特許 7594708 ネクチン４を標的としエキサテカンペイロードを含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-26

(45)【発行日】2024-12-04

(54)【発明の名称】ネクチン４を標的としエキサテカンペイロードを含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/68 20170101AFI20241127BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241127BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241127BHJP

【ＦＩ】

A61K47/68

A61P35/00

A61K39/395 T

【請求項の数】 13

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024170351

(22)【出願日】2024-09-30

【審査請求日】2024-10-02

(31)【優先権主張番号】23201214

(32)【優先日】2023-10-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】523374873

【氏名又は名称】エマージェンス セラピューティクス ゲーエムベーハー

(73)【特許権者】

【識別番号】316011983

【氏名又は名称】ユニヴェルシテ デクス－マルセイユ

(73)【特許権者】

【識別番号】514154570

【氏名又は名称】インサーム（インスティテュート ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル）

(73)【特許権者】

【識別番号】522138777

【氏名又は名称】アンスティチュ・ジャン・パオリ・エ・イレーヌ・カルメット

(73)【特許権者】

【識別番号】505351201

【氏名又は名称】セントレ ナシオナル デ ラ ルシェルシェ シエンティフィーク

(73)【特許権者】

【識別番号】520144853

【氏名又は名称】マブリンク ビオシオンス

(73)【特許権者】

【識別番号】511196870

【氏名又は名称】ユニベルシテ クロード ベルナール リヨン プルミエ

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100103182

【弁理士】

【氏名又は名称】日野 真美

(74)【代理人】

【識別番号】100196966

【弁理士】

【氏名又は名称】植田 渉

(72)【発明者】

【氏名】ヤコブス ペトルス マリア エランズ

(72)【発明者】

【氏名】シャビエル プレヴィレ

(72)【発明者】

【氏名】フローレンス ロスピス

(72)【発明者】

【氏名】ヨアンナ フェアス

(72)【発明者】

【氏名】ダニエル オリーブ

(72)【発明者】

【氏名】マーク ロペス

(72)【発明者】

【氏名】ウォーレン ヴィリセル

(72)【発明者】

【氏名】ベノイト ヨセフ

(72)【発明者】

【氏名】ギー フォーネット

【審査官】三上 晶子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０２２／１１２３５６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０２２／２０７８２５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０２２／２０７６９９（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２

Ａ６１Ｋ ４７／００－ ４７／６９

Ａ６１Ｐ １／００－ ４３／００

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、

【化1】

式中、
Ａｂは、ヒトネクチン－４に結合する抗体であり、Ａｂは、可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖（ＨＣ）及び可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖（ＬＣ）を含み、前記ＨＣＶＲは、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲは、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
（ｉ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号９（ＮＹＧＭＡ）を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号１０（ＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧ）を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号１１（ＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２（ＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡ）を含み、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３（ＳＡＳＹＲＹＳ）を含み、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を含むか、又は
（ｉｉ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１５（ＧＦＴＦＳＮＹＧ）を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号１６（ＩＳＮＬＡＹＧＩ）を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号１７（ＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１８（ＱＮＶＤＴＨ）を含み、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１９（ＳＡＳ）を含み、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号２０（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を含み、
ＤＡＲは、１～８である、ＡＤＣ。

【請求項2】

前記ＨＣＶＲが配列番号７を含み、前記ＬＣＶＲが配列番号８を含み、かつ／又は前記ＨＣが配列番号５を含み、前記ＬＣが配列番号６を含む、請求項１に記載のＡＤＣ。

【請求項3】

前記Ａｂが、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４アイソタイプ、好ましくはヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する、請求項１に記載のＡＤＣ。

【請求項4】

下式を有し、

【化2】

式中、Ａｂは、配列番号５のＨＣ及び配列番号６のＬＣを含み、前記Ａｂは、前記ＨＣのＣ２２２位、Ｃ２２８位、Ｃ２３１位のシステインを介して、かつ前記ＬＣのＣ２１４のシステインを介してコンジュゲートされている、請求項１に記載のＡＤＣ。

【請求項5】

請求項１～４のいずれか一項に記載のＡＤＣを含む組成物であって、前記組成物中の前記ＡＤＣの少なくとも約９５％が、８のＤＡＲを有する、組成物。

【請求項6】

請求項１～４のいずれか一項に記載のＡＤＣと、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。

【請求項7】

それを必要とする患者におけるがんの治療における使用のための、請求項１～４のいずれか一項に記載のＡＤＣを含む組成物。

【請求項8】

前記がんが、尿路上皮がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がん、好ましくは尿路上皮がんである、請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

前記患者が、第一選択、第二選択、又は第三選択治療としてエンホルツマブベドチンを以前に投与されており、任意選択で、前記がんが、エンホルツマブベドチンが投与された後に再発しているか、又は前記がんが、エンホルツマブベドチンが投与された後にエンホルツマブベドチンによる治療に対して難治性になっている、請求項７に記載の組成物。

【請求項10】

療法における使用のための、請求項１～４のいずれか一項に記載のＡＤＣを含む組成物。

【請求項11】

がんの治療のための薬剤の製造のための、請求項１～４のいずれか一項に記載のＡＤＣの、使用。

【請求項12】

ＡＤＣを生成する方法であって、
（ｉ）ヒトネクチン－４に結合する抗体（Ａｂ）であって、前記Ａｂが、可変領域（ＨＣＶＲ）を有する重鎖（ＨＣ）及び可変領域（ＬＣＶＲ）を有する軽鎖（ＬＣ）を含み、前記ＨＣＶＲが、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲが、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ａ）前記ＨＣＤＲ１が、配列番号９（ＮＹＧＭＡ）を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１０（ＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧ）を含み、前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１１（ＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１２（ＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡ）を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１３（ＳＡＳＹＲＹＳ）を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１４（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を含むか、又は
ｂ）前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１５（ＧＦＴＦＳＮＹＧ）を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１６（ＩＳＮＬＡＹＧＩ）を含み、前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１７（ＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１８（ＱＮＶＤＴＨ）を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１９（ＳＡＳ）を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２０（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を含む、Ａｂ、並びに
（ｉｉ）下式の化合物：

【化3】

をコンジュゲートすることを含む、方法。

【請求項13】

前記化合物が、コンジュゲートの間、前記Ａｂに対して少なくとも約８モル過剰で存在する、請求項１２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（配列表への参照）
本出願は、ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表とともに、提出されている。配列表は、２０２３年９月２７日に作成された「ｔｘｔ＿Ｐ３０８２５＿ＦＲ」というタイトルのファイルとして提供され、７，９３５バイトのサイズである。ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

本開示は、医学の分野に関する。より詳細には、本開示は、ネクチン－４抗体薬物コンジュゲート及びその医薬組成物、並びにがんの治療におけるそれらの使用に関する。

【0003】

ネクチン－４は、Ｃａ２＋非依存性免疫グロブリン様細胞接着分子であるネクチンファミリーのメンバーである。ネクチンファミリーの他のものとは異なり、健常組織におけるネクチン－４発現は、主に胎盤又は胚であるが、ネクチン－４は、尿路上皮、乳房、肺、胃、食道、結腸直腸、膵臓、及び卵巣がんを含むいくつかの腫瘍型において過剰発現される。研究により、いくつかのがん型における高いネクチン－４発現が腫瘍発生と関連付けられている。

【0004】

抗ネクチン－４抗体を含む抗体薬物コンジュゲート（antibody drug conjugate、ＡＤＣ）が作製されている。これらには、モノメチルアウリスタチンＥ（monomethyl auristatin E、ＭＭＡＥ）ペイロードを含むＡＤＣ（国際公開第２０１２４７７２４号）、カンプトテシン類似体ペイロードを有するＡＤＣ（国際公開第２０２２１１２３５６号及び国際公開第２０２１１５１９８４号）、並びにエキサテカンペイロードを含むＡＤＣ（国際公開第２０２２２０７８２５号）が含まれる。

【0005】

腫瘍学における使用のためのＡＤＣは、健康な細胞よりも腫瘍標的に対する十分な特異性、許容される毒性と同時にバイスタンダー腫瘍細胞に対する所望の活性の維持、並びに細胞内送達を可能にしつつ良好な物理的及び化学的安定性を維持するペイロードの不安定性の制御など、分子の複数の態様のバランスを取らなければならないため、設計するのが非常に困難な化合物である。具体的には、ＡＤＣの開発における課題のうちの１つは、ペイロードをＡＤＣの抗体にコンジュゲートするのに好適なリンカーを選択することである。リンカーの化学構造は、毒性、特異性、安定性、及び効力を含むＡＤＣの様々な特性に影響を及ぼす。

【0006】

現在、１つのＦＤＡ承認抗ネクチン－４ ＡＤＣが存在し、これは、商品名ＰＡＤＣＥＶ（登録商標）で市販されているエンホルツムマブベドチン－ｅｊｆｖである。エンホルツムマブベドチンは、モノクローナル抗ネクチン－４抗体と、細胞傷害性ペイロードとしてモノメチルアウリスタチン－Ｅ（ＭＭＡＥ）と、を含むＡＤＣである。残念ながら、エンホルツムマブベドチンは、標的化腫瘍細胞とは対照的に、皮膚細胞へのエンホルツムマブの無差別な結合に少なくとも部分的に関連し得るいくつかの望ましくない皮膚毒性を示す。加えて、エンホルツムマブベドチンの長期投与は、ヒト患者における薬物抵抗性がんの発生をもたらし得る。Ｃａｂａｕｄ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２１（２０２２）：１２２７－１２３５）は、前臨床マウスモデルにおいて、多剤抵抗性タンパク質ＭＤＲ １／Ｐ－糖タンパク質（Ｐ－ｇｐ）をコードするＡＢＣＢ１発現の抵抗性腫瘍における上方制御を見出した。抵抗性マウスモデルの抗ネクチン－４抗体－ＭＭＡＥコンジュゲートに対する感受性を、Ｐ－ｇｐ阻害剤タリキダールによってインビトロ及びインビボで回復させることができた。

【0007】

具体的には、トポイソメラーゼＩペイロードを含む抗ネクチン－４ ＡＤＣが依然として必要とされている。具体的には、ある特定の抗ネクチン－４ ＡＤＣにおいて見られる皮膚科学的事象を回避又はより良好な管理を可能にする抗ネクチン－４ ＡＤＣが依然として必要とされている。具体的には、ある特定の抗ネクチン－４ ＡＤＣに見られる視神経障害及び／又は末梢神経障害のシグナルを回避する抗ネクチン－４ ＡＤＣが依然として必要とされている。具体的には、低い免疫原性、安定したインビボ薬物動態、並びに適切な化学的及び物理的安定性を有する抗ネクチン－４ ＡＤＣが依然として必要とされている。追加的に、次の特徴、すなわち、ある特定の腫瘍モデルにおいて測定される改善された抗腫瘍活性、ネクチン－４低腫瘍に対する増強されたバイスタンダー活性、より低い免疫原性、測定可能な抗体エフェクター機能がないこと、並びに／又はより良好な物理的及び化学的安定性のうちの１つ以上を有する抗ネクチン－４ ＡＤＣが依然として必要とされている。

【0008】

ここで、本発明者らは、１つ以上のこれらの必要性に対処する新規抗ネクチン－４ ＡＤＣを開示する。開示されるＡＤＣは、腫瘍発現ネクチン－４に対する選択性を示す抗ネクチン－４抗体、及びエキサテカンを含む新規リンカー－ペイロードを含む。本発明者らは、開示される抗ネクチン－４ ＡＤＣが、凝集、毒性、特異性、安定性、及び効力に関連するこれらの改善された特性のうちの１つ以上を示すことを示す。本発明者らはまた、新規抗ネクチン－４ ＡＤＣを使用して、エンホルツムマブベドチンによる治療に抵抗性であるがんを含む、アウリスタチン抵抗性がんを治療することができることを示す。

【発明の概要】

【0009】

抗ネクチン－４ ＡＤＣ及び抗ネクチン－４ ＡＤＣを含む組成物が本明細書に提供される。患者におけるがん、例えば、ネクチン－４を発現するがんを治療するために、抗ネクチン－４ ＡＤＣ又は抗ネクチン－４ ＡＤＣを含む組成物を使用する方法も本明細書に提供される。

【0010】

一態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体及びペイロードを含むＡＤＣが本明細書に提供される。一態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体をペイロードにコンジュゲートすることによって調製されたＡＤＣが本明細書に提供される。ＡＤＣにおいて、抗体及びペイロードは、直接又はリンカーを介してのいずれかで共有結合又はコンジュゲートされている。開示されるＡＤＣの一態様では、抗体及びペイロードは、リンカーを介して共有結合又はコンジュゲートされる。一態様では、リンカーは、ＡＤＣが全身投与される場合に抗体とペイロードとの間の好適な安定した結合又はコンジュゲーションを提供し、リンカーは、ペイロードがＡＤＣから放出されるように、ＡＤＣがネクチン－４を発現する標的細胞によって内在化される場合に好適な不安定性を提供する。

【0011】

一態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を含むか、又はそれから調製されたＡＤＣが本明細書に提供され、抗体は、重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＨＣＶＲ）と、軽鎖可変領域（light chain variable region、ＬＣＶＲ）とを含み、ＨＣＶＲは、重鎖相補性決定領域（heavy chain complementarity determining region、ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＶＲは、軽鎖相補性決定領域（light chain complementarity determining region、ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、配列番号９（ＮＹＧＭＡ）を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１０（ＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧ）を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１１（ＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１２（ＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡ）を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１３（ＳＡＳＹＲＹＳ）を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号１４（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）（全てＫａｂａｔ番号付け）を含むか、又は
（ｂ）ＨＣＤＲ１は、配列番号１５（ＧＦＴＦＳＮＹＧ）を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６（ＩＳＮＬＡＹＧＩ）を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７（ＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１８（ＱＮＶＤＴＨ）を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１９（ＳＡＳ）を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号２０（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）（全てＩＭＧＴ番号付け）を含む。

【0012】

更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を含むか、又はそれから調製されたＡＤＣが本明細書に提供され、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＨＣＶＲは配列番号７を含み、ＬＣＶＲは配列番号８を含む。

【0013】

別の態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を含むか、又はそれから調製されたＡＤＣが本明細書に提供され、抗体は、本明細書に開示されるＦｃエフェクター機能を改変する抗体定常領域に１つ以上の変異、例えば、Ｆｃ受容体への抗体の結合の低減をもたらす定常領域に変異を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ（ＥＵ番号付け）から選択される１つ以上の変異、又はＬ２４７Ｆ、Ｌ２４８Ｅ、及びＰ３５０Ｓ（Ｋａｂａｔ番号付け）から選択される１つ以上の変異を含むＩｇＧ１重鎖（heavy chain、ＨＣ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、変異Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ（ＥＵ番号付け）の各々、又は変異Ｌ２４７Ｆ、Ｌ２４８Ｅ、及びＰ３５０Ｓ（Ｋａｂａｔ番号付け）の各々を含むＩｇＧ１重鎖（ＨＣ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２に提供される野生型配列に対して、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓから選択される１つ以上の変異を含む鎖（ＨＣ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２に提供される野生型配列に対して変異Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓの各々を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0014】

別の態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を含むか、又はそれから調製されたＡＤＣが本明細書に提供され、抗体は、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（light chain、ＬＣ）を含み、ＨＣは配列番号５を含み、ＬＣは配列番号６を含む。

【0015】

別の態様では、ペイロードに直接又はリンカーを介してコンジュゲートされたネクチン－４抗体を含むＡＤＣが本明細書に提供され、このペイロードは、エキサテカン又はその類似体などの細胞傷害性剤を含み得る。いくつかの実施形態では、ネクチン－４抗体は、１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してペイロードにコンジュゲートされている。

【0016】

いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、抗体のＨＣに存在する１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされている抗ネクチン－４抗体を含むか、又はそれから調製され、システイン残基は、任意選択でＨＣの定常領域に存在する。いくつかの実施形態では、システイン残基は、ＨＣにおいて、Ｃ２２０、Ｃ２２６、Ｃ２２９（ＥＵインデックス番号付け）及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の位置に、又はＣ２３３、Ｃ２３９、Ｃ２４２及びそれらの組み合わせ（Ｋａｂａｔ番号付け）から選択される位置に存在する。いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体は、ＨＣにおいて、Ｃ２２０、Ｃ２２６、Ｃ２２９位（ＥＵインデックス番号付け）、又はＣ２３３、Ｃ２３９、Ｃ２４２位（Ｋａｂａｔ番号付け）に存在するシステイン残基の各々のチオール基を介してコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体は、抗体のＨＣに存在する１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、ＨＣは、配列番号５のアミノ酸配列を有し、システイン残基は、ＨＣにおいて、Ｃ２２２、Ｃ２２８、Ｃ２３１及びそれらの組み合わせから選択される位置に存在し、任意選択で、抗ネクチン－４抗体は、Ｃ２２２、Ｃ２２８、及びＣ２３１位に存在するシステイン残基の各々のチオール基を介してコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体は、ＬＣに存在するシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体は、ＬＣのＣ末端に存在するシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、任意選択で、ＬＣはカッパ軽鎖であり、システイン残基はＣ２１４位に存在する。いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体は、抗体のＬＣに存在する１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、ＬＣは配列番号６のアミノ酸配列を有し、システイン残基はＬＣにおいてＣ２１４位に存在する。いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体は、ＨＣにおいて、Ｃ２２０、Ｃ２２６、Ｃ２２９位（ＥＵインデックス番号付け）又はＣ２３３、Ｃ２３９、Ｃ２４２位（Ｋａｂａｔ番号付け）に存在するシステイン残基のチオール基を介して、かつＬＣにおいて、Ｃ２１４位に存在するシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、抗ネクチン－４抗体は、ＨＣに存在するシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、ＨＣは配列番号５のアミノ酸配列を有し、システインは、Ｃ２２２、Ｃ２２８、及びＣ２３１位に存在し、ネクチン－４抗体は、ＬＣに存在するシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、ＬＣは配列番号６のアミノ酸配列を有し、システインはＣ２１４位に存在する。

【0017】

更なる態様では、（ｉ）ヒトネクチン－４に結合する抗体、（ｉｉ）任意選択で、リンカー、及び（ｉｉｉ）ペイロードを含むか、又はそれらから調製されたＡＤＣが本明細書に提供される。更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を含むＡＤＣが本明細書に提供され、抗体は、ペイロードに直接又はリンカーを介してコンジュゲートされている。更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を、直接又はリンカーを介して間接的のいずれかでペイロードにコンジュゲートすることによって調製されたＡＤＣが本明細書に提供される。

【0018】

更なる態様では、（ｉ）ヒトネクチン－４に結合する抗体、（ｉｉ）任意選択で、リンカー、及び（ｉｉｉ）エキサテカン若しくはその類似体を含むか、又はそれらから調製されたＡＤＣが本明細書に提供される。更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を含むＡＤＣが本明細書に提供され、抗体は、エキサテカン又はその類似体に直接又はリンカーを介してコンジュゲートされている。更なる態様では、直接又はリンカーを介して間接的のいずれかで、ヒトネクチン－４に結合する抗体及びエキサテカン又はその類似体をコンジュゲートすることによって調製されたＡＤＣが本明細書に提供される。

【0019】

更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体、任意選択で、リンカー、及びいくつかの態様では「ペイロード」と称され得る、式（Ｐ）の化合物を含むＡＤＣが本明細書に提供される。

【0020】

【化1】

【0021】

式（Ｐ）の化合物は、エキサテカンと称され得る。

【0022】

更なる態様では、式（Ｐ）のペイロードに直接又はリンカーを介してコンジュゲートされたヒトネクチン－４に結合する抗体を含むＡＤＣが本明細書に提供される。更なる態様では、直接又はリンカーを介して間接的のいずれかで、ヒトネクチン－４に結合する抗体及び式（Ｐ）のペイロードをコンジュゲートすることによって調製されたＡＤＣが本明細書に提供される。

【0023】

更なる態様では、化合物が本明細書に提供され、これは、いくつかの態様では、ＡＤＣのためのリンカー－ペイロードとして利用され得る。一態様では、本明細書に開示されるＡＤＣのためのリンカー－ペイロードとして利用され得る、式（Ｌ－Ｐ）の化合物が開示され、

【0024】

【化2】

式中、ｍは、１～６から選択され、ｎは、１～６から選択され、ｐは、１～２０から選択される。

【0025】

式（Ｌ－Ｐ）のリンカー－ペイロードのいくつかの実施形態では、ｍは２である。

【0026】

式（Ｌ－Ｐ）のリンカー－ペイロードのいくつかの実施形態では、ｎは２である。

【0027】

式（Ｌ－Ｐ）のリンカー－ペイロードのいくつかの実施形態では、ｐは１０である。

【0028】

更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体及び式（Ｌ－Ｐ）の化合物を含むＡＤＣ、又はヒトネクチン－４に結合する抗体及び式（Ｌ－Ｐ）の化合物をコンジュゲートすることにより調製されたＡＤＣが本明細書に提供される。

【0029】

別の態様では、本明細書に開示されるＡＤＣのためのリンカー－ペイロードとして使用され得る、式（Ｌ－Ｐ’）の化合物本明細書に提供される。

【0030】

【化3】

【0031】

別の態様では、化合物：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（（３Ｓ，９Ｓ）－４０－アミノ－９－（２－（２－（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－デカメチル－１，６，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０－トリデカオキソ－２－オキサ－５，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－ウンデカアザテトラコンタン－３－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸が本明細書に提供され、この化合物は、いくつかの態様では、本明細書に開示されるＡＤＣのためのリンカー－ペイロードとして利用され得る。

【0032】

更なる態様では、式（Ｌ－Ｐ）のリンカー－ペイロードにコンジュゲートされたヒトネクチン－４に結合する抗体を含むＡＤＣが本明細書に提供される。更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体及び式（Ｌ－Ｐ）のリンカー－ペイロードをコンジュゲートすることによって調製されたＡＤＣが本明細書に提供される。

【0033】

一態様では、下式（ＡＤＣ）の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が本明細書に提供され、

【0034】

【化4】

式中、Ａｂは、本明細書に開示されるネクチン－４に結合する抗体であり、ｍは、１～６から選択され、ｎは、１～６から選択され、ｐは、１～２０から選択され、ＤＡＲは、１～８（両端を含む）の範囲の値であり、ＡＤＣの薬物－抗体比（drug-antibody ratio、ＤＡＲ）を表す。

【0035】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｍは２である。

【0036】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｎは２である。

【0037】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｐは１０である。

【0038】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＤＡＲは８である。

【0039】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％は、８のＤＡＲを有する。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＡＤＣは組成物中に存在し、組成物中のＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が８のＤＡＲを有する。

【0040】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、Ａｂは、１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してリンカー－ペイロードにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、Ａｂは、ＡｂのＨＣ中の１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、任意選択で、ＨＣは、配列番号５のアミノ酸配列を有し、システインは、Ｃ２２２、Ｃ２２８、Ｃ２３１位、及びそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、Ａｂは、ＡｂのＬＣ中の１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされ、任意選択で、ＬＣは配列番号６のアミノ酸配列を有し、システインはＣ２１４位に存在する。いくつかの実施形態では、Ａｂは配列番号５のＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、及びＣ２３１、並びに配列番号６のＬＣのＣ２１４の全てを介してコンジュゲートされている。

【0041】

更なる態様では、式（Ｌ－Ｐ’）のリンカー－ペイロードにコンジュゲートされたヒトネクチン－４に結合する抗体を含むＡＤＣが本明細書に提供される。更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体及び式（Ｌ－Ｐ’）のリンカー－ペイロードをコンジュゲートすることによって調製されたＡＤＣが本明細書に提供される。

【0042】

一態様では、下式（ＡＤＣ’）の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が本明細書に提供され、

【0043】

【化5】

式中、ＤＡＲは、１～８（両端を含む）の範囲の値であり、ＡＤＣの薬物－抗体比（ＤＡＲ）を表す。

【0044】

式（ＡＤＣ’）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＤＡＲは８である。

【0045】

式（ＡＤＣ’）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％は、８のＤＡＲを有する。式（ＡＤＣ’）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＡＤＣは組成物中に存在し、組成物中のＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が８のＤＡＲを有する。

【0046】

式（ＡＤＣ’）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、Ａｂは、１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してリンカー－ペイロードにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、Ａｂは、ＡｂのＨＣ中の１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、任意選択で、ＨＣは、配列番号５のアミノ酸配列を有し、システインは、Ｃ２２２、Ｃ２２８、Ｃ２３１位、及びそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、Ａｂは、ＡｂのＬＣ中の１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされ、任意選択で、ＬＣは配列番号６のアミノ酸配列を有し、システインはＣ２１４位に存在する。いくつかの実施形態では、Ａｂは配列番号５のＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、及びＣ２３１、並びに配列番号６のＬＣのＣ２１４の全てを介してコンジュゲートされている。

【0047】

別の態様では、下式（ＥＴｘ－２２）の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が本明細書に提供され、

【0048】

【化6】

式中、Ａｂは、本明細書に開示されるネクチン－４に結合する抗体である。Ａｂは、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、ＨＣは配列番号５を含み、ＬＣは配列番号６を含む。Ａｂは、配列番号５のＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、及びＣ２３１、並びに配列番号６のＬＣのＣ２１４を含むシステイン残基のチオール基を介してリンカー－ペイロードにコンジュゲートされている。

【0049】

別の態様では、本明細書に開示される抗ネクチン－４ ＡＤＣを含む組成物が本明細書に提供される。抗ネクチン－４ ＡＤＣを含む開示される組成物の一態様では、組成物中のＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％は、８のＤＡＲを有する。

【0050】

別の態様では、本明細書に開示される抗ネクチン－４抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む医薬組成物が本明細書に提供される。別の態様では、本明細書に開示される抗ネクチン－４ ＡＤＣと、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む医薬組成物が本明細書に提供される。別の態様では、本明細書に開示される抗ネクチン－４ ＡＤＣを含む医薬組成物が本明細書に提供され、組成物中のＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が８のＤＡＲを有する。

【0051】

別の態様では、ネクチン－４発現がんなどのがんの治療を必要とする患者に、有効量の本明細書に開示される抗ネクチン－４ ＡＤＣを投与することを含む、がんを治療する方法が本明細書に提供される。更なる態様では、がんの治療を必要とする患者に、有効量の本明細書に開示される抗ネクチン－４ ＡＤＣを投与することを含む、がんを治療する方法が本明細書に提供され、がんは、尿路上皮がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がんである。別の態様では、がんの治療を必要とする患者に、有効量の本明細書に開示される抗ネクチン－４ ＡＤＣを投与することを含む、がんを治療する方法が本明細書に提供され、任意選択で、がんは、ネクチン－４結合剤及びアウリスタチン、例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含むＡＤＣによる治療に抵抗性である。別の態様では、がんの治療を必要とする患者に、有効量の本明細書に開示される抗ネクチン－４ ＡＤＣを投与することを含む、がんを治療する方法が本明細書に提供され、患者は、エンホルツマブベドチン、任意選択で、商品名Ｐａｄｃｅｖ（登録商標）で市販されているエンホルツマブベドチン－ｅｊｆｖを以前に投与されている。

【0052】

別の態様では、ネクチン－４発現がんなどの本明細書に開示されるがんに罹患している患者にＡＤＣを投与することを含む方法において使用するための、ネクチン－４結合剤及びエキサテカンを含むＡＤＣが本明細書に提供される。任意選択で、がんは、ネクチン－４結合剤及びアウリスタチン、例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含むＡＤＣによる治療に抵抗性である。別の態様では、ネクチン－４発現がんに罹患している患者にＡＤＣを投与することを含む方法において使用するための、ネクチン－４結合剤及びエキサテカンを含むＡＤＣが本明細書に提供され、患者は、エンホルツマブベドチン、任意選択で、商品名Ｐａｄｃｅｖ（登録商標）で市販されているエンホルツマブベドチン－ｅｊｆｖを以前に投与されている。

【0053】

別の態様では、ネクチン－４発現がんなどのがんの治療に使用するための、ネクチン－４結合剤及びエキサテカンを含む医薬組成物が本明細書に提供される。任意選択で、がんは、ネクチン－４結合剤及びアウリスタチン、例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含むＡＤＣによる治療に抵抗性である。別の態様では、がんの治療に使用するためのネクチン－４結合剤及びエキサテカンを含む医薬組成物が本明細書に提供され、患者は、エンホルツマブベドチン、任意選択で、商品名Ｐａｄｃｅｖ（登録商標）で市販されているエンホルツマブベドチン－ｅｊｆｖを以前に投与されている。

【0054】

別の態様では、ネクチン－４発現がんに罹患している患者の治療のための薬剤の製造のための、ネクチン－４結合剤及びエキサテカンを含むＡＤＣの使用が本明細書に提供される。任意選択で、がんは、ネクチン－４結合剤及びアウリスタチン、例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含むＡＤＣによる治療に抵抗性である。別の態様では、ネクチン－４発現がんに罹患している患者の治療のための薬剤の製造のための、ネクチン－４結合剤及びエキサテカンを含むＡＤＣの使用が本明細書に提供され、患者は、エンホルツマブベドチン、任意選択で、Ｐａｄｃｅｖ（登録商標）の商品名で市販されているエンホルツマブベドチン－ｅｊｆｖを以前に投与されている。

【図面の簡単な説明】

【0055】

【図1】ＥＴｘ－２２の概略図。

【図2】裸ヒト化１５Ａ７．５とＥＴｘ－２２との比較ＨＩＣ。

【図3】エクスビボ安定性評価。ＥＴｘ－２２を、マウス、カニクイザル、又はヒト血清中でインキュベートした。示された時間に、ＥＴｘ－２２を、抗ヒトＬＣ－カッパ（マウス）又はＦｃ－ネクチン－４断片（カニクイザル及びヒト）を介して親和性捕捉し、薬物抗体比をＬＣ／ＭＳによって測定した。

【図4】ＥＴｘ－２２インビトロ細胞傷害活性。用量範囲のＥＴｘ－２２（黒三角）又は同じリンカーペイロードにカップリングしたＩｇＧ１アイソタイプ対照（白菱形）を、ヒトネクチン－４を発現するＨＣＴ－１１６－２Ｇ１０クローンとともに８日間インキュベートした。生存率を、ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ蛍光光度計を用いてミトコンドリア酸化（細胞力価青色試薬）によってモニターした。

【図5】ＥＴｘ－２２ ＡＤＣのＰＫ／ＰＤ特徴付け。ＮＳＧマウス及びＴＮＢＣ ＰＤＸ４００移植ＮＳＧマウス（１時点当たりｎ＝３）に、腫瘍が平均１５０ｍｍ^３（Ｔ０）になったときに、１０ｍｇ／ｋｇのＥＴｘ－２２を静脈内注射した。示された時点で、終末血液サンプリングを実施し、血漿をナイーブ及びＰＤＸ ４００移植ＮＳＧマウスから調製した。Ａ、メソスケールディスカバリ（mesoscale discovery）技術によるＥＴｘ－２２（ＡＤＣ＋全抗体）の薬物動態分析。Ｂ、抗ヒトＬＣ－カッパによるＥＴｘ－２２の親和性捕捉後のＬＣ／ＭＳによるインビボ安定性測定。Ｃ、血漿中の循環遊離エキサテカン濃度のＬＣ／ＭＳによる決定。

【図6】ＥＴｘ－２２作用機序。ＴＮＢＣ ＰＤＸ４００移植ＮＳＧマウス（１時点当たりｎ＝３）に、腫瘍が平均１５０ｍｍ^３（Ｔ０）になったときに、１０ｍｇ／ｋｇのＥＴｘ－２２を静脈内注射した。示された時点で、動物を安楽死させ、それらの腫瘍を収集し、測定し、量った。Ａ、ＰＤＸ４００腫瘍におけるＥＴｘ－２２浸潤及び薬力学のＩＨＣ分析。腫瘍を固定し、パラフィンに包埋した。ＥＴｘ－２２（上のパネル）をウサギ抗ヒトＩｇＧで検出し、これは西洋ワサビペルオキシダーゼにカップリングした二次抗ウサギＩｇＧ及びＣｈｒｏｍｏＭａｐ ＤＡＢキットで明らかにされた。トポイソメラーゼＩ阻害剤活性のマーカーであるリン酸化Ｈ２Ａ．Ｘ（下のパネル）を、マウス抗ホスホ－ヒストンＨ２Ａ．Ｘで検出し、これは、西洋ワサビペルオキシダーゼにカップリングした二次ウサギ抗マウスＩｇＧ及び三次抗ウサギＩｇＧ並びにＣｈｒｏｍｏＭａｐ ＤＡＢキットで明らかにされた。Ｂ、腫瘍溶解物のウェスタンブロット分析。西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートされたヤギ抗ヒトＩｇＧを用いてＥＴｘ－２２を検出した。Ｃ、腫瘍１グラム当たりのエキサテカン量のＬＣ／ＭＳ決定。Ｄ、リン酸化Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の定量化。ＡのスライドをＨａｍａｍａｔｓｕスキャナで数え、Ｔｒｉｂｕｎ Ｃａｌｏｐｉｘソフトウェアを使用してリン酸化Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞のパーセンテージを定量化した。Ｅ、キャリパーで測定された腫瘍体積（Ｖ＝（Ｌ×Ｗ×Ｈ）×π／６））。

【図7】ＭＭＡＥ抵抗性ＴＮＢＣ細胞株（ＳＵＭ１９０）におけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。ＮＳＧマウス（ｎ＝５／群）に、マトリゲルに包埋されたＭＭＡＥ抵抗性ＳＵＭ１９０細胞を両側に同所異種移植した。示された時間（黒矢印）に、３つの異なるＡＤＣを静脈内注射した：アイソタイプ対照（８ｍｇ／ｋｇ）、２、４、及び８ｍｇ／ｋｇのＥＴｘ－２２、並びに４及び８ｍｇ／ｋｇのエンホルツムマブベドチン。対照群にはＡＤＣ希釈剤を与えた。腫瘍成長を週２回モニターした（Ｖ（ｍｍ^３）＝Ｌ×Ｗ^２×π／６）。

【図8】ＰＤＸモデル（ＥＳ０２０１、食道がん）におけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。ＢＡＬＢ／ｃ Ｎｕマウスに腫瘍断片を皮下移植した。示された時間（黒矢印）に、示されたＡＤＣを２回静脈内注射した。ネクチン－４発現についてのクイックスコアを、免疫組織化学によって決定した。腫瘍成長を週２回モニターした（Ｖ（ｍｍ^３）＝Ｌ×Ｗ^２×π／６）。

【図9】ＰＤＸモデル（ＢＬＣＵ００３、膀胱がん）におけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。ＮＭＲＩヌードマウスに腫瘍断片を皮下移植した。示された時間（黒矢印）に、示されたＡＤＣを２回静脈内注射した。ネクチン－４発現についてのクイックスコアを、免疫組織化学染色によって決定し、ここに示す。腫瘍成長を週２回モニターした（Ｖ（ｍｍ^３）＝Ｌ×Ｗ^２×π／６）。

【図10】ＰＤＸモデル（Ｂ５２１、膀胱がん）におけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。膀胱がんＰＤＸモデルＢ５２１は、比較的高いネクチン－４発現を示し、エルダフィチニブに対する抵抗性を付与するＦＧＦＲ３におけるホモ接合変異を有する。シスプラチン／ゲムシタビンを投与した：４ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗ×２／６０ｍｇ／ｋｇ ＱＷ×４。

【図11】ＰＤＸモデル（ＨＮ２５７９、頭頸部がん）におけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。頭頸部ＰＤＸモデルＨＮ２５７９は、中程度から高いネクチン－４発現を示す。ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに腫瘍断片を皮下移植した。示された時間（黒矢印）に、示されたＡＤＣを２回静脈内注射した。ネクチン－４発現についてのクイックスコアを、免疫組織化学染色によって決定し、ここに示す。腫瘍成長を週２回モニターした（Ｖ（ｍｍ^３）＝Ｌ×Ｗ^２×π／６）。

【図12】ＰＤＸモデル（ＣＶ３０３５、子宮頸がん）におけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。ＢＡＬＢ／ｃ Ｎｕマウスに腫瘍断片を皮下移植した。示された時間（黒矢印）に、示されたＡＤＣを２回静脈内注射した。ネクチン－４発現についてのクイックスコアを、免疫組織化学染色によって決定し、ここに示す。腫瘍成長を週２回モニターした（Ｖ（ｍｍ^３）＝Ｌ×Ｗ^２×π／６）。

【図13】ＰＤＸモデル（ＣＶ３５６０、子宮頸がん）におけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。子宮頸がんＰＤＸモデルＣＶ３５６０は、中程度から高いネクチン－４発現を示す。

【図14】ＰＤＸモデル（ＯＶ２４２３、卵巣がん）におけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに腫瘍断片を皮下移植した。示された時間（黒矢印）に、示されたＡＤＣを２回静脈内注射した。各ＰＤＸモデルにおいて、ネクチン－４発現についてのクイックスコアを、免疫組織化学染色によって決定し、ここに示す。腫瘍成長を週２回モニターした（Ｖ（ｍｍ^３）＝Ｌ×Ｗ^２×π／６）。

【図15】ＴＮＢＣ ＰＤＸ４００モデルにおけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。ＮＳＧマウスに腫瘍断片を両側に同所移植した。示された時間（黒矢印）に、示されたＡＤＣを静脈内注射した。免疫組織化学染色によって決定されたネクチン－４発現のクイックスコアを示す。バー＝５００μｍ。

【図16】ＴＮＢＣ ＰＤＸ３１７モデルにおけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。ＮＳＧマウスに腫瘍断片を両側に同所移植した。示された時間（黒矢印）に、示されたＡＤＣを静脈内注射した。免疫組織化学染色によって決定されたネクチン－４発現のクイックスコアを示す。バー＝５００μｍ。

【図17】ＴＮＢＣ ＰＤＸ３４８モデルにおけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。ＮＳＧマウスに腫瘍断片を両側に同所移植した。示された時間（黒矢印）に、示されたＡＤＣを静脈内注射した。免疫組織化学染色によって決定されたネクチン－４発現のクイックスコアを示す。バー＝５００μｍ。

【図18】ＴＮＢＣ ＰＤＸ４３４モデルにおけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性。ＴＮＢＣ ＰＤＸ４３４モデルは、低いネクチン－４発現を示す。ＮＳＧマウスに腫瘍断片を両側に同所移植した。示された時間（黒矢印）に、示されたＡＤＣを静脈内注射した。免疫組織化学染色によって決定されたネクチン－４発現のクイックスコアを示す。バー＝５００μｍ。

【発明を実施するための形態】

【0056】

ネクチン－４
本明細書で使用される場合、「ヒトネクチン－４」は、ポリオウイルス受容体関連４、Ｉｇスーパーファミリー受容体ＬＮＩＲ、又はポリオウイルス受容体関連タンパク質４（poliovirus receptor-related protein、ＰＶＲＬ４）としても知られる、ヒトネクチン－４タンパク質又はポリペプチドを指す。ヒトネクチン－４のアミノ酸配列は、ＮＰ＿１１２１７８．２に見出すことができ、配列番号１に提供される。

【0057】

抗体
開示されるＡＤＣは、抗体を含む。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ）、及び任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）であってもよい。

【0058】

本開示の例示的な抗体は、４つのポリペプチド鎖：鎖間ジスルフィド結合を介して架橋される２つの重鎖（heavy chain、ＨＣ）及び２つの軽鎖（light chain、ＬＣ）から構成された、免疫グロブリンＧ（immunoglobulin G、ＩｇＧ）型抗体である。４つのポリペプチド鎖の各々のアミノ末端部分は、抗原認識に主に関与する約１００～１２５個以上のアミノ酸の可変領域を含む。４つのポリペプチド鎖の各々のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を含有する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域から構成される。ＩｇＧアイソタイプは、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）に更に分割され得る。

【0059】

ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が散在する、相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変領域に更に細分され得る。ＣＤＲはタンパク質の表面上に露出しており、抗原結合特異性のための抗体の重要な領域である。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成されており、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置される。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲを「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称し、軽鎖の３つのＣＤＲを「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含有する。アミノ酸残基のＣＤＲへの割り当ては、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，」Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８（１９９７））、Ｎｏｒｔｈ（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，「Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８－２５６（２０１１））、又はＩＭＧＴ（ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで利用可能、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９９；２７：２０９－２１２を参照）に記載されるものを含む、周知のスキームに従って行うことができる。本開示のＣＤＲは、Ｎｏｒｔｈによって決定される。

【0060】

本明細書に記載のＡＤＣのある特定の抗体は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域又はヒトＩｇＧ１に由来するＦｃ領域、例えば、改変されたＦｃエフェクター機能を有する修飾ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含有する。ＩｇＧ１は、抗体依存性細胞傷害（antibody-dependent cell cytotoxicity、ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（complement-dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）を誘導すると知られている。開示されるＡＤＣのいくつかの抗体は、Ｆｃエフェクター機能を改変する、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域に導入されたアミノ酸置換を含む。開示されるＡＤＣの抗体のいくつかの態様では、変異は、Ｆｃ領域において、２３４及び２３５位（ＥＵインデックス番号付け）又は２４７及び２４８位（Ｋａｂａｔ番号付け）に導入される。本明細書に開示される抗体のいくつかの態様では、変異は、２３４、２３５、及び３３１（ＥＵインデックス番号付け）から、又は２４７、２４８、及び３５０（Ｋａｂａｔ番号付け）から選択される１つ以上の位置でＦｃ領域に導入される。いくつかの態様では、本開示の抗ネクチン－４抗体は、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの組み合わせ（ＥＵインデックス番号付け）から選択されるか、又はＬ２４７Ｆ、Ｌ２４８Ｅ、Ｐ３５０Ｓ、及びそれらの組み合わせ（Ｋａｂａｔ番号付け）から選択される１つ以上の変異を含む修飾ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。更なる態様では、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域に導入されたこれらのアミノ酸置換は、Ｆｃ受容体への結合の低減を含むがこれに限定されない、測定可能な抗体エフェクター機能を低減又は排除した。

【0061】

ＩｇＧサブクラスからの哺乳動物での抗体の発現は、一方又は両方の重鎖からのＣ末端アミノ酸の切り取りをもたらす可能性があり、例えば、ＩｇＧ１抗体の場合、１つ又は２つのＣ末端アミノ酸が除去され得る。ＩｇＧ１抗体の場合、Ｃ末端リジンが存在する場合、発現中に重鎖から切り詰められるか、又は切り取られ得る。追加的に、最後から２番目のグリシンも、同様に重鎖から切り詰められるか、切り取られ得る。本明細書に開示される抗ネクチン－４抗体は、それに応じて、１つ以上の切り詰め及び切り取りを含み得る。

【0062】

哺乳動物での抗体の発現はまた、Ｎ末端アミノ酸の修飾ももたらし得る。例えば、重鎖又は軽鎖の最もＮ末端のアミノ酸がグルタミン又はグルタミン酸である場合、ピログルタミン酸に改変され得る。例えば、重鎖又は軽鎖の最もＣ末端のアミノ酸がリジン又はグリシンである場合、除去され得る。本明細書に開示される抗ネクチン－４抗体は、それに応じて、１つ以上の修飾又は除去を含み得る。

【0063】

「核酸」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書で互換的に使用される場合、天然ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、及び／又はヌクレオチドの類似体を組み込んだＤＮＡ、ｃＤＮＡ、及びＲＮＡ分子などの一本鎖及び／又は二本鎖ヌクレオチド含有分子を含むヌクレオチドのポリマーを指す。本開示のポリヌクレオチドはまた、例えば、ＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼ又は合成反応によってその中に組み込まれた基質を含んでもよい。

【0064】

本開示のポリヌクレオチドは、例えば、ポリヌクレオチドが発現制御配列に作動可能に連結された後に、宿主細胞において発現され得る。作動可能に連結されたポリヌクレオチドの発現が可能な発現制御配列は、当該技術分野において周知である。例えば、発現ベクターは、宿主細胞からのポリペプチドの分泌を促進する１つ以上のシグナルペプチドをコードする配列を含み得る。シグナルペプチドは、例えば、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種性シグナルペプチドであり得る。目的のポリヌクレオチド（例えば、抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）を含有する発現ベクターは、周知の方法によって宿主細胞に移入され得る。追加的に、発現ベクターは、所望のポリヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞の検出を助けるために、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、及びジヒドロ葉酸レダクターゼなどの１つ以上の選択マーカーを含み得る。

【0065】

宿主細胞は、本開示の抗体の全部又は一部分を発現する１つ以上の発現ベクターで安定的に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染された細胞を含む。いくつかの実施形態によると、宿主細胞は、本開示の抗体のＨＣポリペプチドを発現する発現ベクター及びＬＣポリペプチドを発現する発現ベクターで、安定的に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染され得る。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、本開示の抗体のＨＣ及びＬＣポリペプチドを発現する発現ベクターであり、安定的に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染され得る。本開示の抗体は、当技術分野で周知の技術に従って、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３又はＣＯＳ細胞などの哺乳動物細胞において産生され得る。

【0066】

本開示の抗体が分泌された培地は、イオン交換及び疎水性相互作用クロマトグラフィの混合様式方法などの従来の技術によって精製することができる。例えば、培地は、従来の方法を使用して、プロテインＡ又はプロテインＧカラムに適用され、そこから溶離することができ、イオン交換及び疎水性相互作用クロマトグラフィの混合様式方法もまた、使用することができる。可溶性凝集体及び多量体を、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィを含む一般的な技術によって効果的に除去し得る。生成物は、例えば、－７０℃で直ちに凍結されても、冷蔵されても、又は凍結乾燥されてもよい。タンパク質精製の様々な方法が採用され得、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８２：８３－８９（１９９０）、及びＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。

【0067】

抗ネクチン－４抗体
開示されるＡＤＣにおいて使用するための抗体は、ネクチン－１などのヒトネクチンファミリーの他のタンパク質に対して、ネクチン－４への特異的結合を示す。本明細書で使用される場合、「結合」及び「特異的結合」という用語は、ネクチン－４抗原のエピトープへの抗体の結合を指す。抗体の結合強度の尺度は親和性と呼ばれる。インビトロアッセイを使用してそのような結合及び／又は親和性を決定するための方法は、当業者に公知である。本発明によれば、フローサイトメトリ、免疫組織化学、及び／又は蛍光による検出が記載されており、本明細書において特に好ましい。抗体の抗原への結合の親和性は、Ｋ_ａ（抗体／抗原複合体からの抗体の会合についての速度定数）、Ｋ_Ｄ（解離定数）、及びＫ_ｄｉｓ（Ｋ_Ｄ／Ｋ_ａ）という用語によって定義され得る。

【0068】

いくつかの態様では、開示されるＡＤＣは、腫瘍選択的抗ネクチン－４抗体である抗ネクチン－４抗体を含み得るか、又はそれから調製され得る。腫瘍選択的抗ネクチン－４抗体は、正常細胞によって発現されたネクチン－４と比較して、より高い親和性で、腫瘍によって発現されたネクチン－４に結合する抗ネクチン－４抗体として特徴付けることができる。比較のために、いくつかの態様では、結合親和性は、フローサイトメトリ、免疫組織化学、及び／又は蛍光によって検出され得る。正常細胞は、正常ヒト内皮ケラチノサイト（normal human endothelial keratinocyte、ＮＨＥＫ）を含み得る。正常細胞は、インビトロで分化したネクチン－４発現ヒト内皮ケラチノサイトを含み得る。一態様では、腫瘍選択的抗ネクチン－４抗体は、腫瘍細胞上に発現されたネクチン－４への結合についての解離定数より大きい、ケラチノサイト上に発現されたネクチン－４への結合についての解離定数Ｋ_Ｄを有し得る。一態様では、腫瘍選択的抗ネクチン－４抗体は、腫瘍細胞と比較して、ケラチノサイトに対してより低い内在化及び／又は細胞傷害活性を示す。一態様では、腫瘍選択的抗ネクチン－４抗体は、腫瘍細胞と比較して、ケラチノサイトに対してより低い結合親和性、より低い内在化、及びより低い細胞傷害活性を示す。一態様では、開示されるＡＤＣの抗ネクチン－４抗体は、参照抗体ＨＡ２２ ｍＡｂ（エンホルツマブ）と比較して、腫瘍細胞と比較して、ケラチノサイトに対してより低い結合親和性、内在化、又は細胞傷害活性を示す。

【0069】

開示されるＡＤＣにおける使用のための腫瘍選択的抗ネクチン－４抗体は、国際公開第２０２２／２０７８２２号及び国際公開第２０２２／２０７８２５号に開示されている抗体を含み得る。一態様では、本明細書に開示されるＡＤＣは、国際公開第２０２２／２０７８２２号及び国際公開第２０２２／２０７８２５号に開示される逆変異を含み、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣを有し、配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣを有する、１５Ａ７．５と称されるモノクローナル抗体、又はＨ１Ｌ２＿１５Ａ７．５と称されるそのヒト化バリアントを含む。

【0070】

ある態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を含むか、又はそれから調製されたＡＤＣが本明細書に提供され、抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、ＨＣＶＲは、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＶＲは、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号９（ＮＹＧＭＡ）を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１０（ＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧ）を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１１（ＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１２（ＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡ）を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１３（ＳＡＳＹＲＹＳ）を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号１４（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）（全てＫａｂａｔ番号付け）を含む。別の態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体が本明細書に提供され、ＨＣＤＲ１は配列番号１５（ＧＦＴＦＳＮＹＧ）を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１６（ＩＳＮＬＡＹＧＩ）を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１７（ＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１８（ＱＮＶＤＴＨ）を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１９（ＳＡＳ）を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２０（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）（全てＩＭＧＴ番号付け）を含む。

【0071】

ある態様では、本明細書に開示されるＡＤＣは、抗ネクチン－４抗体を含むか、又はそれから調製され、抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、抗体は、配列番号７を含むＨＣＶＲ及び配列番号８を含むＬＣＶＲを含む。

【0072】

更なる態様では、本明細書に開示されるＡＤＣは、抗ネクチン－４抗体を含むか、又はそれから調製され、抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、抗体は、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４アイソタイプを有する。更なる態様では、抗ネクチン－４抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。更なる態様では、抗ネクチン－４抗体はヒトＩｇＧ１アイソタイプを有し、抗ネクチン－４抗体のＨＣは、Ｌ２３４、Ｌ２３５、及びＰ３３１位（ＥＵインデックス番号付け）又はＬ２４７、Ｌ２４８、Ｐ３５０位（Ｋａｂａｔ番号付け）に１つ以上の変異を含む。更なる態様では、抗ネクチン－４抗体は、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ（ＥＵインデックス番号付け）又はＬ２４７Ｆ、Ｌ２４８Ｅ、Ｐ３５０Ｓ（Ｋａｂａｔ番号付け）から選択される１つ以上の変異を含む。

【0073】

ある態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を含むか、又はそれから調製されたＡＤＣが本明細書に提供され、抗体は、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、ＨＣは配列番号５を含み、ＬＣは配列番号６を含む。

【0074】

更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体を含むか、又はそれから調製されたＡＤＣが本明細書に提供され、ＨＣは、配列番号５からなり、ＬＣは、配列番号６からなる。

【0075】

別の態様では、配列番号５のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号５のアミノ酸配列及び配列番号６のアミノ酸配列の両方を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞が本明細書に提供される。いくつかの態様では、細胞は、本明細書に開示されるネクチン－４抗体を発現することができる。

【0076】

別の態様では、第１のＤＮＡ分子及び第２のＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞が本明細書に提供され、第１のＤＮＡ分子は、配列番号５のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のＤＮＡ分子は、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む。

【0077】

別の態様では、抗体が発現されるような条件下で、本明細書に開示される哺乳動物細胞のうちの１つを培養することと、発現された抗体を回収することとを含む、ネクチン－４抗体を産生するためのプロセスが本明細書に提供される。

【0078】

別の態様では、抗体が発現されるような条件下で、配列番号５、配列番号６、又は配列番号５及び配列番号６の両方のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を培養することと、発現された抗体を回収することとによって産生される抗体が本明細書に提供される。

【0079】

別の態様では、第１のＤＮＡ分子及び第２のＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞であって、第１のＤＮＡ分子が配列番号５のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のＤＮＡ分子が配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、哺乳動物細胞を、抗体が発現されるような条件下で培養することと、発現された抗体を回収することとによって産生される抗体が本明細書に提供される。

【0080】

本明細書で使用される場合、「エンホルツマブ」という用語は、標準的な条件を使用して発現及び精製された、国際公開第２０１２０４７７２４号（図３Ａ及び図３Ｂ）に開示されている配列を有する完全ヒト抗ネクチン－４ ＩｇＧ１カッパモノクローナル抗体を指す。エンホルツマブは、本明細書において代替的にＨＡ２２ ｍＡｂと称され得る。エンホルツマブ－ベドチン－ｅｊｆｖという用語は、ペプチドリンカーを介してモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）ペイロードにコンジュゲートされたエンホルツマブを含み、リンカー－ペイロードがマレイミドカプロイル（maleimidocaproyl、ＭＣ）－バリン－シトルリン－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥとして表される式を有する、ＰＡＤＣＥＶ（登録商標）の商品名で販売されている抗体－薬物コンジュゲートを指す。

【0081】

ペイロード
本開示のネクチン－４抗体を、様々なペイロード（その薬学的に許容される塩を含む）にコンジュゲートして、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成することができる。一態様では、開示されるＡＤＣは、（ｉ）ヒトネクチン－４に結合する抗体、（ｉｉ）任意選択で、リンカー、及び（ｉｉｉ）ペイロードを含むか、又はそれらから調製される。更なる態様では、開示されるＡＤＣは、ペイロードに直接又はリンカーを介してコンジュゲートされているヒトネクチン－４に結合する抗体を含む。更なる態様では、開示されるＡＤＣは、ヒトネクチン－４に結合する抗体を、直接又はリンカーを介して間接的のいずれかでペイロードにコンジュゲートすることによって調製される。更なる態様では、開示されるＡＤＣは、ＡＤＣがネクチン－４を発現する標的細胞に結合し、ＡＤＣが標的細胞によって内在化された後にペイロードを放出する。

【0082】

本明細書に開示されるネクチン－４抗体へのコンジュゲーションに好適な部分としては、細胞傷害性剤（例えば、化学療法剤）、プロドラッグ変換酵素、放射性同位体又は化合物、毒素、及び当技術分野で公知の他のペイロードが挙げられる。

【0083】

本明細書における例示的なＡＤＣは、エキサテカンベースのペイロード（例えば、エキサテカン又はエキサテカン類似体）を利用する。エキサテカンは、抗がん活性を有することが示されているトポイソメラーゼＩ（topoisomerase I、ＴＯＰＯ１）阻害剤である。エキサテカン及びその類似体は、部分的に切断されたＤＮＡの再アニーリングを防ぎ、その蓄積によって細胞死をもたらすＴＯＰＯ１／ＤＮＡ複合体に結合する。

【0084】

更なる態様では、開示されるＡＤＣは、ヒトネクチン－４に結合する抗体、任意選択で、リンカー、及びエキサテカン又はその類似体を含む。更なる態様では、開示されるＡＤＣは、エキサテカン又はその類似体に直接又はリンカーを介してコンジュゲートされているヒトネクチン－４に結合する抗体を含む。更なる態様では、開示されるＡＤＣは、直接又はリンカーを介して間接的のいずれかで、ヒトネクチン－４に結合する抗体及びエキサテカン又はその類似体をコンジュゲートすることによって調製される。開示されるＡＤＣにおいて、エキサテカンは、その遊離ＮＨ_２基を通じてリンカーを介して（例えば、リンカーとアミド結合を形成するエキサテカンのＮＨ_２基によって）直接又は間接的のいずれかで抗ネクチン－４抗体にコンジュゲートされ得る。

【0085】

更なる態様では、開示されるＡＤＣは、（ｉ）ヒトネクチン－４に結合する抗体、（ｉｉ）任意選択で、リンカー、及び「ペイロード」と称され得る下式（Ｐ）の化合物を含むか、又はそれらから調製される。

【0086】

【化7】

【0087】

式（Ｐ）の化合物は、エキサテカンと称され得る。

【0088】

更なる態様では、開示されるＡＤＣは、式（Ｐ）のペイロードに直接又はリンカーを介してコンジュゲートされているヒトネクチン－４に結合する抗体を含む。更なる態様では、開示されるＡＤＣは、直接又はリンカーを介して間接的のいずれかで、ヒトネクチン－４に結合する抗体及び式（Ｐ）のペイロードにコンジュゲートすることによって調製される。

【0089】

リンカー
本明細書に開示されるように、ペイロードは、当業者によって理解される方法によって、ネクチン－４抗体とコンジュゲートして、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣを形成することができる。そのようなコンジュゲートの一例は、本明細書に記載されるペイロードの本明細書に記載されるネクチン－４抗体へのリンカーを介した接続を含む。

【0090】

ＡＤＣに使用されるリンカーは、ＡＤＣが標的細胞に局在化する時間を可能にするための、血漿中での安定性に対して設計される。ペイロードの放出が早すぎると、全ての種類の非標的組織を損傷することによって、ＡＤＣの治療指数が低下する。ＡＤＣが標的細胞に内在化されると、リンカーは、ペイロードが設計通りに機能することができるように、ペイロード遊離のための機構を提供するはずである。

【0091】

当業者に既知のリンカーは、例えば、切断可能な部分及び切断不可能な部分を含む。したがって、ペイロード、例えば、エキサテカン又はエキサテカン類似体が、切断可能な部分を有するリンカーを介して抗ネクチン－４抗体にコンジュゲートされているか、又は切断不可能な部分を有するリンカーを介して抗体にコンジュゲートされている、ＡＤＣが本明細書に提供される。

【0092】

当技術分野で公知の任意の好適なリンカーを、本開示のＡＤＣの調製において使用することができる。ある特定の態様では、リンカーは、本開示の抗体と、ペイロードとの両方とコンジュゲートすることができる反応基を含む。例としては、抗体のシステイン残基のチオールにコンジュゲート可能であるマレイミド基、及び３－（マレイミド）プロピオン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルなどのペイロードにコンジュゲート可能なスクシンイミドエステル基を含むリンカーが挙げられるが、これらに限定されない。

【0093】

本開示のある特定の態様では、ＡＤＣは、切断可能である部分を有するリンカーを含む。切断可能部分は、細胞内ベータ－グルクロニダーゼによって切断可能であるベータ－グルクロニドを含み得る。

【0094】

本開示のいくつかの態様では、ＡＤＣは、本明細書で開示される抗体のシステインを本明細書に記載のペイロードに接続する、本明細書ではスペーサ単位Ａと称されるスペーサ単位を含むリンカーを含む。ペイロードをシステインのチオール基にコンジュゲートするために当技術分野で使用される化学物質のいくつかは、マレイミド又はスクシンイミド化学物質を含み、本開示のＡＤＣに利用することができる。本開示の更なる態様では、マレイミドプロピオニルなどのマレイミド型スペーサが、本明細書に開示されるリンカーにおいて利用される。

【0095】

本開示のいくつかの態様では、下式のスペーサ単位Ａを有するＡＤＣが本明細書に提供され、

【0096】

【化8】

式中、ｚは１～５である。スペーサ単位Ａは、還元マレイミジル基を介して抗ネクチン－４抗体にコンジュゲートされている。スペーサ単位Ａは、メチレン部分（すなわち、（ＣＨ２）ｚ）部分を通じてリンカーを介して直接又は間接的のいずれかでペイロードにコンジュゲートされていてもよい。スペーサ単位Ａのいくつかの態様では、ｚは２である。いくつかの態様では、スペーサ単位Ａは、リンカーの残部及びペイロードをＡＤＣの抗体から遠位に「離間する」か、又は「配置する」。

【0097】

ポリサルコシン（Polysarcosin、ＰＳＡＲ）及びポリエチレングリコール（Polyethylene Glycol、ＰＥＧ）を含むリンカー。
いくつかの態様では、開示されるＡＤＣは、ポリサルコシン部分を含むリンカーを含む。ポリサルコシン部分を含むＡＤＣは、当技術分野で公知である。（国際公開第２０１９／０８１４５５号及び国際公開第２０２２／２０７６９９号並びにＣｏｎｉｌｈ ｅｔ ａｔ．「Ｅｘａｔｅｃａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｐｏｌｙｓａｒｃｏｓｉｎｅ ｄｒｕｇ－ｌｉｎｋｅｒ ｐｌａｔｆｏｒｍ」（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ １４（２０２１），２４７を参照されたい）。

【0098】

いくつかの態様では、開示されるリンカーは、少なくとも１つのエチレングリコール単位、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０以上のエチレングリコール単位を含む。更に好ましいリンカーは、少なくとも１つのエチレングリコール単位、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０以上のエチレングリコール単位に付加されたアシル基、カルバモイル基、及び／又はスルファミド基などの高極性スペーサを含む。

【0099】

ある特定の実施形態では、リンカーは、例えば、最大２０のサルコシン単位、及び少なくとも１つのエチレングリコール単位、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０以上のエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであり、リンカーは、グリコシダーゼによる切断に供され、特に、グルクロニダーゼによる切断に供される。

【0100】

ある特定の実施形態では、リンカーは、例えば、約８～１２のサルコシン単位、及び少なくとも１つのエチレングリコール単位、例えば、最大１０のエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであり、リンカーは、グリコシダーゼによる切断に供され、特に、グルクロニダーゼによる切断に供される。

【0101】

ある特定の実施形態では、リンカーは、１０のサルコシン単位及び２つのエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであり、リンカーは、グルクロニダーゼによる切断に供される。

【0102】

本発明の更なる態様は、（ｉ）例えば、約８～１２のサルコシン単位、及び少なくとも１つのエチレングリコール単位、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０以上のエチレングリコール単位を含む親水性ポリサルコシンリンカーであって、リンカーがグリコシダーゼによる切断に供され、特にグルクロニダーゼによる切断に供され、リンカーが、抗体又はその抗原結合断片上のシステイン残基と反応することができるチオール反応性基、例えば、マレイミド基を含む、親水性ポリサルコシンリンカーと、（ｉｉ）リンカーに共有結合したエキサテカンと、を含む、リンカー－薬物コンジュゲートに関する。

【0103】

特定の実施形態では、リンカー－薬物コンジュゲートは、（ｉ）親水性ポリサルコシン基（例えば、１０のサルコシン単位からなるポリサルコシン基）、及びポリエチレン基（例えば、２つのエチレングリコール単位からなるポリエチレングリコール基）であって、リンカーがグリコシダーゼによる切断に供され、特にグルクロニダーゼによる切断に供され、リンカーが、抗体又はその抗原結合断片上のシステイン残基と反応することができるマレイミド基を含む、親水性ポリサルコシン基及びポリエチレン基と、（ｉｉ）リンカーに共有結合したエキサテカンと、を含む。いくつかの実施形態では、ポリサルコシン基は、ポリエチレングリコール基及びエキサテカンに対して「直交」として特徴付けられるリンカー中の位置に位置する。

【0104】

自壊性（self-Immolative)単位
ＡＤＣの一部の自壊性（self-immolation）、つまり自己除去(self-removal）は、ＡＤＣの構造内に、例えば、ＡＤＣのリンカー内に設計することができる。自壊性は、典型的には、自壊性単位にコンジュゲートされているトリガー基の除去後に活性化される自壊性単位を伴う。自壊性単位のいくつかの態様では、トリガー基は、ＡＤＣが標的細胞によって内在化された後に、細胞酵素を介して自壊性単位から酵素的に切断される。好適なトリガー基には、細胞内ベータ－グルクロニダーゼを介して自壊性単位から切断されるベータ－グルクロニドが含まれ得る。次いで、更なる生物学的又は化学的反応が、リンカーからの自壊性単位自体の自発的な排除をもたらす。自壊性単位は、ＡＤＣ内のペプチド切断部位に達する細胞プロテアーゼの立体障害を低減するための空間を提供するなど、ＡＤＣに良好な特性を提供することができる。

【0105】

本開示のいくつかの態様では、本明細書に記載されるＡＤＣは、自壊性単位を含有する。存在する場合、自壊性単位は、リンカー内に位置し得、自壊性単位からのトリガー基の酵素的切断後に活性化され得る。いくつかの態様では、自壊性単位は、その４－ヒドロキシル基を介してベータ－グルクロニドにコンジュゲートされている３－ニトロ－オクトパミン基を含み、ベータ－グルクロニドは、腫瘍によって発現された細胞内ベータ－グルクロニダーゼを介して切断可能である。

【0106】

コンジュゲーション
開示されるＡＤＣにおいて、ペイロード、特にエキサテカン又はエキサテカン類似体は、直接又はリンカーを介して間接的のいずれかで抗ネクチン－４抗体に共有結合的にコンジュゲートされる。本明細書に開示される抗体を、本明細書に開示されるペイロードにコンジュゲートする方法は、当技術分野において公知である。いくつかの方法において、抗体は、第１の反応においてリンカーにコンジュゲートされ、次いで、抗体及びリンカーは、第２の反応においてペイロードにコンジュゲートされる。いくつかの方法において、抗体は、１回の反応においてペイロード又はペイロード／リンカーにコンジュゲートされる。

【0107】

ペイロードは、ネクチン－４への抗体の結合を無効にしない、抗ネクチン－４抗体の任意の好適な位置にコンジュゲートされ得る。例えば、ペイロードは、抗体上の反応性アミノ酸残基、例えば、チオール基を有するシステイン残基にコンジュゲートされ得る。

【0108】

ある特定の態様では、ＡＤＣは、１より大きい薬物－抗体／抗体断片モル比（ＤＡＲ）を有し、すなわち、２つ以上の薬物分子が抗体／抗体断片に結合している。典型的には、コンジュゲートは、約２：１～約１６：１、具体的には約４：１～約１０：１、より具体的には約６：１～約８：１のＤＡＲを有する。ＤＡＲは、既知の方法に従って統計分布から計算することができる。いくつかの態様では、ＡＤＣは、８：１のＤＡＲを有する。いくつかの態様では、ＡＤＣは８のＤＡＲを有するか、又はＡＤＣは実質的に均一な８のＤＡＲを有し、例えば、ＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上が８のＤＡＲを有する。

【0109】

いくつかの態様では、ＡＤＣ（又はＡＤＣの集団）のＤＡＲが実質的に均一なＤＡＲであり、ＡＤＣの少なくとも約８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が１～８の選択されたＤＡＲを有するＡＤＣ（又はＡＤＣの集団）を含む組成物を得ることが望ましい場合がある。開示されるＡＤＣ及び開示されるＡＤＣを含む組成物のいくつかの態様では、ＡＤＣを含む組成物は、実質的に均一なＤＡＲを有し、ＡＤＣの少なくとも約８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が、２、４、６、又は８から選択されるＤＡＲを有する。開示されるＡＤＣ及び開示されるＡＤＣを含む組成物のいくつかの態様では、ＡＤＣを含む組成物は、実質的に均一なＤＡＲを有し、ＡＤＣの少なくとも約８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が８のＤＡＲを有する。

【0110】

開示されたＡＤＣ（又はＡＤＣの集団）を含む組成物は、平均ＤＡＲを有するＡＤＣを含み得る。いくつかの実施形態では、開示されるＡＤＣ（又はＡＤＣの集団）を含む組成物は、１～８（両端を含む）の範囲内の値である平均ＤＡＲを有するＡＤＣを含む。いくつかの実施形態では、平均ＤＡＲは、約１、２、３、４、５、６、又は７より大きい。

【0111】

エキサテカンペイロードを含む抗ネクチン－４ ＡＤＣ
更なる態様では、ヒトネクチン－４に結合する抗体及びエキサテカンペイロードを含むＡＤＣが本明細書に提供される。いくつかの態様では、ＡＤＣは、リンカー－ペイロードとして利用され得る下式（Ｌ－Ｐ）の化合物を含むか、又はそれから調製され、

【0112】

【化9】

式中、ｍは、１～６から選択され、ｎは、１～６から選択され、ｐは、１～２０から選択される。

【0113】

式（Ｌ－Ｐ）のリンカー－ペイロードのいくつかの実施形態では、ｍは２である。

【0114】

式（Ｌ－Ｐ）のリンカー－ペイロードのいくつかの実施形態では、ｎは２である。

【0115】

式（Ｌ－Ｐ）のリンカー－ペイロードのいくつかの実施形態では、ｐは１０である。

【0116】

いくつかの態様では、ＡＤＣは、リンカー－ペイロードとして利用され得る下式（Ｌ－Ｐ’）の化合物を含むか、又はそれから調製される。

【0117】

【化10】

【0118】

いくつかの態様では、開示されるＡＤＣは、化合物：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（（３Ｓ，９Ｓ）－４０－アミノ－９－（２－（２－（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－デカメチル－１，６，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０－トリデカオキソ－２－オキサ－５，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－ウンデカアザテトラコンタン－３－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸を含むか、又はそれを使用して調製され、この化合物は、リンカー－ペイロードとして利用され得る。

【0119】

一態様では、本明細書に開示されるＡＤＣは、下式（ＡＤＣ）のものであり、

【0120】

【化11】

式中、Ａｂは、本明細書に開示されるネクチン－４に結合する抗体であり、ｍは、１～６から選択され、ｎは、１～６から選択され、ｐは、１～２０から選択され、ＤＡＲは、１～８であり、ＡＤＣの薬物－抗体比（ＤＡＲ）を表す。

【0121】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｍは、Ａｂの活性を損なわないように、リンカー－ペイロードがＡＤＣのＡｂ部分から十分に離間されるように十分に大きい値であり、この活性は、腫瘍特異的ネクチン－４に対する結合及び結合親和性を含み得る。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｍは１より大きく、好ましくはｍは２である。

【0122】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｍは、リンカー－ペイロードの安定性を損なわないように十分に小さい値である。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｍは、６、５、４、又は３未満であり、好ましくはｍは２である。

【0123】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｎは、十分な親水性を提供し、ＡＤＣの凝集を低減するように十分に大きい値である。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｎは１より大きく、好ましくはｎは２である。

【0124】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｎは、リンカー－ペイロードの安定性を損なわないように十分に小さい値である。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｎは、６、５、４、又は３未満であり、好ましくはｎは２である。

【0125】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｐは、十分な親水性を提供し、ＡＤＣの凝集を低減するように十分に大きい値である。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、又は９より大きく、好ましくはｐは１０である。

【0126】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｐは、リンカー－ペイロードの安定性を損なわないように十分に小さい値である。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ｐは、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、又は１１未満であり、好ましくはｐは１０である。

【0127】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＤＡＲは、ＡＤＣに十分な活性、例えば十分な毒性を提供するように十分に大きい値である。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＤＡＲは、１、２、３、４、５、６、７より大きく、好ましくはＤＡＲは８である。

【0128】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％は、８のＤＡＲを有する。いくつかの実施形態では、式（ＡＤＣ）のＡＤＣは、組成物中に存在し、組成物中のＡＤＣの少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％は８のＤＡＲを有する。いくつかの実施形態では、式（ＡＤＣ）のＡＤＣは、組成物中に存在し、組成物中に存在するＡＤＣは、約１、２、３、４、５、６、又は７より大きい平均ＤＡＲを有する。

【0129】

式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、Ａｂは、１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してリンカー－ペイロードにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、Ａｂは、ＡｂのＨＣ中の１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、任意選択で、ＨＣは、配列番号５のアミノ酸配列を有し、システインは、Ｃ２２２、Ｃ２２８、Ｃ２３１、及びそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、Ａｂは、ＡｂのＬＣ中の１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、任意選択で、ＬＣは配列番号６のアミノ酸配列を有し、システインはＣ２１４である。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、Ａｂは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣを含み、Ａｂは、ＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、Ｃ２３１、及びＬＣのＣ２１４の全てを含むシステイン残基のチオール基を介してリンカー－ペイロードにコンジュゲートされている。

【0130】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＤＣは、下式（ＡＤＣ’）のものであり、

【0131】

【化12】

式中、ＤＡＲは、１～８であり、ＡＤＣの薬物－抗体比（ＤＡＲ）を表す。

【0132】

式（ＡＤＣ’）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＤＡＲは、ＤＡＲに十分な毒性を提供するように十分に大きい値である。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＤＡＲは、１、２、３、４、５、６、７より大きく、好ましくはＤＡＲは８である。

【0133】

式（ＡＤＣ’）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％は、８のＤＡＲを有する。式（ＡＤＣ’）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、ＡＤＣは組成物中に存在し、組成物中のＡＤＣの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が８のＤＡＲを有する。いくつかの実施形態では、式（ＡＤＣ’）のＡＤＣは、組成物中に存在し、組成物中に存在するＡＤＣは、約１、２、３、４、５、６、又は７より大きい平均ＤＡＲを有する。

【0134】

式（ＡＤＣ’）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、Ａｂは、１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してリンカー－ペイロードにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、Ａｂは、ＡｂのＨＣ中の１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、任意選択で、ＨＣは、配列番号５のアミノ酸配列を有し、システインは、Ｃ２２２、Ｃ２２８、Ｃ２３１、及びそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、Ａｂは、ＡｂのＬＣ中の１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してコンジュゲートされており、任意選択で、ＬＣは配列番号６のアミノ酸配列を有し、システインはＣ２１４である。式（ＡＤＣ）のＡＤＣのいくつかの実施形態では、Ａｂは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣを含み、Ａｂは、ＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、Ｃ２３１、及びＬＣのＣ２１４の全てを含むシステイン残基のチオール基を介してリンカー－ペイロードにコンジュゲートされている。

【0135】

別の態様では、式（ＥＴｘ－２２）：のＡＤＣが本明細書に提供され、

【0136】

【化13】

式中、Ａｂは、本明細書に開示されるネクチン－４に結合する抗体である。式（ＥＴｘ－２２）のＡｂは、配列番号５のアミノ酸配列を含む２つのＨＣと、配列番号６のアミノ酸配列を含む２つのＬＣとを含み、Ａｂは、Ａｂの両方のＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、及びＣ２３１中のチオール基を介して、かつＬＣの両方の鎖のＣ２１４中のチオール基を介して、式（ＥＴｘ－２２）中のリンカーペイロードにコンジュゲートされており、８のＤＡＲ（すなわち、Ａｂの各アームについて４つのシステイン－マレイミド連結）を提供する。

【0137】

示されるように、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、３－マレイミド－プロピオニルスペーサ、ＰＥＧ２スペーサ（すなわち、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－）、ペイロードに対して直交として特徴付けられるリンカー中の位置に位置するＰＳＡＲ１０基（すなわち、－（Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））_１０－）、及び４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミンを含む自壊性単位を含むリンカーを含む。

【0138】

いくつかの態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡｂは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、ＨＣＶＲは、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＶＲは、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、（ａ）ＨＣＤＲ１は、配列番号９を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１１を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１２を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号１４（全てＫａｂａｔ番号付け）を含むか、又は（ｂ）ＨＣＤＲ１は、配列番号１５を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１８を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１９を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号２０（全てＩＭＧＴ番号付け）を含む。

【0139】

いくつかの態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣのＡｂは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＨＣＶＲは配列番号７を含み、ＬＣＶＲは配列番号８を含む。

【0140】

いくつかの態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣのＡｂは、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、ＨＣは、配列番号５を含み、ＬＣは、配列番号６を含む。

【0141】

いくつかの態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、リンカー－ペイロード：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（（３Ｓ，９Ｓ）－４０－アミノ－９－（２－（２－（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－デカメチル－１，６，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０－トリデカオキソ－２－オキサ－５，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－ウンデカアザテトラコンタン－３－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸としての化合物を含むか、又はそれを使用して調製される。

【0142】

いくつかの態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、（ｉ）ｍＡｂ、及び（ｉｉ）リンカー－ペイロード：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（（３Ｓ，９Ｓ）－４０－アミノ－９－（２－（２－（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－デカメチル－１，６，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０－トリデカオキソ－２－オキサ－５，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－ウンデカアザテトラコンタン－３－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸をコンジュゲートすることによって調製される。いくつかの態様では、（ｉ）及び（ｉｉ）をコンジュゲートすることによって調製された開示されるＡＤＣは、８のＤＡＲを有する。

【0143】

いくつかの態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、（ａ）ｍＡｂを還元することと、（ｂ）還元されたｍＡｂ及びリンカー－ペイロード：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（（３Ｓ，９Ｓ）－４０－アミノ－９－（２－（２－（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－デカメチル－１，６，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０－トリデカオキソ－２－オキサ－５，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－ウンデカアザテトラコンタン－３－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸をコンジュゲートすることとによって調製される。いくつかの態様では、工程（ａ）及び（ｂ）によって調製された開示されるＡＤＣは、８のＤＡＲを有する。

【0144】

いくつかの態様では、開示されるＡＤＣは、（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号６のＬＣを含むＬＣを含むｍＡｂ、並びに（ｉｉ）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（（３Ｓ，９Ｓ）－４０－アミノ－９－（２－（２－（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－デカメチル－１，６，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０－トリデカオキソ－２－オキサ－５，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－ウンデカアザテトラコンタン－３－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸をコンジュゲートすることによって調製される。いくつかの態様では、開示されるＡＤＣは、コンジュゲートを実施する前にまずｍＡｂを還元し、還元したｍＡｂをリンカーペイロードにコンジュゲートすることによって調製される。いくつかの態様では、還元したｍＡｂ及びリンカー－ペイロードをコンジュゲートすることによって調製された開示されるＡＤＣは、８のＤＡＲを有する。

【0145】

式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣの構造的特徴及び活性
ＥＴｘ－２２と称されるＡＤＣは、下式を有し、

【0146】

【化14】

式中、Ａｂは、配列番号５のアミノ酸配列を含む２つのＨＣ及び配列番号６のアミノ酸配列を含む２つのＬＣを含む、本明細書に開示されるネクチン－４に結合する抗体である。Ａｂは、Ａｂの両方のＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、及びＣ２３１中のチオール基を介して、かつＬＣの両方の鎖のＣ２１４中のチオール基を介して、式（ＥＴｘ－２２）中のリンカーペイロードにコンジュゲートされており、８のＤＡＲを提供する（すなわち、ＥＴｘ－２２は、Ａｂの各アームについて４つのシステイン－マレイミド連結を含む）。

【0147】

示されるように、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、抗ネクチン－４抗体及び式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣのリンカー－ペイロードに関連する明確な構造的特徴を有する。いくつかの態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣのこれらの明確な構造的特徴又はそれらの組み合わせは、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣに望ましい活性を付与する。

【0148】

一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、配列番号５のＨＣ及び配列番号６のＬＣを含むＨ１Ｌ２＿１５Ａ７．５抗ネクチン－４ｍＡｂを含み、これは所望の選択性を示す。一態様では、Ｈ１Ｌ２＿１５Ａ７．５抗ネクチン－４ｍＡｂは、ヒトネクチン－１、ネクチン－２、又はネクチン－３などの他のネクチンタンパク質に対して、ヒトネクチン－４に対して望ましい選択性を示す。一態様では、Ｈ１Ｌ２＿１５Ａ７．５抗ネクチン－４ ｍＡｂは、正常ヒト内皮ケラチノサイトなどの正常細胞によって発現されたネクチン－４と比較して、腫瘍によって発現されたネクチン－４に対して望ましい選択性を示す。

【0149】

一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、８のＤＡＲを有する。一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、望ましい毒性及び効力を提供する８のＤＡＲを有する。一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、８のＤＡＲを有し、ＡＤＣは、最小量の凝集を示す。一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、８のＤＡＲを有し、ＥＴｘ－２２のリンカーは、凝集を最小限に抑える。一態様では、リンカーは、凝集を最小限に抑えるのに十分な長さを有する。一態様では、リンカーは、凝集を最小限に抑えるのに十分に親水性である。

【0150】

示されるように、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣはリンカーを含み、リンカーは、３－マレイミド－プロピオニルスペーサ、ＰＥＧ２スペーサ（すなわち、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－）、ペイロードに対して直交として特徴付けられる位置にあり得るＰＳＡＲ１０基（すなわち、－（Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））_１０－）、及び４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン基を含む自壊性単位を含むか、それらから調製される。一態様では、リンカーのこれらの特徴のうちの１つ以上は、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣの凝集を最小限に抑える。一態様では、これらの構造的特徴のうちの１つ以上は、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣの凝集を最小限に抑えるのに十分な長さを提供する。一態様では、リンカーのこれらの構造的特徴のうちの１つ以上は、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣに十分な親水性を提供して、ＡＤＣの凝集を最小限に抑える。

【0151】

一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、コンジュゲートされたリンカー－ペイロードが、ネクチン－４結合及び親和性の活性などの抗ネクチン－４抗体の活性を実質的に妨げないように、リンカー－ペイロードを抗ネクチン－４抗体から離れて配置するのに十分な長さを有するスペーサを含むリンカーを含む。一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、リンカー－ペイロードの安定性を損なわないように十分に短い長さを有するスペーサを含むリンカーを含む。

【0152】

示されるように、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣはリンカーを含み、リンカーは、３－マレイミド－プロピオニルスペーサ、ＰＥＧ２スペーサ（すなわち、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－）、ペイロードに対して直交として特徴付けられる位置にあり得るＰＳＡＲ１０基（すなわち、－（Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））_１０－）、及び４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン基を含む自壊性単位を含むか、それらから調製される。一態様では、これらの構造的特徴のうちの１つ以上は、抗ネクチン－４抗体からのリンカー－ペイロードの望ましい間隔を提供することができる。

【0153】

一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、望ましい安定性を示すリンカーを含む。一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、血漿中で望ましい安定性を示すリンカーを含む。一態様では、血漿中の安定性は、ＡＤＣが血漿中に置かれた後の時間に対するＡＤＣのＤＡＲを決定することによって測定され得る。

【0154】

示されるように、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣはリンカーを含み、リンカーは、３－マレイミド－プロピオニルスペーサ、ＰＥＧ２スペーサ（すなわち、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－）、ペイロードに対して直交として特徴付けられる位置にあり得るＰＳＡＲ１０基（すなわち、－（Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））_１０－）、及び４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン基を含む自壊性単位を含むか、それらから調製される。一態様では、これらの構造的特徴のうちの１つ以上は、血流中のリンカー－ペイロードの望ましい安定性を提供し得る。

【0155】

一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、選択的切断性を示すリンカーを含む。一態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、ＡＤＣが血流中にある間はインタクトなままであり、ＡＤＣが腫瘍部位に送達された後にのみ切断されるリンカーを含む。いくつかの態様では、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣによって標的化された腫瘍は、リンカーの構成要素を切断する酵素を発現する。いくつかの態様では、腫瘍は、リンカーのベータ－グルクロニドを切断するベータ－グルクロニダーゼを発現する。

【0156】

示されるように、式（ＥＴｘ－２２）のＡＤＣは、トリガー基として機能し得るベータ－グルクロニド基、並びに再配列及び自壊性切断を受ける３－ニトロ－オクトパミン基を含むか、又はそれらから調製される自壊性単位を含む。一態様では、自壊性単位は、選択的切断性を提供し、切断は、ベータ－グルクロニドが標的化腫瘍細胞においてベータ－グルクロニダーゼによって切断されるまで引き起こされない。一態様では、ＥＴｘ－２２のＡＤＣは、細胞内ベータ－グルクロニダーゼを、好ましくは比較的高レベルで発現する腫瘍に送達される。一態様では、ベータ－グルクロニド基が自壊性単位から切断され、次いで、自壊性基が再配列及び自壊性切断を受け、それによってエキサテカンペイロードが放出される。

【0157】

治療用途
別の態様では、がんの治療を必要とする患者に、有効量の本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物を投与することを含む、がんを治療する方法が本明細書に提供される。更なる態様では、がんの治療を必要とする患者に、有効量の本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物を投与することを含む、がんを治療する方法が本明細書に提供され、がんは、膀胱がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がんである。

【0158】

別の態様では、ネクチン－４発現がんに罹患している患者にＡＤＣを投与することを含む方法において使用するための、ネクチン－４結合剤及びエキサテカンを含むＡＤＣが本明細書に提供され、任意選択で、がんは、ネクチン－４結合剤及びアウリスタチン、例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含むＡＤＣによる治療に抵抗性である。別の態様では、ネクチン－４発現がんに罹患している患者の治療のための薬剤の製造のための、ネクチン－４結合剤及びエキサテカンを含むＡＤＣの使用が本明細書に提供され、任意選択で、がんは、ネクチン－４結合剤及びアウリスタチン、例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含むＡＤＣによる治療に抵抗性である。更に別の態様では、ネクチン－４発現がんの治療を必要とする患者に、治療有効量のネクチン－４結合剤及びエキサテカンを含むコンジュゲートを投与することを含む、それを行うための方法が本明細書に提供され、任意選択で、障害は、ネクチン－４結合剤及びアウリスタチン、例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含むＡＤＣによる治療に抵抗性である。

【0159】

更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、膀胱がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、尿路上皮がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、乳がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、肺がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、胃がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、食道がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、結腸直腸がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、膵臓がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、頭頸部がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、卵巣がんである。更なる態様では、がんを治療する方法が提供され、がんは、前立腺がんである。

【0160】

更なる態様では、患者は、エンホルツマブベドチンを投与された後に再発しているか、又は患者は、エンホルツマブベドチン又は標準治療に対して難治性になっている。更なる態様では、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物で治療されている患者は、エンホルツマブベドチンでの治療に不適格である。更なる態様では、患者は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）などのアウリスタチンによる治療に抵抗性であるがんを有する。

【0161】

更なる態様では、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物で治療されている患者は、ネオアジュバント／アジュバント、局所進行性又は転移性環境において、プログラム死受容体－１（programmed death receptor-1、ＰＤ－１）又はプログラム死リガンド１（programmed death-ligand 1、ＰＤ－Ｌ１）阻害剤、及び白金含有化学療法を以前に受けていた。更なる態様では、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物とＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤との組み合わせで治療されている患者は、シスプラチン含有化学療法での治療に不適格である。

【0162】

更なる態様では、有効量の本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物を、１つ以上の抗腫瘍剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて投与することを含む、方法が提供される。更なる態様では、有効量の本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物を、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて投与することを含む、方法が提供される。一態様では、患者は、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤の同時、別々、又は連続的投与の前に、患者のがんによるＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１の発現を測定する診断試験に供される。

【0163】

別の態様では、有効量の本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物を、ＦＧＦＲ化合物と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて投与することを含む、方法が本明細書に提供される。更なる態様では、がんは尿路上皮がんである。更なる態様では、ＦＧＦＲ化合物は、エルダフィチニブ、ＬＯＸＯ－４３５、フチバチニブ、ボファタマブ、ベマリツズマブ、デラザンチニブ、インフィグラチニブ、ペミガチニブ、ロガラチニブ、ＦＧＦ４０１、又はペミガチニブである。いくつかの実施形態では、ネクチン－４ ＡＤＣは、エルダフィチニブによる治療に抵抗性であるがんを有する患者に投与される。

【0164】

別の態様では、療法に使用するための、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が提供される。更なる態様では、がんは、尿路上皮がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がんである。

【0165】

更なる態様では、膀胱がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、尿路上皮がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、乳がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、肺がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、胃がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、食道がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、結腸直腸がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、膵臓がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、頭頸部がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、卵巣がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、前立腺がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。

【0166】

更なる態様では、がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供され、がんは、エンホルツマブベドチンによる治療後に再発しているか、又はがんは、エンホルツマブベドチンに対して難治性になっている。更なる態様では、がんの治療における使用のための、本明細書に記載される医薬組成物のネクチン－４ ＡＤＣが本明細書に提供され、がんは、モノメチルアウラスタチン（aurastatin）Ｅ（ＭＭＡＥ）などのアウリスタチンによる治療に対して抵抗性である。更なる態様では、がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供され、がんは、エンホルツマブベドチンによる治療後に再発しているか、又はがんは、標準治療に対して難治性になっている。更なる態様では、エンホルツマブベドチンの事前使用が禁忌であった、がんの治療において使用するための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。

【0167】

更なる態様では、がんの治療における使用のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供され、事前使用は、ネオアジュバント／アジュバント、局所進行性又は転移性環境におけるＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１阻害剤及び白金含有化学療法に対して起こる。更なる態様では、がんの治療において使用するための、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせた本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供され、がんは、シスプラチン含有化学療法で治療することができない。

【0168】

更なる態様では、がんの治療において使用するための、１つ以上の抗腫瘍剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わされた本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、抗腫瘍剤は、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤である。

【0169】

別の態様では、がんの治療において使用するための、ＦＧＦＲ化合物と同時に、別々に、又は連続的に組み合わされた、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、がんは尿路上皮がんである。更なる態様では、ＦＧＦＲ化合物は、エルダフィチニブ、ＬＯＸＯ－４３５、フチバチニブ、ボファタマブ、ベマリツズマブ、デラザンチニブ、インフィグラチニブ、ペミガチニブ、ロガラチニブ、ＦＧＦ４０１、又はペミガチニブである。別の態様では、エルダフィチニブに抵抗性であるがんの治療において使用するための、医薬組成物のネクチン－４ ＡＤＣが本明細書に提供される。

【0170】

別の態様では、がんの治療のための薬剤の製造のための、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書に提供される。更なる態様では、がんの治療のための薬剤の製造のための、本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書に提供され、がんは、膀胱がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がんである。

【0171】

更なる態様では、がんの治療のための薬剤の製造のための、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書に提供され、がんは、エンホルツマブベドチンによる治療後に再発しているか、又はがんは、エンホルツマブベドチン若しくは標準治療に対して難治性になっている。更なる態様では、エンホルツマブベドチンの事前使用が禁忌であった、がんの治療のための薬剤の製造における本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書に提供される。更なる態様では、がんの治療のための薬剤の製造のための、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書に提供され、がんは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）などのアウリスタチンによる治療に対して抵抗性である。

【0172】

更なる態様では、ネオアジュバント／アジュバント、局所進行性又は転移性環境におけるＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１阻害剤及び白金含有化学療法の事前使用である、がんの治療のための薬剤の製造における本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書に提供される。更なる態様では、がんの治療のための薬剤の製造における本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書で提供され、がんは、シスプラチン含有化学療法で治療することができず、当該薬剤は、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に投与される。

【0173】

更なる態様では、がんの治療のための薬剤の製造における本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書で提供され、当該薬剤は、１つ以上の抗腫瘍剤と同時に、別々に、又は連続的に投与される。更なる態様では、がんの治療のための薬剤の製造における本明細書に記載されるＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書に提供され、当該薬剤は、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に投与される。

【0174】

別の態様では、がんの治療のための薬剤の製造における、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書に提供され、当該薬剤は、ＦＧＦＲ化合物と同時に、別々に、又は連続的に投与される。更なる態様では、がんは尿路上皮がんである。更なる態様では、ＦＧＦＲ化合物は、エルダフィチニブ、ＬＯＸＯ－４３５、フチバチニブ、ボファタマブ、ベマリツズマブ、デラザンチニブ、インフィグラチニブ、ペミガチニブ、ロガラチニブ、ＦＧＦ４０１、又はペミガチニブである。別の態様では、エルダフィチニブによる治療に抵抗性であるがんの治療のための薬剤の製造における、本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物の使用が本明細書に提供される。

【0175】

更なる態様では、膀胱がんは、尿路上皮がん、扁平上皮がん、又は腺がんである。更なる態様では、膀胱がんは、非浸潤性、筋層非浸潤性、又は筋層浸潤性である。更なる態様では、膀胱がんは、膀胱、腎盂、尿管、又は尿道のものである。更なる態様では、乳がんは、ＨＲ陽性、ＨＥＲ２陰性乳がん、又はトリプルネガティブ乳がん（triple negative breast cancer、ＴＮＢＣ）である。更なる態様では、乳がんは、乳管又は小葉である。更なる態様では、肺がんは、扁平上皮非小細胞肺がん（non-small cell lung cancer、ＮＳＣＬＣ）又は非扁平上皮ＮＳＣＬＣである。更なる態様では、肺がんは、扁平上皮、腺がん、又は小細胞がんである。更なる態様では、前立腺がんは、転移性去勢抵抗性前立腺がんである。更なる態様では、胃（gastric）がんは、胃（stomach）がんである。更なる態様では、胃がん又は食道がんは、胃食道接合部がんである。更なる態様では、卵巣がんは、漿液性又は粘液性である。更なる態様では、卵巣がんは、卵管又は腹膜である。

【0176】

更なる態様では、抗腫瘍剤は、白金含有化学療法を含む化学療法治療剤であってもよく、かつ／又はシスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソーム化ドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミド及びドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合粒子注射用懸濁剤、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びイリノテカン）、ゲムシタビン、トポテカン、リポソーム化イリノテカン、ペメトレキセド、及びセツキシマブを含んでもよい。更なる態様では、抗腫瘍剤は、ニボルマブ、イピリムマブ、ピディリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、エパカドスタット、及びデュルバルマブからなる群から選択されるものを含む、腫瘍免疫療法剤であり得る。

【0177】

医薬組成物及び投与方法
本明細書に記載されるＡＤＣは、医薬組成物として製剤化することができ、医薬組成物は、例えば、経口、局所、又は皮下投与などの、抗体又はＡＤＣを生物学的に利用可能にするいずれかの経路によって投与される。

【0178】

また、本明細書に提供されるＡＤＣと、生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、及び補助剤からなる群から選択される１つ以上の剤とを含む、医薬組成物が本明細書に提供される。

【0179】

本開示のＡＤＣ、又はそれを含む医薬組成物は、非経口経路（例えば、皮下及び静脈内）によって投与され得る。本開示のＡＤＣは、薬学的に許容され得る担体、希釈剤、又は賦形剤とともに単回投与又は複数回投与で患者に単独で投与され得る。本明細書に記載される医薬組成物は、当該技術分野において周知の方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ ｅｄ．（２０１２），Ａ．Ｌｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ）によって調製することができ、本明細書に開示される抗体又はＡＤＣ、及び１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む。

【0180】

ある態様では、本明細書に開示される抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物が本明細書に開示される。ある態様では、本明細書に開示されるＡＤＣと、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物が本明細書に開示される。

【0181】

投薬、レジメン、及びサイクル
開示されるネクチン－４ ＡＤＣは、がんの治療を必要とする患者に、有効量の本明細書に記載されるネクチン－４ ＡＤＣ又は医薬組成物を投与することを含む、がんを治療する方法において投与され得る。患者は、ネクチン－４ ＡＤＣの用量、投薬レジメン、又は投薬サイクルを調節することによって、有効量を投与され得る。

【0182】

一態様では、本開示のＡＤＣ、又はそれを含む医薬組成物は、非経口経路（例えば、皮下及び静脈内）によって投与され得る。

【0183】

定義
本明細書で使用される場合、本開示の文脈で（特に特許請求の範囲の文脈で）使用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語及び同様の用語は、本明細書に別段の定めがない限り、又は文脈によって明らかに矛盾していない限り、単数形及び複数形の両方をカバーすると解釈されるべきである。

【0184】

本明細書で使用される「結合する」という用語は、別段の定めがない限り、化学結合又は別のタンパク質若しくは分子との引力相互作用を形成するタンパク質又は分子の能力を意味することを意図しており、当該分野において既知である一般的な方法によって決定されるように、２つのタンパク質又は分子の近接をもたらす。

【0185】

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、所望の治療結果を達成するのに必要な量（期間及び投与手段）を指す。タンパク質又はコンジュゲートの有効量は、個体の病状、年齢、性別及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発するタンパク質又はコンジュゲートの能力などの要因に応じて変動し得る。有効量はまた、タンパク質又はコンジュゲートの任意の毒性効果又は有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。

【0186】

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」又は「治療すること」という用語は、本明細書に開示の障害又は疾患の進行を減速、制御、遅延、若しくは停止し得る、又は障害若しくは疾患症状を改善し得る全てのプロセスを指すが、必ずしも全ての障害若しくは疾患症状の完全な消失を示すわけではない。

【0187】

本明細書で使用される場合、「患者」又は「対象」という用語は、それぞれ、ヒト患者又はヒト対象を指す。「患者」及び「対象」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。

【0188】

ある特定の略語は、以下のように定義される：「ＡＣＮ」は、アセトニトリルを指し、「Ｂｏｃ２Ｏ」は、脱炭酸（decarbonate）ジ－ｔｅｒｔ－ブチルを指す。「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンを指し、「ＤＩＰＥＡ」は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＢＵ」は、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エンを指し、「ＤＭＴＭＭ」は、（４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチル－モルホリニウムクロリドを指し、「ＤＭＡＣ」は、ジメチルアセトアミドを指し、「ＤＭＦ」は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＴＴ」は、ジチオスレイトールを指し、「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチルを指し、「ＥＤＴＡ」は、エチレンジアミン四酢酸を指し、「ＦＡ」はギ酸を指し、「ＨＭＰＡ」は、ヘキサメチルホスホラミドを指し、「ｈ」は、時間を指し、「ＨＥＰＥＳ」は、（Ｎ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸）を指し、「ＨＭＴＴＡ」は、ヘキサメチルトリエチレンテトラミンを指し、「ＨＡＴＵ」は、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＯＢｔ」は、ヒドロキシベンゾトリアゾールを指し、「Ｐｙｒ」は、ピリジンを指し、「ＮＭＭ」は、Ｎ－メチルモルホリンを指し、「ＮＭＰ」は、（Ｎ－メチル－２－ピロリドン）を指し、「Ｓｕ」は、スクシンイミドを指し、「ＰＰＴＳ」は、ｐ－トルエンスルホン酸ピリジニウムを指し、「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを指し、「ＴｓＯＨ」は、ｐ－トルエンスルホン酸を指し、「ＴＣＥＰ」は、（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）を指す。「ＴＦＡ」は、トリフルオロ酢酸を指し、「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを指す。

【0189】

実施形態
以下の実施形態は、例示であり、本発明の範囲を制限するように解釈されるべきではない。

【0190】

実施形態１．以下の式の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、

【0191】

【化15】

式中、Ａｂは、ヒトネクチン－４に結合する抗体であり、Ａｂは、可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖（ＨＣ）及び可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖（ＬＣ）を含み、ＨＣＶＲは、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＶＲは、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、（ｉ）ＨＣＤＲ１は、配列番号９（ＮＹＧＭＡ）を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１０（ＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧ）を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１１（ＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１２（ＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡ）を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１３（ＳＡＳＹＲＹＳ）を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号１４（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）（全てＫａｂａｔ番号付け）を含むか、又は（ｉｉ）ＨＣＤＲ１は、配列番号１５（ＧＦＴＦＳＮＹＧ）を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６（ＩＳＮＬＡＹＧＩ）を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７（ＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１８（ＱＮＶＤＴＨ）を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１９（ＳＡＳ）を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号２０（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）（全てＩＭＧＴ番号付け）を含み、ＤＡＲは、１～８である、ＡＤＣ。

【0192】

実施形態２．ＨＣＶＲが配列番号７を含み、ＬＣＶＲが配列番号８を含む、実施形態１に記載のＡＤＣ。

【0193】

実施形態３．ＨＣが配列番号５を含み、ＬＣが配列番号６を含む、実施形態１又は２に記載のＡＤＣ。

【0194】

実施形態４．Ａｂが、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４アイソタイプを有する、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＤＣ。

【0195】

実施形態５．Ａｂが、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する、実施形態１～４のいずれか１つに記載のＡＤＣ。

【0196】

実施形態６．Ａｂが、ＨＣ又はＬＣに存在するシステイン残基のうちの１つ以上のチオール基を介してコンジュゲートされている、実施形態１～５のいずれか１つに記載のＡＤＣ。

【0197】

実施形態７．Ａｂが、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣ及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣを含み、Ａｂが、ＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、若しくはＣ２３１のチオール基、ＬＣのＣ２１４のチオール基、又はそれらの組み合わせを介してコンジュゲートされている、実施形態１～６のいずれか１つに記載のＡＤＣ。

【0198】

実施形態８．ＡＤＣが、８のＤＡＲを有し、Ａｂが、ＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、及びＣ２３１のチオール基、並びにＬＣのＣ２１４のチオール基によってコンジュゲートされている、実施形態７に記載のＡＤＣ。

【0199】

実施形態９．ＡＤＣの少なくとも９５％が、８のＤＡＲを有する、実施形態１～８のいずれか１つに記載のＡＤＣ。

【0200】

実施形態１０．下式：

【0201】

【化16】

を有する、実施形態１～８のいずれか１つに記載のＡＤＣ。

【0202】

実施形態１１．Ａｂが、配列番号５のＨＣ及び配列番号６のＬＣを含む、実施形態１０に記載のＡＤＣ。

【0203】

実施形態１２．Ａｂが、ＨＣのＣ２２２、Ｃ２２８、Ｃ２３１位のシステインを介して、かつＬＣのＣ２１４のシステインを介してコンジュゲートされている、実施形態１１に記載のＡＤＣ。

【0204】

実施形態１３．実施形態１～８のいずれか１つに記載のＡＤＣを含む組成物であって、組成物中のＡＤＣの少なくとも約９５％が、８のＤＡＲを有する、組成物。

【0205】

実施形態１４．実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＡＤＣ又は実施形態１３に記載の組成物と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。

【0206】

実施形態１５．がんを治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＣ、実施形態１３に記載の組成物、又は実施形態１４に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【0207】

実施形態１６．がんが、尿路上皮がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がんである、実施形態１５に記載の方法。

【0208】

実施形態１７．がんが、尿路上皮がんである、実施形態１５又は１６に記載の方法。

【0209】

実施形態１８．がんが、エンホルツマブベドチンを投与された後に再発しているか、又はがんが、エンホルツマブベドチンによる治療に対して難治性になっている、実施形態１５～１７のいずれか１つに記載の方法。

【0210】

実施形態１９．有効量の、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＣ、実施形態１３に記載の組成物、又は実施形態１４に記載の医薬組成物を患者に投与する前に、第一選択治療、第二選択治療、又は第三選択治療としてエンホルツマブベドチンが患者に投与された、実施形態１５～１８のいずれか１つに記載の方法。

【0211】

実施形態２０．患者が、エンホルツマブベドチンによる治療に不適格である、実施形態１５～１７のいずれか１つに記載の方法。

【0212】

実施形態２１．がんが、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）による治療に抵抗性である、実施形態１５～１７のいずれか１つに記載の方法。

【0213】

実施形態２２．がんが、原発性腫瘍の成長、腫瘍転移の発生及び／若しくは再発、並びに／又は少なくとも１つの腫瘍マーカーの増加、並びに／又はＡＢＣＢ１発現の上方制御を特徴とする、実施形態１５～２１のいずれか１つに記載の方法。

【0214】

実施形態２３．ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤を患者に同時に、別々に、又は連続的に投与することを更に含む、実施形態１５～２２のいずれか１つに記載の方法。

【0215】

実施形態２４．ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤を投与する前に、がんによるＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１の発現を測定する診断試験を患者に施す、実施形態２３に記載の方法。

【0216】

実施形態２５．療法における使用のための、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＡＤＣ。

【0217】

実施形態２６．がんの治療における使用のための、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＡＤＣ。

【0218】

実施形態２７．がんが、尿路上皮がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がんである、実施形態２６に記載の使用のためのＡＤＣ。

【0219】

実施形態２８．がんが、尿路上皮がんである、実施形態２６に記載の使用のためのＡＤＣ。

【0220】

実施形態２９．がんが、エンホルツマブベドチンによる治療後に再発しているか、又はがんが、エンホルツマブベドチンによる治療に対して難治性になっている、実施形態２６～２８のいずれか１つに記載の使用のためのＡＤＣ。

【0221】

実施形態３０．有効量の、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＣ、実施形態１３に記載の組成物、又は実施形態１４に記載の医薬組成物を患者に投与する前に、第一選択治療、第二選択治療、又は第三選択治療としてエンホルツマブベドチンが患者に以前に投与された、実施形態２６～２９のいずれか１つに記載の使用のためのＡＤＣ。

【0222】

実施形態３１．エンホルツマブベドチンの事前使用が禁忌である、実施形態２６～２８のいずれか１つに記載の使用のためのＡＤＣ。

【0223】

実施形態３２．がんが、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）による治療に抵抗性である、実施形態２６～２８のいずれか１つに記載の使用のためのＡＤＣ。

【0224】

実施形態３３．がんが、原発性腫瘍の成長、腫瘍転移の発生及び／若しくは再発、並びに／又は少なくとも１つの腫瘍マーカーの増加、並びに／又はＡＢＣＢ１発現の上方制御を特徴とする、実施形態２６～３２のいずれか１つに記載の使用のためのＡＤＣ。

【0225】

実施形態３４．ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わされる、実施形態２４～３３のいずれか１つに記載の使用のためのＡＤＣ。

【0226】

実施形態３５．がんが、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１を発現するがんとして同定された後に、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わされる、実施形態３４に記載の使用のためのＡＤＣ。

【0227】

実施形態３６．がんの治療に使用するための、有効量の実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＡＤＣ又は有効量の実施形態１３に記載の組成物を含む、医薬組成物。

【0228】

実施形態３７．がんが、尿路上皮がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がんである、実施形態３６に記載の使用のための組成物。

【0229】

実施形態３８．ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて投与される、実施形態３６又は３７に記載の組成物。

【0230】

実施形態３９．がんが、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１を発現するがんとして同定された後に、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて投与される、実施形態３６に記載の組成物。

【0231】

実施形態４０．がんの治療のための薬剤の製造のための、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＡＤＣの使用。

【0232】

実施形態４１．がんが、尿路上皮がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がんである、実施形態４０に記載の使用。

【0233】

実施形態４２．薬剤が、ＰＤ－１阻害剤又はＰＤ－Ｌ１阻害剤を更に含む、請求項４０又は４１に記載の使用。

【0234】

実施形態４３．ＡＤＣを産生する方法であって、（ｉ）ヒトネクチン－４に結合する抗体（Ａｂ）であって、Ａｂが、可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖（ＨＣ）及び可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖（ＬＣ）を含み、ＨＣＶＲが、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＶＲが、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、（ａ）ＨＣＤＲ１が、配列番号９（ＮＹＧＭＡ）を含み、ＨＣＤＲ２が、配列番号１０（ＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧ）を含み、ＨＣＤＲ３が、配列番号１１（ＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、ＬＣＤＲ１が、配列番号１２（ＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡ）を含み、ＬＣＤＲ２が、配列番号１３（ＳＡＳＹＲＹＳ）を含み、ＬＣＤＲ３が、配列番号１４（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）（全てＫａｂａｔ番号付け）を含むか、又は（ｂ）ＨＣＤＲ１が配列番号１５（ＧＦＴＦＳＮＹＧ）を含み、ＨＣＤＲ２が、配列番号１６（ＩＳＮＬＡＹＧＩ）を含み、ＨＣＤＲ３が、配列番号１７（ＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、ＬＣＤＲ１が、配列番号１８（ＱＮＶＤＴＨ）を含み、ＬＣＤＲ２が、配列番号１９（ＳＡＳ）を含み、ＬＣＤＲ３が、配列番号２０（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）（全てＩＭＧＴ付番）を含む、Ａｂ、及び（ｉｉ）下式の化合物をコンジュゲートすることを含む、方法：

【0235】

【化17】

【0236】

実施形態４４．Ａｂ及び化合物が、Ａｂ及び化合物をコンジュゲートし、８のＤＡＲを有するＡＤＣを提供するのに十分な条件下でコンジュゲートされる、実施形態４３に記載の方法。

【0237】

実施形態４５．コンジュゲートする前に、Ａｂを還元剤で還元して、還元されたＡｂを産生することを更に含む、実施形態４３又は４４に記載の方法。

【0238】

実施形態４６．還元剤が、ＤＴＴ又はＴＣＥＰである、実施形態４５に記載の方法。

【0239】

実施形態４７．化合物が、コンジュゲートの間、Ａｂに対して少なくとも約８モル過剰で存在する、実施形態４３～４６のいずれか１つに記載の方法。

【0240】

実施形態４８．化合物が、コンジュゲートの間、Ａｂに対して少なくとも約１２モル過剰で存在する、実施形態４３～４６のいずれか１つに記載の方法。

本発明のさらなる実施形態を以下に示す。
１．以下の式の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、

【化29】

式中、
Ａｂは、ヒトネクチン－４に結合する抗体であり、Ａｂは、可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖（ＨＣ）及び可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖（ＬＣ）を含み、前記ＨＣＶＲは、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲは、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
（ｉ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号９（ＮＹＧＭＡ）を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号１０（ＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧ）を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号１１（ＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２（ＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡ）を含み、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１３（ＳＡＳＹＲＹＳ）を含み、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号１４（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を含むか、又は
（ｉｉ）前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１５（ＧＦＴＦＳＮＹＧ）を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号１６（ＩＳＮＬＡＹＧＩ）を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号１７（ＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１８（ＱＮＶＤＴＨ）を含み、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号１９（ＳＡＳ）を含み、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号２０（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を含み、
ＤＡＲは、１～８である、ＡＤＣ。
２．前記ＨＣＶＲが配列番号７を含み、前記ＬＣＶＲが配列番号８を含み、かつ／又は前記ＨＣが配列番号５を含み、前記ＬＣが配列番号６を含む、上記１に記載のＡＤＣ。
３．前記Ａｂが、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４アイソタイプ、好ましくはヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する、上記１又は２に記載のＡＤＣ。
４．下式を有し、

【化30】

式中、Ａｂは、配列番号５のＨＣ及び配列番号６のＬＣを含み、前記Ａｂは、前記ＨＣのＣ２２２位、Ｃ２２８位、Ｃ２３１位のシステインを介して、かつ前記ＬＣのＣ２１４のシステインを介してコンジュゲートされている、上記１～３のいずれかに記載のＡＤＣ。
５．上記１～３のいずれかに記載のＡＤＣを含む組成物であって、前記組成物中の前記ＡＤＣの少なくとも約９５％が、８のＤＡＲを有する、組成物。
６．上記１～４のいずれかに記載のＡＤＣ又は上記５に記載の組成物と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。
７．がんを治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の上記１～４のいずれかに記載のＡＤＣ、上記５に記載の組成物、又は上記６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
８．前記がんが、尿路上皮がん、乳がん、肺がん、胃がん、食道がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん、卵巣がん、又は前立腺がん、好ましくは尿路上皮がんである、上記７に記載の方法。
９．前記患者が、第一選択、第二選択、又は第三選択治療としてエンホルツマブベドチンを以前に投与されており、任意選択で、前記がんが、エンホルツマブベドチンが投与された後に再発しているか、又は前記がんが、エンホルツマブベドチンが投与された後にエンホルツマブベドチンによる治療に対して難治性になっている、上記７又は８に記載の方法。
１０．療法における使用のための、上記１～４のいずれかに記載のＡＤＣ。
１１．がんの治療における使用のための、上記１～４のいずれかに記載のＡＤＣ。１２．がんの治療に使用するための、有効量の上記１～４のいずれかに記載のＡＤＣ又は有効量の上記５に記載の組成物を含む、医薬組成物。
１３．がんの治療のための薬剤の製造のための、上記１～４のいずれかに記載のＡＤＣの、使用。
１４．ＡＤＣを生成する方法であって、
（ｉ）ヒトネクチン－４に結合する抗体（Ａｂ）であって、前記Ａｂが、可変領域（ＨＣＶＲ）を有する重鎖（ＨＣ）及び可変領域（ＬＣＶＲ）を有する軽鎖（ＬＣ）を含み、前記ＨＣＶＲが、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲが、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ａ）前記ＨＣＤＲ１が、配列番号９（ＮＹＧＭＡ）を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１０（ＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧ）を含み、前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１１（ＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１２（ＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡ）を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１３（ＳＡＳＹＲＹＳ）を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１４（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を含むか、又は
ｂ）前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１５（ＧＦＴＦＳＮＹＧ）を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１６（ＩＳＮＬＡＹＧＩ）を含み、前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１７（ＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ）を含み、前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１８（ＱＮＶＤＴＨ）を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１９（ＳＡＳ）を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２０（ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ）を含む、Ａｂ、並びに
（ｉｉ）下式の化合物：

【化31】

をコンジュゲートすることを含む、方法。
１５．前記化合物が、コンジュゲートの間、前記Ａｂに対して少なくとも約８モル過剰で存在する、上記１５に記載の方法。

【実施例】

【0241】

実施例１：式（Ｌ－Ｐ’）のリンカー－ペイロードの合成：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（（３Ｓ，９Ｓ）－４０－アミノ－９－（２－（２－（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－デカメチル－１，６，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０－トリデカオキソ－２－オキサ－５，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－ウンデカアザテトラコンタン－３－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸

【0242】

【化18】

【0243】

式（Ｌ－Ｐ’）のリンカー－ペイロードは、ポリサルコシン（ＰＳＡＲ）化合物、４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクタパミン化合物、エキサテカン化合物、及びマレイミド－プロプリオニル化合物を含む前駆体又は中間体から合成された。リンカー－ペイロードは、国際公開第２０１９０８１４５５号及び国際公開第２０２２／２０７６９９号に開示されている方法を使用して合成した。

【0244】

ＰＳＡＲ中間体：ＦｍｏｃＮＨ－ＰＥＧ２－Ｇｌｕ（Ｓｕ）－ＰＳＡＲ１０－ＮＨ_２

【0245】

【化19】

【0246】

ＰＳＡＲ中間体は、スキーム１を使用して調製することができる。

【0247】

【化20】

【0248】

ポリサルコシンの樹脂上合成を、市販のＦｍｏｃ－Ｓａｒ－Ｓａｒ－ＯＨジペプトイドビルディングブロックを有するＲｉｎｋアミドについてのサブモノマー合成反復手順を使用して実施する。別段の定めがない限り、全ての反応は室温で実施される。

【0249】

最初のＦｍｏｃ－サルコシン残基を予備充填したＲｉｎｋアミドを出発材料として使用する。Ｆｍｏｃ－サルコシンを予備充填したＲｉｎｋアミドを、ＤＭＦ中２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で室温で１５分間２回処理する。次いで、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄する。樹脂に、ＤＭＦ（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｓａｒ－Ｓａｒ－ＯＨ（３当量）、ＨＡＴＵ（２．９当量）、及びＤＩＰＥＡ（６当量）の溶液を添加した。反応容器を２時間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄する。樹脂を、ＤＭＦ中２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で室温にて１５分間２回処理する。次いで、樹脂をＤＭＦ（４×）及びＤＣＭ（４×）で洗浄して、ｎ＝３のポリサルコシンオリゴマーを有するＲｉｎｋ樹脂を得る。

【0250】

ブロモアセチル化工程とアミン置換工程とを交互に行うことによって、所望の長さが得られるまで、サブモノマー合成手順を使用して、ｎ＝３のポリサルコシンオリゴマーの伸長を実施する。ブロモアセチル化工程を、ＤＭＦ中１０当量のブロモ酢酸及び１３当量のジイソプロピルカルボジイミド（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）を添加することによって実施する。混合物を３０分間撹拌し、排出し、ＤＭＦで洗浄する（４回）。アミン置換工程のために、水溶液中４０％（ｗｔ）メチルアミン（樹脂１００ｍｇ当たり１．５ｍＬ）を添加し、容器を３０分間振盪し、排水し、ＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄する。

【0251】

所望のポリサルコシンオリゴマー長に達したら（例えば、ＰＳＡＲ １０－ｍｅｒ）、直交化学官能化を実施する。直交化学官能基化に続いて、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸基又は他の基による最終キャッピングを行ってもよい。Ｆｍｏｃ保護基は、樹脂切断の前又は後に除去することができる。

【0252】

ポリサルコシンは、以下のように、グルタミン酸及びアミノ－３，６ジオキサオクタン酸で官能化され得る。ＤＭＦ（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯＡｌｌ）－ＯＨ（３当量）、ＨＡＴＵ（２．９当量）、及びＤＩＰＥＡ（６当量）をＲｉｎｋ樹脂に添加する。反応容器を９０分間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄する。次いで、樹脂を室温で１５分間、ＤＭＦ中２０％ピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で２回処理する。樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄し、続いて、ＤＭＦ（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）中のＦｍｏｃ－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸（３当量）、ＨＡＴＵ（２．９当量）、ＤＩＰＥＡ（６当量）と１時間カップリングした。樹脂をＤＭＦ（４回）、ＤＣＭ（４回）で洗浄する。０．２５当量のＰｄ（ＰＰｈ_３）_４及び２０当量のフェニルシラン（アルゴン気流下で穏やかに撹拌した）を含有するＤＣＭ溶液での２回の３０分間の処理によって、ａｌｌｏｃ保護基を除去する。次いで、樹脂をＤＭＦ（５回）及びＤＣＭ（５回）で洗浄する。Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（N-hydroxysuccinimide、ＮＨＳ）エステルを、５０当量のＤＩＣ及び６０当量のＮ－ヒドロキシスクシンイミド（樹脂１００ｍｇ当たり１．５ｍＬ）を含有するＤＭＦ溶液での９０分間の処理によって、最終ポリサルコシン化合物のカルボン酸側鎖に導入する。次いで、樹脂をＤＭＦ（４回）及びＤＣＭ（４回）で洗浄する。次いで、最終ポリサルコシン化合物を樹脂から切断する（１００％ＴＦＡ ２回、３０分）。

【0253】

４－ベータ－グルクロニド－３ニトロ－オクトパミン中間体：（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテート

【0254】

【化21】

【0255】

４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン中間体４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン中間体：（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテートは、スキーム２を使用して調製され得る。

【0256】

【化22】

【0257】

本方法で利用されるオクトパミン又はオクトパミン中間体は、ラセミ混合物として、又はエナンチオピュアな化合物として得ることができる。ラセミ混合物は、エナンチオピュアな化合物を得るために、当技術分野で公知のキラル分離に供することができる。

【0258】

オクトパミン（±）塩酸塩（１６９０ｍｇ／１１ｍｍｏｌ）を、４ｍＬの蒸留水に懸濁する。フラスコを０℃で冷却し、予め冷却した６５％硝酸溶液４ｍＬをゆっくり添加する。反応物を０℃で２０分間維持し、モノニトロ化をＨＰＬＣによって評価する。モノニトロ化オクトパミン前駆体を予め冷却した２５０ｍＬの三角フラスコに移し、８～９のｐＨ値に達するまで飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で０℃でゆっくり中和する。次いで、３０ｍＬのジオキサンを添加し、続いてＢｏｃ_２Ｏ（７２０２ｍｇ／１３．２ｍｍｏｌ）を添加する。反応物を室温に到達させ、一晩撹拌する。次いで、反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和クエン酸溶液で３回、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄する。有機相をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させて、粗生成物を得、これを、シリカゲルでのクロマトグラフィ（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、７０：３０～２０：８０の勾配）によって精製して、モノニトロ化オクトパミン前駆体：ｔｅｒｔ－ブチル（２－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル）エチル）カルバメートを得る。次いで、得られたモノニトロ化オクトパミン前駆体を、更なる合成工程を実施する前にキラル分離に供する。

【0259】

ラセミｔｅｒｔ－ブチル（２－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル）エチル）カルバメートのキラル分離を、ＭＰＬＣカラム並びにＤＣＭ±０．２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨ（均一濃度勾配）の移動相及びＤＣＭ±０．２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨの試料溶媒を使用して実施する。絶対配置を決定するために、両方のエナンチオマーのフェノール位置を、無水ＴＨＦ中１．２モル当量の４－ニトロベンゾイルクロリド及び２モル当量のトリエチルアミンでエステル化する。化合物をシリカゲルでのクロマトグラフィ（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、勾配９０：１０～１０：９０）によって精製して、４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヒドロキシエチル）－２－ニトロフェニル４－ニトロベンゾエートを得る。エナンチオマーの絶対配置（予めヘプタン／ジクロロメタンの１：１混合物に溶解し、３週間ゆっくりと蒸発させて結晶の形成を誘導した）をＸ線結晶学によって確認する。

【0260】

丸底フラッシュ中、Ａｇ_２ＣＯ_３（１５００ｍｇ／５．４ｍｍｏｌ）及び１，１，４，７，１０，１０－ヘキサメチルトリエチレンテトラミン（２５１ｍｇ／１．１ｍｍｏｌ）を４ｍＬの無水アセトニトリルに懸濁し、室温で２時間撹拌する。エナンチオピュアなｔｅｒｔ－ブチル（２－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル）エチル）カルバメート（２９２ｍｇ／０．９８ｍｍｏｌ）及び１－ブロモ－２，３，４－トリ－Ｏ－アセチル－α－Ｄ－グルクロニドメチルエステル（５８３ｍｇ／１．４６ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、溶液混合物を室温で４時間撹拌する。次いで、反応物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和クエン酸溶液で３回、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄する。有機相をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させて、粗製生成物を得、これを、シリカゲルでのクロマトグラフィ（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、７０：３０～３０：７０の勾配）によって精製して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヒドロキシエチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテートを得る。

【0261】

（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヒドロキシエチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテート（３３４ｍｇ／０．５４ｍｍｏｌ）及び４－ニトロフェニルクロロホルメート（２１９ｍｇ／１．０９ｍｍｏｌ）を、６ｍＬの乾燥ＤＣＭに０℃で溶解する。無水ピリジン（１１２ｍｇ／１．４１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。反応物を０．４５μｍのＰＴＦＥフィルタで濾過し、シリカゲルでのクロマトグラフィ（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、８５：１５～３０：７０の勾配）によって精製して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテートを得る。

【0262】

４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体：（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－アミノ－１－（（（（１Ｒ，９Ｒ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：］６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸

【0263】

【化23】

【0264】

４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン中間体を、スキーム３を使用してエキサテカンにコンジュゲートして、４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体：（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－アミノ－１－（（（（１Ｒ，９Ｒ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸を得ることができる。

【0265】

【化24】

【0266】

１０１ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）の４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン中間体（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテート、０．１４ｍｍｏｌのメシル酸エキサテカン、及び１８ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを、無水ＤＭＦ／ピリジンの８５：１５（ｖ／ｖ）混合物１ｍＬに溶解する。１６．７ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを添加する。反応物を４０℃で２時間撹拌し、揮発性物質を減圧下で蒸発させる。粗残渣をシリカゲルでのクロマトグラフィ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配９９：１～９５：５）によって精製して、中間体化合物を得て、次にこれを脱保護に供する。

【0267】

１４４ｍｇ（０．１０６ｍｍｏｌ）のこの中間体化合物を０℃で３ｍＬのＭｅＯＨ（７５：２５）に溶解する。ＬｉＯＨ一水和物（４４．５ｍｇ／１．０６ｍｍｏｌ）を水（０．４ｍＬ）に溶解し、反応容器に添加する。撹拌後、混合物を酢酸（８３ｍｇ／１．４ｍｍｏｌ）で中和し、減圧下で濃縮する。得られた粗生成物をＴＦＡ／ＤＣＭ溶液で再溶解し、撹拌する。揮発性物質を減圧下で蒸発させ、粗残渣を採取し、ＨＰＬＣを使用して精製して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－アミノ－１－（（（（１Ｒ，９Ｒ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：］６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸を得る。

【0268】

官能化ＰＳＡＲ－４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体を得るための、ＰＳＡＲ中間体及び４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体のコンジュゲーション

【0269】

【化25】

【0270】

ＰＳＡＲ中間体及び４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体を、スキーム４を使用してコンジュゲートして、官能化ＰＳＡＲ－４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体を得ることができる。

【0271】

【化26】

【0272】

１００ｍｇ（０．０８１ｍｍｏｌ）のＰＳＡＲ中間体及び５１ｍｇ（０．０６１ｍｍｏｌ）の４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体を無水ＤＭＦに溶解する。４１ｍｇ（０．４０５ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを添加し、反応物を室温で３０分間撹拌する。反応物の完全な変換がＨＰＬＣによって評価された後、ＤＭＦ中の８％（ｖ／ｖ）ピペリジン溶液に達するために、ピペリジンを反応バイアルに直接添加する。次いで、ＨＰＬＣによってＦｍｏｃ脱保護全体が観察されるまで、反応物を室温で５～１０分撹拌する。反応物を水／ＡＣＮ １：１（ｖ／ｖ）中の１０％ＴＦＡ溶液でゆっくり中和し、ＨＰＬＣを使用して精製して、官能化ＰＳＡＲ－４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体を得る。

【0273】

式（Ｌ－Ｐ’）のリンカー－ペイロード：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（（３Ｓ，９Ｓ）－４０－アミノ－９－（２－（２－（２－（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－デカメチル－１，６，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０－トリデカオキソ－２－オキサ－５，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８－ウンデカアザテトラコンタン－３－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸

【0274】

【化27】

【0275】

式（Ｌ－Ｐ’）のリンカー－ペイロードは、スキーム５を使用して、マレイミドプロピオン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル及び官能化－ＰＳＡＲ－４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体をコンジュゲートすることによって調製することができる。

【0276】

【化28】

【0277】

マレイミドプロピオン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル及び官能化－ＰＳＡＲ－４－ベータ－グルクロニド－３－ニトロ－オクトパミン－エキサテカン中間体を、無水ＤＭＦに溶解する（０．１Ｍ濃度のマレイミド化合物）。１．５６ｍｇ（０．０１５）のトリエチルアミンを添加し、反応物の完全な変換がＨＰＬＣによって観察されるまで、反応物を２時間撹拌した。次いで、反応混合物を１％ＴＦＡ水溶液／ＡＣＮ １：１（ｖ／ｖ）で希釈し、ＨＰＬＣ分取方法６を使用して精製して、式（Ｌ－Ｐ’）のリンカー－ペイロードを得る。

【0278】

実施例２：ヒト化抗ネクチン４モノクローナル抗体（１５Ａ７．５ｍＡｂ）
開示されるＡＤＣに利用される抗ネクチン－４ｍＡｂは、国際公開第２０２２／２０７８２２号及び国際公開第２０２２／２０７８２５号に記載されているｍＡｂ １５Ａ７．５のヒト化誘導体である。示されるように、ｍＡｂ １５Ａ７．５は、ケラチノサイトに対して腫瘍細胞に対する選択的親和性を示す。本明細書に開示されるＥＴｘ－２２ ＡＤＣを調製するために利用されるｍＡｂは、そのＨＣ（Ｈ１）のアミノ酸配列及びそのＬＣ（Ｌ２）のアミノ酸配列に導入された復帰変異を有する１５Ａ７．５ｍＡｂのヒト化誘導体であり、本明細書においてＨ１Ｌ２＿１５Ａ７．５と称される。Ｈ１Ｌ２＿１５Ａ７．５ｍＡｂは、配列番号５の重鎖アミノ酸配列及び配列番号６の軽鎖アミノ酸配列を有する。ＨＣ可変領域（ＨＣＶＲ）は、配列番号７として提供され、ＬＣ可変領域（ＬＣＶＲ）は、配列番号８として提供される。ＨＣ及びＬＣの相補性決定領域（ＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ）は、配列番号９～１４（Ｋａｂａｔ）及び配列番号１５～２０（ＩＭＧＴ）として提供される。

【0279】

実施例３：ＥＴｘ－２２ ＡＤＣの調製
「ＥＴｘ－２２」と称されるＡＤＣは、Ｈ１Ｌ２－１５Ａ７．５ｍＡｂを、システイン残基を介して、本明細書において式（Ｌ－Ｐ’）のリンカー－ペイロードと称されるエキサテカンペイロードにコンジュゲートすることによって調製した。ＥＴｘ－２２の概略図を図１に提供する。

【0280】

ＥＴｘ－２２と称されるＡＤＣを調製するために、ＰＢＳ １Ｘ、１ｍＭ ＥＤＴＡ中のｍＡｂ Ｈ１Ｌ２－１５Ａ７．５（ＨＣ：配列番号５、ＬＣ：配列番号６）を、１４モル当量のＴＣＥＰで３７℃で２時間還元し、その後、緩衝液を１００ｍＭ ＫＰＯ_４、１ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ７．４に交換した（Ａｍｉｃｏｎ ｕｌｔｒａ ３０ｋＤａ）。１２モル当量の式（Ｌ－Ｐ’）のリンカー－ペイロードを、還元されたｍＡｂとのコンジュゲーションのために室温で３５分間使用した。次いで、緩衝液を１００ｍＭ ＫＰＯ_４（ｐＨ８．０）に交換した後、酸素の不在下で３７℃で２４時間インキュベートして、マレイミドを自己加水分解させた。最終交換緩衝液を２０ｍＭ Ｈｉｓ（ｐＨ６．０）中で実施した後、０．２２μＭフィルタで濾過して、ＥＴｘ－２２を得た。

【0281】

ＥＴｘ－２２の薬物－抗体比（ＤＡＲ）をＬＣ－ＭＳ分析に従って決定し、コンジュゲートしたｍＡｂ当たり７．７７～７．８２毒素であることが見出された。ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって決定されるように、５％未満の材料が凝集した。疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）によるＥＴｘ－２２の分析は、裸１５Ａ７．５ｍＡｂに近いＥＴｘ－２２についての単一の鋭いピークを明らかにし、これは高い均質な親水性を示す。（図２及び対応する簡単な説明を参照されたい）。ＥＴｘ－２２のエクスビボ安定性を、マウス、カニクイザル、又はヒト血清中でＥＴｘ－２２をインキュベートし、経時的にＤＡＲを測定することによって評価した。（図３及び対応する簡単な説明を参照されたい）。インビトロ細胞傷害活性を、ヒトネクチン－４を発現するＨＣＴ－１１６－２Ｇ１０クローンについて評価した。（図４及び対応する簡単な説明を参照されたい）。

【0282】

比較ＡＤＣとして、ＨＡ２２抗ネクチン－４ｍＡｂをマレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥにコンジュゲートして、エンホルツムマブベドチンを生成した。簡単に述べると、１０ｍＭ酢酸、１％ソルビトール、３％Ｌ－アルギニン（ｐＨ５．０）中のＨＡ２２の１５ｍｇ／ｍＬ溶液を、２０％体積の０．１Ｍ Ｔｒｉｓ、２５ｍＭ ＥＤＴＡ、及び７５０ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ８．４）を補充して、溶液のｐＨを７．５の５ｍＭ ＥＤＴＡ及び１５０ｍＭ塩化ナトリウムに調整した。次いで、ＨＡ２２ ｍＡｂを、２．５モル当量のＴＣＥＰを添加することによって部分的に還元し、次いで、３７℃で２時間穏やかに撹拌した。次いで、部分的に還元されたｍＡｂ溶液を５℃に冷却し、４．４モル当量のシステイン反応性リンカー－エキサテカン化合物をＤＭＳＯの６％（ｖ／ｖ）溶液として添加した。混合物を５℃で６０分間撹拌し、次いで、システイン反応性リンカー－ＭＭＡＥ化合物に対して１モル当量のＮ－アセチルシステインを添加した後、更に１５分間撹拌した。過剰なクエンチされたシステイン反応性リンカー－ペイロード及び他の反応性構成要素を、１０体積の２０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）を用いた抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の限外濾過／透析濾過によって除去した。ＬＣ－ＭＳ分析による薬物－抗体比（ＤＡＲ）は、コンジュゲートしたｍＡｂ当たり３．７９毒素であった。ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって決定されるように、１％未満の材料が凝集した。

【0283】

実施例４：マウスにおけるインビボ研究
雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃヌル（ＮＳＧ）及び雄ＮＭＲＩマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤ及びＢＡＬＢ／ｃヌードマウスをＧｅｍＰｈａｒｍａｔｅｃｈ Ｃｏ．から入手した。マウスを滅菌条件下で収容し、滅菌した食餌及び水を随意に提供し、１２時間明及び１２時間暗サイクルで維持した。ＮＳＧマウスについては、細胞及びＰＤＸを、５０％フェノールレッド不含Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｂｅｃｔｏｎ－Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中に懸濁した０．５×１０^６個の細胞とともに、乳房脂肪体中の両方の側腹部に接種した。そうでなければ、ＰＤＸ断片（２～３ｍｍ直径）を皮下接種した。

【0284】

腫瘍が１００～２００ｍｍ^３の平均体積に達したとき、マウスを処置した。マウスを、示された濃度のＡＤＣの単回用量又は２回用量でｉ．ｖ．処置した。デジタルキャリパーで測定し、腫瘍体積（長さ×幅^２×π／６）を計算することによって、腫瘍成長をモニターした。各群の平均腫瘍体積が１００～２００ｍｍ^３となるように、全ての動物を無作為に処置群に割り当てた。異なる処置の毒性を評価するために、動物の体重を３日毎にモニターした。マウスの体重減少＞２０％、腫瘍体積＞１５００ｍｍ^３、外被の波打ち、及び背の丸まり、衰弱、並びに運動性の低下をモニターし、エンドポイントとみなした。

【0285】

ＥＴｘ－２２のＰＫ／ＰＤ特徴付けを、ＮＳＧマウス及びトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）ＰＤＸ ４００移植ＮＳＧマウスを使用して評価した。（図５及び対応する簡単な説明を参照されたい）。

【0286】

ＥＴｘ－２２の作用機序を、トリプルネガティブ乳がんのＰＤＸモデル（ＰＤＸ４００）を移植したＮＳＧマウスにおいて評価した。（図６及び対応する簡単な説明を参照されたい）。

【0287】

ＭＭＡＥ抵抗性トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）細胞株（ＳＵＭ１９０）におけるＥＴｘ－２２のインビボ有効性を、ＮＳＧマウスにおいて評価した。（図７及び対応する簡単な説明を参照されたい）。

【0288】

ＥＴｘ－２２のインビボ有効性を、食道がん（ＥＳ０２０１）（図８及び対応する簡単な説明）、膀胱がん（ＢＬＣＵ００３）（図９及び対応する簡単な説明）、膀胱がん（Ｂ５２１）（図１０及び対応する簡単な説明）、頭頸部がん（ＨＮ２５７９）（図１１及び対応する簡単な説明）、子宮頸がん（ＣＶ３０３５）（図１２及び対応する簡単な説明）、子宮頸がん（ＣＶ３５６０）（図１３及び対応する簡単な説明）、及び卵巣がん（ＯＶ２４２３）（図１４及び対応する簡単な説明）のＰＤＸモデルにおいて評価した。

【0289】

ＥＴｘ－２２のインビボ有効性を、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）：ＰＤＸ４００（図１５及び対応する簡単な説明）、ＰＤＸ３１７（図１６及び対応する簡単な説明）、ＰＤＸ３４８（図１７及び対応する簡単な説明）、及びＰＤＸ４３４（図１８及び対応する簡単な説明）のＰＤＸモデルにおいて評価した。

【0290】

アミノ酸配列
配列番号１
ＭＰＬＳＬＧＡＥＭＷＧＰＥＡＷＬＬＬＬＬＬＬＡＳＦＴＧＲＣＰＡＧＥＬＥＴＳＤＶＶＴＶＶＬＧＱＤＡＫＬＰＣＦＹＲＧＤＳＧＥＱＶＧＱＶＡＷＡＲＶＤＡＧＥＧＡＱＥＬＡＬＬＨＳＫＹＧＬＨＶＳＰＡＹＥＧＲＶＥＱＰＰＰＰＲＮＰＬＤＧＳＶＬＬＲＮＡＶＱＡＤＥＧＥＹＥＣＲＶＳＴＦＰＡＧＳＦＱＡＲＬＲＬＲＶＬＶＰＰＬＰＳＬＮＰＧＰＡＬＥＥＧＱＧＬＴＬＡＡＳＣＴＡＥＧＳＰＡＰＳＶＴＷＤＴＥＶＫＧＴＴＳＳＲＳＦＫＨＳＲＳＡＡＶＴＳＥＦＨＬＶＰＳＲＳＭＮＧＱＰＬＴＣＶＶＳＨＰＧＬＬＱＤＱＲＩＴＨＩＬＨＶＳＦＬＡＥＡＳＶＲＧＬＥＤＱＮＬＷＨＩＧＲＥＧＡＭＬＫＣＬＳＥＧＱＰＰＰＳＹＮＷＴＲＬＤＧＰＬＰＳＧＶＲＶＤＧＤＴＬＧＦＰＰＬＴＴＥＨＳＧＩＹＶＣＨＶＳＮＥＦＳＳＲＤＳＱＶＴＶＤＶＬＤＰＱＥＤＳＧＫＱＶＤＬＶＳＡＳＶＶＶＶＧＶＩＡＡＬＬＦＣＬＬＶＶＶＶＶＬＭＳＲＹＨＲＲＫＡＱＱＭＴＱＫＹＥＥＥＬＴＬＴＲＥＮＳＩＲＲＬＨＳＨＨＴＤＰＲＳＱＰＥＥＳＶＧＬＲＡＥＧＨＰＤＳＬＫＤＮＳＳＣＳＶＭＳＥＥＰＥＧＲＳＹＳＴＬＴＴＶＲＥＩＥＴＱＴＥＬＬＳＰＧＳＧＲＡＥＥＥＥＤＱＤＥＧＩＫＱＡＭＮＨＦＶＱＥＮＧＴＬＲＡＫＰＴＧＮＧＩＹＩＮＧＲＧＨＬＶ
配列番号２
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号４
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号５
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＡＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号６
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹＳＡＳＹＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号７
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＡＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＡＬＩＹＳＡＳＹＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号９
ＮＹＧＭＡ
配列番号１０
ＦＩＳＮＬＡＹＧＩＮＹＡＤＴＶＴＧ
配列番号１１
ＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ
配列番号１２
ＫＡＳＱＮＶＤＴＨＶＡ
配列番号１３
ＳＡＳＹＲＹＳ
配列番号１４
ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ
配列番号１５
ＧＦＴＦＳＮＹＧ
配列番号１６
ＩＳＮＬＡＹＧＩ
配列番号１７
ＡＲＧＡＲＡＴＧＷＦＡＹ
配列番号１８
ＱＮＶＤＴＨ
配列番号１９
ＳＡＳ
配列番号２０
ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ

【要約】

本開示は、エキサテカンを含むネクチン－４抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及びその医薬組成物、並びにがんの治療のためのＡＤＣを使用する方法を提供する。
【選択図】なし

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【配列表】

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