特許 7621270 シアリダーゼ耐性糖およびその調製および使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-01-16

(45)【発行日】2025-01-24

(54)【発明の名称】シアリダーゼ耐性糖およびその調製および使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07H 5/10 20060101AFI20250117BHJP

   A61K 39/395 20060101ALN20250117BHJP

   A61P 35/00 20060101ALN20250117BHJP

【ＦＩ】

C07H5/10

A61K39/395 B

A61K39/395 H

A61P35/00

【請求項の数】 8

(21)【出願番号】P 2021558537

(86)(22)【出願日】2020-03-10

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-06-22

(86)【国際出願番号】 US2020014608

(87)【国際公開番号】W WO2020205034

(87)【国際公開日】2020-10-08

【審査請求日】2023-02-08

(31)【優先権主張番号】62/829,736

(32)【優先日】2019-04-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】317010417

【氏名又は名称】アカデミア シニカ

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ウォン，チ－ヒューイ

(72)【発明者】

【氏名】ロー，ホン－ジェイ

【審査官】安藤 倫世

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５１８９８９（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１４／１１５７９７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Journal of the American Chemical Society，2007年，129(35)，10630-10631，DOI: 10.1021/ja072687u

【文献】Angewandte Chemie International Edition，2019年01月25日，58(12)，3814-3818，DOI: 10.1002/anie.201812963

【文献】Tetrahedron，1987年，43(24)，5919-5928，DOI: 10.1016/S0040-4020(01)87797-8

【文献】Journal of the American Chemical Society，2019年04月15日，141(16)，6484-6488，DOI: 10.1021/jacs.9b01991

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｈ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

３－ヒドロキシ－シアル酸を糖と反応させることによりグリコシル化反応を行ってα２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドを形成する工程、および
前記α２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドをフッ素化剤と反応させることによりフッ素化反応を行って３－フルオロ－シアル酸を含む糖を形成する工程
を含む、３－フルオロ－シアル酸を含む糖を調製する方法であって、
前記３－ヒドロキシ－シアル酸は、式（Ｉ）の化合物：

【化1】

であり、
前記糖は、式（ＩＩ）の化合物：

【化2】

であり、
前記α２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドは、式（ＩＩＩ）の化合物：

【化3】

であり、
前記３－フルオロ－シアル酸を含む糖は、式（ＩＶ）の化合物：

【化4】

である、３－フルオロ－シアル酸を含む糖を調製する方法。

【請求項2】

前記フッ素化剤はペルフルオロ－１－ブタンスルホニルフルオリド（ＮｆＦ）であり、前記フッ素化反応は触媒の存在下で行い、前記触媒は１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）であり、前記フッ素化反応は、トルエン中で行い、前記フッ素化反応はさらにジフルオロトリメチルケイ酸トリス（ジメチルアミノ）スルホニウム（ＴＡＳＦ）の存在下で行う、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記フッ素化剤はＮｆＦであり、前記グリコシル化反応はＡｇＯＴｆおよびＮａ_２ＨＰＯ_４の存在下で行い、前記フッ素化反応は触媒の存在下で行う、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記触媒はＤＢＵであり、前記グリコシル化およびフッ素化反応はそれぞれトルエン中で行い、
前記フッ素化反応はさらにＴＡＳＦの存在下で行う、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記３－フルオロ－シアル酸を含む糖を第２の糖と反応させることにより別のグリコシル化反応を行う工程をさらに含み、
前記フッ素化剤はＮｆＦであり、前記グリコシル化反応はＡｇＯＴｆおよびＮａ_２ＨＰＯ_４の存在下で行い、前記フッ素化反応は触媒の存在下で行い、
前記触媒はＤＢＵであり、前記グリコシル化およびフッ素化反応はそれぞれトルエン中で行い、
前記フッ素化反応は、任意で、さらにＴＡＳＦの存在下で行う、
請求項１に記載の方法。

【請求項6】

モノクローナル抗体を３－フルオロ－シアル酸を含む糖でグリコシル化する工程を含む、３－フルオロ－シアル酸を含む糖に結合された均質な抗体を調製する方法であって、前記３－フルオロ－シアル酸を含む糖は、
３－ヒドロキシ－シアル酸を糖と反応させることによりグリコシル化反応を行ってα２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドを形成する工程、および
前記α２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドをフッ素化剤と反応させることによりフッ素化反応を行って３－フルオロ－シアル酸を含む糖を形成する工程
によって得られ、
前記３－ヒドロキシ－シアル酸は、式（Ｉ）の化合物：

【化5】

であり、
前記糖は、式（ＩＩ）の化合物：

【化6】

であり、
前記α２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドは、式（ＩＩＩ）の化合物：

【化7】

であり、
前記３－フルオロ－シアル酸を含む糖は、式（ＩＶ）の化合物：

【化8】

である、３－フルオロ－シアル酸を含む糖に結合された均質な抗体を調製する方法。

【請求項7】

前記フッ素化剤はＮｆＦであり、前記グリコシル化反応はＡｇＯＴｆおよびＮａ_２ＨＰＯ_４の存在下で行い、前記フッ素化反応は触媒の存在下で行い、
前記触媒はＤＢＵであり、前記グリコシル化およびフッ素化反応はそれぞれトルエン中で行う、
請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記フッ素化反応後に、前記３－フルオロ－シアル酸を含む糖を第２の糖と反応させることにより別のグリコシル化反応を行う工程をさらに含む、請求項７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

シアル酸は、糖脂質および糖タンパク質上のグリカンの最外端に示されることが多い負に帯電した単糖であり、細胞、ウイルスおよび細菌上の他の生体分子および受容体との相互作用を含む多くの生理的な細胞内および細胞間プロセスに関与している^１。またシアル化は、分泌型糖タンパク質および膜結合受容体の機能および運命を調節するのに重要な役割を担う。例えば上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）のシアル化はＥＧＦＲ二量体化を阻害し、このようにしてＥＧＦ結合およびリン酸化を妨害することが分かっており、これは腫瘍発生に関連づけられている^２。またＮ－グリカンの脱シアル化は基礎をなすガラクトースを露出し、これが肝臓のアシアロ糖タンパク質受容体によって認識され、それにより循環からの糖タンパク質の急速な除去が生じるため、シアル化は血液循環中の糖タンパク質の半減期を調整する^３。故にシアル化の程度の増加は、糖タンパク質治療薬の半減期および望ましくない効果を高める可能性がある。

【0002】

最近ではタンパク質構造および機能に対するグリコシル化の役割が集中的に研究されており、タンパク質、特に治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）のグリカンｓｙｎｔｈｅｓｉｃａｍｐｉｌｌａｒｙおよび糖鎖工学のための新しい方法の開発を奨励している^５。例えば末端のα－２，６－結合型シアル酸を有する脱フコシル化二分岐Ｎ－グリカンは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）および抗炎症活性の増強にとって最適なグリカン構造を有することが分かっている^６。

【0003】

Ｃ－３位にフッ素を有するシアル酸誘導体は、シアリルトランスフェラーゼおよびシアリダーゼ（またはノイラミニダーゼ）を阻害し、かつより安定であることが知られている^７。しかしドナーとしてのフッ化糖によるグリコシル化は、グリコシル化反応を不活性化させるフッ素基の強力な電子効果により大きな課題をもたらすことが多い。対応するシチジン一リン酸－シアル酸から３－フルオロ－シアル酸残基を転移させてα－２，３－結合型シアロシドを形成することができるシアリルトランスフェラーゼは存在するが、利用可能な対応するα－２，６－シアリルトランスフェラーゼは存在しない^１１。

【0004】

従って、糖タンパク質治療薬を開発するために使用することができるα－２，６－結合型３－フルオロ－シアロシド（α-2,6-linked 3-fluoro-sialosides）を含む糖を確実に調製するための方法を提供することが必要とされている。

【発明の概要】

【0005】

本発明の態様は、３－フルオロ－シアル酸を含む糖を調製する方法である。本方法は、３－ヒドロキシ－シアル酸を糖と反応させることによりグリコシル化反応を行ってα２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドを形成する工程、およびα２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドをフッ素化剤と反応させることによりフッ素化反応を行って３－フルオロ－シアル酸を含む糖を形成する工程を含む。

【0006】

本発明の別の態様は、３－フルオロ－シアル酸を含む糖に結合された均質な抗体を調製する方法である。本方法は、モノクローナル抗体を糖でグリコシル化することにより行う。

【0007】

本発明のさらなる態様は、式（ＶＩ）の化合物：

【化1】

（式中、Ｒ^１はＡｃまたはＨであり、Ｒ^２はＢｚまたはＨであり、Ｒ^３はメチルまたはＨであり、Ｒ^４はＢｎまたはＨであり、かつＸはＯＨ、脱離基または糖である）に関する。なお、「Ａｃ」はアセチルを表し、「Ｂｚ」はベンゾイルを表し、「Ｂｎ」はベンジルを表し、糖は単糖、二糖またはオリゴ糖であってもよい。

【0008】

α２，６－結合型３－フルオロ－シアロシド末端Ｎ－グリカンに結合されたモノクローナル抗体も本発明の範囲内である。

【0009】

さらに癌を治療する方法が本発明によって包含される。本方法は、有効量のα２，６－結合型３－フルオロ－シアロシド末端Ｎ－グリカンに結合されたモノクローナル抗体をそれを必要とする対象に投与する工程を含む。

【0010】

本発明の詳細は、以下の発明を実施するための形態に記載されている。本発明の他の特徴、目的および利点は、いくつかの実施形態の以下の詳細な説明および添付の特許請求の範囲からも明らかになるであろう。

【0011】

以下の説明は添付の図面を参照する。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】図１Ａは酵素濃度の関数として３種類のシアロシド、すなわち１、２およびＳ２７の酵素触媒加水分解を示す２つのグラフを示し、図１Ｂは２、Ｓ２７または２－デオキシ－２，３－ジデヒドロ－Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＤＡＮＡ）（シアリダーゼ阻害剤）の濃度の関数としてシアリダーゼ阻害を示す２つのグラフを示す。

【図2】４種類のＮ－グリカン：（１）リツキサン－Ｇ、（２）リツキサン－Ｆ^ａｘ－ＳＣＴ、（３）リツキサン－ＳＣＴおよび（４）市販のリツキサンの染色された電気泳動ゲルである。

【図3】３種類のＮ－グリカン、すなわちリツキサン－Ｆ^ａｘ－ＳＣＴ、リツキサン－ＳＣＴおよびリツキサンについて得られた質量スペクトルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本明細書に最初に詳細に開示されているのは、３－フルオロ－シアル酸を含む糖を調製する方法である。

【0014】

繰り返すが、本方法は、３－ヒドロキシ－シアル酸を糖と反応させることによりグリコシル化反応を行ってα２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドを形成する工程、およびα２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドをフッ素化剤と反応させることによりフッ素化反応を行って３－フルオロ－シアル酸を含む糖を形成する工程を含む。糖は単糖、二糖またはオリゴ糖であってもよい。例示的な方法では、糖は単糖である。

【0015】

本方法の特定の実施形態では、３－ヒドロキシ－シアル酸は２－ブロモ－３－ヒドロキシ－シアル酸であり、グリコシル化反応はトリフルオロメタンスルホン酸銀（ＡｇＯＴｆ）およびリン酸水素二ナトリウム（Ｎａ_２ＨＰＯ_４）の存在下で行う。好ましくは、グリコシル化反応はトルエン中で行う。

【0016】

本方法の他の実施形態では、フッ素化剤はペルフルオロ－１－ブタンスルホニルフルオリド（ＮｆＦ）であり、フッ素化反応は触媒の存在下で行う。例えば触媒は、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）である。好ましくは、フッ素化反応はトルエン中で行う。なお、この反応はさらにジフルオロトリメチルケイ酸トリス（ジメチルアミノ）スルホニウム（ＴＡＳＦ）の存在下で行うことができる。

【0017】

例示的な方法では、３－ヒドロキシ－シアル酸は、式（Ｉ）の化合物：

【化2】

であり、
糖は、式（ＩＩ）の化合物：

【化3】

であり、
α２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドは、式（ＩＩＩ）の化合物：

【化4】

であり、かつ
３－フルオロ－シアル酸を含む糖は、式（ＩＶ）の化合物：

【化5】

である。

【0018】

さらなる実施形態では、本方法は、３－フルオロ－シアル酸を含む糖を第２の糖と反応させることにより別のグリコシル化反応を行う工程をさらに含む。

【0019】

３－フルオロ－シアル酸を含む糖に結合された均質な抗体を調製する方法も本発明の範囲内である。この場合も、本方法はモノクローナル抗体を３－フルオロ－シアル酸を含む糖でグリコシル化する工程を含む。

【0020】

本方法の特定の実施形態では、３－フルオロ－シアル酸を含む糖は、３－ヒドロキシ－シアル酸を糖と反応させることによりグリコシル化反応を行ってα２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドを形成する工程、およびα２，６－結合型３－ヒドロキシ－シアロシドをフッ素化剤と反応させることによりフッ素化反応を行って３－フルオロ－シアル酸を含む糖を形成する工程を含む上記方法およびその実施形態によって得られる。

【0021】

他の実施形態では、３－フルオロ－シアル酸を含む糖は、α２，６－結合型３－フルオロ－シアロシド末端Ｎ－グリカンであり、これは式（Ｖ）の化合物：

【化6】

であってもよく、
式中、Ｚは、

【化7】

である。

【0022】

本発明の別の態様は、式（ＶＩ）の化合物：

【化8】

に関し、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４およびＸは上記発明の概要の箇所に定義されている。

【0023】

一実施形態では、当該化合物は、式（ＩＶ）の化合物：

【化9】

である。

【0024】

さらに別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物は、それぞれＮ－グリカンであるＸを含む。本実施形態の例示的な化合物は、式（Ｖ）の化合物：

【化10】

であり、
式中、Ｚは、

【化11】

である。

【0025】

本発明は、３－フルオロ－シアル酸を含む糖に結合されたモノクローナル抗体も包含し、３－フルオロ－シアル酸を含む糖はα２，６－結合型３－フルオロ－シアロシド末端Ｎ－グリカンである。好ましくはα２，６－結合型３－フルオロ－シアロシド末端Ｎ－グリカンは、上に示されている式（Ｖ）の化合物である。

【0026】

癌または自己免疫疾患を治療する方法が本発明によってさらに包含され、これは有効量の上記モノクローナル抗体をそれを必要とする対象に投与することを含む。例えば、癌は白血病またはリンパ腫であってもよく、自己免疫疾患は関節リウマチ、自己免疫性溶血性貧血、赤芽球癆、血栓性血小板減少性紫斑病、特発性血小板減少性紫斑病白血病、リンパ腫、エバンス症候群、脈管炎、水疱性皮膚症、１型糖尿病、シェーグレン症候群、抗ＮＭＤＡ受容体脳炎、デビック病、グレーブス眼症、自己免疫性膵炎、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群またはＩｇＧ４関連疾患であってもよい。

【0027】

「治療する」または「治療」という用語は本明細書では、治療もしくは予防効果を与えるという目的で、上記疾患すなわち癌、そのような疾患の症状またはそのような疾患に対する素因を有する対象に上記医薬組成物を投与することを指す。「有効量」という用語は、そのような効果を与えるために必要な活性薬物の量を指す。有効な用量は当業者によって認識されるように、治療される疾患の種類、投与経路、賦形剤の使用および他の治療処置と同時使用する可能性に応じて異なる。

【0028】

本発明の特定の具体的な態様のより詳細な説明を以下に提供する。

【0029】

３－フルオロ置換されたシアル酸誘導体は、非フッ素化シアル酸誘導体と比較してシアリダーゼに対してより安定であることが知られている^７。フッ素原子をアノマーのＣ－３位に導入することにより、２，３－ジフルオロシアル酸（ＤＦＳＡ）を開発し（スキーム１）^８、生化学的プローブ^９およびシアリダーゼを研究するための活性系タンパク質プロファイリングプローブ^１０として使用した。ＤＦＳＡの助けを借りて、Ｃ－３において軸方向位置にあるフッ素原子（３Ｆ^ａｘ）が、３Ｆ^ｅｑ誘導体よりも酵素の脱活性化（ｋ_ｉ）および再活性化（ｋ_ｈｙｄｒ）の両方の減速に対してより大きい効果を有することが分かった^８ｂ。この観察に触発されて、本発明者らは糖タンパク質治療薬におけるそれらの潜在的使用のために３－フルオロシアル酸を用いてシアロシドの安定性を調査することを望んだ。具体的には本発明者らは、ｍＡｂ上のＮ－グリカンの末端に３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃモチーフを組み込むことによりシアリダーゼに対するその安定性を高め、かつそのエフェクター機能を維持することができるかを研究する意図である。

【0030】

本発明者らの目標に向かって、本発明者らは二分岐Ｎ－グリカンを含むα２，６－結合型３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃオリゴ糖の合成のための分取方法を開発した。本発明者らは、合成の３－Ｆ^ａｘＮｅｕ５Ａｃ－α２，６－Ｇａｌ結合はシアリダーゼの存在下でより安定であり、かつ対応する二分岐グリカンを有する抗体は非フッ素化対応物と同じ結合親和力を有することも証明した。

【0031】

（ａ）ＸｅＦ_２－ＢＦ_３×ＯＥｔ_２ ^１２、分子状フッ素^１３およびＳｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒによる保護されたグリカンのフッ素化^７ｃ、（ｂ）シアル酸誘導体におけるＣ３でのエクアトリアルヒドロキシル基の反転^７ｆ、および（ｃ）ＭａｎＮＡｃおよび３－フルオロ－ピルビン酸の３Ｆ^ｅｑＮｅｕ５Ａｃおよび３Ｆ^ａｘＮｅｕ５Ａｃへのアルドラーゼ触媒酵素変換^{７ａ、１１ａ、１４}を含む、３Ｆ－Ｎｅｕ５Ａｃの合成のためのいくつかの方法が報告された。しかし本発明者らの知る限りでは、３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ末端Ｎ－グリカンの合成について記載している方法はこれまで存在しない。３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃを含む二糖の調製を開示している唯一の説明は３－Ｆ^ａｘＮｅｕ５Ａｃ－α２，３－Ｌａｃの酵素合成に限られており、必要とされているα２，６－結合型のものではない^１１ａ。従って本発明者らは、本発明者らの努力をこの結合の化学合成に焦点を当てた^１５。

【化12】

【0032】

３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ系のドナーを用いた様々なグリコシル化条件のスクリーニング後に（スキーム２ａ）、本発明者らは、３ＯＨ－Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－Ｇａｌ－ＳＴｏｌにおける３ＯＨ^ｅｑの３Ｆ^ａｘへのＳ_Ｎ２反応を包含する他の戦略を調査した（スキーム２ｂ）。最初に本発明者らは、Ｇｏｔｏらによって報告されている条件を用いてＯ－６におけるシアル化を調べた（表１、項目１）^１６。この反応はトルエン中で１当量の促進剤としてのＡｇＯＴｆおよびベースとしてＮａ_２ＨＰＯ_４を用いて－１０℃で行った（スキーム３）。これらの条件により３：１（α：β）のアノマー比で二糖６が低い収率（１５％）で得られた。溶媒をＣＨ_２Ｃｌ_２に変えてもジアステレオ選択性は向上しなかった（項目２）。温度および反応時間を増加させることにより、その収率は上昇したが、選択性は劇的に低下した（項目３～５）。驚くべきことに、より多くの当量のアクセプターを使用するほど、より良好な立体選択性が観察された（項目３対６）。最適化された条件（項目７）により優れたα選択性（α：β＝１３：１）で６が３５％（９９％ｂｒｓｍ）の収率で得られた。

【化13】

【表1】

【0033】

ＯＨ^ｅｑのＦ^ａｘへの反転は困難な作業であることが分かった。ＴＡＳＦを用いたＯＴｆおよびＯＭｓのフッ素での置換により出発物質の分解が生じた。この変換を最適化するために、本発明者らは様々なフッ素化試薬をスクリーニングしたが全く成功しなかった。しかし、６を無水トルエン中の１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）の存在下でペルフルオロ－１－ブタンスルホニルフルオリド（ＮｆＦ）により９０℃で２日間処理することにより（スキーム３）、４が６％の収率で得られた（表２、項目１）^１７。反応温度の低下（項目１、５および６）および反応時間の増加（項目７）などの反応条件のさらなる最適化により４の全収率が向上した。７から４への変換はＣ－３の周りでの立体障害が原因で律速段階であるように思われる。多くの場合に、本発明者らは１日以内に室温およびＮｆＦおよびＤＢＵの存在下で形成された７を単離することができた。しかし、７から４への変換（７７％ｂｒｓｍの収率）は長い反応時間を必要とする。反応温度を上げることによりその変換を向上させる試みにより、７の分解が生じた。従って本発明者らの最良の結果は、試薬の量の増加および反応時間の１５日間への延長により得られた（項目８）。最後に本発明者らは、ＴＡＳＦの添加により反応効率を高め、それにより反応時間をたった２日に短縮させるのに役立つことを見出した（項目９）。完全に保護された３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－Ｇａｌ－ＳＴｏｌ二糖（４）の立体化学をＸ線回折分析により確認した。

【化14】

【表2】

【0034】

スキーム５を参照すると、ＮＩＳ／ＴＭＳＯＴｆを用いて３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－二糖ドナー４をアクセプター（８）に結合させて９を得た。次にアノマー位置にあるＯ－ａｌｌｙｌ基をＡｃＯＨ／ＮａＯＡｃ中のＰｄＣｌ_２による異性化によって除去し、アノマーのヒドロキシル基（１０）をさらにフルオリド（１１）およびイミデート（１２）に変換した。Ｃｐ_２ＨｆＣｌ_２／ＡｇＯＴｆ条件を用いた３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ末端フルオリドドナー（１１）によるＯ－３におけるコア二糖（１３）のグリコシル化によりヘキサ糖１４を８５％の収率で得た。ベンジリデン基の除去後に、１５をＯ－６位においてグリコシル化して、優れた位置選択性およびα立体選択性により所望の十糖（１６）を７０％の収率で得た。本発明者らは、Ｎ－フェニルトリフルオロアセトイミデートドナー（１２）を用いたＴｆＯＨ促進グリコシル化も試験したが、これにより不十分な収率の生成物が得られた。次に、以下の一連の工程：（ａ）エステルおよびＮＨＴｒｏｃ基を除去するためのＬｉＯＨによる鹸化、（ｂ）遊離アミンおよびアルコールのアセチル化、（ｃ）ナトリウムメトキシドによるＯＡｃ基の除去、および（ｄ）ＭｅＯＨ／水／ＨＣＯ_２Ｈ混合物中のＰｄ／ＣによるＯ－ベンジル基の水素化分解^４ｂに従って、完全に脱保護されたグリカン（１７）を４０％の全収率で得た。

【化15】

【0035】

スキーム５における試薬および条件：（ａ）８、ＴｆＯＨ、ＮＩＳ、４ÅのＭＳ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、－４０℃、２時間、６４％。（ｂ）ＰｄＣｌ_２、ＣＨ_３ＣＯＯＮａ、ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏ、８２％。（ｃ）ＤＡＳＴ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、－２０℃、７３％。（ｄ）ＣｌＣ（＝ＮＰｈ）ＣＦ_３、Ｃｓ_２ＣＯ_３、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃～室温、３時間、５６％。（ｅ）１１、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ_２ＨｆＣｌ_２、トルエン、４ÅのＭＳ、０℃、３時間、８５％。（ｆ）ｐＴＳＡ・Ｈ_２Ｏ、ＣＨ_３ＣＮ、室温、６時間、７５％。（ｇ）１１、ＡｇＯＴｆ、Ｃｐ_２ＨｆＣｌ_２、トルエン、４ÅのＭＳ、－１５℃、３時間、７０％（８０％ｂｒｓｍ）。（ｈ）１２、ＴｆＯＨ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、４ÅのＭＳ、－６０～－２０℃、３時間、３３％（５５％ｂｒｓｍ）。（ｉ）ＬｉＯＨ、ジオキサン／Ｈ_２Ｏ（４：１）、９０℃、１６時間。（ｊ）Ａｃ_２Ｏ、Ｐｙ、１６時間。（ｋ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、１６時間。（ｌ）Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ／ＨＣＯＯＨ（６：３：１）、Ｈ_２、１６時間、４０％（４段階）。

【0036】

段階的合成のためのプロトコルを確立した後、本発明者らは、１７の前駆体であるヘキサ糖（１４）のプログラム可能な［２＋２＋２］ワンポット合成を開発することによりグリカンの組み立てを合理化した（スキーム６）。設計したワンポットプロトコルは、－４０℃での３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－二糖ドナー（４）（ＲＲＶ＝２０５３）と反応性のより低いアクセプター（１８）（ＲＲＶ＝５３７）との最初の結合、その後の－２０℃での還元末端アクセプター１３の注入で構成されていた。－１０℃および標準的な精製プロトコルで１時間後、ヘキサ糖１４を２６％の収率で単離した。

【化16】

【0037】

スキーム６における試薬および条件：（ａ）ＴｆＯＨ、ＮＩＳ、４ÅのＭＳ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、－４０℃～－１０℃、３時間、２６％。

【0038】

シアリダーゼの存在下で３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－Ｇａｌモチーフの安定性に関する予備データを収集するために、本発明者らはウェルシュ菌およびコレラ菌由来の市販されているシアリダーゼを用いるインビトロアッセイ^１９のために、（１）Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－Ｇａｌ－ｐＮＰおよび（２）３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ類似体を基質として調製した（スキーム１）。どちらの酵素も未変性の基質１に対して期待された加水分解活性を示したが、３Ｆ^ａｘ－類似体２に対しては不活性であった（図１Ａを参照）。本発明者らは、２がＤＡＮＡのように１の加水分解を有意に阻害しないことも観察した（図１Ｂを参照）。

【0039】

ｍＡｂの均質なグリコフォームを調製するために、標準的なプロトコル^６に従って化合物１７をオキサゾリンドナーに変換し、かつＥｎｄｏ Ｓ２（Ｄ１８４Ｑ）の存在下でＧｌｃＮＡｃにより修飾されたＩｇＧ（コアフコースを含まない）に連結させた。均質な３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－グリコフォームのＦｃγＲＩＩＩａへの結合親和力を、親の非フッ素化グリコフォーム（Ｇ２Ｓ２）およびリツキシマブの市販試料（主要なグリコフォーム：Ｇ１Ｆ１、Ｇ０Ｆ１、Ｇ２Ｆ１）と共に、表面プラズモン共鳴分析^６により測定した。リツキシマブの市販試料と比較した場合、α２，６－シアル化を含み、かつコアフコースを含まない二分岐Ｎ－グリカンを有するＩｇＧの均質なグリコフォームは、結合親和力における３９．９倍（Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｇ２Ｓ２）および３７．４倍（３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｇ２Ｓ２）の向上を示した（表４を参照）。３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ修飾されたグリコフォームの結合親和力は親のグリカンと同じ範囲内であることが分かったという事実は、３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－グリコシル化ｍＡｂのインビボ研究のための前提を与える。これらの結果はそのうち報告されるであろう。

【0040】

結論として本発明者らは、シアリダーゼ耐性オリゴ糖および３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ末端二分岐Ｎ－グリカンを含む代表的な均質な抗体の合成のためのビルディングブロックとして、３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－Ｇａｌ－ＳＴｏｌの化学合成を開発した。市販のリツキシマブ試料と比較した場合、３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－グリカンにより修飾された均質なグリコフォームは、ＦｃγＲＩＩＩａに結合する際に３７．４倍の向上を示した。さらに親の非フッ素化および３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ修飾された抗体グリコフォームは、Ｆｃ受容体への同様の結合親和力を示した。全体として本発明者らの結果は、治療用糖タンパク質の半減期の向上のための新しい一般的な戦略を明らかにした。

【0041】

さらなる詳細がなくとも、当業者であれば上記説明に基づいて本発明を最大限に利用することができると考えられる。従って以下の具体例は単に例示であり、何であっても決して本開示の残りを限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用されている全ての文献はそれら全体が参照により組み込まれる。

【0042】

実施例１：３－フルオロ－シアル酸を含む糖および前駆体の合成
特に記載がない限り全ての反応を不活性雰囲気下で行い、その後に標準的なシリンジ－セプタム技術を行った。溶媒は商業的供給源から購入し、さらに精製することなく使用した。微粉状モレキュラーシーブ４Å（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を粉砕して粉末にし、使用前に活性化させた。全ての反応の進行をシリカゲル６０ Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ社）で予めコーティングしたＴＬＣガラスプレートにより監視した。ＴＬＣを紫外線（２５４ｎｍ）、ｐ－アニスアルデヒドおよび／またはセリウムモリブデン酸アンモニウム染色により可視化した。Ａｃｒｏｓｓシリカゲル（粒径０．０３５～０．０７０ｍｍ、６０Å）でカラムクロマトグラフィを行った。^１Ｈ、^１３Ｃおよび^１９Ｆ ＮＭＲスペクトルをＢｒｕｋｅｒ ＡＶＩＩＩ－６００、ＤＲＸ－５００、ＡＶ－４００、ＤＰＸ－４００、ＡＶＡＮＣＥ ５００ ＡＶおよびＡＶＡＮＣＥ ６００分光計により２５℃で記録し、残留する溶媒ピークを内部標準として用いて化学シフトをδ（ｐｐｍ）で測定した（δ、^１Ｈ ＮＭＲではｐｐｍ：７．２４（ＣＨＣｌ_３）、４．８０（Ｈ_２Ｏ）、^１３Ｃ ＮＭＲでは７７（ＣＤＣｌ_３））。結合定数（Ｊ）はＨｚで測定した。データは「化学シフト、多重度（ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｍ＝多重線、ｂｒ＝幅広）」で表す。エレクトロスプレーイオン化飛行時間（ＥＳＩ－ＴＯＦ）リフレクトロン実験ではＡｇｉｌｅｎｔ ＬＣ／ＭＳＤ ＴＯＦ質量分析計で高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）を記録した。Ｃｕ Ｋ_α放射線（λ＝１．５４７８）を備えたＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ｐｌａｔｉｎｕｍ－^１３５ＣＣＤ回折計により単結晶Ｘ線回折研究を行った。Ｈｉｔａｃｈｉ ＨＰＬＣ Ｄ－７０００システムによりＨＰＬＣ測定を行った。１ｍＬ／分の流速で溶媒系ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いて順相ＺＯＲＢＡＸ ＲＸ－ＳＩＬ、５μｍ、４．６×２５０ｍｍ（コロイド状シリカ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いてＲＲＶ測定値を記録し、２５４ｎｍで可視化した。

【0043】

【化17】

ｐ－トリル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－５－デオキシ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－グルコ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノシド６α。無水トルエン（６０ｍＬ）中のアクセプター３（１．０５ｇ、１．８０ｍｍｏｌ、１当量）およびドナー５（１．０２ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、１当量）混合物をアルゴン雰囲気下で１０分間撹拌した。次いで反応混合物を－５０℃に冷却し、乾燥Ｎａ_２ＨＰＯ_４（１．０７ｇ、７．５４ｍｍｏｌ、４．２当量）、その後にＡｇＯＴｆ（６９２ｍｇ、２．６９ｍｍｏｌ、１．５当量、トルエン１８ｍＬ中）を撹拌しながら添加した。反応が完了したら（２４時間後にＴＬＣが出発物質の消失を示した）、反応混合物をＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）で希釈し、２０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５ｍＬ）および塩水（５ｍＬ）で洗浄し、次いで有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（３：７）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、回収されたアクセプター３（６７０ｍｇ、９９％ｂｒｓｍ）と共に化合物６（α：β＝１３：１）を白色の粉末として得た（６８０ｍｇ、３５％）。α－アノマー６α：Ｒ_ｆ＝０．３６（シリカゲル、ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝２０：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９６－７．９４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．９１－７．９０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．５０－７．４７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４０－７．３９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３７－７．３２（ｍ，５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２５－７．１８（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０６－７．０４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８１（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．５９（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄｄ，Ｊ＝９．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．３５－５．３２（ｍ，１Ｈ），５．２５（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｄ，Ｊ＝７．８，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．７１（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．２，１０．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｄｄ，Ｊ＝６．６，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８２－３．７３（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．３０（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７１．６，１７０．６，１７０．３，１７０．１，１６９．５，１６８．５，１６５．８，１６５．１，１３８．０，１３７．９，１３３．４，１３３．１，１２９．８，１２９．７，１２９．６，１２８．９，１２８．６，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２７．７，１２７．６，１００．３，８６．６，７５．９，７４．５，７３．７，７３．２，７３．１，７２．５，６８．８，６８．３，６３．１，６２．５，５２．８，４８．４，２３．１，２１．２，２０．９，２０．８，２０．７，２０．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５４Ｈ_５９ＮＯ_２０ＳＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１０９６．３２４３／実測値：１０９６．３２４１．

【0044】

【化18】

ｐ－トリル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－５－デオキシ－Ｄ－エリスロ－β－Ｌ－グルコ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノシド６β。β－アノマー６β：Ｒ_ｆ＝０．４２（シリカゲル、ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝２０：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９４－７．９２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．５０－７．４７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４３－７．４０（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３７－７．３１（ｍ，５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１３－７．１２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８１（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，６．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０７（ｄｄ，Ｊ＝６．０，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．６６－４．６２（ｍ，２Ｈ），４．５５（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝７．８，７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．８，１０．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９２－３．８８（ｍ，２Ｈ），３．８５－３．７７（ｍ，３Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），３．５３（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．２６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０４（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．６８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７１．４，１７０．６，１７０．３，１６９．８，１６９．８，１６６．６，１６５．８，１６５．２，１３９．２，１３８．４，１３３．５，１３３．４，１３３．１，１２９．９，１２９．８，１２９．５，１２８．９，１２８．５，１２８．３，１２７．２，１２６．０，９９．６，８６．９，７６．０，７５．５，７４．３，７３．１，７２．５，７１．７，７０．３，６８．４，６７．２，６２．１，６２．０，５３．３，４７．５，２２．９，２１．５，２１．２，２０．８，２０．７，２０．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５４Ｈ_５９ＮＯ_２０Ｓ［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値：１０７４．３４２４／実測値：１０７４．３４５８．

【0045】

【化19】

ｐ－トリル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノシド４。撹拌子を含むスクリューキャップバイアル中の化合物６α（５００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１当量）のトルエン（５ｍＬ）溶液に、ＤＢＵ（０．２８ｍＬ、１．８６ｍｍｏｌ、４当量）、ペルフルオロ－１－ブタンスルホニルフルオリド（０．３３ｍＬ、１．８６ｍｍｏｌ、４当量）およびＴＡＳＦ（２５６ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。この反応バイアルを密閉し、４０℃で撹拌した。２４時間後に、反応混合物をさらなる量のＤＢＵ（０．２８ｍＬ、１．８６ｍｍｏｌ、４当量）、ペルフルオロ－１－ブタンスルホニルフルオリド（０．３３ｍＬ、１．８６ｍｍｏｌ、４当量）およびＴＡＳＦ（２５６ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ、２当量）で処理し、次いで４０℃でさらに２４時間撹拌した。反応混合物をシリカゲルカラムに直接充填し、アセトン／トルエン（７：３）で溶離した。淡黄色の粉末としてのペルフルオロ－１－ブタンスルホニル化合物７（５０ｍｇ、８％）と共に、二糖４を淡黄色の粉末として得た（３００ｍｇ、６０％）。

【0046】

７からの二糖４の合成：撹拌子を含むスクリューキャップバイアル中の化合物７（７３０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１当量）のトルエン（７ｍＬ）溶液に、ＤＢＵ（０．６４ｍＬ、４．３１ｍｍｏｌ、８当量）およびペルフルオロ－１－ブタンスルホニルフルオリド（０．７７ｍＬ、４．３１ｍｍｏｌ、８当量）を添加した。この容器を密閉し、４０℃で１５日間撹拌した。反応混合物をシリカゲルカラムに直接充填し、溶離液としてのアセトン／トルエン（７：３）で溶離した。淡黄色の粉末としてのペルフルオロ－１－ブタンスルホニル化合物７（２６７ｍｇ、７７％ｂｒｓｍ）と共に、二糖４を淡黄色の粉末として単離した（２８２ｍｇ、４９％）。Ｒ_ｆ＝０．４３（シリカゲル、アセトン／トルエン＝２：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９５－７．９３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．８７－７．８５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４８－７．４４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４１－７．３９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３５－７．３３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３１－７．２９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２５－７．２４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２１－７．１９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１６－７．１４（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０４－７．０３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．７９（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄｄｄ，Ｊ＝９．０，５．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４２（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．３１－５．２８（ｍ，２Ｈ），５．２０（ｄｄ，Ｊ＝２７．０，１１．４Ｈｚ，１Ｈ，ｓｉａ－Ｃ４－Ｈ），５．０１（ｄｄ，Ｊ＝５１．６，１．８Ｈｚ，１Ｈ，ｓｉａ－Ｃ３－Ｈ），４．９７（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．６６（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２８－４．２６（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０９－４．０５（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．２９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．９，１７０．７，１７０．４，１７０．２，１６９．８，１６５．６，１６５．３，１３８．３，１３７．６，１３３．２，１３３．０，１３２．６，１２９．８，１２９．８，１２９．７，１２９．５，１２９．３，１２９．１，１２８．４，１２８．３，１２８．１，１２７．５，１２７．３，９８．３，９８．２，８８．１，８６．８，８６．４，７６．２，７５．６，７４．６，７４．０，７１．４，６９．２，６９．０，６８．５，６８．０，６７．３，６３．４，６２．５，５３．２，４５．５，２３．４，２１．２，２１．２，２０．８，２０．７，２０．７；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－２１５．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５４Ｈ_５８ＦＮＯ_１９ＳＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１０９８．３２００／実測値：１０９８．３２１２．

【0047】

【化20】

ｐ－トリル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－５－デオキシ－３－Ｏ－（ペルフルオロ－１－ブタン）スルホニル－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－グルコ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノシド７。Ｒ_ｆ＝０．５９（シリカゲル、アセトン：トルエン＝２：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９５－７．９４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．９０－７．８９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４９－７．４５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４０－７．３９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３６－７．３０（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２７－７．２６（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２５－７．１８（ｍ，３Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０４－７．０３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８２（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．６２－５．３８（ｍ，４Ｈ），５．２６（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９６－４．９４（ｍ，２Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．７０－４．６４（ｍ，３Ｈ），４．３５－４．３０（ｍ，１Ｈ），４．２２－４．２０（ｍ，２Ｈ），４．０９（ｄｄ，Ｊ＝９．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄ，Ｊ＝６．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．２９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９４（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９０（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．６，１７０．２，１７０．１，１６９．３，１６７．０，１６５．７，１６５．２，１３８．１，１３７．７，１３３．２，１３３．０，１３２．５，１２９．８，１２９．７，１２９．７，１２９．５，１２９．１，１２９．０，１２８．４，１２８．３，１２８．１，１２８．０，１２７．５，１２７．４，９７．８，８６．５，８３．４，７５．７，７４．６，７４．２，７２．６，７０．０，６８．４，６７．９，６６．５，６４．５，６２．４，５３．１，４９．０，２３．０，２１．１，２０．９．，２０．７，２０．６，２０．３；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－１２６．２，－１２６．２，－１２１．５，－１２１．５，－１１０．４，－１１０．４，－８１．０，－８０．９，－８０．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５８Ｈ_５８Ｆ_９ＮＯ_２２Ｓ_２Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１３７８．２６４０／実測値：１３７８．２６４４．

【0048】

【化21】

アリル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－［２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－β－Ｄ－ガラクトピラノシル］－（１→４）－［３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－マンノピラノシド９。無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（７ｍＬ）中のアクセプター８（１．０４ｇ、１．０３ｍｍｏｌ、１当量）、ドナー４（１．３９ｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１．２５当量）および活性化させた粉末状４ÅのＭＳ（０．７０ｇ）の混合物をアルゴン下で１時間撹拌した。次いで反応混合物を－４０℃に冷却し、ＮＩＳ（４６５ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ、２当量）、その後にＴｆＯＨ（Ｅｔ_２Ｏ中０．５Ｍ、０．６２ｍＬ、０．３１ｍｍｏｌ、０．３当量）を撹拌しながら添加した。反応が完了したら（約２時間にＴＬＣが出発物質の消失を示した）、反応混合物をＥｔ_３Ｎ（０．４ｍＬ）で失活させ、セライトパッドで濾過した。濾液をＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）で希釈し、２０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１５ｍＬ）および塩水（８ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物９を白色の粉末として得た（１．３０ｇ、６４％）。Ｒ_ｆ＝０．５１（シリカゲル、アセトン：トルエン＝２：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９０－７．８８（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４８－７．４５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３４－７．２２（ｍ，２４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１８－７．１３（ｍ，１０Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８５－５．７８（ｍ，２Ｈ），５．４７－５．４４（ｍ，１Ｈ），５．３５－５．３２（ｍ，４Ｈ），５．２４－５．１６（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０６－４．９７（ｍ，３Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．８５－４．７３（ｍ，４Ｈ，Ｃ１－Ｈ_α，Ｃ１－Ｈ_β），４．７０－４．５４（ｍ，６Ｈ），４．５３－４．４２（ｍ，４Ｈ），４．３３－４．２６（ｍ，２Ｈ），４．２３－４．１８（ｍ，３Ｈ），４．１４－４．０４（ｍ，３Ｈ），３．９７－３．９３（ｍ，１Ｈ），３．８９－３．８１（ｍ，５Ｈ），３．７３－３．５８（ｍ，１０Ｈ），３．４５－３．４３（ｍ，１Ｈ），３．３２－３．３０（ｍ，１Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１０（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．７，１７０．６，１７０．４，１７０．２，１６９．８，１６５．６，１６５．４，１６５．４，１６５．１，１５３．８，１３８．８，１３８．６，１３８．５，１３８．２，１３８．２，１３８．１，１３３．７，１３３．２，１３３．１，１３３．１，１３０．８，１３０．０，１２９．８，１２９．６，１２９．４，１２９．０，１２８．４，１２８．３，１２８．３，１２８．２，１２８．２，１２８．２，１２８．１，１２８．１，１２８．０，１２８．０，１２７．９，１２７．６，１２７．６，１２７．５，１２７．４，１２７．３，１２７．２，１２５．２，１１７．１，１００．０，９８．３，９８．２，９６．９，９５．６，８８．１，８６．８，７７．９，７５．０，７４．７，７４．６，７４．５，７４．２，７４．１，７３．９，７３．４，７３．３，７３．１，７３．０，７２．４，７１．９，７１．４，７０．９，７０．９，６９．５，６９．２，６９．１，６９．０，６８．０，６７．９，６７．２，６２．９，６２．３，５７．２，５３．２，４５．５，２３．３，２１．０，２０．７，２０．７，２０．６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－２１５．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_１００Ｈ_１０８Ｃｌ_３ＦＮ_２Ｏ_３１Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１９７９．５８７８／実測値：１９７９．５８８９．

【0049】

【化22】

［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－［２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－β－Ｄ－ガラクトピラノシル］－（１→４）－［３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－マンノピラノシド１０。四糖９（５７８ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１当量）の酢酸（６．０ｍＬ、酢酸／水、１０：１＝ｖ／ｖ）撹拌溶液に、ＣＨ_３ＣＯＯＮａ（１２１ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、その後にＰｄＣｌ_２（１０５ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、２当量）を室温で添加した。２０時間後に、ＴＬＣが出発物質の消失を示した際に、反応混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２０ｍＬ）の中に注ぎ入れた。水層を酢酸エチルで抽出し（２×１０ｍＬ）、１つにまとめた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮した。得られた残留物をアセトン／ヘキサン（２：３）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物１０を白色の粉末として得た（４６５ｍｇ、８２％）。Ｒ_ｆ＝０．２３（シリカゲル、アセトン：ヘキサン＝２：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９０－７．８７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４８－７．４５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３４－７．２０（ｍ，２４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１９－７．１２（ｍ，１０Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８０－５．７５（ｍ，１Ｈ），５．４５－５．４３（ｍ，１Ｈ），５．３３－５．２８（ｍ，３Ｈ），５．２１－４．８９（ｍ，５Ｈ，ｍａｎ－Ｃ１－Ｈ_α，ｍａｎ－Ｃ１－Ｈ_β，Ｃ１－Ｈ_β），４．８４－４．３０（ｍ，１５Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．２７－３．７９（ｍ，１２Ｈ），３．７８－３．４３（ｍ，１２Ｈ），２．１３－２．１２（ｍ，６Ｈ，－２ＣＨ_３），２．０９－２．０８（ｍ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０２－２．００（ｍ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９１（ｂｒ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．８，１７０．７，１７０．７，１７０．７，１７０．６，１７０．５，１７０．４，１７０．３，１７０．３，１７０．２，１６９．９，１６９．８，１６５．６，１６５．６，１６５．４，１６５．２，１６５．２，１５４．０，１３８．６，１３８．５，１３８．３，１３８．２，１３８．１，１３３．２，１３３．１，１２９．８，１２９．６，１２９．５，１２９．０，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２８．３，１２８．２，１２８．２，１２８．２，１２８．１，１２８．０，１２７．９，１２７．９，１２７．７，１２７．７，１２７．６，１２７．５，１２７．５，１２７．４，１２７．４，１２７．３，１００．０，９９．５，９８．３，９８．２，９８．１，９５．８，９５．７，９２．３，８８．２，８８．１，８６．８，７６．１，７４．８，７４．７，７４．６，７４．６，７４．３，７４．２，７４．２，７３．９，７３．８，７３．３，７３．２，７３．１，７３．１，７２．７，７２．６，７２．４，７２．３，７１．６，７１．４，７１．２，７０．９，７０．８，６９．９，６９．５，６９．３，６９．２，６９．１，６９．０，６８．１，６８．０，６７．２，６７．１，６３．０，６２．３，６２．２，６２．１，５３．３，５３．３，４５．５，４５．４，２６．３，２３．３，２１．１，２０．８，２０．７，２０．７，２０．６，２０．６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－２１５．２，－２１５．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_９７Ｈ_１０４Ｃｌ_３ＦＮ_２Ｏ_３１Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１９３９．５５６５／実測値：１９３９．５６１９．

【0050】

【化23】

［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－［２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－β－Ｄ－ガラクトピラノシル］－（１→４）－［３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－マンノピラノシルフルオリド１１。ヘミアセタール１０（３９５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、１当量）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）の十分に撹拌した溶液に、ＤＡＳＴ（８１．６μＬ、０．６２ｍｍｏｌ、３当量）を－２０℃で添加した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（３時間）、反応混合物を激しく撹拌した。反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５ｍＬ）および塩水（４ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残留物をアセトン／ヘキサン（３：４）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物１１を白色の粉末として得た（２８９ｍｇ、７３％）。Ｒ_ｆ＝０．３２（シリカゲル、アセトン：ヘキサン＝３：４）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．８９－７．８８（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４７－７．４５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３３－７．２２（ｍ，２２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１７－７．１２（ｍ，１２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．７８（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５３－５．４０（ｍ，２Ｈ），５．３３－５．２９（ｍ，３Ｈ，Ｃ１－Ｈ_α），５．２１（ｄｄ，Ｊ＝２７．６，１１．４Ｈｚ，１Ｈ，ｓｉａ－Ｃ４－Ｈ），５．０５－４．９６（ｍ，２Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．９４（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８２－４．７９（ｍ，４Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．７５－４．７２（ｍ，１Ｈ），４．６８－４．５９（ｍ，３Ｈ），４．５８－４．５４（ｍ，２Ｈ），４．５０－４．４８（ｍ，２Ｈ），４．３０（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２３－４．１５（ｍ，４Ｈ），４．０８－４．０４（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｄｄ，Ｊ＝９．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８９－３．７８（ｍ，５Ｈ），３．７２－３．５７（ｍ，９Ｈ），３．５０－３．４８（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ）２．１４（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．００（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．８，１７０．７，１７０．４，１７０．２，１６９．９，１６５．６，１６５．４，１６５．２，１５３．９，１３８．２，１３８．１，１３７．８，１３３．２，１３３．１，１２９．８，１２９．６，１２９．４，１２９．０，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．１，１２８．０，１２７．９，１２７．７，１２７．６，１２７．６，１２７．４，１２７．３，１２７．３，１０６．９，１０５．４，９９．８，９９．２，９８．３，９８．２，９５．６，８８．１，８６．８，７４．９，７４．８，７４．２，７４．０，７３．９，７３．８，７３．３，７３．２，７２．５，７１．４，７１．３，７０．９，６９．１，６９．１，６８．９，６８．０，６７．３，６２．８，６２．３，５６．９，５３．３，４５．６，２３．４，２１．１，２０．８（２Ｃ），２０．６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－１３８．６，－２１５．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_９７Ｈ_１０３Ｃｌ_３Ｆ_２Ｎ_２Ｏ_３０Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１９４１．５５２１／実測値：１９４１．５５２１．

【0051】

【化24】

（Ｎ－フェニル）－２，２，２－トリフルオロアセトイミデート［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－［２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－β－Ｄ－ガラクトピラノシル］－（１→４）－［３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－Ｄ－マンノピラノシド１２。ヘミアセタール１０（３９５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、１当量）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）の十分に撹拌した溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（８３．２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、２当量）および２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－フェニル－アセトイミドイルクロリド（４１μＬ、０．２６ｍｍｏｌ、２当量）を撹拌しながら０℃で添加し、次いで混合物を室温に温め、３時間撹拌した。反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過し、濃縮した。得られた残留物をアセトン／ヘキサン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物１２を白色の泡状物として得た（１５０ｍｇ、５６％）；アノマーの混合物（α：β＝１：１）。Ｒ_ｆ＝０．５５（シリカゲル、アセトン：ヘキサン＝１：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９３－７．８８（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４９－７．４５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４０－７．１２（ｍ，３８Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．７５－６．７１（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８２－５．７８（ｍ，１Ｈ），５．４６－５．４２（ｍ，１Ｈ），５．３６－５．３０（ｍ，３Ｈ），５．２４－５．１６（ｍ，１Ｈ），５．０８－４．８１（ｍ，５Ｈ，０．５ｍａｎ－Ｃ１－Ｈ_α，２Ｃ１－Ｈ_β），４．７８－４．７４（ｍ，１Ｈ），４．６９－４．４１（ｍ，９Ｈ，０．５ｍａｎ－Ｃ１－Ｈ_β），４．３３－４．０６（ｍ，７Ｈ），３．９５－３．８２（ｍ，５Ｈ），３．６９－３．３６（ｍ，１０Ｈ），２．１６－２．１０（ｍ，９Ｈ，－３ＣＨ_３），２．０１－１．９９（ｍ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．７，１７０．７，１７０．７，１７０．７，１７０．４，１７０．２，１６９．９，１６９．９，１６５．６，１６５．６，１６５．４，１６５．２，１６５．１，１５４．１，１５３．９，１４３．３，１４３．１，１３８．７，１３８．５，１３８．３，１３８．２，１３８．２，１３８．１，１３８．０，１３８．０，１３７．８，１３７．７，１３３．２，１３３．１，１３３．１，１２９．８，１２９．６，１２９．４，１２９．３，１２９．０，１２８．７，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２８．３，１２８．３，１２８．２，１２８．２，１２８．１，１２８．１，１２８．１，１２８．０，１２７．９，１２７．７，１２７．７，１２７．６，１２７．５，１２７．５，１２７．５，１２７．４，１２７．３，１１９．４，１１９．２，１０２．３，１００．２，１００．０，９８．３，９８．２，９５．６，９５．５，８８．０，８６．７，８０．０，７９．３，７５．９，７５．０，７４．７，７４．７，７４．５，７４．３，７４．２，７３．８，７３．８，７３．５，７３．３，７３．２，７３．１，７２．８，７２．４，７２．３，７１．５，７１．４，７１．１，７１．０，７０．９，７０．１，６９．８，６９．３，６９．１，６８．２，６７．２，６７．２，６２．８，６２．３，６２．２，５３．３，５３．２，４５．５，２３．３，２１．０，２１．０，２０．７，２０．７，２０．６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－６５．２，－６５．４，－６５．５，－６５．６，－６５．６，－６５．７，－２１５．６，－２１５．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_１０５Ｈ_１０８Ｃｌ_３Ｆ_４Ｎ_３Ｏ_３１Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：２１１０．５８６０／実測値：２１１０．５８６５．

【0052】

【化25】

ベンジル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－［２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－β－Ｄ－ガラクトピラノシル］－（１→４）－［３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－［３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→３）－［２－Ｏ－アセチル－４，６－Ｏ－ベンジリジン－β－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシド１４。無水トルエン（１５ｍＬ）中のＡｇＯＴｆ（１９４ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、アクセプターに対して６当量）、ビスＣｐ_２ＨｆＣｌ_２（１６７ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、アクセプターに対して３．５当量）および新たに活性化させた４ÅのＭＳ（１．５０ｇ）の混合物をアルゴン下室温で１時間撹拌した。次いで反応混合物を－２０℃に冷却し、ドナー１１（２９０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．２当量）およびアクセプター１３（１１５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、１当量）の無水トルエン（８ｍＬ）溶液で処理した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（３時間）、反応混合物を０℃で撹拌した。反応が完了したら反応混合物をＥｔ_３Ｎ（０．２５ｍＬ）で失活させ、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１０ｍＬ）および塩水（６ｍＬ）で２回洗浄し、有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物１４を白色の粉末として得た（２９９ｍｇ、８５％）。

【0053】

ワンポット合成：無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１．２５ｍＬ）中のアクセプター１８（４０．０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、１当量）、ドナー４（６０．１ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、１．５当量）および活性化させた粉末状の４ÅのＭＳ（０．２５ｇ）の混合物をアルゴン下で１時間撹拌した。次いで反応混合物を－４０℃に冷却し、ＮＩＳ（１２．６ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、１．５当量）、その後にＴｆＯＨ（Ｅｔ_２Ｏ中０．５Ｍ、２２．３μＬ、０．０１１ｍｍｏｌ、０．３当量）を添加し、次いで混合物を－２０℃まで２時間撹拌した。次に、出発物質が消失したら（ＴＬＣによって監視）、反応混合物をアルゴン下で撹拌しながら、無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１．２５ｍＬ）中のアクセプター１３（３４．２ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、１当量）、ＮＩＳ（１６．８ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ、２当量）およびＴｆＯＨ（Ｅｔ_２Ｏ中０．５Ｍ、２２．３μＬ、０．０１１ｍｍｏｌ、０．３当量）で１０分間連続的に処理した。全ての試薬を添加したら、混合物を－１０℃に温め、ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（１時間）撹拌し続けた。完了したら、その反応をＥｔ_３Ｎ（０．４ｍＬ）で失活させ、セライトパッドで濾過した。濾液をＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）で希釈し、２０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（３ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２ｍＬ）および塩水（２ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィ、その後にアセトン／ヘキサン（３：４）を溶離液として用いる第２のカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物１４を白色の粉末として得た（２７ｍｇ、２６％）。Ｒ_ｆ＝０．４３（シリカゲル、アセトン：トルエン＝３：５）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９６－７．９５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．９１－７．９０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．５１－７．４７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３６－７．２６（ｍ，３５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２３－７．１０（ｍ，１９Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８４（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４５－５．４２（ｍ，１Ｈ），５．３４－５．２７（ｍ，４Ｈ），５．２１－５．１５（ｍ，２Ｈ），５．０４－４．９４（ｍ，４Ｈ，Ｃ１－Ｈ_α，Ｃ１－Ｈ_β），４．８７－４．７８（ｍ，４Ｈ），４．７１－４．５０（ｍ，１４Ｈ，２Ｃ１－Ｈ_β），４．４６－４．３４（ｍ，５Ｈ），４．３１－４．２１（ｍ，４Ｈ），４．１６（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１３－４．０６（ｍ，２Ｈ），３．９８－３．９５（ｍ，４Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），３．８４－３．５７（ｍ，１７Ｈ），３．５１－３．４１（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．３５（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｂｒ，１Ｈ），２．９３（ｂｒ，１Ｈ），２．６８－２．６７（ｍ，１Ｈ），２．１２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．８，１７０．７，１７０．４，１７０．２，１６９．７，１６９．４，１６５．６，１６５．４，１６５．２，１５３．７，１５３．６，１３８．９，１３８．７，１３８．４，１３８．３，１３７．９，１３７．１，１３３．２，１２９．８，１２９．７，１２９．５，１２９．１，１２８．９，１２８．６，１２８．５，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２８．３，１２８．２，１２８．１，１２８．１，１２８．０，１２８．０，１２７．９，１２７．９，１２７．９，１２７．８，１２７．８，１２７．６，１２７．６，１２７．６，１２７．５，１２７．４，１２７．４，１２７．３，１２７．２，１２６．３，１０２．１，１００．１，９９．０，９８．７，９８．６，９５．８，９５．５，８８．２，８６．９，７８．８，７８．４，７４．８，７４．５，７４．３，７４．２，７３．９，７３．８，７３．３，７２．９，７２．３，７１．９，７１．４，７１．１，７０．７，７０．３，６９．２，６９．１，６９．０，６８．４，６８．３，６７．９，６７．２，６６．２，６３．２，６２．３，５７．４，５６．８，５３．３，４５．５，２３．３，２１．０，２０．８，２０．７，２０．６，２０．６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－２１５．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_１４２Ｈ_１５０Ｃｌ_６ＦＮ_３Ｏ_４３Ｎａ_２［Ｍ＋２Ｎａ］^２＋の計算値：１４２９．８７７１／実測値：１４２９．８８６４．

【0054】

【化26】

ベンジル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－［２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－β－Ｄ－ガラクトピラノシル］－（１→４）－［３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－［３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→３）－［２－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシド１５。出発物質１４（３１８ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１当量）のアセトニトリル（１２ｍＬ）撹拌溶液に、ｐ－ＴｓＯＨ・Ｈ_２Ｏ（２１．５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（６時間）、反応混合物を激しく撹拌した。完了したら、反応混合物をＥｔ_３Ｎ（０．３ｍＬ）で失活させ、高真空下で濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（３：５）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物１５を白色の粉末として得た（２３１ｍｇ、７５％）。Ｒ_ｆ＝０．２５（シリカゲル、アセトン：トルエン＝１：２）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．８８－７．８７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４６（ｄｄ，Ｊ＝７．２，７．２Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４３（ｄｄ，Ｊ＝７．２，７．２Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３３－７．１３（ｍ，４７Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０９－７．０８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．０１（ｂｒ，１Ｈ），５．７６（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４６－５．４３（ｍ，１Ｈ），５．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．３１－５．２９（ｍ，３Ｈ），５．１９－５．１３（ｍ，２Ｈ，Ｃ１－Ｈ_α），５．０５－４．９６（ｍ，３Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．８９－４．７９（ｍ，４Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．６９－４．６０（ｍ，８Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．５７－４．４９（ｍ，８Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．４５（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４０－４．３６（ｍ，２Ｈ），４．３１（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２４－４．１６（ｍ，４Ｈ），４．１２－４．０９（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｂｒ，１Ｈ），３．９８－３．９３（ｍ，２Ｈ），３．９１－３．８６（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｄｄ，Ｊ＝７．８，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７６－３．６９（ｍ，６Ｈ），３．６６－３．３７（ｍ，１８Ｈ），２．９６－２．９３（ｍ，１Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９０（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．８，１７０．７，１７０．４，１７０．３，１７０．２，１６９．８，１６５．６，１６５．５，１６５．３，１５４．３，１５３．８，１３８．６，１３８．４，１３８．３，１３８．１，１３８．０，１３７．８，１３７．２，１３３．３，１３３．１，１２９．８，１２９．６，１２９．４，１２９．０，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．２，１２７．９，１２７．９，１２７．８，１２７．７，１２７．６，１２７．５，１２７．５，１２７．４，１２７．４，１２７．３，１００．１，９９．１，９８．３，９８．２，９８．１，９５．７，９５．５，８８．２，８６．９，７８．６，７８．２，７５．４，７５．１，７４．８，７４．７，７４．４，７４．２，７４．１，７３．８，７３．３，７３．２，７２．６，７１．９，７１．８，７１．５，７１．４，７０．９，７０．６，６９．５，６２．３，５７．２，５６．８，５３．８，５３．３，４５．４，２３．３，２１．１，２１．０，２０．７（２Ｃ），２０．７；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－２１５．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_１３５Ｈ_１４６Ｃｌ_６ＦＮ_３Ｏ_４３Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：２７４８．７３３７／実測値：２７４８．７３７３．

【0055】

【化27】

ベンジル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－マンノピラノシル－（１→３）］－［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－マンノピラノシル－（１→６）］－［２－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシド１６。

【0056】

フルオリドドナーから：無水トルエン（１０ｍＬ）中のＡｇＯＴｆ（１４２ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ、アクセプターに対して８当量）、Ｃｐ_２ＨｆＣｌ_２（１０５ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、アクセプターに対して４当量）および新たに活性化させた４ÅのＭＳ（１ｇ）の混合物をアルゴン雰囲気下、室温で１時間撹拌した。次いで反応混合物を－４０℃に冷却し、ドナー１１（２３２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１．７５当量）およびアクセプター１５（１８８ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ、１当量）の無水トルエン（１ｍＬ）溶液を添加した。－１５℃で３時間撹拌を続けた。反応混合物をＥｔ_３Ｎ（０．２０ｍＬ）で失活させ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（８ｍＬ）および塩水（４ｍＬ）で２回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（２：３）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、回収された１５（２３．０ｍｇ、８０％ｂｒｓｍ）と共に化合物１６を白色の粉末として得た（２２３ｍｇ、７０％）。

【0057】

トリフルオロアセトイミデートドナーから：無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）中のアクセプター１５（３２．０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１当量）、ドナー１２（４２．９ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、１．７５当量）および活性化させた粉末状の４ÅのＭＳ（２００ｍｇ）の混合物をアルゴン下で３０分間撹拌した。次いで反応混合物を－６０℃に冷却し、ＴｆＯＨ（Ｅｔ_２Ｏ中０．５Ｍ、５．８６μＬ、２．９３μｍｏｌ、アクセプターに対して０．２５当量）で処理した。－２０℃で３時間撹拌した後、反応混合物をＥｔ_３Ｎ（０．１０ｍＬ）で失活させ、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（４ｍＬ）および塩水（３ｍＬ）で２回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（２：３）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、回収されたアクセプター（１２．６ｍｇ、５５％ｂｒｓｍ）と共に化合物１６を白色の粉末として得た（１８．０ｍｇ、３３％）。Ｒ_ｆ＝０．１７（シリカゲル、アセトン：トルエン＝１：２）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９１－７．８６（ｍ，８Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４８－７．４２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３３－７．１１（ｍ，８３Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８１－５．７５（ｍ，２Ｈ），５．４３－５．３８（ｍ，３Ｈ），５．３１－５．０７（ｍ，１１Ｈ，２Ｃ１－Ｈ_α），５．０３－４．７８（ｍ，９Ｈ，２Ｃ１－Ｈ_β），４．７５－４．０８（ｍ，４８Ｈ，４Ｃ１－Ｈ_β），４．０５－３．８９（ｍ，７Ｈ），３．８７－２．９９（ｍ，４０Ｈ），２．１３－２．１２（ｍ，６Ｈ，－２ＣＨ_３），２．１０－２．０７（ｍ，１５Ｈ，－５ＣＨ_３），１．９９－１．９７（ｓ，６Ｈ，－２ＣＨ_３），１．９０－１．８８（ｍ，６Ｈ，－２ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．７，１７０．６，１７０．６，１７０．４，１７０．２，１６９．８，１６９．７，１６９．６，１６５．６，１６５．５，１６５．４，１６５．４，１６５．１，１５４．０，１５３．６，１３９．１，１３８．８，１３８．４，１３８．３，１３８．１，１３８．０，１３７．７，１３３．２，１３３．１，１２９．８，１２９．８，１２９．７，１２９．６，１２９．６，１２９．５，１２９．５，１２９．１，１２９．１，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．２，１２８．０，１２８．０，１２７．８，１２７．８，１２７．８，１２７．７，１２７．７，１２７．５，１２７．４，１２７．４，１２７．３，１２７．２，１２７．１，１００．１，９９．８，９８．８，９８．４，９８．２，９５．７，８８．１，８６．８，７８．３，７７．８，７５．３，７４．７，７４．５，７４．４，７４．３，７４．２，７４．０，７３．９，７３．４，７３．３，７３．３，７３．２，７３．１，７３．０，７２．９，７２．５，７２．４，７２．０，７１．９，７１．５，７１．０，７１．０，７０．９，７０．９，７０．７，６９．５，６９．４，６９．２，６９．１，６９．０，６９．０，６８．５，６８．１，６８．１，６８．０，６７．２，６２．９，６２．２，５７．５，５７．２，５３．８，５３．２，５３．２，４５．５，４５．３，２３．３，２１．０，２１．０，２０．８，２０．７，２０．７，２０．６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－２１５．６（２Ｆ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_２３２Ｈ_２５５Ｃｌ_９Ｆ_２Ｎ_６Ｏ_７４［Ｍ＋Ｈ_３Ｏ＋ＮＨ_４］^２＋の計算値：２３３０．６７７０／実測値：２３３０．６７２４．

【0058】

【化28】

［５－アセトアミド－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソネート－（２→６）－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→４）－２－アセトアミド－２－デオキシ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→２）－α－Ｄ－マンノピラノシル－（１→３）］－［５－アセトアミド－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソネート－（２→６）－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→４）－２－アセトアミド－２－デオキシ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→２）－α－Ｄ－マンノピラノシル－（１→６）］－［β－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→４）－２－アセトアミド－２－デオキシ－Ｄ－グルコピラノシド１７。保護されたグリカン１６（１０３ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１当量）およびＬｉＯＨ（５１．５ｍｇ、Ｓ．Ｍ．ｗｔで５０％）の１，４－ジオキサン／Ｈ_２Ｏ混合物（３ｍＬ、４：１＝ｖ／ｖ）溶液を９０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を高真空下で濃縮し、アセチル化条件（ピリジン（２．５ｍＬ）、Ａｃ_２Ｏ（１．５ｍＬ）、室温、１６時間）に供した。溶媒を除去した後、粗製の残留物をＨ_２Ｏ／ＭｅＯＨ（１：５）を溶離液として用いるＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（登録商標）ＲＰ－１８逆相カラムクロマトグラフィにより精製した。その生成物をＭｅＯＨ（３ｍＬ、０．５Ｍ）中のＮａＯＭｅで１６時間撹拌することにより脱アセチル化した。反応混合物をＩＲ－１２０で中和し、濾過し、真空濃縮した。残留物をＨ_２Ｏ／ＭｅＯＨ（１：４）を溶離液として用いるＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（登録商標）ＲＰ－１８逆相カラムクロマトグラフィにより精製した。脱アセチル化した粗製生成物をＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ／ＨＣＯＯＨ（３ｍＬ、６：３：１＝ｖ／ｖ／ｖ）の混合物に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）_２（５１．５ｍｇ、Ｓ．Ｍ．ｗｔで５０％）で２０時間処理した。反応混合物をセライトパッドで濾過し、真空濃縮した。残留物を（ＢＩＯ－ＲＡＤ）Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ－２カラムクロマトグラフィ（水で溶離）で精製し、その後にＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（登録商標）ＲＰ－１８逆相カラムクロマトグラフィ（水で溶離）で精製して、化合物１７をアノマーの混合物（α：β＝０．６５：０．３５）の白色の粉末として得た（１８．３ｍｇ、４０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ５．２３（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，０．６５Ｈ，ａ－Ｃ１－Ｈ_α），５．１４（ｄ，Ｊ＝５２．８Ｈｚ，２Ｈ，ｓｉａ－Ｃ３－Ｈ），５．１４（ｂｒ，１Ｈ，ｃ－Ｃ１－Ｈ_α），４．９６（ｂｒ，１Ｈ，ｃ’－Ｃ１－Ｈ_α），４．７９（ｂｒ，１Ｈ，ｂ－Ｃ１－Ｈ_β），４．７３（ｂｒ，０．３５Ｈ，ａ－Ｃ１－Ｈ_β），４．６０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，ｄｄ’－Ｃ１－Ｈ_β），４．４８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，ｅｅ’－Ｃ１－Ｈ_β），４．２８－４．２１（ｍ，４Ｈ），４．１３（ｂｒ，１Ｈ），４．００－３．５１（ｍ，５７Ｈ），２．０９－２．０８（ｍ，９Ｈ，－３ＣＨ_３），２．０５（ｂｒ，６Ｈ，－２ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ１７４．５，１７４．２，１７４．１，１０２．７，１０２．６，１００．０，９９．１，９８．９，９８．９，９８．７，９８．６，９６．６，９４．４，９１．０，９０．０，８９．８，８０．０，７９．７，７９．３，７８．９，７６．０，７５．８，７４．１，７４．０，７３．９，７３．１，７２．９，７２．７，７２．４，７１．９，７１．９，７１．６，７１．５，７１．１，７０．３，６９．８，６９．４，６９．２，６９．１，６９．０，６８．７，６８．０，６７．８，６６．９，６６．８，６５．４，６５．２，６３．６，６２．２，６１．２，６１．２，５９．７，５９．６，５５．６，５４．４，５３．１，４６．３，２１．９，２１．６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ－２１７．４，－２１７．４；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_７６Ｈ_１２１Ｆ_２Ｎ_５Ｏ_５７［Ｍ－２Ｈ］^－２の計算値：１０２６．８３５１／実測値：１０２６．８２９９．

【0059】

【化29】

［５－アセトアミド－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソネート－（２→６）－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→４）－２－アセトアミド－２－デオキシ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→２）－α－Ｄ－マンノピラノシル－（１→３）］－［５－アセトアミド－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソネート－（２→６）－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→４）－２－アセトアミド－２－デオキシ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→２）－α－Ｄ－マンノピラノシル－（１→６）］－［β－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→４）－（２－アセトアミド－１，２－ジデオキシ－Ｄ－グルコピラノ）－［２，１－ｄ］－２－メチルオキサゾリンＳ１。グリカンオキサゾリンの代表的な合成。グリカン１７（１４．５ｍｇ、７．０５μｍｏｌ、１当量）、２－クロロ－１，３－ジメチル－１Ｈ－ベンズイミダゾール－３－イウムクロリド（ＣＤＭＢＩ）（１２．２ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、８当量）およびＥｔ_３Ｎ（１９．９μＬ）の水（１２１．１μＬ）溶液を４℃で１時間撹拌した。反応混合物をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５カラムによるゲル濾過クロマトグラフィに供し、０．０５％Ｅｔ_３Ｎ水溶液で溶離した。グリカンオキサゾリン生成物を含有する画分を１つにまとめ、凍結乾燥して所望の生成物Ｓ１を白色の粉末として得た（１２．６ｍｇ、収率８７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ＋０．０５％Ｅｔ_３Ｎ）：δ６．０９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ｏｘａ－Ｃ１－Ｈ_α），５．１２（ｄ，Ｊ＝５２．２Ｈｚ，２Ｈ，ｓｉａ－Ｃ３－Ｈ），５．１１（ｂｒ，１Ｈ，ｃ－Ｃ１－Ｈ_α），４．９５（ｂｒ，１Ｈ，ｃ’－Ｃ１－Ｈ_α），４．７４（ｂｒ，１Ｈ，ｂ－Ｃ１－Ｈ_β），４．６０－４．５７（ｍ，２Ｈ，ｄｄ’－Ｃ１－Ｈ_β），４．４６－４．４５（ｍ，２Ｈ，ｅｅ’－Ｃ１－Ｈ_β），４．３９（ｂｒ，１Ｈ），４．２２－４．１５（ｍ，５Ｈ），３．９８－３．４９（ｍ，５５Ｈ），３．４３－３．４０（ｍ，１Ｈ），２．０７－２．０２（ｍ，１５Ｈ，－５ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ＋０．０５％Ｅｔ_３Ｎ）：δ１７４．９，１７４．７，１７４．７，１７０．７，１７０．７，１６８．５，１０３．１，１０３．１，１０１．４，９９．９，９９．５，９９．４，９９．２，９９．１，９９．０，９６．５，９１．４，９０．２，８０．４，７９．４，７７．９，７６．４，７６．０，７４．６，７４．２，７３．４，７３．４，７２．８，７２．４，７２．３，７２．０，７１．９，７１．５，７０．８，７０．７，７０．２，６９．６，６９．５，６９．４，６９．１，６８．５，６８．２，６７．２，６５．８，６５．７，６５．１，６４．１，６２．６，６１．６，６１．６，６０．１，５４．９，４６．７，２２．４，２２．０，１２．９；^１９Ｆ ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ＋０．０５％Ｅｔ_３Ｎ）：δ－２１７．３（ｄ，Ｊ_ＦＨ＝５１．３Ｈｚ），－２１７．３（ｄ，Ｊ_ＦＨ＝５１．３Ｈｚ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_７６Ｈ_１２０Ｆ_２Ｎ_５Ｏ_５６［Ｍ－Ｈ］^－の計算値：２０３６．６６５８／実測値：２０３６．６６７２．

【0060】

【化30】

スキームＳ１における試薬および条件：（ａ）ＴＦＡ、ＭｅＯＨ、６０℃、１６時間、次いでＡｃＣｌ、室温、２日間、次いでＮａ_２ＨＰＯ_４、ＣＨ_３ＣＮ、還流、２０時間、９２％。（ｂ）参照３、８０％（３段階）。（ｃ）ＴｉＢｒ_４、ジクロロエタン、室温、１０分間、９２％。（ｄ）ＢＨ_３、Ｃｕ（ＯＴｆ）_２、ＴＨＦ、室温、８時間、９６％。

【0061】

【化31】

５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－２，６－アンヒドロ－Ｄ－グリセロ－Ｄ－ガラクト－ノン－２－エン酸メチルＳ３^１９。化合物Ｓ２（２０ｇ、６４．７ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（６００ｍＬ）撹拌溶液に、ＴｆＯＨ（４．９５ｍＬ、６４．７ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応混合物を６０℃で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下での回転蒸発により除去し、トルエンと共に２回同時蒸発させて微量の水を除去した。得られた残留物を丸底フラスコ中のＡｃＣｌ（２００ｍＬ）に０℃で溶解し、密閉し、室温まで２日間撹拌した。溶媒を除去したら、得られた残留物を無水アセトニトリル（２００ｍＬ）で希釈し、次いでＮａ_２ＨＰＯ_４（１９．６ｇ、１５５ｍｍｏｌ、２．４当量）をアルゴン下で添加した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（１６時間）、反応混合物を９０℃で激しく撹拌した。この溶液をセライトパッドで濾過し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（４：１）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ３を褐色の泡状物として得た（２８．２ｇ、９２％）。分光学的データは以前に文献において報告されているものと一致していた^１９。Ｒ_ｆ＝０．３０（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ５．９５（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４７－５．４４（ｍ，２Ｈ），５．３２－５．３０（ｍ，１Ｈ），４．５９（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３８－４．３３（ｍ，２Ｈ），４．１５（ｄ，Ｊ＝１２．０，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．７，１７０．５，１７０．１，１７０．１，１７０．０，１６１．６，１４５．０，１０７．９，７０．６，６７．８，６７．６，６１．９，５２．５，４６．５，２３．１，２０．８，２０．７，２０．７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_２０Ｈ_２７ＮＯ_１２Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：４９６．１４２５／実測値：４９６．１４３５．

【0062】

【化32】

５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－２－ブロモ－２，５－ジデオキシ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－グルコ－ノン－２－ウロピラノソン酸メチル３^２０。エポキシドＳ４の合成を報告されている手順を用いてシアル酸から行った^２１。エポキシド化合物Ｓ４（１．１０ｇ、２．２５ｍｍｏｌ、１当量）の無水１，２－ジクロロエタン（１８ｍＬ）撹拌溶液に、ＴｉＢｒ_４（０．９１ｇ、２．４７ｍｍｏｌ、１．１当量）をアルゴン下で１０分間添加した。高真空下での回転蒸発により溶媒を除去した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、Ｎａ_２ＳＯ_４飽和水溶液（１０ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ_３水溶液（１０ｍＬ）、次いで塩水（５ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮し、得られた残留物をアセトン／ヘキサン（２：１）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物３を白色の粉末として得た（１．１８ｇ、９２％）。分光学的データおよびプロトコルは以前に報告されているものと同一であった^２０。Ｒ_ｆ＝０．２３（シリカゲル、アセトン：トルエン＝１：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ５．９９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．４２（ｄｄ，Ｊ＝７．２，１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２１－５．１８（ｍ，１Ｈ），５．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，６．０，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３２－４．３０（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），３．７８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｂｒ，１Ｈ，－ＯＨ），２．０７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０６（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８４（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７１．４，１７０．６，１７０．３，１６９．８，１６９．７，１６７．０，９８．０，７５．０，７２．８，７２．２，６９．９，６６．５，６１．９，５４．０，４７．２，２２．９，２１．０，２０．７，２０．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_２０Ｈ_２９ＢｒＮＯ_１３［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値：５７０．０８１７／実測値：５７０．０８２２．

【0063】

【化33】

ｐ－トリル２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノシド５^２２。出発物質Ｓ５^２３（４．００ｇ、６．８６ｍｍｏｌ、１当量）のＢＨ_３－ＴＨＦ複合体（ＴＨＦ中に１Ｍ、３４．３ｍＬ、３４．３ｍｍｏｌ、５当量）撹拌溶液に、Ｃｕ（ＯＴｆ）_２（１２４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、０．０５当量）を添加し、反応混合物を室温で８時間撹拌した。完了したら、反応系を０℃でＴＥＡ（０．９６ｍＬ、６．８６ｍｍｏｌ、１当量）により慎重に中和し、次いでＭｅＯＨ（１５ｍＬ）で希釈した。真空中で溶媒を除去した後、得られた残留物をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物５を白色の粉末として得た（３．８５ｇ、９６％）。分光学的データは以前に文献において報告されているものと一致していた^２２。Ｒ_ｆ＝０．４５（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９７－７．９４（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．５１－７．４８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３８－７．３４（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２７－７．２１（ｍ，５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８５（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３６（ｄｄ，Ｊ＝９．６，３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８７（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．７４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｄ，Ｊ＝１１．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝６．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，５．４Ｈｚ，１Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８３（ｂｒ，１Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１６５．９，１６５．２，１３８．１，１３７．４，１３３．４，１３３．１，１３３．０，１２９．８，１２９．７，１２９．６，１２９．５，１２８．９，１２８．７，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２８．１，１２７．９，８６．８，７９．０，７６．０，７４．６，７３．７，６８．５，６１．９，２１．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_３４Ｈ_３２Ｏ_７ＳＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：６０７．１７６１／実測値：６０７．１７７０．

【0064】

【化34】

スキームＳ２における試薬および条件：（ａ）ＴＥＳＯＴｆ、ＢｎＣＨＯ、ＴＥＳＨ、トルエン、ＴＨＦ、２時間、－２０℃、９０％。（ｂ）ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、４ÅのＭＳ、－４０℃、１．５時間、ＣＨ_２Ｃｌ_２、７５％。（ｃ）ＮａＢＨ_３ＣＮ、ＨＣｌ／エーテル、ＡＷ－３００、ＴＨＦ、０℃～室温、１６時間、８５％。

【0065】

【化35】

ｐ－トリル３－Ｏ－ベンジル－４，６－Ｏ－ベンジリデン－２－デオキシ－１－チオ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルバモイルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシドＳ７。出発物質Ｓ６^２４（５．１７ｇ、９．４２ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ／トルエン混合物（４５ｍＬ、１：２＝ｖ／ｖ）撹拌溶液に、ＴＥＳＯＴｆ（４．２６ｍＬ、１８．８ｍｍｏｌ、２当量）をアルゴン下－２０℃で添加した。－２０℃で４５分間撹拌した後、ベンズアルデヒド（４．７９ｍＬ、４７．１ｍｍｏｌ、５当量）およびトリエチルシラン（２．２６ｍＬ、１４．１ｍｍｏｌ、１．５当量）を混合物に撹拌しながら滴下した。－２０℃で２時間後、ＴＬＣが出発物質の消失を示し、その反応をＮａ_２ＣＯ_３飽和水溶液で失活させ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｎａ_２ＣＯ_３飽和水溶液（３０ｍＬ）および塩水で洗浄した。１つにまとめた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空濃縮した。得られた残留物を最初に溶離液としてＣＨ_２Ｃｌ_２／トルエン（１：４）を用い、次いでＥｔＯＡｃ／トルエン（１：１０）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ７を白色の固体として得た（５．４０ｇ、９０％）。Ｒ_ｆ＝０．５０（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：トルエン＝１：２５）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）：δ７．５２－７．５０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４２－７．３６（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３２－７．３１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２９－７．２２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１８－７．１５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．７２（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ－ＣＨ），５．０３（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．９０－４．８２（ｍ，３Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，５．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９５（ｄｄ，Ｊ＝９．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８４－３．７１（ｍ，３Ｈ），３．５６（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８３（ｓ，２Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）：δ１５５．３，１３９．８，１３９．４，１３８．６，１３３．３，１３０．７，１３０．５，１２９．８，１２９．６，１２９．１，１２９．０，１２９．０，１２８．５，１２８．２，１２７．１，１０１．８，９７．１，８８．６，８２．７，８０．８，７５．０，７５．０，７１．２，６９．１，５７．４，２１．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_３０Ｈ_３０Ｃｌ_３ＮＯ_６ＳＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：６６０．０７５２／実測値：６６０．０７４９．

【0066】

【化36】

アリル［３－Ｏ－ベンジル－４，６－Ｏ－ベンジリデン－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－マンノピラノシドＳ９。無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）中のアクセプターＳ８^２５（５２３ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ、１当量）、ドナーＳ７（９００ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ、１．５当量）および活性化させた粉末状の４ÅのＭＳ（２．００ｇ）の混合物をアルゴン下で１時間撹拌した。次いで反応混合物を－４０℃に冷却し、ＮＩＳ（４２３ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ、２当量）およびＴｆＯＨ（Ｅｔ_２Ｏ中０．５Ｍ、０．４７ｍＬ、０．２３ｍｍｏｌ、０．２５当量）で処理した。その温度で１．５時間撹拌した後、ＴＬＣ分析は出発物質の消失を示し、反応混合物をＥｔ_３Ｎ（０．２ｍＬ）で失活させ、セライトパッドで濾過した。濾液をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で希釈し、２０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１０ｍＬ）および塩水（５ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／トルエン（１：１０）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ９を白色の泡状物として得た（７１０ｍｇ、７５％）。Ｒ_ｆ＝０．３６（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：トルエン＝１：１０）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．５０－７．４８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３９－７．３６（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３３－７．２５（ｍ，１５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２３－７．２２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８４（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．２，１０．８，５．４Ｈｚ，１Ｈ），５．５５（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ－ＣＨ），５．２６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２３－５．２０（ｍ，１Ｈ），５．１６（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．９０（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８３（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７５－４．６２（ｍ，６Ｈ，Ｃ１－Ｈ_α），４．５５－４．５１（ｍ，３Ｈ），４．３３－４．２９（ｍ，２Ｈ），４．１３－４．１０（ｍ，１Ｈ），４．０８（ｄｄ，Ｊ＝２．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．００－３．９７（ｍ，１Ｈ），３．９４（ｄｄ，Ｊ＝９．６，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８９（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８２－３．７８（ｍ，２Ｈ），３．７２－３．６６（ｍ，３Ｈ），３．５０－３．４６（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１５３．８，１３８．６，１３８．５，１３８．３，１３８．１，１３７．３，１３３．７，１２９．０，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．１，１２８．０，１２７．８，１２７．６，１２７．６，１２７．４，１２６．０，１１７．２，１０１．２，９８．９，９６．９，９５．５，８２．４，７８．５，７５．６，７５．２，７４．６，７４．４，７４．２，７３．３，７２．２，７２．２，６９．２，６８．６，６８．０，６６．１，５８．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５３Ｈ_５６Ｃｌ_３ＮＯ_１２Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１０２６．２７６０／実測値：１０２６．２７８０．

【0067】

【化37】

アリル［３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－α－Ｄ－マンノピラノシド８^２７。出発物質Ｓ９（５００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ、１当量）の無水ＴＨＦ（１２ｍＬ）撹拌溶液に、活性化させた粉末状ＡＷ３００ＭＳ（１．２０ｇ）をアルゴン下で添加した。次いで反応混合物を０℃に冷却し、ＮａＣＮＢＨ_３（３１３ｍｇ、４．９７ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、その後にＨＣｌ・Ｅｔ_２Ｏ（Ｅｔ_２Ｏ中２Ｍ、２．２４ｍＬ、４．４８ｍｍｏｌ、９当量）をゆっくりと添加し、ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（１６時間）、混合物を撹拌し続けた。完了したら、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（０．５ｍＬ）で失活させ、セライトパッドで濾過した。濾液をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で希釈し、次いで飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（８ｍＬ）および塩水（５ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／トルエン（１：５）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物８を白色の泡状物として得た（４２５ｍｇ、８５％）。分光学的データは文献^２７において報告されているものと一貫していた。Ｒ_ｆ＝０．１７（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：トルエン＝１：１０）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．３６－７．２３（ｍ，２３Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２０－７．１９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８４（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．２。１０．２，６．０Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｂｒ，１Ｈ），５．２１（ｄｄ，Ｊ＝１６．２，１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．８８（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_α），４．７５（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７０－４．６３（ｍ，５Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５５－４．４９（ｍ，４Ｈ），４．１４－４．０７（ｍ，３Ｈ），３．９６－３．８７（ｍ，３Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７３－３．７０（ｍ，３Ｈ），３．６６（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｄ，Ｊ＝９．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５４－３．５１（ｍ，１Ｈ），３．０８（ｍ，１Ｈ），２．７１（ｍ，１Ｈ，－ＯＨ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１５４．０，１３８．５，１３８．５，１３８．４，１３８．１，１３７．６，１３３．７，１２８．５，１２８．５，１２８．３，１２８．３，１２８．３，１２８．２，１２８．０，１２８．０，１２７．８，１２７．７，１２７．７，１２７．６，１２７．６，１２７．５，１１７．３，７９．２，７８．２，７５．１，７４．６，７４．３，７４．２，７３．８，７３．７，７３．４，７３．３，７２．０，７１．７，７０．９，６９．３，６８．０，５７．５；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５３Ｈ_５８Ｃｌ_３ＮＯ_１２Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１０２８．２９１７／実測値：１０２８．２９２７．

【0068】

【化38】

スキームＳ３における試薬および条件：（ａ）ＮａＢＨ_３ＣＮ、ＨＣｌ／エーテル、ＡＷ－３００、ＴＨＦ、０℃～室温、１６時間、９０％。（ｂ）Ａｃ_２Ｏ、ピリジン、室温、１６時間、９８％。（ｃ）ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、ＨＯＰＯ（ＯＢｕ）_２、４ÅのＭＳ、－３０℃、２時間、ＣＨ_２Ｃｌ_２、９０％。（ｄ）ＴＭＳＯＴｆ、４ÅのＭＳ、－５０℃、１時間、ＣＨ_２Ｃｌ_２、８７％。（ｅ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃～室温、７６％。

【0069】

【化39】

ｐ－トリル３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－１－チオ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルバモイルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシドＳ１０^２８。出発物質Ｓ７（１．００ｇ、１．５６ｍｍｏｌ、１当量）の無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）撹拌溶液に、活性化させた粉末状ＡＷ３００ＭＳ（３．００ｇ）をアルゴン下で添加した。次いで反応混合物を０℃に冷却し、ＮａＣＮＢＨ_３（０．９８ｇ、１５．６ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、その後にＨＣｌ・Ｅｔ_２Ｏ（Ｅｔ_２Ｏ中２Ｍ、７．０４ｍＬ、１４．１ｍｍｏｌ、９当量）をゆっくりと添加し、ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（１６時間）、混合物を撹拌した。完了したら、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（０．５ｍＬ）で失活させ、セライトパッドで濾過した。濾液をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で希釈し、次いで飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１５ｍＬ）および塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／ヘキサン／ＣＨ_２Ｃｌ_２（１：３：１）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ１０を白色の泡状物として得た（９０２ｍｇ、９０％）。分光学的データは文献^２８において報告されているものと一貫していた。Ｒ_ｆ＝０．２９（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．４０－７．３８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３６－７．２７（ｍ，１０Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０４－７．０３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．２０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８４（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．７７－４．７２（ｍ，４Ｈ），４．５８－４．５２（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７１－３．６４（ｍ，２Ｈ），３．５０－３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４２－３．３８（ｍ，１Ｈ），２．９０（ｂｒ，１Ｈ，－ＯＨ），２．２９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１５３．８，１３８．１，１３８．１，１３７．７，１３３．０，１２９．６，１２８．６，１２８．５，１２８．４，１２８．１，１２７．９，１２７．８，１２７．７，９５．５，８６．１，８１．９，７８．０，７４．５，７４．４，７３．６，７２．５，７０．４，５５．９，２１．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_３０Ｈ_３２Ｃｌ_３ＮＯ_６ＳＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：６６２．０９０８／実測値：６６２．０９１９．

【0070】

【化40】

ｐ－トリル４－Ｏ－アセチル－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－１－チオ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルバモイルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシドＳ１１。出発物質Ｓ１０（０．９７ｇ、１．５１ｍｍｏｌ、１当量）のピリジン（１２ｍＬ）撹拌溶液に、Ａｃ_２Ｏ（６ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間激しく撹拌し、次いで真空濃縮し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン／ＣＨ_２Ｃｌ_２（１：４：１）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ１１を白色の粉末として得た（１．０１ｇ、９８％）。Ｒ_ｆ＝０．４７（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．４１－７．４０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３４－７．２５（ｍ，８Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２２－７．２１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０３－７．０１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．２９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｂｒ，２Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝９．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６５－３．６３（ｍ，１Ｈ），３．５９－３．５５（ｍ，２Ｈ），３．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６，９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１６９．８，１５３．７，１３８．４，１３８．０，１３７．７，１３３．３，１２９．８，１２８．６，１２８．５，１２８．４，１２８．２，１２８．１，１２８．１，１２７．９，１２７．９，１２７．７，９５．５，８５．３，７９．４，７７．７，７４．４，７３．６，７１．４，６９．７，５６．５，２１．１，２０．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_３２Ｈ_３４Ｃｌ_３ＮＯ_７ＳＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：７０４．１０１４／実測値：１０４．１０３１．

【0071】

【化41】

４－Ｏ－アセチル－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－１－チオ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルバモイルアミノ－αもしくはβ－Ｄ－グルコピラノシドリン酸ジブチルＳ１２ａ，ｂ。無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１８ｍＬ）中の化合物Ｓ１１（９９０ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ、１当量）、リン酸ジブチル（１．１５ｍＬ、５．８０ｍｍｏｌ、３当量）および活性化させた粉末状の４ÅのＭＳ（１．８０ｇ）混合物をアルゴン下で１時間撹拌した。次いでそれを撹拌しながら－３０℃に冷却し、ＮＩＳ（９７８ｍｇ、４．３５ｍｍｏｌ、２当量）を添加し、その後にＴｆＯＨ（Ｅｔ_２Ｏ中０．５Ｍ、０．８７ｍＬ、０．４３ｍｍｏｌ、０．３当量）を添加した。２時間後、ＴＬＣ分析は出発物質の消失を示し、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（０．５ｍＬ）で失活させ、セライトパッドで濾過した。濾液をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で希釈し、２０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５ｍＬ）および塩水（５ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／トルエン（１：３）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ１２を白色の泡状物として得た（１．００ｇ、９０％）；アノマーの混合物（α：β＝１：３）。β－アノマーＳ１２ｂ：Ｒ_ｆ＝０．３２（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：トルエン＝１：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．３０－７．２２（ｍ，１０Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８１（ｂｒ，１Ｈ），５．３５（ｄｄ，Ｊ＝７．８，７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），５．０９（ｄｄ，Ｊ＝９．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６５－４．５８（ｍ，３Ｈ），４．４９－４．４４（ｍ，２Ｈ），４．０６－３．９７（ｍ，４Ｈ），３．８８（ｄｄ，Ｊ＝９．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７７－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，４．２，４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５３－３．５２（ｍ，２Ｈ），１．８３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．６１－１．５４（ｍ，４Ｈ），１．３６－１．３１（ｍ，４Ｈ），０．９３－０．８５（ｍ，６Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１６９．５，１５４．２，１３７．６，１３７．６，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２７．９，１２７．９，１２７．７，１２７．７，９６．５，９５．３，７８．３，７４．５，７３．９，７３．６，７３．５，７０．６，６９．２，６８．１，６８．１，６８．１，６８．０，５７．２，５７．２，３２．１，３２．０，３２．０，２０．７，１８．６，１８．６，１３．５；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_３３Ｈ_４５Ｃｌ_３ＮＯ_１１ＰＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：７９０．１６８８／実測値：７９０．１６８５。α－アノマーＳ１２ａ：Ｒ_ｆ＝０．４４（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：トルエン＝１：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．３１－７．２２（ｍ，１０Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．６７（ｄｄ，Ｊ＝６．０，３．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_α），５．２１－５．１６（ｍ，２Ｈ），４．７５（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６２－４．５６（ｍ，３Ｈ），４．４９－４．４４（ｍ，２Ｈ），４．１１－３．９９（ｍ，６Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５０－３．４９（ｍ，２Ｈ），１．８９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．６０－１．５５（ｍ，４Ｈ），１．３５－１．３１（ｍ，４Ｈ），０．９２－０．８６（ｍ，６Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１６９．３，１５４．０，１３７．４，１３７．４，１２８．４，１２８．２，１２７．８，１２７．８，１２７．８，１２７．６，１２７．６，１２７．６，９６．４，９６．３，９５．２，７６．４，７４．６，７３．６，７３．５，７１．１，７０．１，６８．６，６８．１，６８．０，６８．０，６７．９，５４．４，５４．３，３２．１，３２．０，２０．７，１８．５，１８．５，１３．５；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_３３Ｈ_４５Ｃｌ_３ＮＯ_１１ＰＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：７９０．１６８８／実測値：７９０．１６８８．

【0072】

【化42】

ｐ－トリル［４－Ｏ－アセチル－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－１－チオ－α－Ｄ－マンノピラノシドＳ１４。無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）中のアクセプターＳ１３^２９（４０７ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ、１当量）およびドナーＳ１２（９００ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、１．６当量）および活性化させた粉末状４Åのモレキュラーシーブ（２００ｍｇ）の混合物をアルゴン下で３０分間撹拌した。次いでそれを－５０℃に冷却し、その後にＴＬＣ分析が出発物質の消失を示すまで（１時間）、ＴＭＳＯＴｆ（０．２１ｍＬ、１．１７μｍｏｌ、アクセプターに対して１．６当量）を撹拌しながら添加した。反応混合物をＥｔ_３Ｎ（０．３０ｍＬ）で失活させ、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（８ｍＬ）および塩水（４ｍＬ）で２回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：３）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ１４を白色の粉末として得た（７１０ｍｇ、８７％）。Ｒ_ｆ＝０．２６（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．３７－７．３６（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３３－７．１４（ｍ，２５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０５－７．０３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．３３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_α），５．２６（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．９３－４．９０（ｍ，２Ｈ），４．７７（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６０－４．５２（ｍ，５Ｈ），４．４６－４．３４（ｍ，５Ｈ），４．２７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｄｄ，Ｊ＝９．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１５（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄｄ，Ｊ＝９．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８４－３．８１（ｍ，２Ｈ），３．６４－３．６３（ｍ，２Ｈ），３．５７（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０１（ｄｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１６９．７，１５４．２，１３８．５，１３８．３，１３８．０，１３７．８，１３７．７，１３７．６，１３２．５，１３０．３，１２９．８，１２９．７，１２９．０，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．２，１２８．２，１２８．２，１２７．９，１２７．８，１２７．８，１２７．７，１２７．７，１２７．６，１２７．６，１２７．６，１２７．４，１２５．２，９７．１，９５．４，８６．２，７８．３，７５．２，７５．１，７４．５，７４．１，７４．０，７３．６，７３．４，７３．１，７２．５，７１．７，７１．３，７０．０，６９．２，５８．１，２１．１，２０．８；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５９Ｈ_６２Ｃｌ_３ＮＯ_１２ＳＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１１３６．２９５０／実測値：１１３６．２９７８．

【0073】

【化43】

ｐ－トリル［３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→２）－３，４，６－トリ－Ｏ－ベンジル－１－チオ－α－Ｄ－マンノピラノシド１８。化合物Ｓ１４（２０３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ混合物（１０ｍＬ、１：１＝ｖ／ｖ）の十分に撹拌した溶液に、ＮａＯＭｅ（２．９５ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、０．３当量）を０℃で添加した。２０分後、氷浴を除去し、ＴＬＣ分析が出発物質の消失を示すまで（４時間）、反応混合物を撹拌しながら室温に温めた。完了したら、反応混合物をＩＲ－１２０で中和し、濾過し、真空濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物１８を白色の泡状物として得た（１４９ｍｇ、７６％）。Ｒ_ｆ＝０．１４（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．３９－７．３７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３４－７．２４（ｍ，２５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０６－７．０５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．３３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_α），５．２４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．９３（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６９－４．６４（ｍ，２Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５７－４．５１（ｍ，４Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝２．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２２－４．２０（ｍ，２Ｈ），４．０７－４．０４（ｍ，２Ｈ），３．８４－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．７７－３．７２（ｍ，２Ｈ），３．６７－３．６５（ｍ，１Ｈ），３．５９－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），２．６８（ｂｒ，１Ｈ，－ＯＨ），２．３０（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１５４．２，１３８．５，１３８．４，１３８．３，１３７．９，１３７．７，１３７．６，１３２．５，１３０．３，１２９．８，１２８．５，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２８．１，１２８．０，１２７．９，１２７．８，１２７．８，１２７．７，１２７．６，１２７．６，１２７．５，９７．５，９５．４，８６．２，７９．１，７８．４，７５．３，７５．２，７４．６，７４．４，７４．２，７３．８，７３．８，７３．２，７３．１，７２．５，７１．４，７０．９，６９．３，５７．８，２１．１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５７Ｈ_６０Ｃｌ_３ＮＯ_１１ＳＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１０９４．２８４５／実測値：１０９４．２８８１．

【0074】

【化44】

スキームＳ４における試薬および条件：（ａ）ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、４ÅのＭＳ、－４０℃、１時間、ＣＨ_２Ｃｌ_２、９３％。（ｂ）エチレンジアミン／ＢｕＯＨ（１：４）、９０℃、２時間、次いでＮａＨＣＯ_３、ＴｒｏｃＣｌ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、３時間、８１％。（ｃ）Ｔｆ_２Ｏ、ピリジン、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、４時間。（ｄ）Ｂｕ_４ＮＯＡｃ、トルエン、超音波処理、室温、８時間、次いでＮａＨＣＯ_３、ＴｒｏｃＣｌ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、３時間、６１％（２段階）。（ｅ）ＤＤＱ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、リン酸緩衝液（ｐＨ＝７）、０℃～室温、３時間、８５％。（ｆ）ヒドラジン酢酸塩、ＴＨＦ、室温、１６時間、９２％。（ｇ）Ｔｆ_２Ｏ、ピリジン、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、２時間。（ｈ）Ｂｕ_４ＮＯＡｃ、トルエン、超音波処理、室温、８時間、９３％（２段階）。（ｉ）エチレンジアミン／ＢｕＯＨ（１：４）、９０℃、２時間、次いでＮａＨＣＯ_３、ＴｒｏｃＣｌ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、３時間。（ｊ）Ａｃ_２Ｏ、ピリジン、ＣＨ_２Ｃｌ_２、室温、１６時間、８３％（２段階）。

【0075】

【化45】

ベンジル［４，６－Ｏ－ベンジリジン－３－Ｏ－ｐ－メトキシ－ベンジル－２－Ｏ－レブリノイル－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－フタルイミド－β－Ｄ－グルコピラノシドＳ１７。アクセプターＳ１６の混合物^３０。無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）中のアクセプターＳ１６の混合物^３０（１．５９ｇ、２．７４ｍｍｏｌ、１当量）、ドナーＳ１５^２６（２．１１ｇ、３．５７ｍｍｏｌ、１．３当量）および活性化させた粉末状の４ÅのＭＳ（５．００ｇ）をアルゴン下で１時間撹拌した。次いで反応混合物を－４０℃に冷却し、ＮＩＳ（１．２３ｇ、０．４９ｍｍｏｌ、２当量）を添加し、その後にＴｆＯＨ（Ｅｔ_２Ｏ中０．５Ｍ、１．３７ｍＬ、０．６９ｍｍｏｌ、０．２５当量）を添加した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（２時間）、その反応を続けた。完了したら、反応混合物をＥｔ_３Ｎ（０．７ｍＬ）で失活させ、セライトパッドで濾過した。濾液をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で希釈し、２０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２０ｍＬ）および塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：３）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ１７を白色の泡状物として得た（２．６８ｇ、９３％）。Ｒ_ｆ＝０．４３（シリカゲル、アセトン：トルエン＝１：６）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．７５（ｂｒ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．６３（ｂｒ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．５０（ｂｒ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４６－７．４５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３９－７．３２（ｍ，７Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２９－７．２６（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２０－７．１８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０７－７．０５（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０２－７．０１（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．９８－６．９７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８７－６．８３（ｍ，５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．４４（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ－ＣＨ），５．１０－５．０８（ｍ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．９２（ｄｄ，Ｊ＝９．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８１－４．７１（ｍ，４Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．５６（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３６（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２０－４．１９（ｍ，２Ｈ），４．０９－４．０６（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７９－３．７８（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝９．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５５－３．５１（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１７（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８１－２．７６（ｍ，１Ｈ），２．７０－２．６５（ｍ，１Ｈ），２．５０－２．３８（ｍ，２Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２０６．２，１７１．１，１５９．２，１３８．６，１３８．１，１３７．３，１３３．５，１３１．６，１３０．４，１２９．４，１２９．０，１２８．５，１２８．２，１２８．１，１２７．９，１２７．８，１２７．７，１２７．５，１２７．５，１２７．０，１２６．０，１２３．１，１１３．６，１０１．１，１００．６，９７．４，８１．７，７８．０，７７．９，７６．６，７４．８，７４．５，７３．７，７３．６，７０．７，６８．６，６７．７，６５．８，５５．７，５５．３，３７．７，２９．９，２７．８；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_６１Ｈ_６１ＮＯ_１５Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１０７０．３９３３／実測値：１０７０．３９３３．

【0076】

【化46】

ベンジル［４，６－Ｏ－ベンジリジン－３－Ｏ－ｐ－メトキシ－ベンジル－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシドＳ１８。二糖Ｓ１７（６２５ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、１当量）のエチレンジアミン／ｎ－ＢｕＯＨ（７ｍＬ、２：８＝ｖ／ｖ）溶液を９０℃で２時間撹拌した。溶媒を高真空下での回転蒸発により除去し、トルエンと共に２回同時蒸発させて微量の水を除去した。得られた残留物を無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ_３（２５０ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、５当量）およびクロロギ酸２，２，２－トリクロロエチル（０．４１ｍＬ、２．９８ｍｍｏｌ、５当量）アルゴン下０℃で３時間処理した。完了したら、反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）および塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／トルエン（１：４）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ１８を白色の粉末として得た（４８１ｍｇ、８１％）。Ｒ_ｆ＝０．６０（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：トルエン＝１：２）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．４７－７．４６（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４０－７．２５（ｍ，２０Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８６－６．８５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．４６（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ－ＣＨ），５．１２（ｂｒ，１Ｈ），４．８８－４．８５（ｍ，３Ｈ），４．７１－４．５５（ｍ，９Ｈ，２Ｃ１－Ｈ_β），４．０６－４．０３（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｂｒ，１Ｈ），３．８０（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），３．５６（ｄｄ，Ｊ＝９．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５２－３．４５（ｍ，５Ｈ），３．１５（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．０３（ｂｒ，１Ｈ，－ＯＨ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１５９．３，１５３．８，１３８．４，１３７．７，１３７．３，１３７．２，１３０．４，１２９．６，１２８．９，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．０，１２７．８，１２７．８，１２７．６，１２７．４，１２６．０，１１３．８，１０３．２，１０１．１，９９．２，９５．５，８１．３，７９．９，７９．２，７７．７，７４．９，７４．５，７４．３，７４．２，７３．５，７０．７，６８．６，６８．２，６６．２，５７．６，５５．２；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５１Ｈ_５４Ｃｌ_３ＮＯ_１３Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１０１６．２５５３／実測値：１０１６．２５５４．

【0077】

【化47】

ベンジル［２－Ｏ－アセチル－４，６－Ｏ－ベンジリジン－３－Ｏ－ｐ－メトキシ－ベンジル－β－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシドＳ１９。Ｓ１８から：二糖Ｓ１８（１．０２ｇ、１．０２ｍｍｏｌ、１当量）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１３ｍＬ）撹拌溶液に、無水ピリジン（０．５８ｍＬ、７．１７ｍｍｏｌ、７当量）を添加し、その後にＴｆ_２Ｏ（０．３０ｍＬ、１．７９ｍｍｏｌ、１．７５当量）をアルゴン下０℃で滴下した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（４時間）、反応混合物を０℃で撹拌した。完了したら、それをＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で希釈し、０．５ＮのＨＣｌ（２０ｍＬ）および塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。粗製残留物をＢｕ_４ＮＯＡｃ（９２７ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ、３当量）と混合し、トルエン（２０ｍＬ）に溶解した。溶媒を真空中で除去し、残留物をトルエンと共に２回同時蒸発させ、次いで無水トルエン（１３ｍＬ）に再溶解し、混合物を８時間超音波処理した。この時間の間に、本発明者らはＮＨＴｒｏｃの部分的脱保護を観察し、反応混合物を高真空下で濃縮した。得られた残留物をＣＨ_２Ｃｌ_２（１３ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ_３（４３０ｍｇ、５．１２ｍｍｏｌ、５当量）およびクロロギ酸２，２，２－トリクロロエチル（０．７１ｍＬ、５．１２ｍｍｏｌ、５当量）でアルゴン下０℃で処理した。３時間撹拌した後、反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）および塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／トルエン（１：５）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ１９を白色の粉末として得た（６５０ｍｇ、６１％）。

【0078】

Ｓ２１から：二糖Ｓ２１（１．２０ｇ、１．２１ｍｍｏｌ、１当量）のエチレンジアミン／ｎ－ＢｕＯＨ（１５ｍＬ、２：８＝ｖ／ｖ）溶液を９０℃で２時間撹拌した。溶媒の除去後、粗製生成物をトルエンと共に２回同時蒸発させた。得られた残留物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ_３（５０８ｍｇ、６．０５ｍｍｏｌ、５当量）およびクロロギ酸２，２，２－トリクロロエチル（０．８３ｍＬ、６．０５ｍｍｏｌ、５当量）でアルゴン下０℃で処理した。３時間後、反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（４５ｍＬ）で希釈し、水（３０ｍＬ）および塩水（１５ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮し、トルエンと共に２回同時蒸発させ、真空中で蒸発させた。得られた残留物を、温度を０℃から室温に１６時間かけてゆっくりと温めながら、アセチル化条件ピリジン（１４ｍＬ）中のＡｃ_２Ｏ（７ｍＬ）に直接供した。反応混合物を高真空下で濃縮し、アセトン／トルエン（１：５）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ１９を白色の粉末として得た（１．０４ｇ、８３％）。Ｒ_ｆ＝０．５４（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：トルエン＝１：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．４８－７．４６（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３９－７．３５（ｍ，３Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３３－７．２５（ｍ，１４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２４－７．２１（ｍ，３Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８４－６．８２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．５０（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ－ＣＨ），５．４１（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｂｒ，１Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８８（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７２－４．６２（ｍ，５Ｈ，２Ｃ１－Ｈ_β），４．５８－４．５６（ｍ，３Ｈ），４．４７－４．４４（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄｄ，Ｊ＝９．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８７－３．８４（ｍ，２Ｈ），３．７８－３．７２（ｍ，５Ｈ，－ＣＨ_３），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４５－３．４３（ｍ，２Ｈ），３．３８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，８．４，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．３，１５９．３，１５３．８，１３８．４，１３７．８，１３７．４，１３７．１，１２９．７，１２９．２，１２８．９，１２８．５，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．０，１２８．０，１２７．９，１２７．８，１２７．７，１２６．１，１１３．８，１０１．４，９９．１，９９．１，７７．８，７５．３，７４．４，７３．５，７１．４，７０．８，６９．１，６８．５，６８．４，６７．０，５７．５，５５．２，２１．０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５３Ｈ_５６Ｃｌ_３ＮＯ_１４Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１０５８．２６５８／実測値：１０５８．２６５７．

【0079】

【化48】

ベンジル［２－Ｏ－アセチル－４，６－Ｏ－ベンジリジン－β－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－（２，２，２－トリクロロエトキシ）カルボニルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシド１３。Ｓ１９（１２０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２／リン酸緩衝液混合物（ｐＨ＝７）（３ｍＬ、９：１＝ｖ／ｖ）撹拌溶液に、２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノベンゾキノン（５２．５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、２．２当量）を０℃で添加した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（３時間）、反応混合物を激しく撹拌した。完了したら、反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（８ｍＬ）および塩水（４ｍＬ）で洗浄し、有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／トルエン（１：４）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物１３を白色の粉末として得た（９０ｍｇ、８５％）。Ｒ_ｆ＝０．２９（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：トルエン＝１：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．４５－７．４４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３９－７．３４（ｍ，７Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３３－７．２６（ｍ，１１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．４７（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ－ＣＨ），５．２３（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｂｒ，１Ｈ），４．９１（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８７（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６８－４．６１（ｍ，４Ｈ，２Ｃ１－Ｈ_β），４．５８－４．５６（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄｄ，Ｊ＝９．０，９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｂｒ，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７３－３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝９．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５６（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４３－３．３６（ｍ，２Ｈ），３．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．２１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．５，１５３．８，１３８．５，１３７．８，１３７．１，１３７．０，１２９．３，１２８．６，１２８．６，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２８．１，１２８．０，１２８．０，１２７．９，１２７．８，１２７．７，１２６．２，１０２．１，９９．１，９９．０，７８．５，７８．２，７４．４，７４．４，７３．６，７１．２，７０．８，６９．７，６８．４，６８．４，６６．７，５７．５；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_４５Ｈ_４９Ｃｌ_３ＮＯ_１３［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値：９１６．２２６４／実測値：９１６．２２５２．

【0080】

【化49】

ベンジル［４，６－Ｏ－ベンジリジン－３－Ｏ－ｐ－メトキシ－ベンジル－β－Ｄ－グルコピラノシル］－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－フタルイミド－β－Ｄ－グルコピラノシドＳ２０。出発物質Ｓ１７（２．４８ｇ、２．３７ｍｍｏｌ、１当量）の無水ＴＨＦ（５５ｍＬ）撹拌溶液に、ヒドラジン酢酸塩（３２７ｍｇ、３．５５ｍｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン下室温で添加した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（１６時間）、反応混合物を激しく撹拌した。完了したら、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、水（６０ｍＬ）および塩水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ２０を白色の泡状物として得た（２．０７ｇ、９２％）。Ｒ_ｆ＝０．５４（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．７９－７．５４（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．５１－７．４４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３８－７．３３（ｍ，７Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３０－７．２７（ｍ，３Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０８－７．０４（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０２－７．０１（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．９８－６．９７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．８９－６．８１（ｍ，５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．４６（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ－ＣＨ），５．０９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．８５（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．５６（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ＝１０．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１５－４．１０（ｍ，２Ｈ），４．０４（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），３．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，３．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５６（ｄｄ，Ｊ＝３．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５２－３．４５（ｍ，３Ｈ），３．１８（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｂｒ，１Ｈ，－ＯＨ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１６７．９，１５９．３，１３８．４，１３７．８，１３７．３，１３７．２，１３３．６，１３１．６，１３０．５，１２９．７，１２８．９，１２８．４，１２８．２，１２８．１，１２８．０，１２７．９，１２７．８，１２７．５，１２７．４，１２７．１，１２６．０，１２３．２，１１３．８，１０３．４，１０１．１，９７．５，８１．３，７９．５，７８．８，７７．８，７５．０，７４．７，７４．５，７４．２，７３．６，７０．８，６８．６，６８．２，６６．２，５５．８，５５．３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５６Ｈ_５５ＮＯ_１３Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］の計算値^＋：９７２．３５６５／実測値：９７２．３５６７．

【0081】

【化50】

ベンジル［２－Ｏ－アセチル－４，６－Ｏ－ベンジリジン－３－Ｏ－ｐ－メトキシ－ベンジル－β－Ｄ－マンノピラノシル］－（１→４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－デオキシ－２－フタルイミド－β－Ｄ－グルコピラノシドＳ２１。二糖Ｓ２０（９３６ｍｇ、０．９８５ｍｍｏｌ、１当量）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）撹拌溶液に、無水ピリジン（０．５６ｍＬ、６．９０ｍｍｏｌ、７当量）を添加し、次いでトリフルオロメタンスルホン酸無水物（０．２９ｍＬ、１．７２ｍｍｏｌ、１．７５当量）をアルゴン下０℃で滴下し、ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（２時間）、混合物を０℃で撹拌した。完了したら、反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で希釈し、０．５ＮのＨＣｌ（２０ｍＬ）および塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空濃縮し、得られた残留物をさらなる反応のためにそのまま使用した。上記得られた残留物にＢｕ_４ＮＯＡｃ（５９４ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、２当量）を添加し、トルエン（１８ｍＬ）に溶解した。溶媒を真空中で除去し、残留物をトルエンと共に２回同時蒸発させて微量の水を除去した。残留物を無水トルエン（１２ｍＬ）に再溶解し、混合物を８時間超音波処理した。完了したら、反応混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）および塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ２１を白色の粉末として得た（９１３ｍｇ、９３％）。Ｒ_ｆ＝０．２９（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．７６－７．４９（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４８－７．４６（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３９－７．３１（ｍ，７Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２６－７．２２（ｍ，３Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１０－７．０６（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０４－７．０３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．９９－６．９８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．９０－６．８４（ｍ，５Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．４９（ｓ，１Ｈ，Ｐｈ－ＣＨ），５．４４（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．８２－４．７６（ｍ，３Ｈ），４．６８（ｓ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．５８（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４９－４．４４（ｍ，３Ｈ），４．３８（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２６－４．１９（ｍ，２Ｈ），４．１７－４．１１（ｍ，２Ｈ），３．８６－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），３．７８－３．７６（ｍ，１Ｈ），３．５７－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．４４（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，９．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．２，１６７．８，１５９．２，１３８．５，１３７．８，１３７．４，１３７．１，１３３．６，１３１．５，１２９．７，１２９．２，１２８．９，１２８．５，１２８．１，１２８．１，１２７．９，１２７．９，１２７．８，１２７．７，１２７．６，１２７．５，１２７．１，１２６．０，１２３．１，１１３．８，１０１．４，９９．５，９７．３，７９．１，７７．７，７６．９，７５．４，７４．５，７４．３，７３．５，７１．３，７０．７，６９．１，６８．４，６８．３，６６．９，５５．６，５５．２，２１．０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５８Ｈ_５７ＮＯ_１４Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１０１４．３６７１／実測値：１０１４．３６９９．

【0082】

【化51】

スキームＳ５における試薬および条件：（ａ）Ｂｒ_２、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、１０分間、次いでｐ－ニトロフェノール、Ａｇ_２Ｏ、ＣＨ_３ＣＮ、１時間、７３％。（ｂ）ＮａＢｒＯ_３、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４、Ｈ_２Ｏ、ＥｔＯＡｃ、室温、１．５時間、９３％。（ｃ）ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ、ＭｅＯＨ、室温、１６時間、８４％。（ｄ）Ａｃ_２Ｏ、ピリジン、室温、１６時間、９０％。（ｅ）Ｂｒ_２、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、１０分間、次いでｐ－ニトロフェノール、Ａｇ_２Ｏ、ＣＨ_３ＣＮ、１時間、７４％。（ｆ）ＮａＢｒＯ_３、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４、Ｈ_２Ｏ、ＥｔＯＡｃ、室温、１．５時間、９７％。（ｇ）ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ、ＭｅＯＨ、室温、１６時間、９４％。

【0083】

【化52】

ｐ－ニトロフェニル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－β－Ｄ－ガラクトピラノシドＳ２２。チオグリコシド４（１１５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１当量）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）撹拌溶液に、臭素（６．０２μＬ、０．１２ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で添加した。反応混合物を激しく１０分間撹拌した後、溶媒を真空中で除去し、残留物をトルエンと共に２回同時蒸発させて微量の水を除去した。従って得られた残留物を無水ＣＨ_３ＣＮ（２ｍＬ）に溶解し、４－ニトロフェノール（２５．３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１．７当量）およびＡｇ_２Ｏ（１２４ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、５当量）で処理した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（１時間）、反応混合物を暗所においてＮ_２中で激しく撹拌した。完了したら、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（４ｍＬ）および塩水（３ｍＬ）で２回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ２２を白色の粉末として得た（８５ｍｇ、７３％）。Ｒ_ｆ＝０．４６（シリカゲル、アセトン：トルエン＝２：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．１３－８．１１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．９６－７．９４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．９１－７．８９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４９－７．４４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３５－７．３０（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２４－７．２２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２０－７．１８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１３－７．１１（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．０９（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６５－５．５９（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，３．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），５．３５（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｄｄ，Ｊ＝９．６，１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１９（ｄｄ，Ｊ＝２７．０，１０．８Ｈｚ，１Ｈ，ｓｉａ－Ｃ４－Ｈ），５．０４（ｄｄ，Ｊ＝５１．０，１．８Ｈｚ，１Ｈ，ｓｉａ－Ｃ３－Ｈ），４．７２－４．６７（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３１（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．２，４．２，４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８９－３．８０（ｍ，５Ｈ，－ＣＨ_３），２．２６（ｓ，６Ｈ，－２ＣＨ_３），２．１０（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７１．１，１７０．８，１７０．４，１７０．３，１７０．２，１６５．５，１６５．５，１６５．４，１６５．３，１６１．８，１４２．６，１３８．０，１３３．２，１３３．１，１２９．８，１２９．７，１２９．４，１２９．０，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．１，１２８．０，１２７．５，１２５．６，１１６．８，９８．８，９８．７，９８．２，８８．１，８６．８，７５．０，７３．９，７３．７，７３．２，７１．６，６９．７，６９．１，６９．０，６７．３，６７．２，６３．４，６３．３，５３．４，４５．１，２３．３，２１．２，２０．８，２０．７，２０．６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－２１５．５；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５３Ｈ_５５ＦＮ_２Ｏ_２２Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１１１３．３１２３／実測値：１１１３．３１３１．

【0084】

【化53】

ｐ－ニトロフェニル［５－アセトアミド－４，７，８，９－テトラ－Ｏ－アセチル－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシドＳ２３。化合物Ｓ２２（６３．０ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（０．８ｍＬ）撹拌溶液に、Ｈ_２Ｏ（０．６ｍＬ）中のＮａＢｒＯ_３（８５％、３９．２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、４．５当量）を添加し、その後にＨ_２Ｏ（１．２ｍＬ）中のＮａ_２Ｓ_２Ｏ_４（４０．２ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、４当量）をゆっくりと室温で添加した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（１．５時間）、反応混合物を撹拌した。反応が完了したら反応混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、２０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（５ｍＬ）および塩水（３ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空濃縮し、得られた残留物をアセトン／トルエン（３：５）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ２３を白色の粉末として得た（５４ｍｇ、９３％）。Ｒ_ｆ＝０．４０（シリカゲル、アセトン：トルエン＝２：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．１３－８．１２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．９９－７．９８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．９５－７．９４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．５０－７．４６（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３７－７．３２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１９－７．１８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．０５（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５３（ｄｄｄ，Ｊ＝９．０，６．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４９－５．４５（ｍ，２Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），５．３６（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２７（ｄｄ，Ｊ＝９．０，１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１９（ｄｄ，Ｊ＝２７．０，１１．４Ｈｚ，１Ｈ，ｓｉａ－Ｃ４－Ｈ），５．０５（ｄｄ，Ｊ＝５１．６，１．８Ｈｚ，１Ｈ，ｓｉａ－Ｃ３－Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄｄ，Ｊ＝６．６，６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１３－４．０７（ｍ，１Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９９－３．９８（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．９９（ｂｒ，１Ｈ，－ＯＨ），２．１７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．９，１７０．８，１７０．５，１７０．３，１６５．６，１６５．６，１６５．３，１６１．８，１４２．９，１３３．４，１３３．３，１２９．８，１２９．７，１２９．２，１２９．１，１２９．０，１２８．４，１２８．４，１２８．２，１２５．６，１２５．３，１１７．１，９９．０，９８．１，９８．０，８８．３，８７．０，７３．９，７３．３，７１．６，６９．２，６９．１，６９．０，６７．９，６７．２，６６．５，６３．６，６２．９，５３．４，４５．１，２３．３，２１．１，２０．７，２０．６，２０．６；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－２１６．０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_４６Ｈ_５０ＦＮ_２Ｏ_２２［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値：１００１．２８３４／実測値：１００１．２８３３．

【0085】

【化54】

ｐ－ニトロフェニル［５－アセトアミド－３，５－ジデオキシ－３－フルオロ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－マンノ－ノン－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－β－Ｄ－ガラクトピラノシド２。化合物Ｓ２３（５３ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、１当量）のメタノール（５ｍＬ）溶液に、水（１ｍＬ）中のＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（２２．２ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１６時間撹拌した後、反応混合物をＩＲ－１２０で中和し、濾過し、真空濃縮した。得られた残留物を（ＢＩＯ－ＲＡＤ）Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ－２カラムクロマトグラフィ（水で溶離）で精製して、化合物２を得た（２７ｍｇ、８４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ８．２９－８．２８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３０－７．２９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．２１（ｄｄ，Ｊ＝５１．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ，ｓｉａ－Ｃ３－Ｈ），５．１８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｃ１－Ｈ_β），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝９．０，９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０７－４．００（ｍ，３Ｈ），３．９１－３．７７（ｍ，７Ｈ），３．６３（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５７（ｄｄ，Ｊ＝９．０，１．８Ｈｚ，１Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ１７５．０，１７０．８，１６１．９，１４２．５，１２６．１，１１６．５，１００．０，９８．９，９８．９，９１．６，９０．３，７３．９，７２．４，７２．４，７１．６，７０．３，６９．７，６９．５，６８．４，６８．１，６３．７，６２．６，４６．８，４６．８，２２．０；^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ－２１７．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_２３Ｈ_３２ＦＮ_２Ｏ_１６［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値：６１１．１７３０／実測値：６１１．１７３２．

【0086】

【化55】

ｐ－トリル［５－アセトアミド－３，４，７，８，９－ペンタ－Ｏ－アセチル－５－デオキシ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－グルコ－ノン－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－１－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノシドＳ２４。出発物質６（１７４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、１当量）のピリジン（２ｍＬ）撹拌溶液に、Ａｃ_２Ｏ（１ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間激しく撹拌し、次いで高真空下で濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（１：２）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ２４を白色の粉末として得た（１６２ｍｇ、９０％）。Ｒ_ｆ＝０．４９（シリカゲル、アセトン：トルエン＝２：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．９４－７．９２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．８８－７．８７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４８－７．４４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．４０－７．３８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３５－７．２７（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２３－７．２０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１８－７．１６（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．０５－７．０３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．８０（ｄｄ，Ｊ＝１０．２。９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４４－５．４２（ｍ，２Ｈ），５．３５－５．２９（ｍ，３Ｈ），５．２５（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），４．６７－４．６１（ｍ，３Ｈ），４．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．２，１０．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２５－４．２２（ｍ，２Ｈ），４．０３－３．９７（ｍ，３Ｈ），３．９２－３．８９（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．２９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．００（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９４（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８９（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７１．０，１７０．５，１７０．３，１７０．０，１６９．３，１６８．５，１６８．０，１６５．７，１６５．２，１３８．４，１３７．６，１３３．１，１３２．９，１３２．５，１２９．８，１２９．７，１２９．７，１２９．５，１２９．２，１２９．１，１２８．３，１２８．２，１２８．０，１２７．４，１２７．２，９８．９，８６．５，７６．９，７５．５，７４．６，７４．３，７２．７，７１．６，７１．５，６８．５，６８．３，６６．９，６２．６，６２．５，５２．７，４８．４，２３．０，２１．１，２０．８，２０．７，２０．６，２０．６，２０．５；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５６Ｈ_６１ＮＯ_２１ＳＮａ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値：１１３８．３３４９／実測値：１１３８．３３５８．

【0087】

【化56】

ｐ－ニトロフェニル［５－アセトアミド－３，４，７，８，９－ペンタ－Ｏ－アセチル－５－デオキシ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－グルコ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－４－Ｏ－ベンジル－β－Ｄ－ガラクトピラノシドＳ２５。チオグリコシドＳ２４（１３２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１当量）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（２．５ｍＬ）撹拌溶液に、臭素（６．６７μＬ、０．１３ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で添加した。１０分間激しく撹拌した後、溶媒を真空中で除去し、残留物をトルエンと共に２回同時蒸発させて微量の水を除去した。得られた残留物を無水ＣＨ_３ＣＮ（２．５ｍＬ）に溶解し、４－ニトロフェノール（２８．０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、１．７当量）およびＡｇ_２Ｏ（１３７ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、５当量）で処理した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（１時間）、反応混合物を暗所においてＮ_２中で激しく撹拌した。反応が完了したら反応混合物をＥｔＯＡｃ（１２ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５ｍＬ）および塩水（３ｍＬ）で２回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空濃縮し、得られた残留物をアセトン／トルエン（３：５）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ２５を白色の粉末として得た（９９ｍｇ、７４％）。Ｒ_ｆ＝０．５１（シリカゲル、アセトン：トルエン＝２：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．１５－８．１３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．９５－７．９２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．５０－７．４４（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３６－７．３１（ｍ，６Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２４－７．１９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１７－７．１５（ｍ，３Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．１０（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５４（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．５２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），５．４８（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．２，７．２，３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．３９（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３１－５．２９（ｍ，２Ｈ），５．２３（ｄｄ，Ｊ＝９．６，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７１－４．６５（ｍ，２Ｈ），４．３２－４．３０（ｍ，３Ｈ），４．１９（ｄｄ，Ｊ＝７．２，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８８－３．８６（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．２４（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．１２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０１（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．９０（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８８（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７１．０，１７０．７（２Ｃ），１７０，０，１６９．６，１６８．５，１６８．３，１６５．７，１６５．３，１６１．７，１４２．７，１３７．９，１３３．３，１３３．２，１２９．９，１２９．７，１２９．３，１２８．９，１２８．４，１２８．３，１２８．２，１２８．０，１２７．６，１２５．７，１１６．８，９９．７，９８．４，７５．１，７４．１，７４．０，７３．９，７２．８，７１．６，７１．１，６９．７，６７．６，６７．０，６３．８，６３．３，５２．９，４８．４，２３．０，２０．９，２０．８，２０．７，２０．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_５５Ｈ_５９Ｎ_２Ｏ_２４［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値：１１３１．３４５２／実測値：１１３１．３４４０．

【0088】

【化57】

ｐ－ニトロフェニル［５－アセトアミド－３，４，７，８，９－ペンタ－Ｏ－アセチル－５－デオキシ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－グルコ－ノナ－２－ウロピラノソン酸メチル］－（２→６）－２，３－ジ－Ｏ－ベンゾイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシドＳ２６。化合物Ｓ２５（９１．０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（１．２ｍＬ）撹拌溶液に、Ｈ_２Ｏ（０．９ｍＬ）中のＮａＢｒＯ_３（５４．６ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、４．５当量）を添加し、その後にＨ_２Ｏ（１．８ｍＬ）中のＮａ_２Ｓ_２Ｏ_４（８５％、５６．０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、４当量）を室温でゆっくりと添加した。ＴＬＣが出発物質の消失を示すまで（１．５時間）、反応混合物を撹拌した。完了したら、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で希釈し、２０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（７ｍＬ）および塩水（４ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空濃縮した。得られた残留物をアセトン／トルエン（３：５）を溶離液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ２６を白色の粉末として得た（８１ｍｇ、９７％）。Ｒ_ｆ＝０．２３（シリカゲル、アセトン：トルエン＝２：３）；^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．１８－８．１６（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），８．００－７．９９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．９４－７．９３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．５１－７．４６（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３８－７．３２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．１５－７．１３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），６．０７（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４６－５．３４（ｍ，５Ｈ，Ｃ１－Ｈ_β），５．３０（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．２，１０．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄｄ，Ｊ＝６．６，６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），３．１７（ｂｒ，１Ｈ，－ＯＨ），２．１４（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．０２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），２．００（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８７（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．８５（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７１．１，１７１．０，１７０．４，１７０．０，１６９．９，１６８．８，１６７．９，１６５．８，１６５．２，１６１．７，１４２．９，１３３．４，１３３．３，１２９．９，１２９．７，１２９．３，１２９．１，１２８．４，１２８．４，１２５．８，１１６．９，９９．１，９８．９，７４．０，７３．９，７３．０，７１．１，７０．６，６９．２，６８．７，６７．２，６６．５，６３．０，６２．５，５３．０，４８．５，２３．０，２０．８，２０．７，２０．６，２０．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_４８Ｈ_５３Ｎ_２Ｏ_２４［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値：１０４１．２９８３／実測値：１０４１．２９７６．

【0089】

【化58】

ｐ－ニトロフェニル［５－アセトアミド－５－デオキシ－Ｄ－エリスロ－α－Ｌ－グルコ－ノナ－２－ウロピラノソネート］－（２→６）－β－Ｄ－ガラクトピラノシドＳ２７。化合物Ｓ２６（７５ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、１当量）のメタノール（５ｍＬ）溶液に、水（１ｍＬ）中のＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（３０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ、１０当量）を添加した。室温で１６時間撹拌した後、反応混合物をＩＲ－１２０で中和し、濾過し、濃縮した。得られた残留物を水を溶離液として用いる（ＢＩＯ－ＲＡＤ）Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ－２カラムクロマトグラフィにより精製して、化合物Ｓ２７を得た（４１ｍｇ、９４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ８．２９－８．２８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．２８－７．２７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．２０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｃ１－Ｈ_β），４．０９－４．０６（ｍ，２Ｈ），４．０１（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９２－３．７９（ｍ，６Ｈ），３．７１（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６４－３．６０（ｍ，２Ｈ），３．５３（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４９（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ１７４．８，１７３．０，１６１．９，１４２．５，１２６．１，１１６．４，９９．９，９８．１，７６．１，７３．９，７３．５，７２．４，７２．２，７１．５，７０．３，６８．４，６８．０，６３．０，６２．６，５０．７，２１．９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_２３Ｈ_３３Ｎ_２Ｏ_１７［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値：６０９．１７７４／実測値：６０９．１７７４．

【0090】

【化59】

ｐ－ニトロフェニル［５－アセトアミド－５－デオキシ－Ｄ－グリセロ－α－Ｄ－ガラクト－ノナ－２－ウロピラノシルオネート］－（２→６）－β－Ｄ－ガラクトピラノシド１。１５ｍＬのトリス緩衝液（ｐＨ７．０）中のｐＮＰ－β－Ｇａｌ（１．０ｍｍｏｌ）、シアル酸（１．２ｍｍｏｌ）、シチジン三リン酸（１．２ｍｍｏｌ）、ＣＭＰ－シアル酸合成酵素（ＣＳＳ、１２Ｕ）、ピロホスファターゼ（ＰＰＡ、１Ｕ）およびα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（ＳｉａＴ、１５Ｕ）を５ｍＭのＭｇＣｌ_２および５ｍＭのＭｎＣｌ_２と混合することにより、Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－Ｇａｌ－ｐＮＰ：Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－Ｇａｌ－ｐＮＰを合成した。加熱および遠心分離によるタンパク質の除去後に、生成物を水を溶離液として用いる（ＢＩＯ－ＲＡＤ）Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ－２カラムクロマトグラフィにより精製した。Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－Ｇａｌ－ｐＮＰを含有する画分を回収し、凍結乾燥して化合物１を得た（５０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ８．３３－８．３２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），７．３１－７．２９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｃ１－Ｈ_β），４．０６－４．０４（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９０－３．８６（ｍ，３Ｈ），３．８３（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８０－３．７６（ｍ，１Ｈ），３．７３－３．６９（ｍ，３Ｈ），３．６５－３．６２（ｍ，２Ｈ），３．５７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），２．７９（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ，－ＣＨ_３），１．６８（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，１２．０Ｈｚ，１Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ１７４．６，１７３．１，１６１．４，１４２．１，１２５．７，１１６．０，９９．８，９９．４，７３．６，７２．１，７１．９，７１．３，６９．８，６８．０，６７．７，６７．７，６２．５，６２．２，５１．４，３９．８，２１．６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）ｍ／ｅ：Ｃ_２３Ｈ_３３Ｎ_２Ｏ_１６［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値：５９３．１８２５／実測値：５９３．１８２５．

【0091】

実施例２：シアリダーゼ触媒加水分解に対する安定性およびシアリダーゼ阻害の分析^３１
材料：
ニホンコウジカビ（Ｇ５１６０）のβ－ガラクトシダーゼならびにコレラ菌（１１０８０７２５００１）およびウェルシュ菌（１１５８５８８６００１）由来のシアリダーゼをＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から受け取った。

【0092】

シアリダーゼのための酵素アッセイ：
このアッセイは、基質（０～２０ｍＭ）およびβ－ガラクトシダーゼ（１００ｍＵ）を含有する５０μＬの最終体積で９６ウェルプレートにおいて２連で３７℃で行った。２種類のシアリダーゼのためのアッセイ条件は以下のとおりである：ウェルシュ菌（１ｍＵ）、酢酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ）（ｐＨ５．０）およびＣａＣｌ_２（１０ｍＭ）；コレラ菌（２ｍＵ）、酢酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ）（ｐＨ５．５）、ＣａＣｌ_２（１０ｍＭ）およびＮａＣｌ（１５０ｍＭ）。これらの反応をウェルシュ菌では４０分間～２時間、コレラ菌では一晩行った。６５μＬのＣＡＰＳ緩衝液（Ｎ－シクロヘキシル－３－アミノプロパンスルホン酸、０．５Ｍ、ｐＨ１０．５）を添加して、このアッセイを止めた。形成されたｐ－ニトロフェノラートの量は、マイクロプレートリーダーを用いて反応混合物のＡ_{４０５ｎｍ}を測定することにより決定した。３種類の化合物（Ｎｅｕ５Ａｃ－α２、６－ＧａｌβｐＮＰ、３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－ＧａｌβｐＮＰおよび３ＯＨ^ｅｑ－Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－ＧａｌβｐＮＰ）を酵素のための基質として試験した。全ての３種類の化合物は、シアリダーゼの非存在下３７℃で１時間のインキュベーション後に２０ｍＭにおいてＡ_{４０５ｎｍ}のバックグラウンド吸光度を有する。３種類の化合物、すなわちＮｅｕ５Ａｃ－α２，６－ＧａｌβｐＮＰ、３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－ＧａｌβｐＮＰおよび３ＯＨ^ｅｑ－Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－ＧａｌβｐＮＰの吸光度はそれぞれ０．０４４、０．１２９および０．０７２であった。ｐＮＰの標準曲線は０．３５ｍＭのｐＮＰの段階２倍希釈により決定し、次いでｐＮＰの濃度に対してＡ_{４０５ｎｍ}をグラフ化することによりｐＮＰの標準曲線を得た。

【0093】

シアリダーゼのための阻害アッセイ：
当該アッセイは、様々な濃度（０～２０ｍＭ）の阻害剤の非存在または存在下で基質Ｎｅｕ５Ａｃ－α２，６－ＧａｌβｐＮＰ（０．６ｍＭ）、β－ガラクトシダーゼ（１００ｍＵ）およびシアリダーゼを含有する５０μＬの最終体積で９６ウェルプレートにおいて２連で３７℃で行った。反応をウェルシュ菌では４０分間～２時間、コレラ菌では一晩進行させた。ＣＡＰＳ緩衝液（６５ｕＬ、０．５Ｍ、ｐＨ１０．５）を添加することにより、このアッセイを止めた。形成されたｐ－ニトロフェノラートの量はマイクロプレートリーダーを用いて反応混合物のＡ_{４０５ｎｍ}を測定することにより決定した（図１）。

【0094】

実施例３：表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析によるＦｃγＲＩＩＩａへの結合に対する効果を研究するための３Ｆ^ａｘ－Ｎｅｕ５ＡｃおよびＮｅｕ５Ａｃにより修飾された均質なｍＡｂの調製
酵素の発現：
エンドグリコシダーゼＥｎｄｏ－Ｓ、Ｅｎｄｏ－Ｓ２、Ｅｎｄｏ－Ｓ２突然変異体（Ｄ１８４Ｑ）、およびバクテロイデス・フラジリスＮＣＴＣ９３４３由来のα－Ｌ－フコシダーゼを大腸菌において発現させ、Ｎｉ－ＮＴＡアガロースビーズを用いて酵素の精製を行った。

【0095】

モノ－ＧｌｃＮＡｃ－リツキシマブの調製：
以前に記載されているように^３２、トリス－ＨＣｌ緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．４、１．５ｍＬ）中のリツキシマブ（３．０ｍｇ、リツキサン（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ社）をＥｎｄｏ－Ｓ（１２０μｇ）、Ｅｎｄｏ－Ｓ２（２４０μｇ）およびＢｆＦｕｃＨ（４．５ｍｇ）と共に３７℃で２４時間インキュベートした。ＬＣ－ＭＳおよびＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は重鎖上のＮ－グリカンの完全な切断を示した。反応混合物をトリス－ＨＣｌ緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．４）により予め平衡化されたタンパク質Ａ－アガロース樹脂カラム（１ｍＬ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）によるアフィニティークロマトグラフィに供した。次いで、このカラムをトリス－ＨＣｌ緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．４、２０ｍＬ）で洗浄した。結合されたＩｇＧをグリシン－ＨＣｌ（１００ｍＭ、ｐＨ３．０、１０ｍＬ）により遊離し、溶出画分をトリス－ＨＣｌ緩衝液（１．０Ｍ、ｐＨ８．３）で直接中和した。当該抗体を含有する画分を１つにまとめ、遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心式フィルター、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、マサチューセッツ州ビルリカ）により濃縮してモノ－ＧｌｃＮＡｃリツキシマブ（２．４ｍｇ）を得た。生成物をトリプシン処理し、糖ペプチド、すなわちＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲ（ｍ／ｚ＝１３９１．５８）およびＥＥＱＹＮＳＴＹＲ（ｍ／ｚ＝１８７３．８８）をナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析して、モノ－ＧｌｃＮＡｃのグリコシル化パターンを確認した。

【0096】

グリカンオキサゾリンによるモノ－ＧｌｃＮＡｃリツキシマブのグリコシル基転移：
グリカンオキサゾリンを５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．４）中のＥｎｄｏ－Ｓ２Ｄ１８４Ｑおよびモノ－ＧｌｃＮＡｃリツキシマブ混合物に添加した。この溶液を３７℃で３０分間インキュベートした。次いで反応混合物をタンパク質－Ａアフィニティーカラム、その後にＣａｐｔｏ Ｑ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）のアニオン交換カラムで精製して所望の生成物を回収した。

【0097】

糖鎖工学的に操作されたハーセプチン抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ検出：
全てのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を試料中に存在する２－メルカプトエタノールと共に、ＭＯＰＳ緩衝液中のＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ（登録商標）４～１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて行った（図２）。

【0098】

糖鎖工学的に操作されたｍＡｂのＭＳ分光分析：
トリプシン処理した糖ペプチドの分析のために、高解像度および高質量精度ナノフローＬＣ－ＭＳ／ＭＳ実験を、ナノエレクトロスプレーイオン源（Ｎｅｗ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ社）、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ Ｓｅｒｉｅｓ二成分高速液体クロマトグラフィポンプ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カリフォルニア州パロアルト）、およびＦａｍｏｓオートサンプラ（ＬＣ Ｐａｃｋｉｎｇｓ、カリフォルニア州サンフランシスコ）を備えたＬＴＱＦＴ Ｕｌｔｒａ（線形四重極イオントラップフーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴）質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ社、カリフォルニア州サンノゼ）により行った。消化溶液（６μＬ）を自己充填プレカラム（１５０μｍ（内径）×２０ｍｍ、５μｍ、１００Å）に１０μＬ／分の流速で注入した。３００ｎＬ／分の流速で動作する移動相Ａとして０．１％ギ酸／水および移動相Ｂとして０．１％ギ酸／８０％アセトニトリルを用いる自己充填逆相Ｃ１８ナノカラム（７５μｍ（内径）×３００ｍｍ、５μｍ、１００Å）により、クロマトグラフ分離を行った。フルスキャンＭＳ条件：質量範囲ｍ／ｚ３２０～２０００、解像度ｍ／ｚ４００における１００，０００の調査。ＬＴＱによりＭＳ２のために１０種の最も強力なイオンを連続的に単離した。エレクトロスプレー電圧を１．８ｋＶに維持し、キャピラリー温度を２００℃に設定した（図３および表３）。

【0099】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析
全てのＳＰＲ実験を、泳動用緩衝液としてＨＢＳ－ＥＰ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０）を用いて２５℃で、ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００による単一サイクル速度論的方法を用いて行った。ＦｃγＲＩＩＩａをＨＥＫ－２９３細胞にトランスフェクトして、分析物として複合型グリコシル化組換えタンパク質を発現させた。ＦｃγＲＩＩＩａ受容体へのリツキシマブ結合の分析のために、ヒトＦａｂ捕捉キット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）内の抗ヒトＦａｂ抗体をＣＭ５センサチップの参照および活性チャネルの両方に固定し、次いでＦｃγＲＩＩＩａ分析物の段階希釈物（２，６－ＦｌｕｏＳＣＴおよび２，６－ＳＣＴのために２．５、５、１０、２０、４０ｎＭ；市販のリツキシマブのために８、２４、７２、２１６、６４８ｎＭ）と、２４０秒間の結合およびその後の４２０秒の解離時間にわたって３０μＬ／分で相互作用させるために、リツキシマブを活性チャネル上に捕捉した。リツキシマブデータをバックグラウンド除去のための二重参照により処理した。リツキシマブのデータをＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）において１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデルに当て嵌めて、反応速度／親和定数を得た（表４）。分析対象の抗体をヒトＦａｂ捕捉キットにより捕捉し、単一サイクル速度論的方法により検出した。

【表3】

【表4】

【0100】

実施例４：化合物４および１８の相対反応性値（ＲＲＶ）
以前に報告されている実験手順^３４に従ってＲＲＶを３連で測定した。二糖ドナー４のＲＲＶ（２０５３）を競合参照ドナーＳ３４^２３（ＲＲＶ＝１７９１）に対して測定した。二糖ドナー１８のＲＲＶ（５３７）を競合参照ドナーＳ^２３（ＲＲＶ＝２８６）に対して測定した。

【化60】

【0101】

他の実施形態
本明細書に開示されている特徴の全てをあらゆる組み合わせで１つにまとめてもよい。本明細書に開示されている各特徴を同じ、同等もしくは同様の目的を果たす他の特徴で置き換えてもよい。従って明示的に別段の定めをした場合を除き、開示されている各特徴は一般的な一連の同等もしくは同様の特徴の例にすぎない。

【0102】

さらに上記説明から、当業者であればその趣旨および範囲から逸脱することなく本発明の必須の特性を容易に確認することができ、かつそれを様々な使用および条件に適合させるために本発明の様々な変更および修正をなすことができる。従って他の実施形態も特許請求の範囲内である。

【0103】

参考文献
(1) Varki, A. Sialic acids in human health and disease. Trends Mol. Med. 2008, 14, 351.
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【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】