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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-12-26
(45)【発行日】2025-01-10
(54)【発明の名称】Ｔ細胞リンパ腫の処置
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20241227BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241227BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241227BHJP
A61K 31/7068 20060101ALI20241227BHJP
A61K 31/282 20060101ALI20241227BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 T ZNA
A61P35/00
A61P43/00 121
A61K39/395 E
A61K31/7068
A61K31/282
【請求項の数】
14
(21)【出願番号】P 2021542146
(86)(22)【出願日】2020-01-20
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-04-26
(86)【国際出願番号】 EP2020051234
(87)【国際公開番号】W WO2020152081
(87)【国際公開日】2020-07-30
【審査請求日】2023-01-19
(31)【優先権主張番号】62/795,194
(32)【優先日】2019-01-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】506000184
【氏名又は名称】イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニム
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＮＡＴＥ ＰＨＡＲＭＡ ＰＨＡＲＭＡ Ｓ．Ａ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(74)【代理人】
【識別番号】100170520
【弁理士】
【氏名又は名称】笹倉 真奈美
(72)【発明者】
【氏名】アブデラジム，ハテム
(72)【発明者】
【氏名】パトゥレル，カリーヌ
【審査官】川合 理恵
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１８／０７３３６３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１６－５１３１０４（ＪＰ，Ａ）
【文献】LISA ARGNANI; ET AL，CUTANEOUS T-CELL LYMPHOMAS: FOCUSING ON NOVEL AGENTS IN RELAPSED AND REFRACTORY DISEASE，CANCER TREATMENT REVIEWS，2017年10月28日，VOL:61，PAGE(S):61 - 69，http://dx.doi.org/10.1016/j.ctrv.2017.10.007
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＴＣＬの処置における使用のための、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し、かつＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を除去することができる抗体を含む医薬組成物であって、ここで該医薬組成物は、ゲムシタビン及びオキサリプラチンと組み合わせて投与され、およびここで該抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、オキサリプラチン及びゲムシタビンが、別々の投与のために製剤化され、かつ並行して又は順次投与される、医薬組成物。
【請求項2】
ゲムシタビンが、２週間ごとに１回、８００～１０００ｍｇ／ｍ２の用量で投与され、及びオキサリプラチンが、２週間ごとに１回、７５～１００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項3】
ゲムシタビンが、２週間ごとに１回、８００～１０００ｍｇ／ｍ２の用量で投与され、及びオキサリプラチンが、３週間ごとに１回、７５～１３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項4】
抗体が、１週間当たり１回～４週間ごとに１回投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項5】
抗体が、１週間当たり１回投与され、任意選択で抗体が、第１相において１週間当たり１回投与され、続いて、第２相において２週間ごとに１回又は１ヵ月当たり１回投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項6】
前記ＴＣＬが、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）である、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項7】
前記ＰＴＣＬが、成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、ＰＴＣＬ－ＮＯＳ又は未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）である、請求項６に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項8】
抗体が、１～２０ｍｇ／ｋｇの用量、任意選択で７５０ｍｇの用量で投与される、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項9】
抗体が、少なくとも１回の投与サイクルを含むレジメンにおいて投与され、前記少なくとも１回のサイクルのそれぞれについて、２、３又は４用量の前記ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体が投与され、且つ少なくとも２、３又は４用量のゲムシタビンが投与され、及び任意選択でオキサリプラチンが投与され、ゲムシタビンが、２週間ごとに１回、８００～１０００ｍｇ／ｍ２の用量で投与され、オキサリプラチンが、２週間ごとに１回、７５～１３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項10】
個人におけるＴＣＬの前記処置が、ａ）ＴＣＬを有する前記個人内の悪性細胞のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドステータスを決定することと、
ｂ）前記個人が、悪性細胞の表面上に発現されるＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを有すると決定されると、オキサリプラチン及びゲムシタビンと組み合わせて、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する前記抗体を前記個人に投与することと
を含む、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項11】
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する前記抗体が、（ａ）配列番号４８～５１のいずれかの２Ｂ１２ ＶＨと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号４３～４７のいずれかの２Ｂ１２ ＶＬと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項12】
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する前記抗体が、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｂ）配列番号４４又は４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項13】
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し、かつＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を除去することができる抗体と組み合わせて、ＴＣＬの処置において使用するための、ゲムシタビン及びオキサリプラチンを含む医薬組成物であって、ここで該抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、オキサリプラチン及びゲムシタビンが、別々の投与のために製剤化され、かつ並行して又は順次投与される、医薬組成物。
【請求項14】
ＴＣＬの処置における使用のためのキットであって、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を除去することができる抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含有する医薬組成物、オキサリプラチンを含有する医薬組成物、及びゲムシタビンを含有する医薬組成物を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１月２２日に提出された米国仮特許出願第６２／７９５，１９４号明細書の利益を主張し、これは、任意の図面を含め、その全体が参照によって本明細書に援用される。
本出願は、２０１９年１月２２日に提出された米国仮特許出願第６２／７９５，１９４号明細書の利益を主張し、これは、任意の図面を含め、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【0002】
配列表に対する参照
本出願は、電子形式の配列表と共に提出される。配列表は、サイズが５４ＫＢである、２０２０年１月１４日に作られた「ＫＩＲ－９ ＰＣＴ＿ＳＴ２５」というタイトルのファイルとして提供される。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、電子形式の配列表と共に提出される。配列表は、サイズが５４ＫＢである、２０２０年１月１４日に作られた「ＫＩＲ－９ ＰＣＴ＿ＳＴ２５」というタイトルのファイルとして提供される。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0003】
本発明は、Ｔ細胞リンパ腫の診断及び処置のためのＫＩＲ３ＤＬ２標的作用物質の使用に関する。
【背景技術】
【0004】
ＫＩＲ３ＤＬ２／ＣＤ１５８ｋは、健康な循環ＮＫリンパ球及びＣＤ８＋Ｔリンパ球の亜集団に発現される細胞表面受容体である。しかしながら、ＫＩＲ３ＤＬ２は、悪性Ｔ細胞、特に悪性ＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上にも見出されており、その結果、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）の処置のための標的としてさらに浮上した。
【0005】
ＫＩＲ３ＤＬ２発現ＴＣＬは、菌状息肉腫（ＭＦ）及びセザリー症候群（ＳＳ）などのような皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば、特許文献１（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）及び特許文献２（ＩＮＳＥＲＭ）を参照されたい）並びに末梢Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫（例えば、特許文献３、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａを参照されたい）を含む。ＭＦ及びＳＳは、比較的稀であるが、ＰＴＣＬは、西洋諸国において、高悪性度リンパ腫の１５％～２０％、すべての非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の７％～１０％を占める。それらは、通常、中年～高齢の患者において生じ、主要な特徴は、患者の６８％における播種性疾患によって特徴付けられ、そのほぼ半分（４５％）において全身症状、４分の１（２５．８％）において骨髄（ＢＭ）病変及び３分の１（３７％）において節外性疾患を伴う。積極的な療法にもかかわらず、半分を超える患者がそれらの疾患で死亡する。ある特有の疾病は、処置された場合、予後徴候を改善したが、多くの侵攻性ＰＴＣＬについての予後は、第２及び第３世代の化学療法レジメンを使用しても比較的変わらず、５年間の全生存（ＯＳ）は、依然として例えばＰＴＣＬ－ＮＯＳについて２５％～４７％のままである。
【0006】
ＫＩＲ３ＤＬ２に特異的に結合する抗体は、当技術分野においてよく知られている。Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａは、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２上の一連の様々なエピトープに向けられる多くの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、例えば特許文献４及び特許文献５において記載される抗体１５Ｃ１１、１９Ｈ１２、２２Ｂ２、１８Ｂ１０、１２Ｂ１１、１３Ｈ１、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３及び２０Ｅ９を記載した。Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａによる治験は、ヒト菌状息肉腫及びセザリー症候群患者における抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の有望な結果を実証した。特に、難治性ＳＳ患者からのデータは、単剤ＩＰＨ４１０２（ＡＤＣＣ媒介性抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体）の反復投与による処置に際して、４２．９％の全奏効率（ＯＲＲ）、１３．８ヵ月の奏効期間の中央値（ＤｏＲ）及び１１．７ヵ月の無増悪生存期間の中央値（ＰＦＳ）によって実証される強い臨床活性を明らかにした。これらの望みをもたせ、そのうえ副作用がほとんどない結果並びに健康なＫＩＲ３ＤＬ２発現ＮＫ細胞及びＴ細胞の除去を引き起こすことなく悪性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を除去することができることは、ＴＣＬの処置において重要な前進をもたらす。しかしながら、患者の中には、疾患の進行を示し、且つ／又は最初の処置に十分に応答しなかった者もいた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【文献】国際公開第２０１０／０８１８９０号パンフレット
【文献】国際公開第０２／５０１２２号パンフレット
【文献】国際公開第２０１４／１２８２２１号パンフレット
【文献】国際公開第２０１４／０４４６８１号パンフレット
【文献】国際公開第２０１４／０４４６８６号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
その結果、ＴＣＬを有する患者にとっての利益の改善が当技術分野において必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明は、とりわけ、ゲムシタビン及びオキサリプラチンが、それぞれ悪性Ｔ細胞においてＫＩＲ３ＤＬ２発現の増加を引き起こすことができ、及びこれらの薬剤が抗ＫＩＲ３ＤＬ２除去抗体と組み合わされると、結果として悪性Ｔ細胞を除去する免疫細胞（ＮＫ細胞）の能力の劇的な増加につながるという発見に由来する。
【0010】
興味深いことに、ゲムシタビン及びオキサリプラチンのそれぞれは、別々にＴＣＬ細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２発現を増加させただけでなく、ゲムシタビン＋オキサリプラチンの組み合わせは、ＴＣＬ細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２発現のさらなる増加を引き起こした。ゲムシタビン＋オキサリプラチン＋抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の３つを合わせると、結果として、個別の薬剤と比較して悪性Ｔ細胞を除去する免疫細胞（ＮＫ細胞）の強い能力につながることも観察された。ゲムシタビン（若しくはヌクレオシドアナログ）及び／又はオキサリプラチン（若しくは他の白金化合物）は、そのため、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の活性を強化するために、又は特にリンパ球（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）にＴＣＬ細胞を排除させる抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の能力を強化するために使用することができる。
【0011】
ゲムシタビン及び／又は白金ベースの化合物の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体との組み合わせは、そのため、ＴＣＬ（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現ＴＣＬ、ＰＴＣＬ、ＣＴＣＬ、ＳＳ又はＭＦ）を有する患者の特に有利な処置を提供することができる。
【0012】
ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））は、ヌクレオシド代謝阻害剤として、以下を含む多くの癌腫に対して承認されている：
－ カルボプラチンと組み合わせて、白金ベースの療法の終了の少なくとも６ヵ月後に再発した進行卵巣癌の処置のため、
－ パクリタキセルと組み合わせて、アントラサイクリンが臨床上禁忌である場合を除いて、先に行われたアントラサイクリン含有補助化学療法に失敗した後の転移性乳癌の第一選択処置のため、
－ シスプラチンと組み合わせて、非小細胞肺癌の処置のため、及び
－ 膵臓癌の処置のための単剤として。
－ カルボプラチンと組み合わせて、白金ベースの療法の終了の少なくとも６ヵ月後に再発した進行卵巣癌の処置のため、
－ パクリタキセルと組み合わせて、アントラサイクリンが臨床上禁忌である場合を除いて、先に行われたアントラサイクリン含有補助化学療法に失敗した後の転移性乳癌の第一選択処置のため、
－ シスプラチンと組み合わせて、非小細胞肺癌の処置のため、及び
－ 膵臓癌の処置のための単剤として。
【0013】
オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））は、以下に対して承認されている白金ベースの薬剤である：
－ 原発腫瘍の完全切除を受けたことがある患者における病期ＩＩＩ結腸癌の補助的処置、及び
－ 進行結腸直腸癌の処置。
－ 原発腫瘍の完全切除を受けたことがある患者における病期ＩＩＩ結腸癌の補助的処置、及び
－ 進行結腸直腸癌の処置。
【0014】
したがって、一態様において、本発明は、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させる薬剤又は処置（例えば、化学療法剤）と組み合わせた、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体の使用を介して、ＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性Ｔ細胞に対する抗腫瘍免疫応答を媒介するための改善された方法を提供する。
【0015】
一態様において、本開示は、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させるための手段と組み合わせた、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合することができる抗体の使用を介して、抗腫瘍免疫応答を増強するための改善された方法を提供する。一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させるための手段は、化学療法剤（例えば、ヌクレオシドアナログ及び／又は白金製剤）並びに薬学的に許容され得るキャリヤを含む医薬組成物である。
【0016】
一態様において、ＴＣＬの処置において使用するための、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体が本明細書において提供され、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体は、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させる薬剤と組み合わせて投与される。
【0017】
一態様において、ＴＣＬの処置において使用するための、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させる薬剤が本明細書において提供され、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させる薬剤は、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体と組み合わせて投与される。
【0018】
一実施形態において、個人におけるＴＣＬ細胞を処置又は予防する方法であって、（ａ）悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させる薬剤、及び（ｂ）ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体を個人に投与することを含む方法が提供される。
【0019】
一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体の抗腫瘍効果を強化する方法であって、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させる薬剤を個人に投与することを含む方法が提供される。
【0020】
一実施形態において、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させるための薬剤又は手段は、白金ベースの薬剤である。一実施形態において、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させるための薬剤又は手段は、ヌクレオシド代謝阻害剤、任意選択でゲムシタビン又はそのアナログ若しくは誘導体である。一実施形態において、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させるための薬剤又は手段は、配合剤又は白金ベースの薬剤及びヌクレオシド代謝阻害剤（例えば、ゲムシタビン又はそのアナログ若しくは誘導体）である。
【0021】
一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞（例えば、悪性Ｔ細胞）のエフェクター細胞媒介性溶解を媒介又は誘導する抗体である。一実施形態において、抗体は、ＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰを媒介することができるＦｃドメインを含む。一実施形態において、抗体は、免疫エフェクター細胞の表面に発現される（例えば、免疫エフェクター細胞上のキメラ抗原受容体の一部として）。任意選択で、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に向けてＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰを誘導する単一特異性又は多重特異性（例えば、二重特異性）抗体である。任意の態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を除去することができる抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を除去することができる組成物として特徴付けることができ、組成物は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体を含む。一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体は、ラクタマブ（ｌａｃｕｔａｍａｂ）である。
【0022】
本明細書における任意の実施形態の一態様において、個人は、ヒトであると指定することができる。
【0023】
一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させるための薬剤又は手段は、それぞれ治療有効量で投与される。
【0024】
一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現腫瘍細胞に向けてのＡＤＣＣを媒介するのに十分な量及び頻度において、癌を有する個人に投与される。
【0025】
一実施形態において、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させるための薬剤又は手段は、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現の増加を引き起こすのに十分な量及び頻度において、癌を有する個人に投与される。
【0026】
本明細書における任意の態様において、本開示に従って処置される個人は、ノンレスポンダーであるか、又はＴＣＬのための先に行われた処置時に部分奏効若しくは不完全奏効を経験した個人であり得る。
【0027】
他の実施形態において、抗癌剤が悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させることができるかどうかを決定又は評価する（例えば、インビトロにおいて）ことを含む、ＴＣＬの処置のための、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体と組み合わせた使用のための抗癌剤の効能又は適合性を予測又は評価する方法であって、抗癌剤が悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させることができるという決定は、薬剤が抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と組み合わせて癌の処置に使用され得ることを示す、方法が提供される。抗癌剤が悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２の発現を誘発するか又は増加させることができるかどうかを決定又は評価することは、例えば、悪性ＫＩＲ３ＤＬ２発現Ｔ細胞（例えば、腫瘍細胞）をインビトロにおいて薬剤と接触させることと、ＫＩＲ３ＤＬ２の発現を評価することとを含み得る。一実施形態において、抗癌剤は、化学療法剤、任意選択でヌクレオシドアナログ又は白金製剤である。
【0028】
これらの態様は、本明細書において提供される本発明の説明においてより詳細に記載され、他の態様、特徴及び利点は、本明細書において提供される本発明の説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0029】
【図1】ＨＵＴ７８ ＴＣＬ細胞系（セザリー症候群）に対する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の細胞毒性を示し、抗ＫＩＲ３ＤＬ２の抗腫瘍活性は、ゲムシタビン及びオキサリプラチンのそれぞれによって増強され、ゲムシタビン及びオキサリプラチンの組み合わせによってさらにより増強された。
【図2】ゲムシタビン及びオキサリプラチンが腫瘍細胞における細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２発現を増加させることを示す。ＲＡＪＩ－ＫＩＲ３ＤＬ２（４８時間のインキュベーション）（図２、左側のパネル）又はＨｕｔ７８（トランスフェクトＢ－ＮＨＬ細胞系；２４時間のインキュベーション（図２、右側のパネル）を、ゲムシタビン及びオキサリプラチンの用量を上昇させながらインキュベートした。腫瘍細胞系表面上のＫＩＲ３ＤＬ２の蛍光強度の中央値をフローサイトメトリーによって分析した。
【図3】Ｒａｊｉ－ＫＩＲ３ＤＬ２をＩＶ移植し、１週間に２回、以下により処置したマウス（１グループ当たりｎ＝９）の生存期間を示す：アイソタイプコントロールｍＡｂ、ＩＰＨ４１０２（１回の注射当たり０．３μｇ）、ゲムシタビン（５０ｍｇ／ｋｇ）若しくはオキサリプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）、ＩＰＨ４１０２＋ゲムシタビンの両方又はＩＰＨ４１０２＋オキサリプラチンの両方。
【発明を実施するための形態】
【0030】
本明細書において使用されるように、「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、１つ以上を意味し得る。請求項において使用される場合、語「含む」と共に使用される場合、語「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、１つ又は２つ以上を意味し得る。本明細書において使用されるように、「他の」は、少なくとも第２の又はそれを超えるものを意味し得る。
【0031】
「含む」が使用される場合、これは、任意選択で、「～から本質的になる」又は「～からなる」と交換することができる。
【0032】
本明細書全体内で、いつでも、「ＴＣＬの処置」又は同種のものは、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤（例えば、抗体）に関して言及され、（ａ）ＴＣＬの処置を可能にする用量（治療有効量）で、例えば上記に及び下記に指定される用量（量）で、そのような処置を必要とする温血動物、とりわけヒトに、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤（例えば、薬学的に許容され得るキャリヤ材料中の）を投与するステップを含む（少なくとも１つの処置のための）、ＴＣＬの処置の方法；（ｂ）ＴＣＬの処置のための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤若しくは前記処置における（とりわけヒトにおける）使用のための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の使用；（ｃ）ＴＣＬの処置のための医薬調製物の製造のための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の使用、ＴＣＬの処置のための医薬調製物の製造に抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を使用する方法であって、薬学的に許容され得るキャリヤと抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を混合することを含む方法若しくはＴＣＬの処置に適切な、有効用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を含む医薬調製物；又は（ｄ）本出願が提出される国において特許を受けるのに許容される主題に従うａ）、ｂ）及びｃ）の任意の組み合わせを意味する。
【0033】
本明細書において使用される用語「抗体」は、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体を指す。重鎖中の定常ドメインのタイプに依存して、抗体は、５つの主なクラスのうちの１つに割り当てられる：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ。これらのいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４及び同種のものなどのサブクラス又はアイソタイプにさらに分けられる。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。それぞれの四量体は、同一の２対のポリペプチド鎖から構成され、それぞれの対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。それぞれの鎖のＮ－末端は、抗原認識を主として担う約１００～１１０又はそれを超えるアミノ酸の可変領域を定める。可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれこれらの軽鎖及び重鎖を指す。異なるクラスの免疫グロブリンに相当する重鎖定常ドメインは、「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」及び「ミュー」とそれぞれ称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元立体配置は、よく知られている。ＩｇＧは、それらが生理学的状況において最も一般的な抗体であるため、また、それらが研究所の環境において最も容易に作製されるため、本明細書において用いられる例示的なクラスの抗体となる。一実施形態では、抗体が、モノクローナル抗体である。ヒト化、キメラ、ヒト又はそうでなければヒトに適した抗体が提供される。「抗体」は、完全長抗体及び本明細書に記載される抗体の任意の断片又は誘導体を含む。
【0034】
「超可変領域」という用語は、本明細書において使用される場合、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」若しくは「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）及び８９～９７（Ｌ３）並びに重鎖可変ドメインにおける３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）及び９５～１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．１９９１）並びに／若しくは「超可変ループ」由来のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）及び９１～９６（Ｌ３）並びに重鎖可変ドメインにおける２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）及び９６～１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ １９８７；１９６：９０１－９１７）又は抗原結合を担う必須アミノ酸を決定する類似の系を含む。典型的には、この領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、前掲において記載される方法によって実行される。本明細書における「Ｋａｂａｔ位置」、「Ｋａｂａｔの可変ドメイン残基ナンバリング」及び「Ｋａｂａｔに従う」などのような句は、重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインについてのこのナンバリング方式を指す。Ｋａｂａｔナンバリング方式を使用すると、ペプチドの実際の直線状のアミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又はＣＤＲの短縮形又は挿入に対応するより少ない又は追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、ＣＤＲ Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸の挿入（Ｋａｂａｔに従う残基５２ａ）並びに重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔに従う残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃ等）を含み得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、「標準」Ｋａｂａｔナンバリング配列を有する抗体の配列の相同領域でのアライメントによって所定の抗体について決定され得る。
【0035】
本明細書において使用される「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、ＣＤＲとして定義される領域を除く抗体可変ドメインの領域を意味する。それぞれの抗体可変ドメインフレームワークは、ＣＤＲによって分離される連続した領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）にさらに細分することができる。用語「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」及び「Ｆｃ領域」は、例えば、ヒトγ（ガンマ）重鎖の約アミノ酸（ａａ）２３０～約ａａ４５０の、抗体重鎖のＣ－末端断片又は他のタイプの抗体重鎖（例えば、ヒト抗体についてα、δ、ε及びμ）若しくはその天然に存在するアロタイプにおけるその対応する配列を指す。他に指定のない限り、免疫グロブリンについて一般的に受け入れられているＫａｂａｔアミノ酸ナンバリングは、本開示の全体にわたって使用される（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照されたい）。
【0036】
用語「～に特異的に結合する」は、抗体が、タンパク質の組換え形態、その中のエピトープ又は単離標的細胞の表面に存在する天然のタンパク質を使用して評価されるように、競合結合アッセイにおいて、結合パートナー、例えばＫＩＲ３ＤＬ２に結合することができることを意味する。競合結合アッセイ及び特異的な結合を決定するための他の方法は、下記にさらに記載され、当技術分野においてよく知られている。
【0037】
抗体が、特定のモノクローナル抗体「と競合する」と言われる場合、抗体が、組換えＫＩＲ３ＤＬ２分子又は表面に発現されるＫＩＲ３ＤＬ２分子を使用する結合アッセイにおいてモノクローナル抗体と競合することを意味する。例えば、試験抗体が、結合アッセイにおいてＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド又はＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞へのＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１の結合を低下させる場合、抗体は、ＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１とそれぞれ「競合する」と言われる。
【0038】
本明細書において使用される用語「親和性」は、エピトープへの抗体の結合の強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ－Ａｇ］として定義される解離定数Ｋｄによって与えられ、［Ａｂ－Ａｇ］は抗体－抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は非結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は非結合抗原のモル濃度である。親和性定数Ｋａは、１／Ｋｄによって定義される。ｍＡｂの親和性を決定する方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）及びＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９－６０１（１９８３）において見ることができ、これらの参考文献は、参照により本明細書に完全に組み込まれる。ｍＡｂの親和性を決定するための当技術分野においてよく知られている１つの標準的な方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニングの使用である（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析デバイスによる分析によってなど）。
【0039】
「決定基」は、ポリペプチド上の相互作用又は結合の部位を示す。
【0040】
用語「エピトープ」は抗原決定基を指し、抗体が結合する抗原上のエリア又は領域である。タンパク質エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基及び特異的な抗原結合抗体又はペプチドによって有効に遮断されるアミノ酸残基、すなわち抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基を含み得る。それは、例えば、抗体又は受容体と連結することができる複雑な抗原分子上の最も単純な形態又は最も小さい構造エリアである。エピトープは、線状又は立体構造／構造的なものであり得る。用語「線状エピトープ」は、アミノ酸の線状配列（一次構造）上で連続しているアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。用語「立体構造又は構造的エピトープ」は、すべてが連続しているわけではなく、したがって、分子のフォールディング（二次、三次及び／又は四次構造）によって互いに接近するようになる、アミノ酸の線状配列の隔てられた部分に相当するアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。立体構造エピトープは、３次元構造に依存する。用語「立体構造」は、そのため、多くの場合、「構造的」と区別なく使用される。
【0041】
ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に関する用語「除去すること」、「除去する」又は「除去」は、サンプル又は対象において存在するＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の数にマイナスの影響を与えるように、（例えば、ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰの誘発を通して）死滅させるか、除くか、溶解するか又はそのような死滅、除去若しくは溶解を誘発することができるプロセス、方法又は化合物を意味する。
【0042】
用語「免疫複合体」、「抗体コンジュゲート」、「抗体医薬コンジュゲート」及び「ＡＤＣ」は、区別なく使用され、他の成分（例えば、任意の非抗体成分、治療剤、細胞傷害性部分又は標識）にコンジュゲートされる抗体を指す。
【0043】
用語「作用物質」は、化学化合物、化学化合物の混合物、生体高分子又は生体物質から作製された抽出物を表すために本明細書において使用される。用語「治療剤」は、生物学的活性を有する作用物質を指す。
【0044】
用語「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性」又は「ＡＤＣＣ」は、当技術分野においてよく理解される用語であり、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介する非特異的細胞傷害性細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、好中球及び好酸球を含む。
【0045】
用語「単離された」、「精製された」又は「生物学的に純粋な」は、その天然の状態で見られるように通常それに付随する構成成分が実質的に又は本質的にない材料を指す。純度及び均一性は、ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を使用して典型的に決定される。調製物中に存在する主な種であるタンパク質は、実質的に精製される。
【0046】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において区別なく使用される。用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的ミメティックであるアミノ酸ポリマー並びに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用される。
【0047】
用語「組換え」は、例えば、細胞又は核酸、タンパク質若しくはベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質若しくはベクターが異種核酸若しくはタンパク質の導入又は天然の核酸若しくはタンパク質の改変によって修飾されたこと又は細胞がそのように修飾された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組換え細胞は、細胞の天然の（非組換え）形態内で見られない遺伝子を発現するか又はそうでなければ異常に発現されるか、不十分に発現されるか若しくは全く発現されない天然の遺伝子を発現する。
【0048】
本明細書における文脈の範囲内において、ポリペプチド又はエピトープ「に結合する」抗体という用語は、特異性及び／又は親和性により前記決定基に結合する抗体を示す。
【0049】
用語「同一性」又は「同一な」は、２つ以上のポリペプチドの配列間の関係において使用される場合、一連の２つ以上のアミノ酸残基間のマッチの数によって決定されるように、ポリペプチド間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学モデル又はコンピュータープログラム（すなわち「アルゴリズム」）によって処理される、ギャップアライメント（存在する場合）を有する２つ以上の配列のより小さい配列間の同一マッチのパーセントを測定する。関連するポリペプチドの同一性は、知られている方法によって容易に計算することができる。そのような方法は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１；及びＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）において記載されるものを含むが、これらに限定されない。
【0050】
同一性を決定する方法は、試験された配列間の最大のマッチをもたらすように設計される。同一性を決定する方法は、公的に入手可能なコンピュータープログラムにおいて記載される。２つの配列間の同一性を決定するためのコンピュータープログラム方法は、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）を含むＧＣＧプログラムパッケージ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０（１９９０））を含む。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）及び他の供給源から公的に入手可能である（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、前掲）。よく知られているＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性を決定するために使用され得る。
【0051】
Ｔ細胞悪性腫瘍の処置
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体の活性を強化するために、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２発現を誘発するか又は増加させる薬剤の投与を通した個人におけるＴＣＬの処置及び予防において有用な方法が本明細書に記載される。本明細書に記載される治療レジメン及び治療法は、種々のＴ細胞リンパ腫、特にＣＤ４＋Ｔ細胞リンパ腫に使用することができる。任意の態様において、ＴＣＬは、表面にＫＩＲ３ＤＬ２を発現する悪性細胞によって特徴付けられるＴＣＬであると指定することができる。
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体の活性を強化するために、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２発現を誘発するか又は増加させる薬剤の投与を通した個人におけるＴＣＬの処置及び予防において有用な方法が本明細書に記載される。本明細書に記載される治療レジメン及び治療法は、種々のＴ細胞リンパ腫、特にＣＤ４＋Ｔ細胞リンパ腫に使用することができる。任意の態様において、ＴＣＬは、表面にＫＩＲ３ＤＬ２を発現する悪性細胞によって特徴付けられるＴＣＬであると指定することができる。
【0052】
本明細書において示されるように、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）は、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２発現を誘発するか又は増加させることができる。ゲムシタビンは、固形腫瘍の処置における化学療法として承認されているヌクレオシド類似体である。フルオロウラシル及びピリミジンの他のアナログと同様に、この薬品は、ＤＮＡ複製中に核酸の構成単位の１つ、この場合にはシチジンと置き換わる。したがって、ゲムシタビン並びにそのアナログ及び誘導体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体の活性を強化するために使用することができる。
【0053】
本明細書において示されるように、オキサリプラチンは、悪性Ｔ細胞の表面でのＫＩＲ３ＤＬ２発現を誘発するか又は増加させることができる。オキサリプラチン及び他の白金製剤は、当技術分野においてよく知られており、例えばシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、フェナントリプラチン（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｉｐｌａｔｉｎ）、ピコプラチン、サトラプラチンを含む。したがって、白金製剤は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体の活性を強化するために使用することができる。
【0054】
白金製剤及び／又はゲムシタビン製剤は、例えば、遊離化合物として又は複合体の一部、ナノ粒子剤形、カプセル化されたもの（例えば、リポソーム中に）としてのものを含め、任意の適した形状又は剤形であり得、それぞれの場合に任意選択で追加の薬学的に活性な薬剤とさらに組み合わせることができる。
【0055】
したがって、一態様において、以下のそれぞれの有効量を個人に投与することを含む、ＴＣＬを有する個人を処置する方法が提供される：（ａ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体、並びに（ｂ）白金製剤及び／又はゲムシタビン。一実施形態において、方法は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体、白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及びゲムシタビンを個人に投与することを含む。別の実施形態において、方法は、ゲムシタビンの投与又は使用と組み合わせることなく、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体及び白金製剤（例えば、オキサリプラチン）を個人に投与することを含む。別の実施形態において、方法は、オキサリプラチンの投与又は使用と組み合わせることなく、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体及びゲムシタビンを個人に投与することを含む。別の実施形態において、方法は、白金製剤の投与又は使用と組み合わせることなく、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体及びゲムシタビンを個人に投与することを含む。
【0056】
一実施形態において、白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／又はゲムシタビンは、悪性細胞の表面上のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの発現の増加を引き起こすのに有効な量で投与される。
【0057】
一態様において、悪性細胞を有効量の白金製剤及び／又はゲムシタビンと接触させることを含む、悪性細胞、任意選択でＴＣＬ細胞の表面上でのＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの発現を増加させる（例えば、インビトロにおいて又はＴＣＬを有する個人においてインビボにおいて）方法が提供される。一実施形態において、方法は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２の発現が増加している）を除去するステップをさらに含み、このステップは、悪性細胞を、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する有効量の抗体と接触させることを含む。
【0058】
本明細書において提供される癌の処置のための組み合わせ療法は、Ｔ細胞悪性腫瘍、任意選択でＣＤ４＋Ｔ細胞悪性腫瘍を有する個人を処置するために、（ａ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２除去抗体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体又は抗体断片、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体断片を含むキメラ活性化受容体（例えば、Ｔ細胞受容体）をその表面に発現するエフェクター細胞）、及び（ｂ）白金製剤、任意選択でオキサリプラチンの投与を含むことができる。
【0059】
別の実施形態において、本明細書において提供される癌の処置のための組み合わせ療法は、Ｔ細胞悪性腫瘍、任意選択でＣＤ４＋Ｔ細胞悪性腫瘍を有する個人を処置するために、（ａ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２除去抗体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体又は抗体断片、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体断片を含むキメラ活性化受容体（例えば、Ｔ細胞受容体）をその表面に発現するエフェクター細胞）、及び（ｂ）ヌクレオシド類似体、任意選択でゲムシタビンの投与を含む。
【0060】
別の実施形態において、本明細書において提供される癌の処置のための組み合わせ療法は、Ｔ細胞悪性腫瘍、任意選択でＣＤ４＋Ｔ細胞悪性腫瘍を有する個人を処置するために、（ａ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２除去抗体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体又は抗体断片、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体断片を含むキメラ活性化受容体（例えば、Ｔ細胞受容体）をその表面に発現するエフェクター細胞）、及び（ｂ）白金製剤、任意選択でオキサリプラチン、及び（ｃ）ヌクレオシド類似体、任意選択でゲムシタビンの投与を含む。
【0061】
ＴＣＬを有するか、ＴＣＬに罹患しやすいか又はＴＣＬを経験したことがある個人を処置するための治療方法が提供される。一実施形態において、ＴＣＬは、高悪性度又は進行ＴＣＬ（例えば、病期ＩＶ又はより一般には病期ＩＩを超える）である。一実施形態において、患者は、再発性又は難治性疾患を有する。一実施形態において、患者は、疾患進行について予後不良を有する（例えば、生存期間についての予後不良）か、療法に対する応答について予後不良を有するか、又は先に行われた療法による先に行われた処置後に疾患の進行若しくは再発を有する。
【0062】
一実施形態において、ＴＣＬは、高悪性度Ｔ細胞腫瘍である。一実施形態において、ＴＣＬは、高悪性度非皮膚ＴＣＬである。別の実施形態において、ＴＣＬは、高悪性度皮膚ＴＣＬ、任意選択で原発性皮膚ＣＤ４＋小／中Ｔ細胞リンパ腫又は原発性ＣＤ８＋小／中Ｔ細胞リンパ腫である。一実施形態において、ＴＣＬは、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）である。一実施形態において、ＴＣＬは、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、任意選択で非皮膚ＰＴＣＬである。ＰＴＣＬ及びＰＴＣＬ－ＮＯＳは、任意選択で皮膚Ｔ細胞リンパ腫以外の疾患であると指定され得る。
【0063】
皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（下記の画像を参照されたい）は、皮膚への腫瘍性Ｔリンパ球の局在によって特徴付けられるリンパ増殖性障害の１つのグループである。全体として、ＣＴＣＬは、一種の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）として分類される。ＣＴＣＬについてのＷｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ－Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（ＷＨＯ－ＥＯＲＴＣ）による分類は、Ｗｉｌｌｅｍｚｅ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｂｌｏｏｄ １０５：３７６８－３７８５において報告されている。ＷＨＯ－ＥＯＲＴＣは、ＣＴＣＬを、不活性の臨床的挙動を有するもの及び高悪性度亜型を有するものに分けている。第３のカテゴリーは、Ｔ細胞リンパ腫ではない血液前駆細胞腫瘍のカテゴリーである（ＣＤ４＋／ＣＤ５６＋血液皮膚腫瘍、芽球性ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞リンパ腫又はＢ細胞由来原発性皮膚腫瘍）。不活性の臨床的挙動を有し得るＣＴＣＬは、菌状息肉腫（ＭＦ）及びそのバリアント、原発性皮膚ＣＤ３０＋リンパ増殖性障害（例えば、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症）、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫（暫定的）並びに原発性皮膚ＣＤ４＋小／中型多形性Ｔ細胞リンパ腫（暫定的）を含む。高悪性度臨床的挙動を有するＣＴＣＬは、セザリー症候群（ＳＳ）、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、原発性皮膚末梢Ｔ細胞リンパ腫、非特定、原発性皮膚高悪性度表皮向性ＣＤ８＋Ｔ細胞リンパ腫（暫定的）及び皮膚ガンマ／デルタ陽性Ｔ細胞リンパ腫（暫定的）を含む。本明細書において開示される方法は、これらの状態のそれぞれを治療するために使用することができる。
【0064】
最も一般的なＣＴＬＣは、ＭＦ及びＳＳである。それらの特徴は、例えば、Ｗｉｌｌｅｍｚｅ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｂｌｏｏｄ １０５：３７６８－３７８５において概説されており、この開示は、参照によって本明細書に援用される。ＭＦのほとんどの症例では、その臨床的特徴、病歴並びに組織形態学的及び細胞形態学的所見により診断に至る。炎症性皮膚疾患とＣＴＣＬとを区別するための追加の診断判定基準は、分子的アッセイ（例えば、サザンブロット、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ））による皮膚生検標本における優勢なＴ細胞クローンの実証である。遺伝子検査も検討され得る。古典的な菌状息肉腫は、３つの病期に分けられる：（１）紅斑（萎縮性又は非萎縮性）：非特異的皮膚炎、体幹下部及び殿部の紅斑；わずかなそう痒／そう痒なし；（２）局面：かゆみの激しい局面、リンパ節腫脹、並びに（３）腫瘤：潰瘍形成の傾向がある。セザリー症候群は、紅皮症及び白血病によって特定される。徴候及び症状は、皮膚の浮腫、リンパ節腫脹、手掌及び／又は足底の過角化、脱毛症、爪ジストロフィー、外反並びに肝脾腫を含む。セザリー症候群の診断について、基準は、典型的には、セザリー細胞の絶対数計測、免疫表現性の異常、Ｔ細胞抗原の損失及び／又は分子的若しくは細胞遺伝学的方法によって示される末梢血中のＴ細胞クローンを含む。
【0065】
ＣＴＣＬの病期は、ＴＮＭ分類に従ってＩ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶを含み、適宜、末梢血病変を含む。菌状息肉腫又はセザリー症候群（ＭＦ／ＳＳ）の細胞を有する末梢血病変は、より進行した皮膚の病期、リンパ節及び内臓の病変並びに生存期間の短縮と相関する。ＭＦ及びＳＳは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ（ＩＳＣＬ）及びＥｕｒｏｐｅａｎ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（ＥＯＲＴＣ）によって提唱される正式な病期分類システムを有する。その開示が参照によって本明細書に援用されるＯｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ．１１０（６）：１７１３－１７２２及びＡｇａｒ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２８（３１）：４７３０－４７３９を参照されたい。
【0066】
一実施形態において、ＴＣＬは、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、任意選択で非皮膚ＰＴＣＬである。ＰＴＣＬ及びＰＴＣＬ－ＮＯＳは、任意選択で、別個の病状とみなされる皮膚Ｔ細胞リンパ腫、セザリー症候群及び菌状息肉腫以外の疾患であると指定され得る。一実施形態において、ＰＴＣＬは、結節性の（例えば、主として又は優位に結節性の）ＰＴＣＬである。優位に結節性のＰＴＣＬは、とりわけ、ＰＴＣＬ－ＮＯＳ（末梢Ｔ細胞リンパ腫、非特定型）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）及び血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）を含む。例えば、ＰＴＣＬは、高悪性度で、非皮膚の、優位に結節性のＰＣＴＬであり得る（疾患は、そのうえ、節外性の症状を有し得る）。
【0067】
一実施形態において、ＰＴＣＬは、節外性の（例えば、主として節外性の）ＰＴＣＬである。例えば、ＰＴＣＬは、高悪性度非皮膚節外性ＰＣＴＬであり得る。
【0068】
一実施形態において、ＰＴＣＬは、成人Ｔ細胞白血病又はリンパ腫（ＡＴＬ）、例えばＨＴＬＶ＋ＡＴＬである。
【0069】
一実施形態において、ＰＴＣＬは、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型である。一実施形態において、ＰＴＣＬは、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫である。
【0070】
一実施形態において、ＰＴＣＬは、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、任意選択で肝脾αβＴ細胞リンパ腫、任意選択で肝脾γδＴ細胞リンパ腫である。
【0071】
一実施形態において、ＰＴＣＬは、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、任意選択でＡＬＫ＋ＡＬＣＬ、任意選択でＡＬＫ－ＡＬＣＬである。ＡＬＫ＋ＡＬＣＬは、一般に、従来の療法を使用すれば良好な予後徴候を享受する（５年間生存率は９３％）が、ＡＬＫ－ＡＬＣＬは、不良な予後徴候（３７％）を有する。ＡＬＣＬは、一般に、一様なＣＤ３０表面発現によって特徴付けられる。一実施形態において、ＰＴＣＬは、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、任意選択で皮膚ＡＩＴＬ、任意選択で原発性皮膚ＣＤ４＋小／中Ｔ細胞リンパ腫又は原発性ＣＤ８＋小／中Ｔ細胞リンパ腫、任意選択で非皮膚ＡＩＴＬである。
【0072】
一実施形態において、ＰＴＣＬは、腸管リンパ腫、例えば腸管ＡＬＣＬである。
【0073】
一実施形態において、ＰＴＣＬは、Ｔ細胞前リンパ球性白血病である。
【0074】
一実施形態において、ＰＴＣＬは、ＰＴＣＬ－ＮＯＳ（末梢Ｔ細胞リンパ腫、非特定型）である。ＰＣＴＬ－Ｕ又はＰＴＣＬ－非特定とも呼ばれるＰＴＣＬ－ＮＯＳは、主に結節型の高悪性度リンパ腫であるが、節外性病変が一般的である。大多数の結節性の症例は、ＣＤ４＋及びＣＤ８－であり、ＣＤ３０は、大細胞バリアントにおいて発現され得る。ＰＴＣＬ－ＮＯＳを有するほとんどの患者は、結節性の病変の症状を示すが、多くの節外性の部位も含まれ得る（例えば、肝臓、骨髄、胃腸、皮膚。研究によれば、一般に、５年の全生存期間は、標準的な化学療法を使用すると、およそ３０％～３５％となることが報告されている。これまで、レンネルトリンパ腫、Ｔゾーンリンパ腫、多形性Ｔ細胞リンパ腫及びＴ免疫芽球性リンパ腫などのようなＴ細胞腫瘍の識別できる亜型に対応する多くの確かな実体について記載されたが、これらが特有の臨床病理学的実体に対応するという証拠は、依然として不足している。こういった理由のため、造血器腫瘍及びリンパ系腫瘍の最近のＷｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）による分類では、これらは、ＰＴＣＬ－ＮＯＳ／Ｕといった単一の広範なカテゴリーの下にまとめられた。そのため、ＰＴＣＬ－ＮＯＳは、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、ＡＴＬ／成人Ｔ細胞白血病、節外性ＮＫ／Ｔ細胞白血病鼻型、ＥＡＴＬ／腸症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＣＬ／未分化大細胞リンパ腫及び／又はＡＩＴＬ／血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫などのようなある特有の臨床病理学的実体を除外するように指定され得る。
【0075】
ＰＴＣＬ診断基準は、例えば、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）の分類体系に従う標準的な治療指針のものであり得る（例えば、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．ＷＨＯ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｕｍｏｕｒｓ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ａｎｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅｓ，４ｔｈ ｅｄ．Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ：ＩＡＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２００８を参照されたい）。例えば、その開示が参照によって本明細書に援用されるＦｏｓｓ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｂｌｏｏｄ １１７：６７５６－６７６７も参照されたい。
【0076】
一実施形態において、ＴＣＬは、それらの表面に有意な及び／又は検出可能なＣＤ３０ポリペプチドを発現しない腫瘍又は腫瘍細胞によって特徴付けられる（ＣＤ３０陰性）。他の実施形態において、ＴＣＬは、それらの表面にＣＤ３０を発現する腫瘍又は腫瘍細胞によって特徴付けられ（ＣＤ３０陽性）；一実施形態において、腫瘍又は腫瘍細胞は、それらの表面に低レベルのＣＤ３０を発現し；別の実施形態において、腫瘍又は腫瘍細胞は、それらの表面に高レベルのＣＤ３０を発現する。任意選択で、ＣＤ３０発現は、免疫組織化学的検査によって決定される。
【0077】
例示的な一態様において、検出可能なレベルの癌細胞を有する哺乳動物宿主（例えば、ヒト患者）におけるＴＣＬの進行を低下させる方法であって、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体組成物又は関連する組成物（例えば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体をコードする核酸、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体断片を発現する細胞組成物）を、宿主における血液悪性腫瘍の進行を検出可能に低下させるのに十分な量で投与することを含む方法が提供される。
【0078】
例示的な一態様において、不良な疾患予後を有し、且つ／又は再発したか、又は第１の治療剤による療法に抵抗性であるか若しくは応答性ではない個人におけるＴＣＬを処置する方法が提供される。
【0079】
ＰＴＣＬ（例えば、ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）は、典型的には、詳細な免疫組織化学的検査、フローサイトメトリー、細胞遺伝学的検査及び分子遺伝学的検査が補足された、末梢血の検査又は組織学的な特徴についての組織生検に基づく。検査は、例えば、全血球数及び分類、腎機能及び肝機能の試験、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、ベータ２ミクログロブリン、アルブミン、血清カルシウム、尿酸、骨髄生検、胸部Ｘ線並びに胸部、腹部及び骨盤のコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンを含み得る。進行は、任意選択で、潜在性細胞の選択的なクローン増殖を評価することによって決定される。癌及び癌進行を検出する方法は、いくつかの例が当技術分野において知られている、任意の適した技術によって実現することができる。適した技術の例は、ＰＣＲ及びＲＴ－ＰＣＲ（例えば、癌細胞に関連する遺伝子又は「マーカー」の）、生検、画像処理技術、核型分析及び他の染色体分析、イムノアッセイ／免疫細胞化学的検出技術、組織学的及び／又は組織病理学アッセイ、細胞動態研究及び細胞周期分析、フローサイトメトリー並びに身体検査技術（例えば、身体的症状についての）を含む。
【0080】
対象に抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を送達すること（単離若しくは精製された抗体（例えば、溶液中の抗体）として、ＣＡＲ細胞によって発現される抗体断片として直接的な投与によって又は抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体をコードする核酸配列を含むポックスウイルス遺伝子導入ベクターからなどのような、対象における核酸からの発現によって）及び本明細書における他の方法を実施することは、癌進行（特にＴＣＬ進行）の任意の適した側面を低下させるか、処置するか、予防するか又はそうでなければ回復させるために使用することができる。本明細書における方法は、腫瘍成長（例えば、循環中の腫瘍細胞のパーセンテージ（健康なＴ細胞と比較した腫瘍細胞）、数）及び腫瘍成長と関連する任意のパラメーター又は症状（例えば、バイオマーカー）の低下及び／又は回復において特に有用になり得る。癌進行のそのような側面を個別に及びまとめて低下させるか、予防するか又はそうでなければ回復させる方法は、有利な特徴である。
【0081】
さらなる態様において、ヒト患者などのような哺乳動物宿主におけるＴＣＬの寛解を促進する方法であって、宿主におけるＴＣＬ寛解を促進するために、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含む組成物を宿主に投与することを含む方法が提供される。
【0082】
さらなる態様において、ＴＣＬを発症する危険性を低下させ、癌性の状態を発病する機会を低下させ、且つ／又は早期段階で診断されるＴＣＬの重症度を低下させる方法であって、所望の生理学的効果を実現するために予防有効量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体又は関連する組成物を宿主に投与することを含む方法が提供される。
【0083】
さらなる態様において、ＴＣＬと診断されたヒト患者において、適切な期間にわたる生存の見込みを増加させる方法が提供される。別の態様において、ＴＣＬ患者の生活の質を改善する方法であって、その生活の質を改善するために、有効量の組成物を患者に投与することを含む方法が提供される。さらなる態様において、本明細書に記載される方法は、例えば、ＴＣＬ細胞の総数が低下するように、脊椎動物宿主におけるＴＣＬ細胞の数を有意に低下させるために適用することができる。関連する意味において、ヒト癌患者などのような脊椎動物におけるＴＣＬ細胞を死滅させる（例えば、その死を直接又は間接的に引き起こす）方法が提供される。
【0084】
本明細書において使用されるように、補助的な又は組み合わせの投与は、同じ若しくは異なる投薬形態をした化合物の同時投与又は化合物の別々の投与（例えば、順次投与）を含む。したがって、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、白金製剤及び／又はゲムシタビンと組み合わせて使用することができる。例えば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体並びに白金製剤及び／又はゲムシタビンは、単一の剤形で同時に投与することができる。代わりに、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体並びに白金製剤及び／又はゲムシタビンは、別々に投与するために製剤することができ、並行して又は順次投与される。
【0085】
ゲムシタビンの投与に適した用量は、８００～１２００ｍｇ／ｍ２の用量であり、静脈内に投与される。ゲムシタビンの投与は、２週間毎に１回繰り返すことができる。代わりに、ゲムシタビンは、３週間サイクル（繰り返すことができる）の１日目及び８日目に投与することができる。
【0086】
オキサリプラチンの投与に適した用量は、７５～１５０ｍｇ／ｍ２（例えば、７５ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２，１３０ｍｇ／ｍ２、７５～１３０ｍｇ／ｍ２）の用量であり、静脈内に投与される。オキサリプラチンの投与は、例えば、７５～１００ｍｇ／ｍ２（例えば、７５ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２）の用量で２週間毎に繰り返すことができる。代わりに、オキサリプラチンは、３週間ごとに１回投与することができる（例えば、サイクルを繰り返すことができる場合、３週間サイクルの１日目及び８日目に）。オキサリプラチンを３週間ごとに１回投与する場合、用量範囲は、任意選択で、２週間ごとに投与する場合よりも高いことができ、例えば３週間ごとのレジメンで１００～１５０ｍｇ／ｍ２（例えば、１００ｍｇ／ｍ２、１３０ｍｇ／ｍ２）の用量である。
【0087】
一般に、処置は、少なくとも１回の投与サイクル（例えば、８週間以下の期間）を含み、少なくとも１回のサイクルのそれぞれについて、２、３又は４用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が投与され、少なくとも２、３又は４用量の白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／又はゲムシタビンが投与される。
【0088】
ゲムシタビン及びオキサリプラチンは、同じ日（例えば、１日目）に投与することができるか、又はゲムシタビンを例えば第１の日（１日目）に、続いてオキサリプラチンを翌日（２日目）に投与することができる。
【0089】
ＣＴＬ（例えば、ＰＴＣＬ、ＣＴＣＬ、ＭＦ又はＳＳ）を有するヒトを処置するための適した処置プロトコールは、例えば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及びゲムシタビンのそれぞれの有効量を患者に投与することを含み、処置は、少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が投与され（例えば、毎週、２週間ごと、４週間ごと）且つ少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量のゲムシタビンが投与され、任意選択で、ゲムシタビンが約８００～１２００ｍｇ／ｍ２、任意選択で約８００～１０００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、少なくとも１回の投与サイクルを含む。任意選択で、ゲムシタビンは、２週間毎に１回又は繰り返される３週間サイクルの１日目及び８日目に投与される。任意選択で、処置プロトコールは、白金製剤又はオキサリプラチンとの組み合わせの処置を伴わないものとして特徴付けられる。
【0090】
ＭＦ又はＳＳを有するヒトを処置するための例示的な処置プロトコールは、例えば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及びゲムシタビンのそれぞれの有効量を患者に投与することを含み得、処置は、少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が投与され（例えば、毎週、２週間ごと、４週間ごと）且つ少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量のゲムシタビンが投与され、ゲムシタビンが、繰り返される４週間サイクルの１週目、２週目及び３週目に（例えば、１、８及び１５日目あたりに）約８００～１２００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、少なくとも１回の投与サイクルを含む。４週間サイクルは、例えば、３、４、５、６ヵ月又はそれを超える期間にわたって繰り返すことができる。プロトコールは、白金製剤又はオキサリプラチンとの組み合わせの処置を伴わないものとして特徴付けられ得る。
【0091】
ＣＴＬ（例えば、ＰＴＣＬ）を有するヒトを処置するためのさらに適した処置プロトコールは、例えば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及びオキサリプラチンのそれぞれの有効量を患者に投与することを含み、処置は、少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が投与され（例えば、毎週、２週間ごと、４週間ごと）且つ少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量のオキサリプラチンが投与され、任意選択で、オキサリプラチンが約７５～１３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、少なくとも１回の投与サイクルを含む。任意選択で、オキサリプラチンは、２週間毎に１回又は３週間毎に１回投与される。
【0092】
ＰＣＴＬを有するヒトを処置するための別の適した処置プロトコールは、例えば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、ゲムシタビン及びオキサリプラチンのそれぞれの有効量を患者に投与することを含み、処置は、以下の投与を含む、少なくとも１回の投与サイクルを含む：
－ 抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量（例えば、毎週、２週間ごと、４週間ごと）、
－ ゲムシタビンの少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量、任意選択で、ゲムシタビンは、約８００～１０００ｍｇ／ｍ２の用量で投与され、任意選択で、ゲムシタビンは、２週間毎に１回又は繰り返される３週間サイクルの１日目及び８日目に投与される、及び
－ オキサリプラチンの少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量、任意選択で、オキサリプラチンは、約７５～１３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与され、任意選択で、オキサリプラチンは、２週間毎に１回又は３週間毎に１回（例えば、すなわち繰り返される３週間サイクルの１日目に）投与される。
一実施形態において、オキサリプラチン及びゲムシタビンは、それぞれ２週間ごとに１回、任意選択でさらに同じ日に投与される。別の実施形態において、オキサリプラチン及びゲムシタビンは、それぞれ３週間毎に投与され、オキサリプラチンは、３週間の期間の１日目に投与され、ゲムシタビンは、３週間の期間の１日目及び８日目に投与される。
－ 抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量（例えば、毎週、２週間ごと、４週間ごと）、
－ ゲムシタビンの少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量、任意選択で、ゲムシタビンは、約８００～１０００ｍｇ／ｍ２の用量で投与され、任意選択で、ゲムシタビンは、２週間毎に１回又は繰り返される３週間サイクルの１日目及び８日目に投与される、及び
－ オキサリプラチンの少なくとも１用量、任意選択で少なくとも２用量、任意選択で、オキサリプラチンは、約７５～１３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与され、任意選択で、オキサリプラチンは、２週間毎に１回又は３週間毎に１回（例えば、すなわち繰り返される３週間サイクルの１日目に）投与される。
一実施形態において、オキサリプラチン及びゲムシタビンは、それぞれ２週間ごとに１回、任意選択でさらに同じ日に投与される。別の実施形態において、オキサリプラチン及びゲムシタビンは、それぞれ３週間毎に投与され、オキサリプラチンは、３週間の期間の１日目に投与され、ゲムシタビンは、３週間の期間の１日目及び８日目に投与される。
【0093】
投与サイクルは、本明細書に記載される投与頻度に相応する適した期間であり得ることが理解されるであろう。例えば、投与サイクルは、４週間、８週間、８週間超、８週間未満等の期間であり得る。
【0094】
一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ゲムシタビン及び／又はオキサリプラチンと同じ日に投与される。一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ゲムシタビンの投与の少なくとも１日（例えば、１、２、３日）後に投与される。一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、オキサリプラチンの投与の少なくとも１日（例えば、１、２、３日）後に投与される。一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ゲムシタビン及びオキサリプラチンの両方の投与の少なくとも１日（例えば、１、２、３、４、５、６又は７日）後に投与される（例えば、投与される化合物となる後者の少なくとも１日後）。
【0095】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（例えば、ＩＰＨ４１０２又はラクタマブとして知られているヒト化２Ｂ１２抗体）は、点滴静注により、１～２０ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択で１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量又は７５０ｍｇの均一の用量で有利に投与することができる。抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、１ヵ月当たり１～４回、例えば１週間当たり１回、２週間ごとに１回又は４週間ごとに１回、有利に投与することができる。一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、抗ＫＩＲＤＬ２抗体が週単位で投与される（例えば、４週間ごとの投与）第１相、続いて抗ＫＩＲＤＬ２抗体が１週間当たり１回未満、例えば１ヵ月当たり１～２回、２週間ごとに１回、１ヵ月当たり１回投与される第２相を含むレジメンに従って投与される。一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、抗ＫＩＲＤＬ２抗体が週単位で投与される（例えば、４週間ごとの投与）第１相、続いて抗ＫＩＲＤＬ２抗体が２週間ごとに１回投与される第２相（例えば、２週間ごとに投与される少なくとも２回の逐次投与、例えば２週間ごとに１回投与される２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０回又はそれを超える投与）、続いて抗ＫＩＲＤＬ２抗体が１ヵ月当たり１回投与される第３相（例えば、１ヵ月当たり１回投与される少なくとも２回の逐次投与、例えば１ヵ月当たり１回投与される２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０回又はそれを超える投与を含むレジメンに従って投与される。
【0096】
ゲムシタビン及びオキサリプラチンと組み合わされる場合、処置方法は、例えば、少なくとも１回の投与サイクル（例えば、８週間以下、任意選択で８週間、任意選択で４週間の期間）を含むものとして指定することができ、少なくとも１回のサイクルのそれぞれについて、２、３又は４用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が投与され（例えば、１～２０又は１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量の、７５０ｍｇの均一の用量のヒト化２Ｂ１２抗体）、少なくとも２、３又は４用量のゲムシタビン及びオキサリプラチンが投与される。ゲムシタビン及びオキサリプラチンは、同じ日に又は連日で投与するものとして指定することができる（例えば、７５～１３０ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチンは、８００～１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンの投与の次の日に投与される）。ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、ゲムシタビン及び／若しくはオキサリプラチンと同じ日に、ゲムシタビン及び／若しくはオキサリプラチンの前若しくは後に連日で、又はゲムシタビン及び／若しくはオキサリプラチンの数日前若しくは数日後に投与するものとして指定することができる。
【0097】
処置方法において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体並びに白金製剤及び／又はゲムシタビン製剤は、別々に、一緒に若しくは順次又はカクテルで投与することができる。いくつかの実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、白金製剤及び／又はゲムシタビン製剤の投与前に投与される。例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、ゲムシタビンの投与のおよそ０～３０日、任意選択で１～７日前又は白金製剤の投与の０～３０日、任意選択で１～７日前に投与することができる。いくつかの実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、ゲムシタビン（又は白金製剤）の投与の約３０分～約２週間、約３０分～約１週間、約１時間～約２時間、約２時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～１日又は約１～５日前に投与される。いくつかの実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、白金製剤及び／又はゲムシタビンの投与と並行して投与される。いくつかの実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、白金製剤及び／又はゲムシタビン製剤の投与後に投与される。例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、白金製剤及び／又はゲムシタビン製剤の投与のおよそ０～３０日、任意選択で１～７日後に投与することができる。いくつかの実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、白金製剤及び／又はゲムシタビン製剤の投与の約３０分～約２週間、約３０分～約１週間、約１時間～約２時間、約２時間～約４時間、約４時間～約６時間、約６時間～約８時間、約８時間～１日又は約１～５日後に投与される。
【0098】
一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体並びに白金製剤及び／又はゲムシタビン製剤は、以下の用量で投与される：
（ａ）７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び（ｉ）７５～１３０ｍｇ／ｍ２の白金製剤（例えば、オキサリプラチン）又は（ｉｉ）８００～１２００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン；
（ｂ）１～１０ｍｇ／ｋｇ又は７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び７５～１３０ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン；
（ｃ）１～１０ｍｇ／ｋｇ又は７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び８００～１２００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン；
（ｄ）１～１０ｍｇ／ｋｇ又は７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、７５～１００ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン及び８００～１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン；
（ｅ）１～１０ｍｇ／ｋｇ又は７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、１００～１３０ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン及び８００～１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン。
（ａ）７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び（ｉ）７５～１３０ｍｇ／ｍ２の白金製剤（例えば、オキサリプラチン）又は（ｉｉ）８００～１２００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン；
（ｂ）１～１０ｍｇ／ｋｇ又は７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び７５～１３０ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン；
（ｃ）１～１０ｍｇ／ｋｇ又は７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び８００～１２００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン；
（ｄ）１～１０ｍｇ／ｋｇ又は７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、７５～１００ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン及び８００～１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン；
（ｅ）１～１０ｍｇ／ｋｇ又は７５０ｍｇの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、１００～１３０ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン及び８００～１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビン。
【0099】
キット、例えば以下を含むキットも提供される：
（ｉ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含有する医薬組成物及びゲムシタビンを含有する医薬組成物；
（ｉｉ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含有する医薬組成物及び白金製剤（例えば、オキサリプラチン）を含有する医薬組成物；
（ｉｉｉ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含有する医薬組成物、白金製剤（例えば、オキサリプラチン）を含有する医薬組成物及びゲムシタビンを含有する医薬組成物；
（ｉｖ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含有する第１の医薬組成物並びに前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を、白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／又はゲムシタビンと一緒に投与するための指示書；
（ｖ）白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／又はゲムシタビンを含有する医薬組成物並びに前記組成物を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と一緒に投与するための指示書；
（ｖｉ）白金製剤（例えば、オキサリプラチン）を含有する医薬組成物並びに前記組成物を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（及び任意選択でさらにゲムシタビン）と一緒に投与するための指示書；
（ｖｉｉ）ゲムシタビンを含有する医薬組成物並びに前記組成物を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（及び任意選択でさらに白金製剤（例えば、オキサリプラチン））と一緒に投与するための指示書。
（ｉ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含有する医薬組成物及びゲムシタビンを含有する医薬組成物；
（ｉｉ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含有する医薬組成物及び白金製剤（例えば、オキサリプラチン）を含有する医薬組成物；
（ｉｉｉ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含有する医薬組成物、白金製剤（例えば、オキサリプラチン）を含有する医薬組成物及びゲムシタビンを含有する医薬組成物；
（ｉｖ）抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含有する第１の医薬組成物並びに前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を、白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／又はゲムシタビンと一緒に投与するための指示書；
（ｖ）白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／又はゲムシタビンを含有する医薬組成物並びに前記組成物を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と一緒に投与するための指示書；
（ｖｉ）白金製剤（例えば、オキサリプラチン）を含有する医薬組成物並びに前記組成物を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（及び任意選択でさらにゲムシタビン）と一緒に投与するための指示書；
（ｖｉｉ）ゲムシタビンを含有する医薬組成物並びに前記組成物を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（及び任意選択でさらに白金製剤（例えば、オキサリプラチン））と一緒に投与するための指示書。
【0100】
医薬組成物は、任意選択で、薬学的に許容され得るキャリヤを含むものとして指定され得る。抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、白金製剤及び／又はゲムシタビンは、任意選択で、本明細書における任意の方法において使用するのに適した治療有効量、任意選択で悪性ＴＣＬ細胞の表面のＫＩＲ３ＤＬ２レベルを増加させる量で存在するものとして指定され得る。キットは、任意選択で、例えば、開業医（例えば、医師、看護師又は患者）が、その中に含有される組成物を癌（例えば、特に本明細書において開示されるＣＴＬＣ又はＰＴＣＬ）を有する患者に投与するのを可能にするための投与スケジュールを含む指示書を含むこともできる。任意の実施形態において、キットは、注射器を含むこともできる。
【0101】
任意選択で、キットは、単一用量の医薬組成物の複数のパッケージを含み、それぞれ上記に提供される方法に従う単回投与のための有効量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び／又は白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／又はゲムシタビンを含有する。医薬組成物を投与するのに必要な機器又はデバイスもキットに含まれ得る。例えば、キットは、ある量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、白金製剤又はゲムシタビンを含有する１つ以上の充填済みの注射器又はバイアルを提供し得る。
【0102】
一実施形態において、本発明は、ヒト患者におけるＴＣＬを処置するためのキットを提供し、キットは、以下のものを含む：
（ａ）配列番号３２若しくは４８～５１のいずれかにおいて示される配列を有する重鎖可変領域のＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２及びＨ－ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号３３若しくは４３～４７において示される配列を有する軽鎖可変領域のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２及びＬ－ＣＤＲ３ドメインを含む、ある用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体；及び／又は
（ｂ）ある用量の白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／若しくはある用量のゲムシタビン；並びに
（ｃ）任意選択で、本明細書に記載される任意の方法において、前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び／若しくは前記白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／若しくはゲムシタビンを使用するための指示書。
（ａ）配列番号３２若しくは４８～５１のいずれかにおいて示される配列を有する重鎖可変領域のＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２及びＨ－ＣＤＲ３ドメイン並びに配列番号３３若しくは４３～４７において示される配列を有する軽鎖可変領域のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２及びＬ－ＣＤＲ３ドメインを含む、ある用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体；及び／又は
（ｂ）ある用量の白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／若しくはある用量のゲムシタビン；並びに
（ｃ）任意選択で、本明細書に記載される任意の方法において、前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び／若しくは前記白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及び／若しくはゲムシタビンを使用するための指示書。
【0103】
一実施形態において、処置は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、白金製剤（例えば、オキサリプラチン）及びゲムシタビンの投与を含み、いかなるさらなる抗癌剤も投与されない。
【0104】
本開示の処置方法は、処置の前にＫＩＲ３ＤＬ２発現について腫瘍細胞を特徴付けるステップを伴っても又は伴わなくてもよいことが理解されるであろう。任意の実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２発現は、免疫組織化学的検査によって決定することができる。
【0105】
一実施形態において、方法は、（ａ）個人がＴＣＬ、任意選択でＰＴＣＬを有するかどうかを決定すること；及び（ｂ）個人がＴＣＬ、任意選択でＰＴＣＬを有する場合、個人がＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現するＴＣＬ細胞を有するかどうかを決定することを含む。個人がＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現するＴＣＬ細胞を有するという決定は、個人が本開示の処置方法によって処置することができることを示す。任意選択で、方法は、本開示の処置を個人に施すステップを含む。
【0106】
一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドは、所定の患者から採取されたかなりの数の腫瘍細胞（例えば、ＴＣＬ細胞）において発現される。例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２は、患者から採取されたＴＣＬ細胞の少なくとも３０％、４０％、５０°％、６０％、７０％、８０％又はそれを超えて存在し得る。
【0107】
方法は、任意選択で、患者のある身体コンパートメント内に存在する悪性ＴＣＬ細胞の割合（例えば、パーセンテージ）の評価を可能にする、ＴＣＬの発症レベルの評価のステップをさらに含むことができる（疾患の病期分類）。この方法によれば、前記身体コンパートメントから収集された生物学的サンプル由来の細胞を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と接触させ、それらの表面にＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現している腫瘍細胞（例えば、細胞の割合）が測定される。細胞は、例えば、ＣＤ４＋細胞又はＣＤ４－ＣＤ８＋細胞であり得る。腫瘍細胞がＫＩＲ３ＤＬ２を発現するか又は優位に発現するという所見は、ＴＣＬが高悪性度又は進行ＴＣＬ（例えば、病期ＩＶ又はより一般には病期ＩＩを超える）であることを示す。このようなＴＣＬは、本開示の処置方法を使用して有利に処置することができる。
【0108】
任意の実施形態において、方法は、個人からの生物学的サンプル由来の細胞を抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と接触させること、及びそれらの表面にＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現するＴ細胞の割合（例えば、パーセンテージ）を測定すること、及びそのような割合を、非ＴＣＬヒトにおいて（例えば、健康なヒトにおいて）観察される、表面にＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現するＴ細胞の平均的な割合（例えば、パーセンテージ）と比較することを含む、ＴＣＬ診断のステップを含み得、前記測定された割合が前記平均的な割合よりも有意に高い場合、ＴＣＬ陽性の診断がなされる。
【0109】
別の実施形態において、方法は、例えば、生物学的サンプルにおいて見出される腫瘍細胞について、白金製剤又はゲムシタビンの投与を受けていた個人からの生物学的サンプルにおけるＫＩＲ３ＤＬ２核酸又はポリペプチドの発現レベルを決定するステップを含む。
【0110】
別の実施形態において、方法は、例えば、生物学的サンプルにおいて見出される腫瘍細胞について、抗癌剤（例えば、白金製剤又はゲムシタビン）が個人からの生物学的サンプルにおけるＫＩＲ３ＤＬ２核酸又はポリペプチドの発現レベルを増加させるかどうかを決定するステップを含む。
【0111】
生物学的サンプルにおけるＫＩＲ３ＤＬ２核酸又はポリペプチドの発現レベルを決定することは、健康な個人又は抗癌剤（例えば、白金製剤若しくはゲムシタビン）による処置の前の個人に相当する参照レベル（例えば、値、弱い細胞表面染色等）とレベルを比較することを含み得る。生物学的サンプルが、参照レベルと比較して増加しているレベルでＫＩＲ３ＤＬ２核酸又はポリペプチドを発現するという決定は、個人が抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体による処置から利益を得ることができるＴＣＬを有すること、又は任意選択で、個人が、抗癌剤（例えば、それぞれ白金製剤及び／若しくはゲムシタビン）と組み合わせた抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体による処置から利益を得ることができるＴＣＬを有することを示す。任意選択で、生物学的サンプルにおけるＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの検出は、悪性リンパ球の表面上に発現されるＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを検出することを含む。
【0112】
抗体の産生
ＫＩＲ３ＤＬ２（ＣＤ１５８ｋ）は、開示が参照により本明細書に組み込まれるＰｅｎｄｅ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：５０５－５１８において記載される約１４０ｋＤの３つのＩｇドメイン分子のジスルフィド結合ホモ二量体である。いくつかの対立遺伝子変異体がＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドについて報告されており、これらのそれぞれは、用語ＫＩＲ３ＤＬ２によって包含される。成熟ヒトＫＩＲ３ＤＬ２（ａｌｌｅｌｅ ＊００２）のアミノ酸配列は、下記に配列番号１において示され、２１アミノ酸残基リーダー配列が省かれたＧｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＡＢ５２５２０に対応する。
ＫＩＲ３ＤＬ２（ＣＤ１５８ｋ）は、開示が参照により本明細書に組み込まれるＰｅｎｄｅ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：５０５－５１８において記載される約１４０ｋＤの３つのＩｇドメイン分子のジスルフィド結合ホモ二量体である。いくつかの対立遺伝子変異体がＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドについて報告されており、これらのそれぞれは、用語ＫＩＲ３ＤＬ２によって包含される。成熟ヒトＫＩＲ３ＤＬ２（ａｌｌｅｌｅ ＊００２）のアミノ酸配列は、下記に配列番号１において示され、２１アミノ酸残基リーダー配列が省かれたＧｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＡＢ５２５２０に対応する。
【化1】
【0113】
ＫＩＲ３ＤＬ２（ａｌｌｅｌｅ ＊００２）のｃＤＮＡは、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号Ｕ３０２７２において示される。ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ ａｌｌｅｌｅ ＊００３のアミノ酸配列は、下記に示され、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＡＢ３６５９３に対応する。
【化2】
【0114】
それぞれ野生型、完全長ＫＩＲ３ＤＬ２と１つ以上の生物学的特性又は機能を共有する及び少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えるヌクレオチド又はアミノ酸同一性を共有する任意の核酸又はタンパク質配列も包含される。
【0115】
密接に関連するＫＩＲ３ＤＬ１（ＣＤ１５８ｅ１）は、Ｃｏｌｏｎｎａ ａｎｄ Ｓａｍａｒｉｄｉｓ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８（５２０９），４０５－４０８において記載される約７０ｋＤの単量体分子である。ＫＩＲ３ＤＬ１（ＣＤ１５８ｅ２）ポリペプチド（ａｌｌｅｌｅ ＊００１０１）をコードするｃＤＮＡは、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号Ｌ４１２６９において示され、コードされるアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＡＡ６９８７０において示される。一実施形態では、本明細書において言及されるＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドが、ａｌｌｅｌｅ ＊００１０１である。
【0116】
ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体の例は、１９Ｈ１２、１２Ｂ１１、１０Ｆ６、２Ｂ１２、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３又は２０Ｅ９を含む。これらの及びさらなる抗体は、ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書及びＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９２９３号明細書において提供され、両方とも２０１３年９月１７日に提出され、これらの抗体の開示は、参照によって本明細書に援用される。これらの抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２に選択的に結合し、ＫＩＲ３ＤＬ１（又はＫＩＲ３ＤＳ１）に結合しない。例えば、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３又は２０Ｅ９は、例えば、病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に対するＡＤＣＣの誘発により、ＫＩＲ３ＤＬ２発現標的を除去するために個人に投与される治療剤として使用することができるが、１２Ｂ１１及び１９Ｈ１２は、特に検出アッセイにおけるＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の検出において効率的であり、１２Ｂ１１は、凍結組織切片を使用する免疫組織化学的検査アッセイに有利である一方、１９Ｈ１２は、フローサイトメトリー検出に有利であるため、抗体１２Ｂ１１及び１９Ｈ１２は、細胞の表面上のＫＩＲ３ＤＬ２発現の検出（例えば、インビトロアッセイ）に有利であろう。
【0117】
２Ｂ１２、１０Ｇ５、１９Ｈ１２及び１２Ｂ１１のそれぞれは、ＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞の排除のために個人に投与される治療剤として適している。１９Ｈ１２及び１２Ｂ１１並びにＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９２９３号明細書において開示される他の抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２を介して細胞内に内部移行することができ、例えば抗体が毒性成分にコンジュゲートされる場合、抗体－薬剤コンジュゲートとして構成される除去抗体として有利に使用することができる。２Ｂ１２及びＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書において開示される他の抗体は、腫瘍細胞内へのいかなるＫＩＲ３ＤＬ２による内部移行も誘発せず、それにより、エフェクター細胞媒介性活性が例えばＡＤＣＣを誘発する除去抗体に求められる場合に有利な使用を提供する。
【0118】
抗体１０Ｆ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３又は２０Ｅ９の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表Ａに列挙する。
【0119】
【表1】
【0120】
特定の実施形態では、モノクローナル抗体ＡＺ１５８、１９Ｂ１２、１０Ｇ５、１２Ｂ１１、１０Ｇ５又は２Ｂ１２のいずれかと同じエピトープ又は決定基に本質的に結合する抗体が提供され、任意選択で、抗体が、抗体ＡＺ１５８、１９Ｂ１２、１２Ｂ１１、１０Ｇ５又は２Ｂ１２の抗原結合領域を含む。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体ＡＺ１５８、１９Ｂ１２、１２Ｂ１１、１０Ｇ５又は２Ｂ１２が、そのアミノ酸配列及び／又はそれをコードする核酸配列によって特徴付けることができる。一実施形態では、モノクローナル抗体が、ＡＺ１５８、１９Ｂ１２、１２Ｂ１１、１０Ｇ５又は２Ｂ１２のＦａｂ又はＦ（ａｂ’）２部分を含む。ＡＺ１５８、１９Ｂ１２、１２Ｂ１１、１０Ｇ５又は２Ｂ１２の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。一実施形態によれば、モノクローナル抗体が、ＡＺ１５８、１９Ｂ１２、１２Ｂ１１、１０Ｇ５又は２Ｂ１２の重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む。ＡＺ１５８、１９Ｂ１２、１２Ｂ１１、１０Ｇ５若しくは２Ｂ１２の可変軽鎖可変領域又はＡＺ１５８、１９Ｂ１２、１２Ｂ１１、１０Ｇ５若しくは２Ｂ１２の軽鎖可変領域の１、２若しくは３つのＣＤＲをさらに含むモノクローナル抗体も提供される。任意選択で、任意の１つ以上の前記軽鎖又は重鎖ＣＤＲは、１、２、３、４若しくは５つ又はそれを超えるアミノ酸修飾（例えば、置換、挿入又は欠失）を含有し得る。任意選択で、抗体ＡＺ１５８、１９Ｂ１２、１２Ｂ１１、１０Ｇ５又は２Ｂ１２の抗原結合領域の一部又はすべてを含む軽鎖及び／又は重鎖可変領域のいずれかが、ヒトＩｇＧタイプの免疫グロブリン定常領域、任意選択でヒト定常領域、任意選択でヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプに融合される抗体が提供される。
【0121】
ＴＣＬを処置する際に使用するためのＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体（若しくは抗体断片）は、例えば、単離及び／若しくは精製されたタンパク質組成物の形態であり得るか、又はそれは、細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞若しくはＮＫＴ細胞などのようなＣＡＲエフェクター細胞）の表面上に存在若しくは結合することができるか、又は抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体コード核酸配列を含むポックス若しくは他のウイルス遺伝子導入ベクターからなどのように抗体をコードする核酸の形態をさらにとることができる。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞は、構築することができる。ＣＡＲの例は、Ｔ細胞抗原受容体複合体ゼータ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインに融合された細胞外単鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含むように操作され、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞又はＮＫ細胞などのようなエフェクター細胞において発現された場合、モノクローナル抗体の特異性に基づく抗原認識（すなわちＫＩＲ３ＤＬ２認識）をリダイレクトする能力を有する。一態様において、細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及びＫＩＲ３ＤＬ２特異的細胞外ドメイン（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２に特異的に結合するモノクローナル抗体、例えば本明細書において開示される抗体の１つの可変重鎖及び軽鎖領域に由来するドメイン）を含むＫＩＲ３ＤＬ２特異的キメラ免疫受容体を発現し、細胞表面膜上に担持される遺伝子操作された免疫細胞が提供される。ＫＩＲ３ＤＬ２特異的キメラ免疫受容体、受容体をコードするＤＮＡ構築物及び発現にふさわしい方向で構築物を含有するプラスミド発現ベクターも提供される。
【0122】
一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に対してＡＤＣＣ、任意選択でさらにＡＤＣＰを指示する抗体又は抗体断片を含む。
【0123】
一実施形態において、本明細書における任意の実施形態において使用される抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し、任意選択で、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに実質的に結合せず、１００ｎｇ／ｍｌ未満（又はそれよりも良好な）、任意選択で１～１００ｎｇ／ｍｌの、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対する結合親和性（ＫＤ）によって特徴付けられる。
【0124】
抗体は、任意選択で、１００ｎｇ／ｍｌ未満、任意選択で１～１００ｎｇ／ｍｌ、任意選択で１～５０ｎｇ／ｍｌ、任意選択で２５～７５ｎｇ／ｍｌ、任意選択で約５０ｎｇ／ｍｌの、健康なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解についての５１Ｃｒ遊離測定におけるＥＣ５０によって特徴付けられる。抗体は、任意選択で、本明細書において開示される抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体のＥＣ５０に匹敵する、健康なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解についての５１Ｃｒ遊離測定におけるＥＣ５０によって特徴付けられる（例えば、配列番号４９のＶＨ及び配列番号４４又は４５のＶＬを有し、野生型又は修飾ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含み、ＡＤＣＣを媒介する、本明細書において開示される２Ｂ１２抗体のそのＥＣ５０よりも低い又はその１－ｌｏｇ若しくは０．５－ｌｏｇ内にあるＥＣ５０を有する。
【0125】
抗体ＡＺ１５８
ＡＺ１５８は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド及びヒトＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに結合する（国際公開第２０１０／０８１８９０号パンフレットを参照されたい）。ＡＺ１５８のＶＨは、下記に示され、ＣＤＲ１、２及び３にそれぞれ下線を引く。
ＡＺ１５８は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド及びヒトＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドに結合する（国際公開第２０１０／０８１８９０号パンフレットを参照されたい）。ＡＺ１５８のＶＨは、下記に示され、ＣＤＲ１、２及び３にそれぞれ下線を引く。
【化3】
【0126】
ＡＺ１５８のＶＬは下記に示され、ＣＤＲ１、２及び３にそれぞれ下線を引く。
【化4】
【0127】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、そのようなＡＺ１５８抗体由来の可変領域又はＣＤＲ配列を有する抗体を含み得る（例えば、ヒト定常領域に融合された重鎖及び／又は軽鎖可変領域；ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域に融合された重鎖可変領域）；代わりに、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ＡＺ１５８抗体由来の可変領域又はＣＤＲ配列を有する抗体以外の抗体であり得る。
【0128】
抗体１９Ｈ１２
抗体１９Ｈ１２の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記に列挙される。
抗体１９Ｈ１２の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記に列挙される。
【化5】
【0129】
抗体１９Ｈ１２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記に列挙される。
【化6】
【0130】
一態様では、抗体をコードする精製ポリペプチドが提供され、抗体が、配列番号９において示されるアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＦＧＭＮを含むＨＣＤＲ１領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（例えば、ＮＦＧＭＮ（配列番号７）、ＧＹＴＦＴＮ（配列番号８））（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号１０において示されるアミノ酸配列ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦを含むＨＣＤＲ２領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（例えば、ＷＩＮＴＹＴＧＥ（配列番号１１））（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号１２において示されるアミノ酸配列ＮＧＮＦＧＹＹＦＤＹを含むＨＣＤＲ３領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号１３において示されるアミノ酸配列ＲＳＳＱＮＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥを含むＬＣＤＲ１領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号１４において示されるアミノ酸配列ＫＶＳＮＲＦＳを含むＬＣＤＲ２領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；及び／又は配列番号１５において示されるアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＦＴを含むＬＣＤＲ３領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって欠失若しくは置換され得るか、又は配列は１つ以上のアミノ酸の挿入を含み得る）を含む。
【0131】
他の態様では、
（ａ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号５の重鎖可変領域；並びに／又は
（ｂ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号６の軽鎖可変領域；並びに／又は
（ｃ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号５の重鎖可変領域；及び１つ以上のこれらのアミノ酸が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号６の軽鎖可変領域；並びに／又は
（ｄ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号７～９、１０～１１及び１２においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｅ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１３、１４若しくは１５においてそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｆ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号７、８若しくは９、１０若しくは１１及び１２においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；及び１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１３、１４若しくは１５において示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｇ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号５のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である重鎖可変領域；並びに／又は
（ｈ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号６のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である軽鎖可変領域を含む、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体が提供される。
（ａ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号５の重鎖可変領域；並びに／又は
（ｂ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号６の軽鎖可変領域；並びに／又は
（ｃ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号５の重鎖可変領域；及び１つ以上のこれらのアミノ酸が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号６の軽鎖可変領域；並びに／又は
（ｄ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号７～９、１０～１１及び１２においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｅ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１３、１４若しくは１５においてそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｆ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号７、８若しくは９、１０若しくは１１及び１２においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；及び１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１３、１４若しくは１５において示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｇ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号５のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である重鎖可変領域；並びに／又は
（ｈ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号６のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である軽鎖可変領域を含む、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体が提供される。
【0132】
抗体１２Ｂ１１
抗体１２Ｂ１１の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記に列挙される。
抗体１２Ｂ１１の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記に列挙される。
【化7】
【0133】
抗体１２Ｂ１１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記に列挙される。
【化8】
【0134】
一態様では、抗体をコードする精製ポリペプチドが提供され、抗体が、配列番号２０において示されるアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮを含むＨＣＤＲ１領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（例えば、ＮＹＧＭＮ（配列番号１８）、ＧＹＴＦＴＮ（配列番号１９））（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号２１において示されるアミノ酸配列ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧを含むＨＣＤＲ２領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（例えば、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号２２））（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号２３において示されるアミノ酸配列ＧＰＷＬＡＹを含むＨＣＤＲ３領域又はその少なくとも４、５、６、７、８若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号２４において示されるアミノ酸配列ＫＡＳＱＤＩＮＶＹＬＳを含むＬＣＤＲ１領域又はその少なくとも４、５、６、７、８若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号２５において示されるアミノ酸配列ＲＡＩＲＬＶＤを含むＬＣＤＲ２領域又はその少なくとも４、５、６、７、８若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号２６において示されるアミノ酸配列ＬＱＹＤＥＬＰＹＴを含むＬＣＤＲ３領域又はその少なくとも４、５、６、７、８若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって欠失若しくは置換され得る）を含む。
【0135】
他の態様では、
（ａ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号１６の重鎖可変領域；並びに／又は
（ｂ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号１７の軽鎖可変領域；並びに／又は
（ｃ）１つ以上のアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号１６の重鎖可変領域；及び１、２、３つ若しくはそれを超えるこれらのアミノ酸が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号１７の軽鎖可変領域；並びに／又は
（ｄ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１８、１９若しくは２０、２１若しくは２２及び２３においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｅ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号２４、２５及び２６おいて示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｆ）任意のＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１８、１９若しくは２０、２１若しくは２２及び２３においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；及び任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号２４、２５及び２６において示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｇ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である重鎖可変領域；並びに／又は
（ｈ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である軽鎖可変領域
を含む、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体が提供される。
（ａ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号１６の重鎖可変領域；並びに／又は
（ｂ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号１７の軽鎖可変領域；並びに／又は
（ｃ）１つ以上のアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号１６の重鎖可変領域；及び１、２、３つ若しくはそれを超えるこれらのアミノ酸が異なるアミノ酸によって置換され得る配列番号１７の軽鎖可変領域；並びに／又は
（ｄ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１８、１９若しくは２０、２１若しくは２２及び２３においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｅ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号２４、２５及び２６おいて示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｆ）任意のＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１８、１９若しくは２０、２１若しくは２２及び２３においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；及び任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号２４、２５及び２６において示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｇ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１６のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である重鎖可変領域；並びに／又は
（ｈ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号１７のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である軽鎖可変領域
を含む、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体が提供される。
【0136】
抗体２Ｂ１２
抗体２Ｂ１２の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記に列挙される（Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲに下線を引く）。
抗体２Ｂ１２の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記に列挙される（Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲに下線を引く）。
【化9】
【0137】
抗体２Ｂ１２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記に列挙される（Ｋａｂａｔ ＣＤＲに下線を引く）。
【化10】
【0138】
一態様において、抗体をコードする精製ポリペプチドが提供され、抗体は、配列番号３６において示されるアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＡＧＭＱを含むＨＣＤＲ１領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（例えば、ＧＹＴＦＴＴ（配列番号３４）若しくはＴＡＧＭＱ（配列番号３５））（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号３７において示されるアミノ酸配列ＷＩＮＳＨＳＧＶＰＫＹＡＥＤＦＫＧを含むＨＣＤＲ２領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（例えば、ＷＩＮＳＨＳＧＶＰ（配列番号３８））（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号３９において示されるアミノ酸配列ＧＧＤＥＧＶＭＤＹ（任意選択でトリプトファン残基をさらに含む）を含むＨＣＤＲ３領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つれ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号４０において示されるアミノ酸配列ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡを含むＬＣＤＲ１領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号４１において示されるアミノ酸配列ＷＴＳＴＲＨＴを含むＬＣＤＲ２領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され得る）；配列番号４２において示されるアミノ酸配列ＱＱＨＹＳＴＰＷＴを含むＬＣＤＲ３領域又はその少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列（ここで、１つ以上のこれらのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって欠失又は置換され得る）を含む。
【0139】
他の態様では、
（ａ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号３４、３５若しくは３６（ＨＣＤＲ１）、３７若しくは３８（ＨＣＤＲ２）及び３９（ＨＣＤＲ３）においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｂ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号４０、４１及び４２おいて示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｃ）任意のＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号３４、３５若しくは３６（ＨＣＤＲ１）、３７若しくは３８（ＨＣＤＲ２）及び３９（ＨＣＤＲ３）においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；及び任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号４０、４１及び４２において示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｄ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号３２又は４８～５１のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である重鎖可変領域；並びに／又は
（ｅ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号３３又は４３～４７のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である軽鎖可変領域
を含む、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２を結合する抗体が提供される。
（ａ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号３４、３５若しくは３６（ＨＣＤＲ１）、３７若しくは３８（ＨＣＤＲ２）及び３９（ＨＣＤＲ３）においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｂ）任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号４０、４１及び４２おいて示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｃ）任意のＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号３４、３５若しくは３６（ＨＣＤＲ１）、３７若しくは３８（ＨＣＤＲ２）及び３９（ＨＣＤＲ３）においてそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列；及び任意のＣＤＲの１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号４０、４１及び４２において示される軽鎖ＣＤＲ１、２及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列；並びに／又は
（ｄ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号３２又は４８～５１のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である重鎖可変領域；並びに／又は
（ｅ）１、２、３つ若しくはそれを超えるアミノ酸残基が異なるアミノ酸によって置換され得る、配列番号３３又は４３～４７のアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％同一である軽鎖可変領域
を含む、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２を結合する抗体が提供される。
【0140】
本明細書における実施形態のいずれかの他の態様では、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、２及び３のいずれかが、その少なくとも４、５、６、７、８、９若しくは１０の連続したアミノ酸の配列によって及び／又は対応する配列番号において列挙される特定のＣＤＲ又はＣＤＲのセットと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％若しくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有するとして特徴付けられ得る。
【0141】
他の態様では、上記の抗体のいずれかについて、（ａ）～（ｈ）のモノクローナル抗体とＫＩＲ３ＤＬ２結合について競合する抗体が提供される。
【0142】
ヒト化抗体
別の態様において、本発明の処置の方法で使用される抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ヒト化抗体、例えば下記の表Ｂにおいて示される２Ｂ１２及び１０Ｇ５可変領域から選択されるＶＨ及びＶＬを有するヒト化２Ｂ１２又は１０Ｇ５抗体である。
別の態様において、本発明の処置の方法で使用される抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ヒト化抗体、例えば下記の表Ｂにおいて示される２Ｂ１２及び１０Ｇ５可変領域から選択されるＶＨ及びＶＬを有するヒト化２Ｂ１２又は１０Ｇ５抗体である。
【0143】
例えば、ヒト化２Ｂ１２抗体は、以下を含むことができる：
（ａ）配列番号３４、３５又は３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号３７又は３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；
（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；及び
（ｇ）ヒトフレームワーク配列。
（ａ）配列番号３４、３５又は３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号３７又は３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；
（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；及び
（ｇ）ヒトフレームワーク配列。
【0144】
一実施形態において、ヒト化抗体は、ＪＨ６と一緒にヒトサブグループＶＨ１及び／又はＶＨ７由来の重鎖フレームワークを含み、任意選択で、抗体は、ＩＧＨＪ６＊０１と一緒にＩＧＨＶ７－４－１＊０２及び／又はＩＧＨＶ１－ｃ＊０１を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、ヒトサブグループＶＫ１及び／又はＶＫ４由来の軽鎖フレームワーク、任意選択でＪＨ４と一緒にＩＧＫＶ４－１＊０１及び／又はＩＧＫＶ１－３９＊０１、任意選択でＩＧＫＪ４＊０１を含む。
【0145】
任意選択で、ヒトフレームワークは、例えば、１つ以上の突然変異、例えば復帰突然変異を含む。
【0146】
別の態様において、ヒト化抗体は、配列番号４８～５１のヒト化２Ｂ１２のＶＨドメインに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又はそれを超える同一性）を有するＶＨドメインを含む。別の特定の態様において、ヒト化抗体は、（ａ）ヒトＶＨドメイン内に組み込まれた非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＨドメイン（ここで、ＶＨドメインは、配列番号４８～５１のヒト化２Ｂ１２ ＶＨと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一である）、及び（ｂ）ヒトＶＬドメイン内に組み込まれた非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＬドメイン（ここで、ＶＬドメインは、配列番号４３～４７のヒト化２Ｂ１２ ＶＬと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一である）を含む。
【0147】
別の態様において、ヒト化抗体は、配列番号５７～６１のヒト化１０Ｇ５のＶＨドメインに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又はそれを超える同一性）を有するＶＨドメインを含む。別の特定の態様において、ヒト化抗体は、（ａ）ヒトＶＨドメイン内に組み込まれた非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＨドメイン（ここで、ＶＨドメインは、配列番号５７～６１のヒト化１０Ｇ５ ＶＨと少なくとも約８０％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％など）同一である）、及び（ｂ）ヒトＶＬドメイン内に組み込まれた非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＬドメイン（ここで、ＶＬドメインは、配列番号５２～５６のヒト化１０Ｇ５ ＶＬと、少なくとも約８０％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％など）同一である）を含む。
【0148】
１０Ｇ５又は２Ｂ１２抗体は、天然の又は操作されたヒトＩｇＧ定常ドメインをさらに含み得る。任意選択で、定常ドメインは、任意選択で、Ｆｃ受容体結合を増加させるための修飾をさらに含むＩｇＧ１ドメインである。
【0149】
【表2】
【0150】
【表3】
【0151】
一実施形態において、ヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体は、
（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び
（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び
（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
【0152】
一実施形態において、ヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体は、
（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
【0153】
一実施形態において、ヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体は、
（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び
（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び
（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
【0154】
一実施形態において、ヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体は、
（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び
（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び
（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
【0155】
一実施形態において、ヒト化２Ｂ１２抗体は、ラクタマブとしても知られている抗体ＩＰＨ４１０２（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ、フランス）の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列であるか又はそれを含む（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．３２，Ｎｏ．４，２０１８を参照されたい）。ラクタマブは、ヒト化２Ｂ１２抗体（２Ｂ１２のＫａｂａｔ重鎖及び軽鎖ＣＤＲ１、２及び３を有する）であり、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0156】
任意の適した抗体を使用することができることが理解されるであろうが、一態様において、使用される抗体は、本明細書に記載される任意の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含む、知られている抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と同じエリア又は領域に結合する。抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、配列番号１（又はその部分列）のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１～１９２、残基１～９８又は残基９９～１９２に対応するセグメントにおける、少なくとも部分的に重複するか又は少なくとも１つの残基を含むエピトープに結合し得る。一実施形態では、エピトープのすべての重要な残基が、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１～１９２、残基１～９８又は残基９９～１９２に対応するセグメント中にある。一実施形態では、抗体が、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１～１９２、１～９８又は９９～１９２に対応するセグメント中の１、２、３、４、５、６、７つ又はそれを超える残基を含むエピトープに結合する。好ましくは、抗体が結合する残基は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの表面上に存在する。
【0157】
任意選択で、抗体は、配列番号１の残基Ｐ１７９及び／又は残基Ｓ１８１を含むエピトープに結合する。任意選択で、抗体は、配列番号１のＮ９９、Ｈ１００、Ｅ１３０、Ｈ１３１、Ｆ１３２、Ｖ１７８、Ｐ１７９、Ｈ１８０、Ｓ１８１、Ｐ１８２、Ｙ１８３及び／又は残基Ｑ１８４からなる群から選択される１、２、３、４、５、６、７つ又はそれを超える残基を含むエピトープに結合する。
【0158】
ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書及びＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９２９３号明細書は、一連の突然変異体ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの試験について記載する。ＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体によりトランスフェクトされた細胞への抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の結合を測定し、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（配列番号１）に結合する能力と比較した。本明細書において使用される抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド間の結合の低下は、結合親和性の低下（例えば、特定の突然変異体を発現する細胞のＦＡＣＳ試験などの知られている方法によって若しくは突然変異体ポリペプチドへの結合についてのＢｉａｃｏｒｅ試験によって測定されるように）及び／又は抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の全体の結合能力の低下（例えば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体濃度対ポリペプチド濃度のプロットにおけるＢｍａｘの減少によって証明される）があることを意味する。結合の著しい減少は、突然変異した残基が、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体への結合に直接関与するか又は抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体がＫＩＲ３ＤＬ２に結合した場合に結合タンパク質の非常に近くにあることを示す。抗体エピトープは、このように、そのような残基を含み得、そのような残基に空間的に隣接しているさらなる残基を含み得る。
【0159】
いくつかの実施形態では、結合の著しい減少は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド間の結合親和性及び／又は能力が、４０％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超又は９５％超、抗体及び野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（例えば、配列番号１において示されるポリペプチド）間の結合と比較して低下していることを意味する。ある実施形態では、結合が、検出可能な限界未満まで低下する。いくつかの実施形態では、結合の著しい減少は、突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の結合が、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及び野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（例えば、配列番号１において示される細胞外ドメイン）間で観察される結合の５０％未満（例えば、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％又は１０％未満）である場合に証明される。そのような結合測定値は、当技術分野において知られている様々な結合アッセイを使用して生成することができる。１つのそのようなアッセイの特定の例は、実施例の部において記載される。
【0160】
いくつかの実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（例えば、配列番号１）中の残基が置換された突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して有意により低い結合を示す。ここで使用される速記表記法では、フォーマットは、配列番号１において示されるような残基のナンバリングを伴う野生型残基：ポリペプチド中の位置：突然変異体残基とする。
【0161】
任意選択で、抗体は、配列番号１の残基Ｎ９９、Ｈ１００、Ｅ１３０、Ｈ１３１、Ｆ１３２、Ｖ１７８、Ｐ１７９、Ｈ１８０、Ｓ１８１、Ｐ１８２、Ｙ１８３及び／又は残基Ｑ１８４に置換を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合が低下している。
【0162】
いくつかの実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が、配列番号１の配列を有する野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合するが、任意の１つ以上（例えば、１、２、３又は４つ）の以下の突然変異を有する突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合が減少している：Ｐ１７９Ｔ及び／又はＳ１８１Ｔ（配列番号１に関して）。一実施形態では、突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２への結合が、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２への結合と比較して、有意に低下している。
【0163】
いくつかの実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（例えば、配列番号１）中の残基１～９８、残基９９～２９２又は残基９９～１９２に対応するセグメント（又はそのサブ配列）中の残基が異なるアミノ酸により置換された突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの有意により低い結合を示す。
【0164】
一態様では、抗体が、モノクローナル抗体ＡＺ１５８、１０Ｇ５、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１と競合することができ、モノクローナル抗体ＡＺ１５８、１０Ｇ５、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１と実質的に若しくは本質的に同じ又は同じ、ＫＩＲ３ＤＬ２分子上のエピトープ又は「エピトープ部位」を認識するか、それに結合するか、又はそれに対する免疫特異性を有する。他の実施形態では、モノクローナル抗体が、抗体ＡＺ１５８、１０Ｇ５、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１からなる又はその誘導体若しくは断片である。
【0165】
抗体が抗体ＡＺ１５８、１０Ｇ５、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１と同じエピトープに結合し得るが、適した抗体は、抗体がＫＩＲ３ＤＬ２に結合し、所望の機能性を有する限り、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの任意の部分を認識し、それに対して産生することができることが理解されるであろう。例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２、例えばヒトＫＩＲ３ＤＬ２の任意の断片又はＫＩＲ３ＤＬ２断片の任意の組み合わせは、抗体を産生するために免疫原として使用することができ、抗体は、それらが本明細書に記載されるようにＫＩＲ３ＤＬ２発現ＮＫ細胞上で認識することができる限り、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド内の任意の場所のエピトープを認識することができる。一実施形態では、認識されたエピトープが、細胞表面に存在する、すなわち、それらは、細胞の外側に存在する抗体に接触可能である。任意選択で、エピトープは、抗体ＡＺ１５８、１０Ｇ５、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１によって特異的に認識されるエピトープである。さらに、ＫＩＲ３ＤＬ２内の別個のエピトープを認識する抗体は、例えば、様々な個人間で最大の効能及び幅でＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合するように、組み合わせて使用することができる。
【0166】
抗体は、当技術分野において知られている様々な技術によって産生され得る。典型的には、それらは、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、任意選択でヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む免疫原による、非ヒト動物、任意選択でマウスの免疫化によって産生される。ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドは、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの完全長配列を含み得る又はその断片若しくは誘導体、典型的に免疫原性断片、すなわちＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現する細胞の表面上に曝露したエピトープを含むポリペプチドの一部分、任意選択で、ＡＺ１５８、１０Ｇ５、１９Ｈ１２、２Ｂ１２若しくは１２Ｂ１１抗体によって認識されるエピトープを含み得る。そのような断片は、典型的には、成熟ポリペプチド配列の少なくとも約７つの連続するアミノ酸又はその少なくとも約１０の連続するアミノ酸を含有する。断片は、典型的には、受容体の細胞外ドメインに本質的に由来する。一実施形態では、免疫原が、典型的に細胞の表面の脂質膜中の野生型ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、免疫原が、任意選択で処置された又は溶解された、インタクトな細胞、特にインタクトなヒト細胞を含む。他の実施形態では、ポリペプチドが、組換えＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドである。
【0167】
抗原により非ヒト哺乳動物を免疫化するステップは、マウスにおける抗体の産生を刺激するために、当技術分野においてよく知られている任意の方法で実行され得る（例えば、全開示が参照により本明細書に組み込まれるＥ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８８）を参照されたい）。免疫原は、任意選択で、完全又は不完全フロインドアジュバントなどのアジュバントと共に、バッファー中に懸濁される又は溶解される。免疫原の量、バッファーのタイプ及びアジュバントの量を決定する方法は、当業者によく知られており、決して限定的ではない。これらのパラメーターは異なる免疫原について異なり得るが、容易に解明される。
【0168】
同様に、抗体の産生を刺激するのに十分な免疫化の場所及び頻度も当技術分野においてよく知られている。典型的な免疫化プロトコールでは、非ヒト動物は、１日目及び約１週間後に再び抗原を腹腔内に注射される。任意選択で、不完全フロインドアジュバントなどのアジュバントと共に、およそ２０日目に抗原のリコール注射がこれに続く。リコール注射は静脈内に実行され、数日連続して繰り返され得る。典型的にアジュバントを伴うことなく、４０日目の静脈内の又は腹腔内のブースター注射がこれに続く。このプロトコールは、約４０日後に抗原特異的抗体産生Ｂ細胞の産生をもたらす。他のプロトコールも、それらが免疫化において使用される抗原に向けられる抗体を発現するＢ細胞の産生をもたらす限り、使用され得る。
【0169】
ポリクローナル抗体調製について、血清は、免疫化非ヒト動物から得られ、その中に存在する抗体はよく知られている技術によって単離される。血清は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに反応する抗体を得るために、固体支持体に連結された上記に記載される免疫原のいずれかを使用してアフィニティー精製され得る。
【0170】
代替の実施形態では、非免疫化非ヒト哺乳動物由来のリンパ球が、単離され、インビトロにおいて成長され、次いで、細胞培養中の免疫原に曝露される。次いで、リンパ球は収集され、下記に記載される融合ステップが実行される。
【0171】
例示的なモノクローナル抗体について、次のステップは、免疫化非ヒト哺乳動物由来の脾細胞の単離及び抗体産生ハイブリドーマを形成するための不死化細胞とのそれらの脾細胞の続く融合である。非ヒト哺乳動物由来の脾細胞の単離は、当技術分野においてよく知られており、典型的には、麻酔をかけた非ヒト哺乳動物から脾臓を摘出すること、小さい部分にそれを切ること及び単細胞浮遊液を産生するために、適切なバッファー中に細胞濾過器のナイロンメッシュに脾膜から脾細胞を押し込むことを含む。細胞は、洗浄し、遠心分離し、あらゆる赤血球を溶解するバッファー中に再懸濁する。溶液は再び遠心分離し、ペレット中の残りのリンパ球は、新鮮なバッファー中に最終的に再懸濁する。
【0172】
単離され、単細胞浮遊液中に存在したら、リンパ球は不死の細胞株に融合することができる。ハイブリドーマを作るのに有用な多くの他の不死の細胞株が当技術分野において知られているが、これは典型的にマウス骨髄腫細胞株である。マウス骨髄腫系は、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手可能なＭＯＰＣ－２１及びＭＰＣ－１１マウス腫瘍に由来するもの、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手可能なＸ６３ Ａｇ８６５３及びＳＰ－２細胞を含むが、これらに限定されない。融合は、ポリエチレングリコール又は同種のものを使用して達成される。次いで、結果として生じるハイブリドーマは、非融合親骨髄腫細胞の成長又は生存を阻害する、１つ以上の物質を含有する選択培地において成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる。
【0173】
ハイブリドーマは、マクロファージの支持細胞層上で典型的に成長させる。マクロファージは、脾細胞を単離するために使用される非ヒト哺乳動物の同腹仔由来のものであり得、ハイブリドーマを平板培養する数日前に不完全フロインドアジュバント又は同種のものにより典型的にプライミングされる。融合方法は、開示が参照により本明細書に組み込まれるＧｏｄｉｎｇ，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，” ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）において記載される。
【0174】
細胞を、コロニー形成及び抗体産生に十分な時間、選択培地中で成長させる。これは、通常約７～約１４日である。
【0175】
次いで、ハイブリドーマコロニーは、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド遺伝子産物、任意選択で、抗体ＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１によって特異的に認識されるエピトープに特異的に結合する抗体の産生についてアッセイされる。ハイブリドーマが成長するウェルに適応することができる任意のアッセイが用いられ得るが、アッセイは、典型的には、比色定量ＥＬＩＳＡタイプアッセイである。他のアッセイは、ラジオイムノアッセイ又は蛍光標識細胞分取を含む。所望の抗体産生について陽性のウェルは、１つ以上の別個のコロニーが存在するかどうかを決定するために検査される。２つ以上のコロニーが存在する場合、細胞は再クローニングし、単一の細胞のみが所望の抗体を産生するコロニーをもたらしたことを確実にするために成長させ得る。典型的には、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、例えばＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に結合する能力についても試験されるであろう。
【0176】
モノクローナル抗体を産生することが確認されたハイブリドーマは、ＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ－１６４０などの適切な培地中で大量に成長させることができる。代わりに、ハイブリドーマ細胞は、動物中で腹水腫瘍としてインビボにおいて成長させることができる。所望のモノクローナル抗体を産生するための十分な成長後、モノクローナル抗体を含有する成長培地（又は腹水）は、細胞から分離され、その中に存在するモノクローナル抗体は、精製される。精製は、典型的には、ゲル電気泳動法、透析、アガロース又はセファロースビーズなどの固体支持体に連結されたプロテインＡ若しくはプロテインＧ－セファロース又は抗マウスＩｇを使用するクロマトグラフィーによって実現される（すべて、例えば開示が参照により本明細書に組み込まれるＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．１８－１０３７－４６，Ｅｄｉｔｉｏｎ ＡＣにおいて記載される）。結合した抗体は、低ｐＨバッファー（ｐＨ３．０又はそれ未満のグリシン又は酢酸バッファー）を使用することによってプロテインＡ／プロテインＧカラムから典型的に溶出され、抗体含有画分は即座に中和される。これらの画分は、必要に応じて、プールされ、透析され、濃縮される。
【0177】
単一の明確なコロニーを有する陽性のウェルは、典型的には、１つのモノクローナル抗体のみが検出され、産生されていることを保証するために再クローニングされ、再アッセイされる。
【0178】
抗体は、例えば、全開示が参照により本明細書に組み込まれるＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，３４１（１９８９）ｐ．５４４において開示されるように、免疫グロブリンのコンビナトリアルライブラリーの選択によっても産生され得る。
【0179】
興味がある抗原、すなわちＫＩＲ３ＤＬ２、特に又は本質的にモノクローナル抗体ＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１と同じ領域、決定基又はエピトープに結合する１つ以上の抗体の同定は、抗体競合を評価することができる様々な免疫学的スクリーニングアッセイのいずれか１つを使用して容易に決定することができる。多くのそのようなアッセイは、ルーチン的に実行され、当技術分野においてよく知られている（例えば、参照によって本明細書において特に援用される、１９９７年８月２６日に発行された米国特許第５，６６０，８２７号明細書を参照されたい）。
【0180】
例えば、検査されることになる試験抗体が異なる供給源の動物又はさらに異なるＩｇアイソタイプから得られる場合、コントロール（例えば、ＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１）及び試験抗体が混合され（又はあらかじめ吸着され）、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含有するサンプルに加えられる単純な競合アッセイが用いられ得る。ウェスタンブロット法に基づくプロトコール及びＢＩＡＣＯＲＥ分析の使用は、そのような競合研究における使用に適している。
【0181】
ある実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原サンプルに加える前の期間に、コントロール抗体（例えば、ＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１）を様々な量の試験抗体（例えば、約１：１０又は約１：１００）とあらかじめ混合する。他の実施形態では、コントロール及び様々な量の試験抗体を、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原サンプルへの曝露中に単純に混合することができる。遊離抗体から結合抗体を（例えば、非結合抗体を除くための分離又は洗浄技術を使用することによって）及び試験抗体から２Ｂ１２を（例えば、種特異的若しくはアイソタイプ特異的な二次抗体を使用することによって又は検出可能な標識によりＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２若しくは１２Ｂ１１を特異的に標識することによって）区別することができる限り、試験抗体がＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１の抗原への結合を低下させるかどうかを決定することができる。全く関係のない抗体の非存在下における（標識）コントロール抗体の結合は、コントロール高値として役割を果たすことができる。コントロール低値は、全く同じタイプの非標識抗体（ＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１）と、標識（ＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１）抗体をインキュベートすることによって得ることができ、競合が生じ、標識抗体の結合を低下させるであろう。試験アッセイにおいて、試験抗体の存在下における標識抗体反応性の有意な低下は、試験抗体が標識（ＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１）抗体と「交差反応する」又は競合することを示す。約１：１０～約１：１００のＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１：試験抗体の任意の比で少なくとも約６０％又はより好ましくは少なくとも約８０％若しくは９０％（例えば、約６５～１００％）などのように、少なくとも約５０％、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原へのＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１の結合を低下させる任意の試験抗体を選択することができる。一実施形態において、このような試験抗体は、少なくとも約９０％（例えば、約９５％）、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原へのＡＺ１５８、１９Ｈ１２、２Ｂ１２又は１２Ｂ１１の結合を低下させるであろう。
【0182】
競合は、例えば、フローサイトメトリー試験によって評価することもできる。このような試験において、所定のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを有する細胞は、例えば、最初に２Ｂ１２と、次に蛍光色素又はビオチンで標識された試験抗体とインキュベートすることができる。飽和量の２Ｂ１２とのプレインキュベーション時に得られる結合が、２Ｂ１２とのプレインキュベーションなしの抗体によって得られる結合（蛍光発光によって測定される）の約８０％、好ましくは約５０％、約４０％以下（例えば、約３０％、２０％又は１０％）である場合、抗体は、２Ｂ１２と競合すると言われる。代わりに、飽和量の試験抗体とプレインキュベートした細胞上の標識２Ｂ１２抗体（蛍光色素又はビオチンによって）により得られる結合が、試験抗体とのプレインキュベーションなしで得られる結合の約８０％、好ましくは約５０％、約４０％以下（例えば、約３０％、２０％又は１０％）である場合、抗体は、２Ｂ１２と競合すると言われる。
【0183】
抗体がエピトープ領域内で結合するかどうかの決定は、当業者に知られている方法で実行することができる。そのようなマッピング／特徴付け方法の１つの例として、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体に対するエピトープ領域は、それぞれのＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質において露出したアミン／カルボキシルの化学修飾を使用するエピトープ「フットプリント法」によって決定され得る。そのようなフットプリント法技術の１つの特定の例は、ＨＸＭＳ（質量分析法によって検出される水素－重水素交換）の使用であり、受容体及びリガンドタンパク質アミドプロトンの水素／重水素交換、結合及び逆交換が生じ、タンパク質結合に参加する主鎖アミド基は、逆交換から保護され、そのため、重水素化されたままであろう。関連する領域は、消化性タンパク質分解、ファストマイクロボア高速液体クロマトグラフィー分離及び／又はエレクトロスプレーイオン化質量分析により、この時点で同定することができる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ Ｈ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２６７（２）ｐｐ．２５２－２５９（１９９９）Ｅｎｇｅｎ，Ｊ．Ｒ．ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｌ．（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３，２５６Ａ－２６５Ａを参照されたい。適したエピトープ同定技術の他の例は、核磁気共鳴エピトープマッピング（ＮＭＲ）であり、典型的には、遊離抗原及び抗体などの抗原結合ペプチドと複合体を形成した抗原の２次元ＮＭＲスペクトル中のシグナルの位置が比較される。抗原は、典型的には、１５Ｎにより選択的に同位体標識され、抗原に対応するシグナルのみがＮＭＲスペクトルにおいて見られ、抗原結合ペプチドからのシグナルは見られない。抗原結合ペプチドとの相互作用に典型的に関与するアミノ酸に起源を有する抗原シグナルは、遊離抗原のスペクトルと比較して、複合体のスペクトルにおいて位置をシフトさせ、結合に関与するアミノ酸はそのように同定することができる。例えば、Ｅｒｎｓｔ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｒｅｓ Ｆｏｕｎｄ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ．２００４；（４４）：１４９－６７；Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２８１（１）ｐｐ．６１－６７（１９９８）；及びＳａｉｔｏ ａｎｄ Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９６ Ｊｕｎ；９（３）：５１６－２４を参照されたい。
【0184】
エピトープマッピング／特徴付けは、質量分析法方法を使用して実行することもできる。例えば、Ｄｏｗｎａｒｄ，Ｊ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２０００ Ａｐｒ；３５（４）：４９３－５０３及びＫｉｓｅｌａｒ ａｎｄ Ｄｏｗｎａｒｄ，Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ．１９９９ Ｍａｙ １；７１（９）：１７９２－１８０１を参照されたい。プロテアーゼ消化技術もエピトープマッピング及び同定の状況において有用になり得る。抗原決定基に関連する領域／配列は、プロテアーゼ消化により、例えばＫＩＲ３ＤＬ２に対して約１：５０の比率でトリプシンを使用すること又はｐＨ７～８でのｏ／ｎ消化、その後に続く、ペプチド同定のための質量分析法（ＭＳ）分析により決定することができる。抗ＫＩＲ３ＤＬ２バインダーによってトリプシン切断から保護されたペプチドは、続いて、トリプシン消化にかけられたサンプル及び抗体とインキュベートされ、次いで、例えばトリプシンによる消化にかけられたサンプルの比較によって同定することができる（それによってバインダーについてのフットプリントを明らかにする）。キモトリプシン、ペプシンなどの他の酵素も、同様に又は代わりに、類似するエピトープ特徴付け方法において使用することができる。さらに、酵素的消化は、潜在的な抗原決定基配列が、表面に曝露されておらず、したがって、おそらく、免疫原性／抗原性の点から関連しない、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの領域内にあるかどうかを分析するための迅速な方法を提供することができる。
【0185】
部位特異的突然変異誘発は、結合エピトープの解明に有用な他の技術である。例えば、「アラニンスキャニング」では、タンパク質セグメント内のそれぞれの残基が、アラニン残基と交換され、結合親和性についての結果が測定される。突然変異が結合親和性の著しい減少に至る場合、それはおそらく結合に関与しているであろう。構造的エピトープに対して特異的なモノクローナル抗体（すなわち非フォールドタンパク質に結合しない抗体）は、アラニン置換が、タンパク質の全体的なフォールドに影響を及さないことを検証するために使用することができる。例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９５；２６７：３８３－３８６；及びＷｅｌｌｓ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９６；９３：１－６を参照されたい。
【0186】
電子顕微鏡もエピトープ「フットプリント法」に使用することができる。例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９２；３５５：２７５－２７８は、天然ササゲモザイクウイルスのカプシド表面上のＦａｂ断片の物理的フットプリントを決定するために、連係して適用した低温電子顕微鏡、３次元像修復及びＸ線結晶解析を使用した。
【0187】
エピトープ評価のための「標識遊離」アッセイの他の形態は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、ＢＩＡＣＯＲＥ）及び反射型干渉分光法（ＲｉｆＳ）を含む。例えば、Ｆａｅｇｅｒｓｔａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ １９９０；３：２０８－１４；Ｎｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａ－ｔｏｇｒ．１９９３；６４６：１５９－１６８；Ｌｅｉｐｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９８；３７：３３０８－３３１１；Ｋｒｏｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ ２００２；１７：９３７－９４４を参照されたい。
【0188】
抗体と同じ又は実質的に同じエピトープに結合する抗体は、本明細書に記載される、１つ以上の例示的な競合アッセイにおいて同定することができることも注目されるべきである。
【0189】
ＫＩＲ３ＤＬ２に結合することができ、且つ／又は他の所望される特性を有することができる（例えば、ＡＤＣＣ及び／若しくは抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を媒介する能力）抗体が同定されたら、それらは、典型的には、無関係なポリペプチドを含む他のポリペプチドに結合するそれらの能力について、本明細書に記載されるものを含む標準的な方法を使用しても評価されるであろう。理想的には、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２、例えばヒトＫＩＲ３ＤＬ２にのみ実質的な親和性により結合し、無関係なポリペプチドに有意なレベルで結合しない。しかしながら、ＫＩＲ３ＤＬ２に対する親和性が、それが他の無関係なポリペプチドに対するものよりも実質的に大きい限り（例えば、５×、１０×、５０×、１００×、５００×、１０００×、１０，０００×又はそれを超える）、抗体は、本発明の方法における使用に適していることが理解されるであろう。
【0190】
ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞への抗体の結合は、非ヒト霊長動物、例えばカニクイザル又はマウスなどの他の哺乳動物において評価することもできる。抗体並びにその断片及び誘導体が提供され、前記抗体、断片又は誘導体は、ＫＩＲ３ＤＬ２に特異的に結合し、これは、非ヒト霊長動物、例えばカニクイザル由来のＫＩＲ３ＤＬ２にさらに結合する。
【0191】
脊椎動物又は細胞における免疫化及び抗体の産生において、特定の選択ステップは、主張される抗体を単離するために実行され得る。この点では、特定の実施形態では、本開示は、そのような抗体を産生する方法であって、（ａ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む免疫原により非ヒト哺乳動物を免疫化すること；及び（ｂ）前記免疫化された動物から抗体を調製すること；及び（ｃ）ＫＩＲ３ＤＬ２に結合することができる、ステップ（ｂ）からの抗体を選択することを含む方法に関する。
【0192】
実施形態のいずれかの一態様では、本発明の方法に従って調製される抗体が、モノクローナル抗体である。他の態様では、抗体を産生するために使用される非ヒト動物が、げっ歯動物、ウシ、ブタ、家禽、ウマ、ウサギ、ヤギ又はヒツジなどの哺乳動物である。
【0193】
代替の実施形態によれば、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド上に存在するエピトープに結合する抗体をコードするＤＮＡが、ハイブリドーマから単離され、適切な宿主中へのトランスフェクションのための適切な発現ベクター中に置かれる。次いで、宿主は、抗体又はそのモノクローナル抗体のヒト化バージョン抗体の活性断片、抗体の抗原認識部分を含むキメラ抗体若しくは検出可能な成分を含むバージョンなどのその変異体の組換え産生に使用される。
【0194】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して、容易に単離し、シークエンシングすることができる（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）。単離されたら、ＤＮＡは発現ベクター中に置くことができ、これは、次いで、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を達成するために、トランスフェクトされなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は骨髄腫細胞などの宿主細胞内にトランスフェクトされる。本明細書において別記されるように、そのようなＤＮＡ配列は、多くの目的のいずれかのために、例えば抗体をヒト化する、断片若しくは誘導体を産生するために又は抗体の結合特異性を最適化するために、例えば抗原結合部位中の抗体の配列を修飾するために、修飾することができる。
【0195】
抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現は、当技術分野においてよく知られている（例えば、Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，ｐｐ．２５６（１９９３）；及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０，ｐ．１５１（１９９２）を参照されたい。
【0196】
抗原結合化合物が得られたら、それは、ＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞に向けてＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣを誘発し、且つ／又はそれを除去する能力について評価され得る。ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣ（補体依存性細胞障害作用）を誘発するか又はＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞の活性の除去若しくは阻害に一般に至る抗原結合化合物の能力の評価は、方法の任意の適したステージで実行することができる。この評価は、治療上の使用のために定められた抗体（又は他の化合物）の同定、産生及び／又は開発に関与する様々なステップの１つ以上で有用になり得る。例えば、活性は、候補抗原結合化合物を同定するためのスクリーニング方法との関連において又は抗原結合化合物が選択され、ヒトに適したものにする（例えば、抗体の場合、キメラ又はヒト化される）、抗原結合化合物を発現する細胞（例えば、組換え抗原結合化合物を発現する宿主細胞）が得られ、機能的抗体（若しくは他の化合物）を産生するその能力について評価され、且つ／又はある量の抗原結合化合物が産生され、活性について評価することになる（例えば、産物のバッチ若しくはロットを試験する）方法において、評価され得る。一般に、抗原結合化合物は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合することが知られているであろう。ステップは、複数（例えば、ハイスループットスクリーニング方法を使用する非常に多数又は少数）の抗原結合化合物を試験することを伴い得る。
【0197】
ＡＤＣＰ、ＣＤＣ及びＡＤＣＣの試験は、当技術分野において知られているもの及び本明細書における実験の実施例において記載されるものを含む、様々なアッセイによって実行することができ、決定することができる。ＡＤＣＣの試験は、典型的には、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が結合したＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞（例えば、ＴＣＬ細胞又は他のＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞）が、補体の関与を伴うことなく、Ｆｃ受容体を有するエフェクター細胞によって認識される細胞媒介性細胞傷害性を評価することを含む。ＫＩＲ３ＤＬ２抗原を発現しない細胞は、コントロールとして任意選択で使用することができる。ＮＫ細胞傷害性の活性化は、サイトカイン産生（例えば、ＩＦＮ－γ産生）又は細胞傷害性マーカー（例えば、ＣＤ１０７動員）の増加を測定することによって評価される。一実施形態では、抗体が、サイトカイン産生の増加、細胞傷害性マーカーの発現又はコントロール抗体（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合しない抗体、マウス定常領域を有するＫＩＲ３ＤＬ２抗体）と比較して、標的細胞の存在下において少なくとも２０％、５０％、８０％、１００％、２００％若しくは５００％の標的細胞溶解を誘発するであろう。他の実施例では、標的細胞の溶解は、例えば、クロミウム放出アッセイにおいて検出され、例えば、抗体は、標的細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％又は５０％の溶解を誘発するであろう。
【0198】
抗体の断片及び誘導体（特に指定のない限り又は文脈によって明らかに否定されない限り、本出願において使用される用語「抗体」によって包含される）は、当技術分野において知られている技術によって産生することができる。「断片」は、インタクトな抗体の一部分、一般に、抗原結合部位又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片；二重特異性抗体；限定を伴うことなく、（１）単鎖Ｆｖ分子、（２）関連する重鎖成分がない、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有する１つの軽鎖可変ドメイン又はその断片のみを含有する単鎖ポリペプチド、及び（３）関連する軽鎖成分がない、重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有する１つの重鎖可変領域又はその断片のみを含有する単鎖ポリペプチドを含む、連続したアミノ酸残基の１つの途切れない配列からなる一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体断片（「単鎖抗体断片」又は「単鎖ポリペプチド」と本明細書において呼ばれる）；並びに抗体断片から形成される多特異性抗体を含む。とりわけ、ナノボディ、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体又は「ｄＡｂ」が含まれる。
【0199】
ある実施形態では、抗体を産生するハイブリドーマのＤＮＡが、例えば、相同な非ヒト配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインについてのコード配列を置換することによって（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ｐｐ．６８５１（１９８４））又は非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列のすべて若しくは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合することにより、発現ベクターへの挿入の前に修飾することができる。そのように、もとの抗体の結合特異性を有する「キメラ」抗体又は「ハイブリッド」抗体が、調製される。典型的には、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインと置換される。
【0200】
したがって、他の実施形態によれば、抗体が、ヒト化抗体である。抗体の「ヒト化」形態は、マウス免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、特異的なキメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖又は断片である（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２若しくは抗体の他の抗原結合サブ配列など）。大部分について、ヒト化抗体は、もとの抗体の所望の特異性、親和性及び能力を維持しながら、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、もとの抗体（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基と交換されるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。
【0201】
いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基と交換され得る。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体においても、移入されるＣＤＲ若しくはフレームワーク配列においても見られない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体性能をさらに改良し、最適化するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべて又は実質的にすべてがもとの抗体のものに対応し、ＦＲ領域のすべて又は実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、実質的にすべての、少なくとも１つの、典型的に２つの可変ドメインを含むであろう。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にヒト免疫グロブリンのものも含むであろう。さらなる詳細については、全開示が参照により本明細書に組み込まれるＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１，ｐｐ．５２２（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３３２，ｐｐ．３２３（１９８８）；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２，ｐｐ．５９３（１９９２）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９，ｐｐ．１５３４；及び米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）。抗体をヒト化する方法は、当技術分野においてよく知られている。
【0202】
ヒト化抗体を作製するのに使用されることになるヒト可変ドメイン、軽鎖及び重鎖の両方の選択は、抗原性を低下させるのに非常に重要である。いわゆる「最適適合（ｂｅｓｔ－ｆｉｔ）」方法によれば、抗体の可変ドメインの配列は、知られているヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。次いで、マウスのものに最も近いヒト配列は、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として許容される（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１，ｐｐ．２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．１９６，１９８７，ｐｐ．９０１）。他の方法は、軽鎖又は重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ８９，ｐｐ．４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１，ｐ．２６２３（１９９３））。
【0203】
ＫＩＲ３ＤＬ２受容体に対する高い親和性及び他の好都合な生物学的特性を保持しながら、抗体がヒト化されることはさらに重要である。この目標を達成するために、１つの方法によれば、ヒト化抗体は、親及びヒト化配列の３次元モデルを使用する、親の配列及び様々な概念的なヒト化産物の分析のプロセスによって調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者によく知られている。候補免疫グロブリン配列の有望な３次元構造を示し、表示するコンピュータープログラムは、入手可能である。これらの表示についての検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の有望な役割の分析、すなわちその抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響を及ぼす残基の分析を可能にする。このように、標的抗原に対する親和性の増加などの所望の抗体特質が実現されるように、ＦＲ残基は、コンセンサス配列及びインポート配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に直接、最も実質的に影響を及ぼすことに関与する。
【0204】
ヒト又はヒト化モノクローナル抗体を作製するための別の方法は、免疫化のために遺伝子修飾マウスを使用することである。免疫グロブリン遺伝子が機能的ヒト免疫グロブリン遺伝子によって置き換えられたいくつかのマウス宿主が知られている。したがって、このマウスによって又はこのようなマウスのＢ細胞から作製されるハイブリドーマにおいて産生される抗体は、すでにヒト抗体又はヒト化抗体である。例示的な動物は、米国特許第６，１６２，９６３号明細書及びＪａｋｏｂｏｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２（１９９３）２５５において記載されており、これらは、参照によって本明細書に援用される。ヒト抗体は、ファージディスプレー方法を使用する抗体レパートリーの選択によるなど、様々な他の技術に従っても産生され得る。そのような技術は、当業者に知られており、本出願において開示されるモノクローナル抗体から出発して実行することができる。
【0205】
ＫＩＲ３ＤＬ２結合化合物、例えば抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、第２の成分にさらに結合され得、抗体が、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に第２の成分を送達することができる。任意選択で、第２の成分は、治療剤、毒性の作用物質及び／又は検出可能な作用物質である。
【0206】
非誘導体化又は未修飾形態をした抗体、特にＩｇＧ１又はＩｇＧ３タイプが、例えばＫＩＲ３ＤＬ２発現ＰＴＣＬ細胞に対してＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣを向けることにより、過剰増殖している細胞の増殖を阻害するか又はＰＴＣＬ患者由来のものにおけるなどの過剰増殖している細胞に対して細胞傷害性となることが予想されるが、細胞傷害性である誘導体化抗体免疫複合体を調製することも可能である。一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２特異的抗体が単離され、任意選択で他の状態に修飾されたら（例えば、ヒト化）、それらはそれらを細胞に対して毒性となるように誘導体化されるであろう。このように、ＰＴＣＬ患者への抗体の投与は、過剰増殖している細胞への抗体の比較的特異的な結合に至り、それにより障害の根底にある細胞を直接死滅させる又は阻害するであろう。
【0207】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体がＡＤＣＣ及びＣＤＣを誘発する能力を考慮して、抗体は、抗体依存性細胞傷害性、肥満細胞脱顆粒及び食作用などのエフェクター機能並びにリンパ球増殖及び抗体分泌の調節などの免疫調節性シグナルに影響を与えることもできる、Ｆｃ受容体に結合するそれらの能力を増加させる修飾をなすことができる。典型的な修飾は、少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、置換、欠失、挿入）及び／又はグリコシル化の改変タイプ、例えば低フコシル化を含む修飾ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。
【0208】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、任意選択で修飾されたヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプのＦｃドメイン（又はその一部分）を含み得る。
【0209】
ある実施形態において、ＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメイン（又はそれらを含むＦｃドメイン）は、ヒトＣＤ１６及び任意選択でＦｃＲｎなどのような別の受容体への結合を増加させる１つ以上のアミノ酸修飾（例えば、アミノ酸置換）を含み得る。任意選択で、修飾は、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、例えば、ヒトＦｃＲｎに結合するＦｃ由来のポリペプチドの能力を実質的に減少又は消滅させないであろう。典型的な修飾体は、少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、置換、欠失、挿入）及び／又はグリコシル化の改変タイプ、例えば低フコシル化を含む修飾ヒトＩｇＧ１由来定常領域を含む。そのような修飾は、Ｆｃ受容体：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）との相互作用に影響を与えることができる。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は、活性化（すなわち免疫系増強）受容体であるが、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）は、阻害（すなわち免疫系抑制）受容体である。修飾は、例えば、エフェクター（例えば、ＮＫ）細胞上のＦｃγＲＩＩＩａへのＦｃドメインの結合を増加させ得、且つ／又はＦｃγＲＩＩＢへの結合を減少させ得る。修飾の例は、国際公開第２０１４／０４４６８６号パンフレットにおいて提供され、この開示は、参照によって本明細書に援用される。ＦｃγＲＩＩＩａ又はＦｃＲｎ結合に影響する（増強させる）特異的な突然変異（ＩｇＧ１ Ｆｃドメインにおける）は、さらに下記に記載される。
【0210】
【表4】
【0211】
変異Ｆｃ領域は、Ｆｃ領域のＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインにおいて少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ又はそれを超えるアミノ酸修飾を有する）を含み得、修飾は、ヒトＣＤ１６ポリペプチドへの結合を増強する。他の実施形態において、Ｆｃ領域は、アミノ酸２３７～３４１のＦｃ領域のＣＨ２ドメインにおいて又は残基２３１～３４１を含む下部ヒンジ－ＣＨ２領域内に少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ又はそれを超えるアミノ酸修飾）を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、少なくとも２つのアミノ酸修飾（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９つ又はそれを超えるアミノ酸修飾）を含み、このような修飾の少なくとも１つは、ＣＨ３領域内にあり、少なくとも１つのこのような修飾は、ＣＨ２領域内にある。ヒンジ領域におけるアミノ酸修飾も包含される。一実施形態において、ＣＨ１ドメインにおける、任意選択で、残基２１６～２３０（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む上部ヒンジ領域におけるアミノ酸修飾が包含される。Ｆｃ修飾の任意の適した機能的組み合わせ、例えば異なるＦｃ修飾の任意の組み合わせを作製することができ、これらは、米国特許第７，６３２，４９７号明細書；米国特許第７，５２１，５４２号明細書；米国特許第７，４２５，６１９号明細書；米国特許第７，４１６，７２７号明細書；米国特許第７，３７１，８２６号明細書；米国特許第７，３５５，００８号明細書；米国特許第７，３３５，７４２号明細書；米国特許第７，３３２，５８１号明細書；米国特許第７，１８３，３８７号明細書；米国特許第７，１２２，６３７号明細書；米国特許第６，８２１，５０５号明細書及び米国特許第６，７３７，０５６号明細書；並びに／又は国際公開第２０１１／１０９４００号パンフレット；国際公開第２００８／１０５８８６号パンフレット；国際公開第２００８／００２９３３号パンフレット；国際公開第２００７／０２１８４１号パンフレット；国際公開第２００７／１０６７０７号パンフレット；国際公開第０６／０８８４９４号パンフレット；国際公開第０５／１１５４５２号パンフレット；国際公開第０５／１１０４７４号パンフレット；国際公開第０４／１０３２２６９号パンフレット；国際公開第００／４２０７２号パンフレット；国際公開第０６／０８８４９４号パンフレット；国際公開第０７／０２４２４９号パンフレット；国際公開第０５／０４７３２７号パンフレット；国際公開第０４／０９９２４９号パンフレット及び国際公開第０４／０６３３５１号パンフレット；並びに／又はＬａｚａｒ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３（１１）：４０５－４１０；Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０（４）：４８７－４９０；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６；２７７（３０）：２６７３３－２６７４０及びＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６６０４）のいずれにおいても開示されている。
【実施例】
【0212】
実施例１ － 化学療法剤とのインビトロ組み合わせ研究
化学療法剤が宿主免疫系に負に影響し、その結果として、ＡＤＣＣを媒介する治療抗体の効能を阻害し得ることが知られている。その結果として、本発明者らは、化学療法剤が、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ並びにそれぞれ配列番号４９及び４４において示されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有するヒト化２Ｂ１２抗体ラクタマブのＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ活性に影響するかどうかを評価することを試みた。化学療法剤を、単独で又は組み合わせて、同種異系ＮＫ細胞及びＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー症候群細胞系（Ｈｕｔ７８）と共に、濃度を増加させながらの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の存在下においてインビトロ細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイに追加した。
化学療法剤が宿主免疫系に負に影響し、その結果として、ＡＤＣＣを媒介する治療抗体の効能を阻害し得ることが知られている。その結果として、本発明者らは、化学療法剤が、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ並びにそれぞれ配列番号４９及び４４において示されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有するヒト化２Ｂ１２抗体ラクタマブのＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ活性に影響するかどうかを評価することを試みた。化学療法剤を、単独で又は組み合わせて、同種異系ＮＫ細胞及びＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー症候群細胞系（Ｈｕｔ７８）と共に、濃度を増加させながらの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の存在下においてインビトロ細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイに追加した。
【0213】
結果を図１に示す。この実験設定において、ゲムシタビンもオキサリプラチンも、ＨＵＴ７８ ＣＴＣＬ細胞系に対する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体誘発性のＡＤＣＣを妨げなかった。実際、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗腫瘍活性は、驚くべきことに、ゲムシタビン及びオキサリプラチンのそれぞれによって増強され、ゲムシタビン及びオキサリプラチンの組み合わせによってさらに増強された。
【0214】
実施例２ － ゲムシタビン及びオキサリプラチンはそれぞれＫＩＲ３ＤＬ２発現を増強する
ＨＵＴ７８ ＣＴＣＬ細胞系に対する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体誘発性のＡＤＣＣの増強について考え得る理由について調べるために、本発明者らは、ＫＩＲ３ＤＬ２発現がインビトロにおいて同じ化学療法薬によって調整することができるかどうかを評価した。
ＨＵＴ７８ ＣＴＣＬ細胞系に対する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体誘発性のＡＤＣＣの増強について考え得る理由について調べるために、本発明者らは、ＫＩＲ３ＤＬ２発現がインビトロにおいて同じ化学療法薬によって調整することができるかどうかを評価した。
【0215】
手短に言えば、Ｈｕｔ７８細胞（セザリー症候群細胞系）又はＲＡＪＩ－ＫＩＲ３ＤＬ２細胞（ヒトＫＩＲ３ＤＬ２をトランスフェクトしたＲＡＪＩ Ｂ－ＮＨＬ細胞系を、ゲムシタビン及びオキサリプラチンの用量を上昇させながらインキュベートした。腫瘍細胞系表面上のＫＩＲ３ＤＬ２の蛍光強度の中央値をフローサイトメトリーによって分析した。
【0216】
結果を図２に示す。ＲＡＪＩ－ＫＩＲ３ＤＬ２細胞をパネルＡ（左側）に示し、Ｈｕｔ７８細胞をパネルＢに示す（右側。オキサリプラチン及びゲムシタビンの両方が、ベースラインと比較して２～３倍のプラトーに達するまで、用量依存的に両方の細胞系上のＫＩＲ３ＤＬ２表面発現を増強することがわかった（図２）。これらの図は、２つの独立した実験を代表するものである。興味深いことに、シクロホスファミドなどのような他の化学療法剤は、同じ実験条件においてＫＩＲ３ＤＬ２発現を増加させなかった。
【0217】
概して、これらの結果は、特に、処置の改善を特に必要とし得る、ＰＴＣＬが再発した患者における、ゲムシタビン及びオキサリプラチンとの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の組み合わせの活用を支持するものである。
【0218】
実施例３ － インビボにおける効能
完全に機能的なＮＫ細胞及びマクロファージを保持する免疫不全マウス株のＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスにおける異種移植片モデルである。加えて、マウスＦｃ受容体は、ヒトＦｃに有効に結合し、マウスエフェクター細胞がヒト化ｍＡｂによって動員され、ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰを実行することをインビボにおいて可能にする。Ｂ－ＮＨＬ細胞系ＲＡＪＩを、ＫＩＲ３ＤＬ２（ＲＡＪＩ－ＫＩＲ３ＤＬ２）を安定して発現するようにトランスフェクトし、トランスフェクタントをＩＶによってＳＣＩＤマウスに接種し（５×１０６細胞）、それにより播種腫瘍モデルがもたらされた。最初に、ゲムシタビン及びオキサリプラチンの個々の用量をこの異種移植片モデルにおいて確立した。しかしながら、ゲムシタビン及びオキサリプラチンは、ヒトにおいて一緒に使用することができるが、これらのマウスにおいて、活性であるが、忍容性であるように組み合わせることができるゲムシタビン及びオキサリプラチンの用量を見出すことは、不可能であった。その結果として、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（ラクタマブ）は、ゲムシタビン又はオキサリプラチンと別々に組み合わせた。
完全に機能的なＮＫ細胞及びマクロファージを保持する免疫不全マウス株のＣＢ１７－ＳＣＩＤマウスにおける異種移植片モデルである。加えて、マウスＦｃ受容体は、ヒトＦｃに有効に結合し、マウスエフェクター細胞がヒト化ｍＡｂによって動員され、ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰを実行することをインビボにおいて可能にする。Ｂ－ＮＨＬ細胞系ＲＡＪＩを、ＫＩＲ３ＤＬ２（ＲＡＪＩ－ＫＩＲ３ＤＬ２）を安定して発現するようにトランスフェクトし、トランスフェクタントをＩＶによってＳＣＩＤマウスに接種し（５×１０６細胞）、それにより播種腫瘍モデルがもたらされた。最初に、ゲムシタビン及びオキサリプラチンの個々の用量をこの異種移植片モデルにおいて確立した。しかしながら、ゲムシタビン及びオキサリプラチンは、ヒトにおいて一緒に使用することができるが、これらのマウスにおいて、活性であるが、忍容性であるように組み合わせることができるゲムシタビン及びオキサリプラチンの用量を見出すことは、不可能であった。その結果として、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（ラクタマブ）は、ゲムシタビン又はオキサリプラチンと別々に組み合わせた。
【0219】
この播種腫瘍モデル（１グループ当たりｎ＝９匹のマウス）において、マウスグループは、したがって、以下により、１週間につき２回処置した：
－ アイソタイプコントロールｍＡｂ、
－ 抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（ラクタマブ）、
－ ゲムシタビン（５０ｍｇ／ｋｇ）
－ オキサリプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）、
－ 抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（ラクタマブ）＋ゲムシタビン（５０ｍｇ／ｋｇ）、又は
－ 抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（ラクタマブ）＋オキサリプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）。
－ アイソタイプコントロールｍＡｂ、
－ 抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（ラクタマブ）、
－ ゲムシタビン（５０ｍｇ／ｋｇ）
－ オキサリプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）、
－ 抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（ラクタマブ）＋ゲムシタビン（５０ｍｇ／ｋｇ）、又は
－ 抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（ラクタマブ）＋オキサリプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）。
【0220】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及びアイソタイプコントロールの両方は、１回の注射当たり０．３μｇで投与した。
【0221】
結果を図３に示す。抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及びオキサリプラチンの組み合わせは、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体単独と少なくとも同程度に活性であった（オキサリプラチンは、このモデルにおいて、それのみでは抗腫瘍効果がたとえあったとしても非常に限られていた）。興味深いことに、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及びゲムシタビンは、インビボにおいて相乗的な抗腫瘍活性を示した。抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体及びゲムシタビンにより処置したマウスは、それぞれの薬剤によって別々に処置したマウスと比較して生存期間が有意に改善した。上記に示す効果は、２回の独立した実験において、毎回１グループ当たりの９匹のマウスで再現された。
【0222】
これらの結果は、インビトロ組み合わせデータ並びにゲムシタビン及びオキサリプラチンによるＫＩＲ３ＤＬ２の可能性として考えられる誘発と一緒に、ＴＣＬ患者におけるゲムシタビン及びオキサリプラチンとの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の処置の組み合わせを支持するものである。ヒト化２Ｂ１２との組み合わせは、抗癌処置として特に強力であるが、ゲムシタビン及び／又はオキサリプラチンがＫＩＲ３ＤＬ２発現を増加させる能力は、単独では２Ｂ１２よりも強力でない抗体の抗腫瘍を増強するためにも有用であり得る。組み合わせは、特にＰＴＣＬが再発した患者において有効であり得る。
【0223】
本明細書において引用される刊行物、特許出願及び特許を含むすべての参考文献は、それらの全体が参照により、また、あたかもそれぞれの参考文献が、参照により組み込まれることが個々に且つ明確に示され、且つ本明細書においてその全体が示されるのと同じ程度まで（法律によって許可される最大限の程度まで）、本明細書において別記される特定の文献の組み込みが別々に提供されるにもかかわらず、本明細書に組み込まれる。
【0224】
特に指定のない限り、本明細書において提供される厳密な値はすべて、対応する近似値の代表である（例えば、特定の因子又は測定値に関して提供されるすべての厳密な例示的な値は、適切な場合、「約」によって修飾される、対応する近似の測定値も提供すると考えることができる）。
【0225】
要素に関して「含む」、「有する」、「包含する」又は「含有する」などの用語を使用する本発明の任意の態様又は実施形態の本明細書における記載は、特に指定のない限り又は文脈によって明らかに否定されない限り、その特定の要素「からなる」、「から本質的になる」又は「を実質的に含む」本発明の類似する態様又は実施形態について支持を提供することが意図される（例えば、特定の要素を含むとして本明細書に記載される組成物は、特に指定のない限り又は文脈によって明らかに否定されない限り、その要素からなる組成物を記載することも理解されるべきである）。
【0226】
本明細書において提供されるあらゆる実施例又は例示的な用語（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をより明らかにすることが意図され、特に主張されない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中のいかなる用語も、本発明の実施にとって不可欠なものとして主張されていない要素を示すと解釈されるべきでない。
【図1】
【図2】
【図3】
【配列表】