特許 7587550 第ＸＩ因子抗体および使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-12

(45)【発行日】2024-11-20

(54)【発明の名称】第ＸＩ因子抗体および使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12P 21/08 20060101AFI20241113BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241113BHJP

   C07K 16/36 20060101ALI20241113BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241113BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241113BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241113BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241113BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241113BHJP

【ＦＩ】

C12P21/08

C12N15/13

C07K16/36 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

【請求項の数】 9

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2022079828

(22)【出願日】2022-05-13

(62)【分割の表示】P 2020039843の分割

【原出願日】2016-06-24

(65)【公開番号】P2022116069

(43)【公開日】2022-08-09

【審査請求日】2022-06-10

(31)【優先権主張番号】62/184,955

(32)【優先日】2015-06-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/341,568

(32)【優先日】2016-05-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】504389991

【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100149010

【弁理士】

【氏名又は名称】星川 亮

(72)【発明者】

【氏名】エデル，ヨルグ

(72)【発明者】

【氏名】エヴェルト，ステファン

(72)【発明者】

【氏名】ハッシーペン，ウルリッヒ

(72)【発明者】

【氏名】カダー，ヤッサー

(72)【発明者】

【氏名】マイヤー，ローレンツ エム．

(72)【発明者】

【氏名】メルコ，サム

(72)【発明者】

【氏名】シーリング，ニコラウス

【審査官】市島 洋介

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１１－５０４３７１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１５－５１７３０５（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １６／３６

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト第ＸＩ因子（ＦＸＩ）および／または第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）に結合する抗体またはその抗原結合断片を製造する方法であって、
（ａ）重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）をコードする発現ベクターを含む宿主細胞を、前記宿主細胞が前記ＶＨおよびＶＬを含む１つ以上のポリペプチドを発現する条件下で、増殖させ、それにより前記抗体またはその抗原結合断片を製造することと、
ここで、
ｉ．前記ＶＨは、配列番号２３のＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２４のＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号２５のＣＤＲ３アミノ酸配列を含み；ならびに前記ＶＬは、配列番号３３のＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３４のＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３５のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む;
ｉｉ．前記ＶＨは、配列番号２６のＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２７のＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号２８のＣＤＲ３アミノ酸配列を含み；ならびに前記ＶＬは、配列番号３６のＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３７のＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３８のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む；
ｉｉｉ．前記ＶＨは、配列番号４３のＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号４４のＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号４５のＣＤＲ３アミノ酸配列を含み；ならびに前記ＶＬは、配列番号４７のＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３７のＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号１５のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む；または
ｉｖ．前記ＶＨは、配列番号４６のＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号４のＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号５のＣＤＲ３アミノ酸配列を含み；ならびに前記ＶＬは、配列番号３３のＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号１４のＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号１５のＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記抗体またはその抗原結合断片を精製することと
を含む方法。

【請求項2】

前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ｉ）配列番号９の可変領域重鎖配列と配列番号１９の可変領域軽鎖配列を含む抗体または断片、または（ｉｉ）配列番号２９の可変領域重鎖配列と配列番号３９の可変領域軽鎖配列を含む抗体または断片を含むか、あるいは、
前記抗体が、（ｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、または（ｉｖ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む、
請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記抗体が、Ｄ２６５Ａ置換およびＰ３２９Ａ置換を含むＦｃドメインを含む、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記抗体が、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

前記抗体が、ヒトＩｇＧ１アイソタイプである、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記宿主細胞が、真核細胞である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞、および形質転換Ｂ細胞からなる群から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞である、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、それらの各々が参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、２０
１５年６月２６日に出願された、米国仮出願第６２／１８４，９５５号明細書、および、
２０１６年５月２５日に出願された、米国仮出願第６２／３４１，５６８号明細書の利益
を主張する。

【0002】

本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体において
本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０１６年６月２３日に作成された前記ＡＳ
ＣＩＩコピーは、「PAT056955-WO-PCT_SL.txt」と名付けられ、４５，６８５バイトのサ
イズである。

【0003】

背景
血栓症とは、血栓性素因または凝固亢進状態として公知の遺伝性危険因子と、後天性危
険因子との組合せに後続する、血管内部の血栓形成を指す。血管壁の損傷、うっ血、血小
板の反応性の増大、および凝血因子の活性化は、血栓症の根源的な特色のうちの一部であ
る。血栓症は、静脈循環および動脈循環のいずれにおいても生じる可能性があり、深部静
脈血栓症（ＤＶＴ）、肺塞栓症、および脳卒中の発症を結果としてもたらしうる。動脈系
内で血栓が生じると、下流で虚血症が生じることから、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、虚
血性脳卒中、および急性下肢虚血症がもたらされうる。静脈系内の血栓形成は、深部静脈
血栓症、肺塞栓症、および慢性血栓塞栓性肺高血圧症をもたらすことが典型的である。凝
血はまた、心房細動（ＡＦ）を伴う患者の左心耳内でも形成される可能性があり、脱離し
た血栓は、重篤となる可能性のある合併症、すなわち、血栓塞栓性脳卒中および全身性塞
栓症を結果としてもたらしうる。低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、トロンビンインヒビタ
ー、および第Ｘａ因子（ＦＸａ）インヒビターを含む、現在利用可能な抗血栓薬は全て、
著明な出血の危険性と関連する（Weitz J.I. (2010) Thromb. Haemost. 103, 62）。止血
に影響を及ぼさず、したがって、出血合併症を結果としてもたらさない抗血栓剤の開発が
、強く所望される。

【0004】

現行の抗凝固剤は、注射されるか、または経口服用される。注射用の抗凝固性ＬＭＷＨ
は、広く使用されており、かつて適用された未分画ヘパリンを上回る治療プロファイルの
改善をもたらしている。過去数十年間にわたり、最も一般に使用された経口抗凝固剤は、
ワルファリンであった。ワルファリンは、治療ウィンドウが狭く、このため、凝固状態に
ついての頻繁なモニタリングを要求し、様々な薬物間相互作用を示す。より近年では、経
口で利用可能な直接的ＦＸａおよびトロンビンインヒビターが、抗凝固剤市場に参入し、
適用を増大させている。

【0005】

ＬＭＷＨ、ＦＸａインヒビター、およびトロンビンインヒビターは全て、手術後の静脈
血栓塞栓性疾患の防止、自発的なＤＶＴおよび肺塞栓症の処置、ならびに心房細動におけ
る脳卒中の防止に効果的である。しかし、これらの抗凝固剤はまた、旧来の薬物であるワ
ルファリンおよび未分画ヘパリンについて観察される出血合併症と一般に同等な出血合併
症とも関連する。ＡＤＶＡＮＣＥ－２臨床試験では、ＦＸａインヒビターアピキサバン（
Ｅｌｉｑｕｉｓ）が、人工膝関節置換術後の患者において、ＬＭＷＨであるエノキサパリ
ンと比較された。急性アピキサバン療法は、静脈血栓塞栓性疾患を防止するのに、エノキ
サパリンより効果的であったが、いずれの薬剤も、出血の著明な危険性と関連した。臨床
的に関与性の出血は、アピキサバンを施される患者のうちの４％、およびエノキサパリン
で処置された患者のうちの５％において生じた（Lassen, M.R., et al. (2009) N. Engl.
J. Med. 361, 594）。

【0006】

ＲＥ－ＬＹ試験では、直接的トロンビンインヒビターであるダビガトラン（Ｐｒａｄａ
ｘａ）が、心房細動および脳卒中の危険性を伴う患者において、ワルファリンと比較され
た（Connolly, S.J., et al. (2009) N. Engl. J. Med. 361, 1139）。慢性ダビガトラン
療法は、脳卒中または全身性塞栓症の危険性の著明な低下と関連した。しかし、大量出血
の合併症が、毎日１５０ｍｇのダビガトランを施される患者のうちの３．１％、およびワ
ルファリンを施される患者のうちの３．４％において生じた（ｐ＝０．３１）。

【0007】

心房細動（ＡＦ）は依然として、臨床実践において、最も一般的な心不整脈であり、心
調律異常のための入院のうちの約３分の１を占める。現在、ＡＦは、欧州において、６０
０万を超える患者に、および米国において、約２３０万に影響を及ぼすと推定されており
、老化人口の比率の増大のため、この数は、急速に増大し続けている。６５歳を超える人
口のうちの約５％、および８０歳を超える人々のうちの１０％が、ＡＦを発症すると推定
されているが、ＡＦの有病数は、年齢だけで説明される有病数を超えて増大しつつある。
高血圧症、うっ血性心不全、左室肥大、冠動脈疾患、および糖尿病、ならびに閉塞性睡眠
時無呼吸症などのＡＦ危険因子もまた、増加しつつある。ＡＦに罹患する個体の数はそれ
自体、欧米人において、今後３０年間で、２～３倍に増大することが期待される（Kannel
and Benjamin (2008) Med Clin North Am. 2008; 92:17-40; Bunch, et al. (2012) J I
nnovations of Card Rhythm Manag 2012; 3: 855-63）。

【0008】

ＡＦの主要な危険性は、塞栓性脳卒中の４～５倍の増大である。ＡＦとの関連に帰着し
うる脳卒中の危険性は、年齢と共に急激に増大し、８０～８９歳では、２３．５％へと増
大する。ＡＦは、いずれの性別においても、死亡率の倍増と関連する（Kannel and Benja
min 2008）。ＡＦはまた、認知機能の低下および認知症の全ての形態とも非依存的に関連
する（Marzona, et al. (2012) CMAJ 2012; 184: 329-36; Geita et al 2013; Bunch et
al 2012）。

【0009】

ＡＦを伴う大半の患者は、心塞栓性脳卒中および全身性塞栓症を防止するのに、生涯に
わたる抗凝固療法を要求する。ＣＨＡ２ＤＳ２－ＶＡＳｃ危険性スコアは、妥当性が確認
され、心房細動患者における血栓塞栓性の危険性を予測し、抗凝固療法から利益を得る患
者を同定するのに広く使用されている層別化ツールであり（LIP 2011；Camm, et al. (20
12) Eur Heart J 2012; 33: 2719-2747）、証拠の蓄積は、ＣＨＡ２ＤＳ２－ＶＡＳｃが
、脳卒中および血栓塞栓症を発症する患者を同定するのに、ＣＨＡＤＳ２などのスコアと
少なくとも同程度に正確であるか、または、おそらく、これらより優れており、ＡＦを伴
う患者であって、「真に危険性の小さな」患者を同定するのには、決定的に優れているこ
とを示す。ＡＦ患者のうちの８５～９０％は、抗凝固療法を要求することが推定される。

【0010】

脳卒中および全身性塞栓症の低減における、ビタミンＫアンタゴニスト（ＶＫＡ）の効
果について査定する、６つの試験を含むメタアナリシスでは、脳卒中発症率の危険性の、
高度に有意な低減が観察された（脳卒中の危険性の相対的低減は６７％であった）。全死
因死亡率は、用量を調整したＶＫＡにより、対照と対比して有意に低減された（２６％）
（Hart, Pearce, and Aguilar (2007) Ann Intern Med 2007; 146:857-867）。２～３の
間のＩＮＲ（international normalized ratio）目標値が、最良の利益－危険比と関連し
（Hylek et al (2003) N Engl J Med; 349:1019-1026）、国際ガイドラインおよび国内ガ
イドラインで広く採択されている。

【0011】

近年では、直接的経口抗凝固剤（ＤＯＡＣ）とも称する、新たな経口抗凝固剤（ＮＯＡ
Ｃ）が、承認され、臨床実践へと導入されている。これらの薬物は、血栓塞栓性疾患の低
減において、ワルファリンと、少なくとも同程度に効果的であるか、またはなお優れてい
る（Connolly, et al. (2009) N Engl J Med; 361:1139-51; Connolly, et al. (2011) N
Engl J Med; 364:806-17; Patel, et al. (2011) N Engl J Med 2011; 365:883-91）。
ＮＯＡＣはまた、ワルファリンの最も重篤な合併症、すなわち、出血性脳卒中および頭蓋
内出血の大幅な低減とも関連した。大量出血事象は、良好に施されたワルファリン療法と
同等であるか、またはわずかに少なかった。加えて、ＮＯＡＣは、ワルファリンより小さ
な薬物間相互作用の可能性と関連し、ルーチンのモニタリングを伴わずに使用することが
でき、これは、日常的な医療実践におけるそれらの使用を容易とすることが期待される。

【0012】

近年の改善にもかかわらず、抗凝固剤の使用に伴う出血の危険性は、依然として高いま
まである。例えば、大量出血および臨床的に関与性の非大量出血の年間発症率は、１４．
９％であり、ＲＯＣＫＥＴ研究で、リバーロキサバンにより処置された患者における、大
量出血事象の年間発症率は、３．６％であった（Patel et al 2011）。出血の危険性が高
く、ＨＡＳ Ｂｌｅｄ危険性スコアが≧３であると規定された患者における、大量出血の
年間発症率は＞５％であった（Gallego, et al. (2012) Carc Arrhythm Electrophysiol.
; 5:312-318）。大量出血は、特に関与性の大きな臨床転帰であり、例えば、ＲＯＣＫＥ
Ｔ研究では、大量出血が生じた場合、全死因死亡率は、リバーロキサバン群において２０
．４％およびワルファリン群において２６．１％であった。大量出血事象が生じた場合、
リバーロキサバン群およびワルファリン群、それぞれの患者のうちの４．７％および５．
４％で、脳卒中および全身性塞栓症が生じた（Piccini, et al. (2014) Eur Heart J; 35
:1873-80）。入院、血液製剤の輸液、および血液供給源の活用もまた、大量出血の発生か
ら重大な影響を受けた。出血の危険性はまた、適格性患者において抗凝固剤を施さない、
主要な理由でもある。３５カ国の１８２の病院ならびに５３３３人の外来ＡＦ患者および
入院ＡＦ患者からのデータを含む、Ｅｕｒｏ Ｈｅａｒｔ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｎ Ａｒｔ
ｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎでは、適格性患者のうちの６７％が、退院時に経口抗
凝固剤を施されるに過ぎなかった（Nieuwlaat, et al (2005) Eur Heart J;26, 2422-243
4）。

【0013】

したがって、既存の治療と同等な有効性を伴うが、易出血性を低下させた、脳卒中、全
身性塞栓症、認知機能の低下、および死亡率など、ＡＦの血栓塞栓性合併症を低減しうる
、より安全な治療に対する満たされていない大きな医療上の必要が存在する。

【0014】

概要
本発明は、ヒトの第ＸＩ凝固因子およびＸＩａ（活性化型第ＸＩ因子）（以下、場合に
よって、「ＦＸＩ」、「ＦＸＩａ」、および類似の用語で称する）に結合するモノクロー
ナル抗体、およびこれを含む医薬組成物、およびこれを投与するステップを含む処置方法
に関する。血栓症または血栓塞栓性疾患／障害（例えば、血栓性脳卒中、心房細動、心房
細動における脳卒中の防止（ＳＰＡＦ）、深部静脈血栓症、静脈血栓塞栓症、肺塞栓症、
急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、虚血性脳卒中、急性下肢虚血症、慢性血栓塞栓性肺高血圧
症、全身性塞栓症）の防止および処置において効果的であるが、出血の危険性を保有しな
いか、または最小限の出血の危険性を保有するに過ぎない抗血栓剤を開発すれば、満たさ
れていない大きな医療上の必要が満たされるであろう。

【0015】

具体的な態様では、本明細書で提示される抗体（例えば、ヒトモノクローナル抗体、キ
メラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体）は、ヒトのＦＸＩａおよびＦＸＩ
の触媒ドメイン（ＣＤ）に、同様の高アフィニティーで結合し、ＦＸＩａ内で、不活性の
プロテアーゼドメインコンフォメーションを誘導する。

【0016】

本明細書で記載される、単離抗ＦＸＩ抗体および／または抗ＦＸＩａ抗体、例えば、本
明細書で記載される２つの結合性部位を伴う全長ＩｇＧは、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩ
ａに、１００ｐＭ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で結合する。例えば、本明細書で記載され
る単離抗体は、ヒトのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに、１００ｐＭ以下、５０ｐＭ以下
、４５ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３５ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、または１０ｐＭ以下のＫ
_Ｄで結合しうる。より具体的には、本明細書で記載される単離抗体はまた、ヒトのＦＸＩ
および／またはＦＸＩａに、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（
商標）アッセイにより測定される３４ｐＭ以下の、または溶液中平衡滴定アッセイ（ＳＥ
Ｔ）により測定される４ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合することも可能であり；また、カニクイザ
ルのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）アッセイにより測定され
る５３ｐＭ以下の、またはＳＥＴにより測定される４ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合することも可
能である。具体的な態様では、本明細書で記載される単離抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１
）は、ヒトのＦＸＩおよびＦＸＩａに、例えば、溶液中平衡滴定アッセイ（ＳＥＴ）によ
り測定される、それぞれ、約５ｐＭ（例えば、４．７ｐＭ）および２ｐＭ（例えば、１．
３ｐＭ）以下の見かけのＫ_Ｄで結合する。具体的な実施形態では、本明細書で記載される
抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体は、カニクイザルのＦＸＩ／ＦＸＩａに、ＳＥＴ（例えば、実施
例２を参照されたい）により測定される、ＦＸＩａに対する約１２．５（±６．６）ｐＭ
および約５．０（±０．７）ｐＭの見かけのＫ_Ｄで結合する。具体的な実施形態では、本
明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体は、ウサギのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ
に、約２０（±２）ｎＭのＫ_Ｄで結合する。具体的な態様では、本明細書で記載される抗
ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体は、ヒト、カニクイザル、およびウサギのＦＸＩおよび／またはＦ
ＸＩａに結合するが、マウスまたはラットのＦＸＩには特異的に結合しない。

【0017】

本明細書で記載される、単離抗ＦＸＩ抗原結合性断片および／または抗ＦＸＩａ抗原結
合性断片、例えば、１つの結合性部位を含有する、Ｆａｂ断片および他の断片は、ＦＸＩ
および／またはＦＸＩａに、１０ｎＭ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で結合する。例えば、
本明細書で記載される、単離抗原結合性断片は、ヒトのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに
、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、５００ｐＭ以下、３０５ｐＭ以下、６２ｐＭ
以下のＫＤで結合しうる。より具体的には、本明細書で記載される、単離抗原結合性断片
はまた、ヒトのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに、３０５ｐＭ以下のＫＤで結合すること
も可能である。

【0018】

本発明は、ヒト、ウサギ、およびカニクイザルのＦＸＩａに結合する単離抗体またはそ
の抗原結合性断片に関する。本発明はまた、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ドメイ
ン内、具体的には、活性部位領域の表面に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片に
も関する。

【0019】

本発明はまた、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合し、表１に記載されている抗体（
例えば、ＮＯＶ１４０１）との結合についてさらに競合する単離抗体またはその抗原結合
性断片にも関する。本明細書で記載される、抗体および／またはその抗原結合性断片の間
の「競合」とは、両方の抗体（またはその結合性断片）が、同じまたは重複するＦＸＩエ
ピトープおよび／もしくはＦＸＩａエピトープに結合すること（例えば、当業者に周知の
方法のうちのいずれかにより、競合結合アッセイにおいて決定される）を意味する。本明
細書で使用される抗体またはその抗原結合性断片は、前記競合抗体またはその抗原結合性
断片が、本発明の抗体または抗原結合性断片と同じＦＸＩエピトープおよび／もしくはＦ
ＸＩａエピトープ、またはこれと重複するＦＸＩエピトープおよび／もしくはＦＸＩａエ
ピトープに結合しない限りにおいて、本発明のＦＸＩ抗体および／もしくはＦＸＩａ抗体
または抗原結合性断片（例えば、ＮＯＶ１４０１またはＮＯＶ１０９０）と「競合」しな
い。本明細書で使用される競合抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）本発明の抗体ま
たは抗原結合性断片が、その標的に結合することを、立体的に遮断し（例えば、前記競合
抗体が、近傍の、重複しないＦＸＩエピトープおよび／またはＦＸＩａエピトープに結合
し、本発明の抗体または抗原結合性断片が、その標的に結合することを物理的に防止する
場合）；かつ／あるいは（ｉｉ）異なる、重複しないＦＸＩエピトープおよび／またはＦ
ＸＩａエピトープに結合し、ＦＸＩタンパク質および／またはＦＸＩａタンパク質に、本
発明のＦＸＩ抗体および／もしくはＦＸＩａ抗体または抗原結合性断片が、コンフォメー
ション変化の非存在下で生じる形ではもはや結合できないように、前記コンフォメーショ
ン変化を、前記タンパク質に誘導する、競合抗体またはその抗原結合性断片を含まない。

【0020】

一実施形態では、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合し、表１に記載されている抗体
との結合についてさらに競合する単離抗体またはその抗原結合性断片は、表１の前記抗体
が結合するエピトープの大部分のアミノ酸に結合する。別の実施形態では、ＦＸＩおよび
／またはＦＸＩａに結合し、表１に記載されている抗体との結合についてさらに競合する
単離抗体またはその抗原結合性断片は、表１の前記抗体が結合するエピトープの全てに結
合する。

【0021】

一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、活性のＦＸＩ（ＦＸＩａ）に
結合するが、活性のＦＸＩ（ＦＸＩａ）触媒ドメインに結合すると、ＦＸＩａに、そのコ
ンフォメーションを、不活性コンフォメーションへと変化させる。別の実施形態では、前
記単離抗体またはその抗原結合性断片は、前記不活性コンフォメーションのＮ末端の４つ
の残基、ループ１４５、１８８、および２２０が、活性コンフォメーションと比較して、
シフトし、かつ／または不規則的になる変化をさらに誘導する。

【0022】

一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩ（例えば、ヒトＦＸＩ
）に結合するが、ＦＸＩに結合すると、ＦＸＩ触媒ドメインが、ループ１４５、１８８、
および２２０がＦＸＩａ触媒ドメインの構造内と同様に規則的である活性コンフォメーシ
ョンを取ることを防止する。

【0023】

一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩに結合するが、ＦＸＩ
に結合すると、ＦＸＩ触媒ドメインが、Ｎ末端の４つの残基、ループ１４５、１８８、お
よび２２０がＦＸＩａ触媒ドメインの構造内と同様に規則的である活性コンフォメーショ
ンを取ることを防止する。

【0024】

一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩに結合するが、ＦＸＩ
に結合すると、チモーゲン構造内のコンフォメーション変化を誘導し、ＦＸＩａに結合す
るときに観察される阻害性ＦＸＩコンフォメーションと緊密に関連する阻害性ＦＸＩコン
フォメーションをさらにもたらすことにより、ＦＸＩ触媒ドメインが、活性コンフォメー
ションを取ることを防止する。

【0025】

一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩ
ａに結合するが、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合し、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩ
ａの触媒ドメインと、抗体：抗原複合体を形成すると、ループ１４５、１８８、および２
２０の、活性の第ＸＩ因子（ＦＸＩａ）の触媒ドメインの、複合体化していない構造と比
較した場合のシフトおよび／または配向性の喪失を引き起こす。

【0026】

一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩ
ａに結合するが、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合し、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩ
ａの触媒ドメインと抗体：抗原複合体を形成すると、Ｎ末端の４つの残基、ループ１４５
、１８８、および２２０の、活性の第ＸＩ因子（ＦＸＩａ）の触媒ドメインの、複合体化
していない構造と比較した場合のシフトおよび／または配向性の喪失を引き起こす。

【0027】

一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、活性のＦＸＩ（ＦＸＩａ）に
結合し、ＦＸＩ（ＦＸＩａ）触媒ドメインに、そのコンフォメーションを、ループ１４５
、１８８、および２２０が活性コンフォメーションと比較してシフトし、かつ／または配
向性が喪失している不活性コンフォメーションへと変化させる。

【0028】

一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩに結合するが、チモー
ゲン構造内のコンフォメーション変化を誘導し、これにより、ＦＸＩａに結合するときに
観察される阻害性ＦＸＩコンフォメーションと緊密に関連する阻害性ＦＸＩコンフォメー
ションをもたらすことにより、触媒ドメインが、活性コンフォメーションを取ることを防
止する。

【0029】

本発明はまた、表１に記載されている抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１）と同じエピトー
プに結合する単離抗体またはその抗原結合性断片にもさらに関する。

【0030】

本明細書で記載される単離抗体および抗原結合性断片の結合アフィニティーは、溶解平
衡滴定（ＳＥＴ）により決定することができる。当技術分野では、ＳＥＴ法が知られてお
り、以下でさらに詳細に記載される。代替的に、本明細書で記載される単離抗体または断
片の結合アフィニティーは、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）アッセイにおける、表面プ
ラズモン共鳴測定により決定することができる。当技術分野では、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標
）反応速度アッセイのための方法が知られており、以下でさらに詳細に記載される。

【0031】

本明細書で記載される、単離抗ＦＸＩ抗体および／または単離ＦＸＩａ抗体ならびに抗
原結合性断片を使用して、第ＩＸ因子（また、ＦＩＸとしても公知である）、第Ｘ因子（
ＦＸ）、および／もしくはトロンビンの、直接的もしくは間接的な活性化、ならびに／ま
たは血小板受容体への結合を阻害することができ、これにより、内因系凝固経路および／
または共通凝固経路の活性化を防止することができる。

【0032】

本明細書で記載される、単離抗ＦＸＩ抗体および／または単離ＦＸＩａ抗体ならびに抗
原結合性断片を使用して、第ＩＸ因子（また、ＦＩＸとしても公知である）、第Ｘ因子（
ＦＸ）、および／またはトロンビンの、直接的または間接的な活性化を、１００ｎＭ以下
、５０ｎＭ以下、３５ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、または５．２ｎＭ以下の
ＩＣ_５０で阻害することができる。より具体的には、本明細書で記載される単離抗体また
はその抗原結合性断片は、第ＩＸ因子（また、ＦＩＸとしても公知である）、第Ｘ因子（
ＦＸ）、および／またはトロンビンの、直接的または間接的な活性化を、１００ｎＭ以下
、５０ｎＭ以下、３５ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、または５．２ｎＭ以下の
ＩＣ_５０で阻害しうる。より具体的には、本明細書で記載される単離抗体またはその抗原
結合性断片は、第ＩＸ因子（また、ＦＩＸとしても公知である）、第Ｘ因子（ＦＸ）、お
よび／またはトロンビンの、直接的または間接的な活性化を、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ
以下、３５ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、または１８ｎＭ以下のＩＣ_５０で阻
害しうる。より具体的には、本明細書で記載される単離抗体またはその抗原結合性断片は
、第ＩＸ因子（また、ＦＩＸとしても公知である）、第Ｘ因子（ＦＸ）、および／または
トロンビンの、直接的または間接的な活性化を、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、３５ｎ
Ｍ以下、２５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、または５ｎＭ以下のＩＣ_５０で阻害しうる。具体
的な実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体またはその抗原結合性
断片は、その天然の基質であるＦＩＸの、ＦＸＩａを媒介する活性化を、２ｎＭ以下の、
例えば、１．８ｎＭのＩＣ_５０で阻害する。

【0033】

単離抗ＦＸＩ抗体および／もしくは単離抗ＦＸＩａ抗体、またはそれらの抗原結合性断
片を使用して、例えば、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａを媒介するＦＩＸの活性化の阻害
を介して、内因系凝固経路および／または共通凝固経路を阻害する（例えば、これらの活
性化を遮断する）ことができる。したがって、単離抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、またはそれ
らの抗原結合性断片を使用して、凝血または凝血の拡大を防止することができる。単離抗
体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩを媒介するＦＩＸの活性化を阻害することにより
、深部静脈血栓症などの凝固障害および脳卒中（例えば、虚血性脳卒中）を防止、処置、
または改善するのに使用することができる。

【0034】

具体的な実施形態では、抗ＦＸＩ抗体および／もしくは抗ＦＸＩａ抗体、またはそれら
の抗原結合性断片は、例えば、実施例節で記載されるａＰＴＴアッセイにより決定される
通り、濃度依存的に、ヒト血漿の凝血時間（例えば、血餅が形成し始めるまでの時間）を
延長することが可能である。具体的な実施形態では、凝血時間（ａＰＴＴ）は、ａＰＴＴ
アッセイにより決定される通り、１０ｎＭ～２０ｎＭの範囲、例えば、約１４ｎＭまたは
１５ｎＭの全抗ＦＸＩ抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１）濃度で、ベースラインと比較して
倍増した。特定の実施形態では、抗ＦＸＩ抗体および／もしくは抗ＦＸＩａ抗体、または
それらの抗原結合性断片は、例えば、実施例節で記載されるａＰＴＴアッセイにより決定
される通り、５ｎＭ～２０ｎＭの範囲、例えば、約１３ｎＭのＩＣ５０で、濃度依存的に
、ヒト血漿の凝血時間を延長することが可能である。

【0035】

具体的な実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ抗体および／もしくは抗ＦＸＩ
ａ抗体、またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、実施例節で記載されるａＰＴＴアッ
セイにより決定される通り、例えば、濃度依存的に、少なくとも１．１倍、１．２倍、１
．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、または２倍、
ヒト血漿の凝血時間（例えば、血餅が形成し始めるまでの時間）を延長することが可能で
ある。具体的な実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ抗体および／もしくは抗Ｆ
ＸＩａ抗体、またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、実施例節で記載されるａＰＴＴ
アッセイにより決定される通り、少なくとも１．４倍、１．５倍、１．６倍、または１．
７倍、ヒト血漿の凝血時間（例えば、血餅が形成し始めるまでの時間）を延長することが
可能である。

【0036】

具体的な態様では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ抗体および／もしくは抗ＦＸＩａ抗
体、またはそれらの抗原結合性断片は、非常に低濃度の組織因子（ＴＦ）の存在下におい
て、ＦＸＩａ阻害の、トロンビン→ＦＸＩａのフィードフォワードループに対する効果を
測定する、ヒト血漿中のトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）において、トロンビンの量を
濃度依存的に低減することが可能である。特定の実施形態では、本明細書で記載される抗
ＦＸＩ抗体および／もしくは抗ＦＸＩａ抗体、またはそれらの抗原結合性断片は、ヒト血
漿中のトロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）において、１０ｎＭ～３０ｎＭの範囲、例えば
、約２０ｎＭまたは２４ｎＭのＩＣ_５０値および約１５９ｎＭの残留トロンビン濃度で、
トロンビンの量を低減することが可能である。

【0037】

本明細書の具体的な態様では、ヒトのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ドメインに
特異的に結合し、カニクイザルにおける全抗体の終末相消失半減期（ｔ_１／２）を、約１
４～１５日間とする、抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＨＣＤＲ
１～３およびＬＣＤＲ１～３を含む抗体など、表１における抗体）、またはその抗原結合
性断片が提示される。具体的な実施形態では、このような抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体は、約
６１～６６％の絶対皮下（ｓ．ｃ．）バイオアベイラビリティを呈する。

【0038】

具体的な実施形態では、ヒトのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する、本
明細書で提示される抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＮＯＶ１４０１など、表１
に記載されている抗体）は、以下の特徴：
（ｉ）例えば、それぞれ、約１～２ｐＭおよび４～５ｐＭの見かけのＫ_Ｄで、ヒトのＦ
ＸＩおよびＦＸＩａの触媒ドメイン（ＣＤ）に特異的に結合すること；
（ｉｉ）活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイにより査定された凝
血時間を延長すること；
（ｉｉｉ）活性化型第ＸＩI因子（ＦＸＩＩａ）およびトロンビンのそれぞれによるＦ
ＸＩ活性化の阻害を介して、ヒト血漿中のトロンビン生成を阻害すること；
（ｉｖ）ヒトＦＸＩで再構成されたＦＸＩ－／－マウスにおいて、抗血栓活性および抗
凝固活性を示すこと；
（ｖ）例えば、カニクイザルにおいて、遊離ＦＸＩ（ＦＸＩ_ｆ）レベルを低減するか、
または低減を延長すること；
（ｖｉ）例えば、カニクイザルにおける全抗体の終末相消失半減期を、約１４～１５日
間とすること；
（ｖｉｉ）ヒトおよびサルのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａには特異的に結合するが、
マウスまたはラットのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａには特異的に結合しないこと；なら
びに
（ｖｉｉｉ）ヒトＦＸＩの以下の残基（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔによる番号付け）：Ｐｒｏ
４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔ
ｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２～Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１
～Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４～Ｇｌｕ５
９７、およびＡｒｇ６０２～Ａｒｇ６０４のうちの１つまたは複数（例えば、２つ、３つ
、４つ、５つ、６つ、もしくは７つ、またはこれを超える）、または一部、または全てに
接触すること
のうちの１つまたは複数（例えば、２つ、または３つ、または４つ、または５つ、または
６つ、または７つ）、または全てを呈する。

【0039】

本明細書で記載される単離抗ＦＸＩ抗体および／もしくは単離ＦＸＩａ抗体、またはそ
の抗原結合性断片は、モノクローナル抗体、ヒトまたはヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗
体、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、またはｓｃＦｖ断片、および／または
ＩｇＧのアイソタイプ（例えば、ヒトＩｇＧ１などのＩｇＧ１）でありうる。具体的な実
施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ抗体および／または抗ＦＸＩａ抗体は、組換
えヒト抗体である。具体的な実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ抗体および／
または抗ＦＸＩａ抗体は、ヒトＩｇＧ１／ラムダ（λ）抗体である。具体的な実施形態で
は、本明細書で記載される抗ＦＸＩ抗体および／または抗ＦＸＩａ抗体は、エフェクター
機能（例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ）の可能性を低減するように操作されたＦ
ｃドメイン、例えば、Ｄ２６５Ａ置換および／またはＰ３２９Ａ置換を含むヒトＦｃドメ
インを含むヒトＩｇＧ１／ラムダ（λ）抗体である。

【0040】

本明細書で記載される単離抗ＦＸＩ抗体および／もしくは単離ＦＸＩａ抗体またはそれ
らの抗原結合性断片はまた、アミノ酸が、ヒトＶＨ生殖細胞系列配列またはヒトＶＬ生殖
細胞系列配列のそれぞれに由来する抗体フレームワークへと置換されたフレームワークも
含みうる。

【0041】

本発明の別の態様は、表１に記載されているＦａｂの完全重鎖および軽鎖配列を有する
単離抗体またはその抗原結合性断片を含む。より具体的には、単離抗体またはその抗原結
合性断片は、ＮＯＶ１０９０およびＮＯＶ１４０１の重鎖および軽鎖配列を有しうる。

【0042】

本発明のさらなる態様は、表１に記載されているＦａｂの重鎖および軽鎖可変ドメイン
配列を有する単離抗体またはその抗原結合性断片を含む。より具体的には、単離抗体また
はその抗原結合性断片は、ＮＯＶ１０９０およびＮＯＶ１４０１の重鎖および軽鎖可変ド
メイン配列を有しうる。

【0043】

本発明のさらなる態様は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、ＩＭＧＴ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ
ＣＤＲ、または組合せＣＤＲなど、表１に記載されている抗体の、重鎖可変ドメインＣＤ
Ｒ（すなわち、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）配列と、軽鎖可変ドメイン
ＣＤＲ（すなわち、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）配列とを有する、単離
抗体またはその抗原結合性断片を含む。より具体的には、単離抗体またはその抗原結合性
断片は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、ＩＭＧＴ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、または組合
せＣＤＲなど、例えば、表１に提示された、ＮＯＶ１０９０およびＮＯＶ１４０１の、Ｈ
ＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、お
よびＬＣＤＲ３配列を有しうる。

【0044】

本発明はまた、配列番号３および２３からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１、配列番
号４および２４からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号５および２５
からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含み、ヒトＦＸＩおよび／もしくはヒトＦＸＩ
ａに結合する単離抗体またはその抗原結合性断片にも関する。別の態様では、このような
単離抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１３および３３からなる群から選択され
る軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１４および３４からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２、なら
びに配列番号１５および３５からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３をさらに含む。

【0045】

本発明はまた、配列番号１３および３３からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１、配列
番号１４および３４からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号１５およ
び３５からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３を含み、ヒトＦＸＩおよび／もしくはヒト
ＦＸＩａに結合する単離抗体またはその抗原結合性断片にも関する。

【0046】

本発明はまた、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合する単離抗体またはその抗原結
合性断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、
ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有し、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、
配列番号３、４、および５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列番号１
３、１４、および１５を含むか、またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、
配列番号２３、２４、および２５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、配列
番号３３、３４、および３５を含む単離抗体またはその抗原結合性断片にも関する。

【0047】

本発明はまた、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合する単離抗体またはその抗原結合
性断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、Ｌ
ＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有し、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、そ
れぞれ、配列番号４３、４４、および４５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３
が、それぞれ、配列番号４７、３７、および１５を含む単離抗体またはその抗原結合性断
片にも関する。

【0048】

本発明はまた、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合する単離抗体またはその抗原結合
性断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、Ｌ
ＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有し、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３が、そ
れぞれ、配列番号４６、４、および５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３が、
それぞれ、配列番号３３、１４、および１５を含む単離抗体またはその抗原結合性断片に
も関する。

【0049】

本発明はまた、Ｃｈｏｔｈｉａにより規定される、配列番号９および２９の可変重鎖の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９および３９の可変軽
鎖のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を有する、抗体または抗原結合性断片にも関す
る。本発明の別の態様では、抗体または抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔにより規定される
、配列番号９および２９の重鎖可変ドメイン配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣ
ＤＲ３、ならびに配列番号１９および３９の軽鎖可変ドメイン配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤ
Ｒ２、およびＬＣＤＲ３を有しうる。

【0050】

本発明はまた、ＩＭＧＴにより規定される、配列番号９および２９の可変重鎖のＨＣＤ
Ｒ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９および３９の可変軽鎖のＬ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合性断片にも関する
。本発明の別の態様では、抗体または抗原結合性断片は、Ｃｏｍｂｉｎｅｄにより規定さ
れる、配列番号９および２９の重鎖可変ドメイン配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、および
ＨＣＤＲ３、ならびに配列番号１９および３９の軽鎖可変ドメイン配列のＬＣＤＲ１、Ｌ
ＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有しうる。

【0051】

本発明の一態様では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９および２９か
らなる群から選択される重鎖可変ドメイン配列を含む。単離抗体または抗原結合性断片は
、軽鎖可変ドメイン配列をさらに含むことが可能であり、この場合、重鎖可変ドメインと
軽鎖可変ドメインとは、組み合わさって、ＦＸＩａに対する抗原結合性部位を形成する。
特に、軽鎖可変ドメイン配列は、配列番号１９および３９から選択することができ、この
場合、前記単離抗体またはその抗原結合性断片は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結
合する。

【0052】

本発明はまた、配列番号１９および３９からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン配
列を含み、ヒトＦＸＩおよび／もしくはヒトＦＸＩａに結合する単離抗体またはその抗原
結合性断片にも関する。単離抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変ドメイン配列をさら
に含むことが可能であり、この場合、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとは、組み合
わさって、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに対する抗原結合性部位を形成する。

【0053】

特に、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合する単離抗体またはその抗原結合性断片
は、配列番号９および１９；または１９および３９の配列をそれぞれ含む、重鎖および軽
鎖可変ドメインを有しうる。

【0054】

本発明はさらに、配列番号９および２９からなる群から選択される配列と少なくとも８
０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重
鎖可変ドメインを含む単離抗体またはその抗原結合性断片にも関し、この場合、前記抗体
は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合する。一態様では、単離抗体またはその抗原
結合性断片はまた、配列番号１９および３９からなる群から選択される配列と少なくとも
８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する
軽鎖可変ドメインも含む。本発明のさらなる態様では、単離抗体または抗原結合性断片は
、Ｋａｂａｔにより規定され、表１に記載されている、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤ
Ｒ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。具体的な実施形態では、単
離抗体または抗原結合性断片は、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、または組合せにより規定さ
れ、表１に記載されている、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤ
Ｒ２、およびＬＣＤＲ３を有する。

【0055】

本発明はまた、配列番号１９および３９からなる群から選択される配列と少なくとも８
０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽
鎖可変ドメインを有する単離抗体またはその抗原結合性断片にも関し、この場合、前記抗
体は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合する。

【0056】

本発明の別の態様では、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合する単離抗体またはそ
の抗原結合性断片は、配列番号１１または３１の配列を含む重鎖を有しうる。単離抗体は
また、重鎖と組み合わさって、ヒトＦＸＩおよび／もしくはヒトＦＸＩａに対する抗原結
合性部位を形成しうる軽鎖も含みうる。特に、軽鎖は、配列番号２１または４１を含む配
列を有しうる。特に、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合する単離抗体またはその抗
原結合性断片は、配列番号１１および２１；または３１および４１のそれぞれの配列を含
む重鎖および軽鎖を有しうる。

【0057】

本発明はなおさらに、配列番号１１または３１からなる群から選択される配列と少なく
とも９０％の配列同一性を有する重鎖を含む単離抗体またはその抗原結合性断片にも関し
、この場合、前記抗体は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合する。一態様では、単
離抗体またはその抗原結合性断片はまた、配列番号２１または４１からなる群から選択さ
れる配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％
の配列同一性を有する軽鎖も含む。

【0058】

本発明はなおさらに、配列番号２１または４１からなる群から選択される配列と少なく
とも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有
する軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合性断片にも関し、この場合、前記抗体は、Ｆ
ＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合する。

【0059】

本発明はまた、本明細書で記載される単離抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物
にも関し、同様に、薬学的に許容される担体と組み合わせた抗体組成物にも関する。とり
わけ、本発明は、例えば、抗体のＮＯＶ１０９０およびＮＯＶ１４０１など、表１の抗体
またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物をさらに含む。本発明はまた、表１の単離抗
体またはそれらの抗原結合性断片のうちの２つ以上の組合せを含む医薬組成物にも関する
。

【0060】

本発明はまた、配列番号９および２９から選択される配列を有する可変重鎖をコードす
る単離核酸配列にも関する。特に、核酸は、配列番号１０および３０からなる群から選択
される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９
％の配列同一性を有する。本発明のさらなる態様では、配列は、配列番号１０または３０
である。

【0061】

本発明はまた、配列番号２０および４０から選択される配列を有する可変軽鎖をコード
する単離核酸配列にも関する。特に、核酸は、配列番号２０および４０からなる群から選
択される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９
９％の配列同一性を有する。本発明のさらなる態様では、配列は、配列番号２０および４
０である。

【0062】

本発明はまた、配列番号２０および４０からなる群から選択される配列と少なくとも９
０％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする配列を含む
単離核酸にも関する。

【0063】

本発明はまた、本明細書で記載される核酸分子のうちの１つまたは複数を含むベクター
にも関する。

【0064】

本発明はまた、上記で記載した抗体の重鎖をコードする組換えＤＮＡ配列と、上記で記
載した抗体の軽鎖をコードする第２の組換えＤＮＡ配列とを含む単離宿主細胞にも関し、
この場合、前記ＤＮＡ配列は、プロモーターに作動可能に連結され、宿主細胞内で発現す
ることが可能である。抗体は、ヒトモノクローナル抗体でありうることが企図される。ま
た、宿主細胞は、非ヒト哺乳動物細胞であることも企図される。

【0065】

本発明はまた、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａの発現、ならびに／または内因系凝固
経路および／もしくは共通凝固経路の活性化を低減する方法であって、細胞を、有効量の
、本明細書で記載される単離抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物と接触させるス
テップを含む方法にも関する。

【0066】

本発明はまた、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａの、ＦＩＸへの結合を阻害する方法で
あって、細胞を、有効量の、本明細書で記載される単離抗体またはその抗原結合性断片を
含む組成物と接触させるステップを含む、方法にも関する。

【0067】

細胞は、ヒト細胞であることが企図される。細胞は、対象中にあることがさらに企図さ
れる。一実施形態では、細胞は、血小板であることが企図される。対象は、ヒトであるこ
とがなおさらに企図される。

【0068】

本発明はまた、対象における血栓塞栓性疾患を処置、改善、または防止する方法であっ
て、対象へと、有効量の、本明細書で記載される抗体またはその抗原結合性断片を含む組
成物を、投与するステップを含む方法にも関する。一態様では、血栓塞栓性疾患は、血栓
性障害（例えば、血栓症、血栓性脳卒中、心房細動、心房細動における脳卒中の防止（Ｓ
ＰＡＦ）、深部静脈血栓症、静脈血栓塞栓症、および肺塞栓症）である。対象は、ヒトで
あることも企図される。

【0069】

前出の単離抗体またはそれらの抗原結合性断片のうちのいずれも、モノクローナル抗体
またはその抗原結合性断片でありうる。

【0070】

本開示の非限定的な実施形態を、以下の態様において記載する：
１．ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ドメイン内に結合する単離抗ＦＸＩ抗体および
／もしくは単離抗ＦＸＩａ抗体またはそれらの断片。
２．抗ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの１つまたは複数のエピトープに結合する単離抗体
またはその断片であって、エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、
Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３
７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ
５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌ
ｙｓ５２７、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５
、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のう
ちの２つ以上のアミノ酸残基を含む単離抗体またはその断片。
３．エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ
４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌ
ｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２
、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５
４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌ
ｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの４つ以上のアミノ
酸残基を含む、態様２の単離抗体または断片。
４．エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ
４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌ
ｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２
、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５
４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌ
ｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの６つ以上のアミノ
酸残基を含む、態様２の単離抗体または断片。
５．エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ
４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌ
ｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２
、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５
４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌ
ｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの８つ以上のアミノ
酸残基を含む、態様２の単離抗体または断片。
６．エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ
４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌ
ｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２
、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５
４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌ
ｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４の残基を含む、態様２の単
離抗体または断片。
７．エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｙｓ５２７のアミノ酸残基と、Ｌｅ
ｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、
Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７
６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ
５２６、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇ
ｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの
１つまたは複数のアミノ酸残基とを含む、態様２の単離抗体または断片。
８．エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｙｓ５２７のアミノ酸残基と、Ｌｅ
ｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、
Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７
６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ
５２６、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇ
ｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの
４つ以上のアミノ酸残基とを含む、態様２の単離抗体または断片。
９．エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｙｓ５２７のアミノ酸残基と、Ｌｅ
ｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、
Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７
６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ
５２６、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇ
ｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの
６つ以上のアミノ酸残基とを含む、態様２の単離抗体または断片。
１０．ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ドメイン内に結合する単離抗ＦＸＩ抗体およ
び／もしくは単離抗ＦＸＩａ抗体またはそれらの断片であって、ＦＸＩおよび／またはＦ
ＸＩａの、第ＩＸ因子、第ＸＩＩａ因子、およびトロンビンのうちの１つまたは複数への
結合を遮断する単離抗体または断片。
１１．ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの、第ＩＸ因子、第ＸＩＩａ因子、またはトロンビ
ン、および凝固経路の他の成分のうちの１つまたは複数への結合を遮断する、態様１０の
単離抗体または断片。
１２．ＦＩＸ、ＦＸＩ、およびＦＸＩａのうちの１つまたは複数の、血小板受容体への結
合を遮断する、態様１の単離抗体または断片。
１３．内因系凝固経路または共通凝固経路の活性化を防止する、態様１の単離抗体または
断片。
１４．ヒトＦＸＩタンパク質および／またはヒトＦＸＩａタンパク質に、ＢＩＡＣＯＲＥ
（商標）アッセイにより測定される３４ｎＭ以下の、または溶液中平衡滴定アッセイ（Ｓ
ＥＴ）により測定される４ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する単離抗体またはその断片。
１５．表１に列挙されたＣＤＲのうちの少なくとも１つに対して、少なくとも９０％の同
一性を有する、少なくとも１つの相補性決定領域を含む、態様１の単離抗体または断片。
１６．表１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、態様１の単離抗体または断片
。
１７．態様１の抗体または断片の単離変異体であって、前記抗体または断片が、表１のＣ
ＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、変異体が、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤ
Ｒ３のうちの１つにおいて、少なくとも１～４カ所のアミノ酸変化を有する、単離変異体
。
１８．配列番号５および２５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含む、態様１の単
離抗体または断片。
２０．配列番号９および２９からなる群から選択されるＶＨ、またはそれに対して９０％
の同一性を有するアミノ酸配列；ならびに配列番号１９および３９からなる群から選択さ
れるＶＬ、またはそれに対して９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１の単
離抗体または断片。
２１．配列番号９および２９からなる群から選択されるＶＨ、またはそれに対して９５％
の同一性を有するアミノ酸配列；ならびに配列番号１９および３９からなる群から選択さ
れるＶＬ、またはそれに対して９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１の単
離抗体または断片。
２２．配列番号９および２９からなる群から選択されるＶＨ、またはそれに対して９７％
の同一性を有するアミノ酸配列；ならびに配列番号１９および３９からなる群から選択さ
れるＶＬ、またはそれに対して９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１の単
離抗体または断片。
２３．配列番号９および２９からなる群から選択される可変重鎖配列を含む、態様１の単
離抗体または断片。
２４．配列番号１９および３９からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む、態様１の
単離抗体または断片。
２５．配列番号９および２９からなる群から選択される可変重鎖；ならびに配列番号１９
および３９からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む、態様１の単離抗体または断片
。
２６．配列番号９の可変重鎖および配列番号１９の可変軽鎖配列を含む抗体または断片、
ならびに配列番号２９の可変重鎖および配列番号３９の可変軽鎖配列を含む抗体または断
片からなる群から選択される、態様１の単離抗体または断片。
２７．配列番号４６からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４から
なる群から選択されるＣＤＲ２；５からなる群から選択されるＣＤＲ３；配列番号３３か
らなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１４からなる群から選択され
るＣＤＲ２；および配列番号１５からなる群から選択されるＣＤＲ３を含む、態様１の単
離抗体または断片。
２８．配列番号３および２３からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番
号４および２４からなる群から選択されるＣＤＲ２；５および２５からなる群から選択さ
れるＣＤＲ３；配列番号１３および３３からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲ
１；配列番号１４および３４からなる群から選択されるＣＤＲ２；ならびに配列番号１５
および３５からなる群から選択されるＣＤＲ３を含む、態様１の単離抗体または断片。
２９．配列番号６および２６からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番
号７および２７からなる群から選択されるＣＤＲ２；８および２８からなる群から選択さ
れるＣＤＲ３；配列番号１６および３６からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲ
１；配列番号１７および３７からなる群から選択されるＣＤＲ２；ならびに配列番号１８
および３８からなる群から選択されるＣＤＲ３を含む、態様１の単離抗体または断片。
３０．配列番号３の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配
列番号５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号
１４の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１５の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む、
態様１の単離抗体または断片。
３１．配列番号２３の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号２４の重鎖可変領域のＣＤＲ２
；配列番号２５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号３３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配
列番号３４の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号３５の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を
含む、態様１の単離抗体または断片。
３２．配列番号６の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号７の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配
列番号８の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号
１７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１８の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む、
態様１の単離抗体または断片。
３３．配列番号２６の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号２７の重鎖可変領域のＣＤＲ２
；配列番号２８の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号３６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配
列番号３７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号３８の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を
含む、態様１の単離抗体または断片。
３４．上記態様の一つの抗体またはその断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組
成物。
３５．前記態様のいずれかに記載の単離抗体または断片と同じエピトープに結合する、態
様１の単離抗体または断片。
３６．ヒトＦＸＩタンパク質および／またはヒトＦＸＩａタンパク質への結合について、
前記態様のいずれかに記載の単離抗体または断片と競合する、態様１の単離抗体または断
片。
３７．ＮＯＶ１０９０およびＮＯＶ１４０１からなる群から選択される、態様１の単離抗
体または断片。
３８．血栓塞栓性障害を処置する方法であって、有効量の、前記態様のいずれかに記載の
抗体または断片を含む医薬組成物を、血栓塞栓性障害に罹患している対象へと投与するス
テップを含む方法。
３９．対象が、心房細動と関連する虚血性脳卒中および深部静脈血栓症のうちの１つまた
は複数に罹患している、態様３８の方法。
４０．対象が、心房細動と関連する虚血性脳卒中に罹患している、態様３８の方法。
４１．血栓塞栓性障害を処置する方法であって、有効量の、前記態様のいずれかに記載の
抗体または断片を含む医薬組成物を、スタチン療法と組み合わせて、血栓塞栓性障害に罹
患している対象へと投与するステップを含む方法。
４２．前記態様のいずれかに記載の抗体を含む医薬。
４３．前記態様のいずれかに記載の抗体のうちの１つまたは複数をコードする核酸。
４４．態様４３に記載の核酸を含むベクター。
４５．態様４４に記載のベクターを含む宿主細胞。
４６．活性のＦＸＩ（ＦＸＩａ）触媒ドメインに結合すると、ＦＸＩａに、そのコンフォ
メーションを、Ｎ末端の４つの残基、ループ１４５、１８８、および２２０が活性コンフ
ォメーションと比較してシフトし、かつ／または不規則的である不活性コンフォメーショ
ンへと変化させる、態様１の単離抗体または断片。
４７．ＦＸＩに結合すると、ＦＸＩ触媒ドメインが、ループ１４５、１８８、および２２
０がＦＸＩａ触媒ドメインの構造内と同様に規則的である活性コンフォメーションを取る
ことを防止する、態様１の単離抗体または断片。
４８．ＦＸＩに結合すると、ＦＸＩ触媒ドメインが、Ｎ末端の４つの残基、ループ１４５
、１８８、および２２０がＦＸＩａ触媒ドメインの構造内と同様に規則的である活性コン
フォメーションを取ることを防止する、態様１の単離抗体または断片。
４９．ＦＸＩに結合すると、チモーゲン構造内のコンフォメーション変化を誘導し、ＦＸ
Ｉａに結合するときに観察される阻害性ＦＸＩコンフォメーションと緊密に関連する阻害
性ＦＸＩコンフォメーションをさらにもたらすことにより、ＦＸＩ触媒ドメインが、活性
コンフォメーションを取ることを防止する、態様１の単離抗体または断片。
５０．ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合し、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ド
メインと、抗体：抗原複合体を形成すると、ループ１４５、１８８、および２２０の、活
性の第ＸＩ因子（ＦＸＩａ）の触媒ドメインの、複合体化していない構造と比較した場合
のシフトおよび／または配向性の喪失を引き起こす、態様１の単離抗体または断片。
５１．ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合し、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ド
メインと、抗体：抗原複合体を形成すると、Ｎ末端の４つの残基、ループ１４５、１８８
、および２２０の、活性の第ＸＩ因子（ＦＸＩａ）の触媒ドメインの、複合体化していな
い構造と比較した場合のシフトおよび／または配向性の喪失を引き起こす、態様１の単離
抗体または断片。
５２．活性のＦＸＩ（ＦＸＩａ）に結合し、ＦＸＩ（ＦＸＩａ）触媒ドメインに、そのコ
ンフォメーションを、ループ１４５、１８８、および２２０が活性コンフォメーションと
比較してシフトし、かつ／または配向性が喪失している不活性コンフォメーションへと変
化させる、態様１の単離抗体または断片。

【0071】

定義
別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本
発明が関する技術分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。

【0072】

「ＦＸＩタンパク質」、「ＦＸＩ抗原」、および「ＦＸＩ」という用語は、互換的に使
用され、異なる種における第ＸＩ因子タンパク質を指す。第ＸＩ因子とは、限定的なタン
パク質分解により、活性のセリンプロテアーゼへと転換されると、血液凝固の内因系経路
に参与するチモーゲンとして、ヒト血漿中に、２５～３０ｎＭの濃度で存在する糖タンパ
ク質である、哺乳動物の第ＸＩ血漿凝固因子である。

【0073】

「ＦＸＩａタンパク質」、「ＦＸＩａ抗原」、および「ＦＸＩａ」という用語は、互換
的に使用され、異なる種における活性化型ＦＸＩタンパク質を指す。チモーゲンである第
ＸＩ因子は、血液凝固の接触相を介して、または血小板表面上の、トロンビンを媒介する
活性化を介して、その活性形態である第Ｘｌａ凝固因子（ＦＸＩａ）へと転換される。第
ＸＩ因子のこの活性化時に、内部のペプチド結合は、２つの鎖の各々に切断され、ジスル
フィド結合により共に保持された、２つの重鎖および２つの軽鎖から構成されるセリンプ
ロテアーゼである、活性化型第Ｘｌａ因子を結果としてもたらす。このセリンプロテアー
ゼであるＦＸＩａは、第ＩＸ凝固因子を、ＩＸａへと転換し、続いて、ＩＸａは、第Ｘ凝
固因子を活性化させる（Ｘａ）。次いで、Ｘａは、第ｌｌ凝固因子／トロンビンの活性化
を媒介しうる。例えば、ヒトＦＸＩは、表１（配列番号１）に示される配列を有し、先行
の報告および文献（Mandle RJ Jr, et al. (1979) Blood;54(4):850；ＮＣＢＩ基準配列
：ＡＡＡ５１９８５）において記載されている。

【0074】

本発明の文脈では、「ＦＸＩ」および「ＦＸＩａ」（など）という用語は、天然のＦＸ
Ｉタンパク質およびＦＸＩａタンパク質のそれぞれの突然変異体および変異体であって、
上述の報告において記載されている、天然の一次構造（アミノ酸配列）のアミノ酸配列と
実質的に同じアミノ酸配列を有する突然変異体および変異体を含む。

【0075】

「触媒ドメイン」、「セリンプロテアーゼ触媒ドメイン」という用語、および本明細書
で使用される同様な用語は、循環中の成熟タンパク質のＮ末端のＧｌｕ１から数えた、ア
ミノ酸Ｉｌｅ３７０～Ｖａｌ６０７を意味する。これはまた、ＦＸＩのＣ末端における残
基３８８～６２５としても記載することができる。本明細書で使用される「活性部位」と
いう用語は、アミノ酸であるＨｉｓ４１３、Ａｓｐ４６２、およびＳｅ５５７を含む、触
媒性三残基を意味する（Bane and Gailani (2014) Drug Disc. 19(9)）。

【0076】

数値ｘに関する「約」という用語は、例えば、ｘ±１０％を意味する。

【0077】

本明細書で使用される「抗体」という用語は、全抗体および任意の抗原結合性断片（す
なわち、「抗原結合性部分」）またはそれらの単鎖体を意味する。全抗体は、ジスルフィ
ド結合により相互接続される少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む
糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＶＨと略記する）および
重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメインであるＣＨ１、ＣＨ２、およびＣ
Ｈ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、ＶＬと略記する）および軽鎖定常
領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメインであるＣＬを含む。ＶＨ領域およびＶＬ領
域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称するより保存的な領域を散在させた、相補性決定
領域（ＣＤＲ）と称する超可変性の領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよび
各ＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと、以下の順序で配置される３つのＣＤＲお
よび４つのＦＲ：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４から
なる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合性ドメインを含有する。抗
体の定常領域は、免疫グロブリンの、宿主組織または免疫系の多様な細胞（例えば、エフ
ェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む因子への結合を媒介し
うる。

【0078】

本明細書で使用される、抗体の「抗原結合性部分」または「抗原結合性断片」という用
語は、所与の抗原（例えば、ＸＩａ因子（ＦＸＩａ））に特異的に結合する能力を保持す
る、インタクトな抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合性機能は、インタ
クトな抗体の断片により果たされうる。抗体の抗原結合性部分または抗原結合性断片とい
う用語内に包含される結合性断片の例は、Ｆａｂ断片、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、Ｃ
Ｌドメイン、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片；ヒンジ領域においてジスルフィド
架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ）_２断片；ＶＨド
メインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一のアームのＶＬドメインおよ
びＶＨドメインからなるＦｖ断片；ＶＨドメインまたはＶＬドメインからなる単一ドメイ
ン抗体（ｄＡｂ）断片（Wardら、1989 Nature 341:544～546）；ならびに単離相補性決定
領域（ＣＤＲ）を含む。

【0079】

さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬドメインおよびＶＨドメインは、個別の
遺伝子によりコードされるが、組換え法を使用して、それらを単一のタンパク質鎖として
作製することを可能とする人工のペプチドリンカーにより付着することができ、この場合
、ＶＬ領域およびＶＨ領域は、対合して一価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知であ
り、例えば、Birdら、1988 Science 242:423～426；およびHustonら、1988 Proc. Natl.
Acad. Sci. 85:5879～5883を参照されたい）を形成する。このような単鎖抗体は、抗体の
１つまたは複数の抗原結合性部分または抗原結合性断片を含む。これらの抗体断片は、当
業者に公知の従来の技法を使用して得られ、断片も、インタクトな抗体と同じ形で有用性
についてスクリーニングされる。

【0080】

抗原結合性断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボデ
ィ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ、およびｂｉｓ－ｓｃＦｖ
（例えば、HollingerおよびHudson、2005、Nature Biotechnology、23、9、1126～1136を
参照されたい）へと組み込むこともできる。抗体の抗原結合性部分は、ＩＩＩ型フィブロ
ネクチン（Ｆｎ３）などのポリペプチド（フィブロネクチンポリペプチドモノボディにつ
いて記載する米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）に基づく足場へと
グラフトすることができる。

【0081】

抗原結合性断片は、相補的な軽鎖ポリペプチドと併せて抗原結合性領域の対を形成する
、タンデムＦｖセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）の対を含む単鎖分子へと組み
込むことができる（Zapataら、1995 Protein Eng. 8（10）:1057～1062；および米国特許
第５，６４１，８７０号明細書）。

【0082】

本明細書で使用される「アフィニティー」という用語は、単一の抗原性部位における抗
体と抗原との間の相互作用の強度を指す。各抗原性部位内では、抗体「アーム」の可変領
域は、多数の部位において、弱い非共有結合的力を介して抗原と相互作用し、相互作用が
大きいほど、アフィニティーは強くなる。抗体またはその抗原結合性断片（例えば、Ｆａ
ｂ断片）について本明細書で使用される「高アフィニティー」という用語は一般に、１０
^－９Ｍ以下のＫ_Ｄ（例えば、１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄ、１０^－１１Ｍ以下のＫ_Ｄ、１０^－
１２Ｍ以下のＫ_Ｄ、１０^－１３Ｍ以下のＫ_Ｄ、１０^－１４Ｍ以下のＫ_Ｄなど）を有する抗
体または抗原結合性断片を指す。

【0083】

「アミノ酸」という用語は、自然発生のアミノ酸および合成アミノ酸のほか、自然発生
のアミノ酸と同様の形で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体も指す。自然発生
のアミノ酸とは、遺伝子コードによりコードされるアミノ酸のほか、後で修飾されたアミ
ノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、およびＯ－ホスホセ
リンでもある。アミノ酸類似体とは、自然発生のアミノ酸と同じ基本的化学構造、すなわ
ち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基、例えば、ホモセリン、ノルロイシン
、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムに結合したアルファ炭素を有
する化合物を指す。このような類似体は、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）または修飾
ペプチド骨格を有するが、自然発生のアミノ酸と同じ基本的化学構造を保持する。アミノ
酸模倣体とは、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが、自然発生のアミノ
酸と同様の形で機能する化学化合物を指す。

【0084】

本明細書で使用される「結合特異性」という用語は、１つの抗原決定基だけと反応する
個別の抗原結合部位の能力を指す。

【0085】

抗体（例えば、ＦＸＩ結合性抗体および／またはＦＸＩａ結合性抗体）に「特異的に（
または選択的に）結合する」という語句は、タンパク質および他の生体物質の異質な集団
内のコグネイト抗原（例えば、ヒトのＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａまたはカニクイザ
ルのＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａ）の存在を決定する結合反応を指す。本明細書では
、「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という語句は、「抗原に特異的
に結合する抗体」という用語と互換的に使用される。

【0086】

「ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａを媒介する」という用語は、ＦＸＩおよび／またはＦ
ＸＩａが、第ＩＸ因子（また、ＦＩＸとしても公知である）、第Ｘ因子（ＦＸ）、および
／もしくはトロンビンを、直接的もしくは間接的に活性化させることにより、かつ／また
は血小板受容体に結合することにより、内因系凝固経路および／または共通凝固経路を媒
介するという事実を指す。

【0087】

「止血」という用語は、損傷部位における血流を止めるための主要な機構、および創傷
治癒時に血管の開存を回復するための主要な機構のそれぞれを表す。正常な止血および病
理学的血栓症では、３つの機構：活性化血小板の、血管壁との相互作用を意味する一次止
血、フィブリンの形成、および線溶と称する過程が同時に活性化する。

【0088】

「凝固および凝固カスケード」、「凝固のカスケードモデル」などという用語は、創傷
を密封するように形成される凝血を安定化させるのに用いられる、タンパク質ベースの系
を指す。凝固経路とは、タンパク質分解性カスケードである。経路の各酵素は、血漿中に
、活性化すると、タンパク質分解性切断を受けて、前駆体分子から活性の因子を放出する
、チモーゲン（不活性形態にある）として存在する。凝固カスケードは、活性化過程を制
御する一連の正および負のフィードバックループとして機能する。経路の最終目標は、次
いで、可溶性フィブリノゲンを、凝血を形成するフィブリンへと転換しうる、トロンビン
を産生することである。

【0089】

トロンビンの生成過程は、３つの相：内因系経路、および活性の凝血因子：ＦＸａ（活
性化型第Ｘ因子）を生成させるための代替的な経路である外因系経路、およびトロンビン
の形成を結果としてもたらす、最終的な共通経路に分けることができる（Hoffman M.M. a
nd Monroe D.M. (2005) Curr Hematol Rep. 4:391 -396; Johne J, et al. (2006) Biol
Chem. 387:173-178）。

【0090】

「血小板の凝集」とは、血管の破断が生じたら、正常では血流と直接接触しない物質が
曝露される過程を指す。これらの物質（主に、コラーゲンおよびフォンヴィレブランド因
子）は、血小板が、破断した表面に接着することを可能とする。血小板は、表面に付着す
ると、さらなる血小板を損傷領域へと誘引する化学物質を放出するが、これを血小板の凝
集と称する。これらの２つの過程が、出血を止める最初の応答である。

【0091】

本明細書で使用される「血栓塞栓性障害」という用語または類似の用語は、内因系凝固
経路および／または共通凝固経路が、異常に活性化しているか、または自然に不活化しな
い（例えば、治療手段を伴わずに）、任意の数の状態または疾患を指す。これらの状態は
、血栓性脳卒中、心房細動、心房細動における脳卒中の防止（ＳＰＡＦ）、深部静脈血栓
症、静脈血栓塞栓症、および肺塞栓症を含むがこれらに限定されない。これらはまた、カ
テーテルが血栓性となるカテーテル関連状態（例えば、がん患者におけるヒックマンカテ
ーテル）、およびチュービングが凝血を発症させる体外式膜型人工肺（ＥＣＭＯ）も含み
うる。

【0092】

本明細書で使用される「血栓塞栓性」という用語または類似の用語はまた、本発明の抗
ＦＸＩ Ａｂおよび／もしくは抗ＦＸＩａ Ａｂまたはそれらの抗原結合性断片を使用し
て防止または処置しうる、以下：
・発作性心房細動もしくは発作性心房粗動、遷延性心房細動もしくは遷延性心房粗動、
または永続性心房細動もしくは永続性心房粗動などの心不整脈を疑われるか、または確認
されている対象における血栓塞栓症；
・心房細動における脳卒中の防止（ＳＰＡＦ）を伴う対象であって、その亜集団が、経
皮冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）を受けるＡＦ患者である対象；
・出血の危険性が大きな患者における、急性静脈血栓塞栓性事象（ＶＴＥ）の処置、お
よび長期的な続発性ＶＴＥの防止；
・一過性虚血性発作（ＴＩＡ）または非機能障害誘発性脳卒中の後の二次防止における
大脳および心血管事象、ならびに洞調律を伴う心不全における、血栓塞栓性事象の防止に
おける大脳および心血管事象；
・心不整脈のための心除細動を受ける対象における、左心房内の凝血形成および血栓塞
栓症；
・心不整脈のためのアブレーション手順の前、その間、およびその後における血栓症；
・静脈血栓症であり、これは、下肢または上肢における、深部静脈血栓症または表在静
脈血栓症、腹部静脈および胸部静脈における血栓症、静脈洞血栓症および頸静脈血栓症の
処置および二次防止を含むがこれらに限定されない；
・カテーテルまたはペースメーカーの導線など、静脈内の任意の人工表面上の血栓症；
・静脈血栓症を伴うかまたは伴わない患者における肺塞栓症；
・慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＣＴＥＰＨ）；
・破裂したアテローム性プラーク上の動脈血栓症、動脈内の人工装具上またはカテーテ
ル上の血栓症、および見かけ上正常な動脈内の血栓症であり、これらは、急性冠動脈症候
群、ＳＴ上昇型心筋梗塞、非ＳＴ上昇型心筋梗塞、不安定狭心症、ステント血栓症、動脈
系内の任意の人工表面の血栓症、および肺高血圧症を伴うかまたは伴わない対象における
肺動脈血栓症を含むがこれらに限定されない；
・経皮冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）を受ける患者における、血栓症および血栓
塞栓症；
・心塞栓性脳卒中および潜因性脳卒中；
・侵襲性および非侵襲性のがん性悪性腫瘍を伴う患者における血栓症；
・留置カテーテルにわたる血栓症；
・重病患者における血栓症および血栓塞栓症；
・心血栓症および血栓塞栓症であり、これらは、心筋梗塞後における心血栓症、心動脈
瘤、心筋線維症、心肥大および心機能不全、心筋炎、ならびに心臓内の人工表面などの状
態と関連する心血栓症を含むがこれらに限定されない；
・心房細動を伴うかまたは伴わない、心弁性心疾患を伴う患者における血栓塞栓症；
・心弁用の機械的または生物学的人工装具にわたる血栓塞栓症；
・単純型心奇形または複合型心奇形の心臓修復術後において、天然または人工の心パッ
チ、動脈または静脈の導管を有した患者における血栓塞栓症；
・人工膝関節置換術、人工股関節置換術、および整形外科術、胸部手術または腹部手術
の後における、静脈血栓症および血栓塞栓症；
・頭蓋内インターベンションおよび脊髄インターベンションを含む神経外科術の後にお
ける、動脈血栓症または静脈血栓症；
・第Ｖ因子 Ｌｅｉｄｅｎ、プロトロンビンの突然変異、抗トロンビンＩＩＩ、プロテ
インＣ欠損症およびプロテインＳ欠損症、第ＸＩＩＩ因子の突然変異、家族性異常フィブ
リノゲン血症、先天性プラスミノゲン欠損症、第ＸＩ因子レベルの上昇、鎌状赤血球病、
抗リン脂質症候群、自己免疫疾患、慢性腸疾患、ネフローゼ症候群、溶血性尿毒症、骨髄
増殖性疾患、播種性血管内凝固、発作性夜間ヘモグロビン尿症、およびヘパリン誘導性血
小板減少症を含むがこれらに限定されない、先天性または後天性の血栓性素因；
・慢性腎疾患における血栓症および血栓塞栓症；ならびに
・血液透析を受ける患者、および体外式膜型人工肺を受ける患者における、血栓症およ
び血栓塞栓症
のうちの任意の数も指す場合がある。

【0093】

「キメラ抗体」という用語は、（ａ）抗原結合性部位（可変領域）を、クラス、エフェ
クター機能、および／もしくは種が異なるか、またはクラス、エフェクター機能、および
／もしくは種を改変された定常領域、あるいはキメラ抗体に新たな特性を付与する全く異
なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などへと連結するように、定
常領域またはその一部を、改変するか、置きかえるか、または交換した抗体分子；あるい
は（ｂ）可変領域またはその一部を、抗原特異性が異なるか、または抗原特異性を改変さ
れた可変領域により改変するか、置きかえるか、またはこれと交換した抗体分子を指す。
例えば、マウス抗体は、その定常領域を、ヒト免疫グロブリンに由来する定常領域で置き
かえることにより修飾することができる。ヒト定常領域による置きかえに起因して、キメ
ラ抗体は、ヒトにおける抗原性を、元のマウス抗体と比較して低減しながら、抗原の認識
におけるその特異性を保持しうる。

【0094】

「保存的に修飾された変異体」という用語は、アミノ酸配列および核酸配列のいずれに
も適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体とは、同一なアミノ
酸配列もしくは本質的に同一なアミノ酸配列をコードする核酸、または核酸がアミノ酸配
列をコードしない場合は、本質的に同一な配列を指す。遺伝子コードの縮重性のために、
多数の機能的に同一な核酸が、所与の任意のタンパク質をコードする。例えば、コドンで
あるＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、およびＧＣＵのいずれも、アミノ酸であるアラニンをコー
ドする。したがって、アラニンがコドンにより指定されるあらゆる位置で、コードされる
ポリペプチドを改変せずに、コドンを、記載された対応するコドンのうちのいずれかへと
改変することができる。このような核酸変異は、保存的に修飾された変異のうちの１種で
ある「サイレント変異」である。ポリペプチドをコードする、本明細書のあらゆる核酸配
列はまた、核酸のあらゆる可能なサイレント変異についても記載する。当業者は、核酸内
の各コドン（通常メチオニンだけのコドンであるＡＵＧ、および通常トリプトファンだけ
のコドンであるＴＧＧを除く）を修飾して、機能的に同一な分子をもたらしうることを認
識するであろう。したがって、記載される各配列内では、ポリペプチドをコードする核酸
の各サイレント変異が含意されている。

【0095】

ポリペプチド配列では、「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸の、化学的に類似
するアミノ酸による置換を結果としてもたらす、ポリペプチド配列への個別の置換、欠失
、または付加を含む。当技術分野では、機能的に類似するアミノ酸を提示する保存的置換
表が周知である。このような保存的に修飾された変異体は、本発明の多型変異体、種間相
同体、および対立遺伝子に追加されるものであり、これらを除外するものではない。以下
の８つの群：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタ
ミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リ
シン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ
）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン
（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；および８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）は、互いに
対して保存的置換であるアミノ酸を含有する（例えば、Creighton、Proteins（1984）を
参照されたい）。いくつかの実施形態では、「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸
配列を含有する抗体の結合特徴にそれほど大きな影響を及ぼしたりこれを改変したりしな
いアミノ酸修飾を指すのに使用する。

【0096】

「エピトープ」という用語は、抗体への特異的な結合が可能なタンパク質決定基を意味
する。エピトープは通例、アミノ酸または糖側鎖など、化学的に活性な表面分子群からな
り、通例、特異的な三次元構造特徴のほか、特異的な電荷特徴も有する。コンフォメーシ
ョナルエピトープと非コンフォメーショナルエピトープとは、前者への結合は、変性溶媒
の存在下で失われるが、後者への結合は失われないという点で区別される。競合結合アッ
セイにおいて、当業者に周知の方法のうちのいずれかにより、一方の抗体が、第２の抗体
と同じエピトープに結合することが示される場合、２つの抗体は、「競合する」という。

【0097】

本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領
域のいずれもが、ヒト由来の配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図する
。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もまた、このようなヒト配列、例え
ば、ヒト生殖細胞系列配列またはヒト生殖細胞系列配列の突然変異させたバージョンに由
来する。本発明のヒト抗体は、ヒト配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉ
ｎ ｖｉｔｒｏにおけるランダム突然変異誘発もしくは部位特異的突然変異誘発により導
入された突然変異、またはｉｎ ｖｉｖｏにおける体細胞突然変異により導入された突然
変異）を含みうる。

【0098】

「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、単一の結合特異性を提示する抗体であって
、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域のいずれもが、ヒト配列に由来する可変領域を有
する抗体を指す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝
子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用して調製す
る。

【0099】

「ヒト化」抗体とは、ヒトにおける免疫原性は小さいが、非ヒト抗体の反応性を保持す
る抗体である。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を保持し、抗体の残りの部分を、それ
らのヒト対応物（すなわち、可変領域の定常領域ならびにフレームワーク部分）で置きか
えることにより達成することができる。例えば、Morrisonら、Proc. Natl. Acad. Sci. U
SA、81:6851～6855、1984; MorrisonおよびOi、Adv. Immunol.、44:65～92、1988; Verho
eyenら、Science、239:1534～1536、1988; Padlan、Molec. Immun.、28:489～498、1991
；およびPadlan、Molec. Immun.、31:169～217、1994を参照されたい。ヒト操作技術の他
の例は、ＵＳ５，７６６，８８６において開示されているＸｏｍａ技術を含むがこれらに
限定されない。

【0100】

２つ以上の核酸配列またはポリペプチド配列の文脈における「同一な」または「同一性
」パーセントという用語は、２つ以上の配列または部分配列が同じであることを指す。以
下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して、または手作業のアライメントおよび
目視により測定される比較域または指定領域にわたり、最大の対応性について比較され、
配列決定された場合の、２つの配列の、指定された百分率のアミノ酸残基またはヌクレオ
チドが同じであれば（すなわち、指定される領域にわたる、または、指定されない場合は
、配列全体にわたる、６０％の同一性、任意選択で、６５％、７０％、７５％、８０％、
８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有すれば）、２つの配列は「実質的に
同一」である。任意選択で、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド（または１０アミ
ノ酸）の長さの領域にわたり、またはより好ましくは、１００～５００、または１０００
ヌクレオチド以上（または２０、５０、または２００アミノ酸以上）の長さの領域にわた
り存在する。

【0101】

配列比較では、１つの配列が、それに照らして被験配列を比較する基準配列として働く
ことが典型的である。配列比較アルゴリズムを使用する場合、被験配列および基準配列を
コンピュータへと入力し、必要な場合は、部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプロ
グラムパラメータを指定する。デフォルトのプログラムパラメータを使用することもでき
、代替的なパラメータを指定することもできる。次いで、配列比較アルゴリズムにより、
プログラムパラメータに基づき、被験配列について、基準配列と比べた配列同一性パーセ
ントを計算する。

【0102】

本明細書で使用される「比較域」は、２つの配列を最適に配列決定した後で、配列を、
同じ数の連続的な位置による基準配列と比較しうる、２０～６００、通例約５０～約２０
０、より通例では、約１００～約１５０からなる群から選択される連続的な位置の数のう
ちのいずれか１つによるセグメントに対する言及を含む。当技術分野では、比較のための
配列アライメント法が周知である。比較のための最適な配列アライメントは、例えば、Sm
ithおよびWaterman （1970） Adv. Appl. Math. 2:482cによる局所相同性アルゴリズムに
より行うこともでき、NeedlemanおよびWunsch、J. Mol. Biol. 48:443、1970による相同
性アライメントアルゴリズムにより行うこともでき、PearsonおよびLipman、Proc. Nat'l
. Acad. Sci. USA 85:2444、1988による類似性検索法により行うこともでき、これらアル
ゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆ
ｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７
５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、
ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）により行うこともでき、手作業のアライメントおよび
目視（例えば、Brentら、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons
, Inc.（Ringbou編、2003）を参照されたい）により行うこともできる。

【0103】

配列同一性パーセントおよび配列類似性パーセントを決定するのに適するアルゴリズム
の２つの例は、それぞれ、Altschulら、（1977） Nuc. Acids Res. 25:3389～3402；およ
びAltschulら、（1990） J. Mol. Biol. 215:403～410において記載されている、ＢＬＡ
ＳＴアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ解析を実施
するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎにより公表されている。このアルゴリズムは、デ
ータベース配列内の同じ長さのワードで配列決定したときに、ある正の値の閾値スコアＴ
にマッチするかまたはこれを満たす、クエリー配列内の短いワード長Ｗを同定することに
より、高スコア配列対（ＨＳＰ）をまず同定することを伴う。Ｔを、隣接ワードスコア閾
値（Altschulら、前出）と称する。これらの初期の隣接ワードヒットが、これらを含有す
るより長いＨＳＰを見出す検索を開始するためのシードとして働く。累積アライメントス
コアが増大しうる限りにおいて、ワードヒットを、各配列に沿っていずれの方向にも拡張
する。累積スコアは、ヌクレオチド配列では、パラメータＭ（マッチする残基の対につい
てのリウォードスコア；常に＞０）およびＮ（ミスマッチ残基についてのペナルティース
コア；常に＜０）を使用して計算する。アミノ酸配列では、スコアリングマトリックスを
使用して、累積スコアを計算する。累積アライメントスコアが、達成されたその最大値か
ら量Ｘだけ低下した場合；１つまたは複数の負スコア残基のアライメントの累積のために
、累積スコアが、ゼロ以下に低下した場合；または配列のいずれかの末端に達した場合は
、各方向へのワードヒットの拡張を停止させる。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータであ
るＷ、Ｔ、およびＸにより、アライメントの感度および速度が決定される。ＢＬＡＳＴＮ
プログラム（ヌクレオチド配列の場合）では、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ
）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４をデフォルトとして使用し、両方の鎖の比較を行う。アミノ酸配列
のためのＢＬＡＳＴＰプログラムでは、３のワード長、および１０の期待値（Ｅ）、およ
び５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（HenikoffおよびHenikoff、Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 89:10915、1989を参照されたい）アライメント（Ｂ）、１０の期
待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４をデフォルトとして使用し、両方の鎖の比較を行う。

【0104】

ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列の間の類似性についての統計学的解析（例
えば、KarlinおよびAltschul、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873～5787、1993を参照
されたい）も実施する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は
、２つのヌクレオチド配列間またはアミノ酸配列間のマッチングが偶然に生じる確率の指
標をもたらす最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、被験核酸を基準核酸に照らして
比較したときの最小合計確率が約０．２未満であり、より好ましくは、約０．０１未満で
あり、最も好ましくは、約０．００１未満であれば、核酸は基準配列と類似すると考えら
れる。

【0105】

２つのアミノ酸配列の間の同一性パーセントはまた、ＰＡＭ１２０重みづけ残基表、１
２のギャップ長ペナルティー、および４のギャップペナルティーを使用するＡＬＩＧＮプ
ログラム（バージョン２．０）へと組み込まれた、E. MeyersおよびW. Miller（Comput.
Appl. Biosci.、4:11～17、1988）によるアルゴリズムを使用しても決定することができ
る。加えて、２つのアミノ酸配列の間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｏｍ ６２マト
リックスまたはＰＡＭ２５０マトリックス、および１６、１４、１２、１０、８、６、ま
たは４のギャップ重みづけ、および１、２、３、４、５、または６の長さ重みづけを使用
する、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（インターネット上のgcg.comで入手可能である）
内のＧＡＰプログラムへと組み込まれた、NeedlemanおよびWunsch（J. Mol, Biol. 48:44
4～453、1970）によるアルゴリズムを使用しても決定することができる。

【0106】

上記で言及した配列同一性百分率以外の、２つの核酸配列またはポリペプチドが実質的
に同一であることの別の指標は、下記で記載される通り、第１の核酸によりコードされる
ポリペプチドが、第２の核酸によりコードされるポリペプチドに対する抗体と免疫学的に
交差反応性であることである。したがって、例えば、２つのペプチドが保存的置換だけに
よって異なる場合、ポリペプチドは、第２のポリペプチドと実質的に同一なことが典型的
である。２つの核酸配列が実質的に同一であることの別の指標は、下記で記載される通り
、２つの分子またはそれらの相補体が、厳密な条件下で、互いとハイブリダイズすること
である。２つの核酸配列が実質的に同一であることのさらに別の指標は、同じプライマー
を使用して配列を増幅しうることである。

【0107】

「単離抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗
体を指す（例えば、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに特異的に結合する単離抗体は、Ｆ
ＸＩおよび／もしくはＦＸＩａ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）
。しかし、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに特異的に結合する単離抗体は、他の抗原に
対する交差反応性を有しうる。さらに、単離抗体は、他の細胞内物質および／または化学
物質を実質的に含まない場合もある。

【0108】

「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によりもたらされる抗体クラス（
例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４などのＩｇＧ）を指す。アイソタイプ
はまた、これらのクラスのうちの１つの修飾バージョンも含み、その修飾は、Ｆｃ機能を
改変する、例えば、エフェクター機能またはＦｃ受容体への結合を増強または低減するよ
うに施されている。

【0109】

本明細書で使用される「Ｋ_{ａｓｓｏｃ}」または「Ｋ_ａ」という用語が、特定の抗体－抗
原間相互作用の会合速度を指すことを意図するのに対し、本明細書で使用される「Ｋ_ｄｉ
ｓ」または「Ｋ_ｄ」という用語は、特定の抗体－抗原間相互作用の解離速度を指すことを
意図する。本明細書で使用される「Ｋ_Ｄ」という用語は、Ｋ_ｄのＫ_ａに対する比（すなわ
ち、Ｋ_ｄ／Ｋ_ａ）から得られる解離定数を指すことを意図し、モル濃度（Ｍ）として表す
。抗体のＫ_Ｄ値は、当技術分野で十分に確立された方法を使用して決定することができる
。抗体のＫ_Ｄを決定するための方法は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システムなどのバイオセ
ンサーシステムを使用して表面プラズモン共鳴を測定するか、または溶液平衡滴定（ＳＥ
Ｔ）により溶液中のアフィニティーを測定するステップを含む。

【0110】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」と
いう用語は、単一の分子組成による抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物
は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性およびアフィニティーを提示する。

【0111】

本明細書では、「核酸」という用語が、「ポリヌクレオチド」という用語と互換的に使
用され、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらの一本鎖形態ま
たは二本鎖形態におけるポリマーを指す。「核酸」という用語は、公知のヌクレオチド類
似体または修飾骨格残基もしくは修飾連結を含有する核酸であって、合成の核酸、自然発
生の核酸、および非自然発生の核酸であり、基準核酸と同様の結合特性を有し、基準ヌク
レオチドと同様の形で代謝される核酸を包含する。このような類似体の例は、限定なしに
述べると、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラルメチ
ルホスホネート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。

【0112】

別段に指し示されない限りにおいて、特定の核酸配列はまた、保存的に修飾されたその
変異体（例えば、縮重コドン置換）および相補的配列も暗示的に包含するほか、明示的に
指し示される配列も包含する。とりわけ、下記で詳述される通り、縮重コドン置換は、１
つまたは複数の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が、混合塩基および／ま
たはデオキシイノシン残基で置換された配列を作り出すことにより達成することができる
（Batzerら、Nucleic Acid Res. 19:5081、1991; Ohtsukaら、J. Biol. Chem. 260:2605
～2608、1985；およびRossoliniら、Mol. Cell. Probes 8:91～98、1994）。

【0113】

「作動可能に連結された」という用語は、２つ以上のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮ
Ａ）セグメントの間の機能的関係を指す。「作動可能に連結された」という用語は、転写
調節配列の、転写される配列に対する機能的関係を指すことが典型的である。例えば、プ
ロモーター配列またはエンハンサー配列は、それが、適切な宿主細胞内または他の発現系
内のコード配列の転写を刺激またはモジュレートするとき、コード配列に作動可能に連結
されている。一般に、転写される配列に作動可能に連結されたプロモーター転写調節配列
は、転写される配列と物理的に隣接する、すなわち、シス作用型である。しかし、エンハ
ンサーなど、一部の転写調節配列は、その転写をそれらが増強するコード配列に物理的に
隣接する必要も、近接して配置される必要もない。

【0114】

本明細書で使用される「最適化された」という用語は、ヌクレオチド配列を、産生細胞
または産生生物、一般に、真核細胞、例えば、ピキア（Pichia）属細胞、チャイニーズハ
ムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、またはヒト細胞において好ましいコドンを使用してアミノ
酸配列をコードするように改変していることを意味する。最適化されたヌクレオチド配列
は、「親」配列としてもまた公知の出発ヌクレオチド配列により本来コードされるアミノ
酸配列を、完全に、または可能な限り多く保持するように操作する。本明細書の最適化さ
れた配列は、哺乳動物細胞において好ましいコドンを有するように操作されている。しか
し、本明細書ではまた、他の真核細胞または原核細胞におけるこれらの配列の最適化され
た発現も企図される。最適化されたヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列も
また、最適化されていると称する。

【0115】

本明細書では、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語が、アミノ酸残基の
ポリマーを指すように互換的に使用される。「ポリペプチド」および「タンパク質」とい
う用語は、１つまたは複数のアミノ酸残基が、対応する自然発生のアミノ酸の人工の化学
的模倣体であるアミノ酸ポリマーのほか、自然発生のアミノ酸ポリマーおよび非自然発生
のアミノ酸ポリマーにも適用される。別段に指し示されない限りにおいて、特定のポリペ
プチド配列はまた、保存的に修飾されたその変異体も暗示的に包含する。

【0116】

本明細書で使用される「組換えヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン遺伝子に
ついてトランスジェニックまたはトランスクロモソーマルである動物（例えば、マウス）
またはこれにより調製されるハイブリドーマから単離される抗体、ヒト抗体を発現させる
ように形質転換された宿主細胞、例えば、トランスフェクトーマから単離される抗体、組
換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、およびヒト免疫グロ
ブリン遺伝子配列の全部または一部の、他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う、他の
任意の手段により調製されるか、発現させるか、創出されるか、または単離される抗体な
ど、組換え手段により調製されるか、発現させるか、創出されるか、または単離される、
全てのヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、フレームワーク領域およびＣＤＲ
領域が、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかし、
ある種の実施形態では、このような組換えヒト抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの突然変異誘発
（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックである動物を使用する場合は、ｉｎ
ｖｉｖｏの体細胞突然変異誘発）にかけることができ、したがって、組換え抗体のＶＨ
領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列のＶＨ配列およびＶＬ配列に由
来し、これらに関連するが、ｉｎ ｖｉｖｏのヒト抗体の生殖細胞系列レパートリー内で
天然には存在しない可能性がある配列である。

【0117】

「組換え宿主細胞」（または、簡単に、「宿主細胞」）という用語は、組換え発現ベク
ターを導入した細胞を指す。このような用語は、特定の対象細胞だけを指すことを意図す
るものではなく、このような細胞の子孫細胞も指すことを意図するものであることを理解
されたい。後続する世代では、突然変異または環境的影響に起因して、ある種の修飾が生
じうるため、このような子孫細胞は、実のところ、親細胞と同一ではない可能性もあるが
、やはり本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。

【0118】

「対象」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物を含む。非ヒト動物は、非ヒト霊長動物
（例えば、カニクイザル）、ヒツジ、ウサギ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、および爬
虫類など、全ての脊椎動物（例えば、哺乳動物および非哺乳動物）を含む。特記される場
合を除き、本明細書では、「患者」または「対象」という用語が互換的に使用される。本
明細書で使用される「カニクイザル（cyno）」または「カニクイザル（cynomolgus）」と
いう用語は、カニクイザル（cynomolgus monkey）（カニクイザル（Macaca fascicularis
））を指す。具体的な態様では、患者または対象は、ヒトである。

【0119】

一実施形態では、本明細書で使用される、任意の疾患または障害（例えば、血栓塞栓性
障害）「～を処置すること」またはこれらの「処置」という用語は、疾患または障害を改
善すること（すなわち、疾患またはその臨床症状のうちの少なくとも１つの発症を緩徐化
するか、停止させるか、または軽減すること）を指す。別の実施形態では、「～を処置す
ること」または「処置」とは、患者により識別可能でない可能性があるパラメータを含む
少なくとも１つの物理的パラメータを緩和または改善することを指す。さらに別の実施形
態では、「～を処置すること」または「処置」とは、疾患または障害を、物理的にモジュ
レートする（例えば、識別可能な症状の安定化）か、生理学的にモジュレートする（例え
ば、物理的パラメータの安定化）か、または物理的かつ生理学的にモジュレートすること
を指す。さらに別の実施形態では、「～を処置すること」または「処置」とは、疾患また
は障害の発生または発症または進行を防止するかまたは遅延させることを指す。

【0120】

例えば血栓塞栓性障害を含む、本明細書で記載される適応に関する場合の「防止」とは
、例えば、前記悪化の危険性がある患者における、下記で記載される、血栓塞栓性疾患パ
ラメータの悪化を防止または緩徐化する任意の作用を意味する。

【0121】

「ベクター」という用語は、それが連結された別のポリヌクレオチドを輸送することが
可能なポリヌクレオチド分子を指すことを意図する。ベクターのうちの１つの種類は、さ
らなるＤＮＡセグメントをライゲーションしうる、環状の二本鎖ＤＮＡループを指す「プ
ラスミド」である。ベクターの別の種類は、さらなるＤＮＡセグメントを、ウイルスゲノ
ムへとライゲーションしうる、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶまたはＡＡＶ２）な
どのウイルスベクターである。ある種のベクター（例えば、細菌の複製起点を有する細菌
ベクターおよび哺乳動物のエピソームベクター）は、それらが導入された宿主細胞におけ
る自己複製が可能である。他のベクター（例えば、非哺乳動物のエピソームベクター）は
、宿主細胞へと導入すると、宿主細胞のゲノムへと組み込むことができ、これにより、宿
主ゲノムと共に複製する。さらに、ある種のベクターは、それらが作動的に連結された遺
伝子の発現を方向付けることが可能である。本明細書では、このようなベクターを、「組
換え発現ベクター」（または簡単に、「発現ベクター」）と称する。一般に、組換えＤＮ
Ａ法において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態にあることが多い。プラスミドは
ベクターの最も一般的に使用される形態であるので、本明細書では、「プラスミド」と「
ベクター」とを互換的に使用することができる。しかし、本発明は、同等な機能をもたら
すウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ
随伴ウイルス）など、発現ベクターの他の形態も含むことを意図する。

【図面の簡単な説明】

【0122】

【図1-1】図１Ａ～１Ｃは、ヒトＦＸＩタンパク質で再構成されたＦＸＩ^－／－マウスにおける、ＦｅＣｌ_３誘導性血栓症に対する、ＮＯＶ１４０１の効果を示す図である。ＮＯＶ１４０１は、血栓症を、用量依存的に阻害した。抗体は、非処置ＦＸＩ^－／－マウスにおける場合と同じ程度に、ａＰＴＴを延長した。

【図1-2】（上記の通り。）

【図2】図２Ａ～２Ｂは、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇのＮＯＶ１４０１の、複数回にわたる静脈内（ｉ．ｖ．）（Ａ；Ｎ＝２）投与または皮下（ｓ．ｃ．）（Ｂ；Ｎ＝２）投与の、ａＰＴＴ（ひし形）に対する効果と、カニクイザルにおける総血漿ＮＯＶ１４０１レベル（四角）に対する関係とを示す図である。３ｍｇ／ｋｇの単回投与は、約２倍のａＰＴＴをもたらし、これを、５～６週間にわたり維持した。全ての被験用量は、ａＰＴＴを、同様な程度に延長し、高被験用量が、３ｍｇ／ｋｇの用量で観察されるａＰＴＴの延長の大きさを増大させるとは考えられなかった。

【図3】図３Ａ～３Ｂは、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇのＮＯＶ１４０１の、複数回にわたるｉ．ｖ．（Ａ；Ｎ＝２）投与またはｓ．ｃ．（Ｂ；Ｎ＝２）投与の、血漿遊離ＦＸＩ（四角）に対する効果と、カニクイザルにおけるａＰＴＴ（ひし形）に対する関係とを示す図である。３ｍｇ／ｋｇの単回投与は、遊離ＦＸＩを、５～６週間にわたり、約９０％低減した。全ての被験用量は、遊離ＦＸＩを、同様な程度に低減し、高被験用量が、３ｍｇ／ｋｇの用量で観察される遊離ＦＸＩの低減の大きさを増大させるとは考えられなかった。

【図4】図４Ａ～４Ｂは、ＦＸＩに結合した、本発明のＮＯＶ１４０１抗体のＦａｂのＸ線構造を示す図である。図４Ａは、ＮＯＶ１４０１ Ｆａｂ－ＦＸＩ ＣＤ複合体のＸ線構造を示す。ＦＸＩ触媒ドメインを、グレーの表面として示し、Ｆａｂを、ライトグレー（軽鎖）およびダークグレー（重鎖）のリボンとして示す。図４Ｂは、チモーゲンＦＸＩと重ね合わせた、ＮＯＶ１４０１ Ｆａｂ－ＦＸＩ ＣＤ複合体のＸ線構造を示す。ＦＸＩ触媒ドメインを、グレーのリボンとして示す。Ｆａｂの可変ドメインを、ライトグレー（ＶＬ）およびダークグレー（ＶＨ）のリボンとして示す。４つのアップルドメインを含むチモーゲン構造を、構造の底部におけるダークグレーリボンとして重ね合わせる（ＰＤＢ ２Ｆ８３）。活性化切断部位（Ｉｌｅ３７０）を指し示す。

【図5】図５Ａ～５Ｂは、ＮＯＶ１４０１ Ｆａｂの結合時における、ＦＸＩａの構造的変化を示す図である。図５Ａは、Ｆａｂの結合前における、ＦＸＩａの活性部位についての視図を示す。ＦＸＩａを、透明な表面を伴うリボンとして表す。Ｆａｂの結合時にコンフォメーションを変化させる構造の断面を標識する（ループ１４５、ループ１８８、およびループ２２０）。Ｓ１およびＳ１のサブポケットを指し示す。図５Ｂは、Ｆａｂ複合体内のＦＸＩの不活性コンフォメーションを示す。（Ｆａｂは示さない）。

【図6-1】図６Ａ～６Ｃは、抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体についての複合応答曲線を示す図である。図６Ａは、ＮＯＶ１４０１による第ＸＩａ因子活性の阻害を示す。全長ヒトＦＸＩａの酵素活性を阻害する抗体であるＮＯＶ１４０１の代表的な複合応答曲線。アッセイは、実施例３で記載される通り、蛍光標識されたペプチドの切断を測定する。ロジスティック当てはめモデル［ｙ＝Ａ２＋（Ａ１－Ａ２）／（１＋（ｘ／ＩＣ５０）^ｐ）［式中、ｙは、インヒビター濃度をｘとするときの阻害％であり、Ａ１は、最小の阻害値であり、Ａ２は、最大の阻害値である。指数ｐは、ヒル係数である］による非線形曲線の当てはめを、この代表的データセットにおいて使用することにより、１６０ｐＭのＩＣ_５０値がもたらされる。図６Ｂは、ａＰＴＴについての複合応答曲線を示す。プールされたヒト血漿を使用するａＰＴＴアッセイにおける、抗体であるＮＯＶ１４０１による、凝固時間の延長についての代表的な複合応答曲線。アッセイは、実施例４で記載される通り、異なる濃度のＮＯＶ１４０１の存在下で、内因系凝血カスケードを開始させた後における、凝固時間を測定する。黒線は、ロジスティック非線形当てはめモデルを使用する当てはめを表す。点線は、ＮＯＶ１４０１の非存在下における、プールされたヒト血漿の、ベースラインの凝固時間を表す。ベースラインの凝固時間は、３２．３秒間であり、グラフ内では、グレーの破線で指し示される。グレーの点線は、凝血時間が、ベースラインと比較して倍増したとき、すなわち、２×ａＰＴＴ値となるときの抗体濃度を指し示し、これは、１４ｎＭである。図６Ｃは、ＴＧＡ応答曲線を示す。プールされたヒト血漿を伴うＴＧＡにおける、抗体であるＮＯＶ１４０１による、トロンビン生成の阻害についての代表的な複合応答曲線を示す。アッセイは、実施例４で記載される通り、異なる濃度のＮＯＶ１４０１の、いわゆるトロンビン→ＦＸＩａフィードフォワードループを介する、非常に低濃度の組織因子（ＴＦ）により誘発されうるトロンビン生成に対する効果を測定する。黒線は、４パラメータ用量応答曲線モデルを使用する当てはめを表す。点線は、少量のＴＦにより誘導されるトロンビン生成に起因する、残留トロンビン濃度を表す。２４ｎＭのＩＣ_{５ ０}値および１５９ｎＭの残留トロンビン濃度（点線）を、この複合応答曲線について計算した。

【図6-2】（上記の通り。）

【図7-1】図７Ａ～７Ｂは、ＮＯＶ１４０１の、毎週１０ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝３）および１００ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝５）の１３週間（１４回の投与）にわたるｓ．ｃ．投与、または毎週５０ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝３）の４週間（５回の投与）にわたるｉ．ｖ．投与の、ａＰＴＴおよびＦＸＩ活性（ＦＸＩ：Ｃ）に対する効果を示す図である。図７Ａは、研究の２、２３、および７９日目に測定される、ａＰＴＴに対する効果を示す。ａＰＴＴは、ＮＯＶ１４０１を施される全ての動物において、２．１～３倍に増加され、研究の投与期を通して、高値を維持した。用量依存性は、観察されず、性別に関連する差違も、認められなかった。図７Ｂは、研究の２、２３、および７９日目に測定され、血漿ＦＸＩ活性に対するパーセントとして描示される、ＦＸＩ：Ｃに対する効果を示す。ＦＸＩ：Ｃは、ＮＯＶ１４０１を施される全ての動物において、５～１２％のレベルまで低下し、研究の投与期を通して、これらのレベルを維持した。用量依存性は、観察されず、性別に関連する差違も、認められなかった。

【図7-2】（上記の通り。）

【0123】

詳細な記載
本発明は、部分的に、ＦＸＩａに特異的に結合し、その生物学的活性を阻害する抗体分
子の発見に基づく。本発明は、全長ＩｇＧフォーマット抗体、ならびにＦａｂ断片（例え
ば、抗体ＮＯＶ１０９０およびＮＯＶ１４０１）など、その抗原結合性断片の両方に関す
る。

【0124】

したがって、本発明は、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ（例えば、ヒト、ウサギ、およ
びカニクイザルのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ）に特異的に結合する抗体、医薬組成物
、このような抗体および組成物の作製法および使用法を提供する。

【0125】

第ＸＩ因子
ＦＸＩは、内因系凝固経路および外因系凝固経路の両方において、ならびに血漿による
止血の開始期および増幅期の橋渡しにおいて重要な役割を果たす。第ＸＩＩａ因子および
トロンビンのいずれも、ＦＸＩを活性化させる結果として、持続的なトロンビンの生成お
よび線溶の阻害をもたらしうる。ＦＸＩは、「血管損傷後」に、高組織因子環境下にある
、正常な止血で果たす役割は小さいが、血栓症では、鍵となる役割を果たすと考えられる
。重度の第ＸＩ因子欠損症は、虚血性脳卒中および静脈の血栓塞栓性事象の発症率の低下
と関連する（Salomon et al 2008; Salomon, et al. (2011) Thromb Haemost.; 105:269-
73）。重度の第ＸＩ因子欠損症を伴う対象における出血症状は、低頻度であり、軽度で、
損傷誘導性であることが多く、口腔粘膜、鼻腔粘膜、および尿路など、線溶活性が増大し
た組織に影響することが好ましい（Salomon et al 2011）。致命的な臓器における出血は
、極めてまれであるか、または認められていない。

【0126】

血漿凝固とは、血中の凝固因子が相互作用し、活性化する、逐次的な過程であり、最終
的には、フィブリンの生成および凝血の形成を結果としてもたらす。凝固の古典的カスケ
ードモデルでは、フィブリン生成の過程は、２つの顕著に異なる経路、すなわち、内因系
経路および外因系経路のそれぞれにより開始されうる（Mackman, 2008）。

【0127】

外因系経路では、血管損傷は、血管外組織因子（ＴＦ）を、第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）
と相互作用させ、これを活性化させ、これにより、第Ｘ因子およびプロトロンビンの活性
化を逐次的にもたらす。活性トロンビンは最終的に、可溶性フィブリノゲンを、フィブリ
ンへと転換する。外因系経路は、止血に中心的であり、この経路内の凝固因子に対する干
渉は、出血の危険性を結果としてもたらす。

【0128】

内因系経路では、第ＸＩＩ因子は場合によって、接触活性化と称する過程により活性化
しうる。活性化型第ＸＩＩａ因子の生成は、第ＸＩ因子および第ＩＸ因子の逐次的な活性
化をもたらす。第ＩＸａ因子は、第Ｘ因子を活性化させるので、外因系経路と、内因系経
路とは、この段階で合流する（共通経路）。トロンビン活性は、トロンビンが、第ＸＩ因
子を、第ＸＩＩ因子に依存せずに活性化させる、フィードフォワードループを介して、そ
れ自体の生成を増幅することによりブーストされる。このフィードフォワードループは、
持続的な血栓成長には寄与するが、凝血の形成には、血管外組織因子による強力な活性化
で十分であるので、止血への関与は、最小限に限られる。したがって、内因系経路は、止
血には実質的に関与しない（Gailani and Renne (2007) Arterioscler Thromb Vasc Biol
. 2007, 27(12):2507-13, Muller, Gailiani, and Renne 2011）。

【0129】

様々な手法を使用して、様々な種にわたるＦＸＩまたはＦＸＩａを阻害する前臨床研究
が、この標的の検証に寄与している。ＦＸＩ－／－マウスは、実験による静脈血栓症（Wa
ng, et al. (2006) J Thromb Haemost; 4:1982-8）および動脈血栓症（Wang, et al. (20
05) J Thromb Haemost; 3:695-702）に対して抵抗性である。ＦＸＩＩａによるＦＸＩの
活性化を遮断する抗体（Ａｂ；１４Ｅ１１）によるマウスの処置は、実験による血栓症の
阻害を結果としてもたらし（Cheng, et al. (2010) Blood, 116:3981-9）、虚血性脳卒中
のマウスモデルにおける脳梗塞サイズを低減した（Leung, et al. (2012) Transl Stroke
Res 2012; 3:381-9）。ＦＸＩａによるＦＩＸの結合および活性化を遮断する抗ＦＸＩ
Ａｂを投与されたヒヒでは、コラーゲンでコーティングされた血管グラフト上において、
血小板に富む血栓の増殖の低減が観察され（Tucker, et al. (2009) Blood 2009; 113:93
6-44）、同様の結果は、このモデルにおいて、１４Ｅ１１によっても見出された（Cheng
2010）。これらの研究のうちのいずれにおいても、過剰な出血は認められなかった。

【0130】

マウス（Zhang, et al. (2010) Blood 2010; 116:4684-92）、カニクイザル（Younis,
et al. (2012) Blood 2012; 119:2401-8）、およびヒヒ（Crosby, et al. (2013) Arteri
oscler Thromb Vasc Biol 2013; 33:1670-8）において、アンチセンスオリゴヌクレオチ
ドにより、ＦＸＩの合成を遮断することは、過剰な出血を伴わずに、抗血栓効果および抗
凝固効果を結果としてもたらした。さらに、ラット（Schumacher, et al. (2007) Eur J
Pharmacol 2007; 570:167-74）およびウサギ（Wong, et al. (2011) J Thromb Thromboly
sis 2011; 32:129-37）の静脈血栓症モデルおよび動脈血栓症モデルにおいて、低分子量
インヒビターでＦＸＩａを遮断することによっても、同様な効果がもたらされている。

【0131】

重度のＦＸＩ欠損症を伴う患者は、自発的に出血することがまれであり、線溶活性が高
度な組織内を除き、軽度の外傷誘導性出血を示すにとどまる。重度のＦＸＩ欠損症の希少
性は、これらの患者について、一般集団と比べた血栓プロファイルを明らかにする集団研
究の使用を必然化する。とりわけ、このような研究は、これらの患者では、虚血性脳卒中
（Salomon 2008）および深部静脈血栓症（ＤＶＴ）（Salomon, et al. (2011) Blood 200
8; 111: 4113-17）の発症率が低減されることを報告している。こうして、重度のＦＸＩ
欠損症を伴う１１５例の患者において観察される虚血性脳卒中の数（Ｎ＝１）は、イスラ
エルの一般集団において予測される発症数（Ｎ＝８．６）より少なく（ｐ＜０．００３）
、重度のＦＸＩ欠損症を伴う患者におけるＤＶＴの発症数（Ｎ＝０）は、対照集団におい
て予測される発症数（Ｎ＝４．７）より少なかった（ｐ＜０．０１９）。逆に、ＦＸＩレ
ベルが第９０百分位数を上回る個体は、ＤＶＴを発症する危険性が２倍であった（Meijer
s, et al. (2000) N Engl J Med. 2000; 342:696-701）。

【0132】

近年、ＤＶＴの素因となる手順である、人工膝関節置換術を受ける患者を、ＦＸＩアン
チセンス療法または標準治療（エノキサパリン）で処置した。アンチセンス群（３００ｍ
ｇ）は、標準治療と比較した、静脈血栓症の発症率の７分の１の低下と、出血事象の減少
（有意ではない）とを示した（Buller et al, (2014) N Engl J Med. 372(3):232-40. do
i: 10.1056/NEJMoa1405760. Epub 2014 Dec 7）。

【0133】

まとめると、上記研究は、ＦＸＩを、抗血栓療法に妥当な標的として、強く支持する。

【0134】

ＦＸＩａ抗体および抗原結合性断片
本発明は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに特異的に結合する抗体を提供する。いく
つかの実施形態では、本発明は、ヒト、ウサギ、およびカニクイザルのＦＸＩおよび／も
しくはＦＸＩａにも特異的に結合する抗体を提供する。本発明の抗体は、実施例で記載さ
れる通りに単離されたヒトモノクローナル抗体およびＦａｂを含むがこれらに限定されな
い。

【0135】

本発明は、ＦＸＩタンパク質および／もしくはＦＸＩａタンパク質（例えば、ヒト、ウ
サギ、およびカニクイザルのＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａ）に特異的に結合する抗体
であって、配列番号９および２９のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む抗体を提供
する。本発明はまた、ＦＸＩタンパク質および／またはＦＸＩａタンパク質に特異的に結
合する抗体であって、以下の表１に列挙されるＶＨ ＣＤＲのうちのいずれか１つのアミ
ノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む抗体も提供する。特に、本発明は、ＦＸＩタンパク
質および／またはＦＸＩａタンパク質（例えば、ヒト、ウサギ、およびカニクイザルのＦ
ＸＩおよび／またはＦＸＩａ）に特異的に結合する抗体であって、以下の表１に列挙され
るＶＨ ＣＤＲのうちのいずれかのアミノ酸配列を有する、１つ、２つ、３つ以上のＶＨ
ＣＤＲを含む（または、代替的に、これらからなる）抗体を提供する。

【0136】

本発明は、ＦＸＩａタンパク質に特異的に結合する抗体であって、配列番号１９または
３９のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。本発明はまた、ＦＸＩ
タンパク質および／またはＦＸＩａタンパク質（例えば、ヒト、ウサギ、およびカニクイ
ザルのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ）に特異的に結合する抗体であって、以下の表１に
列挙されるＶＬ ＣＤＲのうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含
む抗体も提供する。特に、本発明は、ＦＸＩａタンパク質（例えば、ヒト、ウサギ、およ
びカニクイザルのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ）に特異的に結合する抗体であって、以
下の表１に列挙されるＶＬ ＣＤＲのうちのいずれかのアミノ酸配列を有する、１つ、２
つ、３つ以上のＶＬ ＣＤＲを含む（または、代替的に、これらからなる）抗体を提供す
る。

【0137】

本発明の他の抗体は、突然変異させているが、なお、ＣＤＲ領域内で、表１に記載され
ている配列内で描示されるＣＤＲ領域と、少なくとも６０、７０、８０、８５、９０、ま
たは９５パーセントの同一性を有するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、本発明
の他の抗体は、ＣＤＲ領域内で、表１に記載されている配列内で描示されるＣＤＲ領域と
比較して、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つ以下のアミノ酸を突然変異させた、突然
変異体のアミノ酸配列を含む。

【0138】

本発明はまた、ＦＸＩタンパク質および／またはＦＸＩａタンパク質（例えば、ヒト、
ウサギ、およびカニクイザルのＦＸＩａ）に特異的に結合する抗体のＶＨ、ＶＬ、全長重
鎖、および全長軽鎖をコードする核酸配列も提供する。このような核酸配列は、哺乳動物
細胞における発現について最適化することができる（例えば、表１は、本発明の抗体の重
鎖および軽鎖に最適化された核酸配列を示す）。

【0139】

【表1-1】

【0140】

【表1-2】

【0141】

【表1-3】

【0142】

【表1-4】

【0143】

【表1-5】

【0144】

【表1-6】

【0145】

本発明の他の抗体は、アミノ酸またはアミノ酸をコードする核酸を突然変異させている
が、表１に記載されている配列となお少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、
９０、または９５パーセントの同一性を有する抗体を含む。いくつかの実施形態は、可変
領域内で、実質的に同じ抗原結合活性を保持しながら、表１に記載されている配列内で描
示された可変領域と比較した場合に、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つ以下のアミノ
酸を突然変異させている、突然変異体のアミノ酸配列を含む。

【0146】

これらの抗体の各々は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合しうるので、ＶＨ配列
、ＶＬ配列、全長軽鎖配列、および全長重鎖配列（アミノ酸配列と、アミノ酸配列をコー
ドするヌクレオチド配列と）を「混合し、マッチさせて」、本発明の他のＦＸＩ結合性抗
体および／もしくはＦＸＩａ結合性抗体を創出することができる。このような「混合し、
マッチさせた」ＦＸＩ結合性抗体および／もしくはＦＸＩａ結合性抗体は、当技術分野で
公知の結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡおよび実施例節で記載される他のアッセイ）を
使用して調べることができる。これらの鎖を混合し、マッチさせる場合、特定のＶＨ／Ｖ
Ｌ対合に由来するＶＨ配列を、構造的に類似するＶＨ配列で置きかえるものとする。同様
に、特定の全長重鎖／全長軽鎖対合に由来する全長重鎖配列を、構造的に類似する全長重
鎖配列で置きかえるものとする。同様に、特定のＶＨ／ＶＬ対合に由来するＶＬ配列を、
構造的に類似するＶＬ配列で置きかえるものとする。同様に、特定の全長重鎖／全長軽鎖
対合に由来する全長軽鎖配列を、構造的に類似する全長軽鎖配列で置きかえるものとする
。

【0147】

したがって、一態様では、本発明は、配列番号９および２９からなる群から選択される
アミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号１９および３９からなる群から
選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する単離抗体またはその抗原結合性
領域を提供し、この場合、抗体は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａ（例えば、ヒト、ウ
サギ、およびカニクイザルのＦＸＩａ）に特異的に結合する。

【0148】

より具体的に、ある種の態様では、本発明は、配列番号９および２９；または１９およ
び３９のそれぞれから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ド
メインを有する、単離抗体またはその抗原結合性領域を提供する。

【0149】

具体的な実施形態では、ヒトのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する、本
明細書で提示される抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９のアミノ酸配列を含む
重鎖可変領域と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0150】

具体的な実施形態では、ヒトのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する、本
明細書で提示される抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２９のアミノ酸配列を含
む重鎖可変領域と、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0151】

別の態様では、本発明は、（ｉ）哺乳動物細胞における発現について最適化されたアミ
ノ酸配列であって、配列番号１１または３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含
む全長重鎖、ならびに哺乳動物細胞における発現について最適化されたアミノ酸配列であ
って、配列番号２１または４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む全長軽鎖を
有する単離抗体、または（ｉｉ）その抗原結合性部分を含む機能的タンパク質を提供する
。より具体的に、ある種の態様では、本発明は、配列番号１１および３１；または１９お
よび３９のそれぞれから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を有する単離抗体
またはその抗原結合性領域を提供する。

【0152】

具体的な実施形態では、ヒトのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する、本
明細書で提示される抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を含
む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0153】

具体的な実施形態では、ヒトのＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する、本
明細書で提示される抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を含
む重鎖可変領域と、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0154】

本明細書で使用される「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性
および抗原結合アフィニティーを付与する、抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。一
般に、各重鎖可変領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）内には、３つのＣＤＲが
あり、各軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）内には、３つのＣＤＲが
ある。

【0155】

所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列の境界は、Kabat et al. (1991), “Sequences of
Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National In
stitutes of Health, Bethesda, MD（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Al-Lazikani
et al., (1997) JMB 273, 927-948（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）、Lefranc e
t al., (2003) Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77（「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）によ
り記載されているスキーム、または「組合せ」システムを含む、周知の多数のスキームの
うちのいずれかを使用して、たやすく決定することができる。

【0156】

例えば、Ｋａｂａｔによれば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）内の抗体であるＮＯＶ１０９
０のＣＤＲアミノ酸残基は、３１～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６６（ＨＣＤＲ２）、お
よび９９～１１１（ＨＣＤＲ３）と番号付けされており、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）内の
ＣＤＲアミノ酸残基は、２２～３５（ＬＣＤＲ１）、５１～５７（ＬＣＤＲ２）、および
９０～１００（ＬＣＤＲ３）と番号付けされている。Ｃｈｏｔｈｉａによれば、ＶＨ内の
ＣＤＲアミノ酸は、２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５７（ＨＣＤＲ２）、および９９
～１１１（ＨＣＤＲ３）と番号付けされており、ＶＬ内のアミノ酸残基は、２５～３３（
ＬＣＤＲ１）、５１～５３（ＬＣＤＲ２）、および９２～９９（ＬＣＤＲ３）と番号付け
されている。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲ定義を組み合わせることに
より、ＣＤＲは、ヒトＶＨ内のアミノ酸残基２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６６（Ｈ
ＣＤＲ２）、および９９～１１１（ＨＣＤＲ３）、ならびにヒトＶＬ内のアミノ酸残基２
２～３５（ＬＣＤＲ１）、５１～５７（ＬＣＤＲ２）、および９０～１００（ＬＣＤＲ３
）からなる。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲ定義を組み合わせることに
より、「組合せ」ＣＤＲは、ヒトＶＨ内のアミノ酸残基２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５０
～６６（ＨＣＤＲ２）、および９９～１０８（ＨＣＤＲ３）、ならびにヒトＶＬ内のアミ
ノ酸残基２４～３８（ＬＣＤＲ１）、５４～６０（ＬＣＤＲ２）、および９３～１０１（
ＬＣＤＲ３）からなる。別の例として、ＩＭＧＴによれば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）内
のＣＤＲアミノ酸残基は、２６～３３（ＨＣＤＲ１）、５１～５８（ＨＣＤＲ２）、およ
び９７～１０８（ＨＣＤＲ３）と番号付けされており、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）内のＣ
ＤＲアミノ酸残基は、２７～３６（ＬＣＤＲ１）、５４～５６（ＬＣＤＲ２）、および９
３～１０１（ＬＣＤＲ３）と番号付けされている。表１は、抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例
えば、ＮＯＶ１０９０およびＮＯＶ１４０１について、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、組
合せ、およびＩＭＧＴによる、例示的なＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ
１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を提示する。別の態様では、本発明は、表１に記載さ
れている、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、またはそれらの組合
せを含むＦＸＩａ結合性抗体を提供する。抗体のＶＨ ＣＤＲ１のアミノ酸配列を、配列
番号３および２３に示す。抗体のＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号４および２
４に示されている。抗体のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号５および２５に示
されている。抗体のＶＬ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１３および３３に示され
ている。抗体のＶＬ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１４および３４に示されてい
る。抗体のＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５および３５に示されている。
これらのＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔシステムを使用して表される。

【0157】

代替的に、Ｃｈｏｔｈｉａシステム（Al-Lazikaniら、（1997）、JMB 273 927～948）
を使用して規定される通り、抗体のＶＨ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号６および
２６に示されている。抗体のＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号７および２７に
示されている。抗体のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号８および２８に示され
ている。抗体のＶＬ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１６および３６に示されてい
る。抗体のＶＬ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１７および３７に示されている。
抗体のＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１８および３８に示されている。

【0158】

代替的に、組合せシステムを使用して規定される通り、抗体のＶＨ ＣＤＲ１のアミノ
酸配列は、配列番号４６に示されている。抗体のＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列
番号４に示されている。抗体のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号５に示されて
いる。抗体のＶＬ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号３３に示されている。抗体のＶ
Ｌ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１４に示されている。抗体のＶＬ ＣＤＲ３の
アミノ酸配列は、配列番号１５に示されている。

【0159】

代替的に、ＩＭＧＴ番号付けスキームを使用して規定される通り、抗体のＶＨ ＣＤＲ
１のアミノ酸配列は、配列番号４３に示されている。抗体のＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配
列は、配列番号４４に示されている。抗体のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号
４５に示されている。抗体のＶＬ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号４７に示されて
いる。抗体のＶＬ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号３７に示されている。抗体のＶ
Ｌ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１５に示されている。

【0160】

これらの抗体の各々は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに結合することが可能であり
、抗原結合特異性は主に、ＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、およびＣＤＲ３領域によりもた
らされることを踏まえれば、各抗体は、本発明の他のＦＸＩ結合性分子および／もしくは
ＦＸＩａ結合性分子を創出するのに、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ Ｃ
ＤＲ３、ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含有するこ
とが好ましいが、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、およびＶＨ ＣＤＲ３配列
、ならびにＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列を、「
混合し、マッチさせる」ことができる（すなわち、異なる抗体に由来するＣＤＲを、混合
し、マッチさせることができる）。このような「混合し、マッチさせた」ＦＸＩ結合性分
子および／もしくはＦＸＩａ結合性抗体は、当技術分野で公知の結合アッセイおよび実施
例で記載される結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、ＳＥＴ、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）ア
ッセイ）を使用して調べることができる。ＶＨ ＣＤＲ配列を混合し、マッチさせる場合
は、特定のＶＨ配列に由来するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、および／またはＣＤＲ３配
列を、構造的に類似するＣＤＲ配列で置きかえるものとする。同様に、ＶＬ ＣＤＲ配列
を混合し、マッチさせる場合は、特定のＶＬ配列に由来するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列
、および／またはＣＤＲ３配列を、構造的に類似するＣＤＲ配列で置きかえるものとする
。当業者には、新規のＶＨ配列およびＶＬ配列を、１つまたは複数のＶＨ ＣＤＲ領域配
列および／またはＶＬ ＣＤＲ領域配列を、本発明のモノクローナル抗体のための、本明
細書で示されるＣＤＲ配列に由来する、構造的に類似する配列で置換することにより創出
しうることがたやすく明らかであろう。前出に加えて、一実施形態では、本明細書で記載
される抗体の抗原結合性断片は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ
３、またはＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むことが可能で
あり、この場合、断片は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに、単一の可変ドメインとし
て結合する。

【0161】

本発明のある種の実施形態では、抗体またはそれらの抗原結合性断片は、表１に記載さ
れているＦａｂの重鎖および軽鎖配列を有しうる。より具体的には、抗体またはその抗原
結合性断片は、ＮＯＶ１０９０およびＮＯＶ１４０１の重鎖および軽鎖配列を有しうる。

【0162】

本発明の他の実施形態では、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに特異的に結合する抗体
または抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔにより規定され、表１に記載されている、重鎖可変
領域のＣＤＲ１、重鎖可変領域のＣＤＲ２、重鎖可変領域のＣＤＲ３、軽鎖可変領域のＣ
ＤＲ１、軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む。本発明のさら
に他の実施形態では、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する抗体または抗原
結合性断片は、Ｃｈｏｔｈｉａにより規定され、表１において記載されている重鎖可変領
域のＣＤＲ１、重鎖可変領域のＣＤＲ２、重鎖可変領域のＣＤＲ３、軽鎖可変領域のＣＤ
Ｒ１、軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む。他の実施形態で
は、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する抗体または抗原結合性断片は、組
合せシステムにより規定され、表１において記載されている重鎖可変領域のＣＤＲ１、重
鎖可変領域のＣＤＲ２、重鎖可変領域のＣＤＲ３、軽鎖可変領域のＣＤＲ１、軽鎖可変領
域のＣＤＲ２、および軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む。本発明のさらに他の実施形態では
、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する抗体または抗原結合性断片は、ＩＭ
ＧＴにより規定され、表１において記載されている重鎖可変領域のＣＤＲ１、重鎖可変領
域のＣＤＲ２、重鎖可変領域のＣＤＲ３、軽鎖可変領域のＣＤＲ１、軽鎖可変領域のＣＤ
Ｒ２、および軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む。

【0163】

具体的な実施形態では、本発明は、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する
抗体であって、配列番号３の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４の重鎖可変領域のＣＤ
Ｒ２；配列番号５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；
配列番号１４の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１５の軽鎖可変領域のＣＤＲ３
を含む抗体を含む。

【0164】

具体的な実施形態では、本発明は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに特異的に結合す
る抗体であって、配列番号２３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号２４の重鎖可変領域
のＣＤＲ２、配列番号２５の重鎖可変領域のＣＤＲ３、配列番号３３の軽鎖可変領域のＣ
ＤＲ１、配列番号３４の軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および配列番号３５の軽鎖可変領域の
ＣＤＲ３を含む抗体を含む。

【0165】

具体的な実施形態では、本発明は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに特異的に結合す
る抗体であって、配列番号６の重鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号７の重鎖可変領域のＣ
ＤＲ２、配列番号８の重鎖可変領域のＣＤＲ３、配列番号１６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１
、配列番号１７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および配列番号１８の軽鎖可変領域のＣＤＲ
３を含む抗体を含む。

【0166】

具体的な実施形態では、本発明は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに特異的に結合す
る抗体であって、配列番号２６の重鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号２７の重鎖可変領域
のＣＤＲ２、配列番号２８の重鎖可変領域のＣＤＲ３、配列番号３６の軽鎖可変領域のＣ
ＤＲ１、配列番号３７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および配列番号３８の軽鎖可変領域の
ＣＤＲ３を含む抗体を含む。

【0167】

本明細書の具体的な実施形態では、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する
抗体であって、配列番号４３の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４４の重鎖可変領域の
ＣＤＲ２；配列番号４５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号４７の軽鎖可変領域のＣＤ
Ｒ１；配列番号３７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１５の軽鎖可変領域のＣ
ＤＲ３を含む抗体が提示される。

【0168】

本明細書の具体的な実施形態では、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに特異的に結合する
抗体であって、配列番号４６の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４の重鎖可変領域のＣ
ＤＲ２；配列番号５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号３３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１
；配列番号１４の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１５の軽鎖可変領域のＣＤＲ
３を含む抗体が提示される。

【0169】

ある種の実施形態では、本発明は、表１に記載されている、ＦＸＩおよび／またはＦＸ
Ｉａに特異的に結合する抗体または抗原結合性断片を含む。好ましい実施形態では、ＦＸ
Ｉおよび／またはＦＸＩａに結合する抗体または抗原結合性断片は、ＮＯＶ１０９０およ
びＮＯＶ１４０１である。

【0170】

抗体の可変領域または全長鎖が、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子を使用する
系から得られる場合、本明細書で使用されるヒト抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産
物」であるかまたはこれ「に由来する」、重鎖もしくは軽鎖可変領域または全長重鎖もし
くは軽鎖を含む。このような系は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニ
ックマウスを、対象の抗原で免疫化するか、または対象の抗原を伴うファージ上で提示さ
れるヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることを含む。ヒト生殖
細胞系列の免疫グロブリン配列「の産物」であるかまたはこれ「に由来する」ヒト抗体は
、ヒト抗体のアミノ酸配列を、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し
、配列がヒト抗体の配列と最も近似する（すなわち、同一性％が最大である）ヒト生殖細
胞系列の免疫グロブリン配列を選択することにより、それ自体として同定することができ
る。

【0171】

特定のヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列「の産物」であるかまたはこれ「に由来
する」ヒト抗体は、例えば、自然発生の体細胞突然変異または部位特異的突然変異の意図
的な導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較したアミノ酸の差異を含有しうる。しかし
、ＶＨフレームワーク領域またはＶＬフレームワーク領域では、選択されたヒト抗体は、
アミノ酸配列が、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸
配列と少なくとも９０％の同一であり、ヒト抗体を、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリ
ンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較した場合に、ヒトとして同定
するアミノ酸残基を含有することが典型的である。ある種の場合には、ヒト抗体は、アミ
ノ酸配列が、生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、
少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または少なくとも９５％、なおまたは、少
なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一でありうる。

【0172】

組換えヒト抗体は、ＶＨフレームワーク領域内またはＶＬフレームワーク領域内のヒト
生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列との、１０アミノ
酸以下の差異を提示することが典型的である。ある種の場合には、ヒト抗体は、生殖細胞
系列の免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列との、５アミノ酸以下、な
おまたは、４、３、２、または１アミノ酸以下の差異を提示しうる。ヒト生殖細胞系列の
免疫グロブリン遺伝子の例は、下記で記載される生殖細胞系列の可変ドメイン断片のほか
、ＤＰ４７およびＤＰＫ９も含むがこれらに限定されない。

【0173】

相同抗体
さらに別の実施形態では、本発明は、表１に記載されている配列（例えば、配列番号２
９、３１、３９、または４１）と相同なアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性
断片を提供するが、抗体は、ＦＸＩタンパク質および／またはＦＸＩａタンパク質（例え
ば、ヒトＦＸＩａ、ウサギＦＸＩａ、およびカニクイザルＦＸＩａ）に結合し、ＮＯＶ１
０９０およびＮＯＶ１４０１など、表１に記載されている抗体の、所望の機能的特性を保
持する。具体的な態様では、このような相同抗体は、表１に記載されているＣＤＲアミノ
酸配列（例えば、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、ＩＭＧＴ ＣＤＲ、ま
たは組合せＣＤＲ）を保持する。

【0174】

例えば、本発明は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む単離抗体またはそ
の機能的な抗原結合性断片を提供し、この場合、重鎖可変ドメインは、配列番号９および
２９からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９０％、
または少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含み；軽鎖可変ドメインは、配列番号１９
および３９からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９
０％、または少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含み；抗体は、ＦＸＩおよび／また
はＦＸＩａ（例えば、ヒトＦＸＩａ、ウサギＦＸＩａ、およびカニクイザルＦＸＩａ）に
特異的に結合する。一実施形態では、単離抗体またはその機能的な抗原結合性断片は、重
鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含み、この場合、重鎖可変ドメインは、配列番
号９のアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％
同一なアミノ酸配列を含み；軽鎖可変ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列と、少な
くとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含み；
抗体は、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ（例えば、ヒトＦＸＩａ、ウサギＦＸＩａ、およ
びカニクイザルＦＸＩａ）に特異的に結合する。一実施形態では、単離抗体またはその機
能的な抗原結合性断片は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含み、この場合、
重鎖可変ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９
０％、または少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含み；軽鎖可変ドメインは、配列番
号３９のアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５
％同一なアミノ酸配列を含み；抗体は、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ（例えば、ヒトＦ
ＸＩａ、ウサギＦＸＩａ、およびカニクイザルＦＸＩａ）に特異的に結合する。本発明の
ある種の態様では、重鎖および軽鎖配列は、Ｋａｂａｔにより規定される、ＨＣＤＲ１配
列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤ
Ｒ３配列、例えば、それぞれ、配列番号３、４、５、１３、１４、および１５をさらに含
む。本発明のある種の他の態様では、重鎖配列および軽鎖配列は、Ｃｈｏｔｈｉａにより
規定される、ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣ
ＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列、例えば、それぞれ、配列番号６、７、８、１６、１
７、および１８をさらに含む。ある種の他の態様では、重鎖配列および軽鎖配列は、組合
せシステムにより規定される、ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣ
ＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列、例えば、それぞれ、配列番号４６
、４、５、３３、１４、および１５をさらに含む。ある種の他の態様では、重鎖配列およ
び軽鎖配列は、ＩＭＧＴにより規定される、ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ
３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列、例えば、それぞれ、
配列番号４３、４４、４５、４７、３７、および１５をさらに含む。

【0175】

他の実施形態では、ＶＨアミノ酸配列および／またはＶＬアミノ酸配列は、表１に示さ
れる配列と、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８
％、または９９％同一でありうる。他の実施形態では、ＶＨアミノ酸配列および／または
ＶＬアミノ酸配列は、１、２、３、４、または５カ所以下のアミノ酸位置におけるアミノ
酸置換を除き同一でありうる。表１に記載されている抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域と大
きな（すなわち、８０％以上の）同一性を有するＶＨ領域およびＶＬ領域を有する抗体は
、配列番号１０または３０、および配列番号２０および４０のそれぞれをコードする核酸
分子の突然変異誘発（例えば、部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発）
の後、本明細書で記載される機能アッセイを使用して、コードされる改変抗体を、機能の
保持について調べることにより得ることができる。

【0176】

他の実施形態では、全長重鎖アミノ酸配列および／または全長軽鎖アミノ酸配列は、表
１に示される配列と（例えば、配列番号１１および／もしくは２１、または３１および／
もしくは４１）、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、または９９％同一でありうる。配列番号１１または３１のうちのいずれかの全長
重鎖、および配列番号２１または４１のうちのいずれかの全長軽鎖と大きな（すなわち、
８０％以上の）同一性を有する全長重鎖および全長軽鎖を有する抗体は、このようなポリ
ペプチドをコードする核酸分子の突然変異誘発（例えば、部位特異的突然変異誘発または
ＰＣＲ媒介突然変異誘発）の後、本明細書で記載される機能アッセイを使用して、コード
される改変抗体を、機能の保持について調べることにより得ることができる。

【0177】

本明細書の一態様では、重鎖および軽鎖を含む単離抗体またはその機能的な抗原結合性
断片を提示し、この場合、重鎖は、配列番号１１および３１からなる群から選択されるア
ミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一なア
ミノ酸配列を含み；軽鎖は、配列番号２１および４１からなる群から選択されるアミノ酸
配列と、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一なアミノ酸
配列を含み；抗体は、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ（例えば、ヒトＦＸＩａ、ウサギＦ
ＸＩａ、およびカニクイザルＦＸＩａ）に特異的に結合する。一実施形態では、単離抗体
またはその機能的な抗原結合性断片は、重鎖および軽鎖を含み、この場合、重鎖は、配列
番号１１のアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９
５％同一なアミノ酸配列を含み；軽鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列と、少なくとも８
０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含み；抗体は、
ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ（例えば、ヒトＦＸＩａ、ウサギＦＸＩａ、およびカニク
イザルＦＸＩａ）に特異的に結合する。一実施形態では、単離抗体またはその機能的な抗
原結合性断片は、重鎖および軽鎖を含み、この場合、重鎖は、配列番号３１のアミノ酸配
列と、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一なアミノ酸配
列を含み；軽鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも９０
％、または少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含み；抗体は、ＦＸＩおよび／または
ＦＸＩａ（例えば、ヒトＦＸＩａ、ウサギＦＸＩａ、およびカニクイザルＦＸＩａ）に特
異的に結合する。本発明のある種の態様では、重鎖配列および軽鎖配列は、Ｋａｂａｔに
より規定される、ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、
ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列、例えば、それぞれ、配列番号３、４、５、１３
、１４、および１５をさらに含む。本発明のある種の他の態様では、重鎖配列および軽鎖
配列は、Ｃｈｏｔｈｉａにより規定される、ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ
３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列、例えば、それぞれ、
配列番号６、７、８、１６、１７、および１８をさらに含む。ある種の他の態様では、重
鎖配列および軽鎖配列は、組合せシステムにより規定される、ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ
２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列、例
えば、それぞれ、配列番号４６、４、５、３３、１４、および１５をさらに含む。ある種
の他の態様では、重鎖配列および軽鎖配列は、ＩＭＧＴにより規定される、ＨＣＤＲ１配
列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤ
Ｒ３配列、例えば、それぞれ、配列番号４３、４４、４５、４７、３７、および１５をさ
らに含む。

【0178】

他の実施形態では、全長重鎖および／または全長軽鎖のヌクレオチド配列は、表１に示
される配列（例えば、配列番号１２および／もしくは２２、または３２および／もしくは
４２）と６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９
％同一でありうる。

【0179】

他の実施形態では、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のヌクレオチド配列は、
表１に示される配列（例えば、配列番号１０および／もしくは２０、または３０および／
もしくは４０）と６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％ま
たは９９％同一でありうる。

【0180】

本明細書で使用される、２つの配列の間の同一性パーセントとは、２つの配列の最適な
アライメントのために導入される必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮
する配列により共有される、同一な位置の数の関数（すなわち、同一性％＝同一な位置の
数／位置の総数×１００）である。２つの配列の間の配列の比較および同一性パーセント
の決定は、下記の非限定的な例で記載されている、数学的アルゴリズムを使用して達成す
ることができる。

【0181】

加えて、または代替的に、本発明のタンパク質配列は、公表されたデータベースに照ら
して検索を実施する、例えば、関連の配列を同定するための「クエリー配列」としてさら
に使用することもできる。例えば、このような検索は、Altschulら、1990 J. Mol. Biol.
215:403～10によるＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施すること
ができる。

【0182】

保存的修飾を伴う抗体
ある種の実施形態では、本発明の抗体は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ
３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列
を含む軽鎖可変領域を有し、この場合、これらのＣＤＲ配列のうちの１つまたは複数は、
本明細書で記載される抗体またはそれらの保存的修飾に基づき指定されたアミノ酸配列を
有し、抗体は、本発明のＦＸＩａ結合性抗体の所望の機能的特性を保持する。

【0183】

したがって、本発明は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖
可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領
域からなる単離抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１アミノ
酸配列が、配列番号３および２３、ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され
、重鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号４および２４、ならびにそれらの保
存的修飾からなる群から選択され、重鎖可変領域のＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号５
および２５、ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され、軽鎖可変領域のＣＤ
Ｒ１アミノ酸配列が、配列番号１３および３３、ならびにそれらの保存的修飾からなる群
から選択され、軽鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号１４および３４、なら
びにそれらの保存的修飾からなる群から選択され、軽鎖可変領域のＣＤＲ３アミノ酸配列
が、配列番号１５および３５、ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され、Ｌ
ＯＸ－１に特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。

【0184】

本明細書の一態様では、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖
可変領域、ならびにＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領
域からなる単離抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域のＣＤＲ１アミノ
酸配列が、表１に記載されているアミノ酸配列およびその保存的修飾からなる群から選択
され；重鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、表１に記載されているアミノ酸配列およ
びその保存的修飾からなる群から選択され；重鎖可変領域のＣＤＲ３アミノ酸配列が、表
１に記載されているアミノ酸配列およびその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可
変領域のＣＤＲ１アミノ酸配列が、表１に記載されているアミノ酸配列およびその保存的
修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域のＣＤＲ２アミノ酸配列が、表１に記載され
ているアミノ酸配列およびその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域のＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列が、表１に記載されているアミノ酸配列およびその保存的修飾からなる
群から選択され；抗体またはその抗原結合性断片が、ＦＸＩａに特異的に結合する。

【0185】

他の実施形態では、本発明の抗体は、哺乳動物細胞における発現について最適化されて
おり、全長重鎖配列および全長軽鎖配列を有し、これらの配列のうちの１つまたは複数は
、本明細書で記載される抗体またはそれらの保存的修飾に基づき指定されたアミノ酸配列
を有し、抗体は、本発明のＦＸＩａ結合性抗体の所望の機能的特性を保持する。したがっ
て、本発明は、全長重鎖および全長軽鎖からなる、哺乳動物細胞における発現について最
適化された単離抗体であって、全長重鎖が、配列番号１１または３１、ならびにそれらの
保存的修飾の群から選択されるアミノ酸配列を有し、全長軽鎖が、配列番号２１または４
１、ならびにそれらの保存的修飾の群から選択されるアミノ酸配列を有し、ＦＸＩおよび
／もしくはＦＸＩａ（例えば、ヒト、ウサギ、およびカニクイザルのＦＸＩａ）に特異的
に結合する抗体を提供する。

【0186】

同じエピトープに結合する抗体
本発明は、表１に記載されているＦＸＩ結合性抗体および／もしくはＦＸＩａ結合性抗
体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。したがって、ＦＸＩおよび／またはＦＸ
Ｉａ結合アッセイ（実施例節で記載されるＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ結合アッセイな
ど）において、本発明の他の抗体と競合する（例えば、本発明の他の抗体の結合を、同じ
エピトープまたは重複するエピトープへの結合により、統計学的に有意な形で競合的に阻
害する）それらの能力に基づき、さらなる抗体を同定することができる。本発明の抗体の
、ＦＸＩタンパク質および／またはＦＸＩａタンパク質への結合を阻害する被験抗体の能
力により、被験抗体が、その抗体と、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａへの結合について競
合することが可能であり、このような抗体は、非限定的な理論によれば、ＦＸＩタンパク
質および／またはＦＸＩａタンパク質上の、それが競合する抗体と同じであるかまたは関
連の（例えば、構造的に類似するか、または空間的に近接した）エピトープに結合しうる
ことが裏付けられる。ある種の実施形態では、本発明の抗体と同じＦＸＩおよび／または
ＦＸＩａ上のエピトープに結合する抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。このような
ヒトモノクローナル抗体は、本明細書で記載される通りに、調製および単離することがで
きる。

【0187】

本明細書で使用される通り、等モル濃度の競合抗体の存在下で、競合抗体が、本発明の
抗体または抗原結合性断片（例えば、ＮＯＶ１４０１またはＮＯＶ１０９０）と同じＦＸ
Ｉエピトープおよび／またはＦＸＩａエピトープに結合し、本発明の抗体または抗原結合
性断片の、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａへの結合を、５０％を超えて（例えば、８０％
、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）阻害する場合、抗体は、結合につい
て「競合する」。これは、例えば、当業者に周知の方法のうちのいずれかにより、競合結
合アッセイにおいて決定することができる。

【0188】

本明細書で使用される抗体またはその抗原結合性断片は、前記競合抗体またはその抗原
結合性断片が、本発明の抗体または抗原結合性断片と同じＦＸＩエピトープおよび／もし
くはＦＸＩａエピトープ、またはこれと重複するＦＸＩエピトープおよび／もしくはＦＸ
Ｉａエピトープに結合しない限りにおいて、本発明のＦＸＩ抗体および／もしくはＦＸＩ
ａ抗体または抗原結合性断片（例えば、ＮＯＶ１４０１またはＮＯＶ１０９０）と「競合
」しない。本明細書で使用される競合抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）本発明の
抗体または抗原結合性断片が、その標的に結合することを、立体的に遮断し（例えば、前
記競合抗体が、重複しないＦＸＩエピトープおよび／またはＦＸＩａエピトープの近傍に
結合し、本発明の抗体または抗原結合性断片が、その標的に結合することを物理的に防止
する場合）；かつ／あるいは（ｉｉ）異なる、重複しないＦＸＩエピトープおよび／また
はＦＸＩａエピトープに結合し、前記タンパク質に、本発明のＦＸＩ抗体および／もしく
はＦＸＩａ抗体または抗原結合性断片が、前記コンフォメーション変化の非存在下で生じ
る形では結合しないように、コンフォメーション変化を、ＦＸＩタンパク質および／また
はＦＸＩａタンパク質に誘導する、競合抗体またはその抗原結合性断片を含まない。

【0189】

操作抗体および修飾抗体
出発抗体から特性を改変した修飾抗体を操作する出発材料として、本明細書で示される
ＶＨ配列および／またはＶＬ配列のうちの１つまたは複数を有する抗体を使用して、本発
明の抗体をさらに調製することができる。抗体は、一方または両方の可変領域（すなわち
、ＶＨおよび／またはＶＬ）内、例えば、１つもしくは複数のＣＤＲ領域内、および／ま
たは１つもしくは複数のフレームワーク領域内の１つまたは複数の残基を修飾することに
より操作することができる。加えて、または代替的に、抗体は、定常領域内の残基を修飾
して、例えば、抗体のエフェクター機能を改変することによっても操作することができる
。

【0190】

実施しうる可変領域操作のうちの１つの種類は、ＣＤＲグラフティングである。抗体は
、主に６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）内に位置するアミノ酸残基を介し
て、標的抗原と相互作用する。この理由で、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個別の抗体の間
の多様性が、ＣＤＲの外部の配列より大きい。ＣＤＲ配列は、大半の抗体－抗原間相互作
用の一因となるため、異なる特性を伴う異なる抗体に由来するフレームワーク配列へとグ
ラフトされた特異的自然発生抗体に由来するＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築するこ
とにより、特異的自然発生抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能であ
る（例えば、Riechmann, L.ら、1998 Nature 332:323～327; Jones, P.ら、1986 Nature
321:522～525; Queen, C.ら、1989 Proc. Natl. Acad. U.S.A. 86:10029～10033；Ｗｉｎ
ｔｅｒによる米国特許第５，２２５，５３９号明細書、ならびにＱｕｅｅｎらによる米国
特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３
，７６２号明細書；および同第６，１８０，３７０号明細書を参照されたい）。

【0191】

したがって、本発明の別の実施形態は、配列番号３および２３からなる群から選択され
るアミノ酸配列を有するＣＤＲ１配列、配列番号４および２４からなる群から選択される
アミノ酸配列を有するＣＤＲ２配列、配列番号５および２５からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を有するＣＤＲ３配列のそれぞれを含む重鎖可変領域と、配列番号１３および
３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１配列、配列番号１４および
３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２配列、ならびに配列番号１
５および３５からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３配列のそれぞれを
有する軽鎖可変領域とを含む単離抗体またはその抗原結合性断片に関する。したがって、
このような抗体は、モノクローナル抗体のＶＨ ＣＤＲ配列およびＶＬ ＣＤＲ配列を含
有するが、これらの抗体に由来する異なるフレームワーク配列を含有しうる。

【0192】

このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系列の抗体遺伝子配列を含む公表されたＤ
ＮＡデータベースまたは公表された参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖お
よび軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、ヒト生殖細胞系列の配列データベ
ースである「ＶＢａｓｅ」（インターネットのmrc-cpe.cam.ac.uk/vbaseで入手可能であ
る）のほか、それらの各々の内容が、参照により本明細書に明示的に組み込まれる、Kaba
t, E. A.ら、1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest、5版、U.S. Depa
rtment of Health and Human Services、NIH Publication第91-3242号; Tomlinson, I. M
.ら、1992 J. Mol. Biol. 227:776～798；およびCox, J. P. L.ら、1994 Eur. J Immunol
. 24:827～836においても見出すことができる。

【0193】

本発明の抗体における使用のためのフレームワーク配列の例は、本発明の選択された抗
体により使用されるフレームワーク配列、例えば、本発明のモノクローナル抗体により使
用されるコンセンサス配列および／またはフレームワーク配列と構造的に類似するフレー
ムワーク配列である。ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、およびＶＨ ＣＤＲ３
配列、ならびにＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列は
、フレームワーク配列が由来する生殖細胞系列の免疫グロブリン遺伝子内で見出される配
列と同一の配列を有するフレームワーク領域へとグラフトすることもでき、ＣＤＲ配列は
、生殖細胞系列配列と比較して、１つまたは複数の突然変異を含有するフレームワーク領
域へとグラフトすることもできる。例えば、ある種の場合には、フレームワーク領域内の
残基を突然変異させて、抗体の抗原結合能力を維持または増強することが有益であると見
出されている（例えば、Ｑｕｅｅｎらによる米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同
第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；および同第６，１８
０，３７０号明細書を参照されたい）。本明細書で記載される抗体および抗原結合性断片
をその上に構築する足場として活用されうるフレームワークは、ＶＨ１Ａ、ＶＨ１Ｂ、Ｖ
Ｈ３、Ｖｋ１、Ｖｌ２、およびＶｋ２を含むがこれらに限定されない。当技術分野では、
さらなるフレームワークが知られており、例えば、インターネットのvbase.mrc-cpe.cam.
ac.uk/index.php?&MMN_position=1:1上のｖＢａｓｅデータベースにおいて見出すことが
できる。

【0194】

したがって、本発明の実施形態は、配列番号９および２９からなる群から選択されるア
ミノ酸配列、またはこのような配列のフレームワーク領域内に１、２、３、４、もしくは
５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を含
む重鎖可変領域を含み、配列番号１９または３９からなる群から選択されるアミノ酸配列
、またはこのような配列のフレームワーク領域内に１、２、３、４、もしくは５カ所のア
ミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可
変領域をさらに含む、単離ＦＸＩａ結合性抗体またはそれらの抗原結合性断片に関する。

【0195】

可変領域修飾の別の種類は、「アフィニティー成熟」として公知の、ＶＨ ＣＤＲ１領
域内、ＶＨ ＣＤＲ２領域内、および／もしくはＶＨ ＣＤＲ３領域内、ならびに／また
はＶＬ ＣＤＲ１領域内、ＶＬ ＣＤＲ２領域内、および／もしくはＶＬ ＣＤＲ３領域
内のアミノ酸残基を突然変異させて、これにより、対象の抗体の１つまたは複数の結合特
性（例えば、アフィニティー）を改善することである。部位特異的突然変異誘発またはＰ
ＣＲ媒介突然変異誘発を実施して、突然変異を導入することができ、本明細書で記載され
、実施例節でも提示される、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイに
おいて、抗体結合性または他の対象の機能的特性に対する効果を査定することができる。
保存的修飾（上記で論じた）を導入することができる。突然変異は、アミノ酸の置換の場
合もあり、付加の場合もあり、欠失の場合もある。さらに、ＣＤＲ領域内の、典型的には
１つ、２つ、３つ、４つ、または５つ以下の残基も改変する。

【0196】

したがって、別の実施形態では、本発明は、配列番号３および２３からなる群から選択
されるアミノ酸配列、または配列番号３および２３と比較して、１、２、３、４、もしく
は５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を
有するＶＨ ＣＤＲ１領域、配列番号４および２４からなる群から選択されるアミノ酸配
列、または配列番号４および２４と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ
酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤ
Ｒ２領域、配列番号５および２５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番
号５および２５と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸
欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３領域、配列番
号１３および３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１３および３
３と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしく
はアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１領域、配列番号１４および
３４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１４および３４と比較して
、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付
加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２領域、ならびに配列番号１５および３５
からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５および３５と比較して、１
、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を
有するアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３領域を有する重鎖可変領域からなる単離ＦＸ
Ｉａ結合性抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。

【0197】

したがって、別の実施形態では、本発明は、配列番号６および２６からなる群から選択
されるアミノ酸配列、または配列番号６および２６と比較して、１、２、３、４、もしく
は５カ所のアミノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を
有するＶＨ ＣＤＲ１領域、配列番号７および２７からなる群から選択されるアミノ酸配
列、または配列番号７および２７と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ
酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤ
Ｒ２領域、ならびに配列番号８および２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、また
は配列番号８および２８と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、
アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３領域
を有する重鎖可変領域と、配列番号１６および３６からなる群から選択されるアミノ酸配
列、または配列番号１６および３６と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミ
ノ酸置換、アミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ Ｃ
ＤＲ１領域、配列番号１７および３７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配
列番号１７および３７と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、ア
ミノ酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２領域、
ならびに配列番号１８および３８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番
号１８および３８と比較して、１、２、３、４、もしくは５カ所のアミノ酸置換、アミノ
酸欠失、もしくはアミノ酸付加を有するアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３領域を有す
る軽鎖可変領域とからなる単離ＦＸＩａ結合性抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供
する。

【0198】

抗原結合性ドメインの、代替的なフレームワークまたは足場へのグラフティング
結果として得られるポリペプチドが、ＦＸＩａに特異的に結合する少なくとも１つの結
合性領域を含む限りにおいて、多種多様な抗体／免疫グロブリンのフレームワークまたは
足場を援用することができる。このようなフレームワークまたは足場は、ヒト免疫グロブ
リンまたはそれらの断片の５つの主要なイディオタイプを含み、好ましくはヒト化側面を
有する他の動物種の免疫グロブリンを含む。この点で、ラクダ科動物において同定される
単一重鎖抗体などの単一重鎖抗体は、特に対象である。当業者により、新規のフレームワ
ーク、足場、および断片が、発見および開発され続けている。

【0199】

一態様では、本発明は、本発明のＣＤＲをグラフトしうる非免疫グロブリン足場を使用
して、非免疫グロブリンベースの抗体を作り出すことに関する。それらが、標的のＦＸＩ
タンパク質および／またはＦＸＩａタンパク質に特異的な結合性領域を含む限りにおいて
、公知または将来の非免疫グロブリンフレームワークおよび非免疫グロブリン足場を援用
することができる。公知の非免疫グロブリンフレームワークおよび非免疫グロブリン足場
は、フィブロネクチン（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａ
ｌｔｈａｍ、ＭＡ）、アンキリン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｒｔｎｅｒｓ ＡＧ、Ｚｕ
ｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｌｔｄ．、Ｃ
ａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ；およびＡｂｌｙｎｘ ｎｖ、Ｚｗｉｊｎａａｒｄｅ、Ｂｅｌｇ
ｉｕｍ）、リポカリン（Ｐｉｅｒｉｓ Ｐｒｏｔｅｏｌａｂ ＡＧ、Ｆｒｅｉｓｉｎｇ、
Ｇｅｒｍａｎｙ）、低分子モジュラー免疫医薬（Ｔｒｕｂｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）、マキシボディ（Ａｖｉｄｉａ，Ｉｎｃ
．、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）、プロテインＡ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ ＡＧ、Ｓ
ｗｅｄｅｎ）、およびアフィリン（ガンマ－クリスタリンまたはユビキチン）（Ｓｃｉｌ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＧｍｂＨ、Ｈａｌｌｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むがこれらに限定さ
れない。

【0200】

フィブロネクチン足場は、ＩＩＩ型フィブロネクチンドメイン（例えば、ＩＩＩ型フィ
ブロネクチンの第１０モジュール（１０ Ｆｎ３ドメイン））に基づく。ＩＩＩ型フィブ
ロネクチンドメインは、それら自体が互いに対してパックされてタンパク質のコアを形成
し、ベータ鎖を互いへと接続し、溶媒へと露出されるループもさらに含有する（ＣＤＲと
類似する）、２つのベータシートの間に分配された、７つまたは８つのベータ鎖を有する
。ベータシートサンドイッチの各エッジには、少なくとも３つのこのようなループがあり
、エッジは、ベータ鎖の方向に対して垂直なタンパク質の境界である（ＵＳ６，８１８，
４１８を参照されたい）。全体的なフォールドは、ラクダおよびラマＩｇＧ内の抗原認識
単位全体を含む最小の機能的抗体断片である重鎖可変領域のフォールドと密接に関連する
が、これらのフィブロネクチンベースの足場は、免疫グロブリンではない。この構造のた
めに、非免疫グロブリン抗体は、性質およびアフィニティーが抗体の性質およびアフィニ
ティーと類似する抗原結合特性を模倣する。これらの足場は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗
体のアフィニティー成熟の工程と類似する、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるループのランダム
化戦略およびシャフリング戦略において使用することができる。これらのフィブロネクチ
ンベースの分子は、標準的なクローニング法を使用して、分子のループ領域を本発明のＣ
ＤＲで置きかえうる、足場として使用することができる。

【0201】

アンキリン技術は、アンキリンに由来するリピートモジュールを伴うタンパク質を、異
なる標的への結合に使用しうる可変領域を保有する足場として使用することに基づく。ア
ンキリンリピートモジュールとは、２つのアンチパラレルのα－ヘリックスおよびβ－タ
ーンからなる、３３アミノ酸のポリペプチドである。可変領域の結合は、リボソームディ
スプレイを使用することにより大部分が最適化される。

【0202】

アビマーは、ＬＲＰ－１など、天然のＡドメイン含有タンパク質に由来する。これらの
ドメインは、本来、タンパク質間相互作用に使用され、ヒトでは、２５０を超えるタンパ
ク質が、構造的にＡドメインに基づく。アビマーは、アミノ酸リンカーを介して連結され
た多数の（２つ～１０の）異なる「Ａドメイン」単量体からなる。標的抗原に結合しうる
アビマーは、例えば、米国特許出願公開第２００４０１７５７５６号明細書；同第２００
５００５３９７３号明細書；同第２００５００４８５１２号明細書；および同第２００６
０００８８４４号明細書において記載されている方法を使用して創出することができる。

【0203】

アフィニティーリガンドであるアフィボディとは、プロテインＡのＩｇＧ結合性ドメイ
ンのうちの１つの足場に基づく３ヘリックスバンドルからなる、低分子の単純なタンパク
質である。プロテインＡとは、細菌である黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）に
由来する表面タンパク質である。この足場ドメインは、それらのうちの１３が、多数のリ
ガンド変異体を伴うアフィボディライブラリーを作り出す、ランダム化されている５８ア
ミノ酸からなる（例えば、ＵＳ５，８３１，０１２を参照されたい）。アフィボディ分子
は、抗体を模倣し、１５０ｋＤａである抗体の分子量と比較して、分子量が６ｋＤａであ
る。その小サイズにもかかわらず、アフィボディ分子の結合部位は、抗体の結合部位と同
様である。

【0204】

アンチカリンとは、Ｐｉｅｒｉｓ ＰｒｏｔｅｏＬａｂ ＡＧ社により開発された生成
物である。アンチカリンは、通例、化学的に感受性の化合物または不溶性の化合物の生理
学的輸送または貯蔵に関与する、広範にわたる低分子の頑健なタンパク質群であるリポカ
リンに由来する。いくつかの天然リポカリンは、ヒト組織内またはヒト体液中で生じる。
タンパク質のアーキテクチャーは、リジッドフレームワークの上部の超可変ループを伴う
免疫グロブリンを連想させる。しかし、抗体またはそれらの組換え断片とは対照的に、リ
ポカリンは、単一の免疫グロブリンドメインよりかろうじて大きい、１６０～１８０アミ
ノ酸残基を伴う単一のポリペプチド鎖からなる。結合性ポケットを構成する４つのループ
のセットは、顕著な構造可塑性を示し、様々な側鎖を許容する。したがって、異なる形状
の規定の標的分子を、高度なアフィニティーおよび特異性で認識するために、結合性部位
を独自の工程で再形成することができる。４つのループのセットを突然変異誘発すること
によりアンチカリンを開発するのには、リポカリンファミリーの１つのタンパク質である
、オオモンシロチョウ（Pieris Brassicae）のビリン結合性タンパク質（ＢＢＰ）が使用
されている。アンチカリンについて記載する特許出願の１つの例は、ＰＣＴ公開国際公開
第１９９９１６８７３号パンフレットにある。

【0205】

アフィリン分子とは、タンパク質および低分子に対する特異的なアフィニティーのため
にデザインされた低分子非免疫グロブリンタンパク質である。新たなアフィリン分子は、
それらの各々が、異なるヒト由来の足場タンパク質に基づく２つのライブラリーから非常
に迅速に選択することができる。アフィリン分子は、免疫グロブリンタンパク質に対する
いかなる構造相同性も示さない。現在、２つのアフィリン足場が援用されており、それら
のうちの一方は、ヒト水晶体の構造タンパク質であるガンマクリスタリンであり、他方は
、「ユビキチン」スーパーファミリータンパク質である。いずれのヒト足場も非常に小型
で、高度な熱安定性を示し、ｐＨ変化および変性剤に対してほぼ耐性である。この高度な
安定性は主に、タンパク質のベータシート構造の展開に起因する。ガンマクリスタリンに
由来するタンパク質の例は、ＷＯ２００１０４１４４において記載されており、「ユビキ
チン様」タンパク質の例は、ＷＯ２００４１０６３６８において記載されている。

【0206】

タンパク質エピトープ模倣体（ＰＥＭ）とは、タンパク質間相互作用に関与する主要な
二次構造である、タンパク質のベータ－ヘアピン二次構造を模倣する、中程度のサイズの
環状ペプチド様分子（分子量：１～２ｋＤａ）である。

【0207】

本発明は、ＦＸＩａタンパク質に特異的に結合する完全ヒト抗体を提供する。キメラ抗
体またはヒト化抗体と比較して、本発明のヒトＦＸＩａ結合性抗体は、ヒト対象へと投与
された場合の抗原性がさらに低減されている。

【0208】

ラクダ科動物抗体
ラマ種（アルパカ（Lama paccos）、ラマ（Lama glama）、およびビクーニャ（Lama vi
cugna））などの新世界メンバーを含む、ラクダおよびヒトコブラクダ（dromedary）（フ
タコブラクダ（Camelus bactrianus）およびヒトコブラクダ（Calelus dromaderius））
ファミリーのメンバーから得られる抗体タンパク質は、サイズ、構造的複雑性、およびヒ
ト対象に対する抗原性に関して特徴付けられている。天然で見出されるこのファミリーの
哺乳動物に由来するある種のＩｇＧ抗体は、軽鎖を欠き、したがって、他の動物に由来す
る抗体の場合の、２つの重鎖および２つの軽鎖を有する、典型的な４つの鎖の四次構造と
は構造的に異なっている。ＰＣＴ／ＥＰ９３／０２２１４（１９９４年３月３日に公表さ
れた国際公開第９４／０４６７８号パンフレット）を参照されたい。

【0209】

ＶＨＨとして同定される小型の単一の可変ドメインである、ラクダ科動物抗体の領域は
、標的に対して高いアフィニティーを有する低分子タンパク質をもたらすことから、「ラ
クダ科動物ナノボディ」として公知の低分子量抗体由来タンパク質を結果としてもたらす
遺伝子操作により得ることができる。１９９８年６月２日に取得された米国特許第５，７
５９，８０８号を参照されたい。また、Stijlemans, B.ら、2004 J Biol Chem 279:1256
～1261; Dumoulin, M.ら、2003 Nature 424:783～788; Pleschberger, M.ら、2003 Bioco
njugate Chem 14:440～448; Cortez-Retamozo, V.ら、2002 Int J Cancer 89:456～62；
およびLauwereys, M.ら、1998 EMBO J 17:3512～3520も参照されたい。ラクダ科動物抗体
および抗体断片の操作ライブラリーは、例えば、Ａｂｌｙｎｘ、Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉ
ｕｍから市販されている。非ヒト由来の他の抗体と同様に、ラクダ科動物抗体のアミノ酸
配列は、ヒト配列により酷似する配列を得るように、組換えにより改変することができる
、すなわち、ナノボディは、「ヒト化」することができる。したがって、ヒトに対するラ
クダ科動物抗体の天然の小さな抗原性を、さらに低減することができる。

【0210】

ラクダ科動物ナノボディの分子量は、ヒトＩｇＧ分子の分子量の約１０分の１で、タン
パク質の物理的直径は、数ナノメートルに過ぎない。サイズが小さいことの１つの帰結は
、大型の抗体タンパク質には機能的に不可視である抗原性部位に結合するラクダ科動物ナ
ノボディの能力である、すなわち、ラクダ科動物ナノボディは、古典的な免疫学的技法を
使用するこれ以外の形では隠蔽されたままの抗原を検出する試薬として有用であり、可能
な治療剤として有用である。したがって、サイズが小さいことのさらに別の帰結は、ラク
ダ科動物ナノボディが、標的タンパク質のグルーブ内または狭小なクレフト内の特異的部
位に結合することの結果として、標的タンパク質を阻害することが可能であり、よって、
古典的な抗体の機能よりも、古典的な低分子量の薬物の機能により酷似する能力において
用いられうることである。

【0211】

低分子量およびコンパクトなサイズはさらに、熱安定性が極めて大きく、極端なｐＨお
よびタンパク質分解性消化に対して安定的であり、抗原性が小さいラクダ科動物ナノボデ
ィを結果としてもたらす。別の帰結は、ラクダ科動物ナノボディが、循環系から組織へと
たやすく移動し、血液脳関門もなお越え、神経組織に影響を及ぼす障害も処置しうること
である。ナノボディはさらに、血液脳関門を越える薬物輸送も容易としうる。２００４年
８月１９日に公表された米国特許出願第２００４０１６１７３８号明細書を参照されたい
。これらの特色を、ヒトに対する抗原性が小さいことと組み合わせることにより、大きな
治療的可能性が指し示される。さらに、これらの分子は、大腸菌（E. coli）などの原核
細胞内で完全に発現させることができ、バクテリオファージとの融合タンパク質として発
現させ、機能的である。

【0212】

したがって、本発明の特色は、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに対して高いアフィニテ
ィーを有するラクダ科動物抗体またはラクダ科動物ナノボディである。本明細書のある種
の実施形態では、ラクダ科動物抗体またはラクダ科動物ナノボディは、天然ではラクダ科
動物において産生される、すなわち、他の抗体について本明細書で記載される技法を使用
する、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａまたはそのペプチド断片による免疫化の後で、ラク
ダ科動物により産生される。代替的に、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａ結合性ラクダ科動
物ナノボディは、操作されたものである、すなわち、例えば、本明細書の実施例において
記載されている、標的としてのＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａ、ならびに／またはその
ドメインおよび／もしくはペプチド断片を伴うパニング手順を使用する、適切に突然変異
誘発させたラクダ科動物ナノボディタンパク質を提示するファージライブラリーからの選
択によって作製される。操作されたナノボディはさらに、遺伝子操作により、レシピエン
ト対象における半減期が、４５分間～２週間となるようにカスタマイズすることもできる
。具体的な実施形態では、ラクダ科動物抗体またはラクダ科動物ナノボディを、例えば、
ＰＣＴ／ＥＰ９３／０２２１４において記載されている通り、本発明のヒト抗体の重鎖ま
たは軽鎖のＣＤＲ配列を、ナノボディまたは単一ドメイン抗体フレームワーク配列へとグ
ラフトすることにより得る。

【0213】

二特異性分子および多価抗体
別の態様では、本発明は、本発明のＦＸＩ結合性抗体および／またはＦＸＩａ結合性抗
体またはその断片を含む二特異性分子または多特異性分子を特色とする。本発明の抗体ま
たはその抗原結合性領域は、少なくとも２つの異なる結合性部位または標的分子に結合す
る二特異性分子を作り出すように誘導体化することもでき、別の機能的分子、例えば、別
のペプチドまたはタンパク質（例えば、受容体に対する別の抗体またはリガンド）へと連
結することもできる。本発明の抗体は実際、３つ以上の異なる結合性部位および／または
標的分子に結合する多特異性分子を作り出すように誘導体化することもでき、他の２つ以
上の機能的分子へと連結することもでき、このような多特異性分子はまた、本明細書で使
用される「二特異性分子」という用語により包含されることも意図される。本発明の二特
異性分子を創出するには、本発明の抗体を、二特異性分子が結果として得られるように、
別の抗体、抗体断片、ペプチド、または結合性模倣体など、１つまたは複数の他の結合性
分子へと機能的に連結する（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的会
合により、またはこれら以外の形で）ことができる。

【0214】

したがって、本発明は、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａに対する少なくとも１つの第
１の結合特異性および第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む二特異性分
子を含む。例えば、第２の標的エピトープは、第１の標的エピトープと異なる、ＦＸＩお
よび／もしくはＦＸＩａの別のエピトープである。

【0215】

加えて、二特異性分子が多特異性である本発明では、分子は、第１の標的エピトープお
よび第２の標的エピトープに加えて、第３の結合特異性もさらに含みうる。

【0216】

一実施形態では、本発明の二特異性分子は、結合特異性として、例えば、Ｆａｂ、Ｆａ
ｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または単鎖Ｆｖを含む、少なくとも１つの抗体またはその
抗体断片を含む。抗体はまた、軽鎖もしくは重鎖の二量体、またはＬａｄｎｅｒら、米国
特許第４，９４６，７７８号明細書において記載されている、Ｆｖもしくは単鎖構築物な
ど、その任意の最小断片でありうる。

【0217】

ダイアボディとは、同じ鎖上の２つのドメインの間の対合を可能とするには短すぎるリ
ンカーにより接続されたＶＨドメインおよびＶＬドメインを単一のポリペプチド鎖上で発
現させた、二価の二特異性分子である。ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、別の鎖の相
補的なドメインと対合し、これにより、２つの抗原結合性部位を創出する（例えば、Holl
igerら、1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444～6448; Poljakら、1994 Structure
2:1121～1123を参照されたい）。ダイアボディは、ＶＨＡ－ＶＬＢおよびＶＨＢ－ＶＬＡ
構造（ＶＨ－ＶＬ立体配置）、またはＶＬＡ－ＶＨＢおよびＶＬＢ－ＶＨＡ構造（ＶＬ－
ＶＨ立体配置）を伴う２つのポリペプチド鎖を、同じ細胞内で発現させることにより作製
することができる。ダイアボディの大半は、細菌内の可溶性形態で発現させることができ
る。単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）は、２つのダイアボディ形成ポリペプチド鎖を、約１
５アミノ酸残基のリンカーで接続することにより作製する（HolligerおよびWinter、1997
Cancer Immunol. Immunother.、45（3～4）:128～30; Wuら、1996 Immunotechnology、2
（1）:21～36を参照されたい）。ｓｃＤｂは、細菌内の可溶性で活性の単量体形態で発現
させることができる（HolligerおよびWinter、1997 Cancer Immunol. Immunother.、45（
34）:128～30; Wuら、1996 Immunotechnology、2（1）:21～36; PluckthunおよびPack、1
997 Immunotechnology、3（2）:83～105; Ridgwayら、1996 Protein Eng.、9（7）:617～
21を参照されたい）。ダイアボディをＦｃへと融合させて、「ジダイアボディ」を作り出
すことができる（Luら、2004 J. Biol. Chem.、279（4）:2856～65を参照されたい）。

【0218】

本発明の二特異性分子内で援用しうる他の抗体は、マウスモノクローナル抗体、キメラ
モノクローナル抗体、およびヒト化モノクローナル抗体である。

【0219】

二特異性分子は、当技術分野で公知の方法を使用して、構成要素である結合特異性をコ
ンジュゲートさせることにより調製することができる。例えば、二特異性分子の各結合特
異性は、個別に作り出し、次いで、互いとコンジュゲートさせることができる。結合特異
性がタンパク質またはペプチドである場合は、様々なカップリング剤または架橋剤を、共
有結合的コンジュゲーションに使用することができる。架橋剤の例は、プロテインＡ、カ
ルボジイミド、Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチル－チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５
，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ－フェニレンジマレイミド
（ｏＰＤＭ）、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（Ｓ
ＰＤＰ）、およびスルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン
－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）を含む（例えば、Karpovskyら、1984 J. E
xp. Med. 160:1686； Liu, MAら、1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648を参照され
たい）。他の方法は、Paulus、1985 Behring Ins. Mitt. 78号、118～132; Brennanら、1
985 Science 229:81～83；およびGlennieら、1987 J. Immunol. 139:2367～2375において
記載されている方法を含む。コンジュゲート剤は、ＳＡＴＡおよびスルホ－ＳＭＣＣであ
り、いずれも、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）か
ら入手可能である。

【0220】

結合特異性が、抗体である場合、それらは、２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域をスルフヒ
ドリル結合させることによりコンジュゲートさせることができる。特定の実施形態では、
コンジュゲーションの前に、奇数のスルフヒドリル残基、例えば、１つのスルフヒドリル
残基を含有するように、ヒンジ領域を修飾する。

【0221】

代替的に、いずれの結合特異性も、同じベクター内でコードさせ、同じ宿主細胞内で発
現およびアセンブルさせることができる。この方法は、二特異性分子が、ｍＡｂ×ｍＡｂ
融合タンパク質、ｍＡｂ×Ｆａｂ融合タンパク質、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）２融合タンパク
質、またはリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質である場合に、特に有用である。本発明の二
特異性分子は、１つの単鎖抗体および結合決定基を含む単鎖分子の場合もあり、２つの結
合決定基を含む単鎖二特異性分子の場合もある。二特異性分子は、少なくとも２つの単鎖
分子を含みうる。二特異性分子を調製する方法については、例えば、米国特許第５，２６
０，２０３号明細書；米国特許第５，４５５，０３０号明細書；米国特許第４，８８１，
１７５号明細書；米国特許第５，１３２，４０５号明細書；米国特許第５，０９１，５１
３号明細書；米国特許第５，４７６，７８６号明細書；米国特許第５，０１３，６５３号
明細書；米国特許第５，２５８，４９８号明細書；および米国特許第５，４８２，８５８
号明細書において記載されている。

【0222】

それらの特異的な標的に対する二特異性分子の結合は、例えば、酵素免疫測定アッセイ
（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＥＡ）、ＦＡＣＳ解析、バイオアッセイ（例
えば、成長阻害アッセイ）、またはウェスタンブロットアッセイにより確認することがで
きる。これらのアッセイの各々では一般に、対象の複合体に特異的な、標識された試薬（
例えば、抗体）を援用することにより、特に対象となるタンパク質－抗体間複合体の存在
が検出される。

【0223】

別の態様では、本発明は、ＦＸＩａに結合する、本発明の抗体の少なくとも２つの同一
であるかまたは異なる抗原結合性部分を含む、多価化合物を提供する。抗原結合性部分は
、タンパク質の融合または共有結合的連結もしくは非共有結合的連結を介して、併せて連
結することができる。代替的に、二特異性分子のための連結法も記載されている。四価化
合物は、例えば、本発明の抗体を、本発明の抗体の定常領域に結合する抗体、例えば、Ｆ
ｃ領域またはヒンジ領域と架橋することにより得ることができる。

【0224】

三量体化ドメインについては、例えば、Ｂｏｒｅａｎによる特許であるＥＰ１０１２２
８０Ｂ１において記載されている。五量体化モジュールについては、例えば、ＰＣＴ／Ｅ
Ｐ９７／０５８９７において記載されている。

【0225】

半減期を延長した抗体
本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける半減期を延長した、ＦＸＩａタンパク質に特異的に
結合する抗体を提供する。

【0226】

多くの因子が、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるタンパク質の半減期に影響を及ぼしうる。例え
ば、腎臓における濾過、肝臓における代謝、タンパク質分解性酵素（プロテアーゼ）によ
る分解、および免疫原性応答（例えば、抗体によるタンパク質の中和およびマクロファー
ジおよび樹状細胞による取込み）。様々な戦略を使用して、本発明の抗体の半減期を延長
することができる。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｒｅＣＯＤＥ ＰＥＧ
、抗体足場、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミ
ン結合性リガンド、および炭水化物シールドとの化学的連結により、アルブミン、ＩｇＧ
、ＦｃＲｎ、およびトランスフェリンなどの血清タンパク質に結合するタンパク質との遺
伝子融合により、ナノボディ、Ｆａｂ、ＤＡＲＰｉｎ、アビマー、アフィボディ、および
アンチカリンなど、血清タンパク質に結合する他の結合部分とカップリングする（遺伝子
的または化学的に）ことにより、ｒＰＥＧ、アルブミン、アルブミンのドメイン、アルブ
ミン結合性タンパク質、およびＦｃとの遺伝子融合により、またはナノ担体、徐放製剤、
もしくは医療デバイスへの組込みにより、本発明の抗体の半減期を延長することができる
。

【0227】

ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗体の血清中循環を延長するため、高分子量のＰＥＧなど、不
活性のポリマー分子を、ＰＥＧの、抗体のＮ末端もしくはＣ末端への部位特異的コンジュ
ゲーションを介して、またはリシン残基上に存在するイプシロン－アミノ基を介して、多
官能性リンカーを伴うかまたは多官能性リンカーを伴わない、抗体またはそれらの断片へ
と付着することができる。抗体をＰＥＧ化するには、抗体またはその断片を、ポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ）の反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのＰＥＧと、１つ
または複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着する条件下で反応させることが典型的
である。ＰＥＧ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似する反応性の水溶性ポリマー）との
アシル化反応またはアルキル化反応により実行することができる。本明細書で使用される
「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ１～Ｃ１０）アルコキシ－ポリエチ
レングリコールもしくはアリールオキシ－ポリエチレングリコールまたはポリエチレング
リコール－マレイミドなど、他のタンパク質を誘導体化するのに使用されているＰＥＧの
形態のうちのいずれかを包含することを意図するものである。ある種の実施形態では、Ｐ
ＥＧ化される抗体は、脱グリコシル化抗体である。直鎖状ポリマーまたは分枝状ポリマー
の誘導体化であって、生物学的活性の喪失を結果として最小とする誘導体化が、使用され
るであろう。コンジュゲーションの程度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび質量分析により緊密
にモニタリングして、ＰＥＧ分子の抗体への適正なコンジュゲーションを確認することが
できる。反応しなかったＰＥＧは、サイズ除外クロマトグラフィーまたはイオン交換クロ
マトグラフィーにより、抗体－ＰＥＧコンジュゲートから分離することができる。ＰＥＧ
誘導体化抗体は、当業者に周知の方法を使用して、例えば、本明細書で記載されるイムノ
アッセイにより、結合活性ならびにｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性について調べることが
できる。当技術分野では、タンパク質をＰＥＧ化する方法が知られており、本発明の抗体
に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ０１５４３１６およ
びＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ０４０１３８４を参照されたい。

【0228】

他の改変されたＰＥＧ化技術は、ｔＲＮＡシンセターゼおよびｔＲＮＡを含む再構成系
を介して、化学的に特定された側鎖を、生合成タンパク質へと組み込む、再構成化学的直
交性直接操作技術（reconstituting chemically orthogonal directed engineering）（
ＲｅＣＯＤＥ ＰＥＧ）を含む。この技術は、３０を超える新たなアミノ酸の、大腸菌（
E. coli）細胞内、酵母細胞内、および哺乳動物細胞内の生合成タンパク質への組込みを
可能とする。ｔＲＮＡは、非天然アミノ酸を、アンバーコドンが配置される任意の位置へ
と組み込み、終止アンバーコドンから、化学的に特定されたアミノ酸の組込みシグナルを
伝達するコドンへと転換する。

【0229】

組換えＰＥＧ化技術（ｒＰＥＧ）はまた、血清半減期の延長にも使用することができる
。この技術は、３００～６００アミノ酸の非構造化タンパク質テールを、既存の医薬用タ
ンパク質へと遺伝子融合させることを伴う。このような非構造化タンパク質鎖の見かけの
分子量は、その実際の分子量の約１５倍であるため、タンパク質の血清半減期は、大きく
増大する。化学的コンジュゲーションおよび再精製を要求する従来のＰＥＧ化とは対照的
に、製造工程は大きく簡略化され、生成物は、均質である。

【0230】

ポリシアリル化は、天然のポリマーであるポリシアル酸（ＰＳＡ）を使用して、活性寿
命を延長し、治療用ペプチドおよび治療用タンパク質の安定性を改善する、別の技術であ
る。ＰＳＡとは、シアル酸（糖）のポリマーである。タンパク質および治療用ペプチドの
薬物送達に使用される場合、コンジュゲーション時に、ポリシアル酸は、保護的微小環境
をもたらす。これは、循環内の治療用タンパク質の活性寿命を延長し、それが免疫系によ
り認識されることを防止する。ＰＳＡポリマーは、天然では、ヒト体内で見出される。Ｐ
ＳＡは、数百万年にわたり、それらの壁をＰＳＡでコーティングするように進化したある
種の細菌により採用された。次いで、これらの天然でポリシアリル化した細菌は、分子的
模倣により、体内の防御系を失効化することが可能となった。自然の究極のステルス技術
であるＰＳＡは、このような細菌から、大量に、かつ、所定の物理的特徴を伴って、容易
に作製することができる。細菌ＰＳＡは、ヒト体内ではＰＳＡと化学的に同一であるので
、タンパク質へとカップリングさせた場合でもなお、完全に非免疫原性である。

【0231】

別の技術は、抗体に連結されたヒドロキシエチルデンプン（「ＨＥＳ」）誘導体の使用
を含む。ＨＥＳとは、蝋状トウモロコシデンプンに由来する、修飾された天然ポリマーで
あり、体内の酵素により代謝されうる。ＨＥＳ溶液は通例、血液量不足を補い、血液のレ
オロジー特性を改善するために投与される。抗体のＨＥＳ化は、分子の安定性を増大させ
ることのほか、腎クリアランスを低減することによっても、循環半減期の延長を可能とし
、生物学的活性の増大を結果としてもたらす。ＨＥＳの分子量など、異なるパラメータを
改変することにより、広範にわたるＨＥＳ抗体コンジュゲートをカスタマイズすることが
できる。

【0232】

ｉｎ ｖｉｖｏにおける半減期を延長した抗体はまた、１つまたは複数のアミノ酸修飾
（すなわち、置換、挿入、または欠失）を、ＩｇＧ定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合
性断片（好ましくはＦｃドメイン断片またはヒンジＦｃドメイン断片）へと導入しても作
り出すことができる。例えば、国際特許公開第９８／２３２８９号パンフレット、国際特
許公開第９７／３４６３１号パンフレット；および米国特許第６，２７７，３７５号明細
書を参照されたい。

【0233】

さらに、抗体または抗体断片を、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてより安定的とするか、または
ｉｎ ｖｉｖｏにおける半減期を延長するために、抗体を、アルブミン（例えば、ヒト血
清アルブミン；ＨＳＡ）へとコンジュゲートさせることもできる。当技術分野では、技法
が周知であり、例えば、国際特許公開第９３／１５１９９号パンフレット、同第９３／１
５２００号パンフレット、および同０１／７７１３７号パンフレット；ならびに欧州特許
第４１３，６２２号明細書を参照されたい。加えて、上記で記載した二特異性抗体の文脈
では、抗体の特異性は、抗体の１つの結合性ドメインが、ＦＸＩａに結合するのに対し、
抗体の第２の結合性ドメインは、血清アルブミン、好ましくは、ＨＳＡに結合するように
デザインすることもできる。

【0234】

半減期を延長するための戦略は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける半減期の延長が所望される、
ナノボディ、フィブロネクチンベースの結合剤、および他の抗体またはタンパク質におい
てとりわけ有用である。

【0235】

抗体コンジュゲート
本発明は、融合タンパク質を作り出すように、異種タンパク質または異種ポリペプチド
へと（またはその断片、好ましくは、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０
、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０
、少なくとも９０、または少なくとも１００アミノ酸のポリペプチドへと）、組換えによ
り融合させるかまたは化学的にコンジュゲートさせた（共有結合的コンジュゲーションお
よび非共有結合的コンジュゲーションの両方を含む）、ＦＸＩａタンパク質に特異的に結
合する抗体またはそれらの断片を提供する。特に、本発明は、本明細書で記載される抗体
の抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨ
ドメイン、ＶＨ ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ ＣＤＲ）と、異種タンパク質、異
種ポリペプチド、または異種ペプチドとを含む融合タンパク質を提供する。当技術分野で
は、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを、抗体または抗体断片と融合またはコ
ンジュゲートさせる方法が知られている。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号明細
書、同第５，６２２，９２９号明細書、同第５，３５９，０４６号明細書、同第５，３４
９，０５３号明細書、同第５，４４７，８５１号明細書、および同第５，１１２，９４６
号明細書；欧州特許第３０７，４３４号明細書および同第ＥＰ３６７，１６６号明細書；
国際特許公開第９６／０４３８８号パンフレットおよび同第９１／０６５７０号パンフレ
ット；Ashkenaziら、1991、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535～10539; Zhengら、19
95、J. Immunol. 154:5590～5600；およびVilら、1992、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89
:11337～11341を参照されたい。

【0236】

さらなる融合タンパク質は、遺伝子シャフリング、モチーフシャフリング、エクソンシ
ャフリング、および／またはコドンシャフリング（まとめて、「ＤＮＡシャフリング」と
称する）の技法を介して作り出すことができる。ＤＮＡシャフリングを援用して、本発明
の抗体またはそれらの断片の活性を改変する（例えば、アフィニティーが大きく、解離速
度が小さい抗体またはそれらの断片）ことができる。一般に、米国特許第５，６０５，７
９３号明細書、同第５，８１１，２３８号明細書、同第５，８３０，７２１号明細書、同
第５，８３４，２５２号明細書、および同第５，８３７，４５８号明細書；Pattenら、19
97、Curr. Opinion Biotechnol. 8:724～33; Harayama、1998、Trends Biotechnol. 16（
2）:76～82; Hanssonら、1999、J. Mol. Biol. 287:265～76；ならびにLorenzoおよびBla
sco、1998、Biotechniques 24（2）:308～313（これらの特許および刊行物の各々は、参
照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる）を参照されたい。抗体もしくは
それらの断片、またはコードされる抗体もしくはそれらの断片は、組換えの前に、エラー
プローンＰＣＲによるランダム突然変異誘発、ランダムヌクレオチド挿入、または他の方
法にかけることにより改変することができる。ＦＸＩａタンパク質に特異的に結合する抗
体またはその断片をコードするポリヌクレオチドは、１つまたは複数の異種分子の１つま
たは複数の成分、モチーフ、区間、一部、ドメイン、断片などで組み換えることができる
。

【0237】

さらに、抗体またはそれらの断片は、精製を容易とするペプチドなどのマーカー配列へ
と融合させることもできる。好ましい実施形態では、マーカーのアミノ酸配列は、それら
のうちの多くが市販されている中でとりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．
、９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ、９１３１１）にお
いて提供されているタグなどのヘキサヒスチジンペプチド（配列番号４８）である。Gent
zら、1989、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821～824において記載されている通り、例
えば、ヘキサヒスチジン（配列番号４８）は、融合タンパク質の簡便な精製をもたらす。
精製に有用な他のペプチドタグは、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来する
エピトープ（Wilsonら、1984、Cell 37:767）に対応するヘマグルチニン（「ＨＡ」）タ
グ、および「フラッグ」タグを含むがこれらに限定されない。

【0238】

他の実施形態では、本発明の抗体またはそれらの断片を、診断剤または検出可能薬剤へ
とコンジュゲートさせる。このような抗体は、疾患または障害の発生、発症、進行、およ
び／または重症度を、特定の治療の有効性を決定することなど、臨床検査手順の一部とし
てモニタリングまたは予後診断するのに有用でありうる。このような診断および検出は、
抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダ
ーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼなどであるがこれらに限定されない多様な酵素
；ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどであるがこれらに限定さ
れない補欠分子族；ウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイ
ン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、また
はフィコエリトリンなどであるがこれらに限定されない蛍光材料；ルミノールなどである
がこれらに限定されない発光材料；ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンな
どであるがこれらに限定されない生物発光材料；ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ
、および１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウ
ム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、および１１１Ｉｎ）、テクネシウム（９９Ｔ
ｃ）、タリウム（２０１Ｔｌ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３
Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３
Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９
０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇ
ｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４
Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、および１１７Ｔｉｎなどであるがこれらに限定されない放
射性材料；ならびに多様なポジトロン断層法を使用するポジトロン放出金属および非放射
性の常磁性金属イオンを含むがこれらに限定されない検出可能な物質へとカップリングす
ることにより達成することができる。

【0239】

本発明は、治療用部分へとコンジュゲートさせた抗体またはそれらの断片の使用もさら
に包含する。抗体またはその断片は、細胞毒素、例えば、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤
、治療剤または放射性金属イオン、例えば、アルファ放射体などの治療用部分へとコンジ
ュゲートさせることができる。細胞毒素または細胞傷害剤は、細胞に有害な任意の薬剤を
含む。

【0240】

さらに、抗体またはその断片は、所与の生物学的応答を修飾する治療用部分または薬物
部分へとコンジュゲートさせることもできる。治療用部分または薬物部分は、古典的化学
的治療剤に限定されるとはみなされないものとする。例えば、薬物部分は、所望の生物学
的活性を保有するタンパク質、ペプチド、またはポリペプチドでありうる。このようなタ
ンパク質は、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス属外毒素、コレラ毒素、また
はジフテリア毒素などの毒素；腫瘍壊死因子、α－インターフェロン、β－インターフェ
ロン、神経成長因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノゲン活性化因子、アポトーシ
ス剤、抗血管新生剤；または例えば、リンホカインなどの生体応答修飾剤などのタンパク
質を含みうる。

【0241】

さらに、抗体は、２１３Ｂｉなどのアルファ放射体などの放射性金属イオン、１３１Ｉ
ｎ、１３１ＬＵ、１３１Ｙ、１３１Ｈｏ、１３１Ｓｍを含むがこれらに限定されない放射
性金属イオンを、ポリペプチドへとコンジュゲートするのに有用な大環状キレート化剤な
どの治療用部分へとコンジュゲートさせることもできる。ある種の実施形態では、大環状
キレート化剤は、リンカー分子を介して抗体へと付着させうる、１，４，７，１０－テト
ラアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）である。
当技術分野では、このようなリンカー分子が一般に公知であり、各々が参照によりそれら
の全体において組み込まれる、Denardoら、1998、Clin Cancer Res. 4（10）:2483～90;
Petersonら、1999、Bioconjug. Chem. 10（4）:553～7；およびZimmermanら、1999、Nucl
. Med. Biol. 26（8）:943～50において記載されている。

【0242】

治療用部分を、抗体へとコンジュゲートさせるための技法は周知であり、例えば、Arno
nら、「Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy」、M
onoclonal Antibodies And Cancer Therapy、Reisfeldら（編）、243～56頁（Alan R. Li
ss, Inc. 1985）; Hellstromら、「Antibodies For Drug Delivery」、Controlled Drug
Delivery（2版）、Robinsonら（編）、623～53頁（Marcel Dekker, Inc. 1987）; Thorpe
、「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review」、Monoclo
nal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications、Pincheraら（編）、475～
506頁（1985）; 「Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Us
e Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy」、Monoclonal Antibodies For Cancer
Detection And Therapy、Baldwinら（編）、303～16頁（Academic Press 1985）；およ
びThorpeら、1982、Immunol. Rev. 62:119～58を参照されたい。

【0243】

抗体はまた、特に、イムノアッセイまたは標的抗原の精製に有用な固体支持体へと付着
させることもできる。このような固体支持体は、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミ
ド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンを含むがこれらに
限定されない。

【0244】

抗体を作製する方法
抗体をコードする核酸
本発明は、上記で記載したＦＸＩａ結合性抗体鎖のセグメントまたはドメインを含むポ
リペプチドをコードする、実質的に精製された核酸分子を提供する。本発明の核酸のいく
つかは、配列番号１０または３０に示される重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列
、および／または配列番号２０または４０に示される軽鎖可変領域をコードするヌクレオ
チド配列を含む。具体的な実施形態では、核酸分子は、表１において同定される核酸分子
である。本発明の他のいくつかの核酸分子は、表１において同定される核酸分子のヌクレ
オチド配列と実質的に（例えば、少なくとも６５、８０％、９５％、または９９％）同一
なヌクレオチド配列を含む。適切な発現ベクターから発現させるとき、これらのポリヌク
レオチドによりコードされるポリペプチドは、ＦＸＩおよび／もしくはＦＸＩａ抗原結合
能を呈示することが可能である。

【0245】

本発明ではまた、上記で示したＦＸＩａ結合性抗体の重鎖または軽鎖に由来する少なく
とも１つのＣＤＲ領域、および、通例３つ全てのＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチ
ドも提供される。他のいくつかのポリヌクレオチドは、上記で示したＦＸＩａ結合性抗体
の重鎖および／または軽鎖の可変領域配列の全てまたは実質的に全てをコードする。コー
ドの縮重性のために、様々な核酸配列は、免疫グロブリンアミノ酸配列の各々をコードす
るであろう。

【0246】

本発明の核酸分子は、抗体の可変領域および定常領域の両方をコードしうる。本発明の
核酸配列のうちのいくつかは、配列番号１１または３１に示される重鎖配列と実質的に（
例えば、少なくとも８０％、９０％、または９９％）同一な重鎖配列をコードするヌクレ
オチドを含む。他のいくつかの核酸配列は、配列番号２１または４１に示される軽鎖配列
と実質的に（例えば、少なくとも８０％、９０％、または９９％）同一な軽鎖配列をコー
ドするヌクレオチドを含む。

【0247】

ポリヌクレオチド配列は、デノボの固相ＤＮＡ合成、またはＦＸＩａ結合性抗体または
その結合性断片をコードする既存の配列（例えば、下記の実施例で記載される配列）に対
するＰＣＲによる突然変異誘発により作製することができる。核酸の直接的な化学合成は
、Narangら、1979、Meth. Enzymol. 68:90によるホスホトリエステル法；Brownら、Meth.
Enzymol. 68:109、1979によるホスホジエステル法；Beaucageら、Tetra. Lett., 22:185
9、1981によるジエチルホスホルアミダイト法；および米国特許第４，４５８，０６６号
明細書による固体支持体法など、当技術分野で公知の方法により達成することができる。
ＰＣＲによる、突然変異の、ポリヌクレオチド配列への導入は、例えば、PCR Technology
: Principles and Applications for DNA Amplification、H.A. Erlich（編）、Freeman
Press、NY、NY、1992；PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications、Innisら
（編）、Academic Press、San Diego、CA、1990; Mattilaら、Nucleic Acids Res. 19:96
7、1991；およびEckertら、PCR Methods and Applications 1:17、1991において記載され
ている通りに実施することができる。

【0248】

本発明ではまた、上記で記載したＦＸＩ結合性抗体および／もしくはＦＸＩａ結合性抗
体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞も提供される。多様な発現ベクターを、
援用して、ＦＸＩａ結合性抗体鎖または結合性断片をコードするポリヌクレオチドを発現
させることができる。ウイルスベースの発現ベクターおよび非ウイルス発現ベクターのい
ずれを使用しても、哺乳動物宿主細胞内で抗体を作製することができる。非ウイルスベク
ターおよび非ウイルス系は、プラスミド、典型的に、タンパク質またはＲＮＡを発現させ
るための発現カセットを伴うエピソームベクター、およびヒト人工染色体を含む（例えば
、Harringtonら、Nat Genet 15:345、1997を参照されたい）。例えば、哺乳動物（例えば
、ヒト）細胞内のＦＸＩａ結合性ポリヌクレオチドおよびＬＯＸ－１結合性ポリペプチド
の発現に有用な非ウイルスベクターは、ｐＴｈｉｏＨｉｓ Ａ、ｐＴｈｉｏＨｉｓ Ｂ、
およびｐＴｈｉｏＨｉｓ Ｃ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ Ａ、ｐＥＢ
ＶＨｉｓ Ｂ、およびｐＥＢＶＨｉｓ Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ
、ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、ならびに他のタンパク質を発現させるための、当技術分野
で公知の他の多数のベクターを含む。有用なウイルスベクターは、レトロウイルス、アデ
ノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスに基づくベクター、ＳＶ４０に基づ
くベクター、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタインバーウイルス、ワクシニアウイル
スベクター、およびセムリキ森林熱ウイルス（ＳＦＶ）を含む。Brentら、前出; Smith、
Annu. Rev. Microbiol. 49:807、1995；およびRosenfeldら、Cell 68:143、1992を参照さ
れたい。

【0249】

発現ベクターの選択は、その中でベクターを発現させる、意図される宿主細胞に依存す
る。発現ベクターは、ＦＸＩａ結合性抗体鎖または断片をコードするポリヌクレオチドに
作動可能に連結されたプロモーターおよび他の調節配列（例えば、エンハンサー）を含有
することが典型的である。いくつかの実施形態では、誘導条件下を除き、挿入された配列
の発現を防止するのに、誘導的プロモーターを援用する。誘導的プロモーターは、例えば
、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーター、または熱ショックプロモー
ターを含む。形質転換された生物の培養物は、それらの発現産物が宿主細胞により良好に
許容されるコード配列の集団にバイアスをかけずに、非誘導条件下で増殖させることがで
きる。プロモーターに加えて、他の調節的エレメントもまた、ＦＸＩａ結合性抗体鎖また
は断片の効率的な発現に要求または所望される可能性がある。これらのエレメントは、Ａ
ＴＧ開始コドンおよび隣接のリボソーム結合性部位または他の配列を典型的に含む。加え
て、発現の効率は、使用される細胞系に適するエンハンサーを組み入れることにより増強
することもできる（例えば、Scharfら、Results Probl. Cell Differ. 20:125、1994；お
よびBittnerら、Meth. Enzymol., 153:516、1987を参照されたい）。例えば、ＳＶ４０エ
ンハンサーまたはＣＭＶエンハンサーを使用して、哺乳動物宿主細胞内の発現を増大させ
ることができる。

【0250】

発現ベクターはまた、挿入されたＦＸＩａ結合性抗体配列によりコードされるポリペプ
チドとの融合タンパク質を形成するように、分泌シグナル配列の位置ももたらしうる。挿
入されたＦＸＩ結合性抗体配列および／もしくはＦＸＩａ結合性抗体配列は、ベクター内
に組み入れる前に、シグナル配列へと連結することが多い。ＦＸＩ結合性抗体および／も
しくはＦＸＩａ結合性抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインをコードする配列
を受容するのに使用されるベクターは、場合によってまた、定常領域またはそれらの一部
もコードする。このようなベクターは、定常領域との融合タンパク質としての可変領域の
発現を可能とし、これにより、インタクトな抗体またはそれらの断片の作製をもたらす。
このような定常領域は、ヒト定常領域であることが典型的である。

【0251】

ＦＸＩ結合性抗体鎖および／もしくはＦＸＩａ結合性抗体鎖を保有し、これを発現させ
るための宿主細胞は、原核細胞の場合もあり、真核細胞の場合もある。大腸菌（E. coli
）は、本発明のポリヌクレオチドをクローニングし、発現させるのに有用な１つの原核生
物宿主である。使用に適する他の微生物宿主は、枯草菌（Bacillus subtilis）などの桿
菌、およびサルモネラ（Salmonella）属種、セラチア（Serratia）属種、および多様なシ
ュードモナス（Pseudomonas）属種など、他の腸内細菌科を含む。これらの原核生物宿主
内ではまた、典型的に、宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば、複製起点）を含有す
る発現ベクターも作製することができる。加えて、ラクトースプロモーター系、トリプト
ファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ベータ－ラクタマーゼプロモーター系、またはファー
ジラムダに由来するプロモーター系など、任意の数の、様々な周知のプロモーターも存在
する。プロモーターは、任意選択で、オペレーター配列により発現を制御することが典型
的であるが、転写および翻訳を開始して終結させるためのリボソーム結合性部位配列など
も有する。本発明のＦＸＩａ結合性ポリペプチドを発現させるのに、酵母など、他の微生
物もまた援用することができる。また、バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細
胞も使用することができる。

【0252】

いくつかの好ましい実施形態では、本発明のＦＸＩ結合性ポリペプチドおよび／もしく
はＦＸＩａ結合性ポリペプチドを発現させ、作製するのに、哺乳動物宿主細胞を使用する
。哺乳動物宿主細胞は、任意の正常非不死化動物細胞または正常不死化動物細胞もしくは
非正常不死化動物細胞またはヒト細胞を含む。例えば、ＣＨＯ細胞系、多様なＣｏｓ細胞
系、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞系、および形質転換Ｂ細胞を含む、インタクトな免疫グロ
ブリンを分泌することが可能な多数の適切な宿主細胞系が開発されている。ポリペプチド
を発現させるための、哺乳動物組織細胞培養物の使用については、例えば、Winnacker、F
ROM GENES TO CLONES、VCH Publishers、N.Y.、N.Y.、1987において一般に論じられてい
る。哺乳動物宿主細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター、およびエンハ
ンサーなどの発現制御配列（例えば、Queenら、Immunol. Rev. 89:49～68、1986を参照さ
れたい）、ならびにリボソーム結合性部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位
、および転写ターミネーター配列などの、必要なプロセシング情報部位を含みうる。

【0253】

これらの発現ベクターは通例、哺乳動物遺伝子に由来するプロモーターまたは哺乳動物
ウイルスに由来するプロモーターを含有する。適切なプロモーターは、構成的プロモータ
ー、細胞型特異的プロモーター、段階特異的プロモーター、および／またはモジュレート
可能プロモーターもしくは調節可能プロモーターでありうる。有用なプロモーターは、メ
タロチオネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタ
ゾン誘導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰ ｐｏｌＩＩＩプロモ
ーター、構成的ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（ヒ
ト即初期ＣＭＶプロモーターなど）、構成的ＣＭＶプロモーター、および当技術分野で公
知のプロモーター－エンハンサーの組合せを含むがこれらに限定されない。

【0254】

対象のポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主の種
類に応じて変化する。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションが一般に原核細胞に
活用されるのに対し、リン酸カルシウム処理または電気穿孔は、他の細胞宿主に使用する
ことができる（一般に、Sambrookら、前出を参照されたい）。他の方法は、例えば、電気
穿孔、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介型形質転換、注射およびマイクロインジェ
クション、遺伝子銃法、ウィロソーム、イムノリポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュ
ゲート、ネイキッドＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質であるＶＰ
２２との融合体（ElliotおよびO'Hare、Cell 88:223、1997）、ＤＮＡの薬剤増強型取込
み、およびｅｘ ｖｉｖｏにおける形質導入を含む。組換えタンパク質の長期にわたる高
収率作製のためには、安定的発現が所望されることが多い。例えば、ＦＸＩａ結合性抗体
鎖または結合性断片を安定的に発現させる細胞系は、ウイルス複製起点または内因性発現
エレメント、および選択マーカー遺伝子を含有する、本発明の発現ベクターを使用して調
製することができる。ベクターを導入した後、細胞は、強化培地中で１～２日間にわたり
成長させてから、選択培地へと切り替えることができる。選択マーカーの目的は、選択に
対する耐性を付与し、その存在により細胞の成長を可能とし、これにより、導入された配
列を選択培地中で発現させることに成功することである。耐性で安定的にトランスフェク
トされた細胞は、細胞型に適する組織培養法を使用して増殖させることができる。

【0255】

フレームワークまたはＦｃの操作
本発明の操作抗体は、例えば、抗体の特性を改善するように、ＶＨおよび／またはＶＬ
内のフレームワーク残基へと修飾を施した操作抗体を含む。このようなフレームワーク修
飾は、抗体の免疫原性を低下させるように施すことが典型的である。例えば、１つの手法
は、１つまたは複数のフレームワーク残基を、対応する生殖細胞系列配列へと「復帰突然
変異させる」ことである。より具体的には、体細胞突然変異を経た抗体は、抗体が由来す
る生殖細胞系列配列と異なるフレームワーク残基を含有しうる。このような残基は、抗体
フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖細胞系列配列と比較することにより同定する
ことができる。フレームワーク領域配列を、それらの生殖細胞系列の立体配置へと戻すに
は、例えば、部位特異的突然変異誘発により、体細胞突然変異を、生殖細胞系列配列へと
「復帰突然変異させる」ことができる。このような「復帰突然変異させた」抗体もまた、
本発明により包含されることを意図する。

【0256】

フレームワーク修飾の別の種類は、１つもしくは複数のフレームワーク領域内の残基、
なおまたは、１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の残基を突然変異させて、Ｔ細胞エピトー
プを除去して、これにより、抗体の潜在的な免疫原性を低減することを伴う。この手法は
また、「脱免疫化」とも称し、Ｃａｒｒらによる米国特許公開第２００３０１５３０４３
号明細書においてさらに詳細に記載されている。

【0257】

フレームワーク内またはＣＤＲ領域内に施された修飾に加えて、またはこれと代替的に
、本発明の抗体は、Ｆｃ領域内の修飾を含んで、典型的に、血清半減期、補体の結合、Ｆ
ｃ受容体の結合、および／または抗原依存性細胞性細胞傷害など、抗体の１つまたは複数
の機能的特性を改変するように操作することもできる。さらに、本発明の抗体は、化学的
に修飾することもでき（例えば、１つまたは複数の化学的部分を抗体に付着することがで
きる）、そのグリコシル化を改変して、ここでもまた、抗体の１つまたは複数の機能的特
性を改変するように修飾することもできる。これらの実施形態の各々については、下記で
さらに詳細に記載する。Ｆｃ領域内の残基の番号付けは、ＫａｂａｔによるＥＵインデッ
クスである。

【0258】

一実施形態では、ヒンジ領域内のシステイン残基の数を改変する、例えば、増大または
減少させるように、ＣＨ１のヒンジ領域を修飾する。この手法は、Ｂｏｄｍｅｒらによる
米国特許第５，６７７，４２５号明細書においてさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ
領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリーを容易とするか
、または抗体の安定性を増大もしくは低下させるように改変する。

【0259】

別の実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域を突然変異させて、抗体の生物学的半減期を
短縮する。より具体的には、抗体のブドウ球菌属プロテインＡ（ＳｐＡ）への結合が、天
然Ｆｃ－ヒンジドメインのＳｐＡへの結合と比べて損なわれるように、１つまたは複数の
アミノ酸突然変異を、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２ドメイン－ＣＨ３ドメイン間界面領域へ
と導入する。この手法は、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号明細書にお
いてさらに詳細に記載されている。

【0260】

別の実施形態では、抗体は、その生物学的半減期を延長するように修飾する。多様な手
法が可能である。例えば、Ｗａｒｄによる米国特許第６，２７７，３７５号明細書におい
て記載されている突然変異のうちの１つまたは複数を使用することができる。代替的に、
生物学的半減期を延長するために、抗体を、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９
，０４６号明細書；および同第６，１２１，０２２号明細書において記載されている、Ｉ
ｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから採取されたサルベージ受容体結合性
エピトープを含有するように、ＣＨ１領域内またはＣＬ領域内で改変することもできる。

【0261】

さらに他の実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸残基を、抗体のエフェクター機能
を改変する異なるアミノ酸残基で置きかえることにより、Ｆｃ領域を改変する。例えば、
抗体が、エフェクターリガンドに対するアフィニティーを改変しているが、親抗体の抗原
結合能は保持するように、１つまたは複数のアミノ酸を、異なるアミノ酸残基で置きかえ
ることができる。それに対するアフィニティーを改変するエフェクターリガンドは、例え
ば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分でありうる。この手法は、両方ともＷｉｎｔｅｒら
による米国特許第５，６２４，８２１号明細書；および同第５，６４８，２６０号明細書
においてさらに詳細に記載されている。

【0262】

別の実施形態では、抗体が、Ｃ１ｑへの結合を改変し、かつ／または補体依存性細胞傷
害作用（ＣＤＣ）を低減もしくは消失させるように、アミノ酸残基から選択される１つま
たは複数のアミノ酸を、異なるアミノ酸残基で置きかえることができる。この手法は、Ｉ
ｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号明細書においてさらに詳細に記
載されている。

【0263】

別の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸残基を改変して、これにより、補体に結
合する抗体の能力を改変する。この手法は、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開国際公開第
９４／２９３５１号パンフレットにおいてさらに記載されている。

【0264】

具体的な実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体）は、任意の表面関連ＦＸＩに
より引き起こされる、ＡＤＣＣまたはＣＤＣの可能性を低減するように、２つのアミノ酸
置換である、Ｄ２６５ＡおよびＰ３２９Ａを含むヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）Ｆｃ領
域を含む。これらのアラニン置換は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを低減することが示されてい
る（例えば、Idosugie et al., J. Immunol. 164:4178-4184, 2000; Shields et al., J.
Biol. Chem. 276:6591-6604, 2001を参照されたい）。

【0265】

さらに別の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸を修飾することにより、抗体依存
性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増大させ、かつ／またはＦｃγ受
容体に対する抗体のアフィニティーを増大させるように、Ｆｃ領域を修飾する。この手法
は、ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開国際公開第００／４２０７２号パンフレットにおいて
さらに記載されている。さらに、ヒトＩｇＧ１上の、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、Ｆｃγ
ＲＩＩＩ、およびＦｃＲｎに対する結合性部位もマップされており、結合を改善させた変
異体も記載されている（Shields, R.L.ら、2001 J. Biol. Chen. 276:6591～6604を参照
されたい）。

【0266】

さらに別の実施形態では、抗体のグリコシル化を修飾する。例えば、脱グリコシル化抗
体（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）を作製することができる。グリコシル化は
、例えば、「抗原」に対する抗体のアフィニティーを増大させるように改変することがで
きる。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つまたは複数のグリコシル化
部位を改変することにより達成することができる。例えば、１つまたは複数の可変領域フ
レームワークグリコシル化部位の消失を結果としてもたらす、１つまたは複数のアミノ酸
置換を作製して、これにより、その部位におけるグリコシル化を消失させることができる
。このような脱グリコシル化により、抗原に対する抗体のアフィニティーを増大させるこ
とができる。このような手法は、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号明細書；
および同第６，３５０，８６１号明細書においてさらに詳細に記載されている。

【0267】

加えて、または代替的に、フコシル残基の量を低減した低フコシル化抗体または二分枝
型ＧｌｃＮａｃ構造を増大させた抗体など、グリコシル化の種類を改変した抗体を作製す
ることもできる。このようなグリコシル化パターンの改変は、抗体のＡＤＣＣ能を増大さ
せることが裏付けられている。このような炭水化物修飾は、例えば、グリコシル化機構を
改変した宿主細胞内で抗体を発現させることにより達成することができる。当技術分野で
は、グリコシル化機構を改変した細胞が記載されており、本発明の組換え抗体を発現させ
、これにより、グリコシル化を改変した抗体を産生するための宿主細胞として使用するこ
とができる。例えば、ＨａｎｇらによるＥＰ１，１７６，１９５は、このような細胞系内
で発現させた抗体が、低フコシル化を呈示するように、フコシルトランスフェラーゼをコ
ードするＦＵＴ８遺伝子を機能的に破壊した細胞系について記載している。Ｐｒｅｓｔａ
によるＰＣＴ公開国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットは、フコースをＡｓｎ（
２９７）連結された炭水化物へと付着する能力を低減し、また、その宿主細胞内で発現さ
せた抗体の低フコシル化も結果としてもたらす、変異体のＣＨＯ細胞系である、Ｌｅｃｌ
３細胞について記載している（また、Shields, R.L.ら、2002 J. Biol. Chem. 277:26733
～26740も参照されたい）。ＵｍａｎａらによるＰＣＴ公開国際公開第９９／５４３４２
号パンフレットは、操作細胞系内で発現させた抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増大を結果
としてもたらす二分枝型ＧｌｃＮａｃ構造の増大を呈示するように、糖タンパク質を修飾
するグリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）－Ｎアセチルグルコサミ
ニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現させるように操作された細胞系
について記載している（また、Umanaら、1999 Nat. Biotech. 17:176～180も参照された
い）。

【0268】

改変抗体を操作する方法
上記で論じた通り、本明細書で示されるＶＨ配列およびＶＬ配列または全長重鎖および
全長軽鎖配列を有するＦＸＩａ結合性抗体は、全長重鎖配列および／もしくは全長軽鎖配
列、ＶＨ配列および／もしくはＶＬ配列、またはこれらへと付着された定常領域を修飾す
ることにより、新たなＦＸＩａ結合性抗体を創出するのに使用することができる。したが
って、本発明の別の態様では、本発明のＦＸＩａ結合性抗体の構造特色を使用して、ヒト
ＦＸＩａに結合し、また、ＦＸＩａの１つまたは複数の機能的特性も阻害すること（例え
ば、ＦＸＩａとＦＸＩａ受容体の結合を阻害する、ＦＸＩａ依存性の細胞増殖を阻害する
）など、本発明の抗体の少なくとも１つの機能的特性を保持する、構造的に関連するＦＸ
Ｉａ結合性抗体を創出する。

【0269】

例えば、本発明の抗体の１つまたは複数のＣＤＲ領域またはそれらの突然変異は、組換
えにより、公知のフレームワーク領域および／または他のＣＤＲと組み合わせて、組換え
により操作された、上記で論じた、本発明の、さらなるＦＸＩａ結合性抗体を創出するこ
とができる。他の種類の修飾は、前出の節で記載した修飾を含む。操作法のための出発材
料は、本明細書で提示されるＶＨ配列および／もしくはＶＬ配列のうちの１つもしくは複
数、またはそれらの１つもしくは複数のＣＤＲ領域である。操作抗体を創出するのに、本
明細書で提示されるＶＨ配列および／もしくはＶＬ配列のうちの１つもしくは複数、また
はそれらの１つもしくは複数のＣＤＲ領域を有する抗体を実際に調製する（すなわち、タ
ンパク質として発現させる）ことは必要ではない。そうではなくて、配列内に含有される
情報を、元の配列に由来する「第２世代の」配列を創出するための出発材料として使用し
、次いで、「第２世代の」配列を、タンパク質として調製し、発現させる。

【0270】

したがって、別の実施形態では、本発明は、配列番号３および２３からなる群から選択
されるＣＤＲ１配列、配列番号４および２４からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、な
らびに／または配列番号５および２５からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する重
鎖可変領域の抗体配列と；配列番号１３および３３からなる群から選択されるＣＤＲ１配
列、配列番号１４および３４からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、ならびに／または
配列番号１５および３５からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域の
抗体配列とからなるＦＸＩａ結合性抗体を調製し；重鎖可変領域の抗体配列および／また
は軽鎖可変領域の抗体配列内の、少なくとも１つのアミノ酸残基を改変して、少なくとも
１つの改変抗体配列を創出し；改変抗体配列を、タンパク質として発現させるための方法
を提供する。

【0271】

したがって、別の実施形態では、本発明は、配列番号６および２６からなる群から選択
されるＣＤＲ１配列、配列番号７および２７からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、な
らびに／または配列番号８および２８からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する重
鎖可変領域の抗体配列と；配列番号１６および３６からなる群から選択されるＣＤＲ１配
列、配列番号１７および３７からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、ならびに／または
配列番号１８および３８からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域の
抗体配列とからなるＦＸＩａ結合性抗体を調製し；重鎖可変領域の抗体配列および／また
は軽鎖可変領域の抗体配列内の、少なくとも１つのアミノ酸残基を改変して、少なくとも
１つの改変抗体配列を創出し；改変抗体配列を、タンパク質として発現させるための方法
を提供する。

【0272】

したがって、別の実施形態では、本発明は、哺乳動物細胞における発現について最適化
されたＦＸＩａ結合性抗体であって、配列番号１１または３１の群から選択される配列を
有する全長重鎖抗体配列と、配列番号２１または４１の群から選択される配列を有する全
長軽鎖抗体配列とからなるＦＸＩａ結合性抗体を調製し、全長重鎖抗体配列および／また
は全長軽鎖抗体配列内の少なくとも１つのアミノ酸残基を改変して、少なくとも１つの改
変抗体配列を創出し、改変抗体配列を、タンパク質として発現させるための方法を提供す
る。一実施形態では、重鎖または軽鎖の改変は、重鎖または軽鎖のフレームワーク領域内
である。

【0273】

改変抗体配列はまた、ＣＤＲ３配列、またはＵＳ２００５／０２５５５５２において記
載されている、最小限の不可欠な結合決定基を固定し、ＣＤＲ１配列およびＣＤＲ２配列
には多様性を持たせた抗体ライブラリーをスクリーニングすることによっても調製するこ
とができる。スクリーニングは、ファージディスプレイ技術など、抗体を、抗体ライブラ
リーからスクリーニングするのに適切な任意のスクリーニング技術に従い実施することが
できる。

【0274】

標準的な分子生物学の技法を使用して、改変抗体配列を調製し、発現させることができ
る。改変抗体配列によりコードされる抗体は、ヒト、カニクイザル、ラットおよび／また
はマウスＦＸＩａに特異的に結合すること；ならびに抗体が、Ｆ３６Ｅ細胞増殖アッセイ
および／またはＢａ／Ｆ３－ＦＸＩａＲ細胞増殖アッセイにおいて、ＦＸＩａ依存性の細
胞増殖を阻害することを含むがこれらに限定されない、本明細書で記載されるＦＸＩａ結
合性抗体の機能的特性のうちの１つ、一部、または全部を保持する抗体である。

【0275】

本発明の抗体を操作する方法のある種の実施形態では、ＦＸＩａ結合性抗体コード配列
の全部または一部に沿って、ランダムに、または選択的に、突然変異を導入することがで
き、結果として得られる修飾ＦＸＩａ結合性抗体を、本明細書で記載される結合活性およ
び／または他の機能的特性についてスクリーニングすることができる。当技術分野では、
突然変異法が記載されている。例えば、ＳｈｏｒｔによるＰＣＴ公開国際公開第０２／０
９２７８０号パンフレットは、飽和突然変異誘発、合成ライゲーションアセンブリー、ま
たはこれらの組合せを使用して、抗体の突然変異を創出し、スクリーニングするための方
法について記載している。代替的に、ＬａｚａｒらによるＰＣＴ公開国際公開第０３／０
７４６７９号パンフレットは、コンピュータによるスクリーニング法を使用して、抗体の
生理化学的特性を最適化する方法について記載している。

【0276】

本発明のある種の実施形態では、抗体は、脱アミド化部位を除去するように操作されて
いる。脱アミド化は、ペプチド内またはタンパク質内の構造的変化および機能的変化を引
き起こすことが公知である。脱アミドは、生物学的活性の低下のほか、タンパク質医薬品
の薬物動態および抗原性の改変も結果としてもたらしうる（Anal Chem. 2005年3月1日;77
（5）:1432～9）。

【0277】

本発明のある種の実施形態では、抗体は、ｐＩを増大させ、それらの薬物様特性を改善
するように操作されている。タンパク質のｐＩは、分子の全体的な生物物理的特性の鍵と
なる決定因子である。ｐＩが小さな抗体は、可溶性が小さく、安定性が小さく、凝集しや
すいことが公知である。さらに、ｐＩが小さな抗体の精製は、とりわけ、臨床における使
用のためのスケールアップにおいて、困難であり、問題を生じる可能性がある。本発明の
抗ＦＸＩ抗体および／もしくは抗ＦＸＩａ抗体またはＦａｂのｐＩを増大させることによ
り、それらの可溶性が改善され、抗体を高濃度（＞１００ｍｇ／ｍｌ）で製剤化すること
が可能となった。抗体を高濃度（例えば、＞１００ｍｇ／ｍｌ）で製剤化することにより
、高用量の抗体を投与することが可能であるという利点がもたらされ、これにより、血栓
性障害および／または血栓塞栓性障害を含む慢性疾患を処置するための著明な利点である
、投与頻度の低減を可能とすることができる。ｐＩの増大はまた、抗体のＩｇＧバージョ
ンのＦｃＲｎを媒介するリサイクリングも増大させ、これにより、薬物が長時間にわたり
体内にとどまり、要求される注射の回数を少なくすることも可能としうる。最後に、ｐＩ
の増大に起因して、抗体の全体的な安定性が著明に改善され、その結果として、保管寿命
およびｉｎ ｖｉｖｏにおける生物学的活性の延長がもたらされる。ｐＩは、８．２以上
であることが好ましい。

【0278】

改変抗体の機能的特性は、実施例において示されるアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）な
ど、当技術分野において利用可能であり、かつ／または本明細書で記載される標準的なア
ッセイを使用して評価することができる。

【0279】

予防的使用および治療的使用
本明細書で記載される、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合する抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１
に記載されている抗体）は、有効量の、本発明の抗体または抗原結合性断片を、それを必
要とする対象へと投与することにより、血栓塞栓性疾患または血栓塞栓性障害（例えば、
血栓性脳卒中、心房細動、心房細動における脳卒中の防止（ＳＰＡＦ）、深部静脈血栓症
、静脈血栓塞栓症、肺塞栓症、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、虚血性脳卒中、急性下肢虚
血症、慢性血栓塞栓性肺高血圧症、または全身性塞栓症）を処置するために、治療的に有
用な濃度で使用することができる。本発明は、有効量の、本発明の抗体を、それを必要と
する対象へと投与することにより、血栓塞栓性障害（例えば、血栓性障害）を処置する方
法を提供する。本発明は、有効量の、本発明の抗体を、それを必要とする対象へと投与す
ることにより、血栓塞栓性障害（例えば、血栓性脳卒中、心房細動、心房細動における脳
卒中の防止（ＳＰＡＦ）、深部静脈血栓症、静脈血栓塞栓症、肺塞栓症、急性冠動脈症候
群（ＡＣＳ）、虚血性脳卒中、急性下肢虚血症、慢性血栓塞栓性肺高血圧症、または全身
性塞栓症）を処置する方法を提供する。

【0280】

本明細書で記載される抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ
ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗
体）はとりわけ、本明細書でより詳細に記載される通り、血栓性障害を含むがこれらに限
定されない、血栓塞栓性状態または血栓塞栓性障害を処置、防止、および改善するのに使
用することができる。

【0281】

本明細書で提示される抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤ
Ｒを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗体）はまた、血栓塞栓性
障害を防止、処置、または改善するために、他の薬剤と組み合わせて使用することもでき
る。例えば、スタチン療法は、血栓性障害および／または血栓塞栓性障害を伴う患者を処
置するために、本発明のＦＸＩａ抗体および抗原結合性断片と組み合わせて使用すること
ができる。

【0282】

本明細書の具体的な実施形態では、心房細動を伴う患者における脳卒中を処置または防
止する方法であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば
、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗Ｆ
ＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を、それを必要
とする患者へと投与するステップを含む方法が提示される。

【0283】

本明細書の具体的な実施形態では、心房細動を伴う患者における塞栓性脳卒中および全
身性塞栓症など、心房細動（ＡＦ）と関連する危険性または状態を管理または防止する方
法であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば、ＮＯＶ
１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／Ｆ
ＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を、それを必要とする患
者へと投与するステップを含む方法が提示される。

【0284】

本明細書の具体的な実施形態では、心房細動を伴う患者における塞栓性脳卒中および全
身性塞栓症など、心房細動（ＡＦ）と関連する状態を処置、管理、または防止する方法で
あって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば、ＮＯＶ１４
０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩ
ａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を、それを必要とする患者へ
と投与するステップを含む方法が提示される。特定の実施形態では、ＡＦ患者は、出血の
危険性が高い。

【0285】

本明細書の具体的な実施形態では、対象（例えば、深部静脈血栓症を伴うか、またはこ
れを発症する危険性がある対象）における深部静脈血栓症またはこれと関連する状態を処
置、管理、または防止する方法であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／Ｆ
ＸＩａ抗体、例えば、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ
ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ
抗体を、それを必要とする対象へと投与するステップを含む方法が提示される。

【0286】

本明細書の具体的な実施形態では、対象（例えば、静脈血栓塞栓症を伴うか、またはこ
れを発症する危険性がある対象）における静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）またはこれと関連す
る状態を処置、管理、または防止する方法であって、有効量の、本明細書で記載される抗
ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲ
およびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ
／ＦＸＩａ抗体を、それを必要とする対象へと投与するステップを含む方法が提示される
。特定の実施形態では、本明細書で提示される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体で処置される対象
は、がん患者を含め、１）出血の危険性が低い、初回の特発性ＶＴＥ、２）特発性ＶＴＥ
の再発、または３）血栓性素因と関連するＶＴＥを経ている。

【0287】

本明細書の具体的な実施形態では、対象（例えば、肺塞栓症を伴うか、またはこれを発
症する危険性がある対象）における肺塞栓症またはこれと関連する状態を処置、管理、ま
たは防止する方法であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、
例えば、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含
む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を、それ
を必要とする対象へと投与するステップを含む方法が提示される。

【0288】

本明細書の具体的な実施形態では、対象における急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）またはこ
れと関連する状態を処置、管理、または防止する方法であって、有効量の、本明細書で記
載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶ
Ｌ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されてい
る抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を、それを必要とする対象へと投与するステップを含む方法が
提示される。

【0289】

本明細書の具体的な実施形態では、対象（例えば、虚血性脳卒中を伴うか、またはこれ
を発症する危険性がある対象）における虚血性脳卒中を処置、管理、または防止する方法
であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば、ＮＯＶ１
４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸ
Ｉａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を、それを必要とする対象
へと投与するステップを含む方法が提示される。

【0290】

本明細書の具体的な実施形態では、対象における急性下肢虚血症を処置、管理、または
防止する方法であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例え
ば、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗
ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を、それを必
要とする対象へと投与するステップを含む方法が提示される。

【0291】

本明細書の具体的な実施形態では、対象における慢性血栓塞栓性肺高血圧症を処置、管
理、または防止する方法であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ
抗体、例えば、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤ
Ｒを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を
、それを必要とする対象へと投与するステップを含む方法が提示される。

【0292】

本明細書の具体的な実施形態では、対象（例えば、全身性塞栓症を伴うか、またはこれ
を発症する危険性がある対象）における全身性塞栓症を処置、管理、または防止する方法
であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば、ＮＯＶ１
４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸ
Ｉａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を、それを必要とする対象
へと投与するステップを含む方法が提示される。

【0293】

本明細書のある種の実施形態では、カテーテルが血栓性となったカテーテル（例えば、
がん患者におけるヒックマンカテーテル）関連状態である、またはチュービングが凝血を
発症させる体外式膜型人工肺（ＥＣＭＯ）である血栓塞栓性状態を処置、管理、または防
止する方法であって、有効量の、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば
、ＮＯＶ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗Ｆ
ＸＩ／ＦＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体を、それを必要
とする対象へと投与するステップを含む方法が提示される。

【0294】

特定の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば、ＮＯＶ
１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／Ｆ
ＸＩａ抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体による処置を必要とする
対象は、
・慢性の抗凝固療法の適応（例えば、ＡＦ、左室性血栓、既往の心塞栓性脳卒中）を伴
う対象；
・大量出血の危険性が中等度～高度である対象；
・ステント血栓症を防止するように、二重の抗血小板療法（アスピリンおよびＰ２Ｙ１
２受容体アンタゴニスト）を施すことを要求しうるステント留置を伴う、待機的経皮冠動
脈インターベンション（ＰＣＩ）または直接的ＰＣＩを受ける対象
を含みうる。

【0295】

特定の実施形態では、以下の状態：
・発作性心房細動もしくは発作性心房粗動、遷延性心房細動もしくは遷延性心房粗動、
または永続性心房細動もしくは永続性心房粗動などの心不整脈を疑われるか、または確認
されている対象における血栓塞栓症；
・心房細動における脳卒中の防止（ＳＰＡＦ）を伴う対象であって、その亜集団が、経
皮冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）を受けるＡＦ患者である対象；
・出血の危険性が大きな患者における、急性静脈血栓塞栓性事象（ＶＴＥ）の処置、お
よび長期的な続発性ＶＴＥの防止；
・一過性虚血性発作（ＴＩＡ）または非機能障害誘発性脳卒中の後の二次防止における
大脳および心血管事象、ならびに洞調律を伴う心不全における血栓塞栓性事象の防止にお
ける大脳および心血管事象；
・心不整脈のための心除細動を受ける対象における、左心房内の凝血形成および血栓塞
栓症；
・心不整脈のためのアブレーション手順の前、その間、およびその後における血栓症；
・静脈血栓症であり、これは、下肢または上肢における、深部静脈血栓症または表在静
脈血栓症、腹部静脈および胸部静脈における血栓症、静脈洞血栓症および頸静脈血栓症の
処置および二次防止を含むがこれらに限定されない；
・カテーテルまたはペースメーカーの導線など、静脈内の任意の人工表面上の血栓症；
・静脈血栓症を伴うかまたは伴わない患者における肺塞栓症；
・慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＣＴＥＰＨ）；
・破裂したアテローム性プラーク上の動脈血栓症、動脈内の人工装具上またはカテーテ
ル上の血栓症、および見かけ上正常な動脈内の血栓症であり、これらは、急性冠動脈症候
群、ＳＴ上昇型心筋梗塞、非ＳＴ上昇型心筋梗塞、不安定狭心症、ステント血栓症、動脈
系内の任意の人工表面の血栓症、および肺高血圧症を伴うかまたは伴わない対象における
肺動脈血栓症を含むがこれらに限定されない；
・経皮冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）を受ける患者における、血栓症および血栓
塞栓症；
・心塞栓性脳卒中および潜因性脳卒中；
・侵襲性および非侵襲性のがん性悪性腫瘍を伴う患者における血栓症；
・留置カテーテルにわたる血栓症；
・重病患者における血栓症および血栓塞栓症；
・心血栓症および血栓塞栓症であり、これらは、心筋梗塞後における心血栓症、心動脈
瘤、心筋線維症、心肥大および心機能不全、心筋炎、ならびに心臓内の人工表面などの状
態と関連する心血栓症を含むがこれらに限定されない；
・心房細動を伴うかまたは伴わない、心弁性心疾患を伴う患者における血栓塞栓症；
・心弁用の機械的または生物学的人工装具にわたる血栓塞栓症；
・単純型心奇形または複合型心奇形の心臓修復術後において、天然または人工の心パッ
チ、動脈または静脈の導管を有した患者における傷害または外傷；
・人工膝関節置換術、人工股関節置換術、および整形外科術、胸部手術または腹部手術
の後における、静脈血栓症および血栓塞栓症；
・頭蓋内インターベンションおよび脊髄インターベンションを含む神経外科術の後にお
ける、動脈血栓症または静脈血栓症；
・第Ｖ因子 Ｌｅｉｄｅｎ、プロトロンビンの突然変異、抗トロンビンＩＩＩ、プロテ
インＣ欠損症およびプロテインＳ欠損症、第ＸＩＩＩ因子の突然変異、家族性異常フィブ
リノゲン血症、先天性プラスミノゲン欠損症、第ＸＩ因子レベルの上昇、鎌状赤血球病、
抗リン脂質症候群、自己免疫疾患、慢性腸疾患、ネフローゼ症候群、溶血性尿毒症、骨髄
増殖性疾患、播種性血管内凝固、発作性夜間ヘモグロビン尿症、およびヘパリン誘導性血
小板減少症を含むがこれらに限定されない、先天性または後天性の血栓性素因；
・慢性腎疾患における血栓症および血栓塞栓症；ならびに
・血液透析を受ける患者、および体外式膜型人工肺を受ける患者における、血栓症およ
び血栓塞栓症
のうちの１つを、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、例えば、ＮＯＶ１４０
１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ
抗体など、表１に記載されている抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体で処置または管理することがで
きる。

【0296】

本明細書の具体的な態様では、本明細書で提示される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば
、ＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体など
、表１に記載されている抗体）で処置されるかまたはこれを投与される患者における出血
、例えば、外傷、手術、月経、または産後と関連する出血を管理する方法であって、抗凝
固効果の反転を含む方法が提示される。ＦＸＩ欠損症は、自発的な出血症状と関連するこ
とがまれであり、具体的な態様では、出血は、外傷、手術、月経、または産後と関連する
ことが最も典型的である。出血の遷延は、大きな外傷の後、または口腔粘膜、鼻腔粘膜、
生殖器粘膜、または泌尿器粘膜などの高線溶領域を伴う臓器に関与する手術の後で生じう
る。抜歯、扁桃摘出術、および子宮または前立腺のアブレーションは、出血の大きな危険
性を伴う手術の例である。また、障害を伴う人々も、鼻血および斑状出血を発症させる傾
向が強く、まれだが、尿中または腸内への出血を発症させる場合もある。ＦＸＩ欠損症を
伴う患者では、自発的な筋肉または関節の出血および頭蓋内出血の頻度は増大しない。静
脈穿刺は通例、出血の長期化と関連しない。ＦＸＩ欠損症と関連する他の遺伝子突然変異
は、重度のＦＸＩ欠損症を伴う患者における、異質な予測外の出血傾向に寄与しうる。抗
血小板剤、他の抗凝固剤、および線溶薬剤の併用は、出血の危険性を増大させうる。

【0297】

本明細書の特定の実施形態では、本明細書で提示される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例え
ば、ＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体な
ど、表１に記載されている抗体）で処置される患者における出血を管理する方法であって
、出血を管理するのに十分な時間にわたる、一次的な抗凝固効果の反転を含む方法が提示
される。具体的な実施形態では、抗凝固効果を反転するステップは、（ｉ）コロイド、晶
質、ヒト血漿、もしくはアルブミンなどの血漿タンパク質を使用する体液の置きかえ；ま
たは（ｉｉ）濃厚赤血球もしくは全血液による輸血を含む。特定の実施形態では、例えば
、重度の救急症例における、抗凝固剤の効果の反転のための治療剤は、新鮮凍結血漿（Ｆ
ＦＰ）、プロトロンビン複合体濃縮物（ＰＣＣ）、および活性化ＰＣＣ［（ＡＰＣＣ）；
例えば、第ＶＩＩＩ因子インヒビターバイパス活性（ＦＥＩＢＡ）］ならびに組換え活性
化型第ＶＩＩ因子（ｒＦＶＩＩａ）など、止血促進性の血液成分を含むがこれらに限定さ
れない。一実施形態では、３０μｇ／ｋｇの用量におけるｒＦＶＩＩａの投与に続き、６
時間ごと、５～７日間にわたる、１ｇのトラネキサム酸に加えて、２～４時間ごとに１５
～３０μｇ／ｋｇの用量で、２４～４８時間にわたるｒＦＶＩＩａの投与を含むレジメン
は、大きな手術を受ける本明細書で提示される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ
１４０１またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体）で処置さ
れる対象、および接近不可能な出血が進行中の部位を伴う患者における止血を回復させ、
出血を止める可能性を有しうる。例えば、Ｒｉｄｄｅｌｌｅらは、インヒビターを伴わな
い重度のＦＸＩ欠損症を伴う、手術を受ける患者４例における経験について報告したが（
Riddell et al., 2011, Thromb. Haemost.; 106: 521-527）、患者は、３０μｇ／ｋｇの
ｒＦＶＩＩａおよび１ｇのトラネキサム酸を、麻酔導入時にｉ．ｖ．投与された。後続の
、１５～３０μｇ／ｋｇのｒＦＶＩＩａのボーラス投与は、Ｒｏｔａｔｉｏｎａｌ Ｔｈ
ｒｏｍｂｏｅｌａｓｔｏｍｅｔｒｙ（ＲＯＴＥＭ）結果により示される指針の通り、２～
４時間間隔で投与された。患者は、上述の用量のｒＦＶＩＩａで、２４～４８時間にわた
り処置された。６時間ごとに１ｇのトラネキサム酸は、５日間にわたり継続された。この
少量シリーズでは、トラネキサム酸と組み合わせた、１５～３０μｇ／ｋｇという低用量
のｒＦＶＩＩａは、この研究の重度のＦＸＩ欠損症における止血異常の矯正において、安
全かつ有効であった。インヒビター（通例、重度のＦＸＩ欠損症を伴う患者への輸血また
は血液製剤の投与の後で獲得される、自家ＦＸＩ中和抗体）を伴う重度のＦＸＩ欠損症を
伴う、５件の手術を経た患者４例を含む別の研究では、著者ら（Livnat et al., 2009, T
hromb. Haemost.; 102: 487-492）は、以下のプロトコールを適用した：手術の２時間前
における、経口トラネキサム酸１ｇ、次いで、インターベンションの直前に、患者に、別
のｉ．ｖ．トラネキサム酸１ｇを施した。用量を１５～３０μｇ／ｋｇの範囲とする組換
えＦＶＩＩａを、手術の完了時に注入した。その後、経口トラネキサム酸１ｇを、６時間
ごとに、少なくとも７日間にわたり施した。フィブリン接着剤を、患者１例における、摘
出された胆嚢床に噴霧した。このプロトコールは、インヒビターを伴う重度のＦＸＩ欠損
症を伴う患者における、正常な止血を確保した。

【0298】

一態様では、フィブリン接着剤を使用して、ＦＸＩ欠損症を伴う患者における、歯科手
術時の局所止血を回復させることができる（Bolton-Maggs (2000) Haemophilia; 6 (S1):
100-9）。本明細書で提示される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１）で
処置される患者における出血を管理する方法に関する、ある種の実施形態では、フィブリ
ン接着剤の使用と関連する、６時間ごと、５～７日間にわたるトラネキサム酸１ｇからな
るレジメンは、小さな手術を受ける対象、および口腔および鼻腔における出血事象を含む
、出血している部位が接近可能な対象において、局所的な止血を確立するのに使用されう
る。

【0299】

医薬組成物
本発明は、薬学的に許容される担体と併せて製剤化されたＦＸＩａ結合性抗体（インタ
クトなまたは結合性断片）を含む医薬組成物を提供する。組成物は加えて、例えば、血栓
塞栓性障害（例えば、血栓性障害）の処置または防止に適する１つまたは複数の他の治療
剤も含有しうる。薬学的に許容される担体は、組成物を増強するかもしくは安定化させる
か、または、組成物の調製を容易とするのに使用することもできる。薬学的に許容される
担体は、生理学的に適合性の溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張
剤および吸収遅延剤などを含む。

【0300】

本発明の医薬組成物は、当技術分野で公知の様々な方法により投与することができる。
投与経路および／または投与方式は、所望される結果に応じて変化する。投与は、静脈内
投与（ｉ．ｖ．）、筋内投与（ｉ．ｍ．）、腹腔内投与（ｉ．ｐ．）、もしくは皮下投与
（ｓ．ｃ．）であるか、または標的部位に近接して投与することが好ましい。薬学的に許
容される担体は、静脈内投与、筋内投与、皮下投与、非経口投与、脊髄投与、または表皮
投与（例えば、注射または注入による）に適するものとする。投与経路に応じて、活性化
合物、すなわち、二特異性分子および多特異性分子である抗体は、化合物を、化合物を不
活化しうる酸および他の天然の状態の作用から保護する材料でコーティングすることがで
きる。

【0301】

特定の態様では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ１４
０１、またはＮＯＶ１４０１のＬＣＤＲおよびＨＣＤＲを含む抗体など、表１に記載され
ている抗体）を、皮下注射のための流体バイアル中に１ｍＬ当たり約７５ｍｇ～１ｍＬ当
たり約２００ｍｇの濃度で製剤化する。特定の実施形態では、医薬組成物は、医薬担体ま
たは医薬賦形剤、例えば、スクロースおよびポリソルベート２０を含む。特定の実施形態
では、医薬組成物は、Ｌ－ヒスチジンおよび／またはヒスチジンＨＣｌ一水和物を含む。
ある種の実施形態では、医薬組成物は、約４～７または５～６のｐＨを有する。

【0302】

特定の態様では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ１４
０１、またはＮＯＶ１４０１のＬＣＤＲおよびＨＣＤＲを含む抗体など、表１に記載され
ている抗体）を、皮下注射のための流体バイアル中に１ｍＬ当たり１５０ｍｇの濃度で製
剤化する。一実施形態では、１５０ｍｇ／ｍＬの流体製剤は、ｐＨ＝５．５±０．５とし
て、１５０ｍｇの抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体、Ｌ－ヒスチジン、ヒスチジンＨＣｌ一水和物
、スクロース、およびポリソルベート２０を含有する。組成物は、滅菌であり、かつ、流
体であるものとする。適正な流体性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用する
ことにより維持することができ、分散液の場合には、要求される粒子サイズを維持し、界
面活性剤を使用することにより維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、
例えば、糖、マンニトールまたはソルビトールなどの多価アルコール、および塩化ナトリ
ウムを含むことが好ましい。注射用組成物の長時間吸収は、組成物中に、吸収を遅延させ
る薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組み入れることにより
もたらすことができる。

【0303】

本発明の医薬組成物は、当技術分野において周知であり、日常的に実施されている方法
に従い調製することができる。例えば、Remington：The Science and Practice of Pharm
acy、Mack Publishing Co.、20版、2000；およびSustained and Controlled Release Dru
g Delivery Systems、J.R. Robinson編、Marcel Dekker, Inc.、New York、1978を参照さ
れたい。医薬組成物は、ＧＭＰ条件下で製造することが好ましい。本発明の医薬組成物中
では、ＦＸＩａ結合性抗体の治療的に有効な用量または治療的に効果的な用量を援用する
ことが典型的である。ＦＸＩａ結合性抗体は、当業者に公知の従来の方法により、薬学的
に許容される剤形へと製剤化する。投与レジメンは、所望される最適応答（例えば、治療
的応答）をもたらすように調整する。例えば、単一のボーラスを投与することもでき、複
数に分割された用量をある期間にわたり投与することもでき、治療状況の要件により指し
示されるのに応じて、用量を比例的に低減するかまたは増大させることもできる。投与の
容易さおよび投与量の均一性のために、非経口組成物を、投与量単位形態で製剤化するこ
とがとりわけ有利である。本明細書で使用される投与量単位形態とは、処置される対象の
ための単位投与量として適する、物理的に個別の単位を指す。各単位は、要求される医薬
担体との関連で、所望の治療効果をもたらすように計算された、所定量の活性化合物を含
有する。

【0304】

本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者に毒性とならずに、特
定の患者、組成物、および投与方式に所望される治療的応答を達成するのに有効な量の有
効成分を得るように変化させることができる。選択される投与量レベルは、援用される本
発明の特定の組成物、それらの活性、投与経路、投与時期、援用される特定の化合物の排
出速度、処置の持続期間、援用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、
化合物、および／または材料、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全般的健康、
および医療既往歴などの因子を含む様々な薬物動態因子に依存する。

【0305】

医師は、医薬組成物中で援用される本発明の抗体の投与を、所望の治療効果を達成する
のに要求されるレベル未満のレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで、投与量を漸
増させることができる。一般に、本明細書で記載される血栓性および／または血栓塞栓性
障害を処置するのに有効な、本発明の組成物の用量は、投与手段、標的部位、患者の生理
学的状態、投与される他の薬物、および処置が予防的であるのか治療的であるのかを含む
、多くの異なる因子に応じて変化する。処置投与量は、安全性および有効性を最適化する
ように滴定することが必要である。抗体の全身投与では、投与量は、宿主の体重１ｋｇ当
たり約０．０１～１５ｍｇの範囲である。抗体の投与（例えば、皮下投与）では、投与量
は、０．１ｍｇ～５ｍｇまたは１ｍｇ～６００ｍｇの範囲でありうる。例えば、本明細書
で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３
ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋ
ｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．
２ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／
ｋｇ、１．７ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２
．１ｍｇ／ｋｇ、２．２ｍｇ／ｋｇ、２．３ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ
／ｋｇ、２．６ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、２．８ｍｇ／ｋｇ、２．９ｍｇ／ｋｇ、
３．０ｍｇ／ｋｇ、３．１ｍｇ／ｋｇ、３．２ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．４ｍ
ｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．７ｍｇ／ｋｇ、３．８ｍｇ／ｋｇ
、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．１ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．３
ｍｇ／ｋｇ、４．４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．６ｍｇ／ｋｇ、４．７ｍｇ／ｋ
ｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、４．９ｍｇ／ｋｇ、または５．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与するこ
とができる。例示的な処置レジメは、２週間ごとに１回、または毎月１回、または３～６
カ月ごとに１回の全身投与を伴う。例示的な処置レジメは、毎週１回、２週間ごとに１回
、３週間ごとに１回、毎月１回、もしくは３～６カ月ごとに１回、または必要に応じて（
ＰＲＮ）の全身投与を伴う。

【0306】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．により、３ｍｇ／ｋｇ
の用量で投与する。

【0307】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．により、１０ｍｇ／ｋ
ｇの用量で投与する。

【0308】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．により、３０ｍｇ／ｋ
ｇの用量で投与する。

【0309】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．により、５０ｍｇ／ｋ
ｇの用量で投与する。

【0310】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．により、１００ｍｇ／
ｋｇの用量で投与する。

【0311】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｉ．ｖ．経路またはｓ．ｃ．経路により、５ｍ
ｇ～６００ｍｇの範囲の用量で投与する。

【0312】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｉ．ｖ．経路またはｓ．ｃ．経路により、約５
ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、９０
ｍｇ、１００ｍｇ、１２０ｍｇ、１５０ｍｇ、１８０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２
４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２７０ｍｇ、３００ｍｇ、３３０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ
、３９０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４５０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５１０
ｍｇ、５４０ｍｇ、５５０ｍｇ、５７０ｍｇ、または６００ｍｇの用量で投与する。

【0313】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｓ．ｃ．経路により、５ｍｇの用量で投与する
。

【0314】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｓ．ｃ．経路により、１５ｍｇの用量で投与す
る。

【0315】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｓ．ｃ．経路により、５０ｍｇの用量で投与す
る。

【0316】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｓ．ｃ．経路により、１５０ｍｇの用量で投与
する。

【0317】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｓ．ｃ．経路により、３００ｍｇの用量で投与
する。

【0318】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｓ．ｃ．経路により、６００ｍｇの用量で投与
する。

【0319】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｉ．ｖ．経路またはｓ．ｃ．経路により、ａＰ
ＴＴの平均持続時間の、２倍以上の延長を、３０日間、３５日間、３６日間、３７日間、
３８日間、３９日間、４０日間、４１日間、４２日間、４３日間、４４日間、４５日間、
または５０日間を超えない期間にわたり達成するのに十分な用量で投与する。

【0320】

ある種の実施形態では、本明細書で記載される抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯ
Ｖ１４０１、またはＮＯＶ１４０１のＶＬ ＣＤＲおよびＶＨ ＣＤＲを含む抗体など、
表１に記載されている抗体）を、例えば、ｉ．ｖ．経路またはｓ．ｃ．経路により、ａＰ
ＴＴの平均持続時間の、２倍以上の超える延長を、４２日間を超えない期間にわたり達成
するのに十分な用量で投与する。

【0321】

抗体は通例、複数回投与する。単回の投与の間の間隔は、毎週、隔週、毎月、または毎
年でありうる。間隔はまた、患者におけるＦＸＩ結合性抗体および／もしくはＦＸＩａ結
合性抗体の血中レベルを測定することにより指し示される通り、不規則でもありうる。加
えて、医師が代替的な投与間隔を決定する場合もあり、毎月または効果的であるのに必要
な間隔で投与する。全身投与のいくつかの方法では、投与量は、抗体の血漿中濃度１～１
０００μｇ／ｍＬまたは１～１２００μｇ／ｍＬを達成するように調整し、いくつかの方
法では、２５～５００μｇ／ｍＬを達成するように調整する。代替的に、抗体は、持続放
出製剤として投与することもでき、この場合は、低頻度の投与が要求される。投与量およ
び頻度は、患者における抗体およびその標的の半減期に応じて変化する。一般に、ヒトお
よびヒト化抗体は、キメラ抗体および非ヒト抗体の半減期より長いヒトにおける半減期を
示す。投与量および投与頻度は、処置が予防的であるのか治療的であるのかに応じて変化
しうる。予防的適用では、比較的低投与量を、比較的低頻度の間隔で、長期にわたり投与
する。一部の患者には、彼らの余生にわたり処置を施し続ける。治療的適用では場合によ
って、比較的高投与量が、疾患の進行が軽減されるか終結するまで、比較的短い間隔で要
求され、好ましくは、患者が、疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで要求され
る。その後、患者には、予防的レジメンを投与することができる。

【実施例】

【0322】

以下の実施例は、本発明をさらに例示するために提示されるものであり、その範囲を限
定するために提示されるものではない。当業者には、本発明の他の変形がたやすく明らか
であろうし、添付の特許請求の範囲によっても包含される。

【0323】

実施例１
ヒトＦａｂファージライブラリーによるパニング
ヒト第ＸＩ因子を認識する抗体を選択するために、複数のパニング戦略を活用した。ヒ
ト第ＸＩ因子およびウサギ第ＸＩａ因子の触媒ドメインタンパク質の異なる変異体に対す
る治療用抗体は、抗体の供給源として、市販の相ディスプレイライブラリーである、Ｍｏ
ｒｐｈｏｓｙｓ ＨｕＣＡＬ ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）ライブラリーを使用して、
第ＸＩ因子に結合したクローンを選択することにより作り出した。ファージミドライブラ
リーは、ファージ表面上にＦａｂを提示するために、ＨｕＣＡＬ（登録商標）概念（Knap
pik et al., 2000, J Mol Biol 296: 57-86）に基づき、ＣｙｓＤｉｓｐｌａｙ（商標）
技術を援用する（国際公開第０１／０５９５０号パンフレット）。抗第ＸＩ因子抗体の流
体相を単離するために、パニング戦略を援用した。

【0324】

交差反応性解析
精製Ｆａｂを、ＥＬＩＳＡにおいて、ヒト第ＸＩ因子（第ＸＩ因子、第ＸＩａ因子、お
よび第ＸＩａ因子の触媒ドメイン）およびウサギ第ＸＩａ因子の触媒ドメインのビオチニ
ル化タンパク質の、異なる変異体への結合について調べた。この目的で、Ｍａｘｉｓｏｒ
ｐ（商標）（Ｎｕｎｃ）３８４ウェルプレートを、４℃、ＰＢＳ中１０ｕｇ／ｍｌのＮｅ
ｕｔｒＡｖｉｄｉｎで一晩にわたりコーティングした。抗原は、ＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ
上、ビオチンを介して、室温（ＲＴ）で３０分間にわたり捕捉した。異なる濃度のＦａｂ
の結合は、Ａｔｔｏｐｈｏｓ蛍光基質（Ｒｏｃｈｅ：型番１１６８１９８２００１）を使
用して、アルカリホスファターゼ（１：５０００に希釈した）へとコンジュゲートさせた
、Ｆ（ａｂ）_２特異的ヤギ抗ヒトＩｇＧにより検出した。５３５ｎｍにおける蛍光発光は
、４３０ｎｍにおける励起により記録した。

【0325】

ＩｇＧへの転換およびＩｇＧの発現
全長ＩｇＧを、ＣＡＰ－Ｔ細胞内で発現させるために、重鎖の可変ドメイン（ＶＨ）断
片および軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）断片を、Ｆａｂの発現ベクターから、ヒトＩｇＧ１
に適切なｐＭｏｒｐｈ（登録商標）＿ｈＩｇベクターへとサブクローニングした。２カ所
のアミノ酸置換（Ｄ２６５ＡおよびＰ３２９Ａ）を、Ｆｃ部分に導入して、任意の表面関
連ＦＸＩにより引き起こされる、ＡＤＣＣまたはＣＤＣの可能性を低減した。これらのア
ラニン置換は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを低減することが示されている（例えば、Idosugie
et al., J. Immunol. 164:4178-4184, 2000; Shields et al., J. Biol. Chem. 276:659
1-6604, 2001を参照されたい）。トランスフェクションの７日後に、細胞培養物上清を採
取した。滅菌濾過の後で、リキッドハンドリングステーションを使用して、溶液を、プロ
テインＡアフィニティークロマトグラフィーにかけた。試料を、５０ｎＭのクエン酸、１
４０ｎＭのＮａＯＨ中で溶出させ、１Ｍのトリス緩衝液でｐＨを中和し、滅菌濾過した（
０．２μｍの小孔サイズ）。タンパク質濃度は、２８０ｎｍにおけるＵＶ分光光度法によ
り決定し、ＩｇＧの純度は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中の変性還元条件下で解析した。

【0326】

実施例２
結合データ
ＦＸＩ触媒ドメインについての表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析
ＳＰＲ測定は、表面プラズモン共鳴ベースの光学バイオセンサーであるＢＩＡＣＯＲＥ
（商標）Ｔ２００（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｐｐｓａ
ｌａ）上で実施した。Ｓｅｒｉｅｓ Ｓセンサーチップ（ＣＭ５）、固定化キット、およ
び再生緩衝液は、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（Ｕｐｐｓａｌａ）から購入した。ＩｇＧ
またはＦａｂのリガンドフォーマットに応じて、２つの異なるアッセイセットアップを実
施した。まず、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）およびＮ－（３－ジメチルアミ
ノプロピル）－Ｎ－エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）により、表面を活性
化させた。標準的なアミンカップリング法（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｐｐｓａｌ
ａ）により、ＮＯＶ１４０１－Ｆａｂを、ＣＭ５チップ上の活性化デキストランマトリッ
クスへと共有結合的に付着させた。ＮＯＶ１４０１－ＩｇＧについて捕捉アッセイを実施
し、ヤギ抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体（ＪＩＲ）を、１４０００ＲＵで、チップ上に固定化し
た。残りの活性表面基は、エタノールアミン（ＥＡ）で不活化した。リガンドを固定化さ
せていない基準細胞を調製し、システムを、１倍濃度のＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液（１０ｍＭ
のＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％のＰ２０、ｐＨ７
．４；Ｔｅｋｎｏｖａ Ｈ８０２２）で平衡化させた。

【0327】

全ての結合実験は、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液を使用して、２５℃、５０μＬ／分の流量で
実施した。捕捉アッセイのために、ＮＯＶ１４０１－ＩｇＧを、８０のＲＵレベルに達す
るまで捕捉した。反応速度研究のために、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中０～２００ｎＭの範囲
の濃度で、ＦＸＩ触媒ドメインの希釈系列を使用した。会合時間は、１２０秒間であり、
解離時間は、１８０秒間であった。表面は、１０ｍＭグリシン、ｐＨ１．５の単回注入（
接触時間を６０秒間とし、安定化時間を１２０秒間とする）により再生させた。データの
加工ならびにｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ、およびＫ_Ｄの決定は、Ｔ２００ ＢｉａＥｖａｌｕａｔ
ｉｏｎソフトウェアバージョン１．０により達成した。二重基準（基準注入およびブラン
ク注入の控除）を適用して、バルク効果および他の系統的アーチファクトについて補正し
た。１：１結合モデル（Ｒ_ｍａｘをグローバルに設定した）を適用することにより、セン
サーグラムを当てはめた。

【0328】

ＦＸＩおよびＦＸＩａについての溶液中平衡滴定（ＳＥＴ）
２２の１．６倍抗原希釈系列（serial 1.6 n dilution）を、試料緩衝液（０．５％の
ＢＳＡおよび０．０２％のＴｗｅｅｎ ２０を含有する、ｐＨ７．４のＰＢＳ）中で調製
し、一定濃度のＮＯＶ１４０１－Ｆａｂ（ｈｕＦＸＩについては、２００ｐＭとし、ｈｕ
ＦＸＩａについては、５００ｐＭとした）またはＮＯＶ１４０１抗体（ｈｕＦＸＩおよび
ｈｕＦＸＩａについては、１０ｐＭとする）を、各抗原濃度へと添加した。抗原希釈系列
の出発濃度は、ｈｕＦＸＩａについては、１００ｎＭとし、ｈｕＦＸＩについては、２０
ｎＭ（Ｆａｂアッセイ）または１ｎＭ（ＩｇＧアッセイ）とした。ウェル１つ当たり６０
μｌずつの希釈ミックスを、二連で、３８４ウェルのポリプロピレンＭＴＰへと分配した
。試料緩衝液を、陰性対照として用い、抗原を含有しない試料を、陽性対照（Ｂｍａｘ）
として用いた。プレートを、シェーカー上、室温で一晩にわたり、シーリングおよびイン
キュベートした。標準的な３８４ウェルＭＳＤアレイＭＴＰを、ＰＢＳ中で希釈された、
０．１μｇ／ｍｌのｈｕＦＸＩａ（ｈｕＦＸＩａおよびｈｕＦＸＩについて）ウェル１つ
当たり３０μｌでコーティングし、４℃で一晩にわたり、シーリングおよびインキュベー
トした。

【0329】

インキュベーションおよびＴＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０を含有するＴＢＳ
）による３回にわたる洗浄の後、抗原でコーティングしたＭＳＤプレートを、ウェル１つ
当たり５０μｌのブロッキング緩衝液（５％のＢＳＡを含有するＰＢＳ）でブロッキング
し、シェーカー上、室温で１時間にわたりインキュベートした。洗浄ステップを繰り返し
、ウェル１つ当たり３０μｌのＦａｂ－抗原調製物／ＩｇＧ－抗原調製物を、ポリプロピ
レンＭＴＰから、抗原でコーティングしたＭＳＤプレートへと移し、シェーカー上、室温
で２０分間にわたりインキュベートした。さらなる洗浄ステップの後、試料緩衝液中で希
釈された、０．５μｇ／ｍｌのＥＣＬ標識ヤギ抗ヒト－ＩｇＧ／Ｆａｂ検出抗体（ＭＳＤ
）３０μｌを、各ウェルへと添加し、振とうしながら、室温で３０分間にわたりインキュ
ベートした。再度、プレートを３回にわたり洗浄した後で、３５μｌのリード緩衝液（Ｍ
ＳＤ）を、各ウェルへと添加した。電気化学発光（ＥＣＬ）シグナルを発生させ、ＭＳＤ
Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ６０００で検出した。

【0330】

平均ＥＣＬシグナルを、各アッセイ内の二連の測定から計算した。データは、全てのデ
ータ点から最低値を控除することにより、ベースラインで調整し、対応する抗原濃度に対
してプロットした。Ｋ_Ｄ値は、プロットを、以下の１：１（Ｆａｂについて）または１：
２（ＩｇＧについて）の当てはめモデル（Piehler et al,. 1997に従う）で当てはめるこ
とにより決定した。

【0331】

結果
結果を、表３および４にまとめる。ＦａｂおよびＩｇＧのいずれのＮＯＶ１４０１フォ
ーマットについても、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により決定される通り、ＦＸＩ触媒ドメイ
ンについて、約２０ｎＭのＫ_Ｄ値を得た。Ｆａｂの、活性化型ＦＸＩおよびチモーゲンＦ
ＸＩのいずれに対するアフィニティーもｐＭの範囲であり、触媒ドメインに対するアフィ
ニティーの、それぞれ、６６および３００倍であった。それらの高アフィニティーに基づ
き、これらの相互作用を、ＳＥＴアッセイにより測定した。ＮＯＶ１４０１－Ｆａｂは、
チモーゲンＦＸＩ（６２ｐＭ）に対して、活性化型ＦＸＩ（３０５ｐＭ）に対する場合の
５倍のアフィニティーを呈した。相互作用は、アビディティー効果による影響を受ける可
能性があるので、ＮＯＶ１４０１－ＩｇＧの、二量体のチモーゲンＦＸＩおよび活性化型
ＦＸＩのいずれに対するアフィニティーも、見かけのＫ_Ｄ値として記録される。

【0332】

ＮＯＶ２４０１はまた、カニクイザルＦＸＩにも結合することを確認するため、ＳＥＴ
実験を、カニクイザル活性化型ＦＸＩおよびカニクイザルチモーゲンＦＸＩについて実施
し、結果として、それぞれ、１２．５±６．６ｐＭ（Ｎ＝２）および５．０±０．７ｐＭ
（Ｎ＝２）の、見かけのＫ_Ｄ値を得た。よって、ＮＯＶ１４０１の、カニクイザルＦＸＩ
タンパク質（活性形態およびチモーゲン）に対するアフィニティーは、ヒトＦＸＩへの結
合についてのアフィニティーと同等である（表３）。

【0333】

【表2】

【0334】

【表3】

【0335】

実施例３
生化学アッセイ：蛍光ペプチドを基質として使用する活性アッセイにおけるＦＸＩａの阻
害
ヒトＦＸＩａ（Ｋｏｒｄｉａ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＮＬ：型番ＨＦＸＩａ １
１１１ａ）の活性は、配列Ｄ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ＊Ｒｈ１１０－Ｄ－Ｐｒｏ（製品
番号：ＢＳ－２４９４；Ｂｉｏｓｙｎｔａｎ ＧｍｂＨ、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ
）を伴う、蛍光標識されたペプチドの切断をモニタリングすることにより決定する。上に
記載した基質配列では、＊は、切断性結合である、Ｄ－Ｌｅｕ：Ｄ－ロイシン、Ｐｒｏ：
プロリン、Ａｒｇ：アルギニン、Ｒｈ１１０：ローダミン１１０、Ｄ－Ｐｒｏ：Ｄ－プロ
リン）を指し示す。ペプチド基質の切断性結合の、ＦＸＩａを媒介する切断は、それぞれ
、４８５ｎｍおよび５３５ｎｍの励起波長および発光波長を使用する場合の、ローダミン
１１０の蛍光強度の増大をもたらす。蛍光強度は、室温（ＲＴ）で、マイクロタイタープ
レートリーダーＳａｆｉｒｅ２（ＴＥＣＡＮ、Ｍａｅｎｎｅｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌ
ａｎｄ）を使用して連続して測定する。アッセイ緩衝液は、ｐＨ７．４の５０ｍＭ ＨＥ
ＰＥＳ、１２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、および０．０５％（ｗ／ｖ）のＣ
ＨＡＰＳを含有する。最終的な活性アッセイでは、ヒトＦＸＩａおよび基質であるＢＳ－
２４９４は、それぞれ、０．１ｎＭおよび０．５μＭのアッセイ濃度を有する。これらの
条件下で、時間経過にわたる蛍光強度の増大は、少なくとも６０分間にわたり直線的であ
る。

【0336】

抗体の阻害活性について調べるため、０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳを含有するＰ
ＢＳ緩衝液（１３７ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ、１０ｍＭのＮａ_２ＨＰＯ_４、
１．８ｍＭのＫＨ_２ＰＯ_４）中で、抗体の希釈系列を調製する。２μＬの抗体溶液を、１
０μＬのＦＸＩａ溶液（アッセイ緩衝液中）と共に、室温で６０分間にわたりプレインキ
ュベートする。プレインキュベーションステップの後で、１０μＬの基質であるＢＳ－２
４９４（アッセイ緩衝液中で希釈した）を添加し、酵素反応を６０分間にわたり進行させ
、その後、蛍光強度を測定する。対照反応（阻害されていない反応物のシグナルは、０％
の阻害と同等であり、酵素を含有しない反応物のシグナルは、１００％の阻害と同等であ
る）および値を移行させるための以下の式：
ｙ＝１００％－［ＦＩ（ｘ）－ＦＩ（ｍｉｎ）］／［ＦＩ（ｍａｘ）－ＦＩ（ｍｉｎ）］
［式中、ｙは、抗体濃度をｘとするときの阻害％であり、ＦＩ（ｘ）は、抗体濃度をｘと
するときに測定される蛍光強度であり、ＦＩ（ｍｉｎ）は、抗体の非存在下にある対照反
応において測定される蛍光強度であり、ＦＩ（ｍａｘ）は、阻害されていない対照反応に
おいて測定される蛍光強度である］を使用することにより、蛍光強度値を、阻害パーセン
トへと変換する。データは、Ｏｒｉｇｉｎ ７．５ＳＲ６プログラム（ＯｒｉｇｉｎＬａ
ｂ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＵＳＡ）を使用して解析する。平均データによるＩＣ５０
値は、ロジスティックス関数：
ｙ＝Ａ２＋（Ａ１－Ａ２）／（１＋（ｘ／ＩＣ５０）^ｐ）
［式中、ｙは、抗体濃度をｘとするときの阻害％であり、Ａ１は、最小の阻害値であり、
Ａ２は、最大の阻害値である。指数ｐは、ヒル係数である］を使用して計算する。

【0337】

図６Ａは、抗体であるＮＯＶ１４０１の、全長ヒトＦＸＩａの酵素活性に対する阻害に
ついての代表的な複合応答曲線を示す。結果は、ＮＯＶ１４０１が、ヒト全長ＦＸＩａの
酵素活性を、濃度依存的に阻害することを示す（図６Ａ）。ロジスティック当てはめモデ
ルによる当てはめは、約１６０ｐＭのＩＣ_５０値をもたらす。

【0338】

実施例４
抗ＦＸＩａ Ａｂの抗凝固活性
活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイおよびトロンビン生成アッセ
イ（ＴＧＡ）を使用することにより、抗体であるＮＯＶ１４０１およびＮＯＶ１０９０の
抗血栓活性について調べた。

【0339】

ａＰＴＴアッセイ：
凍結乾燥正常ヒト血漿「凝固対照Ｎ」（参照番号：５０２００５０）は、Ｔｅｃｈｎｏ
ｃｌｏｎｅ ＧｍｂＨ（Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ）から購入した。凝固対照Ｎは、
選択された健常ドナーのクエン酸血漿からプールされた。この正常血漿に関して得られる
凝血時間は、凝血に関与する凝固因子の正常濃度を反映する。凍結乾燥血漿は、４℃で保
管した。その使用前に、バイアルを注意深く回転させ、次いで、室温で１０分間にわたり
保つことにより、血漿を、１ｍＬの蒸留水中に再懸濁させた。

【0340】

内因系経路誘発試薬である「ａＰＴＴ－ｓ」（参照番号：ＴＥ０３５０）は、ＳＹＣＯ
ｍｅｄ（Ｌｅｍｇｏ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入したものであり、緩衝液（塩化ナトリウ
ム、ポリエチレングリコール２００００；スクロース、アジ化ナトリウム）中に、リン脂
質およびケイ酸塩（コロイド状）を含有する。溶液は、４℃で保管した。

【0341】

塩化カルシウム（参照番号：Ｃ１０１６－５００Ｇ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃ
ｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ、Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）は、二回蒸留水中に２５
ｍＭの原液濃度で調製した。

【0342】

ｐＨ７．５のＵｌｔｒａＰｕｒｅトリス／ＨＣｌ緩衝液（参照番号：１５５６７－０２
７；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＮＹ、ＵＳＡ）お
よびリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ；参照番号：Ｐ４４１７－１００ＴＡＢ；Ｓｉｇｍａ
－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ、Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を
、複合希釈剤とした。

【0343】

３－［（３－コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネートヒ
ドレート（ＣＨＡＰＳ；参照番号：Ｃ３０２３－２５Ｇ）および無水ジメチルスルホキシ
ド（ＤＭＳＯ、参照番号：２７６８５５－１００ＭＬ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ
Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。

【0344】

凝血時間の測定は、半自動式の機械的凝血検出システムである、Ａｍｅｌｕｎｇ ｂａ
ｌｌ ｃｏａｇｕｌｏｍｅｔｅｒ ｍｏｄｅｌ ＫＣ４Ａ（ＳＹＣＯｍｅｄ、Ｌｅｍｇｏ
、Ｇｅｒｍａｎｙから購入した）により実施した。システムは、ステンレス鋼製のボール
（参照番号：ＡＩ５０００；ＳＹＣＯｍｅｄ）を入れた特製のキュベット（参照番号：Ａ
Ｉ４０００；ＳＹＣＯｍｅｄ）を活用する。

【0345】

試料を、キュベットへと添加する。適切なインキュベーション時間の後、キュベットを
、Ａｍｅｌｕｎｇ ｂａｌｌ ｃｏａｇｕｌｏｍｅｔｅｒの測定ウェルに入れる。測定ウ
ェルは、ゆっくりと回転し、キュベットにその長軸の周りを回転させる。キュベットは、
やや傾いて置かれるため、重力および慣性力は、ボールを、常にキュベットの最も低い位
置に置く。ボール位置の正反対の位置に、磁気センサーがある。誘発試薬を添加したら、
タイマーを始動させる。凝固が生じると、反応混合物中に、フィブリン鎖が形成される。
フィブリン鎖は、ボールを、その慣性位置から引き離し、これにより、磁気センサー内に
、インパルスを誘発する。このインパルスは、タイマーを電気的に停止させる。ピペッテ
ィングスキームは、以下（表４ａ）の通りであった。

【0346】

【表4】

【0347】

試料は、Ａｍｅｌｕｎｇ ｂａｌｌ ｃｏａｇｕｌｏｍｅｔｅｒ内、二連、３７℃の温
度で測定した。

【0348】

図６Ｂは、ａＰＴＴ凝血時間の濃度依存的延長をもたらす抗体であるＮＯＶ１４０１の
代表的な複合応答曲線を示す。結果は、ＮＯＶ１４０１が、ヒト血漿のａＰＴＴ凝血時間
の延長を、濃度依存的にもたらすことを示唆する。ａＰＴＴ凝血時間は、約１４ｎＭの濃
度のＮＯＶ１４０１でベースラインと比較して、倍増する。ＩＣ_５０値は、約１３ｎＭで
あると計算された。

【0349】

トロンビン生成アッセイ（ＴＧＡ）：
ＴＧＡ凍結乾燥正常ヒト血漿（凝固対照Ｎ）は、Ｔｅｃｈｎｏｃｌｏｎｅ ＧｍｂＨ（
参照番号：５０２００４０、ロット番号：１Ｐ３７Ｂ００）から購入し、製造元により示
唆される容量中の蒸留水中で再構成する。

【0350】

Ｔｅｃｈｎｏｃｌｏｎｅ ＧｍｂＨ（参照番号：５００６２３０、ロット番号：８Ｆ４
１Ｂ００）製の蛍光性基質であるＺ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－ＡＭＣを使用して、基質
溶液を調製した。凍結乾燥基質のアリコートを、４℃に保った。アッセイにおけるその使
用の２０分前に、バイアル上に表示の容量の蒸留水中に新たに基質を溶解させた。再構成
された基質溶液は、１ｍＭの濃度の蛍光性ペプチドと、１５ｍＭの濃度のＣａＣｌ_２とを
含有する。

【0351】

内因系経路および外因系経路をそれぞれ誘発するための２つの異なる試薬である、「Ｔ
ＧＡ ＲＤ」（参照番号：５００６２２）および「ＴＧＡ ＲＣ Ｌｏｗ」（参照番号：
５００６２１３）は、Ｔｅｃｈｎｏｃｌｏｎｅ ＧｍｂＨ（Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉ
ａ）から購入した。誘発試薬である「ＰＰＰ（乏血小板血漿）－Ｒｅａｇｅｎｔ Ｌｏｗ
」は、Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅ（ＴＳ３１．００、ロット番号：ＰＰＬ１４０９／
０１）から購入し、バイアル上に表示の蒸留水中で再構成した。「ＰＰＰ－Ｒｅａｇｅｎ
ｔ Ｌｏｗ」は、リン脂質と組織因子との混合物を、非常に低濃度で含有する。試薬は、
使用の直前に、ｐＨ７．４の８０ｍＭトリス／ＨＣｌ、０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰ
Ｓ中で８倍希釈した。

【0352】

試料は、Ｃｏｓｔａｒ（製品番号：３６０３）から購入した９６ウェル黒透明底プレー
トにアリコート分割し、この中で測定した。自動化移入のために、試料を、Ｖ字底９６ウ
ェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、３８９４）に入れ、ＣｙＢｉｏ自動化システム（Ａｎａｌ
ｙｔｉｋ Ｊｅｎａ ＵＳ、Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して移した。

【0353】

再構成されたヒト血漿、誘発試薬である「ＰＰＰ－Ｒｅａｇｅｎｔ Ｌｏｗ」、および
基質を、水浴中３７℃で１０分間にわたり、あらかじめ加熱した。ＰＢＳ中に１：３の抗
体希釈系列を、９６ウェルプレート内、５μＭ（１μＭの最終最高濃度の５倍の濃度）の
ＮＯＶ１４０１濃度で始めて、合計８つの希釈率にわたり調製した。２２２μｌの誘発試
薬を、１１０８μｌの基質溶液と混合して、１０＋５０誘発試薬基質ミックスを作り出し
た。自動化システムを使用する後続の移入のために、ウェル１つ当たり８０μｌを、Ｖ字
底９６ウェルプレートへと添加した。プレートは、３７℃に保った。試薬は、表４ｂに示
すスキームに従い添加した。

【0354】

【表5】

【0355】

自動化を使用して、誘発剤／基質混合物を移した。混合物を添加した後で、Ｓｙｎｅｒ
ｇｙ Ｎｅｏ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｉｎｃ．
、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ、ＵＳＡ）を使用して、それぞれ３６０ｎｍおよび４６０ｎｍ
の励起および発光を、速やかに記録した。試料は、プレートリーダー内、３７℃の温度で
、５５秒間隔の二連で、９０分間にわたり測定した。

【0356】

ピークを生成するために、Ｔｅｃｈｎｏｃｌｏｎｅから提供されるＴＧＡ査定ソフトウ
ェアファイルを使用して、トロンビン濃度値データを加工した。ピークについてのプロッ
トを作り出すために、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して、トロンビン濃度対抗体
濃度のデータを当てはめた。これらのデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフト
ウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ、Ｕ
ＳＡ）内の非線形回帰モデルへと当てはめた。ＩＣ_５０値は、ビルトイン型の４パラメー
タ用量応答曲線式（傾き可変型）：ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１
＋１０^{（Ｌｏｇ ＩＣ５０－ｘ）×ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ}）［式中、ｙは、インヒビター濃
度をｘとするときに形成される最大トロンビン濃度であり、ＴｏｐおよびＢｏｔｔｏｍは
、それぞれ、インヒビターを伴わない場合のトロンビン濃度およびインヒビターの最大濃
度におけるトロンビン濃度を表す］を使用して決定した。

【0357】

図６Ｃは、ＴＧＡでのトロンビン生成の濃度依存的な阻害を表示する、抗体であるＮＯ
Ｖ１４０１についての代表的な複合応答曲線を示す。２４ｎＭのＩＣ_５０値および１５９
ｎＭの残留トロンビン濃度（点線）を、この複合応答曲線について計算した。

【0358】

実施例５
ＮＯＶ１４０１（Ｆａｂ）－ＦＸＩ（触媒ドメイン）のタンパク質発現、複合体形成、結
晶化、および構造決定
第ＸＩ因子触媒ドメインを伴う複合体内のパパイン切断により得られる、抗体ＮＯＶ１
４０１のＦａｂ部分の構造は、２．０４Åの分解能で共結晶化により得た。

【0359】

タンパク質の発現：
ＦＸＩ触媒ドメインの発現構築物は、システインへと突然変異した、不対合システイン
であるＣ５００を伴う、アミノ酸残基３８８～６２５（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ Ｐ０３９５
１）からなり、アミノ酸であるＭＧＳＳ（配列番号４９）、オクタヒスチジンタグ（配列
番号５０）、ＰｒｅＳｃｉｓｓｉｏｎ（商標）切断部位に続く、エンテロキナーゼ切断部
位から構成されるＮ末端伸長を伴った。構築物は、遺伝子合成によりアセンブルし、ｐＥ
Ｔ２４ａ発現ベクターへとクローニングし、ＬＢ培地中で増殖させた、大腸菌（E. coli
）のＢＬ２１（ＤＥ３）株内の封入体として発現させた。封入体は、５０ｍＭのトリス／
ＨＣｌ ｐＨ８．０、６．０Ｍの塩化グアニジニウム、５０ｍＭのＤＴＴ中で、２時間に
わたり可溶化させ、組換えタンパク質を完全に変性させた。大過剰量のリフォールディン
グ緩衝液（０．５ＭのトリスｐＨ８．０、０．９ＭのアルギニンＨＣｌ、５ｍＭのＧＳＨ
、０．５ｍＭのＧＳＳＧ、１ｍＭのＥＤＴＡを、ＩＢ溶液へと、最終タンパク質濃度５０
ｕｇ／ｍｌまで速やかに添加して、４℃で５日間にわたりインキュベートした。リフォー
ルディングおよびジスルフィド架橋形成は、３日間にわたる、緩衝液Ａ（５０ｍＭのトリ
スｐＨ８．０）を伴う透析により達成した。

【0360】

リフォールディングしたタンパク質は、緩衝液Ａで平衡化させ、洗浄した、Ｑ－Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を含有するアニオン交換
クロマトグラフィーカラムへとロードした。結合しなかった組換えタンパク質は、フロー
スルーおよび洗浄画分から回収した。エンテロキナーゼ（エンテロキナーゼ：組換えタン
パク質の比を１：１００とし、インキュベーション時間を２．５時間とする）を使用して
、Ｎ末端のタグ配列を除去する前に、ｐＨ７．４の５０ｍＭトリスを伴う透析により、ｐ
Ｈを、７．４へと調整した。切断反応は、試料を、緩衝液Ｂ（ｐＨ７．４の５０ｍＭトリ
ス、０．５ＭのＮａＣｌ）で平衡化させ、洗浄された、Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ ４ ＦＦ（ｈｉｇｈ ｓｕｂ）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を含有す
るベンズアミジンアフィニティーカラムへとロードすることにより停止させ、緩衝液Ｃ（
５０ｍＭのベンズアミジンを含有する緩衝液Ｂ）で溶出させた。活性ＦＸＩ触媒ドメイン
を、ｐＨ５．３の２０ｍＭ酢酸Ｎａ、７５ｍＭのＮａＣｌで平衡化させた、ＸＫ ２６／
６００ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５サイズ除外カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）へと
ロードした。最終タンパク質濃度は、１．０７ｍｇ／ｍｌであった。

【0361】

ＮＯＶ１４０１のＦａｂ部分は、ＩｇＧのパパイン切断により得た。最終Ｆａｂ濃度は
、ＰＢＳ中に１１ｍｇ／ｍｌであった。消化は、１：１００の比（ｗ／ｗ）で抗体へと添
加されたパパイン（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ：１０８ ０１４；１０ｍｇ／
ｍｌ）を使用し、かつ、１ｍＭのシステイン（元のＩｇＧ溶液へと添加した）の存在下、
３７℃で一晩にわたり実施した。消化は、５０μＭの特異的パパインインヒビターである
Ｅ６４（Ｎ－［Ｎ－（Ｌ－３－ｔｒａｎｓ－カルボキシラン－２－カルボニル）－Ｌ－ロ
イシル］－アグマチン）を添加することにより停止させ、Ｆｃ部分を除去するために、消
化物を、小型のプロテインＡカラム（５ｍＬ）に通過させた。Ｆａｂは、フロースルー中
で回収し、ＰＢＳに対して透析し、限外濾過により、その最終濃度まで濃縮し、滅菌濾過
した（０．２２μｍ）。

【0362】

複合体形成、結晶化、および構造分解：
ＦＸＩ触媒ドメインとＦａｂとを、等モル比で混合し、約９ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで
濃縮した。

【0363】

データ収集のために使用する結晶は、０．３μＬのレザバー溶液（０．２Ｍの塩化アン
モニウム、２０％のＰＥＧ ３３５０）、０．２μＬのＦａｂ－ＦＸＩ複合体、および第
１のラウンドの結晶スクリーニングで得られた結晶に由来する、０．１μＬの結晶シード
を混合する、シッティングドロップ蒸気拡散法を援用して、２７７Ｋで得た。

【0364】

データ収集のために、結晶を、液体窒素中で、直接瞬時凍結させた。データは、１００
Ｋで、Ｐｉｌａｔｕｓピクセル検出器（Ｄｅｃｔｒｉｓ）を使用して、１．００００２Å
の波長で、Ｓｗｉｓｓ Ｌｉｇｈｔ ＳｏｕｒｃｅビームラインＸ１０ＳＡで収集した。
データの加工およびスケーリングは、ＸＤＳおよびＸＳＣＡＬＥにより実施した（Kabsch
, W. (2010) Acta Cryst. D66, 125-132）。結晶は、非対称単位１つ当たりの複合体１コ
ピーを伴い、単位胞の寸法を、ａ＝１９１．２７、ｂ＝５３．２２、ｃ＝６５．１６４と
し、アルファ＝９０．０、ベータ＝９４．５６、ガンマ＝９０．０（Ｃ２空間群）として
、２．０４Åの分解能まで回折した。

【0365】

複合体の構造は、ＰＨＡＳＥＲを使用して、ＦＸＩ触媒ドメインの構造、および自社内
で既に解いた切断型Ｆａｂを探索モデルとして使用する分子置換法により解いた（McCoy,
A.J. et al. (2007) J. Appl. Cryst. 40, 658-674）。代替的なリファインメントおよ
び再構築のサイクルは、ｂｕｓｔｅｒおよびｃｏｏｔ ｒｓｐ．を使用して実施した（Br
icogne, G. et al. (2010) BUSTER version 2.9. Cambridge, United Kingdom: Global P
hasing Ltd.; Emsley, P. and Cowtan, K. (2004). Acta Crystallogr. D60, 2126-2132
）。データ収集およびリファインメント統計値を、表５にまとめる。

【0366】

【表6】

【0367】

構造の記載：
構造は、抗体ＮＯＶ１４０１の結合性エピトープが、Ｓ３、Ｓ２、Ｓ１－ベータ、およ
びＳ１の亜部位の部分をカバーする重鎖ＣＤＲ３ループにより、活性部位表面に結合する
ことを明らかにする。隣接する重鎖ＣＤＲ１ループおよび重鎖ＣＤＲ２ループは、ＦＸＩ
の１４５ループ内および２２０ループ（キモトリプシンの番号付け）内のコンフォメーシ
ョン変化を誘導する。加えて、ＦＸＩの４つのＮ末端残基の他、Ａｓｐ１８９の周囲の残
基も不規則となるが、いずれも、ＦＸＩの触媒活性の鍵となる機能を伴う部分である。１
４５ループのコンフォメーション変化は、Ａｒｇ１４４によるＳ１ポケットの閉塞および
Ｔｙｒ１４３によるＳ２の亜部位の閉塞をもたらす。よって、抗体の結合は、複数の機構
を介して、ＦＸＩのコンフォメーションの阻害をもたらす。

【0368】

観察される阻害形態は、ＦＸＩの全長チモーゲン形態（ＰＤＢ ２Ｆ８３）について記
載されている特徴を共有する。抗体の結合の結果として、コンフォメーションを変化させ
ているかまたは不規則となっているＦＸＩ触媒ドメインの部分はまた、チモーゲン内でも
不規則である。これはまた、ＮＯＶ１４０１の、ＦＸＩのチモーゲン形態への強い結合も
説明する。

【0369】

本発明者らによる、ＮＯＶ１４０１は、チモーゲンＦＸＩの活性化を阻害しないという
知見は、結合性エピトープの、ＦＸＩａチモーゲン活性化切断部位からの距離と符合する
。ＮＯＶ１４０１は、ＦＸＩおよびＦＸＩａの両方に結合する。Ｆａｂ－ＦＸＩ ＣＤ複
合体のＸ線構造は、ＦＸＩａの固有の結合方式および阻害機構を明らかにする。ＮＯＶ１
４０１は、ＦＸＩａの活性部位に結合し（図４）、４つのＮ末端残基および触媒ドメイン
ループのコンフォメーション変化を誘導することから、不活性コンフォメーションをもた
らす。この不活性コンフォメーションは、チモーゲン内の、不活性の触媒ドメイン構造と
特徴を共有する（図５）ことから、ＮＯＶ１４０１が、どのようにして、ＦＸＩおよびＦ
ＸＩａのいずれにも、高アフィニティーで結合しうるのかについての説明が与えられる。
例えば、チモーゲン構造内で不規則な、３つの触媒性部位であるループ（例えば、ループ
２２０、ループ１８８、およびループ１４５）はまた、ＮＯＶ１４０１ Ｆａｂ－ＦＸＩ
ＣＤ複合体構造においても不規則であるか、またはシフトしており、活性コンフォメー
ション内で観察されるＮ末端の塩架橋は、チモーゲン構造およびＮＯＶ１４０１ Ｆａｂ
－ＦＸＩ ＣＤ複合体構造のいずれにおいても存在しない（表６）。よって、ＮＯＶ１４
０１は、ＣＤ内のコンフォメーション変化を誘導し、不活性の、チモーゲン様のコンフォ
メーションをもたらすと考えられる。

【0370】

【表7】

【0371】

実施例６
Ｘ線構造ベースのエピトープマッピング
ＡＲＥＡＩＭＯＬ（Briggs, P.J. (2000) CCP4 Newsletter No. 38）を使用して、以下
の表７および表８ａ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔによる番号付け）の通り記載されるＦａｂと接
触するＦＸＩの残基を解析し、Ｆａｂを結合させずに計算した場合の残基表面積と、Ｆａ
ｂと複合体化させて計算した場合の残基表面積との差違を決定する。

【0372】

【表8】

【0373】

【表9】

【0374】

触媒ドメイン配列にマッピングされたＸ線エピトープ（エピトープを形成する残基を、
太字とし、かつ、これらに下線を付す）である。

【0375】

【化1】

【0376】

表８ｂは、ＦＸＩと接触する抗体の残基（パラトープ）を示す。

【0377】

【表10】

【0378】

実施例７
ＦＸＩ抗体の、マウスにおけるＦｅＣｌ_３誘導性血栓症に対する効果
Ｃ５７Ｂｌバックグラウンド上でＦＸＩを欠損するマウス（ＦＸＩ^－／－マウス）を、
Ｎｏｖａｒｔｉｓ（Ｅ．Ｈａｎｏｖｅｒ、ＮＪ）において飼育し、ＮＯＶ１４０１の抗血
栓有効性を評価するのに使用した。ヒトＦＸＩ（ｈＦＸＩ）により静脈内で再構成する場
合、これらのマウスは、血栓形成刺激へと曝露されると、野生型の、血栓性素因のある表
現型を獲得する。本明細書の研究では、動脈の表面へと、塩化第二鉄（ＦｅＣｌ_３）を適
用することにより、頸動脈内に血栓症を誘導した。

【0379】

ＮＯＶ１４０１を、麻酔下にあるマウスの頸静脈を介するボーラスとして、血栓症を誘
導する１５分前に注射した。抗体の用量は、０．２４ｍｇ／ｋｇ～０．４７ｍｇ／ｋｇの
範囲であった。ＦｅＣｌ_３チャレンジの１０分前に、頸静脈を介して、０．４７ｍｇ／ｋ
ｇのヒトＦＸＩを注射することにより、ＦＸＩ^－／－マウスを、ヒトＦＸＩで再構成した
。次いで、３．５％のＦｅＣｌ_３を含浸させた１ｍｍ×１．５ｍｍの濾紙小片２枚を、そ
の外膜表面と接触させて、頸動脈の反対側に貼付し、３分後に除去するのに続き、生理食
塩液で完全に洗浄した。頸動脈を介する血流は、Ｔｒａｎｓｏｎｉｃ ｆｌｏｗ ｐｒｏ
ｂｅにより測定した。ベースラインの血流は、ＦｅＣｌ_３適用前の５分間にわたり、次い
で、ＦｅＣｌ_３の適用後３０分間（すなわち、血栓形成期）にわたり得た。実験の終了時
に、血液を、大静脈から、３．８％のクエン酸ナトリウムを含有するシリンジへとサンプ
リングし、血漿を調製し、ａＰＴＴアッセイにかけた。

【0380】

図１Ａは、ヒトＦＸＩで再構成されたＦＸＩ^－／－マウス（ヒト化ＦＸＩマウスモデル
）における、ＦｅＣｌ_３誘導性血栓症に対する、ＮＯＶ１４０１の効果を示す。図１Ｂは
、同じマウスモデルにおけるａＰＴＴに対するＮＯＶ１４０１の効果を示す。図１Ｃは、
野生型マウスと比較した、ＦＸＩ^－／－マウスにおけるａＰＴＴ延長を示す。

【0381】

ＮＯＶ１４０１は、０．２４ｍｇ／ｋｇから始めて、ｈＦＸＩで再構成されたＦＸＩ^－
／－マウス（図１Ａ）におけるＦｅＣｌ_３誘導性血栓の形成を完全に阻害した。急勾配の
用量応答が観察され、化学量論的で悉無律的な抗血栓応答を反映する可能性が高い。ａＰ
ＴＴは、高用量群において、媒体対照の１．６倍超まで延長され（図１Ｂ）、ＦＸＩの遺
伝子枯渇による同じレベルの延長（図１Ｃ）、すなわち、最大効果に対応する。これらの
結果は、ＮＯＶ１４０１が、マウスＦｅＣｌ_３血栓症モデルにおいて、抗血栓活性を有す
ることを示す。

【0382】

実施例８
ＦＸＩ抗体の、カニクイザルにおける遊離ＦＸＩおよびａＰＴＴに対する効果
ＮＯＶ１４０１など、抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体の薬物動態（ＰＫ）プロファイルおよび
薬理学的効果について査定するため、用量漸増研究において、抗体を、皮下（ｓ．ｃ．）
注射または静脈内（ｉ．ｖ．）注射を介して、カニクイザルへと投与した。

【0383】

カニクイザルにおいて、ａＰＴＴを延長し、３ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与（Ｎ＝２）
または単回皮下投与（Ｎ＝２）の後において、遊離ＦＸＩ（ＦＸＩ_ｆ）レベルを低減する
抗体の能力について調べることにより、ＮＯＶ１４０１の抗凝固効果を特徴付けた。１０
ｍｇ／ｋｇの第２の用量を、全ての動物へと投与するのに続いて、３０ｍｇ／ｋｇの第３
の用量を、全ての動物へと投与して、３ｍｇ／ｋｇで観察された効果が、高用量により強
化されうるのかどうかを決定した。これらの結果は、ＮＯＶ１４０１が、カニクイザルに
おいて、持続的な抗凝固活性を有することを示す。次いで、ａＰＴＴおよびＦＸＩ_ｆレベ
ルにより決定される、その抗凝固効果を特徴とする、ＮＯＶ１４０１の薬力学（ＰＤ）を
、ＰＫプロファイルと比較した。比較は、良好なＰＫ／ＰＤ相関が存在することを指し示
す。

【0384】

動物に、ＮＯＶ１４０１を研究の１日目に、３ｍｇ／ｋｇ、８５日目に、１０ｍｇ／ｋ
ｇ、１１４日目に、３０ｍｇ／ｋｇで、ｉ．ｖ．（Ｎ＝２）投与するか、またはＳ．Ｃ．
（Ｎ＝２）投与した。血液試料は、クエン酸ナトリウム凝固チューブへと、ｉ．ｖ．投与
された動物では、投与の１５分後および２時間後において回収し、全ての動物では、試験
前、投与の６、２４、４８、７２、および９６時間後（１日目、８５日目、および１１４
日目）、ならびに投与の８、１１、１５、１８、２２、２５、２９、３２、３６、３９、
４３、４６、５０、５３、５７、６０、６４、６６、７１、７５、および７８日後（９２
、９５、９９、１０２、１０７、１１０、１２１、１２４、１２８日目、および１１４日
目の投与前にもまた、血液の回収だけ行った）において回収した。全ての血液試料を遠心
分離し、血漿試料を得、約－７０℃以下で凍結させた。

【0385】

ＮＯＶ１４０１の血漿総濃度は、捕捉抗体としてのマウス抗ヒトＩｇＧモノクローナル
抗体と、検出抗体としての、ＨＲＰ標識を伴うヤギ抗ヒトＩｇＧとによる、サンドイッチ
イムノアッセイを使用するＥＬＩＳＡにより、ヒトＩｇＧを検出するための標準的な方法
により測定した。

【0386】

ＦＸＩおよびＮＯＶ１４０１の両方を含有する血漿試料中の遊離ＦＸＩを測定するため
に、結合していないＦＸＩを、固定化ＮＯＶ１４０１により捕捉し、ＮＯＶ１４０１と既
に複合体したＦＸＩは、洗い流した。次いで、プレートに結合したＦＸＩを、ＦＸＩのＡ
２ドメインに結合し、文献（Cheng, et al. Blood, 116:3981-3989, 2010）において記載
されているモノクローナル抗体である、抗体１４Ｅ１１を含有するマウスＦｃにより検出
した。ＮＯＶ１４０１の、ＦＸＩおよびＦＸＩａの両方に対する非常に大きなアフィニテ
ィー、ならびにＮＯＶ１４０１および検出抗体１４Ｅ１１に対する異なる結合性部位は、
遊離ＦＸＩの正確な決定を可能とした。

【0387】

遊離ＦＸＩを結合させるために、ＥＬＩＳＡプレート（３８４－Ｗｅｌｌ ＬＵＭＩＴ
ＲＡＣ（商標）６００ ＨＢ）を、ＮＯＶ１４０１（ＰＢＳ中に５μｇ／ｍＬ）でコーテ
ィングした。ブロッキング（ミルクによるブロッカー：ＫＰＬ：型番５０－８２－０１、
１：２０希釈液）し、プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ；０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０）
で洗浄した後、アッセイ緩衝液（ｐＨ７．４の５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１２５ｍＭのＮａ
Ｃｌ、５ｍＭのＣａＣｌ_２、５ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰ
Ｓ）中で１：４０に希釈した血漿試料を、室温で３０分間にわたりインキュベートし、洗
浄緩衝液で３回にわたり洗浄した。検出抗体である１４Ｅ１１を、０．７％のカゼインを
含有する希釈緩衝液（１．７ｍＭの一塩基性リン酸ナトリウム、８．１ｍＭの二塩基性リ
ン酸ナトリウム七水和物、０．１５Ｍの塩化ナトリウム、０．７％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－
１００、および０．１％のアジ化ナトリウム、ｐＨ７）中、１μｇ／ｍＬで添加した。洗
浄緩衝液によりプレートを洗浄した後、二次検出抗体である、ペルオキシダーゼで標識さ
れた抗マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ：型番Ａ５２７８）を、０．４％のカゼインを含有する
希釈緩衝液中、０．５μｇ／ｍＬで添加した。洗浄緩衝液中でプレートを洗浄した後、５
０μＬのペルオキシダーゼ化学発光基質溶液（ＬｕｍｉＧＬＯ；ＫＰＬ：型番５４－６１
－０１）を添加し、発光シグナルを、マルチモードのマイクロプレートリーダー（ＳＰＥ
ＣＴＲＡＭＡＸ Ｍ５Ｅ）上で速やかに読み取った。各試料中の遊離ＦＸＩ濃度は、１０
０ｎＭのＦＸＩから始め、希釈係数を２および希釈ステップを２２として、Ｅｎｚｙｍｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（型番：ＨＦＸＩ １１１１）製のヒト
ＦＸＩ（チモーゲン）について作成した検量線を使用して決定した。測定前の１：４０の
希釈率を考慮し、定量下限（ＬＬＯＱ）を、０．２４ｎＭのＦＸＩとした。

【0388】

全ての時点の血漿試料を、ａＰＴＴ解析にかけ、ａＰＴＴ結果を、総血漿ＮＯＶ１４０
１濃度および遊離ＦＸＩレベルと比較した。図２Ａおよび２Ｂは、ｉ．ｖ．およびＳ．Ｃ
．投与された動物について、総血漿ＮＯＶ１４０１レベルとの関係におけるａＰＴＴ凝血
時間の変化を示す。図３Ａおよび３Ｂは、ｉ．ｖ．およびＳ．Ｃ．投与された動物につい
て、遊離ＦＸＩレベルとの関係におけるａＰＴＴ凝血時間の変化を示す。

【0389】

ｉ．ｖ．投与されたＮＯＶ１４０１について、最高血漿総ＮＯＶ１４０１レベルは、投
与の１５分後に観察された（図２Ａ）。この時点で、ａＰＴＴは、いずれの動物において
も、ベースラインと対比してほぼ倍増し、平均で５～６週間にわたりこのレベルを維持し
た。投与の１５分後から、ベースラインへの減衰に先立つ測定までの、平均のａＰＴＴ延
長は、各動物について、２．０±０．０２倍および１．９±０．０３倍であった。

【0390】

２回目の投与を行う前の８５日目までに、ａＰＴＴは、ベースラインレベルに達し、Ｎ
ＯＶ１４０１の血漿濃度は、１０ｎＭを下回って降下した。１０ｍｇ／ｋｇの２回目の投
与を、８５日目に行ったところ、血漿総ＮＯＶ１４０１濃度が少なくとも約３倍に増大し
、結果として、１回目の投与後に観察されたａＰＴＴ延長と同様のａＰＴＴ延長がもたら
された。３０ｍｇ／ｋｇの３回目の投与を、１１４日目に行ったところ、ａＰＴＴは延長
を保ったが、血漿総ＮＯＶ１４０１濃度は、さらに少なくとも３倍増大したにもかかわら
ず、さらなる著明なａＰＴＴ延長を結果としてもたらすことはなかった（図２Ａ）。した
がって、３ｍｇ／ｋｇより高用量のＮＯＶ１４０１が達成するａＰＴＴ延長は、３ｍｇ／
ｋｇの用量による場合と同等であり、ａＰＴＴ延長の大きさを増大させることはないと考
えられた。予測される通り、ＮＯＶ１４０１のｓ．ｃ．投与は、ｉ．ｖ．投与の場合より
緩徐なａＰＴＴの延長を結果としてもたらしたが、延長の程度は、ｉ．ｖ．群の場合と同
等であった（図２Ｂ）。ａＰＴＴは、２つの動物において、ベースラインと対比して、平
均で５～６週間にわたり延長された。平均ａＰＴＴ延長倍数は、ｉ．ｖ．処置動物の場合
と同様：投与の６時間後からベースラインへの減衰に先立つ測定まで、２．０±０．０３
および１．８±０．０２であった。ｉ．ｖの場合と同様、高用量の投与は、高血漿ＮＯＶ
１４０１曝露量にもかかわらず、高度なａＰＴＴ応答をもたらさなかった。

【0391】

図２Ａ～２Ｂにおける結果は、カニクイザルにおいて、ＮＯＶ１４０１が、ａＰＴＴを
延長することを裏付ける。

【0392】

ｉ．ｖ．群では、平均ベースライン血漿ＦＸＩ_ｆ濃度は、１０．９±０．３ｎＭであり
、ＮＯＶ１４０１を注射して急速に（１５分後までに）降下した（図３Ａ）。血漿ＦＸＩ
_ｆレベルは、総ＮＯＶ１４０１血漿レベルが、１５ｎＭ～２５ｎＭの間に低下するまで、
低値を維持した（図２Ａ、図３Ａ）。ｓ．ｃ．群では、平均ベースラインのＦＸＩ_ｆ濃度
は、１４．３±１．０ｎＭであった。ＦＸＩ_ｆは、処置の６時間後までに、ベースライン
と対比して、急激に減少し（図３Ｂ）、ＮＯＶ１４０１血漿レベルが、１５ｎＭ～２５ｎ
Ｍの間に低下するまで、低値を維持した（図２Ｂ、図３Ｂ）。ＦＸＩ_ｆは、全ての動物に
おいて、１０ｍｇ／ｋｇの２回目の投与の後で、再び急激に減少し、研究の終了時まで、
低値を維持した。２回にわたる高用量の投与は、ベースラインと比べて、ＦＸＩ_ｆをさら
に低減することはなかった。

【0393】

全ての処置動物において、ＦＸＩ_ｆレベルの低下および回復は、一時的であり、ａＰＴ
ＴのＮＯＶ１４０１誘導性延長と反比例したことから、ＮＯＶ１４０１は、ＦＸＩ_ｆを減
少させることにより、内因系凝固経路の機能を阻害する（ａＰＴＴを延長する）ことが確
認される。

【0394】

これらの結果（例えば、図３Ａおよび３Ｂ）は、ＮＯＶ１４０１が、カニクイザルにお
いて、血漿ＦＸＩ_ｆレベルを低下させることを裏付ける。カニクイザル研究では、過剰な
出血の証拠は、静脈穿刺部位においても、剖検時の粗観察によっても観察されなかった。
さらに、研究を通して、糞便中の潜血も検出されなかった。

【0395】

ＮＯＶ１４０１の持続的な抗凝固効果はまた、カニクイザルにおける、１３週間にわた
るｓ．ｃ．／４週間にわたるｉ．ｖ．反復投与毒性研究でも観察された。この研究では、
ＮＯＶ１４０１を、毎週１０ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝３、雄および雌の組合せ）および１００ｍ
ｇ／ｋｇ（Ｎ＝５、雄および雌の組合せ）の用量で１３週間（１４回の投与）にわたりｓ
．ｃ．投与するか、または毎週５０ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝３、雄および雌の組合せ）の用量で
４週間（５回の投与）にわたりｉ．ｖ．投与した。対照群（Ｎ＝５、雄および雌の組合せ
）には、媒体を、１３および４週間にわたり、それぞれ、ｓ．ｃ．およびｉ．ｖ．で施し
た。ＦＸＩ：Ｃは、ヒトＦＸＩを欠損する血漿の存在下で、カニクイザル血漿試料の凝血
時間（一段階ａＰＴＴ）を測定することにより評価した。ａＰＴＴおよびＦＸＩ：Ｃは、
ｓ．ｃ．群については、研究の２、２３、および７９日目において測定し、ｉ．ｖ．群に
ついては、２および２３日目において測定した。全ての動物および全ての処置群にわたり
、２．１～３倍のａＰＴＴ延長が観察された（図７Ａ）。効果は、研究の投与期を通して
持続的であり、先行の漸増用量研究における観察と同様な用量依存性は観察されなかった
。ＦＸＩ：Ｃは、動物および処置群にわたり、８８～９５％低減され、研究の投与期を通
してこれらのレベルで維持された（図７Ｂ）。ＦＸＩ：Ｃに対する効果もまた、これらの
用量にわたり、用量非依存的であった。

【0396】

過剰な出血を含む、出血の肉眼的兆候または顕微鏡的兆候についての証拠は、静脈穿刺
部位（ｓ．ｃ．注射部位およびｉ．ｖ．注射部位ならびに採血部位を含む）においても、
剖検時の粗観察によっても観察されなかった。さらに、研究の終了時において、糞便中の
潜血も検出されなかった。加えて、死亡も生じず、臨床徴候、体重、食物摂取、眼科パラ
メータおよび心電図パラメータ、血液学、臨床化学、または尿検査に対する被験物質関連
効果も見られなかった。毒性の標的臓器は、同定されなかった。

【0397】

雄における１００ｍｇ／ｋｇのｓ．ｃ．では、甲状腺重量の増大は観察されなかった。
しかし、組織学的相関物は見られないので、この所見の毒性学的意義は結論的なものでは
ない。甲状腺重量には、動物間で大きなばらつきが見られ、所見が認められたのは、１つ
の性別に限られた。顕微鏡的には、ｓ．ｃ．注射部位では、用量依存的な線維症が、いず
れの性別でも、毎週１０および１００ｍｇ／ｋｇのｓ．ｃ．で観察された。これらの所見
は、有害とは考えられなかった。

【0398】

著明な毒性所見は、最長１３週間にわたる、カニクイザルにおける、単回用量漸増投与
または反復投与による一般的毒性研究では観察されなかった。したがって、１３週間にわ
たるＧＬＰ毒性研究で投与された最高のｓ．ｃ．用量レベル（毎週１００ｍｇ／ｋｇ）を
、ＮＯＡＥＬと規定した。

【0399】

実施例９
カニクイザル（単回投与）における薬物動態
カニクイザル（雌、Ｎ＝２）に、３ｍｇ／ｋｇのＮＯＶ１４０１の単回ｉ．ｖ．投与ま
たは単回ｓ．ｃ．投与を行い、血漿ＦＸＩ_ｆ濃度およびａＰＴＴが、投与前の値に戻るま
で観察した。次いで、動物に、１０ｍｇ／ｋｇのＮＯＶ１４０１の単回ｉ．ｖ．投与また
は単回ｓ．ｃ．投与の２週間後、３０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｖ．投与またはｓ．ｃ．投与を行
い、さらに２週間にわたる観察期間を設けた。ＮＯＶ１４０１のＰＫは、総ＮＯＶ１４０
１を測定することにより評価した。最大観察総ＮＯＶ１４０１濃度（Ｃ_ｍａｘ）または総
ＮＯＶ１４０１濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_{０－１４ｄ}）により測定される、総ＮＯＶ
１４０１への曝露量は、各群内の個別の動物間で同等であった。曝露量（Ｃ_ｍａｘまたは
ＡＵＣ_{０－１４ｄ}）は、各投与経路について、ほぼ用量に比例した（表９）。Ｃ_ｍａｘは
、ｉ．ｖ．群において、ｓ．ｃ．群の約３倍であった。しかし、血漿総ＮＯＶ１４０１濃
度は、初期分布期後のいずれの群においても同等であった。終末相消失半減期（ｔ_１／２
）は、３ｍｇ／ｋｇの用量の投与後において、各動物について、２コンパートメントモデ
ルを使用して推定した。ｔ_１／２は、１４～１５日間の範囲であった（Ｎ＝２）。ｓ．ｃ
．注射後における絶対バイオアベイラビリティは、６１～６６％の範囲であった（３つの
用量レベル）。抗ＮＯＶ１４０１抗体は、いずれの動物へのｉ．ｖ．投与後においても、
ｓ．ｃ．投与後においても検出されなかった。

【0400】

【表11】

【0401】

実施例１０
カニクイザル（反復投与）におけるトキシコキネティクス
カニクイザルに、ＮＯＶ１４０１を毎週１０もしくは１００ｍｇ／ｋｇの用量で１３週
間（１４回の投与）にわたりｓ．ｃ．投与するか、または毎週５０ｍｇ／ｋｇの用量で４
週間（５回の投与）にわたりｉ．ｖ．投与した。ＮＯＶ１４０１で処置された動物は、研
究の投与期中に、ＮＯＶ１４０１へと曝露されたが、対照動物における曝露は認められな
かった。血漿総ＮＯＶ１４０１への曝露の、性別に関連する差違は、観察されなかった。
曝露量（Ｃ_ｍａｘおよびＡＵＣ_０－７ｄの両方）の増大は、雄動物および雌動物のいずれ
においても、用量に比例した（表１０）。抗ＮＯＶ１４０１抗体は、毎週１０ｍｇ／ｋｇ
のｓ．ｃ．における動物６匹中５匹、毎週１００ｍｇ／ｋｇのｓ．ｃ．における動物１０
匹中１匹、および毎週５０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｖ．における動物６匹中１匹で検出された。
いずれのｓ．ｃ．投与群においても、総ＮＯＶ１４０１への曝露は損なわれなかった。抗
薬物抗体（ＡＤＡ）陽性動物１匹だけは、研究の２２日目におけるＡＵＣ_０－７ｄが、同
じ群（毎週５０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｖ．）内の他の動物より小さかった。この動物において
、ａＰＴＴ延長に対する影響は認められず、毒性も観察されなかった。

【0402】

【表12】

【0403】

実施例１１
ヒトにおける用量漸増研究
ヒト研究を実行して、健常対象における単回用量投与後の、ＮＯＶ１４０１など、抗Ｆ
ＸＩ／ＦＸＩａ抗体の安全性および忍容性を評価する。１８～５５歳の間の、健常男性対
象および閉経期後不妊／手術による不妊の健常女性対象の合計約６０例を、この研究に登
録する。良好な健康は、過去の医療履歴、スクリーニング時における身体検診、神経学的
検診、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、および検査室検査により決定する。選択され
た対象は、体重が、少なくとも５０ｋｇであり、ボディマス指数（ＢＭＩ）が、１８～３
５ｋｇ／ｍ^２の範囲内である。ＢＭＩ＝体重（ｋｇ）／［身長（ｍ）］^２。

【0404】

いかなる被験用量でも、≧２倍のａＰＴＴの予測平均持続時間の延長が、≧４２日間に
わたり持続することはないという条件で、ヒト研究では、５、１５、５０、１５０、３０
０、および６００ｍｇの、６つのｓ．ｃ．用量レベルについて調べるものとする。２回に
わたる中間解析（ＩＡ）を行って、２つの最高用量レベルについて、用量の選択を確認す
る。３００ｍｇまたは６００ｍｇの用量で、モデルにより予測されるａＰＴＴの平均持続
時間の延長が、４２日間を超える期間にわたり、≧２倍である場合、用量を、例えば、モ
デルシミュレーションに基づき減少させて、ａＰＴＴの平均持続時間の延長が、≧４２日
間にわたり、２倍を超えないことを確保することができる。非限定的で例示的な用量の調
整は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、または５０ｍｇの減少量を使用する、
用量の減少を伴いうる。

【0405】

最初の３つの用量漸増ステップは、約１／２ ｌｏｇの増分で行う。最後の２つの用量
漸増ステップは、標的飽和の遷延およびａＰＴＴ延長の延伸の危険性を軽減するように、
≦２倍の増分とする。

【0406】

ＦＸＩを標的化する治療による、２倍のａＰＴＴ延長の、ある種の日数（例えば、３０
日間、３５日間、４０日間、４２日間など）にわたる最大持続時間は、重度のＦＸＩ欠損
症を伴う患者において、軽度の出血表現型を示す遺伝子データ、後天性インヒビターを伴
うＦＸＩ欠損症を伴う患者に由来するデータ、およびヒト研究、例えば、６週間にわたる
、ＦＸＩ－ＡＳＯの複数回投与が、＞６週間（４２日間）にわたり、出血事象を伴わない
、頑健で持続的なＦＸＩ枯渇を結果としてもたらした、ＦＸＩ－ＡＳＯ研究（例えば、Li
u et al., (2011) “ISIS-FXIRx, a novel and specific antisense inhibitor of facto
r XI, caused significant reduction in FXI antigen and activity and increased aPT
T without causing bleeding in healthy volunteers.” Presented at the 53rd Americ
an Society of Hematology annual meeting and exposition, San Diego, California. B
lood; 118: Abstract 209を参照されたい）に由来するデータにも基づいて評価すること
ができる。ある種の実施形態では、モデルベースの解析は、５０ｍｇのＮＯＶ１４０１の
ｓ．ｃ．投与（６０ｋｇの対象）で、約２．７倍（投与前と比べて）の最大ａＰＴＴ延長
を、一過性に達成しうることを予測する。ある種の実施形態では、高用量は、この２．７
倍の最大ａＰＴＴ延長の持続時間を延伸することが予測される。

【0407】

対象は、身体検診、神経学的検診、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、安全性につい
ての検査室検査、および重篤なＡＥ（ＳＡＥ）を含む有害事象（ＡＥ）など、安全性パラ
メータおよび／または安全性評価項目について、研究を通して、投与後１０６日目を含む
、それまでの期間においてモニタリングされる。

【0408】

抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１）の、ａＰＴＴに対する効果は、ベ
ースラインからの相対変化に基づき評価する。抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ
１４０１）の総血漿濃度を測定して、これらの対象における単回投与についてのＰＫを評
価する。

【0409】

抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１）の免疫原性（ＩＧ）を評価するた
めに、ＡＤＡについてのスクリーニングおよび確認を行う。

【0410】

遊離ＦＸＩおよび総ＦＸＩならびに遊離ＦＸＩ凝固活性（ＦＸＩ：Ｃ）および総ＦＸＩ
：Ｃを測定して、抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１）の、ターゲットエ
ンゲージメントおよび標的に関連するＰＤパラメータに対する効果を評価する。

【0411】

Ｄ－二量体、プロトロンビン断片１．２（Ｆ１．２）、およびプロトロンビン－抗トロ
ンビン複合体（ＴＡＴ）について評価して、抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ１
４０１）の、血栓形成パラメータに対する効果を決定する。

【0412】

抗ＦＸＩ／ＦＸＩａ抗体（例えば、ＮＯＶ１４０１）の、他の凝固パラメータに対する
効果について研究するためには、以下：対象における、プロトロンビン時間（ＰＴ）、ト
ロンビン時間（ＴＴ）、ならびにトロンビン活性化可能な線溶インヒビター、フィブリノ
ゲン、組織プラスミノゲン活性化因子（ｔＰＡ）、およびＴＧＡなど、凝固についての探
索的な検査室パラメータについて評価することができる。

【0413】

研究されるバイオマーカーは、Ｄ－二量体、ＦＸＩ活性、ＰＴ／ＩＮＲ、ＴＴ、Ｆ１．
２、フィブリノゲン、ＴＧＡ、ＴＡＦＩ活性、ＴＡＴ、ＰＡＩ－１抗原、ＴＦＰｉ活性、
ｔＰＡ活性、およびｖＷＦ活性を含みうるがこれらに限定されない。

【0414】

参照による組込み
本明細書で引用される全ての参考文献であって、特許、特許出願、論文、出版物、教科
書などを含む参考文献、およびそれらにおいて引用された参考文献は、それらについて既
に言及した程度において、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。

【0415】

同等物
前出の明細書は、当業者が、本発明を実施することを可能とするのに十分であると考えられる。前出の記載および実施例は、本発明のある種の好ましい実施形態について詳述し、本発明者らにより企図される最良の方式について記載する。しかし、前出の記載および実施例が、本文中でいかに詳述されているように見えるとしても、本発明は、多くの様式で実施することができ、本発明は、添付の特許請求の範囲およびそれらの任意の同等物に従うとみなされるべきであることが察知されるであろう。

本発明は以下の態様を包含し得る。
［１］ ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ドメイン内に結合する単離抗ＦＸＩ抗体および／もしくは単離抗ＦＸＩａ抗体またはそれらの断片。
［２］ 抗ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの１つまたは複数のエピトープに結合する単離抗体またはその断片であって、前記エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの２つ以上のアミノ酸残基を含む単離抗体またはその断片。
［３］ 前記エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの４つ以上のアミノ酸残基を含む、上記［２］に記載の単離抗体または断片。
［４］ 前記エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの６つ以上のアミノ酸残基を含む、上記［２］に記載の単離抗体または断片。
［５］ 前記エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの８つ以上のアミノ酸残基を含む、上記［２］に記載の単離抗体または断片。
［６］ 前記エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ｌｙｓ５２７、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４の残基を含む、上記［２］に記載の単離抗体または断片。
［７］ 前記エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｙｓ５２７のアミノ酸残基と、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの１つまたは複数のアミノ酸残基とを含む、上記［２］に記載の単離抗体または断片。
［８］ 前記エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｙｓ５２７のアミノ酸残基と、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの４つ以上のアミノ酸残基とを含む、上記［２］に記載の単離抗体または断片。
［９］ 前記エピトープが、Ｐｒｏ４１０、Ａｒｇ４１３、Ｌｙｓ５２７のアミノ酸残基と、Ｌｅｕ４１５、Ｃｙｓ４１６、Ｈｉｓ４３１、Ｃｙｓ４３２、Ｔｙｒ４３４、Ｇｌｙ４３５、Ｇｌｕ４３７、Ｔｙｒ４７２、Ｌｙｓ４７３、Ｍｅｔ４７４、Ａｌａ４７５、Ｇｌｕ４７６、Ｔｙｒ５２１、Ａｒｇ５２２、Ｌｙｓ５２３、Ｌｅｕ５２４、Ａｒｇ５２５、Ａｓｐ５２６、Ａｒｇ５４８、Ｈｉｓ５５２、Ｓｅｒ５７５、Ｓｅｒ５９４、Ｔｒｐ５９５、Ｇｌｙ５９６、Ｇｌｕ５９７、Ａｒｇ６０２、Ｇｌｕ６０３、およびＡｒｇ６０４のうちの６つ以上のアミノ酸残基とを含む、上記［２］に記載の単離抗体または断片。
［１０］ ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ドメイン内に結合する単離抗ＦＸＩ抗体および／もしくは単離抗ＦＸＩａ抗体またはそれらの断片であって、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの、第Ｘ因子、第ＸＩＩａ因子、およびトロンビンのうちの１つまたは複数への結合を遮断する単離抗体または断片。
［１１］ ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの、第ＩＸ因子、第ＸＩＩａ因子、またはトロンビン、および凝固経路の他の成分のうちの１つまたは複数への結合を遮断する、上記［１０］に記載の単離抗体または断片。
［１２］ ＦＩＸ、ＦＸＩ、およびＦＸＩａのうちの１つまたは複数の、血小板受容体への結合を遮断する、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［１３］ 内因系凝固経路または共通凝固経路の活性化を防止する、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［１４］ ヒトＦＸＩタンパク質および／またはヒトＦＸＩａタンパク質に、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）アッセイにより測定される３４ｎＭ以下の、または溶液中平衡滴定アッセイ（ＳＥＴ）により測定される４ｐＭ以下のＫ _Ｄ で結合する単離抗体またはその断片。
［１５］ 表１に列挙されたＣＤＲのうちの少なくとも１つに対して、少なくとも９０％の同一性を有する、少なくとも１つの相補性決定領域を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［１６］ 表１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［１７］ 上記［１］に記載の抗体または断片の単離変異体であって、前記抗体または断片が、表１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記変異体が、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの１つにおいて、少なくとも１～４カ所のアミノ酸変化を有する、単離変異体。
［１８］ 配列番号５および２５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２０］ 配列番号９および２９からなる群から選択されるＶＨ、またはそれに対して９０％の同一性を有するアミノ酸配列；ならびに配列番号１９および３９からなる群から選択されるＶＬ、またはそれに対して９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２１］ 配列番号９および２９からなる群から選択されるＶＨ、またはそれに対して９５％の同一性を有するアミノ酸配列；ならびに配列番号１９および３９からなる群から選択されるＶＬ、またはそれに対して９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２２］ 配列番号９および２９からなる群から選択されるＶＨ、またはそれに対して９７％の同一性を有するアミノ酸配列；ならびに配列番号１９および３９からなる群から選択されるＶＬ、またはそれに対して９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２３］ 配列番号９および２９からなる群から選択される可変重鎖配列を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２４］ 配列番号１９および３９からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２５］ 配列番号９および２９からなる群から選択される可変重鎖；ならびに配列番号１９および３９からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２６］ 配列番号９の可変重鎖および配列番号１９の可変軽鎖配列を含む抗体または断片、ならびに配列番号２９の可変重鎖および配列番号３９の可変軽鎖配列を含む抗体または断片からなる群から選択される、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２７］ 配列番号４６からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４からなる群から選択されるＣＤＲ２；５からなる群から選択されるＣＤＲ３；配列番号３３からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１４からなる群から選択されるＣＤＲ２；および配列番号１５からなる群から選択されるＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２８］ 配列番号３および２３からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４および２４からなる群から選択されるＣＤＲ２；５および２５からなる群から選択されるＣＤＲ３；配列番号１３および３３からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１４および３４からなる群から選択されるＣＤＲ２；ならびに配列番号１５および３５からなる群から選択されるＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［２９］ 配列番号６および２６からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号７および２７からなる群から選択されるＣＤＲ２；８および２８からなる群から選択されるＣＤＲ３；配列番号１６および３６からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１７および３７からなる群から選択されるＣＤＲ２；ならびに配列番号１８および３８からなる群から選択されるＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［３０］ 配列番号３の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号４の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１４の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１５の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［３１］ 配列番号２３の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号２４の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号２５の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号３３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号３４の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号３５の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［３２］ 配列番号６の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号７の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号８の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号１６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号１７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号１８の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［３３］ 配列番号２６の重鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号２７の重鎖可変領域のＣＤＲ２；配列番号２８の重鎖可変領域のＣＤＲ３；配列番号３６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１；配列番号３７の軽鎖可変領域のＣＤＲ２；および配列番号３８の軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［３４］ 上記の一項に記載の抗体またはその断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
［３５］ 前記のいずれかに記載の単離抗体または断片と同じエピトープに結合する、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［３６］ ヒトＦＸＩタンパク質および／またはヒトＦＸＩａタンパク質への結合について、前記のいずれかに記載の単離抗体または断片と競合する、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［３７］ ＮＯＶ１０９０およびＮＯＶ１４０１からなる群から選択される、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［３８］ 血栓塞栓性障害を処置する方法であって、有効量の、前記のいずれかに記載の抗体または断片を含む医薬組成物を、血栓塞栓性障害に罹患している対象へと投与するステップを含む方法。
［３９］ 前記対象が、心房細動と関連する虚血性脳卒中および深部静脈血栓症のうちの１つまたは複数に罹患している、上記［３８］に記載の方法。
［４０］ 前記対象が、心房細動と関連する虚血性脳卒中に罹患している、上記［３８］に記載の方法。
［４１］ 血栓塞栓性障害を処置する方法であって、有効量の、前記のいずれかに記載の抗体または断片を含む医薬組成物を、スタチン療法と組み合わせて、血栓塞栓性障害に罹患している対象へと投与するステップを含む方法。
［４２］ 前記のいずれかに記載の抗体を含む医薬。
［４３］ 前記のいずれかに記載の抗体のうちの１つまたは複数をコードする核酸。
［４４］ 上記［４３］に記載の核酸を含むベクター。
［４５］ 上記［４４］に記載のベクターを含む宿主細胞。
［４６］ 活性のＦＸＩ（ＦＸＩａ）触媒ドメインに結合すると、ＦＸＩａに、そのコンフォメーションを、Ｎ末端の４つの残基、ループ１４５、１８８、および２２０が、活性コンフォメーションと比較して、シフトし、かつ／または不規則的である不活性コンフォメーションへと変化させる、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［４７］ ＦＸＩに結合すると、ＦＸＩ触媒ドメインが、ループ１４５、１８８、および２２０がＦＸＩａ触媒ドメインの構造内と同様に規則的である活性コンフォメーションを取ることを防止する、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［４８］ ＦＸＩに結合すると、ＦＸＩ触媒ドメインが、Ｎ末端の４つの残基、ループ１４５、１８８、および２２０がＦＸＩａ触媒ドメインの構造内と同様に規則的である活性コンフォメーションを取ることを防止する、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［４９］ ＦＸＩに結合すると、チモーゲン構造内のコンフォメーション変化を誘導し、ＦＸＩａに結合するときに観察される阻害性ＦＸＩコンフォメーションと緊密に関連する阻害性ＦＸＩコンフォメーションをさらにもたらすことにより、ＦＸＩ触媒ドメインが、活性コンフォメーションを取ることを防止する、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［５０］ ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合し、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ドメインと、抗体：抗原複合体を形成すると、ループ１４５、１８８、および２２０の、活性の第ＸＩ因子（ＦＸＩａ）の触媒ドメインの、複合体化していない構造と比較した場合のシフトおよび／または配向性の喪失を引き起こす、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［５１］ ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａに結合し、ＦＸＩおよび／またはＦＸＩａの触媒ドメインと、抗体：抗原複合体を形成すると、Ｎ末端の４つの残基、ループ１４５、１８８、および２２０の、活性の第ＸＩ因子（ＦＸＩａ）の触媒ドメインの、複合体化していない構造と比較した場合のシフトおよび／または配向性の喪失を引き起こす、上記［１］に記載の単離抗体または断片。
［５２］ 活性のＦＸＩ（ＦＸＩａ）に結合し、ＦＸＩ（ＦＸＩａ）触媒ドメインに、そのコンフォメーションを、ループ１４５、１８８、および２２０が活性コンフォメーションと比較してシフトし、かつ／または配向性が喪失している不活性コンフォメーションへと変化させる、上記［１］に記載の単離抗体または断片。

【図1-1】

【図1-2】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7-1】

【図7-2】

【配列表】

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