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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-11-15
(45)【発行日】2024-11-25
(54)【発明の名称】プレターゲットイメージング剤
(51)【国際特許分類】
C07D 401/12 20060101AFI20241118BHJP
A61K 51/04 20060101ALI20241118BHJP
C07D 409/14 20060101ALI20241118BHJP
A61K 31/444 20060101ALI20241118BHJP
【ＦＩ】
C07D401/12 CSP
A61K51/04
C07D409/14
A61K31/444
【請求項の数】
21
(21)【出願番号】P 2023535896
(86)(22)【出願日】2021-12-15
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-12-26
(86)【国際出願番号】 US2021063552
(87)【国際公開番号】W WO2022132924
(87)【国際公開日】2022-06-23
【審査請求日】2023-06-13
(31)【優先権主張番号】63/126,100
(32)【優先日】2020-12-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/166,484
(32)【優先日】2021-03-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100103182
【弁理士】
【氏名又は名称】日野 真美
(74)【代理人】
【識別番号】100139310
【弁理士】
【氏名又は名称】吉光 真紀
(72)【発明者】
【氏名】カグノリニ，アルド
(72)【発明者】
【氏名】ホウイ，アダム トーマス
(72)【発明者】
【氏名】リー，シーミン
(72)【発明者】
【氏名】ライト，ジャスティン パトリック
(72)【発明者】
【氏名】ション，フイ
【審査官】前田 憲彦
(56)【参考文献】
【文献】特開２０１９－１１２３２６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１８－５１１６４８（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１９／１６８１７０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／１４３０１６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／１０５９１３（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ ４０１／
Ａ６１Ｋ ５１／
Ｃ０７Ｄ ４０９／
Ａ６１Ｋ ３１／
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の式の化合物、【化1】
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
【化2】
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
以下の式の化合物、【化3】
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
【化4】
である、請求項３に記載の化合物。
【請求項5】
以下の式の化合物、【化5】
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
【化6】
である、請求項５に記載の化合物。
【請求項7】
以下の式の化合物、【化7】
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項8】
【化8】
である、請求項７に記載の化合物。
【請求項9】
１種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤とともに、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項10】
【化9】
又はその薬学的に許容される塩、並びにエタノール及びＰＢＳ緩衝液を含む、組成物。
【請求項11】
前記組成物が、アスコルビン酸塩又はアスコルビン酸を含まない、請求項１０に記載の組成物。
【請求項12】
【化10】
又はその薬学的に許容される塩、並びにエタノール及びＰＢＳ緩衝液を含む、組成物。
【請求項13】
前記組成物が、アスコルビン酸塩又はアスコルビン酸を含まない、請求項１２に記載の組成物。
【請求項14】
【化13-1】
【化13-2】
からなる群から選択される、中間体。
【請求項15】
以下の式の化合物、【化14】
（Ｘは、Ｃ－Ｆ、Ｃ－１８Ｆ、又はＮであり、
Ｙは、Ｃ－Ｆ、Ｃ－１８Ｆ、又はＮであり、
Ｘ及びＹの一方（両方ではない）は、Ｎであり、
ＸがＮである場合、ＹはＣ－Ｆ又はＣ－１８Ｆであり、
ＹがＮである場合、ＸはＣ－Ｆ又はＣ－１８Ｆである）
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項16】
【化15】
である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項17】
【化16】
である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項18】
【化17】
である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項19】
【化18】
である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項20】
１種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤とともに、請求項１５～１９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項21】
生体分子を放射性標識する方法であって、ＴＣＯ部分を前記生体分子に結合させ、それにより生体分子－ＴＣＯコンジュゲートを形成することと、
前記生体分子－ＴＣＯコンジュゲートを１８Ｆ標識テトラジンと反応させて、生体分子－ＴＣＯ－テトラジン－１８Ｆ分子を形成することとを含み、前記１８Ｆ標識テトラジンは、
【化19】
からなる群から選択される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、化合物Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド、及びこの化合物の［１８Ｆ］放射線標識バージョン、並びにこれらの化合物の薬学的に許容される塩、並びにこれらの化合物の調製のための中間体、並びにプレターゲットイメージングのためのこれらの化合物の使用方法、並びに診断イメージング（プレターゲットイメージングなど）のためのこれらの化合物の組成物及び配合物、並びにこれらの化合物、組成物、及び配合物を使用するプレターゲットイメージングの方法に関する。
【0002】
本発明はまた、化合物Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド、及びこの化合物の１８Ｆ標識バージョン、並びにこれらの化合物の薬学的に許容される塩、並びにこれらの化合物の調製のための中間体、並びにプレターゲットイメージングのためのこれらの化合物の使用方法、並びに診断イメージング（プレターゲットイメージングなど）のためのこれらの化合物の組成物及び配合物、並びにこれらの化合物、組成物、及び配合物を使用するプレターゲットイメージングの方法に関する。
【背景技術】
【0003】
歴史的に、高分子を使用したＰＥＴイメージングは、全長抗体を直接標識することで実現されてきた。抗体は絶妙な特異性及び選択性を有しているが、クリアランスが遅く脳透過性が低いためにしばしば妨げられる。抗体を用いたイメージングは、長寿命の放射性核種を利用し、非特異的なバックグラウンド信号をクリアするために、放射性免疫複合体の注射後７～１０日後にイメージングが実行される。このタイムラインは臨床診療に容易に組み込まれず、治療対象を高いレベルの放射能に曝露する。通常の臨床診療への混乱及び治療対象への放射線曝露を最小限に抑えるために、プレターゲットベースのイメージングシステムが開発されている。このプレターゲットアプローチは、テトラジンとトランスシクロオクテン（ＴＣＯ）誘導体との間の双直交逆電子需要ディールス・アルダー（ＩＥＤＤＡ）反応に基づく２ステップのプロセスであり、高分子の特異性及び選択性、並びに短寿命の放射性核種を含む小分子の急速な薬物動態を利用する。周辺ターゲットの文献に記載されているプレターゲットイメージングの前臨床例は多数ある（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１７，６０，８２０１－８２１７、及びＪ．Ｌａｂｅｌ Ｃｏｍｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ ２０１４，５７ ２８５－２９０を参照されたい）。
【0004】
抗体ベースのＣＮＳイメージング剤の場合、血液脳関門（ＢＢＢ）には追加の課題がある。２０１７年、Ｓｙｖａｎｅｎ教授ら（Ｕｐｐｓａｌａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）を介した血液脳関門を通過する輸送を通じて、Ａβプロトフィブリルを標的とする二重特異性抗体の脳への取り込みが改善されることを実証した。１２４Ｉ標識抗体を使用したその後のＰＥＴイメージング研究では、注射後３日で、トランスジェニックマウスと野生型マウスとの間で分布が異なることが示された。様々な脳領域の分布パターンは、Ａβの病理と良好な相関関係があった。Ｓｔｉｎａ Ｓｙｖａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ，２０１７；７（２）：３０８－３１８を参照されたい。Ｓｙｖａｎｅｎ Ｓ、Ｆａｎｇ ＸＴ、Ｆａｒｅｓｊｏ Ｒ、Ｒｏｋｋａ Ｊ、Ｌａｎｎｆｅｌｔ Ｌ、Ｏｌｂｅｒｇ ＤＥ、Ｅｒｉｋｓｓｏｎ Ｊ、Ｓｅｈｌｉｎ Ｄ．Ｆｌｕｏｒｉｎｅ－１８－Ｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ＰＥＴ Ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ Ａｍｙｌｏｉｄ－β ｉｎ Ｂｒａｉｎ．ＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０２０，１１，４４６０－４４６８も参照されたい。
【0005】
脳浸透性の高分子以上に、ＣＮＳプレターゲットイメージング研究を成功させるためのもう１つの必要条件は、脳浸透性で、急速にクリアする、反応性でありながら安定な、反応性テトラジン基を含む小分子チェイサーの可用性である。いくつかの１１Ｃ及び１８Ｆ標識小分子テトラジンチェイサーは、かなりの脳への取り込みがあると報告されている（Ｈａｎｎｅｓ Ｍｉｋｕｌａ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１６，２７，７，１７０７－１７１２、及びＨａｎｎｅｓ Ｍｉｋｕｌａ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１４，５３，９６５５－９６５９を参照されたい）。ただし、ＣＮＳプレターゲットイメージング研究でのそれらの適用は報告されていない。
【0006】
２０１９年、Ｂｒｅｎｄｏｎ Ｃｏｏｋ及び共同研究者は、ラットの脳におけるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の分布を研究するためのＣＮＳプレターゲットイメージングの最初の症例を報告した（２０１９ Ｗｏｒｌｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｐｏｓｔｅｒ １３９）。ラットに２．５ｍＭのＡＳＯ－ＴＣＯコンジュゲートを３０μＬの生理食塩水で髄腔内投与し、続いてＡＳＯ－ＴＣＯ投与の２４時間後及び１６８時間後、ＣＮＳ浸透性テトラジン［１８Ｆ］５３７－Ｔｚを静脈内注射した。静的ＰＥＴ－ＣＴスキャンを、［１８Ｆ］５３７－Ｔｚの投与の７５～９０分後に実行した。対照群と比較して、ＡＳＯ－ＴＣＯを投与された動物の脳及び脊椎でより高い放射性トレーサーの取り込みが観察された。［１８Ｆ］５３７－Ｔｚは、動的ＰＥＴイメージングにより、野生型マウスで脳への取り込み（１０分Ｐ．Ｉ．で１．７±０．９％ＩＤ）を示したことも報告された。この［１８Ｆ］５３７－Ｔｚ化合物は、２－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）－Ｎ－（２－フルオロエチル）アセトアミドであると考えられている。
【化1】
【0007】
比較すると、本明細書に開示される［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド及び［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドのＣＤ－１雄マウスにおけるダイナミックＰＥＴイメージングは、これらの化合物が血液脳関門を容易に通過し、それぞれ３．３±０．４％ＩＤ／ｇ及び４．３±０．３％ＩＤ／ｇのピーク脳取り込みに達することを示した。次いで、これらの化合物は、注射後６０分までに脳からほぼバックグラウンドレベル（筋肉）まで安定したクリアランスを示した。着実な脳への浸透及び脳からの迅速かつ完全なウォッシュアウトを備えたこれらの薬剤は、より大きなウィンドウを提供して、より高い信号対バックグラウンド比を達成し、より良好な画質をもたらす。したがって、本発明者らは、本明細書に開示される化合物が、プレターゲットＣＮＳイメージングに利点をもたらすと期待している。
【0008】
本実施形態は、新規化合物、組成物、配合物、及びプレターゲットイメージングのための方法を提供する。したがって、治療対象をイメージングする能力を向上させるこのタイプの改善された技術は、診断イメージングの臨床的利益及び影響を拡大するためにも必要である。改良されたイメージング剤は、現在知られている薬剤と比較して、強化されたプレターゲットイメージを提供する。
【0009】
本実施形態はまた、本明細書において「化合物１」とも呼ばれる化合物Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドを提供し、これは、構造的に式Ｉの化合物として表すことができる。
【化2】
【0010】
式Ｉの化合物は遊離塩基として上に示されている。式Ｉの化合物は、薬学的に許容される塩に変換されてもよく、本実施形態では塩の形態で使用され得る。
【0011】
本実施形態は、本明細書において「化合物２」とも呼ばれる化合物、化合物１の１８Ｆ－バージョンを提供し、これは、構造的に式ＩＩの化合物として表すことができる。
【化3】
【0012】
式ＩＩの化合物は遊離塩基として上に示されている。式ＩＩの化合物は、薬学的に許容される塩に変換されてもよく、本実施形態では塩の形態で使用され得る。
【0013】
本実施形態は、式Ｉ若しくは式ＩＩのいずれかの薬学的に許容される塩の使用、又は遊離塩基としての化合物の使用を提供する。
【0014】
本実施形態は、例えば、プレターゲットイメージング剤などのイメージング剤の調製のための、式Ｉの化合物及び／若しくは式ＩＩの化合物、並びに／又はそれらの混合物の使用を更に提供する。
【0015】
本実施形態は、ヒトにおけるイメージング（プレターゲットイメージング）のための放射性医薬品の製造のための、式Ｉ又はＩＩの化合物の使用を提供する。別の態様では、本発明は、式Ｉ又はＩＩの化合物を調製する方法を提供する。
【0016】
別の態様では、本実施形態は、エタノール（例えば、１０％ＥｔＯＨ（ｖ／ｖ）など）及び好ましくはヒトで使用するため緩衝液（ＰＢＳ緩衝液であり得る）で配合される、化合物１若しくは化合物２、又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉ及び式ＩＩのテトラジン部分がアスコルビン酸塩配合物によって容易に還元され得ることが見出されたので、配合物はアスコルビン酸塩又はアスコルビン酸を含まないことにも留意されたい。したがって、アスコルビン酸塩配合物は、イメージングのための多くの配合物で容易に使用されるが、式Ｉ又は式ＩＩの化合物を用いたイメージングには適さない場合がある。
【0017】
本発明はまた、検出可能な量の化合物１若しくは２、又はその薬学的に許容される塩、又はその組成物を治療対象に導入することを含む、プレターゲットイメージングのための方法を提供する。
【0018】
本実施形態はまた、本明細書において「化合物３」とも呼ばれるＮ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドを提供し、これは、構造的に式ＩＩＩの化合物として表すことができる。
【化4】
【0019】
式ＩＩＩの化合物は遊離塩基として示されている。式ＩＩＩの化合物は、薬学的に許容される塩に変換されてもよく、本実施形態では塩の形態で使用され得る。
【0020】
本実施形態は、本明細書において「化合物４」とも呼ばれる化合物、化合物３の１８Ｆ－バージョンを提供し、これは、構造的に式ＩＶの化合物として表すことができる。
【化5】
【0021】
式ＩＶの化合物は遊離塩基として示されている。式ＩＶの化合物は、薬学的に許容される塩に変換されてもよく、本実施形態では塩の形態で使用され得る。
【0022】
本実施形態は、式ＩＩＩ又はＩＶのいずれかの薬学的に許容される塩の使用、又は遊離塩基としての化合物の使用を提供する。
【0023】
本実施形態は、例えば、プレターゲットイメージング剤などのイメージング剤の調製のための、式ＩＩＩの化合物及び／若しくは式ＩＶの化合物、並びに／又はそれらの混合物の使用を更に提供する。
【0024】
本実施形態は、ヒトにおけるイメージング（プレターゲットイメージング）のための放射性医薬品の製造のための、式ＩＩＩ又はＩＶの化合物の使用を提供する。別の態様では、本発明は、式ＩＩＩ’又はＩＶの化合物を調製する方法を提供する。
【0025】
別の態様では、本実施形態は、エタノール（例えば、１０％ＥｔＯＨ（ｖ／ｖ）など）及び好ましくはヒトで使用するため緩衝液（ＰＢＳ緩衝液であり得る）で配合される、化合物３若しくは化合物４、又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩ及び式ＩＶのテトラジン部分がアスコルビン酸塩配合物によって容易に還元され得ることが見出されたので、配合物はアスコルビン酸塩又はアスコルビン酸を含まないことにも留意されたい。したがって、アスコルビン酸塩配合物は、イメージングのための多くの配合物で容易に使用されるが、式ＩＩＩ又は式ＩＶの化合物を用いたイメージングには適さない場合がある。
【0026】
本発明はまた、検出可能な量の化合物３若しくは４、又はその薬学的に許容される塩、又はその組成物を治療対象に導入することを含む、プレターゲットイメージングのための方法を提供する。
【0027】
本実施形態は、以下に構造的に表すことができる式Ｖの化合物：
（式中、Ｘは、Ｃ－Ｆ、Ｃ－１８Ｆ、又はＮであってもよく、
Ｙは、Ｃ－Ｆ、Ｃ－１８Ｆ、又はＮであってもよく、
Ｘ及びＹの一方（両方ではない）は、Ｎであり、
ＸがＮである場合、ＹはＣ－Ｆ又はＣ－１８Ｆであり、
ＹがＮである場合、ＸはＣ－Ｆ又はＣ－１８Ｆである）、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【化6】
（式中、Ｘは、Ｃ－Ｆ、Ｃ－１８Ｆ、又はＮであってもよく、
Ｙは、Ｃ－Ｆ、Ｃ－１８Ｆ、又はＮであってもよく、
Ｘ及びＹの一方（両方ではない）は、Ｎであり、
ＸがＮである場合、ＹはＣ－Ｆ又はＣ－１８Ｆであり、
ＹがＮである場合、ＸはＣ－Ｆ又はＣ－１８Ｆである）、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0028】
当業者は、式Ｖが上記の化合物１、２、３及び４（並びにこれらの化合物の薬学的に許容される塩）を包含する属として表すことを理解するであろう。したがって、化合物１、２、３及び４（又は式Ｉ～ＩＶ）の実施形態、並びにそれらの関連する使用、組成物、配合物などに関する上記の開示は、式Ｖの化合物にも同様に適用される。
【0029】
本実施形態は、式Ｖのいずれかの薬学的に許容される塩の使用、又は遊離塩基としての化合物の使用を提供する。
【0030】
本実施形態は、例えば、プレターゲットイメージング剤などのイメージング剤の調製のための、式Ｖの化合物、並びに／又はそれらの混合物の使用を更に提供する。
【0031】
本実施形態は、ヒトにおけるイメージング（プレターゲットイメージング）のための放射性医薬品の製造のための、式Ｖの化合物の使用を提供する。別の態様では、本発明は、式Ｖの化合物を調製する方法を提供する。
【0032】
別の態様では、本実施形態は、エタノール（例えば、１０％ＥｔＯＨ（ｖ／ｖ）など）及び好ましくはヒトで使用するため緩衝液（ＰＢＳ緩衝液であり得る）で配合される、式Ｖの化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｖのテトラジン部分がアスコルビン酸塩配合物によって容易に還元され得ることが見出されたので、配合物はアスコルビン酸塩又はアスコルビン酸を含まないことにも留意されたい。したがって、アスコルビン酸塩配合物は、イメージングのための多くの配合物で容易に使用されるが、式Ｖの化合物を用いたイメージングには適さない場合がある。
【0033】
本発明はまた、検出可能な量の式Ｖの化合物、又はその薬学的に許容される塩、又はその組成物を治療対象に導入することを含む、プレターゲットイメージングのための方法を提供する。
【0034】
以下の調製及び実施例は、本発明の実施をよりよく解明するために提供される。これらのスキーム、調製、及び実施例のステップに対する好適な反応条件は、当該技術分野において周知であり、溶媒及び共試薬の置換を含む反応条件の適切な変更は、当業者の能力の範囲内である。
【0035】
更に、当業者であれば、いくつかの状況下で、部分（ｍｏｉｅｔｉｅｓ）が導入される順序が重要ではないことを認識するであろう。式Ｉ又は式ＩＩ又は式ＩＩＩ又は式ＩＶの化合物を生成するのに必要なステップの特定の順番は、熟練した化学者によく理解されているように、合成される特定の化合物、出発化合物、及び置換部分の相対的な不安定性に依存する。これらの化合物は、当技術分野で周知の方法による合成の都合のよい時点で保護又は修飾することができる。本発明の中間体及び最終生成物は、必要に応じて、再結晶、又はシリカゲル若しくはアルミナなどの固体支持体上でのクロマトグラフィーなどの一般的な技術によって更に精製することができる。
【0036】
本発明の化合物は、好ましくは、様々な経路によって投与される放射性医薬組成物として配合される。好ましくは、そのような組成物は、好ましくはヒトにおいて、静脈内使用のためのものである。そのような医薬組成物及びそれらを調製するためのプロセスは、当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｐ．Ｐ．Ｇｅｒｂｉｎｏ，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６）を参照されたい。
【0037】
好ましい配合物は、化合物１又は化合物２の調製物であり得る。好ましい配合物は、化合物３又は化合物４の調製物であり得る。特に好ましいのは、本明細書に記載の手順に従って調製された化合物１又は化合物２又は化合物３又は化合物４である。化合物１又は化合物２の好ましい配合物は、例えば、１０％ＥｔＯＨ（ｖ／ｖ）などのエタノール中で配合される。この配合物はまた、ＰＢＳ緩衝液などの緩衝液を含み得る。他の成分も使用することができる。化合物３又は化合物４の好ましい配合物は、例えば、１０％ＥｔＯＨ（ｖ／ｖ）などのエタノール中で配合される。この配合物はまた、ＰＢＳ緩衝液などの緩衝液を含み得る。他の成分も使用することができる。
【0038】
式Ｉ及びＩＩ及びＩＩＩ及びＩＶの化合物は、好ましくはヒトの臨床イメージングを含む、プレターゲットイメージングに驚くほどかつ予想外に有利であることが発見された。いくつかの実施形態では、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、又はＶの化合物は、プレターゲットイメージングに使用され得る。例えば、式Ｉ～Ｖの化合物は、脳浸透性である可能性があり、したがって、ＣＮＳ（中枢神経系）のプレターゲットイメージングのためのトレーサーとして使用され得る。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ標的のプレターゲットイメージングは、３つ又は４つのステップで達成され得る。
【0039】
１．生物配合物－ＴＣＯコンジュゲート（例えば、シャトル二重特異性抗体－ＴＣＯコンジュゲート、若しくはオリゴヌクレオチド－ＴＣＯコンジュゲート）のＩ．Ｖ．（静脈内）又はＩ．Ｔ（髄腔内）投与、
【0040】
２．生物配合物－ＴＣＯコンジュゲートの分布及び全身性クリアランスを可能にするのに十分な時間（日）を待つ、
【0041】
３．末梢循環生物配合物－ＴＣＯコンジュゲートをマスクするための末梢制限テトラジンのＩ．Ｖ．注射の任意選択のステップ、
【0042】
４．式Ｉ又は式ＩＩ又は式ＩＩＩ又は式Ｖの式ＩＶの脳浸透性化合物のＩ．Ｖ．投与、それに続く脳ＰＥＴイメージング。
【0043】
生物配合物－ＴＣＯコンジュゲートの調製に関しては、そのような技術の使用は文献に公開されており（以下を参照）、腫瘍学のプレターゲットイメージング研究で知られている。
【0044】
１．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１８，２９，５３８－５４５（ＴＣＯ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ；Ｕｓｅ ｏｆ ｃｌｅａｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ ｔｏ ｍａｓｋ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ＴＣＯ）
【0045】
２．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１３，２４，１２１０－１２１７（ＴＣＯ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）
Ｊ． Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１７，６０，８２０１－８２１７（ＴＣＯ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ，Ｐｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ）
Ｊ． Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１７，６０，８２０１－８２１７（ＴＣＯ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ，Ｐｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ）
【0046】
オリゴヌクレオチド－ＴＣＯコンジュゲーションの場合、このタイプのコンジュゲート（ＴＣＯ－ＰＥＧ４オリゴ修飾）は、Ｂｉｏ－Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ社（Ｌｅｗｉｓｖｉｌｌｅ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）から市販されている。したがって、当業者は、生物配合物－ＴＣＯコンジュゲートの調製をどのように達成するかを理解するであろう。
【0047】
プレターゲットイメージングの潜在的な利点のいくつかには、放射能の送達を、高い特異性及び選択性を備えた生物配合物などのターゲットベクターから分離することによって短命の放射性核種を使用する能力、並びに治療対象の放射能への曝露を減らす能力が含まれる。
【図面の簡単な説明】
【0048】
【図1】［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド精製の代表的な半分取ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図2】配合された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドの代表的な分析用ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図3】［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド精製の代表的な半分取ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図4】配合された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドの代表的な分析用ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図5】［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド精製の代表的な半分取ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図6】配合された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドの代表的な分析用ＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図7】テトラジンとのＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯ反応の代表的なＥＳＩ質量結果である。
【図8】テトラジンの代表的な放射性微量［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロピコリンアミド、［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド、及びＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯとの反応物である。
【0049】
以下では、特定の略語を使用する場合がある。これらの略語は次のことを意味する。「ＣＡＳ番号」はＣｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ番号を指し、「Ｃｉ」はキュリー（複数可）を指し、「ＣＴ」はコンピュータ断層撮影を指し、「δ」は、核磁気共鳴分光法における化学シフトを指し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＤＭＳＯ－ｄ６」は重水素化ＤＭＳＯを指し、「ＥＳ／ＭＳ」はエレクトロスプレー質量分析を指し、「ＥｔＯＨ」はエタノール又はエチルアルコールを指し、「ＨＡＴＵ」は１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し、「ｈ」及び「ｈｒ」は時間（複数可）を指し、「ｍｉｎ」は分（複数可）を指し、「％ＩＤ／ｇ」はグラム当たりの注射用量％を指し、「ｍＣｉ」はミリキュリー（複数可）を指し、「ＭＨｚ」はメガヘルツを指し、「μＬ」はマイクロリットル（複数可）を指し、「Ｎ」は、実験における複製の数又はサンプルサイズを指し、「ＮＭＲ」は核磁気共鳴を指し、「ＰＥＴ」は陽電子放出断層撮影を指し、「ＯＡｃ」は酢酸塩を指し、「ｐｐｍ」は１００万分の１を指し、「ｓ」は一重項を指し、「ＳＥＭ」は平均の標準誤差を指し、「ｔＲ」は保持時間を指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。
【0050】
一般的化学及び調製
下記の調製及び実施例は、本発明について更に例示し、本発明の化合物の典型的な合成を表す。試薬及び出発材料は、容易に入手可能であるか、又は当業者によって容易に合成され得る。調製及び実施例は、限定ではなく例示として記載されており、当業者によって様々な変更がなされ得ることを理解されたい。
下記の調製及び実施例は、本発明について更に例示し、本発明の化合物の典型的な合成を表す。試薬及び出発材料は、容易に入手可能であるか、又は当業者によって容易に合成され得る。調製及び実施例は、限定ではなく例示として記載されており、当業者によって様々な変更がなされ得ることを理解されたい。
【0051】
１Ｈ及び１９ＦスペクトルのＮＭＲ分光分析は、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ（商標）ＩＩＩ ＨＤ ４００ＭＨｚ ＮＭＲ分光計で実行され、ＣＤＣｌ３又はＤＭＳＯ－ｄ６溶液として得られ、残留溶媒共鳴（ＣＤＣｌ３、７．２６ｐｐｍ；ＤＭＳＯ－ｄ６、２．５０ｐｐｍ）を１Ｈ ＮＭＲ参照標準として使用して、ｐｐｍで報告される。１９Ｆスペクトルには参照標準は使用されない。ピーク重複度が報告される場合、下記の略語、ｓ（一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）、ｑ（四重項）、ｍ（多重項）、ｂｒ－ｓ（ブロードな一重項）、ｄｄ（二重の二重項）、ｄｔ（二重の三重項）が使用され得る。結合定数（Ｊ）は、報告される場合、ヘルツ（Ｈｚ）で報告される。
【0052】
ＥＳ／ＭＳは、Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムで実行される。エレクトロスプレー質量分析測定（ポジティブ及び／又はネガティブモードで取得）は、ＵＰＬＣシステムに接続されたＷａｔｅｒｓ（登録商標）Ａｃｑｕｉｔｙ ＱＤａ質量検出器で実行される。以下の実験の項で別段に指定されない限り、ＬＣ－ＭＳ条件は次のとおりである。カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ ２．１×３０ｍｍ、１．７μ；波長２５０～６５０ｎｍ。次の２つの勾配のうちの１つを使用する：勾配１：最初は１０％Ｂで０．５分間保持し、１０～９８％Ｂで３．５分間保持し、９８％Ｂで０．５分間保持し、０．６分間１０％Ｂに戻す；勾配２：最初は１０％ Ｂで０．５分間保持し、１０～９８％Ｂで１．５分間保持し、９８％Ｂで０．５分間保持し、再平衡化するために１０％Ｂに戻す。カラム温度：４０℃＋／－１０℃；流量：０．５ｍＬ／分；Ａの溶媒：０．１％ＨＣＯＯＨを含む脱イオン水；Ｂの溶媒：１００％アセトニトリル。
【0053】
もちろん、他の機器及び検出手段並びにＥＳ／ＭＳについては当業者に知られており、当業者には知られているであろう。
【0054】
使用する場合の分取及び分析用ＨＰＬＣ条件の詳細を以下に示す。
【0055】
実施例１
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド
［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（１１５ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）及び２－フルオロピリジン－３－カルボン酸（９０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６ｍＬ）中の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（２６０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、酢酸エチル中の０～５０％ジクロロメタンの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望のクロマトグラフィー画分の溶媒蒸発後に紫色の固体として表題化合物を得る（１５０ｍｇ、収率６４％、ヘキサフルオロリン酸塩を含む）。表題化合物を、２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、３×０．５Ｍ酢酸カリウム水溶液で洗浄することによって更に精製する（７５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）。得られた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、紫色の固体として精製された表題化合物を得る（５１ｍｇ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ：４．６３（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．５１～７．４７（ｍ、１Ｈ）、７．６５（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、８．２６－８．２２（ｍ、１Ｈ）、８．３６－８．３９（ｍ、１Ｈ）、８．５１－８．４８（ｍ、２Ｈ）、９．１７－９．１２（ｍ、１Ｈ）、１０．５８（ｓ、１Ｈ）。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ：－６７．６。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１１（Ｍ＋Ｈ）。
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド
【化7】
［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（１１５ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）及び２－フルオロピリジン－３－カルボン酸（９０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６ｍＬ）中の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（２６０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、酢酸エチル中の０～５０％ジクロロメタンの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望のクロマトグラフィー画分の溶媒蒸発後に紫色の固体として表題化合物を得る（１５０ｍｇ、収率６４％、ヘキサフルオロリン酸塩を含む）。表題化合物を、２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、３×０．５Ｍ酢酸カリウム水溶液で洗浄することによって更に精製する（７５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）。得られた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、紫色の固体として精製された表題化合物を得る（５１ｍｇ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ：４．６３（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、７．５１～７．４７（ｍ、１Ｈ）、７．６５（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、８．２６－８．２２（ｍ、１Ｈ）、８．３６－８．３９（ｍ、１Ｈ）、８．５１－８．４８（ｍ、２Ｈ）、９．１７－９．１２（ｍ、１Ｈ）、１０．５８（ｓ、１Ｈ）。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ：－６７．６。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１１（Ｍ＋Ｈ）。
【0056】
調製物１
２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルピリジン－３－カルボン酸
メチル２－クロロピリジン－３－カルボキシレート（３８０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）及び２－エチルヘキシル３－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルプロパノエート（９００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１８０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）及び４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン（２３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の１，４－ジキソアン（８ｍＬ）中の溶液を、Ｎ２で５分間バブリングし、ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ－ブトキシドの１Ｍ溶液（２．２０ｍＬ、２．２０ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を密封し、１００℃まで一晩加熱する。反応混合物を室温に冷却し、１Ｎ ＮａＯＨ水溶液（６ｍＬ）を添加する。得られた混合物を室温で２～３時間撹拌し、水（３０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出する。水層を１Ｎ ＨＣｌ水溶液でｐＨ約１に中和し、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、酢酸エチル中０～１００％ヘキサンの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（２７０ｍｇ、収率３３％）を黄色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８２［Ｍ＋Ｈ］。
２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルピリジン－３－カルボン酸
【化8】
メチル２－クロロピリジン－３－カルボキシレート（３８０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）及び２－エチルヘキシル３－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルプロパノエート（９００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１８０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）及び４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン（２３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の１，４－ジキソアン（８ｍＬ）中の溶液を、Ｎ２で５分間バブリングし、ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ－ブトキシドの１Ｍ溶液（２．２０ｍＬ、２．２０ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を密封し、１００℃まで一晩加熱する。反応混合物を室温に冷却し、１Ｎ ＮａＯＨ水溶液（６ｍＬ）を添加する。得られた混合物を室温で２～３時間撹拌し、水（３０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出する。水層を１Ｎ ＨＣｌ水溶液でｐＨ約１に中和し、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、酢酸エチル中０～１００％ヘキサンの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（２７０ｍｇ、収率３３％）を黄色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８２［Ｍ＋Ｈ］。
【0057】
調製物２
２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルフィニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミド
２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルピリジン－３－カルボン酸（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及び［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（５９ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）及びＨＡＴＵ（１２２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．６ｍＬ）中の撹拌溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１２０μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。揮発性物質を減圧下で除去する。得られた残渣を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｍ ＫＨＣＯ３水溶液（２×３０ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で順次洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（０～１００％ヘキサン／酢酸エチル）によって精製して、２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミド（１２１ｍｇ、収率８４％）をピンク色の泡状物として得る。
２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルフィニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミド
【化9】
２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルピリジン－３－カルボン酸（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及び［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（５９ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）及びＨＡＴＵ（１２２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．６ｍＬ）中の撹拌溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１２０μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。揮発性物質を減圧下で除去する。得られた残渣を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｍ ＫＨＣＯ３水溶液（２×３０ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で順次洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（０～１００％ヘキサン／酢酸エチル）によって精製して、２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミド（１２１ｍｇ、収率８４％）をピンク色の泡状物として得る。
【0058】
２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミド（１２１ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．５ｍＬ）中の攪拌溶液に、３－クロロペルオキシ安息香酸（純度７７％、３６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で３０分間撹拌し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、０～１００％ヘキサン／酢酸エチルの勾配で溶出するシリカゲル上のクロマトグラフィーによって精製して、２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルフィニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミド（９１ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、収率７３％）をピンク色の泡状物として得る：１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ）、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：２．３９（ｓ、３Ｈ）、３．６９（ｓ、６Ｈ）、４．６０－４．４２（ｍ、２Ｈ）、６．５０－６．４６（ｍ、３Ｈ）、７．１９（ｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．３６－７．３３（ｍ、１Ｈ）、７．５９－７．５６（ｍ、５Ｈ）、８．１０－８．０７（ｍ、１Ｈ）、８．４３（ｄ、Ｊ＝８．５、２Ｈ）、８．６９－８．６７（ｍ、１Ｈ）、９．０８（ｔ、１Ｈ）、１０．５６（ｓ、１Ｈ）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６７（Ｍ＋Ｈ）。
【0059】
調製物３
２－（２，４－ジメトキシ－８－メチル－ジベンゾチオフェン－５－イウム－５－イル）－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミドトリフルオロメタンスルホネート
２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルフィニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミド（２５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及びジエチルアミノポリスチレン（３．２ｍｍｏｌ／ｇ、１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の０℃に冷却したジクロロメタン（３ｍＬ）中の撹拌スラリーに、トリフルオロメタンスルホン酸無水物のジクロロメタン（１５０μＬ、０．１５ｍｍｏｌ）中の１Ｍ溶液を添加する。反応混合物を室温まで温め、３０分間撹拌し、水を一滴加えて反応をクエンチする。混合物を濾過し、固体をジクロロメタンで洗浄する。合わせた濾液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、ジクロロメタン中０～１５％メタノールの勾配を使用したシリカゲル上のクロマトグラフィーで精製して、表題化合物（１０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、収率３２％）を紫色の固体として得る：１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：２．４６（ｓ、３Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、４．０３（ｓ、３Ｈ）、４．９４－４．８１（ｍ、２Ｈ）、６．４３（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．４５－７．４２（ｍ、１Ｈ）、７．６７（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．８０（ｄ、８．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．９１－７．８８（ｍ、１Ｈ）、８．１８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．２８（ｓ、１Ｈ）、８．６５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．６０～８．５９（ｍ、１Ｈ）、８．７３～８．７０（ｍ、１Ｈ）、１０．３０（ｔ、１Ｈ）、１０．６１（ｓ、１Ｈ）。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：－７７．７。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４９（Ｍ＋）。
２－（２，４－ジメトキシ－８－メチル－ジベンゾチオフェン－５－イウム－５－イル）－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミドトリフルオロメタンスルホネート
【化10】
２－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルフィニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミド（２５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及びジエチルアミノポリスチレン（３．２ｍｍｏｌ／ｇ、１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の０℃に冷却したジクロロメタン（３ｍＬ）中の撹拌スラリーに、トリフルオロメタンスルホン酸無水物のジクロロメタン（１５０μＬ、０．１５ｍｍｏｌ）中の１Ｍ溶液を添加する。反応混合物を室温まで温め、３０分間撹拌し、水を一滴加えて反応をクエンチする。混合物を濾過し、固体をジクロロメタンで洗浄する。合わせた濾液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、ジクロロメタン中０～１５％メタノールの勾配を使用したシリカゲル上のクロマトグラフィーで精製して、表題化合物（１０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、収率３２％）を紫色の固体として得る：１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：２．４６（ｓ、３Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、４．０３（ｓ、３Ｈ）、４．９４－４．８１（ｍ、２Ｈ）、６．４３（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．４５－７．４２（ｍ、１Ｈ）、７．６７（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．８０（ｄ、８．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．９１－７．８８（ｍ、１Ｈ）、８．１８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．２８（ｓ、１Ｈ）、８．６５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．６０～８．５９（ｍ、１Ｈ）、８．７３～８．７０（ｍ、１Ｈ）、１０．３０（ｔ、１Ｈ）、１０．６１（ｓ、１Ｈ）。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：－７７．７。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４９（Ｍ＋）。
【0060】
実施例２
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド
表題化合物放射線合成の典型的な放射化学収率は、０．４３５～１．４４２Ｃｉの開始活性を使用し、合成時間５０分で、３．６±１．３４％（Ｎ＝３）である。
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド
【化11】
表題化合物放射線合成の典型的な放射化学収率は、０．４３５～１．４４２Ｃｉの開始活性を使用し、合成時間５０分で、３．６±１．３４％（Ｎ＝３）である。
【0061】
［１８Ｆ］フッ化物活性（０．４３５～１．４４２Ｃｉ）は、Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ａｃｃｅｌｌ Ｐｌｕｓ ＱＭＡ Ｐｌｕｓライトカートリッジ（１３０ｍｇ、３７～５５μｍ、Ｗａｔｅｒｓ部品番号ＷＡＴ０２３５２５；注射用水５ｍＬで事前調整済み）で維持され、アセトニトリルを含有する０．８ｍＬの重炭酸テトラエチルアンモニウム水溶液［水（０．２ｍＬ）及びアセトニトリル（０．６ｍＬ）中の重炭酸テトラエチルアンモニウム（３．５ｍｇ）］を使用してＴＲＡＣＥＲｌａｂ ＦＸＦ－Ｎ反応容器内に溶出される。溶出した活性物質を７０℃に加熱し、圧縮窒素ガスパージ及び真空下で５分間乾燥させる。次いで温度を１００℃に上げ、真空下で５分間保持すると、［１８Ｆ］テトラエチルアンモニウムフルオリドが得られる。反応器を３５℃に冷却し、無水ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中の２－（２，４－ジメトキシ－８－メチル－ジベンゾチオフェン－５－イウム－５－イル）－Ｎ－［［４－（１，２，４，５）－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－３－カルボキサミドトリフルオロメタンスルホネート（１ｍｇ、１．４３μｍｏｌ）の溶液を添加する。温度を４０℃に上げ、反応混合物を４０℃で５分間維持する。次いで、混合物を水中の０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸３．５ｍＬで希釈し、得られた粗反応混合物を精製のために半分取ＨＰＬＣカラムに装填する（条件は図１に列挙されている）。精製された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドを含むＨＰＬＣ画分（図１）を、４０ｍＬの水を含むバイアル内に収集し、Ｓｅｐ－Ｐａｋ（登録商標）Ｌｉｇｈｔ １ｃｃ Ｖａｃ Ｃ１８カートリッジ（５０ｍｇ、５５～１０５μｍ、Ｗａｔｅｒｓ部品番号ＷＡＴ０５４９５５；５ｍＬのＥｔＯＨ及び５ｍＬの水で連続的に前処理済み）に装填する。維持された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドを０．５ｍＬのＥｔＯＨを使用して溶出し、リン酸緩衝食塩水中の１０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨの５ｍＬの配合物に再構成する。得られた［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドの量は、０．０１４～０．０３３Ｃｉの範囲であった。配合された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドの代表的な分析ＨＰＬＣを図２に示す。
【0062】
実施例３
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド
［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（６０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）及び６－フルオロピリジン－２－カルボン酸（４５ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍＬ）中の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１５０μＬ、０．８６ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（１３５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌する。得られたピンク色のスラリーをジクロロメタンと１Ｍクエン酸水溶液との間で分配する。層を分離し、水相をジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、シリカゲル上で減圧下で濃縮する。得られた残渣を、溶離液としてジクロロメタン／酢酸エチルの勾配で溶出するシリカゲル上のクロマトグラフィーによって精製して、フルオロリン酸塩で汚染された粗表題化合物を得る。粗生成物をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｍ酢酸カリウム水溶液（２×１０ｍＬ）で洗浄する。有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、純粋な表題化合物（６４ｍｇ、収率７７％）をマゼンタの固体として得る：１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：４．６２（ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．４５－７．４３（ｍ、１Ｈ）、７．６１（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、８．０２－７．９９（ｍ、１Ｈ）、８．２０（ｑ、１Ｈ）、８．４６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、９．３９（ｔ、１Ｈ）、１０．５６（ｓ、１Ｈ）。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：－６８．０。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１１（Ｍ＋Ｈ）。
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド
【化12】
［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（６０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）及び６－フルオロピリジン－２－カルボン酸（４５ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍＬ）中の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１５０μＬ、０．８６ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（１３５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌する。得られたピンク色のスラリーをジクロロメタンと１Ｍクエン酸水溶液との間で分配する。層を分離し、水相をジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、シリカゲル上で減圧下で濃縮する。得られた残渣を、溶離液としてジクロロメタン／酢酸エチルの勾配で溶出するシリカゲル上のクロマトグラフィーによって精製して、フルオロリン酸塩で汚染された粗表題化合物を得る。粗生成物をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｍ酢酸カリウム水溶液（２×１０ｍＬ）で洗浄する。有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、純粋な表題化合物（６４ｍｇ、収率７７％）をマゼンタの固体として得る：１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：４．６２（ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．４５－７．４３（ｍ、１Ｈ）、７．６１（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、８．０２－７．９９（ｍ、１Ｈ）、８．２０（ｑ、１Ｈ）、８．４６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、９．３９（ｔ、１Ｈ）、１０．５６（ｓ、１Ｈ）。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：－６８．０。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１１（Ｍ＋Ｈ）。
【0063】
調製物４
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチルフェニル］スルファニルピリジン－２－カルボン酸
トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（３１２ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及びビス（２－ジフェニルホスフィノフェニル）エーテル（３６５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（１５ｍＬ）中の溶液に、メチル６－ブロモピリジン－２－カルボキシレート（１．７１ｇ、８．０ｍｍｏｌ）、２－エチルヘキシル３－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルプロパノエート（３．０ｇ、６．６ｍｍｏｌ） 及びカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（２．３ｇ、１９．８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）中の溶液を添加する。混合物をＮ２下、１２０℃で６時間撹拌し、より小規模な反応（Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド中の２－エチルヘキシル３－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルプロパノエート（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及びメチル６－ブロモピリジン－２－カルボキシレート（５８ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を使用）と組み合わせる。反応混合物を２Ｍ ＮａＯＨ水溶液（１０ｍＬ）で処理し、４０℃で１時間撹拌する。混合物を水（７０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で抽出し、有機層を廃棄する。１Ｎ ＨＣｌ水溶液を加えて水相をｐＨ約３に調整する。酸性化した混合物をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、２５０×５０ｍｍ、７μｍ）により精製し、０．２２５％ギ酸を含む水中４０％～８０％アセトニトリルの勾配で２５分間溶出する。所望の画分を凍結乾燥して、表題化合物（１．４９ｇ、収率５３％）を黄色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８２［Ｍ＋Ｈ］。ＥＳ／ＭＳ条件：ＬＣ（低ｐＨ）：ＥＳ／ＭＳは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣＭＳ ２０２０液体クロマトグラフィーシステムで実行される。エレクトロスプレー質量分析測定（ポジティブモードで取得）は、ＬＣシステムに接続されたスキャンモード四重極質量分析で実行される。ＬＣ－ＭＳカラム：Ｘｔｉｍａｔｅ（登録商標）Ｃ１８ ２．１×３０ｍｍ、３μｍ、勾配：１０～８０％Ｂ ３分、８０％Ｂ ０．５分、カラム温度：５０℃、流速：１．２ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．０３７％ギ酸を含む脱イオン水、溶媒Ｂ：０．０１８％ギ酸を含むアセトニトリル、波長ＵＶ２２０ｎｍ及び２５４ｎｍ。
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチルフェニル］スルファニルピリジン－２－カルボン酸
【化13】
トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（３１２ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及びビス（２－ジフェニルホスフィノフェニル）エーテル（３６５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（１５ｍＬ）中の溶液に、メチル６－ブロモピリジン－２－カルボキシレート（１．７１ｇ、８．０ｍｍｏｌ）、２－エチルヘキシル３－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルプロパノエート（３．０ｇ、６．６ｍｍｏｌ） 及びカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（２．３ｇ、１９．８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）中の溶液を添加する。混合物をＮ２下、１２０℃で６時間撹拌し、より小規模な反応（Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド中の２－エチルヘキシル３－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルプロパノエート（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及びメチル６－ブロモピリジン－２－カルボキシレート（５８ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を使用）と組み合わせる。反応混合物を２Ｍ ＮａＯＨ水溶液（１０ｍＬ）で処理し、４０℃で１時間撹拌する。混合物を水（７０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で抽出し、有機層を廃棄する。１Ｎ ＨＣｌ水溶液を加えて水相をｐＨ約３に調整する。酸性化した混合物をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、２５０×５０ｍｍ、７μｍ）により精製し、０．２２５％ギ酸を含む水中４０％～８０％アセトニトリルの勾配で２５分間溶出する。所望の画分を凍結乾燥して、表題化合物（１．４９ｇ、収率５３％）を黄色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８２［Ｍ＋Ｈ］。ＥＳ／ＭＳ条件：ＬＣ（低ｐＨ）：ＥＳ／ＭＳは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣＭＳ ２０２０液体クロマトグラフィーシステムで実行される。エレクトロスプレー質量分析測定（ポジティブモードで取得）は、ＬＣシステムに接続されたスキャンモード四重極質量分析で実行される。ＬＣ－ＭＳカラム：Ｘｔｉｍａｔｅ（登録商標）Ｃ１８ ２．１×３０ｍｍ、３μｍ、勾配：１０～８０％Ｂ ３分、８０％Ｂ ０．５分、カラム温度：５０℃、流速：１．２ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．０３７％ギ酸を含む脱イオン水、溶媒Ｂ：０．０１８％ギ酸を含むアセトニトリル、波長ＵＶ２２０ｎｍ及び２５４ｎｍ。
【0064】
調製物５
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルフィニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミド
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルピリジン－２－カルボン酸（１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）及び［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（９０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）のジクロロメタン（４ｍＬ）中の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（１９０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１４ｍＬ、０．８０ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物を減圧下で部分容積まで濃縮し、３０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、０．５Ｍ ＫＨＣＯ３水溶液（２回）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（１回）で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、ヘキサン中０～９０％酢酸エチルの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミド（１８０ｍｇ、収率８５％）を紫色の泡状固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５５１（Ｍ＋Ｈ）。
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルフィニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミド
【化14】
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルピリジン－２－カルボン酸（１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）及び［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（９０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）のジクロロメタン（４ｍＬ）中の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（１９０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１４ｍＬ、０．８０ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物を減圧下で部分容積まで濃縮し、３０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、０．５Ｍ ＫＨＣＯ３水溶液（２回）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（１回）で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、ヘキサン中０～９０％酢酸エチルの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミド（１８０ｍｇ、収率８５％）を紫色の泡状固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５５１（Ｍ＋Ｈ）。
【0065】
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミド（１８０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中の撹拌溶液に、３－クロロペルオキシ安息香酸（純度７７％、７３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加する。得られた混合物を室温で２～３時間撹拌する。混合物を、ヘキサン中０～１００％酢酸エチルの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（１６７ｍｇ、収率９９％）を紫色の泡状固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６７（Ｍ＋Ｈ）。
【0066】
調製物６
６－（２，４－ジメトキシ－８－メチル－ジベンゾチオフェン－５－イウム－５－イル）－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミドトリフルオロメタンスルホネート
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルフィニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミド（８８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及びポリマー担持トリエチルアミン（０．４ｇ、１ｍｍｏｌ、３．２ｍｍｏｌ／ｇ）の０℃のジクロロメタン（８ｍＬ）中の撹拌懸濁液に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物のジクロロメタン中の１Ｍ溶液（０．４２ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で３０分間撹拌し、水の滴下により反応をクエンチする。得られた懸濁液を濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、ジクロロメタン中の０～１５％メタノールの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（９１ｍｇ、収率８１％）を紫色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：２．４９（ｓ、３Ｈ）、４．０１－４．００（ｍ、６Ｈ）、４．７５－４．６３（ｍ、２Ｈ）、５．７５（ｓ、１Ｈ）、７．０１（ｄ、Ｊ＝２．１ Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２－７．５９（ｍ、３Ｈ）、７．７６－７．７２（ｍ、２Ｈ）、８．２３（ｔ、Ｊ＝７．８ Ｈｚ、１Ｈ）、８．３０（ｄｄ、Ｊ＝０．９、７．８ Ｈｚ、１Ｈ）、８．３７－８．３４（ｍ、１Ｈ）、８．４４（ｄ、Ｊ＝８．３ Ｈｚ、１Ｈ）、８．５５－８．５２（ｍ、２Ｈ）、９．１２－９．０８（ｍ、１Ｈ）、１０．６１（ｓ、１Ｈ）。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：－７７．７。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４９（Ｍ＋）。
６－（２，４－ジメトキシ－８－メチル－ジベンゾチオフェン－５－イウム－５－イル）－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミドトリフルオロメタンスルホネート
【化15】
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルフィニル－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミド（８８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及びポリマー担持トリエチルアミン（０．４ｇ、１ｍｍｏｌ、３．２ｍｍｏｌ／ｇ）の０℃のジクロロメタン（８ｍＬ）中の撹拌懸濁液に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物のジクロロメタン中の１Ｍ溶液（０．４２ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で３０分間撹拌し、水の滴下により反応をクエンチする。得られた懸濁液を濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、ジクロロメタン中の０～１５％メタノールの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（９１ｍｇ、収率８１％）を紫色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：２．４９（ｓ、３Ｈ）、４．０１－４．００（ｍ、６Ｈ）、４．７５－４．６３（ｍ、２Ｈ）、５．７５（ｓ、１Ｈ）、７．０１（ｄ、Ｊ＝２．１ Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２－７．５９（ｍ、３Ｈ）、７．７６－７．７２（ｍ、２Ｈ）、８．２３（ｔ、Ｊ＝７．８ Ｈｚ、１Ｈ）、８．３０（ｄｄ、Ｊ＝０．９、７．８ Ｈｚ、１Ｈ）、８．３７－８．３４（ｍ、１Ｈ）、８．４４（ｄ、Ｊ＝８．３ Ｈｚ、１Ｈ）、８．５５－８．５２（ｍ、２Ｈ）、９．１２－９．０８（ｍ、１Ｈ）、１０．６１（ｓ、１Ｈ）。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ：－７７．７。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４９（Ｍ＋）。
【0067】
実施例４
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド放射線合成の典型的な放射化学収率は、０．６７５～１．３２７Ｃｉを使用し、剛性時間４５～５０分で、１８．５±４．６％（Ｎ＝６）である。
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド
【化16】
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド放射線合成の典型的な放射化学収率は、０．６７５～１．３２７Ｃｉを使用し、剛性時間４５～５０分で、１８．５±４．６％（Ｎ＝６）である。
【0068】
［１８Ｆ］フッ化物活性（０．１９５～１．４７５Ｃｉ）は、Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ａｃｃｅｌｌ Ｐｌｕｓ ＱＭＡ Ｐｌｕｓライトカートリッジ（１３０ｍｇ、３７～５５μｍ、Ｗａｔｅｒｓ部品番号ＷＡＴ０２３５２５；注射用水５ｍＬで事前調整済み）で維持され、０．８ｍＬの重炭酸テトラエチルアンモニウム水溶液［水（０．２ｍＬ）及びアセトニトリル（０．６ｍＬ）中の重炭酸テトラエチルアンモニウム（３．５ｍｇ）］を使用してＴＲＡＣＥＲｌａｂ ＦＸＦ－Ｎ反応容器内に溶出される。溶出した活性物質を７０℃に加熱し、圧縮窒素ガスパージ及び真空下で５分間乾燥させる。温度を１００℃に上げ、真空下で５分間保持すると、［１８Ｆ］テトラエチルアンモニウムフルオリドが得られる。１ｍＬの無水ＤＭＳＯを反応器に添加し、反応器を３５℃に冷却する。［１８Ｆ］テトラエチルアンモニウムフルオリド溶液を、６－（２，４－ジメトキシ－８－メチル－ジベンゾチオフェン－５－イウム－５－イル）－Ｎ－［［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メチル］ピリジン－２－カルボキサミドトリフルオロメタンスルホネート（１ｍｇ、１．４３μｍｏｌ）の無水ＤＭＳＯ（０．２ｍＬ）中の溶液を含むＴＲＡＣＥＲｌａｂ注入バイアル（ＲＶ２）内に移し、室温で５分間保持する。混合物を３．５ｍＬの水中０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸水溶液で希釈し、得られた粗反応混合物を精製のために半分取ＨＰＬＣカラムに装填する（条件は図３に列挙される）。精製された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドを含むＨＰＬＣ画分（図３）を、４０ｍＬの水を含むバイアル内に収集し、Ｓｅｐ－Ｐａｋ（登録商標）Ｌｉｇｈｔ １ｃｃ Ｖａｃ Ｃ１８カートリッジ（５０ｍｇ、５５～１０５μｍ、Ｗａｔｅｒｓ部品番号ＷＡＴ０５４９５５；５ｍＬのＥｔＯＨ及び５ｍＬの水で事前調整済み）に装填する。維持された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドを０．５ｍＬのＥｔＯＨを使用して溶出し、リン酸緩衝食塩水中の１０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨの５ｍＬの配合物に再構成する。得られた［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドの量は、０．００８５～０．０６６Ｃｉの範囲であった。配合された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドの代表的な分析用ＨＰＬＣを図４に示す。
【0069】
比較参考：例５
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド
［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（６０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）及び６－フルオロピリジン－３－カルボン酸（４６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍＬ）中の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（１３５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ、０．５７ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物を濃縮し、酢酸エチルで希釈し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、酢酸エチル中の０～５０％ジクロロメタンの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を紫色の固体として得る（１８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：４．８１（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、２Ｈ）、６．６１－６．５６（ｍ、１Ｈ）、７．０６（ｄｄ、Ｊ＝２．１、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）、８．３５－８．３０（ｍ、１Ｈ）、８．６９－８．６４（ｍ、３Ｈ）、１０．２４（ｓ、１Ｈ）、１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ：－６２．８。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１１［Ｍ＋Ｈ）］＋。
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド
【化17】
［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（６０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｏｏｌｓ、ＣＡＳ番号１４１６７１１－５９－５）及び６－フルオロピリジン－３－カルボン酸（４６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍＬ）中の撹拌溶液に、ＨＡＴＵ（１３５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ、０．５７ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物を濃縮し、酢酸エチルで希釈し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を、酢酸エチル中の０～５０％ジクロロメタンの勾配で溶出するシリカ上のカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を紫色の固体として得る（１８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：４．８１（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、２Ｈ）、６．６１－６．５６（ｍ、１Ｈ）、７．０６（ｄｄ、Ｊ＝２．１、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）、８．３５－８．３０（ｍ、１Ｈ）、８．６９－８．６４（ｍ、３Ｈ）、１０．２４（ｓ、１Ｈ）、１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ：－６２．８。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１１［Ｍ＋Ｈ）］＋。
【0070】
調製物７
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルピリジン－３－カルボン酸
エチル６－クロロピリジン－３－カルボキシレート（２８０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）及び２－エチルヘキシル３－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチルフェニル］スルファニルプロパノエート（７４０ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）の１，４－ジキソアン（１０ｍＬ）中の溶液に、ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ－ブトキシドの１Ｍ溶液（１．８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）を添加する。溶液を８０℃に４～５時間加熱し、次いで室温で一晩撹拌する。２Ｍ水酸化リチウム水溶液（１０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で２～３時間撹拌する。溶液を室温に冷却し、２Ｎ ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチルで抽出する。次いで、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラム（０～８０％ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、表題化合物（５２７ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）をオフホワイトの固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチル－フェニル］スルファニルピリジン－３－カルボン酸
【化18】
エチル６－クロロピリジン－３－カルボキシレート（２８０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）及び２－エチルヘキシル３－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチルフェニル］スルファニルプロパノエート（７４０ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）の１，４－ジキソアン（１０ｍＬ）中の溶液に、ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ－ブトキシドの１Ｍ溶液（１．８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）を添加する。溶液を８０℃に４～５時間加熱し、次いで室温で一晩撹拌する。２Ｍ水酸化リチウム水溶液（１０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で２～３時間撹拌する。溶液を室温に冷却し、２Ｎ ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチルで抽出する。次いで、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラム（０～８０％ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、表題化合物（５２７ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）をオフホワイトの固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0071】
調製物８
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－（（３’，５’－ジメトキシ－５－メチル－［１，１’－ビフェニル］－２－イル）スルフィニル）ニコチンアミド
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチルフェニル］スルファニルピリジン－３－カルボン酸（９４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（５５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１１５ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中の撹拌混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０７ｍＬ、０．４ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。得られた残渣をジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び飽和ＮａＣｌ水溶液で順次洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（０～８０％ヘキサン／酢酸エチル）により精製して、Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－（（３’，５’－ジメトキシ－５－メチル－［１，１’－ビフェニル］－２－イル）チオ）ニコチンアミド（７０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）をピンク色の泡状物として得る。
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－（（３’，５’－ジメトキシ－５－メチル－［１，１’－ビフェニル］－２－イル）スルフィニル）ニコチンアミド
【化19】
６－［２－（３，５－ジメトキシフェニル）－４－メチルフェニル］スルファニルピリジン－３－カルボン酸（９４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び［４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル］メタンアミン塩酸塩（５５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１１５ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中の撹拌混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０７ｍＬ、０．４ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。得られた残渣をジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び飽和ＮａＣｌ水溶液で順次洗浄する。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（０～８０％ヘキサン／酢酸エチル）により精製して、Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－（（３’，５’－ジメトキシ－５－メチル－［１，１’－ビフェニル］－２－イル）チオ）ニコチンアミド（７０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）をピンク色の泡状物として得る。
【0072】
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－（（３’，５’－ジメトキシ－５－メチル－［１，１’－ビフェニル］－２－イル）チオ）ニコチンアミド（７０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍＬ）中の溶液に、３－クロロペルオキシ安息香酸（２０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、純度７７％）を添加する。混合物を室温で２～３時間撹拌する。次いで、混合物をシリカゲルカラム（１２ｇ、０～１００％ヘキサン／酢酸エチル）によって精製して、表題化合物（２４ｍｇ）をピンク色の泡状物として得る：ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0073】
調製物９
５－（５－（（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）カルバモイル）ピリジン－２－イル）－２，４－ジメトキシ－８－メチル－５Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｄ］チオフェン－５－イウムトリフルオロメタンスルホネート
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－（（３’，５’－ジメトキシ－５－メチル－［１，１’－ビフェニル］－２－イル）スルフィニル）ニコチンアミド（２３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及びジエチルアミノポリスチレン（３．２ｍｍｏｌ／ｇ、７０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の０℃に冷却したジクロロメタン（３ｍＬ）中の撹拌スラリーに、トリフルオロメタンスルホン酸無水物のジクロロメタン中の１Ｍ溶液（１３０μＬ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温まで温め、３０分間撹拌する。水を一滴加えることにより反応を停止させる。混合物を濾過し、固体をジクロロメタンで洗浄する。合わせた濾液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、ジクロロメタン中０～２０％メタノールの勾配を使用したシリカゲル上のクロマトグラフィーで精製して、表題化合物（１２ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、収率４１％）を紫色の固体として得る：１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ：２．５５（ｓ、３Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、４．００（ｓ、３Ｈ）、４．６４－４．６２（ｍ、２Ｈ）、６．９２（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２－７．５７（ｍ、３Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、８．２６（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．３９－８．３７（ｍ、２Ｈ）、８．４８－８．４４（ｍ、２Ｈ）、８．５４－８．５２（ｍ、１Ｈ）、８．９２－８．９１（ｍ、１Ｈ）、９．４８－９．４４（ｍ、１Ｈ）、１０．５８（ｓ、１Ｈ）、１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ：－７７．７。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４９［Ｍ＋］。
５－（５－（（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）カルバモイル）ピリジン－２－イル）－２，４－ジメトキシ－８－メチル－５Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｄ］チオフェン－５－イウムトリフルオロメタンスルホネート
【化20】
Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－（（３’，５’－ジメトキシ－５－メチル－［１，１’－ビフェニル］－２－イル）スルフィニル）ニコチンアミド（２３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及びジエチルアミノポリスチレン（３．２ｍｍｏｌ／ｇ、７０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の０℃に冷却したジクロロメタン（３ｍＬ）中の撹拌スラリーに、トリフルオロメタンスルホン酸無水物のジクロロメタン中の１Ｍ溶液（１３０μＬ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温まで温め、３０分間撹拌する。水を一滴加えることにより反応を停止させる。混合物を濾過し、固体をジクロロメタンで洗浄する。合わせた濾液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、ジクロロメタン中０～２０％メタノールの勾配を使用したシリカゲル上のクロマトグラフィーで精製して、表題化合物（１２ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、収率４１％）を紫色の固体として得る：１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ：２．５５（ｓ、３Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、４．００（ｓ、３Ｈ）、４．６４－４．６２（ｍ、２Ｈ）、６．９２（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２－７．５７（ｍ、３Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、８．２６（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．３９－８．３７（ｍ、２Ｈ）、８．４８－８．４４（ｍ、２Ｈ）、８．５４－８．５２（ｍ、１Ｈ）、８．９２－８．９１（ｍ、１Ｈ）、９．４８－９．４４（ｍ、１Ｈ）、１０．５８（ｓ、１Ｈ）、１９Ｆ ＮＭＲ（３７６．４５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ：－７７．７。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４９［Ｍ＋］。
【0074】
比較参考例６
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド放射線合成の典型的な放射化学収率は、０．３１８～０．６１５Ｃｉの開始活性を使用し、剛性時間５０分で、２０±２．１８％（Ｎ＝３）である。
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド
【化21】
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド放射線合成の典型的な放射化学収率は、０．３１８～０．６１５Ｃｉの開始活性を使用し、剛性時間５０分で、２０±２．１８％（Ｎ＝３）である。
【0075】
［１８Ｆ］フッ化物活性（０．３１８～０．６１５Ｃｉ）は、Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ａｃｃｅｌｌ Ｐｌｕｓ ＱＭＡ Ｐｌｕｓライトカートリッジ（１３０ｍｇ、３７～５５μｍ、Ｗａｔｅｒｓ部品番号ＷＡＴ０２３５２５）で維持され、０．８ｍＬの重炭酸テトラエチルアンモニウム水溶液［水（０．２ｍＬ）及びアセトニトリル（０．６ｍＬ）中の重炭酸テトラエチルアンモニウム（３．６ｍｇ）］を使用してＴＲＡＣＥＲｌａｂ ＦＸＦ－Ｎ反応容器内に溶出される。溶出した活性物質を７０℃に加熱し、圧縮窒素ガスパージ及び真空下で５分間乾燥させる。次いで、温度を１００℃に上げ、真空下で５分間保持すると、テトラエチルアンモニウム［１８Ｆ］フルオリドが得られる。次いで、反応器を３０℃に冷却し、１．２ｍＬの無水ＤＭＳＯを反応器に添加する。テトラエチルアンモニウム［１８Ｆ］フルオリド溶液を、５－（５－（（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）カルバモイル）ピリジン－２－イル）－２，４－ジメトキシ－８－メチル－５Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｄ］チオフェン－５－イウムトリフルオロメタンスルホネート［０．３ｍＬの無水ＤＭＳＯ中（１ｍｇ、１．８３μｍｏｌ）］の前駆体溶液を含むＴＲＡＣＥＲｌａｂ注入バイアル（ＲＶ２）に移し、室温で２分間維持する。次いで、混合物を水中の１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ ３．５ｍＬで希釈し、得られた粗反応混合物を精製のために半分取ＨＰＬＣカラムに装填する（条件は図５に列挙されている）。精製された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドを含むＨＰＬＣ画分（図５）を、４０ｍＬの水中０．０２％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含むバイアルに収集し、Ｓｅｐ－Ｐａｋ（登録商標）Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８カートリッジ（１３０ｍｇ、５５～１０５μｍ、Ｗａｔｅｒｓ部品番号ＷＡＴ０２３５０１）に装填する。
【0076】
維持された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドを５ｍＬの０．０２％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ水溶液で洗浄し、１ｍＬのＥｔＯＨを使用して溶出し、ＰＢＳ中の１０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨの１０ｍＬの配合物に再構成する。得られた［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドの量は、０．０４６～０．１２５Ｃｉの範囲であった。配合された［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドの代表的な分析ＨＰＬＣクロマトグラムを図６に示す。
【0077】
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド（実施例２）のＰＥＴ－ＣＴイメージング
Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｉｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌｉｔｙ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、マイクロＰＥＴ／ＣＴイメージングに使用する。雄ＣＤ－１（６週齢、約３０ｇ）マウスを、３％イソフルラン／９７％酸素で麻酔し、スキャナーのベッドに置く。マウスに［１８Ｆ］－Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドをボーラス静脈内尾静脈注射（１５０μＬの生理食塩水総量で約３５０μＣｉ）により投与する。合計４回の動的ＰＥＴスキャンを実行し、続いて解剖学的位置合わせのための短い高解像度ＣＴスキャンを実行する。ＰＥＴ画像は取得時間の１分ごとに生成される。脳、筋肉、及び骨へのトレーサーの取り込みは、融合したＰＥＴ／ＣＴ画像に基づいて関心領域（ＲＯＩ）を視覚的に描画することによって決定し、対応する活動値はＩｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗｏｒｋｐｌａｃｅソフトウェアを使用して決定する。全ての値は、グラムあたりの注射量の割合（％ＩＤ／ｇ）として表される。
Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｉｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌｉｔｙ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、マイクロＰＥＴ／ＣＴイメージングに使用する。雄ＣＤ－１（６週齢、約３０ｇ）マウスを、３％イソフルラン／９７％酸素で麻酔し、スキャナーのベッドに置く。マウスに［１８Ｆ］－Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドをボーラス静脈内尾静脈注射（１５０μＬの生理食塩水総量で約３５０μＣｉ）により投与する。合計４回の動的ＰＥＴスキャンを実行し、続いて解剖学的位置合わせのための短い高解像度ＣＴスキャンを実行する。ＰＥＴ画像は取得時間の１分ごとに生成される。脳、筋肉、及び骨へのトレーサーの取り込みは、融合したＰＥＴ／ＣＴ画像に基づいて関心領域（ＲＯＩ）を視覚的に描画することによって決定し、対応する活動値はＩｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗｏｒｋｐｌａｃｅソフトウェアを使用して決定する。全ての値は、グラムあたりの注射量の割合（％ＩＤ／ｇ）として表される。
【0078】
４つの６０分のＰＥＴスキャンの分析は、［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドが血液脳関門を容易に通過することを示している。３．３％ＩＤ／ｇのピーク脳取り込みが注射後４．５分で観察され、続いて、５９．５分で１．２％ＩＤ／ｇまでトレーサーが安定してクリアランスされる。［１８Ｆ］－Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドの取り込みは、肝臓、腎臓、及び心臓などの臓器において身体の末梢全体でも観察される。脱フッ素化がないことと一致して、スキャン期間中の骨の取り込みは低いままであった。ＣＤ－１雄マウス（ｎ＝４）における［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミドについて、時間活性曲線が生成される。データは以下に表形式（表１）で示される。
【0079】
表１は、［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド（脳、筋肉、及び骨、Ｎ＝４）の６０分間のＰＥＴ時間活性結果を示す。
【表1-1】
【表1-2】
【表1-3】
【0080】
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド（実施例４）のＰＥＴ－ＣＴイメージング
Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｉｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌｉｔｙ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、マイクロＰＥＴ／ＣＴイメージングに使用する。雄ＣＤ－１（６週齢、約３０ｇ）マウスを、３％イソフルラン／９７％酸素で麻酔し、スキャナーのベッドに置いた。マウスに［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドをボーラス静脈内尾静脈注射（１５０μＬの生理食塩水総量で約３００μＣｉ）により投与する。合計４回の動的ＰＥＴスキャンを実行し、続いて解剖学的位置合わせのための短い高解像度ＣＴスキャンを実行する。ＰＥＴ画像は取得時間の１分ごとに生成される。脳、筋肉、及び骨へのトレーサーの取り込みは、融合したＰＥＴ／ＣＴ画像に基づいて関心領域（ＲＯＩ）を視覚的に描画することによって決定し、対応する活動値はＩｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗｏｒｋｐｌａｃｅソフトウェアを使用して決定する。全ての値は、グラムあたりの注射量の割合（％ＩＤ／ｇ）として表される。
Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｉｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌｉｔｙ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、マイクロＰＥＴ／ＣＴイメージングに使用する。雄ＣＤ－１（６週齢、約３０ｇ）マウスを、３％イソフルラン／９７％酸素で麻酔し、スキャナーのベッドに置いた。マウスに［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドをボーラス静脈内尾静脈注射（１５０μＬの生理食塩水総量で約３００μＣｉ）により投与する。合計４回の動的ＰＥＴスキャンを実行し、続いて解剖学的位置合わせのための短い高解像度ＣＴスキャンを実行する。ＰＥＴ画像は取得時間の１分ごとに生成される。脳、筋肉、及び骨へのトレーサーの取り込みは、融合したＰＥＴ／ＣＴ画像に基づいて関心領域（ＲＯＩ）を視覚的に描画することによって決定し、対応する活動値はＩｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗｏｒｋｐｌａｃｅソフトウェアを使用して決定する。全ての値は、グラムあたりの注射量の割合（％ＩＤ／ｇ）として表される。
【0081】
４つの６０分のＰＥＴスキャンの分析は、［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドが血液脳関門を容易に通過することを示している。４．３％ＩＤ／ｇのピーク脳取り込みが注射後２．５分で観察され、続いて、５９．５分で１．１％ＩＤ／ｇまでトレーサーが安定してクリアランスされる。［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドの取り込みは、肝臓、腎臓、及び心臓などの臓器において身体の末梢全体でも観察される。脱フッ素化がないことと一致して、スキャン期間中の骨の取り込みは低いままであった。ＣＤ－１雄マウス（ｎ＝４）における［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドについて、時間活性曲線が生成される。データは以下に表形式（表２）で示される。
【0082】
表２は、［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド（脳、筋肉、及び骨、Ｎ＝４）の６０分間のＰＥＴ時間活性結果を示す。
【表2-1】
【表2-2】
【0083】
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド（比較例６）のＰＥＴ－ＣＴイメージング
Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｉｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌｉｔｙ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、マイクロＰＥＴ／ＣＴイメージングに使用する。雄ＣＤ－１（６週齢、３０～４０ｇ）マウスを、３％イソフルラン／９７％酸素で麻酔し、スキャナーのベッドに置く。マウスに［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドをボーラス静脈内尾静脈注射（１５０μＬの生理食塩水総量で約３００μＣｉ）により投与する。合計２回の動的ＰＥＴスキャンを実行し、続いて解剖学的位置合わせのための短い高解像度ＣＴスキャンを実行する。ＰＥＴ画像は取得時間の１分ごとに生成される。脳、筋肉、及び骨へのトレーサーの取り込みは、融合したＰＥＴ／ＣＴ画像に基づいて関心領域（ＲＯＩ）を視覚的に描画することによって決定し、対応する活動値はＩｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗｏｒｋｐｌａｃｅソフトウェアを使用して決定する。全ての値は、グラムあたりの注射量の割合（％ＩＤ／ｇ）として表される。
Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｉｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌｉｔｙ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、マイクロＰＥＴ／ＣＴイメージングに使用する。雄ＣＤ－１（６週齢、３０～４０ｇ）マウスを、３％イソフルラン／９７％酸素で麻酔し、スキャナーのベッドに置く。マウスに［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドをボーラス静脈内尾静脈注射（１５０μＬの生理食塩水総量で約３００μＣｉ）により投与する。合計２回の動的ＰＥＴスキャンを実行し、続いて解剖学的位置合わせのための短い高解像度ＣＴスキャンを実行する。ＰＥＴ画像は取得時間の１分ごとに生成される。脳、筋肉、及び骨へのトレーサーの取り込みは、融合したＰＥＴ／ＣＴ画像に基づいて関心領域（ＲＯＩ）を視覚的に描画することによって決定し、対応する活動値はＩｎｖｅｏｎ（登録商標）Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗｏｒｋｐｌａｃｅソフトウェアを使用して決定する。全ての値は、グラムあたりの注射量の割合（％ＩＤ／ｇ）として表される。
【0084】
２つのＰＥＴスキャンの分析は、［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドが血液脳関門を通過することを示している。２．６％ＩＤ／ｇのピーク脳取り込みが注射後２．５分で観察され、続いて、５９．５分で１．１％ＩＤ／ｇまでトレーサーが安定してクリアランスされる。［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドの取り込みは、肝臓、腎臓、及び心臓などの臓器において身体の末梢全体で観察される。脱フッ素化がないことと一致して、スキャン期間中の骨の取り込みは低いままであった。ＣＤ－１雄マウス（ｎ＝２）における［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミドについて、時間活性曲線が生成される。データは以下に表形式（表３）で示される。
【0085】
表３は、［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド（脳、筋肉、及び骨、Ｎ＝２）の６０分間のＰＥＴ時間活性結果を示す。
【表3-1】
【表3-2】
【表3-3】
【0086】
表１及び２に示すＰＥＴ－ＣＴデータは、実施例２及び実施例４の１８Ｆ標識化合物が、ＣＤ－１マウスで試験した場合に血液脳関門を通過することを示している。ピーク脳取り込み（％ＩＤ／ｇ）は注射後約２分で観察され、次いで、トレーサーは注射後６０分で筋肉への取り込みによって定義されるベースラインレベルまで安定してクリアランスされる。インビボ脱フッ素化がないことと一致して、スキャン期間中の骨の取り込みは低いままであった。これらのデータは、実施例２及び実施例４の１８Ｆ標識化合物がＣＮＳプレターゲットイメージング用のＰＥＴ－ＣＴイメージング剤として有用であることを示している。
【0087】
２つのＰＥＴスキャンの分析は、［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド（比較例６）が血液脳関門を通過することを示している。２．６％ＩＤ／ｇのピーク脳取り込みが注射後２．５分で観察され、続いて、５９．５分で１．１％ＩＤ／ｇまでトレーサーが安定してクリアランスされる。
【0088】
比較すると、本明細書に開示される［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド（実施例２）及び［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド（実施例４）のＣＤ－１雄マウスにおけるダイナミックＰＥＴイメージングは、これらの化合物が血液脳関門を容易に通過し、それぞれ３．３±０．４％ＩＤ／ｇ及び４．３±０．３％ＩＤ／ｇのピーク脳取り込みに達することを示した。次いで、これらの化合物は、注射後６０分までに脳からほぼバックグラウンドレベル（筋肉）まで安定したクリアランスを示した。
【0089】
これらの薬剤は、より高い脳への浸透及び脳からの迅速かつ完全なウォッシュアウトを備え、したがってより大きなウィンドウを提供して、より高い信号対バックグラウンド比を達成し、より良好な画質をもたらす。したがって、本発明者らは、本明細書に開示される［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロニコチンアミド（実施例２）及び［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド（実施例４）が、［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロニコチンアミド（比較例６）に勝る利点をプレターゲットＣＮＳイメージングに提供すると期待している。
【0090】
プレターゲットイメージング研究における潜在的な応用に加えて、放射性標識テトラジンは、生体分子の標識に有用な補欠分子族であることも複数の出版物で示されている。Ｓｔｅｖｅｎ Ｌｉａｎｇらは、ラクダ科動物の単一ドメイン抗体フラグメントのソルターゼ媒介修飾とその後の１８Ｆ標識テトラジンによる放射性標識を報告している（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ． Ｅｄ．２０１６，５５，５２８－５３３、ＷＯ２０１７／０５９３９７Ａ１）。Ｓｔｉｎａ Ｓｙｖａｎｅｎらは、トランスシクロオクテン（ＴＣＯ）基による官能化とその後の１８Ｆ標識テトラジンとの結合を室温で行うことによる二重特異性抗体の放射性標識を報告している（ＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０２０，１１，２４，４４６０－４４６８）。Ｍｉｃｈａｅｌ Ｚａｌｕｔｓｋｙらは、ＡｌＦキレート又はフルオロピリジン官能基の両方を有する放射性標識テトラジンによるナノボディなどの生体分子の放射性標識を開示している（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１８，２９，４０９０－４１０３、ＷＯ２０２０／２４２９４８Ａ１）。
【0091】
文献の先例に基づいて、本明細書で特許請求されているテトラジンは、生体分子の標識のための補欠分子族としての有用性を有することが期待される。生体分子、Ｍａｌａｔ１アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）に結合したトランスシクロオクテン（ＴＣＯ）を有するテトラジンＮ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロピコリンアミド及びＮ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドの反応性（２０１９ Ｗｏｒｌｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｐｏｓｔｅｒ １３９）は、それぞれＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣ－放射線検出で監視した［１９Ｆ］実験及び［１８Ｆ］実験の両方で確認された。
【0092】
２．５ｍｇ／ｍＬ（２．６７μＭ）のＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯの水溶液に、２当量のテトラジンを添加し、光から保護して室温で３０分間穏やかに振盪した。反応混合物を、Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）Ｘｅｖｏ ＱＴｏｆ質量分析計を備えたＷａｔｅｒｓ（登録商標）Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムでＥＳ／ＭＳによって監視した。ＬＣ－ＭＳ条件は次のとおりであった：カラム：Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）ＡＣＱＵＩＴＹ ＰＲＥＭＩＥＲ ＵＰＬＣオリゴヌクレオチドＢＥＨ Ｃ１８（１３０Å、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５０ｍｍ）；波長２５０～６５０ｎｍ；勾配：最初は５％Ｂで３．５分間保持、１．５分で５～７５％Ｂ、７５％Ｂで４分間保持、０．５分で７５～９８％Ｂに増加、９８％Ｂで１分間保持、再平衡化のために５％Ｂに戻す；カラム温度：７０℃＋／－５℃；流量：０．２ｍＬ／分；Ａの溶媒：水中の７ｍＭ ＴＥＡ及び１００ｍＭ ＨＦＩＰ；Ｂの溶媒：７５％メタノール／２５％アセトニトリル中の７ｍＭ ＴＥＡ及び１００ｍＭ ＨＦＩＰ。
【0093】
ネガティブモードの質量スペクトル（５００～３０００ｍ／ｚ）を目的のピークから合計し、ＭａｘＥｎｔで処理してゼロ電荷質量の結果を生成した。各テトラジン（Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロピコリンアミド及びＮ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド）は、２８２Ｄａの差（７５０２Ｄａ～７７８４Ｄａへのシフト）を示し、親は残っておらず、Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯとテトラジンとの完全な反応を示した（図７）。
【0094】
［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロピコリンアミド及び［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１、２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミドを計算し、それぞれ０．４ｍＬを２部のＭａｌａｔ１－ＡＳＯ－ＴＣＯと反応させた。反応物を光から保護して室温で１５分間穏やかに振盪した後、水で１００倍に希釈した。次いで、希釈した試料を、ＢＧＯ一致検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２９０シリーズＵＰＬＣ ＵＶで分析した。ＨＰＬＣ条件は次のとおりであった：カラム：Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）ＡＣＱＵＩＴＹ ＰＲＥＭＩＥＲ ＵＰＬＣオリゴヌクレオチドＢＥＨ Ｃ１８（１３０Å、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５０ｍｍ）；勾配：最初は５％Ｂで３分間保持、１．５分で５～７５％Ｂ、７５％Ｂで６分間保持、１分で７５～９８％Ｂに増加、９８％Ｂで１分間保持、再平衡化のために５％Ｂに戻す；カラム温度：７０℃＋／－５℃；流量：０．２５ｍＬ／分；Ａの溶媒：水中の７ｍＭ ＴＥＡ及び１００ｍＭ ＨＦＩＰ；Ｂの溶媒：７５％メタノール／２５％アセトニトリル中の７ｍＭ ＴＥＡ及び１００ｍＭ ＨＦＩＰ。
【0095】
Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯとの反応前後の各テトラジン（［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－２－フルオロピコリンアミド及び［１８Ｆ］Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－６－フルオロピコリンアミド）の放射性微量は、未反応テトラジンからなる単一ピーク（ＲＴ＝９分）から２つのピークへのシフトを示したが、より早い溶出ピーク（ＲＴ＝３．４分）は反応種を表す（図８）。
【0096】
したがって、本実施形態では、分子を放射性標識する方法が開示される。特に、第１のステップにおいて、生体分子は、ＴＣＯ部分を結合又は含むように修飾されて、生体分子－ＴＣＯコンジュゲートを形成する。（これを行うための１つの例示的な方法は、上記のＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０２０，１１，２４，４４６０－４４６８に開示されている）。次いで、第２のステップにおいて、生体分子－ＴＣＯコンジュゲートが１８Ｆ標識テトラジンと反応して、環化付加反応を介して生体分子－ＴＣＯ－テトラジン－１８Ｆを形成する。
【0097】
具体的には、方法は、生体分子を放射性標識する方法であって、
ＴＣＯ部分を前記生体分子に結合させ、それにより生体分子－ＴＣＯコンジュゲートを形成することと、
生体分子－ＴＣＯコンジュゲートを１８Ｆ標識テトラジンと反応させて、生体分子－ＴＣＯ－テトラジン－１８Ｆ分子を形成することとを含み、１８Ｆ標識テトラジンは、式ＩＩの化合物及び式ＩＶの化合物からなる群から選択される方法を含み得る。
ＴＣＯ部分を前記生体分子に結合させ、それにより生体分子－ＴＣＯコンジュゲートを形成することと、
生体分子－ＴＣＯコンジュゲートを１８Ｆ標識テトラジンと反応させて、生体分子－ＴＣＯ－テトラジン－１８Ｆ分子を形成することとを含み、１８Ｆ標識テトラジンは、式ＩＩの化合物及び式ＩＶの化合物からなる群から選択される方法を含み得る。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
