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特許7604680ＲＯＣＫプロテアーゼインヒビターであるイソキノリノン型化合物の塩型及びその調製方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-12-13
(45)【発行日】2024-12-23
(54)【発明の名称】ＲＯＣＫプロテアーゼインヒビターであるイソキノリノン型化合物の塩型及びその調製方法
(51)【国際特許分類】
C07D 401/12 20060101AFI20241216BHJP
A61K 31/4725 20060101ALI20241216BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20241216BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20241216BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241216BHJP
【ＦＩ】
C07D401/12 CSP
A61K31/4725
A61P27/02
A61P27/06
A61P43/00 111
【請求項の数】
16
(21)【出願番号】P 2023561419
(86)(22)【出願日】2021-12-21
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2024-01-10
(86)【国際出願番号】 CN2021140206
(87)【国際公開番号】W WO2022135421
(87)【国際公開日】2022-06-30
【審査請求日】2023-07-24
(31)【優先権主張番号】202011521011.6
(32)【優先日】2020-12-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】521556440
【氏名又は名称】コアンチョウ オキュサン オフサルミック バイオテクノロジー カンパニー リミテッド
【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ ４０２， Ｎｏ． ２２３ Ｗｅｓｔ Ｈｕａｎｓｈｉ Ｒｏａｄ， Ｎａｎｓｈａ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１１４００ Ｃｈｉｎａ
(73)【特許権者】
【識別番号】523236744
【氏名又は名称】オキュサン・オフサルミック・ファーマスーティカル（コアンチョウ）・カンパニー・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＯＣＵＳＵＮ ＯＰＨＴＨＡＬＭＩＣ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ（ＧＵＡＮＧＺＨＯＵ）ＣＯ．，ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｆｌｏｏｒ １－３，Ｂｌｏｃｋ Ａ，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ２０３，Ｔｏｎｇｆａ Ｒｏａｄ ２，Ｗａｎｑｉｎｇｓｈａ Ｔｏｗｎ，Ｎａｎｓｈａ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１１４００ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】110000523
【氏名又は名称】アクシス国際弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】チエン・グゥー
(72)【発明者】
【氏名】ヤントン・ワン
(72)【発明者】
【氏名】イーチー・リウ
(72)【発明者】
【氏名】リンユン・ウー
(72)【発明者】
【氏名】シュイ・ヨウ
(72)【発明者】
【氏名】チョーミン・シアオ
(72)【発明者】
【氏名】シューホイ・チェン
【審査官】石田 傑
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０２０／２５３８８２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】中国特許出願公開第１０５０８５４７８（ＣＮ，Ａ）
【文献】再公表特許第２００８／１０５４４２（ＪＰ，Ａ１）
【文献】特表２０１７－５１３９１９（ＪＰ，Ａ）
【文献】再公表特許第２００７／０２６６６４（ＪＰ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型であって、前記Ａ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、３．３０±０．２０°、６．３３±０．２０°、６．５５±０．２０°、１０．６２±０．２０°、１２．５７±０．２０°、１３．１１±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有することを特徴とする式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型。【化1】
【請求項2】
前記Ｘ線粉末回折パターンは、３．３０±０．２０°、６．３３±０．２０°、１０．６２±０．２０°、１２．５７±０．２０°、１３．１１±０．２０°、１７．８５±０．２０°、１８．５１±０．２０°、２０．９９±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する請求項１に記載のＡ結晶型。
【請求項3】
前記Ｘ線粉末回折パターンは、３．３０±０．２０°、６．３３±０．２０°、６．５５±０．２０°、１０．６２±０．２０°、１２．５７±０．２０°、１３．１１±０．２０°、１４．２０±０．２０°、１６．３７±０．２０°、１７．８５±０．２０°、１８．５１±０．２０°、１９．５６±０．２０°、２０．９９±０．２０°、２５．５３±０．２０°、２６．３５±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する請求項１に記載のＡ結晶型。
【請求項4】
前記Ｘ線粉末回折パターンは、３．３０°、６．３３°、６．５５°、１０．６２°、１２．５７°、１３．１１°、１４．２０°、１６．３７°、１７．８５°、１８．５１°、１９．５６°、２０．９９°、２５．５３°、２６．３５°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する請求項２に記載のＡ結晶型。
【請求項5】
前記Ｘ線粉末回折パターンの解析データは以下の表に示される請求項４に記載のＡ結晶型。【表1】
【請求項6】
前記Ａ結晶型の示差走査熱量曲線は２３５．９℃±３．０℃に吸熱ピークの開始点を有する請求項１～５のいずれか１項に記載のＡ結晶型。
【請求項7】
前記Ａ結晶型の熱重量分析曲線は１６０．０±３．０℃で重量減少率が７．７０％に達する請求項１～５のいずれか１項に記載のＡ結晶型。
【請求項8】
式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型であって、前記Ｂ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、１２．１２±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、１７．９４±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有することを特徴とする式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型。【化2】
【請求項9】
前記Ｘ線粉末回折パターンは、９．６９±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する請求項８に記載のＢ結晶型。
【請求項10】
前記Ｘ線粉末回折パターンは、９．６９±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、１７．９４±０．２０°、１９．２３±０．２０°、２０．３７±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する請求項９に記載のＢ結晶型。
【請求項11】
前記Ｘ線粉末回折パターンは、４．８０±０．２０°、９．６９±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１４．６１±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、１７．９４±０．２０°、１９．２３±０．２０°、２０．３７±０．２０°、２１．８７±０．２０°、２７．５３±０．２０°、２８．７２±０．２０°、３３．６１±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する請求項１０に記載のＢ結晶型。
【請求項12】
前記Ｘ線粉末回折パターンの解析データは以下の表に示される請求項１１に記載のＢ結晶型。【表2】
【請求項13】
前記Ｂ結晶型の示差走査熱量曲線は２３９．５±３．０℃に吸熱ピークの開始点を有する請求項８～１２のいずれか１項に記載のＢ結晶型。
【請求項14】
前記Ｂ結晶型の熱重量分析曲線は２００．０±３．０℃で重量減少率が１．３０％に達する請求項８～１２のいずれか１項に記載のＢ結晶型。
【請求項15】
式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型の調製方法であって、（ａ）式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型を溶媒に加えて懸濁液を形成するステップと、
（ｂ）上記懸濁液を５０℃で３時間撹拌し、ろ過、乾燥するステップと、を含み、
ここで、
前記式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、３．３０±０．２０°、６．３３±０．２０°、６．５５±０．２０°、１０．６２±０．２０°、１２．５７±０．２０°、１３．１１±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有し、
前記式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、１２．１２±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、１７．９４±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有し、
前記溶媒はイソプロピルアルコール、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、２－ブタノン及び酢酸エチルから選ばれる式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型の調製方法。
【化3】
【請求項16】
請求項１～７のいずれか１項に記載のＡ結晶型または請求項８～１４のいずれか１項に記載のＢ結晶型または請求項１５に記載の方法で調製することによって得られたＢ結晶型の、緑内障または高眼圧症の治療薬の調製における応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明はＲＯＣＫプロテアーゼインヒビターであるイソキノリノン型化合物の塩型及びその調製方法に関し、緑内障または高眼圧症の治療薬の調製における前記塩型の応用をさらに含む。
【背景技術】
【0002】
ＲＨＯ関連プロテインキナーゼ（Ｒｈｏ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ、ＲＯＣＫと略称）は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼに属し、ＲＨＯの下流標的効果分子であり、人体内で広く発現される。ＲＨＯ関連プロテインキナーゼ（ＲＯＣＫ）はミオシン軽鎖（ＭＬＣ）の調節に関与しており、血管拡張の治療に適し、ＲＯＣＫキナーゼは線維柱帯の流出路細胞に作用してもよく、線維柱帯細胞を拡張し、房水の排出抵抗を低下させることができる。最新の研究では、ＲＯＣＫキナーゼ阻害剤は、角膜内皮細胞の損傷修復を促進し、線維症を防止することができ、大きな応用の見通しがある。
【0003】
イソキノリン・スルホンアミド系化合物は重要なＲＯＣＫキナーゼ阻害剤の１つであり、現在、販売されているファシュールとＫ－１１５（特許ＷＯ２００６０５７３９７Ａ１）はいずれもイソキノリン・スルホンアミド系化合物である。ファシュールは幅広い薬理効果を持つ新薬であり、ＲＨＯキナーゼ阻害物であり、ミオシン軽鎖ホスファターゼの活性を高めることで血管を拡張し、内皮細胞の張力を低下させ、脳組織の微小循環を改善し、脳の盗血を生じさせ、悪化させないと同時に、抗炎症性因子に拮抗し、アポトーシスから神経を保護し、神経の再生を促進することができる。Ｋ－１１５の承認と潜在的な応用は非常に広く、緑内障、高眼圧、糖尿病網膜損傷合併症、加齢黄斑変性症、角膜損傷、白内障及び緑内障手術後の回復などを含み、同時に系統的な薬物にまで拡大する可能性がある。
【0004】
特許ＷＯ２００７０２６６６４Ａ１には、ＲＯＣＫキナーゼ阻害作用を有する化合物、例えば対照化合物２が報告されており、このシリーズの化合物は比較的良い酵素活性を有するが、膜透過性、薬物動態学、薬物形成性などの点で改善する必要がある。本発明は、構造で修飾された類似化合物を報告し、この点の性質を顕著に改善した。
【化1】
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0005】
本発明は、式（ＩＩ）で示される化合物を提供する。
【化2】
【0006】
本発明は式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型をさらに提供し、そのＸ線粉末回折パターンは、６．３３±０．２０°、１０．６２±０．２０°、１３．１１±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【化3】
【0007】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、３．３０±０．２０°、６．３３±０．２０°、６．５５°±０．２０°， １０．６２±０．２０°、１２．５７±０．２０°、１３．１１±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【0008】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、３．３０±０．２０°、６．３３±０．２０°、１０．６２±０．２０°、１２．５７±０．２０°、１３．１１±０．２０°、１７．８５±０．２０°、１８．５１±０．２０°、２０．９９±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【0009】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、３．３０±０．２０°、６．３３±０．２０°、６．５５±０．２０°、１０．６２±０．２０°、１２．５７±０．２０°、１３．１１±０．２０°、１４．２０±０．２０°、１６．３７±０．２０°、１７．８５±０．２０°、１８．５１±０．２０°、１９．５６±０．２０°、２０．９９±０．２０°、２５．５３±０．２０°、２６．３５±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【0010】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型のＸ線粉末回折パターンは基本的に図１に示される。
【0011】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型のＸ線粉末回折パターン解析データを表１に示す。
【0012】
【表1】
【0013】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型のＸ線粉末回折パターンはＣｕ－Ｋα線源の条件下で検出されたものである。
【0014】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型の示差走査熱量曲線は２３５．９±３．０℃に吸熱ピークの開始点を有する。
【0015】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型の示差走査熱量曲線は基本的に図２に示される。
【0016】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型の熱重量分析曲線は１６０．０±３．０℃で重量減少率が７．７０％に達する。
【0017】
本発明のいくつかの手段において、上記Ａ結晶型の熱重量分析曲線は基本的に図３に示される。
【0018】
本発明は式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型をさらに提供し、そのＸ線粉末回折パターンは、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【化4】
【0019】
本発明は式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型をさらに提供し、そのＸ線粉末回折パターンは、９．６９±０．２０°、１２．１２±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【化5】
【0020】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、１２．１２±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、１７．９４±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【0021】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、９．６９±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【0022】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、９．６９±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、１７．９４±０．２０°、１９．２３±０．２０°、２０．３７±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【0023】
本発明は式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型を提供し、そのＸ線粉末回折パターンは、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、及び／又は２１．８７±０．２０°、及び／又は１２．１２±０．２０°、及び／又は１７．９４±０．２０°、及び／又は９．６９±０．２０°、及び／又は２０．３７±０．２０°、及び／又は２１．８７±０．２０°、及び／又は４．８０±０．２０°、及び／又は１４．６１±０．２０°、及び／又は１９．２３±０．２０°、及び／又は２７．５３±０．２０°、及び／又は２８．７２±０．２０°、及び／又は３３．６１±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【0024】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、４．８０±０．２０°、９．６９±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１４．６１±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、１７．９４±０．２０°、１９．２３±０．２０°、２０．３７±０．２０°、２１．８７±０．２０°、２７．５３±０．２０°、２８．７２±０．２０°、３３．６１±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【0025】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型のＸ線粉末回折パターンは、４．８０±０．２０°、９．６９±０．２０°、１２．１２±０．２０°、１６．４８±０．２０°、１６．９５±０．２０°、１７．９４±０．２０°、１９．２３±０．２０°、２０．３７±０．２０°、２１．８７±０．２０°の２θ角に特徴的な回折ピークを有する。
【0026】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型のＸ線粉末回折パターンは基本的に図４に示される。
【0027】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型のＸ線粉末回折パターン解析データは表２に示される。
【0028】
【表2】
【0029】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型のＸ線粉末回折パターンはＣｕ－Ｋα線源の条件下で検出されたものである。
【0030】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型の示差走査熱量曲線は２３９．５±３．０℃に１つの吸熱ピークの開始点を有する。
【0031】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型の示差走査熱量曲線は基本的に図５に示される。
【0032】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型の熱重量分析曲線は２００．０±３．０℃で重量減少率が１．３０％に達する。
【0033】
本発明のいくつかの手段において、上記Ｂ結晶型の熱重量分析曲線は基本的に図６に示される。
【0034】
本発明は式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型の調製方法をさらに提供し、
（ａ）式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型を溶媒に加えて懸濁液を形成するステップと、
（ｂ）上記懸濁液を５０℃で３時間撹拌し、ろ過、乾燥するステップと、を含む。
（ａ）式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型を溶媒に加えて懸濁液を形成するステップと、
（ｂ）上記懸濁液を５０℃で３時間撹拌し、ろ過、乾燥するステップと、を含む。
【0035】
ここで、前記溶媒はイソプロピルアルコール、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、２－ブタノン及び酢酸エチルから選ばれる。
【0036】
本発明のいくつかの手段において、上記式（ＩＩ）で示される化合物、Ａ結晶型及びＢ結晶型の、ＲＯＣＫプロテアーゼインヒビター関連薬物の調製における応用を提供する。
【0037】
本発明のいくつかの手段において、上記式（ＩＩ）で示される化合物、Ａ結晶型及びＢ結晶型の、緑内障または高眼圧症の治療薬の調製における応用を提供する。
【発明の効果】
【0038】
式（Ｉ）で示される化合物は活性薬物の曝露量を顕著に向上させ、同時に、血中薬物ピーク濃度と作用時間を顕著に増加させ、急性高眼圧モデルでは、式（Ｉ）で示される化合物は異なる測定用量で良好な眼圧降下効果を示し、同時に、一定の用量依存性があり、眼圧降下幅度と持続作用時間はいずれもＫ－１１５より優れ、式（Ｉ）で示される化合物は優れた薬効（最高眼圧降下効果と作用時間）を持ち、式（Ｉ）で示される化合物は高いシステム安全性を有する。
【0039】
定義及び説明
特に説明されていない限り、本明細書で使用される以下の用語とフレーズは以下の意味を含むことを意味する。１つの特定のフレーズまたは用語は特に定義されていないか場合、不明確または不明瞭と見なされるべきではなく、通常の意味に従って理解されるべきである。本明細書に商品名が現れるとき、それに対応する商品またはその活性成分を指すことを意図する。
特に説明されていない限り、本明細書で使用される以下の用語とフレーズは以下の意味を含むことを意味する。１つの特定のフレーズまたは用語は特に定義されていないか場合、不明確または不明瞭と見なされるべきではなく、通常の意味に従って理解されるべきである。本明細書に商品名が現れるとき、それに対応する商品またはその活性成分を指すことを意図する。
【0040】
本発明の中間体化合物は、当業者によく知られている複数の合成方法によって調製することができ、以下に示される具体的な実施形態、それと他の化学的合成方法との組み合わせによって形成される実施形態及び当業者によく知られている等価置換形態を含み、好ましい実施形態は本発明の実施例を含む、これに制限されない。
【0041】
本発明の具体的な実施形態の化学反応は適切な溶媒中で完成され、前記の溶媒は本発明の化学変化及びそれに必要な試薬及び物質に適する必要がある。本発明の化合物を取得するために、当業者が既存の実施形態に基づいて合成ステップまたは反応手順を修正または選択する必要がある場合がある。
【0042】
本発明の化合物は当業者によく知られている通常の方法によって構造を確認することができ、本発明は化合物の絶対配置に関すると、該絶対配置は当該分野の通常の技術的手段によって確認することができる。例えば単結晶Ｘ線回折法（ＳＸＲＤ）は、培養した単結晶をＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回折装置で回折強度データを収集し、光源はＣｕＫα放射、走査方式：φ／ 走査であり、関連データを収集した後、直接法（Ｓｈｅｌｘｓ９７）によって結晶構造を解析し、絶対配置を確認できる。
【0043】
以下、実施例を通じて本発明を具体的に説明し、これらの実施例は本発明を何ら限定するものではない。
【0044】
本発明で使用されるすべての溶媒は市販されており、それ以上精製することなく使用できる。
【0045】
本発明は、以下の略語を使用し、ｒ．ｔ．は室温を示し、ＴＨＦはテトラヒドロフランを示し、ＮＭＰはＮ－メチルピロリドンを示し、ＭｅＳＯ3Ｈはメタンスルホン酸を示し、ＤＭＥはエチレングリコールジメチルエーテルを示し、ＤＣＭはジクロロメタンを示し、Ｘｐｈｏｓは２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’４’６’－トリイソプロピルビフェニルを示し、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを示し、ＭｅＯＨはメタノールを示し、ａｃｅｔｏｎｅはアセトンを示し、２－Ｍｅ－ＴＨＦは２－メチルテトラヒドロフランを示し、ＩＰＡはイソプロピルアルコールを示す。
【0046】
化合物は当該分野の通常の命名原則に従って、またはＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアを使用して命名され、市販の化合物はベンダーカタログ名を使用する。
【0047】
本発明のＸ線粉末回折（Ｘ－ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ，ＸＲＰＤ）方法
機器の型番：ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’ｐｅｒｔ3Ｘ線粉末回折装置
テスト方法：約１０ｍｇのサンプルをＸＲＰＤ検出に用いた。
機器の型番：ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’ｐｅｒｔ3Ｘ線粉末回折装置
テスト方法：約１０ｍｇのサンプルをＸＲＰＤ検出に用いた。
【0048】
詳しいＸＲＰＤパラメータは以下のとおりである。
線源：Ｃｕ、Ｋα１＝１．５４０５９８Å；Ｃｕ、Ｋα２＝１．５４４４２６Å
発光管電圧：４０ｋＶ、発光管電流：４０ｍＡ
走査範囲：３－４０ｄｅｇ
ステップ幅角度：０．０２６３ｄｅｇ
ステップ時間：４６．６６５秒
線源：Ｃｕ、Ｋα１＝１．５４０５９８Å；Ｃｕ、Ｋα２＝１．５４４４２６Å
発光管電圧：４０ｋＶ、発光管電流：４０ｍＡ
走査範囲：３－４０ｄｅｇ
ステップ幅角度：０．０２６３ｄｅｇ
ステップ時間：４６．６６５秒
【0049】
本発明の示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ， ＤＳＣ）方法
機器の型番：ＴＡ２５００示差走査熱量計
テスト方法：サンプル（～１－５ｍｇ）をＤＳＣアルミ盤内に入れてテストし、アルミ盤の蓋に穴が開かなく、５０ｍＬ／ｍｉｎのＮ2条件下で、１０℃／ｍｉｎの昇温速率で、サンプルを２５℃（室温）からサンプルの分解前に加熱する。
機器の型番：ＴＡ２５００示差走査熱量計
テスト方法：サンプル（～１－５ｍｇ）をＤＳＣアルミ盤内に入れてテストし、アルミ盤の蓋に穴が開かなく、５０ｍＬ／ｍｉｎのＮ2条件下で、１０℃／ｍｉｎの昇温速率で、サンプルを２５℃（室温）からサンプルの分解前に加熱する。
【0050】
本発明の熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ，ＴＧＡ）方法
機器の型番：ＴＡＱ５０００熱重量分析計
テスト方法：サンプル（～１－５ｍｇ）をＴＧＡアルミ盤内に入れて、開放するようにテストし、１０～２５ｍＬ／ｍｉｎのＮ2条件下で、１０℃／ｍｉｎの昇温速率で、サンプルを室温から３５０℃に加熱する。
機器の型番：ＴＡＱ５０００熱重量分析計
テスト方法：サンプル（～１－５ｍｇ）をＴＧＡアルミ盤内に入れて、開放するようにテストし、１０～２５ｍＬ／ｍｉｎのＮ2条件下で、１０℃／ｍｉｎの昇温速率で、サンプルを室温から３５０℃に加熱する。
【0051】
本発明の動的ガス吸着分析（Ｄｙｎａｍｉｃ Ｖａｐｏｒ Ｓｏｒｐｔｉｏｎ，ＤＶＳ）方法
機器の型番：ＳＭＳ ＤＶＳ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ動的ガス吸着計
動的水分吸着実験は吸着と脱着からなる。通常、設定された相対湿度下で、サンプル重量ｄｍ／ｄｔ≦０．０１％の場合、該相対湿度下でのサンプルによる水分の吸着または脱着がバランスに達したと考えられる。
サンプルテスト温度：Ｔ＝２５℃
バランス時間：ｄｍ／ｄｔ：０．０１％／ｍｉｎ
相対湿度の変化範囲：０％～９５％～０％；ＲＨ（％）
テストステップごとの湿度変化：５％
吸湿性の評価分類は以下の通りである。
備考：ΔＷ％は試験品が２５±１℃及び８０±２％のＲＨでの吸湿による重量増加を示す。
機器の型番：ＳＭＳ ＤＶＳ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ動的ガス吸着計
動的水分吸着実験は吸着と脱着からなる。通常、設定された相対湿度下で、サンプル重量ｄｍ／ｄｔ≦０．０１％の場合、該相対湿度下でのサンプルによる水分の吸着または脱着がバランスに達したと考えられる。
サンプルテスト温度：Ｔ＝２５℃
バランス時間：ｄｍ／ｄｔ：０．０１％／ｍｉｎ
相対湿度の変化範囲：０％～９５％～０％；ＲＨ（％）
テストステップごとの湿度変化：５％
吸湿性の評価分類は以下の通りである。
【表3】
【図面の簡単な説明】
【0052】
【図1】式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型のＣｕ－Ｋα放射のＸＲＰＤスペクトル図である。
【図2】式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型のＤＳＣスペクトル図である。
【図3】式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型のＴＧＡスペクトル図である。
【図4】式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型のＣｕ－Ｋα放射のＸＲＰＤスペクトル図である。
【図5】式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型のＤＳＣスペクトル図である。
【図6】式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型のＴＧＡスペクトル図である。
【図7】式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型のＤＶＳスペクトル図である。
【発明を実施するための形態】
【0053】
本発明の内容をより良く理解するために、以下、具体的な実施例を組み合わせて更に説明するが、具体的な実施形態は本発明の内容を制限するものではない。
【0054】
中間体１－４
ステップ１
内部温度を２５～３５℃に制御し、反応釜にトルエン（２４Ｌ）を加え、撹拌下で反応釜に順次に１－４ａ（４０００ｇ）、炭酸ナトリウム（６１２０ｇ）、メチルホウ酸（３４６５ｇ）、２－ジシクロヘキシルホスフィン－２’，６’－ジメトキシビフェニル（９８．６６ｇ）及びトリス（ジベンジルアセトン）ジパラジウム（８８．０３ｇ）を加え、反応釜を３回窒素置換し、反応釜内の温度を９０℃まで上げ、９０～１００℃で１３時間撹拌する。反応釜に水（４Ｌ）を加えて固体を溶解させ、反応液を室温まで冷却した後、反応液を珪藻土でろ過し、メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（４Ｌ）でろ過ケーキを洗浄し、洗浄液と濾液を合わせた後に濃塩酸（８Ｌ）でｐＨ＝３になるように調節し、静置して液体分離する。下層の水相をメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（５Ｌ）で抽出し、水酸化ナトリウム水溶液で水相をｐＨ＝９に調節し、酢酸エチル（１２Ｌ）で水相を２回抽出し、重量が減少しなくなるまで合わせた有機相を真空濃縮すると、１－４ｂが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+ １４４、実測値１４４。
【化6】
内部温度を２５～３５℃に制御し、反応釜にトルエン（２４Ｌ）を加え、撹拌下で反応釜に順次に１－４ａ（４０００ｇ）、炭酸ナトリウム（６１２０ｇ）、メチルホウ酸（３４６５ｇ）、２－ジシクロヘキシルホスフィン－２’，６’－ジメトキシビフェニル（９８．６６ｇ）及びトリス（ジベンジルアセトン）ジパラジウム（８８．０３ｇ）を加え、反応釜を３回窒素置換し、反応釜内の温度を９０℃まで上げ、９０～１００℃で１３時間撹拌する。反応釜に水（４Ｌ）を加えて固体を溶解させ、反応液を室温まで冷却した後、反応液を珪藻土でろ過し、メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（４Ｌ）でろ過ケーキを洗浄し、洗浄液と濾液を合わせた後に濃塩酸（８Ｌ）でｐＨ＝３になるように調節し、静置して液体分離する。下層の水相をメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（５Ｌ）で抽出し、水酸化ナトリウム水溶液で水相をｐＨ＝９に調節し、酢酸エチル（１２Ｌ）で水相を２回抽出し、重量が減少しなくなるまで合わせた有機相を真空濃縮すると、１－４ｂが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+ １４４、実測値１４４。
【0055】
ステップ２
反応釜内の温度を３０℃未満になるように制御し、５０Ｌの反応釜に濃硫酸（１３．３６Ｌ）をゆっくりと加える。内部温度を５０℃未満になるように制御し、定電圧滴下漏斗で反応釜に１－４ｂ（２５００ｇ）をゆっくりと加える。反応釜内部温度を－１０～０℃に制御して反応釜にバッチ式でＮ－ブロモスクシンイミド（３０７０．２５ｇ）をゆっくりと加え、反応液を－１０～８℃範囲下で１３時間撹拌する。内部温度を５０℃未満になるように制御し、反応液を氷水（８Ｌ）にゆっくりと注ぐ。内部温度を５０℃未満になるように制御し、反応液に水酸化ナトリウム水溶液をゆっくりと滴下し、ｐＨ＝９になるように調節する。反応液に酢酸エチル（１０Ｌ）を加え、１０分撹拌する。反応液をろ過し、酢酸エチル（１２．５Ｌ）でろ過ケーキを洗浄する。酢酸エチル（１０Ｌ×３）で水相を抽出し、合わせた有機相を４５℃で減圧濃縮する。濃縮残留物にｎ-ヘプタン（１０Ｌ）を加えてパルプ化、吸引ろ過して褐色の固体を取得し、固体を真空乾燥オーブン（４０℃）に入れて乾燥し、１－４ｃを取得する。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+２２２、２２４実測値２２２、２２４。
反応釜内の温度を３０℃未満になるように制御し、５０Ｌの反応釜に濃硫酸（１３．３６Ｌ）をゆっくりと加える。内部温度を５０℃未満になるように制御し、定電圧滴下漏斗で反応釜に１－４ｂ（２５００ｇ）をゆっくりと加える。反応釜内部温度を－１０～０℃に制御して反応釜にバッチ式でＮ－ブロモスクシンイミド（３０７０．２５ｇ）をゆっくりと加え、反応液を－１０～８℃範囲下で１３時間撹拌する。内部温度を５０℃未満になるように制御し、反応液を氷水（８Ｌ）にゆっくりと注ぐ。内部温度を５０℃未満になるように制御し、反応液に水酸化ナトリウム水溶液をゆっくりと滴下し、ｐＨ＝９になるように調節する。反応液に酢酸エチル（１０Ｌ）を加え、１０分撹拌する。反応液をろ過し、酢酸エチル（１２．５Ｌ）でろ過ケーキを洗浄する。酢酸エチル（１０Ｌ×３）で水相を抽出し、合わせた有機相を４５℃で減圧濃縮する。濃縮残留物にｎ-ヘプタン（１０Ｌ）を加えてパルプ化、吸引ろ過して褐色の固体を取得し、固体を真空乾燥オーブン（４０℃）に入れて乾燥し、１－４ｃを取得する。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+２２２、２２４実測値２２２、２２４。
【0056】
ステップ３
反応釜（５０Ｌ）に溶媒であるＮ、Ｎ－ジメチルアセトアミド（１０Ｌ）を加え、撹拌下で１－４ｃ（１００３．６５ｇ）を加え、内部温度を５５℃未満になるように制御して反応釜（５０Ｌ）にバッチ式でメチルチオールナトリウム（１２７６．９７ｇ）をゆっくりと加え、反応混合物を５０℃で３０分撹拌する。反応釜の温度を１２０℃に上げ、このとき、内部温度が１０９℃であり、この条件下で１２時間撹拌する。反応釜温度を５０℃に調整し、反応液の温度を４０～５０℃まで下げ、反応液を珪藻土でろ過して酢酸エチル（１０Ｌ）で洗浄し、濾液に水（１０Ｌ）を加え、酢酸エチル（５Ｌ×２）で水相を抽出する。濃塩酸で水相のｐＨを７に調整し、酢酸エチル（５Ｌ×２）で水相を抽出し、有機相を合わせ、有機相を水（１０Ｌ×３）で洗浄し、有機相を重量が変化しなくなるまで減圧濃縮し、１－４ｄが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+１７６、実測値１７６。
反応釜（５０Ｌ）に溶媒であるＮ、Ｎ－ジメチルアセトアミド（１０Ｌ）を加え、撹拌下で１－４ｃ（１００３．６５ｇ）を加え、内部温度を５５℃未満になるように制御して反応釜（５０Ｌ）にバッチ式でメチルチオールナトリウム（１２７６．９７ｇ）をゆっくりと加え、反応混合物を５０℃で３０分撹拌する。反応釜の温度を１２０℃に上げ、このとき、内部温度が１０９℃であり、この条件下で１２時間撹拌する。反応釜温度を５０℃に調整し、反応液の温度を４０～５０℃まで下げ、反応液を珪藻土でろ過して酢酸エチル（１０Ｌ）で洗浄し、濾液に水（１０Ｌ）を加え、酢酸エチル（５Ｌ×２）で水相を抽出する。濃塩酸で水相のｐＨを７に調整し、酢酸エチル（５Ｌ×２）で水相を抽出し、有機相を合わせ、有機相を水（１０Ｌ×３）で洗浄し、有機相を重量が変化しなくなるまで減圧濃縮し、１－４ｄが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+１７６、実測値１７６。
【0057】
ステップ４
ジクロロメタン（８Ｌ）をきれいに洗浄された５０Ｌの高低温反応釜に入れ、撹拌を開始する。１－４ｄ（１４７４．０２ｇ）を反応釜内に加え、反応釜の内部温度を０～１０℃に制御するようにオイルバス温度を調節する。濃塩酸（４．３８Ｌ）をバッチ式で反応釜内にゆっくりと加え、内部温度を５～１５℃になるように制御する。濃塩酸の滴下が完了した後、反応釜の内部温度を－５℃に下げる。次亜塩素酸ナトリウム水溶液（２１．３５Ｌ）をバッチ式で反応釜内にゆっくりと滴下し、過程全体で温度を０～１０℃に制御する。反応液をろ過し、ろ過ケーキをメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（２Ｌ×２）で洗浄し、ろ過ケーキを収集する。収集されたろ過ケーキをオーブンに入れて乾燥させて、１－４ｅが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+２４２、実測値２４２。
ジクロロメタン（８Ｌ）をきれいに洗浄された５０Ｌの高低温反応釜に入れ、撹拌を開始する。１－４ｄ（１４７４．０２ｇ）を反応釜内に加え、反応釜の内部温度を０～１０℃に制御するようにオイルバス温度を調節する。濃塩酸（４．３８Ｌ）をバッチ式で反応釜内にゆっくりと加え、内部温度を５～１５℃になるように制御する。濃塩酸の滴下が完了した後、反応釜の内部温度を－５℃に下げる。次亜塩素酸ナトリウム水溶液（２１．３５Ｌ）をバッチ式で反応釜内にゆっくりと滴下し、過程全体で温度を０～１０℃に制御する。反応液をろ過し、ろ過ケーキをメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（２Ｌ×２）で洗浄し、ろ過ケーキを収集する。収集されたろ過ケーキをオーブンに入れて乾燥させて、１－４ｅが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+２４２、実測値２４２。
【0058】
ステップ５
ジクロロメタン（１０Ｌ）を５０Ｌの反応釜内に加え、撹拌を開始し、内部温度を０～１０℃に制御し、１－４ｅ（１４６２．３５ｇ）を秤量して反応釜に加える。内部温度を０～１０℃に制御し、Ｎ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９３４．６３ｇ）を秤量し、反応液にゆっくりと滴下し、内部温度を０～１０℃に制御し、１－４ｆ（１２３０．２４ｇ）を秤量し、バッチ式で反応液にゆっくりと加える。加えた後、１０～２０℃に昇温し、０．５時間撹拌し続く。有機相を飽和塩化アンモニウム水溶液（３Ｌ×３）で洗浄し、合わせた飽和塩化アンモニウム水溶液をジクロロメタン（３Ｌ）で抽出する。有機相を分離し、重量が変化しなくなるまで減圧した濃縮した後、真空乾燥オーブンで乾燥させて、１－４ｇが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+３９２、実測値３９２。
ジクロロメタン（１０Ｌ）を５０Ｌの反応釜内に加え、撹拌を開始し、内部温度を０～１０℃に制御し、１－４ｅ（１４６２．３５ｇ）を秤量して反応釜に加える。内部温度を０～１０℃に制御し、Ｎ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９３４．６３ｇ）を秤量し、反応液にゆっくりと滴下し、内部温度を０～１０℃に制御し、１－４ｆ（１２３０．２４ｇ）を秤量し、バッチ式で反応液にゆっくりと加える。加えた後、１０～２０℃に昇温し、０．５時間撹拌し続く。有機相を飽和塩化アンモニウム水溶液（３Ｌ×３）で洗浄し、合わせた飽和塩化アンモニウム水溶液をジクロロメタン（３Ｌ）で抽出する。有機相を分離し、重量が変化しなくなるまで減圧した濃縮した後、真空乾燥オーブンで乾燥させて、１－４ｇが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+３９２、実測値３９２。
【0059】
ステップ６
３．１Ｌの無水ジクロロメタンをきれいに洗浄した５Ｌの三口フラスコに加え、撹拌を開始する。秤量した１－４ｇ（４５１．３４ｇ）を反応フラスコに加え、固体が溶解した後、反応フラスコを氷水浴に入れ、反応系の内部温度を０℃に下げる。秤量したｍ-クロロ過安息香酸（４２９．８１ｇ）をバッチ式でゆっくりと５Ｌの反応フラスコに加え、過程全体で温度を０～１０℃に保持する。ｍ-クロロ過安息香酸を加えた後、反応フラスコの氷水浴を除去し、オイルバスに交換し、その内部温度を２０～２５℃に安定させ、１２時間撹拌する。反応フラスコを氷水浴に入れて１時間撹拌し、ろ過し、ろ過ケーキをジクロロメタン（４００ｍＬ×２）ですすぎ、濾液を２５～３０℃で１０％のチオ硫酸ナトリウム水溶液をデンプンのヨウ化カリウム試験紙が青くならないように滴下し、系内に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液をｐＨ＝７になるように滴下する。静置して成層化させ、有機相を残し、水相を３Ｌのジクロロメタンで再度抽出し、有機相を合わせる。有機相を１％の炭酸水素ナトリウム水溶液（４Ｌ×１０）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧濃縮する。濃縮された固体をオーブンで乾燥させて、１－４ｈが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+４０８、実測値４０８。
３．１Ｌの無水ジクロロメタンをきれいに洗浄した５Ｌの三口フラスコに加え、撹拌を開始する。秤量した１－４ｇ（４５１．３４ｇ）を反応フラスコに加え、固体が溶解した後、反応フラスコを氷水浴に入れ、反応系の内部温度を０℃に下げる。秤量したｍ-クロロ過安息香酸（４２９．８１ｇ）をバッチ式でゆっくりと５Ｌの反応フラスコに加え、過程全体で温度を０～１０℃に保持する。ｍ-クロロ過安息香酸を加えた後、反応フラスコの氷水浴を除去し、オイルバスに交換し、その内部温度を２０～２５℃に安定させ、１２時間撹拌する。反応フラスコを氷水浴に入れて１時間撹拌し、ろ過し、ろ過ケーキをジクロロメタン（４００ｍＬ×２）ですすぎ、濾液を２５～３０℃で１０％のチオ硫酸ナトリウム水溶液をデンプンのヨウ化カリウム試験紙が青くならないように滴下し、系内に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液をｐＨ＝７になるように滴下する。静置して成層化させ、有機相を残し、水相を３Ｌのジクロロメタンで再度抽出し、有機相を合わせる。有機相を１％の炭酸水素ナトリウム水溶液（４Ｌ×１０）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濾液を減圧濃縮する。濃縮された固体をオーブンで乾燥させて、１－４ｈが得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+４０８、実測値４０８。
【0060】
ステップ７
５Ｌの三口フラスコに１－４ｈ（３０１．４２ｇ）を加え、テトラヒドロフラン（１．５Ｌ）を加え、均一に撹拌し、内部温度が１０～２０℃でトリエチルアミン（２０６ｍＬ）を滴下し、均一に撹拌する。内部温度が２０～３０℃でトリフルオロ酢酸無水物（２０６ｍＬ）を滴下して２０～３０℃で０．５時間反応する。反応液に水（１．５Ｌ）を加え、均一に撹拌し、反応液が濁る。内部温度が４０～５０℃で固体水酸化ナトリウム（６００ｇ）を加えて０．５時間撹拌し、大量の固体が析出し、メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテルを１．５Ｌ加え、０．５時間撹拌する。反応液を液体分離し、上層の有機相をろ過し、固体を得る。固体をメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル／酢酸エチル（４．４Ｌ，１０：１）でパルプ化し、スラリーをろ過して白色固体を得る。白色固体をオーブンに入れて乾燥させて、１－４粗生成物（３７１．５２ｇ）を得る。５０Ｌの反応釜にテトラヒドロフラン（７Ｌ）を加え、内部温度を２０～２５℃に制御し、１－４粗生成物（１７１３．１９ｇ、他のバッチを組み合わせる）を加え、内部温度が２０～２５℃で０．５時間撹拌する。水を８．６Ｌ加え、２０～２５℃で０．５時間撹拌し、固体水酸化ナトリウム（８００ｇ）を加え、内部温度が２０～２５℃で０．５時間撹拌する。メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（８．６Ｌ）を加えて内部温度が２０～２５℃で０．５時間撹拌する。液体分離し、上層の有機相をろ過し、ろ過によって得られた固体を残し、固体をオーブンに入れて恒量になるまで乾燥させて、１－４が得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+４０８、実測値４０８。
５Ｌの三口フラスコに１－４ｈ（３０１．４２ｇ）を加え、テトラヒドロフラン（１．５Ｌ）を加え、均一に撹拌し、内部温度が１０～２０℃でトリエチルアミン（２０６ｍＬ）を滴下し、均一に撹拌する。内部温度が２０～３０℃でトリフルオロ酢酸無水物（２０６ｍＬ）を滴下して２０～３０℃で０．５時間反応する。反応液に水（１．５Ｌ）を加え、均一に撹拌し、反応液が濁る。内部温度が４０～５０℃で固体水酸化ナトリウム（６００ｇ）を加えて０．５時間撹拌し、大量の固体が析出し、メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテルを１．５Ｌ加え、０．５時間撹拌する。反応液を液体分離し、上層の有機相をろ過し、固体を得る。固体をメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル／酢酸エチル（４．４Ｌ，１０：１）でパルプ化し、スラリーをろ過して白色固体を得る。白色固体をオーブンに入れて乾燥させて、１－４粗生成物（３７１．５２ｇ）を得る。５０Ｌの反応釜にテトラヒドロフラン（７Ｌ）を加え、内部温度を２０～２５℃に制御し、１－４粗生成物（１７１３．１９ｇ、他のバッチを組み合わせる）を加え、内部温度が２０～２５℃で０．５時間撹拌する。水を８．６Ｌ加え、２０～２５℃で０．５時間撹拌し、固体水酸化ナトリウム（８００ｇ）を加え、内部温度が２０～２５℃で０．５時間撹拌する。メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（８．６Ｌ）を加えて内部温度が２０～２５℃で０．５時間撹拌する。液体分離し、上層の有機相をろ過し、ろ過によって得られた固体を残し、固体をオーブンに入れて恒量になるまで乾燥させて、１－４が得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+４０８、実測値４０８。
【0061】
実施例１：式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型の調製
ステップ１
撹拌と窒素保護を開始し、順次にジクロロメタン（８．６Ｌ）、水（８．６Ｌ）、出発物質１－１（５７５．３４ｇ）を反応釜に加える。反応釜の内部温度を１０－１５℃に制御し、順次に反応釜に炭酸水素ナトリウム（１２８９．３６ｇ）、テトラブチル硫酸水素アンモニウム（１３３．８７ｇ）及び出発物質１－２（７６０．２５ｇ）を加え、内部温度を１０－１５℃に制御して２時間撹拌する。反応液を静置して成層化させ、有機相を留分が流出しなくなるまで減圧濃縮する。濃縮液を三口フラスコに移して内部温度を６０－７０℃に制御して１２時間撹拌した後、室温まで自然冷却し、粗生成物をシリカゲルで迅速にろ過してから生成物がなくなるまでジクロロメタンで洗い流す。溶離液を約１．２Ｌに減圧濃縮した後、１％の炭酸水素ナトリウム水溶液（３Ｌ）で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウム（５００ｇ）で乾燥し、ろ過した後に有機相を留分が流出しなくなるまで減圧濃縮し、得られた中間体１－３は、精製せずにそのまま次のステップに使用される。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+１９９、実測値１９９。
1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ3Ｃｌ） δ ７．８１ － ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０１ － ６．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ５．８４ （ｓ， ２Ｈ）， ２．５２ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２７ （ｓ， ３Ｈ）。
【化7】
撹拌と窒素保護を開始し、順次にジクロロメタン（８．６Ｌ）、水（８．６Ｌ）、出発物質１－１（５７５．３４ｇ）を反応釜に加える。反応釜の内部温度を１０－１５℃に制御し、順次に反応釜に炭酸水素ナトリウム（１２８９．３６ｇ）、テトラブチル硫酸水素アンモニウム（１３３．８７ｇ）及び出発物質１－２（７６０．２５ｇ）を加え、内部温度を１０－１５℃に制御して２時間撹拌する。反応液を静置して成層化させ、有機相を留分が流出しなくなるまで減圧濃縮する。濃縮液を三口フラスコに移して内部温度を６０－７０℃に制御して１２時間撹拌した後、室温まで自然冷却し、粗生成物をシリカゲルで迅速にろ過してから生成物がなくなるまでジクロロメタンで洗い流す。溶離液を約１．２Ｌに減圧濃縮した後、１％の炭酸水素ナトリウム水溶液（３Ｌ）で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウム（５００ｇ）で乾燥し、ろ過した後に有機相を留分が流出しなくなるまで減圧濃縮し、得られた中間体１－３は、精製せずにそのまま次のステップに使用される。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+１９９、実測値１９９。
1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ3Ｃｌ） δ ７．８１ － ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０１ － ６．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ５．８４ （ｓ， ２Ｈ）， ２．５２ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２７ （ｓ， ３Ｈ）。
【0062】
ステップ２
２－メチルテトラヒドロフラン（９７０２ｍＬ）を反応釜に加え、撹拌を開始して内部温度を１０－２０℃に制御し、次に、順次に１－４（１０７８．２６ｇ）、炭酸セシウム（１０１７．６３ｇ）及び中間体１－３（６３１．７１ｇ）を加える。反応釜の内部温度を５７－６３℃に上げて２時間４０分撹拌した後、反応を停止した。反応釜の内部温度を１５－２５℃に下げた後、反応液に水（１０．７８Ｌ）を加え、撹拌した後に静置して成層化させ、得られた水相を２－メチルテトラヒドロフランで２回（５３９０ｍＬ×２）抽出し、合わせた有機相を約２．２Ｌに減圧濃縮する。濃縮液にアセトン（１０７８ｍＬ）とｎ-ヘプタン（２１５６ｍＬ）を加えて留分が流出しなくなるまで濃縮し、緩い固体が得られる。内部温度を１０－３０℃に制御し、該固体を混合溶媒（１１．０４９５Ｌ、アセトン：ｎ-ヘプタン＝１：４０）でパルプ化して３回撹拌し、ろ過してｎ-ヘプタン（１０７８ｍＬ）ですすぐ。ろ過ケーキを恒量になるまで真空減圧乾燥し、中間体１－５が得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+５７０、実測値５７０。
1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ3Ｃｌ） δ ８．８６ － ８．７８ （ｍ， １Ｈ）， ８．１３ － ８．０４ （ｍ， １Ｈ）， ７．９３ － ７．８６ （ｍ， １Ｈ）， ７．５８ － ７．４９ （ｍ， １Ｈ）， ７．３９ － ７．３２ （ｍ， １Ｈ）， ７．０９ － ６．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ６．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８６ － ４．７６ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ － ４．３０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３ － ３．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５７ － ３．４７ （ｍ， １Ｈ）， ３．４６ － ３．３７ （ｍ， １Ｈ）， ２．７６ － ２．６７ （ｍ， ３Ｈ）， ２．５９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３９ － ２．２９ （ｍ， ４Ｈ）， ２．０９ － １．９７ （ｍ， １Ｈ）， １．４６ （ｓ， ９Ｈ）。
２－メチルテトラヒドロフラン（９７０２ｍＬ）を反応釜に加え、撹拌を開始して内部温度を１０－２０℃に制御し、次に、順次に１－４（１０７８．２６ｇ）、炭酸セシウム（１０１７．６３ｇ）及び中間体１－３（６３１．７１ｇ）を加える。反応釜の内部温度を５７－６３℃に上げて２時間４０分撹拌した後、反応を停止した。反応釜の内部温度を１５－２５℃に下げた後、反応液に水（１０．７８Ｌ）を加え、撹拌した後に静置して成層化させ、得られた水相を２－メチルテトラヒドロフランで２回（５３９０ｍＬ×２）抽出し、合わせた有機相を約２．２Ｌに減圧濃縮する。濃縮液にアセトン（１０７８ｍＬ）とｎ-ヘプタン（２１５６ｍＬ）を加えて留分が流出しなくなるまで濃縮し、緩い固体が得られる。内部温度を１０－３０℃に制御し、該固体を混合溶媒（１１．０４９５Ｌ、アセトン：ｎ-ヘプタン＝１：４０）でパルプ化して３回撹拌し、ろ過してｎ-ヘプタン（１０７８ｍＬ）ですすぐ。ろ過ケーキを恒量になるまで真空減圧乾燥し、中間体１－５が得られる。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+５７０、実測値５７０。
1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ3Ｃｌ） δ ８．８６ － ８．７８ （ｍ， １Ｈ）， ８．１３ － ８．０４ （ｍ， １Ｈ）， ７．９３ － ７．８６ （ｍ， １Ｈ）， ７．５８ － ７．４９ （ｍ， １Ｈ）， ７．３９ － ７．３２ （ｍ， １Ｈ）， ７．０９ － ６．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ６．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８６ － ４．７６ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ － ４．３０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３ － ３．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５７ － ３．４７ （ｍ， １Ｈ）， ３．４６ － ３．３７ （ｍ， １Ｈ）， ２．７６ － ２．６７ （ｍ， ３Ｈ）， ２．５９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３９ － ２．２９ （ｍ， ４Ｈ）， ２．０９ － １．９７ （ｍ， １Ｈ）， １．４６ （ｓ， ９Ｈ）。
【0063】
ステップ３
内部温度を２０－３０℃に制御して５Ｌの三口フラスコ内に順次に無水テトラヒドロフラン（４．２４Ｌ）と濃硫酸（７１２．４３ｇ）を加え、均一に撹拌した後、使用に準備する。内部温度を２０－３０℃に制御して反応釜に順次に１－５（１０６２．１５ｇ）とテトラヒドロフラン（４．２４Ｌ）を加え、均一に撹拌した後に系中に予め調製された硫酸テトラヒドロフラン溶液を滴下し、続いて反応の内部温度を３５－４５℃に制御して４時間撹拌し、系中に大量の白色沈殿物が次第に析出する。反応釜にメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（８．４８Ｌ）をゆっくりと加えて内部温度を２０－３０℃に制御して０．５時間撹拌し、ろ過した後の固体を２０－３０℃で混合溶媒（メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル／テトラヒドロフラン＝１０．６Ｌ／１０．６Ｌ）及びメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（２１．２Ｌ）で順次に０．５時間パルプ化した後、さらに、濾液のｐＨが約７になるまで順次に水で５回（２１．２Ｌ×５）パルプ化する。内部温度を２０－３０℃に制御し、該固体を順次にメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（１５．９Ｌ）と混合溶媒（メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル／テトラヒドロフラン＝１０．６Ｌ／５．３Ｌ）の中でパルプ化した後、ろ過、すすぎ及び４５℃以下の真空乾燥を経て式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型が得られる。イオンクロマトグラフィーの検出によって、硫酸根の含有量は９．１７％であり、これにより、式（ＩＩ）で示される化合物に０．５個の硫酸塩もあると推定される。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+４７０、実測値４７０。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ6） δ ８．６４ － ８．５８ （ｍ， １Ｈ）， ８．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７４ － ７．６２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１６ － ７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ７．１１ － ７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ６．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９４ － ３．８９ （ｍ， １Ｈ）， ３．７０ － ３．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５５ － ３．４４ （ｍ， １Ｈ）， ３．４３ － ３．２７ （ｍ， １Ｈ）， ２．５９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４８ － ２．４５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．３５ － ２．２９ （ｍ， １Ｈ）， ２．２９ － ２．２４ （ｍ， ３Ｈ）， ２．１６ － １．９０ （ｍ， １Ｈ）。
内部温度を２０－３０℃に制御して５Ｌの三口フラスコ内に順次に無水テトラヒドロフラン（４．２４Ｌ）と濃硫酸（７１２．４３ｇ）を加え、均一に撹拌した後、使用に準備する。内部温度を２０－３０℃に制御して反応釜に順次に１－５（１０６２．１５ｇ）とテトラヒドロフラン（４．２４Ｌ）を加え、均一に撹拌した後に系中に予め調製された硫酸テトラヒドロフラン溶液を滴下し、続いて反応の内部温度を３５－４５℃に制御して４時間撹拌し、系中に大量の白色沈殿物が次第に析出する。反応釜にメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（８．４８Ｌ）をゆっくりと加えて内部温度を２０－３０℃に制御して０．５時間撹拌し、ろ過した後の固体を２０－３０℃で混合溶媒（メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル／テトラヒドロフラン＝１０．６Ｌ／１０．６Ｌ）及びメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（２１．２Ｌ）で順次に０．５時間パルプ化した後、さらに、濾液のｐＨが約７になるまで順次に水で５回（２１．２Ｌ×５）パルプ化する。内部温度を２０－３０℃に制御し、該固体を順次にメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（１５．９Ｌ）と混合溶媒（メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル／テトラヒドロフラン＝１０．６Ｌ／５．３Ｌ）の中でパルプ化した後、ろ過、すすぎ及び４５℃以下の真空乾燥を経て式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型が得られる。イオンクロマトグラフィーの検出によって、硫酸根の含有量は９．１７％であり、これにより、式（ＩＩ）で示される化合物に０．５個の硫酸塩もあると推定される。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+４７０、実測値４７０。1Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ6） δ ８．６４ － ８．５８ （ｍ， １Ｈ）， ８．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７４ － ７．６２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１６ － ７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ７．１１ － ７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ６．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９４ － ３．８９ （ｍ， １Ｈ）， ３．７０ － ３．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５５ － ３．４４ （ｍ， １Ｈ）， ３．４３ － ３．２７ （ｍ， １Ｈ）， ２．５９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．４８ － ２．４５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．３５ － ２．２９ （ｍ， １Ｈ）， ２．２９ － ２．２４ （ｍ， ３Ｈ）， ２．１６ － １．９０ （ｍ， １Ｈ）。
【0064】
【0065】
実施例２：式（Ｉ）で示される化合物の調製
化合物１－５（２．２ｇ，３．８４ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（３５ｍＬ）に溶けて、反応液に塩酸酢酸エチル溶液（４Ｍ，２０ｍＬ）を加え、１５℃で１２時間撹拌する。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてｐＨ値を８に調節し、酢酸エチル（６０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウム（５ｇ）で乾燥し、ろ過し、減圧濃縮して得られた粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（中性系）で精製して式（Ｉ）で示される化合物を得た。
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+ ４７０、実測値４７０。
1Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ＝ ８．７１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．４， ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．５， ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０９ （ｓ， １Ｈ）， ７．０５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７７ － ３．６２ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５９ － ３．５０ （ｍ， １Ｈ）， ３．２０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．９， ９．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， ３Ｈ）， ２．５３ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３２ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３０ － ２．２３ （ｍ， １Ｈ）， １．９６ － １．８６ （ｍ， １Ｈ）。
【化8】
ＭＳ－ＥＳＩ 計算値［Ｍ＋Ｈ］+ ４７０、実測値４７０。
1Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤ3ＯＤ） δ ＝ ８．７１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．４， ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．５， ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０９ （ｓ， １Ｈ）， ７．０５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７７ － ３．６２ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５９ － ３．５０ （ｍ， １Ｈ）， ３．２０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．９， ９．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， ３Ｈ）， ２．５３ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３２ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３０ － ２．２３ （ｍ， １Ｈ）， １．９６ － １．８６ （ｍ， １Ｈ）。
【0066】
実施例３：式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型の調製
適量な式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型を秤量してサンプル瓶に入れ、一定の体積の表３における溶媒を加え、異なる単一溶媒の懸濁液または溶液を調製する。懸濁液を５０℃条件下で３時間持続的に撹拌し、サンプルをろ過して得られた固体を真空乾燥オーブンに入れ、４５℃条件下で真空乾燥して残留溶媒を除去する。
適量な式（ＩＩ）で示される化合物のＡ結晶型を秤量してサンプル瓶に入れ、一定の体積の表３における溶媒を加え、異なる単一溶媒の懸濁液または溶液を調製する。懸濁液を５０℃条件下で３時間持続的に撹拌し、サンプルをろ過して得られた固体を真空乾燥オーブンに入れ、４５℃条件下で真空乾燥して残留溶媒を除去する。
【0067】
【表4】
【0068】
【0069】
実施例４：式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型の吸湿性に関する研究
実験材料：
ＳＭＳ ＤＶＳ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ 動的ガス吸着計
実験方法：
式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型を１０～１５ｍｇ取ってＤＶＳサンプルトレイ内に入れてテストする。
実験結果：
式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型のＤＶＳスペクトルを図７に示し、△Ｗ＝０．７３６％である。
実験結論：
式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型は２５℃と８０％のＲＨでの吸湿重量増加率は０．７３６％であり、わずかな吸湿性がある。
実験材料：
ＳＭＳ ＤＶＳ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ 動的ガス吸着計
実験方法：
式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型を１０～１５ｍｇ取ってＤＶＳサンプルトレイ内に入れてテストする。
実験結果：
式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型のＤＶＳスペクトルを図７に示し、△Ｗ＝０．７３６％である。
実験結論：
式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型は２５℃と８０％のＲＨでの吸湿重量増加率は０．７３６％であり、わずかな吸湿性がある。
【0070】
実施例５：式（ＩＩ）で示される化合物のＢ結晶型の固体安定性に関する研究
式（ＩＩ）で示される化合物の結晶型Ｂをそれぞれ４０℃／７５％ＲＨ条件下で（両層ＬＤＰＥバッグで密封した後、アルミホイルバッグでヒートシールされる）６ヶ月間放置し、２５℃／６０％ＲＨ条件下で（両層ＬＤＰＥバッグで密封した後、アルミホイルバッグでヒートシールされる）１２ヶ月間放置した。各サンプリングポイントで結晶型をそれぞれテストし、サンプルの結晶型の安定性を決定する。
式（ＩＩ）で示される化合物の結晶型Ｂをそれぞれ４０℃／７５％ＲＨ条件下で（両層ＬＤＰＥバッグで密封した後、アルミホイルバッグでヒートシールされる）６ヶ月間放置し、２５℃／６０％ＲＨ条件下で（両層ＬＤＰＥバッグで密封した後、アルミホイルバッグでヒートシールされる）１２ヶ月間放置した。各サンプリングポイントで結晶型をそれぞれテストし、サンプルの結晶型の安定性を決定する。
【0071】
【表5】
【0072】
生物テスト実験
実験例１：房水中の薬物動態テスト
実験目的：
化合物はエステル官能基を含むプロドラッグ分子であり、点眼投与時に眼組織中の豊富なエステル加水分解酵素の作用により活性薬物分子（母薬）に加水分解される。本実験では、化合物が体内で活性薬物成分を生成する速度と活性薬物成分の曝露量を検出する。
実験材料：
雄性ニュージーランド白兎、月齢３－６月、体重２．０－５．０ｋｇ、▲ひ▼州東方養殖有限公司から購入される。
点眼サンプル配置：
使用された溶媒は１．２％ヒドロキシプロピルメチルセルロースＥ５／２０．５％ポロキサマーＰ４０７／１．６％ポロキサマーＰ１８８である。
実験操作：
点眼投与用量は０．５ｍｇ／目であり、両眼に点眼投与した。投与した後０．２５ｈ、０．５ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈに、房水を収集し、房水サンプルを調製する。すべてのサンプルを液体クロマトグラフィー結合質量分析技術で実験動物の房水中の投与化合物の含有量を定量的に検出し、測定した濃度値は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ非コンパートメントモデルを用いて、房水濃度－時間データに基づいて、半減期、房水薬物ピーク濃度、房水薬物ピーク時間、単位曝露量などのパラメータを計算する。
実験例１：房水中の薬物動態テスト
実験目的：
化合物はエステル官能基を含むプロドラッグ分子であり、点眼投与時に眼組織中の豊富なエステル加水分解酵素の作用により活性薬物分子（母薬）に加水分解される。本実験では、化合物が体内で活性薬物成分を生成する速度と活性薬物成分の曝露量を検出する。
実験材料：
雄性ニュージーランド白兎、月齢３－６月、体重２．０－５．０ｋｇ、▲ひ▼州東方養殖有限公司から購入される。
点眼サンプル配置：
使用された溶媒は１．２％ヒドロキシプロピルメチルセルロースＥ５／２０．５％ポロキサマーＰ４０７／１．６％ポロキサマーＰ１８８である。
実験操作：
点眼投与用量は０．５ｍｇ／目であり、両眼に点眼投与した。投与した後０．２５ｈ、０．５ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、２４ｈに、房水を収集し、房水サンプルを調製する。すべてのサンプルを液体クロマトグラフィー結合質量分析技術で実験動物の房水中の投与化合物の含有量を定量的に検出し、測定した濃度値は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ非コンパートメントモデルを用いて、房水濃度－時間データに基づいて、半減期、房水薬物ピーク濃度、房水薬物ピーク時間、単位曝露量などのパラメータを計算する。
【0073】
【表6】
【0074】
結論：実験結果から分かるように、房水の中から受試品化合物（プロドラッグ分子）は検出されず、主にそのエステル加水分解後の活性代謝産物（母薬分子）が検出され、式（Ｉ）で示される化合物は活性薬物の曝露量を顕著に向上させるとともに、血中薬物ピーク濃度と作用時間はいずれも顕著に増加する。
【0075】
実験例２：急性高眼圧のニュージーランドウサギの眼圧降下試験
実験目的：
前房に粘弾剤を注射してウサギの急性高眼圧を誘導し、点眼投与によって式（Ｉ）で示される化合物の異なる濃度での眼圧降下作用を探る。
実験材料：
雄性ニュージーランド白兎、日齢９７－１２７日、体重２．５－３．４ｋｇ、▲ひ▼州東方養殖有限公司から購入される。
実験操作：
５０匹の雄性ニュージーランド白兎を、体重に応じてランダムにグループ化し、合計５つのグループ、１０匹／グループである。グループ１－５の動物の右眼の前房に医療用ヒアルロン酸ナトリウムゲルを一度に注射し、１００μＬ／目で、動物に高眼圧の発生を誘導する。モデル作成した後５～１５分間に、右眼にそれぞれ溶媒、Ｋ－１１５及び受試品（異なる濃度の式（Ｉ）で示される化合物）を点眼投与し、左眼に溶媒を点眼投与し、投与体積はいずれも５０μＬ／目であり、投与前、投与後の２、４、６、８及び１０時間で動物の両眼の眼圧をそれぞれ測定した。実験結果を表６に示す。
実験目的：
前房に粘弾剤を注射してウサギの急性高眼圧を誘導し、点眼投与によって式（Ｉ）で示される化合物の異なる濃度での眼圧降下作用を探る。
実験材料：
雄性ニュージーランド白兎、日齢９７－１２７日、体重２．５－３．４ｋｇ、▲ひ▼州東方養殖有限公司から購入される。
実験操作：
５０匹の雄性ニュージーランド白兎を、体重に応じてランダムにグループ化し、合計５つのグループ、１０匹／グループである。グループ１－５の動物の右眼の前房に医療用ヒアルロン酸ナトリウムゲルを一度に注射し、１００μＬ／目で、動物に高眼圧の発生を誘導する。モデル作成した後５～１５分間に、右眼にそれぞれ溶媒、Ｋ－１１５及び受試品（異なる濃度の式（Ｉ）で示される化合物）を点眼投与し、左眼に溶媒を点眼投与し、投与体積はいずれも５０μＬ／目であり、投与前、投与後の２、４、６、８及び１０時間で動物の両眼の眼圧をそれぞれ測定した。実験結果を表６に示す。
【0076】
【表7】
【0077】
結論：急性高眼圧モデルでは、式（Ｉ）で示される化合物は異なる測定用量下でいずれも良好な眼圧降下効果を示し、同時に一定の用量依存性を有し、眼圧降下幅度と持続作用時間はいずれもＫ－１１５より優れた。
【0078】
実験例３：１４日間、正常眼圧のニュージーランドウサギに点眼投与を繰り返す眼圧降下と眼部毒性試験
実験目的：
正常眼圧のウサギに点眼投与を１４日間繰り返すことによって式（Ｉ）で示される化合物の眼圧降下作用と潜在的な眼部毒性を探る。
実験材料：
雄性ニュージーランド白兎、日齢９７－１２７日、体重２．６３．５ｋｇ、▲ひ▼州東方養殖有限公司から購入される。
実験操作１：
雄性ニュージーランド白兎を、ランダムに７つのグループに分けて、各グループに６匹である。動物体重に応じてランダムにグループ化する。グループ１－７の動物の両眼に溶媒／対照品／受試品を点眼投与し、投与体積はいずれも５０μＬ／目であり、１日１回で１４日間連続し、初回投与日を１日目として記録する。１日目の投与前、投与後１、２、４、６、８及び１０時間で動物眼圧をそれぞれ測定し、２－１４日目に、Ｋ－１１５投与グループを毎日投与後１時間で眼圧を測定し、その他の各グループを毎日投与後４時間で動物眼圧を測定する。実験結果を表７、８及び９に示す。
実験目的：
正常眼圧のウサギに点眼投与を１４日間繰り返すことによって式（Ｉ）で示される化合物の眼圧降下作用と潜在的な眼部毒性を探る。
実験材料：
雄性ニュージーランド白兎、日齢９７－１２７日、体重２．６３．５ｋｇ、▲ひ▼州東方養殖有限公司から購入される。
実験操作１：
雄性ニュージーランド白兎を、ランダムに７つのグループに分けて、各グループに６匹である。動物体重に応じてランダムにグループ化する。グループ１－７の動物の両眼に溶媒／対照品／受試品を点眼投与し、投与体積はいずれも５０μＬ／目であり、１日１回で１４日間連続し、初回投与日を１日目として記録する。１日目の投与前、投与後１、２、４、６、８及び１０時間で動物眼圧をそれぞれ測定し、２－１４日目に、Ｋ－１１５投与グループを毎日投与後１時間で眼圧を測定し、その他の各グループを毎日投与後４時間で動物眼圧を測定する。実験結果を表７、８及び９に示す。
【0079】
【表8】
【0080】
【表9】
【0081】
【表10】
【0082】
結論：式（Ｉ）で示される化合物の単回投与は全ての測定用量（０．５－８．０ｍｇ／ｍＬ）下でいずれもより優れた薬効（最高の眼圧降下効果と作用時間）を示し、Ｋ－１１５より顕著に優れている。１４日間連続投与した場合で、式（Ｉ）で示される化合物は０．５ｍｇ／ｍＬの用量で顕著な眼圧降下効果を持続的に維持することができ、ピーク（Ｃｍａｘ）眼圧降下効果の評価では依然としてＫ－１１５より顕著に優れている。
【0083】
実験操作２：
４２匹の雄性ニュージーランド白兎を、ランダムに７つのグループに分けて、各グループに６匹である。動物体重に応じてランダムにグループ化する。グループ１－７の動物の左眼に生理食塩水を点眼投与し、右眼にそれぞれ溶媒／対照品／受試品を点眼投与し、投与体積はいずれも５０μＬ／目であり、１日１回で１４日間連続投与し、初回投与日を１日目として記録する。１日目投与前、１日目投与後の１、２、４、６、８及び１０時間で動物の眼圧（表１０）をそれぞれ測定する。
４２匹の雄性ニュージーランド白兎を、ランダムに７つのグループに分けて、各グループに６匹である。動物体重に応じてランダムにグループ化する。グループ１－７の動物の左眼に生理食塩水を点眼投与し、右眼にそれぞれ溶媒／対照品／受試品を点眼投与し、投与体積はいずれも５０μＬ／目であり、１日１回で１４日間連続投与し、初回投与日を１日目として記録する。１日目投与前、１日目投与後の１、２、４、６、８及び１０時間で動物の眼圧（表１０）をそれぞれ測定する。
【0084】
試験の開始前（２日目／１日目）、投与期間中毎日投与前（１－１４日目）、最終（１４日目）投与後の１、２、４、２４、４８及び７２時間で、ハンドヘルドスリットランプで動物の両眼に対して眼刺激反応検査とフルオレセインナトリウム検査を行う（評価スコアの基準を参照して評価する）。
【0085】
【表11】
【0086】
結論：式（Ｉ）で示される化合物の単回投与は全ての測定用量（０．２５－４．０ｍｇ／ｍＬ）下でいずれもより優れた薬効（最高の眼圧降下効果と作用時間）を示し、Ｋ－１１５より顕著に優れている。
【0087】
試験の開始前Ｄａｙ－２～Ｄａｙ－１（２日目／１日目）、投与期間中Ｄａｙ１－１４の毎日の１回目の投与前（１－１４日目）及び最終の投与後１、２、４、２４、４８及び７２時間で、ハンドヘルドスリットランプで動物の両眼に対して眼刺激反応検査を行い、評価スコアの基準は以下のとおりである。
【表12】
【0088】
眼刺激反応評価：角膜、虹彩、結膜、浮腫及び分泌物の最大スコアを加算し、各動物の眼の各時間点での眼刺激症状の合計スコアを得る。眼刺激症状の評価スコアに対して、各観察時間点で、各グループの動物のスコアの平均値を計算し、下記表に従って各時間点で、各グループの動物の眼刺激度合を判定する。
【0089】
眼刺激性の評価基準：
【表13】
【0090】
フルオレセインナトリウム検査：毎回の眼刺激反応検査の終了後、ハンドヘルドスリットランプでフルオレセインナトリウム検査を行い、評価スコアの基準は以下のとおりである。
【表14】
【0091】
実験結果は以下のとおりである。
眼刺激性評価基準に従って評価し、各グループの各時間点での眼刺激反応合計スコアは３未満であり、基準分類にしたがってすべて刺激性がない。
眼刺激性評価基準に従って評価し、各グループの各時間点での眼刺激反応合計スコアは３未満であり、基準分類にしたがってすべて刺激性がない。
【0092】
試験中、各グループの動物に生理食塩水で眼を処理し、溶媒、Ｋ－１１５及び式（Ｉ）で示される化合物で眼を処理するフルオレセインナトリウム検査スコアはいずれも１未満である。各グループの動物は各処理と個体時間点で、いずれも角膜蛍光染色スコアが１の染色が現れ、生理的染色と考えられる。各グループは各時間点でいずれも角膜上皮損傷が現れない。
【0093】
結論：本試験条件下で、Ｋ－１１５は４ｍｇ／ｍＬ濃度下で、１４日間連続点眼し、５０マイクロリットル／目／日で、刺激性がない。式（Ｉ）で示される化合物は０．２５～４ｍｇ／ｍＬの濃度範囲内で、１４日間連続点眼し、５０マイクロリットル／目／日で、刺激性がない。
【0094】
実験例４：トキシコキネティクス実験
実験目的：
１４日連続投与後の化合物が血漿中で活性薬物成分を生成する速度と活性薬物成分の曝露量を検出する。
実験材料：
雄性ニュージーランド白兎、月齢３－６月、体重２．０－５．０ｋｇ、▲ひ▼州東方養殖有限公司から購入される。
実験操作：
１４日連続投与後、１４－１５日目に、式（Ｉ）で示される化合物（８．０ｍｇ／ｍＬ）投与グループを選択して、０時間（投与前）と投与後０．５、１、２、４、８、及び２４時間の血液サンプルを収集した。毒性実験動物の耳中動脈、または後肢の伏在静脈（または他の適切な部位）から約０．８ｍＬの全血を収集し、エチレンジアミン四酢酸二カリウム（Ｋ2ＥＤＴＡ）を抗凝固剤とするラベル付きの採血管に入れる。採血後６０分間で３０００回り／分と２℃～８℃条件下で１０分間遠心分離して血漿を取得する。すべてのサンプルに対して液体クロマトグラフィー結合質量分析技術を使用して実験動物の血漿における投与化合物の含有量を定量的に検出する。
実験目的：
１４日連続投与後の化合物が血漿中で活性薬物成分を生成する速度と活性薬物成分の曝露量を検出する。
実験材料：
雄性ニュージーランド白兎、月齢３－６月、体重２．０－５．０ｋｇ、▲ひ▼州東方養殖有限公司から購入される。
実験操作：
１４日連続投与後、１４－１５日目に、式（Ｉ）で示される化合物（８．０ｍｇ／ｍＬ）投与グループを選択して、０時間（投与前）と投与後０．５、１、２、４、８、及び２４時間の血液サンプルを収集した。毒性実験動物の耳中動脈、または後肢の伏在静脈（または他の適切な部位）から約０．８ｍＬの全血を収集し、エチレンジアミン四酢酸二カリウム（Ｋ2ＥＤＴＡ）を抗凝固剤とするラベル付きの採血管に入れる。採血後６０分間で３０００回り／分と２℃～８℃条件下で１０分間遠心分離して血漿を取得する。すべてのサンプルに対して液体クロマトグラフィー結合質量分析技術を使用して実験動物の血漿における投与化合物の含有量を定量的に検出する。
【0095】
【表15】
【0096】
結論：式（Ｉ）で示される化合物は８ｍｇ／ｍＬの高用量で、投与後４時間で、その代謝産物濃度は０．９３４ｎｇ／ｍＬであり、投与後８時間で、その代謝産物濃度は検出限界より低く、システム安全性が高い。
［関連出願の相互参照］
［関連出願の相互参照］
【0097】
出願番号がＣＮ２０２０１１５２１０１１．６で、出願日が２０２０年１２月２１日である中国特許出願の優先権を主張する。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
