特許 7606257 抗ＣＤ２７６抗体、抗体薬物複合体、及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-12-17

(45)【発行日】2024-12-25

(54)【発明の名称】抗ＣＤ２７６抗体、抗体薬物複合体、及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/18 20060101AFI20241218BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241218BHJP

   A61K 38/04 20060101ALI20241218BHJP

   A61K 31/537 20060101ALI20241218BHJP

   A61K 31/5517 20060101ALI20241218BHJP

   A61K 31/7036 20060101ALI20241218BHJP

   A61K 31/704 20060101ALI20241218BHJP

   A61K 31/427 20060101ALI20241218BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20241218BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241218BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20241218BHJP

【ＦＩ】

C07K16/18 ZNA

A61K47/68

A61K38/04

A61K31/537

A61K31/5517

A61K31/7036

A61K31/704

A61K31/427

A61K31/4745

A61P35/00

C12N15/13

【請求項の数】 5

(21)【出願番号】P 2023530655

(86)(22)【出願日】2021-11-19

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-29

(86)【国際出願番号】 CN2021131785

(87)【国際公開番号】W WO2022105879

(87)【国際公開日】2022-05-27

【審査請求日】2023-05-19

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2020/130409

(32)【優先日】2020-11-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】523173379

【氏名又は名称】ブリス バイオファーマシューティカル（ハンゾウ）カンパニー，リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】シァ，ビン

(72)【発明者】

【氏名】コン，ハオ

(72)【発明者】

【氏名】カオ，リシア

(72)【発明者】

【氏名】ジアン，ファンダン

(72)【発明者】

【氏名】ゾウ，ユホン

(72)【発明者】

【氏名】ウェイ，ジピン

【審査官】坂崎 恵美子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５３４２６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１９－５２０３０８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１９－５２１９７３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１１－５０９６７５（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０２１／１５５６３５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１０－５３２７６４（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １６／００

Ｃ１２Ｎ １５／１３

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む単離された抗体又はその抗原結合部分であって、
各重鎖は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含有する重鎖ヒンジ領域を含み；
前記重鎖はそれぞれ配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、
前記軽鎖はそれぞれ配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、
前記抗体がヒトＢ７－Ｈ３タンパク質に特異的に結合する、
単離された抗体又はその抗原結合部分。

【請求項2】

請求項１に記載の抗体が、化学リンカーによって細胞毒性薬にコンジュゲートされているものを含む、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）又はその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

前記細胞毒性薬が、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＦ、メイタンシンＤＭ１及びＤＭ４、メイタンシノール、サンドラマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、アントラサイクリン、カリケアマイシン、ドラスタチン１０、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、タイランスタチンＡ、ウンシアラマイシン、アマニチン、リシン、ジフテリア毒素、^１３１Ｉ、インターロイキン、腫瘍壊死因子、ケモカイン、イリノテカン（ＳＮ３８）、エキサテカン及びエリブリンからなる群より選択される、請求項２に記載のＡＤＣ又はその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

前記化学リンカーが、６－マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ａｌａ－ｐｈｅ）、ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ｐ－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ、ＰＡＢ）、６－マレイミドカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ）、Ｍａｌ－ＰＥＧ_ｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、Ｍａｌ－アミド－ＰＥＧ_ｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、ＭＣ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＰＡＢ、Ａｌｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－（Ａｌｌｏｃ）Ｌｙｓ－ＰＡＢ－ＰＮＰ、及びペルフルオロフェニル３－（ピリジン－２－イルジスルファニル）プロパノエートからなる群より選択される、請求項２又は３のいずれか１項に記載のＡＤＣ又はその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分、或いは請求項２又は３のいずれか１項に記載のＡＤＣ又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【0001】

関連出願の相互参照：
本出願は、２０２０年１１月２０日に提出された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／１３０４０９の優先権を主張し、その開示内容の全体は参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

〔背景技術〕
ＣＤ２７６はＢ７ホモログ３（Ｂ７－Ｈ３）とも呼ばれ、他のＢ７ファミリーメンバーと最大３０％のアミノ酸同一性を共有している^［１］。Ｂ７－Ｈ３タンパク質は、増殖、アポトーシス、浸潤、細胞周期、細胞分化、細胞オートファジー、及び上皮間葉転換の調節に関与している。それはほとんどの正常組織では低レベルで存在するが、膀胱がん、乳房がん、子宮頸部がん、結直腸がん、食道がん、神経膠腫、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、肝内胆管がん、口腔扁平上皮がん、子宮内膜がん、及び黒色腫を含む様々な癌では過剰発現している^{［２－６］}。さらに、Ｂ７－Ｈ３タンパク質は、ヒトの肺がん、乳がん、結腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、及び卵巣がんの腫瘍血管で過剰発現するが、正常な卵巣の血管新生血管では発現しない^{［７－９］}。従って、Ｂ７－Ｈ３指向の治療薬は、生理学的血管新生と病理学的血管新生を区別できない現在の抗血管新生薬よりも、腫瘍血管に対してより高い特異性を有している可能性がある。腫瘍細胞及び腫瘍内皮細胞（ＴＥＣ）のＢ７－Ｈ３の過剰発現は、両方の細胞型を同時に破壊する治療薬の開発にとって魅力的な標的となっている。

【0003】

Ｆｃ増強ヒト化抗ＣＤ２７６抗体であるエノブリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）は、前臨床試験で様々な種類の原発腫瘍の増殖を遅らせる活性を示しており、既に、第Ｉ相臨床試験に入っている。イブツズマブは、黒色腫（ＮＣＴ０１３９１１４３）などの難治性Ｂ７－Ｈ３発現腫瘍、及び骨肉腫やユーイング肉腫（ＮＣＴ０２９８２９４１）などのＢ７－Ｈ３発現腫瘍の治療で研究された。ＭＧＡ２７１は、Ｂ７－Ｈ３を発現する腎細胞及び膀胱がんの異種移植モデルで強力な抗腫瘍活性を示したもう一つのＢ７－Ｈ３標的抗体である^［１０］。ヒト腫瘍細胞との選択的反応性に基づいて最初に同定されたヒト化抗体である８Ｈ９は、その後にＣＤ２７６を認識できることが判明され、これも第Ｉ相臨床試験に入っている^{［１１、１２］}。ヒト化８Ｈ９抗体は、標的腫瘍に対するＢ７－Ｈ３の抑制性免疫特性を調節でき、免疫チェックポイント遮断に影響を与える^［１３］。

【0004】

ＡＤＣは、細胞傷害剤と結合したモノクローナル抗体である。それらは、腫瘍細胞表面タンパク質に対する標的特異性を利用し、従来の化学療法では達成できない特異性と効力で腫瘍に高い効力を持つ毒性ペイロードを送達する。現在、Ｂ７－Ｈ３を標的とするいくつかのＡＤＣが、前臨床開発と臨床開発の様々な段階に入っている。複数の前臨床モデルで、Ｂ７－Ｈ３を標的とするＡＤＣが確立された腫瘍を根絶し、全生存期間を大幅に改善できることが実証されており、これらの分子の治療の可能性を示唆している^［１］。例えば、Ｂ７－Ｈ３を標的とするＤＸｄ－ＡＤＣとして薬物結合に使用されるエクサテカン（ｅｘａｔｅｃａｎ）誘導体（ＤＸ－８９５１誘導体、ＤＸｄ）は、効率的な抗腫瘍効果と少ない副作用を示している。現在、複数の第ＩＩ相臨床試験でそれに対して評価している^［１４］。^１３１Ｉ標識抗Ｂ７－Ｈ３モノクローナル抗体（^１３１Ｉ－４Ｈ７）は放射性生物製剤であり、ヒト腎細胞がんヌードマウスに治療効果があり、既に、第ＩＩＩ相臨床試験に入っている^［１５］。

【0005】

〔発明の概要〕
一つの方面で、本発明は、２つの重鎖と２つの軽鎖を含み、各重鎖は、（ａ１）配列番号１２～２４に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含有する重鎖ヒンジ領域；（ａ２）それぞれ配列番号６、配列番号７、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み；各軽鎖は、（ａ３）それぞれ配列番号９、ＷＡＳ、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。前記抗体はヒトＢ７－Ｈ３タンパク質に特異的に結合できる。幾つかの実施の態様において、各重鎖ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列は配列番号１２である。幾つかの実施の態様において、各重鎖は、ヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインをさらに含み、ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、前記ＣＨ１ドメインは第１４２位にシステインを含む。

【0006】

もう一つの方面で、本発明は、２つの重鎖を含み、各重鎖は、（ａ）アミノ酸配列：－（Ｘ_１）－Ｃ－（Ｘ_２）－ＣＰＰＣＰ－を含み、ここで、Ｘ_１は、０～７個のアミノ酸残基を含むポリペプチドセグメントであり、各アミノ酸残基は独立してシステイン残基ではない任意のアミノ酸残基から選択され、Ｘ_２は、２～７個のアミノ酸残基を有するポリペプチドセグメントであり、各アミノ酸残基は独立してシステイン残基ではない任意のアミノ酸残基から選択されるヒンジ領域；（ｂ）前記ヒンジ領域の上流に位置し、それに連結され、ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、第１４２位にシステインが含まれるヒトＣＨ１ドメインを含み、ここで、前記抗体はヒトＢ７－Ｈ３タンパク質に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。幾つかの実施の態様において、前記ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列は、配列番号１２～２４からなる群より選択され、例えば、配列番号１１、配列番号１２である。幾つかの実施の態様において、抗体は重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含み、各重鎖可変ドメインは、配列番号６、配列番号７及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤＲ３領域を含み、各軽鎖可変ドメインは、配列番号９、ＷＡＳ及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域およびＣＤＲ３領域を含む。

【0007】

幾つかの実施の態様において、本明細書に記載の抗体は、更に２つのｋａｐｐａ（κ）軽鎖を含んでもよく、各軽鎖は一つの重鎖と対になっている。抗体の２つの重鎖は同じであってもよい。抗体の２つの軽鎖は同じであってもよい。

【0008】

幾つかの実施の態様において、抗体のＣＨ１ドメインは、天然ヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラス抗体のＣＨ１ドメインと同じ配列を有しているか、又は天然ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ１ドメインの配列を有し、Ｓ１４２Ｃ突然変異を持っている。

【0009】

幾つかの実施の態様において、各重鎖は、更に、ヒンジ領域の下流に位置し、それに接続された、天然ヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラス抗体のＦｃドメインを含んでもよく、ここで、Ｆｃドメインは、任意選択で、１つまたは複数の置換を含む。

【0010】

幾つかの実施の態様において、各重鎖は、可変ドメインを含み、前記可変ドメインは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施の態様において、各重鎖は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む。

【0011】

幾つかの実施の態様において、各軽鎖は、可変ドメインを含み、前記可変ドメインは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施の態様において、各軽鎖は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。

【0012】

本発明の抗体はモノクローナル抗体であってもよく、それらはラクダ、キメラ、ヒト又はヒト化されたもの由来であってもよい。

【0013】

もう一つの方面において、本明細書に記載の抗体が、細胞毒性薬と化学リンカーにコンジュゲートされている、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0014】

一つの実施の態様において、ＡＤＣは、（Ａ）単離された抗体又はその抗原結合部分、及び（Ｂ）細胞毒性薬を含んでもよく、（Ａ）単離された抗体又はその抗原結合部分は、（ａ１）配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖ヒンジ領域、（ａ２）それぞれ配列番号６、配列番号７、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメイン、及び（ａ３）それぞれ配列番号９、ＷＡＳ、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0015】

ここで、前記単離された抗体又はその抗原結合部分は化学リンカーによって細胞毒性薬にコンジュゲートされている。

【0016】

前記ＡＤＣの細胞毒性薬は、エリブリン（ｅｒｉｂｕｌｉｎ）、モノメチルアウリスタチンＥ（ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｅ、ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｆ、ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＥ（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｅ）、アウリスタチンＦ（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｆ）、メイタンシンＤＭ１（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ ＤＭ１）及びＤＭ４、メイタンシノール（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｌ）、サンドラマイシン（ｓａｎｄｒａｍｙｃｉｎ）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ）、ピロロベンゾジアゼピン二量体、アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ）、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ドラスタチン１０（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ １０）、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、タイランスタチンＡ（ｔｈａｉｌａｎｓｔａｔｉｎ Ａ）、ウンシアラマイシン（ｕｎｃｉａｌａｍｙｃｉｎ）、アマニチン（ａｍａｎｉｔｉｎｓ）、リシン（ｒｉｃｉｎ）、ジフテリア毒素（ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ ｔｏｘｉｎ）、^１３１Ｉ、インターロイキン（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｓ）、腫瘍壊死因子、ケモカイン、イリノテカン（ＳＮ３８）、エクサテカン（ｅｘａｔｅｃａｎ）及びナノ粒子からなる群より選択される。幾つかの実施の態様において、前記化学リンカーは、６－マレイミドカプロイル（６－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ、ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｐｒｏｐｉｏｎｙｌ、ＭＰ）、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ａｌａ－ｐｈｅ）、ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ｐ－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ、ＰＡＢ）、６－マレイミドカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（６－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐ－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ）、Ｍａｌ－ＰＥＧ_ｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、Ｍａｌ－アミド－ＰＥＧ_ｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、ＭＣ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＰＡＢ、Ａｌｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－（Ａｌｌｏｃ）Ｌｙｓ－ＰＡＢ－ＰＮＰ、及びパーフルオロフェニル３－（ピリジン－２－イルジスルファニル）プロパノエート（ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ ３－（ｐｙｒｉｄｉｎｅ－２－ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｏａｔｅ）からなる群より選択される。１つの実施の態様において、前記細胞毒性薬はエリブリンである。もう１つの実施の態様において、前記細胞毒性薬はＭＭＡＥである。

【0017】

もう一つの方面において、本発明は本明細書に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分、或いはＡＤＣ又はその薬学的に許容される塩、及び（ｂ）薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。

【0018】

もう一つの方面において、本発明は有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む、ヒト被験者のがんを治療する方法を提供する。前記がんは、Ｂ７－Ｈ３タンパク質の過剰発現に関連するがんであってもよい。例えば、前記がんは、頭頸部がん、腎臓がん、皮膚がん、結腸がん、神経膠芽腫、神経膠腫、甲状腺がん、中皮腫、黒色腫、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、及び膀胱がんからなる群より選択される。

【0019】

〔図面の簡単な説明〕
〔図１〕本発明で使用される抗体のアミノ酸ナンバリングスキームの概略図である。（ａ）ヒトＩｇＧ１（κ）のＩＭＧＴベースのアミノ酸ナンバリングスキーム。（ｂ）突然変異体（ＩｇＧ１ヒンジ領域に対する）のナンバリングスキーム。

【0020】

〔図２〕２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３抗体の物理化学的試験の結果である。還元性（Ｒ）及び非還元性（ＮＲ）抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析：２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体（ａ）及びＢＨ７３抗体（ｂ）；ＨＥＫ２９３細胞で産生された抗体の純度と収量（ｃ）；精製抗体、２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体（ｄ）及びＢＨ７３抗体（ｅ）のＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析。

【0021】

〔図３〕２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３抗体で調製されたＡＤＣのコンジュゲートグスペクトルである。２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３抗体で調製されたＡＤＣのＨＩＣスペクトルである。（ａ）２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥ、（ｂ）ＢＨ７３－ＭＭＡＥ。

【0022】

〔図４〕２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体及び２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥと組換えＢ７－Ｈ３タンパク質との結合曲線である。

【0023】

〔図５〕Ｂ７－Ｈ３発現がん細胞に対する２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥ、ＢＨ７３－ＭＭＡＥ、及びＢＲ０１０２－ＤＸｄの細胞毒性曲線である。（ａ）Ｕ８７、（ｂ）ＢＴ－４７４、（ｃ）ＨＴ－２９、及び（ｄ）Ａ４３１。

【0024】

〔図６〕結腸直腸がんＨＴ２９異種移植の無胸腺ヌードマウスにおけるＢＨ７３－ＭＭＡＥ及びＢＲ０１０２－ＤＸｄの体内薬物効力である。

【0025】

〔発明を実施するための形態〕
本発明は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体を使用してＢ７－Ｈ３を標的とする抗体及びＡＤＣを提供し、それらの強力な抗腫瘍能力を実証する。

【0026】

一つの方面において、本発明は２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む単離された抗体又はその抗原結合部分であって、
各重鎖は、
（ａ１）配列番号１２～２４に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含有する重鎖ヒンジ領域；
（ａ２）それぞれ配列番号６、配列番号７、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み、
各軽鎖は、
（ａ３）それぞれ配列番号９、ＷＡＳ、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む、
単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。

【0027】

前記抗体はヒトＢ７－Ｈ３タンパク質に特異的に結合できる。幾つかの実施の態様において、前記重鎖ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列は配列番号１２である。幾つかの実施の態様において、各重鎖は、更に、ヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインをさらに含み、ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、前記ＣＨ１ドメインは第１４２位にシステインを含む。

【0028】

この形式の重鎖を含む抗体は、好ましくは、ＣＨ１ドメインのＣ１４２（又は、第１４２位近くのシステインであり、下記でさらに説明されるＩＭＧＴナンバリングスキームによる）と軽鎖の最後のシステイン残基との間でＨ－Ｌ鎖間ジスルフィド結合を形成する。天然ＣＰＰＣＰ配列の上流のヒンジ領域のシステイン残基は、３番目のＨ－Ｈ鎖間ジスルフィド結合を形成する。ＣＨ１ドメインのアミノ酸第１４２位又はその近くのシステインは、ＩｇＧ１サブタイプの単一アミノ酸の突然変異又は挿入によって導入されるか、又はＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブタイプのＣＨ１ドメインの天然のシステイン残基からなるものであってもよい。ＩｇＧ１の天然Ｈ－Ｌジスルフィド結合（ＩｇＧ１抗体の重鎖ヒンジ領域のシステインと対になったアミノ酸と軽鎖の末端の間に位置する）と比較して、この形式のＨ－Ｌジスルフィド結合はより安定しており、抗体への薬物結合中に還元状態で完全な状態を保つことができる。これにより、軽鎖薬物複合体を含むＡＤＣを得る可能性を大幅に低下させる。

【0029】

免疫グロブリンスーパーファミリーのＩＭＧＴナンバリングスキームは、本明細書では、ナンバリングスキーム（図１のａの概略図）を簡略化するために使用され、ここで、ＶＨ又はＶＬ領域はそれぞれアミノ酸残基１～１２８を含む。従って、ＣＨ１ドメインのアミノ酸の番号はａａ １２９～２２６であり；κドメインはａａ １２９～２３５であり；ヒンジ領域はａａ ２２７～２４１（ＩｇＧ１による）であり；ＣＨ２はａａ ２４２～３５１であり、ＣＨ３はａａ ３５２～４５６である。このナンバリングスキームに基づいて、野生型ＩｇＧ１（κ）におけるＨ－Ｌ鎖間ジスルフィド結合は、Ｈ（Ｃ２３１）～Ｌ（Ｃ２３５）の間で形成されるが、ＩｇＧ２（κ）（又はＩｇＧ３（κ）又はＩｇＧ４（κ））においては、Ｈ（Ｃ１４２）－Ｌ（Ｃ２３５）の間で形成できる。重鎖２３０位のセレインがシステインに変更されたＩｇＧ１突然変異体はＩｇＧ１（Ｓ２３０Ｃ）と命名され、Ｃ２３１が欠損したＩｇＧ１突然変異体はＩｇＧ１（Δ２３１）と命名される。Ｃ２３１後に一つのリジンが挿入されたＩｇＧ１突然変異体はＫ２３１．１と命名され、Ｃ２３１後に２つのアミノ酸ＫＬが挿入されたＩｇＧ１突然変異体はＫ２３１．１ Ｌ２３１．２と命名される（ＩｇＧ１のヒンジ領域に導入された突然変異の象徴的な例をいくつか示す図１のｂを参照）。例えば、対照／参照抗体２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３のヒンジ領域は、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含み、本発明の修飾された抗体の一例であるクローンＢＨ７３は、ＥＰＰＫＳＤＣＫＴＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１２）を含有する修飾されたヒンジアミノ酸配列を含む。対照抗体２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３はヒトＩｇＧ１ ＣＨ１を含む一方、抗体ＢＨ７３はヒトＩｇＧ２ ＣＨ１を含むことに注意されたい。

【0030】

もう一つの方面において、本発明は２つの重鎖を含む単離された抗体又はその抗原結合部分であって、各重鎖は、（ａ）アミノ酸配列：－（Ｘ_１）－Ｃ－（Ｘ_２）－ＣＰＰＣＰ－を含み、ここで、Ｘ_１は、０～７個のアミノ酸残基を含むポリペプチドセグメントであり、各アミノ酸残基は独立してシステイン残基ではない任意のアミノ酸残基から選択され、Ｘ_２は、２～７個のアミノ酸残基を含むポリペプチドセグメントであり、各アミノ酸残基は独立してシステイン残基ではない任意のアミノ酸残基から選択されるヒンジ領域；（ｂ）ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、第１４２位にシステインが含まれるヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインを含み、ここで、前記抗体がヒトＢ７－Ｈ３タンパク質に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。

【0031】

いくつかの実施の形態において、前記ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列は、例えば、配列番号１１又は配列番号１２等の配列番号１１～２４からなる群から選択される。いくつかの実施の形態において、本明細書に記載の抗体は、２つのκ軽鎖を含むことができ、各軽鎖は１つの重鎖と対になっている。抗体における２つの重鎖は同一であってもよい。抗体における２つの軽鎖は同一であってもよい。

【0032】

幾つかの実施の形態において、抗体のＣＨ１ドメインは、天然ヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラス抗体のＣＨ１ドメインの配列と同じ配列を有するか、又は天然ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ１ドメインの配列と同じ配列を有し、Ｓ１４２Ｃ突然変異を有する。

【0033】

幾つかの実施の形態において、各重鎖は、更に、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４サブクラス抗体のＦｃドメインを含んでもよく、それはヒンジ領域の下流に位置し、それに連結され、ここで、Ｆｃドメインは、任意選択で１つ又は複数の置換を含む。

【0034】

幾つかの実施の形態において、各重鎖は、可変ドメインを含み、前記可変ドメインは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施の形態において、各重鎖は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む。

【0035】

幾つかの実施の形態において、各軽鎖は、可変ドメインを含み、前記可変ドメインは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施の形態において、各軽鎖は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。

【0036】

幾つかの実施の形態において、抗体の各重鎖は、可変ドメインを含み、前記可変ドメインは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の各軽鎖は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含有する可変ドメインを含む。

【0037】

幾つかの実施の形態において、前記抗体は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含有する重鎖と配列番号５に示されるアミノ酸配列を含有する軽鎖を含む。

【0038】

本明細書で使用される「単離された抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。抗原に特異的に結合する単離された抗体は、当該抗原に結合しない抗体を実質的に含まない。

【0039】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な分子組成の抗体分子群の製剤を指し、ここで、抗体分子群における個々抗体は、ごく少量存在可能性な自然に発生することができる突然変異を除いて同一である。

【0040】

「ヒトＢ７－Ｈ３に特異的に結合する」抗体又は分子は、ヒトＢ７－Ｈ３タンパク質に結合するが、非ヒトＢ７－Ｈ３タンパク質のタンパク質には実質的に結合しない抗体又はポリペプチド分子を指す。

【0041】

当業者は様々な方法／システムを使用して前記抗体のＣＤＲ（相補性決定領域）を定義する。これらのシステムおよび／または定義は、何年にもわたって開発および改良されており、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ、およびＣｏｎｔａｃｔを含む。一般的に使用されるＫａｂａｔの定義は、配列の可変性に基づいている。Ｃｈｏｔｈｉａの定義は、構造リング領域の位置に基づいている。ＩＭＧＴシステムは、配列の可変性と可変ドメイン構造内の位置に基づいている。ＡｂＭの定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの間の妥協案である。Ｃｏｎｔａｃｔの定義は、利用可能な抗体の結晶構造の分析に基づいている。一つの例示的なシステムは、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの組み合わせである。

【0042】

出発ポリペプチドのアミノ酸配列突然変異体をコードするＤＮＡは、当技術分野で知られている様々な方法によって調製することができる。これらの方法は、ポリペプチドをコードする以前に調製されたＤＮＡの部位特異的（又はオリゴヌクレオチドによって媒介される）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、およびカセット突然変異誘発による調製を含むが、これらに限定されない。組換え抗体の突然変異体は、制限断片操作、又は合成オリゴヌクレオチドを用いたオーバーラップ伸長ＰＣＲによっても構築され得る。変異原性プライマーは、システインコドン置換をコードする。標準的な突然変異誘発技術を用いて、そのような突然変異操作された抗体をコードするＤＮＡを生成させることができる。

【0043】

もう一つの方面において、本発明は、本明細書に記載の抗体又はいずれかの抗体の抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。核酸分子を含む発現ベクターを有する宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、リンパ球細胞、ヒト胎児腎細胞又は微生物、例えば大腸菌及び酵母なような真菌）を本発明の抗体の生産に使用でき、好ましくは、モノクローナル抗体である。一つの実施形態において、本発明の部分的又は完全長抗体をコードするＤＮＡは、標準的な分子生物学技術によって得ることができ、遺伝子は、１つ又は複数の発現ベクターへの挿入によって、転写及び翻訳調節配列に作動可能に連結される。「作動可能に連結される（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」という用語は、ベクター内の転写及び翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写及び翻訳を調節するという意図された機能を果たすように、抗体遺伝子がベクターに連結されていることを示す。「調節配列（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」という用語は、抗体遺伝子の転写又は翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図している。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ．（１９９０））に記載された通りである。哺乳動物の宿主細胞発現のための好ましい調節配列には、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルスから由来し、例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ）及びポリオーマプロモーター及び／又はエンハンサーなどのアデノウイルスが含まれる。或いは、ユビキチンプロモーター又はβグロビンプロモーターなどの非ウイルス調節配列を使用することができる。さらに、調節エレメントは、ＳＶ４０初期プロモーター及びヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の長い末端反復からの配列を含むＳＲαプロモーター系などの、異なる供給源からの配列で構成される（Ｔａｋｅｂｅ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ８：４６６－４７２）。発現ベクター及び発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。

【0044】

抗体をコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入することができる。組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。抗体をコードするＤＮＡは、シグナルペプチドがＤＮＡによってコードされる抗体のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（即ち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。

【0045】

もう一つの方面において、抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）又はその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの実施の形態において、ＡＤＣは、本発明に記載の化学リンカーによって細胞毒性薬にコンジュゲートされた本発明の抗体を含む。

【0046】

幾つかの実施の態様において、ＡＤＣの抗体部分は、（ａ１）配列番号１２～２４のいずれか一つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖ヒンジ領域、（ａ２）それぞれ配列番号６、配列番号７、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメイン、（ａ３）更に、それぞれヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインをさらに含有し、ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、前記ＣＨ１ドメインの第１４２位にシステインが含まれる重鎖、及び（ａ４）それぞれ配列番号９、ＷＡＳ、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む。一つの実施の形態において、ＡＤＣの抗体部分はＢＨ７３抗体である。

【0047】

幾つかの実施の形態において、ＡＤＣは、（Ａ）単離された抗体又はその抗原結合部分、及び（Ｂ）細胞毒性薬を含み、前記（Ａ）単離された抗体又はその抗原結合部分は、（ａ１）配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖ヒンジ領域、及び（ａ２）それぞれ配列番号６、配列番号７、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメイン、及び（ａ３）それぞれ配列番号９、ＷＡＳ、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、
ここで、単離された抗体又はその抗原結合部分は化学リンカーによって細胞毒性薬にコンジュゲートされている。一つの実施の形態において、ＡＤＣの抗体部分は２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３である。

【0048】

いくつかの実施の形態において、前記細胞毒性薬は、エリブリン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＦ、メイタンシンＤＭ１及びＤＭ４、メイタンシノール、サンドラマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、アントラサイクリン、カリケアマイシン、ドラスタチン１０、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、タイランスタチンＡ、ウンシアラマイシン、アマニチン、リシン、ジフテリア毒素、^１３１Ｉ、インターロイキン、腫瘍壊死因子、ケモカイン、イリノテカン（ＳＮ３８）、エキソテカン及びナノ粒子からなる群より選択される。特定の実施の形態において、ＡＤＣ中の細胞毒性薬はエリブリンである。他の実施の形態において、ＡＤＣ中の細胞毒性薬はＭＭＡＥである。

【0049】

抗体部分と細胞傷害性薬物を連結する化学リンカーは、切断可能又は切断不可能であり得る。いくつかの実施の形態において、リンカーは、ｎが１～２０（即ち、１～２０の反復単位（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）を有する）であるＰＥＧｎスペーサーを含む。いくつかの実施の形態において、前記化学リンカーは、ＰＥＧｎスペーサーに連結されたリンカーセグメントをさらに含む。いくつかの実施の形態において、前記化学リンカーはリンカーセグメントを含むが、ＰＥＧｎスペーサーは含まない。いくつかの実施の形態において、前記化学リンカーは、６－マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ａｌａ－ｐｈｅ）、ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、６－マレイミドカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ）、Ｍａｌ－ＰＥＧ_ｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、Ｍａｌ－アミド－ＰＥＧ_ｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、ＭＣ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＰＡＢ、Ａｌｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－（Ａｌｌｏｃ）Ｌｙｓ－ＰＡＢ－ＰＮＰ、パーフルオロフェニル３－（ピリジン－２－イルジスルファニル）プロパノエート及びその組み合わせからなる群より選択されるフラグメントを含む。

【0050】

本発明において、ＡＤＣの薬学的に許容される塩には、無機酸、カルボン酸及びスルホン酸の酸付加塩が含まれ、例えば、下記の酸の塩：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸及び安息香酸である。

【0051】

本発明の抗体にコンジュゲートされた薬物の薬学的に許容される塩は、従来の塩基の塩をさらに含み、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩及びマグネシウム塩）とアンモニア又は１～１６個の炭素原子を含む有機アミンから誘導されるアンモニウム塩が含まれ、ここで、有機アミンは、例えば、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンズアミド、Ｎ－メチルピペリジン、Ｎ－メチルモルホリン、アルギニン、リジン、１，２－エチレンジアミンである。

【0052】

本明細書で使用されるＡＤＣは、薬物分子と抗体（又はその抗原結合部分）を含む分子を指し、ここで、薬物と抗体（又はその抗原結合部分）はリンカーによって共有結合されている。本明細書における「ＡＤＣ製剤」は、ＡＤＣ分子のコレクション又は群を指し、その構造は化学リンカーと抗体（又はその抗原結合部分）の異なる付着部位によって異なる場合がある。いくつかの実施の形態において、化学リンカーは主に又は大部分（例えば、≧８０％、≧８５％、≧９０％、≧９５％、又は≧９８％）で重鎖上のシステインとコンジュゲートして、ＡＤＣ製剤が実質的にコンジュゲートする軽鎖がない結果を引き起こす。いくつかの実施の形態において、化学リンカーは、主に抗体の重鎖ヒンジ領域のシステインを介して抗体とコンジュゲートする。いくつかの実施の形態において、薬物対抗体比（ＤＡＲ）が２であるＡＤＣ分子は、ＡＤＣ分子の総量の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又は少なくとも９０％を占める。

【0053】

もう一つの方面において、本発明は本発明の１つ又は複数の抗体、ＡＤＣ、又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本明細書に使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤が含まれる。これらには、生理学的に適合した溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、界面活性剤、増粘剤又は乳化剤、固体結合剤、分散剤又は懸濁助剤、可溶化剤、着色剤、調味剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、防腐剤、等張剤などが含まれるが、これらに限定されない。適切な担体の選択は、当業者の知識の範囲内にある。

【0054】

当該組成物は、別の抗体、薬物、例えば、細胞傷害剤又は抗腫瘍剤などの薬物の１つ又は複数の追加的な薬学的に活性成分を含んでもよい。本発明の医薬組成物は、例えば、別の抗がん剤、別の抗炎症剤などとの併用療法で投与することもできる。

【0055】

前記医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、表皮、及びその他の投与経路に適している。投与経路に応じて、活性成分を材料でコーティングするか、又は材料又は構造に充填して、酸及びそれを不活性化させる可能性のある他の自然条件から保護することができる。本発明で使用される「非経口投与」という語句は、通常は注射による経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入を含むが、これらに限定されない。或いは、本発明の組成物は、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸内、舌下又は局所などの局所、表皮又は粘膜投与経路などの非経口経路を介して投与することができる。

【0056】

もう一つの方面において、本発明は有効量の本明細書の医薬組成物を投与することを含む、ヒト被験者におけるがんを治療する方法を提供する。がんは、Ｂ７－Ｈ３タンパク質の過剰発現に関連するがんであり得る。例えば、がんは、頭頸部がん、腎臓がん、皮膚がん、結腸がん、神経膠芽腫、神経膠腫、甲状腺がん、中皮腫、黒色腫、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がんからなる群より選択され得る。がんは、転移性がん、難治性がん、又は再発性がんであり得る。

【0057】

被験者に組成物を投与する時、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように投与量を調節することができる。被験者、治療する疾患などに応じて、単回ボーラス又は分割投与が可能である。本明細書で使用される投与量の単位形態は、治療される対象のための単位投与量として適した物理的に分離された単位を指す。各単位投与量には、必要な薬学的担体と関連して、所望の治療効果を生み出すように計算された所定の量の有効成分が含まれる。徐放性製剤を使用することができるが、その場合、より少ない頻度で投与する必要がある。

【0058】

本発明の抗体又はそのＡＤＣの薬学的に許容される塩の投与について、投与量の範囲は、被験者の体重に応じて、約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇであり得、より通常は０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。例えば、投薬量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、又は１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。適切な治療法案は、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回などであり得る。本発明の抗Ｂ７－Ｈ３抗体の投与方案の実例には、１ｍｇ／ｋｇ体重又は３ｍｇ／ｋｇ体重の静脈内投与が含まれ得る。

【0059】

本発明の抗体又はＡＤＣ又はその薬学的許容可される塩の「治療有効量」は、好ましくは、疾患症状の重症度の低下、疾患症状のない期間の頻度及び／又は持続期間の増加、或いは疾患による怪我又は障害可能性の予防又は軽減、或いは疾患の進行の阻害又は遅延である。例えば、腫瘍担持被験者の治療では、未治療の被験者と比較して、抗体組成物の「治療有効量」は、腫瘍増殖を少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは、少なくとも約８０％を阻害することができる。
実施例
１． ２７Ｂ４Ｈ４３Ｌ３（参照）及びＢＨ７３抗体の生成
簡単に説明すると、Ｂａｌｂ／Ｃメスマウス（６～８週齢）を組換えヒトＢ７－Ｈ３抗原で免疫させ、ＳＰ２／０骨髄腫細胞で電気融合した最高力価のマウスの脾臓リンパ球を使用した。陽性結合体をＢ７－Ｈ３ ＥＬＩＳＡによってスクリーニングし、複数回のサブクローニング及び増幅によってクローン選択を実行した。クローン２７Ｂ４が、最高バインダーの１つとして識別され、それを選択して遺伝子クローニングに使用した。ＣＤＲ移植によりヒト化し、Ｂ７－Ｈ３結合活性を確認して、ヒト化クローン２７Ｂ４Ｈ４３Ｌ３であり、ｈｕＩｇＧ１フォーマットに調製した。当該参照抗体の重鎖及び軽鎖の配列は、それぞれ配列番号３及び配列番号５に示される通りである。

【0060】

本発明の修飾された抗体の例であるＢＨ７３抗体は、２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体の可変配列、ＩｇＧ２のＣＨ１ドメイン、ＥＰＰＫＳＤＣＫＴＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１２）を含むヒンジ配列、及びＬＡＬＡ突然変異（配列番号Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）を含むＩｇＧ１ Ｆｃによって調製された。その目的は、特定部位（部位特異的結合）に２つの薬物ペイロードを含むＡＤＣを生成させることである。当該ＢＨ７３クローンの重鎖及び軽鎖配列は、それぞれ配列番号４及び配列番号５に示される通りである。
２． ２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３抗体の発現と精製
２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３抗体の発現については、ＨＥＫ２９３細胞での産生を改善するために、コドン最適化と遺伝子合成を実行した。全長の重鎖と軽鎖のＤＮＡをそれぞれ個別のｐｃＤＮＡ３プラスミドにクローニングした。対になったプラスミドはＨＥＫ２９３細胞に一過性トランスフェクションされ、プロテインＡを１ステップの精製により、テストに十分な量のタンパク質を調製した。この形式で作製された抗体は、発見が良好で、収量で十分で、プロテインＡの１ステップ精製プロセスで高純度に精製することができた（図２）。
３． ２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体及びＢＨ７３抗体のコンジュゲートによるＡＤＣの生成
コンジュゲート薬物を生成させるために、中性のｐＨでＴＣＥＰを精製抗体を含むＰＢＳ溶液に加えた。穏やかな還元条件（ＴＣＥＰ：ｍＡｂ＝１～３、中性ｐＨ、室温で２４０分未満）で、抗体の鎖間ジスルフィド結合を部分的に還元した。ＤＭＡに薬物―リンカー（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）を加えて抗体と反応させて、所望の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を得た。ＡＤＣを特徴付けるために、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して、ＡＤＣにおける薬物分布及び薬物と抗体のモル比を評価し、ＡＤＣにおける薬物と代表的なＨＩＣクロマトグラムは図３に示された通りである。これらの穏やかな還元／コンジュゲート条件下では、２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３で調製されたＡＤＣは２、４、及び６個の薬物分子（それぞれＤＡＲ２、ＤＡＲ４、ＤＡＲ６）に結合した２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３のメインピークを含有していた。マイナーピーク（ｍｉｎｏｒ ｐｅａｋ）は２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３（ＤＡＲ０）及び８個の薬物分子（ＤＡＲ８）と２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３の結合であった（図の３ａ）。ＢＨ７３抗体で調製されたＡＤＣは主にＤＡＲ２ ＡＤＣ種からなり、マイナーピークはＢＨ７３（ＤＡＲ０）と４個の薬物分子（ＤＡＲ４）に結合したＢＨ７３であった（図の３ｂ）。
４． 抗体及びそれに対応するＡＤＣのＢ７－Ｈ３結合活性の測定
ＥＬＩＳＡ測定を使用して、比較抗体（２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３）とそれらに対応するＡＤＣ（２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥ、ＢＨ７３－ＭＭＡＥ）のＢ７－Ｈ３結合能力を評価及び比較した。ヒトＢ７－Ｈ３タンパク質（１０００ｎｇ／ｍＬ）を９６ウェルプレートにコーティングし、ウェルレートを４℃で一晩培養した。次に、希釈した試料をＢ７－Ｈ３でコーティングしたウェルプレートに移し、室温で１．５時間培養した。ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（Ｓｉｇｍａ、Ａ０１７０）を検出試薬とし、ＴＭＢを使用して比色反応を実行し、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ １９０）でプレートの４５０／６５０ｎｍにおける吸光度を読み取り、用量応答曲線形式の４パラメータロジスティックモデルを使用してデータ分析を実行した。

【0061】

図４及び表１の結果は、２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３で修飾されたＢＨ７３が２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３と同様のＥＣ_５０でＢ７－Ｈ３に結合し、２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体又はＢＨ７３抗体で調製されたＡＤＣ（２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥ及びＢＨ７３－ＭＭＡＥ）は、対応する裸抗体と比較して、Ｂ７－Ｈ３と同様の結合活性を有していることを示し、ペイロード結合がＡＤＣの標的結合能力に影響を与えないことを示唆している。

【0062】

【表1】

【0063】

５． Ｂ７－Ｈ３発現細胞への測定抗体及びＡＤＣの結合の測定
２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体のＦＡＣＳ及び２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３のＭＦＩを使用して、表２に示される細胞に対してＢ７－Ｈ３発現細胞のスクリーニングを実行した。ＦＡＣＳ測定を使用して、２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体、ＢＨ７３抗体、２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥ及びＢＨ７３－エリブリンのＢ７－Ｈ３発現細胞への結合能力を試験及び比較した。測定のために、標的細胞と試料を４℃で１時間培養した。洗浄した後、試料と二次抗体（ヤギｐＡｂ抗ヒトＩｇＧ（ＦＩＴＣ）（Ａｂｃａｍ、ａｂ９７２２４））を培養した。低サイトメーター（ＢＤ、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６ Ｐｌｕｓ）でＦＡＣＳを実行し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を記録した。Ｂ７－Ｈ３高発現及び低発現細胞を代表する３つの細胞株（Ｕ８７ＭＧ、ＢＴ－４７４及びＨＴ－２９）を使用して、異なる抗体構築物とＡＤＣの結合能力を比較した。ＢＨ７３抗体は、試験したすべての細胞で２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体と同様のＭＦＩレベルを示し、異なる形態のＡＤＣ（２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥ及びＢＨ７３－ＭＭＡＥ）も同様のＭＦＩレベルを示し（表３）、それらのＢ７－Ｈ３結合活性が工程とコンジュゲートの影響を受けないことを示した。

【0064】

【表2】

【0065】

【表3】

【0066】

６． Ｂ７－Ｈ３発現細胞に対するＡＤＣの細胞毒性
２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３又はＢＨ７３を含む抗体部分のＡＤＣの細胞毒性を評価し、体外細胞毒性測定で、異なるＢ７－Ｈ３発現レベルの複数の細胞株と比較した。測定を実施するために、標的細胞を各細胞株の最適化細胞密度で９６ウェル平底組織培養プレートに播種し、３７℃、５％のＣＯ_２で一晩培養した。ＡＤＣ試料の勾配希釈液を細胞プレートに移し、測定ウェルプレートを所定の時間（細胞株に応じて３～７日）培養して、最適な殺傷を実現した。４パラメータロジスティックモデルの用量反応曲線を用いてデータ分析を実行した。図５に示されるように、２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥ及びＢＨ７３－ＭＭＡＥは、ＢＨ－７３を高発現するがん細胞に対して細胞毒性を発揮した。
７． 体内動物モデルと治療
ＢＨ７３の抗体部分を含むＡＤＣの体内抗腫瘍活性を評価し、ＢＲ０１０２－ＤＸｄ ＡＤＣ（ＷＯ＿２０２０＿１３０１２５＿Ａ１）と比較した。ヌードマウスでＨＴ２９結腸直腸がん異種移植片モデルを確立した。ＨＴ２９細胞を無胸腺ヌードマウスの背中に移植した。担癌マウスは、ビヒクル（対照群）又はＡＤＣ溶液で、１回尾静脈注射により処理された。ＡＤＣの投与量は２０ｍｇ／ｋｇであった。図６に示される結果は、ＨＴ２９モデルにおいて、ＢＨ７３－ＭＭＡＥ治療が腫瘍抑制に効果的であるのに対して、同じ投与量レベルでのＢＲ０１０２－ＤＸｄの治療効果は低いことを示ている。

【0067】

引用文献：
［１］．Ｓｅａｍａｎ Ｓ， Ｓｔｅｖｅｎｓ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ， ２００７， １１， ５３９－５５４．
［２］．Ｂｒｕｎｎｅｒ Ａ， Ｈｉｎｔｅｒｈｏｌｚｅｒ， Ｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｇｙｎｅｃｏｌ． Ｏｎｃｏｌ．， ２０１２， １２４，１０５－１１１．
［３］．Ｈｕａｎｇ Ｃ， Ｚｈｏｕ Ｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｌ． Ｒｅｐ．， ２０１６， ３５， ２１８３－２１９０．
［４］．Ａｒｉｇａｍｉ Ｔ， Ｎａｒｉｔａ Ｎ， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｓｕｒｇ．， ２０１０， ２５２， １０４４－１０５１．
［５］．Ｃｈｅｎ ＪＴ， Ｃｈｅｎ ＣＨ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ２０１５， １１２， １３０５７－１３０６２．
［６］．Ｃｒｉｓｐｅｎ ＰＬ， Ｓｈｅｉｎｉｎ Ｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２００８， １４， ５１５０－５１５７．
［７］．Ｂｒｕｎｎｅｒ Ａ， Ｈｉｎｔｅｒｈｏｌｚｅｒ Ｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｇｙｎｅｃｏｌ． Ｏｎｃｏｌ．， ２０１２， １２４， １０５－１１１．
［８］．Ｑｉｎ Ｘ， Ｚｈａｎｇ Ｈ， ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏ． Ｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ．， ２０１３， ６， １６６７－１６７３．
［９］．Ｚａｎｇ Ｘ， Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＰＳ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｄ． Ｐａｔｈｏｌ．， ２０１０， ２３， １１０４－１１１２．
［１０］．Ｌｏｏ Ｄ， Ａｌｄｅｒｓｏｎ ＲＦ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２０１２， １８， ３８３４－３８４５．
［１１］．Ａｈｍｅｄ Ｍ， Ｃｈｅｎｇ Ｍ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０１５， ２９０， ３００１８－３００２９．
［１２］．Ｍｏｄａｋ Ｓ， Ｋｒａｍｅｒ Ｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２００１， ６１， ４０４８－４０５４．
［１３］．Ｃｈｅｎ ＺＺ， Ｗａｎｇ ＬＰ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ．， ２０１６， １７， １３２４－３２．
［１４］．Ｏｇｉｔａｎｉ Ｙ， Ａｂｅ Ｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．， ２０１６， ２６， ５０６９－７２．
［１５］．Ｗａｎｇ Ｇ， Ｗｕ Ｚ， ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ， ２０１６， ７， ２４８８８－９８．
本明細書に記載されたすべての特許文献及び非特許文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0068】

以上、本発明を１つまたは複数の実施形態と結合してして説明したが、本発明はこれらの実施形態に限定されるものではなく、この説明は、添付の特許請求の範囲の精神及び範囲内に含まれる可能性のあるすべての代替物、修正物、及び均等物を網羅することを意図していることを理解されたい。

【0069】

配列表
２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３のＶＨ：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＧＧＳＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＧＮＹＩＳＦＰＭＹＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）。

【0070】

２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３のＶＬ：
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＡＳＲＧＶＳＴＡＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＤＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２）。

【0071】

２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３の重鎖：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＧＧＳＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＧＮＹＩＳＦＰＭＹＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＶＧＧＰＳＶＦＬＬＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＰＥＥＱＹＮＳＴＬＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＬＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３）。

【0072】

ＢＨ７３の重鎖：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＧＧＳＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＧＮＹＩＳＦＰＭＹＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＰＰＫＳＤＣＫＴＫＴＶＥＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４）。

【0073】

２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３のＶＬ－ＣＬ（ヒトＫａｐｐａ）：
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＡＳＲＧＶＳＴＡＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＤＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号５）。

【0074】

ＢＨ７３（及び２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３）の重鎖ＣＤＲ１：
ＧＹＴＦＴＴＹＷ（配列番号６）。

【0075】

ＢＨ７３（及び２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３）の重鎖ＣＤＲ２：
ＩＹＰＧＤＧＧＳ（配列番号７）。

【0076】

ＢＨ７３（及び２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３）の重鎖ＣＤＲ３：
ＡＲＧＧＮＹＩＳＦＰＭＹＹ（配列番号８）。

【0077】

ＢＨ７３（及び２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３）の軽鎖ＣＤＲ１：
ＲＧＶＳＴＡ（配列番号９）。

【0078】

ＢＨ７３（及び２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３）の軽鎖ＣＤＲ２：
ＷＡＳ。

【0079】

ＢＨ７３（及び２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３）の軽鎖ＣＤＲ３：
ＱＱＨＹＤＴＰＹＴ（配列番号１０）。

【0080】

２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３重鎖ヒンジ配列：
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１１）。

【0081】

ＢＨ７３重鎖ヒンジ配列：
ＥＰＰＫＳＤＣＫＴＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１２）。

【0082】

重鎖ヒンジ配列のその他の例：
ＣＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１３）；
ＤＫＴＣＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１４）；
ＥＲＫＳＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１５）；
ＥＰＫＳＤＣＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１６）；
ＥＰＫＳＤＫＣＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１７）；
ＥＰＫＳＤＣＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１８）；
ＥＰＫＳＤＣＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１９）；
ＥＰＫＳＤＫＣＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２０）；
ＥＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２１）；
ＥＰＰＫＳＤＣＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２２）；
ＥＰＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２３）；
ＥＰＰＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２４）。

【図面の簡単な説明】

【0083】

【図1】本発明で使用される抗体のアミノ酸ナンバリングスキームの概略図である。（ａ）ヒトＩｇＧ１（κ）のＩＭＧＴベースのアミノ酸ナンバリングスキーム。（ｂ）突然変異体（ＩｇＧ１ヒンジ領域に対する）のナンバリングスキーム。

【図2】２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３抗体の物理化学的試験の結果である。還元性（Ｒ）及び非還元性（ＮＲ）抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析：２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体（ａ）及びＢＨ７３抗体（ｂ）；ＨＥＫ２９３細胞で産生された抗体の純度と収量（ｃ）；精製抗体、２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体（ｄ）及びＢＨ７３抗体（ｅ）のＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析。

【図3】２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３抗体で調製されたＡＤＣのコンジュゲートグスペクトルである。２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３及びＢＨ７３抗体で調製されたＡＤＣのＨＩＣスペクトルである。（ａ）２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥ、（ｂ）ＢＨ７３－ＭＭＡＥ。

【図4】２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３抗体及び２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥと組換えＢ７－Ｈ３タンパク質との結合曲線である。

【図5】Ｂ７－Ｈ３発現がん細胞に対する２７Ｂ４Ｈ４Ｌ３－ＭＭＡＥ、ＢＨ７３－ＭＭＡＥ、及びＢＲ０１０２－ＤＸｄの細胞毒性曲線である。（ａ）Ｕ８７、（ｂ）ＢＴ－４７４、（ｃ）ＨＴ－２９、及び（ｄ）Ａ４３１。

【図6】結腸直腸がんＨＴ２９異種移植の無胸腺ヌードマウスにおけるＢＨ７３－ＭＭＡＥ及びＢＲ０１０２－ＤＸｄの体内薬物効力である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【配列表】

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