特許 7616583 腫瘍治療におけるイソキノリン化合物の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-01-08

(45)【発行日】2025-01-17

(54)【発明の名称】腫瘍治療におけるイソキノリン化合物の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4375 20060101AFI20250109BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250109BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20250109BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20250109BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20250109BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20250109BHJP

   C12M 1/34 20060101ALI20250109BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20250109BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20250109BHJP

   C12Q 1/68 20180101ALN20250109BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4375

A61P35/00

A61K9/20

A61K9/06

A61K9/08

A61P35/02

C12M1/34 Z

G01N33/53 M

G01N33/574 Z

C12Q1/68 ZNA

【請求項の数】 21

(21)【出願番号】P 2023526860

(86)(22)【出願日】2021-11-05

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-17

(86)【国際出願番号】 CN2021129066

(87)【国際公開番号】W WO2022095972

(87)【国際公開日】2022-05-12

【審査請求日】2023-06-07

(31)【優先権主張番号】202011233335.X

(32)【優先日】2020-11-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】524340608

【氏名又は名称】上海施江生物科技有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＳＨＩＪＩＡＮＧ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．，ＬＴＤ

(73)【特許権者】

【識別番号】513059401

【氏名又は名称】同▲済▼大学

(74)【代理人】

【識別番号】100121728

【弁理士】

【氏名又は名称】井関 勝守

(74)【代理人】

【識別番号】100165803

【弁理士】

【氏名又は名称】金子 修平

(72)【発明者】

【氏名】施裕豊

(72)【発明者】

【氏名】馬文江

(72)【発明者】

【氏名】江賜忠

(72)【発明者】

【氏名】呉長清

(72)【発明者】

【氏名】劉玉娥

(72)【発明者】

【氏名】劉文舉

【審査官】田澤 俊樹

(56)【参考文献】

【文献】特開平１０－７５５９（ＪＰ，Ａ）

【文献】Chunming Gu et al.，"Identification of berberine as a novel drug for the treatment of multiple myeloma via targeting UHRF1"，BMC Biology，2020年03月25日，Vol.18:33，p.1-17，DOI: 10.1186/s12915-020-00766-8

【文献】Fang Zheng et al.，"The enhancement of combination of berberine and metformin in inhibition of DNMT1 gene expression through interplay of SP1 and PDPK1"，Journal of Cellular and Molecular Medicine，2018年，Vol.22，No.1，p.600-612，DOI: 10.1111/jcmm.13347

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／４４

４７／００－４７／６９

９／００－９／７２

Ａ６１Ｐ １／００－４３／００

Ｃ１２Ｍ １／３４

Ｇ０１Ｎ ３３／５３

Ｇ０１Ｎ ３３／５７４

Ｃ１２Ｑ １／６８

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

腫瘍の予防及び／又は治療に用いられる組成物又は製剤の調製のための、式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩の使用であって、
ここで、前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍を含み；及び／又は
前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍を含み；及び／又は
前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍を含み；

【化1】

ここで、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルキルチオール基、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール基を表し；或いは、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール環を形成し；
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１４は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルキルチオール基、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール基を表し；
ここで、前記の任意の「置換」は、原子団上の１つ、２つ、３つ又は４つの水素原子が、Ｃ１－Ｃ８アルキル基、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３－Ｃ８ハロゲン化シクロアルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、－ＣＮ、カルボニル基、シアン基、ヒドロキシル基、メルカプト基、アミノ基、Ｃ１－Ｃ４カルボキシル基、Ｃ２－Ｃ８エステル基、Ｃ２－Ｃ４アシルアミノ基、Ｃ１－Ｃ８アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ８アルキルチオール基、Ｃ３－Ｃ８シクロアルコキシル基、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキルチオール基、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルキルチオール基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、５－１０員ヘテロアリール基、５－１０員ヘテロシクロアルキル基及びピロリジン－２，５－ジケトン基から選択される置換基によって置換されることを指し；
前記のヘテロシクロアルキル基、ヘテロアリール基、ヘテロシクロアルキル環及びヘテロアリール環の複素環上には、それぞれ独立して、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ～４つのヘテロ原子がある
ことを特徴とする使用。

【請求項2】

Ｒ_１及びＲ_４は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基、又は置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオール基を表し；
Ｒ_２及びＲ_３は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基、又は置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオール基を表し；或いは、Ｒ_２とＲ_３は、お互いに置換又は非置換の３員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の４員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の５員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の６員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の７員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の８員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の９員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１０員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１１員ヘテロシクロアルキル環、又は置換又は非置換の１２員ヘテロシクロアルキル環を形成し；
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１４は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルキルチオール基、置換又は非置換の３－１０員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－１０員ヘテロアリール基を表し；
Ｒ_１０、Ｒ_１１及びＲ_１２は、それぞれ独立して、水素原子又はＲ_１７－Ａ－を表し；或いは、Ｒ_１０とＲ_１１及びＲ_１１とＲ_１２は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換の３員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の４員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の５員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の６員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の７員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の８員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の９員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１０員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１１員ヘテロシクロアルキル環、又は置換又は非置換の１２員ヘテロシクロアルキル環を形成し；ここで、ＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１３は、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基、又は置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオール基を表し；及び／又は
Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ハロゲン化Ｃ１－Ｃ１２アルキル基－、５－７員ヘテロシクロアルキル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ピロリジン－２，５－ジケトン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、シアン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ１－Ｃ４アルコキシル基－Ｃ２－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ４アルキルチオール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、又は５－７員ヘテロアリール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－を表す
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項3】

Ｒ_１は水素原子を表し；
Ｒ_２とＲ_３は、お互いに置換又は非置換の

【化2】

を形成し；
Ｒ_４は水素原子を指し；
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８及びＲ_９は、それぞれ独立して、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表し；
Ｒ_１０、Ｒ_１１及びＲ_１２はそれぞれ独立して水素原子又はＲ_１７－Ａ－を表し；或いは、Ｒ_１０とＲ_１１、及びＲ_１１とＲ_１２は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換の

【化3】

を形成し；
Ｒ_１３は、水素原子を表し；
Ｒ_１４は、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表し；
Ｒ_１５及びＲ_１６は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表し；
Ｒ_１７は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、アミル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、ビニル基－メチル基－、アミルエステル基－メチル基－、ハロゲン化プロピル基、ハロゲン化デシル基、モルホリニル基－エチル基－、ピロリジン－２，５－ジケトン基－エチル基－、シアン基－メチル基－、メトキシ基－エチル基－、又はピリジン基－メチル基－を表し；
ＡはＯ又はＳを指し；及び／又は
ＷはＯ又はＳを指す
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項4】

前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－４に示され：

【化4】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し； ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３及びＲ_１４は、請求項１に記載の通りであり；
或いは、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－５に示され：

【化5】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し； ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１３及びＲ_１４は、請求項１に記載の通りであり；
或いは、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－６に示され：

【化6】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し； ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１２、Ｒ_１３及びＲ_１４は、請求項１に記載の通りである
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項5】

請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩の構造は、

【化7】

ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項6】

前記腫瘍はヒトの腫瘍であり；
前記ＮＮＭＴ遺伝子はヒトのＮＮＭＴ遺伝子であり；
前記発現は、タンパク質発現及び／又はｍＲＮＡ発現を含み；
前記組成物は薬物の組成物であり；
前記組成物又は製剤は薬学的に許容される担体を更に含み；
前記組成物又は製剤の形態は固体、液体または半固体であり；及び／又は
前記組成物又は製剤の類型は経口剤、外用剤又は注射用製剤である
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項7】

前記のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ０との間の比率（Ｅ１／Ｅ０）が＜１．０となる腫瘍を指し、前記の同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子が正常に発現される類同な腫瘍細胞を指し；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ０との間の比率（Ｌ１／Ｌ０）が＞１．０となる腫瘍を指し、前記同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が正常にメチル化される類同な腫瘍細胞を指し；及び／又は
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ０との間の比率（Ｗ１／Ｗ０）が＞１．０となる腫瘍を指し、前記同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が正常にメチル化される類同な腫瘍細胞を指す
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項8】

前記のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ０との間の比率（Ｅ１／Ｅ０）が≦０．７となる腫瘍を指し、前記の同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子が正常に発現される類同な腫瘍細胞を指し；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ０との間の比率（Ｌ１／Ｌ０）が≧２となる腫瘍を指し、前記同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が正常にメチル化される類同な腫瘍細胞を指し、；及び／又は
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ０との間の比率（Ｗ１／Ｗ０）が≧２となる腫瘍を指し、前記同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が正常にメチル化される類同な腫瘍細胞を指す
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項9】

前記のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ０との間の比率（Ｅ１／Ｅ０）が≦０．４となる腫瘍を指し、前記の同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子が正常に発現される類同な腫瘍細胞を指し；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ０との間の比率（Ｌ１／Ｌ０）が≧５となる腫瘍を指し、前記同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が正常にメチル化される類同な腫瘍細胞を指し；及び／又は
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ０との間の比率（Ｗ１／Ｗ０）が≧５となる腫瘍を指し、前記同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が正常にメチル化される類同な腫瘍細胞を指す
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項10】

前記のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ０との間の比率（Ｅ１／Ｅ０）が≦０．１となる腫瘍を指し、前記の同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子が正常に発現される類同な腫瘍細胞を指し；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ０との間の比率（Ｌ１／Ｌ０）が≧１０となる腫瘍を指し、前記同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が正常にメチル化される類同な腫瘍細胞を指し；及び／又は
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ１と同一の細胞又は正常細胞中のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ０との間の比率（Ｗ１／Ｗ０）が≧１０となる腫瘍を指し、前記同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が正常にメチル化される類同な腫瘍細胞を指す
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項11】

前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル（Ｍ％）が≧３％且つＭ１％以下となり、ここでＭ１が３～１００の任意の正の整数である腫瘍を指し；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子領域のメチル化されるヌクレオチドの数目とＮＮＭＴ遺伝子領域の全てのヌクレオチドの数目との間の比率を指し；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域内のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域内のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域内のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位自体を含む）のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７３０位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７６９位、ヒト第１１染色体の１１４１６５８０４位、ヒト第１１染色体の１１４１６５９３８位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０５０位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０６６位又はこれらの組合せから選択される部位のヌクレオチドのメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位自体を含む）のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位のうちの１つ又は複数の部位のヌクレオチドのメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベル（Ｍ％）が≧３％且つＭ２％以下となり、ここでＭ２が３～１００の任意の正の整数である腫瘍を指し；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子領域のメチル化されるＣｐＧヌクレオチドの数目とＮＮＭＴ遺伝子領域の全てのヌクレオチドの数目との間の比率を指し；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子領域のメチル化されるＣｐＧヌクレオチドの数目とＮＮＭＴ遺伝子領域の全てのＣｐＧヌクレオチドの数目との間の比率を指し；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位自体を含む）のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７３０位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７６９位、ヒト第１１染色体の１１４１６５８０４位、ヒト第１１染色体の１１４１６５９３８位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０５０位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０６６位又はこれらの組合せから選択される部位のメチル化レベルを含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位自体を含む）のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含み；及び／又は
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、配列番号１配列の部位の第１１６１位、第１１９６位、第１２３５位、第１２７０位、第１４０４位、第１５１６位、第１５３２位又はこれらの組合せから選択される部位のメチル化レベルを含む
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項12】

Ｍ１は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、８０、８５、９０、９５又は１００であり；
Ｍ２は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、８０、８５、９０、９５又は１００であり；
ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のヌクレオチド配列は配列番号１に示され；
ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～２５００位であり；
ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～１８０８位であり；及び／又は
ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の１１６１～１５３２位である
ことを特徴とする請求項１１に記載の使用。

【請求項13】

前記腫瘍は、肺癌、腎臓癌、乳癌、結腸癌、リンパ腫、白血病、膵臓癌、脳腫瘍、肝臓癌、前立腺癌又はこれらの組合せから選択される
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。

【請求項14】

前記肺癌は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌又はこれらの組合せから選択され；
前記結腸癌は結腸腺癌を含み；
前記リンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫又はこれらの組合せから選択され；
前記脳腫瘍は、膠芽細胞腫、神経膠細胞腫、脳髄芽細胞腫、神経芽細胞腫又はこれらの組合せから選択され；
前記腎臓癌は、腎臓透明細胞腺癌、腎臓癌Ｗｉｌｍｓ又はこれらの組合せから選択され；及び／又は
前記白血病は、Ｔリンパ球性白血病、骨髄性白血病又はこれらの組合せから選択される
ことを特徴とする請求項１３に記載の使用。

【請求項15】

前記リンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂリンパ腫を含み；
前記脳髄芽細胞腫は小脳髄芽細胞腫を含み；
前記膠芽細胞腫は多形性膠芽細胞腫を含み；
前記腎臓癌の癌細胞は、腎臓癌Ｗｉｌｍｓ細胞を含み；
前記Ｔリンパ球性白血病は急性Ｔリンパ球性白血病を含み；
前記骨髄性白血病はＭ４級ＡＭＬ急性骨髄性白血病を含み；及び／又は
前記骨髄性白血病はＦＡＢ Ｍ４級ＡＭＬ急性骨髄性白血病を含む
ことを特徴とする請求項１４に記載の使用。

【請求項16】

請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかの判断を補助する方法であって、当該方法は、
正常細胞と比較して、腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化が検出された場合、請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適すると決定付けられ、
正常細胞と比較して、腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化が検出された場合、請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しないと決定づけられる、方法。

【請求項17】

前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍を含み；
前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍を含み；
前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位は、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のヌクレオチド部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位は、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域のヌクレオチド部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位は、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域のヌクレオチド部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位は、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域のヌクレオチド部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位は、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位自体を含む）のヌクレオチド部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位は、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７３０位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７６９位、ヒト第１１染色体の１１４１６５８０４位、ヒト第１１染色体の１１４１６５９３８位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０５０位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０６６位又はこれらの組合せから選択された部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位は、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位自体を含む）のヌクレオチド部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位は、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位のうちの１つ又は複数の部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位は、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位は、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位は、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位は、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位は、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位自体を含む）のＤＮＡ ＣｐＧ部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位は、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７３０位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７６９位、ヒト第１１染色体の１１４１６５８０４位、ヒト第１１染色体の１１４１６５９３８位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０５０位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０６６位又はこれらの組合せから選択された部位を含み；
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位は、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位自体を含む）のＤＮＡ ＣｐＧ部位を含み；及び／又は
前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位は、配列番号１配列の部位の第１１６１位、第１１９６位、第１２３５位、第１２７０位、第１４０４位、第１５１６位、第１５３２位又はこれらの組合せから選択された部位を含む
ことを特徴とする請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のヌクレオチド配列は配列番号１に示され；
ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～２５００位であり；
ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～１８０８位であり；及び／又は
ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の１１６１～１５３２位である
ことを特徴とする請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

検出キットを使用して随伴検出キットを製造する方法であって、
前記検出キットは、（ｉ）ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出するために用いられる検出試剤を備え；
前記随伴検出キットは、請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかを判断するために用いられ；
前記随伴検出キットは取扱説明書又はラベルを更に備え、前記取扱説明書又はラベルには、
腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化になると、請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するようになるという内容；及び／又は
腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化になると、請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しないようになるという内容が記載されている
随伴検出キットの製造方法。

【請求項20】

（ｉ）ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出するために用いられる検出試剤と、
（ｉｉ）請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩とを備える
ことを特徴とする医療キット。

【請求項21】

（ｉ）ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出するために用いられる検出モジュールと、
（ｉｉ）腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化になると、請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するようになるという情報；及び／又は
腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化になると、請求項１に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しないようになるという情報を出力する出力モジュールとを備える
ことを特徴とする装置又はシステム。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、薬物の技術分野に関し、特に腫瘍治療におけるイソキノリン化合物の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

腫瘍は、人類の健康を重く危うくする一般的な病気として悪性腫瘍による死亡率にもずっと上昇傾向をもたらしている。腫瘍の異質性及び患者の個体差により、それの由来や病理学的特徴に応じて同一の治療法又は同一の薬物を単に用いれば、不適切な治療に起因する問題が現れやすくなり、患者の大事な治療時間と時機を遅らせる。そのため、患者の様々な状況に対して個性化の治療を採用する必要性は大いにあるらしい。生物学的技術の発展に伴い、腫瘍治療も精密な治療の時代に入っており、且つ腫瘍の関連遺伝子発現についての変化は次々と発見されており、関連遺伝子の転換は悪性腫瘍の発生に重要な役割を果たしている。細胞の特定の機能を上方調節して癌細胞の不死を促進する等のこういうバイオマーカーの発見と使用は、関連薬物の使用に精密な導引を提供し、腫瘍の個性化の治療を可能にして標的とする投薬を達成し、治療効果を大幅に改善する。

【0003】

そのため、腫瘍を精密に治療できる薬を開発するのは、本技術分野で急務となる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

本発明は、腫瘍の精密な治療を行うようにＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルにより本発明の化合物が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかを判断するマーカーを提供することを目的とする。本発明の化合物は、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化がある腫瘍に対してより著しく優れた治療効果を有する。

【課題を解決するための手段】

【0005】

本発明の第１態様は、式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩についての使用であって、組成物又は製剤を調製し、且つ前記組成物又は前記製剤は腫瘍の予防及び／又は治療に用いられることを特徴とするその使用。

【化1】

【0006】

ここで、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルキルチオール基、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール基を表し；或いは、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール環を形成し；
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１４は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１２アルキルチオール基、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール基を表し；
ここで、前記の任意の「置換」は、原子団上の１つ又は複数（好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）の水素原子が、Ｃ１－Ｃ８アルキル基、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３－Ｃ８ハロゲン化シクロアルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、－ＣＮ、カルボニル基（＝Ｏ）、シアン基、ヒドロキシル基、メルカプト基、アミノ基、Ｃ１－Ｃ４カルボキシル基、Ｃ２－Ｃ８エステル基、Ｃ２－Ｃ４アシルアミノ基、Ｃ１－Ｃ８アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ８アルキルチオール基、Ｃ３－Ｃ８シクロアルコキシル基、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキルチオール基、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルキルチオール基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、５－１０員ヘテロアリール基、５－１０員ヘテロシクロアルキル基及びピロリジン－２，５－ジケトン基から選択される置換基によって置換されることを指し；
前記のヘテロシクロアルキル基、ヘテロアリール基、ヘテロシクロアルキル環及びヘテロアリール環の複素環上には、それぞれ独立して、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ～４つ（好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）のヘテロ原子がある。

【0007】

別の好ましい例で、前記シクロアルキル環には１つ、２つ又は３つのＣ＝Ｃ環式二重結合がある。

【0008】

別の好ましい例で、前記ヘテロシクロアルキル環には１つ、２つ又は３つのＣ＝Ｃ環式二重結合がある。

【0009】

別の好ましい例で、前記「置換」は、原子団上の１つ又は複数（好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）の水素原子が、Ｃ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ６ハロゲン化アルキル基、Ｃ３－Ｃ８ハロゲン化シクロアルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、－ＣＮ、カルボニル基（＝Ｏ）、シアン基、ヒドロキシル基、メルカプト基、アミノ基、Ｃ１－Ｃ４カルボキシル基、Ｃ２－Ｃ６エステル基、Ｃ２－Ｃ４アシルアミノ基、Ｃ１－Ｃ６アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ６アルキルチオール基、Ｃ３－Ｃ６シクロアルコキシル基、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルチオール基、Ｃ１－Ｃ６ハロゲン化アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ６ハロゲン化アルキルチオール基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、５－１０員ヘテロアリール基、５－１０員ヘテロシクロアルキル基及びピロリジン－２，５－ジケトン基から選択される置換基によって置換されることを指す。

【0010】

別の好ましい例で、前記「置換」は、原子団上の１つ又は複数（好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）の水素原子が、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ１－Ｃ４ハロゲン化アルキル基、Ｃ３－Ｃ８ハロゲン化シクロアルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、－ＣＮ、カルボニル基（＝Ｏ）、シアン基、ヒドロキシル基、メルカプト基、アミノ基、Ｃ１－Ｃ４カルボキシル基、Ｃ２－Ｃ６エステル基、Ｃ２－Ｃ４アシルアミノ基、Ｃ１－Ｃ４アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ４アルキルチオール基、Ｃ３－Ｃ６シクロアルコキシル基、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルチオール基、Ｃ１－Ｃ４ハロゲン化アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ４ハロゲン化アルキルチオール基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、５－１０員ヘテロアリール基、５－１０員ヘテロシクロアルキル基及びピロリジン－２，５－ジケトン基から選択される置換基によって置換されることを指す。

【0011】

別の好ましい例で、前記「置換」は、原子団上の１つ又は複数（好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）の水素原子が、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、ハロゲン原子、Ｃ１－Ｃ４アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ４カルボキシル基及びＣ２－Ｃ６エステル基から選択される置換基によって置換されることを指す。

【0012】

別の好ましい例で、前記のヘテロシクロアルキル基、ヘテロアリール基、ヘテロシクロアルキル環及びヘテロアリール環の複素環上には、それぞれ独立して、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１つ～４つ（好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）のヘテロ原子がある。

【0013】

別の好ましい例で、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール環を形成する。

【0014】

別の好ましい例で、Ｒ_１とＲ_２は、お互いに置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール環を形成する。

【0015】

別の好ましい例で、Ｒ_２とＲ_３は、お互いに置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール環を形成する。

【0016】

別の好ましい例で、Ｒ_３とＲ_４は、お互いに置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール環を形成する。

【0017】

別の好ましい例で、Ｒ_１０とＲ_１１は、お互いに置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール環を形成する。

【0018】

別の好ましい例で、Ｒ_１１とＲ_１２は、お互いに置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール環を形成する。

【0019】

別の好ましい例で、Ｒ_１２とＲ_１３は、お互いに置換又は非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１２員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１２員ヘテロアリール環を形成する。

【0020】

別の好ましい例で、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１０アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１０アルキルチオール基、置換又は非置換の３－１０員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－１０員ヘテロアリール基を表し；或いは、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１０員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１０員ヘテロアリール環を形成する。

【0021】

別の好ましい例で、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルキルチオール基、置換又は非置換の３－１０員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－１０員ヘテロアリール基を表し；或いは、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１０員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１０員ヘテロアリール環を形成する。

【0022】

別の好ましい例で、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオール基、置換又は非置換の３－１０員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－１０員ヘテロアリール基を表し；或いは、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル環、置換又は非置換の３－１０員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－１０員ヘテロアリール環を形成する。

【0023】

別の好ましい例で、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表し；或いは、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ６シクロアルキル環、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール環を形成する。

【0024】

別の好ましい例で、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表し；或いは、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ６シクロアルキル環、置換又は非置換の５－７員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール環、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール環を形成する。

【0025】

別の好ましい例で、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基、又は置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオール基を表し；或いは、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ６シクロアルキル環、又は置換又は非置換の５－７員ヘテロシクロアルキル環を形成する。

【0026】

別の好ましい例で、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、又は置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基を表し；或いは、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_１０とＲ_１１及びＲ_１１とＲ_１２は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換のＣ３－Ｃ６シクロアルキル環、又は置換又は非置換の５－７員ヘテロシクロアルキル環を形成する。ここで、前記テロシクロアルキル環には１つ～３つの酸素原子がある。

【0027】

別の好ましい例で、前記テロシクロアルキル環は置換又は非置換の［１，３］ジオキサゾール（１，３－Ｄｉｏｘｏｌｅ）環である。

【0028】

別の好ましい例で、Ｒ_１は水素原子を指す。

【0029】

別の好ましい例で、Ｒ_２とＲ_３は、お互いに置換又は非置換の３員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の４員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の５員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の６員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の７員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の８員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の９員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１０員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１１員ヘテロシクロアルキル環、又は置換又は非置換の１２員ヘテロシクロアルキル環を形成する。

【0030】

別の好ましい例で、Ｒ_２とＲ_３は、お互いに置換又は非置換の［１，３］ジオキサゾール（１，３－Ｄｉｏｘｏｌｅ）環を形成する。

【0031】

本発明では、［１，３］ジオキサゾール環の構造式は次の通りである。

【化2】

【0032】

別の好ましい例で、Ｒ_２とＲ_３は、お互いに置換又は非置換の

【化3】

を形成し；
ここでＡはＯ又はＳを指し；
ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１５及びＲ_１６は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表す。

【0033】

別の好ましい例で、ＡはＯ又はＳを指す。

【0034】

別の好ましい例で、ＷはＯ又はＳを指す。

【0035】

別の好ましい例で、Ｒ_２とＲ_３は、お互いに置換又は非置換の

【化4】

を形成し；ここでＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１５及びＲ_１６は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表す。

【0036】

別の好ましい例で、Ｒ_１とＲ_２、Ｒ_２とＲ_３、Ｒ_３とＲ_４、Ｒ_１０とＲ_１１、Ｒ_１１とＲ_１２、及びＲ_１２とＲ_１３は、それぞれお互いに独立して、５－７員ヘテロシクロアルキル環、好ましくは

【化5】

を形成する。

【0037】

別の好ましい例で、Ｒ_２とＲ_３は、お互いに置換又は非置換の

【化6】

を形成する。

【0038】

別の好ましい例で、Ｒ_４は水素原子を指す。

【0039】

別の好ましい例で、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１４は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１０シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ８アルキルチオール基、置換又は非置換の３－１０員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－１０員ヘテロアリール基を表す。

【0040】

別の好ましい例で、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１４は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表す。

【0041】

別の好ましい例で、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１４は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、ニトロ基、アミノ基、－ＣＯＯＨ、－ＣＨＯ、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表す。

【0042】

別の好ましい例で、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１４は、それぞれ独立して、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す。

【0043】

別の好ましい例で、Ｒ_１０、Ｒ_１１及びＲ_１２は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基、又は置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオール基を表し；或いは、Ｒ_１０とＲ_１１及びＲ_１１とＲ_１２は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換の３員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の４員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の５員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の６員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の７員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の８員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の９員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１０員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１１員ヘテロシクロアルキル環、又は置換又は非置換の１２員ヘテロシクロアルキル環を形成する。

【0044】

別の好ましい例で、Ｒ_１０、Ｒ_１１及びＲ_１２は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、又は置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基を表し；或いは、Ｒ_１０とＲ_１１及びＲ_１１とＲ_１２は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換の３員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の４員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の５員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の６員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の７員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の８員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の９員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１０員ヘテロシクロアルキル環、置換又は非置換の１１員ヘテロシクロアルキル環、又は置換又は非置換の１２員ヘテロシクロアルキル環を形成する。

【0045】

別の好ましい例で、前記テロシクロアルキル環は置換又は非置換の［１，３］ジオキサゾール（１，３－Ｄｉｏｘｏｌｅ）環である。

【0046】

別の好ましい例で、Ｒ_１０、Ｒ_１１及びＲ_１２は、それぞれ独立して、水素原子又はＲ_１７－Ａ－を表し；
ここで、ＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ１－Ｃ１０アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ハロゲン化Ｃ１－Ｃ１２アルキル基－、５－７員ヘテロシクロアルキル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ピロリジン－２，５－ジケトン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、シアン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ１－Ｃ４アルコキシル基－Ｃ２－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ４アルキルチオール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、又は５－７員ヘテロアリール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－を表す。

【0047】

別の好ましい例で、Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ３－Ｃ１０アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ハロゲン化Ｃ１－Ｃ１２アルキル基－、５－７員ヘテロシクロアルキル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ピロリジン－２，５－ジケトン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、シアン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ１－Ｃ４アルコキシル基－Ｃ２－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ４アルキルチオール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、又は５－７員ヘテロアリール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－を表す。

【0048】

別の好ましい例で、Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ハロゲン化Ｃ１－Ｃ１２アルキル基－、５－７員ヘテロシクロアルキル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ピロリジン－２，５－ジケトン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、シアン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ１－Ｃ４アルコキシル基－Ｃ２－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ４アルキルチオール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、又は５－７員ヘテロアリール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－を表す。

【0049】

別の好ましい例で、Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ３－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ハロゲン化Ｃ１－Ｃ１２アルキル基－、５－７員ヘテロシクロアルキル基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、ピロリジン－２，５－ジケトン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、シアン基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、Ｃ１－Ｃ４アルコキシル基－Ｃ２－Ｃ４アルキル基－、Ｃ２－Ｃ４アルキルチオール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－、又は５－７員ヘテロアリール基－Ｃ１－Ｃ４アルキル基－を表す。

【0050】

別の好ましい例で、Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－、又はＣ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－を表す。

【0051】

別の好ましい例で、Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－、又はＣ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－を表す。

【0052】

別の好ましい例で、Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－、又はＣ３－Ｃ７エステル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－を表す。

【0053】

別の好ましい例で、Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ３－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－、又はＣ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－を表す。

【0054】

別の好ましい例で、Ｒ_１７は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、アミル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、ビニル基－メチル基－、アミルエステル基－メチル基－、ハロゲン化プロピル基、ハロゲン化デシル基、モルホリニル基－エチル基－、ピロリジン－２，５－ジケトン基－エチル基－、シアン基－メチル基－、メトキシ基－エチル基－、又はピリジン基－メチル基－を表す。

【0055】

別の好ましい例で、アミルエステル基は－ＣＯＯＣ（ＣＨ_３）_３である。

【0056】

別の好ましい例で、前記ハロゲン化はモノハロゲン化、ジハロゲン化又はトリハロゲン化である。

【0057】

別の好ましい例で、前記プロピル基はＮ－プロピル基である。

【0058】

別の好ましい例で、前記デシル基はＮ－デシル基である。

【0059】

別の好ましい例で、前記ヘキシル基はＮ－ヘキシル基である。

【0060】

別の好ましい例で、Ｒ_１０、Ｒ_１１及びＲ_１２は、それぞれ独立して、水素原子、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、メチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基、又はブチルチオール基を表す。

【0061】

別の好ましい例で、Ｒ_１０とＲ_１１、及びＲ_１１とＲ_１２は、それぞれお互いに独立して、置換又は非置換の［１，３］ジオキサゾール（１，３－Ｄｉｏｘｏｌｅ）環を形成する。

【0062】

別の好ましい例で、Ｒ_１０とＲ_１１は、お互いに置換又は非置換の

【化7】

ここでＡはＯ又はＳを指し；
ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１５及びＲ_１６は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表す。

【0063】

別の好ましい例で、Ｒ_１０とＲ_１１は、お互いに置換又は非置換の［１，３］ジオキサゾール（１，３－Ｄｉｏｘｏｌｅ）環を形成する。

【0064】

別の好ましい例で、Ｒ_１０とＲ_１１は、お互いに置換又は非置換の

【化8】

を形成し；ここでＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１５及びＲ_１６は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表す。

【0065】

別の好ましい例で、Ｒ_１０とＲ_１１は、お互いに置換又は非置換の

【化9】

を形成する。

【0066】

別の好ましい例で、Ｒ_１１とＲ_１２は、お互いに置換又は非置換の［１，３］ジオキサゾール（１，３－Ｄｉｏｘｏｌｅ）環を形成する。

【0067】

別の好ましい例で、Ｒ_１１とＲ_１２は、お互いに置換又は非置換の

【化10】

を形成し；
ここでＡはＯ又はＳを指し；
ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１５及びＲ_１６は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表す。

【0068】

別の好ましい例で、ＡはＯ又はＳを指す。

【0069】

別の好ましい例で、ＷはＯ又はＳを指す。

【0070】

別の好ましい例で、Ｒ_１１とＲ_１２は、お互いに置換又は非置換の

【化11】

を形成し；ここでＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１５及びＲ_１６は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換又は非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオール基、置換又は非置換の３－８員ヘテロシクロアルキル基、置換又は非置換のＣ６－Ｃ１２アリール基、又は置換又は非置換の３－８員ヘテロアリール基を表す。

【0071】

別の好ましい例で、Ｒ_１１とＲ_１２は、お互いに置換又は非置換の

【化12】

を形成する。

【0072】

別の好ましい例で、Ｒ_１３は、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基、又は置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオール基を表す。

【0073】

別の好ましい例で、Ｒ_１３は、水素原子を表す。

【0074】

別の好ましい例で、Ｒ_１４は、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基を表す。

【0075】

別の好ましい例で、Ｒ_１４は、メチル基を表す。

【0076】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－１に示され；

【化13】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３及びＲ_１４は、上記のように定義されている。

【0077】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－２に示され；

【化14】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１３及びＲ_１４は、上記のように定義されている。

【0078】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－３に示され；

【化15】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１２、Ｒ_１３及びＲ_１４は、上記のように定義されている。

【0079】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－４に示され；

【化16】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し；
ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３及びＲ_１４は、上記のように定義されている。

【0080】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－５に示され；

【化17】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し；
ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１３及びＲ_１４は、上記のように定義されている。

【0081】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－６に示され；

【化18】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し；
ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１２、Ｒ_１３及びＲ_１４は、上記のように定義されている。

【0082】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式に示される。

【化19】

【0083】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式に示される。

【化20】

【0084】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物はベルベリン及びコプチシンを含む。

【0085】

別の好ましい例で、前記ベルベリンは塩化ベルベリン又は硫酸ベルベリンを含む。

【0086】

別の好ましい例で、前記コプチシンは塩化コプチシン又は硫酸コプチシンを含む。

【0087】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩は、塩酸、ガラクタル酸、Ｄ－グルクロン酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、アスパラギン酸及びグルタミン酸の何れか又はそれらの組合せから選択される酸、好ましくは塩酸、臭化水素酸及び硫酸の何れか又はそれらの組合せから選択される酸が式Ｉの化合物と形成する塩である。

【0088】

別の好ましい例で、前記腫瘍はヒト由来の腫瘍である。

【0089】

別の好ましい例で、前記腫瘍はヒトの腫瘍である。

【0090】

別の好ましい例で、前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍を含む。

【0091】

別の好ましい例で、前記腫瘍はＤＮＡメチル化酵素が高発現される腫瘍を含む。

【0092】

別の好ましい例で、前記ＤＮＡメチル化酵素は、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３ａ、ＤＮＭＴ３ｂ又はそれらの組合せから選択される。

【0093】

別の好ましい例で、前記腫瘍はＤＮＭＴ１が高発現される腫瘍を含む。

【0094】

別の好ましい例で、前記腫瘍はＤＮＭＴ３ａが高発現される腫瘍を含む。

【0095】

別の好ましい例で、前記腫瘍はＤＮＭＴ３ｂが高発現される腫瘍を含む。

【0096】

別の好ましい例で、前記腫瘍はＵＨＲＦ１が高発現される腫瘍を含む。

【0097】

別の好ましい例で、前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化がある腫瘍を含む。

【0098】

別の好ましい例で、前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍を含む。

【0099】

別の好ましい例で、前記腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍を含む。

【0100】

別の好ましい例で、前記ＮＮＭＴ遺伝子はヒト由来のＮＮＭＴ遺伝子である。

【0101】

別の好ましい例で、前記ＮＮＭＴ遺伝子はヒトのＮＮＭＴ遺伝子である。

【0102】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、当該腫瘍から抽出された１μｇのタンパク質に、それからより好ましくは５μｇ、１０μｇ、１００μｇ又は１０００μｇのタンパク質にＮＮＭＴタンパク質をＮＮＭＴ抗体で検出できない腫瘍を指す。

【0103】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の発現量が同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子の発現量よりも小さくなる腫瘍を指す。

【0104】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ０との間の比率（Ｅ１／Ｅ０）が＜１．０となる腫瘍を指す。

【0105】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ０との間の比率（Ｅ１／Ｅ０）が≦１．０となり、好ましくは≦０．７となり、それからより好ましくは≦０．６、≦０．５、≦０．４、≦０．３、≦０．２、≦０．１、≦０．０５、≦０．０１、≦０．００５、≦０．００１、≦０．０００１、≦０．００００１、≦０．０００００１又は≦０．００００００１となる腫瘍を指す。

【0106】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子が正常に発現される細胞（類同な腫瘍細胞）を指す。

【0107】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、類同な細胞、それでもＮＮＭＴ遺伝子が正常に発現される細胞を指す。

【0108】

別の好ましい例で、前記正常細胞はＮＮＭＴ遺伝子が正常に発現される正常な組織細胞（例えば、腫瘍細胞由来細胞、腫瘍隣接細胞又は癌化膀胱組織細胞）を指す。

【0109】

別の好ましい例で、Ｅ０はＮＮＭＴ遺伝子が正常に発現される細胞のＮＮＭＴ遺伝子の発現量である。

【0110】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子が正常に発現される細胞は、式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩に不敏感である細胞を含む。

【0111】

別の好ましい例で、前記のＤＮＡメチル化酵素が高発現される腫瘍は、当該腫瘍から抽出された２０μｇのタンパク質に、それからより好ましくは５μｇ、１μｇ、０．２μｇ、０．１μｇ又は０．０５μｇのタンパク質にＤＮＡメチル化酵素をＤＮＡメチル化酵素抗体で検出できる腫瘍を指す。

【0112】

別の好ましい例で、前記のＤＮＡメチル化酵素が高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＤＮＡメチル化酵素の発現量が同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＤＮＡメチル化酵素の発現量よりも大きくなる腫瘍を指す。

【0113】

別の好ましい例で、前記のＤＮＡメチル化酵素が高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＤＮＡメチル化酵素の発現量Ａ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＤＮＡメチル化酵素の発現量Ａ０との間の比率（Ａ１／Ａ０）が＞１．０となり、好ましくは≧１．２又は≧１．５となり、それからより好ましくは≧２、≧３、≧５、≧８、≧１０、≧１５、≧２０、≧３０又は≧５０となる腫瘍を指す。

【0114】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、ＤＮＡメチル化酵素が正常に発現される細胞（類同な腫瘍細胞）を指す。

【0115】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、類同な細胞、それでもＤＮＡメチル化酵素が正常に発現される細胞を指す。

【0116】

別の好ましい例で、前記の正常細胞はＤＮＡメチル化酵素が正常に発現される正常な組織細胞（例えば、腫瘍細胞由来細胞、腫瘍隣接細胞又は癌化膀胱組織細胞）を指す。

【0117】

別の好ましい例で、Ａ０はＤＮＡメチル化酵素が正常に発現される細胞のＤＮＡメチル化酵素の発現量である。

【0118】

別の好ましい例で、前記のＤＮＡメチル化酵素が正常に発現される細胞はイソキノリン化合物に不敏感である細胞を含む。

【0119】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ１が高発現される腫瘍は、当該腫瘍から抽出された２０μｇのタンパク質に、それからより好ましくは５μｇ、１μｇ、０．２μｇ、０．０５μｇ又は０．０１μｇのタンパク質にＤＮＭＴ１タンパク質をＤＮＭＴ１抗体で検出できる腫瘍を指す。

【0120】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ１が高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＤＮＭＴ１の発現量が同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＤＮＭＴ１の発現量よりも大きくなる腫瘍を指す。

【0121】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ１が高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＤＮＭＴ１の発現量Ｂ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＤＮＭＴ１の発現量Ｂ０との間の比率（Ｂ１／Ｂ０）が＞１．０となり、好ましくは≧１．２又は≧１．５となり、それからより好ましくは≧２、≧３、≧５、≧８、≧１０、≧１５、≧２０、≧３０又は≧５０となる腫瘍を指す。

【0122】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、ＤＮＭＴ１が正常に発現される細胞（類同な腫瘍細胞）を指す。

【0123】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、類同な細胞、それでもＤＮＭＴ１が正常に発現される細胞を指す。

【0124】

別の好ましい例で、前記正常細胞はＤＮＭＴ１が正常に発現される正常な組織細胞（例えば、腫瘍細胞由来細胞、腫瘍隣接細胞又は癌化膀胱組織細胞）を指す。

【0125】

別の好ましい例で、Ｂ０はＤＮＭＴ１が正常に発現される細胞のＤＮＭＴ１の発現量である。

【0126】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ１が正常に発現される細胞はイソキノリン化合物に不敏感である細胞を含む。

【0127】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ３ａが高発現される腫瘍は、当該腫瘍から抽出された２０μｇのタンパク質に、それからより好ましくは５μｇ、１μｇ、０．２μｇ、０．０５μｇ又は０．０１μｇのタンパク質にＤＮＭＴ３ａタンパク質をＤＮＭＴ３ａ抗体で検出できる腫瘍を指す。

【0128】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ３ａが高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＤＮＭＴ３ａの発現量が同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＤＮＭＴ３ａの発現量よりも大きくなる腫瘍を指す。

【0129】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ３ａが高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＤＮＭＴ３ａの発現量Ｃ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＤＮＭＴ３ａの発現量Ｃ０との間の比率（Ｃ１／Ｃ０）が＞１．０となり、好ましくは≧１．２又は≧１．５となり、それからより好ましくは≧２、≧３、≧５、≧８、≧１０、≧１５、≧２０、≧３０又は≧５０となる腫瘍を指す。

【0130】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、ＤＮＭＴ３ａが正常に発現される細胞（類同な腫瘍細胞）を指す。

【0131】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、類同な細胞、それでもＤＮＭＴ３ａが正常に発現される細胞を指す。

【0132】

別の好ましい例で、前記正常細胞はＤＮＭＴ３ａが正常に発現される正常な組織細胞（例えば、腫瘍細胞由来細胞、腫瘍隣接細胞又は癌化膀胱組織細胞）を指す。

【0133】

別の好ましい例で、Ｃ０はＤＮＭＴ３ａが正常に発現される細胞のＤＮＭＴ３ａの発現量である。

【0134】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ３ａが正常に発現される細胞はイソキノリン化合物に不敏感である細胞を含む。

【0135】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ３ｂが高発現される腫瘍は、当該腫瘍から抽出された２０μｇのタンパク質に、それからより好ましくは５μｇ、１μｇ、０．２μｇ、０．０５μｇ又は０．０１μｇのタンパク質にＤＮＭＴ３ｂタンパク質をＤＮＭＴ３ｂ抗体で検出できる腫瘍を指す。

【0136】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ３ｂが高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＤＮＭＴ３ｂの発現量が同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＤＮＭＴ３ｂの発現量よりも大きくなる腫瘍を指す。

【0137】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ３ｂが高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＤＮＭＴ３ｂの発現量Ｄ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＤＮＭＴ３ｂの発現量Ｄ０との間の比率（Ｄ１／Ｄ０）が＞１．０となり、好ましくは≧１．２又は≧１．５となり、それからより好ましくは≧２、≧３、≧５、≧８、≧１０、≧１５、≧２０、≧３０又は≧５０となる腫瘍を指す。

【0138】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、ＤＮＭＴ３ｂが正常に発現される細胞（類同な腫瘍細胞）を指す。

【0139】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、類同な細胞、それでもＤＮＭＴ３ｂが正常に発現される細胞を指す。

【0140】

別の好ましい例で、前記正常細胞はＤＮＭＴ３ｂが正常に発現される正常な組織細胞（例えば、腫瘍細胞由来細胞、腫瘍隣接細胞又は癌化膀胱組織細胞）を指す。

【0141】

別の好ましい例で、Ｄ０はＤＮＭＴ３ｂが正常に発現される細胞のＤＮＭＴ３ｂの発現量である。

【0142】

別の好ましい例で、前記のＤＮＭＴ３ｂが正常に発現される細胞はイソキノリン化合物に不敏感である細胞を含む。

【0143】

別の好ましい例で、前記のＵＨＲＦ１が高発現される腫瘍は、当該腫瘍から抽出された２０μｇのタンパク質に、それからより好ましくは５μｇ、１μｇ、０．２μｇ、０．０５μｇ又は０．０１μｇのタンパク質にＵＨＲＦ１タンパク質をＵＨＲＦ１抗体で検出できる腫瘍を指す。

【0144】

別の好ましい例で、前記のＵＨＲＦ１が高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＵＨＲＦ１の発現量が同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＵＨＲＦ１の発現量よりも大きくなる腫瘍を指す。

【0145】

別の好ましい例で、前記のＵＨＲＦ１が高発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＵＨＲＦ１の発現量Ｆ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＵＨＲＦ１の発現量Ｆ０との間の比率（Ｆ１／Ｆ０）が＞１．０となり、好ましくは≧１．２又は≧１．５となり、それからより好ましくは≧２、≧３、≧５、≧８、≧１０、≧１５、≧２０、≧３０又は≧５０となる腫瘍を指す。

【0146】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、ＵＨＲＦ１が正常に発現される細胞（類同な腫瘍細胞）を指す。

【0147】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、類同な細胞、それでもＵＨＲＦ１が正常に発現される細胞を指す。

【0148】

別の好ましい例で、前記正常細胞はＵＨＲＦ１が正常に発現される正常な組織細胞（例えば、腫瘍細胞由来細胞、腫瘍隣接細胞又は癌化膀胱組織細胞）を指す。

【0149】

別の好ましい例で、Ｆ０はＵＨＲＦ１が正常に発現される細胞のＵＨＲＦ１の発現量である。

【0150】

別の好ましい例で、前記のＵＨＲＦ１が正常に発現される細胞はイソキノリン化合物に不敏感である細胞を含む。

【0151】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルが同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルよりも大きくする腫瘍を指す。

【0152】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ０との間の比率（Ｌ１／Ｌ０）が＞１．０となり、好ましくは≧１．２又は≧１．５となり、それからより好ましくは≧２、≧３、≧５、≧８、≧１０、≧１５、≧２０、≧３０又は≧５０となる腫瘍を指す。

【0153】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルが≧１％となり、好ましくは≧３％、≧５％、≧１０％、≧１５％又は≧２０％となり、それからより好ましくは≧２５％、≧３０％、≧４０％又は≧５０％となる腫瘍を指す。

【0154】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が正常にメチル化される細胞（類同な腫瘍細胞）を指す。

【0155】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、類同な細胞、それでもＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が正常にメチル化される細胞を指す。

【0156】

別の好ましい例で、前記正常細胞はＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が正常にメチル化される正常な組織細胞（例えば、腫瘍細胞由来細胞、腫瘍隣接細胞又は癌化膀胱組織細胞）を指す。

【0157】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が正常にメチル化される細胞は、式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩に不敏感である細胞を含む。

【0158】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル（Ｍ％）が≧３％且つＭ１％以下となり、ここでＭ１が３～１００の任意の正の整数である腫瘍を指す。

【0159】

別の好ましい例で、Ｍ１は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、８０、８５、９０、９５又は１００である。

【0160】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子領域領域のメチル化されるヌクレオチドの数とＮＮＭＴ遺伝子領域の全てのヌクレオチドの数との間の比率を指す。

【0161】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含む。

【0162】

別の好ましい例で、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のヌクレオチド配列は配列番号１に示される。

【0163】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域内のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含む。

【0164】

別の好ましい例で、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～２５００位である。

【0165】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域内のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含む。

【0166】

別の好ましい例で、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～１８０８位である。

【0167】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域内のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含む。

【0168】

別の好ましい例で、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の１１６１～１５３２位である。

【0169】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位の自体を含む）のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含む。

【0170】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位のうちの１つ又は複数（例えば、２、３、４、５、６又は７）の部位のヌクレオチドのメチル化レベルを含む。

【0171】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７３０位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７６９位、ヒト第１１染色体の１１４１６５８０４位、ヒト第１１染色体の１１４１６５９３８位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０５０位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０６６位又はこれらの組合せから選択される部位のヌクレオチドのメチル化レベルを含む。

【0172】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位の自体を含む）のヌクレオチド部位のメチル化レベルを含む。

【0173】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルは、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位のうちの１つ又は複数（例えば、２、３、４、５、６又は７）の部位のヌクレオチドのメチル化レベルを含む。

【0174】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位、第１１９６位、第１２３５位、第１２７０位、第１４０４位、第１５１６位、第１５３２位又はこれらの組合せから選択される部位のヌクレオチドのメチル化レベルを含む。

【0175】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルが同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルよりも大きくする腫瘍を指す。

【0176】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ０との間の比率（Ｗ１／Ｗ０）が＞１．０となり、好ましくは≧１．２又は≧１．５となり、それからより好ましくは≧２、≧３、≧５、≧８、≧１０、≧１５、≧２０、≧３０又は≧５０となる腫瘍を指す。

【0177】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルが≧１％となり、好ましくは≧３％、≧５％、≧１０％、≧１５％又は≧２０％となり、それからより好ましくは≧２５％、≧３０％、≧４０％又は≧５０％となる腫瘍を指す。

【0178】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が正常にメチル化される細胞（類同な腫瘍細胞）を指す。

【0179】

別の好ましい例で、前記の同一の細胞は、類同な細胞、それでもＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が正常にメチル化される細胞を指す。

【0180】

別の好ましい例で、前記正常細胞は、ＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が正常にメチル化される正常な組織細胞（例えば、腫瘍細胞由来細胞、腫瘍隣接細胞又は癌化膀胱組織細胞）を指す。

【0181】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が正常にメチル化される細胞は、式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩に不敏感である細胞を含む。

【0182】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベル（Ｍ％）が≧３％且つＭ２％以下となり、ここでＭ２が３～１００の任意の正の整数である腫瘍を指す。

【0183】

別の好ましい例で、Ｍ２は５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、８０、８５、９０、９５又は１００である。

【0184】

別の好ましい例で、前記のＣｐＧ部位のメチル化レベルは、遺伝子領域領域のメチル化されるＣｐＧヌクレオチドの数と当該遺伝子領域の全てのヌクレオチドの数との間の比率を指す。

【0185】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子領域領域のメチル化されるＣｐＧヌクレオチドの数とＮＮＭＴ遺伝子領域の全てのヌクレオチドの数との間の比率を指す。

【0186】

別の好ましい例で、前記のＣｐＧ部位のメチル化レベルは、遺伝子領域領域のメチル化されるＣｐＧヌクレオチドの数と当該遺伝子領域の全てのＣｐＧヌクレオチドの数との間の比率を指す。

【0187】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子領域領域のメチル化されるＣｐＧヌクレオチドの数とＮＮＭＴ遺伝子領域の全てのＣｐＧヌクレオチドの数との間の比率を指す。

【0188】

別の好ましい例で、前記のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、某領域のＤＮＡのメチル化されるＣｐＧ部位の数と当該領域ＤＮＡの全てのＣｐＧ部位の数との間の比率を指す。

【0189】

別の好ましい例で、前記のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、某領域のＤＮＡのメチル化されるＣｐＧヌクレオチドの数と当該領域ＤＮＡの全てのヌクレオチドの数との間の比率を指す。

【0190】

別の好ましい例で、前記のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、某領域のＤＮＡのメチル化されるＣｐＧヌクレオチドの数と当該領域ＤＮＡの全てのＣｐＧヌクレオチドの数との間の比率を指す。

【0191】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子領域のＤＮＡのメチル化されるＣｐＧ部位の数とＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡの全てのＣｐＧ部位の数との間の比率を指す。

【0192】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子領域のＤＮＡのメチル化されるＣｐＧヌクレオチドの数とＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡの全てのＣｐＧヌクレオチドの数との間の比率を指す。

【0193】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含む。

【0194】

別の好ましい例で、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のヌクレオチド配列は配列番号１に示される。

【0195】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含む。

【0196】

別の好ましい例で、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～２５００位である。

【0197】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含む。

【0198】

別の好ましい例で、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～１８０８位である。

【0199】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含む。

【0200】

別の好ましい例で、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の１１６１～１５３２位である。

【0201】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位の自体を含む）のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含む。

【0202】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位のうちの１つ又は複数（例えば、２、３、４、５、６又は７）の部位のメチル化レベルを含む。

【0203】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７３０位、ヒト第１１染色体の１１４１６５７６９位、ヒト第１１染色体の１１４１６５８０４位、ヒト第１１染色体の１１４１６５９３８位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０５０位、ヒト第１１染色体の１１４１６６０６６位又はこれらの組合せから選択される部位のメチル化レベルを含む。

【0204】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位の何れか２つの間の領域内（これらの２つの位の自体を含む）のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含む。

【0205】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、配列番号１ヌクレオチド配列の部位の第１１６１位と第１１９６位と第１２３５位と第１２７０位と第１４０４位と第１５１６位と第１５３２位のうちの１つ又は複数（例えば、２、３、４、５、６又は７）の部位のメチル化レベルを含む。

【0206】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、配列番号１配列の部位の第１１６１位、第１１９６位、第１２３５位、第１２７０位、第１４０４位、第１５１６位、第１５３２位又はこれらの組合せから選択される部位のメチル化レベルを含む。

【0207】

別の好ましい例で、前記腫瘍は、肺癌、腎臓癌、乳癌、結腸癌、リンパ腫、白血病、膵臓癌、脳腫瘍、肝臓癌、前立腺癌又はこれらの組合せから選択される。

【0208】

別の好ましい例で、前記肺癌は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌又はこれらの組合せから選択される。

【0209】

別の好ましい例で、前記結腸癌は結腸腺癌を含む。

【0210】

別の好ましい例で、前記リンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫又はこれらの組合せから選択される。

【0211】

別の好ましい例で、前記リンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂリンパ腫を含む。

【0212】

別の好ましい例で、前記脳腫瘍は、膠芽細胞腫、神経膠細胞腫、脳髄芽細胞腫、神経芽細胞腫又はこれらの組合せから選択される。

【0213】

別の好ましい例で、前記脳髄芽細胞腫は小脳髄芽細胞腫を含む。

【0214】

別の好ましい例で、前記膠芽細胞腫は多形性膠芽細胞腫を含む。

【0215】

別の好ましい例で、前記脳腫瘍は、髄芽細胞腫を含む。

【0216】

別の好ましい例で、前記腎臓癌は、腎臓透明細胞腺癌、腎臓癌Ｗｉｌｍｓ又はこれらの組合せから選択される。

【0217】

別の好ましい例で、前記腎臓癌は、腎臓透明細胞腺癌を含む。

【0218】

別の好ましい例で、前記腎臓癌は、腎臓癌Ｗｉｌｍｓを含む。

【0219】

別の好ましい例で、前記腎臓癌の癌細胞は、腎臓癌Ｗｉｌｍｓ細胞を含む。

【0220】

別の好ましい例で、前記白血病は、Ｔリンパ球性白血病、骨髄性白血病又はこれらの組合せから選択される。

【0221】

別の好ましい例で、前記Ｔリンパ球性白血病は急性Ｔリンパ球性白血病を含む。

【0222】

別の好ましい例で、前記骨髄性白血病はＭ４級ＡＭＬ急性骨髄性白血病を含む。

【0223】

別の好ましい例で、前記骨髄性白血病はＦＡＢ Ｍ４級ＡＭＬ急性骨髄性白血病を含む。

【0224】

別の好ましい例で、前記発現は、タンパク質発現及び／又はｍＲＮＡ発現を含む。

【0225】

別の好ましい例で、前記組成物は薬物の組成物である。

【0226】

別の好ましい例で、前記組成物又は製剤は薬学的に許容される担体を更に含む。

【0227】

別の好ましい例で、前記発現はｍＲＮＡ発現又はタンパク質発現である。

【0228】

別の好ましい例で、前記組成物又は製剤の形態は固体、液体または半固体である。

【0229】

別の好ましい例で、前記組成物又は製剤の類型は経口剤、外用剤又は注射用製剤である。

【0230】

別の好ましい例で、前記組成物又は製剤の類型は錠剤、注射剤、輸液剤、軟膏剤、ゲル剤、溶液剤、丸剤又は被膜剤である。

【0231】

本発明の第２態様は、本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかを判断するマーカーを提供し、前記マーカーは、ＮＮＭＴ遺伝子及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを備える。

【0232】

別の好ましい例で、前記マーカーは、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを備える。

【0233】

別の好ましい例で、前記マーカーは、ＮＮＭＴ遺伝子、ＤＮＡメチル化酵素、ＵＨＲＦ１、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位及びＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位を含む。

【0234】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含める。

【0235】

別の好ましい例で、腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化になると、本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するようになる。

【0236】

別の好ましい例で、腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の高発現、ＤＮＡメチル化酵素の低発現、ＵＨＲＦ１の低発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化になると、本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しないようになる。

【0237】

別の好ましい例で、前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適する意味は、腫瘍患者の腫瘍細胞が本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩に敏感である意味を含む。

【0238】

別の好ましい例で、前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しない意味は、腫瘍患者の腫瘍細胞が本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩に不敏感である意味を含む。

【0239】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、本発明の第１態様に記載される様な腫瘍である。

【0240】

別の好ましい例で、前記のＤＮＡメチル化酵素（例えば、ＤＮＭＴ１）が高発現される腫瘍は、本発明の第１態様に記載される様な腫瘍である。

【0241】

別の好ましい例で、前記のＵＨＲＦ１が高発現される腫瘍は、本発明の第１態様に記載される様な腫瘍である。

【0242】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、本発明の第１態様に記載される様な腫瘍である。

【0243】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、本発明の第１態様に記載される様な腫瘍である。

【0244】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子が高発現される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子の発現量Ｅ０との間の比率（Ｅ１／Ｅ０）が＞１．０となり、好ましくは≧１．２又は≧１．５となり、それからより好ましくは≧２、≧３、≧５、≧８、≧１０、≧１５、≧２０、≧３０又は≧５０となる腫瘍を指す。

【0245】

別の好ましい例で、前記のＤＮＡメチル化酵素が低発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＤＮＡメチル化酵素の発現量Ａ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＤＮＡメチル化酵素の発現量Ａ０との間の比率（Ａ１／Ａ０）が＜１．０となり、好ましくは≦０．７となり、それからより好ましくは≦０．６、≦０．５、≦０．４、≦０．３、≦０．２、≦０．１、≦０．０５、≦０．０１、≦０．００５、≦０．００１、≦０．０００１、≦０．００００１、≦０．０００００１又は≦０．００００００１となる腫瘍を指す。

【0246】

別の好ましい例で、前記のＵＨＲＦ１が低発現される腫瘍は、腫瘍細胞のＵＨＲＦ１の発現量Ｆ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＵＨＲＦ１の発現量Ｆ０との間の比率（Ｆ１／Ｆ０）が＜１．０となり、好ましくは≦０．７となり、それからより好ましくは≦０．６、≦０．５、≦０．４、≦０．３、≦０．２、≦０．１、≦０．０５、≦０．０１、≦０．００５、≦０．００１、≦０．０００１、≦０．００００１、≦０．０００００１又は≦０．００００００１となる腫瘍を指す。

【0247】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が低メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルＬ０との間の比率（Ｌ１／Ｌ０）が＜１．０となり、好ましくは≦０．７となり、それからより好ましくは≦０．６、≦０．５、≦０．４、≦０．３、≦０．２、≦０．１、≦０．０５、≦０．０１、≦０．００５、≦０．００１、≦０．０００１、≦０．００００１、≦０．０００００１又は≦０．００００００１となる腫瘍を指す。

【0248】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が低メチル化される腫瘍は、某細胞（例えば、腫瘍細胞）のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ１と同一の細胞又は正常細胞（例えば、癌化膀胱組織細胞）中のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルＷ０との間の比率（Ｗ１／Ｗ０）が＜１．０となり、好ましくは≦０．７となり、それからより好ましくは≦０．６、≦０．５、≦０．４、≦０．３、≦０．２、≦０．１、≦０．０５、≦０．０１、≦０．００５、≦０．００１、≦０．０００１、≦０．００００１、≦０．０００００１又は≦０．００００００１となる腫瘍を指す。

【0249】

本発明の第３態様は、検出キットを提供する。前記検出キットは、
（ｉ）ＮＮＭＴ遺伝子の発現量及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出するために用いられる検出試剤を備える。

【0250】

別の好ましい例で、前記検出キットは、
（ｉ）ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出するために用いられる検出試剤を備える。

【0251】

別の好ましい例で、前記検出キットの検出試料は腫瘍細胞を含む。

【0252】

別の好ましい例で、ＮＮＭＴ遺伝子発現は当該遺伝子のｍＲＮＡ発現及び／又はタンパク質発現を指す。

【0253】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを含む。

【0254】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを指す。

【0255】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを指す。

【0256】

別の好ましい例で、前記のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを指す。

【0257】

本発明の第４態様は、随伴検出キットを製造するために本発明の第３態様に記載の検出キットの使用を提供する。前記随伴検出キットは、本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかを判断するために用いられる。

【0258】

別の好ましい例で、前記随伴検出キットは取扱説明書又はラベルを更に備える。

【0259】

別の好ましい例で、前記取扱説明書又はラベルには、
腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化になると、本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するようになるという内容を記載する。

【0260】

別の好ましい例で、前記取扱説明書又はラベルには、腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の高発現、ＤＮＡメチル化酵素の低発現、ＵＨＲＦ１の低発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化になると、本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しないようになるという内容を記載する。

【0261】

別の好ましい例で、前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適する意味は、本発明の第２態様に記載される様な意味である。

【0262】

別の好ましい例で、前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しない意味は、本発明の第２態様に記載される様な意味である。

【0263】

本発明の第５態様は、医療キットを提供する。前記医療キットは、
（ｉ）ＮＮＭＴ遺伝子の発現量及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出するために用いられる検出試剤と、
（ｉｉ）前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩とを備える。

【0264】

別の好ましい例で、前記医療キットは、
（ｉ）ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出するために用いられる検出試剤と、
（ｉｉ）前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩とを備える。

【0265】

別の好ましい例で、前記医療キットは取扱説明書又はラベルを更に備える。

【0266】

別の好ましい例で、前記取扱説明書又はラベルには、腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化になると、前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するようになるという内容を記載する。

【0267】

別の好ましい例で、前記取扱説明書又はラベルには、腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の高発現、ＤＮＡメチル化酵素の低発現、ＵＨＲＦ１の低発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化になると、前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しないようになるという内容を記載する。

【0268】

本発明の第６態様は、前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩を治療対象に投薬するように腫瘍の予防及び／又は治療の方法を提供する。

【0269】

別の好ましい例で、前記腫瘍は本発明の第１態様に記載される様な腫瘍である。

【0270】

別の好ましい例で、前記対象の腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍を含む。

【0271】

別の好ましい例で、前記対象の腫瘍はＤＮＡメチル化酵素が高発現される腫瘍を含む。

【0272】

別の好ましい例で、前記対象の腫瘍はＵＨＲＦ１が高発現される腫瘍を含む。

【0273】

別の好ましい例で、前記対象の腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍を含む。

【0274】

別の好ましい例で、前記対象の腫瘍はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍を含む。

【0275】

本発明の第７態様は、装置又はシステムを提供する。前記装置又はシステムは、
（ｉ）ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出するために用いられる検出モジュールと、
（ｉｉ）出力モジュールとを備え、
前記出力モジュールは、
腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化になると、前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するようになるという情報、及び／又は
腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の高発現、ＤＮＡメチル化酵素の低発現、ＵＨＲＦ１の低発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化になると、前記の本発明の第１態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩がその腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しないようになるという情報を出力する。

【0276】

別の好ましい例で、前記装置は、遺伝子検出器又はタンパク質検出器を備える。

【0277】

別の好ましい例で、前記装置又はシステムは試料供給モジュールを更に備える。

【0278】

別の好ましい例で、前記試料供給モジュールは腫瘍細胞抽出物を供給するために用いられる。

【0279】

別の好ましい例で、前記装置又はシステムは、データ処理モジュールを更に備える。

【0280】

別の好ましい例で、前記データ処理モジュールは、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを処理してそれらの数値範囲を得る。

【0281】

別の好ましい例で、前記データ処理モジュールは、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量及び／又はＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを処理してそれらの数値範囲を得る。

【0282】

別の好ましい例で、前記データ処理モジュールは、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量及び／又はＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを処理してそれらの数値範囲を得る。

【0283】

別の好ましい例で、前記データ処理モジュールは、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量及び／又はＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを処理してそれらの数値範囲を得る。

【0284】

別の好ましい例で、前記データ処理モジュールは、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量及び／又はＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを処理してそれらの数値範囲を得る。

【0285】

本発明の第８態様は、式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩を提供し；

【化21】

ここでＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３及びＲ_１４は本発明の第１態様に記載の通りである。

【0286】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物は本発明の第１態様に記載の通りである。

【0287】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－４に示され；

【化22】

ここで、ＡはＯ又はＳを指し；
ＷはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１２、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１３及びＲ_１４は、本発明の第１態様にように定義されている。

【0288】

別の好ましい例で、Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は、それぞれ独立して、水素原子、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシル基、又は置換又は非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオール基を表す。

【0289】

別の好ましい例で、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９及びＲ_１４はそれぞれ独立して、水素原子を表す。

【0290】

別の好ましい例で、Ｒ_１０は水素原子又はＲ_１７－Ａ－を表し；
ここでＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ３－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－、又はＣ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－を表す。

【0291】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－１に示され；

【化23】

ここでＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１２、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１３及びＲ_１４は、本発明の第１態様にように定義されている。

【0292】

別の好ましい例で、Ｒ_１０は水素原子又はＲ_１７－Ａ－を表し；
ここでＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ３－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－、又はＣ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－を表す。

【0293】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式に示される。

【化24】

【0294】

別の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式に示される。

【化25】

【0295】

本発明の第９態様は、薬物の組成物を提供する。前記組成物は、前記の本発明の第８態様に記載の式Ｉの化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む。

【0296】

本発明の範囲内において本発明の上記の技術的特徴は次の具体的な技術的特徴（例えば、実施例）と組み合わせられると、新しい又は好ましい技術的解決策を構成するようになると理解すべきである。全文の大きさに限りがあるから、ここでは繰り返しない。

【図面の簡単な説明】

【0297】

【図1】図１は、イソキノリン化合物に敏感である腫瘍細胞とそれに不敏感である腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子発現パターンを示す。

【図2】図２は、イソキノリン化合物に敏感である腫瘍細胞とそれに不敏感である腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを示す。

【図3】図３は、イソキノリン化合物に敏感である腫瘍細胞とそれに不敏感である腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを示す。

【図4】図４は、イソキノリン化合物に敏感である腫瘍細胞とそれに不敏感である腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを示す。

【図5】図５は、イソキノリン化合物に敏感である腫瘍細胞とそれに不敏感である腫瘍細胞の特定のＮＮＭＴ遺伝子領域、即ち、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位、１１４１６５７３０位、１１４１６５７６９位、１１４１６５８０４位、１１４１６５９３８位、１１４１６６０５０位及び１１４１６６０６６位のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化状況を示し、ここで黒い点は関連部位のメチル化を示し、白い点は関連部位の非メチル化を示し、ＳＳＴは転写開始部位を指し、Ｃｈｒ１１はＧＣＦ＿０００００１４０５．２５（ＧＲＣｈ３７．ｐ１３）というヒトゲノムバージョンに従って定義されたヒト第１１染色体を指す。

【図6】図６は、イソキノリン化合物に敏感である脳腫瘍細胞とそれに不敏感である脳腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子発現パターンを示す。

【図7】図７は、イソキノリン化合物に敏感である脳腫瘍細胞とそれに不敏感である脳腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを示す。

【図8】図８は、イソキノリン化合物に敏感である脳腫瘍細胞とそれに不敏感である脳腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを示す。

【図9】図９は、イソキノリン化合物に敏感である脳腫瘍細胞とそれに不敏感である脳腫瘍細胞のＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを示す。

【図10】図１０は、腫瘍細胞中のＮＮＭＴ発現とＤＮＭＴ１、ＵＨＲＦ１、ＤＮＭＴ３ａ及びＤＮＭＴ３ｂの発現との間の相関性を示す。

【図11】図１１は、遺伝子導入法によってＮＣＩ－Ｈ８２細胞のＮＮＭＴタンパク質を過剰発現し、及び／又はｓｈＲＮＡ導入法によってＮＣＩ－Ｈ８２細胞のＤＮＭＴ１発現を下方調節した後の塩化ベルベリンに対する腫瘍細胞の感受性を示し、ここで担体（Ｖｅｃｔｏｒ）はＮＮＭＴタンパク質及びＤＮＭＴ１を正常に発現したＮＣＩ－Ｈ８２細胞であり、ｏｖ－ＮＮＭＴは遺伝子導入法によってＮＮＭＴタンパク質を過剰発現したＮＣＩ－Ｈ８２細胞であり、ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１はｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１に遺伝子を導入することでＤＮＭＴ１発現を下方調節したＮＣＩ－Ｈ８２細胞であり、ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃２はｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃２に遺伝子を導入することでＤＮＭＴ１発現を下方調節したＮＣＩ－Ｈ８２細胞であり、ｏｖ－ＮＮＭＴ／ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１は遺伝子導入法によってＮＮＭＴタンパク質を過剰発現すると同時にｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１に遺伝子を導入することでＤＮＭＴ１発現を下方調節したＮＣＩ－Ｈ８２細胞であり、ｏｖ－ＮＮＭＴ／ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃２は遺伝子導入法によってＮＮＭＴタンパク質を過剰発現すると同時にｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃２に遺伝子を導入することでＤＮＭＴ１発現を下方調節したＮＣＩ－Ｈ８２細胞である。

【図12】図１２は、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ実験によって検出された且つ正常なＮＣＩ－Ｈ８２（担体）に比べてＮＮＭＴタンパク質が過剰発現されたＮＣＩ－Ｈ８２（ｏｖ－ＮＮＭＴ）のＮＮＭＴタンパク質の含有量を示し、ここで担体はＮＮＭＴタンパク質を正常に発現したＮＣＩ－Ｈ８２細胞であり、ｏｖ－ＮＮＭＴは遺伝子導入法によってＮＮＭＴタンパク質を過剰発現したＮＣＩ－Ｈ８２細胞である。

【図13】図１３は、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ実験によって検出された且つ正常なＮＣＩ－Ｈ８２（ｓｈＶｅｃｔｏｒ）に比べて両種のｓｈＲＮＡ方法で腫瘍細胞のＤＮＭＴ１発現が下方調節されたＮＣＩ－Ｈ８２（ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１又はｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃２）のＤＮＭＴ１タンパク質の含有量を示し、ここでｓｈＶｅｃｔｏｒはＮＮＭＴ１を正常に発現したＮＣＩ－Ｈ８２細胞であり、ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１はｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１に遺伝子を導入することでＤＮＭＴ１発現が下方調節されたＮＣＩ－Ｈ８２細胞であり、ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃２はｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃２に遺伝子を導入することでＤＮＭＴ１発現が下方調節されたＮＣＩ－Ｈ８２細胞である。

【図14】図１４は、ＮＣＩ－Ｈ８２腫瘍に対する塩化ベルベリンの阻害効果を示し、ここでＮＣＩ－Ｈ８２はＮＮＭＴタンパク質を正常に発現した細胞である。

【図15】図１５は、ＮＮＭＴタンパク質を過剰発現するとともにＤＮＭＴ１を低発現する（ｏｖ－ＮＮＭＴ／ｓｈ－ＤＮＭＴ１）ＮＣＩ－Ｈ８２腫瘍に対する塩化ベルベリンの阻害効果を示し、ここでｏｖ－ＮＮＭＴ／ｓｈ－ＤＮＭＴ１はＮＮＭＴタンパク質を過剰発現するとともにＤＮＭＴ１を低発現するＮＣＩ－Ｈ８２細胞である。

【発明を実施するための形態】

【0298】

本発明者は、長期的かつ深い研究を行った結果として、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現（又は未発現）、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化がある腫瘍細胞に対して本発明の化合物が明らかな阻害効果を有することを初めて予期せず見出した。ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、本発明の化合物が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかを判断するマーカーとしての機能を果たす。本発明者は、これに基づいて本発明を成し遂げる。

【0299】

用語
本明細書で使われたように、「含む」、「備える」及び「有する」という用語は、互換的に使用される可能性があり、且つ閉鎖された定義に、半閉鎖され及び開放された定義も有する。言い換えれば、前記用語は「．．．によって構成する」、「基本的に．．． よって構成する」という意味を含む。

【0300】

本明細書で使われたように、「ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化がある」と「ＤＮＡ ＣｐＧ部位を高メチル化する」と「ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される」は互いに互換的に使用される可能性がある。

【0301】

本明細書で使われたように、「ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化がある」と「ＤＮＡ ＣｐＧ部位を低メチル化する」と「ＤＮＡ ＣｐＧ部位が低メチル化される」は互換的に使用される可能性がある。

【0302】

本明細書で使われたように、「ＩＣ５０」及び「ＩＣ_５０」という用語は、互換的に使用される可能性があり、半阻害濃度（５０％ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を表し、即ち５０％の阻害効果を達成する時の阻害剤の濃度を意味する。

【0303】

本明細書で使われたように、「ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化」と「ＣｐＧヌクレオチドのメチル化」と「ＣｐＧのメチル化」は互換的に使用される可能性がある。

【0304】

本明細書で使われたように、「Ｐ／Ｓ」という用語は、関連する培地にペニシリン（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ）及びストレプトマイシン（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）を加えることを指す。

【0305】

本明細書で使われたように、「某細胞」という用語は、単一細胞（例えば、単一の癌細胞）又は複数の類同な細胞を含む一群の細胞（例えば、腫瘍組織）を指す。

【0306】

本明細書で使われたように、「本発明の化合物が腫瘍患者に適する」は、腫瘍患者の腫瘍が本発明の化合物に敏感であることなどを意味する。

【0307】

本明細書で使われたように、「本発明の化合物が腫瘍患者に適しない」は、腫瘍患者の腫瘍が本発明の化合物に不敏感であることなどを意味する。

【0308】

本明細書で使われたように、「ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベル」は、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量とＤＮＡメチル化酵素の発現量とＵＨＲＦ１の発現量とＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベルとＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルのうちの一種又は多種を指す。

【0309】

本明細書で使われたように、「ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化」は、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現とＤＮＡメチル化酵素の高発現とＵＨＲＦ１の高発現とＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化とＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化のうちの一種又は多種を指す。

【0310】

本明細書で使われたように、「ＮＮＭＴ遺伝子の高発現、ＤＮＡメチル化酵素の低発現、ＵＨＲＦ１の低発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化」は、ＮＮＭＴ遺伝子の高発現とＤＮＡメチル化酵素の低発現とＵＨＲＦ１の低発現とＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化とＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化のうちの一種又は多種を指す。

【0311】

本明細書で使われたように、「ＮＮＭＴ」という用語の英語名はＮｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｎ－Ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅである。

【0312】

本明細書で使われたように、「ｂｐ」という用語はｂａｓｅ ｐａｉｒを指し、塩基対を意味する。

【0313】

本明細書で使われたように、「ＳＳＴ」という用語は、転写開始部位を指す。

【0314】

本明細書で使われたように、「Ｃｈｒ１１」という用語は、ＧＣＦ＿０００００１４０５．２５（ＧＲＣｈ３７．ｐ１３）というヒトゲノムバージョンに従って定義されたヒト第１１染色体を指す。

【0315】

本明細書で使われたように、「ヒト第１１染色体」という用語は、ＧＣＦ＿０００００１４０５．２５（ＧＲＣｈ３７．ｐ１３）というヒトゲノムバージョンに従って定義されたヒト第１１染色体を指す。

【0316】

本明細書で使われたように、「転写開始部位の前」及び「転写開始部位の後ろ」という用語は転写開始部位の自身を含まない。

【0317】

本明細書で使われたように、「ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位」はヒト第１１染色体の第１１４１６５６９５位にあるヌクレオチドを指し；「ヒト第１１染色体の１１４１６５７３０位」はヒト第１１染色体の第１１４１６５７３０位にあるヌクレオチドを指し；「ヒト第１１染色体の１１４１６５７６９位」はヒト第１１染色体の第１１４１６５７６９位にあるヌクレオチドを指し；「ヒト第１１染色体の１１４１６５８０４位」はヒト第１１染色体の第１１４１６５８０４位にあるヌクレオチドを指し；「ヒト第１１染色体の１１４１６５９３８位」はヒト第１１染色体の第１１４１６５９３８位にあるヌクレオチドを指し；「ヒト第１１染色体の１１４１６６０５０位」はヒト第１１染色体の第１１４１６６０５０位にあるヌクレオチドを指し；「ヒト第１１染色体の１１４１６６０６６位」はヒト第１１染色体の第１１４１６６０６６位にあるヌクレオチドを指す。

【0318】

本明細書で使われたように、遺伝子発現は、当該遺伝子のタンパク質発現及び／又は当該遺伝子のｍＲＮＡ発現等を含む。

【0319】

本明細書で使われたように、「ＤＮＭＴ３ａ」という用語は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ３ａ（ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ３ａ）を指す。

【0320】

本明細書で使われたように、「ＤＮＭＴ３ｂ」という用語は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ３ｂ（ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ３ｂ）を指す。

【0321】

本明細書で使われたように、「ＤＮＭＴ１」という用語は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ１（ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１）を指す。

【0322】

本明細書で使われたように、「ＵＨＲＦ１」という用語は、ＰＨＤ及びリングフィンガードメインを含むユビキチン系類似のタウタンパク質１を指す。

【0323】

当業者が本発明の化合物上の置換基及び置換形態を選択することでは化学的に安定な化合物を製造でき、且つ当該技術分野に既存の技術と以下に記載の方法では前記化合物を合成できると理解すべきである。１つ以上（複数）の置換基によって置換された場合は、これらの置換基が安定な構造を生成する限り、同じ炭素上又は異なる炭素上に位置できることを理解すべきである。

【0324】

本明細書で使われたように、「置換」又は「置換された」という用語は、原子団上の水素原子が非水素原子基で置換されるが、それらの結合価を満たす必要があり、且つ置換により化学的に安定な化合物、即ち、環化や脱離などの変換を自発的に行われない化合物を生成することを指す。

【0325】

本明細書で使われたように、「Ｒ_１」、「Ｒ１」及び「Ｒ^１」は同じ意味を有し、互換的に使用される可能性があり、他の類同な定義も同じ意味を有する。
本明細書で使われたように、

【化26】

は原子団の結合部位を表す。

【0326】

本明細書で使われたように、「アルキル基」という用語は、炭素原子のみを含む直鎖（即ち、分枝無し）、又は分枝飽和の炭化水素基、又は直鎖と分枝鎖との組合せの原子団を指す。アルキル基の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ１－Ｃ６アルキル基）は、前記アルキル基が１つ～６つの炭素原子を有することを指し、例えば、Ｃ１－Ｃ４アルキル基は、１つ～４つの炭素原子を含むアルキル基を指す。これらのアルキル基の代表例は、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓ－ブチル基、ｔ－ブチル基、又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0327】

本明細書で使われたように、「Ｃ２－Ｃ４アルケニル基」という用語は、１つ又は複数の二重結合を有する２つ～４つの炭素原子の直鎖、又は分岐アルケン分子が二重結合に結合する１つの水素原子を失って形成されるヒドロカルビル基を指す。それらの代表例は、ビニル基（ＣＨ_２＝ＣＨ－）、（Ｃ（ＣＨ３）_２＝ＣＨ－）、又は類同な原子団を含む。

【0328】

本明細書で使われたように、「Ｃ２－Ｃ４アルキニル基」という用語は、１つ又は複数の三重結合を有する２つ～４つの炭素原子の直鎖、又は分岐アルケン分子が三重結合に結合する１つの水素原子を失って形成されるヒドロカルビル基を指す。それらの代表例は、エチニル基（ＣＨ≡ＣＨ－）、（Ｈ３Ｃ－Ｃ≡ＣＨ－）、又は類同な原子団を含む。

【0329】

本発明において、「ハロゲン原子」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩを指す。

【0330】

本発明において、「ハロゲン化」は、ハロゲン原子で置き換えられることを指す。

【0331】

本明細書で使われたように、「ハロゲン化アルキル基」という用語は、アルキル基の１つ又は複数（好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）の水素原子がハロゲン原子で置換されるものを指す。前記のアルキル基及びハロゲン原子は上記に定義の通りである。ハロゲン化アルキル基の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルキル基）は、前記ハロゲン化アルキル基が１つ～８つの炭素原子を有することを指し、例えば、Ｃ１－Ｃ６ハロゲン化アルキル基は、１つ～６つの炭素原子を含むハロゲン化アルキル基を指す。これらのハロゲン化アルキル基の代表例は、－ＣＦ_３、－ＣＨＦ_２、モノフッ化イソプロピル基、ジフッ化ブチル基又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0332】

本明細書で使われたように、「シクロアルキル環」という用語は、飽和又は部分的に飽和した単環、二環又は多環（縮合環、架橋環又はスピロ環）の環系を指す。某シクロアルキル環の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ３－Ｃ１２）は、前記シクロアルキル環が３つ～１２個の環上炭素原子を有することを指す。幾つかの好ましい実施例では、「Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル環」という用語は、３つ～８つの環上炭素原子を有する飽和又は部分的に飽和したモノシクロアルキル環又はジシクロアルキル環を指し、シクロプロピル環、シクロブチル環、シクロアミル環、シクロヘプチル環又は類同な環を含む。「スピロシクロアルキル環」は、単環間で１つの炭素原子（スピロ原子と呼ばれる）を共用する二環又は多環を指し、こういう環は１つ又は複数の二重結合を含む可能性があるが、いずれの環にも完全な共役π電子系がない。「縮合シクロアルキル環」は、系内の各環が系内の他の環と共用し隣接する１対の炭素原子の全炭素原子の二環又は多環を指し、ここで１つ又は複数の環は、１つ又は複数の二重結合を含む可能性があるが、いずれの環にも完全な共役π電子系がない。「架橋シクロアルキル環」は、任意の２つの環が直接連結されていない２つの炭素原子を共用する全炭素原子の多環を指し、こういう環は１つ又は複数の二重結合を含む可能性があるが、いずれの環にも完全な共役π電子系がない。これらのシクロアルキル環の代表例は、シクロプロピル環、シクロブチル環、シクロアミル環、シクロヘプチル環又は類同な環を含むが、これらに限定されない。

【0333】

本明細書で使われたように、「シクロアルキル基」という用語は、飽和又は部分的に飽和した単環、二環又は多環（縮合環、架橋環又はスピロ環）の環状原子団を指す。シクロアルキル基の前に炭素数で限定されること （例えば、Ｃ３－Ｃ１２）は、前記シクロアルキル基が３つ～１２個の環上炭素原子を有することを指し、幾つかの好ましい実施例では、「Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル基」という用語は、３つ～８つの環上炭素原子を有する飽和又は部分的に飽和したモノシクロアルキル基又はジシクロアルキル基を指し、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロアミル基、シクロヘプチル基又は類同な原子団を含む。「スピロシクロアルキル基」は、単環間で１つの炭素原子（スピロ原子と呼ばれる）を共用する二環又は多環原子団を指し、こういう原子団は１つ又は複数の二重結合を含む可能性があるが、いずれの原子団にも完全な共役π電子系がない。「縮合シクロアルキル基」は、系内の各環が系内の他の環と共用し隣接する１対の炭素原子の全炭素原子の二環又は多環原子団を指し、ここで１つ又は複数の環は、１つ又は複数の二重結合を含む可能性があるが、いずれの環にも完全な共役π電子系がない。「架橋シクロアルキル基」は、任意の２つの環が直接連結されていない２つの炭素原子を共用する全炭素原子の多環原子団を指し、こういう原子団は１つ又は複数の二重結合を含む可能性があるが、いずれの環にも完全な共役π電子系がない。これらのシクロアルキル基の代表例は、

【化27】

を含むが、これらに限定されない。

【0334】

本明細書で使われたように、「ハロゲン化シクロアルキル基」という用語は、シクロアルキル基の１つ又は複数（好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）の水素原子がハロゲン原子で置換されるものを指す。前記のシクロアルキル基及びハロゲン原子は上記に定義の通りである。シクロアルキル基の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ３－Ｃ８ハロゲン化シクロアルキル基）は、前記シクロアルキル基が３つ～８つの環上炭素原子を有することを指し、例えば、Ｃ３－Ｃ８ハロゲン化シクロアルキル基は、３つ～８つの環上炭素原子を含むハロゲン化シクロアルキル基を指す。これらのハロゲン化シクロアルキル基の代表例は、モノフッ化シクロプロピル基、モノ塩素化シクロブチル基、モノフッ化シクロアミル基、ジフッ化シクロヘプチル基又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0335】

「アルコキシル基」という用語は、Ｒ－Ｏ－原子団を指し、ここでＲはアルキル基を指す。アルキル基は上記に定義の通りである。アルコキシル基の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ１－Ｃ８アルコキシル基）は、前記アルコキシル基中のアルキル基が１つ～８つの炭素原子を有することを指す。これらのアルコキシル基の代表例は、メトキシ基、エトキシル基、Ｎ－プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｔ－ブトキシ基又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0336】

本明細書で使われたように、「アルキルチオール基」という用語は、Ｒ－Ｓ－原子団を指し、ここでＲはアルキル基を指す。アルキル基は上記に定義の通りである。アルキルチオール基の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ１－Ｃ８アルコキシル基）は、前記アルキルチオール基中のアルキル基が１つ～８つの炭素原子を有することを指す。これらのアルキルチオール基の代表例は、メチルチオ基、エチルチオ基、Ｎ－プロピルチオ基、イソプロピルチオ基、ｔ－ブチルチオール基又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0337】

「シクロアルコキシル基」という用語は、Ｒ－Ｏ－原子団を指し、ここでＲはシクロアルキル基を指す。シクロアルキル基は上記に定義の通りである。シクロアルコキシル基の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ３－Ｃ８シクロアルコキシル基）は、前記シクロアルコキシル基中のシクロアルキル基が３つ～８つの炭素原子を有することを指す。これらのシクロアルコキシル基の代表例は、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0338】

「シクロアルキルチオール基」という用語は、Ｒ－Ｓ－原子団を指し、ここでＲはシクロアルキル基を指す。シクロアルキル基は上記に定義の通りである。シクロアルキルチオール基の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ３－Ｃ８シクロアルコキシル基）は、前記シクロアルキルチオール基中のシクロアルキル基が３つ～８つの炭素原子を有することを指す。これらのシクロアルキルチオール基の代表例は、シクロプロピルチオ基、シクロブチルチオール基又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0339】

本明細書で使われたように、「ハロゲン化アルコキシル基」という用語は、ハロゲン化アルキル基－Ｏ－を指す。前記ハロゲン化アルキル基は上記に定義の通りである。例えば、Ｃ１－Ｃ６ハロゲン化アルコキシル基は、１つ～６つの炭素原子を有するハロゲン化アルコキシル基を指す。これらのハロゲン化アルコキシル基の代表例は、モノフッ化メトキシ基、モノフッ化エトキシル基、ジフッ化ブトキシ基又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0340】

本明細書で使われたように、「ハロゲン化アルキルチオール基」という用語は、ハロゲン化アルキル基－Ｓ－を指す。前記ハロゲン化アルキル基は上記に定義の通りである。例えば、Ｃ１－Ｃ６ハロゲン化アルキルチオール基は、１つ～６つの炭素原子を有するハロゲン化アルキルチオール基を指す。これらのハロゲン化アルキルチオール基の代表例は、モノフッ化メチルチオ基、モノフッ化エチルチオ基、ジフッ化ブチルチオール基又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0341】

「ヘテロシクロアルキル環」という用語は、「ヘテロ環」とも呼ばれ、完全飽和又は部分不飽和の環（３～７員単環、７～１１員二環又は８～１６員三環を含むが、これらに限定されない）を指し、ここで少なくとも１つのヘテロ原子は少なくとも１つの炭素原子を有する環に存在する。ヘテロ環を前に限定する員数は、ヘテロシクロアルキル環の環原子の個数を指す。例えば、３－１６員ヘテロ環は、３つ～１６個の環原子を有するヘテロ環を指す。ヘテロ原子を有する各ヘテロ環には１つ又は複数の（例えば、１つ、２つ、３つ又は４つ）ヘテロ原子が存在する可能性があり、それらのヘテロ原子は、それぞれ独立して、窒素原子、酸素原子又は硫黄原子から選択され、ここで、窒素原子又は硫黄原子は酸化される可能性があり、窒素原子も四級化される可能性がある。ヘテロ環は、環又は環系分子の任意のヘテロ原子又は炭素原子の残基に結合する可能性がある。これらの単環ヘテロシクロアルキル環の代表例は、アゼチジニル環やオキセタン環やイミダゾリン環やイミダゾリドン環やテトラヒドロフラニル環やピペリジニル環やピペラジニル環や２－オキシピペラジニル環や２－オキシピペリジニル環や４－ピペリジノン環やテトラヒドロピラニル環やモルホリン環やチオモルホリン環やチオモルホリンスルホキシド環やチオモルホリンスルホン環や１，３－ジオキサン環やテトラヒドロ－１，１－ジオキシチオフェン環等を含むが、これらに限定されない。多環ヘテロシクロアルキル環は、スピロ環、縮合環及び架橋環のヘテロ環を含む。関連するスピロ環、縮合環及び架橋環のヘテロ環は、随意に単結合で他の環と連結するか、環上の任意の二つ以上の原子を介して他のシクロアルキル環及びヘテロ環と更に縮環する。

【0342】

「ヘテロシクロアルキル基」という用語は、完全飽和又は部分不飽和の環状原子団（３～７員単環、７～１１員二環又は８～１６員三環を含むが、これらに限定されない）を指し、ここで少なくとも１つのヘテロ原子は少なくとも１つの炭素原子を有する環に存在する。ヘテロシクロアルキル基を前に限定する員数は、ヘテロシクロアルキル基の環原子の個数を指す。例えば、３－１６員ヘテロシクロアルキル基は、３つ～１６個の環原子を有するヘテロシクロアルキル基を指す。ヘテロ原子を有する各ヘテロ環には１つ又は複数の（例えば、１つ、２つ、３つ又は４つ）ヘテロ原子が存在する可能性があり、それらのヘテロ原子は、それぞれ独立して、窒素原子、酸素原子又は硫黄原子から選択され、ここで、窒素原子又は硫黄原子は酸化される可能性があり、窒素原子も四級化される可能性がある。ヘテロシクロアルキル基は、環又は環系分子の任意のヘテロ原子又は炭素原子の残基に結合する可能性がある。これらの単環ヘテロシクロアルキル基の代表例は、アゼチジニル基やオキセタン基やイミダゾリン基やイミダゾリドン基やテトラヒドロフラニル基やピペリジニル基やピペラジニル基や２－オキシピペラジニル基や２－オキシピペリジニル基や４－ピペリジノン基やテトラヒドロピラニル基やモルホリン基やチオモルホリン基やチオモルホリンスルホキシド基やチオモルホリンスルホン基や１，３－ジオキサン基やテトラヒドロ－１，１－ジオキシチオフェン基等を含むが、これらに限定されない。多環ヘテロシクロアルキル基は、スピロ環、縮合環及び架橋環の複素環基を含む。関連するスピロ環、縮合環及び架橋環のヘテロシクロアルキル基は、随意に単結合で他の原子団と連結するか、環上の任意の二つ以上の原子を介して他のシクロアルキル環及びヘテロ環と更に縮環する。

【0343】

「アリール環」という用語は、共役π電子系を有する全炭素原子の単環又は縮合多環（隣接する一対の炭素原子を共有する環）を指し、芳香族環状炭化水素化合物である。アリール環の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ６－Ｃ１２アリール基）は、前記アリール環が６つ～１２個の環上炭素原子を有することを指す。これらのアリール環の代表例は、フェニル環やナフトイル環等を含む。アリール環は、他の炭素環（飽和環又は不飽和環を含む）に縮合できるが、窒素原子や酸素原子や硫黄原子等のヘテロ原子を含まれない上に、主鎖を結ぶ点は、共役π電子系の環上の炭素原子上にある必要がある。これらのアリール環の代表例は、フェニル環、ナフトイル環又は類同な環を含む。

【0344】

「アリール基」という用語は、共役π電子系を有する全炭素原子の単環式又は縮合多環式（隣接する一対の炭素原子を共有する環）の原子団を指し、芳香族環状炭化水素化合物の原子団である。アリール基の前に炭素数で限定されること（例えば、Ｃ６－Ｃ１２アリール基）は、前記アリール基が６つ～１２個の環上炭素原子を有することを指す。これらのアリール基の代表例は、フェニル基やナフトイル基等を含む。アリール基は、他の環状原子団（飽和環又は不飽和環を含む）に縮合できるが、窒素原子や酸素原子や硫黄原子等のヘテロ原子を含まれない上に、主鎖を結ぶ点は、共役π電子系の環上の炭素原子上にある必要がある。これらのアリール基の代表例は、

【化28】

を含むが、これらに限定されない。

【0345】

「ヘテロアリール環」という用語は、１つ又は複数の （好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）ヘテロ原子を有する芳香族複素環を指す。当該環は、単環（単環式）、又は縮合され又は共有結合された多環（二環式、三環式又は多環式）となり、且つヘテロ原子を含む各複素環が酸素原子、硫黄原子及び窒素原子からそれぞれ独立して選択された１つ又は複数 （例えば、１つ、２つ、３つ又は４つ）のヘテロ原子を有する可能性がある。ヘテロアリール環を前に限定する員数は、ヘテロアリール環の環原子の個数を指す。例えば、５－１２員ヘテロアリール環は、５つ～１２個の環原子を有するヘテロアリール環を指す。これらのヘテロアリール環の代表例は、ピロリル環やピラゾール環やイミダゾール環やオキサゾール環やイソオキサゾール環やチアゾール環やチアジアゾール環やイソチアゾール環やフラン環やピリジン環やピラジン環やピリミジン環やピラジン環やトリアジン環やトリアゾール環やテトラゾリル環等を含むが、これらに限定されない。

【0346】

「ヘテロアリール基」という用語は、１つ又は複数（好ましくは、１つ、２つ、３つ又は４つ）のヘテロ原子を有する芳香族複素環系の原子団を指す。当該原子団は、単環（単環式）、又は縮合され又は共有結合された多環（二環式、三環式又は多環式）となり、且つヘテロ原子を含む各複素環が酸素原子、硫黄原子及び窒素原子からそれぞれ独立して選択された１つ又は複数（例えば、１つ、２つ、３つ又は４つ）のヘテロ原子を有する可能性がある。ヘテロアリール基を前に限定する員数は、ヘテロアリール基の環原子の数を指す。例えば、５－１２員ヘテロアリール基は、５つ～１２個の環原子を有するヘテロアリール基を指す。これらのヘテロアリール基の代表例は、ピロリル基やピラゾール基やイミダゾール基やオキサゾール基やイソオキサゾール基やチアゾール基やチアジアゾール基やイソチアゾール基やフラン基やピリジン基やピラジン基やピリミジン基やピラジン基やトリアジン基やトリアゾール基やテトラゾリル基等を含むが、これらに限定されない。

【0347】

本明細書で使われたように、「カルボキシル基」という用語は、－ＣＯＯＨの原子団或－アルキル基－ＣＯＯＨの原子団を指し、ここでアルキル基は上記に定義の通りである。例えば、「Ｃ_２－Ｃ_４カルボキシル基」は－Ｃ_１－Ｃ_３アルキル基－ＣＯＯＨの原子団を指す。これらのカルボキシル基の代表例は、－ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－Ｃ_２Ｈ_４ＣＯＯＨ又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0348】

本明細書で使われたように、「エステル基」という用語は、Ｒ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－の原子団或－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－Ｒの原子団を指し、ここでアルキル基（Ｒ）は上記に定義の通りである。例えば、「Ｃ_２－Ｃ_４エステル基」は－Ｃ_１－Ｃ_３アルキル基－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－の原子団又は－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－Ｃ_１－Ｃ_３アルキル基の原子団を指す。これらのエステル基の代表例は、ＣＨ_３ＣＯＯ－、Ｃ_２Ｈ_５ＣＯＯ－、Ｃ_３Ｈ_８ＣＯＯ－、（ＣＨ_３）_２ＣＨＣＯＯ－、－ＣＯＯＣＨ_３、－ＣＯＯＣ_２Ｈ_５、－ＣＯＯＣ_３Ｈ_８、－ＣＯＯＣ（ＣＨ_３）_３又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0349】

本明細書で使われたように、「アシルアミノ基」という用語は、Ｒ－Ｃ（Ｏ）－Ｎ－の原子団或－Ｃ（Ｏ）－Ｎ－Ｒの原子団を指し、ここでアルキル基（Ｒ）は上記に定義の通りである。例えば、「Ｃ_２－Ｃ_４アシルアミノ基」は－Ｃ_１－Ｃ_３アルキル基－Ｃ（Ｏ）－Ｎ－の原子団又は－Ｃ（Ｏ）－Ｎ－Ｃ_１－Ｃ_３アルキル基の原子団を指す。これらのアシルアミノ基の代表例は、ＣＨ_３ＣＯ－Ｎ－、Ｃ_２Ｈ_５ＣＯ－Ｎ－、Ｃ_３Ｈ_８ＣＯ－Ｎ－、（ＣＨ_３）_２ＣＨＣＯ－Ｎ－、－ＣＯ－Ｎ－ＣＨ_３、－ＣＯ－Ｎ－Ｃ_２Ｈ_５、－ＣＯ－Ｎ－Ｃ_３Ｈ_８又は類同な原子団を含むが、これらに限定されない。

【0350】

本明細書で使われたように、「アミノ基」は単独又は他の置換基の一部として－ＮＨ_２を表す。

【0351】

本明細書で使われたように、「ニトロ基」は単独又は他の置換基の一部として－ＮＯ_２を表す。

【0352】

本明細書で使われたように、「シアン基」は単独又は他の置換基の一部として－ＣＮを表す。

【0353】

本明細書で使われたように、「ヒドロキシル基」は単独又は他の置換基の一部として－ＯＨを表す。

【0354】

本明細書で使われたように、「メルカプト基」は単独又は他の置換基の一部として－ＳＨを表す。

【0355】

本明細書で、全ての置換基は、「置換していた」と明示的に記載されない限り、置換していないものを意味する。「置換」という用語は、特定の置換基が特定の原子団上において１つ又は複数の水素原子を置換することを指す。特定の置換基は、上記に説明された置換基、又は各実施例に現れる置換基である。好ましくは、前記「置換」は、環又は原子団上の１つ又は複数（好ましくは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ又は８つ）の水素原子が、Ｃ１－Ｃ８アルキル基、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルキル基、Ｃ３－Ｃ８ハロゲン化シクロアルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、－ＣＮ、ヒドロキシル基、メルカプト基、アミノ基、Ｃ１－Ｃ４カルボキシル基、Ｃ２－Ｃ４エステル基、Ｃ２－Ｃ４アシルアミノ基、Ｃ１－Ｃ８アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ８アルキルチオール基、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルコキシル基、Ｃ１－Ｃ８ハロゲン化アルキルチオール基、Ｃ６－Ｃ１２アリール基、５－１０員ヘテロアリール基及び５－１０員ヘテロシクロアルキル基から選択される置換基によって置換されることを指す。特に明記されていない限り、任意に置換を行う原子団は、当該原子団の任意の置換可能な部位に特定の群から選択される置換基を備える可能性があり、且つ前記置換基は各部位に同一となるか異なる可能性がある。

【0356】

本発明において、「予防」は、疾患、及び／又はそれに伴う症状の発症を予防するか、対象を保護して罹病を防ぐ方法を指す。本明細書において使用される「予防」は、疾患及び／又はそれに付随する症状の発症を遅延させ、並びに対象の罹病のリスクを低減することも指す。

【0357】

本発明に記載の「治療」は、疾患の進行を遅延させて終結させるか、疾患を排除することを意味するが、１００％の抑制、排除及び逆転を必要としない。幾つかの実施形態では、本発明の化合物が存在しない場合に観察されるレベルに比べて、本発明の化合物の作用下で腫瘍及びそれの合併症を少なくとも約１０％、３０％、５０％、８０％、又は１００％などで軽減、阻害及び／又は逆転するようになる。

【0358】

化合物
本明細書で使われたように、「本発明の化合物」、「本発明のイソキノリン化合物」、「本発明の式Ｉの化合物」、又は「式Ｉの化合物」は、互換的に使用される可能性があり、式Ｉの結構を備える化合物、又はそれの光学異性体又はラセミ体、又はそれの溶媒和物、又はそれの薬学的に許容される塩を指す。この用語は、上記成分の混合物も含むと理解すべきである。

【化29】

【0359】

具体的に、前記の式Ｉの化合物は、本発明の第１態様にように定義されている。

【0360】

本発明の研究によると、本発明の化合物は、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化がある腫瘍細胞に対してより明らかな阻害効果を有する。ＮＮＭＴ遺伝子の低発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化がある腫瘍細胞は、本発明の化合物に敏感である。

【0361】

本発明の式Ｉの化合物は、陽イオンの状態で酸と薬学的に許容される塩を形成する可能性がある。

【0362】

「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物と酸によって形成される且つ薬物として使用に適する塩を指す。薬学的に許容される塩は無機塩と有機塩を含む。好ましい塩の一種は、本発明の化合物と酸によって形成された塩であり、こういう塩の形成に適する酸は、塩酸や臭化水素酸やフッ化水素酸や硫酸や硝酸やリン酸等の無機酸、ギ酸や酢酸やプロピオン酸やシュウ酸やマロン酸やコハク酸やフマル酸やマレイン酸や乳酸やリンゴ酸や酒石酸やクエン酸やピクリン酸やメタンスルホン酸やベンゼンスルホン酸やベンゼンスルホン酸等の有機酸、及びアスパラギン酸やグルタミン酸等の酸性アミノ酸を含が、これらに限定されない。

【0363】

本発明は、式Ｉに示されたような化合物をそれらの薬学的に許容される塩に常法で変換する可能性がある。例えば、対応する酸の溶液を上記化合物の溶液に加えて、全部の塩類化後溶媒を除去すると、本発明の化合物の対応する塩を獲得できるようになる。

【0364】

本発明の好ましい例で、前記の式Ｉの化合物の構造は、次の式Ｉ－１に示され；

【化30】

ここでＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１２、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１３及びＲ_１４は、本発明の第１態様にように定義されている；
Ｒ_１０は水素原子又はＲ_１７－Ａ－を表し；
ここでＡはＯ又はＳを指し；
Ｒ_１７は、置換又は非置換のＣ３－Ｃ６アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－、又はＣ２－Ｃ８エステル基－Ｃ１－Ｃ２アルキル基－を表す。

【0365】

本発明の好ましい化合物は、

【化31】

から選択される。

【0366】

代表例として、本発明の好ましい化合物は、

【化32】

から選択される。

【0367】

別の好ましい例で、前記ベルベリンは塩化ベルベリン又は硫酸ベルベリンを含む。

【0368】

ＮＮＭＴ遺伝子
本発明において、ＮＮＭＴの英語名はＮｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｎ－Ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅである。データベースが異なれば、ＮＮＭＴ遺伝子の識別番号も異なる。例えば、ＨＧＮＣ：７８６１； Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：４８３７； Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１６６７４１； ＯＭＩＭ：６００００８； ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ４０２６１。

【0369】

ＧＣＦ＿０００００１４０５．２５（ＧＲＣｈ３７．ｐ１３）というヒトゲノムバージョンによると、ＮＮＭＴ遺伝子領域は、ヒト第１１染色体の第１１４，１２８，５２８位のｂｐから第１１４，１８４，２５８位のｂｐまでに位置し、全長が５５，７３１ｂｐとなるＤＮＡ配列である。当該領域はＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域、ＮＮＭＴ遺伝子エクソン領域及びＮＮＭＴ遺伝子イントロン領域を含み、且つＮＮＭＴ遺伝子転写開始部位は第１１４，１６６，５３５位のｂｐである。

【0370】

ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域は、ヒト第１１染色体の第１１４，１６４，５３５位のｂｐから第１１４，１６７，０３４位のｂｐまでのヌクレオチド配列、即ちＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前２０００ｂｐ（［］の内部分）から転写開始部位自身及び後ろ４９９ｂｐ（下線部分）までの配列である。ＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域は、全長が２５００ｂｐとなり、そのヌクレオチド配列が次の配列番号１に示される。

【0371】

配列番号１：
［ＴＡＴＣＣＡＡＧＡＧＣＴＡＴＣＡＧＣＡＣＴＣＣＣＡＴＧＴＴＴＡＴＴＧＴＡＧＣＡＣＴＧＴＴＣＡＣＡＡＴＡＧＣＣＡＡＧＡＴＴＴＧＧＡＡＧＴＡＣＴＣＴＡＡＧＴＧＴＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＡＴＧＡＡＴＧＧＡＴＡＡＡＧＡＣＡＡＴＧＴＧＧＴＡＡＴＡＣＡＣＡＴＡＡＴＧＧＡＧＴＡＣＴＡＴＴＣＡＧＴＣＡＴＡＡＡＧＡＡＧＡＡＴＴＡＧＡＴＣＣＴＧＴＣＡＴＴＴＧＣＡＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＧＧＴＣＡＴＡＡＴＧＴＴＧＡＧＴＧＡＡＡＴＡＡＡＣＣＡＧＧＣＡＣＡＧＡＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＴＴＧＣＡＴＧＴＴＣＴＣＡＣＴＴＡＴＴＴＡＴＧＧＧＡＧＣＴＡＡＡＡＡＣＴＡＡＡＡＴＡＡＣＴＧＡＡＣＴＣＡＣＡＧＡＧＡＴＡＧＡＧＡＧＴＡＧＡＡＧＧＡＴＧＧＴＴＡＣＧＡＧＡＧＧＡＴＧＧＧＡＡＧＧＧＴＡＧＣＧＡＧＧＴＧＧＧＴＡＧＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＧＧＧＡＴＣＡＴＴＡＡＴＧＧＧＴＡＴＡＡＡＡＡＡＴＡＧＴＴＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＧＣＡＧＴＧＧＣＴＣＡＣＧＣＣＴＧＴＡＡＴＣＣＣＡＧＣＡＣＴＴＴＧＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＡＧＧＣＧＧＡＡＣＡＣＣＴＧＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＣＴＧＧＣＣＡＡＴＡＴＧＡＴＧＡＡＡＣＣＣＣＧＴＣＴＣＴＡＣＴＡＡＡＡＡＴＡＣＡＡＡＡＡＴＴＡＧＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＴＧＧＴＧＴＧＣＡＣＣＴＧＴＡＧＴＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＴＧＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＣＡＧＧＡＧＡＡＴＣＧＣＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＧＴＴＧＣＡＧＴＧＡＧＣＴＧＡＧＡＴＣＧＣＧＴＣＡＣＴＧＣＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＧＡＣＴＣＣＡＣＡＴＣＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＴＴＡＧＡＡＡＧＡＴＴＧＡＡＴＡＡＧＡＣＣＴＡＡＴＡＴＴＴＧＣＴＡＧＣＡＣＡＡＣＡＧＧＧＴＧＡＡＴＡＴＡＧＴＡＡＡＡＡＡＴＡＡＴＴＴＡＴＴＴＧＴＡＣＣＴＴＣＡＡＡＡＡＴＡＡＣＴＡＧＡＣＡＡＧＴＡＴＡＡＴＴＧＧＧＴＴＧＴＴＴＧＴＡＡＣＡＣＡＣＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＧＴＧＧＴＧＧＡＴＡＣＣＣＣＡＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＴＧＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＧＣＡＧＧＣＣＴＣＴＡＴＣＡＧＡＡＴＡＴＣＴＣＡＴＧＴＡＡＣＣＣＡＴＡＡＡＴＡＴＡＴＡＣＡＣＣＴＡＣＴＣＴＧＴＡＣＣＣＡＣＡＡＡＡＡＧＴＴＴＴＴＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＴＡＡＡＴＡＧＣＡＡＣＣＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＴＧＧＣＴＧＧＧＴＡＧＡＡＴＡＡＡＴＴＣＴＡＡＧＧＣＣＡＣＡＡＴＧＴＴＡＣＴＧＡＣＣＡＴＧＧＧＴＴＴＴＴＴＧＧＣＴＣＴＣＡＧＴＧＴＡＴＡＧＡＡＡＴＴＧＡＣＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＴＡＧＴＣＴＴＣＣＣＡＡＡＣＡＴＧＣＴＴＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＴＡＣＧＣＣＣＴＧＧＣＡＴＡＡＧＧＧＣＣＡＣＡＡＣＡＡＡＡＧＡＧＡＧＡＧＣＧＡＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＧＡＣＴＣＣＴＴＧＧＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＴＡＧＧＧＡＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＡＧＧＣＡＡＡＧＣＡＣＡＧＧＡＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＧＡＧＧＣＡＧＧＡＴＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＡＡＡＧＣＡＴＡＣＧＡＧＡＡＧＴＧＧＧＧＴＡＴＧＣＡＧＧＴＣＡＧＣＡＴＴＡＣＴＴＧＧＴＴＧＣＡＡＴＧＧＴＴＡＴＣＴＴＧＡＧＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＴＧＧＴＣＴＧＧＣＣＡＧＴＧＧＣＡＡＣＡＡＧＧＣＴＧＴＡＡＡＴＣＡＡＴＴＡＴＴＣＡＧＣＡＴＴＣＣＴＴＣＣＣＡＡＧＧＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＧＧＣＡＡＣＡＴＴＧＴＴＴＡＴＣＴＣＣＴＡＡＧＧＣＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＡＡＧＴＧＡＡＡＧＧＡＴＧＡＣＴＡＡＴＧＧＡＣＡＴＧＴＴＧＴＣＡＧＴＧＡＧＧＴＡＧＴＧＧＴＧＴＧＧＧＴＴＴＴＧＴＧＡＣＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＧＣＡＣＧＡＡＡＧＡＡＴＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＧＧＡＧＴＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＡＡＧＣＣＣＣＡＴＣＣＣＴＡＣＴＣＴＧＴＣＴＣＡＡＡＧＴＧＡＧＴＴＣＡＧＡＡＡＡＧＧＧＧＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＴＴＧＣＴＣＴＧＴＣＧＣＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＣＧＣＣＡＴＣＴＴＧＧＣＴＣＡＣＴＧＣＡＡＧＣＴＣＣＧＣＣＣＣＣＣＧＧＧＴＴＣＡＴＧＣＣＡＴＴＣＴＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＴＡＧＣＴＧＧＧＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＣＣＴＡＣＣＡＣＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＴＡＡＴＴＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＴＡＧＡＧＡＣＧＧＧＧＴＴＴＣＡＣＣＡＴＧＴＴＡＧＣＣＡＧＧＡＴＧＧＴＣＴＣＧＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＣＴＣＧＴＧＡＴＣＴＧＣＣＣＧＣＣＴＴＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＡＧＴＧＣＴＧＧＧＡＴＴＡＣＡＧＧＣＡＴＧＡＧＣＣＴＣＣＧＣＣＣＣＣＧＧＣＣＴＴＡＡＡＴＡＡＴＴＣＴＴＡＡＡＧＧＡＡＧＴＡＡＡＧＴＴＡＡＣＴＴＴＧＡＡＡＧＡＡＣＴＡＴＣＡＧＧＡＴＴＴＧＧＡＴＴＧＡＣＴＧＡＡＡＧＧＡＧＴＧＧＧＧＡＡＧＣＴＴＡＧＧ］ＧＡＧＧＡＧＧＴＧＣＴＴＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＧＧＴＣＡＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＣＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＧＴＴＧＣＣＴＡＧＧＧＣＡＧＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＴＣＴＧＧＧＣＡＴＧＡＧＧＡＧＡＧＧＧＴＣＴＣＧＧＧＡＴＧＴＴＴＧＧＣＴＧＧＡＣＴＡＧＡＴＴＴＴＡＣＡＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＴＣＣＡＧＧＣＴＴＴＴＡＡＡＡＴＴＡＣＴＣＴＴＴＣＣＡＧＡＣＴＴＣＡＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＡＧＣＣＡＡＣＡＴＴＣＣＴＴＡＧＣＣＣＴＧＡＡＴＡＣＡＴＴＴＣＣＴＡＴＣＣＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＣＴＴＣＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴＴＴＣＴＴＴＴＡＣＡＴＧＴＴＴＡＡＡＴＴＴＡＡＡＣＣＡＴＴＣＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＣＴＴＴＴＣＴＴＧＧＧＡＧＡＴＴＣＡＴＧＧＣＡＡＧＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＡＴＧＡＴＧＧＴＧＣＴＴＧＴＴＡＧＧＧＧＡＴＧＴＣＣＴＧＴＣＴＣＴＣＴＧＡＡＣＴＴＴＧＧＧＧＴＣＣＴＡＴＧＣＡＴＴＡＡＡＴＡＡＴＴＴＴＣＣＴＧＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＧＴＧＣＴＣＣＣＴＣＴＧＧＴＣＴＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＡＴＣＣＣＴＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＴＴＧＣＡＴＡＣＡＧＣＴＣＡＴＧＧＣＣＣＴＣＣＣＴＣＴＡＣＣＡＴＡＣＣＣ。

【0372】

本発明において、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１－２５００位である。

【0373】

本発明において、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１－１８０８位である。

【0374】

本発明において、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の１１６１－１５３２位である。

【0375】

本発明において、ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位、１１４１６５７３０位、１１４１６５７６９位、１１４１６５８０４位、１１４１６５９３８位、１１４１６６０５０位及び１１４１６６０６６位に対応する配列番号１のヌクレオチド配列の部位は、それぞれ表１に示される。

【表1】

【0376】

ＤＮＡメチル化（ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）
ＤＮＡメチル化（ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）は、ＤＮＡ配列を変更せずに遺伝子発現を変えるＤＮＡの化学修飾の形式である。多くの研究によると、ＤＮＡメチル化は、クロマチン構造、ＤＮＡ形態、ＤＮＡ安定性及びＤＮＡとタンパク質との相互作用様式を変化させ、遺伝子発現を調節する可能性がある。

【0377】

ＤＮＡメチル化は、最初に発見もされ、最も深く研究もされた後成的遺伝の調節機製の１つである。広義のＤＮＡメチル化は、ＤＮＡ配列上の特定の塩基が、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ１（ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１）の触媒作用下でＳ－アデノシルメチオニン（Ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）をメチル供与体として共有結合を介して１つのメチル基を獲得するという化学修飾プロセスを指す。このＤＮＡメチル化の修飾は、シトシンのＣ－５位やアデニンのＮ－６位やグアニンのＮ－７位等の部位に生じる可能性がある。一般的な研究にかかるＤＮＡメチル化は、主にＣｐＧジヌクレオチド中のシトシン上の第５位の炭素原子がメチル化されるプロセスを指す。その生成物は５－メチルシトシン（５－ｍＣ）と呼ばれ、植物や動物などの真核生物のＤＮＡメチル化の主な形態となる。ＤＮＡメチル化は、比較的安定した修飾状態として、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼの作用下でＤＮＡ複製プロセスにつれて新生の世代ＤＮＡに遺伝できるため、重要な後成的遺伝の調節機製となる。

【0378】

ＤＮＡメチル化反応は２つの類型に分けられる。第１類は、２本の非メチル化鎖を有するＤＮＡがメチル化され、デノボメチル化（ｄｅｎｏｖｏ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）と呼ばれる。第２類は、１本のメチル化鎖を有する二鎖ＤＮＡに他の非メチル化鎖をメチル化し、維持メチル化（ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）と呼ばれる。

【0379】

典型的に、ＤＮＡメチル化はＤＮＡＣｐＧ部位のメチル化である。ＣｐＧジヌクレオチドはヒトゲノムに非常に不均一に分布し、ゲノムにあるいくつかのセグメントにはＣｐＧが通常の確率以上に保たれる。主に遺伝子のプロモーター（ｐｒｏｍｏｔｏｒ）及びエクソン領域に位置するＣｐＧ部位の濃縮領域（ＣｐＧアイランドとも呼ばれる）、ＣｐＧジヌクレオチドを濃縮する一部の領域であり、その中に遺伝子のプロモーターの６０％以上がＣｐＧアイランドを含む。ここで、ＣｐＧはシトシン（Ｃ）－リン酸（ｐ）－グアニン（Ｇ）の略語である。

【0380】

細胞内遺伝子発現は、シグナル伝達経路、転写因子及び後成的遺伝修飾による様々な調節を受ける。ＤＮＡメチル化修飾は、後成的遺伝修飾が遺伝子発現を調節するための重要な方法である。特定の遺伝子領域におけるＤＮＡメチル化レベルは、何時も当該遺伝子の発現レベルに影響を与える。後成的遺伝修飾のＤＮＡメチル化修飾は、シグナル伝達経路や転写因子による遺伝子発現の調節に比べて、遺伝子発現に対する影響がより安定しており、且つ細胞外環境の影響を受けにくくなる。ＤＮＡメチル化修飾は、既存の技術で容易に検出できるため、理想的なバイオマーカーとなる。

【0381】

使用
本発明は、腫瘍の予防及び／又は治療における本発明の化合物の使用を提供する。

【0382】

腫瘍
本発明の研究によると、本発明の化合物は腫瘍の予防及び／又は治療に用いられる。

【0383】

本発明において、「腫瘍」、「癌症」、「癌」及び「腫瘤」は互換的に使用される可能性がある。

【0384】

本発明の好ましい例で、本発明に記載の「腫瘍」は、ＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍を含む。代表例として、本発明に記載のＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0385】

本発明の好ましい例で、本発明に記載の「腫瘍」は、ＤＮＡメチル化酵素が高発現される腫瘍を含む。代表例として、本発明に記載のＤＮＡメチル化酵素が高発現される腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0386】

本発明に記載のＤＮＡメチル化酵素は、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３ａ、ＤＮＭＴ３ｂ又はそれらの組合せを含むが、これらに限定されない。好ましくは、本発明に記載のＤＮＡメチル化酵素はＤＮＭＴ１を含む。

【0387】

本発明の好ましい例で、本発明に記載の「腫瘍」は、ＤＮＭＴ１が高発現される腫瘍を含む。代表例として、本発明に記載のＤＮＭＴ１が高発現される腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0388】

本発明の好ましい例で、本発明に記載の「腫瘍」は、ＤＮＭＴ３ａが高発現される腫瘍を含む。代表例として、本発明に記載のＤＮＭＴ３ａが高発現される腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0389】

本発明の好ましい例で、本発明に記載の「腫瘍」は、ＤＮＭＴ３ｂが高発現される腫瘍を含む。代表例として、本発明に記載のＤＮＭＴ３ｂが高発現される腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0390】

本発明の好ましい例で、本発明に記載の「腫瘍」は、ＵＨＲＦ１（ＰＨＤ及びリングフィンガードメインを含むユビキチン系類似のタウタンパク質１）が高発現される腫瘍を含む。代表例として、本発明に記載のＵＨＲＦ１が高発現される腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0391】

本発明の好ましい例で、本発明に記載の「腫瘍」は、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍を含む。代表例として、本発明に記載のＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0392】

本発明の好ましい例で、本発明に記載の「腫瘍」は、ＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍を含む。代表例として、本発明に記載のＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0393】

より詳細な例として、本発明に記載の腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0394】

本発明においては、様々な腫瘍細胞株に対応する代表的な腫瘍の類型を次に表２に示す。

【表2】

【0395】

マーカー
本発明は、本発明の化合物が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかを判断するマーカーを提供し、前記マーカーは、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを備える。

【0396】

１つの実施状態で、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、本発明の化合物が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかを判断するマーカーとしての機能を果たす。その方法は、
腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の高メチル化になると、本発明の化合物が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適すること、及び／又は
腫瘍患者の腫瘍細胞において、ＮＮＭＴ遺伝子の高発現、ＤＮＡメチル化酵素の低発現、ＵＨＲＦ１の低発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の低メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位の低メチル化になると、本発明の化合物が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適しないようになることを含むが、これらに限定されない。

【0397】

具体的に、ＮＮＭＴ遺伝子が低発現又は未発現される腫瘍、ＤＮＡメチル化酵素（例えば、ＤＮＭＴ１）が高発現される腫瘍、ＵＨＲＦ１が高発現される腫瘍、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が高メチル化される腫瘍及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、本発明の第１態様に記載の通りである。

【0398】

具体的に、ＮＮＭＴ遺伝子が高発現される腫瘍、ＤＮＡメチル化酵素（例えば、ＤＮＭＴ１）が低発現される腫瘍、ＵＨＲＦ１が低発現される腫瘍、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位が低メチル化される腫瘍及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が低メチル化される腫瘍は、本発明の第２態様に記載の通りである。

【0399】

本発明は、前記マーカー（又はそれの発現量）又は検出試剤の使用を更に提供し、それらは検出キットを製造するために用いられる。前記検出キットは本発明の化合物が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかを判断するために用いられる。

【0400】

組成物又は製剤、活性成分の組合せ及び医療キット、並びに投薬方法
好ましくは、本発明に記載の組成物は薬物組成物であり、本発明に記載の組成物は薬学的に許容される担体を含む可能性がある。

【0401】

本明細書で使われたように、「薬学的に許容される担体」は、ヒト又は動物の利用に適する且つ純度が足りて毒性が十分に低くなる必要がある１つ又は複数の相容性の固体、半固体、液体及びゲル充填剤を指す。「相容性」は、それぞれ薬物組成物中の各成分と薬物の活性成分を混合し、且つそれらをお互いに混合すると、薬効が著しく低下しないようになることを指す。

【0402】

本発明において、薬学的に許容される担体は、特に制限せず、当該分野で常用される材料から選択されるか、従来の方法で調製され、又は市場から購入されて獲得できると理解すべきである。薬学的に許容される担体の一部は、繊維素及びその誘導体（例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル・セルロース、カルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム等）やゼラチンやタルクや固体潤滑剤（例えば、ステアリン酸、及びステアリン酸マグネシウム）や硫酸カルシウムや植物油（例えば、大豆油、ゴマ油、落花生油、オリーブ油等）や多価アルコール（例えば、プロピレン・グリコール、グリセリン、マンニトール、ソルビトール等）や乳化剤（例えば、トゥイーン）や湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）や緩衝剤やキレート剤や増粘剤やｐＨ調整剤や浸透促進剤や着色料や香料や安定剤や酸化防止剤や防腐剤や静菌剤やヒートフリー原水等を含む。

【0403】

本発明の好ましい例で、前記組成物又は製剤の形態は固体、液体または半固体である。

【0404】

本発明の好ましい例で、前記組成物又は製剤の類型は経口剤、外用剤又は注射用製剤である。

【0405】

それらの代表例として、前記組成物又は製剤の類型は錠剤、注射剤、輸液剤、軟膏剤、ゲル剤、溶液剤、丸剤又は被膜剤である。

【0406】

薬物製剤は投薬方式と一致すべきである。本発明の薬剤も、他の相乗的治療用の薬剤（使用前、使用中、又は使用後）と共に用いられる。薬物の組成物又は製剤を使う場合は、安全かつ有効な量の薬物が治療対象（例えば、ヒト又は非ヒト哺乳動物）に投薬される。前記の安全かつ有効な量は、通常、少なくとも約体重の１０μｇ／ｋｇ、大抵の場合、約体重の８ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは約体重の１０μｇ／ｋｇ～約体重の１ｍｇ／ｋｇである。勿論、具体的な投薬量は、投薬経路や患者の健康状態等の条件を考える必要があるが、これらの条件は熟練した医師が考えに入れられるものである。

【0407】

本発明は、以下の主な有益な効果を有する。

【0408】

本発明は、本発明の化合物を精密に投薬するためのバイオマーカーを提供し、且つこれらのバイオマーカーが抗腫瘍薬に敏感な腫瘍患者を有効的に識別できると、その治療効果を改善し、抗腫瘍薬に不敏感な腫瘍を有する患者にこれらの薬物を投薬することを免れてこれらの薬物の精密な適用を遂げるようにする。

【0409】

一連の研究をすると、本発明は、ＮＮＭＴ遺伝子の発現量、ＤＮＡメチル化酵素の発現量、ＵＨＲＦ１の発現量、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位のメチル化レベル及び／又はＮＮＭＴ遺伝子プロモーター領域のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルは、本発明の化合物が腫瘍患者の予防及び／又は治療に適するかどうかを判断するマーカーとしての機能を果たすことを初めて予期せず見出す。

【0410】

ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍は、本発明の化合物に高く敏感であり、即ち、本発明の化合物は、ＮＮＭＴ遺伝子の低発現又は未発現、ＤＮＡメチル化酵素の高発現、ＵＨＲＦ１の高発現、ＮＮＭＴ遺伝子のヌクレオチド部位の高メチル化、及び／又はＮＮＭＴ遺伝子領域ＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍に対して優れた治療効果を有する。その上、ＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルの検出方法は、高い完備性、安定性及び信頼性を備えるため、分子マーカーの開発に適する。

【0411】

本発明は、次に特定の実施例と相まってさらに説明される。これらの実施形態は、本発明の範囲を限定せずに本発明対する説明のみを目的とすると理解すべきである。次の実施例で、具体的な条件を明示しない実験方法は、通常一般的な条件に従うか、製造業者の推奨事項に応ずる。特に明記されていない限り、百分比と割合は重量で計算される。

【実施例】

【0412】

様々なイソキノリン化合物（ベルベリン、塩化ベルベリン、メチル化コプチシン、塩化コプチシン、化合物ＢＢＲ－Ａ１、化合物ＢＢＲ－Ａ２及び化合物ＢＢＲ－Ａ５）の構造式は次の通りである。

【化33】

【0413】

ＤＮＭＴ３ａは、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ３ａ、ＮＣＢＩ ｅｎｔｒｅｚ ｇｅｎｅ：１７８８；Ｕｎｉｐｒｏｔｋｂ／Ｓｗｉｓｓ－ｐｏｒｔ：Ｑ９Ｙ６Ｋ１を指す。

【0414】

ＤＮＭＴ３ｂは、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ３ｂ、ＮＣＢＩ ｅｎｔｒｅｚ ｇｅｎｅ：１７８９；Ｕｎｉｐｒｏｔｋｂ／Ｓｗｉｓｓ－ｐｏｒｔ：Ｑ９ＵＢＣ３を指す。

【0415】

ＤＮＭＴ１は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ１、ＮＣＢＩ ｅｎｔｒｅｚ ｇｅｎｅ：１７８６；Ｕｎｉｐｒｏｔｋｂ／Ｓｗｉｓｓ－ｐｏｒｔ：Ｐ２６３５８を指す。

【0416】

ＵＨＲＦ１はＰＨＤ及びリングフィンガードメインを含むユビキチン系類似のタウタンパク質１、ＮＣＢＩ ｅｎｔｒｅｚ ｇｅｎｅ：２９１２８；Ｕｎｉｐｒｏｔｋｂ／Ｓｗｉｓｓ－ｐｏｒｔ：Ｑ９６Ｔ８８を指す。

【0417】

ＮＮＭＴ遺伝子の英語名はＮｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｎ－Ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅである。

【0418】

ＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域のヌクレオチド配列は配列番号１に示される。

【0419】

ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～２５００位である。

【0420】

ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の９５１～１８０８位である。

【0421】

ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐから転写開始部位の前４６９ｂｐまでの領域は、配列番号１に示されたヌクレオチド配列の１１６１～１５３２位である。

【0422】

実施例１
化合物１の調製

【化34】

【0423】

コプチシン／ベルベリン（１２．０ｇ，３５．６ｍｍｏｌ）を１００ｍＬの単孔式瓶に加える同時に油ポンプで真空を作り、反応液を１９０－２１０℃までに２時間ゆっくりと加熱すると、固体が黄色から暗赤色に変えるようになる。原料とするコプチシンの変換の完了ＴＬＣに至って反応を追跡し監視する （ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）。反応粗生成物が室温まで冷却され、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で純化され、暗赤色粉末の化合物１（重量が８．２ｇ、収率が７９％）を得る。

【0424】

化合物１
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ９．２６（ｓ，１Ｈ），８．０２ （ｓ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），６．０３（ｓ，２Ｈ），４．６０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．３５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．１４－３．１１（ｍ，２Ｈ）。

【0425】

実施例２
化合物ＢＢＲ－Ａ１の調製

【化35】

【0426】

化合物１（２００ｍｇ，０．６２ｍｍｏｌ）と１－臭化プロピル（３０５ｍｇ，２．４８ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ） をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解し、８０℃までに加熱するとともに１２時間攪拌する。原料とする化合物１の変換の完了ＴＬＣに至って反応を監視する（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）。減圧で溶媒を留去して得られた反応粗生成物が、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で純化され、黄色固体の化合物ＢＢＲ－Ａ１（１２４ｍｇ，５５％）を得る。

【0427】

化合物ＢＢＲ－Ａ１
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ９．６８（ｓ，１Ｈ），８．７０ （ｓ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．１１（ｓ，２Ｈ），４．９４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．３７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．１０（ｓ，３Ｈ），３．２５（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），１．９７－１．９３（ｍ，２Ｈ），１．１３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
ＥＳＩ－ＭＳ（ｍ／ｚ）：理論値Ｃ_２２Ｈ_２２ＮＯ_４，［Ｍ］＋３６４．４，観測値：３６４．０。

【0428】

実施例３
化合物ＢＢＲ－Ａ２の調製

【化36】

【0429】

化合物１（２００ｍｇ，０．６２ｍｍｏｌ）と臭化アリル（３００ｍｇ，２．４８ｍｍｏｌ，４．０ｅｑｕｉｖ）を ＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解し、８０℃までに加熱するとともに１２時間攪拌する。原料とする化合物１の変換の完了に至って反応を監視する（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）。減圧で溶媒を留去して得られた反応粗生成物が、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で純化され、黄色固体の化合物ＢＢＲ－Ａ２（１２１ｍｇ，５４％）を得る。

【0430】

化合物ＢＢＲ－Ａ２
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ９．７２（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．２６－６．１９（ｍ，１Ｈ），６．１１（ｓ，２Ｈ），５．４４（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９６－４．８４（ｍ，４Ｈ），４．１１（ｓ，３Ｈ），３．２８－３．２４（ｍ，２Ｈ）。
ＥＳＩ－ＭＳ（ｍ／ｚ）：理論値Ｃ_２２Ｈ_２０ＮＯ_４，［Ｍ］＋３６２．４，観測値：３６２．０。

【0431】

実施例４
化合物ＢＢＲ－Ａ５の調製

【化37】

【0432】

化合物１（２００ｍｇ，０．６２ｍｍｏｌ）とブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（４８４ｍｇ，２．４８ｍｍｏｌ，４．０ｅｑｕｉｖ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解し、８０℃までに加熱するとともに１２時間攪拌する。原料とする化合物１の変換の完了に至って反応を監視する（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）。減圧で溶媒を留去して得られた反応粗生成物が、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で純化され、黄色固体の化合物ＢＢＲ－Ａ５（１７５ｍｇ，６５％）を得る。

【0433】

化合物ＢＢＲ－Ａ５
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ９．９７（ｓ，１Ｈ），８．７１ （ｓ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），６．９９（ｓ，１Ｈ），６．１１（ｓ，２Ｈ），５．０３（ｓ，２Ｈ），４．９６－４．９３（ｍ，２Ｈ），４．１０（ｓ，３Ｈ），３．２９－３．２６（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）。
ＥＳＩ－ＭＳ（ｍ／ｚ）：理論値Ｃ_２５Ｈ_２６ＮＯ_６，［Ｍ］＋４３６．５，観測値：４３６．０。

【0434】

実施例５
細胞活性検出試剤を用いて様々な腫瘍細胞株を対するイソキノリン化合物の阻害効果を検出する。

【0435】

実験的背景：Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏキットで細胞活力を検出し、このキットは細胞内のＡＴＰ含有量を直接測定することで、細胞の活性を反映する。本実験はイソキノリン化合物が様々な腫瘍細胞株の活性を抑えるＩＣ_５０値を検出する。

【0436】

実験方法及び結果：様々な腫瘍細胞は１０％ＦＢＳを有する培地（Ｐ／Ｓを加える）で培養され、３時間又は一晩継代培養後、段階希釈された様々なイソキノリン化合物を添加し、３日間培養後に半阻害濃度ＩＣ_５０を測定する。各腫瘍細胞株の名称、由来及び培養条件は次の通りである。
１０％ウシ胎児血清を有するＲＰＭＩ１６４０培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株ＮＣＩ－Ｈ８２（ＡＴＣＣ、番号ＨＴＢ－１７５）；
１０％ウシ胎児血清を有するＭｃＣｏｙ’ｓ ５ａ培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株Ｇ－４０１（ＡＴＣＣ、番号ＣＲＬ－１４４１）；
１０％ウシ胎児血清を有するＬｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ Ｌ－１５培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４５３（ＡＴＣＣ、番号ＨＴＢ－１３１）；
１０％ウシ胎児血清を有するＬｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ Ｌ－１５培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株ＳＷ４８（ＡＴＣＣ、番号ＣＣＬ－２３１）；
１０％ウシ胎児血清を有するＩＭＤＭ培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株ＣＦＰＡＣ－１（ＡＴＣＣ、番号ＣＲＬ－１９１８）；
１０％ウシ胎児血清を有するＲＰＭＩ１６４０培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株７８６－Ｏ（ＡＴＣＣ、番号ＣＲＬ－１９３２）；
１０％ウシ胎児血清を有するＤＭＥＭ培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株ＧＢ－１（ＪＣＲＢ、番号ＩＦＯ５０４８９）；
１０％ウシ胎児血清を有するＥＭＥＭ培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株ＳＦ１２６（ＪＣＲＢ、番号ＩＦＯ５０２８６）。

【0437】

実験結果を下記表３に示す。

【表3】

注：ＩＣ_５０は半阻害濃度（５０％ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）、即ち５０％の阻害効果を達成する時の阻害剤の濃度である。

【0438】

表３からわかったように、様々な細胞に対してイソキノリン化合物の感受性を検出することにより、ＮＣＩ－Ｈ８２（ヒト小細胞肺癌細胞）やＧ－４０１（ヒト腎臓癌Ｗｉｌｍｓ細胞）やＭＤＡ－ＭＢ－４５３（乳癌細胞）やＳＷ４８（ヒト結腸腺癌細胞）は、イソキノリン化合物（ＩＣ_５０が低い）に敏感であるが、ＧＢ－１（ヒト脳膠芽細胞腫細胞）やＣＦＰＡＣ－１（ヒト膵臓癌細胞）やＳＦ－１２６（ヒト脳腫瘍細胞）や７８６－Ｏ（腎臓透明細胞腺癌細胞）は、イソキノリン化合物（ＩＣ_５０値が高い）に不敏感であると発見した。

【0439】

実施例６
ＲＴ－ｑＰＣＲで遺伝子発現分析実験を行うことでイソキノリン化合物に敏感である４例の腫瘍細胞株とそれに不敏感である４例の腫瘍細胞株に対してＮＮＭＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写レベルを検出すし、それぞれこれらの腫瘍細胞株のＮＮＭＴ遺伝子発現パターンを測定する。実験結果を図１に示す。

【0440】

図１からわかったように、ＲＴ－ｑＰＣＲで遺伝子発現分析実験を行うことでイソキノリン化合物に敏感である４例の腫瘍細胞株（ＮＣＩ－Ｈ８２、Ｇ－４０１、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３、ＳＷ４８）とそれに不敏感である４例の腫瘍細胞株（７８６－Ｏ、ＣＦＰＡＣ－１、ＧＢ－１及びＳＦ－１２６）に対してＮＮＭＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写レベルを検出する場合は、ＮＮＭＴ遺伝子が敏感な細胞（ＮＣＩ－Ｈ８２、Ｇ－４０１、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３及びＳＷ４８）において低発現され、不敏感な細胞（７８６－Ｏ、ＣＦＰＡＣ－１、ＧＢ－１及びＳＦ－１２６）において高発現されていたと発見した。

【0441】

そのため、図１から得られる結論は、ＮＮＭＴ遺伝子が高発現される腫瘍細胞株に比べて、ＮＮＭＴ遺伝子を低発現する腫瘍細胞株に対するイソキノリン化合物の阻害効果が明らかに強まり、即ち腫瘍細胞中のＮＮＭＴ遺伝子の発現はイソキノリン化合物に対する感受性と逆相関する。

【0442】

実施例７
イソキノリン化合物に敏感である４例の腫瘍細胞株（ＮＣＩ－Ｈ８２、Ｇ－４０１、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３及びＳＷ４８）とそれに不敏感である４例の腫瘍細胞株（７８６－Ｏ、ＣＦＰＡＣ－１、ＧＢ－１及びＳＦ－１２６）のＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域及びＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域に対しては、亜硫酸水素塩で配列決定を行って関連する領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出する。ゲノムＤＮＡを亜硫酸水素塩で処理して、メチル化されなくなったシトシンが脱アミノ化されてウラシルになるが、メチル化されたシトシンが脱アミノ化されなくなるため、亜硫酸水素塩で処理された配列決定試料を処理された配列決定試料と比較することで、メチル化部位を発見するようになる。実験結果を図２、図３及び図４に示す。

【0443】

図２（ＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域）、図３（ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域）及び図４（ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域）に示されたように、イソキノリン化合物は、ＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域及びＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域にＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍細胞に対して強い阻害効果を有するが、ＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域及びＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域にＤＮＡ ＣｐＧ部位が低メチル化される腫瘍細胞に対して弱い阻害効果を有する。これは、腫瘍細胞におけるＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域及びＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルがイソキノリン化合物に対するそれの感受性と正相関することを示す。

【0444】

実施例８
本実験には、イソキノリン化合物に敏感である３例の腫瘍細胞株（ＮＣＩ－Ｈ８２、Ｇ－４０１及びＳＷ４８）とそれに不敏感である３例の腫瘍細胞株（７８６－Ｏ、ＣＦＰＡＣ－１及びＳＦ－１２６）のＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前８４０ｂｐ（ヒト第１１染色体の第１１４１６５６９５位）から転写開始部位の前４６９ｂｐ（ヒト第１１染色体の第１１４１６６０６６位）までの領域内の特定のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化を研究する。

【0445】

先ず、ゲノムＤＮＡを亜硫酸水素塩で処理して、メチル化されなくなったシトシンが脱アミノ化されてウラシルになるが、メチル化されたシトシンが脱アミノ化されなくなるため、亜硫酸水素塩で処理された配列決定試料を処理された配列決定試料と比較することで、メチル化部位を発見するようになる。次に、この領域に対してＰＣＲ増幅及び配列決定分析をプライマーで行ってこのＤＮＡ領域内のＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出する。

【0446】

分析によると、イソキノリン化合物に敏感である腫瘍細胞株（ＮＣＩ－Ｈ８２、Ｇ－４０１及びＳＷ４８）に７つのＣｐＧ部位（ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位）がほとんどすべてメチル化されているが、イソキノリン化合物に不敏感である腫瘍細胞株（７８６－Ｏ、ＣＦＰＡＣ－１及びＳＦ－１２６）にこれらの７つのＣｐＧ部位がすべてメチル化されないと発見した。関連する部位のメチル化状態を図５に示す。

【0447】

ヒト第１１染色体の１１４１６５６９５位と１１４１６５７３０位と１１４１６５７６９位と１１４１６５８０４位と１１４１６５９３８位と１１４１６６０５０位と１１４１６６０６６位に対応する配列番号１のヌクレオチド配列の部位は、それぞれ次に示される。

【表4】

【0448】

実施例９
細胞活性検出試剤を用いて様々な腫瘍細胞株を対するイソキノリン化合物の阻害効果を検出する。

【0449】

実験的背景：Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏキットで細胞活力を検出し、このキットは細胞内のＡＴＰ含有量を直接測定することで、細胞の活性を反映する。本実験はイソキノリン化合物が様々な腫瘍細胞株の活性を抑えるＩＣ_５０値を検出する。

【0450】

実験方法及び結果：様々な腫瘍細胞は１０％ＦＢＳを有する培地（Ｐ／Ｓを加える）で培養され、３時間又は一晩継代培養後、段階希釈された様々なイソキノリン化合物を添加し、３日間培養後に半阻害濃度ＩＣ_５０を測定する。各腫瘍細胞株の名称、由来及び培養条件は次の通りである。
２０％ウシ胎児血清を有するＥＭＥＭ培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株Ｄ３４１ Ｍｅｄ （ＡＴＣＣ、番号ＨＴＢ－１８７）；
１０％ウシ胎児血清及び２ｍＭグルタミンを有するＲＰＭＩ１６４０培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株Ｋｅｌｌｙ （ＥＣＡＣＣ、番号９２１１０４１１）；
１０％ウシ胎児血清を有するＬｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ Ｌ－１５培地＋Ｐ／Ｓで培養された細胞株ＮＢ－１ （ＡＴＣＣ、番号ＨＴＢ－１３１）。

【0451】

実験結果を下記表５に示す。

【表5】

注：ＩＣ_５０は半阻害濃度（５０％ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）、即ち５０％の阻害効果を達成する時の阻害剤の濃度である。

【0452】

表５からわかったように、様々な細胞に対してイソキノリン化合物の感受性を検出することにより、Ｄ３４１ Ｍｅｄ（小脳髄芽細胞腫）やＫｅｌｌｙ（神経芽細胞腫）やＮＢ－１（神経芽細胞腫）は、イソキノリン化合物（ＩＣ_５０が低い）に敏感であるが、ＧＢ－１（ヒト脳膠芽細胞腫細胞）やＳＦ－１２６（ヒト脳腫瘍細胞）は、イソキノリン化合物（ＩＣ_５０値が高い）に不敏感であると発見した。

【0453】

実施例１０
ＲＴ－ｑＰＣＲで遺伝子発現分析実験を行うことでイソキノリン化合物に敏感である３例の腫瘍細胞株（Ｄ３４１ Ｍｅｄ、Ｋｅｌｌｙ及びＮＢ－１）とそれに不敏感である２例の腫瘍細胞株（ＧＢ－１及びＳＦ－１２６）に対してＮＮＭＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写レベルを検出すし、それぞれこれらの腫瘍細胞株のＮＮＭＴ遺伝子発現パターンを測定する。実験結果を図６に示す。

【0454】

図６からわかったように、ＲＴ－ｑＰＣＲで遺伝子発現分析実験を行うことでイソキノリン化合物に敏感である３例の腫瘍細胞株（Ｄ３４１ Ｍｅｄ、Ｋｅｌｌｙ、ＮＢ－１）とそれに不敏感である２例の腫瘍細胞株（ＧＢ－１、ＳＦ１２６）に対してＮＮＭＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写レベルを検出する場合は、ＮＮＭＴ遺伝子が敏感な細胞（Ｄ３４１ Ｍｅｄ、Ｋｅｌｌｙ、ＮＢ－１）において低発現され、不敏感な細胞 （ＧＢ－１、ＳＦ１２６）において高発現されていたと発見した。

【0455】

そのため、図６から得られる結論は、ＮＮＭＴ遺伝子が高発現される腫瘍細胞株に比べて、ＮＮＭＴ遺伝子が低発現される腫瘍細胞株に対するイソキノリン化合物の阻害効果が明らかに強まり、即ち腫瘍細胞中のＮＮＭＴ遺伝子の発現はイソキノリン化合物に対する感受性と逆相関する。

【0456】

実施例１１
イソキノリン化合物に敏感である３例の腫瘍細胞株（Ｄ３４１ Ｍｅｄ、Ｋｅｌｌｙ及びＮＢ－１）とそれに不敏感である２例の腫瘍細胞株（ＧＢ－１、ＳＦ１２６）のＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域及びＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域に対しては、亜硫酸水素塩で配列決定を行って関連する領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルを検出する。ゲノムＤＮＡを亜硫酸水素塩で処理して、メチル化されなくなったシトシンが脱アミノ化されてウラシルになるが、メチル化されたシトシンが脱アミノ化されなくなるため、亜硫酸水素塩で処理された配列決定試料を処理された配列決定試料と比較することで、メチル化部位を発見するようになる。実験結果を図７、図８及び図９に示す。

【0457】

図７（ＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域）、図８（ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域）及び図９（ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域）に示されたように、イソキノリン化合物は、ＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域及びＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域にＤＮＡ ＣｐＧ部位が高メチル化される腫瘍細胞に対して強い阻害効果を有するが、ＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域及びＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域にＤＮＡ ＣｐＧ部位が低メチル化される腫瘍細胞に対して弱い阻害効果を有する。これは、腫瘍細胞におけるＮＮＭＴ遺伝子のプロモーター領域、ＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の後ろ４９９ｂｐまでの領域及びＮＮＭＴ遺伝子の転写開始部位の前１０５０ｂｐから転写開始部位の前１９３ｂｐまでの領域内のＤＮＡ ＣｐＧ部位のメチル化レベルがイソキノリン化合物に対するそれの感受性と正相関することを示す。

【0458】

実施例１２
細胞ＤＮＡのメチル化レベルは、ＤＮＭＴ３ａ、ＤＮＭＴ３ｂ及びＤＮＭＴ１というＤＮＡメチル化酵素で維持され、且つＤＮＭＴ３ａ及びＤＮＭＴ３ｂはＤＮＡに対してデノボメチル化を行うが、ＤＮＭＴ１はタンパク質ＵＨＲＦ１（ＰＨＤ及びリングフィンガードメインを含むユビキチン系類似のタウタンパク質１）の助力でメチル化されたＤＮＡを複製し維持する。本実施例は、腫瘍中のＮＮＭＴ発現とＤＮＭＴ１、ＵＨＲＦ１、ＤＮＭＴ３ａ及びＤＮＭＴ３ｂ発現との相関性を検出する。

【0459】

実験方法及び結果：公開データベース（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ、ＣＣＬＥ、合計１０１９株の細胞）から様々な細胞中のＮＮＭＴ遺伝子、ＤＮＭＴ１、ＵＨＲＦ１、ＤＮＭＴ３ａ及びＤＮＭＴ３ｂの発現データを獲得し、次にこれらの細胞中のＮＮＭＴ発現とＤＮＭＴ１、ＵＨＲＦ１、ＤＮＭＴ３ａ及びＤＮＭＴ３ｂ発現との相関性、並びに各細胞のＮＮＭＴ遺伝子の発現量とＤＮＭＴ１、ＵＨＲＦ１、ＤＮＭＴ３ａ及びＤＮＭＴ３ｂの発現量との相関性を生物情報学の方法で分析する。実験結果を図１０に示す。

【0460】

図１０からわかったように、各細胞のＮＮＭＴの発現は、ＤＮＡメチル化酵素及びＵＨＲＦ１の発現と逆相関する。

【0461】

実施例１３
関連する細胞のＮＮＭＴ発現量は、イソキノリン化合物に対するそれの感受性と著しく逆相関するが、それのＤＮＭＴ１遺伝子の発現量は、イソキノリン化合物に対するそれの感受性と著しく正相関すると、イソキノリン化合物に対する細胞の感受性におけるＮＮＭＴ及びＤＮＭＴ１の作用を更に検出する。

【0462】

実験方法及び結果：ウイルスベクターを介してＮＮＭＴ遺伝子をＮＣＩ－Ｈ８２細胞に導入してＮＣＩ－Ｈ８２細胞にＮＮＭＴタンパク質を過剰発現させる。ｓｈＲＮＡ導入法によってＮＣＩ－Ｈ８２細胞のＤＮＭＴ１発現を下方調節し、且つ細胞内ＡＴＰを検出することでＮＮＭＴタンパク質の過剰発現及び／又はＤＮＭＴ１の下方調節を検出した後、イソキノリン化合物（塩化ベルベリン）に対する細胞の感受性は変化する。実験結果を図１１に示す。ベクター（Ｖｅｃｔｏｒ）は、空のウイルスを導入したＮＣＩ－Ｈ８２細胞の対照群である。

【0463】

図１１からわかったように、イソキノリン化合物に敏感であるＮＣＩ－Ｈ８２細胞のＮＮＭＴタンパク質（図のｏｖ－ＮＮＭＴ）を単独に過剰発現するか、ＤＮＭＴ１遺伝子を標的とする２つの異なるｓｈＲＮＡを用いてＮＣＩ－Ｈ８２細胞のＤＮＭＴ１発現を下方調節する（図中、ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１はＤＮＭＴ１遺伝子を標的とするｓｈＲＮＡであり、それに対応するＤＮＡ配列はＧＡＴＣＣＧＧＣＣＣＡＡＴＧＡＧＡＣＴＧＡＣＡＴＣＡＡＴＴ ＣＡＡＧＡＧＡＴＴＧＡＴＧＴＣＡＧＴＣＴＣＡＴＴＧＧＧＣＴＴＴＴＴＧ（配列番号２）であり；ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１はＤＮＭＴ１遺伝子を標的とする他のｓｈＲＮＡであり、それに対応するＤＮＡ配列はＧＡＴＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＴＣＣＡＴＣＡＡＧＧＡＡＧＡＴＴＣＡＡＧＡＧＡＴＣＴＴＣＣＴＴＧＡＴＧＧＡＣＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＴＧ（配列番号３））と、ＮＣＩ－Ｈ８２細胞は、塩化ベルベリンに対する感受性が低下するようになる。ＮＣＩ－Ｈ８２細胞においてＮＮＭＴタンパク質を過剰発現すると同時にＤＮＭＴ１発現を下方調節する（図中のｏｖ－ＮＮＭＴ／ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１及びｏｖ－ＮＮＭＴ／ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃２）場合は、塩化ベルベリンに対するＮＣＩ－Ｈ８２細胞の感受性がより著しく低下するようになる。

【0464】

同時に、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ実験の検測結果は、正常なＮＣＩ－Ｈ８２（Ｖｅｃｔｏｒ）と対照して過剰発現されたＮＮＭＴタンパク質のＮＣＩ－Ｈ８２（ｏｖ－ＮＮＭＴ）のＮＮＭＴタンパク質の含有量を図１２に示す。Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ実験の検測結果は、正常なＮＣＩ－Ｈ８２（ｓｈＶｅｃｔｏｒ）と対照して両種のｓｈＲＮＡで下方調節された腫瘍細胞のＤＮＭＴ１発現のＮＣＩ－Ｈ８２（ｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃１又はｓｈ－ＤＮＭＴ１ ＃２の－ＤＮＭＴ１）のＤＮＭＴ１タンパク質の含有量を図１３に示す。

【0465】

そのため、本実施例は、ＮＣＩ－Ｈ８２細胞のＮＮＭＴタンパク質を過剰発現し、且つＮＣＩ－Ｈ８２細胞のＤＮＭＴ１発現を下方調節することで、腫瘍細胞のＮＮＭＴ発現量がイソキノリン化合物に対するそれの感受性と著しく逆相関するが、ＤＮＭＴ１遺伝子の発現量が酸化的リン酸化経路の阻害剤に対するそれの感受性と著しく正相関することを更に検証する。

【0466】

実施例１４
イソキノリン化合物に敏感である細胞が体内でイソキノリン化合物に対する感受性を依然として維持するかどうかを検証するために、敏感な細胞（ＮＣＩ－Ｈ８２）を接種したマウス皮下腫瘍に対する有効性を塩化ベルベリンで検出する。

【0467】

実験方法及び結果：５ｘ１０^６個のＮＣＩ－Ｈ８２細胞、及びＮＮＭＴタンパク質が過剰発現され且つＤＮＭＴ１が低発現された５ｘ１０^６個のＮＣＩ－Ｈ８２細胞（即ちｏｖ－ＮＮＭＴ／ｓｈ－ＤＮＭＴ１、ＮＮＭＴタンパク質を過剰発現し、ＤＮＭＴ１発現量を下方調節する方法は実施例１３で言及される）をヌードマウスの皮下に接種し、様々な担癌マウスを設ける。各グループの担癌マウスの腹腔内に塩化ベルベリンを１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で注射し、マウスの腫瘍サイズの経時的な変化を測定し且つ実験の終了に各群のマウスの腫瘍を解剖して写真撮影すると、これらの腫瘍に対する塩化ベルベリンの阻害効果を検出する。対照群には、同じ腹腔内注射で溶媒を与える。腫瘍体積算出方法は、腫瘍体積＝１／２の長さ×幅^２である。実験結果を図１４及び図１５に示す。

【0468】

図１４及び図１５からわかったように、塩化ベルベリンは、ＮＣＩ－Ｈ８２の接種されたヌードマウスの皮下腫瘍を著しく抑えるが、ｏｖ－ＮＮＭＴ／ｓｈ－ＤＮＭＴ１の接種されたヌードマウスの皮下腫瘍に対する阻害効果は、ＮＣＩ－Ｈ８２の接種されたヌードマウスの皮下腫瘍に対する阻害効果よりも低下する。これは、塩化ベルベリン等のイソキノリン化合物がＮＮＭＴの低発現された腫瘍に対してより強い阻害効果を有し、つまり、ＮＮＭＴの低発現された腫瘍が塩化ベルベリン等のイソキノリン化合物に対する強い感受性を有し、ＮＮＭＴの高発現された且つＤＮＭＴ１の低発現された腫瘍が塩化ベルベリン等のイソキノリン化合物に対する弱い感受性を有することを示す。

【0469】

本出願に参考文献として引用された上文に記載の全部の文献は、それぞれ参考文献として引用されるものを指す。その上、さらに、当業者が本文を読んだ後、本発明に対して様々な修正又は修正を行われ、且つこれによる等価な形態も本出願の請求項の範囲に入ると理解すべきである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【配列表】

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