特許 7595195 ヒトインターロイキン－４受容体アルファ抗体グルココルチコイドコンジュゲート

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-27

(45)【発行日】2024-12-05

(54)【発明の名称】ヒトインターロイキン－４受容体アルファ抗体グルココルチコイドコンジュゲート

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20241128BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241128BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 37/00 20060101ALI20241128BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C12P21/08

C12N15/13

A61K47/68

A61P11/06

A61P29/00

A61P37/00

【請求項の数】 48

(21)【出願番号】P 2023577245

(86)(22)【出願日】2023-05-31

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-18

(86)【国際出願番号】 US2023067673

(87)【国際公開番号】W WO2023235738

(87)【国際公開日】2023-12-07

【審査請求日】2023-12-13

(31)【優先権主張番号】63/348,197

(32)【優先日】2022-06-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(72)【発明者】

【氏名】アットウェル，シェイン クルメン

(72)【発明者】

【氏名】クレイトン，ジョシュア アール

(72)【発明者】

【氏名】フェン，イーチン

(72)【発明者】

【氏名】カルタ，マヤ レイチェル

(72)【発明者】

【氏名】レオン，ドンミエンヌ ドエン ムン

(72)【発明者】

【氏名】ナ，ソンチン

(72)【発明者】

【氏名】ニューバーン，クリスティン ペイジ

(72)【発明者】

【氏名】ペルティエ，ローラ アン

(72)【発明者】

【氏名】ルイス，ディアナ イサベル

(72)【発明者】

【氏名】ストーケル，デイビッド ジョン

(72)【発明者】

【氏名】ワースト，ジャクリーン エム

(72)【発明者】

【氏名】バウアー，スコット ポール

【審査官】福澤 洋光

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１９－５２４６４５（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０２１／１７００２０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Journal of the American Chemical Society，Vol.138，2016年，pp.1430-1445

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １／００－１５／９０

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

Ｃ１２Ｐ １／００－４１／００

ＣＡ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式：

【化1】

（式中、Ａｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体であり、
式中、

【化2】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲート。

【請求項2】

Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
（ｉ）
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、又は
（ｉｉ）
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号４２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、又は
（ｉｉｉ）
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１９を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２０を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４を含む、
請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項3】

【化3】

である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項4】

【化4】

である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項5】

【化5】

である、請求項１又は３に記載のコンジュゲート。

【請求項6】

【化6】

である、請求項１又は４に記載のコンジュゲート。

【請求項7】

【化7】

である、請求項１又は３に記載のコンジュゲート。

【請求項8】

【化8】

である、請求項１又は３に記載のコンジュゲート。

【請求項9】

【化9】

である、請求項１又は４に記載のコンジュゲート。

【請求項10】

【化10】

である、請求項１又は４に記載のコンジュゲート。

【請求項11】

前記Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、
請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項12】

前記ＶＨが配列番号７を含み、前記ＶＬが配列番号８を含む、請求項１１に記載のコンジュゲート。

【請求項13】

前記Ａｂが、
ｉ．配列番号９を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｉｉ．配列番号５０を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｉｉｉ．配列番号３７を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｉｖ．配列番号３１を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｖ．配列番号３５を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｖｉ．配列番号３３を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｖｉｉ．配列番号１３を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、又は
ｖｉｉｉ．配列番号５２を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、を含む、
請求項１１に記載のコンジュゲート。

【請求項14】

前記Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号４２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、
請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項15】

前記ＶＨが配列番号４４を含み、前記ＶＬが配列番号４５を含む、請求項１４に記載のコンジュゲート。

【請求項16】

前記Ａｂが、配列番号４６を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号４７を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む、請求項１４に記載のコンジュゲート。

【請求項17】

前記Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１９を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２０を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４を含む、
請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項18】

前記ＶＨが配列番号２５を含み、前記ＶＬが配列番号２６を含む、請求項１７に記載のコンジュゲート。

【請求項19】

前記Ａｂが、配列番号２７を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号２８を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む、請求項１７に記載のコンジュゲート。

【請求項20】

前記Ａｂが重鎖と軽鎖とを含み、前記重鎖が、
アミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）におけるシステイン、
アミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）におけるシステイン、又は
アミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）のシステイン及びアミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）のシステイン、を含む、
請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項21】

前記Ａｂが重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣがヒトＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項22】

前記Ａｂが重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣがヒトＩｇＧ１アイソタイプである、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項23】

ｎが、２～５である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項24】

ｎが、３～５である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項25】

ｎが、３～４である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項26】

ｎが、約４である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項27】

ｎが、約３である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項28】

ｎが、約２である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項29】

請求項１に記載のコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩、及び１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項30】

炎症性疾患の治療を必要とする対象において、それを治療するための薬剤であって、請求項１に記載のコンジュゲート若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項２９に記載の医薬組成物を含む、薬剤。

【請求項31】

前記炎症性疾患が、２型炎症性疾患である、請求項３０に記載の薬剤。

【請求項32】

前記２型炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、又は慢性自発性蕁麻疹（ＣＳＵ）から選択される、請求項３１に記載の薬剤。

【請求項33】

前記２型炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎である、請求項３２に記載の薬剤。

【請求項34】

炎症性疾患の治療に使用するための、請求項２９に記載の医薬組成物。

【請求項35】

前記炎症性疾患が２型炎症性疾患である、請求項３４に記載の医薬組成物。

【請求項36】

前記２型炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、又は慢性自発性蕁麻疹（ＣＳＵ）から選択される、請求項３５に記載の医薬組成物。

【請求項37】

前記２型炎症性疾患がアトピー性皮膚炎である、請求項３６に記載の医薬組成物。

【請求項38】

炎症性疾患の治療用薬剤の製造における、請求項１に記載のコンジュゲート若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項２９に記載の医薬組成物の使用。

【請求項39】

前記炎症性疾患が２型炎症性疾患である、請求項３８に記載の使用。

【請求項40】

前記２型炎症性疾患は、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、又は慢性自発性蕁麻疹（ＣＳＵ）から選択される、請求項３９に記載の使用。

【請求項41】

前記２型炎症性疾患は、アトピー性皮膚炎である、請求項４０に記載の使用。

【請求項42】

前記Ａｂが、ヒトＩＬ－４Ｒαを中和する、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項43】

前記Ａｂが、ヒトＩＬ－４のヒトＩＬ－４Ｒαへの結合を阻害する、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項44】

前記Ａｂが、ヒトＩＬ－１３のヒトＩＬ－４Ｒαへの結合を阻害する、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項45】

前記Ａｂが、内在化抗体である、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項46】

コンジュゲートを生成する方法であって、前記コンジュゲートが、請求項１に記載のコンジュゲートを含む、方法。

【請求項47】

（ａ）前記抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を還元剤で還元して、還元された抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体を生成する工程であって、前記抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体が、１つ以上の操作されたシステイン残基を含む、工程と、
（ｂ）前記還元された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を酸化剤で酸化して、酸化された抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体を生成する工程と、
（ｃ）前記酸化された抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体を式

【化11】

の化合物と接触させて前記コンジュゲートを生成する工程と、を含む、
請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記還元剤がジチオスレイトールであり、前記酸化剤がデヒドロアスコルビン酸である、請求項４７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、ヒトインターロイキン－４受容体アルファ抗体グルココルチコイド受容体アゴニストコンジュゲート、炎症性疾患、例えばアトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患、又は慢性自発性蕁麻疹等の２型炎症性疾患の治療のためのコンジュゲートの使用方法、コンジュゲートを調製するためのプロセス、及びコンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。

【背景技術】

【0002】

アトピー性皮膚炎は、小児に頻繁に発生するが、多くの成人にも影響を及ぼす、慢性、掻痒性の再発性及び寛解性の炎症性皮膚疾患である。アトピー性皮膚炎の現在の治療には、光療法、コルチコステロイド若しくはカルシニューリン阻害剤を含有する局所クリーム、又はデュピルマブとして知られる皮下注射可能な生物製剤が含まれる。アトピー性皮膚炎の治療においてなされた進展にもかかわらず、アトピー性皮膚炎並びに他の炎症性疾患及び自己免疫疾患を治療するための、現在認可されている治療が有する不利益を最小化又は解消する、新規化合物に対する有意なニーズが存在している。

【0003】

国際公開第２０１７／２１０４７１号は、炎症性疾患を治療するために有用な特定のグルココルチコイド受容体アゴニスト（ＧＣ）及びその免疫複合体を開示している。国際公開第２０１８／０８９３７３号は、新規ステロイド、そのタンパク質コンジュゲート、並びにステロイド及びコンジュゲートを投与することを含む疾患、障害、及び状態を治療する方法を開示している。現在まで、発症中の炎症性疾患の治療のためのヒトＩＬ－４ＲαＧＣコンジュゲートは知られていない。

【発明の概要】

【0004】

本開示は、抗体がヒトＩＬ－４Ｒαに結合する、特定の新規ヒトＩＬ－４Ｒα抗体ＧＣコンジュゲートを提供する。本開示は更に、新規抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体ＧＣコンジュゲートを含む組成物、並びにそのような抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体ＧＣコンジュゲート及びその組成物を使用する方法を提供する。本開示は更に、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患、又は慢性自発性蕁麻疹等の２型炎症性疾患等の炎症性疾患の治療において有用な特定の新規抗ヒトＩＬ－４ＲαＧＣコンジュゲートを提供する。

【0005】

本明細書で提供される特定の抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体ＧＣコンジュゲートは、以下の特性のうちの１つ以上を有する：１）ヒト及び／又はカニクイザルＩＬ－４ＲαのＮ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン１及び２にわたる新規エピトープに結合する、２）所望の結合親和性でヒトＩＬ－４Ｒαに結合する、３）所望の結合親和性でカニクイザルＩＬ－４Ｒαに結合する、４）細胞表面上のヒトＩＬ－４Ｒαに結合して細胞内に内在化する、５）ヒトＩＬ－４Ｒαに結合してＩＬ－４及びＩＬ－１３のＩＬ－４Ｒαへの結合を阻害する、６）インビトロで、ＩＬ－４Ｒαに結合してＩＬ－４Ｒ媒介性応答を阻害する（Ｂ細胞及びＴ細胞におけるｐＳＴＡＴ６、Ｂ細胞増殖、ＣＤ２３発現、サイトカイン産生（例えば、ＭＤＣ、ＧＭ－ＣＳＦ））、７）ヒト及び／又はカニクイザルＩＬ－４Ｒα上のユニークな機能的エピトープに結合する、８）インビロトで、グルココルチコイド受容体アゴニスト媒介性応答を調節する（ＣＤ１６３発現を誘導する、Ｂ細胞増殖を阻害する、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ－５、ＧＭ－ＣＳＦ）を阻害する）、９）グルココルチコイド受容体アゴニスト媒介性遺伝子発現を調節する（上方制御：Ｔｓｃ２２ｄ３、Ｆｋｂｐ５、Ｚｂｔｂ１６；下方制御：ＩＬ－５）、１０）ＡＤＣＣ又はＣＤＣ活性を有意に誘導しない、１１）Ｂ細胞及び／又は骨髄細胞へのＦｃγ受容体結合を保持する、１２）インビボで炎症反応を阻害する、又は１３）良好な開発性プロファイル、例えば、開発、製造、及び／又は製剤化を容易にするための許容可能な粘度、溶解度、及び凝集安定性を有する。

【0006】

したがって、一実施形態では、本開示は、式Ｉ：

【化1】

（式中、Ａｂはヒトインターロイキン－４受容体アルファに結合する抗体（「抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体」）であり、

【化2】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲートを提供する。

【0007】

一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｙ３７、Ｌ３９、Ｆ４１、Ｌ４２、Ｌ４３、Ｅ４５、Ｈ４７、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｅ５２、Ｈ６２、Ｌ６４、Ｍ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｄ７２、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｙ３７、Ｌ３９、Ｆ４１、Ｌ４２、Ｌ４３、Ｅ４５、Ｈ４７、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｅ５２、Ｈ６２、Ｌ６４、Ｍ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｄ７２、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、又は少なくとも５つ以上のアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｌ３９、Ｆ４１、Ｌ４２、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｅ５２、Ｈ６２、Ｌ６４、Ｍ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｄ７２、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｌ３９、Ｆ４１、Ｌ４２、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｅ５２、Ｈ６２、Ｌ６４、Ｍ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｄ７２、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ又はそれより多いアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｙ３７、Ｌ３９、Ｆ４１、Ｌ４３、Ｅ４５、Ｈ４７、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｈ６２、Ｌ６４、Ｍ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６９、Ｄ７２、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｙ３７、Ｌ３９、Ｆ４１、Ｌ４３、Ｅ４５、Ｈ４７、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｈ６２、Ｌ６４、Ｍ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６９、Ｄ７２、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ又はそれより多いアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｙ３７、Ｌ３９、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｅ５２、Ｈ６２、Ｍ６５、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｙ３７、Ｌ３９、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｅ５２、Ｈ６２、Ｍ６５、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ又はそれより多いアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２（アミノ酸残基の位置は配列番号１５に対応する）から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含み、これらの残基は、ＩＬ－４ＲαのＮ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインのドメイン２に位置する。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ６６、Ｄ６７、及びＤ１２５から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ６６及びＤ６７から選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも１つを含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ６６及びＤ１２５から選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも１つを含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、アミノ酸残基Ｄ６６（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）を含む。更に他の実施形態において、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαの新規の構造的及び／又は機能的エピトープに結合し、エピトープは、ＩＬ－４ＲαのＮ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインのドメイン１及びドメイン２にわたる。特定の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαの新規の構造的及び／又は機能的エピトープに結合し、エピトープは、ＩＬ－４Ｒαに対するＩＬ－４結合部位と重複する。このような実施形態において、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４ＲαへのＩＬ－４の結合をブロッキングする。特定の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαの新規の構造的及び／又は機能的エピトープに結合し、エピトープは、ＩＬ－４Ｒαに対するＩＬ－１３結合部位と重複する。このような実施形態において、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４ＲαへのＩＬ－１３の結合をブロッキングする。特定の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαの新規の構造的及び／又は機能的エピトープに結合し、エピトープは、ＩＬ－４Ｒαに対するＩＬ－４結合部位及びＩＬ－１３結合部位の両方と重複する。このような実施形態において、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４ＲαへのＩＬ－４及びＩＬ－１３の結合をブロッキングする。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲートにおいて、ＩＬ－４Ｒαエピトープは、Ｘ線結晶学、アラニンスキャニング突然変異誘発、立体障害突然変異誘発、及び／又はＨＤＸ－ＭＳによって決定される。更に他の実施形態において、ＩＬ－４Ｒαエピトープは、部位特異的突然変異誘発によって決定される。

【0008】

更なる実施形態では、本開示は、式Ｉ：

【化3】

（式中、Ａｂはヒトインターロイキン－４受容体アルファ（「抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体」）に結合する抗体であって、Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１が、配列番号１、１９又は４２を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２又は２０を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号４又は２２を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号６又は２４を含み、

【化4】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲートを提供する。

【0009】

更なる実施形態では、本開示は、式Ｉａ：

【化5】

（式中、ＡｂはヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体であって、Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１が、配列番号１、１９又は４２を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２又は２０を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号４又は２２を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号６又は２４を含み、

【化6】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲートを提供する。

【0010】

更なる実施形態では、本開示は、式Ｉｂ：

【化7】

（式中、ＡｂはヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体であって、Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１が、配列番号１、１９又は４２を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２又は２０を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号４又は２２を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号６又は２４を含み、

【化8】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲートを提供する。

【0011】

更なる実施形態では、本開示は、式Ｉｃ：

【化9】

（式中、ＡｂはヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体であって、Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１が、配列番号１、１９又は４２を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２又は２０を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号４又は２２を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号６又は２４を含み、

【化10】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲートを提供する。

【0012】

更なる実施形態では、本開示は、式Ｉｄ：

【化11】

（式中、ＡｂはヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体であって、Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１が、配列番号１、１９又は４２を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２又は２０を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号４又は２２を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号６又は２４を含み、

【化12】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲートを提供する。

【0013】

更なる実施形態では、本開示は、式Ｉｅ：

【化13】

（式中、ＡｂはヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体であって、Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１が、配列番号１、１９又は４２を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２又は２０を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号４又は２２を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号６又は２４を含み、

【化14】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲートを提供する。

【0014】

更なる実施形態では、本開示は、式Ｉｆ：

【化15】

（式中、ＡｂはヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体であって、Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ＨＣＤＲ１が、配列番号１、１９又は４２を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２又は２０を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号４又は２２を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号６又は２４を含み、

【化16】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲートを提供する。

【0015】

一実施形態では、ｎは２～５である。

【0016】

一実施形態では、ｎは３～５である。

【0017】

一実施形態では、ｎは３～４である。

【0018】

一実施形態では、ｎは、約４である。

【0019】

一実施形態では、ｎは、約３である。

【0020】

一実施形態では、ｎは、約２である。

【0021】

一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号６を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号７を含むＶＨと、配列番号８を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ１であり、Ａｂ１は、配列番号９を含むＨＣと、配列番号１０を含むＬＣと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ２であり、Ａｂ２は、配列番号５０を含むＨＣと、配列番号１０を含むＬＣと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ３であり、Ａｂ３は、配列番号３７を含むＨＣと、配列番号１０を含むＬＣと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ４であり、Ａｂ４は、配列番号３１を含むＨＣと、配列番号１０を含むＬＣと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ５であり、Ａｂ５は、配列番号３５を含むＨＣと、配列番号１０を含むＬＣと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ６であり、Ａｂ６は、配列番号３３を含むＨＣと、配列番号１０を含むＬＣと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ７であり、Ａｂ７は、配列番号１３を含むＨＣと、配列番号１０を含むＬＣと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ８であり、Ａｂ８は、配列番号５２を含むＨＣと、配列番号１０を含むＬＣと、を含む。

【0022】

一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号４２を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号６を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号４４を含むＶＨと、配列番号４５を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ９であり、Ａｂ９は、配列番号４６を含むＨＣと、配列番号４７を含むＬＣと、を含む。

【0023】

一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２０を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号２４を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号２５を含むＶＨと、配列番号２６を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、ＡｂはＡｂ１０であり、Ａｂ１０は、配列番号２７を含むＨＣと、配列番号２８を含むＬＣと、を含む。

【0024】

一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαに結合し、ヒトＩＬ－４ＲαへのヒトＩＬ－４及びヒトＩＬ－１３の結合を阻害する。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαに結合し、ＩＬ－４Ｒ受容体媒介性応答を阻害する（例えば、Ｂ細胞及びＴ細胞におけるｐＳＴＡＴ６を阻害する、Ｂ細胞増殖を阻害する、ＣＤ２３発現を阻害する、サイトカイン分泌（例えば、ＭＤＣ、ＧＭ－ＣＳＦ）を阻害する）。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαに結合し、ＡＤＣＣ又はＣＤＣ活性を有意に誘導しない。一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、細胞表面上のヒトＩＬ－４Ｒαに結合し、式Ｉのコンジュゲートを細胞内に内在化する。

【0025】

本開示の一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、完全ヒト抗体である。本開示の一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。

【0026】

本開示の一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、ＩｇＧ４Ｐとも呼ばれるＳ２２８Ｐ置換（ＥＵ番号付け）を含む修飾ヒトＩｇＧ４ヒンジ領域を有し、これは、インビボでＩｇＧ４ Ｆａｂアーム交換を減少させる（Ｌａｂｒｉｊｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００９，２７（８）：７６７参照）。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４Ｐ骨格を有するＡｂは、エフェクターヌル骨格を有するヒトＩｇＧ４及び／又はヒトＩｇＧ４Ｐ ＩＬ－４Ｒα抗体と比較して、Ｂ細胞及び／又は骨髄細胞への改善された結合を有する。

【0027】

本開示の一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、アミノ酸残基３２２にアラニン（Ｋ３２２Ａ置換）（ＥＵ番号付け）を含む修飾ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有する（ＩｇＧ１Ａとも呼ばれる）。このような実施形態では、Ａｂは、補体活性が低減又は排除されている。一部の実施形態では、Ａｂは、Ｆｃγ及びＣ１ｑ受容体への結合が低減又は排除されたＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及び／又はＰ３２９Ａ（それぞれＩｇＧ１ＡＡ又はＩｇＧＩＡＡＡとも呼ばれる）を含む修飾ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を有する（全ての残基はＥＵ番号付けに従って番号が付されている）。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１Ａ骨格を有するＡｂは、ヒトＩｇＧ１ＡＡＡエフェクターヌル骨格を有する抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体と比較して、Ｂ細胞及び／又は骨髄細胞への改善された結合を示す。

【0028】

本開示の一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、野生型ヒトＩｇＧ４ ＨＣ定常領域を有する同じ抗体と比較して抗体の粘度を低下させる修飾ヒトＩｇＧ４ ＨＣ定常領域を有する。そのような実施形態では、Ａｂは、以下のアミノ酸残基：Ｅ１３７Ｇ、Ｄ２０３Ｎ、Ｑ２７４Ｋ、Ｑ３５５Ｒ、Ｅ４１９Ｑ（全ての位置はＥＵ番号付けに従って番号付けされている）のうちのいずれか１つ以上においてアミノ酸置換を含む修飾ヒトＩｇＧ４ ＨＣ定常領域を有する。一部の実施形態では、Ａｂは、以下のアミノ酸残基：Ｅ１３７Ｇ、Ｄ２０３Ｎ、Ｑ２７４Ｋ、Ｑ３５５Ｒ、Ｅ４１９Ｑ（全ての位置はＥＵ番号付けに従って番号付けされる）におけるアミノ酸置換を含む修飾ヒトＩｇＧ４ ＨＣ定常領域を有する。一部の実施形態では、Ａｂは、以下のアミノ酸残基：Ｑ２７４Ｋ、Ｑ３５５Ｒ、Ｅ４１９Ｑ（全ての位置はＥＵ番号付けに従って番号付けされる）のうちのいずれか１つ以上においてアミノ酸置換を含む修飾ヒトＩｇＧ４ ＨＣ定常領域を有する。一部の実施形態では、Ａｂは、以下のアミノ酸残基：Ｑ２７４Ｋ、Ｑ３５５Ｒ、Ｅ４１９Ｑ（全ての位置はＥＵ番号付けに従って番号付けされている）におけるアミノ酸置換を含む修飾ヒトＩｇＧ４ ＨＣ定常領域を有する。

【0029】

更なる実施形態において、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、１つ以上の操作されたシステイン残基を含む修飾ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４定常ドメインを有する（国際公開第２０１８／２３２０８８（Ａ１）号参照）。そのような実施形態において、Ａｂは、重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）中のアミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）にシステイン、又は重鎖定常ドメイン２（ＣＨ２）中のアミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）にシステインを含む。他の実施形態では、Ａｂは、ＣＨ１ドメイン内のアミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）にシステインを含み、ＣＨ２ドメイン内のアミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）にシステインを含む。

【0030】

一部の実施形態では、式Ｉのコンジュゲート中のＡｂは、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０から選択される。一部の実施形態では、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８は、同じＨＣＤＲ及びＬＣＤＲアミノ酸配列を有する。したがって、以下に示すように、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８は、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｌ３９、Ｆ４１、Ｌ４２、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｅ５２、Ｈ６２、Ｌ６４、Ｍ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｄ７２、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２（アミノ酸残基位置は配列番号１５に対応する）から選択されるアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。以下に示される一部の実施形態では、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｙ３７、Ｌ３９、Ｆ４１、Ｌ４３、Ｅ４５、Ｈ４７、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｈ６２、Ｌ６４、Ｍ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６９、Ｄ７２、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、以下に示すように、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ１２、Ｍ１４、Ｓ１５、Ｉ１６、Ｙ３７、Ｌ３９、Ｔ４８、Ｃ４９、Ｉ５０、Ｅ５２、Ｈ６２、Ｍ６５、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。一部の実施形態では、以下に示すように、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２（アミノ酸残基位置は配列番号１５に対応する）から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含み、これらの残基は、ＩＬ－４ＲαのＮ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインのドメイン２に位置する。以下に示される一部の実施形態では、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ６６、Ｄ６７及びＤ１２５から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む（アミノ酸残基の位置は、配列番号１５に対応する）。以下に示される更なる実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ６６及びＤ６７から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１つを含む（アミノ酸残基位置は、配列番号１５に対応する）。以下に示される更なる実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープは、Ｄ６６及びＤ１２５から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１つを含む（アミノ酸残基位置は、配列番号１５に対応する）。以下に示される更なる実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαのエピトープに結合し、エピトープはアミノ酸残基Ｄ６６を含む（アミノ酸残基位置は配列番号１５に対応する）。そのような実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαの新規の構造的及び／又は機能的エピトープに結合し、エピトープは、ＩＬ－４Ｒαのｎ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインのドメイン１及びドメイン２に及ぶ。特定の実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαの新規の構造的及び／又は機能的エピトープに結合し、エピトープは、ＩＬ－４Ｒαに対するＩＬ－４結合部位と重複する。このような実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４ＲαへのＩＬ－４の結合を阻害する。特定の実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαの新規の構造的及び／又は機能的エピトープに結合し、エピトープは、ＩＬ－４Ｒαに対するＩＬ－１３結合部位と重複する。このような実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４ＲαへのＩＬ－１３の結合を阻害する。一部の実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４Ｒαの新規の構造的及び／又は機能的エピトープに結合し、エピトープは、ＩＬ－４及びＩＬ－１３のＩＬ－４Ｒαへの結合部位と重複する。このような実施形態において、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９及びＡｂ１０は、ヒトＩＬ－４ＲαへのＩＬ－４及びＩＬ－１３の結合を阻害する。一部の実施形態では、ＩＬ－４Ｒαエピトープは、Ｘ線結晶学、アラニンスキャニング変異誘発、立体障害変異誘発、及び／又はＨＤＸ－ＭＳによって決定される。更に他の実施形態において、ＩＬ－４Ｒαエピトープは、部位特異的突然変異誘発によって決定される。

【0031】

一部の実施形態において、本開示は、新規なヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体のＨＣ若しくはＬＣ、すなわちＶＨ若しくはＶＬをコードする核酸、又はそのような核酸を含むベクターを提供する。

【0032】

一部の実施形態において、本開示は、配列番号１１、１２、１４、２９、３０、３２、３４、３６、３８、４８、４９、５１、又は５３の配列を含む核酸を提供する。

【0033】

一部の実施形態において、ヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体の重鎖又は軽鎖をコードする核酸が提供される。一部の実施形態において、配列番号９、１０、１３、２７、２８、３１、３３、３５、３７、４６、４７、５０、又は５２をコードする配列を含む核酸が提供される。一部の実施形態において、配列番号９、１３、２７、３１、３３、３５、３７、４６、５０、又は５２を含む抗体重鎖をコードする配列を含む核酸が提供される。例えば、核酸は、配列番号１１、１４、２９、３２、３４、３６、３８、４８、５１、又は５３の配列を含むことができる。一部の実施形態において、配列番号１０、２８、又は４７を含む抗体軽鎖をコードする配列を含む核酸が提供される。例えば、核酸は、配列番号１２、３０、又は４９の配列を含むことができる。

【0034】

本開示の一部の実施形態において、ヒトＩＬ－４Ｒαに特異的に結合する抗体のＶＨ又はＶＬをコードする核酸が提供される。一部の実施形態では、配列番号７、８、２５、２６、４４、又は４５をコードする配列を含む核酸が提供される。一部の実施形態において、配列番号７、２５、又は４４を含む抗体ＶＨをコードする配列を含む核酸が提供される。一部の実施形態において、配列番号８、２６、又は４５を含む抗体ＶＬをコードする配列を含む核酸が提供される。

【0035】

本開示のいくつかの実施形態において、抗体重鎖又は軽鎖をコードする核酸配列を含むベクターが提供される。例えば、そのようなベクターは、配列番号９、１３、２７、３１、３３、３５、３７、４６、５０、又は５２をコードする核酸配列を含むことができる。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号１０、２８、又は４７をコードする核酸配列を含む。

【0036】

本明細書では、抗体ＶＨ又はＶＬをコードする核酸配列を含むベクターも提供される。例えば、そのようなベクターは、配列番号７、２５、又は４４をコードする核酸配列を含むことができる。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号８、２６、又は４５をコードする核酸配列を含む。

【0037】

抗体重鎖をコードする第１の核酸配列と、抗体軽鎖をコードする第２の核酸配列と、を含むベクターも本明細書に提供される。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号９、１３、２７、３１、３３、３５、３７、４６、５０、又は５２をコードする第１の核酸配列、及び配列番号１０、２８、又は４７をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号９をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号１３をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号２７をコードする第１の核酸配列と、配列番号２８をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号３１をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号３３をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号３５をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号３７をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号５０をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号５２をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態において、ベクターは、配列番号４６をコードする第１の核酸配列と、配列番号４７をコードする第２の核酸配列と、を含む。

【0038】

また、本明細書では、抗体重鎖をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、抗体軽鎖をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む組成物も提供される。一部の実施形態では、組成物は、配列番号９、１３、２７、３１、３３、３５、３７、４６、５０、又は５２をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０、２８又は４７をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号９をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号１３をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号２７をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号２８をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号３１をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号３３をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号３５をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号３７をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号５０をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号５２をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態において、組成物は、配列番号４６をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号４７をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。

【0039】

また、本明細書では、抗体重鎖をコードする核酸配列と、抗体軽鎖をコードする核酸配列と、を含むベクターを含む組成物も提供される。一部の実施形態において、組成物は、配列番号９、１３、２７、３１、３３、３５、３７、４６、５０、又は５２をコードする核酸配列と、配列番号１０、２８、又は４７をコードする第２の核酸配列と、を含むベクターを含む。

【0040】

本明細書で使用される場合、式：

【化17】

中の「ＧＣ」は、適切なグルココルチコイド受容体アゴニストペイロードを指し、以下の式ＩＩａ、ＩＩｂ、又はＩＩｃを含む。

【化18】

【0041】

本明細書で使用される場合、式：

【化19】

中の「Ｌ」は、ＡｂをＧＣに接続する適切なリンカー基を指す。当業者に既知の適切なリンカーは、例えば、切断可能なリンカー及び切断不可能なリンカーを含む。より具体的には、適切なリンカー「Ｌ」は、以下の式ＩＩＩａ～ＩＩＩｆを含む。

【化20】

【0042】

一実施形態において、本開示は、式ＩＶのグルココルチコイド受容体アゴニストペイロード－リンカーを提供する

【化21】

【0043】

一実施形態において、本開示は、式ＩＶａのグルココルチコイド受容体アゴニストペイロード－リンカーを提供する

【化22】

【0044】

一実施形態において、本開示は、式ＩＶｂのグルココルチコイド受容体アゴニストペイロード－リンカーを提供する

【化23】

【0045】

一実施形態において、本開示は、式ＩＶｃのグルココルチコイド受容体アゴニストペイロード－リンカーを提供する

【化24】

【0046】

一実施形態において、本開示は、式ＩＶｄのグルココルチコイド受容体アゴニストペイロード－リンカーを提供する

【化25】

【0047】

一実施形態では、本開示は、式Ｖの化合物を提供する

【化26】

【0048】

更なる実施形態では、本開示は、式Ｖａの化合物を提供する

【化27】

【0049】

一実施形態では、本開示はまた、炎症性疾患の治療を必要とする対象における炎症性疾患を治療する方法であって、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。一実施形態では、本開示はまた、炎症性疾患を治療する方法であって、炎症性疾患は、炎症性疾患の治療を必要とする対象における２型炎症性疾患であり、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態において、２型炎症性疾患は、例えば、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患、又は慢性自発性蕁麻疹である。一実施形態では、本開示は、アトピー性皮膚炎の治療を必要とする対象におけるアトピー性皮膚炎を治療する方法であって、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を更に提供する。一実施形態では、本開示は、好酸球性食道炎の治療を必要とする対象における好酸球性食道炎を治療する方法であって、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を更に提供する。一実施形態では、本開示は、鼻ポリープ症の治療を必要とする対象における鼻ポリープ症を治療する方法であって、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を更に提供する。一実施形態では、本発明は、喘息の治療を必要とする対象における喘息を治療する方法であって、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を更に提供する。一実施形態では、本開示は、慢性副鼻腔炎の治療を必要とする対象における慢性副鼻腔炎を治療する方法であって、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を更に提供する。一実施形態では、本開示は、アレルギー性疾患の治療を必要とする対象におけるアレルギー性疾患を治療する方法であって、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を更に提供する。一実施形態では、本開示は、慢性閉塞性肺疾患の治療を必要とする対象における慢性閉塞性肺疾患を治療する方法であって、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を更に提供する。一実施形態では、本開示は、慢性自発性蕁麻疹の治療を必要とする対象における慢性自発性蕁麻疹を治療する方法であって、有効量の式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、方法を更に提供する。

【0050】

一実施形態では、本開示は、療法における使用のための、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を更に提供する。一実施形態では、本開示は、炎症性疾患の治療における使用のための式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を提供する。特定の実施形態において、炎症性疾患は、２型炎症性疾患である。特定の実施形態において、２型炎症性疾患は、例えば、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患、又は慢性自発性蕁麻疹である。一実施形態では、本開示は、アトピー性皮膚炎の治療における使用のための、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本開示は、好酸球性食道炎の治療における使用のための、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本開示は、鼻ポリープ症の治療における使用のための、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本開示は、喘息の治療における使用のための、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本開示は、慢性副鼻腔炎の治療における使用のための、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本開示は、アレルギー性疾患の治療における使用のための、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本開示は、慢性閉塞性肺疾患の治療における使用のための、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本開示は、慢性自発性蕁麻疹の治療における使用のための、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0051】

一実施形態では、本開示は、炎症性疾患の治療用薬剤の製造における、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の使用も提供する。特定の実施形態において、炎症性疾患は、２型炎症性疾患である。特定の実施形態において、２型炎症性疾患は、例えば、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患、又は慢性自発性蕁麻疹である。一実施形態では、本開示は、アトピー性皮膚炎の治療用薬剤の製造における、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、好酸球性食道炎の治療用薬剤の製造における、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、鼻ポリープ症の治療用薬剤の製造における、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、喘息の治療用薬剤の製造における、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、慢性副鼻腔炎の治療用薬剤の製造における、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、アレルギー性疾患の治療用薬剤の製造における、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、慢性閉塞性肺疾患の治療用薬剤の製造における、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、慢性自発性蕁麻疹の治療用薬剤の製造における、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。

【0052】

本開示の核酸は、例えば、核酸が発現制御配列に作動可能に連結された後に、宿主細胞において発現され得る。作動可能に連結された核酸の発現が可能な発現制御配列は、当該技術分野において周知である。発現ベクターは、宿主細胞からのポリペプチドの分泌を促進する１つ以上のシグナルペプチドをコードする配列を含み得る。目的の核酸（例えば、抗体の重鎖又は軽鎖をコードする核酸）を含む発現ベクターは、周知の方法、例えば、安定的又は一過性のトランスフェクション、形質転換、形質導入又は感染によって宿主細胞に移植され得る。追加的に、発現ベクターは、所望の核酸配列で形質転換された宿主細胞の検出を助けるために、例えばテトラサイクリン、ネオマイシン、及びジヒドロ葉酸レダクターゼ等の１つ以上の選択マーカーを含み得る。

【0053】

別の態様において、本明細書に記載の核酸、ベクター、又は核酸組成物を含む細胞、例えば宿主細胞が本明細書に提供される。宿主細胞は、本明細書に記載の抗体の全部又は一部分を発現する１つ以上の発現ベクターで安定的に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染された細胞であり得る。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、本開示の抗体のＨＣ及びＬＣポリペプチドを発現する発現ベクターで、安定的に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染され得る。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体のＨＣポリペプチドを発現する第１のベクター及びＬＣポリペプチドを発現する第２のベクターで安定的に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染され得る。そのような宿主細胞、例えば哺乳動物宿主細胞は、本明細書に記載のヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体を発現することができる。抗体を発現することができることが知られている哺乳動物宿主細胞には、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、及びＮＳ０細胞が含まれる。

【0054】

一部の実施形態において、細胞、例えば宿主細胞は、配列番号９、１３、２７、３１、３３、３５、３７、４６、５０、又は５２をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０、２８、又は４７をコードする第２の核酸配列と、を含むベクターを含む。

【0055】

一部の実施形態において、細胞、例えば宿主細胞は、配列番号９、１３、２７、３１、３３、３５、３７、４６、５０、又は５２をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０、２８、又は４７をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。

【0056】

本開示は更に、上記の宿主細胞、例えば哺乳動物宿主細胞を、抗体が発現するような条件下で培養し、発現した抗体を培養培地から回収することによって、本明細書に記載のヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体を産生するプロセスを提供する。抗体が分泌された培地は、従来の技術によって精製され得る。タンパク質精製の様々な方法が採用され得、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８２：８３－８９（１９９０）、及びＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３^ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。

【0057】

本開示は、コンジュゲートを生成する方法であって、本開示の化合物を抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体とコンジュゲートすることを含む方法を提供する。

【0058】

本開示は、コンジュゲートを生成する方法であって、式ＩＶの化合物を抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体とコンジュゲートすることを含む方法を提供する。本開示は、コンジュゲートを生成する方法であって、式ＩＶａの化合物を抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体とコンジュゲートすることを含む方法を提供する。本開示は、コンジュゲートを生成する方法であって、式ＩＶｂの化合物を抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体とコンジュゲートすることを含む方法を提供する。本開示は、コンジュゲートを生成する方法であって、式ＩＶｃの化合物を抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体とコンジュゲートさせることを含む方法を提供する。本開示は、コンジュゲートを生成する方法であって、式ＩＶｄの化合物を抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体とコンジュゲートさせることを含む方法を提供する。

【0059】

一部の実施形態において、生成されるコンジュゲートは、式Ｉのコンジュゲートである。

【0060】

本開示は、コンジュゲートを生成する方法であって、
（ａ）抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を還元剤で還元して、還元された抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体を生成する工程であって、抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体が、１つ以上の操作されたシステイン残基を含む、工程と、
（ｂ）還元された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を酸化剤で酸化して、酸化された抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体を生成する工程と、
（ｃ）酸化された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を本開示の化合物と接触させて、コンジュゲートを生成する工程と、を含む。

【0061】

本開示は、コンジュゲートを生成する方法であって、
（ａ）抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を還元剤で還元する工程であって、抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体が、１つ以上の操作されたシステイン残基を含む、工程と、
（ｂ）抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を酸化剤で酸化して、酸化された抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体を生成する工程と、
（ｃ）酸化された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を、式

【化28】

の化合物と接触させて、コンジュゲートを生成する工程と、を含む。

【0062】

一部の実施形態では、還元剤は、ジチオスレイトールである。いくつかの実施形態では、酸化剤は、デヒドロアスコルビン酸である。いくつかの実施形態において、還元剤はジチオスレイトールであり、酸化剤はデヒドロアスコルビン酸である。

【0063】

本開示は更に、本明細書に記載のプロセスのいずれかによって産生される抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0064】

一実施形態では、本開示は、式Ｉのコンジュゲート若しくはその薬学的に許容される塩、又は本明細書に記載の抗体、核酸、若しくはベクターを、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と共に含む、医薬組成物を更に提供する。一実施形態では、本開示は、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と共に含む、医薬組成物を更に提供する。一実施形態では、本開示は更に、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と共に、式Ｉのコンジュゲートを含む、医薬組成物を提供する。一実施形態では、本開示は、式Ｉのコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と混合することを含む、医薬組成物を調製するためのプロセスを更に提供する。一実施形態では、本開示はまた、式Ｉのコンジュゲートの合成のための新規中間体及びプロセスを包含する。

【0065】

発明の詳細な説明
本明細書で使用される「ＩＬ－４Ｒα」という用語は、別段の記載がない限り、細胞内のＩＬ－４Ｒα前駆体タンパク質のプロセシングから生じる任意の天然の成熟ＩＬ－４Ｒαを指す。この用語は、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル又はアカゲザル）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来のＩＬ－４Ｒαを含む。この用語には、ＩＬ－４Ｒαの天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも含まれる。ヒトＩＬ－４Ｒαの一例のアミノ酸配列は当技術分野で知られており、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列Ｐ２４３９４（配列番号３９）である。カニクイザルＩＬ－４Ｒαの一例のアミノ酸配列も当技術分野で知られており、例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＸＰ＿００５５９１５７２．２（配列番号４０）である。「ヒトＩＬ－４Ｒα」という用語は、全ての既知のヒトＩＬ－４Ｒαアイソフォーム及び多形形態を集合的に指すために本明細書で使用される。本明細書で使用される配列番号付けは、シグナルペプチドを含まない成熟タンパク質に基づく。

【0066】

本明細書で使用される「ＩＬ－４Ｒ」という用語は、別段の記載がない限り、ＩＬ－４Ｒαサブユニットと共通γ鎖との複合体（Ｉ型受容体）及び／又はＩＬ－４ＲαサブユニットとＩＬ－１３Ｒα１との複合体（ＩＩ型受容体）を指す。

【0067】

本明細書で使用される「ＩＬ－４」という用語は、別段の記載がない限り、細胞内のＩＬ－４前駆体タンパク質のプロセシングから生じる任意の天然の成熟ＩＬ－４を指す。この用語は、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル又はアカゲザル）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来のＩＬ－４を含む。この用語には、ＩＬ－４の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも含まれる。ヒトＩＬ－４の一例のアミノ酸配列は当技術分野で知られており、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列番号Ｐ０５１１２（配列番号１７）である。「ヒトＩＬ－４」という用語は、全ての既知のヒトＩＬ－４アイソフォーム及び多形形態を集合的に指すために本明細書で使用される。

【0068】

本明細書で使用される「ＩＬ－１３」という用語は、別段の記載がない限り、細胞内のＩＬ－１３前駆体タンパク質のプロセシングから生じる任意の天然の成熟ＩＬ－１３を指す。この用語は、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル又はアカゲザル）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来のＩＬ－１３を含む。この用語には、ＩＬ－１３の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも含まれる。ヒトＩＬ－１３の一例のアミノ酸配列は当技術分野で知られており、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列番号Ｐ３５２２５（配列番号１８）である。「ヒトＩＬ－１３」という用語は、全ての既知のヒトＩＬ－１３アイソフォーム及び多形形態を集合的に指すために本明細書で使用される。

【0069】

本明細書で使用される「ＣＤ２３」という用語は、別段の記載がない限り、細胞内のＣＤ２３前駆体タンパク質のプロセシングから生じる任意の天然の成熟ＣＤ２３を指す。この用語は、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル又はアカゲザル）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来のＣＤ２３を含む。この用語には、ＣＤ２３の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも含まれる。ヒトＣＤ２３の一例のアミノ酸配列は当技術分野で知られており、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列番号Ｐ０６７３４（配列番号４１）である。「ヒトＣＤ２３」という用語は、全ての既知のヒトＣＤ２３アイソフォーム及び多形形態を集合的に指すために本明細書で使用される。

【0070】

本明細書で使用される「ＩＬ－４Ｒ関連障害」という用語は、例えば、１型ＩＬ－４Ｒ及びＩＩ型ＩＬ－４Ｒシグナル伝達に関連する障害などの、ＩＬ－４Ｒ媒介シグナル伝達に関連する障害を指す。このようなＩＬ－４Ｒ関連障害は、例えば、免疫炎症性障害を含み得る。そのような免疫炎症性障害は、本明細書に開示されるような２型炎症性障害を含み得る。ＩＬ－４Ｒ関連障害は、癌を更に含み得る。

【0071】

用語「調節する（modulate）」又は「調節する（modulates）」などは、本明細書で使用される場合、測定可能な値を改変又は変化させることを指し、そのような測定可能な値を上方に改変又は変化させること（すなわちアップモジュレート又はアップモジュレートする）、又は下方に改変又は変化させること（すなわち、ダウンモジュレート又はダウンモジュレートする）を含む。

【0072】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体の実施形態には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性若しくは多重特異性抗体、又はコンジュゲート抗体が含まれる。抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ）、及び任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）であってもよい。本開示の実施形態はまた、抗体断片又は抗原結合断片を含み、「抗体断片又は抗原結合断片」という用語は、例えばＦｃ領域又はＩｇＧ重鎖定常領域に融合してもよい、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄ断片及び線状抗体などの、抗原と相互作用する能力を保持する抗体の少なくとも一部分を含む。

【0073】

例示的な抗体は、４つのポリペプチド鎖：鎖間ジスルフィド結合を介して架橋される２つの重鎖（ＨＣ）及び２つの軽鎖（ＬＣ）から構成された免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）型抗体である。４つのポリペプチド鎖の各々のアミノ末端部分は、抗原認識に主に関与する約１００～１２５個以上のアミノ酸の可変領域を含む。４つのポリペプチド鎖の各々のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を含有する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、抗体重鎖のＦｃ領域及びＣＨ１ドメインを含む、抗体の領域を指す。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域から構成される。ＩｇＧアイソタイプは、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）に更に分割され得る。定常領域中のアミノ酸残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに基づく。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５^ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ：Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９９１）。ＥＵインデックス番号付け又はＥＵ番号付けという用語は、本明細書では交換可能に使用される。

【0074】

ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変領域に更に細分することができる。ＣＤＲはタンパク質の表面上に露出しており、抗原結合特異性のための抗体の重要な領域である。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成されており、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置される。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲを「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称し、軽鎖の３つのＣＤＲを「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含有する。アミノ酸残基のＣＤＲへの割り当ては、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８（１９９７））、Ｎｏｒｔｈ（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，「Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８－２５６（２０１１））、又はＩＭＧＴ（ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで利用可能、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９９；２７：２０９－２１２参照）に記載されるものを含む、周知のスキームによって実施され得る。ＩＭＧＴ及びＮｏｒｔｈ ＣＤＲ定義の組み合わせを、本明細書に記載される例示的な抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体に使用した。

【0075】

本明細書で使用される「Ｆｃ領域」という用語は、抗体重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む抗体の領域を指す。任意選択で、Ｆｃ領域は、抗体重鎖のヒンジ領域の一部分又はヒンジ領域全体を含み得る。エフェクター機能などの生物活性は、抗体のアイソタイプによって異なるＦｃ領域に起因する。抗体エフェクター機能の例としては、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞介在性食作用（ＡＤＣＰ）、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、食作用、細胞表面受容体の下方制御（例えばＢ細胞受容体）、及びＢ細胞の活性化が挙げられる。

【0076】

本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体によって結合される抗原のアミノ酸残基を指す。エピトープは、直鎖状エピトープ、立体構造エピトープ、又はハイブリッドエピトープであり得る。「エピトープ」という用語は、構造的エピトープに関して使用され得る。構造的エピトープは、一部の実施形態によれば、抗体によってカバーされる抗原の領域（例えば、抗原に結合したときの抗体のフットプリント）を説明するために使用され得る。一部の実施形態では、構造的エピトープは、抗体のアミノ酸残基の特定の近接内（例えば、特定のオングストローム数内）にある抗原のアミノ酸残基を説明し得る。「エピトープ」という用語はまた、機能的エピトープに関して使用され得る。機能的エピトープは、一部の実施形態によれば、抗原と抗体との間の結合エネルギーに寄与する様式で抗体のアミノ酸残基と相互作用する抗原のアミノ酸残基を説明するために使用され得る。エピトープは、「エピトープマッピング技術」とも呼ばれる異なる実験技術に従って決定することができる。エピトープの決定は、使用される異なるエピトープマッピング技術に基づいて変動し得、例えば、特定の実験条件によって誘導される抗原の立体構造変化又は切断に起因して、使用される異なる実験条件によっても変動し得ることが理解される。エピトープマッピング技術は、当該技術分野において公知であり（例えば、Ｒｏｃｋｂｅｒｇ ａｎｄ Ｎｉｌｖｅｂｒａｎｔ，Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，３^ｒｄ ｅｄ．２０１８；Ｈｏｌｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １９９８，５３（１）：１６６－１７５）、例えば、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、部位特異的突然変異誘発、種交換突然変異誘発、アラニン走査突然変異誘発、立体障害突然変異誘発、水素－重水素交換（ＨＤＸ）、及び交差ブロッキングアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。

【0077】

本明細書で使用される「結合する」という用語は、別段の定めがない限り、化学結合又は別のタンパク質若しくは分子との引力相互作用を形成するタンパク質又は分子の能力を意味することを意図しており、当該分野において既知である一般的な方法によって決定されるように、２つのタンパク質又は分子の近接をもたらす。

【0078】

本明細書で使用される「核酸」という用語は、天然ヌクレオチド、改変ヌクレオチド、及び／又はヌクレオチドの類似体を組み込んだＤＮＡ、ｃＤＮＡ、並びにＲＮＡ分子等の一本鎖及び／又は二本鎖ヌクレオチド含有分子を含むヌクレオチドのポリマーを指す。本開示のポリヌクレオチドはまた、例えば、ＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼ又は合成反応によってその中に組み込まれた基質を含んでもよい。

【0079】

本開示の実施形態は、ポリペプチド（例えば、抗ヒトインターロイキン－４受容体アルファ抗体）が、１つ以上の薬物部分、例えば、２つの薬物部分、３つの薬物部分、４つの薬物部分、５つの薬物部分、又はそれ以上の薬物部分にコンジュゲートされているコンジュゲートを含む。薬物部分は、本明細書中に記載されるように、ポリペプチド中の１つ以上の部位でポリペプチドにコンジュゲートされ得る。特定の実施形態では、コンジュゲートは、２～５、又は３～５、又は３～４の範囲の平均薬物対抗体比（ＤＡＲ）（モル比）を有する。特定の実施形態では、コンジュゲートは、３～４の平均ＤＡＲを有する。特定の実施形態では、コンジュゲートは、約３の平均ＤＡＲを有する。特定の実施形態では、コンジュゲートは、約４の平均ＤＡＲを有する。

【0080】

本明細書で使用される場合、式Ｉのコンジュゲートは、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ、及びＩｆのコンジュゲートを包含することが理解され、本明細書における式Ｉのコンジュゲートへの言及は全て、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ、及びＩｆのコンジュゲートを含むものとして読まれるべきである。式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ、及びＩｆのコンジュゲートを含む式Ｉのコンジュゲートは、抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体グルココルチコイドコンジュゲート（「抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂＧＣコンジュゲート」）と呼ぶこともできることが、当業者によって更に理解される。

【0081】

本開示の抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体ＧＣコンジュゲートは、医薬組成物として製剤化され得、医薬組成物は、コンジュゲートをバイオアベイラブルにするいずれかの経路によって投与され、そのような経路は、例えば、静注、又は皮下投与を含む。そのような医薬組成物は、当技術分野で既知の技法及び方法を使用して調製され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａ．Ａｄｅｊａｒｅ，Ｅｄｉｔｏｒ，２３^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０２０年出版，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ参照）。

【0082】

本明細書で使用される場合、用語「治療すること」、「治療」、又は「治療するため」は、既存の症状若しくは障害の進行若しくは重症度を抑制すること、緩徐化すること、停止すること、制御すること、遅延させること、若しくは逆転させること、又は既存の症状若しくは障害を改善することを含むが、必ずしも既存の症状若しくは障害の完全な排除を示すわけではない。治療は、患者、特にヒトの症状又は障害の治療のためのタンパク質又は核酸又はベクター又は組成物の投与を含む。

【0083】

本明細書で使用される「阻害する」又は「阻害すること」という用語は、例えば、生物学的応答又は活性の低減、低下、減速、減少、停止、破壊、排除、拮抗、又はブロッキングを指すが、必ずしも生物学的応答の完全な排除を示すわけではない。

【0084】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、限定されるものではないが、ヒト、チンパンジー、類人猿、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、モルモットなどを含む哺乳動物を指す。好ましくは、対象はヒトである。

【0085】

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、対象に単回又は複数回投与すると、診断中又は治療中の対象に所望の効果を提供する、本開示のコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の量又は投与量を指す。本明細書で使用される「有効量」という用語は更に、対象の所望の生物学的又は医学的応答を誘発する、例えば、タンパク質の活性の低下又は阻害を誘発する、あるいは症状を改善する、状態を緩和する、疾患の進行を減速若しくは遅延する、又は疾患などを予防する、本開示のコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の量を指す。非限定的な実施形態では、「有効量」という用語は、対象に投与されたときに、所望の治療結果を達成するために、状態、又は障害又は疾患を少なくとも部分的に緩和、阻害、予防及び／又は改善するために有効である、コンジュゲート又はその薬学的に許容される塩の必要な量（投与量及び期間及び投与の手段）を指す。有効量は、有益な効果が本開示のコンジュゲート又は本開示のその薬学的に許容される塩の毒作用又は有害作用を上回る量でもある。

【0086】

有効量は、既知の技法の使用により、かつ同様の状況下で得られた結果を観察することにより、当業者によって決定され得る。患者のための有効量を決定する際に、担当医によって、患者の種；そのサイズ、年齢、及び全般的健康状態；関連する特定の疾患又は障害；疾患又は障害の程度又は関与又は重症度；個々の患者の応答、投与される特定のコンジュゲート、投与様式；投与される調製物の生物学的利用能特性；選択された投与レジメン；併用薬の使用；並びに他の関連する状況が挙げられるが、これらに限定されない。

【0087】

本発明の範囲内に含まれるのは、式Ｉのコンジュゲートの薬学的に許容される塩である。式Ｉのコンジュゲートなどの本発明のコンジュゲートの薬学的に許容される塩は、当技術分野で公知の標準的な条件下で形成することができる。例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１－１９，（１９７７）を参照のこと。

【0088】

【表1】

【0089】

本開示のコンジュゲート又はその塩は、当業者に既知の様々な手順によって容易に調製されてもよく、そのうちのいくつかが、以下の調製及び実施例において説明されている。当業者は、本開示のコンジュゲート又はその塩を調製するために、記載される経路の各々に対する特定の合成工程を異なる様式で組み合わせることができるか、又は異なるスキームからの工程と併せることができることを認識している。各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィ、濾過、粉砕、及び結晶化を含む、当該技術分野で周知の従来の方法によって回収することできる。全ての置換基は、別途指示のない限り、すでに定義されたとおりである。試薬及び出発物質は、当業者であれば容易に入手可能なものである。以下の調製、実施例、及びアッセイは、本発明を更に説明するものであるが、決して本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。

【図面の簡単な説明】

【0090】

【図1】ヒトＩＬ－４Ｒαと複合体化されたＣｒｙｓｔａｌ Ｋａｐｐａ設計を有するデュピルマブＦａｂ部分の結晶構造を有するＩＬ－４ＲαＥＣＤに結合したＡｂ９のＦａｂ部分のＸ線結晶構造オーバーレイを示す（ｐｄｂアクセッションコード６ＷＧＬ）。

【図2】ヒトＩＬ－４ＲαＥＣＤと複合体化したＣｒｙｓｔａｌ Ｋａｐｐａ設計を有するＡｂ１０ Ｆａｂ部分の結晶構造における機能的エピトープアミノ酸残基位置（ヒトＩＬ－４Ｒα残基Ａｓｐ６６及びＡｓｐ１２５）を示す。

【図3】ヒトＩＬ－４Ｒαと複合体化されたＣｒｙｓｔａｌ Ｋａｐｐａ設計を有するデュピルマブＦａｂ部分の結晶構造を有するＩＬ－４ＲαＥＣＤに結合したＡｂ１のＦａｂ部分のＸ線結晶構造オーバーレイを示す（ｐｄｂアクセッションコード６ＷＧＬ）。

【図4】ヒトＩＬ－４ＲαＥＣＤと複合体化されたＣｒｙｓｔａｌ Ｋａｐｐａ設計を有するＡｂ１ Ｆａｂ部分の結晶構造におけるヒトＩＬ－４Ｒαアミノ酸残基位置Ａｓｐ６６、Ａｓｐ６７、及びＡｓｐ１２５を示す（全て構造的エピトープにおいて同定された。更に、Ａｓｐ６６は機能的エピトープにおいて同定された）。

【図5】実施例１ｂのＡｂ１ＧＣコンジュゲートによる抗ＣＤ４０誘導性Ｂ細胞増殖の阻害を示す。

【図6A】実施例１ｂのＡｂ１ＧＣコンジュゲートによる、骨髄細胞におけるＩＬ－４誘導性ＣＤ２３発現（６Ａ）及びＧＣ誘導性ＣＤ１６３発現（６Ｂ）の阻害を示す。

【図6B】実施例１ｂのＡｂ１ＧＣコンジュゲートによる、骨髄細胞におけるＩＬ－４誘導性ＣＤ２３発現（６Ａ）及びＧＣ誘導性ＣＤ１６３発現（６Ｂ）の阻害を示す。

【図7A】実施例１ｂのＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、ＩＬ－４Ｒα媒介性ＭＤＣ（７Ａ）、ＧＭ－ＣＳＦ（７Ｂ）、及びグルココルチコイド受容体媒介性ＩＬ－５（７Ｃ）サイトカイン分泌を有意に阻害したことを示す。

【図7B】実施例１ｂのＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、ＩＬ－４Ｒα媒介性ＭＤＣ（７Ａ）、ＧＭ－ＣＳＦ（７Ｂ）、及びグルココルチコイド受容体媒介性ＩＬ－５（７Ｃ）サイトカイン分泌を有意に阻害したことを示す。

【図7C】実施例１ｂのＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、ＩＬ－４Ｒα媒介性ＭＤＣ（７Ａ）、ＧＭ－ＣＳＦ（７Ｂ）、及びグルココルチコイド受容体媒介性ＩＬ－５（７Ｃ）サイトカイン分泌を有意に阻害したことを示す。

【図8】実施例１ｂのＡｂ１ＧＣコンジュゲートがＡＤＣＣ活性を有意に誘導しないことを示す。

【図9】実施例１ｂのＡｂ１ＧＣコンジュゲートがＤａｕｄｉ細胞においてＣＤＣ活性を誘導しないことを示す。

【図10A】以下条件での実施例１ｂの例示的なＡｂ１ＧＣコンジュゲートについての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す：ＰＢＳ、ｐＨ７．２（１０Ａ）；酢酸塩、ｐＨ５（１０Ｂ）；及びヒスチジン、ｐＨ６（１０Ｃ）。

【図10B】以下条件での実施例１ｂの例示的なＡｂ１ＧＣコンジュゲートについての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す：ＰＢＳ、ｐＨ７．２（１０Ａ）；酢酸塩、ｐＨ５（１０Ｂ）；及びヒスチジン、ｐＨ６（１０Ｃ）。

【図10C】以下条件での実施例１ｂの例示的なＡｂ１ＧＣコンジュゲートについての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す：ＰＢＳ、ｐＨ７．２（１０Ａ）；酢酸塩、ｐＨ５（１０Ｂ）；及びヒスチジン、ｐＨ６（１０Ｃ）。

【0091】

調製１
６－ブロモ－２－フルオロ－３－メトキシベンズアルデヒド

【化29】

２つの反応を、並行して実施した。ＴＨＦ（１５００ｍＬ）中の４－ブロモ－２－フルオロ－１－メトキシベンゼン（２５０ｇ、１．２ｍｏｌ）の溶液に、ＬＤＡ（２Ｍ、７３０ｍＬ）を－７８℃で３０分かけてゆっくり加えた。更に３０分後、ＤＭＦ（１４０ｍＬ、１．８ｍｏｌ）を－７８℃で３０分かけてゆっくり加えた。１時間後、２つの反応物を組み合わせ、混合物をクエン酸水溶液（２０００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１５００ｍＬ×２）で抽出した。組み合わされた有機層を、飽和ＮａＣｌ水溶液（１０００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、石油エーテル（１０００ｍＬ）で、室温で１２時間にわたって摩砕して、表題化合物（３８２ｇ、６７％の収率）を得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２３３．９（Ｍ＋Ｈ）。

【0092】

調製２
２－フルオロ－３－メトキシ－６－メチルベンズアルデヒド

【化30】

３つの反応を、並行して実施した。６－ブロモ－２－フルオロ－３－メトキシベンズアルデヒド（１２０ｇ、５．３ｍｏｌ）、メチルボロン酸（４７ｇ、７．９ｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（１２ｇ、０．０２ｍｏｌ）、及びＣｓ_２ＣＯ_３（３４０ｇ、１．１ｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（６００ｍＬ）及び水（１２０ｍＬ）の混合物に添加した。混合物を、１２０℃で撹拌した。１２時間後、３つの反応物を組み合わせ、混合物を、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０００ｍＬ）で希釈し、ＭＴＢＥ（１５００ｍＬ×２）で抽出した。組み合わされた有機層を、ｓａｔｄ ａｑ ＮａＣｌ（１０００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィによって精製し、４０：１のＰｅｔエーテル：ＥｔＯＡｃで溶出して、表題化合物を得た（１８０ｇ、５９％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ １６９．３（Ｍ＋Ｈ）。

【0093】

調製３
２－フルオロ－３－ヒドロキシ－６－メチルベンズアルデヒド

【化31】

２－フルオロ－３－メトキシ－６－メチルベンズアルデヒド（１７５ｇ、１．０ｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０５０ｍＬ）中に添加した。ＢＢｒ_３（２００ｍＬ、２．１ｍｏｌ）を、溶液中に、０℃でゆっくり添加した。反応物を、室温で撹拌した。１時間後、混合物を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１０００ｍＬ）で、ｐＨ＝７～８になるまで希釈し、ＭＴＢＥ（１５００ｍＬ×２）で抽出した。組み合わされた有機層を、飽和ＮａＣｌ水溶液（１０００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濃縮して、表題化合物（１１０ｇ、６８％）を得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ １５４．９（Ｍ＋Ｈ）。

【0094】

調製４
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［３－［（２－フルオロ－３－ホルミル－４－メチル－フェノキシ）メチル］フェニル］カルバメート

【化32】

２－フルオロ－３－ヒドロキシ－６－メチルベンズアルデヒド（１３０ｇ、０．８４ｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（３－（ブロモメチル）フェニル）カルバメート（２００ｇ、０．７０ｍｏｌ）、及び炭酸カリウム（３５０ｇ、２．５ｍｏｌ）を、アセトニトリル（７８０ｍＬ）に、室温で添加し、次いで、５０℃まで加熱した。５時間後、反応物を、水（６００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ×２）で抽出した。組み合わされた有機層を、飽和ＮａＣｌ水溶液（８００ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィによって精製し、５０：１のＰｅｔエーテル：ＥｔＯＡｃで溶出して、粗生成物を得た。粗生成物を、ＭＴＢＥ（５００ｍＬ）で、室温で３０分間摩砕して、表題化合物（１０３ｇ、３２％）を得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３８２．１（Ｍ＋Ｎａ）。

【0095】

調製５
（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）－１０－（３－（（３－アミノベンジル）オキシ）－２－フルオロ－６－メチルフェニル）－７－ヒドロキシ－８ｂ－（２－ヒドロキシアセチル）－６ａ，８ａ－ジメチル－１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－４Ｈ－ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－オン

【化33】

過塩素酸（水中の７０％、４．８ｍＬ）を、アセトニトリル（１１０ｍＬ）中の、（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｓ）－１１，１６，１７－トリヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロ－６Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン（４．４ｇ、１２ｍｍｏｌ、「１６アルファ－ヒドロキシプレドニゾロン」とも称される）及びｔｅｒｔ－ブチルＮ－［３－［（２－フルオロ－３－ホルミル－４－メチル－フェノキシ）メチル］フェニル］カルバメート（４．０ｇ、１１ｍｍｏｌ、調製物４）の懸濁液に、－１０℃で添加し、室温まで加温した。１時間後、ＤＭＦ（１０ｍＬ）を、懸濁液に、室温で添加した。１８時間後、反応物を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液でクエンチし、９：１のＤＣＭ：イソプロパノールで抽出した。有機層を組み合わせ、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、１：１のＮＨ_４ＨＣＯ_３水溶液（１０ｍＭ＋５％ＭｅＯＨ）：ＡＣＮで溶離する逆相クロマトグラフィによって精製して、表題化合物、ピーク１（１．７２ｇ、２５％）を得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ６１８．６（Ｍ＋Ｈ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ｄ_６－ＤＭＳＯ）δ０．９３～０．８７（ｍ，６Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ），１．７１～１．６０（ｍ，１Ｈ），１．８９～１．７６（ｍ，４Ｈ），２．１８～２．１２（ｍ，２Ｈ），２．２９（ｓ，４Ｈ），４．２３～４．１７（ｍ，１Ｈ），４．３２～４．３０（ｍ，１Ｈ），４．５０～４．４３（ｍ，１Ｈ），４．８１（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９８～４．９５（ｍ，３Ｈ），５．１６～５．１０（ｍ，３Ｈ），５．６１（ｓ，１Ｈ），５．９５（ｓ，１Ｈ），６．１８～６．１５（ｍ，１Ｈ），６．５３～６．４８（ｍ，２Ｈ），６．５８（ｓ，１Ｈ），６．９０～６．８６（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３３～７．３０（ｍ，１Ｈ）。

【0096】

調製６
（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｓ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）－１０－（３－（（３－アミノベンジル）オキシ）－２－フルオロ－６－メチルフェニル）－７－ヒドロキシ－８ｂ－（２－ヒドロキシアセチル）－６ａ，８ａ－ジメチル－１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－４Ｈ－ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－オン（本明細書ではＧＣ１とも呼ぶ）

【化34】

調製物５から、残渣を、１：１のＮＨ_４ＨＣＯ_３水溶液（１０ｍＭ＋５％ＭｅＯＨ）：ＡＣＮで溶出する逆相クロマトグラフィによって精製して、表題化合物、ピーク２（１．２４ｇ、１８％）を得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ６１８．６（Ｍ＋Ｈ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ｄ_６－ＤＭＳＯ）ｄ^１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：０．８８（ｓ，３Ｈ），１．２４～１．１２（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ），１．６９～１．５６（ｍ，１Ｈ），１．９１～１．７６（ｍ，４Ｈ），２．０８～２．０１（ｍ，２Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．３９～２．２９（ｍ，１Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１２～４．００（ｍ，１Ｈ），４．３７～４．３０（ｍ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），５．００～４．９３（ｍ，２Ｈ），５．１０～５．０６（ｍ，３Ｈ），５．３１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．９５（ｓ，１Ｈ），６．１８（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），６．３４（ｓ，１Ｈ），６．５３～６．４８（ｍ，２Ｈ），６．５８（ｓ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ）。

【0097】

調製７
（３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパノイル）－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニン

【化35】

ＤＭＦ（２５ｍＬ）中のＮ－スクシンイミジル３－マレイミドプロピオネート（５．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）及びＬ－アラニル－Ｌ－アラニン（３．４ｇ、２１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（３．１ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得て、残渣をＥｔＯＡｃ中２％の酢酸で溶出するシリカゲルクロマトグラフィにより精製して、表題化合物（４．０ｇ、６９％）を得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３１２．３（Ｍ＋Ｈ）。

【0098】

調製８
３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（３－（（２－フルオロ－３－（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｓ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）－７－ヒドロキシ－８ｂ－（２－ヒドロキシアセチル）－６ａ，８ａ－ジメチル－４－オキソ－２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－１Ｈ－ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２－ｄ］［１，３］ジオキソール－１０－イル）－４－メチルフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）プロパンアミド（本明細書において「ＧＣ－Ｌ」とも称される）

【化36】

（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｓ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）－１０－（３－（（３－アミノベンジル）オキシ）－２－フルオロ－６－メチルフェニル）－７－ヒドロキシ－８ｂ－（２－ヒドロキシアセチル）－６ａ，８ａ－ジメチル－１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－４Ｈ－ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－オン（ＧＣ１、２４ｇ、３９ｍｍｏｌ、調製６参照）及び３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパノイル）－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニン（１５ｇ、４７ｍｍｏｌ、調製７参照）のＤＭＦ（２５０ｍＬ）溶液を０～５℃に冷却し、２，６－ルチジン（１１ｍＬ、９７ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（１７ｇ、４３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで冷却浴を除去し、混合物を２時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈した。有機溶液を水で３回、飽和ＮａＣｌ水溶液で１回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ（ＭｅＯＨを添加して溶解性を補助した）、濾過し、蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を、ＤＣＭ中１～１０％のＭｅＯＨの勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィによって精製して、表題化合物（２４ｇ、６８％）を得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ９１１．４（Ｍ＋Ｈ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：ｄ ９．８８（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．６０－７．５８（ｍ，１Ｈ），７．３４－７．２９（ｍ，２Ｈ），７．１４－７．０９（ｍ，２Ｈ），７．００（ｓ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．３４（ｓ，１Ｈ），６．１８（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１０．０Ｈｚ，１Ｈ），５．９５（ｓ，１Ｈ），５．７６（ｓ，１Ｈ），５．３１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１３－５．０４（ｍ，３Ｈ），４．７８（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），４．４１－４．３０（ｍ，４Ｈ），４．１０－４．００（ｍ，１Ｈ），３．６１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．４２－２．３１（ｍ，３Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．１１－２．０１（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．７８（ｍ，５Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．１９－１．１１（ｍ，５Ｈ），０．８８（ｓ，３Ｈ）。

【0099】

調製９
３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（３－（（２－フルオロ－３－（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）－７－ヒドロキシ－８ｂ－（２－ヒドロキシアセチル）－６ａ，８ａ－ジメチル－４－オキソ－２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－１Ｈ－ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２－ｄ］［１，３］ジオキソール－１０－イル）－４－メチルフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）プロパンアミド

【化37】

調製８に記載の手順に類似した様式で、調製９の化合物を、（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｒ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）－１０－（３－（（３－アミノベンジル）オキシ）－２－フルオロ－６－メチルフェニル）－７－ヒドロキシ－８ｂ－（２－ヒドロキシアセチル）－６ａ，８ａ－ジメチル－１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－４Ｈ－ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－オン（調製例５参照）及び３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパノイル）－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニン（調製例７参照）から調製した。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ９１１．４（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（５００．１１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：ｄ ９．８８（ｓ，１Ｈ），８．２３－８．２０（ｍ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３３－７．２８（ｍ，２Ｈ），７．１５－７．０８（ｍ，２Ｈ），７．００（ｓ，２Ｈ），６．９１－６．８９（ｍ，１Ｈ），６．１７（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），５．９４（ｓ，１Ｈ），５．６１（ｓ，１Ｈ），５．１６－５．１２（ｍ，３Ｈ），４．９８－４．９６（ｍ，１Ｈ），４．８１（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），４．４９－４．３６（ｍ，６Ｈ），３．６１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．４１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．３０－２．２９（ｍ，４Ｈ），２．１７－２．１５（ｍ，２Ｈ），１．８８－１．７７（ｍ，４Ｈ），１．６９－１．６１（ｍ，１Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．１８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．９３－０．８７（ｍ，６Ｈ）。

【実施例】

【0100】

実施例１．抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体ＧＣコンジュゲートの生成
実施例１ａ．抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体の生成及び操作
抗体生成：ヒトＩＬ－４Ｒαに特異的な抗体を開発するために、ヒト免疫グロブリン可変領域を有するトランスジェニックマウスをヒトＩＬ－４ＲαをＦｃタグ付き細胞外ドメイン（ＥＣＤ）で免疫化しを、ヒト及びカニクイザルＦｃタグ付きＩＬ－４ＲαＥＣＤタンパク質で交互に追加免疫した。スクリーニングは、交差反応性を同定するためにヒスチジンタグ付きヒト及びカニクイザルＩＬ－４ＲαＥＣＤを用いて、ＩＬ－４ブロッキング抗体を同定するために過剰な可溶性ＩＬ－４の非存在下又は存在下で行った。交差反応抗体をＦａｂとしてクローニングし、発現させ、標準的な手順によって精製し、レポーター細胞株、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）－Ｂｌｕｅ ＩＬ－４／ＩＬ－１３（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）において、ＩＬ－４及びＩＬ－１３に対するブロッキング活性について試験した。抗体を選択し、そのＣＤＲ、可変ドメインフレームワーク領域、及びＩｇＧアイソタイプを操作して、親和性、安定性、溶解性、粘度、疎水性、並びに凝集の低減などの特性を改善した。

【0101】

ヒトＩＬ－４ＲαＥＣＤのアミノ酸配列は配列番号１５によって定められ、カニクザルＩＬ－４ＲαＥＣＤのアミノ酸配列は配列番号１６によって定められ、ヒトＩＬ－４のアミノ酸配列は配列番号１７によって定められ、ヒトＩＬ－１３のアミノ酸配列は配列番号１８によって定められる。

【0102】

本発明の抗体は、周知の方法により、合成及び精製することができる。適切な宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）は、２つのベクターが使用される場合、所定のＨＣ：ＬＣベクター比を用いる抗体、又は重鎖及び軽鎖の両方をコードする単一ベクター系を用いる抗体を分泌するための、発現系で一時的に又は安定的にトランスフェクトされることができる。抗体が分泌された清澄化培地は、一般的に使用される技術を用いて精製することができる。

【0103】

親和性及び生物物理学的特性のための抗体操作：ＩＬ－４Ｒα抗体Ａｂ１０を、親和性及び／又は生物物理学的特性（安定性、溶解性、粘度、疎水性、凝集、血清タンパク質結合、熱又は化学的安定性など）を改善する突然変異を見出すために、ハイスループット、部位特異的、飽和突然変異誘発プロトコルを使用して、哺乳動物細胞発現ベクターにおいてＦａｂとして操作した。

【0104】

簡潔に述べると、Ａｂ１０のフレームワーク領域におけるＣＤＲ突然変異誘発及び非定型生殖系列残基を評価した。ＣＤＲ分析により、重要なＣＤＲ置換：ＬＣＤＲ３ Ｈ９１Ｗ、Ｎ９２Ｓが同定され、これらは、得られた抗体の親和性を１０^－９Ｍ範囲から１０^－１１Ｍ範囲に有意に改善した。更なる分析及び実験により、以下のようなＶＨにおける重要な残基改変が同定された：Ａ２３Ｖ、Ｎ９２Ｓ、Ｉ３１Ｈ；ＶＬ：Ｇ２８Ｄは、親和性を維持しながら熱チャレンジＥＬＩＳＡにおける熱安定性を改善した。加えて、ＶＨ中のアミノ酸残基置換：Ａ２３Ｖ、Ｉ５８Ｖ；ＶＬ：Ｇ２８Ｄは、親和性を維持しながら自己会合及び疎水性を低下させることが見出された。アミノ酸残基置換：ＶＨ：Ｉ３１Ｈは、血清タンパク質結合を減少させることが見出された。特定の抗体を更に操作して、ＨＣフレームワーク３中のアスパラギン（Ｎ７２）をアスパラギン酸（Ｎ７２Ｄ）に置換することによって脱アミド化（deaminidation）を排除した。要約すると、７つの重要なアミノ酸残基が同定され、ＶＨ：Ａ２３Ｖ、Ｉ３１Ｈ、Ｉ５８Ｖ、Ｎ７２Ｄ及びＶＬ：Ｇ２８Ｄ、Ｈ９１Ｗ、Ｎ９２Ｓにおいて以下のようにＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７及びＡｂ８に操作され、これらは、抗体の他の機能的又は生物物理学的特性に悪影響を及ぼすことなく、抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体の親和性及び生物物理学的特性（以下に示す）、例えば、熱安定性、自己会合の減少、疎水性、及び／又は血清タンパク質結合を有意に改善した。Ａｂ９を、ＶＨ：Ｉ３１Ｈ、Ｉ５８Ｖ、Ｎ７２Ｄ及びＶＬ：Ｈ９１Ｗ、Ｎ９２Ｓにおいてアミノ酸残基置換を用いて以下のように操作した。表２は、例示的な抗体のＣＤＲアミノ酸配列を示す。例示的な抗体は、表３に提供されるものを含む異なるＩｇＧ骨格を用いて生成された。

【0105】

抗体ヒンジ及びＦｃ骨格選択：抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ９及びＡｂ１０を、ヒンジを安定化し、アーム交換を防止するＳ２２８Ｐ突然変異を含むように操作した。ヒトカッパ定常ドメインと共に野生型ＩｇＧ４ドメインを使用して構築物を完成させた。抗体を合成し本質的に上記のように発現させ、精製した。

【0106】

ヒトＩｇＧ１Ａ及び／又はヒトＩｇＧ４Ｐ骨格は、Ｂ細胞及び骨髄細胞への結合の予想外の利点を提供したので、例示された抗体のために選択された。以下に示されるように、例示された抗体は、エフェクターヌル抗体と比較した場合、Ｂ細胞に対してより大きな結合効力を有することが見出され、したがって、エフェクターヌルであるように操作されていない例示された抗体のＦｃ部分が、抗ＩＬ－４Ｒα抗体のＢ細胞結合に正の影響を与えたことを示す。

【0107】

粘度を改善するための抗体定常領域操作：粘度を改善し、抗体のＦａｂドメインと定常ドメインとの間の潜在的な静電相互作用を軽減するために、抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体重鎖定常領域を電荷平衡によって更に操作した。ＩｇＧ４中のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメイン中の５つの主要なアミノ酸残基が、抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体の粘度に影響を与えるものとして同定された：１）Ｅ１３７（ＣＨ１ドメイン）、２）Ｄ２０３（ＣＨ１ドメイン）、３）Ｑ２７４（ＣＨ２ドメイン）、４）Ｑ３５５（ＣＨ３ドメイン）、及び５）Ｅ４１９（ＣＨ３ドメイン）。抗体の粘度を有意に改善するために、Ａｂ１に対するＱ２７４Ｋ（ＣＨ２ドメイン）、Ｑ３５５Ｒ（ＣＨ３ドメイン）、及びＥ４１９Ｑ（ＣＨ３ドメイン）の組み合わせを含む、これらのアミノ酸置換の様々な組み合わせを有する抗体を生成した。５つのアミノ酸についてのｈＩｇＧ１定常領域における類似の位置は異なり、各ドメインの全体的なｐＩに影響を与えることが見出された。

【0108】

【表2】

【0109】

【表3】

【0110】

実施例１ｂ．抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート（ｎ＝４）の生成

【化38】

式中、ｎは４であり、
ＡｂはＡｂ１である。

【0111】

例示した抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１（表２及び表３を参照）を、まず、４０倍モル過剰のジチオスレイトール（ＤＴＴ）の存在下で、３７℃で２時間又は２１℃で１６時間超還元した。この最初の還元工程を使用して、発現中に重鎖の１２４位及び３７８位で操作されたシステインに結合するシステイン及びグルタチオンを含む様々なキャッピング基を除去した。還元工程の後、脱塩樹脂を通して試料を精製して、システインキャップ並びに還元剤を除去した。その後の２時間の酸化工程を、１０倍モル過剰のデヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）の存在下、室温（約２１℃）で行って、軽鎖と重鎖との間の天然の鎖間ジスルフィド並びにヒンジジスルフィドの対を再形成した。２時間の酸化工程後、４～８モル当量のグルココルチコイド受容体アゴニストペイロード－リンカー（「ＧＣ－Ｌ」）、調製８で調製した３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（３－（（２－フルオロ－３－（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｓ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）－７－ヒドロキシ－８ｂ－（２－ヒドロキシアセチル）－６ａ，８ａ－ジメチル－４－オキソ－２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－１Ｈ－ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２－ｄ］［１，３］ジオキソール－１０－イル）－４－メチルフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）プロパンアミドをＤＭＳＯに溶解した１０ｍＭストック溶液を用いて添加した。次いで、試料を室温で３０～６０分間インキュベートして、操作されたシステインへのＬＰの効率的なコンジュゲーションを可能にした。次いで、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）又は接線流濾過（ＴＦＦ）などの後続の仕上げ工程を使用して、試料を適切な製剤緩衝液に緩衝液交換し、ＤＭＳＯ及び任意の過剰なリンカー－ペイロードを除去した。

【0112】

薬物対抗体比（ＤＡＲ）評価：最終コンジュゲート上に存在するリンカー－ペイロードの平均数を評価するために、１）逆相（ＲＰ）ＨＰＬＣ及び２）飛行時間（ＴＯＦ）質量分析を含む２つの分析方法を使用した。両方の方法とも、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を最終濃度約１０ｍＭまで添加し、続いて４２℃で５分間インキュベートすることを含む最初の試料還元工程を必要とした。

【0113】

逆相ＨＰＬＣ法：１ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体ＧＣコンジュゲート試料を、試料を１０ｍＭ ＤＴＴの存在下、４２℃で５分間インキュベートすることによって還元した。１０～３０マイクログラムの還元された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体ＧＣコンジュゲート試料を、Ｐｈｅｎｙｌ ５ＰＷ、４．６ｍｍ×７．５ｃｍ、１０μＭカラム（Ｔｏｓｈ Ｐａｒｔ＃０００８０４３）上に注入した。Ａ緩衝液は水中の０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）から構成され、一方、Ｂ緩衝液はアセトニトリル（ＡＣＮ）中の０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）から構成された。試料注入前にカラムを２０％Ｂ緩衝液中で平衡化し、続いて約８．５カラム体積にわたって２８％Ｂ～４０％Ｂの勾配をかけた。平均ＤＡＲは、寄与する種ごとのＤＡＲ数を乗じた分画パーセンテージから個々のＤＡＲ種それぞれからの寄与を計算することによって決定した。この値は、還元された試料に基づき、分子の半分のみを表すので、次いで、インタクトな抗体ＧＣコンジュゲートを説明するために、その数に２を掛けた。実施例１ｂの抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートについてのＤＡＲ計算を表４に提供する。

【0114】

【表4】

【0115】

飛行時間型質量分析法：還元された試料８μｇをＰｏｒｏｓｈｅｌｌ ３００ｓｂ－Ｃ３ ２．１×２．５ｍｍ、５μＭカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐａｒｔ＃８２１０７５－９２４）に注入した。緩衝液Ａは水中の０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）から構成され、一方、緩衝液Ｂはアセトニトリル（ＡＣＮ）中の０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）から構成された。試料注入の前にカラムを０％Ｂ緩衝液中で平衡化し、続いて約２８カラム体積にわたって１０％Ｂから８０％Ｂの勾配をかけた。平均ＤＡＲは、寄与する種ごとのＤＡＲ数を乗じた分画パーセンテージから個々のＤＡＲ種それぞれからの寄与を計算することによって決定した。この値は還元された試料に基づいており、分子の半分のみを表しているので、無傷の抗体を説明するためにその数に２を掛けた。実施例１ｂの抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートについてのＤＡＲ計算を表５に提供する。

【0116】

【表5】

【0117】

実施例１ｃ．抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート（ｎ＝３）の生成

【化39】

式中、ｎは３であり、
ＡｂはＡｂ１である。

【0118】

実施例１ｃのコンジュゲートを、実施例１ｂに記載の手順と類似の様式で、より低いモル比のＧＣ－Ｌ、３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（３－（（２－フルオロ－３－（（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｓ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）－７－ヒドロキシ－８ｂ－（２－ヒドロキシアセチル）－６ａ，８ａ－ジメチル－４－オキソ－２，４，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－１Ｈ－ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２－ｄ］［１，３］ジオキソール－１０－イル）－４－メチルフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）プロパンアミドを、コンジュゲーション工程中にＡｂ１に用いて調製した。例えば、対応するＧＣ－Ｌ：Ａｂ１の３．２：１のモル比の使用は、約３の最終ＤＡＲをもたらす。

【0119】

実施例１ｄ．チオスクシンイミド加水分解：式Ｉｅの化合物のチオスクシンイミド環を、以下のスキーム１に示すように、当技術分野で周知の条件下で加水分解して（例えば、国際公開第２０１７／２１０４７１号、段落００１２２６を参照）、式Ｉｆの開環生成物を得ることができる。

【0120】

スキーム１

【化40】

加えて、式Ｉｅの化合物の上記チオスクシンイミド環は、少なくとも部分的なインビボでの加水分解を、標準的な又は周知の処方条件下で受けて、式Ｉｆの開環生成物を提供し得る。

【0121】

実施例２．抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体の構造的及び機能的エピトープ決定
実施例２ａ．Ｘ線結晶学によるＡｂ９Ｆａｂの構造的エピトープ。ヒトＩＬ－４Ｒα上の抗ＩＬ－４ＲαＡｂ９のＦａｂの物理的エピトープを、ヒトＩＬ－４Ｒαと例示した抗体との間の相互作用界面を同定することによって決定した。簡潔に述べると、構造的エピトープを決定するために、ヒトＩＬ－４ＲαＥＣＤをＡｂ９のＦａｂ部分と共結晶化させた。ＩＬ－４Ｒαと複合体化したＡｂ９Ｆａｂの構造は、ＣＨ１ドメインの後で切断された重鎖のヘキサヒスチジンタグ付きＩｇＧ１バリアント及びＡｂ９Ｆａｂの軽鎖の「Ｃｒｙｓｔａｌ Ｋａｐｐａ」バージョンを作製することによって決定した（Ｌｉｅｕ ｅｔ ａｌ．，「Ｒａｐｉｄ ａｎｄ Ｒｏｂｕｓｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆａｂ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ Ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ Ｅｄｇｅ－ｔｏ－ｅｄｇｅ Ｂｅｔａ－ｓｈｅｅｔ Ｐａｃｋｉｎｇ，」ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，１５（９）（２０２０）を参照、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。Ａｂ９バリアントを、Ｃ１８２Ｌ突然変異を含有するヒトＩＬ－４ＲαＥＣＤのヘキサヒスチジンタグ付きバージョンと共発現させ、次いで複合体を固定化金属アフィニティクロマトグラフィによって精製し、結晶化のための標準的な市販のスクリーンを使用してスクリーニングした。結晶が得られ、Ｘ線回折データをＡｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅで収集した。回折データを、分子置換によって削減及び解析し、例示されたＡｂ９Ｆａｂ及びＩＬ－４ＲαＥＣＤの錯体の２．８オングストローム構造が得られるように精密化した。得られた結晶構造から、共結晶化されたＡｂ９Ｆａｂの原子の４．５オングストローム内の任意のＩＬ－４Ｒαアミノ酸残基をエピトープの一部としてカウントした（ＰｙＭＯＬ可視化ソフトウェア［Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ（登録商標）］を使用）。

【0122】

ＰｙＭＯＬ分析は、結晶構造複合体中のＡｂ９Ｆａｂの４．５オングストローム以内にあるＩＬ－４Ｒαアミノ酸残基（配列番号１５に関して）が、例示された抗体の構造的エピトープを含むことを実証した。具体的には、分析により、構造的エピトープが以下のアミノ酸残基：１２位のＡｓｐ、１４位のＭｅｔ、１５位のＳｅｒ、１６位のＩｌｅ、３７位のＴｙｒ、３９位のＬｅｕ、４１位のＰｈｅ、４３位のＬｅｕ、４５位のＧｌｕ、４７位のＨｉｓ、４８位のＴｈｒ、４９位のＣｙｓ、５０位のＩｌｅ、６２位のＨｉｓ、６４位のＬｅｕ、６５位のＭｅｔ、６６位のＡｓｐ、６７位のＡｓｐ、６９位のＶａｌ、７２位のＡｓｐ、９９位のＡｒｇ、１２１位のＰｒｏ、１２３位のＰｒｏ、１２４位のＰｒｏ、１２５位のＡｓｐを含むことが決定された。分析は更に、構造的エピトープがＩＬ－４ＲαのＮ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインのドメイン１及び２にまたがることを決定した。更に、分析により、構造的エピトープの以下のアミノ酸残基が、ＩＬ－４ＲαのＮ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインのドメイン２に位置することが決定された：Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５。

【0123】

また、例示されたＡｂ９Ｆａｂ及びデュピルマブＦａｂの結晶構造と、ヒトＩＬ－４Ｒα（ｐｄｂアクセッションコード６ＷＧＬ）と複合体化された結晶カッパ設計とのオーバーレイは、デュピルマブと比較した場合、Ａｂ９ＦａｂがＩＬ－４Ｒα上の新規エピトープに結合することを示した（図１）。

【0124】

更に、各構造におけるＩＬ－４Ｒα成分上の、例示されたＩＬ－４ＲαＡｂ９Ｆａｂ：ＩＬ－４Ｒα複合体結晶構造の、ＩＬ－４及びＩＬ－１３の公開された複合体並びにそのそれぞれの受容体（ｐｄｂアクセッションコード３ＢＰＮ及び３ＢＰＯ）とのアラインメント（ＰｙＭＯＬ可視化ソフトウェアを使用）は、例示されたＡｂ９Ｆａｂ抗体エピトープが、ＩＬ－４ＲαへのＩＬ－４及びＩＬ－１３結合部位の両方と重複することを示し、したがって、例示された抗体のＦａｂバリアント部分がＩＬ－４Ｒαに結合する場合、例示された抗体のＩＬ－４Ｒαへの結合は、ＩＬ－４及びＩＬ－１３サイトカインがＩＬ－４Ｒαに結合するのを物理的にブロッキングすることを示した。

【0125】

実施例２ｂ．Ａｂ１０の機能的エピトープ。例示された抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１０の機能的エピトープをＥＬＩＳＡによって決定した。簡潔に述べると、３０個の表面アミノ酸残基置換を、以下のようにヘキサヒスチジンタグ付きヒトＩＬ－４Ｒα細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に個々に導入した：Ｋ２Ｄ、Ｅ６Ｒ、Ｋ２２Ｄ、Ｐ２６Ｒ、Ｔ３１Ｒ、Ｆ４１Ａ、Ｌ４２Ｇ、Ｌ４３Ｇ、Ｅ４５Ｒ、Ｇ５６Ｒ、Ｄ６６Ｒ、Ａ７１Ｒ、Ｑ８２Ｇ、Ｋ８７Ｄ、Ｅ９４Ｒ、Ｈ１０７Ａ、Ｄ１０８Ｒ、Ｐ１２４Ｒ、Ｄ１２５Ｒ、Ｄ１４３Ｒ、Ｒ１４８Ｄ、Ｌ１５５Ｒ、Ｒ１６０Ｄ、Ｓ１６４Ｒ、Ｓ１６８Ｒ、Ｑ１８１Ｒ、Ｐ１９２Ｒ、Ｋ１９５Ｄ、又はＨ１９７Ｇ。上記のような単一アミノ酸残基置換を有する各突然変異タンパク質を、ＣＨＯ細胞において一過性に発現させ、標準的な固定化金属アフィニティクロマトグラフィ技術を用いて精製した。ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトカッパ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０６０－０１）で４℃にて一晩コーティングし、次いでＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳカゼインで室温にて３０分間ブロッキングした。次いで、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、例示した抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体Ａｂ６を、ＰＢＳ－カゼイン中１μｇ／ｍＬの最終濃度でウェルに添加し、１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＩＬ－４Ｒα突然変異タンパク質をＰＢＳ－カゼイン中１μｇ／ｍＬから３倍に連続希釈し、５０μＬ／ウェルでプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳ－カゼイン中抗ヒスチジンタグ抗体ＨＲＰコンジュゲート（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，カタログ番号ＭＡＢ０５０Ｈ）の５０００倍希釈を添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを３回洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｐｉｅｒｃｅ，カタログ番号３４０２１）を製造業者の指示に従って添加し、反応をＨ_２ＳＯ_４でクエンチし、吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。抗体の機能的エピトープを、結合シグナルを示さないか、又は対照抗体と比較して有意に減少した結合シグナルを示したウェルに対応する変異アミノ酸残基として決定した。

【0126】

表６Ａの結果は、例示された抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１０の機能的エピトープがアミノ酸残基Ｄ６６及びＤ１２５を含むことを示す。構造的エピトープにおいて同定されたアミノ酸残基のうち、ＩＬ－４Ｒα上のＤ６６Ｒ及びＤ１２５Ｒのアミノ酸残基置換は、それぞれ、変異ＩＬ－４ＲαへのＡｂ１０の結合に対して有意に負の影響を示した。具体的には、ＩＬ－４Ｒαのアミノ酸残基Ｄ６６のアルギニンへの置換は、変異ＩＬ－４ＲαへのＡｂ１０の結合を対照の結合よりも低下させた（それぞれ、０．０４ＯＤ_４５０及び０．１４ＯＤ_４５０）。更に、ＩＬ－４Ｒαの結晶構造上のアミノ酸残基Ｄ６６の近くに位置するアミノ酸残基Ｄ１２５のアルギニンへの置換（図２参照）も、０．５９ＯＤ_４５０の結合の有意な減少を示した。残りのアミノ酸置換は、正の結合の範囲内又は決定された構造的エピトープの外側のいずれかであった。

【0127】

【表6】

【0128】

実施例２ｃ．Ｘ線結晶学によるＡｂ１Ｆａｂの構造的エピトープ。ヒトＩＬ－４Ｒα上のＡｂ１抗ヒトＩＬ－４Ｒα 抗体のＦａｂの物理的エピトープを、本質的に上記のように決定した。結晶が得られ、Ｘ線回折データをＡｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅで収集した。回折データを、分子置換によって削減及び解析し、例示されたＦａｂとＩＬ－４ＲαＥＣＤとの錯体の２．４９オングストローム構造が得られるように精密化した。得られた結晶構造から、共結晶化されたＦａｂの原子の４．５オングストローム以内の任意のＩＬ－４Ｒαアミノ酸残基をエピトープの一部としてカウントした（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）可視化、モデリング及びシミュレーションソフトウェア［Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ］、Ｃｏｏｔ（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｕｂｌｉｃ Ｌｉｃｅｎｓｅ）及びＰｙＭＯＬ可視化ソフトウェア［Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ（登録商標）］を使用）。

【0129】

ＭＯＥ、Ｃｏｏｔ、及びＰｙＭＯＬ分析は、結晶構造複合体中の例示されたＦａｂの４．５オングストローム以内にあるＩＬ－４Ｒαアミノ酸残基（配列番号１５に関して）が構造的エピトープを含むことを実証した。具体的には、分析により、構造的エピトープが以下のアミノ酸残基を含むことが決定された。１２位のＡｓｐ、１４位のＭｅｔ、１５位のＳｅｒ、１６位のＩｌｅ、３９位のＬｅｕ、４１位のＰｈｅ、４２位のＬｅｕ、４８位のＴｈｒ、４９位のＣｙｓ、５０位のＩｌｅ、５２位のＧｌｕ、６２位のＨｉｓ、６４位のＬｅｕ、６５位のＭｅｔ、６６位のＡｓｐ、６７位のＡｓｐ、６８位のＶａｌ、６９位のＶａｌ、７２位のＡｓｐ、９９位のＡｒｇ、１２１位のＰｒｏ、１２３位のＰｒｏ、１２４位のＰｒｏ、１２５位のＡｓｐ、１９２位のＰｒｏ。６６位のＡｓｐは、Ａｂ１Ｆａｂの重鎖と２．６～２．９Åの間の相互作用を有してよく調和されていた。６７位のＡｓｐは、３．１～３．５Åの間のより長い範囲の相互作用を有し、その側鎖周辺の過剰な密度の観察によって証明されるように、その結合位置において柔軟性を示した。分析により、構造的エピトープがＩＬ－４ＲαのＮ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインのドメイン１及び２に及ぶことが決定された。更に、分析により、構造的エピトープの以下のアミノ酸残基がＩＬ－４ＲαのＮ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインのドメイン２に位置することが決定された：Ｒ９９、Ｐ１２１、Ｐ１２３、Ｐ１２４、Ｄ１２５、Ｐ１９２。

【0130】

例示された抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１Ｆａｂと、ヒトＩＬ－４Ｒα（ｐｄｂアクセッションコード６ＷＧＬ）と複合体化された結晶カッパ設計を有するデュピルマブＦａｂの結晶構造とのオーバーレイは、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１が、デュピルマブと比較した場合、ＩＬ－４Ｒα上の新規エピトープに結合することを示した（図３）。

【0131】

例示された抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１Ｆａｂ：ＩＬ－４Ｒα複合体結晶構造と各構造におけるＩＬ－４Ｒα上のＩＬ－４及びＩＬ－１３並びにそれらのそれぞれの受容体（ｐｄｂアクセッションコード３ＢＰＮ及び３ＢＰＯ）の公開された複合体とのアラインメント（ＰｙＭＯＬ可視化ソフトウェアを使用）は、例示された抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂＦａｂ抗体エピトープが、ＩＬ－４ＲαへのＩＬ－４及びＩＬ－１３結合部位の両方と重複することを示した。これは、例示されたＡｂ１の結合が、ＩＬ－４及びＩＬ－１３サイトカインがＩＬ－４Ｒαに結合するのを物理的にブロッキングすることを示した。

【0132】

実施例２ｄ．Ａｂ１の機能的エピトープ。例示されたヒトＩＬ－４Ｒα抗体Ａｂ１の機能的エピトープをＥＬＩＳＡによって決定した。簡潔に述べると、３０個の表面アミノ酸残基置換を、以下のようにヘキサヒスチジンタグ付きヒトＩＬ－４Ｒα細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に個々に導入した：Ｋ２Ｄ、Ｅ６Ｒ、Ｋ２２Ｄ、Ｐ２６Ｒ、Ｔ３１Ｒ、Ｆ４１Ａ、Ｌ４２Ｇ、Ｌ４３Ｇ、Ｅ４５Ｒ、Ｅ５２Ｒ、Ｇ５６Ｒ、Ｄ６６Ｒ、Ａ７１Ｒ、Ｑ８２Ｇ、Ｋ８７Ｄ、Ｅ９４Ｒ、Ｈ１０７Ａ、Ｄ１０８Ｒ、Ｐ１２４Ｒ、Ｄ１２５Ｒ、Ｄ１４３Ｒ、Ｒ１４８Ｄ、Ｌ１５５Ｒ、Ｒ１６０Ｄ、Ｓ１６４Ｒ、Ｓ１６８Ｒ、Ｑ１８１Ｒ、Ｐ１９２Ｒ、Ｋ１９５Ｄ、又はＨ１９７Ｇ。上記のような単一アミノ酸残基置換を有する各突然変異タンパク質を、ＣＨＯ細胞において一過性に発現させ、標準的な固定化金属アフィニティクロマトグラフィ技術を用いて精製した。ＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号１０９－００５－０９８）で４℃にて一晩コーティングし、次いでＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳカゼインで室温にて１時間ブロッキングした。次いで、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、例示したヒトＩＬ－４Ｒα抗体を、ＰＢＳ－カゼイン中１μｇ／ｍＬの最終濃度でウェルに添加し、室温にて１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＩＬ－４Ｒα突然変異タンパク質を３点について、ＰＢＳ－カゼイン中１μｇ／ｍＬから５倍に連続希釈し、５０μＬ／ウェルでプレートに添加し、室温にて１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳ－カゼイン中抗ヒスチジンタグ抗体ＨＲＰコンジュゲート（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，カタログ番号ＭＡＢ０５０Ｈ）の１０００倍希釈を添加し、室温で４５分間インキュベートした。プレートを３回洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｐｉｅｒｃｅ，カタログ番号３４０２８）を製造業者の指示に従って添加し、反応をＨ_２ＳＯ_４でクエンチし、吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。抗体の機能的エピトープを、結合シグナルを示さないか、又は野生型対照と比較して有意に減少した結合シグナルを示したウェルに対応する変異アミノ酸残基として決定した。

【0133】

表６Ｂの結果は、例示された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体Ａｂ１の機能的エピトープがアミノ酸残基Ｄ６６を含むことを示す。ＩＬ－４Ｒα上でのＤ６６からＤ６６Ｒへのアミノ酸残基置換は、Ｄ６６Ｒ ＩＬ－４ＲαへのＡｂ１の結合を陰性対照の結合よりも低下させた（それぞれ、０．０４７ＯＤ_４５０及び０．０６３ＯＤ_４５０）。アミノ酸残基Ｄ６６は、ＩＬ－４Ｒαの結晶構造において構造的エピトープ残基Ｄ６７及びＤ１２５の近くに位置する（図４）。残りのアミノ酸置換は、正の結合の範囲内又は決定された構造的エピトープの外側のいずれかであった。

【0134】

【表7】

【0135】

実施例３．例示的な抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体及び実施例１ｂのＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの結合効力
実施例３ａ．Ｅｌｉｓａ結合：競合Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）ＥＬＩＳＡ結合アッセイを使用して、ヒト及びカニクイザルＩＬ－４Ｒαに対する例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１及びＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの結合効力を測定した。一定最終濃度のＡｂ１又はコンジュゲート（１０ｐＭ）を、ヒト又はカニクイザルＩＬ－４Ｒαの３倍希釈系列と混合して、１０ｎＭの最終出発濃度を得て、混合物を３７℃で４日間インキュベートした。９６ウェルマルチアレイプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号Ｌ１５ＸＡ－３）をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の０．５μｇ／ｍＬのヘキサヒスチジンタグ付きヒト又はカニクイザルＩＬ－４ＲαＥＣＤで、４℃にて一晩コーティングした。コーティング後、プレートを２００μＬのＰＢＳＴ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０と共にＰＢＳ）で１０回洗浄し、３００μＬのＰＢＳカゼインブロッキング緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ番号３７５２８）で３７℃にて１時間ブロッキングした。次いで、プレートを上記のように１０回洗浄し、そして５０μＬのプレインキュベートした抗体：ＩＬ－４Ｒα希釈系列をウェルに移し、３００ｒｐｍで振盪しながら３７℃で１５０秒間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳＴで１０回洗浄し、５０μＬの１μｇ／ｍＬ抗ヒト抗体ｓｕｌｆｏ－ｔａｇ２０（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，カタログ番号Ｒ３２ＡＪ－１）を表７ａのアッセイのためにプレートに添加し、抗ヒトＮＨＰカッパ軽鎖ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ２０（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号Ｄ２０ＴＦ－６）を表７ｂのアッセイのためにプレートに添加し、プレートを３００ｒｐｍで振盪しながら３７℃で３０分間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで１０回洗浄し、１５０μＬ／ウェルの１Ｘ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔをウェルに加え、バッファー添加の１５分後にＳＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｉｍａｇｅｒ６０００（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で分析した。見かけのＫ_Ｄは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を使用して、電気化学発光（ＥＣＬ）応答対ｌｏｇ（可溶性ＩＬ－４Ｒα濃度）にシグモイド曲線を当てはめることによって決定される。データを正規化したＥＣＬ値でグラフ化する。表７ａの結果は、個々の実験からの代表的なデータであり、表７ｂの結果は、２連で行った３回の独立した実験の平均からの代表的なデータである。

【0136】

表７ａ及び７ｂの例示的な結果は、例示的な抗ＩＬ－４Ｒα抗体及びＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、匹敵するＫ_Ｄでヒト及びカニクイザルＩＬ－４Ｒαの両方に結合することを示す。

【0137】

【表8】

【0138】

【表9】

【0139】

実施例３ｂ．Ｂ細胞及びＴ細胞への結合：例示された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体のＢ細胞及びＴ細胞への結合を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイにおいて試験した。標準的なＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（商標）ｐｌｕｓ（ＧＥ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ）密度勾配遠心分離法によって、ヒト血液試料からヒトＰＢＭＣを単離した。新たに単離した細胞ＰＢＭＣを２×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁し、室温で１５分間静置し、次いで１００μＬ／ウェルで丸底９６ウェルプレート（ＣＯＳＴＡＲ（登録商標））に播種し、ＦＡＣＳ緩衝液（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）からの２％ウシ胎児血清を含有するＰＢＳ）で洗浄した。例示された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７にコンジュゲートされたそれぞれの対照ＩｇＧ抗体を、製造業者のプロトコル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って、６６．６７ｎＭでウェルに添加し、４倍希釈して２連とした。次いで、ヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）、ＦＩＴＣ抗ヒトＣＤ３抗体、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７００抗ヒトＣＤ４抗体（全てＢｉｏｌｅｇｅｎｄ（登録商標）から）及びＣＤ２０モノクローナル抗体（２Ｈ７）、ＰｅｒＣＰ－Ｃｙａｎｉｎｅ５．５（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有する等体積の２×抗体カクテルをウェルに添加した。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、最終体積１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｄｙｅ、Ｓｙｔｏｘ（商標）ｂｌｕｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を添加し、試料をフローサイトメーター（ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）Ｘ－２０；ＢＤ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ）を介して分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いてデータ分析を行い、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を用いて統計分析を行った。データは、６人のドナーからのＣＤ２０ Ｂ細胞及びＣＤ４陽性Ｔ細胞集団からのＩＬ－４Ｒα発現細胞のパーセンテージの平均±ＳＥＭを表す。曲線は、個々の細胞集団からの陽性ＩＬ－４Ｒα発現細胞のｌｏｇ（Ａｂ濃度）対パーセントのシグモイド曲線をフィッティングすることによって作成した。

【0140】

代表的な実験からの表８Ａの結果は、例示された抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１及びＡｂ７が、ヒトＰＢＭＣ単離Ｂ細胞（それぞれ０．１５ｎＭ及び０．１４ｎＭのＥＣ_５０）及びＣＤ４^＋Ｔ細胞（それぞれ２６．３ｎＭ及び２８．７ｎＭのＥＣ_５０）上のＩＬ－４Ｒαに、匹敵する親和性で結合したことを示す。

【0141】

更に、例示されたエフェクターヌル抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ８をＡｂ７と比較する代表的な実験からの表８Ｂにおける結果は、エフェクターヌルＡｂ８が、Ａｂ７（０．２７ｎＭのＥＣ_５０）と比較した場合に、Ｂ細胞に対する予想外に減少した親和性（１．０７ｎＭのＥＣ_５０）を有することを示し、抗体のＦｃ部分が、例示されたＩＬ－４Ｒα抗体のＢ細胞への結合に影響を及ぼし得ることを示した。Ａｂ７及びＡｂ８の両方は、同じＣＤＲアミノ酸配列を共有する。

【0142】

【表10】

【0143】

【表11】

【0144】

実施例４．抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂＧＣコンジュゲートのインビトロ機能特性評価
実施例４ａ．抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１による細胞ベースのＩＬ－４及びＩＬ－１３サイトカインブロッキング活性：分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）活性を測定することによって、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－４Ｒ及びＩＬ－１３Ｒ発現細胞株（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を用いて、ＩＬ－４及びＩＬ－１３に対する例示的な抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体のアンタゴニスト活性を行った。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞を、ポリリジンコーティングプレート中の５０μＬの増殖培地中に５×１０^４細胞／ウェルで一晩播種した。抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を、増殖培地中２０μｇ／ｍＬから開始して４倍希釈で、Ｇｒｅｉｎｅｒ ９６ウェル低タンパク質結合プレートにおいて調製した。希釈系列を、増殖培地中で等量の組換えヒトＩＬ－４又はＩＬ－１３（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）のいずれかと混合した。５０μＬの混合物を、次いで、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞を有するプレートに添加して、１００ｐｇ／ｍＬヒトＩＬ－４又は１０ｎｇ／ｍＬヒトＩＬ－１３の最終濃度にし、次いで、プレートを、組織培養インキュベーター中、３７℃で一晩インキュベートした。一晩インキュベートしたプレートからの２０μＬの上清を、９６ウェル組織培養処理プレートに移し、ウェル当たり１８０μＬのＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を添加し、混合物を３７℃で４５分間インキュベートした。分泌された胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）活性を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）において６５０ｎｍで測定した。結果を６５０ｎｍでの光学密度（ＯＤ）として報告し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を用いて統計分析を行った。ＩＣ_５０及び曲線は、各例示抗体について６５０ｎｍでのｌｏｇ（Ａｂ濃度）対ＯＤのシグモイド曲線をフィッティングすることによって作成した。

【0145】

結果は、例示的抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体Ａｂ１、Ａｂ７、及びＡｂ９が、ＩＬ－４及びＩＬ－１３誘導ＳＥＡＰ活性の両方を用量依存的様式で阻害し、ＩＬ－４阻害についてそれぞれ０．０８ｎＭ、０．０７ｎＭ、及び０．０３ｎＭのＩＣ_５０を有し、ＩＬ－１３阻害についてそれぞれ０．６７ｎＭ、０．５１ｎＭ、及び０．２４ｎＭのＩＣ_５０を有することを示した（表９）。

【0146】

【表12】

【0147】

実施例４ｂ．抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの内在化：実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの、ＩＬ－４Ｒαに結合し、Ｄａｕｄｉ細胞に内在化する能力を評価した。ｐＨ感受性標識ｐＨｒｏｄｏ（商標）ｉｆＬ Ｍｉｃｒｏｓｃａｌｅ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ｐ３６０１４）を使用して、１００μｇのＦ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ＃１０９－００６－０９８）を製造業者のプロトコルに従って標識した。Ｄａｕｄｉ細胞（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－２１３）を培地中に１×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁し、１００μＬを９６ウェルプレートに播種した。例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート及び抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂを、複合体形成のために、等濃度のｐＨｒｏｄｏ標識Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧと共に４℃で３０分間インキュベートし、次いで、３点曲線のために１０倍に連続希釈し、Ｄａｕｄｉ細胞に添加し、ＣＯ_２インキュベーター中、３７℃で２５時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを４００×ｇで３分間遠沈させ、上清を吸引した。２％ウシ胎仔血清を含むｄ－ＰＢＳ中にＣＤ２０モノクローナル抗体（２Ｈ７）、ＰｅｒＣＰ－シアニン５．５（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標））及びヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を含有する抗体カクテルをウェルに添加し、ピペッティングによって混合した。次いで、染色された細胞を４℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２％ＦＢＳを含む１００～１５０μＬのｄ－ＰＢＳで２～３回洗浄した。細胞を２％ＦＢＳを含む１００μＬのｄ－ＰＢＳに再懸濁し、５μＬのＳＹＴＯＸ（商標）Ｂｌｕｅ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を適切なウェルに添加し、ピペッティングによって混合した。プレートをＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）Ｘ－２０ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒで分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析を行った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を使用して濃度対ｐＨｒｏｄｏ幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）をプロットすることによって曲線を作成した。

【0148】

表１０の結果は、実施例１ｂの抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、１０、１及び０．１μｇ／ｍＬでそれぞれ８５９、５０９及び３９７のＭＦＩで用量依存的にＤａｕｄｉ細胞に結合し、内部移行したことを示す。抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの内在化は、非コンジュゲートＡｂ１の内在化に匹敵した。これは、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート結合及び内在化機能が、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１のグルココルチコイドへのコンジュゲーションによって影響を受けなかったことを示す。

【0149】

【表13】

【0150】

実施例４ｃ．ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ－４及びＩＬ－１３誘導性ｐＳＴＡＴ６リン酸化の阻害：実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート及び抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１によるＩＬ－４及びＩＬ－１３媒介性ＩＬ－４Ｒ ｐＳＴＡＴ６リン酸化の阻害を、初代Ｂ細胞及び／又はＴ細胞において評価した。標準的なＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（商標）ｐｌｕｓ（ＧＥ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ）密度勾配遠心分離法によって、ヒト血液試料からヒトＰＢＭＣを単離した。単離された細胞を、Ｔ１７５フラスコ（ＦＡＬＣＯＮ）中の１００ｍＬの完全培地（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）から、並びに１％ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）及び０．１％β－メルカプトエタノール、Ｇｉｂｃｏ（商標）からのＲＰＭＩ－１６４０）中に１億～３億細胞で再懸濁し、２μｇ／ｍＬのＰＨＡ（ＳＩＧＭＡ）、０．５μｇ／ｍＬのＬＰＳ（ＳＩＧＭＡ）及び１００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－６で一晩刺激した。細胞を新鮮な培地で洗浄し、４倍希釈及び１１点滴定で希釈した１０μｇ／ｍＬの例示的抗体を含有する１００μＬ完全培地中、９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標））に５×１０^４～２×１０^５細胞／ウェルで播種した。細胞を試料と共に室温で３０分間インキュベートし、次いでヒト組換えＩＬ－４（最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）又はヒト組換えＩＬ－１３（最終濃度１００ｎｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ ＳＹＳＴＥＭＳ）で室温で１２分間刺激した。１２０μＬの１Ｘ Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ）を５分間添加することによって刺激を停止し、次いで、プレートを２０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を吸引した。細胞ペレットを１００μＬの氷冷メタノール（ＳＩＧＭＡ）に再懸濁し、氷上に２０分間置き、２％ＦＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標））含有ＤＰＢＳで洗浄した。細胞を、５０μＬの以下のタンパク質：ＣＤ４、ＣＤ３３、ＣＤ８、及びＣＤ３（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、リン酸化ＳＴＡＴ６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（登録商標））並びにＣＤ２０（ＢＤ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ）に対する抗体カクテル中に再懸濁し、室温で３０分間インキュベートし、次いで２％ＦＢＳを含有するＤＰＢＳで洗浄した。フローサイトメーターを用いて細胞試料を分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析を行い、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を用いて統計分析を行う。曲線は、各個々のドナー細胞集団（ｎ＝２）のリン酸化ＳＴＡＴ６のｌｏｇ（Ａｂ濃度）対阻害パーセントのシグモイド曲線をフィッティングすることによって作成した。

【0151】

表１１Ａの結果は、実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、ＩＬ－４誘導性ＳＴＡＴ６リン酸化を、ＣＤ４＋Ｔ細胞（０．０１７μｇ／ｍＬのＩＣ_５０）及びＢ細胞（０．０４１μｇ／ｍＬのＩＣ_５０）の両方において用量依存的に阻害したことを示す。

【0152】

表１１Ｂの結果は、実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、Ｂ細胞におけるＩＬ－１３誘導性ＳＴＡＴ６リン酸化を用量依存的に阻害した（０．０６４μｇ／ｍＬのＩＣ_５０）ことを示す。これは、ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、ＩＬ－４Ｒを介するＩＬ－４シグナル伝達及びＩＬ－１３シグナル伝達の両方をブロッキングする能力を示す。

【0153】

【表14】

【0154】

【表15】

【0155】

実施例４ｄ．ＩＬ－４誘導性Ｂ細胞増殖の阻害：例示した実施例１ｂの抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート並びに抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１及びＡｂ７によるＢ細胞増殖の阻害を、ヒトＰＢＭＣから単離した初代Ｂ細胞において評価した。ヒトＰＢＭＣは、標準的なＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（商標）ｐｌｕｓ（ＧＥ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ）密度勾配遠心分離法によってヒト血液試料から単離し、初代Ｂ細胞を、製造元のプロトコルに従って、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトナイーブＢ細胞濃縮キットを使用した陰性選択によって、ＰＢＭＣ懸濁液から単離した（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）技術）。単離されたヒト初代Ｂ細胞を１×１０^６細胞／ｍＬに再懸濁し、完全培地（１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０、１×ＭＥＭ－非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×ペニシリン－ストレプトマイシン溶液（全てＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）から）及び１×ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（Ｇｉｂｃｏ（商標））、０．１％β－メルカプトエタノール（ＬＩＦＥ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ）中で、ポリスチレン９６ウェルＵ底プレート中に播種した。細胞を抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１及びＡｂ７で前処理した。

【0156】

（６ａＲ，６ｂＳ，７Ｓ，８ａＳ，８ｂＳ，１０Ｓ，１１ａＲ，１２ａＳ，１２ｂＳ）－１０－（３－（（３－アミノベンジル）オキシ）－２－フルオロ－６－ビニルフェニル）－７－ヒドロキシ－８ｂ－（２－ヒドロキシアセチル）－６ａ，８ａ－ジメチル－１，２，６ａ，６ｂ，７，８，８ａ，８ｂ，１１ａ，１２，１２ａ，１２ｂ－ドデカヒドロ－４Ｈ－ナフト［２’，１’：４，５］インデノ［１，２－ｄ］［１，３］ジオキソール－４－オン（調製例６の化合物、本明細書では「ＧＣ１」とも呼ばれる）、又はアイソタイプ対照を、６６．６７ｎＭで０．５～１時間、４倍希釈し、１０点滴定した。細胞をヒトＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５抗体（２００ｎｇ／ｍＬ；Ｒ＆Ｄ ＳＹＳＴＥＭＳ）及びＩＬ－４組換えヒトタンパク質（５ｎｇ／ｍＬ；Ｒ＆Ｄ ＳＹＳＴＥＭＳ）で３７℃かつ５％ＣＯ_２で２日間刺激した。次いで、細胞を、［^３Ｈ］－チミジン（１ｍＣｉチミジン／ウェル；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標））で１８時間、３７℃でパルスをかけ、［^３Ｈ］－チミジン取り込みのレベルをマイクロプレートカウンター（ＭｉｃｒｏＢｅｔａ２；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標））によって測定し、毎分の細胞カウント（ＣＣＰＭ）として表した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を使用して統計分析を行い、ｌｏｇ（Ａｂ濃度）対２人のドナーからのＣＤ４０刺激単独と比較したＣＣＰＭの平均阻害率のシグモイド曲線をフィッティングすることによって曲線を生成した。

【0157】

表１２Ａの結果は、実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、非コンジュゲート抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１（１．３１ｎＭのＩＣ_５０）に匹敵するＩＬ－４誘導性Ｂ細胞増殖（１．４１ｎＭのＩＣ_５０）を用量依存的に阻害したことを示す。ＧＣ１単独は、アイソタイプ対照に匹敵し、すなわち、有意な阻害は観察されなかった。

【0158】

表１２Ｂは、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１及びＡｂ７によるＩＬ－４誘導性Ｂ細胞増殖の阻害の代表的な結果を示す。

【0159】

【表16】

【0160】

【表17】

【0161】

実施例４ｅ．抗ＣＤ４０誘導性Ｂ細胞増殖のグルココルチコイド受容体媒介性阻害：実施例１ｂの例示した抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート及び抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１によるＢ細胞増殖の阻害を、ヒトＰＢＭＣから単離した初代Ｂ細胞において評価した。ヒトＰＢＭＣは、標準的なＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（商標）ｐｌｕｓ（ＧＥ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ）密度勾配遠心分離法によってヒト血液試料から単離し、初代Ｂ細胞を、製造元のプロトコルに従って、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトナイーブＢ細胞濃縮キットを使用した陰性選択によって、ＰＢＭＣ懸濁液から単離した（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）技術）。単離されたヒト初代Ｂ細胞を１×１０^６細胞／ｍＬに再懸濁し、完全培地（１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０、１×ＭＥＭ－非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×ペニシリン－ストレプトマイシン溶液（全てＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）から）及び１×ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（Ｇｉｂｃｏ（商標））、０．１％β－メルカプトエタノール（ＬＩＦＥ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ）中で、ポリスチレン９６ウェルＵ底プレート中に播種した。細胞を、１００ｎＭで４倍に希釈した抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート、調製例６の化合物（ＧＣ１）又はアイソタイプ対照で０．５～１時間前処理し、９点滴定した。細胞をヒトＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５抗体（２００ｎｇ／ｍＬ；Ｒ＆Ｄ ＳＹＳＴＥＭＳ）で３７℃かつ５％ＣＯ_２で２日間刺激した。次いで、細胞を、［^３Ｈ］－チミジン（１ｍＣｉチミジン／ウェル；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標））で１８時間、３７℃でパルスをかけ、［^３Ｈ］－チミジン取り込みのレベルをマイクロプレートカウンター（ＭｉｃｒｏＢｅｔａ２；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標））によって測定し、毎分の細胞カウント（ＣＣＰＭ）として表した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を使用して統計分析を行い、ｌｏｇ（Ａｂ濃度）対２人のドナーからの刺激なしと比較したＣＣＰＭの平均阻害率のシグモイド曲線をフィッティングすることによって曲線を生成した。

【0162】

表１３及び図５の結果は、実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート及びＧＣ１単独が、抗ＣＤ４０誘導性Ｂ細胞増殖を用量依存的に阻害したことを示す（それぞれ５．５１ｎＭ及び３．７３ｎＭのＩＣ_５０）。最小の阻害が抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１で観察され、これはアイソタイプ単独に匹敵した。これは、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート中のＧＣが、Ｂ細胞に効果的に送達され、Ｂ細胞中のＧＣ受容体アゴニストを効果的に調節して、Ｂ細胞増殖のＩＬ－４Ｒ媒介性阻害とは無関係にＢ細胞増殖を阻害することを示す。

【0163】

【表18】

【0164】

実施例４ｆ．骨髄細胞におけるＩＬ－４誘導性ＣＤ２３の阻害及びＣＤ１６３発現の誘導：実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートによるＩＬ－４誘導性ＣＤ２３発現の阻害及びグルココルチコイド誘導性ＣＤ１６３発現の誘導を、骨髄細胞において評価した。ＣＤ１６３は単球細胞によって発現され、自己免疫障害と関連付けられている。グルココルチコイドは、グルココルチコイドの抗炎症効果に寄与すると考えられるＣＤ１６３発現を誘導することが示されている。抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートにおけるグルココルチコイドの効果を決定するために、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートでの処理に応答した単球細胞の表面上のＣＤ１６３発現レベルを評価する。

【0165】

簡潔には、標準的なＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（商標）ｐｌｕｓ（ＧＥ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ）密度勾配遠心分離法によるＰＢＭＣ単離のために、新鮮なＬＲＳ－ＷＢＣドナーをＳａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋから入手する。細胞を９６ウェル平底プレートに２×１０^５細胞／ウェルで播種した。５０μＬの３×連続希釈抗体をウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ _２で３０分間インキュベートした。次いで、完全培地中の５０μＬの３×刺激の組換えヒトＩＬ－４（Ｒ＆Ｄ ＳＹＳＴＥＭＳ）を、１０ｎｇ／ｍＬの最終濃度までウェルに添加した。プレートを３７℃、５％ＣＯ_２で４８時間インキュベートし、細胞を洗浄し、Ｈｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ６０５（商標）抗ヒトＣＤ１６３抗体、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ７８５（商標）抗ヒトＣＤ３３抗体、ＦＩＴＣ抗ヒトＣＤ３抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（登録商標）から）、ＣＤ２０モノクローナル抗体（２Ｈ７）ＰｅｒＣＰ－Ｃｙａｎｉｎｅ５．５、及びＣＤ２３モノクローナル抗体（ＥＢＶＣＳ２）、ＡＰＣ（ＴＨＥＲＭＯ ＦＩＳＨＥＲ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣから）を含有するＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、最終体積１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｄｙｅ、Ｓｙｔｏｘ（商標）ｂｌｕｅ（ＴＨＥＲＭＯ ＦＩＳＨＥＲ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）をウェルに添加し、試料をフローサイトメーター（ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）Ｘ－２０；ＢＤＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ）により分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いてデータ分析を行った。骨髄性細胞を、Ｓｙｔｏｘ（商標）ｂｌｕｅ、ＣＤ３、及びＣＤ２０陰性、ＣＤ３３陽性細胞として同定した。データは、骨髄細胞の幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）対３又は４ドナーのｌｏｇ（Ａｂ濃度）（平均±ＳＤ）のシグモイド曲線当てはめとして提示し、統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を使用して実施する。

【0166】

表１４並びに図６Ａ及び６Ｂの結果は、実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート及び抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１が、それぞれ１０．７５ｎＭ及び８．２７ｎＭのＩＣ_５０で骨髄細胞上のＩＬ－４（図６Ａ）誘導性ＣＤ２３発現を阻害したことを示す。更に、結果は、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、１０００ｎＭ（９４１のｇＭＦＩ）での非コンジュゲートＡｂ１と比較して、１０００ｎＭ、２５０ｎＭ、及び６３ｎＭ（それぞれ８４６２、５９８４、及び２３１７のｇＭＦＩ）でＣＤ１６３発現を有意に増加させたことを示した（図６Ｂ）。これは、例示された抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、Ａｂ１によって媒介されるＩＬ４Ｒ媒介応答を阻害し、同じ細胞内でＧＣ受容体媒介応答を誘導することができることを示し、抗体及びグルココルチコイドからの抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの二重機能性、並びに抗体による細胞へのＧＣの有効な送達を実証している。

【0167】

【表19】

【0168】

実施例４ｇ．Ｔｈ２分化Ｔ細胞におけるグルココルチコイド誘導性遺伝子発現の誘導：３つのグルココルチコイド受容体媒介遺伝子（Ｔｓｃ２２ｄ３、Ｆｋｂｐ５、及びＺｂｔｂ１６）及び１つのサイトカインの誘導及び発現を、２型炎症及び疾患に関与する細胞を代表するＴｈ２表現型にｅｘ ｖｉｖｏで分化させた初代ヒトＴ細胞において測定する。

【0169】

精製したナイーブＣＤ４ Ｔ細胞を抗ヒトＣＤ３（ＢｉｏＸＣｅｌｌ＃ＢＥ０００１－２）、抗ヒトＣＤ２８（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ＃３０２９３４）、抗ヒトＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ＃ＭＡＢ２８５－５００）、組換えヒトＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ＃２０２－ＩＬ－０５０／ＣＦ）、及び組換えヒトＩＬ－４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ＃６５０７－ＩＬ－１００／ＣＦ）と共に１４日間培養することによって、ヒトＴｈ２細胞をインビトロで分化させた。次いで、最終的に分化したＴｈ２細胞を、アッセイ前に１２時間、ＩＬ－４なしで静置させて、ＩＬ－４Ｒ表面発現を戻した。フローサイトメトリー染色を使用して、ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒで細胞純度を評価した。Ｔｈ２細胞を、ＣＤ４＋（抗ヒトＣＤ４－ｅＦｌｕｏｒ－４５０、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃４８－００４７－４２）、ＧＡＴＡ３＋（抗ヒトＧＡＴＡ３－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙａｎｉｎｅ５．５、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ＃６５３８１２）、及びＩＬ４Ｒ＋（抗ＩＬ－４Ｒα抗体－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ－６４７、Ｌｉｌｌｙ）で確認した。１×１０^６個のＴｈ２細胞／ウェルを１００ｎＭのＩＬ４Ｒ－ＧＣ Ａｂ１で処理し、ヒトＴ活性化因子ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃１１１３２Ｄ）で３７℃にて２４時間刺激した。各アッセイ条件からの細胞をＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ＃７９２１６）中で溶解し、－８０℃で凍結させた。次いで、Ｒｎｅａｓｙ ９６ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ＃７４１８１）を製造業者のプロトコルに従って使用して、ＲＮＡを単離した。データは、アッセイ条件（ｎ＝４）当たり４つの技術的再現の代表である。

【0170】

製造業者が推奨するプロトコルに従って、カスタム遺伝子パネル（表１５）を有するＮａｎｏＳｔｒｉｎｇプラットフォームを使用して、遺伝子発現レベルを決定した。インビトロ培養物から単離されたＲＮＡを、Ｃｙｔａｔｉｏｎ５（Ｂｉｏｔｅｋ）プラットフォーム上でＯＤ_２６０測定を使用して定量した。ＲＮＡをＲｎａｓｅフリー水中で２０ｎｇ／μｌに希釈し、合計１００ｎｇ（５μｌ中）を使用してＮａｎｏＳｔｒｉｎｇカートリッジを調製した。製造業者が推奨するデータ処理方法に従って、ｎＳｏｌｖｅｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェア（バージョン２．０．１１５）を使用して、生のｍＲＮＡカウントを正規化した。全てのｍＲＮＡカウントを、最初に、サンプル内結合密度対照に対してスケーリングし、次いで、実験遺伝子を、ハウスキーピング遺伝子指標に対して更に正規化し、続いて、全データセットについて動的ハウスキーピング遺伝子選択を行い、ハウスキーパー分散を最小化した。正規化された遺伝子カウントをＬｏｇ２スケールに変換し、実験処置群の相対発現を、「処置なし」群の平均Ｌｏｇ２発現を差し引くことによって決定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を用いて統計分析を行う。結果は、処理群＋ＳＤ内の各遺伝子について、各再現についての非処理群の再現の平均に対して正規化された平均ｌｏｇ２発現として報告される（全ての群についてｎ＝４）。正規化された値に対して二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して差を評価し、多重比較のためにボンフェローニ補正を使用して、ｐ＜０．００１の有意水準で、未処置群に対する比較を評価する。

【0171】

表１６の結果は、実施例１ｂの抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、Ｔｈ２分化Ｔ細胞において、グルココルチコイド受容体媒介遺伝子Ｔｓｃ２２ｄ３（２．９６倍上昇、ｐ値＜０．００１）、Ｆｋｂｐ５（１．８１倍上昇、ｐ値＜０．００１）、Ｚｂｔｂ１６（１．２９倍上昇、ｐ値＜０．００３）のｍＲＮＡ発現を誘導し、そしてサイトカインＩＬ－５のｍＲＮＡ発現を２．２９倍（ｐ値＜０．０００１）減少させたことを示す。これは、抗ヒトＩＬ４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、ＧＣ／ＧＲ媒介性遺伝子調節を誘導し得、そして２型炎症及び疾患に関与する細胞を代表する細胞内のＩＬ－５発現を減少させ得ることを示す。

【0172】

【表20】

【0173】

【表21】

【0174】

実施例４ｈ．ヒトＰＢＭＣからのサイトカイン分泌の阻害：室温で３０分間、４００×ｇで遠心分離したフィコール層血液からＰＢＭＣを単離した。ＰＢＭＣ層を滅菌ＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）カタログ番号１００４１ＣＶ）で洗浄し、４℃、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。赤血球を、細胞ペレットを５ｍＬのＡＣＫ溶解緩衝液（ＧＩＢＣＯカタログ番号Ａ１０４９２０１）に細胞ペレットを再懸濁し室温で５分間インキュベートすることによって溶解する。ＲＢＣ溶解後、細胞を洗浄し、温めた完全培地（１０％ＦＢＳ、１％ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液、１％ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）溶液、並びに１％ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）及びＧｉｂｃｏ（商標）からの０．１％β－メルカプトエタノールを含むＲＰＭＩ－１６４０）中に１×１０^６細胞／ｍＬで洗浄し再懸濁する。細胞を１×１０^６細胞／ウェルで９６ウェル平底プレート中に播種する。５０μＬの４×対照ＩｇＧ、抗ヒトＩＬ４ＲαＡｂ１、実施例１ｂの抗ヒトＩＬ４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート、又はＧＣ１単独（９点曲線のために最終濃度１００ｎＭを３倍段階希釈したもの）をウェルに加える。次に、完全培地中の４０μｇ／ｍＬのＰＨＡ－Ｍ（フィトヘマグルチニン、Ｍ型；ＬＩＦＥ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ）及び４００ｎｇ／ｍＬのＰＭＡ（ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート；ＴＯＣＲＩＳ）からなる５０μＬの４×刺激カクテルをウェルに添加する。プレートを、４８時間、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートする。インキュベーション期間の後、プレートを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離し、上清の上部１００μＬを取り除き、サイトカイン検出を行う準備ができるまで－８０℃で保存する。サイトカイン放出は、Ｕ－ＰＬＥＸ Ｃｕｓｔｏｍ Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ［Ｈｕｍａｎ］Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ（ＭＥＳＯ ＳＣＡＬＥ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ）を製造業者のプロトコルに従って使用して検出する。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を用いて統計分析を行う。データは、各サイトカイン（ｎ＝２）についての個々のドナーの阻害率の平均対ｌｏｇ（Ａｂ濃度）のシグモイド曲線フィットとして提示し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を使用して統計分析を行う。

【0175】

表１７及び図７Ａ～Ｃの結果は、実施例１ｂの抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、ＩＬ－４Ｒ媒介サイトカイン分泌及びグルココルチコイド受容体媒介サイトカイン分泌の両方を有意に阻害したことを示す。抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートは、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１と同様にＭＤＣ分泌を阻害した（１００ｎＭでそれぞれ７９．７％及び７４．７％）。抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートは、Ａｂ１単独よりも確実にＧＭ－ＣＳＦ分泌を阻害した（１００ｎＭでそれぞれ７７．６％及び４０．９％、図４Ｂ）。更に、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート及びＧＣ１ペイロードは、ＩＬ－５分泌を１００ｎＭでそれぞれ７８．５％及び９７．４％阻害したが（図４Ｃ）、Ａｂ１は効果を有さなかった（１００ｎＭで約１３．３％）。このデータは、ＩＬ－４Ｒ依存性及びＩＬ－４Ｒ非依存性サイトカイン分泌の両方を阻害する際の抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの二重機能性を実証する。これは、抗体単独と比較した場合、サイトカイン阻害における抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの更なる機能性及び改善された有効性を実証する。

【0176】

【表22】

【0177】

実施例５．実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体ＧＣコンジュゲートのエフェクター機能及びＦｃγ受容体結合
実施例５ａ．ヒトＦｃγ受容体結合。実施例１ｂの例示的な抗ＩＬ－４ＲαＧＣコンジュゲート及び抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体のヒトＦｃγ受容体に対する結合親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析によって評価した。シリーズＳ ＣＭ５チップ（Ｃｙｔｉｖａ Ｐ／Ｎ ＢＲ１００５３０）は、製造者のＥＤＣ／ＮＨＳアミンカップリング法（Ｃｙｔｉｖａ Ｐ／Ｎ ＢＲ１０００５０）を使用して準備した。要約すると、ＥＤＣ／ＮＨＳの１：１混合物を１０μＬ／分で７分間注入することによって４つ全てのフローセル（ＦＣ）の表面を活性化させた。タンパク質Ａ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ Ｐ／Ｎ ５３９２０２）を、ｐＨ４．５の１０ｍＭの酢酸緩衝液で１００μｇ／ｍＬまで希釈し、１０μＬ／分の流速で７分間の注入によって４つ全てのＦＣ上に約４０００ＲＵまで固定化した。未反応部位を、１０μＬ／分で７分間のエタノールアミンの注入によってブロッキングした。ｐＨ１．５の２×１０μＬのグリシン注入を使用して、非共有付随タンパク質を除去した。ランニングバッファーは１ｘＨＢＳ－ＥＰ＋（ＴＥＫＮＯＶＡ、Ｐ／Ｎ Ｈ８０２２）であった。ＦｃγＲ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）－ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ＿１３１Ｒ、及びＦｃγＲＩＩＡ＿１３１Ｈ（ＣＤ３２ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ＿１５８Ｖ、ＦｃγＲＩＩＩＡ＿１５８Ｆ（ＣＤ１６ａ）、及びＦｃγＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）を、安定したＣＨＯ細胞発現から生成し、ＩｇＧセファロース及びサイズ排除クロマトグラフィを使用して精製した。ＦｃγＲＩ結合のために、抗体をランニングバッファー中で２．５μｇ／ｍＬに希釈し、ＦＣ２～４で約１５０ＲＵの各抗体を捕捉した（ＲＵ捕捉）。ＦＣ１は参照ＦＣであったため、ＦＣ１では抗体が捕捉されなかった。ＦｃγＲＩ ＥＣＤをランニングバッファー中で２００ｎＭまで希釈し、次いで、ランニングバッファー中で２倍連続希釈して０．７８ｎＭにした。各濃度の２連注入は、全てのＦＣに４０μＬ／分で１２０秒間注入され、その後１２００秒の解離フェーズが続いた。再生を、ｐＨ１．５の１０ｍＭのグリシン１５μＬを３０μＬ／分で全てのＦＣに注入することによって実施した。参照減算データをＦＣ２ ＦＣ１、ＦＣ３－ＦＣ１、及びＦＣ４－ＦＣ１として収集し、測定値を２５℃で得た。親和性（Ｋ_Ｄ）を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２ Ｂｉａｃｏｒｅ評価ソフトウェアを用いた定常状態平衡分析又はＢＩＡ評価の「１：１（ラングミュア）結合」モデルのいずれかを使用して計算した。ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、及びＦｃγＲＩＩＩａの結合では、抗体をランニングバッファー中で５μｇ／ｍＬに希釈し、約５００ＲＵの各抗体をＦＣ２～４で捕捉した）。ＦＣ１は、参照ＦＣであった。Ｆｃγ受容体ＥＣＤをランニングバッファー中で１０μＭに希釈し、次いで、ランニングバッファー中で２倍連続希釈して３９ｎＭにした。各濃度の２連注入は、全てのＦＣに４０μＬ／分で６０秒間注入され、その後１２０秒の解離フェーズが続いた。再生を、ｐＨ１．５の１０ｍＭのグリシン１５μＬを３０μＬ／分で全てのＦＣに注入することによって実施した。参照減算データをＦＣ２－ＦＣ１、ＦＣ３－ＦＣ１、及びＦＣ４－ＦＣ１として収集し、測定値を２５℃で得た。親和性（Ｋ_Ｄ）を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２ Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）評価ソフトウェアを用いた定常状態平衡分析を使用して計算した。各受容体を少なくとも２回アッセイした。

【0178】

表１８Ａの結果は、実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、及びＦｃγＲＩＩＩａ受容体ＥＣＤに対する結合親和性（Ｋ_Ｄ）を示す。

【0179】

表１８Ｂの結果は、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、及びＦｃγＲＩＩＩａ受容体ＥＣＤに対する例示された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体Ａｂ１及びＡｂ７の結合親和性（Ｋ_Ｄ）を要約している。

【0180】

【表23】

【0181】

【表24】

【0182】

実施例５ｂ．抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）：実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートのインビトロＡＤＣＣアッセイを、レポーター遺伝子に基づくＡＤＣＣアッセイで評価した。簡潔には、標的細胞株としてヒトＩＬ－４Ｒα及びヒトＣＤ２０を発現するＤａｕｄｉ細胞（ＡＴＣＣ、＃ＣＣＬ－２１３）、並びにエフェクター細胞株として機能的ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃを発現するＪｕｒｋａｔ細胞（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）を使用した。全ての試験分子及び細胞を、０．１ｍＭ非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、５００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン、及び０．１％ｗ／ｖ ＢＳＡを含むＲＰＭＩ－１６４０（フェノールレッドなし）を含有するアッセイ培地中で希釈した。試験抗体を、まず３０ｎＭの３×濃度に希釈し、次いで、１：４の比で７回連続希釈した。５０μＬ／ウェルの各分子を、白色不透明底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、＃３９１７）に三連で分注した。ＣＤ２０抗体を陽性対照として使用した。次いで、Ｄａｕｄｉ標的細胞を５０μＬアリコート中５×１０^４細胞／ウェルでプレートに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次に、Ｊｕｒｋａｔ Ｖ１５８細胞をウェルに５０μＬアリコート中１．５×１０ ^５ 細胞／ウェルで添加し、３７℃で４時間インキュベートし、続いて１００μＬ／ウェルのＯｎｅ－Ｇｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｅ８１３０）を添加した。プレートシェーカーを低速で用いてプレートの内容物を混合し、室温で５分間インキュベートし、０．２ｃｐｓの積分を用いてＢｉｏＴｅｋマイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で発光シグナルを読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を使用してデータを分析し、各抗体濃度についての相対発光単位（ＲＬＵ）を、抗体濃度対ＲＬＵの散乱フォーマットでプロットした。結果は、２つの独立した実験の代表であった。

【0183】

図８の結果は、実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートが、陽性対照と比較した場合、ＡＤＣＣ活性を欠くか、又はＡＤＣＣ活性を有さなかったことを示す。同様に、例示された抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１、Ａｂ４、及びＡｂ７についての代表的な結果（図示せず）は、抗体が、陽性対照と比較した場合に、有意なＡＤＣＣ活性を欠くか又は有さないことを示した。

【0184】

実施例５ｃ．補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）：Ｄａｕｄｉ細胞（ＡＴＣＣ、＃ＣＣＬ－２１３）を使用して、例示した抗体のインビトロＣＤＣアッセイを行った。全ての試験抗体、補体、及び細胞を、０．１ｍＭ非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、５００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン、及び０．１％ｗ／ｖ ＢＳＡを含むＲＰＭＩ－１６４０（フェノールレッドなし）からなるアッセイ培地で希釈した。試験抗体を、まず６００ｎＭの３×濃度に希釈し、次いで１：４の比で７回連続希釈した。５０μＬ／ウェルの各抗体（ＣＤ２０陽性対照抗体を含む）を、白色不透明底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、＃３９１７）に三連で分注した。Ｄａｕｄｉ標的細胞を５×１０^４細胞／ウェル、５０μＬ／ウェルで添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次に、３７℃の水浴中で迅速に解凍したヒト血清補体（Ｑｕｉｄｅｌ、＃Ａ１１３）をアッセイ培地中で１：６に希釈し、５０μＬ／ウェルでアッセイプレートに添加した。プレートを３７℃で２時間インキュベートし、続いて１００μＬ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｇ７５７１）を添加した。プレートシェーカーを低速で用いてプレートの内容物を混合し、室温で５分間インキュベートし、０．２ｃｐｓの積分を用いてＢｉｏＴｅｋマイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で発光シグナルを読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を使用してデータを分析し、各抗体濃度についての相対発光単位（ＲＬＵ）を、抗体濃度対ＲＬＵの散乱フォーマットでプロットした。結果は、２つの独立した実験の代表である。

【0185】

図９の結果は、実施例１ｂの例示的なＩＬ－４ＲαＡｂＧＣコンジュゲートが、陽性対照と比較してＣＤＣ応答を誘発しないことを示す。同様に、例示された抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１、Ａｂ４、及びＡｂ７についての代表的な結果（図示せず）は、抗体が、陽性対照と比較した場合、ＣＤＣ応答を誘発しなかったことを示した。

【0186】

実施例６．実施例１ｂの抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの生物物理学的特性
実施例１ｂの例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの生物物理学的特性を、開発可能性について評価した。

【0187】

実施例６ａ．熱安定性：示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、例示した抗体の熱変性に対する安定性を評価した。ＰＢＳ、ｐＨ７．２緩衝液、酢酸塩、ｐＨ５及びヒスチジン、ｐＨ６中の抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの融解開始温度（Ｔｏｎｓｅｔ）及び熱融解温度（ＴＭ１及びＴＭ２）を得た（表１９）。各ドメインについての熱転移温度は十分に解明されなかったが、表１９及び図１０Ａ～Ｃのデータは、例示したリンカー－ペイロードの、例示したもの上の４つの操作されたシステインへのコンジュゲーションが、許容される熱安定性をもたらしたことを示す。

【0188】

実施例６ｂ．温度ストレス時の凝集：例示的な抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートの経時的な溶液安定性を、賦形剤を含む一般的な５ｍＭヒスチジンｐＨ６．０緩衝液中、およそ１００ｍｇ／ｍＬで評価する。濃縮試料を５℃及び３５℃で、それぞれ４週間の期間にわたってインキュベートした。インキュベーション後、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）を使用して、高分子量（％ＨＭＷ）種のパーセンテージについて分析した。表２０の結果は、Ａｂ１上の４つの操作されたシステインへの例示的なリンカー－ペイロードのコンジュゲーションが、３５℃で４週間の期間にわたって抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートについて許容可能なレベルの凝集をもたらすことを示す。

【0189】

【表25】

【0190】

【表26】

【0191】

実施例７．実施例１ｂの抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートのインビボ機能
完全ヒト化マウスモデルのＩＶ型過敏症におけるインビボ有効性：接触過敏症のヒト化マウスモデルを使用して、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１のインビボ活性を決定した。

【0192】

骨髄系列発生を支持するためにヒトＧＭ－ＣＳＦ及びヒトＩＬ－３を発現する免疫不全ＮＯＧマウス（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ、Ｔａｃｏｎｉｃ）に、ヒト臍帯血から単離されたヒトＣＤ３４＋造血幹細胞を６週齢で移植した。幹細胞投与の２０～２４週間後、マウスを十分なヒトＣＤ４５生着（血液中＞２５％）について評価し、オキサゾロン誘導性接触過敏症プロトコルに供した。０日目に、体重によってグループ分けされたマウスに、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート（ｎ＝８）、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１（ｎ＝８）、又は対照ヒトＩｇＧ４Ｐ抗体（ｎ＝８）のいずれかを１０ｍｇ／ｋｇで皮下（ＳＣ）投与した。ＧＣ単独（ｎ＝６）を、感作及び各チャレンジの２４時間前に０．１５ｍｇ／ｋｇ ＳＣで投与した。１日目に、マウスを５％のイソフルランで麻酔し、それらの腹部を剃毛し、エタノール中の３％のオキサゾロン１００μＬを剃毛領域に塗布した。６日目にマウスに同じ用量で再び投与し、麻酔し、次いで投与の２４時間後にエタノール中２％オキサゾロンを両耳（１０μＬ／側／耳）にチャレンジした。用量チャレンジパラダイムを、合計３回のチャレンジについて毎週繰り返した。炎症応答を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ電子キャリパーを使用して、各チャレンジの前及び２４時間後の耳の厚さの差によって決定した。群間のＰ値を、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙの事後検定によって計算し、＜０．０５（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）であれば有意とみなした。

【0193】

表２１の結果は、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲート実施例１ｂが、チャレンジ２及び３後の全ての他の処置と比較して、ハプテン誘導性接触過敏症に対するインビボ炎症反応を有意に阻害することができたことを示す。アイソタイプ対照と比較して、ＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートは、チャレンジ２及び３についてそれぞれ８０％及び７８％炎症を減少させた。加えて、Ａｂ１は、アイソタイプと比較してチャレンジ２後の炎症を有意に阻害しただけであったが（４０％減少）、非コンジュゲートＡｂ１での活性に向かう傾向があった。更に、Ａｂ１ＧＣコンジュゲートと同等の用量及びパラダイムを使用したＧＣ処置は、インビボ活性がＡｂ１ＧＣコンジュゲートに起因することを示すモデルにおいて無効であった。これらの結果は、抗ヒトＩＬ－４ＲαＡｂ１ＧＣコンジュゲートがグルココルチコイドを炎症組織に効果的に送達し、ヒト化マウスモデルにおけるＩＶ型過敏性反応に関連する生物学的効果を有意に抑止したことを示し、この抗炎症応答がヒト対象において誘発され得ることを示している。

【0194】

【表27】

^＊ｐ＜０．０５対アイソタイプ；ＡＮＯＶＡ Ｔｕｋｅｙ；＾ｐ＜０．０１対全て；ＡＮＯＶＡ Ｔｕｋｅｙ
本発明は、以下の実施形態を包含する。
［実施形態１］
式：

【化41】

（式中、Ａｂは、ヒトＩＬ－４Ｒαに結合する抗体であり、
式中、

【化42】

であり、ｎは１～５である）のコンジュゲート。
［実施形態２］
Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１、４２、又は１９を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２又は２０を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４又は２２を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６又は２４を含む、実施形態１に記載のコンジュゲート。
［実施形態３］

【化43】

である、実施形態１に記載のコンジュゲート。
［実施形態４］

【化44】

である、実施形態１に記載のコンジュゲート。
［実施形態５］

【化45】

である、実施形態１又は３に記載のコンジュゲート。
［実施形態６］

【化46】

である、実施形態１又は４に記載のコンジュゲート。
［実施形態７］

【化47】

である、実施形態１又は３に記載のコンジュゲート。
［実施形態８］

【化48】

である、実施形態１又は３に記載のコンジュゲート。
［実施形態９］

【化49】

である、実施形態１又は４に記載のコンジュゲート。
［実施形態１０］

【化50】

である、実施形態１又は４に記載のコンジュゲート。
［実施形態１１］
前記Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、実施形態１～１０のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態１２］
前記ＶＨが配列番号７を含み、前記ＶＬが配列番号８を含む、実施形態１１に記載のコンジュゲート。
［実施形態１３］
前記Ａｂが、
ｉ．配列番号９を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｉｉ．配列番号５０を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｉｉｉ．配列番号３７を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｉｖ．配列番号３１を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｖ．配列番号３５を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｖｉ．配列番号３３を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、
ｖｉｉ．配列番号１３を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、又は
ｖｉｉｉ．配列番号５２を含む重鎖（ＨＣ）及び配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）、を含む実施形態１１～１２のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態１４］
前記Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号４２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、実施形態１～１０のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態１５］
前記ＶＨが配列番号４４を含み、前記ＶＬが配列番号４５を含む、実施形態１４に記載のコンジュゲート。
［実施形態１６］
前記Ａｂが、配列番号４６を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号４７を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む、実施形態１４～１５のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態１７］
前記Ａｂが、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１９を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２０を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４を含む、実施形態１～１０のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態１８］
前記ＶＨが配列番号２５を含み、前記ＶＬが配列番号２６を含む、実施形態１７に記載のコンジュゲート。
［実施形態１９］
前記Ａｂが、配列番号２７を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号２８を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む、実施形態１７～１８のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２０］
前記Ａｂが重鎖と軽鎖とを含み、前記重鎖が、
アミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）におけるシステイン、
アミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）におけるシステイン、又は
アミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）のシステイン及びアミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）のシステイン、を含む実施形態１～１２、１４～１５、１７～１８のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２１］
前記Ａｂが重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣがヒトＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１～１２、１４～１５、１７～１８のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２２］
前記Ａｂが重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣがヒトＩｇＧ１アイソタイプである、実施形態１～１２、１４～１５、１７～１８のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２３］
ｎが、２～５である、実施形態１～２２のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２４］
ｎが、３～５である、実施形態１～２２のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２５］
ｎが、３～４である、実施形態１～２２のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２６］
ｎが、約４である、実施形態１～２２のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２７］
ｎが、約３である、実施形態１～２２のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２８］
ｎが、約２である、実施形態１～２２のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態２９］
実施形態１～２８のいずれか一つに記載のコンジュゲート又はその薬学的に許容される塩、及び１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含む、医薬組成物。
［実施形態３０］
炎症性疾患の治療を必要とする対象において、それを治療する方法であって、前記対象に、有効量の実施形態１～２８に記載のコンジュゲート又は実施形態２９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
［実施形態３１］
前記炎症性疾患が、２型炎症性疾患である、実施形態３０に記載の方法。
［実施形態３２］
前記２型炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、又は慢性自発性蕁麻疹（ＣＳＵ）から選択される、実施形態３１に記載の方法。
［実施形態３３］
前記２型炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎である、実施形態３２に記載の方法。
［実施形態３４］
療法における使用のための、実施形態１～２８のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態３５］
炎症性疾患の治療に使用するための、実施形態１～２８のいずれか一つに記載のコンジュゲート又は実施形態２９に記載の医薬組成物。
［実施形態３６］
前記炎症性疾患が２型炎症性疾患である、実施形態３５に記載の使用のためのコンジュゲート又は医薬組成物。
［実施形態３７］
前記２型炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、又は慢性自発性蕁麻疹（ＣＳＵ）から選択される、実施形態３６に記載の使用のためのコンジュゲート又は医薬組成物。
［実施形態３８］
前記２型炎症性疾患がアトピー性皮膚炎である、実施形態３７に記載の使用のためのコンジュゲート又は医薬組成物。
［実施形態３９］
炎症性疾患の治療用薬剤の製造における、実施形態１～２８のいずれか一つに記載のコンジュゲート又は実施形態２９に記載の医薬組成物の使用。
［実施形態４０］
前記炎症性疾患が２型炎症性疾患である、実施形態３９に記載の使用。
［実施形態４１］
前記２型炎症性疾患は、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ症、喘息、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）、アレルギー性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、又は慢性自発性蕁麻疹（ＣＳＵ）から選択される、実施形態４０に記載の使用。
［実施形態４２］
前記２型炎症性疾患は、アトピー性皮膚炎である、実施形態４１に記載の使用。
［実施形態４３］
前記Ａｂが、ヒトＩＬ－４Ｒαを中和する、実施形態１～２８のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態４４］
前記Ａｂが、ヒトＩＬ－４のヒトＩＬ－４Ｒαへの結合を阻害する、実施形態１～２８のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態４５］
前記Ａｂが、ヒトＩＬ－１３のヒトＩＬ－４Ｒαへの結合を阻害する、実施形態１～２８のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態４６］
前記Ａｂが、内在化抗体である、実施形態１～２８のいずれか一つに記載のコンジュゲート。
［実施形態４７］
コンジュゲートを生成する方法であって、前記コンジュゲートが、実施形態１～２８のいずれか一つに記載のコンジュゲートを含む、方法。
［実施形態４８］
（ａ）前記抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を還元剤で還元して、還元された抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体を生成する工程であって、前記抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体が、１つ以上の操作されたシステイン残基を含む、工程と、
（ｂ）前記還元された抗ヒトＩＬ－４Ｒα抗体を酸化剤で酸化して、酸化された抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体を生成する工程と、
（ｃ）前記酸化された抗ヒトＩＬ－４Ｒ抗体を式

【化51】

の化合物と接触させて前記コンジュゲートを生成する工程と、を含む実施形態４７に記載の方法。
［実施形態４９］
前記還元剤がジチオスレイトールであり、前記酸化剤がデヒドロアスコルビン酸である、実施形態４８に記載の方法。

【0195】

配列表
Ａｂ１
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号４ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＷＳＳＹＰＲＴ
配列番号７ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号９ Ａｂ１に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号１０ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１１ Ａｂ１に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＴＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号１２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ２
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号４ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＷＳＳＹＰＲＴ
配列番号７ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号５０ Ａｂ２に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＧＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号１０ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号５１ Ａｂ２に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＴＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号１２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ３
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号４ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＷＳＳＹＰＲＴ
配列番号７ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号３７ Ａｂ３に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号１０ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３８ Ａｂ３に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＴＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号１２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ４
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号４ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＷＳＳＹＰＲＴ
配列番号７ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号３１ Ａｂ４に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号１０ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３２ Ａｂ４に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＴＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号１２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ５
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号４ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＷＳＳＹＰＲＴ
配列番号７ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号３５ Ａｂ５に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号１０ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３６ Ａｂ５に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＴＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号１２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ６
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号４ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＷＳＳＹＰＲＴ
配列番号７ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号３３ Ａｂ６に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３４ Ａｂ６に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＴＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＧＣＣＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号１２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ７
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号４ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＷＳＳＹＰＲＴ
配列番号７ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１３ Ａｂ７に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１４ Ａｂ７に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＴＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＡＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＧＣＣＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号１２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ８
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号４ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＷＳＳＹＰＲＴ
配列番号７ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号５２ Ａｂ８に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＡＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号５３ Ａｂ８に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＴＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＡＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＧＣＣＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号１２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ９
配列番号４２ Ａｂ９に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号２２ Ａｂ９及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、及びＡｂ９に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＷＳＳＹＰＲＴ
配列番号４４ Ａｂ９に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４５ Ａｂ９に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号４６ Ａｂ９に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＨＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＶＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号４７ Ａｂ９に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＷＳＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４８ ４８に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＡＴＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号４９ Ａｂ９に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ１０
配列番号１９ Ａｂ１０に対するＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＡＳＧＦＴＦＳＩＳＳＭＮ
配列番号２０ Ａｂ１０に対するＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＩＳＲＡＴＧＡＩＹ
配列番号３ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＰＶＦＤＹ
配列番号２２ Ａｂ９及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、及びＡｂ１０に対するＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号２４ Ａｂ１０に対するＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＬＱＨＮＳＹＰＲＴ
配列番号２５ Ａｂ１０に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２６ Ａｂ１０に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２７ Ａｂ１０に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＳＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＲＡＴＧＡＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＮＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号２８ Ａｂ１０に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＡＭＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＶＰＴＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２９ Ａｂ１０に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＴＣＴＣＴＡＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＡＣＡＴＴＡＧＴＣＧＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＡＴＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＧＧＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号３０ Ａｂ１０に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＣＴＡＣＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＣＡＴＡＡＴＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＣＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
配列番号１５ヒトＩＬ－４Ｒα細胞外ドメイン
ＭＫＶＬＱＥＰＴＣＶＳＤＹＭＳＩＳＴＣＥＷＫＭＮＧＰＴＮＣＳＴＥＬＲＬＬＹＱＬＶＦＬＬＳＥＡＨＴＣＩＰＥＮＮＧＧＡＧＣＶＣＨＬＬＭＤＤＶＶＳＡＤＮＹＴＬＤＬＷＡＧＱＱＬＬＷＫＧＳＦＫＰＳＥＨＶＫＰＲＡＰＧＮＬＴＶＨＴＮＶＳＤＴＬＬＬＴＷＳＮＰＹＰＰＤＮＹＬＹＮＨＬＴＹＡＶＮＩＷＳＥＮＤＰＡＤＦＲＩＹＮＶＴＹＬＥＰＳＬＲＩＡＡＳＴＬＫＳＧＩＳＹＲＡＲＶＲＡＷＡＱＣＹＮＴＴＷＳＥＷＳＰＳＴＫＷＨＮＳＹＲＥＰＦＥＱＨ
配列番号１６カニクイザルＩＬ－４Ｒα細胞外ドメイン
ＭＫＶＬＱＥＰＴＣＶＳＤＹＭＳＩＳＴＣＥＷＫＭＧＧＰＴＮＣＳＡＥＬＲＬＬＹＱＬＶＦＱＳＳＥＴＨＴＣＶＰＥＮＮＧＧＶＧＣＶＣＨＬＬＭＤＤＶＶＳＭＤＮＹＴＬＤＬＷＡＧＱＱＬＬＷＫＧＳＦＫＰＳＥＨＶＫＰＲＡＰＧＮＬＴＶＨＴＮＶＳＤＴＶＬＬＴＷＳＮＰＹＰＰＤＮＹＬＹＮＤＬＴＹＡＶＮＩＷＳＥＮＤＰＡＹＳＲＩＨＮＶＴＹＬＫＰＴＬＲＩＰＡＳＴＬＫＳＧＩＳＹＲＡＲＶＲＡＷＡＱＨＹＮＴＴＷＳＥＷＳＰＳＴＫＷＹＮＳＹＲＥＰＦＥＱＲ
配列番号１７ヒトＩＬ－４
ＭＧＬＴＳＱＬＬＰＰＬＦＦＬＬＡＣＡＧＮＦＶＨＧＨＫＣＤＩＴＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＴＬＣＴＥＬＴＶＴＤＩＦＡＡＳＫＮＴＴＥＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹＳＨＨＥＫＤＴＲＣＬＧＡＴＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧＬＮＳＣＰＶＫＥＡＮＱＳＴＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣＳＳ
配列番号１８ヒトＩＬ－１３
ＭＨＰＬＬＮＰＬＬＬＡＬＧＬＭＡＬＬＬＴＴＶＩＡＬＴＣＬＧＧＦＡＳＰＧＰＶＰＰＳＴＡＬＲＥＬＩＥＥＬＶＮＩＴＱＮＱＫＡＰＬＣＮＧＳＭＶＷＳＩＮＬＴＡＧＭＹＣＡＡＬＥＳＬＩＮＶＳＧＣＳＡＩＥＫＴＱＲＭＬＳＧＦＣＰＨＫＶＳＡＧＱＦＳＳＬＨＶＲＤＴＫＩＥＶＡＱＦＶＫＤＬＬＬＨＬＫＫＬＦＲＥＧＲＦＮ
配列番号３９ヒトＩＬ－４Ｒα
ＭＧＷＬＣＳＧＬＬＦＰＶＳＣＬＶＬＬＱＶＡＳＳＧＮＭＫＶＬＱＥＰＴＣＶＳＤＹＭＳＩＳＴＣＥＷＫＭＮＧＰＴＮＣＳＴＥＬＲＬＬＹＱＬＶＦＬＬＳＥＡＨＴＣＩＰＥＮＮＧＧＡＧＣＶＣＨＬＬＭＤＤＶＶＳＡＤＮＹＴＬＤＬＷＡＧＱＱＬＬＷＫＧＳＦＫＰＳＥＨＶＫＰＲＡＰＧＮＬＴＶＨＴＮＶＳＤＴＬＬＬＴＷＳＮＰＹＰＰＤＮＹＬＹＮＨＬＴＹＡＶＮＩＷＳＥＮＤＰＡＤＦＲＩＹＮＶＴＹＬＥＰＳＬＲＩＡＡＳＴＬＫＳＧＩＳＹＲＡＲＶＲＡＷＡＱＣＹＮＴＴＷＳＥＷＳＰＳＴＫＷＨＮＳＹＲＥＰＦＥＱＨＬＬＬＧＶＳＶＳＣＩＶＩＬＡＶＣＬＬＣＹＶＳＩＴＫＩＫＫＥＷＷＤＱＩＰＮＰＡＲＳＲＬＶＡＩＩＩＱＤＡＱＧＳＱＷＥＫＲＳＲＧＱＥＰＡＫＣＰＨＷＫＮＣＬＴＫＬＬＰＣＦＬＥＨＮＭＫＲＤＥＤＰＨＫＡＡＫＥＭＰＦＱＧＳＧＫＳＡＷＣＰＶＥＩＳＫＴＶＬＷＰＥＳＩＳＶＶＲＣＶＥＬＦＥＡＰＶＥＣＥＥＥＥＥＶＥＥＥＫＧＳＦＣＡＳＰＥＳＳＲＤＤＦＱＥＧＲＥＧＩＶＡＲＬＴＥＳＬＦＬＤＬＬＧＥＥＮＧＧＦＣＱＱＤＭＧＥＳＣＬＬＰＰＳＧＳＴＳＡＨＭＰＷＤＥＦＰＳＡＧＰＫＥＡＰＰＷＧＫＥＱＰＬＨＬＥＰＳＰＰＡＳＰＴＱＳＰＤＮＬＴＣＴＥＴＰＬＶＩＡＧＮＰＡＹＲＳＦＳＮＳＬＳＱＳＰＣＰＲＥＬＧＰＤＰＬＬＡＲＨＬＥＥＶＥＰＥＭＰＣＶＰＱＬＳＥＰＴＴＶＰＱＰＥＰＥＴＷＥＱＩＬＲＲＮＶＬＱＨＧＡＡＡＡＰＶＳＡＰＴＳＧＹＱＥＦＶＨＡＶＥＱＧＧＴＱＡＳＡＶＶＧＬＧＰＰＧＥＡＧＹＫＡＦＳＳＬＬＡＳＳＡＶＳＰＥＫＣＧＦＧＡＳＳＧＥＥＧＹＫＰＦＱＤＬＩＰＧＣＰＧＤＰＡＰＶＰＶＰＬＦＴＦＧＬＤＲＥＰＰＲＳＰＱＳＳＨＬＰＳＳＳＰＥＨＬＧＬＥＰＧＥＫＶＥＤＭＰＫＰＰＬＰＱＥＱＡＴＤＰＬＶＤＳＬＧＳＧＩＶＹＳＡＬＴＣＨＬＣＧＨＬＫＱＣＨＧＱＥＤＧＧＱＴＰＶＭＡＳＰＣＣＧＣＣＣＧＤＲＳＳＰＰＴＴＰＬＲＡＰＤＰＳＰＧＧＶＰＬＥＡＳＬＣＰＡＳＬＡＰＳＧＩＳＥＫＳＫＳＳＳＳＦＨＰＡＰＧＮＡＱＳＳＳＱＴＰＫＩＶＮＦＶＳＶＧＰＴＹＭＲＶＳ
配列番号４０カニクイザルＩＬ－４Ｒα
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配列番号４１ヒトＣＤ２３
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【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【配列表】

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