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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-01-14
(45)【発行日】2025-01-22
(54)【発明の名称】組換えアデノ随伴ウイルス及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/015 20060101AFI20250115BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20250115BHJP
C07K 14/47 20060101ALI20250115BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20250115BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20250115BHJP
C12N 7/01 20060101ALI20250115BHJP
C12N 15/864 20060101ALI20250115BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20250115BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20250115BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20250115BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20250115BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20250115BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20250115BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20250115BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20250115BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20250115BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20250115BHJP
C12N 15/35 20060101ALI20250115BHJP
【ＦＩ】
C07K14/015 ZNA
C07K19/00
C07K14/47
C12N15/62 Z
C12N15/12
C12N7/01
C12N15/864 100Z
C12N5/10
A61K35/76
A61P25/00
A61P19/08
A61P13/12
A61P21/00
A61P9/00
A61P43/00 105
A61P27/02
A61K48/00
C12N15/35
【請求項の数】
34
(21)【出願番号】P 2021559079
(86)(22)【出願日】2020-04-02
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-06-10
(86)【国際出願番号】 US2020026485
(87)【国際公開番号】W WO2020206189
(87)【国際公開日】2020-10-08
【審査請求日】2023-03-31
(31)【優先権主張番号】62/963,512
(32)【優先日】2020-01-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/924,107
(32)【優先日】2019-10-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/829,608
(32)【優先日】2019-04-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/833,516
(32)【優先日】2019-04-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/839,368
(32)【優先日】2019-04-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】520135611
【氏名又は名称】リジェネックスバイオ インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100103182
【弁理士】
【氏名又は名称】日野 真美
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100196966
【弁理士】
【氏名又は名称】植田 渉
(72)【発明者】
【氏名】ダノス，オリビエ
(72)【発明者】
【氏名】リウ，イェ
(72)【発明者】
【氏名】マーサー，アンドリュー
(72)【発明者】
【氏名】ヨースト，サマンサ
(72)【発明者】
【氏名】カルムチル メレチル，サブハ
(72)【発明者】
【氏名】フィルンバーグ，エラド
【審査官】上條 のぶよ
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１４－５１８６１４（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２００６／１１９１５０（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２０１５／０３８９５８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１９－５２１６９６（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１９／１９５４４９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／１９５４２３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／００６１８２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／０４６０６９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２００８／１４５４００（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２０１２／１０９５７０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２００８／１４５４０１（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２０１７／２１２０１９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１３／１７００７８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１４／１４４２２９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Molecular Therapy: Methods & Clinical Development，2019年03月01日，Vol.12，p.248-265
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
Ｃ０７Ｋ １４／００－１４／８２５
Ｃ０７Ｋ １９／００
Ｃ１２Ｎ ７／０１
Ｃ１２Ｎ ５／１０
Ａ６１Ｋ ３５／７６
Ａ６１Ｋ ４８／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ．配列番号１１７を含むｒＡＡＶ血清型８（ＡＡＶ８）カプシドタンパク質、またはｂ．配列番号１１８を含むｒＡＡＶ血清型９（ＡＡＶ９）カプシドタンパク質、または
ｃ．配列番号１１７または配列番号１１８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むｒＡＡＶカプシドタンパク質であって、前記ＡＡＶカプシドタンパク質は、ＡＡＶタンパク質ではない異種タンパク質からの少なくとも５個かつ最大で１０個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含み、前記ペプチド挿入物は、配列番号１１８のＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸４５１～４６１のうちの１つに対応するアミノ酸残基の直後にあり、前記カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
【請求項2】
前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸Ｓ４５４に対応するアミノ酸残基の直後に存在する、請求項１に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項3】
前記異種タンパク質は、ホーミングドメインである、請求項１または２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項4】
前記ホーミングドメインは、（ｉ）神経組織ホーミングドメイン；
（ｉｉ）軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン；
（ｉｉｉ）骨ホーミングドメイン；
（ｉｖ）腎臓ホーミングドメイン；
（ｖ）筋肉ホーミングドメイン；
（ｖｉ）内皮細胞ホーミングドメイン；
（ｖｉｉ）インテグリン受容体結合ドメイン；
（ｖｉｉｉ）トランスフェリン受容体結合ドメイン；
（ｉｘ）腫瘍細胞標的化ドメイン；または
（ｘ）網膜細胞ホーミングドメイン
である、請求項３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項5】
前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＳＩＴＬＶＫＳＴＱＴＶ（配列番号２１）、ＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）、ＶＶＭＶＧＥＫＰＩＴＩＴＱＨＳＶＥＴＥＧ（配列番号２５）、ＲＳＳＥＥＤＫＳＴＱＴＴ（配列番号２６）、ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）、ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）、ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）、ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）、ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）、ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）、ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）、またはＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）のダイニンペプチドの少なくとも５個の連続アミノ酸を含み、もしくはそれからなり、またはその７個の連続アミノ酸である、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項6】
前記トランスフェリン受容体結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号１７）、ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号１８）、ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）またはＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）の少なくとも５個の連続アミノ酸であり、またはその７個のアミノ酸である、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項7】
前記網膜細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）の少なくとも５個の連続アミノ酸であり、またはその７個のアミノ酸である、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項8】
前記ペプチド挿入物は：
（ａ）（ＤＹＨ１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２Ｄ７のａａ１～１５４２）（配列番号９７）；
（ｂ）（ＤＹＨ２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２２５のａａ１～１７６４）（配列番号９８）；
（ｃ）（ＤＹＨ３＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＤ５７のａａ１～１３９０）（配列番号９９）；
（ｄ）（ＤＹＨ５＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＥ７３のａａ１～１９４１）（配列番号１００）；
（ｅ）（ＤＹＨ６＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｃ０Ｇ６のａａ１～１４３３）（配列番号１０１）；
（ｆ）（ＤＹＨ７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＷＸＸ０のａａ１～１２８９）（配列番号１０２）；
（ｇ）（ＤＹＨ８＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＪＢ１のａａ１～１８０７）（配列番号１０３）；
（ｈ）（ＤＹＨ９＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＮＹＣ９のａａ１～１８３１）（配列番号１０４）；
（ｉ）（ＤＹＨ１０＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＩＶＦ４のａａ１～１７９３）（配列番号１０５）；
（ｊ）（ＤＹＨ１１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＤＴ５のａａ１～１８５４）（配列番号１０６）；
（ｋ）（ＤＹＨ１２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ６ＺＲ０８のａａ１～１２１４）（配列番号１０７）；
（ｌ）（ＤＹＨ１４＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０ＶＤＤ８のａａ１～２００）（配列番号１０８）；または
（ｍ）（ＤＹＨ１７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＵＦＨ２のａａ１～１７９４）（配列番号１０９）
からなる群からの少なくとも５個かつ最大で１０個の連続アミノ酸を含む、請求項１～７のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項9】
前記ペプチド挿入物は、（ａ）～（ｍ）の前記ダイニン重鎖配列のいずれか１つの残基１～２００からの少なくとも５個かつ最大で１０個の連続アミノ酸を含む、請求項８に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項10】
前記ペプチド挿入物は、（ａ）～（ｍ）の前記ダイニン重鎖配列のいずれか１つの残基１～２００からの７個の連続アミノ酸を含む、請求項９に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項11】
前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）である、請求項７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項12】
前記神経組織ホーミングドメインは、自然修復受容体に結合し、かつ赤血球生成性ではないエリスロポエチン（ＥＰＯ）ドメイン、または前記ドメインのコンフォメーションアナログである、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項13】
前記ペプチド挿入物は、ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）からの少なくとも５個かつ最大で１０個の連続アミノ酸である、請求項１２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項14】
前記神経組織ホーミングタンパク質は、ＳＲＬ（セリン－アルギニン－リジン）モチーフを有する脳ホーミングドメインである、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項15】
前記脳ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＳＳＲＬＤＡ（配列番号１０）またはＣＬＳＳＲＬＤＡＣ（配列番号１１）の少なくとも５個の連続アミノ酸を有し、またはアミノ酸配列ＬＳＳＲＬＤＡ（配列番号１０）またはＣＬＳＳＲＬＤＡＣ（配列番号１１）である、請求項１４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項16】
前記骨ホーミングタンパク質は、ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合ドメインである、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項17】
前記ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、配列ＤＤＤＤＤＤＤＤ（配列番号９）の少なくとも６個のアミノ酸残基である、請求項１６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項18】
前記腎臓ホーミングドメインは、アミノ酸配列ＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）を含む、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項19】
前記腎臓ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＰＶＡＳ（配列番号１３）またはＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）である、請求項１８に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項20】
前記筋肉ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４）を含み、またはそれからなる、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項21】
前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＱＡＶＲＴＳＬ（配列番号２３）またはＱＡＶＲＴＳＨ（配列番号２４）を含み、またはそれからなる、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項22】
前記内皮細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＳＩＧＹＰＬＰ（配列番号２８）を含み、またはそれからなる、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項23】
前記インテグリン結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ（配列番号２９）を有する、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項24】
前記腫瘍細胞標的化ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＮＧＲＡＨＡ（配列番号３０）を含み、またはそれからなる、請求項４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項25】
前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸残基４５３及び４５４のうちの１つの直後にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、請求項３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項26】
前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、請求項２５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項27】
請求項１～２６のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項28】
前記ヌクレオチド配列によってコードされる前記カプシドタンパク質を含むＡＡＶベクターを生成するために請求項２７に記載の核酸を発現することが可能なパッケージング細胞。
【請求項29】
請求項１～２６のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶベクター。
【請求項30】
導入遺伝子をさらに含む、請求項２９に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項31】
請求項２９または３０に記載のｒＡＡＶベクター及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【請求項32】
導入遺伝子を細胞に送達する際に使用するための請求項２９または３０に記載のｒＡＡＶベクターであって、前記細胞は、前記ベクターと接触される、前記ｒＡＡＶベクター。
【請求項33】
導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する際に使用するための請求項２９または３０に記載のｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物であって、前記ベクターは、前記対象に投与される、前記医薬組成物。
【請求項34】
前記ｒＡＡＶベクターは、全身的に、静脈内に、髄腔内に、鼻腔内に、腹腔内に、硝子体内に、腰椎穿刺を介してまたは大槽を介して投与される、請求項３３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
０．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含有し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年３月２９日に作成された前記ＡＳＣＩＩは、３８０１３＿０００２Ｐ１＿ＳＬ．ｔｘｔという名前であり、サイズが６３７，８６６バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含有し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年３月２９日に作成された前記ＡＳＣＩＩは、３８０１３＿０００２Ｐ１＿ＳＬ．ｔｘｔという名前であり、サイズが６３７，８６６バイトである。
【0002】
本発明は、所望の特性を付与及び／または向上させるアミノ酸配列を含むように修飾されたカプシドタンパク質を有する組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）に関する。特に、本発明は、挿入物がＡＡＶ粒子上に表面露出されるように、ウイルスカプシドの可変領域ＩＶ（ＶＲ－ＩＶ）の中または近くにまたは、代替的に、可変領域ＶＩＩＩ（ＶＲ－ＶＩＩＩ）の中または近くに挿入された異種タンパク質からのペプチド挿入物を含む修飾されたカプシドタンパク質を提供する。本発明はまた、ｒＡＡＶを標的組織に誘導するカプシドタンパク質、特に、ｒＡＡＶを網膜及び中枢神経系を含む神経組織に標的化し、及び／またはその形質導入を改善するために表面露出可変領域に挿入された、例えば、エリスロポエチンまたはダイニンに由来するペプチドを含むカプシドタンパク質、及び神経障害を処置するための送達治療剤を提供する。
【背景技術】
【0003】
遺伝子送達ベクターとしてのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）の使用は、満たされていない多くの患者ニーズの処置のための有望な手段である。数十種の天然に存在するＡＡＶカプシドが報告されており、霊長類の組織におけるＡＡＶ配列の天然多様性の調査は、複数の分岐群に分布した１００種を超えるバリアントを特定した。ＡＡＶは、パルボウイルス科に属し、比較的小さなゲノム及び単純な遺伝子成分を有する一本鎖ＤＮＡウイルスである。ＡＡＶは、ヘルパーウイルスを伴わずに、潜伏感染を確立する。ＡＡＶゲノムは、通常、ベクター生成のための複製及びパッケージングシグナルとして機能する、末端逆位反復（ＩＴＲ）に挟まれたＲｅｐ遺伝子及びＣａｐ遺伝子を有する。カプシドタンパク質は、ゲノムＤＮＡを保有し、かつＤＮＡを標的細胞に送達するための組織指向性を決定し得るカプシドを形成する。
【0004】
低い病原性及び長期の標的化遺伝子発現の有望性のため、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）は、治療配列が様々なカプシドにパッケージングされた遺伝子移行ベクターとして使用されてきた。そのようなベクターは、前臨床遺伝子療法研究において使用されており、２０種を超える遺伝子療法生成物が現在、臨床開発下にある。組換えＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ９は、所望の神経向性特性を実証し、ＣＮＳ疾患の処置のための組換えＡＡＶ９を使用した臨床試験が進行中である。しかしながら、ヒト対象におけるｒＡＡＶの神経向性特性を向上させる試みは、成功が限られている。
【0005】
例えば、中枢神経系及び眼、特に網膜に関連する障害の治療において治療剤を送達するために血液脳関門の通過において使用するための神経向性特性が向上したｒＡＡＶベクターが依然として必要とされている。治療剤を送達するために組織特異的標的化が向上した及び／または組織特異的形質導入が向上したｒＡＡＶベクターも必要とされている。
【発明の概要】
【0006】
所望の特性、例えば、ｒＡＡＶゲノムの組織標的化、形質導入及び／または組み込みを付与及び／または向上させるアミノ酸配列を含むように修飾されたカプシドタンパク質を有する組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）が提供される。特に、本発明は、挿入物がＡＡＶ粒子上に表面露出されるように、ウイルスカプシドの可変領域ＩＶ（ＶＲ－ＩＶ）の中または近くにまたは可変領域ＶＩＩＩ（ＶＲ－ＶＩＩＩ）の中または近くに挿入された異種タンパク質からの１つ以上のペプチド挿入物を含む修飾されたカプシドタンパク質を提供する。特定の実施形態では、挿入物は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８、図８で付番されている）のアミノ酸４５１～４６１のうちの１つに対応するアミノ酸残基の直後にあり、これには、ＡＶＶ９カプシドのアミノ酸４５４の後（すなわち、アミノ酸４５４及び４５５の間）、または異なるＡＡＶ型のカプシドタンパク質では、ＡＡＶ９のアミノ酸４５４に対応する残基の後が含まれ（例えば、配列番号１１０～１１７または１１９～１２１）、「対応する」は、図８における配列アライメント、または図８に含まれないＡＡＶ型の場合は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質の配列（配列番号１１８）及び当該技術分野でよく知られているであろうＡＡＶカプシドタンパク質の同様のアミノ酸配列アライメントでアライメントされていることを意味する。よって、本発明は、図８で付番されるように、ＡＡＶ９の位置４５４におけるアミノ酸残基に対応するアミノ酸の直後または近くに挿入された異種タンパク質からのペプチド挿入物を含む修飾されたカプシドタンパク質を提供する。追加の特定の実施形態では、挿入物は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８、図８で付番されている）のアミノ酸５８８に対応するアミノ酸残基の直後に（すなわち、アミノ酸５８８及び５８９の間に）、または異なるＡＡＶ型のカプシドタンパク質においてＡＡＶ９のアミノ酸５８８に対応する残基の後にある（例えば、配列番号１１０～１１７または１１９～１２１）。カプシドタンパク質は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質であり得るが、任意のＡＡＶカプシドタンパク質、例えば、ＡＡＶ血清型１（配列番号１１０）；ＡＡＶ血清型２（配列番号１１１）；ＡＡＶ血清型３（配列番号１１２）；ＡＡＶ血清型４（配列番号１１３）；ＡＡＶ血清型５（配列番号１１４）；ＡＡＶ血清型６（配列番号１１５）；ＡＡＶ７カプシド（配列番号１１６）の４５１～４６１；ＡＡＶ８カプシド（配列番号１１７）の４５１～４６１；ＡＡＶ血清型９（配列番号１１８）；ＡＡＶ血清型９ｅ（配列番号１１９）；ＡＡＶ血清型ｒｈ１０（配列番号１２０）；ＡＡＶ血清型ｒｈ２０（配列番号１２１）；及びＡＡＶ血清型ｈｕ．３７（配列番号１２２）、ＡＡＶ血清型ｒｈ３９（配列番号１２４）、及びＡＡＶ血清型ｒｈ７４（配列番号１２３または配列番号１５４）（図８参照）でもあり得る。
【0007】
ｒＡＡＶを標的組織に誘導するカプシドタンパク質、特に、エリスロポエチンまたはダイニン（軸糸または細胞質ダイニンを含む）に由来するペプチドまたはｒＡＡＶゲノムの組織標的化及び／または細胞取り込み及び／または組み込みを促進するペプチドを含むカプシドタンパク質も提供され、そのペプチドは、表面露出可変領域に挿入され、ｒＡＡＶを、中枢神経系を含む神経組織、及び網膜組織に標的化し、神経障害及び眼障害を処置するための治療剤を送達する。これらのペプチドは、有利には、カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子に組み込まれた場合に、挿入されたペプチドが表面露出されるように、カプシドタンパク質のアミノ酸配列に挿入される。これらのペプチドは、ＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８、アライメントについては図８参照）のアミノ酸２６２～２７３；４５１～４６１；または５８５～５９３のアミノ酸のうちの１つの直後、またはそのアミノ酸に対応するアミノ酸のうちの１つの後、またはＶＰ２をコードする最初のコドンに対応するアミノ酸残基、すなわち、ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸１３８及びＡＡＶ９カプシドの位置１３８に対応するアミノ酸（配列番号１１８、アライメントについては図８参照）の直後に挿入される。所定の実施形態では、挿入されるペプチドは、軸糸ダイニン重鎖のペプチドＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）；ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）；ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）；ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）；ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）；ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）；またはＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）のうちの１つの少なくとも４個の連続アミノ酸であり、もしくはその５、６、７個の連続アミノ酸であり、または、代替的に、ＡＲＡ２９０と称されるエリスロポエチンの非線状エピトープであるＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）の５、６、７、８、９、１０または１１個の連続アミノ酸である。
【0008】
ｒＡＡＶゲノムの細胞取り込み及び／または組み込みを促進または増加させることを含む、特定の組織を標的とするペプチドを含む修飾されたカプシドタンパク質であって、ペプチドが、カプシドタンパク質の表面露出可変領域に挿入されたものが提供される。所定の実施形態では、ペプチドは、骨（例えば、ＤＤＤＤＤＤＤＤ（配列番号９）の少なくとも４個の連続アミノ酸または少なくとも７または８個の連続アミノ酸）、脳（ＬＳＳＲＬＤＡ（配列番号１０）の少なくとも４個のアミノ酸もしくは少なくとも７個の連続アミノ酸または７個の連続アミノ酸またはＣＬＳＳＲＬＤＡＣ（配列番号１１）の７、８または９個の連続アミノ酸）、腎臓（ペプチドＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）またはＬＰＶＡＳ（配列番号１３）の少なくとも４または５個の連続アミノ酸またはペプチドＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）またはＬＰＶＡＳ（配列番号１３））、筋肉（ＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４）の少なくとも４、５、６、または７個の連続アミノ酸またはＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４）のペプチド）、網膜細胞（ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）の少なくとも４個の連続アミノ酸または５、６、または７個の連続アミノ酸）の細胞における形質導入またはゲノム組み込みを標的とし、及び／または促進し、またはトランスフェリン受容体（ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号１７）、ＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号１８）、ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）、またはＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）の少なくとも４個の連続アミノ酸または少なくとも７個の連続アミノ酸または７個の連続アミノ酸）に由来する。所定の実施形態では、ペプチドは、ＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）であり、またはＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４）であり、例えば、カプシドＡＡＶ９の位置４５４の後に挿入されたこのペプチドを含有するカプシドは、カプシドを有するｒＡＡＶを、肝臓と比較して優先的に腎臓を標的とする。他の実施形態では、挿入されるペプチドは、少なくとも４個の連続アミノ酸または少なくとも７もしくは８個の連続アミノ酸であり、またはペプチドＳＩＴＬＶＫＳＴＱＴＶ（配列番号２１）またはＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）またはＱＡＶＲＴＳＬ（配列番号２３）またはＱＡＶＲＴＳＨ（配列番号２４）である。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１２個以下の連続アミノ酸である。他の実施形態では、指向性、形質導入を改善し得るまたは免疫中和活性を低下させ得る１つ以上のアミノ酸置換を有する修飾されたカプシドが提供される。そのようなアミノ酸改変には、ＡＡＶ８のＡ２６９Ｓ、及び他のＡＡＶ型カプシドにおける対応する置換、ＡＡＶ９のＳ２６３Ｆ／Ｓ２６９Ｔ／Ａ２７３Ｔ、及び他のＡＡＶ型カプシドにおける対応する置換、ＡＡＶ９のＷ５３０ＲまたはＱ４７４Ａ、及び他のＡＡＶ型カプシドにおける対応する置換が含まれる。これらのアミノ酸置換を有するカプシドは、ＡＡＶ８カプシドの４９８～５００におけるＮＮＮ（アスパラギン）のＡＡＡ（アラニン）での置換、またはＡＡＶ９カプシドの４９６～４９８におけるＮＮＮ（アスパラギン）のＡＡＡ（アラニン）での置換、または他のＡＡＶ型カプシドにおける対応する置換をさらに有し得る。
【0009】
全身性、静脈内、髄腔内、鼻腔内、腹腔内、または硝子体内投与時に、１つ以上の細胞タイプを含む１つ以上の組織においてｒＡＡＶの形質導入を促進する修飾されたカプシドタンパク質であって、カプシドタンパク質は、カプシドの表面露出可変領域（ＶＲ）、例えば、ＶＲ－Ｉ、ＶＲ－ＩＶもしくはＶＲ－ＶＩＩＩに、またはＶＰ２の最初のアミノ酸の後、例えば、ＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８のアミノ酸配列）の残基１３８の直後または別のＡＡＶカプシドの対応する残基の直後に挿入され、または代替的には、本明細書に記載のアミノ酸置換のうちの１つ以上で修飾されたペプチドを含み、少なくとも１つの組織における修飾されたカプシドを有するＡＡＶの形質導入は、対応する非修飾カプシドを有するＡＡＶの形質導入と比較して、前記投与時に増加する、カプシドタンパク質も提供される。所定の実施形態では、形質導入は、ＧＦＰ蛍光などの導入遺伝子の検出によって測定される。
【0010】
所定の実施形態では、治療対象となる導入遺伝子を含むゲノムを有するｒＡＡＶを含む、本明細書に記載の修飾されたカプシドを組み込んだｒＡＡＶが提供される。本明細書に記載のｒＡＡＶを生成するためのパッケージング細胞が提供される。本明細書に記載の修飾されたｒＡＡＶの送達による処置方法、及び本明細書に記載の修飾されたｒＡＡＶを含む薬学的組成物も提供される。本明細書に記載の修飾されたカプシドを有するｒＡＡＶを製造する方法も提供される。
【0011】
本発明は、ヒト軸糸ダイニン重鎖尾部、ＡＲＡ２９０、及び他の組織標的化またはホーミングペプチドに基づいて設計されたペプチド挿入物で修飾されたｒＡＡＶ９カプシド及びアミノ酸置換で修飾されたカプシドの構築を以下に記載する例によって説明される。
【0012】
３．１．実施形態
１．カプシドタンパク質ではない異種タンパク質からの少なくとも４個かつ最大で２０個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、前記ペプチド挿入物は、図８のＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８）のアミノ酸４５１～４６１のうちの１つに対応するアミノ酸残基の直後にあり、前記カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
１．カプシドタンパク質ではない異種タンパク質からの少なくとも４個かつ最大で２０個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、前記ペプチド挿入物は、図８のＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８）のアミノ酸４５１～４６１のうちの１つに対応するアミノ酸残基の直後にあり、前記カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
【0013】
２．前記カプシドタンパク質は、ＡＡＶ血清型１（ＡＡＶ１）、血清型２（ＡＡＶ２）、血清型３（ＡＡＶ３）、血清型４（ＡＡＶ４）、血清型５（ＡＡＶ５）、血清型６（ＡＡＶ６）、血清型７（ＡＡＶ７）、血清型８（ＡＡＶ８）、血清型ｒｈ８（ＡＡＶｒｈ８）、血清型９（ＡＡＶ９）、血清型９ｅ（ＡＡＶ９ｅ）、血清型ｒｈ１０（ＡＡＶｒｈ１０）、血清型ｒｈ２０（ＡＡＶｒｈ２０）、血清型ｒｈ３９（ＡＡＶｒｈ３９）、血清型ｈｕ．３７（ＡＡＶｈｕ．３７）または血清型ｒｈ７４（ＡＡＶｒｈ７４）のうちの少なくとも１つのＡＡＶ血清型からのものである、実施形態１に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0014】
３．前記ペプチド挿入物は、図８に示される配列における
ＡＡＶ１カプシドアミノ酸配列（配列番号１１０）の４５０～４５９；
ＡＡＶ２カプシドアミノ酸配列（配列番号１１１）の４４９～４５８；
ＡＡＶ３カプシドアミノ酸配列（配列番号１１２）の４４９～４５９；
ＡＡＶ４カプシドアミノ酸配列（配列番号１１３）の４４３～４５３；
ＡＡＶ５カプシドアミノ酸配列（配列番号１１４）の４４２～４４５；
ＡＡＶ６カプシドアミノ酸配列（配列番号１１５）の４５０～４５９；
ＡＡＶ７カプシドアミノ酸配列（配列番号１１６）の４５１～４６１；
ＡＡＶ８カプシドアミノ酸配列（配列番号１１７）の４５１～４６１；
ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列（配列番号１１８）の４５１～４６１；
ＡＡＶ９ｅカプシドアミノ酸配列（配列番号１１９）の４５２～４６１；
ＡＡＶｒｈ１０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２０）の４５２～４６１；
ＡＡＶｒｈ２０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２１）の４５２～４６１；
ＡＡＶｈｕ．３７カプシドアミノ酸配列（配列番号１２２）の４５２～４６１；
ＡＡＶｒｈ７４カプシドアミノ酸配列（配列番号１２３または配列番号１５４）の４５２～４６１；または
ＡＡＶｒｈ３９カプシドアミノ酸配列（配列番号１２４）の４５２～４６１
の中のアミノ酸残基のうちの１つの直後に存在する、実施形態２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
ＡＡＶ１カプシドアミノ酸配列（配列番号１１０）の４５０～４５９；
ＡＡＶ２カプシドアミノ酸配列（配列番号１１１）の４４９～４５８；
ＡＡＶ３カプシドアミノ酸配列（配列番号１１２）の４４９～４５９；
ＡＡＶ４カプシドアミノ酸配列（配列番号１１３）の４４３～４５３；
ＡＡＶ５カプシドアミノ酸配列（配列番号１１４）の４４２～４４５；
ＡＡＶ６カプシドアミノ酸配列（配列番号１１５）の４５０～４５９；
ＡＡＶ７カプシドアミノ酸配列（配列番号１１６）の４５１～４６１；
ＡＡＶ８カプシドアミノ酸配列（配列番号１１７）の４５１～４６１；
ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列（配列番号１１８）の４５１～４６１；
ＡＡＶ９ｅカプシドアミノ酸配列（配列番号１１９）の４５２～４６１；
ＡＡＶｒｈ１０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２０）の４５２～４６１；
ＡＡＶｒｈ２０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２１）の４５２～４６１；
ＡＡＶｈｕ．３７カプシドアミノ酸配列（配列番号１２２）の４５２～４６１；
ＡＡＶｒｈ７４カプシドアミノ酸配列（配列番号１２３または配列番号１５４）の４５２～４６１；または
ＡＡＶｒｈ３９カプシドアミノ酸配列（配列番号１２４）の４５２～４６１
の中のアミノ酸残基のうちの１つの直後に存在する、実施形態２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0015】
４．前記ペプチド挿入物は、図８においてアライメントされ、そのアミノ酸付番に従って、ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸残基Ｉ４５１、Ｎ４５２、Ｇ４５３、Ｓ４５４、Ｇ４５５、Ｑ４５６、Ｎ４５７、Ｑ４５８、Ｑ４５９、Ｔ４６０、またはＬ４６１のうちの１つの直後、またはＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８）のアミノ酸Ｉ４５１、Ｎ４５２、Ｇ４５３、Ｓ４５４、Ｇ４５５、Ｑ４５６、Ｎ４５７、Ｑ４５８、Ｑ４５９、Ｔ４６０、またはＬ４６１に対応するＡＡＶカプシドにおけるアミノ酸残基の直後に存在する、実施形態３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0016】
５．前記異種タンパク質は、ホーミングドメイン、中和抗体エピトープ、または精製タグである、任意の先行する実施形態のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0017】
６．前記ホーミングドメインは、
神経組織ホーミングドメイン；
軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン；
骨ホーミングドメイン；
腎臓ホーミングドメイン；
筋肉ホーミングドメイン；
内皮細胞ホーミングドメイン；
インテグリン受容体結合ドメイン；
トランスフェリン受容体結合ドメイン；
腫瘍細胞標的化ドメイン；または
網膜細胞ホーミングドメイン
である、実施形態５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
神経組織ホーミングドメイン；
軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン；
骨ホーミングドメイン；
腎臓ホーミングドメイン；
筋肉ホーミングドメイン；
内皮細胞ホーミングドメイン；
インテグリン受容体結合ドメイン；
トランスフェリン受容体結合ドメイン；
腫瘍細胞標的化ドメイン；または
網膜細胞ホーミングドメイン
である、実施形態５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0018】
７．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＳＩＴＬＶＫＳＴＱＴＶ（配列番号２１）、ＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）、ＶＶＭＶＧＥＫＰＩＴＩＴＱＨＳＶＥＴＥＧ（配列番号２５）、ＲＳＳＥＥＤＫＳＴＱＴＴ（配列番号２６）、ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）、ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）、ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）、ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）、ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）、ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）、ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）、ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）、またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）の少なくとも４個または少なくとも７個の連続アミノ酸のダイニンペプチドまたはダイニンホーミングペプチドを含み、またはそれからなる、実施形態６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0019】
８．前記トランスフェリン受容体結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）またはＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）の少なくとも４個または少なくとも７個の連続アミノ酸を含む、実施形態６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0020】
９．前記網膜細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、実施形態６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0021】
１０．前記ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質または前記ＡＡＶ９カプシドタンパク質に存在する、実施形態９に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0022】
１１．前記ペプチド挿入物は、図８においてアライメントされ、アミノ酸付番に従って、ＡＡＶ９カプシドタンパク質において前記ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８）のアミノ酸Ｓ４５４の後にまたはＡＡＶカプシドタンパク質において前記ＡＡＶ９カプシドタンパク質のＳ４５４に対応する残基の後に存在する、先行実施形態のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0023】
１２．前記カプシドタンパク質は、前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質ではない、上記の実施形態のいずれかのｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0024】
１３．上記の実施形態のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質をコードする、またはそれと少なくとも８０％の同一性を共有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【0025】
１４．前記ヌクレオチド配列によってコードされる前記カプシドタンパク質を含むＡＡＶベクターを生成するために実施形態１３に記載の核酸を発現することが可能なパッケージング細胞。
【0026】
１５．実施形態１～１２のいずれかに記載のカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶベクター。
【0027】
１６．導入遺伝子をさらに含む、実施形態１５に記載のｒＡＡＶベクター。
【0028】
１７．実施形態１５または１６に記載のｒＡＡＶベクター及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【0029】
１８．導入遺伝子を細胞に送達する方法であって、前記方法は、前記細胞を実施形態１６に記載のｒＡＡＶベクターと接触させることを含み、前記導入遺伝子は、前記細胞に送達される、前記方法。
【0030】
１９．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織、または標的細胞もしくはその細胞マトリックスに送達する方法であって、前記方法は、前記対象に実施形態１６に記載のｒＡＡＶベクターを投与することを含み、前記導入遺伝子は、前記対象の前記標的組織に送達される、前記方法。
【0031】
２０．導入遺伝子を細胞に送達する際に使用するための薬学的組成物であって、前記組成物は、実施形態１６に記載のｒＡＡＶベクターを含み、前記細胞は、前記ベクターと接触される、前記薬学的組成物。
【0032】
２１．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する際に使用するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、実施形態１６に記載のｒＡＡＶベクターを含み、前記ペプチド挿入物は、ホーミングペプチドであり、前記ベクターは、前記対象に投与される、前記薬学的組成物。
【0033】
２２．前記ｒＡＡＶベクターは、全身的に、静脈内に、髄腔内に、鼻腔内に、腹腔内に、または硝子体内に投与される、実施形態１８～２１に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
【0034】
２３．前記標的組織、または標的細胞もしくはその細胞マトリックスは、
神経組織であり、前記ベクターは、前記神経組織ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
骨であり、前記ベクターは、前記骨ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
腎臓であり、前記ベクターは、前記腎臓ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
筋肉であり、前記ベクターは、前記筋肉ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
内皮細胞であり、前記ベクターは、前記内皮細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
インテグリン受容体を発現する細胞であり、前記ベクターは、前記インテグリン受容体結合ドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
トランスフェリン受容体を発現する腫瘍細胞であり、前記ベクターは、前記トランスフェリン受容体結合ドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
腫瘍細胞であり、前記ベクターは、前記腫瘍細胞標的化ドメインからのペプチド挿入物を含み、または
網膜細胞であり、前記ベクターは、前記網膜細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物
を含む、実施形態１８～２１に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
神経組織であり、前記ベクターは、前記神経組織ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
骨であり、前記ベクターは、前記骨ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
腎臓であり、前記ベクターは、前記腎臓ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
筋肉であり、前記ベクターは、前記筋肉ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
内皮細胞であり、前記ベクターは、前記内皮細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
インテグリン受容体を発現する細胞であり、前記ベクターは、前記インテグリン受容体結合ドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
トランスフェリン受容体を発現する腫瘍細胞であり、前記ベクターは、前記トランスフェリン受容体結合ドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
腫瘍細胞であり、前記ベクターは、前記腫瘍細胞標的化ドメインからのペプチド挿入物を含み、または
網膜細胞であり、前記ベクターは、前記網膜細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物
を含む、実施形態１８～２１に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
【0035】
２４．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、前記カプシドタンパク質は、
神経組織ホーミングタンパク質またはドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）を含まない）；
軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン；
骨ホーミングドメイン；
腎臓ホーミングドメイン；
筋肉ホーミングドメイン；
内皮細胞ホーミングドメイン；
インテグリン受容体結合ドメイン；
トランスフェリン受容体結合ドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）もＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）も含まない）；
腫瘍細胞標的化ドメイン；及び
網膜細胞ホーミングドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）もＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）も含まない）
からなる群から選択される異種タンパク質またはドメインからの少なくとも４個かつ最大で２０個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含み、
前記カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
神経組織ホーミングタンパク質またはドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）を含まない）；
軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン；
骨ホーミングドメイン；
腎臓ホーミングドメイン；
筋肉ホーミングドメイン；
内皮細胞ホーミングドメイン；
インテグリン受容体結合ドメイン；
トランスフェリン受容体結合ドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）もＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）も含まない）；
腫瘍細胞標的化ドメイン；及び
網膜細胞ホーミングドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）もＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）も含まない）
からなる群から選択される異種タンパク質またはドメインからの少なくとも４個かつ最大で２０個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含み、
前記カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
【0036】
２５．前記神経組織ホーミングタンパク質または網膜細胞ホーミングドメインは、ヒト軸糸ダイニン（ＨＡＤ）重鎖尾部である、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0037】
２６．前記ペプチド挿入物は、前記ＨＡＤ重鎖尾部の二量化ドメインからの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸を含む、実施形態２５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0038】
２７．前記ペプチド挿入物は、（図７Ａ～７Ｍに示される）：
（ＤＹＨ１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２Ｄ７のａａ１～１５４２）（配列番号９７）；
（ＤＹＨ２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２２５のａａ１～１７６４）（配列番号９８）；
（ＤＹＨ３＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＤ５７のａａ１～１３９０）（配列番号９９）；
（ＤＹＨ５＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＥ７３のａａ１～１９４１）（配列番号１００）；
（ＤＹＨ６＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｃ０Ｇ６のａａ１～１４３３）（配列番号１０１）；
（ＤＹＨ７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＷＸＸ０のａａ１～１２８９）（配列番号１０２）；
（ＤＹＨ８＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＪＢ１のａａ１～１８０７）（配列番号１０３）；
（ＤＹＨ９＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＮＹＣ９のａａ１～１８３１）（配列番号１０４）；
（ＤＹＨ１０＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＩＶＦ４のａａ１～１７９３）（配列番号１０５）；
（ＤＹＨ１１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＤＴ５のａａ１～１８５４）（配列番号１０６）；
（ＤＹＨ１２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ６ＺＲ０８のａａ１～１２１４）（配列番号１０７）；
（ＤＹＨ１４＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０ＶＤＤ８のａａ１～２００）（配列番号１０８）；または
（ＤＹＨ１７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＵＦＨ２のａａ１～１７９４）（配列番号１０９）
からなる群からの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸を含む、実施形態２６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
（ＤＹＨ１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２Ｄ７のａａ１～１５４２）（配列番号９７）；
（ＤＹＨ２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２２５のａａ１～１７６４）（配列番号９８）；
（ＤＹＨ３＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＤ５７のａａ１～１３９０）（配列番号９９）；
（ＤＹＨ５＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＥ７３のａａ１～１９４１）（配列番号１００）；
（ＤＹＨ６＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｃ０Ｇ６のａａ１～１４３３）（配列番号１０１）；
（ＤＹＨ７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＷＸＸ０のａａ１～１２８９）（配列番号１０２）；
（ＤＹＨ８＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＪＢ１のａａ１～１８０７）（配列番号１０３）；
（ＤＹＨ９＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＮＹＣ９のａａ１～１８３１）（配列番号１０４）；
（ＤＹＨ１０＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＩＶＦ４のａａ１～１７９３）（配列番号１０５）；
（ＤＹＨ１１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＤＴ５のａａ１～１８５４）（配列番号１０６）；
（ＤＹＨ１２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ６ＺＲ０８のａａ１～１２１４）（配列番号１０７）；
（ＤＹＨ１４＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０ＶＤＤ８のａａ１～２００）（配列番号１０８）；または
（ＤＹＨ１７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＵＦＨ２のａａ１～１７９４）（配列番号１０９）
からなる群からの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸を含む、実施形態２６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0039】
２８．前記ペプチド挿入物は、軸糸ダイニン重鎖配列（図７Ａ～７Ｍ）のいずれか１つの残基１～２００からの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸を含む、実施形態２７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0040】
２９．前記ペプチド挿入物は、図７Ａ～７Ｍの前記軸糸ダイニン重鎖配列のいずれか１つからの７個の連続アミノ酸を含む、実施形態２７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0041】
３０．前記ペプチド挿入物は、前記ダイニン重鎖配列（図７Ａ～７Ｍ）のいずれか１つの残基１～２００からの７個の連続アミノ酸を含む、実施形態２８に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0042】
３１．前記ペプチド挿入物は、
ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）；
ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）；
ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）；
ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）；
ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）；
ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）；または
ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）
のうちの１つの少なくとも４個の連続アミノ酸を含む、実施形態２５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）；
ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）；
ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）；
ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）；
ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）；
ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）；または
ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）
のうちの１つの少なくとも４個の連続アミノ酸を含む、実施形態２５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0043】
３２．前記ペプチド挿入物は、
ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）；
ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）；
ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）；
ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）；
ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）；
ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）；または
ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）
のうちの１つからのペプチドからなる、実施形態２５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）；
ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）；
ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）；
ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）；
ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）；
ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）；または
ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）
のうちの１つからのペプチドからなる、実施形態２５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0044】
３３．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含む、実施形態３２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0045】
３４．前記神経組織ホーミングタンパク質は、マウス軸糸ダイニン（ＭＡＤ）重鎖尾部である、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0046】
３５．前記神経組織ホーミングドメインは、自然修復受容体に結合し、かつ赤血球生成性ではないＥＰＯ（エリスロポエチン）ドメイン、または前記ドメインのコンフォメーションアナログである、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0047】
３６．前記ペプチド挿入物は、ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）からの少なくとも４個かつ最大で１１個の連続アミノ酸を含む、実施形態３５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0048】
３７．前記ペプチド挿入物は、ＡＲＡ２９０配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）である、実施形態３６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0049】
３８．前記神経組織ホーミングタンパク質は、ＳＲＬ（セリン－アルギニン－リジン）モチーフを有する脳ホーミングドメインである、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0050】
３９．前記脳ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＳＳＲＬＤＡ（配列番号１０）またはＣＬＳＳＲＬＤＡＣ（配列番号１１）の少なくとも７個の連続アミノ酸を含む、実施形態３８に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0051】
４０．前記軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメインは、ダイニン軽鎖ホーミングドメインである、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0052】
４１．前記ダイニン軽鎖ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、ＳＩＴＬＶＫＳＴＱＴＶ（配列番号２１）、ＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）、ＶＶＭＶＧＥＫＰＩＴＩＴＱＨＳＶＥＴＥＧ（配列番号２５）、またはＲＳＳＥＥＤＫＳＴＱＴＴ（配列番号２６）のうちの１つである、実施形態４０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0053】
４２．前記骨ホーミングタンパク質は、ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合ドメインである、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0054】
４３．前記ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、配列ＤＤＤＤＤＤＤＤ（配列番号９）の少なくとも６個のアミノ酸残基である、実施形態４２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0055】
４４．前記腎臓ホーミングドメインは、アミノ酸配列ＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）である、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0056】
４５．前記腎臓ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＰＶＡＳ（配列番号１３）またはＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）である、実施形態４４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0057】
４６．前記筋肉ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４）である、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0058】
４７．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＱＡＶＲＴＳＬ（配列番号２３）またはＱＡＶＲＴＳＨ（配列番号２４）である、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0059】
４８．前記内皮細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＳＩＧＹＰＬＰ（配列番号２８）である、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0060】
４９．前記インテグリン結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ（配列番号２９）を有する、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0061】
５０．前記トランスフェリン受容体結合ドメインは、トランスフェリンドメイン、もしくはそのコンフォメーションアナログ、または鉄模倣体である、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0062】
５１．前記トランスフェリンドメインからの前記ペプチド挿入物は、配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号１７）またはＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号１８）からの少なくとも４個の連続アミノ酸かつ最大で１２個の連続アミノ酸を含む、実施形態５０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0063】
５２．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号１７）またはＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号１８）である、実施形態５１に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0064】
５３．前記腫瘍細胞標的化ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＮＧＲＡＨＡ（配列番号３０）である、実施形態２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0065】
５４．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸残基（図８に示される）：
ＡＡＶ１カプシドアミノ酸配列（配列番号１１０）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；または５８５～５９３；
ＡＡＶ２カプシドアミノ酸配列（配列番号１１１）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５８；または５８４～５９２；
ＡＡＶ３カプシドアミノ酸配列（配列番号１１２）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５９；または５８５～５９３；
ＡＡＶ４カプシドアミノ酸配列（配列番号１１３）の１３７；２５６～２６２；４４３～４５３；または５８３～５９１；
ＡＡＶ５カプシドアミノ酸配列（配列番号１１４）の１３７；２５２～２６２；４４２～４４５；または５７４～５８２；
ＡＡＶ６カプシドアミノ酸配列（配列番号１１５）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；５８５～５９３；
ＡＡＶ７カプシドアミノ酸配列（配列番号１１６）の１３８；２６３～２７３；４５１～４６１；５８６～５９４；
ＡＡＶ８カプシドアミノ酸配列（配列番号１１７）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列（配列番号１１８）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；
ＡＡＶ９ｅカプシドアミノ酸配列（配列番号１１９）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；
ＡＡＶｒｈ１０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２０）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
ＡＡＶｒｈ２０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２１）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
ＡＡＶｈｕ３７カプシドアミノ酸配列（配列番号１２２）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
ＡＡＶｒｈ７４カプシドアミノ酸配列（配列番号１２３または配列番号１５４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；または
ＡＡＶｒｈ３９カプシドアミノ酸配列（配列番号１２４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５
のうちの１つの直後に存在する、実施形態２４～５３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
ＡＡＶ１カプシドアミノ酸配列（配列番号１１０）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；または５８５～５９３；
ＡＡＶ２カプシドアミノ酸配列（配列番号１１１）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５８；または５８４～５９２；
ＡＡＶ３カプシドアミノ酸配列（配列番号１１２）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５９；または５８５～５９３；
ＡＡＶ４カプシドアミノ酸配列（配列番号１１３）の１３７；２５６～２６２；４４３～４５３；または５８３～５９１；
ＡＡＶ５カプシドアミノ酸配列（配列番号１１４）の１３７；２５２～２６２；４４２～４４５；または５７４～５８２；
ＡＡＶ６カプシドアミノ酸配列（配列番号１１５）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；５８５～５９３；
ＡＡＶ７カプシドアミノ酸配列（配列番号１１６）の１３８；２６３～２７３；４５１～４６１；５８６～５９４；
ＡＡＶ８カプシドアミノ酸配列（配列番号１１７）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列（配列番号１１８）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；
ＡＡＶ９ｅカプシドアミノ酸配列（配列番号１１９）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；
ＡＡＶｒｈ１０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２０）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
ＡＡＶｒｈ２０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２１）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
ＡＡＶｈｕ３７カプシドアミノ酸配列（配列番号１２２）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
ＡＡＶｒｈ７４カプシドアミノ酸配列（配列番号１２３または配列番号１５４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；または
ＡＡＶｒｈ３９カプシドアミノ酸配列（配列番号１２４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５
のうちの１つの直後に存在する、実施形態２４～５３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0066】
５５．前記ＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８）のアミノ酸残基５８８～５８９の間にまたは図８においてアライメントされているように前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸残基５８８～５８９の間に対応して挿入されたアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含む組換えＡＡＶカプシドタンパク質。
【0067】
５６．前記ＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８）のアミノ酸Ｉ４５１～Ｌ４６１またはＳ２６８のうちの１つの直後にまたは図８においてアライメントされているように前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸Ｉ４５１～Ｌ４６１またはＳ２６８のうちの１つに対応して挿入されたアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含む組換えＡＡＶカプシドタンパク質。
【0068】
５７．前記ＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８）のアミノ酸残基５８８～５８９の間にまたは図８においてアライメントされているように前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸残基５８８～５８９の間に対応して挿入されたアミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）を含む組換えＡＡＶカプシドタンパク質。
【0069】
５８．前記ＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８）のアミノ酸Ｉ４５１～Ｌ４６１またはＳ２６８のうちの１つの直後にまたは図８においてアライメントされているように前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸Ｉ４５１～Ｌ４６１またはＳ２６８のうちの１つに対応して挿入されたアミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）を含む組換えＡＡＶカプシドタンパク質。
【0070】
５９．前記ペプチド挿入物は、図８においてアライメントされているように、ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８）のアミノ酸４５１～４６１、Ｓ２６８またはＱ５８８のうちの１つに対応するアミノ酸残基の直後に存在する、実施形態２４～５４のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0071】
６０．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８）のアミノ酸４５１～４６１のうちの１つの直後に存在する、実施形態５９に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0072】
６１．前記ペプチド挿入物は、第８可変領域（ＶＲ－ＶＩＩＩ）において存在する、実施形態２４～５３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0073】
６２．前記カプシドタンパク質は、前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質ではない、実施形態２４～６１のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0074】
６３．実施形態２４～６２のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質をコードする、またはそれと少なくとも８０％の同一性を共有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【0075】
６４．前記ヌクレオチド配列によってコードされる前記カプシドタンパク質を含むＡＡＶベクターを生成するために実施形態６３に記載の核酸を発現することが可能なパッケージング細胞。
【0076】
６５．実施形態２４～６２のいずれかに記載のカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶベクター。
【0077】
６６．導入遺伝子をさらに含む、実施形態６５に記載のｒＡＡＶベクター。
【0078】
６７．実施形態６５または６６に記載のｒＡＡＶベクター及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【0079】
６８．導入遺伝子を細胞に送達する方法であって、前記方法は、前記細胞を実施形態６６に記載のｒＡＡＶベクターと接触させることを含み、前記導入遺伝子は、前記細胞に送達される、前記方法。
【0080】
６９．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する方法であって、前記方法は、実施形態６６に記載のｒＡＡＶベクターを前記対象に投与することを含み、前記導入遺伝子は、前記対象に送達される、前記方法。
【0081】
７０．導入遺伝子に細胞に送達する際に使用するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、実施形態６６に記載のｒＡＡＶベクターを含み、前記導入遺伝子は、前記細胞に送達される、前記薬学的組成物。
【0082】
７１．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する際に使用するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、実施形態６６に記載のｒＡＡＶベクターを含み、導入遺伝子は、前記標的組織に送達される、前記薬学的組成物。
【0083】
７２．前記ｒＡＡＶベクターは、全身的に、静脈内に、髄腔内に、鼻腔内に、腹腔内に、または硝子体内に投与される、実施形態６８～７１に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
【0084】
７３．前記ベクターは、腰椎穿刺を介してまたは大槽を介して投与される、実施形態６８～７１に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
【0085】
７４．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、前記カプシドタンパク質は、ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）、ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）、ＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）、またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）のうちの１つからの少なくとも４個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含み、
【0086】
前記ペプチド挿入物は、図８においてアライメントされているように、ＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸２６８、４５４または５８８に対応するアミノ酸残基の直後に存在する、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
【0087】
７５．前記カプシドタンパク質は、前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質ではない、実施形態７４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0088】
７６．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８）のアミノ酸残基４５４及び４５５の間にアミノ酸配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）を含む、実施形態７４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0089】
７７．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８）のアミノ酸残基２６２～２７３のうちの１つの直後にアミノ酸配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）を含む、実施形態７４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0090】
７８．前記ペプチド挿入物は、ＡＡＶ８カプシドタンパク質（配列番号１１７）のアミノ酸残基４５４～４５５の間にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、実施形態７４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0091】
７９．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、実施形態７８に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0092】
８０．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質（配列番号１１７）のアミノ酸残基５９０～５９１の間に挿入されたアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、実施形態７４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0093】
８１．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、実施形態８０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0094】
８２．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質（配列番号１１７）のアミノ酸残基２６３～２７４の直後にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、実施形態７４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0095】
８３．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、実施形態８２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
【0096】
８４．実施形態７４～８３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質をコードする、またはそれと少なくとも８０％の同一性を共有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【0097】
８５．前記ヌクレオチド配列によってコードされる前記カプシドタンパク質を含むＡＡＶベクターを生成するために実施形態８４に記載の核酸を発現することが可能なパッケージング細胞。
【0098】
８６．実施形態７４～８３のいずれかに記載のカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶベクター。
【0099】
８７．導入遺伝子をさらに含む、実施形態８６に記載のｒＡＡＶベクター。
【0100】
８８．実施形態８６または８７に記載のｒＡＡＶベクター及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【0101】
８９．導入遺伝子を細胞に送達する方法であって、前記方法は、前記細胞を実施形態８６または８７に記載のｒＡＡＶベクターと接触させることを含み、前記導入遺伝子は、前記細胞に送達される、前記方法。
【0102】
９０．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する方法であって、前記方法は、実施形態８６または８７に記載のｒＡＡＶベクターを前記対象に投与することを含み、前記導入遺伝子は、前記標的組織に送達される、前記方法。
【0103】
９１．導入遺伝子に細胞に送達する際に使用するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、実施形態８６または８７に記載のｒＡＡＶベクターを含み、前記導入遺伝子は、前記細胞に送達される、前記薬学的組成物。
【0104】
９２．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する際に使用するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、実施形態８６または８７に記載のｒＡＡＶベクターを含み、前記導入遺伝子は、前記標的組織に送達される、前記薬学的組成物。
【0105】
９３．前記標的組織は、網膜細胞であり、前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、実施形態８９～９２に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
【0106】
９４．前記ｒＡＡＶベクターは、全身的に、静脈内に、髄腔内に、鼻腔内に、腹腔内に、または硝子体内に投与される、実施形態８９～９３に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
【0107】
９５．前記ベクターは、腰椎穿刺を介してまたは大槽を介して投与される、実施形態８９～９３に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
【0108】
９６．組換えＡＡＶカプシドタンパク質であって、野生型または非修飾カプシドタンパク質に対する１つ以上のアミノ酸置換であって、前記ｒＡＡＶカプシドタンパク質は、Ａ２６９Ｓアミノ酸置換を有するＡＡＶ８カプシドタンパク質（配列番号１１７）であり、またはＳ２６３Ｇ／Ｓ２６９Ｒ／Ａ２７３Ｔ置換、またはＷ５０３ＲもしくはＱ４７４Ａ置換を有するＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８）である、前記１つ以上のアミノ酸置換、または別のＡＡＶ型カプシドのカプシドタンパク質における対応する置換を含む、前記組換えＡＡＶカプシドタンパク質。
【0109】
９７．ＡＡＶ８カプシドタンパク質についての４９８－ＮＮＮ／ＡＡＡ－５００もしくはＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８）についての４９６－ＮＮＮ／ＡＡＡ－４９８、または別のＡＡＶ型カプシドのカプシドタンパク質における対応する置換をさらに含む、実施形態９６に記載の組換えＡＡＶカプシドタンパク質。
【0110】
９８．実施形態９６または９７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質をコードする、またはそれと少なくとも８０％の同一性を共有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【0111】
９９．前記ヌクレオチド配列によってコードされる前記カプシドタンパク質を含むＡＡＶベクターを生成するために実施形態９８に記載の核酸を発現することが可能なパッケージング細胞。
【0112】
１００．実施形態９６または９７に記載のいずれかのカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶベクター。
【0113】
１０１．導入遺伝子をさらに含む、実施形態１００に記載のｒＡＡＶベクター。
【0114】
１０２．実施形態１００または１０１に記載のｒＡＡＶベクター及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【0115】
１０３．導入遺伝子を細胞に送達する方法であって、前記方法は、前記細胞を実施形態１０１に記載のｒＡＡＶベクターと接触させることを含み、前記導入遺伝子は、前記細胞に送達される、前記方法。
【0116】
１０４．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する方法であって、前記方法は、実施形態１０１に記載のｒＡＡＶベクターを前記対象に投与することを含み、前記導入遺伝子は、前記標的組織に送達される、前記方法。
【0117】
１０５．導入遺伝子を細胞に送達する際に使用するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、実施形態１０１に記載のｒＡＡＶベクターを含み、前記導入遺伝子は、前記細胞に送達される、前記薬学的組成物。
【0118】
１０６．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する際に使用するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、実施形態１０１に記載のｒＡＡＶベクターを含み、前記導入遺伝子は、前記標的組織に送達される、前記薬学的組成物。
【0119】
１０７．前記ｒＡＡＶベクターは、全身的に、静脈内に、髄腔内に、鼻腔内に、腹腔内に、または硝子体内に投与される、実施形態１０２～１０６に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
【0120】
１０８．前記ベクターは、腰椎穿刺を介してまたは大槽を介して投与される、実施形態１０２～１０６に記載の方法、または使用のための薬学的組成物。
【図面の簡単な説明】
【0121】
【図1】他のＡＡＶの領域に対応する残基Ｌ４４７～Ｒ４７６（残基４５１～４５９は括弧で示されている）からのアデノ随伴ウイルス９型のＶＲ－ＩＶループ（ＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶ）を含むカプシドアミノ酸配列の配列比較を示している。図は、配列番号８７～９２、８８、及び９３～９６を、それぞれ、出現の順で開示している。
【図2】カプシド可変領域ＶＲ－ＩＶ、ＶＲ－Ｖ及びＶＲ－ＶＩＩＩを示す、ＡＡＶカプシド構造のタンパク質モデルを示している。ボックスは、モデルにおいて表されるように、表面露出アミノ酸を提供するＶＲ－ＩＶのループ領域を強調している。
【図3】野生型ＡＡＶ９及び８種の候補改変ｒＡＡＶ９ベクター（１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、及び１０９７）のｍＬ当たりのゲノムコピー（ＧＣ／ｍＬ）の観点からの高パッケージング効率（力価）を示しており、候補ベクターは、それぞれ、残基Ｉ４５１～Ｑ４５８からのＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶの中の異なる部位の直後にＦＬＡＧ挿入物を各々含有する。すべてのベクターを、１０ｍＬの培養物中でルシフェラーゼ導入遺伝子と共にパッケージングした；エラーバーは、平均の標準誤差を表す。
【図4】抗ＦＬＡＧ樹脂への結合によるパッケージングされたベクターの免疫沈降によって確認された、８種の候補改変ｒＡＡＶ９ベクター（１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、及び１０９７）の各々におけるｌ ＶＲ－ＩＶループＦＬＡＧ挿入物の表面露出を実証している。
【図5】野生型ＡＡＶ９（９－ｌｕｃ）、または８種の候補改変（ＦＬＡＧペプチドが挿入されている）ｒＡＡＶ９ベクター（１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、及び１０９７）の各々のいずれかにパッケージングされた、（導入遺伝子として）ルシフェラーゼ遺伝子を保有するカプシドベクターで形質導入されたＬｅｃ２細胞における形質導入効率を示しており；形質導入活性は、９－ｌｕｃの活性を１００％として採用してルシフェラーゼ活性パーセントとして（Ａ）、またはタンパク質のマイクログラム当たりの相対光単位（ＲＬＵ）として（Ｂ）表されている。
【図6A】様々なペプチドの長さ及び組成のＡＡＶ９のＳ４５４の直後の挿入物が、パッケージング細胞におけるＡＡＶ粒子の生成効率に影響を及ぼし得ることを図示している棒グラフを示している。様々な組成及び長さの１０種のペプチドを、ＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶの中のＳ４５４の後に挿入した。トランスフェクションから５日後にトランスフェクションされた浮遊ＨＥＫ２９３細胞の収穫された上清についてｑＰＣＲを実施した。棒グラフにおいて示された結果は、全体収率（力価）によって示されているように、挿入物の特質が、ＨＥＫ２９３細胞によってＡＡＶ粒子が生成され、分泌される能力に影響を及ぼすことを実証している。（エラーバーは、Ｙ軸に括弧で記されているペプチドの平均長さの標準誤差を表す）。
【図6B】以下の細胞株の形質導入された細胞培養物の蛍光画像を示している：（６Ｂ）Ｌｅｃ２細胞株、（６Ｃ）ＨＴ－２２細胞株、（６Ｄ）ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞株、及び（６Ｅ）Ｃ２Ｃ１２細胞株。ＧＦＰ導入遺伝子を含有するＡＡＶ９野生型及びＳ４５４挿入ホーミングペプチドカプシドを使用して前述の細胞株を形質導入した。Ｐ１ベクターは、極端に低い形質導入効率のため画像に含まれず、Ｐ８ベクターは、低い力価のため含まれなかった。ＡＡＶ９．Ｓ４５４．ＦＬＡＧは、試験されたすべての細胞タイプにおいて低い形質導入レベルを示した。
【図6C】以下の細胞株の形質導入された細胞培養物の蛍光画像を示している：（６Ｂ）Ｌｅｃ２細胞株、（６Ｃ）ＨＴ－２２細胞株、（６Ｄ）ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞株、及び（６Ｅ）Ｃ２Ｃ１２細胞株。ＧＦＰ導入遺伝子を含有するＡＡＶ９野生型及びＳ４５４挿入ホーミングペプチドカプシドを使用して前述の細胞株を形質導入した。Ｐ１ベクターは、極端に低い形質導入効率のため画像に含まれず、Ｐ８ベクターは、低い力価のため含まれなかった。ＡＡＶ９．Ｓ４５４．ＦＬＡＧは、試験されたすべての細胞タイプにおいて低い形質導入レベルを示した。
【図6D】以下の細胞株の形質導入された細胞培養物の蛍光画像を示している：（６Ｂ）Ｌｅｃ２細胞株、（６Ｃ）ＨＴ－２２細胞株、（６Ｄ）ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞株、及び（６Ｅ）Ｃ２Ｃ１２細胞株。ＧＦＰ導入遺伝子を含有するＡＡＶ９野生型及びＳ４５４挿入ホーミングペプチドカプシドを使用して前述の細胞株を形質導入した。Ｐ１ベクターは、極端に低い形質導入効率のため画像に含まれず、Ｐ８ベクターは、低い力価のため含まれなかった。ＡＡＶ９．Ｓ４５４．ＦＬＡＧは、試験されたすべての細胞タイプにおいて低い形質導入レベルを示した。
【図6E】以下の細胞株の形質導入された細胞培養物の蛍光画像を示している：（６Ｂ）Ｌｅｃ２細胞株、（６Ｃ）ＨＴ－２２細胞株、（６Ｄ）ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞株、及び（６Ｅ）Ｃ２Ｃ１２細胞株。ＧＦＰ導入遺伝子を含有するＡＡＶ９野生型及びＳ４５４挿入ホーミングペプチドカプシドを使用して前述の細胞株を形質導入した。Ｐ１ベクターは、極端に低い形質導入効率のため画像に含まれず、Ｐ８ベクターは、低い力価のため含まれなかった。ＡＡＶ９．Ｓ４５４．ＦＬＡＧは、試験されたすべての細胞タイプにおいて低い形質導入レベルを示した。
【図7A】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7B】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7C】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7D】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7E】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7F】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7G】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7H】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7I】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7J】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7K】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7L】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図7M】ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４、及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列を示している。
【図8-1】ＶＰ２の開始コドンの後、及び可変領域１（ＶＲ－Ｉ）、可変領域４（ＶＲ－ＩＶ）、及び可変領域８（ＶＲ－ＶＩＩＩ）の中または近く（すべて灰色で強調されている）に異種ペプチドのための挿入部位を有するＡＡＶ１～９ｅ、ｒｈ１０、ｒｈ２０、ｒｈ３９、ならびにｒｈ７４バージョン１及びバージョン２のアライメントを示しており、各カプシドタンパク質の可変領域８（ＶＲ－ＶＩＩＩ）の中の特定の挿入部位は、記号「＃」によって示されている（ＡＡＶ９のアミノ酸付番に従ってアミノ酸残基５８８の後）。
【図9】Ｑ５８８及びＡ５８９の間にＡＲＡ２９０のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターについてのアミノ酸配列を示しており（配列番号１５３）；ＡＲＡ２９０挿入物は太字で示されている。
【図10】ＡＡＶベクター：ＡＡＶ９；本明細書でＡＡＶ９ｅとも称されるＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ（位置５８８及び５８９の間に挿入されたペプチドＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）及び改変Ａ５８７Ｄ／Ａ５８８Ｇを有するＡＡＶ９）；ＡＡＶ．ｈＤｙｎ（５８８及び５８９の間にＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を有するＡＡＶ９）；ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｓ（位置５８８及び５８９の間にペプチドＱＡＶＲＴＳＬ（配列番号２３）を有するＡＡＶ９）；及びＡＡＶ．ＰＨＰ．ＳＨ（位置５８８及び５８９の間に挿入されたペプチドＱＡＶＲＴＳＨ（配列番号２４）を有するＡＡＶ９）の投与後のマウス脳細胞におけるＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）導入遺伝子のコピーを示している。
【図11】Ｑ５８８及びＡ５８９の間（Ａ）、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間（Ｂ）、ならびにＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間（Ｃ）にＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、それぞれ、ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）挿入物は太字で示されている。
【図12】Ｑ５８８及びＡ５８９の間（Ａ）、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間（Ｂ）、ならびにＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間（Ｃ）にＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、それぞれ、ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）挿入物は太字で示されている。
【図13】Ｑ５８８及びＡ５８９の間（Ａ）、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間（Ｂ）、ならびにＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間（Ｃ）にＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、それぞれ、ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）挿入物は太字で示されている。
【図14】Ｑ５８８及びＡ５８９の間（Ａ）、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間（Ｂ）、ならびにＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間（Ｃ）にＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、それぞれ、ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）挿入物は太字で示されている。
【図15】Ｑ５８８及びＡ５８９の間（Ａ）、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間（Ｂ）、ならびにＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間（Ｃ）にＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、それぞれ、ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）挿入物は太字で示されている。
【図16】Ｑ５８８及びＡ５８９の間（Ａ）、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間（Ｂ）、ならびにＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間（Ｃ）にＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、それぞれ、ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）挿入物は太字で示されている。
【図17】Ｑ５８８及びＡ５８９の間（Ａ）、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間（Ｂ）、ならびにＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間（Ｃ）にＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、それぞれ、ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）挿入物は太字で示されている。
【図18】Ｎ５９０及びＴ５９１の間（Ａ）、ＶＲ－ＩＩＩのＡ２６９及びＴ２７０の間（Ｂ）、ならびにＶＲ－ＩＶのＴ４５３及びＴ４５４の間（Ｃ）にＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、それぞれ、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）挿入物は太字で示されている。
【図19】Ｎ５９０及びＴ５９１の間（Ａ）、ＶＲ－ＩＩＩのＡ２６９及びＴ２７０の間（Ｂ）、ならびにＶＲ－ＩＶのＴ４５３及びＴ４５４の間（Ｃ）にＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、それぞれ、ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）挿入物は太字で示されている。
【図20】血液脳関門（ＢＢＢ）細胞層を通過するＡＡＶベクターについてのｉｎ ｖｉｔｒｏトランズウェルアッセイ（Ａ）、及びＡＡＶ．ｈＤｙｎ（反転三角によって示されている）が、ＡＡＶ９（四角）よりも早く、また、ＡＡＶ２（丸）よりも早く、かつ高い程度までアッセイのＢＢＢ細胞層を通過することを示す結果（Ｂ）を示している。
【図21】修飾されたカプシド及びネイティブカプシドのプールが静脈内に投与されたマウスからの脳ｇＤＮＡの次世代シーケンシング（ＮＧＳ）分析の結果を示しており、プールにおける異なるカプシドのマウスの組織における相対的存在量を明らかにしている。３つの異なるプールをマウスに注射した。点線は、どのベクターが一緒にプールされていたかを示している。親ＡＡＶ９は、対照として各プールに含まれていた（プール１：ＢＣ０１、プール２：ＢＣ３１、プール３：ＢＣ０１）。プールの各カプシドについてのバーコードが表８ａ～８ｃに列挙されている。
【図22】雌のＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＡＡＶ．ｈＤｙｎのｉｎ ｖｉｖｏ形質導入プロファイルを示しており、脳（Ａ）、肝臓（Ｂ）、心臓（Ｃ）、肺（Ｄ）、腎臓（Ｅ）、骨格筋（Ｆ）、座骨神経（Ｇ）、及び卵巣（Ｈ）における、ナイーブマウス、またはＡＡＶ９もしくはＡＡＶ．ｈＤｙｎのいずれかが注射されたマウスにおけるコピー数／マイクログラムｇＤＮＡを示しており、ＡＡＶ．ｈＤｙｎは、ＡＡＶ９と比較して増加した脳生体内分布を示している。
【図23】脳全体にわたるＡＡＶ．ｈＤｙｎからのＧＦＰの分布を示しており、線条体（Ａ）、海馬（Ｂ）、及び皮質（Ｃ）からの脳切片の免疫組織化学染色の画像は、改変ベクターによる脳の包括的形質導入を明らかにした。
【図24】アミノ酸４５４の直後にホーミングペプチドの挿入物を含有する遺伝子修飾されたＡＡＶ９ベクターのｉｎ ｖｉｖｏでの腎臓対肝臓の形質導入効率比を示している。この研究において使用されたホーミングペプチドの詳細は、表８に概説されている。
【図25】ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）ペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターについてのアミノ酸配列を示しており、ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）挿入物は太字で示されている。
【発明を実施するための形態】
【0122】
所望の特性、例えば、ｒＡＡＶゲノムの組織標的化、形質導入及び組み込みを付与及び／または向上させるアミノ酸配列を含むように修飾されたカプシドタンパク質を有する組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）が提供される。特に、カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合にペプチド挿入物が表面露出されるように、ウイルスカプシドの可変領域ＩＶ（ＶＲ－ＩＶ）の中またはその近くに、異種タンパク質からの４～２０個、または７個の連続アミノ酸、及び実施形態では、１２個以下の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含む修飾されたカプシドタンパク質が提供される。例えば、ヒト軸糸ダイニンの重鎖尾部領域の二量化ドメイン及び本明細書に記載される他のもの（表１Ａ及び１Ｂ参照）からの、特定の組織を標的とし、及び／またはｒＡＡＶ細胞取り込み、形質導入及び／またはゲノム組み込みを促進するペプチドが挿入された組換えカプシドタンパク質、及びそれらを含むｒＡＡＶも提供される。
【0123】
本明細書に記載の形質導入及び／または組織指向性を促進する１つ以上のアミノ酸置換を有する修飾されたカプシドも提供される。カプシドタンパク質を含む組換えベクターもまた、その薬学的組成物、カプシドタンパク質をコードする核酸、ならびに標的化送達、改善された形質導入及び／または標的組織に関連する障害の処置のための修飾されたカプシドを有するカプシドタンパク質及びｒＡＡＶベクターを作製する方法及び使用する方法と一緒に提供される。特に、ｒＡＡＶを含む組成物ならびにエリスロポエチンもしくはダイニンに由来するペプチドまたはダイニンに関連するものを含むカプシドタンパク質を、ｒＡＡＶを網膜及び／または中枢神経系を含む神経組織に標的化するために及び神経障害及び／または眼、特に、網膜の障害を処置するための治療剤の送達を容易化するために使用する方法が提供される。標的組織、例えば、骨、腎臓、筋肉、肺、網膜、及び心臓を標的とし、またはそれにホーミングするペプチド挿入物を含むｒＡＡＶを含む組成物、及びそれを使用する方法も提供される。
【0124】
５．１．定義
用語「ＡＡＶ」または「アデノ随伴ウイルス」は、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ属のウイルス内のディペンドパルボウイルスを指す。ＡＡＶは、天然に存在する「野生型」ウイルスに由来するＡＡＶ、天然に存在するｃａｐ遺伝子によってコードされるカプシドタンパク質を含むカプシドにパッケージングされたｒＡＡＶゲノム及び／または天然に存在しないカプシドｃａｐ遺伝子によってコードされるカプシドタンパク質を含むカプシドにパッケージングされたｒＡＡＶゲノムに由来するＡＡＶであり得る。後者の例には、天然に存在するカプシドのアミノ酸配列内にペプチド挿入物を含むカプシドタンパク質を有するｒＡＡＶが含まれる。
用語「ＡＡＶ」または「アデノ随伴ウイルス」は、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ属のウイルス内のディペンドパルボウイルスを指す。ＡＡＶは、天然に存在する「野生型」ウイルスに由来するＡＡＶ、天然に存在するｃａｐ遺伝子によってコードされるカプシドタンパク質を含むカプシドにパッケージングされたｒＡＡＶゲノム及び／または天然に存在しないカプシドｃａｐ遺伝子によってコードされるカプシドタンパク質を含むカプシドにパッケージングされたｒＡＡＶゲノムに由来するＡＡＶであり得る。後者の例には、天然に存在するカプシドのアミノ酸配列内にペプチド挿入物を含むカプシドタンパク質を有するｒＡＡＶが含まれる。
【0125】
用語「ｒＡＡＶ」は、「組換えＡＡＶ」を指す。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ｒｅｐ遺伝子及びｃａｐ遺伝子の一部またはすべてが異種配列で置き換えられたＡＡＶゲノムを有する。
【0126】
用語「ｒｅｐ－ｃａｐヘルパープラスミド」は、ウイルスのｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子機能を提供し、かつ機能的ｒｅｐ遺伝子及び／またはｃａｐ遺伝子配列を欠くｒＡＡＶゲノムからのＡＡＶの生成を補助するプラスミドを指す。
【0127】
用語「ｃａｐ遺伝子」は、ウイルスのカプシド被覆を形成するまたは形成するのを補助するカプシドタンパク質をコードする核酸配列を指す。ＡＡＶの場合、カプシドタンパク質は、ＶＰ１、ＶＰ２、またはＶＰ３であり得る。
【0128】
用語「ｒｅｐ遺伝子」は、ウイルスの複製及び生成に必要な非構造タンパク質をコードする核酸配列を指す。
【0129】
本明細書で使用される場合、用語「核酸」及び「ヌクレオチド配列」には、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ及びＲＮＡ分子の組み合わせまたはハイブリッドＤＮＡ／ＲＮＡ分子、ならびにＤＮＡまたはＲＮＡ分子のアナログが含まれる。そのようなアナログは、イノシンまたはトリチル化塩基を含むがこれらに限定されないヌクレオチドアナログを使用して生成され得る。そのようなアナログはまた、例えば、ヌクレアーゼ耐性または細胞膜を通過する増加した能力などの分子に有益な属性を与える改変された骨格を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子を含み得る。核酸またはヌクレオチド配列は、一本鎖、二本鎖であり得、一本鎖部分及び二本鎖部分の両方を含有し得、三本鎖部分を含有し得るが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【0130】
本明細書で使用される場合、用語「対象」、「宿主」、及び「患者」は、互換的に使用される。本明細書で使用される場合、対象は、哺乳動物、例えば、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）または霊長類（例えば、サル及びヒト）、または、所定の実施形態では、ヒトである。
【0131】
本明細書で使用される場合、用語「治療剤」は、疾患または障害に関連する症状を処置、管理、または改善する際に使用され得る任意の薬剤であって、疾患または障害が、導入遺伝子によって提供される機能に関連するものを指す。本明細書で使用される場合、「治療的有効量」は、標的疾患または障害の処置または管理において、それを罹患している対象に投与された場合に少なくとも１つの治療的利益を提供する薬剤の量（例えば、導入遺伝子によって発現される生成物の量）を指す。さらに、本発明の薬剤に関する治療的有効量は、単独での、または他の療法と組み合わせた場合の薬剤の量が、疾患または障害の処置または管理において少なくとも１つの治療的利益を提供することを意味する。
【0132】
本明細書で使用される場合、用語「予防剤」は、疾患または障害の進行の予防、遅延、または減速において使用され得る任意の薬剤であって、疾患または障害が、導入遺伝子によって提供される機能に関連するものを指す。本明細書で使用される場合、「予防的有効量」は、標的疾患または障害の予防または遅延において、その素因がある対象に投与された場合に少なくとも１つの予防的利益を提供する予防剤の量（例えば、導入遺伝子によって発現される生成物の量）を指す。予防的有効量はまた、標的疾患または障害の発生を予防または遅延させる；または標的疾患または障害の進行を減速させるのに十分な薬剤の量；標的疾患または障害の開始を遅延または最小化するのに十分な量；または再発またはその広がりを予防または遅延させるのに十分な量を指し得る。予防的有効量はまた、標的疾患または障害の症状の増悪を予防または遅延させるのに十分な薬剤の量を指し得る。さらに、本発明の予防剤に関する予防的有効量は、単独での、または他の薬剤と組み合わせた場合の予防剤の量が、疾患または障害の予防または遅延において少なくとも１つの予防的利益を提供することを意味する。
【0133】
本発明の予防剤は、標的疾患または障害の「素因がある」対象に投与され得る。疾患または障害の「素因がある」対象は、疾患または障害の発症に関連する症状を示すもの、またはそのような疾患もしくは障害についての遺伝子構造、環境曝露、もしくは他のリスク要因を有するが、症状はまだ疾患または障害として診断されるレベルではないものである。例えば、（導入遺伝子によって提供される）欠落遺伝子に関連する疾患の家族歴を有する患者は、その素因があるものとして適する場合がある。さらに、原発性腫瘍の除去後に持続する潜伏腫瘍を有する患者は、腫瘍の再発の素因があるものとして適する場合がある。
【0134】
「中枢神経系」（「ＣＮＳ」）は、本明細書で使用される場合、循環薬剤が血液脳関門を通過した後に到達する神経組織を指し、例えば、脳、視神経、脳神経、及び脊髄を含む。ＣＮＳにはまた、脊髄中心管及び脳室を満たす脳脊髄液が含まれる。
【0135】
５．２．組換えＡＡＶカプシド及びベクター
１つの態様は、ＡＡＶタンパク質ではない異種タンパク質からのペプチド挿入物を含むように修飾されたカプシドタンパク質である組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）のカプシドタンパク質であって、ＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合にペプチド挿入物が表面露出されるものに関する。いくつかの実施形態では、ペプチド挿入物は、ＡＡＶ９カプシドの可変領域ＩＶ（ＶＲ－ＩＶ）、または別の型のＡＡＶカプシドについての対応する領域の中に（すなわち、いかなるカプシドアミノ酸も欠失させることなく２つのアミノ酸の間に）存在する（図８におけるアライメント参照）。いくつかの実施形態では、ペプチド挿入物は、ＡＡＶ９カプシドの可変領域ＶＩＩＩ（ＶＲ－ＶＩＩＩ）、または別のＡＡＶ型についてのカプシドの対応する領域の中に（すなわち、いかなるカプシドアミノ酸も欠失させることなく２つのアミノ酸の間に）存在する（図８におけるアライメント参照）。いくつかの実施形態では、ペプチド挿入物は、ｒＡＡＶ粒子を標的組織に誘導し、及び／またはｒＡＡＶ取り込み、形質導入及び／またはゲノム組み込みを促進する異種タンパク質またはドメイン（ＡＡＶカプシドタンパク質またはドメインではない）からのものである。修飾されたカプシドタンパク質及びそのバリアントをコードする核酸、ｒＡＡＶベクターを生成するための核酸を発現するためのパッケージング細胞、導入遺伝子をさらに含むｒＡＡＶベクター、及びｒＡＡＶベクターの薬学的組成物、ならびに導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的細胞タイプまたは標的組織に送達するためにｒＡＡＶベクターを使用する方法も提供される。
１つの態様は、ＡＡＶタンパク質ではない異種タンパク質からのペプチド挿入物を含むように修飾されたカプシドタンパク質である組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）のカプシドタンパク質であって、ＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合にペプチド挿入物が表面露出されるものに関する。いくつかの実施形態では、ペプチド挿入物は、ＡＡＶ９カプシドの可変領域ＩＶ（ＶＲ－ＩＶ）、または別の型のＡＡＶカプシドについての対応する領域の中に（すなわち、いかなるカプシドアミノ酸も欠失させることなく２つのアミノ酸の間に）存在する（図８におけるアライメント参照）。いくつかの実施形態では、ペプチド挿入物は、ＡＡＶ９カプシドの可変領域ＶＩＩＩ（ＶＲ－ＶＩＩＩ）、または別のＡＡＶ型についてのカプシドの対応する領域の中に（すなわち、いかなるカプシドアミノ酸も欠失させることなく２つのアミノ酸の間に）存在する（図８におけるアライメント参照）。いくつかの実施形態では、ペプチド挿入物は、ｒＡＡＶ粒子を標的組織に誘導し、及び／またはｒＡＡＶ取り込み、形質導入及び／またはゲノム組み込みを促進する異種タンパク質またはドメイン（ＡＡＶカプシドタンパク質またはドメインではない）からのものである。修飾されたカプシドタンパク質及びそのバリアントをコードする核酸、ｒＡＡＶベクターを生成するための核酸を発現するためのパッケージング細胞、導入遺伝子をさらに含むｒＡＡＶベクター、及びｒＡＡＶベクターの薬学的組成物、ならびに導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的細胞タイプまたは標的組織に送達するためにｒＡＡＶベクターを使用する方法も提供される。
【0136】
様々な実施形態では、標的組織は、神経組織、骨、腎臓、筋肉、眼／網膜、もしくは内皮組織、または特定の受容体もしくは腫瘍であり得、ペプチド挿入物は、組織、または例えば、１つ以上の特定の細胞タイプ、例えば、標的組織内のもの、またはその細胞マトリックスを特異的に認識し、及び／または結合する異種タンパク質またはドメインに由来する。特に、エリスロポエチンまたはダイニンに由来するペプチド、特に軸糸ダイニンまたは細胞質ダイニンの重鎖二量化ドメイン、または任意の表面露出可変領域に挿入された細胞質ダイニンに結合し、または関連するものは、ｒＡＡＶを神経組織に標的化し得、これには、血液脳関門を通過してＣＮＳに至ること及び神経障害を処置するための治療剤を送達することが含まれる。
【0137】
５．２．１ ペプチド挿入物を有するｒＡＡＶベクター
本発明者は、驚くべきことに、ＡＡＶ９カプシドＶＲ－ＩＶループ（図２参照）の中及び近くならびに他のＡＡＶ型のカプシドのＶＲ－ＩＶループ上の対応する領域にペプチド挿入物に適した位置を発見した。先行研究は、様々なＡＡＶにおける潜在的位置を研究したが、いずれもこの目的に適するものとしてＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶを特定しなかった（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２０００，“Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｄｅｎｏ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ２（ＡＡＶ２）Ｃａｐｓｉｄ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＡＡＶ２ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｗｉｔｈ Ａｌｔｅｒｅｄ Ｔｒｏｐｉｓｍ，” Ｊ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７４（１８）：８６３５－８６４７ ；Ｌｏｃｈｒｉｅ ｅｔ ａｌ，２００６，“Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ（ＡＡＶ）ｃａｐｓｉｄ ｇｅｎｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｒａｔ ａｎｄ ｍｏｕｓｅ ｌｉｖｅｒ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｄｅｆｉｎｅ ｔｗｏ ｎｅｗ ＡＡＶ ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｓｔａｎｔｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ＡＡＶ－５，” Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３５３：６８－８２；Ｓｈｉ ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔｔ，２００３，“ＲＧＤ Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｉｎ ＶＰ３ Ｐｒｏｖｉｄｅｓ Ａｄｅｎｏ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ２（ＡＡＶ２）－Ｂａｓｅｄ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ａ Ｈｅｐａｒａｎ Ｓｕｌｆａｔｅ－Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｔｒｙ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，” Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７（４）：５１５５２５－；Ｎｉｃｋｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，“Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＡＡＶ２－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｔｏ Ｈｕｍａｎ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ” Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ４（２）：１７４－１８１；Ｇｒｉｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，“Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ－Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎｔｏ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ Ｃａｐｓｉｄｓ，” Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ３（６）：９６４－９７５；Ｇｉｒｏｄ ｅｔ ａｌ．１９９９，“Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃａｐｓｉｄ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｌｌｏｗ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２，” Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３（９）：１０５２－１０５６；Ｄｏｕａｒ ｅｔ ａｌ．，２００３，“Ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ ｉｎ ａ ｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅ ｓｉｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＶ２ ｃａｐｓｉｄ，“Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３０９：２０３－２０８；及びＰｏｎｎａｚｈａｇａｎ，ｅｔ ａｌ．２００１，Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７５（１９）：９４９３－９５０１を考察されたい）。
本発明者は、驚くべきことに、ＡＡＶ９カプシドＶＲ－ＩＶループ（図２参照）の中及び近くならびに他のＡＡＶ型のカプシドのＶＲ－ＩＶループ上の対応する領域にペプチド挿入物に適した位置を発見した。先行研究は、様々なＡＡＶにおける潜在的位置を研究したが、いずれもこの目的に適するものとしてＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶを特定しなかった（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２０００，“Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｄｅｎｏ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ２（ＡＡＶ２）Ｃａｐｓｉｄ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＡＡＶ２ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｗｉｔｈ Ａｌｔｅｒｅｄ Ｔｒｏｐｉｓｍ，” Ｊ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７４（１８）：８６３５－８６４７ ；Ｌｏｃｈｒｉｅ ｅｔ ａｌ，２００６，“Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ（ＡＡＶ）ｃａｐｓｉｄ ｇｅｎｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｒａｔ ａｎｄ ｍｏｕｓｅ ｌｉｖｅｒ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｄｅｆｉｎｅ ｔｗｏ ｎｅｗ ＡＡＶ ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｓｔａｎｔｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ＡＡＶ－５，” Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３５３：６８－８２；Ｓｈｉ ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔｔ，２００３，“ＲＧＤ Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｉｎ ＶＰ３ Ｐｒｏｖｉｄｅｓ Ａｄｅｎｏ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ２（ＡＡＶ２）－Ｂａｓｅｄ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ａ Ｈｅｐａｒａｎ Ｓｕｌｆａｔｅ－Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｔｒｙ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，” Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７（４）：５１５５２５－；Ｎｉｃｋｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，“Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＡＡＶ２－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｔｏ Ｈｕｍａｎ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ” Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ４（２）：１７４－１８１；Ｇｒｉｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，“Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ－Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎｔｏ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ Ｃａｐｓｉｄｓ，” Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ３（６）：９６４－９７５；Ｇｉｒｏｄ ｅｔ ａｌ．１９９９，“Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃａｐｓｉｄ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｌｌｏｗ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２，” Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３（９）：１０５２－１０５６；Ｄｏｕａｒ ｅｔ ａｌ．，２００３，“Ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ ｉｎ ａ ｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅ ｓｉｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＶ２ ｃａｐｓｉｄ，“Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３０９：２０３－２０８；及びＰｏｎｎａｚｈａｇａｎ，ｅｔ ａｌ．２００１，Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７５（１９）：９４９３－９５０１を考察されたい）。
【0138】
したがって、新規挿入点で、特に、カプシド被覆における表面露出可変領域の中に、特にカプシドタンパク質の可変領域ＩＶの中または近くにペプチド挿入物を保有するｒＡＡＶベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶカプシドタンパク質は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質（アミノ酸配列の配列番号１１８、ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸配列を有する他のＡＡＶ血清型のカプシドタンパク質アミノ酸配列のアライメントについては図８参照）のアミノ酸４５１～４６１のうちの１つに対応するアミノ酸残基の直後に（すなわち、Ｃ末端へのペプチド結合によって接続される）ペプチド挿入物を含み、カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される。ペプチド挿入物は、ＡＡＶカプシドタンパク質のいずれの残基も欠失させるべきではない。通常、ペプチド挿入物は、他の血清型と比較して、そのカプシドタンパク質の可変（保存性が低い）領域において、及び表面露出ループにおいて存在する。
【0139】
所与の部位「で」挿入されるものとして記載されるペプチド挿入物は、野生型ウイルスにおいてその部位で通常見られる残基の直後の（すなわち、そのカルボキシ基に対するペプチド結合を有する）挿入を指す。例えば、ＡＡＶ９におけるＱ５８８での挿入は、ペプチド挿入物が、ＡＡＶ９野生型カプシドタンパク質配列（配列番号１１８）におけるＱ５８８及び連続アミノ酸（Ａ５８９）の間に現れることを意味する。実施形態では、挿入点においてまたはその近くに（５、１０、１５残基内または挿入の部位である構造ループ内で）アミノ酸残基の欠失は存在しない。
【0140】
特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質であり、挿入物は、アミノ酸残基４５１～４６１のうちの少なくとも１つの直後に存在する。特定の実施形態では、ペプチド挿入物は、ＡＡＶ９カプシド（アミノ酸配列配列番号１１８）のアミノ酸Ｉ４５１、Ｎ４５２、Ｇ４５３、Ｓ４５４、Ｇ４５５、Ｑ４５６、Ｎ４５７、Ｑ４５８、Ｑ４５９、Ｔ４６０、またはＬ４６１の直後に存在する。所定の実施形態では、ペプチドは、ＡＡＶ９カプシドタンパク質の残基Ｓ４５４及びＧ４５５の間またはＡＡＶ９カプシドタンパク質（アミノ酸配列配列番号１１８）以外のＡＡＶカプシドタンパク質のＳ４５４及びＧ４５５に対応する残基の間に挿入される。
【0141】
他の実施形態では、異種ペプチドがＡＡＶベクターに組み込まれた場合に表面露出されるように、ＡＡＶカプシドタンパク質に挿入されたカプシドタンパク質に対して異種の標的化ペプチドを含む修飾されたカプシドタンパク質が提供される。そのようなペプチドは、好ましくはヒト軸糸ダイニン（ＨＡＤ）重鎖尾部からのものであり、または以下の表１Ａ及び１Ｂに列挙されるものもしくは特定の組織タイプのための他の標的化ペプチドである。
【0142】
他の実施形態では、カプシドタンパク質は、ＡＡＶ血清型１（ＡＡＶ１）、血清型２（ＡＡＶ２）、血清型３（ＡＡＶ３）、血清型４（ＡＡＶ４）、血清型５（ＡＡＶ５）、血清型６（ＡＡＶ６）、血清型７（ＡＡＶ７）、血清型８（ＡＡＶ８）、血清型ｒｈ８（ＡＡＶｒｈ８）、血清型９ｅ（ＡＡＶ９ｅ）、血清型ｒｈ１０（ＡＡＶｒｈ１０）、血清型ｒｈ２０（ＡＡＶｒｈ２０）、血清型ｒｈ３９（ＡＡＶｒｈ３９）、血清型ｈｕ．３７（ＡＡＶｈｕ．３７）、及び血清型ｒｈ７４（ＡＡＶｒｈ７４、バージョン１及び２）（図８参照）から選択される少なくとも１つのＡＡＶ型からのものであり、挿入物は、アミノ酸残基４５１～４６１のうちの少なくとも１つに対応するアミノ酸残基の直後に存在する。これらの異なるＡＡＶ血清型のアライメントは、図８に示されているように、「対応する」アミノ酸残基が、参照配列における残基としてアライメントにおいて同じ位置で並べられるように、異なるカプシドアミノ酸配列における「対応する」アミノ酸残基を示す。いくつかの特定の実施形態では、ペプチド挿入物は、図８に示される配列におけるＡＡＶ１カプシド（配列番号１１０）の４５０～４５９；ＡＡＶ２カプシド（配列番号１１１）の４４９～４５８；ＡＡＶ３カプシド（配列番号１１２）の４４９～４５９；ＡＡＶ４カプシド（配列番号１１３）の４４３～４５３；ＡＡＶ５カプシド（配列番号１１４）の４４２～４４５；ＡＡＶ６カプシド（配列番号１１５）の４５０～４５９；ＡＡＶ７カプシド（配列番号１１６）の４５１～４６１；ＡＡＶ８カプシド（配列番号１１７）の４５１～４６１；ＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８）の４５１～４６１；ＡＡＶ９ｅカプシド（配列番号１１９）の４５２～４６１；ＡＡＶｒｈ１０カプシド（配列番号１２０）の４５２～４６１；ＡＡＶｒｈ２０カプシド（配列番号１２１）の４５２～４６１；ＡＡＶｈｕ．３７（配列番号１２２）の４５２～４６１；ＡＡＶｒｈ７４（配列番号１２３または配列番号１５４）の４５２～４６１；またはＡＡＶｒｈ３９（配列番号１２４）の４５２～４６１の中のアミノ酸残基のうちの１つの直後に存在する。所定の実施形態では、ｒＡＡＶカプシドタンパク質は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質（配列番号１１８のアミノ酸配列を有する、図８参照）のアミノ酸５８８の直後に（すなわち、そのＣ末端に）ペプチド挿入物を含み、カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される。他の実施形態では、ｒＡＡＶカプシドタンパク質は、ＡＡＶ９のアミノ酸５８８またはＡＡＶ９のアミノ酸５８８に対応するものの直後にはないペプチド挿入物を有する。
【0143】
他の実施形態では、ペプチドが、表１Ａ及び１Ｂの少なくとも４個の連続アミノ酸、もしくは少なくとも７個の連続アミノ酸、または正確に７個の連続アミノ酸であるが、実施形態では、１２個以下の連続アミノ酸、またはその機能的断片を含む標的化ペプチドである場合、カプシドタンパク質は、ＡＡＶ血清型１（ＡＡＶ１）、血清型２（ＡＡＶ２）、血清型３（ＡＡＶ３）、血清型４（ＡＡＶ４）、血清型５（ＡＡＶ５）、血清型６（ＡＡＶ６）、血清型７（ＡＡＶ７）、血清型８（ＡＡＶ８）、血清型ｒｈ８（ＡＡＶｒｈ８）、血清型９ｅ（ＡＡＶ９ｅ）、血清型ｒｈ１０（ＡＡＶｒｈ１０）、血清型ｒｈ２０（ＡＡＶｒｈ２０）、血清型ｒｈ３９（ＡＡＶｒｈ３９）、血清型ｈｕ．３７（ＡＡＶｈｕ．３７）、及び血清型ｒｈ７４（ＡＡＶｒｈ７４、バージョン１及び２）（図８参照）から選択される少なくとも１つのＡＡＶ型からのものであり、ペプチドがＡＡＶベクターに組み込まれた場合に表面露出されるように、ペプチドは、任意の点でカプシドタンパク質に挿入される。特定の実施形態では、ペプチドは、ＡＡＶ１カプシド（配列番号１１０）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；もしくは５８５～５９３；ＡＡＶ２カプシド（配列番号１１１）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５８；もしくは５８４～５９２；ＡＡＶ３カプシド（配列番号１１２）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５９；もしくは５８５～５９３；ＡＡＶ４カプシド（配列番号１１３）の１３７；２５６～２６２；４４３～４５３；もしくは５８３～５９１；ＡＡＶ５カプシド（配列番号１１４）の１３７；２５２～２６２；４４２～４４５；もしくは５７４～５８２；ＡＡＶ６カプシド（配列番号１１５）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；５８５～５９３；ＡＡＶ７カプシド（配列番号１１６）の１３８；２６３～２７３；４５１～４６１；５８６～５９４；ＡＡＶ８カプシド（配列番号１１７）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；ＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；ＡＡＶ９ｅカプシド（配列番号１１９）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；ＡＡＶｒｈ１０カプシド（配列番号１２０）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；ＡＡＶｒｈ２０カプシド（配列番号１２１）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；ＡＡＶｒｈ７４カプシド（配列番号１２３または配列番号１５４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５、ＡＡＶｈｕ３７カプシド（配列番号１２２）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；またはＡＡＶｒｈ３９カプシド（配列番号１２４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５（図８で付番されている）の後に挿入される。
【0144】
いくつかの実施形態では、カプシドタンパク質は、血清型ＡＡＶ２以外のＡＡＶからのものである。いくつかの実施形態では、ペプチド挿入物は、ＡＡＶ２カプシドタンパク質のアミノ酸５７０または６１１に対応するアミノ酸残基の直後に存在しない。いくつかの実施形態では、ペプチド挿入物は、ＡＡＶ２カプシドタンパク質のアミノ酸５８７～５８８に対応するアミノ酸残基の間に存在しない（ＳｃｈａｆｆｅｒらのＵＳ２０１４／０２９４７７１参照）。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列ＤＤＤＤＤＤＤＤ（配列番号９）を有する骨１ペプチドの挿入物は、ＡＡＶ２カプシドタンパク質のアミノ酸１３８の直後に存在しない（Ａｌｍｅｃｉｇａ－Ｄｉａｚ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ．８４：５４５参照）。
【0145】
修飾されたカプシドを含むＡＡＶベクターも提供される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、非複製性であり、ｒｅｐまたはｃａｐタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含まない（これらは、ｒＡＡＶベクターの製造においてパッケージング細胞によって供給される）。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶの１つ以上の血清型からの成分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ１４、ＡＡＶ１５、ＡＡＶ１６、ＡＡＶ．ｒｈ８、ＡＡＶ．ｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、もしくはＡＡＶ．ＨＳＣ１６もしくは他のｒＡＡＶ粒子、またはそれらの２つ以上の組み合わせのうちの１つ以上からのカプシド成分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ１４、ＡＡＶ１５、ＡＡＶ１６、ＡＡＶ．ｒｈ８、ＡＡＶ．ｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、もしくはＡＡＶ．ＨＳＣ１６もしくは他のｒＡＡＶ粒子、またはそれらの２つ以上の組み合わせのうちの１つ以上からの成分を含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ１４、ＡＡＶ１５、ＡＡＶ１６、ＡＡＶ．ｒｈ８、ＡＡＶ．ｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ｒＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、もしくはＡＡＶ．ＨＳＣ１６、またはそれらの誘導体、改変、もしくはシュードタイプから選択されるＡＡＶカプシド血清型のＶＰ１配列、ＶＰ２配列及び／またはＶＰ３配列と少なくとも８０％またはより同一、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち、最大で１００％同一のカプシドタンパク質を含む。これらの修飾されたＡＡＶベクターは、治療タンパク質をコードする導入遺伝子を含むゲノムを含み得る。
【0146】
特定の実施形態では、本明細書における組成物及び方法において使用するための組換えＡＡＶは、Ａｎｃ８０またはＡｎｃ８０Ｌ６５である（例えば、Ｚｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２（６）：１０５６－１０６８（その全体が参照により組み込まれる）参照）。特定の実施形態では、本明細書における組成物及び方法において使用するための組換えＡＡＶは、ＡＡＶ．７ｍ８である（そのバリアントを含む）（例えば、ＵＳ９，１９３，９５６；ＵＳ９，４５８，５１７；ＵＳ９，５８７，２８２；ＵＳ２０１６／０３７６３２３、及びＷＯ２０１８／０７５７９８（その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）参照）。特定の実施形態では、本明細書における組成物及び方法において使用するためのＡＡＶは、ＵＳ９，５８５，９７１で開示されている任意のＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂである。特定の実施形態では、本明細書における組成物及び方法において使用するためのＡＡＶは、ＡＡＶ８及び血清型ｃｙ５、ｒｈ２０またはｒｈ３９に由来するハイブリッドカプシド配列を有するＡＡＶ２／Ｒｅｃ２ベクターまたはＡＡＶ２／Ｒｅｃ３ベクターである（例えば、Ｉｓｓａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ８（４）：ｅ６０３６１（これらのベクターについて参照により本明細書に組み込まれる）参照）。特定の実施形態では、本明細書における組成物及び方法において使用するためのＡＡＶは、以下のいずれか（その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）で開示されているＡＡＶである：ＵＳ，２８２，１９９；ＵＳ７，９０６，１１１；ＵＳ８，５２４，４４６；ＵＳ８，９９９，６７８；ＵＳ８，６２８，９６６；ＵＳ８，９２７，５１４；ＵＳ８，７３４，８０９；ＵＳ９，２８４，３５７；ＵＳ９，４０９，９５３；ＵＳ９，１６９，２９９；ＵＳ９，１９３，９５６；ＵＳ９，４５８，５１７；ＵＳ９，５８７，２８２；ＵＳ２０１５／０３７４８０３；ＵＳ２０１５／０１２６５８８；ＵＳ２０１７／００６７９０８；ＵＳ２０１３／０２２４８３６；ＵＳ２０１６／０２１５０２４；ＵＳ２０１７／００５１２５７；ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９；及びＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、以下の特許及び特許出願（その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）：米国特許番号７，２８２，１９９；７，９０６，１１１；８，５２４，４４６；８，９９９，６７８；８，６２８，９６６；８，９２７，５１４；８，７３４，８０９；ＵＳ９，２８４，３５７；９，４０９，９５３；９，１６９，２９９；９，１９３，９５６；９，４５８，５１７；及び９，５８７，２８２；米国特許出願公開番号２０１５／０３７４８０３；２０１５／０１２６５８８；２０１７／００６７９０８；２０１３／０２２４８３６；２０１６／０２１５０２４；２０１７／００５１２５７；及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９；ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５のいずれかに開示されているＡＡＶカプシドのＶＰ１、ＶＰ２及び／またはＶＰ３配列と少なくとも８０％またはより同一、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち、最大で１００％同一のカプシドタンパク質を有する。
【0147】
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、米国特許番号９，８４０，７１９及びＷＯ２０１５／０１３３１３に開示されている任意のＡＡＶカプシド、例えば、ＡＡＶ．Ｒｈ７４及びＲＨＭ４－１を含む（その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ ｒｈ．７４などのＷＯ２０１４／１７２６６９に開示されている任意のＡＡＶカプシドを含む（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｇｅｏｒｇｉａｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２３：８５７－８６２及びＧｅｏｒｇｉａｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２５：４５０（その各々は、その全体が参照により組み込まれる）に記載されているように、ＡＡＶ２／５のカプシドを含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２ｔＹＦなどのＷＯ２０１７／０７０４９１に開示されている任意のＡＡＶカプシドを含む（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ｐｕｚｚｏ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２９（９）：４１８（その全体が参照により組み込まれる）に記載されているように、ＡＡＶＬＫ０３またはＡＡＶ３Ｂのカプシドである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、米国特許番号８，６２８，９６６；ＵＳ８，９２７，５１４；ＵＳ９，９２３，１２０及びＷＯ２０１６／０４９２３０に開示されている任意のＡＡＶカプシド、例えば、ＨＳＣ１、ＨＳＣ２、ＨＳＣ３、ＨＳＣ４、ＨＳＣ５、ＨＳＣ６、ＨＳＣ７、ＨＳＣ８、ＨＳＣ９、ＨＳＣ１０、ＨＳＣ１１、ＨＳＣ１２、ＨＳＣ１３、ＨＳＣ１４、ＨＳＣ１５、またはＨＳＣ１６（その各々は、その全体が参照により組み込まれる）を含む。
【0148】
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、国際出願公開番号ＷＯ２００３／０５２０５１（例えば、´０５１公開の配列番号２参照）、ＷＯ２００５／０３３３２１（例えば、´３２１公開の配列番号１２３及び８８参照）、ＷＯ０３／０４２３９７（例えば、´３９７公開の配列番号２、８１、８５、及び９７参照）、ＷＯ２００６／０６８８８８（例えば、´８８８公開の配列番号１及び３～６参照）、ＷＯ２００６／１１０６８９（例えば、´６８９公開の配列番号５～３８参照）、ＷＯ２００９／１０４９６４（例えば、´９６４公開の配列番号１～５、７、９、２０、２２、２４及び３１参照）、ＷＯ２０１０／１２７０９７（例えば、´０９７公開の配列番号５～３８参照）、及びＷＯ２０１５／１９１５０８（例えば、´５０８公開の配列番号８０～２９４参照）、及び米国出願公開番号２０１５００２３９２４（例えば、´９２４公開の配列番号１、５～１０参照）（その各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているカプシドタンパク質を有する。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、国際出願公開番号ＷＯ２００３／０５２０５１（例えば、´０５１公開の配列番号２参照）、ＷＯ２００５／０３３３２１（例えば、´３２１公開の配列番号１２３及び８８参照）、ＷＯ０３／０４２３９７（例えば、´３９７公開の配列番号２、８１、８５、及び９７参照）、ＷＯ２００６／０６８８８８（例えば、´８８８公開の配列番号１及び３～６参照）、ＷＯ２００６／１１０６８９（例えば、´６８９公開の配列番号５～３８参照）、ＷＯ２００９／１０４９６４（例えば、９６４公開の配列番号１～５、７、９、２０、２２、２４及び３１参照）、Ｗ０２０１０／１２７０９７（例えば、´０９７公開の配列番号５～３８参照）、及びＷＯ２０１５／１９１５０８（例えば、´５０８公開の配列番号８０～２９４参照）、及び米国出願公開番号２０１５００２３９２４（例えば、´９２４公開の配列番号１、５～１０参照）に開示されているＡＡＶカプシドのＶＰ１、ＶＰ２及び／またはＶＰ３配列と少なくとも８０％またはより高い同一性、例えば、８５％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など、すなわち、最大で１００％同一のカプシドタンパク質を有する。
【0149】
追加の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、シュードタイプ化ＡＡＶカプシドを含む。いくつかの実施形態では、シュードタイプ化ＡＡＶカプシドは、ｒＡＡＶ２／８またはｒＡＡＶ２／９シュードタイプ化ＡＡＶカプシドである。シュードタイプ化ｒＡＡＶ粒子を生成及び使用するための方法は、当該技術分野で知られている（例えば、Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７５：７６６２－７６７１（２００１）；Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７４：１５２４－１５３２（２０００）；Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８：１５８－１６７（２００２）；及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１０：３０７５－３０８１，（２００１）参照）。
【0150】
所定の実施形態では、一本鎖ＡＡＶ（ｓｓＡＡＶ）が使用され得る。所定の実施形態では、自己相補性ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶが使用され得る（例えば、Ｗｕ，２００７，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１８（２）：１７１－８２；ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，８（１６）：１２４８－１２５４；ＵＳ６，５９６，５３５；ＵＳ７，１２５，７１７；及びＵＳ７，４５６，６８３（その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）参照）。
【0151】
通常、ペプチド挿入物は、異種タンパク質またはそのドメインからの連続アミノ酸の配列である。挿入されるペプチドは、典型的には、それが由来するタンパク質またはドメインの特定の生物学的サンプル機能、特性、または特徴を保持するのに十分に長い。挿入されるペプチドは、典型的には、挿入物を有さないネイティブカプシドタンパク質と類似してまたは実質的に類似して、カプシドタンパク質が被覆を形成することが可能となるように十分に短い。好ましい実施形態では、ペプチド挿入物は、長さが約４～約３０アミノ酸残基、長さが約４～約２０、約４～約１５、約５～約１０、または約７アミノ酸である。挿入のためのペプチド配列は、長さが少なくとも４アミノ酸であり、長さが５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５アミノ酸であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチド配列は、長さが１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸である。実施形態では、ペプチドは、長さが７アミノ酸、１０アミノ酸または１２アミノ酸以下である。
【0152】
ＡＡＶカプシドタンパク質における「異種タンパク質からのペプチド挿入物」は、カプシドタンパク質に導入されており、かつ任意のＡＡＶ血清型カプシドに対してネイティブではないアミノ酸配列を指す。非限定的な例には、ＡＡＶカプシドタンパク質におけるヒトタンパク質のペプチドが含まれる。
【0153】
いくつかの実施形態では、ペプチド挿入物は、ホーミングタンパク質もしくはそのホーミングドメインまたは標的化タンパク質またはその標的化ドメインからのものである。「ホーミングドメイン」または「ホーミングタンパク質」は、特定の細胞タイプの細胞マトリックスを含む特定の細胞タイプ、組織タイプ、器官、腫瘍タイプなどを他の細胞、組織、器官、または腫瘍と比較して優先的にまたは選択的に標的とするドメインまたはタンパク質である。本発明の文脈では、ホーミングタンパク質またはドメインからのペプチドは、カプシドタンパク質に挿入するためのペプチドを提供して、カプシド被覆、またはＡＡＶベクターの一部を形成し、次いで、カプシド、被覆、またはベクターを誘導して特定の細胞タイプ、組織タイプ、器官、腫瘍タイプなどを標的とし、またはＡＡＶゲノムの取り込み及び／または組み込みを促進し得る。ホーミングタンパク質またはドメインの非限定的な例には、神経組織ホーミングドメイン、軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン、骨ホーミングドメイン、腎臓ホーミングドメイン、筋肉ホーミングドメイン、内皮細胞ホーミングドメイン、網膜細胞ホーミングドメイン、特定の細胞受容体を標的とするドメイン、例えば、インテグリン受容体結合ドメイン及びトランスフェリン受容体結合ドメイン、腫瘍細胞標的化ドメイン、他のウイルスからの標的化ペプチドなどが含まれる。本明細書で使用される場合、用語「ホーミング」及び「標的化」は、互換的に使用される。これらのペプチドはまた、または代替的に、標的組織の細胞におけるｒＡＡＶの細胞取り込み、形質導入及び／またはゲノム組み込みを促進し得る。
【0154】
本明細書に記載のＡＡＶカプシド部位のいずれかとしてペプチド挿入物として使用するためのペプチドの例は、以下の表１Ａ～１Ｂに提供されており、これには、ペプチドの機能性属性を有するその少なくとも４個のアミノ酸連続部分、またはその７個のアミノ酸連続部分、いくつかの実施形態では、１２個以下の連続アミノ酸が含まれる。例えば、Ｌａａｋｋｏｎｅｎ ａｎｄ Ｖｕｏｒｉｎｅｎ，２０１０，“Ｈｏｍｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｓ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｖｅｈｉｃｌｅｓ，” Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２：３２６－３３７（ｒｅｖｉｅｗ ａｒｔｉｃｌｅ）も参照されたい。所定の実施形態では、組換えＡＡＶカプシド及びＡＡＶベクターは、ペプチド挿入物が提示されるような方法でＡＡＶカプシド配列に挿入された、以下の表１Ａ及び１Ｂのいずれかからのペプチド、またはその少なくとも４、５、６、または７個のアミノ酸連続部分を含むように修飾されている。他の実施形態では、ペプチドは、ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸配列（配列番号１１８）の位置１３８、２６２～２７３、４５１～４６１、または５８５～５９３におけるアミノ酸残基または任意の他のＡＡＶ血清型におけるそれに対応する位置の後に挿入される（カプシド配列アライメントについては図８参照）。
【表1A】
【表1B】
【表2】
【表3A】
【表3B】
【0155】
例えば、グリア由来成長因子（ＧＤＧＦ）をコードする導入遺伝子を含むｒＡＡＶベクターは、パーキンソン病を処置／予防／管理するのに利用される。通常、ｒＡＡＶベクターは、全身的に投与される。例えば、ｒＡＡＶベクターは、静脈内、髄腔内、鼻腔内、及び／または腹腔内投与によって提供され得る。
【0156】
特定の態様では、本発明のｒＡＡＶは、標的組織、または、標的細胞タイプに関連する細胞マトリックスを含む標的細胞タイプ（処置／予防される障害または疾患に関連する）への送達に利用される。特定の組織または細胞タイプに関連する疾患または障害は、身体の細胞タイプの他の組織と比較して、特定の組織または細胞タイプに大きな影響を及ぼすもの、または障害の作用または症状が特定の組織または細胞タイプで現れるものである。導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する方法は、ペプチド挿入物がホーミングペプチドであるｒＡＡＶを対象に投与することを含む。パーキンソン病の場合、例えば、ｒＡＡＶを神経組織に誘導するペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得、特に、ペプチド挿入物は、ｒＡＡＶが血液脳関門を通過してＣＮＳに至ることを容易化する。そのようなペプチド挿入物には、神経組織ホーミングドメイン、例えば、本明細書に記載の「ＥＰＯペプチド」または「ＨＡＤペプチド」に由来するものが含まれる。
【0157】
例えば、ＥＰＯペプチドを含むカプシドタンパク質は、ＡＡＶをＣＮＳに再標的化し、血液脳関門を通過するのに利用され得る。ＥＰＯペプチドを含むカプシドタンパク質は、ＣＮＳ組織に対して保護的効果をさらに有し得、例えば、ＥＰＯ挿入物は、自然修復受容体に結合し、ＩＲＲ生物学的スイッチを活性化し、炎症を抑制し、及び／またはＣＮＳ修復を開始させる。いくつかの実施形態では、本発明のＥＰＯペプチドを含むｒＡＡＶは、以下の障害のうちの１つ以上に利用される：器官虚血性傷害、脳卒中、心筋梗塞、腎臓傷害、腎臓疾患、脳傷害、腎臓虚血、四肢虚血、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性神経炎、多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、神経障害性疼痛、糖尿病合併症、例えば、糖尿病性網膜症及び糖尿病性自律性ニューロパシー、ならびにサルコイドーシス。
【0158】
神経組織に関連する疾患または障害のため、本明細書に記載されているものなどの、神経組織ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得る。神経組織に関連する疾患／障害には、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、バッテン病、バッテン若年性ＮＣＬ型、カナバン病、慢性疼痛、フリードライヒ運動失調症、多形性膠芽腫、ハンチントン病、後期幼児期ニューロンセロイドリポフスチン症（ＬＩＮＣＬ）、リソソーム蓄積障害、レーバー先天性黒内障、多発性硬化症、パーキンソン病、ポンぺ病、レット症候群、脊髄損傷、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、脳卒中、及び外傷性脳損傷が含まれる。ベクターは、疾患または障害に罹患している、または発症するリスクがある対象への治療／予防利益のための導入遺伝子をさらに含有し得る（表３Ａ～３Ｂ参照）。
【0159】
骨に関連する疾患または障害のため、本明細書に記載されているものなどの、骨ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得る。
【0160】
腎臓に関連する疾患または障害のため、本明細書に記載されているものなどの、腎臓ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得る。
【0161】
筋肉に関連する疾患または障害のため、本明細書に記載されているものなどの、筋肉ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得る。
【0162】
内皮細胞に関連する疾患または障害のため、本明細書に記載されているものなどの、内皮細胞ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得る。
【0163】
インテグリン受容体または特定のインテグリン受容体を発現する細胞に関連する疾患または障害のため、本明細書に記載されているものなどの、インテグリン受容体結合ドメインからのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得る。
【0164】
トランスフェリン受容体またはトランスフェリン受容体を発現する細胞に関連する疾患または障害のため、本明細書に記載されているものなどの、トランスフェリン受容体結合ドメインからのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得る。
【0165】
腫瘍に関連する疾患または障害のため、前記腫瘍細胞標的化ドメインからのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得る。
【0166】
網膜または眼に関連する疾患または障害のため、ＨＡＤペプチドを含む、前記網膜細胞ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶベクターが使用され得る。ペプチド挿入物は、網膜指向性を向上させ、ｒＡＡＶを対象の眼または網膜を標的とするように誘導し、血液眼関門を通過する。用語「網膜細胞」は、アマクリン細胞、双極細胞、水平細胞、ミュラーグリア細胞、光受容細胞（例えば、桿体及び錐体）、網膜神経節細胞（例えば、ミジェット細胞、パラソル細胞、二重層別化（ｂｉｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ）細胞、巨大網膜神経節細胞、及び感光性神経節細胞）、網膜色素上皮、内境界膜の内皮細胞などを含む網膜の中または近くに見られる細胞タイプの１つ以上指す。
【0167】
通常、ｒＡＡＶベクターが網膜細胞ホーミングのためのペプチド挿入物を含む場合、ベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏ注射、例えば、眼への直接的注射によって投与される。例えば、網膜指向性を向上させるためのペプチド挿入物を含むｒＡＡＶは、硝子体内に投与され得る。いくつかの実施形態では、網膜指向性を向上させるためのｒＡＡＶは、眼内注射によって、例えば、眼の硝子体または房水に扁平部を介して投与される。いくつかの実施形態では、網膜指向性を向上させるためのｒＡＡＶは、眼球周囲注射または結膜下注射で投与される。網膜細胞ホーミングのためのペプチド挿入物を有するｒＡＡＶベクターの１つの利点は、対象が手術を回避し得ること、例えば、注射によって代わりに送達される治療剤を埋め込むための手術を回避することである。所定の実施形態では、治療剤は、硝子体内注射によって本明細書に記載のｒＡＡＶベクターによって送達されて、眼に関連する疾患または障害、特に、対象の網膜に関連する疾患または障害を処置するための治療的有効量を提供する。より多くの実施形態では、処置は、単回硝子体内注射、２回以下の硝子体内注射、３回以下の硝子体内注射、４回以下の硝子体内注射、５回以下の硝子体内注射、または６回以下の硝子体内注射の後に達成される。
【0168】
眼または網膜に関連する疾患／障害は、「眼疾患」と称される。眼疾患の非限定的な例には、前部虚血性視神経症；急性黄斑視神経網膜症；バルデー・ビードル症候群；ベーチェット病；網膜静脈分枝閉塞症；網膜中心静脈閉塞症；先天性脈絡膜欠如；脈絡膜血管新生；脈絡網膜変性；錐体杆体ジストロフィー；色覚障害（例えば、色覚異常、第一色覚異常、第二色覚異常、及び第三色覚異常）；先天性停止性夜盲；糖尿病性ブドウ膜炎；網膜上膜障害；遺伝性黄斑変性症；ヒストプラスマ症；黄斑変性症（例えば、急性黄斑変性症、非滲出性加齢黄斑変性症、滲出性加齢黄斑変性症）；糖尿病性網膜症；浮腫（例えば、黄斑浮腫、類嚢胞黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫）；緑内障；レーバー先天性黒内障；レーバー遺伝性視神経症；黄斑部毛細血管拡張症；多巣性脈絡膜炎；非網膜症糖尿病性網膜機能不全；眼外傷；眼腫瘍；増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）；未熟児網膜症；網膜分離症；網膜色素変性症；網膜動脈閉塞性疾患、網膜剥離、スターガルト病（黄色斑眼底）；交感性眼炎；ブドウ膜拡散；ブドウ膜炎網膜疾患；アッシャー症候群；フォークト・小柳・原田（ＶＫＨ）症候群；または眼レーザーもしくは光力学療法に関連する後部眼状態が含まれる。
【0169】
本発明のｒＡＡＶベクターはまた、特に、オリゴヌクレオチド、薬物、造影剤、無機ナノ粒子、リポソーム、抗体の標的細胞または組織への送達、特に標的化送達を容易化し得る。ｒＡＡＶベクターはまた、特に、ノンコーディングＤＮＡ、ＲＮＡ、またはオリゴヌクレオチドの標的組織への送達、特に標的化送達を容易化し得る。
【0170】
薬剤は、当該技術分野で知られている及び／または本明細書に記載されている薬学的に許容可能な組成物として提供され得る。また、本発明のｒＡＡＶ分子は、単独でまたは他の予防及び／または治療剤と組み合わせて投与され得る。
【0171】
本明細書で提供される投与の投薬量及び頻度は、治療的に有効及び予防的に有効という用語に包含される。投薬量及び頻度は、典型的には、投与される特定の治療または予防剤、疾患の重症度及びタイプ、投与経路、ならびに患者の年齢、体重、反応、及び既往歴に応じて各患者について特定の要素に従って変わり、実施者の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。好適なレジメンは、そのような要因を考慮することによって及び例えば、文献で報告され、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（５６ｔｈ ｅｄ．，２００２）で推奨されている投薬量に従って当業者によって選択され得る。予防及び／または治療剤は、繰り返し投与され得る。予防または治療剤を投与する時間的レジメン、及びそのような薬剤が別々にまたは混合物として投与されるかなどの手順のいくつかの態様が変わり得る。
【0172】
有効となる本発明の薬剤の量は、標準的な臨床的技術によって決定され得る。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系に由来する用量－反応曲線から外挿され得る。本発明の方法において使用される任意の薬剤のため、治療的に有効な用量は、細胞培養アッセイから最初に推定され得る。用量は、細胞培養において決定されるＩＣ５０（すなわち、症状の最大半数阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために動物モデルにおいて設計され得る。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【0173】
予防及び／または治療剤、ならびにそれらの組み合わせは、ヒトにおける使用の前に好適な動物モデル系において試験され得る。そのような動物モデル系には、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ブタ、イヌ、ウサギなどが含まれるがこれらに限定されない。当該技術分野でよく知られている任意の動物系が使用され得る。そのようなモデル系は、広く使用されており、当業者によく知られている。いくつかの実施形態では、ラット、マウス、または霊長類以外の他の小哺乳動物に基づくＣＮＳ病態のための動物モデル系が使用される。
【0174】
本発明の予防及び／または治療剤が動物モデルにおいて試験されると、それらは、それらの有効性を確立するために臨床試験において試験され得る。臨床試験の確立は、当業者に知られている一般的な方法論に従って行われ、本発明の薬剤の最適な投薬量及び投与経路ならびに毒性プロファイルが確立され得る。例えば、臨床試験は、ヒト患者における有効性及び毒性について本発明のｒＡＡＶ分子を試験するように設計され得る。
【0175】
本発明の予防及び／または治療剤の毒性及び有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％の致死用量）及びＥＤ５０（集団の５０％で治療的に有効な用量）を決定するために、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定され得る。毒性と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、それは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。高い治療指数を示す予防及び／または治療剤が好ましい。毒性副作用を示す予防及び／または治療剤が使用され得るが、非感染細胞への潜在的な損傷を最小化し、それにより、副作用を減少させるために、そのような薬剤を罹患組織の部位に標的化する送達システムを設計するように注意が払われるべきである。
【0176】
本発明のｒＡＡＶ分子は、通常、所望の治療的及び／または予防的利益を得るために有効な時間及び量で投与される。細胞培養アッセイ及び動物研究から得られるデータは、ヒトにおいて使用するための予防及び／または治療剤の投薬量のための範囲及び／またはスケジュールを設計する際に使用され得る。そのような薬剤の投薬量は、毒性がほとんどないか全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内に入る。投薬量は、用いられる投薬形態及び利用される投与経路に応じてこの範囲内で変わり得る。
【0177】
患者のためのｒＡＡＶベクターの治療的有効投薬量は、通常、約１×１０９～約１×１０１６ゲノムｒＡＡＶベクター、または約１×１０１０～約１×１０１５、約１×１０１２～約１×１０１６、または約１×１０１４～約１×１０１６ＡＡＶゲノムの濃度を含有する約０．１ｍｌ～約１００ｍｌの溶液である。導入遺伝子の発現のレベルは、投薬量、頻度、スケジューリングなどを決定／調整するためにモニターされ得る。
【0178】
本発明の薬剤の治療的にまたは予防的に有効な量での対象の処置は、単回処置を含み得、または一連の処置を含み得る。例えば、本発明の薬剤を含む薬学的組成物は、１日１回、１日２回、または１日３回投与され得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、１日１回、１日おき、週１回、週２回、２週毎に１回、月１回、６週毎に１回、２ヶ月毎に１回、年２回、または年１回投与され得る。所定の薬剤の有効な投薬量、例えば、本発明の二重抗原結合分子を含む薬剤の有効な投薬量は、治療の過程で増加または減少し得ることも理解される。
【0179】
いくつかの実施形態では、進行中の処置は、慢性疾患または障害の進行中の処置及び／または管理におけるもののように、例えば、長期ベースで指示される。例えば、特定の実施形態では、本発明の薬剤は、所定の期間、例えば、少なくとも６ヶ月、少なくとも１年、少なくとも２年、少なくとも５年、少なくとも１０年、少なくとも１５年、少なくとも２０年、またはそれを必要とする対象の人生の残りの間にわたって投与される。
【0180】
本発明のｒＡＡＶ分子は、単独でまたは他の予防及び／または治療剤と組み合わせて投与され得る。各予防または治療剤は、同じ時間または異なる時点で任意の順序で順次に投与され得る；しかしながら、同じ時間に投与されない場合、それらは、所望の治療的または予防的効果を提供するように、十分に近い時間で投与されるべきである。各治療剤は、任意の適切な形態で及び任意の好適な経路によって別々に投与され得る。
【0181】
様々な実施形態では、異なる予防及び／または治療剤は、１時間未満の間隔で、約１時間の間隔で、約１時間～約２時間の間隔で、約２時間～約３時間の間隔で、約３時間～約４時間の間隔で、約４時間～約５時間の間隔で、約５時間～約６時間の間隔で、約６時間～約７時間の間隔で、約７時間～約８時間の間隔で、約８時間～約９時間の間隔で、約９時間～約１０時間の間隔で、約１０時間～約１１時間の間隔で、約１１時間～約１２時間の間隔で、２４時間以内の間隔で、または４８時間以内の間隔で投与される。所定の実施形態では、２つ以上の薬剤は、同一の患者来訪において投与される。
【0182】
本発明の薬剤を投与する方法には、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、及び皮下（注入またはボーラス注射を含む））、硬膜外、及び上皮または皮膚粘膜または粘膜内層（例えば、鼻腔内、経口粘膜、直腸、及び腸粘膜など）を介する吸収によるものが含まれるがこれらに限定されない。特定の実施形態では、導入遺伝子がＣＮＳにおいて発現することが意図されている場合などは、ベクターは、腰椎穿刺を介してまたは大槽を介して投与される。
【0183】
所定の実施形態では、本発明の薬剤は、静脈内に投与され、他の生物学的活性剤と一緒に投与され得る。
【0184】
別の特定の実施形態では、本発明の薬剤は、持続放出製剤で送達され得、例えば、その場合、製剤は、延長放出及びそれによる投与される薬剤の延長した半減期を提供する。使用に好適な制御放出システムには、限定されないが、拡散制御、溶媒制御、及び化学的制御システムが含まれる。拡散制御システムには、例えば、分子の放出が拡散障壁を介する透過によって制御されるように、本発明の分子がデバイス内に封入されたリザーバデバイスが含まれる。一般的なリザーバデバイスには、例えば、膜、カプセル、マイクロカプセル、リポソーム、及び中空ファイバーが含まれる。モノリス性（マトリックス）デバイスは、拡散制御システムのもう一つのタイプであり、二重抗原結合分子は、速度制御マトリックス（例えば、ポリマーマトリックス）に分散または溶解される。本発明の薬剤は、速度制御マトリックス全体を通して均質的に分散され得、放出の速度は、マトリックスを通して拡散によって制御される。モノリス性マトリックスデバイスにおいて使用するのに好適なポリマーには、天然に存在するポリマー、合成ポリマー及び合成的に改変された天然ポリマー、ならびにポリマー誘導体が含まれる。
【0185】
当業者に知られている任意の技術は、本明細書に記載の１つ以上の薬剤を含む持続放出製剤を生成するために使用され得る。例えば、米国特許番号４，５２６，９３８；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０５５４８；ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２０６９８；Ｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ－Ｒｅｌｅａｓｅ Ｇｅｌ，” Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ＆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，３９：１７９ １８９，１９９６；Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｌｕｎｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｏｎｇ－Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，” ＰＤＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５０：３７２ ３９７，１９９５；Ｃｌｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ａ ｂＦＧＦ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，” Ｐｒｏ．Ｉｎｔｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２４：８５３ ８５４，１９９７；及びＬａｍ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，” Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２４：７５９ ７６０，１９９７（その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。一実施形態では、ポンプが、制御放出システムにおいて使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ，ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．，１４：２０，１９８７；Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｒｇｅｒｙ，８８：５０７，１９８０；及びＳａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２１：５７４，１９８９参照）。別の実施形態では、ポリマー物質は、二重抗原結合分子、またはその抗原結合断片を含む薬剤の制御放出を達成するために使用され得る（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２３：６１，１９８３参照；また、Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２８：１９０，１９８５；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，２５：３５１，１９８９；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．，７ １：１０５，１９８９）；米国特許番号５，６７９，３７７；米国特許番号５，９１６，５９７；米国特許番号５，９１２，０１５；米国特許番号５，９８９，４６３；米国特許番号５，１２８，３２６；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／１５１５４；及びＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／２０２５３参照）。さらに別の実施形態では、制御放出システムは、治療標的の近傍（例えば、罹患関節）に配置され、よって、全身用量の一部のみを必要とし得る（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５ １３８（１９８４）参照）。他の制御放出システムは、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：１５２７ １５３３，１９９０によるレビューにおいて論述されている。
【0186】
また、ｒＡＡＶは、科学的研究、例えば、光遺伝学のためのｉｎ ｖｉｖｏ送達導入遺伝子、ｍｉＲＮＡでの遺伝子ノックダウン、条件的遺伝子欠損のためのリコンビナーゼ送達、ＣＲＩＳＰＲでの遺伝子編集などのために使用され得る。
【0187】
５．５．薬学的組成物及びキット
本発明は、薬学的に許容可能な担体及び本発明の薬剤を含む薬学的組成物をさらに提供し、前記薬剤は、本発明のｒＡＡＶ分子を含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、対象への投与のための薬学的に許容可能な担体と組み合わされたｒＡＡＶを含む。一実施形態では、用語「薬学的に許容可能な」は、連邦もしくは州政府の規制当局によって承認されているまたは米国薬局方もしくは動物、より具体的にはヒトにおいて使用するための他の一般的に認識されている薬局方に列挙されていることを意味する。用語「担体」は、薬剤と共に投与される希釈剤、アジュバント（例えば、フロイント完全及び不完全アジュバント）、賦形剤、またはビヒクルを指す。そのような薬学的担体は、滅菌液体、例えば、水及び、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む、石油、動物、植物、または合成起源のものを含む油であり得る。水は、薬学的組成物が静脈内に投与される場合に一般的な担体である。生理食塩溶液及び水性デキストロース及びグリセロール溶液もまた、液体担体、特に注射用溶液として用いられ得る。好適な薬学的賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、胡粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。薬学的に許容可能な担体、賦形剤、及び安定化剤のさらなる例には、緩衝液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン及びゼラチン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、当該技術分野で知られているように、ＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）が含まれるがこれらに限定されない。本発明の薬学的組成物にはまた、上記の成分に加えて、滑沢剤、湿潤剤、甘味料、香味剤、乳化剤、懸濁剤、及び防腐剤が含まれ得る。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、持続放出製剤などの形態をとり得る。
本発明は、薬学的に許容可能な担体及び本発明の薬剤を含む薬学的組成物をさらに提供し、前記薬剤は、本発明のｒＡＡＶ分子を含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、対象への投与のための薬学的に許容可能な担体と組み合わされたｒＡＡＶを含む。一実施形態では、用語「薬学的に許容可能な」は、連邦もしくは州政府の規制当局によって承認されているまたは米国薬局方もしくは動物、より具体的にはヒトにおいて使用するための他の一般的に認識されている薬局方に列挙されていることを意味する。用語「担体」は、薬剤と共に投与される希釈剤、アジュバント（例えば、フロイント完全及び不完全アジュバント）、賦形剤、またはビヒクルを指す。そのような薬学的担体は、滅菌液体、例えば、水及び、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む、石油、動物、植物、または合成起源のものを含む油であり得る。水は、薬学的組成物が静脈内に投与される場合に一般的な担体である。生理食塩溶液及び水性デキストロース及びグリセロール溶液もまた、液体担体、特に注射用溶液として用いられ得る。好適な薬学的賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、胡粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。薬学的に許容可能な担体、賦形剤、及び安定化剤のさらなる例には、緩衝液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン及びゼラチン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、当該技術分野で知られているように、ＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）が含まれるがこれらに限定されない。本発明の薬学的組成物にはまた、上記の成分に加えて、滑沢剤、湿潤剤、甘味料、香味剤、乳化剤、懸濁剤、及び防腐剤が含まれ得る。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、持続放出製剤などの形態をとり得る。
【0188】
本発明の所定の実施形態では、薬学的組成物は、本発明の方法に従って使用するために提供され、前記薬学的組成物は、治療的及び／または予防的有効量の本発明の薬剤を薬学的に許容可能な担体と一緒に含む。
【0189】
所定の実施形態では、本発明の薬剤は、実質的に純粋である（すなわち、その効果を制限するまたは望ましくない副作用をもたらす物質を実質的に含まない）。特定の実施形態では、宿主または対象は、動物、例えば、哺乳動物、例えば、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）及び霊長類（例えば、サル、例えば、カニクイザル及びヒト）である。所定の実施形態では、宿主は、ヒトである。
【0190】
本発明は、上記の方法において使用され得るキットをさらに提供する。一実施形態では、キットは、例えば、１つ以上の容器内に、本発明の１つ以上の薬剤を含む。別の実施形態では、キットは、１つ以上の容器内に、病態の処置に有用な１つ以上の他の予防または治療剤をさらに含む。
【0191】
本発明はまた、薬剤または活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封された容器に包装された本発明の薬剤を提供する。一実施形態では、薬剤は、密封容器において乾燥した滅菌凍結乾燥粉末または水非含有濃縮物として供給され、例えば、水または生理食塩水で、対象への投与のための適切な濃度に再構成され得る。典型的には、薬剤は、少なくとも５ｍｇ、より多くの場合、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、または少なくとも７５ｍｇの単位投薬量で密封容器において乾燥した滅菌凍結乾燥粉末として供給される。凍結乾燥薬剤は、その元の容器において２～８℃の間で保存されるべきであり、薬剤は、再構成された後１２時間以内、通常は６時間以内、５時間以内、３時間以内、または１時間以内に投与されるべきである。代替的な実施形態では、本発明の薬剤は、薬剤または活性剤の量及び濃度を示す密封容器において液体形態で供給される。典型的には、薬剤の液体形態は、密封容器において少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも２５ｍｇ／ｍｌで供給される。
【0192】
本発明の組成物には、薬学的組成物の製造において有用なバルク薬物組成物（例えば、非純粋または非滅菌組成物）及び薬学的組成物（すなわち、対象または患者への投与に好適な組成物）が含まれる。バルク薬物組成物は、例えば、予防的または治療的有効量の本明細書に開示される薬剤またはそれらの薬剤及び薬学的に許容可能な担体の組み合わせを含む単位投薬形態の調製において使用され得る。
【0193】
本発明は、本発明の薬剤のうちの１つ以上で満たされた１つ以上の容器を含む薬学的パックまたはキットをさらに提供する。また、標的疾患または障害の処置に有用な１つ以上の他の予防または治療剤もまた、薬学的パックまたはキットに含まれ得る。本発明はまた、本発明の薬学的組成物の成分のうちの１つ以上で満たされた１つ以上の容器を含む薬学的パックまたはキットを提供する。そのような容器（複数可）に任意に関連するものは、薬品または生物学的生成物の製造、使用または販売を規制する政府当局によって規定された形式の通知であり得、この通知は、ヒト投与についての製造、使用または販売の当局による承認を反映する。
【0194】
通常、本発明の組成物の成分は、例えば、薬剤または活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封された容器における乾燥した凍結乾燥粉末または水非含有濃縮物として、別々にまたは単位投薬形態で一緒に混合して供給される。組成物が注入によって投与される場合、それは、滅菌薬学的グレード水または生理食塩水を含有する注入ボトルを用いて分注され得る。組成物が注射によって投与される場合、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが、成分が投与前に混合され得るように提供され得る。
【実施例】
【0195】
以下の実施例は、挿入変異誘発を介するカプシド修飾のための候補を特定するためのＡＡＶ９カプシド上の表面露出ループの分析を報告する。本発明は、例として、ヒト軸糸ダイニン重鎖尾部に基づいて設計された７－ｍｅｒペプチドを含有するように修飾されたｒＡＡＶ９カプシドの構築を記載している。簡潔には、短いペプチド挿入物に適している可能性がある表面ループを選択するために３つの基準を使用した：１）隣接ループとの最小の側鎖相互作用；２）血清型間の可変配列及び構造（保存配列の欠如）；及び３）一般的に標的とされる中和抗体エピトープを妨害する潜在性。ペプチド挿入物変異体のパネルを構築し、個々の変異体を、実行可能なカプシド組み立て、ペプチド表面露出、及び効力についてスクリーニングした。次いで上位の候補をホーミングペプチドの挿入のためのテンプレートとして使用して、これらのペプチド挿入点が、ｒＡＡＶベクターを対象となる組織に再標的化するために使用できるかどうかを試験した。さらなる例は、本明細書に記載の改変ＡＡＶカプシドの一部について向上した形質導入及び組織指向性を実証する。
【0196】
６．１．実施例１－ＡＡＶ９カプシドの分析
図１及び２は、他のＡＡＶのＶＲ－ＩＶ（図１）に対するアミノ酸配列比較によるアデノ随伴ウイルス９型の可変領域４（ＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶ）の分析及びタンパク質モデル（図２）を示している。見られるように、ＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶは、３フォールドスパイクの先端または外側表面で表面上に露出している。さらなる分析は、ＶＲ－ＩＶとＶＲ－Ｖとの間のいくつかの側鎖相互作用が存在すること及びＶＲ－ＩＶの配列及び構造が、ＡＡＶ血清型間で可変であること、及びさらに、一般的に標的とされる中和抗体エピトープを妨害し、それにより、改変カプシドの免疫原性を減少させる潜在性が存在することを示していた。
図１及び２は、他のＡＡＶのＶＲ－ＩＶ（図１）に対するアミノ酸配列比較によるアデノ随伴ウイルス９型の可変領域４（ＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶ）の分析及びタンパク質モデル（図２）を示している。見られるように、ＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶは、３フォールドスパイクの先端または外側表面で表面上に露出している。さらなる分析は、ＶＲ－ＩＶとＶＲ－Ｖとの間のいくつかの側鎖相互作用が存在すること及びＶＲ－ＩＶの配列及び構造が、ＡＡＶ血清型間で可変であること、及びさらに、一般的に標的とされる中和抗体エピトープを妨害し、それにより、改変カプシドの免疫原性を減少させる潜在性が存在することを示していた。
【0197】
６．２．実施例２－ＡＡＶ９変異体の構築
８種のＡＡＶ９変異体を、各々がＶＲ－ＩＶループにおける異なる挿入点で異種ペプチドを含むように構築した。異種ペプチドは、表４に示されているように、ｐＲＧＮＸ１０９０～１０９７として特定されるベクターにおける以下の残基の直後に挿入されたＦＬＡＧタグであった。
８種のＡＡＶ９変異体を、各々がＶＲ－ＩＶループにおける異なる挿入点で異種ペプチドを含むように構築した。異種ペプチドは、表４に示されているように、ｐＲＧＮＸ１０９０～１０９７として特定されるベクターにおける以下の残基の直後に挿入されたＦＬＡＧタグであった。
【表4】
【0198】
６．３．実施例３－パッケージング効率の分析
図３は、野生型ＡＡＶ９及び８種の候補ｒＡＡＶ９ベクター（１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、及び１０９７）のｍＬ当たりのゲノムコピー（ＧＣ／ｍＬ）の観点からの高いパッケージング効率を示しており、候補ベクターは、それぞれ、ＡＡＶ９のＶＲ－ＩＶの中の異なる部位でＦＬＡＧ挿入物を含有する。すべてのベクターを１０ｍＬの培養物中でルシフェラーゼ導入遺伝子と共にパッケージングして、どの挿入点がカプシドパッケージングを妨害したかの決定を容易化した；エラーバーは、平均の標準誤差を表す。
図３は、野生型ＡＡＶ９及び８種の候補ｒＡＡＶ９ベクター（１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、及び１０９７）のｍＬ当たりのゲノムコピー（ＧＣ／ｍＬ）の観点からの高いパッケージング効率を示しており、候補ベクターは、それぞれ、ＡＡＶ９のＶＲ－ＩＶの中の異なる部位でＦＬＡＧ挿入物を含有する。すべてのベクターを１０ｍＬの培養物中でルシフェラーゼ導入遺伝子と共にパッケージングして、どの挿入点がカプシドパッケージングを妨害したかの決定を容易化した；エラーバーは、平均の標準誤差を表す。
【0199】
見られるように、すべての候補が高効率でパッケージングする。
【0200】
６．４．実施例４－表面ＦＬＡＧ露出の分析
図４は、抗ＦＬＡＧ樹脂への結合による形質導入ベクターの免疫沈降によって確認された、８種の候補ｒＡＡＶ９ベクター（１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、及び１０９７）の各々におけるＦＬＡＧ挿入物の表面露出を示している。抗ＦＬＡＧへの結合は、表面上にペプチド挿入物を提示するカプシドの形成を可能にする挿入点を示している。
図４は、抗ＦＬＡＧ樹脂への結合による形質導入ベクターの免疫沈降によって確認された、８種の候補ｒＡＡＶ９ベクター（１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、及び１０９７）の各々におけるＦＬＡＧ挿入物の表面露出を示している。抗ＦＬＡＧへの結合は、表面上にペプチド挿入物を提示するカプシドの形成を可能にする挿入点を示している。
【0201】
形質導入された細胞を溶解し、遠心分離した。５００μＬの細胞培養上清を２０μＬのアガロース－ＦＬＡＧビーズにロードし、ゲルにも直接的にロードされるＳＤＳ－ＰＡＧＥロードバッファーで溶出させた。陰性対照のため、ＦＬＡＧ挿入物を含有しない２９３－ｓｓｃ上清を使用した。
【0202】
見られるように、１０９０は、候補ベクターのうち最も低い力価を有し、最も少ないタンパク質プルダウンを示していた。陽性対照でも極めて低い力価が確認された。ＳＤＳ－ＰＡＧＥでの可視化のために十分ではない量の陽性対照がロードされたようである。
【0203】
６．５．実施例５－形質導入効率の分析
図５Ａ～５Ｂは、野生型ＡＡＶ９（９－ｌｕｃ）、または８種の候補ｒＡＡＶ９ベクター（１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、及び１０９７）の各々のいずれかにパッケージングされた、導入遺伝子としてルシフェラーゼ遺伝子を保有するカプシドベクターで形質導入されたＬｅｃ２細胞における形質導入効率を示しており；活性は、９－ｌｕｃの活性を１００％として採用してルシフェラーゼ活性パーセントとして（図５Ａ）、またはタンパク質のマイクログラム当たりの相対光単位（ＲＬＵ）として（図５Ｂ）表されている。
図５Ａ～５Ｂは、野生型ＡＡＶ９（９－ｌｕｃ）、または８種の候補ｒＡＡＶ９ベクター（１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、及び１０９７）の各々のいずれかにパッケージングされた、導入遺伝子としてルシフェラーゼ遺伝子を保有するカプシドベクターで形質導入されたＬｅｃ２細胞における形質導入効率を示しており；活性は、９－ｌｕｃの活性を１００％として採用してルシフェラーゼ活性パーセントとして（図５Ａ）、またはタンパク質のマイクログラム当たりの相対光単位（ＲＬＵ）として（図５Ｂ）表されている。
【0204】
ＣＨＯ由来Ｌｅｃ２細胞をαＭＥＭ及び１０％ＦＢＳ中で成長させた。Ｌｅｃ２細胞を約２×１０８ＧＣベクターのＭＯＩ（約１０，０００のＭＯＩ）で形質導入し、ＶｉｒａＤｕｃｔｉｎ試薬で処置した（Ｌｅｃ２細胞を約１０，０００ＧＣ／細胞のＭＯＩで形質導入したが４０μｇ／ｍＬの塩化亜鉛（ＺｎＣｌ２）で処置したものについて同様の結果が観察された；結果は示されていない）。Ｌｅｃ２細胞は、ＣＨＯからのプロリン栄養要求株である。
【0205】
見られるように、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの形質導入効率は、野生型ＡＡＶ９（９－ｌｕｃ）を使用して得られたものよりも低い。それにもかかわらず、先行研究は、ホーミングペプチドの導入が、非標的細胞（２９３、Ｌｅｃ２、またはＨｅＬａなど）においてｉｎ ｖｉｔｒｏ遺伝子移行を減少させ得るのに対し、標的細胞におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ遺伝子移行を有意に増加させることを示している（例えば、Ｎｉｃｋｌｉｎ ｅｔ ａｌ．２００１；及びＧｒｉｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．２００１参照）。
【0206】
６．６．実施例６－挿入ペプチドの組成及び長さの要因としてのパッケージング効率の分析
図６Ａは、様々なペプチドの長さ及び組成のＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８）のＳ４５４の直後の挿入物が、パッケージング細胞株におけるＡＡＶ粒子の生成効率に影響を及ぼし得ることを図示している棒グラフを示している。様々な組成及び長さの１０種のペプチドを、ＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶの中のＳ４５４の後（残基４５４及び４５５の間）に挿入した。トランスフェクションから５日後にトランスフェクションされた浮遊ＨＥＫ２９３細胞の収穫された上清についてｑＰＣＲを実施した。棒グラフに示された結果は、挿入物の特質及び長さが、２９３細胞においてＡＡＶ粒子が高力価で生成され、パッケージングされる能力に影響を及ぼし得ることを実証している。（エラーバーは、Ｙ軸において括弧で記されているペプチドの平均長さの標準誤差を表す）。
図６Ａは、様々なペプチドの長さ及び組成のＡＡＶ９カプシド（配列番号１１８）のＳ４５４の直後の挿入物が、パッケージング細胞株におけるＡＡＶ粒子の生成効率に影響を及ぼし得ることを図示している棒グラフを示している。様々な組成及び長さの１０種のペプチドを、ＡＡＶ９ ＶＲ－ＩＶの中のＳ４５４の後（残基４５４及び４５５の間）に挿入した。トランスフェクションから５日後にトランスフェクションされた浮遊ＨＥＫ２９３細胞の収穫された上清についてｑＰＣＲを実施した。棒グラフに示された結果は、挿入物の特質及び長さが、２９３細胞においてＡＡＶ粒子が高力価で生成され、パッケージングされる能力に影響を及ぼし得ることを実証している。（エラーバーは、Ｙ軸において括弧で記されているペプチドの平均長さの標準誤差を表す）。
【0207】
Ｓ４５４挿入部位で以下のペプチド配列（表５）のホーミングペプチドを含有するカプシドタンパク質を有するＡＡＶ９ベクターを研究した。浮遊適合ＨＥＫ２９３細胞を、１０ｍＬの培地中で形質導入の１日前に１×１０６細胞／ｍＬで播種した。三重プラスミドＤＮＡトランスフェクションをＰＥＩｐｒｏ（登録商標）（Ｐｏｌｙｐｕｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）を用いて１：１．７５のＤＮＡ：ＰＥＩ比で行った。トランスフェクションの５日後に細胞を遠沈し、上清を収穫し、－８０℃で保存した。
【表5】
【0208】
トランスフェクションから５日後に収穫されたトランスフェクションされた浮遊ＨＥＫ２９３細胞の上清についてｑＰＣＲを実施した。サンプルをＤＮａｓｅ Ｉ処置に供して残留プラスミドまたは細胞性ＤＮＡを除去し、次いで熱処理してＤＮａｓｅ Ｉを不活性化し、カプシドを変性させた。サンプルをＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ、Ｎｏ ＡｍｐＥｒａｓｅＵＮＧ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び導入遺伝子コンストラクトにパッケージングされたＰｏｌｙＡ配列に対するプライマー／プローブを使用してｑＰＣＲを介して力価測定した。標準曲線を、ＲＧＸ－５０１ベクターＢＤＳを使用して確立した。
【0209】
長さが５～１０アミノ酸の範囲のＳ４５４の直後のペプチド挿入物は、適正な力価を有するＡＡＶ粒子を生成した一方で、１２アミノ酸の長さを有するペプチド挿入物については有意なパッケージング欠損が観察されたことに伴い、サイズ上限がある可能性がある。
【0210】
６．７．実施例７－ホーミングペプチドは、Ｓ４５４の後に挿入された場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＡＡＶ９の形質導入特性を変化させる。
図６Ｂ～Ｅは、（図６Ｂ）Ｌｅｃ２細胞株（シアル酸欠損上皮細胞株）（図６Ｃ）ＨＴ－２２細胞株（ニューロン細胞株）、（図６Ｄ）ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞株（脳内皮細胞株）、及び（図６Ｅ）Ｃ２Ｃ１２細胞株（筋肉細胞株）の細胞培養物の蛍光画像を示している。ＧＦＰ導入遺伝子を含有する表５のＡＡＶ９野生型及びＳ４５４挿入ホーミングペプチドカプシドを使用して前述の細胞株を形質導入した。
図６Ｂ～Ｅは、（図６Ｂ）Ｌｅｃ２細胞株（シアル酸欠損上皮細胞株）（図６Ｃ）ＨＴ－２２細胞株（ニューロン細胞株）、（図６Ｄ）ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞株（脳内皮細胞株）、及び（図６Ｅ）Ｃ２Ｃ１２細胞株（筋肉細胞株）の細胞培養物の蛍光画像を示している。ＧＦＰ導入遺伝子を含有する表５のＡＡＶ９野生型及びＳ４５４挿入ホーミングペプチドカプシドを使用して前述の細胞株を形質導入した。
【0211】
細胞株を形質導入の２４時間前に５～２０×１０３細胞／ウェル（細胞株による）で９６ウェルに播種した。細胞をＡＡＶ９－ＧＦＰベクター（挿入物を有するまたは有さない）で１×１０１０粒子／ウェルで形質導入し、各細胞株において発現速度の相違に応じて、形質導入から４８～９６時間後にＣｙｔａｔｉｏｎ５（ＢｉｏＴｅｋ）を介して分析した。Ｌｅｃ２細胞を実施例５のように培養し、血液脳関門ｈＣＭＥＣ／Ｄ３（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）細胞を製造業者のプロトコルに従って培養し、ＨＴ－２２及びＨＵＨ７細胞をＤＭＥＭ及び１０％ＦＢＳ中で培養し、Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞をＤＭＥＭ及び１０％ＦＢＳに播種し、２％ウマ血清及び０．１％インスリンが補充されたＤＭＥＭ中でトランスフェクション前の３日間分化させた。ＡＡＶ９．Ｓ４５４．ＦＬＡＧは、試験されたすべての細胞タイプにおいて低い形質導入レベルを示した。
【0212】
画像は、未改変ＡＡＶ９カプシドと比較して、ＡＡＶ９カプシドタンパク質においてＳ４５４の後に挿入された場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＡＡＶ９の形質導入特性を変化させ得ることを示している。すべての細胞株についてＰ７（ＴｆＲ１ペプチド、ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号１７））は、最も高い形質導入率を示し、これにＰ９（ＴｆＲ３ペプチド、ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９））が続いた。Ｐ４（腎臓１ペプチド、ＬＰＶＡＳ（配列番号１３））は、すべての細胞タイプについてＡＡＶ９野生型のものよりもわずかに高い形質導入率を示した。Ｌｅｃ２及びＨＴ－２２細胞株培養物と比較して、脳内皮ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞株及びＣ２Ｃ１２筋肉細胞株培養物では、Ｐ６（筋肉１ペプチド、ＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４））についてより高い形質導入率が観察された。Ｐ１ベクターは、極端に低い形質導入効率のため画像に含まれず、Ｐ８ベクターは、低い力価のため含まれなかった。
【0213】
６．８．実施例８－ヒト軸糸ダイニン（ＨＡＤ）の分析
図７Ａ～７Ｍは、ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列をそれぞれ示している。
図７Ａ～７Ｍは、ヒト軸糸ダイニン１～１２、１４及び１７の重鎖尾部ドメインについてのアミノ酸配列をそれぞれ示している。
【0214】
６．９．実施例９－ペプチド挿入点のためのＡＡＶカプシドの分析
図８は、灰色で強調されたＶＰ２の開始コドン、可変領域１（ＶＲ－Ｉ）、可変領域４（ＶＲ－ＩＶ）、及び可変領域８（ＶＲ－ＶＩＩＩ）の中または近くのヒト軸糸ダイニンペプチドのための挿入部位内のＡＡＶ１～９ｅ、ｒｈ１０、ｒｈ２０、ｒｈ３９、ｒｈ７４及びｈｕ．３７カプシド配列のアライメントを示しており、各カプシドタンパク質の可変領域８（ＶＲ－ＶＩＩＩ）の中の特定の挿入部位は、記号「＃」によって示されている（ＡＡＶ９のアミノ酸付番に従ってアミノ酸残基５８８の後）。
図８は、灰色で強調されたＶＰ２の開始コドン、可変領域１（ＶＲ－Ｉ）、可変領域４（ＶＲ－ＩＶ）、及び可変領域８（ＶＲ－ＶＩＩＩ）の中または近くのヒト軸糸ダイニンペプチドのための挿入部位内のＡＡＶ１～９ｅ、ｒｈ１０、ｒｈ２０、ｒｈ３９、ｒｈ７４及びｈｕ．３７カプシド配列のアライメントを示しており、各カプシドタンパク質の可変領域８（ＶＲ－ＶＩＩＩ）の中の特定の挿入部位は、記号「＃」によって示されている（ＡＡＶ９のアミノ酸付番に従ってアミノ酸残基５８８の後）。
【0215】
６．１０．実施例１０－ＡＲＡ２９０を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図９は、ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列のＱ５８８及びＡ５８９の間にＡＲＡ２９０のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドについてのアミノ酸配列を示している（配列番号１５３）。
図９は、ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列のＱ５８８及びＡ５８９の間にＡＲＡ２９０のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドについてのアミノ酸配列を示している（配列番号１５３）。
【0216】
６．１１．実施例１１－様々なベクターのＡＡＶゲノムコピー／μｇゲノムＤＮＡの比較
図１０は、ＡＡＶベクター：ＡＡＶ９；ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ；ＡＡＶ．ｈＤｙｎ（カプシド配列に対して他のアミノ酸改変を有さない５８８～５８９の間にＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を有するＡＡＶ９））；ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｓ；及びＡＡＶ．ＰＨＰ．ＳＨ（表１０参照）の投与後の、マウス脳細胞において発現したＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）導入遺伝子のコピーを示している。
図１０は、ＡＡＶベクター：ＡＡＶ９；ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ；ＡＡＶ．ｈＤｙｎ（カプシド配列に対して他のアミノ酸改変を有さない５８８～５８９の間にＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を有するＡＡＶ９））；ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｓ；及びＡＡＶ．ＰＨＰ．ＳＨ（表１０参照）の投与後の、マウス脳細胞において発現したＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）導入遺伝子のコピーを示している。
【0217】
ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂは、カプシド配列に対して他のアミノ酸改変を有さない、ＡＡＶ９カプシドにおけるＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）挿入物を有するカプシドである。ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢは、ＰＨＰ．Ｂ挿入物のカプシド配列上流の２つのアミノ酸改変を有する、ＡＡＶ９カプシドにおけるＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）挿入物を有するカプシドである（表１０も参照）。表６Ａは、研究において利用されたカプシドをまとめている。
【表6A】
【0218】
物質及び方法
ＧＦＰ導入遺伝子をコードするＡＡＶ９、ＡＡＶ．ＰＨＰｅＢ、ＡＡＶ．ｈＤｙｎ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｓ及びＡＡＶ．ＰＨＰ．ＳＨ のコンストラクトを調製し、１×ＰＢＳ＋０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ中で製剤化した。雌のＣ５７ＢＬ／６マウスを、１日目の体重に基づいて処置群に無作為化した。雌のＣ５７ＢＬ／６マウスの５つの群に、以下の表６Ｂに従って、ＡＡＶ９．ＧＦＰ、ＡＡＶ．ＰＨＰｅＢ．ＧＦＰ、ＡＡＶ．ｈＤｙｎ．ＧＦＰ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｓ．ＧＦＰまたはＡＡＶ．ＰＨＰ．ＳＨ．ＧＦＰをそれぞれ静脈内投与した。投薬体積は、１０ｍＬ／ｋｇ（０．２００ｍＬ／２０ｇマウス）であった。マウスは、開始日に８～１２週齢であった。投与後１５日目に、動物を安楽死させ、脳組織、肝臓、前肢二頭筋、心臓、腎臓、肺、卵巣、及び座骨神経を含む末梢組織を収集した。
ＧＦＰ導入遺伝子をコードするＡＡＶ９、ＡＡＶ．ＰＨＰｅＢ、ＡＡＶ．ｈＤｙｎ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｓ及びＡＡＶ．ＰＨＰ．ＳＨ のコンストラクトを調製し、１×ＰＢＳ＋０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ中で製剤化した。雌のＣ５７ＢＬ／６マウスを、１日目の体重に基づいて処置群に無作為化した。雌のＣ５７ＢＬ／６マウスの５つの群に、以下の表６Ｂに従って、ＡＡＶ９．ＧＦＰ、ＡＡＶ．ＰＨＰｅＢ．ＧＦＰ、ＡＡＶ．ｈＤｙｎ．ＧＦＰ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｓ．ＧＦＰまたはＡＡＶ．ＰＨＰ．ＳＨ．ＧＦＰをそれぞれ静脈内投与した。投薬体積は、１０ｍＬ／ｋｇ（０．２００ｍＬ／２０ｇマウス）であった。マウスは、開始日に８～１２週齢であった。投与後１５日目に、動物を安楽死させ、脳組織、肝臓、前肢二頭筋、心臓、腎臓、肺、卵巣、及び座骨神経を含む末梢組織を収集した。
【表6B】
【0219】
定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を使用して脳ゲノムＤＮＡのμｇ当たりのベクターゲノムの数を決定した。注射されたマウスからの脳サンプルを処理し、Ｑｉａｇｅｎ製のＢｌｏｏｄ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡキットを使用してゲノムＤＮＡを単離した。標準曲線法に従ってｅＧＦＰに特異的なプライマー－プローブの組み合わせを使用してＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ５装置（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ）でｑＰＣＲアッセイを実行した。
【0220】
脳ゲノムＤＮＡのμｇ当たりのＡＡＶベクターゲノムコピーは、ＡＡＶ．ｈＤｙｎが投与されたマウスでは、すべての他のＡＡＶ血清型：ＡＡＶ９、ＡＡＶ．ＰＨＰｅＢ、ＰＨＰ．Ｓ、及びＰＨＰ．ＳＨと比較して、少なくとも１ｌｏｇ高かった（図１０参照）。この研究で見られるように、ＧＣ／μｇゲノムＤＮＡは、ＡＡＶ．ｈＤｙｎで最も高く、これは、ＡＡＶ９カプシドの残基５８８～５８９の間に「ＴＬＡＡＰＦＫ」（配列番号２）ペプチド挿入物（ヒト軸糸ダイニンからのペプチド）を含有するＡＡＶ９カプシドである。研究は、ｅＧＦＰを保有するＡＡＶ．ｈＤｙｎが全身的に投与された５匹のマウスにおいて、平均で１Ｅ０４ＧＣ／μｇ導入遺伝子を超えてマウス脳における形質導入を実証した。しかしながら、「ＴＬＡＶＰＦＫ」（配列番号２７）配列（マウスダイニンからのペプチド）を含有するベクターＡＡＶ．ＰＨＰｅＢを含む他の改変されたＡＡＶ９カプシドは、全身的処置をすると１Ｅ０３ＧＣ／μｇ導入遺伝子を下回ってマウス脳における形質導入を実証した。
【0221】
６．１２．実施例１２－処置の方法における組織ホーミングｒＡＡＶベクターの使用
核酸（導入遺伝子）を提供することによって処置／予防され得る障害を特定する（表３Ａ～３Ｂ参照）。標的組織に関連する障害を有する対象を特定する。対象に、第１の量の本発明のｒＡＡＶベクターを投与し、そのベクターは、標的組織にホーミングし、送達される導入遺伝子を保有するペプチド挿入物を有するカプシドタンパク質を含む。必要な場合、治療的有効量の導入遺伝子が標的組織に送達されて治療的または予防的利益が対象に提供されるまで第２または第３の用量のベクターを対象に投与する。
核酸（導入遺伝子）を提供することによって処置／予防され得る障害を特定する（表３Ａ～３Ｂ参照）。標的組織に関連する障害を有する対象を特定する。対象に、第１の量の本発明のｒＡＡＶベクターを投与し、そのベクターは、標的組織にホーミングし、送達される導入遺伝子を保有するペプチド挿入物を有するカプシドタンパク質を含む。必要な場合、治療的有効量の導入遺伝子が標的組織に送達されて治療的または予防的利益が対象に提供されるまで第２または第３の用量のベクターを対象に投与する。
【0222】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子を網膜に投与するための方法が提供され、これにより、導入遺伝子をカプシドで内包したＡＡＶ．ｈＤｙｎカプシドが静脈内に、全身的にまたは硝子体内に投与される。
【0223】
６．１３．実施例１３－ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図１１Ａは、ＶＲ－ＩＩＩＶのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
図１１Ａは、ＶＲ－ＩＩＩＶのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0224】
図１１Ｂは、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間にアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0225】
図１１Ｃは、ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0226】
６．１４．実施例１４－ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図１２Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
図１２Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0227】
図１２Ｂは、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間にアミノ酸配列ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0228】
図１２Ｃは、ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0229】
６．１５．実施例１５－ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図１３Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
図１３Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0230】
図１３Ｂは、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間にアミノ酸配列ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0231】
図１３Ｃは、ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0232】
６．１６．実施例１６－ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図１４Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
図１４Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0233】
図１４Ｂは、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間にアミノ酸配列ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0234】
図１４Ｃは、ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0235】
６．１７．実施例１７－ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図１５Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
図１５Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0236】
図１５Ｂは、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間にアミノ酸配列ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0237】
図１５Ｃは、ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0238】
６．１８．実施例１８－ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図１６Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
図１６Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0239】
図１６Ｂは、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間にアミノ酸配列ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0240】
図１６Ｃは、ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0241】
６．１９．実施例１９－ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図１７Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
図１７Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＱ５８８及びＡ５８９の間にアミノ酸配列ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0242】
図１７Ｂは、ＶＲ－ＩＩＩのＳ２６８及びＳ２６９の間にアミノ酸配列ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0243】
図１７Ｃは、ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0244】
６．２０．実施例２０－ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図１８Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＮ５９０及びＴ５９１の間にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
図１８Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＮ５９０及びＴ５９１の間にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0245】
図１８Ｂは、ＶＲ－ＩＩＩのＡ２６９及びＴ２７０の間にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0246】
図１８Ｃは、ＶＲ－ＩＶのＴ４５３及びＴ４５４の間にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0247】
６．２１．実施例２１－ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図１９Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＮ５９０及びＴ５９１の間にアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
図１９Ａは、ＶＲ－ＶＩＩＩのＮ５９０及びＴ５９１の間にアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0248】
図１９Ｂは、ＶＲ－ＩＩＩのＡ２６９及びＴ２７０の間にアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0249】
図１９Ｃは、ＶＲ－ＩＶのＴ４５３及びＴ４５４の間にアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ８ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。挿入されたペプチドは太字。
【0250】
６．２２．実施例２２：ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの改変カプシドの評価
ＡＡＶカプシド配列をペプチド挿入物または誘導変異誘発のいずれかによって改変し、プールして、ＧＦＰ発現カセットと共にパッケージングされたバーコード化ライブラリを得た。次いで次世代シーケンシング（ＮＧＳ）及び定量ＰＣＲを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、及びマウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏ生体内分布について改変ベクターを評価した。ＡＡＶ．ｈＤｙｎをこのプールからの高い脳形質導入ベクターとして特定し、さらにマウスにおける個々の送達研究において評価して、その形質導入プロファイルを特性化した。また、このベクターの細胞指向性を理解するために脳切片の免疫組織化学分析を実施した。
ＡＡＶカプシド配列をペプチド挿入物または誘導変異誘発のいずれかによって改変し、プールして、ＧＦＰ発現カセットと共にパッケージングされたバーコード化ライブラリを得た。次いで次世代シーケンシング（ＮＧＳ）及び定量ＰＣＲを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、及びマウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏ生体内分布について改変ベクターを評価した。ＡＡＶ．ｈＤｙｎをこのプールからの高い脳形質導入ベクターとして特定し、さらにマウスにおける個々の送達研究において評価して、その形質導入プロファイルを特性化した。また、このベクターの細胞指向性を理解するために脳切片の免疫組織化学分析を実施した。
【0251】
６．２２．１ 実施例２２Ａ－血液脳関門を通過する形質導入のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験
改変カプシドが血液脳関門を通過する能力を、ｈＣＭＥＣ／Ｄ３ ＢＢＢ細胞（ＳＣＣ０６６、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ－Ｓｉｇｍａ）を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏトランズウェルアッセイにおいて試験した（図２０Ａ～２０Ｂ参照）。より具体的には、Ｓａｄｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１４ ＰＬｏＳ ＯＮＥ ９（４）：ｅ９６３４０）Ａ ｈｕｍａｎ Ｂｌｏｏｄ－Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ ｔｒａｎｓｃｙｔｏｓｉｓ ａｓｓａｙ ｒｅｖｅａｌｓ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｒａｎｓｃｙｔｏｓｉｓ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｐＨ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂｉｎｄｉｎｇ，Ａｐｒｉｌ ２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｉｓｓｕｅ ４；及びＺｈａｎｇ，Ｘ．，Ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ ｓｈｕｔｔｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｅｎｈａｎｃｅ ＡＡＶ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ａｆｔｅｒ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，２０１８ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １７６：７１－８３からアッセイを本質的に適合させた。簡潔には、５×１０４個のｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞／ｃｍ２を１２ウェルプレートにおいてコラーゲン被覆トランズウェルインサートに播種した。各インサートは、５００μＬの培地を含有し、下部チャンバーは、１ｍＬの培地を含有していた。培地を１日おきに交換した。播種後１０日の時点で上清を除去した（ゼロ（０）時点）。この０時点で、１×１０９ＧＣのベクターを上側インサートチャンバーの培地に加えることによって細胞を形質導入した。１０μＬの下側チャンバーの上清サンプルを形質導入から０．５、３、６、及び２３時間後に間隔を空けて試験のために取り除いた。各条件（ベクター）を二重に試験し、力価についてＰｏｌｙＡに対するｑＰＣＲを介して三重に測定した。
改変カプシドが血液脳関門を通過する能力を、ｈＣＭＥＣ／Ｄ３ ＢＢＢ細胞（ＳＣＣ０６６、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ－Ｓｉｇｍａ）を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏトランズウェルアッセイにおいて試験した（図２０Ａ～２０Ｂ参照）。より具体的には、Ｓａｄｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１４ ＰＬｏＳ ＯＮＥ ９（４）：ｅ９６３４０）Ａ ｈｕｍａｎ Ｂｌｏｏｄ－Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ ｔｒａｎｓｃｙｔｏｓｉｓ ａｓｓａｙ ｒｅｖｅａｌｓ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｒａｎｓｃｙｔｏｓｉｓ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｐＨ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂｉｎｄｉｎｇ，Ａｐｒｉｌ ２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｉｓｓｕｅ ４；及びＺｈａｎｇ，Ｘ．，Ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ ｓｈｕｔｔｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｅｎｈａｎｃｅ ＡＡＶ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ａｆｔｅｒ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，２０１８ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １７６：７１－８３からアッセイを本質的に適合させた。簡潔には、５×１０４個のｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞／ｃｍ２を１２ウェルプレートにおいてコラーゲン被覆トランズウェルインサートに播種した。各インサートは、５００μＬの培地を含有し、下部チャンバーは、１ｍＬの培地を含有していた。培地を１日おきに交換した。播種後１０日の時点で上清を除去した（ゼロ（０）時点）。この０時点で、１×１０９ＧＣのベクターを上側インサートチャンバーの培地に加えることによって細胞を形質導入した。１０μＬの下側チャンバーの上清サンプルを形質導入から０．５、３、６、及び２３時間後に間隔を空けて試験のために取り除いた。各条件（ベクター）を二重に試験し、力価についてＰｏｌｙＡに対するｑＰＣＲを介して三重に測定した。
【0252】
図２０Ａ～２０Ｂは、血液脳関門（ＢＢＢ）細胞層を通過するＡＡＶ．ｈＤｙｎ（アミノ酸残基５８８～５８９の間にＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を有するＡＡＶ９）についてのｉｎ ｖｉｔｒｏトランズウェルアッセイ（２０Ａ）、及びＡＡＶ．ｈＤｙｎ（図において反転三角によって示されている）が、ＡＡＶ９（四角）よりも早く、また、ＡＡＶ２（丸）よりも早く、かつ高い程度までアッセイのＢＢＢ細胞層を通過することを示す結果（図２０Ｂ）を示している。開発されたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、向上したＢＢＢ通過トラフィッキングを予測し、同様のアッセイは、他の器官への標的化を予測するためにも使用され得る。
【0253】
６．２２．２ 実施例２２Ｂ－改変カプシドの形質導入及び生体内分布
６．２２．２．１ 物質及び方法
ＶＲ－ＩＶの位置Ｓ４５４の後に（表７）またはＡＡＶカプシドのＶＲ－ＶＩＩＩ表面露出ループの位置Ｑ５８８の後に様々なペプチド配列を挿入することによって、ならびにアミノ酸１３７（ＡＡＶ４、ＡＡＶ４－４、及びＡＡＶ５）でまたはアミノ酸１３８（ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３－３、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９ｅ、ｒｈ．１０、ｒｈ．２０、ｒｈ．３９、ｒｈ．７４、及びｈｕ．３７）（図８）で開始するＶＰ２の開始コドンの後に挿入物を挿入することによって、広く使用されているＡＡＶカプシド（ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、及びＡＡＶｒｈ．１０を含む）に対してカプシド改変を実施した（所定のカプシド配列については表１０も参照）。選択された単数～複数のアミノ酸変異もまた、カプシドを改変するために使用した。Ｙｏｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｇｕｉｄｅｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｏｓｅｄ ｌｏｏｐｓ ｏｎ ＡＡＶ Ｃａｐｓｉｄｓ．２０１９．ＡＳＧＣＴ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ；及びＷｕ ｅｔ ａｌ．，２０００ Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（ｓｕｐｒａ）も参照されたい。パッケージング効率は、小規模ではこれらのカプシド改変のいずれかの後に悪影響を受けないことが確認された。
６．２２．２．１ 物質及び方法
ＶＲ－ＩＶの位置Ｓ４５４の後に（表７）またはＡＡＶカプシドのＶＲ－ＶＩＩＩ表面露出ループの位置Ｑ５８８の後に様々なペプチド配列を挿入することによって、ならびにアミノ酸１３７（ＡＡＶ４、ＡＡＶ４－４、及びＡＡＶ５）でまたはアミノ酸１３８（ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３－３、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９ｅ、ｒｈ．１０、ｒｈ．２０、ｒｈ．３９、ｒｈ．７４、及びｈｕ．３７）（図８）で開始するＶＰ２の開始コドンの後に挿入物を挿入することによって、広く使用されているＡＡＶカプシド（ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、及びＡＡＶｒｈ．１０を含む）に対してカプシド改変を実施した（所定のカプシド配列については表１０も参照）。選択された単数～複数のアミノ酸変異もまた、カプシドを改変するために使用した。Ｙｏｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｇｕｉｄｅｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｏｓｅｄ ｌｏｏｐｓ ｏｎ ＡＡＶ Ｃａｐｓｉｄｓ．２０１９．ＡＳＧＣＴ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ；及びＷｕ ｅｔ ａｌ．，２０００ Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（ｓｕｐｒａ）も参照されたい。パッケージング効率は、小規模ではこれらのカプシド改変のいずれかの後に悪影響を受けないことが確認された。
【0254】
所定の改変カプシドを有するｒＡＡＶを、実施例５において上述したように、Ｌｅｃ２細胞においてｉｎ ｖｉｔｒｏで形質導入について試験した。Ｌｅｃ２細胞における形質導入について試験された改変ＡＡＶは以下の通りである：ＡＡＶ９と比較して、ｅＢ ５８８ Ａｄ、ｅＢ ５８８ Ｈｅｐ、ｅＢ ５８８ ｐ７９、ｅＢ ５８８ Ｒａｂ、ＡＡＶ９ ５８８ Ａｄ、ＡＡＶ９ ５８８ Ｈｅｐ、ＡＡＶ９ ５８８ ｐ７９、ＡＡＶ９ ５８８ Ｒａｂ、ｅＢ ＶＰ２ Ａｄ、ｅＢ ＶＰ２ Ｈｅｐ、ｅＢ ＶＰ２ ｐ７９、ｅＢ ＶＰ２ Ｒａｂ、ＡＡＶ９ ＶＰ２ Ａｄ、ＡＡＶ９ ＶＰ２ Ｈｅｐ、ＡＡＶ９ ＶＰ２ ｐ７９、ＡＡＶ９ ＶＰ２Ｒａｂ。ＡＡＶカプシドの同一性については以下の表７Ｂを参照されたい。
【0255】
生体内分布を試験するために、改変ＡＡＶを、各々の個々のカプシドに対応する特定のバーコードを含有するｅＧＦＰ導入遺伝子カセットと共にパッケージングした。スクリーニングの効率を向上させるために新規バーコード化ベクターをプールし、マウスに注射した。
【0256】
遺伝子変化したＡＡＶベクターの生体内分布を分析するために、ＧＦＰをコードする様々なベクターを調製し、１×ＰＢＳ＋０．０００１％プルロニック酸中で製剤化した。すべてのベクターは、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）ライブラリ（プール）調製を可能にするために１０ｂｐのバーコードを含有するシスプラスミドを用いて作製した。３つのベクタープール（研究１、研究２及び研究３ベクター）を表７Ａ～Ｃに従って５匹の雌のＣ５７Ｂｌ／６マウスのコホートに静脈内注射した。投薬体積はそれぞれ１０ｍＬ／ｋｇ（０．２ｍＬ／２０ｇマウス）であった。
【0257】
マウスを１日目の体重に基づいて処置群に無作為化し、開始日でのそれらの年齢は８～１２週であった。投与後１５日目に、動物を安楽死させ、脳、腎臓、肝臓、座骨神経、肺、心臓、及び筋肉組織を含む末梢組織を収集した。プールからの選択されたカプシドを個々に注射した研究において、同じプロトコルに従った。
【0258】
Ｑｉａｇｅｎ製のＤＮｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ ｋｉｔ（６９５０６）を使用してゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）を組織サンプルから単離した。各ベクターのバーコード領域を、製造業者（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）によって推奨されているように、ＮＧＳ及びユニークデュアルインデックス（ＵＤＩ）及びマルチプレックスシーケンシングストラテジーのためのオーバーラップを含有するプライマーで増幅させた。試薬ナノ及びマイクロキットｖ２（ＭＳ－１０３－１００１／１００２）を使用するＩｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑを使用して、マウスから収集されたサンプルにつき各々のバーコード化ＡＡＶベクターの相対的存在量を決定した。したがって、以下の表７Ａ～Ｃにおける各ベクターサンプルを上記のようにバーコード化して、各リードの特定を可能にし、選別してから最終データ分析をした。当初注射されたプールにおけるＡＡＶの組成に基づいてデータを正規化し、バーコード化サンプルに特異的なプライマー－プローブの組み合わせを用いたｑＰＣＲ分析から得られた総ゲノムコピー数を使用して定量した。
【表7A】
【表7B】
【表7C】
【0259】
プールからの選択されたカプシドを個々に注射した研究において、ｑＰＣＲを使用して、組織ゲノムＤＮＡのμｇ当たりのベクターゲノムの数を決定した。標準曲線法に従ってｅＧＦＰに特異的なプライマー－プローブの組み合わせを使用してＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ５（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ）でｑＰＣＲを行った（図２２）。
【0260】
個々のベクターを特性化のためにマウスに注射した研究から、ホルマリン固定したマウス脳を振動ブレードミクロトーム（ＶＴ１０００Ｓ，Ｌｅｉｃａ）で４０μｍの厚さで切片化し、浮遊切片をＧＦＰに対する抗体で探索し、送達されたベクターの細胞分布を調べた。
【0261】
より具体的には、ＡＡＶ．ｈＤｙｎが注射されたマウスからの固定した脳をＶｉｂｒａｔｏｍｅ（Ｌｅｉｃａ，ＶＴ－１０００）を使用して切片化し、抗ＧＦＰ抗体（ＡＢ３０８０，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣ ｋｉｔ（ＰＫ－６１００，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）及びＤＡＢ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｋｉｔ（ＳＫ－４１００，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）を使用してＧＦＰ発現を評価した。ＡＡＶ．ｈＤｙｎが注射されたマウスにおける脳全体を通してＧＦＰを発現する細胞の広い分布が存在し、これには、脳の皮質、線条体、及び海馬における分布が含まれていた。図２３Ａ～２３Ｃは、これらの領域からの画像を示しており、スケールバーは４００ｕｍである（以下に論述される）。
【0262】
【0263】
Ｌｅｃ２細胞形質導入アッセイのデータは示されていない。ＡＡＶ９ ５８８ Ｈｅｐ（位置５８８の後に挿入されたペプチドＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）（表１ｂにおけるＤＬＣ－ＡＳ２）を有するＡＡＶ９）は、野生型ＡＡＶ９よりも有意に高い形質導入（４倍）を示し、ＡＡＶ９ ＶＰ２ Ａｄ（位置１３８の後に挿入されたペプチドＳＩＴＬＶＫＳＴＱＴＶ（配列番号２１）（表１ｂにおけるＤＬＣ－ＡＳ１）を有するＡＡＶ９）、ＡＡＶ９ ＶＰ２ Ｈｅｐ（位置１３８の後に挿入されたペプチドＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）（表１ｂにおけるＤＬＣ－ＡＳ２）を有するＡＡＶ９）、及びＡＡＶ９ ＶＰ２ Ｒａｂ（位置１３８の後に挿入されたペプチドＲＳＳＥＥＤＫＳＴＱＴＴ（配列番号２６）（表１ｂにおけるＤＬＣ－ＡＳ４）を有するＡＡＶ９）は、ＡＡＶ９と比べてわずかに高いＬｅｃ２細胞の形質導入を示した。アッセイされた他のＡＡＶは、ＡＡＶ９よりも低いレベルの形質導入を示した。
【0264】
図２１は、脳ｇＤＮＡの次世代シーケンシング（ＮＧＳ）分析の結果を示しており、静脈内注射の後にマウス脳に送達されたカプシドプールの相対的存在量（組成割合）を明らかにしている。当初注射されたプールにおけるＡＡＶの組成に基づいてデータを正規化し、ｅＧＦＰ配列に特異的なプライマー－プローブの組み合わせを用いたｑＰＣＲ分析から得られた総ゲノムコピー数を使用して定量した。示されているデータは、３つの異なる実験からのものである。点線は、どのベクターが一緒にプールされていたかを示している。親ＡＡＶ９を標準として使用し、各プールに含めた。「ＢＣ」識別子は、上記の表７Ａ、７Ｂ及び７Ｃにおいて示されているとおりである。
【0265】
図２２Ａ～２２Ｈは、雌のＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＡＡＶ．ｈＤｙｎのｉｎ ｖｉｖｏ形質導入プロファイルを示しており、ナイーブマウス、またはＡＡＶ９もしくはＡＡＶ．ｈＤｙｎのいずれかが注射されたマウスにおいて脳（図２２Ａ）、肝臓（図２２Ｂ）、心臓（図２２Ｃ）、肺（図２２Ｄ）、腎臓（図２２Ｅ）、骨格筋（図２２Ｆ）、座骨神経（図２２Ｇ）、及び卵巣（図２２Ｈ）におけるコピー数／マイクログラムｇＤＮＡを示しており、ＡＡＶ．ｈＤｙｎは、ＡＡＶ９と比較して増加した脳生体内分布を示している。脳ゲノムＤＮＡのμｇ当たりのＡＡＶベクターゲノムコピーは、親ＡＡＶ９ベクターと比較して、ＡＡＶ．ｈＤｙｎが投与されたマウスでは少なくとも１ｌｏｇ高かった。
【0266】
図２３Ａ～２３Ｃは、上述した免疫組織化学分析において分析された領域からの画像を示しており；スケールバーは４００μｍである。図２３Ａ～２３Ｃは、脳全体にわたるＡＡＶ．ｈＤｙｎからのＧＦＰの分布を示しており、線条体（図２３Ａ）、海馬（図２３Ｂ）、及び皮質（図２３Ｃ）からの脳切片の免疫組織化学染色の画像は、改変ベクターによる脳の全体的な形質導入を明らかにした。
【0267】
６．２２．２．３ 結論
ＶＲ－ＩＶ及びＶＲ－ＶＩＩＩの表面露出ループにおける挿入によってまたは特定のアミノ酸変異によってのいずれかで実施されたＡＡＶカプシド改変は、それらのパッケージング効率に影響を及ぼさず、本明細書に記載の生成システムにおいて同様の力価をもたらすことができた。
ＶＲ－ＩＶ及びＶＲ－ＶＩＩＩの表面露出ループにおける挿入によってまたは特定のアミノ酸変異によってのいずれかで実施されたＡＡＶカプシド改変は、それらのパッケージング効率に影響を及ぼさず、本明細書に記載の生成システムにおいて同様の力価をもたらすことができた。
【0268】
ＡＡＶ．ｈＤｙｎのマウスへの静脈内投与は、試験された他の改変ＡＡＶベクター及びＡＡＶ９より高いウイルスゲノムの相対的存在量及びより多い脳細胞形質導入をもたらした。
【0269】
６．２３．実施例２３－ホーミングペプチド腎臓１Ｃは、全身送達の後に向上した形質導入を示す。
ＡＡＶカプシド配列をペプチド挿入物のいずれかによって改変し、プールして、ＧＦＰ発現カセットと共にパッケージングされたバーコード化ライブラリを得た。次いで改変ＡＡＶ９ベクターの生体内分布プロファイルを、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）及び定量ＰＣＲを使用してマウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏで評価した。ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）（腎臓１Ｃ）またはＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４）（筋肉１）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターは、肝臓と比較して腎臓の増加した形質導入効率を示した（図２４）。
ＡＡＶカプシド配列をペプチド挿入物のいずれかによって改変し、プールして、ＧＦＰ発現カセットと共にパッケージングされたバーコード化ライブラリを得た。次いで改変ＡＡＶ９ベクターの生体内分布プロファイルを、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）及び定量ＰＣＲを使用してマウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏで評価した。ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）（腎臓１Ｃ）またはＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４）（筋肉１）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターは、肝臓と比較して腎臓の増加した形質導入効率を示した（図２４）。
【0270】
６．２３．１ 物質及び方法
ＡＡＶカプシドのＶＲ－ＩＶ表面露出ループの位置Ｓ４５４の後に様々なホーミングペプチド配列を挿入することによってＡＡＶ９に対するカプシド改変を実施した。パッケージング効率は、小規模ではこれらのカプシド改変のいずれかの後に悪影響を受けないことが確認された。ペプチド配列が以下の表８に示されている。すべての改変ＡＡＶは、各々の個々のカプシドに対応する特定のバーコードを含有するｅＧＦＰ導入遺伝子カセットと共にパッケージングした。スクリーニングの効率を向上させるためにこれらの新規のバーコード化ベクターをプールした（実施例２２Ｂにおいて上記で説明されているように；研究３、表７Ｃ参照）。
ＡＡＶカプシドのＶＲ－ＩＶ表面露出ループの位置Ｓ４５４の後に様々なホーミングペプチド配列を挿入することによってＡＡＶ９に対するカプシド改変を実施した。パッケージング効率は、小規模ではこれらのカプシド改変のいずれかの後に悪影響を受けないことが確認された。ペプチド配列が以下の表８に示されている。すべての改変ＡＡＶは、各々の個々のカプシドに対応する特定のバーコードを含有するｅＧＦＰ導入遺伝子カセットと共にパッケージングした。スクリーニングの効率を向上させるためにこれらの新規のバーコード化ベクターをプールした（実施例２２Ｂにおいて上記で説明されているように；研究３、表７Ｃ参照）。
【0271】
遺伝子変化したＡＡＶベクターを、研究３の変化ベクターに関して実施例２２Ｂにおいて上記で説明したようにマウスに静脈内注射した。当初注射されたプールにおけるＡＡＶの組成に基づいてデータを正規化し、ｅＧＦＰ配列に特異的なプライマー－プローブの組み合わせを用いたｑＰＣＲ分析から得られた総ゲノムコピー数を使用して定量し、腎臓対肝臓組織標的化をより綿密に試験した。
【0272】
６．２３．２ 結果及び結論
図２４は、雌のＣ５７Ｂｌ／６マウスにおいて異なるホーミングペプチド挿入物（表８）を有するＡＡＶ９ Ｓ４５４ベクターのｉｎ ｖｉｖｏ形質導入の腎臓対肝臓の比を示している。改変カプシドのためのプールの総腎臓形質導入に対する腎臓対肝臓の形質導入を計算のために使用した。ＡＡＶ９ Ｓ４５４腎臓１及びＡＡＶ９ Ｓ４５４腎臓２（腎臓１Ｃ）は、親ＡＡＶ９と比較して増加した腎臓生体内分布を示す。親ＡＡＶ９ベクターは、約０．２５の比で腎臓と比較して増加した肝臓の形質導入を示すのに対し、腎臓ホーミングペプチド１Ｃ（及びさらに筋肉１）の挿入は、この比の約１．０への増加をもたらす。腎臓ｇＤＮＡのμｇ当たりのＡＡＶベクターゲノムコピーは、ＡＡＶ９ Ｓ４５４腎臓１またはＡＡＶ９ Ｓ４５４筋肉１が投与されたマウスでは、すべての他のＡＡＶ９ Ｓ４５４ベクターと比較して少なくとも５倍高かった（図２４参照）。
図２４は、雌のＣ５７Ｂｌ／６マウスにおいて異なるホーミングペプチド挿入物（表８）を有するＡＡＶ９ Ｓ４５４ベクターのｉｎ ｖｉｖｏ形質導入の腎臓対肝臓の比を示している。改変カプシドのためのプールの総腎臓形質導入に対する腎臓対肝臓の形質導入を計算のために使用した。ＡＡＶ９ Ｓ４５４腎臓１及びＡＡＶ９ Ｓ４５４腎臓２（腎臓１Ｃ）は、親ＡＡＶ９と比較して増加した腎臓生体内分布を示す。親ＡＡＶ９ベクターは、約０．２５の比で腎臓と比較して増加した肝臓の形質導入を示すのに対し、腎臓ホーミングペプチド１Ｃ（及びさらに筋肉１）の挿入は、この比の約１．０への増加をもたらす。腎臓ｇＤＮＡのμｇ当たりのＡＡＶベクターゲノムコピーは、ＡＡＶ９ Ｓ４５４腎臓１またはＡＡＶ９ Ｓ４５４筋肉１が投与されたマウスでは、すべての他のＡＡＶ９ Ｓ４５４ベクターと比較して少なくとも５倍高かった（図２４参照）。
【表8】
【0273】
表面露出ループＶＲ－ＩＶにおける異なるホーミングペプチドの挿入によって実施されたＡＡＶカプシド改変は、それらのパッケージング効率に影響を及ぼさず、本明細書に記載の生成システムにおいて同様の力価をもたらすことができた。
【0274】
ＡＡＶ９ Ｓ４５４腎臓１及びＡＡＶ９ Ｓ４５４腎臓１Ｃのマウスへの静脈内投与は、試験された他の改変ＡＡＶ９ベクター及び親ＡＡＶ９ベクターより高いウイルスゲノムの相対的存在量及びより多い腎臓細胞形質導入をもたらした。ＡＡＶ９ Ｓ４５４腎臓１またはＡＡＶ９ Ｓ４５４筋肉１ベクターのマウスへの静脈内投与はまた、より低い肝臓細胞形質導入をもたらした。
【0275】
６．２４．実施例２４－ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）を含有するｒＡＡＶカプシドの構築
図２５は、ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。
図２５は、ＶＲ－ＩＶのＳ４５４及びＧ４５５の間にアミノ酸配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）のペプチド挿入物を含む組換えＡＡＶ９ベクターカプシドのためのアミノ酸配列を示している。
【0276】
６．２５．実施例２５－カニクイザルにおけるｒＡＡＶベクタープールの生体内分布
修飾されたカプシド及びＧＦＰ導入遺伝子を有する組換えＡＡＶのプールの投与、ｉｎ ｖｉｖｏ及び死後観察、及び生体内分布を、カニクイザルにおける単回静脈内、脳室内または硝子体内注射の後に評価する（表９）。プールは複数のカプシドを含有し、これらはそれぞれ、カニクイザルへの投与の後に次世代シーケンシング（ＮＧＳ）分析を使用した特定を可能にする独自のバーコード識別を含有する。カニクイザルは、大きな動物種におけるＡＡＶ生体内分布研究のための及びヒトへのさらなる変換のためのモデルとしてのその確立された有用性及び許容性のため試験系として選択される。この研究におけるすべての動物は、先行処置に関してナイーブである。プールは、少なくとも表９に列挙された修飾されたカプシドを有する以下の組換えＡＡＶを含み得る。
修飾されたカプシド及びＧＦＰ導入遺伝子を有する組換えＡＡＶのプールの投与、ｉｎ ｖｉｖｏ及び死後観察、及び生体内分布を、カニクイザルにおける単回静脈内、脳室内または硝子体内注射の後に評価する（表９）。プールは複数のカプシドを含有し、これらはそれぞれ、カニクイザルへの投与の後に次世代シーケンシング（ＮＧＳ）分析を使用した特定を可能にする独自のバーコード識別を含有する。カニクイザルは、大きな動物種におけるＡＡＶ生体内分布研究のための及びヒトへのさらなる変換のためのモデルとしてのその確立された有用性及び許容性のため試験系として選択される。この研究におけるすべての動物は、先行処置に関してナイーブである。プールは、少なくとも表９に列挙された修飾されたカプシドを有する以下の組換えＡＡＶを含み得る。
【表9】
【0277】
６．２５．１．研究設計
９匹の雌のカニクイザル動物を使用する。臨床的兆候データ及びプレスクリーニング抗体力価に基づいて実験に好適と判断された動物を、コンピュータで生成された乱数を使用して体重別に研究群に分ける。３つの異なる投与経路を使用し、関連する組織を収集して、異なる経路に関連した生体内分布を評価する（ＮＧＳ及びＰＣＲによって測定される）。３匹の動物に脳室内（ＩＣＶ）用量投与のために左側脳室にカテーテルを埋め込み（群１）、３匹の動物に単回静脈内注入を受けさせ（群２）、３匹の動物に単回硝子体内注射を受けさせる（群３）。２匹の動物は交換動物としての役割を果たし、必要に応じて埋め込みをする。群１の動物にＭＲＩスキャンを受けさせて、適切なＩＣＶカテーテル配置のための座標を決定する。
９匹の雌のカニクイザル動物を使用する。臨床的兆候データ及びプレスクリーニング抗体力価に基づいて実験に好適と判断された動物を、コンピュータで生成された乱数を使用して体重別に研究群に分ける。３つの異なる投与経路を使用し、関連する組織を収集して、異なる経路に関連した生体内分布を評価する（ＮＧＳ及びＰＣＲによって測定される）。３匹の動物に脳室内（ＩＣＶ）用量投与のために左側脳室にカテーテルを埋め込み（群１）、３匹の動物に単回静脈内注入を受けさせ（群２）、３匹の動物に単回硝子体内注射を受けさせる（群３）。２匹の動物は交換動物としての役割を果たし、必要に応じて埋め込みをする。群１の動物にＭＲＩスキャンを受けさせて、適切なＩＣＶカテーテル配置のための座標を決定する。
【0278】
ＩＶ注入を３ｍＬ／分の速度で投与し、続いて０．２ｍＬのビヒクルを投与してＩＶカテーテルから用量をフラッシュする。３匹の静脈内動物に単回用量のプールされた組換えＡＡＶを４ｍＬ／ｋｇの体積で摂取させる。総用量（ｖｇ）及び用量体積（ｍＬ／ｋｇ）を生データで記録する。非ヒト霊長類における文献レビュー及び先行研究に基づいて、１×１０１３ＧＣ／ｋｇ体重のＩＶ用量が、全身送達からのＣＮＳ及び骨格筋を含む末梢組織における所望の分布を有するのに必要となることが決定された。
【0279】
ＩＣＶ埋込動物に、１ｍＬの体積のＡＡＶ－ＮＡＶ－ＧＦＰｂｃで単回ボーラス用量を摂取させ（ゆっくりとした注入、およそ０．１ｍＬ／分で）、続いて０．１ｍＬのビヒクルを摂取させてカテーテルシステムから用量をフラッシュする。ＩＣＶ用量は、現行の臨床プログラムをサポートするために先行の非ヒト霊長類研究からの分布データに基づいている。
【0280】
硝子体内（ＩＶＴ）注射を、５０μＬの用量体積でボーラス注射として両側に投与する。
【0281】
６．２５．２．観察及び試験
臨床的兆候を少なくとも１日１回記録し、これは投薬の開始のおよそ２週間前から開始して研究期間全体にわたって継続する。動物を臨床的効果、疾病、及び／または死亡の兆候について観察する。研究指示者及び／または技術者の裁量で、動物の状態に基づいてさらなる観察を記録し得る。
臨床的兆候を少なくとも１日１回記録し、これは投薬の開始のおよそ２週間前から開始して研究期間全体にわたって継続する。動物を臨床的効果、疾病、及び／または死亡の兆候について観察する。研究指示者及び／または技術者の裁量で、動物の状態に基づいてさらなる観察を記録し得る。
【0282】
用量投与の前、ならびに２日目、８日目、１５日目及び２２日目に群３の動物について眼科的試験を実施する。すべての動物を１日目の後に実施される眼科的試験のために塩酸ケタミンＩＭで鎮静化する。１日目で検査のため、動物を注射麻酔で鎮静化する（セクション１５．３．３参照）。試験の前に１％トロピカミドで眼を拡げる。試験には、細隙灯生体顕微鏡検査法及び間接検眼法が含まれる。また、圧平眼圧測定を、投薬前、用量投与の直後（約１０～１５分）ならびに２日目及び２２日目に群３の動物について実施する。
【0283】
用量投与のおよそ２～３週前に中和抗体分析のために末梢静脈から血液サンプル（約３ｍＬ）を収集する。
【0284】
６．２５．３．生物学的分析サンプル収集
群２（ＩＶ）のみの動物から、用量投与前、用量投与から３時間（±１０分）、６時間（±１０分）及び２４時間（±０．５時間）後に、生物学的分析（ＡＡＶカプシドクリアランス）のために末梢静脈から全血サンプル（約０．５ｍＬ）を収集する。シリンジ及び針を使用してサンプルを収集し、２つのＫ２ ＥＤＴＡチューブに移し、時間を記録する。
群２（ＩＶ）のみの動物から、用量投与前、用量投与から３時間（±１０分）、６時間（±１０分）及び２４時間（±０．５時間）後に、生物学的分析（ＡＡＶカプシドクリアランス）のために末梢静脈から全血サンプル（約０．５ｍＬ）を収集する。シリンジ及び針を使用してサンプルを収集し、２つのＫ２ ＥＤＴＡチューブに移し、時間を記録する。
【0285】
用量投与前（１日目）、８日目及び１５日目ならびに剖検前（２２日目）にＰＢＭＣ分析のために絶食動物から末梢静脈から血液サンプル（約５ｍＬ）を収集する。リチウムヘパリンチューブを使用してサンプルを得、時間を記録する。
【0286】
用量投与前（１日目、２ｍＬ）及び剖検（２２日目、５ｍＬ）時に生物学的分析のために末梢静脈から血液サンプルを収集する。凝固チューブにサンプルを収集し、時間を記録する。チューブを十分に凝固するまで室温で維持し、次いでおよそ２４００ｒｐｍで、室温で１５分間遠心分離する。血清を収穫し、ラベル付きバイアル（剖検サンプルを１ｍＬのアリコートに分割する）に入れ、液体窒素中で凍結させ、－６０℃以下で保存する。
【0287】
用量投与前に群１のみの動物から大槽脊椎穿刺からＣＳＦ（約１．５ｍＬ）を収集する。剖検直前にすべての動物（群１～３）から大槽脊椎穿刺からＣＳＦ（約２ｍＬ）を収集する。ＣＳＦを収集する試みがなされるが、脊椎穿刺の不成功のため、サンプルは、動物（複数可）からすべての間隔で収集されない場合がある。収集すると、サンプルを処理まで氷上で保存する。
【0288】
６．２５．４．剖検
処置の少なくとも２１日後（２２日目）に、死亡が発見されたまたは切迫屠殺した動物について、及び計画されていた剖検時に肉眼的剖検を実施する。死亡が発見されたものを除くすべての動物を８ｍｇ／ｋｇのケタミンＨＣｌ ＩＭで鎮静化し、イソフルラン／酸素混合物で維持し、ヘパリンナトリウムの静脈内ボーラス（２００ＩＵ／ｋｇ）を提供する。動物に、生理食塩水中０．００１％の亜硝酸ナトリウムを、左心室を介して灌流する。死亡が発見された動物を剖検するが、灌流はしない。
処置の少なくとも２１日後（２２日目）に、死亡が発見されたまたは切迫屠殺した動物について、及び計画されていた剖検時に肉眼的剖検を実施する。死亡が発見されたものを除くすべての動物を８ｍｇ／ｋｇのケタミンＨＣｌ ＩＭで鎮静化し、イソフルラン／酸素混合物で維持し、ヘパリンナトリウムの静脈内ボーラス（２００ＩＵ／ｋｇ）を提供する。動物に、生理食塩水中０．００１％の亜硝酸ナトリウムを、左心室を介して灌流する。死亡が発見された動物を剖検するが、灌流はしない。
【0289】
以下の組織をすべての動物（死亡が発見されたものを含む）から確保する：骨髄、脳、盲腸、結腸、神経後根及び神経節、十二指腸、食道、視神経を含む眼、肉眼的病変、心臓、回腸、空腸、腎臓、膝関節、肝臓、気管支を含む肺、リンパ節、卵巣、膵臓、座骨神経、骨格筋、脊髄、脾臓、甲状腺、気管、及び迷走神経。
【0290】
６．２５．５．生物学的分析
群２（ＩＶ）の動物から収集された全血をｑＰＣＲ及び次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって評価する。
群２（ＩＶ）の動物から収集された全血をｑＰＣＲ及び次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって評価する。
【0291】
すべての動物から収集されたＰＢＭＣサンプルを、必要に応じて、フローサイトメトリー及び酵素結合免疫吸着スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）によって評価する。
【0292】
血清及び／またはＣＳＦにおける循環中和抗体及び遊離ベクターの存在を、必要により、ＥＬＩＳＡ及び細胞ベースアッセイによって評価する。
【0293】
組織におけるベクターコピー数及び転写産物の数を定量ＰＣＲ及びＮＧＳ法によって試験する。
【0294】
６．２６．カプシドアミノ酸配列
表１０は、本明細書に記載の研究において記載及び／または使用された所定の修飾されたカプシドタンパク質のアミノ酸配列を提供する。異種ペプチド及びアミノ酸置換は、灰色の陰で示されている。
表１０は、本明細書に記載の研究において記載及び／または使用された所定の修飾されたカプシドタンパク質のアミノ酸配列を提供する。異種ペプチド及びアミノ酸置換は、灰色の陰で示されている。
【表10】
【0295】
７．均等物
本発明は、その具体的な実施形態を参照して詳細に説明されているが、機能的に均等である類型が本発明の範囲内であることが理解される。実際、本明細書に示され、記載されているものに加えて本発明の様々な改変が、前述の記載及び添付の図面から当業者に明らかになる。そのような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲に入ることが意図されている。当業者は、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または慣用的な実験を超えるものを使用せずに確認することができる。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
本発明は、その具体的な実施形態を参照して詳細に説明されているが、機能的に均等である類型が本発明の範囲内であることが理解される。実際、本明細書に示され、記載されているものに加えて本発明の様々な改変が、前述の記載及び添付の図面から当業者に明らかになる。そのような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲に入ることが意図されている。当業者は、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または慣用的な実験を超えるものを使用せずに確認することができる。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
【0296】
本明細書で言及されたすべての刊行物、特許及び特許出願は、各々の個々の刊行物、特許または特許出願がそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれることが具体的かつ個々に示されているかのように、同じ程度まで参照により本明細書に組み込まれる。
【0297】
本明細書の論述は、当該技術分野が直面している問題の本質のより良好な理解を提供し、どのようにも先行技術として認めるものとして解釈されるべきではなく、また、本明細書におけるいかなる参考文献も、そのような参考文献が本出願に対する「先行技術」を構成することを認めるものとして解釈されるべきではない。
【0298】
本明細書で引用される特許出願及び刊行物を含むすべての参考文献は、各々の個々の刊行物または特許または特許出願が、すべての目的のためにその全体が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同じ程度まで、それらの全体がすべての目的のために参照により本明細書に組み込まれる。本発明の多くの改変及び類型は、当業者に明らかになるように、その趣旨及び範囲から逸脱することなくなされ得る。本明細書に記載の特定の実施形態は、例として提供されているにすぎず、本発明は、そのような特許請求の範囲が権利を有する均等物の全範囲と共に、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定されるべきである。
本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．ＡＡＶタンパク質ではない異種タンパク質からの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、前記ペプチド挿入物は、図８のＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸１３８；またはアミノ酸４５１～４６１のうちの１つに対応するアミノ酸残基の直後にあり、前記カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
２．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、前記カプシドタンパク質は、
（ｉ）神経組織ホーミングタンパク質またはドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）を含まない）；
（ｉｉ）軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン；
（ｉｉｉ）骨ホーミングドメイン；
（ｉｖ）腎臓ホーミングドメイン；
（ｖ）筋肉ホーミングドメイン；
（ｖｉ）内皮細胞ホーミングドメイン；
（ｖｉｉ）インテグリン受容体結合ドメイン；
（ｖｉｉｉ）トランスフェリン受容体結合ドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）もＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）も含まない）；
（ｉｘ）腫瘍細胞標的化ドメイン；または
（ｘ）網膜細胞ホーミングタンパク質またはドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）もＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）も含まない）
からなる群から選択される異種タンパク質またはドメインからの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含み、
前記カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
３．前記カプシドタンパク質は、ＡＡＶ１型（ＡＡＶ１）、血清型２（ＡＡＶ２）、血清型３（ＡＡＶ３）、血清型４（ＡＡＶ４）、血清型５（ＡＡＶ５）、血清型６（ＡＡＶ６）、血清型７（ＡＡＶ７）、血清型８（ＡＡＶ８）、血清型ｒｈ８（ＡＡＶｒｈ８）、血清型９（ＡＡＶ９）、血清型９ｅ（ＡＡＶ９ｅ）、血清型ｒｈ１０（ＡＡＶｒｈ１０）、血清型ｒｈ２０（ＡＡＶｒｈ２０）、血清型ｈｕ．３７（ＡＶＶｈｕ．３７）、血清型ｒｈ３９（ＡＡＶｒｈ３９）、及び血清型ｒｈ７４（ＡＡＶｒｈ７４）から選択される少なくとも１つのＡＡＶ型からのものである、上記１または２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４．前記ペプチド挿入物は、図８に示される配列における
（ａ）ＡＡＶ１カプシドアミノ酸配列（配列番号１１０）の４５０～４５９；
（ｂ）ＡＡＶ２カプシドアミノ酸配列（配列番号１１１）の４４９～４５８；
（ｃ）ＡＡＶ３カプシドアミノ酸配列（配列番号１１２）の４４９～４５９；
（ｄ）ＡＡＶ４カプシドアミノ酸配列（配列番号１１３）の４４３～４５３；
（ｅ）ＡＡＶ５カプシドアミノ酸配列（配列番号１１４）の４４２～４４５；
（ｆ）ＡＡＶ６カプシドアミノ酸配列（配列番号１１５）の４５０～４５９；
（ｇ）ＡＡＶ７カプシドアミノ酸配列（配列番号１１６）の４５１～４６１；
（ｈ）ＡＡＶ８カプシドアミノ酸配列（配列番号１１７）の４５１～４６１；
（ｉ）ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列（配列番号１１８）の４５１～４６１；
（ｊ）ＡＡＶ９ｅカプシドアミノ酸配列（配列番号１１９）の４５２～４６１；
（ｋ）ＡＡＶｒｈ１０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２０）の４５２～４６１；
（ｌ）ＡＡＶｒｈ２０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２１）の４５２～４６１；
（ｍ）ＡＡＶｈｕ．３７カプシドアミノ酸配列（配列番号１２２）の４５２～４６１；
（ｎ）ＡＡＶｒｈ７４カプシドアミノ酸配列（配列番号１２３または配列番号１５４）の４５２～４６１；または
（ｏ）ＡＡＶｒｈ３９カプシドアミノ酸配列（配列番号１２４）の４５２～４６１
の中のアミノ酸残基のうちの１つの直後に存在する、上記１～３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸Ｉ４５１、Ｎ４５２、Ｇ４５３、Ｓ４５４、Ｇ４５５、Ｑ４５６、Ｎ４５７、Ｑ４５８、Ｑ４５９、Ｔ４６０、またはＬ４６１のうちの１つに対応するアミノ酸残基の後に存在する、上記４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
６．前記異種タンパク質は、ホーミングドメイン、中和抗体エピトープ、または精製タグである、上記１、３～５のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
７．前記ホーミングドメインは、
（ｉ）神経組織ホーミングドメイン；
（ｉｉ）軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン；
（ｉｉｉ）骨ホーミングドメイン；
（ｉｖ）腎臓ホーミングドメイン；
（ｖ）筋肉ホーミングドメイン；
（ｖｉ）内皮細胞ホーミングドメイン；
（ｖｉｉ）インテグリン受容体結合ドメイン；
（ｖｉｉｉ）トランスフェリン受容体結合ドメイン；
（ｉｘ）腫瘍細胞標的化ドメイン；または
（ｘ）網膜細胞ホーミングドメイン
である、上記６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
８．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＳＩＴＬＶＫＳＴＱＴＶ（配列番号２１）、ＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）、ＶＶＭＶＧＥＫＰＩＴＩＴＱＨＳＶＥＴＥＧ（配列番号２５）、ＲＳＳＥＥＤＫＳＴＱＴＴ（配列番号２６）、ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）、ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）、ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）、ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）、ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）、ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）、ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）、またはＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）のダイニンペプチドの少なくとも４個の連続アミノ酸を含み、もしくはそれからなり、またはその７個の連続アミノ酸である、上記７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
９．前記トランスフェリン受容体結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）またはＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）の少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個のアミノ酸である、上記７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１０．前記網膜細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）の少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個のアミノ酸である、上記７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１１．前記ＡＡＶカプシドタンパク質は、ＡＡＶ８カプシドタンパク質またはＡＡＶ９カプシドタンパク質である、上記１０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１２．前記精製タグからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号８６）の血球凝集素（ＨＡ）エピトープまたはアミノ酸配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号５２）のＦＬＡＧタグの少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個の連続アミノ酸である、上記７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１３．前記神経組織ホーミングタンパク質または前記網膜細胞ホーミングタンパク質は、ヒト軸糸ダイニン（ＨＡＤ）重鎖尾部である、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１４．前記ペプチド挿入物は、前記ＨＡＤ重鎖尾部の二量化ドメインからの少なくとも４個かつ最大で１５個の連続アミノ酸を含む、上記１３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１５．前記ペプチド挿入物は、（図７に示される）：
（ａ）（ＤＹＨ１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２Ｄ７のａａ１～１５４２）（配列番号９７）；
（ｂ）（ＤＹＨ２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２２５のａａ１～１７６４）（配列番号９８）；
（ｃ）（ＤＹＨ３＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＤ５７のａａ１～１３９０）（配列番号９９）；
（ｄ）（ＤＹＨ５＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＥ７３のａａ１～１９４１）（配列番号１００）；
（ｅ）（ＤＹＨ６＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｃ０Ｇ６のａａ１～１４３３）（配列番号１０１）；
（ｆ）（ＤＹＨ７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＷＸＸ０のａａ１～１２８９）（配列番号１０２）；
（ｇ）（ＤＹＨ８＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＪＢ１のａａ１～１８０７）（配列番号１０３）；
（ｈ）（ＤＹＨ９＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＮＹＣ９のａａ１～１８３１）（配列番号１０４）；
（ｉ）（ＤＹＨ１０＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＩＶＦ４のａａ１～１７９３）（配列番号１０５）；
（ｊ）（ＤＹＨ１１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＤＴ５のａａ１～１８５４）（配列番号１０６）；
（ｋ）（ＤＹＨ１２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ６ＺＲ０８のａａ１～１２１４）（配列番号１０７）；
（ｌ）（ＤＹＨ１４＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０ＶＤＤ８のａａ１～２００）（配列番号１０８）；または
（ｍ）（ＤＹＨ１７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＵＦＨ２のａａ１～１７９４）（配列番号１０９）
からなる群からの少なくとも４個かつ最大で１５個の連続アミノ酸を含む、上記１４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１６．前記ペプチド挿入物は、ダイニン重鎖配列（図７）のいずれか１つの残基１～２００からの少なくとも４個かつ最大で１５個の連続アミノ酸を含む、上記１５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１７．前記ペプチド挿入物は、図７の前記ダイニン重鎖配列のいずれか１つからの７個の連続アミノ酸を含む、上記１５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１８．前記ペプチド挿入物は、ダイニン重鎖配列（図７）のいずれか１つの残基１～２００からの７個の連続アミノ酸を含む、上記１６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１９．前記ペプチド挿入物は、ペプチド：
（ａ）ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）；
（ｂ）ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）；
（ｃ）ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）；
（ｄ）ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）；
（ｅ）ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）；
（ｆ）ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）；または
（ｇ）ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）
のうちの１つの少なくとも４個の連続アミノ酸を含む、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２０．前記ペプチド挿入物は、ペプチド：
（ａ）ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）；
（ｂ）ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）；
（ｃ）ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）；
（ｄ）ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）；
（ｅ）ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）；
（ｆ）ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）；または
（ｇ）ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）
のうちの１つからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２１．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）である、上記２０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２２．前記神経組織ホーミングタンパク質は、マウス軸糸ダイニン（ＭＡＤ）重鎖尾部である、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２３．前記神経組織ホーミングドメインは、自然修復受容体に結合し、かつ赤血球生成性ではないＥＰＯ（エリスロポエチン）ドメイン、または前記ドメインのコンフォメーションアナログである、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２４．前記ペプチド挿入物は、ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）からの少なくとも４個かつ最大で１１個の連続アミノ酸である、上記２３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２５．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）を有する、上記２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２６．前記神経組織ホーミングタンパク質は、ＳＲＬ（セリン－アルギニン－リジン）モチーフを有する脳ホーミングドメインである、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２７．前記脳ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＳＳＲＬＤＡ（配列番号１０）またはＣＬＳＳＲＬＤＡＣ（配列番号１１）の少なくとも４個の連続アミノ酸を有し、またはアミノ酸配列ＬＳＳＲＬＤＡ（配列番号１０）またはＣＬＳＳＲＬＤＡＣ（配列番号１１）である、上記２６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２８．前記軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメインは、ダイニン軽鎖ホーミングドメインである、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２９．前記ダイニン軽鎖ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、ＳＩＴＬＶＫＳＴＱＴＶ（配列番号２１）、ＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）、ＶＶＭＶＧＥＫＰＩＴＩＴＱＨＳＶＥＴＥＧ（配列番号２５）、またはＲＳＳＥＥＤＫＳＴＱＴＴ（配列番号２６）のうちの１つの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸である、上記２８に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３０．前記骨ホーミングタンパク質は、ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合ドメインである、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３１．前記ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、配列ＤＤＤＤＤＤＤＤ（配列番号９）の少なくとも６個のアミノ酸残基である、上記３０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３２．前記腎臓ホーミングドメインは、アミノ酸配列ＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）を含む、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３３．前記腎臓ホーミングドメインペプチドからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＰＶＡＳ（配列番号１３）またはＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）である、上記３２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３４．前記筋肉ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４）を含み、またはそれからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３５．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＱＡＶＲＴＳＬ（配列番号２３）またはＱＡＶＲＴＳＨ（配列番号２４）を含み、またはそれからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３６．前記内皮細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＳＩＧＹＰＬＰ（配列番号２８）を含み、またはそれからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３７．前記インテグリン結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ（配列番号２９）を有する、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３８．前記トランスフェリン受容体結合ドメインは、トランスフェリンドメイン、もしくはそのコンフォメーションアナログ、または鉄模倣体である、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３９．前記トランスフェリンドメインからの前記ペプチド挿入物は、配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号１７）またはＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号１８）からの少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個の連続アミノ酸である、上記３８に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４０．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号１７）またはＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号１８）を含み、またはそれからなる、上記３９に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４１．前記腫瘍細胞標的化ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＮＧＲＡＨＡ（配列番号３０）を含み、またはそれからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４２．前記ペプチド挿入物は、ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）、ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）、ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）、ＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）、及びＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）のうちの１つからの少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個の連続アミノ酸である、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４３．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸残基（図８に示される）：
（ａ）ＡＡＶ１カプシドアミノ酸配列（配列番号１１０）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；または５８５～５９３；
（ｂ）ＡＡＶ２カプシドアミノ酸配列（配列番号１１１）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５８；または５８４～５９２；
（ｃ）ＡＡＶ３カプシドアミノ酸配列（配列番号１１２）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５９；または５８５～５９３；
（ｄ）ＡＡＶ４カプシドアミノ酸配列（配列番号１１３）の１３７；２５６～２６２；４４３～４５３；または５８３～５９１；
（ｅ）ＡＡＶ５カプシドアミノ酸配列（配列番号１１４）の１３７；２５２～２６２；４４２～４４５；または５７４～５８２；
（ｆ）ＡＡＶ６カプシドアミノ酸配列（配列番号１１５）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；５８５～５９３；
（ｇ）ＡＡＶ７カプシドアミノ酸配列（配列番号１１６）の１３８；２６３～２７３；４５１～４６１；５８６～５９４；
（ｈ）ＡＡＶ８カプシドアミノ酸配列（配列番号１１７）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
（ｉ）ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列（配列番号１１８）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；
（ｊ）ＡＡＶ９ｅカプシドアミノ酸配列（配列番号１１９）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；
（ｋ）ＡＡＶｒｈ１０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２０）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
（ｌ）ＡＡＶｒｈ２０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２１）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
（ｍ）ＡＡＶｈｕ３７カプシドアミノ酸配列（配列番号１２２）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
（ｎ）ＡＡＶｒｈ７４カプシドアミノ酸配列（配列番号１２３または配列番号１５４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；または
（ｏ）ＡＡＶｒｈ３９カプシドアミノ酸配列（配列番号１２４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５
のうちの１つの直後に存在する、上記２または１３～４２のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４４．前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸残基５８８～５８９の間またはＡＡＶ９カプシドのアミノ酸１３８に対応するアミノ酸残基の直後（図８参照）に挿入されたアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４５．前記ＡＡＶ９カプシドのＩ４５１～Ｌ４６１、Ｓ２６８またはＱ５８８のうちの１つの後（図８）に挿入されたアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４６．前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸残基５８８～５８９（図８参照）の間にアミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４７．前記ＡＡＶ９カプシドのＩ４５１～Ｌ４６１、またはＳ２６８から選択される１つ以上の位置（図８）で挿入されたアミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４８．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸残基２６２～２７３のうちの１つの直後にアミノ酸配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４９．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸残基２６９及び２７０の間にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５０．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を有する、上記４９に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５１．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸残基５９０及び５９１の間にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５２．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を有する、上記５１に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５３．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸残基４５３及び４５４のうちの１つの直後にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５４．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、上記５３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５５．前記カプシドは、ＡＡＶ９であり、前記ペプチド挿入物は、ＡＡＶ９のアミノ酸残基４５４～４５５の間（図８）に存在する、上記２または１３～４３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５６．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドのＩ４５１～Ｌ４６１、Ｓ２６８またはＱ５８８のうちの１つに対応する酸残基の直後（図８）に存在する、上記２または１３～４３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５７．前記ペプチド挿入物は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸４５１～４６１のうちの１つの直後に存在する、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５８．前記ペプチド挿入物は、ＡＡＶカプシド第８可変領域（ＶＲ－ＶＩＩＩ）において存在する、上記２または１３～４３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５９．前記カプシドタンパク質は、前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質ではない、先行上記のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
６０．組換えＡＡＶカプシドタンパク質であって、野生型または非修飾カプシドタンパク質に対する１つ以上のアミノ酸置換であって、前記ｒＡＡＶカプシドタンパク質は、Ａ２６９Ｓアミノ酸置換を有するＡＡＶ８カプシドタンパク質であり、またはＳ２６３Ｇ／Ｓ２６９Ｒ／Ａ２７３Ｔ置換、またはＷ５０３ＲもしくはＱ４７４Ａ置換を有するＡＡＶ９カプシドタンパク質である、前記１つ以上のアミノ酸置換、または別のＡＡＶ型カプシドのカプシドタンパク質における対応する置換を含む、前記組換えＡＡＶカプシドタンパク質。
６１．ＡＡＶ８カプシドタンパク質についての４９８－ＮＮＮ／ＡＡＡ－５００もしくはＡＡＶ９カプシドタンパク質についての４９６－ＮＮＮ／ＡＡＡ－４９８、または別のＡＡＶ型カプシドのカプシドタンパク質における対応する置換をさらに含む、実施形態６０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
６２．先行上記のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質をコードする、またはそれと少なくとも８０％の同一性を共有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
６３．先行上記のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質をコードする、上記６２に記載の核酸。
６４．前記ヌクレオチド配列によってコードされる前記カプシドタンパク質を含むＡＡＶベクターを生成するために上記６２または６３に記載の核酸を発現することが可能なパッケージング細胞。
６５．上記１～６１のいずれかに記載のカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶベクター。
６６．導入遺伝子をさらに含む、上記６５に記載のｒＡＡＶベクター。
６７．上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクター及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
６８．導入遺伝子を細胞に送達する方法であって、前記方法は、前記細胞を上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクターと接触させることを含む、前記方法；または導入遺伝子を細胞に送達する際に使用するための上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクターであって、前記細胞は、前記ベクターと接触される、前記ｒＡＡＶベクター。
６９．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する方法であって、前記方法は、上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクターを前記対象に投与することを含み、前記ペプチド挿入物は、ホーミングペプチドである、前記方法；または導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する際に使用するための上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクターであって、前記ベクターは、前記対象に投与される、前記ｒＡＡＶベクター。
７０．前記ｒＡＡＶベクターは、全身的に、静脈内に、髄腔内に、鼻腔内に、腹腔内に、硝子体内に、腰椎穿刺を介してまたは大槽を介して投与される、上記６９に記載の方法、または使用のためのｒＡＡＶベクター。
７１．前記標的組織は、
（ｉ）神経組織であり、前記ベクターは、前記神経組織ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
（ｉｉ）骨であり、前記ベクターは、前記骨ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｉｉｉ）腎臓であり、前記ベクターは、前記腎臓ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｉｖ）筋肉であり、前記ベクターは、前記筋肉ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｖ）内皮細胞であり、前記ベクターは、前記内皮細胞ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｖｉ）インテグリン受容体であり、前記ベクターは、前記インテグリン受容体結合ドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｖｉｉ）腫瘍細胞上のトランスフェリン受容体であり、前記ベクターは、前記トランスフェリン受容体結合ドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｖｉｉｉ）腫瘍細胞であり、前記ベクターは、前記腫瘍細胞標的化ドメインからのペプチド挿入物を含み、または
（ｉｘ）網膜細胞であり、前記ベクターは、前記網膜細胞ホーミングドメインからのペプチド挿入物
を含む、上記７０に記載の方法、または使用のためのｒＡＡＶベクター。
７２．前記標的組織は、網膜細胞であり、前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、上記７１に記載の方法、または使用のためのｒＡＡＶベクター。
７３．前記標的組織は、網膜細胞であり、前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含む、上記７２に記載の方法、または使用のためのｒＡＡＶベクター。
本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．ＡＡＶタンパク質ではない異種タンパク質からの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、前記ペプチド挿入物は、図８のＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸１３８；またはアミノ酸４５１～４６１のうちの１つに対応するアミノ酸残基の直後にあり、前記カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
２．組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、前記カプシドタンパク質は、
（ｉ）神経組織ホーミングタンパク質またはドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）を含まない）；
（ｉｉ）軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン；
（ｉｉｉ）骨ホーミングドメイン；
（ｉｖ）腎臓ホーミングドメイン；
（ｖ）筋肉ホーミングドメイン；
（ｖｉ）内皮細胞ホーミングドメイン；
（ｖｉｉ）インテグリン受容体結合ドメイン；
（ｖｉｉｉ）トランスフェリン受容体結合ドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）もＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）も含まない）；
（ｉｘ）腫瘍細胞標的化ドメイン；または
（ｘ）網膜細胞ホーミングタンパク質またはドメイン（但し、ペプチド挿入物は、配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）もＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）も含まない）
からなる群から選択される異種タンパク質またはドメインからの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸のペプチド挿入物を含み、
前記カプシドタンパク質がＡＡＶ粒子としてパッケージングされた場合、前記ペプチド挿入物は表面露出される、前記組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）カプシドタンパク質。
３．前記カプシドタンパク質は、ＡＡＶ１型（ＡＡＶ１）、血清型２（ＡＡＶ２）、血清型３（ＡＡＶ３）、血清型４（ＡＡＶ４）、血清型５（ＡＡＶ５）、血清型６（ＡＡＶ６）、血清型７（ＡＡＶ７）、血清型８（ＡＡＶ８）、血清型ｒｈ８（ＡＡＶｒｈ８）、血清型９（ＡＡＶ９）、血清型９ｅ（ＡＡＶ９ｅ）、血清型ｒｈ１０（ＡＡＶｒｈ１０）、血清型ｒｈ２０（ＡＡＶｒｈ２０）、血清型ｈｕ．３７（ＡＶＶｈｕ．３７）、血清型ｒｈ３９（ＡＡＶｒｈ３９）、及び血清型ｒｈ７４（ＡＡＶｒｈ７４）から選択される少なくとも１つのＡＡＶ型からのものである、上記１または２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４．前記ペプチド挿入物は、図８に示される配列における
（ａ）ＡＡＶ１カプシドアミノ酸配列（配列番号１１０）の４５０～４５９；
（ｂ）ＡＡＶ２カプシドアミノ酸配列（配列番号１１１）の４４９～４５８；
（ｃ）ＡＡＶ３カプシドアミノ酸配列（配列番号１１２）の４４９～４５９；
（ｄ）ＡＡＶ４カプシドアミノ酸配列（配列番号１１３）の４４３～４５３；
（ｅ）ＡＡＶ５カプシドアミノ酸配列（配列番号１１４）の４４２～４４５；
（ｆ）ＡＡＶ６カプシドアミノ酸配列（配列番号１１５）の４５０～４５９；
（ｇ）ＡＡＶ７カプシドアミノ酸配列（配列番号１１６）の４５１～４６１；
（ｈ）ＡＡＶ８カプシドアミノ酸配列（配列番号１１７）の４５１～４６１；
（ｉ）ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列（配列番号１１８）の４５１～４６１；
（ｊ）ＡＡＶ９ｅカプシドアミノ酸配列（配列番号１１９）の４５２～４６１；
（ｋ）ＡＡＶｒｈ１０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２０）の４５２～４６１；
（ｌ）ＡＡＶｒｈ２０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２１）の４５２～４６１；
（ｍ）ＡＡＶｈｕ．３７カプシドアミノ酸配列（配列番号１２２）の４５２～４６１；
（ｎ）ＡＡＶｒｈ７４カプシドアミノ酸配列（配列番号１２３または配列番号１５４）の４５２～４６１；または
（ｏ）ＡＡＶｒｈ３９カプシドアミノ酸配列（配列番号１２４）の４５２～４６１
の中のアミノ酸残基のうちの１つの直後に存在する、上記１～３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸Ｉ４５１、Ｎ４５２、Ｇ４５３、Ｓ４５４、Ｇ４５５、Ｑ４５６、Ｎ４５７、Ｑ４５８、Ｑ４５９、Ｔ４６０、またはＬ４６１のうちの１つに対応するアミノ酸残基の後に存在する、上記４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
６．前記異種タンパク質は、ホーミングドメイン、中和抗体エピトープ、または精製タグである、上記１、３～５のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
７．前記ホーミングドメインは、
（ｉ）神経組織ホーミングドメイン；
（ｉｉ）軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメイン；
（ｉｉｉ）骨ホーミングドメイン；
（ｉｖ）腎臓ホーミングドメイン；
（ｖ）筋肉ホーミングドメイン；
（ｖｉ）内皮細胞ホーミングドメイン；
（ｖｉｉ）インテグリン受容体結合ドメイン；
（ｖｉｉｉ）トランスフェリン受容体結合ドメイン；
（ｉｘ）腫瘍細胞標的化ドメイン；または
（ｘ）網膜細胞ホーミングドメイン
である、上記６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
８．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＳＩＴＬＶＫＳＴＱＴＶ（配列番号２１）、ＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）、ＶＶＭＶＧＥＫＰＩＴＩＴＱＨＳＶＥＴＥＧ（配列番号２５）、ＲＳＳＥＥＤＫＳＴＱＴＴ（配列番号２６）、ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）、ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）、ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）、ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）、ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）、ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）、ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）、またはＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）のダイニンペプチドの少なくとも４個の連続アミノ酸を含み、もしくはそれからなり、またはその７個の連続アミノ酸である、上記７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
９．前記トランスフェリン受容体結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）またはＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）の少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個のアミノ酸である、上記７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１０．前記網膜細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）の少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個のアミノ酸である、上記７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１１．前記ＡＡＶカプシドタンパク質は、ＡＡＶ８カプシドタンパク質またはＡＡＶ９カプシドタンパク質である、上記１０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１２．前記精製タグからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号８６）の血球凝集素（ＨＡ）エピトープまたはアミノ酸配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号５２）のＦＬＡＧタグの少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個の連続アミノ酸である、上記７に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１３．前記神経組織ホーミングタンパク質または前記網膜細胞ホーミングタンパク質は、ヒト軸糸ダイニン（ＨＡＤ）重鎖尾部である、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１４．前記ペプチド挿入物は、前記ＨＡＤ重鎖尾部の二量化ドメインからの少なくとも４個かつ最大で１５個の連続アミノ酸を含む、上記１３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１５．前記ペプチド挿入物は、（図７に示される）：
（ａ）（ＤＹＨ１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２Ｄ７のａａ１～１５４２）（配列番号９７）；
（ｂ）（ＤＹＨ２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｐ２２５のａａ１～１７６４）（配列番号９８）；
（ｃ）（ＤＹＨ３＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＤ５７のａａ１～１３９０）（配列番号９９）；
（ｄ）（ＤＹＨ５＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＴＥ７３のａａ１～１９４１）（配列番号１００）；
（ｅ）（ＤＹＨ６＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９Ｃ０Ｇ６のａａ１～１４３３）（配列番号１０１）；
（ｆ）（ＤＹＨ７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＷＸＸ０のａａ１～１２８９）（配列番号１０２）；
（ｇ）（ＤＹＨ８＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＪＢ１のａａ１～１８０７）（配列番号１０３）；
（ｈ）（ＤＹＨ９＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＮＹＣ９のａａ１～１８３１）（配列番号１０４）；
（ｉ）（ＤＹＨ１０＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ８ＩＶＦ４のａａ１～１７９３）（配列番号１０５）；
（ｊ）（ＤＹＨ１１＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９６ＤＴ５のａａ１～１８５４）（配列番号１０６）；
（ｋ）（ＤＹＨ１２＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ６ＺＲ０８のａａ１～１２１４）（配列番号１０７）；
（ｌ）（ＤＹＨ１４＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０ＶＤＤ８のａａ１～２００）（配列番号１０８）；または
（ｍ）（ＤＹＨ１７＿ＨＵＭＡＮ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＵＦＨ２のａａ１～１７９４）（配列番号１０９）
からなる群からの少なくとも４個かつ最大で１５個の連続アミノ酸を含む、上記１４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１６．前記ペプチド挿入物は、ダイニン重鎖配列（図７）のいずれか１つの残基１～２００からの少なくとも４個かつ最大で１５個の連続アミノ酸を含む、上記１５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１７．前記ペプチド挿入物は、図７の前記ダイニン重鎖配列のいずれか１つからの７個の連続アミノ酸を含む、上記１５に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１８．前記ペプチド挿入物は、ダイニン重鎖配列（図７）のいずれか１つの残基１～２００からの７個の連続アミノ酸を含む、上記１６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
１９．前記ペプチド挿入物は、ペプチド：
（ａ）ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）；
（ｂ）ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）；
（ｃ）ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）；
（ｄ）ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）；
（ｅ）ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）；
（ｆ）ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）；または
（ｇ）ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）
のうちの１つの少なくとも４個の連続アミノ酸を含む、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２０．前記ペプチド挿入物は、ペプチド：
（ａ）ＫＭＱＶＰＦＱ（配列番号１）；
（ｂ）ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）；
（ｃ）ＱＱＡＡＰＳＦ（配列番号３）；
（ｄ）ＲＹＮＡＰＦＫ（配列番号４）；
（ｅ）ＬＫＬＰＰＩＶ（配列番号５）；
（ｆ）ＰＦＩＫＰＦＥ（配列番号６）；または
（ｇ）ＴＬＳＬＰＷＫ（配列番号７）
のうちの１つからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２１．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）である、上記２０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２２．前記神経組織ホーミングタンパク質は、マウス軸糸ダイニン（ＭＡＤ）重鎖尾部である、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２３．前記神経組織ホーミングドメインは、自然修復受容体に結合し、かつ赤血球生成性ではないＥＰＯ（エリスロポエチン）ドメイン、または前記ドメインのコンフォメーションアナログである、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２４．前記ペプチド挿入物は、ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）からの少なくとも４個かつ最大で１１個の連続アミノ酸である、上記２３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２５．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）を有する、上記２４に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２６．前記神経組織ホーミングタンパク質は、ＳＲＬ（セリン－アルギニン－リジン）モチーフを有する脳ホーミングドメインである、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２７．前記脳ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＳＳＲＬＤＡ（配列番号１０）またはＣＬＳＳＲＬＤＡＣ（配列番号１１）の少なくとも４個の連続アミノ酸を有し、またはアミノ酸配列ＬＳＳＲＬＤＡ（配列番号１０）またはＣＬＳＳＲＬＤＡＣ（配列番号１１）である、上記２６に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２８．前記軸糸または細胞質ダイニンホーミングドメインは、ダイニン軽鎖ホーミングドメインである、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
２９．前記ダイニン軽鎖ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、ＳＩＴＬＶＫＳＴＱＴＶ（配列番号２１）、ＴＩＬＳＲＳＴＱＴＧ（配列番号２２）、ＶＶＭＶＧＥＫＰＩＴＩＴＱＨＳＶＥＴＥＧ（配列番号２５）、またはＲＳＳＥＥＤＫＳＴＱＴＴ（配列番号２６）のうちの１つの少なくとも４個かつ最大で１２個の連続アミノ酸である、上記２８に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３０．前記骨ホーミングタンパク質は、ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合ドメインである、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３１．前記ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、配列ＤＤＤＤＤＤＤＤ（配列番号９）の少なくとも６個のアミノ酸残基である、上記３０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３２．前記腎臓ホーミングドメインは、アミノ酸配列ＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）を含む、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３３．前記腎臓ホーミングドメインペプチドからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＰＶＡＳ（配列番号１３）またはＣＬＰＶＡＳＣ（配列番号１２）である、上記３２に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３４．前記筋肉ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＡＳＳＬＮＩＡ（配列番号１４）を含み、またはそれからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３５．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＱＡＶＲＴＳＬ（配列番号２３）またはＱＡＶＲＴＳＨ（配列番号２４）を含み、またはそれからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３６．前記内皮細胞ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＳＩＧＹＰＬＰ（配列番号２８）を含み、またはそれからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３７．前記インテグリン結合ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ（配列番号２９）を有する、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３８．前記トランスフェリン受容体結合ドメインは、トランスフェリンドメイン、もしくはそのコンフォメーションアナログ、または鉄模倣体である、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
３９．前記トランスフェリンドメインからの前記ペプチド挿入物は、配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号１７）またはＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号１８）からの少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個の連続アミノ酸である、上記３８に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４０．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＨＡＩＹＰＲＨ（配列番号１７）またはＴＨＲＰＰＭＷＳＰＶＷＰ（配列番号１８）を含み、またはそれからなる、上記３９に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４１．前記腫瘍細胞標的化ドメインからの前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＮＧＲＡＨＡ（配列番号３０）を含み、またはそれからなる、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４２．前記ペプチド挿入物は、ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）、ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）、ＲＴＩＧＰＳＶ（配列番号１９）、ＣＲＴＩＧＰＳＶＣ（配列番号２０）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）、及びＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）のうちの１つからの少なくとも４個の連続アミノ酸であり、またはその７個の連続アミノ酸である、上記２または３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４３．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸残基（図８に示される）：
（ａ）ＡＡＶ１カプシドアミノ酸配列（配列番号１１０）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；または５８５～５９３；
（ｂ）ＡＡＶ２カプシドアミノ酸配列（配列番号１１１）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５８；または５８４～５９２；
（ｃ）ＡＡＶ３カプシドアミノ酸配列（配列番号１１２）の１３８；２６２～２７２；４４９～４５９；または５８５～５９３；
（ｄ）ＡＡＶ４カプシドアミノ酸配列（配列番号１１３）の１３７；２５６～２６２；４４３～４５３；または５８３～５９１；
（ｅ）ＡＡＶ５カプシドアミノ酸配列（配列番号１１４）の１３７；２５２～２６２；４４２～４４５；または５７４～５８２；
（ｆ）ＡＡＶ６カプシドアミノ酸配列（配列番号１１５）の１３８；２６２～２７２；４５０～４５９；５８５～５９３；
（ｇ）ＡＡＶ７カプシドアミノ酸配列（配列番号１１６）の１３８；２６３～２７３；４５１～４６１；５８６～５９４；
（ｈ）ＡＡＶ８カプシドアミノ酸配列（配列番号１１７）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
（ｉ）ＡＡＶ９カプシドアミノ酸配列（配列番号１１８）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；
（ｊ）ＡＡＶ９ｅカプシドアミノ酸配列（配列番号１１９）の１３８；２６２～２７３；４５２～４６１；５８５～５９３；
（ｋ）ＡＡＶｒｈ１０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２０）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
（ｌ）ＡＡＶｒｈ２０カプシドアミノ酸配列（配列番号１２１）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
（ｍ）ＡＡＶｈｕ３７カプシドアミノ酸配列（配列番号１２２）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；
（ｎ）ＡＡＶｒｈ７４カプシドアミノ酸配列（配列番号１２３または配列番号１５４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５；または
（ｏ）ＡＡＶｒｈ３９カプシドアミノ酸配列（配列番号１２４）の１３８；２６３～２７４；４５２～４６１；５８７～５９５
のうちの１つの直後に存在する、上記２または１３～４２のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４４．前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸残基５８８～５８９の間またはＡＡＶ９カプシドのアミノ酸１３８に対応するアミノ酸残基の直後（図８参照）に挿入されたアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４５．前記ＡＡＶ９カプシドのＩ４５１～Ｌ４６１、Ｓ２６８またはＱ５８８のうちの１つの後（図８）に挿入されたアミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４６．前記ＡＡＶ９カプシドのアミノ酸残基５８８～５８９（図８参照）の間にアミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４７．前記ＡＡＶ９カプシドのＩ４５１～Ｌ４６１、またはＳ２６８から選択される１つ以上の位置（図８）で挿入されたアミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号８）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４８．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸残基２６２～２７３のうちの１つの直後にアミノ酸配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号２７）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
４９．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸残基２６９及び２７０の間にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５０．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を有する、上記４９に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５１．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸残基５９０及び５９１の間にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５２．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を有する、上記５１に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５３．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸残基４５３及び４５４のうちの１つの直後にアミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）を含む、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５４．前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、上記５３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５５．前記カプシドは、ＡＡＶ９であり、前記ペプチド挿入物は、ＡＡＶ９のアミノ酸残基４５４～４５５の間（図８）に存在する、上記２または１３～４３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５６．前記ペプチド挿入物は、前記ＡＡＶ９カプシドのＩ４５１～Ｌ４６１、Ｓ２６８またはＱ５８８のうちの１つに対応する酸残基の直後（図８）に存在する、上記２または１３～４３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５７．前記ペプチド挿入物は、ＡＡＶ９カプシドタンパク質のアミノ酸４５１～４６１のうちの１つの直後に存在する、上記４３に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５８．前記ペプチド挿入物は、ＡＡＶカプシド第８可変領域（ＶＲ－ＶＩＩＩ）において存在する、上記２または１３～４３のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
５９．前記カプシドタンパク質は、前記ＡＡＶ２カプシドタンパク質ではない、先行上記のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
６０．組換えＡＡＶカプシドタンパク質であって、野生型または非修飾カプシドタンパク質に対する１つ以上のアミノ酸置換であって、前記ｒＡＡＶカプシドタンパク質は、Ａ２６９Ｓアミノ酸置換を有するＡＡＶ８カプシドタンパク質であり、またはＳ２６３Ｇ／Ｓ２６９Ｒ／Ａ２７３Ｔ置換、またはＷ５０３ＲもしくはＱ４７４Ａ置換を有するＡＡＶ９カプシドタンパク質である、前記１つ以上のアミノ酸置換、または別のＡＡＶ型カプシドのカプシドタンパク質における対応する置換を含む、前記組換えＡＡＶカプシドタンパク質。
６１．ＡＡＶ８カプシドタンパク質についての４９８－ＮＮＮ／ＡＡＡ－５００もしくはＡＡＶ９カプシドタンパク質についての４９６－ＮＮＮ／ＡＡＡ－４９８、または別のＡＡＶ型カプシドのカプシドタンパク質における対応する置換をさらに含む、実施形態６０に記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質。
６２．先行上記のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質をコードする、またはそれと少なくとも８０％の同一性を共有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
６３．先行上記のいずれかに記載のｒＡＡＶカプシドタンパク質をコードする、上記６２に記載の核酸。
６４．前記ヌクレオチド配列によってコードされる前記カプシドタンパク質を含むＡＡＶベクターを生成するために上記６２または６３に記載の核酸を発現することが可能なパッケージング細胞。
６５．上記１～６１のいずれかに記載のカプシドタンパク質を含むｒＡＡＶベクター。
６６．導入遺伝子をさらに含む、上記６５に記載のｒＡＡＶベクター。
６７．上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクター及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
６８．導入遺伝子を細胞に送達する方法であって、前記方法は、前記細胞を上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクターと接触させることを含む、前記方法；または導入遺伝子を細胞に送達する際に使用するための上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクターであって、前記細胞は、前記ベクターと接触される、前記ｒＡＡＶベクター。
６９．導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する方法であって、前記方法は、上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクターを前記対象に投与することを含み、前記ペプチド挿入物は、ホーミングペプチドである、前記方法；または導入遺伝子を、それを必要とする対象の標的組織に送達する際に使用するための上記６５または６６に記載のｒＡＡＶベクターであって、前記ベクターは、前記対象に投与される、前記ｒＡＡＶベクター。
７０．前記ｒＡＡＶベクターは、全身的に、静脈内に、髄腔内に、鼻腔内に、腹腔内に、硝子体内に、腰椎穿刺を介してまたは大槽を介して投与される、上記６９に記載の方法、または使用のためのｒＡＡＶベクター。
７１．前記標的組織は、
（ｉ）神経組織であり、前記ベクターは、前記神経組織ホーミングドメインからの前記ペプチド挿入物を含み、
（ｉｉ）骨であり、前記ベクターは、前記骨ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｉｉｉ）腎臓であり、前記ベクターは、前記腎臓ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｉｖ）筋肉であり、前記ベクターは、前記筋肉ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｖ）内皮細胞であり、前記ベクターは、前記内皮細胞ホーミングドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｖｉ）インテグリン受容体であり、前記ベクターは、前記インテグリン受容体結合ドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｖｉｉ）腫瘍細胞上のトランスフェリン受容体であり、前記ベクターは、前記トランスフェリン受容体結合ドメインからのペプチド挿入物を含み、
（ｖｉｉｉ）腫瘍細胞であり、前記ベクターは、前記腫瘍細胞標的化ドメインからのペプチド挿入物を含み、または
（ｉｘ）網膜細胞であり、前記ベクターは、前記網膜細胞ホーミングドメインからのペプチド挿入物
を含む、上記７０に記載の方法、または使用のためのｒＡＡＶベクター。
７２．前記標的組織は、網膜細胞であり、前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）、ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１５）またはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号１６）を含む、上記７１に記載の方法、または使用のためのｒＡＡＶベクター。
７３．前記標的組織は、網膜細胞であり、前記ペプチド挿入物は、アミノ酸配列ＴＬＡＡＰＦＫ（配列番号２）を含む、上記７２に記載の方法、または使用のためのｒＡＡＶベクター。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図6E】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図7E】
【図7F】
【図7G】
【図7H】
【図7I】
【図7J】
【図7K】
【図7L】
【図7M】
【図8-1】
【図8-2】
【図8-3】
【図8-4】
【図8-5】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【配列表】