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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-11-29
(45)【発行日】2024-12-09
(54)【発明の名称】ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体およびその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 19/00 20060101AFI20241202BHJP
C07K 16/30 20060101ALI20241202BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20241202BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241202BHJP
C12N 15/86 20060101ALI20241202BHJP
C12N 15/867 20060101ALI20241202BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241202BHJP
C12N 7/01 20060101ALI20241202BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241202BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20241202BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20241202BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20241202BHJP
【ＦＩ】
C07K19/00 ZNA
C07K16/30
C12N15/62 Z
C12N15/13
C12N15/86 Z
C12N15/867 Z
C12N5/10
C12N7/01
A61K39/395 N
A61K48/00
A61K35/76
A61P35/02
【請求項の数】
23
(21)【出願番号】P 2022529577
(86)(22)【出願日】2020-12-22
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-14
(86)【国際出願番号】 CN2020138257
(87)【国際公開番号】W WO2022120942
(87)【国際公開日】2022-06-16
【審査請求日】2022-05-19
(31)【優先権主張番号】202011461194.7
(32)【優先日】2020-12-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】522199217
【氏名又は名称】広州百▲ジ▼基因科技有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】李 光超
(72)【発明者】
【氏名】羅 敏
(72)【発明者】
【氏名】丁 ▲ブン▼
(72)【発明者】
【氏名】周 兆
(72)【発明者】
【氏名】王 学俊
【審査官】坂井田 京
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１８－５０４４５９（ＪＰ，Ａ）
【文献】Int J Mol Sci.，2017年10月27日，Vol.18, No.11 (2259)，pp.1-8
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １５／００ー１５／９０
Ｃ０７Ｋ １９／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
Ｇｏｏｇｌｅ／Ｇｏｏｇｌｅ Ｓｃｈｏｌａｒ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含み、前記抗原結合ドメインは抗ＣＬＬ１抗体である、
ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体であって、
前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７で示されるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８で示されるアミノ酸配列を含む、
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
【請求項2】
前記ヒンジ領域はＣＤ８αヒンジ領域を含む、請求項１に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
【請求項3】
前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通領域および／またはＣＤ２８膜貫通領域を含む、請求項１または２に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
【請求項4】
前記シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζを含む、請求項１から３のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
【請求項5】
前記シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＣＤ２８細胞内領域、ＤＡＰ１０、またはＯＸ４０のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを更に含む、
請求項４に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
【請求項6】
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体はシグナルペプチドを更に含む、
請求項１から５のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
【請求項7】
前記シグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドおよび／またはＩｇＧκ軽鎖シグナルペプチドを含む、
請求項６に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
【請求項8】
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１抗体、ＣＤ８αヒンジ領域、ＣＤ８α膜貫通領域、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζを含む、請求項１から７のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
【請求項9】
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４で示されるアミノ酸配列を含み、または前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項１から８のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体。
【請求項10】
請求項１から９のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体のコード遺伝子を含む、核酸分子。
【請求項11】
前記核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９で示される核酸配列を含み、または前記核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０で示される核酸配列を含み、または
前記核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１で示される核酸配列を含む、
請求項１０に記載の核酸分子。
【請求項12】
請求項１０または１１に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項13】
前記発現ベクターは、請求項１０または１１に記載の核酸分子を含むウイルスベクターまたは非ウイルスベクターであり、前記ウイルスベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターのいずれか１種を含み、
前記非ウイルスベクターは、Ｐｉｇｇｙｂａｃトランスポゾン系、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン系、またはナノベクターのいずれか１種を含む、
請求項１２に記載の発現ベクター。
【請求項14】
請求項１２または１３に記載の発現ベクターおよびヘルパープラスミドがトランスフェクションされた哺乳細胞で調製される、請求項１０または１１に記載の核酸分子を含む組換えレンチウイルス。
【請求項15】
請求項１から９のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を発現する、
キメラ抗原受容体の免疫細胞。
【請求項16】
前記キメラ抗原受容体の免疫細胞のゲノムに、請求項１０または１１に記載の核酸分子が組み込まれる、
請求項１５に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞。
【請求項17】
前記キメラ抗原受容体の免疫細胞は、請求項１２または１３に記載の発現ベクターおよび／または請求項１４に記載の組換えレンチウイルスを含む、
請求項１５または１６に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞。
【請求項18】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはマクロファージのいずれか１種を含む、
請求項１５から１７のいずれか１項に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞。
【請求項19】
前記Ｔ細胞は、αβΤ細胞および／またはγδΤ細胞を含む、請求項１８に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞。
【請求項20】
請求項１５から１９のいずれか１項に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞を含む、
医薬組成物。
【請求項21】
医薬的に許容されるベクター、賦形剤、または希釈剤のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを更に含む、
請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項22】
請求項１から９のいずれか１項に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体、請求項１０または１１に記載の核酸分子、請求項１２または１３に記載の発現ベクター、請求項１４に記載の組換えレンチウイルス、請求項１５から１９のいずれか１項に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞、または請求項２０または２１に記載の医薬組成物の、悪性腫瘍治療薬の調製における使用。
【請求項23】
前記悪性腫瘍は急性骨髄性白血病を含む、
請求項２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、生物医薬の技術分野に関し、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体およびその使用に関する。
【背景技術】
【0002】
Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ１）は、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２のメンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）とも呼ばれ、ＩＩ型膜貫通タンパク質である。研究によると、ＣＬＬ１は、造血細胞に制限的に発現し、主に、末梢血および骨髄中の骨髄系に由来する細胞を含み、例えば、単核細胞、樹状細胞、顆粒球およびほとんどの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞を含む。なお、ＣＬＬ１が末梢血および骨髄中の骨髄細胞に大量に発現するが、末梢組織中の骨髄系に由来する細胞に発現せず、例えば、組織マクロファージおよび組織樹状細胞にＣＬＬ１がいずれも発見しないことが分かった。研究によると、ＣＬＬ１がＡＭＬ幹細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－）およびごく一部の造血前駆細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３３＋）に発現するが、正常の造血幹細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３３－）に発現しないことが更に分かった。
【0003】
このような特殊な発現モードにより、ＣＬＬ１は、ＡＭＬを診断して治療する潜在的な標的点になることが期待されている。しかし、現在、ＣＬＬ１を標的とする免疫療法の報告は稀である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
本願は、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体およびその使用を提供し、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗 原受容体は、ＣＬＬ１に対して結合能力を有する抗ＣＬＬ１抗体を抗原結合ドメインとして採用し、精製されたまたは遊離したＣＬＬ１タンパク質と結合することができるだけでなく、更に細胞表面のＣＬＬ１タンパク質と結合することもでき、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞は、腫瘍治療分野で重要な応用の見通しを有する。
【課題を解決するための手段】
【0005】
態様１において、本願は、
抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含み、
前記抗原結合ドメインは抗ＣＬＬ１抗体である、
ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を提供する。
抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含み、
前記抗原結合ドメインは抗ＣＬＬ１抗体である、
ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を提供する。
【0006】
本願において、ＣＬＬ１に対して結合能力を有する抗ＣＬＬ１抗体をキメラ抗原受容体の抗原結合ドメインとして採用し、キメラ抗原受容体は、ＣＬＬ１陽性腫瘍細胞と特異的に結合してＣＬＬ１陽性腫瘍に対する特異的な標的作用を実現することができる。
【0007】
いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２で示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１を形成する。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＭＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＴＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＥＩＦＰＧＳＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＦＴＡＤＴＳＳＮＴＡ
ＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＨＹＣＡＲＧＧＴＹＮＤＹＳＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＲＬＬＩＦＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＭＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＴＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＥＩＦＰＧＳＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＦＴＡＤＴＳＳＮＴＡ
ＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＨＹＣＡＲＧＧＴＹＮＤＹＳＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＲＬＬＩＦＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。
【0008】
いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４で示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７を形成する。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＳＤＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＥＡＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＧＬＬＩＹＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＦＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＳＤＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＥＡＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＧＬＬＩＹＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＦＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。
【0009】
いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６で示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体２７Ｈ４を形成する。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＨＭＨＷＶＫＱＳＨＶＫＳＬＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６：
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＨＭＨＷＶＫＱＳＨＶＫＳＬＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６：
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ。
【0010】
いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７で示されるアミノ酸配列およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８～１０の１つで示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体Ｈ２７Ｈ４Ｌ１を形成し、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体Ｈ２７Ｈ４Ｌ２を形成し、あるいは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体Ｈ２７Ｈ４Ｌ３を形成する。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＨＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬ
ＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＨＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬ
ＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
【0011】
いくつかの具体的な実施形態において、前記抗原結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２で示されるアミノ酸配列を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２とは、連結ペプチドを介して連結されて抗ＣＬＬ１抗体１０７５．７を形成する。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１：
ＤＩＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＫＥＧＤＹＤＶＧＮＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２：
ＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＮＶＩＳＳＹＶＨＷＹＱＱＲＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＳＧＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１：
ＤＩＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＫＥＧＤＹＤＶＧＮＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２：
ＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＮＶＩＳＳＹＶＨＷＹＱＱＲＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＳＧＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬ。
【0012】
好ましくは、前記ヒンジ領域はＣＤ８αヒンジ領域を含む。
【0013】
好ましくは、前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通領域および／またはＣＤ２８膜貫通領域を含み、ＣＤ８α膜貫通領域であることが好ましい。
【0014】
好ましくは、前記シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζを含む。
【0015】
好ましくは、前記シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＣＤ２８細胞内領域、ＤＡＰ１０、またはＯＸ４０のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを更に含む。
【0016】
好ましくは、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体はシグナルペプチドを更に含む。
【0017】
好ましくは、前記シグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドおよび／またはＩｇＧκ軽鎖シグナルペプチドを含む。
【0018】
好ましい技術案として、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１抗体、ＣＤ８αヒンジ領域、ＣＤ８α膜貫通領域、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζを含む。
【0019】
いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は１９Ｃ１－ＣＡＲであり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＲＬＬＩＦＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＭＫＰＧＡＳ
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＲＬＬＩＦＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＭＫＰＧＡＳ
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【0020】
いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は２３Ｄ７－ＣＡＲであり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＧＬＬＩＹＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＦＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＰＧＳＤＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＥＡＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＧＬＬＩＹＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＦＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＰＧＳＤＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＥＡＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。
【0021】
いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は２７Ｈ４－ＣＡＲであり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＨＭＨＷＶＫＱＳＨＶＫＳＬＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＨＭＨＷＶＫＱＳＨＶＫＳＬＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。
【0022】
いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体はＨ２７Ｈ４－ＣＡＲであり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡ
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡ
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【0023】
いくつかの具体的な実施形態において、前記ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体は１０７５．７－ＣＡＲであり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７で示されるアミノ酸配列を含む。ここで、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＮＶＩＳＳＹＶＨＷＹＱＱＲＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＳＧＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＫＥＧＤＹＤＶＧＮＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＮＶＩＳＳＹＶＨＷＹＱＱＲＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＳＧＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＫＥＧＤＹＤＶＧＮＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊。
【0024】
態様２において、本願は、態様１に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体のコード遺伝子を含む核酸分子を提供する。
【0025】
いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８で示される核酸配列を含み、１９Ｃ１－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８：
ａｔｇｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｔｃａｃａｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃｔｃｃｃａｃｔｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃａｃｇｃｃｇｃａｃｇｇｃｃｔｃａｇａｔｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｇｃｃａｔｃａｔｇａｇｃｇｃｃｔｃｔｃｃａｇｇｃｇａｇａａｇｇｔｇａｃａａｔｇａｃｔｔｇｔｔｃｃｇｃａａｇｃａｇｃｔｃａｇｔｔａｇｔｔａｃａｔｇｔａｔｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａａｃｃａｇｇｃｔｃｔｔｃｔｃｃａａｇｇｃｔｃｃｔｇａｔｃｔｔｃｇａｃａｃｔｔｃｔａａｃｃｔｇｇｃａｔｃｃｇｇａｇｔｃｃｃａｇｔｇｃｇｇｔｔｃａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａａｃａｔｃｔｔａｔａｇｃｃｔｇａｃｔａｔｔａｇｃｃｇｇａｔｇｇａｇｇｃａｇａａｇａｔｇｃａｇｃｔａｃｃｔａｃｔａｃｔｇｔｃａａｃａｇｔｇｇｔｃｔａｇｔｔａｔｃｃａｃｔｃａｃｔｔｔｔｇｇｔｇｃａｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇｇａｇｃｔｃａａａｇｇｔｇｇａｇｇａｇｇａｔｃｔｇｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｇｔｇｇａｇｇａｇｇｃｇｇｃｔｃａｃａｇｇｔｃｃａａｃｔｇｃａｇｃａａｔｃｔｇｇｔｇｃａｇａａｃｔｇａｔｇａａｇｃｃｔｇｇａｇｃａａｇｃｇｔｔａａａａｔｃｔｃｔｔｇｃａａａｇｃａａｃａｇｇａｔａｃａｃｃｔｔｔｔｃｔｔｃｃｔａｃｔｇｇａｔａｇａｇｔｇｇｇｔｇａａａｃａａａｇａｃｃａｇｇａｃａｃｇｇａｃ
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８：
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【0026】
いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９で示される核酸配列を含み、２３Ｄ７－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９：
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９：
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【0027】
いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０で示される核酸配列を含み、２７Ｈ４－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０：
ａｔｇｇｃｔｃｔｇｃｃｔｇｔｔａｃｔｇｃａｃｔｇｃｔｇｃｔｃｃｃｔｃｔｇｇｃｔｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃａｔｇｃｔｇｃｔｃｇｇｃｃｔｇａｔａｔａｇｔｇａｔｇｔｃｃｃａａａｇｃｃｃａｔｃｃａｇｃｃｔｇｇｃｃｇｔｇｔｃｃｇｔｃｇｇｃｇａａａａｇｇｔｇａｃｔａｔｇａｇｔｔｇｃａａａｔｃｃａｇｃｃａａａｇｃｃｔｇｃｔｇｔａｃａｇｔｇａｃａａｃｃａａａａｇａａｃｔａｃｃｔｇｇｃａｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａｇｃｃｔｇｇａｃａｇｔｃａｃｃａａａｇｃｔｃｃｔｃａｔｃｔａｃｔｇｇｇｃｔａｇｃａｃａａｇｇｇａｇａｇｃｇｇｃｇｔｃｃｃａｇａｃａｇｇｔｔｔａｃｔｇｇｃａｇｃｇｇｇａｇｔｇｇｃａｃｃｇａｔｔｔｃａｃｃｃｔｇａｃａａｔａａｇｃｔｃｔｇｔｃａａｇｇｃｃｇａａｇａｃｃｔｃｇｃｔｇｔｇｔａｃｔａｔｔｇｔｃａｇｃａｇｔａｔｔａｔａｃｃｔａｔｃｃｃｔａｔａｃｔｔｔｃｇｇｔｇｇａｇｇｇａｃｃａａａｃｔｃｇａｇａｔｔａａａｇｇａｇｇｔｇｇｃｇｇｃｔｃｔｇｇａｇｇｔｇｇａｇｇｔｔｃｃｇｇｃｇｇｔｇｇｃｇｇｔａｇｔｇａａｇｔｇｃａｇｃｔｇｃａｇｃａｇａｇｃｇｇｇｃｃｔｇａａｃｔｃｇｔｇａａａｃｃｔｇｇｔｇｃｃｔｃｃｇｔｔａａａａｔｃｔｃｃｔｇｃａａｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｔａｃｔｃａｔｔｃａｃａｇｇｇｔａｔｃａｃａｔｇｃａｔｔｇｇｇｔｇａａｇｃａｇａｇｃｃａｃｇｔｃａａａｔｃａｃｔｇｇａａｔｇｇａｔｃｇｇｃａｇｇａｔｔａａｔｃｃａｔａｃａａｔｇｇｃｇｃｔｇｃｔｔｃａｃａｔａａｃｃａｇａａｇｔｔｃａａｇｇａｃａａａｇｃｃａｃｃｃｔｇａｃｔｇｔｃｇａｔａａｇｔｃａｔｃａａｇｔａｃａｇｃａｔａｃａｔｇｇａｇｃｔｇｃａｔｔｃｃｃｔｇａｃｔａｇｃｇａｇｇａｃａｇｃｇｃｔｇｔｔｔａｃｔａｃｔｇｃｇｃａｃｇｃｇｇｃｔｇｇｇａｃｔａｃｇａｃｇｇｔｇｇｃｔａｔｔａｃｇｃｃａｔｇｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇａｃａａｇｇｃａｃｃａｇｃｇｔｃａｃａｇｔｔｔｃａａｇｔａｃｔａｃｇａｃｃｃｃｔｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃｃｔａｃｔｃｃｔｇｃａｃｃｔａｃａａｔｃｇｃａａｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｇｔｃｔｃａｇａｃｃｃｇａａｇｃａｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃａｔａｃａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｃｇａｔａｔａｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｃｃｇｇｃａｃｔｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｃａａａｃｇｃｇｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｔｃｃｔｇｔａｔａｔｃｔｔｔａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃａｔｇａｇｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｃａｃｔｃａａｇａｇｇａａｇａｃｇｇｔｔｇｔａｇｃｔｇｃｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇａｇｇａａｇａａｇａｇｇｇａｇｇｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃｔｃｃｃｇｃｔｃａｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｔａｔｃａｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｃｃａｇｃｔｇｔａｃａａｔｇａｇｃｔｃａａｃｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇａｇｇａａｔａｔｇａｃｇｔｔｃｔｇｇａｔａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａ
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【0028】
いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１で示される核酸配列を含み、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１：
ａｔｇｇａｔａｔｇａｇｇｇｔｔｃｃｔｇｃａｃａａｃｔｃｃｔｇｇｇａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇｃｔｇａｇａｇｇｃｇｃａａｇａｔｇｔｇａｔａｔｃｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃｔａｇｔａｇｃｃｔｇｔｃｔｇｃｃｔｃｃｇｔｃｇｇｃｇａｔｃｇｇｇｔｇａｃｃａｔｔａｃｔｔｇｃａａａｔｃｃｔｃａｃａｇａｇｃｃｔｃｃｔｃｔａｃｔｃｃｇａｔａａｔｃａｇａａｇａａｃｔａｃｃｔｃｇｃｃｔｇｇｔａｔｃａａｃａｇａａａｃｃａｇｇｇａａｇｇｃａｃｃｔａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｃｔａｃｔｇｇｇｃｔａｇｔａｃｃｃｇｃｇａａｔｃｃｇｇｃｇｔｃｃｃｔａｇｃａｇｇｔｔｃｔｃｔｇｇｃａｇｃｇｇｇａｇｃｇｇｇａｃａｇａｔｔｔｃａｃｃｃｔｃａｃｔａｔｃｔｃｃｔｃｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｇａａｇａｃｔｔｃｇｃａａｃｔｔａｃｔａｃｔｇｔｃａｇｃａｇｔａｔｔａｔａｃｔｔａｃｃｃａｔａｃａｃｔｔｔｃｇｇａｃａｇｇｇａａｃａａａａｃｔｇｇａａａｔｔａａａｇｇｔｇｇａｇｇｔｇｇａｔｃｔｇｇｔｇｇｃｇｇｔｇｇｃａｇｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｇｔｃｔｇａａｇｔｃｃａａｃｔｇｇｔｇｃａｇａｇｃｇｇｔｇｃａｇａｇｇｔｇａａｇａａｇｃｃｔｇｇａｇｃａｔｃａｇｔｇａａｇｇｔｇｔｃｔｔｇｃａａａｇｃｃａｇｔｇｇｃｔａｃａｃａｔｔｃａｃｔｇｇａｔａｔｃａｔａｔｇｃａｔｔｇｇｇｔｔａｇｇｃａｇｇｃａｃｃｃｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇａａｇａａｔｃａａｃｃｃｔｔａｔａａｔｇｇｃｇｃｔｇｃｃｔｃｔｃａｃａａｔｃａａａａｇｔｔｔａａｇｇａｔｃｇｇｇｔｃａｃｔａｔｃａｃｔｃｇｇｇａｃａｃｔｔｃｃｇｃａａｇｃａｃｃｇｃｃｔａｔａｔｇｇａｇｃｔｇａｇｃａｇｃｃｔｇｃｇｇａｇｔｇａａｇａｃａｃａｇｃａｇｔｃｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｔｃｇｃｇｇａｔｇｇｇａｃｔａｔｇａｃｇｇｃｇｇｔｔａｔｔａｔｇｃｃａｔｇｇａｔｔａｃｔｇｇｇｇａｃａｇｇｇｃａｃａｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃａｃｔａｃｇａｃｃｃｃｔｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃｃｔａｃｔｃｃｔｇｃａｃｃｔａｃａａｔｃｇｃａａｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｇｔｃｔｃａｇａｃｃｃｇａａｇｃａｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃａｔａｃａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｃｇａｔａｔａｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｃｃｇｇｃａｃｔｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｃａａａｃｇｃｇｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｔｃｃｔｇｔａｔａｔｃｔｔｔａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃａｔｇａｇｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｃａｃｔｃａａｇａｇｇａａｇａｃｇｇｔｔｇｔａｇｃｔｇｃｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇａｇｇａａｇａａｇａｇｇｇａｇｇｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃｔｃｃｃｇｃｔｃａｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｔａｔｃａｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｃｃａｇｃｔｇｔａｃａａｔｇａｇｃｔｃａａｃｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇａｇｇａａｔａｔｇａｃｇｔｔｃｔｇｇａｔａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｔｇｇｇａａｇｃｃｔｃｇｃａｇｇａａｇａａｔｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｇｃｔｃｔａｃａａｔｇａｇｃｔｇｃａｇａａａｇａｃａａａａｔｇｇｃａｇａｇｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａａａｔｃｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｃａｇａｇｇｃａａａｇｇａｃａｃｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｃａｇｇｇｃｃｔｇｔｃｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｔｃｔｃｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｇｃｃａｃｃａａｇｇｔｇａ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１：
ａｔｇｇａｔａｔｇａｇｇｇｔｔｃｃｔｇｃａｃａａｃｔｃｃｔｇｇｇａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇｃｔｇａｇａｇｇｃｇｃａａｇａｔｇｔｇａｔａｔｃｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃｔａｇｔａｇｃｃｔｇｔｃｔｇｃｃｔｃｃｇｔｃｇｇｃｇａｔｃｇｇｇｔｇａｃｃａｔｔａｃｔｔｇｃａａａｔｃｃｔｃａｃａｇａｇｃｃｔｃｃｔｃｔａｃｔｃｃｇａｔａａｔｃａｇａａｇａａｃｔａｃｃｔｃｇｃｃｔｇｇｔａｔｃａａｃａｇａａａｃｃａｇｇｇａａｇｇｃａｃｃｔａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｃｔａｃｔｇｇｇｃｔａｇｔａｃｃｃｇｃｇａａｔｃｃｇｇｃｇｔｃｃｃｔａｇｃａｇｇｔｔｃｔｃｔｇｇｃａｇｃｇｇｇａｇｃｇｇｇａｃａｇａｔｔｔｃａｃｃｃｔｃａｃｔａｔｃｔｃｃｔｃｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｇａａｇａｃｔｔｃｇｃａａｃｔｔａｃｔａｃｔｇｔｃａｇｃａｇｔａｔｔａｔａｃｔｔａｃｃｃａｔａｃａｃｔｔｔｃｇｇａｃａｇｇｇａａｃａａａａｃｔｇｇａａａｔｔａａａｇｇｔｇｇａｇｇｔｇｇａｔｃｔｇｇｔｇｇｃｇｇｔｇｇｃａｇｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｇｔｃｔｇａａｇｔｃｃａａｃｔｇｇｔｇｃａｇａｇｃｇｇｔｇｃａｇａｇｇｔｇａａｇａａｇｃｃｔｇｇａｇｃａｔｃａｇｔｇａａｇｇｔｇｔｃｔｔｇｃａａａｇｃｃａｇｔｇｇｃｔａｃａｃａｔｔｃａｃｔｇｇａｔａｔｃａｔａｔｇｃａｔｔｇｇｇｔｔａｇｇｃａｇｇｃａｃｃｃｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇａａｇａａｔｃａａｃｃｃｔｔａｔａａｔｇｇｃｇｃｔｇｃｃｔｃｔｃａｃａａｔｃａａａａｇｔｔｔａａｇｇａｔｃｇｇｇｔｃａｃｔａｔｃａｃｔｃｇｇｇａｃａｃｔｔｃｃｇｃａａｇｃａｃｃｇｃｃｔａｔａｔｇｇａｇｃｔｇａｇｃａｇｃｃｔｇｃｇｇａｇｔｇａａｇａｃａｃａｇｃａｇｔｃｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｔｃｇｃｇｇａｔｇｇｇａｃｔａｔｇａｃｇｇｃｇｇｔｔａｔｔａｔｇｃｃａｔｇｇａｔｔａｃｔｇｇｇｇａｃａｇｇｇｃａｃａｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃａｃｔａｃｇａｃｃｃｃｔｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃｃｔａｃｔｃｃｔｇｃａｃｃｔａｃａａｔｃｇｃａａｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｇｔｃｔｃａｇａｃｃｃｇａａｇｃａｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃａｔａｃａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｃｇａｔａｔａｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｃｃｇｇｃａｃｔｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｃａａａｃｇｃｇｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｔｃｃｔｇｔａｔａｔｃｔｔｔａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃａｔｇａｇｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｃａｃｔｃａａｇａｇｇａａｇａｃｇｇｔｔｇｔａｇｃｔｇｃｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇａｇｇａａｇａａｇａｇｇｇａｇｇｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃｔｃｃｃｇｃｔｃａｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｔａｔｃａｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｃｃａｇｃｔｇｔａｃａａｔｇａｇｃｔｃａａｃｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇａｇｇａａｔａｔｇａｃｇｔｔｃｔｇｇａｔａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｔｇｇｇａａｇｃｃｔｃｇｃａｇｇａａｇａａｔｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｇｃｔｃｔａｃａａｔｇａｇｃｔｇｃａｇａａａｇａｃａａａａｔｇｇｃａｇａｇｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａａａｔｃｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｃａｇａｇｇｃａａａｇｇａｃａｃｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｃａｇｇｇｃｃｔｇｔｃｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｔｃｔｃｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｇｃｃａｃｃａａｇｇｔｇａ。
【0029】
いくつかの具体的な実施形態において、前記核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２
で示される核酸配列を含み、１０７５．７－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２：
ａｔｇｇｃｔｃｔｇｃｃｔｇｔｔａｃｔｇｃａｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｃａｃｔｇｇｃａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃａｔｇｃａｇｃｃａｇｇｃｃｃｇａｇａａｔｇｔｇｃｔｇａｃａｃａｇｔｃｔｃｃａｇｃｃａｔｃａｔｇａｇｃｇｃｃｔｃｔｃｃｃｇｇｔｇａａａａｇｇｔｔａｃｔａｔｇａｃｃｔｇｔｃｇｇｇｃａａｇｔｔｃａａａｔｇｔｇａｔｃｔｃｃｔｃｔｔａｔｇｔｇｃａｃｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇｃｇｃｔｃａｇｇｔｇｃａａｇｃｃｃａａａｇｃｔｇｔｇｇａｔｃｔａｔｔｃｃａｃｔｔｃｔａａｃｃｔｇｇｃｃｔｃｃｇｇｔｇｔｃｃｃａｇｃｃｃｇｃｔｔｔｔｃｔｇｇａａｇｃｇｇｇｔｃａｇｇｃａｃｃｔｃａｔａｃｔｃｃｃｔｃａｃｃａｔａｔｃａａｇｔｇｔｇｇａａｇｃｔｇａｇｇａｔｇｃａｇｃｔａｃｔｔａｃｔａｃｔｇｃｃａａｃａｇｔａｃｔｃｔｇｇｔｔａｃｃｃａｃｔｇａｃｃｔｔｃｇｇａｇｃｃｇｇｇａｃａａａｇｃｔｇｇａａｃｔｇｇｇａｇｇａｇｇｃｇｇｇｔｃｃｇｇｃｇｇｔｇｇａｇｇｇｔｃｃｇｇａｇｇｔｇｇｃｇｇｇｔｃｃｇａｔａｔｃｃａｇｃｔｇｃａａｇａｇｔｃａｇｇｃｃｃａｇｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｃｃｔｔｃｃｃａａａｇｃｃｔｇａｇｔｃｔｃａｃｃｔｇｔｔｃｃｇｔｇａｃａｇｇｔｔａｔｔｃｃａｔｔａｃｔａｇｃｇｃａｔａｔｔａｃｔｇｇａａｃｔｇｇａｔａａｇａｃａａｔｔｃｃｃａｇｇａａａｃａａａｃｔｃｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇｃｔａｃａｔｃｔｃａｔａｃｇａｃｇｇｇｃｇｇａａｃａａｃｔａｔａａｃｃｃａｔｃｃｃｔｇａａｇａａｔｃｇｇａｔｔｔｃｃａｔｃａｃｔａｇａｇａｃａｃａｔｃｃａａｇａａｃｃａｇｔｔｃｔｔｔｃｔｃａａｇｃｔｇａａｔａｇｃｇｔｇａｃａａｃｔｇａｇｇａｔａｃａｇｃａａｃｃｔａｃｔａｔｔｇｃｇｃｃａａｇｇａａｇｇａｇａｃｔａｔｇａｔｇｔｔｇｇｃａａｃｔａｔｔａｔｇｃａａｔｇｇａｃｔａｔｔｇｇｇｇａｃａｇｇｇｃａｃａｔｃａｇｔｇａｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃａｃｔａｃｇａｃｃｃｃｔｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃｃｔａｃｔｃｃｔｇｃａｃｃｔａｃａａｔｃｇｃａａｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｇｔｃｔｃａｇａｃｃｃｇａａｇｃａｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃａｔａｃａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｃｇａｔａｔａｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｃｃｇｇｃａｃｔｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｃａａａｃｇｃｇｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｔｃｃｔｇｔａｔａｔｃｔｔｔａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃａｔｇａｇｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｃａｃｔｃａａｇａｇｇａａｇａｃｇｇｔｔｇｔａｇｃｔｇｃｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇａｇｇａａｇａａｇａｇｇｇａｇｇｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃｔｃｃｃｇｃｔｃａｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｔａｔｃａｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｃｃａｇｃｔｇｔａｃａａｔｇａｇｃｔｃａａｃｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇａｇｇａａｔａｔｇａｃｇｔｔｃｔｇｇａｔａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｔｇｇｇａａｇｃｃｔｃｇｃａｇｇａａｇａａｔｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｇｃｔｃｔａｃａａｔｇａｇｃｔｇｃａｇａａａｇａｃａａａａｔｇｇｃａｇａｇｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａａａｔｃｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｃａｇａｇｇｃａａａｇｇａｃａｃｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｃａｇｇｇｃｃｔｇｔｃｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｔｃｔｃｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｇｃｃａｃｃａａｇｇｔｇａ。
で示される核酸配列を含み、１０７５．７－ＣＡＲのコード遺伝子である。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２：
ａｔｇｇｃｔｃｔｇｃｃｔｇｔｔａｃｔｇｃａｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｃａｃｔｇｇｃａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃａｔｇｃａｇｃｃａｇｇｃｃｃｇａｇａａｔｇｔｇｃｔｇａｃａｃａｇｔｃｔｃｃａｇｃｃａｔｃａｔｇａｇｃｇｃｃｔｃｔｃｃｃｇｇｔｇａａａａｇｇｔｔａｃｔａｔｇａｃｃｔｇｔｃｇｇｇｃａａｇｔｔｃａａａｔｇｔｇａｔｃｔｃｃｔｃｔｔａｔｇｔｇｃａｃｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇｃｇｃｔｃａｇｇｔｇｃａａｇｃｃｃａａａｇｃｔｇｔｇｇａｔｃｔａｔｔｃｃａｃｔｔｃｔａａｃｃｔｇｇｃｃｔｃｃｇｇｔｇｔｃｃｃａｇｃｃｃｇｃｔｔｔｔｃｔｇｇａａｇｃｇｇｇｔｃａｇｇｃａｃｃｔｃａｔａｃｔｃｃｃｔｃａｃｃａｔａｔｃａａｇｔｇｔｇｇａａｇｃｔｇａｇｇａｔｇｃａｇｃｔａｃｔｔａｃｔａｃｔｇｃｃａａｃａｇｔａｃｔｃｔｇｇｔｔａｃｃｃａｃｔｇａｃｃｔｔｃｇｇａｇｃｃｇｇｇａｃａａａｇｃｔｇｇａａｃｔｇｇｇａｇｇａｇｇｃｇｇｇｔｃｃｇｇｃｇｇｔｇｇａｇｇｇｔｃｃｇｇａｇｇｔｇｇｃｇｇｇｔｃｃｇａｔａｔｃｃａｇｃｔｇｃａａｇａｇｔｃａｇｇｃｃｃａｇｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｃｃｔｔｃｃｃａａａｇｃｃｔｇａｇｔｃｔｃａｃｃｔｇｔｔｃｃｇｔｇａｃａｇｇｔｔａｔｔｃｃａｔｔａｃｔａｇｃｇｃａｔａｔｔａｃｔｇｇａａｃｔｇｇａｔａａｇａｃａａｔｔｃｃｃａｇｇａａａｃａａａｃｔｃｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇｃｔａｃａｔｃｔｃａｔａｃｇａｃｇｇｇｃｇｇａａｃａａｃｔａｔａａｃｃｃａｔｃｃｃｔｇａａｇａａｔｃｇｇａｔｔｔｃｃａｔｃａｃｔａｇａｇａｃａｃａｔｃｃａａｇａａｃｃａｇｔｔｃｔｔｔｃｔｃａａｇｃｔｇａａｔａｇｃｇｔｇａｃａａｃｔｇａｇｇａｔａｃａｇｃａａｃｃｔａｃｔａｔｔｇｃｇｃｃａａｇｇａａｇｇａｇａｃｔａｔｇａｔｇｔｔｇｇｃａａｃｔａｔｔａｔｇｃａａｔｇｇａｃｔａｔｔｇｇｇｇａｃａｇｇｇｃａｃａｔｃａｇｔｇａｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃａｃｔａｃｇａｃｃｃｃｔｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃｃｔａｃｔｃｃｔｇｃａｃｃｔａｃａａｔｃｇｃａａｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｇｔｃｔｃａｇａｃｃｃｇａａｇｃａｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃａｔａｃａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｃｇａｔａｔａｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃａｃｃａｃｔｇｇｃｃｇｇｃａｃｔｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｇｔｃｃｃｔｃｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｃａａａｃｇｃｇｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｔｃｃｔｇｔａｔａｔｃｔｔｔａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃａｔｇａｇｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｃａｃｔｃａａｇａｇｇａａｇａｃｇｇｔｔｇｔａｇｃｔｇｃｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇａｇｇａａｇａａｇａｇｇｇａｇｇｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃｔｃｃｃｇｃｔｃａｇｃｃｇａｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｔａｔｃａｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｃｃａｇｃｔｇｔａｃａａｔｇａｇｃｔｃａａｃｃｔｇｇｇａａｇａａｇｇｇａｇｇａａｔａｔｇａｃｇｔｔｃｔｇｇａｔａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｔｇｇｇａａｇｃｃｔｃｇｃａｇｇａａｇａａｔｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｇｃｔｃｔａｃａａｔｇａｇｃｔｇｃａｇａａａｇａｃａａａａｔｇｇｃａｇａｇｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａａａｔｃｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｃａｇａｇｇｃａａａｇｇａｃａｃｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｃａｇｇｇｃｃｔｇｔｃｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｔｃｔｃｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｇｃｃａｃｃａａｇｇｔｇａ。
【0030】
態様３において、本願は、態様２に記載の核酸分子を含む発現ベクターを提供する。
【0031】
好ましくは、前記発現ベクターは、態様２に記載の核酸分子を含むウイルスベクターまたは非ウイルスベクターである。
【0032】
好ましくは、前記ウイルスベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターのいずれか１種を含む。
【0033】
好ましくは、前記非ウイルスベクターは、Ｐｉｇｇｙｂａｃトランスポゾン系、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン系、またはナノベクターのいずれか１種を含む
。
。
【0034】
態様４において、本願は、態様３に記載の発現ベクターおよびヘルパープラスミドがトランスフェクションされた哺乳細胞で調製される組換えレンチウイルスを提供する。
【0035】
態様５において、本願は、態様１に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を発現するキメラ抗原受容体の免疫細胞を提供する。
【0036】
本願において、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞は、キメラ抗原受容体の抗原結合ドメインを用い、ＣＬＬ１陽性腫瘍細胞を標的とし、免疫細胞の殺傷機能を発揮してサイトカインＩＦＮ－γを分泌し、異なるＥ：Ｔ（Ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｃｅｌｌ：Ｔａｒｇｅｔ ｃｅｌｌ）でＣＬＬ１腫瘍に対する殺傷作用を実現する。
【0037】
好ましくは、前記キメラ抗原受容体の免疫細胞のゲノムに態様２に記載の核酸分子が組み込まれる。
【0038】
好ましくは、前記キメラ抗原受容体の免疫細胞は、態様３に記載の発現ベクターおよび／または態様４に記載の組換えレンチウイルスを含む。
【0039】
好ましくは、前記免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはマクロファージのいずれか１種を含む。
【0040】
好ましくは、前記Ｔ細胞は、αβΤ細胞および／またはγδΤ細胞を含む。
【0041】
態様６において、本願は、態様５に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞を含む医薬組成物を提供する。
【0042】
好ましくは、前記医薬組成物は、医薬的に許容されるベクター、賦形剤、または希釈剤のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを更に含む。
【0043】
態様７において、本願は、態様１に記載のＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体、態様２に記載の核酸分子、態様３に記載の発現ベクター、態様４に記載の組換えレンチウイルス、態様５に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞、または態様６に記載の医薬組成物の、悪性腫瘍治療薬の調製における使用を提供する。
【0044】
好ましくは、前記悪性腫瘍は急性骨髄性白血病を含む。
【0045】
態様８において、本願は、癌の治療方法を提供する、前記方法は、有効用量の態様５に記載のキメラ抗原受容体の免疫細胞または態様６に記載の医薬組成物を患者に投与し、且つ、１種または複数種の抗腫瘍薬を同時、別々、または順次投与する。
【0046】
好ましくは、前記癌症は急性骨髄性白血病を含む。
【発明の効果】
【0047】
従来技術と比べ、本願は、以下のような有益な効果を有する。
【0048】
（１）本願は、抗ＣＬＬ１抗体を抗原結合ドメインとして用いてＣＡＲ分子を構築し、ＣＬＬ１標的ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＡＲ素子に依存して異なるＥ：ＴでＣＬＬ１陽性腫瘍細胞に対して殺傷作用を発揮し、ここで、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔは、最適な殺傷機能を有する。
【0049】
（２）本願のＣＬＬ１標的ＣＡＲ－Ｔ細胞はＣＬＬ１陽性腫瘍細胞と共培養した後、大量のサイトカインＩＦＮ－γを分泌し、ＣＡＲ－ＴのＣＬＬ１腫瘍細胞に対する特異的な殺傷効果を証明する。
【図面の簡単な説明】
【0050】
【図1】異なる腫瘍細胞のＣＬＬ１に対する発現状況である。
【図2】ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体の構造模式図である。
【図4】異なるＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率である。
【図5】ＣＬＬ１を標的とするＣＡＲ－ＴのＲａｊｉ－ＣＬＬ１細胞に対する殺傷率である。
【図6】ＣＬＬ１を標的とするＣＡＲ－Ｔの、標的細胞を殺傷したＩＦＮ－γの分泌状況である。
【発明を実施するための形態】
【0051】
本願が講じた技術的手段およびその効果を更に説明するために、以下、実施例および図面を参照しながら本願について更に説明する。ここで説明する具体的な実施形態は、本願を解釈するためのものに過ぎず、本願を限定するものではないことが理解できる。
【0052】
実施例に具体的な技術または条件が明記されていないものは、本分野内の文献に記載されている技術もしくは条件、または製品の説明書に従って行われる。使用される試薬または機器におけるメーカーが明記されていないものは、いずれも正規のルートから購入可能な通常の製品である。
【0053】
実施例１ 抗ＣＬＬ１抗体の由来
本実施例は、抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１、２３Ｄ７、２７Ｈ４、ヒト化２７Ｈ４（Ｈ２７Ｈ４）および１０７５．７（特許ＵＳ８５３６３１０Ｂ２）を抗原結合ドメインとして選択してＣＡＲ分子を構築することに用い、ここで、１９Ｃ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １～２で示される可変領域を含み、２３Ｄ７はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３～４で示される可変領域を含み、２７Ｈ４はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５～６で示される可変領域を含み、Ｈ２７Ｈ４はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７～８で示される可変領域を含み、１０７５．７はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１～１２で示される可変領域を含んだ。
本実施例は、抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１、２３Ｄ７、２７Ｈ４、ヒト化２７Ｈ４（Ｈ２７Ｈ４）および１０７５．７（特許ＵＳ８５３６３１０Ｂ２）を抗原結合ドメインとして選択してＣＡＲ分子を構築することに用い、ここで、１９Ｃ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １～２で示される可変領域を含み、２３Ｄ７はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３～４で示される可変領域を含み、２７Ｈ４はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５～６で示される可変領域を含み、Ｈ２７Ｈ４はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７～８で示される可変領域を含み、１０７５．７はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１～１２で示される可変領域を含んだ。
【0054】
実施例２ 腫瘍細胞のＣＬＬ１に対する発現
本実施例は、ＦＩＴＣ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ３７１（ＣＬＬ１）抗体（ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて標的細胞Ｊｕｒｋａｔ、ＫＧ－１ａと共にインキュベートした後、標的細胞のＣＬＬ１に対する発現をフローサイトメーターで検出した。
本実施例は、ＦＩＴＣ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ３７１（ＣＬＬ１）抗体（ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて標的細胞Ｊｕｒｋａｔ、ＫＧ－１ａと共にインキュベートした後、標的細胞のＣＬＬ１に対する発現をフローサイトメーターで検出した。
【0055】
結果は、図１に示すように、ＴＨＰ－１、Ｕ９３７およびＨＬ－６０はＣＬＬ１陽性細胞であり、ＪｕｒｋａｔおよびＫＧ－１ａはＣＬＬ１陰性細胞であった。
【0056】
実施例３ キメラ抗原受容体の設計
本実施例は、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を設計し、構造模式図は図２に示すように、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＬＬ１抗原に特異的に結合する一本鎖抗体（Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ）、ＣＤ８αヒンジ領域（Ｈｉｎｇｅ）と膜貫通領域（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ）、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを
含み、具体的なＣＡＲ分子は以下のとおりであった。
(1) １９Ｃ１－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（１９Ｃ１）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(2) ２３Ｄ７－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（２３Ｄ７）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(3) ２７Ｈ４－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（２７Ｈ４）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(4) ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ：ＩｇＧκ軽鎖シグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（Ｈ２７Ｈ４）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(5) １０７５．７－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（１０７５．７）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
本実施例は、ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体を設計し、構造模式図は図２に示すように、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＬＬ１抗原に特異的に結合する一本鎖抗体（Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ）、ＣＤ８αヒンジ領域（Ｈｉｎｇｅ）と膜貫通領域（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ）、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを
含み、具体的なＣＡＲ分子は以下のとおりであった。
(1) １９Ｃ１－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（１９Ｃ１）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(2) ２３Ｄ７－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（２３Ｄ７）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(3) ２７Ｈ４－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（２７Ｈ４）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(4) ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ：ＩｇＧκ軽鎖シグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（Ｈ２７Ｈ４）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
(5) １０７５．７－ＣＡＲ：ＣＤ８αシグナルペプチド、Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ｓｃＦｖ（１０７５．７）、ＣＤ８αｈｉｎｇｅ＋ＴＭ、４－１ＢＢ、およびＣＤ３ζ。
【0057】
ここで、ＣＤ８αシグナルペプチドのアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４に示すとおりであり、ＩｇＧκ軽鎖シグナルペプチドのアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２５に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２６に示すとおりであり、ＣＤ８αｈｉｎｇｅのアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２８に示すとおりであり、ＣＤ８α ＴＭのアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２９に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３０に示すとおりであり、４－１ＢＢのアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３１に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ： ３２に示すとおりであり、ＣＤ３ζのアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３３に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３４に示すとおりであった。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４：
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２５：
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２６：
ａｔｇｇａｔａｔｇａｇｇｇｔｔｃｃｔｇｃａｃａａｃｔｃｃｔｇｇｇａｃｔｃｃｔｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇｃｔｇａｇａｇｇｃｇｃａａｇａｔｇｔ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７：
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２８：
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２９：
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３０：
ａｔｃｔａｃａｔｃｔｇｇｇｃｇｃｃｃｔｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｔｔｇｔｇｇｇｇｔｃｃｔｔｃｔｃｃｔｇｔｃａｃｔｇｇｔｔａｔｃａｃｃｃｔｔｔａｃｔｇｃ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３１：
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３２：
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３３：
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３４：
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ＮＯ： ３２に示すとおりであり、ＣＤ３ζのアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３３に示すとおりで、核酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３４に示すとおりであった。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３：
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３１：
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ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３４：
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【0058】
実施例４ ＣＬＬ１標的キメラ抗原受容体の発現ベクターの構築
（１）実施例３で設計されたＣＡＲ分子に基づき、ＣＡＲコード遺伝子をコドン最適化し、ヒト由来細胞での効率的な発現を促進し、ＣＡＲコード遺伝子を全遺伝子合成した（広州ＩＧＥバイオテクノロジー有限公司）。
（１）実施例３で設計されたＣＡＲ分子に基づき、ＣＡＲコード遺伝子をコドン最適化し、ヒト由来細胞での効率的な発現を促進し、ＣＡＲコード遺伝子を全遺伝子合成した（広州ＩＧＥバイオテクノロジー有限公司）。
【0059】
（２）ＥｃｏＲＩとＢａｍＨＩとの２つの酵素で全長ＣＡＲ遺伝子および空ベクターｐＣＤＨ－ＥＦ１－ＭＣＳを切断し、３７℃の水浴で３０ｍｉｎ酵素切断した後、１．５％のアガロースゲルを用いてＤＮＡ電気泳動を行い、アガロースゲルで精製して試薬キット（天根社製）を回収し、酵素切断生成物を精製して回収処理した。
【0060】
（３）表１で示される連結系を調製し、ＣＡＲ遺伝子断片と線形化ｐＣＤＨ－ＥＦ１－ＭＣＳとを２２℃で１ｈ連結し、連結生成物を直接Ｓｔｂｌ３大腸菌のコンピンテントセルに形質転換し、２００μＬの形質転換生成物をアンピシリン耐性ＬＢプレートに塗布し、３７℃のインキュベーターで上下反転させて一晩培養し、翌朝、３つのモノクローナルをランダムに選択してコロニーＰＣＲ鑑定を行い、陽性クローンをシーケンシング鑑定した。
【0061】
【表1】
【0062】
【0063】
実施例５ レンチウイルス包装
本実施例は、４プラスミド系を採用して実施例４で構築されたレンチウイルス発現ベクターに対してレンチウイルス包装を行い、具体的なステップは、以下のとおりである。
本実施例は、４プラスミド系を採用して実施例４で構築されたレンチウイルス発現ベクターに対してレンチウイルス包装を行い、具体的なステップは、以下のとおりである。
【0064】
（１）レンチウイルス発現ベクター、ヘルパープラスミドｇａｇ／ｐｏｌ、Ｒｅｖ、ＶＳＶ－Ｇで構成された４プラスミド系とＰＥＩトランスフェクション試薬とを混合させた後、一定の体積の無血清ＤＭＥＭに加え、均一に混合させて１５ｍｉｎ置いた。
【0065】
（２）上記混合液を２９３Ｔ細胞が敷かれたＴ７５細胞フラスコに入れ、軽く均一に混合させ、３７℃にて５％のＣＯ２細胞インキュベーターで６ｈ培養した。
【0066】
（３）６ｈ後に新鮮な培地に交換し、培養し続け、１０ｍＭのブタン酸ナトリウム溶液を加え、７２ｈ後にレンチウイルス培養上清を収集して精製検出を行った。
【0067】
実施例６ Ｔ細胞の取得および増幅
各ボランティアから３０ｍＬの全血を採取し、末梢血と生理食塩水とを１：１で混合させて希釈し、遠心チューブにＦｉｃｏｌｌリンパ球分離液を加え、希釈した末梢血を徐々に加え、１５００ｒｐｍで３０ｍｉｎ遠心し、ＰＢＭＣ層を軽く吸い取って別の遠心チューブに移した。
各ボランティアから３０ｍＬの全血を採取し、末梢血と生理食塩水とを１：１で混合させて希釈し、遠心チューブにＦｉｃｏｌｌリンパ球分離液を加え、希釈した末梢血を徐々に加え、１５００ｒｐｍで３０ｍｉｎ遠心し、ＰＢＭＣ層を軽く吸い取って別の遠心チューブに移した。
【0068】
生理食塩水でＰＢＭＣを複数回洗浄し、Ｘ－ＶＩＶＯ培地（５０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む）に移して培養し、ＰＢＭＣ分離後、Ｘ－ＶＩＶＯ（５０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む）で活性化させ、２日間後に培地を、３００ＩＵ／ｍＬのＸ－ＶＩＶＯを含む培地に交換して拡大培養し、その後、２日毎にカウントを１回行い、新鮮な３００ＩＵ／ｍＬのＸ－ＶＩＶＯを含む培地に交換し、細胞濃度を（０．５～１）×１０６個／ｍＬに維持し、１０日間連続して観察した。
【0069】
実施例７ ＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
本実施例は、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎを用いてレンチウイルスのＴ細胞に対する感染効率を向上させ、ステップは以下のとおりであった。
本実施例は、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎを用いてレンチウイルスのＴ細胞に対する感染効率を向上させ、ステップは以下のとおりであった。
【0070】
３０μｇのＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎを６孔プレート内にコーティングし、３７℃の細胞インキュベーターに置いて２ｈ保持した。ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎを吸い取り、２．５％のＢＳＡを含むＨａｎｋ’ｓ溶液でコーティングされた６孔プレートをブロッキングし、３７℃の細胞インキュベーターに置いて０．５ｈ保持し、ブロッキング液を吸い取り、２％のｈｅｐｅｓを含むＨａｎｋ’ｓ溶液で６孔プレートを洗浄し、Ｘ－ＶＩＶＯ培地を加え、適量のレンチウイルス溶液を加え、２０００ｇで２ｈ遠心し、上清を捨て、１×１０６個のＴ細胞（ＣＤ３陽性＞９０％）を加え、１０００ｇで１０ｍｉｎ遠心し、３７℃にて５％のＣＯ２および一定の湿度の細胞インキュベーター内に置いて培養させ、翌日、上記ステップを繰り返した。
【0071】
レンチウイルスの添加量は、表２を参照した。
【0072】
【表2】
【0073】
フローサイトメーターを採用してＴ細胞表面のＣＡＲ分子の発現を検出し、ＣＬＬ１－Ｆｃ融合タンパク質（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司）でＣＡＲ発現を検出し、二次抗体は、ＦＩＴＣ－Ｌａｂｅｌｅｄ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ Ｆｃ、ＣＡＲがトランスフェクションされていないＴ細胞（Ｔ ｍｏｃｋ）をネガティブコントロールとして採用した。
【0074】
結果は、図４および表３に示すように、１９Ｃ１－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が１３．２８％であり、２３Ｄ７－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が３７．４９％であり、２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が３９．４４％であり、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が３３．５９％であり、１０７５．７－ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現陽性率が５．０９％であった。
【0075】
【表3】
【0076】
実施例８ ＣＡＲ－Ｔ細胞の殺傷機能
本実施例は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイムラベルフリー動的分析技術（Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ、ＲＴＣＡ）を用いて細胞殺傷効果に対して全過程に亘って自動化検出を行った。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ（登録商標）リアルタイムマーカレス細胞分析装置（ＲＴＣＡ）は、微小電子インピーダンス技術に基づき、Ｅ－ｐｌａｔｅプレートの底部に大量の金属微小電極が組み込まれ、接着細胞が金属微小電極に接着すると、細胞数、直径および接着能力はいずれも金属微小電極間の電流伝導に影響を及ぼし、インピーダンス値の変化を引き起こし、この変化は極めて微細で鋭敏であり、毒効果で、細胞は、インピーダンス値に直接または間接的に影響を及ぼす。そのため、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅは、分子標的による細胞毒性効果を監視することができた。
本実施例は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイムラベルフリー動的分析技術（Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ、ＲＴＣＡ）を用いて細胞殺傷効果に対して全過程に亘って自動化検出を行った。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ（登録商標）リアルタイムマーカレス細胞分析装置（ＲＴＣＡ）は、微小電子インピーダンス技術に基づき、Ｅ－ｐｌａｔｅプレートの底部に大量の金属微小電極が組み込まれ、接着細胞が金属微小電極に接着すると、細胞数、直径および接着能力はいずれも金属微小電極間の電流伝導に影響を及ぼし、インピーダンス値の変化を引き起こし、この変化は極めて微細で鋭敏であり、毒効果で、細胞は、インピーダンス値に直接または間接的に影響を及ぼす。そのため、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅは、分子標的による細胞毒性効果を監視することができた。
【0077】
ステップは以下のとおりであった。
【0078】
（１）一定の体積の１×Ｔｅｔｈｅｒ Ｂｕｆｆｅｒでａｎｔｉ－ＣＤ４０を希釈し、Ｅ－Ｐｌａｔｅ Ｖｉｅｗ ９６孔プレートの各孔に５０μＬの希釈したａｎｔｉ－ＣＤ
４０を加えてコーティング液とし、室温で遮光して３ｈインキュベートし、各グループに３つの孔を設けた。
４０を加えてコーティング液とし、室温で遮光して３ｈインキュベートし、各グループに３つの孔を設けた。
【0079】
（２）コーティング液を捨て、２００μＬのＰＢＳで孔を２回軽く洗浄し、各孔に２％のＦＢＳを含む５０μＬの１６４０培地を入れ、Ｅ－Ｐｌａｔｅ Ｖｉｅｗ ９６孔プレートをｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ機器に入れ（機器を１ｈ前からインキュベーターに入れた）、３７℃で１ｈバランスさせ、背景値を測定した。
【0080】
（３）ＣＬＬ１を過剰発現した安定したＲａｊｉ細胞（Ｒａｊｉ－ＣＬＬ１）を標的細胞として採用し、標的細胞懸濁液を調製して細胞密度を測定し、各孔に５００００個の細胞／５０μＬを加え、各孔の最終体積が１００μＬであり、室温で３０ｍｉｎ静置してインキュベートし、Ｅ－Ｐｌａｔｅ Ｖｉｅｗ ９６孔プレートを再び機器に戻し、ソフトウェアを操作してデータを収集し、５ｍｉｎ毎にインピーダンスを１回検出し、検出時間は２ｈであった。
【0081】
（４）異なるＥ：Ｔの効果細胞懸濁液（即ち、ＣＡＲ－Ｔ細胞）およびネガティブコントロール細胞懸濁液（即ち、トランスフェクションされていないＴ細胞）をそれぞれ調製し、各孔に５０μＬの希釈した効果細胞懸濁液またはネガティブコントロール細胞懸濁液を加え、ブランクグループに５０μＬの培地を加え、ポジティブコントロールグループに５０μＬの１×Ｃｙｔｏｌｙｓｉｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎを加え、室温で３０ｍｉｎ静置してインキュベートし、効果細胞を固定した標的細胞に均一に分布させた。
【0082】
（５）Ｅ－Ｐｌａｔｅ Ｖｉｅｗ ９６孔プレートを再び機器に入れ、ソフトウェアを操作してデータを収集し、５ｍｉｎ毎にインピーダンスを１回検出し、検出時間が１６ｈであり、実験が終了した後、データを記憶して分析した。
【0083】
結果は、図５に示すように、１９Ｃ１－ＣＡＲ－Ｔ、２３Ｄ７－ＣＡＲ－Ｔ、２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ、または１０７５．７－ＣＡＲ－Ｔは、異なるＥ：Ｔ（１：１、２：１、４：１）でＲａｊｉ－ＣＬＬ１と共に１６ｈインキュベートした後、いずれもＲａｊｉ－ＣＬＬ１細胞を効果的に殺傷することができ、Ｅ：Ｔが大きければ殺傷能力が強かった。ここで、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔは、最も強い殺傷能力を有し、２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔの殺傷能力はＨ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔに類似し、次は２３Ｄ７－ＣＡＲ－Ｔであり、１９Ｃ１－ＣＡＲ－Ｔおよび１０７５．７－ＣＡＲ－Ｔの殺傷能力は弱く、ＣＡＲがトランスフェクションされていないＴ ｍｏｃｋはＲａｊｉ－ＣＬＬ１を殺傷することができず、ａｎｔｉ－ＣＬＬ１ ＣＡＲ－Ｔの殺傷活性がＣＡＲ素子に依存することを意味する。
【0084】
実施例９ 腫瘍細胞と共培養した後のＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γに対する分泌
本実施例は、Ｈｕｍａｎ ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ試薬キット（Ｎｅｏｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いてＣＡＲ－Ｔ細胞がＩＦＮ－γサイトカインを放出する濃度を検出し、標的細胞と共培養した後のＣＡＲ－ＴのＩＦＮ－γに対する分泌量を分析し、具体的には、ＣＬＬ１陽性細胞Ｒａｊｉ－ＣＬＬ１、ＨＬ６０、Ｕ９３７を陽性標的細胞として採用し、ＣＬＬ１陰性細胞Ｒａｊｉを陰性標的細胞として採用した。
本実施例は、Ｈｕｍａｎ ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ試薬キット（Ｎｅｏｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いてＣＡＲ－Ｔ細胞がＩＦＮ－γサイトカインを放出する濃度を検出し、標的細胞と共培養した後のＣＡＲ－ＴのＩＦＮ－γに対する分泌量を分析し、具体的には、ＣＬＬ１陽性細胞Ｒａｊｉ－ＣＬＬ１、ＨＬ６０、Ｕ９３７を陽性標的細胞として採用し、ＣＬＬ１陰性細胞Ｒａｊｉを陰性標的細胞として採用した。
【0085】
ＣＡＲ－Ｔ細胞と異なる標的細胞とをＥ：Ｔ＝１：１で共に１６ｈインキュベートし、上清を取って酵素免疫法（ＥＬＩＳＡ）で培養液の上清内のＩＦＮ－γの分泌量を検出した。検出原理は、二抗体サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用い、抗ヒトＩＦＮ－γ抗体をＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、実験時に、サンプルまたは標準品内のヒトＩＦＮ－γがコーティング抗体と結合し、遊離した成分が洗浄された。ビオチン化抗ヒトＩＦＮ－γ抗体および西洋ワサビペルオキシダーゼで標識されたアビジンを順次加え、抗ヒトＩＦＮ
－γ抗体は、コーティング抗体に結合されたヒトＩＦＮ－γと結合し、ビオチンがアビジンと特異的に結合して免疫複合体を形成し、遊離した成分が洗浄された。発色基質（ＴＭＢ）を加え、西洋ワサビペルオキシダーゼの触媒で青色を呈し、終了液を加えてから黄色になり、プレートリーダーで波長４５０ｎｍでＯＤ値を測定し、ＩＦＮ－γ濃度はＯＤ４５０に比例し、検量線を描画することでサンプル内のＩＦＮ－γの濃度を計算した。
－γ抗体は、コーティング抗体に結合されたヒトＩＦＮ－γと結合し、ビオチンがアビジンと特異的に結合して免疫複合体を形成し、遊離した成分が洗浄された。発色基質（ＴＭＢ）を加え、西洋ワサビペルオキシダーゼの触媒で青色を呈し、終了液を加えてから黄色になり、プレートリーダーで波長４５０ｎｍでＯＤ値を測定し、ＩＦＮ－γ濃度はＯＤ４５０に比例し、検量線を描画することでサンプル内のＩＦＮ－γの濃度を計算した。
【0086】
結果は、図６に示すように、１９Ｃ１－ＣＡＲ－Ｔ、２３Ｄ７－ＣＡＲ－Ｔ、２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ、Ｈ２７Ｈ４－ＣＡＲ－Ｔ、または１０７５．７－ＣＡＲ－Ｔは、Ｒａｊｉ－ＣＬＬ１、ＨＬ６０、またはＵ９３７と共培養した後、大量のＩＦＮ－γを放出したが、Ｒａｊｉ細胞と共培養した後、大量のＩＦＮ－γの放出が見られず、ＣＬＬ１標的のＣＡＲ－Ｔ細胞の殺傷が特異性を有することを意味する。
【0087】
上記をまとめ、本願のＣＬＬ１標的ＣＡＲ－Ｔ細胞は、異なるＥ：ＴでＣＬＬ１陽性腫瘍細胞に対して著しい殺傷作用を有し、腫瘍細胞と共培養した後、大量のサイトカインＩＦＮ－γを分泌し、ＣＬＬ１陽性腫瘍の治療分野で応用の見通しを有する。
【0088】
本願は、上記実施例により本願の詳細方法を説明するが、本願は上記詳細方法に限定されるものではなく、即ち、本願は上記詳細方法に依存して実施しなければならないことを意味するものではないことを、出願人より声明する。当業者であれば、本願に対するいかなる改良、本願の製品の各原料に対する等価的な置換および補助成分の追加、具体的な形態の選択等は、全て本願の保護範囲および開示範囲内に含まれることを理解すべきである。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】