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特許7594004フェロポーチン阻害剤（ＶＩＴ－２７６３）を用いる鎌状赤血球症を治療するための方法及び組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-11-25
(45)【発行日】2024-12-03
(54)【発明の名称】フェロポーチン阻害剤（ＶＩＴ－２７６３）を用いる鎌状赤血球症を治療するための方法及び組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/4439 20060101AFI20241126BHJP
A61P 7/06 20060101ALI20241126BHJP
A61P 9/14 20060101ALI20241126BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20241126BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20241126BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20241126BHJP
A61K 9/48 20060101ALI20241126BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20241126BHJP
A61K 31/17 20060101ALI20241126BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241126BHJP
【ＦＩ】
A61K31/4439
A61P7/06
A61P9/14
A61P1/16
A61P11/00
A61P29/00
A61K9/48
A61K45/00
A61K31/17
A61P43/00 111
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2022523485
(86)(22)【出願日】2020-10-22
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-04
(86)【国際出願番号】 EP2020079802
(87)【国際公開番号】W WO2021078889
(87)【国際公開日】2021-04-29
【審査請求日】2023-05-29
(31)【優先権主張番号】19000483.8
(32)【優先日】2019-10-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】62/924,556
(32)【優先日】2019-10-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】20163777.4
(32)【優先日】2020-03-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】20176336.4
(32)【優先日】2020-05-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】509203050
【氏名又は名称】ヴィフォール （インターナショナル） アクチェンゲゼルシャフト
【氏名又は名称原語表記】Ｖｉｆｏｒ （Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ） ＡＧ
(74)【代理人】
【識別番号】100114188
【弁理士】
【氏名又は名称】小野 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100119253
【弁理士】
【氏名又は名称】金山 賢教
(74)【代理人】
【識別番号】100124855
【弁理士】
【氏名又は名称】坪倉 道明
(74)【代理人】
【識別番号】100129713
【弁理士】
【氏名又は名称】重森 一輝
(74)【代理人】
【識別番号】100137213
【弁理士】
【氏名又は名称】安藤 健司
(74)【代理人】
【識別番号】100143823
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 英彦
(74)【代理人】
【識別番号】100183519
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻田 芳恵
(74)【代理人】
【識別番号】100196483
【弁理士】
【氏名又は名称】川嵜 洋祐
(74)【代理人】
【識別番号】100160749
【弁理士】
【氏名又は名称】飯野 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100160255
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 祐輔
(74)【代理人】
【識別番号】100182132
【弁理士】
【氏名又は名称】河野 隆
(74)【代理人】
【識別番号】100172683
【弁理士】
【氏名又は名称】綾 聡平
(74)【代理人】
【識別番号】100146318
【弁理士】
【氏名又は名称】岩瀬 吉和
(74)【代理人】
【識別番号】100127812
【弁理士】
【氏名又は名称】城山 康文
(72)【発明者】
【氏名】マノロヴァ，ヴァニア
(72)【発明者】
【氏名】デュレンベルガー，フランツ
(72)【発明者】
【氏名】ニッフェネガー，ナジャ
【審査官】長部 喜幸
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１８／１９２９７３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】MANOLOVA Vania, et al.，The oral ferroportin inhibitor VIT-2763 prevents hemolysis and vaso-occlusion in a sickle cell diseases model II，LIPPINCOTT WILLIAMS AND WILKINS NLD，2020年06月12日，vol. 4, no. Supplement 1
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ９／００－３３／４４
Ａ６１Ｋ４７／００－４７／６９
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
鎌状赤血球症に罹患している患者における血管炎症及び血管閉塞の予防及び治療における使用のための、下記式による化合物の３ＨＣｌ塩を含む医薬組成物。【化3】
【請求項2】
前記鎌状赤血球症が、ＨｂＳＳ；ＨｂＳＣ；ＨｂＳβ０サラセミア；ＨｂＳβ＋サラセミア、ＨｂＳＤ、ＨｂＳＥ及びＨｂＳＯから選択される、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項3】
経口投与用の形態である、請求項１又は２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項4】
経口投与用の充填カプセルの形態である、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項5】
前記治療が、治療を必要とする患者に、前記塩の５ｍｇ、１５ｍｇ、３０ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇ又は２４０ｍｇの１日用量を投与することを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項6】
前記治療が、治療を必要とする患者に、体重５０ｋｇ以上及び１００ｋｇ以下の患者に対して、前記塩の３０ｍｇ又は６０ｍｇの１日用量を投与することを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項7】
前記治療が、治療を必要とする患者に、前記塩の選択された１日用量を１日１回又は２回投与することを含む、請求項５又は６に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項8】
請求項１～７のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物が、当該化合物の併用投与のための逐次使用のための少なくとも一つの追加の医薬活性化合物と、固定用量又は自由用量の組み合わせで存在する、併用療法組成物。
【請求項9】
少なくとも一つの追加の医薬活性化合物が、ＳＣＤ医薬類の群から選択される、請求項８に記載の使用のための併用療法組成物。
【請求項10】
少なくとも一つの追加の医薬活性化合物が、ヒドロキシ尿素及び／又は疼痛緩和薬の群から選択される、請求項８又は９に記載の使用のための併用療法組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
鎌状赤血球症（ＳＣＤ）は、生涯続く重度の溶血性貧血、再発性疼痛発作、慢性臓器障害及び平均余命の顕著な減少を特徴とするヘモグロビン合成の遺伝性障害である。ＳＣＤは、ヘモグロビン（Ｈｂ）β遺伝子の変異により、βグロビンタンパク質のアミノ酸置換が起こり、鎌状ヘモグロビン（ＨｂＳ）対立遺伝子βＳが生じることで発症する。ＳＣＤのマウスモデル（Ｔｏｗｎｅｓマウス）では、マウスのＨｂ遺伝子が欠失され、ヒト鎌状Ｈｂ遺伝子に置き換わっている。ＨｂＳにホモ接合性であるマウスは、専らヒト鎌状Ｈｂを発現し、剛体鎌状赤血球（ｓＲＢＣ）、溶血性貧血、鉄過剰症、脾赤色髄の拡大、炎症、内皮血管への血球付着の増加による血管閉塞／血管閉塞（ＶＯ）、及び臓器損傷を有するヒトでのＳＣＤとよく似た病態を発症する。デオキシＨｂＳの重合は、鎌状ＲＢＸＣの寿命を縮め、血管内溶血及び血管外溶血を促進する。血管内溶血は、ＲＢＣから無細胞Ｈｂを放出させる。この無細胞Ｈｂは、第一鉄（Ｆｅ２＋）から第二鉄（Ｆｅ３＋）Ｈｂ（ｍｅｔＨｂ）に容易に酸化され、そこからヘムが血管内に容易に解離して、酸化ストレス、炎症、ＶＯ、虚血及び組織損傷を引き起こす（Ｕｍｂｒｅｉｔ Ｊ．，Ａｍ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，２００７）。
【0002】
それに関連するＳＣＤを治療するための従来の（承認された）薬剤は、ヒドロキシ尿素（ドロキシア、ハイドレア、シクロス）、Ｌ－グルタミン経口粉剤（エンダリ）、クリザンリズマブ（アダクベオ）、ボキセロートル（オキシブリタ）である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【文献】ＷＯ２０１７／０６８０８９Ａ１
【文献】ＷＯ２０１７０６８０９０Ａ１
【非特許文献】
【0004】
【文献】Ｕｍｂｒｅｉｔ Ｊ．， Ａｍ． Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ．， ２００７．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
ヒドロキシ尿素の連日投与は、疼痛発作の頻度を減らし、輸血や入院の必要性を減らす可能性があると考えられる。それは感染症のリスクを高める可能性がある。
【0006】
Ｌ－グルタミン経口粉剤（エンダリ）は、疼痛発作の頻度を減らすのに役立つ。
【0007】
クリザンリズマブ（アダクベオ）は静脈内投与薬であり、疼痛発作の頻度を下げるのに役立つ。副作用には、吐き気、関節痛、背部痛及び発熱を含み得る。
【0008】
ボクセロトール（オクスブライタ）は経口投与薬であり、鎌状赤血球症患者における貧血を改善する。副作用には、頭痛、吐き気、下痢、疲労、発疹及び発熱を含み得る。
【0009】
さらに、ＳＣＤ患者には鎮痛剤が定期的に投与され、それは鎌状赤血球疼痛発作時の疼痛を和らげるのに役立つが、疼痛の原因を治療するものではない。
【0010】
本発明の目的は、ＳＣＤを治療するための新規で改良された薬物又は治療法を提供することであった。特に、新規な薬物又はＳＣＤ療法は、ＳＣＤに関連するマーカー、症状又は事象の１以上を改善、緩和又は変化させ、本明細書でさらに定義されるように、正常化レベルに向かわせるものでなければならない。本発明のさらなる目的は、従来のヒドロキシ尿素治療と比較して安全性プロファイルが改善されたＳＣＤ薬剤又は治療法を提供することであった。本発明のさらなる目的は、従来のボキセロトール治療と比較して、少なくとも同じ又はさらに改善された安全性プロファイルを有するＳＣＤ薬物又は治療法を提供することであった。本発明は、本明細書において下記でより詳細に説明される１以上の態様を考慮して、改善されたＳＣＤ療法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0011】
本明細書では、下記式の化合物（化合物１２７）：
又は薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、ＳＣＤの治療方法が記載されている。好適な塩の中には、安息香酸塩、ＨＣｌ塩、クエン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩及びトルエンスルホン酸塩がある。各種実施形態において、化合物：塩の比率は、１：１、２：１、１：２又は１：３である。本明細書で使用される場合、化合物の塩は、特定の比率が示されていない限り、任意の比率の化合物：塩を指す。
【化1】
【0012】
化合物１２７及び化合物１２７の合成方法は、ＷＯ２０１７／０６８０８９及びＷＯ２０１７０６８０９０Ａ１に記載されており、それらは参照により本明細書に組み込まれる。化合物１２７の特定の塩、並びに化合物１２７の各種多形体が、ＷＯ２０１８／１９２９７３に記載されており、それは参照により本明細書に組み込まれる。鎌状赤血球症の治療におけるそこに開示された特定の塩の使用の可能性が、各種他の適応症の中のリストで言及されている。実施例１３には、化合物１２７のＨ２ＳＯ４及びＨＣｌ－モノ塩を用いた単回投与静脈及び経口薬物動態試験が記載されている。
【0013】
Ｖａｎｉａ Ｍａｎｏｌｏｖａ：″Ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｃｌａｓｓ ｏｒａｌ Ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：Ｍｏｄｅ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｂｅｔａ－Ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ″；ＥＨＡ Ａｂｓｔｒａｃｔ，１４．０６．２０１９には、中間型サラセミアの治療において化合物１２７を使用することが開示されているが、それの任意の特定の塩形態については一言もない。さらに、鎌状赤血球症の治療における潜在的な有効性についても、そこでは言及されていない。
【0014】
Ｊ．Ｈ．Ｂａｅｋら、″Ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｐｌａｓｍａ ｉｒｏｎ， ｏｘｉｄａｎｔ ｓｔｒｅｓｓ，ａｎｄ ｒｅｎａｌ ｉｎｊｕｒｙ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｓ″；ＴＲＡＮＳＦＵＳＩＯＮ，００，１－１１，２０２０では、モルモットを用いたモデルでの急性赤血球輸血直後にＶｉｆｏｒ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）社提供の低分子フェロポーチン阻害剤ＶＩＴ－２６５３を静脈投与することで、血漿鉄、ＮＴＢＩレベル、酸化ストレス及び細胞損傷が減弱される結果となったと報告されている。
【0015】
フェロポーチン－ヘプシジン軸が、血中鉄レベルを調節している。化合物１２７は、フェロポーチンの結合及び内在化においてヘプシジンと競合する。化合物１２７はフェロポーチンを阻害することで、血中への鉄輸送を阻害する。
【0016】
本発明の新たな使用の文脈における「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」又は「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、ＳＣＤに関連する少なくとも一つの症状又は病的症状の改善を含む。本発明の文脈における「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」又は「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、さらに、予防を含む。本発明による化合物１２７による治療は、特に、下記のマーカー、症状又は事象の一つ以上を、例えば正常化レベルに向けて改善、緩和又は変化させる。
【0017】
本発明による処置の効果
本発明の特定の態様は、上記若しくは下記の、又は特に実施例に記載されているマーカー、症状又は事象の１以上の治療、予防又は軽減における使用のための、本明細書のいずれかの箇所に記載されている化合物１２７に関するものである。
本発明の特定の態様は、上記若しくは下記の、又は特に実施例に記載されているマーカー、症状又は事象の１以上の治療、予防又は軽減における使用のための、本明細書のいずれかの箇所に記載されている化合物１２７に関するものである。
【0018】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、溶血を減少させる（例えば、無細胞ヘモグロビン（Ｈｂ）の減少、無細胞ヘムの減少、総ビリルビン及び間接血漿ビリルビンの減少又は血清ＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）の減少によって評価される）。
【0019】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、総血清鉄、血清フェリチン、血清トランスフェリン、及び計算ＴＳＡＴ（トランスフェリン飽和）の１以上を改善する。
【0020】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、網状赤血球増多症を軽減し、網状赤血球数及び／又は％網状赤血球を改善する。
【0021】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、総Ｈｂ、ＲＢＣ数、ヘマトクリット、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）、及び平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＣＨＣＭ）の１以上を低下させる。
【0022】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、ＲＢＣ分布幅（ＲＤＷ）、血小板及び網状赤血球数の１以上を改善する。
【0023】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、小球性ＲＢＣ（ＲＢＣ容積対Ｈｂ散布図）を改善する。
【0024】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、異常ＲＢＣ（鎌状化）における変化を達成し、及び／又はＲＢＣ鎌形化（末梢血スメア）を改善する。
【0025】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、白血球増加を軽減させる。
【0026】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、血中白血球数を低下させる（例えば、血中好中球数及び／又は血中リンパ球数を低下させる）。
【0027】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、血管外及び／又は血管内溶血を減少させる。
【0028】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、１以上の溶血マーカー、例えば間接／総ビリルビン、ｈｓＣＲＰ（高感受性Ｃ反応性タンパク質）によって測定される血中炎症マーカー、ＩＬ－１及びＩＬ－６（インターロイキン）、ＴＮＦ－α、ｓＶＣＡＭ－１、エンドセリン－１、ｓＰ－セレクチン、ｓＩＣＡＭ－１、及びキサンチンオキシダーゼを改善する。
【0029】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、Ｈｂ濃度、ＲＢＣ数、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球Ｈｂ（ＭＣＨ）、平均赤血球Ｈｂ濃度（ＭＣＨＣ）、小体Ｈｂ濃度平均（ＣＨＣＭ）、ＲＢＣ分布幅、血小板及び網状赤血球数、％網状赤血球、％低色素性、小球性ＲＢＣ（ＲＢＣ容積対Ｈｂ散布図）、ＣＨＣＭ（平均赤血球ヘモグロビン濃度）、総血清鉄、血清フェリチン、血清トランスフェリン、計算ＴＳＡＴ、ヘプシジン、ＥＰＯ（エリトロポエチン）、ＮＴＢＩ（非トランスフェリン結合鉄）、可溶性トランスフェリン受容体（ｓＴＦＲ）、（ｓＴＦＲ－２）、及びＬＤＨを含むＲＢＣ指数の１以上を改善する。
【0030】
これは、上述及び後述のパラメータの１以上を測定することで、ＳＣＤの治療における本発明の化合物の有効性を評価することができることを意味している。本発明の化合物１２７は、これらのパラメータのうち少なくとも一つを改善するのに適している。
【0031】
本発明の意味において、「改善する」又は「向上する」という用語は、治療効果の意味において、それぞれのマーカー又は症状の調節又は変化を含むことができる。
【0032】
より具体的には、本発明によるＳＣＤ治療は、以下をもたらし得る：
投与後最長７２時間、最長６０時間、最長４８時間、最長３６時間、最長２４時間又は最長１２、８、６、５、４、３、２、１及び０．５時間の期間内のいずれかの時点で測定され、そして本発明の治療の開始前０．５、１、２、３、４、５、６、８、１２、２４、３６、又は４８時間、又は最長＜１週間以内のいずれかの時点で測定される患者におけるＮＴＢＩレベルと比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は少なくとも１００％の患者におけるＮＴＢＩレベルの低下。
投与後最長７２時間、最長６０時間、最長４８時間、最長３６時間、最長２４時間又は最長１２、８、６、５、４、３、２、１及び０．５時間の期間内のいずれかの時点で測定され、そして本発明の治療の開始前０．５、１、２、３、４、５、６、８、１２、２４、３６、又は４８時間、又は最長＜１週間以内のいずれかの時点で測定される患者におけるＮＴＢＩレベルと比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は少なくとも１００％の患者におけるＮＴＢＩレベルの低下。
【0033】
投与後最長７２時間、最長６０時間、最長４８時間、最長３６時間、最長２４時間又は最長１２、８、６、５、４、３、２、１及び０．５時間の期間内のいずれかの時点で測定され、そして本発明の治療の開始前０．５、１、２、３、４、５、６、８、１２、２４、３６、又は４８時間、又は最長＜１週間以内のいずれかの時点で測定される患者における総ＬＰＩレベルと比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は少なくとも１００％の患者におけるＬＰＩレベルの低下。
【0034】
初回投与後最長１週間、最長２週間、最長３週間、最長４週間、最長３ヶ月の期間内のいずれかの時点で測定され、そして本発明の治療開始前１週間、２週間、３週間、又は４週間以内のいずれかの時点で測定される対象者における個々のパラメータと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は少なくとも１００％の、患者におけるパラメータＨｃｔ、ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＲＤＷ及び網状赤血球数のうち少なくとも一つの改善。
【0035】
初回投与後最長１週間、最長２週間、最長３週間、最長４週間、最長３ヶ月の期間内のいずれかの時点で測定され、そして本発明の治療開始前１週間、２週間、３週間、又は４週間以内のいずれかの時点で測定される患者における血清フェリチンレベルと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は少なくとも１００％の、患者における血清フェリチンレベルの低下。
【0036】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、肝臓、腎臓及び／又は脾臓におけるさらなる鉄蓄積を低減又は防止する。
【0037】
従って、さらなる態様において、当該新たな治療により、初回投与後最長１週間、最長２週間、最長３週間、最長４週間、最長３ヶ月の期間内のいずれかの時点で測定され、そして本発明の治療開始前１週間、２週間、３週間、又は４週間以内のいずれかの時点で測定されるＳＣＤ患者での肝臓、腎臓及び／又は脾臓鉄濃度のレベルと比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は少なくとも１００％の、ＳＣＤ患者における肝臓、腎臓及び／又は脾臓鉄濃度の低下が生じ得る。
【0038】
場合により、化合物１２７による治療によって、腎臓での鉄過剰が減少する。
【0039】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、血管炎症マーカー、例えばｓＶＣＡＭ－１のレベルを低下させる。
【0040】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、血管の炎症を軽減する。
【0041】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、炎症を起こした静脈内又は微小血管への血球の付着を低減し、微小血管における血流を改善する。
【0042】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、微小血管への血球の付着、血管閉塞（ＶＯ）を低減し、ＶＯ事象を軽減する。
【0043】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、ＶＯＣ又は疼痛性ＶＯＣ発作の頻度を低下させ、及び／又はＡＣＳ（急性胸部症候群）を含む疼痛性ＶＯＣの再発を防止する。
【0044】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、ＶＯＣ又は疼痛ＶＯＣ発作の頻度を低下させ、及び／又は、本発明の治療開始前１週間、２週間、３週間又は４週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、２４ヶ月以内に患者におけるＡＣＳを含む再発性疼痛ＶＯＣを予防し；又は治療後少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月又はそれ以上にわたり、ＳＣＤ患者がＶＯＣ又は疼痛ＶＯＣ発作を患わないことを達成する。
【0045】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、４８週間を通じて、疼痛（ＶＯＣ）発作の平均数の減少を達成する。
【0046】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、ＯＨ－尿素ナイーブ患者において４８週間を通じて疼痛（ＶＯＣ）発作の平均数の減少を達成する。
【0047】
好ましい態様は、血管炎症又はＶＯ及びＶＯ事象の治療、予防又は緩和における使用のための、本明細書のいずれかの箇所に記載の化合物１２７に関する。
【0048】
場合により、ＳＣＤに罹患している対象者の化合物１２７による治療は、特には本発明の治療開始前１週間、２週間、３週間又は４週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、２４ヶ月以内の患者における輸血負担と比較して患者での輸血負担の低減のようなＲＢＣ輸血の必要性を低下させ；又は治療後少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月又はそれ以上にわたりＳＣＤ患者が赤血球輸血を必要とせず、赤血球輸血に依存しなくなるようにすることを達成する。
【0049】
さらなる態様において、当該新規治療は、本発明の治療開始前１、２、３、又は４週間以内に決定されるＳＣＤ患者での生活の質と比較して、ＳＣＤ患者の生活の質の改善をもたらすことができる。生活の質の改善は、治療開始後３、６、９、１２、１５、１８、２１又は２４ヶ月以内に決定される。生活の質は、成人鎌状赤血球症生活の質測定システム（ＡＳＣＱ－ＭＥ）を用いて、患者報告転帰（ＰＲＯ）における変化を評価することにより決定されることができる。
【0050】
上記で定義されたパラメータの測定は、当技術分野の従来の方法を用いて、特に未公開のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０２０／０７０３９１に記載された方法によって実施することができ、そのそれぞれの内容は、参照によりここに包含される。
【0051】
治療される患者群
基本的に、本発明による新しい使用において治療される対象者は、齧歯類及び霊長類のような任意の哺乳類であることができ、好ましい態様では、その新たな医学的使用はヒトの治療に関するものである。ＳＣＤに罹患し、本発明による新たな方法で治療されるべき対象者は、「患者」とも称される。
基本的に、本発明による新しい使用において治療される対象者は、齧歯類及び霊長類のような任意の哺乳類であることができ、好ましい態様では、その新たな医学的使用はヒトの治療に関するものである。ＳＣＤに罹患し、本発明による新たな方法で治療されるべき対象者は、「患者」とも称される。
【0052】
治療されるべき対象者は、いずれの年齢であっても良い。本発明の好ましい態様は、小児及び青年の治療に関するものである。従って、本発明の好ましい態様では、本明細書に記載の新規な方法で治療される対象者は、≦１８歳である。より詳細には、本明細書に記載の新規の方法で治療すべき対象者は、≦１６歳、≦１５歳、≦１４歳、≦１３歳、≦１２歳、≦１１歳、≦１０歳、≦９歳、≦８歳、≦７歳、≦６歳、又は≦５歳である。本発明のさらなる態様では、本明細書に記載される新たな方法で治療される対象者は、１～３歳、３～５歳、５～７歳、７～９歳、９～１１歳、１１～１３歳、１３～１５歳、１５～２０歳、２０～２５歳、２５～３０歳、又は＞３０歳である。好ましくは、治療される小児患者は、≦１６歳又は≦１２歳である。小児を治療する場合、本明細書に記載の新たな方法で治療される対象者は、≧２歳、好ましくは≧２歳かつ≦１６歳又は≦１２歳であることが好ましい。
【0053】
成人及び青年の治療のさらなる態様では、患者は、≧１２歳又は≧１６歳である。
【0054】
成人を治療する場合、本明細書に記載の新規な方法で治療される対象者は、１８～５０歳、好ましくは１８～２５歳、２０～２５歳、２５～３０歳、３０～３５歳、３５～４０歳、４０～４５歳、４５～５０歳である。また、５０～５５歳、５５～６０歳、又は６０歳より高齢である高齢者を治療することも可能である。高齢者を治療する場合、本明細書に記載の新たな方法で治療される対象者は、６０～８０歳、例えば６０～６５歳、６５～７０歳、７０～７５歳、７５～８０歳、又は８０歳より高齢である。
【0055】
本発明の化合物による治療によってかなりの利点が提供されることから、小児及び青年の治療が特に好ましい。前記化合物は、経口投与することができ、その方が非経口投与より有利である。さらに、本発明の経口的に生物学的利用可能な化合物は、体内では適度な生物学的利用能及び半減期を有することがわかっていることから、比較的迅速に排出される。それにより、副作用が少なくなり、薬物の可逆性がより早くなり、それは小児の治療において特に重要である。
【0056】
化合物１２７は、ＨｂＳＳ、ＨｂＳＣ、ＨｂＳβ０サラセミア、ＨｂＳβ＋サラセミア、ＨｂＳＤ、ＨｂＳＥ、及びＨｂＳＯを含む各種形態のＳＣＤを患う患者を治療するのに用いることができる。特に、化合物１２７は、ＨｂＳＳ又はＨｂＳβ０サラセミアに罹患している患者を治療するのに用いることができる。
【0057】
化合物１２７は、特に、例えばヒドロキシ尿素による単独療法では十分に制御できない、本明細書のいずれかの箇所で定義のＳＣＤに罹患している患者の治療に使用することができる。
【0058】
化合物１２７は、年に１回以上のＶＯＣを有する本明細書に記載のＳＣＤに罹患している患者の治療に用いることができる。
【0059】
化合物１２７は、年に１回以上及び６回以下のＶＯＣを有する本明細書に記載のＳＣＤに罹患している患者の治療に用いることができる。
【0060】
化合物１２７は、＞１．５×正常値上限（ＵＬＮ）の絶対網状赤血球数及び％網状赤血球数を有する本明細書に記載のＳＣＤに罹患している患者の治療に用いることができる。
【0061】
化合物１２７は、脾臓の部分切除又は全摘出術の履歴を有する患者、心臓障害若しくは肺障害の病歴又は臨床的に重要な所見を有する患者、及び／又は赤血球（ＲＢＣ）輸血療法（ＳＣＤを治療するための慢性、予防的又は防止的輸血を含む）を受けたことがあるか頻繁に若しくは定期的に受けている患者の治療に使用することができる。
【0062】
投与形態
本発明による化合物は、好ましくは、例えば経口投与のための丸薬、錠剤、例えば腸溶コーティング錠、フィルム錠及び層状錠剤、経口投与のための徐放製剤、デポー製剤、糖衣錠、粒剤、乳濁液、散剤、マイクロカプセル、マイクロ製剤、ナノ製剤、リポソーム製剤、カプセル、例えば、腸溶コーティングカプセル、粉剤、微結晶製剤、散布剤、滴剤、アンプル、液剤及び懸濁液を含む経口投与形態での医薬又は医薬組成物で提供される。
本発明による化合物は、好ましくは、例えば経口投与のための丸薬、錠剤、例えば腸溶コーティング錠、フィルム錠及び層状錠剤、経口投与のための徐放製剤、デポー製剤、糖衣錠、粒剤、乳濁液、散剤、マイクロカプセル、マイクロ製剤、ナノ製剤、リポソーム製剤、カプセル、例えば、腸溶コーティングカプセル、粉剤、微結晶製剤、散布剤、滴剤、アンプル、液剤及び懸濁液を含む経口投与形態での医薬又は医薬組成物で提供される。
【0063】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、上記で定義の錠剤又はカプセルの形態で投与される。より好ましいものは、薬剤化合物１２７を充填したカプセルである。これらは、例えば、耐酸性形態として、又はｐＨ依存性コーティングを有して存在することができる。
【0064】
薬剤化合物は、純粋な薬剤物質として、又はさらなる薬学的に許容されるアジュバント、補助剤、溶媒、添加剤などを含む医薬組成物の形態でカプセルに充填されてもよい。
【0065】
一般に、本発明の化合物を含む投与形態は、さらなる薬学的に許容されるアジュバント、補助剤、充填剤、溶媒、添加剤などを含んでいてもよい。
【0066】
医薬組成物は、例えば、最大９９重量％又は最大９０重量％又は最大８０重量％又は最大７０重量％の本発明の薬剤化合物を含むことができ、残りはそれぞれ、薬理的に許容される担体及び／又は補助剤及び／又は溶媒及び／又は任意にさらなる薬学的に活性な化合物によって形成される。
【0067】
薬学的に許容される担体、補助剤又は溶媒などは、医薬目的、特に固体医薬製剤のために慣用的に使用される種々の有機若しくは無機担体及び／又は補助剤を含む、一般的な医薬担体、補助剤又は溶媒である。例としては、賦形剤（例えば、サッカロース、デンプン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム）；結合剤（例えば、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、サッカロース、デンプン）；崩壊剤（例えば、デンプン、加水分解デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースのカルシウム塩、ヒドロキシプロピルデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム）；香味剤（例えば、クエン酸、メントール、グリシン、オレンジ粉末）；保存剤（例えば、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、パラベン（例えば、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン））；安定剤（例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸及びｔｉｔｒｉｐｌｅｘシリーズの多価カルボン酸、例えばジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ））；懸濁化剤（例えば、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム）；分散剤；希釈剤（例えば、水、有機溶剤）；ワックス、脂肪及び油（例えば、ミツロウ、カカオ脂）；ポリエチレングリコール；白色ワセリン等を含む。
【0068】
液剤、懸濁剤及びゲルのような液体医薬製剤は、通常、水及び／又は薬学的に許容される有機溶媒のような液体担体を含む。さらに、このような液体製剤は、例えば、上で定義される、ｐＨ調整剤、乳化剤又は分散剤、緩衝剤、保存剤、湿潤剤、ゼラチン化剤（例えばメチルセルロース）、染料及び／又は香味剤を含むこともできる。組成物は等張性であってもよく、すなわち血液と同じ浸透圧を有することができる。組成物の等張性は、塩化ナトリウム及び他の薬学的に許容される薬剤、例えば、デキストロース、マルトース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール及び他の無機又は有機可溶性物質を用いることによって調整することができる。液体組成物の粘度は、メチルセルロースのような薬学的に許容される増粘剤によって調整することができる。他の好適な増粘剤としては、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーを含む。増粘剤の好ましい濃度は、選択される薬剤に依存する。
【0069】
液体組成物の貯蔵寿命を延ばすために薬学的に許容される保存剤を使用することができる。例えば、パラベン、チメロサール、クロロブタノール及び塩化ベンザルコニウムを含む複数の保存剤も使用することができるが、ベンジルアルコールが適切であり得る。
【0070】
したがって、本発明のさらなる態様は、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物及び多形体を含む本発明による化合物、並びに、経口投与形態で本明細書に定義のＳＣＤの治療における使用のためのそれらを含む医薬、組成物及び組み合わせ製剤に関する。
【0071】
投与法
本発明による使用のための本発明による化合物は、下記の投与法の一つによって投与することができる。
本発明による使用のための本発明による化合物は、下記の投与法の一つによって投与することができる。
【0072】
１態様において、本発明による化合物は、例えば１日１～４回、好ましくは１日１回又は２回、０．００１～５００ｍｇの用量で、治療を必要とする患者に投与することができる。しかしながら、年齢、体重、患者の症状、疾患の重症度又は投与の種類に応じて、用量を増減することができる。本発明のさらなる態様において、本発明の化合物は、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１ｍｇ、１．５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７５ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇの用量として投与することができる。
【0073】
好ましいのは０．５～５００ｍｇ、より好ましいのは１～３００ｍｇ又は３～３００ｍｇ、さらに好ましいのは１～２５０ｍｇ又は５～２５０ｍｇの用量である。
【0074】
最も好ましいのは、５ｍｇ、１５ｍｇ、３０ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇ又は２４０ｍｇの用量である。特に好ましいのは、３０ｍｇ、６０ｍｇ、９０ｍｇ、１２０ｍｇ又は２４０ｍｇの用量であり、より特に好ましいのは３０ｍｇ、６０ｍｇ、９０ｍｇ又は１２０ｍｇの用量である。最も好ましいのは、３０ｍｇ、６０ｍｇ及び１２０ｍｇの用量である。
【0075】
上記で定義された投与量を、総１日用量として１日１回投与で、又は１日２回以上の投与のために小分け用量に分割して投与することができる。
【0076】
さらなる好ましい態様において、３０ｍｇ、６０ｍｇ、９０ｍｇ又は１２０ｍｇの１日用量を、１日１回の単回投与として投与されることが好ましい。さらなる好ましい態様では、６０ｍｇ又は１２０ｍｇの１日用量を、それぞれ１日２回、二つの３０ｍｇ又は二つの６０ｍｇとして投与される。また、１日用量９０ｍｇを３０ｍｇの用量で１日３回投与することも可能である。
【0077】
さらなる態様では、０．００１～６０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～６０ｍｇ／ｋｇ、０．１～６０ｍｇ／ｋｇ、又は０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５及び６０ｍｇ／ｋｇの用量を投与することが可能である。体重５０ｋｇ以上の患者に１２０ｍｇ又は最大２４０ｍｇ、及び体重５０ｋｇ以上の患者に６０ｍｇの用量をそれぞれ１日１回又は１日２回投与することができる。体重５０ｋｇ以上の患者に６０ｍｇを、及び体重５０ｋｇ以下の患者に３０ｍｇを、各場合で１日１回又は２回投与することが好ましい。さらに、体重５０ｋｇ以上１００ｋｇ以下の患者に、上記で定義の用量３０ｍｇ及び６０ｍｇを投与することが好ましい。
【0078】
一般に、体重調整した投与が可能であり、さらなる態様ではそれが好ましい。
【0079】
本発明の化合物を年齢相応の製剤で投与することも好ましい。特に、２歳以上の患者に対する小児用投与形態は、特定の投与形態を必要とし、例としては、シロップ、液剤、滴剤、又は液体飲料に溶解させるための製剤を含む。
【0080】
さらなる態様では、初期用量として上記で定義の投与量の一つを選択し、その後、１～７日、１～５日、好ましくは１～３日、又は２日に１回の間隔を繰り返して、上記定義されたものと同じ又は変更させた用量を１回以上投与することが可能である。
【0081】
初期用量及びその後の用量は、上記で定義された投与量の中から選択し、提供された範囲内で患者のニーズに応じて調整／変動させることができる。
【0082】
特に、その後の用量は、個々の患者、疾患の経過、治療効果に応じて適切に選択することができる。１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、及びそれ以上の用量を投与することができる。
【0083】
初期用量は、１回以上の後続用量と等量又は異なっていても良い。さらに、後続の用量が等量であっても異なっていても良い。
【0084】
繰り返し投与の間隔は同じ長さであることができるか、個々の患者、疾患の経過及び治療応答に応じて変えることができる。
【0085】
好ましくは、後続用量は、後続投与回数の増加とともに減少するものである。
【0086】
好ましくは、３ｍｇ～３００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ～２５０ｍｇ、最も好ましくは５ｍｇ、１５ｍｇ、３０ｍｇ、６０ｍｇ、９０ｍｇ、１２０ｍｇ又は２４０ｍｇの用量を、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも７日間、最長４週間の治療期間にわたって１日１回投与する。さらなる好ましい態様では、３０ｍｇ、６０ｍｇ又は１２０ｍｇの用量を１日１回投与する。さらなる好ましい態様では、３０ｍｇ、６０ｍｇ又は１２０ｍｇの総１日用量の投与を、それぞれ１５ｍｇ、３０ｍｇ又は６０ｍｇの用量を１日２回投与することによって行う。
【0087】
さらなる態様では、２４０ｍｇの総１日用量の投与を、１２０ｍｇ用量を１日２回投与することによって行う。
【0088】
さらなる態様では、上記で定義された用量の中から選択される初期用量を、最初に１週間、２週間、３週間、４週間以上投与し、その後、上記で定義された用量の中から選択される増加した用量をさらに１週間、２週間、３週間、４週間以上の期間投与することにより用量を投与することで用量を変えて投与を行う。治療結果に応じて、上記で定義された期間、より高い初期用量で開始し、次いで、その後の治療間隔の間、用量を低下させることも可能である。好ましくは、３０ｍｇ又は６０ｍｇの初期１日用量を４週間投与し、その後、さらに４週間同じ用量を投与するか、又はその後、さらに４週間増量した用量を投与する。そのような投与法は、１日３０ｍｇを４週間投与し、その後１日６０ｍｇをさらに４週間投与することを含むことができる。
【0089】
特に、総１日用量２４０ｍｇまでの用量が、安全かつ良好に耐容されることがわかっている。その好ましい投与法はさらに、経口吸収が速く、投与後１５～３０分という早期に検出可能なレベルとなることを示した。吸収レベルは、繰り返し投与しても安定に維持され、臨界蓄積は観察されない。
【0090】
この好ましい投与方法はさらに、平均血清鉄レベル及び平均トランスフェリン飽和度計算値を効率的に低下させることがわかっており、ＳＣＤの治療にそれが有効であることが示している。
【0091】
併用療法
本発明のさらなる目的は、本発明の化合物及び少なくとも一つのさらなる医薬活性化合物（「併用療法化合物」）を含む医薬又は組み合わせ製剤に関するものであり、好ましくは、追加の活性化合物はＳＣＤの治療に有用である。併用療法化合物は、鉄キレート化合物を含む鉄過剰症及び関連症状の予防及び治療に用いられる活性化合物、又は鉄過剰症に付随する又は起因する症状、障害若しくは疾患のいずれかの予防及び治療のための化合物から選択することができる。好適な併用療法化合物は、ＳＣＤ、サラセミア、ヘモクロマトーシス、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病又はパーキンソン病）及び関連症状の予防及び治療のための医薬活性化合物から選択することができる。好ましくは、少なくとも一つの追加の医薬活性併用療法化合物は、ＳＣＤを治療するための薬剤、例えばヒドロキシ尿素、ボキセロートル、ＡＤＡＫＶＥＯ（登録商標）（クリザンリズマブ）、Ｌ－グルタミン経口粉剤（エンダリ）、胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）誘発剤、ＰＤＥ９の阻害剤（例えばＩＭＲ－６８７）、及び／又は疼痛緩和薬から選択される。ＳＣＤを治療するための薬剤群からの最も好ましい併用療法化合物は、胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）誘発剤である。
本発明のさらなる目的は、本発明の化合物及び少なくとも一つのさらなる医薬活性化合物（「併用療法化合物」）を含む医薬又は組み合わせ製剤に関するものであり、好ましくは、追加の活性化合物はＳＣＤの治療に有用である。併用療法化合物は、鉄キレート化合物を含む鉄過剰症及び関連症状の予防及び治療に用いられる活性化合物、又は鉄過剰症に付随する又は起因する症状、障害若しくは疾患のいずれかの予防及び治療のための化合物から選択することができる。好適な併用療法化合物は、ＳＣＤ、サラセミア、ヘモクロマトーシス、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病又はパーキンソン病）及び関連症状の予防及び治療のための医薬活性化合物から選択することができる。好ましくは、少なくとも一つの追加の医薬活性併用療法化合物は、ＳＣＤを治療するための薬剤、例えばヒドロキシ尿素、ボキセロートル、ＡＤＡＫＶＥＯ（登録商標）（クリザンリズマブ）、Ｌ－グルタミン経口粉剤（エンダリ）、胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）誘発剤、ＰＤＥ９の阻害剤（例えばＩＭＲ－６８７）、及び／又は疼痛緩和薬から選択される。ＳＣＤを治療するための薬剤群からの最も好ましい併用療法化合物は、胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）誘発剤である。
【0092】
前記少なくとも一つの別の医薬活性併用療法化合物は、さらに、鉄過剰症を軽減する薬剤（例えば、Ｔｍｐｒｓｓ６－ＡＳＯ）及び鉄キレート剤、特にはクルクミン、ＳＳＰ－００４１８４、デフェリトリン、デフェラシロクス、デフェロキサミン及びデフェリプロン、並びに、ＪＡＫ２阻害剤から選択することができる。鉄キレート化合物の群からの最も好ましい併用療法化合物は、デフェラシロクスである。
【0093】
さらなる好ましい併用療法化合物は、ルスパテルセプト、レンチグロビンＢＢ３０５（会社ブルーバードバイオ社によって開発された遺伝子療法合成ヒトヘプシジン（ＬＪＰＣ－４０１）、ヘプシジンペプチド模倣物ＰＴＧ－３００及びＴｍｐｒｓｓ６（ＩＯＮＩＳ－ＴＭＰＲＳＳ６－Ｌ ＲＸ）標的アンチセンスオリゴ核酸）のようなβ－サラセミアを治療するための薬剤から選択することができる。
【0094】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に定義される新規な使用及び医学的治療であって、本明細書に定義される化合物を、順次使用するために固定用量又は自由用量の組み合わせで、上記で定義の併用療法化合物の１以上との併用療法で、処置を必要とする患者に投与する。そのような併用療法は、本発明で定義の化合物と、少なくとも一つの追加の医薬活性化合物（薬剤／併用療法化合物）との同時投与を含む。
【0095】
固定用量併用療法における併用療法は、固定用量製剤での本明細書で定義の化合物と少なくとも一つの追加の医薬活性化合物との同時投与を含む。
【0096】
自由用量併用療法における併用療法は、個々の化合物の同時投与又はある期間にわたって分散させた個々の化合物の順次使用のいずれかによる、本明細書で定義の化合物及び少なくとも一つの追加の医薬活性化合物の、個々の化合物の自由用量での同時投与を含む。
【0097】
特に好ましい実施形態では、併用療法は、化合物番号１２７と、ＳＣＤ医薬類、好ましくはヒドロキシ尿素及び／又は疼痛緩和薬の群からの併用療法化合物の同時経口投与を含む。
【0098】
本発明のさらなる態様は、薬剤化合物が、ＷＯ２０２０／１２３８５０Ａ１に記載のものの中から選択される一つ、特に後述するその特定の例示化合物の一つである、本明細書に記載の併用療法に関するものである。
【0099】
さらなる態様は、ボキセロートル、ＡＤＡＫＶＥＯ（登録商標）（クリザンリズマブ）、Ｌ－グルタミン経口粉剤（エンダリ）、胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）誘発剤、ＰＤＥ９の阻害剤（ＩＭＲ－６８７等）、及び／又は疼痛緩和薬との併用療法で、本明細書に記載の化合物１２７を投与することによるＳＣＤ治療の新規な併用療法の提供に関するものである。化合物１２７と組み合わせてＳＣＤを治療するための薬剤群からの最も好ましい併用療法化合物は、胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）誘発薬である。
【0100】
さらなる有用な化合物
ＳＣＤを治療するための他の有用な化合物は、ＷＯ２０１７／０６８０８９、ＷＯ２０１７０６８０９０Ａ１及びＷＯ２０１８／１９２９７３に記載されている。したがって、一部の実施形態において、患者は、式（Ｉ）の化合物を投与することによって治療され、
式中、
Ｘ１は、Ｎ又はＯであり；そして
Ｘ２は、Ｎ、Ｓ又はＯであり；
ただし、Ｘ１及びＸ２は異なっており；
Ｒ１は、
－水素及び
－置換されていても良いアルキル
からなる群から選択され；
ｎは、１～３の整数であり；
Ａ１及びＡ２は、独立に、アルカンジイル（ａｌｋａｎｅｄｉｙ）の群から選択され；
Ｒ２は、
－水素、又は
－置換されていても良いアルキル
であり；
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、置換されていても良い４～６員環を形成し；
Ｒ３は、１、２又は３個の任意の置換基を示し、その置換基は独立に、
ハロゲン、
シアノ、
置換されていても良いアルキル、
置換されていても良いアルコキシ、及び
カルボキシル基
からなる群から選択することができ；
Ｒ４は、
水素、
ハロゲン、
Ｃ１－Ｃ３－アルキル、及び
ハロゲン置換されたアルキル
からなる群から選択される。
ＳＣＤを治療するための他の有用な化合物は、ＷＯ２０１７／０６８０８９、ＷＯ２０１７０６８０９０Ａ１及びＷＯ２０１８／１９２９７３に記載されている。したがって、一部の実施形態において、患者は、式（Ｉ）の化合物を投与することによって治療され、
【化2】
Ｘ１は、Ｎ又はＯであり；そして
Ｘ２は、Ｎ、Ｓ又はＯであり；
ただし、Ｘ１及びＸ２は異なっており；
Ｒ１は、
－水素及び
－置換されていても良いアルキル
からなる群から選択され；
ｎは、１～３の整数であり；
Ａ１及びＡ２は、独立に、アルカンジイル（ａｌｋａｎｅｄｉｙ）の群から選択され；
Ｒ２は、
－水素、又は
－置換されていても良いアルキル
であり；
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、置換されていても良い４～６員環を形成し；
Ｒ３は、１、２又は３個の任意の置換基を示し、その置換基は独立に、
ハロゲン、
シアノ、
置換されていても良いアルキル、
置換されていても良いアルコキシ、及び
カルボキシル基
からなる群から選択することができ；
Ｒ４は、
水素、
ハロゲン、
Ｃ１－Ｃ３－アルキル、及び
ハロゲン置換されたアルキル
からなる群から選択される。
【0101】
一部の実施形態において、
ｎ＝１であり；
Ｒ２＝水素であり；
Ｒ３＝水素であり；
Ｒ４＝水素であり；
Ａ１＝メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり；
Ａ２＝メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１、３－ジイルであり；
又はＡ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、置換されていても良い４員環を形成し、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）による化合物：
を形成し、
ここで、式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）において、
ｍは、１、２又は３の整数であり、
Ｘ１、Ｘ２、及びＲ１は、式（Ｉ）による化合物について定義の意味を有する。
ｎ＝１であり；
Ｒ２＝水素であり；
Ｒ３＝水素であり；
Ｒ４＝水素であり；
Ａ１＝メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり；
Ａ２＝メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１、３－ジイルであり；
又はＡ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、置換されていても良い４員環を形成し、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）による化合物：
【化3】
ここで、式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）において、
ｍは、１、２又は３の整数であり、
Ｘ１、Ｘ２、及びＲ１は、式（Ｉ）による化合物について定義の意味を有する。
【0102】
一部の実施形態において、下記のもの及び薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される化合物によって患者が治療される。
【0103】
【表1】
【0104】
さらなる好ましい態様において、本発明は、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物が、下記のもの及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、本明細書で定義の新たな使用及び治療方法に関する。
【0105】
【表2】
【0106】
さらなる好ましい態様において、本発明は、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物が、下記のもの及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、本明細書で定義の新たな使用及び治療方法に関する。
【0107】
【表3】
【0108】
一部の実施形態において、当該方法は、下記のもの及びそれらの薬学的に許容される塩から選択される化合物を投与することを含む。
【化4】
【0109】
式Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩにおいて、置換基は、次のように定義される：
置換されていても良いアルキルは、好ましくは、好ましくは１～８個、より好ましくは１～６個、特に好ましくは１～４個、さらにより好ましくは１、２若しくは３個の炭素原子を含む直鎖又は分岐アルキルを含み、Ｃ１－Ｃ４－アルキル又はＣ１－Ｃ３－アルキルとしても示される。
置換されていても良いアルキルは、好ましくは、好ましくは１～８個、より好ましくは１～６個、特に好ましくは１～４個、さらにより好ましくは１、２若しくは３個の炭素原子を含む直鎖又は分岐アルキルを含み、Ｃ１－Ｃ４－アルキル又はＣ１－Ｃ３－アルキルとしても示される。
【0110】
置換されていてもよいアルキルは、好ましくは３～８個、より好ましくは５個又は６個の炭素原子を含むシクロアルキルをさらに含む。
【0111】
１～８個の炭素原子を含むアルキル残基の例には、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｉ－プロピル基、ｎ－ブチル基、ｉ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、ｉ－ペンチル基、ｓｅｃ－ペンチル基、ｔ－ペンチル基、２－メチルブチル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、４－メチルペンチル基、１－エチルブチル基、２－エチルブチル基、３－エチルブチル基、１，１－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１－エチル－１－メチルプロピル基、ｎ－ヘプチル基、１－メチルヘキシル基、２－メチルヘキシル基、３－メチルヘキシル基、４－メチルヘキシル基、５－メチルヘキシル基、１－エチルペンチル基、２－エチルペンチル基、３－エチルペンチル基、４－エチルペンチル基、１，１－ジメチルペンチル基、２，２－ジメチルペンチル基、３，３－ジメチルペンチル基、４，４－ジメチルペンチル基、１－プロピルブチル基、ｎ－オクチル基、１－メチルヘプチル基、２－メチルヘプチル基、３－メチルヘプチル基、４－メチルヘプチル基、５－メチルヘプチル基、６－メチルヘプチル基、１－エチルヘキシル基、２－エチルヘキシル基、３－エチルヘキシル基、４－エチルヘキシル基、５－エチルヘキシル基、１，１－ジメチルヘキシル基、２，２－ジメチルヘキシル基、３，３－ジメチルヘキシル基、４，４－ジメチルヘキシル基、５，５－ジメチルヘキシル基、１－プロピルペンチル基、２－プロピルペンチル基などを含む。１～４個の炭素原子を含むもの（Ｃ１－Ｃ４－アルキル）、例えば特にメチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル及びｔ－ブチルが好ましい。Ｃ１－Ｃ３アルキル、特にメチル、エチル、プロピル及びｉ－プロピルがより好ましい。Ｃ１及びＣ２アルキル、例えばメチル及びエチルが最も好ましい。
【0112】
３～８個の炭素原子を含むシクロアルキル残基には、好ましくは、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基及びシクロオクチル基を含む。シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基及びシクロヘキシル基が好ましい。シクロプロピル基が特に好ましい。
【0113】
上記で定義の置換されていても良いアルキルの置換基には、好ましくは、例えば、下記で定義のハロゲン、例えば好ましくはＦ、上記で定義のシクロアルキル、例えば好ましくはシクロプロピル、下記で定義の置換されていても良いヘテロアリール、例えば好ましくはベンゾイミダゾリル基、下記で定義の置換されていても良いアミノ、例えば好ましくはアミノ基又はベンジルオキシカルボニルアミノ、カルボキシル基、下記で定義のアミノカルボニル基、並びに、アルキレン基、例えば特には、例えばメチレン置換されたエチル基（ＣＨ３－（Ｃ＝ＣＨ２）－又は
、式中、＊は結合箇所を示す。）を形成しているメチレン基からなる群から選択される、同一若しくは異なる置換基の１、２及び３個を含む。
【化5】
【0114】
ハロゲンにはフッ素、塩素、臭素及びヨウ素、好ましくはフッ素又は塩素を含み、フッ素が最も好ましい。
【0115】
ハロゲンによって置換された１～８個の炭素原子を含む直鎖又は分岐アルキル残基の例には、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、クロロメチル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、ブロモメチル基、ジブロモメチル基、トリブロモメチル基、１－フルオロエチル基、１－クロロエチル基、１－ブロモエチル基、２－フルオロエチル基、２－クロロエチル基、２－ブロモエチル基、ジフルオロエチル基（例えば、１，２－ジフルオロエチル基）、１，２－ジクロロエチル基、１，２－ジブロモエチル基、２，２－ジフルオロエチル基、２，２－ジクロロエチル基、２，２－ジブロモエチル基、２，２，２－トリフルオロエチル基、ヘプタフルオロエチル基、１－フルオロプロピル基、１－クロロプロピル基、１－ブロモプロピル基、２－フルオロプロピル基、２－クロロプロピル基、２－ブロモプロピル基、３－フルオロプロピル基、３－クロロプロピル基、３－ブロモプロピル基、１，２－ジフルオロプロピル基、１，２－ジクロロプロピル基、１，２－ジブロモプロピル基、２，３－ジフルオロプロピル基、２，３－ジクロロプロピル基、２，３－ジブロモプロピル基、３，３，３－トリフルオロプロピル基、２，２，３，３，３－ペンタフルオロプロピル基、２－フルオロブチル基、２－クロロブチル基、２－ブロモブチル基、４－フルオロブチル基、４－クロロブチル基、４－ブロモブチル基、４，４，４－トリフルオロブチル基、２，２，３，３，４，４，４－ヘプタフルオロブチル基、パーフルオロブチル基、２－フルオロペンチル基、２－クロロペンチル基、２－ブロモペンチル基、５－フルオロペンチル基、５－クロロペンチル基、５－ブロモペンチル基、パーフルオロペンチル基、２－フルオロヘキシル基、２－クロロヘキシル基、２－ブロモヘキシル基、６－フルオロヘキシル基、６－クロロヘキシル基、６－ブロモヘキシル基、パーフルオロヘキシル基、２－フルオロヘプチル基、２－クロロヘプチル基、２－ブロモヘプトイル基、７－フルオロヘプチル基、７－クロロヘプチル基、７－ブロモヘプチル基、パーフルオロヘプチル基などを含む。フルオロアルキル、ジフルオロアルキル及びトリフルオロアルキルが特に挙げられ、トリフルオロメチル並びにモノ－及びジ－フルオロエチルが好ましい。トリフルオロメチルが特に好ましい。
【0116】
シクロアルキル置換されたアルキル基の例には、１～３個、好ましくは１個のシクロアルキルを含む上記のアルキル残基を含み、例えばシクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチルシクロヘキシルメチル、２－シクロプロピルエチル、２－シクロブチルエチル、２－シクロペンチルエチル２－シクロヘキシルエチル、２－又は３－シクロプロピルプロピル、２－又は３－シクロブチルプロピル、２－又は３－シクロペンチルプロピル、２－又は３－シクロヘキシルプロピルなどである。好ましいものは、シクロプロピルメチルである。
【0117】
ヘテロアリール置換されたアルキル基の例には、１～３個、好ましくは１個の（置換されていても良い）ヘテロアリール基を含む上記のアルキル残基を含み、例えばピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、チオフェニル又はオキサゾリル基、例えばピリジン－２－イル－メチル、ピリジン－３－イル－メチル、ピリジン－４－イル－メチル、２－ピリジン－２－イル－エチル、２－ピリジン－１－イル－エチル、２－ピリジン－３－イル－エチル、ピリダジン－３－イル－メチル、ピリミジン－２－イル－メチル、ピリミジン－４－イル－メチル、ピラジン－２－イル－メチル、ピラゾール－３－イル－メチル、ピラゾール－４－イル－メチル、ピラゾール－５－イル－メチル、イミダゾール－２－イル－メチル、イミダゾール－５－イル－メチル、ベンゾイミダゾール－２－イル－メチル、チオフェン－２－イル－メチル、チオフェン－３－イル－メチル、１，３－オキサゾール－２－イル－メチルである。
【0118】
好ましいものは、ベンゾイミダゾリル基で置換されたアルキル基であり、例えばベンゾイミダゾール－２－イル－メチル及びベンゾイミダゾール－２－イル－エチルである。
【0119】
アミノ置換されたアルキル残基の例には、１～３個、好ましくは１個の（置換されていても良い）下記で定義のアミノ基を含む上記のアルキル残基を含み、例えば、アミノアルキル（ＮＨ２－アルキル）又はモノ－若しくはジアルキルアミノ－アルキル、例えばアミノメチル、２－アミノエチル、２－又は３－アミノプロピル、メチルアミノメチル、メチルアミノエチル、メチルアミノプロピル、２－エチルアミノメチル、３－エチルアミノメチル、２－エチルアミノエチル、３－エチルアミノエチルなど（３－アミノプロピルが好ましい）、又は下記式による基などの置換されていても良いアルキルオキシカルボニルアミノ基で置換されていても良いアルキル基であり、
式中、Ｒはフェニル基を定義し、ベンジルオキシカルボニルアミノプロピル基を形成している。
【化6】
【0120】
置換されていても良いアミノには、好ましくは、アミノ（－ＮＨ２）、置換されていても良いモノ－又はジアルキルアミノ（アルキル－ＮＨ－、（アルキル）２Ｎ－）を含み、「アルキル」に関しては、上記の置換されていても良いアルキルの定義を参照することができる。好ましいものは、モノ－又はジメチルアミノ、モノ－又はジエチルアミノ及びモノプロピルアミノである。最も好ましいものは、アミノ基（－ＮＨ２）、及びモノプロピルアミノである。
【0121】
さらに、カルボキシル基は、基［－（Ｃ＝Ｏ）－ＯＨ］を示し、アミノカルボニル基は、基［ＮＨ２－（Ｃ＝Ｏ）－］を示す。
【0122】
置換されていても良いアルコキシには、置換されていても良いアルキル－Ｏ－基を含み、前述のアルキル基の定義を参照することができる。好ましいアルコキシ基は、最大６個の炭素原子を含む直鎖若しくは分岐アルコキシ基であり、例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロピルオキシ基、ｉ－プロピルオキシ基、ｎ－ブチルオキシ基、ｉ－ブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔ－ブチルオキシ基、ｎ－ペンチルオキシ基、ｉ－ペンチルオキシ基、ｓｅｃ－ペンチルオキシ基、ｔ－ペンチルオキシ基、２－メチルブトキシ基、ｎ－ヘキシルオキシ基、ｉ－ヘキシルオキシ基、ｔ－ヘキシルオキシ基、ｓｅｃ－ヘキシルオキシ基、２－メチルペンチルオキシ基、３－メチルペンチルオキシ基、１－エチルブチルオキシ基、２－エチルブチルオキシ基、１，１－ジメチルブチルオキシ基、２，２－ジメチルブチルオキシ基、３，３－ジメチルブチルオキシ基、１－エチル－１－メチルプロピルオキシ基、並びに、シクロアルキルオキシ基、例えばシクロペンチルオキシ基又はシクロヘキシルオキシ基である。メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロピルオキシ基及びｉ－プロピルオキシ基が好ましい。メトキシ及びエトキシ基がより好ましい。特に好ましいものはメトキシ基である。
【0123】
置換されていても良いアルカンジイルは、好ましくは１～６個、好ましくは１～４個、より好ましくは１、２又は３個の炭素原子を有する二価の直鎖若しくは分岐アルカンジイル基であり、それは、ハロゲン、ヒドロキシル（－ＯＨ）、オキソ基（（＝Ｏ；カルボニル又はアシル基［－（Ｃ＝Ｏ）－］を形成）及び上記で定義のアルキル基、例えば好ましくはメチルからなる群から選択される１～３個、好ましくは１又は２個の置換基を有していても良い。好ましい例として、メチレン、エタン－１，２－ジイル、エタン－１，１－ジイル、プロパン－１，３－ジイル、プロパン－１，１－ジイル、プロパン－１，２－ジイル、プロパン－２，２－ジイル、ブタン－１，４－ジイル、ブタン－１，２－ジイル、ブタン－１，３－ジイル、ブタン－２，３－ジイル、ブタン－１，１－ジイル、ブタン－２，２－ジイル、ブタン－３，３－ジイル、ペンタン－１，５－ジイルなどを挙げることができる。特に好ましいものは、メチレン、エタン－１，２－ジイル、エタン－１，１－ジイル、プロパン－１，３－ジイル、プロパン－２，２－ジイル、及びブタン－２，２－ジイルである。最も好ましいものは、メチレン、エタン－１，２－ジイル及びプロパン－１、３－ジイルである。
【0124】
好ましい置換されたアルカンジイル基は、ヒドロキシ置換されたアルカンジイル、例えばヒドロキシ置換されたエタンジイル、オキソ置換されたアルカンジイル、例えばオキソ置換されたメチレン又はエタンジイル基であり、カルボニル又はアシル（アセチル）基、ハロゲン置換されたアルカンジイル基を形成している。
【0125】
場合により、上記で定義の直鎖若しくは分岐アルカンジイル基の意味を有するＡ１、及び上記で定義の置換されていても良いアルキル基の意味を有するＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、置換されていても良い４～６員環を形成しており、それは上記で定義の１～３個の置換基で置換されていても良い。従って、Ａ１及びＲ２が一緒になって、下記式の一つによる基を形成していることができる。
この場合、（置換された又は置換されていない）４員環形成が好ましく、例えば特には、下記の基である。
この場合、左側の結合箇所は、式（Ｉ）における位置Ｘ１とＸ２の間の複素５員環への直接結合箇所を示す。右側の結合箇所は、本明細書で定義のアルカンジイル基の意味を有する基Ａ２への結合箇所を示す。
【化7】
【化8】
【0126】
本明細書で定義の式（Ｉ）において、ｎは、１～３の整数、例えば１、２若しくは３の意味を有しており、従ってメチレン基、エタン－１，２－ジイル基又はプロパン－１、３－ジイル基を示す。より好ましくは、ｎは１又は２、さらにより好ましくは、ｎは１であり、メチレン基を示す。
【0127】
一部の実施形態において、
Ａ）
Ｘ１は、Ｎ又はＯであり；
Ｘ２は、Ｎ、Ｓ又はＯであり；
ただし、Ｘ１及びＸ２は異なっており；
従って、下記式による５員複素環：
を形成し、
式中、＊はアミノカルボニル基への結合箇所を示し、＊＊はＡ１基への結合箇所を示す。
Ａ）
Ｘ１は、Ｎ又はＯであり；
Ｘ２は、Ｎ、Ｓ又はＯであり；
ただし、Ｘ１及びＸ２は異なっており；
従って、下記式による５員複素環：
【化9】
式中、＊はアミノカルボニル基への結合箇所を示し、＊＊はＡ１基への結合箇所を示す。
【0128】
Ｂ）
ｎは、１、２又は３の整数であり；好ましくは、ｎは１又は２であり、より好ましくは、ｎは１である。
ｎは、１、２又は３の整数であり；好ましくは、ｎは１又は２であり、より好ましくは、ｎは１である。
【0129】
Ｃ）
Ｒ１は、
－水素及び
－置換されていても良いアルキル（上記で定義）
からなる群から選択され；
好ましくは、Ｒ１は、水素又はメチルであり、より好ましくは、Ｒ１は水素である。
Ｒ１は、
－水素及び
－置換されていても良いアルキル（上記で定義）
からなる群から選択され；
好ましくは、Ｒ１は、水素又はメチルであり、より好ましくは、Ｒ１は水素である。
【0130】
Ｄ）
Ｒ２は、
－水素、及び
－置換されていても良いアルキル（上記で定義）
からなる群から選択され；
好ましくは、Ｒ２は、水素又はＣ１－Ｃ４－アルキルであり、より好ましくは、Ｒ２は水素又はメチルであり、さらにより好ましくは、Ｒ２は水素である。
Ｒ２は、
－水素、及び
－置換されていても良いアルキル（上記で定義）
からなる群から選択され；
好ましくは、Ｒ２は、水素又はＣ１－Ｃ４－アルキルであり、より好ましくは、Ｒ２は水素又はメチルであり、さらにより好ましくは、Ｒ２は水素である。
【0131】
Ｅ）
Ｒ３は、１、２又は３個の任意の置換基を示し、それは独立に、
－ハロゲン（上記で定義）、
－シアノ、
－置換されていても良いアルキル（上記で定義）、
－置換されていても良いアルコキシ（上記で定義）、及び
－カルボキシル基（上記で定義）
からなる群から選択することができ；
好ましくは、Ｒ３は、１又は２個の任意の置換基を示し、それは独立に、
－ハロゲン、
－シアノ、
－１、２又は３個のハロゲン原子（上記で定義）で置換されていても良いアルキル（上記で定義）、
置換されていても良いアルコキシ（上記で定義）、及び
カルボキシル基（上記で定義）
からなる群から選択することができ；
より好ましくは、Ｒ３は、１又は２個の任意の置換基を示し、それは独立に、
－Ｆ及びＣｌ、
－シアノ、
－トリフルオロメチル、
－メトキシ、及び
－カルボキシル基
からなる群から選択することができ；
さらにより好ましくは、Ｒ３は水素であり、式（Ｉ）における未置換の末端ベンゾイミダゾリル環を示している。
Ｒ３は、１、２又は３個の任意の置換基を示し、それは独立に、
－ハロゲン（上記で定義）、
－シアノ、
－置換されていても良いアルキル（上記で定義）、
－置換されていても良いアルコキシ（上記で定義）、及び
－カルボキシル基（上記で定義）
からなる群から選択することができ；
好ましくは、Ｒ３は、１又は２個の任意の置換基を示し、それは独立に、
－ハロゲン、
－シアノ、
－１、２又は３個のハロゲン原子（上記で定義）で置換されていても良いアルキル（上記で定義）、
置換されていても良いアルコキシ（上記で定義）、及び
カルボキシル基（上記で定義）
からなる群から選択することができ；
より好ましくは、Ｒ３は、１又は２個の任意の置換基を示し、それは独立に、
－Ｆ及びＣｌ、
－シアノ、
－トリフルオロメチル、
－メトキシ、及び
－カルボキシル基
からなる群から選択することができ；
さらにより好ましくは、Ｒ３は水素であり、式（Ｉ）における未置換の末端ベンゾイミダゾリル環を示している。
【0132】
Ｆ）
Ｒ４は、
－水素、
－ハロゲン（上記で定義）、
－Ｃ１－Ｃ３－アルキル、及び
－ハロゲン置換されたアルキル（上記で定義）
からなる群から選択され；
好ましくは、Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、
－メチル、エチル、イソ－プロピル、及び
－トリフルオロメチル
からなる群から選択され；
より好ましくは、Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、
－メチル、及び
－トリフルオロメチル
からなる群から選択され；
より好ましくは、Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、及び
－メチル
からなる群から選択され；
さらにより好ましくは、Ｒ４は水素である。
Ｒ４は、
－水素、
－ハロゲン（上記で定義）、
－Ｃ１－Ｃ３－アルキル、及び
－ハロゲン置換されたアルキル（上記で定義）
からなる群から選択され；
好ましくは、Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、
－メチル、エチル、イソ－プロピル、及び
－トリフルオロメチル
からなる群から選択され；
より好ましくは、Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、
－メチル、及び
－トリフルオロメチル
からなる群から選択され；
より好ましくは、Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、及び
－メチル
からなる群から選択され；
さらにより好ましくは、Ｒ４は水素である。
【0133】
Ｇ）
Ａ１はアルカンジイルであり、
好ましくは、Ａ１は、メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり、より好ましくは、Ａ１はエタン－１，２－ジイルである。
Ａ１はアルカンジイルであり、
好ましくは、Ａ１は、メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり、より好ましくは、Ａ１はエタン－１，２－ジイルである。
【0134】
Ｈ）
Ａ２はアルカンジイルであり、
好ましくは、Ａ２は、メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１、３－ジイルであり、
より好ましくは、Ａ２は、メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり、さらにより好ましくは、Ａ２はエタン－１，２－ジイルである。
Ａ２はアルカンジイルであり、
好ましくは、Ａ２は、メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１、３－ジイルであり、
より好ましくは、Ａ２は、メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり、さらにより好ましくは、Ａ２はエタン－１，２－ジイルである。
【0135】
Ｉ）又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、上記で定義の置換されていても良い４～６員環を形成し；
その場合、Ａ１及びＲ２は、それらが結合している窒素原子とともに、好ましくは、上記で定義の置換されていても良い４員環を形成し、
その場合、Ａ１及びＲ２は、それらが結合している窒素原子とともに、より好ましくは、未置換の４員環（アゼチジニル環）を形成している。
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、上記で定義の置換されていても良い４～６員環を形成し；
その場合、Ａ１及びＲ２は、それらが結合している窒素原子とともに、好ましくは、上記で定義の置換されていても良い４員環を形成し、
その場合、Ａ１及びＲ２は、それらが結合している窒素原子とともに、より好ましくは、未置換の４員環（アゼチジニル環）を形成している。
【0136】
ここで、下記の（Ｉ）の化合物の置換基は、特に、下記の意味を有することができる：
ｎは、上記のＢ）による意味のいずれかを有し、残りの置換基は、Ａ）及びＣ）～Ｉ）で定義の意味のいずれかを有することができる。
ｎは、上記のＢ）による意味のいずれかを有し、残りの置換基は、Ａ）及びＣ）～Ｉ）で定義の意味のいずれかを有することができる。
【0137】
Ｒ１は、上記のＣ）による意味のいずれかを有し、残りの置換基は、Ａ）及びＢ）及びＤ）～Ｉ）で定義の意味のいずれかを有することができる。
【0138】
Ｒ２は、上記のＤ）による意味のいずれかを有し、残りの置換基は、Ａ）～Ｃ）及びＥ）～Ｈ）又はＩ）で定義の意味のいずれかを有することができる。
【0139】
Ｒ３は、上記のＥ）による意味のいずれかを有し、残りの置換基は、Ａ）～Ｄ）及びＦ）～Ｉ）で定義の意味のいずれかを有することができる。
【0140】
Ｒ４は、上記のＦ）による意味のいずれかを有し、残りの置換基は、Ａ）～Ｅ）及びＧ）～Ｉ）で定義の意味のいずれかを有することができる。
【0141】
Ａ１は、上記のＧ）による意味のいずれかを有し、残りの置換基は、Ａ）～Ｆ）及びＨ）又はＩ）で定義の意味のいずれかを有することができる。
【0142】
Ａ２は、上記のＨ）による意味のいずれかを有し、残りの置換基は、Ａ）～Ｇ）及びＩ）で定義の意味のいずれかを有することができる。
【0143】
Ｒ２及びＡ１は、Ｉ）で定義の意味のいずれかを有し、残りの置換基は、Ａ）～Ｃ）、Ｅ）、Ｆ）及びＨ）で定義の意味のいずれかを有することができる。
【0144】
場合により、Ｘ１は、Ｎ又はＯであり；Ｘ２は、Ｎ、Ｓ又はＯであり；ただし、Ｘ１及びＸ２は異なっており；Ｒ１は水素であり；ｎは１、２又は３であり；Ａ１は、メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり；Ａ２は、メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１，３－ジイルであり；Ｒ２は水素又はＣ１－Ｃ４－アルキルであり；
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、置換されていても良い４員環を形成し；Ｒ３は、１又は２個の任意の置換基を示し、それは
－ハロゲン、
－シアノ、
－１、２又は３個のハロゲン原子によって置換されていても良いアルキル、
－置換されていても良いアルコキシ、及び
－カルボキシル基
からなる群から選択することができ；
Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、
－メチル、エチル、イソ－プロピル、及び
－トリフルオロメチル
からなる群から選択され；又はそれの塩である。
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、置換されていても良い４員環を形成し；Ｒ３は、１又は２個の任意の置換基を示し、それは
－ハロゲン、
－シアノ、
－１、２又は３個のハロゲン原子によって置換されていても良いアルキル、
－置換されていても良いアルコキシ、及び
－カルボキシル基
からなる群から選択することができ；
Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、
－メチル、エチル、イソ－プロピル、及び
－トリフルオロメチル
からなる群から選択され；又はそれの塩である。
【0145】
場合により、その塩は、式（Ｉ）の化合物の安息香酸、クエン酸、フマル酸、塩酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸及びトルエンスルホン酸からなる群からの酸との塩から選択され、化合物（Ｉ）：酸の比が１～２：１～３であることを特徴とする。
【0146】
一般式Ｉの化合物の一部の場合では、Ｘ１は、Ｎ又はＯであり；Ｘ２は、Ｎ、Ｓ又はＯであり；ただし、Ｘ１及びＸ２は異なっており；Ｒ１は水素であり；ｎは１又は２であり；Ａ１は、メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり；Ａ２は、メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１，３－ジイルであり；Ｒ２は水素又はメチルであり；
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、未置換の４員環を形成し；
Ｒ３は１又は２個の任意の置換基を示しており、それは独立に、
－Ｆ及びＣｌ、
－シアノ、
－トリフルオロメチル、
－メトキシ、及び
－カルボキシル基
からなる群から選択することができ；
Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、
－メチル、及び
－トリフルオロメチル
からなる群から選択される。
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、未置換の４員環を形成し；
Ｒ３は１又は２個の任意の置換基を示しており、それは独立に、
－Ｆ及びＣｌ、
－シアノ、
－トリフルオロメチル、
－メトキシ、及び
－カルボキシル基
からなる群から選択することができ；
Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、
－メチル、及び
－トリフルオロメチル
からなる群から選択される。
【0147】
場合により、その塩は、式（Ｉ）の化合物の安息香酸、クエン酸、フマル酸、塩酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸及びトルエンスルホン酸からなる群からの酸との塩から選択され、化合物（Ｉ）：酸の比が１～２：１～３であることを特徴とする。
【0148】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態において、Ｘ１はＮ又はＯであり；Ｘ２はＮ、Ｓ又はＯであり；ただし、Ｘ１及びＸ２は異なっており；Ｒ１は水素であり；ｎは１であり；Ａ１は、メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり；Ａ２は、メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１，３－ジイルであり；Ｒ２は水素であり；
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、未置換の４員環を形成し；Ｒ３は水素を示していることで、未置換の末端ベンゾイミダゾリル環を形成し；Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、及び
－メチル又はそれの塩
からなる群から選択され；
その塩は、式（Ｉ）の化合物の安息香酸、クエン酸、フマル酸、塩酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸及びトルエンスルホン酸からなる群からの酸との塩から選択され、化合物（Ｉ）：酸の比が１～２：１～３であることを特徴とする。
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、未置換の４員環を形成し；Ｒ３は水素を示していることで、未置換の末端ベンゾイミダゾリル環を形成し；Ｒ４は、
－水素、
－Ｃｌ、及び
－メチル又はそれの塩
からなる群から選択され；
その塩は、式（Ｉ）の化合物の安息香酸、クエン酸、フマル酸、塩酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸及びトルエンスルホン酸からなる群からの酸との塩から選択され、化合物（Ｉ）：酸の比が１～２：１～３であることを特徴とする。
【0149】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態において、Ｘ１はＮ又はＯであり；Ｘ２はＮ、Ｓ又はＯであり；ただし、Ｘ１及びＸ２は異なっており；Ｒ１は水素であり；ｎは１であり；Ａ１は、メチレン又はエタン－１，２－ジイルであり；Ａ２は、メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１、３－ジイルであり；Ｒ２は水素であり；
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、未置換の４員環を形成し；Ｒ３は水素を示していることから、未置換の末端ベンゾイミダゾリル環を形成し；Ｒ４は水素であり；又はそれの塩である。
又は
Ａ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、未置換の４員環を形成し；Ｒ３は水素を示していることから、未置換の末端ベンゾイミダゾリル環を形成し；Ｒ４は水素であり；又はそれの塩である。
【0150】
一部の実施形態において、前記塩は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）の化合物又は下記で定義のＷＯ２０２０／１２３８５０Ａ１による化合物の安息香酸、クエン酸、フマル酸、塩酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸及びトルエンスルホン酸からなる群からの酸との塩から選択され、化合物（Ｉ）：酸の比が１～２：１～３であることを特徴とし；及び
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態において、ｎ＝１であり；Ｒ３＝水素であり；Ｒ４＝水素であり；Ａ１＝エタン－１，２－ジイルであり；Ａ２＝メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１，３－ジイルであり；Ｒ２＝水素であり；又はＡ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、置換されていても良い４員環を形成していることで、下記の式（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）による化合物：
を形成し、
ここで、式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）において、
ｍは、１、２又は３の整数であり、そして
Ｘ１、Ｘ２、及びＲ１は、式（Ｉ）の化合物を含むいずれかの実施形態において上記で定義された意味を有する。
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態において、ｎ＝１であり；Ｒ３＝水素であり；Ｒ４＝水素であり；Ａ１＝エタン－１，２－ジイルであり；Ａ２＝メチレン、エタン－１，２－ジイル又はプロパン－１，３－ジイルであり；Ｒ２＝水素であり；又はＡ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子とともに、置換されていても良い４員環を形成していることで、下記の式（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）による化合物：
【化10】
ここで、式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）において、
ｍは、１、２又は３の整数であり、そして
Ｘ１、Ｘ２、及びＲ１は、式（Ｉ）の化合物を含むいずれかの実施形態において上記で定義された意味を有する。
【0151】
特に、式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）において、Ｘ１及びＸ２は、Ａ）において上記で定義の意味を有する。
【0152】
式（ＩＩ）において、Ｒ１及びＲ２は、好ましくは水素である。
【0153】
式（ＩＩＩ）において、Ｒ１は、好ましくは水素であり、ｍは、好ましくは２である。
【0154】
一般式（ＩＩ）の化合物のさらなる好ましい実施形態において、Ｘ１及びＸ２は、Ｎ及びＯから選択され、そして、異なっており；Ｒ１＝水素であり；Ｒ２＝水素であり；及びｍ＝２である。
【0155】
塩を形成する、化合物（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）、又は下記で定義のＷＯ２０２０／１２３８５０Ａ１による化合物は、「塩基」又は「遊離塩基」とも称される。遊離塩基の形態での、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）による化合物又は下記で定義のＷＯ２０２０／１２３８５０Ａ１による化合物は、酸性基が結合し得るアミノ基のような少なくとも一つの塩基性基を有する。
【0156】
式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物又は下記で定義のＷＯ２０２０／１２３８５０Ａ１による化合物の塩は、塩基（化合物（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ））：酸の比１～２：１～３を有する塩から選択することができ、ここで、塩形成性の酸に関しては、上記で定義の選択を参照する。
【0157】
当該化合物は、塩（化合物（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ））の上記で示された酸の１以上との混合塩であって、同じ又は異なる塩基：酸比を有することができる混合塩であることができる。その酸は、カチオン型の化合物（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の対アニオンを提供するものである。
【0158】
特に好ましいものは、上記で記載の化合物の３ＨＣｌ塩である。
【0159】
特に好ましい実施形態において、当該方法は、化合物１２７の３ＨＣｌ塩を投与することを含む。
【化11】
【0160】
本発明のさらなる態様において、化合物１２７は、下記の塩の一つの形態で投与することができる。
【0161】
下記式を有する１：１硫酸塩：
下記式を有する１：１リン酸塩：
２：１リン酸塩（ヘミリン酸塩）。
【化12】
【化13】
【化14】
【0162】
フェロポーチン阻害剤として作用し、本明細書で定義のＳＣＤの治療において好適であるさらなる化合物は、ＷＯ２０２０／１２３８５０Ａ１に記載のものであり、その文献は参照によって全体が本明細書に組み込まれる。本明細書で定義のＳＣＤの治療において好適であるＷＯ２０２０／１２３８５０Ａ１に記載の化合物の中の特定の化合物は、下記のものからなる群から選択することができる：
【0163】
【表4】
【0164】
ＷＯ２０２０／１２３８５０Ａ１に記載され、上記の群から選択される化合物は、胎児性ヘモグロビン（ＨｂＦ）誘発剤との新たな併用療法で化合物を投与することによる、ＳＣＤを治療するための新たな併用療法として提供することができる。好ましい実施形態において、化合物２－（２－｛［２－（１Ｈ－１，３－ベンゾジアゾール－２－イル）エチル］アミノ}エチル）－Ｎ－［（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル］－［１，３］オキサゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミンが、ＳＣＤを治療するための胎児性ヘモグロビン（ＨｂＦ）誘発剤との併用療法で提供される。
【図面の簡単な説明】
【0165】
【図1】ＴｏｗｎｅｓマウスからのＲＢＣの溶血に対する化合物１２７の効果。無細胞Ｈｂ、ヘム及び乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の血漿レベルを示している。溶血マーカーは、市販のキット（無細胞Ｈｂキット＃ＣＳＢ Ｅ０９６３２ｈ、Ｃｕｓａｂｉｏ；ヘムアッセイキット＃ＭＡＫ３１６、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を用い、製造者の説明書にしたがって測定した。ＬＤＨは、日立臨床化学自動分析装置を用いて、血漿中で測定した。個々の値及び平均±ＳＤを示し、ダネットの多重比較検定、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎ＝マウス９～１０匹／群での一元配置ＡＮＯＶＡを用いて全ての処置群をＨｂＳＳビヒクル群と比較することで統計解析を行った。
【図2】化合物１２７又はビヒクルで６週間処置したＴｏｗｎｅｓマウスのＲＢＣ指数。個々の値及び平均±ＳＤを示し、ダネットの多重比較検定、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎ＝マウス９～１０匹／群での一元配置ＡＮＯＶＡを用いて、全ての処置群をＨｂＳＳビヒクル群と比較することで統計解析を行った。
【図3】化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスにおける高ＷＢＣ数を修正した。個々の値及び平均±ＳＤを示し、ダネットの多重比較検定、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎ＝マウス５～１０匹／群での一元配置ＡＮＯＶＡを用いて、全ての処置群をＨｂＳＳビヒクル群と比較することで統計解析を行った。
【図4】化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスにおける脾臓及び肝臓の大きさを低下させた。個々の値及び平均±ＳＤを示し、ダネットの多重比較検定、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎ＝マウス９～１０匹／群での一元配置ＡＮＯＶＡを用いて、全ての処置群をＨｂＳＳビヒクル群と比較することで統計解析を行った。
【図5】６週間にわたり化合物１２７又はビヒクルで処置したＴｏｗｎｅｓマウスにおける総及び５８Ｆｅ臓器鉄レベル。個々の値及び平均±ＳＤを示し、ダネットの多重比較検定、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎ＝マウス８～１０匹／群での一元配置ＡＮＯＶＡを用いて、全ての処置群をＨｂＳＳビヒクル群と比較することで統計解析を行った。
【図6】化合物１２７は、６週間にわたり化合物１２７で処置した鎌状赤血球マウスでのミトコンドリアを含む成熟ＲＢＣのパーセントを低下させた。
【図7】化合物１２７は、ＴｏｗｎｅｓマウスにおけるｓＶＣＡＭ－１の血漿レベルを低下させた。ｓＶＣＡＭ－１を、ＥＬＩＳＡによって測定した。個々の値及び平均±ＳＤを示し、ダネットの多重比較検定、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎ＝マウス６～９匹／群での一元配置ＡＮＯＶＡを用いて全ての処置群をＨｂＳＳビヒクル群と比較することで統計解析を行った。
【図8】第４３／４４日の化合物１２７の最終投与から３時間後に血漿鉄を測定した。個々の値と平均±ＳＤを示している。ＨｂＳＳビヒクル群に対する有意差を示している：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（ダネットの多重比較検定での一元配置ＡＮＯＶＡ）。
【図9】Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ １２０自動血液分析装置を用いて測定した第４３／４４日のＨｂＳＳ及びＨｂＡＡマウスにおけるＭＣＨＣ（左）及びＣＨＣＭ（右）。個々の値と平均±ＳＤを示している。ＨｂＳＳビヒクル群に対する有意差を示している：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（ダネットの多重比較検定での一元配置ＡＮＯＶＡ）。
【図10】Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ １２０自動血液分析装置を用いて測定した第４３／４４日の雄及び雌ＨｂＳＳ及びＨｂＡＡにおける低色素性（左上）、小球性（右上）、高色素性（左下）及び大球性（右下）ＲＢＣのパーセント。個々の値と平均±ＳＤを示している。ＨｂＳＳビヒクル群に対する有意差を示している：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（ダネットの多重比較検定での一元配置ＡＮＯＶＡ）。
【図11】試験第４３／４４日のＨｂＳＳ及びＨｂＡＡマウスの血漿中の総ビリルビン及び間接ビリルビン。個々の値と平均±ＳＤを示している。ＨｂＳＳビヒクル群に対する有意差を示している：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（ダネットの多重比較検定での一元配置ＡＮＯＶＡ）。
【図12】試験終了後のＨｂＳＳ及びＨｂＡＡマウスの血漿中のｓＰ－セレクチン（左）及びＲＡＮＴＥＳ（右）の血漿レベル。ＨｂＳＳビヒクル群に対する有意差を示している：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（ダネットの多重比較検定での一元配置ＡＮＯＶＡ）。
【図13】ＨｂＳＳ及びＨｂＡＡマウスの全血での血漿キサンチンオキシダーゼ（ＸＯ）活性及び細胞内ＲＯＳ。ＸＯの血漿活性及びＲＯＳ陽性成熟ＲＢＣのパーセントを、個々の値と平均±ＳＤとして示している。ＨｂＳＳビヒクル群と比較した有意差を示している：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１（ダネットの多重比較検定での一元配置ＡＮＯＶＡ）。
【図14】化合物１２７は、ＴｏｗｎｅｓマウスのＲＢＣ中の細胞内鉄（５６Ｆｅ及び５８Ｆｅ）を減少させた。５６Ｆｅ及び５８Ｆｅの細胞内含有量を、ＩＣＰ－ＭＳによってＴｏｗｎｅｓマウスからの洗浄ＲＢＣで測定し、ＲＢＣ数に正規化した。個々の値と平均±ＳＤを示してあり、ダネットの多重比較検定、＊ｐ＜０．０５、ｎ＝マウス６～９匹／群での一元配置ＡＮＯＶＡを用いて、全ての処置群をＨｂＳＳビヒクル群と比較することで統計解析を行った。
【図15】化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスの肝臓における門脈周囲炎症及びケモカインＣＸＣＬ１ｍＲＮＡ発現を低下させた。門脈周囲炎症の発生は、Ｈ＆Ｅ染色パラフィン切片で評価した。総肝臓ＲＮＡからのＣＸＣＬ１のｍＲＮＡ発現を、ＲＴ－ｑＰＣＲによって評価した。個々のスコア又は個々のΔＣｔ及び平均±ＳＤを示してあり、ダネットの多重比較検定、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎ＝マウス７～１１匹／群での一元配置ＡＮＯＶＡを用いて全ての処置群をＨｂＳＳビヒクル群と比較することで統計解析を行った。
【図16】化合物１２７は、肝臓損傷のバイオマーカーを低下させた。血漿中のアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）活性を、日立臨床化学自動分析装置を用いて測定した。個々の値と平均±ＳＤを示してあり、対応のない両側スチューデントｔ検定、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎ＝マウス９～１０匹／群によって統計解析を行った。
【図17】化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスの肺におけるＩＬ－１βｍＲＮＡ発現を低下させた。総肺ＲＮＡからのＩＬ－１βのｍＲＮＡ発現を、ＲＴ－ｑＰＣＲによって評価した。個々のΔＣｔ及び平均±ＳＤを示してあり、ダネットの多重比較検定、＊ｐ＜０．０５、ｎ＝マウス８～１２匹／群での一元配置ＡＮＯＶＡを用いて、全ての処置群をＨｂＳＳビヒクル群と比較することで統計解析を行った。
【0166】
図１～１７において、「ＶＩＴ－２７６３」は、化合物１２７を示す（それの３ＨＣｌ塩の形態で）。
【発明を実施するための形態】
【0167】
Ｔｏｗｎｅｓマウスを遺伝子操作して、専らヒト鎌状ヘモグロビンを発現するようにした（Ｒｙａｎ ｅｔ ａｌ． １９９０ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：５６６）。Ｔｏｗｎｅｓマウスは、貧血、網状赤血球数の上昇、脾臓の肥大、血管の炎症があり、低酸素、炎症及び溶血に応答してＶＯになりやすい。
【0168】
以下に記載する試験では、ヒトＨｂＳホモ接合体の雄及び雌マウス（ＨｂＳＳ）及び野生型（ＷＴ）ヒトヘモグロビンＨｂＡを発現する対照マウス（ＨｂＡＡ）を使用した。
【0169】
第１の試験（図１～７）：
マウスは、１０～１２週齢でＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し（Ｂ６；１２９ Ｈｂｂｔｍ２（ＨＢＧ１，ＨＢＢ＊）Ｔｏｗ／Ｈｂｂｔｍ３（ＨＢＧ１，ＨＢＢ）Ｔｏｗ Ｈｂａｔｍ１（ＨＢＡ）Ｔｏｗ／Ｊ、品番：０１３０７１；「Ｔｏｗｎｅｓマウス」）、鉄含有率の低い飼料（鉄１０～１３ｐｐｍ、Ｇｒａｎｏｖｉｔ）を与え、週末を除き６週間にわたって６０若しくは１２０ｍｇ／ｋｇの化合物１２７又はビヒクル（０．５％メチルセルロース／水）を１日２回経口投与（ｂｉｄ）した。化合物投与の合間で、マウスには、標準的な齧歯類飼料に存在する鉄（２５０ｐｐｍの鉄）の代わりに、安定な鉄同位体５８Ｆｅ（還元剤としての１０ｍＭアスコルビン酸を補充した１ｍＭ５８Ｆｅ（ＩＩ）ＳＯ４）を含む飲料水を摂取させた。標識５８Ｆｅにより、試験中に吸収された鉄と試験前に吸収された鉄を区別することができた。
マウスは、１０～１２週齢でＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し（Ｂ６；１２９ Ｈｂｂｔｍ２（ＨＢＧ１，ＨＢＢ＊）Ｔｏｗ／Ｈｂｂｔｍ３（ＨＢＧ１，ＨＢＢ）Ｔｏｗ Ｈｂａｔｍ１（ＨＢＡ）Ｔｏｗ／Ｊ、品番：０１３０７１；「Ｔｏｗｎｅｓマウス」）、鉄含有率の低い飼料（鉄１０～１３ｐｐｍ、Ｇｒａｎｏｖｉｔ）を与え、週末を除き６週間にわたって６０若しくは１２０ｍｇ／ｋｇの化合物１２７又はビヒクル（０．５％メチルセルロース／水）を１日２回経口投与（ｂｉｄ）した。化合物投与の合間で、マウスには、標準的な齧歯類飼料に存在する鉄（２５０ｐｐｍの鉄）の代わりに、安定な鉄同位体５８Ｆｅ（還元剤としての１０ｍＭアスコルビン酸を補充した１ｍＭ５８Ｆｅ（ＩＩ）ＳＯ４）を含む飲料水を摂取させた。標識５８Ｆｅにより、試験中に吸収された鉄と試験前に吸収された鉄を区別することができた。
【0170】
第２の試験（図８～１３）：
ＨｂＳ（ＨｂＳＳ）ホモ接合体Ｔｏｗｎｅｓマウス（６週齢、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、品番０１３０７１）に、低鉄飼料（ＬＩＤ、Ｇｒａｎｏｖｉｔ、カタログ２０３９、バッチ０００１９０６９０３、鉄含有量８．６ｍｇ／ｋｇ）を与え、化合物１２７を６０ｍｇ／ｋｇで１日２回（ｂｉｄ）経口投与するか、ビヒクルとしての０．５％メチルセルロース（ＭＣ）を投与した。マウスには、初回投与後６時間にわたり、１ｍＭ硫酸５８Ｆｅ（ＩＩ）と１０ｍＭアスコルビン酸を補充した飲料水（ＤＷ）を摂取させた。ＤＷ中に補充した硫酸５８Ｆｅ（ＩＩ）の濃度を、鉄含有量２５０ｍｇ／ｋｇの標準的な齧歯類飼料のレベルまで飼料による鉄分補給を補完するように調整している。残りの１８時間の間、鉄及びアスコルビン酸を含まない水を提供した。正常なヒトヘモグロビン（野生型、ＷＴ）を発現する非鎌状Ｔｏｗｎｅｓマウス（ＨｂＡＡ）には、ビヒクルを１日２回投与し、対照として使用した。化合物１２７又はビヒクルの投与とそれに続く５８Ｆｅ含有水への曝露を４４日間繰り返した。週末（ＷＥ）には投与を休止し、マウスにはＬＩＤと５８Ｆｅを含まないミネラルウォーターを自由に摂取させた。
ＨｂＳ（ＨｂＳＳ）ホモ接合体Ｔｏｗｎｅｓマウス（６週齢、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、品番０１３０７１）に、低鉄飼料（ＬＩＤ、Ｇｒａｎｏｖｉｔ、カタログ２０３９、バッチ０００１９０６９０３、鉄含有量８．６ｍｇ／ｋｇ）を与え、化合物１２７を６０ｍｇ／ｋｇで１日２回（ｂｉｄ）経口投与するか、ビヒクルとしての０．５％メチルセルロース（ＭＣ）を投与した。マウスには、初回投与後６時間にわたり、１ｍＭ硫酸５８Ｆｅ（ＩＩ）と１０ｍＭアスコルビン酸を補充した飲料水（ＤＷ）を摂取させた。ＤＷ中に補充した硫酸５８Ｆｅ（ＩＩ）の濃度を、鉄含有量２５０ｍｇ／ｋｇの標準的な齧歯類飼料のレベルまで飼料による鉄分補給を補完するように調整している。残りの１８時間の間、鉄及びアスコルビン酸を含まない水を提供した。正常なヒトヘモグロビン（野生型、ＷＴ）を発現する非鎌状Ｔｏｗｎｅｓマウス（ＨｂＡＡ）には、ビヒクルを１日２回投与し、対照として使用した。化合物１２７又はビヒクルの投与とそれに続く５８Ｆｅ含有水への曝露を４４日間繰り返した。週末（ＷＥ）には投与を休止し、マウスにはＬＩＤと５８Ｆｅを含まないミネラルウォーターを自由に摂取させた。
【0171】
ＭＵＬＴＩＧＥＮＴ鉄アッセイ（Ａｂｂｏｔｔ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて血漿鉄を測定した。
【0172】
血液パラメータを、試験最終日（第４３／４４日）に採取した全血試料で測定し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ ＡＤＶＩＡ １２０システムを使用して測定した。
【0173】
ＲＢＣ中のＲＯＣを、ＡＰＣ－ｅＦｌｕｏｒ７８０結合ラット抗マウスＴｅｒ１１９抗体及びＰＥ結合ラット抗マウスＣＤ７１抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号４７－５９２１－８２及び１２－０７１１）で標識した成熟ＲＢＣ中の指示薬クロロメチル－２′，７′－ジクロロジフルオロセインジアセテート（ＣＭ－Ｈ２ＤＣＦＤＡ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｃ６８２７）で検出した。
【0174】
血漿中のキサンチンオキシダーゼの活性は、キサンチンオキシダーゼ活性測定キット（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号ＭＡＫ０７８）を用いて測定した。
【0175】
血漿ビリルビンは、アッセイキット（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号ＭＡＫ１２６）を用い、製造者の説明書に従って測定した。
【0176】
血漿ｓＰ－セレクチン及びＲＡＮＴＥＳは、ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、それぞれカタログ番号ＭＶＣ００及びカタログ番号ＤＹ４７８－０５）により、製造者説明書に従って測定した。
【0177】
鎌状赤血球貧血（鎌状赤血球症）の治療のためのＶＯの予防における化合物１２７の活性は、例えばＹｕｌｉｎ Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．， ″ＭＥＫ１／２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｒｅｖｅｒｓｅ ａｃｕｔｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｓｉｃｋｌｅ ｃｅｌｌ ｄｉｓｅａｓｅ″； Ｔｈｅ ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌ． ３０， Ｎｏ． ３， ｐｐ １１７１－１１８６， ２０１６に記載のものなどのＷＯ２０１８／１９２９７３に記載のマウスモデルを用いることで測定することができる。当該マウスモデルは、鎌状赤血球貧血におけるＶＯの治療における化合物１２７又は本発明のさらなる実施形態の化合物の活性を測定するのに好適に適合させることができる。最適化された試験条件への好適な適合を実施することができ、これは当業者の日常的な業務の範囲内である。
【0178】
実施例１～１７に記載の二つの試験では、化合物１２７の３ＨＣｌ塩を使用する。
【0179】
実施例１：化合物１２７はＴｏｗｎｅｓマウスにおける溶血を低減した。
【0180】
Ｔｏｗｎｅｓマウスの赤血球は、ビヒクル処置された対照ＨｂＳＳ群における無細胞Ｈｂ、ヘム、ＬＤＨのレベルの上昇によって示されるように、溶血しやすい（図１）。特に、化合物１２７は、無細胞Ｈｂ、ヘム、ＬＤＨのレベルを有意に減少させたことから、化合物１２７によるフェロポーチン阻害が、Ｔｏｗｎｅｓマウスにおける溶血を減少させたことが示唆される（図１）。
【0181】
実施例２：ＲＢＣ指数に対する化合物１２７の効果
第１の試験（図１～７）：
ＨｂＳＳマウスは、ＨｂＡＡマウスと比較して、ＲＢＣ数の減少、Ｈｂ及び代償性網状赤血球増多症及び白血球数上昇のような溶血性貧血を示す血液パラメータが病的に変化している貧血である。血液パラメータは、化合物１２７による処置を６週間行った後、自動血球分析装置により新鮮なＥＤＴＡ－血液で測定した。６週間にわたるＨｂＳＳマウスでの化合物１２７の経口投与により、総Ｈｂ、ＲＢＣ数、ヘマトクリット、平均赤血球容積（ＭＣＶ）及び平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）が低下した。ＳＣＤ患者のＲＢＣ中のＨｂＳの低下は、ＨｂＳ凝集の減少及び臨床上の便益と関連している（Ｃａｓｔｒｏ Ｏ． Ａｍ． Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ．， １９９４）。
第１の試験（図１～７）：
ＨｂＳＳマウスは、ＨｂＡＡマウスと比較して、ＲＢＣ数の減少、Ｈｂ及び代償性網状赤血球増多症及び白血球数上昇のような溶血性貧血を示す血液パラメータが病的に変化している貧血である。血液パラメータは、化合物１２７による処置を６週間行った後、自動血球分析装置により新鮮なＥＤＴＡ－血液で測定した。６週間にわたるＨｂＳＳマウスでの化合物１２７の経口投与により、総Ｈｂ、ＲＢＣ数、ヘマトクリット、平均赤血球容積（ＭＣＶ）及び平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）が低下した。ＳＣＤ患者のＲＢＣ中のＨｂＳの低下は、ＨｂＳ凝集の減少及び臨床上の便益と関連している（Ｃａｓｔｒｏ Ｏ． Ａｍ． Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ．， １９９４）。
【0182】
第２の試験（図８～１３）：
Ｔｏｗｎｅｓ ＨｂＳＳマウスは、ＨｂＡＡ対照と同様の血漿鉄レベルを有する。第２の試験では、化合物１２７をＨｂＳＳマウスに６０ｍｇ／ｋｇで４４日間１日２回投与し、急性有効性のマーカーとして化合物の最終投与の３時間後に血漿鉄を測定した。化合物１２７投与を受けたＨｂＳＳマウスの血漿鉄濃度は有意に低下し、それは、化合物１２７が血液循環への鉄輸送を阻害する効果があることを示している（図８）。
Ｔｏｗｎｅｓ ＨｂＳＳマウスは、ＨｂＡＡ対照と同様の血漿鉄レベルを有する。第２の試験では、化合物１２７をＨｂＳＳマウスに６０ｍｇ／ｋｇで４４日間１日２回投与し、急性有効性のマーカーとして化合物の最終投与の３時間後に血漿鉄を測定した。化合物１２７投与を受けたＨｂＳＳマウスの血漿鉄濃度は有意に低下し、それは、化合物１２７が血液循環への鉄輸送を阻害する効果があることを示している（図８）。
【0183】
また、化合物１２７で処置したＴｏｗｎｅｓマウスでは、平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）が有意に低下した（図９、左）。ＭＣＨＣは、溶解血液中の平均Ｈｂ濃度をヘマトクリットで割ることで計算される。ＳＣＤのような溶血性疾患では、溶血した血液サンプルに遊離Ｈｂが存在するため、ＭＣＨＣ値が誤って過大に推算される可能性がある。そこで、Ｔｏｗｎｅｓマウスにおける過度の溶血によるアーチファクトの可能性を回避するため、ＲＢＣ内のＨｂＳ濃度を、小体Ｈｂ濃度平均（ＣＨＣＭ）パラメータに基づいて評価した。ＣＨＣＭはレーザー光散乱から測定され、無傷のＲＢＣ内のヘモグロビン含有量を反映する細胞Ｈｂを逆算するのに用いられる。ＣＨＣＭは溶血の影響を受けず、化合物１２７で処置したＨｂＳＳマウスにおいて有意に低く、そのことは、化合物１２７による鉄制限によって、ＳＣＤモデルでのＨｂＳの濃度が低下することをさらに示している（図９、右）。さらに、ＲＢＣ容積とＨｂ濃度に基づくＲＢＣの分布の散布図解析により、化合物１２７で処置したＨｂＳＳマウスにおいて、大球性ＲＢＣの減少に伴い、低球性及び小球性ＲＢＣのパーセントに有意な増加があることが明らかとなった（図１０）。Ｔｏｗｎｅｓマウスからの血液サンプルの血液学的分析は、フェロポーチンを遮断することによって、化合物１２７が鉄制限赤血球生成を誘発し、その結果、ＲＢＣにおけるＨｂＳ濃度が低下していることを示している。ＳＣＤ患者のＲＢＣにおけるＨｂＳ低下は、ＨｂＳ凝集の減少及び臨床的利益と関連していた（Ｃａｓｔｒｏ Ｏ． Ａｍ． Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ．， １９９４）。したがって、化合物１２７によるＨｂＳ低下は、ＳＣＤにおける新規な治療アプローチとなる可能性がある。
【0184】
第１の試験で示されるように、化合物１２７は、無細胞Ｈｂ、ヘム及びＬＤＨの減少によって示されるように、Ｔｏｗｎｅｓマウスの溶血を減弱させた（図１）。さらに、第２の試験で示されるように、化合物１２７は、臨床的に関連する溶血マーカーである総ビリルビン及び間接ビリルビンを低下させ、それはさらに、溶血を低減する化合物の有効性をさらに裏付けるものである（図１１）。
【0185】
ｓＲＢＣ、活性化白血球及び遊離ヘムの内皮との相互作用は、血管の炎症を引き起こし、血管閉塞及び臓器損傷を促進する。ＳＣＤにおける内皮機能障害は、ｓＶＣＡＭ－１及びｓＰ－セレクチンなどの可溶性接着分子のレベル上昇と関連している。
【0186】
二つの独立した試験は、化合物１２７がｓＶＣＡＭ－１（図７、第１の試験）及びｓＰ－セレクチン（図１２左、第２の独立の試験）を有意に減少させたことを示しており、それは、化合物１２７が血管の炎症を抑え、それによってＳＣＤのＴｏｗｎｅｓモデルにおける血管閉塞を防止する可能性を示唆している。
【0187】
ＲＢＣ由来のヘムは、自然免疫系を活性化する損傷関連分子パターンとして作用し、酸化物質の産生、炎症、血管閉塞、虚血及び組織損傷を生じる（Ｂｅｌｃｈｅｒ ＪＤ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． ｉｎｖｅｓｔ， ２００６）。Ｔｏｗｎｅｓマウス及びＳＣＤ患者は、循環中の白血球が上昇し、それが炎症性サイトカインやケモカインを産生して、さらなる炎症細胞を引き寄せ、内皮を活性化する。例として、ＨｂＳＳマウスは、炎症部位への白血球の動員に関与するケモカインＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）の血漿レベル上昇を示した。化合物１２７による処置により、ＨｂＳＳマウスにおけるＲＡＮＴＥＳレベルが有意に低下し（図１２、右）、それは、化合物１２７が、血液循環中の白血球数を低下させる（図３）だけでなく、それの炎症促進活性も抑制することを示唆している。
【0188】
血漿キサンチンオキシダーゼ（ＸＯ）活性は、ＳＣＤ患者で上昇し、血管内スーパーオキシドや過酸化水素の産生を促進する原因と定義された。ＸＯ活性の上昇は、Ｔｏｗｎｅｓマウスの血漿でも報告されており（Ｏｓａｒｏｇｉａｇｂｏｎ ＵＲ ｅｔ ａｌ， Ｂｌｏｏｄ， ２０００；Ａｓｌａｎ Ｍ ｅｔ ａｌ， ＰＮＡＳ， ２００１）、ＲＯＳ産生及び酸化的組織損傷の重要な原因であると考えられている。実際、ＨｂＳＳマウスでは、ＨｂＡＡマウスに比べ、ＸＯ活性が有意に高かった。化合物１２７は、ＨｂＳＳマウスの血漿中のＸＯ活性を低下させ、そのことは、血管の酸化的損傷が減少していることを示唆している（図１３左）。さらに、蛍光指示薬ＣＭ－Ｈ２ＤＣＦＤＡを用いた血球での細胞内ＲＯＳのフローサイトメトリー分析により、ＨｂＳＳマウスからのＲＢＣの大部分がＲＯＣレベルが高く、６０ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ化合物１２７による処置を行うと、ＲＯＣレベルは有意に低下した（図１３右）。
【0189】
化合物１２７によるＨｂＳの低下は、ｓＲＢＣに好ましい効果をもたらす可能性がある。重要な点として、化合物１２７は、溶血に対する代償応答のためにＳＣＤにおいて大きく拡大する網状赤血球数を有意に低下させた（図２）。
【0190】
これらのデータを合わせると、化合物１２７が酸化ストレス及び血管の炎症を低減する可能性が明らかに示されており、結果的に、血球の血管内皮への接着が減少し、最終的にＳＣＤのＴｏｗｎｅｓモデルにおいてＶＯ事象が予防される可能性がある。
【0191】
実施例３：化合物１２７のＷＢＣ指数に対する効果
ＳＣＤにおける白血球増加は、疼痛発作、急性胸部症候群、卒中及び死亡の発生率の増加と関連している（Ｐｌａｔｔ， ＮＥＪＭ， １９９１）。予想外に、化合物１２７によるＴｏｗｎｅｓマウスの処置により、血中白血球数、特に好中球及びリンパ球が有意に減少した（図３）。このデータは、化合物１２７がＳＣＤにおける炎症に有益な効果を有する可能性を示唆している。
ＳＣＤにおける白血球増加は、疼痛発作、急性胸部症候群、卒中及び死亡の発生率の増加と関連している（Ｐｌａｔｔ， ＮＥＪＭ， １９９１）。予想外に、化合物１２７によるＴｏｗｎｅｓマウスの処置により、血中白血球数、特に好中球及びリンパ球が有意に減少した（図３）。このデータは、化合物１２７がＳＣＤにおける炎症に有益な効果を有する可能性を示唆している。
【0192】
実施例４：化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスにおける脾臓及び肝臓の大きさを低下させた。
【0193】
Ｔｏｗｎｅｓマウスの脾臓は、ストレス性の赤血球生成により大きく肥大している（ＷＴと比較して最大で７倍）。注目すべき点として、化合物１２７はＴｏｗｎｅｓマウスの脾臓サイズを縮小させ、そのことは、化合物１２７が髄外赤血球造血を改善することを実証している（図４、左）。さらに、化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスの肝臓重量の増加をＷＴに近いレベルまで矯正した（図４、中央）。Ｔｏｗｎｅｓマウスにおける腎臓重量は、ＷＴ同腹仔の範囲内であり、化合物１２７処置によっても変化しなかった（図４、右）。
【0194】
実施例５：化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスにおける臓器鉄負荷を防ぎ、総腎臓鉄を減少させた。
【0195】
Ｔｏｗｎｅｓマウスは、欠損ＲＢＣの血管内及び血管外溶血の結果として、肝臓、腎臓及び脾臓のような臓器に過剰な鉄を蓄積している。ＳＣＤにおける溶血の約１／３は、変形して弾性のないｓＲＢＣの機械的破壊による血管内のものであり、２／３はマクロファージによる異常ｓＲＢＣの除去による血管外のものであると推定されている（Ｈｅｂｂｅｌ ＲＰ， Ａｍ． Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ．， ２０１１）。さらに、貧血になると腸内の低酸素誘導因子（ＨＩＦ）－２αの発現が上昇し、それが鉄の過剰吸収を引き起こす（Ｄａｓ Ｎ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０１５）。
【0196】
齧歯類ＰＫ試験における経口投与は、化合物１２７が全身的に利用できることを示しており、それは、十二指腸（食事性鉄吸収）、肝臓（肝細胞及びマクロファージでの鉄貯蔵）及び脾臓（マクロファージ中の鉄が老化赤血球を形成）を含むすべてのフェロポーチン発現組織における鉄排出を遮断できることを示唆している。臓器にすでに存在する鉄と新たに吸収された鉄に対する化合物１２７の影響を区別するために、試験中に、マウスには、安定な鉄同位体５８Ｆｅを含む飲料水を摂取できるようにした。ビヒクル又は化合物１２７で処置したＨｂＳＳマウスの臓器中の総鉄及び５８Ｆｅ含有量を、それぞれ誘導結合型プラズマ発光分光分析（ＩＣＰ－ＯＥＳ）及び誘導結合型プラズマ質量分析（ＩＣＰ－ＭＳ）によって分析した。化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスにおける総肝臓鉄濃度及び脾臓鉄含有量を変化させず、それはこれら組織からのフェロポーチン介在鉄排出と一致していた（図５、左上及び中央のパネル）。驚くべきことに、化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスからの腎臓における総鉄濃度を有意に低下させた（図５、右上パネル）。腎臓の鉄代謝及び皮質鉄沈着の異常がＳＣＤに特徴的であり、腎臓合併症に関与している（Ｖａｚｑｕｅｚ－Ｍｅｖｅｓ Ｇ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ， ２０１６）。したがって、化合物１２７による腎臓鉄の低下は、ＳＣＤにおける腎機能に対する有益な効果を有する可能性がある。
【0197】
重要な点として、化合物１２７を投与したＴｏｗｎｅｓマウスの肝臓、腎臓及び脾臓における５８Ｆｅ濃度は、ビヒクル処置マウスの濃度と比較して有意に低く、それは、化合物１２７がさらなる臓器鉄蓄積を防止することを示している（図５、下パネル）。
【0198】
実施例６：化合物１２７は、Ｔｏｗｎｅｓマウスの成熟ｓＲＢＣにおいてアポトーシスマーカーを減少させ、ミトコンドリアクリアランスを改善した。
【0199】
ＨｂＳの重合が、ｓＲＢＣにおけるフリーラジカル形成、脱水及び膜損傷を誘発し、それが細胞アポトーシスにつながる可能性がある。アポトーシスを起こした赤血球はホスファチジルセリン（ＰＳ）を細胞外空間に露出させ、それは赤血球を貪食の標的とするシグナルである。ＲＢＣ上のＰＳ露出は、ＲＢＣのアネキシンＶ染色とフローサイトメトリーによって測定した。化合物１２７は、用量依存的にｓＲＢＣ上のＰＳ露出を減少させており、そのことは、鉄の制限が、膜構成及び可能性としてＲＢＣの生存を改善することを示すものである（図６、左）。
【0200】
健常者のＲＢＣ前駆体は、マイトファジーによって末端分化時にミトコンドリアを除去する。成熟ＲＢＣにおけるミトコンドリアの異常な保持が、ＳＣＤの患者及びマウスについて報告されている（Ｊａｇａｄｅｅｓｗａｒａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１７）。ＲＢＣにおけるミトコンドリアの保持を、Ｔｅｒ１１９及びＣＤ７１抗体を用いるフローサイトメトリーによって調べて、ＲＢＣ成熟状態を識別し、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒによって、ミトコンドリアを検出した。特に、両用量で化合物１２７により処置されたＴｏｗｎｅｓマウスの赤血球は、ミトコンドリアを含む成熟ＲＢＣの割合が低かった（図６、右）。マイトファジー遺伝子における特異的欠失を有するマウスモデルは、ミトコンドリア保持に起因するＲＢＣの生存の減少を示した（Ｓａｎｄｏｖａｌ ｅｔ ａｌ．， ２００８；Ｍｏｒｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１０）。このことは、ＳＣＤにおける化合物１２７によるミトコンドリア保持ＲＢＣの割合低下が、ＲＢＣの寿命に良い影響を与える可能性を強く示唆している。
【0201】
実施例７：化合物１２７は、ＳＣＤのＴｏｗｎｅｓモデルにおいて、血管炎症マーカーを減少させた。
【0202】
ｓＲＢＣ、活性化白血球及び遊離ヘムの内皮との相互作用は、血管炎症を引き起こし、ＶＯ及び臓器傷害を促進する。ＳＣＤにおける内皮機能障害は、血管接着分子１（ｓＶＣＡＭ－１）のような可溶性接着分子のレベル上昇と関連している。溶血の減少（図１）及び白血球数の減少（図３）と一致して、化合物１２７による処置は、ＴｏｗｎｅｓマウスにおけるｓＶＣＡＭ－１レベルを有意に低下させた（図７）。このデータは、化合物１２７がＳＣＤのＴｏｗｎｅｓモデルにおいて血管炎症を減少させ、それがＶＯ事象を防止する可能性があることを示している。
【0203】
実施例８：マウスモデルでの鎌状赤血球症におけるＶＯの治療における化合物１２７の活性の測定
ＷＯ ２０１８／１９２９７３に記載の方法を用いて、本発明のフェロポーチン阻害剤化合物の活性を求めることができる。
ＷＯ ２０１８／１９２９７３に記載の方法を用いて、本発明のフェロポーチン阻害剤化合物の活性を求めることができる。
【0204】
Ｙｕｌｉｎ Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ． ｉｎ ″ＭＥＫ１／２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｒｅｖｅｒｓｅ ａｃｕｔｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｓｉｃｋｌｅ ｃｅｌｌ ｄｉｓｅａｓｅ″； Ｔｈｅ ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌ． ３０， Ｎｏ． ３， ｐｐ １１７１－１１８６， ２０１６によって記載されているマウスモデルを用いて、鎌状赤血球症治療における化合物１２７の活性を以下のように求めることができる。
【0205】
血管閉塞（ＶＯ）発作は、ＳＣＤ患者における罹患率及び死亡率の主要な原因である。低酸素、脱水、炎症又は溶血はすべて、小血管における活性化内皮への鎌状ＲＢＣ、好中球及び血小板の付着の増加に寄与して、凝血、血管閉塞、疼痛性発作及び不可逆的多臓器損傷を促進する。高白血球数、特に活性化好中球が、ＳＣＤ患者における早期死亡、無症候性脳梗塞、出血性脳卒中、及び急性胸部症候群と相関していた（Ｐｌａｔｔ ＯＳ， ＮＥＪＭ， １９９４）。ＳＣＤにおける溶血は、鎌状ＲＢＣ膜の損傷から生じて、慢性貧血とＨｂの循環中への放出を引き起こし、それがＮＯの枯渇、酸化ストレスの発生、ヘムの放出によって炎症を促進する。鎌状ＲＢＣは微小胞を放出し、それは内皮細胞による活性酸素種（ＲＯＳ）産生を誘発し、白血球の接着を促進し、ホスファチジルセリン依存的に内皮アポトーシスを誘発し、それがＳＣＤにおける急性ＶＯに寄与する（Ｃａｍｕｓ Ｍ， Ｂｌｏｏｄ， ２０１２）。
【0206】
このデータに基づくと、本発明の化合物は、鎌状ＲＢＣにおける溶血を減少させ、内皮への白血球の接着を引き続いて防止することによって、ＳＣＤにおけるＶＯを緩和し得るという仮説を立てることができる。
【0207】
この仮説を検証するために、ＳＣＤのＴｏｗｎｅｓマウスモデルにおいて、ビヒクル又は本発明の化合物を３０又は１００ｍｇ／ｋｇで１日２回（ＢＩＤ）４週間経口投与する（Ｒｙａｎ Ｔ， Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９０）。これらのマウスは、ヒトヘモグロビン（ｈα／ｈα：βＳ／βＳ、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を専ら発現するように遺伝子操作されている。Ｔｏｗｎｅｓマウスは、貧血、網状赤血球数の上昇、脾臓の肥大、血管炎症を有しており、低酸素、炎症、溶血に応答してＶＯになりやすい。炎症内皮への白血球及び鎌状赤血球の接着に対するフェロポーチン阻害剤の効果を調べるために、２５日間ビヒクル又はフェロポーチン阻害剤で処置したＴｏｗｎｅｓマウスに麻酔を施し、既報の方法に従って（Ｋａｌａｍｂｕｒ ＶＳ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ， ２００４；Ｚｅｎｎａｄｉ， Ｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ， ２００７）、滅菌条件下に窓付きチャンバを背面皮膚ひだに外科的に埋め込んだ。手術の３日後に、マウスにＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）０．５μｇを注射し、炎症を誘発させてＶＯとする。ＴＮＦα投与９０分後に、ローダミン結合Ｌｙ６Ｇ（Ｓｉｇｍａ）及びフィコエリスリン結合抗ＴＥＲ１１９ｍＡｂ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）をそれぞれ静脈注射することで、白血球及びＲＢＣをイン・ビボで標識する。微小血管の内皮への白血球及びＲＢＳの付着を、既報の方法（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ， ＦＡＳＥＢ Ｊ， ２０１６）に従って、蛍光生体顕微鏡検査によってその後の９０分間モニタリングする。すなわち、窓付きチャンバを備えた麻酔動物を３７℃に維持し、血流及び細胞接着事象を、蛍光顕微鏡（Ａｘｏｐｌａｎ顕微鏡、Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ）に接続したデジタルビデオカメラＣ２４００（浜松ホトニクス株式会社、浜松市、日本）を使用して記録する。マウス１匹につき２０～３０セグメントの微小毛細管を調べ、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて付着した蛍光標識細胞の蛍光強度を測定することにより、静止画上で細胞付着を定量する。結果は、細胞１００万当たりの蛍光単位で表した。
【0208】
結論：
要約すると、経口フェロポーチン阻害剤化合物１２７による鉄制限が、溶血、酸化ストレス、血管及び全身性炎症を有意に減少させ、ＲＢＣ形態を改善し、それによってＳＣＤのＴｏｗｎｅｓモデルにおいて血管閉塞事象が緩和され、血行動態が改善された。
要約すると、経口フェロポーチン阻害剤化合物１２７による鉄制限が、溶血、酸化ストレス、血管及び全身性炎症を有意に減少させ、ＲＢＣ形態を改善し、それによってＳＣＤのＴｏｗｎｅｓモデルにおいて血管閉塞事象が緩和され、血行動態が改善された。
【0209】
フェロポーチン阻害剤は、鎌状赤血球病のマウスモデルにおいて、急性血管閉塞及び臓器損傷を予防する。
【0216】
他の実施形態
理解すべき点として、以上において本発明をその詳細な説明とともに説明してきたが、前記の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を説明するためのものであり、限定するものではない。他の態様、利点及び変更は、下記の特許請求の範囲に包含されるものである。
理解すべき点として、以上において本発明をその詳細な説明とともに説明してきたが、前記の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を説明するためのものであり、限定するものではない。他の態様、利点及び変更は、下記の特許請求の範囲に包含されるものである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】