特許 7592412 魚介類アレルギーの診断の方法及び製品

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-22

(45)【発行日】2024-12-02

(54)【発明の名称】魚介類アレルギーの診断の方法及び製品

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/53 20060101AFI20241125BHJP

   G01N 33/543 20060101ALI20241125BHJP

   C07K 14/435 20060101ALI20241125BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20241125BHJP

   C07K 17/00 20060101ALI20241125BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20241125BHJP

【ＦＩ】

G01N33/53 N

G01N33/53 Q

G01N33/543 501A

C07K14/435

C07K16/18

C07K17/00

C12N15/12 ZNA

【請求項の数】 20

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2020105486

(22)【出願日】2020-06-18

(65)【公開番号】P2021006811

(43)【公開日】2021-01-21

【審査請求日】2022-06-13

(31)【優先権主張番号】19181250.2

(32)【優先日】2019-06-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】516125624

【氏名又は名称】ユーロイミューン・メディツィニシェ・ラボルディアグノシュティカ・アクチエンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】100099623

【弁理士】

【氏名又は名称】奥山 尚一

(74)【代理人】

【氏名又は名称】松島 鉄男

(74)【代理人】

【識別番号】100125380

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 綾子

(74)【代理人】

【識別番号】100142996

【弁理士】

【氏名又は名称】森本 聡二

(74)【代理人】

【識別番号】100166268

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 祐

(74)【代理人】

【識別番号】100170379

【弁理士】

【氏名又は名称】徳本 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100180231

【弁理士】

【氏名又は名称】水島 亜希子

(74)【代理人】

【氏名又は名称】有原 幸一

(73)【特許権者】

【識別番号】511096673

【氏名又は名称】ホスピタル クリニク デ バルセロナ

(73)【特許権者】

【識別番号】522504020

【氏名又は名称】インスティテュ・ディンヴェスティガシオンス・ビオメディカス・オウグスト・ピー・イ・スニェー

【氏名又は名称原語表記】Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｄ’Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｃｉｏｎｓ Ｂｉｏｍｅｄｉｑｕｅｓ Ａｕｇｕｓｔ Ｐｉ ｉ Ｓｕｎｙｅｒ

(74)【代理人】

【識別番号】100099623

【弁理士】

【氏名又は名称】奥山 尚一

(74)【代理人】

【識別番号】100125380

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 綾子

(74)【代理人】

【識別番号】100142996

【弁理士】

【氏名又は名称】森本 聡二

(74)【代理人】

【識別番号】100166268

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 祐

(74)【代理人】

【識別番号】100180231

【弁理士】

【氏名又は名称】水島 亜希子

(72)【発明者】

【氏名】ヴァルトラウト・ズーア

(72)【発明者】

【氏名】マルコ・クリンゲ

(72)【発明者】

【氏名】アルフ・ヴァイマン

(72)【発明者】

【氏名】シュテファニー・ローヴァー

(72)【発明者】

【氏名】ヘニング・ザイスマン

(72)【発明者】

【氏名】マリオナ・パスカル・カプデビラ

【審査官】中村 直子

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２０１６／０３５５５５５（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特開平１０－１１３１５２（ＪＰ，Ａ）

【文献】MOTOYAMA, K. et al.，Cephalopod Tropomyosins: Identification as Major Allergens and Molecular Cloning，Food and Chemical Toxicology，2006年12月，Vol.44/No.12，p.1997-2002，DOI: 10.1016/j.fct.2006.06.018

【文献】Yong-Xia ZHANG et al.，，Purification, Characterization, and Analysis of the Allergenic Properties of Myosin Light Chain in Procambarus clarkii，Journal of Agricultural and Food Chemistry，2015年06月30日，Vol. 63，No. 27，p.6271-6282，DOI: 10.1021/acs.jafc.5b01318

【文献】吉岡武也，木下康宣，生鮮スルメイカ保管中に起こる性状変化に関する研究II －物性測定法の検討と保管中の変化－，北海道道立工業技術センター研究報告，2006年，Vol.9，p.15-20，https://techakodate.or.jp/center/information/report/h18/report2006_004.pdf

【文献】WATANABE, B. et al.，Amino-Acid Sequence of LC-1 Light Chain of Squid Mantle Muscle Myosin，BIOLOGICAL CHEMISTRY，1986年10月，Vol.367/No.2，p.1025-1032

【文献】MAITA, T. et al.，Amino Acid Sequence of The Regulatory Light Chain of Squid Mantle Muscle Myosin，JOURNAL OF BIOCHEMISTRY，日本，1987年11月01日

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｇ０１Ｎ ３３／４８－３３／９８

Ｃ０７Ｋ １４／４３５

Ｃ０７Ｋ １６／１８

Ｃ０７Ｋ １７／００

Ｃ１２Ｎ １５／１２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象由来の試料中の配列番号８に示されるイカＭＬＣ１又は配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２又は配列番号１０のバリアントを含む群からのポリペプチドに対する抗体を特異的に捕捉する手段を含む、診断的に有用な担体であって、前記バリアントが、イカアレルギーに罹患している患者からの試料からの、イカＭＬＣ２に結合する抗体との結合能を有し、かつ、配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２からの少なくとも連続する６アミノ酸残基を含むエピトープであって、任意選択的に、配列番号３０、配列番号３１、配列番号４２、配列番号４３および配列番号５１を含む群から選択される１または複数の配列を含むエピトープを含む、担体。

【請求項2】

前記担体が、ビーズ、試験ストリップ、マイクロタイタープレート、マイクロアレイ、ブロット、ガラス表面、スライド、バイオチップ及びメンブレンを含む群から選択される、請求項１に記載の担体。

【請求項3】

前記担体が、ウエスタンブロット、ラインブロット及びドットブロットを含む群から選択される、請求項１に記載の担体。

【請求項4】

前記担体が、マイクロタイタープレート又はラインブロットである、請求項１に記載の担体。

【請求項5】

前記担体が、イカＴＭに対する抗体を捕捉する手段をさらに含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の担体。

【請求項6】

請求項１～５のいずれか１項に記載の診断的に有用な担体を含むキット。

【請求項7】

前記キットが、ｉ）キャリブレーター又はキャリブレーターのセット、ｉｉ）洗浄緩衝液、及びｉｉｉ）ＩｇＥ抗体を検出する手段を含む群からの１つ又は複数を含む、請求項６に記載のキット。

【請求項8】

前記キットが、ｉ）キャリブレーター又はキャリブレーターのセット、ｉｉ）洗浄緩衝液、及びｉｉｉ）ＩｇＥ抗体を検出する手段の全てを含む、請求項７に記載のキット。

【請求項9】

前記ＩｇＥ抗体を検出する手段が標識二次抗体である、請求項７または８に記載のキット。

【請求項10】

配列番号８に示されるイカＭＬＣ１又は配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２又は配列番号１０のバリアントを含む群からのポリペプチドに対する抗体の存在又は非存在を、対象由来の試料において検出するステップを含む方法であって、前記バリアントが、配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２からの少なくとも連続する６アミノ酸残基を含むエピトープであって、任意選択的に、配列番号３０、配列番号３１、配列番号４２、配列番号４３および配列番号５１を含む群から選択される１または複数の配列を含むエピトープを含む、方法。

【請求項11】

イカＴＭに対する抗体の存在又は非存在を、前記試料において検出するステップをさらに含む、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記ポリペプチドが、真核細胞で発現されたポリペプチドである、請求項１～９のいずれか１項に記載の担体又はキット。

【請求項13】

イカアレルギーの診断のための、請求項１～５のいずれか１項に記載の担体又は請求項６に記載のキットの製造のための、配列番号８に示されるイカＭＬＣ１又は配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２又は配列番号１０のバリアントを含むポリペプチドの使用であって、前記ポリペプチドが単離又は固定されており、前記バリアントが、イカアレルギーに罹患している患者からの試料からの、イカＭＬＣ２に結合する抗体との結合能を有し、かつ、配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２からの少なくとも連続する６アミノ酸残基を含むエピトープであって、任意選択的に、配列番号３０、配列番号３１、配列番号４２、配列番号４３および配列番号５１を含む群から選択される１または複数の配列を含むエピトープを含む、使用。

【請求項14】

診断キットの製造のための、請求項１～５のいずれか１項に記載の担体又は請求項６に記載のキットの製造のための、配列番号８に示されるイカＭＬＣ１又は配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２又は配列番号１０のバリアントを含むポリペプチドの使用であって、前記ポリペプチドが単離又は固定されており、前記バリアントが、イカアレルギーに罹患している患者からの試料からの、イカＭＬＣ２に結合する抗体との結合能を有し、かつ、配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２からの少なくとも連続する６アミノ酸残基を含むエピトープであって、任意選択的に、配列番号３０、配列番号３１、配列番号４２、配列番号４３および配列番号５１を含む群から選択される１または複数の配列を含むエピトープを含む、使用。

【請求項15】

前記診断キットがイカアレルギーの診断のためのものである、請求項１４に記載の使用。

【請求項16】

前記診断が、貝類アレルギーの鑑別診断である、請求項１４又は１５に記載の使用。

【請求項17】

前記鑑別が、エビアレルギーとイカアレルギーとの間で行われる、請求項１６に記載の使用。

【請求項18】

ポリペプチドを含む医療デバイス又は診断デバイスに、前記ポリペプチドに対する抗体を含む溶液を接触させるステップを含む方法であって、前記ポリペプチドが、配列番号８に示されるイカＭＬＣ１又は配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２又は配列番号１０のバリアントを含む群から選択され、前記バリアントが、イカアレルギーに罹患している患者からの試料からの、イカＭＬＣ２に結合する抗体との結合能を有し、かつ、配列番号１０に示されるイカＭＬＣ２からの少なくとも連続する６アミノ酸残基を含むエピトープであって、任意選択的に、配列番号３０、配列番号３１、配列番号４２、配列番号４３および配列番号５１を含む群から選択される１または複数の配列を含むエピトープを含む、方法。

【請求項19】

前記抗体が既知の濃度である、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記抗体がＩｇＥ抗体である、請求項１８又は１９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、対象由来の試料中のイカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２又はそのバリアントを含む群からのポリペプチドに対する抗体を特異的に捕捉する手段を含む診断的に有用な担体、イカＭＬＣ１又はイカＭＬＣ２に対する抗体の存在又は非存在を対象由来の試料において検出するステップを含む方法、及び好ましくはアレルギーの診断のための、診断キットの製造のための、本発明によるポリペプチド若しくは担体又はイカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２に対する患者の試料からのＩｇＥ抗体に特異的に結合するポリペプチドの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

魚介類へのアレルギー反応の範囲は、軽度の反応から全身性反応に至り、重度のアナフィラキシー反応を含む。認識できる魚介類製品を消費する際のアレルギー反応は別として、アレルゲンは、その性質ゆえにアレルギー反応の危険性が隠れている様々な食品中の認識できない成分である可能性がある。

【0003】

魚介類アレルギーの有病率が高いにもかかわらず、治療に利用できる選択肢は少なく、回避することが唯一の可能な選択肢であることが多い。もちろん、これには患者が反応する抗原の性質に関する正確な情報を必要とする。

【0004】

特に最も有病率を有する魚介類成分、特にエビ（ｓｈｒｉｍｐ）、エビ（ｐｒａｗｎ）、カニ、ロブスター及びザリガニを含む甲殻類に関して、一連の試験が市販されている。例えば、筋タンパク質トロポミオシンは、様々なエビの種の主要な交差反応性アレルゲンとして同定された。

【0005】

そのような魚介類アレルギーの診断試験は、アレルゲン源のタンパク質に関して特異性を有する患者からのＩｇＥ抗体の検出に関与する。しかしながら、ＩｇＥ試験陽性、すなわちＩｇＥ感作は、必ずしも臨床兆候と相関するとは限らない。言い換えれば、１つのアレルゲンに対するＩｇＥが検出される場合、この観察結果は、確定診断を提供するのに十分ではない。

【0006】

むしろ、これは、試験されたアレルゲン源が、他より関連性が高い可能性があることを示唆する第１の指標である。臨床診療では、医師によるアレルギーの診断は通常、関連性のあるアレルゲン源についての陽性のＩｇＥ感作と、このアレルゲンに対するアレルギー反応の説得力のある病歴との両方に基づく。さらに、特定の抽出物を患者の皮膚に局所適用することにより実施される皮膚プリック試験（ＳＰＴ）などの補完的な試験の結果が、最終診断に考慮され得る。

【0007】

しかしながら、多くの患者は、これまで知られていないアレルゲンに反応するため、決定的な診断をすることは不可能である。

【0008】

特定のアレルゲンに対するアレルギーの同定に成功した後に、治療が続いて行われ得る。抗ヒスタミン類は治療を改善するために使用され得、アレルゲンの管理された投与に基づく特定の免疫療法を用いて、長期的かつ治癒的な治療が実施され得る。正確なメカニズムは完全にはわかっていないが、免疫系のそのような特定の活性が後の同じアレルゲンへの環境曝露による症状を緩和する。様々な植物及び動物のアレルゲンに対して治療の成功が実証されている。

【0009】

Ｙａｄｚｉｒらは、白イカからの抽出物を、２Ｄ ＳＤＳ ＰＡＧＥを含むプロテオミクス分析に供し、次いで質量分析及びバイオインフォマティクス分析に供した（Ｙａｄｚｉｒ，Ｚ．Ｈ．Ｍ．，Ｍｉｓｎａｎ，Ｒ．及びＭｕｒａｄ，Ｓ．（２０１２）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｏｐｏｍｙｏｓｉｎ ａｓ ｍａｊｏｒ ａｌｌｅｒｇｅｎ ｏｆ ｗｈｉｔｅ ｓｑｕｉｄ（Ｌｏｌｉｇｏ ｅｄｕｌｉｓ）ｂｙ ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ ａｎｄ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ａｓｉａｎ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，４３（１），１８５）。５０個を超える異なるタンパク質が同定されたが、唯一、一貫した反応性のタンパク質スポットは、トロポミオシンに割り当てられた。

【0010】

Ｔｏｎｇ，Ｓ．Ｗ．らは、ミオシン軽鎖を様々な種由来のアレルゲンとして開示するが、イカ由来ではない（Ｔｏｎｇ，Ｓ．Ｗ．，Ｙｕｅｎ，Ａ．Ｗ．Ｔ．，Ｗａｉ，Ｃ．Ｙ．Ｙ．，Ｌｅｕｎｇ，Ｎ．Ｙ．Ｈ．，Ｃｈｕ，Ｋ．Ｈ．，Ｌｅｕｎｇ，Ｐ．Ｓ．Ｃ．（２０１８）Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｆｉｓｈ ａｎｄ ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ ａｌｌｅｒｇｉｅｓ，Ｊ．Ａｓｔｈｍａ ａｎｄ Ａｌｌｅｒｇｙ，１１，２４７－２６０）。

【0011】

米国特許出願第２０１５／０１５３３５８号は、様々なエビのアレルゲンを開示し、その中でエビのミオシン軽鎖を開示する。イカのミオシン軽鎖は開示されていない。

【0012】

Ｍｉｙａｚａｗａらは、イカのアレルゲンの精製を開示した（Ｍｉｙａｚａｗａ，Ｍ．Ｔ．，Ｆｕｋａｍａｃｈｉ，Ｆ．，Ｉｎａｋａｇｉ，Ｑ．，Ｒｅｅｓｅ，Ｇ．，Ｄａｕｌ，Ｃ．Ｂ．，Ｌｅｈｒｅｒ，Ｓ．Ｃ．，Ｉｎｏｕｙｅ，Ｓ及びＳａｋａｇｕｃｈｉ，Ｍ．（１９９６）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９８，９４８－９５３）。イカのトロポミオシンが同定され、７０～９０ｋＤａの間の分子量を有するアレルゲン性タンパク質も検出されたが、イカのミオシン軽鎖の分子量である約１８ｋＤａの反応性バンドは免疫ブロットでは検出されず、イカのミオシン軽鎖もまた開示されず、抗原に関しては言うまでもない。

【0013】

したがって、魚介類に対するアレルギー反応を診断、治療及び予防するための試薬及び方法を提供することが継続的に求められている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0014】

【文献】米国特許出願第２０１５／０１５３３５８号

【非特許文献】

【0015】

【文献】Ｙａｄｚｉｒ，Ｚ．Ｈ．Ｍ．，Ｍｉｓｎａｎ，Ｒ．及びＭｕｒａｄ，Ｓ．（２０１２）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｏｐｏｍｙｏｓｉｎ ａｓ ｍａｊｏｒ ａｌｌｅｒｇｅｎ ｏｆ ｗｈｉｔｅ ｓｑｕｉｄ（Ｌｏｌｉｇｏ ｅｄｕｌｉｓ）ｂｙ ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ ａｎｄ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ａｓｉａｎ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，４３（１），１８５

【文献】Ｔｏｎｇ，Ｓ．Ｗ．，Ｙｕｅｎ，Ａ．Ｗ．Ｔ．，Ｗａｉ，Ｃ．Ｙ．Ｙ．，Ｌｅｕｎｇ，Ｎ．Ｙ．Ｈ．，Ｃｈｕ，Ｋ．Ｈ．，Ｌｅｕｎｇ，Ｐ．Ｓ．Ｃ．（２０１８）Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｆｉｓｈ ａｎｄ ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ ａｌｌｅｒｇｉｅｓ，Ｊ．Ａｓｔｈｍａ ａｎｄ Ａｌｌｅｒｇｙ，１１，２４７－２６０

【文献】Ｍｉｙａｚａｗａ，Ｍ．Ｔ．，Ｆｕｋａｍａｃｈｉ，Ｆ．，Ｉｎａｋａｇｉ，Ｑ．，Ｒｅｅｓｅ，Ｇ．，Ｄａｕｌ，Ｃ．Ｂ．，Ｌｅｈｒｅｒ，Ｓ．Ｃ．，Ｉｎｏｕｙｅ，Ｓ及びＳａｋａｇｕｃｈｉ，Ｍ．（１９９６）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９８，９４８－９５３

【発明の概要】

【0016】

本発明の根底にある課題は、魚介類アレルギー、好ましくは軟体動物アレルギー、より好ましくはイカアレルギーの診断又は診断の補助のための新しい試験及び関連試薬を提供することである。

【0017】

本発明の根底にある別の課題は、魚介類アレルギーの鑑別診断又は鑑別診断の補助のための新しい試験及び関連試薬を提供することであり、それによりイカアレルギーを、他の魚介類アレルギー、特にエビアレルギーと区別することが可能である。

【0018】

本発明の根底にある課題は、添付の独立請求項及び従属請求項の主題によって解決される。

【0019】

第１の態様では、対象由来の試料中のイカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２又はそのバリアントを含む群からのポリペプチドに対する抗体を特異的に捕捉する手段を含む診断的に有用な担体によって、課題が解決される。

【0020】

好ましい実施形態では、担体は、ビーズ、試験ストリップ、マイクロタイタープレート、マイクロアレイ、ブロットを含む群から、好ましくはウエスタンブロット、ラインブロット及びドットブロット、ガラス表面、セルロース誘導体などのポリマー、スライド、バイオチップ及びメンブレンを含む群から選択され、最も好ましくはマイクロタイタープレート又はラインブロットである。

【0021】

好ましい実施形態では、担体は、イカＴＭに対する抗体を捕捉する手段をさらに含む。

【0022】

第２の態様では、請求項１から３のいずれか１項に記載の診断的に有用な担体を含むキットによって課題が解決され、該キットは、好ましくは、キャリブレーター、好ましくはキャリブレーターのセット、洗浄緩衝液、及びＩｇＥ抗体又はＩｇＧ抗体、好ましくはＩｇＧ４抗体、好ましくは標識二次抗体を検出する手段を含む群から１つ又は複数を、好ましくは全てをさらに含む。

【0023】

第３の態様では、イカＭＬＣ１又はイカＭＬＣ２に対する抗体の存在又は非存在を対象由来の試料において検出するステップを含む方法によって課題が解決される。

【0024】

好ましい実施形態では、方法は、イカＴＭに対する抗体の存在又は非存在を該試料において検出するステップをさらに含む。

【0025】

第４の態様では、イカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２又はそのバリアントを含む、好ましくはアジュバントをさらに含む医薬組成物によって課題が解決される。

【0026】

第５の態様では、イカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２又はそのバリアントを含むポリペプチドによって課題が解決され、該ポリペプチドは、単離又は固定化される。

【0027】

好ましい実施形態では、ポリペプチドは、前記ポリペプチドに特異的に結合する抗体、好ましくはＩｇＥ又はＩｇＧクラス抗体、好ましくはＩｇＧ４クラス抗体との複合体である。

【0028】

好ましい実施形態では、ポリペプチドは、真核細胞で発現される。

【0029】

第６の態様では、アレルギーの診断のための本発明によるポリペプチド、担体又はキットの使用によって、課題が解決される。

【0030】

第７の態様では、好ましくはアレルギーの診断のための、診断キットの製造のための、本発明によるポリペプチド若しくは担体、又はイカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２に対する患者の試料からのＩｇＥ抗体又はＩｇＧ抗体、好ましくはＩｇＧ４抗体に特異的に結合するポリペプチドの使用によって、課題が解決される。

【0031】

好ましい実施形態では、アレルギーは、貝類アレルギーであり、好ましくはイカアレルギーである。

【0032】

好ましい実施形態では、診断は、貝類アレルギーの鑑別診断であり、好ましくは、エビアレルギーとイカアレルギーとの間で区別される。

【0033】

別の好ましい実施形態では、診断は、アレルギーの鑑別診断であり、好ましくは、昆虫アレルギーと貝類アレルギーとの間で区別され、昆虫は、より好ましくは、イエコオロギ及び小麦粉虫（ｆｌｏｕｒ ｗｏｒｍ）を含む群から選択され得る。

【0034】

第８の態様では、ポリペプチドを含む医療デバイス又は診断デバイスを、抗体、好ましくは該ポリペプチドに対するＩｇＥ抗体又はＩｇＧ抗体、好ましくはＩｇＧ４抗体を含む溶液と、好ましくは該ポリペプチドに対し既知の濃度で接触させるステップを含む方法によって課題が解決され、該ポリペプチドは、イカＭＬＣ１及びイカＭＬＣ２又はそれらのバリアントを含む群から選択される。

【0035】

第９の態様では、イカＭＬＣ１又はイカＭＬＣ２に特異的に結合する、抗体、好ましくはＩｇＥ抗体又はＩｇＧ抗体、好ましくはＩｇＧ４クラス抗体によって課題が解決され、抗体は、好ましくは単離される。好ましい実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。

【0036】

本発明は、イカのミオシン軽鎖１（ＭＬＣ１）ポリペプチド及びミオシン軽鎖２（ＭＬＣ２）ポリペプチドがアレルゲンであり、イカＭＬＣ１及びイカＭＬＣ２に対する抗体が、イカアレルギーに罹患している患者からの試料中に検出することができるという本発明者らによる驚くべき発見に基づいている。さらに、そのような抗体と、イカのトロポミオシン、エビのＭＬＣ及びエビのトロポミオシン（ＴＭ）を含む群からの１つ又は複数の抗原に対する抗体との検出の組み合わせは、診断の有用性を高める。さらに、イカに対するアレルギーは、他の魚介類アレルギー、特にエビアレルギーと区別することができる。

【0037】

好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、「イカＭＬＣ１」という用語は、配列番号８若しくはそのバリアント又はＵｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ０５９４５を指し、好ましくは、配列番号８又はそのバリアントを指す。好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、「イカＭＬＣ２」という用語は、配列番号１０又はそのバリアントを指す。好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、「イカＴＭ」という用語は、配列番号６又はそのバリアントを指す。好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、「エビＭＬＣ」という用語は、配列番号７又はそのバリアントを指す。好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、「エビＴＭ」という用語は、配列番号４又は受託番号Ｑ３Ｙ８Ｍ６を指し、好ましくは配列番号４又はそのバリアントを指す。本出願を通して参照されるいずれのデータベースコードも、本出願の出願日又はその最先の優先日での、Ｕｎｉｐｒｏｔのようなオンラインの各データベースから入手可能なポリペプチド配列を指す。

【0038】

本発明は、診断的に有用な担体に関し、好ましくは、担体を伴う抗体を特異的に捕捉する手段を、対象、好ましくは哺乳動物対象、より好ましくはヒト対象からの体液試料と接触させるための固体担体である。

【0039】

本発明によれば、担体は、抗体を特異的に捕捉する１つ又は複数の手段を含み、好ましくは１つ以上、より好ましくは２つ以上、より好ましくは３つ以上のそのような手段を含み、それらのそれぞれが、異なる抗体を特異的に捕捉することが可能である。最も好ましい実施形態では、担体は、イカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２、及びイカＴＭを含む群からの１つ又は複数の抗原に対する抗体を特異的に検出する手段を含む。前記手段は、好ましくは前記担体上に固定化される。好ましい実施形態では、抗体を特異的に捕捉する手段は、イカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭ、又はそれらのバリアントを含む群などからの捕捉若しくは検出される抗体が結合する抗原又はそのバリアントを含む、又はそれらからなるポリペプチドである。ポリペプチドは、直鎖ペプチド又は折りたたまれたポリペプチドであり得、後者は、好ましくは、ＣＤ分光法によって決定され得るとおり、天然タンパク質と本質的に同じ折りたたみを適用するバリアントである。好ましい実施形態では、ペプチド又はポリペプチドは、少なくとも７、好ましくは１０、より好ましくは１５個のアミノ酸の捕捉又は検出される抗体に対するエピトープを含む。前記抗原は、付着している不溶性担体と一緒に、試料と接触している反応混合物から、例えば濾過、遠心分離又はデカンテーションなどの単純な様式で分離することができる。

【0040】

本発明による固定化はいずれも、可逆的又は不可逆的様式であり得る。例えば、固定化されるポリペプチドが、高濃度の塩の添加によりマスクされ得るイオン相互作用を介して担体と相互作用する場合、又は、ポリペプチドが、切断可能な共有結合を介して結合される場合、固定化は可逆的である。反対に、そのようなポリペプチドが、水溶液中で切断することができない共有結合を介して担体に拘束されている場合、固定化は不可逆的である。例えば、ポリペプチドに対して親和性を有する抗体又は他の実体を固定化し、続いて該ポリペプチドを添加し、ポリペプチド－抗体複合体を形成することにより、ポリペプチドが間接的に固定化され得る。捕捉された抗体は、標識二次抗体又は検出される抗体を特異的に捕捉する標識された手段を使用して検出され得る。固定化の方法については、Ｗｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｏ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ－Ｌｉｎｋｉｎｇ，１９９１，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，及びＲｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｉ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，第２版，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００５に記載される。

【0041】

好ましい実施形態では、診断的に有用な担体はブロットであり、好ましくはラインブロットである（Ｒａｏｕｌｔ，Ｄ．及びＤａｓｃｈ，Ｇ．Ａ．（１９８９），Ｔｈｅ ｌｉｎｅ ｂｌｏｔ：ａｎ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｓｅｒｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１２５（１－２），５７－６５；ＷＯ２０１３０４１５４０）。好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、「ラインブロット」という用語は、好ましくはそれらのそれぞれがポリペプチドである抗体を特異的に捕捉する１つ又は複数の手段でコーティングされる試験ストリップ、より好ましくはメンブレンに基づくものを指す。２つ以上の手段を使用する場合は、好ましくは、それらは担体上で空間的に分離される。好ましくは、バンドの幅は、試験ストリップの幅の少なくとも３０、より好ましくは４０、５０、６０、７０、又は８０％である。ラインブロットは、それが十分に長くかつ適切な条件下で、特にヒト血清の存在下で、試料又は二次抗体とそれぞれ接触したことを確認する１つ又は複数の対照バンドを含み得る。様々なブロットについては、当技術分野、例えば、ｖａｎ Ｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．及びＲｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ，Ｍ．Ｈ．Ｖ．，Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９４，Ｍａｒｃｅｌｌ Ｄｅｋｋｅｒ，特にＣｈａｐｔｅｒ３５に記載される。

【0042】

好ましい実施形態では、担体は、側方流動イムノアッセイデバイスであり得る。側方流動デバイスは、試料液体が配置される試料パッド、検出される抗体が結合する抗原及びコロイド金などの検出可能な標識を含む下流位置の粒子コンジュゲート、検出される抗体に結合する該粒子コンジュゲートを固定化する手段を有する試験ライン、及び対照ラインを含むメンブレンを含み得る。側方流動イムノアッセイについては、Ｗｏｎｇ，Ｒ．，Ｔｓｅ，Ｈ．Ｌａｔｅｒａｌ Ｆｌｏｗ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００９に記載される。

【0043】

好ましい実施形態では、担体は、ＭＬＣ１及び／若しくはＭＬＣ２、又はそのバリアントを含むポリペプチドが固定化されるセルロース誘導体である。そのような誘導体については、当技術分野、例えば、Ａｄｅｌｅｋｅ，Ｏ．Ａ．Ｐｒｅｍｉｕｍ ｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｐｏｌｙｍｅｒ ｂａｓｅｄ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅｓ ａｔ ｗｏｒｋ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｘ，ｄｏｉ １０．１０１６／ｊ．ｉｊｐｘ．２０１９．１０００２３に記載される。

【0044】

好ましい実施形態では、本発明による二次抗体は、Ｉｇ（免疫グロブリン）クラスの全ての抗体に結合する抗体であり得る。好ましくは、二次抗体は、１つ又は複数の異なるヒト抗体クラス、好ましくはＩｇＥ抗体及び／又はＩｇＧ抗体及び／又はＩｇＭ抗体、好ましくはＩｇＧ抗体及び／又はＩｇＥ抗体、好ましくはＩｇＥ抗体に結合する。二次抗体は、一般的には、前記クラスの定常領域を認識する。広範な二次抗体が市販されており入手可能である。好ましい実施形態では、ＩｇＭクラス抗体、ＩｇＧクラス抗体及びＩｇＥクラス抗体に結合する二次抗体は、ＩｇＭクラス抗体に結合する二次抗体、ＩｇＧクラス抗体に結合する二次抗体及びＩｇＥクラス抗体に結合する二次抗体を含む混合物であり得る。好ましい実施形態では、ＩｇＥクラス抗体及びＩｇＧクラス抗体に結合する二次抗体は、ＩｇＥクラス抗体に結合する二次抗体及びＩｇＧクラス抗体に結合する二次抗体を含む混合物であり得る。二次抗体は、好ましくは標識される。適切な二次抗体は、例えば、ＥＵＲＯＩＭＭＵＮ Ｍｅｄｉｚｉｎｉｓｃｈｅ Ｌａｂｏｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｋａ ＡＧ（「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ」、製品ＥＩ２６０６－９６０１－２又は２２６０－９６０１）、又はＲｏｃｋｌａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．（Ｄｙｌｉｇｈｔ ６０９－１４５－００６）から市販されている。

【0045】

好ましい実施形態では、診断的に有用な担体、より好ましくはラインブロットは、Ｎ－グリカン上のアルファ－１，３－フコースなどの糖タンパク質エピトープに対するＩｇＥ抗体又は類似の抗体の結合による偽陽性結果の同定を可能にするＣＣＤ対照を含む（Ａｌｔｍａｎｎ，Ｆ．（２０１６）Ｃｏｐｉｎｇ ｗｉｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｉｎ ａｌｌｅｒｇｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ａｌｌｅｒｇｏ Ｊ Ｉｎｔ ２５（４），９８－１０５）。これは、糖タンパク質エピトープを含むラインブロットにおける追加ラインであり得、陰性の場合は、他のバンドで偽陰性反応性がないことを示す。多数のラインブロットは、例えば、ＥＵＲＯＩＭＭＵＮ Ｍｅｄｉｚｉｎｉｓｃｈｅ Ｌａｂｏｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｋａ ＡＧ、リューベック、ドイツから市販されている。好ましい実施形態では、本発明による方法は、交差反応性炭水化物エピトープに結合し、そのため偽陽性結果をもたらす抗体の存在又は非存在を検出するステップを含む。他の試験ストリップは、ディップスティックを含む。様々な試験ストリップ及びブロットに基づく担体については、当技術分野、例えば、Ｋｈａｒｅ，Ｒ．，Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， Ｗｉｌｅｙ ２０１９、特にＣｈａｐｔｅｒ１４、及びＦｉｓｃｈｂａｃｈ，Ｆ．Ｔ．，Ｂａｒｎｅｔｔ，Ｍ．，Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｔｅｓｔｓ，第８版，２００９、特にＣｈａｐｔｅｒ３に記載される。

【0046】

別の好ましい実施形態では、診断的に有用な担体はビーズである。炭水化物、例えばセファロース若しくはアガロース、又はプラスチックに主に基づく、多数の用途のための様々なビーズが市販されている。それらは、カルボキシル基又はエステル基などの活性又は活性化可能な化学基を含有し、抗体を特異的に捕捉する手段の固定化に利用することができる。好ましくは、ビーズは、０．１μｍ～１０μｍ、０．５μｍ～８μｍ、０．７５μｍ～７μｍ又は１μｍ～６μｍの平均直径を有するビーズである。ビーズは、直接的に又は親和性リガンドを介して抗体を特異的に捕捉する手段、例えば、ビオチン又はグルタチオン及びストレプトアビジン及びＧＳＴでそれぞれコーティングすることができる。例えば、ビーズはビオチン又はグルタチオンでコーティングされ得、抗原はストレプトアビジン若しくはグルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ又はそのバリアントとそれぞれ融合され得る。好ましくは、ビーズは、１０～９０％、好ましくは２０～８０％、好ましくは３０～７０％、より好ましくは４０～６０％（ｗ／ｗ）のビーズ含有量を有する水性懸濁液の形態で提供される。好ましい実施形態では、ビーズは、第１の検出可能なマーカー、例えば、蛍光染料でコーティングされる。

【0047】

異なるアレルゲンがコーティングされる複数の種類のビーズが使用される場合、各種類は、例えば、フローサイトメトリーでビーズ及びアレルゲンの種類を同定するために、ビーズの種類を区別可能にさせる異なる種類の検出可能なマーカーを有し得る。アレルゲンに対する抗体の存在が蛍光標識を使用して検出される場合、第１の検出可能な標識は、蛍光標識の場合も、例えば緑色及び赤色のレーザーなどの別々のレーザーを使用して両者が区別できるように選択される。

【0048】

特に好ましい実施形態では、ビーズは常磁性ビーズであり、磁石の助力により表面に容易に濃縮させることができる。この目的のために、市販の常磁性ビーズは通常、常磁性鉱物、例えば酸化鉄を含有する。多数の適切な常磁性ビーズが市販されている。ビーズは、検出可能な標識で標識され得る。抗原又は抗体をビーズにコーティングし、それらを診断アッセイに使用する技術は、当技術分野で公知であり、教科書に記載されており、例えば、最新技術に、例えば、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．Ｅ．，Ｄｕｂｅｌ，Ｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，第２版，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ２０１０及びＷｉｌｄ，Ｄ．Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，第３版、２００５，Ｅｌｓｅｖｉｅｒに記載される。

【0049】

別の好ましい実施形態では、担体はマイクロタイタープレートであり、好ましくは、少なくとも８つのウェルを含み、ＥＬＩＳＡに使用できる。少なくとも１つのウェルは、直接的又は間接的のいずれかで抗体を特異的に捕捉する手段でコーティングされる。少なくとも３つ、好ましくは４つ、より好ましくは５つのキャリブレーターが提供され、それらは抗原に対する抗体、好ましくはイカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭ又はそのバリアントを含む群からの１つ又は複数の抗原に対する抗体を規定の濃度で含み、半定量分析用の検量線を設定するために使用することができる。本発明の方法が実施される場合、キャリブレーターは、試料と並行して処理及び発色され得る。酵素活性、化学発光又は蛍光標識などの検出可能な標識を含む二次抗体が提供され得、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ活性又はアルカリホスファターゼ活性を有する標識又は化学発光が可能な酵素が提供され得る。ＥＬＩＳＡ分析を行うためのプロトコル及びコーティングされたマイクロタイタープレートを含む試薬の製造は周知であり、当技術分野、例えば、Ｃｒｏｗｔｈｅｒ，Ｊ．Ｒ．，Ｔｈｅ ＥＬＩＳＡ Ｇｕｉｄｅｂｏｏｋ，２００１，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，特にＣｈａｐｔｅｒ３に記載される。

【0050】

別の好ましい実施形態では、担体は、マイクロアレイである。好ましい実施形態では、本明細書で記載されるとおり、「マイクロアレイ」という用語は、様々な空間的に個別のアレルゲンで、好ましくは少なくとも２０、好ましくは３０、４０、５０、８０又は１００個にスポットされたチップを指す。それらは、追加の軟体動物アレルゲンを含み得、例えば、Ｔｏｎｇ，Ｓ．Ｗ．，Ｙｕｅｎ，Ａ．Ｗ．Ｔ．，Ｗａｉ，Ｃ．Ｙ．Ｙ．，Ｌｅｕｎｇ，Ｎ．Ｙ．Ｈ．，Ｃｈｕ，Ｋ．Ｈ．，Ｌｅｕｎｇ，Ｐ．Ｓ．Ｃ．（２０１８）Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｆｉｓｈ ａｎｄ ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ ａｌｌｅｒｇｉｅｓ，Ｊ．Ａｓｔｈｍａ ａｎｄ Ａｌｌｅｒｇｙ，１１，２４７－２６０；米国特許出願第２０１５／０１５３３５８号及びＭｉｙａｚａｗａ，Ｍ．Ｔ．，Ｆｕｋａｍａｃｈｉ，Ｆ．，Ｉｎａｋａｇｉ，Ｑ．，Ｒｅｅｓｅ，Ｇ．，Ｄａｕｌ，Ｃ．Ｂ．，Ｌｅｈｒｅｒ，Ｓ．Ｃ．Ｉｎｏｕｙｅ，Ｓ及びＳａｋａｇｕｃｈｉ，Ｍ．（１９９６）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９８，９４８－９５３に記載されるものである。マイクロアレイは当技術分野で公知であり、Ｓｃｈｅｎａ，Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ，２００５，Ｊｏｎｅｓ ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔｔに記載される。

【0051】

本発明を実施するために使用される対象由来の試料は、免疫グロブリンとも呼ばれる抗体を含む。通常、試料は、対象の免疫グロブリン全体の代表的なセットを含む体液である。しかしながら、試料は、提供されると、様々なクラスの免疫グロブリンの相対分布に影響し得る、対象の免疫グロブリンの全体又は任意の免疫グロブリンクラス、好ましくはＩｇＥ又はＩｇＧ、好ましくはＩｇＧ４の分画、遠心分離、濃縮又は分離を含み得る、さらなる処置に供され得る。試料は、全血、血清、血漿、脳脊髄液及び唾液を含む群から選択され得、好ましくは血清である。最も好ましい実施形態では、試料はＩｇＥクラス抗体を含む。より好ましい実施形態では、試料は、ＩｇＡクラス、ＩｇＧクラス及びＩｇＥクラス、好ましくはＩｇＧクラス及びＩｇＥクラス、より好ましくはＩｇＧ１クラス、ＩｇＧ４クラス及びＩｇＥクラスからの対象の抗体の代表的なセットを含み、最も好ましくは、様々な抗原に対する抗体の割合は、特にＩｇＥクラスの抗体において、対象から得られるような試料の割合と比較して本質的に変化しない。試料は、抗原への曝露時に抗体を産生することができる動物又はヒトに由来し得、好ましくは哺乳動物、より好ましくは霊長類、最も好ましくはヒト対象である。対象は実験動物であってもよく、好ましくはマウス、ラット、ウサギ、ハムスター、ニワトリ、ヤギ、霊長類又はウマを含む群からのものであり、より好ましくはげっ歯類である。この方法及び試薬は、例えば、ワクチン又は薬物候補を開発する目的のために、又は抗血清産生のために、実験動物が成功裡に免疫化されたかを試験するために使用され得る。

【0052】

本発明の教示は、本出願において、例えば、関数、名前、配列、受託番号を明示的に、或いは暗黙的に参照する正確な配列を持つポリペプチドを使用して実施されることだけでない可能性があり、そのようなポリペプチドのバリアントもまた使用して実施される可能性がある。

【0053】

好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、「バリアント」という用語は、参照される完全長配列の少なくとも１つの断片を指し得、より具体的には、完全長配列に対して、１つ又は両方の末端において１つ又は複数のアミノ酸がトランケートされた１つ又は複数のアミノ酸配列又は核酸配列を指し得る。そのような断片は、元の配列又はそのバリアントの少なくとも６、７、８、９、１０、１５、２５、５０、７５、１００、１１０、１２０、又は１３０個の連続したアミノ酸を有するペプチドを含む、又はコードする。バリアントの全長は、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００又は２５０以上のアミノ酸であり得る。

【0054】

別の好ましい実施形態では、「バリアント」という用語は、少なくとも１つの断片を指すだけでなく、アミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片にも関し、断片は、好ましくは少なくとも２５、より好ましくは５０、より好ましくは１００個の連続したアミノ酸を含み、それらは、参照される参照アミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも４０、５０、６０、７０、７５、８０、８５、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％が同一であり、生物活性、例えば目的の抗体に特異的に結合する能力、又はポリペプチドの折りたたみ、又は構造に必須のアミノ酸以外のアミノ酸が欠損又は置換される、及び／又は１つ若しくは複数のそのような必須アミノ酸が保存的様式で置換される、及び／又はポリペプチドの生物活性が少なくとも部分的に保存されるように、アミノ酸が付加又は欠損される。最新技術は、２つの所与の核酸又はアミノ酸配列を整列させ、同一性の程度を計算するために使用できる様々な方法を含む。例えば、Ａｒｔｈｕｒ Ｌｅｓｋ（２００８），Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２００８，第３版を参照。好ましい実施形態では、ＣｌｕｓｔａｌＷソフトウェア（Ｌａｒｋｉｎ，Ｍ．Ａ．，Ｂｌａｃｋｓｈｉｅｌｄｓ，Ｇ．，Ｂｒｏｗｎ，Ｎ．Ｐ．，Ｃｈｅｎｎａ，Ｒ．、ＭｃＧｅｔｔｉｇａｎ，Ｐ．Ａ．，ＭｃＷｉｌｌｉａｍ，Ｈ．，Ｖａｌｅｎｔｉｎ，Ｆ．、Ｗａｌｌａｃｅ，Ｉ．Ｍ．，Ｗｉｌｍ，Ａ．，Ｌｏｐｅｚ，Ｒ．，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｇｉｂｓｏｎ，Ｔ．Ｊ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．（２００７）：Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ ａｎｄ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２３，２９４７－２９４８）がデフォルト設定を適用するために使用される。

【0055】

好ましい実施形態では、バリアントはさらに、化学修飾、例えば、同位体標識又は検出可能な標識などの標識、又はグリコシル化、リン酸化、アセチル化、脱炭酸化、シトルリン化、ヒドロキシル化などの共有結合修飾を含み得る。当業者は、ポリペプチドの修飾の方法に精通している。さらに、バリアントはまた、他の既知のポリペプチド又はそのバリアント、好ましくは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍポリペプチド、アフィニティータグ、他の抗原などから誘導されない、例えば、人工リンカーとの融合によっても生成され得る。

【0056】

本発明によれば、診断的に有用な担体などの医療デバイス又は診断デバイスは、アフィニティータグを含む組換えバリアント（任意選択的に、プロテアーゼ切断部位を含み得る人工リンカーを有する）を真核細胞又は原核細胞などの細胞において発現させ、発現したバリアントをアフィニティータグに特異的に結合するリガンドと接触させ（そのリガンドは固相に固定化される）、非特異的に結合した細胞由来の物質が除去されるように固相を洗浄し、発現したバリアントを、好ましくは過剰の非固定化リガンドを加えることにより、固相から溶出することによって調製され得る。次いで、バリアントはデバイス上で固定化され得る。任意選択的に、固定化前に、バリアントをプロテアーゼ、好ましくはプロテアーゼ切断部位を認識するプロテアーゼと接触することにより、アフィニティータグが除去され得る。アフィニティータグは、１８Ａ、ＡＣＰ、アルデヒド、Ａｖｉ、ＢＣＣＰ、カルモジュリン、キチン結合タンパク質、Ｅ－Ｔａｇ、ＥＬＫ１６、ＦＬＡＧ、フラッシュ、ポリグルタミン酸塩、ポリアスパラギン酸塩、ＧＳＴ、ＧＦＰ、ＨＡ、Ｉｓｏｐｅ、マルトース結合タンパク質、ｍｙｃ、ｎｕｓ、ＮＥ、ＰｒｏｔＡ、ＰｒｏｔＣ、Ｔｈｏ１ｄ４、Ｓ－Ｔａｇ、ＳｎｏｏｐＴａｇ、ＳｐｙＴａｇ、ＳｏｆＴａｇ、ストレプトアビジン、Ｓｔｒｅｐ－ｔａｇ ＩＩ、Ｔ７ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｔａｇ、ＴＡＰ、ＴＣ、チオレドキシン、Ｔｙ、Ｖ５、ＶＳＶ及びＸｐｒｅｓｓ Ｔａｇを含むタグの群から選択され得る。有用なプロテアーゼは、ＴＥＶ、トロンビン、Ｆａｋｔｏｒ Ｘａ又はエンテロペプチダーゼを含むが、これらに限定されない。

【0057】

好ましい実施形態では、真核細胞は、昆虫細胞又は哺乳動物細胞であり、より好ましくは哺乳動物細胞であり、最も好ましくはヒト細胞である。不死化人工細胞株は、任意のタンパク質の産生に使用され得、例えばＣＨＯ又はＨＥＫ２９３である。

【0058】

ポリペプチドのバリアントは、生物活性を有する。好ましい実施形態では、そのような生物活性とは、それぞれの抗体に結合する能力である。好ましい実施形態では、ポリペプチドのバリアントは、好ましくは魚介類アレルギー、より好ましくはイカアレルギーに罹患している患者の試料からのそれぞれの抗体に結合する能力を持つエピトープを含み、より好ましくは、エピトープは、好ましくはイカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭを含む群から選択される抗原の少なくとも５、６、７又は８個のアミノ酸残基を含む配列を含む。より具体的には、イカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭのバリアントは、魚介類アレルギー、より好ましくはイカアレルギーに罹患している患者からの試料由来の抗体に結合する抗体に特異的に結合する、又は特異的に捕捉する能力を有する。

【0059】

好ましい実施形態では、診断的に有用な担体は、ポリペプチド、より好ましくは、甲殻類ＭＬＣ、甲殻類筋形質カルシウム結合タンパク質、甲殻類ＴＭ、甲殻類トロポニンＣ、甲殻類アルギニンキナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ハウスダストダニアレルゲン（好ましくは、Ｄｅｒ ｆ １、Ｄｅｒ ｆ ２、Ｄｅｒ ｆ ３、Ｄｅｒ ｆ ４、Ｄｅｒ ｆ ６、Ｄｅｒ ｆ ７、Ｄｅｒ ｆ ８、Ｄｅｒ ｆ １０、Ｄｅｒ ｆ １１、Ｄｅｒ ｆ １３、Ｄｅｒ ｆ １４、Ｄｅｒ ｆ １５、Ｄｅｒ ｆ １６、Ｄｅｒ ｆ １７、Ｄｅｒ ｆ １８、Ｄｅｒ ｆ ２０、Ｄｅｒ ｆ ２１、Ｄｅｒ ｆ ２２、Ｄｅｒ ｆ ２３、Ｄｅｒ ｆ ２４、Ｄｅｒ ｆ ２５、Ｄｅｒ ｆ ２６、Ｄｅｒ ｆ ２７、Ｄｅｒ ｆ ２８、Ｄｅｒ ｆ ２９、Ｄｅｒ ｆ ３０、Ｄｅｒ ｆ ３１、Ｄｅｒ ｆ ３２、Ｄｅｒ ｆ ３３、Ｄｅｒ ｆ ３４、Ｄｅｒ ｆ ３５、Ｄｅｒ ｆ ３６、Ｄｅｒ ｆ ３７、Ｄｅｒ ｆ ３８、Ｄｅｒ ｆ ３９、Ｄｅｒ ｍ １、Ｄｅｒ ｐ １、Ｄｅｒ ｐ ２、Ｄｅｒ ｐ ３、Ｄｅｒ ｐ ４、Ｄｅｒ ｐ ６、Ｄｅｒ ｐ ７、Ｄｅｒ ｐ ８、Ｄｅｒ ｐ １０、Ｄｅｒ ｐ １１、Ｄｅｒ ｐ １３、Ｄｅｒ ｐ １４、Ｄｅｒ ｐ １５、Ｄｅｒ ｐ １８、Ｄｅｒ ｐ ２０、Ｄｅｒ ｐ ２１、Ｄｅｒ ｐ ２３、Ｄｅｒ ｐ ２４、Ｄｅｒ ｐ ２５、Ｄｅｒ ｐ ３６、Ｄｅｒ ｐ ３７、Ｄｅｒ ｐ ３８、Ｄｅｒ ｐ ３９、Ｅｕｒ ｍ １、Ｅｕｒ ｍ ２、Ｅｕｒ ｍ ３、Ｅｕｒ ｍ ４、Ｅｕｒ ｍ １４を含む群から選択される）、ゴキブリアレルゲン（好ましくは、Ｂｌａ ｇ １、Ｂｌａ ｇ ２、Ｂｌａ ｇ ３、Ｂｌａ ｇ ４、Ｂｌａ ｇ ５、Ｂｌａ ｇ ６、Ｂｌａ ｇ ７、Ｂｌａ ｇ ８、Ｂｌａ ｇ ９、Ｂｌａ ｇ １１、Ｐｅｒ ａ １、Ｐｅｒ ａ ２、Ｐｅｒ ａ ３、Ｐｅｒ ａ ５、Ｐｅｒ ａ ６、Ｐｅｒ ａ ７、Ｐｅｒ ａ ９、Ｐｅｒ ａ １０、Ｐｅｒ ａ １１、Ｐｅｒ ａ １２、Ｐｅｒ ａ １３を含む群から選択される）を含む群からのポリペプチドに対する抗体を特異的に捕捉する１つ又は複数のさらなる手段を含み、該甲殻類タンパク質は、好ましくは、エビタンパク質であり、最も好ましくは、Ｐｅｎ ｍ １（トロポミオシン）、Ｐｅｎ ｍ ２（アルギニンキナーゼ）、Ｐｅｎ ｍ ３（ミオシン軽鎖）、Ｐｅｎ ｍ ４（筋形質カルシウム結合タンパク質）、Ｃｒａ ｃ ６（トロポニンｃ）及びＣｒａ ｃ ８（トリオースリン酸イソメラーゼ）を含む群から選択される。

【0060】

エビアレルゲンのエピトープを含む包括的な情報は、Ｐａｓｃａｌ，Ｍ．，Ｇｒｉｓｈｉｎａ，Ｇ．，Ｙａｎｇ，Ａ．Ｃ．，Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｇａｒｃｉａ，Ｓ．，Ｌｉｎ，Ｊ．，Ｔｏｗｌｅ，Ｄ．，Ｉｂａｎｅｚ，Ｍ．Ｄ．，Ｓａｓｔｒｅ，Ｊ．，Ｓａｍｐｓｏｎ，Ｈ．Ａ．及びＡｙｕｓｏ，Ｒ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｓｈｒｉｍｐ Ａｌｌｅｒｇｙ：Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ Ｓｅｖｅｒａｌ Ａｌｌｅｒｇｅｎｓ ｔｏ Ｐｒｅｄｉｃｔ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｐｒａｃｔ．，５２１－５２９ｅ１０に見出すことが可能であり、参照により本明細書の一部をなすものとする。

【0061】

ＭＬＣアレルゲンのエピトープは、Ｚｈａｎｇら（Ｚｈａｎｇ，Ｙ．Ｘ．，Ｃｈｅｎ，Ｈ．Ｌ．，Ｍａｌｅｋｉ，Ｓ．Ｊ．，Ｃａｏ，Ｍ．Ｊ．，Ｚｈａｎｇ，Ｌ．Ｊ．，Ｓｕ，Ｗ．Ｊ．及びＬｉｕ，Ｇ．Ｍ．（２０１５）Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｃｈａｒａｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｍｙｏｓｉｎ Ｌｉｇｈｔ Ｃｈａｉｎ ｉｎ Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉｉ（２０１５）Ｊ．Ａｇｒ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，６３，６２７１－６２８２）によって調査されている。配列Ｘのバリアントが必要な場合、当業者は、配列Ｘから開始し、点変異、トランケーションなどの改変を導入し、その後に前記バリアントがそのような試料の抗体に結合するかどうかを試験することで前記バリアントが生物活性をなお有することを確認することによって、生物活性を有するバリアントを設計することが可能である。

【0062】

当業者は、イカＭＬＣ１抗原のエピトープが、ＧＧＴＫＫＭＧＥ（配列番号１８）、ＳＳＫＤＴＧＴＡ（配列番号１９）、及びＤＲＥＧＱ（配列番号２０）及びそれらのバリアントを含み得ると考えてよい。

【0063】

配列ＧＧＴＫＫＭＧＥＫＡＹＫＬＥＥＩＬＰＩＹＥＥＭＳＳＫＤＴＧＴＡＡＤＥＦＭＥＡＦＫＴＦＤＲＥＧＱ（配列番号２１）及びそのバリアントもまた、抗原性が高い。

【0064】

当業者は、イカＭＬＣ２抗原のエピトープが、ＡＬＲＮＡＦＳＭＦＤ（配列番号３０）、より好ましくは、ＮＡＦＳＭＦ（配列番号３１）、ＦＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４２）、より好ましくは、ＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４３）及びＦＳＫＥＥＩＫＮＶＷＫＤ（配列番号５１）を含むと考えられ得る。

【0065】

エビＭＬＣアレルゲンのエピトープについては、Ｐａｓｃａｌら、２０１５年に記載される。当業者は、イカＴＭのエピトープが、ＤＥＳＥＲＧＲＫＶＬＥＮＲＳＱＧＤＥＥＲ（配列番号２６）、ＩＤＬＬＥＫＱＬＥＥＡＫＷＩＡＥＤＡＤＲ（配列番号２７）、ＫＦＤＥＡＡＲＫＬＡＩＴＥＶＤＬＥＲＡＥＡＲＬＥ（配列番号２８）、ＫＥＶＤＲＬＥＤＥＬＬＡＥＫＥＲＹＫＴＩＳＤＥＬＤＱＴＦＡＥＬＡＧＹ（配列番号２９）及びそれらのバリアントを含むと考えられ得る。

【0066】

そのため、本発明によるバリアントは、そのようなエピトープを含むポリペプチド及びペプチドを含む。好ましい実施形態では、配列番号１０で示されるＭＬＣ２のバリアントは、配列番号３０、配列番号４２、及び配列番号５１を含む群から１つ又は複数、好ましくは全てを含み、好ましくは、配列番号４３及び配列番号３１を含む群から選択される一方又は両方を含むペプチド又はポリペプチドを含む。より好ましい実施形態では、バリアントは、配列番号１０の少なくとも５、６、７、８、９、１０、１２又は１５個のアミノ酸の伸長を含むアミノ酸配列を含み、該伸長は、配列番号３０、配列番号４２及び配列番号５１を含む群からの１つ又は複数、好ましくは全てを含み、好ましくは配列番号４３及び配列番号３１を含む群から選択される一方又は両方を含む。実施例２に記載される結果は、ＭＬＣ２のバリアントを設計する場合、当業者を導くために役立つであろう。

【0067】

好ましい実施形態では、抗体を特異的に捕捉する手段としてバリアントを含むラインブロットアッセイは、好ましくは実施例に記載のとおり、バリアントがそのような活性を有するかどうかを試験するために使用することができる。バリアントはまた、抗原配列部への特異的な結合活性を有しない、及び／又は他の配列部に結合しない限り、Ｎ末端及び／又はＣ末端ペプチド又はポリペプチド融合も含み得、したがって、その結合特性が大幅に変化するように、及び／又は抗体にもはや結合できないように、抗原配列をマスキングする。

【0068】

ポリペプチドは、内因性形態の前記ポリペプチドを含む組織、体液又は細胞、より好ましくは該ポリペプチドを過剰発現する細胞、そのような細胞の粗製溶解物又は濃縮溶解物から、本質的に純粋であり得る精製及び／又は単離されたポリペプチドへと、任意の形態及び任意の精製度で提供され得る。好ましい実施形態では、ポリペプチドは天然ポリペプチドであり、本明細書で使用されるとおり、「天然ポリペプチド」という用語は、折りたたまれたポリペプチド、より好ましくは細胞、より好ましくは原核生物又は真核生物、好ましくは哺乳動物細胞から精製される折りたたまれたポリペプチドを指す。ポリペプチドのグリコシル化形態が使用され得る。

【0069】

本発明によれば、ポリペプチドは組換えタンパク質であり得、本明細書で使用されるとおり、「組換え」という用語は、産生プロセスの任意の段階で遺伝子工学的アプローチを使用して、例えば、ポリペプチドをコードする核酸を細胞又は組織における過剰発現のための強力なプロモーターに融合する、又はポリペプチド自体の配列を操作することによって産生されるポリペプチドを指す。当業者は、コードされる核酸及びポリペプチドを操作する方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．及びＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，ＣＳＨ ｏｒ ｉｎ Ｂｒｏｗｎ Ｔ．Ａ．（１９８６），Ｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ－ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈａｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌに記載される）、及び天然又は組換えポリペプチドを産生及び精製する方法（例えば、ハンドブック「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓによる出版、及びＢｕｒｇｅｓｓ，Ｒ．Ｒ．，Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍ．Ｐ．（２００９）：Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）に精通している。別の好ましい実施形態では、ポリペプチドは、単離されたポリペプチドであり、「単離される」という用語は、ポリペプチドがバイオテクノロジー又は合成アプローチを使用する産生時のその状態と比較して濃縮され、好ましくは純粋である、すなわち、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動と、それに続くクマシーブルー染色及び目視試験によって判断されるとおり、前記ポリペプチドからなるそれぞれの液体において、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、又は９９パーセントの該ポリペプチドであることを意味する。好ましくは、抗体を捕捉する手段として使用される担体上のいずれのポリペプチドも、純粋である。

【0070】

本発明の教示は、好ましくは、魚介類アレルギーの診断のためのキットを提供する。そのようなキットは、本発明の方法を実施するために必要な特定の試薬、特に本発明による診断的に有用な担体、さらに、任意選択的に、本発明の方法を実施するために必要な１つ若しくは複数の溶液又は試薬（好ましくは、試料希釈緩衝液、洗浄緩衝液、及び任意の特異的に捕捉される抗体を検出する手段又は試薬を含む緩衝液（例えば、検出可能な標識を含み得る二次抗体、及び任意選択的に後者を検出する手段）を含む群から、又は群の全てから選択される）を含む容器である。さらに、キットは、キットの使用方法を詳しく説明する説明書を含み得る。キットは、本発明のポリペプチドを、対象、好ましくはヒト対象からの体液試料と接触させるための診断的に有用な担体、例えばラインブロットを含み得る。さらに、キットは、陽性対照、例えば、イカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２、及びイカＴＭ、並びにそのバリアントを含む群からの１つ又は複数に結合することが公知である組換え抗体又はポリクローナル抗体、及び陰性対照、例えば、ウシ血清アルブミンなどのイカＭＬＣ１又はイカＭＬＣ２又はイカＴＭとの検出可能な親和性を有しないタンパク質を含み得る。陽性対照は、イカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及び／又はイカＴＭに対する抗体、好ましくはＩｇＧ４などのＩｇＥ又はＩｇＧを含む患者からの希釈試料であり得る。最後に、そのようなキットは、キャリブレーターとも呼ばれる１つ又は複数の標準溶液を含み得、イカＭＬＣ１に結合する抗体、イカＭＬＣ２に結合する抗体、及びイカＴＭに結合する抗体、並びにキットに含有されるイカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭ又はそのバリアントを含む群からの抗原を含むポリペプチドに結合する抗体を含む群からの１つ又は複数の抗体を含み、例えば、検量線を調製するために診断的に有用な担体上で固定化され、好ましくは各標準溶液中の抗体の絶対濃度又は相対濃度は既知である。標準溶液の濃度は、検量線に濃度範囲がカバーされるように異なり得る。例えば、２つの標準溶液中の抗体の相対濃度は、１：２、１：５、１：１０、１：２０、１：５０、１：１００又はそれ以上であり得る。より好ましい実施形態では、抗体は、定常領域若しくはそのバリアントを有し、又は検出される抗体のように二次抗体への結合親和性を有し、及び／又は検出に使用されるいずれの二次抗体も前記抗体及び検出される抗体に結合する。抗体は、ヒトＩｇＥ又はＩｇＧクラス抗体、好ましくはＩｇＧ４クラス抗体、より好ましくはＩｇＥクラス抗体に結合する二次抗体に結合するモノクローナル抗体、好ましくはヒトＩｇＥ又はＩｇＧ定常領域、好ましくはＩｇＧ４定常領域、より好ましくはＩｇＥ定常領域又はそのバリアントを含むハイブリッドであり得る。キットは、イカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭ又はそのバリアントを含む群からの抗原を含む本発明によるポリペプチド、又は精製ポリペプチドを含み得、ポリペプチドは任意選択的に検出可能な標識を含む。キットはまた、洗浄溶液も含み得る。キットは、反応緩衝液などの他の液体が存在する場合に、試料と診断的に有用な担体を接触させるために適切な防水容器を含み得る。例えば、ラインブロットは、インキュベーショントレイ内に又はそれと組み合わせて提供されてもよく、又はマイクロタイタープレートが提供されてもよい。適切な容器は、例えば、ＥＰ３０２５７８０又はＥＰ３０２５７７９の最新技術に記載される。キットは、本発明による方法、例えば第８の態様による方法を実施するための試薬を含有し得る。キャリブレーター及びそれらの使用については、Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第３版、Ｄａｖｉｄ Ｗｉｌｄ著、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ ２００５、特にＣｈａｐｔｅｒ９に記載される。

【0071】

本発明によれば、捕捉される抗体を検出する手段又は試薬又はポリペプチドが、イカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭを含む群からの１つ又は複数に対し捕捉される抗体を検出するために提供され得る、又は使用され得る。この手段又は試薬又はポリペプチドは、目的のクラスの抗体の定常領域に結合する二次抗体又はその断片若しくはバリアントであり得る。例えば、捕捉されたヒトＩｇＧ４クラス抗体などのヒトＩｇＥ又はＩｇＧクラス抗体が検出される場合、ヒトＩｇＧ４クラス抗体などのヒトＩｇＥ又はＩｇＧクラス抗体の定常領域に特異的に結合する抗体が、それぞれ使用され得る。抗体は、好ましくはそのようなクラスの定常領域に特異的に結合するモノクローナル抗体であり、それらの可変領域によって決定されるようなそれらの結合特異性に関係なく、溶液中のそのクラスの全ての抗体を捕捉するために使用でき、例えば、Ｂｅｒｌｉｎａ，Ａ．Ｎ．，Ｔａｒａｎｏｖａ，Ｎ．Ａ．，Ｚｈｅｒｄｅｖ，Ａ．Ｖ．，Ｓａｎｋｏｖ，Ｍ．Ｎ．，Ａｎｄｒｅｅｖ，Ｉ．Ｖ．，Ｍａｒｔｙｎｏｖ，Ａ．Ｉ及びＤｚａｎｔｉｅｖ，Ｂ．Ｂ．（２０１３）Ｑｕａｎｔｕｍ－Ｄｏｔ－Ｂａｓｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ａｓｓａｙ ｆｏｒ Ｔｏｔａｌ ＩｇＥ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ． ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（１０）：ｅ７７４８５．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００７７４８５に記載される供給元から市販されている。該手段又は試薬は、直接的又は間接的に標識され得る。

【0072】

好ましい実施形態では、手段又は試薬又は抗体のいずれの結合又は検出又は捕捉、好ましくは検出される抗体のＭＬＣ１又はＭＬＣ２、好ましくはＭＬＣ２などの抗原への結合は、特異的に結合するという意味を含み、好ましくは、例えば手段と捕捉された抗体との間の結合反応が、ｐＨ ７のＰＢＳ緩衝液中で２５℃にて、Ｂｉａｃｏｒｅ装置を使用した表面プラズモン共鳴により測定されるとおり、１ｘ１０^－５Ｍ、より好ましくは１ｘ１０^－７Ｍ、より好ましくは１ｘ１０^－８Ｍ、より好ましくは１ｘ１０^－９Ｍ、より好ましくは１ｘ１０^－１０Ｍ、より好ましくは１ｘ１０^－１１Ｍ、より好ましくは１ｘ１０^－１２Ｍの解離定数を特徴とする結合反応よりも強いことを意味する。

【0073】

本発明による方法又は製品は、アレルギー、好ましくは魚介類アレルギー、より好ましくはイカアレルギーの診断に使用され得る。好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、「診断」という用語は、患者が平均対象又は比較対象より（後者は好ましくは同様の症状を有する）、過去に、診断時に、若しくは将来にアレルギーに罹患している若しくは可能性が高い若しくはより可能性が高いかどうかの評価に役立つ情報を得ること、どのようにアレルギーが進行する若しくは将来に進行する可能性が高いかを調べること、又は治療に関して患者の反応性を評価すること、又はアレルギーに罹患している対象の治療において化合物の有効性を測定することを目的とするあらゆる種類の手順を指す。言い換えれば、「診断」という用語は、診断するだけでなく、疾患又は障害の経過を予測する及び／又は監視することも含む。本発明によるポリペプチドに対する抗体の検出により示されるイカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭを含む群から選択される少なくとも１つの抗原に対する抗体が、対象由来の試料中に検出される場合、この対象はアレルギーに罹患している可能性が高い、又は可能性がより高い。

【0074】

したがって、「診断」という用語は、好ましくは、本発明による診断の方法又は製品が、パラメータはもちろん、単一の試験に基づく診断を完了するのに最終的かつ十分であるという意味を含むものではなく、「鑑別診断」と呼ばれるものへの寄与、すなわち、一連の診断パラメータに基づく一連の考え得る状態の可能性を考慮する系統的診断手順を指し得る。好ましい実施形態では、「診断」という用語は、方法又は製品又は使用が、アレルギーの診断を補助する、又はアレルギーに罹患するリスクを対象に特定するために使用され得ることを意味する。「診断」という用語はまた、患者にとって最も有望な治療計画を選択するために使用される方法又は薬剤も指し得る。アレルギーは、魚介類アレルギーであり得、本明細書で使用されるとおり、「魚介類」という用語は、好ましくは、甲殻類及び軟体動物、好ましくは軟体動物、好ましくはイカを指す。本発明によれば、甲殻類、好ましくはエビに対するアレルギーは、軟体動物、好ましくはイカに対するアレルギーと区別され得る。

【0075】

本発明は、液体において、例えば、対象由来の試料においてイカＭＬＣ１に対する抗体、イカＭＬＣ２に対する抗体及びイカＴＭに対する抗体を含む群から選択される抗体の存在又は非存在を検出するステップを含む方法に関する。そのような方法は、ａ）液体を提供するステップ、ｂ）診断的に有用な担体及び抗体、より具体的にはポリペプチド及び抗体を含む複合体の形成に適合する条件下で、該液体をイカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭを含む群からのポリペプチドと接触させるステップ、ｃ）任意選択的に、例えば、該液体を除去することにより、任意の前記複合体を単離するステップ、ｄ）任意選択的に、前記複合体を洗浄するステップ、及びｅ）任意選択的に、競合アッセイ形式の場合に標識され得るイカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭを含む群から選択されるそれぞれの抗原と接触させた後に前記複合体を検出するステップを含み得る。この方法は、好ましくはインビトロでの方法である。

【0076】

本発明による予後予測、診断、方法又はキットのための抗体又は複合体の検出は、免疫拡散技術、免疫電気泳動技術、光散乱イムノアッセイ、凝集技術、標識イムノアッセイ（放射性標識イムノアッセイ、比色アッセイなどの酵素イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイ及び免疫蛍光技術を含む群のものなど）を含む群から選択される方法の使用を含む。当業者は、これらの方法に精通しており、これらはまた、最新技術、例えば、Ｚａｎｅ，Ｈ．Ｄ．（２００１）：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｉｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ、特にＣｈａｐｔｅｒ１４に記載される。好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、抗体の「存在」という用語は、そのような方法、好ましくは酵素イムノアッセイ、より好ましくは比色アッセイ又は化学発光イムノアッセイ、最も好ましくは、実施例に記載されるとおりアルカリホスファターゼ活性を使用するラインブロット及び検出に基づく比色アッセイを含む群から選択される方法を使用して、抗体が検出可能であることを意味する。

【0077】

多くの場合において、検出することは、好ましくは抗体の存在又は非存在を検出することを意味し、任意選択的に、液体において、抗体の濃度が、好ましくはＥＬＩＳＡを使用する測定により規定された一定の閾値を超えているかどうかを決定することを意味し、それは診断に十分である。１つ又は複数の抗体、好ましくはイカＭＬＣ１に対する抗体、イカＭＬＣ２に対する抗体、及びイカＴＭに対する抗体を含む群からの抗体を検出することができる場合には、これは臨床医の診断に役立つ情報となり、患者がアレルギーに罹患している可能性の増加を示す。好ましい実施形態では、平均的な健康な対象で見られ得るレベルと比較した、血清中の抗体の相対濃度が測定され得る。また、イカ抗原、好ましくはイカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及び／又はイカＴＭに対する１つ又は複数の抗体の相対濃度が、エビアレルゲン、好ましくはエビＭＬＣ１、エビＭＬＣ２及び／又はエビＴＭに対する１つ又は複数の抗体の相対濃度よりも高い場合は、患者がエビアレルギーよりもイカアレルギーに罹患している可能性が高いことを示し得る。好ましい実施形態では、本明細書で使用されるとおり、「存在の検出」という用語は、目的の抗体が存在する、又は目的の抗体が健康な対象で存在するよりも多く存在することを示す適切な複合体検出方法を使用して、任意のバックグラウンドレベルを十分に超えてシグナルが検出され得るかどうかを調べるのに十分であることを意味する。

【0078】

好ましい実施形態では、イカＭＬＣ１に対する抗体、イカＭＬＣ２に対する抗体、及びイカＴＭに対する抗体を含む群から選択される２つ以上の抗体の存在又は非存在が同時に、すなわち、同じ時間に検出される。

【0079】

好ましい実施形態では、イカＭＬＣ１に対する抗体、イカＭＬＣ２に対する抗体、及びイカＴＭに対する抗体を含む群から選択される２つ以上の抗体の存在又は非存在が、空間的に別個の反応、より好ましくは、別個の容器の異なる反応混合物中で検出される。

【0080】

好ましい実施形態では、イカＭＬＣ１に対する抗体、イカＭＬＣ２に対する抗体、及びイカＴＭに対する抗体を含む群から選択される２つ以上の抗体が検出される。より好ましい実施形態では、これは、これらの抗体の少なくとも１つが存在するかだけでなく、これらの抗体のどの抗体が存在するかも検出されることを意味する。言い換えれば、これらの抗体のどの抗体が試料中に存在するかを区別することができる。

【0081】

好ましい実施形態では、本発明は、アレルギーの診断のキットの製造のための、イカＭＬＣ１に対する抗体、イカＭＬＣ２に対する抗体、及びイカＴＭに対する抗体を含む群から選択される１つ又は複数の抗体の検出のための試薬若しくは手段若しくはポリペプチド；又はそのような１つ又は複数の抗体に結合する試薬；又は、イカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２若しくはイカＴＭ又はそのバリアントをコードする核酸；又はストリンジェントな条件下で、前記核酸に特異的にハイブリダイズする核酸；又は前記核酸を含むベクター若しくは細胞の使用を提供する。好ましい実施形態では、前記ベクターを含む細胞が核酸の発現を可能にする条件下で用意及び培養され、次いでイカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２若しくはイカＴＭ又はそのバリアントであり得る発現産物を単離し、次いで本発明による方法又は製品において抗体を特異的に捕捉する手段として発現産物を使用する。

【0082】

別の好ましい実施形態では、方法は、抗体検出アッセイの信頼性を確認するためのものであってよく、患者からの試料ではなく、（好ましくは既知の濃度の）イカアレルゲンに対する抗体を含むことが既知である溶液中のイカＭＬＣ１に対する抗体、イカＭＬＣ２に対する抗体、及びイカＴＭに対する抗体を含む群からのイカアレルゲンに対する抗体を検出するステップを含み得る。或いは、溶液は、バックグラウンドを調べるための抗体を含まない陰性対照であり得る。そのような方法は、診断の方法に並行して、又は前後に実施され得る。

【0083】

好ましい実施形態では、本発明は、抗体が、好ましくは、イカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２、及びイカＴＭに対する抗体を含む群から選択され、より好ましくは前記群からの全ての抗体であり、
ａ． 担体、これは試料が該担体に接触するときに、試料からの少なくとも１つの抗体を捕捉する手段を含む、
ｂ． 検出可能な手段が担体に接触するときに、担体によって捕捉された抗体に結合することができる検出可能な手段、特に、該検出可能な手段は、担体上に捕捉された抗体に結合することができる標識二次抗体である、
ｃ． 任意選択的に、担体及び検出可能な手段から任意の試料を、好ましくは洗浄により除去する手段、
ｄ． 検出可能な手段の存在を検出し、結果を電気シグナルに変換するための検出デバイス、及び
ｅ． 任意選択的に、検出デバイスから電子シグナルを受信し、バックグラウンドで検出されたシグナルのレベルとの比較、又は健康な対象由来の試料で得られた入力参照値との比較によって、シグナルのレベルがイカアレルギーの可能性の増加、特にエビアレルギーよりイカアレルギーの可能性が高いことを示しているかを測定する手段、
を含む、アレルギーの可能性の増加を示す１つ又は複数の抗体を検出するための患者からの試料を分析する装置を提供する。

【0084】

本発明は、任意選択的に１つ又は複数のさらなる魚介類抗原と組み合わせて、イカＭＬＣ１、イカＭＬＣ２及びイカＴＭ又はそのバリアントを含む群から選択される１つ又は複数の抗原を含む医薬組成物、好ましくはワクチン、を提供し、該組成物は、好ましくは、対象、好ましくは哺乳動物対象、より好ましくはヒトへの投与に適する。そのような医薬組成物は、薬学的に許容できる担体を含み得る。医薬組成物は、例えば、経口的に、非経口的に、吸入スプレーにより、局所的に、点眼剤により、直腸内に、経鼻的に、頬側に、経膣的に、又は移植されたリザーバーを介して投与され得ろ。ここで、本明細書で記載されるとおり、「非経口的」という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内及び頭蓋内への注射又は注入技術を含む。医薬組成物は、適切な剤形、例えば、好ましくは無菌形態の、カプセル、錠剤及び水性懸濁液及び溶液で提供され得る。医薬組成物は、疾患の治療方法、好ましくはアレルギーの治療方法で使用され得、該方法は、有効量の本発明のポリペプチドを対象に投与することを含む。抗原の低アレルギー性バリアントが使用され得る。当業者は、既知のアレルゲンの低アレルギー性バリアントを生成する方法に精通している。医薬組成物は、例えばＰＢＳに基づく無菌液体溶液であり得、注射用であり得る。そのような医薬組成物及びバリアントの生成は、当技術分野で、例えば、Ｃｕｒｉｎら、（２０１８）Ｎｅｘｔ－Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｅｎ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｉｅｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ，Ｃｕｒｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ａｓｔｈｍａ Ｒｅｐ．１８，３９（２０１８）、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ１１８８２－０１８－０７９０－ｘ、又はＶａｃｃｉｎｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｌｅｒｇｉｅｓ Ｖａｌｅｎｔａ及びＣｏｆｆｍａｎ著、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ２０１１に記載される。

【0085】

本発明によれば、イカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２又はそのバリアントを含むポリペプチドに特異的に結合する抗体が、好ましくは抗体が単離されて提供され得る。そのような抗体は、陽性対照又はキャリブレーターとして使用され得るだけでなく、抗体試験の競合アッセイ又はサンドイッチアッセイなどの様々なアッセイ形式において使用され得、検出される抗体を含む複合体、イカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２又はそのバリアントを含むポリペプチド、及びイカＭＬＣ１又はイカＭＬＣ２を含むポリペプチドに特異的に結合する抗体が検出される。より好ましくは、提供される抗体は、ＡＬＲＮＡＦＳＭＦＤ（配列番号３０）、より好ましくは、ＮＡＦＳＭＦ（配列番号３１）、ＦＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４２）、より好ましくは、ＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４３）及びＦＳＫＥＥＩＫＮＶＷＫＤ（配列番号５１）を含む群からの配列に対する抗体である。より好ましくは、抗体は、ＡＬＲＮＡＦＳＭＦＤ（配列番号３０）、より好ましくは、ＮＡＦＳＭＦ（配列番号３１）、ＦＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４２）、より好ましくは、ＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４３）及びＦＳＫＥＥＩＫＮＶＷＫＤ（配列番号５１）を含む群から選択される配列を含むＭＬＣ２からのエピトープに対する抗体である。或いは、抗体は、例えば、競合アッセイのためにＭＬＣ２又はそのバリアントを含むポリペプチドを固定化するための、ＡＬＲＮＡＦＳＭＦＤ（配列番号３０）、より好ましくは、ＮＡＦＳＭＦ（配列番号３１）、ＦＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４２）、より好ましくは、ＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４３）及びＦＳＫＥＥＩＫＮＶＷＫＤ（配列番号５１）を含む群からの配列、又はその配列を含むエピトープ以外のＭＬＣ２上の結合部位に結合する抗体であり得る。抗体はモノクローナル抗体であり得る。抗体はポリクローナル抗体であり得る。抗体はモノクローナル抗体であり得る。抗体は、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、ニワトリ、ヤギ、霊長類又はウマを含む群から選択される動物からの抗体であり得る。これら及び他のアッセイについては、Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第３版、Ｄａｖｉｄ Ｗｉｌｄ著、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ ２００５、特にＣｈａｐｔｅｒ１及び２に記載される。

【0086】

本発明によれば、イカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２又はそのバリアントを含む群からのポリペプチドが、イカＭＬＣ１若しくはイカＭＬＣ２又はそのバリアントに対するポリクローナル抗体を作製するために使用され得る。本発明によれば、ポリペプチドは、抗体を産生することができる動物、好ましくは哺乳動物及び鳥類に注射され得、次いで従来のプロトコルによって抗血清が回収される。本発明による試薬及び方法は、抗体、好ましくはＩｇＥ又はＩｇＧクラス抗体、好ましくはＩｇＧ４クラス抗体の産生の有効性、又はワクチン摂取の有効性、又は患者へ投与される薬物若しくはワクチン若しくは候補薬物若しくはワクチンの有効性を測定するために使用され得る。例えば、候補薬物の投与後に産生される抗体のレベルが低下する場合、その薬物が有効であることを示す。モノクローナル及びポリクローナル抗体の産生は、これら及び他のアッセイが記載されるＴｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第３版、Ｄａｖｉｄ Ｗｉｌｄ著、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ ２００５、特にＣｈａｐｔｅｒ８に記載される。

【0087】

好ましい実施形態では、本発明による製品、例えば、担体、デバイス、ポリペプチド、抗体、キャリブレーターなどは、ウシ血清アルブミンなどの安定剤、又はアザイドなどの保存剤と組み合わせて、又はそれらを含む組成物として使用され得る。

【図面の簡単な説明】

【0088】

【図1】図１は、実施例のストリップに基づく、様々なエビ及びイカのタンパク質を用いたＥＵＲＯＬＩＮＥ試験の配置を示す図である。

【図2】図２は、この実施例で記載のとおりインキュベートされたペプチドチップの例を示す図である。チップは８つのパネルで構成され、緑色のレギュラーパネルは対照ペプチドを示す。ＩｇＥ反応は緑色で示され、ＩｇＧ４反応は赤色で示される。

【図3】図３は、実施例２で議論するように、配列番号１０に基づくペプチドに対する４人のアレルギー患者及び２人の耐性患者に基づく血清中の抗体反応性の検出を示す図である。Ｙ軸はＣスコアを示し、Ｘ軸は別個のペプチドを示す。黒い線はカットオフを示し、緑の列はＩＧＥ反応性を示し、赤の列はＩｇＧ４反応性を示す。

【図4】図４は、配列番号１０に基づく重複ペプチドに対するＩｇＥ及びＩｇＧ４血清反応性のヒートマップを示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0089】

［配列］
本発明は、一連の新規の核酸配列及びポリペプチド配列を含み、より具体的には以下を含む。

【0090】

配列番号１：実施例で使用されるとおり、Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するＴｏｄ ｐ ＭＬＣ１をコードするヌクレオチド配列
ATGAGCCATCATCATCATCATCATCATCATTTGGAAGTGCTGTTTCAGGGTCCATCCATGTCTCAACTGACCAAAGACGAAATTGAGGAAGTCCGTGAAGTGTTTGACCTCTTCGACTTTTGGGATGGTCGTGATGGTGATGTTGACGCTGCGAAAGTTGGCGATCTGTTACGCTGTTTAGGGATGAATCCAACCGAAGCTCAGGTACACCAACATGGAGGCACGAAGAAAATGGGCGAGAAAGCGTATAAACTGGAAGAGATTCTGCCGATTTATGAGGAAATGAGCTCCAAAGATACTGGCACAGCAGCGGACGAATTCATGGAAGCCTTCAAAACGTTTGATCGTGAAGGTCAGGGTTTGATCAGTTCAGCCGAAATTCGGAATGTGCTGAAAATGCTTGGCGAACGCATTACCGAGGATCAGTGCAACGATATCTTCACCTTTTGCGACATTCGCGAAGATATCGATGGGAACATCAAATACGAGGATCTGATGAAGAAGGTGATGGCAGGACCTTTTCCGGACAAATCGGATTAA

【0091】

配列番号２：実施例で使用されるとおり、Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するＴｏｄ ｐ ＭＬＣ２をコードするヌクレオチド配列
ATGAGCCATCATCATCATCATCATCATCATTTGGAAGTGCTGTTTCAGGGTCCATCCATGGCGGAAGAAGCTCCTCGTCGCGTGAAACTGTCACAACGCCAGATGCAGGAGCTGAAAGAAGCGTTTACCATGATTGATCAGGACCGTGATGGGTTCATTGGCATGGAAGATCTGAAAGACATGTTCAGCTCTTTAGGACGGGTACCACCCGATGACGAACTGAATGCCATGCTGAAAGAATGCCCGGGTCAACTCAATTTCACGGCTTTTCTGACCTTGTTTGGGGAGAAAGTGAGTGGTACTGACCCGGAAGATGCACTTCGCAATGCCTTTTCGATGTTCGACGAAGATGGTCAGGGCTTTATCCCGGAAGATTATCTGAAAGACTTGCTGGAAAATATGGGCGATAACTTTTCCAAAGAGGAGATTAAGAACGTCTGGAAAGATGCACCGTTAAAGAACAAACAGTTCAACTACAACAAGATGGTTGACATCAAAGGCAAAGCGGAGGATGAAGATTAA

【0092】

配列番号３：実施例で使用されるとおり、Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するＰｅｎ ａ １．０１０１（Ｐｅｎａｅｕｓ ａｚｔｅｃｕｓ トロポミオシン）をコードするポリペプチド配列
MSHHHHHHHHLEVLFQGPSMDAIKKKMQAMKLEKDNAMDRADTLEQQNKEANNRAEKSEEEVHNLQKRMQQLENDLDQVQESLLKANIQLVEKDKALSNAEGEVAALNRRIQLLEEDLERSEERLNTATTKLAEASQAADESERMRKVLENRSLSDEERMDALENQLKEARFLAEEADRKYDEVARKLAMVEADLERAEERAETGESKIVELEEELRVVGNNLKSLEVSEEKANQREEAYKEQIKTLTNKLKAAEARAEFAERSVQKLQKEVDRLEDELVNEKEKYKSITDELDQTFSELSGY

【0093】

配列番号４：Ｐｅｎ ａ １．０１０１（Ｐｅｎａｅｕｓ ａｚｔｅｃｕｓ トロポミオシン）をコードするポリペプチド配列；受託番号Ｑ３Ｙ８Ｍ６
MDAIKKKMQAMKLEKDNAMDRADTLEQQNKEANNRAEKSEEEVHNLQKRMQQLENDLDQVQESLLKANIQLVEKDKALSNAEGEVAALNRRIQLLEEDLERSEERLNTATTKLAEASQAADESERMRKVLENRSLSDEERMDALENQLKEARFLAEEADRKYDEVARKLAMVEADLERAEERAETGESKIVELEEELRVVGNNLKSLEVSEEKANQREEAYKEQIKTLTNKLKAAEARAEFAERSVQKLQKEVDRLEDELVNEKEKYKSITDELDQTFSELSGY

【0094】

配列番号５：実施例で使用されるとおり、Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するＳｅｐ ｌ １．０１０１（Ｓｅｐｉｏｔｅｕｔｈｉｓ ｌｅｓｓｏｎｉａｎａ トロポミオシン）をコードするポリペプチド配列
MSHHHHHHHHLEVLFQGPSMDAIKKKMLAMKMEKEVATDKAEQTEQSLRDLEDAKNKIEEDLSTLQKKYANLENDFDNANEQLTAANTNLEASEKRVAECESEIQGLNRRIQLLEEDLERSEERFSSAQSKLEDASKAADESERGRKVLENRSQGDEERIDLLEKQLEEAKWIAEDADRKFDEAARKLAITEVDLERAEARLEAAEAKIVELEEELKVVGNNMKSLEISEQEASQREDSYEETIRDLTHRLKEAENRAAEAERTVSKLQKEVDRLEDELLAEKERYKTISDELDQTFAELAGY

【0095】

配列番号６：Ｓｅｐ ｌ １．０１０１（Ｓｅｐｉｏｔｅｕｔｈｉｓ ｌｅｓｓｏｎｉａｎａ トロポミオシン）をコードするポリペプチド配列
MDAIKKKMLAMKMEKEVATDKAEQTEQSLRDLEDAKNKIEEDLSTLQKKYANLENDFDNANEQLTAANTNLEASEKRVAECESEIQGLNRRIQLLEEDLERSEERFSSAQSKLEDASKAADESERGRKVLENRSQGDEERIDLLEKQLEEAKWIAEDADRKFDEAARKLAITEVDLERAEARLEAAEAKIVELEEELKVVGNNMKSLEISEQEASQREDSYEETIRDLTHRLKEAENRAAEAERTVSKLQKEVDRLEDELLAEKERYKTISDELDQTFAELAGY

【0096】

配列番号７：Ｌｉｔ ｖ ３．０１０１（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ ミオシン軽鎖２）をコードするポリペプチド配列［Ｈｉｓタグ化型は配列番号１７］
MSRKSGSRSSSKRSKKSGGGSNVFDMFTQRQVAEFKEGFQLMDRDKDGVIGKTDLRGTFDEIGRIATDQELDEMLADAPAPINFTMLLNMFAERQTGESDDDDVVAKAFLAFADEEGNIDCDTFRHALMTWGDKFSSQEADDALDQMDIDDGGKIDVQGVIQMLTAGGGDDAAAEEA

【0097】

配列番号８：受託番号Ｐ０５９４５から誘導される、Ｔｏｄ ｐ ＭＬＣ１（ミオシン軽鎖１）Ｔｏｄａｒｏｄｅｓ ｐａｃｉｆｉｃｕｓをコードするポリペプチド配列
SQLTKDEIEEVREVFDLFDFWDGRDGDVDAAKVGDLLRCLGMNPTEAQVHQHGGTKKMGEKAYKLEEILPIYEEMSSKDTGTAADEFMEAFKTFDREGQGLISSAEIRNVLKMLGERITEDQCNDIFTFCDIREDIDGNIKYEDLMKKVMAGPFPDKSD

【0098】

配列番号９：実施例で使用されるとおり、Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するＴｏｄ ｐ ＭＬＣ１（Ｔｏｄａｒｏｄｅｓ ｐａｃｉｆｉｃｕｓ ミオシン軽鎖１）をコードするポリペプチド配列
MSHHHHHHHHLEVLFQGPSMSQLTKDEIEEVREVFDLFDFWDGRDGDVDAAKVGDLLRCLGMNPTEAQVHQHGGTKKMGEKAYKLEEILPIYEEMSSKDTGTAADEFMEAFKTFDREGQGLISSAEIRNVLKMLGERITEDQCNDIFTFCDIREDIDGNIKYEDLMKKVMAGPFPDKSD

【0099】

配列番号１０：Ｔｏｄ ｐ ＭＬＣ２（Ｔｏｄａｒｏｄｅｓ ｐａｃｉｆｉｃｕｓ ミオシン軽鎖２）をコードするポリペプチド配列
AEEAPRRVKLSQRQMQELKEAFTMIDQDRDGFIGMEDLKDMFSSLGRVPPDDELNAMLKECPGQLNFTAFLTLFGEKVSGTDPEDALRNAFSMFDEDGQGFIPEDYLKDLLENMGDNFSKEEIKNVWKDAPLKNKQFNYNKMVDIKGKAEDED

【0100】

配列番号１１：実施例で使用されるとおり、Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するＴｏｄ ｐ ＭＬＣ２（Ｔｏｄａｒｏｄｅｓ ｐａｃｉｆｉｃｕｓ ミオシン軽鎖２）をコードするポリペプチド配列
MSHHHHHHHHLEVLFQGPSMAEEAPRRVKLSQRQMQELKEAFTMIDQDRDGFIGMEDLKDMFSSLGRVPPDDELNAMLKECPGQLNFTAFLTLFGEKVSGTDPEDALRNAFSMFDEDGQGFIPEDYLKDLLENMGDNFSKEEIKNVWKDAPLKNKQFNYNKMVDIKGKAEDED

【0101】

配列番号１２：Ｌｉｔ ｖ ３．０１０１（ミオシン軽鎖２）をコードする配列を含むベクターｐＥＴ２４ｄ－Ｌｉｔ ｖ３．０１０１－（ＰＳｃ）－Ｈｉｓの核酸配列
GGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACCATGTCTCGCAAAAGTGGCTCACGTTCCAGCTCCAAACGCAGCAAGAAATCGGGTGGTGGCTCGAATGTCTTTGACATGTTCACGCAACGCCAAGTTGCGGAGTTCAAAGAAGGGTTTCAGCTGATGGATCGCGACAAAGATGGGGTGATTGGCAAAACCGATCTGCGTGGTACCTTTGACGAGATTGGCCGCATTGCGACCGATCAGGAACTGGATGAGATGCTTGCAGATGCCCCAGCACCGATCAATTTCACGATGCTCCTGAACATGTTTGCGGAACGTCAGACTGGCGAATCTGACGACGATGACGTGGTTGCCAAAGCGTTCTTAGCCTTTGCCGATGAAGAGGGAAACATCGATTGCGATACCTTTCGGCATGCTCTGATGACTTGGGGCGACAAGTTCAGCAGTCAAGAAGCGGATGATGCCTTGGATCAGATGGACATTGATGACGGCGGGAAAATCGACGTACAGGGTGTGATTCAGATGCTGACAGCTGGTGGAGGTGATGATGCAGCAGCGGAAGAAGCTCTCGAGGTCCTGTTCCAAGGACCCCACCACCATCACCATCACTGATCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAACAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGGAACTATATCCGGATTGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAATTAATTCTTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAAAAGTTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTCCCGGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACATCATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGATAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTAGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGCTGCGGTAAAGCTCATCAGCGTGGTCGTGAAGCGATTCACAGATGTCTGCCTGTTCATCCGCGTCCAGCTCGTTGAGTTTCTCCAGAAGCGTTAATGTCTGGCTTCTGATAAAGCGGGCCATGTTAAGGGCGGTTTTTTCCTGTTTGGTCACTGATGCCTCCGTGTAAGGGGGATTTCTGTTCATGGGGGTAATGATACCGATGAAACGAGAGAGGATGCTCACGATACGGGTTACTGATGATGAACATGCCCGGTTACTGGAACGTTGTGAGGGTAAACAACTGGCGGTATGGATGCGGCGGGACCAGAGAAAAATCACTCAGGGTCAATGCCAGCGCTTCGTTAATACAGATGTAGGTGTTCCACAGGGTAGCCAGCAGCATCCTGCGATGCAGATCCGGAACATAATGGTGCAGGGCGCTGACTTCCGCGTTTCCAGACTTTACGAAACACGGAAACCGAAGACCATTCATGTTGTTGCTCAGGTCGCAGACGTTTTGCAGCAGCAGTCGCTTCACGTTCGCTCGCGTATCGGTGATTCATTCTGCTAACCAGTAAGGCAACCCCGCCAGCCTAGCCGGGTCCTCAACGACAGGAGCACGATCATGCGCACCCGTGGGGCCGCCATGCCGGCGATAATGGCCTGCTTCTCGCCGAAACGTTTGGTGGCGGGACCAGTGACGAAGGCTTGAGCGAGGGCGTGCAAGATTCCGAATACCGCAAGCGACAGGCCGATCATCGTCGCGCTCCAGCGAAAGCGGTCCTCGCCGAAAATGACCCAGAGCGCTGCCGGCACCTGTCCTACGAGTTGCATGATAAAGAAGACAGTCATAAGTGCGGCGACGATAGTCATGCCCCGCGCCCACCGGAAGGAGCTGACTGGGTTGAAGGCTCTCAAGGGCATCGGTCGAGATCCCGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTTACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCCAGGGTGGTTTTTCTTTTCACCAGTGAGACGGGCAACAGCTGATTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTGCAGCAAGCGGTCCACGCTGGTTTGCCCCAGCAGGCGAAAATCCTGTTTGATGGTGGTTAACGGCGGGATATAACATGAGCTGTCTTCGGTATCGTCGTATCCCACTACCGAGATATCCGCACCAACGCGCAGCCCGGACTCGGTAATGGCGCGCATTGCGCCCAGCGCCATCTGATCGTTGGCAACCAGCATCGCAGTGGGAACGATGCCCTCATTCAGCATTTGCATGGTTTGTTGAAAACCGGACATGGCACTCCAGTCGCCTTCCCGTTCCGCTATCGGCTGAATTTGATTGCGAGTGAGATATTTATGCCAGCCAGCCAGACGCAGACGCGCCGAGACAGAACTTAATGGGCCCGCTAACAGCGCGATTTGCTGGTGACCCAATGCGACCAGATGCTCCACGCCCAGTCGCGTACCGTCTTCATGGGAGAAAATAATACTGTTGATGGGTGTCTGGTCAGAGACATCAAGAAATAACGCCGGAACATTAGTGCAGGCAGCTTCCACAGCAATGGCATCCTGGTCATCCAGCGGATAGTTAATGATCAGCCCACTGACGCGTTGCGCGAGAAGATTGTGCACCGCCGCTTTACAGGCTTCGACGCCGCTTCGTTCTACCATCGACACCACCACGCTGGCACCCAGTTGATCGGCGCGAGATTTAATCGCCGCGACAATTTGCGACGGCGCGTGCAGGGCCAGACTGGAGGTGGCAACGCCAATCAGCAACGACTGTTTGCCCGCCAGTTGTTGTGCCACGCGGTTGGGAATGTAATTCAGCTCCGCCATCGCCGCTTCCACTTTTTCCCGCGTTTTCGCAGAAACGTGGCTGGCCTGGTTCACCACGCGGGAAACGGTCTGATAAGAGACACCGGCATACTCTGCGACATCGTATAACGTTACTGGTTTCACATTCACCACCCTGAATTGACTCTCTTCCGGGCGCTATCATGCCATACCGCGAAAGGTTTTGCGCCATTCGATGGTGTCCGGGATCTCGACGCTCTCCCTTATGCGACTCCTGCATTAGGAAGCAGCCCAGTAGTAGGTTGAGGCCGTTGAGCACCGCCGCCGCAAGGAATGGTGCATGCAAGGAGATGGCGCCCAACAGTCCCCCGGCCACGGGGCCTGCCACCATACCCACGCCGAAACAAGCGCTCATGAGCCCGAAGTGGCGAGCCCGATCTTCCCCATCGGTGATGTCGGCGATATAGGCGCCAGCAACCGCACCTGTGGCGCCGGTGATGCCGGCCACGATGCGTCCGGCGTAGAGGATCGAGATCTCGATCCCGCGAAATTAATACGACTCACTATA

【0102】

配列番号１３：Ｐｅｎ ａ １．０１０１をコードする配列を含む、ベクターｐＥＴ２４ｄ－Ｎ－（ＰＳｃ）－Ｐｅｎ＿ａ１．０１０１の核酸配列
GGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACCATGAGCCATCATCATCATCATCATCATCATTTGGAAGTGCTGTTTCAGGGTCCATCCATGGATGCCATCAAGAAGAAGATGCAGGCCATGAAACTGGAGAAAGACAACGCCATGGATCGTGCGGATACACTGGAACAGCAGAACAAAGAAGCGAATAATCGTGCGGAAAAGTCTGAAGAAGAAGTGCATAATCTGCAGAAACGCATGCAACAGTTGGAAAACGATCTGGATCAAGTGCAGGAAAGTCTCCTGAAAGCGAACATTCAGCTGGTAGAGAAAGACAAAGCGCTTTCGAATGCAGAAGGCGAAGTTGCCGCCTTGAATCGTCGCATTCAACTGTTGGAAGAAGATCTGGAACGCTCAGAAGAGCGGTTAAATACCGCCACCACCAAATTAGCTGAAGCAAGCCAAGCAGCCGACGAATCTGAACGTATGCGCAAAGTGCTGGAGAATCGCTCACTCTCGGATGAAGAACGCATGGACGCGTTAGAGAACCAGCTGAAAGAGGCTCGTTTTCTCGCGGAGGAAGCTGACCGGAAATACGATGAAGTGGCGCGCAAACTGGCCATGGTTGAGGCCGACCTTGAGCGCGCTGAAGAACGCGCAGAGACTGGTGAGAGCAAAATCGTAGAACTGGAAGAGGAGTTACGTGTCGTTGGCAATAACCTGAAATCCCTGGAAGTTTCCGAGGAGAAAGCTAACCAGCGCGAAGAAGCGTATAAAGAACAGATCAAGACTCTGACGAACAAACTGAAAGCGGCAGAGGCACGTGCGGAATTTGCAGAACGTAGCGTGCAAAAGCTGCAGAAAGAAGTCGATCGCTTGGAAGATGAACTGGTCAACGAGAAAGAAAAGTACAAATCGATTACCGATGAACTCGACCAAACGTTCAGCGAACTTAGTGGGTATTAATCGAGTAAGTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAACAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGGAACTATATCCGGATTGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAATTAATTCTTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAAAAGTTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTCCCGGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACATCATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGATAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTAGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGCTGCGGTAAAGCTCATCAGCGTGGTCGTGAAGCGATTCACAGATGTCTGCCTGTTCATCCGCGTCCAGCTCGTTGAGTTTCTCCAGAAGCGTTAATGTCTGGCTTCTGATAAAGCGGGCCATGTTAAGGGCGGTTTTTTCCTGTTTGGTCACTGATGCCTCCGTGTAAGGGGGATTTCTGTTCATGGGGGTAATGATACCGATGAAACGAGAGAGGATGCTCACGATACGGGTTACTGATGATGAACATGCCCGGTTACTGGAACGTTGTGAGGGTAAACAACTGGCGGTATGGATGCGGCGGGACCAGAGAAAAATCACTCAGGGTCAATGCCAGCGCTTCGTTAATACAGATGTAGGTGTTCCACAGGGTAGCCAGCAGCATCCTGCGATGCAGATCCGGAACATAATGGTGCAGGGCGCTGACTTCCGCGTTTCCAGACTTTACGAAACACGGAAACCGAAGACCATTCATGTTGTTGCTCAGGTCGCAGACGTTTTGCAGCAGCAGTCGCTTCACGTTCGCTCGCGTATCGGTGATTCATTCTGCTAACCAGTAAGGCAACCCCGCCAGCCTAGCCGGGTCCTCAACGACAGGAGCACGATCATGCGCACCCGTGGGGCCGCCATGCCGGCGATAATGGCCTGCTTCTCGCCGAAACGTTTGGTGGCGGGACCAGTGACGAAGGCTTGAGCGAGGGCGTGCAAGATTCCGAATACCGCAAGCGACAGGCCGATCATCGTCGCGCTCCAGCGAAAGCGGTCCTCGCCGAAAATGACCCAGAGCGCTGCCGGCACCTGTCCTACGAGTTGCATGATAAAGAAGACAGTCATAAGTGCGGCGACGATAGTCATGCCCCGCGCCCACCGGAAGGAGCTGACTGGGTTGAAGGCTCTCAAGGGCATCGGTCGAGATCCCGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTTACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCCAGGGTGGTTTTTCTTTTCACCAGTGAGACGGGCAACAGCTGATTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTGCAGCAAGCGGTCCACGCTGGTTTGCCCCAGCAGGCGAAAATCCTGTTTGATGGTGGTTAACGGCGGGATATAACATGAGCTGTCTTCGGTATCGTCGTATCCCACTACCGAGATATCCGCACCAACGCGCAGCCCGGACTCGGTAATGGCGCGCATTGCGCCCAGCGCCATCTGATCGTTGGCAACCAGCATCGCAGTGGGAACGATGCCCTCATTCAGCATTTGCATGGTTTGTTGAAAACCGGACATGGCACTCCAGTCGCCTTCCCGTTCCGCTATCGGCTGAATTTGATTGCGAGTGAGATATTTATGCCAGCCAGCCAGACGCAGACGCGCCGAGACAGAACTTAATGGGCCCGCTAACAGCGCGATTTGCTGGTGACCCAATGCGACCAGATGCTCCACGCCCAGTCGCGTACCGTCTTCATGGGAGAAAATAATACTGTTGATGGGTGTCTGGTCAGAGACATCAAGAAATAACGCCGGAACATTAGTGCAGGCAGCTTCCACAGCAATGGCATCCTGGTCATCCAGCGGATAGTTAATGATCAGCCCACTGACGCGTTGCGCGAGAAGATTGTGCACCGCCGCTTTACAGGCTTCGACGCCGCTTCGTTCTACCATCGACACCACCACGCTGGCACCCAGTTGATCGGCGCGAGATTTAATCGCCGCGACAATTTGCGACGGCGCGTGCAGGGCCAGACTGGAGGTGGCAACGCCAATCAGCAACGACTGTTTGCCCGCCAGTTGTTGTGCCACGCGGTTGGGAATGTAATTCAGCTCCGCCATCGCCGCTTCCACTTTTTCCCGCGTTTTCGCAGAAACGTGGCTGGCCTGGTTCACCACGCGGGAAACGGTCTGATAAGAGACACCGGCATACTCTGCGACATCGTATAACGTTACTGGTTTCACATTCACCACCCTGAATTGACTCTCTTCCGGGCGCTATCATGCCATACCGCGAAAGGTTTTGCGCCATTCGATGGTGTCCGGGATCTCGACGCTCTCCCTTATGCGACTCCTGCATTAGGAAGCAGCCCAGTAGTAGGTTGAGGCCGTTGAGCACCGCCGCCGCAAGGAATGGTGCATGCAAGGAGATGGCGCCCAACAGTCCCCCGGCCACGGGGCCTGCCACCATACCCACGCCGAAACAAGCGCTCATGAGCCCGAAGTGGCGAGCCCGATCTTCCCCATCGGTGATGTCGGCGATATAGGCGCCAGCAACCGCACCTGTGGCGCCGGTGATGCCGGCCACGATGCGTCCGGCGTAGAGGATCGAGATCTCGATCCCGCGAAATTAATACGACTCACTATA

【0103】

配列番号１４：Ｓｅｐ ｌ１．０１０１をコードする配列を含むベクターｐＥＴ２４ｄ－Ｎ－（ＰＳｃ）－Ｓｅｐ ｌ１．０１０１の核酸配列
GGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACCATGAGCCATCATCATCATCATCATCATCATTTGGAAGTGCTGTTTCAGGGTCCATCCATGGATGCCATCAAGAAGAAAATGCTGGCTATGAAAATGGAGAAAGAGGTTGCAACCGACAAAGCGGAGCAAACCGAACAGTCACTGCGTGATCTGGAAGATGCGAAGAACAAAATCGAAGAAGATCTGAGCACATTGCAGAAGAAATATGCCAACCTCGAAAACGATTTCGACAATGCGAATGAACAGCTGACTGCAGCGAACACGAACTTAGAAGCGTCCGAGAAACGTGTCGCAGAATGCGAATCGGAGATTCAAGGCCTTAATCGGCGCATTCAGCTGCTTGAAGAGGACTTAGAGCGTAGTGAAGAACGCTTTTCTAGCGCTCAGAGCAAACTGGAAGATGCCTCGAAAGCCGCTGATGAATCCGAACGTGGTCGCAAAGTGCTGGAGAATCGCAGTCAAGGGGACGAAGAACGCATTGATCTGCTCGAGAAACAGTTGGAAGAAGCGAAATGGATTGCCGAAGATGCGGATCGCAAATTCGACGAAGCTGCGCGTAAACTGGCCATTACCGAAGTCGATCTCGAACGTGCGGAAGCACGTTTGGAAGCAGCTGAGGCGAAAATCGTGGAACTGGAGGAGGAACTGAAAGTAGTTGGCAACAACATGAAATCGCTGGAAATCTCAGAGCAGGAAGCTTCTCAACGTGAGGACAGCTATGAGGAAACCATTCGCGATCTTACTCATCGCCTGAAAGAGGCCGAAAATCGGGCAGCAGAAGCCGAACGCACAGTGTCCAAACTGCAGAAAGAGGTTGATCGCTTAGAGGACGAACTGCTGGCCGAAAAGGAACGCTACAAGACCATCAGTGACGAATTGGATCAGACGTTTGCGGAATTAGCGGGTTATTAATGATCGAGTAAGTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAACAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGGAACTATATCCGGATTGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAATTAATTCTTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAAAAGTTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTCCCGGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACATCATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGATAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTAGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGCTGCGGTAAAGCTCATCAGCGTGGTCGTGAAGCGATTCACAGATGTCTGCCTGTTCATCCGCGTCCAGCTCGTTGAGTTTCTCCAGAAGCGTTAATGTCTGGCTTCTGATAAAGCGGGCCATGTTAAGGGCGGTTTTTTCCTGTTTGGTCACTGATGCCTCCGTGTAAGGGGGATTTCTGTTCATGGGGGTAATGATACCGATGAAACGAGAGAGGATGCTCACGATACGGGTTACTGATGATGAACATGCCCGGTTACTGGAACGTTGTGAGGGTAAACAACTGGCGGTATGGATGCGGCGGGACCAGAGAAAAATCACTCAGGGTCAATGCCAGCGCTTCGTTAATACAGATGTAGGTGTTCCACAGGGTAGCCAGCAGCATCCTGCGATGCAGATCCGGAACATAATGGTGCAGGGCGCTGACTTCCGCGTTTCCAGACTTTACGAAACACGGAAACCGAAGACCATTCATGTTGTTGCTCAGGTCGCAGACGTTTTGCAGCAGCAGTCGCTTCACGTTCGCTCGCGTATCGGTGATTCATTCTGCTAACCAGTAAGGCAACCCCGCCAGCCTAGCCGGGTCCTCAACGACAGGAGCACGATCATGCGCACCCGTGGGGCCGCCATGCCGGCGATAATGGCCTGCTTCTCGCCGAAACGTTTGGTGGCGGGACCAGTGACGAAGGCTTGAGCGAGGGCGTGCAAGATTCCGAATACCGCAAGCGACAGGCCGATCATCGTCGCGCTCCAGCGAAAGCGGTCCTCGCCGAAAATGACCCAGAGCGCTGCCGGCACCTGTCCTACGAGTTGCATGATAAAGAAGACAGTCATAAGTGCGGCGACGATAGTCATGCCCCGCGCCCACCGGAAGGAGCTGACTGGGTTGAAGGCTCTCAAGGGCATCGGTCGAGATCCCGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTTACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCCAGGGTGGTTTTTCTTTTCACCAGTGAGACGGGCAACAGCTGATTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTGCAGCAAGCGGTCCACGCTGGTTTGCCCCAGCAGGCGAAAATCCTGTTTGATGGTGGTTAACGGCGGGATATAACATGAGCTGTCTTCGGTATCGTCGTATCCCACTACCGAGATATCCGCACCAACGCGCAGCCCGGACTCGGTAATGGCGCGCATTGCGCCCAGCGCCATCTGATCGTTGGCAACCAGCATCGCAGTGGGAACGATGCCCTCATTCAGCATTTGCATGGTTTGTTGAAAACCGGACATGGCACTCCAGTCGCCTTCCCGTTCCGCTATCGGCTGAATTTGATTGCGAGTGAGATATTTATGCCAGCCAGCCAGACGCAGACGCGCCGAGACAGAACTTAATGGGCCCGCTAACAGCGCGATTTGCTGGTGACCCAATGCGACCAGATGCTCCACGCCCAGTCGCGTACCGTCTTCATGGGAGAAAATAATACTGTTGATGGGTGTCTGGTCAGAGACATCAAGAAATAACGCCGGAACATTAGTGCAGGCAGCTTCCACAGCAATGGCATCCTGGTCATCCAGCGGATAGTTAATGATCAGCCCACTGACGCGTTGCGCGAGAAGATTGTGCACCGCCGCTTTACAGGCTTCGACGCCGCTTCGTTCTACCATCGACACCACCACGCTGGCACCCAGTTGATCGGCGCGAGATTTAATCGCCGCGACAATTTGCGACGGCGCGTGCAGGGCCAGACTGGAGGTGGCAACGCCAATCAGCAACGACTGTTTGCCCGCCAGTTGTTGTGCCACGCGGTTGGGAATGTAATTCAGCTCCGCCATCGCCGCTTCCACTTTTTCCCGCGTTTTCGCAGAAACGTGGCTGGCCTGGTTCACCACGCGGGAAACGGTCTGATAAGAGACACCGGCATACTCTGCGACATCGTATAACGTTACTGGTTTCACATTCACCACCCTGAATTGACTCTCTTCCGGGCGCTATCATGCCATACCGCGAAAGGTTTTGCGCCATTCGATGGTGTCCGGGATCTCGACGCTCTCCCTTATGCGACTCCTGCATTAGGAAGCAGCCCAGTAGTAGGTTGAGGCCGTTGAGCACCGCCGCCGCAAGGAATGGTGCATGCAAGGAGATGGCGCCCAACAGTCCCCCGGCCACGGGGCCTGCCACCATACCCACGCCGAAACAAGCGCTCATGAGCCCGAAGTGGCGAGCCCGATCTTCCCCATCGGTGATGTCGGCGATATAGGCGCCAGCAACCGCACCTGTGGCGCCGGTGATGCCGGCCACGATGCGTCCGGCGTAGAGGATCGAGATCTCGATCCCGCGAAATTAATACGACTCACTATA

【0104】

配列番号１５：Ｔｏｄ ｐ ＭＬＣ１（軽鎖１）をコードする配列を含むベクターｐＥＴ２４ｄ－Ｎ－（ＰＳｃ）－Ｔｏｄ ｐ ＭＬＣ１の核酸配列
GGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACCATGAGCCATCATCATCATCATCATCATCATTTGGAAGTGCTGTTTCAGGGTCCATCCATGTCTCAACTGACCAAAGACGAAATTGAGGAAGTCCGTGAAGTGTTTGACCTCTTCGACTTTTGGGATGGTCGTGATGGTGATGTTGACGCTGCGAAAGTTGGCGATCTGTTACGCTGTTTAGGGATGAATCCAACCGAAGCTCAGGTACACCAACATGGAGGCACGAAGAAAATGGGCGAGAAAGCGTATAAACTGGAAGAGATTCTGCCGATTTATGAGGAAATGAGCTCCAAAGATACTGGCACAGCAGCGGACGAATTCATGGAAGCCTTCAAAACGTTTGATCGTGAAGGTCAGGGTTTGATCAGTTCAGCCGAAATTCGGAATGTGCTGAAAATGCTTGGCGAACGCATTACCGAGGATCAGTGCAACGATATCTTCACCTTTTGCGACATTCGCGAAGATATCGATGGGAACATCAAATACGAGGATCTGATGAAGAAGGTGATGGCAGGACCTTTTCCGGACAAATCGGATTAATGATCGAGTAAGTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAACAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGGAACTATATCCGGATTGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAATTAATTCTTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAAAAGTTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTCCCGGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACATCATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGATAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTAGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGCTGCGGTAAAGCTCATCAGCGTGGTCGTGAAGCGATTCACAGATGTCTGCCTGTTCATCCGCGTCCAGCTCGTTGAGTTTCTCCAGAAGCGTTAATGTCTGGCTTCTGATAAAGCGGGCCATGTTAAGGGCGGTTTTTTCCTGTTTGGTCACTGATGCCTCCGTGTAAGGGGGATTTCTGTTCATGGGGGTAATGATACCGATGAAACGAGAGAGGATGCTCACGATACGGGTTACTGATGATGAACATGCCCGGTTACTGGAACGTTGTGAGGGTAAACAACTGGCGGTATGGATGCGGCGGGACCAGAGAAAAATCACTCAGGGTCAATGCCAGCGCTTCGTTAATACAGATGTAGGTGTTCCACAGGGTAGCCAGCAGCATCCTGCGATGCAGATCCGGAACATAATGGTGCAGGGCGCTGACTTCCGCGTTTCCAGACTTTACGAAACACGGAAACCGAAGACCATTCATGTTGTTGCTCAGGTCGCAGACGTTTTGCAGCAGCAGTCGCTTCACGTTCGCTCGCGTATCGGTGATTCATTCTGCTAACCAGTAAGGCAACCCCGCCAGCCTAGCCGGGTCCTCAACGACAGGAGCACGATCATGCGCACCCGTGGGGCCGCCATGCCGGCGATAATGGCCTGCTTCTCGCCGAAACGTTTGGTGGCGGGACCAGTGACGAAGGCTTGAGCGAGGGCGTGCAAGATTCCGAATACCGCAAGCGACAGGCCGATCATCGTCGCGCTCCAGCGAAAGCGGTCCTCGCCGAAAATGACCCAGAGCGCTGCCGGCACCTGTCCTACGAGTTGCATGATAAAGAAGACAGTCATAAGTGCGGCGACGATAGTCATGCCCCGCGCCCACCGGAAGGAGCTGACTGGGTTGAAGGCTCTCAAGGGCATCGGTCGAGATCCCGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTTACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCCAGGGTGGTTTTTCTTTTCACCAGTGAGACGGGCAACAGCTGATTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTGCAGCAAGCGGTCCACGCTGGTTTGCCCCAGCAGGCGAAAATCCTGTTTGATGGTGGTTAACGGCGGGATATAACATGAGCTGTCTTCGGTATCGTCGTATCCCACTACCGAGATATCCGCACCAACGCGCAGCCCGGACTCGGTAATGGCGCGCATTGCGCCCAGCGCCATCTGATCGTTGGCAACCAGCATCGCAGTGGGAACGATGCCCTCATTCAGCATTTGCATGGTTTGTTGAAAACCGGACATGGCACTCCAGTCGCCTTCCCGTTCCGCTATCGGCTGAATTTGATTGCGAGTGAGATATTTATGCCAGCCAGCCAGACGCAGACGCGCCGAGACAGAACTTAATGGGCCCGCTAACAGCGCGATTTGCTGGTGACCCAATGCGACCAGATGCTCCACGCCCAGTCGCGTACCGTCTTCATGGGAGAAAATAATACTGTTGATGGGTGTCTGGTCAGAGACATCAAGAAATAACGCCGGAACATTAGTGCAGGCAGCTTCCACAGCAATGGCATCCTGGTCATCCAGCGGATAGTTAATGATCAGCCCACTGACGCGTTGCGCGAGAAGATTGTGCACCGCCGCTTTACAGGCTTCGACGCCGCTTCGTTCTACCATCGACACCACCACGCTGGCACCCAGTTGATCGGCGCGAGATTTAATCGCCGCGACAATTTGCGACGGCGCGTGCAGGGCCAGACTGGAGGTGGCAACGCCAATCAGCAACGACTGTTTGCCCGCCAGTTGTTGTGCCACGCGGTTGGGAATGTAATTCAGCTCCGCCATCGCCGCTTCCACTTTTTCCCGCGTTTTCGCAGAAACGTGGCTGGCCTGGTTCACCACGCGGGAAACGGTCTGATAAGAGACACCGGCATACTCTGCGACATCGTATAACGTTACTGGTTTCACATTCACCACCCTGAATTGACTCTCTTCCGGGCGCTATCATGCCATACCGCGAAAGGTTTTGCGCCATTCGATGGTGTCCGGGATCTCGACGCTCTCCCTTATGCGACTCCTGCATTAGGAAGCAGCCCAGTAGTAGGTTGAGGCCGTTGAGCACCGCCGCCGCAAGGAATGGTGCATGCAAGGAGATGGCGCCCAACAGTCCCCCGGCCACGGGGCCTGCCACCATACCCACGCCGAAACAAGCGCTCATGAGCCCGAAGTGGCGAGCCCGATCTTCCCCATCGGTGATGTCGGCGATATAGGCGCCAGCAACCGCACCTGTGGCGCCGGTGATGCCGGCCACGATGCGTCCGGCGTAGAGGATCGAGATCTCGATCCCGCGAAATTAATACGACTCACTATA

【0105】

配列番号１６：Ｔｏｄ ｐ ＭＬＣ２（軽鎖２）をコードする配列を含むｐＥｔ２４ｄ誘導ベクターｐＥＴ２４ｄ－Ｎ－（ＰＳｃ）－Ｔｏｄ ｐ ＭＬＣ２の核酸配列
GGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACCATGAGCCATCATCATCATCATCATCATCATTTGGAAGTGCTGTTTCAGGGTCCATCCATGGCGGAAGAAGCTCCTCGTCGCGTGAAACTGTCACAACGCCAGATGCAGGAGCTGAAAGAAGCGTTTACCATGATTGATCAGGACCGTGATGGGTTCATTGGCATGGAAGATCTGAAAGACATGTTCAGCTCTTTAGGACGGGTACCACCCGATGACGAACTGAATGCCATGCTGAAAGAATGCCCGGGTCAACTCAATTTCACGGCTTTTCTGACCTTGTTTGGGGAGAAAGTGAGTGGTACTGACCCGGAAGATGCACTTCGCAATGCCTTTTCGATGTTCGACGAAGATGGTCAGGGCTTTATCCCGGAAGATTATCTGAAAGACTTGCTGGAAAATATGGGCGATAACTTTTCCAAAGAGGAGATTAAGAACGTCTGGAAAGATGCACCGTTAAAGAACAAACAGTTCAACTACAACAAGATGGTTGACATCAAAGGCAAAGCGGAGGATGAAGATTAATGATCGAGTAAGTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAACAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGGAACTATATCCGGATTGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAATTAATTCTTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAAAAGTTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTCCCGGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACATCATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGATAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTAGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGCTGCGGTAAAGCTCATCAGCGTGGTCGTGAAGCGATTCACAGATGTCTGCCTGTTCATCCGCGTCCAGCTCGTTGAGTTTCTCCAGAAGCGTTAATGTCTGGCTTCTGATAAAGCGGGCCATGTTAAGGGCGGTTTTTTCCTGTTTGGTCACTGATGCCTCCGTGTAAGGGGGATTTCTGTTCATGGGGGTAATGATACCGATGAAACGAGAGAGGATGCTCACGATACGGGTTACTGATGATGAACATGCCCGGTTACTGGAACGTTGTGAGGGTAAACAACTGGCGGTATGGATGCGGCGGGACCAGAGAAAAATCACTCAGGGTCAATGCCAGCGCTTCGTTAATACAGATGTAGGTGTTCCACAGGGTAGCCAGCAGCATCCTGCGATGCAGATCCGGAACATAATGGTGCAGGGCGCTGACTTCCGCGTTTCCAGACTTTACGAAACACGGAAACCGAAGACCATTCATGTTGTTGCTCAGGTCGCAGACGTTTTGCAGCAGCAGTCGCTTCACGTTCGCTCGCGTATCGGTGATTCATTCTGCTAACCAGTAAGGCAACCCCGCCAGCCTAGCCGGGTCCTCAACGACAGGAGCACGATCATGCGCACCCGTGGGGCCGCCATGCCGGCGATAATGGCCTGCTTCTCGCCGAAACGTTTGGTGGCGGGACCAGTGACGAAGGCTTGAGCGAGGGCGTGCAAGATTCCGAATACCGCAAGCGACAGGCCGATCATCGTCGCGCTCCAGCGAAAGCGGTCCTCGCCGAAAATGACCCAGAGCGCTGCCGGCACCTGTCCTACGAGTTGCATGATAAAGAAGACAGTCATAAGTGCGGCGACGATAGTCATGCCCCGCGCCCACCGGAAGGAGCTGACTGGGTTGAAGGCTCTCAAGGGCATCGGTCGAGATCCCGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTTACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCCAGGGTGGTTTTTCTTTTCACCAGTGAGACGGGCAACAGCTGATTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTGCAGCAAGCGGTCCACGCTGGTTTGCCCCAGCAGGCGAAAATCCTGTTTGATGGTGGTTAACGGCGGGATATAACATGAGCTGTCTTCGGTATCGTCGTATCCCACTACCGAGATATCCGCACCAACGCGCAGCCCGGACTCGGTAATGGCGCGCATTGCGCCCAGCGCCATCTGATCGTTGGCAACCAGCATCGCAGTGGGAACGATGCCCTCATTCAGCATTTGCATGGTTTGTTGAAAACCGGACATGGCACTCCAGTCGCCTTCCCGTTCCGCTATCGGCTGAATTTGATTGCGAGTGAGATATTTATGCCAGCCAGCCAGACGCAGACGCGCCGAGACAGAACTTAATGGGCCCGCTAACAGCGCGATTTGCTGGTGACCCAATGCGACCAGATGCTCCACGCCCAGTCGCGTACCGTCTTCATGGGAGAAAATAATACTGTTGATGGGTGTCTGGTCAGAGACATCAAGAAATAACGCCGGAACATTAGTGCAGGCAGCTTCCACAGCAATGGCATCCTGGTCATCCAGCGGATAGTTAATGATCAGCCCACTGACGCGTTGCGCGAGAAGATTGTGCACCGCCGCTTTACAGGCTTCGACGCCGCTTCGTTCTACCATCGACACCACCACGCTGGCACCCAGTTGATCGGCGCGAGATTTAATCGCCGCGACAATTTGCGACGGCGCGTGCAGGGCCAGACTGGAGGTGGCAACGCCAATCAGCAACGACTGTTTGCCCGCCAGTTGTTGTGCCACGCGGTTGGGAATGTAATTCAGCTCCGCCATCGCCGCTTCCACTTTTTCCCGCGTTTTCGCAGAAACGTGGCTGGCCTGGTTCACCACGCGGGAAACGGTCTGATAAGAGACACCGGCATACTCTGCGACATCGTATAACGTTACTGGTTTCACATTCACCACCCTGAATTGACTCTCTTCCGGGCGCTATCATGCCATACCGCGAAAGGTTTTGCGCCATTCGATGGTGTCCGGGATCTCGACGCTCTCCCTTATGCGACTCCTGCATTAGGAAGCAGCCCAGTAGTAGGTTGAGGCCGTTGAGCACCGCCGCCGCAAGGAATGGTGCATGCAAGGAGATGGCGCCCAACAGTCCCCCGGCCACGGGGCCTGCCACCATACCCACGCCGAAACAAGCGCTCATGAGCCCGAAGTGGCGAGCCCGATCTTCCCCATCGGTGATGTCGGCGATATAGGCGCCAGCAACCGCACCTGTGGCGCCGGTGATGCCGGCCACGATGCGTCCGGCGTAGAGGATCGAGATCTCGATCCCGCGAAATTAATACGACTCACTATA

【0106】

配列番号１７：実施例で使用されるとおり、Ｃ末端Ｈｉｓタグを有するＬｉｔ ｖ ３．０１０１（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ ミオシン軽鎖２）をコードするポリペプチド配列
MSRKSGSRSSSKRSKKSGGGSNVFDMFTQRQVAEFKEGFQLMDRDKDGVIGKTDLRGTFDEIGRIATDQELDEMLADAPAPINFTMLLNMFAERQTGESDDDDVVAKAFLAFADEEGNIDCDTFRHALMTWGDKFSSQEADDALDQMDIDDGGKIDVQGVIQMLTAGGGDDAAAEEALEVLFQGPHHHHHH

【0107】

配列番号１８：Ｔｏｄ ＭＬＣ１のエピトープ配列
GGTKKMGE

【0108】

配列番号１９：Ｔｏｄ ＭＬＣ１のエピトープ配列
SSKDTGTA

【0109】

配列番号２０：Ｔｏｄ ＭＬＣ１のエピトープ配列
DREGQ

【0110】

配列番号２１：Ｔｏｄ ＭＬＣ１のエピトープ配列
GGTKKMGEKAYKLEEILPIYEEMSSKDTGTAADEFMEAFKTFDREGQ

【0111】

配列番号２２：Ｔｏｄ ＭＬＣ２のエピトープ配列
QGPSMA

【0112】

配列番号２３：Ｔｏｄ ＭＬＣ２のエピトープ配列
KVSGTDPE

【0113】

配列番号２４：Ｔｏｄ ＭＬＣ２のエピトープ配列
DREGQ

【0114】

配列番号２５：Ｔｏｄ ＭＬＣ２のエピトープ配列
QELKEAFTMIDQDRDGFIGMEDLKDMFSSLGRVPPDDELNAMLKECPGQLNFT

【0115】

配列番号２６：Ｔｏｄ ＴＭのエピトープ配列
DESERGRKVLENRSQGDEER

【0116】

配列番号２７：Ｔｏｄ ＴＭのエピトープ配列
IDLLEKQLEEAKWIAEDADR

【0117】

配列番号２８：Ｔｏｄ ＴＭのエピトープ配列
KFDEAARKLAITEVDLERAEARLE

【0118】

配列番号２９：Ｔｏｄ ＴＭのエピトープ配列
KEVDRLEDELLAEKERYKTISDELDQTFAELAGY

【0119】

配列番号３０：ＭＬＣ２のエピトープ配列１
ALRNAFSMFD

【0120】

配列番号３１：ＭＬＣ２のより短いエピトープ配列１
NAFSMF

【0121】

配列番号３２：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド１
GTDPEDALRNAFSMF

【0122】

配列番号３３：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド２
TDPEDALRNAFSMFD

【0123】

配列番号３４：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド３
DPEDALRNAFSMFDE

【0124】

配列番号３５：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド４
PEDALRNAFSMFDED

【0125】

配列番号３６：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド５
EDALRNAFSMFDEDG

【0126】

配列番号３７：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド６
DALRNAFSMFDEDGQ

【0127】

配列番号３８：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド７
ALRNAFSMFDEDGQG

【0128】

配列番号３９：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド８
LRNAFSMFDEDGQGF

【0129】

配列番号４０：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド９
RNAFSMFDEDGQGFI

【0130】

配列番号４１：ＭＬＣ２のエピトープ配列１の同定用のマイクロアレイペプチド２０
NAFSMFDEDGQGFIP

【0131】

配列番号４２：ＭＬＣ２のエピトープ配列２
FIPEDYLKDL

【0132】

配列番号４３：ＭＬＣ２のより短いエピトープ配列２
IPEDYLKDL

【0133】

配列番号４４：ＭＬＣ２のエピトープ配列２の同定用のマイクロアレイペプチド１
EDGQGFIPEDYLKDL

【0134】

配列番号４５：ＭＬＣ２のエピトープ配列２の同定用のマイクロアレイペプチド２
DGQGFIPEDYLKDLL

【0135】

配列番号４６：ＭＬＣ２のエピトープ配列２の同定用のマイクロアレイペプチド３
GQGFIPEDYLKDLLE

【0136】

配列番号４７：ＭＬＣ２のエピトープ配列２の同定用のマイクロアレイペプチド４
QGFIPEDYLKDLLEN

【0137】

配列番号４８：ＭＬＣ２のエピトープ配列２の同定用のマイクロアレイペプチド５
GFIPEDYLKDLLENM

【0138】

配列番号４９：ＭＬＣ２のエピトープ配列２の同定用のマイクロアレイペプチド６
FIPEDYLKDLLENMG

【0139】

配列番号５０：ＭＬＣ２のエピトープ配列２の同定用のマイクロアレイペプチド７
IPEDYLKDLLENMGD

【0140】

配列番号５１：ＭＬＣ２のエピトープ配列３
FSKEEIKNVWKD

【0141】

配列番号５２：ＭＬＣ２のエピトープ配列３の同定用のマイクロアレイペプチド１
GDNFSKEEIKNVWKD

【0142】

配列番号５３：ＭＬＣ２のエピトープ配列３の同定用のマイクロアレイペプチド１
DNFSKEEIKNVWKDA

【0143】

配列番号５４：ＭＬＣ２のエピトープ配列３の同定用のマイクロアレイペプチド２
NFSKEEIKNVWKDAP

【0144】

配列番号５５：ＭＬＣ２のエピトープ配列３の同定用のマイクロアレイペプチド３
FSKEEIKNVWKDAPL

【0145】

配列番号５６：マイクロアレイペプチド番号８：
GSGSGSGAEEAPRRV

【0146】

配列番号５７：マイクロアレイペプチド番号９：
SGSGSGAEEAPRRVK

【0147】

配列番号５８：マイクロアレイペプチド番号１０：
GSGSGAEEAPRRVKL

【0148】

配列番号５９：マイクロアレイペプチド番号１１：
SGSGAEEAPRRVKLS

【0149】

配列番号６０：マイクロアレイペプチド番号１２：
GSGAEEAPRRVKLSQ

【0150】

配列番号６１：マイクロアレイペプチド番号１３：
SGAEEAPRRVKLSQR

【0151】

配列番号６２：マイクロアレイペプチド番号１４：
GAEEAPRRVKLSQRQ

【0152】

配列番号６３：マイクロアレイペプチド番号１５：
AEEAPRRVKLSQRQM

【0153】

配列番号６４：マイクロアレイペプチド番号１６：
EEAPRRVKLSQRQMQ

【0154】

配列番号６５：マイクロアレイペプチド番号１７：
EAPRRVKLSQRQMQE

【0155】

配列番号６６：マイクロアレイペプチド番号１８：
APRRVKLSQRQMQEL

【0156】

配列番号６７：マイクロアレイペプチド番号１９：
PRRVKLSQRQMQELK

【0157】

配列番号６８：マイクロアレイペプチド番号２０：
RRVKLSQRQMQELKE

【0158】

配列番号６９：マイクロアレイペプチド番号２１：
RVKLSQRQMQELKEA

【0159】

配列番号７０：マイクロアレイペプチド番号２２：
VKLSQRQMQELKEAF

【0160】

配列番号７１：マイクロアレイペプチド番号２３：
KLSQRQMQELKEAFT

【0161】

配列番号７２：マイクロアレイペプチド番号２４：
LSQRQMQELKEAFTM

【0162】

配列番号７３：マイクロアレイペプチド番号２５：
SQRQMQELKEAFTMI

【0163】

配列番号７４：マイクロアレイペプチド番号２６：
QRQMQELKEAFTMID

【0164】

配列番号７５：マイクロアレイペプチド番号２７：
RQMQELKEAFTMIDQ

【0165】

配列番号７６：マイクロアレイペプチド番号２８：
QMQELKEAFTMIDQD

【0166】

配列番号７７：マイクロアレイペプチド番号２９：
MQELKEAFTMIDQDR

【0167】

配列番号７８：マイクロアレイペプチド番号３０：
QELKEAFTMIDQDRD

【0168】

配列番号７９：マイクロアレイペプチド番号３１：
ELKEAFTMIDQDRDG

【0169】

配列番号８０：マイクロアレイペプチド番号３２：
LKEAFTMIDQDRDGF

【0170】

配列番号８１：マイクロアレイペプチド番号３３：
KEAFTMIDQDRDGFI

【0171】

配列番号８２：マイクロアレイペプチド番号３４：
EAFTMIDQDRDGFIG

【0172】

配列番号８３：マイクロアレイペプチド番号３５：
AFTMIDQDRDGFIGM

【0173】

配列番号８４：マイクロアレイペプチド番号３６：
FTMIDQDRDGFIGME

【0174】

配列番号８５：マイクロアレイペプチド番号３７：
TMIDQDRDGFIGMED

【0175】

配列番号８６：マイクロアレイペプチド番号３８：
MIDQDRDGFIGMEDL

【0176】

配列番号８７：マイクロアレイペプチド番号３９：
IDQDRDGFIGMEDLK

【0177】

配列番号８８：マイクロアレイペプチド番号４０：
DQDRDGFIGMEDLKD

【0178】

配列番号８９：マイクロアレイペプチド番号４１：
QDRDGFIGMEDLKDM

【0179】

配列番号９０：マイクロアレイペプチド番号４２：
DRDGFIGMEDLKDMF

【0180】

配列番号９１：マイクロアレイペプチド番号４３：
RDGFIGMEDLKDMFS

【0181】

配列番号９２：マイクロアレイペプチド番号４４：
DGFIGMEDLKDMFSS

【0182】

配列番号９３：マイクロアレイペプチド番号４５：
GFIGMEDLKDMFSSL

【0183】

配列番号９４：マイクロアレイペプチド番号４６：
FIGMEDLKDMFSSLG

【0184】

配列番号９５：マイクロアレイペプチド番号４７：
IGMEDLKDMFSSLGR

【0185】

配列番号９６：マイクロアレイペプチド番号４８：
GMEDLKDMFSSLGRV

【0186】

配列番号９７：マイクロアレイペプチド番号４９：
MEDLKDMFSSLGRVP

【0187】

配列番号９８：マイクロアレイペプチド番号５０：
EDLKDMFSSLGRVPP

【0188】

配列番号９９：マイクロアレイペプチド番号５１：
DLKDMFSSLGRVPPD

【0189】

配列番号１００：マイクロアレイペプチド番号５２：
LKDMFSSLGRVPPDD

【0190】

配列番号１０１：マイクロアレイペプチド番号５３：
KDMFSSLGRVPPDDE

【0191】

配列番号１０２：マイクロアレイペプチド番号５４：
DMFSSLGRVPPDDEL

【0192】

配列番号１０３：マイクロアレイペプチド番号５５：
MFSSLGRVPPDDELN

【0193】

配列番号１０４：マイクロアレイペプチド番号５６：
FSSLGRVPPDDELNA

【0194】

配列番号１０５：マイクロアレイペプチド番号５７：
SSLGRVPPDDELNAM

【0195】

配列番号１０６：マイクロアレイペプチド番号５８：
SLGRVPPDDELNAML

【0196】

配列番号１０７：マイクロアレイペプチド番号５９：
LGRVPPDDELNAMLK

【0197】

配列番号１０８：マイクロアレイペプチド番号６０：
GRVPPDDELNAMLKE

【0198】

配列番号１０９：マイクロアレイペプチド番号６１：
RVPPDDELNAMLKEC

【0199】

配列番号１１０：マイクロアレイペプチド番号６２：
VPPDDELNAMLKECP

【0200】

配列番号１１１：マイクロアレイペプチド番号６３：
PPDDELNAMLKECPG

【0201】

配列番号１１２：マイクロアレイペプチド番号６４：
PDDELNAMLKECPGQ

【0202】

配列番号１１３：マイクロアレイペプチド番号６５：
DDELNAMLKECPGQL

【0203】

配列番号１１４：マイクロアレイペプチド番号６６：
DELNAMLKECPGQLN

【0204】

配列番号１１５：マイクロアレイペプチド番号６７：
ELNAMLKECPGQLNF

【0205】

配列番号１１６：マイクロアレイペプチド番号６８：
LNAMLKECPGQLNFT

【0206】

配列番号１１７：マイクロアレイペプチド番号６９：
NAMLKECPGQLNFTA

【0207】

配列番号１１８：マイクロアレイペプチド番号７０：
AMLKECPGQLNFTAF

【0208】

配列番号１１９：マイクロアレイペプチド番号７１：
MLKECPGQLNFTAFL

【0209】

配列番号１２０：マイクロアレイペプチド番号７２：
LKECPGQLNFTAFLT

【0210】

配列番号１２１：マイクロアレイペプチド番号７３：
KECPGQLNFTAFLTL

【0211】

配列番号１２２：マイクロアレイペプチド番号７４：
ECPGQLNFTAFLTLF

【0212】

配列番号１２３：マイクロアレイペプチド番号７５：
CPGQLNFTAFLTLFG

【0213】

配列番号１２４：マイクロアレイペプチド番号７６：
PGQLNFTAFLTLFGE

【0214】

配列番号１２５：マイクロアレイペプチド番号７７：
GQLNFTAFLTLFGEK

【0215】

配列番号１２６：マイクロアレイペプチド番号７８：
QLNFTAFLTLFGEKV

【0216】

配列番号１２７：マイクロアレイペプチド番号７９：
LNFTAFLTLFGEKVS

【0217】

配列番号１２８：マイクロアレイペプチド番号８０：
NFTAFLTLFGEKVSG

【0218】

配列番号１２９：マイクロアレイペプチド番号８１：
FTAFLTLFGEKVSGT

【0219】

配列番号１３０：マイクロアレイペプチド番号８２：
TAFLTLFGEKVSGTD

【0220】

配列番号１３１：マイクロアレイペプチド番号８３：
AFLTLFGEKVSGTDP

【0221】

配列番号１３２：マイクロアレイペプチド番号８４：
FLTLFGEKVSGTDPE

【0222】

配列番号１３３：マイクロアレイペプチド番号８５：
LTLFGEKVSGTDPED

【0223】

配列番号１３４：マイクロアレイペプチド番号８６：
TLFGEKVSGTDPEDA

【0224】

配列番号１３５：マイクロアレイペプチド番号８７：
LFGEKVSGTDPEDAL

【0225】

配列番号１３６：マイクロアレイペプチド番号８８：
FGEKVSGTDPEDALR

【0226】

配列番号１３７：マイクロアレイペプチド番号８９：
GEKVSGTDPEDALRN

【0227】

配列番号１３８：マイクロアレイペプチド番号９０：
EKVSGTDPEDALRNA

【0228】

配列番号１３９：マイクロアレイペプチド番号９１：
KVSGTDPEDALRNAF

【0229】

配列番号１４０：マイクロアレイペプチド番号９２：
VSGTDPEDALRNAFS

【0230】

配列番号１４１：マイクロアレイペプチド番号９３：
SGTDPEDALRNAFSM

【0231】

配列番号１４２：マイクロアレイペプチド番号９４：
GTDPEDALRNAFSMF

【0232】

配列番号１４３：マイクロアレイペプチド番号９５：
TDPEDALRNAFSMFD

【0233】

配列番号１４４：マイクロアレイペプチド番号９６：
DPEDALRNAFSMFDE

【0234】

配列番号１４５：マイクロアレイペプチド番号９７：
PEDALRNAFSMFDED

【0235】

配列番号１４６：マイクロアレイペプチド番号９８：
EDALRNAFSMFDEDG

【0236】

配列番号１４７：マイクロアレイペプチド番号９９：
DALRNAFSMFDEDGQ

【0237】

配列番号１４８：マイクロアレイペプチド番号１００：
ALRNAFSMFDEDGQG

【0238】

配列番号１４９：マイクロアレイペプチド番号１０１：
LRNAFSMFDEDGQGF

【0239】

配列番号１５０：マイクロアレイペプチド番号１０２：
RNAFSMFDEDGQGFI

【0240】

配列番号１５１：マイクロアレイペプチド番号１０３：
NAFSMFDEDGQGFIP

【0241】

配列番号１５２：マイクロアレイペプチド番号１０４：
AFSMFDEDGQGFIPE

【0242】

配列番号１５３：マイクロアレイペプチド番号１０５：
FSMFDEDGQGFIPED

【0243】

配列番号１５４：マイクロアレイペプチド番号１０６：
SMFDEDGQGFIPEDY

【0244】

配列番号１５５：マイクロアレイペプチド番号１０７：
MFDEDGQGFIPEDYL

【0245】

配列番号１５６：マイクロアレイペプチド番号１０８：
FDEDGQGFIPEDYLK

【0246】

配列番号１５７：マイクロアレイペプチド番号１０９：
DEDGQGFIPEDYLKD

【0247】

配列番号１５８：マイクロアレイペプチド番号１１０：
EDGQGFIPEDYLKDL

【0248】

配列番号１５９：マイクロアレイペプチド番号１１１：
DGQGFIPEDYLKDLL

【0249】

配列番号１６０：マイクロアレイペプチド番号１１２：
GQGFIPEDYLKDLLE

【0250】

配列番号１６１：マイクロアレイペプチド番号１１３：
QGFIPEDYLKDLLEN

【0251】

配列番号１６２：マイクロアレイペプチド番号１１４：
GFIPEDYLKDLLENM

【0252】

配列番号１６３：マイクロアレイペプチド番号１１５：
FIPEDYLKDLLENMG

【0253】

配列番号１６４：マイクロアレイペプチド番号１１６：
IPEDYLKDLLENMGD

【0254】

配列番号１６５：マイクロアレイペプチド番号１１７：
PEDYLKDLLENMGDN

【0255】

配列番号１６６：マイクロアレイペプチド番号１１８：
EDYLKDLLENMGDNF

【0256】

配列番号１６７：マイクロアレイペプチド番号１１９：
DYLKDLLENMGDNFS

【0257】

配列番号１６８：マイクロアレイペプチド番号１２０：
YLKDLLENMGDNFSK

【0258】

配列番号１６９：マイクロアレイペプチド番号１２１：
LKDLLENMGDNFSKE

【0259】

配列番号１７０：マイクロアレイペプチド番号１２２：
KDLLENMGDNFSKEE

【0260】

配列番号１７１：マイクロアレイペプチド番号１２３：
DLLENMGDNFSKEEI

【0261】

配列番号１７２：マイクロアレイペプチド番号１２４：
LLENMGDNFSKEEIK

【0262】

配列番号１７３：マイクロアレイペプチド番号１２５：
LENMGDNFSKEEIKN

【0263】

配列番号１７４：マイクロアレイペプチド番号１２６：
ENMGDNFSKEEIKNV

【0264】

配列番号１７５：マイクロアレイペプチド番号１２７：
NMGDNFSKEEIKNVW

【0265】

配列番号１７６：マイクロアレイペプチド番号１２８：
MGDNFSKEEIKNVWK

【0266】

配列番号１７７：マイクロアレイペプチド番号１２９：
GDNFSKEEIKNVWKD

【0267】

配列番号１７８：マイクロアレイペプチド番号１３０：
DNFSKEEIKNVWKDA

【0268】

配列番号１７９：マイクロアレイペプチド番号１３１：
NFSKEEIKNVWKDAP

【0269】

配列番号１８０：マイクロアレイペプチド番号１３２：
FSKEEIKNVWKDAPL

【0270】

配列番号１８１：マイクロアレイペプチド番号１３３：
SKEEIKNVWKDAPLK

【0271】

配列番号１８２：マイクロアレイペプチド番号１３４：
KEEIKNVWKDAPLKN

【0272】

配列番号１８３：マイクロアレイペプチド番号１３５：
EEIKNVWKDAPLKNK

【0273】

配列番号１８４：マイクロアレイペプチド番号１３６：
EIKNVWKDAPLKNKQ

【0274】

配列番号１８５：マイクロアレイペプチド番号１３７：
IKNVWKDAPLKNKQF

【0275】

配列番号１８６：マイクロアレイペプチド番号１３８：
KNVWKDAPLKNKQFN

【0276】

配列番号１８７：マイクロアレイペプチド番号１３９：
NVWKDAPLKNKQFNY

【0277】

配列番号１８８：マイクロアレイペプチド番号１４０：
VWKDAPLKNKQFNYN

【0278】

配列番号１８９：マイクロアレイペプチド番号１４１：
WKDAPLKNKQFNYNK

【0279】

配列番号１９０：マイクロアレイペプチド番号１４２：
KDAPLKNKQFNYNKM

【0280】

配列番号１９１：マイクロアレイペプチド番号１４３：
DAPLKNKQFNYNKMV

【0281】

配列番号１９２：マイクロアレイペプチド番号１４４：
APLKNKQFNYNKMVD

【0282】

配列番号１９３：マイクロアレイペプチド番号１４５：
PLKNKQFNYNKMVDI

【0283】

配列番号１９４：マイクロアレイペプチド番号１４６：
LKNKQFNYNKMVDIK

【0284】

配列番号１９５：マイクロアレイペプチド番号１４７：
KNKQFNYNKMVDIKG

【0285】

配列番号１９６：マイクロアレイペプチド番号１４８：
NKQFNYNKMVDIKGK

【0286】

配列番号１９７：マイクロアレイペプチド番号１４９：
KQFNYNKMVDIKGKA

【0287】

配列番号１９８：マイクロアレイペプチド番号１５０：
QFNYNKMVDIKGKAE

【0288】

配列番号１９９：マイクロアレイペプチド番号１５１：
FNYNKMVDIKGKAED

【0289】

配列番号２００：マイクロアレイペプチド番号１５２：
NYNKMVDIKGKAEDE

【0290】

配列番号２０１：マイクロアレイペプチド番号１５３：
YNKMVDIKGKAEDED

【0291】

配列番号２０２：マイクロアレイペプチド番号１５４：
NKMVDIKGKAEDEDG

【0292】

配列番号２０３：マイクロアレイペプチド番号１５５：
KMVDIKGKAEDEDGS

【0293】

配列番号２０４：マイクロアレイペプチド番号１５６：
MVDIKGKAEDEDGSG

【0294】

配列番号２０５：マイクロアレイペプチド番号１５７：
VDIKGKAEDEDGSGS

【0295】

配列番号２０６：マイクロアレイペプチド番号１５８：
DIKGKAEDEDGSGSG

【0296】

配列番号２０７：マイクロアレイペプチド番号１５９：
IKGKAEDEDGSGSGS

【0297】

配列番号２０８：マイクロアレイペプチド番号１６０：
KGKAEDEDGSGSGSG

【0298】

本発明は、本発明のさらなる特徴、実施形態、態様及び利点をとり得る、以下の非限定的な実施例によってさらに説明される。

【実施例】

【0299】

［実施例１：Ｔｏｄ ｐ ＭＬＣ１及びＴｏｄ ｐ ＭＬＣ２の診断的信頼性の評価］
＜Ｔｏｄ ｐ ＭＬＣ１及びＴｏｄ ｐ ＭＬＣ２のクローニング、組換え発現及び精製＞
リンカー及びＨｉｓタグの配列に連結される上記のタンパク質のコーディングＤＮＡ配列を、遺伝子合成によって生成し（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ＧｍｂＨ）、ポリメラーゼ連鎖反応によって増幅し、ｐＢＡＤ／ＴＯＰＯ（登録商標）ＴｈｉｏＦｕｓｉｏｎ（商標）発現キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して組換えベクターｐＥｔ２４ｄにサブクローニングした。得られた配列番号１２（エビＭＬＣ、Ｌｉｔ ｖ ３．０１０１をコードするインサートを含む）、配列番号１３（エビＴＭ、Ｐｅｎ ａ １．０１０１をコードするインサートを含む）、配列番号１４（イカＴＭ、Ｓｅｐ ｌ１．０１０１をコードするインサートを含む）、配列番号１５（イカＭＬＣ１をコードするインサートを含む）及び配列番号１６（イカＭＬＣ２をコードするインサートを含む）を使用した。この融合タンパク質を、製造業者によって記載のとおり、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させ、ニッケルマトリックスにおけるアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）によって単離した。

【0300】

＜多重パラメータラインブロットの調製（ＥＵＲＯＬＩＮＥ）＞
ＥＵＲＯＬＩＮＥラインブロットは、ニトロセルロースメンブレン（Ｗｈａｔｍａｎから市販されている）上に、精密ディスペンサー（Ｚｅｔａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販されている）を使用し、単離された単一融合タンパク質の配列番号３（Ｈｉｓタグを有するエビＴＭ Ｐｅｎ ａ １．０１０１）、配列番号５（Ｓｅｐ Ｉ １．０１０１、Ｈｉｓタグを有するイカＴＭ）、配列番号１７（Ｌｉｔ ｖ ３．０１０１、Ｈｉｓタグを有するエビＭＬＣ２）、配列番号９（Ｈｉｓタグを有するイカＭＬＣ１）及び配列番号１１（Ｈｉｓタグを有するイカＭＬＣ２）をコーティングすることによって生成した。製造業者の指示の推奨のとおり、ブロッキング及び洗浄の後に、単一のタンパク質を含有するメンブレンを３ｍｍのストリップに整列及び切断し、マルチパラメータ試験を行った。最終的な配置を図１に示す。

【0301】

＜ＥＵＲＯＬＩＮＥラインアッセイを使用した試料の評価＞
ＥＵＲＯＬＩＮＥストリップを、製造業者（ＥＵＲＯＩＭＭＵＮ Ｍｅｄｉｚｉｎｉｓｃｈｅ Ｌａｂｏｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｋａ ＡＧ、リューベック、ドイツ）の指示（製品番号ＤＰ３１１０－１６０１Ｅ）の推奨のとおり、インキュベートした。詳細には、ストリップを、洗浄緩衝液において１ｍｌの１／１１（ｖ／ｖ）の希釈患者試料（２５人のイカアレルギー患者及び４２人のイカ耐性患者）と、室温にて１６時間インキュベートした。患者の試料を除去した後、ストリップを１ストリップあたり１ｍｌの洗浄緩衝液で５分間、３回洗浄し、続いてＡＰとコンジュゲートした１ｍｌの抗ヒトＩｇＥ抗体と１時間インキュベートした。その後、ストリップを再度洗浄緩衝液で５回洗浄し、次いでＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質で１０分間インキュベートした。

【0302】

結果の評価を、スキャナ及びＥＵＲＯＬＩＮＥＳｃａｎ（登録商標）プログラム（ＥＵＲＯＩＭＭＵＮ ＡＧ、リューベック、ドイツ）を使用して実施した。半定量分析は、ＷＨＯ基準（７５／５０２）のＩｇＥ検量線を使用することにより実現することが可能である。

【0303】

＜統計分析＞
アッセイ性能統計は、患者の食品チャレンジの結果に基づいてＴＰ：真陽性試験結果のパーセンテージ、ＴＮ：真陰性試験結果のパーセンテージ、ＦＰ：偽陽性試験結果のパーセンテージ、ＦＮ：偽陰性試験結果のパーセンテージの定義で計算した。

【0304】

＜結果＞
単一アレルゲン成分に対するイカアレルギーに基づく感作の予測が可能かどうかを特定するために、様々なエビ及びイカのタンパク質を含有するＥＵＲＯＬＩＮＥ多重パラメータストリップを、２５人のイカアレルギーの小児及び４２人のイカ耐性の小児からの試料とインキュベートした。

【0305】

アッセイ性能統計を表１に示す。イカ及びエビＴＭの両方は、高い感度及び中程度の特異度を示し、それぞれ５７％及び５９％のＰＰＶをもたらす。ＴＭは交差反応性の高い節足動物汎アレルゲンとして広く認められているため、この結果は驚くことではなく、実施されたアッセイの妥当性を確認するものである。

【0306】

反対に、イカＭＬＣ２は、同様の特異度（８６％対９５％）を有するエビＭＬＣ２と比較してより高い感度を示し（４４％対１６％）、ＰＰＶ値（６５％対６７％）及びＮＰＶ値（７２％対６６％）をもたらす。総じて、イカＭＬＣ２は、この試験で使用される全てのタンパク質で最も高い効率性を示す。

【0307】

ＭＬＣ１の感度（８％）は制限されるが、その特異度（１００％）は優れている。

【0308】

要約すると、示された結果は、請求されるイカＭＬＣ２が、現在入手可能な全てのイカアレルギー試験システムと比較して、イカアレルギーの予測に診断上の利益をもたらすことを明確に示している。

【0309】

【表1】

【0310】

〔実施例２：Ｔｏｄ ｐＭＬＣ２＿Ｖ２の比較エピトープマッピング］
Ｅｈｌｅｒｓらの記載のとおり（Ｅｈｌｅｒｓ，Ａ．Ｍ．，Ｋｌｉｎｇｅ，Ｍ．，Ｓｕｅｒ，Ｗ．，Ｗｅｉｍａｎｎ，Ｙ．，Ｋｎｕｌｓｔ，Ａ．Ｃ．，Ｂｅｓａ，Ｆ．，Ｌｅ，Ｔ．Ｍ．，Ｏｔｔｅｎ，Ｈ．Ｇ．（２０１９）Ａｒａ ｈ ７ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｓｈａｒｅ ｍａｎｙ ｌｉｎｅａｒ ｅｐｉｔｏｐｅｓ：Ａｒｅ ３Ｄ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｃｒｕｃｉａｌ ｔｏ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ？，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ ４９（１１），１５１２－１５１９）、配列番号１０を示す１５個のアミノ酸配列の重複ペプチドを含むペプチドマイクロアレイチップを製造し、インキュベートし、１個のオフセットを選択し、３重に測定を実施した。使用されるペプチドは、配列番号５６～配列番号２０８を含む。各ペプチドは１５個のアミノ酸を含み、オフセットは１個であった。測定を３重に実施した。

【0311】

患者コホートは、イカアレルギーの患者からの１１例の血清、及び感作したが耐性のある患者からの８例の試料、及び健康なドナーからの２例の血清を含んだ。

【0312】

結果の有意性を高めるためにカットオフ値を３に増加したことを以外は、Ｅｈｌｅｒｓらによる記載のとおりに結果を評価した。抗ｈｉｓタグモノクローナル抗体３Ｄ５について記載されるような、少なくとも４アミノ酸のエピトープ長に相当する後続の４ペプチドストレッチが認められた場合に検証されたものとして判断した（Ｌｉｎｄｎｅｒ，Ｐ．，Ｂａｕｅｒ，Ｋ．，Ｋｒｅｂｂｅｒ，Ａ．，Ｎｉｅｂａ，Ｌ．，Ｋｒｅｍｍｅｒ，Ｅ．，Ｋｒｅｂｂｅｒ，Ｃ．，Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，Ａ．，Ｋｌｉｎｇｅｒ，Ｂ．，Ｍｏｃｉｋａｔ，Ｒ．，Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．（１９９７）Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｓ－ｔａｇｇｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉ－Ｈｉｓ ｔａｇ ｓｃＦｖ－ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｏｒ ｓｃＦｖ－ｐｈａｇｅ ｆｕｓｉｏｎｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２２（１），１４０－９）。

【0313】

図２は、この実施例に記載されるように、インキュベートされたペプチドチップの例を示す図である。このチップは８つのパネルで構成され、緑色のレギュラーパネルは対照ペプチドを示す。ＩｇＥ反応は緑色で示され、ＩｇＧ４反応は赤色で示される。

【0314】

図３は、実施例２で議論されるとおり配列番号１０に基づくペプチドに対する４人のアレルギー患者及び２人の耐性患者に基づく血清中の抗体反応性の検出を示す図である。Ｙ軸はＣスコアを示し、Ｘ軸は別個のペプチドを示す。黒い線はカットオフを示し、緑の列はＩＧＥ反応性を示し、赤の列はＩｇＧ４反応性を示す。

【0315】

図４は、配列番号１０に基づく重複ペプチドに対するＩｇＥ及びＩｇＧ４血清反応性のヒートマップを示す図である。

【0316】

第１の列は、患者の血清の名称を表す。左側の列は、使用されるペプチドを示す。少なくとも３つのセットスコアを有する反応を陽性と考えた。少なくとも３個の後続ペプチドが認識された場合にエピトープは有効であると考えた。緑色シグナルは、対応するペプチドとのＩＧＧ反応性を示す。赤色シグナルは、ＩＧＧ４反応性を示す。色が強いほど、シグナルは高くなる。

【0317】

＜結果＞
アレルギー患者からの血清の反応性と耐性患者からの血清の反応性との間に、明確な区別が示された。

【0318】

耐性患者からの血清の９例中２例は、配列番号１０のｎ末端領域を示すペプチドと反応したが、アレルギー患者に特異的な反応性は、ＡＬＲＮＡＦＳＭＦＤ（配列番号３０）、ＮＡＦＳＭＦ（配列番号３１）、ＦＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４２）、ＩＰＥＤＹＬＫＤＬ（配列番号４３）及びＦＳＫＥＥＩＫＮＶＷＫＤ（配列番号５１）の配列を含むペプチドに対して確認された。

【0319】

総合的に、配列番号３１、配列番号４３及び配列番号５１、並びにそれらを含むペプチド又はタンパク質の配列を含むエピトープは、アレルギー患者からの抗体によって特異的に認識されると結論づけることができる。これらのエピトープは、耐性患者の抗体のいずれによっても認識されず、イムノアッセイの試薬として、それらに結合する抗原、又はそれらに結合する若しくはそれらに結合しない抗体を設計するために使用され得る。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

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