特許 7610773 免疫応答を改変するためのＰＢＭＣへの生体分子の送達

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-12-25

(45)【発行日】2025-01-09

(54)【発明の名称】免疫応答を改変するためのＰＢＭＣへの生体分子の送達

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/078 20100101AFI20241226BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20241226BHJP

   C12N 5/0781 20100101ALI20241226BHJP

   C12N 5/0786 20100101ALI20241226BHJP

   A61K 35/17 20250101ALI20241226BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20241226BHJP

   C12N 15/87 20060101ALN20241226BHJP

【ＦＩ】

C12N5/078 ZNA

C12N5/0783

C12N5/0781

C12N5/0786

A61K35/17

A61P35/00

A61P31/00

A61P31/12

A61P37/04

C12N15/87 Z

【請求項の数】 19

(21)【出願番号】P 2021550182

(86)(22)【出願日】2020-02-27

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-04-18

(86)【国際出願番号】 US2020020194

(87)【国際公開番号】W WO2020176789

(87)【国際公開日】2020-09-03

【審査請求日】2023-02-27

(31)【優先権主張番号】62/812,225

(32)【優先日】2019-02-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】19161964.2

(32)【優先日】2019-03-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】62/841,089

(32)【優先日】2019-04-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/886,799

(32)【優先日】2019-08-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/933,304

(32)【優先日】2019-11-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/948,732

(32)【優先日】2019-12-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】524224032

【氏名又は名称】ステムセル テクノロジーズ カナダ インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】シャレイ， アーモン アール．

(72)【発明者】

【氏名】バーンスタイン， ハワード

(72)【発明者】

【氏名】ラフヘッド， スコット

(72)【発明者】

【氏名】ブーティー， マシュー

(72)【発明者】

【氏名】ブラゴヴィッチ， カタリナ

(72)【発明者】

【氏名】フラヴァティ， ケラン

(72)【発明者】

【氏名】ヤラル， デフネ

(72)【発明者】

【氏名】オザイ， エムラ イルケル

(72)【発明者】

【氏名】スミス， キャロライン ケリー

【審査官】西 賢二

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５３３７０２（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１８／１０６８４９（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １／００－７／０８

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性である抗原を含み、前記複数の改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記複数の改変ＰＢＭＣがアジュバントとともにインキュベートされており、
前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、対応する複数の調整されていない改変ＰＢＭＣと比較して、（ａ）１つまたは複数の共刺激分子、および／または（ｂ）１つまたは複数のサイトカインの増加した発現を示し、
前記十分な時間が、ａ）２～１０時間の間、ｂ）３～６時間の間、またはｃ）少なくとも４時間であり、
複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させ、それによって、前記インプットＰＢＭＣと接触したとき、前記抗原が摂動を介して前記インプットＰＢＭＣに入るように、前記インプットＰＢＭＣの前記摂動を引き起こすことによって、前記抗原が、前記複数のインプットＰＢＭＣに細胞内送達されて、前記複数の改変ＰＢＭＣが生産されている、
調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項2】

調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性である抗原および第１のアジュバントを含み、前記複数の改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記複数の改変ＰＢＭＣが第２のアジュバントとともにインキュベートされており、
前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、対応する複数の調整されていない改変ＰＢＭＣと比較して、（ａ）１つまたは複数の共刺激分子、および／または（ｂ）１つまたは複数のサイトカインの増加した発現を示し、
前記十分な時間が、ａ）２～１０時間の間、ｂ）３～６時間の間、またはｃ）少なくとも４時間であり、
複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させ、それによって、前記インプットＰＢＭＣと接触したとき、前記抗原および／または前記第１のアジュバントが摂動を介して前記インプットＰＢＭＣに入るように、前記インプットＰＢＭＣの前記摂動を引き起こすことによって、前記抗原および／または前記第１のアジュバントが、前記複数のインプットＰＢＭＣに細胞内送達されて、前記複数の改変ＰＢＭＣが生産されている、
調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項3】

Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球またはそれらの組合せのうちの２つまたはそれよりも多くを含む、請求項１または２に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項4】

前記改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートされていない対応する改変ＰＢＭＣと比較して、前記改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する前記作用物質とともにさらにインキュベートされている、請求項１～３のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項5】

前記細胞変形狭窄の直径は、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の１０％～９９％である、請求項１～４のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項6】

前記細胞変形狭窄の直径は、４．２μｍ～６μｍである、請求項１～５のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項7】

前記複数のインプットＰＢＭＣを含む前記細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、ここで、前記複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている、請求項１～６のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項8】

前記アジュバント、前記第１のアジュバントおよび／または前記第２のアジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項9】

前記抗原が、疾患関連抗原、感染性疾患抗原、またはがん抗原を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項10】

（ａ）前記疾患関連抗原がヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である、（ｂ）前記感染性疾患抗原がＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）抗原である、（ｃ）前記がん抗原が、頭頸部がん、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、または唾液腺がんに由来する、または（ｄ）（ａ）～（ｃ）のいずれかの組合せである、請求項９に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【請求項11】

請求項１～１０のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物。

【請求項12】

がん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患の処置を必要とする対象においてそれを行うための、請求項１１に記載の組成物。

【請求項13】

免疫応答の刺激を必要とする対象においてそれを行うための、請求項１１に記載の組成物。

【請求項14】

抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するための方法であって、前記方法は、前記抗原を含む複数のＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含み、
ここで、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、対応する複数の調整されていない改変ＰＢＭＣと比較して、（ａ）１つまたは複数の共刺激分子、および／または（ｂ）１つまたは複数のサイトカインの増加した発現を示し、
前記十分な時間が、ａ）２～１０時間の間、ｂ）３～６時間の間、またはｃ）少なくとも４時間であり、
前記複数のＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させ、それによって、前記ＰＢＭＣと接触したとき、前記抗原が摂動を介して前記ＰＢＭＣに入るように、前記ＰＢＭＣの前記摂動を引き起こすことによって、前記抗原が、前記複数のＰＢＭＣに細胞内送達される、
方法。

【請求項15】

前記細胞変形狭窄の直径は、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の１０％～９９％である、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記細胞変形狭窄の直径は、４．２μｍ～６μｍである、請求項１４または１５に記載の方法。

【請求項17】

前記複数のインプットＰＢＭＣを含む前記細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、ここで、前記複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストを含む、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記抗原が、疾患関連抗原、感染性疾患抗原、またはがん抗原を含む、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年２月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／８１２，２２５号、２０１９年３月１１日に出願された欧州特許出願第１９１６１９６４．２号、２０１９年４月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／８４１，０８９号、２０１９年８月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／８８６，７９９号、２０１９年１１月８日に出願された米国仮特許出願第６２／９３３，３０４号、および２０１９年１２月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／９４８，７３２号の利益を主張し、これらのそれぞれの全内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける以下の提出の内容は、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる：コンピューター可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５０３２２００２２４１ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２０年２月２４日、サイズ：１５ＫＢ）。

【0003】

発明の分野
本開示は、一般に、抗原および／またはアジュバントを含む末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、そのようなＰＢＭＣ細胞を製造する方法、および例えば個体における免疫応答をモジュレートするための、そのようなＰＢＭＣを使用する方法に関する。

【背景技術】

【0004】

発明の背景
免疫療法は、受動的または能動的のいずれかの、２つの主な種類の介入に分けることができる。受動的プロトコールは、事前に活性化されたおよび／もしくは操作された細胞、疾患特異的治療用抗体、ならびに／またはサイトカインの投与を含む。能動免疫療法の戦略は、ｉｎ ｖｉｖｏで免疫系エフェクター機能を刺激することを対象とする。いくつかの現在の能動的プロトコールは、疾患関連ペプチド、溶解物、または同種異系細胞全体によるワクチン接種戦略、腫瘍抗原送達のためのビヒクルとしての自家ＤＣの注入、および免疫チェックポイントモジュレーターの注入を含む。Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ， Ｎｉｋｏｓ Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４ （２０１６）を参照されたい。

【0005】

疾患関連抗原によって刺激されたＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）およびＣＤ４^＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞は、罹患細胞を標的にし、破壊する潜在力を有するが、内因性Ｔ細胞応答を誘導するための現在の方法は、課題に直面している。
特許出願および刊行物を含む、本明細書において引用されるすべての参照文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【文献】Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ， Ｎｉｋｏｓ Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４ （２０１６）

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

発明の簡単な概要
本発明は、個体における免疫応答の刺激のための抗原を含む末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を提供する。一部の実施形態では、抗原は、Ｃｅｌｌ Ｓｑｕｅｅｚｅ（登録商標）プラットフォームを使用して、細胞内に送達される。本発明者らは、ＰＢＭＣの混合集団が、純粋なＢ細胞およびＴ細胞の集団よりも高い有効性を有することを予想外にも見出した。加えて、本発明は、少なくとも一部分において、アジュバントによるＰＢＭＣの調整が、ＰＢＭＣが個体に投与される場合に、増加した免疫刺激をもたらすＰＢＭＣの抗原提示細胞の活性化を増加させたという予想外の発見に基づく。

【0008】

一部の態様では、本発明は、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性である、複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性であり、抗原は、がん抗原、感染性疾患抗原、またはウイルス疾患関連抗原である、複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の態様では、本発明は、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性である、調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性であり、抗原は、がん抗原、感染性疾患抗原、またはウイルス疾患関連抗原である、調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、抗原およびアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性である、調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。

【0009】

一部の態様では、本発明は、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、抗原をＰＢＭＣに導入する前に、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを提供する。

【0010】

一部の態様では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、プロセスは、改変ＰＢＭＣを調整するためのアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを提供する。

【0011】

一部の態様では、本発明は、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）抗原を含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）アジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、本明細書の記載に従って抗原および／またはアジュバントを含み、プロセスは、抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原および／またはアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップをさらに含む。一部の実施形態では、プロセスは、改変ＰＢＭＣを調整するためのアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、プロセスは、インプットＰＢＭＣおよび／または改変ＰＢＭＣを、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応する改変ＰＢＭＣと比較して改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む。

【0012】

一部の態様では、本発明は、手術、治療、または診断による、ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、がん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患の処置における使用のための、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供する。

【0013】

一部の態様では、本発明は、医薬としての使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、本発明は、手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、本発明は、医薬としての使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、本発明は、ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、本発明は、個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患を処置する方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、本発明は、個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患の処置における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、本発明は、個体おけるＨＰＶ関連疾患を処置する方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、本発明は、個体におけるＨＰＶ関連疾患の処置における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。

【0014】

一部の態様では、本発明は、個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患を処置するための医薬の製造における抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の使用を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、本発明は、ＨＰＶ関連疾患を処置するための医薬の製造における抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の使用を提供し、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。

【0015】

一部の態様では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップであって、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮであり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップであって、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮであり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。好ましい実施形態では、アジュバントはＣＰＧ７９０９である。

【0016】

一部の態様では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製されたヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製されたＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製されたＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製されたＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。

【0017】

一部の態様では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３４μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３４μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。

【0018】

一部の態様では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを提供する。

【0019】

一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答を刺激するための方法であって、ａ）配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｂ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、方法を提供する。

【0020】

一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答を刺激するための方法であって、ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｂ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答を刺激するための方法であって、ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｂ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答を刺激するための方法であって、ａ）配列番号１９および／または配列番号２３のアミノ酸配列を含む複数の抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｂ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答を刺激するための方法であって、ａ）配列番号１９および配列番号２３のアミノ酸配列からなる複数の抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｂ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合的に連結されたペプチドのプール内に含有される。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合的に連結されたペプチドのプール内に含有され、それぞれのペプチドは、１つ以下の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合的に連結されたペプチドのプール内に含有され、配列番号１９のアミノ酸配列および配列番号２３のアミノ酸は、別々のペプチド内に含有される。

【0021】

一部の態様では、本発明は、以下のステップ：ａ）ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）複数のＰＢＭＣに抗原を導入するステップ；およびｃ）抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、アジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供する。

【0022】

一部の態様では、本発明は、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）抗原を含むインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）アジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｄ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）抗原を含むインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）アジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｄ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供する。

【0023】

一部の態様では、本発明は、個体に抗原と会合した複数のＰＢＭＣを投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法を提供し、複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）抗原がインプットＰＢＭＣの細胞表面と会合するのを可能にするのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原と会合した複数のＰＢＭＣを作出するステップ；およびｂ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、方法は、アジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。

【0024】

一部の態様では、本発明は、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するための方法であって、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、アジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、以下のステップ：ａ）抗原を含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）アジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、インプットＰＢＭＣおよび／または改変ＰＢＭＣを、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応する改変ＰＢＭＣと比較して改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、前記抗原は、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性である、複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２）
前記抗原は、がん抗原、感染性疾患抗原、またはウイルス疾患関連抗原である、項目１に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３）
前記複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの２つまたはそれよりも多くを含む、項目１または２に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目４）
抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、前記抗原は、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性である、調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目５）
前記抗原は、がん抗原、感染性疾患抗原、またはウイルス疾患関連抗原である、項目４に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目６）
抗原およびアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、前記抗原は、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性である、調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目７）
前記複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの２つまたはそれよりも多くを含む、項目４～６のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目８）
前記ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、項目４～７のいずれか一項に記載の調整された複数のＰＢＭＣ。
（項目９）
抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣであって、前記ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、続いて前記抗原を前記ＰＢＭＣに導入し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣ。
（項目１０）
抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目１１）
抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目１２）
抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目１３）
抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、前記抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目１４）
前記プロセスは、前記改変ＰＢＭＣを調整するための前記アジュバントとのインキュベーションの前に、前記細胞懸濁液から、前記抗原、または前記抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む、項目１２または１３に記載の抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目１５）
抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原および前記アジュバントとともにインキュベートするステップそれによって、前記抗原およびアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目１６）
抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｃ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目１７）
抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）前記アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目１８）
抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）前記抗原を含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目１９）
前記プロセスは、
前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原および／またはアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および／または前記アジュバントを含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
をさらに含む、項目１０、１１、１５、１７および１８のいずれか一項に記載の抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２０）
前記プロセスは、前記インプットＰＢＭＣおよび／または前記改変ＰＢＭＣを、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応する改変ＰＢＭＣと比較して前記改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む、項目１～１９のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２１）
前記狭窄の直径は、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である、項目１０～２０のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２２）
前記狭窄の直径は、約４．２μｍ～約６μｍである、項目１０～２１のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２３）
前記狭窄の直径は、約４．２μｍ～約４．８μｍである、項目１０～２２のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２４）
前記複数のインプットＰＢＭＣを含む前記細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、ここで、前記複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている、項目１０～２３のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２５）
前記複数の改変ＰＢＭＣは、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約１時間～約２４時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、項目８、９、１２～１４、１６および１９～２４のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２６）
前記複数の改変ＰＢＭＣは、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約２時間～約１０時間または約３時間～約６時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、項目８、９、１２～１４、１６および１９～２４のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２７）
前記抗原および／または前記アジュバントは、前記複数のＰＢＭＣ中の細胞の少なくとも約７０％に存在する、項目１～２６のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２８）
前記アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、項目６～９および１２～２７のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目２９）
前記アジュバントはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、項目６～９および１２～２８のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３０）
前記抗原は疾患関連抗原である、項目１～２９のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３１）
前記抗原はヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である、項目１～３０のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３２）
前記細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、項目１～３１のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３３）
前記共刺激分子は、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、項目３２に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３４）
前記細胞は、１つまたは複数のサイトカインの発現を増加させるようにさらに改変されている、項目１～３３のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３５）
前記サイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α、またはＩＬ－２１である、項目３４に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３６）
１つまたは複数の共刺激分子は、複数の非改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御され、ここで、前記共刺激分子は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６である、項目４～９、１２～１４、１６および１９～３５のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３７）
前記ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、複数の調整されていないＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍よりも高く、または１０倍よりも高く、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される、項目３６に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３８）
前記改変ＰＢＭＣは、複数の調整されていないＰＢＭＣと比較して、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の増加した発現を有する、項目４～９、１２～１４、１６および１９～３７のいずれか一項に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目３９）
ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の前記発現は、複数の調整されていないＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍よりも高く、または１０倍よりも高く増加している、項目３８に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。
（項目４０）
項目１～３９のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物。
（項目４１）
医薬としての使用のための、項目１～３９のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物。
（項目４２）
手術、治療、または診断による、ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、項目１～３９のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物。
（項目４３）
がん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患の処置における使用のための、項目４０～４２のいずれか一項に記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物。
（項目４４）
前記改変ＰＢＭＣは、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後の投与のためのものである、項目４０～４３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４５）
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちのいずれか１つを標的にする、項目４４に記載の組成物。
（項目４６）
前記改変ＰＢＭＣは、治療剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、項目４０～４３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４７）
個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患を処置するための医薬の製造における抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の使用であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、使用。
（項目４８）
個体における免疫応答を刺激するための方法であって、
ａ）ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目４９）
個体における免疫応答を刺激するための方法であって、
ａ）ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）抗原を前記複数のＰＢＭＣに導入するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目５０）
個体における免疫応答を刺激するための方法であって、
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目５１）
前記アジュバントとのインキュベーションの前に、前記細胞懸濁液から、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原および前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目５３）
個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｃ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目５４）
個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目５５）
個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）抗原を含むインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目５６）
個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭｓの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ；および
ｄ）アジュバントを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目５７）
個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）抗原を含むインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ；および
ｄ）アジュバントを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目５８）
前記プロセスが、前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原および／またはアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および／またはアジュバントを含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップをさらに含む、項目５２および５４～５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
個体における免疫応答を刺激するための方法であって、前記個体に、抗原と会合した複数のＰＢＭＣを投与するステップを含み、複数の改変ＰＢＭＣは、
ａ）抗原がインプットＰＢＭＣの細胞表面と会合するのを可能にするのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原と会合した前記複数のＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製され、
ｂ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。
（項目６０）
前記免疫応答の刺激が、個体におけるがん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患の処置における使用のためである、項目４８～５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
前記改変ＰＢＭＣは、サイトカインの投与の前、それと並行して、または後に投与される、項目４８～６０に記載の方法。
（項目６２）
前記サイトカインはＩＬ－１５である、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
前記複数のＰＢＭＣまたは調整された複数のＰＢＭＣは、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、項目４８～６０に記載の方法。
（項目６４）
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、およびＴＩＭ－３のいずれか１つを標的にする、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記複数のＰＢＭＣまたは調整された複数のＰＢＭＣは、治療剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、項目４８～６０に記載の方法。
（項目６６）
前記治療剤は化学療法剤である、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するための方法であって、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップを含む、方法。
（項目６８）
抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。
（項目６９）
前記アジュバントとのインキュベーションの前に、前記細胞懸濁液から、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。
（項目７１）
抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原および前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。
（項目７２）
抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｃ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。
（項目７３）
抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。
（項目７４）
抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）抗原を含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。
（項目７５）
前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原および／またはアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および／またはアジュバントを含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップをさらに含む、項目７０、７１、７３および７４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
前記プロセスは、前記インプットＰＢＭＣおよび／または前記改変ＰＢＭＣを、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応する改変ＰＢＭＣと比較して前記改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む、項目４８～７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７７）
前記狭窄の直径は、約４．２μｍ～約６μｍである、項目５０～７６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７８）
前記狭窄の直径は、約４．２μｍ～約４．８μｍである、項目５０～７７のいずれか一項に記載の方法。
（項目７９）
前記複数のインプットＰＢＭＣを含む前記細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、ここで、前記複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている、項目５０～７８のいずれか一項に記載の方法。
（項目８０）
前記複数の改変ＰＢＭＣは、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約１時間～約２４時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、項目４８～５１、５３、５８、６０～６９、７２および７５～７９のいずれか一項に記載の調整された方法。
（項目８１）
前記複数の改変ＰＢＭＣは、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約２時間～約１０時間または約３時間～約６時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、項目４８～５１、５３、５８、６０～６９、７２および７５～８０のいずれか一項に記載の調整された方法。
（項目８２）
前記アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、項目４８、５０～５８、６０～６９および７１～８１のいずれか一項に記載の方法。
（項目８３）
前記アジュバントはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、項目４８、５０～５８、６０～６９および７１～８２のいずれか一項に記載の方法。
（項目８４）
前記抗原は疾患関連抗原である、項目４８～８３のいずれか一項に記載の方法。
（項目８５）
前記抗原はヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記細胞は、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、項目４８～８５のいずれか一項に記載の方法。
（項目８７）
前記共刺激分子は、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２またはｓｃＦｖ抗ＣＤ２８である、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
前記細胞は、サイトカインの発現を増加させるようにさらに改変されている、項目４８～８７のいずれか一項に記載の方法。
（項目８９）
前記サイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α、またはＩＬ－２１である、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
１つまたは複数の共刺激分子は、複数のインプットＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御され、ここで、前記共刺激分子は、ＣＤ８０またはＣＤ８６である、項目４８～５１、５３、５８、６０～６９、７１および７３～８９のいずれか一項に記載の方法。
（項目９１）
前記ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、複数の調整されていないＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍よりも高く、または１０倍よりも高く、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
前記調整された改変ＰＢＭＣは、複数の調整されていないＰＢＭＣと比較して、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の増加した発現を有する、項目４８～５１、５３、５８、６０～６９、７１および７３～９１のいずれか一項に記載の方法。
（項目９３）
ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の前記発現は、複数の調整されていないＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍、または１０倍よりも高く増加している、項目９２に記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1-1】図１Ａは、Ｅ６および／またはＥ７ ＳＬＰのＳＱＺが媒介する送達、ならびにその後のＭＨＣ－ＩにおけるＥ６およびＥ７エピトープそれぞれのプロセシングおよび提示を表す、複数のＰＢＭＣ内の代表的な細胞の模式図である。代表的な細胞は、ＰＢＭＣ細胞型（Ｔ細胞、単球、ＮＫ細胞およびＢ細胞など）のうちのいずれか１つであり得る。

【0026】

【図1-2】図１Ｂは、ＣｐＧアジュバントの供投与あり、またはなしの、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣの個体への単剤療法の投与の増大フェーズにおけるコホートを代表する概略図である。丸の量は改変ＰＢＭＣの相対用量を表し、矢印は投与を表し、二重らせんはＣｐＧアジュバントを表し、「ＡＶＢ」は追加ワクチンブーストを示す。

【0027】

【図1-3】図１Ｃは、ＨＰＶ抗原を含むＰＢＭＣおよびアテゾリズマブの個体への組合せ投与の増大フェーズにおけるコホートを代表する概略図である。丸の量は改変ＰＢＭＣの相対用量を表し、矢印は投与を表し、「ＡＶＢ」は追加ワクチンブーストを示す。

【0028】

【図2】図２Ａは、デキストランのインキュベーション（エンドサイトーシス）、ならびに３０、６０および９０ｐｓｉの駆動圧力下でのデキストランのＳＱＺが媒介する送達後の脾細胞中の亜集団の生存率を示す。図２Ｂは、エンドサイトーシス、または３０、６０および９０ｐｓｉの駆動圧力下でのＳＱＺが媒介する送達によって送達されたデキストランを有する細胞のパーセンテージを示す。

【0029】

【図3】図３は、Ｂ細胞またはＯＶＡをＳＱＺロードされた脾細胞によって誘発される抗原特異的免疫応答に対する、細胞の調整およびＣｐＧの供投与の効果を示す。

【0030】

【図4】図４は、ＯＶＡをＳＱＺロードされたクラフト化脾細胞によって誘発される抗原特異的免疫応答に対する、脾細胞の調整、およびさまざまな濃度でのＣｐＧの供投与の効果を示す。

【0031】

【図5】図５は、ＯＶＡをＳＱＺロードされたクラフト化脾細胞によって誘発される抗原特異的免疫応答に対する、脾細胞の調整、およびＣｐＧまたはＩＦＮαの供投与の効果を示す。

【0032】

【図6】図６は、異なる細胞用量で、１回投与（プライム）または２回投与（プライム－ブースト）で投与された場合に、ＯＶＡをＳＱＺロードされた調整されたクラフト化脾細胞によって誘発される抗原特異的免疫応答を示す。

【0033】

【図7】図７は、異なる用量で、１回投与（プライム）または２回投与（プライム－ブースト）で投与された場合に、（ａ）ＯＶＡをＳＱＺロードされた調整されたＢ細胞、または（ｂ）ＯＶＡをＳＱＺロードされた調整されたクラフト化脾細胞によって誘発される抗原特異的免疫応答を示す。

【0034】

【図8】図８は、ＯＶＡをＳＱＺロードされた成熟脾細胞によって誘発される抗原特異的免疫応答に対する、調整（ＣｐＧインキュベーション）の期間の効果を示す。

【0035】

【図9】図９は、Ｅ７を発現するＴＣ１腫瘍の阻害におけるＥ７ ＨＰＶ抗原をＳＱＺロードされた成熟脾細胞の用量依存性効果を示す。

【0036】

【図10-1】図１０Ａは、ヒトＰＢＭＣ（上）およびマウス脾細胞（下）内のＢ細胞亜集団における活性化マーカーに対するＣｐＧインキュベーションの効果を示す。

【0037】

【図10-2】図１０Ｂは、ヒトＰＢＭＣまたはマウス脾細胞がＣｐＧとのインキュベーションに供された場合のサイトカイン／ケモカインプロファイルの変化を示す。

【0038】

【図11】図１１は、ヒトＰＢＭＣが６０ｐｓｉの駆動圧力および３．５μｍまたは４μｍの狭窄の幅でのＳＱＺが媒介する送達に供された場合の、細胞の組成およびＭＨＣ－Ｉレベルの変化を示す。

【0039】

【図12-1】図１２Ａは、６０ｐｓｉの駆動圧力および３．５μｍまたは４μｍの狭窄の幅でのＳＱＺが媒介する送達に供されたヒトＰＢＭＣ内のＣＤ３^＋Ｔ細胞またはＣＤ１４^＋単球の生存率およびそれらへのペイロード送達を示す。

【0040】

【図12-2】図１２Ｂは、６０ｐｓｉの駆動圧力および３．５μｍまたは４μｍの狭窄の幅でのＳＱＺが媒介する送達に供されたヒトＰＢＭＣ内のＣＤ２０^＋Ｂ細胞またはＣＤ５６^＋ＮＫ細胞の生存率およびそれらへのペイロード送達を示す。

【0041】

【図13】図１３は、３．５μｍまたは４μｍの狭窄の幅を使用するＳＱＺが媒介するプロセスを介してＥ７ ＨＰＶ抗原をロードされた成熟ヒトＰＢＭＣと共培養された場合の、ＰＢＭＣ集団（下）を有するサブセットの送達とＥ７特異的レスポンダー細胞（上）の刺激との相関を示す。

【0042】

【図14】図１４は、４５ｐｓｉまたは６０ｐｓｉの駆動圧力、３．５μｍ、４μｍまたは４．５μｍの狭窄の幅、および室温（上）または氷上（下）で行われるプロセスでのＳＱＺが媒介するプロセスを介してＥ７ ＨＰＶ抗原をロードされた成熟ヒトＰＢＭＣと共培養された場合の、Ｅ７特異的レスポンダー細胞の刺激を示す。

【0043】

【図15】図１５の上パネルは、ｐｐ６５をＳＱＺロードされたヒトＰＢＭＣ、またはｐｐ６５をＳＱＺロードされ、アジュバントを用いて成熟させたヒトＰＢＭＣと（１μＭのＣｐＧの存在下または非存在下）共培養された場合の、ｐｐ６５特異的レスポンダー細胞の刺激を示す。

【0044】

図１５の下パネルは、（ａ）ｐｐ６５をＳＱＺロードされたヒトＰＢＭＣ、もしくはｐｐ６５をＳＱＺロードされ、アジュバントを用いて成熟させたヒトＰＢＭＣと１μＭのＣｐＧの存在下で共培養された場合の、または（ｂ）ｐｐ６５をＳＱＺロードされたヒトＴ細胞、もしくはｐｐ６５をＳＱＺロードされ、アジュバントを用いて成熟させたヒトＴ細胞と共培養された場合の、ｐｐ６５特異的レスポンダー細胞の刺激を示す。

【0045】

【図16】図１６は、レスポンダーがｐｐ６５ ＣＭＶ抗原をＳＱＺロードされた成熟ヒトＰＢＭＣと共培養された場合の、ｐｐ６５特異的レスポンダー細胞の刺激に対する、（ａ）さまざまなアジュバントによるＰＢＭＣ成熟、および（ｂ）ＳＱＺロードにおいて使用されるｐｐ６５抗原の濃度の効果を示す。

【0046】

【図17】図１７は、ｐｐ６５ ＣＭＶ抗原をＳＱＺロードされた成熟ヒトＰＢＭＣと共培養された場合の、ｐｐ６５特異的レスポンダー細胞の刺激に対する、３または２４時間のインキュベーション時間でのＣｐＧ、Ｒ８３７およびＲ８４８の異なるアジュバントによるＰＢＭＣ成熟の効果を示す。

【0047】

【図18】図１８は、ｐｐ６５ ＣＭＶ抗原をＳＱＺロードされた調整されたマウス脾細胞によって誘発される抗原特異的応答に対する、ＳＱＺが媒介するロードの前、対、後の脾細胞の調整の効果を示す。

【0048】

【図19】図１９は、Ｅ７を発現する腫瘍を持つマウスに、ｐｐ６５がロードされた脾細胞単独（群Ｂ）、化学療法（シスプラチン）単独（群Ｃ、Ｄ、Ｇ）、または化学療法と組み合わせたｐｐ６５がロードされた脾細胞（群Ｅ、Ｆ、Ｈ）を投与した場合の、腫瘍阻害に対する効果を示す。

【0049】

【図20】図２０Ａは、室温または氷上での３ｋＤａのデキストランのヒトＰＢＭＣの亜集団へのＳＱＺが媒介する送達の有効性を示す。図２０Ｂは、５０ｐｓｉまたは７０ｐａｉの駆動圧力での３ｋＤａのデキストランのヒトＰＢＭＣの亜集団へのＳＱＺが媒介する送達の有効性を示す。

【0050】

【図21】図２１ＡおよびＢは、Ｅ７を発現する腫瘍を持つマウスに、Ｅ７ ＨＰＶ抗原がＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞を投与した場合の、腫瘍阻害（図２１Ａ）および生存の改善（図２１Ｂ）に対する、脾細胞の調整またはＣｐＧ供投与の効果を示す。

【0051】

【図22】図２２は、ＯＶＡ抗原をＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞によって誘発される抗原特異的応答に対する、ＣｐＧもしくはＩＦＮαの供投与あり、またはなしでの脾細胞の調整の効果を示す。

【0052】

【図23-1】図２３Ａ～２３Ｈは、ＳＱＺ処理に供されたか、または処理されていないクラフト化マウス脾細胞内のＢ細胞マーカーのＣＤ８６（図２３Ａ～Ｄ）およびＨ－２ｋｂ（図２３Ｅ～Ｈ）の発現に対する、ＣｐＧ１８２６とのインキュベーションあり、またはなしの脾細胞の調整の効果を示す。

【図23-2】同上。

【図23-3】同上。

【図23-4】同上。

【0053】

【図24-1】図２４Ａ～２４Ｄは、非処置マウス（図２４Ａ）、１μｇのＣｐＧ１８２６ ＩＶのみを注射されたマウス（図２４Ｂ）、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞で免疫されたマウス（図２４Ｃ）、またはＥ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞を共注射され、１μｇのＣｐＧ１８２６ ＩＶを共注射されたマウス（図２４Ｄ）における循環サイトカインのレベルを示す。

【図24-2】同上。

【図24-3】同上。

【図24-4】同上。

【0054】

【図25】図２５は、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞（Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶ）、および処理されていないクラフト化マウス脾細胞の循環動態を示す。

【0055】

【図26-1】図２６Ａ～２６Ｅは、Ｅ７特異的Ｔ細胞の浸潤の量を示し、図２６Ｆは、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞、またはされていないクラフト化マウス脾細胞による免疫付与後の経時的な腫瘍体積を示す。腫瘍環境における生細胞あたりのＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージ、および腫瘍量あたりのＣＤ８＋Ｔ細胞の数を、図２６Ａおよび２６Ｄにそれぞれ示す。腫瘍環境における生細胞あたりのＥ７特異的Ｔ細胞のパーセンテージ、および腫瘍量あたりのＥ７特異的Ｔ細胞の数を、図２６Ｃおよび２６Ｅにそれぞれ示す。腫瘍環境におけるＣＤ８＋Ｔ細胞あたりのＥ７特異的Ｔ細胞のパーセンテージを図２６Ｂに示す。

【図26-2】同上。

【図26-3】同上。

【0056】

【図27-1】図２７Ａ～２７Ｄは、ＯＶＡをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞によるか、もしくはＯＶＡとともにインキュベートされたクラフト化マウス脾細胞（インキュベーション対照）による刺激によるか、または刺激なし（ＯＴ－Ｉ対照）での、ＷＴまたはＭＨＣ－Ｉ －／－マウスにおけるＯＶＡ特異的Ｔ細胞（ＯＴ－Ｉ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞）のｉｎ ｖｉｖｏ増殖の量を示す。図２７Ａおよび２７Ｃは、２反復の実験についてのレシピエントのリンパ節におけるそれぞれのＯＴ－Ｉ増殖を示す。図２７Ｂおよび２７Ｄは、２反復の実験についてのレシピエントの脾臓におけるそれぞれのＯＴ－Ｉ増殖を示す。

【図27-2】同上。

【0057】

【図28-1】図２８Ａ～２８Ｅは、ＯＶＡをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞（図２８Ａ）、またはＯＶＡをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞の示されたサブセット（図２８Ｂ、２８Ｃ、２８Ｄ、２８Ｅについてそれぞれ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、ＮＫ細胞のサブセット）との共培養後のＯＴ－Ｉ ＣＤ８^＋ Ｔ細胞における活性化マーカーのＣＤ６９の増殖および発現を示す。

【図28-2】同上。

【図28-3】同上。

【0058】

【図29-1】図２９Ａ～２９Ｆの上パネルは、それぞれの試料についてのＺ－ｓｔａｃｋの中央からの共焦点イメージングを示し、形質膜の局在化（ＣＤ４５染色、ＰＭ、上パネル）、ＦＡＭ標識ＨＰＶ ＳＬＰの局在化（ＳＬＰ、上から２番目のパネル）、およびそれらの相対的な局在化を示す重ね合わせ（重ね合わせ、上から３番目のパネル）を実証するが、図２９の下パネルは、ＲＰＭＩ中でＳＱＺ処理されたヒトＰＢＭＣ（図２９Ａ、２９Ｃ、２９Ｅ）またはＦＡＭ標識されたＥ６、Ｅ７もしくはＥ６＋Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたヒトＰＢＭＣ（それぞれ図２９Ｂ、２９Ｄ、２９Ｆ）についてのそれぞれの重ね合わせパネルに示す白線に沿って、細胞の中央を横断するライントレースを示す。

【図29-2】同上。

【図29-3】同上。

【図29-4】同上。

【図29-5】同上。

【図29-6】同上。

【0059】

【図30】図３０は、ＣＦＳＥ希釈物（左パネル）およびその後の定量（右パネル）によって測定された、非処置のままにしたか（ＮＣ）、ｇｐ１００ ＳＬＰとともにインキュベートされたか（インキュベーション対照）、ｇｐ１００ ＳＬＰをＳＱＺロードされたか（圧搾）、またはｇｐ１００ ＳＬＰでパルス（ＰＰ）された、Ｂ細胞の共注射後のｇｐ１００特異的Ｔ細胞の増殖を示す。

【0060】

【図31】図３１は、非処置マウス、またはＥ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化脾細胞を予防的に投与されたマウスにおける移植されたＴＣ－１腫瘍の腫瘍体積の変化を示す。非処置コホートＩは、０日目にＴＣ－１腫瘍を移植された。非処置コホートＩＩは、６０日目にＴＣ－１腫瘍を移植された。ＳＱＺロードされた脾細胞で処置されたマウスに、０日目および６０日目の両方にＴＣ－１腫瘍を移植した。

【0061】

【図32】図３２は、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化脾細胞の治療的処置後の移植されたＴＣ－１腫瘍の腫瘍体積の変化を示す。マウスを、プライミングの単一用量（移植後１０日目）またはプライムおよびブーストレジメン下（移植後、１０日目にプライム、１７日目および２４日目にブースト）のいずれかとして投与された、０．１×１０^６個または１．０×１０^６個のＳＱＺロードされた脾細胞で処置した。

【0062】

【図33】図３３ＡおよびＢは、Ｅ７を発現する腫瘍を持つマウスに、ＨＰＶ Ｅ７抗原をＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞を投与した場合の、腫瘍阻害（図３３Ａ）および生存の改善（図３３Ｂ）に対する、脾細胞の調整またはＣｐＧ供投与の効果を示す。

【0063】

【図34】図３４は、クラフト化脾細胞が、積み荷なしでＳＱＺ処理されたか（ＳＱＺのみ）、またはＯＶＡの存在下でＳＱＺ処理された（ＳＱＺ＋ＯＶＡ）後、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の脾細胞の亜集団中で、ＯＶＡから処理されたエピトープのＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）のＭＨＣ－Ｉ提示の程度を示す。

【0064】

【図35】図３５は、ＨＰＶ１６ Ｅ７抗原をＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞によって誘発される抗原特異的応答についての脾細胞投与の用量依存性の有効性を示す。

【0065】

【図36-1】図３６Ａ～３６Ｃは、Ｅ７特異的Ｔ細胞の浸潤の量を示し、図３６Ｄは、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞、もしくはペプチドワクチンよる免疫付与後、または非処置のままの、経時的な腫瘍体積を示す。腫瘍環境における生細胞あたりのＣＤ４５＋白血球のパーセンテージ、ＣＤ４５＋細胞中のＣＤ８＋Ｔ細胞の数、および腫瘍環境におけるＣＤ８＋Ｔ細胞あたりのＥ７特異的Ｔ細胞のパーセンテージを、図３６Ａ、３６Ｂおよび３６Ｃにそれぞれ示す。

【図36-2】同上。

【0066】

【図37】図３７Ａは、典型的な研究環境においてＳＱＺ処理細胞の数、対、製造環境においてＳＱＺ処理細胞の数を示す。図３７Ｂは、デキストランとのインキュベーション後、またはデキストランの存在下でのＳＱＺ処理後のＰＢＭＣの生存率を示す。図３７Ｃは、ＰＢＭＣ、ならびにＢ細胞（ＣＤ２０＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）の構成細胞型について、インキュベーション後にデキストランで陽性の細胞、またはデキストランをＳＱＺ処理細胞のパーセンテージを示す。

【0067】

【図38】図３８Ａは、ＰＢＭＣに、非処置のままにしたか（ＮＣ）、空のペイロードをＳＱＺ処理したか（空ＳＱＺ）、またはＣＤ８６をコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードした（ＳＱＺ）後、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）のＰＢＭＣ亜集団内のＣＤ８６を発現する細胞のパーセンテージを示す。図３８Ｂは、ＰＢＭＣに、空のペイロードをＳＱＺ処理し（空ＳＱＺ）、またはＩＦＮα２をコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードした（ＳＱＺ）後、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）のＰＢＭＣ亜集団内のＩＦＮα２を発現する細胞のパーセンテージを示す。

【0068】

【図39】図３９Ａは、ＰＢＭＣに、空のペイロードをＳＱＺ処理し（空ＳＱＺ）、またはＣＤ８６をコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードした（ＳＱＺ）後、７２時間にわたるＴ細胞（ＣＤ３＋）のＰＢＭＣ亜集団内のＣＤ８６発現のパーセンテージを示す。図３９Ｂは、ＰＢＭＣに、空のペイロードをＳＱＺ処理し（空ＳＱＺ）、または４－１ＢＢＬをコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードした（ＳＱＺ）後、７２時間にわたるＴ細胞（ＣＤ３＋）のＰＢＭＣ亜集団内の４－１ＢＢＬを発現する細胞のパーセンテージを示す。

【0069】

【図40】図４０は、ＰＢＭＣに、非改変ｅＧＦＰ ｍＲＮＡ、または５－メトキシウリジン骨格改変（５ｍｏＵ）を持つｅＧＦＰ ｍＲＮＡを、０μｇ／ｍＬ～２００μｇ／ｍＬのｍＲＮＡ濃度でＳＱＺ処理した後の、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）のＰＢＭＣ亜集団内のｅＧＦＰ発現の量を示す。

【0070】

【図41】図４１は、ＰＢＭＣに、非処置のままにしたか（ＮＣ）、またはＩＬ－１２、ＩＦＮαもしくはＩＬ－２をそれぞれコードするｍＲＮＡをＳＱＺ処理した（ＳＱＺ）後の、ＰＢＭＣによるＩＬ－１２、ＩＦＮαまたはＩＬ－２のサイトカインの分泌の度合いを示す。

【0071】

【図42-1】図４２Ａは、エフェクター免疫細胞応答の刺激における増強された抗原提示細胞からのシグナル１、２、３の概略図を示す。図４２Ｂは、ＰＢＭＣに、ＣＤ７０または４－１ＢＢＬをそれぞれコードするｍＲＮＡをＳＱＺ処理した後、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）のＰＢＭＣ亜集団内の４８時間にわたるシグナル２のエフェクターの発現の量を示す。図４２Ｃは、ＰＢＭＣに、ＩＦＮα２またはＩＬ－２をそれぞれコードするｍＲＮＡをＳＱＺ処理した後の、２４時間にわたるＰＢＭＣによるシグナル３のエフェクターの分泌の量を示す。

【図42-2】同上。

【0072】

【図43】図４３Ａは、非刺激か、ＳＱＺ処理の前にＣｏｎＡで刺激されたか、ＳＱＺ処理の後にｃｏｎＡで刺激されたＰＢＭＣについて、ＰＢＭＣにおけるｅＧＦＰの翻訳および発現の量を示し、ここで、ＰＢＭＣは、ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡの存在下でＳＱＺ処理された。図４３Ｂは、ＰＢＭＣがＣＤ８６をコードするｍＲＮＡの存在下でＳＱＺ処理された場合の、非刺激、またはＳＱＺ処理の前にＣｏｎＡで刺激されたＰＢＭＣにおけるＣＤ８６の発現の量を示す。

【0073】

【図44-1】図４４Ａは、シグナル２およびシグナル３のエフェクターｍＲＮＡが、ＳＱＺロードの後にクラフト化マウス脾細胞において翻訳されたかどうかを研究する実験の概略図を示す。図４４Ｂは、クラフト化脾細胞が、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＯＸ４０ＬをそれぞれコードするｍＲＮＡの存在下でＳＱＺ処理された後、クラフト化マウス脾細胞におけるＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＯＸ４０Ｌの発現の量を示す。図４４Ｃは、クラフト化脾細胞が、ＩＬ－１２、ＩＬ－２またはＩＦＮα２をそれぞれコードするｍＲＮＡの存在下でＳＱＺ処理された後、クラフト化マウス脾細胞によるＩＬ－１２、ＩＬ－２またはＩＦＮα２の分泌の量を示す。

【図44-2】同上。

【0074】

【図45-1】図４５Ａは、クラフト化マウス脾細胞におけるシグナル２およびシグナル３のエフェクターｍＲＮＡのＳＱＺロードが、抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激する能力の増強を促進し得るかどうかを研究する実験の概略図を示す。図４５Ｂは、ＯＶＡペプチド、およびシグナル２のエフェクター（ＣＤ７０、ＣＤ８０またはＣＤ８６）をコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞との共培養におけるＯＶＡ特異的Ｔ細胞の活性化の度合いを示した。図４５Ｃは、ＯＶＡペプチド、およびシグナル３のエフェクターＩＬ－２をコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞との共培養におけるＯＶＡ特異的Ｔ細胞の活性化の度合いを示した。

【図45-2】同上。

【0075】

【図46-1】図４６Ａは、それぞれの抗原（Ｅ７、ＨＳＶ ＧＤ１、ＭＡＲＴ－１、ｐｐ６５またはインフルエンザＭ１）をコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードされたヒトＰＢＭＣとの共培養における抗原特異的レスポンダーＴ細胞の活性化の量を示す。図４６Ｂおよび４６Ｃは、ＰＢＭＣを、Ｅ７またはＭ１をそれぞれコードするｍＲＮＡの存在下でＳＱＺ処理した後の、ＰＢＭＣにおけるＥ７またはＭ１の翻訳および発現の量を示す。

【図46-2】同上。

【0076】

【図47-1】図４７Ａは、抗原特異的Ｔ細胞応答の刺激におけるロードされたマウス脾細胞の効力に関して、ｍＲＮＡ、対、抗原のタンパク質形態のＳＱＺロードを比較する実験の概略図を示す。図４７Ｂは、ＯＶＡタンパク質、またはＯＶＡをコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードされたマウス脾細胞との共培養における活性化されたＯＶＡ特異的Ｔ細胞の量を示す。

【図47-2】同上。

【0077】

【図48-1】図４８Ａおよび４８Ｂは、Ｅ７をロードされたクラフト化脾細胞および抗ＣＴＬＡ４投与の組合せが、Ｅ７を有する腫瘍ＴＣ１に対する治療効果の改善をもたらすかどうかを研究する実験の実験設計および概略図をそれぞれ示す。図４８Ｃ、４８Ｄ、４８Ｅおよび４８Ｆは、Ｅ７を発現する腫瘍を持つマウスに、ＨＰＶ Ｅ７抗原をＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞を、抗ＣＴＬＡ４抗体のさらなる投与のあり、またはなしで投与した場合の、腫瘍成長阻害（図４８Ｃ）、腫瘍出現の遅延または阻害（図４８Ｄおよび４８Ｅ）、および生存の改善（図４８Ｆ）に対する腫瘍抗原をロードされた脾細胞および免疫チェックポイント阻害剤の組合せの追加の治療効果を示す。

【図48-2】同上。

【図48-3】同上。

【図48-4】同上。

【図48-5】同上。

【発明を実施するための形態】

【0078】

発明の詳細な説明
抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、ＣＴＬの内因性活性化の誘導において重要な役割を果たす。この研究では、がんおよび炎症性疾患を含むさまざまな適応に対する免疫応答のモジュレートにおける使用のための、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を操作するＣｅｌｌ Ｓｑｕｅｅｚｅ（登録商標）プラットフォームの実行を記載する。標的抗原および／またはアジュバントのＰＢＭＣへの効率的なサイトゾル送達を可能にすることによって、このプラットフォームは、非常に有効な標的抗原のＭＨＣ－Ｉ提示、およびｉｎ ｖｉｖｏでのＣＴＬの刺激を誘導する能力を実証した。本発明者らは、ＰＢＭＣの混合集団が、純粋なＢ細胞およびＴ細胞の集団単独よりも高い有効性を有することを予想外にも発見した。加えて、本発明者らは、調整されていない抗原がロードされたＰＢＭＣと比較して、個体に投与された場合に、アジュバントによるＰＢＭＣの調整が、より高い免疫刺激をもたらす抗原提示細胞の活性化を増加させることを予想外にも発見した。

【0079】

本出願は、一部の態様では、抗原およびアジュバントを含む改変ＰＢＭＣであって、抗原は細胞内に存在する、改変ＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、抗原を含むＰＢＭＣは、個体への投与の前に、所定の期間、アジュバントの存在下でインキュベートされる（すなわち、ＰＢＭＣは調整される）。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、抗原をＰＢＭＣに導入する前に、所定の期間、アジュバントの存在下でインキュベートされる。

【0080】

一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、ａ）インプットＰＢＭＣ細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣ細胞の摂動を引き起こして摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む改変ＰＢＭＣを作出するステップによって調製される。個体における免疫応答をモジュレートするため、例えば、個体における免疫応答を増強するために、改変ＰＢＭＣを使用する方法も提供される。一部の実施形態では、増強された免疫応答は抗原に向けられる。一部の実施形態では、細胞変形狭窄は、マイクロ流体チャネル、例えば、本明細書に記載のマイクロ流体チャネルのいずれかに含有される。

【0081】

一般技法
本明細書に記載または参照される技法および手順は、一般に、十分に理解されており、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， ４^ｔｈ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．， ２０１２）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ．， ２００３）；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．）；ＰＣＲ ２： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｍ．Ｊ． ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ， Ｂ．Ｄ． Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ． Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．， １９９５）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， ｅｄｓ．， １９８８）；Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ： Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ （Ｒ．Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， ６^ｔｈ ｅｄ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， ２０１０）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ （Ｍ．Ｊ． Ｇａｉｔ， ｅｄ．， １９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ； Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ （Ｊ．Ｅ． Ｃｅｌｌｉｓ， ｅｄ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， １９９８）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ （Ｊ．Ｐ． Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ． Ｒｏｂｅｒｔｓ， Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， １９９８）；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ： Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ （Ａ． Ｄｏｙｌｅ， Ｊ．Ｂ． Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ， ａｎｄ Ｄ．Ｇ． Ｎｅｗｅｌｌ， ｅｄｓ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， １９９３－８）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｄ．Ｍ． Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ． Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ， ｅｄｓ．， １９９６）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ （Ｊ．Ｍ． Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ． Ｃａｌｏｓ， ｅｄｓ．， １９８７）；ＰＣＲ： Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ， （Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， １９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｊ．Ｅ． Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， １９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， ２００２）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ （Ｃ．Ａ． Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．， ２００４）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ （Ｐ． Ｆｉｎｃｈ， １９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｄ． Ｃａｔｔｙ．， ｅｄ．， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， １９８８－１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｐ． Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ． Ｄｅａｎ， ｅｄｓ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ２０００）；Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｅ． Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ． Ｌａｎｅ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ （Ｍ． Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ． Ｄ． Ｃａｐｒａ， ｅｄｓ．， Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， １９９５）；およびＣａｎｃｅｒ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ （Ｖ．Ｔ． ＤｅＶｉｔａ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｊ．Ｂ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ， ２０１１）に記載されている広く利用されている方法論などの、従来の方法論を使用して、当業者によって一般的に用いられている。

【0082】

定義
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、適切である場合は常に、単数で使用されている用語は、複数も含み、逆もまた同様である。下記に説明する任意の定義が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合、説明する定義が優先されるものとする。

【0083】

本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、他に指示されない限り、複数の参照を含む。

【0084】

本明細書に記載の本発明の態様および実施形態は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」および「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」の態様および実施形態を含むことが理解される。

【0085】

本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野における当業者に容易に公知である、それぞれの値についての通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」の値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーターそれ自体を対象にする実施形態を含む（および記載する）。

【0086】

本明細書で使用される場合、「末梢血単核細胞」または「ＰＢＭＣ」は、丸形の核を有する血液細胞の異種集団を指す。ＰＢＭＣの集団において見出され得る細胞の例としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞（ＮＫＴ細胞およびＣＩＫ細胞を含む）などのリンパ球、ならびにマクロファージおよび樹状細胞などの単球が挙げられる。本明細書で使用される「複数のＰＢＭＣ」は、血液細胞の少なくとも２種類の細胞を含むＰＢＭＣの調製物を指す。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの２つまたはそれよりも多くを含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの３つまたはそれよりも多くを含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの４つまたはそれよりも多くを含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および樹状細胞を含む。

【0087】

ＰＢＭＣは、当技術分野において公知の手段によって単離することができる。例えば、ＰＢＭＣは、他の血液細胞と比較して、ＰＢＭＣの密度に基づいて、個体の末梢血から得ることができる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ（例えば、ｆｉｃｏｌｌ勾配）を使用して、個体の末梢血から得られる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＥＬＵＴＲＡ（登録商標）細胞分離システムを使用して、個体の末梢血から得られる。

【0088】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣの集団は、個体から単離される。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、集団が、特定の個体に由来し、本明細書に記載の方法のいずれかによって操作され、特定の個体に戻される、ＰＢＭＣの自家集団である。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、集団が、１つの個体に由来し、本明細書に記載の方法のいずれかによって操作され、第２の個体に投与される、ＰＢＭＣの同種異系集団である。

【0089】

一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣの再構成調製物である。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣの集団において典型的に見出される細胞を混合することによって、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの２つまたはそれよりも多くの集団を混合することによって、作出され得る。一部の実施形態では、脾細胞の集団中の細胞の比は、ヒトＰＢＭＣの集団プロファイルをより良好に反映するように調節される（すなわち、クラフト化される）。例えば、Ｂ細胞は、ヒトＰＢＭＣの集団をより良好に反映するように脾細胞の集団から枯渇させてもよい。

【0090】

本明細書で使用される「ポア」という用語は、限定なく、材料内の孔、裂け目、空洞、開口部、割れ目、間隙または穿孔部を含む、開口を指す。一部の例では、（示される場合）用語は、本開示の表面内のポアを指す。他の例では、（示される場合）ポアは、細胞膜におけるポアを指すことができる。

【0091】

本明細書で使用される「膜」という用語は、ポアを含有する選択的な障壁またはシートを指す。用語は、境界または裏打ちとしての機能を果たす柔軟なシート様構造を含む。一部の例では、用語は、ポアを含有する表面またはフィルターを指す。この用語は、「細胞膜」という用語とは区別される。

【0092】

本明細書で使用される「フィルター」という用語は、ポアの選択的通過を可能にする多孔性物品を指す。一部の例では、用語は、ポアを含有する表面または膜を指す。

【0093】

本明細書で使用される「不均質」という用語は、構造または組成において、混ぜ合わされるか、または均一ではないものを指す。一部の例では、用語は、所与の表面内で多様なサイズ、形状または分布を有するポアを指す。

【0094】

本明細書で使用される「均質」という用語は、全体にわたって、構造または組成が一貫しているか、または均一であるものを指す。一部の例では、用語は、所与の表面内で一貫したサイズ、形状または分布を有するポアを指す。

【0095】

コード配列および制御配列などの核酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常、互いに接合されない、および／または通常、特定の細胞と関連しない配列を表す。そのため、核酸構築物またはベクターの「異種」領域は、本来は、他の分子との関連で見出されない別の核酸分子内の、またはそれらに結合した核酸のセグメントである。例えば、核酸構築物の異種領域は、本来は、コード配列との関連で見出されない配列に隣接するコード配列を含み得る。異種コード配列の別の例は、コード配列それ自体が、本来は見出されない構築物（例えば、生来の遺伝子（ｎａｔｉｖｅ ｇｅｎｅ）と異なるコドンを有する合成配列）である。同様に、細胞に通常存在しない構築物で形質転換された細胞は、本発明の目的のために、異種とみなされるはずである。対立遺伝子変形形態または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ＤＮＡを生じさせない。

【0096】

ペプチド配列およびポリペプチド配列などのアミノ酸配列に関連する場合の「異種」という用語は、通常、互いに接合されない、および／または通常、特定の細胞と関連しない配列を表す。そのため、ペプチド配列の「異種」領域は、本来は、他の分子との関連で見出されない別のアミノ酸分子内の、またはそれらに結合したアミノ酸のセグメントである。例えば、ペプチド構築物の異種領域は、本来は、ペプチドのアミノ酸配列との関連で見出されない配列に隣接するペプチドのアミノ酸配列を含み得る。異種ペプチド配列の別の例は、ペプチド配列それ自体が、本来は見出されない構築物（例えば、生来の遺伝子からコードされる異なるアミノ酸を有する合成配列）である。同様に、細胞に通常存在しないアミノ酸構築物を発現するベクターで形質転換された細胞は、本発明の目的のために、異種とみなされるはずである。対立遺伝子変形形態または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ペプチドを生じさせない。

【0097】

「外因性」という用語は、細胞に関して、抗原またはアジュバントなどの作用物質への言及において使用される場合、細胞の外側から送達される（すなわち、細胞の外側由来の）作用物質を指す。細胞は、すでに存在するその作用物質を有してもよいし、有さなくてもよく、外因性作用物質が送達された後にその作用物質を産生してもよいし、産生しなくてもよい。

【0098】

本明細書で使用される場合、「阻害する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、遮断する、低下させる、除去する、または他の方法で拮抗させる作用を指し得る。阻害は、部分的な阻害または完全な阻害を指し得る。例えば、免疫応答を阻害するとは、免疫応答の遮断、低下、除去、または任意の他の拮抗をもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の阻害としては、限定されるものではないが、核酸の転写の低下、ｍＲＮＡの存在量の低下（例えば、ｍＲＮＡ転写をサイレンシングする）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡの翻訳の阻害などが挙げられ得る。

【0099】

本明細書で使用される場合、「抑制する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、減少させる、低下させる、妨げる、制限する、軽減する、または他の方法で減退させる作用を指し得る。抑制は、部分的な抑制または完全な抑制を指し得る。例えば、免疫応答を抑制するとは、免疫応答を減少させること、低下させること、妨げること、制限すること、軽減すること、または他の方法で減退させることをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現の抑制としては、限定されるものではないが、核酸の転写の低下、ｍＲＮＡの存在量の低下（例えば、ｍＲＮＡ転写をサイレンシングする）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡの翻訳の阻害などが挙げられ得る。

【0100】

本明細書で使用される場合、「増強する」という用語は、特定の標的の存在または活性を、改善する、ブーストする、高める、または他の方法で増加させる作用を指し得る。例えば、免疫応答を増強するとは、免疫応答を改善すること、ブーストすること、高めること、または他の方法で増加させることをもたらす任意の作用を指し得る。例示的な一例では、免疫応答を増強するとは、免疫応答を改善する、ブーストする、高める、もしくは他の方法で増加させるために、抗原および／またはアジュバントを用いることを指し得る。他の例では、核酸の発現を増強することとしては、限定されるものではないが、核酸の転写の増加、ｍＲＮＡの存在量の増加（例えば、ｍＲＮＡ転写を増加させる）、ｍＲＮＡの分解の減少、ｍＲＮＡの翻訳の増加などが挙げられ得る。

【0101】

本明細書で使用される場合、「モジュレートする」という用語は、特定の標的の存在または活性を、変化させる、変える、変動させる、または他の方法で改変する作用を指し得る。例えば、免疫応答をモジュレートするとは、免疫応答を変化させること、変えること、変動させること、または他の方法で改変することをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現をモジュレートすることとしては、限定されるものではないが、核酸の転写における変化、ｍＲＮＡの存在量における変化（例えば、ｍＲＮＡ転写を増加させる）、ｍＲＮＡの分解における対応する変化、ｍＲＮＡの翻訳における変化などが挙げられ得る。

【0102】

本明細書で使用される場合、「誘導する」という用語は、開始する、促す、刺激する、確立する、または他の方法で結果を生成する作用を指し得る。例えば、免疫応答を誘導するとは、所望の免疫応答を開始すること、促すこと、刺激すること、確立すること、または他の方法で生成することをもたらす任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現を誘導することとしては、限定されるものではないが、核酸の転写の開始、ｍＲＮＡの翻訳の開始などが挙げられ得る。

【0103】

本明細書で使用される「同種」という用語は、同じ生物体に由来する分子を指す。一部の例では、用語は、所与の生物体内で通常見出されるか、または発現する、核酸またはタンパク質を指す。

【0104】

本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかの、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指す。そのため、この用語は、限定されるものではないが、一本鎖、二本鎖または多重鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、あるいはプリンおよびピリミジン塩基、または他の天然の、化学的もしくは生化学的に修飾された、非天然もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーを含む。ポリヌクレオチドの主鎖は、糖およびリン酸基（ＲＮＡまたはＤＮＡにおいて典型的に見出され得る通り）、または修飾もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含むことができる。あるいは、ポリヌクレオチドの主鎖は、ホスホルアミデートおよびホスホロチオエートなどの合成サブユニットのポリマーを含むことができ、そのため、オリゴデオキシヌクレオシドホスホルアミデート（Ｐ－ＮＨ２）、または混合ホスホルアミデート－ホスホジエステルオリゴマーであり得る。加えて、二本鎖ポリヌクレオチドは、相補鎖を合成すること、および適切な条件下で鎖をアニーリングすることによる、またはＤＮＡポリメラーゼを適切なプライマーと共に使用して相補鎖をｄｅ ｎｏｖｏで合成することによるいずれかで、化学合成の一本鎖ポリヌクレオチド生成物から得ることができる。

【0105】

「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換可能に使用され、最小の長さに限定されない。アミノ酸残基のそのようなポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含有し得、限定されるものではないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体および多量体が挙げられる。全長タンパク質およびその断片は両方とも定義により包含される。用語は、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらにまた、本発明の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加および置換（一般に、本来は、保存的）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異誘発によるような計画的なものであってもよく、またはタンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅に起因するエラーによるなど偶発的なものであってもよい。

【0106】

本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答を直接的にまたは間接的にのいずれかでモジュレートおよび／または発生させる物質を指す。一般に、アジュバントは、抗原と併せて投与されて、抗原単独と比較して抗原に対する免疫応答の増強をもたらす。一部の実施形態では、アジュバントは、複数のＰＢＭＣを調整するために使用される（例えば、実施例において実証する通り）。さまざまなアジュバントが本明細書に記載される。

【0107】

「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」および「ＣｐＧ ＯＤＮ」という用語は、本明細書において、ホスフェートによって分離されるシトシンおよびグアニンのジヌクレオチド（本明細書において「ＣｐＧ」ジヌクレオチドまたは「ＣｐＧ」とも称する）を含有するＤＮＡ分子を指す。本開示のＣｐＧ ＯＤＮは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する。すなわち、ＣｐＧジヌクレオチド中のシトシンは、メチル化されない（すなわち、５－メチルシトシンではない）。ＣｐＧ ＯＤＮは、部分的または完全なホスホロチオエート（ＰＳ）主鎖を有していてもよい。

【0108】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」または「薬学的に適合する」は、生物学的、または別段望ましくないものではない材料を意味し、例えば、材料は、任意の有意な望ましくない生物学的効果を引き起こすまたはそれが含有される組成物の他の構成要素のいずれかと有害な形式で相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に組み込まれ得る。薬学的に許容される担体または賦形剤は、好ましくは、毒性学的および製造試験の必要な基準を満たしており、ならびに／または米国食品医薬品局によって作られた不活性成分ガイド（Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ）に含まれる。

【0109】

本明細書に記載の任意の構造的および機能的特徴について、これらの特徴を決定する方法は、当技術分野において公知である。
改変ＰＢＭＣ、組成物、および改変ＰＢＭＣを作出する方法
改変ＰＢＭＣ

【0110】

ある特定の態様では、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性である、複数の改変ＰＢＭＣが提供される。他の態様では、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性であり、抗原は、がん抗原、感染性疾患抗原、またはウイルス疾患関連抗原である、複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の態様では、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性である、調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の態様では、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性であり、抗原は、がん抗原、感染性疾患抗原、またはウイルス疾患関連抗原である、調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。ある特定の態様では、抗原およびアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、抗原は、改変ＰＢＭＣに対して外因性である、調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の核酸は、１つまたは複数のビヒクルに運ばれ、１つまたは複数のビヒクルは、インプットＰＢＭＣに送達される。一部の実施形態では、ビヒクルは、ウイルスまたはウイルス関連粒子である。一部の実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、バキュロウイルス、ヘルペスウイルス、またはレトロウイルスのうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、ウイルスはＡＡＶを含む。一部の実施形態では、ビヒクルは、脂質系ビヒクル、例えばリポソームである。一部の実施形態では、ビヒクルはナノ粒子である。

【0111】

一部の態様では、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣが提供される。他の態様では、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。

【0112】

一部の態様では、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣが提供される。他の態様では、配列番号１９のアミノ酸配列を含む抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の態様では、配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣが提供される。他の態様では、配列番号２３のアミノ酸配列を含む抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。

【0113】

一部の態様では、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣが提供される。他の態様では、抗原をＰＢＭＣに導入する前に、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣが提供される。

【0114】

一部の態様では、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含む調整された複数のＰＢＭＣが提供される。他の態様では、抗原をＰＢＭＣに導入する前に、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含む調整された複数のＰＢＭＣが提供される。

【0115】

抗原および／またはアジュバントは、狭窄が媒介する送達（ＳＱＺ）を使用してＰＢＭＣに導入することができる。したがって、一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0116】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、プロセスは、改変ＰＢＭＣを調整するためのアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、１つまたは複数の核酸は、１つまたは複数のビヒクルに運ばれ、１つまたは複数のビヒクルは、インプットＰＢＭＣに送達される。一部の実施形態では、ビヒクルは、ウイルスまたはウイルス関連粒子である。一部の実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、バキュロウイルス、ヘルペスウイルス、またはレトロウイルスのうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、ウイルスはＡＡＶを含む。一部の実施形態では、ビヒクルは、脂質系ビヒクル、例えばリポソームである。一部の実施形態では、ビヒクルはナノ粒子である。

【0117】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0118】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0119】

ある特定の態様では、以下のステップ：ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣが提供される。ある態様では、以下のステップ：ａ）抗原を含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）アジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣが提供される。

【0120】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0121】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製されたヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0122】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および

【0123】

ｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製されたＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0124】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0125】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製されたＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0126】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製されたＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0127】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップであって、アジュバントはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0128】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0129】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0130】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣは、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0131】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣは、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0132】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0133】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。

【0134】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0135】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0136】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、抗原は、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0137】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0138】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、抗原を含む改変ＰＢＭＣは、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0139】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣは、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0140】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約１μＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約１μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約１００００：１～約１：１００００である。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約２００：１である。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約２０：１である。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0141】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、プロセスは、抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原および／またはアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップをさらに含む。一部の実施形態では、プロセスは、改変ＰＢＭＣを調整するためのアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。

【0142】

本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞のサイトゾルに存在し、アジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の複数の区画に存在する。さらなる実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の細胞の少なくとも約７０％に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の細胞の、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、または約９９％のうちのいずれか１つに存在する。一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球のそれぞれの細胞の少なくとも約７０％に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球のそれぞれの細胞の少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、または約９９％のうちのいずれか１つに存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞または単球のうちの１つまたは複数の細胞の少なくとも約７０％に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球のうちの１つまたは複数の細胞の、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、または約９９％のうちのいずれか１つに存在する。

【0143】

一部の実施形態では、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つを含む組成物が提供される。一部の実施形態では、医薬としての使用のための、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つを含む組成物が提供される。一部の実施形態では、手術、治療、または診断による、ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つを含む組成物が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つを含む、がんまたは感染性疾患の処置における使用のための組成物が提供される。一部の実施形態では、がん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患の処置における使用のための、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つを含む組成物が提供される。一部の実施形態では、がんは、頭頸部がん、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、または唾液腺がんである。一部の実施形態では、感染性疾患は、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＥＢＶ、ＭＣＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶと関連する。一部の実施形態では、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つ、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物がある。一部の実施形態では、組成物は、がんまたは感染性疾患の処置のためのものである。

【0144】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードするｍＲＮＡを含む。
組成物

【0145】

ある特定の態様では、医薬としての使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0146】

一部の態様では、手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0147】

一部の態様では、医薬としての使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0148】

一部の態様では、ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0149】

一部の態様では、個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患を処置する方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0150】

一部の態様では、個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患の処置における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0151】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置する方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0152】

一部の態様では、個体におけるＨＰＶ関連疾患の処置における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0153】

一部の態様では、個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患を処置するための医薬の製造における抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の使用が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0154】

一部の態様では、ＨＰＶ関連疾患を処置するための医薬の製造における抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の使用が提供され、調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0155】

本明細書に記載の組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約１μＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約１μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約１００００：１～約１：１００００である。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約２００：１である。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約２０：１である。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0156】

本明細書に記載の組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、プロセスは、抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原および／またはアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップをさらに含む。一部の実施形態では、プロセスは、改変ＰＢＭＣを調整するためのアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。

【0157】

本明細書に記載の組成物のいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞のサイトゾルに存在し、アジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の複数の区画に存在する。さらなる実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の細胞の少なくとも約７０％に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の細胞の、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、または約９９％、または１００％のうちのいずれか１つに存在する。一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の表面に結合している。

【0158】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードするｍＲＮＡを含む。
複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法

【0159】

一部の態様では、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するための方法であって、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップを含む、方法も提供される。

【0160】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法がある。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0161】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0162】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0163】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0164】

ある特定の態様では、以下のステップ：ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0165】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）抗原を含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）アジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。

【0166】

ある特定の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0167】

ある特定の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0168】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0169】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0170】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0171】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップであって、アジュバントはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0172】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣは、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0173】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、抗原を含む改変ＰＢＭＣは、アジュバントとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0174】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0175】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0176】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0177】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含む、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0178】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、抗原を含む改変ＰＢＭＣは、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0179】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、抗原を含む改変ＰＢＭＣは、アジュバントとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0180】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約１μＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約１μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約１００００：１～約１：１００００である。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約２００：１である。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約２０：１である。

【0181】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、プロセスは、抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原および／またはアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップをさらに含む。一部の実施形態では、プロセスは、改変ＰＢＭＣを調整するためのアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。

【0182】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞のサイトゾルに存在し、アジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の複数の区画に存在する。さらなる実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の細胞の少なくとも約７０％に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の細胞の、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、または約９９％、または１００％のうちのいずれか１つに存在する。一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞または単球の１つまたは複数の細胞の、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、約９９％、または１００％のうちのいずれか１つに存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞または単球のそれぞれの細胞の、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、または約９９％、または１００％のうちのいずれか１つに存在する。

【0183】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、プロセスは、インプットＰＢＭＣおよび／または改変ＰＢＭＣを、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応する改変ＰＢＭＣと比較して改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む。
個体における応答を刺激する方法

【0184】

一部の態様では、本発明は、がんもしくは感染性疾患を処置および予防する、ならびに／またはがんもしくは感染性疾患を有する個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物を個体に投与するステップを含み、改変ＰＢＭＣは、細胞内にがんまたは感染性疾患に関連する抗原を含む、方法を提供する。

【0185】

一部の実施形態では、個体における免疫応答を刺激するための方法であって、本明細書に記載の、複数の改変ＰＢＭＣ、組成物、または医薬組成物のいずれか１つを個体に投与するステップを含む、方法が提供される。

【0186】

ある特定の態様では、個体における免疫応答を刺激するための方法であって、ａ）配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｂ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、方法が提供される。

【0187】

ある特定の態様では、以下のステップ：ａ）ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。

【0188】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）複数のＰＢＭＣを抗原に導入するステップ；およびｃ）抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。

【0189】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、アジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0190】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原およびアジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原およびアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0191】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0192】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0193】

ある特定の態様では、以下のステップ：ａ）抗原を含むインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）アジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0194】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｄ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0195】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）抗原を含むインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）アジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｃ）複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップ；およびｄ）アジュバントを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。

【0196】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0197】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。 一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0198】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0199】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）ＨＰＶ抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣをＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）ＨＰＶ抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0200】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣは、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0201】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0202】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0203】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0204】

一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；ｃ）抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；およびｄ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを個体に投与するステップを含む、個体における免疫応答を刺激する方法が提供される。一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0205】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ、または（ｂ）約４．５μｍである。一部の実施形態では、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣは、ＣｐＧ ＯＤＮとともに、（ａ）約２時間～約１０時間、（ｂ）約３時間～約６時間、または（ｃ）約４時間、インキュベートされる。

【0206】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約１μＭであり、および／または摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約１μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約１００００：１～約１：１００００である。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約２００：１である。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントの比は、約２０：１である。

【0207】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、プロセスは、抗原を含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原および／またはアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップをさらに含む。一部の実施形態では、プロセスは、改変ＰＢＭＣを調整するためのアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む。

【0208】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞のサイトゾルに存在し、アジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の小胞に存在する。一部の実施形態では、小胞はエンドソームである。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の複数の区画に存在する。さらなる実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の細胞の少なくとも約７０％に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、複数のＰＢＭＣ中の細胞の、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、または約９９％、または１００％のうちのいずれか１つに存在する。一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、約９９％、または１００％のうちのいずれか１つに存在する。一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞または単球の１つまたは複数の細胞の、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、約９９％、または１００％のうちのいずれか１つに存在する。一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球のそれぞれの細胞の、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、約９９％、または１００％のうちのいずれか１つに存在する。一部の実施形態では、抗原は、複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の１つまたは複数の細胞の、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９５％、約９９％、または１００％のうちのいずれか１つに存在する。

【0209】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、プロセスは、インプットＰＢＭＣおよび／または改変ＰＢＭＣを、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応する改変ＰＢＭＣと比較して改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む。

【0210】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、方法は、第３のアジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および第３のアジュバントは同時に投与される。一部の実施形態では、第３のアジュバントは、複数の改変ＰＢＭＣの投与の前、それと並行して、または後に個体に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および第３のアジュバントは逐次的に投与される。一部の実施形態では、第３のアジュバントは、狭窄で送達されるアジュバントと同じである。一部の実施形態では、第３のアジュバントは、調整用アジュバントと同じである。一部の実施形態では、第３のアジュバントは、狭窄で送達されるアジュバントと異なる。一部の実施形態では、第３のアジュバントは、調整用アジュバントと異なる。

【0211】

一部の実施形態では、方法は、改変ＰＢＭＣの複数回投与を含む。一部の実施形態では、方法は、改変ＰＢＭＣの約３～約９回の投与を含む。一部の実施形態では、方法は、改変ＰＢＭＣの約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５回の投与のうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、方法は、必要により、改変ＰＢＭＣの連続投与を含む。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣの２回の連続投与の間の時間間隔は約１日～約３０日である。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣの２回の連続投与の間の時間間隔は約２１日である。一部の実施形態では、改変免疫細胞の２回の連続投与の間の時間間隔は、約１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、１４、１６、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１５０日のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、個体は、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ中の少なくとも１つの細胞は、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９９％のうちのいずれか１つは、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９９％のうちのいずれか１つは、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣ内のＢ細胞の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９９％のうちのいずれか１つは、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣ内のＮＫ細胞の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９９％のうちのいずれか１つは、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣ内の単球の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９９％のうちのいずれか１つは、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である。

【0212】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、第３のアジュバントを投与する前に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、第３のアジュバントの投与の約１時間～約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、第３のアジュバントの投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、第３のアジュバントの投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日前に投与される。

【0213】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、第３のアジュバントの投与後に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、第３のアジュバントの投与の約１時間～約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、第３のアジュバントの投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、第３のアジュバントの投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日後に投与される。

【0214】

一部の実施形態では、第３のアジュバントは、いずれか１つのＩＦＮ－αまたはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、第３のアジュバントはＣｐＧ７９０９である。

【0215】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、治療剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される。一部の実施形態では、治療剤は、免疫チェックポイント阻害剤、化学療法または放射線療法のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、治療剤は、１つまたは複数のサイトカインを含む。

【0216】

免疫チェックポイントは、免疫系の制御因子であり、チェック中に免疫応答を保つ。免疫チェックポイント阻害剤は、免疫応答の増強を促進するために用いることができる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は同時に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および免疫チェックポイント阻害剤は逐次的に投与される。

【0217】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間～約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日前に投与される。

【0218】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約７日、約１０日、約１４日、約１８日、約２１日、約２４日、約２８日、約３０日、約３５日、約４０日、約４５日、または約５０日前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約７日～約１０日、約１０日～約１４日、約１４日～約１８日、約１８日～約２１日、約２１日～約２４日、約２４日～約２８日、約２８日～約３０日、約３０日～約３５日、約３５日～約４０日、約４０日～約４５日、または約４５日～約５０日前に投与される。

【0219】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間～約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日後に投与される。

【0220】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約７日、約１０日、約１４日、約１８日、約２１日、約２４日、約２８日、約３０日、約３５日、約４０日、約４５日、または約５０日後に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、免疫チェックポイント阻害剤の投与の約７日～約１０日、約１０日～約１４日、約１４日～約１８日、約１８日～約２１日、約２１日～約２４日、約２４日～約２８日、約２８日～約３０日、約３０日～約３５日、約３５日～約４０日、約４０日～約４５日、または約４５日～約５０日後に投与される。

【0221】

一部の実施形態では、方法は、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の複数回投与、および／またはチェックポイント阻害剤の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および／またはチェックポイント阻害剤の２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与、１０回投与、１１回投与、１２回投与、１３回投与、１４回投与、または１５回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および／またはチェックポイント阻害剤の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。

【0222】

例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、限定なく、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡを標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体、ＰＤ－Ｌ１を結合する抗体、ＣＴＬＡ－４を結合する抗体、ＬＡＧ３を結合する抗体、またはＴＩＭ－３を結合する抗体、、ＴＩＧＩＴに結合する抗体、ＶＩＳＴＡを結合する抗体、ＴＩＭ－１を結合する抗体、Ｂ７－Ｈ４を結合する抗体、またはＢＴＬＡを結合する抗体のうちの１つまたは複数である。のうちの１つまたは複数である。さらなる実施形態では、抗体は、全長抗体または任意のバリアント、例えば、限定されるものではないが、抗体断片、一本鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、または抗原結合断片（Ｆａｂ）であり得る。さらなる実施形態では、抗体は、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数の化学化合物である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数に結合するか、および／またはこれらを阻害する、１つまたは複数のペプチドである。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１を標的にする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１を標的にする。

【0223】

サイトカインを、がん、例えば、ＨＰＶ関連がんに対する相加または相乗効果を達成するために、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、１つまたはそれより多くのサイトカインの投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物およびサイトカインは同時に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物およびサイトカインは逐次的に投与される。

【0224】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与の前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与後に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与の約１時間～約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日前に投与される。

【0225】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与の約７日、約１０日、約１４日、約１８日、約２１日、約２４日、約２８日、約３０日、約３５日、約４０日、約４５日、または約５０日前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与の約７日～約１０日、約１０日～約１４日、約１４日～約１８日、約１８日～約２１日、約２１日～約２４日、約２４日～約２８日、約２８日～約３０日、約３０日～約３５日、約３５日～約４０日、約４０日～約４５日、または約４５日～約５０日前に投与される。

【0226】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与後に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与の約１時間～約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、サイトカインの投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日後に投与される。

【0227】

例示的なサイトカインとしては、限定されるものではないが、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、および腫瘍壊死因子が挙げられる。一部の実施形態では、サイトカインは、細胞性免疫応答を増強する。一部の実施形態では、サイトカインは、抗体応答を増強する。一部の実施形態では、サイトカインはＩ型サイトカインである。一部の実施形態では、サイトカインは２型サイトカインである。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－ａ、またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、サイトカインはＩＬ－１５を含む。

【0228】

化学療法を、がん、例えば、ＨＰＶ関連がんに対する相加または相乗効果を達成するために、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および化学療法は同時に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ含む組成物および化学療法は逐次的に投与される。

【0229】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与後に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与の約１時間～約１週間前に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与の約１時間～約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日前に投与される。

【0230】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与後に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与の約１時間～約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日後に投与される。

【0231】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与の約７日、約１０日、約１４日、約１８日、約２１日、約２４日、約２８日、約３０日、約３５日、約４０日、約４５日、または約５０日後に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、化学療法の投与の約７日～約１０日、約１０日～約１４日、約１４日～約１８日、約１８日～約２１日、約２１日～約２４日、約２４日～約２８日、約２８日～約３０日、約３０日～約３５日、約３５日～約４０日、約４０日～約４５日、または約４５日～約５０日後に投与される。

【0232】

一部の実施形態では、方法は、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の複数回投与、および／または化学療法の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および／または化学療法の２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与、１０回投与、１１回投与、１２回投与、１３回投与、１４回投与、または１５回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および／または化学療法の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。

【0233】

例示的な化学療法は、細胞周期依存性または細胞周期非依存性であり得る。一部の実施形態では、化学療法は、１つまたは複数の化学療法剤を含む。一部の実施形態では、化学療法剤は、がんにおける、細胞分裂、ＤＮＡ、または代謝のうちの１つまたは複数を標的にし得る。一部の実施形態では、化学療法剤は、限定されるものではないが、シスプラチン、オキサリプラチン、またはカルボプラチンなどの白金系作用物質である。一部の実施形態では、化学療法剤はタキサン（ドセタキセルまたはパクリタキセルなど）である。一部の実施形態では、化学療法剤は、５－フルオロウラシル、ドキソルビシン、またはイリノテカンである。一部の実施形態では、化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、または有糸分裂阻害剤のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、化学療法はシスプラチンを含む。

【0234】

放射線療法を、がん、例えば、ＨＰＶ関連がんに対する相加または相乗効果を達成するために、本明細書に記載の複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および放射線療法は同時に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および放射線療法は逐次的に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与と組み合わせて、化学療法と組み合わせて、および／または免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、投与される。

【0235】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与の前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与後に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間～約１週間前に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日前に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日前に投与される。

【0236】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与後に投与される。例えば、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間～約１週間後に投与される。例えば、一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約６０時間、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日後に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与の約１時間～約２時間、約２時間～約３時間、約３時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～約１０時間、約１０時間～約１２時間、約１２時間～約１４時間、約１４時間～約１６時間、約１６時間～約１８時間、約１８時間～約２０時間、約２０時間～約２４時間、約２４時間～約３０時間、約３０時間～約３６時間、約３６時間～約４２時間、約４２時間～約４８時間、約４８時間～約６０時間、約６０時間～約３日、約３日～約４日、約４日～約５日、約５日～約６日、約６日～約７日後に投与される。

【0237】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与の約７日、約１０日、約１４日、約１８日、約２１日、約２４日、約２８日、約３０日、約３５日、約４０日、約４５日、または約５０日後に投与される。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物は、放射線療法の投与の約７日～約１０日、約１０日～約１４日、約１４日～約１８日、約１８日～約２１日、約２１日～約２４日、約２４日～約２８日、約２８日～約３０日、約３０日～約３５日、約３５日～約４０日、約４０日～約４５日、または約４５日～約５０日後に投与される。

【0238】

一部の実施形態では、方法は、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の複数回投与、および／または放射線療法の複数回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および／または放射線療法の２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与、１０回投与、１１回投与、１２回投与、１３回投与、１４回投与、または１５回投与を含む。例えば、一部の実施形態では、方法は、複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物および／または放射線療法の５回未満の投与、１０回未満の投与、１５回未満の投与、２０回未満の投与、２５回未満の投与、３０回未満の投与、５０回未満の投与、７５回未満の投与、１００回未満、または２００回未満の投与を含む。

【0239】

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれか１つによる個体における免疫応答を刺激する方法における使用のための抗原を含む複数のＰＢＭＣが提供される。

【0240】

本明細書に記載の方法のいずれか１つによる一部の方法では、方法は、個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する。パピローマウイルスは、直径が約５５ｎｍのビリオンサイズを有する小さな非エンベロープＤＮＡウイルスである。１００を超えるＨＰＶ遺伝子型が完全に特徴付けられ、より多くの数が存在すると推定される。ＨＰＶは、子宮頸がん、ならびに一部の外陰、膣、陰茎、中咽頭、肛門および直腸がんの公知の原因である。ほとんどのＨＰＶ感染症は、無症状で自然に消失するが、腫瘍形成性のＨＰＶ型の１つによる持続感染は、前がん状態またはがんに進行し得る。他のＨＰＶ関連疾患としては、尋常性疣贅、足底疣贅、扁平疣贅、肛門性器疣贅、肛門病変、表皮異形成、局所性上皮肥厚、口腔乳頭腫、疣贅嚢胞（ｖｅｒｒｕｃｏｕｓ ｃｙｓｔ）、喉頭乳頭腫症、扁平上皮内病変（ＳＩＬ）、子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰部上皮内腫瘍（ＶＩＮ）および膣上皮内腫瘍（ＶＡＩＮ）を挙げることができる。公知のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）型の多くは、腫瘍形成性であるサブセットによる良性病変を引き起こす。疫学的および系統発生学的な関係に基づいて、ＨＰＶ型は、１５種の「高リスク型」（ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２）および３種の「おそらく高リスク型」（ＨＰＶ２６、５３、および６６）に分類され、これらは、一緒に、低および高悪性度の子宮頸部の変化およびがん、ならびに外陰、膣、陰茎、肛門がんおよび肛門周囲がんなどの他の肛門性器（ａｎｏｇｅｎｔｉａｌ）がん、ならびに頭頸部がんとして現れることが公知である。最近、高リスク型のＨＰＶ１６および１８と乳がんとの関連も記載されている。「低リスク型」として分類される１１種のＨＰＶ型（ＨＰＶ６、１１、４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２および８１）は、良性の低悪性度の子宮頸部の変化、性器疣贅および再発性呼吸器乳頭腫症として現れることが公知である。皮膚のＨＰＶ型５、８および９２は、皮膚がんと関連する。一部のＨＰＶ関連がんでは、免疫系は抑制され、それに応じて、抗腫瘍応答は有意に損なわれる。Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７ （２０１７）を参照されたい。

【0241】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードするｍＲＮＡを含む。
ＰＢＭＣ組成物

【0242】

本明細書で使用される場合、ＰＢＭＣは、個体から得られる全血からの白血球除去によって単離され得る。同じ個体または異なる個体からのＰＢＭＣの異なるプールを混合することによって再構成されるＰＢＭＣ組成物も提供される。他の例では、ＰＢＭＣはまた、生成プロファイルを有する混合細胞組成物に異なる細胞の集団を混合することによって、再構成されてもよい。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを再構成するために使用される細胞の集団は、混合細胞集団（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの１つまたは複数の混合物など）である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを再構成するために使用される細胞の集団は、精製細胞集団（精製されたＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞または単球など）である。追加の例では、ＰＢＭＣ組成物の再構成において使用される異なる細胞の集団は、同じ個体（例えば、自家）から単離する、または異なる個体（例えば、同種異系および／または異種）から単離することができる。

【0243】

したがって、本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞を含む。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、ＣＤ３＋ Ｔ細胞、ＣＤ２０＋ Ｂ細胞、ＣＤ１４＋単球、ＣＤ５６＋ ＮＫ細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比と本質的に同じである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血からの白血球除去生成物中のＰＢＭＣの総数に対する比と本質的に同じである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、または５０％以下のうちのいずれか１つで異なる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１０％以下のいずれか１つで異なる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、全血からの白血球除去生成物中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、または５０％以下のうちのいずれか１つで異なる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血からの白血球除去生成物中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１０％以下のいずれか１つで異なる。

【0244】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約７０％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３．５％～約３５％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約４％～約２５％は、ＮＫ細胞である。

【0245】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約９０％～約９９％は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球からなる。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約８０％～約８５％、約８５％～約９０％、約９０％～約９５％、または約９５％～約９９％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約９０％は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。

【0246】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約９０％～約９９％は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約８０％～約８５％、約８５％～約９０％、約９０％～約９５％、または約９５％～約９９％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球からなる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約９０％は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球からなる。

【0247】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約２５％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約２．５％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のうちのいずれか１つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約３．５％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約４％は、単球である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの少なくとも約２５％は、Ｔ細胞であり；インプットＰＢＭＣの少なくとも約２．５％は、Ｂ細胞であり；インプットＰＢＭＣの少なくとも約３．５％は、ＮＫ細胞であり；インプットＰＢＭＣの少なくとも約４％は、単球である。

【0248】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約２０％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約０．２５％、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約２％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％のうちのいずれか１つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの少なくとも約２０％は、Ｔ細胞であり；改変ＰＢＭＣの少なくとも約２％は、Ｂ細胞であり；改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、ＮＫ細胞であり；改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、単球である。

【0249】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％以下のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約７０％以下は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約５％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２５％、３０％、３５％、４０％、または５０％以下のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約１４％以下は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、または６０％以下のうちのいずれか１つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約３５％以下は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約５％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２５％、３０％、３５％、４０％、または５０％以下のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約４％以下は、単球である。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣの約２５％以下は、Ｔ細胞であり；インプットＰＢＭＣの約２．５％以下は、Ｂ細胞であり；インプットＰＢＭＣの約３．５％以下は、ＮＫ細胞であり；インプットＰＢＭＣの約４％以下は、単球である。

【0250】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％以下のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２０％以下は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約０．２５％、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％以下のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２％以下は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、７．５％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、または３０％以下のうちのいずれか１つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３％以下は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％以下のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３％以下は、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２０％以下は、Ｔ細胞であり；改変ＰＢＭＣの約２％以下は、Ｂ細胞であり；改変ＰＢＭＣの約３％以下は、ＮＫ細胞であり；改変ＰＢＭＣの約３％以下は、単球である。

【0251】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、または７０％～７５％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約７０％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１％～２．５％、２．５％～４％、４％～６％、６％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、または２０％～２５％のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１％～２％、２％～３．５％、３．５％～５％、５％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、または２０％～２５％のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３．５％～約３５％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２％～４％、４％～６％、６％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、または３５％～４０％のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約４％～約２５％は、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約７０％はＴ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％はＢ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約３．５％～約３５％はＮＫ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約４％～約２５％はＮＫ細胞である。

【0252】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、または７０％～７５％のうちのいずれか１つは、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約７０％は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１％～２．５％、２．５％～４％、４％～６％、６％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、または２０％～２５％のうちのいずれか１つは、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％は、Ｂ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約１％～２％、２％～３．５％、３．５％～５％、５％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、または２０％～２５％のうちのいずれか１つは、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約３．５％～約３５％は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２％～４％、４％～６％、６％～８％、８％～１０％、１０％～１２％、１２％～１４％、１４％～１６％、１６％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、または３５％～４０％のうちのいずれか１つは、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約４％～約２５％は、単球である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの約２５％～約７０％はＴ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％はＢ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約３．５％～約３５％はＮＫ細胞であり、改変ＰＢＭＣの約４％～約２５％はＮＫ細胞である。

【0253】

本明細書で使用される場合、ＰＢＭＣはまた、単核血液細胞（リンパ球および単球など）の混合細胞集団の組成物を操作した後、作出され得る。一部の例では、インプットＰＢＭＣは、単核血液細胞の混合細胞集団内のある特定の亜集団（Ｂ細胞など）を低下させた（枯渇させたなど）後、作出される。個体における単核血液細胞の混合細胞集団における組成は、同じ個体における全血からの白血球除去生成物とより酷似した細胞集団を作製するために操作することができる。他の例では、単核血液細胞（例えば、マウス脾細胞）の混合細胞集団における組成は、ヒト全血からの白血球除去生成物から単離されたヒトＰＢＭＣとより酷似した細胞集団を作製するために操作することもできる。

【0254】

一部の実施形態では、狭窄（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）が媒介する送達は、ＰＢＭＣ内の異なる亜集団（Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、または単球など）の生存能力を、有意な方法で、差次的にモジュレートしない。一部の実施形態では、調整プロセスは、ＰＢＭＣ内の異なる亜集団の生存能力を、有意な方法で、差次的にモジュレートしない。一部の実施形態では、作用物質（限定されるものではないが、生物保存剤、またはＰＢＭＣの機能および／もしくは生存能力を増強する作用物質のいずれか１つを含む）のさらなる添加は、ＰＢＭＣ内のさまざまな亜集団の生存能力を、有意な方法で、差次的にモジュレートしない。したがって、本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージは、数で約１０％以下異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージは、数で、約５％、８％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、または２０％以下のうちのいずれか１つ異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージは、数で約１０％以下異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージは、数で、約５％、８％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、または２０％以下のうちのいずれか１つ異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージは、数で約１０％以下異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージは、数で、約５％、８％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、または２０％以下のうちのいずれか１つ異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージは、数で約１０％以下異なる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージおよび複数のインプットＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージは、数で、約５％、８％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、または２０％以下のうちのいずれか１つ異なる。
抗原

【0255】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は疾患関連抗原である。一部の実施形態では、抗原は、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡから誘導されている。一部の実施形態では、抗原は非自己抗原である。一部の実施形態では、抗原は、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原または真菌抗原である。一部の実施形態では、抗原は、罹患細胞の溶解物などの溶解物から誘導されている。一部の実施形態では、抗原は、腫瘍溶解物から誘導されている。一部の実施形態では、抗原は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、抗原は、がんに関連する。一部の実施形態では、がんは、頭頸部がん、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、または唾液腺がんである。一部の実施形態では、抗原は、頭頸部がん抗原、子宮頸がん抗原、外陰がん抗原、膣がん抗原、陰茎がん抗原、肛門がん抗原、肛門周囲がん抗原、肛門性器がん抗原、口腔がん抗原、唾液腺がん抗原、乳がん抗原、皮膚がん抗原、膀胱がん抗原、結腸がん、直腸がん抗原、子宮内膜がん抗原、腎臓がん抗原、白血病抗原、肺がん抗原、黒色腫抗原、非ホジキンリンパ腫抗原、膵臓がん抗原、前立腺がん抗原、または甲状腺がん抗原であり、一部の実施形態では、がんは固形がんである。一部の実施形態では、がんは血液がんである。一部の実施形態では、がんはウイルス関連がんである。一部の実施形態では、がんはＨＰＶ関連がんである。一部の実施形態では、がんは限局性がんである。一部の実施形態では、がんは転移性がんである。一部の実施形態では、抗原は、感染性疾患に関連する。一部の実施形態では、感染性疾患は、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＥＢＶ、ＭＣＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶと関連する。

【0256】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。

【0257】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原はヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である。パピローマウイルスは、直径が約５５ｎｍのビリオンサイズを有する小さな非エンベロープＤＮＡウイルスである。１００を超えるＨＰＶ遺伝子型が完全に特徴付けられ、より多くの数が存在すると推定される。ＨＰＶは、子宮頸がん、ならびに一部の外陰、膣、陰茎、中咽頭、肛門および直腸がんの公知の原因である。ほとんどのＨＰＶ感染症は、無症状で自然に消失するが、腫瘍形成性のＨＰＶ型の１つによる持続感染は、前がん状態またはがんに進行し得る。他のＨＰＶ関連疾患としては、尋常性疣贅、足底疣贅、扁平疣贅、肛門性器疣贅、肛門病変、表皮異形成、局所性上皮肥厚、口腔乳頭腫、疣贅嚢胞（ｖｅｒｒｕｃｏｕｓ ｃｙｓｔ）、喉頭乳頭腫症、扁平上皮内病変（ＳＩＬ）、子宮頸部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）、外陰部上皮内腫瘍（ＶＩＮ）および膣上皮内腫瘍（ＶＡＩＮ）を挙げることができる。公知のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）型の多くは、腫瘍形成性であるサブセットによる良性病変を引き起こす。疫学的および系統発生学的な関係に基づいて、ＨＰＶ型は、１５種の「高リスク型」（ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３、および８２）および３種の「おそらく高リスク型」（ＨＰＶ２６、５３、および６６）に分類され、これらは、一緒に、低および高悪性度の子宮頸部の変化およびがん、ならびに外陰、膣、陰茎、肛門および肛門周囲がんなどの他の肛門性器（ａｎｏｇｅｎｔｉａｌ）がん、ならびに頭頸部がんとして現れることが公知である。最近、高リスク型のＨＰＶ１６および１８と乳がんとの関連も記載された。「低リスク型」として分類される１１種のＨＰＶ型（ＨＰＶ６、１１、４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２および８１）は、良性の低悪性度の子宮頸部の変化、性器疣贅および再発性呼吸器乳頭腫症として現れることが公知である。皮膚のＨＰＶ型５、８および９２は、皮膚がんと関連する。一部のＨＰＶ関連がんでは、免疫系は抑制され、それに応じて、抗腫瘍応答は有意に損なわれる。Ｓｕｒｅｓｈ ａｎｄ Ｂｕｒｔｎｅｓｓ， Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １３（６）：２０－２７ （２０１７）を参照されたい。一部の実施形態では、抗原は、同じおよび／または異なる抗原に対する応答を誘発する複数のポリペプチドのプールである。一部の実施形態では、複数の抗原のプール中の抗原は、複数の抗原のプール中の他の抗原に向けられた免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、抗原性ＨＰＶエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＨＰＶは、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＬＡ－Ａ２特異的エピトープで構成される。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ Ｅ６抗原またはＨＰＶ Ｅ７抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７から誘導されるペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原は、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７から誘導されるＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む。一部の実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドは、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号１９と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は、配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号１９のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号１９のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、ＨＰＶ抗原は配列番号２３のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列の少なくとも１つを含む複数の抗原である。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列の２、３、４、５、６、７、または８つを含む複数の抗原である。一部の実施形態では、抗原は、配列番号１９と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列、および配列番号２３と少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む複数の抗原である。好ましい実施形態では、抗原は、配列番号１９のアミノ酸配列、および配列番号２３のアミノ酸配列を含む複数の抗原である。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合的に連結されたペプチドのプール内に含有される。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合的に連結されたペプチドのプール内に含有され、それぞれのペプチドは、１つ以下の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の抗原は、非共有結合的に連結されたペプチドのプール内に含有され、配列番号１９のアミノ酸配列および配列番号２３のアミノ酸配列は、別々のペプチド内に含有される。

【0258】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。さらなる実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む改変ＰＢＭＣの個体への投与後、複数の免疫原性エピトープは、他の免疫原性エピトープのいずれかに対する個体における免疫応答を減少させない。一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合されている。一部の実施形態では、抗原は、免疫原性ペプチドエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、抗原は、異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである。一部の実施形態では、隣接異種ペプチド配列は、疾患関連免疫原性ペプチドから誘導されている。一部の実施形態では、隣接異種ペプチド配列は天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、隣接異種ペプチド配列は、免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）から誘導されている。一部の実施形態では、Ｎ末端隣接ポリペプチドは、配列番号５～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／またはＣ末端隣接ポリペプチドは、配列番号１１～１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る。
アジュバント

【0259】

本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、免疫応答を、直接的または間接的のいずれかで、モジュレートおよび／または発生させる物質を指し得る。本発明の一部の実施形態では、アジュバントは、ＰＢＭＣの集団を調整するために使用される（すなわち、ＰＢＭＣは、個体への投与の前にアジュバントとともにインキュベートされる）。一部の例では、アジュバントは、抗原と併せて投与されて、抗原単独と比較して抗原に対する免疫応答の増強をもたらす。したがって、アジュバントは、抗原に対する免疫細胞応答（例えば、Ｔ細胞応答）の誘発をブーストするために使用することができる。一部の実施形態では、本発明は、細胞内に抗原（例えば、ＨＰＶ抗原）、および細胞内にアジュバントを含むように改変されたＰＢＭＣを提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載のようにして摂動されたＰＢＭＣは、抗原およびアジュバントの両方とともにインキュベートされる。例示的なアジュバントとしては、限定なく、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、およびレチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ－Ｉ）アゴニスト、ならびにＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９のためのアゴニストが挙げられる。例示的なアジュバントとしては、限定なく、ＣｐＧ ＯＤＮ、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、イミキモド（Ｒ８３７）、レシキモド（Ｒ８４８）、またはリポ多糖（ＬＰＳ）が挙げられる。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ ９アゴニストである。特定の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ１０１８、ＣｐＧ ＯＤＮ１５８５、ＣｐＧ ＯＤＮ２２１６、ＣｐＧ ＯＤＮ２３３６、ＣｐＧ ＯＤＮ１６６８、ＣｐＧ ＯＤＮ１８２６、ＣＰＧ ＯＤＮ２００６、ＣｐＧ ＯＤＮ２００７、ＣｐＧ ＯＤＮ ＢＷ００６、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｄ－ＳＬ０１、ＣｐＧ ＯＤＮ２３９５、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｍ３６２、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｄ－ＳＬ０３の群から選択されたものを含む。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮアジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ１８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ；配列番号３０）またはＣｐＧ ＯＤＮ２００６（ＣｐＧ７９０９としても公知）（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ；配列番号３１）オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ７９０９である。一部の実施形態では、ＲＩＧ－Ｉアゴニストは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）を含む。複数のアジュバントを、免疫応答の誘発を増強するための抗原と併せて使用することもできる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは１つよりも多いアジュバントを含む。複数のアジュバントを、免疫応答の誘発を増強するための抗原と併せて使用することもできる。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは１つよりも多いアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、アジュバントのＣｐＧ ＯＤＮ、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ ９アゴニストの任意の組合せを含む。

【0260】

本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、他に指示されない限り、アジュバントは、（ａ）摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされ、それを通過するアジュバント、（ｂ）ＰＢＭＣを調整するために、ＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバント、（ｃ）個体に改変ＰＢＭＣと共投与されるアジュバントを指す場合がある。

【0261】

一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされるアジュバントの濃度は、１μＭである。

【0262】

一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、１μＭである。

【0263】

一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１～約１：１００００のうちのいずれかである。例えば、一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１～約１０００：１、約１０００：１～約１００：１、約１００：１～約１０：１、約１０：１～約１：１、約１：１～約１：１０、約１：１０～約１：１００、約１：１００～約１：１０００、約１：１０００～約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約２００：１である。一部の実施形態では、摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原対アジュバントのモル比は、約２０：１である。

【0264】

一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。例えば、一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．１μＭ～約１ｍＭの濃度でアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１μＭの濃度でアジュバントを含む。

【0265】

一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度で抗原を含む。例えば、一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１０ｍＭのいずれかよりも高い濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．１μＭ～約１ｍＭの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１μＭの濃度で抗原を含む。

【0266】

一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．１ｎＭ、約１ｎＭ、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかの濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１０ｍＭよりも高い濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．１ｎＭ～約１ｎＭ、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～約１００ｎＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかの濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１０ｎＭ～約１００ｎＭの濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１ｎＭ～約１０ｎＭの濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約５０ｎＭの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、核酸はｍＲＮＡである。

【0267】

一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．０１μｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．０１μｇ／ｍＬ、約０．１μｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、または約１０ｍｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかの濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１０μｇ／ｍＬよりも高い濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．００１μｇ／ｍＬ～約０．１μｇ／ｍＬ、約０．１μｇ／ｍＬ～約１μｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ～約１０μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬ、または１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのうちのいずれかの濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約０．１μｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬの濃度で抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、約１μｇ／ｍＬ、約２μｇ／ｍＬ、約５μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約２０μｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約４０μｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ、約７０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ、約２００μｇ／ｍＬ、または約３００μｇ／ｍＬ、または約５００μｇ／ｍＬのうちのいずれか１つの濃度で抗原を含む。一部の実施形態では、核酸はｍＲＮＡである。

【0268】

一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１～約１：１００００のうちのいずれかである。例えば、一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約１００００：１～約１０００：１、約１０００：１～約１００：１、約１００：１～約１０：１、約１０：１～約１：１、約１：１～約１：１０、約１：１０～約１：１００、約１：１００～約１：１０００、約１：１０００～約１：１００００のうちのいずれかである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約２００：１である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣにおける抗原対アジュバントのモル比は、約２０：１である。
一部の実施形態では、抗原は、それ自体と、他の抗原と、またはアジュバントと複合体を形成する。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、ａ）抗原、ｂ）抗原および少なくとも１つの他の抗原、ならびに／またはｃ）抗原およびアジュバントを含む複合体を含む。
ＰＢＭＣの特徴のさらなる改変

【0269】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する複数の改変ＰＢＭＣと比較して改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、作用物質をさらに含み、この作用物質は、この作用物質を含まない対応する複数の改変ＰＢＭＣと比較して凍結－解凍サイクルの際の改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する。一部の実施形態では、作用物質は、凍結保存剤および／または低温保存剤である。一部の実施形態では、凍結保存剤も低温保存剤も、任意の凍結－解凍サイクルの前の作用物質を含まない対応する複数のＰＢＭＣと比較して作用物質を含む複数のＰＢＭＣにおいて１０％または２０％を超える細胞死を引き起こさない。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣの少なくとも約７０％、約８０％、または約９０％は、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルの後、生存している。一部の実施形態では、作用物質は、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である。一部の実施形態では、作用物質はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質はヒトアルブミンである。一部の実施形態では、作用物質は、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ－スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、またはＥＤＴＡのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、二価金属カチオンは、Ｍｇ^２＋、Ｚｎ^２＋またはＣａ^２＋のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＤＭＳＯ、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、イノシン、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、ナトリウム金属イオン、カリウム金属イオン、マグネシウム金属イオン、塩化物、アセテート、グルコネート、スクロース、水酸化カリウム、または水酸化ナトリウムのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）のうちの１つまたは複数である。

【0270】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている。一部の実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸を含む。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらすｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、共刺激分子は、Ｔ細胞の活性化の刺激におけるシグナル２のエフェクターである。

【0271】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、１つまたは複数のサイトカインの発現を増加させるようにさらに改変されている。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、またはＩＦＮα２のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、１つまたは複数のサイトカインの増加した発現および／または分泌をもたらす核酸を含む。一部の実施形態では、サイトカインは、Ｔ細胞の活性化の刺激におけるシグナル３のエフェクターである。

【0272】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣ中の少なくとも１つの細胞は、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、ＨＬＡ－Ａ０２ ＭＨＣクラスＩの発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣは、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変されたＰＢＭＣの同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変ＰＢＭＣの同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している。一部の実施形態では、改変されたＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期と比較して増加している。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期と比較して、約１０％、２５％、５０％、７５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、２００倍、もしくは５００倍またはそれよりも高くのいずれか１つだけ増加している。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期と本質的に同じである。

【0273】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、プロセスは、インプットＰＢＭＣおよび／または改変ＰＢＭＣを、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応する改変ＰＢＭＣと比較して改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む。
ＰＢＭＣの調整

【0274】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、調整される。さらなる実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、成熟している。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、狭窄が媒介する送達の後、調整される。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣは、狭窄で送達される抗原および／またはアジュバントを含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、第２のアジュバントとともにインキュベートされ、それによって、抗原および／またはアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するための第２のアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から単離される。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、狭窄が媒介する送達の後、調整される。一部の実施形態では、狭窄で送達される抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣは、狭窄で送達される抗原および／またはアジュバントを含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、第２のアジュバントとともにインキュベートされ、それによって、抗原および／またはアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する。一部の態様では、以下のステップ：ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原および／またはアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；ｂ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原および／またはアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣおよび／またはアジュバントを作出するステップ；およびｃ）狭窄により送達される抗原および／またはアジュバントを含む改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、狭窄により送達される抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣをａ第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣおよび／またはアジュバントを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣおよび／またはアジュバントが提供される。一部の実施形態では、プロセスは、改変ＰＢＭＣを調整するための第２のアジュバントとのインキュベーションの前に、細胞懸濁液から、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣおよび／またはアジュバントを単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、狭窄で送達されるアジュバントは、調整用アジュバントと同じである。一部の実施形態では、狭窄で送達されるアジュバントは、調整用アジュバントと異なる。

【0275】

一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、１μＭである。

【0276】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約１～約２４時間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約２～約１０時間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約３～約６時間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のうちのいずれか１つの間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣを調整するために、約４時間、アジュバントとともにインキュベートされる。

【0277】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、狭窄が媒介する送達の前に、調整される。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートされ、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出する。一部の実施形態では、ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップを含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、プロセスは、調整された複数のインプットＰＢＭＣを、細胞変形狭窄を通過させる前に、調整された複数のインプットＰＢＭＣを、調整用アジュバントから単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、以下のステップ：ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣを調整用アジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原および／またはアジュバントが通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｃ）抗原および／またはアジュバントが摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原および／またはアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣおよび／またはアジュバントを作出するステップを含むプロセスによって調製された抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣおよび／またはアジュバントが提供される。一部の実施形態では、プロセスは、調整された複数のインプットＰＢＭＣを、細胞変形狭窄を通過させる前に、調整された複数のインプットＰＢＭＣを、調整用アジュバントから単離するステップをさらに含む。一部の実施形態では、狭窄で送達されるアジュバントは、調整用アジュバントと同じである。一部の実施形態では、狭窄で送達されるアジュバントは、調整用アジュバントと異なる。

【0278】

一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、１μＭである。

【0279】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約１～約２４時間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約２～約１０時間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約３～約６時間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のうちのいずれか１つの間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、インプットＰＢＭＣを調整するために、約４時間、アジュバントとともにインキュベートされる。

【0280】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣが提供される。一部の実施形態では、抗原をＰＢＭＣに導入する前に、ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣが提供される。

【0281】

上記の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約１０ｍＭである。例えば、一部の実施形態では、ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ、約０．１μＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ、または約１０ｍＭ未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．０１μＭ～約０．１μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約１０μＭ～約１００μＭ、約１００μＭ～約１ｍＭ、または１ｍＭ～約１０ｍＭのうちのいずれかである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１ｍＭである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、約０．１μＭ～約１０μＭである。一部の実施形態では、ＰＢＭＣとともにインキュベートされる抗原の濃度は、１μＭである。

【0282】

本明細書に記載の方法、組成物、または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約１～約２４時間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約２～約１０時間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約３～約６時間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約１時間、２時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、または２４時間のうちのいずれか１つの間、アジュバントとともにインキュベートされる。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、ＰＢＭＣを調整するために、約４時間、アジュバントとともにインキュベートされる。

【0283】

本明細書に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、１つまたは複数の共刺激分子は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣと比較して、調整された複数の改変ＰＢＭＣにおいて上方制御される。一部の実施形態では、１つまたは複数の共刺激分子は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団と比較して、調整された複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団において上方制御される。一部の実施形態では、１つまたは複数の共刺激分子は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される。一部の実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６である。一部の実施形態では、共刺激分子はＣＤ８６である。一部の実施形態では、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍よりも高く、または１０倍よりも高く、調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される。一部の実施形態では、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍～約１．５倍、約１．５倍～約１．８倍、約１．８倍～約２倍、約２倍～約３倍、約３倍～約４倍、約４倍～約５倍、約５倍～約８倍、約８倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約２００倍、約２００倍～約５００倍、または約５００倍よりも高くのうちのいずれか、調整された複数の改変ＰＢＭＣのＢ細胞において上方制御される。一部の実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の発現は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣと比較して調整された複数の改変ＰＢＭＣにおいて増加している。一部の実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の発現は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の亜集団と比較して調整された複数中の細胞の亜集団において増加している。一部の実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の発現は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍、または１０倍よりも高く、調整された複数の改変ＰＢＭＣにおいて増加している。一部の実施形態では、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の発現は、調整されていない複数の改変ＰＢＭＣと比較して、約１．２倍～約１．５倍、約１．５倍～約１．８倍、約１．８倍～約２倍、約２倍～約３倍、約３倍～約４倍、約４倍～約５倍、約５倍～約８倍、約８倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約２００倍、約２００倍～約５００倍、または約５００倍よりも高くのうちのいずれか、調整された複数の改変ＰＢＭＣにおいて増加している。

【0284】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードするｍＲＮＡを含む。
マイクロ流体システムおよびその構成要素
細胞変形狭窄を提供するためのマイクロ流体チャネル

【0285】

一部の実施形態では、本発明は、ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、狭窄を通過させ、狭窄はＰＢＭＣを変形させ、それにより、抗原および／またはアジュバントがＰＢＭＣに入るように、ＰＢＭＣの摂動を引き起こすことによって、免疫応答をモジュレートするための方法であって、狭窄は、マイクロ流体チャネル内に含有される、方法を提供する。一部の実施形態では、複数の狭窄は、マイクロ流体チャネル内に、並列および／または直列で配置することができる。本明細書に開示の方法における使用のための細胞変形狭窄を含有する例示的なマイクロ流体チャネルは、ＷＯ２０１３０５９３４３に記載されている。本明細書に開示の方法における使用のための例示的なポアを有する表面は、ＷＯ２０１７０４１０５０に記載されている。

【0286】

一部の実施形態では、マイクロ流体チャネルは、管腔を含み、緩衝液に懸濁されたＰＢＭＣが通過することができるように構成され、マイクロ流体チャネルは、狭窄を含む。マイクロ流体チャネルは、ケイ素、金属（例えば、ステンレス鋼）、プラスチック（例えば、ポリスチレン）、セラミック、ガラス、結晶性基材、アモルファス基材、またはポリマー（例えば、ポリ－メチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ＰＤＭＳ、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）など）を含む、いくつかの材料のうちのいずれか１つで作られ得る。マイクロ流体チャネルの製作は、ドライエッチング、ウェットエッチング、フォトリソグラフィー、射出成型、レーザーアブレーションまたはＳＵ－８マスクを含む、当技術分野において公知の任意の方法によって行うことができる。

【0287】

一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄は、入口部分、中心点および出口部分を含む。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の長さ、深さおよび幅は、変動させることができる。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の直径は、ＰＢＭＣの直径の関数である。ＰＢＭＣの直径を決定するための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、高含有量イメージング、細胞計数器またはフローサイトメトリーである。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約２０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、ＰＢＭＣの平均直径またはＰＢＭＣの亜集団の平均直径の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、複数のインプットＰＢＭＣの最小断面距離の平均の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９９％である。一部の実施形態では、チャネルは、約２μｍ～約１０μｍの狭窄の幅、またはそれらの間の任意の幅もしくは幅の範囲を含む。一部の実施形態では、チャネルは、約３μｍ～約１０μｍの狭窄の幅を含む。一部の実施形態では、チャネルは、約３μｍ～約６μｍの狭窄の幅を含む。一部の実施形態では、チャネルは、約４．２μｍ～約４．８μｍの狭窄の幅を含む。例えば、狭窄の幅は、約２μｍ、約２．５μｍ、約３μｍ、約３．５μｍ、約４μｍ、約４．５μｍ、約５μｍ、約５．５μｍ、約６μｍ、約６．５μｍ、または約７μｍのうちのいずれか１つであり得る。一部の実施形態では、チャネルは、約１０μｍの狭窄の長さ、および約３．５μｍの狭窄の幅を含む。一部の実施形態では、チャネルは、約１０μｍの狭窄の長さ、および約４μｍの狭窄の幅を含む。一部の実施形態では、チャネルは、約１０μｍの狭窄の長さ、および約４．５μｍの狭窄の幅を含む。チャネルの断面、入口部分、中心点および出口部分も変動させることができる。例えば、断面は、円形、楕円形、細長いスリット、正方形、六角形、または三角形の形状であり得る。入口部分は、狭窄の角度を規定し、狭窄の角度は、チャネルの目詰まりを低下させるために最適化され、ＰＢＭＣへの化合物の増強された送達のために最適化される。出口部分の角度も同様に変動させることができる。例えば、出口部分の角度は、非層流をもたらし得る乱流の可能性を低下させるために構成される。一部の実施形態では、入口部分および／または出口部分の壁は、直線状である。他の実施形態では、入口部分および／または出口部分の壁は、湾曲している。
細胞変形狭窄を提供するためのポアを有する表面

【0288】

一部の実施形態では、本発明は、複数のＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、狭窄を通過させ、狭窄はＰＢＭＣを変形させ、それにより、抗原および／またはアジュバントがＰＢＭＣに入るように、ＰＢＭＣの摂動を引き起こすことによって、免疫応答をモジュレートするための方法であって、狭窄は、ポアであるか、またはポア内に含有される、方法を提供する。一部の実施形態では、ポアは、表面に含有される。本明細書に開示の方法における使用のためのポアを有する例示的な表面は、ＷＯ２０１７０４１０５０に記載されている。

【0289】

本明細書に開示の表面は、いくつかの材料のいずれか１つで作られ、いくつかの形態のいずれか１つをとることができる。一部の実施形態では、表面はフィルターである。一部の実施形態では、表面は膜である。一部の実施形態では、フィルターは、タンジェンシャルフローフィルターである。一部の実施形態では、表面は、スポンジまたはスポンジ様のマトリックスである。一部の実施形態では、表面はマトリックスである。

【0290】

一部の実施形態では、表面は、蛇行状のパス表面である。一部の実施形態では、蛇行状のパス表面は、酢酸セルロースを含む。一部の実施形態では、表面は、限定なく、合成または天然ポリマー、ポリカーボネート、ケイ素、ガラス、金属、合金、硝酸セルロース、銀、酢酸セルロース、ナイロン、ポリエステル、ポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、ポリプロピレン、ＰＶＤＦ、ポリテトラフルオロエチレン、混合セルロースエステル、ポーセレン、およびセラミックから選択される材料を含む。

【0291】

本明細書に開示の表面は、当技術分野で公知の任意の形状、例えば、３次元形状を有することができる。表面の２次元形状は、限定なく、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、または八角形であり得る。一部の実施形態では、表面は、丸形の形状である。一部の実施形態では、表面３次元形状は、円柱状、円錐状、または立方体状である。

【0292】

表面は、さまざまな断面の幅および厚さを有することができる。一部の実施形態では、表面の断面の幅は、約１ｍｍ～約１ｍ、またはそれらの間の任意の断面の幅もしくは断面の幅の範囲である。一部の実施形態では、表面は、規定された厚さを有する。一部の実施形態では、表面の厚さは均一である。一部の実施形態では、表面の厚さは可変である。例えば、一部の実施形態では、表面の部分は、表面の他の部分よりも厚いか、または薄い。一部の実施形態では、表面の厚さは、約１％～約９０％、またはそれらの間の任意のパーセンテージもしくはパーセンテージの範囲で変動する。一部の実施形態では、表面は、約０．０１μｍ～約５ｍｍの厚さ、またはそれらの間の任意の厚さもしくは厚さの範囲である。

【0293】

ポアの通路の入口および出口は、さまざまな角度を有し得る。ポアの角度は、ＰＢＭＣが通過する間に、ポアの目詰まりを最小化するために選択することができる。一部の実施形態では、表面を通る流速は、約０．００１ｍＬ／ｃｍ^２／秒～約１００Ｌ／ｃｍ^２／秒、またはそれらの間の任意の速度もしくは速度の範囲である。例えば、入口または出口部分の角度は、約０～約９０度であり得る。一部の実施形態では、入口または出口部分は、９０度よりも大きくあり得る。一部の実施形態では、ポアは、同一の入口および出口の角度を有する。一部の実施形態では、ポアは、異なる入口および出口の角度を有する。一部の実施形態では、ポアの縁は、滑らかであり、例えば、丸みを帯びているか、または湾曲している。滑らかなポアの縁は、突起、隆線および起伏のある部分がない、連続的な、平坦かつ平らな表面を有する。一部の実施形態では、ポアの縁は、鋭い。鋭いポアの縁は、先端が尖っているか、または鋭角である、細い縁を有する。一部の実施形態では、ポアの通路は、まっすぐである。まっすぐなポアの通路は、曲線、屈曲、角度および他の凸凹を含まない。一部の実施形態では、ポアの通路は、湾曲している。湾曲したポアの通路は、屈曲しているか、または直線から外れる。一部の実施形態では、ポアの通路は、複数の曲線、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれよりも多くの湾曲を有する。

【0294】

ポアは、２次元または３次元形状を含む、当技術分野において公知の任意の形状を有することができる。ポアの形状（例えば、断面形状）は、限定なく、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、および八角形であり得る。一部の実施形態では、ポアの断面は、丸形の形状である。一部の実施形態では、ポアの３次元形状は、円柱状または円錐状である。一部の実施形態では、ポアは、溝がある入口および出口の形状を有する。一部の実施形態では、ポアの形状は、所与の表面内のポアの間で均質（すなわち、一貫したまたは規則的）である。一部の実施形態では、ポアの形状は、所与の表面内のポアの間で不均質（すなわち、混合または変動する）である。

【0295】

本明細書に記載の表面は、総ポア数の範囲を有することができる。一部の実施形態では、ポアは、総表面積の約１０％～約８０％を包含する。一部の実施形態では、表面は、約１．０×１０^５～約１．０×１０^３０個の総ポア、またはそれらの間の任意の数もしくは数の範囲を含有する。一部の実施形態では、表面は、約１０～約１．０×１０^１５ポア／ｍｍ^２の表面積を含む。

【0296】

ポアは、所与の表面内に非常に多くの様式で分布し得る。一部の実施形態では、ポアは、所与の表面内に並行して分布する。そのような一例では、ポアは、同じ方向に並んで分布し、所与の表面内で同じ距離離れている。一部の実施形態では、ポアの分布は、規則正しいか、または均質である。そのような一例では、ポアは、規則的な系統的パターンで分布するか、または所与の表面内で同じ距離離れている。一部の実施形態では、ポアの分布は、ランダムまたは不均質である。そのような一例では、ポアは、不規則的な無秩序のパターンで分布するか、または所与の表面内で異なる距離離れている。一部の実施形態では、複数の表面は、直列で分布する。複数の表面は、均質または不均質な表面のサイズ、形状および／または粗さであり得る。複数の表面は、均質または不均質なポアのサイズ、形状および／または数を有するポアをさらに含有することができ、それによって、異なるＰＢＭＣの種類へのある範囲の化合物の同時送達を可能にする。

【0297】

一部の実施形態では、個々のポアは、均一な幅寸法（すなわち、ポアの通路の長さに沿って一定の幅）を有する。一部の実施形態では、個々のポアは、可変の幅（すなわち、ポアの通路の長さに沿って増加または減少する幅）を有する。一部の実施形態では、所与の表面内のポアは、同じ個々のポアの深さを有する。一部の実施形態では、所与の表面内のポアは、異なる個々のポアの深さを有する。一部の実施形態では、ポアは、互いに直接隣接している。一部の実施形態では、ポアは、ある距離により、互いに離れている。一部の実施形態では、ポアは、約０．００１μｍ～約３０ｍｍの距離、またはそれらの間の任意の距離もしくは距離の範囲により、互いに離れている。

【0298】

一部の実施形態では、表面は、材料でコーティングされる。材料は、限定なく、テフロン（登録商標）、接着コーティング、界面活性剤、タンパク質、接着分子、抗体、抗凝固剤、細胞機能をモジュレートする因子、核酸、脂質、炭水化物または膜貫通タンパク質を含む、当技術分野において公知の任意の材料から選択することができる。一部の実施形態では、表面は、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）でコーティングされる。一部の実施形態では、材料は、表面に共有結合的に付加される。一部の実施形態では、材料は、表面に非共有結合的に付加されるか、または吸着される。一部の実施形態では、表面分子は、ＰＢＭＣがポアを通過するときに放出される。

【0299】

一部の実施形態では、表面は、修飾された化学的性質を有する。一部の実施形態では、表面は極性である。一部の実施形態では、表面は親水性である。一部の実施形態では、表面は非極性である。一部の実施形態では、表面は疎水性である。一部の実施形態では、表面は帯電している。一部の実施形態では、表面は、正および／または負に帯電している。一部の実施形態では、表面は、一部の領域において正に帯電し、他の領域において負に帯電することができる。一部の実施形態では、表面は、全体として正電荷、または全体として負電荷を有する。一部の実施形態では、表面は、滑らか、電解研磨される、粗い、またはプラズマ処理される、のうちのいずれか１つであり得る。一部の実施形態では、表面は、双性イオンまたは双極性化合物を含む。一部の実施形態では、表面はプラズマ処理される。

【0300】

一部の実施形態では、表面は、より大きなモジュール内に含有される。一部の実施形態では、表面は、プラスチックまたはガラスシリンジなどのシリンジ内に含有される。一部の実施形態では、表面は、プラスチックフィルターホルダー内に含有される。一部の実施形態では、表面は、ピペットチップ内に含有される。

【0301】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、１つまたは複数の核酸は、１つまたは複数のビヒクルに運ばれ、１つまたは複数のビヒクルは、インプットＰＢＭＣに送達される。一部の実施形態では、ビヒクルは、ウイルスまたはウイルス関連粒子である。一部の実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、バキュロウイルス、ヘルペスウイルス、またはレトロウイルスのうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、ウイルスはＡＡＶを含む。一部の実施形態では、ビヒクルは、脂質系ビヒクル、例えばリポソームである。一部の実施形態では、ビヒクルはナノ粒子である。

【0302】

細胞摂動
一部の実施形態では、本発明は、ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、狭窄を通過させ、狭窄はＰＢＭＣを変形させ、それにより、抗原および／またはアジュバントがＰＢＭＣに入るように、ＰＢＭＣの摂動を引き起こすことによって、免疫応答をモジュレートするための方法であって、ＰＢＭＣにおける摂動は、ＰＢＭＣの外側から材料をＰＢＭＣに移動させることを可能にする、ＰＢＭＣにおける開裂（例えば、孔、裂け目、空洞、開口部、ポア、割れ目、間隙、穿孔部）である、方法を提供する。変形は、例えば、機械的ひずみまたは機械的ひずみおよびせん断力によって引き起こすことができる。一部の実施形態では、摂動は、ＰＢＭＣ膜内の摂動である。一部の実施形態では、摂動は一過性である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣ摂動は、約１．０×１０^－９秒～約２時間、またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲で持続する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣ摂動は、約１．０×１０^－９秒～約１秒、約１秒～約１分、または約１分～約１時間、持続する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣ摂動は、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－２、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－３、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－４、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－５、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－６、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－７、または約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－８秒のうちのいずれか１つの間、持続する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣ摂動は、約１．０×１０^－８～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－７～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－６～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－５～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－４～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－３～約１．０×１０^－１、または約１．０×１０^－２～約１．０×１０^－１秒のうちのいずれか１つの間、持続する。本明細書に記載の方法によって作り出されるＰＢＭＣ摂動（例えば、ポアまたは孔）は、補体または細菌溶血素によって作り出されるものなどの、多量体ポア構造を形成するためのタンパク質サブユニットのアセンブリーの結果として形成されない。

【0303】

ＰＢＭＣが狭窄を通過するときに、狭窄は、ＰＢＭＣ膜に傷害を一時的に与え、これが、摂動による材料の受動的拡散を可能にする。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、およそ１００μ秒の短い期間のみ変形されて、細胞シグナル伝達機構によりアポトーシス経路を活性化する機会を最小化するが、他の持続時間も可能である（例えば、数ナノ秒～数時間の範囲）。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約１．０×１０^－９秒～約２時間、またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲で、変形される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約１．０×１０^－９秒～約１秒、約１秒～約１分、または約１分～約１時間、変形される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－２、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－３、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－４、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－５、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－６、約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－７、または約１．０×１０^－９～約１．０×１０^－８秒のうちのいずれか１つの間、変形される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約１．０×１０^－８～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－７～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－６～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－５～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－４～約１．０×１０^－１、約１．０×１０^－３～約１．０×１０^－１、または約１．０×１０^－２～約１．０×１０^－１秒のうちいずれか１つの間、変形される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣを変形させることは、限定なく、約１μｓ～少なくとも約７５０μｓ、例えば、少なくとも約１μｓ、１０μｓ、５０μｓ、１００μｓ、５００μｓ、または７５０μｓの範囲の時間、ＰＢＭＣを変形させることを含む。

【0304】

一部の実施形態では、ＰＢＭＣへの抗原および／またはアジュバントの通過は、ＰＢＭＣが狭窄を通過するのと同時に、および／またはＰＢＭＣの摂動と同時に起こる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣへの化合物の通過は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した後に起こる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣへの化合物の通過は、ＰＢＭＣが狭窄を通過したおよそ数分後に起こる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣへの化合物の通過は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した約１．０×１０^－２秒～少なくとも約３０分後に起こる。例えば、ＰＢＭＣへの化合物の通過は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した、約１．０×１０^－２秒～約１秒、約１秒～約１分、または約１分～約３０分後に起こる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣへの化合物の通過は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した、約１．０×１０^－２秒～約１０分、約１．０×１０^－２秒～約５分、約１．０×１０^－２秒～約１分、約１．０×１０^－２秒～約３０秒、約１．０×１０^－２秒～約１０秒、約１．０×１０^－２秒～約１秒、または約１．０×１０^－２秒～約０．１秒後に起こる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣへの化合物の通過は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した、約１．０×１０^－１秒～約１０分、約１秒～約１０分、約１０秒～約１０分、約５０秒～約１０分、約１分～約１０分、または約５分～約１０分後に起こる。一部の実施形態では、狭窄を通過した後のＰＢＭＣにおける摂動は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した後、およそ約５分以内に修正される。

【0305】

一部の実施形態では、狭窄を通過した後の細胞生存率は、約５％～約１００％である。一部の実施形態では、狭窄を通過した後の細胞生存率は、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％である。一部の実施形態では、細胞生存率は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した約１．０×１０^－２秒～少なくとも約１０日後に測定される。例えば、細胞生存率は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した、約１．０×１０^－２秒～約１秒、約１秒～約１分、約１分～約３０分、または約３０分～約２時間後に測定される。一部の実施形態では、細胞生存率は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した、約１．０×１０^－２秒～約２時間、約１．０×１０^－２秒～約１時間、約１．０×１０^－２秒～約３０分、約１．０×１０^－２秒～約１分、約１．０×１０^－２秒～約３０秒、約１．０×１０^－２秒～約１秒、または約１．０×１０^－２秒～約０．１秒後に測定される。一部の実施形態では、細胞生存率は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した、約１．５時間～約２時間、約１時間～約２時間、約３０分～約２時間、約１５分～約２時間、約１分～約２時間、約３０秒～約２時間、または約１秒～約２時間後に測定される。一部の実施形態では、細胞生存率は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した、約２時間～約５時間、約５時間～約１２時間、約１２時間～約２４時間、または約２４時間～約１０日後に測定される。

【0306】

送達パラメーター
いくつかのパラメーターが、本明細書に記載の方法による免疫応答をモジュレートするためのＰＢＭＣへの化合物の送達に影響を与え得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、狭窄を通過する前、それと並行して、またはその後に、化合物と接触する。ＰＢＭＣは、送達するための化合物を含む溶液に懸濁されて狭窄を通過し得るが、化合物は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した後に、細胞懸濁液に添加することができる。一部の実施形態では、送達される化合物は、狭窄にコーティングされる。

【0307】

ＰＢＭＣへの化合物の送達に影響を与え得るパラメーターの例としては、限定されるものではないが、狭窄の寸法、狭窄の入口の角度、狭窄の表面の性質（例えば、粗さ、化学修飾、親水性、疎水性など）、運転流束（例えば、狭窄を通る細胞通過時間）、ＰＢＭＣの濃度、細胞懸濁液中の化合物の濃度、および狭窄を通過した後にＰＢＭＣを回復させるまたはインキュベートする時間の量が挙げられ、ＰＢＭＣに送達される化合物の通過に影響を及ぼし得る。ＰＢＭＣへの化合物の送達に影響を与える追加のパラメーターとしては、狭窄におけるＰＢＭＣの速度、狭窄におけるせん断速度、細胞懸濁液の粘度、流速に垂直な速度成分、および狭窄における時間を挙げることができる。加えて、チャネルを直列および／または並列で含む複数のチップは、ＰＢＭＣへの送達に影響を与え得る。並列の複数のチップは、スループットを増強するのに有用であり得る。そのようなパラメーターは、化合物の送達を制御するために設計することができる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの濃度は、約１０～少なくとも約１０^１２個細胞／ｍＬ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及ぶ。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１ｇ／ｍＬ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及び得る。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１ｐＭ～少なくとも約２Ｍ、またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲に及び得る。

【0308】

本開示の方法において使用される温度は、化合物の送達および細胞生存率に影響を及ぼすように調整することができる。一部の実施形態では、方法は、約－５℃～約４５℃で行われる。例えば、方法は、室温（例えば、約２０℃）、生理学的温度（例えば、約３７℃）、生理学的温度よりも高い（例えば、約３７℃よりも高い～４５℃、またはそれよりも高い）もしくは低下した温度（例えば、約－５℃～約４℃）、またはこれらの例示的な温度の間の温度で行うことができる。

【0309】

さまざまな方法を利用して、狭窄を通過させてＰＢＭＣを駆動することができる。例えば、圧力を、入口側のポンプ（例えば、コンプレッサー）によって印加することができ、真空を、出口側の真空ポンプによって印加することができ、毛細管作用を、チューブによって適用することができ、および／またはシステムに、重力を供給することができる。変位に基づく流動システムを使用することもできる（例えば、シリンジポンプ、蠕動ポンプ、手動シリンジまたはピペット、ピストンなど）。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、陽圧または陰圧によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、一定圧力または可変圧力によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、圧力は、シリンジを使用して印加される。一部の実施形態では、圧力は、ガス（例えば、ガスボンベからの）を使用して印加される陽圧である。一部の実施形態では、圧力は、ポンプを使用して印加される。一部の実施形態では、ポンプは、蠕動ポンプまたはダイヤフラムポンプである。一部の実施形態では、圧力は、真空を使用して印加される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ｇ力によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、遠心力によって狭窄を通過する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、毛細管圧によって狭窄を通過する。

【0310】

一部の実施形態では、流体の流動は、狭窄を通過させてＰＢＭＣを方向づける。一部の実施形態では、流体の流動は、ＰＢＭＣが狭窄を通過する前の乱流である。乱流は、所与のポイントでの速度が、大きさおよび方向が不規則に変動する流体の流動である。一部の実施形態では、狭窄を通る流体の流動は、層流である。層流は、すべてのポイントでの流動の方向が一定のままである、固体境界付近の流体における途切れない流動を含む。一部の実施形態では、流体の流動は、ＰＢＭＣが狭窄を通過した後の乱流である。ＰＢＭＣが狭窄を通過する速度は、変動させることができる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、均一な細胞スピードで狭窄を通過する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、変動する細胞スピードで狭窄を通過する。

【0311】

他の実施形態では、組合せ処置は、ＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、狭窄に通過させることによって、免疫応答をモジュレートするために使用され、狭窄は、ＰＢＭＣを変形させ、それによって、抗原および／またはアジュバントが、例えば、本明細書に記載の方法でＰＢＭＣに入るように、ＰＢＭＣの摂動を引き起こした後、狭窄の下流で電場に曝露される。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、狭窄を通過した後、少なくとも１つの電極によって生じた電場を通過する。一部の実施形態では、電場は、ＰＢＭＣの核などのＰＢＭＣの内側の第２の場所への化合物の送達を支援する。例えば、細胞変形狭窄および電場の組合せは、ＰＢＭＣ（例えば、細胞核）に、抗体をコードするプラスミドを送達し、抗体のｄｅ ｎｏｖｏ産生をもたらす。一部の実施形態では、１つまたは複数の電極は、電場を生じるために細胞変形狭窄に近接している。一部の実施形態では、電場は、約０．１ｋＶ／ｍ～約１００ＭＶ／ｍ、またはそれらの間の任意の数もしくは数の範囲である。一部の実施形態では、集積回路を使用して、電極を駆動するための電気シグナルを提供する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、約１ｎｓ～約１ｓのパルス幅、および約１００ｎｓ～約１０ｓ、またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲の期間、電場に曝露される。
ＰＢＭＣへの送達のための細胞懸濁液

【0312】

細胞懸濁液は、混合されるか、または精製された、集団または複数のＰＢＭＣであり得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、全血などの混合細胞集団である。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、ＰＢＭＣの精製された集団（例えば、複数の）などの精製細胞集団である。他の実施形態では、ＰＢＭＣの集団（例えば、複数の）は、１つまたは複数の細胞が枯渇している。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの集団は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のうちの１つまたは複数が枯渇している。

【0313】

細胞懸濁液の組成（例えば、容量オスモル濃度、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）は、免疫応答をモジュレートするための化合物の送達に影響し得る。一部の実施形態では、懸濁液は全血を含む。あるいは、細胞懸濁液は、血液以外の生理食塩溶液または生理学的媒体中の細胞の混合物である。一部の実施形態では、細胞懸濁液は水溶液を含む。一部の実施形態では、水溶液は、細胞培養培地、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、塩、金属イオン、糖、成長因子、動物由来生成物、増量材料、界面活性剤、潤滑剤、脂質、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、細胞周期阻害剤、および／またはアクチン重合に影響する作用物質を含む。一部の実施形態では、細胞培養培地は、ＤＭＥＭ、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）、ＩＭＤＭ、ＲＰＭＩ、Ｘ－Ｖｉｖｏ １０（商標）１０、およびＸ－Ｖｉｖｏ １５（商標）である。加えて、溶液緩衝液（ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ）は、例えば、狭窄またはポアの目詰まりを低下または排除し、細胞生存率を改善するように設計することができる、１つまたは複数の潤滑剤（プルロニック（登録商標）または他の界面活性剤）を含むことができる。例示的な界面活性剤としては、限定なく、ポロキサマー；ポリソルベート；マンニトール、ソルビトールなどの糖または糖アルコール；動物由来血清；およびアルブミンタンパク質が挙げられる。

【0314】

ある特定の種類のＰＢＭＣによる一部の構成では、ＰＢＭＣは、ＰＢＭＣの内部への化合物の送達を助ける１つまたは複数の溶液中でインキュベートすることができる。一部の実施形態では、水溶液は、アクチン重合に影響する作用物質を含む。一部の実施形態では、アクチン重合に影響する作用物質は、ラトランクリンＡ、サイトカラシンおよび／またはコルヒチンである。例えば、ＰＢＭＣは、ラトランクリン（Ｌａｎｔｒｕｎｃｕｌｉｎ）Ａ（０．１μｇ／ｍＬ）などの解重合溶液中で、送達前に１時間インキュベートして、アクチン細胞骨格を解重合することができる。追加の例として、ＰＢＭＣは、１０μＭのコルヒチン（Ｓｉｇｍａ）中で、送達前に２時間インキュベートして、微小管ネットワークを解重合することができる。

【0315】

細胞懸濁液の粘度も、本明細書に開示される方法に影響し得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液の粘度は、約８．９×１０^－４Ｐａ・ｓ～約４．０×１０^－３Ｐａ・ｓ、またはそれらの間の任意の値もしくは値の範囲のいずれか１つの間に及ぶ。一部の実施形態では、粘度は、約８．９×１０^－４Ｐａ・ｓ～約４．０×１０^－３Ｐａ・ｓ、約８．９×１０^－４Ｐａ・ｓ～約３．０×１０^－３Ｐａ・ｓ、約８．９×１０^－４Ｐａ・ｓ～約２．０×１０^－３Ｐａ・ｓ、または約８．９×１０^－３Ｐａ・ｓ～約１．０×１０^－３Ｐａ・ｓのうちのいずれか１つの間に及ぶ。一部の実施形態では、粘度は、約０．８９ｃＰ～約４．０ｃＰ、約０．８９ｃＰ～約３．０ｃＰ、約０．８９ｃＰ～約２．０ｃＰ、または約０．８９ｃＰ～約１．０ｃＰのうちのいずれか１つの間に及ぶ。一部の実施形態では、細胞懸濁液の粘度がせん断ひずみの条件下で減少する、せん断減粘効果が観察される。粘度は、限定なく、ガラス毛細管粘度計などの粘度計、またはレオメーターを含む、当技術分野において公知の任意の方法によって測定することができる。粘度計は、１つの流動条件下で粘度を測定するが、レオメーターは、流動条件と共に変動する粘度を測定するために使用される。一部の実施形態では、粘度は、血液などのせん断減粘性溶液について測定される。一部の実施形態では、粘度は、約－５℃～約４５℃で測定される。例えば、粘度は、室温（例えば、約２０℃）、生理学的温度（例えば、約３７℃）、生理学的温度よりも高い（例えば、約３７℃よりも高い～４５℃、またはそれよりも高い）、低下した温度（例えば、約－５℃～約４℃）、またはこれらの例示的な温度の間の温度で測定される。
狭窄が媒介する送達

【0316】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣである、のいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、ＰＢＭＣの直径の関数、例えば、複数のＰＢＭＣの平均直径、または複数のＰＢＭＣ内の亜集団の平均直径である。一部の実施形態では、細胞の直径は、細胞（例えば、複数のＰＢＭＣ内の細胞）の最小断面距離によって測定される。

【0317】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、または約３０％～約４５％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、約８０％～約９０％、または約９０％～約９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のうちのいずれか１つである。

【0318】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約５０％～約９９％、約５０％～約９０％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、約６０％～約９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約７０％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、約８０％～約９０％、または約９０％～約９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小平均直径を有する細胞の亜集団は、リンパ球の集団であり、リンパ球の集団の直径は、約６μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、リンパ球の集団の平均直径は、約７μｍである。一部の実施形態では、リンパ球の集団は、Ｔ細胞の集団である。一部の実施形態では、リンパ球は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣ内の最小平均直径を有する細胞の亜集団は、Ｔ細胞である。

【0319】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約９０％、約１０％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％、約４０％～約６０％、約３０％～約４５％、約１５％～約３０％、約１５％～約２０％、約２０％～約２５％、約２５％～約３０％、約２０％～約３０％、約３０％～約７０％、または約３０％～約６０％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５％～約１０％、約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、約８０％～約９０％、または約９０％～約９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大平均直径を有する細胞の亜集団は、単球の集団であり、単球の集団の直径は、約１５μｍ～約２５μｍである。一部の実施形態では、単球の集団の平均直径は、約２０μｍである。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣ内の最大平均直径を有する細胞の亜集団は、単球である。

【0320】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約１５μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．２μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．２μｍ～約４．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約２μｍ～約１４μｍ、約４μｍ～約１２μｍ、約６μｍ～約９μｍ、約４μｍ～約６μｍ、約４μｍ～約５μｍ、約３．５μｍ～約７μｍ、約３．５μｍ～約６．３μｍ、約３．５μｍ～約５．６μｍ、約３．５μｍ～約４．９μｍ、約４．２μｍ～約６．３μｍ、約４．２μｍ～約５．６μｍ、または約４．２μｍ～約４．９μｍのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍ、または１５μｍのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍ、または５．０μｍのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄の直径は、約４．５μｍである。

【0321】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約２０ｐｓｉ～約１５０ｐｓｉの範囲の圧力下で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約３０ｐｓｉ～約１２０ｐｓｉの範囲の圧力下で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約６０ｐｓｉ～約９０ｐｓｉの範囲の圧力下で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約３０ｐｓｉ～約４０ｐｓｉ、約４０ｐｓｉ～約５０ｐｓｉ、約５０ｐｓｉ～約６０ｐｓｉ、約６０ｐｓｉ～約７０ｐｓｉ、約７０ｐｓｉ～約８０ｐｓｉ、約８０ｐｓｉ～約９０ｐｓｉ、約９０ｐｓｉ～約１００ｐｓｉ、約１００ｐｓｉ～約１１０ｐｓｉ、または約１１０ｐｓｉ～約１２０ｐｓｉのうちのいずれか１つの範囲の圧力下で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約２０ｐｓｉ、２５ｐｓｉ、３０ｐｓｉ、３５ｐｓｉ、４０ｐｓｉ、４５ｐｓｉ、５０ｐｓｉ、５５ｐｓｉ、６０ｐｓｉ、６５ｐｓｉ、７０ｐｓｉ、７５ｐｓｉ、８０ｐｓｉ、８５ｐｓｉ、９０ｐｓｉ、９５ｐｓｉ、１００ｐｓｉ、１０５ｐｓｉ、１１０ｐｓｉ、１１５ｐｓｉ、または１２０ｐｓｉのうちのいずれか１つの圧力下で狭窄を通過させる。

【0322】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約１５０ｋＰａ～約１０００ｋＰａの範囲の圧力下で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約２０７ｋＰａ～約８３０ｋＰａの範囲の圧力下で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約４１５ｋＰａ～約６２１ｋＰａの範囲の圧力下で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約２００ｋＰａ～約２５０ｋＰａ、約２５０ｋＰａ～約３００ｋＰａ、３００ｋＰａ～約３５０ｋＰａ、約３５０ｋＰａ～約４００ｋＰａ、４００ｋＰａ～約４５０ｋＰａ、約４５０ｋＰａ～約５００ｋＰａ、５００ｋＰａ～約５５０ｋＰａ、約５５０ｋＰａ～約６００ｋＰａ、６００ｋＰａ～約６５０ｋＰａ、約６５０ｋＰａ～約７００ｋＰａ、７００ｋＰａ～約７５０ｋＰａ、約７５０ｋＰａ～約８００ｋＰａ、８００ｋＰａ～約８５０ｋＰａ、約８５０ｋＰａ～約９００ｋＰａ、９００ｋＰａ～約９５０ｋＰａ、約９５０ｋＰａ～約１０００ｋＰａのうちのいずれか１つの範囲の圧力下で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約２００ｋＰａ、２５０ｋＰａ、３００ｋＰａ、３５０ｋＰａ、４００ｋＰａ、４１５ｋＰａ、４５０ｋＰａ、５００ｋＰａ、５５０ｋＰａ、６００ｋＰａ、６１２ｋＰａ、６５０ｋＰａ、７００ｋＰａ、７５０ｋＰａ、８００ｋＰａ、または８５０ｋＰａのうちのいずれか１つの圧力下で狭窄を通過させる。

【0323】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約０℃～約３７℃の範囲の温度で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約０℃～約１０℃の範囲の温度で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約２℃～約８℃の範囲の温度で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約２℃～約６℃、約５℃～約１０℃、約１０℃～約１５℃、約１５℃～約２０℃、約２０℃～約２５℃、約２５℃～約３０℃、約３０℃～約３５℃、または約３５℃～約３７℃のうちのいずれか１つの範囲の温度で狭窄を通過させる。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを、約０℃、１℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、または３７℃のうちのいずれか１つの温度で狭窄を通過させる。

【0324】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄を通過した後、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣが３７℃に基準化する（ｎｏｒｍａｌｉｚｅ）のを可能にするのに十分な時間、３７℃の温度でインキュベートされる。一部の実施形態では、狭窄を通過した後、複数の改変ＰＢＭＣは、改変ＰＢＭＣが２５℃に基準化するのを可能にするのに十分な時間、２５℃の温度でインキュベートされる。

【0325】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、インプット免疫細胞は、約０．００１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分の流速、またはそれらの間の任意の速度もしくは速度の範囲で、狭窄を通過する。一部の実施形態では、流速は、約０．００１ｍＬ／分～約１７５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１５０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１２５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１００ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約５０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約２５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約７．５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約５．０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約２．５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約０．１ｍＬ／分、または約０．００１ｍＬ／分～約０．０１ｍＬ／分である。一部の実施形態では、流速は、約０．００１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約０．０１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約０．１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約５０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約７５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１００ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１５０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約０．５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約２．５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約７．５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約２５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、または約１７５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分である。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、約１０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分の流速で、狭窄を通過する。一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣは、約１００ｍＬ／分の流速で、狭窄を通過する。

【0326】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄は、当技術分野において公知の任意の形状、例えば、３次元形状または２次元形状を有することができる。狭窄の断面形状などの２次元形状は、限定なく、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、または八角形であり得る。狭窄の３次元形状は、限定なく、円柱状、円錐状または立方体状であり得る。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、長方形である。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、スリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約３μｍ～約１０μｍの幅、および／または約１μｍ～約２００μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約３μｍ～約６μｍの幅、および／または約２０μｍ～約１２０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．２μｍ～約６μｍの幅、および／または約２０μｍ～約１２０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．２μｍ～約６μｍの幅、および／または約４０μｍ～約１００μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．２μｍ～約６μｍの幅、および／または約２０μｍ～約８０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄の断面形状は、約４．５μｍの幅、および／または約８０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、スリットは、約１０μｍ～約３０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約２μｍ～約５０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約２μｍ～約５μｍ、約５μｍ～約１０μｍ、約１０μｍ～約１５μｍ、約１５μｍ～約２０μｍ、約２０μｍ～約２５μｍ、約２５μｍ～約３０μｍ、約３０μｍ～約３５μｍ、約３５μｍ～約４０μｍ、約４０μｍ～約４５μｍ、または約４５μｍ～約５０μｍのうちのいずれか１つの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約１０μｍの長さを含む。

【0327】

一部の実施形態では、狭窄は、入口部分および出口部分を含む。狭窄の入口および出口は、さまざまな角度を有し得る。一部の実施形態では、狭窄は、同一の入口および出口の角度を有する。一部の実施形態では、狭窄は、異なる入口および出口の角度を有する。狭窄の角度は、ＰＢＭＣが通過する間に、狭窄の目詰まりを最小化するために選択することができる。一部の実施形態では、表面を通る流速は、約０．００１ｍＬ／分～約１００ｍＬ／分、またはそれらの間の任意の速度もしくは速度の範囲である。一部の例では、入口および／または出口部分の角度は、約０～約９０度であり得る。一部の実施形態では、入口および／または出口部分は、９０度よりも大きくあり得る。一部の実施形態では、入口部分は、入口の角度を規定し、入口の角度は、約０度～約９０度である。一部の実施形態では、入口の角度は、約１０度～約４０度、約１２度～約４５度、約１５度～約３０度のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、入口の角度は、約２０度～約２２度である。一部の実施形態では、出口部分は、出口の角度を規定し、出口の角度は、約０度～約９０度である。一部の実施形態では、出口の角度は、約１０度～約４０度、約１２度～約４５度、約１５度～約３０度のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、出口の角度は、約２０度～約２２度である。一部の実施形態では、入口部分は、入口の角度を規定し、入口の角度は、約２０度～約２２度であり、出口部分は、出口の角度を規定し、出口の角度は、約２０度～約２２度である。

【0328】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、狭窄の縁は、滑らかであり、例えば、丸みを帯びているか、または湾曲している。滑らかな狭窄の縁は、突起、隆線および起伏のある部分がない、連続的な、平坦かつ平らな表面を有する。一部の実施形態では、狭窄の縁は、鋭い。鋭い狭窄の縁は、先端が尖っているか、または鋭角である、細い縁を有する。一部の実施形態では、狭窄の通路は、まっすぐである。まっすぐな狭窄の通路は、曲線、屈曲、角度および他の凸凹を含まない。一部の実施形態では、狭窄の通路は、湾曲している。湾曲した狭窄の通路は、屈曲しているか、または直線から外れる。一部の実施形態では、狭窄の通路は、複数の曲線、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれよりも多くの湾曲を有する。

【0329】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている。一部の実施形態では、複数の狭窄は、直列で配置されている。一部の実施形態では、複数の狭窄は、並列で配置されている。一部の実施形態では、複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている。一部の実施形態では、直列で配置される複数の狭窄は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、５０、７５、１００、５００、１，０００またはそれよりも多くの直列の狭窄のうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、並列で配置される複数の狭窄は、約２、５、１０、５０、７５、１００、５００、１，０００またはそれよりも多くの直列の狭窄のうちのいずれか１つを含み得る。

【0330】

本明細書に開示の方法における使用のための細胞変形狭窄を含有する例示的なマイクロ流体チャネルは、ＷＯ２０１３０５９３４３に記載されている。本明細書に開示の方法における使用のためのポアを有する例示的な表面は、ＷＯ２０１７０４１０５０に記載されている。
システムおよびキット

【0331】

一部の態様では、本発明は、例えば、本明細書に記載の方法のいずれかにおける使用のための、本明細書に記載の実施形態のいずれかによる、狭窄、ＰＢＭＣ懸濁液、抗原またはアジュバントの１つまたは複数を含むシステムを提供する。システムは、「マイクロ流体システムおよびその構成要素」という名称の上記の項に開示のものを含む、本明細書に開示の主題の組成物および方法について記載の任意の実施形態を含むことができる。一部の実施形態では、細胞変形狭窄は、ＰＢＭＣへの送達のための大きさである。一部の実施形態では、送達パラメーター、例えば、運転流束、細胞および化合物の濃度、温度、狭窄における細胞の速度、ならびに細胞懸濁液の組成（例えば、容量オスモル濃度、塩濃度、血清含有量、細胞濃度、ｐＨなど）は、免疫応答をモジュレートするするために、化合物の最大の応答について最適化される。

【0332】

個体における免疫応答のモジュレートにおける使用のためのキットまたは製造品も提供される。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載の改変ＰＢＭＣのいずれかを含む、抗原および／またはアジュバントを含む改変ＰＢＭＣを含む。一部の実施形態では、キットは、個体における免疫応答のモジュレートにおける使用のための改変ＰＢＭＣの作出における使用のための、狭窄、ＰＢＭＣ懸濁液、抗原またはアジュバントの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、キットは、好適なパッケージ内に、本明細書に記載の成分（例えば、ポアを含有するマイクロ流体チャネルもしくは表面、細胞懸濁液および／または化合物）を含む。好適なパッケージ材料は、当技術分野において公知であり、例えば、バイアル（密封バイアルなど）、容器、アンプル、瓶、広口瓶、フレキシブル包装材料（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）などが挙げられる。これらの製品は、さらに滅菌され得かつ／または密封され得る。

【0333】

本発明は、本明細書に記載の方法の構成要素を含むキットも提供し、個体における免疫応答をモジュレートする方法を行うための指示、ならびに／または抗原および／またはアジュバントをＰＢＭＣに導入するための指示をさらに含んでいてもよい。本明細書に記載のキットは、バッファ、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、ならびに本明細書に記載の方法のいずれかを行うための指示を伴う添付文書；例えば、個体において免疫応答をモジュレートするための指示、または抗原および／またはアジュバントを含有するようにＰＢＭＣを改変するための指示を含む、他の材料をさらに含み得る。
ＨＰＶおよびＨＰＶ関連疾患

【0334】

本明細書に記載のシステムおよびキットのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。
他の実施形態

【0335】

他の実施形態は、以下の条件のうちの１つまたは複数を有する本明細書に記載の実施形態のいずれかを提供する。
－ 抗原は、ＨＰＶ抗原ではない
－ 抗原は、ＨＰＶ Ｅ６抗原ではない
－ 抗原は、ＨＰＶ Ｅ７抗原ではない
－ 抗原は、ＨＰＶ Ｅ６抗原ではなく、かつＨＰＶ Ｅ７抗原ではない
－ アジュバントは、抗原と一緒にＰＢＭＣに導入されない
－ アジュバントは、抗原を含むＰＢＭＣのサイトゾルに存在しない
－ アジュバントは、個体に投与されない

【0336】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、ＨＰＶ抗原を発現しない。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、ＨＰＶ抗原をコードする核酸を含まない。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、ＨＰＶ Ｅ６抗原を含まない。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、ＨＰＶ Ｅ６抗原をコードする核酸を含まない。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、ＨＰＶ Ｅ７抗原を含まない。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、ＨＰＶ Ｅ７抗原をコードする核酸を含まない。

【0337】

一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、ＨＰＶ Ｅ６抗原を含まず、ＨＰＶ Ｅ７抗原を含まない。一部の実施形態では、複数の改変ＰＢＭＣは、ＨＰＶ Ｅ６抗原をコードする核酸を含まず、かつＨＰＶ Ｅ７抗原をコードする核酸を含まない。

【0338】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードする核酸を含む。本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原を発現しない。

【0339】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、抗原は１つまたは複数のタンパク質を含む。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数の核酸によってコードされ、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびプラスミドなどの１つまたは複数の核酸の形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、抗原は、１つまたは複数のｍＲＮＡによってコードされ、１つまたは複数のｍＲＮＡの形態でＰＢＭＣに入る。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、抗原をコードするｍＲＮＡを含む。

【0340】

本明細書に記載の方法、組成物または複数の改変ＰＢＭＣのいずれか１つによる一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、個体における耐性を誘導しない。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、個体における免疫応答を抑制しない。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、免疫寛容原性因子を含まない。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、免疫寛容原性因子と組み合わせて投与されない。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、免疫寛容原性因子の投与の前、それと同時に、またはその後に、投与されない。

【0341】

本出願の一部の実施形態では、「調整される」および「成熟される」という用語は、互換可能に使用され得る。
例示的な実施形態

【0342】

本発明は、以下に列挙する実施形態を提供する。

【0343】

１．抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、前記抗原は、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性である、複数の改変ＰＢＭＣ。

【0344】

２．抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、前記抗原は、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性であり、前記抗原は、がん抗原、感染性疾患抗原、またはウイルス疾患関連抗原である、複数の改変ＰＢＭＣ。

【0345】

３．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、前記抗原は、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性である、調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0346】

４．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、前記抗原は、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性であり、前記抗原は、がん抗原、感染性疾患抗原、またはウイルス疾患関連抗原である、調製された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0347】

５．抗原およびアジュバントを含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、前記抗原は、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性である、調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0348】

６．配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣ。

【0349】

７．配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0350】

８．抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣであって、前記ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣ。

【0351】

９．抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣであって、前記抗原を前記ＰＢＭＣに導入する前に、前記ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップによって調製される、抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣ。

【0352】

１０．抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣ。

【0353】

１１．抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する、抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣ。

【0354】

１２．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0355】

１３．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、前記抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記複数の改変ＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とアジュバントとともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0356】

１４．前記プロセスは前記改変ＰＢＭＣを調整するための前記アジュバントとのインキュベーションの前に、前記細胞懸濁液から、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む、実施形態１２または１３に記載の抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0357】

１５．抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原および前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。

【0358】

１６．抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸および前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸および前記アジュバントとともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出する、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。

【0359】

１７．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、および／または前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、実施形態１５または１６に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0360】

１８．（ａ）前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、および／または前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、実施形態１５～１７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0361】

１９．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約１μＭである、および／または前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約１μＭである、実施形態１５～１８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0362】

２０．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原対前記アジュバントの比が、約１００００：１～約１：１００００である、実施形態１５～１９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0363】

２１．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原対前記アジュバントの比が、約２００：１である、実施形態１５～２０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0364】

２２．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、
ａ）インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、狭窄の直径は、懸濁液中のインプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きなインプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｃ）抗原が摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0365】

２３．前記インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、実施形態２２に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0366】

２４．前記インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、実施形態２２または２３に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0367】

２５．前記インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約１μＭである、実施形態２２～２４のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0368】

２６．抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）前記アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。

【0369】

２７．抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）前記抗原を含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。

【0370】

２８．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、実施形態１０～１４、および２２～２７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0371】

２９．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、実施形態１０～１４、および２２～２８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0372】

３０．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約１μＭである、実施形態１０～１４、および２２～２９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0373】

３１．前記プロセスが、
前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原および／またはアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および／またはアジュバントを含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣおよび／または前記アジュバントを作出するステップをさらに含む、実施形態１５～２１、および２６～３０のいずれか１つに従う抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。

【0374】

３２．前記プロセスは前記改変ＰＢＭＣを調整するための前記アジュバントとのインキュベーションの前に、前記細胞懸濁液から、前記抗原および／または前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む、実施形態３１に記載の抗原および／またはアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣ。

【0375】

３３．前記改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、実施形態８～３１のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0376】

３４．前記改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、実施形態８～３３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0377】

３５．前記改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約１μＭである、実施形態８～３４のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0378】

３６．前記プロセスは、前記インプットＰＢＭＣおよび／または前記改変ＰＢＭＣを、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応する改変ＰＢＭＣと比較して前記改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む、実施形態８～３５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0379】

３７．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である、実施形態１０～３６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0380】

３８．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約７０％である、実施形態１０～３７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0381】

３９．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約２０％～約６０％である、実施形態１０～３８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0382】

４０．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約４０％～約６０％である、実施形態１０～３９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0383】

４１．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約３０％～約４５％である、実施形態１０～４０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0384】

４２．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約９９％である、実施形態１０～３６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0385】

４３．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約７０％である、実施形態１０～３６および４２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0386】

４４．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約２０％～約６０％である、実施形態１０～３６、４２および４３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0387】

４５．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約３０％～約４５％である、実施形態１０～３６および４２～４４のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0388】

４６．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５０％～約９９％である、実施形態１０～３６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0389】

４７．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５０％～約９０％である、実施形態１０～３６および４６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0390】

４８．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５０％～約８０％である、実施形態１０～３６、４６および４７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0391】

４９．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５０％～約７０％である、実施形態１０～３６および４６～４８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0392】

５０．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約６０％～約９０％である、実施形態１０～３６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0393】

５１．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約６０％～約８０％である、実施形態１０～３６および５０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0394】

５２．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約６０％～約７０％である、実施形態１０～３６、５０および５１のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0395】

５３．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約９９％である、実施形態１０～５２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0396】

５４．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約７０％である、実施形態１０～５３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0397】

５５．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約２０％～約６０％である、実施形態１０～５４のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0398】

５６．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約２０％～約３０％である、実施形態１０～５５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0399】

５７．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約２０％～約２５％である、実施形態１０～５６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0400】

５８．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約３０％～約７０％である、実施形態１０～５５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0401】

５９．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約３０％～約６０％である、実施形態１０～５５および５８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0402】

６０．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約３０％～約４５％である、実施形態１０～５５、５８および５９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0403】

６１．前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の前記亜集団が、Ｔ細胞である、実施形態４２～６０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0404】

６２．前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の前記亜集団が、単球である、実施形態５３～６１のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0405】

６３．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約１０μｍである、実施形態１０～６２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0406】

６４．前記狭窄の直径が、約４μｍ～約１０μｍである、実施形態１０～６３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0407】

６５．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約６μｍである、実施形態１０～６３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0408】

６６．前記狭窄の直径が、約４．２μｍ～約６μｍである、実施形態１０～６５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0409】

６７．前記狭窄の直径が、約４．５μｍである、実施形態１０～６６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0410】

６８．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約３０ｐｓｉ～約１２０ｐｓｉまたは約６０ｐｓｉ～約９０ｐｓｉの範囲の圧力下で前記狭窄を通過させた、実施形態１０～６７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0411】

６９．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約２０７ｋＰａ～約８３０ｋＰａまたは約４１５ｋＰａ～約６２１ｋＰａの範囲の圧力下で前記狭窄を通過させた、実施形態１０～６７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0412】

７０．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約０．００１ｍＬ／ｃｍ^２／秒～約２００Ｌ／ｃｍ^２／秒の流速で前記狭窄を通過させた、実施形態１０～６７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0413】

７１．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約０．１ｍＬ／ｃｍ^２／秒～約１５０Ｌ／ｃｍ^２／秒の流速で前記狭窄を通過させた、実施形態１０～６７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0414】

７２．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約１００ｍＬ／ｃｍ^２／秒の流速で前記狭窄を通過させた、実施形態１０～６７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0415】

７３．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約０℃～約３７℃の範囲の温度で前記狭窄を通過させた、実施形態１０～７２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0416】

７４．前記狭窄を通過した後、前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣが３７℃に基準化するのを可能にするのに十分な時間、３７℃の温度でインキュベートされる、実施形態１０～７３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0417】

７５．前記狭窄を通過した後、前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣが２５℃に基準化するのを可能にするのに十分な時間、２５℃の温度でインキュベートされる、実施形態１０～７４のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0418】

７６．前記狭窄の断面形状が、円形、楕円形、丸形、正方形、長方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、および八角形からなる群から選択される、実施形態１０～７５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0419】

７７．前記狭窄の断面形状が、スリットである、実施形態１０～７６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0420】

７８．スリットが、約３μｍ～６μｍの幅、および／または約２０μｍ～１２０μｍの深さを含む、実施形態７７に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0421】

７９．前記スリットが、約４．２μｍ～６μｍの幅、および／または約２０μｍ～１２０μｍの深さを含む、実施形態７８に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0422】

８０．前記スリットが、約４．５μｍの幅、および／または約８０μｍの深さを含む、実施形態７７～７９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0423】

８１．前記複数のインプットＰＢＭＣを含む前記細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、前記複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている、実施形態１０～８０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0424】

８２．前記狭窄が、入口部分および出口部分を含み、
（ａ）前記入口部分は、入口の角度を規定し、前記入口の角度は、約０度～約９０度もしくは約２２～２２度であり；および／または
（ｂ）前記出口部分は、出口の角度を規定し、前記出口の角度は、約０度～約９０度もしくは約２０～２２度であり；
好ましくは、（ａ）および（ｂ）について約２０～２２度である、
実施形態１０～８０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0425】

８３．前記複数のインプットＰＢＭＣを含む前記細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、前記複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている、実施形態１０～８２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0426】

８４．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約１～約２４時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、実施形態１２～１４、２２～２５、３１～８３のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0427】

８５．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約２～約１０時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、実施形態１２～１４、２２～２５、３１～８４のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0428】

８６．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約３～約６時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、実施形態１２～１４、２２～２５、３１～８５のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0429】

８７．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約４時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、実施形態１２～１４、２２～２５、３１～８６のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0430】

８８．前記抗原、前記抗原をコードする前記核酸、および／またはアジュバントが、前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞のサイトゾルおよび／または小胞に存在する、実施形態１～８７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0431】

８９．前記抗原、および／または前記抗原をコードする前記核酸が、前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞のサイトゾルに存在し、前記アジュバントが、前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の小胞に存在する、実施形態１～８８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0432】

９０．前記小胞が、エンドソームである、実施形態８８または８９に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0433】

９１．前記抗原、前記抗原をコードする前記核酸、および／または前記アジュバントが、前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の複数の区画に存在する、実施形態１～９０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0434】

９２．前記抗原、前記抗原をコードする前記核酸、および／または前記アジュバントが、前記複数のＰＢＭＣ中の前記細胞の少なくとも約７０％に存在する、実施形態１～９１のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0435】

９３．前記抗原、前記抗原をコードする前記核酸、および／または前記アジュバントが、前記複数のＰＢＭＣ中のＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球のそれぞれの少なくとも約７０％に存在する、実施形態１～９２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0436】

９４．前記抗原が、前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の表面に結合している、実施形態１～９３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0437】

９５．前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、実施形態５～９４のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0438】

９６．前記アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮである、実施形態９５に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0439】

９７．前記ＣｐＧ ＯＤＮが、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである、実施形態９６に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0440】

９８．前記抗原が、疾患関連抗原である、実施形態１～９７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0441】

９９．前記抗原が、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡから誘導されている、実施形態９８に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0442】

１００．前記抗原が、非自己抗原である、実施形態１～９９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0443】

１０１．前記抗原が、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原である、実施形態１～１００のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0444】

１０２．前記抗原が、腫瘍溶解物から誘導されている、実施形態１～５および８～１０１のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0445】

１０３．前記抗原が、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である、実施形態１～１０１のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0446】

１０４．前記ＨＰＶが、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である、実施形態１０３に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0447】

１０５．前記抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７から誘導されるペプチドを含む、実施形態１０３または１０４に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0448】

１０６．前記抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７から誘導されるＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む、実施形態１０３または１０４に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0449】

１０７．前記ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドが、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１０６に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0450】

１０８．前記抗原が、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１０７に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0451】

１０９．前記改変ＰＢＭＣが、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む、実施形態１～１０８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0452】

１１０．前記複数の免疫原性エピトープを含む前記複数の抗原を含む前記改変ＰＢＭＣの個体への投与後、前記複数の免疫原性エピトープは、他の免疫原性エピトープのいずれかに対する前記個体における免疫応答を減少させる、実施形態１０９に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0453】

１１１．前記抗原がポリペプチドであり、前記免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである、実施形態１１０に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0454】

１１２．前記免疫原性ペプチドエピトープが、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合されている、実施形態１１１に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0455】

１１３．前記抗原が、免疫原性ペプチドエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、実施形態１１１に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0456】

１１４．前記抗原が、異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである、実施形態１１１に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0457】

１１５．隣接異種ペプチド配列が、疾患関連免疫原性ペプチドから誘導されている、実施形態１１４に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0458】

１１６．前記Ｎ末端隣接ポリペプチドが、配列番号５～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／または前記Ｃ末端隣接ポリペプチドが、配列番号１１～１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１１２に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0459】

１１７．前記抗原が、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態１～１１６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0460】

１１８．前記改変ＰＢＭＣが、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、実施形態５、１５～２１および２６～１１７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0461】

１１９．前記改変ＰＢＭＣが、約１ｎＭ～約１ｍＭの濃度で前記抗原を含む、実施形態１～１１８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0462】

１２０．前記抗原対前記アジュバントの比が、約１００００：１～約１：１００００である、実施形態１～１１９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0463】

１２１．前記抗原対前記アジュバントの比が、約２００：１である、実施形態１～１２０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0464】

１２２．前記改変ＰＢＭＣが、ａ）前記抗原、ｂ）前記抗原および少なくとも１つの他の抗原、ｃ）前記抗原および前記アジュバント、ｄ）前記抗原をコードする前記核酸、ｅ）前記抗原をコードする核酸、および１つの他の抗原をコードする少なくとも１つの他の核酸、ならびに／またはｆ）前記抗原をコードする前記核酸および前記アジュバントを含む複合体を含む、実施形態１～１１８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0465】

１２３．前記複数の改変ＰＢＭＣが、作用物質をさらに含み、この作用物質が、前記作用物質を含まない対応する複数の改変ＰＢＭＣと比較して前記複数の改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する、実施形態３～５、７～９、１２～１４、２２～２５および３１～１２２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0466】

１２４．前記複数の改変ＰＢＭＣが、作用物質をさらに含み、この作用物質が、前記作用物質を含まない対応する複数の改変ＰＢＭＣと比較して凍結－解凍サイクルの際の前記複数の改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する、実施形態３～５、７～９、１２～１４、２２～２５および３１～１２３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0467】

１２５．前記調整された複数の改変ＰＢＭＣの少なくとも約７０％、約８０％、または約９０％が、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルの後、生存している、実施形態３～５、７～９、１２～１４、２２～２５および３１～１２４のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0468】

１２６．前記作用物質が、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である、実施形態１２３～１２５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0469】

１２７．前記作用物質が、アルブミンである、実施形態１２３～１２６のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0470】

１２８．前記アルブミンが、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、実施形態１２７に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0471】

１２９．前記作用物質が、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ－スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、またはＥＤＴＡのうちの１つまたは複数である、実施形態１２３～１２５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0472】

１３０．前記作用物質が、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）のうちの１つまたは複数である、実施形態１２３～１２５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0473】

１３１．前記作用物質が、マウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を含む、実施形態１２８に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0474】

１３２．前記作用物質が、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む、実施形態１２８に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0475】

１３３．前記細胞が、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、実施形態１～１３２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0476】

１３４．前記共刺激分子が、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、またはＣＤ１１２である、実施形態１３３に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0477】

１３５．前記共刺激分子が、シグナル２のエフェクターである、実施形態１３３に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0478】

１３６．前記細胞が、前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含む、実施形態１３３～１３５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0479】

１３７．前記核酸が、前記共刺激分子をコードする、実施形態１３６に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0480】

１３８．前記細胞が、１つまたは複数のサイトカインの発現を増加させるようにさらに改変されている、実施形態１～１３７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0481】

１３９．前記サイトカインが、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α、またはＩＬ－２１である、実施形態１３８に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0482】

１４０．前記共刺激分子が、シグナル３のエフェクターである、実施形態１３３に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0483】

１４１．前記細胞が、前記１つまたは複数のサイトカインの増加した発現をもたらす核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含む、実施形態１３８～１４０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0484】

１４２．前記核酸が、前記サイトカインをコードする、実施形態１４１に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0485】

１４３．前記複数の改変ＰＢＭＣ中の少なくとも１つの細胞が、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である、実施形態１～１４２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0486】

１４４．前記改変ＰＢＭＣが、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態１～１４２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0487】

１４５．前記改変ＰＢＭＣが、ＨＬＡ－Ａ０２ ＭＨＣ Ｉをモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態１～１４２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0488】

１４６．前記改変ＰＢＭＣが、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態１～１４５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0489】

１４７．前記改変ＰＢＭＣの同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変ＰＢＭＣの同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、実施形態１４５に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0490】

１４８．前記改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期と比較して増加している、実施形態１～１４７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0491】

１４９．前記改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期と本質的に同じである、実施形態１～１４７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0492】

１５０．前記改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における前記循環半減期は、対応する非改変ＰＢＭＣの循環半減期と本質的に同じである、実施形態１～１４７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0493】

１５１．前記複数のＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１～１５０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0494】

１５２．前記複数のＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞のうちの２つまたはそれより多くを含む、実施形態１～１５１のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0495】

１５３．前記複数のＰＢＭＣが、ＣＤ３＋ Ｔ細胞、ＣＤ２０＋ Ｂ細胞、ＣＤ１４＋単球、ＣＤ５６＋ ＮＫ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１～１５２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0496】

１５４．前記複数のインプットＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比と本質的に同じである、実施形態１０～１５３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0497】

１５５．前記複数のインプットＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血からの白血球除去生成物中のＰＢＭＣの総数に対する比と本質的に同じである、実施形態１０～１５３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0498】

１５６．前記複数のインプットＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、前記複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１０％以下異なる、実施形態１０～１５３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0499】

１５７．前記複数のインプットＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、前記複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血からの白血球除去生成物中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１０％以下異なる、実施形態１０～１５３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0500】

１５８．（ａ）前記インプットＰＢＭＣの少なくとも約２５％は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記インプットＰＢＭＣの少なくとも約２．５％は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記インプットＰＢＭＣの少なくとも約３．５％は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記インプットＰＢＭＣの少なくとも約４％は、単球である、
実施形態１０～１５７のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0501】

１５９．（ａ）前記改変ＰＢＭＣの少なくとも約２０％は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記改変ＰＢＭＣの少なくとも約２％は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、単球である、
実施形態１～１５８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0502】

１６０．（ａ）前記インプットＰＢＭＣの約７０％以下は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記インプットＰＢＭＣの約１４％以下は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記インプットＰＢＭＣの約３５％以下は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記インプットＰＢＭＣの約２５％以下は、単球である、
実施形態１～１５９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0503】

１６１．（ａ）前記改変ＰＢＭＣの約８０％以下は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記改変ＰＢＭＣの約１６％以下は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記改変ＰＢＭＣの約４０％以下は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記改変ＰＢＭＣの約３０％以下は、単球である、
実施形態１～１６０のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0504】

１６２．（ａ）前記改変ＰＢＭＣの約２５％～約７０％は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記改変ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記改変ＰＢＭＣの約３．５％～約３５％は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記改変ＰＢＭＣの約４％～約２５％は、単球である、
実施形態１～１６１のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0505】

１６３．（ａ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージは、数で約１０％以下異なり；
（ｂ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージは、数で約１０％以下異なり；
（ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージは、数で約１０％以下異なり；ならびに／または
（ｄ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージは、数で約１０％以下異なる、
実施形態１～１６２のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0506】

１６４．１つまたは複数の共刺激分子は、複数の非改変ＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣの前記Ｂ細胞において上方制御され、前記共刺激分子は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６である、実施形態３～９および１２～１６３のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0507】

１６５．前記ＣＤ８０および／またはＣＤ８６が、複数の調整されていないＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍よりも高く、または１０倍よりも高く、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣの前記Ｂ細胞において上方制御される、実施形態１６４に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0508】

１６６．前記共刺激分子が、ＣＤ８６である、実施形態１６４または１６５に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0509】

１６７．前記改変ＰＢＭＣが、複数の調整されていないＰＢＭＣと比較して、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の増加した発現を有する、実施形態３～９および１２～１６６のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0510】

１６８．ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の前記発現が、前記複数の調整されていないＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍よりも高く、または１０倍よりも高く、増加している、実施形態１６７に記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0511】

１６９．実施形態１～１６８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物。

【0512】

１７０．医薬としての使用のための、実施形態１～１６９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物。

【0513】

１７１．手術、治療、または診断による、ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための、実施形態１～１６９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物。

【0514】

１７２．がん、感染性疾患、またはウイルス関連疾患の処置における使用のための、実施形態１～１６９のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物。

【0515】

１７３．前記がんが、頭頸部がん、子宮頸がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、肛門がん、肛門周囲がん、肛門性器がん、口腔がん、または唾液腺がんである、実施形態１７２に記載の組成物。

【0516】

１７４．前記改変ＰＢＭＣが、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態１７１～１７３のいずれか一つに記載の組成物。

【0517】

１７５．前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのいずれか１つを標的にする、実施形態１７４に記載の組成物。

【0518】

１７６．前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１を標的にする、実施形態１７５に記載の組成物。

【0519】

１７７．前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１を標的にする、実施形態１７５に記載の組成物。

【0520】

１７８．前記改変ＰＢＭＣが、治療剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態１７１～１７７のいずれか一つに記載の組成物。

【0521】

１７９．前記治療剤が、化学療法剤である、実施形態１７８に記載の組成物。

【0522】

１８０．前記感染性疾患が、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＥＢＶ、ＭＣＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶと関連する、実施形態１７２に記載の組成物。

【0523】

１８１．実施形態１～１６８のいずれか一つに記載の改変ＰＢＭＣ、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。

【0524】

１８２．がんまたは感染性疾患の処置のためのものである、実施形態１７１～１８１のいずれか一つに記載の組成物。

【0525】

１８３．医薬としての使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、組成物。

【0526】

１８４．医薬としての使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、前記抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、組成物。

【0527】

１８５．手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、組成物。

【0528】

１８６．手術、治療、または診断によるヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、組成物。

【0529】

１８７．医薬としての使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｃ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、組成物。

【0530】

１８８．医薬としての使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、組成物。

【0531】

１８９．ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｃ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、組成物。

【0532】

１９０．ヒトまたは動物身体の処置の方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、組成物。

【0533】

１９１．個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患を処置する方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、組成物。

【0534】

１９２．個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患を処置する方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、前記抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、組成物。

【0535】

１９３．個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患の処置における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、組成物。

【0536】

１９４．個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患の処置における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、前記抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、組成物。

【0537】

１９５．個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置する方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、組成物。

【0538】

１９６．個体におけるＨＰＶ関連疾患を処置する方法における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、前記抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、組成物。

【0539】

１９７．個体におけるＨＰＶ関連疾患の処置における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、組成物。

【0540】

１９８．個体におけるＨＰＶ関連疾患の処置における使用のための抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、前記抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップ
を含むプロセスによって調製され、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、組成物。

【0541】

１９９．個体におけるがん、感染性疾患またはウイルス関連疾患を処置するための医薬の製造における抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の使用であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、使用。

【0542】

２００．ＨＰＶ関連疾患を処置するための医薬の製造における抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを含む組成物の使用であって、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣは、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、使用。

【0543】

２０１．ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約４μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0544】

２０２．ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約４μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0545】

２０３．ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約４μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0546】

２０４．ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約４μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0547】

２０５．前記狭窄の直径が、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ；または（ｂ）約４．５μｍである、実施形態２０１～２０４のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0548】

２０６．前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣが、（ａ）約２時間～約１０時間；（ｂ）約３時間～約６時間；または（ｃ）約４時間、ＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートされる、実施形態２０１～２０５のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0549】

２０７．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0550】

２０８．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0551】

２０９．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0552】

２１０．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、以下のステップ：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される、抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0553】

２１１．前記狭窄の直径が、約４μｍ～約１０μｍである、実施形態２０７～２１０のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0554】

２１２．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約６μｍである、実施形態２０７～２１１のいずれか一つに記載の調整された調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0555】

２１３．前記狭窄の直径が、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ；または（ｂ）約４．５μｍである、実施形態２０７～２１２のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0556】

２１４．前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣが、（ａ）約２時間～約１０時間；（ｂ）約３時間～約６時間；または（ｃ）約４時間、ＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートされる、実施形態２０７～２１３のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0557】

２１５．個体における免疫応答を刺激するための方法であって、実施形態１～１６８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ、実施形態１６９～１８０に記載の組成物、または実施形態１８１に記載の医薬組成物を前記個体に投与するステップを含む、方法。

【0558】

２１６．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ；および
ｂ）アジュバントを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0559】

２１７．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）前記ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0560】

２１８．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）前記ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記複数のＰＢＭＣに抗原を導入するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0561】

２１９．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0562】

２２０．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、前記抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップであって、前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0563】

２２１．前記アジュバントとのインキュベーションの前に、前記細胞懸濁液から、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む、実施形態２２０に記載の方法。

【0564】

２２２．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原およびアジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原および前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0565】

２２３．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原をコードする核酸およびアジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸および前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸および前記アジュバントとともにインキュベートするステップ
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0566】

２２４．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、および／または前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、実施形態２２３に記載の方法。

【0567】

２２５．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、および／または前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、実施形態２２２～２２４のいずれか一つに記載の方法。

【0568】

２２６．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約１μＭである、および／または前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約１μＭである、実施形態２２２～２２５のいずれか一つに記載の方法。

【0569】

２２７．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原対前記アジュバントの比が、約１００００：１～約１：１００００である、実施形態２２２～２２６のいずれか一つに記載の方法。

【0570】

２２８．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原対前記アジュバントの比が、約２００：１である、実施形態２２２～２２７のいずれか一つに記載の方法。

【0571】

２２９．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｃ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0572】

２３０．前記インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、実施形態２２９に記載の方法。

【0573】

２３１．前記インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、実施形態２２９または２３０に記載の方法。

【0574】

２３２．前記インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約１μＭである、実施形態２２９～２３１のいずれか一つに記載の方法。

【0575】

２３３．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0576】

２３４．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）抗原を含むインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0577】

２３５．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、実施形態２３４に記載の方法。

【0578】

２３６．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、実施形態２３４または２３５に記載の方法。

【0579】

２３７．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記アジュバントの濃度が、約１μＭである、実施形態２３４～２３６のいずれか一つに記載の方法。

【0580】

２３８．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭｓの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ；および
ｄ）アジュバントを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0581】

２３９．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）抗原を含むインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ；および
ｄ）アジュバントを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0582】

２４０．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、実施形態２１９～２３３、２３８および２３９のいずれか一つに記載の方法。

【0583】

２４１．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、実施形態２１９～２３３および２３８～２４０のいずれか一つに記載の方法。

【0584】

２４２．前記摂動インプットＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記抗原の濃度が、約１μＭである、実施形態２１９～２３３および２３８～２４１のいずれか一つに記載の方法。

【0585】

２４３．前記プロセスが、
前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原および／またはアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを第２のアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および／またはアジュバントを含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
をさらに含む、実施形態２２２～２２８および２３３～２４２のいずれか一つに記載の方法。

【0586】

２４４ 前記改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記第２のアジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１ｍＭである、実施形態２４３に記載の方法。

【0587】

２４５．前記改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記第２のアジュバントの濃度が、約０．１μＭ～約１０μＭである、実施形態２４３または２４４に記載の方法。

【0588】

２４６．前記改変ＰＢＭＣとともにインキュベートされる前記第２のアジュバントの濃度が、約１μＭである、実施形態２４３～２４５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0589】

２４７．個体における免疫応答を刺激する方法であって、前記個体に抗原と会合した複数のＰＢＭＣを投与するステップを含み、前記複数の改変ＰＢＭＣは、
ａ）前記抗原が前記インプットＰＢＭＣの細胞表面と会合するのを可能にするのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣを抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原と会合した前記複数のＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製され、
ｂ）前記複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0590】

２４８．アジュバントを前記個体に投与するステップをさらに含む、実施形態２１５～２４７のいずれか一つに記載の方法。

【0591】

２４９．前記アジュバントが、前記複数の改変ＰＢＭＣの投与の前、それと並行して、または後に前記個体に投与される、実施形態２４８に記載の方法。

【0592】

２５０．実施形態２１５～２４５および２４７～２４９のいずれか一つによる個体における免疫応答を刺激する方法における使用のための抗原を含む複数のＰＢＭＣ。

【0593】

２５１．抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出する方法であって、前記ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む複数のＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数のＰＢＭＣを作出するステップを含む、方法。

【0594】

２５２．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0595】

２５３．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートし、それによって、前記抗原をコードする前記核酸を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートするステップを含み、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、方法。

【0596】

２５４．前記アジュバントとのインキュベーションの前に、前記細胞懸濁液から、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む、実施形態２５２に記載の方法。

【0597】

２５５．前記アジュバントとのインキュベーションの前に、前記細胞懸濁液から、前記抗原をコードする前記核酸を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを単離するステップをさらに含む、実施形態２５３に記載の方法。

【0598】

２５６．抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0599】

２５７．抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートするステップを含み、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出する、方法。

【0600】

２５８．抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原および前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原および前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0601】

２５９．抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸および前記アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸および前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸および前記アジュバントとともにインキュベートするステップを含み、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原およびアジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出する、方法。

【0602】

２６０．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｃ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0603】

２６１．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）前記インプットＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、複数のインプットＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、調整された複数のインプットＰＢＭＣを作出するステップ；
ｂ）前記調整された複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｃ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記調整された複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートするステップを含み、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する、方法。

【0604】

２６２．抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0605】

２６３．抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）アジュバントを含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、抗原をコードする核酸が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；および
ｂ）前記抗原をコードする前記核酸が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原をコードする前記核酸とともにインキュベートするステップを含み、
前記核酸は前記ＰＢＭＣにおいて発現されて前記抗原を産生し、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出する、方法。

【0606】

２６４．抗原およびアジュバントを含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）抗原を含む複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、アジュバントが通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；およびｂ）前記アジュバントが前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原および前記アジュバントを含む前記複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0607】

２６５．前記プロセスが、前記インプットＰＢＭＣおよび／または前記改変ＰＢＭＣを、さらなるインキュベーションステップなしで調製された対応する改変ＰＢＭＣと比較して前記改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質とともにインキュベートするステップをさらに含む、実施形態２１９～２４５、２４７～２４８および２５１～２６４に記載の方法。

【0608】

２６６．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約９９％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２６５のいずれか一つに記載の方法。

【0609】

２６７．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約１０％～約７０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２６５のいずれか一つに記載の方法。

【0610】

２６８．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約２０％～約６０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２６７のいずれか一つに記載の方法。

【0611】

２６９．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣの平均直径の約３０％～約４５％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２６８のいずれか一つに記載の方法。

【0612】

２７０．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約９９％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２６９のいずれか一つに記載の方法。

【0613】

２７１．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約７０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２７０のいずれか一つに記載の方法。

【0614】

２７２．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約２０％～約６０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２７１のいずれか一つに記載の方法。

【0615】

２７３．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約３０％～約４５％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２７２のいずれか一つに記載の方法。

【0616】

２７４．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５０％～約９９％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２７０のいずれか一つに記載の方法。

【0617】

２７５．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５０％～約９０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、２５１～２７０および２７４のいずれか一つに記載の方法。

【0618】

２７６．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５０％～約８０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、２５１～２７０および２７４～２７５のいずれか一つに記載の方法。

【0619】

２７７．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約５０％～約７０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、２５１～２７０および２７４～２７６のいずれか一つに記載の方法。

【0620】

２７８．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約６０％～約９０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、および２５１～２７０のいずれか一つに記載の方法。１

【0621】

２７９．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約６０％～約８０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、２５１～２７０および２７８のいずれか一つに記載の方法。

【0622】

２８０．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約６０％～約７０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、２５１～２７０および２７８～２７９のいずれか一つに記載の方法。

【0623】

２８１．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約９９％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、および２５１～２８０のいずれか一つに記載の方法。

【0624】

２８２．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約１０％～約７０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、および２５１～２８１のいずれか一つに記載の方法。

【0625】

２８３．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約２０％～約６０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、および２５１～２８２のいずれか一つに記載の方法。

【0626】

２８４．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約２０％～約３０％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、および２５１～２８３のいずれか一つに記載の方法。

【0627】

２８５．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約２０％～約２５％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、および２５１～２８４のいずれか一つに記載の方法。

【0628】

２８６．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約３０％～約４５％である、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９、および２５１～２８３のいずれか一つに記載の方法。

【0629】

２８７．前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の前記亜集団が、Ｔ細胞である、実施形態２７０～２８６のいずれか一つに記載の方法。

【0630】

２８８．前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の前記亜集団が、単球である、実施形態２８１～２８６のいずれか一つに記載の方法。

【0631】

２８９．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約１０μｍである、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２７５のいずれか一つに記載の方法。

【0632】

２９０．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約６μｍである、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２８９のいずれか一つに記載の方法。

【0633】

２９１．前記狭窄の直径が、約４μｍ～約１０μｍである、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２８９のいずれか一つに記載の方法。

【0634】

２９２．前記狭窄の直径が、約４．２μｍ～約６μｍである、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２９１のいずれか一つに記載の方法。

【0635】

２９３．前記狭窄の直径が、約４．５μｍである、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２９２のいずれか一つに記載の方法。

【0636】

２９４．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約３０ｐｓｉ～約９０ｐｓｉの範囲の圧力下で前記狭窄を通過させた、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２９３のいずれか一つに記載の方法。

【0637】

２９５．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約２０７ｋＰａ～約８３０ｋＰａまたは約４１５ｋＰａ～約６２１ｋＰａの範囲の圧力下で前記狭窄を通過させた、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２９３のいずれか一つに記載の方法。

【0638】

２９６．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約０．００１ｍＬ／ｃｍ^２／秒～約２００Ｌ／ｃｍ^２／秒の流速で前記狭窄を通過させた、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２９５のいずれか一つに記載の方法。

【0639】

２９７．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約０．１ｍＬ／ｃｍ^２／秒～約１５０Ｌ／ｃｍ^２／秒の流速で前記狭窄を通過させた、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２９５のいずれか一つに記載の方法。

【0640】

２９８．前記複数のインプットＰＢＭＣを、流速または約１００Ｌ／ｃｍ^２／秒で前記狭窄を通過させた、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２９７のいずれか一つに記載の方法。

【0641】

２９９．前記複数のインプットＰＢＭＣを、約０℃～約３７℃の範囲の温度で前記狭窄を通過させた、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２９８のいずれか一つに記載の方法。

【0642】

３００．前記狭窄を通過した後、前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣが約３７℃に基準化するのを可能にするのに十分な時間、約３７℃の温度でインキュベートされる、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～２９９のいずれか一つに記載の方法。

【0643】

３０１．前記狭窄を通過した後、前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣが約２５℃に基準化するのを可能にするのに十分な時間、約２５℃の温度でインキュベートされる、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～３００のいずれか一つに記載の方法。

【0644】

３０２．前記狭窄の断面形状が、円形、楕円形、丸形、正方形、長方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、および八角形からなる群から選択される、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～３０１のいずれか一つに記載の方法。

【0645】

３０３．前記狭窄の断面形状が、スリットである、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～３０２のいずれか一つに記載の方法。

【0646】

３０４．スリットが、約３μｍ～６μｍの幅、および／または約２０μｍ～１２０μｍの深さを含む、実施形態３０３に記載の方法。

【0647】

３０５．前記スリットが、約４．２μｍ～６μｍの幅、および／または約２０～１２０μｍの深さを含む、実施形態３０３に記載の方法。

【0648】

３０６．前記スリットが、４．５μｍの幅、および／または８０μｍの深さを含む、実施形態３０３～３０５に記載の方法。

【0649】

３０７．前記複数のインプットＰＢＭＣを含む前記細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、前記複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～３０６のいずれか一つに記載の方法。

【0650】

３０８．前記狭窄が、入口部分および出口部分を含み、
（ａ）前記入口部分は、入口の角度を規定し、前記入口の角度は、約０度～約９０度もしくは約２２～２２度であり；および／または
（ｂ）前記出口部分は、出口の角度を規定し、前記出口の角度は、約０度～約９０度もしくは約２０～２２度であり；
好ましくは、（ａ）および（ｂ）について約２０～２２度である、
実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～３０７のいずれか一つに記載の方法。

【0651】

３０９．前記複数のインプットＰＢＭＣを含む前記細胞懸濁液は、複数の狭窄を通過させられ、前記複数の狭窄は、直列および／または並列で配置されている、実施形態２１９～２４５、２４７～２４９および２５１～３０８のいずれか一つに記載の方法。

【0652】

３１０．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約１～約２４時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、実施形態２１９～２２１、２２９～２３２、２４３～２４５、２４７～２４９、２５１および２６５～３０９のいずれか一つに記載の方法。

【0653】

３１１．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約２～約１０時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、実施形態２１９～２２１、２２９～２３２、２４３～２４５、２５１および２６５～３１０のいずれか一つに記載の方法。

【0654】

３１２．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約３～約６時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、実施形態２１９～２２１、２２９～２３２、２４３～２４５、２５１および２６５～３１１のいずれか一つに記載の方法。

【0655】

３１３．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約４時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、実施形態２１９～２２１、２２９～２３２、２４３～２４５、２５１および２６５～３１２のいずれか一つに記載の方法。

【0656】

３１４．前記抗原、および／またはアジュバントが、前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞のサイトゾルおよび／または小胞に存在する、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３１３のいずれか一つに記載の方法。

【0657】

３１５．前記小胞が、エンドソームである、実施形態３１４に記載の方法。

【0658】

３１６．前記抗原および／またはアジュバントが、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の複数の区画に存在する、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３１５のいずれか一つに記載の方法。

【0659】

３１７．前記抗原が、前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞のサイトゾルに存在し、前記アジュバントが、前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の小胞に存在する、実施形態２２２～２２８、２３３～２３７、２４７～２４９および２５１～３１６のいずれか一つに記載の方法。

【0660】

３１８．前記抗原が、複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の表面に結合している、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３１７のいずれか一つに記載の方法。

【0661】

３１９．前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３１８のいずれか一つに記載の方法。

【0662】

３２０．前記アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮである、実施形態３１９に記載の方法。

【0663】

３２１．前記ＣｐＧ ＯＤＮが、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである、実施形態３２０に記載の方法。

【0664】

３２２．前記抗原が、疾患関連抗原である、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３１５のいずれか一つに記載の方法。

【0665】

３２３．前記抗原が、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡから誘導されている、実施形態３２２に記載の方法。

【0666】

３２４．前記抗原が、非自己抗原である、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３２３のいずれか一つに記載の方法。

【0667】

３２５．前記抗原が、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原である、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３２４のいずれか一つに記載の方法。

【0668】

３２６．前記抗原が、腫瘍溶解物から誘導されている、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３２５のいずれか一つに記載の方法。

【0669】

３２７．前記抗原が、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である、実施形態３２５に記載の方法。

【0670】

３２８．前記ＨＰＶが、ＨＰＶ－１６またはＨＰＶ－１８である、実施形態３２７に記載の方法。

【0671】

３２９．前記抗原が、ＨＰＶ Ｅ６および／またはＥ７から誘導されるＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドを含む、実施形態３２７または３２８に記載の方法。

【0672】

３３０．前記ＨＬＡ－Ａ２拘束性ペプチドが、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態３２９に記載の方法。

【0673】

３３１．前記抗原が、配列番号１８～２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態３３０に記載の方法。

【0674】

３３２．前記改変ＰＢＭＣが、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３１５のいずれか一つに記載の方法。

【0675】

３３３．前記複数の免疫原性エピトープを含む前記複数の抗原を含む前記改変ＰＢＭＣの個体への投与後、前記複数の免疫原性エピトープは、他の免疫原性エピトープのいずれかに対する前記個体における免疫応答を減少させる、実施形態３３２に記載の方法。

【0676】

３３４．前記抗原が、免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３３３のいずれか一つに記載の方法。

【0677】

３３５．前記免疫原性ペプチドエピトープが、Ｎ末端隣接ポリペプチドおよび／またはＣ末端隣接ポリペプチドに融合されている、実施形態３３４に記載の方法。

【0678】

３３６．前記抗原が、免疫原性ペプチドエピトープおよび１つまたは複数の異種ペプチド配列を含むポリペプチドである、実施形態３３４または３３５に記載の方法。

【0679】

３３７．前記抗原が、異種ペプチド配列がそのＮ末端および／またはそのＣ末端で隣接している免疫原性ペプチドエピトープを含むポリペプチドである、実施形態３３４に記載の方法。

【0680】

３３８．隣接異種ペプチド配列が、疾患関連免疫原性ペプチドから誘導されている、実施形態３３４～３３７のいずれか一つに記載の方法。

【0681】

３３９．前記Ｎ末端隣接ポリペプチドが、配列番号５～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、および／または前記Ｃ末端隣接ポリペプチドが、配列番号１１～１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態３３４～３３７のいずれか一つに記載の方法。

【0682】

３４０．前記抗原が、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングされ得る、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３２３のいずれか一つに記載の方法。

【0683】

３４１．前記改変ＰＢＭＣが、約０．１μＭ～約１ｍＭの濃度で前記アジュバントを含む、実施形態２１７、２２２～２２７、２３３、２３７、２３９～２４５、２４７～２４９および２５１～３４０のいずれか一つに記載の方法。

【0684】

３４２．前記改変ＰＢＭＣが、約０．１μＭ～約１ｍＭの濃度で前記抗原を含む、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３２５のいずれか一つに記載の方法。

【0685】

３４３．前記抗原対前記アジュバントの比が、約１００００：１～約１：１００００である、実施形態２１７、２２２～２２７、２３３、２３７、２３９～２４５、２４７～２４９および２５１～３４２のいずれか一つに記載の方法。

【0686】

３４４．前記抗原対前記アジュバントの比が、約２００：１である、実施形態３１７に記載の方法。

【0687】

３４５．前記改変ＰＢＭＣが、ａ）前記抗原、ｂ）前記抗原および少なくとも１つの他の抗原、ｃ）前記抗原および前記アジュバント、ｄ）前記抗原をコードする前記核酸、ｅ）前記抗原をコードする核酸、および１つの他の抗原をコードする少なくとも１つの他の核酸、ならびに／またはｆ）前記抗原をコードする前記核酸および前記アジュバントを含む複合体を含む、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３４４のいずれか一つに記載の方法。

【0688】

３４６．前記調整された複数の改変ＰＢＭＣが、作用物質をさらに含み、この作用物質が、前記作用物質を含まない対応する改変ＰＢＭＣと比較して前記改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３４５のいずれか一つに記載の方法。

【0689】

３４７．前記調整された複数の改変ＰＢＭＣが、作用物質をさらに含み、この作用物質が、前記作用物質を含まない対応する改変ＰＢＭＣと比較して凍結－解凍サイクルの際の前記改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３４６のいずれか一つに記載の方法。

【0690】

３４８．前記調整された複数の改変ＰＢＭＣの少なくとも約７０％、約８０％、または約９０％が、最大で１、２、３、４、５回の凍結－解凍サイクルの後、生存している、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３４７のいずれか一つに記載の方法。

【0691】

３４９．前記作用物質が、エンドサイトーシスを増強する化合物、安定剤、または補因子である、実施形態３４８に記載の方法。

【0692】

３５０．前記作用物質が、アルブミンである、実施形態３４９に記載の方法。

【0693】

３５１．前記アルブミンが、マウス、ウシ、またはヒトアルブミンである、実施形態３５０に記載の方法。

【0694】

３５２．前記作用物質が、二価金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ－スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、またはＥＤＴＡのうちの１つまたは複数である、３５１に記載の方法。

【0695】

３５３．前記作用物質が、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）のうちの１つまたは複数である、実施形態３５１または３５２に記載の方法。

【0696】

３５４．前記作用物質が、マウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を含む、実施形態３５３に記載の方法。

【0697】

３５５．前記作用物質が、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む、実施形態３５４に記載の方法。

【0698】

３５６．前記細胞が、共刺激分子のうちの１つまたは複数の発現を増加させるようにさらに改変されている、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３５５のいずれか一つに記載の方法。

【0699】

３５７．前記共刺激分子が、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳＬ）、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、またはｓｃＦｖ抗ＣＤ２８である、実施形態３５６に記載の方法。

【0700】

３５８．前記共刺激分子が、シグナル２のエフェクターである、実施形態３５６に記載の方法。

【0701】

３５９．前記細胞が、前記１つまたは複数の共刺激分子の増加した発現をもたらす核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含む、実施形態３５６～３５８のいずれか一つに記載の方法。

【0702】

３６０．前記核酸が、前記共刺激分子をコードするｍＲＮＡである、実施形態３５９に記載の方法。

【0703】

３６１．前記細胞が、サイトカインの発現を増加させるようにさらに改変されている、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３６０のいずれか一つに記載の方法。

【0704】

３６２．前記サイトカインが、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α、またはＩＬ－２１である、実施形態３６１に記載の方法。

【0705】

３６３．前記共刺激分子が、シグナル３のエフェクターである、実施形態３５６に記載の方法。

【0706】

３６４．前記細胞が、前記１つまたは複数のサイトカインの増加した発現をもたらす核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含む、実施形態３６１～３６３のいずれか一つに記載の方法。

【0707】

３６５．前記核酸が、前記サイトカインをコードするｍＲＮＡである、実施形態３６４に記載の方法。

【0708】

３６６．前記改変ＰＢＭＣが、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３６５のいずれか一つに記載の方法。

【0709】

３６７．前記改変ＰＢＭＣが、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３６６のいずれか一つに記載の方法。

【0710】

３６８．前記改変ＰＢＭＣの同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答は、さらなる改変を含まない対応する改変ＰＢＭＣの同種異系の状況における投与に応答した個体において開始された自然免疫応答と比較して低下している、実施形態３６６に記載の方法。

【0711】

３６９．前記改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期は、さらなる改変を含まない対応する改変ＰＢＭＣの、それらが投与された個体における循環半減期と比較して増加している、実施形態３６６または３６７に記載の方法。

【0712】

３７０．前記複数のインプットＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３６９のいずれか一つに記載の方法。

【0713】

３７１．前記複数のインプットＰＢＭＣが、ＣＤ３＋ Ｔ細胞、ＣＤ２０＋ Ｂ細胞、ＣＤ１４＋単球、またはＣＤ５６＋ ＮＫ細胞のうちの１つまたは複数を含む、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７０のいずれか一つに記載の方法。

【0714】

３７２．前記複数のインプットＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比と本質的に同じである、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７１のいずれか一つに記載の方法。

【0715】

３７３．前記複数のインプットＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血からの白血球除去生成物中のＰＢＭＣの総数に対する比と本質的に同じである、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７１のいずれか一つに記載の方法。

【0716】

３７４．前記複数のインプットＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、前記複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１０％以下異なる、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７３のいずれか一つに記載の方法。

【0717】

３７５．前記複数のインプットＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球を含み、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および単球の、前記複数のインプットＰＢＭＣ中のＰＢＭＣの総数に対する比は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球の、全血中のＰＢＭＣの総数に対する比から、１０％以下異なる、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７４のいずれか一つに記載の方法。

【0718】

３７６．（ａ）前記インプットＰＢＭＣの少なくとも約２５％は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記インプットＰＢＭＣの少なくとも約２．５％は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記インプットＰＢＭＣの少なくとも約３．５％は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記インプットＰＢＭＣの少なくとも約４％は、単球である、
実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７５のいずれか一つに記載の方法。

【0719】

３７７．（ａ）前記改変ＰＢＭＣの少なくとも約２０％は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記改変ＰＢＭＣの少なくとも約２％は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記改変ＰＢＭＣの少なくとも約３％は、単球である、
実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７６のいずれか一つに記載の方法。

【0720】

３７８．（ａ）前記インプットＰＢＭＣの約７０％以下は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記インプットＰＢＭＣの約１４％以下は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記インプットＰＢＭＣの約３５％以下は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記インプットＰＢＭＣの約２５％以下は、単球である、
実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７７のいずれか一つに記載の方法。

【0721】

３７９．（ａ）前記改変ＰＢＭＣの約８０％以下は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記改変ＰＢＭＣの約１６％以下は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記改変ＰＢＭＣの約４０％以下は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記改変ＰＢＭＣの約３０％以下は、単球である、
実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７８のいずれか一つに記載の方法。

【0722】

３８０．（ａ）前記改変ＰＢＭＣの約２５％～約７０％は、Ｔ細胞であり；
（ｂ）前記改変ＰＢＭＣの約２．５％～約１４％は、Ｂ細胞であり；
（ｃ）前記改変ＰＢＭＣの約３．５％～約３５％は、ＮＫ細胞であり；または
（ｄ）前記改変ＰＢＭＣの約４％～約２５％は、単球である、
実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７９のいずれか一つに記載の方法。

【0723】

３８１．（ａ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージは、数で１０％以下異なり；
（ｂ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージは、数で１０％以下異なり；
（ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージは、数で１０％以下異なり；ならびに／または
（ｄ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージは、数で１０％以下異なる、
実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３８０のいずれか一つに記載の方法。

【0724】

３８２．１つまたは複数の共刺激分子は、複数のインプットＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣの前記Ｂ細胞において上方制御され、前記共刺激分子は、ＣＤ８０またはＣＤ８６である、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３７８のいずれか一つに記載の方法。

【0725】

３８３．前記ＣＤ８０および／またはＣＤ８６が、複数の調整されていないＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍よりも高く、または１０倍よりも高く、前記調整された複数の改変ＰＢＭＣの前記Ｂ細胞において上方制御される、実施形態３８２に記載の方法。

【0726】

３８４．前記共刺激分子が、ＣＤ８６である、実施形態３８２または３８３に記載の方法。

【0727】

３８５．前記調整された改変ＰＢＭＣが、複数の調整されていないＰＢＭＣと比較して、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の増加した発現を有する、実施形態３８２～３８４のいずれか一つに記載の方法。

【0728】

３８６．ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の前記発現が、前記複数の調整されていないＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍、または１０倍よりも高く、増加している、実施形態３８５に記載の方法。

【0729】

３８７．前記改変ＰＢＭＣが、前記個体に対して同種異系である、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３８５のいずれか一つに記載の方法。

【0730】

３８８．前記改変ＰＢＭＣが、前記個体に対して自家である、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３８５のいずれか一つに記載の方法。

【0731】

３８９．前記個体が、炎症および／または免疫応答をモジュレートするよう事前調整されている、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３８８のいずれか一つに記載の方法。

【0732】

３９０．第３のアジュバントを前記個体に投与するステップをさらに含む、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３８９のいずれか一つに記載の方法。

【0733】

３９１．前記第３のアジュバントが、ＩＦＮ－αまたはＣｐＧ ＯＤＮである、実施形態３９０に記載の方法。

【0734】

３９２．前記第３のアジュバントが、ＣｐＧ７９０９である、実施形態３９０に記載の方法。

【0735】

３９３．前記複数の改変ＰＢＭＣおよび前記第３のアジュバントが、並行して、または同時に投与される、実施形態３９０～３９２のいずれか一つに記載の方法。

【0736】

３９４．前記複数の改変ＰＢＭＣおよび前記第３のアジュバントが、逐次的に投与される、実施形態３９０～３９２のいずれか一つに記載の方法。

【0737】

３９５．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記第３のアジュバントを投与する前に投与される、実施形態３９０～３９４のいずれか一つに記載の方法。

【0738】

３９６．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記第３のアジュバントの投与後に投与される、実施形態３９０～３９５のいずれか一つに記載の方法。

【0739】

３９７．前記改変ＰＢＭＣが、サイトカインの投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３９６に記載の方法。

【0740】

３９８．前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、またはＩＬ－１５のうちの１つまたは複数である、実施形態３９７に記載の方法。

【0741】

３９９．前記改変ＰＢＭＣが、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～３９８に記載の方法。

【0742】

４００．前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、およびＴＩＭ－３のいずれか１つを標的にする、実施形態３９９に記載の方法。

【0743】

４０１．前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１を標的にする、実施形態４００に記載の方法。

【0744】

４０２．前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１を標的にする、実施形態４００に記載の方法。

【0745】

４０３．前記改変ＰＢＭＣが、治療剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～４０２に記載の方法。

【0746】

４０４．前記治療剤が、化学療法剤である、実施形態４０３に記載の方法。

【0747】

４０５．前記個体への前記改変ＰＢＭＣの投与は、前記抗原に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～４０４のいずれか一つに記載の方法。

【0748】

４０６．前記個体への前記改変ＰＢＭＣの投与は、前記抗原に特異的なヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または増殖をもたらす、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～４０５のいずれか一つに記載の方法。

【0749】

４０７．前記個体に投与される前記改変ＰＢＭＣの量は、約１×１０^４～約１×１０^１２個細胞である、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～４０６のいずれか一つに記載の方法。

【0750】

４０８．前記個体に投与される前記改変ＰＢＭＣの量は、約１×１０^５～約１×１０^１２個細胞である、実施形態４０７に記載の方法。

【0751】

４０９．前記個体に投与される前記改変ＰＢＭＣの量は、約５×１０^５～約２．５×１０^６個細胞／ｋｇ体重である、実施形態４０７または４０８に記載の方法。

【0752】

４１０．前記改変ＰＢＭＣの複数回投与を含む、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～４０９のいずれか一つに記載の方法。

【0753】

４１１．約３～約９回の投与を含む、実施形態４１０に記載の方法。

【0754】

４１２．前記複数の改変ＰＢＭＣの２回の連続投与の間の時間間隔は約１日～約３０日である、実施形態４１０または４１１に記載の方法。

【0755】

４１３．前記複数の改変ＰＢＭＣの２回の連続投与の間の時間間隔は約２１日である、実施形態４１０～４１２のいずれか一つに記載の方法。

【0756】

４１４．前記個体が、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～４１３のいずれか一つに記載の方法。

【0757】

４１５．前記複数の改変ＰＢＭＣ中の少なくとも１つの細胞は、ＨＬＡ－Ａ２の発現について陽性である、実施形態２１５～２４５、２４７～２４９および２５１～４１４のいずれか一つに記載の方法。

【0758】

４１６．ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0759】

４１７．ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0760】

４１８．ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0761】

４１９．ＨＰＶ抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0762】

４２０．前記狭窄の直径が、約４μｍ～約１０μｍである、実施形態４１６～４１９のいずれか一つに記載の方法。

【0763】

４２１．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約６μｍである、実施形態４１６～４２０のいずれか一つに記載の方法。

【0764】

４２２．前記狭窄の直径が、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ；または（ｂ）約４．５μｍである、実施形態４１６～４２１のいずれか一つに記載の方法。

【0765】

４２３．前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣが、（ａ）約２時間～約１０時間；（ｂ）約３時間～約６時間；または（ｃ）約４時間、ＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートされる、実施形態４１６～４２２のいずれか一つに記載の方法。

【0766】

４２４．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0767】

４２５．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0768】

４２６．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0769】

４２７．抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0770】

４２８．前記狭窄の直径が、約４μｍ～約１０μｍである、実施形態４２４～４２７のいずれか一つに記載の方法。

【0771】

４２９．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約６μｍである、実施形態４２４～４２８のいずれか一つに記載の方法。

【0772】

４３０．前記狭窄の直径が、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ；または（ｂ）約４．５μｍである、実施形態４２４～４２９のいずれか一つに記載の方法。

【0773】

４３１．前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣが、（ａ）約２時間～約１０時間；（ｂ）約３時間～約６時間；または（ｃ）約４時間、ＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートされる、実施形態４２４～４３０のいずれか一つに記載の方法。

【0774】

４３２．個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0775】

４３３．個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0776】

４３４．個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0777】

４３５．個体におけるＨＰＶ抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、前記ＨＰＶ抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記ＨＰＶ抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記ＨＰＶ抗原とともにインキュベートし、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記ＨＰＶ抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0778】

４３６．前記狭窄の直径が、約４μｍ～約１０μｍである、実施形態４３２～４３５のいずれか一つに記載の方法。

【0779】

４３７．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約６μｍである、実施形態４３２～４３６のいずれか一つに記載の方法。

【0780】

４３８．前記狭窄の直径が、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ；または（ｂ）約４．５μｍである、実施形態４３２～４３７のいずれか一つに記載の方法。

【0781】

４３９．前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣが、（ａ）約２時間～約１０時間；（ｂ）約３時間～約６時間；または（ｃ）約４時間、ＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートされる、実施形態４３２～４３８のいずれか一つに記載の方法。

【0782】

４４０．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0783】

４４１．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0784】

４４２．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0785】

４４３．個体における免疫応答を刺激する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、約３μｍ～約１０μｍであり、それによって、抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するために約１時間～約２４時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートするステップであって、前記ＣｐＧ ＯＤＮはＣｐＧ７９０９であり、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｄ）前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを前記個体に投与するステップ
を含む、方法。

【0786】

４４４．前記狭窄の直径が、約４μｍ～約１０μｍである、実施形態４４０～４４３のいずれか一つに記載の方法。

【0787】

４４５．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約６μｍである、実施形態４４０～４４４のいずれか一つに記載の方法。

【0788】

４４６．前記狭窄の直径が、（ａ）約４．２μｍ～約６μｍ；または（ｂ）約４．５μｍである、実施形態４４０～４４５のいずれか一つに記載の方法。

【0789】

４４７．前記ＨＰＶ抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣが、（ａ）約２時間～約１０時間；（ｂ）約３時間～約６時間；または（ｃ）約４時間、ＣｐＧ ＯＤＮとともにインキュベートされる、実施形態４４０～４４６のいずれか一つに記載の方法。

【0790】

４４８．前記個体に第２のアジュバントを投与するステップをさらに含む、実施形態４３２～４４７のいずれか一つに記載の方法。

【0791】

４４９．前記第２のアジュバントが、ＩＦＮ－αまたはＣｐＧ ＯＤＮである、実施形態４４８に記載の方法。

【0792】

４５０．前記第２のアジュバントが、ＣｐＧ７９０９である、実施形態４４９に記載の方法。

【0793】

４５１．前記調整された複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣの生存率および／または機能を増強する作用物質をさらに含み、必要に応じて前記作用物質は、ピルビン酸ナトリウム、アデニン、Ｒｅｊｕｖｅｓｏｌ（登録商標）、トレハロース、デキストロース、マンノース、スクロース、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（登録商標）、ＤＭＳＯ、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１５、ＨＥＰＥＳ、グリセロール、グルタチオン、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）のうちの１つまたは複数である、実施形態４３２～４５０のいずれか一つに記載の方法。

【0794】

４５２．前記改変ＰＢＭＣが、免疫チェックポイント阻害剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態４３２～４５１に記載の方法。

【0795】

４５３．前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、およびＴＩＭ－３のいずれか１つを標的にする、実施形態４５２に記載の方法。

【0796】

４５４．前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１を標的にする、実施形態４５３に記載の方法。

【0797】

４５５．前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１を標的にする、実施形態４５３に記載の方法。

【0798】

４５６．前記改変ＰＢＭＣが、治療剤の投与の前、それと並行して、または後に投与される、実施形態４４０～４５５に記載の方法。

【0799】

４５７．前記治療剤が、化学療法剤である、実施形態４５６に記載の方法。
追加の実施形態

【0800】

１．抗原を含む複数の改変末梢血単核細胞（ＰＭＢＣ）であって、前記抗原は、前記改変ＰＢＭＣに対して外因性であり、前記複数の改変ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球のうちの２つまたはそれよりも多くを含み、特に、前記抗原は、がん抗原、感染性疾患抗原、またはウイルス疾患関連抗原である、複数の改変ＰＢＭＣ。

【0801】

２．前記抗原は、前記複数のＰＢＭＣ中の前記細胞の少なくとも約７０％に存在する、実施形態１に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0802】

３．調整された複数の改変ＰＢＭＣであり、特に、前記改変ＰＢＭＣはアジュバントを含む、実施形態１または２に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0803】

４．前記抗原は前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞のサイトゾルに存在し、前記アジュバントは前記複数の改変ＰＢＭＣ中の細胞の小胞に存在する、実施形態３に記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0804】

５．ＣＤ８０および／またはＣＤ８６は、複数の調整されていないＰＢＭＣ中のＢ細胞と比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍よりも高く、または１０倍よりも高く、前記複数の調整されたＰＢＭＣの前記Ｂ細胞において上方制御される、実施形態３または４のいずれか１つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0805】

６．ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＩＰ－１０、またはＴＮＦ－αのうちの１つまたは複数の前記発現は、複数の調整されていないＰＢＭＣと比較して、約１．２倍、１．５倍、１．８倍、２倍、３倍、４倍、５倍、８倍よりも高く、または１０倍よりも高く、前記複数の調整されたＰＢＭＣのＰＢＭＣにおいて増加している、実施形態３～５のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0806】

７．実施形態１～６のいずれか一つに従う複数の改変ＰＭＢＣであって、
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される複数の改変ＰＭＢＣ。

【0807】

８．実施形態３～７のいずれか一つに従う調整された複数の改変ＰＢＭＣであって、
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣを前記アジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む前記調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含むプロセスによって調製される調整された複数の改変ＰＢＭＣ。

【0808】

９．（ａ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内のＴ細胞のパーセンテージは、約１０％以下異なり；
（ｂ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内のＢ細胞のパーセンテージは、約１０％以下異なり；
（ｃ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内のＮＫ細胞のパーセンテージは、約１０％以下異なり；ならびに／または
（ｄ）前記複数の改変ＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージおよび前記複数のインプットＰＢＭＣ内の単球のパーセンテージは、約１０％以下異なる、
実施形態１～８のいずれか一つに記載の複数の改変ＰＢＭＣ。

【0809】

１０．抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出する方法であって：
ａ）複数のインプットＰＢＭＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄を通過させるステップであって、前記狭窄の直径は、前記懸濁液中の前記インプットＰＢＭＣの直径の関数であり、それによって、前記抗原が通過するのに十分に大きな前記インプットＰＢＭＣの摂動を引き起こして複数の摂動インプットＰＢＭＣを形成するステップ；
ｂ）前記抗原が前記摂動インプットＰＢＭＣに入るのを可能にするのに十分な時間、前記複数の摂動インプットＰＢＭＣを前記抗原とともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ；および必要に応じて
ｃ）前記抗原を含む前記改変ＰＢＭＣを調整するのに十分な時間、前記抗原を含む前記複数の改変ＰＢＭＣをアジュバントとともにインキュベートし、それによって、前記抗原を含む調整された複数の改変ＰＢＭＣを作出するステップ
を含む、方法。

【0810】

１１．前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最小直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約６０％～約９０％であり、および／または前記狭窄の直径が、前記複数のインプットＰＢＭＣ内の最大直径を有する細胞の亜集団の平均直径の約２０％～約３０％である、実施形態７～９のいずれか一つに記載の複数の改変もしくは調整されたＰＢＭＣ、または実施形態１０に記載の方法。

【0811】

１２．前記狭窄の直径が、約３μｍ～約１０μｍ、特に約３μｍ～約６μｍである、実施形態７～９もしくは１１のいずれか一つに記載の複数の改変もしくは調整されたＰＢＭＣ、または実施形態１０もしくは１１に記載の方法。

【0812】

１３．前記複数の改変ＰＢＭＣが、前記改変ＰＢＭＣを調整するために、約１～約２４時間、特に、約２～約１０時間、前記アジュバントとともにインキュベートされる、実施形態８～９もしくは１１～１２のいずれか一つに記載の調整された複数の改変ＰＢＭＣ、または実施形態１０～１２のいずれか一つに記載の方法。

【0813】

１４．前記アジュバントが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＬＰＳ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、Ｒ８３７、Ｒ８４８、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストである、実施形態３～９もしくは１１～１３のいずれか一つに記載の調整された複数の改変もしくは調整されたＰＢＭＣ、または実施形態１０～１３のいずれか一つに記載の方法。

【0814】

１５．前記抗原が、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原である、実施形態１～９もしくは１１～１４のいずれか一つに記載の複数の改変もしくは調整されたＰＢＭＣ、または実施形態１０～１４のいずれか一つに記載の方法。

【実施例】

【0815】

当業者は、いくつかの実施形態が本発明の範囲および精神内で可能であることを認識する。本発明は、ここに、以下の非限定的な実施例を参照することによって、より詳細に記載する。以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、当然ながら、その範囲を決して限定するものとして解釈されるべきではない。
（実施例１）

【0816】

個体における免疫応答の刺激における抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣの有効性を調査するために、ＨＰＶ由来抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを作出し、個体に投与する。治療的ワクチンとしての使用のための疾患抗原を含む調整されたＰＢＭＣの有効性を、単剤療法として、またはＰＤ－Ｌ１阻害剤および／もしくは化学療法剤などの追加の治療剤と組み合わせた場合について、研究する。

【0817】

ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物物質は、ＭＨＣ－Ｉ上のＨＰＶ１６のＨＬＡ－Ａ０２拘束性Ｅ６およびＥ７エピトープを提示する自家ＰＢＭＣからなる。ＰＢＭＣの大部分（＞９０％）は、Ｔ細胞、単球、ＮＫ細胞、およびＢ細胞からなる。ＰＢＭＣ－ＨＰＶの構造の説明を図１Ａに提示し、示された線は、ＨＰＶ１６の免疫原性エピトープを含有する全長Ｅ６およびＥ７合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）を表す。最小エピトープを、赤色および緑色でそれぞれマークする。送達されると、ＳＬＰは、プロセシングされて最小エピトープを生じ、これは、その後、ＭＨＣ－Ｉに提示される。

【0818】

図１Ａにおける細胞は、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ細胞型（Ｔ細胞、単球、ＮＫ細胞およびＢ細胞）のいずれかを表す。

【0819】

ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物物質の産生における出発物質として使用されるＥ６ ＳＬＰおよびＥ７ ＳＬＰを下記に示す。これらのペプチドは、ＨＰＶ１６に対する抗原性エピトープを含有する（太字で示す）。

【化1】

【0820】

製造プロセスの間に細胞のサイトゾルに送達された後、これらのペプチドは細胞によってプロセシングされ、抗原性エピトープを含有する得られるセグメントは、さまざまなＰＢＭＣ細胞のＭＨＣ－Ｉに提示される。Ｅ６ ＳＬＰは、ネイティブＥ６タンパク質由来の２５アミノ酸のペプチドであり、これは、Ｅ６タンパク質のＨＬＡ－Ａ２拘束性免疫優性エピトープとして引用されているＨＬＡ－Ａ２抗原ペプチドＴＩＨＤＩＩＬＥＣＶ（配列番号１）を含有するので、選択された。Ｅ７ ＳＬＰは、Ｅ６タンパク質由来の隣接アミノ酸内にＨＬＡ－Ａ２拘束性免疫優性エピトープＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号３）を含有する。このＥ７エピトープは、抗原性Ｅ７ペプチドとして広く引用されている。ネイティブＥ７タンパク質と同一ではないこの隣接配列中のＥ７エピトープは、ネイティブＥ７隣接配列を含有するＳＬＰよりも効率的にプロセシングされ、ヒト抗原提示細胞によってｉｎ ｖｉｔｒｏで提示されることが見出された。

【0821】

ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物物質の製造プロセスの一部として、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ細胞は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ９）シグナル伝達を刺激するＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）であるＣｐＧ７９０９で調整される。この成熟は、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ細胞による炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－６）の産生、ならびにＢ細胞における共刺激分子（例えば、ＣＤ８６）およびＭＨＣ－Ｉの上方制御をもたらす。成熟期間後、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物物質は、洗浄して、ＣｐＧ７９０９および蓄積したサイトカインが除去され、その後、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物製品と呼ばれるＨＰＶ抗原を含む調整された複数のＰＢＭＣを含む組成物に製剤化される。

【0822】

ＣｐＧ７９０９が細胞を成熟させた後であるが、ＣｐＧ７９０９を洗い流し、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物製品を作出するために必要な製剤化および充填の直前に、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物物質は、サイトゾルに送達されるＥ６およびＥ７ ＳＬＰを有する細胞で構成される。

【0823】

薬物製品を製造するために、ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物物質は、２回洗浄され、その後、溶液中で製剤化される。例えば、５０％（ｖ／ｖ）の極低温保存培地（ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０など）、３０％（ｖ／ｖ）の低温保存培地（ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌ（登録商標）ＦＲＳなど）、および２０％（ｖ／ｖ）のアルブミン（Ａｌｂｕｋｅｄ（商標）２５（２５％ヒト血清アルブミン）；ＮＤＣ ＃７６１２５－０７９２－１０など）を含有する溶液を含有することができる。

【0824】

白血球除去のおよそ６～８日後、患者は、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物製品を静脈内（ＩＶ）に受ける。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ薬物製品の用量は、患者の用量コホートにより変動し、生細胞／ｋｇ基準で投薬される。

【0825】

ファーストインヒューマン（ＦＩＨ）研究は、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶおよびＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋アテゾリズマブについての増大フェーズおよび拡大フェーズで構成される。

【0826】

ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ増大フェーズは、以下のコホートを含む。
（１）最初の投与と、それに続く最初の投薬の３週間後に１回および６週間後に１回のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの２回のブースターによる低細胞用量コホート。
（２）最初の投与と、それに続く３週間の間隔で投与されるＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの５回のブースターの低細胞用量。
（３）３回の同じアリコートの、最初の投与と、それに続く最初の投薬の３週間後に１回および６週間後に１回のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの２回のブースターによる高細胞用量コホート。
（４）最初の投与と、それに続く最初の投薬の３週間後に１回および６週間後に１回のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの２回のブースターによる高細胞用量コホート。このコホートでは、ＣｐＧ７９０９は、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ後に毎回供投与される。

【0827】

ＦＩＨ研究の主要な焦点は、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶの投与の評価であるが、この研究は、１つのコホートでのＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶおよびＣｐＧ７９０９の供投与の評価を含む（コホート４）。コホート４は、ＣｐＧ７９０９が、その後のコホートおよび拡大フェーズのために供投与されるか否かの情報を提供する。ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶは、最初にＩＶによって投与され、それに続いてコホート４ではＣｐＧ７９０９がＩＶ投与される。

【0828】

ＣｐＧ７９０９の供投与の安全性、耐容性および影響に関するそれぞれのコホートにおける少なくとも４人の患者の分析後、薬物製品のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶが、ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋アテゾリズマブについての増大フェーズにおいてＣｐＧ７９０９と供投与されるか否かを研究の治験責任医師と一緒に決定する。以下のコホートを試験する。
（５）最初の投与と、それに続く最初の投薬の３週間後に１回および６週間後に１回のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋アテゾリズマブの２回のブースターによる低細胞用量コホート＋アテゾリズマブ。
（６）最初の投与と、それに続く３週間の間隔で投与されるＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋アテゾリズマブの少なくとも５回のブースター（収集した細胞の数に依存して最大で９回）による低細胞用量コホート＋アテゾリズマブ。
（７）最初の投与と、それに続く最初の投薬の３週間後に１回および６週間後に１回のＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋アテゾリズマブの２回のブースターによる高細胞用量コホート＋アテゾリズマブ。

【0829】

図１Ｂおよび図１Ｃは、それぞれＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ単剤療法およびＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋アテゾリズマブ併用療法についてのコホートの処置の代表的な概略図を示す。

【0830】

拡大フェーズ研究について、単剤療法としてのＳＱＺ－ＰＭＢＣ－ＨＰＶを投薬するための最大で３つのバスケットは以下である。
（１）選択された推奨フェーズ２投薬（ＲＰ２Ｄ）レジメンでのＨＰＶ１６陽性頭頸部扁平上皮がん。
（２）選択された推奨フェーズ２投薬（ＲＰ２Ｄ）レジメンでのＨＰＶ１６陽性子宮頸がん。
（３）選択された推奨フェーズ２投薬（ＲＰ２Ｄ）レジメンでの他のＨＰＶ１６陽性がん。

【0831】

ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋アテゾリズマブのための最大で３つのバスケットは以下である。
ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶについての選択された推奨フェーズ２投薬（ＲＰ２Ｄ）レジメンでのＨＰＶ１６陽性頭頸部扁平上皮がん。
ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶについての選択された推奨フェーズ２投薬（ＲＰ２Ｄ）レジメンでのＨＰＶ１６陽性子宮頸がん。
ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶについての選択された推奨フェーズ２投薬（ＲＰ２Ｄ）レジメンでの他のＨＰＶ１６陽性がん。
（実施例２）

【0832】

個々の免疫細胞サブセットへのＳＱＺが媒介する送達を定量するために、マウス脾細胞に蛍光トレーサー分子をロードし、生存率および送達について評価した。
方法

【0833】

脾細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスから単離し（２０Ｍ／ｍＬ）、ＲＰＭＩ中に１００μｇ／ｍＬの蛍光で標識されたデキストラン（３ｋＤａ）をＳＱＺ（３０、６０および９０ｐｓｉ；４μｍの狭窄）を使用してロードし、生存率、および混合脾細胞集団内の個々の免疫細胞サブセットへのデキストランの送達パーセントをフローサイトメトリーによって決定した。
結果

【0834】

図２に示すように、デキストランの脾細胞への送達パーセントは、３０および６０ｐｓｉ条件による生存率のほんのわずかな減少、ならびに９０ｐｓｉ条件による生存率のより大きな減少を伴って、圧力の増加とともに有意に増加した（Ｐ＜０．００１；Ｅｎｄｏに対するそれぞれの条件）。Ｂ細胞およびＮＫ細胞は、他の細胞集団の中で最も高いレベルの送達を有していたが、依然として認識できる量のＴ細胞および単球の送達があった。生存率に対する最小限の影響のみで最も高い送達を与える条件（６０ｐｓｉ）で、すべての細胞サブセットは、約１５％以内の送達パーセントを有していた（すべての細胞型にわたって６０～７５％の送達）。これらのデータは、ＳＱＺが、生存率に対する小さな影響で、マウス脾細胞の混合集団中のそれぞれの免疫細胞サブセットに同時に分子を効率的に送達することができることを示す。
（実施例３）

【0835】

異なるアジュバント戦略の影響を評価するために、混合脾細胞および単離されたＢ細胞にモデル抗原をロードし、調整し、および／またはアジュバントと共注射し、炎症性サイトカインのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞の相対パーセンテージをフローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0836】

０日目に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、Ｂ細胞と一緒に、免疫磁気分離を介して１つの群について脾細胞から単離し、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μｍの狭窄）によってＯｖａタンパク質（４００μｇ／ｍＬ）をロードし、培地（Ｒ１０）単独またはＣｐＧ１８２６（１μＭ）を有する培地のいずれか中で、１６時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（５匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）、Ｂ細胞（５×１０^６個細胞／ｍＬ）、脾細胞（５×１０^６個細胞／ｍＬ）または２５μｇのＣｐＧ１８２６と共注射される脾細胞のいずれかを１日目に後眼窩に注射した。８日目に、脾臓を収集し、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）（１μｇ／ｍＬ）で再刺激し、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって決定した。
結果

【0837】

図３に示すように、Ｏｖａをロードされた脾細胞で処置されたマウスについてのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、脾細胞がＣｐＧで１６時間調整された場合に有意に高かったが（すべての他の条件と比べてＰ＜０．００５；データは３つの独立した実験を表す）、しかしながら、マウスが、ＣｐＧを共注射された場合に、またはＣｐＧを用いて成熟させたＢ細胞（Ｂ_ＡＰＣ）で処置された場合に、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞％の有意な増加はなかった。これらのデータは、ＣｐＧを用いて成熟させたＯｖａをロードされた脾細胞による処置が、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞中の炎症性サイトカイン産生の有意な増加をもたらしたが、ＯｖａロードＢ細胞、またはＣｐＧと共注射された脾細胞は、認識できる応答を誘導しなかったことを示す。
（実施例４）

【0838】

より低用量のＣｐＧと共注射された、抗原をロードされた脾細胞が抗原特異的応答を誘発することができるかを決定するために、脾細胞に、モデル抗原をロードし、ＣｐＧを用いて成熟させるか、ＣｐＧと共注射するか、または漸増用量のＣｐＧを用いて成熟させ、漸増用量のＣｐＧと共注射し、炎症性サイトカインのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞の相対パーセンテージを、フローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0839】

０日目に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物を得た。次いで、これらの混合脾細胞に、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μｍの狭窄）によってＯｖａタンパク質（４００μｇ／ｍＬ）をロードし、培地（Ｒ１０）単独またはＣｐＧ１８２６（１μＭ）を有する培地のいずれか中で、１６時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（５匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）、ＣｐＧを用いて成熟させた脾細胞（１×１０^６個細胞／マウス）、２５μｇのＣｐＧ１８２６と共注射される脾細胞、または異なる用量のＣｐＧ（０．１～１０μｇ）と共注射される、ＣｐＧを用いて成熟させた脾細胞のいずれかを１日目に後眼窩に注射した。８日目に、脾臓を収集し、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）（１μｇ／ｍＬ）で再刺激し、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって決定した。
結果

【0840】

図４に示すように、Ｏｖａをロードされた脾細胞で処置されたマウスについてのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、脾細胞がＣｐＧを用いて１６時間成熟された場合に有意に高かったが（非処置と比べてＰ＜０．０５）、しかしながら、対照と比べて、マウスが、ＣｐＧを共注射された場合に、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞％の有意な増加はなかった。加えて、脾細胞を、ＣｐＧを用いて成熟させた場合に、任意の用量のＣｐＧを用いて成熟させ、任意の用量のＣｐＧと共注射されたものと比較して、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞％のパーセンテージの統計学的に有意な増加はなく、５μｇのＣｐＧ共注射による明らかなわずかな減少があった。これらのデータは、ＣｐＧを用いて成熟させたＯｖａをロードされた脾細胞と組み合わせたＣｐＧの共注射が、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞中の炎症性サイトカイン産生の有意な増加をもたらさないことを示す。
（実施例５）

【0841】

異なるアジュバントと共注射された、抗原をロードされた脾細胞が抗原特異的応答を誘発することができるかを決定するために、脾細胞に、モデル抗原をロードし、ＣｐＧを用いて成熟させるか、ＣｐＧと共注射するか、またはＣｐＣを用いて成熟させ、ＣｐＧもしくはＩＮＦ－αのいずれかと共注射し、炎症性サイトカインのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞の相対パーセンテージを、フローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0842】

０日目に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物を得た。次いで、これらの混合脾細胞に、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μｍの狭窄）によってＯｖａタンパク質（４００μｇ／ｍＬ）をロードし、培地（Ｒ１０）単独またはＣｐＧ１８２６（１μＭ）を有する培地のいずれか中で、１６時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（５匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）、ＣｐＧを用いて成熟させた脾細胞（１×１０^６個細胞／マウス）、１μｇのＣｐＧ１８２６と共注射される脾細胞、またはＣｐＧもしくは１００００ＵのＩＦＮ－αのいずれかと共注射される、ＣｐＧを用いて成熟させた脾細胞のいずれかを１日目に後眼窩に注射した。８日目に、脾臓を収集し、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）（１μｇ／ｍＬ）で再刺激し、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって決定した。
結果

【0843】

図５に示すように、Ｏｖａをロードされた脾細胞で処置されたマウスについてのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、脾細胞を、ＣｐＧを用いて１６時間成熟させた場合に最も高く、非処置（Ｐ＜０．０００１）およびＣｐＧ共注射（Ｐ＜０．００５）と比較した場合に有意に増加していた。脾細胞を、ＣｐＧを用いて成熟させること、およびそれらをいずれかのアジュバントと共注射することに有意な利益はなく、共注射されたアジュバントが効果を鈍らせる傾向があった。これらのデータは、ＣｐＧを用いて成熟させたＯｖａをロードされた脾細胞と組み合わせたＣｐＧまたはＩＦＮ－αの共注射が、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞中の炎症性サイトカイン産生の有意な増加をもたらさないことを示す。
（実施例６）

【0844】

抗原特異的脾細胞ワクチンのブーストがより大きな抗原特異的応答を誘発することができるかを決定するために、脾細胞に、モデル抗原をロードし、ＣｐＧを用いて成熟させ、レピシエントマウスに１回（プライム）または２回（プライム－ブースト）注射し、炎症性サイトカインのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞の相対パーセンテージを、フローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0845】

－７日目に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物を得た。次いで、これらの混合脾細胞に、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μｍの狭窄）によってＯｖａタンパク質（４００μｇ／ｍＬ）を、およびＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）を４時間ロードした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（５匹のマウス／群）に、１００μＬの脾細胞（１×１０^５～６個細胞／マウス）を－７日目および／または０日目に後眼窩に注射した。７日目に、脾臓を収集し、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）（１μｇ／ｍＬ）で再刺激し、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって決定した。
結果

【0846】

図６に示すように、脾細胞の漸増用量は、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージの中程度の増加をもたらしたが、７日後のブーストの追加は、試験された脾細胞用量のすべてについて、ＩＦＮ－γ＋細胞の有意な（Ｐ＜０．０５）増加をもたらした。興味深いことに、ブースト増強は、より低い細胞用量で最も顕著であり、０．１Ｍの用量は抗原特異的応答において８倍の増加を示した。これらのデータは、試験されたすべての用量について、プライミング７日後のブーストの使用は、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の応答の有意な増強をもたらすことを示す。
（実施例７）

【0847】

細胞用量の重要性、およびＢ細胞、対、混合脾細胞ワクチンの相対有効性を評価するために、細胞にモデル抗原をロードし、アジュバントを用いて成熟させ、炎症性サイトカインのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞の相対パーセンテージをフローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0848】

０日目に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物を得た。加えて、単離されたＢ細胞を、正の免疫磁気分離を介して雌ドナーマウスの脾臓から得た。これらの異なる細胞組成物に、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μｍの狭窄）によってＯｖａタンパク質（４００μｇ／ｍＬ）をロードし、培地（Ｒ１０）単独またはＣｐＧ１８２６（１μＭ）を有する培地のいずれか中で、１６時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（５匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）、Ｂ細胞または脾細胞（０．２５～４×１０^６個細胞／ｍＬ）のいずれかを１日目に後眼窩に注射した。８日目に、脾臓を収集し、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）（１μｇ／ｍＬ）で再刺激し、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって決定した。
結果

【0849】

図７に示すように、ＯｖａロードＢ細胞または脾細胞で処置されたマウスについてのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、正の用量応答を示し、４Ｍ個細胞用量が、試験された両方の細胞型について最も高い応答をもたらした。一般に、脾細胞のすべての用量は、それらのＢＡＰＣ対応物よりも高い平均応答をもたらし、有意性の傾向があった。このデータは、より高い細胞数が応答の増加の傾向を示すこと、および脾細胞がより高い抗原特異的応答を誘導し得ることを示す。
（実施例８）

【0850】

抗原特異的応答を誘導する混合脾細胞の相対有効性に対するＣｐＧの成熟時間の影響を評価するために、脾細胞にモデル抗原をロードし、さまざま時間にわたってＣｐＧを用いて成熟させ、炎症性サイトカインのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞の相対パーセンテージをフローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0851】

０日目に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物を得た。脾細胞に、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μｍの狭窄）によってＯｖａタンパク質（４００μｇ／ｍＬ）をロードし、培地（Ｒ１０）単独またはＣｐＧ１８２６（１μＭ）を有する培地のいずれか中で、さまざまな時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（５匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）または脾細胞（１×１０^６個細胞／ｍＬ）のいずれかを１日目に後眼窩に注射した。８日目に、脾臓を収集し、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）（１μｇ／ｍＬ）で再刺激し、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって決定した。
結果

【0852】

図８に示すように、Ｏｖａをロードされた脾細胞で処置されたマウスについてのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、より長いＣｐＧ成熟時間で増加した（^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、＃Ｐ＜０．００５、すべての比較はＣｐＧなしと行った）。少なくとも４時間のすべての成熟時間で観察された応答において有意な増加があった。これらのデータは、ＳＱＺ後の少なくとも４時間のＣｐＧ成熟時間が、有意な抗原特異的応答を誘導するために必要であることを示す。
（実施例９）

【0853】

治療的環境において腫瘍の成長阻害をもたらすために必要な脾細胞の最小有効細胞用量を決定するために、脾細胞の４つの異なる用量を、時間に対してプロットされた腫瘍の面積を用いるＨＰＶ Ｅ７を発現するＴＣ１腫瘍モデルにおいて試験した。
方法

【0854】

０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、０日目に、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。７日目（プライム）に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物を得た。脾細胞に、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化2】

＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μＭの狭窄）を介してロードし、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と４時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）または脾細胞（０．０５～１Ｍ個細胞／マウス）のいずれかを７日目に後眼窩に注射した。ＴＣ－１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、３０日間、非処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。
結果

【0855】

図９に示すように、式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、非処置群（脾細胞なし）およびＨＰＶ Ｅ７をロードされた脾細胞の漸増数で処置された群からのマウスの間で比較した。脾細胞用量が高くなると、腫瘍の成長阻害がより良好になり、１Ｍ個用量で平均して完全な腫瘍退縮をもたらすことを見出した。３０日後、１Ｍ個処置群において腫瘍なしであった５匹の残ったマウスが存在したが、０．２５Ｍ群は、腫瘍なしの３匹のマウスを有していた。これらのデータは、ＳＱＺによってロードされた脾細胞が、ＨＰＶ関連がんの治療モデルにおいて腫瘍退縮を誘導することができることを示す。
（実施例１０）

【0856】

混合集団内のＢ細胞に対するＣｐＧ成熟の効果を決定するために、ヒトＰＢＭＣおよびマウス脾細胞をさまざまな時間ＣｐＧを用いて成熟させ、活性化マーカーＣＤ８６の相対量を、Ｂ細胞集団においてフローサイトメトリーによって測定し、サイトカインおよびケモカインのレベルを、マルチプレックスアッセイによって定量した。
方法

【0857】

マウス脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物を得た。ヒトＰＢＭＣおよび脾細胞を、さまざまな時間（２～２４時間）および濃度（１～１０μＭ）について、Ｒ１０中、ＣｐＧ（ヒトについて２００６、マウスについて１８２６）とともにインキュベートした。ＣｐＧインキュベーション後、細胞を、Ｒ１０で洗浄し、ＣＤ８６のレベルについてフローサイトメトリーによって評価した一方、上清を採取し、サイトカインのレベルを、マルチプレックス（２９プレックス）ヒトサイトカイン／ケモカインアッセイを使用して分析した。
結果

【0858】

図１０Ａは、以下の結果を示す：ヒト（上）－ＣｐＧのより高い１０μＭ用量は、ヒトＰＢＭＣのＢ細胞集団中のＣＤ８６のレベルが２時間後に経時的に減少したことを示した。より低い１μＭ用量は、すべての時点で１０μＭよりも高いレベルのＣＤ８６をもたらし、これは二峰性の経時変化も示し、レベルは２時間後に減少し、２４時間後に戻り始めた。これらのデータは、より低いレベルのＣｐＧが、最も早い観察時点ですべての用量がピークになる、より高いＢ細胞活性化をもたらすことができることを示す。

【0859】

マウス（下）－マウスＢ細胞について、経時的に、両方の濃度でＣＤ８６レベルの、認識できる変化はなかった。これらのデータは、マウスＢ細胞が、ＣｐＧ成熟に応答してＣＤ８６を上方制御しないことを示す。

【0860】

図１０Ｂサイトカイン／ケモカイン（図１０Ｂ）に示すように、図１０Ｂ－ヒトおよびマウスのケモカイン／サイトカインプロファイルの両方からの結果は同様の傾向を示し、ＣｐＧ処置（ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＭＩＰ－１Ｂ）に応答して多くの同じタンパク質が増加するが、ＩＬ－１０およびＩＬ－１３は、マウス脾細胞においてのみ増加した。これらの結果は、ヒトＰＢＭＣおよびマウス脾細胞が、ＩＬ－１０およびＩＬ－１３を明らかな例外として、ＣｐＧに対して同様のケモカイン／サイトカイン応答を有することを示す。
（実施例１１）

【0861】

細胞組成およびＭＨＣ－Ｉレベルに対するＳＱＺ化の影響を決定するために、ヒトＰＢＭＣを、細胞圧搾に供し、免疫細胞の相対パーセンテージおよびＭＨＣ－Ｉの表面発現を、フローサイトメトリーによって評価した。
方法

【0862】

ＨＬＡ－Ａ２＋ドナー由来のヒトＰＢＭＣを、（Ｅｎｄｏ）とともにインキュベートしたか、またはＳＱＺ（６０ｐｓｉ；３．５～４μｍの幅）によって蛍光で標識された３ｋＤａのデキストラン（１００μｇ／ｍＬ）を室温でロードした。次いで、ロードされたＰＢＭＣを、フローサイトメトリーを介して、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および単球の相対組成、ならびにＨＬＡ－Ａ２ ＭＨＣ－Ｉ表面発現について分析した。
結果

【0863】

図１１に示すように、ＳＱＺを使用するヒトＰＢＭＣのロードは、ＳＱＺ後のＭＨＣ－Ｉレベルのわずかな（１２％）の減少と一致して、Ｂ細胞（ＣＤ２０）、Ｔ細胞（ＣＤ３）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６）および単球（ＣＤ１４）［上］について５％未満の変化をもたらした。細胞組成およびＭＨＣ－Ｉレベルの両方について、３．５μｍの狭窄の幅は、わずかに高い変化をもたらした。まとめると、これらのデータは、ＳＱＺによるＰＢＭＣのロードが、免疫細胞サブセットの相対存在量およびそれらのＭＨＣ－Ｉ表面発現を認識できるほど変化させないことを裏付ける。
（実施例１２）

【0864】

個々の細胞サブセットにおける送達およびＳＱＺ化の影響を決定するために、ヒトＰＢＭＣを、細胞圧搾に供し、蛍光化合物の異なる免疫細胞集団に対する生存率および送達を、フローサイトメトリーによって評価した。
方法

【0865】

ヒトＰＢＭＣを、（Ｅｎｄｏ）とともにインキュベートし、またはＳＱＺ（６０ｐｓｉ；３．５～４μｍの幅）によって、蛍光で標識された３ｋＤａのデキストラン（１００μｇ／ｍＬ）を室温でロードした。次いで、ロードされたＰＢＭＣを、フローサイトメトリーによって生存率および送達について分析した。
結果

【0866】

図１２ＡおよびＢに示すように、ＳＱＺを使用するヒトＰＢＭＣのロードは、Ｂ細胞（ＣＤ２０）、Ｔ細胞（ＣＤ３）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６）および単球（ＣＤ１４）の生存率［左］について１０％未満の変化をもたらした。デキストランで送達された細胞のパーセンテージは、３．５μｍの幅の狭窄について６０％（Ｂ細胞）～９０％（単球）の範囲であり、４μｍの幅の狭窄は、すべての細胞型にわたって送達された約１０～２０％のより少ない細胞をもたらした。Ｔ細胞および単球について細胞あたりロードされたデキストランの量の最大で３５倍の増加、ならびに３．５μｍの幅についてＢ細胞およびＮＫ細胞について約５～１０倍の増加があった。４μｍの幅の狭窄は、一般に、３．５μｍの幅から、約２倍だけ送達の量を減少させた。
（実施例１３）

【0867】

混合集団からの全体的な機能的応答に対する個々の細胞サブセットへの送達の効果を決定するために、ヒトＰＢＭＣに、疾患関連抗原およびタグ化デキストランをＳＱＺによってロードし、抗原特異的レスポンダー細胞を刺激する能力を、測定し、タグ化化合物の送達と比較した。
方法

【0868】

ＨＬＡ－Ａ０２＋ドナー由来のヒトＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）を、５０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化3】

および蛍光で標識された３ｋＤａのデキストラン（１００μｇ／ｍＬ）の存在下、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；室温）によってロードし、異なる狭窄の幅（３．５および４μｍ）の間での細胞サブセットへの送達のレベルを、フローサイトメトリーによって定量した。次いで、ＰＢＭＣを、刺激因子：レスポンダー細胞が２：１の比でＥ７１１－２０特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ－２（１０Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養し、非処置対照、または最小エピトープ（ＰＰ－０．１μＭ－ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ；（配列番号３））と終夜インキュベートされた２：１の刺激因子：レスポンダー細胞と比較した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ－γ産生のレベルを、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡによって評価した。
結果

【0869】

表１３に示すように、ＳＱＺを使用するヒトＰＢＭＣのロードは、ＥＬＩＳＡ（上）によって評価されたＩＦＮ－γ産生のレベルの最大で約４倍の増加（３．５μｍ）をもたらした。４μｍの狭窄を介した送達は、Ｅ７特異的レスポンダーＴ細胞に対する、およそ半分のレベルの抗原特異的応答を示した（中央および右－同じ試料からの図１１のデータの再分析）。この機能的効果は、３．５μｍの条件によるＥ７ ＳＬＰのより高い送達と相関した。これらの知見は、増強された送達が、ヒトＰＢＭＣの細胞の抗原提示機能の増加をもたらすことができることを示す。
（実施例１４）

【0870】

抗原特異的応答を活性化する免疫細胞の能力に対するさまざまな送達パラメーターの影響を決定するために、ヒトＰＢＭＣに、疾患関連抗原をＳＱＺによってロードし、抗原特異的レスポンダー細胞を刺激する能力を、測定し、異なるＳＱＺ条件全体にわたって比較する。
方法

【0871】

ＨＬＡ－Ａ０２＋ドナー由来のヒトＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）を、５０μＭのｐｐ６５ ＳＬＰ

【化4】

の存在下、ＳＱＺによってロードし、圧力（４５、６０ｐｓｉ）、温度（室温、氷）および狭窄の幅（３．５～４．５μｍ）を変化させた。次いで、ＰＢＭＣを、刺激因子：レスポンダー細胞が２：１の比でｐｐ６５特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ－２（１０Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養し、非処置対照、または最小エピトープ（ＰＰ－０．１μＭ－ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ（配列番号５５））と終夜インキュベートされた２：１の刺激因子：レスポンダー細胞と比較した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ－γ産生のレベルを、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡによって評価した。
結果

【0872】

表１４に示すように、ＳＱＺを使用するｐｐ６５ ＳＬＰによるヒトＰＢＭＣのロードは、ＥＬＩＳＡによって評価されたＩＦＮ－γ産生のレベルの約６～９倍の増加をもたらした。より狭い狭窄の幅（３．５μｍ）およびより高い圧力（６０ｐｓｉ）は、より高い応答をもたらし、連続的に広がったチップは、機能性の喪失をもたらし、この現象は、室温（上）および氷（下）の条件の間で保存される。まとめると、ＳＱＺの間の氷にわずかな利益があり得るが、すべての条件は、ＩＦＮ－γ産生の有意な増加をもたらした。
（実施例１５）

【0873】

抗原特異的応答を活性化するヒト免疫細胞の能力に対するＣｐＧ成熟の影響を決定するため、およびロードされたＴ細胞ＡＰＣに対するこの応答を比較するために、ヒトＰＢＭＣまたは単離されたＴ細胞に、疾患関連抗原をＳＱＺによってロードし、抗原特異的レスポンダー細胞を刺激する能力を、測定し、ＣｐＧ成熟なしと比較した。
方法

【0874】

ＨＬＡ－Ａ０２＋ドナーのＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）から単離されたヒトＨＬＡ－Ａ０２＋ＰＢＭＣまたはＴ細胞を、５０μＭのｐｐ６５ ＳＬＰ

【化5】

の存在下、ＳＱＺ（４５ｐｓｉ；ＰＢＭＣについて３μｍの狭窄、Ｔ細胞について４．５μｍを使用）によってロードした。次いで、ＰＢＭＣを、刺激因子：レスポンダーが２：１の比でｐｐ６５特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ－２（１０Ｕ／ｍＬ）＋／－ＣｐＧ２００６（１μＭ）の存在下で培養し、非処置対照、または最小エピトープ（ＰＰ－０．１μＭ－ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ（配列番号５５））と終夜インキュベートされた２：１の刺激因子：レスポンダー細胞と比較した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ－γ産生のレベルを、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡによって評価した。
結果

【0875】

図１５に示すように、ＳＱＺを使用するｐｐ６５ ＳＬＰによるヒトＰＢＭＣのロードは、ＣｐＧあり、およびなしの両方で、ＳＬＰ（Ｅｎｄｏ）とともにインキュベートされた細胞よりも高いＩＦＮ－γ産生をもたらした。加えて、なしと比べて、ＣｐＧと共培養されたＳＱＺロード条件の間で応答の３０％の増加があった（Ｐ＜０．０５；上）。Ｔ細胞は、ＣｐＧ成熟に応答せず、そのため、Ｔ細胞の条件を、ＣｐＧ条件で共培養されたＰＢＭＣと直接比較し、ＰＢＭＣの条件でほぼ２倍の応答があったことを見出した（Ｐ＜０．００１；下）。まとめると、これらのデータは、ＣｐＧ共培養が、ヒトＰＢＭＣの抗原特異的応答を増強すること、およびＣｐＧを有するＰＢＭＣが、ロードされたＴ細胞と比較した場合に、この応答の誘発においてほぼ２倍強力であることを示す。
（実施例１６）

【0876】

ヒトの状況における抗原特異的応答の活性化に対するアジュバントおよび抗原の濃度の効果を調べるために、ヒトＰＢＭＣに、異なる濃度の疾患関連抗原をＳＱＺによってロードし、抗原特異的レスポンダー細胞を刺激する能力を、測定し、異なるアジュバントの間で比較した。
方法

【0877】

ＨＬＡ－Ａ０２＋ドナー由来のヒトＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）を、異なる濃度のｐｐ６５ ＳＬＰ

【化6】

；１、１０および５０μＭ）の存在下、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；３．５μｍの狭窄）によってロードした。次いで、ＰＢＭＣを、刺激因子：レスポンダーが２：１の比でｐｐ６５特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、ＩＬ－２（１０Ｕ／ｍＬ）＋／－ＣｐＧ２００６（１μＭ）またはＲ８３７（１μｇ／ｍＬ；イミキモド）の存在下で培養し、非処置対照、または最小エピトープ（ＰＰ－０．１μＭ－ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ（配列番号５５））と終夜インキュベートされた２：１の刺激因子：レスポンダー細胞と比較した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ－γ産生のレベルを、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡによって評価した。
結果

【0878】

図１６に示すように、アジュバントあり、およびなしでＳＱＺによって１μＭのｐｐ６５ ＳＬＰをロードされたヒトＰＢＭＣの機能的応答の間に有意差はなかったが、より高い濃度は、アジュバントとの共培養に対して有意な利益を示した。１０μＭのｐｐ６５ ＳＬＰ条件は、なしと比べて、ＣｐＧと共培養されたＰＢＭＣの応答のわずかであるが有意ではない増加を示したが、アジュバントなしと比較して、ＰＢＭＣをＲ８３７と共培養した場合に有意な増加があった（Ｐ＜０．０００１）。この効果は、５０μＭのＳＬＰを使用した場合にさらにより顕著であり、ＣｐＧおよびＲ８３７は、抗原特異的応答の有意な増強をもたらした（Ｐ＜０．０００１）。すべての場合で、いずれかのアジュバントとの共培養には増加した利益があったが、Ｒ８３７は、最も高い応答を一貫してもたらし、この効果は、ｐｐ６５ ＳＬＰのより高い濃度によって強化された。まとめると、これらのデータは、共培養の間のアジュバントの使用が、ヒトＰＢＭＣの抗原特異的応答を増強すること、およびこの効果が、使用される抗原の濃度に依存することを示す。
（実施例１７）

【0879】

ヒトの状況における抗原特異的応答の活性化に対するアジュバント組成物および成熟期間の効果を調べるために、ヒトＰＢＭＣに、疾患関連抗原をＳＱＺによってロードし、異なるアジュバントを用いて異なるインキュベーション時間で成熟させ、抗原特異的レスポンダー細胞を刺激する能力を、測定し、異なるアジュバントの間で比較した。
方法

【0880】

ＨＬＡ－Ａ０２＋ドナー由来のヒトＰＢＭＣ（１０Ｍ個細胞／ｍＬ）を、５０μＭのｐｐ６５ ＳＬＰ

【化7】

の存在下、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；３．５μｍの狭窄）によってロードした。次いで、ＰＢＭＣを、ＣｐＧ２００６（１μＭ）、Ｒ８３７（１μｇ／ｍＬ；イミキモド）またはＲ８４８（１μｇ／ｍＬ；レシキモド）を用いて、３または２４時間のいずれかにわたって成熟させ、続いて、ＩＬ－２（１０Ｕ／ｍＬ）の存在下、刺激因子：レスポンダーが２：１の比でｐｐ６５特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共培養し、非処置対照、または最小エピトープ（ＰＰ－０．１μＭ－ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ（配列番号５５））と終夜インキュベートされた２：１の刺激因子：レスポンダー細胞と比較した。２４時間後、上清を各条件から収集し、ＩＦＮ－γ産生のレベルを、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡによって評価した。
結果

【0881】

図１７に示すように、アジュバントあり、およびなしで、ＳＱＺによってｐｐ６５ ＳＬＰをロードされたヒトＰＢＭＣの機能的応答の間の有意差はなかったが、Ｒ８４８で３または２４時間のいずれかにわたって処置された群は、最も高い全体的な応答を与えた。これらのデータは、ＳＱＺ後にＰＢＭＣを成熟させるアジュバントの使用は、抗原特異的応答を増強し得ることを示すが、この効果は、すべてのアジュバントおよび試験された時点で応答の有意な増加をもたらすことは見出されなかった。
（実施例１８）

【0882】

抗原特異的応答に対するＳＱＺ前またはＳＱＺ後の成熟の影響を定量するために、マウス脾細胞に、モデル抗原をロードし、ＣｐＧを用いて成熟させ、レピシエントマウスに１回（プライム）または２回（プライム－ブースト）注射し、炎症性サイトカインのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞の相対パーセンテージを、フローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0883】

－１日目（成熟→ＳＱＺ）または０日目（ＳＱＺ→成熟）に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、－１日目に４時間、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）を用いて成熟させ（成熟→ＳＱＺ）、次いで０日目にＳＱＺ（３０、６０、９０ｐｓｉ；４μｍの狭窄）によってＯｖａタンパク質（４００μｇ／ｍＬ）をロードするか（ＳＱＺ→成熟）、または０日目にＳＱＺによってＯｖａをロードし、続いてＣｐＧ１８２６との４時間のインキュベーションのいずれかを行った。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（５匹のマウス／群）に、１００μＬの脾細胞（１×１０^６個細胞／マウス）を０日目に後眼窩に注射した。７日目に、脾臓を収集し、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）（１μｇ／ｍＬ）で再刺激し、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって決定した。
結果

【0884】

図１８に示すように、Ｏｖａを脾細胞にロードするために使用した圧力の増加は、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージの有意な増加をもたらしたが（Ｐ＜０．０５）、成熟させ、次いでＳＱＺロードした脾細胞、またはＳＱＺロードし、次いで成熟させた脾細胞の間に有意な変化はなかった。これらのデータは、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗原特異的応答を誘発するための能力において、脾細胞のロード／成熟の順序に有意差がないことを示す。
（実施例１９）

【0885】

白金系化学療法と組み合わせる抗原をロードされた脾細胞による動物の同時処置に利益があるかを決定するために、抗原関連腫瘍細胞の腫瘍成長阻害を、ｉｎ ｖｉｖｏの治療モデルにおいて測定し、複数の脾細胞＋／－化学療法処置レジメンを比較し、各群のマウスの生存を時間に対してプロットした。
方法

【0886】

０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、０日目に、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス；１０匹のマウス／群）を右後側腹部に注射した。５日目および７日目に、マウスに、群に従って、ビヒクルまたはシスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを注射した。９日目に、一部の動物は、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ、４μｍの狭窄）を介して、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化8】

＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をロードされ、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と約１６時間インキュベートされた雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得た脾細胞のプライムも受けた。２７日目および２９日目に、非処置マウス、または９日目のみ脾細胞で処置されたマウスに、概説された群に従って、１～２用量のシスプラチンを与えた。ＴＣ１腫瘍を有するマウスの各群の生存を、１２０日にわたって評価し、プロットした。
結果

【0887】

図１９に示すように、式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、非処置マウス、Ｅ７をロードされた脾細胞単独で処置されたマウス、１～２用量のシスプラチン単独で処置されたマウス、またはさまざまな組合せで処置されたマウスの間で比較し、カプランマイヤー生存曲線をプロットした。脾細胞を含む４つの処置群は、非処置動物だけでなく、シスプラチン単独を受けたものに対して大きな生存優位性を示し、生存期間中央値は５０日を超えた（脾細胞＋シスプラチン処置の場合に、生存期間中央値は１２０日後でさえ到達しなかった）。特に注目すべきことには、脾細胞単独で処置されたマウスは、非処置群およびシスプラチン単独群に対して約４０日の生存優位性を有していたが、脾細胞＋シスプラチン群は、脾細胞単独群に対してさえより高い生存優位性を有していた。これらのデータは、ＳＱＺによってロードされた脾細胞が、ＨＰＶ関連がんの治療モデルにおける生存優位性を誘導することができること、およびシスプラチン化学療法の追加が、脾細胞ワクチンの生存優位性をさらに強化したことを示す。
（実施例２０）

【0888】

臨床スケールを使用して個々の細胞サブセットにおける送達および異なるＳＱＺ化パラメーターの影響を決定するために、ヒトＰＢＭＣを、異なる温度および圧力で細胞圧搾に供し、蛍光化合物の異なる免疫細胞集団に対する生存率および送達を、フローサイトメトリーによって評価した。
方法

【0889】

ヒトＰＢＭＣに、ＳＱＺ（５０～７０ｐｓｉ；４．５μｍの幅）によって、蛍光で標識された３ｋＤａのデキストラン（１００μｇ／ｍＬ）を室温および氷上でロードした。次いで、ロードされたＰＢＭＣを、フローサイトメトリーによって生存率および送達について分析した。
結果

【0890】

図２０ＡおよびＢに示すように、臨床スケールでＳＱＺを使用するヒトＰＢＭＣのロードは、さらに、最高で８０％の細胞（氷上の単球、図２０Ａ）の送達の成功を可能にし、氷上でＳＱＺ化された細胞は、すべての細胞サブセットにわたって、送達された細胞のより高いパーセンテージ（３０～５０％の増加）をもたらした。より高い圧力（７０ｐｓｉ）は、５０ｐｓｉと比べて送達された細胞の最も高いパーセンテージを与えたが、試験されたすべての場合で、生存率は、バルクＰＢＭＣ集団について８８％を上回った。まとめると、これらのデータは、ＳＱＺを混合集団中の複数の細胞型に送達するために使用することができること、および氷上でわずかに高い圧力でのＳＱＺ化が最良の全体的な送達をもたらしたことを示す。
（実施例２１）

【0891】

治療的環境において腫瘍成長阻害をもたらす抗原をロードされた脾細胞の能力に対する成熟＋／－アジュバントの共注射の影響を決定するために、脾細胞を、アジュバントを用いて成熟させるか、アジュバントと共注射するか、またはアジュバントを用いて成熟させ、アジュバントと共注射し、ＨＰＶ Ｅ７を発現するＴＣ１腫瘍モデルにおいて試験し、腫瘍の面積および生存を時間に対してプロットした。
方法

【0892】

０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目（プライム）に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせてより良好にヒトＰＢＭＣを模倣し、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。脾細胞に、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化9】

＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μＭの狭窄、室温）を介してロードし、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と４時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）、脾細胞（１Ｍ個細胞／マウス）または脾細胞＋ＣｐＧ（１μｇ／マウス）のいずれかを１０日目に後眼窩に注射した。ＴＣ－１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、３２日間、非処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。
結果

【0893】

式（（長さ×幅^２）／２）によって測定される腫瘍成長を、非処置群（脾細胞なし）およびアジュバント単独（ＣｐＧ）、脾細胞または脾細胞＋アジュバントを共注射で処置された群からのマウスの間で比較した。図２１ＡおよびＢに示すように、非処置動物およびＣｐＧ単独で処置された動物の腫瘍成長の間に（それぞれ２８日および３２日の生存期間中央値）観察可能な差はなかったが、Ｅ７をロードされた未成熟脾細胞についての腫瘍成長の速度のわずかな阻害があった。しかしながら、成熟され、ロードされた脾細胞＋／－ＣｐＧの共注射のいずれかを受けた群は、腫瘍退縮をもたらし、腫瘍は、研究の過程にわたってそれらの初期の最大に達しなかった。加えて、脾細胞処置群は、３２日目まで生存期間中央値のポイントに達しなかった。これらのデータは、ＳＱＺによってロードされ、アジュバントを用いて成熟させた脾細胞（アジュバントの共注射あり、またはなし）が、ＨＰＶ関連がんの治療モデルにおいて腫瘍退縮を誘導することができることを示す。
（実施例２２）

【0894】

異なるアジュバントと共注射された、抗原をロードされた脾細胞が抗原特異的応答を誘発することができるかを決定するために、脾細胞に、モデル抗原をロードし、ＣｐＧを用いて成熟させるか、ＣｐＧと共注射するか、またはＣｐＣを用いて成熟させ、ＣｐＧもしくはＩＮＦ－αのいずれかと共注射し、マウスは、プライムおよびブーストを受け、炎症性サイトカインのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞の相対パーセンテージを、フローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0895】

０日目に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物を得た。次いで、これらの混合脾細胞に、ＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μｍの狭窄）によってＯｖａタンパク質（４００μｇ／ｍＬ）をロードし、培地（Ｒ１０）単独またはＣｐＧ１８２６（１μＭ）を有する培地のいずれか中で、４時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（５匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）、ＣｐＧを用いて成熟させた脾細胞（１×１０^６個細胞／マウス）、１μｇのＣｐＧ１８２６と共注射される脾細胞、またはＣｐＧもしくは１００００ＵのＩＦＮ－αのいずれかと共注射される、ＣｐＧを用いて成熟させた脾細胞のいずれかを１日目に後眼窩に注射した。７日目に、レピシエントマウスを、０日目のプライムと同一の様式でブーストした。１４日目に、脾臓を収集し、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）（１μｇ／ｍＬ）で再刺激し、ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）によって決定した。
結果

【0896】

図２２に示すように、Ｏｖａをロードされた脾細胞で処置されたマウスについてのＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージは、脾細胞をＣｐＧの共注射あり、またはなしで、ＣｐＧを用いて４時間成熟させた場合に最も高く、非処置（Ｐ＜０．０００１）、未成熟脾細胞（Ｐ＜０．００５）および未成熟脾細胞＋ＣｐＧ共注射（Ｐ＜０．０５）と比較した場合に有意な増加していた。ＩＦＮ－γ＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージのわずかな増加があったが、非処置と比べて、ＣｐＧと共注射された未成熟脾細胞、またはＩＦＮ－αと共注射される成熟脾細胞には有意な利益はなかった。これらのデータは、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の炎症性サイトカイン産生の有意な増加のためにＣｐＧ成熟が必要であること、およびＣｐＧの共注射がＩＦＮ－αの共注射よりもわずかに良好であったことを示す。
（実施例２３）

【0897】

ＣｐＧ１８２６を用いた成熟とそれに続くＳＱＺ処理後のＰＢＭＣにおけるＢ細胞成熟マーカーの上方制御を評価するために、Ｂ細胞成熟マーカーの上方制御を、ＳＱＺ処理マウス脾細胞をＣｐＧ１８２６とともにインキュベートした後、フローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0898】

脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。次いで、クラフト化マウス脾細胞を、ペイロードなしでＳＱＺ処理し、ＣＤ８６およびＨ－２Ｋ^ｂのレベルを、フローサイトメトリーによって測定した。
結果

【0899】

図２３Ａ～Ｇにおいて平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって示されるように、４つの独立した実験は、ＣｐＧ１８２６成熟後のクラフト化マウス脾細胞内のＢ２２０＋細胞（Ｂ細胞）におけるＣＤ８６およびマウスＭＨＣ－Ｉ（Ｈ－２Ｋｂ）発現の増加を実証した。ＣｐＧ１８２６を用いた成熟後のＢ２２０＋細胞サブセット（Ｂ細胞）についてのＣＤ８６およびＨ－２Ｋｂ発現の増加は、ＳＱＺ処理されたクラフト化マウス脾細胞（灰色バー）および処理されていないクラフト化マウス脾細胞（黒色バー）の両方と同様であった。これらのデータは、ＳＱＺ処理が、クラフト化マウス脾細胞内のＢ２２０＋細胞（Ｂ細胞）の成熟に対するＣｐＧの効果を変化させなかったことを示す。
（実施例２４）

【0900】

アジュバントと共注射された、抗原をロードされたＰＢＭＣが血清サイトカインレベルの全身性効果を誘発するかを決定するために、マウス脾細胞に、ＨＰＶ抗原をロードし、ＣｐＧを用いて成熟させ、ＣｐＧ共注射あり、またはなしで、マウスに導入し、マウスの循環サイトカインを、マルチプレックスサイトカインアッセイによって測定した。
方法

【0901】

脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。クラフト化マウス脾細胞に、２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化10】

をＳＱＺロードし、続いてＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と３７℃で４時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウスに、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞を注射するか（Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶ）、または１μｇのＣｐＧ１８２６をＩＶ注射するか（細胞なし）、または両方の組合せを注射し（Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶ＋１μｇのＣｐＧ共注射）、循環サイトカインのレベルを、マウスマルチプレックス（２５プレックス）サイトカイン／ケモカインアッセイを介して血液から測定した。
結果

【0902】

図２４Ａ～２４Ｄに示すように、ＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞（図２４Ｃ、２４Ｄ）で免疫されたマウスにおける血清サイトカイン濃度の範囲は、処置なしの対照マウス（図２４Ａ）および１μｇのＣｐＧ１８２６をＩＶ注射されたマウス（細胞なし）（図２４Ｂ）において測定された血清サイトカイン濃度の範囲とすべての時点で同等であった。これらの結果は、ＣｐＧ１８２６共注射あり、またはなしでのＭ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶによる免疫付与が、処置なし、またはＣｐＧ（細胞なし）対照と比べて、炎症促進性サイトカインの産生またはその血清濃度のいずれかの変化をもたらさなかったことを示す。すべての条件での血清サイトカインの存在は、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶによる免疫付与が、血清サイトカインの産生または分泌における全身性の効果を有さなかったことをさらに実証した。
（実施例２５）

【0903】

養子移入の際の循環動態に対するＰＢＭＣのＳＱＺが媒介する処理の影響を調査するために、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたマウス脾細胞（Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶ）および処理されていないマウス脾細胞をそれぞれ、静脈内注射を介してマウスに投与し、経時的な血液中の循環ドナーマウス脾細胞の数を、フローサイトメトリーによって決定した。
方法

【0904】

脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（ＣＤ４５．１）ドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。次いで、クラフト化マウス脾細胞に、２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化11】

をＳＱＺロードし、続いてＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と３７℃で４時間インキュベートし、ロードされたクラフト化マウス脾細胞を、雌ＣＤ４５．２ Ｂ６．ＳＪＬ－Ｐｔｐｒｃａ Ｐｅｐｃｂ／ＢｏｙＪレピシエントマウス（５～７匹のマウス／群）に後眼窩に注射し、血液（１００ｕＬ）を、以下の時点：投与３０分後、１日目、３日目、７日目および１５日目で、投与後２週間の過程にわたって、レピシエントマウスから採取した。経時的な循環するクラフト化マウス脾細胞の数を、フローサイトメトリーによって評価した。
結果

【0905】

図２５に示すように、養子移入の際に、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶおよび処理されていないクラフト化マウス脾細胞は、免疫付与後２週間の過程にわたって、宿主血液中で同様の持続性を示した（４つの独立した実験から表された累積データ）。一元配置分散分析およびチューキーの事後検定により、いずれの時点でも２つの群の間に統計学的な差はなかった。これらの研究は、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶの循環動態が、処理されていないクラフト化マウス脾細胞と統計学的に異ならないことを実証する。
（実施例２６）

【0906】

この研究の目的は、対照細胞と比較して、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶによる免疫付与の１２日後のＴＣ－１腫瘍の腫瘍微小環境においてＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞を定量すること、および腫瘍成長モデルにおいてＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞を腫瘍のクリアランスと相互に関連付けることであった。
方法

【0907】

０日目に、ＴＣ－１細胞（１００μＬのＰＢＳ中５０ｋ個／マウス）を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（７匹のマウス／群）の右後側腹部に皮下注射した。１６日目に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。クラフト化マウス脾細胞に、２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化12】

をＳＱＺロードし、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と３７℃で４時間インキュベートし、ロードされたクラフト化マウス脾細胞を、腫瘍を有するマウスに後眼窩に注射した。２８日目（免疫付与の１２日後）に、腫瘍を切除し、それからの単一細胞懸濁液を作出した。単一細胞懸濁液を、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）について、フローサイトメトリーによって評価した。
結果

【0908】

図２６Ａに見られるように、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶで免疫したマウスは、免疫付与の１２日後（すなわち、腫瘍移植の２８日後）に、対照マウス（処置なし）と比較して、腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージの４４．７倍の増加を有していた。Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶ処置動物では、これらのＣＤ８＋ Ｔ細胞の大部分が、四量体染色によって決定されるように、Ｅ７抗原に対して特異的であった（ＣＤ８α＋集団の８７．２±６．０％）（図２６Ｂ）。腫瘍中のＥ７四量体染色に対して陽性の細胞のパーセンテージも定量した（図２６Ｃ）。これは、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶによる免疫付与が、処置なしの群との比較において、免疫付与の１２日後の腫瘍微小環境中のＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の存在を有意に増加させたことを実証する（７６５倍の増加）。図２６Ｄおよび２６Ｅに示すように、Ｅ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞のこの増加は、腫瘍量に対して正規化した場合にも観察された。これらのデータは、ＴＣ－１マウス腫瘍モデルにおけるＭ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶによる免疫付与が、腫瘍に浸潤するＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の有意な増加をもたらしたことを実証する。腫瘍体積の減少（図２６Ｆ）と連動したＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加（図２６Ａ～Ｅ）は、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶが、Ｅ７特異的エフェクターＣＤ８＋ Ｔ細胞を増やすことによって、腫瘍負荷を低下させたことを裏付けた。
（実施例２７）

【0909】

モデル抗原（Ｏｖａ）で処理されたマウス脾細胞が、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）（オボアルブミンのＣＤ８拘束性エピトープ）の直接提示によるｉｎ ｖｉｖｏでのＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を刺激するかどうかを実証するために、ＭＨＣ－Ｉ －／－マウスをレシピエントとして使用して、ＯＶＡでＳＱＺ処理マウス脾細胞による直接提示の検討を可能にするためにレピシエントマウスのプロフェッショナルＡＰＣへの抗原のハンドオフを分断した。
方法
０日目に、ＯＴ－Ｉ Ｔ細胞を、免疫磁気分離によって、雌ＯＴ－Ｉマウスの脾細胞から単離した。単離したＯＴ－Ｉ Ｔ細胞を、ＣＦＳＥで染色した後、雌レピシエントマウス（ＷＴまたはＭＨＣ－Ｉ －／－）に後眼窩に注射した（２．５×１０^６個細胞／マウス）。次に、脾細胞を、雌ＣＤ４５．１ Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。クラフト化マウス脾細胞に、Ｏｖａ（４００μｇ／ｍＬ）をＳＱＺロードし、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と３７℃で４時間インキュベートし、ロードされたクラフト化マウス脾細胞を、レピシエントマウスに後眼窩に注射した（５×１０^６個細胞／マウス）。３日目に、リンパ節および脾臓をレシピエントマウスから切除し、フローサイトメトリーおよびＣＦＳＥ染色を使用して、増殖について評価した。
結果

【0910】

図２７Ａ～Ｄに示すように、オボアルブミンをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞を受けたＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ＷＴ）マウスおよびＭＨＣ－Ｉ－／－マウスは両方とも、ロバストなＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖を示し、増殖指数は、脾臓およびリンパ節の両方において４～６の範囲であった。オボアルブミンとともにインキュベートされた、クラフト化マウス脾細胞を受けたＷＴマウスおよびＭＨＣ－Ｉ－／－マウス（インキュベーション対照、ＳＱＺ処理なし）は、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖がほとんどまたはまったくなく、ＳＱＺプロセスが、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ８＋ Ｔ細胞への直接提示のために、クラフト化マウス脾細胞に抗原を導入するために必要であることを実証した。ＯＴ－Ｉ Ｔ細胞のみを受けたマウス（非刺激養子移入ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞についての対照）は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を誘導しなかった。これらの結果は、ＭＨＣ－Ｉ提示が、オボアルブミンで処理された移入されたクラフト化マウス脾細胞に拘束され、その後のＣＤ８＋ Ｔ細胞応答において役割を果たすレシピエント抗原提示細胞（ＡＰＣ）への抗原ハンドオフの可能性を排除することを実証する。ＭＨＣ－Ｉ－／－レシピエントにおけるＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖は、ＳＱＺ処理されたクラフト化マウス脾細胞が抗原を直接提示することを実証する。
（実施例２８）

【0911】

この研究は、共培養において抗原特異的Ｔ細胞の活性化を評価することによって、クラフト化マウス脾細胞内の４つの細胞型（Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および単球）の抗原提示能力を調べた。
方法

【0912】

０日目に、脾細胞を、雌ＣＤ４５．１ Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。次いで、クラフト化マウス脾細胞を、Ｏｖａ（４００μｇ／ｍＬ）あり、またはなしでＳＱＺ処理し、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と３７℃で４時間インキュベートした。４時間後、ＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞のアリコート（５×１０^６個細胞／マウス）を、さまざまな免疫磁気分離に供して、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の精製されたサブセットを得た。次に、ＯＴ－Ｉ Ｔ細胞を、免疫磁気分離によって、雌ＯＴ－Ｉマウスの脾細胞から単離した。ＯＴ－Ｉ（１×１０^５個細胞／ウェル）を、クラフト化マウス脾細胞または代表的な個々の細胞サブセット（ＯＶＡあり、またはなしでＳＱＺ処理された）のいずれかと共培養し、３７℃で２４時間インキュベートした。陽性対照（ペプチドスパイク）のために、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）ペプチド（ＯＶＡ_{２５７～２６４}－１μｇ／ｍＬ）を、ＯＴ－Ｉおよび処理されていないクラフト化マウス脾細胞を有する懸濁液に添加し、共培養の全期間にわたって保持した。次いで、Ｔ細胞活性化マーカーのＣＤ６９を、フローサイトメトリーによって評価した。
結果

【0913】

このマーカーの表面発現が、ＭＨＣ－Ｉの状況において提示されたペプチド抗原によるＴ細胞受容体の会合後に増加するので、細胞表面のＣＤ６９発現を、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の活性化の読み取りとして使用した。図２８Ａ～２８Ｅに示すように、クラフト化マウス脾細胞内の４つの主要な細胞型のすべて（Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および単球）は、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞に抗原を直接提示することができた。これらのデータは、これらの細胞型のそれぞれが、抗原提示細胞として機能し得ることを示す。ＯｖａでＳＱＺ処理され、ＣｐＧ１８２６を用いて成熟させたすべての細胞型は、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞に抗原を提示し、陽性対照（ペプチドスパイク）と同等のレベルでＯＴ－Ｉ Ｔ細胞の活性化を誘導した。
（実施例２９）

【0914】

この研究は、蛍光標識されたＨＰＶ Ｅ６もしくはＥ７ ＳＬＰ、またはそれらの組合せを、ＳＱＺ処理により細胞内で送達することができるか、および任意の送達されたＳＬＰが、ヒトＰＢＭＣのサイトゾルに局在化するかどうかを決定した。
方法

【0915】

３人の異なるＨＬＡ－Ａ^＊０２＋ドナー由来のヒトＰＢＭＣに、氷上で、５０μＭのＦＡＭ標識Ｅ６、Ｅ７またはＥ６＋Ｅ７の組合せをＳＱＺロードし、細胞を、ＡＦ６４７コンジュゲート抗ＣＤ４５抗体（形質膜マーカー）染料、およびＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２染色（核染色）で共染色した。ＲＰＭＩのみでＳＱＺ処理されたヒトＰＢＭＣは、陰性対照としての機能を果たした。ペプチドの局在化を、共焦点イメージングによって決定した。具体的には、任意のＦＡＭ－Ｅ６および／またはＦＡＭ－Ｅ７ ＳＬＰの局在化を、走査ディスク共焦点顕微鏡において可視化した。Ｚ－ｓｔａｃｋ分析を細胞について行って、ＦＡＭ－Ｅ６および／またはＦＡＭ－Ｅ７ ＳＬＰの正確な局在化を決定した。ライン走査トレースを、それぞれの試料のＺ－ｓｔａｃｋの中央からの共焦点スライスにおいて行い（すなわち、そのようなスライス画像は、細胞の中央を表す）、これらのスライスを分析して、ＳＱＺ処理後のＳＬＰの任意の細胞内送達を確認した。ライン走査トレースのために、明らかなＦＡＭシグナルを有する細胞を分析のために選択し、ここでライン走査を、蛍光画像に表示された白い線に沿って、細胞の中心（白色の円）を通じてトレースした（図２９Ａ～２９Ｆ、上パネル）。
結果

【0916】

ＳＱＺ処理の後、調べた光学スライス内において、ＦＡＭ蛍光シグナルが形質膜によって取り囲まれていることが観察されたが（図２９Ｂ、２９Ｄ、２９Ｆ、上の３つのパネル）、ＦＡＭシグナルは陰性対照において検出されなかった（図２９Ａ、２９Ｃ、２９Ｅ、上の３つのパネル）。ほとんどのＳＱＺロードされた細胞は、広視野画像においてさまざまな強度の可視の細胞内ＳＬＰを表示し、しかしながら、二量体のシグナルは、顕微鏡のダイナミックレンジに起因して可視化することは困難である可能性があった。ライン走査トレースは、ＦＡＭ蛍光シグナルの大部分が、形質膜シグナルだけを示す陰性対照のトレースと比較する場合に（図２９Ａ、２９Ｃ、２９Ｅ、下のパネル）、形質膜シグナルの範囲内で検出され（図２９Ｂ、２９Ｄ、２９Ｆ、下のパネル）、ＦＡＭ－Ｅ６およびＦＡＭ－Ｅ７ ＳＬＰがＳＱＺ処理後に細胞内であったことを示した。これは、ＳＱＺ処理がそれぞれのＳＬＰをサイトゾルにロードしたことを示すが、核と共局在する一部のシグナルを検出した（示さない）。留意すべきことには、ＦＡＭ分子は、典型的には、ＭＨＣ－Ｉにおける提示のためのＳＬＰのプロテアソームのプロセシングの間に免疫原性エピトープから切断される。そのため、生システムにおいて、ＦＡＭ標識ＳＬＰからのＦＡＭシグナルは、これがプロセシングされ、ＭＨＣ－Ｉに提示されるので、ＳＬＰから分断される。しかしながら、これらの実験では、ヒトＰＢＭＣを固定し、次いでＳＱＺ処理の直後に染色して、ＦＡＭ標識ＳＬＰのそのようなプロセシングを最小化した。この共焦点イメージング研究は、ＳＱＺ処理による蛍光標識されたＥ６およびＥ７ ＳＬＰ（ＦＡＭ－Ｅ６およびＦＡＭ－Ｅ７）のヒトＰＢＭＣへの細胞内送達を確認する。
（実施例３０）

【0917】

マウスＢ細胞にロードされた疾患関連抗原が、抗原特異的Ｔ細胞の増殖をもたらすことができるかを決定するために、ｇｐ１００をＳＱＺ処理によってＢ細胞にロードし、ｇｐ１００特異的Ｔ細胞（ｐｍｅｌ ＣＤ８^＋Ｔ細胞）の増殖を、フローサイトメトリーによって分析した。
方法

【0918】

マウスＢ細胞を、非処置のままにしたか（ＮＣ）、ｇｐ１００合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）と室温でインキュベートしたか（インキュベーション対照）、ｇｐ１００ ＳＬＰの存在下でのＳＱＺ処理したか（圧搾）、または短鎖ペプチドで３７℃で１時間パルスした（ＰＰ）。Ｂ細胞（５×１０^６個細胞／マウス）を、３μｇのＬＰＳと共注射して、２．５×１０^６個のＣＦＳＥ標識ｐｍｅｌ ＣＤ８^＋Ｔ細胞も受けているマウスに免疫した。増殖について測定するために、ｐｍｅｌ ＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＦＳＥ希釈物を、免疫付与の３日後に評価した（群あたりｎ＝５匹のマウス）。
結果

【0919】

ＳＱＺ処理によってｇｐ１００をロードされたマウスＢ細胞は、増加したＣＦＳＥ希釈物（図３０の左パネル）およびその後の増殖指数の定量（図３０の右パネル）によって示されるように、ｇｐ１００特異的Ｔ細胞の増殖の有意な増加をもたらした。ＳＱＺロードされたＢ細胞は、非処置対照、ペプチドパルス対照またはエンドサイトーシス対照と比べて、増殖のほぼ５倍の増加を有していた（図３０の右パネル）。これらのデータは、抗原のＢ細胞へのＳＱＺロードが、ＳＬＰまたは最小エピトープとＢ細胞をインキュベートするよりも、抗原特異的Ｔ細胞の増殖の有意に効率的な刺激をもたらすことを示す。
（実施例３１）

【0920】

合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）をＳＱＺロードされた脾細胞が、防御免疫応答をプライムすることができるかを決定するために、クラフト化脾細胞を、Ｅ７合成長鎖ペプチド（Ｅ７ ＳＬＰ）の存在下でＳＱＺ処理し、その後、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７を発現する腫瘍細胞系のＴＣ－１の移植の１４日前および７日前の両方に、マウスに投与した。
方法

【0921】

脾細胞を、雌ＣＤ４５．１ Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。次いで、クラフト化脾細胞を、ＨＰＶ１６ Ｅ７に対するＣＤ８エピトープを含有するＳＬＰの存在下でＳＱＺ処理した。マウスを、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化脾細胞で、－１４日目にプライムし、－７日目にブーストした。０日目に、マウスに、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７陽性ＴＣ－１腫瘍細胞系を右側腹部に皮下移植した。式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、非処置群（コホートＩおよびコホートＩＩ）およびＨＰＶ Ｅ７でロードされたクラフト化脾細胞で処置された群からのマウスの間で比較した。すべての免疫されたマウスは、６０日間腫瘍なしのままであり、その後、左側腹部に皮下移植されたＴＣ－１腫瘍細胞を再チャレンジし、左側腹部に腫瘍細胞が移植された非処置動物の異なるコホートと比較した。
結果

【0922】

図３１に示すように、ＳＱＺロードされたクラフト化脾細胞で処置されたすべてのマウス（１５／１５）は、原発腫瘍のチャレンジから保護されたが、非処置動物は、常に腫瘍を発生した。再チャレンジにおいて、ＳＱＺロードされたクラフト化脾細胞で処置された１１／１５のマウスは、腫瘍成長から完全に保護され、これは、保護免疫記憶の形成と一致した。
（実施例３２）

【0923】

さまざまな用量のＥ７ ＳＬＰをロードされたクラフト化脾細胞を使用するブーストの効果を調べるために、Ｅ７合成長鎖ペプチドと共に圧搾した。マウスに、移植後１０日目のプライムのみの免疫付与として、または１０、１７および２４日目に投与されるプライム／ブースト／ブーストレジメンとして、示された用量のＥ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされた圧搾された脾細胞を投与した。
方法

【0924】

０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目（プライム）に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせてより良好にヒトＰＢＭＣを模倣し、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。クラフト化脾細胞に、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化13】

＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μＭの狭窄、室温）を介してロードし、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と４時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）、脾細胞（１Ｍ個細胞／マウス）または脾細胞（１Ｍ個細胞／マウス）＋ＣｐＧ（１μｇ／マウス）のいずれかを１０日目に後眼窩に注射した。

【0925】

ブースター免疫付与の効果を調べるために、治療的に免疫されたマウスのコホートは、１７日目および２４日目（プライム／ブースト／ブースト）に、追加用量のＳＱＺロードされた脾細胞を受けた。式（（長さ×幅２）／２）によって測定される腫瘍成長を、５０日目まで、非処置マウスおよび示された処置群の間で比較した。
結果

【0926】

図３２に示すように、１０日目に投与された単一用量の０．１×１０^６個のＳＱＺロードされた脾細胞は、免疫応答のプライミングにおいて中程度の有効性を有していたが、しかしながら、追加用量の０．１×１０^６個細胞によるブーストは、治療有効性を有意に増強した。一方、１．０×１０^６個細胞の投薬は、単一プライミング用量のプライムとして、またはプライムおよびブーストレジメン下のいずれかで投与された場合に、腫瘍成長を遅延させた。
（実施例３３）

【0927】

治療的環境において腫瘍成長阻害をもたらす抗原をロードされた脾細胞の能力に対する成熟＋／－アジュバントの共注射の影響を決定するために、脾細胞を、アジュバントを用いて成熟させるか、アジュバントと共注射するか、またはアジュバントを用いて成熟させ、アジュバントと共注射し、ＨＰＶ Ｅ７を発現するＴＣ１腫瘍モデルにおいて試験し、腫瘍の面積および生存を時間に対してプロットした。
方法

【0928】

０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目（プライム）に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせてより良好にヒトＰＢＭＣを模倣し、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。クラフト化脾細胞に、事前に複合体を形成させた２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化14】

＋２０μＭのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をＳＱＺ（６０ｐｓｉ；４μＭの狭窄、室温）を介してロードし、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と４時間インキュベートした。雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレシピエントマウス（１０匹のマウス／群）に、１００μＬのビヒクル（ＰＢＳ）、脾細胞（１Ｍ個細胞／マウス）または脾細胞＋ＣｐＧ（１μｇ／マウス）のいずれかを１０日目に後眼窩に注射した。ＴＣ－１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、６０日間、非処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。
結果

【0929】

式（（長さ×幅^２）／２）によって測定される腫瘍成長を、非処置群（脾細胞なし）およびアジュバント単独（ＣｐＧ）、脾細胞または脾細胞＋アジュバントを共注射で処置された群からのマウスの間で比較した。図３３ＡおよびＢに示すように、非処置動物およびＣｐＧ単独で処置された動物の腫瘍成長の間に観察可能な差はなかったが（それぞれ２８日および３２日の生存期間中央値）、Ｅ７をロードされた未成熟脾細胞についての腫瘍成長の速度のわずかな阻害があった（３５日の生存期間中央値）。しかしながら、成熟され、ロードされた脾細胞を、ＣｐＧの共注射あり、またはなしのいずれかで受けた群は、腫瘍退縮をもたらし、腫瘍は、研究の過程にわたってそれらの初期の最大に達しなかった（それぞれ、５３日および５６日の生存期間中央値）。これらのデータは、ＳＱＺによってロードされ、アジュバントを用いて成熟させた脾細胞（アジュバントの共注射あり、またはなし）が、ＨＰＶ関連がんの治療モデルにおいて腫瘍退縮を誘導することができることを示す。
（実施例３４）

【0930】

マウス脾細胞内に含有される主な細胞サブセットによるＳＱＺ送達抗原のＭＨＣ－Ｉ提示を評価するために、クラフト化マウス脾細胞に、ＯＶＡをＳＱＺロードし、その後、サブセットにおける提示を、２５－Ｄ１．１６抗体を使用して、フローサイトメトリーを介して分析した。２５－Ｄ１．１６抗体は、それがオボアルブミン由来の免疫優性ＣＤ８^＋Ｔ細胞エピトープ（ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４））を提示する場合にのみ、マウス細胞の表面上のＨ－２ｋｂ（ＭＨＣ－Ｉ）に特異的に結合する。
方法

【0931】

脾細胞を、雌ＣＤ４５．１ Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。次いで、クラフト化脾細胞を、積み荷なしでＳＱＺ処理し（ＳＱＺのみ）、またはオボアルブミンタンパク質の存在下でＳＱＺ処理した（ＳＱＺ＋ＯＶＡ）。示された時点で、細胞を、それぞれ示された細胞型についてＨ－２ｋｂにおけるＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号５４）の提示を評価するために２５－Ｄ１．１６抗体を含む抗体パネルで染色し、フローサイトメトリーによって分析した（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および単球）。
結果

【0932】

図３４に示すように、ＯＶＡの存在下でＳＱＺ処理された細胞について、抗原提示は、単球、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞について、２時間および４時間の時点で検出可能であった。これは、ＯＶＡでＳＱＺ処理されなかった細胞（ＳＱＺのみ）と比べて、２５－Ｄ１．１６抗体染色からのシグナルの増加からの証拠であった。ＳＱＺ処理の２時間および４時間後、≧４０％の蛍光強度の増加が、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞について検出可能であった。単球について、蛍光強度の増加は、ＳＱＺ処理の２時間および４時間後、≧１０％であった。
（実施例３５）

【0933】

腫瘍抗原（ＨＰＶ１６ Ｅ７）で処理されたマウス脾細胞がＥ７特異的Ｔ細胞の増殖を刺激するかどうかを実証するために、マウスを、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞で免疫し、抗原の再刺激における内因性Ｔ細胞応答を、細胞内サイトカイン染色によって測定した。
方法

【0934】

脾細胞を、雌ＣＤ４５．１ Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。クラフト化マウス脾細胞に、Ｅ７ ＳＬＰ（２０μＭ）をＳＱＺロードし、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と３７℃で４時間インキュベートし、ロードされたクラフト化マウス脾細胞を、マウスあたり１００万個、２５万個または１０万個細胞で、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊレピシエントマウスに後眼窩に注射した。対照マウスは非処置のままにした。免疫付与の７日後、脾臓をレシピエントマウスから収集し、ｅｘ ｖｉｖｏで、Ｅ７最小エピトープで再刺激した。細胞内サイトカイン染色を行って、Ｅ７認識に応答してインターフェロン－γを産生する内因性ＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセンテージを決定した。
結果

【0935】

図３５に示すように、１００万個のＥ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞を受けたマウスは、レシピエントマウスの脾臓がｅｘ ｖｉｖｏでＥ７最小エピトープで刺激された場合に、ＩＦＮ－γ分泌の有意な誘導によって示されるように、脾臓におけるロバストなＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を示した。２５万個のＥ７ ＳＬＰをＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞を受けたマウスも、レシピエントマウスの脾臓がｅｘ ｖｉｖｏでＥ７最小エピトープで刺激された場合に、ＩＦＮ－γの観察可能な誘導によって示されるように、脾臓におけるＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を示した。対照的に、非処置動物は、脾臓がｅｘ ｖｉｖｏでＥ７最小エピトープで刺激された場合に、ＩＦＮ－γ分泌の欠如によって示されるように、任意の観察可能なＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を示さなかった。
（実施例３６）

【0936】

この研究の目的は、対照細胞と比較して、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶまたはペプチドワクチン（Ｅ７ ＳＬＰ＋ＣｐＧ）による免疫付与の１２日後のＴＣ－１腫瘍の腫瘍微小環境においてＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞を定量すること、および腫瘍成長モデルにおいてＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞を腫瘍のクリアランスと相互に関連付けることであった。
方法

【0937】

０日目に、ＴＣ－１細胞（１００μＬのＰＢＳ中５０ｋ個／マウス）を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（７匹のマウス／群）の右後側腹部に皮下注射した。１６日目に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。クラフト化マウス脾細胞に、２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化15】

をＳＱＺロードし、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と３７℃で４時間インキュベートし、ロードされたクラフト化マウス脾細胞を、腫瘍を有するマウスにＩＶ（後眼窩）注射した。ペプチドワクチンを受けているマウスについて、１５０μｇのＥ７ ＳＬＰおよび５０μｇのＣｐＧを、１６日目に、レシピエントマウスに（マウスごとに）皮下注射した。対照マウスは非処置のままにした。

【0938】

２８日目（免疫付与の１２日後）に、腫瘍を切除し、それからの単一細胞懸濁液を作出した。単一細胞懸濁液を、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）について、フローサイトメトリーによって評価した。
結果

【0939】

図３６Ａに示すように、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶで免疫されたマウスは、免疫付与の１２日後（すなわち、腫瘍移植の２８日後）にペプチドワクチンを受けているマウスまたは対照マウスと比較して、腫瘍微小環境内の生細胞の中でＣＤ４５＋白血球の有意な増加を有していた。腫瘍中のこれらの白血球のうち、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶで免疫されたマウスは、対照マウス（＜５％）およびペプチドワクチンを受けているマウス（＜２０％）と比較して、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の有意により高いパーセンテージ（＞３０％）を有していた（図３６Ｂ）。さらにまた、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶ処置動物において、これらのＣＤ８＋ Ｔ細胞の大部分（＞８０％）は、対照マウス（＜５％）およびペプチドワクチンを受けているマウス（＜４０％）と比較して、四量体染色によって決定されるように、Ｅ７抗原に特異的であった（図３６Ｃ）。図３６Ｄに見られるように、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶの投与は、腫瘍成長が阻害されなかった、非処置マウスまたはペプチドワクチンで処置されたマウスと比較して、免疫付与の４日後に開始する腫瘍体積の退縮をもたらした。まとめると、これらのデータは、ＴＣ－１マウス腫瘍モデルにおけるＭ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶによる免疫付与が、腫瘍に浸潤するＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の有意な増加をもたらしたことを実証する。腫瘍体積の減少（図３６Ｄ）と連動したＥ７特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加（図３６Ａ～Ｃ）は、Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶが、Ｅ７特異的エフェクターＣＤ８＋ Ｔ細胞を増やすことによって、腫瘍負荷を低下させたことを裏付けた。
（実施例３７）

【0940】

本研究の目的は、ヒトＰＢＭＣのＳＱＺロードのスケーラビリティを実証することである。ヒトＰＢＭＣを、製造スケールで、デキストランの存在下でＳＱＺ処理に供し、ペイロード送達およびＰＢＭＣの生存率を評価した。
方法

【0941】

健康なＨＬＡ－Ａ２＋ドナーの末梢血を含有するＬｅｕｋｏｐａｋ（ＨＥＭＡＣＡＲＥ（登録商標））を得、ＰＢＭＣを水簸を介して単離した。得られたＰＢＭＣを、１２０ｍＬのＲＰＭＩに再懸濁させて、７．２０×１０^７個細胞／ｍＬの濃度のＰＢＭＣ懸濁液を得た。次いで、ＲＢＣ懸濁液を、蛍光デキストラン（３ｋＤａのＤｅｘｔｒａ ＡＦ６８０）の存在下、（ｉ）インキュベートしたか、または（ｉｉ）ＳＱＺ処理（５０ｐｓｉ、４μｍ直径の狭窄、２～８℃）に供した。ＳＱＺ処理を、その後、ＳＱＺ処理された細胞を１０００ｍＬのＲＰＭＩに入れることで、クエンチした。インキュベーションまたはＳＱＺ処理の２時間後、生存率および蛍光デキストラン送達を、ＰＢＭＣについて、ならびにＢ細胞（ＣＤ２０＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）内の各細胞型について、フローサイトメトリーを介して測定した。
結果

【0942】

図３７Ａは、この実施例に記載の製造環境においてＳＱＺ処理された細胞の数が、実験環境においてＳＱＺ処理された細胞の数よりも３桁よりも高いことを示す。図３７Ｂに示すように、インキュベーション対照およびＳＱＺ処理されたＰＢＭＣの間の生存率に有意差はなく、両方とも８０％を超える生存率を記録した。図３７Ｃに示すように、３ｋＤａのデキストランを、すべてのＰＢＭＣの約８０％、およびそれぞれの細胞型の少なくとも６０％に、ＳＱＺ処理を介して送達した。９０％を上回るＣＤ１４＋単球に、ＳＱＺ処理後、デキストランをロードした。対照的に、デキストランとともにインキュベートされたＰＢＭＣの１０％未満が任意の送達を示した。まとめると、結果は、ＳＱＺが媒介する送達を、製造スケールで使用して、生存率の任意の有意な喪失なく、ＰＢＭＣのすべての構成細胞型に効率的にペイロードを送達することができることを示す。
（実施例３８）

【0943】

ＳＱＺ送達によって導入されるｍＲＮＡがＰＢＭＣサブセットにおいて翻訳および発現され得るかどうかを決定するために、ヒトＰＢＭＣを、ＣＤ８６またはＩＦＮα２をコードするｍＲＮＡの存在下でＳＱＺ処理に供し、ＣＤ８６またはＩＦＮα２のタンパク質発現を、フローサイトメトリーまたは細胞内染色によって評価した。
方法

【0944】

ヒトＰＢＭＣを、非処置のままにしたか（ＮＣ）、あるいはＣＤ８６もしくはＩＦＮα２（ＳＱＺ）をコードするｍＲＮＡ、または空のペイロード（空ＳＱＺ）の存在下、ＳＱＺ処理に供した。ＳＱＺロードの後、ＣＤ８６をコードするｍＲＮＡをロードされたＰＢＭＣを、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）の構成細胞型において、フローサイトメトリーによって、ＣＤ８６表面発現について分析した。ＩＦＮα２をコードするｍＲＮＡでＳＱＺ処理されたＰＢＭＣについて、ロードされたＰＢＭＣを、ＧＯＬＧＩＰＬＵＧ／ＧＯＬＧＩＳＴＯＰと４時間インキュベートして、分泌を停止させ、その後、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）の構成細胞型において、細胞内染色によって、ＩＦＮα２発現について分析した。
結果

【0945】

図３８Ａおよび３８Ｂに示すように、すべてのＰＢＭＣのサブセット集団は、非処置ＰＢＭＣ、または空ペイロードをＳＱＺ処理された対照ＰＢＭＣと比較して、それぞれのコードするｍＲＮＡの送達後、それぞれの細胞の少なくとも約４０％で、ＣＤ８６またはＩＦＮα２の発現を示した。ＣＤ１４＋単球は、本質的にＣＤ８６を発現する。結果は、コードされたタンパク質の効率的な発現のために、ｍＲＮＡをＳＱＺ送達によってＰＢＭＣに導入することができることを示した。
（実施例３９）

【0946】

ＳＱＺ送達によって導入される候補ｍＲＮＡの発現の度合いおよび期間の変動を決定するために、ヒトＰＢＭＣに、ＣＤ８６または４－１ＢＢＬをコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードし、ＣＤ８６または４－１ＢＢＬの対応するタンパク質発現を、フローサイトメトリーによって評価した。
方法

【0947】

ヒトＰＢＭＣを、ＣＤ８６もしくはＩＦＮα２をコードするｍＲＮＡ（ＳＱＺ）、または空のペイロード（空ＳＱＺ）の存在下、ＳＱＺ処理に供した。ＳＱＺロードの後、それぞれのｍＲＮＡをロードされたＰＢＭＣを、３７℃で４時間インキュベートし、それぞれのコードされたタンパク質の発現を、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）の構成細胞型において、２４時間ごとにフローサイトメトリーによって測定した。
結果

【0948】

図３９Ａおよび３９Ｂは、それぞれのｍＲＮＡをＳＱＺロードされたＰＢＭＣ内のＴ細胞サブセットの集団におけるＣＤ８６および４－１ＢＢＬの発現を示す。図３９Ａに示すように、ＣＤ８６をコードするｍＲＮＡをロードされたＰＢＭＣ内のＴ細胞サブセットは、ＳＱＺ処理の４時間～４８時間後に、対照と比較して、ＣＤ８６＋細胞のパーセンテージの有意な増加を示し、ＣＤ８６＋細胞のパーセンテージは、ＳＱＺ処理の７２時間後にのみわずかに減少した。図３９Ｂに示すように、４－１ＢＢＬをコードするｍＲＮＡをロードされたＰＢＭＣ内のＴ細胞サブセットは、ＳＱＺ処理の４時間後に、４－１ＢＢＬ＋細胞のパーセンテージの中程度の増加を示し、４－１ＢＢＬ＋－陽性細胞のパーセンテージは、インキュベーションの２４時間後にのみ著しく減少した。結果は、異なる候補ｍＲＮＡのＳＱＺ送達が、コードされるタンパク質の発現の異なる度合いおよび期間をもたらすことができることを示した。
（実施例４０）

【0949】

ｍＲＮＡの翻訳を増強する改変が、ＳＱＺ送達によって導入された候補ｍＲＮＡの発現に影響を与えるかどうかを決定するために、ヒトＰＢＭＣに、非改変ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡ、または５－メトキシウリジン骨格（５ｍｏＵ）を有するＧＦＰをコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードし、対応するｅＧＦＰ発現を、フローサイトメトリーによって評価した。
方法

【0950】

ヒトＰＢＭＣを、０～２００μｇ／ｍＬの非改変ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡ、または５ｍｏＵ骨格を有するＧＦＰをコードするｍＲＮＡの存在下、ＳＱＺ処理に供した。ＳＱＺロードの後、それぞれのｍＲＮＡをロードされたＰＢＭＣを、３７℃で４時間インキュベートし、ｅＧＦＰ発現を、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）の構成細胞型において、フローサイトメトリーを介して平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定した。
結果

【0951】

図４０は、非改変ｅＧＦＰ ｍＲＮＡまたは５ｍｏＵで改変されたｅＧＦＰ ｍＲＮＡをＳＱＺロードされたＰＢＭＣ内のＴ細胞サブセットの集団におけるｅＧＦＰの発現を示す。図４０に示すように、非改変ｅＧＦＰ ｍＲＮＡをロードされたＰＢＭＣ内のＴ細胞サブセットは、５ｍｏＵで改変されたｅＧＦＰ ｍＲＮＡをロードされたものと比較して、より高いＭＦＩを示した。結果は、５ｍｏＵ ＲＮＡ改変が、ＳＱＺ処理によって送達されたｍＲＮＡの翻訳の増強をもたらさなかったことを示した。
（実施例４１）

【0952】

ＳＱＺ送達によって導入されたｍＲＮＡによってコードされるサイトカインがＰＢＭＣサブセットにおいて翻訳、発現および分泌され得るかどうかを決定するために、ヒトＰＢＭＣに、それぞれＩＬ－１２、ＩＦＮαまたはＩＬ－２をコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードし、対応するＩＬ－１２、ＩＦＮαまたはＩＬ－２の分泌を、ＥＬＩＳＡによって評価した。
方法

【0953】

ヒトＰＢＭＣを、非処置のままにしたか（ＮＣ）、あるいはＩＬ－１２をコードするｍＲＮＡ（５０μｇ／ｍＬのＩＬ－１２ａおよび５０μｇ／ｍＬのＩＬ－１２ｂ ｍＲＮＡ）、ＩＦＮαをコードするｍＲＮＡ（１００μｇ／ｍＬ）もしくはＩＬ－２をコードするｍＲＮＡ（ＳＱＺ）（１００μｇ／ｍＬ）、または空のペイロード（空ＳＱＺ）の存在下、ＳＱＺ処理に供した。ＳＱＺロードの後、サイトカインをコードするｍＲＮＡをロードされたそれぞれのＰＢＭＣを、次いで、３７℃で４時間インキュベートし、その後、上清を、ＥＬＩＳＡによってアッセイして、それぞれのサイトカインの発現および分泌を決定した。
結果

【0954】

図４１に示すように、サイトカインをコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードされたＰＢＭＣは、ＩＬ－１２、ＩＦＮαまたはＩＬ－２のそれぞれの有意な発現および分泌を示した。結果は、コードされたサイトカインの効率的な発現および分泌のために、ｍＲＮＡをＳＱＺ送達によってＰＢＭＣに導入することができることを示した。
（実施例４２）

【0955】

図４２Ａに図示するように、抗原提示細胞（シグナル１）によるＴ細胞受容体の会合に加えて、免疫応答の活性化は、共刺激受容体の活性化（シグナル２）およびサイトカイン受容体の結合（シグナル３）などの追加シグナルによって増強される。ＳＱＺ送達によって導入されるｍＲＮＡが、これらの増強シグナルのためのタンパク質エフェクターに翻訳および発現され得るかどうかを決定するために、ヒトＰＢＭＣに、ＣＤ７０もしくは４－１ＢＢＬをコードするｍＲＮＡ（シグナル２のため）および／またはＩＦＮα２もしくはＩＬ－２をコードするｍＲＮＡ（シグナル３）をそれぞれＳＱＺロードした。対応するＣＤ７０または４－１ＢＢＬの発現を、フローサイトメトリーによって測定したが、対応するＩＦＮα２またはＩＬ－２の分泌は、ＥＬＩＳＡを介して培養上清から測定した。
方法

【0956】

ヒトＰＢＭＣを、非処置のままにしたか（ＮＣ）、またはＣＤ７０、４－１ＢＢＬ、ＩＦＮα２もしくはＩＬ－２をコードするそれぞれのｍＲＮＡの存在下、ＳＱＺ処理に供した。ＣＤ７０または４－１ＢＢＬをコードするｍＲＮＡによるＳＱＺ処理の後、それぞれのｍＲＮＡをロードされたＰＢＭＣを、３７℃で４時間インキュベートし、それぞれのコードされたタンパク質ＣＤ７０または４－１ＢＢＬの発現を、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）の構成細胞型において、２４時間ごとにフローサイトメトリーによって測定した。ＩＦＮα２またはＩＬ－２をコードするｍＲＮＡによるＳＱＺロードの後、それぞれのｍＲＮＡをロードされたＰＢＭＣを、次いで、３７℃で４時間インキュベートし、その後、上清を、最長で２４時間までの時点で採取し、ＥＬＩＳＡによってアッセイして、それぞれのサイトカインＩＦＮα２またはＩＬ－２の発現および分泌を決定した。
結果

【0957】

図４２Ｂに示すように、すべてのロードされたＰＢＭＣサブセットの集団は、フローサイトメトリーによってアッセイされた平均蛍光強度の増加によって示されように、それぞれのコードするｍＲＮＡの送達後、ＣＤ７０または４－１ＢＢＬの発現をそれぞれ示した。ＣＤ７０または４－１ＢＢＬのそれぞれの発現は、少なくとも４８時間維持された。ＰＢＭＣサブセットの中で、単球は、ＣＤ７０または４－１ＢＢＬをコードするＳＱＺ送達されたｍＲＮＡのより高い発現を示した。図４２Ｃに示すように、サイトカインをコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードされたＰＢＭＣは、ＩＦＮα２またはＩＬ－２のそれぞれの有意な発現および分泌を示し、発現および分泌は、ＳＱＺ処理後少なくとも２４時間維持された。結果は、免疫活性化においてシグナルの増強を提供する分子の効率的な発現および分泌のために、ｍＲＮＡをＳＱＺ送達によってＰＢＭＣに導入することができることを示した。
（実施例４３）

【0958】

図４２Ａに図示するように、抗原提示細胞（シグナル１）によるＴ細胞受容体の会合に加えて、免疫応答の活性化は、共刺激受容体の活性化（シグナル２）およびサイトカイン受容体の結合（シグナル３）などの追加シグナルによって増強される。シグナル１の活性化がＳＱＺ送達によって導入されたｍＲＮＡの翻訳および発現に影響を与えるかどうかを決定するために、クラフト化マウス脾細胞に、抗原非依存性マイトジェンを誘導するシグナル１であるコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）の刺激あり、またはなしで、候補ｍＲＮＡ（ｅＧＦＰまたはＣＤ８６）をＳＱＺロードした。次いで、対応するｅＧＦＰおよびＣＤ８６の発現を、フローサイトメトリーによって測定した。
方法

【0959】

脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。クラフト化マウス脾細胞を、非刺激のままにしたか（ＣｏｎＡなし）、またはＳＱＺ処理の前もしくは後にＣｏｎＡで刺激した（ＳＱＺ前刺激またはＳＱＺ後刺激）。ＳＱＺが媒介する送達のために、クラフト化マウス脾細胞を、ｅＧＦＰもしくはＣＤ８６をコードするそれぞれのｍＲＮＡ（１００μｇ／ｍＬ）、または空のペイロード（空ＳＱＺ）の存在下、ＳＱＺ処理に供した。ｅＧＦＰまたはＣＤ８６をコードするｍＲＮＡによるＳＱＺ処理の後、それぞれのｍＲＮＡをロードされたクラフト化マウス脾細胞を、３７℃で４時間インキュベートし、それぞれのコードされたタンパク質ｅＧＦＰまたはＣＤ８６の発現を、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）の構成細胞型において、フローサイトメトリーによって測定した。
結果

【0960】

図４３Ａに示すように、ＣｏｎＡ刺激なし、またはＳＱＺロード後にＣｏｎＡによって刺激された、クラフト化マウス脾細胞は、フロー分析において、ＧＦＰ＋であるＴ細胞サブセットの１５．３％～１７．０％で、中程度のｅＧＦＰの翻訳および発現を示した。ＳＱＺロードの前のＣｏｎＡによるクラフト化マウス脾細胞の刺激は、フロー分析において、ＧＦＰ＋であるＴ細胞サブセットの９１．１％で、ｅＧＦＰの翻訳および発現を劇的に増加させた。同様に、図４３Ｂに示すように、ＣｏｎＡ刺激なしのクラフト化マウス脾細胞は、対照と比較して、Ｔ細胞サブセットの集団におけるＣＤ８６のＭＦＩの小さな増加によって実証されるように、中程度のＣＤ８６の翻訳および発現を示したが、ＳＱＺロードの前のＣｏｎＡによるクラフト化マウス脾細胞の刺激は、対照と比較して、Ｔ細胞サブセットの集団におけるＣＤ８６のＭＦＩの有意な増加によって実証されるように、ＣＤ８６の翻訳および発現を劇的に増加させた。これらの結果は、ＣｏｎＡ刺激が、ＳＱＺ処理によって送達される候補ｍＲＮＡの翻訳を増強することを示した。
（実施例４４）

【0961】

図４２Ａに図示するように、抗原提示細胞（シグナル１）によるＴ細胞受容体の会合に加えて、免疫応答の活性化は、共刺激受容体の活性化（シグナル２）およびサイトカイン受容体の結合（シグナル３）などの追加シグナルによって増強される。マウス細胞においてシグナル２およびシグナル３のエフェクターをコードするｍＲＮＡの発現有効性および動態を決定するために、クラフト化マウス脾細胞に、候補ｍＲＮＡ（シグナル２について、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＯＸ４０Ｌ；シグナル３について、ＩＬ－１２、ＩＬ－２およびＩＦＮα２）をＳＱＺロードした。対応するＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＯＸ４０Ｌの発現を、フローサイトメトリーによって測定したが、対応するＩＬ－１２、ＩＬ－２およびＩＦＮα２の分泌は、ＥＬＩＳＡを介して培養上清から測定した。
方法

【0962】

脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。ＳＱＺが媒介する送達のために、クラフト化マウス脾細胞を、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６もしくはＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、またはＩＬ－１２、ＩＬ－２およびＩＦＮα２をコードするｍＲＮＡ（すべて１００μｇ／ｍＬ）、あるいは空のペイロード（空ＳＱＺ）のそれぞれの存在下、ＳＱＺ処理に供した。シグナル２のエフェクターをコードするｍＲＮＡによるＳＱＺ処理の後、それぞれのｍＲＮＡをロードされたクラフト化マウス脾細胞を、３７℃で４時間インキュベートし、それぞれのコードされたタンパク質ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＯＸ４０Ｌの発現を、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）の構成細胞型において、４８時間、フローサイトメトリーによって測定した。シグナル２のエフェクターをコードするｍＲＮＡによるＳＱＺ処理の後、それぞれのｍＲＮＡをロードされたクラフト化マウス脾細胞を、３７℃で４時間インキュベートし、それぞれのコードされたタンパク質ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＯＸ４０Ｌの発現を、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）および単球（ＣＤ１４＋）の構成細胞型において、４８時間、フローサイトメトリーによって測定した。シグナル３のエフェクター（サイトカイン）をコードするｍＲＮＡによるＳＱＺ処理の後、それぞれのｍＲＮＡをロードされたクラフト化マウス脾細胞を、次いで、３７℃で４時間インキュベートし、その後、上清を、最長で４８時間までの時点で採取し、アッセイして、それぞれのサイトカインＩＬ－１２、ＩＬ－２およびＩＦＮα２の発現および分泌を決定した（図４４Ａ）。
結果

【0963】

図４４Ｂに示すように、シグナル２のエフェクター（ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはＯＸ４０Ｌ）をＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞は、それぞれのＭＦＩの、認識できる増加によって示されるように、それぞれのタンパク質の有意な翻訳および発現を示した。ＣＤ８６の発現は、ＳＱＺの少なくとも４８時間後まで持続することが観察され、ＣＤ７０の発現は、ＳＱＺの４８時間後に消失したが、ＣＤ８０およびＯＸ４０Ｋは、ＳＱＺの２４時間後に消失した。図４４Ｃに示すように、シグナル３のエフェクター（ＩＬ－１２、ＩＬ－２またはＩＦＮα２）をＳＱＺロードされたクラフト化マウス脾細胞は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて検出されるシグナルの、認識できる増加によって示されるように、それぞれのサイトカインの有意な発現および分泌を示した。ＩＬ－１２およびＩＬ－２の分泌は、ＳＱＺの４時間後に有意に誘導され、ＳＱＺの２４時間後にわずかに増加し、４８時間でわずかに徐々に減少した。対照的に、ＩＦＮα２の分泌は、ＳＱＺの４時間後～ＳＱＺの２４時間後に有意に増加し、ＳＱＺの４８時間後にさらに増加した。これらの結果は、シグナル２およびシグナル３のエフェクターをコードするｍＲＮＡが、ＳＱＺが媒介する細胞内送達後に効果的に翻訳および発現されたことを示した。しかしながら、これらのエフェクターの発現の期間および大きさは、エフェクター分子によって変動した。
（実施例４５）

【0964】

マウス細胞においてシグナル２およびシグナル３のエフェクターをコードするｍＲＮＡが、ｉｎ ｖｉｔｒｏで抗原特異的免疫応答を増強することができるかどうかを決定するために、ＣｏｎＡ活性化されたクラフト化マウス脾細胞に、ＯＶＡ抗原および候補ｍＲＮＡ（シグナル２について、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６；シグナル３について、ＩＬ－２）をＳＱＺロードした。その後、ＳＱＺロードされたクラフト化脾細胞を、ＯＶＡ特異的ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞と共培養し、ＯＴ－Ｉ Ｔ細胞の活性化を、ＩＦＮ－γ分泌のＥＬＩＳＡを介して測定した。
方法

【0965】

脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせ、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得、その後、ＣｏｎＡで活性化した。ＳＱＺが媒介する送達のために、クラフト化マウス脾細胞を、（ｉ）ＯＶＡ（５μｇ／ｍＬ）、および（ｉｉ）それぞれ、ＣＤ７０、ＣＤ８０もしくはＣＤ８６をコードするｍＲＮＡ、またはＩＬ－１２をコードするｍＲＮＡ（すべて１００μｇ／ｍＬ）の存在下、またはｍＲＮＡなしで、ＳＱＺ処理に供した。シグナル２またはシグナル３のエフェクターをコードするｍＲＮＡによるＳＱＺ処理の後、それぞれのｍＲＮＡをロードされたクラフト化マウス脾細胞を、３７℃で４時間インキュベートし、１：２または１：４の比でＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞と２４時間共培養した。Ｔ細胞活性化をアッセイするために、上清を共培養物から採取し、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡアッセイに供した（図４５Ａ）。
結果

【0966】

図４５Ｂおよび４５Ｃに示すように、シグナル２のエフェクター（ＣＤ７０、ＣＤ８０またはＣＤ８６）またはシグナル３のエフェクター（ＩＬ－１２）と組み合わされた、ＣｏｎＡ活性化された、ＯＶＡをロードされたクラフト化マウス脾細胞は、ＯＶＡ特異的ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の活性化の有意な増加を示した。ＯＶＡ特異的Ｔ細胞応答の増加は、ＣＤ８６ ｍＲＮＡまたはＩＬ－１２ ｍＲＮＡがクラフト化マウス脾細胞にＯＶＡと共送達された場合に、特に有意であった。これらの結果は、翻訳および発現が可能であることに加えて、シグナル２およびシグナル３のエフェクターをコードするｍＲＮＡが、抗原特異的Ｔ細胞応答の活性化において抗原提示細胞としてのマウス脾細胞の機能の能力を増強し得ることを示した。
（実施例４６）

【0967】

ヒトＰＢＭＣの抗原をコードするｍＲＮＡがｉｎ ｖｉｔｒｏで抗原特異的免疫応答を増強することができるかどうかを決定するために、ヒトＰＢＭＣに、さまざまな利用可能な抗原をＳＱＺロードし、その後、それぞれの抗原特異的ＡＳＴＡＲＴＥレスポンダーＴ細胞と共培養し、レスポンダーＴ細胞の活性化を、ＩＦＮ－γ分泌のＥＬＩＳＡを介して測定した。
方法

【0968】

ヒトＰＢＭＣを、（ｉ）非処理のままにしたか（ＮＣ）、（ｉｉ）１μｇ／ｍＬのそれぞれのペプチド抗原でパルスしたか（ＰＰ、陽性対照）、または（ｉｉｉ）それぞれの抗原（Ｅ７、ＨＳＶ ＧＦ１、ＭＡＲＴ－１、ｐｐ６５またはインフルエンザＭ１）をコードする１００μｇ／ｍＬのｍＲＮＡの存在下、ＳＱＺ処理に供した、または（ｉｖ）空のペイロードでＳＱＺ処理した（空ＳＱＺ）。ウエスタンブロットを使用して、ＳＱＺ処理の４時間後および２４時間後にロードされたｍＲＮＡの翻訳を分析した。免疫活性化をアッセイするために、ＳＱＺロードの後、それぞれの抗原をコードするｍＲＮＡをロードされたＰＢＭＣを、３７℃で４時間インキュベートし、それぞれの抗原特異的ＡＳＴＡＲＴＥレスポンダーＴ細胞と２４時間共培養した。Ｔ細胞活性化を測定するために、上清を共培養物から採取し、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡに供した。
結果

【0969】

図４６Ｂおよび４６Ｃに示すように、ＨＰＶ１６－Ｅ７およびインフルエンザＭ１をコードするｍＲＮＡのＳＱＺが媒介する送達の後、それぞれの抗原は、ウエスタンブロットの明確なバンドによって示されるように、翻訳および発現された。Ｔ細胞活性化アッセイのために（図４６Ａ）、Ｅ７、ＨＳＶ ＧＤ１、ＭＡＲＴ－１またはｐｐ６５抗原をコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードされたＰＢＭＣは、共培養後のＩＦＮ－γ分泌の欠如によって実証されるように、ペプチドパルス（ＰＰ）に供されたＰＢＭＣと比較して、観察可能なレスポンダーＴ細胞の活性化を誘導しなかったが、インフルエンザＭ１をコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードされたＰＢＭＣは、ペプチドパルス（ＰＰ）に供されたＰＢＭＣと比較して、共培養後のＩＦＮ－γ分泌の有意な誘導によって観察されるように、Ｍ１特異的Ｔ細胞活性化を強く誘導した。これらの結果は、現在のプロトコールを使用して、抗原をコードするｍＲＮＡを、抗原提示を促進するため、およびすべてではないが一部の抗原について抗原特異的なＴ細胞応答を刺激するために、ＳＱＺが媒介する送達において用い得ることを示した。
（実施例４７）

【0970】

ｉｎ ｖｉｔｒｏで抗原特異的応答を活性化するマウス免疫細胞の促進において、ＳＱＺ送達された抗原をコードするｍＲＮＡおよびペプチド抗原の有効性を比較するために、全マウス脾細胞に、ＯＶＡタンパク質、またはＯＶＡをコードするｍＲＮＡをＳＱＺロードし、その後、ＯＶＡ特異的ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞と共培養し、ＯＴ－Ｉ Ｔ細胞の活性化を、ＣＤ６９の発現を介して測定した。
方法

【0971】

脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、（ｉ）ＯＶＡをコードするｍＲＮＡ（０～２５０ｎＭ）またはＯＶＡタンパク質（０～１２５０ｎＭ）の存在下、室温下、６０ｐｓｉで、３．５μｍの幅、３０μｍの高さの狭窄を使用するＳＱＺ処理に供した。ウエスタンブロットを使用して、ＳＱＺ処理の４時間後および２４時間後にロードされたｍＲＮＡの翻訳を分析した。免疫活性化をアッセイするために、ＳＱＺロードの後、それぞれのＯＶＡをコードするｍＲＮＡまたはＯＶＡタンパク質をロードされた脾細胞を、３７℃で４時間インキュベートし、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞と２４時間共培養した。Ｔ細胞活性化を測定するために、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞におけるＣＤ６９の発現を、フローサイトメトリーを介して測定した（図４７Ａ）。
結果

【0972】

図４７Ｂに示すように、マウス脾細胞において同じそれぞれのモル濃度でＳＱＺロードした場合に、ＯＶＡをコードするｍＲＮＡは、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の活性化の促進において、ＯＶＡタンパク質よりもはるかに強力（約２０倍強力）であった。＜５０ｎＭのＯＶＡ ｍＲＮＡの存在下でＳＱＺ処理された脾細胞は、共培養の際に、ＣＤ６９を発現するＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の有意なパーセンテージをもたらした。比較すると、少なくとも１０００ｎＭのＯＶＡタンパク質の存在下でＳＱＺ処理された脾細胞は、共培養の際に、ＣＤ６９を発現するＯＴ－Ｉ ＣＤ８＋ Ｔ細胞の同様のパーセンテージの達成をもたらした。これらの結果は、少なくともＯＶＡ抗原について、抗原をコードするｍＲＮＡの脾細胞のロードが、抗原特異的Ｔ細胞応答のｉｎ ｖｉｔｒｏの活性化の促進において、タンパク質のものよりも有効であったことを示した。
（実施例４８）

【0973】

治療的環境において、腫瘍成長阻害における抗原をロードされた脾細胞の能力に対する免疫チェックポイント阻害剤との組合せの効果を決定するために、ＨＰＶ Ｅ７を発現するＴＣ１腫瘍モデルを移植されたマウスに、抗ＣＴＬＡ４注射、Ｅ７ ＳＬＰをＳＱＺロードしたクラフト化マウス脾細胞（Ｍ－ＳＱＺ－Ｓｐｌｅｎｏ－ＨＰＶ）のいずれかを投与し、または両方の組合せを投与し、腫瘍体積および生存を時間に対してプロットした。
方法

【0974】

０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウスに、ＴＣ１腫瘍細胞（５０ｋ個細胞／マウス）を右後側腹部に注射した。１０日目（プライム）に、脾細胞を、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊドナーマウスの脾臓から得、負の免疫磁気分離によって枯渇したそれらのＢ細胞を有している脾細胞と組み合わせてより良好にヒトＰＢＭＣを模倣し、ヒトＰＢＭＣをより代表する脾細胞組成物（すなわち、クラフト化脾細胞）を得た。クラフト化脾細胞に、２０μＭのＥ７ ＳＬＰ

【化16】

をＳＱＺロードし、ＣｐＧ１８２６（Ｒ１０中１μＭ）と３７℃で４時間インキュベートし、ロードされたクラフト化マウス脾細胞を、腫瘍を有するマウスにＩＶ（後眼窩）注射した（Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ）（マウスあたり１×１０^６個細胞）。次いで、ロードされた脾細胞を受けたマウス、およびロードされた脾細胞なしのマウスのコホートに、示されたスケジュール（スケジュール１：１１日目、１４日目、１７日目；スケジュール２：１７日目、２０日目、２４日目；スケジュール３：ＴＣ－１移植後、２４日目、２８日目、３１日目）で抗ＣＴＬＡ４注射を投与した。対照マウスは非処置のままにした（群あたり１０匹のマウス）（図４８Ａ、４８Ｂ）。ＴＣ－１腫瘍成長を、腫瘍移植の１週間後に開始して、週あたり２回測定し、６０日間、非処置マウスにおける腫瘍成長と比較した。
結果

【0975】

式（（長さ×幅^２）／２）によって測定される腫瘍成長を、対照マウス（非処置）、ならびにクラフト化Ｅ７をロードされた脾細胞で処置された群（Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ）、抗ＣＴＬＡ４で処置された群（α－ＣＴＬＡ４）、および両方の組合せで処置された群（Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋α－ＣＴＬＡ４）の間で比較した。図４８Ｃに示すように、対照マウスおよび抗ＣＴＬＡ４単独で処置されたマウス（スケジュール１ α－ＣＴＬＡ４；スケジュール２ α－ＣＴＬＡ４；スケジュール３ α－ＣＴＬＡ４）における腫瘍成長の間に観察可能な差はなかったが、Ｅ７をロードされた脾細胞でプライムされたマウス（Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ）について腫瘍成長の速度において認識できる阻害があった。注目すべきことには、Ｅ７をロードされた脾細胞および抗ＣＴＬＡ４の組合せの投与は、ＴＣ－１腫瘍成長の阻害において有意な相加効果を示した（Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋α－ＣＴＬＡ４）（図４８Ｃ）。

【0976】

非処置マウス、抗ＣＴＬＡ４単独で処置されたマウス（スケジュール１ α－ＣＴＬＡ４；スケジュール２ α－ＣＴＬＡ４；スケジュール３ α－ＣＴＬＡ４）またはＥ７をロードされた脾細胞でプライムされたマウス（Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ）はすべて、４０日目またはそれよりも早く、腫瘍を発生した（図４８Ｄ）。比較すると、Ｅ７をロードされた脾細胞および抗ＣＴＬＡ４の投与の組合せを受けたマウス（Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋α－ＣＴＬＡ４）は、腫瘍発生の阻害または遅延を示し、２、１、および３匹のマウスは、Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋スケジュール１ α－ＣＴＬＡ４、Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋スケジュール２ α－ＣＴＬＡ４、およびＭ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋スケジュール３ α－ＣＴＬＡ４について、それぞれ、６０日目には腫瘍がなかった（図４８Ｅ）。

【0977】

腫瘍成長阻害の結果と一致して、Ｅ７をロードされた脾細胞および抗ＣＴＬＡ４投与の組合せも、ＴＣ－１を持つマウスの生存の改善において相加効果を示した。非処置マウスは、３８日の生存期間中央値を示したが、抗ＣＴＬＡ４単独で処置されたマウス（スケジュール１ α－ＣＴＬＡ４；スケジュール２ α－ＣＴＬＡ４；スケジュール３ α－ＣＴＬＡ４）は、それぞれ、３２日、３３日および３５．５日の生存期間中央値を示した。Ｅ７をロードされた脾細胞でプライムされたマウス（Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ）は、５０日のわずかに改善された生存期間中央値を示した。注目すべきことには、生存期間中央値は、Ｅ７をロードされた脾細胞および抗ＣＴＬＡ４投与の組合せを受けたマウス（Ｍ－ＳＱＺ－ＰＢＭＣ－ＨＰＶ＋α－ＣＴＬＡ４）について、ＴＣ－１移植後６０日目に達しなかった（図４８Ｆ）。

【0978】

これらの結果は、抗原をロードされた脾細胞および免疫チェックポイント阻害剤の治療的組合せが、腫瘍成長の阻害および生存の改善における追加の利益を与えたことを示した。

【0979】

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10-1】

【図10-2】

【図11】

【図12-1】

【図12-2】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23-1】

【図23-2】

【図23-3】

【図23-4】

【図24-1】

【図24-2】

【図24-3】

【図24-4】

【図25】

【図26-1】

【図26-2】

【図26-3】

【図27-1】

【図27-2】

【図28-1】

【図28-2】

【図28-3】

【図29-1】

【図29-2】

【図29-3】

【図29-4】

【図29-5】

【図29-6】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36-1】

【図36-2】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42-1】

【図42-2】

【図43】

【図44-1】

【図44-2】

【図45-1】

【図45-2】

【図46-1】

【図46-2】

【図47-1】

【図47-2】

【図48-1】

【図48-2】

【図48-3】

【図48-4】

【図48-5】

【配列表】

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