特許 7610862 がんの予防または治療用薬学的組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-12-25

(45)【発行日】2025-01-09

(54)【発明の名称】がんの予防または治療用薬学的組成物

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/06 20060101AFI20241226BHJP

   A61K 38/08 20190101ALI20241226BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241226BHJP

【ＦＩ】

C07K7/06 ZNA

A61K38/08

A61P35/00

A61P35/02

【請求項の数】 16

(21)【出願番号】P 2022561199

(86)(22)【出願日】2022-02-25

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-05-30

(86)【国際出願番号】 KR2022002762

(87)【国際公開番号】W WO2022203219

(87)【国際公開日】2022-09-29

【審査請求日】2022-10-06

(31)【優先権主張番号】10-2021-0036803

(32)【優先日】2021-03-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(31)【優先権主張番号】PCT/KR2022/002399

(32)【優先日】2022-02-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】520413140

【氏名又は名称】エル－ベース カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｌ－ＢＡＳＥ ＣＯ．，ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000729

【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チョン、ド ヨン

【審査官】西澤 龍彦

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１６／０９９１８８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１６／１７２７２２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１４／２００９１０（ＷＯ，Ａ２）

【文献】国際公開第２０２１／１９４２２８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０２２／１９７１００（ＷＯ，Ａ１）

【文献】YEON, M et al.，CAGE Binds to Beclin1, Regulates Autophagic Flux and CAGE-Derived Peptide Confers Sensitivity to Anti-cancer Drugs in Non-small Cell Lung Cancer Cells，frontiers in Oncology，2018年，Vol. 8，pp. 1-16

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記一般式で表される化合物：
［一般式］
Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ
（前記一般式中、
Ａは、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ）であり、Ｑは、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）であり、Ｔは、スレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）であり、Ｇは、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）であり、Ｋは、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）であり、
Ｘは、

【化1】

からなる群から選ばれた一つであり、ＡのＮ末端側に結合している。）

【請求項2】

下記一般式で表される化合物を有効成分として含む、がんの予防または治療用薬学的組成物：
［一般式］
Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ
（前記一般式中、
Ａは、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ）であり、Ｑは、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）であり、Ｔは、スレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）であり、Ｇは、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）であり、Ｋは、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）であり、
Ｘは、

【化2】

からなる群から選ばれた一つであり、ＡのＮ末端側に結合している。）

【請求項3】

前記がんは、肺がん、乳がん、血液がん、大腸がん、膵臓がん、およびこれらの組み合わせからなる群から選ばれたがんであることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項4】

前記肺がんは、非小細胞性肺がん（ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）であることを特徴とする請求項３に記載の薬学的組成物。

【請求項5】

前記血液がんは、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、およびこれらの組み合わせからなる群から選ばれた血液がんであることを特徴とする請求項３に記載の薬学的組成物。

【請求項6】

前記Ｘは、

【化3】

からなる群から選ばれた一つであり、前記がんは、肺がんであることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項7】

前記Ｘは、

【化4】

からなる群から選ばれた一つであり、前記がんは、乳がんであることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項8】

前記Ｘは、

【化5】

からなる群から選ばれた一つであり、前記がんは、血液がんであることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項9】

前記Ｘは、

【化6】

からなる群から選ばれた一つであり、前記がんは、膵臓がんであることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項10】

前記Ｘは、

【化7】

からなる群から選ばれた一つであり、前記がんは、大腸がんであることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項11】

前記Ｘが

【化8】

である場合、化合物のヒト血液内での半減期が１００分～１５０分であることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項12】

前記Ｘが

【化9】

からなる群から選ばれた一つである場合、化合物のヒト血液内での半減期が４５分～７０分であることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項13】

前記Ｘが

【化10】

である場合、化合物のヒト血液内での半減期が２０分～３０分であることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項14】

下記の段階を含むオリゴペプチドＸ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの製造方法：
（前記Ａは、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ）であり、Ｑは、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）であり、Ｔは、スレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）であり、Ｇは、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）であり、Ｋは、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）であり、
前記Ｘは、

【化11】

からなる群から選ばれた一つである。）
（１）ＴＧおよびＫＴをそれぞれ合成する段階；
（２）前記ＴＧとＫＴを結合してＴＧＫＴを合成する段階；
（３）前記ＴＧＫＴのＮ末端にＴＧを結合してＴＧＴＧＫＴを合成する段階；
（４）前記ＴＧＴＧＫＴのＮ末端にＱを結合してＱＴＧＴＧＫＴを合成する段階；および
（５）前記ＱＴＧＴＧＫＴのＮ末端にアラニン誘導体（Ｘ－Ａ）を結合してＸ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを合成する段階。

【請求項15】

請求項１に記載の化合物をこれを必要とする個体に投与する段階を含み、ここで、対象はヒトを除く、がんの予防または治療方法。

【請求項16】

がん治療用薬剤の製造のための請求項１に記載の化合物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規のオリゴペプチドＡＱＴＧＴＧＫＴのアナログ化合物、これを有効成分として含むがんの予防または治療用薬学的組成物およびその製造方法に関する。

【0002】

本発明は、２０２１年３月２２日に出願された韓国特許出願第１０－２０２１－００３６８０３号および２０２２年２月１８日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＫＲ２０２２／００２３９９号に基づく優先権を主張し、当該出願の明細書および図面に開示されたすべての内容は本出願に援用される。

【背景技術】

【0003】

現在、がんの早期診断法の開発および新しい抗がん療法の持続的な開発に伴ってがんの治療効果が向上しているにも関わらず、がんは、まだ韓国における死亡原因のうち１～２位を争う重要な疾患である。現在使用されている抗がん剤の大部分は、化学療法によるものであり、がんの種類によって薬理作用が多様であり、毒性による副作用が多様に現れるので、がん治療の問題点として指摘されている。

【0004】

従来の抗がん剤は、がん細胞だけでなく、正常細胞にも浸透して、正常細胞の機能および活性に損傷を与えるので、骨髄機能の低下、胃腸障害、脱毛症などの副作用を誘発したり、長期間化学療法による抗がん剤に対する多剤耐性を示すなど、がん治療の大きな問題点を示す。したがって、従来の抗がん剤のこのような深刻な問題点を解決できる革新的な抗がん剤の開発に関する研究が活発に行われている。

【0005】

一方、腫瘍細胞の特異的腫瘍抗原を標的とする抗体の開発が行われているが、抗体の場合、免疫反応の恐れおよび組織内浸透の低い効率性などの問題点がある。他方で、ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｅ）の場合、分子量が小さくて、抗体とは異なって免疫反応の恐れが少なく、組織内浸透が容易であるという長所があり、腫瘍抗原を標的とするペプチド系抗がん剤は、腫瘍に選択的に作用できるので、正常細胞に損傷を与えるなどの副作用が殆どないことが期待されている。しかしながら、このような長所にもかかわらず、非常に制限的ながん腫にのみ使用されており、特にヒトに投与直後、短時間内に分解されて効果を発揮しにくいという問題点があった。

【0006】

前記問題点を解決するための方法として、ペプチドをアミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）、エステル化（ｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、アシル化（ａｃｙｌａｔｉｏｎ）、アセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）、ペグ化（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ）、環化（ｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ）またはアルキル化（ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ）などによって変形させることによって、収率の向上、生体内活性の増加、受容体に対するペプチドの親和性増加、タンパク質の分解遅延などを試みることができるが、前記変形によっても所望の効果が向上することは保障されず、かえってペプチドが本来有していた生体内活性を喪失したり、予期しない副作用が発生しうる危険がある。したがって、このような否定的効果を最小化するとと同時に、目的とする効果を最大化するためのペプチドの変形に対する研究が活発に行われている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明は、上述したような従来技術上の問題点を解決するためになされたものであって、オリゴペプチドＡＱＴＧＴＧＫＴ（ａｌａｎｉｎｅ－ｇｌｕｔａｍｉｎｅ－ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ－ｇｌｙｃｉｎｅ－ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ－ｇｌｙｃｉｎｅ－ｌｙｓｉｎｅ－ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）の抗がん効果および血液内での半減期をより一層向上させるために、鋭意努力した結果、本発明を完成した。特に、ＡＱＴＧＴＧＫＴペプチドのアミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）したアナログ化合物は、優れた抗がん効果および増加した半減期を有することを確認した。

【0008】

これより、本発明の目的は、下記の一般式で表される化合物を提供することにある：

【0009】

［一般式］
Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ

【0010】

前記一般式中、Ａは、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ）であり、Ｑは、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）であり、Ｔは、スレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）であり、Ｇは、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）であり、Ｋは、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）であり、
Ｘは、

【化1】

からなる群から選ばれた一つ以上である。

【0011】

本発明の他の目的は、前記の一般式で表される化合物を有効成分として含む、がんの予防または治療用薬学的組成物を提供することにある。

【0012】

本発明のさらに他の目的は、前記一般式で表される化合物の製造方法を提供することにある。

【0013】

しかしながら、本発明が解決しようとする技術的課題は、以上で言及した課題に制限されず、言及されていない他の課題は、以下の記載から本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が明確に理解できる。

【課題を解決するための手段】

【0014】

上記のような本発明の目的を達成するために、本発明は、下記の一般式で表される化合物を提供する：

【0015】

［一般式］
Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ

【0016】

前記一般式中、Ａは、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ）であり、Ｑは、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）であり、Ｔは、スレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）であり、Ｇは、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）であり、Ｋは、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）であり、
Ｘは、

【化2】

からなる群から選ばれた一つ以上である。

【0017】

また、本発明は、下記の一般式で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、がんの予防または治療用薬学的組成物を提供する：

【0018】

［一般式］
Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ

【0019】

前記一般式中、Ａは、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ）であり、Ｑは、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）であり、Ｔは、スレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）であり、Ｇは、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）であり、Ｋは、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）であり、
Ｘは、

【化3】

からなる群から選ばれた一つ以上である。

【0020】

また、本発明は、前記一般式で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩をこれを必要とする個体に投与する段階を含むがんの予防または治療方法を提供する。前記化合物は、有効量で投与することができる。

【0021】

それだけでなく、本発明は、前記一般式で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩のがんに対する予防、改善または治療用途を提供する。

【0022】

さらに、本発明は、前記一般式で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩のがん治療用薬剤を生産するための用途を提供する。

【0023】

本発明の一具現例において、前記がんは、肺がん、乳がん、血液がん、大腸がん、膵臓がん、およびこれらの組み合わせからなる群から選ばれたがんでありうるが、これに限定されるものではない。

【0024】

本発明の他の具現例において、前記肺がんは、非小細胞性肺がん（ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）でありうるが、これに限定されるものではない。

【0025】

本発明のさらに他の具現例において、前記血液がんは、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、およびこれらの組み合わせからなる群から選ばれたものであってもよいが、これに限定されるものではない。

【0026】

本発明の一具現例において、前記Ｘは、

【化4】

からなる群から選ばれた一つ以上であり、前記がんは、肺がんでありうるが、これに限定されるものではない。

【0027】

本発明の他の具現例において、前記Ｘは、

【化5】

からなる群から選ばれた一つ以上であり、前記がんは、乳がんでありうるが、これに限定されるものではない。

【0028】

本発明のさらに他の具現例において、前記Ｘは、

【化6】

からなる群から選ばれた一つ以上であり、前記がんは、血液がんでありうるが、これに限定されるものではない。

【0029】

本発明のさらに他の具現例において、前記Ｘは、

【化7】

からなる群から選ばれた一つ以上であり、前記がんは、膵臓がんでありうるが、これに限定されるものではない。

【0030】

本発明のさらに他の具現例において、前記Ｘは、

【化8】

からなる群から選ばれた一つ以上であり、前記がんは、大腸がんでありうるが、これに限定されるものではない。

【0031】

本発明の一具体例において、前記Ｘが

【化9】

である場合、前記化合物は、ヒト血液内での半減期が１００分～１５０分であってもよいが、これに限定されるものではない。

【0032】

本発明の他の具体例において、前記Ｘが

【化10】

からなる群から選ばれた一つ以上である場合、前記化合物は、ヒト血液内での半減期が４５分～７０分であってもよいが、これに限定されるものではない。

【0033】

本発明のさらに他の具体例において、前記Ｘが

【化11】

である場合、前記化合物は、ヒト血液内での半減期が２０分～３０分であってもよいが、これに限定されるものではない。

【0034】

また、本発明は、下記の段階を含むオリゴペプチドＸ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの製造方法を提供する：

【0035】

（前記Ａは、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ）であり、Ｑは、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）であり、Ｔは、スレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）であり、Ｇは、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）であり、Ｋは、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）であり、
前記Ｘは、

【化12】

からなる群から選ばれた一つである。）

【0036】

（１）ＴＧおよびＫＴをそれぞれ合成する段階；
（２）前記ＴＧとＫＴを結合してＴＧＫＴを合成する段階；
（３）前記ＴＧＫＴのＮ末端にＴＧを結合してＴＧＴＧＫＴを合成する段階；
（４）前記ＴＧＴＧＫＴのＮ末端にＱを結合してＱＴＧＴＧＫＴを合成する段階；および
（５）前記ＱＴＧＴＧＫＴのＮ末端にアラニン誘導体（Ｘ－Ａ）を結合してＸ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを合成する段階。

【発明の効果】

【0037】

本発明は、新規のオリゴペプチドＡＱＴＧＴＧＫＴのアナログ化合物、これを有効成分として含むがんの予防または治療用薬学的組成物およびその製造方法に関し、前記オリゴペプチドＡＱＴＧＴＧＫＴのアナログが優れた抗がん効果を示し、ヒトの血液内で安定に存在することを確認した。したがって、本発明による薬学的組成物は、オリゴペプチドが持っている長所である抗体に比べて分子量が小さくて、免疫反応の恐れが少なく、組織内に浸透が容易であるという点に加えて、がん細胞の増殖抑制効果に非常に優れており、ヒトの血液内で安定に存在できる効果を示すので、がんを治療するのに有用な抗がん剤として使用できることが期待される。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1-7】図１～図７は、本発明による化合物を同定し、化合物の構造確認のためのＵＰＬＣ－ＭＳ（図上）および^１Ｈ ＮＭＲ（図下）結果を示す図であり、図１は、４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、図２は、Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、図３は、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、図４は、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、図５は、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、図６は、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、図７は、Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの測定結果を示す図である。

【図8】図８は、肺がん細胞株Ｈ１２９９で本発明の化合物処理による細胞活性抑制効果をＣＴＧ ａｓｓａｙによって分析した結果を示す図である（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１；以下同一）。

【図9】図９は、肺がん細胞株Ｈ１９７５で本発明の化合物処理による細胞活性抑制効果をＣＴＧ ａｓｓａｙによって分析した結果を示す図である。

【図10】図１０は、肺がん（乳頭状腺癌）細胞株Ｈ８２０で本発明の化合物処理による細胞活性抑制効果をＭＴＴ ａｓｓａｙによって分析した結果を示す図である。

【図11a】図１１ａは、乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１で本発明の化合物処理による細胞活性抑制効果をＣＴＧ ａｓｓａｙによって分析した結果を示す図である。

【図11b】図１１ｂは、乳がん細胞株ＨＣＣ１９３７で本発明の化合物処理による細胞活性抑制効果をＭＴＴ ａｓｓａｙによって分析した結果を示す図である。

【図12】図１２は、血液がん細胞株Ｊｕｒｋａｔ ｃｌｏｎｅ Ｅ６－１で本発明の化合物処理による細胞活性抑制効果をＭＴＴ ａｓｓａｙによって分析した結果を示す図である。

【図13】図１３は、膵臓がん細胞株ＣＦＰＡＣ－１で本発明の化合物処理による細胞活性抑制効果をＭＴＴ ａｓｓａｙによって分析した結果を示す図である。

【図14】図１４は、大腸がん細胞株ＨＴ２９で本発明の化合物処理による細胞活性抑制効果をＭＴＴ ａｓｓａｙによって分析した結果を示す図である。

【図15】図１５は、肺がん細胞株Ｈ８２０をヌードマウスに接種して腫瘍を形成させた後、本発明の化合物処理による腫瘍成長抑制を分析した結果を示す図である。

【図16】図１６は、肺がん細胞株Ｈ１９７５をヌードマウスに接種して腫瘍を形成させた後、本発明の化合物処理による腫瘍成長抑制を分析した結果を示す図である。

【図17】図１７は、乳がん細胞株ＨＣＣ１８０６をマウスに接種して腫瘍を形成させた後、本発明の化合物処理による腫瘍成長抑制を分析した結果を示す図である。

【図18】図１８は、大腸がん細胞株ＣＴ２６をマウスに接種して腫瘍を形成させた後、腫瘍体積を測定して本発明の化合物を処理による腫瘍成長抑制を分析した結果を示す図である。

【図19-26】図１９～図２６は、ヒト血液内で本発明によるそれぞれの化合物の時間帯別残留量を測定した結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0039】

本発明者らは、オリゴペプチドＡＱＴＧＴＧＫＴのアミド化アナログ（ａｍｉｄａｔｉｏｎ ａｎａｌｏｇ）を新しく合成し、これらが優れた抗がん効果（実施例２参照）および血液内での優れた安定性（実施例３参照）を示すという事実を確認して、本発明を完成した。これより、本発明は、下記の一般式で表される化合物を提供することができる：

【0040】

［一般式］
Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ

【0041】

前記一般式中、Ａは、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ）であり、Ｑは、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）であり、Ｔは、スレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）であり、Ｇは、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）であり、Ｋは、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）であり、Ｘは、

【化13】

からなる群から選ばれた一つ以上である。

【0042】

本発明の他の様態として、本発明は、前記一般式で表される化合物を有効成分として含む、がんの予防または治療用薬学的組成物を提供することができる。

【0043】

本発明のさらに他の様態として、本発明は、前記一般式で表される化合物を個体に投与する段階を含むがんの予防または治療方法を提供することができる。

【0044】

本明細書において使用される用語「予防」とは、本発明による組成物の投与によってがんによる症状を遮断したり、抑制または遅延させるすべての行為を意味する。

【0045】

本明細書において使用される用語「治療」とは、本発明による組成物の投与によってがんによる症状が好転したり有益に変更されるすべての行為を意味する。

【0046】

本明細書において使用される用語「個体」とは、疾患の予防または治療を必要とする対象を意味する。例えば、前記個体は、ヒト、または非ヒトである霊長類、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジおよびウシを含む哺乳類でありうる。

【0047】

本明細書において使用される用語「オリゴペプチド」は、ペプチド結合によってアミノ酸残基が互いに結合して形成された線状（ｌｉｎｅａｒ）の分子を意味する。本発明のオリゴペプチドは、分子・生物学的な方法と共に当業界で公知となった化学的合成方法（例えば、固相合成技術（ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ））によって製造されることができる（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９－５４（１９６３）；Ｓｔｅｗａｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ．ｅｄ．，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．：Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，１１１（１９８４））。

【0048】

本発明による化合物の範囲には、さらに、その薬学的に許容可能な塩が含まれ得る。本明細書において使用される用語「薬学的に許容可能な」という用語は、過度な毒性、刺激、アレルギー反応またはその他問題点や合併症なしで利得／危険の比が合理的なので、対象体（例：ヒト）の組織と接触して使用するのに適しており、健全な医学的判断の範疇内である化合物を意味する。前記薬学的に許容可能な塩は、例えば薬学的に許容可能な遊離酸（ｆｒｅｅ ａｃｉｄ）により形成された酸付加塩および薬学的に許容可能な金属塩を含む。

【0049】

また、本発明による化合物の範囲には、本発明の化合物と均等な生物学的活性を発揮するアミノ酸配列の変異を有する生物学的機能均等物が含まれ得る。このようなアミノ酸配列の変異は、アミノ酸の側鎖置換体の相対的類似性、例えば、疎水性、親水性、電荷およびサイズなどに基づいてなる。アミノ酸の側鎖置換体のサイズ、形態および種類に対する分析によって、アラニンとグリシンは、類似のサイズを有し；リシンは、陽電荷を帯びた残基であり；グルタミンとスレオニンは、電荷を帯びないことが分かる。したがって、このような考慮事項に基づいて、アラニンとグリシン；そしてグルタミンとスレオニンは、生物学的に機能均等物といえる。

【0050】

変異を導入するにあたって、アミノ酸の疎水性インデックス（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ ｉｎｄｅｘ）が考慮されることができる。それぞれのアミノ酸は、疎水性と電荷によって次のように疎水性インデックスが付与されている：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；スレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リシン（－３．９）；およびアルギニン（－４．５）。
タンパク質の相互的な生物学的機能（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）を付与するにあたって疎水性アミノ酸インデックスは非常に重要である。類似の疎水性インデックスを有するアミノ酸で置換する場合、類似の生物学的活性を保有できることは公知の事実である。疎水性インデックスを参照して変異を導入させる場合、好ましくは、±２以内、より好ましくは、±１以内、より好ましくは、±０．５以内の疎水性インデックス差異を示すアミノ酸の間に置換をする。

【0051】

一方、類似の親水性値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ ｖａｌｕｅ）を有するアミノ酸間の置換が均等な生物学的活性を有するタンパク質をもたらすことはよく知られている。米国特許第４，５５４，１０１号に開示されたように、次の親水性値がそれぞれのアミノ酸残基に付与されている：アルギニン（＋３．０）；リシン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）；トリプトファン（－３．４）。

【0052】

親水性値を参照して変異を導入させる場合、好ましくは、±２以内、より好ましくは、±１以内、より好ましくは、±０．５以内の親水性値の差異を示すアミノ酸の間に置換をする。

【0053】

分子の活性を全体的に変更させないタンパク質でのアミノ酸交換は、当該分野において公知となっている（Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ，Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９）。最も通常的に起こる交換は、アミノ酸残基Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｙｒ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ間の交換である。

【0054】

上述した生物学的均等活性を有する変異を考慮すると、本発明の前記一般式で表される化合物のアミノ酸配列（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）のタンパク質は、これと実質的な同一性（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を示す配列を含むと解釈される。前記の実質的な同一性は、上記した本発明の配列と任意の他の配列を最大限対応するようにアライン（ａｌｉｇｎ）し、当業界で通常使用されるアルゴリズムを利用してアラインされた配列を分析した場合に、最小６２．５％の相同性、より好ましくは、７５％以上の相同性、最も好ましくは、８７．５％以上の相同性を示す配列を意味する。配列比較のためのアラインメント方法は、当業界で公知となっている。

【0055】

本発明の薬学的組成物は、がんの予防または治療に使用される。本発明の薬学的組成物が使用可能ながんは、肺がん、乳がん、血液がん、大腸がん、膵臓がん、およびこれらの組み合わせからなる群から選ばれたがんでありうるが、これに限定されるものではない。

【0056】

本発明において、前記肺がんは、非小細胞性肺がん（ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）でありうるが、これに限定されるものではない。本発明の一具現例において、本発明による化合物は、Ｔ７９０Ｍ突然変異陽性患者、ＥＧＦＲ ｍ^－患者、および／またはＯｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ耐性患者の肺がん治療のためのものでありうるが、これに限定されるものではない。

【0057】

また、前記乳がんは、Ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＨＲ）陽性乳がんでありうるが、これに限定されるものではない。また、前記乳がんは、トリプルネガティブ乳がん（Ｔｒｉｐｌｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）でありうるが、これに限定されるものではない。

【0058】

また、前記血液がんは、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、およびこれらの組み合わせからなる群から選ばれた血液がんでありうるが、これに限定されるものではない。

【0059】

本発明の一実施例では、本発明による薬学的組成物が肺がん、乳がん、血液がん、膵臓がんおよび大腸がんに対して優れた抗がん活性を示すことを確認した（実施例２参照）。

【0060】

本発明において、前記薬学的組成物が肺がんの予防または治療に使用される場合、一般式Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴで表される化合物を有効成分として含み、前記Ｘは、

【化14】

からなる群から選ばれた一つ以上でありうるが、これに限定されるものではない。

【0061】

また、本発明において、前記薬学的組成物が乳がんの予防または治療に使用される場合、一般式Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴで表される化合物を有効成分として含み、前記Ｘは、

【化15】

からなる群から選ばれた一つ以上であってもよいが、これに限定されるものではない。

【0062】

また、本発明において、前記薬学的組成物が血液がんの予防または治療に使用される場合、一般式Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴで表される化合物を有効成分として含み、前記Ｘは、

【化16】

からなる群から選ばれた一つ以上であってもよいが、これに限定されるものではない。

【0063】

また、本発明において、前記薬学的組成物が膵臓がんの予防または治療に使用される場合、一般式Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴで表される化合物を有効成分として含み、前記Ｘは、

【化17】

からなる群から選ばれた一つ以上であってもよいが、これに限定されるものではない。

【0064】

また、本発明において、前記薬学的組成物が大腸がんの予防または治療に使用される場合、一般式Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴで表される化合物を有効成分として含み、前記Ｘは、

【化18】

からなる群から選ばれた一つ以上であってもよいが、これに限定されるものではない。

【0065】

本発明の他の実施例では、本発明による前記一般式で表される化合物がヒトの血液内で安定に存在でき、ＡＱＴＧＴＧＫＴと比較して、向上した半減期を有するという事実を確認した（実施例３参照）。したがって、前記実施例の結果は、本発明による化合物が向上した抗がん効果および安定性を有することを示す。

【0066】

本発明の一般式Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴで表される化合物において、前記Ｘが

【化19】

である場合、前記化合物のヒト血液内での半減期は、２０分以上であってもよいが、これに限定されるものではない。前記半減期は、例えば２０分～３０分、２１分～３０分、２２分～３０分、２３分～３０分、２４分～３０分、２５分～３０分、２６分～３０分、２７分～３０分、２８分～３０分、２９分～３０分、２０分～２９分、２１分～２９分、２１分～２８分、２１分～２７分、２１分～２６分、２１分～２５分、２１分～２４分、２１分～２３分、２１分～２２分、２２分～３０分、２２分～２８分、２２分～２６分、２２分～２４分、２３分～３０分、２３分～２８分、２３分～２６分、２３分～２４分、２４分～３０分、２４分～２７分、２５分～３０分、２５分～２７分、２６分～３０分、２６分～２８分、２７分～３０分、２７分～２９分、２８分～３０分、２８分～２９分、または２９分～３０分などであってもよい。また、前記半減期は、ＡＱＴＧＴＧＫＴの半減期と比較して、１９００％～２９００％増加したものであってもよいが、これに限定されるものではない。前記増加比率は、例えば１９００％～２７００％、２０００％～２７００％、２１００％～２７００％、２２００％～２７００％、２３００％～２７００％、２４００％～２７００％、２５００％～２７００％、２６００％～２７００％、１９００％～２６００％、２０００％～２６００％、２１００％～２６００％、２１００％～２５００％、２１００％～２４００％、２１００％～２３００％、２１００％～２２００％、２２００％～２７００％、２２００％～２６００％、２２００％～２５００％、２２００％～２４００％、２２００％～２３００％、２３００％～２７００％、２３００％～２５００％、２４００％～２７００％、２４００％～２６００％、または２５００％～２７００％などであってもよい。

【0067】

また、本発明の一般式Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴで表される化合物において、前記Ｘが

【化20】

からなる群から選ばれた一つ以上である場合、前記化合物のヒト血液内での半減期は、４５分以上であってもよいが、これに限定されるものではない。前記半減期は、例えば４５分～７０分、４６分～７０分、４７分～７０分、４８分～７０分、４９分～７０分、５０分～７０分、５１分～７０分、５３分～７０分、５５分～７０分、５７分～７０分、５９分～７０分、６５分～７０分、４５分～６５分、５０分～６５分、５５分～６５分、６０分～６５分、４５分～６０分、５０分～６０分、５５分～６０分、４５分～５５分、５０分～５５分、または６０分～７０分などであってもよい。また、前記半減期は、ＡＱＴＧＴＧＫＴの半減期と比較して、４４００％～６９００％増加したものであってもよいが、これに限定されるものではない。前記増加比率は、例えば４４００％～６９００％、４５００％～６９００％、４６００％～６９００％、４７００％～６９００％、４８００％～６９００％、４９００％～６９００％、５０００％～６９００％、５１００％～６９００％、５２００％～６９００％、５３００％～６９００％、５４００％～６９００％、５５００％～６９００％、５６００％～６９００％、５７００％～６９００％、５８００％～６９００％、５９００％～６９００％、６０００％～６９００％、６１００％～６９００％、６２００％～６９００％、６３００％～６９００％、６４００％～６９００％、６５００％～６９００％、６６００％～６９００％、６７００％～６９００％、６８００％～６９００％、４４００％～６５００％、４５００％～６５００％、４７００％～６５００％、５０００％～６５００％、５２００％～６５００％、５５００％～６５００％、５７００％～６５００％、６０００％～６５００％、６３００％～６５００％、４４００％～６０００％、４６００％～６０００％、４８００％～６０００％、５０００％～６０００％、５５００％～６０００％、４４００％～５５００％、４７００％～５５００％、５０００％～５５００％、５２００％～５５００％、４４００％～５０００％、４８００％～５０００％、４４００％～４７００％、または４５００％～４７００％などであってもよい。

【0068】

また、本発明の一般式Ｘ－ＡＱＴＧＴＧＫＴで表される化合物において、前記Ｘが

【化21】

である場合、前記化合物のヒト血液内での半減期は、１００分以上であってもよいが、これに限定されるものではない。前記半減期は、例えば１００分～１５０分、１０２分～１５０分、１０３分～１５０分、１０４分～１５０分、１０５分～１５０分、１０６分～１５０分、１０７分～１５０分、１０８分～１５０分、１０９分～１５０分、１１０分～１５０分、１１１分～１５０分、１１２分～１５０分、１１５分～１５０分、１１７分～１５０分、１２０分～１５０分、１２３分～１５０分、１２５分～１５０分、１２７分～１５０分、１３０分～１５０分、１３２分～１５０分、１３５分～１５０分、１３７分～１５０分、１４０分～１５０分、１４２分～１５０分、１４５分～１５０分、１４７分～１５０分、１４８分～１５０分、１００分～１４０分、１０２分～１４０分、１０４分～１４０分、１０６分～１４０分、１０８分～１４０分、１２０分～１４０分、１２５分～１４０分、１３０分～１４０分、１３５分～１４０分、１００分～１３０分、１０２分～１３０分、１０５～１３０分、１１０分～１３０分、１１５分～１３０分、１２０分～１３０分、１２５分～１３０分、１００分～１２０分、１０５分～１２０分、１１０分～１２０分、１１５分～１２０分、１００分～１１０分、１０５分～１１０分、または１００分～１０５分などであってもよい。また、前記半減期は、ＡＱＴＧＴＧＫＴの半減期と比較して、９９００％～１４９００％増加したものであってもよいが、これに限定されるものではない。前記増加比率は、例えば９９００％～１４９００％、１００００％～１４９００％、１０１００％～１４９００％、１０２００％～１４９００％、１０３００％～１４９００％、１０４００％～１４９００％、１０５００％～１４９００％、１０７００％～１４９００％、１１０００％～１４９００％、１１５００％～１４９００％、１２０００％～１４９００％、１２５００％～１４９００％、１３０００％～１４９００％、１３５００％～１４９００％、１４０００％～１４９００％、１４５００％～１４９００％、９９００％～１２０００％、１００００％～１２０００％、１０２００％～１２０００％、１０５００％～１２０００％、１０７００％～１２０００％、１１０００％～１２０００％、１１５００％～１２０００％、１１７００％～１２０００％、９９００％～１１０００％、１００００％～１１０００％、または９９００％～１００００％などであってもよい。

【0069】

一方、本発明による薬学的組成物は、有効成分以外に、薬学的組成物として製造するために通常使用する適切な担体、賦形剤および／または希釈剤をさらに含んでもよい。また、通常の方法によって散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤形、外用剤、坐剤および滅菌注射溶液の形態で剤形化して使用できる。

【0070】

前記組成物に含まれ得る担体、賦形剤および希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアガム、アルギネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾアート、プロピルヒドロキシベンゾアート、タルク、マグネシウムステアレート、および鉱物油などがある。前記組成物を製剤化する場合には、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調製することができる。

【0071】

本発明による薬学的組成物は、薬学的に有効な量で投与される。本発明において、「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット／リスクの割合で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量レベルは、患者の疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する感度、投与時間、投与経路および排出比率、治療期間、同時に使用される薬物を含む要素およびその他医学分野によく知られた要素によって決定されることができる。好ましい投与量は、個体の状態および体重、疾患の程度、薬物形態、投与経路および期間によって選択されることができる。具体的な例として、前記薬学的組成物は、０．００１～１０００ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１０ｍｇ／ｋｇまたは０．１～１ｍｇ／ｋｇの量を１日に１回～数回に分けて投与することができる。

【0072】

上記した要素を全部考慮して副作用なしで最小限の量で最大効果を得ることができる量を投与することが重要であり、これは、当業者によって決定されることができる。具体的に、本発明による薬学的組成物の有効量は、患者の年齢、性別、状態、体重、体内での活性成分の吸収度、不活性率および排泄速度、疾患の種類、併用される薬物によって変わることができる。

【0073】

本発明の薬学的組成物は、個体に多様な経路で投与することができる。例えば、経口投与、鼻腔内投与、経気管支投与、動脈注射、静脈注射、皮下注射、筋肉注射または腹腔内注射によって投与することができる。一日投与量は、一日に１回～数回に分けて投与することができる。

【0074】

本発明の他の様態として、本発明は、下記の段階を含むオリゴペプチドＸ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの製造方法を提供することができる：

【0075】

（前記Ａは、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ）であり、Ｑは、グルタミン（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ）であり、Ｔは、スレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）であり、Ｇは、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）であり、Ｋは、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）であり、
前記Ｘは、

【化22】

からなる群から選ばれた一つである。）
（１）ＴＧおよびＫＴをそれぞれ合成する段階；
（２）前記ＴＧとＫＴを結合してＴＧＫＴを合成する段階；
（３）前記ＴＧＫＴのＮ末端にＴＧを結合してＴＧＴＧＫＴを合成する段階；
（４）前記ＴＧＴＧＫＴのＮ末端にＱを結合してＱＴＧＴＧＫＴを合成する段階；および
（５）前記ＱＴＧＴＧＫＴのＮ末端にアラニン誘導体（Ｘ－Ａ）を結合してＸ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを合成する段階。

【実施例】

【0076】

本明細書および請求範囲に使用された用語や単語は、通常的または辞書的な意味に限定して解釈されてはならず、発明者は、自分の発明を最も最善の方法で説明するために用語の概念を適切に定義できるという原則に基づいて本発明の技術的思想に符合する意味と概念と解釈されるべきである。

【0077】

以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかしながら、下記の実施例は、ただ本発明をより容易に理解するために提供されるものであり、下記実施例によって本発明の内容が限定されるものではない。

【0078】

［実施例］
実験方法
１．ＣＴＧ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ）分析
本発明によるＡＱＴＧＴＧＫＴアナログ化合物をがん細胞株に処理した後、ＣＴＧ分析を通じて細胞の増殖程度を測定した。具体的に、９６－ｗｅｌｌプレートに各ｗｅｌｌ当たり５×１０^３／１００μｌの細胞をシーディング（ｓｅｅｄｉｎｇ）し、２４時間培養した後、本発明によるＡＱＴＧＴＧＫＴアナログ７種をそれぞれトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）した。４８時間経過後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏ．，米国）試薬を細胞培養液と同量で混合し、２分間回転撹拌器（ｏｒｂｉｔａｌ ｓｈａｋｅｒ）で反応させた。室温で１０分間反応させた後、ルミノメーター（ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ；ＧｌｏＭａｘ，Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて発光シグナルを測定した。

【0079】

２．ＭＴＴ（ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ）分析
本発明によるＡＱＴＧＴＧＫＴアナログ化合物をがん細胞株に処理した後、ＭＴＴ分析を通じて細胞の増殖程度を測定した。具体的に、９６－ｗｅｌｌプレートに各ｗｅｌｌ当たり５×１０^３／１００μｌの細胞を分注し、２４時間培養した後、本発明によるＡＱＴＧＴＧＫＴアナログ７種をそれぞれ導入した。７２時間経過後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－９６（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏ．，米国）試薬を各ｗｅｌｌ当たり１０μｌずつ添加し、５％ＣＯ_２、３７℃で反応させた。３時間経過後、分光光度計（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ；ＳＰＥＣＴＲＯｓｔａｒ^Ｎａｎｏ，ＢＭＧ）を用いて４９０ｎｍで吸光度を測定した。

【0080】

３．肺がん動物モデル
Ｈ１９７５細胞を４×１０^６ ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅの濃度で１５０μｌずつマウスの脇腹に皮下注射で１回接種した。接種完了後、形成されたｔｕｍｏｒ ｍａｓｓのｖｏｌｕｍｅが７０～１３０ｍｍ^３に到達したことを確認した後、無作為群分離を実施した。試験物質は、３日間隔で５回、２日間隔で５回尾静脈投与した。
Ｈ８２０細胞を５×１０^６ ｃｅｌｌｓ ／ｍｏｕｓｅの濃度でｍａｔｒｉｇｅｌと１：１の割合で２００μｌずつマウスの脇腹に皮下注射で１回接種した。接種完了後、形成されたｔｕｍｏｒ ｍａｓｓのｖｏｌｕｍｅが７０～１３０ｍｍ３に到達したことを確認した後、無作為群分離を実施した。試験物質は、毎日１４回尾静脈投与した。

【0081】

４．乳がん動物モデル
乳がん細胞株であるＨＣＣ１８０６細胞を５×１０^６ ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅの濃度で、ｍａｔｒｉｇｅｌと１：１の割合で２００μｌずつマウスの脇腹に皮下注射で１回接種した。接種完了後、形成された腫瘍の体積が７０～１３０ｍｍ^３に到達したことを確認し、無作為群分離を実施した。試験物質は、１０ｍｐｋの濃度で２日間隔７回尾静脈投与し、投与開始日を１日に設定した。腫瘍の体積は、週２回測定し、長軸径と短軸径を測定して体積を算出し、同時に個体の絶対重量を測定した。

【0082】

５．大腸がん動物モデル
ＣＡＧＥ遺伝子の発現を誘導したＣＴ２６細胞株を１×１０^６ ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅの濃度でｍａｔｒｉｇｅｌ １：１で２００μｌずつマウスの脇腹に皮下注射で１回接種した。接種完了後、形成された腫瘍の体積が７０ｍｍ３に到達したことを確認し、無作為群分離を実施した。試験物質は、１０ｍｐｋの濃度で２日間隔７回尾静脈投与し、投与開始日を１日に設定した。腫瘍の体積は、週２回測定し、長軸径と短軸径を測定して体積を算出し、同時に個体の絶対重量を測定した。

【0083】

実施例１：ＡＱＴＧＴＧＫＴアナログ（ａｎａｌｏｇ）の製造
１．１．反応一般
すべての反応は、別途の言及がない限り、さらなる反応を行うことなく、商業的に販売される物質および試薬を用いて行った。反応は、シリカゲルプレート（Ｋｅｉｓｅｌｇｅｌ ６０ Ｆ２５４，Ｍｅｒｃｋ）および／または超高性能液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）上の薄膜クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によりモニタリングした。ＴＬＣプレート上の斑点の可視化は、ＵＶ光によって、そして、過マンガン酸カリウムおよび／またはニンヒドリンでＴＬＣプレートを染色し、ヒートガン（ｈｅａｔ ｇｕｎ）で炭化させることによって達成された。すべての生成物は、^１Ｈ ＮＭＲおよび／またはＵＰＬＣ－ＭＳを用いて特定した。

【0084】

１．２．Ｂｏｃ／ＯＢｎ－ＴＧの合成
まず、官能基がベンジルで保護されたＴＧを下記の反応式１によって合成した。以下、各反応式で化合物は、下記に併記したアラビア数字（ｎ）によって化合物ｎと称することとする。

【0085】

［反応式１］

【化23】

【0086】

具体的に、ＢｏｃＴｈｒ（ＯＢｎ）ＯＨ（化合物１；２５．０ｇ、８０．８ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＮＯＳｕ（９．７７ｇ、８４．８ｍｍｏｌ、１．０５当量）をジクロロメタン（１５０ｍＬ）に溶解させた。混合物を０℃に冷却させ、不活性雰囲気下に置いた。その後、前記混合物に１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミドヒドロクロリド（１６．３ｇ、８４．８ｍｍｏｌ、１．０５当量）を添加した。混合物を室温に加温し、２０時間撹拌した。次に、混合物をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）で洗浄し、相を分離した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下に濃縮して、生成物として淡黄色のオイル（３５．７ｇ、＞１００％収率、定量的収率を仮定）の化合物２を収得した。

【0087】

前記化合物２のＢｏｃＴｈｒ（ＯＢｎ）ＯＳｕ（３２．８ｇ、８０．８ｍｍｏｌ、１．０当量）を１，４－ジオキサン（２００ｍＬ）に溶解させ、蒸留水（１００ｍＬ）中のグリシンナトリウム塩水和物溶液を一度に添加した。室温で６時間撹拌した後、混合物をエチルアセテートおよびクエン酸（飽和水性）に分画した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過した後、減圧下で濃縮した。粗物質を水（０．１％ギ酸）溶離液中、３０～７０％アセトニトリル（０．１％ギ酸）でＣ１８（４００ｇ）カラムで精製した。所望の分画を合わせ、エチルアセテートおよびＮａＨＣＯ_３（飽和水性）に分画した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過した後、減圧下に生成物として淡黄色のガム（２１．９ｇ、７４％収率）の化合物３を収得した。

【0088】

１．３．ＣＢｚ／ＯＢｎ／ＣＯ_２Ｂｎ－ＫＴの合成
ＯＨ官能基がベンジルで保護されたＫＴを下記の反応式２によって合成した。

【0089】

［反応式２］

【化24】

【0090】

具体的に、ＢｏｃＬｙｓ（ＣＢｚ）ＯＨ（化合物４；２７．０ｇ、７０．９ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＮＯＳｕ（９．８０ｇ、８５．１ｍｍｏｌ、１．２当量）をジクロロメタン（１２８ｍＬ）に溶解させた。混合物を０℃に冷却させ、不活性雰囲気下に置いた。その後、前記混合物に１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミドヒドロクロリド（１６．３ｇ、８５．１ｍｍｏｌ、１．０５当量）を添加した。混合物を室温に加温し、２０時間撹拌した。次に、混合物をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）で洗浄し、相を分離した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下に濃縮して、生成物として淡黄色のオイル（３６．７ｇ、＞１００％収率、定量的収率と仮定）の化合物５を収得した。

【0091】

次に、前記化合物５（ＢｏｃＬｙｓ（Ｃｂｚ）ＯＳｕ；３６．７ｇ、７０．９ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＴｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ．ＨＣｌ（２５．０ｇ、７４．４ｍｍｏｌ、１．０５当量）を室温で１，４－ジオキサン（４７７ｍＬ）に溶解させた。前記溶液に蒸留水（３２６ｍＬ）中のＮａＨＣＯ_３（６．８５ｇ、８１．５ｍｍｏｌ、１．１５当量）の溶液を添加した。以後、生成された混合物を室温で２０時間撹拌した。反応混合物をエチルアセテートで希釈し、１０％クエン酸（水性）および塩水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、ろ過した後、減圧下で濃縮して、生成物として黄色の油性固体５５．９ｇ（＞１００％収率、定量的収率と仮定）の化合物６を収得した。

【0092】

最後に、前記化合物６（ＢｏｃＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ；５５．９ｇ、７０．９ｍｍｏｌ、１．００当量）を１，４－ジオキサン（３６０ｍＬ）に溶解させ、１，４－ジオキサン（１７７ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌを添加した。混合物を室温で一晩中撹拌した。その後、ＮａＨＣＯ_３の飽和水溶液をｐＨ値が８になるまで添加した。前記溶液をエチルアセテートで抽出して、生成された有機溶液をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた後、ろ過した後、減圧下で濃縮して、生成物として黄色の油性固体（３８．７ｇ、９７％収率）の化合物７を収得した。

【0093】

１．４．ＣＢｚ／ＯＢｎ／ＯＢｎ／ＣＯ_２Ｂｎ－ＴＧＫＴの合成
前記１．２．および１．３．で合成したＴＧとＫＴを下記の反応式３によって結合してＴＧＫＴを合成した。

【0094】

［反応式３］

【化25】

【0095】

より具体的に、ジクロロメタン（５０ｍＬ）中のＢｏｃＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＯＨ（化合物３；５．６１ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、１．００当量）および化合物８（Ｌｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ；１０．０ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、１．０当量）溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５．９０ｍＬ、３３．７ｍｍｏｌ、２．２当量）を添加した。混合物を室温で不活性雰囲気下に撹拌し、ＨＡＴＵ（７．００ｇ、１８．４ｍｍｏｌ、１．２０当量）を添加した。生成された混合物を２時間撹拌した後、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）で洗浄し、次いで、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、ろ過した後、減圧下に濃縮して、生成物として淡い橙色の油性固体（２５．０ｇ、＞１００％収率、定量的収率と仮定）の化合物９を収得した。

【0096】

前記収得したＢｏｃＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物９；以前の段階から取った１３．９ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、１．０当量）を窒素下に室温で１，４－ジオキサン（１５０ｍＬ）に溶解させた。この溶液に１，４－ジオキサン（２０ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌを添加した。前記混合物は、室温で２０時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水（０．１％ギ酸）溶離液中、２０％アセトニトリル（０．１％ギ酸）を用いてＣ１８（４００ｇ）カラムで精製した。所望の分画を合わせ、凍結乾燥させた。生成された粉末は、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）およびジクロロメタンに溶解させ、１５分間撹拌した。層を分離させ、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた後、ろ過した後、減圧下に濃縮させて、生成物として無色ガム（１０．９ｇ、８８％収率）の化合物１０を収得した。

【0097】

１．５．ＣＢｚ／ＯＢｎ／ＯＢｎ／ＯＢｎ／ＣＯ_２Ｂｎ－ＴＧＴＧＫＴの合成
前記１．２．および１．４．で合成したＴＧ（化合物３）とＴＧＫＴ（化合物１０）を下記の反応式４によって結合して、ベンジルで保護されたＴＧＴＧＫＴを合成した。

【0098】

［反応式４］

【化26】

【0099】

より具体的に、ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のＢｏｃＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＯＨ（化合物３；５．１０ｇ、１４．０ｍｍｏｌ、１．０５当量）およびＢｏｃＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１０；１０．８ｇ、１３．３ｍｍｏｌ、１．０当量）溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５．１０ｍＬ、２９．３ｍｍｏｌ、２．２当量）を添加した。混合物を室温で不活性雰囲気下に撹拌し、ＨＡＴＵ（５．６０ｇ、１４．７ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。生成された混合物を２時間撹拌し、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）およびＮａＨＣＯ_３（飽和水性）で洗浄した。有機層を減圧下で濃縮して、生成物として淡黄色のガム（２１．４ｇ、＞１００％収率、定量的収率を仮定）の化合物１１を収得した。

【0100】

次いで、前記収得した化合物１１（ＢｏｃＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ；以前の段階で取った１５．４ｇ、１３．３ｍｍｏｌ、１．００当量）を窒素下の室温で１，４－ジオキサン（１５０ｍＬ）に溶解させた。この溶液に１，４－ジオキサン（５０ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌを添加し、混合物を室温で５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水（０．１％ギ酸）溶離液中２０％アセトニトリル（０．１％ギ酸）を用いてＣ１８（１２０ｇ）カラムで精製した。所望の分画を合わせ、半分の体積に濃縮した後、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）およびエチルアセテートに分画した。層を分離し、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた後、ろ過し、減圧下に濃縮して、生成物として灰白色の固体（１４．６ｇ、＞１００％収率、定量的収率を仮定）の化合物１２を収得した。

【0101】

１．６．ＣＢｚ／ＯＢｎ／ＯＢｎ／ＯＢｎ／ＣＯ_２Ｂｎ－ＱＴＧＴＧＫＴの合成
前記１．５．で合成した化合物１２（ＴＧＴＧＫＴ）に下記反応式５によってＱを追加で結合して、化合物１４（ＱＴＧＴＧＫＴ）を合成した。

【0102】

［反応式５］

【化27】

【0103】

より具体的に、エチルアセテート（１５０ｍＬ）およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）中のＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１２；１２．７ｇ、１２．０ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＢｏｃＧｌｎＯＨ（３．２５ｇ、１３．２ｍｍｏｌ、１．１当量）の溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４．６０ｍＬ、２６．４ｍｍｏｌ、２．２当量）を添加した。混合物を室温で不活性雰囲気下に撹拌し、ＨＡＴＵ（５．４７ｇ、１４．４ｍｍｏｌ、１．２０当量）を添加した。生成された混合物を１時間撹拌した後、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）で洗浄した。有機層をジクロロメタンでさらに抽出した。次いで、有機層を合わせ、減圧下に濃縮させた。粗物質を水（０．１％ギ酸）中の２０～１００％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配を用いて４００ｇ、Ｃ１８カラムで精製した。所望の分画を合わせた後、エチルアセテートおよびＮａＨＣＯ_３（飽和水性）溶液に分画した。有機層を濃縮させ、凍結乾燥工程によって残留物を除去した。合わせた分画で合計１２．９ｇ（８９％総収率）の化合物１３を収得した。

【0104】

前記収得した化合物１３（ＢｏｃＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ；７．００ｇ、５．４０ｍｍｏｌ、１．００当量）を窒素下に室温で１，４－ジオキサン（１５０ｍＬ）に溶解させた。この溶液に１，４－ジオキサン（４３．５ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌを添加した。混合物を室温で２０時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水／アセトニトリル（２／１）溶液を用いて凍結乾燥させた。最終的に淡黄色の粉末（６．３６ｇ、９６％収率）の化合物１４を分離した。

【0105】

１．７．ＡＱＴＧＴＧＫＴアナログの合成
４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを除いた残りの６種のアナログは、前記反応式５の最終生成物である化合物１４および下記反応式６の生成物である化合物１７ｎを下記反応式７によって結合させて合成した。

【0106】

［反応式６］

【化28】

【0107】

［反応式７］

【化29】

【0108】

前記反応式７によって純度９０％以上の３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ ２．９ｍｇ、純度８９％の４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ ７．０ｍｇ、純度９５％以上の２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ ２２．７ｍｇ、純度９０％以上のＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ ２３．２ｍｇ、および純度８５％のＮａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ ２３．２ｍｇを最終的に収得した。

【0109】

以下、それぞれのアナログ合成過程について具体的に説明する。

【0110】

１．７．１．３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの合成
３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ（化合物１９－１）は、下記反応式８によって収得した化合物１７－１を前記化合物１４と反応式９によって反応させて、最終目的化合物である３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを合成した。

【0111】

［反応式８］

【化30】

【0112】

より具体的に、Ｈ－Ａｌａ－ＯＢｚｌ．ＨＣｌ（３８８ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、１．２当量）をエチルアセテート（１０ｍＬ）に懸濁させ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６５３μＬ、３．７５ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。室温で５分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（８５５ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ、１．５当量）および［１，１’－ビフェニル］－３－カルボン酸（２９７ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をエチルアセテートで希釈した後、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）および塩水で洗浄した。収得した有機物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した後、減圧下に濃縮させた。残留物は、２５ｇカラムでヘプタン中の２～４０％エチルアセテート勾配で精製して、無色固体（４９３ｍｇ、９１％収率）の化合物１６－１を収得した。

【0113】

次いで、最小量の水で濡らした１０％Ｐｄ／Ｃ（４９ｍｇ）をメタノール（３０ｍＬ）中の化合物１６－１（３－ＰｈＰｈ－ＡｌａＯＢｎ；４９３ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）溶液に添加した。前記混合物を水素雰囲気（バルーン）下で２時間撹拌した。混合物は、セライトパッドを通じてろ過させ、メタノールおよびエチルアセテートで洗浄した。収得したろ液は、減圧下に濃縮させて、無色バブル（３３７ｍｇ、９１％収率）の化合物１７－１を収得し、これを下記反応式９によって化合物１４と反応させた。

【0114】

［反応式９］

【化31】

【0115】

より具体的に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９７．０μＬ、０．５５６ｍｍｏｌ、２．２当量）およびジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１４；３００ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ、１当量）および３－ＰｈＰｈ－ＡｌａＯＨ（化合物１７－１；６８．０ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ、１当量）懸濁液にＨＡＴＵ（１０６ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、反応混合物をＮａＨＣＯ_３（飽和水性）で洗浄した。有機物を減圧下で濃縮し、残留物を水（０．１％ギ酸）中の４０～１００％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配で６０ｇ、Ｃ１８カラムで精製して、凍結乾燥を経た後、無色固体（１４０ｍｇ、３８％収率）の化合物１８－１を収得した。

【0116】

次いで、１０％Ｐｄ／Ｃ（８５．０ｍｇ）を２Ｍ塩酸（水性、０．５ｍＬ）および２－プロパノール（１０ｍＬ）中の３－ＰｈＰｈ－ＡｌａＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１８－１；８５．０ｍｇ、５９．１μｍｏｌ）溶液に添加した。前記混合物を水素雰囲気（バルーン）下で４．５時間撹拌した後、混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを通じてろ過した。収得したろ液を減圧下に濃縮し、残留物を凍結乾燥した。その後、水（０．１％ギ酸）中の５～５０％アセトニトリル（０．１％ギ酸）を用いて６０ｇ、Ｃ１８カラムで物質を精製し、凍結乾燥して、無色固体（２．９ｍｇ、５％収率）の目的化合物１９－１を収得した。

【0117】

化合物１９－１（３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ）の^１Ｈ ＮＭＲデータは、次のように測定された：
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ＝８．０１－７．９９（ｍ、１Ｈ）、７．８６－７．８２（ｍ、１Ｈ）、７．７５－７．６６（ｍ、３Ｈ）、７．５５（ｔ、Ｊ ７．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．４９（ｔ、Ｊ ７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．４３－７．３８（ｍ、１Ｈ）、４．４８－４．２４（ｍ、５Ｈ）、４．２３－４．１２（ｍ、３Ｈ）、４．０９（ｄ、Ｊ ３．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．００－３．９６（ｍ、２Ｈ）、３．８８（ｓ、２Ｈ）、２．９０（ｔ、Ｊ ７．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．３５（ｔ、Ｊ ７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．１５－２．０６（ｍ、１Ｈ）、２．０３－１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．８４－１．７２（ｍ、１Ｈ）、１．７０－１．５２（ｍ、３Ｈ）、１．４５（ｄ、Ｊ ７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．４０－１．２４（ｍ、２Ｈ）、１．１５－１．０５（ｍ、９Ｈ）、１６ ｅｘｃｈａｎｇｅａｂｌｅ ｐｒｏｔｏｎｓ ｎｏｔ ｖｉｓｉｂｌｅ。

【0118】

１．７．２．４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの合成
４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ（化合物１９－２）は、下記反応式１０によって収得した化合物１７－２を前記化合物１４と反応式１１によって反応させて、最終目的化合物である４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを合成した。

【0119】

［反応式１０］

【化32】

【0120】

より具体的に、Ｈ－Ａｌａ－ＯＢｚｌ．ＨＣｌ（４２５ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、１．２当量）をエチルアセテート（１０ｍＬ）に懸濁させ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７１５μＬ、４．１１ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。室温で５分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（９３７ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ、１．５当量）および４－メトキシ安息香酸（２５０ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、前記混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をエチルアセテートで希釈した後、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）および塩水で洗浄した。有機物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した後、減圧下に濃縮させた。残留物をヘプタン中の１５－５０％エチルアセテート勾配で２５ｇカラム上で精製して、無色固体（３６０ｍｇ、７０％収率）の化合物１６－２を収得した。

【0121】

次いで、最小量の水で濡らした１０％Ｐｄ／Ｃ（１８ｍｇ）をメタノール（１５ｍＬ）中の４－ＯＭｅＰｈ－ＡｌａＯＢｎ（化合物１６－２；１８０ｍｇ、０．５７４ｍｍｏｌ）溶液に添加した。混合物を水素雰囲気（バルーン）下で１１０時間撹拌した。その後、前記混合物をセライトパッドを通じてろ過し、メタノールで洗浄した。収得したろ液は、減圧下に濃縮させて、無色オイル（１２８ｍｇ、１００％収率）の化合物１７－２を収得し、これを下記反応式１１によって化合物１４と反応させた。

【0122】

［反応式１１］

【化33】

【0123】

より具体的に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６３．０μＬ、０．３６０ｍｍｏｌ、２．２当量）およびジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１４；２００ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ、１当量）および４－ＯＭｅＰｈ－ＡｌａＯＨ（化合物１７－２；３６．６ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ、１当量）の懸濁液にＨＡＴＵ（７４．５ｍｇ、０．１９６ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。混合物を室温で６４時間撹拌し、前記反応混合物をメタノールで希釈した後、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）および水で洗浄した。有機物を減圧下で濃縮し、残留物を水（０．１％ギ酸）中の５０～９５％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配で６０ｇ、Ｃ１８カラムで精製して、凍結乾燥を経た後、無色固体（１１３ｍｇ、５０％収率）の化合物１８－２を収得した。

【0124】

次いで、１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を２Ｍ塩酸（水性、１．０ｍＬ）および２－プロパノール（２０ｍＬ）中の４－ＯＭｅＰｈ－ＡｌａＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１８－２；１０８ｍｇ、７７．６μｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を水素雰囲気（バルーン）下で１８時間撹拌した。前記混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを通じてろ過した。収得したろ液を減圧下に濃縮させ、残留物を水に溶解させた後、凍結乾燥させた。前記乾燥された物質を水（０．１％ギ酸）中の５～３０％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配を用いて３０ｇ、Ｃ１８カラムで精製し、凍結乾燥して、無色固体（７．０ｍｇ、１０％収率）の化合物１９－２を収得した。

【0125】

化合物１９－２（４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ）の^１Ｈ ＮＭＲデータは、次のように測定された：
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ＝７．７６－７．７１（ｍ、２Ｈ）、７．０２－６．９８（ｍ、２Ｈ）、４．４２－４．２８（ｍ、５Ｈ）、４．２４－４．１３（ｍ、３Ｈ）、４．０９（ｄ、Ｊ ３．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．０１－３．９６（ｍ、２Ｈ）、３．８９（ｓ、２Ｈ）、３．８１（ｓ、３Ｈ）、２．９１（ｔ、Ｊ ７．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．３４（ｔ、Ｊ ７．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．１４－２．０６（ｍ、１Ｈ）、２．００－１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．８５－１．７５（ｍ、１Ｈ）、１．７１－１．５４（ｍ、３Ｈ）、１．４２（ｄ、Ｊ ７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．４０－１．２５（ｍ、３Ｈ）、１．１６－１．０７（ｍ、８Ｈ）、１６ ｅｘｃｈａｎｇｅａｂｌｅ ｐｒｏｔｏｎｓ ｎｏｔ ｖｉｓｉｂｌｅ。

【0126】

１．７．３．２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの合成
２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ（化合物１９－３）は、下記反応式１２によって収得した化合物１７－３を前記化合物１４と反応式１３によって反応させて、最終目的化合物である２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを合成した。

【0127】

［反応式１２］

【化34】

【0128】

より具体的に、Ｈ－Ａｌａ－ＯＢｚｌ．ＨＣｌ（３８８ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、１．２当量）をエチルアセテート（１０ｍＬ）に懸濁させ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６５３μＬ、３．７５ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。室温で５分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（８５５ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ、１．５当量）および［１，１’－ビフェニル］－２－カルボン酸（２９７ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。前記反応混合物をエチルアセテートで希釈した後、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）および塩水で洗浄した。収得した有機物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した後、減圧下に濃縮させた。残留物をヘプタン中の２～４０％エチルアセテート勾配で２５ｇカラムで精製して、無色オイル（４１６ｍｇ、７７％収率）の化合物１６－３を収得した。

【0129】

次いで、最小量の水で濡らした１０％Ｐｄ／Ｃ（４２ｍｇ）をメタノール（２０ｍＬ）中の２－ＰｈＰｈ－ＡｌａＯＢｎ（化合物１６－３；４１６ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を水素雰囲気（バルーン）下で１８時間撹拌した。その後、前記混合物をセライトパッドを通じてろ過し、メタノールで洗浄した。収得したろ液は、減圧下に濃縮させて、無色オイル（３０８ｍｇ、９９％収率）の化合物１７－３を収得し、これを下記反応式１３によって化合物１４と反応させた。

【0130】

［反応式１３］

【化35】

【0131】

より具体的に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６３．０μＬ、０．３６０ｍｍｏｌ、２．２当量）およびジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１４；２００ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ、１当量）および２－ＰｈＰｈ－ＡｌａＯＨ（化合物１７－３；４４．２ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ、１当量）の懸濁液にＨＡＴＵ（７４．５ｍｇ、０．１９６ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。混合物を室温で６４時間撹拌し、前記反応混合物をメタノールで希釈した後、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）および水で洗浄した。有機層を減圧下に濃縮し、残留物を水（０．１％ギ酸）中の５０～９５％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配で６０ｇ、Ｃ１８カラムで精製して、凍結乾燥を経た後、無色固体（１１５ｍｇ、４９％収率）の化合物１８－３を収得した。

【0132】

次いで、１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を２Ｍ塩酸（水性、１．０ｍＬ）および２－プロパノール（２０ｍＬ）中の２－ＰｈＰｈ－ＡｌａＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１８－３；１１０ｍｇ、７６．５μｍｏｌ）溶液に添加した。混合物を水素雰囲気（バルーン）下で１８時間撹拌した。前記混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを通じてろ過した。収得したろ液を減圧下に濃縮させ、残留物を水に溶解させた後、凍結乾燥した。前記乾燥した物質を水（０．１％ギ酸）中の５～５０％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配で３０ｇ、Ｃ１８カラムで精製し、凍結乾燥して、無色固体（２２．７ｍｇ、３１％収率）の化合物１９－３を収得した。

【0133】

化合物１９－３（２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ）の^１Ｈ ＮＭＲデータは、次のように測定された：
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ＝７．５６－７．４８（ｍ、２Ｈ）、７．４４－７．３３（ｍ、７Ｈ）、４．３８－４．２６（ｍ、４Ｈ）、４．２５－４．１３（ｍ、４Ｈ）、４．０８（ｄ、Ｊ ３．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．００－３．９６（ｍ、２Ｈ）、３．８９（ｓ、２Ｈ）、２．９１（ｔ、Ｊ ７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．２５（ｔ、Ｊ ７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．０９－２．０１（ｍ、１Ｈ）、１．９３－１．７７（ｍ、２Ｈ）、１．７２－１．５６（ｍ、３Ｈ）、１．４１－１．２９（ｍ、２Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ ７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．１２（ｄ、Ｊ ５．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．０８（ｄ、Ｊ ６．４Ｈｚ、３Ｈ）、１６ ｅｘｃｈａｎｇｅａｂｌｅ ｐｒｏｔｏｎｓ ｎｏｔ ｖｉｓｉｂｌｅ。

【0134】

１．７．４．Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの合成
Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ（化合物１９－４）は、下記反応式１４によって収得した化合物１７－４を前記化合物１４と反応式１５によって反応させて、最終目的化合物であるＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを合成した。

【0135】

［反応式１４］

【化36】

【0136】

より具体的に、Ｈ－Ａｌａ－ＯＢｚｌ．ＨＣｌ（３８８ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、１．２当量）をエチルアセテート（１０ｍＬ）に懸濁させ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６５３μＬ、３．７５ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。室温で５分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（８５５ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ、１．５当量）および安息香酸（１８３ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で１８時間撹拌した。前記反応混合物をエチルアセテートで希釈した後、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）および塩水で洗浄した。収得した有機物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した後、減圧下に濃縮させた。残留物をヘプタン中の２－５０％エチルアセテート勾配で２５ｇカラムで精製して、無色オイル（３７５ｍｇ、８８％収率）の化合物１６－４を収得した。

【0137】

次いで、最小量の水で濡らした１０％Ｐｄ／Ｃ（３８ｍｇ）をメタノール（３０ｍＬ）中のＰｈ－Ａｌａ－ＯＢｎ（化合物１６－４；３７５ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を水素雰囲気（バルーン）下で４時間撹拌した。その後、前記混合物をセライトパッドを通じてろ過し、メタノールで洗浄した。収得したろ液は、減圧下に濃縮させて、無色ガラス（ｇｌａｓｓ；２５４ｍｇ、９９％収率）の化合物１７－４を収得し、これを下記反応式１５によって化合物１４と反応させた。

【0138】

［反応式１５］

【化37】

【0139】

より具体的に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９７．０μＬ、０．５５６ｍｍｏｌ、２．２当量）およびジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１４；３００ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ、１当量）およびＰｈ－Ａｌａ－ＯＨ（化合物１７－４；４９．０ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ、１）の懸濁液にＨＡＴＵ（１０６ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、前記反応混合物をＮａＨＣＯ_３（飽和水性）で洗浄した。有機物を減圧下に濃縮し、収得した残留物を水（０．１％ギ酸）中の４０～１００％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配で６０ｇ、Ｃ１８カラムで精製して、凍結乾燥を経た後、無色固体（２００ｍｇ、５８％）の化合物１８－４を収得した。

【0140】

次いで、１０％Ｐｄ／Ｃ（１１０ｍｇ）を２Ｍ塩酸（水性、１．０ｍＬ）および２－プロパノール（２０ｍＬ）中のＰｈ－ＡｌａＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１８－４；１１０ｍｇ、８０．８μｍｏｌ）溶液に添加した。混合物を水素雰囲気（バルーン）下で１８時間撹拌した。前記混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを通じてろ過した。収得したろ液を減圧下に濃縮させ、残留物を水に溶解させた後、凍結乾燥させた。前記乾燥した物質を水（０．１％ギ酸）中の５～５０％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配を用いて６０ｇ、Ｃ１８カラムで精製し、凍結乾燥して、無色固体（２３．２ｍｇ、３３％収率）の化合物１９－４を収得した。

【0141】

化合物１９－４（Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ）の^１Ｈ ＮＭＲデータは、次のように測定された：
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ＝７．７４－７．７０（ｍ、２Ｈ）、７．５８－７．５３（ｍ、１Ｈ）、７．４８－７．４３（ｍ、２Ｈ）、４．４５－４．３４（ｍ、３Ｈ）、４．３２－４．２７（ｍ、２Ｈ）、４．２５－４．１４（ｍ、３Ｈ）、４．１１（ｄ、Ｊ ３．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．００－３．９６（ｍ、２Ｈ）、３．８９（ｓ、２Ｈ）、２．９１（ｔ、Ｊ ７．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．３４（ｔ、Ｊ ７．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．１４－２．０６（ｍ、１Ｈ）、２．０１－１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．８５－１．７６（ｍ、１Ｈ）、１．７１－１．５６（ｍ、３Ｈ）、１．４３（ｄ、Ｊ ７．３Ｈｚ、３Ｈ）、１．４０－１．３０（ｍ、２Ｈ）、１．１６－１．０７（ｍ、９Ｈ）、１６ ｅｘｃｈａｎｇｅａｂｌｅ ｐｒｏｔｏｎｓ ｎｏｔ ｖｉｓｉｂｌｅ。

【0142】

１．７．５．Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの合成
Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ（化合物１９－５）は、下記反応式１６によって収得した化合物１７－５を前記化合物１４と反応式１７によって反応させて、最終目的化合物であるＮａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを合成した。

【0143】

［反応式１６］

【化38】

【0144】

より具体的に、Ｈ－Ａｌａ－ＯＢｚｌ．ＨＣｌ（３８８ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、１．２当量）をエチルアセテート（１０ｍＬ）に懸濁させ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６５３μＬ、３．７５ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。室温で５分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（８５５ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ、１．５当量）および２－ナフトエ酸（２５８ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。前記反応混合物をエチルアセテートで希釈した後、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水性）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水性）および塩水で洗浄した。収得した有機物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した後、減圧下に濃縮させた。残留物をヘプタン中の２－４０％エチルアセテート勾配で２５ｇカラムで精製して、無色固体（３８５ｍｇ、７７％収率）の化合物１６－５を収得した。

【0145】

次いで、最小量の水で濡らした１０％Ｐｄ／Ｃ（３９ｍｇ）をメタノール（２０ｍＬ）中の２－Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡｌａＯＢｎ（化合物１６－５；３８５ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を水素雰囲気（バルーン）下で４時間撹拌した。その後、前記混合物をセライトパッドを通じてろ過し、メタノールで洗浄した。収得したろ液は、減圧下に濃縮させて、無色固体（２６６ｍｇ、９５％収率）の化合物１７－５を収得し、これを下記反応式１７によって化合物１４と反応させた。

【0146】

［反応式１７］

【化39】

【0147】

より具体的に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９７．０μＬ、０．５５６ｍｍｏｌ、２．２当量）およびジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１４；３００ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ、１当量）および２－Ｎａｐｈｔｈｙｌ－Ａｌａ－ＯＨ（化合物１７－５；６１．０ｍｇ、０．２５３ｍｍｏｌ、１当量）懸濁液にＨＡＴＵ（１０６ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、次いで、（飽和水性）ＮａＨＣＯ_３で洗浄した。収得した有機層を減圧下に濃縮し、残留物を水（０．１％ギ酸）中の４０～１００％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配で６０ｇ、Ｃ１８カラムで精製して、凍結乾燥を経た後、無色固体（２３０ｍｇ、６４％収率）の化合物１８－５を収得した。

【0148】

次いで、１０％Ｐｄ／Ｃ（１０１ｍｇ）を２Ｍ塩酸（水性、１．０ｍＬ）および２－プロパノール（２０ｍＬ）中の２－Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡｌａＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１８－５；１０１ｍｇ、７１．５μｍｏｌ）溶液に添加した。混合物を水素雰囲気（バルーン）下で３時間撹拌した。前記混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを通じてろ過した。収得したろ液を減圧下に濃縮させ、残留物を水に溶解させた後、凍結乾燥させた。前記乾燥した物質を水（０．１％ギ酸）中の５～４０％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配で３０ｇ、Ｃ１８カラム上で精製し、凍結乾燥して、無色固体（２３．２ｍｇ、３３％収率）の化合物１９－５を収得した。

【0149】

化合物１９－５（Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ）の^１Ｈ ＮＭＲデータは、次のように測定された：
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ＝８．３２（ｓ、１Ｈ）、８．０１－７．９０（ｍ、３Ｈ）、７．７９－７．７３（ｍ、１Ｈ）、７．６４－７．５５（ｍ、２Ｈ）、４．５１－３．７０（ｍ、１３Ｈ）、２．９６－２．８１（ｍ、２Ｈ）、２．３９－２．３０（ｍ、２Ｈ）、２．１８－２．０４（ｍ、１Ｈ）、２．０３－１．９３（ｍ、１Ｈ）、１．８５－１．７２（ｍ、１Ｈ）、１．７１－１．５３（ｍ、３Ｈ）、１．５０－１．４３（ｍ、３Ｈ）、１．３９－１．２４（ｍ、２Ｈ）、１．１９－１．０４（ｍ、９Ｈ）、１６ ｅｘｃｈａｎｇｅａｂｌｅ ｐｒｏｔｏｎｓ ｎｏｔ ｖｉｓｉｂｌｅ。

【0150】

１．８．Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの合成
Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ（化合物１９－６）は、下記反応式１８によって行われて、最終目的化合物であるＡｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを合成した。

【0151】

［反応式１８］

【化40】

【0152】

より具体的に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９４．０μＬ、０．５４０ｍｍｏｌ、２．２当量）およびジクロロメタン（３０ｍＬ）中のＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１４；３００ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、１当量）およびＡｃ－Ａｌａ－ＯＨ（３２．１ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、１当量）の懸濁液にＨＡＴＵ（１１２ｍｇ、０．２９４ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。混合物を室温で１４時間撹拌し、前記反応混合物を（飽和水性）ＮＨ４Ｃｌ、ＮａＨＣＯ_３および水で洗浄した。有機層を減圧下に濃縮し、残留物を水（０．１％ギ酸）中の５０～９５％アセトニトリル（０．１％ギ酸）勾配で６０ｇ、Ｃ１８カラムで精製した。所望の分画を合わせ、凍結乾燥して、無色固体（１０４ｍｇ、３３％収率）の化合物１８－６を収得した。

【0153】

次いで、１０％Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ）を２Ｍ塩酸（水性、０．１９ｍＬ）および２－プロパノール（５ｍＬ）中のＡｃ－ＡｌａＧｌｎＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＴｈｒ（ＯＢｎ）ＧｌｙＬｙｓ（Ｃｂｚ）Ｔｈｒ（ＯＢｎ）ＯＢｎ（化合物１８－６；３３ｍｇ、２５μｍｏｌ）溶液に添加した。混合物を水素雰囲気（バルーン）下で１４時間撹拌した。前記混合物を０．４５μｍシリンジフィルターを通じてろ過した。収得したろ液を減圧下に濃縮させ、水に溶解させた後、凍結乾燥した。前記乾燥した物質をメタノール中の０．５Ｍアンモニアで溶離させながら、５００ｍｇ ＳＣＸ－２カートリッジで精製した。所望の分画を合わせ、減圧下に濃縮した後、凍結乾燥して、無色固体（７．６ｍｇ、３７％収率）の化合物１９－６を収得した。

【0154】

化合物１９－６（Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ）の^１Ｈ ＮＭＲデータは、次のように測定された：
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ＝４．４０－４．３３（ｍ、２Ｈ）、４．３２－４．２７（ｍ、２Ｈ）、４．２４－４．１２（ｍ、４Ｈ）、４．０８（ｄ、Ｊ ４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．０３－３．８８（ｍ、４Ｈ）、２．９２（ｔ、Ｊ ７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．３２（ｔ、Ｊ ７．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．１５－２．０２（ｍ、１Ｈ）、１．９９－１．８８（ｍ、４Ｈ）、１．８６－１．７６（ｍ、１Ｈ）、１．７４－１．５５（ｍ、３Ｈ）、１．４５－１．３１（ｍ、２Ｈ）、１．２９（ｔ、Ｊ ７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．２０－１．０６（ｍ、１０Ｈ）、１６ ｅｘｃｈａｎｇｅａｂｌｅ ｐｒｏｔｏｎｓ ｎｏｔ ｖｉｓｉｂｌｅ。

【0155】

１．９．４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの合成
１．９．１．ＱＴＧＴＧＫＴ中間体の合成
４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ合成のための中間体ＱＴＧＴＧＫＴは、下記反応式１９～反応式２３によって合成した：

【0156】

［反応式１９］

【化41】

【0157】

［反応式２０］

【化42】

【0158】

［反応式２１］

【化43】

【0159】

［反応式２２］

【化44】

【0160】

［反応式２３］

【化45】

【0161】

前記反応式１９～反応式２３は、ベンジル保護基の有無を除いては、前記反応式１～反応式５とほぼ類似の過程であり、重複する説明は省略することとする。

【0162】

１．９．２．４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの合成
前記反応式２３で収得した化合物３１は、下記反応式２４で合成されたアラニン誘導体と反応式２５によって結合されて、最終生成物４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを収得した。

【0163】

［反応式２４］

【化46】

【0164】

［反応式２５］

【化47】

【0165】

また、前記反応式２４および反応式２５は、前述した反応式とほぼ類似の過程によって進行されたところ、重複する説明は省略することとする。最終的に無色固体（５８３ｍｇ、６８％収率）の化合物３６を収得した。

【0166】

化合物３６（４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ）の^１Ｈ ＮＭＲデータは、次のように測定された：
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）：δ＝７．８５（ｄ、Ｊ ８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、Ｊ ８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ ７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．４９（ｔ、Ｊ ７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．４２（ｔ、Ｊ ７．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．３４－４．０４（ｍ、６Ｈ）、４．０７（ｄ、Ｊ ３．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．９３（ｄ、Ｊ ２．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．８２（ｔ、Ｊ ７．０Ｈｚ、２Ｈ）、１．８２－１．６７（ｍ、１Ｈ）、１．６６－１．５５（ｍ、１Ｈ）、１．５４－１．４４（ｍ、２Ｈ）、１．３７－１．２２（ｍ、２Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ ６．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．０６（ｔ、Ｊ ６．５Ｈｚ、３Ｈ）、１０ ｅｘｃｈａｎｇｅａｂｌｅ ｐｒｏｔｏｎｓ ｎｏｔ ｖｉｓｉｂｌｅ。

【0167】

１．１０．化合物の確認
前記製法によって収得したＡＱＴＧＴＧＫＴアナログ７種は、^１Ｈ ＮＭＲおよびＵＰＬＣ－ＭＳ（ｕｌｔｒａｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）技法で分析して、化学構造を確認した。分析結果は、図１～図７に示し、化合物は、表１に整理した。

【0168】

【表1】

【0169】

実施例２：ＡＱＴＧＴＧＫＴアナログの抗がん効果の確認
２．１．肺がん細胞活性抑制効果
前記実験方法で記述したＣＴＧ分析方法によって肺がん細胞株Ｈ１２９９にＡＱＴＧＴＧＫＴアナログを１００μＭの濃度で４８時間処理したり、肺がん細胞株Ｈ８２０またはＨ１９７５にＡＱＴＧＴＧＫＴアナログを１０μＭの濃度で７２時間処理した後、各アナログの細胞毒性を比較した。

【0170】

その結果、図８に示されたように、Ｈ１２９９細胞株に４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを処理した場合には、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、細胞の活性が約１０％減少し、Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは４．２％、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは１５％、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは１２％、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは２０％、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは１８％、Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは１４％の細胞活性抑制効果を示した。

【0171】

Ｈ１９７５細胞株の場合、図９に示されたように、Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを処理した場合には、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、細胞の活性が約１６％減少し、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは３３％、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは４％、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは３％の細胞活性抑制効果を示した。

【0172】

また、Ｈ８２０細胞株の場合、図１０に示されたように、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを処理した場合には、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、細胞の活性が約１２％減少し、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは１０％の細胞活性抑制効果を示した。

【0173】

このような結果は、前記アミド化アナログが肺がん細胞の分裂を非常に効果的に抑制できることを示す。

【0174】

２．２．乳がん細胞の活性および増殖抑制効果
（１）乳がん細胞の活性抑制効果
前記実験方法で記述したＣＴＧ分析方法によって乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１にＡＱＴＧＴＧＫＴアナログを１００μＭの濃度で４８時間処理した後、細胞内のＡＴＰ量を測定することによって、細胞の活性を比較した。

【0175】

その結果、図１１ａに示されたように、４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを処理した場合には、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、細胞の活性が約３０％減少効果を示し、乳がん細胞の分裂を抑制するのに卓越した効果があることを立証した。

【0176】

（２）乳がん細胞の成長および増殖能抑制効果
前記実験方法で記述したＭＴＴ分析方法によって乳がん細胞株にＡＱＴＧＴＧＫＴアナログを処理して、細胞増殖抑制効果を比較した。乳がん細胞株としてＨＣＣ１９３７を用いた。

【0177】

ＨＣＣ１９３７細胞株にＡｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、Ｎａｐｈｔｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを１００μＭの濃度で処理し、７２時間後に細胞増殖抑制効果を比較した。その結果、図１１ｂに示されたように、Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、およびＮａｐｈｔｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、細胞増殖をそれぞれ約１１．１％、１７．１％、１４．３％、１５．９％、１３．６％、および９．５％抑制したことが示された。

【0178】

前記実験結果は、本発明によるＡＱＴＧＴＧＫＴアナログが乳がんに対して優れた抗がん効果を発揮することを示す。

【0179】

２．３．血液がん細胞の成長および増殖能抑制効果
前記実験方法で記述したＭＴＴ分析方法によって血液がん細胞株にＡＱＴＧＴＧＫＴアナログを処理して細胞毒性を比較した。血液がん細胞株としてＪｕｒｋａｔ ｃｌｏｎｅ Ｅ６－１を用いた。

【0180】

Ｊｕｒｋａｔ ｃｌｏｎｅ Ｅ６－１に４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、およびＮａｐｈｔｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴをそれぞれ１０μＭの濃度で処理し、４８時間後に細胞増殖抑制効果を比較した。その結果、図１２に示されたように、４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、およびＮａｐｈｔｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、細胞増殖をそれぞれ約４．８％、７．９％、６．４％、４％、６．７％、１０．２％、および１０．４％抑制したことが示された。

【0181】

上記のような結果は、本発明によるＡＱＴＧＴＧＫＴアナログが血液がん細胞に対して優れた抗がん効果があることを示す。

【0182】

２．４．膵臓がん細胞の成長および増殖能抑制効果
前記実験方法で記述したＭＴＴ分析方法によって膵臓がん細胞株ＣＦＰＡＣ－１にＡＱＴＧＴＧＫＴアナログを１０μＭの濃度で７２時間処理して、細胞毒性を比較した。

【0183】

その結果、図１３に示されたように、４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを処理した場合には、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、細胞の活性が約１２％減少し、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは２％、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは６％、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは３％、Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは３％の細胞活性抑制効果を示した。

【0184】

上記のような結果は、本発明によるＡＱＴＧＴＧＫＴアナログが膵臓がん細胞に対する優れた抗がん効果があることを示す。

【0185】

２．５．大腸がん細胞の成長および増殖能抑制効果
前記実験方法で記述したＭＴＴ分析方法によって大腸がん細胞株ＨＴ２９にＡＱＴＧＴＧＫＴアナログを５０μＭの濃度で７２時間処理して、細胞毒性を比較した。

【0186】

その結果、図１４に示されたように、４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを処理した場合には、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、細胞の増殖が約８％減少し、Ａｃ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは５８％、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは５９％、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは４８％、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは７％、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは４０％、Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは５８％の細胞増殖抑制効果を示した。上記のような結果は、本発明によるＡＱＴＧＴＧＫＴアナログが大腸がん細胞に対する優れた抗がん効果があることを示す。

【0187】

２．６．肺がん細胞を接種した動物モデルにおける腫瘍成長抑制効果
前記実験方法で記述した動物実験分析方法によって肺がん細胞株Ｈ８２０が移植されたヌードマウスにＡＱＴＧＴＧＫＴアナログを１０ｍｐｋの用量で３日間隔で５回、２日間隔で５回、合計で１０回処理して、腫瘍の成長を比較した。

【0188】

その結果、図１５に示されたように、Ｈ８２０肺がん細胞株を移植した後、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを処理した場合には、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、腫瘍の成長が約１６．５％減少し、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは２７％、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは２０％、Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴは２６％の腫瘍成長の抑制効果を示した。

【0189】

また、Ｈ１９７５肺がん細胞を移植したヌードマウスにＡＱＴＧＴＧＫＴアナログを１０ｍｐｋの用量で１４日間処理して、腫瘍の成長を比較した。

【0190】

その結果、図１６に示されたように、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴを処理した場合には、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ）と比較して、腫瘍の成長が約１６．５％減少して、腫瘍成長の抑制効果を示した。

【0191】

総合的に、上記のような結果は、肺がん細胞を移植した動物モデルにおいて本発明の化合物に優れた抗がん効果があることを示す。

【0192】

２．７．乳がん細胞を接種した動物モデルにおける腫瘍成長抑制効果
前記実験方法で記述した動物実験分析方法によって乳がん細胞株が移植された免疫不全マウスにＡＱＴＧＴＧＫＴとＡＱＴＧＴＧＫＴアナログ３種（３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、およびＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ）を１０ｍｐｋの用量で２日間隔、合計で７回尾静脈投与して、腫瘍の成長を比較した。

【0193】

アナログ７回投与を終えて２日後である１５日目に腫瘍の体積を算出した結果、ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループは平均１８８４．１７ｍｍ^３、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループは９４４．７０ｍｍ^３、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループは８１２．６９ｍｍ^３、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループは１１３３．８０ｍｍ^３と測定され、ＡＱＴＧＴＧＫＴグループの腫瘍体積と比べて約４９．８６％、５６．８６％、３９．８２％と腫瘍の成長を抑制した（図１７）。

【0194】

総合的に、上記のような結果は、乳がん細胞を移植した動物モデルにおいてマウスの体重には影響を及ぼさずに、本発明の化合物に優れた抗がん効果があることを示す。

【0195】

２．８．大腸がん細胞を接種した動物モデルにおける腫瘍成長抑制効果
前記実験方法で記述した動物実験分析方法によってＣＡＧＥ遺伝子の発現を誘導したＣＴ２６細胞株が移植されたマウスにＡＱＴＧＴＧＫＴおよびＡＱＴＧＴＧＫＴアナログ２種（３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴおよびＮａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ）をそれぞれ１０ｍｐｋの用量で２日間隔、合計で７回尾静脈投与して、腫瘍の成長を比較した。

【0196】

その結果、対照群（ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与群）と比べて、アナログ投与グループは、１０日後から腫瘍の成長が抑制されたことが示され、アナログ７回投与の翌日である１４日に腫瘍の体積を算出した結果、ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループは平均２５７３．０７ｍｍ^３、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループは平均８８０．３５ｍｍ^３、Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループは平均８８０．３５ｍｍ^３であることが確認された（図１８）。ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループと比較して、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループは約６５．７９％、Ｎａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループは約６２．０４％と腫瘍の成長が抑制されたことが示された。１２日および１４日基準、ＡＱＴＧＴＧＫＴ投与グループと比較して、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、Ｎａｐｈｔｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの２種のアナログ投与グループにおいてｐ＜０．００１と統計的に有意に腫瘍の成長を抑制した。

【0197】

総合的に、上記のような結果は、ＣＡＧＥの発現を誘導したＣＴ２６細胞を移植した動物モデルにおいてマウスの体重には影響を及ぼさずに、本発明の化合物に優れた抗がん効果があることを示す。

【0198】

実施例３：ＡＱＴＧＴＧＫＴアナログの血液内安定性の確認
本発明によるＡＱＴＧＴＧＫＴアナログが血液内で何分間安定に存在するかを確認するために、１００％ヒト血液に１０μＭの各化合物を入れ、０、５、１０、１５、３０、６０および１２０分が経過した時点で血液内残留量を測定した。

【0199】

その結果、図１９～図２６に示されたように、ＡＱＴＧＴＧＫＴの場合には、半減期が１分も経っておらず、２０分以内に血液内でほとんど分解されて、残留ＡＱＴＧＴＧＫＴがほとんど検出されないことが確認された。これに対し、本発明による７種のＡＱＴＧＴＧＫＴアナログは、全部顕著に向上した安定性を示したが、特に４－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、３－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、４－ＭｅＯＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、２－ＰｈＰｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴ、Ｐｈ－ＡＱＴＧＴＧＫＴおよびＮａｐｈｔｈｙｌ－ＡＱＴＧＴＧＫＴの場合には、４７分～１０５分の半減期を示し、１２０分が経過した後にも、２０～４０％が血液内残留して、高い安定性を示した。このような結果は、アミド化アナログがさらに優れた抗がん効果を示すだけでなく、より一層向上した血液内安定性を示して、標的に到達するまで分解されずに安定に存在できることを示す結果である。

【0200】

上述した本発明の説明は、例示のためのものであって、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者は、本発明の技術的思想や必須的な特徴を変更することなく、他の具体的な形態に容易に変形が可能であることが理解することができる。したがって、以上で記述した実施例は、全ての面において例示的なものであり、限定的でないものと理解すべきである。

【産業上の利用可能性】

【0201】

本発明は、新規のオリゴペプチドＡＱＴＧＴＧＫＴのアナログ化合物、これを有効成分として含むがんの予防または治療用薬学的組成物およびその製造方法に関し、前記オリゴペプチドＡＱＴＧＴＧＫＴのアナログが優れた抗がん効果を示し、ヒトの血液内で安定に存在することを確認した。したがって、本発明による薬学的組成物は、オリゴペプチドが持っている長所である抗体に比べて分子量が小さくて、免疫反応の恐れが少なく、組織内に浸透が容易であるという点に加えて、がん細胞の増殖抑制効果に非常に優れており、ヒトの血液内で安定に存在できる効果を示すので、がんを治療するのに有用な抗がん剤として使用できることが期待される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11a】

【図11b】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【配列表】

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