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▶ アンファスター・ファーマスーティカルズ・インコーポレイションの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-01-08
(45)【発行日】2025-01-17
(54)【発明の名称】安定なペプチド製剤を調製するための方法
(51)【国際特許分類】
A61K 38/00 20060101AFI20250109BHJP
A61K 38/20 20060101ALI20250109BHJP
A61K 38/21 20060101ALI20250109BHJP
A61K 38/22 20060101ALI20250109BHJP
A61K 38/26 20060101ALI20250109BHJP
A61K 38/27 20060101ALI20250109BHJP
A61K 38/28 20060101ALI20250109BHJP
A61K 38/37 20060101ALI20250109BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20250109BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20250109BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20250109BHJP
A61K 47/40 20060101ALI20250109BHJP
C07K 1/34 20060101ALN20250109BHJP
【ＦＩ】
A61K38/00
A61K38/20
A61K38/21
A61K38/22
A61K38/26
A61K38/27
A61K38/28
A61K38/37
A61K9/14
A61K47/12
A61K47/24
A61K47/40
C07K1/34 ZNA
【請求項の数】
21
(21)【出願番号】P 2023038306
(22)【出願日】2023-03-13
(62)【分割の表示】P 2021560275の分割
【原出願日】2020-04-20
(65)【公開番号】P2023075249
(43)【公開日】2023-05-30
【審査請求日】2023-03-30
(31)【優先権主張番号】62/839,246
(32)【優先日】2019-04-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】502261451
【氏名又は名称】アンファスター・ファーマスーティカルズ・インコーポレイション
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100139310
【弁理士】
【氏名又は名称】吉光 真紀
(72)【発明者】
【氏名】ブラウン，グレゴリー ネルソン
(72)【発明者】
【氏名】ヴァン スコーク，クルト ガルト
【審査官】伊藤 基章
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１８－５０７８５２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１４－５２４９０８（ＪＰ，Ａ）
【文献】米国特許出願公開第２００３／０１４６１５６（ＵＳ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３８／００
Ａ６１Ｋ ９／００
Ａ６１Ｋ ４７／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ペプチド粉末製剤を調製するための方法であって、ａ．水性担体中で、酸、リン脂質界面活性剤、およびシクロデキストリンの第１の混合物を形成するステップと、
ｂ．前記第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．前記第１の濾過生成物にペプチドを添加して第２の混合物を形成し、前記第２の混合物を第２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．前記第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、前記固体製剤を処理して残留含水量が５％未満の最終粉末製剤を製造するステップと、を含み、前記ぺプチドが、アミリン、アミリン類似体、組換えヒト第ＶＩＩＩ因子（ｒｆＶＩＩ）、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、カルシトニン、ＧＬＰ－１類似体、ＧＬＰ－１－ＧＬＰデュアルアゴニスト、ＧＩＰアゴニスト、組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、オクタペプチドＣＣＲ５阻害剤Ｄ－Ａｌａ－ペプチドＴ－アミリン、組換えヒトインスリン、インスリン類似体、ＰＴＨ １－３１環状ペプチド類似体、インターフェロン－β、インターフェロンβ－１ａ、インターフェロンβ－１ｂ、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、酢酸プラムリンチド、グルカゴンまたはグルカゴン類似体からなる群から選択される、方法。
【請求項2】
前記最終粉末製剤中の前記ペプチドの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって測定される非凝集ペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
乾燥の前の前記溶液のｐＨは２～３に維持される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記リン脂質界面活性剤は、リン脂質界面活性剤の混合物または単一タイプのリン脂質界面活性剤を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記ステップｄは、第２の濾過生成物を凍結乾燥または噴霧乾燥して固体製剤を形成するステップと、前記固体製剤を処理して最終粉末製剤を製造するステップとを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜、酢酸セルロース膜、硝酸セルロース膜、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ、テフロン（登録商標））膜、ポリ塩化ビニル膜、またはポリエーテルスルホン膜を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記ペプチドが、グルカゴンまたはグルカゴン類似体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記ペプチドが、グルカゴンである、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記酸が、クエン酸または酢酸である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記リン脂質界面活性剤が、ドデシルホスホコリン、ジデシルホスファチジルコリン、リゾラウロイルホスファチジルコリン、ジオクタノイルホスファチジルコリン、またはジラウロイルホスファチジルグリセロールである、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記シクロデキストリンが、α－シクロデキストリン、β－シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ－シクロデキストリン、またはγ－シクロデキストリンである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記ペプチドがグルカゴンであり、前記方法が、ａ．水性担体中で、酢酸、ドデシルホスホコリン、およびβ－シクロデキストリンの第１の混合物を形成するステップと、
ｂ．前記第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．前記第１の濾過生成物にグルカゴンを添加して第２の混合物を形成し、前記第２の混合物を第２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．前記第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、前記固体製剤を処理して最終粉末製剤を製造するステップと、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項13】
前記最終粉末製剤中の前記グルカゴンの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって測定される非凝集グルカゴンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記酢酸が、１Ｍの濃度である、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項15】
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、ＰＶＤＦ膜を含む、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、約０．４５μｍの孔径を含む、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記乾燥は、凍結乾燥、噴霧乾燥、またはトレイ乾燥を含む、請求項１２～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記最終粉末製剤は、グルカゴン、ドデシルホスホコリンおよびβ－シクロデキストリンを１０：１０：８０（グルカゴン：ドデシルホスホコリン：β－シクロデキストリン）の重量比で含む、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記最終粉末製剤は、経鼻投与用に製剤化される、請求項１２～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記最終粉末製剤を、経鼻排出デバイスに充填するステップをさらに含む、請求項１２～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記酸の量が、１０％ｗ／ｗ未満である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医薬の分野に関する。より具体的には、本発明は、ペプチドを含む粉末製剤
を調製するための改善された方法を提供する。本発明はさらに、グルカゴンまたはグルカ
ゴン類似体を含む粉末製剤を調製するための改善された方法を提供し、当該粉末製剤は経
鼻投与に適している。
を調製するための改善された方法を提供する。本発明はさらに、グルカゴンまたはグルカ
ゴン類似体を含む粉末製剤を調製するための改善された方法を提供し、当該粉末製剤は経
鼻投与に適している。
【背景技術】
【0002】
ペプチドは、製造プロセスの間および後に凝集等の物理的不安定性を有する傾向がある
。凝集は、いくつかの異なる機構によって生じる複雑なプロセスである。凝集は、小さな
可溶性の凝集体を形成する、いくつかのペプチドまたはタンパク質の核形成によって誘発
され、次いでそれらは、その後により大きな不溶性凝集体が成長するための核形成中心と
して機能する。核形成－成長プロセスは、時間、温度、タンパク質濃度、およびその他の
パラメータによって増加し得る。製造中、タンパク質は、限外濾過、アフィニティークロ
マトグラフィー、選択的吸収クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、凍結
乾燥、透析、および沈殿または「塩析」等の様々な手段を用いて精製および濃縮される。
そのような濃縮プロセスは、凝集を引き起こし得る（Ｍａｇｇｉｏ、ＢｉｏＰｒｏｃｅｓ
ｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ２００８；６（１０）：５８－６５）。これらの凝集
体を除去または可溶化するには追加の処理ステップが必要であるが、それは高価であり得
、また製品全体の収率を低下させる可能性がある。凝集の影響には、材料の損失、有効性
の低下、薬物動態の変化、安定性および製品の貯蔵寿命の低下、ならびに望ましくない免
疫原性の誘導が含まれる。
。凝集は、いくつかの異なる機構によって生じる複雑なプロセスである。凝集は、小さな
可溶性の凝集体を形成する、いくつかのペプチドまたはタンパク質の核形成によって誘発
され、次いでそれらは、その後により大きな不溶性凝集体が成長するための核形成中心と
して機能する。核形成－成長プロセスは、時間、温度、タンパク質濃度、およびその他の
パラメータによって増加し得る。製造中、タンパク質は、限外濾過、アフィニティークロ
マトグラフィー、選択的吸収クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、凍結
乾燥、透析、および沈殿または「塩析」等の様々な手段を用いて精製および濃縮される。
そのような濃縮プロセスは、凝集を引き起こし得る（Ｍａｇｇｉｏ、ＢｉｏＰｒｏｃｅｓ
ｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ２００８；６（１０）：５８－６５）。これらの凝集
体を除去または可溶化するには追加の処理ステップが必要であるが、それは高価であり得
、また製品全体の収率を低下させる可能性がある。凝集の影響には、材料の損失、有効性
の低下、薬物動態の変化、安定性および製品の貯蔵寿命の低下、ならびに望ましくない免
疫原性の誘導が含まれる。
【0003】
特に、現在の高濃度溶液への傾向によってタンパク質間相互作用の可能性が高くなり、
それによって凝集が促進されるため、凝集はバイオ医薬品メーカーにとって大きな問題と
なっている。（Ｍａｇｇｉｏ，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ２
００８；６（１０）：５８－６５）。限定されないが、ｐＨ、緩衝液条件、イオン強度の
調整、および／またはシクロデキストリン等の他の賦形剤の添加を含む、ペプチドの凝集
を制限するための様々な手法が研究されてきた。
それによって凝集が促進されるため、凝集はバイオ医薬品メーカーにとって大きな問題と
なっている。（Ｍａｇｇｉｏ，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ２
００８；６（１０）：５８－６５）。限定されないが、ｐＨ、緩衝液条件、イオン強度の
調整、および／またはシクロデキストリン等の他の賦形剤の添加を含む、ペプチドの凝集
を制限するための様々な手法が研究されてきた。
【0004】
グルカゴンは、水溶液中で凝集する傾向があることで知られており（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ
ＪＳ．，Ｊ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０；４（６）：１３
５７－１３６７；Ｂｅａｖｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．１９６９；１１（１）：３７－４２；Ｍａｔｉｌａｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，
Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ．ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２０
０９；（３６）：４１２－４２０）、グルカゴン粉末製剤の製造中に問題を引き起こし得
る。経鼻投与に適したグルカゴン粉末製剤を調製する以前の方法は、ＷＯ２０１６／１３
３８６３に開示されている。
ＪＳ．，Ｊ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０；４（６）：１３
５７－１３６７；Ｂｅａｖｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．１９６９；１１（１）：３７－４２；Ｍａｔｉｌａｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，
Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ．ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２０
０９；（３６）：４１２－４２０）、グルカゴン粉末製剤の製造中に問題を引き起こし得
る。経鼻投与に適したグルカゴン粉末製剤を調製する以前の方法は、ＷＯ２０１６／１３
３８６３に開示されている。
【0005】
ペプチド粉末製剤、特にグルカゴンまたはグルカゴン類似体粉末製剤を調製するための
代替方法の必要性が存在する。特に、水溶液中のペプチドの凝集を低減または排除する方
法が必要である。凝集を低減するか、または好ましくは排除することにより、最終粉末製
剤は、非常に高いパーセンテージの活性ペプチドを保持することとなり、非常に有利であ
る。好ましくは、方法は、乾燥前に、長期間、例えば最大２４時間、物理的および化学的
に安定な水溶液をもたらす。この拡張された安定性により、プロセスが大規模製造にはる
かに適したものとなる。さらに、長い貯蔵寿命、好ましくは最大約２４ヶ月を有する最終
粉末製剤をもたらす方法が必要である。
代替方法の必要性が存在する。特に、水溶液中のペプチドの凝集を低減または排除する方
法が必要である。凝集を低減するか、または好ましくは排除することにより、最終粉末製
剤は、非常に高いパーセンテージの活性ペプチドを保持することとなり、非常に有利であ
る。好ましくは、方法は、乾燥前に、長期間、例えば最大２４時間、物理的および化学的
に安定な水溶液をもたらす。この拡張された安定性により、プロセスが大規模製造にはる
かに適したものとなる。さらに、長い貯蔵寿命、好ましくは最大約２４ヶ月を有する最終
粉末製剤をもたらす方法が必要である。
【0006】
したがって、本発明は、粉末製剤の製造中にペプチドの凝集を低減する、改善された費
用効果の高い方法を提供する。この方法には、二重濾過ステップが組み込まれている。本
発明で使用されるそのようなペプチドの１つは、グルカゴンまたはグルカゴン類似体であ
る。本発明の方法に従って調製される粉末製剤は、経鼻投与に特に適している。
用効果の高い方法を提供する。この方法には、二重濾過ステップが組み込まれている。本
発明で使用されるそのようなペプチドの１つは、グルカゴンまたはグルカゴン類似体であ
る。本発明の方法に従って調製される粉末製剤は、経鼻投与に特に適している。
【発明の概要】
【0007】
本発明の一態様によれば、ペプチド粉末製剤を調製するための方法が提供される。この
方法は、以下のステップを含む：
ａ．水性担体中で、酸、リン脂質界面活性剤、およびシクロデキストリンの第１の混合
物を形成するステップと、
ｂ．第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約
０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．第１の濾過生成物にペプチドを添加して第２の混合物を形成し、第２の混合物を第
２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μ
ｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、固体製剤を処理して最終粉末製
剤を製造するステップ。
方法は、以下のステップを含む：
ａ．水性担体中で、酸、リン脂質界面活性剤、およびシクロデキストリンの第１の混合
物を形成するステップと、
ｂ．第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約
０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．第１の濾過生成物にペプチドを添加して第２の混合物を形成し、第２の混合物を第
２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μ
ｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、固体製剤を処理して最終粉末製
剤を製造するステップ。
【0008】
一実施形態において、ペプチドは、グルカゴンまたはグルカゴン類似体である。特に、
それはグルカゴンである。
それはグルカゴンである。
【0009】
一実施形態において、酸は、クエン酸または酢酸である。特に、それは酢酸である。よ
り具体的には、酢酸は、１Ｍの濃度である。
り具体的には、酢酸は、１Ｍの濃度である。
【0010】
一実施形態において、界面活性剤、シクロデキストリンおよびペプチドが一緒になって
、第２の混合物の約１．５重量％～約３重量％を構成する。特定の実施形態において、そ
れらは、第２の混合物の約２重量％を構成する。さらなる実施形態において、それらは、
第２の混合物の約２．５重量％を構成する。
、第２の混合物の約１．５重量％～約３重量％を構成する。特定の実施形態において、そ
れらは、第２の混合物の約２重量％を構成する。さらなる実施形態において、それらは、
第２の混合物の約２．５重量％を構成する。
【0011】
一実施形態において、界面活性剤は、ドデシルホスホコリン（ＤＰＣ）、ジデシルホス
ファチジルコリン（ＤＤＰＣ）、リゾラウロイルホスファチジルコリン（ＬＬＰＣ）、ジ
オクタノイルホスファチジルコリン（Ｄ８ＰＣ）、またはジラウロイルホスファチジルグ
リセロール（ＤＬＰＧ）である。特に、界面活性剤はＤＰＣである。
ファチジルコリン（ＤＤＰＣ）、リゾラウロイルホスファチジルコリン（ＬＬＰＣ）、ジ
オクタノイルホスファチジルコリン（Ｄ８ＰＣ）、またはジラウロイルホスファチジルグ
リセロール（ＤＬＰＧ）である。特に、界面活性剤はＤＰＣである。
【0012】
一実施形態において、シクロデキストリンは、α－シクロデキストリン、β－シクロデ
キストリン、ヒドロキシプロピルβ－シクロデキストリン、またはγ－シクロデキストリ
ンである。特に、シクロデキストリンは、β－シクロデキストリンである。
キストリン、ヒドロキシプロピルβ－シクロデキストリン、またはγ－シクロデキストリ
ンである。特に、シクロデキストリンは、β－シクロデキストリンである。
【0013】
一実施形態において、最終粉末製剤中のペプチドの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって
測定される非凝集ペプチドである。好ましくは、ペプチドの９９％超が非凝集ペプチドで
ある。より好ましくは、ペプチドの１００％が非凝集ペプチドである。
測定される非凝集ペプチドである。好ましくは、ペプチドの９９％超が非凝集ペプチドで
ある。より好ましくは、ペプチドの１００％が非凝集ペプチドである。
【0014】
本発明の別の態様によれば、以下のステップを含むペプチド粉末製剤を調製するための
方法が提供される：
ａ．水性担体中で、リン脂質界面活性剤とシクロデキストリンの第１の混合物を形成す
るステップと、
ｂ．第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約
０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．第１の濾過生成物にペプチドを添加して第２の混合物を形成し、第２の混合物を第
２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μ
ｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、固体製剤を処理して最終粉末製
剤を製造するステップ。
方法が提供される：
ａ．水性担体中で、リン脂質界面活性剤とシクロデキストリンの第１の混合物を形成す
るステップと、
ｂ．第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約
０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．第１の濾過生成物にペプチドを添加して第２の混合物を形成し、第２の混合物を第
２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μ
ｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、固体製剤を処理して最終粉末製
剤を製造するステップ。
【0015】
一実施形態において、界面活性剤、シクロデキストリンおよびペプチドが一緒になって
、第２の混合物の約１．５重量％～約３重量％を構成する。特定の実施形態において、そ
れらは、第２の混合物の約２重量％を構成する。さらなる実施形態において、それらは、
第２の混合物の約２．５重量％を構成する。
、第２の混合物の約１．５重量％～約３重量％を構成する。特定の実施形態において、そ
れらは、第２の混合物の約２重量％を構成する。さらなる実施形態において、それらは、
第２の混合物の約２．５重量％を構成する。
【0016】
一実施形態において、界面活性剤は、ＤＰＣ、ＤＤＰＣ、ＬＬＰＣ、Ｄ８ＰＣ、または
ＤＬＰＧである。特に、界面活性剤はＤＰＣである。
ＤＬＰＧである。特に、界面活性剤はＤＰＣである。
【0017】
一実施形態において、シクロデキストリンは、α－シクロデキストリン、β－シクロデ
キストリン、ヒドロキシプロピルβ－シクロデキストリン、またはγ－シクロデキストリ
ンである。特に、シクロデキストリンは、β－シクロデキストリンである。
キストリン、ヒドロキシプロピルβ－シクロデキストリン、またはγ－シクロデキストリ
ンである。特に、シクロデキストリンは、β－シクロデキストリンである。
【0018】
一実施形態において、最終粉末製剤中のペプチドの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって
測定される非凝集ペプチドである。好ましくは、ペプチドの９９％超が非凝集ペプチドで
ある。より好ましくは、ペプチドの１００％が非凝集ペプチドである。
測定される非凝集ペプチドである。好ましくは、ペプチドの９９％超が非凝集ペプチドで
ある。より好ましくは、ペプチドの１００％が非凝集ペプチドである。
【0019】
本発明の別の態様によれば、以下のステップを含むグルカゴン粉末製剤を調製するため
の方法が提供される。
ａ．水性担体中で、酢酸、ＤＰＣ、およびβ－シクロデキストリンの第１の混合物を形
成するステップと、
ｂ．第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約
０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．第１の濾過生成物にグルカゴンを添加して第２の混合物を形成し、第２の混合物を
第２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５
μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、固体製剤を処理して最終粉末製
剤を製造するステップ。
の方法が提供される。
ａ．水性担体中で、酢酸、ＤＰＣ、およびβ－シクロデキストリンの第１の混合物を形
成するステップと、
ｂ．第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約
０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．第１の濾過生成物にグルカゴンを添加して第２の混合物を形成し、第２の混合物を
第２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５
μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、固体製剤を処理して最終粉末製
剤を製造するステップ。
【0020】
一実施形態において、グルカゴン、ＤＰＣおよびβ－シクロデキストリンは一緒になっ
て、第２の混合物の約１．５重量％～約３重量％を構成する。特定の実施形態において、
それらは、第２の混合物の約２重量％を構成する。さらなる実施形態において、それらは
、第２の混合物の約２．５重量％を構成する。
て、第２の混合物の約１．５重量％～約３重量％を構成する。特定の実施形態において、
それらは、第２の混合物の約２重量％を構成する。さらなる実施形態において、それらは
、第２の混合物の約２．５重量％を構成する。
【0021】
一実施形態において、酢酸は、１Ｍの濃度である。
【0022】
一実施形態において、最終粉末製剤中のグルカゴンの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによっ
て測定される非凝集グルカゴンである。好ましくは、グルカゴンの９９％超が非凝集グル
カゴンである。より好ましくは、グルカゴンの１００％が非凝集グルカゴンである。
て測定される非凝集グルカゴンである。好ましくは、グルカゴンの９９％超が非凝集グル
カゴンである。より好ましくは、グルカゴンの１００％が非凝集グルカゴンである。
【0023】
本発明はさらに、本発明の方法に従って調製される粉末製剤を提供する。
【0024】
特定の実施形態において、第２の濾過生成物の乾燥は、フリーズドライ（凍結乾燥）ま
たは噴霧乾燥によって実施することができる。
たは噴霧乾燥によって実施することができる。
【0025】
特定の実施形態において、第１および第２の濾過ステップの両方におけるフィルター膜
は、限定されないが、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、酢酸セルロース、硝酸セルロ
ース、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ、テフロン（登録商標））、ポリ塩化ビニ
ル、ポリエーテルスルホン、またはｃＧＭＰ製造環境での使用に適した他の濾材を含む。
好ましい実施形態において、フィルター膜はＰＶＤＦを含む。
は、限定されないが、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、酢酸セルロース、硝酸セルロ
ース、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ、テフロン（登録商標））、ポリ塩化ビニ
ル、ポリエーテルスルホン、またはｃＧＭＰ製造環境での使用に適した他の濾材を含む。
好ましい実施形態において、フィルター膜はＰＶＤＦを含む。
【0026】
特定の実施形態において、第１および第２の濾過ステップの両方におけるフィルター膜
は、約０．４５μｍの孔径を有する膜である。好ましい実施形態において、フィルター膜
は、０．４５μｍの孔径を有するＰＶＤＦ膜である。
は、約０．４５μｍの孔径を有する膜である。好ましい実施形態において、フィルター膜
は、０．４５μｍの孔径を有するＰＶＤＦ膜である。
【0027】
一実施形態において、本発明の方法の間、溶液のｐＨは２～３に維持される。
【0028】
一実施形態において、本発明の方法の液相は、１５～３０℃、好ましくは１８～２５℃
、より好ましくは約２０℃付近の温度で実施される。
、より好ましくは約２０℃付近の温度で実施される。
【0029】
本発明の方法は、粉末製剤の製造中に凝集する傾向があるペプチドに使用することがで
きる。特に、この方法は、限定されないが、アミリン、アミリン類似体、組換えヒト第Ｖ
ＩＩＩ因子（ｒｆＶＩＩ）、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、カルシトニ
ン、ＧＬＰ－１類似体、ＧＬＰ－１－ＧＬＰデュアルアゴニスト、ＧＩＰアゴニスト、組
換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、オクタペプチドＣＣＲ５阻害剤Ｄ－Ａｌａ－ペプチ
ドＴ－アミリン、組換えヒトインスリン、インスリン類似体、ＰＴＨ １－３１環状ペプ
チド類似体、インターフェロン－β、インターフェロンβ－１ａおよびβ－１ｂ、インタ
ーロイキン－２（ＩＬ－２）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、酢酸プラムリンチド、およ
びウロキナーゼ等の酵素を含むペプチドに使用することができる。
きる。特に、この方法は、限定されないが、アミリン、アミリン類似体、組換えヒト第Ｖ
ＩＩＩ因子（ｒｆＶＩＩ）、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、カルシトニ
ン、ＧＬＰ－１類似体、ＧＬＰ－１－ＧＬＰデュアルアゴニスト、ＧＩＰアゴニスト、組
換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、オクタペプチドＣＣＲ５阻害剤Ｄ－Ａｌａ－ペプチ
ドＴ－アミリン、組換えヒトインスリン、インスリン類似体、ＰＴＨ １－３１環状ペプ
チド類似体、インターフェロン－β、インターフェロンβ－１ａおよびβ－１ｂ、インタ
ーロイキン－２（ＩＬ－２）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、酢酸プラムリンチド、およ
びウロキナーゼ等の酵素を含むペプチドに使用することができる。
【0030】
特に、本発明の方法は、グルカゴン粉末製剤を調製するために用いることができる。グ
ルカゴンは、病院内および病院外の両方で、重度の低血糖症の非常に効果的な治療である
。グルカゴンは、注射による投与の直前に希釈剤と混合しなければならない粉末製剤とし
て入手可能である。グルカゴンの液体製剤も知られている（Ｐｏｎｔｉｒｏｌｉ ｅｔ
ａｌ．，Ｂｒ Ｍｅｄ Ｊ（Ｃｌｉｎ Ｒｅｓ Ｅｄ）１９８３；２８７：４６２－４６
３）。重度の低血糖症の治療のための経鼻投与用のグルカゴン粉末が開発され、ＷＯ２０
１６／１３３８６３に記載されているが、これは最近、Ｂａｑｓｉｍｉ（商標）の名称で
米国およびヨーロッパで承認された。
ルカゴンは、病院内および病院外の両方で、重度の低血糖症の非常に効果的な治療である
。グルカゴンは、注射による投与の直前に希釈剤と混合しなければならない粉末製剤とし
て入手可能である。グルカゴンの液体製剤も知られている（Ｐｏｎｔｉｒｏｌｉ ｅｔ
ａｌ．，Ｂｒ Ｍｅｄ Ｊ（Ｃｌｉｎ Ｒｅｓ Ｅｄ）１９８３；２８７：４６２－４６
３）。重度の低血糖症の治療のための経鼻投与用のグルカゴン粉末が開発され、ＷＯ２０
１６／１３３８６３に記載されているが、これは最近、Ｂａｑｓｉｍｉ（商標）の名称で
米国およびヨーロッパで承認された。
【0031】
本発明の方法に従って製造されるグルカゴンまたはグルカゴン類似体製剤は、経鼻投与
に特に適している。好ましい実施形態において、本発明の方法に従って製造される製剤は
、以下のうちの１つまたは複数を有する：
●肺に到達する可能性のある小さな粒子の低い割合
●一方の鼻孔への単回投与として治療効果を達成するために必要な薬物の総用量を提供
するのに十分な薬物含有量
●数十ミリグラムの総用量、または送達デバイスによって可能な最大量を送達するのに
十分な薬物含有量
●アレルギーまたは風邪に伴い得る鼻づまりがあるにもかかわらず効果的であるために
十分な薬物含有量および吸収特性
●長期間、好ましくは少なくとも２４ヶ月間の、周囲条件下での保存中の安定性
●良好な安全性および耐容性プロファイル
に特に適している。好ましい実施形態において、本発明の方法に従って製造される製剤は
、以下のうちの１つまたは複数を有する：
●肺に到達する可能性のある小さな粒子の低い割合
●一方の鼻孔への単回投与として治療効果を達成するために必要な薬物の総用量を提供
するのに十分な薬物含有量
●数十ミリグラムの総用量、または送達デバイスによって可能な最大量を送達するのに
十分な薬物含有量
●アレルギーまたは風邪に伴い得る鼻づまりがあるにもかかわらず効果的であるために
十分な薬物含有量および吸収特性
●長期間、好ましくは少なくとも２４ヶ月間の、周囲条件下での保存中の安定性
●良好な安全性および耐容性プロファイル
【0032】
本明細書で使用される場合、「凝集」という用語は、ペプチド等の小さなオリゴマー前
駆体の種核、核形成中心、原繊維、またはゲルの、蓄積、凝集、集塊、二量体化、重合、
または形成を指す。凝集体のサイズは、可溶性二量体および他の多量体（見かけの球径で
約５～１０ｎｍ）から、肉眼では見ることができない粒子および目に見える粒子として識
別される、より大きな不溶性種（見かけの直径で約２０～５０μｍ）までに及ぶ。可溶性
凝集体群から、高分子量種等のより大きなものは、有害な臨床転帰をもたらす可能性のあ
る免疫原性応答を誘発することが可能であり得る。
駆体の種核、核形成中心、原繊維、またはゲルの、蓄積、凝集、集塊、二量体化、重合、
または形成を指す。凝集体のサイズは、可溶性二量体および他の多量体（見かけの球径で
約５～１０ｎｍ）から、肉眼では見ることができない粒子および目に見える粒子として識
別される、より大きな不溶性種（見かけの直径で約２０～５０μｍ）までに及ぶ。可溶性
凝集体群から、高分子量種等のより大きなものは、有害な臨床転帰をもたらす可能性のあ
る免疫原性応答を誘発することが可能であり得る。
【0033】
本明細書で使用される場合、「種核」または「核形成中心」という用語は、より大きな
凝集体が形成される最小の凝集体サイズを指す。
凝集体が形成される最小の凝集体サイズを指す。
【0034】
逆相ＨＰＬＣを用いて、最終粉末製剤中の非凝集ペプチドの量を決定することができる
。当業者に既知の標準的な条件、例えば、以下の実施例に記載されている条件を使用する
ことができる。
。当業者に既知の標準的な条件、例えば、以下の実施例に記載されている条件を使用する
ことができる。
【0035】
本明細書で使用される場合、「グルカゴン」は、配列
Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－
Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－
Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ（配列番号
１）のポリペプチドを指す。
グルカゴンは、化学的に合成するか、組換えＤＮＡ技術によって生成するか、または天然
資源から抽出することができる。「グルカゴン類似体」という用語は、インビボで血糖の
増加を刺激する能力を保持するこの配列の変異体を指す。
Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－
Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－
Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ（配列番号
１）のポリペプチドを指す。
グルカゴンは、化学的に合成するか、組換えＤＮＡ技術によって生成するか、または天然
資源から抽出することができる。「グルカゴン類似体」という用語は、インビボで血糖の
増加を刺激する能力を保持するこの配列の変異体を指す。
【0036】
天然配列の１つのアミノ酸がアラニンで置換されているグルカゴン類似体、および複数
の置換を有する類似体の例は、Ｃｈａｂｅｎｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ２０１４；３：２９３－３００に開示されている。増強された生
物学的活性を有するグルカゴン類縁体を生じるように３個のアミノ酸が修飾された例示的
な類似体は、［Ｌｙｓ１７，１８，Ｇ１ｕ２１］グルカゴンであるＺｅａｌａｎｄ Ｐｈ
ａｒｍａは、例えば、米国特許公開第２０１４００８０７５７号、２０１４００１７３３
号、２０１３０３１６９４１号、２０１３０１５７９３５号、２０１３０１５７９２９号
、２０１２０１７８６７０号、２０１１０２９３５８６号、２０１１０２８６９８２号、
２０１１０２８６９８１号、および２０１００２０４１０５号に、多数のグルカゴン類似
体を開示している。これらの類似体は、グルカゴン受容体よりもＧＬＰ受容体に対して高
い結合親和性を有すると報告されているが、それでもなおグルカゴンの活性を保持してい
る。Ｚｅａｌａｎｄ Ｐｈａｒｍａは、ＺＰ４２０７と呼ばれる低血糖症の治療のための
グルカゴン類似体の臨床試験も開始している。米国特許公開第２０１３／００５３３１０
号は、低血糖症の治療に有用な他のグルカゴン類似体を開示している。
の置換を有する類似体の例は、Ｃｈａｂｅｎｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ２０１４；３：２９３－３００に開示されている。増強された生
物学的活性を有するグルカゴン類縁体を生じるように３個のアミノ酸が修飾された例示的
な類似体は、［Ｌｙｓ１７，１８，Ｇ１ｕ２１］グルカゴンであるＺｅａｌａｎｄ Ｐｈ
ａｒｍａは、例えば、米国特許公開第２０１４００８０７５７号、２０１４００１７３３
号、２０１３０３１６９４１号、２０１３０１５７９３５号、２０１３０１５７９２９号
、２０１２０１７８６７０号、２０１１０２９３５８６号、２０１１０２８６９８２号、
２０１１０２８６９８１号、および２０１００２０４１０５号に、多数のグルカゴン類似
体を開示している。これらの類似体は、グルカゴン受容体よりもＧＬＰ受容体に対して高
い結合親和性を有すると報告されているが、それでもなおグルカゴンの活性を保持してい
る。Ｚｅａｌａｎｄ Ｐｈａｒｍａは、ＺＰ４２０７と呼ばれる低血糖症の治療のための
グルカゴン類似体の臨床試験も開始している。米国特許公開第２０１３／００５３３１０
号は、低血糖症の治療に有用な他のグルカゴン類似体を開示している。
【0037】
リン脂質界面活性剤は、鼻粘膜を含む人体の細胞および組織の一部である生体膜に広範
に分布する成分である。細胞内で最も一般的なリン脂質界面活性剤は、ホスファチジルコ
リンおよびホスホコリン（ＰＣ）であるが、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）は生体
膜の重要な成分である。アシル基の１つを除去することによりジアシルＰＣまたはＰＧに
由来するリゾホスリン脂質も使用することができる。
に分布する成分である。細胞内で最も一般的なリン脂質界面活性剤は、ホスファチジルコ
リンおよびホスホコリン（ＰＣ）であるが、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）は生体
膜の重要な成分である。アシル基の１つを除去することによりジアシルＰＣまたはＰＧに
由来するリゾホスリン脂質も使用することができる。
【0038】
本発明で使用することができる例示的なリン脂質界面活性剤は、ドデシルホスホコリン
（ＤＰＣ）、ジデシルホスファチジルコリン（ＤＤＰＣまたは１，２－ジデシル－ｓｎ－
グリセロ－３－ホスホコリン）、リゾラウロイルホスファチジルコリン（ＬＬＰＣまたは
１－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）、ジオクタノイルホスファチジ
ルコリン（Ｄ８ＰＣまたは１，２－ジオクタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン
）およびジラウロイルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧまたは１，２－ジラウロイ
ル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ（１’－ｒａｃ－グリセロール）である。
（ＤＰＣ）、ジデシルホスファチジルコリン（ＤＤＰＣまたは１，２－ジデシル－ｓｎ－
グリセロ－３－ホスホコリン）、リゾラウロイルホスファチジルコリン（ＬＬＰＣまたは
１－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）、ジオクタノイルホスファチジ
ルコリン（Ｄ８ＰＣまたは１，２－ジオクタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン
）およびジラウロイルホスファチジルグリセロール（ＤＬＰＧまたは１，２－ジラウロイ
ル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ（１’－ｒａｃ－グリセロール）である。
【0039】
好ましいリン脂質界面活性剤は、粉末製剤の製造中に用いられる濃度で、二重層ではな
く、ミセルを形成するものである。これには、ＤＰＣ、ＤＤＰＣ、ＬＬＰＣ、およびＤ８
ＰＣが含まれるが、ＤＬＰＧは含まれない。最も好ましいのはＤＰＣである。
く、ミセルを形成するものである。これには、ＤＰＣ、ＤＤＰＣ、ＬＬＰＣ、およびＤ８
ＰＣが含まれるが、ＤＬＰＧは含まれない。最も好ましいのはＤＰＣである。
【0040】
本発明の特定の実施形態において、単一タイプのリン脂質界面活性剤が使用される。他
の実施形態において、リン脂質界面活性剤成分は、例えば、上記で特定された界面活性剤
の任意の２つ、３つ、または４つの組み合わせを含む、リン脂質界面活性剤の混合物から
構成され得る。
の実施形態において、リン脂質界面活性剤成分は、例えば、上記で特定された界面活性剤
の任意の２つ、３つ、または４つの組み合わせを含む、リン脂質界面活性剤の混合物から
構成され得る。
【0041】
本明細書で使用される場合、「シクロデキストリン」という用語は、環内に６つ、７つ
、または８つのグルコース残基を含み、円錐形を形成するシクロデキストリン、すなわち
、以下を指す：
●α（アルファ）－シクロデキストリン：６員糖環分子
●β（ベータ）－シクロデキストリン：７員糖環分子
●γ（ガンマ）－シクロデキストリン：８員糖環分子。
、または８つのグルコース残基を含み、円錐形を形成するシクロデキストリン、すなわち
、以下を指す：
●α（アルファ）－シクロデキストリン：６員糖環分子
●β（ベータ）－シクロデキストリン：７員糖環分子
●γ（ガンマ）－シクロデキストリン：８員糖環分子。
【0042】
α－ＣＤは、臨床試験でＮｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋによって粉末製剤（ＨｙｐｏＧｏｎ
（登録商標）Ｎａｓａｌ）に使用された（Ｓｔｅｎｎｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂ
ｅｔｏｌｏｇｉａ １９９３；３６：９３１－９３５；Ｒｏｓｅｎｆａｌｃｋ ＡＭ、ｅ
ｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ １９９２；１７：４３
－５０）。α－ＣＤの水溶解度は、約５重量％であると報告されている。
（登録商標）Ｎａｓａｌ）に使用された（Ｓｔｅｎｎｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂ
ｅｔｏｌｏｇｉａ １９９３；３６：９３１－９３５；Ｒｏｓｅｎｆａｌｃｋ ＡＭ、ｅ
ｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ １９９２；１７：４３
－５０）。α－ＣＤの水溶解度は、約５重量％であると報告されている。
【0043】
一方はα－ＣＤよりも水溶解度が低く（β－ＣＤ、１．８５重量％）、もう一方はα－
ＣＤよりも水溶解度が高い（ＨＰ－β－ＣＤ）他の２つのシクロデキストリンも、本発明
における使用に適しており、水中で自由に可溶性であるγ－シクロデキストリンも同様で
ある。
ＣＤよりも水溶解度が高い（ＨＰ－β－ＣＤ）他の２つのシクロデキストリンも、本発明
における使用に適しており、水中で自由に可溶性であるγ－シクロデキストリンも同様で
ある。
【0044】
製剤中のシクロデキストリンは充填剤として作用し、また鼻粘膜表面に付着してグルカ
ゴンの吸収を補助する。鼻孔に送達されると、主成分（９０重量％～７０重量％）、すな
わちシクロデキストリンは、粉末が粘膜表面に付着するのを助ける。
ゴンの吸収を補助する。鼻孔に送達されると、主成分（９０重量％～７０重量％）、すな
わちシクロデキストリンは、粉末が粘膜表面に付着するのを助ける。
【0045】
シクロデキストリンは、個別に使用されてもよいか、または任意の２つ以上のシクロデ
キストリンの混合物として使用されてもよい。
キストリンの混合物として使用されてもよい。
【0046】
特定の実施形態において、本方法に従って調製されるグルカゴン粉末製剤は、グルカゴ
ン、ＤＰＣおよびβ－シクロデキストリンを含む。好ましくは、粉末製剤は、１０：１０
：８０（グルカゴン：ＤＰＣ：β－シクロデキストリン）の重量比でグルカゴン、ＤＰＣ
およびβ－シクロデキストリンを含む。好ましくは、グルカゴンは、一方の鼻孔に単回用
量で投与された場合に有効である治療量で存在する。一実施形態において、グルカゴンの
用量は約３ｍｇである。
ン、ＤＰＣおよびβ－シクロデキストリンを含む。好ましくは、粉末製剤は、１０：１０
：８０（グルカゴン：ＤＰＣ：β－シクロデキストリン）の重量比でグルカゴン、ＤＰＣ
およびβ－シクロデキストリンを含む。好ましくは、グルカゴンは、一方の鼻孔に単回用
量で投与された場合に有効である治療量で存在する。一実施形態において、グルカゴンの
用量は約３ｍｇである。
【0047】
混合は、静的および動的混合を含む方法によって行うことができる。動的混合は、軸に
取り付けられ、モーターによって回転する、液体に挿入された刃を使用して行うことがで
きる。静的混合は、静的ミキサー内の曲がりくねった経路に液体を流すことによって行う
ことができる。高速混合条件下での混合中に空気－水界面が存在すると、発泡が生じる場
合がある。高速混合はまた、剪断応力に起因してタンパク質の不安定化をもたらす場合も
ある。発泡を最小限に抑え、好ましくはそれを排除するために、低速混合条件が好ましい
。動的混合の場合、速度はスターラーの１分あたりの回転数（ｒｐｍ）によって決定され
る。好ましいｒｐｍ値は、５０～３００、より好ましくは５０～２５０、さらには５０～
１００である。
取り付けられ、モーターによって回転する、液体に挿入された刃を使用して行うことがで
きる。静的混合は、静的ミキサー内の曲がりくねった経路に液体を流すことによって行う
ことができる。高速混合条件下での混合中に空気－水界面が存在すると、発泡が生じる場
合がある。高速混合はまた、剪断応力に起因してタンパク質の不安定化をもたらす場合も
ある。発泡を最小限に抑え、好ましくはそれを排除するために、低速混合条件が好ましい
。動的混合の場合、速度はスターラーの１分あたりの回転数（ｒｐｍ）によって決定され
る。好ましいｒｐｍ値は、５０～３００、より好ましくは５０～２５０、さらには５０～
１００である。
【0048】
第２の濾過生成物を乾燥させて、溶媒を除去し、固体生成物を残す。乾燥は、凍結乾燥
、噴霧乾燥、トレイ乾燥または他の技術によって実施することができる。生成物の巨視的
な物理的特性は、乾燥技術に応じて変化し、凍結乾燥からの薄片状の固体または乾燥固体
ケーキの形態であり得る。
、噴霧乾燥、トレイ乾燥または他の技術によって実施することができる。生成物の巨視的
な物理的特性は、乾燥技術に応じて変化し、凍結乾燥からの薄片状の固体または乾燥固体
ケーキの形態であり得る。
【0049】
過剰な水分含有量を有する粉末は、粘着性があり、凝集塊を形成する可能性があり、そ
の結果、投与デバイスに充填するために操作するのが困難な粉末が生じる。重要なのは、
残留含水量のレベルが安定性に直接影響することである。バルク粉末の残留水分含有量レ
ベルが５％を超えると、残留含水量が５％未満の粉末と比較して安定性が低下する。した
がって、特定の実施形態において、本発明に従って調製される粉末製剤は、好ましくは５
％未満の残留含水量を有する。
の結果、投与デバイスに充填するために操作するのが困難な粉末が生じる。重要なのは、
残留含水量のレベルが安定性に直接影響することである。バルク粉末の残留水分含有量レ
ベルが５％を超えると、残留含水量が５％未満の粉末と比較して安定性が低下する。した
がって、特定の実施形態において、本発明に従って調製される粉末製剤は、好ましくは５
％未満の残留含水量を有する。
【0050】
特定の実施形態において、本発明に従って調製される粉末製剤中の酸の量は、１０％ｗ
／ｗ未満、好ましくは６％ｗ／ｗ未満である。
／ｗ未満、好ましくは６％ｗ／ｗ未満である。
【0051】
経鼻投与に適した粉末は、それらを経鼻排出デバイスに充填することを可能にするのに
十分な流動性を可能にする物理的特性を必要とする。流動性は、粒径、形状、密度、表面
テクスチャー、表面積、密度、凝集力、接着性、弾性、多孔性、吸湿性、および破砕性を
含む様々なパラメータによって決定される。
十分な流動性を可能にする物理的特性を必要とする。流動性は、粒径、形状、密度、表面
テクスチャー、表面積、密度、凝集力、接着性、弾性、多孔性、吸湿性、および破砕性を
含む様々なパラメータによって決定される。
【0052】
適切な粒径および流動性特性を有する粉末は、小さすぎるまたは大きすぎる粒子を除去
するようにバルク粉末を処理することによって製造することができる。小さすぎるまたは
大きすぎる粒子を除去するようにバルク粉末を処理する方法は、バルク粉末を粉砕してよ
り大きな粒子を分解し、ふるいにかけて所望の粒径範囲の粒子を単離することを含み得る
。上下振動ふるい、水平ふるい、タップ型ふるい、超音波ふるい、および空気循環ジェッ
トふるい等の、様々なふるい方法が実施され得る。ふるいは、一定公称開口の単一ふるい
として使用されてもよいか、または所望の粒径分布を得るように、開口が徐々に小さくな
る一連のふるいを通してバルク粉末を処理してもよい。ふるいは、公称開口が２５～１０
００μｍの範囲の金網メッシュふるいであってもよい。
するようにバルク粉末を処理することによって製造することができる。小さすぎるまたは
大きすぎる粒子を除去するようにバルク粉末を処理する方法は、バルク粉末を粉砕してよ
り大きな粒子を分解し、ふるいにかけて所望の粒径範囲の粒子を単離することを含み得る
。上下振動ふるい、水平ふるい、タップ型ふるい、超音波ふるい、および空気循環ジェッ
トふるい等の、様々なふるい方法が実施され得る。ふるいは、一定公称開口の単一ふるい
として使用されてもよいか、または所望の粒径分布を得るように、開口が徐々に小さくな
る一連のふるいを通してバルク粉末を処理してもよい。ふるいは、公称開口が２５～１０
００μｍの範囲の金網メッシュふるいであってもよい。
【実施例】
【0053】
実施例１．グルカゴン粉末製剤の調製（二重濾過ステップ）
ＤＰＣを撹拌により１Ｍ酢酸溶液に溶解する。次に、β－シクロデキストリンをＤＰＣ
溶液に添加し、溶解するまで撹拌して第１の溶液を形成する。第１の溶液を、０．４５μ
ｍ ＰＶＤＦフィルターを介して第１の濾過ステップに供する。濾過生成物（賦形剤溶液
）を新しいクリーンタンクに収集し、タンクの温度を２０℃±２℃に調整して、溶液への
材料の溶解性を確保する。タンク内の標的温度に達したら、溶液を撹拌しながら、グルカ
ゴンまたはグルカゴン類似体をタンクに添加する。グルカゴンが溶解したように見えたら
すぐに（視覚的確認による）、撹拌を直ちに終了する。次いで、グルカゴン溶液を第２の
０．４５μｍ ＰＶＤＦフィルターを通して濾過し、濾過された材料を第２のクリーンタ
ンクに収集する。この第２の濾過された材料（第２の濾過生成物）は、９７．５％ｗ／ｗ
の１Ｍ酢酸水溶液、０．２５％ｗ／ｗのＤＰＣ、２％ｗ／ｗのβ－シクロデキストリン、
および０．２５％ｗ／ｗのグルカゴン（合計２．５％ｗ／ｗの固形分重量）を含む。次い
で、材料を凍結乾燥し、緻密化ステップを経て、最終的なグルカゴン粉末製剤を製造する
。
ＤＰＣを撹拌により１Ｍ酢酸溶液に溶解する。次に、β－シクロデキストリンをＤＰＣ
溶液に添加し、溶解するまで撹拌して第１の溶液を形成する。第１の溶液を、０．４５μ
ｍ ＰＶＤＦフィルターを介して第１の濾過ステップに供する。濾過生成物（賦形剤溶液
）を新しいクリーンタンクに収集し、タンクの温度を２０℃±２℃に調整して、溶液への
材料の溶解性を確保する。タンク内の標的温度に達したら、溶液を撹拌しながら、グルカ
ゴンまたはグルカゴン類似体をタンクに添加する。グルカゴンが溶解したように見えたら
すぐに（視覚的確認による）、撹拌を直ちに終了する。次いで、グルカゴン溶液を第２の
０．４５μｍ ＰＶＤＦフィルターを通して濾過し、濾過された材料を第２のクリーンタ
ンクに収集する。この第２の濾過された材料（第２の濾過生成物）は、９７．５％ｗ／ｗ
の１Ｍ酢酸水溶液、０．２５％ｗ／ｗのＤＰＣ、２％ｗ／ｗのβ－シクロデキストリン、
および０．２５％ｗ／ｗのグルカゴン（合計２．５％ｗ／ｗの固形分重量）を含む。次い
で、材料を凍結乾燥し、緻密化ステップを経て、最終的なグルカゴン粉末製剤を製造する
。
【0054】
比較例．グルカゴン粉末製剤の調製（単一濾過ステップ）
ＤＰＣを撹拌により１Ｍ酢酸溶液（８リットル）に溶解する。溶液を撹拌しながらグル
カゴンを添加する。グルカゴンが溶解したように見えたらすぐに（視覚的確認による）、
撹拌しながらβ－シクロデキストリンを添加する。添加した固体がすべて溶解したように
見えたら、０．４５μｍ ＰＶＤＦフィルターを通して溶液を濾過する。単一のフィルタ
ー膜の目詰まりまたはファウリングが発生した場合、複数のフィルターの使用が必要にな
る場合がある。濾過された材料は、０．３％ｗ／ｗのＤＰＣ、２．４％ｗ／ｗのβ－シク
ロデキストリン、および０．３％ｗ／ｗのグルカゴン（合計３％％ｗ／ｗの固形分）を含
む。濾過された材料を収集し、凍結乾燥する。
ＤＰＣを撹拌により１Ｍ酢酸溶液（８リットル）に溶解する。溶液を撹拌しながらグル
カゴンを添加する。グルカゴンが溶解したように見えたらすぐに（視覚的確認による）、
撹拌しながらβ－シクロデキストリンを添加する。添加した固体がすべて溶解したように
見えたら、０．４５μｍ ＰＶＤＦフィルターを通して溶液を濾過する。単一のフィルタ
ー膜の目詰まりまたはファウリングが発生した場合、複数のフィルターの使用が必要にな
る場合がある。濾過された材料は、０．３％ｗ／ｗのＤＰＣ、２．４％ｗ／ｗのβ－シク
ロデキストリン、および０．３％ｗ／ｗのグルカゴン（合計３％％ｗ／ｗの固形分）を含
む。濾過された材料を収集し、凍結乾燥する。
【0055】
１回目の濾過後の賦形剤溶液の安定性
賦形剤溶液（酢酸、ＤＰＣおよびβ－シクロデキストリン）を、本質的に実施例１に記
載されるように、２．５％ｗ／ｗの固形分濃度で調製する。試験期間中、溶液を２５℃に
維持する。データを表１にまとめる。２２時間の期間にわたって含有量に有意な変化は起
きず、物質収支が確認された。
賦形剤溶液（酢酸、ＤＰＣおよびβ－シクロデキストリン）を、本質的に実施例１に記
載されるように、２．５％ｗ／ｗの固形分濃度で調製する。試験期間中、溶液を２５℃に
維持する。データを表１にまとめる。２２時間の期間にわたって含有量に有意な変化は起
きず、物質収支が確認された。
【表1】
【0056】
グルカゴンを含む水溶液の安定性
溶液アッセイ
グルカゴン溶液を、本質的に実施例１（第２の濾過生成物）に記載されるように調製す
る。調製後、グルカゴン溶液を撹拌せずに静置する。溶液サンプルを所定の時間に採取し
、アッセイの前に０．４５μｍフィルターを通過させる。凝集体に変換したあらゆるグル
カゴンがこの濾過ステップによって除去されるため、このアッセイは凝集の程度の推定を
提供する。
溶液アッセイ
グルカゴン溶液を、本質的に実施例１（第２の濾過生成物）に記載されるように調製す
る。調製後、グルカゴン溶液を撹拌せずに静置する。溶液サンプルを所定の時間に採取し
、アッセイの前に０．４５μｍフィルターを通過させる。凝集体に変換したあらゆるグル
カゴンがこの濾過ステップによって除去されるため、このアッセイは凝集の程度の推定を
提供する。
【0057】
蛍光アッセイ
蛍光法の基本は、グルカゴン分子中の単一トリプトファン残基の発光波長のシフトを利
用することである（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ＪＳ．，Ｊ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｓｃｉ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌ．２０１０；４（６）：１３５７－１３６７）。グルカゴン分子が、そのコンフ
ォメーションをランダムコイルまたはαヘリックスから凝集形態に変化させると、トリプ
トファン分子の局所環境が発光スペクトルの青方偏移の形で変化する。したがって、ファ
イバー光学的に結合された後方散乱蛍光プローブを用いて、グルカゴンの発光蛍光シグナ
ルの波長の変化を経時的に監視することにより、非凝集グルカゴンと該分子の凝集形態と
の発光ピークの比を計算することが、リアルタイムでの凝集を監視するためのツールとし
て用いられ得る。
蛍光法の基本は、グルカゴン分子中の単一トリプトファン残基の発光波長のシフトを利
用することである（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ＪＳ．，Ｊ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｓｃｉ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌ．２０１０；４（６）：１３５７－１３６７）。グルカゴン分子が、そのコンフ
ォメーションをランダムコイルまたはαヘリックスから凝集形態に変化させると、トリプ
トファン分子の局所環境が発光スペクトルの青方偏移の形で変化する。したがって、ファ
イバー光学的に結合された後方散乱蛍光プローブを用いて、グルカゴンの発光蛍光シグナ
ルの波長の変化を経時的に監視することにより、非凝集グルカゴンと該分子の凝集形態と
の発光ピークの比を計算することが、リアルタイムでの凝集を監視するためのツールとし
て用いられ得る。
【0058】
グルカゴン溶液を、本質的に実施例１（第２の濾過生成物）に記載されるように調製す
る。蛍光プローブを用いて、発光スペクトルの経時変化を監視する。溶液を撹拌せず、室
温で２４時間監視する。
る。蛍光プローブを用いて、発光スペクトルの経時変化を監視する。溶液を撹拌せず、室
温で２４時間監視する。
【0059】
小規模実験（１００ｍＬ）では、この２４時間の期間にグルカゴン蛍光比の変化は観察
されなかった。
されなかった。
【0060】
さらなる実験において、グルカゴン溶液を、本質的に実施例１（第２の濾過生成物）に
記載されるように調製し、異なる温度に維持する。比較のために、これを第２の濾過ステ
ップを通過していないグルカゴン溶液と比較する。その結果を表２にまとめる。
記載されるように調製し、異なる温度に維持する。比較のために、これを第２の濾過ステ
ップを通過していないグルカゴン溶液と比較する。その結果を表２にまとめる。
【表2】
【0061】
試験の結果は、グルカゴン溶液が第２の濾過ステップを通過し、５℃または２０℃で撹
拌せずに保持された場合、システムからの凝集によってグルカゴンが失われないことを示
している。しかしながら、溶液を濾過しないと、２４時間にわたってグルカゴン含有量の
約８％が失われる。
拌せずに保持された場合、システムからの凝集によってグルカゴンが失われないことを示
している。しかしながら、溶液を濾過しないと、２４時間にわたってグルカゴン含有量の
約８％が失われる。
【0062】
本質的に実施例１に記載されるように調製したグルカゴン溶液の化学的安定性はまた、
本質的に以下に記載されるように逆相ＨＰＬＣを用いて試験することができる。
本質的に以下に記載されるように逆相ＨＰＬＣを用いて試験することができる。
【0063】
１００リットル（２．５％ｗ／ｗ固形分）規模の量の二重濾過により、本質的に上記の
ように実施された調製では、驚くべきことに、第２の濾過ステップ後に収集された溶液は
、検出可能な凝集もなく、２４時間まで物理的および化学的に安定であることが分かった
（上記の方法の１つまたは複数によって決定される）。一方、１回の濾過ステップのみに
供されたグルカゴン溶液材料（比較例、８リットルおよび３％ｗ／ｗ固形分）は、グルカ
ゴンの添加から約１５分以内に目に見える凝集を示した。
ように実施された調製では、驚くべきことに、第２の濾過ステップ後に収集された溶液は
、検出可能な凝集もなく、２４時間まで物理的および化学的に安定であることが分かった
（上記の方法の１つまたは複数によって決定される）。一方、１回の濾過ステップのみに
供されたグルカゴン溶液材料（比較例、８リットルおよび３％ｗ／ｗ固形分）は、グルカ
ゴンの添加から約１５分以内に目に見える凝集を示した。
【0064】
経鼻グルカゴン粉末製剤のＨＰＬＣによる化学的安定性分析
明確に定義された外部参照標準に対する、実施例１に従って調製された経鼻グルカゴン
粉末製剤の安定性は、日常的ＲＰ－ＨＰＬＣ技術を用いて決定される。簡単に述べると、
ＨＰＬＣ逆相カラムＣ１８（内径３．０ｍｍ×１５０ｍｍ、粒径２．６μｍ）を、２１４
ｎｍのＵＶ検出波長で、リン酸カリウム緩衝液：アセトニトリル移動相とともに用いる。
勾配移動相の組成は、５４％、８０：２０の１５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液：アセトニ
トリルで３分間保持することで開始し、７０％、６０：４０のリン酸カリウム緩衝液：ア
セトニトリルの組成で８分かけて終了する。
明確に定義された外部参照標準に対する、実施例１に従って調製された経鼻グルカゴン
粉末製剤の安定性は、日常的ＲＰ－ＨＰＬＣ技術を用いて決定される。簡単に述べると、
ＨＰＬＣ逆相カラムＣ１８（内径３．０ｍｍ×１５０ｍｍ、粒径２．６μｍ）を、２１４
ｎｍのＵＶ検出波長で、リン酸カリウム緩衝液：アセトニトリル移動相とともに用いる。
勾配移動相の組成は、５４％、８０：２０の１５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液：アセトニ
トリルで３分間保持することで開始し、７０％、６０：４０のリン酸カリウム緩衝液：ア
セトニトリルの組成で８分かけて終了する。
【0065】
表３に示すように、本質的に上記のように実施された実験において、実施例１（１００
Ｌ）に従って調製された経鼻グルカゴン粉末製剤の３つの異なるバッチからの代表的なサ
ンプルは、実験精度内で約１００％のグルカゴン活性を保持した。
Ｌ）に従って調製された経鼻グルカゴン粉末製剤の３つの異なるバッチからの代表的なサ
ンプルは、実験精度内で約１００％のグルカゴン活性を保持した。
【0066】
経鼻グルカゴン粉末製剤の効力バイオアッセイ
グルカゴンの細胞表面受容体とＣＲＥ－ルシフェラーゼレポーター遺伝子の両方を安定
に発現するように操作された胎児腎臓細胞株ＨＥＫ２９３を用いて、最終的な経鼻グルカ
ゴン製剤製品の相対的効力を決定する。この細胞ベースのアッセイでは、ＣＲＥプロモー
ターからのルシフェラーゼの転写は、内因性サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）シグナル伝
達経路に沿った応答をトリガーすることによって制御される。したがって、グルカゴンの
細胞表面受容体への結合は、ｃＡＭＰ産生を誘導する。これにより、ｃＡＭＰ応答エレメ
ント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）のリン酸化および活性化がもたらされ、その結果、ＣＲ
Ｅ－ルシフェラーゼレポーター遺伝子によるルシフェラーゼの発現が起こる。ルシフェラ
ーゼ産生は、ルシフェリン基質を反応混合物に添加し、ルミノメーターを使用してルシフ
ェリンの酸化を定量化することによって決定される。発光シグナルは、存在するルシフェ
ラーゼの量に比例し、それは細胞を誘導するために使用されるグルカゴンの量に正比例す
る。試験サンプルの相対的効力は、参照標準の典型的な８ポイント用量反応曲線をサンプ
ルのそれと比較することによって決定される。応答データを、４パラメータロジスティッ
クモデルに適合させ、参照標準のＥＣ５０およびサンプルのＥＣ５０を決定する（これら
のＥＣ５０値の比は、試験材料の相対的効力を表す）。
グルカゴンの細胞表面受容体とＣＲＥ－ルシフェラーゼレポーター遺伝子の両方を安定
に発現するように操作された胎児腎臓細胞株ＨＥＫ２９３を用いて、最終的な経鼻グルカ
ゴン製剤製品の相対的効力を決定する。この細胞ベースのアッセイでは、ＣＲＥプロモー
ターからのルシフェラーゼの転写は、内因性サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）シグナル伝
達経路に沿った応答をトリガーすることによって制御される。したがって、グルカゴンの
細胞表面受容体への結合は、ｃＡＭＰ産生を誘導する。これにより、ｃＡＭＰ応答エレメ
ント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）のリン酸化および活性化がもたらされ、その結果、ＣＲ
Ｅ－ルシフェラーゼレポーター遺伝子によるルシフェラーゼの発現が起こる。ルシフェラ
ーゼ産生は、ルシフェリン基質を反応混合物に添加し、ルミノメーターを使用してルシフ
ェリンの酸化を定量化することによって決定される。発光シグナルは、存在するルシフェ
ラーゼの量に比例し、それは細胞を誘導するために使用されるグルカゴンの量に正比例す
る。試験サンプルの相対的効力は、参照標準の典型的な８ポイント用量反応曲線をサンプ
ルのそれと比較することによって決定される。応答データを、４パラメータロジスティッ
クモデルに適合させ、参照標準のＥＣ５０およびサンプルのＥＣ５０を決定する（これら
のＥＣ５０値の比は、試験材料の相対的効力を表す）。
【0067】
ＨＥＫ２９３細胞を、増殖培地（１．０ｍｇ／ｍＬ Ｇｅｎｅｔｅｃｉｎ（登録商標）
および１２５μｇ／ｍｌハイグロマイシンＢを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥ
Ｍ）中の１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）。ペニシリンおよびストレプトマイシンが１００
ユニット／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンの最終濃度で添加
されてもよい）に播種し、３７℃で３０分～２．５時間付着させる。増殖培地を洗浄し、
ＤＭＥＭ中の０．２５％ＦＢＳと、０．５％ウシ血清アルブミン、１×ペニシリン／スト
レプトマイシン、および０．０００３２ｎｇ／ｍＬ～２５ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度のグル
カゴンとからなるアッセイ培地と交換する。プレートを３７℃で４．５時間インキュベー
トする。ウェルごとに１００μＬのＳｔｅａｄｙＧｌｏ（登録商標）を添加し、次いで、
ウェルを周囲温度で３０分間継続的に撹拌する。プレートをルミノメーターで読み取る。
および１２５μｇ／ｍｌハイグロマイシンＢを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥ
Ｍ）中の１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）。ペニシリンおよびストレプトマイシンが１００
ユニット／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンの最終濃度で添加
されてもよい）に播種し、３７℃で３０分～２．５時間付着させる。増殖培地を洗浄し、
ＤＭＥＭ中の０．２５％ＦＢＳと、０．５％ウシ血清アルブミン、１×ペニシリン／スト
レプトマイシン、および０．０００３２ｎｇ／ｍＬ～２５ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度のグル
カゴンとからなるアッセイ培地と交換する。プレートを３７℃で４．５時間インキュベー
トする。ウェルごとに１００μＬのＳｔｅａｄｙＧｌｏ（登録商標）を添加し、次いで、
ウェルを周囲温度で３０分間継続的に撹拌する。プレートをルミノメーターで読み取る。
【0068】
表３に示すように、本質的に上記のように実施された実験では、細胞ベースのアッセイ
によって測定されたグルカゴンの相対的効力のパーセントは、９４％～１０２％であるこ
とがわかり、実施例１（１００Ｌ）による製剤の調製中に凝集が起こっていなかったこと
が示される。これらの結果は、同じ参照標準を使用したグルカゴン化学物質ベースのアッ
セイ結果と同等であった。
によって測定されたグルカゴンの相対的効力のパーセントは、９４％～１０２％であるこ
とがわかり、実施例１（１００Ｌ）による製剤の調製中に凝集が起こっていなかったこと
が示される。これらの結果は、同じ参照標準を使用したグルカゴン化学物質ベースのアッ
セイ結果と同等であった。
【0069】
経鼻グルカゴン粉末製剤の不純物分析
経鼻グルカゴン粉末製剤中の潜在的な不純物の同定および定量化は、日常的ＲＰ－ＨＰ
ＬＣ技術を用いて行われる。不純物は、製造プロセス、または最終製剤中の材料の化学分
解に起因して発生し得る。方法は、ＵＳＰ４１－ＮＦ３６に概説されている条件に基づい
ている。この分析は、グルカゴン粉末製剤の安定性の指標を提供する。
経鼻グルカゴン粉末製剤中の潜在的な不純物の同定および定量化は、日常的ＲＰ－ＨＰ
ＬＣ技術を用いて行われる。不純物は、製造プロセス、または最終製剤中の材料の化学分
解に起因して発生し得る。方法は、ＵＳＰ４１－ＮＦ３６に概説されている条件に基づい
ている。この分析は、グルカゴン粉末製剤の安定性の指標を提供する。
【0070】
表３に示すように、本質的に上記のように実施された実験では、バッチ出荷時の総不純
物レベルは約０．４％～約０．５６％の範囲である。さらに、実施例１に従って調製され
た経鼻グルカゴン粉末製剤について提案された貯蔵寿命仕様分析は、最大約２４ヶ月間、
約２０％（ａ／ａ）以下の総不純物レベルを有する。驚くべきことに、経鼻グルカゴン粉
末製剤は、現在のＵＳＰモノグラフ（ＵＳＰ４１－ＮＦ３６）が、３１％（ａ／ａ）以下
の総不純物および関連化合物が存在することという制限を規定する、現在市販されている
グルカゴン緊急キットに推奨されるレベルよりも大幅に低い総不純物レベルを有する。
物レベルは約０．４％～約０．５６％の範囲である。さらに、実施例１に従って調製され
た経鼻グルカゴン粉末製剤について提案された貯蔵寿命仕様分析は、最大約２４ヶ月間、
約２０％（ａ／ａ）以下の総不純物レベルを有する。驚くべきことに、経鼻グルカゴン粉
末製剤は、現在のＵＳＰモノグラフ（ＵＳＰ４１－ＮＦ３６）が、３１％（ａ／ａ）以下
の総不純物および関連化合物が存在することという制限を規定する、現在市販されている
グルカゴン緊急キットに推奨されるレベルよりも大幅に低い総不純物レベルを有する。
【表3】
【0071】
経鼻グルカゴン粉末製剤の臨床的有効性
実施例１の２段階濾過プロセスを用いた、大規模な品質管理された製造バッチからの経
鼻グルカゴン粉末製剤の臨床的有効性は、ＮＣＴ０３３３９４５３臨床試験研究（Ｓｕｉ
ｃｏら、ＥＡＳＤ－２００８；要約１５０）において研究された。簡単に述べると、経鼻
グルカゴン粉末製剤（ＮＧ）の有効性および安全性を、制御されたインスリン誘発性低血
糖の間に、１型糖尿病の成人患者における筋肉内グルカゴン（ＩＭＧ）と比較した。経鼻
グルカゴン粉末製剤は、３．０ｍｇの用量で一方の鼻孔に送達するためのデバイスに充填
される。
実施例１の２段階濾過プロセスを用いた、大規模な品質管理された製造バッチからの経
鼻グルカゴン粉末製剤の臨床的有効性は、ＮＣＴ０３３３９４５３臨床試験研究（Ｓｕｉ
ｃｏら、ＥＡＳＤ－２００８；要約１５０）において研究された。簡単に述べると、経鼻
グルカゴン粉末製剤（ＮＧ）の有効性および安全性を、制御されたインスリン誘発性低血
糖の間に、１型糖尿病の成人患者における筋肉内グルカゴン（ＩＭＧ）と比較した。経鼻
グルカゴン粉末製剤は、３．０ｍｇの用量で一方の鼻孔に送達するためのデバイスに充填
される。
【0072】
表４に示す結果は、患者の１００％がＮＧまたはＩＭＧのいずれかで成功裏に治療され
たこと、およびＮＧ活性がこの研究でＩＭＧ活性に匹敵することを示している。
たこと、およびＮＧ活性がこの研究でＩＭＧ活性に匹敵することを示している。
【表4】
【0073】
配列
（配列番号１）
Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ
本発明は以下の態様を含み得る。
（１）
ペプチド粉末製剤を調製するための方法であって、
ａ．水性担体中で、酸、リン脂質界面活性剤、およびシクロデキストリンの第１の混合物を形成するステップと、
ｂ．前記第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．前記第１の濾過生成物にペプチドを添加して第２の混合物を形成し、前記第２の混合物を第２の濾過ステップに供す
るステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．前記第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、前記固体製剤を処理して最終粉末製剤を製造するステップと、を含む、方法。
（２）
前記ペプチドが、グルカゴンまたはグルカゴン類似体である、請求項１に記載の方法。（３）
前記ペプチドが、グルカゴンである、請求項２に記載の方法。
（４）
前記界面活性剤、前記シクロデキストリンおよび前記ペプチドが一緒になって、前記第２の混合物の約１．５重量％～約３重量％を構成する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
（５）
界面活性剤、前記シクロデキストリンおよび前記ペプチドが一緒になって、前記第２の混合物の約２重量％を構成する、請求項４に記載の方法。
（６）
界面活性剤、前記シクロデキストリンおよび前記ペプチドが一緒になって、前記第２の混合物の約２．５重量％を構成する、請求項４に記載の方法。
（７）
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
（８）
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、約０．４５μｍの孔径を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
（９）
前記酸が、クエン酸または酢酸である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。（１０）
前記酸が、酢酸である、請求項９に記載の方法。
（１１）
前記酢酸が、１Ｍの濃度である、請求項１０に記載の方法。
（１２）
前記界面活性剤が、ドデシルホスホコリン、ジデシルホスファチジルコリン、リゾラウロイルホスファチジルコリン、ジオクタノイルホスファチジルコリン、またはジラウロイルホスファチジルグリセロールである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。（１３）
前記界面活性剤が、ドデシルホスホコリンである、請求項１２に記載の方法。
（１４）
前記シクロデキストリンが、α－シクロデキストリン、β－シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ－シクロデキストリン、またはγ－シクロデキストリンである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
（１５）
前記シクロデキストリンが、β－シクロデキストリンである、請求項１４に記載の方法。
（１６）
ペプチド粉末製剤を調製するための方法であって、
ａ．水性担体中で、リン脂質界面活性剤とシクロデキストリンの第１の混合物を形成するステップと、
ｂ．前記第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．前記第１の濾過生成物にペプチドを添加して第２の混合物を形成し、前記第２の混合物を第２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．前記第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、前記固体製剤を処理して最終粉末製剤を製造するステップと、を含む、方法。
（１７）
前記最終粉末製剤中の前記ペプチドの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって測定される非凝集ペプチドである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
（１８）
請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法によって調製される、粉末製剤。
（１９）
グルカゴン粉末製剤を調製するための方法であって、
ａ．水性担体中で、酢酸、ドデシルホスホコリン、およびβ－シクロデキストリンの第１の混合物を形成するステップと、
ｂ．前記第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．前記第１の濾過生成物にグルカゴンを添加して第２の混合物を形成し、前記第２の混合物を第２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．前記第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、前記固体製剤を処理して最終粉末製剤を製造するステップと、を含む、方法。
（２０）
界面活性剤、前記シクロデキストリンおよび前記ペプチドが一緒になって、前記第２の混合物の約２．５重量％を構成する、請求項１９に記載の方法。
（２１）
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、ＰＶＤＦ膜を含む、請求項１９または請求項２０に記載の方法。
（２２）
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、約０．４５μｍの孔径を含む、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の方法。
（２３）
前記酢酸が、１Ｍの濃度である、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の方法。
（２４）
前記最終粉末製剤中の前記グルカゴンの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって測定される非凝集グルカゴンである、請求項１９～２３のいずれか一項に記載の方法。
（２５）
請求項１９～２４のいずれか一項に記載の方法によって調製される、粉末製剤。
（２６）
前記最終粉末製剤中の前記グルカゴンの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって測定される非凝集グルカゴンである、請求項２５に記載の粉末製剤。
（配列番号１）
Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ
本発明は以下の態様を含み得る。
（１）
ペプチド粉末製剤を調製するための方法であって、
ａ．水性担体中で、酸、リン脂質界面活性剤、およびシクロデキストリンの第１の混合物を形成するステップと、
ｂ．前記第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．前記第１の濾過生成物にペプチドを添加して第２の混合物を形成し、前記第２の混合物を第２の濾過ステップに供す
るステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．前記第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、前記固体製剤を処理して最終粉末製剤を製造するステップと、を含む、方法。
（２）
前記ペプチドが、グルカゴンまたはグルカゴン類似体である、請求項１に記載の方法。（３）
前記ペプチドが、グルカゴンである、請求項２に記載の方法。
（４）
前記界面活性剤、前記シクロデキストリンおよび前記ペプチドが一緒になって、前記第２の混合物の約１．５重量％～約３重量％を構成する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
（５）
界面活性剤、前記シクロデキストリンおよび前記ペプチドが一緒になって、前記第２の混合物の約２重量％を構成する、請求項４に記載の方法。
（６）
界面活性剤、前記シクロデキストリンおよび前記ペプチドが一緒になって、前記第２の混合物の約２．５重量％を構成する、請求項４に記載の方法。
（７）
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
（８）
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、約０．４５μｍの孔径を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
（９）
前記酸が、クエン酸または酢酸である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。（１０）
前記酸が、酢酸である、請求項９に記載の方法。
（１１）
前記酢酸が、１Ｍの濃度である、請求項１０に記載の方法。
（１２）
前記界面活性剤が、ドデシルホスホコリン、ジデシルホスファチジルコリン、リゾラウロイルホスファチジルコリン、ジオクタノイルホスファチジルコリン、またはジラウロイルホスファチジルグリセロールである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。（１３）
前記界面活性剤が、ドデシルホスホコリンである、請求項１２に記載の方法。
（１４）
前記シクロデキストリンが、α－シクロデキストリン、β－シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ－シクロデキストリン、またはγ－シクロデキストリンである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
（１５）
前記シクロデキストリンが、β－シクロデキストリンである、請求項１４に記載の方法。
（１６）
ペプチド粉末製剤を調製するための方法であって、
ａ．水性担体中で、リン脂質界面活性剤とシクロデキストリンの第１の混合物を形成するステップと、
ｂ．前記第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．前記第１の濾過生成物にペプチドを添加して第２の混合物を形成し、前記第２の混合物を第２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．前記第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、前記固体製剤を処理して最終粉末製剤を製造するステップと、を含む、方法。
（１７）
前記最終粉末製剤中の前記ペプチドの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって測定される非凝集ペプチドである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
（１８）
請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法によって調製される、粉末製剤。
（１９）
グルカゴン粉末製剤を調製するための方法であって、
ａ．水性担体中で、酢酸、ドデシルホスホコリン、およびβ－シクロデキストリンの第１の混合物を形成するステップと、
ｂ．前記第１の混合物を第１の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｃ．前記第１の濾過生成物にグルカゴンを添加して第２の混合物を形成し、前記第２の混合物を第２の濾過ステップに供するステップであって、フィルターが、約０．４μｍ～約０．５μｍの孔径を有する膜を含む、ステップと、
ｄ．前記第２の濾過生成物を乾燥させて固体製剤を形成し、前記固体製剤を処理して最終粉末製剤を製造するステップと、を含む、方法。
（２０）
界面活性剤、前記シクロデキストリンおよび前記ペプチドが一緒になって、前記第２の混合物の約２．５重量％を構成する、請求項１９に記載の方法。
（２１）
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、ＰＶＤＦ膜を含む、請求項１９または請求項２０に記載の方法。
（２２）
前記第１および前記第２の濾過ステップの両方における前記膜が、約０．４５μｍの孔径を含む、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の方法。
（２３）
前記酢酸が、１Ｍの濃度である、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の方法。
（２４）
前記最終粉末製剤中の前記グルカゴンの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって測定される非凝集グルカゴンである、請求項１９～２３のいずれか一項に記載の方法。
（２５）
請求項１９～２４のいずれか一項に記載の方法によって調製される、粉末製剤。
（２６）
前記最終粉末製剤中の前記グルカゴンの９８％超が、逆相ＨＰＬＣによって測定される非凝集グルカゴンである、請求項２５に記載の粉末製剤。
【配列表】