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特許7623551アロエベラの葉の乳酸菌発酵物を含有する皮膚外用剤およびその製造方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B1)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-01-20
(45)【発行日】2025-01-28
(54)【発明の名称】アロエベラの葉の乳酸菌発酵物を含有する皮膚外用剤およびその製造方法
(51)【国際特許分類】
A61K 8/9794 20170101AFI20250121BHJP
A61K 8/99 20170101ALI20250121BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20250121BHJP
A61K 36/886 20060101ALI20250121BHJP
A61K 35/747 20150101ALI20250121BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20250121BHJP
A61P 17/16 20060101ALI20250121BHJP
【ＦＩ】
A61K8/9794
A61K8/99
A61Q19/00
A61K36/886
A61K35/747
A61P17/00
A61P17/16
A61P17/00 101
【請求項の数】
5
(21)【出願番号】P 2024549194
(86)(22)【出願日】2024-04-23
(86)【国際出願番号】 JP2024015847
【審査請求日】2024-08-20
(31)【優先権主張番号】P 2023070742
(32)【優先日】2023-04-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2023218768
(32)【優先日】2023-12-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-03877
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】000119472
【氏名又は名称】一丸ファルコス株式会社
(73)【特許権者】
【識別番号】000208086
【氏名又は名称】大洋香料株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110003557
【氏名又は名称】弁理士法人レクシード・テック
(72)【発明者】
【氏名】藤田 幸子
(72)【発明者】
【氏名】藤澤 宗隆
(72)【発明者】
【氏名】▲高▼橋 良知
【審査官】小久保 敦規
(56)【参考文献】
【文献】中国特許出願公開第１１３３９８０４５（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１１３８５５６０３（ＣＮ，Ａ）
【文献】韓国公開特許第１０－２０１９－００７９５１４（ＫＲ，Ａ）
【文献】RO, Hyang Seon, et al.，Enhancement of the Anti-Skin Wrinkling Effects of Aloe arborescens Miller Extracts Associated with L，Evidence-based Complementary and Alternative Medicine，Vol. 2020，Article ID 2743594 (2020).
【文献】JIANG, Meixiu, et al.，Evaluation of the antioxidative, antibacterial, and anti-inflammatory effects of the Aloe fermentati，Mediators of Inflammation，Vol. 2016，2945650/1-2945650/8 (2016).
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ８／００ － ８／９９
Ａ６１Ｑ １／００ － ９０／００
Ａ６１Ｋ ３５／００ － ３５／７６８
Ａ６１Ｋ ３６／００ － ３６／９０６８
Ａ６１Ｐ １／００ － ４３／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０／ＪＳＴＣｈｉｎａ（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
アロエベラの葉の乳酸菌発酵物を含有する皮膚外用剤であって、前記乳酸菌が、ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）である、皮膚外用剤。
【請求項2】
ヒアルロン酸産生促進活性を有する、請求項１に記載の皮膚外用剤。
【請求項3】
皮膚の乾燥を予防及び／または改善するための、請求項１に記載の皮膚外用剤。
【請求項4】
皮膚常在菌叢のバランスを改善するための、請求項１に記載の皮膚外用剤。
【請求項5】
アロエベラの葉の液汁から生産される乳酸菌発酵物を含有する皮膚外用剤の製造方法で、前記乳酸菌発酵物を生産する工程は、
前記液汁をラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）により発酵させる発酵工程を含む、皮膚外用剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【クロスリファレンス】
【0001】
本出願は、日本国において、２０２３年４月２４日に出願された特願２０２３－０７０７４２号および２０２３年１２月２６日に出願された特願２０２３－２１８７６８号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容はすべて参照によりそのまま本明細書に援用される。
【技術分野】
【0002】
本発明は、アロエベラの葉の乳酸菌発酵物を含有する皮膚外用剤およびその製造方法、などに関する。
【背景技術】
【0003】
乳酸菌発酵物は、皮膚のしわ及び／又はたるみの改善効果を示すことから、化粧水や基礎化粧品等において一般的に配合されている。その中でも、植物のアロエを用いたものとして、種々の乳酸菌によるアロエ発酵生成物を用いた保湿剤（特許文献１）や、アロエ乳酸菌発酵物を含んだ洗浄用化粧料（特許文献２）が報告されている。しかし、これらは、乳酸菌ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）について、標準株等の既存株を用いていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【文献】特許第３７９５０１１号公報
【文献】特開２０２２－１６４４０６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本発明者らは、鋭意検討の結果、ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の新規菌株であるＴＹ－６１０株を見出した。そこで、当該株を用いて、アロエベラの葉の液汁の乳酸菌発酵物を有効成分とする、新規の皮膚外用剤、およびその製造方法を提供すること、などを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
（１）上記目的を達成するための一実施形態に係る皮膚外用剤は、
アロエベラの葉の乳酸菌発酵物を含有し、
前記乳酸菌は、ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）である。
（２）別の実施形態に係る皮膚外用剤において、好ましくは、ヒアルロン酸産生促進活性を有する。
（３）別の実施形態に係る皮膚外用剤において、好ましくは、皮膚の乾燥を予防及び／または改善する。
（４）別の実施形態に係る皮膚外用剤において、好ましくは、皮膚常在菌叢のバランスを改善する。
（５）上記目的を達成するための一実施形態に係るアロエベラの葉の液汁から生産される乳酸菌発酵物を含有する皮膚外用剤の製造方法は、
乳酸菌発酵物を生産する工程において、
前記液汁をラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）により発酵させる発酵工程と、を含む。
当該乳酸菌発酵物を生産する工程は、好ましくは、
前記液汁からアロインを除去するアロイン除去工程と、
前記アロイン除去工程後の前記液汁をラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）により発酵させる発酵工程と、を含む。
アロエベラの葉の乳酸菌発酵物を含有し、
前記乳酸菌は、ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）である。
（２）別の実施形態に係る皮膚外用剤において、好ましくは、ヒアルロン酸産生促進活性を有する。
（３）別の実施形態に係る皮膚外用剤において、好ましくは、皮膚の乾燥を予防及び／または改善する。
（４）別の実施形態に係る皮膚外用剤において、好ましくは、皮膚常在菌叢のバランスを改善する。
（５）上記目的を達成するための一実施形態に係るアロエベラの葉の液汁から生産される乳酸菌発酵物を含有する皮膚外用剤の製造方法は、
乳酸菌発酵物を生産する工程において、
前記液汁をラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）により発酵させる発酵工程と、を含む。
当該乳酸菌発酵物を生産する工程は、好ましくは、
前記液汁からアロインを除去するアロイン除去工程と、
前記アロイン除去工程後の前記液汁をラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）により発酵させる発酵工程と、を含む。
【発明の効果】
【0007】
本発明によれば、ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の新規菌株であるＴＹ－６１０株を用いることで、アロエベラの葉の液汁の乳酸菌発酵物を有効成分とする、新規の皮膚外用剤、およびその製造方法を提供すること、などができる。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【発明を実施するための形態】
【0009】
次に、本発明の各実施形態について、説明する。なお、以下に説明する各実施形態は、特許請求の範囲に係る発明を限定するものではなく、また、各実施形態の中で説明されている諸要素及びその組み合わせの全てが本発明の解決手段に必須であるとは限らない。
【0010】
（アロエベラの葉）
本発明に用いられるアロエベラ（Ａｌｏｅ ｖｅｒａ）の葉は、厚いクチクラ層で構成される外皮と、外皮の内側に存在する葉肉から構成される。本発明において「アロエベラの葉」は、例えば生のまま又は乾燥物でもよく、粉砕して用いることもできる。本発明におけるアロエベラの葉の原料としての使用量は、特に限定されないが、発酵工程の際に用いられる原料の全重量のうち、０．０１％以上が好ましく、０．１％以上がより好ましく、１％以上が特に好ましい。
本発明に用いられるアロエベラ（Ａｌｏｅ ｖｅｒａ）の葉は、厚いクチクラ層で構成される外皮と、外皮の内側に存在する葉肉から構成される。本発明において「アロエベラの葉」は、例えば生のまま又は乾燥物でもよく、粉砕して用いることもできる。本発明におけるアロエベラの葉の原料としての使用量は、特に限定されないが、発酵工程の際に用いられる原料の全重量のうち、０．０１％以上が好ましく、０．１％以上がより好ましく、１％以上が特に好ましい。
【0011】
（ＴＹ－６１０株）
本発明において、アロエベラの葉の乳酸菌発酵には、ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（以降、単にＴＹ－６１０株と記載することもある。）を用いる。ＴＹ－６１０株は、キャベツの漬物から単離された、ラクチプランチバチルス・プランタラムの新規菌株である。ＴＹ－６１０株は、標準株と異なる性質として、曳糸性が見られることから、粘質多糖を生産し、菌体外に放出していると考えられる。ＴＹ－６１０株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、２０２３年４月５日付で受託番号ＮＩＴＥ Ｐ―０３８７７として寄託されている。その後、ＴＹ－６１０株は、国際寄託当局である、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に対して、国内寄託（原寄託日：２０２３年４月５日）から、２０２４年３月１３日にブダペスト条約に基づく国際寄託へ移管請求され、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８７７を付与されている。
本発明において、アロエベラの葉の乳酸菌発酵には、ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（以降、単にＴＹ－６１０株と記載することもある。）を用いる。ＴＹ－６１０株は、キャベツの漬物から単離された、ラクチプランチバチルス・プランタラムの新規菌株である。ＴＹ－６１０株は、標準株と異なる性質として、曳糸性が見られることから、粘質多糖を生産し、菌体外に放出していると考えられる。ＴＹ－６１０株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、２０２３年４月５日付で受託番号ＮＩＴＥ Ｐ―０３８７７として寄託されている。その後、ＴＹ－６１０株は、国際寄託当局である、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に対して、国内寄託（原寄託日：２０２３年４月５日）から、２０２４年３月１３日にブダペスト条約に基づく国際寄託へ移管請求され、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８７７を付与されている。
【0012】
（乳酸菌発酵物）
本発明において、「乳酸菌発酵物」とは、アロエベラの葉を上記ＴＹ－６１０株で発酵させたものをいう。乳酸菌発酵物の形態は、特に限定されず、液体でも、パウダー状などの固体でも良く、本発明の使用形態によって任意に選択される。また、本発明に係る乳酸菌発酵物は、防腐剤・抗菌剤・キレート剤などの添加物を含有していてもよい。防腐剤・抗菌剤・キレート剤としては、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン等のヒドロキシ安息香酸及びその塩若しくはそのエステル；サリチル酸；安息香酸ナトリウム；フェノキシエタノール；１，２－ペンタンジオール、１，２－ヘキサンジオール等の１，２－ジオール；メチルクロロイソチアゾリノン、メチルイソチアゾリノン等のイソチアゾリンオン誘導体；イミダゾリニウムウレア；デヒドロ酢酸及びその塩；フェノール類；トリクロサン等のハロゲン化ビスフェノール類、酸アミド類、四級アンモニウム塩類；トリクロロカルバニド、ジンクピリチオン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ソルビン酸、クロルヘキシジン、グルコン酸クロルヘキシジン、ハロカルバン、ヘキサクロロフェン、ヒノキチオール；フェノール、イソプロピルフェノール、クレゾール、チモール、パラクロロフェノール、フェニルフェノール、フェニルフェノールナトリウム等のその他フェノール類；フェニルエチルアルコール、感光素類、抗菌性ゼオライト、銀イオン；ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ２Ｎａ、ＥＤＴＡ３Ｎａ、ＥＤＴＡ４Ｎａ等のエデト酸塩（エチレンジアミン四酢酸塩）；ＨＥＤＴＡ３Ｎａ等のヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸塩；ペンテト酸塩（ジエチレントリアミン五酢酸塩）；フィチン酸；エチドロン酸等のホスホン酸及びそのナトリウム塩等の塩類；シュウ酸ナトリウム；ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸等のポリポリアミノ酸類；ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、リン酸；クエン酸ナトリウム、クエン酸、アラニン、ジヒドロキシエチルグリシン、グルコン酸、アスコルビン酸、コハク酸、酒石酸等が挙げられる。乳酸菌発酵物における添加物の含有量は、特に限定されないが、当該乳酸菌発酵物の全重量に対して、１％以下が好ましく、０．５％以下がより好ましく、０．１％以下が特に好ましい。
本発明において、「乳酸菌発酵物」とは、アロエベラの葉を上記ＴＹ－６１０株で発酵させたものをいう。乳酸菌発酵物の形態は、特に限定されず、液体でも、パウダー状などの固体でも良く、本発明の使用形態によって任意に選択される。また、本発明に係る乳酸菌発酵物は、防腐剤・抗菌剤・キレート剤などの添加物を含有していてもよい。防腐剤・抗菌剤・キレート剤としては、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン等のヒドロキシ安息香酸及びその塩若しくはそのエステル；サリチル酸；安息香酸ナトリウム；フェノキシエタノール；１，２－ペンタンジオール、１，２－ヘキサンジオール等の１，２－ジオール；メチルクロロイソチアゾリノン、メチルイソチアゾリノン等のイソチアゾリンオン誘導体；イミダゾリニウムウレア；デヒドロ酢酸及びその塩；フェノール類；トリクロサン等のハロゲン化ビスフェノール類、酸アミド類、四級アンモニウム塩類；トリクロロカルバニド、ジンクピリチオン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ソルビン酸、クロルヘキシジン、グルコン酸クロルヘキシジン、ハロカルバン、ヘキサクロロフェン、ヒノキチオール；フェノール、イソプロピルフェノール、クレゾール、チモール、パラクロロフェノール、フェニルフェノール、フェニルフェノールナトリウム等のその他フェノール類；フェニルエチルアルコール、感光素類、抗菌性ゼオライト、銀イオン；ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ２Ｎａ、ＥＤＴＡ３Ｎａ、ＥＤＴＡ４Ｎａ等のエデト酸塩（エチレンジアミン四酢酸塩）；ＨＥＤＴＡ３Ｎａ等のヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸塩；ペンテト酸塩（ジエチレントリアミン五酢酸塩）；フィチン酸；エチドロン酸等のホスホン酸及びそのナトリウム塩等の塩類；シュウ酸ナトリウム；ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸等のポリポリアミノ酸類；ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、リン酸；クエン酸ナトリウム、クエン酸、アラニン、ジヒドロキシエチルグリシン、グルコン酸、アスコルビン酸、コハク酸、酒石酸等が挙げられる。乳酸菌発酵物における添加物の含有量は、特に限定されないが、当該乳酸菌発酵物の全重量に対して、１％以下が好ましく、０．５％以下がより好ましく、０．１％以下が特に好ましい。
【0013】
（皮膚外用剤の形態）
本発明による皮膚外用剤は、アンプル、カプセル、粉末、顆粒、液体、ゲル、気泡、エマルジョン、シート、ミスト、スプレー剤等利用上の適当な形態の１）医薬品類、２）医薬部外品類、３）局所用又は全身用の皮膚外用剤類（例えば、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パック等の基礎化粧料、固形石鹸、液体ソープ、ハンドウォッシュ等の洗顔料や皮膚洗浄料、マッサージ用剤、クレンジング用剤、除毛剤、脱毛剤、髭剃り処理料、アフターシェーブローション、プレシェーブローション、シェービングクリーム、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ等のメークアップ化粧料、香水類、美爪剤、美爪エナメル、美爪エナメル除去剤、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、貼付剤、エアゾール剤等）、４）頭皮・頭髪に適用する薬用又は／及び化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、ヘアートリートメント剤、プレヘアートリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛・養毛料、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、エアゾール剤等）、５）浴湯に投じて使用する浴用剤、６）その他、腋臭防止剤や消臭剤、制汗剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュ等が挙げられる。
本発明による皮膚外用剤は、アンプル、カプセル、粉末、顆粒、液体、ゲル、気泡、エマルジョン、シート、ミスト、スプレー剤等利用上の適当な形態の１）医薬品類、２）医薬部外品類、３）局所用又は全身用の皮膚外用剤類（例えば、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パック等の基礎化粧料、固形石鹸、液体ソープ、ハンドウォッシュ等の洗顔料や皮膚洗浄料、マッサージ用剤、クレンジング用剤、除毛剤、脱毛剤、髭剃り処理料、アフターシェーブローション、プレシェーブローション、シェービングクリーム、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ等のメークアップ化粧料、香水類、美爪剤、美爪エナメル、美爪エナメル除去剤、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、貼付剤、エアゾール剤等）、４）頭皮・頭髪に適用する薬用又は／及び化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、ヘアートリートメント剤、プレヘアートリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛・養毛料、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、エアゾール剤等）、５）浴湯に投じて使用する浴用剤、６）その他、腋臭防止剤や消臭剤、制汗剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュ等が挙げられる。
【0014】
（皮膚外用剤の構成成分）
また、このような剤の製造には、必要に応じて、本発明の効果を損ねない範囲で以下に例示する成分や添加剤を任意に選択・併用することができる。これらの処方系中への配合量は、特に規定するものではないが、通常、０．０００１～５０％程度が好ましいと考えられる。
また、このような剤の製造には、必要に応じて、本発明の効果を損ねない範囲で以下に例示する成分や添加剤を任意に選択・併用することができる。これらの処方系中への配合量は、特に規定するものではないが、通常、０．０００１～５０％程度が好ましいと考えられる。
【0015】
（１）各種油脂類
アボカド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、シア脂、液状シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、スクワレン、スクワラン、プリスタン又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）等。
アボカド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、シア脂、液状シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、スクワレン、スクワラン、プリスタン又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）等。
【0016】
（２）ロウ類
ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス等。
ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス等。
【0017】
（３）鉱物油
流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス等。
流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス等。
【0018】
（４）脂肪酸類
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸等の天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、２－エチルブタン酸、イソペンタン酸、２－メチルペンタン酸、２－エチルヘキサン酸、イソペンタン酸等の合成脂肪酸。
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸等の天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、２－エチルブタン酸、イソペンタン酸、２－メチルペンタン酸、２－エチルヘキサン酸、イソペンタン酸等の合成脂肪酸。
【0019】
（５）アルコール類
エタノール、イソプロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、フェノキシエタノール等の天然アルコール、２－ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２－オクチルドデカノール等の合成アルコール。
エタノール、イソプロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、フェノキシエタノール等の天然アルコール、２－ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２－オクチルドデカノール等の合成アルコール。
【0020】
（６）多価アルコール類
酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１、３－ブチレングリコール、ペンチルグリコール、グリセリン、ペンタエリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、ガラクチトール、ソルビトール、マンニトール、ラクチトール、マルチトール等。
酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１、３－ブチレングリコール、ペンチルグリコール、グリセリン、ペンタエリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、ガラクチトール、ソルビトール、マンニトール、ラクチトール、マルチトール等。
【0021】
（７）エステル類
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコール等。
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコール等。
【0022】
（８）金属セッケン類
ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛等。
ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛等。
【0023】
（９）ガム質、糖類又は水溶性高分子化合物
アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイド等のアルキレン（Ｃ２～Ｃ４）オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル（Ｃ２～Ｃ４）キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミン等。
アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイド等のアルキレン（Ｃ２～Ｃ４）オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル（Ｃ２～Ｃ４）キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミン等。
【0024】
（１０）界面活性剤
アニオン界面活性剤（アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤：カルボン酸型両性界面活性剤（アミノ型、ベタイン型）、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤）等。
アニオン界面活性剤（アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤：カルボン酸型両性界面活性剤（アミノ型、ベタイン型）、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤）等。
【0025】
（１１）各種ビタミン類
ビタミンＡ群：レチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群：チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ群：ビタミンＣ酸又はその誘導体、ビタミンＤ群：エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群：ビタミンＥ又はその誘導体、ユビキノン類、ビタミンＫ群：フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）、その他、必須脂肪酸（ビタミンＦ）、カルニチン、フェルラ酸、γ－オリザノール、オロット酸、ビタミンＰ類（ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン）、ビタミンＵ等。
ビタミンＡ群：レチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群：チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ群：ビタミンＣ酸又はその誘導体、ビタミンＤ群：エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群：ビタミンＥ又はその誘導体、ユビキノン類、ビタミンＫ群：フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）、その他、必須脂肪酸（ビタミンＦ）、カルニチン、フェルラ酸、γ－オリザノール、オロット酸、ビタミンＰ類（ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン）、ビタミンＵ等。
【0026】
（１２）各種アミノ酸類
バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等や、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体等。
バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等や、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体等。
【0027】
（１３）植物又は動物系原料由来の種々の添加物
これらは、添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工（例えば、粉砕、製粉、洗浄、加水分解、醗酵、精製、圧搾、抽出、分画、ろ過、乾燥、粉末化、造粒、溶解、滅菌、ｐＨ調整、脱臭、脱色等を任意に選択、組み合わせた処理）を行い、各種の素材から任意に選択して供すれば良い。
これらは、添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工（例えば、粉砕、製粉、洗浄、加水分解、醗酵、精製、圧搾、抽出、分画、ろ過、乾燥、粉末化、造粒、溶解、滅菌、ｐＨ調整、脱臭、脱色等を任意に選択、組み合わせた処理）を行い、各種の素材から任意に選択して供すれば良い。
【0028】
当該皮膚外用剤における乳酸菌発酵物の含有量の上限は、特に限定されるものではなく、例えば、皮膚外用剤の全重量の５０質量％であってもよく、１０質量％であってもよく、５質量％であってもよく、１質量％であってもよい。また、当該皮膚外用剤における乳酸菌発酵物の含有量の下限は、特に限定されるものではないが、皮膚外用剤の全重量の０．００１質量％が好ましく、０．０１質量％がより好ましく、０．０５質量％がさらに好ましく、０．１質量％が特に好ましい。
【0029】
（ヒアルロン酸産生促進活性）
本発明において、「ヒアルロン酸産生促進」とは皮膚においてヒアルロン酸産生を促進させることをいい、「ヒアルロン酸産生促進活性」とは上記のヒアルロン酸産生促進を引き起こす活性をいう。
本発明において、「ヒアルロン酸産生促進」とは皮膚においてヒアルロン酸産生を促進させることをいい、「ヒアルロン酸産生促進活性」とは上記のヒアルロン酸産生促進を引き起こす活性をいう。
【0030】
（皮膚常在菌叢のバランス改善）
本発明において、「皮膚常在菌」とは、ヒトの表皮、頭皮、粘膜等に存在する微生物のうち、多くの人が保有するものをいう。ヒトの皮膚常在菌は、善玉菌と悪玉菌との二種類に大別される。善玉菌とは、皮膚に有用な働きをするものをいう。善玉菌としては、例えば、表皮ブドウ球菌が挙げられる。表皮ブドウ球菌は、皮脂を脂肪酸とグリセリンとに分解することで、皮膚を弱酸性に保っている。一方、悪玉菌とは、皮膚に有害な働きをするものをいう。悪玉菌としては、例えば、黄色ブドウ球菌が挙げられる。黄色ブドウ球菌は、アトピー性皮膚炎などの皮膚疾患の原因となる。本発明において、「皮膚常在菌叢のバランス改善」は、上記の皮膚常在菌のうち、善玉菌の増殖を阻害せず、もしくは促進すること、及び／または悪玉菌の増殖を阻害することであるが、好ましくは、表皮ブドウ球菌の増殖を促進すること、及び／または黄色ブドウ球菌の増殖を抑制すること、である。
本発明において、「皮膚常在菌」とは、ヒトの表皮、頭皮、粘膜等に存在する微生物のうち、多くの人が保有するものをいう。ヒトの皮膚常在菌は、善玉菌と悪玉菌との二種類に大別される。善玉菌とは、皮膚に有用な働きをするものをいう。善玉菌としては、例えば、表皮ブドウ球菌が挙げられる。表皮ブドウ球菌は、皮脂を脂肪酸とグリセリンとに分解することで、皮膚を弱酸性に保っている。一方、悪玉菌とは、皮膚に有害な働きをするものをいう。悪玉菌としては、例えば、黄色ブドウ球菌が挙げられる。黄色ブドウ球菌は、アトピー性皮膚炎などの皮膚疾患の原因となる。本発明において、「皮膚常在菌叢のバランス改善」は、上記の皮膚常在菌のうち、善玉菌の増殖を阻害せず、もしくは促進すること、及び／または悪玉菌の増殖を阻害することであるが、好ましくは、表皮ブドウ球菌の増殖を促進すること、及び／または黄色ブドウ球菌の増殖を抑制すること、である。
【0031】
（皮膚の乾燥）
本発明において、「皮膚の乾燥」は、皮膚の角層から水分が失われる状態である。角層から水分が失われると、皮膚のバリア機能が低下し、外部刺激の侵入が容易となる。外部刺激の侵入に伴い、炎症性サイトカインが産生されると、炎症が誘発され、かゆみや赤みをもたらす。患部をかきむしる等すると湿疹ができ、皮膚のターンオーバーの期間が短くなる。それに伴い、保湿機能等が未熟な角層細胞が増加することで、さらに皮膚が乾燥しやすくなる。炎症性サイトカインとしては、例えば、表皮バリア機能の低下を伴い肌荒れの一因となるＩＬ－１α、赤みを誘発するＩＬ－６などが挙げられる。本発明において、「皮膚の乾燥を予防及び／または改善する」とは、上述した炎症性サイトカインの産生を抑制することをいう。産生を抑制する炎症性サイトカインの種類は特に限定されないが、好ましくは、ＩＬ－１α及び／またはＩＬ－６である。
本発明において、「皮膚の乾燥」は、皮膚の角層から水分が失われる状態である。角層から水分が失われると、皮膚のバリア機能が低下し、外部刺激の侵入が容易となる。外部刺激の侵入に伴い、炎症性サイトカインが産生されると、炎症が誘発され、かゆみや赤みをもたらす。患部をかきむしる等すると湿疹ができ、皮膚のターンオーバーの期間が短くなる。それに伴い、保湿機能等が未熟な角層細胞が増加することで、さらに皮膚が乾燥しやすくなる。炎症性サイトカインとしては、例えば、表皮バリア機能の低下を伴い肌荒れの一因となるＩＬ－１α、赤みを誘発するＩＬ－６などが挙げられる。本発明において、「皮膚の乾燥を予防及び／または改善する」とは、上述した炎症性サイトカインの産生を抑制することをいう。産生を抑制する炎症性サイトカインの種類は特に限定されないが、好ましくは、ＩＬ－１α及び／またはＩＬ－６である。
【0032】
本発明の他の側面では、皮膚外用剤の製造方法を提供する。
【0033】
（アロイン除去工程）
アロインは、アロエベラ葉の外皮層に含まれ、苦みおよび瀉下活性を有する薬効成分である。アロインは、通常、化粧品の製造工程においては除去される。本発明において、皮膚外用剤の製造方法は、好ましくはアロイン除去工程を含む。当該アロイン除去工程は、アロインを除去可能であれば限定されず、活性炭への吸着などの公知の方法を任意に用いることができる。
アロインは、アロエベラ葉の外皮層に含まれ、苦みおよび瀉下活性を有する薬効成分である。アロインは、通常、化粧品の製造工程においては除去される。本発明において、皮膚外用剤の製造方法は、好ましくはアロイン除去工程を含む。当該アロイン除去工程は、アロインを除去可能であれば限定されず、活性炭への吸着などの公知の方法を任意に用いることができる。
【0034】
（発酵工程）
以下、本発明における発酵工程について、詳細に説明する。
以下、本発明における発酵工程について、詳細に説明する。
【0035】
本発明において、発酵工程は、アロイン除去工程後のアロエベラの葉の液汁成分と、ＴＹ－６１０株とを混合して行われる。アロイン除去工程後のアロエベラの葉の液汁成分は、後述の実施例においてはパウダー状だが、これに限定されず、例えば液体でもよい。当該液汁成分は、発酵媒体に懸濁または添加されたのちに発酵工程に供される。発酵媒体は、当該液汁成分に対して適当な量となるよう、水または水と低級アルコール類（メタノール、エタノール、プロパノールなど）もしくはグリコール類（エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、グリセリンなど）との混液等が用いられる。発酵媒体中にはグルコース、フルクトース、スクロース、砂糖、グラニュ糖、上白糖などの糖類を添加してもよい。また、発酵媒体中には酵母エキスを添加してもよい。
【0036】
当該液汁成分の懸濁液は、発酵工程に供する前に、殺菌を行って発酵の障害となる雑菌を除去される。この場合、殺菌除去方法としては、発酵素材を予め殺菌用エタノール等で洗浄殺菌した上無菌水等の無菌媒体に懸濁する方法を用いてもよく、又発酵素材を媒体に懸濁した後、懸濁液を加熱殺菌する方法を用いてもよい。加熱殺菌法としては、懸濁液を１２０～１３０℃で１０～２０分間加熱するオートクレーブ殺菌法や、懸濁液を８０～９０℃に６０～１２０分間保持することを１日１回２～３日間繰り返す間断殺菌法が、一般に用いられる。
【0037】
発酵は、加熱殺菌後の発酵媒体に、ＴＹ－６１０株を含む培地を添加して行う。発酵に要する時間は、特に限定されないが、１２～３６時間が好ましく、１５～３０時間がより好ましく、１８～２４時間が特に好ましい。また、発酵時の温度条件は、１５～３７℃が好ましく、２０～３５℃がより好ましく、２５～３２℃が特に好ましい。発酵終了後、ＴＹ－６１０株の菌体を除去するが、菌体の除去方法は、特に限定されず、公知の方法、例えば遠心分離、濾過などを用いることができる。乳酸菌発酵物の糖度（Ｂｒｉｘ）は、特に限定されないが、０．１～２０°が好ましく、０．５～１５°がより好ましく、１～１０°が特に好ましい。
【0038】
菌体除去後の乳酸菌発酵物には、防腐剤を加えてもよい。ここで、防腐剤は、上述した皮膚外用剤に添加される防腐剤であれば特に限定されない。しかし、このような防腐剤は、例えば皮膚外用剤に添加したときに皮膚刺激やべたつきを生じさせる可能性があるため、できるだけ使用量の低減が望まれている。したがって、防腐剤を添加する場合の下限濃度には制限がなく、０質量％を超えればよい。上限濃度は１質量％であり、０．５質量％が好ましく、０．１質量％がさらに好ましい。これらの低濃度で防腐作用を有する防腐剤としては、例えば、パラベン類や安息香酸及びその塩などが好ましく、さらに好ましくは安息香酸ナトリウム、である。
【0039】
懸濁液とＴＹ－６１０株を含む培地とを含む混合液（以下、単に混合液と記載。）の発酵前のｐＨは、約４～５が好ましく、約４．５～５がより好ましく、約４．７が特に好ましい。発酵後のｐＨは、約３～４が好ましく、約３．５～４がより好ましく、約３．７が特に好ましい。また、混合液の発酵前の酸度は、乳酸換算％で約０．２～０．３が好ましく、約０．２１がより好ましい。混合液の発酵後の酸度は、乳酸換算％で約０．７～０．８が好ましく、約０．７６がより好ましい。
【0040】
上記の発酵工程で生産された乳酸菌発酵物を、皮膚外用剤の形態で提供する場合は、例えば、当該乳酸菌発酵物に加えて、薬学的又は化粧品学的に許容される担体（水、油性成分等）と共に提供することができる。さらに、必要に応じて、例えば、上述した通常使用しうる成分や添加物を加え、常法により所望の形態に調製すればよい。
【0041】
次に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に何ら制約されるものではない。なお、以下の実施例において、各種成分の添加量を示す数値の単位％は、質量％を意味する。
【実施例】
【0042】
以下、試験例で挙げる実験で用いた実験材料は次の通りである。
・ヒト表皮角化細胞：正常ヒト表皮角化細胞、クラボウ、ＫＫ－４００９、凍結ＮＨＥＫ（ＮＢ）新生児由来、ＫＵＲＡＢＯ
・角化細胞培養用培地（１）：ＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２特注ＧＣ別添培地、クラボウ、ＫＫ－２１７０Ｓ。当該特注ＧＣ別添培地に、カルシウム（最終濃度０．０６ｍＭ）添加した培地。
・角化細胞培養用培地（２）：当該培地（１）からＢＰＥ（Ｂｏｖｉｎｅ Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ Ｅｘｔｒａｃｔ、ウシ脳下垂体抽出物）及びＥＧＦ（上皮成長因子）を除いた培地
・表皮ブドウ球菌：表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）の標準菌（ＡＴＣＣ１２２２８）
・ＮＢ培地：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｂｒｏｔｈ Ｎｏ．２液体培地（Ｏｘｏｉｄ Ｌｉｍｉｔｅｄ、ＣＭ００６７Ｂ）
・ヒト表皮角化細胞：正常ヒト表皮角化細胞、クラボウ、ＫＫ－４００９、凍結ＮＨＥＫ（ＮＢ）新生児由来、ＫＵＲＡＢＯ
・角化細胞培養用培地（１）：ＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２特注ＧＣ別添培地、クラボウ、ＫＫ－２１７０Ｓ。当該特注ＧＣ別添培地に、カルシウム（最終濃度０．０６ｍＭ）添加した培地。
・角化細胞培養用培地（２）：当該培地（１）からＢＰＥ（Ｂｏｖｉｎｅ Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ Ｅｘｔｒａｃｔ、ウシ脳下垂体抽出物）及びＥＧＦ（上皮成長因子）を除いた培地
・表皮ブドウ球菌：表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）の標準菌（ＡＴＣＣ１２２２８）
・ＮＢ培地：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｂｒｏｔｈ Ｎｏ．２液体培地（Ｏｘｏｉｄ Ｌｉｍｉｔｅｄ、ＣＭ００６７Ｂ）
【0043】
（乳酸菌発酵物の作製）
以下工程により、以下試験例で用いた乳酸菌発酵物（発酵過程を経たアロエベラの液汁成分（アロエパウダー））を作製した。
以下工程により、以下試験例で用いた乳酸菌発酵物（発酵過程を経たアロエベラの液汁成分（アロエパウダー））を作製した。
【0044】
なお、以下試験例で用いた未発酵物は、アロエパウダー（アロイン除去工程を経たアロエベラの葉の液汁成分、Ｏｒｇａｎｉｃ ＳＱ Ｆｒｅｅｚｅ Ｄｒｉｅｄ Ａｌｏｅ Ｖｅｒａ Ｌｅａｆ Ｐｏｗｄｅｒ １００Ｘ（Ａｒｏｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．製）である。
【0045】
１．ＴＹ－６１０株の前培養
ＴＹ－６１０株を以下表１記載の組成の培地に１×１０６ｃｆｕ／ｍＬとなるように接種し、３０℃で１８時間培養した。
ＴＹ－６１０株を以下表１記載の組成の培地に１×１０６ｃｆｕ／ｍＬとなるように接種し、３０℃で１８時間培養した。
【0046】
【表1】
【0047】
２．アロイン除去工程を経たアロエベラの葉の液汁成分（アロエパウダー）の準備
アロイン除去工程を経たアロエベラの葉の液汁成分として、アロエパウダーであるＯｒｇａｎｉｃ ＳＱ Ｆｒｅｅｚｅ Ｄｒｉｅｄ Ａｌｏｅ Ｖｅｒａ Ｌｅａｆ Ｐｏｗｄｅｒ １００Ｘ（Ａｒｏｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．製）を用いた。なお、以下試験例で示す未発酵物は、このアロエパウダーである。
アロイン除去工程を経たアロエベラの葉の液汁成分として、アロエパウダーであるＯｒｇａｎｉｃ ＳＱ Ｆｒｅｅｚｅ Ｄｒｉｅｄ Ａｌｏｅ Ｖｅｒａ Ｌｅａｆ Ｐｏｗｄｅｒ １００Ｘ（Ａｒｏｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．製）を用いた。なお、以下試験例で示す未発酵物は、このアロエパウダーである。
【0048】
３．アロエパウダーの発酵工程
上記のアロエパウダー６．０ｋｇ（混合液全重量の約１％）を、以下表２記載の組成の発酵媒体に懸濁し、計５９４．０ｋｇの懸濁液を得た。
上記のアロエパウダー６．０ｋｇ（混合液全重量の約１％）を、以下表２記載の組成の発酵媒体に懸濁し、計５９４．０ｋｇの懸濁液を得た。
【0049】
【表2】
【0050】
当該懸濁液の糖度（Ｂｒｉｘ）は、２．０°であった。
【0051】
当該懸濁液を９０℃で１分間、加熱殺菌を行った。当該加熱殺菌後の懸濁液を約３０℃まで冷却した。当該冷却後の懸濁液へ、ＴＹ－６１０株を含む前培養培地を、６．０ｋｇ添加した。
【0052】
当該添加後の懸濁液に対して、３０℃の条件下で、１８時間、発酵工程を行った。なお、当該発酵工程後の懸濁液の糖度（Ｂｒｉｘ）は、１．９°であった。
【0053】
４．ＴＹ－６１０株の除去
以下記載のように、当該発酵工程を経た懸濁液から、ＴＹ－６１０株を除去した。発酵工程後の乳酸菌発酵物を連続式遠心分離機にて遠心分離（８，２００×ｇ）を行い、上清を回収した。当該上清をプリコート法（ｐｒｅｃｏａｔｉｎｇ）により濾過し、濾液を得た。
以下記載のように、当該発酵工程を経た懸濁液から、ＴＹ－６１０株を除去した。発酵工程後の乳酸菌発酵物を連続式遠心分離機にて遠心分離（８，２００×ｇ）を行い、上清を回収した。当該上清をプリコート法（ｐｒｅｃｏａｔｉｎｇ）により濾過し、濾液を得た。
【0054】
（試験例１）ヒアルロン酸産生促進活性評価
本試験例では、ヒト表皮角化細胞に対し、未発酵物または乳酸菌発酵物を添加し、ヒアルロン酸産生量の変化を評価（定量）した。
本試験例では、ヒト表皮角化細胞に対し、未発酵物または乳酸菌発酵物を添加し、ヒアルロン酸産生量の変化を評価（定量）した。
【0055】
（ヒト表皮角化細胞の準備）
ヒト表皮角化細胞を、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで２４ｗｅｌｌ培養プレートに播種した。当該播種した細胞を、角化細胞培養用培地（１）中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。当該培養により、本試験例１で用いる細胞を準備した。
ヒト表皮角化細胞を、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで２４ｗｅｌｌ培養プレートに播種した。当該播種した細胞を、角化細胞培養用培地（１）中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。当該培養により、本試験例１で用いる細胞を準備した。
【0056】
（表皮角化細胞への試料の添加）
当該準備した細胞を、以下表３に記載の条件にて、５％ＣＯ２、３７℃の条件で７２時間培養した。当該培養後、上清を回収した。当該回収した上清の中のヒアルロン酸を、ＱｎＥ Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄ （ＨＡ） ＥＬＩＳＡ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢＴＰ社製、ＢＴＰ－９６２００）によって測定した。当該測定した結果を表３に示す。
当該準備した細胞を、以下表３に記載の条件にて、５％ＣＯ２、３７℃の条件で７２時間培養した。当該培養後、上清を回収した。当該回収した上清の中のヒアルロン酸を、ＱｎＥ Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄ （ＨＡ） ＥＬＩＳＡ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢＴＰ社製、ＢＴＰ－９６２００）によって測定した。当該測定した結果を表３に示す。
【0057】
【表3】
【0058】
表３に示す測定した結果は、各群（ｎ＝３）の測定した平均値からコントロール群を１００として示した値（相対値）である。表３で記載の＊はｎ＝３のＤｕｎｎｅｔｔ検定で、コントロール群と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。表３で記載の†はｎ＝３のＤｕｎｎｅｔｔ検定で、終濃度０．１％の未発酵物添加群と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。表３等で示すように、所定量の乳酸菌発酵物の添加により、Ｃｏｎｔｒｏｌ群などと比べ、ヒアルロン酸産生量の増加が見られた。
【0059】
（試験例２）乾燥刺激評価試験
本試験例では、ヒト表皮角化細胞に対し、乳酸菌発酵物を添加し、乾燥刺激によるＩＬ－１α産生量およびＩＬ－６産生量の変化を評価した。
本試験例では、ヒト表皮角化細胞に対し、乳酸菌発酵物を添加し、乾燥刺激によるＩＬ－１α産生量およびＩＬ－６産生量の変化を評価した。
【0060】
（ヒト表皮角化細胞の準備）
ヒト表皮角化細胞を、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで２４ｗｅｌｌ培養プレートに播種した。当該播種した細胞を、角化細胞培養用培地（１）中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。当該培養により、本試験例２で用いる細胞を準備した。
ヒト表皮角化細胞を、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで２４ｗｅｌｌ培養プレートに播種した。当該播種した細胞を、角化細胞培養用培地（１）中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。当該培養により、本試験例２で用いる細胞を準備した。
【0061】
（表皮角化細胞への試料の添加）
当該準備した細胞を、以下表４に記載の条件にて、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、上清を除去した。この除去後、次の行為を行った。
・表４記載のＣｏｎｔｒｏｌ群以外の群に対して、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。
・表４記載のＣｏｎｔｒｏｌ群に対して、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けない状態で、５分間、２５℃での静置を行った。このＣｏｎｔｒｏｌ群に対して、当該静置後、そのまま以下５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。
当該準備した細胞を、以下表４に記載の条件にて、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、上清を除去した。この除去後、次の行為を行った。
・表４記載のＣｏｎｔｒｏｌ群以外の群に対して、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。
・表４記載のＣｏｎｔｒｏｌ群に対して、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けない状態で、５分間、２５℃での静置を行った。このＣｏｎｔｒｏｌ群に対して、当該静置後、そのまま以下５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。
【0062】
当該乾燥刺激を行った群は、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該乾燥刺激を行った群及びＣｏｎｔｒｏｌ群について、この培養後、当該回収した上清の中のＩＬ－１α産生量及びＩＬ－６産生量を測定した。ヒトＩＬ１－ａｌｐｈａ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（ＰＧＩ製、ＫＥ００１２３）を用いてＩＬ－１α産生量を測定した。ヒトＩＬ－６ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ製、Ｄ６０５０）を用いてＩＬ－６産生量を測定した。当該測定した結果を、表４に示す。表４に示す測定した結果は、各群（ｎ＝３）の測定した平均値からコントロール群を１００とした場合で示した値（の相対値）を示す。表４で示す＊は、ｎ＝３のＤｕｎｎｅｔｔ検定で、未添加群と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。表４等で示すように、乳酸菌発酵物の添加により、未添加群に比べ、ＩＬ－１α産生量の低下及びＩＬ－６産生量の低下が確認された。
【0063】
【表4】
【0064】
（試験例３）炎症状態の細胞に対する乾燥刺激評価試験
本試験例では、炎症状態の細胞に対し、乳酸菌発酵物を添加し、乾燥刺激によるＩＬ－１α産生量の変化を評価した。
本試験例では、炎症状態の細胞に対し、乳酸菌発酵物を添加し、乾燥刺激によるＩＬ－１α産生量の変化を評価した。
【0065】
（表皮角化細胞の準備）
ヒト表皮角化細胞を、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで２４ｗｅｌｌ培養プレートに播種した。当該播種した細胞を、角化細胞培養用培地（１）中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。当該培養により、本試験例３で用いる細胞を準備した。
ヒト表皮角化細胞を、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで２４ｗｅｌｌ培養プレートに播種した。当該播種した細胞を、角化細胞培養用培地（１）中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。当該培養により、本試験例３で用いる細胞を準備した。
【0066】
（炎症状態の細胞及び炎症状態でない細胞の準備）
当該準備した細胞を用いて、以下のように、炎症状態の細胞及び炎症状態でない細胞を準備した。
当該準備した細胞を用いて、以下のように、炎症状態の細胞及び炎症状態でない細胞を準備した。
【0067】
炎症状態の細胞については、次の２種類を準備した。以下表５で示す群１及び群５で、炎症状態の細胞その１を用いた。以下表５で示す群２及び群６で、炎症状態の細胞その２を用いた。
・炎症状態の細胞その１：
ＴＮＦ－α（最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）及びＩＮＦ－γ（最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を含有した角化細胞培養用培地（２）へ、播種した。当該播種した細胞を５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、細胞を回収した。当該回収した細胞を炎症状態の細胞その１とした。
・炎症状態の細胞その２：
ＴＮＦ－α（最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を含有した角化細胞培養用培地（２）へ、播種した。当該播種した細胞を５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、細胞を回収した。当該回収した細胞を炎症状態の細胞その２とした。
・炎症状態の細胞その１：
ＴＮＦ－α（最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）及びＩＮＦ－γ（最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を含有した角化細胞培養用培地（２）へ、播種した。当該播種した細胞を５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、細胞を回収した。当該回収した細胞を炎症状態の細胞その１とした。
・炎症状態の細胞その２：
ＴＮＦ－α（最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を含有した角化細胞培養用培地（２）へ、播種した。当該播種した細胞を５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、細胞を回収した。当該回収した細胞を炎症状態の細胞その２とした。
【0068】
炎症状態でない細胞を次のように準備した。精製水（３０μＬ）を含有した角化細胞培養用培地（２）へ、播種した。当該播種した細胞を５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、細胞を回収した。当該回収した細胞を炎症状態でない細胞とした。以下表５で示す群３、群４、群７及び群８で、炎症状態でない細胞を用いた。
【0069】
（炎症状態の細胞又は炎症状態でない細胞への試料の添加）
以下表５に記載の条件（細胞への試料の添加）にて、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、上清を除去した。この除去後、次の行為を行った。
・表５記載の群１、群２、群３、群５、群６及び群７に対して、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。
・表５記載の群４及び群８に対して、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けない状態で、５分間、２５℃での静置を行った。この群４及び群８に対して、当該静置後、そのまま以下５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。
以下表５に記載の条件（細胞への試料の添加）にて、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、上清を除去した。この除去後、次の行為を行った。
・表５記載の群１、群２、群３、群５、群６及び群７に対して、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。
・表５記載の群４及び群８に対して、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けない状態で、５分間、２５℃での静置を行った。この群４及び群８に対して、当該静置後、そのまま以下５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。
【0070】
当該乾燥刺激を行った後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加後、５％ＣＯ２、３７℃の条件２４時間培養した。当該乾燥刺激を行った群、群４及び群８について、この培養後、当該回収した上清の中のＩＬ－１α産生量を測定した。ヒトＡｕｔｈｅｎｔｉＫｉｎｅＴＭ ＩＬ－１ ａｌｐｈａ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ （ＰＧＩ製、ＫＥ００２６８）を用いてＩＬ－１α産生量を測定した。当該測定した結果を、表５に示す。表５に示す測定した結果は、各群（ｎ＝３）の測定した平均値から群８（Ｃｏｎｔｒｏｌ群）を１００とした場合で示した値（相対値）を示す。表５で示す＊などは、ｎ＝３のＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で、以下を示す。表５などに示すように、乳酸菌発酵物の添加により、ＩＬ－１α産生量の低下が確認できた。
・＊：群１と群５との比較で、群５と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。
・＊＊：群２と群６との比較で、群６と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。
・＊＊＊：群３と群７との比較で、群７と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。
・＊＊＊＊：群４と群８との比較で、群８と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。
・＊：群１と群５との比較で、群５と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。
・＊＊：群２と群６との比較で、群６と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。
・＊＊＊：群３と群７との比較で、群７と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。
・＊＊＊＊：群４と群８との比較で、群８と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。
【0071】
【表5】
【0072】
（試験例４）表皮ブドウ球菌の増殖試験
本試験例では、培養した表皮ブドウ球菌に、乳酸菌発酵物を添加し、表皮ブドウ球菌の増殖に対する影響を評価した。
本試験例では、培養した表皮ブドウ球菌に、乳酸菌発酵物を添加し、表皮ブドウ球菌の増殖に対する影響を評価した。
【0073】
（表皮ブドウ球菌の培養）
表６に記載の条件で、表皮ブドウ球菌の培養（３７℃で２０時間の培養）を行った。当該培養後の表皮ブドウ球菌数（培地中に含まれる表皮ブドウ球菌の濃度、ＣＦＵ／ｍＬ）を次の式１に記載のように算出した。
表６に記載の条件で、表皮ブドウ球菌の培養（３７℃で２０時間の培養）を行った。当該培養後の表皮ブドウ球菌数（培地中に含まれる表皮ブドウ球菌の濃度、ＣＦＵ／ｍＬ）を次の式１に記載のように算出した。
【0074】
Ｘ＝（Ｃ／Ｓ）×１０３×Ｎ・・・・・（式１）
２０時間培養した培養液中に含まれている表皮ブドウ球菌の濃度をＸ（ＣＦＵ／ｍＬ）とする。培養液を１／Ｃに希釈したため、希釈後の培養液中での表皮ブドウ球菌の濃度は、Ｘ／Ｃ（ＣＦＵ／ｍＬ）と表される。当該希釈後の表皮ブドウ球菌培養液をＳ（μＬ）、すなわちＳ×１０－３ｍＬプレートに播種したため、当該播種した培養液中の表皮ブドウ球菌の数は、（Ｘ／Ｃ）×Ｓ×１０－３（ＣＦＵ）と表される。播種後のプレート上にＮ個のコロニーが得られたとすると、（Ｘ／Ｃ）×Ｓ×１０－３＝Ｎとなる。
２０時間培養した培養液中に含まれている表皮ブドウ球菌の濃度をＸ（ＣＦＵ／ｍＬ）とする。培養液を１／Ｃに希釈したため、希釈後の培養液中での表皮ブドウ球菌の濃度は、Ｘ／Ｃ（ＣＦＵ／ｍＬ）と表される。当該希釈後の表皮ブドウ球菌培養液をＳ（μＬ）、すなわちＳ×１０－３ｍＬプレートに播種したため、当該播種した培養液中の表皮ブドウ球菌の数は、（Ｘ／Ｃ）×Ｓ×１０－３（ＣＦＵ）と表される。播種後のプレート上にＮ個のコロニーが得られたとすると、（Ｘ／Ｃ）×Ｓ×１０－３＝Ｎとなる。
【0075】
当該算出した結果を表６に示す。表６中の＊はｎ＝３のＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で、０．１０％の未発酵物添加群（群２）の当該球菌数と、０．１０％の乳酸菌発酵物添加群（群１）の当該球菌数と比較して、ｐ＜０．０５の有意差を示した。表６に示すように未発酵物の添加（群２）と比べ、乳酸菌発酵物の添加（群１）により、当該表皮ブドウ球菌数が多いことが確認された。
【0076】
【表6】
【0077】
（試験例５）黄色ブドウ球菌の増殖試験
表７に記載の条件で、黄色ブドウ球菌の培養（３７℃で２０時間の培養）を行った。当該培養後の黄色ブドウ球菌数（培地中に含まれる黄色ブドウ球菌の濃度、ＣＦＵ／ｍＬ）を次の式２に記載のように算出した。
表７に記載の条件で、黄色ブドウ球菌の培養（３７℃で２０時間の培養）を行った。当該培養後の黄色ブドウ球菌数（培地中に含まれる黄色ブドウ球菌の濃度、ＣＦＵ／ｍＬ）を次の式２に記載のように算出した。
【0078】
Ｘ＝（Ｃ／Ｓ）×１０３×Ｎ・・・・・（式２）
２０時間培養した培養液中に含まれている黄色ブドウ球菌の濃度をＸ（ＣＦＵ／ｍＬ）とする。培養液を１／Ｃに希釈したため、希釈後の培養液中での黄色ブドウ球菌の濃度は、Ｘ／Ｃ（ＣＦＵ／ｍＬ）と表される。当該希釈後の黄色ブドウ球菌培養液をＳ（μＬ）、すなわちＳ×１０－３ｍＬプレートに播種したため、当該播種した培養液中の黄色ブドウ球菌の数は、（Ｘ／Ｃ）×Ｓ×１０－３（ＣＦＵ）と表される。播種後のプレート上にＮ個のコロニーが得られたとすると、（Ｘ／Ｃ）×Ｓ×１０－３＝Ｎとなる。
２０時間培養した培養液中に含まれている黄色ブドウ球菌の濃度をＸ（ＣＦＵ／ｍＬ）とする。培養液を１／Ｃに希釈したため、希釈後の培養液中での黄色ブドウ球菌の濃度は、Ｘ／Ｃ（ＣＦＵ／ｍＬ）と表される。当該希釈後の黄色ブドウ球菌培養液をＳ（μＬ）、すなわちＳ×１０－３ｍＬプレートに播種したため、当該播種した培養液中の黄色ブドウ球菌の数は、（Ｘ／Ｃ）×Ｓ×１０－３（ＣＦＵ）と表される。播種後のプレート上にＮ個のコロニーが得られたとすると、（Ｘ／Ｃ）×Ｓ×１０－３＝Ｎとなる。
【0079】
当該算出した結果を表７に示す。表７中の＊はｎ＝３のＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で、乳酸菌発酵物の未添加群（群２）の当該球菌数と、０．１０％の乳酸菌発酵物添加群（群１）の当該球菌数と比較して、ｐ＜０．０５の有意差を示した。表７に示すように当該未添加群（群２）と比べ、乳酸菌発酵物の添加（群１）により、当該黄色ブドウ球菌数が少ないことが確認された。表６で示す結果（乳酸菌発酵物の添加による表皮ブドウ球菌数が増加したことを示す結果）及びこの表７で示す結果（乳酸菌発酵物の添加による黄色ブドウ球菌数が減少したことを示す結果）から、所定の乳酸菌発酵物の添加により、皮膚常在菌叢のバランスを改善することが可能と考えられる。
【0080】
【表7】
【0081】
（試験例６）乾燥刺激評価試験
本試験例では、ヒト表皮角化細胞に対し、乳酸菌発酵物を添加し、乾燥刺激によるＩＬ－１αレセプターアンタゴニスト（ＩＬ－１ＲＡ）産生量を評価した。
本試験例では、ヒト表皮角化細胞に対し、乳酸菌発酵物を添加し、乾燥刺激によるＩＬ－１αレセプターアンタゴニスト（ＩＬ－１ＲＡ）産生量を評価した。
【0082】
（ヒト表皮角化細胞の準備）
ヒト表皮角化細胞を、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで２４ｗｅｌｌ培養プレートに播種した。当該播種した細胞を、角化細胞培養用培地（１）中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。当該培養により、本試験例６で用いる細胞を準備した。
ヒト表皮角化細胞を、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで２４ｗｅｌｌ培養プレートに播種した。当該播種した細胞を、角化細胞培養用培地（１）中で、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間、７５％コンフルエント状態になるまで培養した。当該培養により、本試験例６で用いる細胞を準備した。
【0083】
（表皮角化細胞への試料の添加）
当該準備した細胞を、以下表８に記載の条件にて、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、上清を除去した。この除去後、次の行為を行った。
当該準備した細胞を、以下表８に記載の条件にて、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。当該培養後、上清を除去した。この除去後、次の行為を行った。
【0084】
・７回の乾燥刺激：群１及び群５において、以下の行為を行った。
２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
【0085】
・５回の乾燥刺激：群２及び群６において、以下の行為を行った。
２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
【0086】
・３回の乾燥刺激：群３及び群７において、以下の行為を行った。
２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
この除去後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けた状態で、５分間乾燥刺激（２５℃での静置）を行った。当該刺激後、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件で２４時間培養した。この培養後、上清を除去した。
【0087】
・乾燥刺激なし：群４及び群８において、以下の行為を行った。
角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けない状態で、５分間、２５℃での静置を行った。このＣｏｎｔｒｏｌ群に対して、当該静置後、そのまま以下５％ＣＯ２、３７℃の条件２４時間培養した。
角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加後、２４ｗｅｌｌ培養プレートの上蓋を開けない状態で、５分間、２５℃での静置を行った。このＣｏｎｔｒｏｌ群に対して、当該静置後、そのまま以下５％ＣＯ２、３７℃の条件２４時間培養した。
【0088】
当該乾燥刺激を行った群は、角化細胞培養用培地（２）を各ウェルへ各１ｍＬ添加した。当該添加後、５％ＣＯ２、３７℃の条件２４時間培養した。当該乾燥刺激を行った群及び当該乾燥刺激なしについて、この２４時間培養後、当該回収した上清の中のＩＬ－１ＲＡ産生量を測定した。ＩＬ－１ｒａ／ＩＬ－１Ｆ３， Ｈｕｍａｎ， ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄシステムズ、ＤＲＡ００Ｂ）を用いてＩＬ－１ＲＡ産生量を測定した。当該測定した結果を表８に示す。表８に示す測定した結果は、各群（ｎ＝３）の測定した平均値から群８（コントロール群）を１００とした場合として示した値（相対値）を示す。表８で示す＊は、ｎ＝３のＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で、群５と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。表８で示す＊＊は、ｎ＝３のＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で、群６と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。表８で示す＊＊＊は、ｎ＝３のＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で、群７と比較してｐ＜０．０５の有意差を示す。表８に示すように、乳酸菌発酵物の添加により、ＩＬ－１ＲＡ産生量の低下が確認できた。
【0089】
【表8】
【0090】
（試験例７）ヒトモニター試験による肌状態改善作用の評価
２０２３年１月から２０２３年３月の期間で、２０歳から６９歳の健康な男女１２名（平均年齢４４．６歳（男性の平均年齢：４２．２歳、女性の平均年齢：４５．４歳））を被験者として、このモニター試験を行った。
２０２３年１月から２０２３年３月の期間で、２０歳から６９歳の健康な男女１２名（平均年齢４４．６歳（男性の平均年齢：４２．２歳、女性の平均年齢：４５．４歳））を被験者として、このモニター試験を行った。
【0091】
（試験方法）
表９で示す組成のローション（表９ローション）を被験者の顔の左半分に所定期間にて塗布し、表１０に示すローション（表１０ローション）を被験者の顔の右半分に所定期間にて塗布した。この所定期間は、１日２回ずつ（朝晩）４週間である。４週間後には、被験者１人あたり、表９ローションが４２ｍｇ及び表１０ローションが４２ｍｇの量が塗布された。そして、これらのローションの塗布前の０日と、ローションを塗布してから４週間目に、測定（皮膚の水分量測定及び皮膚の水分蒸散量の測定）を行った。Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（ＣＭ８２５、Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて、当該皮膚の水分量測定及び当該皮膚の水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を測定した。皮膚水分分布・形態測定装置「ＭｏｉｓｔｕｒｅＭａｐＭＭ１００（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ社製）」を用いて、当該皮膚のキメ密度を測定した。
表９で示す組成のローション（表９ローション）を被験者の顔の左半分に所定期間にて塗布し、表１０に示すローション（表１０ローション）を被験者の顔の右半分に所定期間にて塗布した。この所定期間は、１日２回ずつ（朝晩）４週間である。４週間後には、被験者１人あたり、表９ローションが４２ｍｇ及び表１０ローションが４２ｍｇの量が塗布された。そして、これらのローションの塗布前の０日と、ローションを塗布してから４週間目に、測定（皮膚の水分量測定及び皮膚の水分蒸散量の測定）を行った。Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（ＣＭ８２５、Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて、当該皮膚の水分量測定及び当該皮膚の水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を測定した。皮膚水分分布・形態測定装置「ＭｏｉｓｔｕｒｅＭａｐＭＭ１００（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ社製）」を用いて、当該皮膚のキメ密度を測定した。
【0092】
【表9】
【0093】
【表10】
【0094】
（測定結果）
以下示す結果は、当該１２名の平均値（当該測定の平均値）を算出し、当該算出後０日（当該塗布前）の値を１００とした場合の値（相対値）を示す。
当該皮膚の水分量測定は、当該４週間後において、表１０ローション塗布群は１０３．３６であったが、表９ローション塗布群は１１０．６２（０日の表９ローション塗布群の値と比べｐ＜０．０１（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定））であった。
当該皮膚の水分蒸散量（ＴＥＷＬ）の測定を行った。当該４週間後において、表１０ローション塗布群は１０２．３５であったが、表９ローション塗布群は１０９．８０（０日の表９ローション塗布群の値と比べｐ＜０．０５（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定））であった。
当該皮膚のキメ密度を測定した。当該４週間後において、表１０ローション塗布群は９２．４７であったが、表９ローション塗布群は１０６．４７（４週間後の表１０ローション塗布群の値と比べｐ＜０．０５（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定））であった。
これらの測定結果から、乳酸菌発酵物を含有しないローション（表１０記載のローション）を皮膚へ塗布することに比べ、乳酸菌発酵物を含有するローション（表９記載のローション）を皮膚へ塗布することにより、皮膚の水分量の維持等が確認された。
以下示す結果は、当該１２名の平均値（当該測定の平均値）を算出し、当該算出後０日（当該塗布前）の値を１００とした場合の値（相対値）を示す。
当該皮膚の水分量測定は、当該４週間後において、表１０ローション塗布群は１０３．３６であったが、表９ローション塗布群は１１０．６２（０日の表９ローション塗布群の値と比べｐ＜０．０１（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定））であった。
当該皮膚の水分蒸散量（ＴＥＷＬ）の測定を行った。当該４週間後において、表１０ローション塗布群は１０２．３５であったが、表９ローション塗布群は１０９．８０（０日の表９ローション塗布群の値と比べｐ＜０．０５（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定））であった。
当該皮膚のキメ密度を測定した。当該４週間後において、表１０ローション塗布群は９２．４７であったが、表９ローション塗布群は１０６．４７（４週間後の表１０ローション塗布群の値と比べｐ＜０．０５（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定））であった。
これらの測定結果から、乳酸菌発酵物を含有しないローション（表１０記載のローション）を皮膚へ塗布することに比べ、乳酸菌発酵物を含有するローション（表９記載のローション）を皮膚へ塗布することにより、皮膚の水分量の維持等が確認された。
【0095】
（試験例８）ヒトモニター試験によるほうれい線の長さの評価
２０２３年１月下旬から２０２３年３月上旬の期間で、２０歳から６９歳の健康な男女１２名（試験前のアンケートで「季節により肌の調子が変化しやすい及び／又は肌荒れや乾燥が気になる」と答えた方、平均年齢４４．６歳（男性の平均年齢：４２．２歳、女性の平均年齢：４５．４歳））を被験者として、このモニター試験を行った。
２０２３年１月下旬から２０２３年３月上旬の期間で、２０歳から６９歳の健康な男女１２名（試験前のアンケートで「季節により肌の調子が変化しやすい及び／又は肌荒れや乾燥が気になる」と答えた方、平均年齢４４．６歳（男性の平均年齢：４２．２歳、女性の平均年齢：４５．４歳））を被験者として、このモニター試験を行った。
【0096】
表９で示す組成のローション（表９ローション）を被験者の顔の左半分に所定期間にて塗布し、表１０に示すローション（表１０ローション）を被験者の顔の右半分に所定期間にて塗布した。この所定期間は、１日２回ずつ（朝晩）４週間である。４週間後には、被験者１人あたり、表９ローションが１４ｇ及び表１０ローションが１４ｇの量を塗布された。そして、これらのローションの塗布前の０日と、ローションを塗布してから４週間目に、測定（ほうれい線の測定）を行った。Ａｎｔｅｒａ３ＤＴＭ （Ｍｉｒａｖｅｘ、Ｄｕｂｌｉｎ、Ｉｒｅｌａｎｄ）を用いて当該測定（ほうれい線の測定）を行った。なお、図１に、測定部位（ほうれい線）を示す。
【0097】
（測定結果）
以下示す結果は、当該１２名の平均値（当該測定の平均値）を算出し、当該算出後０日（当該塗布前）の値を１００とした場合の値（相対値）を示す。当該値は、当該４週間後において、表１０ローション塗布群は１０１．８であったが、表９ローション塗布群は１００．２であった。
以下示す結果は、当該１２名の平均値（当該測定の平均値）を算出し、当該算出後０日（当該塗布前）の値を１００とした場合の値（相対値）を示す。当該値は、当該４週間後において、表１０ローション塗布群は１０１．８であったが、表９ローション塗布群は１００．２であった。
【0098】
なお、当該１２名のうち、医師の診察で花粉症の診断を受けた６名（この６名は、花粉症予防又は／治療用の薬を投与しなかった）を選択した結果も次に記載する。以下示す結果は、当該６名の平均値（当該測定の平均値）を算出し、当該算出後０日（当該塗布前）の値を１００とした場合の値（相対値）を示す。当該値は、当該４週間後において、表１０ローション塗布群は１０３．５であったが、表９ローション塗布群は１００．０（当該４週間後の表１０ローション塗布群の値と比較してのＰａｉｒｅｄ ｔ－ｔｅｓｔで、ｐ＜０．０５）であった。
【0099】
（試験例９）ヒトモニター試験による角層の重層剥離の評価
文献（日本香粧品学会誌、Ｖｏｌ．３８、Ｎｏ．２、ｐ８７－９１、２０１４、画像解析を用いた重層剥離の評価検討）に記載の方法を参考にして、当該評価を行った。２０２３年１月下旬から２０２３年３月上旬の期間で、２０歳から６９歳の健康な男女１２名（試験前のアンケートで「季節により肌の調子が変化しやすい」と答えた方、平均年齢４４．６歳（男性の平均年齢：４２．２歳、女性の平均年齢：４５．４歳））を被験者として、このモニター試験を行った。
文献（日本香粧品学会誌、Ｖｏｌ．３８、Ｎｏ．２、ｐ８７－９１、２０１４、画像解析を用いた重層剥離の評価検討）に記載の方法を参考にして、当該評価を行った。２０２３年１月下旬から２０２３年３月上旬の期間で、２０歳から６９歳の健康な男女１２名（試験前のアンケートで「季節により肌の調子が変化しやすい」と答えた方、平均年齢４４．６歳（男性の平均年齢：４２．２歳、女性の平均年齢：４５．４歳））を被験者として、このモニター試験を行った。
【0100】
表９で示す組成のローション（表９ローション）を被験者の顔の左半分に所定期間にて塗布し、表１０に示すローション（表１０ローション）を被験者の顔の右半分に所定期間にて塗布した。この所定期間は、１日２回ずつ（朝晩）４週間である。４週間後には、被験者１人あたり、表９ローションが１４ｇ及び表１０ローションが１４ｇの量を塗布された。
【0101】
（テープストリッピング法による解析）
頬部の角層を次のように採取した。角質チェッカーＡＳＴ－０１（日本アッシュ株式会社）を使用し、塗布前（０日）、塗布後４週間に左右１枚ずつ２回採取し、被験者一人につき、合計４枚採取した。
頬部の角層を次のように採取した。角質チェッカーＡＳＴ－０１（日本アッシュ株式会社）を使用し、塗布前（０日）、塗布後４週間に左右１枚ずつ２回採取し、被験者一人につき、合計４枚採取した。
【0102】
角層の染色を次のように行った。先ず、角層が転写された角質チェッカーを、水浴で軽く洗浄した。当該洗浄後、当該チェッカーを、ゲンチアナバイオレット（関東化学）１％とブリリアントグリーン（Ｍｅｒｃｋ）０．５％を溶解させた染色液の中に１０分浸した。当該浸した後、チェッカーを、水浴ですすいでから、風乾させた。
【0103】
当該風乾後（角層が乾いた後）、角層を角質チェッカー用の台紙に張り付けた。デジタルマイクロスコープ ＶＨＸ－５０００ （Ｋｅｙｅｎｃｅ）を用いて、台紙に張り付けられた角層（角層細胞）を撮影した。撮影の色調整をＲ５８３、Ｇ２６５、Ｂ４５２に、サイズを標準の「１６００×１２００」に、それぞれ設定し、角層画像を撮影した。角層のサイズおよび重層剥離の度合いを評価するため、それぞれの基準となるスケールを用意し、目視にて、当該角層画像を評価した。図２は、１２名のうち、ランダムに選択した１名（５０代男性）の標本の顕微鏡写真である。
【0104】
（測定結果）
図２の顕微鏡写真に示すように、４週間後の写真において、表１０ローション塗布群に比べ、表９ローション塗布群の方が、重層の剥離がされない傾向であったことを確認した。
図２の顕微鏡写真に示すように、４週間後の写真において、表１０ローション塗布群に比べ、表９ローション塗布群の方が、重層の剥離がされない傾向であったことを確認した。
【0105】
角質細胞の剥離は、表皮の角質細胞間の接着機構が弱まって、古い角質細胞が皮膚表面からはがれ落ちることを意味し、角質細胞同士を接着しているデスモソームというタンパク質を分解することにより、剥離が促進される（Ｊ．Ｓｏｃ．Ｃｏｓｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．Ｊｐｎ．、角層の接着剥離の機構とスキンケアに対する役割、ｐ１６－ｐ２６）。しかし、このタンパク質分解酵素の活性が低下すると、デスモソームの分解が阻害され、角質がスムーズに剥離できなくなり、重層化が起こる。これによって、肌のくすみや肌あれ、キメの乱れなどの肌トラブルを引き起こすと考えられている。したがって、皮膚の角質細胞の剥離が促進され、重層化が抑制されることにより、肌のくすみが改善してなめらかになると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【0106】
本発明は、皮膚外用剤およびその製造方法などに利用可能である。
【要約】
【課題】
ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の新規菌株であるＴＹ－６１０株を用いることで、アロエベラの葉の液汁の乳酸菌発酵物を有効成分とする、新規の皮膚外用剤、およびその製造方法を提供する。
【解決手段】
本発明は、アロエベラの葉の乳酸菌発酵物を含有する皮膚外用剤であって、
前記乳酸菌が、ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）である、皮膚外用剤およびその製造方法に関する。
【選択図】なし
ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の新規菌株であるＴＹ－６１０株を用いることで、アロエベラの葉の液汁の乳酸菌発酵物を有効成分とする、新規の皮膚外用剤、およびその製造方法を提供する。
【解決手段】
本発明は、アロエベラの葉の乳酸菌発酵物を含有する皮膚外用剤であって、
前記乳酸菌が、ラクチプランチバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＴＹ－６１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ―０３８７７）である、皮膚外用剤およびその製造方法に関する。
【選択図】なし
【図1】
【図2】
