特許7610411 | 知財ポータル「IP Force」

知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」

▶ アーラ　フーズ　エイエムビーエイの特許一覧

特許7610411ＢＬＧベースのインスタント飲料粉末

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

目に優しい文字サイズ小中大 PDF Top

< >

1
2
3

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-12-24

(45)【発行日】2025-01-08

(54)【発明の名称】ＢＬＧベースのインスタント飲料粉末

(51)【国際特許分類】

A23L 2/39 20060101AFI20241225BHJP

A23L 2/66 20060101ALI20241225BHJP

A23L 2/02 20060101ALI20241225BHJP

A23L 2/38 20210101ALI20241225BHJP

A23L 33/135 20160101ALI20241225BHJP

A23L 33/19 20160101ALI20241225BHJP

A23L 2/68 20060101ALI20241225BHJP

【ＦＩ】

A23L2/00 Q

A23L2/66

A23L2/02 E

A23L2/02 A

A23L2/38 P

A23L33/135

A23L33/19

A23L2/68

A23L2/39

【請求項の数】 15

(21)【出願番号】P 2020573262

(86)(22)【出願日】2019-06-26

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-11-11

(86)【国際出願番号】 EP2019067048

(87)【国際公開番号】W WO2020002454

(87)【国際公開日】2020-01-02

【審査請求日】2022-06-23

(31)【優先権主張番号】18180224.0

(32)【優先日】2018-06-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】18180212.5

(32)【優先日】2018-06-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】PCT/EP2018/067299

(32)【優先日】2018-06-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】PCT/EP2018/067316

(32)【優先日】2018-06-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】PCT/EP2018/067280

(32)【優先日】2018-06-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】520507335

【氏名又は名称】アーラフーズエイエムビーエイ

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ラウリドセン、カスペルベーゲルンド

(72)【発明者】

【氏名】ベルテルセン、ハンス

(72)【発明者】

【氏名】ニールセン、セレンバング

(72)【発明者】

【氏名】デモーラマシエル、ギョーム

(72)【発明者】

【氏名】センデルガールド、コーレ

(72)【発明者】

【氏名】パルジコラエイ、ベーナズラジ

(72)【発明者】

【氏名】イエーガー、ターニャクリスティーネ

【審査官】村松宏紀

(56)【参考文献】

【文献】特表２００６－５０８１６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５０９３３５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平０９－２３８６１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２００７／０１７２４７４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１６／０２２７８２８（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ２３Ｌ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

少なくとも５％重量／重量のベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）を含む、以下のインスタント飲料粉末：
ｉ．タンパク質の総量の少なくとも９１％重量／重量はＢＬＧで構成され、
さらに、ビタミン、香味料、着色剤、ミネラル、甘味料、抗酸化剤、食用酸、脂質、炭水化物、プレバイオティクス、プロバイオティクス、消泡剤、及び非ホエイタンパク質からなる群から選択される少なくとも１つの追加の原料を含む。

【請求項2】

以下の１つ又は２つ以上を含む、請求項１に記載の粉末：
ｉ．甘味料、例えば、砂糖甘味料及び／又は非砂糖甘味料、
ｉｉ．香味料、
ｉｉｉ．少なくとも１つの食用酸、例えばクエン酸又は他の適切な食用酸、
ｉｖ．インスタント飲料のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計が最大１０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である、
脱塩水中の前記粉末の１０％重量／重量溶液が、２～８の範囲のｐＨを有する。

【請求項3】

総タンパク質に対して少なくとも９２％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９３％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９４％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９５％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９６％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９７％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９８％重量／重量のＢＬＧ、又は総タンパク質に対して少なくとも９９％重量／重量のＢＬＧを含む、請求項１又は２に記載の粉末。

【請求項4】

最大６％重量／重量、例えば、最大５％重量／重量、好ましくは最大４％重量／重量、より好ましくは最大３％重量／重量、さらにより好ましくは最大２％重量／重量の含水量を含む、請求項１～３のいずれかに記載の粉末。

【請求項5】

粉末が以下を含む、請求項１～４のいずれかに記載の粉末：
ｉ．最大６％重量／重量の水
ｉｉ．全固形分に対して少なくとも１５％重量／重量の総タンパク質
ｉｉｉ．総タンパク質に対して少なくとも９１％重量／重量のＢＬＧ、
該粉末は乾燥粉末である。

【請求項6】

少なくとも０．３０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．４ｇ／ｍＬ、より好ましくは０．５ｇ／ｍＬ、又はさらにより好ましくは０．５ｇ／ｍＬのかさ密度を有する、請求項１～５のいずれかに記載の粉末。

【請求項7】

Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計が最大１０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である、請求項１～６のいずれかに記載の粉末。

【請求項8】

脱塩水中の１０％重量／重量溶液において粉末が、室温で２～８の範囲のｐＨを有する、請求項１～７のいずれかに記載の粉末。

【請求項9】

変性度が、最大１０％、好ましくは最大４％、より好ましくは最大１％、さらにより好ましくは最大０．４％、さらにより好ましくは最大０．１％である、請求項１～８のいずれかに記載の粉末。

【請求項10】

ＢＬＧの結晶化度が少なくとも２０％であり、好ましくは少なくとも４０％である、請求項１～９のいずれかに記載の粉末。

【請求項11】

栄養失調であるか又は栄養失調のリスクのある患者の処置方法に使用するための、請求項１～１０のいずれかに記載の粉末。

【請求項12】

腎臓病の処置方法で使用するための、請求項１～１１のいずれかに記載の粉末。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれかに記載の粉末を含み、以下を含むキット：
ｉ．前記粉末を測定するためのツール、及び
ｉｉ．容器を開閉するための蓋を備えた前記容器、
前記容器は、前記粉末を液体と混合して食品を形成するためのものであり、前記容器が、前記容器から直接食品を飲むように適合されている。

【請求項14】

液体及び請求項１～１２のいずれかに記載のインスタント飲料粉末を含む液体食品を調製するための、以下を含む方法：
ｉ．請求項１～１２のいずれかに記載の粉末を液体に添加すること、
ｉｉ．任意に、少なくとも１つの追加の原料を添加すること、及び
ｉｉｉ．前記粉末と液体を混合して均一な混合物を形成すること。

【請求項15】

さらなる原料が果物又は野菜から選択される、請求項１４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、インスタント飲料粉末製品及びインスタント飲料粉末製品を調製するための方法、インスタント飲料粉末から製造される液体食品、及び液体食品を調製するための方法、液体食品の使用、並びにインスタント飲料粉末製品を含むキットに関する。

【背景技術】

【0002】

乳清タンパク質を含む栄養補助食品は、筋肉の合成、体重管理、並びに筋肉及び体重の維持に一般的に使用されている。栄養補助食品は、様々な種類の消費者、例えば、スポーツをする男性／女性、運動選手、子供、高齢者、及び栄養失調のある若しくは栄養失調のリスクがある、及び／又はタンパク質の必要量が増加している患者を対象としている。そのため、消費者は製品を飲みたいと感じるような、栄養補助食品に対する消費者の認識は非常に重要である。

【0003】

乳清タンパク質は、乳清又はホエイから単離することができる。ホエイは典型的には、ベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）、アルファラクトアルブミン（ＡＬＡ）、血清アルブミン、及び免疫グロブリンの混合物で構成されており、ＢＬＧが最も優勢である。そのため、ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）は、これらのタンパク質の混合物を含む。ホエイタンパク質単離物（ＷＰＩ）は、ＷＰＣよりも少ない脂肪及び乳糖を含む。乳清又はホエイからのベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）の単離は、多くの出版物の主題であり、典型的には、精製されたベータ－ラクトグロブリン製品に到達するために、複数の分離工程及び多くの場合クロマトグラフィー技術を伴う。

【0004】

国際特許出願第２００２／０５６７０７号公報（Ｎｅｓｔｌｅ）は、少なくとも１つの脂肪又は油源、少なくとも１つの炭水化物源、及び少なくとも１つのタンパク質源を有するバランスのとれた粉末ブレンド組成物に関し、これを記載している。この組成物は、食品の栄養価を補うために食品に有利に添加されるが、食品の味を実質的に変えることはない。

【0005】

国際公開第２０１８／１１５５２０号公報Ａ１は、塩溶様式のＢＬＧの結晶化に基づいて、食用の単離されたベータ－ラクトグロブリン組成物及び／又は結晶化ベータ－ラクトグロブリンを含む組成物を製造する方法を開示している。続いて、結晶化ＢＬＧを残りの母液から分離することができる。

【0006】

国際公開第２０１１／１１２６９５号公報Ａ１は、栄養組成物、並びに栄養組成物を製造及び使用する方法を開示している。栄養組成物は、ホエイタンパク質ミセル及びロイシンを含み、低粘度の流体マトリックス及び許容可能な感覚受容特性も維持しながら、ヒトにおいてタンパク質合成を改善するのに十分な量のロイシンを提供する。

【0007】

国際公開第２０１１／０５１４３６号公報Ａ１は、ヒト又は動物の消費を意図した少なくとも部分的に透明な組成物を開示し、かかる組成物の包装に関する。本発明の一実施形態は、少なくとも部分的に透明な水性非アルコール組成物を含む少なくとも部分的に透明な容器に関する。容器は、組成物中に存在する液晶を可視化する少なくとも１つの偏光子を含む。

【0008】

国際公開第２００４／０４９８１９号公報Ａ２は、１つ又は２つ以上の球状タンパク質の溶液を提供する工程であって、その溶液において、タンパク質（複数の場合がある）が、少なくとも部分的にフィブリルに凝集している工程、並びに以下：ｐＨを上げる工程；塩濃度を上げる工程；溶液を濃縮する工程；及び溶液の溶媒品質を変更する工程、の１つ又は２つ以上をランダムな順序で実施する工程を含む、球状タンパク質の機能特性を改善するための方法を開示している。好ましくは、１つ又は２つ以上の球状タンパク質の溶液は、低ｐＨでの加熱又は変性剤の添加によって提供される。このようにして得られたタンパク質添加物、食品及び非食品用途、並びにタンパク質添加物を含む食品及び非食品へのその使用も開示されている。

【0009】

国際公開第２０１０／０３７７３６号公報Ａ１は、ホエイタンパク質の単離、並びにホエイ製品及びホエイ単離物の調製を開示している。特に、本発明は、動物から得られたホエイからのβ－ラクトグロブリン生成物の単離、及びαに富むホエイタンパク質単離物の単離に関する。本発明によって提供されるαに富むホエイタンパク質単離物は、β－ラクトグロブリンが低いことの他に、α－ラクトアルブミン及び免疫グロブリンＧも高い。

【0010】

フランス国特許第２２９６４２８号は、任意の既知の分離プロセスによって得られた乳清タンパク質に基づく栄養学的及び処置的使用のためのタンパク質組成物を開示している。該組成物を、乳児及び成人の消化器障害（例えば、下痢）の処置又は予防、腸感染症に対する抵抗性の増加、及び特定の代謝障害（例えば、高フェニルアラニン血症）の処置に使用することができる。それらはまた、皮膚科学的又は美容的に使用することができ、低タンパク食の一部を形成することができる。

【発明の概要】

【0011】

本発明者らは、ＢＬＧの含有量が高いインスタント飲料粉末製品を提供した。該製品は常温保存可能であると同時に、食欲をそそる、すなわち、製品の外観及び味が消費者にとって魅力的である食品をもたらす。

【0012】

そのため、本発明の態様は、少なくとも１％重量／重量、好ましくは少なくとも５％のＢＬＧを含むインスタント飲料粉末であって、
ｉ．ＢＬＧの結晶化度が少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％であり、及び／又は
ｉｉ．タンパク質の総量の少なくとも８５％重量／重量がＢＬＧで構成され、
さらに、ビタミン、香味料、着色剤、ミネラル、甘味料、抗酸化剤、食用酸、脂質、炭水化物、プレバイオティクス、プロバイオティクス、消泡剤、及び非ホエイタンパク質からなる群から選択される少なくとも１つの追加の原料を含む、インスタント飲料粉末に関する。

【0013】

本発明の別の態様は、ＢＬＧ及び少なくとも１つの任意の原料を含むインスタント飲料粉末を調製するための方法であって、乾燥ＢＬＧ単離物を、ビタミン、香味料、着色剤、ミネラル、甘味料、抗酸化剤、食品酸、脂質、炭水化物、プレバイオティクス、プロバイオティクス、消泡剤、及び非ホエイタンパク質からなる群から選択される少なくとも１つの追加の原料とブレンドしてインスタント飲料粉末を得ることを含む、方法に関する。

【0014】

さらに、本発明の一態様は、本発明による液体及び粉末を含む液体食品に関する。

【0015】

本発明のさらなる態様は、本発明による液体食品を調製する方法であって、
ｉ．本発明によるインスタント飲料粉末を添加すること、
ｉｉ．任意に、少なくとも１つのさらなる原料を添加すること、並びに
ｉｉｉ．得られた粉末及び液体を混合して均一な混合物を形成すること、を含む方法に関する。

【0016】

本発明のさらなる態様は、栄養補助食品として使用するための、本発明によるインスタント飲料粉末に関する。

【0017】

本発明のさらなる態様は、本発明による粉末を含むキットであって、
ｉ．当該粉末を測定するための手段、及び
ｉｉ．容器を開閉するための蓋を有する容器を備え、
当該容器が、当該粉末を液体と混合して食品を形成するためのものであり、当該容器が、容器から直接食品を飲むように適合されている、キットに関する。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】図１は、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４５５３号の例３のフィード３から回収されたＢＬＧ結晶の顕微鏡写真である。

【図2】図２は、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４５５３号の例３のフィード２から得られたＢＬＧ結晶の全体及びフラグメント化したものの顕微鏡写真を示している。

【図3】図３は、例５で調製した６種類の低リン飲料のサブサンプルを含む試験管の写真である。

【0019】

定義
本発明の文脈では、「ベータ－ラクトグロブリン」又は「ＢＬＧ」という用語は、哺乳動物種に由来し、例えば、ネイティブの、折りたたまれていない及び／又はグリコシル化された形態であり、天然に存在する遺伝的変異体を含むベータ－ラクトグロブリンに関する。該用語はさらに、凝集性ＢＬＧ、沈殿したＢＬＧ及び結晶性ＢＬＧを含む。ＢＬＧの量に言及する場合、凝集性ＢＬＧを含むＢＬＧの合計量が言及される。ＢＬＧの総量は、例１．３１に従って決定される。「凝集性ＢＬＧ」という用語は、少なくとも部分的に折りたたまれておらず、さらに、典型的には疎水性相互作用及び／又は共有結合によって、他の変性ＢＬＧ分子及び／又は他の変性ホエイタンパク質と凝集しているＢＬＧに関する。

【0020】

ＢＬＧは、ウシホエイ及び乳清で最も優勢なタンパク質であり、幾つかの遺伝的変異体に存在し、牛乳の主なものはＡ及びＢと標識されている。ＢＬＧはリポカリンタンパク質であり、多くの疎水性分子に結合することができ、それらの輸送における役割を示唆している。ＢＬＧは、シデロホアを介して鉄に結合できることも示されており、病原体と戦う役割を果たしている可能性がある。ＢＬＧのホモログはヒトの母乳に欠けている。

【0021】

ウシＢＬＧは、およそ１６２アミノ酸残基の比較的小さなタンパク質で、分子量はおよそ１８．３～１８．４ｋＤａである。生理学的条件下では、ウシＢＬＧは主に二量体であるが、核磁気共鳴分光法を使用して決定されるように、そのネイティブ状態を保持しながら、約ｐＨ３未満の単量体に解離する。逆に、ＢＬＧはまた、様々な自然条件下で、四量体、八量体、及びその他の多量体の凝集形態でも発生する。

【0022】

本発明の文脈では、「非凝集性ベータ－ラクトグロブリン」又は「非凝集性ＢＬＧ」という用語は、哺乳動物種に由来し、例えば、ネイティブの、折りたたまれていない及び／又はグリコシル化された形態であり、天然に存在する遺伝的変異体を含むベータ－ラクトグロブリンに関する。しかしながら、該用語には、凝集性ＢＬＧ、沈殿したＢＬＧ、又は結晶化ＢＬＧは含まれない。非凝集性ＢＬＧの量又は濃度は、例１．６に従って決定される。

【0023】

総ＢＬＧに対する非凝集性ＢＬＧのパーセンテージは、計算（ｍ_総ＢＬＧ－ｍ_{非凝集性ＢＬＧ}）／ｍ_総ＢＬＧ＊１００％によって決定される。ｍ_総ＢＬＧは、例１．３１に従って決定されるＢＬＧの濃度又は量であり、ｍ_{非凝集性ＢＬＧ}は、例１．６に従って決定される非凝集性ＢＬＧの濃度又は量である。

【0024】

本発明の文脈では、「結晶」という用語は、その構成要素（原子、分子、又はイオン等）が高度に秩序化された微視的構造に配置され、全ての方向に延びる結晶格子を形成する固体材料に関する。

【0025】

本発明の文脈では、「ＢＬＧ結晶」という用語は、高度に秩序化された微視的構造に配置され、全ての方向に延びる結晶格子を形成する、主に非凝集性の好ましくはネイティブのＢＬＧを含むタンパク質結晶に関する。ＢＬＧ結晶は、例えば、モノリシック又は多結晶であり、例えば無傷の結晶、結晶のフラグメント、又はそれらの組み合わせである。結晶のフラグメントは、例えば、無傷の結晶が加工中に機械的剪断に供される場合に形成される。結晶のフラグメントはまた、結晶の高度に秩序化された微視的構造を有するが、無傷の結晶の均一な表面及び／又は均一な端若しくは角を欠いている場合がある。例えば、多くの無傷のＢＬＧ結晶の例については図１、ＢＬＧ結晶のフラグメントの例については図２を参照されたい。いずれの場合も、ＢＬＧ結晶又は結晶フラグメントは、光学顕微鏡を使用して、明確に定義されたコンパクトでコヒーレントな構造として視覚的に識別できる。ＢＬＧ結晶又は結晶フラグメントは、多くの場合、少なくとも部分的に透明である。タンパク質結晶はさらに複屈折性であることが知られており、この光学特性を使用して、結晶構造を有する未知の粒子を識別することができる。一方、非結晶性ＢＬＧ凝集物は、定義が不十分で不透明であり、不規則なサイズの開口した又は多孔性の塊として現れることがよくある。

【0026】

本発明の文脈では、「結晶化」という用語は、タンパク質結晶の形成に関する。結晶化は、例えば、自発的に発生するか、結晶化シードの添加によって開始される。

【0027】

本発明の文脈では、「食用組成物」という用語はヒトの消費及び食品原料としての使用に安全であり、トルエン又は他の望ましくない有機溶媒等の問題のある量の有毒な成分を含まない組成物に関する。

【0028】

本発明の文脈では、「ＡＬＡ」又は「アルファ－ラクトアルブミン」は、哺乳動物種に由来し、例えば、ネイティブ及び／又はグリコシル化された形態であり、天然に存在する遺伝的変異体を含むアルファ－ラクトアルブミンに関する。該用語はさらに、凝集性ＡＬＡ及び沈殿したＢＬＧを含む。ＡＬＡの量に言及する場合、例えば、凝集性ＡＬＡを含むＡＬＡの合計量が言及される。ＡＬＡの総量は、例１．３１に従って決定される。「凝集性ＡＬＡ」という用語は、典型的には少なくとも部分的に折りたたまれておらず、さらに、典型的には疎水性相互作用及び／又は共有結合によって、他の変性ＡＬＡ分子及び／又は他の変性ホエイタンパク質と凝集しているＡＬＡに関する。

【0029】

アルファ－ラクトアルブミン（ＡＬＡ）は、ほとんど全ての哺乳動物種の乳に含まれるタンパク質である。ＡＬＡはラクトースシンターゼ（ＬＳ）ヘテロダイマーの調節サブユニットを形成し、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ（ベータ４Ｇａｌ－Ｔ１）は触媒成分を形成する。一緒に、これらのタンパク質は、ＬＳがガラクトース部分をグルコースに転移することによってラクトースを生成することを可能にする。ベータ－ラクトグロブリンとの主な構造上の違いの１つは、ＡＬＡには共有結合性凝集反応の開始点として機能できる遊離チオール基がないことである。

【0030】

本発明の文脈では、「非凝集性ＡＬＡ」もまた、哺乳動物種に由来し、例えば、ネイティブの、折りたたまれていない及び／又はグリコシル化された形態であり、天然に存在する遺伝的変異体を含むＡＬＡに関する。しかしながら、該用語には、凝集性ＡＬＡ又は沈殿したＡＬＡは含まれない。非凝集性ＢＬＧの量又は濃度は、例１．６に従って決定される。

【0031】

総ＡＬＡに対する非凝集性ＡＬＡのパーセンテージは、計算（ｍ_総ＡＬＡ－ｍ_{非凝集性ＡＬＡ}）／ｍ_総ＡＬＡ＊１００％によって決定される。ｍ_総ＡＬＡは、例１．３１に従って決定されるＡＬＡの濃度又は量であり、ｍ_{非凝集性ＡＬＡ}は、例１．６に従って決定される非凝集性ＡＬＡの濃度又は量である。

【0032】

本発明の文脈では、「カゼイノマクロペプチド」又は「ＣＭＰ」という用語は、例えば、ネイティブ及び／又はグリコシル化された形態であり、アスパラギン酸プロテイナーゼによる天然に存在する遺伝的変異体、例えばキモシを含む、哺乳動物種からの「κ－ＣＮ」又は「カッパーカゼイン」の加水分解に由来する親水性ペプチド、残基１０６～１６９に関する。

【0033】

本発明の文脈では、「ＢＬＧ単離物」という用語は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量の量でＢＬＧを含む組成物を意味する。ＢＬＧ単離物は、好ましくは、全固形分に対して少なくとも３０％重量／重量、好ましくは少なくとも８０％重量／重量の総タンパク質含有量を有する。

【0034】

本発明の文脈では、「ＢＬＧ単離粉末」という用語は、粉末形態のＢＬＧ単離物、好ましくは自由流動性粉末に関する。

【0035】

本発明の文脈では、「ＢＬＧ分離液」という用語は、液体形態、好ましくは水性液体のＢＬＧ単離物に関する。

【0036】

「ホエイ」という用語は、乳のカゼインが沈殿して除去された後に残る液相に関する。カゼインの沈殿は、例えば乳の酸性化及び／又はレンネット酵素の使用によって達成され得る。カゼインのレンネットベースの沈殿によって生成されるホエイ製品である「スイートホエイ」と、カゼインの酸ベースの沈殿によって生成されるホエイ製品である「酸ホエイ」又は「サワーホエイ」等、幾つかのタイプのホエイが存在する。カゼインの酸ベースの沈殿は、例えば、食用酸の添加又は細菌培養によって達成され得る。

【0037】

「乳清」という用語は、例えば、精密濾過又は大孔径限外濾過によってカゼイン及び乳脂肪球が乳から除去されたときに残る液体に関する。乳清は、「理想的なホエイ」と称されることもある。

【0038】

「乳清タンパク質」又は「血清タンパク質」という用語は、乳清中に存在するタンパク質に関する。

【0039】

本発明の文脈では、「ホエイタンパク質」という用語は、ホエイ又は乳清中に見られるタンパク質に関する。ホエイタンパク質は、ホエイ又は乳清に見られるタンパク質種のサブセットである場合、またさらには単一のホエイタンパク質種の場合もあり、又はホエイ又は／及び乳清に見られるタンパク質種の完全なセットである場合がある。

【0040】

本発明の文脈では、スイートホエイに由来する標準的なホエイタンパク質濃縮物の主要な非ＢＬＧタンパク質は、ＡＬＡ、ＣＭＰ、ウシ血清アルブミン、免疫グロブリン、オステオポンチン、ラクトフェリン、及びラクトペルオキシダーゼである。本発明の文脈では、スイートホエイに由来する標準的なホエイタンパク質濃縮物の主な非ＢＬＧホエイタンパク質の重量パーセントは、以下のとおりである：
総タンパク質に対して１８％重量／重量の量のＡＬＡ、
総タンパク質に対して１８％重量／重量の量のＣＭＰ、
総タンパク質に対して４％重量／重量の量のＢＳＡ、
総タンパク質に対して５％重量／重量の量のカゼイン種、
総タンパク質に対して６％重量／重量の量の免疫グロブリン、
総タンパク質に対して０．５％重量／重量の量のオステオポンチン、
総タンパク質に対して０．１％重量／重量の量のラクトフェリン、及び
総タンパク質に対して０．１％重量／重量の量のラクトペルオキシダーゼ。

【0041】

カゼインという用語は、乳に含まれるカゼインタンパク質に関し、個々のカゼイン種である生乳に見られるネイティブミセルカゼインとカゼインの両方を含む。

【0042】

本発明の文脈では、「過飽和」又は「ＢＬＧに関して過飽和」である液体は、所与の物理的及び化学的条件で液体中の非凝集性ＢＬＧの飽和点を超える溶解した非凝集性ＢＬＧの濃度を含む。「過飽和」という用語は、結晶化の分野でよく知られており（例えば、ＧｅｒａｒｄＣｏｑｕｅｒｅｌａ，“Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｙｓｔｅｍｓｆｒｏｍｓｏｌｕｔｉｏｎ：ｐｈａｓｅｄｉａｇｒａｍｓ，ｓｕｐｅｒｓａｔｕｒａｔｉｏｎａｎｄｏｔｈｅｒｂａｓｉｃｃｏｎｃｅｐｔｓ”，ＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙＲｅｖｉｅｗｓ，ｐ．２２８６－２３００，Ｉｓｓｕｅ７，２０１４を参照されたい）、過飽和は、様々な測定手法（例えば、分光法又は粒子径分析）によって決定され得る。本発明の文脈では、ＢＬＧに関する過飽和を、以下の手順によって決定する。

【0043】

特定の条件設定の液体がＢＬＧに関して過飽和であるかどうかを試験する手順：
ａ）試験する液体のサンプル５０ｍｌを、高さ１１５ｍｍ、内径２５ｍｍ、容量５０ｍＬの遠心管（ＶＷＲカタログ番号５２５－０４０２）に移す。工程ａ）～ｈ）の間、サンプル及び後続する画分を液体の元の物理的及び化学的条件に保つように注意する必要がある：
ｂ）サンプルを直ちに３０００ｇで３．０分間、最大３０秒の加速及び最大３０秒の減速で遠心分離する。
ｃ）遠心分離の直後に、上清をできるだけ多く（ペレットが形成された場合にペレットを乱さずに）第２の遠心管（工程ａと同じタイプ）に移す。
ｄ）上清の０．０５ｍＬサブサンプルを採取する（サブサンプルＡ）
ｅ）粒子径が最大２００ミクロンのＢＬＧ結晶１０ｍｇ（全固形分に対して少なくとも９８％純粋、非凝集性ＢＬＧ）を第２の遠心管に加え、混合物を攪拌する。
ｆ）第２の遠心管を元の温度で６０分間放置する。
ｇ）工程ｆ）の直後に、第２の遠心管を５００ｇで１０分間遠心分離し、上清の別の０．０５ｍｌサブサンプル（サブサンプルＢ）を採取する。
ｈ）工程ｇ）の遠心分離ペレットを回収し、存在する場合は、ｍｉｌｌｉＱ水に再懸濁し、顕微鏡で見える結晶の存在について懸濁液を直ちに検査する。
ｉ）例１．６に概説されている方法を使用して、サブサンプルＡ及びＢの非凝集性ＢＬＧの濃度を決定する。結果を、サブサンプルの総重量に対する％ＢＬＧ重量／重量として表す。サブサンプルＡの非凝集性ＢＬＧの濃度はＣ_{ＢＬＧ，Ａ}と称され、サブサンプルＢの非凝集性ＢＬＧの濃度はＣ_{ＢＬＧ，Ｂ}と称される。
ｊ）工程ａ）のサンプルを採取した液体は、Ｃ_{ＢＬＧ，Ｂ}がＣ_{ＢＬＧ，Ａ}よりも低く、且つ工程ｉ）で結晶が観察された場合、（特定の条件で）過飽和であった。

【0044】

本発明の文脈では、「液体」及び「溶液」という用語は、例えば、タンパク質結晶又は他のタンパク質粒子等の粒子状物質を含まない組成物と、液体及び固体及び／又は半固体粒子の組み合わせを含む組成物の両方を包含する。したがって、「液体」又は「溶液」は、懸濁液さらにはスラリーであってもよい。しかしながら、「液体」及び「溶液」は、好ましくはポンプ輸送可能である。

【0045】

本発明の文脈では、「ホエイタンパク質濃縮物」（ＷＰＣ）及び「血清タンパク質濃縮物」（ＳＰＣ）という用語は、全固形分に対してタンパク質の総量が２０～８９％重量／重量である乾燥又は水性組成物に関係する。

【0046】

ＷＰＣ又はＳＰＣには、以下が含まれていることが望ましい：
全固形分に対して２０～８９％重量／重量のタンパク質、
総タンパク質に対して１５～７０％重量／重量のＢＬＧ、
総タンパク質に対して８～５０％重量／重量のＡＬＡ、及び
タンパク質に対して０～４０％重量／重量のＣＭＰ。

【0047】

或いは、しかしまた好ましいことに、ＷＰＣ又はＳＰＣは以下を含み得る：
全固形分に対して２０～８９％重量／重量のタンパク質、
総タンパク質に対して１５～９０％重量／重量のＢＬＧ、
総タンパク質に対して４～５０％重量／重量のＡＬＡ、及び
タンパク質に対して０～４０％重量／重量のＣＭＰ。

【0048】

好ましくは、ＷＰＣ又はＳＰＣは以下を含む：
全固形分に対して２０～８９％重量／重量のタンパク質、
総タンパク質に対して１５～８０％重量／重量のＢＬＧ、
総タンパク質に対して４～５０％重量／重量のＡＬＡ、及び
タンパク質に対して０～４０％重量／重量のＣＭＰ。

【0049】

より好ましくは、ＷＰＣ又はＳＰＣは以下を含む：
全固形分に対して７０～８９％重量／重量のタンパク質、
総タンパク質に対して３０～９０％重量／重量のＢＬＧ、
総タンパク質に対して４～３５％重量／重量のＡＬＡ、及び
タンパク質と比較して０～２５％重量／重量のＣＭＰ。

【0050】

ＳＰＣには典型的には、ＣＭＰが含まれていないか、微量のＣＭＰのみが含まれている。

【0051】

「ホエイタンパク質単離物」（ＷＰＩ）及び「血清タンパク質単離物」（ＳＰＩ）という用語は、全固形分に対して９０～１００％重量／重量のタンパク質の総量を含む乾燥又は水性組成物に関係する。

【0052】

ＷＰＩ又はＳＰＩには、以下が含まれていることが望ましい：
全固形分に対して９０～１００％重量／重量のタンパク質、
総タンパク質に対して１５～７０％重量／重量のＢＬＧ、
総タンパク質に対して８～５０％重量／重量のＡＬＡ、及び
総タンパク質に対して０～４０％重量／重量のＣＭＰ。

【0053】

或いは、しかしまた好ましいことに、ＷＰＩ又はＳＰＩは以下を含み得る：
全固形分に対して９０～１００％重量／重量のタンパク質、
総タンパク質に対して３０～９５％重量／重量のＢＬＧ、
総タンパク質に対して４～３５％重量／重量のＡＬＡ、及び
総タンパク質に対して０～２５％重量／重量のＣＭＰ。

【0054】

より好ましくは、ＷＰＩ又はＳＰＩは以下を含み得る：
全固形分に対して９０～１００％重量／重量のタンパク質、
総タンパク質に対して３０～９０％重量／重量のＢＬＧ、
総タンパク質に対して４～３５％重量／重量のＡＬＡ、及び
総タンパク質に対して０～２５％重量／重量のＣＭＰ。

【0055】

ＳＰＩには典型的には、ＣＭＰが含まれていないか、微量のＣＭＰのみが含まれている。

【0056】

本発明の文脈では、「追加のタンパク質」という用語は、ＢＬＧではないタンパク質を意味する。ホエイタンパク質溶液に存在する追加のタンパク質は、典型的には、乳清又はホエイに見られる非ＢＬＧタンパク質の１つ又は２つ以上を含む。かかるタンパク質の非限定的な例は、アルファ－ラクトアルブミン、ウシ血清アルブミン、免疫グロブリン、カゼイノマクロペプチド（ＣＭＰ）、オステオポンチン、ラクトフェリン、及び乳脂肪球膜タンパク質である。

【0057】

「本質的にからなる」及び「本質的にからなっている」という用語は、問題の請求項又は特徴が、特定の材料又は工程、及び特許請求の範囲に記載された発明の基本的及び新規の特性（複数の場合がある）に実質的に影響を与えないものを包含することを意味する。

【0058】

本発明の文脈では、「Ｙ及び／又はＸ」という句は、「Ｙ」又は「Ｘ」又は「Ｙ及びＸ」を意味する。同じ論理に沿って、「ｎ_１、ｎ_２、…、ｎ_ｉ－１、及び／又はｎ_ｉ」という句は、「ｎ_１」又は「ｎ_２」又は…又は「ｎ_ｉ－１」若しくは「ｎ_ｉ」、又は成分の任意の組み合わせ：ｎ_１、ｎ_２、…ｎ_ｉ－１、及びｎ_ｉを意味する。

【0059】

本発明の文脈では、「乾燥する」又は「乾燥した」という用語は、問題の組成物又は生成物が、最大１０％重量／重量の水、好ましくは最大６％重量／重量、より好ましくはさらに少ない水を含むことを意味する。

【0060】

本発明の文脈では、「物理的微生物減少」という用語は、組成物の生存可能な微生物の総量の減少をもたらす組成物との物理的相互作用に関する。該用語は、微生物を死滅させる結果となる化学物質の添加を含まない。該用語はさらに、噴霧乾燥中に噴霧された液滴がさらされる熱曝露を含まないが、噴霧乾燥前の可能な予熱を含む。

【0061】

本発明の文脈では、粉末のｐＨは、９０ｇの脱塩水に混合した１０ｇの粉末のｐＨを指し、例１．１６に従って測定される。

【0062】

本発明の文脈では、特定の組成物の成分、製品、又は材料の重量パーセント（％重量／重量）は、別の基準が具体的に言及されていない限り（例えば、全固形分又は総タンパク質）、特定の組成物、製品、又は材料の重量に対するその成分の重量パーセントを意味する。

【0063】

本発明の文脈では、プロセスの工程である「濃縮」及び動詞「濃縮する」は、タンパク質の濃度に関するものであり、全固形分ベースのタンパク質の濃度及び総重量ベースのタンパク質の濃度の両方を包含する。これは、例えばその濃度は、タンパク質の含有量が全固形分に対して増加する限り、組成物のタンパク質の絶対濃度重量／重量が増加することを必ずしも必要としない。

【0064】

本発明の文脈では、成分Ｘと成分Ｙとの間の「重量比」という用語は、計算ｍ_Ｘ／ｍ_Ｙによって得られる値を意味し、式中、ｍ_Ｘは、成分Ｘの量（重量）であり、ｍ_Ｙは、成分Ｙの量（重量）である。

【0065】

本発明の文脈では、「少なくとも低温殺菌」という用語は、７０℃で１０秒間の熱処理以上の微生物死滅効果を有する熱処理に関する。殺菌効果を決定するための基準は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｏ１５７：Ｈ７である。

【0066】

本発明の文脈では、「ホエイタンパク質フィード」という用語は、液体ＢＬＧ単離物が由来するホエイタンパク質源に関する。ホエイタンパク質フィードは、液体ＢＬＧ単離物よりも総タンパク質に比べてＢＬＧの含有量が少なく、典型的にはＷＰＣ、ＷＰＩ、ＳＰＣ、又はＳＰＩである。

【0067】

本発明の文脈では、「ＢＬＧ濃縮組成物」という用語は、ホエイタンパク質フィードからＢＬＧを単離することから生じるＢＬＧ濃縮組成物に関する。ＢＬＧ濃縮組成物は、典型的には、ホエイタンパク質フィードと同じホエイタンパク質を含むが、ＢＬＧは、ホエイタンパク質フィードよりも総タンパク質に対して有意に高い濃度で存在する。ＢＬＧ濃縮組成物は、例えば、クロマトグラフィー、タンパク質結晶化及び／又は膜ベースのタンパク質分画によってホエイタンパク質フィードから調製される。ＢＬＧ濃縮組成物は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量の量のＢＬＧを含む。場合によっては、ＢＬＧ濃縮組成物を液体ＢＬＧ単離物として直接使用することができる。ただし、ＢＬＧが豊富な組成物を液体ＢＬＧ単離物に変換するには、多くの場合、追加の処理が必要である。

【0068】

本発明の文脈では、「ホエイタンパク質溶液」という用語は、塩溶様式でＢＬＧに関して過飽和であり、ＢＬＧ結晶を調製するのに有用である特殊な水性ホエイタンパク質組成物を説明するために使用される。

【0069】

本発明の文脈では、「滅菌」という用語は、問題の滅菌組成物、又は製品が生存可能な微生物を含まず、したがって、室温での貯蔵中に微生物の増殖がないことを意味する。滅菌された組成物は無菌である。

【0070】

飲料調製物等の液体を滅菌し、滅菌容器に無菌的に包装する場合、典型的には、室温で少なくとも６ヵ月の貯蔵寿命がある。滅菌処理は、液体の腐敗を引き起こす可能性のある胞子及び微生物を死滅させる。

【0071】

本発明の文脈では、「エネルギー含量」という用語は、食品に含まれるエネルギーの総含有量を意味する。エネルギー含量は、キロジュール（ｋＪ）又はキロカロリー（ｋｃａｌ）で測定でき、食品の量あたりのカロリー、例えば、食品１００グラムあたりのｋｃａｌと称される。一例は、３５０ｋｃａｌ／１００グラムのインスタント飲料粉末のエネルギー含量を有するインスタント飲料粉末である。

【0072】

食品の総エネルギー含量には、食品に存在する全ての多量栄養素、例えばタンパク質、脂質、及び炭水化物からのエネルギーからのエネルギー寄与が含まれる。食品中の多量栄養素からのエネルギーの分布は、食品中の多量栄養素の量、及び食品中の総エネルギー含量に対する多量栄養素の寄与に基づいて計算できる。エネルギー分布は、食品の総エネルギー含量のエネルギーパーセント（Ｅ％）として表すことができる。例えば、タンパク質２０Ｅ％、炭水化物５０Ｅ％、脂質３０Ｅ％を含むインスタント飲料粉末の場合、これは、総エネルギーの２０％がタンパク質に由来し、総エネルギーの５０％が炭水化物に由来し、３０％が総エネルギーは脂肪（脂質）に由来する。

【0073】

本発明の文脈では、「栄養補助食品」という用語は、タンパク質、脂質及び／又は炭水化物等の１つ又は２つ以上の多量栄養素を含み、任意にビタミン及びミネラルを含む食品に関する。栄養補助食品は、完全なもの又は不完全なもののいずれでもよい。

【0074】

「栄養的に完全な栄養補助食品」という用語は、タンパク質、脂質、炭水化物を含み、さらにビタミン、ミネラル、微量元素を含む食品を意味し、該食品は完全で健康的な食事に一致する栄養プロファイルを有する。

【0075】

「栄養的に不完全なサプリメント」という用語は、１つ又は２つ以上の多量栄養素を含み、任意に、さらにビタミン、ミネラル、及び微量元素を含む食品を意味する。不完全な栄養補助食品は、唯一の栄養素としてタンパク質を含む場合もあり、又はタンパク質、脂質、及び炭水化物を含む場合もある。

【0076】

「特別な医療目的の食品（ＦＳＭＰ：ｆｏｏｄｆｏｒｓｐｅｃｉａｌｍｅｄｉｃａｌｐｕｒｐｏｓｅｓ）」又は「医療食品」という用語は、経口摂取又は経管栄養用の食品であり、特有の栄養要求がある特定の医学的障害、疾患、又は状態に対して使用され、また医学的管理下で使用される。医療食品は、栄養的に完全なサプリメントであってもよく、又は栄養的に不完全なサプリメントであってもよい。

【0077】

「栄養素」という用語は、生物が生き残り、成長し、繁殖するために使用する物質を意味する。栄養素は、多量栄養素又は微量栄養素のいずれかである。多量栄養素は、消費されたときにエネルギーを提供する栄養素、例えば、タンパク質、脂質、炭水化物である。微量栄養素は栄養素であり、ビタミン、ミネラル、微量元素である。

【0078】

「インスタント飲料粉末」又は「インスタント飲料粉末製品」という用語は、水等の液体の添加によって液体飲料に変換することができる粉末を意味する。

【0079】

本発明の文脈では、実質的に使用される「飲料調製物」及び「調製物」という用語は、例えば、注ぐ、すする、又は経管栄養によって飲料として摂取することができる任意の水ベースの液体に関する。

【0080】

本発明の文脈では、「タンパク質画分」という用語は、問題の組成物のタンパク質、例えば、タンパク質の粉末又は飲料製剤のタンパク質に関する。

【0081】

本発明の文脈では、「渋味」という用語は、口当たりに関する。渋味は頬の筋肉の収縮のように感じ、唾液の産生を増加させる。したがって、渋味は、それ自体が味ではなく、口の中での物理的な口当たり及び時間依存性の感覚である。

【0082】

本発明の文脈では、「乾いた口当たり」という用語は、口の中の感触に関し、口及び歯の乾燥しているように感じ、唾液生成が最小限に抑えられる。したがって、乾いた口当たりは、それ自体が味ではなく、口の中での物理的な口当たり及び時間依存性の感覚である。

【0083】

本発明の文脈では、本明細書で使用される「ミネラル」という用語は、別段の指定がない限り、主要なミネラル、微量又は少数のミネラル、他のミネラル、及びそれらの組み合わせのいずれか１つを指す。主なミネラルとしては、カルシウム、リン、カリウム、硫黄、ナトリウム、塩素、マグネシウムが挙げられる。微量又は少数のミネラルとしては、鉄、コバルト、銅、亜鉛、モリブデン、ヨウ素、セレン、マンガンが挙げられ、その他のミネラルとしては、クロム、フッ素、ホウ素、リチウム、及びストロンチウムが挙げられる。

【0084】

本発明の文脈では、本明細書で使用される「脂質」、「脂肪」、及び「油」という用語は、別段の指定がない限り、植物若しくは動物に由来するか、又はそれらから加工される脂質材料を指すために同じ意味で使用される。これらの用語には、合成脂質材料がヒトの消費に適している限り、そのような合成脂質材料も含まれる。

【0085】

本発明の文脈では、「透明」という用語は、視覚的に透明な外観を有し、光を通し、それを通して明瞭な画像が現れる飲料調製物を包含する。透明な飲料の濁度は最大２００ＮＴＵである。

【0086】

本発明の文脈では、「不透明」という用語は、目に見えて不明瞭な外観を有する飲料調製物を包含し、それは２００ＮＴＵを超える濁度を有する。

【0087】

本発明の文脈では、「母液」という用語は、ＢＬＧが結晶化され、ＢＬＧ結晶が少なくとも部分的に除去された後に残るホエイタンパク質溶液に関する。母液にはまだ幾つかのＢＬＧ結晶が含まれている可能性があるが、通常は分離を免れた小さなＢＬＧ結晶のみが含まれている。

【0088】

【発明を実施するための形態】

【0089】

栄養補助食品の全体的な概念は、消費者によって認められている。栄養補助食品は、味と外観が食欲をそそるものでなくてはならず、そうでなければ、消費者によって拒絶される。さらに、消費者は添加物を含まない天然製品を高く評価している。消費者にとって重要なさらなるパラメーターは、製品の貯蔵寿命である。

【0090】

本発明の態様は、少なくとも１％重量／重量、好ましくは少なくとも５％のＢＬＧを含むインスタント飲料粉末であって、
ｉ．ＢＬＧの結晶化度が少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％であり、及び／又は
ｉｉ．タンパク質の総量の少なくとも８５％重量／重量がＢＬＧで構成され、
さらに、ビタミン、香味料、着色剤、ミネラル、甘味料、抗酸化剤、食用酸、脂質、炭水化物、プレバイオティクス、プロバイオティクス、消泡剤、及び非ホエイタンパク質からなる群から選択される少なくとも１つの追加の原料を含む、インスタント飲料粉末に関する。

【0091】

インスタント飲料粉末に使用されるＢＬＧ源は、本特許出願に記載されているように、ＢＬＧ単離物又はＢＬＧ単離粉末であり得る。本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ源は、インスタント飲料粉末の総タンパク質の少なくとも９０％重量／重量、より好ましくは少なくとも９５％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９８％重量／重量に寄与し、最も好ましくはインスタント飲料粉末の全てのタンパク質に寄与していることである。

【0092】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ源は、ＢＬＧ単離粉末であり、それは、インスタント飲料粉末中の唯一のタンパク質源である。

【0093】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、ＢＬＧ単離粉末及び他の原料をドライブレンドすることによって調製される。

【0094】

本発明の他の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、溶解形態の少なくとも１つの原料を使用し、続いて乾燥工程を行うことによって調製される。乾燥工程は、例えば、湿式造粒プロセス又は噴霧乾燥工程の一部を形成する。

【0095】

本発明のインスタント飲料粉末のＢＬＧは、好ましくは、変性度が低く、例えば、最大１０％、好ましくは最大４％、より好ましくは最大１％、さらにより好ましくは最大０．４％、さらにより好ましくは最大０．１％である。最も好ましくは、ＢＬＧは全く変性されていない。インスタント飲料粉末の場合、液体と混合したときに泡立つ傾向が減少するため、ＢＬＧの変性度が低いことが有利である。

【0096】

インスタント飲料粉末は、好ましくは、最大１０％、好ましくは最大４％、より好ましくは最大１％、さらにより好ましくは最大０．４％、さらにより好ましくは最大０．１％のタンパク質変性度を有する。最も好ましくは、タンパク質は全く変性されていない。

【0097】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、１～９０％重量／重量のＢＬＧを含む。本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、３０～９０％重量／重量のＢＬＧ、より好ましくは４０～９０％重量／重量の範囲のＢＬＧ、又はさらにより好ましくは５０～９０％重量／重量の範囲のＢＬＧを含む。

【0098】

本発明の他の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、１０～９７％重量／重量のＢＬＧを含む。本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、３０～９６％重量／重量のＢＬＧ、より好ましくは４０～９５％重量／重量の範囲のＢＬＧ、又はさらにより好ましくは５０～９４％重量／重量の範囲のＢＬＧを含む。

【0099】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、１～５０％重量／重量のＢＬＧを含む。本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、２～４５％重量／重量のＢＬＧ、より好ましくは３～４０％重量／重量の範囲のＢＬＧ、又はさらにより好ましくは３～３５％重量／重量の範囲のＢＬＧを含む。

【0100】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、ＢＬＧをタンパク質の総量の少なくとも８５％重量／重量を含む。

【0101】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、例えば、総タンパク質に対して少なくとも８６％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも８７％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも８８％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも８９％重量／重量のＢＬＧを含む。

【0102】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも９１％重量／重量のＢＬＧ、例えば、総タンパク質に対して少なくとも９２％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９３％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９４％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９５％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９６％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９７％重量／重量のＢＬＧ、総タンパク質に対して少なくとも９８％重量／重量のＢＬＧ、又は総タンパク質に対して少なくとも９９％重量／重量のＢＬＧを含む。

【0103】

本発明のインスタント飲料粉末の幾つかの好ましい実施形態では、タンパク質の少なくとも８５％重量／重量はＢＬＧである。好ましくは、タンパク質の少なくとも８８％重量／重量はＢＬＧであり、より好ましくは少なくとも９０％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９１％重量／重量、最も好ましくは少なくとも９２％重量／重量のタンパク質がＢＬＧである。

【0104】

さらに高い相対量のＢＬＧが実現可能且つ望ましいことから、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のタンパク質の少なくとも９４％重量／重量がＢＬＧであり、より好ましくは、タンパク質の少なくとも９６％重量／重量がＢＬＧであり、さらにより好ましくはタンパク質の少なくとも９８％重量／重量がＢＬＧであり、最も好ましくタンパク質のおよそ１００％重量／重量がＢＬＧである。

【0105】

例えば、インスタント飲料粉末は、好ましくは、総タンパク質に対して、少なくとも９７．５％重量／重量、好ましくは少なくとも９８．０％重量／重量、より好ましくは少なくとも９８．５％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９９．０％の量のＢＬＧ、最も好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９９．５％重量／重量、例えば総タンパク質に対しておよそ１００．０％の量のＢＬＧを含む。

【0106】

インスタント飲料粉末のタンパク質は、好ましくは哺乳動物の乳から、好ましくは反芻動物、例えばウシ、ヒツジ、ヤギ、スイギュウ、ラクダ、ラマ、ウマ及び／又はシカの乳から調製される。ウシの乳由来のタンパク質が特に好ましい。したがって、インスタント飲料粉末のタンパク質は、好ましくは牛乳のタンパク質である。

【0107】

インスタント飲料粉末のタンパク質は、好ましくはホエイタンパク質又は乳清タンパク質であり、さらにより好ましくはウシのホエイタンパク質又は乳清タンパク質である。

【0108】

固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０ｎｍ／Ｉ３５０ｎｍ）は、ＢＬＧのアンフォールディングの程度の尺度であり、本発明者らは、高いＢＬＧトリプトファン蛍光発光比は、ＢＬＧのアンフォールディングが低いか全くないことと相関することを見出し、固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０ｎｍ／Ｉ３５０ｎｍ）は例１．１に従って測定される。

【0109】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、少なくとも１．１１の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０ｎｍ／Ｉ３５０ｎｍ）を有する。

【0110】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、少なくとも１．１２、好ましくは少なくとも１．１３、より好ましくは少なくとも１．１５、さらにより好ましくは少なくとも１．１７、及び最も好ましくは少なくとも１．１９の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０ｎｍ／Ｉ３５０ｎｍ）を有する。

【0111】

インスタント飲料粉末にかなりの量の非タンパク質物質が含まれている場合は、固有トリプトファン蛍光発光比を測定する前にタンパク質画分を単離することが好ましい。そのため、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のタンパク質画分は、少なくとも１．１１の固有トリプトファン蛍光発光比を有する。

【0112】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のタンパク質画分は、少なくとも１．１２、好ましくは少なくとも１．１３、より好ましくは少なくとも１．１５、さらにより好ましくは少なくとも１．１７、及び最も好ましくは少なくとも１．１９の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０ｎｍ／Ｉ３５０ｎｍ）を有する。

【0113】

例えば、インスタント飲料粉末を脱塩水に溶解し、タンパク質を保持するフィルターを使用して溶液を透析又は限外濾過ベースの透析に供することにより、インスタント飲料粉末からタンパク質画分を分離する。

【0114】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のＢＬＧの結晶化度は、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも６０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％である。ＢＬＧの結晶化度が少なくとも２０％であるということは、インスタント飲料粉末に乾燥したＢＬＧ結晶の形態でかなりの量のＢＬＧが存在することを意味する。

【0115】

本発明者らは、タンパク質が従来のＷＰＩよりも高密度の形態で存在することを意味するのため、少なくとも２０％のＢＬＧの結晶化度が有利であることを見出した。これにより、インスタント飲料粉末の全体的なかさ密度が高くなり、粉っぽさが少なくなり、エンドユーザーの取り扱いが容易になる。本発明者らはまた、例えば、タンパク質粉末に加えて、炭水化物粉末及び／又は食用酸粉末を含む、ドライブレンドされたインスタント飲料粉末における粒子分離の傾向が減少していることを観察した。

【0116】

本発明は、甘味と高タンパク質含有量の両方を有する低炭水化物インスタント飲料粉末を提供することを可能にする。

【0117】

したがって、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、以下を含む：
－３２０～３８０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲、好ましくは３５０～３７０ｋｃａｌ／１００グラムの範囲のエネルギー含量、
－９０～１００Ｅ％の範囲、好ましくは９５～１００Ｅ％の範囲のタンパク質からのエネルギーの寄与、
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量、より好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９４％重量／重量の量のＢＬＧ
－０～１０Ｅ％の範囲、好ましくは０～５Ｅ％の範囲の炭水化物からのエネルギーの寄与、
－０．０１～４％重量／重量の範囲、好ましくは０．０５～３％の範囲の高甘味度甘味料の総量
－少なくとも０．４５ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、より好ましくは少なくとも０．６ｇ／ｍＬのかさ密度を有する。

【0118】

インスタント飲料粉末のタンパク質は、好ましくは、ｉ）２～４．９、ｉｉ）６．１～８．５、又はｉｉｉ）５．０～６．０の範囲のｐＨを有し、以下：
－少なくとも９０％重量／重量、好ましくは少なくとも９５％重量／重量の量の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量、より好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９４％重量／重量の量のＢＬＧ、を含むＢＬＧ単離粉末によって提供され、
当該ＢＬＧ単離粉末は以下：
－少なくとも０．４５ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、より好ましくは少なくとも０．６ｇ／ｍＬのかさ密度、並びに
－以下の１つ又は２つ以上：
－少なくとも１．１１、好ましくは少なくとも１．１３、より好ましくは少なくとも１．１５の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）
－最大１０％、好ましくは少なくとも５％のタンパク質変性度
－ｐＨ３．９で最大２００ＮＴＵの熱安定性、及び
－最大１０００コロニー形成単位／ｇ、を有する。

【0119】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、ビタミン、香味料、着色剤、ミネラル、甘味料、抗酸化剤、食用酸、脂質、炭水化物、プレバイオティクス、プロバイオティクス、及び非ホエイタンパク質からなる群から選択される少なくとも１つの追加の原料をさらに含む。

【0120】

さらなる原料は、インスタント飲料粉末が所望の栄養素、すなわち、栄養失調のある患者又は栄養失調のリスクのある患者、腎臓病に苦しむ患者、体重増加のために特に適合された栄養素を含むことを保証するか、又は例えばスポーツマン若しくはアスリートにより栄養補助食品として使用され得る。

【0121】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、ビタミンＡ、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ９（葉酸）、及びビタミンＢ１２（コバラミン）、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、コリン、イノシトール、それらの塩、それらの誘導体及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるビタミンを含み得る。

【0122】

一実施形態では、インスタント飲料粉末は、塩、香味料、調味料及び／又は香辛料からなる群から選択される香味料を含み得る。本発明の好ましい実施形態では、フレーバーは、チョコレート、ココア、レモン、オレンジ、ライム、ストロベリー、バナナ、フォレストフルーツフレーバー又はそれらの組み合わせを含む。

【0123】

一実施形態では、インスタント飲料粉末は、ホウ素、カルシウム、クロム、銅、ヨウ素、鉄、マグネシウム、マンガン、モリブデン、ニッケル、リン、カリウム、ナトリウム、セレン、シリコン、スズ、バナジウム、亜鉛、又はそれらの組み合わせからなる群から選択されるミネラルを含み得る。

【0124】

インスタント飲料粉末はさらに、ホエイ又は乳由来の製品に典型的に存在する塩及びミネラルを含み得る。インスタント飲料粉末のミネラル含量は、典型的には、食品原料又は製品の灰分として表される。好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、ベータカロチン、ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレン、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される抗酸化剤を含み得る。

【0125】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、炭水化物甘味料、ポリオール及び／又は高甘味度甘味料等の１つ又は２つ以上の甘味料を含み得る。インスタント飲料粉末は、例えば、インスタント飲料粉末の総重量に対して０．００１～２０％重量／重量の範囲の炭水化物甘味料の総量を含み得る。或いは、インスタント飲料粉末は、食品の総重量に対して０．１～１５％重量／重量の範囲の炭水化物甘味料の総量を含み得る。

【0126】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、少なくとも１つの高甘味度甘味料を含む。一実施形態では、少なくとも１つの高甘味度甘味料は、アスパルテーム、シクラメート、スクラロース、アセスルファム塩、ネオテーム、サッカリン、ステビア抽出物、レバウジオシドＡ等のステビオールグリコシド、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。本発明の幾つかの実施形態では、甘味料は、１つ又は２つ以上の高甘味度甘味料（ＨＩＳ）を含むか、さらにはそれらからなることが特に好ましい。

【0127】

高甘味度甘味料は、天然甘味料と人工甘味料の両方に見られ、典型的には、ショ糖の少なくとも１０倍の甘味度を持っている。

【0128】

使用する場合、高甘味度甘味料の総量は、典型的には、０．０１～４％重量／重量の範囲である。例えば、高甘味度甘味料の総量は、０．０５～３％重量／重量の範囲であり得る。或いは、高甘味度甘味料の総量は、０．１～２．０％重量／重量の範囲であり得る。

【0129】

甘味料の選択は、製造される飲料、及び製品の消費者に依存し得て、例えば、患者の具体的な診断に合わせて調整され得る。高甘味度の砂糖甘味料（アスパルテーム、アセトスルファム－Ｋ、スクラロース等）は、甘味料からのエネルギーの寄与が望まれない飲料に使用され得るが、天然プロファイルを有する飲料の場合は、天然甘味料（ステビオールグリコシド、ソルビトール、スクロース等）が使用され得る。

【0130】

さらに、甘味料は、１つ又は２つ以上のポリオール甘味料を含むか、さらにはそれらからなることが好ましい場合がある。有用なポリオール甘味料の非限定的な例は、マルチトール、マンニトール、ラクチトール、ソルビトール、イノシトール、キシリトール、トレイトール、ガラクチトール又はそれらの組み合わせである。使用する場合、ポリオール甘味料の総量は、典型的には、１～４０％重量／重量の範囲である。例えば、ポリオール甘味料の総量は、２～３０％重量／重量の範囲であり得る。或いは、ポリオール甘味料の総量は、４～２０％重量／重量の範囲であり得る。

【0131】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、以下の１つ又は２つ以上を含み得る：
ｉ．甘味料、例：砂糖甘味料及び／又は非砂糖甘味料、
ｉｉ．香味料、
ｉｉｉ．少なくとも１つの食用酸、例えばクエン酸又は他の適切な食用酸、
ｉｖ．インスタント飲料のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計は、最大１０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質であり、
ここで、脱塩水中の粉末の１０％重量／重量溶液は、２～８の範囲のｐＨを有する。

【0132】

インスタント飲料粉末のｐＨは、例１．１６に記載されているように、室温で９０ｍｌの脱塩水に１０グラムのインスタント飲料粉末を溶解することによって測定することができる。

【0133】

本発明者らは、例えば、腎臓病の患者に特に有用なインスタント飲料粉末の場合、インスタント飲料粉末に低リン／低カリウムＢＬＧ単離粉末を使用することが有利であることを見出した。

【0134】

甘味料、香味料、及び／又は食用酸を添加することにより、インスタント飲料粉末が消費者にアピールするように製品の味を設計することができる。本発明の一実施形態では、消費者は患者であり得て、インスタント飲料粉末のフレーバー、甘味料、及び酸性プロファイルが該患者のニーズ及び診断に適合するように調整される。

【0135】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、高甘味度甘味料及び香味料を含み得る。本発明のさらにより好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、０．００１～０．０５％重量／重量のスクラロース、及び０．０１～０．２％重量／重量、並びにチョコレート、ココア、レモン、オレンジ、ライム、イチゴ、バナナ、フォレストフルーツフレーバー又はそれらの組み合わせから選択されるフレーバーを含む。

【0136】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、消泡剤を含む。消泡剤は、食品に適した消泡剤から選択することができる。消泡剤は、油系消泡剤、水系消泡剤、シリコーン系消泡剤、ＥＰ／ＰＯ系消泡剤、又はそれらの組み合わせから選択され得る。

【0137】

インスタント飲料粉末の含水量は最大６％重量／重量である。本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、最大５％重量／重量の水、好ましくは最大４％重量／重量の水、より好ましくは最大３％重量／重量の水、さらにより好ましくは最大２％重量／重量の水を含む。

【0138】

インスタント飲料粉末の貯蔵安定性は、粉末の含水量を下げると高められる可能性がある。

【0139】

本発明者らは、インスタント飲料粉末の一部の所望の特性に到達ようにミネラル含量を制御することが有利であり得ることを見出した。

【0140】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計は、最大１０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。好ましくは、インスタント飲料粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計は、最大６ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、より好ましくは最大４ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、さらにより好ましくは最大２ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0141】

本発明の他の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計は、最大１ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。好ましくは、インスタント飲料粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計は、最大０．６ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、より好ましくは最大０．４ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、さらにより好ましくは最大０．２ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、最も好ましくは最大０．１ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0142】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、例えば、ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４５５３号明細書に記載されている１つ又は２つ以上の方法で入手可能な乾燥ＢＬＧ結晶を含む。ＢＬＧ結晶を含むインスタント飲料粉末は、少なくとも０．３０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．４ｇ／ｍＬのかさ密度を有し得る。

【0143】

本発明者らは、ＢＬＧの少なくとも一部が結晶形態にあるインスタント飲料粉末は、ＢＬＧ結晶を含まない同等のインスタントＢＬＧ組成物よりも高密度であることを観察した。したがって、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、少なくとも０．３０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．４０ｇ／ｍＬのかさ密度を有する。好ましくは、インスタント飲料粉末は、少なくとも０．４５ｇ／ｍＬのかさ密度を有する。より好ましくは、インスタント飲料粉末は、少なくとも０．５０ｇ／ｍＬのかさ密度を有する。インスタント飲料粉末が少なくとも０．６ｇ／ｍＬのかさ密度を有することがさらにより好ましい。インスタント飲料粉末は、例えば、少なくとも０．７ｇ／ｍＬのかさ密度を有し得る。

【0144】

本発明のインスタント飲料粉末は、好ましくは、０．３～１．０ｇ／ｍＬの範囲、好ましくは０．４０～０．９ｇ／ｍＬの範囲、より好ましくは０．４５～０．８ｇ／ｍＬの範囲、さらにより好ましくは０．４５～０．７５ｇ／ｍＬの範囲、さらにより好ましくは０．５０～０．７５ｇ／ｍＬの範囲、最も好ましくは０．６～０．７５ｇ／ｍＬの範囲のかさ密度を有する。

【0145】

粉末のかさ密度は、例１．１７に従って測定することができる。

【0146】

本発明のインスタント飲料粉末中の総タンパク質含有量及びエネルギー含量は、インスタント飲料粉末の使用目的に依存する。インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、２００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲である。

【0147】

インスタント飲料粉末の場合、タンパク質からのエネルギーの寄与は、少なくとも７Ｅ％、好ましくは少なくとも２５Ｅ％、より好ましくは少なくとも３０Ｅ％、さらにより好ましくは少なくとも４０Ｅ％であり得る。

【0148】

本発明の好ましい実施形態では、タンパク質からのエネルギーの寄与は、１０～３０Ｅ％の範囲、好ましくは１０～１５Ｅ％の範囲、さらにより好ましくは１１Ｅ％である。或いは、タンパク質からのエネルギーの寄与は、１５～２５Ｅ％の範囲、好ましくは１８～２２Ｅ％の範囲である。

【0149】

本発明の好ましい実施形態では、タンパク質からのエネルギーの寄与は、７～２５Ｅ％の範囲、好ましくは１０～２５Ｅ％の範囲、より好ましくは１５～２０Ｅ％であるか、又はさらにより好ましくはインスタント飲料粉末には、タンパク質から１５Ｅ％若しくはタンパク質から２０Ｅ％のエネルギーが含まれているか、又はタンパク質からのエネルギーの寄与は８～１５Ｅ％の範囲である。

【0150】

本発明の別の好ましい実施形態では、タンパク質からのエネルギーの寄与は、少なくとも５０Ｅ％、好ましくは少なくとも６０Ｅ％又は少なくとも７０Ｅ％、又はさらにより好ましいのは少なくとも８０Ｅ％である。本発明の好ましい実施形態では、タンパク質からのエネルギーの寄与は、８０～１００Ｅ％の範囲、好ましくは９０～１００Ｅ％の範囲、又はさらにより好ましくは９５～１００Ｅ％の範囲である。

【0151】

本発明の好ましい実施形態では、タンパク質からのエネルギーの寄与は、３０～８０Ｅ％の範囲、好ましくは６０～８０Ｅ％の範囲である。本発明の別の実施形態では、タンパク質からのエネルギーの寄与は、３０～４０Ｅ％の範囲であり、さらにより好ましくは、インスタント飲料粉末は、タンパク質から３３Ｅ％を含む。

【0152】

インスタント飲料粉末は、例えば、栄養失調のある若しくは栄養失調のリスクのある患者の処置、腎臓病に苦しむ患者に対して、又は体重増加のために栄養補助食品として使用され得るか、又は運動前、運動中若しくは運動後にスポーツマン若しくはアスリートにより栄養補助食品として使用され得る。

【0153】

本発明のインスタント飲料粉末は、タンパク質以外の多量栄養素を含み得る。インスタント飲料粉末は、タンパク質に加えて炭水化物及び／又は脂質を含むことができる。本発明のインスタント飲料粉末中の総脂質含有量は、インスタント飲料粉末の使用目的に依存する。本発明の一実施形態では、脂質からのエネルギーの寄与は、０～６０Ｅ％の範囲である。

【0154】

本発明の好ましい実施形態では、脂質からのエネルギーの寄与は、０～５Ｅ％の範囲で、好ましくは０～２Ｅ％の範囲であるか、又はより好ましいのは脂質から０～３Ｅ％の範囲である。

【0155】

さらに脂質が少ないことが好ましい場合があり、そのため本発明の好ましい実施形態では、脂質からのエネルギーの寄与は、０～１Ｅ％の範囲で、好ましくは０～０．１Ｅ％の範囲であるか、又はより好ましいのは脂質から０～０．０１Ｅ％の範囲である。

【0156】

本発明の好ましい実施形態では、脂質からのエネルギーの寄与は、３０～６０Ｅ％の範囲、好ましくは３０～５０Ｅ％の範囲であり、又はさらにより好ましくは、インスタント飲料粉末は脂質から３５Ｅ％、脂質から４５Ｅ％又は脂質から５０Ｅ％を含む。或いは、脂質からのエネルギーの寄与は２５～４５Ｅ％の範囲である。

【0157】

本発明の好ましい実施形態では、脂質からのエネルギーの寄与は、１５～２０Ｅ％の範囲、好ましくは１６～１８Ｅ％の範囲であり、又はさらにより好ましくは、インスタント飲料粉末は脂質から１６Ｅ％を含む。

【0158】

【0159】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、タンパク質に加えて炭水化物を含み得る。インスタント飲料粉末の総エネルギーに対する炭水化物のエネルギー寄与は、０～９０Ｅ％の範囲であり得る。

【0160】

炭水化物は、糖、オリゴ糖又は多糖から選択することができる。糖の例は、単糖、二糖、及びポリオールである。オリゴ糖の例は、マルトデキストリン等のマルトオリゴ糖、又はラフィノース、スタキオース、又はフラクトオリゴ糖等の他のオリゴ糖である。多糖類の例は、アミロース、アミロペクチン、又は加工デンプン等のデンプン、及び食物繊維、セルロース、ペクチン、及び親水コロイド等の非デンプン多糖類である。本発明の好ましい実施形態では、炭水化物は、マルトデキストリン、サッカロース又はグルコースシロップから選択される。

【0161】

本発明のインスタント飲料粉末中の炭水化物含有量は、インスタント飲料粉末の使用目的に依存する。スポーツマン又はアスリートに使用されるインスタント飲料粉末の場合、スポーツマンの即時エネルギーを高めるために砂糖の形態で炭水化物を添加するか、満腹感を長引かせるために遅い（ｓｌｏｗ）炭水化物の形態で炭水化物又は食物繊維を添加することができる。

【0162】

本発明の好ましい実施形態では、炭水化物からのエネルギーの寄与は、７０～９０Ｅ％の範囲、好ましくは７５～８５Ｅ％の範囲であり、又はより好ましくは、インスタント飲料粉末は、８９Ｅ％の炭水化物を含む。

【0163】

本発明の好ましい実施形態では、炭水化物からのエネルギーの寄与は、３０～５０Ｅ％の範囲、好ましくは３５～４５Ｅ％の範囲であり、又はさらにより好ましくは、インスタント飲料粉末は、炭水化物から３５Ｅ％、炭水化物から４５Ｅ％若しくは炭水化物から５０Ｅ％を含む。或いは、炭水化物からのエネルギーの寄与は、４５～５５Ｅ％の範囲等、４０～６０Ｅ％の範囲である。

【0164】

本発明の別の好ましい実施形態では、炭水化物からのエネルギーの寄与は、０～２０Ｅ％の範囲である。本発明の好ましい実施形態では、炭水化物からのエネルギーの寄与は、０～１０Ｅ％の範囲、好ましくは０～５Ｅ％の範囲である。

【0165】

本発明のさらに好ましい実施形態では、炭水化物からのエネルギーの寄与は、０～４Ｅ％、より好ましくは０～１Ｅ％、さらにより好ましくは０～０．２Ｅ％の範囲である。

【0166】

本発明の別の好ましい実施形態では、炭水化物からのエネルギーの寄与は、３～２０Ｅ％の範囲である。本発明の好ましい実施形態では、炭水化物からのエネルギーの寄与は４～１５Ｅ％の範囲である。本発明の別の実施形態では、炭水化物からのエネルギーの寄与は、４５～５５Ｅ％の範囲である。

【0167】

【0168】

本発明のインスタント飲料粉末はタンパク質を含み、タンパク質に加えて、インスタント飲料粉末の使用目的に応じて脂質及び／又は炭水化物を含み得る。

【0169】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント粉末は、ビタミン、ミネラル、及び微量元素をさらに含む。インスタント飲料粉末は、例えば、栄養失調のある若しくは栄養失調のリスクのある患者の処置、腎臓病に苦しむ患者に対して、又は体重増加のために栄養補助食品として使用され得るか、又はスポーツマン若しくはアスリートにより栄養補助食品として使用され得る。

【0170】

インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲であり得る。本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、３００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲であり、さらにより好ましいのは、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、３２０～３８０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲であり、又は最も好ましいのは３５０～３７０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲である。

【0171】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％のようなエネルギー分布を有する。本発明のより好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質１０～１５Ｅ％、炭水化物７５～８５Ｅ％、及び脂質０～１Ｅ％のエネルギー分布を有する。本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質１１Ｅ％、炭水化物８９Ｅ％、及び脂質０Ｅ％のエネルギー分布を有する。

【0172】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、タンパク質、炭水化物、及び脂質を含み、任意に、ビタミン、ミネラル、及び微量元素を含む。飲料粉末の推奨される１日の摂取量が、ビタミン、ミネラル、及び微量元素の推奨される１日の摂取量を供給するように、インスタント飲料粉末を設計することができる。しかしながら、これは必要条件ではない。

【0173】

かかるインスタント飲料粉末は、消費者が、エネルギー分布、多量栄養素及び微量栄養素に関して健康的な食事を反映する多量栄養素の割合を備えた栄養補助食品に関心がある場合、例えば、栄養補助食品が、医療専門家の監督の下で与えられる場合、栄養補助食品として有用な場合がある。

【0174】

インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、４００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲である。本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、４１０～４９０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲であり、さらにより好ましくは、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、４２０～４８０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲であり、又は最も好ましいのは４４０～４６０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲である。

【0175】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質７～２５Ｅ％、炭水化物３０～５０Ｅ％、及び脂質３０～５５Ｅ％のようなエネルギー分布を有する。本発明のより好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質１０～２５Ｅ％、炭水化物３０～５０Ｅ％及び脂質３０～５５Ｅ％、又はさらにより好ましくはタンパク質１５～２０Ｅ％、炭水化物３５～４５Ｅ％及びの脂質３５～５０Ｅ％エネルギー分布を有する。本発明のさらにより好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質１５Ｅ％、炭水化物３５Ｅ％及び脂質５０Ｅ％のエネルギー分布を有し、タンパク質２０Ｅ％、炭水化物４５Ｅ％及び脂質３５Ｅ％のエネルギー分布を有し、又は８～１５Ｅ％タンパク質、４０～４７Ｅ％炭水化物及び４５Ｅ％脂質のエネルギー分布を有する。

【0176】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント粉末は、ビタミン、ミネラル、及び微量元素をさらに含む。

【0177】

【0178】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、タンパク質、炭水化物、及び脂質を含む。かかるインスタント飲料粉末は、タンパク質の摂取が消費者の最優先事項である場合、例えば、消費者が通常の食事を補うことを望む場合、栄養補助食品として有用となる可能性がある。インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、２００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲である。本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、２００～３５０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲であり、さらにより好ましくは、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、２００～３００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲である。

【0179】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質８０～９８Ｅ％、炭水化物０～２０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％のようなエネルギー分布を有する。本発明のより好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質９０～９８Ｅ％、炭水化物０～１０Ｅ％、及び脂質０～３Ｅ％のエネルギー分布を有する。本発明のさらにより好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質９５～９８Ｅ％、炭水化物０～５Ｅ％、及び脂質０～２Ｅ％のエネルギー分布を有する。

【0180】

本発明の一実施形態では、インスタント粉末は、ビタミン、ミネラル、及び微量元素をさらに含む。本発明の好ましい実施形態では、インスタント粉末は、ビタミン、ミネラル、及び微量元素をさらに含む。インスタント飲料粉末は、例えば、栄養失調のある若しくは栄養失調のリスクのある患者の処置、腎臓病に苦しむ患者に対して、又は体重増加のために栄養補助食品として使用され得るか、又はスポーツマン若しくはアスリートにより栄養補助食品として使用され得る。

【0181】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、タンパク質、炭水化物、及び脂質を含む。インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、２００～４２０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲である。本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、３００～４２０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲であり、又はより好ましいのは、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、３２０～３８０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲であり、又はさらにより好ましいのは、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、３５０～３７０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲である。

【0182】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質３０～８０Ｅ％、炭水化物３～２０Ｅ％、及び脂質１５～２０Ｅ％のようなエネルギー分布を有する。本発明のより好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質６０～８０Ｅ％、炭水化物４～１５Ｅ％、及び脂質１６～１８Ｅ％のエネルギー分布を有する。本発明のさらにより好ましい実施形態では、インスタント飲料サプリメントは、タンパク質３０～４０Ｅ％、炭水化物４５～５５Ｅ％、及び脂質１２～１８Ｅ％、例えば、タンパク質３３Ｅ％、炭水化物４６Ｅ％、及び脂質１５Ｅ％等のエネルギー分布を有する。

【0183】

或いは、インスタント飲料粉末のエネルギー含量は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物４０～６０Ｅ％及び脂質２５～４５Ｅ％、又は好ましくはタンパク質１５～２５Ｅ％、炭水化物４５～５５Ｅ％及び脂質３０～４０Ｅ％のようなエネルギー分布で、１５０～２５０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲であり得る。

【0184】

本発明の一実施形態では、インスタント粉末は、ビタミン、ミネラル、及び微量元素をさらに含む。

【0185】

【0186】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、香味料、着色剤、甘味料、抗酸化剤、食用酸、脂質、炭水化物、プレバイオティクス、プロバイオティクス、又は非ホエイタンパク質をさらに含み得る。

【0187】

便宜上、インスタント飲料粉末は、本発明のインスタント粉末、当該粉末を測定するためのツール、及び容器を開閉するための蓋を有する容器を備えたキットで販売することができ、当該容器は、当該粉末を液体と混合して食品を形成するものであり、当該容器は、容器から直接食品を飲むように適合されている。有用な容器の例は、例えば、ボトル、カートン、ブリックパック（ｂｒｉｃｋｓ）、ポーチ、及び／又はバッグである。

【0188】

キットを購入する消費者は、本発明による液体食品を容易に調製するための全ての物品を入手する。測定ツールは、消費者が容器内の水の量に対して正しい量のインスタント粉末を計量することを保証する。

【0189】

本発明の一実施形態では、インスタント粉末を測定するためのツールはスプーンであり、容器は飲用ボトルである。本発明の一実施形態では、容器は、容器を満たす液体の量の内部表示を有する。本発明の一実施形態では、蓋は、容器から直接液体食品を飲むために、及び液体食品を混合する間、閉じるために適合された開口部を有する。

【0190】

インスタント飲料粉末から調製される製品の味は製品のｐＨに依存するため、インスタント飲料粉末のｐＨは重要である。粉末のｐＨは、例１．１６に記載されているように、２５℃の脱塩水中のインスタント飲料粉末の１０％重量／重量溶液中のｐＨを測定することによって決定することができる。本発明の一実施形態では、脱塩水中の１０％重量／重量溶液中のインスタント飲料粉末のｐＨは、２５℃で２～８の範囲である。

【0191】

本発明の一実施形態では、ｐＨは、２．０～４．９の範囲、例えば、２．５～４．７、より好ましくは２．８～４．３、さらにより好ましくは３．２～４．０、最も好ましくは３．４～３．９の範囲である。或いは、しかしまた好ましいことに、インスタント飲料粉末は、３．６～４．３の範囲のｐＨを有し得る。

【0192】

或いは、脱塩水中の１０％重量／重量溶液中のインスタント飲料粉末のｐＨは、２５℃で５．０～６．０の範囲のｐＨであり、好ましくは、粉末は５．１～５．９、より好ましくは５．２～５．８、さらにより好ましくは５．３～５．７、最も好ましくは５．４～５．６の範囲のｐＨを有する。

【0193】

或いは、インスタント飲料粉末のｐＨは、６．１～８．５、より好ましくは６．２～８．０、さらにより好ましくは６．３～７．７、最も好ましくは６．５～７．５の範囲である。

【0194】

さらに、本発明の一態様は、本明細書で食品原料として定義されるインスタント飲料の使用に関する。

【0195】

本発明の一態様は、本明細書に記載のインスタント飲料粉末製品を含む容器を含む、包装されたインスタント飲料粉末製品に関する。

【0196】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末製品は、容器内に密閉され、任意に不活性ガスと共に包装される。

【0197】

インスタント飲料粉末製品を保管するために、多種多様な容器を使用することができる。例えば、容器は、ボトル、缶、バッグ、ポーチ、及び小袋からなる群から選択される容器であり得る。

【0198】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含む。

【0199】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２～８の範囲である。

【0200】

【0201】

【0202】

【0203】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２～８の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0204】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２．０～４．９の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0205】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは５．０～６．０の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0206】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは６．１～８．５の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0207】

【0208】

【0209】

【0210】

【0211】

【0212】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、４００～５００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質７～２５Ｅ％、炭水化物３０～５０Ｅ％、及び脂質３０～５５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２～８の範囲である。

【0213】

【0214】

【0215】

【0216】

【0217】

【0218】

【0219】

【0220】

【0221】

【0222】

【0223】

【0224】

【0225】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２～８の範囲である。

【0226】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２．０～４．９の範囲である。

【0227】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは５．０～６．０の範囲である。

【0228】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは６．１～８．５の範囲である。

【0229】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２～８の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0230】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２．０～４．９の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0231】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは５．０～６．０の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0232】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは６．１～８．５の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0233】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２～８の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含み、インスタント飲料粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ及びＣａの合計は最大１０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0234】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２．０～４．９の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含み、インスタント飲料粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ及びＣａの合計は最大１０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0235】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは５．０～６．０の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含み、インスタント飲料粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ及びＣａの合計は最大１０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0236】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４００ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物７０～９０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは６．１～８．５の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含み、インスタント飲料粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ及びＣａの合計は最大１０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0237】

【0238】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～３５０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質８０～９８Ｅ％、炭水化物０～２０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２～８の範囲である。

【0239】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～３５０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質８０～９８Ｅ％、炭水化物０～２０Ｅ％、及び脂質０～５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも９５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２．０～４．９の範囲である。

【0240】

【0241】

【0242】

【0243】

【0244】

【0245】

【0246】

【0247】

【0248】

【0249】

【0250】

【0251】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４２０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質３０～８０Ｅ％、炭水化物３～２０Ｅ％、及び脂質１５～２０Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２～８の範囲である。

【0252】

【0253】

【0254】

【0255】

【0256】

【0257】

【0258】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、２００～４２０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質３０～８０Ｅ％、炭水化物３～２０Ｅ％、及び脂質１５～２０Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは６．１～８．５の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0259】

【0260】

【0261】

【0262】

【0263】

【0264】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、１５０～２５０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物４０～６０Ｅ％、及び脂質２５～４５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは２～８の範囲である。

【0265】

【0266】

【0267】

【0268】

【0269】

【0270】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、１５０～２５０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物４０～６０Ｅ％、及び脂質２５～４５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは５．０～６．０の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0271】

本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、１５０～２５０ｋｃａｌ／粉末１００グラムの範囲のエネルギー含量を有し、エネルギー分布は、タンパク質１０～３０Ｅ％、炭水化物４０～６０Ｅ％、及び脂質２５～４５Ｅ％の範囲であり、インスタント飲料粉末は、総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９０％％重量／重量のＢＬＧを含み、粉末のｐＨは６．１～８．５の範囲であり、インスタント飲料粉末は、ビタミン、ミネラル及び微量元素をさらに含む。

【0272】

【0273】

【0274】

【0275】

【0276】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、食品は、乾燥食品、例えば、炭水化物及びタンパク質を含むバー又はインスタント飲料粉末であり、当該乾燥食品は、少なくとも１％重量／重量のＢＬＧ、好ましくは少なくとも５％を含み、ここで、
ｉ）ＢＬＧの結晶化度は少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％であり、及び／又は
ｉｉ）タンパク質の総量の少なくとも９０％重量／重量がＢＬＧで構成されている。

【0277】

本発明の幾つかの特に好ましい実施形態では、食品は、タンパク質１００ｇあたり最大４０ｍｇのリンを含む低リン食品である。

【0278】

食品の非限定的な例は、例えば、乳製品、キャンディー、飲料、インスタント飲料、プロテインバー、経腸栄養組成物、ベーカリー製品である。

【0279】

本発明の他の好ましい実施形態では、食品は、以下：
－少なくとも１％重量／重量、好ましくは少なくとも５％重量／重量のＢＬＧの総量を提供する粉末形態の本明細書に定義される食用ＢＬＧ組成物であって、
少なくとも２０％のＢＬＧの結晶化度を有する当該食用ＢＬＧ組成物と、
－粉末形態の甘味料、例えば砂糖甘味料及び／又は非砂糖甘味料と、
－任意に、香料と、
－粉末形態の少なくとも１つの食用酸、例えばクエン酸又は他の適切な食用酸と、
－最大８０ｍｇのリン／１００ｇのタンパク質と、
を含むか、又はそれらから本質的になるインスタント飲料粉末であり、
ここで、脱塩水中のインスタント飲料粉末の１０％溶液は、
２．５～４．０の範囲のｐＨを有する。

【0280】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、食用ＢＬＧ組成物は、以下：
－最大６％重量／重量の水
－全固形分に対して少なくとも８０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、を含み、
当該食用ＢＬＧ組成物は、
－乾燥粉末であり、
－少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．６０ｇ／ｍＬのかさ密度を有する。

【0281】

本発明の他の好ましい実施形態では、食用ＢＬＧ組成物は、以下：
－最大６％重量／重量の水
－全固形分に対して少なくとも８０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、を含み、
当該食用ＢＬＧ組成物は、
－乾燥粉末であり、
－少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．６０ｇ／ｍＬのかさ密度を有し、
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のＢＬＧの結晶化度を有する。

【0282】

本発明のさらなる好ましい実施形態では、食用ＢＬＧ組成物は、以下：
－最大６％重量／重量の水
－全固形分に対して少なくとも８０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ
－タンパク質１００ｇあたり最大８０ｍｇのリン、を含み、
当該食用ＢＬＧ組成物は、
－乾燥粉末である。

【0283】

本発明のさらに好ましい実施形態では、食用ＢＬＧ組成物は、以下：
－最大６％重量／重量の水
－全固形分に対して少なくとも９０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９７％のＢＬＧ
－タンパク質１００ｇあたり最大５０ｍｇのリン、を含み、
当該食用ＢＬＧ組成物は、
－乾燥粉末である。

【0284】

本発明の他の好ましい実施形態では、食用ＢＬＧ組成物は、以下：
－最大６％重量／重量の水
－全固形分に対して少なくとも８０％の総タンパク質、好ましくは全固形分に対して少なくとも９０％の総タンパク質、
－総タンパク質に対して３０～７０％のＢＬＧ、
－総タンパク質に対して８～２５％重量／重量のＡＬＡ、を含み、
当該食用ＢＬＧ組成物は、
－乾燥粉末であり、
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のＢＬＧの結晶化度を有する。

【0285】

本発明の一態様では、液体食品は、インスタント飲料粉末から調製される。本発明のインスタント飲料粉末を使用することにより、非常に短時間で液体食品を得ることができる。

【0286】

そのため、本発明のさらなる態様は、本発明による液体食品を調製する方法に関し、当該方法は、
ｉ．本発明によるインスタント飲料粉末の添加すること、
ｉｉ．任意に、少なくとも１つの追加の原料を添加すること、
ｉｉｉ．得られた粉末及び液体を混合して均一な混合物を形成すること、を含む。

【0287】

一実施形態では、液体は、水、乳製品、果汁、野菜果汁、飲料、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、さらなる原料は、果物又は野菜から選択される。

【0288】

粉末と液体を混合する場合は、振とうすることで混合することができる。液体食品を振とうした後、インスタント飲料粉末は完全に溶解するために１／２～２分間放置してもよい。インスタント飲料粉末の１つの利点は、インスタント飲料粉末が容易に溶解し、均一な溶液を形成し、均一な溶液のままである、すなわち、実質的に分離が起こらないことである。

【0289】

インスタント飲料粉末に通常関連する問題は、粉末から液体食品を調製するときに泡が発生することである。本発明のインスタント飲料粉末は、粉末から液体食品を調製するときに泡立ちにくい。

【0290】

本発明の液体及び粉末を含む液体食品は、本発明のインスタント飲料粉末を液体と混合することによって調製することができる。本発明の一実施形態では、インスタント飲料粉末は、当該液体１００グラムあたり最大４０グラムの当該粉末、例えば、当該液体１００グラムあたり最大３０グラムの当該粉末を含み得る。本発明の好ましい実施形態では、液体食品は、当該液体１００グラムあたり１～３０グラムの当該粉末、より好ましくは１～２０グラムの当該粉末、さらにより好ましくは１～１０グラムの当該粉末、又は好ましくは当該粉末１～５グラム、又はさらにより好ましくは当該粉末２．５～５グラムを含む。

【0291】

本発明の一実施形態では、液体食品は、液体１００グラムあたり５～２５グラムの当該粉末、好ましくは液体１００グラムあたり５～２５グラムの当該粉末、より好ましくは１０～１５グラムの当該粉末、さらにより好ましくは１１～１４グラムの当該粉末、又はより好ましくは１１～１２グラムの当該粉末を含む。

【0292】

本発明の一実施形態では、食品は、３０～３００ｋｃａｌ／食品１００グラムの範囲、好ましくは３０～１００ｋｃａｌ／食品１００グラムの範囲、より好ましくは４０～９０ｋｃａｌ／食品１００グラムの範囲、又はさらにより好ましくは４０～７０ｋｃａｌ／食品１００グラムの範囲のエネルギー含量を有する。

【0293】

或いは、食品は、１００～３００ｋｃａｌ／食品１００グラムの範囲、好ましくは１００～２５０ｋｃａｌ／食品１００グラムの範囲、又はより好ましくは１２５～２２５ｋｃａｌ／食品１００グラムの範囲のエネルギー含量を有する。

【0294】

液体食品は、水、乳製品、果汁、野菜果汁、飲料、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される液体を含み得る。

【0295】

液体食品、例えばインスタント飲料粉末から調製された飲料の外観は、消費者にとって非常に重要である。透明性は、消費者が製品を評価するために使用するパラメーターである。液体食品の透明度を決定する１つの方法は、例１．７に記載するように製品の濁度を測定することである。

【0296】

インスタント飲料粉末から調製された飲料の幾つかの実施形態では、飲料が透明であることが有益である。これは、例えば、飲料がスポーツ飲料として、又は「タンパク質水」で使用される場合に有利である可能性があり、その場合、飲料は外観が水に似ていることが有益である。

【0297】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末から調製された飲料は、最大２００ＮＴＵの濁度を有し、かかる飲料は、透明及び／又は半透明である。

【0298】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末から調製された飲料は、最大１５０ＮＴＵの濁度、又は好ましくは最大１００ＮＴＵの濁度、又は好ましくは最大８０ＮＴＵの濁度、又は好ましくは最大６０ＮＴＵの濁度、又はより好ましくは最大４０ＮＴＵの濁度、又は好ましくは最大３０ＮＴＵの濁度、好ましくは最大２０ＮＴＵの濁度、より好ましくは最大１０ＮＴＵの濁度、より好ましくは最大５ＮＴＵの濁度を有し、さらにより好ましくは、飲料は最大２ＮＴＵの濁度を有する。

【0299】

本発明の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末から調製された飲料は、２００ＮＴＵを超える濁度を有し、かかる飲料は不透明である。

【0300】

インスタント飲料粉末から調製された飲料の幾つかの実施形態では、飲料が不透明であることが有益である。これは、例えば、飲料が乳に似ていて、乳白色の外観を有するべきである場合に有利である。栄養的に完全な栄養補助食品の外観は、典型的には、不透明である。

【0301】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末から調製された飲料は、２５０ＮＴＵを超える濁度を有する。好ましくは、飲料は、３００ＮＴＵを超える濁度を有し、より好ましくは、５００ＮＴＵを超える濁度を有し、より好ましくは、１０００を超える濁度、好ましくは１５００ＮＴＵを超える濁度を有し、さらにより好ましくは、２０００ＮＴＵを超える濁度を有する。

【0302】

製品の色は消費者にとって非常に重要である。ホエイタンパク質を含むインスタント飲料粉末製品は、わずかに黄色をしている。しかしながら、少なくとも２０％の結晶化度を有するＢＬＧを含むインスタント飲料粉末、又はタンパク質の少なくとも９０％がＢＬＧによって構成されるインスタント飲料粉末を使用する場合、製品の色は実質的に黄色が少なく、製品はより白色に見える。したがって、黄色をマスクするためにインスタント飲料粉末に色を加える必要はない。

【0303】

製品の色を測定する１つの方法は、色を３つの数値として表すＣＩＥＬＡＢ色空間を使用することであり、Ｌ＊は明度、ａ＊及びｂ＊は緑－赤及び青－黄色の色成分である。例１．９は、液体食品のＬ＊、ａ＊、及びｂ＊値を測定する方法を示している。

【0304】

本発明の一実施形態では、液体食品のタンパク質画分が、ＣＩＥＬＡＢカラースケールで－０．１０～＋０．５１の範囲の色値デルタｂ＊を有し、ここで、室温で測定した場合、デルタｂ＊＝ｂ_{６．０重量／重量％タンパク質に標準化されたサンプル}＊－ｂ_脱塩水＊である。

【0305】

【0306】

本発明の一実施形態では、ＢＬＧ源のＢＬＧは、有機酸でコーティングされている。ＢＬＧ源が、例えば粉末である場合、これは、粉末が有機酸でコーティングされていることを意味する。タンパク質を含むインスタント飲料粉末を調製する場合、タンパク質の溶解度を改善するためにレシチンが一般的に使用される。しかしながら、レシチンはリンの供給源である。したがって、タンパク質を含むインスタント飲料粉末の溶解度を改善する別の方法を見つけることが望ましい。

【0307】

本発明者らは、ＢＬＧ源のＢＬＧ結晶又は粉末粒子を１つ又は２つ以上の有機酸でコーティングすることにより、インスタント飲料粉末の溶解度が向上することを見出した。有機酸又は有機酸の塩は、ピルビン酸塩、アコニット酸塩、クエン酸塩、ｉｓｏ－クエン酸塩、ケトグルタル酸塩、スクシニル－ＣｏＡ、コハク酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、オキサロ酢酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、タンニン酸、安息香酸、マレイン酸及び乳酸塩からなる群から選択され得る。本発明の好ましい実施形態では、ＢＬＧ結晶は、ピルビン酸塩、クエン酸塩、ｉｓｏ－クエン酸塩、ケトグルタル酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、オキサロ酢酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩及び乳酸塩、並びにそれらの塩からなる群から選択される有機酸又は有機酸の塩でコーティングされる。

【0308】

本発明の好ましい実施形態では、ＢＬＧ源のＢＬＧ結晶は、クエン酸塩、例えば、クエン酸三ナトリウム、クエン酸カリウム及びクエン酸カルシウムからなる群から選択されるクエン酸塩でコーティングされている。

【0309】

本発明の好ましい実施形態では、ＢＬＧ源のＢＬＧは、噴霧乾燥又は流動床を使用することによって有機酸でコーティングされる。乾燥されたＢＬＧ結晶が、例えば、噴霧乾燥又は流動床を使用して、有機酸又はその塩でコーティングされることが特に好ましい。

【0310】

ＢＬＧ源を、ＢＬＧが結晶として分離されるホエイタンパク質フィードから取得できる。ＢＬＧ単離物を調製する１つの方法は、参照により本明細書に組み込まれる国際特許出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４５５３号明細書に記載されている。ＢＬＧ単離物は、出願時のＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４５５３明細書第６頁、２３～３２行目に記載されるように調製することができ、結晶化及び／又は単離された形態のＢＬＧを含む食用組成物は、本発明のＢＬＧ単離物に対応する。好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離物は、出願時のＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４５５３明細書第３９頁、１５～３４行目に記載されている方法によって調製される。別の好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離物は、出願時のＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４５５３明細書第４１頁、１～２４行目に記載されている方法によって調製される。

【0311】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末は、乾燥ＢＬＧ結晶を含むＢＬＧ単離粉末を含むか、さらにはそれからなり、当該ＢＬＧ単離粉末は、有機酸及び／又は有機酸の塩でコーティングされている。ＢＬＧ単離物の重量と有機酸及び脱プロトン化有機酸の合計の総重量との間の重量比は、好ましくは５～１００、より好ましくは８～６０、さらにより好ましくは１０～４０、最も好ましくは１２～３０である。

【0312】

本発明の一態様は、有機酸及び／又は有機酸の塩でコーティングされたＢＬＧ単離粉末を製造する方法に関し、該方法は、以下：
－好ましくは本明細書に記載のＢＬＧ結晶化プロセスによって得られた、好ましくは乾燥ＢＬＧ結晶を含むか、さらにはそれからなる、コーティングされるＢＬＧ単離粉末を提供する工程、及び
－コーティングされるＢＬＧ単離粉末に有機酸及び／又は有機酸の塩を、好ましくはＢＬＧ単離粉末をコーティングするのに十分な量であるが、それが溶解することを避けて適用する工程、
－任意に、コーティングされたＢＬＧ単離粉末から残留水分を蒸発させる工程、を含む。

【0313】

コーティングされるＢＬＧ単離粉末は、好ましくは、高いタンパク質含有量及び高いＢＬＧ純度の両方を有する。コーティングされるＢＬＧ単離粉末は、好ましくは、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも６０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％のＢＬＧの結晶化度を有する。

【0314】

ＢＬＧ単離粉末の重量と有機酸及び脱プロトン化有機酸の合計の総重量との間の重量比を提供するのに十分な量でコーティングされるＢＬＧ単離粉末に対して、有機酸及び／又は有機酸の塩は、好ましくは５～１００、より好ましくは８～６０、さらにより好ましくは１０～４０、最も好ましくは１２～３０である。

【0315】

有機酸及び／又は有機酸の塩は、好ましくは、有機酸及び／又は有機酸の塩を、好ましくは溶解形態で流動床に噴霧して、ＢＬＧ単離粉末をコーティングすることにより、流動床システムにおいてＢＬＧ単離粉末に適用される。動作中の温度は、好ましくは５～７０℃の範囲であり、より好ましくは５０～６５℃の範囲であり、好ましくはおよそ６０℃等である。

【0316】

有機酸及び／又は有機酸の塩を適用した後、コーティングされたＢＬＧ単離物を処理して、好ましくは含水量が最大６％重量／重量、より好ましくは最大５％重量／重量になるまで追加の水分を蒸発させることができる。

【0317】

有機酸は、好ましくは食用有機酸、すなわちいわゆる食用酸である。

【0318】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末を調製するために使用されるＢＬＧ源は、少なくとも２０％重量／重量の固形分を有する。好ましくは、ＢＬＧ源は、少なくとも３０％重量／重量の固形分を有し、より好ましくは、ＢＬＧ源は、少なくとも４０％重量／重量の固形分を有し、さらにより好ましくは、ＢＬＧ源は、少なくとも５０％重量／重量、例えば少なくとも６０％重量／重量等の固形分を有する。

【0319】

本発明の他の好ましい実施形態では、インスタント飲料粉末を調製するために使用されるＢＬＧ源は、２０～８０％重量／重量の範囲の固形分を有する。好ましくは、ＢＬＧ源は、３０～７０％重量／重量の範囲の固形分を有する。より好ましくは、ＢＬＧ源は、４０～６５％重量／重量の範囲の固形分を有する。さらにより好ましくは、ＢＬＧ源は、５０～６５％重量／重量の範囲、例えばおよそ６０％重量／重量等の固形分を有する。

【0320】

ＢＬＧ源は、好ましくは、ＢＬＧ単離粉末であるか、又は液体ＢＬＧ単離物は、水及びＢＬＧ単離粉末の固形物を１～５０％重量／重量の範囲の量で含む。ＢＬＧ源がＢＬＧ単離粉末であることが特に好ましい。

【0321】

ベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）単離粉末は、好ましくは噴霧乾燥によって調製され、ｉ）２～４．９、ｉｉ）６．１～８．５、又はｉｉｉ）５．０～６．０の範囲のｐＨを有し、
－少なくとも３０％重量／重量の量の総タンパク質と、
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量の量のＢＬＧと、
－最大１０％重量／重量の量の水と、を含む。

【0322】

ＢＬＧ単離粉末は、好ましくは、以下の１つ又は２つ以上を有する：
－少なくとも０．２ｇ／ｃｍ^３のかさ密度、
－少なくとも１．１１の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）
－最大１０％のタンパク質変性度、
－ｐＨ３．９で最大２００ＮＴＵの熱安定性、及び
－最大１０００コロニー形成単位／ｇ。

【0323】

ＢＬＧ単離粉末は、好ましくは食用組成物である。本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、本明細書で定義される食用ＢＬＧ組成物である。

【0324】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、２～４．９の範囲のｐＨを有する。かかる粉末は、酸性食品、特に酸性飲料に特に有用である。

【0325】

本発明の他の好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、６．１～８．５の範囲のｐＨを有する。

【0326】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、少なくとも４０％重量／重量、好ましくは少なくとも５０％重量／重量、少なくとも６０％重量／重量、より好ましくは少なくとも７０％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも８０％重量／重量の量の総タンパク質を含む。

【0327】

さらに高いタンパク質含有量が必要とされる場合があり、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、少なくとも８５％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、少なくとも９２％重量／重量、より好ましくは少なくとも９４％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９５％重量／重量の量の総タンパク質を含む。

【0328】

総タンパク質は、例１．５に従って測定される。

【0329】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、総タンパク質に対して、少なくとも９２％重量／重量、好ましくは少なくとも９５％重量／重量、より好ましくは少なくとも９７％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９８％の量のＢＬＧ、最も好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９９．５％重量／重量の量のＢＬＧを含む。

【0330】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、アルファ－ラクトアルブミン（ＡＬＡ）及びカゼイノマクロペプチド（ＣＭＰ）の合計は、粉末の非ＢＬＧタンパク質の少なくとも４０％重量／重量、好ましくは、粉末の非ＢＬＧタンパク質の少なくとも６０％重量／重量、より好ましくは少なくとも７０％重量／重量、最も好ましくは少なくとも９０％重量／重量を構成する。

【0331】

本発明の他の好ましい実施形態では、各主要な非ＢＬＧホエイタンパク質は、総タンパク質に対する重量パーセンテージで存在し、これは、スイートホエイに由来する標準的なホエイタンパク質濃縮物中の総タンパク質に対するその重量パーセンテージで最大２５％、好ましくは最大２０％、より好ましくは最大１５％、さらにより好ましくは最大１０％、最も好ましくは最大６％である。

【0332】

さらに低い濃度の主要な非ＢＬＧホエイタンパク質が望ましい場合がある。そのため、本発明の追加の好ましい実施形態では、各主要な非ＢＬＧホエイタンパク質は、総タンパク質に対する重量パーセンテージで存在し、これは、スイートホエイに由来する標準的なホエイタンパク質濃縮物中の総タンパク質に対するその重量パーセンテージで最大４％、好ましくは最大３％、より好ましくは最大２％、さらにより好ましくは最大１％である。

【0333】

本発明者らは、ラクトフェリン及び／又はラクトペルオキシダーゼの還元が、無彩色の（ｃｏｌｏｕｒ－ｎｅｕｔｒａｌ）ホエイタンパク質生成物を得るのに特に有利であるという徴候を見てきた。

【0334】

そのため、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ラクトフェリンは、総タンパク質に対する重量パーセンテージで存在し、これは、スイートホエイに由来する標準的なホエイタンパク質濃縮物中の総タンパク質に対するその重量パーセンテージの最大２５％、好ましくは最大２０％、より好ましくは最大１５％、さらにより好ましくは最大１０％、最も好ましくは最大６％である。さらに低濃度のラクトフェリンが望ましい場合がある。そのため、本発明の追加の好ましい実施形態では、ラクトフェリンは、総タンパク質に対する重量パーセンテージで存在し、これは、スイートホエイに由来する標準的なホエイタンパク質濃縮物中の総タンパク質に対するその重量パーセンテージの最大４％、好ましくは最大３％、より好ましくは最大２％、さらにより好ましくは最大１％である。

【0335】

同様に、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ラクトペルオキシダーゼは、総タンパク質に対する重量パーセンテージで存在し、これは、スイートホエイに由来する標準的なホエイタンパク質濃縮物中の総タンパク質に対するその重量パーセンテージの最大２５％、好ましくは最大２０％、より好ましくは最大１５％、さらにより好ましくは最大１０％、最も好ましくは最大６％である。さらに低濃度のラクトペルオキシダーゼが望ましい場合がある。そのため、本発明の追加の好ましい実施形態では、ラクトペルオキシダーゼは、総タンパク質に対する重量パーセンテージで存在し、これは、スイートホエイに由来する標準的なホエイタンパク質濃縮物中の総タンパク質に対するその重量パーセンテージの最大４％、好ましくは最大３％、より好ましくは最大２％、さらにより好ましくは最大１％である。

【0336】

ラクトフェリン及びラクトペルオキシダーゼは、例１．２９に従って定量化される。

【0337】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、最大１０％重量／重量、好ましくは最大７％重量／重量、より好ましくは最大６％重量／重量、さらにより好ましくは最大４％重量／重量の量の含水量を有し、最も好ましいのは最大２％重量／重量である。

【0338】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、最大６０％重量／重量、好ましくは最大５０％重量／重量、より好ましくは最大２０％重量／重量、さらにより好ましくは最大１０％重量／重量、さらにより好ましくは最大１％重量／重量、最も好ましくは最大０．１％の量の炭水化物を含む。例えば、ＢＬＧ単離粉末は、例えば、ラクトース、オリゴ糖、及び／又はラクトースの加水分解生成物（すなわち、グルコース及びガラクトース）、スクロース、及び／又はマルトデキストリン等の炭水化物を含み得る。

【0339】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、最大１０％重量／重量、好ましくは最大５％重量／重量、より好ましくは最大２％重量／重量、さらにより好ましくは最大０．１％重量／重量の量の脂質を含む。

【0340】

本発明者らは、ＢＬＧ単離粉末の一部の所望の特性に達するようにミネラル含量を制御することが有利となり得ることを見出した。

【0341】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計は、最大１０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。好ましくは、ＢＬＧ単離粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計は、最大６ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、より好ましくは最大４ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、さらにより好ましくは最大２ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0342】

本発明の他の好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計は、最大１ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。好ましくは、ＢＬＧ単離粉末のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、及びＣａの量の合計は、最大０．６ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、より好ましくは最大０．４ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、さらにより好ましくは最大０．２ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、最も好ましくは最大０．１ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0343】

本発明の他の好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末のＭｇ及びＣａの量の合計は、最大５ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。好ましくは、ＢＬＧ単離粉末のＭｇ及びＣａの量の合計は、最大３ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、より好ましくは最大１．０ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、さらにより好ましくは最大０．５ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0344】

本発明の他の好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末のＭｇ及びＣａの量の合計は、最大０．３ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。好ましくは、ＢＬＧ単離粉末のＭｇ及びＣａの量の合計は、最大０．２ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、より好ましくは最大０．１ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、さらにより好ましくは最大０．０３ｍｍｏｌ／ｇタンパク質、最も好ましくは最大０．０１ｍｍｏｌ／ｇタンパク質である。

【0345】

本発明者らは、腎臓病の患者に特に有用な低リン／低カリウム変異体のＢＬＧ単離粉末を使用することが可能であることを見出した。かかる製品を製造するには、ＢＬＧ単離粉末のリン及びカリウムの含有量が等しく低くなければならない。

【0346】

そのため、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大１００ｍｇのリンの総リン含有量を有する。好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大８０ｍｇのリンの総含有量を有する。より好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大５０ｍｇのリンの総含有量を有する。さらにより好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大２０ｍｇのリンの総リン含有量を有する。ＢＬＧ単離粉末のリンの総含有量は、タンパク質１００ｇあたり最大５ｍｇである。

【0347】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大６００ｍｇのカリウムを含む。より好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大５００ｍｇのカリウムを含む。より好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大４００ｍｇのカリウムを含む。より好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大３００ｍｇのカリウムを含む。さらにより好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大２００ｍｇのカリウムで粉末を単離する。さらにより好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、タンパク質１００ｇあたり最大１００ｍｇのカリウムを含む。さらにより好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、１００ｇタンパク質あたり最大５０ｍｇのカリウムを含み、さらにより好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、１００ｇタンパク質あたり最大１０ｍｇのカリウムを含む。

【0348】

リンの含有量は、問題の組成物の元素リンの総量に関し、例１．１９に従って決定される。同様に、カリウムの含有量は、問題の組成物の元素カリウムの総量に関し、例１．１９に従って決定される。

【0349】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、最大リン１００ｍｇ／タンパク質１００ｇ及び最大カリウム７００ｍｇ／タンパク質１００ｇ、好ましくは最大リン８０ｍｇ／タンパク質１００ｇ及び最大カリウム６００ｍｇ／タンパク質１００ｇ、より好ましくは最大リン６０ｍｇ／タンパク質１００ｇ及び最大カリウム５００ｍｇ／タンパク質１００ｇ、より好ましくは最大リン５０ｍｇ／タンパク質１００ｇ及び最大４００ｍｇカリウム／タンパク質１００ｇ、又はより好ましくは最大リン２０ｍｇ／タンパク質１００ｇ及び最大カリウム２００ｍｇ／タンパク質１００ｇ、又はさらにより好ましくは最大リン１０ｍｇ／タンパク質１００ｇ及び最大カリウム５０ｍｇ／１００ｇのタンパク質を含む。本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、最大リン（ｐｈｏｓｐｈｏｒ）１００ｍｇ／タンパク質１００ｇ、及び最大カリウム３４０ｍｇ／タンパク質１００ｇを含む。

【0350】

本発明による低リン及び／又は低カリウム組成物は、腎機能が低下している患者群用の食品を製造するための食品原料として使用することができる。

【0351】

本発明者らは、幾つかの用途について、例えば、酸性食品、特に酸性飲料の場合、ｐＨが最大４．９、さらにより好ましくは最大４．３の酸性ＢＬＧ単離粉末を有することが特に有利であることを見出した。これは、高タンパクで透明な酸性飲料に特に当てはまる。

【0352】

本発明の文脈では、透明な液体は、例１．７に従って測定された最大２００ＮＴＵの濁度を有する。

【0353】

そのため、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、２～４．９の範囲のｐＨを有する。好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、２．５～４．７、より好ましくは２．８～４．３、さらにより好ましくは３．２～４．０、最も好ましくは３．４～３．９の範囲のｐＨを有する。或いは、しかしまた好ましいことに、ＢＬＧ単離粉末は、３．６～４．３の範囲のｐＨを有し得る。

【0354】

本発明者らは、幾つかの用途について、例えば、ｐＨ中性の食品、特にｐＨ中性の飲料では、ｐＨ中性のＢＬＧ単離粉末を使用することが特に有利であることを見出した。これは、高タンパク質で、透明又は不透明のｐＨ中性飲料に特に当てはまる。

【0355】

そのため、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、６．１～８．５の範囲のｐＨを有する。好ましくは、粉末は、６．１～８．５、より好ましくは６．２～８．０、さらにより好ましくは６．３～７．７、最も好ましくは６．５～７．５の範囲のｐＨを有する。

【0356】

本発明の他の好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、５．０～６．０の範囲のｐＨを有する。好ましくは、粉末は、５．１～５．９、より好ましくは５．２～５．８、さらにより好ましくは５．３～５．７、及び最も好ましくは５．４～５．６の範囲のｐＨを有する。

【0357】

有利には、本発明で使用されるＢＬＧ単離粉末は、少なくとも０．２０ｇ／ｃｍ^３、好ましくは少なくとも０．３０ｇ／ｃｍ^３、より好ましくは少なくとも０．４０ｇ／ｃｍ^３、さらにより好ましくは少なくとも０．４５ｇ／ｃｍ^３、より好ましくは少なくとも０．５０ｇ／ｃｍ^３、最も好ましくは少なくとも０．６ｇ／ｃｍ^３のかさ密度を有し得る。

【0358】

凍結乾燥したＢＬＧ単離物等の低密度粉末はふわふわしており、使用中に製造現場の空気中に容易に引き込まれる。これは、凍結乾燥粉末が他の食料製品に対する相互汚染のリスクを高め、ほこりの多い環境が衛生上の問題の原因であることが知られていることから、問題がある。極端な場合、ほこりの多い環境では粉塵爆発のリスクも高まる。

【0359】

本発明の高密度変形物は、取り扱いがより容易であり、周囲の空気に流れ込みにくい。

【0360】

本発明の高密度変異体の追加の利点は、それらが輸送中に占めるスペースが少なく、それにより、１つの体積単位で輸送することができるＢＬＧ単離粉末の重量を増加させることである。

【0361】

しかしながら、本発明の高密度変異体の利点は、それらが他の粉末食品の原料、例えば、粉砂糖（かさ密度およそ０．５６ｇ／ｃｍ^３）、グラニュー糖（かさ密度およそ０．７１ｇ／ｃｍ^３）、クエン酸粉末（かさ密度およそ０．７７ｇ／ｃｍ^３）等との粉末混合物で使用される場合、それらが分離しにくいことである。

【0362】

本発明のＢＬＧ単離粉末は、かさ密度が０．２～１．０ｇ／ｃｍ^３の範囲、好ましくは０．３０～０．９ｇ／ｃｍ^３の範囲、より好ましくは０．４０～０．８ｇ／ｃｍ^３の範囲、さらにより好ましくは０．４５～０．７５ｇ／ｃｍ^３、さらにより好ましくは０．５０～０．７５ｇ／ｃｍ^３の範囲、最も好ましくは０．６～０．７５ｇ／ｃｍ^３の範囲の範囲を有し得る。

【0363】

粉末のかさ密度は、例１．１７に従って測定される。

【0364】

本発明者らは、ＢＬＧのネイティブの立体構造を維持することが有利であることを見出し、ＢＬＧが酸性飲料に使用される場合、ＢＬＧのアンフォールディングの増加が乾いた口当たりのレベルの増加をもたらすという徴候を見てきた。

【0365】

固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）は、ＢＬＧのアンフォールディングの程度の尺度であり、本発明者らは、ＢＬＧのアンフォールディングが低いか全くないことと相関する高い固有トリプトファン蛍光発光比では、乾いた口当たりが少ないと観察されたことを見出した。固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）は、例１．１に従って測定される。

【0366】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、少なくとも１．１１の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）を有する。

【0367】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、少なくとも１．１２、好ましくは少なくとも１．１３、より好ましくは少なくとも１．１５、さらにより好ましくは少なくとも１．１７、及び最も好ましくは少なくとも１．１９の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）を有する。

【0368】

ＢＬＧ単離粉末にかなりの量の非タンパク質物質が含まれている場合は、固有トリプトファン蛍光発光比を測定する前にタンパク質画分を単離することが好ましい。そのため、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末のタンパク質画分は、少なくとも１．１１の固有トリプトファン蛍光発光比を有する。

【0369】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末のタンパク質画分は、少なくとも１．１２、好ましくは少なくとも１．１３、より好ましくは少なくとも１．１５、さらにより好ましくは少なくとも１．１７、及び最も好ましくは少なくとも１．１９の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）を有する。

【0370】

例えば、ＢＬＧ単離粉末を脱塩水に溶解し、タンパク質を保持するフィルターを使用して溶液を透析又は限外濾過ベースの透析に供することにより、ＢＬＧ単離粉末からタンパク質画分を分離する。ＢＬＧ単離粉末が干渉レベルの脂質を含む場合、かかる脂質は、例えば、精密濾過によって除去される。精密濾過と限外濾過／ダイアフィルトレーションの工程を組み合わせて、タンパク質画分から脂質と小分子の両方を除去することができる。

【0371】

ＢＬＧ単離粉末のかなりの量のＢＬＧが非凝集性ＢＬＧであることがしばしば好ましい。好ましくはＢＬＧの少なくとも５０％は、非凝集性ＢＬＧである。より好ましくは、ＢＬＧの少なくとも少なくとも８０％は、非凝集性ＢＬＧである。ＢＬＧの少なくとも９０％が非凝集性ＢＬＧであることがさらに好ましい。ＢＬＧの少なくとも９５％が非凝集性ＢＬＧであることが最も好ましい。ＢＬＧ単離粉末のＢＬＧのおよそ１００％が非凝集性ＢＬＧであることがさらにより好ましい。

【0372】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、最大１０％、好ましくは最大８％、より好ましくは最大６％、さらにより好ましくは最大３％、さらにより好ましくは最大１％、及び最も好ましくは最大０．２％のタンパク質変性度を有する。

【0373】

しかしながら、例えば、不透明な飲料が必要な場合のように、ＢＬＧ単離粉末が有意なレベルのタンパク質変性を有することもまた好ましい場合がある。したがって、本発明の他の好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、少なくとも１１％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも４０％、さらにより好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも７５％、最も好ましくは少なくとも９０％のタンパク質変性度を有する。

【0374】

ＢＬＧ単離粉末がかなりのレベルのタンパク質変性を有する場合、低レベルの不溶性タンパク質物質、すなわち、貯蔵中に飲料に沈殿する沈殿タンパク質物質を維持することがしばしば好ましい。不溶性物質のレベルは、例１．１０に従って測定される。

【0375】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、最大２０％重量／重量の不溶性タンパク質物質、好ましくは最大１０％重量／重量の不溶性タンパク質物質、より好ましくは最大５％重量／重量の不溶性タンパク質物質を含み、さらに好ましいのは最大３％重量／重量の不溶性タンパク質物質、最も好ましいのは最大１％重量／重量の不溶性タンパク質物質を含むことである。ＢＬＧ単離粉末が不溶性タンパク質物質を全く含まないことがさらに好ましい場合がある。

【0376】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、最大１９％、好ましくは最大１０％、より好ましくは最大５％、最も好ましくは０％のＢＬＧの結晶化度を有する。

【0377】

本発明の他の好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも６０％、最も好ましくは少なくとも８０％のＢＬＧの結晶化度を有する。これらの実施形態は、かなりの量の乾燥ＢＬＧ結晶を含み、タンパク質源を固体のコンパクトな形態で存在させるという利点を提供する。

【0378】

本発明者らは、ＢＬＧ単離粉末のｐＨ３．９での熱安定性が、透明な高タンパク質飲料に対するその有用性の良好な指標であることを見出した。ｐＨ３．９での熱安定性は、例１．２に従って測定される。

【0379】

ＢＬＧ単離粉末が、ｐＨ３．９で最大２００ＮＴＵ、好ましくは最大１００ＮＴＵ、より好ましくは最大６０ＮＴＵ、さらにより好ましい最大４０ＮＴＵの熱安定性を有し、最も好ましいのは最大２０ＮＴＵである。さらにより良好な熱安定性が可能であり、ＢＬＧ単離粉末は、好ましくは、ｐＨ３．９で最大１０ＮＴＵ、好ましくは最大８ＮＴＵ、より好ましくは最大４ＮＴＵの熱安定性を有し、さらに好ましいのは最大２ＮＴＵである。

【0380】

ＢＬＧ単離粉末の微生物の含有量は、好ましくは最小限に保たれる。しかしながら、微生物減少プロセスはタンパク質のアンフォールディング及び変性につながる傾向があるため、高度なタンパク質のネイティブ性及び低含有量の微生物の両方を得ることは困難である。本発明は、非常に低い微生物の含有量を得ると同時に、高レベルのＢＬＧのネイティブ性を維持することを可能にする。

【0381】

そのため、本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、最大１５０００コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｇを含む。好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、最大１００００ＣＦＵ／ｇを含む。より好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、最大５０００ＣＦＵ／ｇを含む。さらにより好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、最大１０００ＣＦＵ／ｇを含む。さらにより好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、最大３００ＣＦＵ／ｇを含む。最も好ましくは、ＢＬＧ単離粉末は、最大１００ＣＦＵ／ｇ、例えば最大１０ＣＦＵ／ｇ等を含む。特に好ましい実施形態では、粉末は無菌である。無菌のＢＬＧ単離粉末は、例えば、酸性ｐＨでの精密濾過及び熱処理等のＢＬＧ単離粉末の製造中に幾つかの物理的微生物減少プロセスを組み合わせることによって調製され得る。

【0382】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、ｉ）２～４．９、ｉｉ）６．１～８．５、又はｉｉｉ）５．０～６．０の範囲のｐＨを有し、
－少なくとも３０％重量／重量、好ましくは少なくとも８０％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９０％重量／重量の量の総タンパク質と、
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量の量のベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）と
－最大６％重量／重量の量の水と、
－最大２％重量／重量、好ましくは最大０．５％重量／重量の量の脂質と、を含み、
当該ＢＬＧ単離粉末は、
－少なくとも１．１１の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）
－最大１０％のタンパク質変性度、及び
－ｐＨ３．９で最大２００ＮＴＵの熱安定性、を有する。

【0383】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、ｉ）２～４．９、又はｉｉ）６．１～８．５の範囲のｐＨを有し、
－少なくとも３０％重量／重量、好ましくは少なくとも８０％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９０％重量／重量の量の総タンパク質と、
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、より好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９４％重量／重量の量のベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）と
－最大６％重量／重量の量の水と、
－最大２％重量／重量、好ましくは最大０．５％重量／重量の量の脂質と、を含み、
当該ＢＬＧ単離粉末は、
－少なくとも１．１１の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）
－最大１０％、好ましくは最大５％のタンパク質変性度、及び
－ｐＨ３．９で最大７０ＮＴＵ、好ましくは最大５０ＮＴＵ、さらにより好ましくは最大４０ＮＴＵの熱安定性、を有する。

【0384】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、ｉ）２～４．９、又はｉｉ）６．１～８．５の範囲のｐＨを有し、
－少なくとも３０％重量／重量の量の総タンパク質と、
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量の量のベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）と
－最大６％重量／重量の量の水と、を含み、
当該ＢＬＧ単離粉末は、
－少なくとも０．２ｇ／ｃｍ^３のかさ密度、
－少なくとも１．１１の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）
－最大１０％のタンパク質変性度、及び
－ｐＨ３．９で最大２００ＮＴＵの熱安定性、を有する。

【0385】

本発明の他の好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、２～４．９の範囲のｐＨを有し、
－少なくとも８０％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９４％重量／重量の量の総タンパク質と、
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、さらにより好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９４％重量／重量の量のベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）と
－最大６％重量／重量の量の水と、
－最大２％重量／重量、好ましくは最大０．５％重量／重量の量の脂質と、を含み、
当該ＢＬＧ単離粉末は、
－少なくとも０．２ｇ／ｃｍ^３、好ましくは少なくとも０．３ｇ／ｃｍ^３、より好ましくは少なくとも０．４ｇ／ｃｍ^３のかさ密度、
－少なくとも１．１１の固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）
－最大１０％、好ましくは最大５％、より好ましくは最大２％のタンパク質変性度、及び
－ｐＨ３．９で最大５０ＮＴＵ、好ましくは最大３０ＮＴＵ、さらにより好ましくは最大１０ＮＴＵの熱安定性、を有する。

【0386】

本発明のさらに好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、６．１～８．５の範囲のｐＨを有し、
－少なくとも８０％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９４％重量／重量の量の総タンパク質と、
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、さらにより好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９４％重量／重量の量のベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）と
－最大６％重量／重量の量の水と、
－最大２％重量／重量、好ましくは最大０．５％重量／重量の量の脂質と、を含み、
当該ＢＬＧ単離粉末は、
－少なくとも０．２ｇ／ｃｍ^３、好ましくは少なくとも０．３ｇ／ｃｍ^３、及びより好ましくは少なくとも０．４ｇ／ｃｍ^３のかさ密度、
－最大１０％、好ましくは最大５％、より好ましくは最大２％のタンパク質変性度、及び
－ｐＨ３．９で最大５０ＮＴＵ、好ましくは最大３０ＮＴＵ、さらにより好ましくは最大１０ＮＴＵの熱安定性、を有する。

【0387】

本発明のさらに好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、６．１～８．５の範囲のｐＨを有し、
－少なくとも８０％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９４％重量／重量の量の総タンパク質と、
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、さらにより好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９４％重量／重量の量のベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）と
－最大６％重量／重量の量の水と、
－最大２％重量／重量、好ましくは最大０．５％重量／重量の量の脂質と、を含み、
当該ＢＬＧ単離粉末は、
－少なくとも０．２ｇ／ｃｍ^３、好ましくは少なくとも０．３ｇ／ｃｍ^３、より好ましくは少なくとも０．４ｇ／ｃｍ^３のかさ密度、
－最大１０％、好ましくは最大５％、より好ましくは最大２％のタンパク質変性度、及び
－ｐＨ３．９で最大５０ＮＴＵ、好ましくは最大３０ＮＴＵ、さらにより好ましくは最大１０ＮＴＵの熱安定性、を有する。

【0388】

本発明のさらに好ましい実施形態では、ＢＬＧ単離粉末は、５．０～６．０の範囲のｐＨを有し、
－少なくとも８０％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、さらにより好ましくは少なくとも９４％重量／重量の量の総タンパク質と、
－総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量、好ましくは少なくとも９０％重量／重量、さらにより好ましくは総タンパク質に対して少なくとも９４％重量／重量の量のベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）と
－最大６％重量／重量の量の水と、
－最大２％重量／重量、好ましくは最大０．５％重量／重量の量の脂質と、を含み、
当該ＢＬＧ単離粉末は、
－少なくとも０．２ｇ／ｃｍ^３、好ましくは少なくとも０．３ｇ／ｃｍ^３、より好ましくは少なくとも０．４ｇ／ｃｍ^３のかさ密度、
－最大１０％、好ましくは最大５％、より好ましくは最大２％のタンパク質変性度、
－ｐＨ３．９で最大５０ＮＴＵ、好ましくは最大３０ＮＴＵ、さらにより好ましくは最大１０ＮＴＵの熱安定性、及び
－好ましくは、１０％未満のＢＬＧ結晶化度を有する。

【0389】

総タンパク質に対して少なくとも８５％重量／重量の量のＢＬＧを含む、ＢＬＧ単離粉末は、典型的には、
ａ）以下、
ｉ）２～４．９の範囲のｐＨ、
ｉｉ）６．１～８．５の範囲のｐＨ、又は
ｉｉｉ）５．０～６．０の範囲のｐＨ、を有する液体ＢＬＧ単離物を提供する工程であって、
当該液体ＢＬＧ単離物が、総タンパク質に対して少なくとも８５重量／重量の量のＢＬＧを含む工程、
ｂ）任意に、液体ＢＬＧ単離物を物理的微生物減少に供する工程、
ｃ）好ましくは、噴霧乾燥により液体ＢＬＧ単離物を乾燥させる工程、を含む、方法によって提供される。

【0390】

液体ＢＬＧ単離物は、好ましくは哺乳動物の乳から、好ましくは反芻動物、例えばウシ、ヒツジ、ヤギ、スイギュウ、ラクダ、ラマ、雌ウマ及び／又はシカの乳から調製される。ウシの乳由来のタンパク質が特に好ましい。したがって、ＢＬＧは好ましくはウシＢＬＧである。

【0391】

液体ＢＬＧ単離物は、幾つかの異なる方法で提供され得る。

【0392】

典型的には、液体ＢＬＧ単離物の提供は、以下の方法のうちの１つ又は２つ以上によってＢＬＧ濃縮組成物を提供するために、ホエイタンパク質フィードからＢＬＧを分離することを含むか、さらにはそれからなる：
－塩溶によるＢＬＧの結晶化又は沈殿、
－塩析によるＢＬＧのＢＬＧの結晶化又は沈殿、
－イオン交換クロマトグラフィー、及び
－限外濾過によるホエイタンパク質の分画。

【0393】

ＢＬＧ濃縮組成物を提供するための特に好ましい方法は、ＢＬＧの結晶化によるものであり、好ましくは塩溶によるか、或いは塩析によるものである。

【0394】

ホエイタンパク質フィードは、好ましくは、ＷＰＣ、ＷＰＩ、ＳＰＣ、ＳＰＩ、又はそれらの組み合わせである。

【0395】

「ホエイタンパク質フィード」という用語は、ＢＬＧ濃縮組成物及びその後の液体ＢＬＧ単離物が由来する組成物に関する。

【0396】

本発明の幾つかの実施形態では、ＢＬＧ濃縮組成物の調製は、米国特許第２，７９０，７９０号公報Ａ１によるｐＨ範囲３．６～４．０での高塩ＢＬＧ結晶化を含むか、又はそれからなる。

【0397】

本発明の他の実施形態では、ＢＬＧ濃縮組成物の調製は、ｄｅＪｏｎｇｈｅｔａｌ（ＭｉｌｄＩｓｏｌａｔｉｏｎＰｒｏｃｅｄｕｒｅＤｉｓｃｌｏｓｅｓＮｅｗＰｒｏｔｅｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ β－Ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，ＪＤａｉｒｙＳｃｉ．，ｖｏｌ．８４（３），２００１，ｐａｇｅｓ５６２－５７１）、又はＶｙａｓｅｔａｌ（Ｓｃａｌｅ－ＵｐｏｆＮａｔｉｖｅ β－ＬａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎＡｆｆｉｎｉｔｙＳｅｐａｒａｔｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓ，Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．８５：１６３９－１６４５，２００２）によって記載される方法を含むか、さらにはそれからなる。

【0398】

しかしながら、本発明の特に好ましい実施形態では、ＢＬＧ濃縮組成物は、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４５５３号明細書に記載されている塩溶条件下でｐＨ５～６での結晶化によって調製され、これは、全ての目的で参照により本明細書に組み込まれる。

【0399】

本発明の幾つかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ濃縮組成物は、総タンパク質に対して少なくとも９０％のＢＬＧを含み、好ましくはＢＬＧ結晶を含む、ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４５５３による食用ＢＬＧ組成物である。

【0400】

液体ＢＬＧ単離物として使用するために必要な特性をまだ持っていない場合、ホエイタンパク質フィードから分離されたＢＬＧ濃縮組成物を、液体ＢＬＧ単離物を提供する一環として、以下：
－脱塩、
－ミネラルの添加、
－希釈、
－濃縮、
－物理的微生物減少、及び
－ｐＨ調整、
の群から選択される１つ又は２つ以上の工程に供することができる

【0401】

脱塩の非限定的な例としては、例えば、透析、ゲル濾過、ＵＦ／ダイアフィルトレーション、ＮＦ／ダイアフィルトレーション、及びイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。

【0402】

ミネラル添加の非限定的な例としては、例えば、例えば、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、及び／又はＭｇの塩等の可溶性の食品に許容可能な塩の添加が含まれる。かかる塩は、例えば、リン酸塩、塩化物塩、又は例えば、クエン酸塩若しくは乳酸塩等の食用酸の塩であり得る。ミネラルを、固体、懸濁、又は溶解した形態で添加することができる。

【0403】

希釈の非限定的な例としては、例えば、水、脱塩水、又はミネラル、酸、塩基の水溶液等の液体希釈剤の添加が挙げられる。

【0404】

濃度の非限定的な例としては、例えば、蒸発、逆浸透、ナノ濾過、限外濾過及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0405】

濃度が全固形分に対してタンパク質の濃度を増加させる必要がある場合は、限外濾過又は代わりに透析等の濃縮工程を使用することが好ましい。濃度が全固形分に対してタンパク質の濃度を増加させる必要がない場合、例えば、蒸発、ナノ濾過及び／又は逆浸透が有用である可能性がある。

【0406】

物理的微生物減少の非限定的な例としては、例えば、熱処理、細菌濾過、ＵＶ照射、高圧処理、パルス電界処理、及び超音波が挙げられる。これらの方法は、当業者によく知られている。

【0407】

ｐＨ調整の非限定的な例としては、例えば、塩基及び／又は酸、好ましくは食品に許容可能な塩基及び／又は酸の添加が挙げられる。二価金属カチオンをキレート化することができる酸及び／又は塩基を使用することが特に好ましい。かかる酸及び／又は塩基の例は、クエン酸、クエン酸塩、ＥＤＴＡ、乳酸、乳酸塩、リン酸、リン酸塩、及びそれらの組み合わせである。

【0408】

以下において、ＢＬＧ濃縮組成物からの工程ａ）の液体ＢＬＧ単離物の提供の幾つかの好ましい実施形態。この文脈で言及されたプロセスの工程は、ＢＬＧ濃縮組成物に続くＢＬＧ含有生成物流に適用される。

【0409】

本発明を、特定の実施形態を参照して上で説明した。しかしながら、上記以外の実施形態は、本発明の範囲内で等しく可能である。本発明の様々な実施形態及び態様の異なる特徴及び工程は、特に明記しない限り、本明細書に記載されているもの以外の方法で組み合わせることができる。

【0410】

例
例１：分析の方法
例１．１：内因性トリプトファン蛍光によるタンパク質のネイティブ性の決定
トリプトファン（Ｔｒｐ）蛍光分光法は、タンパク質のフォールディング及びアンフォールディングを監視するためのよく知られたツールである。ネイティブタンパク質内に埋め込まれたＴｒｐ残基は、典型的には、折りたたまれていないタンパク質等の溶媒に曝露される位置に存在する場合よりも、３３０ｎｍ付近で最も高い蛍光発光を示す。折りたたまれていないタンパク質では、Ｔｒｐ蛍光発光の波長は典型的には、より高い波長へとシフトし、３５０ｎｍ付近で測定されることがよくある。本発明者らは、ここで、この遷移を利用して、３３０ｎｍ及び３５０ｎｍでの蛍光発光の比率を計算し、加熱温度の影響を調査することにより、熱的に誘発されたアンフォールディングを監視する。

【0411】

分析は以下の工程を含む：
・飲料組成物をＭＱ水で０．６ｍｇ／ｍＬに希釈した。
・３００μｌのサンプルを、気泡を避けて白色９６ウェルプレートに移すか、又は３ｍｌを１０ｍｍの石英キュベットに移した。
・３１０～４００ｎｍのトリプトファン蛍光発光強度を、５ｎｍスリットを使用して２９５で励起することにより上部から記録した。
・サンプルを、プレートリーダーアクセサリ（Ｇ９８１０Ａ）又はシングルキュベットホルダーを備えたＣａｒｙＥｃｌｉｐｓｅ蛍光分光光度計を使用して２２℃で測定した。
・発光強度比を、３３０ｎｍで測定された蛍光発光強度を３５０ｎｍでの発光強度で割ること、すなわちＲ＝Ｉ３３０／Ｉ３５０によって計算し、タンパク質のネイティブ率（ｎａｔｉｖｉｔｙ）の尺度として使用した。
ｏ少なくとも１．１１のＲは、優勢なネイティブＢＬＧ立体構造を表し、
ｏ１．１１未満のＲは、少なくとも部分的なアンフォールディング及び凝集を報告する。

【0412】

例１．２：ＰＨ３．９での熱安定性
ｐＨ３．９での熱安定性：
ｐＨ３．９での熱安定性は、ｐＨ３．９での長時間の低温殺菌時にタンパク質組成物が透明な状態を維持する能力の尺度である。

【0413】

ｐＨ３．９での熱安定性は、ｐＨ３．９の水溶液を形成し、試験する粉末又は液体のサンプルを水と混合することにより６．０％重量／重量タンパク質を含め（又は、希薄な液体の場合、代替的には、低温蒸発によって濃縮する）、最小限の０．１ＭＮａＯＨ又は０．１ＭＨＣｌでｐＨを３．９に調整することによって決定される。

【0414】

ｐＨを調整した混合物を３０分間静置した後、２５ｍＬの混合物を３０ｍＬの薄壁ガラス試験管に移す。７５．０℃の水浴に浸漬することで３００秒間、７５．０℃に加熱する。加熱後直ちにガラス試験管を氷浴に移して１～５℃に冷却し、熱処理されたサンプルの濁度を、例１．７に従って測定する。

【0415】

例１．３：ホエイタンパク質組成物のタンパク質変性度の決定
変性ホエイタンパク質は、ｐＨ４．６未満又はｐＨ４．６超のｐＨ値よりもｐＨ４．６での溶解度が低いことが知られているため、ホエイタンパク質組成物の変性度は、溶液中のタンパク質が安定しているｐＨでのタンパク質の総量に対するｐＨ４．６での可溶性タンパク質の量を測定することによって決定される。

【0416】

より具体的には、ホエイタンパク質の場合、分析されるホエイタンパク質組成物（例えば、粉末又は水溶液）は、以下に変換される：
－総タンパク質５．０％（重量／重量）を含み、ｐＨが７．０又は３．０の第１の水溶液、及び
－総タンパク質５．０％（重量／重量）を含み、ｐＨが４．６の第２の水溶液。

【0417】

ｐＨ調整を、３％（重量／重量）ＮａＯＨ（水溶液）又は５％（重量／重量）ＨＣｌ（水溶液）を使用して行う。

【0418】

第１の水溶液の総タンパク質含有量（ＰｐＨ７．０又は３．０）を、例１．５に従って決定する。

【0419】

第２の水溶液を室温で２時間保管し、続いて３０００ｇで５分間遠心分離する。上清のサンプルを回収し、例１．５に従って分析して、上清中のタンパク質濃度（Ｓ_{ｐＨ４．６}）を得る。

【0420】

ホエイタンパク質組成物のタンパク質変性度、Ｄを次のとおり計算する：
Ｄ＝（（ＰｐＨ７．０又は３．０－ＳｐＨ４．６）／ＰｐＨ７．０又は３．０）＊１００％

【0421】

例１．４逆相ＵＰＬＣ分析を使用したタンパク質変性の決定（ＰＨ４．６酸沈殿を伴う）。
ＢＬＧサンプル（非加熱参照及び加熱ＢＬＧ飲料組成物等）をＭＱ水で２％に希釈した。５ｍｌのタンパク質溶液、１０ｍｌのＭｉｌｌｉ－Ｑ、４ｍｌの１０％酢酸、及び６ｍｌの１．０ＭＮａＯＡｃを混合し、２０分間攪拌して、ｐＨ４．６付近で変性タンパク質を沈殿凝集させる。溶液を０．２２μｍフィルターで濾過し、凝集物及び非ネイティブタンパク質を除去する。

【0422】

全てのサンプルを、研磨水（ｐｏｌｉｓｈｅｄｗａｔｅｒ）を加えることによって同じ程度の希釈に供した。

【0423】

各サンプルについて、ＵＰＬＣカラム（ＰｒｏｔｅｉｎＢＥＨＣ４；３００Å；１．７μｍ；１５０×２．１ｍｍ）を備えたＵＰＬＣシステムに同じ容量を充填し、２１４ｎｍで検出した。

【0424】

サンプルを、次の条件を使用して流した：
バッファーＡ：Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水、０．１％重量／重量ＴＦＡ
バッファーＢ：ＨＰＬＣグレードのアセトニトリル、０．１％重量／重量ＴＦＡ
流量：０．４ｍｌ／分
勾配：０～６．００分２４～４５％Ｂ；６．００～６．５０分４５～９０％Ｂ；６．５０～７．００分９０％Ｂ；７．００～７．５０分９０～２４％Ｂ、及び７．５０～１０．００分２４％Ｂ。

【0425】

タンパク質標準（ＳｉｇｍａＬ０１３０）に対するＢＬＧピークの面積を使用して、サンプル中のネイティブｂＬＧの濃度を決定した（５レベルの検量線）

【0426】

サンプルをさらに希釈し、線形範囲外の場合は再注入した。

【0427】

例１．５：総タンパク質の決定
サンプルの総タンパク質含有量（真のタンパク質）を、以下によって決定する：
１）ＩＳＯ８９６８－１／２｜ＩＤＦ０２０－１／２－牛乳－窒素含有量の決定－第１／２部：ケルダール法を使用した窒素含有量の決定に準拠したサンプルの全窒素の窒素含有量の決定。
２）ＩＳＯ８９６８－４｜ＩＤＦ０２０－４－乳－窒素含有量の決定－第４部：非タンパク質窒素含有量の決定に準拠したサンプルの非タンパク質窒素の決定。
３）タンパク質の総量を（ｍ_総窒素－ｍ_{非タンパク質－窒素}）＊６．３８として計算する。

【0428】

例１．６：非凝集性ＢＬＧ、ＡＬＡ、及びＣＭＰの決定
非凝集性アルファ－ラクトアルブミン（ＡＬＡ）、ベータ－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）、及びカゼイノマクロペプチド（ＣＭＰ）の含有量を、それぞれ０．４ｍｌ／分のＨＰＬＣ分析で分析した。２５マイクロＬの濾過サンプルを、溶離液（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水４６５ｇ、アセトニトリル４１７．３ｇ及びトリフルオロ酢酸１ｍｌ）で平衡化したプレカラムＰＷｘｌ（６ｍｍ×４ｃｍ、Ｔｏｓｏｈａｓｓ、日本）を取り付けて、連続して接続された２つのＴＳＫｇｅｌ３０００ＰＷｘｌ（７．８ｍｍ３０ｃｍ、Ｔｏｓｏｈａｓｓ、日本）カラムに注入し、２１０ｎｍのＵＶ検出器を使用した。

【0429】

ネイティブアルファ－ラクトアルブミン（Ｃ_アルファ）、ベータ－ラクトグロブリン（Ｃ_ベータ）、及びカゼイノマクロペプチド（Ｃ_ＣＭＰ）の含有量の定量的決定を、対応する標準タンパク質で得られたピーク面積をサンプルのピーク面積と比較することによって行った。

【0430】

追加のタンパク質（非ＢＬＧタンパク質）の総量を、総タンパク質の量（例１．５に従って決定）からＢＬＧの量を差し引くことによって決定した。

【0431】

例１．７：濁度の測定
濁度は、空気中の煙と同様に、一般に肉眼では見えない多数の粒子によって引き起こされる流体の曇り又はもやである。

【0432】

濁度は比濁濁度単位（ＮＴＵ）で測定される。

【0433】

２０ｍｌの飲料／サンプルをＮＴＵガラスに添加し、Ｔｕｒｂｉｑｕａｎｔ（登録商標）３０００ＩＲ濁度計に入れた。ＮＴＵ値を安定化後に測定し、２回繰り返した。

【0434】

例１．８：粘度の決定
飲料調製物の粘度を、レオメーター（ＡｎｔｏｎＰａａｒ，ＰｈｙｓｉｃａＭＣＲ３０１）を使用して測定した。

【0435】

３．８ｍＬのサンプルをカップＤＧ２６．７に添加した。サンプルを２２℃に平衡化した後、５０ｓ^－１で３０秒間事前に剪断し、その後３０秒間の平衡時間、そして１ｓ^－１～２００ｓ^－１及び１ｓ^－１の剪断速度スイープを実行した。

【0436】

特に明記しない限り、粘度は１００ｓ^－１の剪断速度で単位センチポアズ（ｃＰ）で表される。測定されたｃＰ値が高いほど、粘度が高くなる。

【0437】

或いは、ＧｉｌｓｏｎによるＶｉｓｃｏｍａｎを使用して粘度を推定し、約３００ｓ^－１の剪断速度で報告した。

【0438】

例１．９：色の決定
色彩色差計（ＫｏｎｉｃａＭｉｎｏｌｔａ、ＣＲ－４００）を用いて色を測定した。１５ｇのサンプルを小さなペトリ皿（５５×１４．２ｍｍ、ＶＷＲカタログ番号３９１－０８９５）に追加して、気泡の形成を回避した。サンプルのタンパク質含有量は、６．０重量／重量％タンパク質以下に標準化した。

【0439】

クロマメーターを白色の較正プレート（Ｎｏ．１９０３３１７７）に較正した。光源をＤ６５に設定し、オブザーバーを２度に設定した。色（ＣＩＥＬＡＢ色空間、ａ＊値、ｂ＊値、Ｌ＊値）を、ペトリ皿の様々な場所での３つの個別の読み取り値の平均として、懸濁液を覆う蓋をして測定した。

【0440】

脱塩水基準の値は次のとおりである。
Ｌ＊３９．９７±０．３
ａ＊０．００±０．０６
ｂ＊－０．２２±０．０９

【0441】

測定値を、脱塩水測定値に基づいてデルタ／差の値に変換した。
デルタＬ＊＝Ｌ_{６．０重量／重量％タンパク質に標準化されたサンプル}＊－Ｌ_脱塩水＊、室温で測定。
デルタａ＊＝ａ_{６．０重量／重量％タンパク質に標準化されたサンプル}＊－ａ_脱塩水＊、室温で測定。
デルタｂ＊＝ｂ_{６．０重量／重量％タンパク質に標準化されたサンプル}－ｂ_脱塩水＊、室温で測定。

【0442】

サンプルは６．０重量／重量％タンパク質以下に標準化されている。

【0443】

Ｌ＊ａ＊ｂ＊色空間（ＣＩＥＬＡＢ空間とも称される）は、１９７６年に国際照明委員会（ＣＩＥ）によって定義された均一色空間の１つであり、明度及び色相を定量的に報告するために使用された（ＩＳＯ１１６６４－４：２００８（Ｅ）／ＣＩＥＳ０１４－４／Ｅ：２００７）。

【0444】

この空間では、Ｌ＊は明度（０～１００の値）を示し、Ｌ＊＝０で最も暗い黒、Ｌ＊＝１００で最も明るい白を示す。

【0445】

カラーチャネルａ＊及びｂ＊は、ａ＊＝０及びｂ＊＝０での真のニュートラルグレー値を表す。ａ＊軸は緑と赤の成分を表し、緑は負の方向、赤は正の方向である。ｂ＊軸は青と黄色の成分を表し、負の方向が青、正の方向が黄色である。

【0446】

例１．１０飲料安定性試験／不溶性タンパク質物質
３０００ｇで５分間遠心分離した際に、加熱されたサンプル中の総タンパク質の１５％未満が沈殿した場合、ホエイタンパク質飲料の組成は安定していると見なされた：
・およそ２０ｇのサンプルを遠心管に加え、３０００ｇで５分間遠心分離した。
・遠心分離前のタンパク質及び遠心分離後の上清のケルダール分析を使用して、タンパク質の回収率を定量した。例１．５を参照されたい。

【0447】

タンパク質の損失を計算する：

【数1】

【0448】

このパラメーターは、不溶性タンパク質物質のレベルと称されることもあり、液体サンプルと粉末サンプルの両方の分析に使用できる。サンプルが粉末の場合、１０ｇの粉末を９０ｇの脱塩水に懸濁し、２２℃で１時間穏やかに攪拌しながら水和させる。遠心管に対しておよそ２０ｇのサンプル（液体サンプル又は懸濁粉末サンプル等）を３０００ｇで５分間遠心分離する。遠心分離前のタンパク質（Ｐ_{ｔｏｔａｌ}）及び遠心分離後の上清（Ｐ_{３０００×ｇ}）のケルダール分析を使用して、例１．５に従ってタンパク質の回収率を定量した。

【0449】

不溶性タンパク質物質の量を計算する：

【数2】

【0450】

例１．１１：官能評価
熱処理された飲料調製物は、記述的な官能評価を受けた。飲料調製物は、プレート熱交換器を使用して加熱に供した。

【0451】

１容量のサンプルを１容量の水と混合し、非加熱ホエイタンパク質単離物と比較し、乳酸及びクエン酸も最終試飲セッションの前に属性リストを作成するために使用する。

【0452】

クラッカー、白茶、メロン、及び水を使用して、各サンプルの間に参加者の口を浄化した。

【0453】

周囲温度（２０～２５℃）の１５ｍｌ試験サンプルを小さなカップで提供した。

【0454】

試験サンプルは、無作為化された順序で３つの異なるブロックで３回にわたって１０名の個人にそれぞれ提供された。

【0455】

属性（上記の表を参照）を、０＝低強度、１５＝高強度で１５ｃｍスケールで評価した。

【0456】

統計分析は、「Ｐａｎｅｌｃｈｅｃｋ」ソフトウェアで、複数の反復に対して３元配置ＡＮＯＶＡ検定を使用して実施した。サンプルを固定し、パネルを無作為に設定した。

【0457】

最小の有意差値（文字に関連付けられた群のペアワイズ比較）を意味するボンフェローニ補正を使用して、サンプル間の有意差を評価した。

【0458】

例１．１２：イメージングによる透明度の決定
飲料調製物の写真を、「ｌｏｒｅｍｉｐｓｕｍ」のテキストが書かれた紙片に触れている濁度ＮＴＵ測定バイアルにサンプルを入れることによって行った。スマートフォンを使用してバイアルを撮影し、本発明者らは、バイアルを通してテキストがはっきりと観察できるかどうかを評価した。

【0459】

例１．１３：灰分含有量の決定
食品の灰分を、ＮＭＫＬ１７３：２００５「食品中の灰分重量計測式決定」に従って測定する。

【0460】

例１．１４：導電率の決定
水溶液の「導電率」（「比導電率」と称されることもある）は、溶液が電気を伝導する能力の尺度である。導電率は、例えば、２つの電極間の溶液のＡＣ抵抗を測定することによって決定され、結果は典型的には、ミリジーメンス／ｃｍ（ｍＳ／ｃｍ）の単位で示される。導電率は、例えば、ＥＰＡ（米国環境保護庁）の方法番号１２０．１に従って測定することができる。

【0461】

本明細書に記載されている導電率の値は、別段の指定がない限り、２５℃に正規化されている。

【0462】

導電率は、導電率計（テトラコン３２５電極を備えたＷＴＷＣｏｎｄ３２１０）で測定される。

【0463】

システムは、使用前にマニュアルに記載されているように較正されている。電極は、局所的な希釈を避けるために、測定が行われるのと同じタイプの媒質でよくすすいでおく。測定が行われる領域が完全に水没するように、電極を媒質に下げる。次いで、電極を攪拌して、電極に閉じ込められた空気を全て除去する。次いで、電極を、安定した値が表示から取得され、記録されるまで静止状態に保つ。

【0464】

例１．１５：溶液の全固形分の決定
溶液の全固形分は、ＮＭＫＬ１１０第２版、２００５（全固形分（水）－乳及び乳製品の重量分析）に従って決定することができる。ＮＭＫＬは、「ヨーロッパ標準分析法と食品分析に関する北欧委員会（ＮｏｒｄｉｓｋＭｅｔｏｄｉｋｋｏｍｉｔｅｆｏｒＮａｅｒｉｎｇｓｍｉｄｌｅｒ）」の略語である。

【0465】

溶液の含水量は、１００％から全固形分の相対量（％重量／重量）を引いたものとして計算できる。

【0466】

例１．１６：ＰＨの決定
全てのｐＨ値は、ｐＨガラス電極を使用して測定され、２５℃に正規化されている。

【0467】

ｐＨガラス電極（温度補償付き）は、使用前に注意深くすすぎ、使用前に較正する。

【0468】

サンプルが液体の場合、ｐＨは２５℃の溶液中で直接測定される。

【0469】

サンプルが粉末の場合、１０グラムの粉末を９０ｍｌの脱塩水に室温で激しく攪拌しながら溶解する。次いで、溶液のｐＨを２５℃で測定する。

【0470】

例１．１７：緩み密度及びかさ密度の決定
乾燥粉末の密度は、特定の条件下で特別なＳｔａｍｐｆ体積計（メスシリンダー）を使用して分析される粉末の重量と体積の関係として定義される。密度は典型的には、ｇ／ｍＬ又はｋｇ／Ｌで表される。

【0471】

この方法では、乾燥粉末のサンプルをメスシリンダーに詰め込む。指定された回数のタッピングの後、製品の体積を読み取り、密度を計算する。

【0472】

この方法により、以下の３種類の密度を定義ですることができる：
・充填密度、これは、指定されたメスシリンダーに移された後の粉末の体積で割った質量である。
・緩み密度、この規格で指定された条件に従って、１００回のタッピング後の粉末の体積で割った質量である。
・かさ密度、この規格で指定された条件に従って、６２５回のタッピング後の粉末の体積で割った質量である。

【0473】

この方法では、０～２５０ｍｌに目盛りを付けた、２５０ｍｌのメスシリンダー、重量１９０±１５ｇ（Ｊ．ＥｎｇｅｌｓｍａｎｎＡ．Ｇ．６７０５９Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ／Ｒｈ）の特殊なメスシリンダー、及び例えば、Ｊ．エンゲルスマンＡ．Ｇ．のＳｔａｍｐｆ体積計を使用する。

【0474】

乾燥製品の緩み密度及びかさ密度を、以下の手順で決定する。

【0475】

前処理：
測定するサンプルを室温で保管する。

【0476】

次いで、容器を繰り返し回転及び転倒させてサンプルを完全に混合する（粒子の粉砕を避ける）。容器は２／３を超えて満たされていない。

【0477】

手順：
１００．０±０．１グラムの粉末を量り、メスシリンダーに移す。容量Ｖ_０をｍｌで読み取る。

【0478】

１００ｇの粉末がシリンダーに収まらない場合は、量を５０又は２５グラムに減らす必要がある。

【0479】

メスシリンダーをＳｔａｍｐｆ体積計に固定し、これを１００回をタップする。スパチュラで表面を平らにし、容量Ｖ_１００をｍｌで読み取る。

【0480】

タブの数を６２５（１００タップを含む）に変更する。軽くたたいた後、表面を水平にし、容量Ｖ_６２５をｍｌで読み取る。

【0481】

密度の計算：
次の式に従って、ｇ／ｍＬで表される緩み密度及びかさ密度を計算する：
かさ密度＝Ｍ／Ｖ
式中、Ｍは計量されたサンプルをグラムで示し、Ｖは６２５回のタッピング後の容量をｍｌで示す。

【0482】

例１．１８：粉末の含水量の決定
食品の含水量は、ＩＳＯ５５３７：２００４（粉乳－含水量の測定（基準法））に従って測定される。ＮＭＫＬは、「ヨーロッパ標準分析法と食品分析に関する北欧委員会（ＮｏｒｄｉｓｋＭｅｔｏｄｉｋｋｏｍｉｔｅｆｏｒＮａｅｒｉｎｇｓｍｉｄｌｅｒ）」の略語である。

【0483】

例１．１９：カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウム、リンの量の測定（ＩＣＰ－ＭＳ法）
カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウム、及びリンの総量は、サンプルを最初にマイクロ波分解を使用して分解し、次いでミネラル（複数の場合がある）の総量がＩＣＰ装置を使用して決定される手順を使用して決定される。

【0484】

装置：
マイクロ波はＡｎｔｏｎＰａａｒ製であり、ＩＣＰはＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＩｎｃ製のＯｐｔｉｍａ２０００ＤＶである。

【0485】

材料：
１ＭＨＮＯ_３
２％ＨＮＯ_３中のイットリウム
５％ＨＮＯ_３中のカルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウム、及びリンの適切な標準

【0486】

前処理：
一定量の粉末を量り取り、その粉末をマイクロ波分解チューブに移す。５ｍｌの１ＭＨＮＯ_３を添加する。電子レンジの指示に従って、電子レンジでサンプルを分解する。分解されたチューブをドラフトチャンバーに入れ、蓋を外して揮発性のヒュームを蒸発させる。

【0487】

測定手順：
既知量のＭｉｌｌｉ－Ｑ水を使用して、前処理したサンプルをＤｉｇｉＴＵＢＥに移す。２％ＨＮＯ_３中のイットリウムの溶液を分解チューブに添加し（５０ｍｌの希釈サンプルあたり約０．２５ｍｌ）、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水を使用して既知の容量に希釈する。製造元が説明する手順を使用して、ＩＣＰでサンプルを分析する。

【0488】

ブラインドサンプルは、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水を使用して、１０ｍｌの１ＭＨＮＯ_３及び０．５ｍＬのイットリウム２％ＨＮＯ_３溶液の混合物を最終容量１００ｍＬに希釈することによって調製される。

【0489】

予想されるサンプル濃度を挟む濃度を持つ少なくとも３つの標準サンプルを調製する。

【0490】

例１．２０：フロシン値の決定：
フロシン値は、“ＭａｉｌｌａｒｄＲｅａｃｔｉｏｎＥｖａｌｕａｔｉｏｎｂｙＦｕｒｏｓｉｎｅＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎＤｕｒｉｎｇＩｎｆａｎｔＣｅｒｅａｌＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ”，Ｇｕｅｒｒａ－Ｈｅｒｎａｎｄｅｚｅｔａｌ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｅｒｅａｌＳｃｉｅｎｃｅ２９（１９９９）１７１－１７６に記載されるとおりに決定され、タンパク質の総量は例１．５に従って決定される。フロシン値は、タンパク質１００ｇあたりｍｇ単位のフロシンで報告される。

【0491】

例１．２１：液体中のＢＬＧの結晶化度の決定
以下の方法を使用して、ｐＨが５～６の範囲の液体中のＢＬＧの結晶化度を決定する。
ａ）問題の液体のサンプル１０ｍｌを、孔径０．４５ミクロンのＣＡメンブレンを備えたＭａｘｉ－Ｓｐｉｎフィルターに移す。
ｂ）遠心分離機を２℃に保って、直ちにフィルターを１５００ｇで５分間回転させる。
ｃ）スピンフィルターの被保持物側に２ｍｌの冷Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水（２℃）を加え、直ちに、遠心分離機を２℃に冷却したまま、フィルターを１５００ｇで５分間スピンし、透過液（透過液Ａ）を収集して、体積を測定し、例１．３１に概説されている方法を使用してＨＰＬＣを介してＢＬＧ濃度を決定する。
ｄ）フィルターの被保持物側に４ｍｌの２ＭＮａＣｌを加え、すばやく攪拌し、混合物を２５℃で１５分間放置する。
ｅ）直ちにフィルターを１５００ｇで５分間回転させ、透過液を収集する（透過液Ｂ）
ｆ）例１．３１に概説されている方法を使用して、透過液Ａ及び透過液ＢのＢＬＧの総重量を決定し、その結果を重量パーセントではなくＢＬＧの総重量に変換する。透過液Ａ中のＢＬＧの重量はｍ_透過物Ａと称され、透過液ＢのＢＬＧの重量はｍ_透過物Ｂと称される。
ｇ）ＢＬＧに関する液体の結晶化度は、次のように決定される：
結晶化度＝ｍ_透過物Ｂ／（ｍ_透過物Ａ＋ｍ_透過物Ｂ）＊１００％

【0492】

例１．２２：乾燥粉末中のＢＬＧの結晶化度の決定
この方法は、乾燥粉末中のＢＬＧの結晶化度を決定するために使用される。
ａ）５．０グラムの粉末サンプルを２０．０グラムの冷Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水（２℃）と混合し、２℃で５分間放置する。
ｂ）問題の液体のサンプルを０．４５ミクロンのＣＡメンブレンを備えたＭａｘｉ－Ｓｐｉｎフィルターフィルターに移す。
ｃ）遠心分離機を２℃に保って、直ちに、フィルターを１５００ｇで５分間回転させる。
ｄ）スピンフィルターの被保持物側に２ｍＬの冷Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水（２℃）を添加し、直ちにフィルターを１５００ｇで５分間回転させ、透過液（透過液Ａ）を収集し、容量を測定してＢＬＧを決定する。例１．６に概説されている方法を使用してＨＰＬＣを介して濃縮し、結果を重量パーセントではなくＢＬＧの総重量に変換する。透過液ＡのＢＬＧの重量は、ｍ_透過液Ａと称される。
ｆ）次いで、粉末中のＢＬＧの結晶化度を、次の式を使用して計算する：

【数3】

式中、ｍ_{ＢＬＧ合計}は、工程ａ）の粉末サンプル中のＢＬＧの総量である。

【0493】

粉末サンプルのＢＬＧの総量が不明な場合は、別の５ｇの粉末サンプル（同じ粉末供給源に由来する）を２０．０グラムのＭｉｌｌｉ－Ｑ水に懸濁し、ＮａＯＨ水溶液を添加してｐＨを７．０に調整し、混合物を攪拌しながら２５℃で１時間放置し、最後に例１．３１を使用して粉末サンプルのＢＬＧの総量を決定することにより、これを決定してもよい。

【0494】

例１．２３：ＵＦ透過導電率の決定
１５ｍＬのサンプルを３ｋＤａカットオフ（３０００ＮＭＷＬ）のＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ－１５遠心フィルターユニットに移し、４０００ｇで２０～３０分間、又は導電率を測定するのに十分な容量のＵＦ透過液がフィルターユニットの下部に蓄積するまで遠心分離する。遠心分離直後に導電率を測定する。サンプルの取り扱い及び遠心分離は、サンプルの供給源の温度で行われる。

【0495】

例１．２４：粉末中の乾燥ＢＬＧ結晶の検出
粉末中の乾燥ＢＬＧ結晶の存在は、次の方法でされ得る：

【0496】

分析する粉末のサンプルを再懸濁し、４℃の温度の脱塩水に２部の水及び１部の粉末の重量比で穏やかに混合し、４℃で１時間再水和させる。

【0497】

再水和されたサンプルを、結晶の存在を識別するために顕微鏡検査によって調べ、好ましくは複屈折を検出するために平面偏光を使用する。

【0498】

結晶様物質を分離し、結晶構造の存在を確認するためＸ線結晶構造解析に供し、また、好ましくは結晶格子（空間群及び単位格子の寸法）がＢＬＧ結晶の格子に対応していることも確認する。

【0499】

分離された結晶様物質の化学組成を分析して、その固体が主にＢＬＧで構成されていることを確認する。

【0500】

例１．２５：乳糖の総量の決定
乳糖の総量は、ＩＳＯ５７６５－２：２００２（ＩＤＦ７９－２：２００２）「粉乳、乾燥アイスミックス、及びプロセスチーズ－乳糖含有量の測定－第２部：乳糖のガラクトース部分を利用した酵素法」に従って測定される。

【0501】

例１．２６：炭水化物の総量の決定：
炭水化物の量は、ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈＴｏｔａｌＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＡｓｓａｙＫｉｔ（ＣａｔＭＡＫ１０４－１ＫＴ）を使用して決定され、このキットでは、炭水化物が加水分解され、フルフラール及びヒドロキシフルフラールに変換されて、これらが４９０ｎｍで分光光度的にモニターされるクロマゲンに変換される。

【0502】

例１．２７：脂質の総量の決定
脂質の量は、ＩＳＯ１２１１：２０１０（脂肪含有量の決定－Ｒｏｓｅ－Ｇｏｔｔｌｉｅｂ重量分析法）に従って決定される。

【0503】

例１．２８：ブリックスの決定
ブリックス測定を、研磨水（逆浸透によって濾過された水で最大０．０５ｍＳ／ｃｍの導電率が得られる）に対して較正されたＰＡＬ－αデジタル手持ち屈折計（Ａｔａｇｏ）を使用して行った。

【0504】

およそ５００μｌのサンプルを装置のプリズム面に移し、測定を開始した。測定値を読み取り、記録した

【0505】

ホエイタンパク質溶液のブリックスは、全固形分（ＴＳ）の含有量に比例し、ＴＳ（％重量／重量）はおよそブリックス＊０．８５である。

【0506】

例１．２９ラクトフェリン及びラクトペルオキシダーゼの測定
ラクトフェリンの濃度は、Ｓｏｙｅｕｒｔ２０１２で概説されているＥＬＩＳＡイムノアッセイによって決定される（Ｓｏｙｅｕｒｔｅｔａｌ；Ｍｉｄ－ｉｎｆｒａｒｅｄｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎｃｏｎｔｅｎｔｉｎｂｏｖｉｎｅｍｉｌｋ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｎｄｉｃａｔｏｒｏｆｍａｓｔｉｔｉｓ；Ａｎｉｍａｌ（２０１２），６：１１，ｐｐ１８３０－１８３８）。

【0507】

ラクトペルオキシダーゼの濃度は、市販のウシラクトペルオキシダーゼキットを使用して決定される。

【0508】

例１．３０：コロニー形成単位の数の決定
サンプル１グラムあたりのコロニー形成単位の数の決定は、ＩＳＯ４８３３－１：２０１３（Ｅ）：食品及び動物の飼料原料の微生物学－微生物の列挙のための水平法－３０℃でのコロニーカウント手法に従って実行される。

【0509】

例１．３１：ＢＬＧ、ＡＬＡ、及びＣＭＰの総量の決定
この手順は、ＡＬＡ、ＢＬＧ、ＣＭＰ等のタンパク質、及び任意に、組成物中の他のタンパク質種を定量分析するための液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法である。例１．６の方法とは反対に、本方法はまた、凝集されたものの中に存在するタンパク質を測定し、したがって、問題の組成物中のタンパク質種の総量の測定値を提供する。

【0510】

分離モードはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）であり、この方法ではサンプル溶媒及びＨＰＬＣ移動相の両方として６ＭグアニジンＨＣＩバッファーを使用する。メルカプトエタノールは、タンパク質又はタンパク質凝集物のジスルフィド（Ｓ－Ｓ）を還元して、折りたたまれていない単量体構造を作成する還元剤として使用される。

【0511】

サンプル前処理は、移動相に１０ｍｇ相当のタンパク質を溶解することで容易に達成される。

【0512】

２つのＴＳＫ－ＧＥＬＧ３０００ＳＷＸＬ（７．７ｍｍ×３０．０ｃｍ）カラム（ＧＰＣカラム）及びガードカラムを直列に配置して、原材料中の主要なタンパク質の適切な分離を達成する。

【0513】

溶出された分析対象物を、ＵＶ検出（２８０ｎｍ）によって検出及び定量する。

【0514】

機器／材料：
１．手動シールワッシャー付きＨＰＬＣポンプ５１５（Ｗａｔｅｒｓ）
２．ＨＰＬＣポンプコントローラーモジュールＩＩ（Ｗａｔｅｒｓ）
３．オートサンプラー７１７（Ｗａｔｅｒｓ）
４．デュアル吸光度検出器２４８７（Ｗａｔｅｒｓ）
５．定量的レポートを生成できるコンピュータソフトウェア（Ｅｍｐｏｗｅｒ３、Ｗａｔｅｒｓ）
６．分析カラム：２つのＴＳＫ－ＧＥＬＧ３０００ＳＷＸＬ（７．８×３００ｍｍ、Ｐ／Ｎ：０８５４１）。
ガードカラム：ＴＳＫ－ＧｕａｒｄＣｏｌｕｍｎＳＷｘＬ（６．０×４０ｍｍ、Ｐ／Ｎ：０８５４３）。
７．超音波浴（Ｂｒａｎｓｏｎ５２００）
０．２μｍ酢酸セルロースメンブレンを備えた８．２５ｍｍシリンジフィルター（５１４－００６０、ＶＷＲ）

【0515】

手順：
移動相：
Ａ．ストック緩衝液。
１．１０００ｍｌのビーカーに５６．６ｇのＮａ_２ＨＰＯ_４、３．５ｇのＮａＨ_２ＰＯ_４、及び２．９ｇのＥＤＴＡを量り入れる。
８００ｍｌの水に溶かす。
２．ｐＨを測定し、必要に応じてＨＣｌ（ｐＨを下げる）又はＮａＯＨ（ｐＨを上げる）で７．５±０．１に調整する。
３．１０００ｍｌのメスフラスコに移し、水で希釈して容量を調整する。

【0516】

Ｂ．６ＭグアニジンＨＣｌ移動相。
１．２０００ｍＬのビーカーに１１４６ｇのグアニジンＨＣｌを量り取り、２００ｍｌのストック緩衝液（Ａ）を加える。
２．マグネチックスターラー（５０℃）で混合しながら、この溶液を水で約１６００ｍｌに希釈する。
３．ＮａＯＨでｐＨを７．５±０．１に調整する。４．２０００ｍｌのメスフラスコに移し、水で希釈して容量を調整する。５．０．２２μｍメンブレンフィルターを備えた溶媒濾過装置を使用して濾過する。

【0517】

較正標準。
定量する各タンパク質の較正標準を、以下の方法で調製する：
１．約２５ｍｇのタンパク質参照標準を１０ｍｌに正確に（０．０１ｍｇまで）計量し、
メスフラスコに入れ、１０ｍｌの水に溶かす。
これは、タンパク質のタンパク質ストック標準液（Ｓ１）である。
２．２００μｌのＳ１を２０ｍｌメスフラスコにピペットで入れ、移動相で希釈して容量を調整する。
これは、低希釈標準溶液ＷＳ１である。
３．５００μＬのＳ１を１０ｍｌメスフラスコにピペットで入れ、移動相で希釈して容量を調整する。
これは標準溶液ＷＳ２である。
４．５００μＬのＳ１を５ｍｌメスフラスコにピペットで入れ、移動相で希釈して容量を調整する。
これは標準溶液ＷＳ３である。
５．７５０μＬのＳ１を５ｍｌメスフラスコにピペットで入れ、移動相で希釈して容量を調整する。
これは標準ソリューションＷＳ４である。
６．１．０ｍＬのＳ１を５ｍＬメスフラスコにピペットで入れ、移動相で容量まで希釈する。
これは、高希釈標準溶液ＷＳ５である。
７．目盛り付き使い捨てピペットを使用して、１．５ｍＬのＷＳ１～５を別々のバイアルに移す。
各バイアル及びキャップに１０μＬの２－メルカプトエタノールを加える。溶液を１０秒間ボルテックスする。
標準液を周囲温度で約１時間置く。
８．０．２２μｍの酢酸セルロースシリンジフィルターを使用して標準液を濾過する。

【0518】

タンパク質の純度は、ケルダール（Ｎ×６．３８）を使用して測定し、ＨＰＬＣを使用して標準溶液ＷＳ５からの面積％を測定する。
タンパク質（ｍｇ）＝「タンパク質標準重量」（ｍｇ）×Ｐ１×Ｐ２
Ｐ１＝Ｐ％（ケルダール）
Ｐ２＝タンパク質面積％（ＨＰＬＣ）

【0519】

サンプルの調製
１．元のサンプルのタンパク質２５ｍｇに相当する量を２５ｍＬメスフラスコに量り取る。
２．およそ２０ｍＬの移動相を加え、サンプルを約３０分間溶解させる。
３．移動相を容量に加え、１６７μＬの２－メルカプトエタノールを２５ｍｌのサンプル溶液に加える。
４．約３０分間超音波処理し、その後、サンプルを周囲温度で約１時間半放置する。
５．溶液を混合し、０．２２μｌの酢酸セルロースシリンジフィルターを使用して濾過する。

【0520】

ＨＰＬＣシステム／カラム
カラムの平衡化
１．ＧＰＣガードカラムと２つのＧＰＣ分析カラムとを直列に接続する。
新しいカラムは通常、リン酸塩緩衝液中で出荷される。
２．新しいカラムに３０～６０分間０．１ｍＬ／分から０．５ｍＬ／分で徐々に水を流す。
約１時間フラッシュを続ける。
３．流量を０．５ｍＬ／分から０．１ｍＬ／分に徐々に下げ、
リザーバーにおいて移動相に交換する。
４．圧力ショックを回避するために、ポンプの流量を３０～６０分間で０．１ｍＬ／分から０．５ｍＬ／分まで徐々に増やし、０．５ｍＬ／分のままにする。
５．１０種類のサンプルを注入してカラムを飽和させ、ピークが溶出するのを待つ。
これは、カラムのコンディショニングに役立つ。
この工程は、次の注入の前に各注入が完了するのを待つ必要はなく、行われる。
６．移動相で少なくとも１時間平衡化する。

【0521】

結果の計算
定量されるタンパク質、例えばアルファ－ラクトアルブミン、ベータ－ラクトグロブリン、及びカゼイノマクロペプチドの含有量の定量的決定を、対応する標準タンパク質で得られたピーク面積をサンプルのピーク面積と比較することによって行った。結果は、特定のタンパク質／１００ｇの元のサンプル、又は元のサンプルの重量に対する特定のタンパク質の重量パーセントとして報告される。

【0522】

例２：粗ホエイタンパク質濃縮物からのベータ－ラクトグロブリンの結晶化
プロトコル：
標準的なチーズ製造プロセスからのスイートホエイに由来し、１．２ミクロンのフィルターで濾過されたラクトース枯渇ＵＦ保持液を、ＢＬＧ結晶化プロセスのフィードとして使用した。スイートホエイフィードを、４６ミルのスペーサー、フィード圧力１．５～３．０バールでＫｏｃｈＨＦＫ－３２８タイプのメンブレンを使用し、全固形分２１％（ＴＳ）±５のフィード濃度を使用し、またイアフィルトレーション媒質として研磨水（逆浸透によって濾過された水で、最大０．０５ｍＳ／ｃｍの導電率が得られる）を使用して、限外濾過セットアップ上でコンディショニングした。限外濾過中のフィード及び保持液の温度はおよそ１２℃であった。次いで、ＨＣｌを加えることによってｐＨを調整して、およそ５．４０のｐＨを得た。保持液の導電率の低下が２０分間にわたって０．０３ｍＳ／ｃｍを下回るまで、ダイアフィルトレーションを続けた次いで、保持液をおよそ３０％ＴＳに濃縮した（濃縮保持液の総重量に対しておよそ２３．１％の総タンパク質）。濃縮された保持液のサンプルを３０００ｇで５分間遠心分離したが、目に見えるペレットは形成されなかった。上清をＨＰＬＣ分析に供した。フィードの組成を表１に示す。

【0523】

濃縮された保持液に、自発的なＢＬＧ結晶化から得られた０．５ｇ／Ｌの純粋なＢＬＧ結晶材料によりシードした（フィード２の関連で例３に記載されるとおり）。シーディング材料は、ＢＬＧ結晶スラリーをＭｉｌｌｉＱ水で５回洗浄し、各洗浄後にＢＬＧ結晶を収集することによって調製した。洗浄後、ＢＬＧ結晶を凍結乾燥し、乳棒及び乳鉢を使用して粉砕し、次いで、２００ミクロンのふるいに通した。したがって、結晶化シードの粒子径は２００ミクロン未満であった。

【0524】

濃縮された保持液を３００Ｌの結晶化タンクに移し、そこで約４℃に冷却し、穏やかに攪拌しながらこの温度で一晩保持した。翌朝、冷却された濃縮保持液のサンプルを試験管に移し、視覚的及び顕微鏡的に検査した。一晩で、急速に沈降する結晶が明らかに形成された。結晶と母液の両方を含む混合物の実験室サンプルを、氷水浴中でさらに０℃に冷却した。母液及び結晶を３０００ｇで５分間遠心分離して分離し、ＨＰＬＣ分析のため上清及びペレットのサンプルを採取した。結晶を冷研磨水で一度洗浄し、次に再度遠心分離してからペレットを凍結乾燥させた。

【表1】

【0525】

ＨＰＬＣによるＢＬＧ相対収量の定量：
全てのサンプルを、研磨水（ｐｏｌｉｓｈｅｄｗａｔｅｒ）を加えることによって同じ程度の希釈に供した。サンプルを０．２２ミクロンのフィルターで濾過した。各サンプルについてＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＪｕｐｉｔｅｒ（登録商標）５μｍＣ４３００Å、ＬＣカラム２５０×４．６ｍｍ（ＰａｒｔＮｕｍｂｅｒ：００Ｇ－４１６７－Ｅ０）を備えたＨＰＬＣシステムに同じ容量をロードし、２１４ｎｍで検出した。

【0526】

サンプルを、次の条件を使用して流した：
バッファーＡ：ＭｉｌｌｉＱ水、０．１％重量／重量ＴＦＡ
バッファーＢ：ＨＰＬＣグレードのアセトニトリル、０．０８５％重量／重量ＴＦＡ
流量：１ｍｌ／分
勾配：０～３０分８２～５５％Ａ及び１８～４５％Ｂ；３０～３２分５５～１０％Ａ及び４５～９０％Ｂ；３２．５～３７．５分１０％Ａ及び９０％Ｂ；３８～４８分１０～８２％Ａ及び９０～１８％Ｂ。

【0527】

データ処理：
全てのサンプルを同じ方法で処理したため、本発明者らは、ＢＬＧピークの面積を直接比較して、相対収量を得ることができる。結晶にはＢＬＧのみが含まれており、サンプルは全て同じ方法で処理されているため、アルファ－ラクトアルブミン（ＡＬＡ）の濃度、したがってＡＬＡの面積は全てのサンプルで同じはずである。したがって、結晶化前後のＡＬＡの面積は、相対収量を計算する際の補正係数（ｃｆ）として使用される。

【数4】

【0528】

相対収量を、次の式で計算する。

【数5】

【0529】

結果
スイートホエイに由来するＢＬＧの結晶化の前後から得られたクロマトグラムから、ＢＬＧの濃度の大幅な減少が起こったことが明らかであり、前述の収率の計算を使用して、除去されたＢＬＧの収率を６４．５％重量／重量と決定した。

【0530】

結晶スラリーを顕微鏡で調べた。サンプルには六方晶が含まれており、その多くは２００ミクロンよりかなり大きいサイズであり、観察された結晶がシーディング結晶だけではないことを示している。針で押すと簡単に粉々になり、タンパク質の結晶であることが確認された。

【0531】

洗浄された結晶生成物のクロマトグラムは、ＢＬＧがクロマトグラムの総面積の９８．９％を占めることを示している。ＢＬＧ生成物の純度は、追加の洗浄によってさらに高めることができる。

【0532】

結論：
この例は、驚くべきことに、総タンパク質に対して４８％を超える非ＢＬＧタンパク質を含む粗ホエイタンパク質濃縮物からＢＬＧを選択的に結晶化することが可能であり、得られたＢＬＧ結晶単離物が非常に高い純度を有することを実証している。この発見は、ＢＬＧが他のタンパク質成分から穏やかな方法で分離され、高温及び問題のある化学物質への長時間の曝露を回避することが好まれる、工業用乳タンパク質分離の新たなアプローチへの道を開く。

【0533】

例３：３種類のホエイタンパク質溶液におけるＢＬＧの結晶化
プロトコル：
例２と同じ実験的及び分析的設定を使用して、３つの異なるタイプのホエイタンパク質含有原材料を結晶化のためのフィードとして試験した。ただし、フィード２を用いて行われた実験ではシードは使用されなかった。フィード１及び２は、スイートホエイに基づいており、例２に記載されているように、処理前にＳｙｎｄｅｒＦＲ膜を介して脂肪を減少させた。フィード３は酸性ホエイに由来した。

【0534】

３つのフィードの組成を、下記表２、表３、及び表４に示す。フィード３は２１％ＴＳ（フィードの総重量に対して１３．３％重量／重量の総タンパク質）で結晶化され、他の２つ（フィード１の総タンパク質は２６．３％重量／重量、フィード２は２５．０％）よりも有意に低濃度であった。

【0535】

結晶化した供給物１のスラリーを、０．４５ミクロンのＣＡ膜を備えたＭａｘｉ－Ｓｐｉｎフィルター上で１５００ｇで５分間遠心分離した。次いで、２倍量のＭｉｌｌｉＱ水をフィルターケーキに加えてから、再度遠心分離した。得られたフィルターケーキをＨＰＬＣで分析した。フィード２からのペレットを２倍量のＭｉｌｌｉＱ水で洗浄し、標準条件下で再度遠心分離してから、ペレットをＨＰＬＣで分析した。フィード３からのペレットを洗浄せずに分析した。

【0536】

フィード２から作製された結晶を１０％ＴＳに希釈し、１ＭＮａＯＨを使用してｐＨをｐＨ７に調整して、結晶化を逆転させた。結晶化を逆転させるために、フィード２からの結晶スラリー、３６％ＴＳにＮａＣｌを加えた。

【表2】

【表3】

【表4】

【0537】

結果
フィード１：
フィードのタンパク質組成物及び母液のクロマトグラムから、ＢＬＧの大部分が上記プロセスによって結晶として回収されたことが明らかである。単離されたＢＬＧの収率（例２に記載されるように計算される）は、フィード中のＢＬＧの総量に対しておよそ６５％である。

【0538】

結晶化期間の初期に撮影されたサンプルの顕微鏡写真、及び結晶化が終了したときに撮影されたサンプルの顕微鏡写真から、ＢＬＧ結晶が比較的壊れやすいことが明らかである。幾つかの結晶は攪拌中に壊れるように見え、六角形又は菱形の形状から結晶のフラグメントに変換され、結晶のフラグメントは依然として非常にコンパクトで明確に見えるが、より不規則な形状をしている。

【0539】

分離してスピンフィルターで洗浄したＢＬＧ結晶のクロマトグラムから、純度が非常に高く、他のホエイタンパク質の除去が非常に効率的であることがわかる。

【0540】

フィード２：
フィード２のタンパク質組成物及び得られた母液のクロマトグラムから、ＢＬＧの大部分が除去されていることが明らかであり、計算された収率はフィード２中のＢＬＧの総量に対して８２％であった。

【0541】

結晶化の前後のフィード２を調べると、結晶化中にフィードが透明な液体（攪拌磁石が見える）から乳白色の不透明な液体に変化したことがわかる。

【0542】

ＢＬＧ結晶の顕微鏡写真は、結晶の大部分が破壊されているが、六角形の形状を示している。

【0543】

２倍量のＭｉｌｌｉＱ水で洗浄した後のＢＬＧ結晶の分離ペレットのクロマトグラムは、結晶が非常に高純度でＢＬＧを含んでいることを明確に示している。

【0544】

導電率を上げる（ＮａＣｌを加える）又はｐＨを変える（ＮａＯＨを加えることでｐＨを７に調整する）ことで、環境が結晶構造に適さなくなるようにすると、いずれの場合も、ＢＬＧ結晶が溶解するにつれて乳白色の懸濁液が透明の液体に変わることを示している。

【0545】

フィード２から得られた結晶調製物のミネラル組成を表５に示す。本発明者らは、リンとタンパク質の比率が非常に低かったことが、結晶調製物を腎臓病の患者のタンパク質源として適したものすると認識している。

【表5】

【0546】

フィード３：
フィード３のタンパク質組成物及び得られた母液のクロマトグラムから、ＢＬＧの大部分が単離されたことが明らかである（フィード中のＢＬＧの総量に対して計算された収率７０．３％）。結晶化前にタンパク質含有量が多ければ、得られる収量はさらに高かったであろう。

【0547】

フィード３（実質的にＣＭＰを含まない）から単離されたＢＬＧ結晶の顕微鏡写真は、結晶が六角形ではなく長方形の形状を有していたことを示している。長方形の結晶は六角形の結晶よりも頑丈に見えた。洗浄せずに分離した結晶ペレットのクロマトグラムの場合、クロマトグラムは、結晶が六角形ではなく長方形であるにもかかわらず、ＢＬＧ結晶であることを明確に示している。

【表6】

【0548】

フィード３に由来する結晶調製物は、４５ｍｇのＰ／１００ｇタンパク質を含んでいた。本発明者らは、リンとタンパク質の比率が非常に低いことが、結晶調製物を腎臓病の患者のタンパク質源として適したものとすると認識している。

【0549】

結論：
３つのフィードはいずれもＢＬＧ結晶化プロセスに適していた。ＢＬＧ結晶は、塩を加えるか、又はｐＨ若しくは温度を上げることで簡単に溶解した。この新たな方法により、リンの含有量が非常に少ないＢＬＧ製剤を調製でき、該調製物を腎疾患を有する患者のタンパク質源として適したものとしている。

【0550】

例４：噴霧乾燥されたＢＬＧ結晶の調製及びかさ密度の決定
例３（フィード２を使用）で生成されたＢＬＧ結晶の一部を、デカンター遠心分離機で、１２００ｇ、５１８０ＲＰＭ、６４ミルのスペーサー（ミルは１／１０００インチを意味する）により１１０ＲＰＭ差、及び２５～３０Ｌ／時のフローで分離した。次いで、ＢＬＧ結晶相を研磨水と１：１で混合し、同じ設定を使用してデカンター遠心分離機で再度分離した。次いで、ＢＬＧ結晶相を研磨水と混合して、それをおよそ２５％の乾燥物を含み、およそ８０のＢＬＧの結晶化度を有するスラリーにして、続いて、１８０℃の入口温度及び８５℃の出口温度を有するパイロットプラント噴霧乾燥機で予熱せずに乾燥させた。噴霧乾燥までの液体流の温度は１０～１２℃であった。出口でサンプリングされて得られた粉末は、４．３７％重量／重量の含水量を有していた。

【0551】

スラリー中のＢＬＧの結晶化度はおよそ９０％であった。

【0552】

本発明者らはまた、３５０ｇ、２７５０ＲＰＭ、６４ミルのスペーサーにより１５０ＲＰＭ差、及び７５Ｌ／時の流量でデカンター遠心分離機上においてＢＬＧ結晶及び母液のスラリーを分離することに成功した。続いて、ＢＬＧ結晶相を研磨水と１：２で混合した。次に、ＢＬＧ結晶相を研磨水と混合してより薄いスラリーにし、その後、上記と同じパラメーターを使用してパイロットプラント噴霧乾燥機で乾燥させた。

【0553】

次いで、噴霧乾燥粉末のかさ密度を例１．１７に従って測定し、同じ装置で乾燥させた標準ＷＰＩのかさ密度と比較した。標準のＷＰＩのかさ密度（６２５回のスタンピングに基づく）は０．３９ｇ／ｍＬであり、これはＷＰＩ粉末の通常の範囲の上限である。しかしながら、噴霧乾燥されたＢＬＧ結晶調製物のかさ密度は０．６８ｇ／ｍＬであり、標準のＷＰＩのかさ密度よりも７５％超高かった。これは本当に驚くべきことであり、ロジスティック及び適用に関する両方の利点を数多く提供する。

【表7】

【0554】

続いて、噴霧乾燥されたＢＬＧ結晶調製物のサンプルを冷脱塩水に再懸濁すると、ＢＬＧ結晶は依然として顕微鏡検査によってはっきりと見えた。クエン酸又はＮａＣｌを添加すると、ＢＬＧ結晶が溶解し、不透明な結晶懸濁液が透明な液体に変化した。

【0555】

本発明者らは、乾燥工程中の長時間の加熱が、結晶形態であるＢＬＧの量を減少させるという徴候を見てきた。したがって、ＢＬＧ結晶調製物の熱曝露は可能な限り低いことが好ましい。

【0556】

結論：
この例は、ＢＬＧ結晶を含むスラリーを噴霧乾燥できること、及び乾燥工程中の加熱が制御されている場合、ＢＬＧ結晶が再懸濁された噴霧乾燥粉末にまだ存在することを示している。

【0557】

本発明者らはさらに、ＢＬＧ結晶を含むホエイタンパク質粉末のかさ密度が、溶解したタンパク質流の通常の噴霧乾燥によって得られるものよりもかなり高いことを見出した。高密度粉末は、粉末１ｋｇあたりに必要な包装材料が少なくて済み、所与のコンテナ又はトラックでより多くの粉末（質量）を輸送できるため、より費用効果の高い粉末の包装及びロジスティクスが可能になる。

【0558】

高密度粉末はまた、取り扱いが容易であり、製造及び使用中のふわふわ及びほこりが少ないように見える。

【0559】

例５：低リンタンパク質飲０例３からの精製ＢＬＧ生成物（フィード３から得られた結晶調製物）を使用して、６種類の低リンインスタント飲料粉末を調製した。全ての乾燥原料をブレンドしてインスタント飲料粉末を得てから、脱塩水と混合して各サンプル１０ｋｇを得て、１０℃で１時間水和させた。

【表8】

【0560】

６種類のサンプルのサブサンプルの濁度をＴｕｒｂｉｑｕａｎｔ（登録商標）３０００ＩＲ濁度計で測定し、粘度をＧｉｌｓｏｎ製のｖｉｃｏｍａｎで測定した。結果を下の表に示す。

【表9】

【0561】

６種類の低リン飲料サンプルのサブサンプルを含む試験管の写真を図３に示す。左から右に、サブサンプルはサンプルＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＦであった。試験管の目視検査により、濁度測定が検証され、全ての飲料サンプルが透明であり、特にサンプルＣ及びＤ（ｐＨ３．０）は非常に透明であったことが記録された。低粘度は、飲料サンプルを容易に飲めることを示している。

【0562】

飲料の調製に使用された原料はいずれもリンが少なく、不要なミネラルを含まなかった。したがって、得られた飲料は、リン含有量がおよそ４５ｍｇＰ／１００ｇタンパク質であり、概してミネラル含量が非常に低かった。したがって、インスタント飲料粉末から調製された６種類の液体食品は、腎臓病患者のインスタントタンパク質飲料としての使用に適していた。

【0563】

例６：動的クロスフロー濾過による結晶分離
標準的なチーズ製造プロセスからのスイートホエイに由来し、１．２ミクロンのフィルターで濾過されたラクトース枯渇ＵＦ保持液を結晶化プロセスのフィードとして使用した。スイートホエイフィードを、４６ミルのスペーサー、フィード圧力１．５～３．０バールでＫｏｃｈＨＦＫ－３２８タイプのメンブレンを使用し、全固形分１０％（ＴＳ）±５のフィード濃度を使用し、またイアフィルトレーション媒質として研磨水（逆浸透によって濾過された水で、最大０．０５ｍＳ／ｃｍの導電率が得られる）を使用して、限外濾過セットアップ上でコンディショニングした。限外濾過中のフィード及び保持液の温度はおよそ１２℃であった。次いで、ＨＣｌを加えることによってｐＨを調整して、およそ５．６０のｐＨを得た。保持液の導電率が１．３０ｍＳ／ｃｍを下回るまで、ダイアフィルトレーションを続けた次いで、保持液をおよそ２７％ＴＳ（濃縮保持液の総重量に対しておよそ２１％の総タンパク質）に濃縮する前に、供給物を２５℃に加熱した。透過導電率は、濃縮終了時に０．３３ｍＳ／ｃｍであった。濃縮された保持液のサンプルを３０００ｇで５分間遠心分離したが、目に見えるペレットは形成されなかった。

【0564】

濃縮された保持液を３００Ｌの結晶化タンクに移し、そこで約６℃に冷却し、穏やかに攪拌しながらこの温度で一晩保持した。翌朝、保持液が結晶化していた。母液及び結晶を３０００ｇで５分間遠心分離して分離し、ＨＰＬＣ分析のため上清及びペレットのサンプルを採取した。このプロセスからのＢＬＧの収率を６７％と計算した。

【0565】

３００Ｌのタンクからの結晶スラリーを、口径５００ｎｍの１つのディスクメンブレンを使用するＡｎｄｒｉｔｚＤＣＦ１５２Ｓシステムのフィードに使用した。濾過を８℃で行い、回転速度は３２Ｈｚであり、膜貫通圧力は０．４バールであった。このシステムは、保持液が連続的に除去される大型のユニットとは異なり、濾過チャンバー内に保持液が蓄積されるデッドエンド濾過として機能する。濾過は４０分の間安定して行われ、その時点で濾過チャンバー内に蓄積した固形物が濾過に影響を及ぼし始めた。

【0566】

結晶塊の量は、ＤＦＣ操作中に大幅に増加した。

【0567】

結論：ＤＣＦは、ＭＬから結晶を分離するための安定した効率的な手段を提供する。必要に応じて、洗浄液をＤＣＦに追加することができた。

【0568】

例７：様々なホエイタンパク質製品のタンパク質変性度
市販製品と４つのＢＬＧ単離物のタンパク質変性度を比較した。ＢＬＧ単離物は、本発明のインスタント飲料粉末を調製するのに適している。サンプルを以下に説明する。

【0569】

サンプルＢ～Ｅを次の方法で調製した。
結晶スラリーを、例６に記載するように調製し、例４に記載するように分離した。分離したＢＬＧスラリーの一部を取り出し、４つに分けた。

【0570】

サンプルＢ：分離されたＢＬＧ結晶スラリーの第１の部分を、３％ＮａＯＨを使用してＢＬＧ結晶スラリーのｐＨを７．０１に調整することにより、乾燥せずに再溶解し、次いで、サンプルをブリックス６に希釈して、およそ５％のタンパク質溶液を作製した。

【0571】

サンプルＣ：分離したＢＬＧ結晶スラリーの第２の部分を凍結乾燥した。次いで、粉末を研磨水に再懸濁し、３％ＮａＯＨを使用してｐＨを７．０９に調整し、サンプルをブリックス６に希釈して、およそ５％のタンパク質溶液を作製した。

【0572】

サンプルＤ：分離されたＢＬＧ結晶スラリーの第３の部分を、３％ＮａＯＨを使用してｐＨを７．０に調整することによって再溶解し、次いで凍結乾燥した。次いで、凍結乾燥した粉末を研磨水に再懸濁し、ｐＨを７．０７と測定した。次いで、サンプルをブリックス６に希釈して、およそ５％のタンパク質溶液を作製した。

【0573】

サンプルＥ：分離されたＢＬＧ結晶スラリーの第４の部分を、例４に記載されるように処理し、噴霧乾燥した。次いで、粉末を研磨水に再懸濁し、３％ＮａＯＨを使用してｐＨを７．０４に調整した。次いで、サンプルをブリックス６に希釈して、およそ５％のタンパク質溶液を作製した。

【0574】

各サンプルのタンパク質変性度を、例１．３に従って決定し、結果を下記表に示す

【0575】

結論：
乾燥方法に関係なく、ＢＬＧ単離物の変性タンパク質の程度は驚くほど低く、比較に使用された市販のＷＰＩでみられるものの１０分の１にすぎなかった。噴霧乾燥されたＢＬＧ結晶スラリー製品が依然として全ての生成物の中で最も低い変性度を有することは特に驚くべきことである。

【0576】

例８：噴霧乾燥された酸性ＢＬＧ単離粉末の製造
ホエイタンパク質フィード
標準的なチーズ製造プロセスからのスイートホエイに由来するラクトース枯渇ＵＦ保持液は１．２ミクロンのフィルターで濾過されており、ＢＬＧ結晶化プロセスのフィードとして使用される前にＳｙｎｄｅｒＦＲメンブレンにより脂肪が減少されていた。フィードの化学組成を表１０に示す。本発明者らは、この例で言及されているＢＬＧ、ＡＬＡ等の特定のタンパク質の全ての重量パーセントが、総タンパク質に対する非凝集性タンパク質の重量パーセントに関係していることを認識している。

【0577】

コンディショニング
スイートホエイフィードを、全固形分２１％（ＴＳ）±５のフィード濃度まで、４６ミルのスペーサー、フィード圧力１．５～３．０バールで、ＫｏｃｈＨＦＫ－３２８タイプのメンブレン（７０ｍ^２メンブレン）を使用し、またダイアフィルトレーション媒質として研磨水（逆浸透によって濾過された水で、最大０．０５ｍＳ／ｃｍの導電率が得られる）を使用して、２０℃の限外濾過セットアップ上でコンディショニングした。次いで、ｐＨがおよそ５．５になるようにＨＣｌを加えることによってｐＨを調整した。保持液の導電率の低下が２０分間にわたって０．１ｍＳ／ｃｍを下回るまで、ダイアフィルトレーションを続けた次に、透過液フローが１．４３Ｌ／時／ｍ^２を下回るまで、保持液を濃縮した。濃縮保持液の第１のサンプルを採取し、３０００ｇで５分間遠心分離した。第１のサンプルの上清をＢＬＧ収量の測定に使用した。

【0578】

結晶化
濃縮された保持液を３００Ｌの結晶化タンクに移し、そこで再水和され噴霧乾燥されたＢＬＧ結晶から作られた純粋なＢＬＧ結晶材料と共にシードした。続いて、シードされたホエイタンパク質溶液を、２０℃からおよそ６℃まで、およそ１０時間かけて冷却して、ＢＬＧ結晶を形成して成長させた。

【0579】

冷却後、結晶を含むホエイタンパク質溶液のサンプル（第２のサンプル）を採取し、３０００ｇで５分間の遠心分離によってＢＬＧ結晶を分離した。第２のサンプルに由来する上清及び結晶ペレットを以下に説明するようにＨＰＬＣ分析に供した。結晶化の収率を、以下に概説するように計算し、５７％と決定した。

【表10】

【0580】

ＨＰＬＣを使用したＢＬＧ収率の決定：
第１及び第２のサンプルの上清を研磨水を加えることによって同程度に希釈し、希釈した上清を０．２２μｍのフィルターで濾過した。濾過及び希釈した上清ごとに、同じ容量をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＪｕｐｉｔｅｒ（登録商標）５μｍＣ４３００Å、ＬＣカラム２５０×４．６ｍｍ、Ｅａ．を備えたＨＰＬＣシステムに充填し、２１４ｎｍで検出した。

【0581】

サンプルを、以下の条件を使用して流した：
バッファーＡ：ＭｉｌｌｉＱ水、０．１％重量／重量ＴＦＡ
バッファーＢ：ＨＰＬＣグレードのアセトニトリル、０．０８５％重量／重量ＴＦＡ
流量：１ｍｌ／分
カラム温度：４０℃
勾配：０～３０分８２～５５％Ａ及び１８～４５％Ｂ；３０～３２分５５～１０％Ａ及び４５～９０％Ｂ；３２．５～３７．５分１０％Ａ及び９０％Ｂ；３８～４８分１０～８２％Ａ及び９０～１８％Ｂ。

【0582】

データ処理：
両方の上清を同じ方法で処理したため、ＢＬＧピークの面積を直接比較して、相対収量を計算することができる。結晶にはＢＬＧのみが含まれており、サンプルは全て同じ方法で処理されているため、アルファ－ラクトアルブミン（ＡＬＡ）の濃度、したがってＡＬＡの面積は全てのサンプルで同じはずである。したがって、結晶化前後のＡＬＡの面積は、相対収量を計算する際の補正係数（ｃｆ）として使用される。

【数6】

【0583】

相対収量を、次の式で計算する。

【数7】

【0584】

ＢＬＣ結晶の酸溶解
結晶化タンクからの残りの材料を、デカンターを使用して、３５０ｇ、２７５０ＲＰＭ、６４スペーサーにより１５０ＲＰＭ差、及び７５Ｌ／時のフィードフローで分離した後、供給物を研磨水と１：２で混合した。次いで、結晶を迅速に溶解させるためリン酸を加えてｐＨをおよそ３．０に下げる前に、デカンターからのＢＬＧ結晶／固相を研磨水と混合してより薄いスラリーにした。

【0585】

ＢＬＧ結晶を溶解した後、純粋なＢＬＧタンパク質液を、結晶化のためのフィードを調製するために使用したのと同じＵＦ設定で１５ブリックスに濃縮し、ｐＨをおよそ３．８の最終ｐＨに調整した。次いで、液体ＢＬＧ単離物を７５度に５分間加熱し、続いて１０℃に冷却した。熱処理により、熱処理前の１３７．０００ＣＦＵ／ｇから熱処理後の１０００ＣＦＵ／ｇ未満に微生物負荷が減少することがわかった。熱処理はタンパク質の変性を引き起こさず、固有のトリプトファン蛍光比（３３０ｎｍ／３５０ｎｍ）は１．２０と決定され、ＢＬＧ分子のネイティブ立体構造を示している。

【0586】

ＢＬＧを、１８０℃の入口温度及び７５℃の出口温度を有するパイロットプラント噴霧乾燥機で乾燥した。出口でサンプリングされた得られた粉末は、およそ４％重量／重量の含水量を有し、粉末の化学組成を表１１に示す。乾燥粉末のサンプルを溶解し、タンパク質変性度を１．５％と決定し、固有トリプトファン蛍光発光比（Ｉ３３０／Ｉ３５０）を１．２０と測定した。

【表11】

【0587】

噴霧乾燥粉末のかさ密度（６２５タップ）は０．２～０．３ｇ／ｃｍ^３と推定された。

【0588】

結論：上記のプロセスを使用することにより、本発明者らは、処理中にタンパク質の変性又はタンパク質のアンフォールディングを実質的に発生させることなく熱処理できる高純度のＢＬＧ生成物を製造することができた。熱処理は、タンパク質生成物に損傷を与えることなく、細菌レベルを大幅に低下させた。

【0589】

本発明者らは、噴霧乾燥の前にタンパク質含有量を増加させることにより、さらに高いかさ密度を得ることができるという徴候を見てきた。また、本発明者らは、噴霧乾燥に使用される入口及び／又は出口温度が低下した場合、さらに低い程度の変性が得られることを観察した。

【0590】

例９：噴霧乾燥したｐＨ中性ＢＬＧ単離粉末の製造
例２と同じプロトコル及び実験設定を使用する場合、表１２に示されるラクトース還元ホエイタンパク質単離物をコンディショニングし、結晶化のためのフィードに使用した。結晶化の収率を６８％と計算した。

【0591】

本発明者らは、この例で言及されているＢＬＧ及びＡＬＡ等の特定のタンパク質の全ての重量パーセントが、総タンパク質に対する非凝集性タンパク質の重量パーセントに関係していることを認識している。

【表12】

【0592】

結晶化タンクからの残りの材料を、デカンター上で、３５０ｇ、２７５０ＲＰＭ、６４スペーサーによる１５０ＲＰＭ差、及び７５Ｌ／時の供給流量で分離した後、供給物を研磨水と１：２で混合した。次いで、結晶を迅速に溶解させるため０．１Ｍ水酸化カリウムを加えて、ｐＨをおよそ７に調整する前に、デカンターからのＢＬＧ結晶／固相を研磨水と混合してより薄いスラリーにした。

【0593】

結晶を溶解した後、純粋なＢＬＧタンパク質液を、結晶化のためのホエイタンパク質溶液を調製するために使用したのと同じＵＦ設定で１５ブリックスに濃縮し、ｐＨを７．０の最終ｐＨに調整した。ＢＬＧを、１８０℃の入口温度及び７５℃の出口温度を有するパイロットプラント噴霧乾燥機で乾燥した。出口でサンプリングして得られた粉末は、およそ４％重量／重量の含水量を有していた。粉末の組成を表１３に示す。乾燥後、粉末の一部を脱塩水に溶解し、タンパク質変性度を９．０％と決定し、固有のトリプトファン蛍光比（３３０ｎｍ／３５０ｎｍ）は１．１６であった。

【表13】

【0594】

噴霧乾燥粉末のかさ密度（６２５タップ）は０．２～０．３ｇ／ｃｍ^３と推定された。

【0595】

結論：上記のプロセスを使用することにより、本発明者らは、処理中のタンパク質の変性が最小限であるか又は全くない、ｐＨ中性で高純度のＢＬＧ生成物を製造することができる。本発明者らは、噴霧乾燥の前にタンパク質含有量を増加させることにより、さらに高いかさ密度を得ることができるという徴候を見てきた。また、本発明者らは、噴霧乾燥に使用される入口及び／又は出口温度が低下した場合、さらに低い程度の変性が得られることを観察した。噴霧乾燥の前にミネラル含量を減らすことにより、変性のレベルをさらに下げることができる。

【0596】

例１０：コーティングされたＢＬＧ単離粉末の調製
例４又は例９に記載されるとおりに製造した噴霧乾燥ＢＬＧ単離物を使用して、コーティングされたＢＬＧ単離物を流動床（ＤＩＯＳＮＡ、ＭＩＮＩＬＡＢＸＰ番号３６５～１４６ｌ）で製造した。入口温度は６０℃であった。プロセスの期間中、粉末温度は４０～５０℃であり、空気流は１時間あたり２５～３５ｍ^３であった。コーティング材料を５０ｇの脱塩水に溶解し、流動床にゆっくりと注入し、そこで噴霧した。各バッチについて、５００ｇの噴霧乾燥されたＢＬＧ単離物を使用した。コーティング材料を添加した後、コーティングされたＢＬＧ単離物の含水量が４～５％になるまで乾燥を続けた。この設定を使用して、２５ｇのクエン酸でコーティングされたＢＬＧ単離物、及び３０ｇのクエン酸三ナトリウムでコーティングされたＢＬＧ単離物を生成した。

【0597】

表に示すように試験サンプルを調製し、以下に説明するように溶解度に関して分析した。記載されている１０％重量／重量溶液に加えて、ＢＬＧ単離粉末の３０％重量／重量溶液を調製して試験した。試験サンプルを、以下に記載されるように、濡れ性に関してさらに分析した。加えて、試験サンプルを、例１．１１に設定されたパラメーターに従って、訓練を受けた２名の試験担当者によって感覚的に評価した。

【0598】

例８に由来するＢＬＧ単離粉末を使用して、レシチンでコーティングされた粉末を、上記と同じ流動床で生成した。５００ｇの粉末を流動床に加え、入口温度は７５℃であり、空気流は２５ｍ^３／時であった。粉末温度が３８℃に達したとき、５０ｍＬの水をネブライザーを介してゆっくりと加えた。粉末温度を４５℃まで上昇させ、５ｍｌのレシチンをネブライザーを通して注入した。粉末を６５℃に加熱し、水分が５％未満になるまで乾燥させた。

【0599】

溶解性試験：本試験により、本発明の粉末の溶解性及び溶解しやすさ（ｒｅａｄｉｎｅｓｓ）を測定することができる。密封可能な透明な試験管内の９０グラムの脱塩水（８℃）に１０グラムの粉末を加える。混合物を手で３０秒間激しく振とうする。混合物を直ちに評価し、１分間放置した後、混合物を再度評価する。評価は、液相の透明性、泡の形成、色、及び粉末がどの程度溶解したかというパラメーターの目視検査によって行われる。

結果

【0600】

結論：製造したＢＬＧ単離粉末は、良好な凝集構造を持ち、水に容易に溶解した。全てのコーティングされたＢＬＧ単離粉末（サンプル１、３～５、及び７～８）は、この試験で通常コーティングされたＷＰＩ（試験サンプル２）と同等又はそれ以上の性能を示した。３０％のバージョンを試験すると、コーティングされたものとされていないものの両方のＢＬＧ単離物を驚くほど簡単に溶解できたため（試験サンプル１、３～５、７～８）、タンパク質濃度が３０％を超える可能性があると考えられる。３０％溶液（サンプル７～８）のコーティングされたＢＬＧ単離物及びコーティングされていないＢＬＧ単離物はいずれも、泡の中に目に見える粒子があった標準ＷＰＩ（サンプル９）と比較して容易に溶解した。

【0601】

濡れ性：該方法を粉末の濡れ性を表すために使用する。濡れ性は、サンプル全体が濡れるまでにかかる時間として定義される。０．５グラムの粉末を計り取り、直径５ｃｍの円筒形容器内の１００ｇの脱塩水（５℃）の表面に置く。粉末を水面に置いてから粉末が溶解するか、水面を通過するまでの時間を測定する。

結果

【0602】

結論：コーティングされたＢＬＧ単離粉末（サンプル１０、１２、１４）は、クエン酸でコーティングされたＢＬＧ単離粉末（サンプル１３）を除いて、通常のインスタント化されたＷＰＩ（サンプル１１、１５）と同様の方法で濡れた。コーティングされていないＢＬＧ単離粉末が標準のＷＰＩ（サンプル６）よりもはるかによく濡れたことは驚くべきことであった。

【0603】

例１１：コーティングされていないＢＬＧ単離物の濡れ性
この例では、コーティングされていない酸性ＢＬＧ単離物及びコーティングされていない中性ＢＬＧ単離物の濡れ性を、コーティングされていないホエイタンパク質単離物（ＷＰＩ）の濡れ性と比較する。濡れ性は、サンプル全体が濡れるまでにかかる時間として定義される。０．５グラムの粉末を計り取り、直径５ｃｍの円筒形容器内の１００ｇの脱塩水（１０℃）の表面に置く。粉末を水面に置いてから粉末が溶解するか、水面を通過するまでの時間を測定する。

結果

【0604】

結論：コーティングされていないＢＬＧ単離粉末（サンプル２、３）が標準のＷＰＩ（サンプル１）よりもはるかによく濡れたことは驚くべきことであった。

【0605】

例１２：インスタント飲料粉末の調製
栄養補助食品として使用されるインスタント粉末の調製。

【0606】

インスタント粉末１００ｇを、以下の原料をブレンドすることによって調製する：例４で調製される少なくとも８５％重量／重量のＢＬＧを含むホエイタンパク質濃縮物９１グラム、及びダイズレシチン４グラム。

【0607】

１００グラムのインスタント粉末には、次のようなエネルギー分布を持つ３６０Ｋｃａｌが含まれている：脂質から２Ｅ％、炭水化物から１Ｅ％、タンパク質から９７Ｅ％。インスタント粉末から調製された食品を、インスタント粉末を水と混合して飲料を得るか、又は粉末を通常の食事に加えることによって、栄養失調の患者又は栄養失調のリスクのある患者の処置のためのタンパク質サプリメントとして使用できる。１０～１５グラムのインスタント粉末を１５～２５℃の温度の水中で攪拌する。調製されたインスタント粉末飲料は、味、色及び粘度がよい。

【0608】

例１３：インスタント飲料粉末の調製
ＢＬＧを含む栄養的に完全なインスタント粉末の調製。

【0609】

１００ｇのインスタント粉末を、植物油（パーム核油、ココナッツ油、ナタネ油、及びヒマワリ油からなる混合物）１８．２グラム、グルコースシロップ５６．４グラム、並びに例４で調製される９０％重量／重量のＢＬＧ及びダイズレシチン約３グラムを含むホエイタンパク質濃縮物少なくとも２０グラムをブレンドすることによって調製する。

【0610】

さらに、クエン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、リン酸水素マグネシウム、リン酸水素カリウム、塩化マグネシウム、塩化コリン、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、芳香族（ａｒｏｍａ）、硫酸鉄、Ｌ－アスコルビン酸、硫酸亜鉛、クエン酸マグネシウム、ＤＬ－アルファ－トコフェリルアセタート、硫酸マンガン、ニコチンアミド、Ｄ－ビオチン、硫酸銅、カルシウム－Ｄ－パントテン酸、プテロイルモノグルタミン酸、フッ化ナトリウム、ＤＬ－α－トコフェロール、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、カロテノイド、パルミチン酸レチニル、リボフラビン、シアノコバラミン、コレカルシフェロール、塩化クロム、モリブデンナトリウム、ヨウ化カリウム、亜セレン酸ナトリウム及びフィトメナジオンを添加して、３８１μｇのＲＥビタミンＡ、０．９１ｍｇのカロテノイド、３．３μｇのビタミンＤ、５．９ｍｇのα－ＴＥビタミンＥ、２４μｇのビタミンＫ、０．６９ｍｇのビタミンＢ１、０．７４ｍｇのビタミンＢ２、８．３ｍｇの－ＮＥナイアシン、２．５ｍｇのパントテン酸、０．７９μｇのビタミンＢ６、１２３μｇの葉酸、０．９８μｇのビタミンＢ１２、２４μｇのビオチン、６０ｍｇのビタミンＣ、１５６ｍｇのコリン、１．１７グラムの塩、４６９ｍｇのナトリウム、７０５ｍｇのカリウム、５７８ｍｇの塩化物、３７１ｍｇのカルシウム、３３７ｍｇのリン、１０７ｍｇのマグネシウム、７．４ｍｇの鉄、５．６ｍｇの亜鉛、０．８３ｍｇの銅、１．５ｍｇのマンガン、０．５ｇのフッ化物、４８μｇのモリブデン、２６μｇセレン、２５μｇのクロム、６１μｇのヨウ化物の栄養プロファイルを有するインスタント粉末を得る。

【0611】

インスタント粉末には、４６２Ｋｃａｌ／１００グラムが含まれており、エネルギー分布は次のとおりである：脂質から３５．６Ｅ％、炭水化物から４８．７Ｅ％、及びタンパク質から１５．７Ｅ％。インスタント粉末から調製された食品は、例えば、インスタント粉末を水と混合して飲み物を得るか、又は経管栄養に使用するため、栄養失調のある又は栄養失調のリスクのある患者の処置のための栄養的に完全な食品として使用することができる。２２グラムのインスタント粉末を８５ｍｌの冷水（沸騰させたもの）に入れて攪拌し、１００ｋｃａｌを含む飲料を得る。３３グラムのインスタント粉末を７８ｍｌの冷水（沸騰させたもの）に入れて攪拌し、１５０ｋｃａｌを含む飲料を得る。調製されたインスタント粉末飲料は、味、色、及び粘度がよい。

【図1】

【図2】

【図3】

知財求人

知財求人お知らせサービス

知財のニュースを調べる
- 知財ニュース
- 知財周辺ニュース
企業の特許を調べる
知財のセミナーを調べる
知財,特許事務所への求職・転職
特許事務所をさがす
弁理士試験を受ける
- 年の弁理士試験情報
- 弁理士試験の合格率など統計
知財の法律をしらべる
期限日をしらべる
- 今日に対して意見書・補正書の期限
- 今日に対して審査請求期限日
知財の判決をしらべる
コンテンツ・リンク
運営会社
プレスの皆様へ
- お問い合わせ
ユーザーの皆様
- お問い合わせ・フィードバック
広告掲載を希望の皆様へ
- 広告掲載について
- 求人広告の掲載について

IP Force 特許公報掲載プロジェクト 2022.1.31 β版