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特許7605747修飾されたＧＩＰペプチド類似体

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-12-16

(45)【発行日】2024-12-24

(54)【発明の名称】修飾されたＧＩＰペプチド類似体

(51)【国際特許分類】

C07K 14/575 20060101AFI20241217BHJP

A61P 3/00 20060101ALI20241217BHJP

A61P 3/10 20060101ALI20241217BHJP

A61P 5/50 20060101ALI20241217BHJP

A61P 3/08 20060101ALI20241217BHJP

A61P 3/04 20060101ALI20241217BHJP

A61P 3/06 20060101ALI20241217BHJP

A61P 9/00 20060101ALI20241217BHJP

A61P 9/12 20060101ALI20241217BHJP

A61P 9/10 20060101ALI20241217BHJP

A61K 38/22 20060101ALI20241217BHJP

【ＦＩ】

C07K14/575 ZNA

A61P3/00

A61P3/10

A61P5/50

A61P3/08

A61P3/04

A61P3/06

A61P9/00

A61P9/12

A61P9/10 101

A61K38/22

【請求項の数】 17

(21)【出願番号】P 2021552785

(86)(22)【出願日】2019-12-03

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-01-20

(86)【国際出願番号】 EP2019083506

(87)【国際公開番号】W WO2020115048

(87)【国際公開日】2020-06-11

【審査請求日】2022-11-29

(31)【優先権主張番号】19176739.1

(32)【優先日】2019-05-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】18209896.2

(32)【優先日】2018-12-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】521239624

【氏名又は名称】アンタグセラピューティクスエーピーエス

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋香元

(72)【発明者】

【氏名】スパール‐ウリッチ，アレクサンダー，ホヴァード

(72)【発明者】

【氏名】シヴァースン，ビアン，ビエンズ

(72)【発明者】

【氏名】リバー，ディッテ

(72)【発明者】

【氏名】ロースンキーレ，メッテ，マリー

【審査官】坂崎恵美子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１６／０３４１８６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２００８－５３０１３０（ＪＰ，Ａ）

【文献】Diabetologia，2015年，Vol.58，p.2144-2153

【文献】J.Med. Chem.，2006年，Vol.49，p.1047-1054

【文献】Molecular and Cellular Endocrinology，2015年，Vol.401，p.120-129

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ１４／５７５

Ａ６１Ｋ３８／２２

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

アミノ酸配列：

【化1】

又はその機能的バリアントからなるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、前記バリアントは、前記アミノ酸配列の任意のアミノ酸残基に１又は２個の個々のアミノ酸置換を有し、ただし、９位のアミノ酸残基がＥであり、１５位のアミノ酸残基がＥであり、１８位のアミノ酸残基がＫ又はＯｒｎであり、
前記アミノ酸配列は、前記アミノ酸配列又はその前記機能的バリアントの１８位のアミノ酸残基に脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号２）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドであるか、又はＺは、エキセンディン－４（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号３）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドであり、かつ前記ＧＩＰ類似体が、ＧＩＰＲのアンタゴニストである、ＧＩＰ類似体。

【請求項2】

前記ＧＩＰ類似体が、少なくとも８０％のＧＩＰＲ活性を阻害する、及び／又は
前記ＧＩＰ類似体が、少なくとも８０％のＧＩＰＲ活性を阻害し、ＧＩＰＲ活性の阻害が、細胞内ｃＡＭＰの減少として決定される、及び／又は
前記ＧＩＰ類似体が、５０ｎＭ又は５０ｎＭ未満のＩＣ５０値に相当するＧＩＰＲアンタゴニスト効力を有する、請求項１に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項3】

前記アミノ酸配列の３位のアミノ酸が、Ｅ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｐ、Ｄ、γ－グルタミン酸（γＧｌｕ）、Ｄ－γ－グルタミン酸（Ｄ－γＧｌｕ）、β－グルタミン酸（βＧｌｕ）、ｐｙｒｏＥ（ピログルタミン酸）及びグルタル酸から選択され；
前記アミノ酸配列の１１位のアミノ酸が、Ｓ、Ｋ、Ｏｒｎ及びＡから選択され；
前記アミノ酸配列の１２位のアミノ酸が、Ｉ、Ｋ、Ｏｒｎ及び２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）から選択され；
前記アミノ酸配列の１３位のアミノ酸が、ＡとＡｉｂから選択され；
前記アミノ酸配列の１６位のアミノ酸が、ＫとＲから選択され；
前記アミノ酸配列の１７位のアミノ酸が、Ｉ、Ｏｒｎ及びＫから選択され；
前記アミノ酸配列の２０位のアミノ酸が、Ｑ、Ｏｒｎ及びＫから選択され；
前記アミノ酸配列の２８位のアミノ酸が、ＡとＥから選択され；
前記アミノ酸配列の２９位のアミノ酸が、ＱとＧから選択され；かつ／又は
前記アミノ酸配列の３０位のアミノ酸が、Ｋ、Ｒ、Ｇ及びＡから選択される、
請求項１に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項4】

前記機能的バリアントが、前記アミノ酸配列の任意のアミノ酸残基に１個の個々のアミノ酸置換を有する、及び／又は前記機能的バリアントが、前記アミノ酸配列の任意のアミノ酸残基に２個の個々のアミノ酸置換を有し、ただし、９位のアミノ酸残基がＥであり、１５位のアミノ酸残基がＥであり、１８位のアミノ酸残基がＫ又はＯｒｎである、あるいは
前記機能的バリアントが、前記アミノ酸配列の任意のアミノ酸残基に１個の個々のアミノ酸置換を有する、及び／又は前記機能的バリアントが、前記アミノ酸配列の任意のアミノ酸残基に２個の個々のアミノ酸置換を有し、前記置換が保存的アミノ酸置換であり、ただし、９位のアミノ酸残基がＥであり、１５位のアミノ酸残基がＥであり、１８位のアミノ酸残基がＫ又はＯｒｎである、請求項１に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項5】

Ｚが、エキセンディン－４（３０－３９）のＣ末端の１以上の連続したアミノ酸残基（ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号４）からなる、請求項１に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項6】

Ｚが、
グリシン又はプロリン、
ＧＰ、ＰＳ、ＰＳＳ、ＧＰＳ、ＧＰＳＳ（配列番号６）、ＰＳＳＧ（配列番号１２）、ＰＳＳＧＡ（配列番号１３）、ＧＰＳＳＧ（配列番号７）、ＧＰＳＳＧＡ（配列番号８）、ＰＳＳＧＡＰ（配列番号１４）、ＧＰＳＳＧＡＰ（配列番号９）、ＰＳＳＧＡＰＰ（配列番号１５）、ＧＰＳＳＧＡＰＰ（配列番号１０）、ＰＳＳＧＡＰＰＰ（配列番号１６）、ＰＳＳＧＡＰＰＰ（配列番号１１）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号５）、及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号４）、又は前記アミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアント、
ＧＫ、ＧＫＫ、ＧＫＫＮ（配列番号１７）、ＧＫＫＮＤ（配列番号１８）、又は
ＧＫＫＮＤＷ（配列番号１９）、ＧＫＫＫＤＷ（配列番号２８）、ＧＫＫＮＤＫ（配列番号２９）、ＧＲＫＮＤＷ（配列番号２０）、ＧＫＲＮＤＷ（配列番号２１）、ＧＲＲＮＤＷ（配列番号２２）、ＧＫＫＮＤＷＫ（配列番号２３）、ＧＫＫＮＤＷＫＨ（配列番号２４）、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ（配列番号２５）、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ（配列番号２６）、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ（配列番号２７）及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ（配列番号２）、又は前記アミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアント、
からなる群から選択されるペプチドである、請求項１に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項7】

脂肪酸分子が、前記アミノ酸配列の１８位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に結合しており、例えば、脂肪酸分子が、前記アミノ酸配列の１８位のリジン残基の側鎖アミノ基に直接又はリンカーを介して結合している、請求項１に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項8】

前記脂肪酸分子が直鎖脂肪酸又は分岐脂肪酸である、請求項１に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項9】

前記脂肪酸分子が、モノアシル脂肪酸分子、若しくはジアシル脂肪酸分子である、及び／又は
前記脂肪酸分子が、式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ－（式中、ｎは、４～２４の整数である）のアシル基を含む、及び／又は
前記脂肪酸分子が、式ＣＯＯＨ（ＣＨ _２） _ｎＣＯ－（ジカルボン酸）（式中、ｎは、４～２４の整数である）から選択されるアシル基を含む、請求項１に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項10】

前記脂肪酸分子が、前記ＧＩＰ類似体のアミノ酸残基の側鎖のεアミノ基に直接又はリンカーを介して結合している、請求項１に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項11】

前記リンカーが、
ａ．α－アミノ酸、γ－アミノ酸及びω－アミノ酸、
ｂ．コハク酸、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、及びＡｓｐから選択される１以上のアミノ酸、
ｃ．γ－アミノブタノイル（γ－アミノ酪酸）、γ－Ｇｌｕ（γ－グルタミン酸）、β－Ａｓｐ（β－アスパラギル）、β－Ａｌａ（β－アラニル）及びＧｌｙのうちの１以上、及び
ｄ．［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_ｎ（ＡＥＥＡｃ_ｎ）（式中、ｎは、１～５０の整数、又は１～４、１～３又は１～２の整数である）
から個々に選択される１以上の部分を含む、請求項１０に記載のＧＩＰ類似体。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか１項に記載のＧＩＰ類似体を含む、医薬組成物。

【請求項13】

以下から選択されるアミノ酸配列：

【化2】

又はその機能的バリアントを有するＧＩＰ類似体を含む、医薬組成物であって、前記バリアントが１～２個の個々のアミノ酸置換を有する、医薬組成物。

【請求項14】

【化3】

又はその機能的バリアントから選択されるＧＩＰ類似体を含む、医薬組成物であって、前記バリアントが１～２個の個々のアミノ酸置換を有する、医薬組成物。

【請求項15】

【化4】

又はその機能的バリアントであるＧＩＰ類似体を含む、医薬組成物であって、前記バリアントが１～２個の個々のアミノ酸置換を有する、医薬組成物。

【請求項16】

ｉ）ＧＩＰ誘導性グルカゴン分泌、ｉｉ）ＧＩＰ誘導性インスリン分泌、ｉｉｉ）ＧＩＰ誘導性ソマトスタチン分泌、ｉｖ）ＧＩＰ誘導性グルコース取り込み、ｖ）ＧＩＰ誘導性脂肪酸合成及び／又は脂肪酸組み込み、ｖｉ）高い若しくは増加したＧＩＰＲの発現又は活性、ｖｉｉ）食後ＧＩＰ放出、ｖｉｉｉ）遊離脂肪酸及び／又はトリグリセリドの血清レベル、ｉｘ）ＧＩＰ誘導性食欲増加、ｘ）エネルギー支出のＧＩＰ誘導性減少、ｘｉ）腸からの栄養素の吸収のＧＩＰ誘導性増加、ｘｉｉ）ＧＬＰ－１の食欲抑制効果のＧＩＰ誘導性減少、ｘｉｉｉ）ＧＩＰ誘導性レプチン耐性のうちの１以上を阻害又は低下させる方法で使用するための、請求項１に記載のＧＩＰ類似体を含む医薬組成物又は医薬品。

【請求項17】

メタボリックシンドローム、肥満、糖尿病前症、Ｉ型糖尿病、２型糖尿病、インスリン抵抗性、空腹時グルコースの上昇、高血糖、空腹時血清トリグリセリドレベルの上昇、低レベルの超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、低レベルの高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、脂質異常血症、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の増加／減少、高コレステロールレベル、異常な脂質沈着、心血管疾患、血圧上昇及びアテローム性動脈硬化症から選択される病態を治療する方法で使用するための、請求項１に記載のＧＩＰ類似体を含む医薬組成物又は医薬品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＧＩＰ受容体のアンタゴニストであるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）由来のペプチド類似体に関する。これらのＧＩＰペプチド類似体は、１以上の個々のアミノ酸置換を含むことによって修飾され、リンカーを用いて／リンカーなしでコンジュゲートされた脂肪酸であり、その結果、改善されたアンタゴニスト活性及び改善された薬物動態を有する。

【背景技術】

【0002】

グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）は、食事後に腸のＫ細胞から分泌されるホルモンである^１。その姉妹ホルモンのグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）のように、ＧＩＰは強力なインスリン分泌促進物質である^２。ＧＬＰ－１のグルカゴン静的（ｇｌｕｃａｇｏｎｏｓｔａｔｉｃ）効果とは対照的に^３'^４、ＧＩＰは、ある条件下でグルカゴン放出特性を示すことが示されている（^３ _' ^５～１３）。ＧＩＰの生物学を理解することへの関心は、げっ歯類のＧＩＰＲ（ＧＩＰ受容体）及び脂肪症との関連によって強められた^{１４～２１}。ヒトでは、あまり明確ではないが、脂肪組織におけるＧＩＰＲ発現の証明^２２、高ＢＭＩと増加したＧＩＰレベルとの関連^{２２,２３}、高インスリンで、高グルコースの状態でのＧＩＰ投与後の脂肪組織の血流及びＴＡＧ（トリアシルグリセロール）沈着の増加^２４、食事制限されている肥満児で観察される基礎及び食後のＧＩＰレベルの減少^２５、及び高脂肪食を与えられている健康な若い男性で観察される絶食ＧＩＰレベルの増加^２６と共に、脂肪代謝におけるＧＩＰの役割について同様の証拠がある。

【0003】

そのため、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのエキセンディン（９－３９）の発見後のＧＬＰ－１の理解の進歩^{２７,２８}を目の当たりにした研究者からの一般的な需要に加えて、抗肥満剤としての可能性は、強力なＧＩＰＲアンタゴニストの開発のためにさらなる注目を集めている。ＧＩＰの機能に拮抗するために、多くの異なる計画、例えば、低分子受容体アンタゴニスト^２９、ＧＩＰに対する予防接種^{３０～３２}、アンタゴニスト特性を有するＧＩＰ分子の様々な短縮化と変異^{３３～３９}、及び最近のＧＩＰＲに対する強力なアンタゴニスト抗体^４０が行われている。

【0004】

生理的条件下では、４２個のアミノ酸のホルモンＧＩＰは、ＧＩＰ分子の第３位で切断する酵素ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ－４）によって分解され、ＧＩＰ３－４２が生じる。合成のブタＧＩＰ３－４２は、ヒトＧＩＰＲに生体外で拮抗するが、生理学的濃度でブタ又は灌流ラットの膵臓ではアンタゴニストの特性を示さなかった^４１。多くのペプチドホルモンは翻訳後修飾され、異なる長さ及びアミノ酸修飾を有する様々な生物学的形態をもたらす^{４２,４３}。そのため、ＧＩＰ１－３０は翻訳後処理の結果として生成され^４４、ＧＩＰＲに対してアゴニストである^{３３,４５}ことが示された。ＧＩＰ１－３０がヒトの循環に分泌される場合、ＤＰＰ－４が触媒する切断によって、ＧＩＰ３－３０が生じる。

【0005】

米国特許第７,８７５,５８７号は、ＤＰＰ－４による分解に対する耐性が高まったＧＩＰ（１－４２）に由来するＧＩＰ受容体アンタゴニスト、並びにインスリン抵抗性及び肥満の治療のためのそれらの使用を開示している。ＷＯ２００４／０６７５４８では、ＤＰＰ－４代謝産物は、ファーマコフォアの共有結合によって修飾され、ペプチド代謝産物に関連付けられるより長い半減期を達成し、ＧＩＰを含む天然ペプチドと同じくらい切断ペプチドの生物活性を保持している。ＷＯ２０１２／０５５７７０は、ＧＩＰＲアンタゴニスト作用を有し、容易に除去される内因性代謝産物としてＧＩＰ（３－４２）を開示し、ＧＩＰＲアゴニスト活性を有する短縮化されたＧＩＰ類似体の一例としてＧＩＰ（２－３０）を開示している。ＷＯ１９９８／２４４６４は、アンタゴニストＧＩＰ（７－３０）を開示している。

【0006】

ＷＯ２０１６／０３４１８６及びＨａｎｓｅｎら２０１６は、アンタゴニストＧＩＰ（３－３０）及びＧＩＰ（５－３０）を開示している。Ｐａｔｈａｋら２０１５は、エキセンディン（１－３９）からの９個のアミノ酸ＣｅｘでＣ末端修飾され、リジン残基がパルミトイルで修飾されたＧＩＰ（３－３０）を開示している。

【0007】

生体内での作用のより長い持続期間を提供するために、ある範囲の異なる手法が、ＧＬＰ－１化合物の構造を修飾するために使用されてきた。これらには、アミノ酸残基（ＷＯ９６／２９３４２及びＷＯ９８／０８８７１）並びにアシル化ＧＬＰ－１類似体への親油性置換基（ＷＯ００／３４３３１）の導入が含まれる。ＷＯ０２／４６２２７は、生体内半減期を延長するために、ＧＬＰ－１と、ヒト血清アルブミンに融合したエキセンディン－４類似体を開示している。

【発明の概要】

【0008】

本発明者らは、ＧＩＰＲのアンタゴニストであるＧＩＰペプチドを同定し、これは１以上の個々の置換を含み、アンタゴニスト特性が改善されたＧＩＰペプチドをもたらす。本開示のＧＩＰペプチドは本明細書ではアシル化され、半減期及び生体内安定性を増加させる。本開示のＧＩＰペプチドはまた、天然のＧＩＰ（１－４２）と比較してＮ末端が短縮化され、少なくともＧＩＰ（１－４２）の１位及び２位に最初の２つのアミノ酸を含まない。さらに驚くべきことに、本発明者らは、ＧＩＰ（３１－４２）残基の１以上を含むペプチド又はＧＩＰ３－３０、ＧＩＰ５－３０及びＧＩＰ６－３０のうちのいずれか１つのＣ末端に結合し、アシル化されたエキセンディン－４の１以上の残基を含むペプチドなどのより長いＧＩＰペプチドが、改善されたＧＩＰＲアンタゴニスト特性及び／又は非常に長い生体内半減期及び／又は選択性の増加を保持するか、又はさらに示すことを発見した。これにより、ある範囲の治療用途に潜在的に有用になる。

【発明の効果】

【0009】

一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号ＸＸ：

【化1】

（ここで、Ｘ_１及びＸ_２は、個々に任意のアミノ酸であるか又は除去される）
又はその機能的バリアントからなるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体に関し、前記バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸に１～８、１～４個などのアミノ酸置換を有し、
前記ペプチドは、配列番号ＸＸ又はその前記機能的バリアントの３～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号Ｚ）の１以上のアミノ酸残基又はエキセンディン－４（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号Ｅ）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドである。

【0010】

ＧＩＰ（３－３０）／ＧＩＰ（５－３０）／ＧＩＰ（６－３０）及びそれらの類似体が、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ又はＧＫＫＮＤＷなどのエキセンディン－４又はＧＩＰ（１－４２）のＣ末端部分からのアミノ酸残基で延長される場合、上記の態様の重要な利点は、生体内半減期が、対応する非延長類似体と比較して驚くほど高い程度まで延長されることである。これは特に、延長されたＧＩＰ類似体が、例えば、延長されたＧＩＰ（３－３０）類似体の場合は１８位及び延長されたＧＩＰ（５－３０）類似体の場合は１１位などの特定の位置で脂質化される場合であり得る。

【0011】

ＧＩＰ（３－３０）／ＧＩＰ（５－３０）／ＧＩＰ（６－３０）及びそれらの類似体が、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ又はＧＫＫＮＤＷなどのエキセンディン－４又はＧＩＰ（１－４２）のＣ末端部分からのアミノ酸残基で延長される場合、上記の態様の別の重要な利点は、アンタゴニスト特性が増加し得、かつ／又はＧＩＰ受容体アゴニズムに対する選択性が増加することである。そのため、延長されたＧＩＰ類似体が、例えば、延長されたＧＩＰ（３－３０）類似体の場合は１８位及び延長されたＧＩＰ（５－３０）類似体の場合は１１位などの特定の位置で脂質化される場合、改善されたアンタゴニスト効果が得られ、半減期も驚くほど増加し得る。

【0012】

ＧＩＰ（３－３０）／ＧＩＰ（５－３０）／ＧＩＰ（６－３０）及びそれらの類似体が、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ又はＧＫＫＮＤＷなどのエキセンディン－４又はＧＩＰ（１－４２）のＣ末端部分からのアミノ酸残基で延長される場合に、上記の態様のさらなる重要な利点は、例えば、ＧＬＰ－１Ｒ及びグルカゴンＲなどのファミリーＢＧＰＣＲの他の受容体メンバーの活性化又は阻害に関して選択性が高まることである。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】例えば、ＡＴ６３１などのＣ末端が延長したＧＩＰ（３－３０）アンタゴニストは、類似体ＡＴ１５８などのＣ末端が延長されていないＧＩＰ（３－３０）アンタゴニストと比較して、３０時間超の非常に長いＴ_１／２を示す。ブタに脂質化ＧＩＰ（３－３０）ＮＨ_２類似体ＡＴ１５８及び脂質化ＧＩＰ（３－３０）Ｃｅｘ（３１－３９）類似体ＡＴ６３１を皮下投与し、示された時点で中心静脈カテーテルから血液試料を採取した。ＡＴ６３１の半減期をＲＩＡに基づいて決定し（「材料と方法」参照）、Ｃｍａｘの割合を時間に対してプロットした。ＡＴ６３１は、ＡＴ１５８よりも驚くほど長い半減期を示す。

【発明を実施するための形態】

【0014】

定義
「親和性」という用語は、受容体とそのリガンド（複数可）との結合の強さを指す。本文脈において、その結合部位に対するペプチドアンタゴニストの親和性（Ｋｉ）は、アゴニスト活性の阻害期間を決定する。アンタゴニストの親和性は、機能研究におけるシルド回帰を用いて、又は１）チェン＝プルソフ式を用いる競合結合実験、２）スキャッチャード式を用いる飽和結合実験又は３）オン速度及びオフ速度（Ｋ_０ｎとＫ_０ｆｆそれぞれ）の決定を用いる動態研究のような放射性リガンド結合実験によって実験的に決定することができる。

【0015】

用語「ＩＣ５０」は、半最大阻害濃度（ＩＣ５０）を表し、これは、特定の生物学的又は生化学的機能を阻害する物質の有効性の尺度である。この定量的尺度は、特定の薬物又は他の物質（例えば、アンタゴニスト）が、所与の生物学的プロセス（又はプロセスの構成要素、すなわち酵素、細胞、細胞受容体又は微生物）を半分阻害するのにどの程度必要とされるかを示す。これは、薬理学研究におけるアンタゴニスト薬の効力の尺度として一般的に使用されている。ＩＣ５０は、生体外での５０％阻害に必要な薬物の濃度を表す。本文脈において、ＩＣ５０値は、放射性標識リガンドの５０％が受容体から移される薬物の濃度を指すこともでき、これは、競合結合実験で行われる薬物親和性の特徴付けである。

【0016】

本文脈における用語「アゴニスト」は、受容体からの下流シグナル伝達カスケードに結合し、活性化することができるペプチド、又はその類似体を指す。

【0017】

本文脈における用語「アンタゴニスト」は、本明細書で定義されるように、受容体に結合し、受容体のアゴニスト媒介応答を阻止又は低減することができるＧＩＰペプチド類似体を指す。アンタゴニストは通常、受容体に結合する際に生物学的応答自体を引き起こさない。アンタゴニストは、その同族受容体に対する効力ではなく、親和性を有し、その受容体に対するアンタゴニストに結合して、受容体におけるアゴニスト又は逆アゴニストの機能を阻害する。アンタゴニストは、受容体上の活性（オルソステリック）部位又はアロステリック部位に結合することによってその効果を媒介するか、又はそれらは、通常、受容体の活性の生物学的調節に関与しない特有の結合部位で相互作用し得る。アンタゴニスト活性は、アンタゴニスト受容体複合体の長寿に依存して可逆的又は不可逆的であり得、これは、逆に、アンタゴニスト受容体結合の性質に依存する。薬物アンタゴニストの大半は、典型的には、受容体上の構造的に定義される結合部位で内因性リガンド又は基質と競合することによってその効力を達成する。アンタゴニストは、競合的アンタゴニスト、非競合的アンタゴニスト、不競合的アンタゴニスト、サイレントアンタゴニスト、部分的なアゴニスト又は逆アゴニストであり得る。

【0018】

競合的アンタゴニスト（克服可能なアンタゴニストとも呼ばれる）は、内因性リガンド又はアゴニストと同じ結合部位（すなわち活性部位）で受容体に可逆的に結合するが、受容体を活性化しない。アゴニスト及びアンタゴニストは、そのため、受容体上の同じ結合部位に対して「競合する」。結合すると、アンタゴニストはアゴニストの結合を阻止する。受容体の活性レベルは、部位及びそれらの相対的な濃度に対する各分子の相対親和性によって決定される。高濃度の競合的アンタゴニストは、アンタゴニストが占める受容体の割合を増加させる。

【0019】

用語「非競合的アンタゴニズム」（克服可能でない又は持続性のアンタゴニズム）は、アンタゴニストが受容体の活性部位に結合する現象と、アンタゴニストが受容体のアロステリック部位に結合する現象の２つの機能的に類似した結果を伴う別々の現象を説明する。最大応答を達成するために必要なアゴニストの量に影響を与えるが、その最大応答の大きさに影響を与えない競合的アンタゴニストとは異なり、非競合的アンタゴニストは、任意の量のアゴニストによって達成できる最大応答の大きさを低下させる。

【0020】

用語「サイレントアンタゴニスト」は、受容体を活性化するための固有の活性を全くもたない競合受容体アンタゴニストを指す。

【0021】

用語「部分的アゴニスト」は、所与の受容体において、最大受容体占有後に誘発する機能的応答の振幅が異なる可能性のあるアゴニストを指す。部分的アゴニストは、受容体占有率を完全アゴニストと競合し、それによって、完全アゴニスト単独で観察されるものと比較して受容体活性化に純減少をもたらすので、完全アゴニスト（又はより効果的なアゴニスト）の存在下で競合的アンタゴニストとして機能することができる。

【0022】

用語「逆アゴニスト」は、アゴニストと同じ受容体結合部位に結合し、その効果を拮抗することができるＧＩＰペプチド類似体などのリガンドを指す。さらに、逆アゴニストはまた、構成的に活性のある受容体の基礎活性を阻害することができる。

【0023】

本明細書で使用する用語「グルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチド受容体（ＧＩＰＲ）アンタゴニスト」は、ＧＩＰＲに結合し、ＧＩＰＲのアゴニスト媒介応答を阻止又は低下させることができるペプチドなどの化合物を指す。

【0024】

用語「個体」は、脊椎動物、哺乳動物種の特定のメンバー、好ましくはヒトを含む霊長類を指す。本明細書で使用する場合、「対象」及び「個体」は互換的に使用され得る。

【0025】

「単離ペプチド」は、その天然の、典型的には細胞の環境の構成要素から分離及び／又は回収されたペプチドであり、本来ポリペプチドと結合している炭水化物、脂質、又は他のタンパク質性の不純物などの混入している細胞構成要素を本質的に含まない。典型的には、単離ペプチドの調製物は、高度に精製された形態、すなわち、少なくとも約８０％純粋、少なくとも約９０％純粋、少なくとも約９５％純粋、９５％超純粋、又は９９％超純粋なペプチドを含有する。用語「単離」は、二量体、四量体、あるいはグリコシル化形態若しくは誘導体形態などの代替物理形態中に同じペプチドの存在を排除しない。

【0026】

「アミノ酸残基」は、ペプチド結合又はペプチド結合とは異なる結合によって連結された天然の又は非天然のアミノ酸残基であり得る。アミノ酸残基は、Ｄ配置又はＬ配置で存在し得る。アミノ酸残基は、炭素原子、又は炭素原子の鎖を含む中心部によって分離されたアミノ末端部（ＮＨ_２）とカルボキシ末端部（ＣＯＯＨ）を含み、そのうちの少なくとも１つは、少なくとも１つの側鎖又は官能基を含む。ＮＨ_２は、アミノ酸又はペプチドのアミノ末端に存在するアミノ基を指し、ＣＯＯＨは、アミノ酸又はペプチドのカルボキシ末端に存在するカルボキシ基を指す。一般用語アミノ酸は、天然アミノ酸と非天然アミノ酸の両方を含む。Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４３：３５５２－５９（１９６９）に列挙されており、米国特許規則（３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．），節１．８２２（ｂ）（２）に採用されている標準命名法の天然アミノ酸は、ここに記載されているアミノ酸のグループ：Ｙ、Ｇ、Ｆ、Ｍ、Ａ、Ｓ、Ｉ、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｐ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、Ｅ、Ｗ、Ｒ、Ｄ、Ｎ及びＣに属している。非天然アミノ酸は、すぐ上に列挙されていないものである。また、非天然アミノ酸残基は、修飾アミノ酸残基、Ｌ－アミノ酸残基、及びＤ－アミノ酸残基の立体異性体を含むが、これらに限定されない。

【0027】

「同等のアミノ酸残基」は、ポリペプチドの構造及び／又は機能を実質的に変化させることなく、ポリペプチド中の別のアミノ酸残基を置換することができるアミノ酸残基を指す。そのため、同等のアミノ酸は、側鎖の嵩高さ、側鎖の極性（極性又は非極性）、疎水性（疎水性又は親水性）、ｐＨ（酸性、中性又は塩基性）及び炭素分子の側鎖組織（芳香族／脂肪族）などの類似の特性を有する。このように、「同等のアミノ酸残基」は、「保存的アミノ酸置換」と見なすことができ、これは、その側鎖が類似の生化学的性質を有し、ペプチドの機能に影響を与えないアミノ酸の置換である。

【0028】

共通のアミノ酸の中でも、例えば、「保存的アミノ酸置換」はまた、以下のグループ：（１）グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン、（２）フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン、（３）セリン及びスレオニン、（４）アスパルギン酸及びグルタミン酸、（５）グルタミン及びアスパラギン、並びに（６）リジン、アルギニン及びヒスチジンの各々の中のアミノ酸同士の置換によって例示することができる。

【0029】

本明細書において適用される用語「同等のアミノ酸置換」の意味で、１つのアミノ酸は、一実施形態では、本明細書以下に示されるアミノ酸のグループ内の別のアミノ酸と置換され得る：
ｉ）極性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、及びＣｙｓ）
ｉｉ）非極性側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、及びＭｅｔ）
ｉｉｉ）脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）
ｉｖ）環状側鎖を有するアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ）
ｖ）芳香族側鎖を有するアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）
ｖｉ）酸性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）
ｖｉｉ）塩基性側鎖を有するアミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）
ｖｉｉｉ）アミド側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｎ、Ｇｌｎ）
ｉｘ）ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ）
ｘ）硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃｙｓ、Ｍｅｔ）
ｘｉ）中性、弱疎水性アミノ酸（Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）
ｘｉｉ）親水性、酸性アミノ酸（Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ）、及び
ｘｉｉｉ）疎水性アミノ酸（Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ）。

【0030】

加えて、本開示のペプチドのセリン残基は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ及びＴｈｒ（極性無電荷側鎖を有する全てのアミノ酸）からなる群から選択されるアミノ酸と置換され得る。かつ独立して、グリシン残基（Ｇｌｙ）は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸と置換される。かつ独立して、アルギニン残基（Ａｒｇ）は、ＬｙｓとＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸と置換される（全て正に帯電した側鎖を有する）。かつ独立して、リジン残基（Ｌｙｓ）は、Ａｒｇ及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸と置換され得る。かつ独立して、メチオニン残基（Ｍｅｔ）は、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ及びＴｒｐからなる群から選択されるアミノ酸と置換され得る（全て疎水性側鎖を有する）。かつ独立して、グルタミン残基（Ｇｌｎ）は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、及びＡｓｎからなる群から選択されるアミノ酸と置換され得る。かつ独立して、アラニン残基（Ａｌａ）は、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸と置換され得る。

【0031】

Ｌ型又はＤ型（光学異性体）が特定されていない場合、問題のアミノ酸は天然のＬ型（Ｐｕｒｅ＆Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．（５６（５）ｐｐ５９５－６２４（１９８４）参照）又はＤ型を有し、その結果、形成されたペプチドは、Ｌ型、Ｄ型のアミノ酸、又はＬ型とＤ型の混合の配列で構成され得ることが理解されるべきである。

【0032】

本明細書で使用する場合、グルタミン酸（Ｇｌｕ）模倣体は、３つの炭素原子によって分離された２つのカルボキシ官能基を有する部分である。例としては、ベータ－Ｇｌｕ、ガンマ－Ｇｌｕ又はグルタル酸が挙げられる。

【0033】

ペプチドの「機能的バリアント」は、その機能的バリアントであるペプチドと本質的に同じ機能を果たすことが可能なペプチドである。特に、機能的バリアントは、受容体などの本質的に同じ分子に結合することができるか、又はその機能的バリアントであるペプチドと同じ受容体媒介応答を行うことができる。「グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体」の機能的バリアントは、ＧＩＰＲに結合し、ｃＡＭＰ生成などのＧＩＰＲの下流のシグナル伝達を活性化又は阻害することができるペプチドである。グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド受容体（ＧＩＰＲ）アンタゴニストの機能的バリアントは、ＧＩＰＲに結合し、ｃＡＭＰ生成などのアゴニスト媒介ＧＩＰＲシグナル伝達を阻害又は低下させることができるペプチドである。

【0034】

「生理活性物質」（すなわち、生物活性物質／薬剤）は、生体内又は生体外で実証することができるいくつかの薬理学的で、しばしば有益な効果を提供する任意の薬剤、薬物、化合物、物質の組成物又は混合物である。それは、本明細書で定義されるＧＩＰペプチド類似体及びそれらを含む化合物又は組成物を指す。本明細書で使用する場合、この用語は、個体において局所的又は全身的な効果をもたらす任意の生理学的又は薬理学的に活性のある物質を含む。

【0035】

本明細書で使用する用語「薬物」及び「医薬」は、ヒト又は動物の体内で局所的又は全身的に作用する生物学的、生理学的、又は薬理学的に活性のある物質を含む。

【0036】

本明細書で使用する用語「治療」及び「治療すること」は、病態、疾患又は障害と闘う目的での患者の管理及びケアを指す。この用語は、患者が苦しんでいる所与の病態に対する治療の全スペクトルを含み、症状若しくは合併症の回復又は緩和；病態の進行の遅延、臨床症状、疾患又は障害の部分的停止；病態、疾患若しくは障害の治癒又は排除；検出可能か検出不可能かにかかわらず、病態若しくは症状の回復又は緩和、及び寛解（部分的又は完全かどうかにかかわらない）；並びに／又は病態、疾患若しくは障害の獲得の予防又は獲得のリスクの軽減の目的での、ペプチド若しくは組成物の投与などの治癒療法、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）療法又は予防（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）療法、回復療法又は緩和療法を同等に指すことを意図し、ここで、「予防すること」又は「予防」は、病態、疾患若しくは障害の発症を妨げる目的での患者の管理及びケアを指すことを理解すべきであり、かつ症状若しくは合併症の発症の予防又はリスクの低減のための活性化合物の投与を含む。本明細書で使用する用語「緩和」及びそのバリエーションは、生理学的病態若しくは症状の程度及び／又は望ましくない徴候を和らげ、かつ／又は本発明の組成物を投与しない場合に比べて、進行の時間経過が遅くなるか、又は長くなることを意味する。

【0037】

治療される個体は、哺乳動物、特にヒトであることが好ましい。しかし、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ及びブタなどの動物の治療も、本明細書に包含される。

【0038】

「それを必要とする個体」は、本開示の恩恵を受ける可能性のある個体を指す。一実施形態では、それを必要とする前記個体は、疾患個体であり、前記疾患は、肥満若しくは糖尿病などの代謝性疾患又は障害、骨密度障害又は癌であり得る。

【0039】

本発明による治療は、予防、回復及び／又は治癒することができる。

【0040】

生理活性剤の「薬理学的有効量」、「医薬有効量」又は「生理学的有効量」は、そのような組成物が投与される場合に、期待される生理的反応が得られるように治療される予定の個体の血流中又は作用部位（例えば、肺、胃系、大腸系、前立腺など）において所望のレベルの活性剤を提供するために必要である、本明細書に記載の医薬組成物中に存在する生理活性剤の量である。本文脈における生理活性剤は、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体を指す。

【0041】

本明細書で使用する「共投与すること」又は「共投与」は、本発明の１以上のＧＩＰペプチド類似体及び最新の医薬組成物の投与を指す。少なくとも２つの成分を、別々に、順次又は同時に投与することができる。

【0042】

詳細な説明
ＧＩＰは、胃抑制性ペプチド（又はポリペプチド）としても知られているグルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチドを指す。本明細書で使用する略語ＧＩＰ又はｈＧＩＰは、ヒトＧＩＰ（Ｕｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｐ０９６８１）である。ＧＩＰは、１５３個のアミノ酸プロタンパク質に由来し、生物活性のある４２個のアミノ酸ペプチドとして循環している。十二指腸の粘膜及び消化管の空腸のＫ細胞によって合成される。

【0043】

ＧＩＰＲ（又はＧＩＰ受容体）は、胃抑制性ポリペプチド受容体を指す。これらの７つの膜貫通タンパク質は、少なくとも膵臓のβ細胞上に見られる。本明細書で使用する略語ＧＩＰＲ又はｈＧＩＰＲは、ヒトＧＩＰＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ登録番号Ｐ４８５４６）である。

【0044】

本発明者らは、ＧＩＰＲのアンタゴニストであるＧＩＰペプチドを同定し、これは、改善されたアンタゴニスト特性を有するＧＩＰペプチドをもたらす１以上の個々の置換を含む。本開示のＧＩＰペプチドは、半減期及び生体内安定性を高めるためにアシル化される。さらに驚くべきことに、本発明者らは、ＧＩＰ（３１－４２）残基の１以上を含むペプチド、又はＧＩＰ３－３０、ＧＩＰ５－３０及びＧＩＰ６－３０のいずれか１つのＣ末端に結合し、アシル化されたエキセンディン－４の１以上の残基を含むペプチドなどのより長いＧＩＰペプチドが、ＧＩＰＲアンタゴニスト特性を保持することを発見した。これにより、それらはある範囲の治療用途に潜在的に有用になる。

【0045】

一実施形態では、エキセンディン－４は、アミノ酸配列ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号）を有するペプチドである。

【0046】

ＧＩＰペプチド
本発明は、１以上の個々の置換を含み、前例のないＧＩＰＲアンタゴニスト特性を有し、かつ１種以上の脂肪酸がそれに結合して、ＧＩＰＲアンタゴニスト特性を保持しながら前記ペプチドの半減期を増大させるＧＩＰのペプチド断片を含むＧＩＰペプチド類似体を対象とする。

【0047】

延長されたＧＩＰペプチド類似体
アミノ酸配列の配列番号ＸＸ：

【化2】

（ここで、Ｘ_１及びＸ_２は、個々に任意のアミノ酸であるか又は除去される）
又はその機能的バリアントからなるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供することが本開示の一態様であり、前記バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸に１～８個の個々のアミノ酸置換を有し、
前記ペプチドは、配列番号ＸＸ又はその前記機能的バリアントの３～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号Ｚ）の１以上のアミノ酸残基又はエキセンディン－４（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号Ｅ）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドである。

【0048】

アミノ酸配列の配列番号ＸＸ：

【化3】

（ここで、Ｘ_１及びＸ_２は、個々に任意のアミノ酸であるか又は除去される）
又はその機能的バリアントからなるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供することも本開示の一態様であり、前記バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸に１～４個の個々のアミノ酸置換を有し、
前記ペプチドは、配列番号ＸＸ又はその前記機能的バリアントの３～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号Ｚ）の１以上のアミノ酸残基又はエキセンディン－４（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号Ｅ）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドである。

【0049】

一実施形態では、本開示は、配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）：

【化4】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）：

【化5】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
及び配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）：

【化6】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
又はその機能的バリアントからなる群から選択されるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体を提供し、前記バリアントは、配列番号及び配列番号のいずれか１つに１～４個の個々のアミノ酸置換を有し；
前記ペプチドは、配列番号及び配列番号のいずれか１つ又は配列番号及び配列番号のいずれか１つに１～４個のアミノ酸置換を含むその機能的バリアントの４～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸残基を結合させることによって修飾され；
リンカーの有無にかかわらず、Ｚは、
グリシン又はプロリン、
ＧＰ、ＧＰＳ、ＧＰＳＳ、ＧＰＳＳＧ、ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳからなる群から選択される断片、
ＰＳ、ＰＳＳ、ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳ
からなる群から選択される断片、
ＧＫ、ＧＫＫ、ＧＫＫＮ、ＧＫＫＮＤ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱからなる群から選択される断片、又は、
ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ、又は該アミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアントからなる群から選択される断片、又は
ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、又は該アミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアントからなる群から選択される断片、
である。

【0050】

ＧＩＰアンタゴニストのＧＩＰ（３－３０）／ＧＩＰ（４－３０）／ＧＩＰ（５－３０）／ＧＩＰ（６－３０）及びそれらの類似体が、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ又はＧＫＫＮＤＷなどのエキセンディン－４又はＧＩＰ（１－４２）のＣ末端部分からのアミノ酸残基で延長される上記の態様の重要な利点は、対応する非延長類似体と比較して、生体内半減期が驚くほど高い程度に延長されることである。これは、特に、延長されたＧＩＰ（３－３０）類似体が、例えば、延長されたＧＩＰ（３－３０）、ＧＩＰ（４－３０）、ＧＩＰ（５－３０）及びＧＩＰ（６－３０）類似体の１１、１２、１７及び１８位などの特定の位置で脂質化される場合であり得る。そのため、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＧＫＫＮＤＷ、又はそれらの断片のＣ末端延長、及び特定の位置での脂質化は、Ｃ末端延長のない対応する配列と比較して、アンタゴニスト効果の改善と同時に、５若しくは１０時間又はさらに１５若しくは２０時間超の驚くほど大きな程度まで半減期の改善をもたらし得る。

【0051】

本明細書で使用する「ＧＩＰ（３－３０）」は、ＧＩＰ又はその機能的バリアント、例えば、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、及びそれらの機能的バリアントの残基３～３０からなるＧＩＰペプチド類似体を指す。本明細書で使用する「ＧＩＰ（４－３０）」は、ＧＩＰ、又はその機能的バリアント、例えば、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）及びそれらの機能的バリアントの残基４～３０からなるＧＩＰペプチド類似体を指す。本明細書で使用する「ＧＩＰ（５－３０）」は、配列番号ＧＩＰ（５－３０）などのＧＩＰ又はその機能的バリアントの残基５－３０からなるＧＩＰペプチド類似体を指す。本明細書で使用する「ＧＩＰ（６－３０）」は、配列番号ＧＩＰ（６－３０）などのＧＩＰ又はその機能的バリアントの残基６～３０からなるＧＩＰペプチド類似体を指す。

【0052】

一実施形態では、前記ペプチドはＣ末端カルボキシル化された（－ＣＯＯＨ）である。

【0053】

いかなる理論にも縛られることなく、遊離Ｃ末端カルボン酸はアルブミンへの結合の増加を助けるので、予期せず生体内半減期をさらに延ばすことができる。

【0054】

配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）及びそれらの類似体のＧＩＰアンタゴニストが、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ又はＧＫＫＮＤＷなどのエキセンディン－４又はＧＩＰ（１－４２）のＣ末端部分からのアミノ酸残基で延長される上記の態様の別の重要な利点は、アンタゴニスト特性が増加し得、かつ／又はＧＩＰ受容体アゴニズムに対する選択性が増加することである。ＧＩＰ（３－４２）は、ＧＩＰ（３－３０）よりも不良のアンタゴニストである［Ｈａｎｓｅｎら２０１６ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ］ため、エキセンディン－４由来のＣ末端延長－ＰＳＳＧＡＰＰＰＳを有するＡＴ６３１のアンタゴニズムが改善されることは予想外である。さらに、エキセンディン－４はＧＬＰ－１アゴニストであるため、エキセンディン－４のＣ末端部分からのアミノ酸残基を用いた配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）類似体の延長によるＧＩＰアンタゴニスト作用の改善は、非常に予想外である。

【0055】

配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）及びそれらの類似体のＧＩＰアンタゴニストが、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ又はＧＫＫＮＤＷなどのエキセンディン－４又はＧＩＰ（１－４２）のＣ末端部分からのアミノ酸残基で延長される上記の態様のさらなる重要な利点は、例えば、ＧＬＰ－１Ｒ及びグルカゴン－Ｒなどの、ＧＰＣＲファミリーＢの他の受容体メンバーの活性化又は阻害に関して選択性が増加することである。

【0056】

一実施形態では、例えば、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ又はＧＫＫＮＤＷなどのエキセンディン－４又はＧＩＰ（１－４２）のＣ末端部分からのアミノ酸残基で延長され、Ｃ末端カルボキシル化されている配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）及びそれらの類似体のＧＩＰアンタゴニストが提供される。

【0057】

一実施形態では、単離ペプチドであるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供される。

【0058】

一実施形態では、本明細書に開示され、
５位のアミノ酸が、Ｔであるか、又は除去され；
９位のアミノ酸が、Ｄ、Ｅ及びＴから選択され；
１１位のアミノ酸が、Ｓ、Ｋ及びＡから選択され；
１２位のアミノ酸が、Ｉ、Ｋ及び２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）から選択され；
１３位のアミノ酸が、ＡとＡｉｂから選択され；
１４位のアミノ酸が、Ｍ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｌ及びＮｌｅから選択され；
１５位のアミノ酸が、ＤとＥから選択され；
１６位のアミノ酸が、ＫとＲから選択され；
１７位のアミノ酸が、ＩとＫから選択され；
１８位のアミノ酸が、ＨとＫから選択され；
２０位のアミノ酸が、ＱとＫから選択され；
２１位のアミノ酸が、ＤとＥから選択され；
２４位のアミノ酸が、Ｎ、Ｋ、Ｑ及びＥから選択され；
２８位のアミノ酸が、ＡとＥから選択され；
２９位のアミノ酸が、ＱとＧから選択され；かつ／又は
３０位のアミノ酸は、Ｋ、Ｒ、Ｇ及びＡから選択される、
ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供される。

【0059】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記機能的バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸残基に１個の個々のアミノ酸置換、２個の個々のアミノ酸置換など、例えば、３個の個々のアミノ酸置換、４個の個々のアミノ酸置換などを有する。

【0060】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はそれらの機能的バリアントが提供され、前記機能的バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸残基に１個の個々のアミノ酸置換、２個の個々のアミノ酸置換など、例えば、３個の個々のアミノ酸置換、４個の個々のアミノ酸置換などを有し、前記置換は保存的アミノ酸置換である。

【0061】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はそれらの機能的バリアントが提供され、前記機能的バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸残基に１～２個の個々のアミノ酸置換、２～３個の個々のアミノ酸置換など、３～４個の個々のアミノ酸置換など、５～６個の個々のアミノ酸置換など、６～７個の個々のアミノ酸置換など、７～８個の個々のアミノ酸置換などを有する。

【0062】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記ＧＩＰペプチド類似体は、Ｘ_１及びＸ_２が除去されるアミノ酸配列の配列番号ＸＸからなる。

【0063】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記ＧＩＰペプチド類似体は、Ｘ_１、Ｘ_２及び５位のアミノ酸残基が除去されるアミノ酸配列の配列番号ＸＸからなる。一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記機能的バリアントは、配列番号ＸＸのアミノ酸残基３～３０のいずれか１つに１～７個の個々のアミノ酸置換、１個の個々のアミノ酸置換など、２個の個々のアミノ酸置換など、３個の個々のアミノ酸置換など、４個の個々のアミノ酸置換など、例えば、５個の個々のアミノ酸置換など、６個の個々のアミノ酸置換など、７個の個々のアミノ酸置換などを有する。

【0064】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記機能的バリアントは、配列番号ＸＸのアミノ酸残基３～３０のいずれか１つに１～２個の個々のアミノ酸置換、２～３個の個々のアミノ酸置換など、３～４個の個々のアミノ酸置換など、４～５個の個々のアミノ酸置換など、５～６個の個々のアミノ酸置換など、６～７個の個々のアミノ酸置など、７～８個の個々のアミノ酸置換などを有する。

【0065】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記機能的バリアントは、配列番号ＸＸのアミノ酸残基３、４、７、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２４、２８、２９及び３０のいずれか１つに１～２個の個々のアミノ酸置換、２～３個の個々のアミノ酸置換など、３～４個の個々のアミノ酸置換など、４～５個の個々のアミノ酸置換など、５～６個の個々のアミノ酸置換など、６～７個の個々のアミノ酸置換など、７～８個の個々のアミノ酸置換などを有する。

【0066】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記機能的バリアントは、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）のアミノ酸残基４～１０のいずれか１つに１～２個の個々のアミノ酸置換を有する。

【0067】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記機能的バリアントは、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つなどの配列番号ＸＸのアミノ酸残基１９～２７のいずれか１つに１～２個、１～３個など、２～３個などの個々のアミノ酸置換を有する。

【0068】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸのＧＩＰペプチド類似体の少なくとも１つのアミノ酸残基がＥと置換されている。

【0069】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、９、１４、１５、２１、２４及び２８位のいずれか１つの少なくとも１つのアミノ酸残基がＥと置換され、好ましくは、配列番号ＸＸの９、１５、２１及び２４位のいずれか１つの少なくとも１つのアミノ酸残基がＥと置換されている。

【0070】

本明細書で定義されるように、配列番号ＸＸのペプチドの１以上のアミノ酸残基のＥでの置換は、アンタゴニスト作用の増大、溶解性の増大、及び／又は置換ペプチドの安定性の増大をもたらし得るので特に有利である。

【0071】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、Ｘ_１は、Ｅ、Ｓ、Ｇ、Ｖ、２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｐ、Ｄ、γ－グルタミン酸（γＧｌｕ）、Ｄ－γ－グルタミン酸（Ｄ－γＧｌｕ）、β－グルタミン酸（βＧｌｕ）、ｐｙｒｏＥ（ピログルタミン酸）、グルタル酸からなる群から選択されるアミノ酸残基である。

【0072】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、Ｘ_１がＥである。

【0073】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、Ｘ_１はｐｙｒｏＥ（ピログルタミン酸）である。

【0074】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸなどの（ｈＧＩＰ３－３０、配列番号）の３位のＥ（Ｇｌｕ）が、Ｓ、Ｇ、Ｖ、２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｐ、Ｄ、γ－グルタミン酸（γＧｌｕ）、Ｄ－γ－グルタミン酸（Ｄ－γＧｌｕ）、β－グルタミン酸（βＧｌｕ）、ｐｙｒｏＥ（ピログルタミン酸）、グルタル酸からなる群から選択されるアミノ酸残基などの任意のアミノ酸と置換されている。ペンタン二酸とも呼ばれ得るグルタル酸は、アミノ基が欠けているデスアミノグルタミン酸、すなわち、グルタミン酸である。グルタル酸は、グルタミン酸模倣体とも呼ばれ得る。

【0075】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、Ｘ_１はＥ又はグルタル酸である。

【0076】

３位にＥを有する本開示によるＧＩＰペプチド類似体は、ＧＩＰＲにおいて非常に強力なアンタゴニストであり得る。しかし、３位にＥを有すると、不安定な化合物をもたらし得る。いかなる理論にも縛られることなく、３位のＥは、Ｎ末端のアミノ基とＥの側鎖カルボン酸との間の環化によってｐｙｒｏＧｌｕを形成し得る。したがって、３位でＥを置換することは有利であり得る。本発明者らは、Ｎ末端のアミノ基が強力なアンタゴニストを得るのに必ずしも必要ではない場合があることを発見した。

【0077】

グルタル酸はアミノ基を持たないため、Ｎ末端のｐｙｒｏＧｌｕ形成ができないので、３位のＥ（すなわち、Ｎ末端から最初のアミノ酸）をグルタル酸と置換することは有利であり得る。ｐｙｒｏＧｌｕ形成は、グルタミン酸にとって望ましくない副反応であり得る。３位のグルタル酸との置換も効力を増加させ得る。グルタル酸は、リジン及びトリプトファンを含むいくつかのアミノ酸の代謝中に体内で自然に生成される。

【0078】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）のいずれか１つなどの（ｈＧＩＰ３－３０、配列番号）の３位のＥ（Ｇｌｕ）は、Ｓ（Ｓｅｒ）と置換される。

【0079】

【0080】

【0081】

【0082】

【0083】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、Ｘ_２は、Ｇ及びＥからなる群から選択されるアミノ酸残基である。

【0084】

【0085】

【0086】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの９位のＤは、Ｅ及びＴからなる群から選択されるアミノ酸残基と置換される。９位にＥを有する利点は、溶解性などの効力及び／又は物理的安定性が増加し得ることである。９位のＥはまた、アンタゴニスト活性を防止し得る。

【0087】

【0088】

【0089】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの１１位のＳは、Ａ、Ｋ及びＯｒｎからなる群から選択されるアミノ酸残基と置換される。

【0090】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの１１位のＳは、Ａ、Ｒ、Ｋ及びＯｒｎからなる群から選択されるアミノ酸残基と置換される。

【0091】

【0092】

【0093】

【0094】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの１２位のＩは、Ｋ、Ｏｒｎ及び２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸残基と置換される。

【0095】

【0096】

【0097】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの１３位のＡは、２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）と置換される。１３位にＡｉｂを有する利点は、効力が大幅に増加し得ることである。加えて、１３位のＡｉｂは、生体内安定性又は物理的安定性などのペプチドの安定性を増加させ得る。

【0098】

配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの１２位及び１３位のアミノ酸残基のいずれか１つの置換は、ＧＩＰペプチド類似体の安定性及び半減期をさらに増加させ得ることが観察された。

【0099】

【0100】

【0101】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの１４位のＭは、Ｌ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、Ｅ、Ｓ、Ｋ及びＯｒｎからなる群から選択されるアミノ酸残基と置換される。

【0102】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの１４位のＭは、Ｌ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）及びＫからなる群から選択されるアミノ酸残基と置換される。いくつかの実施形態では、１４位のアミノ酸はＬ又はＮｌｅである。Ｍは酸化しやすいので、Ｌ、Ｎｌｅ又はＫなどの別のアミノ酸、例えば、Ｌ又はＮｌｅとそれを置換することは有利であり得る。

【0103】

いくつかの実施形態では、１４位のアミノ酸はＬである。

【0104】

【0105】

【0106】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの１５位のＤは、Ｅと置換される。１５位にＥを有する利点は、溶解性などの効力及び／又は物理的安定性が増加し得ることである。１５位のＥもアンタゴニスト活性を防止し得る。

【0107】

【0108】

【0109】

【0110】

【0111】

【0112】

【0113】

【0114】

【0115】

【0116】

【0117】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの１８位のＨは、Ａ、Ｒ、Ｋ及びＯｒｎからなる群から選択されるアミノ酸と置換される。

【0118】

【0119】

【0120】

【0121】

【0122】

【0123】

【0124】

【0125】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの２１位のＤは、Ｅと置換される。２１位にＥを有する利点は、溶解性などの効力及び／又は物理的安定性が増加し得ることである。

【0126】

【0127】

【0128】

【0129】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの２４位のＮは、Ｅと置換される。２４位にＥを有する利点は、溶解性などの物理的安定性が増加し得ることである。また、凝集に対する感受性を低下させ得る。

【0130】

【0131】

【0132】

【0133】

【0134】

【0135】

【0136】

【0137】

【0138】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はその機能的バリアントのいずれか１つの３０位のＫは、Ｒ、Ａ、Ｅ及びＧからなる群から選択されるアミノ酸と置換され、好ましくはＲ、Ａ及びＧからなる群から選択されるアミノ酸と置換される。

【0139】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、９、１５、２１、及び２４位のアミノ酸残基は全て個々に、Ａ、Ｌ、Ｅ及びＫからなる群から選択されるアルファヘリックス安定化アミノ酸残基である。

【0140】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記ＧＩＰペプチド類似体は、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つのなどの、配列番号ＸＸのアミノ酸残基３－３０のいずれか１つに少なくとも１つのＫへの置換及び１つのＥ又はＡｉｂへの置換を含む。

【0141】

【0142】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、
５位のアミノ酸はＴであり；
６位のアミノ酸はＦであり；
１０位のアミノ酸はＹであり；
２２位のアミノ酸はＦであり；
２３位のアミノ酸はＶであり；
２５位のアミノ酸はＷであり；
２６位のアミノ酸はＬであり；
２７位のアミノ酸はＬである。

【0143】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、５位のアミノ酸がＴである。

【0144】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、６位のアミノ酸がＦである。

【0145】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、７位のアミノ酸がＩである。

【0146】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、１０位のアミノ酸がＹである。

【0147】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、２２位のアミノ酸がＦである。

【0148】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、２３位のアミノ酸がＶである。

【0149】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、２５位のアミノ酸がＷである。

【0150】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、２６位のアミノ酸がＬである。

【0151】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、２７位のアミノ酸がＬである。

【0152】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、２９及び３０位のアミノ酸残基は両方ともＧではない。

【0153】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、２９及び３０位のアミノ酸残基の１つだけがＧである。

【0154】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、２９及び３０位のアミノ酸残基は、Ｑ、Ｅ及びＫからなる群から個々に選択される。

【0155】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、２９位のアミノ酸がＱである。

【0156】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）又はその機能的バリアントが提供され、３０位のアミノ酸がＫである。

【0157】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）、
（ここで、３位のアミノ酸残基は、Ｅ又はグルタル酸であるか、又は存在せず、
４位のアミノ酸残基は、Ｇであるか、又は存在せず、
５位のアミノ酸残基は、Ｔであり、
６位のアミノ酸残基は、Ｆであり、
７位のアミノ酸残基は、Ｉであり、
８位のアミノ酸残基は、Ｓであり、
９位のアミノ酸残基は、Ｄ又はＥであり、
１０位のアミノ酸残基は、Ｙであり、
１１位のアミノ酸残基は、Ｋ又はＳであり、
１２位のアミノ酸残基は、Ｉ又はＫであり、
１３位のアミノ酸残基は、Ａ又はＡｉｂ又はＫであり、
１４位のアミノ酸残基は、Ｍ、Ｌ、Ｎｌｅ又はＫであり、
１５位のアミノ酸残基は、Ｄ又はＥであり、
１６位のアミノ酸残基は、Ｋであり、
１７位のアミノ酸残基は、Ｉ又はＫであり、
１８位のアミノ酸残基は、Ｈ又はＫであり、
１９位のアミノ酸残基は、Ｑであり、
２０位のアミノ酸残基は、Ｑであり、
２１位のアミノ酸残基は、Ｄ又はＥであり、
２２位のアミノ酸残基は、Ｆであり、
２３位のアミノ酸残基は、Ｖであり、
２４位のアミノ酸残基は、Ｎ、Ａ、Ｑ又はＥであり、
２５位のアミノ酸残基は、Ｗであり、
２６位のアミノ酸残基は、Ｌであり、
２７位のアミノ酸残基は、Ｌであり、
２８位のアミノ酸残基は、Ａ、Ｅ又はＫであり、
２９位のアミノ酸残基は、Ｑ、Ｇ又はＫであり、かつ
３０位のアミノ酸残基は、Ｋ又はＧである）
又はその機能的バリアントが提供される。

【0158】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）、
（ここで、３位のアミノ酸残基は、Ｅ又はグルタル酸であるか、又は存在せず、
４位のアミノ酸は、Ｇｌｙであるか、又は存在せず；
５位のアミノ酸は、Ｔであり；
９位のアミノ酸は、Ｄ、Ｅから選択され；
１１位のアミノ酸は、Ｓ、Ｋ及びＡから選択され；
１２位のアミノ酸は、Ｉ及びＫから選択され；
１３位のアミノ酸は、Ａ及びＡｉｂから選択され；
１４位のアミノ酸は、Ｍ、Ｌ及びＮｌｅから選択され；
１５位のアミノ酸は、Ｄ及びＥから選択され；
１６位のアミノ酸は、Ｋ及びＲから選択され；
１７位のアミノ酸は、Ｉ及びＫから選択され；
１８位のアミノ酸は、Ｈ及びＫから選択され；
２０位のアミノ酸は、Ｑ及びＫから選択され；
２１位のアミノ酸は、Ｄ及びＥから選択され；
２４位のアミノ酸は、Ｎ、Ｑ及びＥから選択され；
２８位のアミノ酸は、Ａ及びＥから選択され；
２９位のアミノ酸は、Ｑ及びＧから選択され；かつ／又は
３０位のアミノ酸は、Ｋ、Ｒ、Ｇ及びＡから選択される）
が提供される。

【0159】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体（配列番号ＸＸ）、
（ここで、３位のアミノ酸は、Ｇｌｕ又はグルタル酸であるか、又は存在せず；
４位のアミノ酸は、Ｇｌｙであるか、又は存在せず；
５位のアミノ酸は、Ｔであり；
６位のアミノ酸は、Ｆであり；
７位のアミノ酸は、Ｉであり；
９位のアミノ酸は、Ｄ及びＥから選択され；
１０位のアミノ酸は、Ｙであり；
１１位のアミノ酸は、Ｓ、Ｋ及びＡから選択され；
１２位のアミノ酸は、Ｉ及びＫから選択され；
１３位のアミノ酸は、Ａ及びＡｉｂから選択され；
１４位のアミノ酸は、Ｍ、Ｌ及びＮｌｅから選択され；
１５位のアミノ酸は、Ｄ及びＥから選択され；
１６位のアミノ酸は、Ｋ及びＲから選択され；
１７位のアミノ酸は、Ｉ及びＫから選択され；
１８位のアミノ酸は、Ｈ及びＫから選択され；
２０位のアミノ酸は、Ｑ及びＫから選択され；
２１位のアミノ酸は、Ｄ及びＥから選択され；
２２位のアミノ酸は、Ｆであり；
２３位のアミノ酸は、Ｖであり；
２４位のアミノ酸は、Ｎ、Ｑ及びＥから選択され；
２５位のアミノ酸は、Ｗであり；
２６位のアミノ酸は、Ｌであり；
２７位のアミノ酸は、Ｌであり；
２９位のアミノ酸は、Ｑであり；かつ／又は
３０位のアミノ酸は、Ｋ又はＲである）
が提供される。

【0160】

一実施形態では、本開示は、配列番号（ＧＩＰ３－３０Ｘ_１－Ｘ_２）：

【化7】

からなるＧＩＰペプチド類似体を提供する。

【0161】

一実施形態では、本開示は、配列番号（ＧＩＰ３－３０Ｘ_２）：

【化8】

からなるＧＩＰペプチド類似体を提供する。

【0162】

一実施形態では、本開示は、配列番号（ＧＩＰ３－３０Ｘ_１）：

【化9】

からなるＧＩＰペプチド類似体を提供する。

【0163】

一実施形態では、本開示は、配列番号（ＧＩＰ３－３０）：

【化10】

からなるＧＩＰペプチド類似体を提供する。

【0164】

一実施形態では、本開示は、配列番号（ＧＩＰ４－３０Ｘ_２）：

【化11】

からなるＧＩＰペプチド類似体を提供する。

【0165】

一実施形態では、本開示は、配列番号（ＧＩＰ４－３０）：

【化12】

からなるＧＩＰペプチド類似体を提供する。

【0166】

一実施形態では、本開示は、３位のアミノ酸残基が存在しない場合には、４位のアミノ酸残基が存在しないＧＩＰペプチド類似体を提供する。

【0167】

一実施形態では、本開示は、配列番号（ＧＩＰ５－３０）：

【化13】

からなるＧＩＰペプチド類似体を提供する。

【0168】

一実施形態では、本開示は、配列番号（ＧＩＰ６－３０）：

【化14】

からなるＧＩＰペプチド類似体を提供する。

【0169】

本開示のＧＩＰペプチド類似体の１つの特徴は、Ｚ、Ｚペプチド、又はペプチドＺと呼ばれる部分の存在である。本明細書に記載されるように、Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号Ｚ）の１以上のアミノ酸残基又はエキセンディン－４（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号Ｅ）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドである。Ｚペプチドの存在は、ＧＩＰペプチド類似体の半減期とアンタゴニスト効力の両方を改善するので有利である。

【0170】

本開示の一実施形態では、Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（配列番号Ｚ）の１以上の連続したアミノ酸残基からなる。

【0171】

本開示の一実施形態では、Ｚは、エキセンディン－４（配列番号Ｅ）の１以上の連続したアミノ酸残基からなる。

【0172】

本開示の一実施形態では、Ｚは、エキセンディン－４（３０－３９）（ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号ＣＥ３０－３９）のＣ末端の１以上の連続したアミノ酸残基からなる。

【0173】

本開示の一実施形態では、Ｚは、エキセンディン－４（２９－３９）（ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号ＣＥ２９－３９）のＣ末端の１以上の連続したアミノ酸残基からなる。

【0174】

本開示の一実施形態では、Ｚは、少なくとも１つのＧ又は１つのＰを含む。いかなる理論にも縛られることなく、Ｚが例えば、３１位及び／又は３２位などにＧ又はＰを含む場合、ＧＩＰペプチド類似体の半減期は増加し、これはＣ末端からの分解低下に起因し得、ＧＩＰペプチド類似体の生体内安定性を増加させる。

【0175】

本開示の一実施形態では、Ｚは、少なくとも２つのＰを含む。

【0176】

本開示の一実施形態では、Ｚは、
－グリシン又はプロリン、
－ＧＰ、ＧＰＳ、ＧＰＳＳ、ＧＰＳＳＧ、ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、
－ＰＳ、ＰＳＳ、ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、
－ＧＫ、ＧＫＫ、ＧＫＫＮ、ＧＫＫＮＤ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ、
－ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＫＫＫＤＷ、ＧＫＫＮＤＫＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ、又はアミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアント、又は
－ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、又はアミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアント、
からなる群から選択されるペプチドである。

【0177】

本開示の一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ又はそのバリアントの３位のアミノ酸残基に結合していない。

【0178】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１又は配列番号ＧＩＰ（３－３０）の３位のアミノ酸残基のＮ末端アミノ基に結合していない。

【0179】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２又は配列番号ＧＩＰ（４－３０）の４位でアミノ酸残基のＮ末端アミノ基に結合していない。

【0180】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＧＩＰ（５－３０）の５位におけるアミノ酸残基のＮ末端アミノ基に結合していない。

【0181】

一実施形態では、脂肪酸分子はＺのアミノ酸残基に結合していない。

【0182】

一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体は遊離Ｎ末端を有する。そのため、ＧＩＰペプチド類似体のＮ末端は、アセチル化、アシル化、又はアルキル化されていないなどの、置換されていないアミノ（－ＮＨ_２）部分を含む。したがって、ＧＩＰペプチド類似体のＮ末端は、遊離アミノ（－ＮＨ_２）部分を含んでいてもよい。

【0183】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の７～２９位のいずれか１つの位置でアミノ酸残基に結合している。一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそのバリアントのいずれか１つの７～２９位のいずれか１つの位置でアミノ酸残基に結合している。

【0184】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸのなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の６～２９位のいずれか１つの位置でアミノ酸残基に結合している。一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそのバリアントのいずれか１つの６～２９位のいずれか１つの位置でアミノ酸残基に結合している。

【0185】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸのなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の４～２９位のいずれか１つの位置でアミノ酸残基に結合している。一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそのバリアントのいずれか１つの４～２９位のいずれか１つの位置でアミノ酸残基に結合している。

【0186】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸなどの前記ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントの５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位又は２９位でアミノ酸残基に結合している。

【0187】

一実施形態では、脂肪酸分子は、ｈＧＩＰ（６－３０）又はその機能的バリアントの６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位又は２９位でアミノ酸残基に結合している。

【0188】

一実施形態では、脂肪酸分子は、ｈＧＩＰ（５－３０）又はその機能的バリアントの５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位又は２９位でアミノ酸残基に結合している。

【0189】

一実施形態では、脂肪酸分子は、ｈＧＩＰ（３－３０）又はその機能的バリアントの４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位又は２９位でアミノ酸残基に結合している。

【0190】

【0191】

【0192】

【0193】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそれらの機能的バリアントのいずれか１つの１１、１２、１７及び１８位のいずれか１つの位置で１以上のアミノ酸残基に結合している。これらの位置のいずれか１つの位置での脂肪酸の結合は、特に長い半減期を有し、特に高いアンタゴニスト効力を有するＧＩＰペプチド類似体をもたらし得る。

【0194】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又は少なくとも１つのＫ若しくはＯｒｎ残基を含むそれらの機能的バリアントのいずれか１つなどの前記ＧＩＰペプチド類似体のＫ残基又はＯｒｎ残基のイプシロンアミノ基に結合している。

【0195】

【0196】

【0197】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそれらの機能的バリアントのいずれか１つなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の１８位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基に結合しており、１８位のＨは、前記ＧＩＰペプチド類似体においてＫ又はＯｒｎと置換されている。１８位のアミノ酸残基の側鎖アミノ基への脂肪酸の結合は、特に長い半減期を有し、特に高いアンタゴニスト効力を有するＧＩＰペプチド類似体をもたらし得る。

【0198】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそれらのバリアントのいずれか１つなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の１１位のアミノ基残基の側鎖アミノ基に結合しており、１１位のＳは前記ＧＩＰペプチド類似体においてＫ又はＯｒｎと置換されている。

【0199】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそれらのバリアントのいずれか１つなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の１２位のアミノ基残基の側鎖アミノ基に結合しており、１２位のＩは前記ＧＩＰペプチド類似体においてＫ又はＯｒｎと置換されている。

【0200】

一実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそれらのバリアントのいずれか１つなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の１１位のアミノ基残基に結合している。

【0201】

【0202】

一実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそれらの機能的バリアントのいずれか１つなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の１２位のアミノ酸残基に結合している。

【0203】

【0204】

一実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそれらの機能的バリアントのいずれか１つなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の１７位のアミノ酸残基に結合している。

【0205】

【0206】

【0207】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）、又はそれらの機能的バリアントのいずれか１つなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の１８位のＫに結合している。

【0208】

一実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸分子は、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つなどの前記ＧＩＰペプチド類似体の１８位のリジンに結合しており、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つの９、１５、及び２４位のアミノ酸の少なくとも２つはＥである。

【0209】

一実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸分子が、ＧＩＰペプチド類似体の１１又は１８位などの１１～１８位のいずれか１つなどの、ＧＩＰペプチド類似体の中央のアミノ酸に結合している。

【0210】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記ペプチドは、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）のいずれか１つの類似体であり、

【化15】

からなる群から選択される配列を有し、
前記ペプチドは、上記配列のいずれか１つの４～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、前記ペプチドはＣ末端カルボキシル化され得る。

【0211】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記ペプチドは、ｈＧＩＰ５－３０（配列番号（５－３０））の類似体であり、

【化16】

【0212】

一実施形態では、ＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントが提供され、前記ペプチドは、ｈＧＩＰ６－３０（配列番号（６－３０））の類似体であり、
FISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK － Z；配列番号ＧＩＰ（６－３０）［Ｈ１８Ｋ］
からなる群から選択される配列を有し、
前記ペプチドは、上記配列のいずれか１つの４～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、前記ペプチドはＣ末端カルボキシル化され得る。

【0213】

一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体はＣ末端アミド化（－ＮＨ_２）される。

【0214】

一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体は、Ｃ末端カルボキシル化（－ＣＯＯＨ）され、例えば、Ｃ末端が遊離カルボン酸である。

【0215】

機能的バリアント－変異体
一実施形態では、前記アミノ酸置換の１以上、又は全ては、保存的アミノ酸置換（又は同義置換）である。保存的置換は、その側鎖が類似の生化学的性質を有するため、ペプチドの機能に影響を与えないアミノ酸の置換である。

【0216】

本明細書に開示される特定のアミノ酸置換は、ＫからＲ、Ａ、Ｇ；ＥからＤ、Ｓ、Ｐ、Ｇ、Ｖ、２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、γ－グルタミン酸（γＧｌｕ）、Ｄ－γ－グルタミン酸（Ｄ－γＧｌｕ）、β－グルタミン酸（βＧｌｕ）、ｐｙｒｏＥ（ピログルタミン酸）、グルタル酸；ＬからＭ；ＱからＥ；ＩからＶ；ＩからＬ、Ｋ、Ａｉｂ；ＡからＳ、Ａｉｂ、Ｅ；ＹからＷ；ＫからＱ；ＳからＴ、Ｋ；ＮからＳ；ＭからＬ、Ｎｌｅ、Ｅ、Ｓ、Ｋ；ＨからＫ；Ｎ、Ｉ、Ｓ、ＧからＡ；Ｎ、Ｉ、ＳからＴ；ＤからＥ、Ｔ；ＮからＱ、Ｅ；ＱからＲ、Ｋ、Ｇ；ＧからＥ、Ｔ、Ｋである。

【0217】

別の実施形態では、本明細書で定義される機能的変異体は、アルキルアミノ酸がアルキルアミノ酸と置換されている配列、芳香族アミノ酸が芳香族アミノ酸と置換されている配列、硫黄含有アミノ酸が硫黄含有アミノ酸と置換されている配列、ヒドロキシ含有アミノ酸がヒドロキシ含有アミノ酸と置換されている配列、酸性アミノ酸が酸性アミノ酸と置換されている配列、塩基性アミノ酸が塩基性アミノ酸と置換されている配列、及び／又は二塩基性モノカルボン酸アミノ酸が二塩基性モノカルボン酸アミノ酸と置換されている配列を含む。

【0218】

保存的置換は、結果として得られるバリアントが機能している限り、配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つから選択されるＧＩＰペプチド類似体の上記の特定の位置の任意の１以上に導入され得る。しかし、１以上の位置に非保存的置換（非同義置換）を導入することも望ましい場合がある。

【0219】

一実施形態における配列番号ＸＸ、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１－Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（３－３０）Ｘ_１、配列番号ＧＩＰ（３－３０）、配列番号ＧＩＰ（４－３０）Ｘ_２、配列番号ＧＩＰ（４－３０）、配列番号ＧＩＰ（５－３０）、配列番号ＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つから選択されるＧＩＰペプチド類似体のバリアントの形成につながる非保存的置換は、ｉ）実質的に極性が異なるアミノ酸残基、例えば、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ、若しくはＧｌｎなどの極性側鎖を有する残基、又はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、若しくはＬｙｓなどの荷電アミノ酸と置換される非極性側鎖（Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ若しくはＭｅｔ）を有する残基の置換、又は荷電残基若しくは極性残基の非極性残基での置換；及び／又はｉｉ）別の残基によるＰｒｏ又はＧｌｙの置換などの、ペプチド骨格配向に対する効果が実質的に異なるアミノ酸残基の置換；及び／又はｉｉｉ）電荷が実質的に異なるアミノ酸残基の置換、例えば、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐなどの負に帯電した残基とＬｙｓ、Ｈｉｓ若しくはＡｒｇなどの正に帯電した残基との置換（及びその逆）；及び／又はｉｖ）立体容積が実質的に異なるアミノ酸残基の置換、例えば、小さい側鎖を有するもの、例えば、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒなどのかさばる残基と、例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ若しくはＳｅｒとの置換（及びその逆）を含む。

【0220】

アミノ酸の置換は、一実施形態では、それらの疎水性及び親水性の値、並びに電荷、サイズなどを含むアミノ酸側鎖置換基の相対的類似性に基づいて行うことができる。

【0221】

本明細書で定義されるＧＩＰペプチド類似体又はその機能的バリアントの対応物は、タンパク質原性又は天然アミノ酸、すなわち、自然にポリペプチドに組み込まれる２２個のアミノ酸を含む。これらのうち２０個は、普遍的な遺伝コードによってコードされ、残りの２個のセレノシステイン（Ｓｅｃ、Ｕ）及びピロリジン（Ｐｙｌ、Ｏ）は、特有の合成機構によりタンパク質に組み込まれる。

【0222】

本明細書で定義されるＧＩＰペプチド類似体は、１以上の天然に存在しないアミノ酸残基（非天然、非タンパク質原性若しくは非標準アミノ酸）又はグルタル酸などのアミノ酸模倣体を含む。天然に存在しないアミノ酸には、例えば、限定されないが、β－２－ナフチルアラニン、トランス－３－メチルプロリン、２,４－メタノプロリン、シス－４－ヒドロキシプロリン、オリニチン（Ｏｒｎ）、トランス－４－ヒドロキシプロリン、Ｎ－メチルグリシン、アロトレオニン、メチルトレオニン、ヒドロキシエチルシステイン、ヒドロキシエチルホモシステイン、ニトログルタミン、ホモグルタミン、ピペコリン酸、チアゾリジンカルボン酸、デヒドロプロリン、３－及び４－メチルプロリン、３,３－ジメチルプロリン、ｔｅｒｔ－ロイシン、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メトキシニン（Ｍｏｘ）、ノルバリン、２－アザフェニルアラニン、３－アザフェニルアラニン、４－アザフェニルアラニン、及び４－フルオロフェニルアラニンが含まれる。

【0223】

一実施形態では、アミノ酸Ｍｅｔは、酸化耐性アミノ酸類似体、例えば、その水素結合特性ではなく、疎水性相互作用に重要なアミノ酸側鎖の長さを保持するノルロイシン（Ｎｌｅ）若しくはＬｅｕ；又はＮｌｅと比較してＭｅｔの電子特性により似ている非天然型アミノ酸であるメトキシニン（Ｍｏｘ）；又はＬｙｓと置換される。

【0224】

標準及び／又は非標準アミノ酸は、ペプチド結合によって（線形ペプチド鎖を形成するため）、又は非ペプチド結合によって（例えば、アミノ酸の可変側鎖を介して）連結され得る。好ましくは、本明細書で定義されるペプチドのアミノ酸は、ペプチド結合によって連結される。

【0225】

用語ペプチドはまた、当技術分野で知られているように、化学的又は酵素触媒反応によって導入される翻訳後修飾を包含する。それらには、１以上のアミノ酸残基のアセチル化、リン酸化、メチル化、グルコシル化、糖化、アミド化、ヒドロキシル化、脱イミノ化、脱アミド化、カルバミル化及び硫酸化、並びにリソソームカテプシンを含む既知のタンパク質酵素によるタンパク質分解修飾、及びまたカルパイン、セクレターゼ及びマトリックスメタロプロテアーゼが含まれる。

【0226】

また、ペプチドの機能的等価物は、ユビキチン化、標識（例えば、放射性核種、様々な酵素など）、ペグ化（ポリエチレングリコールによる誘導体化）など、又はヒトタンパク質に通常生じない（非タンパク質原性）オルニチンなどのアミノ酸の挿入（又は化学合成による置換）による化学的修飾を含み得る。

【0227】

立体的に類似した化合物は、ペプチド構造の重要な部分を模倣するように製剤化され得る。これは、当業者に知られているモデリング及び化学設計の技術によって達成され得る。例えば、エステル化及び他のアルキル化は、例えば、テトラペプチド構造を模倣するためにジアルギニンペプチド骨格のアミノ末端を修飾するように用いられ得る。このような全ての立体的に類似した構築物が本発明の範囲内に入ることが理解されるであろう。Ｎ末端及びＣ末端のアルキル化並びにエステル化を有するペプチドも、本発明の中に包含される。例えば、グルタル酸は、グルタミン酸を模倣する立体的に類似した化合物である。

【0228】

一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体のＮ末端アミノ酸は、いかなる化学修飾も有していない。置換はＧＩＰＲでのアゴニスト作用をもたらし得るので、ＧＩＰペプチド類似体のＮ末端におけるアミノ基が遊離である、すなわち置換されていないことが有利であり得る。

【0229】

存在する場合、脂肪酸又はリンカーの長さを延長すると、アンタゴニスト効力を低下させる可能性があるようである。しかし、同時に１３位にＡｉｂ残基を組み込むと、特に、９、１５及び２１位の１以上のＥと組み合わせるなど、９、１５、２１及び２４位の１以上の位置のＥと組み合わせると、一部又は全部の効力の低下を補うようである。

【0230】

脂肪酸分子の結合
一実施形態では、脂肪酸分子は、側鎖アミノアルキル基（－Ｃ_ｎＨ_２ｎＮＨ_２）を有する１以上のアミノ酸残基に結合している。

【0231】

一実施形態では、脂肪酸分子は、側鎖アミノ基（ＮＨ_２）を有する１以上のアミノ酸残基に結合している。

【0232】

一実施形態では、脂肪酸分子は、アミノ酸残基のアミノ基（ＮＨ_２）に結合している。

【0233】

一実施形態では、脂肪酸分子は、アミノ酸残基の側鎖アミノ基に結合している。

【0234】

一実施形態では、脂肪酸分子は、リジン残基（Ｌｙｓ、Ｋ）のε（イプシロン）側鎖アミノ基に結合している。

【0235】

一実施形態では、脂肪酸分子は、オルニチン残基（Ｏｒｎ）のδ（デルタ）側鎖アミノ基に結合している。

【0236】

一実施形態では、脂肪酸分子が結合したアミノ酸残基は、ＬｙｓとＯｒｎからなる群から選択される。

【0237】

一実施形態では、脂肪酸分子が結合したアミノ酸残基は、Ｌｙｓである。

【0238】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸなどの前記ＧＩＰペプチド類似体のＯｒｎ残基、又はＯｒｎアミノ酸残基を含む機能的バリアントのデルタアミノ基に結合している。

【0239】

一実施形態では、脂肪酸分子は、配列番号ＸＸなどの前記ＧＩＰペプチド類似体、又はその機能的バリアントのＫ残基のイプシロンアミノ基に結合している。

【0240】

一実施形態では、脂肪酸分子は結合しているアミノ酸残基は、配列番号ＸＸなどの前記ＧＩＰペプチド類似体又はそのバリアントの最もＮ末端のアミノ酸残基などの最もＮ末端のアミノ酸残基であり、前記脂肪酸は、Ｎ末端アミノ酸の側鎖に含まれるアミノ基に結合している。

【0241】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、直鎖脂肪酸である。

【0242】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、分岐脂肪酸である。

【0243】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、１つの脂肪酸を含むモノアシル脂肪酸分子である。モノアシル脂肪酸分子は、カルボキシル基を１つだけ含む脂肪酸分子である。好ましくは、カルボキシル基は、脂肪酸分子の一端に位置する。

【0244】

例えば、ＧＩＰペプチドは、式Ｉ：

【化17】

に示すように、リンカーを介してモノアシル脂肪酸（ヘキサデカノイルなど）にコンジュゲートされ得る。

【0245】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、ジアシル脂肪酸分子である。ジアシル脂肪酸分子は、２つのカルボキシル基を含む脂肪酸分子である。好ましくは、カルボキシル基の一方又は両方は、脂肪酸分子の１つ又は各々の末端に位置する。

【0246】

例えば、ＧＩＰペプチドは、式ＩＩ：

【化18】

に示すように、リンカーを介して「二酸」とも呼ばれる（１５－カルボキシペンタデカノイルなどの）ジアシル脂肪酸にコンジュゲートされ得る。

【0247】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、２つの脂肪酸を含むジアシル脂肪酸分子である。

【0248】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、２つのカルボキシル官能基を含むジアシル脂肪酸分子である。

【0249】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ－（式中、ｎは、４～２４の整数である）のアシル基を含む。

【0250】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_６ＣＯ－、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_８ＣＯ－、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１０ＣＯ－、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１２ＣＯ－、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１４ＣＯ－、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１６ＣＯ－、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１８ＣＯ－、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_２０ＣＯ－及びＣＨ_３（ＣＨ_２）_２２ＣＯ－からなる群から選択されるアシル基を含む。

【0251】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１０ＣＯ－（ラウリル、Ｃ１２）、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１２ＣＯ－（ミリストイル、Ｃ１４）、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１４ＣＯ－（パルミトイル、Ｃ１６）、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１６ＣＯ－（ステアリル、Ｃ１８）、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１８ＣＯ－（アラキジル、Ｃ２０）及びＣＨ_３（ＣＨ_２）_２０ＣＯ－（ベヘニル、Ｃ２２）からなる群から選択される（モノ）アシル脂肪酸である。

【0252】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、ＨＯＯＣ－ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１０ＣＯ－（ドデカノイル、Ｃ１２）、ＨＯＯＣ－ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１２ＣＯ－（１－テトラデカノイル、Ｃ１４）、ＨＯＯＣ－ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１４ＣＯ－（ヘキサデカノイル、Ｃ１６）、ＨＯＯＣ－ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１５ＣＯ－（１５－カルボキシ－ペンタデカノイル、Ｃ１７）、ＨＯＯＣ－ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１６ＣＯ－（オクタデカノイル、Ｃ１８）、ＨＯＯＣ－ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１７ＣＯ－（１７－カルボキシ－ヘプタデカノイル、Ｃ１９）、ＨＯＯＣ－ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１８ＣＯ－（エイコサノイル、Ｃ２０）、ＨＯＯＣ－ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１９ＣＯ－（１９－カルボキシ－ノナデカノイル、Ｃ２１）及びＨＯＯＣ－ＣＨ_３（ＣＨ_２）_２０ＣＯ－（ベヘニル、Ｃ２２）からなる群から選択される（ジ）アシル脂肪酸である。

【0253】

【0254】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、式ＣＯＯＨ（ＣＨ_２）_ｎＣＯ－（ジカルボン酸）（式中、ｎは、４～２４の整数である）のアシル基を含む。

【0255】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、ＣＯＯＨ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ－（Ｃ１６二酸）、ＣＯＯＨ（ＣＨ_２）_１６ＣＯ－（Ｃ１８二酸）、ＣＯＯＨ（ＣＨ_２）_１８ＣＯ－（Ｃ２０二酸）及びＣＯＯＨ（ＣＨ_２）_２０ＣＯ－（Ｃ２２二酸）からなる群から選択されるアシル基を含む。

【0256】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、Ｃ１２、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８、Ｃ２０及びＣ２２から選択される。

【0257】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、Ｃ１４二酸、Ｃ１６二酸、Ｃ１８二酸、Ｃ２０二酸及びＣ２２二酸から選択される。

【0258】

一実施形態では、脂肪酸分子は、パルミトイルである。

【0259】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、１,１６－ヘキサデカン二酸／ヘキサデカン二酸である。

【0260】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、１５－カルボキシペンタデカノイルである。

【0261】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、ステアリルである。

【0262】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、１，１８－オクタデカン二酸/オクタデカン二酸である。

【0263】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、１７－カルボキシヘプタデカノイルである。

【0264】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、アラキジルである。

【0265】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、１,２０－エイコサン酸／エイコサン酸である。

【0266】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、１９－カルボキシノナデカノイルである。

【0267】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、ベヘニルである。

【0268】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、１,２２－ドコサン酸／ドコサン酸である。

【0269】

一実施形態では、前記脂肪酸分子は、ＣＯＯＨ（ＣＨ_２）_１４ＣＯ－を含むか、又はからなる。一実施形態では、前記脂肪酸分子は、ＣＯＯＨ（ＣＨ_２）_１６ＣＯ－を含むか、又はからなる。一実施形態では、前記脂肪酸分子は、ＣＯＯＨ（ＣＨ_２）_１８ＣＯ－を含むか、又はからなる。

【0270】

脂肪酸分子は、脂肪酸分子のカルボキシル基がアミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成するようにアミノ酸残基に直接結合していてもよい。

【0271】

リンカーを介した脂肪酸分子の結合
本明細書においてペプチドへの脂肪酸分子の結合は、直接的又は間接的に、すなわちリンカー又はスペーサーを介して生じ得る。

【0272】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、アミノ酸残基に直接結合している。

【0273】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、アミノ酸残基のα－アミノ基に直接結合しており、前記アミノ酸残基はＮ末端アミノ酸残基である。

【0274】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、Ｌｙｓ残基のイプシロンアミノ基に直接結合している。

【0275】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、Ｏｒｎ残基のデルタアミノ基に直接結合している。

【0276】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、式ＩＩＩ：

【化19】

に示すように、リンカー又はスペーサーを介してアミノ酸残基に結合している。

【0277】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、リンカー又はスペーサーを介してＬｙｓ残基のイプシロンアミノ基に結合している。

【0278】

一実施形態では、本開示による脂肪酸分子は、リンカー又はスペーサーを介してＯｒｎ残基のデルタアミノ基に結合している。

【0279】

一実施形態では、脂肪酸分子は、リンカーのアミノ基が脂肪酸分子のカルボキシル基とアミド結合を形成するように、スペーサー（又はリンカー）を用いてアミノ酸残基に結合することができる。

【0280】

一実施形態では、リンカーは、α，ω－アミノ酸である。適切なリンカーの例は、コハク酸、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ又はＡｓｐ、又はＧｌｙ－Ｌｙｓなどのジペプチドである。リンカーがコハク酸である場合、その１つのカルボキシル基はアミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成し、その他のカルボキシル基は脂肪酸分子のアミノ基とアミド結合を形成し得る。リンカーがＬｙｓ、Ｇｌｕ又はＡｓｐである場合、そのカルボキシル基はアミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成し、そのアミノ基は脂肪酸分子のカルボキシル基とアミド結合を形成し得る。Ｌｙｓがリンカーとして使用される場合、場合によっては、Ｌｙｓのεアミノ基と脂肪酸分子の間にさらなるリンカーが挿入され得る。一実施形態で、このようなさらなるリンカーは、Ｌｙｓのεアミノ基と脂肪酸分子内に存在するアミノ基とがアミド結合を形成するコハク酸である。他のリンカーは、Ｎε－（γ－Ｌ－グルタミル）、Ｎε－（β－Ｌ－アスパラギル）、Ｎε－グリシル、及びＮε－（α－（γ－アミノブタノイル）である。

【0281】

一実施形態では、リンカーは、
ａ．α－アミノ酸、γ－アミノ酸又はω－アミノ酸、
ｂ．コハク酸、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｐからなる群から選択される１以上のアミノ酸、
ｃ．γ－アミノブタノイル（γ－アミノ酪酸）、γ－Ｇｌｕ（γ－グルタミン酸）、β－Ａｓｐ（β－アスパラギル）、β－Ａｌａ（β－アラニル）及びＧｌｙのうちの１以上、及び
ｄ．［８－アミノ－３,６－ジオキサオクタン酸］_ｎ（ＡＥＥＡｃ_ｎ）（式中、ｎは、１～４、１～３又は１～２の整数などの１～５０の整数である）
からなる群から個々に選択される１以上の部分を含む。

【0282】

一実施形態では、リンカーは親水性リンカーである。一実施形態では、リンカーは非天然アミノ酸親水性リンカーである。

【0283】

一実施形態では、リンカーは、γ－アミノブタノイル（γ－アミノ酪酸）、γ－グルタミル（γ－グルタミン酸）、β－アスパラギル、β－アラニル及びグリシルからなる群から選択される。一実施形態では、リンカーは、γ－アミノブタノイル（γ－アミノ酪酸）、γ－グルタミル（γ－グルタミン酸）、β－アスパラギル、β－アラニル及びグリシルのうちの１以上を含む。

【0284】

一実施形態では、リンカーは、個々のリンカー部分の繰り返しである。一実施形態では、リンカーは同一のリンカー部分の繰り返しである。一実施形態では、リンカーは異なるリンカー部分の繰り返しである。

【0285】

一実施形態では、リンカーはγ－グルタミン酸である。

【0286】

一実施形態では、リンカーは、γ－グルタミン酸－８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸（γ－Ｇｌｕ）－（ＡＥＥＡｃ）、又はその繰り返しである。

【0287】

一実施形態では、リンカーは、γ－グルタミン酸－８－アミノ－３、６－ジオキサオクタン酸（γ－Ｇｌｕ）－（ＡＥＥＡｃ_ｎ）の１以上の繰り返しを含む。

【0288】

本明細書に開示されるリンカーの例は、リンカーの端のいずれか１つを介してＧＩＰペプチド類似体のアミノ酸残基に結合することができるようなものである。そのため、例えば、リンカーが、γ－グルタミン酸－８－アミノ－３、６－ジオキサオクタン酸（γ－Ｇｌｕ）－（ＡＥＥＡｃ_ｎ）の１以上の繰り返しを含む場合、前記リンカーは、γ－Ｇｌｕを介して、又はＡＥＥＡｃ_ｎを介して、ＧＩＰペプチド類似体のアミノ酸残基に結合することができる。

【0289】

一実施形態では、リンカーは、［γ－グルタミン酸］－［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_ｎ（γ－Ｇｌｕ）－（ＡＥＥＡｃ_ｎ）であり、式中、ｎは１～５０の整数である。

【0290】

一実施形態では、リンカーは、［γ－グルタミン酸］－［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_ｎ（γ－Ｇｌｕ）－（ＡＥＥＡｃ_ｎ）であり、ｎは、１～２、２～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～４５、４５～５０の整数などの１～５０の整数である。

【0291】

一実施形態では、リンカーは、［γ－グルタミン酸］－［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_ｎ（γ－Ｇｌｕ）－（ＡＥＥＡｃ_ｎ）であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９及び５０からなる群から選択される整数である。

【0292】

一実施形態では、リンカーは、［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_ｎ（ＡＥＥＡｃ_ｎ）であり、式中、ｎは、１～２、２～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、１１～１２、１２～１３、１３～１４、１４～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～４５、４５～５０の整数などの１～５０の整数である。

【0293】

一実施形態では、リンカーは、［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_ｎ（ＡＥＥＡｃ_ｎ）であり、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９及び５０からなる群から選択される整数である。

【0294】

一実施形態では、リンカーは、［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_ｎ（ＡＥＥＡｃ_ｎ）であり、式中、ｎは、１、２、３からなる群から選択される整数である。

【0295】

一実施形態では、リンカーは、［γ－グルタミン酸］－［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_ｎ（γ－Ｇｌｕ）－ＡＥＥＡｃ_ｎ）であり、式中、ｎは１、２、３からなる群から選択される整数である。

【0296】

一実施形態では、リンカーは、［γ－グルタミン酸］－［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］（γ－Ｇｌｕ）－ＡＥＥＡｃ又は［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］－［γ－グルタミン酸］（ＡＥＥＡｃ－γ－Ｇｌｕ）である。例えば、ＧＩＰペプチドは、式ＩＶ：

【化20】

に示されるように、［γ－グルタミン酸］－［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］を介して、脂肪酸（例えば、式ＩＶ中のＣ１６又はパルミチン酸／パルミトイル、しかし、任意の他の脂肪酸を使用してもよい）にコンジュゲートされ得る。式ＩＶ：式は、立体化学を描写せず、通常、特に指定しない限り、天然のＬ型が使用される。

【0297】

例えば、ＧＩＰペプチドは、式Ｖ：

【化21】

に示されるように、［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］－［γ－グルタミン酸］を介して、脂肪酸（例えば、式ＩＶ中のＣ１６又はパルミチン酸／パルミトイル、しかし、任意の他の脂肪酸を使用してもよい）にコンジュゲートされ得る。式Ｖ：式は、立体化学を描写せず、通常、特に指定しない限り、天然のＬ型が使用される。

【0298】

一実施形態では、リンカーは、［γ－グルタミン酸］－［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_２（γ－Ｇｌｕ）－（ＡＥＥＡｃ）_２である。例えば、リンカーは、ｙＧｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－又はＡＥＥＡｃ－ｙＧｌｕ－ＡＥＥＡｃ－又はＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ｙＧｌｕ－を含むか、又はそれからなり得る。

【0299】

一実施形態では、リンカーは、［γ－グルタミン酸］－［８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸］_３（γ－Ｇｌｕ）－（ＡＥＥＡｃ）_３である。例えば、リンカーは、ｙＧｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－又はＡＥＥＡｃ－ｙＧｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－又はＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ｙＧｌｕ－ＡＥＥＡｃ－又はＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ｙＧｌｕ－を含むか、又はそれからなり得る。

【0300】

本明細書に提供されるように、１つのγ－グルタミン酸及び１、２又は３個の８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸部分を含むか又はそれからなるリンカーは、γ－Ｇｌｕを介して又はＡＥＥＡｃ_ｎを介して、ＧＩＰペプチド類似体のアミノ酸残基に結合することができる。

【0301】

一実施形態では、リンカーは、Ｃｙｓ以外のアミノ酸残基である。一実施形態では、リンカーは４－Ａｂｕである。一実施形態では、リンカーは、ｙ－アミノ酪酸である。

【0302】

別の実施形態では、リンカーはジペプチド、例えば、Ｃ末端アミノ酸残基がＬｙｓ、Ｈｉｓ又はＴｒｐ、好ましくはＬｙｓであり、かつＮ末端アミノ酸残基がＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ及びＰｒｏを含む群から選択されるジペプチドである。一実施形態では、ジペプチドリンカーはＧｌｙ－Ｌｙｓである。

【0303】

一実施形態では、リンカーは、γ－アミノブタノイル（γ－アミノ酪酸）、γ－グルタミル（γ－グルタミン酸）、β－アスパラギル、β－アラニル及びグリシルからなる群から選択される１以上の部分を含む。一実施形態では、リンカーは、γ－アミノブタノイル（γ－アミノ酪酸）、γ－グルタミル（γ－グルタミン酸）、β－アスパラギル、β－アラニル、グリシル、γ－グルタミン酸－８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸（γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ_ｎ、式中、ｎは１～５０の整数である）、Ｃｙｓ、４－Ａｂｕ、ｙ－アミノ酪酸及びジペプチドを除くアミノ酸残基のうちの１以上を含む。

【0304】

別の実施形態では、リンカーは、１～７個のメチレン基、好ましくは２個のメチレン基を有する未分岐のアルカンα，ω－ジカルボン酸基であり、リンカーは、親ペプチドのアミノ基と脂肪酸分子のアミノ基との間に架橋を形成する。

【0305】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体は脂肪酸を含み、該脂肪酸分子は、リンカーと脂肪酸の組み合わせが、
ｉ．ヘキサデカノイル－γ－Ｇｌｕ－
ｉｉ．ヘキサデカノイル－γ－Ｇｌｕ－γ－Ｇｌｕ－
ｉｉｉ．ヘキサデカノイル－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－
ｉｖ．ヘキサデカノイル－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｖ．ヘキサデカノイル－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｖｉ．［１５－カルボキシペンタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－
ｖｉｉ．［１５－カルボキシペンタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－γ－Ｇｌｕ－
ｖｉｉｉ．［１５－カルボキシペンタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－
ｉｘ．［１５－カルボキシペンタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｘ．［１５－カルボキシペンタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｉ．オクタデカノイル－γ－Ｇｌｕ－
ｘｉｉ．オクタデカノイル－γ－Ｇｌｕ－γ－Ｇｌｕ－
ｘｉｉｉ．オクタデカノイル－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｉｖ．オクタデカノイル－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｖ．オクタデカノイル－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｖｉ．［１７－カルボキシヘプタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－
ｘｖｉｉ．［１７－カルボキシヘプタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－γ－Ｇｌｕ－
ｘｖｉｉｉ．［１７－カルボキシヘプタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｉｘ．［１７－カルボキシヘプタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｘ．［１７－カルボキシヘプタデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｘｉ．エイコサノイル－γ－Ｇｌｕ－
ｘｘｉｉ．エイコサノイル－γ－Ｇｌｕ－γ－Ｇｌｕ－
ｘｘｉｉｉ．エイコサノイル－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｘｉｖ．エイコサノイル－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｘｖ．エイコサノイル－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｘｖｉ．［１９－カルボキシノナデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－
ｘｘｖｉｉ．［１９－カルボキシノナデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－γ－Ｇｌｕ－
ｘｘｖｉｉｉ．［１９－カルボキシノナデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｘｉｘ．［１９－カルボキシノナデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
ｘｘｘ．［１９－カルボキシノナデカノイル］－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－
からなる群から選択されるように、リンカーを介してアミノ酸残基に結合される。

【0306】

一実施形態では、本明細書に開示されるＧＩＰペプチド類似体は脂肪酸を含み、該脂肪酸分子は、リンカーと脂肪酸の組み合わせが、
ｉ．［１５－カルボキシペンタデカノイル－γＧｌｕ
ｉｉ．［１７－カルボキシヘプタデカノイル－γＧｌｕ－ＡＥＥＡｃ－ＡＥＥＡｃ－、及び
ｉｉｉ．［１７－カルボキシヘプタデカノイル－ｙＧｌｕ－ｙＧｌｕ
からなる群から選択されるように、リンカーを介してアミノ酸残基に結合される。

【0307】

脂肪酸を有するＧＩＰペプチド
一実施形態では、本明細書に定義されるＧＩＰ類似体は、

【化22】

又はその機能的バリアントからなる群から選択され、前記脂肪酸は、直接結合されるか、又は本明細書で定義されるリンカー／スペーサーを介して結合される。

【0308】

Ｃ１６は脂肪酸ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１４ＣＯ－（パルミトイル）で、Ｃ１８は脂肪酸ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１６ＣＯ－（ステアリル）ということになる。接尾辞「－二酸」は、脂肪酸分子がジアシル脂肪酸分子であることを意味する。そのような接尾辞は、モノアシル脂肪酸分子を指さない。

【0309】

Ｃ２０は脂肪酸ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１８ＣＯ－（アラキジル）ということになる。接尾辞「－二酸」は、脂肪酸分子がジアシル脂肪酸分子であることを意味する。そのような接尾辞は、モノアシル脂肪酸分子を指さない。

【0310】

Ｃ２２は脂肪酸ＣＨ_３（ＣＨ_２）_２０ＣＯ－（ベヘニル）ということになる。接尾辞「－二酸」は、脂肪酸分子がジアシル脂肪酸分子であることを意味する。そのような接尾辞は、モノアシル脂肪酸分子を指さない。

【0311】

一実施形態では、本明細書に定義されるＧＩＰ類似体は、

【化23】

又はその機能的バリアントからなる群から選択される。

【0312】

一実施形態では、ＧＩＰ類似体は、

【化24】

又はその機能的バリアントからなる群から選択され、
前記脂肪酸は、直接結合されるか、又は本明細書で定義されるリンカー／スペーサーを介して結合される。

【0313】

化合物
さらなる態様は、本明細書で定義されるペプチドを含むか、又はそれからなる化合物を提供することである。一実施形態では、前記化合物はペプチド単量体（すなわち、ペプチドの１コピーを含む）として製剤化されるが、別の実施形態では、前記化合物はペプチド多量体として製剤化される。

【0314】

多量体化合物
一実施形態では、本開示によるペプチドは多量体として製剤化される。多量体は、複数のペプチドモノマーを含むか、又はそれからなるタンパク質である。多量体は、通常、非共有結合と一緒に保持される複数の分子の集合体である。この定義は、共有結合で共に保持される一連のモノマーであるポリマーと多量体を区別する。

【0315】

本開示のペプチド配列は、一実施形態では、化学結合によって又はリンカー基を介して本開示の別の（同一又は非同一の）ペプチド配列に連結される。いくつかの実施形態では、開示のペプチドは、モノマーのオリゴマー又は多量体として製剤化され、各モノマーは、本開示に従って定義されるペプチド配列である。

【0316】

そのため、本開示によると、多量体化合物は、一実施形態では、開示の２以上のペプチド配列を含むポリマーであり、前記ペプチド配列が同一又は非同一であり、２以上のペプチド配列のうちの少なくとも１つが本開示によるペプチドである。好ましくは、両方のペプチド配列は、本開示によるペプチドである。

【0317】

一実施形態では、多量体化合物は二量体であり、本開示による２つのペプチドを含み、前記２つのペプチドは互いに対して同一又は非同一である。

【0318】

別の実施形態では、多量体化合物は三量体であり、本開示による３つのペプチドを含み、前記ペプチドは互いに対して同一又は非同一である。

【0319】

別の実施形態では、多量体化合物は四量体であり、本開示による４つのペプチドを含み、前記ペプチドは互いに対して同一又は非同一である。

【0320】

一実施形態では、多量体化合物は、四量体又は八量体デンドリマーなどのデンドリマーである。デンドリマーは繰り返し分岐し、大まかに球状の大きな分子であり、典型的には、コアの周りで対称であり、しばしば球形の３次元形態をとる。

【0321】

本開示によるデンドリマーは、４個のペプチド、８個のペプチド、１６個のペプチド、又は３２個のペプチドを含んでよい。１つの特定の実施形態では、前記デンドリマーは、４つのペプチド（すなわち四量体デンドリマー）又は８個のペプチド（八量体デンドリマー）を含む。

【0322】

いくつかの特定の実施形態では、多量体化合物は、本発明の２つの同一アミノ酸配列（二量体）を含むか、又は化合物が、本開示のアミノ酸配列の４つの同一コピー（四量体デンドリマー）を含む。

【0323】

本開示による多量体は、一実施形態では、ペプチド結合又はリンカー基を介して２以上のペプチドモノマーを連結することによってなされる。一実施形態では、それらは、リジン残基（各ペプチド鎖は単一リジン残基に連結されている）などのリジン骨格に連結されるか、又はポリマー担体、例えば、タンパク質担体に結合される。前記リンカー基は、一実施形態では、３、７、１５個以上のリジン残基を含むリジン系デンドリマー構造に見られるような複数のリジン残基を有するコア部分などの複数のリジン残基を含むが、当業者に知られるペプチドモノマーの任意の他の連結が想定され得る。

【0324】

一実施形態では、連結は、ペプチドモノマーのＮ末端及び／又はＣ末端で生じる。

【0325】

一実施形態では、
Ａ）
－アミノ酸配列の配列番号ＸＸ：

【化25】

（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、個々に任意のアミノ酸であるか、又は除去される）
又はその機能的バリアントからなるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、前記バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸において１～７、１～４個などの個々のアミノ酸置換を有し、前記ペプチドは、配列番号ＸＸ又はその前記機能的バリアントの３～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号Ｚ）の１以上のアミノ酸残基又はエキセンディン－４（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号Ｅ）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドである）グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体；並びに
－配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）：

【化26】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）：

【化27】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、及び
配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）：

【化28】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
又はその機能的バリアントからなる群から選択されるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体であって、前記バリアントは、配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）及び配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つに１～４個の個々のアミノ酸置換を有し、
前記ペプチドは、リンカーの有無にかかわらず、配列番号及び配列番号のいずれか１つ、又は配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）及び配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つに１～４個のアミノ酸置換を含むその機能的バリアントの４～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、
ａ．グリシン又はプロリン、
ｂ．ＧＰ、ＧＰＳ、ＧＰＳＳ、ＧＰＳＳＧ、ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳからなる群から選択される断片、
ｂ１．ＰＳ、ＰＳＳ、ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳからなる群から選択される断片、
ｃ．ＧＫ、ＧＫＫ、ＧＫＫＮ、ＧＫＫＮＤ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱからなる群から選択される断片、又は
ｄ．ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱからなる群から選択される断片又はアミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアント、又は
ｅ．ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、又はアミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアントからなる群から選択される断片、
からなる群から選択されるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体；
Ｂ）必要に応じて、１以上のリンカー基
からなる多量体化合物が提供される。

【0326】

アンタゴニストの特性と親和性の決定
ペプチドがＧＩＰＲのアンタゴニストであるかどうかを判定するために、例えば、ペプチドのＩＣ５０を決定することによる、当技術分野で知られている方法が採用され得る。これは、用量応答曲線を構築し、アゴニスト活性の逆転に対する異なる濃度のペプチドの影響を調べることによって行うことができる。アゴニストは、ＧＩＰ１－４２、例えば、ｈＧＩＰ－１－４２又はｈＧＩＰ１－３０であり得る。ＧＩＰＲは、ｈＧＩＰＲ、ｒＧＩＰＲ、ｍＧＩＰＲ、イヌＧＩＰＲ、ブタＧＩＰＲ又はアカゲザルＧＩＰＲであり得る。ＩＣ５０値は、所与のアンタゴニストについて、アゴニストの最大生物学的応答の半分を阻害するのに必要な濃度を決定することによって計算することができる。ペプチドがアンタゴニストであるかどうかを判定する方法は、実施例４に記載されているが、当技術分野で知られている他の方法も使用され得る。例えば、漸増濃度のＧＩＰ由来ペプチドでのｈＧＩＰ１－４２ｃＡＭＰ線量応答曲線に対してシルドプロット分析を行うことができる。このようにして、アンタゴニスト活性の種類も決定され得る。

【0327】

本開示のＧＩＰペプチド類似体は、ＧＩＰＲに対してアンタゴニスト活性を有することを特徴とする。特に、本開示のＧＩＰペプチド類似体は、ＧＩＰペプチドのコア（ＧＩＰの残基３～２９）における脂肪酸の存在に及びＧＩＰペプチドのＣ末端での延長の存在に大きく起因して、ＧＩＰＲの強力なアンタゴニストである。

【0328】

一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体はＧＩＰＲのアンタゴニストである。

【0329】

一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体は、阻害が可能である場合、「材料及び方法」に記載のＣｉｓＢｉｏｃＡＭＰアッセイ及び／又はＤｉｓｃｏｖｅＲｘｃＡＭＰアッセイなどによる細胞内ｃＡＭＰの減少を決定するアッセイによって測定した時に、少なくとも７０％、少なくとも７５％など、少なくとも８０％など、少なくとも８５％など、少なくとも９０％など、少なくとも９５％など、約１００％などのＧＩＰＲ活性を阻害する。

【0330】

一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体は、例えば、「材料及び方法」に記載のＣｉｓＢｉｏｃＡＭＰアッセイ及び／又はＤｉｓｃｏｖｅＲｘｃＡＭＰアッセイなどによる細胞内ｃＡＭＰの減少を決定するアッセイによって、ＧＩＰＲ活性の阻害を細胞内ｃＡＭＰの減少として決定する場合、少なくとも８０％、少なくとも８５％など、少なくとも９０％など、少なくとも９５％など、約１００％などのＧＩＰＲ活性を阻害する。％阻害は、Ｅｍａｘの阻害の％であり、これはペプチドが８５％のＥｍａｘを阻害する場合、ＧＩＰＲの残りの活性が１５％あることを意味する。

【0331】

一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体は、５０ｎＭ以下、４５ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３５ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１～５ｎＭなどのＩＣ５０に相当するＧＩＰＲアンタゴニスト活性を有し、アンタゴニスト活性（「効力」とも呼ばれる）は、「材料及び方法」に記載のＣｉｓＢｉｏｃＡＭＰアッセイ及び／又はＤｉｓｃｏｖｅＲｘｃＡＭＰアッセイなどによる細胞内ｃＡＭＰの減少を決定するアッセイによって測定される。

【0332】

ＧＩＰペプチド類似体などの化合物のアンタゴニスト活性を決定する方法は、当業者に知られている。ＧＩＰペプチド類似体などの化合物のアンタゴニスト活性を決定するために使用できる例示的な方法は、本明細書の「実施例」に見い出すことができ、例えば、それらの方法は、細胞内ｃＡＭＰを測定し、ＧＩＰペプチド類似体を用いる細胞の処理から生じる細胞内ｃＡＭＰの減少を決定することを含む。

【0333】

本開示のＧＩＰペプチド類似体はまた、ＧＩＰＲに対してアゴニスト活性が低いか又は全くないことも特徴とする。２０％以下、好ましくは１０％以下、さらにより好ましくは５％以下のアゴニスト活性などのＧＩＰＲに対するアゴニスト活性が低いか又は全くないＧＩＰペプチド類似体は、「サイレントアンタゴニスト」とも呼ばれる。

【0334】

一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体は、最大でも３０％、最大でも２５％など、最大でも２０％など、最大でも１５％など、最大でも１０％など、最大でも５％などのＧＩＰＲ活性を刺激することができ、一実施形態では、本開示のＧＩＰペプチド類似体は、ＧＩＰＲに対するアゴニスト活性がない、すなわち、約０％のＧＩＰＲ活性を刺激する。

【0335】

「材料及び方法」に記載されているように、ＧＩＰＲに対するＧＩＰペプチド類似体のアゴニスト活性は、アンタゴニスト活性と同じ方法で決定することができるが、減少の代わりに、細胞内ｃＡＭＰの増加が測定される。

【0336】

治療方法
また、一態様は、医薬として使用するための、本明細書で定義されるペプチド、又は該ペプチドを含む組成物を提供することである。

【0337】

一実施形態では、医薬品として使用するための、アミノ酸配列の配列番号ＸＸ：

【化29】

（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、個々に任意のアミノ酸であるか、又は除去される）
又はその機能的バリアントからなるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体が提供され、前記バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸に１～８、１～４個などの個々のアミノ酸置換を有し、
前記ペプチドは、配列番号ＸＸ又はその前記機能的バリアントの３～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号Ｚ）の１以上のアミノ酸残基又はエキセンディン－４（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ：配列番号Ｅ）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドである。

【0338】

一実施形態では、医薬として使用するための、
配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）：

【化30】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）：

【化31】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）：

【化32】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
又はその機能的バリアントからなる群から選択されるＧＩＰ類似体が提供され、
前記バリアントは、配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）、配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）及び配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）のアミノ酸残基のいずれか１つに１～４個の個々のアミノ酸置換を有し、
前記ペプチドは、配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）、配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）及び配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つ、又はリンカーの有無にかかわらず、配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）、配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）及び配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）のアミノ酸残基のいずれか１つに１～４個のアミノ酸置換を含むその機能的バリアントの６～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、グリシン又はプロリン、
ＧＰ、ＧＰＳ、ＧＰＳＳ、ＧＰＳＳＧ、ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳからなる群から選択される断片、
ＰＳ、ＰＳＳ、ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳからなる群から選択される断片、
ＧＫ、ＧＫＫ、ＧＫＫＮ、ＧＫＫＮＤ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱからなる群から選択される断片、又は、
ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ、又は該アミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアントからなる群から選択される断片、又は
ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、又は該アミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアントからなる群から選択される断片、
である。

【0339】

一実施形態では、ｉ）ＧＩＰ誘導性グルカゴン分泌、ｉｉ）ＧＩＰ誘導性インスリン分泌、ｉｉｉ）ＧＩＰ誘導性ソマトスタチン分泌、ｉｖ）ＧＩＰ誘導性グルコース取り込み、ｖ）ＧＩＰ誘導性脂肪酸合成及び／又は脂肪酸組み込み、ｖｉ）高い若しくは増加したＧＩＰＲの発現又は活性、ｖｉｉ）食後ＧＩＰ放出、ｖｉｉｉ）遊離脂肪酸及び／又はトリグリセリドの血清レベル、ｉｘ）ＧＩＰ誘導性食欲増加、ｘ）エネルギー支出のＧＩＰ誘導性減少、ｘｉ）腸からの栄養素の吸収のＧＩＰ誘導性増加、ｘｉｉ）ＧＬＰ－１の食欲抑制効果のＧＩＰ誘導性減少、ｘｉｉｉ）ＧＩＰ誘導性レプチン耐性のうちの１以上を阻害又は低下させる方法で使用するための、アミノ酸配列の配列番号ＸＸ：

【化33】

（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、個々に任意のアミノ酸であるか、又は除去される）
又はその機能的バリアントからなるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体が提供され、
前記バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸で１～８、１～４個などの個々のアミノ酸置換を有し、
前記ペプチドは、配列番号ＸＸ又はその前記機能的バリアントの３～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号Ｚ）の１以上のアミノ酸残基又はエキセンディン－４（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号Ｅ）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドである。

【0340】

一実施形態では、ｉ）ＧＩＰ誘導性グルカゴン分泌、ｉｉ）ＧＩＰ誘導性インスリン分泌、ｉｉｉ）ＧＩＰ誘導性ソマトスタチン分泌、ｉｖ）ＧＩＰ誘導性グルコース取り込み、ｖ）ＧＩＰ誘導性脂肪酸合成及び／又は脂肪酸組み込み、ｖｉ）高い若しくは増加したＧＩＰＲの発現又は活性、ｖｉｉ）食後ＧＩＰ放出、ｖｉｉｉ）遊離脂肪酸及び／又はトリグリセリドの血清レベル、ｉｘ）ＧＩＰ誘導性骨吸収の低下のうちの１以上を阻害又は低下させる方法で使用するための、
配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）：

【化34】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）：

【化35】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）：

【化36】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
又はその機能的バリアントからなる群から選択されるＧＩＰ類似体が提供され、
前記バリアントは、配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）、配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）及び配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）のアミノ酸残基のいずれか１つに１～４個の個々のアミノ酸置換を有し、
前記ペプチドは、配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）、配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）及び配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）のいずれか１つ、又はリンカーの有無にかかわらず、配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）、配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）及び配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）のアミノ酸残基のいずれか１つに１～４個のアミノ酸置換を含むその機能的バリアントの６～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され、
Ｚは、
グリシン又はプロリン、
ＧＰ、ＧＰＳ、ＧＰＳＳ、ＧＰＳＳＧ、ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳからなる群から選択される断片、
ＰＳ、ＰＳＳ、ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳからなる群から選択される断片、
ＧＫ、ＧＫＫ、ＧＫＫＮ、ＧＫＫＮＤ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱからなる群から選択される断片、又は、
ＧＰＳＳＧＡ、ＧＰＳＳＧＡＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰ、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、ＧＫＫＮＤＷ、ＧＲＫＮＤＷ、ＧＫＲＮＤＷ、ＧＲＲＮＤＷ、ＧＫＫＮＤＷＫ、ＧＫＫＮＤＷＫＨ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩ、ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴ及びＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ、又は該アミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアントからなる群から選択される断片、又は
ＰＳＳＧ、ＰＳＳＧＡ、ＰＳＳＧＡＰ、ＰＳＳＧＡＰＰ、ＰＳＳＧＡＰＰＰ及びＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、又は該アミノ酸残基のいずれか１つに１若しくは２個の個々のアミノ酸置換を含むそのバリアントからなる群から選択される断片、
である。

【0341】

一実施形態では、メタボリックシンドローム、肥満、糖尿病前症、Ｉ型糖尿病、２型糖尿病、インスリン抵抗性、空腹時グルコースの上昇、高血糖、空腹時血清トリグリセリドレベルの上昇、低レベルの超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、低レベルの高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、脂質異常血症、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の増加／減少、高コレステロールレベル、異常な脂質沈着、心血管疾患、血圧上昇及びアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される病態を治療する方法で使用するための、
アミノ酸配列の配列番号ＸＸ：

【化37】

（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、個々に任意のアミノ酸であるか、又は除去される）
又はその機能的バリアントからなるグルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）類似体が提供され、
前記バリアントは、配列番号ＸＸの任意のアミノ酸で１～８、１～４個などの個々のアミノ酸置換を有し、
前記ペプチドは、配列番号ＸＸ又はその前記機能的バリアントの３～２９位の１以上のアミノ酸残基に少なくとも１つの脂肪酸分子を結合させることによって修飾され
Ｚは、ＧＩＰ（３１－４２）（ＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ；配列番号Ｚ）の１以上のアミノ酸残基又はエキセンディン－４（ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号Ｅ）の１以上のアミノ酸残基を含むペプチドである。

【0342】

一実施形態では、メタボリックシンドローム、肥満、過体重、肥満関連障害、糖尿病前症、Ｉ型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病関連障害、インスリン抵抗性、空腹時グルコースの上昇、高血糖、空腹時血清トリグリセリドレベルの上昇、低レベルの超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、低レベルの高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、脂質異常血症、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の増加／減少、高コレステロールレベル、異常な脂質沈着、心血管疾患、血圧上昇及びアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される病態を治療する方法で使用するための、
配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）：

【化38】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）：

【化39】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）：

【化40】

【0343】

一実施形態では、体重減少を誘導する方法で使用するための、
アミノ酸配列の配列番号ＸＸ：

【化41】

【0344】

一実施形態では、体重減少を誘導する方法で使用するための、
配列番号ｈＧＩＰ（３－３０）：

【化42】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）：

【化43】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）：

【化44】

【0345】

一実施形態では、
－メタボリックシンドローム、肥満、過体重、肥満関連障害、糖尿病前症、Ｉ型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病関連障害、インスリン抵抗性、空腹時グルコースの上昇、高血糖、空腹時血清トリグリセリドレベルの上昇、低レベルの超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、低レベルの高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、脂質異常血症、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の増加／減少、高コレステロールレベル、異常な脂質沈着、心血管疾患、血圧上昇及びアテローム性動脈硬化からなる群から選択される病態を治療するため、又は
－体重減少を誘導するため、又は
－結腸癌、神経内分泌癌及び副腎腺腫を含むが、これらに限定されない癌を治療するため、
の医薬品の製造に使用するための、
アミノ酸配列の配列番号ＸＸ：

【化45】

【0346】

【化46】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（５－３０）：

【化47】

からなるアミノ酸配列を有するペプチド、
配列番号ｈＧＩＰ（６－３０）：

【化48】

【0347】

１つの特定の実施形態では、肥満を治療する方法で使用するための、本明細書で定義されるＧＩＰペプチド類似体が提供される。

【0348】

１つの特定の実施形態では、Ｉ型及びＩＩ型の真性糖尿病を含む真性糖尿病を治療する方法で使用するための、本明細書で定義されるＧＩＰペプチド類似体が提供される。

【0349】

１つの特定の実施形態では、インスリン抵抗性を治療する方法で使用するための、本明細書で定義されるＧＩＰペプチド類似体が提供される。

【0350】

さらなる態様は、癌を治療する方法で使用するための、本明細書で定義されるＧＩＰペプチド類似体を提供することである。

【0351】

肥満関連障害は、食物摂取量の増加、食欲の増加、過食、神経性過食症、抗精神病薬又はステロイドの投与によって誘導性される肥満、胃運動の低下／増加、胃排出の遅延／増加、身体可動性の低下、変形性関節症、脂質異常症、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の増加／減少、高コレステロールレベル、及び異常な脂質沈着のいずれか１つであり得る。

【0352】

いくつかの実施形態では、脂質異常症、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の増加／減少、コレステロール、及び異常な脂質沈着は、脂肪酸代謝障害と呼ばれる。

【0353】

糖尿病関連障害は、耐糖能障害（ＩＧＴ）、ＩＧＴから２型糖尿病への進行、インスリンを必要としない２型糖尿病からインスリンを必要とする２型糖尿病への進行、β細胞機能の減少、β細胞集団の減少、β細胞アポトーシスの増加、β細胞に対するグルコース感受性の減少のいずれか１つであり得る。

【0354】

心血管疾患は、冠状動脈性心疾患、心筋梗塞、再灌流傷害、脳卒中、脳虚血、左心室肥大、冠動脈疾患、高血圧、本態性高血圧、急性高血圧緊急症、心筋症、心不全、運動不耐症、急性及び／又は慢性心不全、不整脈、心不整脈、失神、狭心症、心臓バイパス及び／又はステント再閉塞、間欠性跛行（アテローム性動脈硬化症とも呼ばれる）、拡張障害、及び収縮不全のいずれか１つ、並びにそれらの組み合わせであり得る。

【0355】

一実施形態では、癌は、大腸癌、神経内分泌癌及び副腎腺腫からなる群から選択される。

【0356】

さらなる態様は、骨密度障害（又は骨容積障害）を治療する方法で使用するための、本明細書で定義されるＧＩＰペプチド類似体を提供することである。

【0357】

一実施形態では、骨細胞の活性を阻害する方法で使用するための、本明細書に定義されるＧＩＰペプチド類似体が提供される。一実施形態では、ＧＩＰ誘導性の骨吸収の食後低下を阻害する（又は拮抗する）方法で使用するための、本明細書で定義されるペプチドが提供される。一実施形態では、骨癌を治療する方法で使用するための、本明細書に定義されるペプチドが提供される。

【0358】

一実施形態では、骨密度（又は容積）障害は、骨粗鬆症、低い骨密度及び／又は骨容積の低下を特徴とする障害、高い骨密度及び／又は骨容積の増加及び骨粗鬆症を特徴とする障害からなる群から選択される。

【0359】

さらなる態様は、障害の態様を特徴付けるか、若しくは調べる方法、並びに／又は障害に関連付けられるヒト生理学の態様を特徴付けるか、若しくは調べる方法で使用するための、本明細書で定義されるＧＩＰペプチド類似体を提供することであり、一実施形態では、前記障害は、メタボリックシンドローム、肥満、真性糖尿病、インスリン抵抗性、本明細書で定義される肥満関連障害又は本明細書で定義される糖尿病関連障害から選択される。他の態様では、本発明は、大腸癌又は副腎腺腫などの癌を治療する方法に関する。他の態様では、本発明は、高い骨密度及び／又は骨容積の増加又は骨粗鬆症を特徴とする骨密度障害の治療方法に関する。他の態様では、本発明は、アテローム性動脈硬化症を治療する方法に関する。

【0360】

メタボリックシンドローム、肥満、過体重、真性糖尿病、インスリン抵抗性、本明細書で定義される肥満関連障害、又は本明細書で定義される糖尿病関連障害；大腸癌若しくは副腎腺腫などの癌；高い骨密度及び／又は骨容積の増加を特徴とする骨密度障害などの骨密度障害；又はアテローム性動脈硬化症を治療するための方法であって、それを必要とする個体に、本明細書で定義される有効量のペプチドを投与する工程を含む方法も提供される。

【0361】

本明細書で言及される必要とする個体は、本開示によるペプチド又は医薬組成物の投与から利益を得ることができる個体である。そのような個体は、メタボリックシンドローム、及び／又は、肥満、過体重、糖尿病、インスリン抵抗性、本明細書で定義される肥満関連障害、若しくは本明細書で定義される糖尿病関連障害などの代謝障害、大腸癌若しくは副腎腺腫などの癌、骨密度障害に罹患するか、又は罹患する危険性が存在し得る。個体は、任意のヒト、男性又は女性、幼児、中高年又は老人であり得る。個体で治療又は予防される障害は、個体の年齢、個体の一般的な健康、個体の治療に使用される薬物、及び個体がメタボリックシンドローム、及び／又は肥満、過体重、糖尿病、インスリン抵抗性、本明細書に定義される肥満関連障害、又は本明細書に定義される糖尿病関連障害、大腸癌若しくは副腎腺腫などの癌、アテローム性動脈硬化症、骨密度障害などの代謝障害を有するか、又は誘導された可能性のある疾患又は障害に罹患した既往歴があるかどうかに関連し得る。いくつかの実施形態では、治療される障害は、ＧＩＰ誘導性グルカゴン分泌、ＧＩＰ誘導性インスリン分泌、ＧＩＰ誘導性ソマトスタチン分泌、ＧＩＰ誘導性グルコース取り込み、ＧＩＰ誘導性脂肪酸合成及び／又は脂肪酸取り込み、ＧＩＰＲの高い発現及び／若しくは活性、食後のＧＩＰの放出に関連する。用語「高い」は、治療を必要としない個体で観察される対応するレベルよりも大きいレベルを指していると解釈されるべきである。

【0362】

調製方法（ペプチド）
本開示によるペプチドは、当技術分野で知られている任意の方法で調製され得る。そのため、ＧＩＰ由来ペプチドは、溶液の合成又はメリフィールド型固相合成などの標準的なペプチド調製技術によって調製され得る。

【0363】

一実施形態では、本明細書で定義されるペプチドは、非天然のペプチドであり、ＧＩＰ（１－４２）などの天然タンパク質の未変性ＧＩＰに由来する。

【0364】

一実施形態では、本開示によるペプチドは、血清などのその天然由来の源から精製される。タンパク質精製は、複雑な混合物から単一型のタンパク質を分離することを意図した一連のプロセスである。出発物質は通常、生体組織である。精製プロセスの様々な工程は、タンパク質を閉じ込めるマトリックスからタンパク質を解放し、混合物のタンパク質部分と非タンパク質部分を分離し、最終的に他の全てのタンパク質から所望のタンパク質を分離することができる。分離工程は、（例えば）タンパク質サイズ、物理化学的性質、結合親和性及び生物活性の違いを利用することができる。

【0365】

一実施形態では、本開示によるペプチドは、合成で作製又は生成される。

【0366】

ペプチドの合成での生成方法は、当技術分野でよく知られている。合成ペプチドを生成するための詳細な説明と実用的な助言は、合成ペプチド：ユーザーズガイド（ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＰｅｐｔｉｄｅｓ：ＡＵｓｅｒ’ｓＧｕｉｄｅ）（ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ），ＧｒａｎｔＧ．Ａ．（編），ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，２００２、又は医薬製剤：ペプチドとタンパク質の開発（ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ：ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＰｅｐｔｉｄｅｓａｎｄＰｒｏｔｅｉｎｓ），ＦｒｏｋｊａｅｒａｎｄＨｏｖｇａａｒｄ（編），Ｔａｙｌｏｒ及びＦｒａｎｃｉｓ，１９９９に見出すことができる。

【0367】

一実施形態では、本発明のペプチド又はペプチド配列は、特に、配列補助ペプチド合成法（ＳＡＰＳ）法により、溶液合成により、メリフィールド型固相合成などの固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）により、組換え技術（前記宿主細胞において発現を導くことができる第２の核酸と作動可能に結合されたペプチドをコードする第１の核酸配列を含む宿主細胞による産生）又は酵素合成によって合成で生成される。それらは、当業者には周知である。

【0368】

ペプチドは、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）又はｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）をＮ－ａ－アミノ保護基として、及び側鎖機能に適する共通の保護基として使用する完全自動化ペプチドシンセサイザー上でバッチ的に合成することができる。

【0369】

逆相ＨＰＬＣなどによる精製後、ペプチドは、例えば、環状又はＣ末端若しくはＮ末端修飾された異性体を得るためにさらに処理され得る。環化及び末端修飾の方法は当技術分野で周知である。

【0370】

本発明によるペプチドは、モノマー又は二量体若しくは四量体などの多量体として合成され得る。

【0371】

医薬組成物及び製剤
本開示の生理活性剤を未加工の化学物質（ペプチド）として投与することが可能である一方で、医薬製剤の形態でそれらを提示することが好ましい場合がある。そのような医薬製剤は、医薬組成物、医薬として許容される組成物又は医薬として安全な組成物と称することができる。

【0372】

したがって、本発明の生理活性剤、又はその医薬として許容される塩若しくはエステル、医薬として許容される担体、賦形剤及び／又は希釈剤を含む医薬製剤がさらに提供される。該医薬品製剤は、例えば、レミントン：薬学の科学と実践（ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ）２００５、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓに記載されている従来の技術によって調製することができる。

【0373】

本発明のペプチド化合物の医薬として許容される塩は、それらを調製できる場合に、本発明に包含されることも意図される。これらの塩は、医薬使用への適用において許容されるものである。つまり、塩は親化合物の生物活性を保持し、その適用及び疾患治療における使用において不利又は有害な影響を及ぼさないことを意味する。

【0374】

医薬として許容される塩は、標準的な方法で調製される。親化合物が塩基である場合、それは、過剰な有機酸又は無機酸を適切な溶媒で処理される。親化合物が酸である場合、それは、適切な溶媒中で無機塩基又は有機塩基で処理される。

【0375】

本明細書に開示されるペプチド化合物は、経口、直腸、又は非経口（皮下を含む）経路によって、有効量で、医薬として許容される担体又は希釈剤と同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）、同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、又は共にそのアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩の形態で、特に好ましくは、その医薬組成物の形態で投与され得る。

【0376】

本発明の医薬組成物で使用するための医薬として許容される酸付加塩の例には、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸などの鉱酸、並びに酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、ｐ－トルエンスルホン酸、及びアリールスルホン酸などの有機酸由来のものが含まれる。

【0377】

特定の実施形態では、本開示によるペプチドは、酢酸塩、ＨＣｌ（塩酸）塩又はＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）塩として製剤化される。

【0378】

投与と投薬量
本開示によれば、本明細書で定義されるペプチド又はペプチドを含む組成物が、医薬有効用量又は治療有効量で、治療を必要とする個体に投与される。投薬量の要件は、使用される特定の薬物組成物、投与経路及び治療される特定の対象によって異なり、これは障害の重症度及び種類、並びに対象の体重及び一般的な状態に依存する。また、ペプチド化合物の個々の投薬量の最適な量と間隔は、治療される病態の性質と程度、形態、投与経路及び投与部位、並びに治療される特定の患者によって決定され、そのような最適化は、従来の技術によって決定できることも当業者なら認識するであろう。また、最適な治療経過、すなわち、定義される日数に対して１日当たりに与えられる化合物の投与回数は、従来の治療決定試験のコースを用いて確認できることも当業者なら理解するであろう。

【0379】

一実施形態では、生理活性剤は、１日１回、１日２回など、１日３回など、１日４回など、１日５回など少なくとも１日１回投与される。

【0380】

用量はまた、断続的な間隔、又用量が毎日投与されない間隔で投与され得る。むしろ、１回以上の用量を、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、毎週、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、又はそれらの範囲内の間隔（２～４週間ごと、又は４～６週間ごとなど）に投与することができる。

【0381】

一実施形態では、用量は、週に１回、週１回など、１週あたり１用量などで投与される。

【0382】

投与経路
投与の好ましい経路は、治療対象の一般的な病態及び年齢、治療される病態の性質、体内の治療される組織の位置及び選択される有効成分に依存することが理解されるであろう。

【0383】

全身治療
本開示による全身治療の場合、投与経路は、最終的に所望の作用部位を標的とする血流中に生理活性剤を導入することができる。

【0384】

そのような投与経路は、経腸経路（口腔、直腸、経鼻、肺、頬、舌下、経皮、大槽内及び腹腔内投与を含む）、及び／又は非経口経路（皮下、筋肉内、髄腔内、脳内、静脈内及び皮内投与を含む）などの任意の適切な経路である。

【0385】

非経口投与
非経口投与は、経口／経腸経路ではない任意の投与経路であり、それによって、医薬は肝臓における初回通過分解を回避する。したがって、非経口投与は、注射及び注入、例えば、静脈内投与、筋肉内投与又は皮下投与などのボーラス注射又は持続点滴を含む。さらに、非経口投与には、吸入及び局所投与が含まれる。

【0386】

したがって、生理活性剤は、生理活性物質が、例えば、鼻、膣、目、口、生殖管、肺、消化管、又は直腸、好ましくは、鼻の粘膜、又は口に与えられる動物の任意の粘膜を横断するように局所的に投与され得、したがって、非経口投与はまた、頬、舌下、経鼻、直腸、膣及び腹腔内投与並びに吸入若しくは設置による肺投与及び気管支投与を含み得る。また、薬剤は皮膚を横切るように局所的に投与され得る。

【0387】

本発明の有利な実施形態によれば、ＧＩＰ類似体は皮下に投与される。

【0388】

局所治療
本発明による生理活性剤は、一実施形態では、局所治療として使用され得る、すなわち、作用部位（複数可）に直接導入することができる。したがって、生理活性剤は、皮膚又は粘膜に直接塗布してもよいし、又は生理活性剤を作用部位、例えば、疾患組織に、又は疾患組織に直接通じる末端動脈に注入してもよい。これらの投与形態は、血液脳関門を回避することが好ましい。

【0389】

キットオブパーツ
本開示はまた、上記の生理活性剤のうちの１以上及び１以上の第２の活性成分などの少なくとも１つの追加の又はさらなる成分を含むキットオブパーツに関する。

【0390】

参照文献１．ＢａｇｇｉｏＬＬ，ＤｒｕｃｋｅｒＤＪ．ＢｉｏｌｏｇｙｏｆＩｎｃｒｅｔｉｎｓ：ＧＬＰ－１ａｎｄＧＩＰ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ２００７；１３２（６）：２１３１－２１５７．
２．ＨｏｌｓｔＪＪ．ＯｎｔｈｅＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙｏｆＧＩＰａｎｄＧＬＰ－１．ＨｏｒｍＭｅｔａｂＲｅｓ２００４；３６（１１／１２）：７４７－７５４．
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１０．ＤｉｎｇＷＧ，ＲｅｎｓｔｒｏｍＥ，ＲｏｒｓｍａｎＰ，ＢｕｓｃｈａｒｄＫ，ＧｒｏｍａｄａＪ．Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅＩａｎｄｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓｔｉｍｕｌａｔｅＣａ２＋－ｉｎｄｕｃｅｄｓｅｃｒｅｔｉｏｎｉｎｒａｔａｌｐｈａ－ｃｅｌｌｓｂｙａｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＡ－ｍｅｄｉａｔｅｄｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ１９９７；４６（５）：７９２－８００．
１１．ＭｅｉｅｒＪＪ，ＧａｌｌｗｉｔｚＢ，ＳｉｅｐｍａｎｎＮｅｔａｌ．Ｇａｓｔｒｉｃｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＩＰ）ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｇｌｕｃａｇｏｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎｉｎｈｅａｌｔｈｙｈｕｍａｎｓｕｂｊｅｃｔｓａｔｅｕｇｌｙｃａｅｍｉａ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ２００３；４６（６）：７９８－８０１．
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２０．ＮａｓｔｅｓｋａＤ，ＨａｒａｄａＮ，ＳｕｚｕｋｉＫｅｔａｌ．ＣｈｒｏｎｉｃＲｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆＧＩＰＳｅｃｒｅｔｉｏｎＡｌｌｅｖｉａｔｅｓＯｂｅｓｉｔｙａｎｄＩｎｓｕｌｉｎＲｅｓｉｓｔａｎｃｅＵｎｄｅｒＨｉｇｈ－ＦａｔＤｉｅｔＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ２０１４；６３（７）：２３３２－２３４３．
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２６．ＢｒｏｎｓＣ，ＪｅｎｓｅｎＣＢ，ＳｔｏｒｇａａｒｄＨｅｔａｌ．Ｉｍｐａｃｔｏｆｓｈｏｒｔ－ｔｅｒｍｈｉｇｈ－ｆａｔｆｅｅｄｉｎｇｏｎｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｙｏｕｎｇｈｅａｌｔｈｙｍｅｎ．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ２００９；５８７（１０）：２３８７－２３９７．
２７．ＲａｕｆｍａｎＪＰ，ＳｉｎｇｈＬ，ＥｎｇＪ．Ｅｘｅｎｄｉｎ－３，ａｎｏｖｅｌｐｅｐｔｉｄｅｆｒｏｍＨｅｌｏｄｅｒｍａｈｏｒｒｉｄｕｍｖｅｎｏｍ，ｉｎｔｅｒａｃｔｓｗｉｔｈｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｐｔｉｄｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓａｎｄａｎｅｗｌｙｄｅｓｃｒｉｂｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｏｎｄｉｓｐｅｒｓｅｄａｃｉｎｉｆｒｏｍｇｕｉｎｅａｐｉｇｐａｎｃｒｅａｓ．Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆｅｘｅｎｄｉｎ－３（９－３９）ａｍｉｄｅ，ａｓｐｅｃｉｆｉｃｅｘｅｎｄｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ１９９１；２６６（５）：２８９７－２９０２．
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２９．ＮａｋａｍｕｒａＴ，ＴａｎｉｍｏｔｏＨ，ＭｉｚｕｎｏＹ，ＴｓｕｂａｍｏｔｏＹ，ＮｏｄａＨ．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａｎｏｖｅｌｌｏｗＧＣｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔａｎｔａｇｏｎｉｓｔｏｆｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＳＫＬ－１４９５９，ｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，ＯｂｅｓｉｔｙａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ２０１２；１４（６）：５１１－５１７．
３０．ＥｂｅｒｔＲ，ＩｌｌｍｅｒＫ，ＣｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔＷ．Ｒｅｌｅａｓｅｏｆｇａｓｔｒｉｃｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＩＰ）ｂｙｉｎｔｒａｄｕｏｄｅｎａｌａｃｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｒａｔｓａｎｄｈｕｍａｎｓａｎｄａｂｏｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｔｈｅｉｎｃｒｅｔｉｎｅｆｆｅｃｔｏｆａｃｉｄｂｙＧＩＰ－ａｎｔｉｓｅｒｕｍｉｎｒａｔｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ１９７９；７６（３）：５１５－５２３．
３１．ＦｕｌｕｒｉｊａＡ，ＬｕｔｚＴＡ，ＳｌａｄｋｏＫｅｔａｌ．ＶａｃｃｉｎａｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔＧＩＰｆｏｒｔｈｅＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＯｂｅｓｉｔｙ．ＰＬｏＳＯＮＥ２００８；３（９）：ｅ３１６３．
３２．ＩｒｗｉｎＮ，ＭｃＣｌｅａｎＰＬ，ＰａｔｔｅｒｓｏｎＳ，ＨｕｎｔｅｒＫ，ＦｌａｔｔＰＲ．Ａｃｔｉｖｅｉｍｍｕｎｉｓａｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｇａｓｔｒｉｃｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＩＰ）ｉｍｐｒｏｖｅｓｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅｃｏｎｔｒｏｌｉｎａｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｏｆｏｂｅｓｉｔｙ－ｄｉａｂｅｔｅｓ．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ．ｂｃｈｍ３９０，７５．２００９．１６－７－２０１４．
３３．ＨｉｎｋｅＳＡ，ＭａｎｈａｒｔＳ，ＰａｍｉｒＮｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｂｉｏａｃｔｉｖｅｄｏｍａｉｎｉｎｔｈｅａｍｉｎｏ－ｔｅｒｍｉｎｕｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＩＰ）．ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ（ＢＢＡ）－ＰｒｏｔｅｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ２００１；１５４７（１）：１４３－１５５．
３４．ＴｓｅｎｇＣＣ，ＫｉｅｆｆｅｒＴＪ，ＪａｒｂｏｅＬＡ，ＵｓｄｉｎＴＢ，ＷｏｌｆｅＭＭ．Ｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｌｅａｓｅｂｙｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＩＰ）．Ｅｆｆｅｃｔｏｆａｓｐｅｃｉｆｉｃｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｎｔｈｅｒａｔ．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ１９９６；９８（１１）：２４４０－２４４５．
３５．ＩｒｗｉｎＮ，ＧｒｅｅｎＢＤ，ＰａｒｋｅｒＪＣ，ＧａｕｌｔＶＡ，Ｏ‘ＨａｒｔｅＦＰＭ，ＦｌａｔｔＰＲ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｓｙｎｔｈｅｔｉｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｅｐｔｉｄｅｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，ＧＩＰ（１－１６）ａｎｄ（Ｐｒｏ３）ＧＩＰ（１－１６）．ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＰｅｐｔｉｄｅｓ２００６；１３５（１ＧＣｏ２）：４５－５３．
３６．ＫｅｒｒＢＤ，ＦｌａｔｔＡＪＳ，ＦｌａｔｔＰＲ，ＧａｕｌｔＶＡ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｏｎｓｏｆＮ－ｔｅｒｍｉｎａｌｔｒｕｎｃａｔｅｄｆｏｒｍｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ２０１１；４０４（３）：８７０－８７６．
３７．ＧｅｌｌｉｎｇＲＷ，ＣｏｙＤＨ，ＰｅｄｅｒｓｏｎＲＡｅｔａｌ．ＧＩＰ（６－３０ａｍｉｄｅ）ｃｏｎｔａｉｎｓｔｈｅｈｉｇｈａｆｆｉｎｉｔｙｂｉｎｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎｏｆＧＩＰａｎｄｉｓａｐｏｔｅｎｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＧＩＰ１－４２ａｃｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ．ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＰｅｐｔｉｄｅｓ１９９７；６９（３）：１５１－１５４．
３８．ＤｅａｃｏｎＣＦＰ．ＧＩＰ－（３－４２）ｄｏｅｓｎｏｔａｎｔａｇｏｎｉｚｅｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆＧＩＰａｔｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ－ＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ２００６；２９１（３）：Ｅ４６８－Ｅ４７５．
３９．ＧａｕｌｔＶＡ，Ｏ‘ＨａｒｔｅＦＰＭ，ＨａｒｒｉｏｔｔＰ，ＦｌａｔｔＰＲ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＣｅｌｌｕｌａｒａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｃＥｆｆｅｃｔｓｏｆａＮｏｖｅｌＥｎｚｙｍｅ－ＲｅｓｉｓｔａｎｔＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｏｆＧｌｕｃｏｓｅ－ＤｅｐｅｎｄｅｎｔＩｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ２００２；２９０（５）：１４２０－１４２６．
４０．ＲａｖｎＰ，ＭａｄｈｕｒａｎｔａｋａｍＣ，ＫｕｎｚｅＳｅｔａｌ．ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＮｏｖｅｌＰｏｔｅｎｔａｎｄＳｅｌｅｃｔｉｖｅＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｓｏｆＧｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＩｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅＲｅｃｅｐｔｏｒ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２０１３；２８８（２７）：１９７６０－１９７７２．
４１．ＤｅａｃｏｎＣＦ，ＰｌａｍｂｏｅｃｋＡ，ＲｏｓｅｎｋｉｌｄｅＭＭ，ｄｅＨｅｅｒＪ，ＨｏｌｓｔＪＪ．ＧＩＰ－（３－４２）ｄｏｅｓｎｏｔａｎｔａｇｏｎｉｚｅｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆＧＩＰａｔｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ－ＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ２００６；２９１（３）：Ｅ４６８－Ｅ４７５．
４２．ＧｏｅｔｚｅＪＰ，ＨｕｎｔｅｒＩ，ＬｉｐｐｅｒｔＳＫ，ＢａｒｄｒａｍＬ，ＲｅｈｆｅｌｄＪＦ．Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｅｐｔｉｄｅｈｏｒｍｏｎｅｓａｎｄｐｒｏｈｏｒｍｏｎｅｓｉｎｐｌａｓｍａ．ＦｒｏｎｔＢｉｏｓｃｉ２０１２；１７：１８０４－１８１５．
４３．ＧｏｅｔｚｅＪＰ，ＲｅｈｆｅｌｄＪＦ．Ｐｅｐｔｉｄｅｈｏｒｍｏｎｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｐｒｏｈｏｒｍｏｎｅｓａｓｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ．ＢｉｏｍａｒｋｅｒｓＭｅｄ２００９；３（４）：３３５－３３８．
４４．ＦｕｊｉｔａＹ，ＡｓａｄｉＡ，ＹａｎｇＧＫ，ＫｗｏｋＹＮ，ＫｉｅｆｆｅｒＴＪ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆｐｒｏ－ｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｉｎｇｕｔ．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ－ＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌａｎｄＬｉｖｅｒＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ２０１０；２９８（５）：Ｇ６０８－Ｇ６１４．
４５．ＷｉｄｅｎｍａｉｅｒＳＢ，ＫｉｍＳＪ，ＹａｎｇＧＫｅｔａｌ．ＡＧＩＰＲｅｃｅｐｔｏｒＡｇｏｎｉｓｔＥｘｈｉｂｉｔｓｂｅｔａ－ＣｅｌｌＡｎｔｉ－ＡｐｏｐｔｏｔｉｃＡｃｔｉｏｎｓｉｎＲａｔＭｏｄｅｌｓｏｆＤｉａｂｅｔｅｓＲｅｓｕｌｔｉｎｇｉｎＩｍｐｒｏｖｅｄｂｅｔａ－ＣｅｌｌＦｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＧｌｙｃｅｍｉｃＣｏｎｔｒｏｌ．ＰＬｏＳＯＮＥ２０１０；５（３）：ｅ９５９０．
４６．ＧｒａｈａｍＦＬ，ｖａｎｄｅｒＥｂＡＪ．Ａｎｅｗｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｔｈｅａｓｓａｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙｏｆｈｕｍａｎａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ５ＤＮＡ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１９７３；５２（２）：４５６－４６７．
４７．ＫｉｓｓｏｗＨ，ＨａｒｔｍａｎｎＢ，ＨｏｌｓｔＪＪｅｔａｌ．Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ－１（ＧＬＰ－１）ｒｅｃｅｐｔｏｒａｇｏｎｉｓｍｏｒＤＰＰ－４ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｄｏｅｓｎｏｔａｃｃｅｌｅｒａｔｅｎｅｏｐｌａｓｉａｉｎｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｔｒｅａｔｅｄｍｉｃｅ．ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＰｅｐｔｉｄｅｓ２０１２；１７９（１－３）：９１－１００．
４８．ＨｏｅｊｂｅｒｇＰＶ，ＶｉｌｓｂｏｅｌｌＴ，ＲａｂｏｅｌＲｅｔａｌ．Ｆｏｕｒｗｅｅｋｓｏｆｎｅａｒ－ｎｏｒｍａｌｉｓａｔｉｏｎｏｆｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅｉｍｐｒｏｖｅｓｔｈｅｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ－１ａｎｄｇｌｕｃｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ２００９；５２（２）：１９９－２０７．
４９．ＨａｎｓｅｎＬＳ，Ｓｐａｒｒｅ－ＵｌｒｉｃｈＡＨ，ｅｔａｌ．．Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙａｎｄＣ－ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙｔｒｕｎｃａｔｅｄｆｏｒｍｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅａｒｅｈｉｇｈ－ａｆｆｉｎｉｔｙｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓｏｆｔｈｅｈｕｍａｎＧＩＰｒｅｃｅｐｔｏｒ．ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ２０１６；１７３８２６－８３８．

【0391】

実施例
本実施例では、次の結論を支持する：
１）特定の部位における個々のアミノ酸置換は、アンタゴニストプロファイルの改善をもたらす
２）いくつかのアシル化部位は、ＧＩＰ（３－３０）＋延長とＧＩＰ（５－３０）＋延長の両方に大きな可能性を示す
３）ＧＩＰ（１－４２）又はエキセンディン－４からのＣ末端アミノ酸残基での延長は、アンタゴニスト効果及び／又は生体内半減期の延長及び／又は選択性などの効果の改善をもたらす
４）本発明の実施形態によるＧＩＰペプチド類似体は、溶解度の増加などの物理的安定性を高めている
５）本発明の実施形態によるＧＩＰペプチド類似体は、ＧＩＰＲにおけるアゴニスト活性を減少させるか又は全く有していない。

【0392】

材料と方法
ＧＩＰ（３－３０）及びＧＩＰ（５－３０）ペプチドそれ自体の生成と作用は、ＷＯ２０１６／０３４１８６に開示されている。

【0393】

材料
ヒトＧＩＰ（１－４２）は、Ｂａｃｈｅｍ，Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ（Ｈ５６４５）から購入し、残りのリガンドは、Ｃａｓｌｏ（商標）、Ｌｙｎｇｂｙ，ＤｅｎｍａｒｋａｎｄＡｌｍａｃＧｒｏｕｐ，Ｃｒａｉｇａｖｏｎ，イギリス，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ＆ＥｌｅｐｈａｎｔｓＧｍｂＨ，Ｈｅｎｎｉｎｇｓｄｏｒｆ，ドイツ，及びＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃ，中国によって合成された。ヒトＧＩＰ受容体のｃＤＮＡを、Ｏｒｉｇｅｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ（ＳＣ１１０９０６）から購入し、ヒトＧＩＰ（１－４２）をｐＣＭＶ－Ｓｃｒｉｐｔベクターにクローニングした。ヨウ素化ヒトＧＩＰ（１－４２）を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｋｏｖｌｕｎｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ（ＮＥＸ４０２０２５ＵＣ）から購入した。

【0394】

動物
Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ又はオスのＷｉｓｔａｒラットを、健康医学部（ＨｅａｌｔｈａｎｄＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ）の動物施設に収容した。

【0395】

トランスフェクションと組織培養
ＣＯＳ－７細胞を、１０％のウシ胎児血清、２ｍＭのグルタミン、１８０ユニット／ｍｌのペニシリン、及び４５ｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したダルベックコ改変イーグル培地１８８５中で、１０％ＣＯ_２及び３７℃で培養した。ｃＡＭＰ蓄積及び競合結合のために、クロロキンを添加したリン酸カルシウム沈殿法を用いて、ＣＯＳ－７細胞の一過性トランスフェクションを行った^{４６－４７}。

【0396】

ｃＡＭＰアッセイ
代替１（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘアッセイとも呼ばれる）：
ヒトＧＩＰ受容体を発現する一過性トランスフェクトＣＯＳ－７細胞を、３．５^＊１０^４／ウェルの密度を有する白色９６ウェルプレートに播種した。翌日、細胞をＨｅｐｅｓ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）緩衝液で２回洗浄し、ＨＢＳ及び１ｍＭの３－イソブチル－１－メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）と３７℃で３０分間インキュベートした。アゴニスト特性を調べるために、リガンドを加え、３７℃で３０分間インキュベートした。アンタゴニスト特性を調べるために、細胞をアゴニストの添加前に１０分間アンタゴニストと予めインキュベーターし、その後さらに２０分間インキュベートした。ＨｉｔＨｕｎｔｅｒＴＭｃＡＭＰＸＳアッセイ（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ）を製造業者の説明書に従って行った。

【0397】

代替２（ＣｉｓＢｉｏアッセイとも呼ばれる）：
ヒトＧＩＰ受容体に対する化合物の生体外機能活性も、受容体を一過的に発現するＨＥＫ－２９３細胞において決定することができる。アッセイの日に、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ，１５６３０－１０６）、０，１％のプルロニックＦ－６８（Ｇｉｂｃｏ，２４０４０－０３２）及び０，１％のカゼイン（Ｓｉｇｍａ，Ｃ４７６５）を補充したＨＢＳＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ，１４０２５－５０）に細胞を再懸濁し、５０００細胞／ウェルの密度で３８４ウェルプレートに播種した。本開示のＧＩＰペプチド類似体を、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％プルロニック、０．１％のカゼイン及び５００ｕＭのＩＢＭＸを補充したＨＢＳＳ緩衝液で希釈した。アンタゴニスト特性を調べるために、試験されるＧＩＰペプチド類似体をそれぞれ独立して細胞に添加し、ＥＣ５０濃度でアゴニスト（ＧＩＰ１－４２）を添加する前に、３７℃で２０分間インキュベートし、その後３７℃で３０分間インキュベートした。結果として生じる細胞内ｃＡＭＰの減少は、ＣｉｓＢｉｏｃＡＭＰＤｙｎａｍｉｃ２ＨＴＲＦアッセイキットを用いて定量的に決定した。このアッセイは、クリプテート標識抗体への結合について、細胞によって生成される天然のｃＡＭＰと色素ｄ２で標識したｃＡＭＰとの間の競合に基づいている。特定のシグナル（すなわちエネルギー伝達シグナル）は、試料中のｃＡＭＰの濃度に反比例する。ｃＡＭＰ－ｄ２コンジュゲートと抗体の抗ｃＡＭＰ－クリプテートの両方を、キットに提供される溶解緩衝液で希釈し、製造業者のプロトコルに従って細胞に添加した。得られた競合アッセイを室温で６０分間インキュベートし、３２０ｎｍ励起及び６６５ｎｍと６２０ｎｍ発光のＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）装置を用いてシグナルを検出した。ＨＴＲＦ比（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ^＊１０，０００での放出）は、存在するｃＡＭＰの量に反比例し、ｃＡＭＰ標準曲線を使用してウェル当たりｎＭのｃＡＭＰに変換される。用量応答曲線は、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍで非線形回帰分析（４つのロジスティックパラメータの式）を用いてフィッティングし、それによってｐＩＣ５０値を推定した。ＧＩＰ受容体でのアゴニスト特性を調べるために、上記のように化合物を希釈して細胞に添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。結果として得られる細胞内ｃＡＭＰの増加を、上記のＣｉｓＢｉｏｃＡＭＰＤｙｎａｍｉｃ２ＨＴＲＦアッセイキットを用いて決定した。

【0398】

Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタで推定される消失半減期（Ｔ_１／２）
２～３匹のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタを、本発明のＧＩＰ類似体の１つ（１～１０ｎｍｏｌ／ｋｇ、総量２～６ｍＬ）を皮下投与し、中心静脈カテーテルから血液試料を皮下投与前及び投与後最大４３２時間までに採取した。試料間で、カテーテルを生理食塩水及びヘパリンで洗い流した。血液を冷たいＥＤＴＡチューブに採取し、遠心分離し、分析まで血漿を－２０℃に保った。

【0399】

Ｗｉｓｔａｒラットで推定される消失半減期（Ｔ_１／２）
３匹のＷｉｓｔａｒラットに、本発明のＧＩＰ類似体の１つ（７ｎｍｏｌ／ｋｇ、総投薬量１ｍｌ／ｋｇ）を静脈内投与し、血液試料を投与前及び投与後７２時間までに尾先端から採取した。血液を冷たいＥＤＴＡチューブに採取し、遠心分離し、分析まで血漿を－２０℃に保った。

【0400】

修飾されたＧＩＰペプチド類似体の血漿濃度の決定
Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ、又はオスのＷｉｓｔａｒラットにおける本発明によるＧＩＰ類似体の血漿中濃度を、放射免疫分析（ＲＩＡ）又は液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）により分析した。ＲＩＡベースの測定では、類似体の免疫反応性を、実験室のウサギで作製し、ＧＩＰ（１－３０）ＮＨ_２の中央領域又はＧＩＰ（３－３０）ＮＨ_２のアミド化Ｃ末端のいずれかに特異的なポリクローナル抗体である抗血清Ａｂ９５２３４、Ａｂ９５２３５、又はＡｂ９５２３６を用いて決定した。ＬＣ／ＭＳベースの測定では、３部のエタノールを添加し、その後に完全に混合することによって、血漿試料を沈殿させた。上清の遠心分離及び希釈後、試料をＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析し、９点の検量線と比較した。キャリブレーション曲線を、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタからの未処理の血漿マトリックスで調製した。ＬＣ／ＭＳを、ＲｅｄＧｌｅａｄＤｉｓｃｏｖｅｒｙＡＢ，Ｌｕｎｄ，スウェーデンによって行った。

【0401】

データ分析
ＩＣ_５０、ＥＣ_５０、及びＥｍａｘ値を、非線形回帰によって決定した。これらを、グラフパッドプリズム６．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、米国）とマイクロソフトのエクセル（商標）で行った。消失Ｔ_１／２を含む薬物動態パラメータを、ソフトウェアのＰＫソリューション２．０（ＳｕｍｍｉｔＲｅｓｅａｒｃｈｓｅｒｖｉｃｅｓ、米国）を用いて計算した。

【0402】

実施例１－ＧＩＰ（１－４２）又はエキセンディン－４からの１～１２個のＣ末端アミノ酸残基で延長したヒトＧＩＰ（３－３０）及びＧＩＰ（５－３０）のアンタゴニスト特性は、余分なＣ末端アミノ酸残基の追加後に保存又は改善される
ＧＩＰ（３－３０）及びＧＩＰ（５－３０）への１～１２個の余分なＣ末端アミノ酸残基の付加の、アンタゴニスト活性及びＴ_１／２に対する効果を、以下に示すとおりに試験した。ＧＩＰ類似体も、リンカーの有無にかかわらず、例えば、１１、１２、１７、１８又は２０位でアシル化し、セリン－１１、イソロイシン－１２、イソロイシン－１７、ヒスチジン－１８又はグルタミン－２０は以前にリジンと置換されていた。

【0403】

結果：
１８位がＣ１６二酸で脂質化されたＧＩＰ（３－３６）類似体、例えば、ＡＴ３６１は、例えば、ＡＴ１５８と比較して、２ｎＭの改善されたＩＣ_５０値を示す。ＡＴ３６１も、３１時間という非常に高いＴ_１／２を有した。半減期は、１４時間の半減期しか有していなかったＡＴ１５８などの、１８位がＣ１６二酸で脂質化された類似体ＧＩＰ（３－３０）バリアントに比べて驚くほど長い。長い半減期は、例えば、ＡＴ３６１がＮ末端に遊離アミン基を有するので、Ｎ末端でのＮ－キャッピング又は他の種類の安定化を行うことなく達成される。

【0404】

例えば、ＡＴ６３１などのエキセンディン－４のＣ末端部からのＧＩＰ（３－３０）＋アミノ酸は、一般に高い強力なアンタゴニストであった。ＡＴ６３１は、例えば、ＡＴ１５８と比較して、１．９ｎＭの改善されたＩＣ_５０値を示した。ＡＴ６３１の半減期も、５６時間という非常に長いＴ_１／２が測定されたように、生体内で３０時間超であり、例えば、ＡＴ１５８（図１参照）又はＣ１６脂肪酸も有するリラグルチドと比較して驚くほど長い。長い半減期は、例えば、ＡＴ６３１がＮ末端に遊離アミン基を有するので、Ｎ末端でのＮ－キャッピング又は他の種類の安定化を行うことなく達成される。

【0405】

まとめると、例えば、ＡＴ３６１及びＡＴ６３１などのＣ端末が延長したＧＩＰ（３－３０）アンタゴニストは、ＰＣＴ／ＥＰ２０１８／０６４３５５で報告されたものよりも優れたアンタゴニストであった。Ｔ_１／２の調査のために、ブタで試験したアンタゴニストは、ＰＣＴ／ＥＰ２０１８／０６４３５５で報告されたものよりもはるかに優れていた。ＡＴ３６１とＡＴ６３１の両方とも、例えば、ＧＩＰ（３－３０）類似体ＡＴ１５８（表１Ｂと図１参照）及び例えば、リラグルチド（１日１回のＧＬＰ－１類似体）などの当技術分野で公知の他のＣ１６脂質化ペプチドと比較して、３０時間超の非常に長いＴ_１／２を示す。また、ＡＴ４３７、ＡＴ６３２、ＡＴ５８７、ＡＴ５８９、ＡＴ６１４、ＡＴ６１６、ＡＴ６１８、ＡＴ６１９は、非常に長い半減期を有する。ＧＩＰ（３－３０）のＣ末端延長（ＡＴ３６１及びＡＴ６３１内のように）とアシル化、すなわち、例えば、１８位のリジン上などの特定の位置における脂肪酸の結合の組み合わせは、驚くほど長い半減期を生じさせることができる。

【0406】

いかなる理論にも縛られることなく、Ｃ末端におけるカルボン酸の存在（ＡＴ３６１及びＡＴ６３１内のように）もまた、半減期の改善に寄与し得る。

【0407】

様々な化合物の薬物動態特性を評価及び比較する場合、２以上の種を用いることが有益であり得る。これまで、上記で議論した半減期はミニブタにおいてのみ決定されている。一般的に、ミニブタよりもラットで消失半減期が短いことが認められているが、以下ではラットにおける薬物動態の所見について議論する。表３Ａ及び３Ｂから、Ｗｉｓｔａｒラットにおける平均の時間依存的血漿濃度は、例えば、ＡＴ６５１などのＣ末端の４０位に結合した脂肪酸を有するＧＩＰ類似体と比較して、ペプチドの中央領域に脂肪酸が結合している類似体では、曝露及び半減期がはるかに高いことが分かる。また、各時点での暴露は、本発明の実施形態による全試験ペプチドでは、例えば、ＡＴ６５１などのＣ末端の４０位に脂肪酸が結合しているＧＩＰ類似体と比較してはるかに高い。そのため、ＧＩＰ（３－３０）の中央領域に脂肪酸を結合させ、例えば、１１及び１８位でＣ末端を延長すると、Ｃ末端の４０位への脂肪酸結合よりも薬理的に優れた類似体を生成する。また、試験した類似体の多くはＣ１６脂肪酸が付いているが（ＡＴ３６１、ＡＴ６３１、ＡＴ３６６、ＡＴ６３２、ＡＴ４４７）、同じ長さの脂肪酸が結合している類似のペプチド、例えば、ラットで４時間のＴ_１／２を有するリラグルチドと比較して、Ｔ_１／２が驚くほど長い（それぞれ１１時間、７時間、７時間、８時間、５．８時間）ことに留意することも重要である。いかなる理論にも縛られることなく、Ｃ末端延長ＧＩＰペプチドは、脂質化による半減期延長に有利な分子を構成することができた。

【0408】

表２Ｂから、特定の置換が有利であり得ることもわかる。個々の９、１３、１４、１５、１８、２１及び２４位のいずれかなどの特定の位置に、Ｅ、Ｌ、Ｋ、Ａ及びＡｉｂなどのアルファヘリックス安定化アミノ酸を導入すると、特にアンタゴニスト効力の増加に関して有益であり得る。例えば、２４位でのＥとの置換は、効力が保持又は増加する。１４位でのＬ、Ｎｌｅ又はＫとの置換は、例えば、ＡＴ６１８、ＡＴ６１９及びＡＴ６２１から分かるように、効力が保持されるか、又はさらに増加する。９位及び／又は１５位及び／又は２１位でのＤとＥの置換は、例えば、ＡＴ６１３、ＡＴ６１４、ＡＴ６１６及びＡＴ６１７、並びに例えば、ＡＴ６９３、ＡＴ６９５、ＡＴ６９６及びＡＴ７００から分かるように効力を増加させるように見える。また、一般に、遊離Ｃ末端カルボン酸は効力を高めることもわかる。Ｃ１６二酸からＣ１８二酸などの脂肪酸の長さが長くなると、効力が減少することが多い。しかし、特定の置換はこれを補う可能性がある。例えば、１３位のＡｉｂ又は例えば、９及び／又は１５及び／又は２１位のＥとの置換。２４位におけるＥとの置換は、アンタゴニスト効力を保持又は改善するだけでなく、例えば、約７．５の生理学的ｐＨでの溶解性を改善する。また、表２Ｂから、例えば、ＡＴ４６７、ＡＴ４６８、ＡＴ４６９、ＡＴ４７０、ＡＴ４７１、ＡＴ４７２、ＡＴ４７３及びＡＴ４７４のように、様々なＺが効力を保持又は増加させることも分かる。例えば、ＡＴ６３３及びＡＴ６３５から、Ｎ末端アセチル化がＧＩＰＲで（部分的な）アゴニズムをもたらすことが分かる。

【0409】

表１Ａ：延長を有するＧＩＰアンタゴニストの名前と構造。リンカーが２以上のユニットからなる場合、最初の名前付きユニットがペプチドに連結され、最後の名前付きユニットが脂肪酸に連結されることを意図している。しかし、リンカーの単位は異なる順序で配置されてもよく、リンカーの機能への影響は全くないか又は少しである。

【表1】

【0410】

表１Ｂ：アンタゴニスト特性、アゴニスト特性、及び延長を有するＧＩＰアンタゴニストのいくつかの半減期Ｔ_１／２。データを、ｃＡＭＰアッセイ（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘアッセイ）により取得した。

【表2】

【0411】

表１Ｃ：アンタゴニスト特性、アゴニスト特性、及び延長を有するＧＩＰアンタゴニストのいくつかの消失半減期Ｔ_１／２。ＣｉｓＢｉｏアッセイ（上記の代替２）を用いて、表１Ｂに列挙したＧＩＰペプチド類似体のアンタゴニスト活性及びアゴニスト活性を決定した。

【表3】

表１Ｃ続き

【表4】

ＡＴ６３１の半減期をＲＩＡに基づいて決定し、ＡＴ３６１の半減期をＬＣ／ＭＳに基づいて決定する（「材料と方法」参照）。

【0412】

表２Ａ：選択化合物の番号についてＷｉｓｔａｒラットにおける平均及び時間依存性の血漿濃度が示されている。血漿濃度は、ＬＣ／ＭＳによって決定した（「材料と方法」参照）。

【表5】

ｎａ：この時点／血漿試料が採取されなかったため、利用できない。
表２Ｂ：Ｗｉｓｔａｒにおける消失Ｔ_１／２は、データセットが計算を可能にした選択化合物の番号について示されている（「材料と方法」参照）。

【表6】

【0413】

実施例２－選択性
ｃＡＭＰアッセイ－選択性
ＧＬＰ１受容体（ＧＬＰ１Ｒ）、ＧＬＰ２受容体（ＧＬＰ２Ｒ）、グルカゴン受容体（ＧｃｇＲ）又はセクレチン受容体（ＳＣＴＲ）のいずれかを発現する一過性トランスフェクトＣＯＳ－７細胞を、３．５^＊１０^４／ウェルの密度で白色９６ウェルプレートに播種した。翌日、細胞をＨｅｐｅｓ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）緩衝液で２回洗浄し、ＨＢＳと１ｍＭの３－イソブチル－１－メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）と共に３７℃で３０分間インキュベートした。アゴニスト特性を調べるために、リガンドを加え、３７℃で３０分間インキュベートした。アンタゴニスト特性を調べるために、発現した受容体に対する天然アゴニスト（ＧＬＰ－１Ｒ発現細胞についてはＧＬＰ１、ＧＬＰ２Ｒ発現細胞についてはＧＬＰ２、ＧｃｇＲについてはグルカゴン及びＳＣＴＲについてはセクレチン）を添加する前に、細胞を、アンタゴニストと１０分間プレインキュベートした。ＩＣ５０を決定するために、最大ｃＡＭＰ蓄積の５０～８０％に対応する天然アゴニストの濃度を使用した。ＨｉｔＨｕｎｔｅｒＴＭｃＡＭＰＸＳアッセイ（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ）を、製造業者の説明書に従って行った。

【0414】

結果：
発明者らは、ＰＣＴ／ＥＰ２０１８／０６４３５５からの最良のアンタゴニストの選択性データを、本出願で最高のアンタゴニストと比較した。これは、ＧＩＰＲ、グルカゴン受容体及びＧＬＰ－１受容体に対するペプチドのアンタゴニスト特性を決定することによって行った。表３のデータによって示されるように、本出願におけるアンタゴニストは、ＰＣＴ／ＥＰ２０１８／０６４３５５からのアンタゴニストよりも選択的であった。ＧＩＰ（３－３０）のＣ末端延長（例えば、ＡＴ３６１及びＡＴ６３１など）並びに、例えば、１８位のリジン上でのアシル化の組み合わせは、驚くほど選択的なアンタゴニストを生成するようである。

【0415】

表３Ａ．本開示及びＰＣＴ／ＥＰ２０１８／０６４３５５に以前記載されているＧＩＰアンタゴニストのＧＩＰＲ、グルカゴン受容体及びＧＬＰ－１受容体に関連するアンタゴニスト特性

【表7】