノール、イソプロパノール、又はそれらと水の混合溶媒であり、より好ましくはエタノールである。
【0032】
本願の別の態様では、
（ｄ）式（Ｉ）化合物を溶媒に入れて、超音波より均一に混合して、懸濁液又は溶液にするステップと、
（ｅ）恒温振盪機において前記懸濁液又は溶液を加熱して攪拌し、遠心分離し、乾燥して、式（Ｉ）化合物の結晶Ａを得るステップとを含む、式（Ｉ）化合物の結晶Ａの製造方法がさらに提供される。
（ｄ）式（Ｉ）化合物を溶媒に入れて、超音波より均一に混合して、懸濁液又は溶液にするステップと、
（ｅ）恒温振盪機において前記懸濁液又は溶液を加熱して攪拌し、遠心分離し、乾燥して、式（Ｉ）化合物の結晶Ａを得るステップとを含む、式（Ｉ）化合物の結晶Ａの製造方法がさらに提供される。
【0033】
本願の一実施形態において、前記ステップ（ｄ）で溶媒はメタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン、水、水と前記いずれかの溶媒との混合溶媒から選ばれ、好ましくはメタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン、水、水とメタノールの混合溶媒、水とエタノールの混合溶媒、水とアセトンの混合溶媒である。前記水とメタノール、水とエタノール、水とアセトンの体積比は１：１～５から選ばれ、好ましくは１：１～３である。
【0034】
本願の一実施形態において、前記ステップ（ａ）で式（Ｉ）化合物と溶媒のモル体積比は１ｍｍｏｌ：１～１０ｍＬであり、好ましくは１ｍｍｏｌ：２～６ｍＬであり、より好ましくは１ｍｍｏｌ：２～４ｍＬである。
【0035】
本願の一実施形態において、前記ステップ（ｄ）で式（Ｉ）化合物と溶媒のモル体積比は１ｍｍｏｌ：１～１５ｍＬであり、好ましくは１ｍｍｏｌ：４～１０ｍＬであり、より好ましくは１ｍｍｏｌ：８～１０ｍＬである。
【0036】
本願の一実施形態において、前記ステップ（ｂ）で還流温度は６０～１２０℃であり、好ましくは８０～９０℃である。
【0037】
本願の一実施形態において、前記ステップ（ｅ）で攪拌温度は３０～５０℃であり、好ましくは４０～５０℃である。
【0038】
本願の別の態様では、式（Ｉ）化合物の結晶組成物が提供され、前記式（Ｉ）化合物の結晶が前記結晶組成物の重量の５０％以上を、好ましくは７５％以上を、より好ましくは９０％以上を、最も好ましくは９５％以上を占める。前記結晶組成物には、式（Ｉ）化合物の他の結晶又は非結晶の形態がわずかに含まれてもよい。
【0039】
本願の別の態様では、治療有効量の前記式（Ｉ）化合物の結晶又は前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物を含む医薬組成物が提供され、前記医薬組成物は少なくとも１種の薬学的に許容される担体又は他の賦形剤を含んでもよい。
【0040】
本願の別の態様では、ｃＩＡＰ１阻害に関わるがんの治療薬物を製造するための、前記式（Ｉ）化合物の結晶、前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物又は前記医薬組成物の用途が提供される。
【0041】
本願の別の態様では、哺乳動物におけるｃＩＡＰ１阻害に関わるがんを治療するための、前記式（Ｉ）化合物の結晶、前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物又は前記医薬組成物の用途が提供される。
【0042】
本願の別の態様では、哺乳動物におけるｃＩＡＰ１阻害に関わるがんの治療方法であって、必要とする哺乳動物に治療有効量の前記式（Ｉ）化合物の結晶、前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物又は前記医薬組成物を投与することを含む前記方法が提供される。
【0043】
本願の別の態様では、哺乳動物におけるｃＩＡＰ１阻害に関わるがんを治療するための、前記式（Ｉ）化合物の結晶、前記式（Ｉ）化合物の結晶組成物又は前記医薬組成物が提供される。
【0044】
本願の一実施形態において、前記哺乳動物はヒトである。
本願の一実施形態において、前記ｃＩＡＰ１阻害に関わるがんは乳がんから選ばれる。
本願の一実施形態において、前記ｃＩＡＰ１阻害に関わるがんは乳がんから選ばれる。
【0045】
本願の一実施形態において、前記ｃＩＡＰ１阻害に関わるがんはトリプルネガティブ乳がんから選ばれる。
【0046】
本願にかかる式（Ｉ）化合物の結晶は生理活性、安全性、生物学的利用能などの少なくとも１つにおいて優れた効果を有し、式（Ｉ）化合物の結晶Ａは安定性が高く、吸湿性が低く、しかもｃＩＡＰ１阻害活性が良好で、薬物として価値が高い。式（Ｉ）化合物の結晶Ａは良好な薬物動態特性をも有し、薬物としての使用に相応しく、前記薬物動態特性は、ＳＤラット、ビーグル犬などに対する臨床前動物試験で測定されてもよいし、ヒトに対する臨床試験で測定されてもよい。
【0047】
本願では、医薬組成物を特定の剤形にすることができ、投与経路として好ましいのは経口投与、非経口投与（皮下、筋肉内、静脈内を含む）、直腸投与などである。例えば、経口投与に適する剤形はタブレット剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、ピル剤、粉末剤、錠剤、シロップ剤、懸濁剤を含み、非経口投与に適する剤形は水系又は非水系の注射用溶液やエマルションを含み、直腸投与に適する剤形は親水性又は疎水性の担体を使用する坐剤を含む。
【0048】
本願では、サンプルのＸ線粉末回折パターンは次の条件下で測定する。装置：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ＡＤＶＡＮＣＥ Ｘ線回折装置、ターゲット：ＣｕＫα、波長：λ＝１．５４０５６Å、２θ角度範囲：３～４０°、発散スリット：０．６０ｍｍ、検出器スリット：１０．５０ｍｍ、発散制限スリット：７．１０ｍｍ、ステップ長：０．０２°、時間／ステップ：０．１２秒、試料回転数：１５ｒｐｍ、Ｃｕターゲットの管電圧、管電流：４０ｋＶ、４０ｍＡ。
【0049】
本願では、ＤＳＣ曲線は次の条件下で測定する。装置：ＴＡ Ｑ２０００示差走査熱量測定機、温度範囲：３０～３００℃、加熱速度：１０℃／ｍｉｎ。
【0050】
本願では、ＴＧＡ曲線は次の条件下で測定する。装置：ＴＡ Ｑ５０００熱重量分析計、温度範囲：２５～３００℃、加熱速度：１０℃／ｍｉｎ。
【0051】
なお、Ｘ線粉末回折パターンで、ピークの位置又はピークの相対強度が測定装置、測定方法／条件などによって異なる可能性がある。いずれの特定の結晶形でも、ピークの位置には誤差があってもよく、２θ値の測定誤差は±０．２°であってもよい。そのため、各種の結晶形を同定する時は、当該誤差を考慮すべきであり、誤差内にあるものは本願の範囲に含まれる。
【0052】
なお、同じ結晶形でも、ＤＳＣにおける吸収ピークの出現位置は測定装置、測定方法／条件などによって異なる可能性がある。いずれの特定の結晶形でも、吸収ピークの位置には誤差があってもよく、誤差は±５℃であってもよい。そのため、各種の結晶形を決定する時は、当該誤差を考慮すべきであり、誤差内にあるものは本願の範囲に含まれる。
【0053】
なお、同じ結晶形でも、ＴＧＡにおける重量減少温度の出現位置は測定装置、測定方法／条件などにより異なる可能性がある。いずれの特定の結晶形でも、重量減少温度の位置には誤差があってもよく、誤差は±５℃であってもよい。そのため、各種の結晶形を決定する時は、当該誤差を考慮すべきであり、誤差内にあるものは本願の範囲に含まれる。
【0054】
（定義及び説明）
本願の明細書、特許請求の範囲で使用する下記の用語は、特段の断りがある場合を除き、下記の意味を有する。
本願の明細書、特許請求の範囲で使用する下記の用語は、特段の断りがある場合を除き、下記の意味を有する。
【0055】
「哺乳動物」はヒト、実験室用哺乳動物や愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、羊、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ）のような飼育動物、野生哺乳動物などの非飼育の哺乳動物を含む。
【0056】
用語「医薬組成物」とは、生理活性化合物を哺乳動物、例えばヒトに伝達するための本分野で一般的に許容される媒体と本願化合物とからなる製剤である。前記媒体は薬学的に許容される全ての使用可能な担体を含む。医薬組成物の方は化合物が生体に投与しやすい。
【0057】
用語「治療有効量」とは、毒性はなく所望の効果を得るための薬物又は製剤の十分な用量を指す。有効量には個体差があり、対象の年齢や一般状況に関係があり、有効成分にも関係し、適切な有効量は場合によって当業者が通常の試験で決めることができる。
【0058】
本願では、「薬学的に許容される担体」とは有効成分と共に投与され、生体に明らかな刺激はなく、しかも活性化合物の生理活性や特性を損わない担体を指す。担体の他の情報に関しては、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）を参照することができ、当該文献の内容は援用で本明細書に組み込まれる。
【0059】
本願では、「室温」とは２０℃～３０℃を指す。
【図面の簡単な説明】
【0060】
【発明を実施するための形態】
【0061】
下記の具体的な実施例は、当業者に本願をより明確に理解させ実施させられるためのものである。それは本願の範囲への限定と見なされず、本願の例示的な説明と典型的な例に過ぎない。
【0062】
本願で中間化合物は、下記の具体的な実施形態、それと他の化学的合成方法と組み合わせた実施形態及び当業者が熟知する代替的な入れ替え形態を含む、当業者が熟知する様々な合成方法で調製することができる。好ましい実施形態は本願の実施例を含み、ただしそれらに限定されない。
【0063】
本願の具体的な実施形態に係る化学反応は適切な溶媒において行われ、前記溶媒は本願に係る化学的変化及び使用する試薬と材料に適合すべきである。本願化合物を得るためには、当業者が既存の実施形態を踏まえて合成ステップ又は反応プロセスに変更又は選択を行うことがある。
【0064】
本願で使用する全ての溶媒が市販品で、精製しなくてもそのまま使用できる。
【実施例1】
【0065】
実施例１：式（Ｉ）化合物の結晶Ａの製造
【0066】
【化3】
【0067】
ステップ１：
反応ケトルにジクロロメタン（１６．０Ｌ）を加え、温度を０℃に下げて、化合物１（２．０ｋｇ、９．９４ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加えて攪拌し、さらにトリエチルアミン（４．４２Ｌ、２９．８１ｍｏｌ、３．０Ｅｑ）、４－ジメチルアミノピリジン（６１．００ｇ、４９６．８６ｍｍｏｌ、０．０５Ｅｑ）を加えて、数回に分けてｐ－トルエンスルホニルクロリド（２．１８ｋｇ、１１．４３ｍｏｌ、１．１５Ｅｑ）を加え、内部温度を０～１０℃に制御して、さらに、反応ケトルにジクロロメタン（４Ｌ）を加え、温度を２０℃に上げて引き続き１６時間攪拌した。反応ケトルに水（２０Ｌ）を加え、５分間攪拌して静置して分液し、水相を除去して、有機相を１０％のクエン酸水溶液（１５．０Ｌ＊２）と塩水（１５．０Ｌ＊２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（２．０ｋｇ）で１時間乾燥して、濾過し、濾液をロータリーエバポレータに移し濃縮して、化合物２を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ７．７８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），４．１３－３．９３（ｍ，２Ｈ），３．９２－３．８１（ｍ，１Ｈ），３．２２－３．１１（ｍ，２Ｈ），１．９６－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．７４－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ），１．３８－１．２３（ｍ，９Ｈ）。
反応ケトルにジクロロメタン（１６．０Ｌ）を加え、温度を０℃に下げて、化合物１（２．０ｋｇ、９．９４ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加えて攪拌し、さらにトリエチルアミン（４．４２Ｌ、２９．８１ｍｏｌ、３．０Ｅｑ）、４－ジメチルアミノピリジン（６１．００ｇ、４９６．８６ｍｍｏｌ、０．０５Ｅｑ）を加えて、数回に分けてｐ－トルエンスルホニルクロリド（２．１８ｋｇ、１１．４３ｍｏｌ、１．１５Ｅｑ）を加え、内部温度を０～１０℃に制御して、さらに、反応ケトルにジクロロメタン（４Ｌ）を加え、温度を２０℃に上げて引き続き１６時間攪拌した。反応ケトルに水（２０Ｌ）を加え、５分間攪拌して静置して分液し、水相を除去して、有機相を１０％のクエン酸水溶液（１５．０Ｌ＊２）と塩水（１５．０Ｌ＊２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（２．０ｋｇ）で１時間乾燥して、濾過し、濾液をロータリーエバポレータに移し濃縮して、化合物２を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ７．７８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），４．１３－３．９３（ｍ，２Ｈ），３．９２－３．８１（ｍ，１Ｈ），３．２２－３．１１（ｍ，２Ｈ），１．９６－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．７４－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ），１．３８－１．２３（ｍ，９Ｈ）。
【0068】
ステップ２：
乾燥した反応ケトルにジクロロメタン（１．３０Ｌ）、そして化合物３（１．２８ｋｇ、８．４９ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加えて攪拌して溶解し、温度を下げて、内部温度が０℃になるまで冷却すると、窒素ガス保護下で塩化アセチル（６０６．０ｍＬ、８．４９ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を３０分間で滴加し、さらに、反応ケトルに１Ｍのジエチルアルミニウムクロリドのｎ－ヘキサン溶液（８．５０Ｌ、８．４９ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を滴加して、内部温度を０～５℃に制御して、３時間をかけ滴加したら、１時間反応させた。反応液をゆっくりとかつ数回に分けて攪拌しながら氷水（２０．０Ｌ）に注ぐと、大量の赤色の固体が析出し、混合物をクエンチしてロータリーエバポレータに移し、３０℃下で濃縮して、ジクロロメタン及びｎ－ヘキサンを除去し、残留物に２－メチルテトラヒドロフラン（２０．０Ｌ）を加え、分液装置に移して１５分間攪拌した後、分液し、水相を除去して、有機相を塩水（２０Ｌ＊２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（３．０ｋｇ）で乾燥して、濾過し、ケーキを２－メチルテトラヒドロフラン（２Ｌ）で洗浄して、濾液をロータリーエバポレータに移し濃縮して、残留物を５０Ｌ反応ケトルに移し、酢酸エチル：ｎ－ヘプタン（Ｖ：Ｖ）＝１：１（１０．０Ｌ）を加えて１０時間攪拌し、濾過して、ケーキを酢酸エチル：ｎ－ヘプタン（Ｖ：Ｖ）＝１：１（３００ｍＬ）ですすぎ、吸引乾燥し、オーブンに移して３５℃で減圧下で乾燥して化合物４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１２．１０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ）。
乾燥した反応ケトルにジクロロメタン（１．３０Ｌ）、そして化合物３（１．２８ｋｇ、８．４９ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加えて攪拌して溶解し、温度を下げて、内部温度が０℃になるまで冷却すると、窒素ガス保護下で塩化アセチル（６０６．０ｍＬ、８．４９ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を３０分間で滴加し、さらに、反応ケトルに１Ｍのジエチルアルミニウムクロリドのｎ－ヘキサン溶液（８．５０Ｌ、８．４９ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を滴加して、内部温度を０～５℃に制御して、３時間をかけ滴加したら、１時間反応させた。反応液をゆっくりとかつ数回に分けて攪拌しながら氷水（２０．０Ｌ）に注ぐと、大量の赤色の固体が析出し、混合物をクエンチしてロータリーエバポレータに移し、３０℃下で濃縮して、ジクロロメタン及びｎ－ヘキサンを除去し、残留物に２－メチルテトラヒドロフラン（２０．０Ｌ）を加え、分液装置に移して１５分間攪拌した後、分液し、水相を除去して、有機相を塩水（２０Ｌ＊２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（３．０ｋｇ）で乾燥して、濾過し、ケーキを２－メチルテトラヒドロフラン（２Ｌ）で洗浄して、濾液をロータリーエバポレータに移し濃縮して、残留物を５０Ｌ反応ケトルに移し、酢酸エチル：ｎ－ヘプタン（Ｖ：Ｖ）＝１：１（１０．０Ｌ）を加えて１０時間攪拌し、濾過して、ケーキを酢酸エチル：ｎ－ヘプタン（Ｖ：Ｖ）＝１：１（３００ｍＬ）ですすぎ、吸引乾燥し、オーブンに移して３５℃で減圧下で乾燥して化合物４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１２．１０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ）。
【0069】
ステップ３：
窒素ガス保護下で反応ケトルにＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（６．０Ｌ）を加えて、２５℃下で化合物２（３．９５ｋｇ、１１．１２ｍｏｌ、１．３０Ｅｑ）、化合物４（１．７３ｋｇ、８．５６ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加え、数回に分けて１０分間で炭酸セシウム（４．１８ｋｇ、１２．８５ｍｏｌ、１．５０Ｅｑ）を加え、反応ケトルの壁をＮ，Ｎ－ジエチルアセトアミド（１．０Ｌ）で洗い流し、温度を８０～８５℃に上げて１６時間反応させた。温度を２５℃に下げて、反応液にゆっくりと水（３０Ｌ）、そして酢酸エチル（２０Ｌ）を加えて攪拌し、分液装置に移して分液させ、水相を酢酸エチル（１０．０Ｌ）で１回抽出して、有機相を合わせ、水（１５．０Ｌ＊２）と塩水（１５．０Ｌ＊２）で洗浄して、無水硫酸ナトリウム（３．０ｋｇ）で１時間乾燥し、濾過し、ケーキを酢酸エチル（２．０Ｌ）ですすぎして、濾液をロータリーエバポレータに移し濃縮して、粗生物を得、反応ケトルに移し、酢酸エチル：ｎ－ヘプタン（Ｖ：Ｖ）＝１：２（９．０Ｌ）を加えて２時間攪拌し、濾過し、ケーキを酢酸エチル：ｎ－ヘプタン（Ｖ：Ｖ）＝１：２（５００ｍＬ）ですすぎして、吸引乾燥し、オーブンに移して３５℃で減圧下で乾燥して化合物５を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．４３－８．２８（ｍ，１Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），７．７４－７．５２（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．４０－４．０５（ｍ，３Ｈ），３．３１－３．１１（ｍ，２Ｈ），２．５０－２．３５（ｍ，３Ｈ），１．９０－１．６９（ｍ，４Ｈ），１．３９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，５Ｈ），１．０８（ｂｒ ｓ，４Ｈ）。
窒素ガス保護下で反応ケトルにＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（６．０Ｌ）を加えて、２５℃下で化合物２（３．９５ｋｇ、１１．１２ｍｏｌ、１．３０Ｅｑ）、化合物４（１．７３ｋｇ、８．５６ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加え、数回に分けて１０分間で炭酸セシウム（４．１８ｋｇ、１２．８５ｍｏｌ、１．５０Ｅｑ）を加え、反応ケトルの壁をＮ，Ｎ－ジエチルアセトアミド（１．０Ｌ）で洗い流し、温度を８０～８５℃に上げて１６時間反応させた。温度を２５℃に下げて、反応液にゆっくりと水（３０Ｌ）、そして酢酸エチル（２０Ｌ）を加えて攪拌し、分液装置に移して分液させ、水相を酢酸エチル（１０．０Ｌ）で１回抽出して、有機相を合わせ、水（１５．０Ｌ＊２）と塩水（１５．０Ｌ＊２）で洗浄して、無水硫酸ナトリウム（３．０ｋｇ）で１時間乾燥し、濾過し、ケーキを酢酸エチル（２．０Ｌ）ですすぎして、濾液をロータリーエバポレータに移し濃縮して、粗生物を得、反応ケトルに移し、酢酸エチル：ｎ－ヘプタン（Ｖ：Ｖ）＝１：２（９．０Ｌ）を加えて２時間攪拌し、濾過し、ケーキを酢酸エチル：ｎ－ヘプタン（Ｖ：Ｖ）＝１：２（５００ｍＬ）ですすぎして、吸引乾燥し、オーブンに移して３５℃で減圧下で乾燥して化合物５を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．４３－８．２８（ｍ，１Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），７．７４－７．５２（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．４０－４．０５（ｍ，３Ｈ），３．３１－３．１１（ｍ，２Ｈ），２．５０－２．３５（ｍ，３Ｈ），１．９０－１．６９（ｍ，４Ｈ），１．３９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，５Ｈ），１．０８（ｂｒ ｓ，４Ｈ）。
【0070】
ステップ４：
乾燥した反応ケトルに酢酸エチル（１６．５Ｌ）、そして化合物５（１．６５ｋｇ、４．３８ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加えて攪拌して溶解し、温度を下げて、内部温度が０℃になるまで冷却すると、用時調製した塩酸－酢酸エチル溶液（１５．０Ｌ、４．０ｍｏｌ／Ｌ）を１時間で滴加し、室温２０～３０℃に戻して１６時間反応させた。反応液を濾過して、ケーキを酢酸エチル（５Ｌ＊２）ですすぎし、ケーキを吸引乾燥して粗生物を得、粗生物を酢酸エチルに懸濁させて４時間攪拌した。濾過し、乾燥して化合物６を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．００（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．５４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．７６（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８０－４．７２（ｍ，１Ｈ），４．６２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．２７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１８－３．００（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．１７－１．６３（ｍ，４Ｈ）。
乾燥した反応ケトルに酢酸エチル（１６．５Ｌ）、そして化合物５（１．６５ｋｇ、４．３８ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加えて攪拌して溶解し、温度を下げて、内部温度が０℃になるまで冷却すると、用時調製した塩酸－酢酸エチル溶液（１５．０Ｌ、４．０ｍｏｌ／Ｌ）を１時間で滴加し、室温２０～３０℃に戻して１６時間反応させた。反応液を濾過して、ケーキを酢酸エチル（５Ｌ＊２）ですすぎし、ケーキを吸引乾燥して粗生物を得、粗生物を酢酸エチルに懸濁させて４時間攪拌した。濾過し、乾燥して化合物６を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．００（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．５４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．７６（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８０－４．７２（ｍ，１Ｈ），４．６２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．２７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１８－３．００（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．１７－１．６３（ｍ，４Ｈ）。
【0071】
ステップ５：
化合物７（２．１３ｋｇ、８．３０ｍｏｌ、１．０５Ｅｑ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１２．５０Ｌ）をこの順に反応ケトルに加えて、反応ケトルの温度を０～１０℃に調節して、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（３．１５ｋｇ、８．３０ｍｏｌ、１．０５Ｅｑ）を加えて、白色の懸濁液を得、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３．０６ｋｇ、２３．７１ｍｏｌ、３．０Ｅｑ）を滴加し、内部温度を１０℃以下に制御して、その間に固体が徐々に溶解して清澄液を得た。滴加が完了すると、内部温度を５～１０℃に制御して、攪拌しながら３０分間反応させた。数回に分けて化合物６（２．５０ｋｇ、７．９０ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加え、内部温度を５～１０℃に制御して、その間に白煙が発生した。滴加が完了すると、徐々に温度を２５～３０℃に上げて、１．５時間反応させた。攪拌しながら、半分の反応液をゆっくりと水（３０．０Ｌ）の入った反応ケトルに滴加すると、大量の固体が析出し、３０分間攪拌した後、吸引濾過し、ケーキを吸引乾燥して、同様の手法で残り半分の反応液を処理した。ケーキは共に５０℃で真空下で重量が一定になるまで乾燥して、化合物８を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．４７－８．４１（ｍ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．９７－７．９１（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４９－４．３０（ｍ，２Ｈ），４．１５－３．８９（ｍ，２Ｈ），３．６２（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝８．０，５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．１７－１．９７（ｍ，１Ｈ），１．９６－１．８５（ｍ，１Ｈ），１．７８－１．５２（ｍ，９Ｈ），１．３８－１．３１（ｍ，９Ｈ），１．２０－１．０６（ｍ，４Ｈ）。
化合物７（２．１３ｋｇ、８．３０ｍｏｌ、１．０５Ｅｑ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１２．５０Ｌ）をこの順に反応ケトルに加えて、反応ケトルの温度を０～１０℃に調節して、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（３．１５ｋｇ、８．３０ｍｏｌ、１．０５Ｅｑ）を加えて、白色の懸濁液を得、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３．０６ｋｇ、２３．７１ｍｏｌ、３．０Ｅｑ）を滴加し、内部温度を１０℃以下に制御して、その間に固体が徐々に溶解して清澄液を得た。滴加が完了すると、内部温度を５～１０℃に制御して、攪拌しながら３０分間反応させた。数回に分けて化合物６（２．５０ｋｇ、７．９０ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加え、内部温度を５～１０℃に制御して、その間に白煙が発生した。滴加が完了すると、徐々に温度を２５～３０℃に上げて、１．５時間反応させた。攪拌しながら、半分の反応液をゆっくりと水（３０．０Ｌ）の入った反応ケトルに滴加すると、大量の固体が析出し、３０分間攪拌した後、吸引濾過し、ケーキを吸引乾燥して、同様の手法で残り半分の反応液を処理した。ケーキは共に５０℃で真空下で重量が一定になるまで乾燥して、化合物８を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．４７－８．４１（ｍ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．９７－７．９１（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４９－４．３０（ｍ，２Ｈ），４．１５－３．８９（ｍ，２Ｈ），３．６２（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝８．０，５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．１７－１．９７（ｍ，１Ｈ），１．９６－１．８５（ｍ，１Ｈ），１．７８－１．５２（ｍ，９Ｈ），１．３８－１．３１（ｍ，９Ｈ），１．２０－１．０６（ｍ，４Ｈ）。
【0072】
ステップ６：
酢酸エチル（１７．７０Ｌ）を５０Ｌ反応ケトルに加えて、反応ケトルの温度を０～５℃に調節し、化合物８（１．７０ｋｇ、３．３７ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加えて、白色の懸濁液を得、蠕動ポンプで用時調製した塩酸－酢酸エチル溶液（１７．７０Ｌ、４ｍｏｌ／Ｌ、２１．０Ｅｑ）を加え、その間に固体が徐々に溶解して赤褐色の溶液を得た。滴加が完了すると、徐々に温度を１０～２５℃に上げて２．５時間反応させて、大量の赤褐色の固体が析出した。反応液を濾過して、ケーキ及びケトル壁上の固体をメタノール（７．０Ｌ）で溶解し、有機相をロータリーエバポレータに移して、減圧下で濃縮して固体を得、当該固体を酢酸エチル（８．８５Ｌ）に懸濁させて一晩攪拌した。混合物を濾過して、３５～４５℃で真空下でケーキを重量が一定になるまで乾燥して、化合物９を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．５０（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，３Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝２．１，８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５６－４．４５（ｍ，１Ｈ），４．４５－４．３６（ｍ，１Ｈ），４．１５（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７０－３．６２（ｍ，１Ｈ），３．６１－３．５６（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．１９－２．０３（ｍ，１Ｈ），１．９６－１．８７（ｍ，１Ｈ），１．８３－１．６６（ｍ，５Ｈ），１．６０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，３Ｈ），１．１４－０．９３（ｍ，４Ｈ）。
酢酸エチル（１７．７０Ｌ）を５０Ｌ反応ケトルに加えて、反応ケトルの温度を０～５℃に調節し、化合物８（１．７０ｋｇ、３．３７ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加えて、白色の懸濁液を得、蠕動ポンプで用時調製した塩酸－酢酸エチル溶液（１７．７０Ｌ、４ｍｏｌ／Ｌ、２１．０Ｅｑ）を加え、その間に固体が徐々に溶解して赤褐色の溶液を得た。滴加が完了すると、徐々に温度を１０～２５℃に上げて２．５時間反応させて、大量の赤褐色の固体が析出した。反応液を濾過して、ケーキ及びケトル壁上の固体をメタノール（７．０Ｌ）で溶解し、有機相をロータリーエバポレータに移して、減圧下で濃縮して固体を得、当該固体を酢酸エチル（８．８５Ｌ）に懸濁させて一晩攪拌した。混合物を濾過して、３５～４５℃で真空下でケーキを重量が一定になるまで乾燥して、化合物９を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．５０（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，３Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝２．１，８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５６－４．４５（ｍ，１Ｈ），４．４５－４．３６（ｍ，１Ｈ），４．１５（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７０－３．６２（ｍ，１Ｈ），３．６１－３．５６（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．１９－２．０３（ｍ，１Ｈ），１．９６－１．８７（ｍ，１Ｈ），１．８３－１．６６（ｍ，５Ｈ），１．６０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，３Ｈ），１．１４－０．９３（ｍ，４Ｈ）。
【0073】
ステップ７：
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１１．８８Ｌ）を反応ケトルに加え、反応ケトルの温度を０～５℃に調節して、化合物１０（１．３６ｋｇ、６．７１ｍｏｌ、１．０５Ｅｑ）及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（２．５４ｋｇ、６．７１ｍｏｌ、１．０５Ｅｑ）を加え、固体が一部溶解して、白色の懸濁液を得、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．４８ｋｇ、１９．１６ｍｏｌ、３．０Ｅｑ）を滴加し、反応ケトルの温度を０～５℃に制御して、固体が徐々に溶解して清澄液を得た。滴加が完了すると、反応ケトルの温度を０～５℃に制御して３０分間反応させ、ゆっくりと化合物９（２．９ｋｇ、６．３９ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加え、その間に白煙が発生し、顕著な放熱が伴い、原料の添加速度の制御で反応温度を０～５℃に制御し、滴加が完了すると、温度を２５～３０℃に上げて２３時間反応させた。５回に分けて反応液を処理し、攪拌しながら反応液（約５．０Ｌ）を３５．０Ｌの水に滴加すると、大量の白色の固体が析出し、３０分間攪拌して濾過し、ケーキを吸引乾燥して、ケーキを合わせた。ケーキとケトル壁上の固体を酢酸エチル（３０．０Ｌ）で溶解した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して化合物１１を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２９－７．２２（ｍ，１Ｈ），６．７８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．７８－４．４５（ｍ，４Ｈ），３．８８－３．５５（ｍ，４Ｈ），２．８４－２．７６（ｍ，３Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），２．０６－１．９４（ｍ，２Ｈ），１．７３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，６Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），１．３３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１６（ｂｒ ｓ，４Ｈ）。
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１１．８８Ｌ）を反応ケトルに加え、反応ケトルの温度を０～５℃に調節して、化合物１０（１．３６ｋｇ、６．７１ｍｏｌ、１．０５Ｅｑ）及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（２．５４ｋｇ、６．７１ｍｏｌ、１．０５Ｅｑ）を加え、固体が一部溶解して、白色の懸濁液を得、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．４８ｋｇ、１９．１６ｍｏｌ、３．０Ｅｑ）を滴加し、反応ケトルの温度を０～５℃に制御して、固体が徐々に溶解して清澄液を得た。滴加が完了すると、反応ケトルの温度を０～５℃に制御して３０分間反応させ、ゆっくりと化合物９（２．９ｋｇ、６．３９ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を加え、その間に白煙が発生し、顕著な放熱が伴い、原料の添加速度の制御で反応温度を０～５℃に制御し、滴加が完了すると、温度を２５～３０℃に上げて２３時間反応させた。５回に分けて反応液を処理し、攪拌しながら反応液（約５．０Ｌ）を３５．０Ｌの水に滴加すると、大量の白色の固体が析出し、３０分間攪拌して濾過し、ケーキを吸引乾燥して、ケーキを合わせた。ケーキとケトル壁上の固体を酢酸エチル（３０．０Ｌ）で溶解した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して化合物１１を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２９－７．２２（ｍ，１Ｈ），６．７８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．７８－４．４５（ｍ，４Ｈ），３．８８－３．５５（ｍ，４Ｈ），２．８４－２．７６（ｍ，３Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），２．０６－１．９４（ｍ，２Ｈ），１．７３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，６Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），１．３３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１６（ｂｒ ｓ，４Ｈ）。
【0074】
ステップ８：
酢酸エチル（１０．０Ｌ）を反応ケトルに加え、反応ケトルの温度を０～５℃に調節して、化合物１１（３．８４ｋｇ、６．０３ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を酢酸エチル（９．２０Ｌ）で溶解して反応ケトルを加えた。蠕動ポンプで用時調製した塩酸－酢酸エチル溶液（４ｍｏｌ／Ｌ、１９．２０Ｌ）に加え、流速を０．５０Ｌ／ｍｉｎとして、滴加が完了すると、徐々に温度を室温から２５～３０℃に上げて１９時間反応させ、ケトルの壁に大量の固体が出現した。反応ケトルにメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１０．０Ｌ）を加えて、反応液を２．０時間攪拌し、反応液を濾過して、ケーキを吸引乾燥した。ケーキとケトル壁上の固体を水（３０．０Ｌ）で溶解し、内部温度が５～１０℃に下がると、酢酸エチル（１０．０Ｌ＊２）で２回抽出して、水相を集めた。２回に分けて水相を処理し、１５．０Ｌの水を反応ケトルに加え、内部温度が５～１０℃に下がると、ｐＨが９になるまで質量分率が１０％の炭酸カリウム水溶液を滴加して、反応液が赤紫色から無色に変わって、固体が析出し、３０分間攪拌して濾過した。固体がきめ細かい場合には、酢酸エチル（１．５０Ｌ）を加えて３０分間攪拌して濾過し、ケーキを吸引乾燥して反応ケトルに移し、イソプロパノールを加えて２．０時間攪拌してもよい。混合物を濾過して、ケーキを４５℃で真空下で重量が一定になるまで乾燥して、式（Ｉ）化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．５０－８．３９（ｍ，１Ｈ），８．２０－８．０９（ｍ，１Ｈ），７．９６－７．８２（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５８－４．３４（ｍ，３Ｈ），４．１４－４．０２（ｍ，１Ｈ），３．７９－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．０６－２．８８（ｍ，１Ｈ），２．４８－２．４１（ｍ，３Ｈ），２．２４－２．１３（ｍ，３Ｈ），２．０９－１．９５（ｍ，３Ｈ），１．９３－１．８５（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．５４（ｍ，８Ｈ），１．１２－１．０１（ｍ，６Ｈ），０．９９－０．８６（ｍ，１Ｈ）。
酢酸エチル（１０．０Ｌ）を反応ケトルに加え、反応ケトルの温度を０～５℃に調節して、化合物１１（３．８４ｋｇ、６．０３ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を酢酸エチル（９．２０Ｌ）で溶解して反応ケトルを加えた。蠕動ポンプで用時調製した塩酸－酢酸エチル溶液（４ｍｏｌ／Ｌ、１９．２０Ｌ）に加え、流速を０．５０Ｌ／ｍｉｎとして、滴加が完了すると、徐々に温度を室温から２５～３０℃に上げて１９時間反応させ、ケトルの壁に大量の固体が出現した。反応ケトルにメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１０．０Ｌ）を加えて、反応液を２．０時間攪拌し、反応液を濾過して、ケーキを吸引乾燥した。ケーキとケトル壁上の固体を水（３０．０Ｌ）で溶解し、内部温度が５～１０℃に下がると、酢酸エチル（１０．０Ｌ＊２）で２回抽出して、水相を集めた。２回に分けて水相を処理し、１５．０Ｌの水を反応ケトルに加え、内部温度が５～１０℃に下がると、ｐＨが９になるまで質量分率が１０％の炭酸カリウム水溶液を滴加して、反応液が赤紫色から無色に変わって、固体が析出し、３０分間攪拌して濾過した。固体がきめ細かい場合には、酢酸エチル（１．５０Ｌ）を加えて３０分間攪拌して濾過し、ケーキを吸引乾燥して反応ケトルに移し、イソプロパノールを加えて２．０時間攪拌してもよい。混合物を濾過して、ケーキを４５℃で真空下で重量が一定になるまで乾燥して、式（Ｉ）化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．５０－８．３９（ｍ，１Ｈ），８．２０－８．０９（ｍ，１Ｈ），７．９６－７．８２（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５８－４．３４（ｍ，３Ｈ），４．１４－４．０２（ｍ，１Ｈ），３．７９－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．０６－２．８８（ｍ，１Ｈ），２．４８－２．４１（ｍ，３Ｈ），２．２４－２．１３（ｍ，３Ｈ），２．０９－１．９５（ｍ，３Ｈ），１．９３－１．８５（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．５４（ｍ，８Ｈ），１．１２－１．０１（ｍ，６Ｈ），０．９９－０．８６（ｍ，１Ｈ）。
【0075】
ステップ９：
エタノール（１４．０Ｌ）を反応ケトルに加えて、攪拌を開始し、式（Ｉ）化合物（１．７４ｋｇ、３．４１ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を反応ケトルに加え、固体が溶解しきれず、懸濁液を得た。循環浴の温度を９０℃に設定して、ケトル内にエタノールが還流し始め、固体が徐々に清澄化していき、１５分間保温した後、熱いうちに濾過し、濾液を反応ケトルに移して温度が徐々に室温に下がると、大量の固体が析出した。反応液を濾過して、ケーキを３５～４５℃で真空下で重量が一定になるまで乾燥して、式（Ｉ）化合物の結晶Ａを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．４７－８．３９（ｍ，１Ｈ），８．１９－８．０８（ｍ，１Ｈ），７．９７－７．６７（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．２０（ｍ，１Ｈ），４．５９－４．２９（ｍ，３Ｈ），４．１７－４．００（ｍ，１Ｈ），３．６３（ｔｄ，Ｊ＝７．６，３．８Ｈｚ，２Ｈ），２．９７（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４７－２．３９（ｍ，３Ｈ），２．２４－２．１４（ｍ，３Ｈ），２．１１－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．９４－１．８１（ｍ，１Ｈ），１．７８－１．４９（ｍ，８Ｈ），１．２５－０．８７（ｍ，８Ｈ）。
エタノール（１４．０Ｌ）を反応ケトルに加えて、攪拌を開始し、式（Ｉ）化合物（１．７４ｋｇ、３．４１ｍｏｌ、１．０Ｅｑ）を反応ケトルに加え、固体が溶解しきれず、懸濁液を得た。循環浴の温度を９０℃に設定して、ケトル内にエタノールが還流し始め、固体が徐々に清澄化していき、１５分間保温した後、熱いうちに濾過し、濾液を反応ケトルに移して温度が徐々に室温に下がると、大量の固体が析出した。反応液を濾過して、ケーキを３５～４５℃で真空下で重量が一定になるまで乾燥して、式（Ｉ）化合物の結晶Ａを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．４７－８．３９（ｍ，１Ｈ），８．１９－８．０８（ｍ，１Ｈ），７．９７－７．６７（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．２０（ｍ，１Ｈ），４．５９－４．２９（ｍ，３Ｈ），４．１７－４．００（ｍ，１Ｈ），３．６３（ｔｄ，Ｊ＝７．６，３．８Ｈｚ，２Ｈ），２．９７（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４７－２．３９（ｍ，３Ｈ），２．２４－２．１４（ｍ，３Ｈ），２．１１－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．９４－１．８１（ｍ，１Ｈ），１．７８－１．４９（ｍ，８Ｈ），１．２５－０．８７（ｍ，８Ｈ）。
【0076】
実施例２：式（Ｉ）化合物の結晶Ａの製造
それぞれ約５０ｍｇの式（Ｉ）化合物を秤量して、それぞれ１．５ｍＬ液相保存用バイアルに加え、それぞれ適量の溶媒又は溶媒混合物を加え（表２参照）、超音波より均一に混合又は溶解した。懸濁液サンプルを恒温振盪機にセットして４０℃で遮光下で６０時間攪拌した。その後、液体サンプルを高速遠心分離して、遠心分離後に固体を３５℃の真空オーブンに入れて一晩乾燥して、乾燥サンプルを得、ＸＲＰＤ測定を行った。
それぞれ約５０ｍｇの式（Ｉ）化合物を秤量して、それぞれ１．５ｍＬ液相保存用バイアルに加え、それぞれ適量の溶媒又は溶媒混合物を加え（表２参照）、超音波より均一に混合又は溶解した。懸濁液サンプルを恒温振盪機にセットして４０℃で遮光下で６０時間攪拌した。その後、液体サンプルを高速遠心分離して、遠心分離後に固体を３５℃の真空オーブンに入れて一晩乾燥して、乾燥サンプルを得、ＸＲＰＤ測定を行った。
【0077】
【表2】
【0078】
実験例１：式（Ｉ）化合物の結晶Ａの吸湿性試験
実験条件：
装置型番：ＳＭＳＤＶＳ Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的ガス吸着装置（ＤＶＳ）。
実験条件：
装置型番：ＳＭＳＤＶＳ Ａｄｖａｎｔａｇｅ動的ガス吸着装置（ＤＶＳ）。
【0079】
試験条件：式（Ｉ）化合物の結晶Ａ（１０～１５ｍｇ）をＤＶＳサンプルパンに入れて試験を行った。
【0080】
ＤＶＳパラメータは次のとおりである。
温度：２５℃。
温度：２５℃。
【0081】
平衡：ｄｍ／ｄｔ＝０．０１％／ｍｉｎ（最短１０ｍｉｎ、最長１８０ｍｉｎ）。
乾燥：０％ＲＨ下で１２０ｍｉｎ乾燥。
乾燥：０％ＲＨ下で１２０ｍｉｎ乾燥。
【0082】
ＲＨ（％）測定勾配：１０％。
ＲＨ（％）測定勾配範囲：０％～９０％～０％。
ＲＨ（％）測定勾配範囲：０％～９０％～０％。
【0083】
吸湿性の評価基準は表３を参照する。
【0084】
【表3】
【0085】
注：＊２５℃／８０％ＲＨ下の吸湿による重量増加。
実験結果：式（Ｉ）化合物の結晶Ａの２５℃で８０％ＲＨ下の吸湿による重量増加は０．７２％であった。
実験結果：式（Ｉ）化合物の結晶Ａの２５℃で８０％ＲＨ下の吸湿による重量増加は０．７２％であった。
【0086】
実験結論：式（Ｉ）化合物の結晶Ａはやや吸湿性があり、保存しやすく、潮解、変形、カビなどが起こりにくいため、薬物として価値が高い。
【0087】
実験例２：式（Ｉ）化合物の結晶Ａの安定性試験
実験方法：
影響因子実験：式（Ｉ）化合物の結晶Ａを１２部秤量して、各１．５０ｇであり、各条件では３部を使用して調べた。各サンプルを開放した計量ボトルに入れて、高温下で異なる条件に設定したデシケータに入れ、その後、対応の安定化ボックスに入れて検討した。高湿度条件については相当の条件の安定化ボックスに入れて検討した。
実験方法：
影響因子実験：式（Ｉ）化合物の結晶Ａを１２部秤量して、各１．５０ｇであり、各条件では３部を使用して調べた。各サンプルを開放した計量ボトルに入れて、高温下で異なる条件に設定したデシケータに入れ、その後、対応の安定化ボックスに入れて検討した。高湿度条件については相当の条件の安定化ボックスに入れて検討した。
【0088】
光安定性実験：式（Ｉ）化合物の結晶Ａを４部秤量して、各１．５０ｇであり、２部は光照射サンプル（一方は５日間光照射サンプル、他方は１０日間光照射サンプル）とし、残りの２部は対照サンプル（一方は５日間対照サンプル、他方は１０日間対照サンプル）とし、光照射サンプルを清潔な計量ボトルに入れて、単層にして敷き詰め、上が覆われないよう透明な蓋をして、光照射ボックスに入れて光照射を与えた。対照サンプルの包装方法は光照射サンプルと一致し、ただし計量ボトルの外側をアルミニウムフィルムで覆った。
【0089】
長期加速実験：式（Ｉ）化合物の結晶Ａを２２部秤量して、各１．５０ｇであった。各サンプルをそれぞれ２層ＬＤＰＥバッグに入れ、各層のＬＤＰＥバッグをそれぞれバックルで密封して、さらにアルミ箔バッグに入れてヒートシールした。検出時点に、対応の試験サンプルを取り出して蓋をし、０日のサンプルを冷蔵庫から取り出して、サンプルが室温に戻ったら分析した。約１０ｍｇの試料を用いてＸＲＰＤを測定した。化合物を下記の条件下で静置し異なる時点にサンプルを採取して性状、ＸＲＰＤ、含有量及び関連物質を検出した。試験条件及び検出項目は表４、表５を参照する。
【0090】
【表4】
【0091】
【表5】
【0092】
実験結論：
ＸＲＰＤ測定結果から、式（Ｉ）化合物の結晶Ａが０日と変わりはなく、様々な試験条件下で式（Ｉ）化合物の結晶Ａが安定的であることが示された。
ＸＲＰＤ測定結果から、式（Ｉ）化合物の結晶Ａが０日と変わりはなく、様々な試験条件下で式（Ｉ）化合物の結晶Ａが安定的であることが示された。
【0093】
実験例３：ｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３とＸＩＡＰ ＢＩＲ３の結合実験
実験材料：
試験緩衝系（ｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３又はＸＩＡＰ ＢＩＲ３のバッファー）：０．１ｍｏｌ／Ｌのリン酸カリウム、ｐＨ７．５、０．１％のウシ血清アルブミン、０．００５％トリトンＸ－１００、１％ジメチルスルホキシド。
実験材料：
試験緩衝系（ｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３又はＸＩＡＰ ＢＩＲ３のバッファー）：０．１ｍｏｌ／Ｌのリン酸カリウム、ｐＨ７．５、０．１％のウシ血清アルブミン、０．００５％トリトンＸ－１００、１％ジメチルスルホキシド。
【0094】
プローブ：ＡＲＰＦＡＱ－Ｋ（５－ＦＡＭ）－ＮＨ２。
目標：
ｃＩＡＰ１－ＢＩＲ３－ｈｉｓ：ＲＢＣ（カタログ番号ＡＰＴ－１１－３７０）、ヒトｃＩＡＰ１のＢＩＲ３ドメイン（アミノ酸２５８～３６３を含むｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３）をＧＳＴ－融合タンパク質として大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から発現及び精製した。
目標：
ｃＩＡＰ１－ＢＩＲ３－ｈｉｓ：ＲＢＣ（カタログ番号ＡＰＴ－１１－３７０）、ヒトｃＩＡＰ１のＢＩＲ３ドメイン（アミノ酸２５８～３６３を含むｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３）をＧＳＴ－融合タンパク質として大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から発現及び精製した。
【0095】
ＸＩＡＰ－ＢＩＲ３－ｈｉｓ：ＲＢＣ（カタログ番号ＡＰＴ－１１－３７４）、ＸＩＡＰのＢＩＲ３ドメイン（アミノ酸２５５～３５６を含むＸＩＡＰ ＢＩＲ３）をＧＳＴ－融合タンパク質として大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から発現及び精製した。
【0096】
反応条件：５ｎＭのＡＲＰＦＡＱ－Ｋ（５－ＦＡＭ）－ＮＨ２、２０ｎＭのｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３、３０ｎＭのＸＩＡＰ ＢＩＲ３。
【0097】
実験ステップ：
まずｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３又はＸＩＡＰ ＢＩＲ３のバッファーを使用前に調製して、２倍のｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３又はＸＩＡＰ ＢＩＲ３溶液を加え、さらに、音響学的手法で、１００％ＤＭＳＯで溶解した被験化合物をｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３又はＸＩＡＰ ＢＩＲ３のバッファーに加え、その後、２倍のプローブを加え、室温下で暗所において混合して６０分間インキュベートし、蛍光偏光を測定してｍＰ値を計算し、最後にＩＣ５０値を得た。
まずｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３又はＸＩＡＰ ＢＩＲ３のバッファーを使用前に調製して、２倍のｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３又はＸＩＡＰ ＢＩＲ３溶液を加え、さらに、音響学的手法で、１００％ＤＭＳＯで溶解した被験化合物をｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３又はＸＩＡＰ ＢＩＲ３のバッファーに加え、その後、２倍のプローブを加え、室温下で暗所において混合して６０分間インキュベートし、蛍光偏光を測定してｍＰ値を計算し、最後にＩＣ５０値を得た。
【0098】
実験結果：表６に示すとおりである。
実験結論：
本願の式（Ｉ）化合物は良好なｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３結合活性を示し、しかもｃＩＡＰ１及びＸＩＡＰに良好な選択性を示している。
実験結論：
本願の式（Ｉ）化合物は良好なｃＩＡＰ１ ＢＩＲ３結合活性を示し、しかもｃＩＡＰ１及びＸＩＡＰに良好な選択性を示している。
【0099】
実験例４：インビトロ細胞活性試験
実験材料：
ＲＰＭＩ １６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ－２２４０００８９）、ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ－１００９９１４１）、トリプシン（Ｔｒｙｐｓｉｎ）、０．０５％ＥＤＴＡ・４Ｎａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ－２５３０００６２）、発光法細胞生存率検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ－Ｇ７５７３）、ダルベッコリン酸バッファー（ＨｙＣｌｏｎｅ－ＳＨ３００２８．０１Ｂ）、３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ－６００７６８０）。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルアナライザ。
実験材料：
ＲＰＭＩ １６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ－２２４０００８９）、ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ－１００９９１４１）、トリプシン（Ｔｒｙｐｓｉｎ）、０．０５％ＥＤＴＡ・４Ｎａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ－２５３０００６２）、発光法細胞生存率検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ－Ｇ７５７３）、ダルベッコリン酸バッファー（ＨｙＣｌｏｎｅ－ＳＨ３００２８．０１Ｂ）、３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ－６００７６８０）。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルアナライザ。
【0100】
実験方法：
１． ３８４マイクロウェルプレートのウェルに、２５０個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を含む３０μＬのＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞懸濁液を加えた。
１． ３８４マイクロウェルプレートのウェルに、２５０個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を含む３０μＬのＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞懸濁液を加えた。
【0101】
２． ２０μＬの被験化合物（被験化合物の最高濃度が１０μＭで、被験化合物を５倍で勾配希釈し、各化合物を１０つの濃度勾配に希釈した）を加え、その後、細胞培養プレートを二酸化炭素インキュベータに戻して７日間培養した。
【0102】
３．細胞培養プレートを室温下で水平に３０分間静置した。
４．細胞培養プレートの各ウェルに２０μＬのＰｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加えた。
４．細胞培養プレートの各ウェルに２０μＬのＰｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加えた。
【0103】
５． １０分間後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルアナライザで読み取った。
実験結果：表６参照。
実験結果：表６参照。
【0104】
実験結論：
本願の式（Ｉ）化合物は良好なＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞抗増殖活性を有する。
本願の式（Ｉ）化合物は良好なＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞抗増殖活性を有する。
【0105】
【表6】
【0106】
実験例５：インビボ薬効研究１
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳がん患者からのヒト由来腫瘍細胞株を皮下移植された異種移植（ＣＤＸ）ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおいてインビボ薬効実験を行った。
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳がん患者からのヒト由来腫瘍細胞株を皮下移植された異種移植（ＣＤＸ）ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおいてインビボ薬効実験を行った。
【0107】
実験手順：
雌の６～８週齢で、体重が約１８～２２ｇのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、病原体のない特殊な環境で、換気ケージに保持した（１ケージ当たりマウス３匹）。全てのケージ、床敷と水は使用前に消毒した。全ての動物は不自由なく認証済みの標準的な実験動物用飼料を摂取することができる。上海西普爾必凱実験動物有限公司（Ｓｈａｎｇｈａｉ ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ）から合計で４８匹のマウスを購入して実験に使用した。各マウスには右脇腹で腫瘍細胞（０．２ｍＬのリン酸塩バッファー中１０×１０６個）を皮下移植して、腫瘍を増殖させた。平均腫瘍体積が約１４７ｍｍ３になると投与を開始した。試験化合物を毎日経口投与し、投与用量は３０ｍｇ／ｋｇであった。３日ごとに二次元測定器ノギスで腫瘍体積を測定し、体積単位はｍｍ３であり、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２で計算し、式中、ａは腫瘍の長径、ｂは短径であった。抗腫瘍効果は化合物で処理した動物の平均腫瘍増加体積を未処理動物の平均腫瘍増加体積で割って判定した。
雌の６～８週齢で、体重が約１８～２２ｇのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、病原体のない特殊な環境で、換気ケージに保持した（１ケージ当たりマウス３匹）。全てのケージ、床敷と水は使用前に消毒した。全ての動物は不自由なく認証済みの標準的な実験動物用飼料を摂取することができる。上海西普爾必凱実験動物有限公司（Ｓｈａｎｇｈａｉ ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ）から合計で４８匹のマウスを購入して実験に使用した。各マウスには右脇腹で腫瘍細胞（０．２ｍＬのリン酸塩バッファー中１０×１０６個）を皮下移植して、腫瘍を増殖させた。平均腫瘍体積が約１４７ｍｍ３になると投与を開始した。試験化合物を毎日経口投与し、投与用量は３０ｍｇ／ｋｇであった。３日ごとに二次元測定器ノギスで腫瘍体積を測定し、体積単位はｍｍ３であり、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２で計算し、式中、ａは腫瘍の長径、ｂは短径であった。抗腫瘍効果は化合物で処理した動物の平均腫瘍増加体積を未処理動物の平均腫瘍増加体積で割って判定した。
【0108】
実験結果：表７参照。
実験結論：
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳がんＣＤＸインビボ薬効モデルにおいて、本願の式（Ｉ）化合物が良好な薬効を示している。
実験結論：
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳がんＣＤＸインビボ薬効モデルにおいて、本願の式（Ｉ）化合物が良好な薬効を示している。
【0109】
【表7】
【0110】
実験例６：インビボ薬効研究２
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳がん患者からのヒト由来腫瘍細胞株を皮下移植された異種移植（ＣＤＸ）ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおいてインビボ薬効実験を行った。
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳がん患者からのヒト由来腫瘍細胞株を皮下移植された異種移植（ＣＤＸ）ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおいてインビボ薬効実験を行った。
【0111】
実験手順：
雌の６～８週齢で、体重が約１８～２２ｇのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、病原体のない特殊な環境で、換気ケージに保持した（１ケージ当たりマウス３匹）。全てのケージ、床敷と水は使用前に消毒した。全ての動物は不自由なく認証済みの標準的な実験動物用飼料を摂取することができる。上海西普爾必凱実験動物有限公司（Ｓｈａｎｇｈａｉ ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ）から合計で４８匹のマウスを購入し実験に使用した。各匹マウスには右脇腹で腫瘍細胞（０．２ｍＬのリン酸塩バッファー中１０×１０６個）を皮下移植して、腫瘍を増殖させた。平均腫瘍体積が約１１０ｍｍ３になると投与を開始した。試験化合物を毎日経口投与し、投与用量は３０ｍｇ／ｋｇであった。３日ごとに二次元測定器ノギスで腫瘍体積を測定し、体積単位はｍｍ３であり、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２で計算し、式中、ａは腫瘍の長径、ｂは短径であった。抗腫瘍効果は化合物で処理した動物の平均腫瘍増加体積を未処理動物の平均腫瘍増加体積で割って判定した。
雌の６～８週齢で、体重が約１８～２２ｇのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、病原体のない特殊な環境で、換気ケージに保持した（１ケージ当たりマウス３匹）。全てのケージ、床敷と水は使用前に消毒した。全ての動物は不自由なく認証済みの標準的な実験動物用飼料を摂取することができる。上海西普爾必凱実験動物有限公司（Ｓｈａｎｇｈａｉ ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ）から合計で４８匹のマウスを購入し実験に使用した。各匹マウスには右脇腹で腫瘍細胞（０．２ｍＬのリン酸塩バッファー中１０×１０６個）を皮下移植して、腫瘍を増殖させた。平均腫瘍体積が約１１０ｍｍ３になると投与を開始した。試験化合物を毎日経口投与し、投与用量は３０ｍｇ／ｋｇであった。３日ごとに二次元測定器ノギスで腫瘍体積を測定し、体積単位はｍｍ３であり、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２で計算し、式中、ａは腫瘍の長径、ｂは短径であった。抗腫瘍効果は化合物で処理した動物の平均腫瘍増加体積を未処理動物の平均腫瘍増加体積で割って判定した。
【0112】
実験結果：表８参照。
実験結論：
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳がんＣＤＸインビボ薬効モデルにおいて、本願の式（Ｉ）化合物が良好な薬効を示している。
実験結論：
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳がんＣＤＸインビボ薬効モデルにおいて、本願の式（Ｉ）化合物が良好な薬効を示している。
【0113】
【表8】
【図1】
【図2】
【図3】