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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-12-03
(45)【発行日】2024-12-11
(54)【発明の名称】オリゴ糖合成にかかる繰り返し二糖とそのオリゴマーの製造法
(51)【国際特許分類】
C07H 1/06 20060101AFI20241204BHJP
C07H 15/04 20060101ALI20241204BHJP
C07H 15/203 20060101ALI20241204BHJP
【ＦＩ】
C07H1/06
C07H15/04 D CSP
C07H15/203
【請求項の数】
7
(21)【出願番号】P 2021547006
(86)(22)【出願日】2020-09-18
(86)【国際出願番号】 JP2020035624
(87)【国際公開番号】W WO2021054474
(87)【国際公開日】2021-03-25
【審査請求日】2023-09-05
(31)【優先権主張番号】P 2019171012
(32)【優先日】2019-09-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2020042193
(32)【優先日】2020-03-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】504150461
【氏名又は名称】国立大学法人鳥取大学
(74)【代理人】
【識別番号】100083806
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 秀和
(74)【代理人】
【識別番号】100101247
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 俊一
(74)【代理人】
【識別番号】100095500
【弁理士】
【氏名又は名称】伊藤 正和
(74)【代理人】
【識別番号】100098327
【弁理士】
【氏名又は名称】高松 俊雄
(72)【発明者】
【氏名】田村 純一
(72)【発明者】
【氏名】田村 敬裕
【審査官】増永 淳司
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１９／１３６３９９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】TEJBRANT, J，An approach to the synthesis of O-glycopeptides，Chemical communications，1992年，No. 7
【文献】FUKASE, K et al.，Synthesis of New Serine-Linked Oligosaccharides in Blood-Clotting Factors VII and IX and Protein Z.，Bulletin of the Chemical Society of Japan，1992年，Vol. 65，pp. 436-445
【文献】LOURENCO, EC et al.，Synthesis of potassium (2R)-2-O-α-D-glucopyranosyl-(1→6)-α-D-glucopyranosyl-2,3-dihydroxypropanoa，Carbohydrate Research，2009年，Vol. 344，pp. 2073-2078
【文献】INAMORI, K et al.，Dystroglycan Function Requires Xylosyl- and Glucoronyltransferase Activities of LARGE，SCIENCE，2012年，Vol. 335，pp. 93-96
【文献】TAMURA, T et al.，Regio- and stereo-controlled synthesis of β-Xyl(1-4)Rbo-5P1-Rbo, the partial structure of O-mannosy，Tetrahedron Letters，2018年12月31日，Vol. 60，pp. 465-468
【文献】DENG, S et al.，A Facile Synthetic Approach to a Group of Structurally Typical Diosgenyl Saponins，Tetrahedron Letters，1998年，Vol. 39，pp. 6511-6514
【文献】DENG, S et al.，Synthesis of three diosgenyl saponins: dioscin, polyphyllin D, and balanitin 7，Carbohydrate Research，1999年，Vol. 317，pp. 53-62
【文献】WINTER, HC et al.，Banana lectin is unique in its recognition of the reducing unit of 3-O-β-glucosyl/mannosyl disaccha，Glycobiology，2005年，Vol. 15，pp. 1043-1050
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｈ １３／００
Ｃ０７Ｈ １５／２０３
Ｃ０７Ｈ １５／０４
Ｃ０７Ｈ １／０６
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
ＣＡＳＲＥＡＣＴ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（２’）：【化5】
で表されるキシロース誘導体と、
式（３’）：
【化6】
で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体から、
式（４’）：
【化7】
で表されるα－グリコシドを製造する方法であって、下記工程１）～３）：
工程１） 式（２’）で表されるキシロース誘導体と式（３’）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを直接縮合させてα１→３グリコシドおよびβ１→３グリコシドの混合物を得て、
工程２） 工程１）で得られた混合物を脱保護し、次いで、
工程３） 工程２）で脱保護された混合物からα－グリコシドを分離する
を含み、工程３）の分離が、β－グリコシドをクロロホルムに溶解させてβ－グリコシドを除去することにより行われる、方法。
【請求項2】
工程１）の縮合が、ＮＩＳ－ＡｇＯＴｆ、ＮＩＳ－ＴｆＯＨ、ＭｅＯＴｆ、ＣｕＢｒ２－ＡｇＯＴｆ－ｎＢｕ４ＮＩ、またはＮＢＳ－ＡｇＯＴｆを縮合剤として用いて行われる、請求項１記載の方法。
【請求項3】
工程２）の脱保護が、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いる加水分解により、キシロース残基の２－、３－および４－位に水酸基を有するトリオールを形成させるものである、請求項１または２記載の方法。
【請求項4】
Ｒ
７
’およびＲ
８
’がアセチル基である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
式（９）：【化10】
【請求項6】
式（７）：【化11】
で示される二糖供与体を、式（８）：
【化12】
で示される二糖受容体と反応させることにより四糖誘導体を得て、次いで、四糖誘導体を脱保護することにより式（９）：
【化13】
【請求項7】
Ｘ１はトリクロロアセトイミドイルオキシ、Ｘ２～Ｘ６はアセチル、Ｘ７はメチル、Ｘ８はアリル、Ｘ９およびＸ１０はベンジル、Ｘ１１はＴＢＤＰＳ、Ｘ１２およびＸ１３は一緒になってイソプロピリデンアセタールを形成している、請求項６記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、糖鎖の合成中間体およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【0002】
筋ジストロフィーの一種である糖鎖異常型筋ジストロフィーは、糖タンパクであるジストログリカンの生合成異常によって引き起こされ、筋細胞の傷害をはじめ、脳奇形や精神発達遅滞などの中枢神経障害を伴う。最近の研究により、筋細胞に存在するジストログリカンの糖鎖異常が糖鎖異常型筋ジストロフィーの原因であることがわかってきた。ジストログリカンの糖鎖のうち、ラミニンと親和性のある糖鎖部分をマトリグリカンという。マトリグリカンは、ラミニンを介して筋細胞と基底膜とを繋ぎとめるものであり、この糖鎖に生合成異常が生じることにより糖鎖異常型筋ジストロフィーが発症する。
【0003】
マトリグリカンを含むＳｅｒ／Ｔｈｒ以降の糖鎖の全体構造について研究が進められ、リビトールリン酸を介してマトリグリカンが伸長するＯ－マンノシルグリカンであることがわかっている。マトリグリカンはその非還元末端部分にα－キシロースとβ－グルクロン酸からなる二糖の繰り返しを有する糖鎖を含んでおり（非特許文献１）、この二糖の繰り返しを有する糖鎖がラミニンとの結合に必要であることがわかっている（非特許文献２）。
【0004】
糖鎖異常型筋ジストロフィーの治療には、Ｏ－マンノシルグリカンの生合成に関与する糖鎖生合成酵素を規定する遺伝子の改善が有望視されている。しかし、関与する遺伝子の種類は多く、過剰発現した場合は病状が悪化することも報告されており、糖鎖異常型筋ジストロフィーの遺伝子治療は容易ではない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【文献】Kanagawa, M. et al., Cell Rep., 14, 2209-2223 (2016)
【文献】Goddeeris, M. et al., Nature 503, 136-140 (2013)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
ラミニンを介して筋細胞と基底膜とを繋ぎとめているジストログリカン上のマトリグリカンを再構築できれば、糖鎖異常型筋ジストロフィーの発症を抑制することができる。したがって、本発明が解決すべき課題は、マトリグリカンを再構築することである。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明者らは、上記課題を解決せんと鋭意研究を重ね、α－キシロースとβ－グルクロン酸からなる二糖の繰り返しを有する糖鎖を合成するための二糖ユニット（Ｘｙｌα１－３ＧｌｃＡβ）の合成、該二糖ユニット同士を結合した四糖の合成、ならびに該繰り返しを有する糖鎖とαジストログリカンから伸長する糖鎖をつなぐ四糖部分の合成に成功し、マトリグリカンの再構築可能性を示した。本発明者らは、これらの知見から本発明を完成するに至った。
【0008】
したがって、本発明は以下のものを提供する。
［１］式（１）：
［式中、Ｘ１は脱離基または保護された水酸基であり、Ｙ１はカルボキシル基もしくはヒドロキシメチル基またはそれらの前駆体である基であり、Ｒ１～Ｒ５はそれぞれ独立して水素であるかまたは水酸基の保護基である］
で表される二糖誘導体。
［２］Ｘ１がトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ、アルコキシおよびフェノキシからなる群より選択される基であり、Ｙ１がＣＯＯＺ１またはＣＨ２ＯＺ２であり、Ｚ１がアルキル基であり、Ｚ２は水酸基の保護基であり、Ｒ１～Ｒ５がそれぞれ独立して置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニル、イソプロピリデン、ベンジリデンおよびトリアルキルシリルからなる群より選択される基である［１］記載の二糖誘導体。
［３］式（２）：
［式中、Ｘ２は脱離基であり、Ｙはキシロース残基の配座を固定する基であり、Ｒ６は、p－アルキルオキシベンジル、３，４－ジアルキルオキシベンジル、固相化されたp－アルキルオキシベンジル、固相化された３，４－ジアルキルオキシベンジル、ナフチル、ナフチルメチル、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ３、－ＣＨ＝Ｃ＝ＣＨ２、および水素からなる群から選択される基である］
で表されるキシロース誘導体と、
式（３）：
［式中、Ｘ３は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ７およびＲ８は水酸基の保護基であり、Ｙ４はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基である］
で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体から、
式（４）：
［式中、Ｘ３、Ｒ７、Ｒ８およびＹ４は上記定義と同じである］
で表されるα－グリコシドを製造する方法であって、下記工程１）～３）：
工程１） 式（２）で表されるキシロース誘導体と式（３）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを反応させて、キシロース誘導体のＯＲ６基とグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体の非保護水酸基とを介した混合アセタール誘導体を製造し、
工程２） 工程１）で得られた混合アセタール誘導体を、脱離基Ｘ２を活性化させることにより反応させてα１→３二糖誘導体を製造し、次いで、
工程３） 工程２）で得られた二糖誘導体を脱保護して式（４）に誘導する
を含む方法。
［４］Ｘ２がトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、ハロゲン、アリールチオ、およびペンテニルオキシからなる群より選択される基であり、Ｙがアセタール、カーボネート、シリレンアセタール、およびスタニレンアセタールからなる群より選択される基であり、Ｒ６がｐ－メトキシベンジルおよびナフチルメチルからなる群より選択される基であり、Ｘ３がトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ、アルコキシおよびフェノキシからなる群より選択される基であり、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ独立して置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニルおよびトリアルキルシリルからなる群より選択される基であり、Ｙ４がＣＯＯＺ２またはＣＨ２ＯＺ３であり、Ｚ２がアルキル基であり、Ｚ３は水酸基の保護基である［３］記載の方法。
［５］Ｒ７、Ｒ８が置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチルおよびレブリノイルからなる群より選択される基である［４］記載の方法。
［６］式（２’）：
［式中、Ｘ２’は脱離基であり、Ｙ’はキシロース残基の配座を固定する基であり、Ｒ６’は隣接基関与能のない水酸基の保護基である］
で表されるキシロース誘導体と、
式（３’）：
［式中、Ｘ３’は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ７’は隣接基関与能のある水酸基の保護基、Ｒ８’は水酸基の保護基であり、Ｙ４’はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基である］
で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体から、
式（４’）：
［式中、Ｘ３’、Ｒ７’、Ｒ８’およびＹ４’は上記定義と同じである］
で表されるα－グリコシドを製造する方法であって、下記工程１）～３）：
工程１） 式（２’）で表されるキシロース誘導体と式（３’）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを直接縮合させてα１→３グリコシドおよびβ１→３グリコシドの混合物を得て、
工程２） 工程１）で得られた混合物を脱保護し、次いで、
工程３） 工程２）で脱保護された混合物からα－グリコシドを分離する
を含む方法。
［７］工程１）の縮合が、ＮＩＳ－ＡｇＯＴｆ、ＮＩＳ－ＴｆＯＨ、ＭｅＯＴｆ、ＣｕＢｒ２－ＡｇＯＴｆ－ｎＢｕ４ＮＩ、またはＮＢＳ－ＡｇＯＴｆを縮合剤として用いて行われる、［６］記載の方法。
［８］工程２）の脱保護が、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いる加水分解により、キシロース残基の２－、３－および４－位に水酸基を有するトリオールを形成させるものである、［６］または［７］記載の方法。
［９］工程３）の分離が、β－グリコシドをクロロホルムに溶解させてβ－グリコシドを除去することにより行われる、［６］～［８］のいずれかに記載の方法。
［１０］式（１）で示される二糖誘導体を中間体（ＸＧユニットという）として用いることを含む、式（５）：
［式中、Ｘ４は脱離基であるかまたは保護された水酸基であり、ｎは１以上の整数である］
で示されるＸＧユニットオリゴマーを製造する方法。
［１１］式（１）で示される二糖誘導体を糖供与体とし、式（１’）：
［式中、Ｙ５はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基であり、Ｘ５は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ９～Ｒ１２は水酸基の保護基である］
で示される二糖誘導体を糖受容体として反応させることを含む［１０］記載の方法。
［１２］Ｙ５がＣＯＯＺ３またはＣＨ２ＯＺ４であり、Ｚ３がアルキル基であり、Ｚ４は水酸基の保護基であり、Ｘ５がトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ、アルコキシおよびフェノキシからなる群より選択される基であり、Ｒ９～Ｒ１２はそれぞれ独立して、置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニルおよびトリアルキルシリルからなる群より選択される基である［１１］記載の方法。
［１３］Ｒ９が置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチルおよびレブリノイルからなる群より選択される基である［１２］記載の方法。
［１４］式（９）：
で示される四糖またはその誘導体。
［１５］式（７）：
［式中、Ｘ１は脱離基または保護された水酸基、Ｘ２～Ｘ６は水酸基の保護基、Ｘ７はアルキル基である］
で示される二糖供与体を、式（８）：
［式中、Ｘ８～Ｘ１３は水酸基の保護基である、たたしＸ１２およびＸ１３は一緒になってアセタールを形成してもよい］
で示される二糖受容体と反応させることにより四糖誘導体を得て、次いで、四糖誘導体を脱保護することにより式（９）：
で示される四糖を得ることを特徴とする、式（９）で示される四糖の製造方法。
［１６］Ｘ１はトリクロロアセトイミドイルオキシ、Ｘ２～Ｘ６はアセチル、Ｘ７はメチル、Ｘ８はアリル、Ｘ９およびＸ１０はベンジル、Ｘ１１はＴＢＤＰＳ、Ｘ１２およびＸ１３は一緒になってイソプロピリデンアセタールを形成している、［１５］記載の方法。
［１］式（１）：
【化1】
［式中、Ｘ１は脱離基または保護された水酸基であり、Ｙ１はカルボキシル基もしくはヒドロキシメチル基またはそれらの前駆体である基であり、Ｒ１～Ｒ５はそれぞれ独立して水素であるかまたは水酸基の保護基である］
で表される二糖誘導体。
［２］Ｘ１がトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ、アルコキシおよびフェノキシからなる群より選択される基であり、Ｙ１がＣＯＯＺ１またはＣＨ２ＯＺ２であり、Ｚ１がアルキル基であり、Ｚ２は水酸基の保護基であり、Ｒ１～Ｒ５がそれぞれ独立して置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニル、イソプロピリデン、ベンジリデンおよびトリアルキルシリルからなる群より選択される基である［１］記載の二糖誘導体。
［３］式（２）：
【化2】
［式中、Ｘ２は脱離基であり、Ｙはキシロース残基の配座を固定する基であり、Ｒ６は、p－アルキルオキシベンジル、３，４－ジアルキルオキシベンジル、固相化されたp－アルキルオキシベンジル、固相化された３，４－ジアルキルオキシベンジル、ナフチル、ナフチルメチル、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ３、－ＣＨ＝Ｃ＝ＣＨ２、および水素からなる群から選択される基である］
で表されるキシロース誘導体と、
式（３）：
【化3】
［式中、Ｘ３は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ７およびＲ８は水酸基の保護基であり、Ｙ４はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基である］
で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体から、
式（４）：
【化4】
［式中、Ｘ３、Ｒ７、Ｒ８およびＹ４は上記定義と同じである］
で表されるα－グリコシドを製造する方法であって、下記工程１）～３）：
工程１） 式（２）で表されるキシロース誘導体と式（３）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを反応させて、キシロース誘導体のＯＲ６基とグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体の非保護水酸基とを介した混合アセタール誘導体を製造し、
工程２） 工程１）で得られた混合アセタール誘導体を、脱離基Ｘ２を活性化させることにより反応させてα１→３二糖誘導体を製造し、次いで、
工程３） 工程２）で得られた二糖誘導体を脱保護して式（４）に誘導する
を含む方法。
［４］Ｘ２がトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、ハロゲン、アリールチオ、およびペンテニルオキシからなる群より選択される基であり、Ｙがアセタール、カーボネート、シリレンアセタール、およびスタニレンアセタールからなる群より選択される基であり、Ｒ６がｐ－メトキシベンジルおよびナフチルメチルからなる群より選択される基であり、Ｘ３がトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ、アルコキシおよびフェノキシからなる群より選択される基であり、Ｒ７およびＲ８がそれぞれ独立して置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニルおよびトリアルキルシリルからなる群より選択される基であり、Ｙ４がＣＯＯＺ２またはＣＨ２ＯＺ３であり、Ｚ２がアルキル基であり、Ｚ３は水酸基の保護基である［３］記載の方法。
［５］Ｒ７、Ｒ８が置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチルおよびレブリノイルからなる群より選択される基である［４］記載の方法。
［６］式（２’）：
【化5】
［式中、Ｘ２’は脱離基であり、Ｙ’はキシロース残基の配座を固定する基であり、Ｒ６’は隣接基関与能のない水酸基の保護基である］
で表されるキシロース誘導体と、
式（３’）：
【化6】
［式中、Ｘ３’は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ７’は隣接基関与能のある水酸基の保護基、Ｒ８’は水酸基の保護基であり、Ｙ４’はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基である］
で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体から、
式（４’）：
【化7】
［式中、Ｘ３’、Ｒ７’、Ｒ８’およびＹ４’は上記定義と同じである］
で表されるα－グリコシドを製造する方法であって、下記工程１）～３）：
工程１） 式（２’）で表されるキシロース誘導体と式（３’）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを直接縮合させてα１→３グリコシドおよびβ１→３グリコシドの混合物を得て、
工程２） 工程１）で得られた混合物を脱保護し、次いで、
工程３） 工程２）で脱保護された混合物からα－グリコシドを分離する
を含む方法。
［７］工程１）の縮合が、ＮＩＳ－ＡｇＯＴｆ、ＮＩＳ－ＴｆＯＨ、ＭｅＯＴｆ、ＣｕＢｒ２－ＡｇＯＴｆ－ｎＢｕ４ＮＩ、またはＮＢＳ－ＡｇＯＴｆを縮合剤として用いて行われる、［６］記載の方法。
［８］工程２）の脱保護が、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いる加水分解により、キシロース残基の２－、３－および４－位に水酸基を有するトリオールを形成させるものである、［６］または［７］記載の方法。
［９］工程３）の分離が、β－グリコシドをクロロホルムに溶解させてβ－グリコシドを除去することにより行われる、［６］～［８］のいずれかに記載の方法。
［１０］式（１）で示される二糖誘導体を中間体（ＸＧユニットという）として用いることを含む、式（５）：
【化8】
［式中、Ｘ４は脱離基であるかまたは保護された水酸基であり、ｎは１以上の整数である］
で示されるＸＧユニットオリゴマーを製造する方法。
［１１］式（１）で示される二糖誘導体を糖供与体とし、式（１’）：
【化9】
［式中、Ｙ５はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基であり、Ｘ５は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ９～Ｒ１２は水酸基の保護基である］
で示される二糖誘導体を糖受容体として反応させることを含む［１０］記載の方法。
［１２］Ｙ５がＣＯＯＺ３またはＣＨ２ＯＺ４であり、Ｚ３がアルキル基であり、Ｚ４は水酸基の保護基であり、Ｘ５がトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ、アルコキシおよびフェノキシからなる群より選択される基であり、Ｒ９～Ｒ１２はそれぞれ独立して、置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニルおよびトリアルキルシリルからなる群より選択される基である［１１］記載の方法。
［１３］Ｒ９が置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチルおよびレブリノイルからなる群より選択される基である［１２］記載の方法。
［１４］式（９）：
【化10】
で示される四糖またはその誘導体。
［１５］式（７）：
【化11】
［式中、Ｘ１は脱離基または保護された水酸基、Ｘ２～Ｘ６は水酸基の保護基、Ｘ７はアルキル基である］
で示される二糖供与体を、式（８）：
【化12】
［式中、Ｘ８～Ｘ１３は水酸基の保護基である、たたしＸ１２およびＸ１３は一緒になってアセタールを形成してもよい］
で示される二糖受容体と反応させることにより四糖誘導体を得て、次いで、四糖誘導体を脱保護することにより式（９）：
【化13】
で示される四糖を得ることを特徴とする、式（９）で示される四糖の製造方法。
［１６］Ｘ１はトリクロロアセトイミドイルオキシ、Ｘ２～Ｘ６はアセチル、Ｘ７はメチル、Ｘ８はアリル、Ｘ９およびＸ１０はベンジル、Ｘ１１はＴＢＤＰＳ、Ｘ１２およびＸ１３は一緒になってイソプロピリデンアセタールを形成している、［１５］記載の方法。
【発明の効果】
【0009】
本発明によれば、誘導体化されていてもよいα－キシロースと誘導体化されていてもよいβ－グルクロン酸からなる二糖ユニットが提供される。該二糖ユニットを用いて該ポストリン酸糖鎖を再構築することができる。このことは、糖鎖異常型筋ジストロフィーの発症抑制を可能にする。
【発明を実施するための形態】
【0010】
１．二糖誘導体
本発明は、１の態様において、式（１）：
［式中、Ｘ１は脱離基または保護された水酸基であり、Ｙ１はカルボキシル基もしくはヒドロキシメチル基またはそれらの前駆体である基であり、Ｒ１～Ｒ５はそれぞれ独立して水素であるかまたは水酸基の保護基である］
で表される二糖誘導体を提供する。
本発明は、１の態様において、式（１）：
【化14】
［式中、Ｘ１は脱離基または保護された水酸基であり、Ｙ１はカルボキシル基もしくはヒドロキシメチル基またはそれらの前駆体である基であり、Ｒ１～Ｒ５はそれぞれ独立して水素であるかまたは水酸基の保護基である］
で表される二糖誘導体を提供する。
【0011】
Ｘ１としては公知の脱離基または保護された水酸基を使用でき、トリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ（４－ペンテニルオキシ）等の、糖鎖合成に一般的に使用される脱離基が例示されるが、これらに限定されない。本開示における他の箇所の脱離基も同様である。好ましい脱離基Ｘ１としてはトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオやフェニルチオなどのチオグリコシドを形成するものが例示されるが、これらに限定されない。水酸基の保護基は当業者によく知られている。すなわち、保護された水酸基は当業者によく知られている。Ｘ１はアルコキシまたはフェノキシであってもよい。
【0012】
Ｙ１はカルボキシル基もしくはヒドロキシメチル基またはそれらの前駆体である基である。カルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基は、当業者によく知られており、例えば酸化／還元反応、加水分解反応のような反応、加熱などを経ることにより典型的に１ステップでカルボキシル基またはヒドロキシメチル基に転換できる基を表す。カルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体は通常はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の誘導体でもある。Ｙ１基の例としては、ＣＯＯＺ１またはＣＨ２ＯＺ２などが挙げられるが、これらに限定されない。ここで、Ｚ１はアルキル基であり、好ましくは炭素数１～３個のアルキル基である。より好ましいＺ１基はメチルである。Ｚ２は通常用いられる水酸基の保護基である。水酸基の保護基は公知であり、その具体例は本明細書に記載されている。
【0013】
Ｒ１～Ｒ５はそれぞれ独立して水素であるかまたは水酸基の保護基である。本開示における保護基は糖鎖形成後に除去可能な基であることが好ましい。本開示において、化合物中に複数の水酸基の保護基がある場合は、それら複数の保護基は互いに異なる種類であり得、または互いに同じ種類であり得る。互いに異なる種類の保護基を使用することにより、選択的な脱保護が促進され得る。このような水酸基の保護基は公知であり、例えば、Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis, 5th Edition (Wiley)の第２章に記載されている保護基を挙げることができる。具体的には、ベンジル基、ｐ－メトキシベンジル基、ｐ－メトキシフェニル基、ｐ－ニトロベンジル基、ベンゾイル基、ｐ－メチルベンゾイル基、ベンジリデン基、アセチル基、ピバロイル基、レブリノイル基、アリル基、メトキシメチル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、イソプロピリデン、ベンジリデン、アリルオキシカルボニル、トリアルキルシリルなどが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいＲ１基としては、隣接基関与能のある置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、レブリノイルが挙げられるが、これらに限定されない。隣接基関与能のある保護基のさらなる例は後述するＲ７’基について記載されており、それらをＲ１基に用いることができる。好ましいＲ２～Ｒ５基としては、置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニル、トリアルキルシリル等の糖鎖合成に一般的に使用される保護基が挙げられるが、これらに限定されない。Ｒ１～Ｒ５のうちの少なくとも１つ（例えばＲ１、またはＲ２～Ｒ５のいずれか）が保護基であることが好ましく、その場合の残りの基は水素である。Ｒ１～Ｒ５のすべてが保護基であってもよい。
【0014】
本発明は、さらなる態様において、式（２）：
［式中、Ｘ２は脱離基であり、Ｙはキシロース残基の配座を固定する基であり、Ｒ６はp－アルキルオキシベンジル、３，４－ジアルキルオキシベンジル、固相化されたp－アルキルオキシベンジル、固相化された３，４－ジアルキルオキシベンジル、ナフチル、ナフチルメチル、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ３、－ＣＨ＝Ｃ＝ＣＨ２、および水素からなる群から選択される基である］
で表されるキシロース誘導体と、
式（３）：
［式中、Ｘ３は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ７およびＲ８は水酸基の保護基であり、Ｙ４はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基である］
で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体から、
式（４）：
［式中、Ｘ３、Ｒ７、Ｒ８およびＹ４は上記定義と同じである］
で表されるα－グリコシドを製造する方法であって、下記工程１）～３）：
工程１） 式（２）で表されるキシロース誘導体と式（３）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを反応させて、キシロース誘導体のＯＲ６基とグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体の非保護水酸基とを介した混合アセタール誘導体を製造し、
工程２） 工程１）で得られた混合アセタール誘導体を、脱離基Ｘ２を活性化させることにより反応させてα１→３二糖誘導体を製造し、次いで、
工程３） 工程２）で得られた二糖誘導体を脱保護して式（４）に誘導する
を含む方法を提供する。
【化15】
［式中、Ｘ２は脱離基であり、Ｙはキシロース残基の配座を固定する基であり、Ｒ６はp－アルキルオキシベンジル、３，４－ジアルキルオキシベンジル、固相化されたp－アルキルオキシベンジル、固相化された３，４－ジアルキルオキシベンジル、ナフチル、ナフチルメチル、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ３、－ＣＨ＝Ｃ＝ＣＨ２、および水素からなる群から選択される基である］
で表されるキシロース誘導体と、
式（３）：
【化16】
［式中、Ｘ３は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ７およびＲ８は水酸基の保護基であり、Ｙ４はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基である］
で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体から、
式（４）：
【化17】
［式中、Ｘ３、Ｒ７、Ｒ８およびＹ４は上記定義と同じである］
で表されるα－グリコシドを製造する方法であって、下記工程１）～３）：
工程１） 式（２）で表されるキシロース誘導体と式（３）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを反応させて、キシロース誘導体のＯＲ６基とグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体の非保護水酸基とを介した混合アセタール誘導体を製造し、
工程２） 工程１）で得られた混合アセタール誘導体を、脱離基Ｘ２を活性化させることにより反応させてα１→３二糖誘導体を製造し、次いで、
工程３） 工程２）で得られた二糖誘導体を脱保護して式（４）に誘導する
を含む方法を提供する。
【0015】
上記のα－グリコシドの製造方法において、式（２）の化合物が糖供与体、式（３）の化合物が糖受容体となる。
【0016】
式（２）の化合物において、Ｘ２は脱離基である。Ｘ２は上で説明した脱離基Ｘ１と同様であり、トリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、フェニルスルフィニル、ハロゲン、ペンテニルオキシ等の、糖鎖合成に一般的に使用される脱離基が例示されるが、これらに限定されない。脱離基として好ましいＸ２としてはトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオやアリールチオなどのチオグリコシドを形成するものが例示されるが、これらに限定されない。本開示において脱離基として記載されるアルキルチオ基は、例えば炭素数１～２０のアルキルチオであり得るが、これに限定されない。本開示において脱離基として記載されるアリールチオ基は、例えばフェニルチオまたはトリルチオであり得るがこれに限定されない。
【0017】
式（２）の糖供与体において、Ｙは、キシロース残基を表記の配座に固定し、環の反転を防止しうる基である。なお、式（２）において、左側に表示された２つの酸素原子はＹ基に含まれる。具体的には、Ｙは、アセタール、カーボネート、シリレンアセタール、またはスタニレンアセタールであり得る。アセタールはジアセタールを含む。これらの構造を定義づける酸素原子が、上記式（２）の左側に表示された２つの酸素原子に相当することが理解されるべきである。より具体的には、Ｙは下記式（２ａ）で表される構造であり得る。
式（２ａ）中、ＺはＣ、Ｓｉ、またはＳｎであり、Ｚ＝Ｃであり且つＹがアセタールである場合にはｎは０～２の整数（好ましくは０または１）でありそれ例外の場合はｎは０である。各Ｚに結合する２つのＬは、それぞれ独立してアルキル、フェニル、または水素である。２つのＬのいずれか片方または両方がアルキルまたはフェニルであることが好ましい。ｎが１以上の場合は、各Ｚに結合する２つのＬの片方はさらにアルキルオキシ（例えばメトキシ）またはフェニルオキシであり得る。あるいは、Ｚ＝Ｃであり且つＹがカーボネートである場合には、Ｚに結合する２つのＬは一緒になって「Ｏ＝」を表す。アルキルおよびアルキルオキシにおけるアルキル基は、例えば炭素数１～６個のアルキル基であり得るが、これに限定されない。
式（２）の糖供与体の好ましい具体例を下記に示す。下記の例において、（２－１）および（２－２）はＹがｎ＝０のアセタールである実施形態、（２－３）はＹがｎ＝１のアセタールである実施形態、（２－４）、（２－５）、および（２－６）はそれぞれＹがカーボネート、シリレンアセタール、およびスタニレンアセタールである実施形態を表す。ここに示されるＬ基は例示であって、Ｌ基はこれらに限定されない。
【化18】
式（２ａ）中、ＺはＣ、Ｓｉ、またはＳｎであり、Ｚ＝Ｃであり且つＹがアセタールである場合にはｎは０～２の整数（好ましくは０または１）でありそれ例外の場合はｎは０である。各Ｚに結合する２つのＬは、それぞれ独立してアルキル、フェニル、または水素である。２つのＬのいずれか片方または両方がアルキルまたはフェニルであることが好ましい。ｎが１以上の場合は、各Ｚに結合する２つのＬの片方はさらにアルキルオキシ（例えばメトキシ）またはフェニルオキシであり得る。あるいは、Ｚ＝Ｃであり且つＹがカーボネートである場合には、Ｚに結合する２つのＬは一緒になって「Ｏ＝」を表す。アルキルおよびアルキルオキシにおけるアルキル基は、例えば炭素数１～６個のアルキル基であり得るが、これに限定されない。
式（２）の糖供与体の好ましい具体例を下記に示す。下記の例において、（２－１）および（２－２）はＹがｎ＝０のアセタールである実施形態、（２－３）はＹがｎ＝１のアセタールである実施形態、（２－４）、（２－５）、および（２－６）はそれぞれＹがカーボネート、シリレンアセタール、およびスタニレンアセタールである実施形態を表す。ここに示されるＬ基は例示であって、Ｌ基はこれらに限定されない。
【化19】
【0018】
Ｒ６は、p－アルキルオキシベンジル、３，４－ジアルキルオキシベンジル、固相化されたp－アルキルオキシベンジル、固相化された３，４－ジアルキルオキシベンジル、ナフチル、ナフチルメチル、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ３、－ＣＨ＝Ｃ＝ＣＨ２、および水素からなる群から選択される。これらＲ６は、ＩＡＤ（intramolecular aglycon delivery：分子内アグリコン転移）法によりこの糖供与体の２位と糖受容体の３位（唯一の非保護水酸基）との間をつなぐ混合アセタールを生じさせる基である。ＩＡＤ法自体は当業者に知られており、Carbohydrate Research, 343, 1553-1573 (2008)においてCumpsteyにより総説されている。例えば、Ｒ６がp－アルキルオキシベンジル、３，４－ジアルキルオキシベンジル、固相化されたp－アルキルオキシベンジル、固相化された３，４－ジアルキルオキシベンジル、ナフチル、またはナフチルメチルである場合に、２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－ｐ－ベンゾキノン（ＤＤＱ）を用いる酸化条件下で、式（３）に示す糖受容体との間に（該糖受容体の第３位非保護水酸基を介して）混合アセタールを生じせしめる。当業者には理解されているように、ＤＤＱの他にも、Ｒ６の種類に応じて、混合アセタールを生じさせるために異なる試薬が用いられ得る（例えば、トシル酸等の酸触媒、Ｎ－ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）、およびイミダゾールと４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等の塩基触媒が挙げられるがこれらに限定されない）。特に、Ｒ６が水素である場合には、糖受容体との反応にＭｅ２ＳｉＣｌ２を加えてシリレン混合アセタール形成に関与させることができる。上記Cumpstey総説に記述されているように、ＩＡＤ法により混合アセタールを生じさせるための具体的な試薬は当業者に知られており、当業者が適宜選択することができる。上述したＲ６基中のアルキルオキシ基は例えば炭素数１～６のものであり得るがこれに限定されない。好ましいＲ６としてはｐ－メトキシベンジル、ナフチルメチルが挙げられるが、これらに限定されない。
【0019】
式（３）の糖受容体において、Ｘ３は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ７およびＲ８は水酸基の保護基である。Ｘ３は上で説明したＸ１と同様であり、Ｒ７およびＲ８は上で説明したＲ１～Ｒ５と、特にＲ１およびＲ２と同様である。脱離基として好ましいＸ３としては、トリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ等の、糖鎖合成に一般的に使用される脱離基が挙げられる。好ましいＲ７およびＲ８としては、置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニル、トリアルキルシリル等の糖鎖合成に一般的に使用される保護基が挙げられる。特に好ましいＲ７としては、隣接基関与能のある置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、レブリノイルなどが挙げられるが、これらに限定されない。隣接基関与能のある保護基のさらなる例は後述するＲ７’基について記載されており、それらをＲ７基に用いることができる。
【0020】
Ｙ４は上で説明したＹ１と同様であり、例えばＣＯＯＺ２またはＣＨ２ＯＺ３などが挙げられるが、これらに限定されない。ここに、Ｚ２はアルキル基であり、好ましくは炭素数１～３個のアルキル基である。より好ましいＺ２基はメチルである。Ｚ３は通常用いられる水酸基の保護基である。水酸基の保護基は公知である。
【0021】
式（２）で示されるキシロース誘導体（糖供与体）と式（３）で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体（糖受容体）を縮合させて式（４）で示されるα－グリコシドを得る。α－グリコシドを得るための工程は以下の１）～３）を含む。工程１）～３）、特に工程１）、２）は、ＩＡＤ法に基づくものである。
工程１） 式（２）で表されるキシロース誘導体と式（３）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを反応させて、キシロース誘導体の２位のＯＲ６基とグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体の３位の非保護水酸基とを介した混合アセタール誘導体を製造し、
工程２） 工程１）で得られた混合アセタール誘導体を、脱離基Ｘ２を活性化せることにより反応させてα１→３二糖誘導体を製造し、次いで、
工程３） 工程２）で得られた二糖誘導体を脱保護して式（４）に誘導する。
工程１） 式（２）で表されるキシロース誘導体と式（３）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを反応させて、キシロース誘導体の２位のＯＲ６基とグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体の３位の非保護水酸基とを介した混合アセタール誘導体を製造し、
工程２） 工程１）で得られた混合アセタール誘導体を、脱離基Ｘ２を活性化せることにより反応させてα１→３二糖誘導体を製造し、次いで、
工程３） 工程２）で得られた二糖誘導体を脱保護して式（４）に誘導する。
【0022】
工程１）の反応は、例えば２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－ｐ－ベンゾキノン（ＤＤＱ）の存在下で行い得る。工程１）で製造される混合アセタール誘導体は、糖供与体の２位炭素と糖受容体の３位炭素がアセタールの２つの酸素原子とそれぞれ結合した混合アセタールである。工程２）で得られる二糖誘導体は、式（４）と同様に、糖供与体の１位炭素と糖受容体の３位炭素が同じ１つの酸素原子に結合して連結された二糖である。異なる種類の脱離基Ｘ２を活性化しうる多様な縮合剤（グリコシル化プロモーター）が当業者に知られており、ＩＡＤ法の一部としてCumpstey総説にも詳しく記述されている。工程２）の反応は、例えばＮＩＳ－ＡｇＯＴｆ、ＮＩＳ－ＴｆＯＨ、ＭｅＯＴｆ、ＣｕＢｒ２－ＡｇＯＴｆ－ｎＢｕ４ＮＩ、ＮＢＳ－ＡｇＯＴｆなどの縮合剤（グリコシル化プロモーター）の存在下で行い得る。工程３）は脱保護工程である。保護基の種類によって脱保護の方法が異なるが、様々な保護基の脱保護の方法が公知である。例えばベンジル基などの場合は酸やアルカリによる加水分解にて脱保護を行ってもよい。トリフルオロ酢酸は脱保護のために特に好ましく用いられる。脱保護によりＹ基も除去されて、キシロースの３，４位に水酸基を残すことができる。
【0023】
上記のα－グリコシドの製造方法の具体例を以下のスキーム１に示す。
［上のスキーム中、Ｌｅｖは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ２Ｈ４Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、Ｂzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ５であり、MＢｎは－ＣＨ２Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、MPは－Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、Meは－ＣＨ３であり、Ａcは－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、MＢzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ4ＣＨ3（p）である］
【化20】
［上のスキーム中、Ｌｅｖは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ２Ｈ４Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、Ｂzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ５であり、MＢｎは－ＣＨ２Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、MPは－Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、Meは－ＣＨ３であり、Ａcは－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、MＢzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ4ＣＨ3（p）である］
【0024】
本発明は、さらなる態様において、上記式（２）で示されるキシロース誘導体と、上記式（３）で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを、２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－ｐ－ベンゾキノン（ＤＤＱ）等の存在下で反応させて混合アセタール誘導体を得て、該混合アセタール誘導体を縮合剤の存在下で縮合させ、次いで、所望により縮合物を脱保護することを含む、二糖（キシロースα１－３グルクロン酸、該二糖において、キシロース残基およびグルクロン酸残基は誘導体化されていてもよい）の製造方法を提供する。
所望により脱保護とは、保護基の一部（少なくとも１つ）または全部を除去することをいう。糖の誘導体化は当業者に公知である。例えば、上記二糖が公知の保護基を含んでいてもよく、公知の脱離基を含んでいてもよい。上記二糖の保護基および脱離基としては、上で説明したものが挙げられるが、これらに限定されない。
所望により脱保護とは、保護基の一部（少なくとも１つ）または全部を除去することをいう。糖の誘導体化は当業者に公知である。例えば、上記二糖が公知の保護基を含んでいてもよく、公知の脱離基を含んでいてもよい。上記二糖の保護基および脱離基としては、上で説明したものが挙げられるが、これらに限定されない。
【0025】
式（２）に対応するキシロース誘導体（糖供与体）と式（３）に対応するグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体（糖受容体）との反応には以下の問題点があった：
・αキシロースには隣接基関与が利用できないため、アノマー位の立体制御が難しい。
・キシロースは環反転しやすい。
これらの問題点により、α－グリコシド結合が形成されない場合がある。
そこで、本発明者らは、分子内アグリコン転移を生ぜしめる保護基でキシロースの２位の水酸基を保護して糖受容体（グルクロン酸誘導体）と縮合させることにより、分子内アグリコン転移反応を生じさせ、α選択的なグリコシル化を可能とした。分子内アグリコン転移を生ぜしめる保護基としては上述したようにｐ－メトキシベンジル基、ナフチル基などが挙げられる。
さらに、本発明者らは、キシロースの３位および４位を、２，３－ブタンジオンなどを用いてジアセタール等として水酸基保護すると共に環固定することにより、キシロースの環反転を防止することにした。
これらの工夫により本発明者らは上記問題点を解決し、立体選択的に式（４）に示されるαグリコシドを合成することに成功した。
・αキシロースには隣接基関与が利用できないため、アノマー位の立体制御が難しい。
・キシロースは環反転しやすい。
これらの問題点により、α－グリコシド結合が形成されない場合がある。
そこで、本発明者らは、分子内アグリコン転移を生ぜしめる保護基でキシロースの２位の水酸基を保護して糖受容体（グルクロン酸誘導体）と縮合させることにより、分子内アグリコン転移反応を生じさせ、α選択的なグリコシル化を可能とした。分子内アグリコン転移を生ぜしめる保護基としては上述したようにｐ－メトキシベンジル基、ナフチル基などが挙げられる。
さらに、本発明者らは、キシロースの３位および４位を、２，３－ブタンジオンなどを用いてジアセタール等として水酸基保護すると共に環固定することにより、キシロースの環反転を防止することにした。
これらの工夫により本発明者らは上記問題点を解決し、立体選択的に式（４）に示されるαグリコシドを合成することに成功した。
【0026】
上記方法で得られた式（４）の二糖の水酸基を適宜保護して式（１）で示す本発明の二糖誘導体を得ることができる。保護基の選択および着脱は当業者の技量の範囲内である。
【0027】
上記段落００１４～００２５に記載した方法では、立体選択的に二糖生成物が得られるものの、その収率が低い難点があった。そこで、本発明者らは、式（２’）で示されるキシロース誘導体（糖供与体）と式（３’）で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体（糖受容体）を、混合アセタール（分子内アグリコン転移）を経る方法によらないで直接縮合させて式（４’）で示されるα－グリコシドとβ－グリコシドを含む混合物を得た。所望のα－グリコシドの単離は困難であった。しかしながら、下のスキーム２に示すトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）による加水分解で保護基を除去して得られた所望のα－グリコシドを含むジアステレオマー混合物の溶解性を鋭意検討した結果、所望のα－グリコシドはメタノールに可溶であるがクロロホルムには不溶である一方、副生成物であるβ－グリコシドは、逆にクロロホルムに可溶である事実を発見するに至った。この特性を利用して所望のα－グリコシドのみを上記段落００１４～００２５に記載した方法よりも高い収率で得ることに成功した。
【0028】
したがって、本発明は、さらなる態様において、
式（２’）：
［式中、Ｘ２’は脱離基であり、Ｙ’はキシロース残基の配座を固定する基であり、Ｒ６’は水酸基の保護基である］
で表されるキシロース誘導体と、
式（３’）：
［式中、Ｘ３’は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ７’は水酸基の保護基であり、Ｒ８’は水酸基の保護基であり、Ｙ４’はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基である］
で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体から、
式（４’）：
［式中、Ｘ３’、Ｒ７’、Ｒ８’およびＹ４’は上記定義と同じである］
で表されるα－グリコシドを製造する方法であって、下記工程１）～３）：
工程１） 式（２’）で表されるキシロース誘導体と式（３’）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを直接縮合させてα１→３グリコシドおよびβ１→３グリコシドの混合物を得て、
工程２） 工程１）で得られた混合物を脱保護し、次いで、
工程３） 工程２）で脱保護された混合物からα－グリコシドを分離する
を含む方法を提供する。
式（２’）：
【化21】
［式中、Ｘ２’は脱離基であり、Ｙ’はキシロース残基の配座を固定する基であり、Ｒ６’は水酸基の保護基である］
で表されるキシロース誘導体と、
式（３’）：
【化22】
［式中、Ｘ３’は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ７’は水酸基の保護基であり、Ｒ８’は水酸基の保護基であり、Ｙ４’はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基である］
で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体から、
式（４’）：
【化23】
［式中、Ｘ３’、Ｒ７’、Ｒ８’およびＹ４’は上記定義と同じである］
で表されるα－グリコシドを製造する方法であって、下記工程１）～３）：
工程１） 式（２’）で表されるキシロース誘導体と式（３’）で表されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを直接縮合させてα１→３グリコシドおよびβ１→３グリコシドの混合物を得て、
工程２） 工程１）で得られた混合物を脱保護し、次いで、
工程３） 工程２）で脱保護された混合物からα－グリコシドを分離する
を含む方法を提供する。
【0029】
縮合に用いる糖供与体１０３はαβいずれの立体配置でも生成物２０８aと２０８bを同じ収率で与える（下のスキーム２のMethod 1, Method 2）。したがって、使用する糖供与体１０３の立体化学は限定されないし、その混合物でも良い（下のスキーム２のMethod 3）。
【0030】
式（２’）で示される糖供与体において、Ｘ２’およびＹ’は式（２）に関して説明したＸ２およびＹとそれぞれ同じである。式（２’）において、左側に表示された２つの酸素原子はＹ’基に含まれる。Ｒ６’は水酸基の保護基である。Ｒ６’は隣接基関与能のない水酸基の保護基であることがより好ましく、隣接基関与能のあるアシル基はもっぱらβ-グリコシドを生じうる。特に適切なＲ６’の具体例としては、ベンジル基、ｐ－メトキシベンジル基、ｐ－メトキシフェニル基、ｐ－ニトロベンジル基、アリル基、メトキシメチル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、トリイソプロピルシリル基などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいＲ６’としてはｐ－メトキシベンジル基が挙げられるが、これに限定されない。
本開示において、隣接基関与（化学大辞典 共立出版）能のある水酸基の保護基とは、当業者に理解されるように、水酸基の保護基で－Ｃ（＝Ｏ）Ｒとして一般化されるものをいい、式（２’）の例に沿っていうと、１位の脱離基（Ｘ２’）が脱離した後に１位炭素原子上に生じるカルボカチオンを上記酸素原子が攻撃して形成される環構造が２位の水酸基と同じ面（cis面）を覆うことにより、反対側（trans側）からの受容体の攻撃を専らにさせる機能を持つ保護基である。この記述に該当しない保護基は、隣接基関与能のない保護基と解される。
本開示において、隣接基関与（化学大辞典 共立出版）能のある水酸基の保護基とは、当業者に理解されるように、水酸基の保護基で－Ｃ（＝Ｏ）Ｒとして一般化されるものをいい、式（２’）の例に沿っていうと、１位の脱離基（Ｘ２’）が脱離した後に１位炭素原子上に生じるカルボカチオンを上記酸素原子が攻撃して形成される環構造が２位の水酸基と同じ面（cis面）を覆うことにより、反対側（trans側）からの受容体の攻撃を専らにさせる機能を持つ保護基である。この記述に該当しない保護基は、隣接基関与能のない保護基と解される。
【0031】
式（３’）で示される糖受容体において、Ｒ７’は水酸基の保護基であるが、糖間の縮合においてβ－グリコシドを形成させるためには、Ｒ７’は隣接基関与能のある水酸基の保護基であることが好ましい。隣接基関与能のある水酸基の保護基としては、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒとしてアシル基を形成するもの、例えばＲがアルキルまたはアリールであるアセチル基、１～３個のハロゲン原子で置換されたアセチル基、ベンゾイル基、１～５個のハロゲン、ニトロ基および／または炭素数１～３個のアルキル基で置換されたベンゾイル基、およびレブリノイル基、ならびにベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル基などが挙げられるがこれらに限定されない。好ましいＲ７’としてはアセチル基、１～３個のハロゲン原子で置換されたアセチル基、ベンゾイル基、１～５個のハロゲン、ニトロ基および／または炭素数１～３個のアルキル基で置換されたベンゾイル基などが挙げられるがこれらに限定されない。Ｘ３’、Ｒ８’およびＹ４’は式（３）に関して説明したＸ３、Ｒ８およびＹ４とそれぞれ同じである。例えば、Ｘ３’がｐ－メトキシフェニルで保護された水酸基、Ｒ７’およびＲ８’がアセチル基、Ｙ４’がカルボン酸メチル基であってもよい。
【0032】
工程１）の縮合反応は、公知の縮合剤（グリコシル化プロモーター）を用いて行うことができる。公知の縮合剤としては、ＮＩＳ－ＡｇＯＴｆ、ＮＩＳ－ＴｆＯＨ、ＭｅＯＴｆ、ＣｕＢｒ２－ＡｇＯＴｆ－ｎＢｕ４ＮＩ、ＮＢＳ－ＡｇＯＴｆなどが挙げられるが、ＮＩＳ－ＡｇＯＴｆが好ましい。これらの縮合剤の存在下で脱離基Ｘ２’が活性化する。直接縮合とは、糖供与体の置換基と糖受容体の置換基が、他の化合物または基を介さずに結合を生じさせることをいう。本開示では特に、直接縮合は、分子内アグリコン転移を介する態様と対照的に、はじめから１→３グリコシド結合を形成させる縮合を指す。
【0033】
工程２）の脱保護は、公知の方法にて行うことができる。好ましくは、キシロース残基の２－、３－、および４－位を脱保護してトリオールとする。このようなトリオールのうち、α－グリコシドは式（４’）の二糖誘導体である。しかも、後で述べる溶媒を用いて簡単に式（４’）の二糖誘導体を分離することができる。かかる脱保護に使用される薬剤としては酸が用いられる。このような酸としてはトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、トリクロロ酢酸などが好ましく、ＴＦＡが特に好ましい。
【0034】
工程３）において、工程２）で得られた脱保護されたグリコシド混合物（脱保護されたトリオールのジアステレオマー混合物）からα－グリコシドを分離する。ジアステレオマー（α－グリコシドとβ－グリコシド）の分離方法としては、クロマトグラフィーを用いる方法、溶媒抽出法などが用いられ得る。分離されたα－グリコシドが式（４’）の二糖誘導体と異なる場合は、公知の方法にて保護および／または脱保護などを行って、式（４’）の二糖誘導体を得てもよい。とりわけ、キシロース残基の２－、３－、および４－位を脱保護してトリオールとして得られたα－グリコシド（式（４’）の二糖誘導体）はクロロホルムには不溶であるがメタノールに可溶であり、β－グリコシドはクロロホルムに可溶である（メタノールへの溶解性は比較的低い）。この性質を利用して、ジアステレオマー混合物をクロロホルムで処理して、溶解したβ－グリコシドを除去することにより、所望のα－グリコシドを分離することができる。あるいはジアステレオマー混合物をメタノールで処理して溶解したα－グリコシドを回収することを経て、所望のα－グリコシドを分離してもよい。
【0035】
上記のα－グリコシドの新しい製造方法の具体例を以下のスキーム２に示す。
［上のスキーム中、MＢｎは－ＣＨ２Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、MPは－Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、Meは－ＣＨ３であり、Ａcは－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、NISはN-ヨードコハク酸イミドであり、AgOTfはトリフルオロメタンスルホン酸銀であり、TFAはトリフルオロ酢酸である］
【化24】
［上のスキーム中、MＢｎは－ＣＨ２Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、MPは－Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、Meは－ＣＨ３であり、Ａcは－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、NISはN-ヨードコハク酸イミドであり、AgOTfはトリフルオロメタンスルホン酸銀であり、TFAはトリフルオロ酢酸である］
【0036】
本発明は、さらなる態様において、上記式（２’）で示されるキシロース誘導体と、上記式（３’）で示されるグルコース誘導体またはグルクロン酸誘導体とを直接縮合させて、α－グリコシドおよびβ－グリコシドの混合物を得て、所望により該混合物を脱保護し、次いで、該混合物からα－グリコシドを分離することを含む、二糖（キシロースα１－３グルクロン酸、該二糖において、キシロース残基およびグルクロン酸残基は誘導体化されていてもよい）の製造方法を提供する。
所望により脱保護とは、保護基の一部（少なくとも１つ）または全部を除去することをいう。糖の誘導体化は当業者に公知である。例えば、上記二糖が公知の保護基を含んでいてもよく、公知の脱離基を含んでいてもよい。上記二糖の保護基および脱離基としては、上で説明したものが挙げられるが、これらに限定されない。
所望により脱保護とは、保護基の一部（少なくとも１つ）または全部を除去することをいう。糖の誘導体化は当業者に公知である。例えば、上記二糖が公知の保護基を含んでいてもよく、公知の脱離基を含んでいてもよい。上記二糖の保護基および脱離基としては、上で説明したものが挙げられるが、これらに限定されない。
【0037】
２．二糖誘導体のオリゴマー
本発明の二糖誘導体は、ラミニンを介して筋細胞と基底膜とを繋ぎとめているジストログリカン上のポストリン酸糖鎖合成のための構成単位（本明細書においてＸＧユニットという場合がある）として使用することができる。二糖誘導体をオリゴマー化することにより、ポストリン酸糖鎖を再構築することができる。本発明の二糖誘導体は、ポストリン酸糖鎖を再構築するための必須合成単位である。
本発明の二糖誘導体は、ラミニンを介して筋細胞と基底膜とを繋ぎとめているジストログリカン上のポストリン酸糖鎖合成のための構成単位（本明細書においてＸＧユニットという場合がある）として使用することができる。二糖誘導体をオリゴマー化することにより、ポストリン酸糖鎖を再構築することができる。本発明の二糖誘導体は、ポストリン酸糖鎖を再構築するための必須合成単位である。
【0038】
二糖誘導体同士を縮合させることにより四糖誘導体を得ることができる。四糖誘導体と二糖誘導体を縮合させ、所望により脱保護を行って六糖誘導体を得ることができる。該六糖誘導体と二糖誘導体を縮合させ、所望により脱保護を行って八糖誘導体を得ることができる。あるいは四糖誘導体同士を縮合させ、所望により脱保護を行って八糖誘導体を得ることができる。このようにして、二糖誘導体のオリゴマーを合成することができる。
【0039】
したがって、本発明はさらなる態様において、式（１）で示される二糖誘導体を中間体（ＸＧユニット）として用いることを含む、式（５）：
［式中、Ｘ４は脱離基であるかまたは保護された水酸基であり、ｎは１以上の整数である］
で示されるＸＧユニットのオリゴマーを製造する方法を提供する。オリゴマーの連結反応は単純に反復できるため、ｎの上限は特に制限されないことが当業者に理解される。ｎは例えば３００以下、２００以下、１００以下、５０以下、２０以下等であり得る。
【化25】
［式中、Ｘ４は脱離基であるかまたは保護された水酸基であり、ｎは１以上の整数である］
で示されるＸＧユニットのオリゴマーを製造する方法を提供する。オリゴマーの連結反応は単純に反復できるため、ｎの上限は特に制限されないことが当業者に理解される。ｎは例えば３００以下、２００以下、１００以下、５０以下、２０以下等であり得る。
【0040】
式（５）で示される化合物のＸ４が脱離基である場合、Ｘ４は上で説明したＸ１等と同様の脱離基である。Ｘ４が保護された水酸基である場合、Ｘ４は上で説明したＲ１等と同様の保護基を含み得る。
【0041】
具体的には、式（１）で示される二糖誘導体を糖供与体とし、式（１’）：
［式中、Ｙ５はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基であり、Ｘ５は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ９～Ｒ１２は水酸基の保護基である］
で示される二糖誘導体を糖受容体として、これらを縮合させることにより四糖誘導体を得ることができる。同様の手法にて、四糖誘導体どうしを縮合させ、あるいは式（１）で示される二糖誘導体と四糖誘導体を縮合させ、あるいは四糖誘導体と式（１’）で示される二糖誘導体縮合させ、あるいはこれらのオリゴマーとオリゴマーおよび／または二糖誘導体との縮合を繰り返すことにより、より鎖長の長いオリゴマー誘導体を得ることができる。これらのオリゴマー誘導体を公知の方法により脱保護して、より鎖長の長い式（５）に示すオリゴマーを得ることができる。
【化26】
［式中、Ｙ５はカルボキシル基またはヒドロキシメチル基の前駆体である基であり、Ｘ５は脱離基または保護された水酸基であり、Ｒ９～Ｒ１２は水酸基の保護基である］
で示される二糖誘導体を糖受容体として、これらを縮合させることにより四糖誘導体を得ることができる。同様の手法にて、四糖誘導体どうしを縮合させ、あるいは式（１）で示される二糖誘導体と四糖誘導体を縮合させ、あるいは四糖誘導体と式（１’）で示される二糖誘導体縮合させ、あるいはこれらのオリゴマーとオリゴマーおよび／または二糖誘導体との縮合を繰り返すことにより、より鎖長の長いオリゴマー誘導体を得ることができる。これらのオリゴマー誘導体を公知の方法により脱保護して、より鎖長の長い式（５）に示すオリゴマーを得ることができる。
【0042】
式（１’）において、Ｙ５は上で説明したＹ１等と同様の基である。Ｙ５の例としてはＣＯＯＺ３またはＣＨ２ＯＺ４などが挙げられるが、これらに限定されない。ここに、Ｚ３はアルキル基であり、好ましくは炭素数１～３個のアルキル基である。より好ましいＺ３基はメチルである。Ｚ４は通常の水酸基の保護基である。Ｘ５は脱離基または保護された水酸基である。Ｒ９～Ｒ１２は水酸基の保護基であり、これらは上で説明したＲ１等と同様の基である。好ましいＸ５としては、トリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ等の、糖鎖合成に一般的に使用される脱離基が挙げられるがこれらに限定されない。好ましいＲ９～Ｒ１２としては、置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニル、トリアルキルシリル等の糖鎖合成に一般的に使用される保護基が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいＲ９としては、隣接基関与能のある置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、レブリノイルなどが挙げられるが、これらに限定されない。隣接基関与能のある保護基のさらなる例は上述するＲ７’基について記載されており、それらをＲ９基に用いることができる。
【0043】
式（１）で示される二糖誘導体を糖供与体とし、式（１’）で示される二糖誘導体を糖受容体として、これらを縮合させて四糖誘導体を合成する手順の具体例を以下のスキーム３に示す。下の具体例において得られたオリゴマー２０６ｂを、公知の方法で脱保護して式（５）に示すオリゴマー（ｎ＝１）を得ることができる。
［上のスキーム中、Ｌｅｖは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ２Ｈ４Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、Ｂzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ５であり、MPは－Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、Meは－ＣＨ３であり、MＢzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ4ＣＨ3（p）である］
【化27】
［上のスキーム中、Ｌｅｖは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ２Ｈ４Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、Ｂzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ５であり、MPは－Ｃ６Ｈ4ＯＣＨ3（p）であり、Meは－ＣＨ３であり、MＢzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ4ＣＨ3（p）である］
【0044】
上の具体例において得られたオリゴマー２０６ｂを、公知の方法、例えば水酸化ナトリウム水溶液のような塩基で処理することにより脱保護して、式（５）に示すオリゴマー（ｎ＝１）を得ることができる。
【0045】
本発明は、さらなる態様において、上記式（１）で示される二糖誘導体を糖供与体とし、上記式（１’）で示される二糖誘導体を糖受容体として反応させ、次いで、所望により、得られた四糖誘導体を脱保護することを含む、誘導体化されていてもよい式（５）で示される四糖の製造方法を提供する。
所望により脱保護とは、保護基の一部（少なくとも１つ）または全部を除去することをいう。糖の誘導体化は当業者に公知である。例えば、上記四糖が公知の保護基を含んでいてもよく、公知の脱離基を含んでいてもよい。上記四糖の保護基および脱離基としては、上で説明したものが挙げられるが、これらに限定されない。
所望により脱保護とは、保護基の一部（少なくとも１つ）または全部を除去することをいう。糖の誘導体化は当業者に公知である。例えば、上記四糖が公知の保護基を含んでいてもよく、公知の脱離基を含んでいてもよい。上記四糖の保護基および脱離基としては、上で説明したものが挙げられるが、これらに限定されない。
【0046】
３．ポストリン酸糖鎖のキシロース－グルクロン酸繰り返し構造とαジストログリカンから伸びた糖鎖とを結合する四糖の合成
本発明は、さらなる態様において、式（９）：
で示される四糖またはその誘導体を提供する。式（９）の四糖は、ポストリン酸糖鎖のキシロース－グルクロン酸繰り返し構造とαジストログリカンから伸びた糖鎖とを結合する部分である。上記二糖誘導体、そのオリゴマー、および式（９）の四糖を用いてポストリン酸糖鎖を再構築することができる。再構築された糖鎖を、糖鎖異常型筋ジストロフィーの治療および予防のための医薬として用いることができる。式（９）の誘導体の例としては、式（９）中の水酸基の少なくとも一部または全部が保護基にて保護されている化合物、および式（９）中のカルボキシル基がアルキルエステル化されている化合物などが挙げられるが、これらに限定されない。式（９）の四糖の誘導体の具体例としては、下のスキーム中の化合物４０４および４０５が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明は、さらなる態様において、式（９）：
【化28】
で示される四糖またはその誘導体を提供する。式（９）の四糖は、ポストリン酸糖鎖のキシロース－グルクロン酸繰り返し構造とαジストログリカンから伸びた糖鎖とを結合する部分である。上記二糖誘導体、そのオリゴマー、および式（９）の四糖を用いてポストリン酸糖鎖を再構築することができる。再構築された糖鎖を、糖鎖異常型筋ジストロフィーの治療および予防のための医薬として用いることができる。式（９）の誘導体の例としては、式（９）中の水酸基の少なくとも一部または全部が保護基にて保護されている化合物、および式（９）中のカルボキシル基がアルキルエステル化されている化合物などが挙げられるが、これらに限定されない。式（９）の四糖の誘導体の具体例としては、下のスキーム中の化合物４０４および４０５が挙げられるが、これらに限定されない。
【0047】
本発明は、さらにもう１つの態様において、式（７）：
［式中、Ｘ１は脱離基または保護された水酸基、Ｘ２～Ｘ６は水酸基の保護基、Ｘ７はアルキル基である］
で示される二糖供与体を、式（８）：
［式中、Ｘ８～Ｘ１３は水酸基の保護基である、たたしＸ１２およびＸ１３は一緒になってアセタールを形成してもよい］
で示される二糖受容体と反応させることにより四糖誘導体を得て、次いで、四糖誘導体を脱保護することにより式（９）：
で示される四糖を製造する方法を提供する。
【化29】
［式中、Ｘ１は脱離基または保護された水酸基、Ｘ２～Ｘ６は水酸基の保護基、Ｘ７はアルキル基である］
で示される二糖供与体を、式（８）：
【化30】
［式中、Ｘ８～Ｘ１３は水酸基の保護基である、たたしＸ１２およびＸ１３は一緒になってアセタールを形成してもよい］
で示される二糖受容体と反応させることにより四糖誘導体を得て、次いで、四糖誘導体を脱保護することにより式（９）：
【化31】
で示される四糖を製造する方法を提供する。
【0048】
化合物（７）における脱離基Ｘ１としては公知のものを使用でき、トリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ハロゲン、ペンテニルオキシ等の糖鎖合成に一般的に使用される脱離基が例示されるが、これらに限定されない。好ましい脱離基Ｘ１としてはトリクロロアセトイミドイルオキシ、アルキルチオやフェニルチオなどのチオグリコシドを形成するものが例示されるが、これらに限定されない。化合物（７）における水酸基の保護基Ｘ２～Ｘ６としては、置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニル、トリアルキルシリル等の糖鎖合成に一般的に使用される保護基が挙げられるが、これらに限定されない。化合物（７）におけるアルキル基は、好ましくは炭素数１～３個のアルキル基であり、典型的にはメチル基である。１の具体例において、化合物（７）のＸ１はトリクロロアセトイミドイルオキシ、Ｘ２～Ｘ６はアセチル、Ｘ７はメチルである。
【0049】
化合物（８）における水酸基の保護基Ｘ８～Ｘ１３としては、キシロースの２、３位水酸基が保護され、リビトール側の保護基が除去されないあるいは変化しないかぎり、糖鎖合成に一般的に使用される保護基を使用できる。そのような保護基の例としては、置換ベンジルを含むベンジル、アリル、レブリノイル、置換ベンゾイルを含むベンゾイル、置換アセチルを含むアセチル、アリルオキシカルボニル、トリアルキルシリル等が挙げられるがこれらに限定されない。化合物（８）の２－位および３－位の水酸基は、アセタールによって保護されていてもよい。１の具体例において、化合物（８）のＸ８はアリル、Ｘ９およびＸ１０はベンジル、Ｘ１１はＴＢＤＰＳ、２－位および３－位の水酸基はイソプロピリデンアセタールによって保護されている（つまり、Ｘ１２およびＸ１３は一緒になってイソプロピリデンアセタールを形成している）。
【0050】
式（７）の化合物は、公知の手法を用いて式（１）の二糖誘導体から誘導してもよい。
【0051】
式（８）の化合物は、公知の手法を用いて、例えば式（１０）：
［式中、Ｌｅｖは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ２Ｈ４Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、Ｂｎは－ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、Ａｌｌは－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２であり、ＴＢＤＰＳは－Ｓｉ（Ｃ６Ｈ５）２ｔｅｒｔ－Ｃ４Ｈ９である］
で示される二糖誘導体から誘導してもよい。
【化32】
［式中、Ｌｅｖは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ２Ｈ４Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、Ｂｎは－ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、Ａｌｌは－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２であり、ＴＢＤＰＳは－Ｓｉ（Ｃ６Ｈ５）２ｔｅｒｔ－Ｃ４Ｈ９である］
で示される二糖誘導体から誘導してもよい。
【0052】
上記方法の具体例を以下のスキーム４に示す。
［上のスキーム中、Ｌｅｖは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ２Ｈ４Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、Etは－Ｃ２Ｈ５であり、Ａcは－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、MＢzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ4ＣＨ3（p）であり、Ａｌｌは－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２であり、CSAはカンファースルホン酸であり、DMFはジメチルホルムアミドであり、ＴＢＤＰＳは－Ｓｉ（Ｃ６Ｈ５）２ｔｅｒｔ－Ｃ４Ｈ９であり、THFはテトラヒドロフランであり、TMSOTfはトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルであり、Ａｌｌは－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２であり、TBAFはテトラブチルアンモニウムフルオリドである］
【化33】
［上のスキーム中、Ｌｅｖは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ２Ｈ４Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、Etは－Ｃ２Ｈ５であり、Ａcは－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、MＢzは－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ4ＣＨ3（p）であり、Ａｌｌは－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２であり、CSAはカンファースルホン酸であり、DMFはジメチルホルムアミドであり、ＴＢＤＰＳは－Ｓｉ（Ｃ６Ｈ５）２ｔｅｒｔ－Ｃ４Ｈ９であり、THFはテトラヒドロフランであり、TMSOTfはトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルであり、Ａｌｌは－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２であり、TBAFはテトラブチルアンモニウムフルオリドである］
【0053】
式（１）の二糖誘導体の水酸基の保護基をアセチル基とした化合物のグルクロン酸の１位に－ＯＣ（ＮＨ）ＣＣｌ３などの脱離基を導入して式（７）に示す化合物を得てもよい。式（１０）に示す化合物をキシロースから誘導してもよい。式（１０）に示す化合物の２位、３位および４位のレブリノイル保護基を脱保護して、次いで、２位および３位の水酸基と２－メトキシプロペンとの間で環を形成させて式（８）に示す化合物を得る。式（７）に示す化合物（糖供与体）と式（８）に示す化合物（糖受容体）を反応させ、次いで、公知の方法により脱保護を行って、式（９）に示す四糖を得る。
【0054】
本発明は、さらなる態様において、上記式（７）で示される二糖供与体を、上記式（８）で示される二糖受容体と反応させ、次いで、所望により、得られた四糖誘導体を脱保護することを含む、誘導体化されていてもよい式（９）で示される四糖の製造方法を提供する。
所望により脱保護とは、保護基の一部（少なくとも１つ）または全部を除去することをいう。糖の誘導体化は当業者に公知である。例えば、上記四糖が公知の保護基を含んでいてもよく、公知の脱離基を含んでいてもよい。上記四糖の保護基および脱離基としては、上で説明したものが挙げられるが、これらに限定されない。
所望により脱保護とは、保護基の一部（少なくとも１つ）または全部を除去することをいう。糖の誘導体化は当業者に公知である。例えば、上記四糖が公知の保護基を含んでいてもよく、公知の脱離基を含んでいてもよい。上記四糖の保護基および脱離基としては、上で説明したものが挙げられるが、これらに限定されない。
【0055】
上記説明およびスキームに示した反応条件は例示であって、当業者はこれらの反応条件を適宜変更することができる。
【0056】
本明細書中の用語の意味は、特に断らない限り、生化学、生物学、化学、薬学、医学などの分野において通常に理解されている意味と同じである。
【0057】
以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、実施例はあくまでも例示説明であり、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例1】
【0058】
実施例１ 二糖誘導体の合成
（１）Dodecyl 3,4-O-(2,3-dimethoxybutan-2,3-diyl)-1-thio-α-D-xylopyranoside (102a)の合成
ＭｅＯＨ（９４ｍＬ）に溶解した既知化合物（１０１ａ，６．１９ｇ，１８．５ｍｍｏｌ）にトリメチルオルトホルメート（１８ｍＬ）、２，３－ブタンジオン（６．５ｍＬ）と触媒量のカンファースルホン酸を加え５０℃で一晩攪拌した。トリエチルアミンを加え濃縮し、濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝２０：１～５：１）で精製し、１０２ａ（２．９７ｇ，２７％）を得た。
（１）Dodecyl 3,4-O-(2,3-dimethoxybutan-2,3-diyl)-1-thio-α-D-xylopyranoside (102a)の合成
ＭｅＯＨ（９４ｍＬ）に溶解した既知化合物（１０１ａ，６．１９ｇ，１８．５ｍｍｏｌ）にトリメチルオルトホルメート（１８ｍＬ）、２，３－ブタンジオン（６．５ｍＬ）と触媒量のカンファースルホン酸を加え５０℃で一晩攪拌した。トリエチルアミンを加え濃縮し、濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝２０：１～５：１）で精製し、１０２ａ（２．９７ｇ，２７％）を得た。
【0059】
（x）Dodecyl 3,4-O-(2,3-dimethoxybutan-2,3-diyl)-1-thio-β-D-xylopyranoside (102b)の合成
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）に溶解した既知化合物（１０１b，２．１０ｇ，６．２８ｍｍｏｌ）にトリメチルオルトホルメート（６ｍＬ）、２，３－ブタンジオン（２．４ｍＬ）と触媒量のカンファースルホン酸を加え４０℃で一晩攪拌した。トリエチルアミンを加え濃縮し、濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝２０：１～３：１）で精製し、１０２b（２．５２ｇ，８９％）を得た。
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）に溶解した既知化合物（１０１b，２．１０ｇ，６．２８ｍｍｏｌ）にトリメチルオルトホルメート（６ｍＬ）、２，３－ブタンジオン（２．４ｍＬ）と触媒量のカンファースルホン酸を加え４０℃で一晩攪拌した。トリエチルアミンを加え濃縮し、濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝２０：１～３：１）で精製し、１０２b（２．５２ｇ，８９％）を得た。
【0060】
（２）3,4-O-(2,3-dimethoxybutan-2,3-diyl)-2-O-(4-methoxy)benzyl-1-thio-α-D-xylopyranoside (103a)の合成
化合物（１０２ａ，９４１．９ｍｇ，２．０９９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１１ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（５５％，１０６．３ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）を加え２時間攪拌した．ここに４－メトキシベンジルクロリド（０．５７ｍＬ，５．６ｍｍｏｌ）を加え、４時間攪拌した．反応液に氷と１Ｍ 塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１～１０：１）で精製し、１０３ａ（７４３．０ｍｇ，６２％）を得た。
化合物（１０２ａ，９４１．９ｍｇ，２．０９９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１１ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（５５％，１０６．３ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）を加え２時間攪拌した．ここに４－メトキシベンジルクロリド（０．５７ｍＬ，５．６ｍｍｏｌ）を加え、４時間攪拌した．反応液に氷と１Ｍ 塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１～１０：１）で精製し、１０３ａ（７４３．０ｍｇ，６２％）を得た。
【0061】
（２）3,4-O-(2,3-dimethoxybutan-2,3-diyl)-2-O-(4-methoxy)benzyl-1-thio-β-D-xylopyranoside (103b)の合成
化合物（１０２ｂ，２．５２ｇ，５．６２ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（２８ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（５５％，０．５０ｇ，１１．５ｍｍｏｌ）を加え２時間攪拌した．ここに４－メトキシベンジルクロリド（１．６ｍＬ，８．９ｍｍｏｌ）を加え、３時間攪拌した．反応液に氷と１Ｍ 塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝８：１～６：１）で精製し、１０３ｂ（２．４３ｇ，７６％）を得た。
化合物（１０２ｂ，２．５２ｇ，５．６２ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（２８ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（５５％，０．５０ｇ，１１．５ｍｍｏｌ）を加え２時間攪拌した．ここに４－メトキシベンジルクロリド（１．６ｍＬ，８．９ｍｍｏｌ）を加え、３時間攪拌した．反応液に氷と１Ｍ 塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝８：１～６：１）で精製し、１０３ｂ（２．４３ｇ，７６％）を得た。
【0062】
（３）Methyl (4-methoxyphenyl 2,4-di-O-acetyl-β-D-glucopyranoside) uronate (113a)の合成
ＭｅＯＨ（１２０ｍＬ）に溶解した既知化合物（１１１，２２．７５ｇ，５１．６６ｍｍｏｌ）に１．０Ｍ ＮａＯＨ（１２０ｍＬ）を加え室温で一晩攪拌した．その後、１．０Ｍ ＨＣｌで中和し、濃縮、乾燥した。得られた乾燥物にＡｃ２Ｏ（５００ｍＬ）とＩ２（０．２４ｇ）を加えて室温で８時間撹拌した。適当量のＭｅＯＨ、氷、１Ｍハイポ（チオ硫酸ナトリウム）を加え、酢酸エチルで抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、生成物を得た。得られた生成物をＭｅＯＨ ４００ｍＬに溶解し、一週間加熱還流した。反応液を濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝４：１）で精製し、１１３ａを３．５６ｇ（３工程収率１７％）得た。
ＭｅＯＨ（１２０ｍＬ）に溶解した既知化合物（１１１，２２．７５ｇ，５１．６６ｍｍｏｌ）に１．０Ｍ ＮａＯＨ（１２０ｍＬ）を加え室温で一晩攪拌した．その後、１．０Ｍ ＨＣｌで中和し、濃縮、乾燥した。得られた乾燥物にＡｃ２Ｏ（５００ｍＬ）とＩ２（０．２４ｇ）を加えて室温で８時間撹拌した。適当量のＭｅＯＨ、氷、１Ｍハイポ（チオ硫酸ナトリウム）を加え、酢酸エチルで抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、生成物を得た。得られた生成物をＭｅＯＨ ４００ｍＬに溶解し、一週間加熱還流した。反応液を濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝４：１）で精製し、１１３ａを３．５６ｇ（３工程収率１７％）得た。
【0063】
（４）Methyl (4-methoxyphenyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranoside) uronate (113b)の合成
ＴＨＦ（２１２ｍＬ）と水（３１ｍＬ）の混合溶媒に溶解した既知化合物（１１１，２３．９２ｇ，５４．３１ｍｍｏｌ）に１．２５Ｍ ＬｉＯＨ（２９６ｍＬ）を０℃で加え６時間攪拌した。その後、１．０Ｍ ＨＣｌで中和し、濃縮、乾燥した。得られた乾燥物をＤＭＦ（５５０ｍＬ）に溶解し、無水安息香酸（１７２．２４ｇ，７６１．３４ｍｍｏｌ）を加えて７９℃で３時間撹拌した。その後、ピリジン（２２６ｍＬ）とＤＭＡＰ（３．４０ｇ，２７．８ｍｍｏｌ）を加えて室温で終夜撹拌した。適当量の氷を加え、酢酸エチルで抽出し、氷冷１Ｍ ＨＣｌと飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮し、生成物をＭｅＯＨ（５６３ｍＬ）に溶解し、酢酸ナトリウム（７．８６ｇ，９５．８ｍｍｏｌ）を加えて５時間加熱攪拌した。反応液を濃縮し、クロロホルムで抽出して常法による後処理を行ったのち、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝８：１～０：１）で精製し、１１３ｂを１０．９ｇ（３工程収率３８％）を得た。
ＴＨＦ（２１２ｍＬ）と水（３１ｍＬ）の混合溶媒に溶解した既知化合物（１１１，２３．９２ｇ，５４．３１ｍｍｏｌ）に１．２５Ｍ ＬｉＯＨ（２９６ｍＬ）を０℃で加え６時間攪拌した。その後、１．０Ｍ ＨＣｌで中和し、濃縮、乾燥した。得られた乾燥物をＤＭＦ（５５０ｍＬ）に溶解し、無水安息香酸（１７２．２４ｇ，７６１．３４ｍｍｏｌ）を加えて７９℃で３時間撹拌した。その後、ピリジン（２２６ｍＬ）とＤＭＡＰ（３．４０ｇ，２７．８ｍｍｏｌ）を加えて室温で終夜撹拌した。適当量の氷を加え、酢酸エチルで抽出し、氷冷１Ｍ ＨＣｌと飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮し、生成物をＭｅＯＨ（５６３ｍＬ）に溶解し、酢酸ナトリウム（７．８６ｇ，９５．８ｍｍｏｌ）を加えて５時間加熱攪拌した。反応液を濃縮し、クロロホルムで抽出して常法による後処理を行ったのち、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝８：１～０：１）で精製し、１１３ｂを１０．９ｇ（３工程収率３８％）を得た。
【0064】
（５）Methyl (2,3,4-tri-O-acetyl-α-D-xylopyranosyl)-(1→3)-β-(4-methoxyphenyl2,4-di-O-acetyl-β-D-glucopyranosid)uronate (204a)の合成
ＤＤＱ（４７７．２ｍｇ，２．１０２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液にモレキュラーシーブス４Ａ（１．５ｇ）を加え、１１３ａ（５３５．７ｍｇ，１．３５４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液を加え、室温で１時間攪拌した。そこに１０３b（９６７．４ｍｇ，１．７００ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）溶液を攪拌しつつ０℃で加え、その後室温で４時間反応を継続した。反応液に０．１Ｍアスコルビン酸水溶液を加え、珪藻土濾過した濾液をクロロホルムで抽出した。有機層は０．１Ｍアスコルビン酸水溶液、飽和重曹水と飽和食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物を濾別し、濾液の濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝６：１～１：１０）で精製し、混合アセタール（２０１ａ）を１．０７４ｇ（８３％）得た。ＮＩＳ（５２５．５ｍｇ，２．３４ｍｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（１９５．３ｍｇ，７６０μｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２２ｍＬ）に懸濁させ、モレキュラーシーブス４Ａ（２．３ｇ）存在下、遮光して１時間攪拌した。混合アセタール（２０１ａ，１．０７４ｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（２２０ｍＬ）溶液を－２０℃で滴下し２時間攪拌を続けた。反応液に適当量の１Ｍハイポ、飽和重曹水と飽和食塩水を加え、珪藻土濾過した濾液をクロロホルムで抽出した。有機層は１Ｍハイポ、飽和重曹水と飽和食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物を濾別し、濾液の濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝３０：１～１：１０～酢酸エチル：メタノール＝３０：１）で精製し、二糖画分（７５３．９ｍｇ）を得た。このうち２９９．７ｍｇに０℃で９０％トリフルオロ酢酸（１５ｍＬ）を加え攪拌した。反応液は２時間かけて室温に戻し試薬を減圧留去した。濃縮残渣にピリジン（３ｍＬ）と無水酢酸（３ｍＬ）を加え３時間攪拌した。試薬を減圧留去し、濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１０：１～２：３）で精製し、２０４ａを８５．６ｍｇ（２４％）得た。
ＤＤＱ（４７７．２ｍｇ，２．１０２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液にモレキュラーシーブス４Ａ（１．５ｇ）を加え、１１３ａ（５３５．７ｍｇ，１．３５４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液を加え、室温で１時間攪拌した。そこに１０３b（９６７．４ｍｇ，１．７００ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）溶液を攪拌しつつ０℃で加え、その後室温で４時間反応を継続した。反応液に０．１Ｍアスコルビン酸水溶液を加え、珪藻土濾過した濾液をクロロホルムで抽出した。有機層は０．１Ｍアスコルビン酸水溶液、飽和重曹水と飽和食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物を濾別し、濾液の濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝６：１～１：１０）で精製し、混合アセタール（２０１ａ）を１．０７４ｇ（８３％）得た。ＮＩＳ（５２５．５ｍｇ，２．３４ｍｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（１９５．３ｍｇ，７６０μｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２２ｍＬ）に懸濁させ、モレキュラーシーブス４Ａ（２．３ｇ）存在下、遮光して１時間攪拌した。混合アセタール（２０１ａ，１．０７４ｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（２２０ｍＬ）溶液を－２０℃で滴下し２時間攪拌を続けた。反応液に適当量の１Ｍハイポ、飽和重曹水と飽和食塩水を加え、珪藻土濾過した濾液をクロロホルムで抽出した。有機層は１Ｍハイポ、飽和重曹水と飽和食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物を濾別し、濾液の濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝３０：１～１：１０～酢酸エチル：メタノール＝３０：１）で精製し、二糖画分（７５３．９ｍｇ）を得た。このうち２９９．７ｍｇに０℃で９０％トリフルオロ酢酸（１５ｍＬ）を加え攪拌した。反応液は２時間かけて室温に戻し試薬を減圧留去した。濃縮残渣にピリジン（３ｍＬ）と無水酢酸（３ｍＬ）を加え３時間攪拌した。試薬を減圧留去し、濃縮残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１０：１～２：３）で精製し、２０４ａを８５．６ｍｇ（２４％）得た。
【0065】
（６）Methyl α-D-xylopyranosyl-(1→3)-β-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranosid)uronate (202bａ)の合成
モレキュラーシーブス４Ａ（１．７４ｇ）とＤＤＱ（４７４．２ｍｇ，２．０８７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）懸濁液に１１３ｂ（７０６．３ｍｇ，１．３５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）溶液を加え、室温で１時間攪拌した。そこに１０３b（９６２．９ｍｇ，１．６９３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）溶液を攪拌しつつ０℃で加え、その後室温で一晩反応を継続した。反応液を再度０℃に冷却しＤＤＱ（１６０．４ｍｇ，７０６μｍｏｌ）を加え５時間攪拌した。室温に戻し２０４ａの合成と同様の後処理を行い、濃縮残渣をゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）とシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１：０～２：１）で精製し、混合アセタール（２０１ｂ）を４３５．５ｍｇ（収率３０％）得た。遮光してＮＩＳ（１２４．６ｍｇ，５５３．８μｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（６１．６ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）に懸濁させ、モレキュラーシーブス４Ａ（０．４３ｇ）存在下、混合アセタール（２０１ｂ，２３２．９ｍｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）溶液を－２０℃で滴下し３時間攪拌を続けた。２０４ａの合成と同様の後処理を行い、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、生成物（１５６．７ｍｇ）を得た。これに０℃で９０％トリフルオロ酢酸（８ｍＬ）を加え２．５時間攪拌した。室温に戻し試薬を減圧留去し、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、２０２ｂａ（４９．４ｍｇ，７５．５μｍｏｌ，２工程収率３５％）を得た。
モレキュラーシーブス４Ａ（１．７４ｇ）とＤＤＱ（４７４．２ｍｇ，２．０８７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）懸濁液に１１３ｂ（７０６．３ｍｇ，１．３５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）溶液を加え、室温で１時間攪拌した。そこに１０３b（９６２．９ｍｇ，１．６９３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）溶液を攪拌しつつ０℃で加え、その後室温で一晩反応を継続した。反応液を再度０℃に冷却しＤＤＱ（１６０．４ｍｇ，７０６μｍｏｌ）を加え５時間攪拌した。室温に戻し２０４ａの合成と同様の後処理を行い、濃縮残渣をゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）とシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１：０～２：１）で精製し、混合アセタール（２０１ｂ）を４３５．５ｍｇ（収率３０％）得た。遮光してＮＩＳ（１２４．６ｍｇ，５５３．８μｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（６１．６ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）に懸濁させ、モレキュラーシーブス４Ａ（０．４３ｇ）存在下、混合アセタール（２０１ｂ，２３２．９ｍｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）溶液を－２０℃で滴下し３時間攪拌を続けた。２０４ａの合成と同様の後処理を行い、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、生成物（１５６．７ｍｇ）を得た。これに０℃で９０％トリフルオロ酢酸（８ｍＬ）を加え２．５時間攪拌した。室温に戻し試薬を減圧留去し、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、２０２ｂａ（４９．４ｍｇ，７５．５μｍｏｌ，２工程収率３５％）を得た。
【0066】
（７）Methyl [2,4-di-O-(4-methyl)benzoyl-α-D-xylopyranosyl]-(1-3)-β-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranosid)uronate (203b1), Methyl [3,4-di-O-(4-methyl)benzoyl-α-D-xylopyranosyl]-(1-3)-β-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranosid)uronate (203b2)の合成
化合物２０２ｂａ（２３９．２ｍｇ，３６５．４μｍｏｌ）をトルエン（１３ｍＬ）に溶解し、酸化ジブチルすず（ＩＶ）（３２７．６ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を加えディーンスターク装置で２．５時間反応させた。反応液を氷冷し塩化４－メチルベンゾイル（１２２μＬ，９２３μｍｏｌ）を加え室温で終夜攪拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸エチルで抽出し、常法により後処理を行った。濃縮残渣をゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、生成物のクロロホルム溶液を１Ｍ ＨＣｌと飽和食塩水で洗浄し、有機層の濃縮残渣（３８１．９ｍｇ）をトルエン（１２．５ｍＬ）とメタノール（２．５ｍＬ）に溶解した。この溶液を氷冷し、２Ｍ ＴＭＳ ジアゾメタン（６６０μＬ，１１．６μｍｏｌ）を加え、１時間後に減圧濃縮した。残渣をゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）とシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１０：０～０：１）で精製し、２０３ｂ１（２０２．９ｍｇ）と２０３ｂ２（４２．６ｍｇ，）をそれぞれ収率６２％と２５％で得た。
２０３ｂ１: ESI-HRMS m/z [(M+Na)+]: calcd. for C49H46NaO16: 913.2678; found, 913.2678.
２０３ｂ２: ESI-HRMS m/z [(M+Na)+]: calcd. for C49H46NaO16: 913.2678; found, 913.2658.
化合物２０２ｂａ（２３９．２ｍｇ，３６５．４μｍｏｌ）をトルエン（１３ｍＬ）に溶解し、酸化ジブチルすず（ＩＶ）（３２７．６ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）を加えディーンスターク装置で２．５時間反応させた。反応液を氷冷し塩化４－メチルベンゾイル（１２２μＬ，９２３μｍｏｌ）を加え室温で終夜攪拌した。反応液に飽和重曹水を加え、酢酸エチルで抽出し、常法により後処理を行った。濃縮残渣をゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、生成物のクロロホルム溶液を１Ｍ ＨＣｌと飽和食塩水で洗浄し、有機層の濃縮残渣（３８１．９ｍｇ）をトルエン（１２．５ｍＬ）とメタノール（２．５ｍＬ）に溶解した。この溶液を氷冷し、２Ｍ ＴＭＳ ジアゾメタン（６６０μＬ，１１．６μｍｏｌ）を加え、１時間後に減圧濃縮した。残渣をゲル濾過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）とシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１０：０～０：１）で精製し、２０３ｂ１（２０２．９ｍｇ）と２０３ｂ２（４２．６ｍｇ，）をそれぞれ収率６２％と２５％で得た。
２０３ｂ１: ESI-HRMS m/z [(M+Na)+]: calcd. for C49H46NaO16: 913.2678; found, 913.2678.
２０３ｂ２: ESI-HRMS m/z [(M+Na)+]: calcd. for C49H46NaO16: 913.2678; found, 913.2658.
【0067】
（８）Methyl [3-O-levulynoyl-2,4-di-O-(4-methyl)benzoyl-α-D-xylopyranosyl]-(1→3)-β-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranosid)uronate (204b)の合成
化合物（２０３ｂ１，１１１．４ｍｇ，１２５μｍｏｌ）をピリジン（６４０μＬ）に溶解し、１Ｍ レブリン酸（３２５μｌ，０．３１３ｍｍｏｌ）の１，２－ジクロロエタン溶液と、ＤＭＡＰを少量加え、室温で２時間撹拌した。反応液を飽和食塩水で中和し、ＣＨＣｌ３抽出と常法による後処理を行った。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１～０：１）で精製し、２０４ｂ（１２４．８ｍｇ）を定量的に得た。
化合物（２０３ｂ１，１１１．４ｍｇ，１２５μｍｏｌ）をピリジン（６４０μＬ）に溶解し、１Ｍ レブリン酸（３２５μｌ，０．３１３ｍｍｏｌ）の１，２－ジクロロエタン溶液と、ＤＭＡＰを少量加え、室温で２時間撹拌した。反応液を飽和食塩水で中和し、ＣＨＣｌ３抽出と常法による後処理を行った。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１～０：１）で精製し、２０４ｂ（１２４．８ｍｇ）を定量的に得た。
【0068】
（９）Methyl (2,3,4-tri-O-acetyl-α-D-xylopyranosyl)-(1→3)-β-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-acetyl-β-D- glucopyranosylimidate)uronate (205a)の合成
化合物（２０４ａ，８３．４ｍｇ，１２７μｍｏｌ）をアセトニトリル（４ｍＬ）とＨ２Ｏ（１ｍＬ）の混合溶液に溶解し、そこにＣＡＮ（２０３．６ｍｇ，３７１．４μｍｏｌ）を加えて、室温で１．５時間撹拌した。反応液に０．１Ｍアスコルビン酸を加え、ＣＨＣｌ３抽出と飽和食塩水による洗浄をし、常法による後処理を行った。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝５：１～２：３）で精製し、生成物（７３．６ｍｇ）を得た。これをジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、ＣＣｌ３ＣＮ（１２７μＬ，１．２５ｍｍｏｌ）を加えて、０℃に冷却した。その後ＤＢＵを２滴加え、室温に戻して１時間撹拌した。反応液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１０：１～１：１）で精製し、２０５ａ（７２．８ｍｇ）を収率８２％（２工程）で得た。
1H-NMR δH(CDCl3): 8.72 (s, 1H, NH), 6.67 (d, 1H, J1,2=3.54 Hz, GlcA-1), 5.35 (brt, 1H,J=10.08 Hz, Xyl-3), 5.33 (d, 1H, J1,2=3.72 Hz, Xyl-1), 5.30 (dd, 1H,J3,4=9.37 Hz, J4,5=10.20 Hz, GlcA-4), 5.10 (dd, 1H, J2,3=9.90 Hz, GlcA-2), 4.95 (ddd, 1H,J3,4=10.14 Hz, J4,5a=6.42 Hz, J4,5e=9.60 Hz, Xyl-4), 4.72 (dd, 1H, J2,3=10.26 Hz, Xyl-2), 4.35 (brt, 1H,J=9.63 Hz, GlcA-3), 4.35 (d, 1H, GlcA-5), 3.76 (m, 2H, Xyl-5a,e), 3.73 (s, 3H, COOMe), 2.09, 2.04, 2.04, 2.02, 2.01 (each s, 3Hx5, 5Ac)
化合物（２０４ａ，８３．４ｍｇ，１２７μｍｏｌ）をアセトニトリル（４ｍＬ）とＨ２Ｏ（１ｍＬ）の混合溶液に溶解し、そこにＣＡＮ（２０３．６ｍｇ，３７１．４μｍｏｌ）を加えて、室温で１．５時間撹拌した。反応液に０．１Ｍアスコルビン酸を加え、ＣＨＣｌ３抽出と飽和食塩水による洗浄をし、常法による後処理を行った。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝５：１～２：３）で精製し、生成物（７３．６ｍｇ）を得た。これをジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、ＣＣｌ３ＣＮ（１２７μＬ，１．２５ｍｍｏｌ）を加えて、０℃に冷却した。その後ＤＢＵを２滴加え、室温に戻して１時間撹拌した。反応液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１０：１～１：１）で精製し、２０５ａ（７２．８ｍｇ）を収率８２％（２工程）で得た。
1H-NMR δH(CDCl3): 8.72 (s, 1H, NH), 6.67 (d, 1H, J1,2=3.54 Hz, GlcA-1), 5.35 (brt, 1H,J=10.08 Hz, Xyl-3), 5.33 (d, 1H, J1,2=3.72 Hz, Xyl-1), 5.30 (dd, 1H,J3,4=9.37 Hz, J4,5=10.20 Hz, GlcA-4), 5.10 (dd, 1H, J2,3=9.90 Hz, GlcA-2), 4.95 (ddd, 1H,J3,4=10.14 Hz, J4,5a=6.42 Hz, J4,5e=9.60 Hz, Xyl-4), 4.72 (dd, 1H, J2,3=10.26 Hz, Xyl-2), 4.35 (brt, 1H,J=9.63 Hz, GlcA-3), 4.35 (d, 1H, GlcA-5), 3.76 (m, 2H, Xyl-5a,e), 3.73 (s, 3H, COOMe), 2.09, 2.04, 2.04, 2.02, 2.01 (each s, 3Hx5, 5Ac)
【0069】
（１０）Methyl [3-O-levulynoyl-2,4-di-O-(4-methyl)benzoyl-α-D-xylopyranosyl]-(1→3)-β-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranosylimidate)uronate (205b)の合成
化合物（２０４ｂ，１２４．８ｍｇ，１２６．２μｍｏｌ）をアセトニトリル（５．８ｍＬ）とＨ２Ｏ（１．４ｍＬ）の混合溶液に溶解し、そこにＣＡＮ（３６２．２ｍｇ，６６０．７μｍｏｌ）を加えて、室温で４．５時間撹拌した。反応液に０．１Ｍアスコルビン酸を加え、ＣＨＣｌ３抽出と飽和食塩水による洗浄をし、常法による後処理をおこなった。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１～０：１）で精製し、生成物（１１０．８ｍｇ）を得た。これをジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、ＣＣｌ３ＣＮ（１２５μＬ，１．２５ｍｍｏｌ）を加えて、０℃に冷却した。その後ＤＢＵを１滴加え、室温に戻して１時間撹拌した。反応液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝５０：１～０：１）で精製し、２０５ｂ（１０９．７ｍｇ）を収率８０％（２工程）で得た。
1H-NMR δH(CDCl3): 8.70 (s, 1H, NH), 7.97-7.95 (m, 2H, Ar), 7.64-7.58 (m, 4H, Ar), 7.54-7.51 (m, 3H, Ar), 7.33-7.29 (m, 2H, Ar), 7.22 (brt, 1H, J=7.80 Hz, Ar), 7.16 (d, 1H, J=7.98 Hz, Ar), 7.11 (d, 1H, J=7.98 Hz, Ar), 6.84 (d, 1H, J1,2=3.78 Hz, GlcA-1), 5.60 (brt, 1H,J=9.90 Hz, Xyl-3), 5.59-5.56 (m, 2H, GlcA-2, 4), 5.50 (d, 1H, J1,2=3.90 Hz, Xyl-1), 5.00 (dd, 1H, J2,3=10.44 Hz, Xyl-2), 4.97 (m, 1H,Xyl-4), 4.72 (t, 1H, J2,3= J3,4=9.46 Hz, GlcA-3), 4.52 (d, 1H, J4,5=10.20 Hz, GlcA-5), 3.70 (brt, 1H, J=10.92 Hz, Xyl-5a), 3,63 (dd, 1H, J4,5e=6.18 Hz, J5a,5e=11.22 Hz, Xyl-5e), 3.52 (s, 3H, COOMe), 2.40 (s, 6H, 2PhMe), 2.39-2.16 (m, 4H, 2CH2), 1.86 (s, 3H, Lev).
化合物（２０４ｂ，１２４．８ｍｇ，１２６．２μｍｏｌ）をアセトニトリル（５．８ｍＬ）とＨ２Ｏ（１．４ｍＬ）の混合溶液に溶解し、そこにＣＡＮ（３６２．２ｍｇ，６６０．７μｍｏｌ）を加えて、室温で４．５時間撹拌した。反応液に０．１Ｍアスコルビン酸を加え、ＣＨＣｌ３抽出と飽和食塩水による洗浄をし、常法による後処理をおこなった。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１～０：１）で精製し、生成物（１１０．８ｍｇ）を得た。これをジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、ＣＣｌ３ＣＮ（１２５μＬ，１．２５ｍｍｏｌ）を加えて、０℃に冷却した。その後ＤＢＵを１滴加え、室温に戻して１時間撹拌した。反応液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝５０：１～０：１）で精製し、２０５ｂ（１０９．７ｍｇ）を収率８０％（２工程）で得た。
1H-NMR δH(CDCl3): 8.70 (s, 1H, NH), 7.97-7.95 (m, 2H, Ar), 7.64-7.58 (m, 4H, Ar), 7.54-7.51 (m, 3H, Ar), 7.33-7.29 (m, 2H, Ar), 7.22 (brt, 1H, J=7.80 Hz, Ar), 7.16 (d, 1H, J=7.98 Hz, Ar), 7.11 (d, 1H, J=7.98 Hz, Ar), 6.84 (d, 1H, J1,2=3.78 Hz, GlcA-1), 5.60 (brt, 1H,J=9.90 Hz, Xyl-3), 5.59-5.56 (m, 2H, GlcA-2, 4), 5.50 (d, 1H, J1,2=3.90 Hz, Xyl-1), 5.00 (dd, 1H, J2,3=10.44 Hz, Xyl-2), 4.97 (m, 1H,Xyl-4), 4.72 (t, 1H, J2,3= J3,4=9.46 Hz, GlcA-3), 4.52 (d, 1H, J4,5=10.20 Hz, GlcA-5), 3.70 (brt, 1H, J=10.92 Hz, Xyl-5a), 3,63 (dd, 1H, J4,5e=6.18 Hz, J5a,5e=11.22 Hz, Xyl-5e), 3.52 (s, 3H, COOMe), 2.40 (s, 6H, 2PhMe), 2.39-2.16 (m, 4H, 2CH2), 1.86 (s, 3H, Lev).
【0070】
（x）Methyl 3,4-O-(2,3-dimethoxybutan-2,3-diyl)-2-O-(4-methoxy)benzyl-α-D-xylopyranosyl-(1→3)-β-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-acetyl-α and β-D-glucopyranosid)uronate (208a, 208b)の合成
（αチオグリコシドを用いる縮合:Method 1）
トルエン（３．０ｍＬ）とジオキサン（３．０ｍＬ）の混合溶媒中で１０３ａ（３９７．８ｍｇ、０．６９９ｍｍｏｌ）と１１３ａ（１８３．５ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ）を、モレキュラーシーブ４Ａ（０．６４ｇ）の存在下、室温で１時間攪拌した。そこにＮＩＳ（２３８．２ｍｇ、１．０５９ｍｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（７１．４ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ）を－２０ｏＣで加えた。１．５時間後、１Ｍ ハイポ、飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌを加えて反応を中止し、珪藻土ろ過した濾液をＣＨＣｌ３で抽出し、有機層は飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ別し、ろ液の濃縮残渣をゲルろ過カラムカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、２０８ａと２０８ｂの混合物（２４５．９ｍｇ、α５８％、β１２％）を得た。
（βチオグリコシドを用いる縮合:Method 2）
トルエン（３．０ｍＬ）とジオキサン（３．０ｍＬ）の混合溶媒中で１０３ｂ（１８４．７ｍｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）と１１３ａ（８６．９ｍｇ、０．２１８ｍｍｏｌ）を、モレキュラーシーブ４Ａ（０．３３ｇ）の存在下、室温で２時間攪拌した。そこにＮＩＳ（１１０．１ｍｇ、０．４８９ｍｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（３８．４ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）を－２０℃で加えた。２時間後、１Ｍ ハイポ、飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌを加えて反応を中止し、珪藻土ろ過した濾液をＣＨＣｌ３で抽出し、有機層は飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ別し、ろ液の濃縮残渣をゲルろ過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、２０８ａと２０８ｂの混合物（１２０．７ｍｇ、α６０％、β１２％）を得た。
（αとβチオグリコシドを用いる縮合:Method 3）
トルエン（１０．０ｍＬ）とジオキサン（１０．０ｍＬ）の混合溶媒中で１０３ａと１０３ｂの約１：１混合物（１．０５ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）と１１３ａ（４９１．４ｍｇ、１．２３４ｍｍｏｌ）を、モレキュラーシーブ４Ａ（１．８１ｇ）の存在下、室温で１時間攪拌した。そこにＮＩＳ（５８８．３ｍｇ、２．６１５ｍｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（１９１．６ｍｇ、０．７４５８ｍｍｏｌ）を－２０℃で加えた。２時間後、１Ｍ ハイポ、飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌを加えて反応を中止し珪藻土ろ過した濾液をＣＨＣｌ３で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮しゲルろ過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、２０８ａと２０８ｂの混合物（７５４．４ｍｇ、α６７％、β１３％）を得た。
（αチオグリコシドを用いる縮合:Method 1）
トルエン（３．０ｍＬ）とジオキサン（３．０ｍＬ）の混合溶媒中で１０３ａ（３９７．８ｍｇ、０．６９９ｍｍｏｌ）と１１３ａ（１８３．５ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ）を、モレキュラーシーブ４Ａ（０．６４ｇ）の存在下、室温で１時間攪拌した。そこにＮＩＳ（２３８．２ｍｇ、１．０５９ｍｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（７１．４ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ）を－２０ｏＣで加えた。１．５時間後、１Ｍ ハイポ、飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌを加えて反応を中止し、珪藻土ろ過した濾液をＣＨＣｌ３で抽出し、有機層は飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ別し、ろ液の濃縮残渣をゲルろ過カラムカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、２０８ａと２０８ｂの混合物（２４５．９ｍｇ、α５８％、β１２％）を得た。
（βチオグリコシドを用いる縮合:Method 2）
トルエン（３．０ｍＬ）とジオキサン（３．０ｍＬ）の混合溶媒中で１０３ｂ（１８４．７ｍｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）と１１３ａ（８６．９ｍｇ、０．２１８ｍｍｏｌ）を、モレキュラーシーブ４Ａ（０．３３ｇ）の存在下、室温で２時間攪拌した。そこにＮＩＳ（１１０．１ｍｇ、０．４８９ｍｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（３８．４ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）を－２０℃で加えた。２時間後、１Ｍ ハイポ、飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌを加えて反応を中止し、珪藻土ろ過した濾液をＣＨＣｌ３で抽出し、有機層は飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ別し、ろ液の濃縮残渣をゲルろ過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、２０８ａと２０８ｂの混合物（１２０．７ｍｇ、α６０％、β１２％）を得た。
（αとβチオグリコシドを用いる縮合:Method 3）
トルエン（１０．０ｍＬ）とジオキサン（１０．０ｍＬ）の混合溶媒中で１０３ａと１０３ｂの約１：１混合物（１．０５ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）と１１３ａ（４９１．４ｍｇ、１．２３４ｍｍｏｌ）を、モレキュラーシーブ４Ａ（１．８１ｇ）の存在下、室温で１時間攪拌した。そこにＮＩＳ（５８８．３ｍｇ、２．６１５ｍｍｏｌ）とＡｇＯＴｆ（１９１．６ｍｇ、０．７４５８ｍｍｏｌ）を－２０℃で加えた。２時間後、１Ｍ ハイポ、飽和ＮａＨＣＯ３と飽和ＮａＣｌを加えて反応を中止し珪藻土ろ過した濾液をＣＨＣｌ３で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮しゲルろ過カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、２０８ａと２０８ｂの混合物（７５４．４ｍｇ、α６７％、β１３％）を得た。
【0071】
（x）Methyl α-D-xylopyranosyl-(1→3)-β-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-acetyl-β-D-glucopyranosid)uronate (202aa)の合成
化合物２０８ａと２０８ｂの混合物（７５４．４ｍｇ、α：β＝６７：１３）に９０％トリフルオロ酢酸（１０．０ｍＬ）を加え０℃で攪拌した。２．５時間後濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝１：１～酢酸エチル：メタノール＝１０：１）で精製し２０２ａａと２０２ａｂの混合物（４７４．５ｍｇ、収率９１％）を得た。これをクロロホルムに懸濁させ，ろ過した．不溶物を回収し，２０２ａａ（４２７．８ｍｇ）を得た（２０８ａと２０８ｂの混合物からの収率８２％）。1H-NMR δH(CD3OD):6.98-6.92(m,2H,Ar-H),6.84-6.82(m,2H,Ar-H),5.19-5.11(m,4H,Glc A-1,2,4),4.95(d,1H,J1,2=3.84Hz,Xyl-1),4.27(d,1H,J4,5=9.96Hz,Glc A-5),4.12(t,1H,J2,3=J3,4=9.24Hz,Glc A-3),3.74,3.69(2s,3H×2,2O C H3),3.53-3.39(m,4H,Xyl-3,4,5ab),2.12,2.07(2s,3H×2,2A c).
化合物２０８ａと２０８ｂの混合物（７５４．４ｍｇ、α：β＝６７：１３）に９０％トリフルオロ酢酸（１０．０ｍＬ）を加え０℃で攪拌した。２．５時間後濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝１：１～酢酸エチル：メタノール＝１０：１）で精製し２０２ａａと２０２ａｂの混合物（４７４．５ｍｇ、収率９１％）を得た。これをクロロホルムに懸濁させ，ろ過した．不溶物を回収し，２０２ａａ（４２７．８ｍｇ）を得た（２０８ａと２０８ｂの混合物からの収率８２％）。1H-NMR δH(CD3OD):6.98-6.92(m,2H,Ar-H),6.84-6.82(m,2H,Ar-H),5.19-5.11(m,4H,Glc A-1,2,4),4.95(d,1H,J1,2=3.84Hz,Xyl-1),4.27(d,1H,J4,5=9.96Hz,Glc A-5),4.12(t,1H,J2,3=J3,4=9.24Hz,Glc A-3),3.74,3.69(2s,3H×2,2O C H3),3.53-3.39(m,4H,Xyl-3,4,5ab),2.12,2.07(2s,3H×2,2A c).
【実施例2】
【0072】
実施例２ 四糖誘導体（ｎ＝１である式（５）の化合物）の合成
（１）Methyl [3-O-levulinoyl-2,4-di-O-(4-methyl)benzoyl-α-D-xylopyranosyl]-(1→3)-(methyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-[2,4-di-O-(4-methyl)benzoyl-α-D-xylopyranosyl]-(1→3)-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranosid)uronate (206b)の合成
二糖供与体（２０５ｂ，１０９．７ｍｇ，１０６．７μｍｏｌ）と二糖受容体（２０３ｂ１，９０．２ｍｇ，１０１μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．５ｍＬ）に溶解し、ＭＳＡＷ３００（０．３１ｇ）を加えて、３０分撹拌した。これを－２０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（１０μＬ，５３．５μｍｏｌ）を加えて３時間撹拌した。反応溶液に飽和重曹水を加え、セライトろ過を行った。常法による後処理を行い、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１：１）で精製し、２０６ｂ（５６．３ｍｇ，３２．１μｍｏｌ）を収率３２％で得た。[α]D +21.0°(c 0.66,CHCl3). 1H-NMR δH(CDCl3): 7.92-7.899 (m, 4H, Ar), 7.66-7.62 (m, 5H, Ar), 7.59 (d, 2H, J=8.16 Hz, Ar), 7.55-7.50 (m, 7H, Ar), 7.41 (d, 2H, J=7.44 Hz, Ar), 7.33-7.27 (m, 5H, Ar), 7.18 (m, 3H, Ar), 7.15 (d, 2H, J=8.04 Hz, Ar), 7.11 (d, 2H, J=7.75 Hz, Ar), 7.06 (d, 2H, J=7.92 Hz, Ar), 6.91-6.89 (m, 2H, Ar), 6.88-6.86 (m, 2H, Ar), 6.71-6.70 (m, 2H, Ar), 5.55 (dd, 1H, J1,2=7.26 Hz, J2,3=8.64 Hz, H-21), 5.50 (brt, 1H, J=8.94 Hz, H-41), 5.45 (t, 1H, J2,3= J3,4=9.78 Hz, H-34), 5.42 (brt, 1H, J=9.45 Hz, H-43), 5.34 (d, 1H, J1,2=3.60 Hz, H-12), 5.28 (d, 1H, J1,2=3.96 Hz, H-14), 5.25 (brt, 1H, J=8.52 Hz, H-23), 5.09 (d, 1H, H-11), 5.00 (dd, 1H, J1,2=7.98 Hz, H-13), 4.81-4.76 (m, 3H, H-42, 24, 44), 4.71 (dd, 1H, J2,3=9.60 Hz, H-23), 4.43 (brt, 1H, J=9.27 Hz, H-32), 4.33 (brt, 1H, J=8.73 Hz, H-31), 4.17 (brt, 1H, J=9.08 Hz, H-33), 4.12 (d, 1H, J4,5=9.84 Hz, H-53), 4.11 (d, 1H, J4,5=9.19 Hz, H-51), 3.70, 3.53, 3.44 (3s, 3Hx3, 3OMe), 3.66 (dd, 1H, J4,5e=5.93 Hz, J5a,5e=11.53 Hz, H-52e), 3.49 (brt, 1H, J=10.78 Hz, H-52a), 3.31 (brt, 1H, J=11.05 Hz, H-54a), 3.21 (dd, 1H, J4,5e=6.00 Hz, J5a,5e=11.33 Hz, H-54e), 2.50, 2.45, 2.39, 2.37 (4s, 12H, 4PhMe), 2.44-2.10 (m, 4H, 2CH2), 1.83 (s, 3H, Lev). ESI-HRMS m/z [(M+Na)+]: calcd. for C96H90NaO32: 1777.5307; found, 1777.5330.
（１）Methyl [3-O-levulinoyl-2,4-di-O-(4-methyl)benzoyl-α-D-xylopyranosyl]-(1→3)-(methyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyluronate)-(1→3)-[2,4-di-O-(4-methyl)benzoyl-α-D-xylopyranosyl]-(1→3)-(4-methoxyphenyl 2,4-di-O-benzoyl-β-D-glucopyranosid)uronate (206b)の合成
二糖供与体（２０５ｂ，１０９．７ｍｇ，１０６．７μｍｏｌ）と二糖受容体（２０３ｂ１，９０．２ｍｇ，１０１μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．５ｍＬ）に溶解し、ＭＳＡＷ３００（０．３１ｇ）を加えて、３０分撹拌した。これを－２０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（１０μＬ，５３．５μｍｏｌ）を加えて３時間撹拌した。反応溶液に飽和重曹水を加え、セライトろ過を行った。常法による後処理を行い、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１：１）で精製し、２０６ｂ（５６．３ｍｇ，３２．１μｍｏｌ）を収率３２％で得た。[α]D +21.0°(c 0.66,CHCl3). 1H-NMR δH(CDCl3): 7.92-7.899 (m, 4H, Ar), 7.66-7.62 (m, 5H, Ar), 7.59 (d, 2H, J=8.16 Hz, Ar), 7.55-7.50 (m, 7H, Ar), 7.41 (d, 2H, J=7.44 Hz, Ar), 7.33-7.27 (m, 5H, Ar), 7.18 (m, 3H, Ar), 7.15 (d, 2H, J=8.04 Hz, Ar), 7.11 (d, 2H, J=7.75 Hz, Ar), 7.06 (d, 2H, J=7.92 Hz, Ar), 6.91-6.89 (m, 2H, Ar), 6.88-6.86 (m, 2H, Ar), 6.71-6.70 (m, 2H, Ar), 5.55 (dd, 1H, J1,2=7.26 Hz, J2,3=8.64 Hz, H-21), 5.50 (brt, 1H, J=8.94 Hz, H-41), 5.45 (t, 1H, J2,3= J3,4=9.78 Hz, H-34), 5.42 (brt, 1H, J=9.45 Hz, H-43), 5.34 (d, 1H, J1,2=3.60 Hz, H-12), 5.28 (d, 1H, J1,2=3.96 Hz, H-14), 5.25 (brt, 1H, J=8.52 Hz, H-23), 5.09 (d, 1H, H-11), 5.00 (dd, 1H, J1,2=7.98 Hz, H-13), 4.81-4.76 (m, 3H, H-42, 24, 44), 4.71 (dd, 1H, J2,3=9.60 Hz, H-23), 4.43 (brt, 1H, J=9.27 Hz, H-32), 4.33 (brt, 1H, J=8.73 Hz, H-31), 4.17 (brt, 1H, J=9.08 Hz, H-33), 4.12 (d, 1H, J4,5=9.84 Hz, H-53), 4.11 (d, 1H, J4,5=9.19 Hz, H-51), 3.70, 3.53, 3.44 (3s, 3Hx3, 3OMe), 3.66 (dd, 1H, J4,5e=5.93 Hz, J5a,5e=11.53 Hz, H-52e), 3.49 (brt, 1H, J=10.78 Hz, H-52a), 3.31 (brt, 1H, J=11.05 Hz, H-54a), 3.21 (dd, 1H, J4,5e=6.00 Hz, J5a,5e=11.33 Hz, H-54e), 2.50, 2.45, 2.39, 2.37 (4s, 12H, 4PhMe), 2.44-2.10 (m, 4H, 2CH2), 1.83 (s, 3H, Lev). ESI-HRMS m/z [(M+Na)+]: calcd. for C96H90NaO32: 1777.5307; found, 1777.5330.
【0073】
（２）α-D-Xylopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyluronic acid-(1→3)-α-D-xylopyranosyl-(1→3)-4-methoxyphenyl β-D-glucopyranosyluronic acid, disodium salt (207b)の合成
化合物（２０６ｂ，１５．１ｍｇ，８．６０μｍｏｌ）をＴＨＦ（１．４ｍｌ）とＨ２Ｏ（０．１ｍｌ）の混合溶液に溶解し、１．２５Ｍ ＬｉＯＨ（７０μＬ，８６μｍｏｌ）を加え２．５時間撹拌した。減圧留去後０℃に冷却しＭｅＯＨを１．０ｍＬ加え、０．５Ｍ ＮａＯＨ（５０μＬ）を加えて室温で１６日間撹拌した。５０％酢酸（２滴）を加えて減圧留去し、得られた残渣をゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＬＨ－２０，１％酢酸）とＢｏｎｄ Ｅｌｕｔ（Ｃ８）で精製し、２０７ｂを４．１ｍｇ（収率６４％）得た。[α]D +18.3°(c 0.41,H2O). 1H-NMR δH(H2O) (DHO=4.70 ppm): 7.00-6.99 (m, 2H, Ar), 6.87-6.85 (m, 4H, Ar), 5.26 (d, 1H, J1,2=3.78 Hz, H-14or2), 5.22 (d, 1H, J1,2=3.84 Hz, H-12or4), 4.87 (d, 1H, J1,2=7.80 Hz, H-11), 4.63 (d, 1H, J1,2=8.00 Hz, H-13), 3.68 (s, 3H, OMe), 3.61 (m, 1H, H-24or2), 3.56 (m, 2H, H-33, 32or4), 3.55(m, 1H, H-21), 3.41 (dd, 1H, J2,3=9.72 Hz, H-22or4), 3.38 (dd, 1H, J2,3=9.12 Hz, H-23). ESI-HRMS m/z[(M+Na)+]: calcd. for C29H40NaO22: 763.1903; found, 763.1884.
化合物（２０６ｂ，１５．１ｍｇ，８．６０μｍｏｌ）をＴＨＦ（１．４ｍｌ）とＨ２Ｏ（０．１ｍｌ）の混合溶液に溶解し、１．２５Ｍ ＬｉＯＨ（７０μＬ，８６μｍｏｌ）を加え２．５時間撹拌した。減圧留去後０℃に冷却しＭｅＯＨを１．０ｍＬ加え、０．５Ｍ ＮａＯＨ（５０μＬ）を加えて室温で１６日間撹拌した。５０％酢酸（２滴）を加えて減圧留去し、得られた残渣をゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＬＨ－２０，１％酢酸）とＢｏｎｄ Ｅｌｕｔ（Ｃ８）で精製し、２０７ｂを４．１ｍｇ（収率６４％）得た。[α]D +18.3°(c 0.41,H2O). 1H-NMR δH(H2O) (DHO=4.70 ppm): 7.00-6.99 (m, 2H, Ar), 6.87-6.85 (m, 4H, Ar), 5.26 (d, 1H, J1,2=3.78 Hz, H-14or2), 5.22 (d, 1H, J1,2=3.84 Hz, H-12or4), 4.87 (d, 1H, J1,2=7.80 Hz, H-11), 4.63 (d, 1H, J1,2=8.00 Hz, H-13), 3.68 (s, 3H, OMe), 3.61 (m, 1H, H-24or2), 3.56 (m, 2H, H-33, 32or4), 3.55(m, 1H, H-21), 3.41 (dd, 1H, J2,3=9.72 Hz, H-22or4), 3.38 (dd, 1H, J2,3=9.12 Hz, H-23). ESI-HRMS m/z[(M+Na)+]: calcd. for C29H40NaO22: 763.1903; found, 763.1884.
【実施例3】
【0074】
実施例３ 式（９）に示す四糖誘導体の合成
（１）化合物４０２の合成
トルエン（６．０ｍＬ）とエタノール（３．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解した式１０、化合物４０１（２７３．６ｍｇ、０．２５１６ｍｍｏｌ）にＨ２ＮＮＨ２・ＡｃＯＨ（１１２．１ｍｇ）加え室温で一晩撹拌した。その後、反応液を濃縮しゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１：１）とシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝１００：１）で精製し、化合物４０２を１３７．０ｍｇ、収率７５％で得た。
（１）化合物４０２の合成
トルエン（６．０ｍＬ）とエタノール（３．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解した式１０、化合物４０１（２７３．６ｍｇ、０．２５１６ｍｍｏｌ）にＨ２ＮＮＨ２・ＡｃＯＨ（１１２．１ｍｇ）加え室温で一晩撹拌した。その後、反応液を濃縮しゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１：１）とシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝１００：１）で精製し、化合物４０２を１３７．０ｍｇ、収率７５％で得た。
【0075】
（２）化合物４０３（式８）の合成
ＤＭＦに溶解させた化合物４０２（９７．４ｍｇ、０．１３４０ｍｍｏｌ）に、１０－カンファースルホン酸（３．９ｍｇ）を加えて室温で撹拌させた。そこに、２－メトキシプロペン（１４μＬ）を加えた。８時間後さらに２－メトキシプロペン（１４μＬ）を加え一晩撹拌した。その後、さらに２－メトキシプロペン（２８μＬ）を加え、２時間後、ジイソプロピルエチルアミンを加えて反応を停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝６：１～４：１）で精製し、化合物４０３（式８）を７０．２ｍｇ（収率６８％）得た。
ＤＭＦに溶解させた化合物４０２（９７．４ｍｇ、０．１３４０ｍｍｏｌ）に、１０－カンファースルホン酸（３．９ｍｇ）を加えて室温で撹拌させた。そこに、２－メトキシプロペン（１４μＬ）を加えた。８時間後さらに２－メトキシプロペン（１４μＬ）を加え一晩撹拌した。その後、さらに２－メトキシプロペン（２８μＬ）を加え、２時間後、ジイソプロピルエチルアミンを加えて反応を停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮しシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝６：１～４：１）で精製し、化合物４０３（式８）を７０．２ｍｇ（収率６８％）得た。
【0076】
（３）化合物４０４の合成
ＭＳＡＷ３００に、ＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた式７、化合物２０５ａ（１３５．４ｍｇ、０．１９４８ｍｍｏｌ）と式８，化合物４０３（１１０．０ｍｇ、０．１４０５ｍｍｏｌ）を加え、－７８℃で撹拌した。そこにＴＭＳＯＴｆ（４．０μＬ）を加えた。１．５時間後、飽和ＮａＨＣＯ３を加えて反応を停止させ、ＣＨＣｌ３で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮しゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１：１）で精製し、生成物（７５．８ｍｇ）を得た。得られた生成物にＡｃ２Ｏ（３．０ｍＬ）とピリジン（３．０ｍＬ）を加え室温で一晩撹拌した。その後反応液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、化合物４０４を６７．３ｍｇ（２工程収率３５％）得た。
ＭＳＡＷ３００に、ＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた式７、化合物２０５ａ（１３５．４ｍｇ、０．１９４８ｍｍｏｌ）と式８，化合物４０３（１１０．０ｍｇ、０．１４０５ｍｍｏｌ）を加え、－７８℃で撹拌した。そこにＴＭＳＯＴｆ（４．０μＬ）を加えた。１．５時間後、飽和ＮａＨＣＯ３を加えて反応を停止させ、ＣＨＣｌ３で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮しゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１：１）で精製し、生成物（７５．８ｍｇ）を得た。得られた生成物にＡｃ２Ｏ（３．０ｍＬ）とピリジン（３．０ｍＬ）を加え室温で一晩撹拌した。その後反応液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、化合物４０４を６７．３ｍｇ（２工程収率３５％）得た。
【0077】
（４）化合物４０５の合成
(1,5-cyclooctadiene)bis(methyldiphenylphosphine)iridium(I) hexafluorophosphateにＴＨＦ（１．０ｍＬ）を加えＨ２で活性化させたのちに、Ａｒ雰囲気にした。そこにＴＨＦ（５．０ｍＬ）に溶解させた化合物４０４（６７．３ｍｇ、０．０４９５０ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１．５時間撹拌した。その後、水を加え、０℃にし、炭酸水素ナトリウム（８．９ｍｇ）とヨウ素（２６．２ｍｇ）を加えて２時間撹拌した。その後、１Ｍハイポを加えて反応を停止させＣＨＣｌ３で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝３：１～酢酸エチル：メタノール＝１０：１）で精製し、生成物（６０．０ｍｇ）を得た。得られた生成物をＴＨＦ（４．０ｍＬ）に溶解しＡｃＯＨ（２５μＬ）と１Ｍ ｔ－ブチルアンモニウムフルオリド（２２０μＬ）加え、室温で２日間撹拌した。その後、ＣＨＣｌ３で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、化合物４０５を２９．１ｍｇ（２工程収率５４％）得た。
(1,5-cyclooctadiene)bis(methyldiphenylphosphine)iridium(I) hexafluorophosphateにＴＨＦ（１．０ｍＬ）を加えＨ２で活性化させたのちに、Ａｒ雰囲気にした。そこにＴＨＦ（５．０ｍＬ）に溶解させた化合物４０４（６７．３ｍｇ、０．０４９５０ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１．５時間撹拌した。その後、水を加え、０℃にし、炭酸水素ナトリウム（８．９ｍｇ）とヨウ素（２６．２ｍｇ）を加えて２時間撹拌した。その後、１Ｍハイポを加えて反応を停止させＣＨＣｌ３で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝３：１～酢酸エチル：メタノール＝１０：１）で精製し、生成物（６０．０ｍｇ）を得た。得られた生成物をＴＨＦ（４．０ｍＬ）に溶解しＡｃＯＨ（２５μＬ）と１Ｍ ｔ－ブチルアンモニウムフルオリド（２２０μＬ）加え、室温で２日間撹拌した。その後、ＣＨＣｌ３で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。不溶物をろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、化合物４０５を２９．１ｍｇ（２工程収率５４％）得た。
【0078】
（５）化合物４０６（式９）の合成
ＴＨＦ（４．０ｍＬ）と水（０．２ｍＬ）の混合溶媒に溶解した化合物４０５（２９．１ｍｇ，０．０２７０ｍｍｏｌ）に１．２５Ｍ ＬｉＯＨ（２１０μＬ）を０℃で加え１時間攪拌した。反応液を濃縮し、メタノール（４．０ｍＬ）を加えて、０．１Ｍ ＮａＯＨ（５滴）添加して一晩室温で撹拌した。ＡｃＯＨを添加し反応を停止させ、反応液を濃縮し、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＬＨ－２０，１％酢酸）で精製し生成物（２０．０ｍｇ）を得た。得られた生成物をメタノール（２．０ｍＬ）と水（２．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、パラジウム－カーボンを加えた。その後、フラスコ内をＨ２雰囲気にし、一晩室温で撹拌した。反応液をセライトろ過したのちに、濃縮、乾燥させ、式９、化合物４０６を１４．６ｍｇ（２工程収率９２％）得た。
1H-NMR δH(D2O): 5.17(d, 1H, J1,2=3.84 Hz, Xyl2-1), 4.44(d, 1H, J1,2=7.86 Hz, Xyl1-1), 4.42(d, 1H, J1,2=8.22 Hz, GlcA-1), 3.94(dd, 1H, J=5.34, 11.88 Hz, Xyl-5a), 3.86-3.84(m, 1H, Rbo-4), 3.74-3.72(m, 4H, Xyl2-4, Rbo-3, 5a, 1a), 3.69-3.60(m, 5H, Xyl1-4, GlcA-5, Rbo-2, 5b, Xyl2-5a), 3.54-3.43(m, 6H, Xyl2-3, 5b, Xyl1-3, GlcA-3,4, Rbo-1b), 3.38(dd, 1H, J2,3=9.66 Hz Xyl2-2), 3.27(d, 1H, J2,3=9.12 Hz, GlcA-2), 3.24-3.20(m, 2H, Xyl1-2, Xyl1-5b).13C NMR δC (D2O): 105.46(Xyl1-1), 103.84(GlcA-1), 101.52(Xyl2-1), 83.51(GlcA-4), 83.33(Rbo-4), 79.48(Xyl1-4), 77.56(Rbo-3), 76.37(Xyl1-3), 75.67(Xyl1-2), 75.60(Xyl2-3), 74.60, 74.40(GlcA-5, Rbo-2), 74.20(Xyl2-2), 74.12(Xyl2-4), 73.85(GlcA-2), 71.95(GlcA-3), 65.53(Xyl1-5), 65.22(Xyl2-5), 64.03(Rbo-1), 62.77(Rbo-5). ESI-HRMS m/z[(M+Na)+]: calcd. for C21H36NaO19: 615.1748; found, 615.1744.
ＴＨＦ（４．０ｍＬ）と水（０．２ｍＬ）の混合溶媒に溶解した化合物４０５（２９．１ｍｇ，０．０２７０ｍｍｏｌ）に１．２５Ｍ ＬｉＯＨ（２１０μＬ）を０℃で加え１時間攪拌した。反応液を濃縮し、メタノール（４．０ｍＬ）を加えて、０．１Ｍ ＮａＯＨ（５滴）添加して一晩室温で撹拌した。ＡｃＯＨを添加し反応を停止させ、反応液を濃縮し、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー（ＬＨ－２０，１％酢酸）で精製し生成物（２０．０ｍｇ）を得た。得られた生成物をメタノール（２．０ｍＬ）と水（２．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、パラジウム－カーボンを加えた。その後、フラスコ内をＨ２雰囲気にし、一晩室温で撹拌した。反応液をセライトろ過したのちに、濃縮、乾燥させ、式９、化合物４０６を１４．６ｍｇ（２工程収率９２％）得た。
1H-NMR δH(D2O): 5.17(d, 1H, J1,2=3.84 Hz, Xyl2-1), 4.44(d, 1H, J1,2=7.86 Hz, Xyl1-1), 4.42(d, 1H, J1,2=8.22 Hz, GlcA-1), 3.94(dd, 1H, J=5.34, 11.88 Hz, Xyl-5a), 3.86-3.84(m, 1H, Rbo-4), 3.74-3.72(m, 4H, Xyl2-4, Rbo-3, 5a, 1a), 3.69-3.60(m, 5H, Xyl1-4, GlcA-5, Rbo-2, 5b, Xyl2-5a), 3.54-3.43(m, 6H, Xyl2-3, 5b, Xyl1-3, GlcA-3,4, Rbo-1b), 3.38(dd, 1H, J2,3=9.66 Hz Xyl2-2), 3.27(d, 1H, J2,3=9.12 Hz, GlcA-2), 3.24-3.20(m, 2H, Xyl1-2, Xyl1-5b).13C NMR δC (D2O): 105.46(Xyl1-1), 103.84(GlcA-1), 101.52(Xyl2-1), 83.51(GlcA-4), 83.33(Rbo-4), 79.48(Xyl1-4), 77.56(Rbo-3), 76.37(Xyl1-3), 75.67(Xyl1-2), 75.60(Xyl2-3), 74.60, 74.40(GlcA-5, Rbo-2), 74.20(Xyl2-2), 74.12(Xyl2-4), 73.85(GlcA-2), 71.95(GlcA-3), 65.53(Xyl1-5), 65.22(Xyl2-5), 64.03(Rbo-1), 62.77(Rbo-5). ESI-HRMS m/z[(M+Na)+]: calcd. for C21H36NaO19: 615.1748; found, 615.1744.
【産業上の利用可能性】
【0079】
本発明は、医薬の製造分野、糖鎖工学の分野などにおいて利用可能である。