特許 7602907 ソラナム・リコペルシカム及びその作出方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-12-11

(45)【発行日】2024-12-19

(54)【発明の名称】ソラナム・リコペルシカム及びその作出方法

(51)【国際特許分類】

   A01H 6/82 20180101AFI20241212BHJP

   C12Q 1/6844 20180101ALI20241212BHJP

   C12Q 1/6813 20180101ALI20241212BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20241212BHJP

【ＦＩ】

A01H6/82 ZNA

C12Q1/6844 Z

C12Q1/6813 Z

C12N15/09 Z

【請求項の数】 7

(21)【出願番号】P 2020211366

(22)【出願日】2020-12-21

(65)【公開番号】P2022098049

(43)【公開日】2022-07-01

【審査請求日】2023-09-21

(73)【特許権者】

【識別番号】000104113

【氏名又は名称】カゴメ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110002572

【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】大井 有希

(72)【発明者】

【氏名】吉田 美穂

【審査官】千葉 直紀

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１３－５０７９７７（ＪＰ，Ａ）

【文献】Acta Horticulturae，2009年，Vol. 877，pp. 947-952

【文献】Horticultural Plant Journal，2016年，Vol. 2, No. 1，pp. 26-34

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ０１Ｈ、Ｃ１２Ｑ、Ｃ１２Ｎ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

γ－アミノ酪酸を蓄積するソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置するγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、上記第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しない、ソラナム・リコペルシカムであって、
配列番号１の塩基配列を野生種型とし、配列番号２の塩基配列を栽培種型とする第１のＤＮＡマーカーが野生種型のホモ接合型又はヘテロ接合型であり、配列番号３の塩基配列を野生種型とし、配列番号４の塩基配列を栽培種型とする第２のＤＮＡマーカーが栽培種型のホモ接合型である、
ソラナム・リコペルシカム。

【請求項2】

野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６系統と栽培種ソラナム・リコペルシカムＭ８２とのイントログレッションラインＩＬ３－３（アクセッションＮｏ．ＬＡ３４８８）の後代系統である、請求項１記載のソラナム・リコペルシカム。

【請求項3】

γ－アミノ酪酸を蓄積するソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置するγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有する第１のソラナム・リコペルシカムと、任意の第２のソラナム・リコペルシカムを祖先とする交雑系統を作製する工程と、
上記γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、上記第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しない、ソラナム・リコペルシカム交雑系統を選抜する工程とを備え、
上記選抜する工程では、配列番号１の塩基配列を野生種型とし、配列番号２の塩基配列を栽培種型とする第１のＤＮＡマーカーが野生種型のホモ接合型又はヘテロ接合型であり、配列番号３の塩基配列を野生種型とし、配列番号４の塩基配列を栽培種型とする第２のＤＮＡマーカーが栽培種型のホモ接合型である交雑系統を選抜することを特徴とする、
ソラナム・リコペルシカムの作出方法。

【請求項4】

上記交雑系統を作製する工程は、自殖交雑系統及び/又は戻し交雑系統を作製することを特徴とする請求項３記載のソラナム・リコペルシカムの作出方法。

【請求項5】

上記第１のソラナム・リコペルシカムは、野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６系統と栽培種ソラナム・リコペルシカムＭ８２とのイントログレッションラインＩＬ３－３（アクセッションＮｏ．ＬＡ３４８８）であることを特徴とする請求項３記載のソラナム・リコペルシカムの作出方法。

【請求項6】

配列番号１の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドと配列番号２の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドとからなる一対のポリヌクレオチドに含まれる複数の変異部位、並びに配列番号３の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドと配列番号４の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドとからなる一対のポリヌクレオチドに含まれる複数の変異部位のうち、少なくとも１つの変異部位を検出する検出手段を含む、ＤＮＡマーカー検出キット。

【請求項7】

上記検出手段は、検出対象の変異部位を含む領域を増幅する一対のプライマー、及び/又は、検出対象の変異部位における野生種型にハイブリダイズする野生種型プローブ及び栽培種型にハイブリダイズする栽培種型プローブからなる一対のプローブを含むことを特徴とする請求項６記載のＤＮＡマーカー検出キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、従来にない特徴を有する新規なソラナム・リコペルシカム及びその作出方法に関する。

【背景技術】

【0002】

γ－アミノ酪酸（ＧＡＢＡ又はギャバと称される場合もある）は、グルタミン酸デカルボキシラーゼによる脱炭酸反応によってグルタミン酸から作られる。γ－アミノ酪酸は、ヒトや哺乳動物の中枢神経系において抑制性伝達物質として機能する。γ－アミノ酪酸は、頭部外傷後遺症に伴う諸症状を適応症とした医療用医薬品としての利用、食品の健康機能成分としての利用が可能となっている。

【0003】

γ－アミノ酪酸は野菜（トマトやケール、パプリカ等）や果物（メロンやブドウ、バナナ等）、乳酸菌発酵製品（漬物やヨーグルト等）といった食品に多く含まれる。特に、トマト（学名：ソラナム・リコペルシカム（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ Ｌ．））については、γ－アミノ酪酸含量を高める改良が行われている。

【0004】

例えば、特許文献１には、グルタミン酸（Ｇｌｕ）からγ‐アミノ酪酸を合成するグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）として、植物由来のＧＡＤをコードする遺伝子に関する開示ある。そして、特許文献１には、植物にＧＡＢＡを高蓄積させるため、機能的植物ＧＡＤ酵素をコードするポリヌクレオチドを植物ゲノムに組み込み形質転換植物したことが開示されている。また、特許文献１には、公知情報としてシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）におけるＧＡＤ、タバコにおけるＧＡＤ、ペチュニアにけるＧＡＤ、トマトにけるＧＡＤの配列情報が開示されている。

【0005】

また、特許文献２には、γ－アミノ酪酸を高濃度に含有するトマト果実、具体的には生果１ｋｇあたり８００～３０００ｍｇのγ－アミノ酪酸を含むトマト果実を用いた、γ－アミノ酪酸を高濃度に含有する組成物を開示している。非特許文献１には、塩ストレスによってトマト果実に含まれるＧＡＢＡ量が増加することが開示されている。ただし、非特許文献１には、塩ストレスによって果重の低下や、尻腐れ果実の発生を引き起こすことが開示されている。

【0006】

また、非特許文献２には、トマトのＧＡＢＡ含有量を増やすために、ゲノム編集技術を利用して、内在する２種類のＧＡＤ遺伝子に対して自己抑制ドメインを削除したところ、ＧＡＢＡの７～１５倍量蓄積したことが開示されている。さらに、非特許文献３には、ゲノム編集によってＧＡＢＡを高蓄積するトマトと、純粋系統トマト品種「愛知ファースト」を交配してハイブリッド系統を作出し、ＧＡＢＡの蓄積などの果実形質を評価したことが開示されている。非特許文献３で作出したハイブリッド系統は、ＧＡＢＡを果実に高蓄積するといった特徴を有している。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【文献】特表２００５－５０６０３４号公報

【文献】特開２００９－０２７９８７号公報

【非特許文献】

【0008】

【文献】Metabolic Alterations in Organic Acids and γ-Aminobutyric Acid in Developing Tomato (Solanum lycopersicum L.) Fruits, Plant and Cell Physiology, 2010, Aug; 51(8): 1300-1314

【文献】Efficient increase ofγ-aminobutyric acid (GABA) content in tomato fruits by targeted mutagenesis, SCIENTIFIC Reports, 2017, volume 7, page 7057

【文献】Utilization of a Genome-Edited Tomato (Solanum lycopersicum) with High Gamma Aminobutyric Acid Content in Hybrid Breeding, J Agric Food Chem, 2018, 66, 4, 963-971

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

上述したように、遺伝子組み換え技術やゲノム編集技術を用いた高ＧＡＢＡ蓄積トマトの作出例はあるものの、これらの技術によらず交配育種によってＧＡＢＡ高蓄積するような特性を有するトマトは知られていなかった。そこで、本発明は、上述した実情に鑑みて、遺伝子組み換え技術やゲノム編集技術によらず交配育種によってＧＡＢＡを高蓄積する新規なトマト（ソラナム・リコペルシカム）及びその作出方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0010】

上述した目的を達成するため、本発明者らが鋭意検討した結果、γ－アミノ酪酸を蓄積するソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置するγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有するソラナム・リコペルシカムを使用することで、当該γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、上記第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しないソラナム・リコペルシカムを作出できることを見いだし、本発明を完成するに至った。

【0011】

本発明は以下を包含する。
（１）γ－アミノ酪酸を蓄積するソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置するγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、上記第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しない、ソラナム・リコペルシカム。
（２）配列番号１の塩基配列を野生種型とし、配列番号２の塩基配列を栽培種型とする第１のＤＮＡマーカーが野生種型のホモ接合型又はヘテロ接合型であり、配列番号３の塩基配列を野生種型とし、配列番号４の塩基配列を栽培種型とする第２のＤＮＡマーカーが栽培種型のホモ接合型である（１）記載のソラナム・リコペルシカム。
（３）野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６系統と栽培種ソラナム・リコペルシカムＭ８２とのイントログレッションラインＩＬ３－３（アクセッションＮｏ．ＬＡ３４８８）の後代系統である（１）記載のソラナム・リコペルシカム。

【0012】

（４）γ－アミノ酪酸を蓄積するソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置するγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有する第１のソラナム・リコペルシカムと、任意の第２のソラナム・リコペルシカムを祖先とする交雑系統を作製する工程と、上記γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、上記第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しない、ソラナム・リコペルシカム交雑系統を選抜する工程とを備える、ソラナム・リコペルシカムの作出方法。
（５）上記交雑系統を作製する工程は、自殖交雑系統及び/又は戻し交雑系統を作製することを特徴とする（４）記載のソラナム・リコペルシカムの作出方法。
（６）上記選抜する工程では、配列番号１の塩基配列を野生種型とし、配列番号２の塩基配列を栽培種型とする第１のＤＮＡマーカーが野生種型のホモ接合型又はヘテロ接合型であり、配列番号３の塩基配列を野生種型とし、配列番号４の塩基配列を栽培種型とする第２のＤＮＡマーカーが栽培種型のホモ接合型である交雑系統を選抜することを特徴とする（４）記載のソラナム・リコペルシカムの作出方法。
（７）上記第１のソラナム・リコペルシカムは、野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６系統と栽培種ソラナム・リコペルシカムＭ８２とのイントログレッションラインＩＬ３－３（アクセッションＮｏ．ＬＡ３４８８）であることを特徴とする（４）記載のソラナム・リコペルシカムの作出方法。

【0013】

（８）配列番号１の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドと配列番号２の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドとからなる一対のポリヌクレオチドであって、配列番号１の塩基配列を野生種型とし、配列番号２の塩基配列を栽培種型とし、交雑系統が野生種型のホモ接合型又はヘテロ接合型である場合にγ－アミノ酪酸を蓄積するソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置するγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有すると判断できる当該一対のポリヌクレオチドのＤＮＡマーカーとしての使用。
（９）配列番号１の塩基配列と配列番号２の塩基配列とに含まれる複数の変異部位のうち、少なくとも１つの変異部位に基づいて、交雑系統が野生種型のホモ接合型又はヘテロ接合型であるか判定することを特徴とする（８）記載の使用。

【0014】

（１０）配列番号３の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドと配列番号４の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドとからなる一対のポリヌクレオチドであって、配列番号３の塩基配列を野生種型とし、配列番号４の塩基配列を栽培種型とし、交雑系統が栽培種型のホモ接合型である場合にソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しないと判断できる当該一対のポリヌクレオチドのＤＮＡマーカーとしての使用。
（１１）配列番号３の塩基配列と配列番号４の塩基配列とに含まれる複数の変異部位のうち、少なくとも１つの変異部位に基づいて、交雑系統が栽培種型のホモ接合型であるか判定することを特徴とする（１０）記載の使用。

【0015】

（１２）配列番号１の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドと配列番号２の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドとからなる一対のポリヌクレオチドに含まれる複数の変異部位、並びに配列番号３の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドと配列番号４の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドとからなる一対のポリヌクレオチドに含まれる複数の変異部位のうち、少なくとも１つの変異部位を検出する検出手段を含む、ＤＮＡマーカー検出キット。
（１３）上記検出手段は、検出対象の変異部位を含む領域を増幅する一対のプライマー、及び/又は、検出対象の変異部位における野生種型にハイブリダイズする野生種型プローブ及び栽培種型にハイブリダイズする栽培種型プローブからなる一対のプローブを含むことを特徴とする（１２）記載のＤＮＡマーカー検出キット。

【発明の効果】

【0016】

本発明に係るソラナム・リコペルシカムは、単位果重あたりのγ－アミノ酪酸の蓄積量が極めて高く、且つγ－アミノ酪酸の高蓄積に伴う果重の低下が極めて少なく、その結果、γ－アミノ酪酸含量が極めて高いという特性を有する。

【0017】

また、本発明に係るソラナム・リコペルシカムの作出方法は、γ－アミノ酪酸を蓄積するソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置するγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有する第１のソラナム・リコペルシカムを利用することによって、当該γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ上記第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しない、ソラナム・リコペルシカム交雑系統を作出することができる。したがって、本発明に係るソラナム・リコペルシカムの作出方法によれば、γ－アミノ酪酸含量が極めて高いソラナム・リコペルシカムを作出することができる。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】マーカーＮｏ．２で増幅するＤＮＡ領域のアライメント

【図2】マーカーＮｏ．３２で増幅するＤＮＡ領域のアライメント

【発明を実施するための形態】

【0019】

本発明に係るソラナム・リコペルシカムは、γ－アミノ酪酸を蓄積するソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置するγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、上記第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しないといった特徴を有する。ソラナム・ペネリとソラナム・リコペルシカムとのイントログレッションラインのうち、ソラナム・ペネリの第３染色体の特定の領域を含むものが果重は比較的に小さいものの、γ－アミノ酪酸を高蓄積することに着目した。そして、当該特定の領域に、γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子と低果重関連遺伝子が存在することを想定した。

【0020】

本発明に係るソラナム・リコペルシカムは、これらγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子と低果重関連遺伝子を分離して、単位果重あたりのγ－アミノ酪酸の蓄積量が極めて高く、且つγ－アミノ酪酸の高蓄積に伴う果重の低下が極めて少ないといった新規な特徴を有する。

【0021】

ここで、γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子とは、果実中のγ－アミノ酪酸量が増加する形質に関連する遺伝子を意味し、例えば、γ－アミノ酪酸合成に関与する遺伝子（例えば、グルタミン酸デカルボキシラーゼ遺伝子）、γ－アミノ酪酸の代謝を抑制する遺伝子、γ－アミノ酪合成の基質となるグルタミン酸の生合成に関与する遺伝子、グルタミン酸の代謝を抑制する遺伝子などが含まれると考えられる。ソラナム・ペネリの第３染色体上に位置するこれらγ－アミノ酪酸合成に関与する遺伝子（例えば、グルタミン酸デカルボキシラーゼ遺伝子）等が、ソラナム・リコペルシカムにおける相同遺伝子と比較して、γ－アミノ酪酸をより高蓄積させるように機能すると考えられる。

【0022】

また、低果重関連遺伝子とは、果実の重量を低下させる形質に関連する遺伝子を意味し、例えば、果実の成長に関連する遺伝子等が含まれると考えられる。ソラナム・ペネリの第３染色体上に位置するこれら果実の成長に関連する遺伝子等が、ソラナム・リコペルシカムにおける相同遺伝子と比較して、果重をより低下させるように機能すると考えられる。

【0023】

なお、ソラナム・ペネリとソラナム・リコペルシカムとのイントログレッションラインとしては、特に限定されないが、例えば栽培種ソラナム・リコペルシカムＭ８２の染色体の一部を、野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６の染色体に置換したものを使用することができる。ＵＣ ＤＡＶＩＳ Ｃ.Ｍ. Ｒｉｃｋ Ｔｏｍａｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ（ＴＧＲＣ ｈｔｔｐ：／／ｔｇｒｃ．ｕｃｄａｖｉｓ．ｅｄｕ）は、栽培種ソラナム・リコペルシカムＭ８２の染色体の一部を、野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６の染色体に置換した様々なイントログレッションラインを提供している。これらイントログレッションのうち、第３染色体の一部が置換されたイントログレッションラインＩＬ３－３（アクセッションＮｏ．ＬＡ３４８８）は、果重は比較的に小さいものの、γ－アミノ酪酸を高蓄積するといった形質を示す。

【0024】

したがって、本発明に係るソラナム・リコペルシカムは、例えば、イントログレッションラインＩＬ３－３（アクセッションＮｏ．ＬＡ３４８８）から作出することができる。すなわち、イントログレッションラインＩＬ３－３と、他の栽培種ソラナム・リコペルシカムを両親として、交配によって多数の後代系統を作出する。得られた後代系統のうち、γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、上記第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しない遺伝子型のものを選択する。

【0025】

ここで、交配とは、特に限定されず、品種改良などにおいて通常用いられている交配技術を使用することができる。例えば、交配技術としては、自殖交配及び戻し交配を挙げることができる。本発明に係るソラナム・リコペルシカムを作出するにあたり、上述したイントログレッションラインＩＬ３－３と、他の栽培種ソラナム・リコペルシカムを両親として、数世代に亘って自殖交配を行ったり、数世代に亘って戻し交配を行ったり、自殖交配と戻し交配を適宜繰り返す等の方法を採用することができる。

【0026】

栽培種ソラナム・リコペルシカムとは、特に限定されず、一般に入手可能なものを使用することができる。使用可能な栽培種ソラナム・リコペルシカムとしては、例えば、Ｍ８２、ふりこま、とまと中間母本農３号、ＮＴ６０４、なつのこま、イエローキャロル、デルハーベスト２号、タキイ大玉１９３、オルメカ、リコボール、ＴＹファースト、ＫＲＮ－２０１１、スイートメモリー、ＴＴＭ０５６、アイタキ１号、ＳＡＫＴＯＭ１２、ＤＧ０７－１、ＴＯＮＴＥＬＬＥ、ＮＩＮＩＶＥ、ＰＲＳ等を挙げることができる。

【0027】

得られた後代が、上述したγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、上記低果重関連遺伝子を有しない遺伝子型であるかは、具体的には、第１のＤＮＡマーカーと第２のＤＮＡマーカーを用いて判断することができる。すなわち、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーは、γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、上記低果重関連遺伝子を有しない遺伝子型を判別できるＤＮＡマーカーである。より具体的には、得られた後代から定法に従ってゲノムＤＮＡを抽出し、抽出したゲノムＤＮＡにおける第１のＤＮＡマーカーと第２のＤＮＡマーカーを解析する。

【0028】

第１のＤＮＡマーカーは、例えば、配列番号１の塩基配列を野生種型とし、配列番号２の塩基配列を栽培種型とすることができる。すなわち、配列番号１の塩基配列が野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６由来の塩基配列であり、配列番号２の塩基配列が栽培種ソラナム・リコペルシカムＭ８２由来の塩基配列である。配列番号１の塩基配列と配列番号２の塩基配列とをペアワイズアライメントして比較した結果を図１に示す。なお、図１に示す第１のＤＮＡマーカーは、後述する実施例に示したように、ＤＮＡマーカー解析の結果、上から３行目及び４行目の「ＰＫ９９３」と「Ｈｅｉｎｚ１７０６」が栽培種型の塩基配列であり、上から１行目及び２行目の「ＴＫ８７２８」と「１９Ｆ２７３」が野生種型の塩基配列である。配列番号１の塩基配列と配列番号２の塩基配列とを比較した結果を表１にまとめる。

【0029】

【表1】

【0030】

なお、第１のＤＮＡマーカーは、配列番号１及び２の塩基配列で特定されるが、配列番号１及び２そのものに限定されるものではなく、上記変異部位１－１～１－１０のうち少なくとも１種以上、好ましくは３種以上、より好ましくは５種以上、更に好ましくは７種以上、最も好ましくは１０種の変異部位を保存する限り、配列番号１及び２とは異なる塩基配列であっても良い。第１のＤＮＡマーカーに含まれる配列番号１とは異なる塩基配列としては、上記変異部位１－１～１－１０のうち少なくとも１種以上、好ましくは３種以上、より好ましくは５種以上、更に好ましくは７種以上、最も好ましくは１０種の変異部位を保存し、且つ、配列番号１に対して９０％以上の一致度、好ましくは配列番号１に対して９５％以上の一致度、より好ましくは配列番号１に対して９７％以上の一致度、最も好ましくは配列番号１に対して９９％以上の一致度を有する塩基配列を挙げることができる。同様に、第１のＤＮＡマーカーに含まれる配列番号２とは異なる塩基配列としては、上記変異部位１－１～１－１０のうち少なくとも１種以上、好ましくは３種以上、より好ましくは５種以上、更に好ましくは７種以上、最も好ましくは１０種の変異部位を保存し、且つ、配列番号２に対して９０％以上の一致度、好ましくは配列番号１に対して９５％以上の一致度、より好ましくは配列番号１に対して９７％以上の一致度、最も好ましくは配列番号１に対して９９％以上の一致度を有する塩基配列を挙げることができる。

【0031】

また、第２のＤＮＡマーカーは、例えば、配列番号３の塩基配列を野生種型とし、配列番号４の塩基配列を栽培種型とすることができる。すなわち、配列番号３の塩基配列が野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６由来の塩基配列であり、配列番号４の塩基配列が栽培種ソラナム・リコペルシカムＭ８２由来の塩基配列である。配列番号３の塩基配列と配列番号４の塩基配列とをペアワイズアライメントして比較した結果を図２に示す。なお、図２に示す第２のＤＮＡマーカーは、後述する実施例に示したように、ＤＮＡマーカー解析の結果、上から１行目～３行目の「ＰＫ９９３」、「１９Ｆ２７３」、「Ｈｅｉｎｚ１７０６」が栽培種型の塩基配列であり、上から４行目の「ＴＫ８７２８」が野生種型の塩基配列である。配列番号３の塩基配列と配列番号４の塩基配列とを比較した結果を表２にまとめる。

【0032】

【表2】

【0033】

なお、第２のＤＮＡマーカーは、配列番号３及び４の塩基配列で特定されるが、配列番号３及び４そのものに限定されるものではなく、上記変異部位２－１～２－４のうち少なくとも１種以上、好ましくは２種以上、より好ましくは３種以上、更に好ましくは４種の変異部位を保存する限り、配列番号３及び４とは異なる塩基配列であっても良い。第２のＤＮＡマーカーに含まれる配列番号３とは異なる塩基配列としては、上記変異部位２－１～２－４のうち少なくとも１種以上、好ましくは２種以上、より好ましくは３種以上、更に好ましくは４種の変異部位を保存し、且つ、配列番号３に対して９０％以上の一致度、好ましくは配列番号３に対して９５％以上の一致度、より好ましくは配列番号３に対して９７％以上の一致度、最も好ましくは配列番号３に対して９９％以上の一致度を有する塩基配列を挙げることができる。同様に、第２のＤＮＡマーカーに含まれる配列番号４とは異なる塩基配列としては、上記変異部位２－１～２－４のうち少なくとも１種以上、好ましくは２種以上、より好ましくは３種以上、更に好ましくは４種の変異部位を保存し、且つ、配列番号４に対して９０％以上の一致度、好ましくは配列番号４に対して９５％以上の一致度、より好ましくは配列番号４に対して９７％以上の一致度、最も好ましくは配列番号４に対して９９％以上の一致度を有する塩基配列を挙げることができる。

【0034】

以上で説明した第１のＤＮＡマーカー及び/又は第２のＤＮＡマーカーは、それぞれゲノムＤＮＡに存在する所定の領域のポリヌクレオチドであって、野生種型であるか栽培種型であるか判別できるポリヌクレオチドである。

【0035】

すなわち、配列番号１の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドと配列番号２の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドは、交雑系統が上記γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有するといった特徴を有するかの判定に使用することができる。また、配列番号３の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドと配列番号４の塩基配列で特定されるポリヌクレオチドは、交雑系統が上記低果重関連遺伝子を有しないといった特徴を有するかの判定に使用することができる。

【0036】

一方、これら第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれの接合型を判定するには、通常の方法に基づいて適宜行うことができる。具体的には、第１のＤＮＡマーカーに含まれる上記複数の変異部位及び第２のＤＮＡマーカーに含まれる上記複数の変異部位のうち、少なくとも１つの変異部位を検出する検出手段を使用することで、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれの接合型を判定することができる。

【0037】

例えば、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーは、それぞれ野生種型と栽培種型との相違点として５６塩基の欠失型変異（変異部位１－３）と１０塩基の欠失型変異（変異部位２－３）を有している。したがって、上記検出手段として、それぞれ変異部位を挟みこみよう一対のプライマーを設計し、当該プライマーを用いた核酸増幅反応によって増幅したＤＮＡ断片の塩基長に基づいて第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれの接合型を判定することができる。核酸増幅は、例えばＰＣＲ法によって行うことができるが、他の公知の増幅方法、例えば、ＬＣＲ（ｌｉｇａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）法やＬＡＭＰ（Ｌｏｏｐ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法等によって行ってもよい。

【0038】

また、この方法以外にも、シーケンサー等を利用し、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーの塩基配列を直接読み取ることによって、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれの接合型を判定することができる。さらに、いわゆる、ＳＳＣＰ（Ｓｉｎｇｌｅ Ｓｔｒａｎｄ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：一本鎖高次構造多型）法を用いて第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれの接合型を判定することができる。

【0039】

さらに、異なる方法としては、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーのそれぞれに対して、変異部位の配列パターンによって制限酵素の認識配列となる場合には、当該変異部位を含むＤＮＡ断片を増幅し、得られたＤＮＡ断片に対する制限酵素による切断の有無に基づいて第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれの接合型を判定することができる。なお、その他、意図的に設計したミスマッチプライマーを含むプライマーセットによって制限酵素認識部位を作製するｄＣＡＰＳ（ｄｅｒｉｖｅｄ ＣＡＰＳ）法を用いてもよい。

【0040】

さらにまた、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれについて、上記検出手段として、各変異部位について配列パターン毎に特異的にハイブリダイズするプローブを設計する方法を適用することができる。具体的には、検出対象の変異部位における野生種型にハイブリダイずる野生種型プローブ及び栽培種型にハイブリダイズする栽培種型プローブからなる一対のプローブを設計する。そして、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれについて、検出対象の変異部位を含むＤＮＡ断片を増幅し、増幅したＤＮＡ断片と上記一対のプローブとをハイブリダイズにさせることで、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれの接合型を判定することができる。

【0041】

さらにまた、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれについて、各変異部位の配列パターンを一部に含ませてプライマーを設計する方法を適用することができる。この場合、設計したプライマーを用いて第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーを増幅させ、増幅の有無によって、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーそれぞれの接合型を判定することができる。

【0042】

上述した第１のＤＮＡマーカーは、１箇所の欠失型変異と、９箇所の一塩基多型とを含んでいる。第１のＤＮＡマーカーが野生種型であるとは、表１に示した１０種の変異部位の全ての配列パターンを明らかにしたときに、少なくとも５箇所、好ましくは６箇所、より好ましくは７箇所、より好ましくは８箇所、更に好ましくは９箇所、最も好ましくは１０箇所が野生種型の配列パターンであることを意味する。第１のＤＮＡマーカーが栽培種型であるとは、表１に示した１０種の変異部位の全ての配列パターンを明らかにしたときに、少なくとも５箇所、好ましくは６箇所、より好ましくは７箇所、より好ましくは８箇所、更に好ましくは９箇所、最も好ましくは１０箇所が栽培種型の配列パターンであることを意味する。

【0043】

ただし、第１のＤＮＡマーカーの接合型を判定する際、上述した１０箇所の変異部位の配列パターンを全て同定する必要はなく、１０種類の変異部位のうち、少なくとも１箇所、あるいは２～９箇所の変異部位の配列パターンを同定すればよい。これら１０箇所の変異部位は連鎖不平衡にあるため、少ない数（例えば１箇所）の変異部位の配列パターンを同定すれば、他の変異部位についても配列パターンが高精度に予測できるためである。

【0044】

また、第１のＤＮＡマーカーがヘテロ接合型であるとは、表１に示した変異部位に関して野生種型の配列パターンと栽培種型の配列パターンとを共に有する場合を意味する。

【0045】

一方、上述した第２のＤＮＡマーカーは、１箇所の欠失型変異と、３箇所の一塩基多型とを含んでいる。第２のＤＮＡマーカーが野生種型であるとは、表２に示した４種の変異部位の全ての配列パターンを明らかにしたときに、少なくとも２箇所、好ましくは３箇所、最も好ましくは４箇所が野生型の配列パターンであることを意味する。第２のＤＮＡマーカーが栽培種型であるとは、表２に示した４種の変異部位の全ての配列パターンを明らかにしたときに、少なくとも２箇所、好ましくは３箇所、最も好ましくは４箇所が栽培種型の配列パターンであることを意味する。

【0046】

ただし、第２のＤＮＡマーカーの接合型を判定する際、上述した４箇所の変異部位を全て明らかにする必要はなく、４種類の変異部位のうち、少なくとも１箇所、あるいは２～３箇所の変異部位の配列パターンを明らかにすればよい。これら４箇所の変異部位は連鎖不平衡にあるため、少ない数（例えば１箇所）の変異部位の配列パターンを同定すれば、他の変異部位についても配列パターンが高精度に予測できるためである。

【0047】

また、第２のＤＮＡマーカーが栽培種型のホモ接合型であるとは、表２に示した変異部位に関して栽培種型の配列パターンを有する場合を意味する。

【0048】

以上のようにして交配で得られた後代について、第１のＤＮＡマーカー及び第２のＤＮＡマーカーを解析することで、ソラナム・ペネリにおける第３染色体に位置するγ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、当該第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しないといった特徴を有するか否かを判定することができる。そして、判定の結果、γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子を有し、且つ、当該第３染色体に位置する低果重関連遺伝子を有しないといった特徴を有するソラナム・リコペルシカムは、単位果重あたりのγ－アミノ酪酸の蓄積量が極めて高く、且つγ－アミノ酪酸の高蓄積に伴う果重の低下が極めて少ないため、γ－アミノ酪酸含量が極めて高いという特性を有する。

【0049】

ここで、単位果重あたりのγ－アミノ酪酸の蓄積量とは、特に限定されないが、例えば、果実の単位重量（例えば１ｍｇ）あたりに含まれるγ－アミノ酪酸の重量として評価することができる。本発明に係るソラナム・リコペルシカムは、片方の親として利用した栽培種ソラナム・リコペルシカムにおけるγ－アミノ酪酸蓄積量と比較して有意に高いγ－アミノ酪酸蓄積量を示す。有意とは、統計的に有意の意味であり、スチューデントのｔ検定やウェルチのｔ検定などの手法により判断できる。例えば、本発明に係るソラナム・リコペルシカムは、片方の親として利用した栽培種ソラナム・リコペルシカムと比較して１０５％のγ－アミノ酪酸蓄積量、好ましくは１１０％のγ－アミノ酪酸蓄積量、好ましくは１３０％のγ－アミノ酪酸蓄積量、好ましくは１５０％のγ－アミノ酪酸蓄積量、好ましくは１７０％のγ－アミノ酪酸蓄積量、好ましくは２００％のγ－アミノ酪酸蓄積量、好ましくは２３０％のγ－アミノ酪酸蓄積量、好ましくは２５０％のγ－アミノ酪酸蓄積量、好ましくは３００％のγ－アミノ酪酸蓄積量、好ましくは３５０％のγ－アミノ酪酸蓄積量となる。

【0050】

また、γ－アミノ酪酸の高蓄積に伴う果重の低下については、特に限定されないが、例えば、果実の重量や果実の直径などによって評価することができる。後述する実施例に示しているように、γ－アミノ酪酸蓄積量の高いソラナム・ペネリと栽培種ソラナム・リコペルシカムとを交配して得られるγ－アミノ酪酸の高蓄積後代は、当該栽培種ソラナム・リコペルシカムと比較して果重が顕著に低下する傾向にある。しかしながら、本発明に係るソラナム・リコペルシカムは、γ－アミノ酪酸を高蓄積するにも拘わらず、片方の親として利用した栽培種ソラナム・リコペルシカムの果重と比較して果重が高いか、果重が低下するとしても、その程度は極めて小さいという特徴を有する。例えば、本発明に係るソラナム・リコペルシカムは、片方の親として利用した栽培種ソラナム・リコペルシカムの果重と比較して１００～１１０％の果重であることが好ましく、５５～１００％の果重であることが好ましく、６０～１００％の果重であることがより好ましく、７０～１００％の果重であることがより好ましく、８０～１００％の果重であることが更に好ましく、８５～１００％の果重であることが最も好ましい。

【実施例】

【0051】

以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明の技術範囲は以下の実施例に限定されるものではない。

【0052】

［実施例１］
実施例１では、加工用トマトを用いて、γ－アミノ酪酸を高蓄積する新規な交雑系統を開発した。
＜材料＞
本実施例で用いたソラナム・リコペルシカムの系統を表３に示した。ＴＫ８７２８は、ＵＣ ＤＡＶＩＳ Ｃ.Ｍ. Ｒｉｃｋ Ｔｏｍａｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ（ＴＧＲＣ ｈｔｔｐ：／／ｔｇｒｃ．ｕｃｄａｖｉｓ．ｅｄｕ）から入手したものである。ＴＫ８７２８は、野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６系統と栽培種ソラナム・リコペルシカムＭ８２とのイントログレッションラインＩＬ３－３（アクセッションＮｏ．ＬＡ３４８８）である。

【0053】

これと、カゴメ株式会社が育成した加工用トマト品種ＰＫ９９３と交雑して、Ｆ１世代を得た。Ｆ１世代を自殖してＦ２世代（１６Ｆ２８０、１６Ｆ２８１、１６Ｆ２８２）を得た。Ｆ２世代の自殖を２回繰り返してＦ４世代（１８Ｆ３０８、１８Ｆ３０７）を得た。Ｆ４世代の自殖を２回繰り返してＦ６世代（１９Ｆ２７３）を得た。これらの植物体は、カゴメ株式会社が所有する圃場にて、栽培を行った。

【0054】

【表3】

【0055】

＜方法＞
＜ＤＮＡマーカーの作出＞
公知のデータベース（Ｓｏｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｎｅｔｗｏｒｋ ｈｔｔｐｓ：／／ｓｏｌｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｎｅｔ／）で公開されている、野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６系統とソラナム・リコペルシカムの塩基配列情報に基づいて、野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６系統とソラナム・リコペルシカムＨｅｉｎｚ１７０６との間で多型が検出可能なＤＮＡマーカーを作製した。作製したＤＮＡマーカーにおける、プライマーの第３染色体上の位置及び塩基配列、アニーリング温度並びにバンドパターンを表４に示す。プライマーの第３染色体上の位置の特定には、公知のデータベースで公開されているマップのバージョンＳＬ３．０を用いた。

【0056】

【表4】

なお、表４に示した各プライマーの塩基配列を上から順に配列番号５～１８とした。

【0057】

＜ＤＮＡマーカー検定＞
各ソラナム・リコペルシカムの系統から抽出したＤＮＡをテンプレートとしてＰＣＲを行った。当該ＰＣＲ産物について、キャピラリー電気泳動装置（ＤＮＡ／ＲＮＡ分析用マイクロチップ電機泳動装置ＭＣＥ－２０２、島津製作所社製）で電気泳動を行った。電気泳動の結果得られたバンドパターンから、遺伝子型を特定した。ＰＣＲの反応条件を表５に示す。キャピラリー電気泳動は、前記装置の所定のプロトコルに従い行った。

【0058】

【表5】

【0059】

＜ＧＡＢＡ含有量と果重の測定＞
各ソラナム・リコペルシカムの系統から、赤く熟した果実を収穫した。収穫後に果重を測定した。果重の測定は、電子天秤（ＭＥ１００２Ｅ、メトラー社製）で行った。果重の測定が終了した果実をミキサーで１分間破砕した。破砕後、ビン容器に充填し、沸騰湯浴中で３０分間加熱した。加熱後、ろ紙（定量濾紙Ｎｏ．５Ａ、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）でろ過した。ろ液をＧＡＢＡ含有量測定用サンプルとした。ＧＡＢＡの測定は、次の方法で行った。ろ液を３％スルホサリチル酸で１０倍（容量）に希釈した後、メンブレンフィルター（ＤＩＳＭＩＣ－２５ＣＳ０．２０μｍ ２５ＣＳ０２０ＡＮ、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）で濾過し、アミノ酸自動分析計（Ｌ－８９００、日立製作所社製）を用いて測定した。ＧＡＢＡ量は、市販の標品を用いて作成した検量線から算出した。

【0060】

＜結果＞
ＧＡＢＡ含有量と果重を測定した結果を表６に示した。

【0061】

【表6】

【0062】

また、本実施例で作出した後代について、ＧＡＢＡ含有量、果重及びＤＮＡマーカー解析の結果をまとめて表７に示した。

【0063】

【表7】

【0064】

＜ＴＫ８７２８の解析＞
表６に示したように、イントログレッションＴＫ８７２８は、バックグラウンド品種であるソラナム・リコペルシカムＭ８２に比べ、ＧＡＢＡの含有量が約３倍まで増加するが、果重は約５０％まで低下していた。ＴＫ８７２８は、第３染色体の一部が野生種ソラナム・ペネリＬＡ０７１６系統の遺伝子型に置換されている。このことから、当該領域に、ＧＡＢＡを高含有させる遺伝子（以下、「γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子」という。）と、果重を低下させる遺伝子（以下、「低果重関連遺伝子」という。）が座上している可能性が示唆された。

【0065】

＜Ｆ２世代の解析＞
Ｆ２世代において、１６Ｆ２８１は１６Ｆ２８０と比べ、ＧＡＢＡ含有量は高く、果重は低くなった。スチューデントのｔ検定の結果、１６Ｆ２８１のＧＡＢＡ含有量は、１６Ｆ２８０と比較すると有意に高く（ｐ＝０．００００５１＜０．０５）、果重は有意に低く（ｐ＝０．０２０＜０．０５）なった。この結果と、ＤＮＡマーカー解析の結果から推察されるのは、γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子及び低果重関連遺伝子は、Ｎｏ．１からＮｏ．３の間に存在することである。Ｆ２世代において、Ｎｏ．２がヘテロ型となっている個体を自殖してＦ３世代を得た。さらにＦ３世代において、Ｎｏ．２がヘテロ型となっている個体を自殖してＦ４世代を得た。

【0066】

＜Ｆ４世代の解析＞
Ｆ４世代において、１８Ｆ３０８は１８Ｆ３０７と比べ、ＧＡＢＡ含有量は高く、果重は低くなった。この結果と、ＤＮＡマーカー解析の結果から推察されるのは、γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子及び低果重関連遺伝子は、Ｎｏ．２の近傍に存在することである。Ｆ４世代において、ＧＡＢＡ含有量及び果重が高い個体を選抜し、自殖してＦ５世代を得た。さらにＦ５世代において、ＧＡＢＡ含有量及び果重が高い個体を選抜し、自殖してＦ６世代を得た。

【0067】

＜Ｆ６世代の解析＞
Ｆ６世代において、対照品種であるＰＫ９９３と比較して、ＧＡＢＡ含有量が約２倍に増加しつつも、果重が８５％以上を保持している系統（１９Ｆ２７３）が得られた。ＤＮＡマーカー解析の結果について見ると、１９Ｆ２７３は、Ｎｏ．２及びＮｏ．３１が野生種型であり、Ｎｏ．３２、Ｎｏ．８、Ｎｏ．６、Ｎｏ．３が栽培種型である。スチューデントのｔ検定の結果、１９Ｆ２７３のＧＡＢＡ含量は、ＰＫ９９３と比較して有意に高くなった（ｐ＝０．０１＜０．０５）。他方、１９Ｆ２７３の果重は、ＰＫ９９３と比較して有意に低くなった（ｐ＝０．０４７＜０．０５）。しかし、１９Ｆ２７３の果重は、ＧＡＢＡ含有量が高い系統である１６Ｆ２８１と比較すると有意に高く（ｐ＝０．０００８＜０．０５）、ＧＡＢＡ含有量が通常の系統である１６Ｆ２８０と比較すると有意な差はみられなかった（ｐ＝０．２７＞０．０５）。

【0068】

これらの結果から、１９Ｆ２７３では、γ－アミノ酪酸代謝関連遺伝子と低果重関連遺伝子を分離することができたと判断した。以上より、Ｎｏ．２及びＮｏ．３１の遺伝子領域が野生種型であり、Ｎｏ．３２の遺伝子領域が栽培種型であるソラナム・リコペルシカムを選抜することで、ＧＡＢＡを高含有しつつも、果重の低下が抑えられた新規なソラナム・リコペルシカムを育成できることが明らかとなった。

【0069】

＜ＤＮＡマーカーで増幅する領域のシークエンス解析＞
ＴＫ８７２８、１９Ｆ２７３、ＰＫ９９３、Ｈｅｉｎｚ１７０６について、マーカーＮｏ．２で増幅する領域のシークエンス解析を行った。シークエンスは、ユーロフィンジェノミクス株式会社に外注した。シークエンスのアライメント結果を図１に示した。マーカーＮｏ．２に関して、野生種型の塩基配列を配列番号１に示し、栽培種型の塩基配列を配列番号２に示した。マーカーＮｏ．２で増幅する領域において、ＧＡＢＡ含有量が高くなる形質に連鎖する変異が１０個確認された（第１のＤＮＡマーカー）。

【0070】

ＴＫ８７２８、１９Ｆ２７３、ＰＫ９９３、Ｈｅｉｎｚ１７０６について、マーカーＮｏ．３２で増幅する領域のシークエンス解析を前述と同様の方法で行った。シークエンスのアライメント結果を図２に示した。マーカーＮｏ．３２に関して、野生種型の塩基配列を配列番号３に示し、栽培種型の塩基配列を配列番号４に示した。マーカーＮｏ．３２で増幅する領域において、果重が低下する形質に連鎖する変異が４個確認された（第２のＤＮＡマーカー）。

【0071】

［実施例２］
実施例２では、生鮮用トマトを用いて、γ－アミノ酪酸を高蓄積する新規な交雑系統を開発した。
＜材料＞
本実施例で用いたソラナム・リコペルシカムは、以下のとおりである。ＴＫ８７２８は、実施例１で用いたものと同様である。これと、カゴメ株式会社が育成した生鮮用トマト品種ＰＫ９４１とを交雑して、Ｆ１世代を得た。Ｆ１世代にＰＫ９４１を４回戻し交雑し、ＢＣ４Ｆ１世代を得た。さらにＢＣ４Ｆ１世代を自殖して、ＢＣ４Ｆ２世代（２０Ｋ１０１－１、２０Ｋ１０１－２、２０Ｋ１０１－３）を得た。これらの植物体は、カゴメ株式会社が所有するフェンロ―型温室にて、栽培を行った。
＜方法＞
ＤＮＡマーカーは、実施例１で作出したものと同じものを使用した。ＤＮＡマーカー検定、ＧＡＢＡ含有量の測定、果重の測定は、実施例１と同様の方法で行った。
＜結果＞
ＧＡＢＡ含有量と果重を測定した結果を表８に示した。

【0072】

【表8】

【0073】

また、本実施例で作出した後代について、ＧＡＢＡ含有量、果重及びＤＮＡマーカー解析の結果をまとめて表９に示した。

【0074】

【表9】

【0075】

＜ＢＣ４Ｆ２世代の解析＞
表８に示す用に、ＢＣ４Ｆ２世代において、２０Ｋ１０１－１は、ＧＡＢＡ含有量も果重も、ＰＫ９４１と同程度であった。他方、２０Ｋ１０１－３は、ＰＫ９４１と比べ、ＧＡＢＡ含有量は高くなるものの、果重が低下した。２０Ｋ１０１－２は、ＰＫ９４１と同等の果重でありながら、ＧＡＢＡ含有量も高くなった。また。表９に示したＤＮＡマーカー解析の結果から、２０Ｋ１０１－２は、Ｎｏ．２だけがヘテロ型であり、Ｎｏ．３１、Ｎｏ．３２は栽培種型であったことから、Ｎｏ．２の遺伝子領域が野生種型又はヘテロ型であり、Ｎｏ．３２の遺伝子型が栽培種型であるソラナム・リコペルシカムを選抜することで、ＧＡＢＡを高含有しつつも、果重の低下が抑えられたソラナム・リコペルシカムを育成できることが明らかとなった。なお、Ｎｏ．３１は、実施例１及び２の結果から、野生種型であっても、栽培種型であってもよいと考えられた。

【産業上の利用可能性】

【0076】

本発明は、例えば、ＧＡＢＡを高蓄積するソラナム・リコペルシカム新規品種の育種に利用することができる。

【図1】

【図2】

【配列表】

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