特許 7596555 アカシア蜂蜜の成熟度の識別方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-11-29

(45)【発行日】2024-12-09

(54)【発明の名称】アカシア蜂蜜の成熟度の識別方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/02 20060101AFI20241202BHJP

   G01N 30/88 20060101ALI20241202BHJP

   G01N 30/74 20060101ALI20241202BHJP

   G01N 30/26 20060101ALI20241202BHJP

   G01N 30/06 20060101ALI20241202BHJP

   A23L 21/25 20160101ALN20241202BHJP

【ＦＩ】

G01N33/02

G01N30/88 N

G01N30/74 Z

G01N30/26 A

G01N30/06 C

A23L21/25

【請求項の数】 9

(21)【出願番号】P 2023553219

(86)(22)【出願日】2022-11-22

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-08

(86)【国際出願番号】 CN2022133567

(87)【国際公開番号】W WO2023093731

(87)【国際公開日】2023-06-01

【審査請求日】2023-10-02

(31)【優先権主張番号】202111390505.X

(32)【優先日】2021-11-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】520088904

【氏名又は名称】中国農業科学院蜜蜂研究所

【氏名又は名称原語表記】Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｐｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．１ Ｘｉａｎｇｓｈａｎｂｅｉｇｏｕ， Ｈａｉｄｉａｎ， Ｂｅｉｊｉｎｇ， １０００９３

(74)【代理人】

【識別番号】110001737

【氏名又は名称】弁理士法人スズエ国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】田文礼

(72)【発明者】

【氏名】王文千

(72)【発明者】

【氏名】薛暁鋒

(72)【発明者】

【氏名】延莎

(72)【発明者】

【氏名】王宣

(72)【発明者】

【氏名】彭文君

(72)【発明者】

【氏名】呉黎明

(72)【発明者】

【氏名】王凱

(72)【発明者】

【氏名】方小明

(72)【発明者】

【氏名】李相▲きん▼

【審査官】黒田 浩一

(56)【参考文献】

【文献】中国特許出願公開第１１２４８５３４４（ＣＮ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１１１９９９３３２（ＣＮ，Ａ）

【文献】WU,Meijia et al，Study on the Changes of Main Ingredients of Acacia Honey during the Ripening Process Based on Clustering Analysis and Principal Component Analysis，Science and Technology of Food Industry，中国，2021年10月23日，42(24)，112-118

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｇ０１Ｎ ３３／００－３３／４６

Ｇ０１Ｎ ３０／００－３０／９６

Ｇ０１Ｎ １／００－１／４４

Ａ２３Ｌ ２１／２５

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０／ＪＳＴＣｈｉｎａ（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースを、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器を用いて検出し、ツラノースを特徴的なマーカーとして使用して、蜂の巣の内で少なくとも７日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋が７５％以上である成熟したアカシア蜂蜜を検出する方法。

【請求項2】

アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースを、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器を用いて検出し、ツラノースを特徴的なマーカーとして使用して、蜂の巣の内で少なくとも７日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋が７５％以上である成熟したアカシア蜂蜜、蜂の巣の内で３日間超かつ５日間以下醸造され、かつ蜜脾の封蓋は３０～７０％である半未熟なアカシア蜂蜜、又は蜂の巣の内で０～３日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋は１０％以下である未熟な蜂蜜のいずれかに、アカシア蜂蜜の成熟度を識別する方法。

【請求項3】

アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースを、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器を用いて検出し、ツラノースを特徴的なマーカーとして使用して、蜂の巣の内で少なくとも７日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋が７５％以上である成熟したアカシア蜂蜜と、蜂の巣の内で０～３日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋が１０％以下である未熟なアカシア蜂蜜を識別する方法。

【請求項4】

アカシア蜂蜜の成熟度の識別方法であって、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器を用いて、アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースを検出し、ツラノースを特徴的なマーカーとして、識別対象のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．５％以上であれば、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルが成熟したアカシア蜂蜜であると判断し、識別対象のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．３％以上かつ０．５％未満であれば、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルが半未熟なアカシア蜂蜜であると判断し、識別対象のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．３％未満であれば、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルが未熟なアカシア蜂蜜であると判断し、
前記成熟したアカシア蜂蜜は、蜂の巣の内で少なくとも７日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋が７５％以上であり、
前記半未熟なアカシア蜂蜜は、蜂の巣の内で３日間超かつ５日間以下醸造され、かつ蜜脾の封蓋は３０～７０％であり、
前記未熟な蜂蜜は、蜂の巣の内で０～３日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋は１０％以下であることを特徴とするアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。

【請求項5】

ツラノースの含有量とピーク面積との線形関係により検量線を作成し、該検量線及びアカシア蜂蜜サンプルから検出されたツラノースのピーク面積に従ってその含有量を計算し、前記ツラノースの含有量は、アカシア蜂蜜サンプルに対する質量百分率の含有量であることを特徴とする請求項４に記載のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。

【請求項6】

前記高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器による検出の液体クロマトグラフィー条件は、クロマトグラフィーカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ社製、商品名：Ｈｉ－Ｐｌｅｘ Ｐｂ、ＵＳＰ Ｌ１９）を用い、カラム温度が６８～７２℃であることを特徴とする請求項４又は５に記載のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。

【請求項7】

前記クロマトグラフィーカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ社製、商品名：Ｈｉ－Ｐｌｅｘ Ｐｂ、ＵＳＰ Ｌ１９）のサイズが４．０×２５０ｍｍであることを特徴とする請求項６に記載のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。

【請求項8】

水を移動相とし、溶出方法がアイソクラティック溶出であることを特徴とする請求項６に記載のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。

【請求項9】

前記移動相の流速が０．５～０．７ｍＬ／ｍｉｎ、注入量が４５～５５μＬであることを特徴とする請求項８に記載のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２１年１１月２３日に中国特許庁に出願された、出願番号がＣＮ２０２１１１３９０５０５．Ｘ、発明の名称が「アカシア蜂蜜の成熟度の識別方法」である中国特許出願の優先権を主張し、その内容全体は参照により本出願に組み込まれる。

【0002】

本発明は、食品検出の技術分野に関し、具体的には、アカシア蜂蜜の成熟度の識別方法に関する。

【背景技術】

【0003】

アカシア蜂蜜は、蜜蜂がニセアカシアの花の蜜を収集して醸造した蜂蜜である。アカシア蜂蜜は、色が明るく、口当たりが柔らかく、甘くて脂っこくなく、独特なニセアカシアの花のすがすがしい香りを有し、良質でハイエンドの蜂蜜の品種に属し、その市場価値は他の蜂蜜に比べて非常に高い。アカシア蜂蜜の成熟過程は、蜜蜂が花の蜜を収集した時点から始まり、採集蜂はニセアカシアの花の蜜を蜜嚢に摂取して蜂の巣に持ち帰り、蜂の巣の内でアカシア蜂蜜の醸造を開始する。採集蜂は、採集過程で、インベルターゼ及びアミラーゼを分泌して花の蜜に混入し、帰巣した後、蜜汁を吐き出して内勤蜂に分配する。内勤蜂は、蜜汁を蜜嚢に吸入し、自身のくちばしを利用して繰り返して収縮させ、内勤蜂は、この繰り返し過程で、様々な酵素類を絶えず加え、成分の変換を実現する。内勤蜂は出し入れ、変換時に羽を絶えず振動させ、水の蒸発を加速させ、蜜脾中の蜂蜜の水分含有量が２０％程度に低下すると、蜂蜜が蜜蝋で封蓋すると、アカシア蜂蜜は基本的に成熟になる。アカシア蜂蜜の成熟過程は通常、少なくとも７日間を必要とし、蜜脾の封蓋は７５％以上に達する。したがって、蜂の巣の内で少なくとも７日間醸造され、蜜脾が７５％以上封蓋されるアカシア蜂蜜は通常、成熟したアカシア蜂蜜とみなされる。

【0004】

しかし、ニセアカシアの花期が短く、生産量を最大化するために、一般的に１～３日を超えるニセアカシアの花の蜜を人工的に収集し、人工濃縮により水分含有量を２１％以下に低下させて、未熟なアカシア蜂蜜を得る。この種の未熟なアカシア蜂蜜の理化学指標はいずれも国家標準アカシア蜂蜜の理化学指標の要件を満たしているため、それを自然に成熟したアカシア蜂蜜と効果的に区別できず、アカシア蜂蜜が成熟しているか否か及び成熟度を区別することも困難である。現在、市場における異なる成熟度のアカシア蜂蜜の価値も異なり、一部の企業は高価値を追求するために、未熟又は完全に成熟していないアカシア蜂蜜を成熟したアカシア蜂蜜として販売し、蜂蜜市場の秩序を大幅に乱す。したがって、異なる品質のアカシア蜂蜜を区別し、アカシア蜂蜜の品質と価値を保証するために、アカシア蜂蜜の成熟度を判別するための安定した確実な指標を早急に開発する必要がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明の目的は、ツラノースを特徴的なマーカーとして使用して、アカシア蜂蜜の成熟度を識別する方法を提供することである。

【0006】

蜂蜜の物質組成は成熟過程で変化するが、蜂蜜中の高含有量の化学成分はいずれも成熟過程で特徴的な含有量変化が発生するわけではなく、多くの成分の含有量変化は規則的ではなく、成熟した蜂蜜の特徴的なマーカーとすることは困難である。蜂蜜の偽物混入及び蜂蜜の成熟度は、蜂蜜の２つの異なる評価方法であり、偽物混入に比べて、成熟度の評価は製品の等級付けを良好に実現でき、すなわち、偽物混入がない場合、成熟度の違いに応じて製品を異なる等級に分け、製品の異なる価値を実現する。成熟度の識別及び評価は、蜂蜜の高品質・高価格を実現するための重要な支持的役割となっている。本発明は、アカシア蜂蜜の成熟過程に関する研究において、アカシア蜂蜜の成熟過程におけるツラノースの含有量の変化が蜂の巣の内の醸造時間及び封蓋と明らかな関連性を有し、特徴的なマーカーとして成熟したアカシア蜂蜜と未熟なアカシア蜂蜜を識別するために使用できることを発見した。さらに、異なる年、供給源及び成熟度の大サンプル量のアカシア蜂蜜を検出することにより、異なる成熟度のアカシア蜂蜜におけるツラノースの含有量の変化の特徴が非常に安定していることを発見し、また、ツラノースの価格が高く、アカシア蜂蜜に人為的に加えることが困難であり、アカシア蜂蜜の成熟度の特徴的なマーカーとして、成熟した及び未熟なアカシア蜂蜜を識別するのに適している。

【課題を解決するための手段】

【0007】

上記発見に基づいて、本発明は以下の技術的解決手段を提供する。

【0008】

第１の態様では、本発明は、成熟したアカシア蜂蜜の特徴的なマーカーとしてのツラノースの使用を提供する。

【0009】

第２の態様では、本発明は、アカシア蜂蜜の成熟度の識別におけるツラノースの使用を提供する。

【0010】

第３の態様では、本発明は、成熟したアカシア蜂蜜及び未熟なアカシア蜂蜜の識別におけるツラノースの使用を提供する。

【0011】

第４の態様では、本発明は、アカシア蜂蜜の成熟度の識別方法を提供し、該方法は、ツラノースを特徴的なマーカーとしてアカシア蜂蜜サンプルを検出し、識別対象のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．５％以上であれば、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルが成熟したアカシア蜂蜜であると判断し、識別対象のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．３％以上かつ０．５％未満であれば、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルが半熟なアカシア蜂蜜であると判断し、識別対象のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．３％未満であれば、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルが未熟なアカシア蜂蜜であると判断する。

【0012】

ここで、前記成熟したアカシア蜂蜜は、蜂の巣の内で少なくとも７日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋率が７５％以上であり、
前記半未熟なアカシア蜂蜜は、蜂の巣の内で３日間超かつ５日間以下醸造され、かつ蜜脾の封蓋率が３０～７０％であり、
前記未熟な蜂蜜は、蜂の巣の内で０～３日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋率が１０％以下である。

【0013】

好ましくは、上記識別方法は、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器を用いて、前記アカシア蜂蜜サンプルを検出する。

【0014】

具体的には、ツラノースの含有量とピーク面積との線形関係により検量線を作成し、該検量線及びアカシア蜂蜜サンプルから検出されたツラノースのピーク面積に従ってその含有量を計算する。

【0015】

本発明において、ツラノースの含有量は、アカシア蜂蜜サンプルに対する質量百分率の含有量である。

【0016】

前記識別方法は、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器を用いて、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルを検出し、得られたスペクトルにはツラノースに対応する特徴的なピークが含まれ、その含有量が０．５％以上であれば、該アカシア蜂蜜サンプルが成熟したアカシア蜂蜜であると判断する。

【0017】

好ましくは、前記高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器による検出の液体クロマトグラフィー条件は、Ｈｉ－ＰｌｅｘＰｂ、ＵＳＰ Ｌ１９クロマトグラフィーカラムを用い、カラム温度が６８～７２℃（好ましくは７０℃）である。

【0018】

上記Ｈｉ－Ｐｌｅｘ Ｐｂ、ＵＳＰ Ｌ１９クロマトグラフィーカラムは、具体的には、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｈｉ－Ｐｌｅｘ Ｐｂ、ＵＳＰ Ｌ１９、４．０×２５０ｍｍである。

【0019】

前記液体クロマトグラフィーは、水を移動相とし、溶出方法はアイソクラティック溶出である。

【0020】

上記液体クロマトグラフィー条件を用いる場合、前記移動相の流速は、好ましくは０．５～０．７ｍＬ／ｍｉｎ、より好ましくは０．６ｍＬ／ｍｉｎであり、注入量は、好ましくは４５～５５μＬ、より好ましくは５０μＬである。

【0021】

好ましくは、前記高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器による検出の蒸発光散乱検出器の条件は、霧化温度が９０℃、蒸発温度が６０℃、キャリアガス流速が１．２ＳＬＭである。

【0022】

高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器によって検出を行う前に、アカシア蜂蜜サンプルを前処理するステップをさらに含み、前記前処理は、前記アカシア蜂蜜サンプルを水に溶解した後、濾過処理することを含む。

【0023】

具体的には、前記アカシア蜂蜜サンプルを超純水に溶解し、均一に混合し、得られた溶液を濾過膜で濾過した後に高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器により直接検出する。

【0024】

本発明の一実施形態として、上記アカシア蜂蜜サンプル溶液を調製するために加える水の体積は、アカシア蜂蜜サンプルの質量の３～５倍である。実施例では、前記蜂蜜サンプルの前処理方法は、アカシア蜂蜜サンプル１ｇを超純水３ｍＬに加え、ボルテックスし、５ｍＬに定容し、０．２２μｍナイロン濾過膜で濾過し、注入することである。

【発明の効果】

【0025】

本発明の有益な効果は以下のとおりである。本発明は、アカシア蜂蜜の成熟過程におけるツラノースの含有量の変化が明らかな特徴を有することを初めて発見し、ツラノースの含有量０．５％以上を成熟したアカシア蜂蜜の判断基準として使用できると決定し、成熟したアカシア蜂蜜と未熟なアカシア蜂蜜を識別し、その成熟度を決定するために用いられる。

【0026】

本発明は、ツラノースを特徴的なマーカーとしてアカシア蜂蜜の成熟度を識別する方法を開発し、該方法は、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器を用いて、アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースを検出し、高い特異性及び感度を有し、ツラノースに対する検出限界が０．１％に達する。本発明は、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器による検出の重要な条件パラメータをさらに最適化することにより、アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの検出精度をさらに向上させる。

【0027】

本発明のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法は、操作が簡単で、効率が高く、コストが低いなどの特徴を有し、検出結果が確実で安定しており、判断度が高く、普及と応用が容易で、成熟したアカシア蜂蜜の識別に効果的な方法を提供し、良質なアカシア蜂蜜の関連業界又は国家標準の制定に一定の指導的な意義を有し、同時に蜂蜜消費者の正当な権益を保護し、蜂蜜消費業界の健全な発展を維持することに重要な意義を有する。

【図面の簡単な説明】

【0028】

【図1】本発明の実施例１における異なる成熟度のアカシア蜂蜜のクロマトグラムである。

【発明を実施するための形態】

【0029】

以下の実施例は、本発明を説明するものであるが、本発明の範囲を限定するものではない。

【0030】

以下の実施例で使用される実験方法は、特に説明しない限り、いずれも一般的な方法である。使用する材料、試薬等は、特に説明しない限り、商業的に入手可能である。ここで、使用する一部の機器及び試薬は、以下のとおりである。高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器、米国Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司；電子分析天秤（ＰＬ２０３）、ドイツＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥＤＯ公司；超純水機（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ Ｇｒａｄｉｅｎｔ）、米国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司；ボルテックスミキサー（Ｇ５６０Ｅ）、米国Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ公司。

【0031】

実施例１ 異なる成熟度のアカシア蜂蜜中のツラノースの含有量の検出

【0032】

１、サンプルの供給源：２０１９年、２０２０年、２０２１年に、それぞれ陝西省延安市及び河南省三門峡市（アカシア蜂蜜の主産地）の複数の異なる養蜂場で蜜蜂が１日間（１ｄ）、３日間（３ｄ）、５日間（５ｄ）、７日間（７ｄ）、９日間（９ｄ）、１１日間（１１ｄ）、１３日間（１３ｄ）醸造したアカシア蜂蜜サンプルを収集した。異なる醸造日数のサンプルについて、各養蜂場から３つを取り、醸造時間及び蜜脾の封蓋率を記録した。ここで、収集されたすべての１ｄ～５ｄのサンプルは、人工濃縮によりその水分含有量を１８～２１％の範囲内に制御し、収集された７ｄ～１３ｄのサンプルは、水分含有量を測定する必要があり、その水分含有量は２１％以下であるべき、蜜脾の封蓋が７５％以上を満たす必要がある。

【0033】

具体的なアカシア蜂蜜サンプルの情報を表１及び表２に示す。すべてのアカシア蜂蜜サンプルに対して通常の品質指標測定及び花粉の識別が行われ、その結果は、すべてのサンプルがいずれも対応するアカシア蜂蜜の属性特徴に一致していることを示した。

【0034】

収集されたすべてのアカシア蜂蜜サンプルのツラノースの含有量を検出した。

【0035】

２、サンプルの前処理：アカシア蜂蜜サンプル１ｇを超純水３ｍＬに加え、ボルテックスし、５ｍＬメスフラスコに水で定容し、０．２２μｍナイロン濾過膜で濾過し、注入した。

【0036】

３、機器条件の設定：
（１）液体クロマトグラフィー条件
クロマトグラフィーカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｈｉ－Ｐｌｅｘ Ｐｂ、ＵＳＰ Ｌ１９、４．０×２５０ｍｍ；
カラム温度：７０℃；
注入量：５０μＬ；
移動相：超純水；
溶出条件：アイソクラティック溶出；
流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ。

【0037】

（２）蒸発光散乱検出器の条件：
噴霧温度：９０℃；
蒸発温度：６０℃；
キャリアガス流速：１．２ＳＬＭ；
収集時間帯：０～９ｍｉｎで収集せず（蜂蜜における高含有量のフルクトース及びグルコースの干渉を回避できる）、９～１５ｍｉｎでデータを収集した。

【0038】

４、検量線の作成：濃度が０．０２％、０．１％、０．２％、０．５％、１．０％、２．０％、５．０％のツラノース標準品を調製し、濃度値の対数（１０を底とする対数である）と応答値の対数を求めて検量線を作成した。

【0039】

５、アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量の検出：ツラノースの含有量とピーク面積との線形関係により検量線を作成し、該検量線及びアカシア蜂蜜サンプルから検出されたツラノースのピーク面積に従ってその含有量を計算した。

【0040】

統計によると、異なる成熟度のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量を表１及び表２に示し、以上の検出結果から、アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．５％以上であれば、成熟したアカシア蜂蜜であると判断でき、実際にサンプリングしたときの結果と一致し、成熟したアカシア蜂蜜の条件に合い、すなわち、アカシア蜂蜜が蜂の巣の中で少なくとも７ｄ醸造され、かつ封蓋率が７５％以上であった。アカシア蜂蜜試料中のツラノースの含有量が０．５％未満かつ０．３％以上であれば、半熟なアカシア蜂蜜であると判断でき、蜂の巣の中で３日間超かつ５日間以下醸造されたサンプルであり、その封蓋率が３０％～７０％であった。アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．３％未満であれば、未熟なアカシア蜂蜜と判断できた（１～３ｄのサンプル、基本的に封蓋なし）。

【0041】

異なる成熟度のアカシア蜂蜜の検出スペクトルを図１に示す。

【0042】

【表1】

【0043】

【表2】

【0044】

実施例２ 市販されているアカシア蜂蜜の識別における特徴的なマーカーとしてのツラノースの使用

【0045】

１、サンプルの供給源

【0046】

アカシア蜂蜜とラベル付けされた様々なグレード又はブランドの蜂蜜サンプルを合計１８個市場から購入し、すべてのサンプルの花粉検査を行った結果、アカシア蜂蜜であることが実証された。

【0047】

２、サンプルの前処理：アカシア蜂蜜サンプル１ｇを超純水３ｍＬに加え、ボルテックスし、５．０ｍＬに水で定容し、０．２２μｍナイロン濾過膜で濾過し、注入した。

【0048】

３、機器条件の設定：
（１）液体クロマトグラフィー条件
クロマトグラフィーカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｈｉ－Ｐｌｅｘ Ｐｂ、ＵＳＰ Ｌ１９、４．０×２５０ｍｍ；
カラム温度：７０℃；
注入量：５０μＬ；
移動相：超純水；
溶出条件：アイソクラティック溶出；
流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ。

【0049】

（２）蒸発光散乱検出器の条件：
噴霧温度：９０℃；
蒸発温度：６０℃；
キャリアガス流速：１．２ＳＬＭ。

【0050】

４、検量線の作成：濃度が０．０２％、０．１％、０．２％、０．５％、１．０％、２．０％、５．０％のツラノース標準品を調製し、濃度値の対数（１０を底とする対数である）と応答値の対数を求めて検量線を作成した。

【0051】

５、アカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量の検出：ツラノースの含有量とピーク面積との線形関係により検量線を作成し、該検量線及びアカシア蜂蜜サンプルから検出されたツラノースのピーク面積に従ってその含有量を計算した。

【0052】

結果を表３に示す。

【0053】

【表3】

【0054】

試験結果から、７個のサンプルのツラノースの含有量が０．５％超であれば、成熟したアカシア蜂蜜であると判断し、サンプルのトレーサビリティ情報によれば、サンプルが成熟したアカシア蜂蜜を生産する認証企業からのものであることが確認でき、本発明が提供する成熟度の識別方法の判別精度が高いことが示された。ここで、４つのサンプル中のツラノースの含有量が０．３％～０．５％であれば、半熟なアカシア蜂蜜であると判断し、７個のサンプルのツラノースの含有量が０．３％未満であれば、未熟なアカシア蜂蜜であると判断した。以上の結果から、本発明の識別方法は、アカシア蜂蜜の成熟度を効果的に識別でき、市販のアカシア蜂蜜の成熟度の等級分けに使用でき、アカシア蜂蜜が成熟度に応じて価格が異なることを実現できることが証明された。

【0055】

以上、一般的な説明及び具体的な実施形態を用いて、本発明を詳細に記載したが、本発明に基づいて多くの修正又は改善を行い得ることは、当業者に明らかである。したがって、本発明の精神から逸脱せずに行われたこれらの修正又は改善は、いずれも本発明の特許請求の範囲に属する。
以下に、本願出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］
成熟したアカシア蜂蜜の特徴的なマーカーとしてのツラノースの使用。
［２］
アカシア蜂蜜の成熟度の識別におけるツラノースの使用。
［３］
成熟したアカシア蜂蜜と未熟なアカシア蜂蜜の識別におけるツラノースの使用。
［４］
アカシア蜂蜜の成熟度の識別方法であって、ツラノースを特徴的なマーカーとしてアカシア蜂蜜サンプルを検出し、識別対象のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．５％以上であれば、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルが成熟したアカシア蜂蜜であると判断し、識別対象のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．３％以上かつ０．５％未満であれば、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルが半未熟なアカシア蜂蜜であると判断し、識別対象のアカシア蜂蜜サンプル中のツラノースの含有量が０．３％未満であれば、識別対象のアカシア蜂蜜サンプルが未熟なアカシア蜂蜜であると判断し、
前記成熟したアカシア蜂蜜は、蜂の巣の内で少なくとも７日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋が７５％以上であり、
前記半未熟なアカシア蜂蜜は、蜂の巣の内で３日間超かつ５日間以下醸造され、かつ蜜脾の封蓋は３０～７０％であり、
前記未熟な蜂蜜は、蜂の巣の内で０～３日間醸造され、かつ蜜脾の封蓋は１０％以下であることを特徴とするアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。
［５］
前記アカシア蜂蜜サンプルを検出することは、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器を用いて、前記アカシア蜂蜜サンプルを検出することであることを特徴とする［４］のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。
［６］
前記アカシア蜂蜜サンプルを検出することは、高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器を用いて、前記アカシア蜂蜜サンプルを検出することであり、ツラノースの含有量とピーク面積との線形関係により検量線を作成し、該検量線及びアカシア蜂蜜サンプルから検出されたツラノースのピーク面積に従ってその含有量を計算し、前記ツラノースの含有量は、アカシア蜂蜜サンプルに対する質量百分率の含有量であることを特徴とする［５］のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。
［７］
前記高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器による検出の液体クロマトグラフィー条件は、Ｈｉ－Ｐｌｅｘ Ｐｂ、ＵＳＰ Ｌ１９クロマトグラフィーカラムを用い、カラム温度が６８～７２℃であることを特徴とする［５］又は［６］のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。
［８］
前記Ｈｉ－Ｐｌｅｘ Ｐｂ、ＵＳＰ Ｌ１９クロマトグラフィーカラムのサイズが４．０×２５０ｍｍであることを特徴とする［７］のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。
［９］
水を移動相とし、溶出方法がアイソクラティック溶出であることを特徴とする［７］のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。
［１０］
前記移動相の流速が０．５～０．７ｍＬ／ｍｉｎ、注入量が４５～５５μＬであることを特徴とする［９］のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。
［１１］
前記高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器による検出の蒸発光散乱検出器の条件は、霧化温度が９０℃、蒸発温度が６０℃、キャリアガス流速が１．２ＳＬＭであることを特徴とする［５］～［１０］のいずれかのアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。
［１２］
高速液体クロマトグラフィー蒸発光散乱検出器によって検出を行う前に、アカシア蜂蜜サンプルを前処理するステップをさらに含み、前記前処理は、前記アカシア蜂蜜サンプルを水に溶解した後、濾過処理することを含むことを特徴とする［５］～［１０］のいずれかのアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。
［１３］
アカシア蜂蜜サンプル溶液に加える水の体積が前記アカシア蜂蜜サンプルの質量の３～５倍であることを特徴とする［１２］のアカシア蜂蜜の成熟度の識別方法。

【図1】