特許 7600244 ＦＧＦ－２１コンジュゲート製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-12-06

(45)【発行日】2024-12-16

(54)【発明の名称】ＦＧＦ－２１コンジュゲート製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/60 20170101AFI20241209BHJP

   A61K 38/18 20060101ALI20241209BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241209BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241209BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20241209BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20241209BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20241209BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20241209BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20241209BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20241209BHJP

   C07K 14/50 20060101ALN20241209BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20241209BHJP

【ＦＩ】

A61K47/60

A61K38/18

A61P43/00 105

A61P29/00 ZNA

A61P1/16

A61P3/10

A61K47/18

A61K47/26

A61K9/08

A61K9/14

C07K14/50

C12N15/12

【請求項の数】 15

(21)【出願番号】P 2022541986

(86)(22)【出願日】2021-01-07

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-13

(86)【国際出願番号】 US2021012530

(87)【国際公開番号】W WO2021142143

(87)【国際公開日】2021-07-15

【審査請求日】2024-01-05

(31)【優先権主張番号】62/958,580

(32)【優先日】2020-01-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】391015708

【氏名又は名称】ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー

【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＳＴＯＬ－ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ ＣＯＭＰＡＮＹ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(74)【代理人】

【識別番号】100162695

【弁理士】

【氏名又は名称】釜平 双美

(74)【代理人】

【識別番号】100156155

【弁理士】

【氏名又は名称】水原 正弘

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(72)【発明者】

【氏名】パーム，トーマス

(72)【発明者】

【氏名】ホスラビ，メフルナズ

(72)【発明者】

【氏名】パトケ，サンケット

【審査官】三上 晶子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１８－５１３１５９（ＪＰ，Ａ）

【文献】Obesity，2019年，Vol.27，pp.41-49

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２

Ａ６１Ｋ ４７／００－ ４７／６９

Ａ６１Ｐ １／００－４３／００

Ａ６１Ｋ ３８／１８

Ｃ０７Ｋ １４／５０

Ｃ１２Ｎ １５／１２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）ＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約１０ｍＭ～約５０ｍＭの間の濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約１００ｍＭ～約１Ｍの間の濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約１０μＭ～約１００μＭの間の濃度のＤＴＰＡ；
を含む医薬製剤であって、
該製剤のｐＨは約６．７～約７．５の間であり、
該ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、式Ｉ：

【化1】

［式中、
ｎは約６７０～約６９０の間（例えば約６８１）であり、
ＦＧＦ－２１ポリペプチドは配列番号１を含む］
のコンジュゲート（例えば、配列番号２、４、または６の化合物に対応するＦＧＦ－２１コンジュゲート）である、医薬製剤。

【請求項2】

該ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、または約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し、
（ｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；約６００ｍＭの濃度のスクロース；約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および約５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含み、かつ、ｐＨが約７．１であるか；
（ｉｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；６００ｍＭの濃度のスクロース；０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含み、かつ、ｐＨが７．１であるか；
（ｉｉｉ）約１０ｍｇ／ｍＬの濃度のＦＧＦ－２１コンジュゲート；約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；約６００ｍＭの濃度のスクロース；約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および約５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含み、かつ、ｐＨが約７．１であるか；
（ｉｖ）約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＦＧＦ－２１コンジュゲート；約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；約６００ｍＭの濃度のスクロース；約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および約５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含み、かつ、ｐＨが約７．１であるか；または、
（ｖ）１０ｍｇ／ｍＬの濃度のＦＧＦ－２１コンジュゲート；２０ｍＭの濃度のヒスチジン；６００ｍＭの濃度のスクロース；０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含み、かつ、ｐＨが、７．０である；
請求項１に記載の医薬製剤。

【請求項3】

約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、または約４０ｍｇ／ｍｌの濃度の配列番号２、４、または６のＦＧＦ－２１コンジュゲート；２０ｍＭの濃度のヒスチジン；６００ｍＭの濃度のスクロース；０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含み、かつ、ｐＨが７．０である、医薬製剤。

【請求項4】

該製剤は皮下投与（例えば安全シリンジを使用する皮下投与）のために製剤化される、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項5】

対象における線維症および／または糖尿病と関連する疾患または状態の処置または防止における使用のための、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項6】

該疾患または状態が糖尿病である、請求項５に記載の医薬製剤。

【請求項7】

該糖尿病が２型糖尿病である、請求項６に記載の医薬製剤。

【請求項8】

該疾患または状態が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項５に記載の医薬製剤。

【請求項9】

該医薬製剤の有効量の対象への投与が、肝硬度を減少させるか、体脂肪率を減少させるか、体重を減少させるか、肝重量対体重比を減少させるか、肝脂質含量を減少させるか、肝線維症面積を減少させるか、空腹時血中グルコースレベルを低下させるか、空腹時トリグリセリドレベルを低下させるか、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させるか、ＡｐｏＢレベルを低下させるか、ＡｐｏＣレベルを低下させるか、ＨＤＬコレステロールを増大させるか、またはこれらの任意の組合せをもたらす、請求項５～８のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項10】

該ＦＧＦ－２１コンジュゲートが約２０ｍｇのフラット用量で投与される、請求項５～９のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項11】

該ＦＧＦ－２１コンジュゲートが１週間の投与間隔で投与される、請求項５～１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項12】

該医薬製剤が皮下投与される（例えば安全シリンジを使用して皮下投与される）、請求項５～１１のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項13】

該医薬製剤の対象への投与が、非処置対象、または該医薬製剤の投与前における対象におけるレベルと比較して、肝脂肪レベルの低減；肝損傷レベルの低減；線維症レベルの低減；線維症のバイオメーカーである、血清Ｐｒｏ－Ｃ３（Ｎ末端ＩＩＩ型コラーゲンプロペプチド）レベルの低下；アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの低下；アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルの低下；血清アジポネクチンレベルの上昇；血漿ＬＤＬレベルの低下；血漿ＨＤＬレベルの上昇；血漿トリグリセリドレベルの低下；肝硬度レベルの低減；またはこれらの任意の組合せを結果としてもたらす、請求項５～１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。

【請求項14】

（ｉ）ＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約１０ｍＭ～約５０ｍＭの間の濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約１００ｍＭ～約１Ｍの間の濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約１０μＭ～約１００μＭの間の濃度のＤＴＰＡ
を含む製剤を含むバイアルであって、
該製剤のｐＨは約６．７～約７．５の間であり、
該ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、式Ｉ：

【化2】

［式中、
ｎは約６７０～約６９０の間（例えば、約６８１）であり、
ＦＧＦ－２１ポリペプチドは配列番号１を含む］
を含む（例えば、配列番号２、４、または６の化合物に対応するＦＧＦ－２１コンジュゲートである）、バイアル。

【請求項15】

該製剤が、
（ｉ）約１０ｍｇ～約２０ｍｇのＦＧＦ－２１コンジュゲート；約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；約６００ｍＭの濃度のスクロース；約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および約５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含み、かつ、ｐＨが約７．１であるか；
（ｉｉ）約１０ｍｇのＦＧＦ－２１コンジュゲート；約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；約６００ｍＭの濃度のスクロース；約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および約５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含み、かつ、ｐＨが約７．１であるか；または
（ｉｉｉ）約２０ｍｇのＦＧＦ－２１コンジュゲート；約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；約６００ｍＭの濃度のスクロース；約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および約５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含み、かつ、ｐＨが約７．１である；
請求項１４に記載のバイアル。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

ＥＦＳ－ＷＥＢを介して、電子的に提出される配列表に対する言及
本出願と共に、電子的に提出される配列表（名称：３３３８＿２０８ＰＣ０３＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ；サイズ：１１，０４９バイト；および作成日：２０２１年１月５日）の内容は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。
分野

【0002】

本出願は、とりわけ、ＦＧＦ－２１ポリペプチド、例えば、ＰＥＧ化ＦＧＦ－２１ポリペプチド（ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１）を含み、キレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）、界面活性剤（例えば、ＰＳ８０）を使用して安定化され、特異的なｐＨ範囲（例えば、約７．１）を有する、例えば、皮下投与を含む、多様な経路を介する投与のための製剤に関する。

【背景技術】

【0003】

線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、複数の生理学的機能において、極めて重要な役割を果たす発生組織および成人組織において広く発現されるポリペプチド（Baird et al., Cancer Cells, 3:239-243, 1991）である（McKeehan et al., Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 59:135-176, 1998；Burgess, W. H. et al., Annu. Rev. Biochem. 58:575-606 (1989)）。文献によると、ＦＧＦファミリーは、少なくとも２２のメンバーからなる（Reuss et al., Cell Tissue Res. 313:139-157 (2003)）。

【0004】

ＦＧＦ－２１は、線維症と関連する疾患および状態の処置のために使用され得る。線維症とは、臓器または組織における、過剰な線維性結合組織の形成である。線維性組織の過剰な沈着は、臓器または組織の機能障害をもたらし得る病理学的状態と関連する。罹患臓器は、肺（肺もしくは肺の線維症）、肝臓（肝または肝臓の線維症）、腎臓（腎もしくは腎臓の線維症）、および心臓（心臓の線維症）を含み得る。線維症はまた、関節、皮膚、腸、骨髄、その他を含む、他の組織および臓器にも影響を及ぼし得る。例示的な線維性状態または線維性疾患は、肝臓に影響を及ぼす非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；腎臓に影響を及ぼす糖尿病性腎疾患および糖尿病性腎症；ならびに心臓に影響を及ぼす代謝性心不全を含むがこれらに限定されない。例えば、ＮＡＳＨは、アルコールを、殆どまたは全く摂取しない人々の肝臓における脂肪蓄積、炎症、および損傷により特徴づけられ、疾患は、肝硬変をもたらし得る。ＮＡＳＨは、ある特定の脂質の血中レベルが上昇し、糖尿病または前糖尿病を有することが多い、体重過剰または肥満の中年者において診断される傾向がある。

【0005】

ＦＧＦ－２１は、インビボにおいてタンパク質分解を受け、インビトロにおいて凝集物を形成し、脱アミド化を受ける傾向があり（Gimeno and Moller, Trends Endocrinol Metab. 2014 June; 25(6):303-11；米国特許第８，３６１，９６３号；Hecht et al., PLoS One. 2012; 7(11):e49345；米国特許公開第２００７／０２９３４３０号；ＷＯ２００６／００６５５８２）、ＦＧＦ－２１を含有する医薬組成物の保管寿命を、潜在的に限定することが報告されている。治療的ポリペプチドの凝集物および脱アミド化形態は、免疫原性を潜在的に増大させる可能性がある（U.S. Department of Health and Human Services, "Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products," August 2014；Subramanyam (ed.), "Therapeutic Protein Immunogenicity Focus Group Newsletter," American Association of Pharmaceutical Scientists, Vol. 1, Issue 3 (December 2011)を参照されたい。）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本開示は、とりわけ、ＦＧＦ－２１ポリペプチドを含み、特に、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドを含む医薬製剤の作製と関連する問題に対処する医薬製剤に対する必要性に対処する。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本開示は、（ｉ）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分へとコンジュゲートされた線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ－２１）ポリペプチド（「ＦＧＦ－２１コンジュゲート」）、および（ｉｉ）アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤とを含む医薬製剤であって、製剤が、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しない参照製剤と比較して、安定性を改善しており、ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化1】

を含み、ｎが、任意の整数である、医薬製剤を提供する。

【0008】

一部の態様では、ＰＥＧ部分は、ＦＧＦ－２１ポリペプチド内の非天然アミノ酸へとコンジュゲートされる。一部の態様では、ＦＧＦ－２１ポリペプチド内の非天然アミノ酸は、フェニルアラニン誘導体である。一部の態様では、フェニルアラニン誘導体は、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンである。

【0009】

一部の態様では、ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列に対する、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、この場合、ポリペプチドは、ＦＧＦ－２１活性を有する。一部の態様では、非天然アミノ酸は、配列番号３に対応する、アミノ酸残基１０９にある。一部の態様では、ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、配列番号１に明示された配列を含む。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、配列番号２の化合物に対応する。

【0010】

一部の態様では、式Ｉにおけるｎは、約５００～約９００エチレングリコール単位、約６００～約８００エチレングリコール単位、約６５０～約７５０エチレングリコール単位、または約６７０～約６９０エチレングリコール単位である。一部の態様では、ｎは、約６７０～約６９０エチレングリコール単位の間、例えば、約６８１エチレングリコール単位である。

【0011】

一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、配列番号４の化合物に対応する。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、Ｌコンフォメーションにある。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、Ｄコンフォメーションにある。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、約１ｍｇ／ｍｌ～約４０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で存在する。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、約１０ｍｇ／ｍｌまたは約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

【0012】

一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、単位用量当たり約１ｍｇ～約４０ｍｇの間の量で存在する。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、単位用量当たり約１ｍｇ、単位用量当たり約５ｍｇ、単位用量当たり約１０ｍｇ、単位用量当たり約２０ｍｇ、または単位用量当たり約４０ｍｇの量で存在する。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、単位用量当たり約１０ｍｇまたは約２０ｍｇの量で存在する。

【0013】

一部の態様では、医薬製剤は、
（ａ）４０℃で、約１カ月にわたり保管された場合における、ポリペプチドの脱アミド化率の、参照製剤に照らした低下；
（ｂ）４０℃で、約１カ月にわたり保管された場合における、高分子量（ＨＭＷ）ポリペプチドの凝集率の、参照製剤に照らした低下；または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）の両方
のうちの１つまたは複数を呈する。

【0014】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤は、１つまたは複数のメチオニンの酸化を防止または緩和する。一部の態様では、メチオニンは、ＦＧＦ－２１ポリペプチドのメチオニン１（Ｍｅｔ１）および／またはメチオニン１６９（Ｍｅｔ１６９）に対応する。一部の態様では、メチオニンの酸化は、２５℃および／または４０℃のキレート剤により防止または緩和される。一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）である。一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ～約１００μＭ ＤＴＰＡの間、約２０μＭ～約９０μＭ ＤＴＰＡの間、約３０μＭ～約８０μＭ ＤＴＰＡの間、約２５μＭ～約７５μＭ ＤＴＰＡの間、または約４０μＭ～約６０μＭ ＤＴＰＡの間、または約３０μＭ～約７０μＭ ＤＴＰＡの間、または約４０μＭ～約７０μＭ ＤＴＰＡの間の量で存在する。一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭ、または約６０μＭ ＤＴＰＡの量で存在する。

【0015】

一部の態様では、製剤のｐＨは、６．５を上回るか、６．６を上回るか、６．７を上回るか、６．８を上回るか、６．９を上回るか、７．０を上回るか、７．１を上回るか、７．２を上回るか、７．３を上回るか、７．４を上回るか、または７．５を上回る。一部の態様では、ｐＨは、約６．７～約７．５、約６．８～約７．５、約６．９～約７．４、約７．０～約７．３、約７．１～７．２、約７．１～約７．３、約７．１～約７．４、または約７．１～約７．５の間である。一部の態様では、ｐＨは、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、または約７．５である。一部の態様では、医薬製剤は、ｐＨが６．５である参照製剤より安定である。

【0016】

一部の態様では、医薬製剤は、界面活性剤をさらに含む。一部の態様では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。一部の態様では、非アニオン性界面活性剤は、ポリソルベートである。一部の態様では、ポリソルベートは、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）である。一部の態様では、ポリソルベート８０である界面活性剤は、約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０３％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．０７％（ｗ／ｖ）、または約０．０５％～約０．０６％（ｗ／ｖ）の量で存在する。一部の態様では、ポリソルベート８０である界面活性剤は、少なくとも約０．０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０９％（ｗ／ｖ）、または少なくとも約０．１％（ｗ／ｖ）の量で存在する。一部の態様では、界面活性剤は、シェーカー上で撹拌される場合の、微粒子および／または気泡の形成を緩和する。

【0017】

一部の態様では、医薬製剤は、アミノ酸緩衝剤をさらに含む。一部の態様では、アミノ酸緩衝剤は、ヒスチジンである。一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ～約２５ｍＭヒスチジン、約１７．５～約２２．５ヒスチジン、または約４０ｍＭ～約６０ｍＭヒスチジンの量で存在する。一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭヒスチジン、または約５０ｍＭヒスチジンの量で存在する。

【0018】

一部の態様では、医薬製剤は、浸透圧調節剤をさらに含む。一部の態様では、浸透圧調節剤は、糖を含む。一部の態様では、糖は、スクロースである。一部の態様では、スクロースである浸透圧調節剤は、約１００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約２００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約３００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約４００ｍＭ～約７００ｍＭスクロース、または約５００ｍＭ～約６００ｍＭスクロースの量で存在する。一部の態様では、スクロースである浸透圧調節剤は、約１００ｍＭスクロース、約２００ｍＭスクロース、約３００ｍＭスクロース、約４００ｍＭスクロース、約５００ｍＭスクロース、約６００ｍＭスクロース、約７００ｍＭスクロース、約８００ｍＭスクロース、約９００ｍＭスクロース、または約１Ｍスクロースの量で存在する。

【0019】

一部の態様では、製剤は、皮下投与のために製剤化される。一部の態様では、製剤は、安全シリンジによる皮下投与のために製剤化される。一部の態様では、製剤は、毎日投与または毎週投与のために製剤化される。一部の態様では、製剤は、水性製剤である。

【0020】

本開示は、
（ｉ）ＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約１０ｍＭ～約５０ｍＭの間の濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約１００ｍＭ～約１Ｍの間の濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約１０μＭ～約１００μＭの間の濃度のＤＴＰＡ
を含む医薬製剤であって、
製剤のｐＨが、約６．７～約７．５の間であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化2】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、医薬製剤を提供する。

【0021】

本開示はまた、
（ｉ）ＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約５０μＭの濃度のＤＴＰＡ
を含む医薬製剤であって、
ｐＨが、約７．１であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化3】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、医薬製剤も提供する。

【0022】

また、
（ｉ）ＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；
（ｉｖ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）５０μＭの濃度のＤＴＰＡ
を含む医薬製剤であって、
ｐＨが、７．１であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化4】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、医薬製剤も提供される。

【0023】

本開示は、
（ｉ）ＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；および
（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース
を含む医薬製剤であって、
ｐＨが、約７．０であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化5】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、医薬製剤を提供する。

【0024】

本開示は、
（ｉ）ＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；および
（ｉｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース
を含む医薬製剤であって、
ｐＨが、７．０であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化6】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、医薬製剤を提供する。

【0025】

本開示はまた、
（ｉ）約１０ｍｇ／ｍＬの濃度のＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡ
を含む医薬製剤であって、
ｐＨが、約７．１であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化7】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、医薬製剤も提供する。

【0026】

本開示はまた、
（ｉ）約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡ
を含む医薬製剤であって、
ｐＨが、約７．１であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化8】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、医薬製剤も提供する。

【0027】

本開示は、
（ｉ）１０ｍｇ／ｍＬの濃度のＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；
（ｉｖ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡ
を含む医薬製剤であって、
ｐＨが、７．０であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化9】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、医薬製剤を提供する。

【0028】

本開示は、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号２または４のＰＥＧ－ＦＧＦ２１；
（ｉｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；
（ｉｖ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡ
を含む医薬製剤であって、
ｐＨが、７．０であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化10】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、医薬製剤を提供する。

【0029】

本開示は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分へとコンジュゲートされた線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ－２１）ポリペプチド（「ＦＧＦ－２１コンジュゲート」）を含む医薬製剤の安定性を改善する方法であって、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を混合する工程を含み、製剤が、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しない参照製剤と比較して、安定性を改善しており、ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化11】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、方法を提供する。

【0030】

本明細書で開示される方法についての、一部の態様では、ＰＥＧ部分は、ＦＧＦ－２１ポリペプチド内の非天然アミノ酸へとコンジュゲートされる。一部の態様では、ＦＧＦ－２１ポリペプチド内の非天然アミノ酸は、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンである。一部の態様では、ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、配列番号１のＦＧＦ－２１ポリペプチドである。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、Ｌコンフォメーションにある。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、Ｄコンフォメーションにある。一部の態様では、安定性の改善は、（ｉ）ポリペプチドの物理的安定性の増大、（ｉｉ）ポリペプチドの化学的安定性の増大、または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の両方を含む。一部の態様では、物理的安定性の増大は、（ｉ）ポリペプチド凝集の防止もしくは減少、（ｉｉ）ポリペプチド断片化の防止もしくは減少、または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の両方を含む。一部の態様では、化学的安定性の増大は、（ｉ）ポリペプチドの脱アミド化の防止もしくは減少、（ｉｉ）ポリペプチドの酸化の防止もしくは減少、または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の両方を含む。一部の態様では、安定性の改善は、（ａ）４０℃で、約１カ月にわたり保管された場合における、ポリペプチドの脱アミド化率の、参照製剤に照らした低下；（ｂ）４０℃で、約１カ月にわたり保管された場合における、高分子量（ＨＭＷ）ポリペプチドの凝集率の、参照製剤に照らした低下；または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の両方のうちの１つまたは複数を含む。一部の態様では、安定性の改善は、１つまたは複数のメチオニンの酸化の防止または緩和を含む。一部の態様では、メチオニンは、ＦＧＦ－２１ポリペプチドのＭｅｔ１および／またはＭｅｔ１６９に対応する。一部の態様では、メチオニンの酸化は、２５℃および／または４０℃で防止または緩和される。

【0031】

本明細書で開示される方法についての、一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤は、ＤＴＰＡである。一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ～約１００μＭ ＤＴＰＡの間、約２０μＭ～約９０μＭ ＤＴＰＡの間、約２５μＭ～約７５μＭ ＤＴＰＡの間、約４０μＭ～約６０μＭ ＤＴＰＡの間、約３０μＭ～約７０μＭ ＤＴＰＡの間、約３０μＭ～約８０μＭ ＤＴＰＡの間、または約４０μＭ～約７０μＭ ＤＴＰＡの間の量で存在する。一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭ、または約６０μＭ ＤＴＰＡの量で存在する。

【0032】

本明細書で開示される方法についての、一部の態様では、方法は、ｐＨを、６．５を上回るか、６．６を上回るか、６．７を上回るか、６．８を上回るか、６．９を上回るか、または７．０を上回るように調整する工程をさらに含む。一部の態様では、ｐＨは、約６．８～約７．５の間、または約６．９～約７．４の間、または約７．０～約７．３の間、または約７．１～７．２の間、または約７．１～約７．３の間、または約７．１～約７．４の間、または約７．１～約７．５の間へと調整される。一部の態様では、調整されたｐＨは、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、または約７．５である。一部の態様では、製剤は、ｐＨが６．５である参照製剤より安定である。

【0033】

本明細書で開示される方法についての、一部の態様では、方法は、界面活性剤を混合する工程をさらに含む。一部の態様では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。一部の態様では、非アニオン性界面活性剤は、ポリソルベートである。一部の態様では、ポリソルベートは、ポリソルベート８０である。一部の態様では、ポリソルベート８０である界面活性剤は、約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０３％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．０７％（ｗ／ｖ）、または約０．０５％～約０．０６％（ｗ／ｖ）の量で混合される。一部の態様では、ポリソルベート８０である界面活性剤は、少なくとも約０．０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０９％（ｗ／ｖ）、または少なくとも約０．１％（ｗ／ｖ）の量で混合される。一部の態様では、界面活性剤は、シェーカー上で撹拌される場合の、微粒子の形成および／または気泡の形成を緩和する。

【0034】

本明細書で開示される方法についての、一部の態様では、方法は、アミノ酸緩衝剤を混合する工程をさらに含む。一部の態様では、アミノ酸緩衝剤は、ヒスチジンである。一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ～約２５ｍＭヒスチジン、約１７．５ｍＭ～約２２．５ｍＭヒスチジン、または約４０ｍＭ～約６０ｍＭヒスチジンの量で混合される。一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭヒスチジン、または約５０ｍＭヒスチジンの量で混合される。

【0035】

本明細書で開示される方法についての、一部の態様では、方法は、浸透圧調節剤を混合する工程をさらに含む。一部の態様では、浸透圧調節剤は、糖を含む。一部の態様では、糖は、スクロースである。一部の態様では、スクロースである浸透圧調節剤は、約１００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約２００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約３００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約４００ｍＭ～約７００ｍＭスクロース、または約５００ｍＭ～約６００ｍＭスクロースの量で混合される。一部の態様では、スクロースである浸透圧調節剤は、約１００ｍＭスクロース、約２００ｍＭスクロース、約３００ｍＭスクロース、約４００ｍＭスクロース、約５００ｍＭスクロース、約６００ｍＭスクロース、約７００ｍＭスクロース、約８００ｍＭスクロース、約９００ｍＭスクロース、または約１Ｍスクロースの量で混合される。

【0036】

一部の態様では、製剤は、水性製剤である。一部の態様では、本開示は、本明細書で開示される方法に従い調製される医薬製剤を提供する。

【0037】

本開示はまた、
（ｉ）ＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約１０ｍＭ～約５０ｍＭの間の濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約１００ｍＭ～約１Ｍの間の濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約１０μＭ～約１００μＭの間の濃度のＤＴＰＡ
を含むバイアルであって、
製剤のｐＨが、約６．７～約７．５の間であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化12】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、バイアルも提供する。

【0038】

本開示はまた、
（ｉ）約５ｍｇ～約２０ｍｇのＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；および
（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース
を含むバイアルであって、
ｐＨが、約７．０であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化13】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、バイアルも提供する。

【0039】

本開示はまた、
（ｉ）約１０ｍｇ～約２０ｍｇのＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡ
を含むバイアルであって、
ｐＨが、約７．１であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化14】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、バイアルも提供する。

【0040】

本開示はまた、
（ｉ）約１０ｍｇのＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡ
を含むバイアルであって、
ｐＨが、約７．１であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化15】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、バイアルも提供する。

【0041】

本開示はまた、
（ｉ）約２０ｍｇのＦＧＦ－２１コンジュゲート；
（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；
（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；
（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および
（ｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡ
を含むバイアルであって、
ｐＨが、約７．１であり、
ＦＧＦ－２１コンジュゲートが、式Ｉ：

【化16】

を含み、
ｎが、約６７０～約６９０の間、例えば、約６８１であり、ＦＧＦ－２１ポリペプチドが、配列番号１を含む、バイアルも提供する。

【0042】

本開示はまた、（ｉ）本明細書で開示される医薬製剤、または本明細書で開示されるバイアルと、（ｉｉ）使用のための指示書とを含むキットまたは製造品も提供する。

【0043】

本開示はまた、それを必要とする対象における線維症および／または糖尿病と関連する疾患または状態を処置または防止する方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示される医薬製剤、本明細書で開示されるバイアル、または本明細書で開示されるキットを投与する工程を含む方法も提供する。一部の態様では、疾患または状態は、糖尿病である。一部の態様では、糖尿病は、２型糖尿病である。一部の態様では、疾患または状態は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。一部の態様では、有効量の医薬製剤の、対象への投与は、肝硬度を減少させるか、体脂肪率を減少させるか、体重を減少させるか、肝重量対体重比を減少させるか、肝脂質含量を減少させるか、肝線維症面積を減少させるか、空腹時血中グルコースレベルを低下させるか、空腹時トリグリセリドレベルを低下させるか、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させるか、ＡｐｏＢレベルを低下させるか、ＡｐｏＣレベルを低下させるか、ＨＤＬコレステロールを増大させるか、またはこれらの任意の組合せである。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、約２０ｍｇのフラット用量で投与される。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、１週間の投与間隔で投与される。一部の態様では、医薬製剤は、皮下投与される。一部の態様では、医薬製剤は、安全シリンジを使用して、皮下投与される。一部の態様では、医薬製剤の、対象への投与は、非処置対象、または医薬製剤の投与前における対象におけるレベルと比較して、
（ｉ）肝脂肪レベルの低減；
（ｉｉ）肝損傷レベルの低減；
（ｉｉｉ）線維症レベルの低減；
（ｉｖ）線維症のバイオメーカーである、血清Ｐｒｏ－Ｃ３（Ｎ末端ＩＩＩ型コラーゲンプロペプチド）レベルの低下；
（ｖ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの低下；
（ｖｉ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルの低下；
（ｖｉｉ）血清アジポネクチンレベルの上昇；
（ｖｉｉｉ）血漿ＬＤＬレベルの低下；
（ｉｘ）血漿ＨＤＬレベルの上昇；
（ｘ）血漿トリグリセリドレベルの低下；
（ｘｉ）肝硬度レベルの低減；または
（ｘｉｉ）これらの任意の組合せ
を結果としてもたらす。

【0044】

一部の態様では、ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、約３０ｋＤａであるＰＥＧへとコンジュゲートされ得る。

【図面の簡単な説明】

【0045】

【図1】図１Ａおよび１Ｂは、製剤組成の関数としての、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化を示す。図１Ａは、ペンテト酸（ＤＴＰＡ）またはポリソルベート８０を伴わない製剤中の脱アミド化を示す。図１Ｂは、ペンテト酸（ＤＴＰＡ）およびポリソルベート８０を含む製剤中の脱アミド化を示す。

【0046】

【図2】図２Ａおよび２Ｂは、５０μＭのＤＴＰＡ（また、ペンテト酸としても公知である）の存在下および非存在下、メチオニン１（図２Ａ）およびメチオニン１６９（図２Ｂ）における、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１ポリペプチドの金属触媒性酸化を示す。

【0047】

【図3】図３Ａおよび３Ｂは、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の凝集に対する、ｐＨの影響を示す。図３Ａは、時間、ｐＨ、および使用されるバッファー系の関数としての凝集を示す。図３Ｂは、異なる温度および時間（５℃、１４カ月間；２５℃、１カ月間；４０℃、１日間）、ならびに異なるｐＨにおける凝集を示す。

【0048】

【図4】図４Ａおよび４Ｂは、製剤組成の関数としての、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の凝集を示す。図４Ａは、ペンテト酸（ＤＴＰＡ）またはポリソルベート８０を伴わない製剤中の凝集を示す。図４Ｂは、ペンテト酸（ＤＴＰＡ）およびポリソルベート８０を伴う製剤中の凝集を示す。

【0049】

【図5】図５は、ＰＳ８０を伴わない、高濃度のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１が、３００ｒｐｍのオービタルシェーカーによる２４時間（左）、または６時間にわたるリストアクションシェーキング（右）の後に混濁したことを示す。０．０１％～０．１％（ｗ／ｖ）の間のポリソルベート８０の添加は、試料の混濁を低減した。

【0050】

【図6】図６は、本開示のＰＥＧ化ＦＧＦ－２１コンジュゲート；特に、ＦＧＦ－２１コンジュゲート内の非天然アミノ酸が、パラ－アセチル－フェニルアラニン、例えば、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンである例についての概略表示を示す。ｎは、ＰＥＧポリマー内に含有されるエチレングリコール単位の数を表す。

【0051】

【図7】図７は、本開示のＦＧＦ－２１コンジュゲートをもたらすように、部位特異的な形で、ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、パラ－アセチル－フェニルアラニンなどの非天然アミノ酸を含むＦＧＦ－２１ポリペプチド）へと融合またはコンジュゲートすることができる、６８１エチレングリコール単位を含む特異的なＰＥＧリンカーについての概略表示を示す。

【発明を実施するための形態】

【0052】

本開示は、例えば、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、配列番号２または４）などの線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ－２１）コンジュゲートを含む安定化医薬製剤を提供する。ＤＴＰＡなど、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤の存在は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１中の、１つまたは複数のアミノ酸残基、例えば、メチオニンの酸化を緩和することが観察されている。

【0053】

本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤への、ＤＴＰＡの組込みはまた、保管時における、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの脱アミド化率も低下させ、また、保管時における、高分子量凝集率も低減する。製剤のｐＨを、７．１へと調整することにより、さらなる安定化が達成され得る。加えて、製剤は、ポリソルベート８０などの界面活性剤を添加することによりさらに安定化され得る。

【0054】

本開示はまた、開示される製剤を製造する方法のほか、開示される方法を適用することにより作製される製剤も提供する。また、線維症と関連する疾患、例えば、ＮＡＳＨおよび糖尿病の処置または予防の方法であって、開示される安定化製剤の、それを必要とする対象への投与を含む方法も提供される。
定義

【0055】

本開示が、よりたやすく理解され得るために、ある特定の用語が、まず規定される。本出願で使用される通り、本明細書で、そうでないことが明示的に提示されない限りにおいて、以下の用語の各々は、下記で明示される意味を有するものとする。さらなる定義は、本出願を通して明示されるものとする。

【0056】

本開示は、群の、正確に１つのメンバーが、所与の生成物中またはプロセスにおいて存在するか、用いられるか、または他の形で関連する態様を含む。本開示は、群のメンバーのうちの、１つを超えるメンバー、または全てのメンバーが、所与の生成物中またはプロセスにおいて存在するか、用いられるか、または他の形で関連する態様を含む。

【0057】

単数形の「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が、明確にそうでないことを指示しない限りにおいて、複数の指示対象を含む。本明細書では、「ある（ａ）」、（または「ある（ａｎ）」）という用語のほか、「１つまたは複数の」および「少なくとも１つの」という用語は、互換的に使用され得る。ある特定の態様では、「ある（ａ）」または「ある（ａｎ）」という用語は、「単一の」を意味する。他の態様では、「ある（ａ）」または「ある（ａｎ）」という用語は、「２つ以上」または「複数の」を含む。したがって、例えば、ある「ＦＧＦ－２１コンジュゲート」に対する言及は、１つまたは複数のこのようなタンパク質またはコンジュゲートに対する言及であり、当業者に公知の、これらの同等物などを含む。

【0058】

さらに、本明細書で使用される場合の「および／または」は、他の特色または成分を伴うか、またはこれを伴わない、２つの指定された特色または成分の各々の、具体的な開示として理解されるものとする。したがって、本明細書における「Ａおよび／またはＢ」などの語句中で使用される、「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句中で使用される、「および／または」という用語は、以下の態様：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）の各々を包含することが意図される。

【0059】

本明細書で使用される、「約」という用語は、当業者により決定される特定の値または組成について、許容可能な誤差の範囲内にある値または組成を指し、これは、値または組成がどのようにして測定または決定されるのか、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存するであろう。例えば、「約」とは、当技術分野における慣行に従い、１標準偏差またはこれを超える範囲内を意味し得る。代替的に、「約」とは、最大で２０％の範囲を意味し得る。さらに、特に、生体系または生物学的過程に関して述べると、用語は、値の最大で桁数の範囲内、または最大で５倍以内を意味し得る。特定の値または組成が、本出願および特許請求の範囲において提示される場合、そうでないことが言明されない限りにおいて、「約」の意味は、特定の値または組成について、許容可能な誤差の範囲内にあると仮定されるものとする。「約」という用語が、数値範囲と共に使用される場合、境界を、明示された数値を上回って、およびこれを下回って拡張することにより、この範囲を修飾する。したがって、「約１０～２０」とは、「約１０～約２０」を意味する。一般に、「約」という用語は、言明された値を上回る数値および下回る数値を、上方または下方（より高い、またはより低く）の、例えば１０パーセントのばらつきにより修飾し得る。

【0060】

そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される、全ての技術用語および学術用語は、本開示が関する技術分野の当業者により、一般に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press；およびOxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、当業者に、本開示において使用される用語の多くについての一般的な語釈を提供する。

【0061】

本明細書で、態様について、「含むこと」という表現により記載されるいかなる場合においても、「からなること」および／または「から本質的になること」という用語により記載される、他の点では類似の態様もまた提供されることが理解される。

【0062】

単位、接頭辞、および記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）で許容される形態において表示される。数値範囲は、範囲規定数を包含する。そうでないことが指し示されない限りにおいて、アミノ酸配列は、左から右へと、アミノからカルボキシへの向きに書かれる。本明細書で提示される小見出しは、全体としての本明細書を参照することにより与えられ得る、本開示の多様な態様の限定ではない。したがって、すぐ下記で規定される用語は、その全体における本明細書を参照することにより、十分に規定される。

【0063】

本明細書では、アミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される、一般に公知のそれらの３文字記号または１文字記号により言及される。そうでないことが指し示されない限りにおいて、アミノ酸配列は、左から右へと、アミノからカルボキシへの向きに書かれる。

【0064】

凝集：「凝集」という用語は、ポリペプチド、例えば、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１のＦＧＦ－２１ポリペプチド部分が、他の分子（同じポリペプチドの他の分子など）と共に、非共有結合的に連結された複合体を形成し、これにより、高分子量複合体を形成する傾向を指す。凝集物の形成を測定する例示的方法は、本明細書の実施例に記載されている解析用サイズ排除クロマトグラフィーを含む。凝集の相対量は、例えば、凝集を低減しているポリペプチドを同定するように、参照化合物に照らして決定され得る。凝集の相対量は、例えば、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１が、凝集を低減している製剤を同定するように、参照製剤に照らしても決定され得る。

【0065】

アミノ酸置換：「アミノ酸置換」という用語は、親配列内または参照配列（例えば、野生型配列）内に存在するアミノ酸残基を、別のアミノ酸残基で置きかえることを指す。アミノ酸は、例えば、化学的ペプチド合成を介して、または当技術分野で公知の組換え法を通して、親配列内または参照配列（例えば、野生型ポリペプチド配列）内で置換され得る。したがって、「Ｘ位における置換」に対する言及とは、Ｘ位に存在するアミノ酸の、代替的アミノ酸残基による置換を指す。一部の態様では、置換パターンは、スキームＡｎＹ［Ａは、ｎ位に天然で存在するか、または元来存在するアミノ酸に対応する１文字コードであり、Ｙは、置換アミノ酸残基である］に従い記載され得る。他の態様では、置換パターンは、スキームＡｎ（ＹＺ）［Ａは、ｎ位に天然で存在するか、または元来存在するアミノ酸を置換するアミノ酸残基に対応する１文字コードであり、ＹおよびＺは、Ａを置きかえ得る、代替的な置換アミノ酸残基である］に従い記載され得る。

【0066】

本開示の文脈では、置換（アミノ酸置換と称される場合であってもなお）は、核酸レベルで行われる、すなわち、代替的アミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換は、第１のアミノ酸をコードするコドンを、第２のアミノ酸をコードするコドンで置換することにより行われる。

【0067】

約：本明細書で、１つまたは複数の目的の値へと適用されて使用される、「約」という用語は、言明された参照値と同様の値を指す。ある特定の態様では、「約」という用語は、そうでないことが言明されるか、またはそうでないことが文脈から明らかでない限りにおいて（このような数が、可能な値の１００％を超える場合を除く）、いずれの方向（これを超えるか、またはこれ未満である）においても、言明された参照値の、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはこれ未満以内に収まる値の範囲を指す。

【0068】

と関連する：疾患に関して本明細書で使用される、「と関連する」という用語は、問題の症候、測定、特徴、または状態が、この疾患の診断、発症、存在、または進行と連関することを意味する。関連は、疾患と因果的に連関する場合もあるが、疾患と因果的に連関しなくてもよい。

【0069】

生物学的に活性：本明細書で開示される分子、例えば、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１に適用される、「生物学的に活性」という用語は、生物に関する、生物学的系、生物学的経路、生物学的分子、または生物学的相互作用の、任意の物理的特性または生化学的特性に影響を及ぼし得る、任意の物質を意味する。特に、本明細書で使用される、生物学的活性分子は、疾患もしくは状態、例えば、ヒトもしくは他の動物における線維症と関連する疾患もしくは状態の、診断、治癒、緩和、処置、もしくは防止、またはヒトもしくは動物の身体的健康もしくは精神的健康を、他の形で増強することが意図された、任意の物質を含むがこれらに限定されない。

【0070】

保存的アミノ酸置換：「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似する側鎖を有するアミノ酸残基で置きかえられる置換である。当技術分野では、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、またはヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、またはシステイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、またはトリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはヒスチジン）を含む、類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが規定されている。したがって、ポリペプチド内のアミノ酸が、同じ側鎖ファミリーに由来する、別のアミノ酸で置きかえられる場合、アミノ酸置換は、保存的であると考えられる。別の態様では、アミノ酸の連なりは、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる、構造的に類似する連なりで、保存的に置きかえられ得る。

【0071】

非保存的アミノ酸置換は、（ｉ）電気陽性側鎖を有する残基（例えば、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓ）が、電気陰性残基（例えば、ＧｌｕまたはＡｓｐ）で、もしくはこれらにより置換される置換、（ｉｉ）親水性残基（例えば、ＳｅｒまたはＴｈｒ）が、疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、またはＶａｌ）で、もしくはこれらにより置換される置換、（ｉｉｉ）システインまたはプロリンが、他の任意の残基で、もしくはこれらにより置換される置換、または（ｉｖ）バルクの疎水性側鎖もしくは芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、ＩｌｅまたはＴｒｐ）が、小型側鎖を有する残基（例えば、ＡｌａまたはＳｅｒ）、もしくは側鎖を有さない残基（例えば、Ｇｌｙ）で、もしくはこれらにより置換される置換を含む。

【0072】

他のアミノ酸置換もまた使用され得る。例えば、アミノ酸であるアラニンについて、置換は、Ｄ－アラニン、グリシン、ベータ－アラニン、Ｌ－システイン、およびＤ－システインのうちのいずれか１つから採択され得る。リシンについて、置きかえは、Ｄ－リシン、アルギニン、Ｄ－アルギニン、ホモアルギニン、メチオニン、Ｄ－メチオニン、オルニチン、またはＤ－オルニチンのうちのいずれか１つであり得る。一般に、単離ポリペプチドの特性の変化を誘導することが期待され得る、機能的に重要な領域内の置換は、（ｉ）極性残基、例えば、セリン、もしくはトレオニンが、疎水性残基、例えば、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、もしくはアラニンで（またはこれらにより）置換される置換；（ｉｉ）システイン残基が、他の任意の残基で（またはこれらにより）置換される置換；（ｉｉｉ）電気陽性側鎖を有する残基、例えば、リシン、アルギニンもしくはヒスチジンが、電気陰性側鎖、例えば、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸を有する残基で（またはこれらにより）置換される置換；または（ｉｖ）バルク側鎖、例えば、フェニルアラニンを有する残基が、このような側鎖を有さない残基、例えば、グリシンで（またはこれらにより）置換される置換である。前出の非保存的置換のうちの１つが、タンパク質の機能的特性を変更し得る可能性はまた、タンパク質の機能的に重要な領域に照らした置換位置とも相関し得る：したがって、一部の非保存的置換は、生物学的特性に対して、殆ど、または全く、影響を及ぼさない場合がある。

【0073】

保存された：本明細書で使用される、「保存された」という用語は、それぞれが、比較される、２つ以上の配列の同じ位置において、変更されずに生じるアミノ酸残基である、ポリペプチド配列のアミノ酸残基を指す。比較的保存されたアミノ酸とは、配列内の他の箇所に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸より近縁の配列の中で、保存されているアミノ酸である。

【0074】

一部の態様では、２つ以上の配列は、互いと、１００％同一である場合、「完全に保存されている」または「同一」であると言われる。一部の態様では、２つ以上の配列は、互いと、少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。一部の態様では、２つ以上の配列は、互いと、約７０％同一であるか、約８０％同一であるか、約９０％同一であるか、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合、「高度に保存されている」であると言われる。一部の態様では、２つ以上の配列は、互いと、少なくとも３０％同一であるか、少なくとも４０％同一であるか、少なくとも５０％同一であるか、少なくとも６０％同一であるか、少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「保存されている」と言われる。一部の態様では、２つ以上の配列は、互いと、約３０％同一であるか、約４０％同一であるか、約５０％同一であるか、約６０％同一であるか、約７０％同一であるか、約８０％同一であるか、約９０％同一であるか、約９５％同一であるか、約９８％同一であるか、または約９９％同一である場合、「保存されている」と言われる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの全長に適用される場合もあり、またはその部分、領域、もしくは特徴に適用される場合もある。

【0075】

脱アミド化：「脱アミド化」という用語は、ポリペプチド内のアミノ酸残基が、脱アミド化反応を、自発的に受け、これにより、アミノ酸の化学構造を変化させ、ポリペプチドの機能に、潜在的に影響を及ぼす傾向を指す。脱アミド化を測定する例示的方法については、本明細書の実施例で開示される。脱アミド化の相対量は、例えば、脱アミド化を低下させているポリペプチドを同定するように、参照化合物に照らして決定され得る。脱アミド化の相対量はまた、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１が、脱アミド化を低減している製剤を同定するように、参照製剤に照らしても決定され得る。

【0076】

線維症と関連する疾患：「線維症と関連する疾患」という用語は、線維症が生じることが観察されているか、または線維症が、疾患の病因、進行、もしくは症候と関連するか、もしくはこれに寄与することが公知であるか、もしくはそのように考えられるか、または疾患が進行するにつれて、線維症が、生じることが公知であるか、もしくはそのように考えられる疾患、障害、および状態を含む。

【0077】

線維症は、膵臓、肺、心臓、腎臓、肝臓、眼、神経系、骨髄、リンパ節、心内膜、または後腹膜などの臓器または組織に影響を及ぼし得る。線維症と関連する例示的疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症、肝硬変前期、肝硬変、びまん性実質性肺疾患、嚢胞性線維症、肺もしくは肺の線維症、進行性塊状線維症、特発性肺線維症、注射部位線維症、腎もしくは腎臓の線維症、慢性腎疾患、糖尿病性腎疾患、巣状分節状糸球体硬化症、膜性腎症、ＩｇＡ腎症、筋線維症、心不全、代謝性心不全、心線維症、白内障性線維症、白内障、眼瘢痕化、膵線維症、皮膚線維症、腸線維症、腸狭窄、心内膜心筋線維症、心房線維症、縦隔線維症、クローン病、後腹膜線維症、ケロイド、腎原性全身性線維症、強皮症、全身性硬化症、関節線維症、ペイロニー症候群、デュピュイトラン拘縮、糖尿病性神経障害、癒着性関節包炎、アルコール性肝疾患、脂肪肝、ウイルス性肝炎、胆管疾患、原発性ヘモクロマトーシス、薬物関連肝硬変、特発性肝硬変、ウィルソン病、およびアルファ１アンチトリプシン欠損症、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、ヒト線維性肺疾患、黄斑変性、腎性網膜症、硝子体網膜症、心筋線維症、グレーブス眼症、薬物誘導性エルゴチン中毒、心血管疾患、アテローム性動脈硬化／再狭窄、肥厚性瘢痕、原発性筋線維症または特発性筋線維症、および炎症性腸疾患（コラーゲン性大腸炎を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、肝線維症、腎もしくは腎臓の線維症、肺もしくは肺の線維症、および心もしくは心臓の線維症を含み得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、肝線維症であり得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、ＮＡＳＨであり得る。

【0078】

有効量：本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤について本明細書で使用される、「有効量」という用語は、有益な結果または所望の結果、例えば、臨床結果をもたらすのに十分な量であり、このように、「有効量」は、適用される文脈に依存する。例えば、ＮＡＳＨを処置する、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を投与する文脈では、有効量のＦＧＦ－２１コンジュゲートは、例えば、肝脂肪、肝損傷、または線維症を改善するのに（例えば、非処置対象におけるレベルに照らすか、または処置を投与する前の対象におけるレベルに照らした、肝脂肪、肝損傷、または線維症の低減に）十分な量である。一部の態様では、本明細書で開示される製剤中の、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの量は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターによる測定に基づく。

【0079】

一部の態様では、ＮＡＳＨを処置するための、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の有効量は、１つまたは複数の線維症のバイオメーカーのレベルを、非処置対象におけるレベルに照らして、または処置を投与する前の対象におけるレベルに照らして変化させ得る：例えば、血清Ｐｒｏ－Ｃ３を低下させ得るか；ＡＬＴもしくはＡＳＴを低下させ得るか；血清アジポネクチンを上昇させ得るか；血漿ＬＤＬを低下させ得るか；血漿ＨＤＬを上昇させ得るか；血漿トリグリセリドを低下させ得るか；またはこれらの任意の組合せをもたらし得る。

【0080】

「有効量」という用語は、「有効用量」、「治療有効量」、または「治療有効用量」と互換的に使用され得る。

【0081】

本開示の方法および投与量に関する「フラット用量」とは、患者の体重または体表面積（ＢＳＡ）を考慮せずに、患者へと投与される用量を意味する。したがって、フラット用量は、１ｋｇ当たりの用量ｍｇとして施されるのではなく、分子の絶対量、例えば、ｍｇとして施される。本明細書で、フラット用量と対比して言及される、「重量ベースの用量」という用語は、患者へと投与される用量が、患者の体重に基づき計算されることを意味する。一部の態様では、本明細書で開示されるフラット用量中の、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの量は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターによる測定に基づく。

【0082】

ＦＧＦ－２１活性：「ＦＧＦ－２１活性」という用語は、ＦＧＦ－２１コンジュゲート（例えば、本開示のＰＥＧ化ＦＧＦ－２１コンジュゲート）内の、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの、少なくとも１つの生物学的活性を指す。「生物学的活性」という用語は、分子、例えば、ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、ＦＧＦ－２１コンジュゲート、または本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１内のＦＧＦ－２１ポリペプチド）の、ウイルス、細菌、バクテリオファージ、トランスポゾン、プリオン、昆虫、真菌、植物、動物、およびヒトを含むがこれらに限定されない生物に関する、生物学的系、生物学的経路、生物学的分子、または生物学的相互作用の、任意の物理的特性または生化学的特性に影響を及ぼす能力を指す。

【0083】

例えば、生物学的活性は、野生型ＦＧＦ－２１により果たされる生物学的機能のうちのいずれかを含む。分子が、野生型ＦＧＦ－２１（配列番号３の野生型ＦＧＦ－２１ポリペプチドなど）の少なくとも１つの生物学的活性を有するのかどうかを決定する例示的方法は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国出願公開第２０１７／０１８９４８６号の実施例５および１７において開示されている方法を含む、当技術分野で公知である任意の機能的アッセイを含み得る。

【0084】

参照化合物：生物学的活性の相対レベルは、例えば、参照化合物に照らして、意図された治療的使用のための生物学的活性を有するか、またはこのための十分に高い生物学的活性を有するポリペプチド、例えば、参照化合物のＥＣ_５０より５倍未満、１０倍未満、２０倍未満、５０倍未満、または１００倍未満高いＥＣ_５０を有するポリペプチドを同定するように決定され得る。生物学的活性の相対レベルは、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１が、意図された治療的使用のための生物学的活性を有するか、またはこのための十分に高い生物学的活性を有する製剤、例えば、参照製剤中の対応するＦＧＦ－２１のＥＣ_５０より５倍未満、１０倍未満、２０倍未満、５０倍未満、または１００倍未満高いＥＣ_５０を有する製剤を同定するように、参照製剤に照らしても決定され得る。

【0085】

本明細書で記載される参照化合物は、本明細書で記載されるＰＥＧ化などの修飾を欠く、対応するＦＧＦ－２１配列であり得る。例えば、参照化合物は、野生型ＦＧＦ－２１ポリペプチド配列の場合もあり、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド配列（例えば、Ｑ１０９の、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンなどの非天然アミノ酸による置きかえなどのアミノ酸置換を伴う野生型ＦＧＦ－２１）の場合もあるが、ＰＥＧコンジュゲート部分を伴わない。したがって、一部の態様では、参照化合物は、本明細書で記載されるＰＥＧ部分へと連結されていない、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含有し得る。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0086】

本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１についての、例示的参照化合物は、限定せずに述べると、配列番号３の野生型ＦＧＦ－２１、および配列番号１の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドを含む。

【0087】

一部の態様では、参照化合物は、さらなるアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含有し得る。一部の態様では、比較は、ポリペプチドのＰＥＧ化形態により実施される場合もあり、非ＰＥＧ化形態により実施される場合もあり；前者の場合において、比較は、非天然アミノ酸を含むポリペプチドにより実施される場合もあり、非天然アミノ酸を含まないポリペプチドにより実施される場合もある。

【0088】

同一性：本明細書で使用される、「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、ポリペプチド分子間における、全体的な単量体の保存を指す。さらなる限定詞を伴わない、「同一」という用語、例えば、タンパク質Ａが、タンパク質Ｂと同一であるとは、配列が、１００％同一であること（１００％の配列同一性）を含意する。２つの配列について、例えば、「７０％同一」と記載することは、それらについて、例えば、「７０％の配列同一性」を有すると記載することと同義である。

【0089】

２つのポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、例えば、最適の比較を目的として、２つの配列をアライメントすることにより実施され得る（例えば、最適のアライメントのために、第１のポリペプチド配列および第２のポリペプチド配列の、一方または両方へと、ギャップが導入され、同一でない配列は、比較を目的として棄却される場合がある）。ある特定の態様では、比較を目的としてアライメントされる配列の長さは、参照配列の長さの、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸が比較される。

【0090】

第１の配列内の位置が、第２の配列内の対応する位置と同じアミノ酸により占有されている場合、分子は、この位置において同一である。２つの配列の間の同一性パーセントは、２つの配列の、最適のアライメントのために導入される必要があるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮するときに、配列により共有される、同一な位置の数の関数である。２つの配列の間の配列の比較、および同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達せられ得る。

【0091】

適切なソフトウェアプログラムは、多様な供給元から入手可能であり、タンパク質配列およびヌクレオチド配列の両方のアライメントのためのソフトウェアプログラムである。配列同一性パーセントを決定するのに適する、１つのプログラムは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎによるＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能である、ＢＬＡＳＴプログラムスイートの一部である、ｂｌ２ｓｅｑである。ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮアルゴリズムまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２つの配列の間の比較を実施する。ＢＬＡＳＴＮが、核酸配列を比較するのに使用されるのに対し、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するのに使用される。他の適切なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳバイオインフォマティクスプログラムスイートの一部である、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒであり、また、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａにおける、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）からも入手可能である。配列アライメントは、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、またはＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなど、当技術分野で公知の方法を使用して行われ得る。

【0092】

ポリペプチドの参照配列とアライメントする、単一のポリペプチド標的配列内の異なる領域は、各々、それらの固有の配列同一性パーセントを有し得る。配列同一性パーセント値は、最も近い１０分の１位数へと丸められることが留意される。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、および８０．１４が、８０．１へと切り下げて丸められるのに対し、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、および８０．１９は、８０．２へと切り上げて丸められる。長さの値は常に、整数となることもまた留意される。

【0093】

ある特定の態様では、第１のアミノ酸配列の、第２のアミノ酸配列に対する同一性百分率（ＩＤ％）は、ＩＤ％＝１００×（Ｙ／Ｚ）［式中、Ｙは、第１の配列と、第２の配列とのアライメント（目視検査または特定の配列アライメントプログラムによりアライメントされた）において、同一なマッチとして評定されたアミノ酸残基の数であり、Ｚは、第２の配列内の残基の総数である］として計算される。第１の配列の長さが、第２の配列より長い場合、第１の配列の、第２の配列に対する同一性パーセントは、第２の配列の、第１の配列に対する同一性パーセントより高くなる。

【0094】

当業者は、配列同一性パーセントの計算のための配列アライメントの生成が、もっぱら、一次配列データにより駆動される、二元的な配列間比較に限定されないことを認識するであろう。また、配列アライメントは、配列データを、構造的データ（例えば、結晶構造解析によるタンパク質構造）、機能的データ（例えば、突然変異の位置）、または系統発生データなど、異種供給源に由来するデータと統合することにより生成され得ることも認識されるであろう。異種データを統合して、複数の配列アライメントを生成するのに適するプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇにおいて入手可能であり、代替的に、例えば、ＥＢＩからも入手可能である、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅである。また、配列同一性パーセントを計算するのに使用される、最終アライメントは、自動でキュレートされる場合もあり、手動でキュレートされる場合もあることも認識されるであろう。

【0095】

インビボにおけるタンパク質分解性：「インビボにおけるタンパク質分解性」という用語は、前記生物内で生じるプロテアーゼから生じ得る、生体系へと導入された場合における（例えば、生物へと注入された場合における）、ポリペプチドの切断を指す。タンパク質分解は、ポリペプチドの生物学的活性または半減期に潜在的に影響を及ぼし得る。例えば、野生型ＦＧＦ－２１は、切断型不活性ポリペプチドを結果としてもたらす、Ｃ末端における切断を受ける場合がある。

【0096】

ＦＧＦ－２１のインビボにおけるタンパク質分解を測定する例示的方法は、米国出願公開第２０１７／０１８９４８６号の実施例１０に記載されている、ＭＳＤ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）ベースのＥＣＬＩＡ（ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）である。インビボまたはインビトロにおけるタンパク質分解の相対量は、例えば、インビボにおけるタンパク質分解を低下させているポリペプチドを同定するように、参照化合物に照らして決定され得る。インビボにおけるタンパク質分解の相対量はまた、参照製剤に照らして、すなわち、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１のＦＧＦ－２１ポリペプチド部分が、インビトロにおけるタンパク質分解を低下させている製剤を同定するようにも決定され得る。

【0097】

単離された：本明細書で使用される、「単離された」という用語は、それが会合していた（天然においてであれ、実験設定条件下においてであれ）成分のうちの少なくとも一部から分離された物質または実体（例えば、ポリペプチド）を指す。単離物質（例えば、タンパク質）は、それらが会合していた物質に照らして、純度レベルが変動する場合がある。

【0098】

連結された：「連結された」、「融合された」、「コンジュゲートされた」、および「接合された」という用語は、互換的に使用され、共有結合的に融合されるか、またはコンカテネートされたＰＥＧ部分（例えば、約３０ｋＤのＰＥＧ部分）であって、ＦＧＦ－２１ポリペプチド、例えば、本明細書で開示される変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号１のＦＧＦ－２１ポリペプチド）の内部への挿入を含むＰＥＧ部分を指す。

【0099】

本開示の文脈では、ＦＧＦ－２ポリペプチド、例えば、本明細書で開示される変異体ＦＧＦ－２ポリペプチド（例えば、配列番号１のＦＧＦ－２１ポリペプチド）と、ＰＥＧ部分とは、化学合成の結果として「融合」され得る。

【0100】

本開示の文脈では、「コンジュゲートする」または「コンジュゲーション」という用語は、２つの分子実体（例えば、ＦＧＦ－２１ポリペプチド、例えば、本明細書で開示される変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド、およびＰＥＧなどのポリマー部分）が化学的に連結されていることを表示する。一部の特定の態様では、ＦＧＦ－２１ポリペプチドと、ＰＥＧ部分とは、本明細書で開示される式Ｉにおいて示される通り、オキシム連結を介して連結される。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0101】

突然変異：本開示の内容では、上記で規定された、「突然変異」および「アミノ酸置換」という用語（場合によって単に、「置換」とも称される）は、互換的であると考えられる。

【0102】

非天然アミノ酸：「非天然アミノ酸」とは、２０の一般的アミノ酸、またはピロリシンもしくはセレノシステインのうちの１つではないアミノ酸を指す。「非天然アミノ酸」という用語と同義に使用され得る、他の用語は、「非天然コードアミノ酸」、「非天然アミノ酸」、「天然に存在しないアミノ酸」、ならびにこれらの多様なハイフン付き形および非ハイフン付き形である。

【0103】

「非天然アミノ酸」という用語はまた、天然コードアミノ酸（２０の一般的アミノ酸を含むがこれらに限定されない）の修飾（例えば、翻訳後修飾）により生じるが、それら自体が、翻訳複合体により成長しつつあるポリペプチド鎖へと、天然で組み込まれることはないアミノ酸も含むがこれらに限定されない。このような非天然アミノ酸の例は、Ｎ－アセチルグルコサミニル－Ｌ－セリン、Ｎ－アセチルグルコサミニル－Ｌ－トレオニン、およびＯ－ホスホチロシンを含むがこれらに限定されない。本開示の具体的な一態様では、非天然アミノ酸は、パラ－アセチルフェニルアラニンである。本開示の具体的な一態様では、非天然アミノ酸は、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンである。本開示の具体的な一態様では、非天然アミノ酸は、パラ－アセチル－Ｄ－フェニルアラニンである。

【0104】

患者：本明細書で使用される、「患者」とは、処置を求め得る対象、もしくは処置を必要とし得る対象、処置を要求する対象、処置を施されている対象、処置を施されることになる対象、または特定の疾患または状態について訓練を受けた職業的従事者によるケア下にある対象を指す。

【0105】

医薬組成物：「医薬組成物」という用語は、有効成分（例えば、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１）の生物学的活性が、有効となることを可能とするような形態にあり、組成物が投与される対象に対して、許容不可能な程度に毒性である、さらなる成分（例えば、賦形剤および水）を含有しない調製物を指す。このような組成物は、無菌であり得る。

【0106】

薬学的に許容される：本明細書では、「薬学的に許容される」という語句は、穏当な医学的判断の範囲内にあり、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒトおよび動物の組織との接触における使用に適する、妥当な利益／リスク比と釣り合う、化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すように用いられる。一般に、動物における使用のためであり、より具体的には、ヒトにおける使用のための、連邦政府または州政府の規制機関による承認（または米国薬局方もしくは他の一般に認知されている薬局方）は、これらの化合物、材料、組成物、および／または剤形が、薬学的に許容されることを含意する。治療目的に安全なものとして、一般に許容可能な、化合物、材料、組成物、および／または剤形は、「治療用に許容可能」である。

【0107】

薬学的に許容される賦形剤：本明細書で使用される、「薬学的に許容される賦形剤」という語句は、本明細書で記載される活性化合物以外（例えば、活性化合物を懸濁または溶解させることが可能なビヒクル）であり、対象において実質的に非毒性であり、非炎症性である特性を有する、任意の成分を指す。賦形剤は、例えば、キレート剤、界面活性剤、緩衝剤、浸透圧調節剤、抗酸化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、保存剤、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味剤、および水和水を含み得る。治療目的に安全なものとして、一般に許容される賦形剤は、「治療用に許容可能な賦形剤」である。

【0108】

薬学的に許容される塩：本開示はまた、本明細書で記載される化合物の、薬学的に許容される塩も含む。本明細書で使用される、「薬学的に許容される塩」とは、開示される化合物の誘導体を指し、この場合、親化合物は、既存の酸部分または塩基部分を、その塩形態へと転換することにより（例えば、遊離塩基を、適切な有機酸と反応させることにより）修飾される。薬学的に許容される塩の例は、アミンなどの塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などを含むがこれらに限定されない。

【0109】

ポリペプチド：本明細書では、「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すように、互換的に使用される。ポリマーは、修飾アミノ酸を含み得る。用語はまた、天然で、または介入により修飾されたアミノ酸ポリマー；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識化成分とのコンジュゲーションなど、他の任意の操作もしくは修飾も包含する。定義内にはまた、例えば、１つまたは複数のアミノ酸の類似体（例えば、非天然アミノ酸など、ホモシステイン、オルニチン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、Ｄ－アミノ酸、およびクレアチンを含む）のほか、当技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。特定の態様では、本明細書で開示されるポリペプチドは、ＦＧＦ－２１ポリペプチドである。

【0110】

本明細書で使用されるポリペプチドという用語は、任意のサイズ、構造、または機能の、タンパク質、ポリペプチド、およびペプチドを指す。ポリペプチドは、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、相同体、オーソログ、パラログ、断片、ならびに前出の他の同等物、変異体、および類似体を含む。ポリペプチドは、単一のポリペプチドの場合もあり、二量体、三量体、または四量体などの多分子複合体の場合もある。ポリペプチドはまた、単鎖ポリペプチドまたは多鎖ポリペプチドも含み得る。最も一般に、ジスルフィド連結は、多鎖ポリペプチド内に見出される。ポリペプチドという用語はまた、１つまたは複数のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の、人工的な化学的類似体であるアミノ酸ポリマーにも適用され得る。一部の態様では、「ペプチド」は、５０アミノ酸以下の長さ、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸の長さであり得る。

【0111】

防止すること：本明細書で使用される、「防止すること」という用語は、疾患、障害、および／もしくは状態の発生を、部分的に、もしくは完全に遅延させること；特定の疾患、障害、および／もしくは状態の、１つもしくは複数の症候、特徴、もしくは臨床症状の発生を、部分的に、もしくは完全に遅延させること；特定の疾患、障害、および／もしくは状態の、１つもしくは複数の症候、特徴、もしくは症状の発生を、部分的に、もしくは完全に遅延させること；特定の疾患、障害、および／もしくは状態からの進行を、部分的に、もしくは完全に遅延させること；ならびに／または疾患、障害、および／もしくは状態と関連する病態を発症する危険性を減少させることを指す。一部の態様では、本出願で開示される医薬製剤は、ＮＡＳＨまたは糖尿病など、線維症と関連する疾患または状態の発生を防止するか、これらの症候を防止するか、またはこれらの合併症を防止するのに使用され得る。

【0112】

予防法：本明細書で使用される、「予防法」とは、疾患もしくは状態の発生を防止する、または線維症と関連する疾患もしくは状態、例えば、ＮＡＳＨの症候を防止するか、もしくはこれらの発生を遅延させるのに使用される治療法または一連の措置を指す。一部の態様では、本出願で開示される医薬製剤は、予防的に使用され得る。

【0113】

予防：本明細書で使用される、「予防」とは、健康を維持し、線維症と関連する疾患もしくは状態、例えば、ＮＡＳＨもしくは糖尿病を防止するか、もしくはこれらの発生を遅延させるか、または疾患もしくは状態と関連する症候を防止するか、もしくはこれらの発生を遅延させるために取られる方策を指す。

【0114】

組換え：「組換え」ポリペプチドまたは「組換え」タンパク質とは、組換えＤＮＡ技術を介して作製されたポリペプチドまたはタンパク質を指す。操作宿主細胞内で発現される、組換作製ポリペプチドおよび組換作製タンパク質は、任意の適切な技法により、分離されるか、分画されるか、または部分的に、もしくは実質的に精製された、天然ポリペプチドまたは組換えポリペプチドと同様に、本開示の目的で、単離されていると考えられる。本明細書で開示される変異体ＦＧＦ－２１は、当技術分野で公知の方法を使用して、組換え作製され得る。本明細書で開示されるタンパク質およびペプチドはまた、化学合成される場合もある。

【0115】

一部の態様では、本明細書で開示されるコンジュゲート（例えば、非天然アミノ酸を含むＦＧＦ－２１ポリペプチド、例えば、配列番号１のＦＧＦ－２１）に有用なＦＧＦ－２１ポリペプチドは、細菌宿主により組換え作製される。

【0116】

類似性：本明細書で使用される、「類似性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、ポリペプチド分子間における、全体的な類縁性を指す。ポリマー分子の、互いとの類似性パーセントの計算は、類似性パーセントの計算が、当技術分野で理解される保存的置換を考慮に入れることを除き、同一性パーセントの計算と同じ方式で実施され得る。

【0117】

可溶性：「可溶性」という用語は、別の物質中に溶解し得る物質の量、例えば、水溶液中に溶解し得る野生型ＦＧＦ－２１（例えば、配列番号３のＦＧＦ－２１ポリペプチド）、変異体ＦＧＦ－２１（例えば、非天然アミノ酸を含むＦＧＦ－２１ポリペプチド、例えば、配列番号１のＦＧＦ－２１ポリペプチド）、または本開示のＦＧＦ－２１コンジュゲート（例えば、配列番号２または配列番号４のＦＧＦ－２１ポリペプチド）の量を指す。

【0118】

野生型ＦＧＦ－２１ポリペプチド、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド、またはＦＧＦ－２１コンジュゲートの可溶性を測定する例示的方法は、米国出願公開第２０１７／０１８９４８６号の実施例８に記載されている、栓流可溶性試験である。相対可溶性は、例えば、参照化合物に照らして、可溶性を増大させているポリペプチドを同定するように決定され得る。一部の態様では、相対可溶性は、ポリペプチドが可溶性を増大させている製剤を同定するように、参照製剤に照らして決定され得る。

【0119】

対象：「対象」または「個体」または「動物」または「哺乳動物」とは、それらについて、診断、予後診断、または治療が所望される、任意の対象、特に、哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象は、ヒト、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ（ｃａｔｔｌｅ、ｃｏｗｓ）などの、家畜、農場動物、動物園動物、競技動物、愛玩動物；類人猿、サル、オランウータン、およびチンパンジーなどの霊長動物；イヌおよびオオカミなどのイヌ科動物；ネコ、ライオン、およびトラなどのネコ科動物；ウマ、ロバ、およびシマウマなどのウマ科動物；クマ；ウシ、ブタ、およびヒツジなどの食用動物；シカおよびキリンなどの有蹄動物；マウス、ラット、ハムスター、およびモルモットなどの齧歯動物などを含むがこれらに限定されない。ある特定の態様では、哺乳動物は、ヒト対象である。他の態様では、対象は、ヒト患者である。特定の態様では、対象は、インビボにおいてであれ、インビトロにおいてであれ、エクスビボにおいてであれ、本明細書で記載される方法に適するヒト患者またはその細胞である。

【0120】

患うこと：疾患、障害、および／または状態を「患っている」個体は、疾患、障害、および／または状態の、１つまたは複数の症候を伴うか、または提示すると診断されている。一部の態様では、本明細書で開示される医薬製剤は、ＮＡＳＨまたは糖尿病など、線維症と関連する疾患または状態を患う対象へと投与され得る。

【0121】

罹患しやすい：疾患、障害、および／または状態に「罹患しやすい」個体は、疾患、障害、および／もしくは状態を伴うと診断されておらず、かつ／または疾患、障害、および／もしくは状態の症候を呈さない場合もあるが、疾患またはその症候を発症する傾向を有する。一部の態様では、疾患、障害、および／または状態（例えば、がん）に罹患しやすい個体は、以下：（１）疾患、障害、および／または状態の発症と関連する遺伝子突然変異；（２）疾患、障害、および／または状態の発症と関連する遺伝子多型；（３）疾患、障害、および／または状態と関連するタンパク質および／または核酸の発現および／または活性の増大および／または減少；（４）疾患、障害、および／または状態の発症と関連する習慣および／または生活様式；（５）疾患、障害、および／または状態の家族歴；ならびに（６）疾患、障害、および／または状態の発症と関連する微生物への曝露および／またはこれらの感染のうちの１つまたは複数により特徴づけられ得る。

【0122】

一部の態様では、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または状態を発症するであろう。一部の態様では、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または状態を発症しないであろう。一部の態様では、本明細書で開示される医薬製剤は、ＮＡＳＨまたは糖尿病など、線維症と関連する疾患または状態に罹患しやすい対象へと投与され得る。

【0123】

治療剤：「治療剤」または「薬剤」という用語は、対象へと投与されると、治療的効果、診断的効果、および／もしくは予防的効果を有し、かつ／または所望の生物学的効果および／もしくは薬理学的効果を誘発する分子的実体を指す。例えば、一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート（例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１）は、治療剤であり得る。一部の態様では、薬剤は、本明細書で開示される、少なくとも１つのＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１との組合せ療法の一部として共投与される別の分子である。

【0124】

治療有効量：本明細書で使用される、「治療有効量」という用語は、感染症、疾患、障害、および／または状態を患うか、またはこれらに罹患しやすい対象へと投与された場合に、感染症、疾患、障害、および／または状態を処置し、これらの症候を改善し、これらを診断し、防止し、および／またはこれらの発生を遅延させるのに十分な、送達される薬剤（例えば、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１、またはＦＧＦ－２１コンジュゲートを含む製剤）の量を意味する。一般に、治療有効量の投与は、治療的に有効な転帰を結果としてもたらすことが期待される。

【0125】

治療的に有効な転帰：本明細書で使用される、「治療的に有効な転帰」という用語は、感染症、疾患、障害、および／または状態を患うか、またはこれらに罹患しやすい対象において、感染症、疾患、障害、および／または状態を処置し、これらの症候を改善し、これらを診断し、防止し、および／またはこれらの発生を遅延させるのに十分な転帰を意味する。

【0126】

処置する、処置、治療：本明細書で使用される、「処置する」もしくは「処置」もしくは「治療」という用語、またはこれらの文法的変化形は、線維症と関連する疾患または状態、例えば、ＮＡＳＨまたは糖尿病の、１つまたは複数の症候または特徴を、部分的に、または完全に防止し、緩和し、改善し（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ、ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ）、和らげ、これらの発生を遅延させ、これらの進行を阻害し、これらの重症度を軽減し、および／またはこれらの発生率を低減することを指す。例えば、線維症と関連する疾患を「処置すること」は、症候を防止すること、症候を改善すること、疾患もしくは状態またはその症候の発生を遅延させることなどを指す場合がある。処置は、疾患、障害、および／または状態と関連する病態を発症する危険性を減少させる目的で、疾患、障害、および／もしくは状態の徴候を呈さない対象、ならびに／または疾患、障害、および／もしくは状態の早期徴候だけを呈する対象へと投与され得る。

【0127】

ｕｇ、ｕＭ、ｕＬ：本明細書で使用される、「ｕｇ」、「ｕＭ」、および「ｕＬ」という用語は、それぞれ、「μｇ」、「μΜ」、および「μＬ」と互換的に使用される。

【0128】

本開示の多様な態様については、以下の小節において、さらに詳細に記載される。
Ｉ．ＦＧＦ－２１コンジュゲート製剤

【0129】

本開示は、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ－２１）コンジュゲート、およびアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）を含む医薬製剤であって、製剤が、参照製剤と比較して、安定性を改善した医薬製剤を提供する。「参照製剤」という用語は、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しないことを除き、「被験製剤」（参照製剤と比較される製剤）と同じ成分および特性（例えば、ｐＨ、温度）を含む製剤を指す。

【0130】

「ＦＧＦ－２１コンジュゲート」という用語は、ＰＥＧ部分へと連結されたＦＧＦ－２１ポリペプチド部分を含むコンジュゲートを指す。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。「ＦＧＦ－２１ポリペプチド」という用語は、一般に、野生型ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号３のポリペプチド）、および「変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド」の両方を指す。

【0131】

本明細書で使用される、「ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１コンジュゲート」または「ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１」という用語は、オキシム連結を介して、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド部分へと連結されたＰＥＧ部分を含む、ＰＥＧ化ＦＧＦ－２１形態を指す。例示的な、本開示のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、下記の表４における、配列番号２または５、および配列番号４または６に明示されている。

【表1】

【0132】

当技術分野で公知である、多数のＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される、ＰＥＧ化ＦＧＦ－２１コンジュゲート製剤、例えば、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第８，０１２，９３１号および同第９，４３４，７８８号において開示されている、ＰＥＧ化ＦＧＦ－２１コンジュゲート製剤において使用され得る。線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ－２１）については、文献（それらの各々が、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Nishimura et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1492:203-206 (2000)；ＷＯ０１／３６６４０およびＷＯ０１／１８１７２；ならびに米国特許公開第２００４０２５９７８０号）において記載されている。他のＦＧＦと異なり、ＦＧＦ－２１は、増殖効果および腫瘍形成効果を及ぼさないことが報告されている（Ornitz and Itoh, Genome Biology 2001, 2(3):reviews3005.1-3005.12）。

【0133】

一部の態様では、本開示に有用なＦＧＦ－２１ポリペプチドは、Ｎ末端におけるメチオニンを伴わない、配列番号２または配列番号４に明示されるアミノ酸配列を含む。

【0134】

ＦＧＦ－２１について、複数の多型が同定されている。米国特許公開第２００１００１２６２８号および米国特許第６，７１６，６２６号では、ロイシンまたはプロリンが、同じ位置に記載されている。１つのアミノ酸（ロイシン）が異なる、Ｎ末端のリーダー配列またはシグナル配列は、米国特許第６，７１６，６２６号および米国特許公開第２００４０２５９７８０号に示されている。ＦＧＦ－２１の変異体または突然変異体は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第６，７１６，６２６号；米国特許公開第２００５／０１７６６３１号、同第２００５／００３７４５７号、同第２００４／０１８５４９４号、同第２００４／０２５９７８０号、同第２００２／０１６４７１３号、および同第２００１／００１２６２８号；ＷＯ０１／３６６４０；ＷＯ０３／０１１２１３；ＷＯ０３／０５９２７０；ＷＯ０４／１１０４７２；ＷＯ０５／０６１７１２；ＷＯ０５／０７２７６９；ＷＯ０５／０９１９４４；ＷＯ０５／１１３６０６；ＷＯ０６／０２８５９５；ＷＯ０６／０２８７１４；ＷＯ０６／０５０２４７；ＷＯ０６／０６５５８２；ＷＯ０６／０７８４６３；ＷＯ０１／０１８１７２；ＷＯ０９／１４９１７１；ＷＯ１０／０４２７４７；ＷＯ１２／０６６０７５；ＷＯ１１／１５４３４９；ＷＯ１３／０５２３１１；ＷＯ１３／１８８１８１において開示されている変異体または突然変異体を含むがこれらに限定されない。

【0135】

本明細書で使用される、「変異体ＦＧＦ－２１」および「変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド」という用語は、少なくとも１つのアミノ酸位置において、参照野生型ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号３の野生型ヒトＦＧＦ－２１）と異なり、典型的に、線維芽細胞増殖因子２１の、少なくとも１つの生物学的活性を有するＦＧＦ－２１ポリペプチドのほか、それらの生物学的活性に関わらず、ＦＧＦ－２１類似体、ＦＧＦ－２１アイソフォーム、ＦＧＦ－２１模倣体、ＦＧＦ－２１断片、ハイブリッドＦＧＦ－２１タンパク質、これらの融合タンパク質、オリゴマーおよび多量体、相同体、グリコシル化パターン変異体、スプライス変異体、ならびにムテインを指す。「変異体ＦＧＦ－２１」という用語は、天然に存在する変異体、および天然に存在しない変異体、例えば、野生型ＦＧＦ－２１ポリペプチド、例えば、配列番号３のポリペプチド内のアミノ酸の、非天然アミノ酸（例えば、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニン）による置換から得られる変異体の両方を包含する。置換は、例えば、組換え発現、または化学合成もしくは酵素合成の結果であり得る。一部の態様では、本開示の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、配列番号１のポリペプチドを含むか、これからなるか、またはこれから本質的になる。

【0136】

本開示の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、１つまたは複数のアミノ酸の置換、付加、または欠失を含むＦＧＦ－２１ポリペプチドを包含する。例えば、本開示の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、１つもしくは複数のアミノ酸の置換（例えば、天然に存在するアミノ酸または天然に存在しないアミノ酸による）、欠失（末端または内部の欠失）、または異種部分の接合（アミノ酸配列内の、Ｃ末端、Ｎ末端、または内部における、挿間／挿入いずれかによる接合、または側鎖接合による接合）などの修飾を含む。変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドという用語はまた、ＦＧＦ－２１の多型（例えば、天然に存在するＦＧＦ－２１の配列変異体）、例えば、Ｐ形態またはＬ形態も包含する。

【0137】

天然に存在するＦＧＦ－２１ポリペプチド内の、多種多様なアミノ酸位置における置換について記載されている。可溶性または安定性をモジュレートするか、アゴニスト活性を増大させるか、インビボまたはインビトロにおける半減期を延長するか、プロテアーゼ抵抗性を増大させるか、ポリペプチドを、アンタゴニストへと転換するか、免疫原性もしくは毒性を低減するか、精製を容易とするか、もしくは製造可能性を促進するか、またはこれらの任意の組合せである置換を含むがこれらに限定されない置換もまた、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドという用語により包含される。

【0138】

変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドという用語はまた、天然に存在するＦＧＦ－２１ポリペプチドの、生物学的活性断片、生物学的活性変異体、および立体異性体のほか、天然に存在するＦＧＦ－２１のアゴニスト、模倣体、およびアンタゴニスト変異体、ならびにこれらのポリペプチド融合体も含む。変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドという用語により、アミノ末端、カルボキシル末端、またはこれらの両方において、さらなるアミノ酸を含む融合体が包含される。

【0139】

例示的融合体は、例えば、メチオニンが、例えば、リーダーペプチドもしくはシグナルペプチドを欠く、ＦＧＦ－２１の成熟形態、またはその部分の組換え発現から得られる、ＦＧＦ－２１ポリペプチドのＮ末端へと連結された、メチオニルＦＧＦ－２１（メチオニンは、例えば、イー・コリ内の組換え発現から得られる、ＦＧＦ－２１のＮ末端へと連結される）、精製を目的とする融合体（ポリヒスチジンまたはアフィニティーエピトープを含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない。

【0140】

変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドという用語はまた、任意のアミノ酸位置においてグリコシル化されたポリペプチド、ポリペプチドＮ結合型グリコシル化形態、またはＯ結合型グリコシル化形態などであるがこれらに限定されない、グリコシル化ＦＧＦ－２１ポリペプチドも含む。単一のヌクレオチド変化を含有する変異体もまた、ＦＧＦ－２１の生物学的活性変異体と考えられる。加えて、スプライス変異体もまた含まれる。

【0141】

変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドという用語はまた、化学的手段により連結されるか、または融合タンパク質として発現された、任意の１つまたは複数の非修飾ＦＧＦ－２１もしくは修飾ＦＧＦ－２１、または他の任意のポリペプチド、タンパク質、炭水化物、ポリマー、低分子、リンカー、リガンド、または任意の種類の他の生物学的活性分子による、ＦＧＦ－２１のヘテロ二量体、ホモ二量体、ヘテロ多量体、またはホモ多量体のほか、例えば、特異的な欠失または他の修飾を含有するが、なお生物学的活性を維持するポリペプチド類似体も含む。

【0142】

一部の態様では、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの、その受容体に対するアフィニティーを増大させる、付加、置換、または欠失を含む。同様に、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドという用語は、検出（ＧＦＰを含むがこれらに限定されない）、精製、組織膜もしくは細胞膜を通した輸送、プロドラッグの放出もしくは活性化、ＦＧＦ－２１ポリペプチドサイズの低減、またはポリペプチドの他の形質を改善する化学的もしくは酵素的切断配列、プロテアーゼにより切断された配列、反応性基、抗体結合性ドメイン（ＦＬＡＧまたはポリＨｉｓを含むがこれらに限定されない）もしくは他のアフィニティーベースの配列（ＦＬＡＧ、ポリＨｉｓ、ＧＳＴなどを含むがこれらに限定されない）もしくは連結分子（ビオチンを含むがこれらに限定されない）を含む。

【0143】

一部の態様では、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、配列番号１もしくは配列番号３、またはＮ末端におけるメチオニンを伴わない配列番号１もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対する、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含み、この場合、ポリペプチドは、ＦＧＦ－２１活性を有する。一部の態様では、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、配列番号５または配列番号６に明示されるアミノ酸配列を含む。

【0144】

一部の態様では、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、配列番号１もしくは配列番号３、またはＮ末端におけるメチオニンを伴わない配列番号１もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対する、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるか、またはこれらから本質的になり、この場合、ポリペプチドは、ＦＧＦ－２１活性を有する。一部の態様では、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、配列番号５または配列番号６に明示されるアミノ酸配列から本質的になる。

【0145】

この定義により包含される、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、例えば、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドを含む。一部の態様では、非天然アミノ酸は、アミノオキシ誘導体と反応すると、安定的なオキシム連結を形成し得るアミノ酸、例えば、ｐ－アセチルフェニルアラニン、ｍ－アセチルフェニルアラニン、ｐ－（３－オキソブテノイル）－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－（２－アミノ－３－ヒドロキシエチル）フェニルアラニンなどである。一部の態様では、非天然アミノ酸は、ｐ－アセチルフェニルアラニンである。一部の態様では、非天然アミノ酸は、ｐ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンである。

【0146】

一部の態様では、１つまたは複数の非天然アミノ酸は、野生型ＦＧＦ－２１の以下の位置：１位の前（すなわち、Ｎ末端に）、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２（すなわち、タンパク質のカルボキシル末端）（配列番号３に対応するアミノ酸位置）のうちの１つまたは複数に組み込まれる。

【0147】

一部の具体的な態様では、本開示の変異体ＦＧＦ－２１は、配列番号１の修飾ＦＧＦ－２１ポリペプチド、すなわち、野生型ＦＧＦ－２１のグルタミン１０９が、非天然アミノ酸であるパラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンにより置換されている、配列番号３の野生型ＦＧＦ－２１の誘導体である。

【0148】

一部の具体的な態様では、本開示のＦＧＦ－２１ポリペプチドは、ＦＧＦ－２１ポリペプチド（配列番号１または配列番号３）のＮ末端におけるメチオニンが、除去されるように修飾される：配列番号５または６。

【0149】

上記で開示された通り、本開示の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）部分へと連結され得る。ＰＥＧの、本明細書で開示される変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号１のＦＧＦ－２１ポリペプチド）への連結は、非修飾形態と比べた、血清（インビボ）半減期の延長もしくはモジュレート、または治療半減期の延長もしくはモジュレート、免疫原性または毒性のモジュレート、凝集および多量体形成など、物理的会合特徴のモジュレート、受容体への結合の変更、１つまたは複数の結合パートナーへの結合の変更、ならびに受容体の二量体化または多量体化の変更を含むがこれらに限定されない変化を結果としてもたらし得る。一部の態様では、ＰＥＧの、本明細書で開示される変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号１のＦＧＦ－２１ポリペプチド）への連結は、吸収速度の増大、毒性の低減、可溶性の改善、タンパク質凝集の低減、ＰＥＧ化ＦＧＦ－２１の生物学的活性および／または標的選択性の増大、製造可能性の増大、および／または免疫原性の低減（例えば、米国特許第４，１７９，３３７号を参照されたい）を含むがこれらに限定されない、薬物動態特性または生物物理特性を、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号１のＦＧＦ－２１ポリペプチド）、または野生型ＦＧＦ－２１（例えば、配列番号３のＦＧＦ－２１ポリペプチド）の非コンジュゲート形態などの参照化合物と比較して改善または変更する。一部の態様では、少なくとも１つのリンカーが、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド部分と、ＰＥＧ部分との間に介在し得る。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0150】

ＦＧＦ－２１またはＦＧＦファミリーメンバーの結晶構造、およびこれらの、ＦＧＦ受容体との相互作用の検討は、どの、ある特定のアミノ酸残基が、溶媒へと、完全に、または部分的にアクセス可能な側鎖を有するのかを指し示し得る。これらの位置における非天然アミノ酸の側鎖は、タンパク質表面から離れ、外側の溶媒へと向くので、ＰＥＧへと連結され得る。

【0151】

ＰＥＧは、野生型ＦＧＦ－２１ポリペプチドまたは変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドの、以下のアミノ酸位置：１位の前（すなわち、Ｎ末端に）、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２（すなわち、タンパク質のカルボキシル末端）（配列番号３に対応するアミノ酸位置）のうちの１つまたは複数へと連結され得る。一部の態様では、ＰＥＧは、非天然アミノ酸、例えば、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンなどのフェニルアラニン誘導体の側鎖へと接合され、上記で開示された位置のうちのいずれかにおいて、天然に存在するアミノ酸を置換する。

【0152】

本開示のＰＥＧは、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、これらのＣ_１～Ｃ_１０モノアルコキシ誘導体またはＣ_１～Ｃ_１０モノアリールオキシ誘導体（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，２５２，７１４号において記載されている）、モノメトキシポリエチレングリコール、離散型ＰＥＧ、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリアルキレングリコールおよびその誘導体、ポリアルキレングリコールとその誘導体とのコポリマー、またはこれらの混合物を含むがこれらに限定されない。一部の態様では、ＰＥＧは、分枝状構造を有し得る。分枝状ＰＥＧについては、例えば、米国特許第５，６４３，５７５号；Morpurgo et al., Appl. Biochem. Biotechnol. 56:59-72 (1996)；Vorobjev et al., Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750 (1999)；およびCaliceti et al., Bioconjug. Chem. 10:638-646 (1999)において記載されている。

【0153】

一部の態様では、ＰＥＧの分子量は、約３０ｋＤａである。所望のプロファイル（例えば、所望される持続放出の持続時間、存在する場合、生物学的活性に対する影響、操作の容易さ、抗原性の程度または欠如、およびポリエチレングリコールの、タンパク質または類似体に対する他の公知の影響）に応じて、他のサイズも使用され得る。一部の態様では、ＰＥＧの分子量は、約２８ｋＤａ、約２９ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３１ｋＤａ、または約３２ｋＤａである。一部の態様では、ＰＥＧの分子量は、約２８ｋＤａ～約２９ｋＤａの間、約２９ｋＤａ～約３０ｋＤａの間、約３０ｋＤａ～約３１ｋＤａの間、または約３１ｋＤａ～約３２ｋＤａの間である。当技術分野では、ＰＥＧ（ならびにＦＧＦ－２１コンジュゲート）の分子量を決定する方法が周知である。本開示のためのＰＥＧの分子量を測定するのに、任意の公知の方法、例えば、質量分析（例えば、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦおよび／またはＥＳＩ）が使用され得る。

【0154】

一部の態様では、ＰＥＧは、約６００エチレングリコール単位、約６１０エチレングリコール単位、約６２０エチレングリコール単位、約６３０エチレングリコール単位、約６４０エチレングリコール単位、約６５０エチレングリコール単位、約６６０エチレングリコール単位、約６７０エチレングリコール単位、約６８０エチレングリコール単位、約６９０エチレングリコール単位、約７００エチレングリコール単位、約７１０エチレングリコール単位、約７２０エチレングリコール単位、約７３０エチレングリコール単位、約７４０エチレングリコール単位、約７５０エチレングリコール単位、約７６０エチレングリコール単位、約７７０エチレングリコール単位、約７８０エチレングリコール単位、約７９０エチレングリコール単位、または約８００エチレングリコール単位を有する。

【0155】

一部の態様では、ＰＥＧは、約６００エチレングリコール単位～約６１０エチレングリコール単位の間、約６１０エチレングリコール単位～約６２０エチレングリコール単位の間、約６２０エチレングリコール単位～約６３０エチレングリコール単位の間、約６３０エチレングリコール単位～約６４０エチレングリコール単位の間、約６４０エチレングリコール単位～約６５０エチレングリコール単位の間、約６５０エチレングリコール単位～約６６０エチレングリコール単位の間、約６６０エチレングリコール単位～約６７０エチレングリコール単位の間、約６７０エチレングリコール単位～約６８０エチレングリコール単位の間、約６８０エチレングリコール単位～約６９０エチレングリコール単位の間、約６９０エチレングリコール単位～約７００エチレングリコール単位の間、約７００エチレングリコール単位～約７１０エチレングリコール単位の間、約７１０エチレングリコール単位～約７２０エチレングリコール単位の間、約７２０エチレングリコール単位～約７３０エチレングリコール単位の間、約７３０エチレングリコール単位～約７４０エチレングリコール単位の間、約７４０エチレングリコール単位～約７５０エチレングリコール単位の間、約７５０エチレングリコール単位～約７６０エチレングリコール単位の間、約７６０エチレングリコール単位～約７７０エチレングリコール単位の間、約７７０エチレングリコール単位～約７８０エチレングリコール単位の間、約７８０エチレングリコール単位～約７９０エチレングリコール単位の間、または約７９０エチレングリコール単位～約８００エチレングリコール単位の間を有する。

【0156】

一部の態様では、ＰＥＧは、６６０、６６１、６６２、６６３、６６４、６６５、６６６、６６７、６６８、６６９、６７０、６７１、６７２、６７３、６７４、６７５、６７６、６７７、６７８、６７９、６８０、６８１、６８２、６８３、６８４、６８５、６８６、６８７、６８８、６８９、６９０、６９１、６９２、６９３、６９４、６９５、６９６、６９７、６９８、６９９、または７００エチレングリコール単位を有する。

【0157】

一部の具体的な態様では、ＰＥＧ部分は、オキシム連結を介して、本開示の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号１のＦＧＦ－２１ポリペプチド）へと連結される。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、ＰＥＧ分子の反応性基（例えば、図７に提示された、３０ｋＤａのメチルＰＥＧ_６８１アミノオキシ分子のアミノオキシ基）と、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド内の非天然アミノ酸の反応性基（例えば、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドの配列のアミノ酸１０９位における、例えば、ｐ－アセチル－フェニルアラニンのアセチル基）との間で形成されるオキシム連結を介して、本開示の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド（例えば、配列番号１の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチド）へと連結される。一部の態様では、非天然アミノ酸は、配列番号３のＧｌｎ１０９を置きかえる、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンである。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0158】

一部の態様では、本明細書で開示される製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートは、配列番号２のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１、すなわち、野生型ＦＧＦ－２１のグルタミン１０９（配列番号３）が、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンで置きかえられており、ＰＥＧ部分、例えば、約２８ｋＤａ～約３２ｋＤａの間の分子量、例えば、約３０ｋＤａの直鎖状ＰＥＧが、オキシム連結を介して、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンへと、共有結合的に接合されている、配列番号１のＦＧＦ－２１である。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0159】

一部の態様では、本明細書で開示される製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートは、配列番号２のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１、すなわち、（ｉ）パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンが、野生型ＦＧＦ－２１のグルタミン１０９（配列番号３）を置きかえる、配列番号１のＦＧＦ－２１、および（ｉｉ）オキシム連結を介して、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンへと、共有結合的に接合されたＰＥＧ部分、例えば、約２８ｋＤａ～約３２ｋＤａの間の分子量、例えば、約３０ｋＤａの直鎖状ＰＥＧを含むＦＧＦ－２１コンジュゲートである。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0160】

一部の態様では、本明細書で開示される製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートは、配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１、すなわち、野生型ＦＧＦ－２１のグルタミン１０９（配列番号３）が、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンで置きかえられており、６８１エチレングリコール単位を含むＰＥＧ部分が、オキシム連結を介して、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンへと、共有結合的に接合されている、配列番号１のＦＧＦ－２１である。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0161】

一部の態様では、本明細書で開示される製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートは、配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１、すなわち、（ｉ）パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンが、野生型ＦＧＦ－２１のグルタミン１０９（配列番号３）を置きかえた、配列番号１のＦＧＦ－２１、および（ｉｉ）オキシム連結を介して、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンへと、共有結合的に接合された、６８１エチレングリコール単位を含むＰＥＧ部分を含むＦＧＦ－２１コンジュゲートである。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0162】

したがって、本開示の一部の具体的な態様では、本明細書で開示される製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートは、（ｉ）配列番号１のＦＧＦ－２１ポリペプチド部分、および（ｉｉ）６８１エチレングリコール単位を伴うＰＥＧ部分、すなわち、分子量が約３０ｋＤａであるＰＥＧ部分であって、オキシム連結を介して、１０９位において、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンへと、共有結合的に接合されたＰＥＧ部分を含む。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0163】

一部の態様では、オキシム連結は、変異体ＦＧＦ－２１内に存在する非天然アミノ酸の反応性基（例えば、ｐ－アセチルフェニルアラニンのアセチル基）と、ＰＥＧ分子の反応性基（例えば、図７に提示される遠位メトキシ基を含む、３０ｋＤａのＰＥＧ_６８１アミノオキシ分子のアミノオキシ基）との化学的反応により形成される。一部の態様では、非天然アミノ酸は、組換えにより（例えば、原核細胞培養物中の発現により）、インビトロにおける転写および翻訳を使用して、化学合成を使用して、または当技術分野で公知である任意の方法を使用して、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドへと組み込まれ得る。一部の態様では、ＰＥＧ分子は、アミノ酸（例えば、ｐ－アセチル－フェニルアラニン）へと、化学的に連結され、その後、ＰＥＧ－アミノ酸は、例えば、化学合成を介して、ＦＧＦ－２１ポリペプチドへと組み込まれ得る。一部の態様では、ＰＥＧ分子は、遠位メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３）基を含む。

【0164】

酵母による発現を介する、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの作製は、かつて、Ｏ結合型グリコシル化部位を除去するのに、部位特異的突然変異誘発を要求する、Ｏ結合型グリコシル化の存在により妨げられてきた。ＦＧＦ－２１ポリペプチドはまた、哺乳動物細胞培養物中の組換えにより作製された場合にも、実質的程度のグリコシル化を示す。したがって、一部の態様では、本開示の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、原核細胞培養物中の組換えにより作製される。したがって、一部の態様では、本開示の変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、グリコシル化されない。

【0165】

上記で開示された通り、本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１と、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）とを含む医薬製剤を提供した。「キレート剤」または「カチオンキレート剤」という用語は、互換的であり、元の金属イオンの化学的特性と異なる化学的特性を有する、新たな錯体イオンを形成することにより、金属イオンを、溶液系から除去することが可能な、任意の物質を指す。特に、本明細書で開示されるカチオンキレート剤は、二価金属、例えば、Ｃａ＋＋に特異的に結合するキレート剤である。

【0166】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート製剤は、１つまたは複数の安定性の改善、例えば、脱アミド化率の低下、および／または凝集率の低下を呈する。例えば、ＤＴＰＡなど、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤の、ＦＧＦ－２１コンジュゲート製剤への組入れは、ある特定の温度（例えば、４０℃）で、ある特定の期間（例えば、１カ月間）にわたり保管された場合における、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0167】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、約２５℃、約３０℃、約３５℃、約４０℃、または約４５℃で保管された医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、２５℃を上回るか、３０℃を上回るか、３５℃を上回るか、約４０℃であるか、または約４５℃である温度で保管された医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0168】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、約２０℃～約２５℃、約２５℃～約３０℃、約３０℃～約３５℃、または約４０℃～約４５℃の間で保管された医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0169】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、上記で開示された温度または温度範囲で、約１週間、約２週間、約３週間、約１カ月間、約２カ月間、約３カ月間、または約４カ月間にわたり保管された後における医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0170】

具体的な態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、４０℃で、約１カ月にわたり保管された医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0171】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、約２５℃、約３０℃、約３５℃、約４０℃、または約４５℃で保管された医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の高分子量（ＨＭＷ）凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、２５℃を上回るか、３０℃を上回るか、３５℃を上回るか、約４０℃であるか、または約４５℃である温度で保管された医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１のＨＭＷ凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0172】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、約２０℃～約２５℃、約２５℃～約３０℃、約３０℃～約３５℃、または約４０℃～約４５℃の間で保管された医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１のＨＭＷ凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0173】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、上記で開示された温度または温度範囲で、約１週間、約２週間、約３週間、約１カ月間、約２カ月間、約３カ月間、または約４カ月間にわたり保管された後における医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１のＨＭＷ凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。具体的な態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、４０℃で、約１カ月にわたり保管された医薬製剤中の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１のＨＭＷ凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0174】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡは、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１中の１つまたは複数のアミノ酸、例えば、メチオニンの酸化を防止または緩和する。特定の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡは、配列番号３のアミノ酸１および／またはアミノ酸１６９（または配列番号１、２、もしくは４における対応するアミノ酸）の酸化を、２５℃および／または４０℃において、防止または緩和する。

【0175】

一部の具体的な態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤は、ＤＴＰＡである。ペンテト酸またはジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）は、５つのカルボキシメチル基を伴う、ジエチレントリアミン骨格からなるアミノポリカルボン酸である。ＤＴＰＡの共役塩基は、金属カチオンに対して、高アフィニティーを有する。したがって、ペンタアニオンであるＤＴＰＡ^５－は、各窒素中心および各ＣＯＯ^－基が、配位結合のための中心として見なされると仮定すると、潜在的に、オクタデンテートリガンドである。その錯体についての形成定数は、ＥＤＴＡについての形成定数より、約１００大きい。

【0176】

キレート剤として、ＤＴＰＡは、最大で８つの結合を形成することにより、金属イオンを包み込む。しかし、遷移金属は、通例、８つ未満の配位結合を形成する。このため、ＤＴＰＡは、その誘導体であるペンデチドにより示される通り、金属との錯体を形成した後で、なおも、他の試薬に結合する能力を有する。例えば、銅（ＩＩ）とのその錯体内で、ＤＴＰＡは、３つのアミン中心、および５つのカルボキシレートのうちの３つを利用する、ヘキサデンテート様で結合する。

【0177】

他の一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール－ビス（β－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、または類縁の化合物、例えば、チウキセタン（その炭素骨格が、イソチオシアナトベンジル基およびメチル基を含有する、ＤＴＰＡの修飾形）など、別のアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤であり得る。当技術分野で公知である、ＤＴＰＡおよびＥＤＴＡと類縁の他のキレート剤は、アミド基の窒素が、１つまたは複数のＣ_１～Ｃ_１８アルキル基で置換されたキレート剤、例えば、ＤＴＰＡ．ＢＭＡおよびＥＤＴＡ．ＢＭＡである。

【0178】

一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ～約１００μＭの間、１５μＭ～約９５μＭの間、約２０μＭ～約９０μＭの間、約２５μＭ～約８５μＭの間、約３０μＭ～約８０μＭの間、約３５μＭ～約７５μＭの間、約４０μＭ～約７０μＭの間、約４５μＭ～約６５μＭの間、約５０μＭ～約６０μＭの間、約２５μＭ～約７５μＭの間、約４０μＭ～約６０μＭの間、約３０μＭ～約７０μＭの間、または約４０μＭ～約７５μＭの間の量で存在する。

【0179】

一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ、約１５μＭ、約２０μＭ、約２５μＭ、約３０μＭ、約３５μＭ、約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭ、約６０μＭ、約６５μＭ、約７０μＭ、約７５μＭ、約８０μＭ、約８５μＭ、約９０μＭ、約９５μＭ、または約１００μＭの量で存在する。

【0180】

一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、少なくとも約１５μＭ、少なくとも約２０μＭ、少なくとも約２５μＭ、少なくとも約３０μＭ、少なくとも約３５μＭ、少なくとも約４０μＭ、少なくとも約４５μＭ、少なくとも約５０μＭ、少なくとも約５５μＭ、少なくとも約６０μＭ、少なくとも約６５μＭ、少なくとも約７０μＭ、または少なくとも約７５μＭの量で存在する。

【0181】

具体的な態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡは、５０μＭの量で存在する。

【0182】

一部の態様では、本明細書で開示される製剤のｐＨは、約６．５を上回るか、約６．６を上回るか、約６．７を上回るか、約６．８を上回るか、約６．９を上回るか、約７．０を上回るか、約７．１を上回るか、約７．２を上回るか、約７．３を上回るか、約７．４を上回るか、または約７．５を上回る。一部の態様では、製剤のｐＨは、６．５を上回るか、６．６を上回るか、６．７を上回るか、６．８を上回るか、６．９を上回るか、７．０を上回るか、７．１を上回るか、７．２を上回るか、７．３を上回るか、７．４を上回るか、または７．５を上回る。一部の態様では、製剤のｐＨは、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、または約７．５である。

【0183】

一部の態様では、製剤のｐＨは、約６．５～約７．５の間、約６．６～約７．５、約６．７～約７．５、約６．８～約７．５、約６．９～約７．５、約７．０～約７．５、約７．１～約７．５、約７．２～約７．５、約７．３～約７．５、約７．４～約７．５、約６．５～約７．４、約６．５～約７．３、約６．５～約７．２、約６．５～約７．１、約６．５～約７．０、約６．５～約６．９、約６．５～約６．８、約６．５～約６．７、約６．６～約７．４、約６．７～約７．４、約６．８～約７．４、約６．９～約７．４、約７．０～約７．４、約７．１～約７．４、約７．２～約７．４、約７．３～約７．４、約６．５～約７．３、約６．６～約７．３、約６．７～約７．３、約６．７～約７．３、約６．８～約７．３、約６．９～約７．３、約７．０～約７．３、約７．１～約７．３、約７．２～約７．３、約６．５～約７．２、約６．６～約７．２、約６．７～約７．２、約６．８～約７．２、約６．９～約７．２、約７．０～約７．２、約７．１～約７．２、約６．９～約７．１、または約７．０～約７．１である。

【0184】

一部の態様では、製剤のｐＨは、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、または約７．５である。一部の態様では、医薬製剤は、ｐＨが６．５である参照製剤より安定である。

【0185】

一部の態様では、医薬製剤は、界面活性剤をさらに含む。本明細書で使用される、「界面活性剤」という用語は、水中もしくは水溶液中に溶解もしくは懸濁させられた場合に、表面張力を低減するか、または２つの液体の間の表面張力、もしくは液体と固体との間の表面張力を低減する、任意の化合物、典型的に、脂肪族分子を意味する。

【0186】

本開示の文脈では、界面活性剤は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む溶液中の、界面応力および界面せん断を減少させる、任意の化合物である。

【0187】

一部の態様では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、すなわち、中性溶液中で、正味の電荷を有さない傾向がある界面活性剤である。一部の態様では、非アニオン性界面活性剤は、ポリソルベートである。ポリソルベートは、タンパク質を、界面誘導性凝集に対して安定化し、タンパク質の表面吸着を最小化するように、タンパク質医薬において広く使用される、非イオン性界面活性剤の重要なクラスである（Wang W 2005. Protein aggregation and its inhibition in biopharmaceutics. Int J Pharm 289 (1-2):1-30）。ポリソルベートは、ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）ソルビタンの脂肪酸エステルから構成される、両親媒性の、非イオン性界面活性剤である。市販のポリソルベートは、主に、ソルビタンＰＯＥ脂肪酸エステルを含有する、化学的に多様な混合物である。

【0188】

本明細書で使用される、「ポリソルベート」という用語は、典型的に、エチレンオキシドとコポリマー化される、ソルビトールのオレイン酸エステルおよびその無水物を指す。例示的ポリソルベートは、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ ２０；ＰＳ２０）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）；ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ ４０；ＰＳ４０）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）；ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ ６０；ＰＳ６０）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート）；およびポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ ８０；ＰＳ８０）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）を含む。

【0189】

「ポリオキシエチレン」部分に後続する数である２０は、分子内に見出されるオキシエチレン－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）－基の総数を指す。「ポリソルベート」部分に後続する数は、分子のポリオキシエチレンソルビタン部分と会合する脂肪酸の種類に関する。モノラウレートは、２０により指し示され、モノパルミテートは、４０により指し示され、モノステアレートは、６０により指し示され、モノオレエートは、８０により指し示される。一部の態様では、非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの場合、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｍｌの量である、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を上回る量で存在する。Wan and Lee, Journal of Pharm Sci, 63, p.136, 1974を参照されたい。本明細書を通して、界面活性剤濃度（％）は、（ｗ／ｖ）に対応する。

【0190】

一部の態様では、ポリソルベートは、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）である。一部の態様では、ポリソルベート８０である界面活性剤は、約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０３％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０５％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０６％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０７％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０８％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０９％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０３％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０５％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０６％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０７％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０８％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０３％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０５％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０６％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０７％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０５％～約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０６％～約０．０７％（ｗ／ｖ）、または約０．０５％～約０．０６％（ｗ／ｖ）の量で存在する。

【0191】

一部の態様では、ポリソルベート８０である界面活性剤は、少なくとも約０．０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０９％（ｗ／ｖ）、または少なくとも約０．１％（ｗ／ｖ）の量で存在する。

【0192】

一部の態様では、界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０は、例えば、製剤が、シェーカー上で撹拌される場合の、微粒子および／または気泡の形成を緩和する。一部の態様では、製剤中の界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０の存在は、微粒子の形成を、参照製剤中の微粒子形成レベルと比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％低減し得る。一部の態様では、製剤中の界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０の存在は、気泡の形成を、参照製剤中の気泡形成レベルと比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％低減し得る。

【0193】

一部の態様では、医薬製剤は、アミノ酸緩衝剤をさらに含む。アミノ酸は、容易に代謝可能な天然存在物質であるため、医薬適用において、バッファーとして使用されると有利であり得る。さらに、バッファーとして使用されるアミノ酸はまた、製剤が凍結乾燥される場合に、アモルファス相にあるタンパク質も保護し得る。適切なアミノ酸バッファーは、ヒスチジン、リシン、および／またはアルギニンを含有し得る。ヒスチジンは、約ｐＨ７において、良好な緩衝能を有する。

【0194】

本明細書で使用される、「ヒスチジン」という用語は、Ｌ－ヒスチジンまたはＤ－ヒスチジン、ヒスチジンの溶媒和形態、ヒスチジンの水和形態（例えば、一水和物）、もしくはヒスチジンの無水形態、またはこれらの混合物を含む。本開示の製剤中の、他の適切なバッファーは、少数を挙げれば、グルタミン酸、トリス、またはコハク酸である。

【0195】

一部の具体的な態様では、アミノ酸緩衝剤は、Ｌ－ヒスチジンである。

【0196】

一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約８０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約８５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約９０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、または約９５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジンの量で存在する。

【0197】

一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約２０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約８０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約８５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジンの量で存在する。

【0198】

一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約５０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ～約２５ｍＭヒスチジン、または約２０ｍＭ～約２５ｍＭヒスチジンの量で存在する。

【0199】

一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約１５ｍＭ～約２０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約６０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約６０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ～約６０ｍＭヒスチジン、約１５．５ｍＭ～約２４．５ｍＭヒスチジン、約１６ｍＭ～約２４ｍＭヒスチジン、約１６．５ｍＭ～約２３．５ｍＭヒスチジン、約１７ｍＭ～約２３ｍＭヒスチジン、約１７．５ｍＭ～約２２．５ｍＭヒスチジン、約１８ｍＭ～約２２ｍＭヒスチジン、約１８．５ｍＭ～約２１．５ｍＭヒスチジン、約１９ｍＭ～約２１ｍＭヒスチジン、または約１９．５ｍＭ～約２０．５ｍＭヒスチジンの量で存在する。

【0200】

一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭヒスチジン、約１１ｍＭヒスチジン、約１２ｍＭヒスチジン、約１３ｍＭヒスチジン、約１４ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭヒスチジン、約１６ｍＭヒスチジン、約１７ｍＭヒスチジン、約１８ｍＭヒスチジン、約１９ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジン、約２１ｍＭヒスチジン、約２２ｍＭヒスチジン、約２３ｍＭヒスチジン、約２４ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約２６ｍＭヒスチジン、約２７ｍＭヒスチジン、約２８ｍＭヒスチジン、約２９ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約３１ｍＭヒスチジン、約３２ｍＭヒスチジン、約３３ｍＭヒスチジン、約３４ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭヒスチジン、約３６ｍＭヒスチジン、約３７ｍＭヒスチジン、約３８ｍＭヒスチジン、約３９ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約４１ｍＭヒスチジン、約４２ｍＭヒスチジン、約４３ｍＭヒスチジン、約４４ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭヒスチジン、約４６ｍＭヒスチジン、約４７ｍＭヒスチジン、約４８ｍＭヒスチジン、約４９ｍＭヒスチジン、または約５０ｍＭヒスチジンの量で存在する。

【0201】

一部の態様では、医薬製剤は、浸透圧調節剤（当技術分野ではまた、等張剤としても公知である）をさらに含む。本開示に従い、浸透圧調節剤（等張剤）は、ポリオール、糖、炭水化物、塩化ナトリウムなどの塩、またはこれらの混合物を含み得る。例示的ポリオールは、分子量が、約６００ｋＤ未満である（例えば、１２０～４００ｋＤの範囲にある）ポリオール、例えば、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、エリスリトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、グリセロール、ラクチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イノシトール、またはこれらの混合物を含む。

【0202】

糖または炭水化物である浸透圧調節剤は、単糖、二糖、および多糖、またはこれらの混合物を含む。一部の態様では、糖または炭水化物は、果糖、グルコース、マンノース、スクロース、ソルボース、キシロース、ラクトース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、水溶性グルカン、およびこれらの混合物からなる群から選択される。

【0203】

一部の態様では、浸透圧調節剤は、還元糖もしくは非還元糖、またはこれらの混合物の群から選択される糖を含む。一部の態様では、浸透圧調節剤または等張剤は、好ましくは、スクロース、トレハロース、またはこれらの混合物からなる群から選択される、非還元糖、糖である糖を含む。一部の具体的な態様では、非還元糖は、スクロースである。

【0204】

一部の態様では、スクロースである浸透圧調節剤は、約１００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約２００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約３００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約４００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約５００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約６００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約７００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約８００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約９００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約２００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約３００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約４００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約５００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約６００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約７００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約８００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約３００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約４００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約５００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約６００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約７００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約４００ｍＭ～約７００ｍＭスクロース、約５００ｍＭ～約７００ｍＭスクロース、約６００ｍＭ～約７００ｍＭスクロース、または約５００ｍＭ～約６００ｍＭスクロースの量で存在する。

【0205】

一部の態様では、スクロースである浸透圧調節剤は、約１００ｍＭスクロース、約１５０ｍＭスクロース、約２００ｍＭスクロース、約２５０ｍＭスクロース、約３００ｍＭスクロース、約３５０ｍＭスクロース、約４００ｍＭスクロース、約４５０ｍＭスクロース、約５００ｍＭスクロース、約５５０ｍＭスクロース、約６００ｍＭスクロース、約６５０ｍＭスクロース、約７００ｍＭスクロース、約７５０ｍＭスクロース、約８００ｍＭスクロース、約８５０ｍＭスクロース、約９００ｍＭスクロース、約９５０ｍＭスクロース、または約１Ｍスクロースの量で存在する。

【0206】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約１ｍｇ／ｍｌ～約４０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で存在する。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、または約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一部の態様では、本明細書で開示される医薬製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートの濃度は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターによる測定に基づく。

【0207】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約１ｍｇ／ｍｌ～５ｍｇ／ｍｌの間、約５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌの間、約１０ｍｇ／ｍｌ～約１５ｍｇ／ｍｌの間、約１５ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの間、約２０ｍｇ／ｍｌ～約２５ｍｇ／ｍｌの間、約２５ｍｇ／ｍｌ～約３０ｍｇ／ｍｌの間、約３０ｍｇ／ｍｌ～約３５ｍｇ／ｍｌの間、または約３５ｍｇ／ｍｌ～約４０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で存在する。

【0208】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１１ｍｇ／ｍｌ、約１２ｍｇ／ｍｌ、約１３ｍｇ／ｍｌ、約１４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１８ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ／ｍｌ、約２３ｍｇ／ｍｌ、約２４ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２７ｍｇ／ｍｌ、約２８ｍｇ／ｍｌ、約２９ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３１ｍｇ／ｍｌ、約３２ｍｇ／ｍｌ、約３３ｍｇ／ｍｌ、約３４ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約３６ｍｇ／ｍｌ、約３７ｍｇ／ｍｌ、約３８ｍｇ／ｍｌ、約３９ｍｇ／ｍｌ、または約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

【0209】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の濃度は、当技術分野で公知の方法、または本明細書の実施例節において開示される具体的方法に従い決定される。

【0210】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される製剤中に、用量当たり約１ｍｇ～約４０ｍｇの間の量で存在する。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される製剤中に、用量当たり約１ｍｇ～約５ｍｇの間の量、用量当たり約１ｍｇ～約１０ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約１５ｍｇの間、用量当たり約１ｍｇ～約２０ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約２５ｍｇの間、用量当たり約１ｍｇ～約３０ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約３５ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約４０ｍｇの間で存在する。一部の態様では、用量は、フラット用量である。一部の態様では、本明細書で開示される医薬製剤中の、ＦＧＦ－２１コンジュゲートの量は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターによる測定に基づく。

【0211】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される製剤中に、用量当たり約１ｍｇ～約２１ｍｇの間の量、用量当たり約１ｍｇ～約２２ｍｇの間、用量当たり約１ｍｇ～約２３ｍｇの間、用量当たり約１ｍｇ～約２４ｍｇの間、用量当たり約１ｍｇ～約２５ｍｇの間、用量当たり約１ｍｇ～約２６ｍｇの間、用量当たり約１ｍｇ～約２７ｍｇの間、用量当たり約１ｍｇ～約２８ｍｇの間、用量当たり約１ｍｇ～約２９ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約３０ｍｇの間で存在する。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される製剤中に、用量当たり４０ｍｇを超える高量で存在する。一部の態様では、用量は、フラット用量である。

【0212】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される製剤中に、用量当たり約１ｍｇ、用量当たり約２ｍｇ、用量当たり約３ｍｇ、用量当たり約４ｍｇ、用量当たり約５ｍｇ、用量当たり約６ｍｇ、用量当たり約７ｍｇ、用量当たり約８ｍｇ、用量当たり約９ｍｇ、用量当たり約１０ｍｇ、用量当たり約１１ｍｇ、用量当たり約１２ｍｇ、用量当たり約１３ｍｇ、用量当たり約１４ｍｇ、用量当たり約１５ｍｇ、用量当たり約１６ｍｇ、用量当たり約１７ｍｇ、用量当たり約１８ｍｇ、用量当たり約１９ｍｇ、用量当たり約２０ｍｇ、用量当たり約２１ｍｇ、用量当たり約２２ｍｇ、用量当たり約２３ｍｇ、用量当たり約２４ｍｇ、用量当たり約２５ｍｇ、用量当たり約２６ｍｇ、用量当たり約２７ｍｇ、用量当たり約２８ｍｇ、用量当たり約２９ｍｇ、用量当たり約３０ｍｇ、用量当たり約３１ｍｇ、用量当たり約３２ｍｇ、用量当たり約３３ｍｇ、用量当たり約３４ｍｇ、用量当たり約３５ｍｇ、用量当たり約３６ｍｇ、用量当たり約３７ｍｇ、用量当たり約３８ｍｇ、用量当たり約３９ｍｇ、または用量当たり約４０ｍｇの量で存在する。具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される製剤中に、用量当たり約１０ｍｇの量で存在する。具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される製剤中に、用量当たり約２０ｍｇの量で存在する。一部の態様では、用量は、フラット用量である。

【0213】

一部の態様では、医薬製剤は、皮下投与のために製剤化される。下記で論じられる通り、本明細書で開示される他の医薬製剤は、他の経路を介して投与され得る。一部の態様では、医薬製剤は、例えば、安全シリンジによる皮下投与のために製剤化される。一部の態様では、製剤は、毎日投与または毎週投与、例えば、１、２、３、４、５、６日間ごと、毎週、または隔週の投与のために製剤化される。一部の態様では、製剤は、水性製剤である。

【0214】

一部の態様では、本開示は、（ｉ）本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）約１０ｍＭ～約５０ｍＭの間の濃度のヒスチジン；（ｉｉｉ）約１００ｍＭ～約１Ｍの間の濃度のスクロース；（ｉｖ）約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および（ｖ）約１０μＭ～約１００μＭの間の濃度のＤＴＰＡを含む医薬製剤であって、製剤のｐＨが、約６．７～約７．５の間である、医薬製剤を提供する。

【0215】

一部の態様では、本開示は、（ｉ）本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）約１０ｍＭ～約５０ｍＭの間の濃度のヒスチジン；（ｉｉｉ）約１００ｍＭ～約１Ｍの間の濃度のスクロース；（ｉｖ）約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および（ｖ）約１０μＭ～約１００μＭの間の濃度のＤＴＰＡを含む医薬製剤であって、製剤のｐＨが、約６．７～約７．５の間である、医薬製剤を提供する。

【0216】

また、（ｉ）本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｖ）約５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含む医薬製剤であって、ｐＨが、約７．１である、医薬製剤も提供される。

【0217】

また、（ｉ）本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｖ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｖ）５０μＭの濃度のＤＴＰＡを含む医薬製剤であって、ｐＨが、７．１である、医薬製剤も提供される。

【0218】

また、（ｉ）本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；および（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロースを含む医薬製剤であって、ｐＨが、約７．０である、医薬製剤も提供される。

【0219】

また、（ｉ）本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；および（ｉｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロースを含む医薬製剤であって、ｐＨが、７．０である、医薬製剤も提供される。

【0220】

一部の具体的な態様では、本開示は、（ｉ）約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを含む医薬製剤であって、ｐＨが、約７．１である、医薬製剤を提供する。一部の態様では、本明細書で開示される医薬製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートの濃度は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターにより測定される。

【0221】

また、（ｉ）約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを含む医薬製剤であって、ｐＨが、約７．１である、医薬製剤も提供される。一部の態様では、本明細書で開示される医薬製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートの濃度は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターにより測定される。

【0222】

また、（ｉ）１０ｍｇ／ｍＬの濃度の本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｖ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｖ）５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを含む医薬製剤であって、ｐＨが、７．１である、医薬製剤も提供される。

【0223】

また、（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの濃度の本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｖ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｖ）５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを含む医薬製剤であって、ｐＨが、７．１である、医薬製剤も提供される。

【0224】

本開示はまた、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤の安定性を改善する方法のうちのいずれかに従い調製される医薬製剤も提供する。

【0225】

具体的な態様では、本開示は、配列番号４または６のＦＧＦ－２１コンジュゲートを、２０ｍＭヒスチジン、６００ｍＭスクロース、５０ｕＭ ＤＴＰＡ、および０．０５％ＰＳ８０、ｐＨ７．１中に、２０ｇ／Ｌの濃度で含む医薬製剤を提供する。具体的な態様では、本開示は、配列番号４または６のＦＧＦ－２１コンジュゲートを、２０ｍＭヒスチジン、６００ｍＭスクロース、５０ｕＭ ＤＴＰＡ、および０．０５％ＰＳ８０（ｗ／ｖ）、ｐＨ７．１中に、１０ｇ／Ｌの濃度で含む医薬製剤を提供する。一部の態様では、本明細書で開示される医薬製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートの濃度は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターにより測定される。

【0226】

一部の態様では、製剤は、凍結されている。一部の態様では、製剤は、バッグ内、例えば、クラムシェル型バッグ内に保管される。一部の態様では、バッグ、例えば、クラムシェル型バッグは、６Ｌ～１２Ｌの間の容量を有する。

【0227】

一部の態様では、製剤は、バイアル内に含有される。一部の態様では、製剤は、シリンジ内に含有される。一部の態様では、シリンジは、安全シリンジである。一部の態様では、シリンジは、予め充填可能なシリンジである。一部の態様では、シリンジは、ＢＤ ＮＥＯＰＡＫ（商標）予め充填可能なシリンジである。一部の態様では、製剤は、自己注射デバイス内に含有される。

【0228】

一部の態様では、シリンジ（例えば、予め充填可能なシリンジ）または自己注射デバイスは、配列番号４または６のＦＧＦ－２１コンジュゲートを、２０ｍＭヒスチジン、６００ｍＭスクロース、５０ｕＭ ＤＴＰＡ、および０．０５％ＰＳ８０（ｗ／ｖ）、ｐＨ７．１中に、１０ｇ／Ｌの濃度で含む、１ｍＬの医薬製剤を含む。一部の態様では、シリンジ（例えば、予め充填可能なシリンジ）または自己注射デバイスは、配列番号４または６のＦＧＦ－２１コンジュゲートを、２０ｍＭヒスチジン、６００ｍＭスクロース、５０ｕＭ ＤＴＰＡ、および０．０５％ＰＳ８０、ｐＨ７．１中に、２０ｇ／Ｌの濃度で含む、１ｍＬの医薬製剤を含む。一部の態様では、本明細書で開示される医薬製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートの濃度は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターにより測定される。
ＩＩ．製造法

【0229】

本開示はまた、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤の安定性を改善または増強する方法であって、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡを混合する工程を含み、製剤が、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤を含有しない参照製剤と比較して、安定性を改善している、方法も提供する。これらの安定化法は、（ｉ）アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤の、製剤への混合、（ｉｉ）ポリソルベートである界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０の混合、（ｉｉｉ）製剤のｐＨの、約７．１への調整、または（ｉｖ）これらの任意の組合せを含む。

【0230】

一部の態様では、本明細書で記載される医薬製剤は、（ｉ）約１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）約２０ｍＭの最終濃度を達成する量のヒスチジン；（ｉｉｉ）約６００ｍＭの最終濃度を達成する量のスクロース；（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量のポリソルベート８０；および（ｖ）約５０ｕＭの最終濃度を達成する量のＤＴＰＡ；を混合し、ｐＨを、約７．１に調整するプロセスにより作られる。

【0231】

一部の態様では、本明細書で記載される医薬製剤は、（ｉ）約２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）約２０ｍＭの最終濃度を達成する量のヒスチジン；（ｉｉｉ）約６００ｍＭの最終濃度を達成する量のスクロース；（ｉｖ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量のポリソルベート８０；および（ｖ）約５０ｕＭの最終濃度を達成する量のＤＴＰＡ；を混合し、ｐＨを、約７．１に調整するプロセスにより作られる。

【0232】

一部の態様では、本明細書で記載される医薬製剤は、（ｉ）１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）２０ｍＭの最終濃度を達成する量のヒスチジン；（ｉｉｉ）６００ｍＭの最終濃度を達成する量のスクロース；（ｉｖ）０．０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量のポリソルベート８０；および（ｖ）５０ｕＭの最終濃度を達成する量のＤＴＰＡ；を混合し、ｐＨを、７．１に調整するプロセスにより作られる。

【0233】

一部の態様では、本明細書で記載される医薬製剤は、（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を達成する量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２もしくは５または配列番号４もしくは６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１；（ｉｉ）２０ｍＭの最終濃度を達成する量のヒスチジン；（ｉｉｉ）６００ｍＭの最終濃度を達成する量のスクロース；（ｉｖ）０．０５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を達成する量のポリソルベート８０；および（ｖ）５０ｕＭの最終濃度を達成する量のＤＴＰＡ；を混合し、ｐＨを、７．１に調整するプロセスにより作られる。

【0234】

本明細書で使用される、「混合すること」という用語は、当技術分野で公知の任意の手段により、開示される濃度に到達するように、あらかじめ定められていない順序で、本明細書で開示される製剤の成分を組み合わせることを指す。例えば、本明細書で開示される医薬製剤中の賦形剤は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む溶液へと、逐次的に添加される場合もあり、同時に添加される場合もある。代替的に、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む濃縮溶液が、製剤中の賦形剤の全部または一部を含む溶液へと添加される場合もある。他の態様では、賦形剤は、例えば、透析または濾過を使用して、製剤へと組み込まれ得る。

【0235】

一部の態様では、開示される方法の適用から得られる安定性の改善は、例えば、（ｉ）参照製剤に照らした、物理的安定性の増大、（ｉｉ）参照製剤に照らした、化学的安定性の増大、または（ｉｉｉ）これらの組合せを含む。

【0236】

一部の態様では、物理的安定性の増大は、（ｉ）ＦＧＦ－２１ポリペプチド凝集の防止もしくは減少、（ｉｉ）ＦＧＦ－２１ポリペプチド断片化の防止もしくは減少、または（ｉｉｉ）これらの組合せを含む。

【0237】

一部の態様では、本明細書で開示される医薬組成物中で観察される、ＦＧＦ－２１ポリペプチド凝集は、参照製剤中で観察されるＦＧＦ－２１ポリペプチド凝集の、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、または約１０％である。

【0238】

一部の態様では、本明細書で開示される医薬組成物中で観察される、ＦＧＦ－２１ポリペプチド凝集は、参照製剤中で観察されるＦＧＦ－２１ポリペプチド凝集の、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、または１０％未満である。

【0239】

一部の態様では、本明細書で開示される医薬組成物中で観察される、ＦＧＦ－２１ポリペプチド断片化は、参照製剤中で観察されるＦＧＦ－２１ポリペプチド断片化の、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、または約１０％である。

【0240】

一部の態様では、本明細書で開示される医薬組成物中で観察される、ＦＧＦ－２１ポリペプチド断片化は、参照製剤中で観察されるＦＧＦ－２１ポリペプチド断片化の、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、または１０％未満である。

【0241】

一部の態様では、化学的安定性の増大は、（ｉ）ＦＧＦ－２１ポリペプチドの脱アミド化の防止もしくは減少、（ｉｉ）ＦＧＦ－２１ポリペプチドの酸化の防止もしくは減少、または（ｉｉｉ）これらの組合せを含む。一部の態様では、本明細書で開示される医薬組成物中で観察される、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの脱アミド化は、参照製剤中で観察されるＦＧＦ－２１ポリペプチドの脱アミド化の、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、または約１０％である。

【0242】

一部の態様では、本明細書で開示される医薬組成物中で観察される、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの脱アミド化は、参照製剤中で観察されるＦＧＦ－２１ポリペプチドの脱アミド化の、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、または１０％未満である。

【0243】

一部の態様では、本明細書で開示される医薬組成物中で観察される、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの酸化は、参照製剤中で観察されるＦＧＦ－２１ポリペプチドの酸化の、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、または約１０％である。

【0244】

一部の態様では、本明細書で開示される医薬組成物中で観察される、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの酸化は、参照製剤中で観察されるＦＧＦ－２ポリペプチドの酸化の、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、または１０％未満である。

【0245】

一部の態様では、本明細書で開示される製剤を安定化する（安定性を改善または増強する）方法は、分解レベルだけでなく、また、分解速度も低下させ得る：例えば、開示される方法は、参照製剤に照らして、ポリペプチドの脱アミド化率を低下させることもでき、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの酸化を低下させることもでき、ＦＧＦ－２１ポリペプチドの凝集を低下させることもでき、ＦＧＦ－２１ポリペプチドのタンパク質分解を低下させることもでき、これらの任意の組合せも可能である。

【0246】

例えば、ＤＴＰＡなど、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤の、本明細書で開示される医薬製剤への混合は、ある特定の温度で、ある特定の期間にわたり保管された場合における、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0247】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、医薬製剤が、例えば、約２５℃、約３０℃、約３５℃、約４０℃、または約４５℃で保管された場合における、ＦＧＦ－２１コンジュゲートの脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0248】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、医薬製剤が、２５℃を上回るか、３０℃を上回るか、３５℃を上回るか、約４０℃であるか、または約４５℃である温度で保管された場合における、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0249】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）は、医薬製剤が、約２０℃～約２５℃、約２５℃～約３０℃、約３０℃～約３５℃、または約４０℃～約４５℃の間で保管された場合における、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0250】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、医薬製剤が、上記で開示された温度または温度範囲で、約１週間、約２週間、約３週間、約１カ月間、約２カ月間、約３カ月間、または約４カ月間にわたり保管された場合における、ＦＧＦ－２１コンジュゲートの脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0251】

具体的な態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、医薬製剤が、４０℃で、約１カ月間にわたり保管された場合における、ＦＧＦ－２１コンジュゲートの脱アミド化率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0252】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、医薬製剤が、約２５℃、約３０℃、約３５℃、約４０℃、または約４５℃で保管された場合における、ＦＧＦ－２１コンジュゲートの高分子量（ＨＭＷ）凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0253】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、医薬製剤が、２５℃を上回るか、３０℃を上回るか、３５℃を上回るか、約４０℃であるか、または約４５℃である温度で保管された場合における、ＦＧＦ－２１コンジュゲートのＨＭＷ凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0254】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、医薬製剤が、約２０℃～約２５℃、約２５℃～約３０℃、約３０℃～約３５℃、または約４０℃～約４５℃の間の温度で保管された場合における、ＦＧＦ－２１コンジュゲートのＨＭＷ凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0255】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、医薬製剤が、上記で開示された温度または温度範囲で、約１週間、約２週間、約３週間、約１カ月間、約２カ月間、約３カ月間、または約４カ月間にわたり保管された場合における、ＦＧＦ－２１コンジュゲートの、ＨＭＷ凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0256】

具体的な態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、医薬製剤が、４０℃で、約１カ月間にわたり保管された場合における、ＦＧＦ－２１コンジュゲートの、ＨＭＷ凝集率を、参照製剤に照らして低下させ得る。

【0257】

一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、ＦＧＦ－２１コンジュゲート内の、１つまたは複数のメチオニンの酸化を防止または緩和し得る。

【0258】

特定の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤（例えば、ＤＴＰＡ）の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤への混合は、配列番号３（野生型ＦＧＦ－２１）のアミノ酸１および／もしくはアミノ酸１６９、または配列番号１、２、４、もしくは本開示に従う、他の任意のＦＧＦ－２１コンジュゲートにおける、対応するアミノ酸）の酸化を、例えば、２５℃および／または４０℃において、防止または緩和し得る。

【0259】

開示される方法は、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤であるＤＴＰＡを使用し得る。しかし、他の一部の態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤は、例えば、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＤＯＴＡ、チウキセタンなどのＤＴＰＡ類縁化合物、または当技術分野で公知の、ＤＴＰＡおよびＥＤＴＡと類縁である、任意のキレート剤、例えば、ＤＴＰＡ．ＢＭＡおよびＥＤＴＡ．ＢＭＡなど、別のアミノポリカルボン酸カチオンキレート剤であり得る。

【0260】

一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ～約１００μＭの間、１５μＭ～約９５μＭの間、約２０μＭ～約９０μＭの間、約２５μＭ～約８５μＭの間、約３０μＭ～約８０μＭの間、約３５μＭ～約７５μＭの間、約４０μＭ～約７０μＭの間、約４５μＭ～約６５μＭの間、約５０μＭ～約６０μＭの間、約２５μＭ～約７５μＭの間、約４０μＭ～約６０μＭの間、約３０μＭ～約７０μＭの間、または約４０μＭ～約７５μＭの間の量で混合され得る。

【0261】

一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、約１０μＭ、約１５μＭ、約２０μＭ、約２５μＭ、約３０μＭ、約３５μＭ、約４０μＭ、約４５μＭ、約５０μＭ、約５５μＭ、約６０μＭ、約６５μＭ、約７０μＭ、約７５μＭ、約８０μＭ、約８５μＭ、約９０μＭ、約９５μＭ、または約１００μＭの量で混合され得る。

【0262】

一部の態様では、ＤＴＰＡカチオンキレート剤は、少なくとも約１５μＭ、少なくとも約２０μＭ、少なくとも約２５μＭ、少なくとも約３０μＭ、少なくとも約３５μＭ、少なくとも約４０μＭ、少なくとも約４５μＭ、少なくとも約５０μＭ、少なくとも約５５μＭ、少なくとも約６０μＭ、少なくとも約６５μＭ、少なくとも約７０μＭ、または少なくとも約７５μＭの量で混合され得る。

【0263】

具体的な態様では、アミノポリカルボン酸カチオンキレート剤、例えば、ＤＴＰＡは、５０μＭの量で混合される。

【0264】

本明細書で開示される方法についての、一部の態様では、製剤のｐＨは、約６．５を上回るか、約６．６を上回るか、約６．７を上回るか、約６．８を上回るか、約６．９を上回るか、約７．０を上回るか、約７．１を上回るか、約７．２を上回るか、約７．３を上回るか、約７．４を上回るか、または約７．５を上回るｐＨへと調整される。

【0265】

一部の態様では、製剤のｐＨは、６．５を上回るか、６．６を上回るか、６．７を上回るか、６．８を上回るか、６．９を上回るか、７．０を上回るか、７．１を上回るか、７．２を上回るか、７．３を上回るか、７．４を上回るか、または７．５を上回るｐＨへと調整される。

【0266】

一部の態様では、製剤のｐＨは、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、または７．５のｐＨへと調整される。

【0267】

一部の態様では、製剤のｐＨは、約６．５～約７．５の間、約６．６～約７．５、約６．７～約７．５、約６．８～約７．５、約６．９～約７．５、約７．０～約７．５、約７．１～約７．５、約７．２～約７．５、約７．３～約７．５、約７．４～約７．５、約６．５～約７．４、約６．５～約７．３、約６．５～約７．２、約６．５～約７．１、約６．５～約７．０、約６．５～約６．９、約６．５～約６．８、約６．５～約６．７、約６．６～約７．４、約６．７～約７．４、約６．８～約７．４、約６．９～約７．４、約７．０～約７．４、約７．１～約７．４、約７．２～約７．４、約７．３～約７．４、約６．５～約７．３、約６．６～約７．３、約６．７～約７．３、約６．７～約７．３、約６．８～約７．３、約６．９～約７．３、約７．０～約７．３、約７．１～約７．３、約７．２～約７．３、約６．５～約７．２、約６．６～約７．２、約６．７～約７．２、約６．８～約７．２、約６．９～約７．２、約７．０～約７．２、約７．１～約７．２、約６．９～約７．１、または約７．０～約７．１のｐＨへと調整される。

【0268】

一部の態様では、製剤のｐＨは、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、または約７．５のｐＨへと調整される。一部の態様では、医薬製剤は、ｐＨを調整した後で、ｐＨが６．５である参照製剤より安定である。

【0269】

一部の態様では、製剤のｐＨは、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、または７．５のｐＨへと調整される。一部の態様では、医薬製剤は、ｐＨを調整した後で、ｐＨが６．５である参照製剤より安定である。

【0270】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤の安定性を改善する方法は、界面活性剤を混合する工程をさらに含む。一部の態様では、混合される界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、すなわち、中性溶液中で、正味の電荷を有さない傾向がある界面活性剤である。一部の態様では、混合非アニオン性界面活性剤は、ポリソルベートである。一部の態様では、非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの場合、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｍｌの量である、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を上回る量で混合される。Wan and Lee, Journal of Pharm Sci, 63, p.136, 1974を参照されたい。本方法についての一部の態様では、ポリソルベートは、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）である。

【0271】

一部の態様では、ＰＳ８０である界面活性剤は、約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０３％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０５％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０６％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０７％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０８％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０９％～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０３％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０５％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０６％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０７％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０８％～約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０３％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０５％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０６％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０７％～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０４％～約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０５％～約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０６％～約０．０７％（ｗ／ｖ）、または約０．０５％～約０．０６％（ｗ／ｖ）の量で、医薬製剤へと混合される。

【0272】

一部の態様では、ポリソルベート８０である界面活性剤は、少なくとも約０．０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも約０．０９％（ｗ／ｖ）、または少なくとも約０．１％（ｗ／ｖ）の量で混合される。一部の態様では、界面活性剤、例えば、ＰＳ８０は、例えば、製剤が、撹拌された（例えば、シェーカー上で）場合の、微粒子の形成および／または気泡の形成を緩和または防止するのに十分な量で混合される。

【0273】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤の安定性を改善する方法は、アミノ酸緩衝剤、例えば、ヒスチジン（すなわち、Ｌ－ヒスチジン、Ｄ－ヒスチジン、溶媒和ヒスチジン、水和ヒスチジン、無水ヒスチジン、またはこれらの混合物）を混合する工程をさらに含む。

【0274】

一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約８０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約８５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約９０ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約９５ｍＭ～約１００ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約８０ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約８５ｍＭ～約９０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約７０ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約７５ｍＭ～約８０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約５５ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約６０ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約６５ｍＭ～約７０ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭ～約３０ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭ～約２５ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭ～約６０ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭ～約６０ｍＭヒスチジン、約５０ｍＭ～約６０ｍＭヒスチジン、約１５．５ｍＭ～約２４．５ｍＭヒスチジン、約１６ｍＭ～約２４ｍＭヒスチジン、約１６．５ｍＭ～約２３．５ｍＭヒスチジン、約１７ｍＭ～約２３ｍＭヒスチジン、約１７．５ｍＭ～約２２．５ｍＭヒスチジン、約１８ｍＭ～約２２ｍＭヒスチジン、約１８．５ｍＭ～約２１．５ｍＭヒスチジン、約１９ｍＭ～約２１ｍＭヒスチジン、または約１９．５ｍＭ～約２０．５ｍＭヒスチジンの量で混合される。

【0275】

一部の態様では、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭヒスチジン、約１１ｍＭヒスチジン、約１２ｍＭヒスチジン、約１３ｍＭヒスチジン、約１４ｍＭヒスチジン、約１５ｍＭヒスチジン、約１６ｍＭヒスチジン、約１７ｍＭヒスチジン、約１８ｍＭヒスチジン、約１９ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジン、約２１ｍＭヒスチジン、約２２ｍＭヒスチジン、約２３ｍＭヒスチジン、約２４ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約２６ｍＭヒスチジン、約２７ｍＭヒスチジン、約２８ｍＭヒスチジン、約２９ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約３１ｍＭヒスチジン、約３２ｍＭヒスチジン、約３３ｍＭヒスチジン、約３４ｍＭヒスチジン、約３５ｍＭヒスチジン、約３６ｍＭヒスチジン、約３７ｍＭヒスチジン、約３８ｍＭヒスチジン、約３９ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約４１ｍＭヒスチジン、約４２ｍＭヒスチジン、約４３ｍＭヒスチジン、約４４ｍＭヒスチジン、約４５ｍＭヒスチジン、約４６ｍＭヒスチジン、約４７ｍＭヒスチジン、約４８ｍＭヒスチジン、約４９ｍＭヒスチジン、または約５０ｍＭヒスチジンの量で混合される。

【0276】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤の安定性を改善する方法は、浸透圧調節剤（等張剤）を混合する工程をさらに含む。本開示に従い、浸透圧調節剤（等張剤）は、ポリオール、糖、炭水化物、塩化ナトリウムなどの塩、またはこれらの混合物を含み得る。例示的ポリオールは、分子量が、約６００ｋＤ未満である（例えば、１２０～４００ｋＤの範囲にある）ポリオール、例えば、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、エリスリトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、グリセロール、ラクチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イノシトール、またはこれらの混合物を含む。糖または炭水化物である浸透圧調節剤は、単糖、二糖、および多糖、またはこれらの混合物を含む。

【0277】

一部の態様では、糖または炭水化物は、果糖、グルコース、マンノース、スクロース、ソルボース、キシロース、ラクトース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、水溶性グルカン、およびこれらの混合物からなる群から選択される。一部の態様では、浸透圧調節剤は、還元糖もしくは非還元糖、またはこれらの混合物の群から選択される糖を含む。一部の態様では、浸透圧調節剤または等張剤は、好ましくは、スクロース、トレハロース、またはこれらの混合物からなる群から選択される、非還元糖である糖を含む。一部の具体的な態様では、非還元糖は、スクロースである。

【0278】

一部の態様では、スクロースである浸透圧調節剤は、約１００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約２００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約３００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約４００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約５００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約６００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約７００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約８００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約９００ｍＭ～約１Ｍスクロース、約２００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約３００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約４００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約５００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約６００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約７００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約８００ｍＭ～約９００ｍＭスクロース、約３００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約４００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約５００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約６００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約７００ｍＭ～約８００ｍＭスクロース、約４００ｍＭ～約７００ｍＭスクロース、約５００ｍＭ～約７００ｍＭスクロース、約６００ｍＭ～約７００ｍＭスクロース、または約５００ｍＭ～約６００ｍＭスクロースの量で混合される。

【0279】

一部の態様では、スクロースである浸透圧調節剤は、約１００ｍＭスクロース、約１５０ｍＭスクロース、約２００ｍＭスクロース、約２５０ｍＭスクロース、約３００ｍＭスクロース、約３５０ｍＭスクロース、約４００ｍＭスクロース、約４５０ｍＭスクロース、約５００ｍＭスクロース、約５５０ｍＭスクロース、約６００ｍＭスクロース、約６５０ｍＭスクロース、約７００ｍＭスクロース、約７５０ｍＭスクロース、約８００ｍＭスクロース、約８５０ｍＭスクロース、約９００ｍＭスクロース、約９５０ｍＭスクロース、または約１Ｍスクロースの量で混合される。

【0280】

一部の態様では、本明細書で開示される方法において有用なＦＧＦ－２１コンジュゲートは、配列番号３のアミノ酸配列（野生型ヒトＦＧＦ－２１）に対する、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するＦＧＦ－２１ポリペプチドを含み、この場合、ＦＧＦ－２１ポリペプチドは、ＦＧＦ－２１活性を有する。

【0281】

一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、配列番号２のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１、すなわち、野生型ＦＧＦ－２１のグルタミン１０９（配列番号３）が、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンで置きかえられており、ＰＥＧ部分、例えば、約２８ｋＤａ～約３２ｋＤａの間の分子量、例えば、約３０ｋＤａの直鎖状ＰＥＧが、オキシム連結を介して、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンへと、共有結合的に接合されている、配列番号１のＦＧＦ－２１である。一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲートは、配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１、すなわち、野生型ＦＧＦ－２１のグルタミン１０９（配列番号３）が、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンで置きかえられており、６８１エチレングリコール単位を含むＰＥＧ部分が、オキシム連結を介して、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニンへと、共有結合的に接合されている、配列番号１のＦＧＦ－２１である。

【0282】

本明細書で開示される方法についての、一部の態様では、ＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約１ｍｇ／ｍｌ～約４０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で存在する。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、または約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一部の具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。一部の具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

【0283】

一部の態様では、製剤は、約１ｍＬの、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を、約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。一部の態様では、製剤は、約１ｍＬの、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を、約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。

【0284】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の濃度は、当技術分野で公知の方法、または本明細書の実施例節において開示される具体的方法に従い決定される。

【0285】

本明細書で開示される方法についての、一部の態様では、製剤は、皮下投与のために製剤化される。一部の態様では、製剤は、安全シリンジによる皮下投与のために製剤化される。一部の態様では、製剤は、毎日投与または毎週投与のために製剤化される。一部の態様では、製剤は、水性製剤である。

【0286】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約１０ｍＭ～約５０ｍＭの間の濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約１００ｍＭ～約１Ｍの間の濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約１０μＭ～約１００μＭの間の濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、製剤のｐＨが、約６．７～約７．５の間である、方法を提供する。

【0287】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約１５ｍＭ～約４５ｍＭの間の濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約２００ｍＭ～約９００ｍＭの間の濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０２％～約０．０９％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約２０μＭ～約９０μＭの間の濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、製剤のｐＨが、約６．８～約７．４の間である、方法を提供する。

【0288】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約１５ｍＭ～約４０ｍＭの間の濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約３００ｍＭ～約８００ｍＭの間の濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０３％～約０．０８％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約３０μＭ～約８０μＭの間の濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、製剤のｐＨが、約６．９～約７．３の間である、方法を提供する。

【0289】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約１５ｍＭ～約３０ｍＭの間の濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約４００ｍＭ～約８００ｍＭの間の濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０４％～約０．０７％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約４０μＭ～約７０μＭの間の濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、製剤のｐＨが、約７～約７．２の間である、方法を提供する。

【0290】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約１５ｍＭ～約２５ｍＭの間の濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約５００ｍＭ～約７００ｍＭの間の濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０４％～約０．０６％（ｗ／ｖ）の間の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約４５μＭ～約５５μＭの間の濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、製剤のｐＨが、約７～約７．１の間である、方法を提供する。一部の態様では、本明細書で開示される医薬製剤中のＦＧＦ－２１コンジュゲートの濃度は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターにより測定される。

【0291】

本開示はまた、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約５０μＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、約７．１である、方法も提供する。

【0292】

本開示はまた、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）５０μＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、７．１である、方法も提供する。

【0293】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；および（ｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロースを混合する工程を含み、ｐＨが、約７．０である、方法を提供する。

【0294】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；および（ｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロースを混合する工程を含み、ｐＨが、７．０である、方法を提供する。

【0295】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、約７．１である、方法を提供する。

【0296】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、約７．１である、方法を提供する。

【0297】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、７．１である、方法を提供する。

【0298】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、７．１である、方法を提供する。

【0299】

本開示はまた、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約５０μＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、約７．１である、方法も提供する。

【0300】

本開示はまた、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）５０μＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、７．１である、方法も提供する。

【0301】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；および（ｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロースを混合する工程を含み、ｐＨが、約７．０である、方法を提供する。

【0302】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（例えば、１０ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬの濃度の）を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；および（ｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロースを混合する工程を含み、ｐＨが、７．０である、方法を提供する。

【0303】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、約７．１である、方法を提供する。

【0304】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）約６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）約０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）約５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、約７．１である、方法を提供する。

【0305】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、７．１である、方法を提供する。

【0306】

本開示は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤の安定性を改善する方法であって、（ｉ）２０ｍＭの濃度のヒスチジン；（ｉｉ）６００ｍＭの濃度のスクロース；（ｉｉｉ）０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０；および（ｉｖ）５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを混合する工程を含み、ｐＨが、７．１である、方法を提供する。

【0307】

一部の実施形態では、医薬製剤中に含まれる個々の賦形剤（例えば、ＤＴＰＡ、ＰＳ８０、ヒスチジン、スクロース、またはこれらの組合せ）の濃度は、その製造過程において、医薬製剤へと添加される、個々の賦形剤の、完成医薬製剤の最終容量単位当たりの量（例えば、重量、モル数など）であると決定／計算され得る。他の実施形態では、医薬製剤中に含まれる賦形剤（例えば、ＤＴＰＡ、ＰＳ８０、ヒスチジン、スクロース、またはこれらの組合せ）の濃度は、医薬製剤中の、個々の賦形剤の実際の量に基づく。

【0308】

一部の態様では、本明細書で開示される製造法は、本明細書で開示される製剤、例えば、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約１０ｍｇまたは約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１、２０ｍＭの濃度のヒスチジン、６００ｍＭの濃度のスクロース、０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０、および５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを含む製剤であって、ｐＨが、７．１である、製剤を、容器へと移す工程をさらに含む。一部の態様では、本明細書で開示される製造法は、本明細書で開示される製剤、例えば、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約１０ｍｇまたは約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１、２０ｍＭの濃度のヒスチジン、６００ｍＭの濃度のスクロース、０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート８０、および５０ｕＭの濃度のＤＴＰＡを含む製剤であって、ｐＨが、７．１である、製剤を、容器へと移す工程をさらに含む。一部の態様では、容器は、バイアルである。一部の態様では、容器は、バッグ、例えば、クラムシェル型バッグである。一部の態様では、バッグ、例えば、クラムシェル型バッグは、６Ｌ～１２Ｌの間の容量を有する。一部の態様では、容器は、シリンジである。一部の態様では、シリンジは、安全シリンジである。一部の態様では、シリンジは、予め充填可能なシリンジである。一部の態様では、シリンジは、ＢＤ ＮＥＯＰＡＫ（商標）予め充填可能なシリンジである。一部の態様では、容器は、自己注射デバイスである。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約１０ｍｇまたは約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む、約１ｍＬの製剤を、容器（例えば、バイアル、シリンジ、または自己注射デバイス）内に沈着させる。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、約１０ｍｇまたは約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む、約１ｍＬの製剤を、容器（例えば、バイアル、シリンジ、または自己注射デバイス）内に沈着させる。一部の態様では、容器は、複数の用量、例えば、複数の１ｍＬの用量を含有する。
ＩＩＩ．処置法

【0309】

本開示はまた、それを必要とする対象における線維症および／または糖尿病と関連する疾患または状態を処置または防止する方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含む方法も提供する。

【0310】

一部の態様では、疾患または状態は、糖尿病、例えば、２型糖尿病である。一部の態様では、疾患または状態は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。

【0311】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される処置または防止法において、用量当たり約１ｍｇ～約４０ｍｇの間の量（例えば、１ｍＬの用量またはその倍数用量）で使用され得る。一部の態様では、用量に対するＦＧＦ－２１コンジュゲートの量は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターによる測定に基づく。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される処置または防止法において、用量当たり約１ｍｇ～約５ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約１０ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約１５ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約２０ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約２５ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約３０ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約３５ｍｇの間、または用量当たり約１ｍｇ～約４０ｍｇの間の量（例えば、１ｍＬの用量またはその倍数用量）で使用され得る。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される処置または防止法において、用量当たり４０ｍｇを超える高量（例えば、１ｍＬの用量またはその倍数用量）で使用され得る。一部の態様では、用量は、フラット用量である。

【0312】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される処置または防止法において、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、または用量当たり約４０ｍｇの量で使用され得る。具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される処置または防止法において、用量当たり約１０ｍｇの量（例えば、１ｍＬの用量またはその倍数用量）で使用され得る。具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１は、本明細書で開示される処置または防止法において、用量当たり約２０ｍｇの量（例えば、１ｍＬの用量またはその倍数用量）で使用され得る。一部の態様では、用量は、フラット用量である。

【0313】

一部の態様では、医薬製剤は、例えば、安全シリンジまたは自己注射器を使用して、皮下投与される。一部の態様では、医薬製剤は、毎日または毎週投与される。

【0314】

一部の態様では、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤の、対象への投与は、肝硬度を減少させるか、体脂肪率を減少させるか、体重を減少させるか、肝重量対体重比を減少させるか、肝脂質含量を減少させるか、肝線維症面積を減少させるか、空腹時血中グルコースレベルを低下させるか、空腹時トリグリセリドレベルを低下させるか、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させるか、ＡｐｏＢレベルを低下させるか、ＡｐｏＣレベルを低下させるか、ＨＤＬコレステロールを増大させるか、またはこれらの任意の組合せである。

【0315】

一部の態様では、本明細書で開示される処置法に従う、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤の、対象への投与は、非処置対象、または医薬製剤の投与前における対象におけるレベルと比較して、（ｉ）肝脂肪レベルの低減；（ｉｉ）肝損傷レベルの低減；（ｉｉｉ）線維症レベルの低減；（ｉｖ）線維症のバイオメーカーである、血清Ｐｒｏ－Ｃ３（Ｎ末端ＩＩＩ型コラーゲンプロペプチド）レベルの低下；（ｖ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルの低下；（ｖｉ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルの低下；（ｖｉｉ）血清アジポネクチンレベルの上昇；（ｖｉｉｉ）血漿ＬＤＬレベルの低下；（ｉｘ）血漿ＨＤＬレベルの上昇；（ｘ）血漿トリグリセリドレベルの低下；（ｘｉ）肝硬度レベルの低減；または（ｘｉｉ）これらの任意の組合せを結果としてもたらす。

【0316】

本開示は、線維症と関連する疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含む方法を提供する。

【0317】

一部の態様では、線維症と関連する疾患は、膵臓、肺、心臓、腎臓、肝臓、眼、神経系、骨髄、リンパ節、心内膜、および／または後腹膜などの臓器または組織に影響を及ぼし得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、肝線維症または肝硬変前期であり得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、びまん性実質性肺疾患、嚢胞性線維症、肺線維症、進行性塊状線維症、特発性肺線維症、注射部位線維症、腎線維症、慢性腎疾患、糖尿病性腎疾患、巣状分節状糸球体硬化症、膜性腎症、ＩｇＡ腎症、筋線維症、心不全、急性心不全、慢性心不全、代謝性心不全、心線維症、白内障性線維症、白内障、眼瘢痕化、膵線維症、皮膚線維症、腸線維症、腸狭窄、心内膜心筋線維症、心房線維症、縦隔線維症、クローン病、後腹膜線維症、ケロイド、腎原性全身性線維症、強皮症、全身性硬化症、関節線維症、ペイロニー症候群、デュピュイトラン拘縮、糖尿病性神経障害、癒着性関節包炎、アルコール性肝疾患、脂肪肝、ウイルス性肝炎、胆管疾患、原発性ヘモクロマトーシス、薬物関連肝硬変、特発性肝硬変、ウィルソン病、およびアルファ１アンチトリプシン欠損症、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、ヒト線維性肺疾患、肝線維症、黄斑変性、腎性網膜症、硝子体網膜症、心筋線維症、グレーブス眼症、薬物誘導性エルゴチン中毒、心血管疾患、アテローム性動脈硬化／再狭窄、肥厚性瘢痕、原発性筋線維症または特発性筋線維症、および炎症性腸疾患（コラーゲン性大腸炎を含むがこれらに限定されない）から選択され得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、肺疾患、肺がん、薬物療法、化学療法、または放射線療法のうちの１つまたは複数から生じる。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、老齢、心臓発作、脳卒中、心筋損傷、または左心室機能不全のうちの１つまたは複数から生じる。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、腎線維症、糸球体腎炎、慢性腎疾患、慢性腎不全、および全身性エリテマトーデス、がん、物理的閉塞、毒素、代謝性疾患、免疫疾患、または糖尿病性腎症と関連する腎炎から選択され得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、外傷、脊髄損傷、感染、手術、虚血性損傷、心臓発作、火傷、環境汚染物質への曝露、肺炎、結核、または急性呼吸器逼迫症候群のうちの１つまたは複数から生じる。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、肺線維症、間質性肺疾患、ヒト線維性肺疾患、特発性肺線維症、肝線維症、心線維症、心筋線維症、黄斑変性、腎性網膜症、硝子体網膜症、グレーブス眼症、薬物誘導性エルゴチン中毒、心血管疾患、アテローム性動脈硬化／再狭窄、ケロイドおよび肥厚性瘢痕、原発性筋線維症または特発性筋線維症、炎症性腸疾患、コラーゲン性大腸炎、眼瘢痕化および白内障性線維症から選択され得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、ＮＡＳＨ、肝線維症、および肝硬変から選択され得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、ＮＡＳＨであり得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、糖尿病性腎臓疾患、慢性腎疾患、および腎線維症から選択され得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、代謝性心不全および心線維症から選択され得る。一部の態様では、線維症と関連する疾患は、肺線維症であり得る。

【0318】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象における肝脂肪画分を減少させる方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含み、任意選択で、対象が、ＮＡＳＨを発症する危険性があるか、またはこれを伴うと診断されている、方法を提供する。

【0319】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において、肝硬度を減少させるか、体脂肪率を減少させるか、体重を減少させるか、肝重量対体重比を減少させるか、肝脂質含量を減少させるか、肝線維症面積を減少させるか、空腹時血中グルコースレベルを低下させるか、空腹時トリグリセリドレベルを低下させるか、ＬＤＬコレステロールレベルを低下させるか、ＡｐｏＢレベルを低下させるか、ＡｐｏＣレベルを低下させるか、および／またはＨＤＬコレステロールを増大させる方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含み、任意選択で、対象が、ＮＡＳＨを発症する危険性があるか、またはこれを伴うと診断されている、方法を提供する。

【0320】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において、アジポネクチンレベルを増大させる方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含み、任意選択で、前記対象が、ＮＡＳＨを発症する危険性があるか、またはこれを伴うと診断されている、方法を提供する。

【0321】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において、ＮＡＳＨと関連する、１つまたは複数の症候を処置する方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含む方法を提供する。

【0322】

本明細書ではまた、それを必要とする対象におけるＮＡＳＨを処置または防止する方法であって、対象へと、治療有効量の、配列番号１を含む、変異体ＦＧＦ－２１ポリペプチドを含む、本明細書で開示される医薬製剤を投与する工程を含み、その非天然のｐ－アセチル－フェニルアラニン残基が、オキシム連結を介して、約２８ｋＤａ～約３２ｋＤａの分子量のＰＥＧ部分へと連結されている、方法も提供される。一部の態様では、非天然のｐ－アセチル－フェニルアラニンは、野生型ＦＧＦ－２１のグルタミン１０９（配列番号３）を置換する。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、約３０ｋＤａの分子量を有する。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、約６００～約８００エチレングリコール単位の間を有する。一部の態様では、ＰＥＧ部分は、ＰＥＧ_６８１である。

【0323】

一部の具体的な態様では、本開示は、それを必要とする対象におけるＮＡＳＨを処置または防止する方法であって、対象へと、治療有効量の、配列番号２または配列番号４のＦＧＦ－２１コンジュゲートを含む、本明細書で開示される医薬製剤を投与する工程を含む方法を提供する。

【0324】

一部の態様では、対象は、任意選択で、肝生検により決定される、ＮＡＳＨ ＣＲＮによる線維症病期１～３を呈し得る。一部の態様では、処置の前に、対象は、少なくとも約６０の脂肪肝指数を呈し得る。一部の態様では、処置の前に、対象は、任意選択で、磁気共鳴イメージングにより決定される、少なくとも１０％の肝脂肪画分百分率を呈し得る。

【0325】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象における１型糖尿病または２型糖尿病を処置する方法であって、対象へと、治療有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含む方法を提供する。

【0326】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象における肥満症を処置する方法であって、対象へと、治療有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含む方法を提供する。

【0327】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象におけるグルコースおよび脂質のホメオスタシス、グルコース取込み、ＧＬＵＴ１発現、ならびに／またはグルコース、トリグリセリド、インスリン、もしくはグルカゴンの血清濃度のうちの少なくとも１つを調節する方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含む方法を提供する。

【0328】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象におけるインスリン感受性を増大させるか、アジポネクチンレベルを上昇させるか、血中グルコースレベルを低減するか、グルカゴンレベルを低減するか、トリグリセリドレベルを低減するか、フルクトサミンレベルを低減するか、低密度コレステロールレベルを低減するか、またはＣ反応性タンパク質レベルを低減する方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含む方法を提供する。

【0329】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象における、肥満症、糖尿病、膵炎、インスリン抵抗性、高インスリン血症、耐糖能異常、高血糖症、メタボリック症候群、耐糖能障害、グルコースクリアランス不全、高血中グルコース、およびプラダー－ウィリー症候群から選択される状態または障害を処置する方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含む方法を提供する。

【0330】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象における、Ａ型インスリン抵抗性、Ｃ型インスリン抵抗性（別称：ＨＡＩＲ－ＡＮ症候群）、ラブソン－メンデンホール症候群、ドノヒュー症候群、または妖精症、高アンドロゲン血症、多毛症、もしくは黒色表皮症から選択される、インスリン関連状態またはインスリン関連障害を処置する方法であって、対象へと、有効量の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤を投与する工程を含む方法を提供する。

【0331】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、注射を介して投与され得る。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、例えば、シリンジ（安全シリンジなど）または自己注射器を使用する、皮下注射、ＩＶ注射、腹腔内注射、または筋内注射を介して投与され得る。

【0332】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、毎日約１回の頻度で、または毎日約１回未満の頻度で投与され得る。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、毎週約２回の頻度で、または毎週約２回未満の頻度で投与され得る。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、毎週約１回の頻度で、または毎週約２回未満の頻度で投与され得る。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、２週間ごとに約１回の頻度で、または毎週約２回未満の頻度で投与され得る。

【0333】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、３週間ごとに約１回の頻度で、または毎週約２回未満の頻度で投与され得る。

【0334】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、毎月約１回の頻度で、または毎月約１回未満の頻度で投与され得る。

【0335】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、４週間ごとに１回の頻度で投与され得る。

【0336】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、毎日約１回の頻度で投与され得る。

【0337】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、毎週約１回の頻度で投与され得る。

【0338】

一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、用量当たり、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート約１ｍｇ、約２ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５、および約１００ｍｇから選択される量で投与され得る。具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、用量当たり約１０ｍｇの量（例えば、１ｍＬの用量またはその倍数用量）で投与され得る。具体的な態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、用量当たり約２０ｍｇの量（例えば、１ｍＬの用量またはその倍数用量）で投与され得る。一部の態様では、用量は、フラット用量である。

【0339】

例えば、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、本明細書における、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、対象へと、レシピエント対象の体重１ｋｇ当たり約０．１～１００ｍｇの間の濃度で投与され得る。一部の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、対象へと、レシピエント対象の体重１ｋｇ当たり約０．５～５ｍｇの間の、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の濃度で投与され得る。別の態様では、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤は、レシピエント対象へと、毎週約１回または２回、２日ごとに１回、３日ごとに１回、４日ごとに１回、５日ごとに１回、または６日ごとに１回など、毎日１回～２週間ごとに１回の間の頻度で投与され得る。

【0340】

本開示の医薬製剤、すなわち、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む製剤は、非経口経路、例えば、皮下注射もしくは静脈内注射を含むがこれらに限定されない注射、または他の任意の形態の注射もしくは注入を含むがこれらに限定されない、タンパク質またはペプチドに適する、任意の従来の経路により投与され得る。一部の態様では、医薬製剤は、シリンジ、例えば、安全シリンジを使用して投与され得る。一部の態様では、医薬製剤は、自己注射器を使用して投与され得る。
ＩＶ．製造品およびキット

【0341】

本開示はまた、（ｉ）本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含むＦＧＦ－２１医薬製剤と、（ｉｉ）使用のための指示書とを含む製造品またはキットも提供する。一部の態様では、製造品またはキットは、容器を含み得る。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管を含む。一部の態様では、容器は、ガラス、プラスチック、または金属など、様々な材料から形成され得る。一部の態様では、容器は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤、例えば、液体製剤を保持する。一部の態様では、容器は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号５または配列番号６のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤、例えば、液体製剤を保持する。

【0342】

容器上の表示または容器と関連する表示は、再構成および／または使用のための指示を指し示し得る。例えば、標識は、本明細書で開示されるＦＧＦ－２１コンジュゲート、例えば、配列番号２または配列番号４のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を含む医薬製剤が、上記で記載したタンパク質濃度へと希釈されるべきことを指し示し得る。標識は、製剤が、皮下投与に有用であるか、または皮下投与のために意図された皮下製剤であることをさらに指し示し得る。

【0343】

一部の態様では、製剤を保持する容器は、例えば、皮下製剤の反復投与（例えば、２～６回またはこれを超える投与）を可能とする、多目的バイアルである。代替的に、容器は、例えば、皮下製剤を含有する、プレフィルドシリンジであり得る。

【0344】

製造品またはキットは、例えば、溶媒を含む、第２の容器をさらに含み得る。製造品は、商業的見地および使用者の見地から所望される他の材料であって、他のバッファー、希釈剤、フィルター、注射針、シリンジ、および使用のための指示書を伴うパッケージ添付文書を含む材料をさらに含み得る。一部の態様では、キットまたは製造品は、シリンジ（例えば、安全シリンジ）を含む。一部の態様では、キットまたは製造品は、自己注射器を含む。

【0345】

「発明の概要」節および「要約」節ではなく、「発明を実施するための形態」節が、特許請求の範囲を解釈するのに使用されることが意図されていることを認識されたい。「発明の概要」節および「要約」節は、本発明者（ら）により想定される、１つまたは複数の、本開示の例示的態様を明示し得るが、これらの全てを明示し得るわけではなく、したがって、いかなる形であれ、本開示および付属の特許請求の範囲を限定することは意図されない。

【0346】

上記では、指定されたその機能および関係の実施を例示する、機能的構成要素を一助として、本開示について記載された。本明細書では、これらの機能的構成要素の境界は、記載の便宜のために、任意に規定されている。指定されたその機能および関係が、適切に実施される限りにおいて、代替的な境界が規定され得る。

【0347】

具体的な態様についての前出の記載は、他の実施者が、当技術分野の技術の範囲内にある知見を適用することにより、本開示の概念から逸脱せず、不要な実験を伴わずに、このような具体的な態様を、多様な適用のために、たやすく改変し、および／または適合させ得る、本開示の一般的性格を完全に明らかにするであろう。したがって、このような適合および改変は、本明細書で提示される教示および指針に基づき、開示された態様の均等物の意味および範囲の内にあることが意図される。本明細書における表現法または用語法は、本明細書の用語法または表現法が、教示および指針に照らして、当業者により解釈されるように、記載を目的とするものであり、限界を目的とするものではないことが理解されるものとする。

【0348】

本開示の幅および範囲は、上記で記載された例示的態様のうちのいずれによっても限定されず、以下の特許請求の範囲およびこれらの均等物だけにより規定されるものとする

【0349】

本出願を通して引用され得る、引用される全ての参考文献（参考文献、特許、特許出願、およびウェブサイトを含む）の内容は、それらの中で引用された参考文献と同様に、任意の目的で、参照によりそれらの全体において本明細書に明示的に組み込まれる。

【実施例】

【0350】

（実施例１）
ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１製剤の開発
初期研究のために、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を、２０ｍＭトリス、２５０ｍＭスクロース、ｐＨ８．３中に、７．５ｍｇ／ｍＬで製剤化した。この製剤中で観察された高脱アミド化率は、薬物製品を、－２０℃で凍結させて保管することを必要とした。したがって、２～８℃における薬物製品の保管を可能とするＲＴＵ（ｒｅａｄｙ－ｔｏ ｕｓｅ）製剤を開発するための、さらなる研究を実施した。

【0351】

図６に描示される遠位メトキシ基を含む、３０ｋＤａの直鎖状ＰＥＧ部分を、部位特異的な形で、変異体ＦＧＦ－２１（配列番号１）へと接合させる結果として、パラ－アセチル－フェニルアラニンが、Ｌコンフォメーションを有する、図６に示される分子コンジュゲート構造もたらすことにより、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１（配列番号２）を作った。部位特異的ＰＥＧ化を達成するために、当技術分野で公知の方法により、活性化ＰＥＧを、ＦＧＦ－２１分子の１０９位において、非天然アミノ酸である、パラ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＦ）と反応させて、化学的に安定なオキシム連結型ＰＥＧ－タンパク質コンジュゲートを形成した。活性化ＰＥＧは、例えば、日本、東京、日油株式会社を含む、多くの供給元から市販されている。

【0352】

製剤のｐＨの低下が、分子の凝集率を増大させることが示された一方、製剤ｐＨの上昇は、脱アミド化率を増大させることが示された。１０ｍｇ／ｍＬの標的タンパク質濃度では、ｐＨ７．０が、凝集率と、脱アミド化率との最良の均衡点であることが見出された。スクロース濃度の増大は、分子を、凝集に対して、さらに安定化することが示された。

【0353】

さらなる研究のために選び出された製剤は、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、６００ｍＭのスクロース、ｐＨ７．０中に、１０ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ－ＦＧＦ－２１であった。患者１名当たり２０ｍｇの想定毎週用量を踏まえ、プレフィルドシリンジ内の、高濃度薬物製品を開発した。高濃度薬物製品を可能とするために、製剤のさらなる最適化が必要であった。

【0354】

高濃度製剤の初期開発は、３ｍＬのＩ型ガラスバイアル内で行った。２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、６００ｍＭのスクロース、ｐＨ７．０中で、１５ｍｇ／ｍＬおよび２２ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を撹拌したところ、気泡の閉込めが観察され、溶液は、ますます混濁した（図５、左画像）。問題を緩和しようとする試みの中で、ポリソルベート８０を使用した。ポリソルベート８０は、気泡の閉込めを防止することが可能であった（図５、右画像）。こうして、ポリソルベート８０を、０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度で、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の高濃度製剤へと添加した。

【0355】

酸化は、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の臨界品質特性であり、Ｃ末端近傍における、メチオニン１６９の酸化は、受容体への結合、したがって、分子の活性を消失させる。金属触媒性酸化は、タンパク質が酸化され得る機構のうちの１つである。細胞培養物からのキャリーオーバー、ステンレス鋼製容器との接触、賦形剤中の不純物、予め充填可能なシリンジの形成プロセスなどのために、微小濃度の金属が、タンパク質製剤中に存在し得る。

【0356】

ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１が、金属触媒性酸化に対して感受性であるのかどうか調べるために、０．０５ｍＭのペンテト酸（ジエチレントリアミン五酢酸、ＤＴＰＡ）の存在下または非存在下における、金属カクテル（２５０ｐｐｍのＦｅ、１０ｐｐｍのＣｕ、１５ｐｐｍのＣｒ、１５ｐｐｍのＮｉ、１０ｐｐｍのＭｏ）の添加を伴う試料、およびこれらを伴わない試料を、それぞれ、２５℃で、１カ月間、および４０℃で、２週間にわたりインキュベートした。メチオニン１およびメチオニン１６９の酸化レベルは、トリプシンペプチドマッピングにより決定した（図２Ａおよび２Ｂ）。

【0357】

ペンテト酸（ＤＴＰＡ）の非存在下では、金属が添加されていない試料中でも、両方のメチオニン残基の著明な酸化が観察された一方、金属カクテルをスパイクされた試料中では、酸化レベルは、さらに高度であった。５０μＭのペンテト酸を伴う試料中では、いずれのメチオニンについても、酸化レベルの上昇は観察されなかった。これは、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１が、金属触媒性酸化に対して感受性であり、製剤中に、微量レベルの金属が、既に存在することを示唆する。ペンテト酸は、製剤中に存在する金属のほか、製剤へとスパイクされた、さらなる金属も、効果的にキレート化し、メチオニン１および１６９の金属触媒性酸化を防止した。こうして、５０μＭのペンテト酸を、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の高濃度製剤へと添加した。

【0358】

ｐＨを、高濃度製剤に最適化するために、本発明者らは、ｐＨ６．３～８．５の間で回収されたＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の凝集データを再検討し、これは、ｐＨ６．８を下回ると、凝集率が急速に増大することを示した（図３Ａおよび３Ｂ）。こうして、本発明者らは、高濃度製剤のための標的ｐＨを、ｐＨ７．０からｐＨ７．１へと増大させた。

【0359】

新規の高濃度製剤を、既存の製剤と比較するために、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、６００ｍＭスクロース、０．０５ｍＭのペンテト酸、０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、ｐＨ７．０（ｐＨ最適化の前）中、２０ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ－ＦＧＦ－２１を、安定性試験にかけ、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、６００ｍＭのスクロース、ｐＨ７．０中、２２．５ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ－ＦＧＦ－２１と比較した。

【0360】

図４Ａおよび４Ｂ、図１Ａおよび１Ｂにおいて示される通り、ポリソルベート８０およびペンテト酸の、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１製剤への添加は、全ての温度における凝集率の低下、および４０℃における脱アミド化の低下を結果としてもたらした。
試験法

【0361】

凝集：凝集は、市販の解析用カラム（Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬ、７．８×３００ｍｍ、Ｐ／Ｎ：０８５４１）を備えた市販のシステム（例えば、ＰＤＡ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １１００シリーズＨＰＬＣシステム、またはＰＤＡ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ｅ２６９５シリーズＨＰＬＣ）上における、サイズ排除高速液体クロマトグラフィーにより調べた。０．８ｍｌ／分の流量における、９５％リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）および５％エタノールによる移動相を使用して、高分子量分子種を、タンパク質単量体から分離した。ＰＢＳにより、試料を、０．５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度へと希釈し、各実験のために、０．０１ｍｇ（０．０２ｍＬ）を注入した。凝集物の量は、装置のソフトウェアを使用して、高分子量ピークの面積を、観察された全てのピークの総面積で除することにより決定した。

【0362】

脱アミド化：脱アミド化は、市販の解析用カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏ ＷＡＸ、非多孔型、５μｍカラム、４．６×２５０ｍｍ、Ｐ／Ｎ：５１９０－２４８７）を備えた市販のシステム（例えば、ＰＤＡ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １１００シリーズＨＰＬＣシステム、またはＰＤＡ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ｅ２６９５シリーズＨＰＬＣ）上における、アニオン交換高速液体クロマトグラフィーにより調べた。移動相Ａは、２０ｍＭのトリス、ｐＨ８．２からなり、移動相Ｂは、２０ｍＭのトリス、５００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ８．２からなった。１．０ｍｌ／分の流量で、２０分間にわたる、２％Ｂ～６７％Ｂの直線勾配を使用して、荷電タンパク質変異体を分離した。移動相Ａにより、試料を、１ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度へと希釈し、各実験のために、０．０７５ｍｇ（０．０７５ｍＬ）を注入した。脱アミド化の量は、装置のソフトウェアを使用して、酸性変異体ピークの面積を、観察された全てのピークの総面積で除することにより決定した。

【0363】

酸化：酸化は、トリプシンペプチドマッピングにより調べた。タンパク質試料を、トリプシンで消化させた後、結果として得られるペプチドを、市販の解析用カラム（Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃ１８ ＢＥＨペプチドＲＰ ＵＰＬＣカラム、２．１×１５０ｍｍ、粒子サイズ：１．７μｍ、小孔サイズ：１３０Å、Ｐ／Ｎ：１８６００３５５６）を備えた市販のシステム（例えば、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ）上の逆相超高速液体クロマトグラフィーにより分離した。移動相Ａは、水中０．２％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）からなり、移動相Ｂは、アセトニトリル中０．２％のＴＦＡからなった。６０℃の温度および０．３ｍｌ／分の流量で、２７分間にわたる、１０％Ｂ～４０％Ｂの複合勾配を使用して、トリプシンペプチドを分離した。酸化の量は、装置のソフトウェアを使用して、酸化ペプチドピークの面積を、酸化ペプチドピークの面積と、対応する非酸化ペプチドピークの面積との総面積で除することにより決定した。

【0364】

微粒子の形成および気泡の形成：目視による観察を行う。

【0365】

ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の濃度：本明細書で開示される医薬製剤中のＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の濃度は、２８０ｎｍにおいて、０．８７（ｍＬ／（ｍｇ×ｃｍ））の減衰定数を使用する、Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、例えば、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｆｉｂｒｅｔｔｅ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＦ０００２－Ｐ５０）（ＳｏｌｏＶＰＥディスポーザブルＵＶプラスチックベッセル（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｐ／ＮＯＣ０００９－Ｃ１））を備えたＡｇｉｌｅｎｔ Ｃａｒｙ ６０ ＵＶ－Ｖｉｓスペクトロメーターにより測定した。本開示を通して、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１の投与量は、このようにして測定された医薬製剤に基づく。Ｓｌｏｐｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙはまた、ＰＥＧ－ＦＧＦ－２１だけでなく、一般に、任意のＦＧＦ－２１コンジュゲートにも適用可能である。

【0366】

ｐＨの決定：ｐＨは、標準的方法（ＵＳＰ＜７９１＞）に従い決定した。

【0367】

賦形剤の濃度：本明細書で開示される医薬製剤中の、個々の賦形剤（例えば、ＤＴＰＡ、ＰＳ８０、ヒスチジン、スクロース）の濃度は、その製造過程において、医薬製剤へと添加される、個々の賦形剤の、完成医薬製剤の最終容量単位当たりの量（重量、モル数など）であると決定／計算した。代替的に、賦形剤の濃度は、医薬製剤中の、個々の賦形剤の実際の量に基づき得る。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

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