特許 7625531 立体障害の大きなアミノ酸を含むペプチド化合物の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-01-24

(45)【発行日】2025-02-03

(54)【発明の名称】立体障害の大きなアミノ酸を含むペプチド化合物の製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 1/06 20060101AFI20250127BHJP

   C07K 1/04 20060101ALI20250127BHJP

   C07K 7/64 20060101ALI20250127BHJP

【ＦＩ】

C07K1/06

C07K1/04

C07K7/64

【請求項の数】 24

(21)【出願番号】P 2021554957

(86)(22)【出願日】2020-11-05

(86)【国際出願番号】 JP2020041279

(87)【国際公開番号】W WO2021090856

(87)【国際公開日】2021-05-14

【審査請求日】2023-09-08

(31)【優先権主張番号】P 2019202408

(32)【優先日】2019-11-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000003311

【氏名又は名称】中外製薬株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100135242

【弁理士】

【氏名又は名称】江守 英太

(72)【発明者】

【氏名】野村 研一

(72)【発明者】

【氏名】森田 雄也

(72)【発明者】

【氏名】橋本 哲

【審査官】松原 寛子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１５－５０９９４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】Journal of the American Chemical Society，2008年，Vol.130, No.44，P.14382-14383，DOI 10.1021/ja806063k

【文献】Tetrahedron Letters，1998年，Vol.39, No.3/4，P.241-244，DOI 10.1016/S0040-4039(97)10504-4

【文献】Biopolymers (Peptide Science)，2011年，Vol.96, No.5，P.651-668，DOI 10.1002/bip.21620

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する方法であって、以下の工程を含む方法：
工程Ａ：Ｎ－置換アミノ酸、その塩、もしくはそれらの溶媒和物、またはＮ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物、その塩、もしくはそれらの溶媒和物と、電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸、その塩、その脱水体、またはそれらの溶媒和物とを、縮合試薬の存在下または非存在下で反応させて、電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、もしくはそれらの溶媒和物を得る工程、および
工程Ｂ：Ｎ末端の電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基のアミノ基に、塩基と置換基導入剤の存在下、置換基を導入して、電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程
（ただし、前記電子求引性の保護基は、該保護基が結合しているＮＨ基のｐＫａ（水中）が６～１１となる保護基であり、前記塩基の共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）は２２～３１である）。

【請求項2】

Ｎ－置換アミノ酸、またはＮ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物が、固相合成用樹脂に担持されている、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

Ｎ－置換アミノ酸、またはＮ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物が、式（２）：

【化1】

［式中、
Ｐ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルスルホニルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニル、１つまたは複数のハロゲンによって置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_３は、ヒドロキシ、Ｏ－ＰＧ_２、任意のアミノ酸残基、または任意のペプチド残基であり、
ＰＧ_２は、カルボキシル基の保護基である。］
で表される、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸が、式（３）：

【化2】

［式中、
ＰＧ_１は、電子求引性の保護基であり、
Ｒ_１およびＱ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、または置換されていてもよいＣ_７－Ｃ_１４アラルキルから独立して選択されるか、あるいは
Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環または４～７員飽和複素環を形成する。］
で表される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

工程Ａで得られるペプチド化合物が、式（４）：

【化3】

［式中、
ＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１は式（３）のＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１とそれぞれ同義であり、
Ｐ_２、Ｒ_２、およびＲ_３は式（２）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３とそれぞれ同義である］
で表される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

工程Ｂにおける置換基導入剤がＰ_１Ｘ（式中、Ｐ_１は、式（１）のＰ_１と同義であり、Ｘは脱離基である）であり、工程Ｂで得られるペプチド化合物が、式（１）：

【化4】

［式中、
Ｐ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
ＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１は式（３）のＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１とそれぞれ同義であり、
Ｐ_２、Ｒ_２、およびＲ_３は式（２）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３とそれぞれ同義である］
で表される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

式（３）および／または式（４）において、ＰＧ _１ が結合しているＮＨ基のｐＫａ（水中）が６～１１である、請求項４～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

以下の工程を含む、式（１）：

【化5】

［式中、
ＰＧ_１は、アミノ基の保護基であり、
Ｐ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_１およびＱ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、または置換されていてもよいＣ_７－Ｃ_１４アラルキルから独立して選択されるか、あるいは
Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環または４～７員飽和複素環を形成し、
Ｐ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルスルホニルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニル、１つまたは複数のハロゲンによって置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_３は、ヒドロキシ、Ｏ－ＰＧ_２、任意のアミノ酸残基、または任意のペプチド残基であり、
ＰＧ_２は、カルボキシル基の保護基である。］
で表される２つのアミノ酸残基が連結された構造を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する方法：
工程Ａ：式（２）：

【化6】

［式中、Ｐ_２、Ｒ_２、およびＲ_３は、式（１）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３とそれぞれ同義である］
で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物、および式（３）：

【化7】

［式中、ＰＧ_１、Ｑ_１、およびＲ_１は式（１）のＰＧ_１、Ｑ_１、およびＲ_１とそれぞれ同義である］
で表される化合物、その塩、その脱水体、またはそれらの溶媒和物を縮合試薬と反応させるか、または該式（２）で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物と、該式（３）で表される化合物の脱水体、その塩、またはそれらの溶媒和物とを反応させて、式（４）：

【化8】

［式中、ＰＧ_１、Ｐ_２、Ｑ_１、およびＲ_１～Ｒ_３は、式（１）のＰＧ_１、Ｐ_２、Ｑ_１、およびＲ_１～Ｒ_３とそれぞれ同義である］
で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程、および
工程Ｂ：式（４）で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物をＰ_１導入試薬と反応させて、式（１）で表されるペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程
（ただし、前記式（３）および／または式（４）において、ＰＧ _１ が結合しているＮＨ基のｐＫａ（水中）は６～１１であり、前記Ｐ _１ 導入試薬は、Ｐ _１ Ｘ（式中、Ｐ _１ は、式（１）のＰ _１ と同義であり、Ｘは脱離基である）と塩基の組み合わせであり、前記塩基の共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）は２２～３１である）。

【請求項9】

Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロプロパン環、シクロブタン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環、もしくはテトラヒドロピラン環を形成するか、または
Ｒ_１およびＱ_１は、メチル、エチル、２－メチルプロピル、アリル、メトキシメチル、シクロヘキシルメチル、置換されていてもよいベンジル、もしくは置換されていてもよいフェネチルから独立して選択される、
請求項４～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

ＰＧ_１が、Ｃ_２－Ｃ_６ハロアシルである、請求項４～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

Ｃ_２－Ｃ_６ハロアシルが、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、ペンタフルオロプロピオニル、2,3,3,3-テトラフルオロ-2-(トリフルオロメチル)プロピオニル、または3,3,3-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)プロピオニルである、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

脱水体が、下記式：

【化9】

［式中、Ｑ_１およびＲ_１は、式（１）のＱ_１およびＲ_１とそれぞれ同義であり、Ｒ_４は、Ｃ_１－Ｃ_５ハロアルキルである。］
で表される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

Ｒ_１およびＱ_１が、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環を形成する、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

Ｒ_４が、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、1,2,2,2-テトラフルオロ-1-(トリフルオロメチル)エチル、または2,2,2-トリフルオロ-1-(トリフルオロメチル)エチルである、請求項１２または１３に記載の方法。

【請求項15】

Ｐ_１が、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、アリル、ベンジル、またはフェネチルである、請求項６～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

Ｐ_２が、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、アリル、ベンジル、またはフェネチルである、請求項３～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

Ｒ_３が、固相合成用樹脂に担持された任意のアミノ酸残基または任意のペプチド残基である、請求項３～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

固相合成用樹脂が、ＣＴＣ樹脂、Ｗａｎｇ樹脂、またはＳＡＳＲＩＮ樹脂である、請求項２～６および１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

縮合試薬がＤＩＣもしくはＥＤＣＩ・ＨＣｌのいずれか、またはＤＩＣおよびＯｘｙｍａの組み合わせである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

塩基が、

【化10】

［式中、
ＲＢ_１とＲＢ_４は、それぞれ独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１とＲＢ_４は、ＲＢ_１が結合している窒素原子およびＲＢ_４が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２とＲＢ_３は、それぞれ独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２とＲＢ_３は、ＲＢ_２が結合している窒素原子およびＲＢ_３が結合している窒素原子ならびに該窒素原子が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成する］、

【化11】

［式中、
ＲＢ_６は、水素またはＣ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_５とＲＢ_７は、それぞれ独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_８は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、かつＲＢ_９はＣ_１－Ｃ_４アルキルまたはフェニルであるか、ＲＢ_８とＲＢ_９は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ここでＲＢ_９がフェニルである場合、２つのＢ２は、該フェニル基の２つのベンゼン環が縮合してナフタレンを形成してもよい］、

【化12】

［式中、
ＲＢ_１０は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１０およびＲＢ_１１は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１１は、ＲＢ_１０およびＲＢ_１１が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１１およびＲＢ_１２は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１２は、ＲＢ_１１およびＲＢ_１２が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１２およびＲＢ_１３は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１３は、ＲＢ_１２およびＲＢ_１３が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１３およびＲＢ_１４は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１４は、ＲＢ_１３およびＲＢ_１４が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１４およびＲＢ_１５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１５は、ＲＢ_１４およびＲＢ_１５が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_１６は水素、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールである。］、および

【化13】

［式中、
ＲＢ_１７は、独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１７およびＲＢ_１８は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１８は、ＲＢ_１７およびＲＢ_１８が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１８およびＲＢ_１９は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１９は、ＲＢ_１８およびＲＢ_１９が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１９およびＲＢ_２０は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２０は、ＲＢ_１９およびＲＢ_２０が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_２１は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２１およびＲＢ_２２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２２は、ＲＢ_２１およびＲＢ_２２が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２２およびＲＢ_２３は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２３は、ＲＢ_２２およびＲＢ_２３が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２３およびＲＢ_２４は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２４は、ＲＢ_２３およびＲＢ_２４が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２４およびＲＢ_２５は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２５は、ＲＢ_２４およびＲＢ_２５が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２５およびＲＢ_２６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２６は、ＲＢ_２５およびＲＢ_２６が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_２７は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキル、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールである。］
からなる群から選ばれる、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

塩基が、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン（DBU）、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノン-5-エン（DBN）、1,8-ビス（テトラメチルグアニジノ）ナフタレン（TMGN）、7-メチル-1,5,7-トリアザビシクロ[4.4.0]デカ-5-エン（MTBD）、2-tert-ブチル-1,1,3,3-テトラメチルグアニジン（BTMG）、1,5,7-トリアザビシクロ[4.4.0]デカ-5-エン（TBD）、tert-ブチルイミノ-トリス(ジメチルアミノ)ホスホラン（P1-tBu）、tert-ブチルイミノ-トリ(ピロリジノ)ホスホラン（P1-t-Bu-トリス(テトラメチレン), BTPP）、2-tert-ブチルイミノ-2-ジエチルアミノ-1,3-ジメチルペルヒドロ-1,3,2-ジアザホスホリン（BEMP）、tert-オクチルイミノ-トリス（ジメチルアミノ）ホスホラン（P1-t-Oct）、イミノ-トリス（ジメチルアミノ）ホスホラン（HP1(dma)）、1-tert-ブチル-2,2,4,4,4-ペンタキス(ジメチルアミノ)-2λ⁵,4λ⁵-カテナジ(ホスファゼン)（P2-t-Bu）、および1-エチル-2,2,4,4,4-ペンタキス(ジメチルアミノ)-2λ⁵,4λ⁵-カテナジ(ホスファゼン)（P2-Et）からなる群より選択される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

工程Ｂが、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＩ、テトラヒドロフラン、２－メチルテトラヒドロフラン、およびアセトニトリルからなる群から選ばれる溶媒中で行われる、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法を含む、Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含むペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する方法。

【請求項24】

請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法によって製造されたペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物からＮ末端の保護基を脱保護する工程、
任意でペプチド鎖を伸長する工程、および
Ｃ末端側の基とＮ末端側の基を環化して環状部を形成する工程を含む、環状ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物の製造方法であって、
該環状ペプチド化合物が、８～１５のアミノ酸残基を含み、少なくとも３つのＮ置換アミノ酸残基を含み、かつ少なくとも１つのＮ置換されていないアミノ酸残基を含み、環状部が少なくとも８つのアミノ酸残基を含む、前記方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、立体障害の大きなアミノ酸を含むペプチド化合物の製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

従来の医薬では創薬ターゲットとして使えなかった、いわゆるtough-targetの例として、細胞内の分子等を標的とする創薬、またはタンパク－タンパク相互作用の阻害による創薬などがあげられる。これらが創薬の標的に使われてこなかったのは、医薬の分子が疾病の標的分子に到達できないため、または標的分子の作用部位の形状が従来の医薬では作用しにくい形状であることが挙げられる（非特許文献１）。

【0003】

最近になって、従来の技術ではアクセスすることが困難であった、tough-targetにアクセスする方法として、環状ペプチドが注目されている（非特許文献２）。環状ペプチドの医薬への適応には、標的への結合能の向上だけでなく、ドラッグライク（薬らしさ：好ましくは、膜透過性と代謝安定性の両立を示す。）な環状ペプチドであることや、効率的な環状ペプチドのスクリーニング方法が考察されてきた（非特許文献３、４）。また、ドラッグライクな非天然アミノ酸を含む、非天然型環状ペプチドに必要とされる条件が明らかになり、創薬におけるその重要性とその認知度が高まっている（特許文献１）。非天然アミノ酸は、この非天然型ペプチドの重要な要素であるところ、非天然アミノ酸、例えばＮ－メチル（もしくは、Ｎ－アルキル）アミノ酸を含むペプチド、場合によっては、Ｎ－メチル（もしくは、Ｎ－アルキル）アミノ酸が連続するユニットを含むペプチドの合成は、その嵩高さによって天然型ペプチドに比べて高難易度であることは広く認知されている（非特許文献５、６）。

【0004】

アミノ酸の側鎖が天然アミノ酸と異なる非天然アミノ酸に視点を移してみると、アミノ酸のα位が二つの置換基で置換されたα，α－ジ置換アミノ酸は、脂溶性の増大、立体障害によるα，α－ジ置換アミノ酸を含むペプチドのコンフォメーション自由度の制限、生体内での安定化に寄与すると報告されており（非特許文献７）、薬効面およびドラッグライクの面の双方に大きく正の影響を及ぼすことが期待できる。

【0005】

これら非天然アミノ酸を含むペプチドの製造法に於いて、ペプチド合成に最も汎用されるＦｍｏｃ法は、これら非天然アミノ酸の構造的な嵩高さに起因して、不向きであることが知られている（非特許文献８）。

【0006】

これらのことから、α，α－ジ置換アミノ酸のカルボキシル基の、アミノ酸のアミノ基への縮合反応によるペプチド合成、とりわけＮ－アルキル化α，α－ジ置換アミノ酸のカルボキシル基の、Ｎ－アルキル化アミノ酸のアミノ基への縮合反応によるペプチドの合成は、一方または双方のアミノ酸の立体的な嵩高さに起因して困難であることが容易に推測される。

【0007】

Ｎ－アルキルアミノ酸を連続的に導入する方法のひとつとして、Ｎ－アルキルアミノ酸より立体障害の小さいＮ－Ｈアミノ酸を縮合させてペプチドを合成し、得られたペプチド中に複数あるＮＨ基のうち、目的とするＮＨ基を選択的にＮ－アルキル化する方法が知られている（非特許文献９、１０）。しかし、これらの方法は、α－モノ置換アミノ酸とＮ－アルキルアミノ酸を結合させる方法であり、Ｎ－アルキル－α，α－ジ置換アミノ酸とＮ－アルキルアミノ酸が結合した配列を持つペプチドの実用的な合成法は知られていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【文献】国際公開第２０１８／２２５８６４号

【非特許文献】

【0009】

【文献】Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 2016, 56, 23-40.

【文献】Future Med. Chem. 2009, 1, 1289-1310.

【文献】ACS Chem. Biol., 2013, 8, 488- 499.

【文献】Drug Discovery Today, 2014, 19, 388-399.

【文献】J. Peptide Res., 2005, 65, 153-166.

【文献】Biopolymers, 109; e23110 (DOI:10.1002/bip.23110)

【文献】有機合成化学協会誌 2002, vol.60, No.2, 125-136.

【文献】Chem. Soc. Rev., 2016, 45, 631-654.

【文献】Org. Lett., 2013, 15, 5012-5015.

【文献】J. Am. Chem. Soc., 1997, 119, 2301-2302.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

非特許文献５には、嵩高いアミノ酸を含むペプチドの製造法として、Ｎ－アルキルアミノ酸を含むペプチドの製造方法が例示されている。しかし、この文献はアミノ酸の縮合反応における副反応のメカニズムの考察と縮合試薬について記載するにとどまり、さらに嵩高いα，α－ジ置換アミノ酸の縮合反応については記載されていない。

【0011】

非特許文献６には、Ｎ－アルキルアミノ酸の製造方法と、Ｎ－アルキルアミノ酸を含むペプチドの製造方法が例示されている。この文献にはアミノ酸の縮合剤に焦点を当てた製造法が例示されているが、さらに嵩高いα，α－ジ置換アミノ酸の縮合反応は記載されていない。

【0012】

非特許文献７には、α，α－ジ置換アミノ酸の製造法と、α，α－ジ置換アミノ酸を含むペプチドの有用性、α，α－ジ置換アミノ酸の例示、およびそれらの製造方法が記載されているが、立体的に嵩高いアミノ酸を含むペプチドの製造についての記載はない。

【0013】

非特許文献８には、合成の困難なペプチドの製造法について例示されている。この文献には、溶解度が低い、あるいは凝集しやすいペプチドの製造について記載されているが、縮合反応を用いて課題を解決する方法についての記載はない。

【0014】

非特許文献９には、温和な条件で除去可能なトリフルオロアセチル基を用いたＮ－アルキルアミノ酸によるペプチド結合の形成法と、Ｎ－アルキルアミノ酸を含むペプチドの製造法が例示されている。しかし、さらに嵩高いα，α－ジ置換アミノ酸との縮合反応についての言及はない。また、トリフルオロアセチル基が結合した窒素原子にのみ選択的にアルキル基を導入できる訳ではなく、トリフルオロアセチル基の酸素原子にもアルキル基が導入された異性体の副生成物が生じることも知られている。

【0015】

非特許文献１０には、ノシル基で保護されたアミノ酸の窒素原子にアルキル基を導入して、Ｎ－アルキルアミノ酸を含むペプチドを製造する方法が記載されている。しかし、ノシル基の脱保護工程では副反応が起こることから、目的物の製造に問題があることが知られている（非特許文献９）。

【0016】

以上のように、Ｎ－アルキル－α，α－ジ置換アミノ酸などのＮ－置換－α，α－ジ置換アミノ酸とＮ－アルキルアミノ酸などのＮ－置換アミノ酸との結合形成反応は困難だが、その有効な解決手段は知られていない。本発明はこのような状況に鑑みてなされたものであり、Ｎ－置換－α，α－ジ置換アミノ酸残基、および／またはＮ－置換アミノ酸残基を含むペプチド化合物の製造方法を提供することを課題とする。より具体的には、Ｎ－置換アミノ酸にＮ－置換－α，α－ジ置換アミノ酸を導入する方法を提供することを課題とする。さらにはＮ－非置換－α，α－ジ置換アミノ酸残基のアミノ基を高選択的にＮ－官能基化する方法を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0017】

本発明者らは、Ｎ－置換アミノ酸とＮ－置換－α，α－ジ置換アミノ酸を連結させる方法を見出した。具体的には、Ｎ－置換アミノ酸と比較して立体的に嵩が低く、かつ電子求引性の保護基でアミノ基を保護することによりカルボキシル基の反応性を向上させたＮ－非置換－α，α－ジ置換アミノ酸を用いることで効率よく目的のアミノ酸を導入できることを見出した。またこれに続くアミノ基の官能基化では、電子求引性の保護基に起因して酸性度が上昇したＮＨ基に対して選択的にＮ－アルキル化反応などのＮ－官能基化反応が進行することを見出した。さらには、電子求引性の保護基に起因してＮＨ基の酸性度が上昇していることに着目し、Ｎ－官能基化反応に使用する特定の塩基を見出し、本発明を完成するに至った。

【0018】

すなわち本発明は、非限定の具体的な一態様において以下を包含する。
〔１〕Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する方法であって、以下の工程を含む方法：
工程Ａ：Ｎ－置換アミノ酸、その塩、もしくはそれらの溶媒和物、またはＮ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物、その塩、もしくはそれらの溶媒和物と、電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸、その塩、その脱水体、またはそれらの溶媒和物とを、縮合試薬の存在下または非存在下で反応させて、電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、もしくはそれらの溶媒和物を得る工程、および
工程Ｂ：Ｎ末端の電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基のアミノ基に、塩基と置換基導入剤の存在下、置換基を導入して、電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程。
〔２〕電子求引性の保護基が、該保護基が結合しているＮＨ基のｐＫａ（水中）が６～１１となる保護基である、〔１〕に記載の方法。
〔３〕塩基の共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）が１８～３１である、〔１〕または〔２〕に記載の方法。
〔４〕Ｎ－置換アミノ酸、またはＮ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物が、固相合成用樹脂に担持されている、〔１〕～〔３〕のいずれかに記載の方法。
〔５〕Ｎ－置換アミノ酸、またはＮ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物が、式（２）：

［式中、
Ｐ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルスルホニルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニル、１つまたは複数のハロゲンによって置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_３は、ヒドロキシ、Ｏ－ＰＧ_２、任意のアミノ酸残基、または任意のペプチド残基であり、
ＰＧ_２は、カルボキシル基の保護基である。］
で表される、〔１〕～〔４〕のいずれかに記載の方法。
〔６〕電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸が、式（３）：

［式中、
ＰＧ_１は、電子求引性の保護基であり、
Ｒ_１およびＱ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、または置換されていてもよいＣ_７－Ｃ_１４アラルキルから独立して選択されるか、あるいは
Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環または４～７員飽和複素環を形成する。］
で表される、〔１〕～〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔７〕工程Ａで得られるペプチド化合物が、式（４）：

［式中、
ＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１は式（３）のＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１とそれぞれ同義であり、
Ｐ_２、Ｒ_２、およびＲ_３は式（２）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３とそれぞれ同義である］
で表される、〔１〕～〔６〕のいずれかに記載の方法。
〔８〕工程Ｂにおける置換基導入剤がＰ_１Ｘ（式中、Ｐ_１は、式（１）のＰ_１と同義であり、Ｘは脱離基である）であり、工程Ｂで得られるペプチド化合物が、式（１）：

［式中、
Ｐ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
ＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１は式（３）のＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１とそれぞれ同義であり、
Ｐ_２、Ｒ_２、およびＲ_３は式（２）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３とそれぞれ同義である］
で表される、〔１〕～〔７〕のいずれかに記載の方法。
〔９〕以下の工程を含む、式（１）：

［式中、
ＰＧ_１は、アミノ基の保護基であり、
Ｐ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_１およびＱ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、または置換されていてもよいＣ_７－Ｃ_１４アラルキルから独立して選択されるか、あるいは
Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環または４～７員飽和複素環を形成し、
Ｐ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルスルホニルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニル、１つまたは複数のハロゲンによって置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_３は、ヒドロキシ、Ｏ－ＰＧ_２、任意のアミノ酸残基、または任意のペプチド残基であり、
ＰＧ_２は、カルボキシル基の保護基である。］
で表される２つのアミノ酸残基が連結された構造を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する方法：
工程Ａ：式（２）：

［式中、Ｐ_２、Ｒ_２、およびＲ_３は、式（１）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３とそれぞれ同義である］
で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物、および式（３）：

［式中、ＰＧ_１、Ｑ_１、およびＲ_１は式（１）のＰＧ_１、Ｑ_１、およびＲ_１とそれぞれ同義である］
で表される化合物、その塩、その脱水体、またはそれらの溶媒和物を縮合試薬と反応させるか、または該式（２）で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物と、該式（３）で表される化合物の脱水体、その塩、またはそれらの溶媒和物とを反応させて、式（４）：

［式中、ＰＧ_１、Ｐ_２、Ｑ_１、およびＲ_１～Ｒ_３は、式（１）のＰＧ_１、Ｐ_２、Ｑ_１、およびＲ_１～Ｒ_３とそれぞれ同義である］
で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程、および
工程Ｂ：式（４）で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物をＰ_１導入試薬と反応させて、式（１）で表されるペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程。
〔１０〕Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロプロパン環、シクロブタン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環、もしくはテトラヒドロピラン環を形成するか、または
Ｒ_１およびＱ_１は、メチル、エチル、２－メチルプロピル、アリル、メトキシメチル、シクロヘキシルメチル、置換されていてもよいベンジル、もしくは置換されていてもよいフェネチルから独立して選択される、
〔６〕～〔９〕のいずれかに記載の方法。
〔１１〕式（３）および／または式（４）において、ＰＧ_１が結合しているＮＨ基のｐＫａ（水中）が６～１１である、〔６〕～〔１０〕のいずれかに記載の方法。
〔１２〕ＰＧ_１が、Ｃ_２－Ｃ_６ハロアシルである、〔６〕～〔１１〕のいずれかに記載の方法。
〔１３〕Ｃ_２－Ｃ_６ハロアシルが、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、ペンタフルオロプロピオニル、2,3,3,3-テトラフルオロ-2-(トリフルオロメチル)プロピオニル、または3,3,3-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)プロピオニルである、〔１２〕に記載の方法。
〔１４〕脱水体が、下記式：

［式中、Ｑ_１およびＲ_１は、式（１）のＱ_１およびＲ_１とそれぞれ同義であり、Ｒ_４は、Ｃ_１－Ｃ_５ハロアルキルである。］
で表される、〔１〕～〔１３〕のいずれかに記載の方法。
〔１５〕Ｒ_１およびＱ_１が、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環を形成する、〔１４〕に記載の方法。
〔１６〕Ｒ_４が、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、1,2,2,2-テトラフルオロ-1-(トリフルオロメチル)エチル、または2,2,2-トリフルオロ-1-(トリフルオロメチル)エチルである、〔１４〕または〔１５〕に記載の方法。
〔１７〕Ｐ_１が、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、アリル、ベンジル、またはフェネチルである、〔８〕～〔１６〕のいずれかに記載の方法。
〔１８〕Ｐ_２が、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、アリル、ベンジル、またはフェネチルである、〔５〕～〔１７〕のいずれかに記載の方法。
〔１９〕Ｒ_３が、固相合成用樹脂に担持された任意のアミノ酸残基または任意のペプチド残基である、〔５〕～〔１８〕のいずれかに記載の方法。
〔２０〕固相合成用樹脂が、ＣＴＣ樹脂、Ｗａｎｇ樹脂、またはＳＡＳＲＩＮ樹脂である、〔４〕～〔８〕および〔１９〕のいずれかに記載の方法。
〔２１〕縮合試薬がＤＩＣもしくはＥＤＣＩ・ＨＣｌのいずれか、またはＤＩＣおよびＯｘｙｍａの組み合わせである、〔１〕～〔２０〕のいずれかに記載の方法。
〔２２〕Ｐ_１導入試薬が、Ｐ_１Ｘ（式中、Ｐ_１は、式（１）のＰ_１と同義であり、Ｘは脱離基である）と塩基の組み合わせである、〔９〕～〔２１〕のいずれかに記載の方法。
〔２３〕塩基の共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）が１８～３１である、〔２２〕に記載の方法。
〔２４〕塩基が、

［式中、
ＲＢ_１とＲＢ_４は、それぞれ独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１とＲＢ_４は、ＲＢ_１が結合している窒素原子およびＲＢ_４が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２とＲＢ_３は、それぞれ独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２とＲＢ_３は、ＲＢ_２が結合している窒素原子およびＲＢ_３が結合している窒素原子ならびに該窒素原子が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成する］、

［式中、
ＲＢ_６は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_５とＲＢ_７は、それぞれ独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_８は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、かつＲＢ_９はＣ_１－Ｃ_４アルキルまたはフェニルであるか、ＲＢ_８とＲＢ_９は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ここでＲＢ_９がフェニルである場合、２つのＢ２は、該フェニル基の２つのベンゼン環が縮合してナフタレンを形成してもよい］、

［式中、
ＲＢ_１０は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１０およびＲＢ_１１は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１１は、ＲＢ_１０およびＲＢ_１１が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１１およびＲＢ_１２は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１２は、ＲＢ_１１およびＲＢ_１２が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１２およびＲＢ_１３は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１３は、ＲＢ_１２およびＲＢ_１３が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１３およびＲＢ_１４は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１４は、ＲＢ_１３およびＲＢ_１４が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１４およびＲＢ_１５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１５は、ＲＢ_１４およびＲＢ_１５が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_１６は水素、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールである。］、および

［式中、
ＲＢ_１７は、独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１７およびＲＢ_１８は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１８は、ＲＢ_１７およびＲＢ_１８が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１８およびＲＢ_１９は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１９は、ＲＢ_１８およびＲＢ_１９が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１９およびＲＢ_２０は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２０は、ＲＢ_１９およびＲＢ_２０が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_２１は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２１およびＲＢ_２２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２２は、ＲＢ_２１およびＲＢ_２２が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２２およびＲＢ_２３は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２３は、ＲＢ_２２およびＲＢ_２３が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２３およびＲＢ_２４は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２４は、ＲＢ_２３およびＲＢ_２４が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２４およびＲＢ_２５は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２５は、ＲＢ_２４およびＲＢ_２５が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２５およびＲＢ_２６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２６は、ＲＢ_２５およびＲＢ_２６が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_２７は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキル、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールである。］
からなる群から選ばれる、〔３〕～〔８〕および〔２２〕～〔２３〕のいずれかに記載の方法。
〔２５〕塩基が、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン（DBU）、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノン-5-エン（DBN）、1,8-ビス（テトラメチルグアニジノ）ナフタレン（TMGN）、7-メチル-1,5,7-トリアザビシクロ[4.4.0]デカ-5-エン（MTBD）、2-tert-ブチル-1,1,3,3-テトラメチルグアニジン（BTMG）、1,5,7-トリアザビシクロ[4.4.0]デカ-5-エン（TBD）、tert-ブチルイミノ-トリス(ジメチルアミノ)ホスホラン（P1-tBu）、tert-ブチルイミノ-トリ(ピロリジノ)ホスホラン（P1-t-Bu-トリス(テトラメチレン), BTPP）、2-tert-ブチルイミノ-2-ジエチルアミノ-1,3-ジメチルペルヒドロ-1,3,2-ジアザホスホリン（BEMP）、tert-オクチルイミノ-トリス（ジメチルアミノ）ホスホラン（P1-t-Oct）、イミノ-トリス（ジメチルアミノ）ホスホラン（HP1(dma)）、1-tert-ブチル-2,2,4,4,4-ペンタキス(ジメチルアミノ)-2λ⁵,4λ⁵-カテナジ(ホスファゼン)（P2-t-Bu）、および1-エチル-2,2,4,4,4-ペンタキス(ジメチルアミノ)-2λ⁵,4λ⁵-カテナジ(ホスファゼン)（P2-Et）からなる群より選択される、〔３〕～〔８〕および〔２２〕～〔２４〕のいずれかに記載の方法。
〔２６〕工程Ｂが、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＩ、テトラヒドロフラン、２－メチルテトラヒドロフラン、およびアセトニトリルからなる群から選ばれる溶媒中で行われる、〔１〕～〔２５〕のいずれかに記載の方法。
〔２７〕〔１〕～〔２６〕のいずれかに記載の方法を含む、Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含むペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する方法。
〔２８〕〔１〕～〔２７〕のいずれかに記載の方法によって製造されたペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物からＮ末端の保護基を脱保護する工程、
任意でペプチド鎖を伸長する工程、および
Ｃ末端側の基とＮ末端側の基を環化して環状部を形成する工程を含む、環状ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物の製造方法であって、
該環状ペプチド化合物が、８～１５のアミノ酸残基を含み、少なくとも３つのＮ置換アミノ酸残基を含み、かつ少なくとも１つのＮ置換されていないアミノ酸残基を含み、環状部が少なくとも８つのアミノ酸残基を含む、前記方法。

【発明の効果】

【0019】

本発明によれば、ペプチド医薬品、ペプチド医薬品の探索、および／または医薬品の原薬供給に有用なＮ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含むペプチド化合物を、効率的に製造できる。また、種々の非天然アミノ酸残基が結合したペプチド化合物も製造可能であるため、構造の多様なペプチド化合物を提供できる。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】図１は、フォトダイオードアレイ検出器を用い、最大吸収波長で検出した、実施例２－４の反応混合物のＬＣＭＳ分析（分析条件：ＳＱＤＦＡ０５）の結果を示した図である。

【図2】図２は、フォトダイオードアレイ検出器を用い、最大吸収波長で検出した、比較例１の反応混合物のＬＣＭＳ分析（分析条件：ＳＱＤＦＡ０５）の結果を示した図である。

【図3】図３は、フォトダイオードアレイ検出器を用い、最大吸収波長で検出した、比較例２－４の反応混合物のＬＣＭＳ分析（分析条件：ＳＱＤＦＡ０５）の結果を示した図である。

【図4】図４は、フォトダイオードアレイ検出器を用い、最大吸収波長で検出した、比較例２－５の反応混合物のＬＣＭＳ分析（分析条件：ＳＱＤＦＡ０５）の結果を示した図である。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本発明において使用される略語を以下に記す。
ＡＡ：酢酸アンモニウム
ＣＳＡ：（＋）－１０－カンファースルホン酸
ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン
ＤＣＣ：Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＣＥ：１，２－ジクロロエタン
ＤＥＡＤ：アゾジカルボン酸ジエチル
ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＩＡＤ：アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：Ｎ，Ｎ－ジメチル－４－アミノピリジン
ｄｔｂｂｐｙ：４，４’－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－２，２’－ビピリジル
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＦＡ：ギ酸
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基
ＮＭＰ：Ｎ－メチル－２－ピロリドン
ＴＢＭＥ：ｔ－ブチルメチルエーテル
ＴＥＳ：トリエチルシラン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＦＥ：２，２，２－トリフルオロエタノール
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＨＰ：テトラヒドロピラニル基
ＴＭＳＣｌ：クロロトリメチルシラン
ＨＦＩＰ：１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロイソプロピルアルコール
ＨＯＡｔ：１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＯＯＢｔ：３，４－ジヒドロ－３－ヒドロキシ－４－オキソ－１，２，３－ベンゾトリアジン
ＩＰＡＣ：酢酸イソプロピル
ｏｘｙｍａ：シアノ（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル
ＰＰＴＳ：ｐ－トルエンスルホン酸ピリジニウム
ＥＤＣＩ・ＨＣｌ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシラン
ＴｆＯＨ：トリフルオロメタンスルホン酸
ＨＡＴＵ：Ｏ－（７－アザ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｆｍｏｃ－Ｃｌ：カルボノクロリド酸（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル
Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ：炭酸Ｎ－スクシンイミジル９－フルオレニルメチル
Ｎｓ：ｏ－ニトロベンゼンスルホニル基
Ｔｒｔ：トリフェニルメチル基、またはトリチル基
Ｔｆａ：トリフルオロアセチル基
ＭＴＢＤ：７－メチル－１，５，７－トリアザビシクロ［４．４．０］デカ－５－エン
ＴＭＧＮ：１，８－ビス（テトラメチルグアニジノ）ナフタレン
Ｐ１－ｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブチルイミノ－トリス（ジメチルアミノ）ホスホラン

【0022】

（官能基等の定義）
本明細書における「ハロゲン原子」としては、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩが例示される。

【0023】

本明細書において「アルキル」とは、脂肪族炭化水素から任意の水素原子を１個除いて誘導される１価の基であり、骨格中にヘテロ原子（炭素及び水素原子以外の原子をいう。）または不飽和の炭素－炭素結合を含有せず、水素及び炭素原子を含有するヒドロカルビルまたは炭化水素基構造の部分集合を有する。アルキルは直鎖状のものだけでなく、分枝鎖状のものも含む。アルキルとして具体的には、炭素原子数１～２０（Ｃ_１－Ｃ_２０、以下「Ｃ_ｐ－Ｃ_ｑ」とは炭素原子数がｐ～ｑ個であることを意味する）のアルキルであり、好ましくはＣ_１－Ｃ_１０アルキル、より好ましくはＣ_１－Ｃ_６アルキルが挙げられる。アルキルとして、具体的には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル（２－メチルプロピル）、ｎ－ペンチル、ｓ－ペンチル（１－メチルブチル）、ｔ－ペンチル（１，１－ジメチルプロピル）、ネオペンチル（２，２－ジメチルプロピル）、イソペンチル（３－メチルブチル）、３－ペンチル（１－エチルプロピル）、１，２－ジメチルプロピル、２－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，２，２－トリメチルプロピル、１，１，２，２－テトラメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、２，３－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチル、１－エチルブチル、２－エチルブチル等が挙げられる。

【0024】

本明細書において「アルケニル」とは、少なくとも１個の二重結合（２個の隣接ｓｐ^２炭素原子）を有する１価の基である。二重結合および置換分（存在する場合）の配置によって、二重結合の幾何学的形態は、エントゲーゲン（Ｅ）またはツザンメン（Ｚ）、シスまたはトランス配置をとることができる。アルケニルは、直鎖状のものだけでなく、分枝鎖状ものも含む。アルケニルとして好ましくはＣ_２－Ｃ_１０アルケニル、より好ましくはＣ_２－Ｃ_６アルケニルが挙げられ、具体的には、たとえば、ビニル、アリル、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル（シス、トランスを含む）、３－ブテニル、ペンテニル、３－メチル－２－ブテニル、ヘキセニルなどが挙げられる。

【0025】

本明細書において「アルキニル」とは、少なくとも１個の三重結合（２個の隣接ＳＰ炭素原子）を有する、１価の基である。アルキニルは、直鎖状のものだけでなく、分枝鎖状のものも含む。アルキニルとして好ましくはＣ_２－Ｃ_１０アルキニル、より好ましくはＣ_２－Ｃ_６アルキニルが挙げられ、具体的には、たとえば、エチニル、１－プロピニル、プロパルギル、３－ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、３－フェニル－２－プロピニル、３－（２'－フルオロフェニル）－２－プロピニル、２－ヒドロキシ－２－プロピニル、３－（３－フルオロフェニル）－２－プロピニル、３－メチル－（５－フェニル）－４－ペンチニルなどが挙げられる。

【0026】

本明細書において「シクロアルキル」とは、飽和または部分的に飽和した環状の１価の脂肪族炭化水素基を意味し、単環、ビシクロ環、スピロ環を含む。シクロアルキルとして好ましくはＣ_３－Ｃ_８シクロアルキルが挙げられ、具体的には、たとえば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、スピロ［３．３］ヘプチルなどが挙げられる。

【0027】

本明細書において「アリール」とは１価の芳香族炭化水素環を意味し、好ましくはＣ_６－Ｃ_１０アリールが挙げられる。アリールとして具体的には、たとえば、フェニル、ナフチル（たとえば、１－ナフチル、２－ナフチル）などが挙げられる。

【0028】

本明細書において「ヘテロシクリル」とは、炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を含有する、非芳香族の環状の１価の基を意味する。ヘテロシクリルは、環中に二重およびまたは三重結合を有していてもよく、環中の炭素原子は酸化されてカルボニルを形成してもよく、単環でも縮合環でもよい。環を構成する原子の数は好ましくは４～１０であり（４～１０員ヘテロシクリル）、より好ましくは４～７である（４～７員ヘテロシクリル）。ヘテロシクリルとしては具体的には、たとえば、アゼチジニル、オキセタニル、ジヒドロフリル、テトラヒドロフリル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジル、テトラヒドロピリミジル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、１，２－チアジナン、チアジアゾリジニル、アゼチジニル、オキサゾリドン、ベンゾジオキサニル、ベンゾオキサゾリル、ジオキソラニル、ジオキサニル、テトラヒドロピロロ[１,２－ｃ]イミダゾール、チエタニル、３，６－ジアザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、３－オキサ－８－アザビシクロ[３．２．１]オクタニル、スルタム、２－オキサスピロ[３．３]ヘプチルなどが挙げられる。

【0029】

本明細書において「ヘテロアリール」とは、炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を含有する、芳香族性の環状の１価の基を意味する。環は単環でも、他の環との縮合環でもよく、部分的に飽和されていてもよい。環を構成する原子の数は好ましくは５～１０（５～１０員ヘテロアリール）であり、より好ましくは５～７（５～７員ヘテロアリール）である。ヘテロアリールとして具体的には、たとえば、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ベンゾジオキソリル、インドリジニル、イミダゾピリジルなどが挙げられる。

【0030】

本明細書において「アルコキシ」とは、前記定義の「アルキル」が結合したオキシ基を意味し、好ましくはＣ_１－Ｃ_６アルコキシが挙げられる。アルコキシとして具体的には、たとえば、メトキシ、エトキシ、１－プロポキシ、２－プロポキシ、ｎ－ブトキシ、ｉ－ブトキシ、ｓ－ブトキシ、ｔ－ブトキシ、ペンチルオキシ、３－メチルブトキシなどが挙げられる。

【0031】

本明細書における「アシル（アルカノイル）」は、水素または前記「アルキル」にカルボニル基が結合した基であることを意味し、好ましくは、Ｃ_１－Ｃ_６アシル、より好ましくはＣ_２－Ｃ_４アシルが挙げられる。アシルとして、具体的には、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブタノイルなどが例示される。

【0032】

本明細書において「シクロアルコキシ」とは、前記定義の「シクロアルキル」が結合したオキシ基を意味し、好ましくはＣ_３－Ｃ_８シクロアルコキシが挙げられる。シクロアルコキシとして具体的には、たとえば、シクロプロポキシ、シクロブトキシ、シクロペンチルオキシなどが挙げられる。

【0033】

本明細書において「アルキルスルホニル」とは、前記定義の「アルキル」が結合したスルホニル基を意味し、好ましくはＣ_１－Ｃ_６アルキルスルホニルが挙げられる。アルキルスルホニルとして具体的には、たとえば、メチルスルホニルなどが挙げられる。

【0034】

本明細書における「ヒドロキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つ、または複数の水素が水酸基で置換された基を意味し、Ｃ_１－Ｃ_６ヒドロキシアルキルが好ましい。ヒドロキシアルキルとして具体的には、たとえば、ヒドロキシメチル、１－ヒドロキシエチル、２－ヒドロキシエチル、２－ヒドロキシ－２－メチルプロピル、５－ヒドロキシペンチルなどが挙げられる。

【0035】

本明細書における「ハロアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素がハロゲンで置換された基を意味し、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキルが好ましく、Ｃ_１－Ｃ_６フルオロアルキルがより好ましい。ハロアルキルとして具体的には、たとえば、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２－ジフルオロエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、３，３－ジフルオロプロピル、４，４－ジフルオロブチル、５，５－ジフルオロペンチルなどが挙げられる。

【0036】

本明細書における「ハロアルコキシ」とは、前記定義の「アルコキシ」の１つまたは複数の水素がハロゲンで置換された基を意味し、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシが好ましい。ハロアルコキシとして具体的には、たとえば、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、２，２－ジフルオロエトキシ、２，２，２－トリフルオロエトキシなどが挙げられる。

【0037】

本明細書における「ハロアシル（ハロアルカノイル）」は、前記「ハロアルキル」にカルボニル基が結合した基であることを意味し、好ましくは、Ｃ_２－Ｃ_６ハロアシル、より好ましくはＣ_２－Ｃ_４ハロアシルが挙げられる。ハロアシルとして、具体的には、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、ペンタフルオロプロピオニル、2,3,3,3-テトラフルオロ-2-(トリフルオロメチル)プロピオニル、3,3,3-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)プロピオニルなどが例示される。

【0038】

本明細書における「アルコキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アルコキシ」で置換された基を意味し、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキルが好ましく、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_２アルキルがより好ましい。アルコキシアルキルとして具体的には、たとえば、メトキシメチル、エトキシメチル、１－プロポキシメチル、２－プロポキシメチル、ｎ－ブトキシメチル、ｉ－ブトキシメチル、ｓ－ブトキシメチル、ｔ－ブトキシメチル、ペンチルオキシメチル、３－メチルブトキシメチル、１－メトキシエチル、２－メトキシエチル、２－エトキシエチルなどが挙げられる。

【0039】

本明細書における「シクロアルキルアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「シクロアルキル」で置換された基を意味し、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキルが好ましく、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキルＣ_１－Ｃ_２アルキルがより好ましい。シクロアルキルアルキルとして具体的には、たとえば、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチルなどが挙げられる。

【0040】

本明細書における「シクロアルコキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「シクロアルコキシ」で置換された基を意味し、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキルが好ましく、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルコキシＣ_１－Ｃ_２アルキルがより好ましい。シクロアルコキシアルキルとして具体的には、たとえば、シクロプロポキシメチル、シクロブトキシメチルなどが挙げられる。

【0041】

本明細書における「アルキルスルホニルアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アルキルスルホニル」で置換された基を意味し、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルスルホニルＣ_１－Ｃ_６アルキルが好ましく、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルスルホニルＣ_１－Ｃ_２アルキルがより好ましい。アルキルスルホニルアルキルとして具体的には、たとえば、メチルスルホニルメチル、２－（メチルスルホニル）エチルなどが挙げられる。

【0042】

本明細書において「アラルキル（アリールアルキル）」とは、前記定義の「アルキル」の少なくとも一つの水素原子が前記定義の「アリール」で置換された基を意味し、Ｃ_７－Ｃ_１４アラルキルが好ましく、Ｃ_７－Ｃ_１０アラルキルがより好ましい。アラルキルとして具体的には、たとえば、ベンジル、フェネチル、３－フェニルプロピルなどが挙げられる。

【0043】

本明細書において「ヘテロアラルキル（ヘテロアリールアルキル）」とは、前記定義の「アルキル」の少なくとも一つの水素原子が前記定義の「ヘテロアリール」で置換された基を意味し、５～１０員ヘテロアリールＣ_１－Ｃ_６アルキルが好ましく、５～１０員ヘテロアリールＣ_１－Ｃ_２アルキルがより好ましい。ヘテロアリールアルキルとして具体的には、たとえば、３－チエニルメチル、４－チアゾリルメチル、２－ピリジルメチル、３－ピリジルメチル、４－ピリジルメチル、２－（２－ピリジル）エチル、２－（３－ピリジル）エチル、２－（４－ピリジル）エチル、２－（６－キノリル）エチル、２－（７－キノリル）エチル、２－（６－インドリル）エチル、２－（５－インドリル）エチル、２－（５－ベンゾフラニル）エチルなどが挙げられる。

【0044】

本明細書において「カルボキシル基の保護基」には、アルキルエステル型の保護基、ベンジルエステル型の保護基、置換されたアルキルエステル型の保護基などが挙げられる。カルボキシル基の保護基として具体的には、メチル基、エチル基、ｔ－Ｂｕ基、ベンジル基、トリチル基、クミル基、メトキシトリチル基、２－（トリメチルシリル）エチル基、２，２，２－トリクロロエチル基、アリル基などが例示される。

【0045】

本明細書において「アミノ基の保護基」には、カルバメート型の保護基、アミド型の保護基、イミド型の保護基、スルホンアミド型の保護基などが挙げられる。アミノ基の保護基として具体的には、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、Ａｌｌｏｃ、トリフルオロアセチル、ペンタフルオロプロピオニル、フタロイル、トシル、２－ニトロベンゼンスルホニル、４－ニトロベンゼンスルホニル、２，４－ジニトロベンゼンスルホニルなどが例示される。

【0046】

本明細書における「脂環式環」は、非芳香族炭化水素環を意味する。脂環式環は、環中に不飽和結合を有してもよく、２個以上の環を有する多環性の環でもよい。また環を構成する炭素原子は酸化されてカルボニルを形成してもよい。脂環式環として好ましくは３～８員脂環式環が挙げられ、具体的には、たとえば、シクロプロパン環、シクロブタン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環、シクロヘプタン環、シクロオクタン環、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン環などが挙げられる。

【0047】

本明細書における「複素環」は、炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を含有する、非芳香族の複素環を意味する。複素環は、環中に二重およびまたは三重結合を有していてもよく、環中の炭素原子は酸化されてカルボニルを形成してもよく、単環、縮合環、スピロ環でもよい。環を構成する原子の数は限定されないが、好ましくは３～１２であり（３～１２員複素環）、より好ましくは４～７である（４～７員複素環）。複素環としては具体的には、たとえば、ピペラジン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ホモモルホリン、ヘキサヒドロピラジン、３－オキソピペラジン、２－オキソピロリジン、アゼチジン、２－オキソイミダゾリジン、オキセタン、ジヒドロフラン、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロピリジン、チオモルホリン、ピラゾリジン、イミダゾリン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イミダゾリジン、イソチアゾリジン、チアジアゾリジン、オキサゾリドン、ベンゾジオキサン、ジオキソラン、ジオキサン、テトラヒドロチオピランなどが挙げられる。

【0048】

本明細書における「飽和複素環」は、炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を含有し、環中に二重結合および／または三重結合を含まない、非芳香族の複素環を意味する。飽和複素環は単環でもよく、他の環、例えば、ベンゼン環などの芳香環と縮合環を形成してもよい。飽和複素環が縮合環を形成する場合、飽和複素環として好ましくは４～７員飽和複素環が挙げられ、具体的には、たとえば、アゼチジン環、オキセタン環、テトラヒドロフラン環、テトラヒドロピラン環、モルホリン環、チオモルホリン環、ピロリジン環、４－オキソピロリジン環、ピペリジン環、４－オキソピペリジン環、ピペラジン環、ピラゾリジン環、イミダゾリジン環、オキサゾリジン環、イソオキサゾリジン環、チアゾリジン環、イソチアゾリジン環、チアジアゾリジン環、オキサゾリドン環、ジオキソラン環、ジオキサン環、チエタン環、オクタヒドロインドール環、インドリン環などが挙げられる。

【0049】

本明細書において、「ペプチド鎖」とは、１つまたはそれ以上の天然アミノ酸および／または非天然アミノ酸がアミド結合および／またはエステル結合により連結されているペプチド鎖をいう。ペプチド鎖として好ましくは、１～１５のアミノ酸残基を含むペプチド鎖であり、より好ましくは５～１２のアミノ酸残基からなるペプチド鎖である。

【0050】

本発明における「ペプチド化合物」は、天然アミノ酸及び／又は非天然アミノ酸がアミド結合あるいはエステル結合によって連結されるペプチド化合物であれば特に限定されないが、アミノ酸残基数として好ましくは５～３０残基、より好ましくは８～１５残基、さらに好ましくは９～１３残基のペプチド化合物である。固相合成用樹脂に担持されているものもペプチド化合物に含まれる。本発明において合成されるペプチド化合物は、１つのペプチド中に少なくとも３つのＮ－置換アミノ酸を含むことが好ましく、少なくとも５つ以上のＮ置換アミノ酸を含むことがより好ましい。これらのＮ置換アミノ酸は、ペプチド化合物中に連続して存在していても、不連続に存在していてもよい。本明細書において、ペプチド化合物を構成する「アミノ酸」を「アミノ酸残基」、ペプチド化合物の全部または一部を構成する「ペプチド」を「ペプチド残基」ということがある。本発明におけるペプチド化合物は、直鎖状でも環状でもよく、環状ペプチド化合物が好ましい。

【0051】

本発明における「環状ペプチド化合物」は、直鎖ペプチド化合物のＮ末端側の基とＣ末端側の基とを環化することにより得ることができる環状のペプチド化合物である。環化は、アミド結合のような炭素－窒素結合による環化、エステル結合やエーテル結合のような炭素－酸素結合による環化、チオエーテル結合のような炭素－硫黄結合による環化、炭素－炭素結合による環化、あるいは複素環構築による環化など、どのような形態であってもよい。これらのうちでは、アミド結合あるいは炭素－炭素結合などの共有結合を介した環化が好ましく、側鎖のカルボン酸基とＮ末端の主鎖のアミノ基によるアミド結合を介した環化がより好ましい。環化に用いられるカルボン酸基やアミノ基等の位置は、主鎖上のものでも、側鎖上のものでもよく、環化可能な位置にあれば、特に制限されない。

【0052】

本明細書において「１つまたは複数の」とは、１つまたは２つ以上の数を意味する。「１つまたは複数の」が、ある基の置換基に関連する文脈で用いられる場合、この用語は、１つからその基が許容する置換基の最大数までの数を意味する。「１つまたは複数の」として具体的には、たとえば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、および／またはそれより大きい数が挙げられる。

【0053】

本明細書において「固相合成用樹脂」は、固相法によるペプチド化合物の合成に用いることができるものであれば、特に限定されない。このような固相合成用樹脂として、具体的には、例えば、ＣＴＣ樹脂、Ｗａｎｇ樹脂、ＳＡＳＲＩＮ樹脂、トリチルクロリド樹脂（Ｔｒｔ樹脂）、４－メチルトリチルクロリド樹脂（Ｍｔｔ樹脂）、４－メトキシトリチルクロリド樹脂（Ｍｍｔ）などの酸性条件で除去可能なものが挙げられる。樹脂は、用いられるアミノ酸側の官能基に合わせて適宜選択することができる。例えば、アミノ酸側の官能基としてカルボン酸（主鎖カルボン酸、もしくは、ＡｓｐやＧｌｕに代表される側鎖カルボン酸）、又は、芳香環上のヒドロキシ基（Ｔｙｒに代表されるフェノール基）を用いる場合には、樹脂として、トリチルクロリド樹脂（Ｔｒｔ樹脂）もしくは２－クロロトリチルクロリド樹脂（ＣＴＣ樹脂）を用いることが好ましい。アミノ酸側の官能基として脂肪族ヒドロキシ基（ＳｅｒやＴｈｒに代表される脂肪族アルコール基）を用いる場合には、樹脂として、トリチルクロリド樹脂（Ｔｒｔ樹脂）、２－クロロトリチルクロリド樹脂（ＣＴＣ樹脂）もしくは４－メチルトリチルクロリド樹脂（Ｍｔｔ樹脂）を用いることが好ましい。なお、本明細書中にて、樹脂をレジンと記載する場合もある。固相合成用樹脂は、ペプチド中のＣ末端のアミノ酸に限定されない任意の位置のアミノ酸と連結することが可能である。Ｃ末端のアミノ酸のカルボキシル基が固相合成用樹脂と連結していることが好ましく、そのカルボキシル基は主鎖のカルボキシル基でも側鎖のカルボキシル基でもよい。

【0054】

樹脂を構成するポリマーの種類についても特に限定されない。ポリスチレンで構成される樹脂の場合には、１００－２００ｍｅｓｈもしくは２００－４００ｍｅｓｈのいずれを用いても良い。また、架橋率についても特に限定されないが、１％ＤＶＢ（ジビニルベンゼン）架橋のものが好ましい。また、樹脂を構成するポリマーの種類として、Tentagel、またはChemmatrixが挙げられる。

【0055】

本明細書に記載の化合物の製造において、定義した基が実施方法の条件下で望まない化学的変換を受けてしまう場合、例えば、官能基の保護、脱保護等の手段を用いることにより、該化合物を製造することができる。ここで保護基の選択および脱着操作は、例えば、「Greene’s,“Protective Groups in Organic Synthesis”（第５版，John Wiley & Sons 2014）」に記載の方法を挙げることができ、これらを反応条件に応じて適宜用いればよい。また、必要に応じて置換基導入等の反応工程の順序を変えることもできる。

【0056】

本明細書において、「置換されていてもよい」という修飾語句が付与されている場合、その置換基としては、例えば、アルキル、アルコキシ、フルオロアルキル、フルオロアルコキシ、オキソ、アミノカルボニル、アルキルスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロゲン、ニトロ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シアノ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミルなどが例示される。

【0057】

さらにこれらそれぞれに置換基が付与されていてもよく、それら置換基も制限されず、例えば、ハロゲン原子、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、ホウ素原子、ケイ素原子、又はリン原子を含む任意の置換基の中から独立して１つ又は２つ以上自由に選択されてよい。すなわち、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、シクロアルキルなどが例示される。

【0058】

本発明に記載の化合物は、その塩またはそれらの溶媒和物であることができる。本発明に記載の化合物の塩には、例えば、塩酸塩；臭化水素酸塩；ヨウ化水素酸塩；リン酸塩；ホスホン酸塩；硫酸塩；メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩などのスルホン酸塩；酢酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、サリチル酸塩などのカルボン酸塩；または、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、アルキルアンモニウム塩、ジアルキルアンモニウム塩、トリアルキルアンモニウム塩、テトラアルキルアンモニウム塩などのアンモニウム塩などが含まれる。これらの塩は、例えば、当該化合物と、酸または塩基とを接触させることにより製造される。本発明に記載の化合物の溶媒和物とは、溶液中で溶質分子が溶媒分子を強く引き付け、一つの分子集団をつくる現象をいい、溶媒が水であれば水和物と言う。本発明に記載の化合物は、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノールなど）、ジメチルホルムアミド、またはジグリムなどの有機溶媒、または水などから選択される単独の溶媒との溶媒和物でも、複数の溶媒との溶媒和物でもよい。

【0059】

本明細書における「アミノ酸」には、天然アミノ酸、及び非天然アミノ酸（アミノ酸誘導体ということがある）が含まれる。本明細書における「天然アミノ酸」とは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｐｒｏを指す。非天然アミノ酸（アミノ酸誘導体）は特に限定されないが、β－アミノ酸、Ｄ型アミノ酸、Ｎ置換アミノ酸、α，α－ジ置換アミノ酸、側鎖が天然アミノ酸と異なるアミノ酸、ヒドロキシカルボン酸などが例示される。本明細書におけるアミノ酸としては、任意の立体配置が許容されるが、好ましくはＬ型アミノ酸である。アミノ酸の側鎖の選択は特に制限を設けないが、水素原子の他にも例えばアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、ヘテロアラルキル基、シクロアルキル基、スピロ結合したシクロアルキル基から自由に選択される。それぞれには置換基が付与されていてもよく、それら置換基も制限されず、例えば、ハロゲン原子、Ｏ原子、Ｓ原子、Ｎ原子、Ｂ原子、Ｓｉ原子、又はＰ原子を含む任意の置換基の中から独立して１つ又は２つ以上自由に選択されてよい。すなわち、置換されていてもよいアルキル基、アルコキシ基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、シクロアルキル基など、または、オキソ、アミノカルボニル、ハロゲン原子などが例示される。非限定の一態様において、本明細書におけるアミノ酸は、同一分子内にカルボキシ基とアミノ基を有する化合物であってよい（この場合であっても、プロリン、ヒドロキシプロリンのようなイミノ酸もアミノ酸に含まれる）。

【0060】

本明細書におけるハロゲン原子を含む置換基としては、ハロゲンを置換基に有するアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基などが例示され、より具体的には、フルオロアルキル、ジフルオロアルキル、トリフルオロアルキルなどが例示される。

【0061】

Ｏ原子を含む置換基としては、ヒドロキシ（－ＯＨ）、オキシ（－ＯＲ）、カルボニル（－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）、カルボキシ（－ＣＯ_２Ｈ）、オキシカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ）、カルボニルオキシ（－Ｏ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）、チオカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＳＲ）、カルボニルチオ（－Ｓ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）、アミノカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＮＨＲ）、カルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）、オキシカルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ）、スルホニルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ_２－Ｒ）、アミノスルホニル（－ＳＯ_２－ＮＨＲ）、スルファモイルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ_２－ＮＨＲ）、チオカルボキシル（－Ｃ＝Ｏ－ＳＨ）、カルボキシルカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＣＯ_２Ｈ）などの基が挙げられる。

【0062】

オキシ（－ＯＲ）の例としては、アルコキシ、シクロアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アラルキルオキシなどが挙げられる。アルコキシとしては、Ｃ_１－Ｃ_４アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_２アルコキシが好ましく、なかでもメトキシ、又はエトキシが好ましい。

【0063】

カルボニル（－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）の例としては、ホルミル（－Ｃ＝Ｏ－Ｈ）、アルキルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、アラルキルカルボニルなどが挙げられる。

【0064】

オキシカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ）の例としては、アルキルオキシカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アルキニルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニルなどが挙げられる。

【0065】

カルボニルオキシ（－Ｏ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）の例としては、アルキルカルボニルオキシ、シクロアルキルカルボニルオキシ、アルケニルカルボニルオキシ、アルキニルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、ヘテロアリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシなどが挙げられる。

【0066】

チオカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＳＲ）の例としては、アルキルチオカルボニル、シクロアルキルチオカルボニル、アルケニルチオカルボニル、アルキニルチオカルボニル、アリールチオカルボニル、ヘテロアリールチオカルボニル、アラルキルチオカルボニルなどが挙げられる。

【0067】

カルボニルチオ（－Ｓ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）の例としては、アルキルカルボニルチオ、シクロアルキルカルボニルチオ、アルケニルカルボニルチオ、アルキニルカルボニルチオ、アリールカルボニルチオ、ヘテロアリールカルボニルチオ、アラルキルカルボニルチオなどが挙げられる。

【0068】

アミノカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＮＨＲ）の例としては、アルキルアミノカルボニル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_６又はＣ_１－Ｃ_４アルキルアミノカルボニル、なかでもエチルアミノカルボニル、メチルアミノカルボニルなどが例示される。）、シクロアルキルアミノカルボニル、アルケニルアミノカルボニル、アルキニルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアミノカルボニル、アラルキルアミノカルボニルなどが挙げられる。これらに加えて、－Ｃ＝Ｏ－ＮＨＲ中のＮ原子と結合したＨ原子が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。

【0069】

カルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）の例としては、アルキルカルボニルアミノ、シクロアルキルカルボニルアミノ、アルケニルカルボニルアミノ、アルキニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノなどが挙げられる。これらに加えて－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ中のＮ原子と結合したＨ原子が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。

【0070】

オキシカルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ）の例としては、アルコキシカルボニルアミノ、シクロアルコキシカルボニルアミノ、アルケニルオキシカルボニルアミノ、アルキニルオキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシカルボニルアミノ、アラルキルオキシカルボニルアミノなどが挙げられる。これらに加えて、－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ中のＮ原子と結合したＨ原子がアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。

【0071】

スルホニルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ_２－Ｒ）の例としては、アルキルスルホニルアミノ、シクロアルキルスルホニルアミノ、アルケニルスルホニルアミノ、アルキニルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールスルホニルアミノ、アラルキルスルホニルアミノなどが挙げられる。これらに加えて、－ＮＨ－ＳＯ_２－Ｒ中のＮ原子と結合したＨ原子がアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。

【0072】

アミノスルホニル（－ＳＯ_２－ＮＨＲ）の例としては、アルキルアミノスルホニル、シクロアルキルアミノスルホニル、アルケニルアミノスルホニル、アルキニルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、ヘテロアリールアミノスルホニル、アラルキルアミノスルホニルなどが挙げられる。これらに加えて、－ＳＯ_２－ＮＨＲ中のＮ原子と結合したＨ原子がアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。

【0073】

スルファモイルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ_２－ＮＨＲ）の例としては、アルキルスルファモイルアミノ、シクロアルキルスルファモイルアミノ、アルケニルスルファモイルアミノ、アルキニルスルファモイルアミノ、アリールスルファモイルアミノ、ヘテロアリールスルファモイルアミノ、アラルキルスルファモイルアミノなどが挙げられる。さらに、－ＮＨ－ＳＯ_２－ＮＨＲ中のＮ原子と結合した２つのＨ原子はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、およびアラルキルからなる群より独立して選択される置換基で置換されていてもよく、またこれらの２つの置換基は環を形成しても良い。

【0074】

Ｓ原子を含む置換基として、チオール（－ＳＨ）、チオ（－Ｓ－Ｒ）、スルフィニル（－Ｓ＝Ｏ－Ｒ）、スルホニル（－ＳＯ_２－Ｒ）、スルホ（－ＳＯ_３Ｈ）、ペンタフルオロスルファニル（－ＳＦ_５）が挙げられる。

【0075】

チオ（－Ｓ－Ｒ）の例としては、アルキルチオ、シクロアルキルチオ、アルケニルチオ、アルキニルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオなどの中から選択される。

【0076】

スルフィニル（－Ｓ＝Ｏ－Ｒ）の例としては、アルキルスルフィニル、シクロアルキルスルフィニル、アルケニルスルフィニル、アルキニルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アラルキルスルフィニルなどが挙げられる。

【0077】

スルホニル（－ＳＯ_２－Ｒ）の例としては、アルキルスルホニル、シクロアルキルスルホニル、アルケニルスルホニル、アルキニルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アラルキルスルホニルなどが挙げられる。

【0078】

Ｎ原子を含む置換基として、アジド（－Ｎ_３、「アジド基」ともいう）、シアノ（－ＣＮ）、１級アミノ（－ＮＨ_２）、２級アミノ（－ＮＨ－Ｒ；モノ置換アミノともいう。）、３級アミノ（－ＮＲ（Ｒ'）；ジ置換アミノともいう。）、アミジノ（－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ_２）、置換アミジノ（－Ｃ（＝ＮＲ）－ＮＲ'Ｒ"）、グアニジノ（－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ_２）、置換グアニジノ（－ＮＲ－Ｃ（＝ＮＲ'''）－ＮＲ'Ｒ"）、アミノカルボニルアミノ（－ＮＲ－ＣＯ－ＮＲ'Ｒ"）、ピリジル、ピペリジノ、モルホリノ、アゼチジニルなどの基が挙げられる。

【0079】

２級アミノ（－ＮＨ－Ｒ）の例としては、アルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アラルキルアミノなどが挙げられる。

【0080】

３級アミノ（－ＮＲ（Ｒ'）；ジ置換アミノ）の例としては、例えばアルキル（アラルキル）アミノなど、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルなどの中からそれぞれ独立して選択される、任意の２つの置換基を有するアミノ基が挙げられ、これらの任意の２つの置換基は環を形成しても良い。具体的には、ジアルキルアミノ、なかでもＣ_１－Ｃ_６ジアルキルアミノ、Ｃ_１－Ｃ_４ジアルキルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノなどが例示される。本明細書において「Ｃ_ｐ－Ｃ_ｑジアルキルアミノ基」とは、アミノ基にＣ_ｐ－Ｃ_ｑアルキル基が２個置換された基をいい、両Ｃ_ｐ－Ｃ_ｑアルキル基は同一であっても異なっていてもよい。

【0081】

置換アミジノ（－Ｃ（＝ＮＲ）－ＮＲ'Ｒ''）の例としては、Ｎ原子上の３つの置換基Ｒ、Ｒ'、およびＲ''が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルの中からそれぞれ独立して選択された基、例えばアルキル（アラルキル）（アリール）アミジノなどが挙げられる。

【0082】

置換グアニジノ（－ＮＲ－Ｃ（＝ＮＲ'''）－ＮＲ'Ｒ''）の例としては、Ｒ、Ｒ'、Ｒ''、およびＲ'''が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルの中からそれぞれ独立して選択された基、あるいはこれらが環を形成した基などが挙げられる。

【0083】

アミノカルボニルアミノ（－ＮＲ－ＣＯ－ＮＲ'Ｒ''）の例としては、Ｒ、Ｒ'、およびＲ''が、水素原子、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルの中からそれぞれ独立して選択された基、あるいはこれらは環を形成した基などが挙げられる。

【0084】

Ｂ原子を含む置換基として、ボリル（－ＢＲ（Ｒ'））やジオキシボリル（－Ｂ（ＯＲ）（ＯＲ'））などが挙げられる。これらの２つの置換基ＲおよびＲ'は、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルなどの中からそれぞれ独立して選択されるか、あるいはこれらは環を形成してもよい。具体的には、環状ボリル基が挙げられ、さらに具体的には、ピナコラートボリル基、ネオペンタンジオラートボリル基、カテコラートボリル基などが挙げられる。

【0085】

本明細書におけるＮ置換アミノ酸の窒素原子上の置換基として具体的には、アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_４アルキル、メチル、Ｃ_７－Ｃ_１４アラルキル、ベンジル、フェネチルなどが例示される。

【0086】

アミノ酸の主鎖アミノ基は、非置換（－ＮＨ_２）でも、置換されていてもよい（即ち、－ＮＨＲ。ここで、Ｒは置換基を有していてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、シクロアルキルを示し、またプロリンのようにＮ原子に結合した炭素鎖とα位の炭素原子とが環を形成していてもよい。）。このような主鎖アミノ基の水素原子が置換されているアミノ酸を、本明細書において「Ｎ－置換アミノ酸」と称する場合がある。本明細書における「Ｎ－置換アミノ酸」としては、好ましくはＮ－アルキルアミノ酸、Ｎ－Ｃ_１－Ｃ_６アルキルアミノ酸、Ｎ－Ｃ_１－Ｃ_４アルキルアミノ酸、Ｎ－メチルアミノ酸、Ｎ－Ｃ_２－Ｃ_６アルケニルアミノ酸、Ｎ－アリルアミノ酸、Ｎ－Ｃ_７－Ｃ_１４アラルキルアミノ酸、Ｎ－ベンジルアミノ酸、Ｎ－フェネチルアミノ酸が例示されるが、これらに限定されるものではない。

【0087】

本明細書における「アミノ酸」にはそれぞれに対応する全ての同位体を含まれる。「アミノ酸」の同位体は、少なくとも１つの原子が、原子番号（陽子数）が同じで、質量数（陽子と中性子の数の和）が異なる原子で置換されたものである。本明細書の「アミノ酸」に含まれる同位体の例としては、水素原子、炭素原子、窒素原子、酸素原子、リン原子、硫黄原子、フッ素原子、塩素原子などがあり、それぞれ、^２Ｈ、^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ等が含まれる。

【0088】

（製造方法）
ある態様において、本発明は、後述の工程Ａおよび工程Ｂを含む、Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する方法に関する。

【0089】

（工程Ａ）
工程Ａは、Ｎ－置換アミノ酸、その塩、もしくはそれらの溶媒和物、またはＮ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物、その塩、もしくはそれらの溶媒和物と、電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸、その塩、その脱水体、またはそれらの溶媒和物とを、縮合試薬の存在下または非存在下で反応させて、Ｎ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、もしくはそれらの溶媒和物を得る工程である。本明細書において、ペプチド化合物がジペプチドを含むとは、該ペプチド化合物を構成するアミノ酸配列中に該ジペプチドを含むことを意味する。

【0090】

ある態様において、工程Ａに用いられる「Ｎ－置換アミノ酸」は、主鎖のアミノ基が－ＮＨＲである任意の天然または非天然アミノ酸であり、ここで、Ｒは水素以外の任意の基である。Ｒとして具体的には、例えば、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキルなどが挙げられ、またＲはプロリンのようにＮ原子に結合した炭素鎖とα位の炭素原子とが環を形成していてもよく、該環はさらに任意の置換基で置換されていてもよい。また、Ｎ－置換アミノ酸は塩の形態や溶媒和物の形態であってもよい。

【0091】

ある態様において、工程Ａに用いられる「Ｎ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物」は、前記Ｎ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有していれば、該ペプチド化合物に含まれる他のアミノ酸の種類および数は限定されない。また、該ペプチド化合物は、塩の形態や溶媒和物の形態であってもよい。

【0092】

工程Ａに用いられるＮ－置換アミノ酸、またはＮ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物は、商業的供給業者から購入するか、あるいは商業的供給業者から購入したもの改変して調製してもよい。

【0093】

このようなＮ－置換アミノ酸、またはＮ－置換アミノ酸残基をＮ末端に有するペプチド化合物として具体的には、下記式（２）：

［式中、
Ｐ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルスルホニルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニル、１つまたは複数のハロゲンによって置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
Ｒ_３は、ヒドロキシ、Ｏ－ＰＧ_２、任意のアミノ酸残基、または任意のペプチド残基であり、
ＰＧ_２は、カルボキシル基の保護基である。］
で表される化合物、またはその塩、もしくはそれらの溶媒和物が挙げられる。

【0094】

ある態様において、工程Ａに用いられる「電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸」は、アミノ酸のα炭素に水素以外の二つの任意の置換基を有し、アミノ酸の主鎖のアミノ基が非置換であり、かつ該アミノ基が電子求引性の保護基で保護されている（すなわち、「保護基－ＮＨ－」）、アミノ酸を意味する。該アミノ酸は、塩の形態や溶媒和物の形態であってもよい。α炭素に結合している二つの置換基は、同一でもよく、異なっていてもよい。該置換基として、具体的には、例えば、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキルなどが挙げられる。また、α炭素に結合している二つの置換基はそれらが結合している炭素原子と一緒になって置換されていてもよい脂環式環、または置換されていてもよい複素環を形成していてもよい。

【0095】

工程Ａに用いられる電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸は、商業的供給業者から購入するか、あるいは商業的供給業者から購入したものを改変することにより調製してもよい。

【0096】

ある態様において、工程Ａは、縮合試薬の存在下で反応が行うことができる。一方、工程Ａは、例えば、Ｎ－非置換－α，αジ置換アミノ酸の脱水体を用いる場合など、縮合反応が進行すれば、縮合試薬の非存在下で反応を行ってもよい。

【0097】

このような電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸として具体的には、下記式（３）：

［式中、
ＰＧ_１は、電子求引性の保護基であり、
Ｒ_１およびＱ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、または置換されていてもよいＣ_７－Ｃ_１４アラルキルから独立して選択されるか、あるいは
Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環または４～７員飽和複素環を形成する。］
で表される化合物、またはその塩、もしくはそれらの溶媒和物が挙げられる。

【0098】

ある態様において、Ｎ－非置換－α，αジ置換アミノ酸に結合した電子求引性の保護基は、該保護基が結合しているＮＨ基のｐＫａ（水中）が６～１１となる保護基であり、ＮＨ基のｐＫａ（水中）が８～１１となる保護基が好ましい。このような保護基として具体的には、Ｃ_２－Ｃ_６ハロアシルが挙げられ、より具体的には、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、ペンタフルオロプロピオニル、２，３，３，３－テトラフルオロ－２－（トリフルオロメチル）プロピオニル、または３，３，３－トリフルオロ－２－（トリフルオロメチル）プロピオニルなどが挙げられる。

【0099】

ある態様において、工程Ａによって得られる、Ｎ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物として具体的には、下記式（４）：

［式中、
ＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１は式（３）のＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１とそれぞれ同義であり、
Ｐ_２、Ｒ_２、およびＲ_３は式（２）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３とそれぞれ同義である］
で表される化合物、またはその塩、もしくはそれらの溶媒和物が挙げられる。

【0100】

（工程Ｂ）
工程Ｂは、工程Ａによって得られたペプチド化合物のＮ末端にある電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基のアミノ基に、塩基と置換基導入剤の存在下、置換基を導入して、電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、かつ該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程である。

【0101】

本工程で導入される置換基として、具体的には、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいシクロアルキルなどが挙げられる。

【0102】

ある態様において、工程Ｂに用いられる塩基は、その共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）が２３～３０であるものが好ましい。このような塩基として具体的には、後述のアミジン骨格を有する塩基、グアニジン骨格を有する塩基、またはホスファゼン骨格を有する塩基などが挙げられる。

【0103】

ある態様において、工程Ｂに用いられる置換基導入剤は、Ｎ末端の電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸残基のアミノ基（すなわち「保護基－ＮＨ－」）に置換基を導入するために用いられる。置換基導入剤としては、求電子試薬を用いることができる。具体的には導入する置換基と脱離基（例えば、ハロゲン、トリフルオロメタンスルホニル基、メタンスルホニル基、もしくはトシル基などのスルホン酸基、またはリン酸基）とが結合した化合物を用いることができる。

【0104】

ある態様において、工程Ｂによって得られる電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物として具体的には、下記式（１）：

［式中、
Ｐ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルであり、
ＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１は式（３）のＰＧ_１、Ｒ_１、およびＱ_１とそれぞれ同義であり、
Ｐ_２、Ｒ_２、およびＲ_３は式（２）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３とそれぞれ同義である］
で表される化合物、またはその塩、もしくはそれらの溶媒和物が挙げられる。

【0105】

本発明の方法によって製造される「Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物」は、そのＮ末端のアミノ基が保護基で保護されているものでも、保護基が除去されて遊離のアミノ基（ＮＨＲ－）であるものでもよい。Ｎ末端のアミノ基が保護基で保護されている場合、該保護基は、工程Ａに用いた「電子求引性の保護基でアミノ基が保護されているＮ－非置換－α，αジ置換アミノ酸」に起因した電子求引性の保護基でも、該電子求引性の保護基が脱保護された後に導入された別の保護基（例えば、Ｆｍｏｃ基）でもよい。本発明は、前記工程Ａおよび前記工程Ｂに加えて、電子求引性の保護基を除去する工程および該保護基とは別の任意の保護基を導入する工程を含むことができる。保護基の脱着には、たとえば、「Greene’s,“Protective Groups in Organic Synthesis”（第５版，John Wiley & Sons 2014）」に記載の方法を用いることができる。

【0106】

ある態様において、本発明は、以下のスキームに示すとおりの工程Ａおよび工程Ｂを含む、式（１）で表される２つのアミノ酸残基が連結された構造を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する方法に関する。

【0107】

上記の各式中、ＰＧ_１は、アミノ基の保護基であり、式（４）において、ＰＧ_１が結合しているＮＨ基のｐＫａが１１以下となるような保護基が好ましく用いられる。ＰＧ_１が結合しているＮＨ基のｐＫａが１１以下、好ましくは６～１１、より好ましくは８～１１の場合、ＰＧ_１が結合している式（４）のＮＨ基に選択的にＰ_１基を導入することが可能である。ｐＫａは、Advanced Chemistry Development (ACD/Labs) Software V11.02 ((C) 1994-2019 ACD/Labs)を用いた計算値を用いることができる。たとえば、トリフルオロアセチルが窒素原子に結合した、ｔｅｒｔ－ブチル（２，２，２－トリフルオロアセチル）アラニナートのＮＨ基のｐｋａは９．７１であり、２－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）プロパン酸ｔｅｒｔ－ブチルのＮＨ基のｐｋａは９．２１である。また、ペンタフルオロプロピオニルが窒素原子に結合した、２－メチル－２－（２，２，３，３，３－ペンタフルオロプロパンアミド）プロパン酸メチルのＮＨ基のｐｋａは９．２７であり、トリクロロアセチルが窒素原子に結合した、２－メチル－２－（２，２，２－トリクロロアセトアミド）プロパン酸メチルのＮＨ基のｐｋａは９．７２である。その一方で、これらハロアシル基より電子求引力の弱いアセチル基が窒素原子に結合した、２－アセトアミド－２－メチルプロパン酸メチルのＮＨ基のｐｋａは１４．３６であり、ＮＨ基の酸性度はハロアシル基より弱い。本発明において、ＰＧ_１は、ＮＨ基のプロトンの酸性度が高くなるような電子求引性の保護基が好ましく、このような保護基としてＣ_２－Ｃ_６ハロアシルが挙げられる。Ｃ_２－Ｃ_６ハロアシルとしては、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、ペンタフルオロプロピオニル、２，３，３，３－テトラフルオロ－２－（トリフルオロメチル）プロピオニル、または３，３，３－トリフルオロ－２－（トリフルオロメチル）プロピオニルなどが好ましい。

【0108】

式（１）中、Ｐ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルである。Ｐ_１が、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルである場合、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルとして好ましくは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、またはｉ－プロピルであり、Ｐ_１が、Ｃ _２ －Ｃ_６アルケニルである場合、Ｃ _２ －Ｃ_６アルケニルとして好ましくは、アリルであり、Ｐ_１が、Ｃ_７－Ｃ_１４アラルキルである場合、Ｃ_７－Ｃ_１４アラルキルとして好ましくは、ベンジルまたはフェネチルである。

【0109】

上記の各式中、Ｒ_１およびＱ_１は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、または置換されていてもよいＣ_７－Ｃ_１４アラルキルから独立して選択されるか、あるいは
Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環または４～７員飽和複素環を形成する。

【0110】

Ｒ_１および／またはＱ_１がＣ_１－Ｃ_６アルキルである場合、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルとして好ましくは、メチル、エチル、ｉ－プロピル、２－メチルプロピルである。Ｒ_１および／またはＱ_１がＣ_２－Ｃ_６アルケニルである場合、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニルとして好ましくはアリルである。Ｒ_１および／またはＱ_１がＣ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキルである場合、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキルとして好ましくはメトキシメチル、エトキシメチル、１－プロポキシメチル、２－プロポキシメチル、ｎ－ブトキシメチル、ｉ－ブトキシメチル、ｓ－ブトキシメチル、ｔ－ブトキシメチル、ペンチルオキシメチル、３－メチルブトキシメチル、１－メトキシエチル、２－メトキシエチル、または２－エトキシエチルである。Ｒ_１および／またはＱ_１がＣ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキルである場合、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキルとして好ましくはシクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチル、シクロヘプチルメチル、２－シクロプロピルエチル、２－シクロブチルエチル、２－シクロペンチルエチル、２－シクロへキシルエチルである。Ｒ_１および／またはＱ_１が置換されていてもよいＣ_７－Ｃ_１４アラルキルである場合、Ｃ_７－Ｃ_１４アラルキルとして好ましくはベンジルまたはフェネチルであり、Ｃ_７－Ｃ_１４アラルキルのアリールの置換基として好ましくは、ハロゲン、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシ、およびシアノからなる群より選択される１つまたは複数の基である。

【0111】

Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環または４～７員飽和複素環を形成する場合、３～８員脂環式環として好ましくは、シクロプロパン環、シクロブタン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環であり、４～７員飽和複素環として好ましくはテトラヒドロピラン環である。

【0112】

上記の各式中、Ｐ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルである。Ｐ_２が、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルである場合、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルとして好ましくは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、またはｉ－プロピルであり、Ｐ_２が、Ｃ _２ －Ｃ_６アルケニルである場合、Ｃ _２ －Ｃ_６アルケニルとして好ましくは、アリルであり、Ｐ_２が、Ｃ_７－Ｃ_１４アラルキルである場合、Ｃ_７－Ｃ_１４アラルキルとして好ましくは、ベンジルまたはフェネチルである。

【0113】

上記の各中、Ｒ_２は、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルスルホニルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニル、１つまたは複数のハロゲンによって置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_６アルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルＣ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルコキシＣ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_７－Ｃ_１４アラルキルである。

【0114】

Ｒ_２として好ましくは、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６フルオロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_４ヒドロキシアルキル、メチルスルホニルＣ_１－Ｃ_２アルキル、Ｃ_２－Ｃ_３アルキニル、１つまたは複数のフッ素によって置換されていてもよいＣ_１－Ｃ_４アルコキシＣ_１－Ｃ_２アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキルＣ_１－Ｃ_２アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルコキシＣ_１－Ｃ_２アルキル、ベンジル、フェネチルである。

【0115】

Ｒ_２として具体的には、たとえば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、１－メチルプロピル、２－メチルプロピル、ｎ－ブチル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ｎ－ペンチル、プロパルギル、３，３－ジフルオロブチル、５，５－ジフルオロペンチル、メトキシメチル、１－メトキシエチル、２－メトキシエチル、ｎ－プロポキシメチル、１－ヒドロキシエチル、シクロプロポキシメチル、シクロブトキシメチル、（２，２，２－トリフルオロエトキシ）メチル、２－メチルスルホニルエチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチル、ベンジル、フェネチルなどが挙げられる。

【0116】

上記の各式中、Ｒ_３は、ヒドロキシ、Ｏ－ＰＧ_２、任意のアミノ酸残基、または任意のペプチド残基であり、ここでＰＧ_２は、カルボキシル基の保護基である。Ｒ_３がＯ－ＰＧ_２である場合、ＰＧ_２として具体的には、たとえば、ｔ－ブチルなどのアルキルや、トリチル、クミル、アリル、ベンジルなどが挙げられる。Ｒ_３が任意のアミノ酸残基、または任意のペプチド残基である場合、アミノ酸残基またはペプチド残基は、固相合成用樹脂に担持されていてもよい。ペプチド残基が固相合成用樹脂に担持されている場合、該樹脂はペプチド残基のＣ末端のアミノ酸残基に担持されていても、それ以外の任意の位置のアミノ酸残基に担持されていてもよい。固相合成用樹脂として、好ましくはＣＴＣ樹脂、Ｗａｎｇ樹脂、またはＳＡＳＲＩＮ樹脂が挙げられ、さらに好ましくはＣＴＣ樹脂である。またＲ_３が任意のペプチド残基である場合、該ペプチド残基は任意の種類および数のアミノ酸残基によって構成される。ペプチド残基を構成するアミノ酸残基の数として好ましくは２～１３であり、より好ましくは２～９である。

【0117】

式（１）中、以下の式：

で表されるアミノ酸残基として具体的には、たとえば、MeAib、MecLeu、Me(Me)Phe、Me(Me)Abu、Me(Me)Leu、Me(Me)Ser(Me)、Me(Me)Phe、Me(Me)Cha、Me(Me)Val、EtAib、nPrAib、AllylAib、BnAibが挙げられる。

【0118】

式（１）中、以下の式：

で表されるアミノ酸残基として具体的には、たとえば、MeAla、MeLeu、MeCha、MeVal、MeAla(cPent)、MeAla(cBu)、MeAla(cPr)、MeChg、MeGly(cPent)、MeGly(cBu)、MeGly(cPr)、MeAbu、MeNva、MeNle、MeNva(5-F2)、MeHle、MeIle、MeSer(nPr)、MeSer(cPr)、MeHnl、MeHnl(7-F2)、MePRA、MeSer(Me)、MeThr、MeSer(cBu)、MeSer(Tfe)、MeThr(Me)、MeHse(Me)、MeMet(O2)、EtVal、nPrValが挙げられる。

【0119】

式（１）中、Ｒ_３が任意のアミノ酸残基である場合、該アミノ酸残基として具体的には、たとえば、MeSer(tBuOH)、bAla、bMeAla、MeGly、MePhe、MePhe(3-F)、MePhe(4-F)、D-MePhe、2-ACHxC、2-ACPnC、3-CF3-bAla、Asp-mor、Asp-mor(26-bicyc)、Asp-mor(SO2)、Asp-NMe2、Asp-oxz、Asp-pip、Asp-pip(345-F6)、Asp-pip(4-Me)、Asp-pip-tBu、Asp-piz(oxe)、Asp-pyrro、Asp-pyrro(34-F4)、Asp-pyrro(3-Me2)、D-(Propargyl)Gly-(C#CH2)、D-3-Abu、D-3-MeAbu、D-Gly(Allyl)-(C#CH2)、D-Hph-(C#CH2)、D-Leu-(C#CH2)、D-MeAsp-pyrro、D-MeLeu-(C#CH2)、D-Pic(2)-(C#CH2)、D-Pro-(C#CH2)、D-Ser(iPen)-(C#CH2)、D-Ser(NtBu-Aca)-(C#CH2)、EtAsp-pip、MeAsp-aze、MeAsp-mor、MeAsp-mor(26-bicyc)、MeAsp-mor(SO2)、MeAsp-NMe2、MeAsp-oxz、MeAsp-pip、MeAsp-pip(345-F6)、MeAsp-pip(3-F2)、MeAsp-pip(4-F2)、MeAsp-pip(4-Me)、MeAsp-piz(oxe)、MeAsp-pyrro、MeAsp-pyrro(34-F4)、MeAsp-pyrro(3-Me2)、nPrAsp-pipが挙げられる。

【0120】

工程Ａは、式（２）で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物と、式（３）で表される化合物、その塩、その脱水体、またはそれらの溶媒和物とを縮合試薬と反応させて、式（４）で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程、あるいは式（２）で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物、および式（３）で表される化合物の脱水体（すなわち、式（３’）で表される化合物）、その塩、またはそれらの溶媒和物とを縮合試薬の非存在下で反応させて、式（４）で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程である。

【0121】

以下の式（２）で表される化合物は、商業的供給業者から購入するか、あるいは必要に応じて、商業的供給業者から購入したものを改変して用いることができる。具体的にはたとえば、式（２）で表される化合物は、商業的供給業者から購入したものにＰ_２を導入することによって、製造することができる。

式（２）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３は、式（１）のＰ_２、Ｒ_２、およびＲ_３とそれぞれ同義である。

【0122】

以下の式（３）で表される化合物は、商業的供給業者から購入するか、あるいは必要に応じて、商業的供給業者から購入したものを改変して用いることができる。具体的にはたとえば、式（３）で表される化合物は、商業的供給業者から購入したものに、溶媒中、塩基とＰＧ_１導入試薬を用いてＰＧ_１を導入することによって、製造することができる。ＰＧ_１導入試薬として具体的には、たとえば、トリフルオロ酢酸エチル、ペンタフルオロプロピオン酸エチル、またはトリクロロ酢酸エチル、トリフルオロ酢酸無水物、ペンタフルオロプロピオン酸無水物、トリクロロ酢酸無水物などが挙げられ、塩基として具体的には、たとえば、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドなどが挙げられる。ＰＧ_１の導入の際に用いられる溶媒として具体的には、トリフルオロ酢酸エチル、ペンタフルオロプロピオン酸エチル、またはトリクロロ酢酸エチルを導入試薬として用いた場合には、たとえば、メタノール、エタノールなどが挙げられる。また、トリフルオロ酢酸無水物、ペンタフルオロプロピオン酸無水物、トリクロロ酢酸無水物を導入試薬として用いた場合には、たとえば、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ピリジンなどが挙げられる。

式中、ＰＧ_１、Ｑ_１、およびＲ_１は式（１）のＰＧ_１、Ｑ_１、およびＲ_１とそれぞれ同義である。

【0123】

工程Ａは、文献既知の反応条件を適用して行うことができる。例えば、メルク株式会社が平成１４年５月１日に発行した固相合成ハンドブックなどに記載されている方法が例示され、これらを反応条件に応じて適宜用いればよい。工程Ａで用いられる縮合試薬として、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＤＩＣ（Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）に代表されるカルボジイミド系縮合剤、カルボジイミド系縮合剤とＨＯＡｔ、ＨＯＢｔ、ｏｘｙｍａに代表される添加剤の組み合わせ、ＨＡＴＵ（Ｏ－（７－アザ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＨＢＴＵ（Ｏ－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＨＣＴＵ（Ｏ－（６－クロロ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＣＯＭＵ（（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルホリノカルベニウムヘキサフルオロリン酸塩）に代表されるウロニウム塩系縮合剤、ＰｙＡＯＰ（（７－アザベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＰｙＢＯＰ（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ－トリ（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＰｙＯｘｉｍ（［エチルシアノ（ヒドロキシイミノ）アセタト－Ｏ^２］トリ－１－ピロリジニルホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩）に代表されるホスホニウム塩系縮合剤、１－クロロ－Ｎ，Ｎ－２－トリメチル－１－プロペニルアミン（Ｇｈｏｓｅｚ試薬）、ＴＣＦＨ（クロロ－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルホルムアミジニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＰｙＣＩＵ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－ビス（テトラメチレン）クロロホルムアミジニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＢＴＦＦＨ（フルオロ－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－ビス（テトラメチレン）ホルムアミジニウムヘキサフルオロリン酸塩）、ＴＦＦＨ（フルオロ－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルアミジニウムヘキサフルオロリン酸塩）に代表されるホルムアミジニウム塩系縮合剤などを用いることができる。好ましくは、ＤＩＣもしくはＥＤＣＩ・ＨＣｌのいずれか、またはＤＩＣおよびＯｘｙｍａの組み合わせである。

【0124】

また、ＰＧ_１がＣ_２－Ｃ_６ハロアシルである場合、式（３）で表される化合物から調製した、この化合物の脱水体である式（３’）で表されるオキサゾロンを工程Ａに用いることもできる。オキサゾロン環を構成する酸素原子および酸素原子と窒素原子の間の炭素原子はＰＧ_１のＣ_２－Ｃ_６ハロアシルのカルボニル基に由来し、Ｒ_４はＰＧ_１のＣ_２－Ｃ_６ハロアシルのハロアルキル基に由来する、Ｃ_１－Ｃ_５ハロアルキルである。オキサゾロンを調製するための反応剤として具体的には、たとえば、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、塩化チオニルなどが挙げられる。

【0125】

式（３’）で表される化合物において、Ｒ_１およびＱ_１は式（３）のＲ_１およびＱ_１と同義である。Ｒ_１およびＱ_１は、それらが結合している炭素原子と一緒になって３～８員脂環式環を形成していてもよく、このような該３～８員脂環式環として具体的には、シクロプロパン環、シクロブタン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環などが挙げられる。

【0126】

式（３’）で表される化合物において、Ｒ_４はＣ_１－Ｃ_５ハロアルキルであり、Ｃ_１－Ｃ_５ハロアルキルとして具体的には、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、1,2,2,2-テトラフルオロ-1-(トリフルオロメチル)エチル、または2,2,2-トリフルオロ-1-(トリフルオロメチル)エチルなどが挙げられる。これらのうちでは、トリフルオロメチルが好ましい。

【0127】

工程Ｂは、式（４）で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物をＰ_１導入試薬と反応させて、式（１）で表されるペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を得る工程である。

【0128】

本発明では、Ｐ_１導入試薬としてＰ_１Ｘ（式中、Ｐ_１は、式（１）のＰ_１と同義であり、Ｘは脱離基である）と塩基の組み合わせを用いることができる。工程Ｂでは、式（４）で表される化合物に、好適なｐＫａの塩基の存在下でＰ_１Ｘを作用させることで、ＰＧ_１が結合した窒素原子に選択的にＰ_１を導入することができる。

【0129】

Ｐ_１Ｘとして、具体的には、ヨウ化アルキル、臭化アルキル、トリフルオロメタンスルホン酸アルキル、ｐ－トルエンスルホン酸アルキル、ヨウ化アルケニル、臭化アルケニル、トリフルオロメタンスルホン酸アルケニル、ｐ－トルエンスルホン酸アルケニル、ヨウ化アラルキル、臭化アラルキル、トリフルオロメタンスルホン酸アラルキル、ｐ－トルエンスルホン酸アラルキルなどが挙げられる。Ｐ_１導入試薬がメチル化試薬である場合、メチル化試薬として具体的には、たとえば、ヨウ化メチル、ジメチル硫酸、トリフルオロメタンスルホン酸メチル、ｐ－トルエンスルホン酸メチル、メタンスルホン酸メチルなどが挙げられる、Ｐ_１導入試薬がエチル化試薬である場合、エチル化試薬として具体的には、たとえば、ヨウ化エチル、臭化エチル、ジエチル硫酸、トリフルオロメタンスルホン酸エチル、ｐ－トルエンスルホン酸エチル、メタンスルホン酸エチルなどが挙げられる。Ｐ_１導入試薬がアリル化試薬である場合、アリル化試薬として具体的には、たとえば、塩化アリル、臭化アリルなどが挙げられる。Ｐ_１導入試薬がベンジル化試薬である場合、ベンジル化試薬として具体的には、たとえば、塩化ベンジル、臭化ベンジルなどが挙げられる。Ｐ_１導入試薬がフェネチル化試薬である場合、フェネチル化試薬として具体的には、たとえば、（２－ヨードエチル）ベンゼン、（２－ブロモエチル）ベンゼンなどが挙げられる。

【0130】

Ｐ_１導入試薬としてＰ_１Ｘと塩基の組み合わせを用いる場合、塩基は、目的とする窒素原子にＰ_１を導入するのに適した塩基性度をもつものを用いることができる。塩基の塩基性度は、塩基の共役酸のｐＫａで表される。塩基の共役酸のｐＫａを塩基のｐＫａとよぶことがある。
具体的には、Ｐ_１が結合しているＮＨ基の水素を脱水素化するに足る、ｐＫａを持つ塩基を用いることができる。

【0131】

塩基の共役酸のｐＫａは、Advanced Chemistry Development (ACD/Labs) Software V11.02 ((c) 1994-2019 ACD/Labs)を用いた計算値、Chem. Eur. J. 2002, 8, 1682‐1693、J. Org. Chem.2005, 70, 3, 1019-1028、Eur. J. Org. Chem., 2019, 40, 6735-6748、またはSigma-Aldrich社のカタログ記載の値などを適宜参照することができる。

【0132】

ｐＫａは溶媒により異なる。ＤＢＵ、ＤＢＮ、ＴＭＧＮ、ＭＴＢＤ、ＢＴＭＧの共役酸の水中でのｐＫａは、それぞれ１３．２８、１３．４２、１２．２６、１４．３７、１３．８１である。（（Advanced Chemistry Development (ACD/Labs) Software V11.02 ((c) 1994-2019 ACD/Labs)を用いた計算値））

【0133】

一方、ＤＢＵ、ＴＭＧＮ、ＭＴＢＤ、Ｐ１－ｔＢｕ、ＢＴＰＰ、ＢＥＭＰの共役酸のアセトニトリル中でのｐＫａは、２４．３２、２５．１、２５．４３、２６．９、２８．４，２７．６である（Chem. Eur. J. 2002, 8, 1682‐1693、Sigma-Aldrich社のカタログ記載値）。ＤＢＮの共役酸のアセトニトリル中でのｐＫａは、２３．８９である（Eur. J. Org. Chem., 2019, 40, 6735-6748）。

【0134】

【表1】

【0135】

塩基の共役酸の水中でのｐＫａ値（Advanced Chemistry Development (ACD/Labs) Software V11.02 ((C) 1994-2019 ACD/Labsによる計算値）と、アセトニトリル中でのｐＫａ値は、アセトニトリル中でのｐＫａ値のほうがおおよそ１０～１４大きい。

【0136】

本発明では、ＰＧ_１が結合しているＮＨ基のｐＫａ（水中）が１１以下となるような保護基が好ましく用いられる。ＰＧ_１が結合しているＮＨ基のｐＫａ（水中）は、好ましくは６～１１であり、より好ましくは８～１１である。

【0137】

ＮＨ基のプロトンを脱プロトン化するのに必要な塩基の共役酸のｐＫａは、ＮＨ基のｐＫａと比較して、少なくとも２以上、好ましくは２～３、さらに好ましく２～６離れていることが必要である。

【0138】

したがって、ＰＧ_１が結合したＮＨ基のｐＫａが６～１１である場合、用いる塩基の共役酸のｐＫａは、（１）ＮＨ基のｐＫａより大きく、（２）さらにｐＫａは少なくとも２以上、好ましくは６以上離れていて、（３）さらに水中でのｐＫａのアセトニトリル中でのｐＫａの換算値分（１０～１４）大きな値のｐＫａを持つ塩基が好ましい。具体的な塩基の共役酸のｐＫａ値（アセトニトリル中）として、１８～３１、２２～２９、２２～３０、２２～３１、２３～２９、２３～３０、２３～３１であれば本反応の塩基として用いることができる。用いる塩基の共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）の範囲として好ましくは、２２～３１である。

【0139】

また、ＰＧ_１が結合したＮＨ基のｐＫａ（アセトニトリル中）が８～１１である場合、用いる塩基の共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）が２０～３１、２０～３０、２０～２９、２１～３１、２１～３０、２１～２９、２２～３１、２２～３０、２２～２９、２３～３１、２３～３０、２３～２９であれば本反応の塩基として用いることができる。用いる塩基の共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）の範囲として好ましくは、２３～３０である。

【0140】

ある態様において、前記塩基はアミジン骨格を有する下記式Ｂ１で表される。

［式中、
ＲＢ_１とＲＢ_４は、それぞれ独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１とＲＢ_４は、ＲＢ_１が結合している窒素原子およびＲＢ_４が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２とＲＢ_３は、それぞれ独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２とＲＢ_３は、ＲＢ_２が結合している窒素原子およびＲＢ_３が結合している窒素原子ならびに該窒素原子が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成する］

【0141】

ＲＢ_１～ＲＢ_４が、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである場合、該Ｃ_１－Ｃ_４アルキルとして好ましくはメチル、エチルが挙げられる。
ＲＢ_１とＲＢ_４が５～８員環を形成する場合、該５～８員環として好ましくは、ピロリジン環、ピペリジン環、アゼパン環などが挙げられる。
ＲＢ_２とＲＢ_３が５～８員環を形成する場合、該５～８員環として好ましくは、1,4,5,6-テトラヒドロピリミジン環などが挙げられる。

【0142】

式Ｂ１で表される塩基として具体的には、たとえば、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン（DBU）、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノン-5-エン（DBN）などが挙げられる。

【0143】

ある態様において、前記塩基はグアニジン骨格を有する下記式Ｂ２で表される。

［式中、
ＲＢ_６は、水素またはＣ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_５とＲＢ_７は、それぞれ独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_８は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、かつＲＢ_９はＣ_１－Ｃ_４アルキルまたはフェニルであるか、ＲＢ_８とＲＢ_９は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合している炭素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ここでＲＢ_９がフェニルである場合、２つのＢ２は、該フェニル基の２つのベンゼン環が縮合してナフタレンを形成してもよい。］

【0144】

ＲＢ_５～ＲＢ_８が、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである場合、該Ｃ_１－Ｃ_４アルキルとして好ましくはメチルであり、ＲＢ_９が、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである場合、該Ｃ_１－Ｃ_４アルキルとして好ましくはｔ－ブチルである。
ＲＢ_５とＲＢ_７が５～８員環を形成する場合、該５～８員環として好ましくは、イミダゾリジン環、ヘキサヒドロピリミジン環、１，３－ジアゼパン環などが挙げられる。
ＲＢ_８とＲＢ_９が５～８員環を形成する場合、該５～８員環として好ましくは、1,4,5,6-テトラヒドロピリミジン環などが挙げられる。

【0145】

式Ｂ２で表される塩基として具体的には、たとえば、1,8-ビス（テトラメチルグアニジノ）ナフタレン（TMGN）、7-メチル-1,5,7-トリアザビシクロ[4.4.0]デカ-5-エン（MTBD）、2-tert-ブチル-1,1,3,3-テトラメチルグアニジン（BTMG）、1,5,7-トリアザビシクロ[4.4.0]デカ-5-エン（TBD）などが挙げられる。

【0146】

ある態様において、前記塩基はホスファゼン骨格を有する下記式Ｂ３で表される。

［式中、
ＲＢ_１０は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１０およびＲＢ_１１は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１１は、ＲＢ_１０およびＲＢ_１１が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１１およびＲＢ_１２は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１２は、ＲＢ_１１およびＲＢ_１２が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１２およびＲＢ_１３は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１３は、ＲＢ_１２およびＲＢ_１３が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１３およびＲＢ_１４は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１４は、ＲＢ_１３およびＲＢ_１４が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１４およびＲＢ_１５は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１５は、ＲＢ_１４およびＲＢ_１５が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_１６は水素、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールである。］

【0147】

ＲＢ_１０～ＲＢ_１５が、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである場合、該Ｃ_１－Ｃ_４アルキルとして好ましくはメチル、エチルであり、ＲＢ_１６が、Ｃ_１－Ｃ_８アルキルである場合、該Ｃ_１－Ｃ_８アルキルとして好ましくはｔ－ブチル、ｔ－オクチルである。
ＲＢ_１０とＲＢ_１１、ＲＢ_１２とＲＢ_１３、および／またはＲＢ_１４とＲＢ_１５が５～８員環を形成する場合、該５～８員環として好ましくは、ピロリジン環、ピペリジン環、アゼパン環などが挙げられる。
ＲＢ_１１とＲＢ_１２、および／またはＲＢ_１３とＲＢ_１４が５～８員環を形成する場合、該５～８員環は、ＲＢ_１１、ＲＢ_１２、ＲＢ_１３、およびＲＢ_１４が結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子以外にヘテロ原子を含まない、５～８員の飽和環であることが好ましい。

【0148】

式Ｂ３で表される塩基として具体的には、たとえば、tert-ブチルイミノ-トリス(ジメチルアミノ)ホスホラン（P1-tBu）、tert-オクチルイミノ-トリス（ジメチルアミノ）ホスホラン（P1-t-Oct）、tert-ブチルイミノ-トリ(ピロリジノ)ホスホラン（P1-t-Bu-トリス(テトラメチレン), BTPP）、2-tert-ブチルイミノ-2-ジエチルアミノ-1,3-ジメチルペルヒドロ-1,3,2-ジアザホスホリン（BEMP）、イミノ-トリス（ジメチルアミノ）ホスホラン（HP1(dma)）などが挙げられる。

【0149】

ある態様において、前記塩基は窒素原子を介した２つのリン原子を含むホスファゼン骨格を有する下記Ｂ４で表される。

［式中、
ＲＢ_１７は、独立してＣ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１７およびＲＢ_１８は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１８は、ＲＢ_１７およびＲＢ_１８が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１８およびＲＢ_１９は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_１９は、ＲＢ_１８およびＲＢ_１９が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_１９およびＲＢ_２０は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２０は、ＲＢ_１９およびＲＢ_２０が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_２１は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２１およびＲＢ_２２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２２は、ＲＢ_２１およびＲＢ_２２が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２２およびＲＢ_２３は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２３は、ＲＢ_２２およびＲＢ_２３が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２３およびＲＢ_２４は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２４は、ＲＢ_２３およびＲＢ_２４が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２４およびＲＢ_２５は、それらが結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２５は、ＲＢ_２４およびＲＢ_２５が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであるか、またはＲＢ_２５およびＲＢ_２６は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５～８員環を形成し、
ＲＢ_２６は、ＲＢ_２５およびＲＢ_２６が５～８員環を形成する場合を除き、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、
ＲＢ_２７は、Ｃ_１－Ｃ_４アルキル、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールである。］

【0150】

ＲＢ_１７～ＲＢ_２６が、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである場合、該Ｃ_１－Ｃ_４アルキルとして好ましくはメチル、エチルであり、ＲＢ_２７が、Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである場合、該Ｃ_１－Ｃ_４アルキルとして好ましくはｔ－ブチルである。
ＲＢ_１７とＲＢ_１８、ＲＢ_１９とＲＢ_２０、ＲＢ_２１とＲＢ_２２、ＲＢ_２３とＲＢ_２４、ＲＢ_２５とＲＢ_２６が５～８員環を形成する場合、該５～８員環として好ましくは、ピロリジン環、ピペリジン環、アゼパン環などが挙げられる。
ＲＢ_１７とＲＢ_１８が共にＣ_１－Ｃ_４アルキルである場合、ＲＢ_１９とＲＢ_２０も共にＣ_１－Ｃ_４アルキルであることが好ましく、ＲＢ_１７とＲＢ_１８が５～８員環を形成する、ＲＢ_１９とＲＢ_２０も５～８員環を形成することが好ましい。
ＲＢ_２１とＲＢ_２２が共にＣ_１－Ｃ_４アルキルである場合、ＲＢ_２３とＲＢ_２４およびＲＢ_２５とＲＢ_２６も共にＣ_１－Ｃ_４アルキルであることが好ましく、ＲＢ_２１とＲＢ_２２が５～８員環を形成する、ＲＢ_２３とＲＢ_２４およびＲＢ_２５とＲＢ_２６も５～８員環を形成することが好ましい。
ＲＢ_１８とＲＢ_１９、および／またはＲＢ_２２とＲＢ_２３が５～８員環を形成する場合、該５～８員環は、ＲＢ_１１、ＲＢ_１２、ＲＢ_１３、およびＲＢ_１４が結合している各窒素原子および該各窒素原子が結合しているリン原子以外にヘテロ原子を含まない、５～８員の飽和環であることが好ましい。

【0151】

式Ｂ４で表される塩基として具体的には、たとえば、1-tert-ブチル-2,2,4,4,4-ペンタキス(ジメチルアミノ)-2λ⁵,4λ⁵-カテナジ(ホスファゼン)（P2-t-Bu）、1-エチル-2,2,4,4,4-ペンタキス(ジメチルアミノ)-2λ⁵、4λ⁵-カテナジ(ホスファゼン)（P2-Et）などが挙げられる。

【0152】

本発明において、Ｐ_１導入試薬としてＰ_１Ｘと塩基の組み合わせを用いる場合、反応に用いる溶媒としては、ＤＭＦやＮＭＰに代表されるアミド系溶媒、ＤＭＩに代表されるウレア系溶媒、テトラヒドロフランや２－メチルテトラヒドロフランに代表されるエーテル系溶媒、およびアセトニトリルが挙げられ、これらのうちではアミド系溶媒が好ましい。

【0153】

Ｐ_１導入試薬としてＰ_１Ｘと塩基を用いる場合、ＰＧ_１で保護されたアミノ基のｐＫａ（水中）が６～１１であり、塩基の共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）が２３～３０となるＰＧ_１と塩基の組み合わせが好ましい。また、ＰＧ_１で保護されたアミノ基のｐＫａ（水中）が８～１１であり、塩基の共役酸のｐＫａ（アセトニトリル中）が２３～２７となるＰＧ_１と塩基の組み合わせがより好ましい。ＰＧ_１、Ｐ_１Ｘ、および塩基の組み合わせとしては、ＰＧ_１がトリフルオロアセチルであり、Ｐ_１Ｘがヨウ化メチル、ジメチル硫酸、ヨウ化エチル、臭化アリル、ヨウ化ｎ－プロピル、臭化ベンジルであり、塩基がＰ１－ｔＢｕ、ＴＭＧＮ、またはＭＴＢＤであることが好ましい。具体的なＰＧ_１と塩基の組み合わせとしては、トリフルオロアセチルとＴＭＧＮ、トリフルオロアセチルとＰ１－ｔＢｕ、トリフルオロアセチルとＭＴＢＤなどが挙げられる。

【0154】

ある態様において、本発明は、Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する前記方法を含む、Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物を製造する方法に関する。当該方法は、本明細書に記載された方法により製造されたＮ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基をＮ末端に有し、該Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含むペプチド化合物のＮ末端および／またはＣ末端に、１または複数のアミノ酸残基および／またはペプチド残基をさらに縮合させる工程を含むことができる。この方法により製造されたペプチド化合物は、Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む任意のペプチド化合物であり、これには、該ジペプチド残基のＮ末端側およびＣ末端側に任意の数および種類のアミノ酸が連結されたペプチド化合物が含まれる。

【0155】

ある態様において、本発明は、本発明の方法により製造された式（１）で表されるペプチド化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物からＮ末端の保護基（例えば、ＰＧ_１）を脱保護する工程、任意にペプチド鎖を伸長する工程、およびＣ末端側の基とＮ末端側の基を環化して環状部を形成する工程をさらに含む、環状ペプチド化合物の製造方法にも関する。
環状ペプチド化合物は、８～１５のアミノ酸残基、好ましくは１０～１３のアミノ酸残基を含み、少なくとも３個、好ましくは少なくとも３個～（環状ペプチド化合物を構成するアミノ酸残基数－１）個のＮ置換アミノ酸残基を含み、かつ少なくとも１個、好ましくは少なくとも３個のＮ置換されていないアミノ酸残基を含み、環状部が少なくとも８個のアミノ酸残基、好ましくは少なくとも１０個のアミノ酸残基を含む。

【0156】

式（１）で表されるペプチド化合物からＰＧ_１を脱保護する工程には、たとえば、「Greene’s,“Protective Groups in Organic Synthesis”（第５版，John Wiley & Sons 2014）」に記載の方法を用いることができる。

【0157】

ペプチド鎖を伸長する工程、および環状部を形成する工程には、たとえばＷＯ２０１３／１００１３２もしくはＷＯ２０１８／２２５８６４に記載の方法など公知の方法を用いることができる。固相合成によってペプチド鎖を伸長した場合には、伸長工程と環状部を形成する工程の前に、樹脂からの切り出し工程を含んでもよい。

【0158】

なお、本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。

【実施例】

【0159】

本発明の内容を以下の実施例、比較例及び参照例でさらに説明するが、本発明はその内容に限定されるものではない。全ての出発物質および試薬は商業的供給業者から入手、もしくは公知の方法を用いて合成した。ＬＣＭＳの分析条件は表２に記載した。

【0160】

【表2】

【0161】

実施例１：本実施例中で使用するアミノ酸やレジンに担持されたペプチド等の調製
実施例１－１：ペプチド合成機によるペプチド合成に用いるＦｍｏｃ－アミノ酸
本明細書内に記載するペプチド合成において、ペプチド合成機による合成には表３～表５に記載するＦｍｏｃ－アミノ酸を用いた。
表３、および表５記載のＦｍｏｃ－アミノ酸は商業的供給業者から購入した。
表４記載のＦｍｏｃ－アミノ酸は以下に示すスキームのとおり合成した。

【0162】

【表3】

【0163】

【表4】

【0164】

【表5】

【0165】

実施例１－１－１：化合物ＡＡ２－００１、（２Ｓ）－４－［３－クロロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル］－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）ブタン酸、（Ｆｍｏｃ－Ｈｐｈ（４－ＣＦ３－３－Ｃｌ）－ＯＨ）の合成

【0166】

（４Ｓ）－４－［（２－メチルプロパン－２－イル）オキシカルボニルアミノ］－５－オキソ－５－フェニルメトキシペンタン酸（Ｂｏｃ－Ｇｌｕ－ＯＢｎ、ＣＡＳ番号３０９２４－９３－７）（２００ｇ，５９２．８２ｍｍｏｌ）、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド（１０６ｇ，６４９．７８ｍｍｏｌ，１．１０等量）、ＤＭＡＰ（３．６ｇ，２９．４７ｍｍｏｌ，０．０５等量）のＴＨＦ（２Ｌ）溶液に、窒素雰囲気下、０℃にてＤＩＣ（１３８ｍＬ，１．５４等量）を滴下にて加えた。反応液を２５℃で１６時間撹拌し、固形物をろ過にて取り除き、ろ液を減圧下溶媒留去した。残渣をトルエンで希釈し、生じた固体をろ過にて取り除き、ろ液を減圧下溶媒留去した。残渣を再結晶（アセトン／ヘプタン）にて精製し、化合物ＡＡ２－００１－ａ（１－Ｏ－ベンジル ５－Ｏ－（１，３－ジオキソイソインドル－２－イル） （２Ｓ）－２－［（２－メチルプロパン－２－イル）オキシカルボニルアミノ］ペンタンジオエート）を得た。（２３０ｇ，８０％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５０５．２（Ｍ＋Ｎａ）＋
保持時間：０．９９２分（分析条件ＳＭＤｍｅｔｈｏｄ＿１６）

【0167】

臭化ニッケル三水和物（ＮｉＢｒ_２・３Ｈ_２Ｏ）（４ｇ，０．０７等量）および４，４’－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－２，２’－ビピリジル（ｄｔｂｂｐｙ）（３．９ｇ，１４．５５ｍｍｏｌ，０．０７等量）をＤＭＡ（５００ｍＬ）に加え、窒素雰囲気下、５０℃で２時間撹拌しＮｉ溶液を調製した。

【0168】

化合物ＡＡ２－００１－ａ（１００ｇ，２０７．３ｍｍｏｌ）、亜鉛粉末（７０ｇ，５等量）および４－ブロモ－２－クロロ－１－（トリフルオロメチル）ベンゼン（１６０ｇ，６１７ｍｍｏｌ，３等量）のＤＭＡ（５００ｍＬ）混合液に、先に調整したＮｉ溶液を添加し、２５℃で１６時間撹拌した。反応液にＥＤＴＡ・２Ｎａ水溶液（１０％）を加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル）で精製し、化合物ＡＡ２－００１－ｂを得た。（７５ｇ，７７％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４９４（Ｍ＋Ｎａ）＋
保持時間：２．８６３分（分析条件ＳＭＤｍｅｔｈｏｄ＿１７）

【0169】

化合物ＡＡ２－００１－ｂ（７５ｇ，１５８．９３ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（９００ｍＬ）を０℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸（ＴｆＯＨ）（４２ｍＬ，３．００等量）を滴下にて加えた。室温で１時間撹拌後、水（７５ｍＬ）を加えた。この混合液を水で抽出し、合わせた水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒留去した。残渣にアセトニトリル／水（９００／９００ｍＬ）を加え、水酸化ナトリウム水溶液（４８％）でｐＨを７に調整した。この溶液にＦｍｏｃ－ＯＳｕ（５１．２ｇ，１５１．９３ｍｍｏｌ，０．９５等量）を加え、ｐＨ７．８から８．０を維持しながら室温で１６時間撹拌した。反応液をろ過し、ろ液を６ｍｏｌ／Ｌ塩酸水でｐＨを２に調整した。析出した固体を集め、５０℃で乾燥して化合物ＡＡ２－００１（（２Ｓ）－４－［３－クロロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル］－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）ブタン酸、Ｆｍｏｃ－Ｈｐｈ（４－ＣＦ３－３－Ｃｌ）－ＯＨ）を得た。（７０ｇ，８７％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２５．８（Ｍ＋Ｎａ）＋
保持時間：２．１８０分（分析条件ＳＭＤｍｅｔｈｏｄ＿２１）
１Ｈ―ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１２．７０（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．７９－７．５９（ｍ，５Ｈ），７．４５－７．２８（ｍ，５Ｈ），４．４０－４．１９（ｍ，３Ｈ），３．９６－３．８８（ｍ，１Ｈ），２．８２－２．６０（ｍ，２Ｈ），２．１１－１．７７（ｍ，２Ｈ）

【0170】

実施例１－１－２：化合物ＡＡ２－００２、（２Ｓ）－３－シクロブチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパン酸（Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ（ｃＢｕ）－ＯＨ）の合成

【0171】

化合物ＡＡ２－００２－ａ（（２Ｓ）－３－シクロブチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ］プロパン酸、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ（ｃＢｕ）－ＯＨ）（３．３６ｇ，９．１９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４６ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下にてパラホルムアルデヒド（０．８２８ｇ，２７．６ｍｍｏｌ）、無水硫酸マグネシウム（２．７７ｇ，２２．９９ｍｍｏｌ）、三フッ化ほう素ジエチルエーテル錯体（ＢＦ_３・ＯＥｔ_２）（１．３９８ｍＬ，１１．０３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液に飽和塩化ナトリウム水溶液を水で半分の濃度に希釈した水溶液を加え、さらにＤＣＭを加えて希釈した。分離した有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄し、濾過をした。得られた有機層を減圧下溶媒留去して化合物ＡＡ２－００２－ｂを粗生成物として得た（３．６３ｇ）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３７８（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：１．０１分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0172】

得られた化合物ＡＡ２－００２－ｂ（３．４７ｇ）のＤＣＭ（３０．６ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下、トリエチルシラン（４．３９ｍＬ，２７．６ｍｍｏｌ）、水（０．１６６ｇ，９．１９ｍｍｏｌ）、三フッ化ほう素ジエチルエーテル錯体（ＢＦ_３・ＯＥｔ_２）（３．５０ｍＬ，２７．６ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。反応液に飽和塩化ナトリウム水溶液を水で半分の濃度に希釈した水溶液を加えて室温にて１５分間撹拌した。得られた混合物から分離した有機層を減圧下溶媒留去した。得られた残渣を逆相カラムクロマトグラフィー（０．１％ギ酸‐水／０．１％ギ酸‐アセトニトリル）にて精製することで化合物ＡＡ２－００２（（２Ｓ）－３－シクロブチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパン酸、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ（ｃＢｕ）－ＯＨ）を得た。（３．１８ｇ，２工程９１％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３８０（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．９４分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0173】

実施例１－１－３：化合物ＡＡ２－００３、（２Ｓ）－２－シクロペンチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］酢酸（Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ）の合成

【0174】

化合物ＡＡ２－００３－ａ（（２Ｓ）－２－シクロペンチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ］酢酸、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ）（３０．０ｇ，８２ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（７．３９ｇ，２４６ｍｍｏｌ）およびＣＳＡ（０．９５４ｇ，４．１０ｍｍｏｌ）のトルエン（１６０ｍＬ）混合液に、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（９．０ｍＬ）を加えた後、６０℃で４時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、固体をろ過により除去した。ろ液を酢酸エチル（２２０ｍＬ）で希釈後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で順に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後に減圧濃縮し、化合物ＡＡ２－００３－ｂを粗生成物として得た。これ以上の精製は実施せずに次の反応を行った。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３７８（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：１．０１分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0175】

得られた化合物ＡＡ２－００３－ｂ（３１ｇ，８２ｍｍｏｌ）とトリエチルシラン（ＴＥＳ）（６５．５ｍＬ，４１０ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（ＤＣＥ）（９０ｍＬ）の混合液にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（７６ｍＬ，９８４ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で１６時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後に減圧濃縮し、得られた固体をｎ－ヘキサン／酢酸エチル（９５／５）で洗浄し、減圧乾燥することで化合物ＡＡ２－００３（（２Ｓ）－２－シクロペンチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］酢酸、Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ）を得た（２９．１ｇ，９３％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３８０（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．９２分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0176】

実施例１－１－４：化合物ＡＡ２－００４、（２Ｓ）－２－シクロブチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］酢酸（Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ（ｃＢｕ）－ＯＨ）の合成

【0177】

化合物ＡＡ２－００４－ａ（２Ｓ）－２－シクロブチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ］酢酸、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ（ｃＢｕ）－ＯＨ）（２．５ｇ，７．１１ｍｍｏｌ）を出発原料とし、化合物ＡＡ２－００２－ｂの合成と同様の手法にて化合物ＡＡ２－００４－ｂを粗生成物として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３６４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．９７分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0178】

上記により得られた化合物ＡＡ２－００４－ｂの全量を用いて、化合物ＡＡ２－００２の合成と同様の手法にて反応後、逆相カラムクロマトグラフィー（０．１％ギ酸水溶液／０．１％ギ酸アセトニトリル溶液）にて精製することで化合物ＡＡ２－００４（（２Ｓ）－２－シクロブチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］酢酸、Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ（ｃＢｕ）－ＯＨ）を得た。（２．３２ｇ，２工程８９％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３６６（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．８８分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0179】

実施例１－１－５：化合物ＡＡ２－００５、（２Ｓ）－３－シクロペンチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパン酸（Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ）の合成

【0180】

化合物ＡＡ２－００５－ａ（（２Ｓ）－３－シクロペンチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ］プロパン酸、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ）（１０ｇ，２６．４ｍｍｏｌ）を出発原料とし、化合物ＡＡ２－００２－ｂの合成と同様の手法にて化合物ＡＡ２－００５－ｂ（１０．５ｇ）を粗生成物として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３９２（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：１．０５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0181】

得られた化合物ＡＡ２－００５－ｂ（１０．５ｇ）を用いて、化合物ＡＡ２－００２の合成と同様の手法にて反応後、逆相カラムクロマトグラフィー（０．１％ギ酸水溶液／０．１％ギ酸アセトニトリル溶液）にて精製することで化合物ＡＡ２－００５（（２Ｓ）－３－シクロペンチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパン酸、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ）を得た。（１０．１１ｇ，２工程９６％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３９４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．９８分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0182】

実施例１－２：本実施例中で使用するレジンに担持されたアミノ酸およびペプチド等の調製
実施例１－２－１：化合物１－２－１、（３Ｓ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－４－オキソ－４－ピロリジン－１－イルブタン酸－２－クロロトリチルレジン（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）の合成

【0183】

本明細書では、ポリマーやレジンと化合物が結合した場合、ポリマーやレジン部位を○にて表記する場合がある。また、レジン部位の反応点を明確にさせる目的で、○に接続させて反応部位の化学構造を表記させる場合がある。例えば、上記の構造（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－１））では、レジンの２－クロロトリチル基がＡｓｐの側鎖カルボン酸とエステル結合を介して結合している。なお、ｐｙｒｒｏとはピロリジンを意味し、上記の構造ではＣ末端のカルボン酸基がピロリジンとアミド結合を形成している。

【0184】

窒素雰囲気下、０℃にてＤＭＦ（６００ｍＬ）にＥＤＣＩ・ＨＣｌ（６７．１ｇ，３５０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（４３．４ｇ，３２１ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（１２０ｇ，２９２ｍｍｏｌ）を順に加え、０℃で１時間撹拌した。この反応液にピロリジン（２６．３ｍＬ，３２１ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、０℃で１時間半撹拌した。反応液に酢酸エチル（１０ｖ）と０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水（２ｖ）を０℃で加え、有機層を分離した。得られた有機層を０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液／水（１／１（ｖ／ｖ））、飽和塩化ナトリウム水溶液／水（１／１（ｖ／ｖ））で順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒留去して化合物１－２－１－ａを粗生成物として得た。（１３７．１ｇ，ｑｕａｎｔ．）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４６５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：１．０５分（分析条件ＳＱＤ化合物ＡＡ０５）

【0185】

氷冷下にて、化合物１－２－１－ａ（１３７ｇ，３９５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１３７ｍＬ）溶液にＴＦＡ（２７１ｍＬ）を内温が１０℃を超えないようにゆっくり加えた。室温で１時間撹拌後、ジイソプロピルエーテル（３．４Ｌ）を４回に分けて加え、析出した固体をろ取し、乾燥して化合物１－２－１－ｂ（（３Ｓ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－４－オキソ－４－ピロリジン－１－イルブタン酸，Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ）を得た。（１０８．４ｇ，９０％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４０９（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．８３分（分析条件ＳＱＤ化合物ＡＡ０５）

【0186】

Ｆｍｏｃアミノ酸のレジンへの担持反応は、ＷＯ２０１３／１００１３２もしくはＷＯ２０１８／２２５８６４に記載の方法に従って行った。フィルター付きの反応容器に２－クロロトリチルクロライドレジン（１．６０ｍｍｏｌ／ｇ、１００－２００ｍｅｓｈ、１％ＤＶＢ、４８．７ｇ）と脱水ジクロロメタン（５００ｍＬ）を入れ、室温にて２０分間振とうした。窒素圧をかけてジクロロメタンを除いた後、化合物１－２－１－ｂ（１５．９１ｇ） と脱水ジクロロメタン（３５０ｍＬ）に脱水メタノール（１２．６３ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３２．６ｍＬ）を加えた混合液を反応容器に添加し、６０分間振とうした。窒素圧をかけて反応液を除いた後、脱水ジクロロメタン（３５０ｍＬ）に脱水メタノール（９７．３ｍＬ）とジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３２．６ｍＬ）を加えた混合液を反応容器に添加し、１時間３０分振とうした。窒素圧をかけて反応液を除いた後、ジクロロメタン（３５０ｍＬ）を入れ５分間振とうした後に窒素圧をかけて反応液を除いた。このジクロロメタンでのレジンの洗浄を５回繰り返し、得られたレジンを減圧下で一晩乾燥させ、（３Ｓ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－４－オキソ－４－ピロリジン－１－イルブタン酸－２－クロロトリチルレジン（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ、化合物１－２－１、５９．７９ｇ）を得た。

【0187】

担持率の確認のため、得られた化合物１－２－１（１２．６ｍｇ）を反応容器に入れ、ＤＭＦ（２ｍＬ）を加えて、室温にて１時間振とうした。その後、ＤＢＵ（４０μＬ）を加えて３０℃で３０分間振とうした。その後、反応混合液にＤＭＦ（８ｍＬ）を加え、その溶液１ｍＬをＤＭＦ（１１．５ｍＬ）で希釈した。得られた希釈溶液の吸光度（２９４ｎｍ）を測定（Ｓｈｉｍａｄｚｕ、ＵＶ－１６００ＰＣ（セル長１．０ｃｍ）を用いて測定）した。樹脂に担持されているＦｍｏｃアミノ酸のＦｍｏｃに由来するジベンゾフルベンを測定することで、化合物１－２－１ の担持量を０．４６４ｍｍｏｌ／ｇと算出した。
なお、同様に合成した担持量が異なる別ロットについてもペプチド合成や検討等に使用した。

【0188】

実施例１－２－２：Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の調製

【0189】

本実施例中にて使用するＦｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の調製は、ペプチド合成機（Multipep RS； Intavis社製）を用いて、Ｆｍｏｃ法により行った。操作の詳細な手順については合成機に付属のマニュアルに従った。

【0190】

実施例１－２－１にて調製したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－１、０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ）（１カラムあたり１００ｍｇ）と、Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－ＯＨ（０．６ｍｏｌ／Ｌ）と１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ，０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液、およびジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（１０％ｖ／ｖ）を合成機にセットした。

【0191】

合成を始めるにあたって、セットしたＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－１、０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ）（１カラムあたり１００ｍｇ）に対し、ジクロロメタン（ＤＣＭ）を１カラムあたり１ｍＬを加えて３０分程度静置し、レジンを膨潤させた。続いてレジンをＤＭＦにて洗浄した。

【0192】

脱Ｆｍｏｃ工程
１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２％ｖ／ｖ）を１カラムあたり０．７ｍＬを加えて５～１０分間静置し、脱Ｆｍｏｃを行った。続いて、レジンをＤＭＦ（１カラムあたり０．７ｍＬ、４回繰り返す）にて洗浄した。

【0193】

伸長工程
脱Ｆｍｏｃ工程を経たレジンに対し、セットしたＦｍｏｃ－アミノ酸溶液（１カラムあたり０．３０ｍＬ）とＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（１カラムあたり０．３６ｍＬ）とを混合した溶液を加え、４０度にて静置した。反応完結後、レジンをＤＭＦ（１カラムあたり０．７ｍＬ、４回繰り返す）にて洗浄した。

【0194】

上記工程にて、Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌを伸長した。伸長後は脱Ｆｍｏｃ工程を行わずに、さらにＤＣＭにて洗浄し、乾燥させた後、以後の検討に用いた。
なお、化合物１－２－２が得られたことを確認する目的で、得られたレジンの一部に対し、ＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドの切り出しをおこなった。切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、目的ペプチドＦｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２＊）の生成が確認された。なお、本実施例において、化合物番号に＊を付した場合には、反応の確認のためにレジンからペプチドを切り出して確認した化合物を示す。化合物１－２－２＊は、化合物１－２－２に含まれるペプチドのカルボン酸と、レジンの２－クロロトリチル基との結合を切断したペプチド化合物を示す。

【0195】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ５２２．３２ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７６分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0196】

実施例１－２－３：Ｆｍｏｃ－ＭｅＰｈｅ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－３）の調製

【0197】

実施例１－２－２と同様に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－１、０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ）に対してＦｍｏｃ－ＭｅＰｈｅ－ＯＨを伸長することによって調製した。

【0198】

なお、化合物１－２－３が得られたことを確認する目的で、得られたレジンの一部に対し、ＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ）にてペプチドの切り出しをおこなった。切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、目的ペプチドＦｍｏｃ－ＭｅＰｈｅ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－３＊）の生成が確認された。

【0199】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ５７０．３１ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．８０分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0200】

実施例１－２－４：（３Ｒ）－３－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］ブタン酸－２－クロロトリチルレジン（Ｆｍｏｃ－Ｄ－３－ＭｅＡｂｕ－Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）ｒｅｓｉｎ、化合物１－２－４）の合成

【0201】

商業的供給業者より購入した（３Ｒ）－３－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］ブタン酸（Ｆｍｏｃ－Ｄ－３－ＭｅＡｂｕ－ＯＨ）（１１．５ｇ，３３．９ｍｍｏｌ）と２－クロロトリチルクロライドレジン（１．６９ｍｍｏｌ／ｇ、１００－２００ｍｅｓｈ、１％ＤＶＢ、５０ｇ、８４．５ｍｍｏｌ）を用い、化合物１－２－１の合成と同様の手法にて、（３Ｒ）－３－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］ブタン酸－２－クロロトリチルレジン（Ｆｍｏｃ－Ｄ－３－ＭｅＡｂｕ－Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）ｒｅｓｉｎ、化合物１－２－４）を得た。（５８．９５ｇ，担持量０．３４３ｍｍｏｌ／ｇ）
なお、同様に合成した担持量が異なる別ロットにおいても本実施例におけるペプチド合成に使用した。

【0202】

実施例１－３：ペプチド合成に用いるＦｍｏｃ以外の保護基で保護されたアミノ酸、およびその脱水体
本明細書内に記載するペプチド合成において用いる、Ｆｍｏｃ以外の保護基で保護されたアミノ酸、およびその脱水体は以下のとおり合成した。

【0203】

実施例１－３－１：２－メチル－２－［（２，２，２－トリフルオロアセチル）アミノ］プロパン酸 （Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＯＨ）（化合物１－３－１）の調製

【0204】

２－アミノ－２－メチルプロパン酸（２５．０ｇ）に対し、メタノール（２４２ｍＬ）、ＤＩＰＥＡ（６３．５ｍＬ，１．５等量）、トリフルオロ酢酸エチル（（ＣＡＳ番号３８３－６３－１）、 ３７．６ｍＬ，１．３等量）を加え、混合物を５０度にて１８時間撹拌した。その後、溶媒を減圧留去し、得られた残渣に対して１Ｎ塩酸水溶液と酢酸エチルを加え、有機層と水層を分離した。得られた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥させ、溶媒を減圧留去し、１８．２ｇの粗生成物を得た。

【0205】

粗生成物（１６．０ｇ）をＴＢＭＥ（８０ｍＬ）に溶解した後、撹拌しながらヘプタン（３２０ｍＬ）を１時間以上かけて滴下した。混合物を氷冷下、さらに１時間撹拌した後、濾過をした。得られた粉末をＴＢＭＥ／ヘプタン溶液（１／４，３２ｍＬ）で洗浄した後、減圧乾燥し、２－メチル－２－［（２，２，２－トリフルオロアセチル）アミノ］プロパン酸（Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＯＨ）（化合物１－３－１）を１３．５ｇ得た。
ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ １９７．９３ （Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．４０分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0206】

実施例１－３－２．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＯＨ（（Ｓ）－２－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）ブタン酸、化合物１－３－２－ｂ）の合成

【0207】

化合物１－３－２－ａ（（Ｓ）－２－アミノ－２－メチルブタン酸、イソバリン、H-(Me)Abu-OH）（１５．０ｇ，１２８ｍｍｏｌ）のメタノール（１５０ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（８２．７ｇ，６４０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸エチル（５４．６ｇ，３８４ｍｍｏｌ）を加えた後、５０℃で１６時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、減圧濃縮し、得られた残渣をＴＢＭＥに溶解した後、１Ｎ塩酸水溶液で２回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後に減圧濃縮し、粗生成物を得た。得られた粗生成物をＴＢＭＥ／ヘキサン（１：７）から再結晶することで、化合物１－３－２－ｂ（（Ｓ）－２－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）ブタン酸）（１２ｇ，４４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２１４．０（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．３２分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0208】

実施例１－３－３．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＯＨ（（Ｓ）－２，４－ジメチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）ペンタン酸、化合物１－３－３－ｂ）の合成

【0209】

化合物１－３－３－ａ（２－メチルロイシン、（Ｓ）－２－アミノ－２，４－ジメチルペンタン酸、Ｈ－（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＯＨ）（１５．０ｇ，１０３ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（４０．１ｇ，３１０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸エチル（４４．０ｇ，３１０ｍｍｏｌ）を加えた後、５０℃で１６時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、減圧濃縮し、得られた残渣をＴＢＭＥに溶解した後、１Ｎ塩酸水溶液で２回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後に減圧濃縮し、粗生成物を得た。得られた粗生成物をＴＢＭＥ／ヘキサン（１：７）から再結晶することで、化合物１－３－３－ｂ（（Ｓ）－２，４－ジメチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）ペンタン酸）（１０ｇ，４０％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２４２．１（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６６分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0210】

実施例１－３－４．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＯＨ（（Ｓ）－３－メトキシ－２－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）プロパン酸、化合物１－３－４－ｂ）の合成

【0211】

化合物１－３－４－ａ（３－メトキシ－２－メチル－Ｌ－アラニン、（Ｓ）－２－アミノ－３－メトキシ－２－メチルプロパン酸、Ｈ－（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＯＨ）（１．５ｇ，１１ｍｍｏｌ）のメタノール（１９ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（５．９ｍＬ，３４ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸エチル（４．０ｍＬ）を加えた後、５０℃で２１時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、減圧濃縮し、得られた残渣をＴＢＭＥ（４５ｍＬ）に溶解した後、１Ｎ塩酸水溶液（４５ｍＬ）で２回、飽和塩化ナトリウム水溶液（４５ｍＬ）で１回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後に減圧濃縮し、粗生成物を得た。得られた粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィー（０．１％ギ酸‐水／０．１％ギ酸‐アセトニトリル）にて精製することで、化合物１－３－４－ｂ（（Ｓ）－３－メトキシ－２－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）プロパン酸）（２．０７ｇ，７２％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２２８．２（Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．４１分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0212】

実施例１－３－５．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＯＨ（（Ｓ）－２－メチル－３－フェニル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）プロパン酸、化合物１－３－５－ｂ）の合成

【0213】

化合物１－３－５－ａ（（２Ｓ）－２－アミノ－２－メチル－３－フェニルプロパン酸、Ｈ－（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＯＨ）（１０．０ｇ，５５．８ｍｍｏｌ）のメタノール（５００ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（２１．６３ｇ，１６７．４ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸エチル（２３．７８ｇ，１６７．４ｍｍｏｌ）を加えた後、５０℃で１６時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、減圧濃縮し、得られた残渣をＴＢＭＥに溶解した後、１Ｎ塩酸水溶液で２回、飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後に減圧濃縮し、粗生成物を得た。得られた粗生成物をＴＢＭＥ／ヘキサン（１：１５）から再結晶することで、化合物１－３－５－ｂ（（Ｓ）－２－メチル－３－フェニル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）プロパン酸）（８ｇ，５２％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２７４．０（Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．６８分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0214】

実施例１－３－６．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＯＨ（（Ｓ）－３－シクロヘキシル－２－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）プロパン酸、化合物１－３－６－ｃ）の合成

【0215】

化合物１－３－６ａ（２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－シクロヘキシル－２－メチルプロパン酸、Ｆｍｏｃ－（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＯＨ）のジクロロメタン（１８．４ｍＬ）溶液に４－（３－フェニルプロピル）ピペリジン（４．７ｍＬ，２２ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下室温で１６時間撹拌した。反応液に水（８ｍＬ）を加えて生成物を抽出し、水層を逆相カラムクロマトグラフィー（０．１％ギ酸‐水／０．１％ギ酸‐アセトニトリル）にて精製した。また、有機相に水（５ｍＬ）と２Ｎ塩酸（５ｍＬ）を加え、残る粗生成物を水層に抽出した後、水層を逆相カラムクロマトグラフィー（０．１％ギ酸‐水／０．１％ギ酸‐アセトニトリル）にて精製した。カラム精製物を合わせることで化合物１－３－６－ｂ（（Ｓ）－２－アミノ－３－シクロヘキシル－２－メチルプロパン酸、Ｈ－（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＯＨ）（１．１ｇ，８１％）とし、次の反応に用いた。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１８６．１（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．３２分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0216】

化合物１－３－６－ｂ（（Ｓ）－２－アミノ－３－シクロヘキシル－２－メチルプロパン酸、Ｈ－（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＯＨ）（１．１ｇ，６．０ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（３．１ｍＬ，１８ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸エチル（２．１ｍＬ）を加えた後、５０℃で２時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエチルアミン（３．１ｍＬ，１８ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸エチル（２．１ｍＬ）を加えた後、５０度で２０時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた残渣をＴＢＭＥ（３０ｍＬ）に溶解した後、１Ｎ塩酸水溶液（３０ｍＬ）で２回、飽和塩化ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）で１回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後に減圧濃縮し、粗生成物を得た。得られた粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィー（０．１％ギ酸‐水／０．１％ギ酸‐アセトニトリル）にて精製することで、化合物１－３－６－ｃ（（Ｓ）－３－シクロヘキシル－２－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）プロパン酸）（１．２２ｇ，７２％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２８０．２（Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．７５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0217】

実施例１－３－７．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＯＨ（（Ｓ）－２，３－ジメチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）ブタン酸、化合物１－３－７－ｂ）の合成

【0218】

化合物１－３－７－ａ（（Ｓ）－２－アミノ－２，３－ジメチルブタン酸、Ｈ－（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＯＨ）（２．０ｇ，１５ｍｍｏｌ）のメタノール（２５ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（８．０ｍＬ，４６ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸エチル（５．５ｍＬ）を加えた後、５０度で３時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエチルアミン（４．０ｍＬ，２３ｍｍｏｌ）トリフルオロ酢酸エチル（２．７ｍＬ）を加えた後、５０度で１６時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた残渣をＴＢＭＥ（４０ｍＬ）に溶解した後、１Ｎ塩酸水溶液（４０ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）で順に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後に減圧濃縮し、粗生成物を得た。得られた粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィー（０．１％ギ酸‐水／０．１％ギ酸‐アセトニトリル）にて精製することで、化合物１－３－７－ｂ（（Ｓ）－２，３－ジメチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）ブタン酸）（１．１７ｇ，３４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２２６．１（Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．５４分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0219】

実施例１－３－８．Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨ（１－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）シクロペンタン－１－カルボン酸、化合物１－３－８－ｂ）の合成

【0220】

化合物１－３－８－ａ（１－アミノシクロペンタンカルボン酸、Ｈ－ｃＬｅｕ－ＯＨ）（２５ｇ，１９４ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（３７．５ｇ，２９０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸エチル（４１．３ｇ，２９０ｍｍｏｌ）を加えた後、５０度で２日間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエチルアミン（４．０ｍＬ，２３ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸エチル（２．７ｍＬ）を加えた後、５０度で１６時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた残渣をＴＢＭＥに溶解した後、１Ｎ塩酸水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で順に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後に減圧濃縮し、粗生成物を得た。得られた粗生成物をＴＢＭＥ／ヘキサン（３：２０）から再結晶することで、化合物１－３－８－ｂ（１－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）シクロペンタン－１－カルボン酸）（２０ｇ，４６％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２２４．０（Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．４９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0221】

実施例１－３－９．２－（トリフルオロメチル）－３－オキサ－１－アザスピロ［４．４］ノナ－１－エン－４－オン（化合物１－３－９）の合成

【0222】

化合物１－３－８－ｂ（Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨ、１－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）シクロペンタン－１－カルボン酸）（２５ｇ，１１１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２２５ｍＬ）溶液に、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２７．７ｇ，１４４ｍｍｏｌを加え、室温で２日間撹拌した。反応後、反応液を減圧濃縮し、粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル）にて精製することで、化合物１－３－９（２－（トリフルオロメチル）－３－オキサ－１－アザスピロ［４．４］ノナ－１－エン－４－オン）（１１．９ｇ，５２％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝２０８．１（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．８６分（分析条件ＳＱＤＡＡ０５）

【0223】

実施例２：固相合成中のペプチドにてＮ末端がＮ－置換されたアミノ酸残基に対して、Ｎ末端がＴｆａ保護されたＮ－無置換－α，α－ジ置換アミノ酸を伸長し、固相上でのＮ－官能基化を経てＮ－置換－α，α－ジ置換アミノ酸残基の導入を試みた実験

【0224】

実施例２－１：Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＯＨの伸長
実施例２－１－１：Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、ＤＩＣを用いたＴｆａ－Ａｉｂ－ＯＨの伸長
フィルター付きの反応容器に、実施例１－２－２にて調製したＦｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）（０．４７３ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ｍＬ）を加えて室温にて１時間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で３回洗浄した。続いて、レジンに２％ＤＢＵ／ＤＭＦ溶液（脱Ｆｍｏｃ溶液：０．７ｍＬ）を加えて室温にて５分間振とうし、脱Ｆｍｏｃをおこなった。脱Ｆｍｏｃ溶液を除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。
得られたレジンに対し、Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＯＨの伸長反応を実施した。

【0225】

伸長反応は０．６Ｍ Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＯＨ／ＮＭＰ溶液（０．３ｍＬ）と１０％ＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（０．３６ｍＬ）とを混合した溶液をレジンに加え、４０度にて２０時間振とうすることで実施した。

【0226】

伸長反応の液相をフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．７ｍＬ）で４回洗浄し、化合物２－１（Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）のロット１（以下では化合物２－１－１と記載）を得た。

【0227】

反応の進行を確認するため、得られたレジン（化合物２－１－１）をＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１＊）の生成を確認した。他のペプチド成分は検出されなかった。このレジン（化合物２－１－１）は、実施例２－３にて使用した。

【0228】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ４８１．２１ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．５３分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0229】

実施例２－１－２：Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、ＤＩＣを用い、ｏｘｙｍａを添加剤として加えたＴｆａ－Ａｉｂ－ＯＨの伸長
フィルター付きの反応容器に、実施例１－２－２にて調製したＦｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）（０．４７３ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）をいれ、伸長試薬以外は実施例２－１－１と同様の方法にてＴｆａ－Ａｉｂの伸長をおこなった。伸長試薬は、０．６Ｍ Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＯＨ／０．３７５Ｍ ｏｘｙｍａ／ＮＭＰ溶液（０．３ｍＬ）と１０％ＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（０．３６ｍＬ）とを混合した溶液を使用した。実施例２－１－１と同様にレジンからペプチドを切り出し、ＬＣＭＳにて分析した結果、目的ペプチドＴｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１＊）８７．５０％（ＵＶａｒｅａ）に加えて、未反応のＨ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏが２．２％（ＵＶａｒｅａ）、および２つの同定されないピーク（それぞれ８．８５，１．４３％（ＵＶａｒｅａ））が確認された。このレジン（化合物２－１のロット２、以下では化合物２－１－２と記載）は、比較例１にて使用した。

【0230】

実施例２－１－３：Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、ＥＤＣＩ・ＨＣｌを用いたＴｆａ－Ａｉｂ－ＯＨの伸長
フィルター付きの反応容器に、実施例１－２－２にて調製したＦｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）（０．４７３ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）をいれ、伸長試薬以外は実施例２－１－１と同様の方法にてＴｆａ－Ａｉｂの伸長をおこなった。伸長試薬は、０．６Ｍ Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＯＨ／ＮＭＰ溶液（０．３ｍＬ）とＥＤＣＩ・ＨＣｌ（４８ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）／ＤＭＦ溶液（０．３６ｍＬ）とを混合した溶液を使用した。実施例２－１－１と同様にレジンからペプチドを切り出し、ＬＣＭＳにて分析した結果、目的ペプチドＴｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１＊）９３．１％（ＵＶａｒｅａ）に加えて、未反応のＨ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏが３．０％（ＵＶａｒｅａ）、同定されない３．９％（ＵＶａｒｅａ）のピークが確認された。このレジン（化合物２－１のロット３、以下では化合物２－１－３と記載）は、実施例２－２および実施例２－３にて使用した。

【0231】

実施例２－２：Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応（メチル化剤としてヨウ化メチル、塩基としてＤＢＵ）によるＮ－メチル化
フィルター付きの反応容器に、実施例２－１にて調製したＴｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１－３）（２５ｍｇ）にジクロロメタン（１ｍＬ）を加えて室温にて１５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＮＭＰ（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。

【0232】

得られたレジンに対し、ＤＢＵ（２３μＬ）／ＮＭＰ（０．３５ｍＬ）溶液を加え、続いてヨウ化メチル（６３μＬ）／ＮＭＰ（０．３５ｍＬ）溶液を加え、４０度で３０分間振とうした。液相をフィルターで除去した後、ＮＭＰ（０．７ｍＬ）にて４回、ジクロロメタンにて４回洗浄した。得られたレジンを少量サンプリングし、ＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析した。

【0233】

１回目のメチル化を行ったレジンに対し、反応転換率の向上の目的で、再度、同様の操作を実施した。２回目のメチル化は４０度で２０時間振とうして実施した。レジン洗浄することで、化合物２－２を得た。得られたレジンを少量サンプリングし、ＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的物（化合物２－２＊）と未反応物（化合物２－１＊）を確認した。結果は、表６に示す通りだった。

【0234】

【表6】

【0235】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ４９５．２３ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．５７分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0236】

この結果から、メチル化剤としてヨウ化メチルを、塩基としてＤＢＵ(共役酸のアセトニトリル中でのｐＫａ＝２４．３４（J. Org. Chem. 2005, 70, 1019-1028)）を用いた求核置換反応にて、Ｔｆａ保護されたＮ末端選択的にＮ－メチル化が進行することが分かった。試薬を入れ替えて反応を繰り返すことで、反応の転換率を向上させられることが示された。

【0237】

実施例２－３：Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応（メチル化剤としてヨウ化メチル、種々の塩基）によるＮ－メチル化
フィルター付きの反応容器に、実施例２－１にて調製したＴｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１－１または２－１－３）（２５ｍｇ）にジクロロメタン（１ｍＬ）を加えて室温にて１５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。

【0238】

得られたレジンに対し、塩基（添加量は表７中に記載）／ＤＭＦ（０．３５ｍＬ）溶液を加え、続いてヨウ化メチル（６３μＬ）／ＤＭＦ（０．３５ｍＬ）溶液を加え、４０度で１５時間振とうした。液相をフィルターで除去した後、ＤＭＦ（０．７ｍＬ）にて４回、ジクロロメタンにて４回洗浄し、化合物２－２を得た。得られたレジンを少量サンプリングし、ＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析した。
切り出して反応確認をした結果は、表７に示す通りだった。Ｐ１－ｔＢｕを塩基として使用した場合には、過剰にメチル化された生成物（化合物２－３＊）の生成も僅かに認められた。

【0239】

【表7】

【0240】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ５０９．２５ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．５９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0241】

この結果から、塩基としてＤＢＵよりも強い塩基性を有するＭＴＢＤ（共役酸のアセトニトリル中でのｐＫａ＝２５．４３（Chem. Eur. J. 2002, 8, 1682-1693））、ＴＭＧＮ（共役酸のアセトニトリル中でのｐＫａ＝２５．１（Chem. Eur. J. 2002, 8, 1682-1693））、Ｐ１－ｔＢｕ（共役酸のアセトニトリル中でのｐＫａ＝２６．９（アルドリッチ社 ホスファゼン塩基に関するウェブサイトhttps://www.sigmaaldrich.com/chemistry/chemical-synthesis/technology-spotlights/phosphazenes.html（２０１９年１０月１０日に閲覧）））を用いた求核置換反応にて、目的のＮ－メチル化が進行することが示された。なお、Ｐ１－ｔＢｕを用いた場合には、該当箇所であるＴｆａアミド部位とは別の２級アミド部位（Ａｓｐのアミノ基とＭｅＶａｌのカルボキシル基から構成されるアミド部位）にて過剰にメチル化された生成物が僅かに（３．８％）確認された。この結果より、Ｔｆａアミド部位で選択的にＮ－メチル化するためには、共役酸のｐＫａの値が２７以下である塩基を用いることがより好ましいことが推察される。

【0242】

実施例２－４：Ｎ－アルキル化後のＴｆａ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－２）のＴｆａ保護の脱保護
窒素雰囲気下、水素化ホウ素ナトリウム（０．５ｇ）にトリグリム（トリエチレングリコールジメチルエーテル）（６．６ｍＬ）を加え、室温にて１０分間撹拌し、２．０Ｍ水素化ホウ素ナトリウム／トリグリム溶液を得た。

【0243】

フィルター付きの反応容器に、実施例２－３、表７のｒｕｎ３にて調製した、ＴＭＧＮを塩基としてＮ－メチル化したレジン（化合物２－２）を加え、ジクロロメタン（１ｍＬ）を加えて室温にて３０分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＴＨＦ（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。

【0244】

得られたレジンに対しＴＨＦ（１２５μＬ）、メタノール（６３μＬ）、先に調製した２．０Ｍ 水素化ホウ素ナトリウム／トリグリム溶液（６３μＬ）を加え、室温で３０分間振とうした。液相をフィルターで除去した後、メタノール（０．７ｍＬ）にて４回（各洗浄時間は１分間）、続いてジクロロメタン（０．７ｍＬ）にて４回洗浄し、化合物２－４を得た。得られたレジンを少量サンプリングし、ＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析した。

【0245】

Ｔｆａ保護された原料ペプチドＴｆａ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－２＊）は完全に消費され、目的ペプチドＨ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－４＊）が観測された。ＬＣチャートは図１のとおりで、高純度での合成が可能であることが確認された。

【0246】

目的ペプチドＨ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－４＊）
ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ３９９．２３ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．３５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0247】

以上のとおり、本発明によって、嵩高いＮ－アルキルアミノ酸に続いてＮ－メチル－α，α－ジアルキルアミノ酸を高純度で導入できることが示された。またこれに続く脱Ｔｆａ工程も良好に進行することが確認できており、引き続きＮ末端から従来のペプチド伸長等を実施することが可能である。

【0248】

実施例２－５．固相上にて、嵩高いＮ－メチルアミノ酸（ＭｅＶａｌ）に続き、種々のＮ－メチル－α,α－ジアルキルアミノ酸を導入した実験
以下の一般式に従い、種々のＴｆａ－アミノ酸を用いて化合物２－５－１－１～化合物２－５－７－１および化合物２－５－１－２～化合物２－５－７－２を合成した。

【0249】

【表8】

【0250】

実施例２－５－１．Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－１－２）の合成
実施例２－５－１－１．Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＯＨの伸長
フィルター付きの反応容器に、実施例１－２－２と同様の手法により調製したＦｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）（０．５５２ ｍｍｏｌ／ｇ， １００ ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ ｍＬ）を加えて室温にて４５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で３回洗浄した。続いて、レジンに２％ ＤＢＵ／ＤＭＦ溶液（脱Ｆｍｏｃ溶液：０．７ ｍＬ）を加えて室温にて５分間振とうし、脱Ｆｍｏｃをおこなった。脱Ｆｍｏｃ溶液を除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で４回洗浄した。

【0251】

得られたレジンに対し、Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＯＨ（化合物１－３－２－ｂ）の伸長反応を実施した。

【0252】

伸長反応は０．６ Ｍ Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＯＨ（化合物１－３－２－ｂ）／ＮＭＰ溶液（０．３ ｍＬ）と１０％ ＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（０．３６ ｍＬ）とを混合した溶液をレジンに加え、６０度にて４８時間振とうすることで実施した。

【0253】

伸長反応の液相をフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．７ ｍＬ）で４回洗浄し、化合物２－５－１－１（Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を得た。

【0254】

反応の進行を確認するため、得られたレジン（化合物２－５－１－１）を一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－１－１＊）の生成を確認した。他のペプチド成分は検出されなかった。伸長後はＤＣＭにて洗浄し、乾燥させた後、以後の検討に用いた。

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４９５．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．５６分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0255】

実施例２－５－１－２．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－１－１）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応によるＮ－メチル化
フィルター付きの反応容器に、実施例２－５－１－１にて調製したＴｆａ－（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－１－１）（４５ ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ ｍＬ）を加えて室温にて４５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で４回洗浄した。

【0256】

得られたレジンに対し、ＴＭＧＮ（２７ｍｇ）／ＤＭＦ（０．１７５ ｍＬ）溶液を加え、続いてヨウ化メチル（３１ μＬ）／ＤＭＦ （０．１７５ ｍＬ）溶液を加え、４０度で１時間振とうした。液相をフィルターで除去した後、ＤＭＦ （０．７ ｍＬ）にて２回洗浄した。得られたレジンを少量サンプリングし、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析した。

【0257】

１回目のメチル化を行ったレジンに対し、反応転換率の向上の目的で、同様の操作をさらに３回実施した。２回目のメチル化は４０度で１．５時間振とうして実施した。３回目と４回目のメチル化は４０度で１時間振とうして実施した。４回のメチル化後、レジンをＤＭＦで４回、さらにＤＣＭで４回洗浄することで、化合物２－５－１－２を得た。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ａｂｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－１－２＊）９４．０％（ＵＶａｒｅａ）に加えてＴｆａアミド部位のＯ－メチル化体（化合物２－５－１－２ａ＊）６．０％（ＵＶａｒｅａ）を確認した。

【0258】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５０９．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６０分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0259】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５０９．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0260】

実施例２－５－２．Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－２－２）の合成
実施例２－５－２－１．Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＯＨの伸長
実施例２－５－１－１に示した手法により、化合物１－２－２（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ），０．６Ｍ Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＯＨ（化合物１－３－３－ｂ）／ＤＭＦ溶液（０．３ｍＬ）を用いて化合物２－５－２－１（Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－２－１＊）（８４．５％ ＵＶａｒｅａ）に加えてＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏの過剰伸長体（化合物２－５－２－１ａ＊）６．８％（ＵＶａｒｅａ）を主な不純物として確認した（脱Ｆｍｏｃ後の変換効率は＞９９％）。

【0261】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２３．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６７分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0262】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝８０４．７（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７３分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0263】

実施例２－５－２－２．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－２－１）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応によるＮ－メチル化
実施例２－５－１－２に示した手法により、化合物２－５－２－１（４５ｍｇ）を用いて化合物２－５－２－２（Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｌｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－２－２＊）（６８．５％ ＵＶａｒｅａ）に加えてＴｆａアミド部位のＯ－メチル化体（化合物２－５－２－２ａ＊）１７．０％（ＵＶａｒｅａ）、出発原料である化合物２－５－２－１＊（１４．５％ ＵＶａｒｅａ）を確認した。

【0264】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５３７．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７０分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0265】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５３７．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．８１分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0266】

実施例２－５－３．Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－３－２）の合成
実施例２－５－３－１．Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＯＨの伸長
実施例２－５－１－１に示した手法により、化合物１－２－２（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ），０．６Ｍ Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＯＨ（化合物１－３－４－ｂ）／ＤＭＦ溶液（０．３ｍＬ）を用いて化合物２－５－３－１（Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－３－１＊）の生成を確認した。他のペプチド成分は検出されなかった。

【0267】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５１１．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．５５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0268】

実施例２－５－３－２．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－３－１）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応によるＮ－メチル化
実施例２－５－１－２に示した手法により、化合物２－５－３－１（４５ｍｇ）を用いて化合物２－５－３－２（Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｓｅｒ（Ｍｅ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－３－２＊）の生成を確認した（９４．０％ ＵＶａｒｅａ）。

【0269】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２５．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６１分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0270】

実施例２－５－４．Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－４－２）の合成
実施例２－５－４－１．Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＯＨの伸長
実施例２－５－１－１と同様の手法により、反応時間を７２時間とすることで化合物１－２－２（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ），０．６Ｍ Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＯＨ（化合物１－３－５－ｂ）／ＤＭＦ溶液（０．３ｍＬ）を用いて化合物２－５－４－１（Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－４－１＊）の生成を確認した（８１．４％ ＵＶａｒｅａ）。脱Ｆｍｏｃ後の変換効率は＞９９％であり、主な不純物としてＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏの過剰伸長体（化合物２－５－４－１ａ＊）４．１％（ＵＶａｒｅａ）の他、構造不明のピークが検出された。

【0271】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５５７．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６８分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0272】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝８３８．７（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７３分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0273】

実施例２－５－４－２．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－４－１）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応によるＮ－メチル化
実施例２－５－１－２に示した手法により、化合物２－５－４－１（４５ｍｇ）を用いて化合物２－５－４－２（Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。この時２回目のＮ－メチル化も１時間で実施した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－４－２＊）（７９．７％ ＵＶａｒｅａ）の生成を確認した他、ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏの過剰伸長体（化合物２－５－４－２ａ＊）とＴｆａアミド部位のＯ－メチル化体（化合物２－５－４－２ｂ＊）（あわせて１１．８％ ＵＶａｒｅａ）を不純物として検出した（出発原料の変換効率は１００％）。

【0274】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５７１．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７４分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0275】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝８５２．７（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0276】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５７１．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0277】

実施例２－５－５．Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－５－２）の合成
実施例２－５－５－１．Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＯＨの伸長
実施例２－５－１－１と同様の手法により、反応時間を７２時間とすることで化合物１－２－２（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ），０．６Ｍ Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＯＨ（化合物１－３－６－ｃ）／ＤＭＦ溶液（０．３ｍＬ）を用いて化合物２－５－５－１（Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－５－１＊）の生成を確認した（８１．１％ ＵＶａｒｅａ）。主な不純物としてＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏの過剰伸長体（化合物２－５－５－１ａ＊）を含む複数の構造不明のピークが検出された（脱Ｆｍｏｃ後の変換効率は１００％）。

【0278】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５６３．６（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７６分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0279】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝８４４．８（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．８０分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0280】

実施例２－５－５－２．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｐｈｅ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－５－１）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応によるＮ－メチル化
実施例２－５－１－２に示した手法により、化合物２－５－５－１（４５ｍｇ）を用いて化合物２－５－５－２（Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。この時２回目のＮ－メチル化も１時間で実施した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｃｈａ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－５－２＊）（７４．４％ ＵＶａｒｅａ）に加えてＴｆａアミド部位のＯ－メチル化体（化合物２－５－５－２ａ＊）１２．１％（ＵＶａｒｅａ）、出発原料である化合物２－５－５－１＊（１３．５％ ＵＶａｒｅａ）を確認した。

【0281】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５７７．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．８０分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0282】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５７７．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．９２分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0283】

実施例２－５－６．Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－６－２）の合成
実施例２－５－６－１．Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＯＨの伸長
実施例２－５－１－１と同様の手法により、反応時間を７２時間とすることで化合物１－２－２（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ），０．６Ｍ Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＯＨ（化合物１－３－７－ｂ）／ＤＭＦ溶液（０．３ｍＬ）を用いて化合物２－５－６－１（Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－６－１＊）の生成を確認した（６６．６％ ＵＶａｒｅａ）。不純物としてＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏの過剰伸長体（化合物２－５－６－１ａ＊）を含む複数の構造不明のピークが検出された（脱Ｆｍｏｃ後の変換効率は９８％）。

【0284】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５０９．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．５９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0285】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝７９０．７（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６７分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0286】

実施例２－５－６－２．Ｔｆａ－（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－６－１）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応によるＮ－メチル化
実施例２－５－１－２に示した手法に基づき、反応温度を６０度とし、化合物２－５－６－１（４０ｍｇ）を用いて化合物２－５－６－２（Ｔｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。この時２回目のＮ－メチル化も１時間で実施した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－Ｍｅ（Ｍｅ）Ｖａｌ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－６－２＊）（２１．２％ ＵＶａｒｅａ）に加えてＴｆａアミド部位のＯ－メチル化体（化合物２－５－６－２ａ＊）１７．１％（ＵＶａｒｅａ）、出発原料である化合物２－５－６－１＊（３９．６％ ＵＶａｒｅａ）を確認した。また、複数の構造不明ピークを検出した。

【0287】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２３．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0288】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２３．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７７分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0289】

実施例２－５－７．Ｔｆａ－ＭｅｃＬｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－７－２）の合成
実施例２－５－７－１．Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）の脱Ｆｍｏｃ後、Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨの伸長
実施例２－５－１－１に示した手法により、化合物１－２－２（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ），０．６Ｍ Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨ（化合物１－３－８－ｂ）／ＤＭＦ溶液（０．３ｍＬ）を用いて化合物２－５－７－１（Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ｃＬｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－７－１＊）の生成を確認した。他のペプチド成分は検出されなかった。

【0290】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５０７．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．５６分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0291】

実施例２－５－７－２．Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－７－１）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応によるＮ－メチル化
実施例２－５－１－２に示した手法により、化合物２－５－７－１（４５ｍｇ）を用いて化合物２－５－７－２（Ｔｆａ－ＭｅｃＬｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ＭｅｃＬｅｕ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－５－７－２＊）（９２．１％ ＵＶａｒｅａ）の生成を確認した他、Ｔｆａアミド部位のＯ－メチル化体（化合物２－５－７－２ａ＊）７．９％（ＵＶａｒｅａ）を不純物として検出した（出発原料の変換効率は１００％）。

【0292】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２１．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６１分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0293】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２１．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７０分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0294】

以上、実施例２－５の結果より、本発明の手法によって、固相合成において嵩高いN-メチルアミノ酸に続き、ＭｅＡｉｂ以外の種々のＮ－メチル－α,α－ジアルキルアミノ酸の導入が実用的なレベルにて可能であることが示された。

【0295】

実施例２－６．固相上にて、嵩高いＮ－メチルアミノ酸（ＭｅＶａｌ）に続き、種々のＮ－置換－α,α―ジアルキルアミノ酸を導入した実験
以下の一般式に従い、種々のＴｆａ－アミノ酸を用いて化合物２－６－１～化合物２－６－４を合成した。

【0296】

【表9】

【0297】

実施例２－６－１．Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１）のＴｆａアミド部位のＮ－エチル化
フィルター付きの反応容器に、実施例２－１－１と同様の手法により調製したＴｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１）（０．５５２ ｍｍｏｌ／ｇ， ５０ ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ ｍＬ）を加えて室温にて４５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で４回洗浄した。

【0298】

得られたレジンに対し、ＴＭＧＮ （２９ｍｇ）／ＤＭＦ （０．１７５ ｍＬ）溶液を加え、続いてヨウ化エチル（４４ μＬ）／ＤＭＦ （０．１７５ ｍＬ）溶液を加え、６０度で１時間振とうした。液相をフィルターで除去した後、ＤＭＦ （０．７ ｍＬ）にて２回洗浄した。得られたレジンを少量サンプリングし、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析した。

【0299】

１回目のエチル化を行ったレジンに対し、反応転換率の向上の目的で、同様の操作をさらに４回実施した。５回目のエチル化後、レジンをＤＭＦで４回、さらにＤＣＭで４回洗浄することで、化合物２－６－１（Ｔｆａ－ＥｔＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を得た。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ＥｔＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－６－１＊）（２６．１％ ＵＶａｒｅａ）に加えてＴｆａアミド部位のＯ－エチル化体（化合物２－６－１ａ＊）１５．４％（ＵＶａｒｅａ）、出発原料化合物２－１＊（５４．８％ ＵＶａｒｅａ）等を確認した。

【0300】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５０９．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６０分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0301】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５０９．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６７分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0302】

実施例２－６－２．Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１）のＴｆａアミド部位のＮ－ｎ－プロピル化
実施例２－６－１に示した手法により、化合物２－１（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，５０ｍｇ），ｎ－プロピルヨージド（５４ μＬ×５）を用いて化合物２－６－２（Ｔｆａ－ｎＰｒＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ｎＰｒＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－６－２＊）（１０．０％ ＵＶａｒｅａ）に加えてＴｆａアミド部位のＯ－ｎ－プロピル化体（化合物２－６－２ａ＊）６．３％ （ＵＶａｒｅａ）、出発原料化合物２－１＊（８２．７％ ＵＶａｒｅａ）等を確認した。

【0303】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２３．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６６分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0304】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２３．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７３分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0305】

実施例２－６－３．Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１）のＴｆａアミド部位のＮ－アリル化
実施例２－６－１に示した手法により、化合物２－１（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，５０ｍｇ），アリルブロミド（４８ μＬ×５）を用いて化合物２－６－３（Ｔｆａ－ＡｌｌｙｌＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ＡｌｌｙｌＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－６－３＊）（２０．３％ ＵＶａｒｅａ）に加えてＴｆａアミド部位のＯ－アリル化体（化合物２－６－３ａ＊）６．９％（ＵＶａｒｅａ）、出発原料化合物２－１＊（７２．８％ ＵＶａｒｅａ）を確認した。

【0306】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２１．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６４分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0307】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２１．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７１分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0308】

実施例２－６－４．Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１）のＴｆａアミド部位のＮ－ベンジル化
実施例２－６－１に示した手法により、化合物２－１（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，５０ｍｇ），ベンジルブロミド（６６ μＬ×５）を用いて化合物２－６－４（Ｔｆａ－ＢｎＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ＢｎＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－６－４＊）（６．２％ ＵＶａｒｅａ）に加えてＴｆａアミド部位のＯ－ベンジル化体（化合物２－６－４ａ＊）７．７％（ＵＶａｒｅａ）、出発原料化合物２－１＊（７９．５％ ＵＶａｒｅａ）を確認した。

【0309】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５７１．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７２分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0310】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５７１．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0311】

以上、実施例２－６の結果より、本発明の手法によって、固相合成において嵩高いＮ－メチルアミノ酸に続き、Ｎ－メチル－α,α－ジアルキルアミノ酸に限らず、Ｎ－置換－α,α－ジアルキルアミノ酸の導入が実用的なレベルにて可能であることが示された。

【0312】

実施例２－７．固相上にて、嵩高いＮ－アルキルアミノ酸（ＥｔＶａｌ／ｎＰｒＶａｌ）に続き、Ｎ－メチル－α,α－ジアルキルアミノ酸（ＭｅｃＬｅｕ）を導入した実験
以下の一般式に従い、化合物２－７－１～化合物２－７－２、化合物２－７－３－１～化合物２－７－３－４および化合物２－７－４－１～化合物２－７－４－４を合成した。

【0313】

【表10】

【0314】

実施例２－７－１．Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－１）の調製
フィルター付きの反応容器に、実施例１－２－１と同様の手法により調製したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－１）（０．５５２ ｍｍｏｌ／ｇ， １００ ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ ｍＬ）を加えて室温にて４５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で３回洗浄した。続いて、レジンに２％ ＤＢＵ／ＤＭＦ溶液（脱Ｆｍｏｃ溶液：０．７ ｍＬ）を加えて室温にて５分間振とうし、脱Ｆｍｏｃをおこなった。脱Ｆｍｏｃ溶液を除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で４回洗浄した。

【0315】

得られたレジンに対し、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨの伸長反応を実施した。
伸長反応はＦｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ（０．６ ｍｏｌ／Ｌ）、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ， ０．３７５ ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液（０．３ｍＬ）と１０％ ＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（０．３６ ｍＬ）とを混合した溶液をレジンに加え、４０度にて３時間振とうすることで実施した。

【0316】

伸長反応の液相をフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．７ ｍＬ）で４回洗浄し、化合物２－７－１（Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を得た。

【0317】

反応の進行を確認するため、得られたレジン（化合物２－７－１）の一部（～５ ｍｇ）を取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＦｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－１＊）の生成を確認した（９７．３％ ＵＶａｒｅａ）。またＶａｌの過剰伸長体（化合物２－７－１ａ＊）２．７％（ＵＶａｒｅａ）も同時に検出された。伸長後はＤＣＭにて洗浄し、乾燥させた後、以後の検討に用いた。

【0318】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５０８．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７２分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0319】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝６０７．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７４分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0320】

実施例２－７－２．Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－１）の脱ＦｍｏｃおよびＮ末端のＮｓ化
フィルター付きの反応容器に、実施例２－７－１にて調製したＦｍｏｃ－Ｖａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－１）（０．５５２ ｍｍｏｌ／ｇ， １カラムにつき１００ ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ ｍＬ）を加えて室温にて４５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で２回洗浄した。続いて、レジンに２％ ＤＢＵ／ＤＭＦ溶液（脱Ｆｍｏｃ溶液：０．７ ｍＬ）を加えて室温にて１０分間振とうし、脱Ｆｍｏｃをおこなった。脱Ｆｍｏｃ溶液を除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ， ０．１５７ ｍｏｌ／Ｌ）とＤＩＰＥＡ（０．１５７ ｍｏｌ／Ｌ）のＤＭＦ溶液（０．７ｍＬ）、ＤＭＦ（０．７ｍＬ）で順に洗浄し、続いてＴＨＦ（０．７ ｍＬ）で３回洗浄した。

【0321】

得られたレジンに対し、２，４，６－トリメチルピリジン（０．０７４ ｍＬ， ０．５５２ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（０．３５ ｍＬ）および２－ニトロベンゼンスルホニルクロリド（０．０４９ ｇ， ０．２２１ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（０．３５ ｍＬ）を加え、４０度にて３時間振とうした。

【0322】

液相をフィルターで除去した後、レジンをＴＨＦ（１ ｍＬ）で５回、ジクロロメタン（１ ｍＬ）で５回洗浄し、化合物２－７－２（Ｎｓ－Ｖａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を得た。

【0323】

伸長の進行を確認するため、得られたレジンの一部（～５ ｍｇ）を取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、目的ペプチドＮｓ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－２＊）が９４．３％（ＵＶａｒｅａ）生成していることが確認された。Ｎｓ化後はＤＣＭにて洗浄し、乾燥させた後、以後の検討に用いた。

【0324】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４７１．３（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．５５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0325】

実施例２－７－３－１．Ｎｓ－Ｖａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－２）のＮｓアミド部位に対する光延反応によるＮ－エチル化
フィルター付きの反応容器に、実施例２－７－２にて調製したＮｓ－Ｖａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－２）（０．５５２ ｍｍｏｌ／ｇ， １００ ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ ｍＬ）を加えて室温にて４５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＴＨＦ（１ ｍＬ）で２回洗浄した。

【0326】

別途１．５ｍＬバイアルにトリフェニルホスフィン（７２．０ ｍｇ， ０．２７６ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．３５ｍＬ）溶液とＤＩＡＤ（５４ μＬ、０．２７６ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．３５ｍＬ）溶液を加えて軽く振り混ぜ、室温にて１５分間静置後、エタノール（３２ μＬ、０．５５２ ｍｍｏｌ）を加えて混和した後５分間静置した。得られた溶液を膨潤させたレジンに加え、３５度にて１時間振とうした。液相をフィルターで除去した後、レジンをＴＨＦ（０．７ ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．７ ｍＬ）で４回洗浄し、化合物２－７－３－１（Ｎｓ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を得た。

【0327】

得られたレジンの一部（～５ ｍｇ）をＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドからの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、目的ペプチドＮｓ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－１＊）の生成を確認した（化合物２－７－２からの変換率は１００％）。得られたレジンは乾燥させた後、以後の検討に用いた。

【0328】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４９９．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６４分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0329】

実施例２－７－３－２．Ｎｓ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－１）の脱Ｎｓ化
フィルター付きの反応容器に、実施例２－７－３－１にて調製したＮｓ－Ｖａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－１）（０．５５２ ｍｍｏｌ／ｇ， １００ ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ ｍＬ）を加えて室温にて４５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＮＭＰ（０．７ ｍＬ）で２回洗浄した。

【0330】

得られたレジンに対し、ＤＢＵ（４２ μＬ、０．２７６ ｍｍｏｌ）／ＮＭＰ溶液（０．３５ ｍＬ）と１－ドデカンチオール（１２６ μＬ、０．５５２ ｍｍｏｌ）／ＮＭＰ溶液（０．３５ ｍＬ）を加え、６０度にて４時間振とうした。液相をフィルターで除去した後、ＮＭＰ（０．７ ｍＬ）にて２回洗浄した。得られたレジンの一部を取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析した。

【0331】

１回目の脱Ｎｓ化を行ったレジンに対し、反応転換率の向上の目的で、再度、同様の操作を実施した。２回目の脱Ｎｓ化は６０度で１２時間振とうした。２回目の脱Ｎｓ化後、レジンをＮＭＰで４回、さらにＤＣＭで４回洗浄することで、化合物２－７－３－２（Ｈ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を得た。得られたレジンの一部を取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＨ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－２＊）８４．６％（ＵＶａｒｅａ）に加えてに加え、Ｎｓ保護のニトロ基に対して１－ドデカンチオールがイプソ置換したと推定される不純物（化合物２－７－３－２ａ＊）（１２．６％ ＵＶａｒｅａ）を検出した。

【0332】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３１４．３（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．２６分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0333】

【化1】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝６５４．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：１．２５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0334】

実施例２－７－３－３．Ｈ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－２）に対するＴｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨの伸長反応は、レジンに２－（トリフルオロメチル）－３－オキサ－１－アザスピロ［４．４］ノナ－１－エン－４－オン（化合物１－３－９）を用いたＴｆａ－ｃＬｅｕの伸長
フィルター付きの反応容器に、実施例２－７－３－２にて調製したＨ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－２）（０．５５２ ｍｍｏｌ／ｇ， １００ ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ ｍＬ）を加えて室温にて４５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で３回洗浄した。Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨの伸長反応は、レジンに２－（トリフルオロメチル）－３－オキサ－１－アザスピロ［４．４］ノナ－１－エン－４－オン（化合物１－３－９）（０．５８２ｇ，２．８１ｍｍｏｌ）をニートで加え、６０度で４８時間振盪することで実施した。反応の進行を確認するため、２４時間後に少量の得られたレジンをサンプリングし、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドの生成を確認した。伸長反応後の液相をフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（１ ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（１ ｍＬ）で４回洗浄し、化合物２－７－３－３（Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を得た。

【0335】

反応の進行を確認するため、得られたレジン（化合物２－７－３－３）の一部を取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ｃＬｅｕ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－３＊）（５５．５％ ＵＶａｒｅａ）の生成を確認した他、ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏの過剰伸長体（化合物２－７－３－３ａ＊）（１８．０％ ＵＶａｒｅａ）、Ｎｓ保護のニトロ基に対して１－ドデカンチオールがイプソ置換したと推定される不純物（化合物２－７－３－２ａ＊）（１１．８％ ＵＶａｒｅａ）等を検出した。また、Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨがレジンに担持されたようなピークも検出した。伸長後はＤＣＭにて洗浄し、乾燥させた後、以後の検討に用いた。

【0336】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２１．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６０分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0337】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝８１６．７（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0338】

実施例２－７－３－４．Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－３）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応によるＮ－メチル化
フィルター付きの反応容器に、実施例２－７－３－３にて調製したＴｆａ－ｃＬｅｕ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－３）（６６ ｍｇ）をいれ、ジクロロメタン（１ ｍＬ）を加えて室温にて１時間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ ｍＬ）で４回洗浄した。

【0339】

得られたレジンに対し、ＴＭＧＮ （５９ｍｇ）／ＤＭＦ （０．３５ ｍＬ）溶液を加え、続いてヨウ化メチル（６９ μＬ）／ＤＭＦ （０．３５ ｍＬ）溶液を加え、４０度で１時間振とうした。液相をフィルターで除去した後、ＤＭＦ（０．７ ｍＬ）にて２回洗浄した。得られたレジンの一部を取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析した。

【0340】

１回目のメチル化を行ったレジンに対し、反応転換率の向上の目的で、同様の操作をさらに２回実施した。３回のメチル化後、レジンをＤＭＦで４回、さらにＤＣＭで４回洗浄することで、化合物２－７－３－４（Ｔｆａ－ＭｅｃＬｅｕ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を得た。得られたレジンの一部を取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ＭｅｃＬｅｕ－ＥｔＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－３－４＊）（５３．２％ ＵＶａｒｅａ）に加えてＥｔＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏが過剰伸長した後にＭｅ化された化合物（化合物２－７－３－４ａ＊）（２９．８％ ＵＶａｒｅａ）、Ｎｓ保護のニトロ基に対して１－ドデカンチオールがイプソ置換したと推定される不純物（化合物２－７－３－２ａ＊）（１１．９％ ＵＶａｒｅａ）等を確認した。また、Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨがレジンに担持され、Ｍｅ化されたようなピークも検出した。

【0341】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５３５．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６６分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0342】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝８３０．７（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0343】

実施例２－７－４－１．Ｎｓ－Ｖａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－２）のＮｓアミド部位に対する光延反応によるＮ－ｎ－プロピル化
実施例２－７－３－１に示した手法により、化合物２－７－２（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）および１－プロパノール（４１ μＬ、０．５５２ ｍｍｏｌ）を用いて化合物２－７－４－１（Ｎｓ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＮｓ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－４－１＊）９４．７％（ＵＶａｒｅａ）の生成を確認した（化合物２－７－２からの変換率は１００％）。

【0344】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５１３．４（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0345】

実施例２－７－４－２．Ｎｓ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－４－１）の脱Ｎｓ化
実施例２－７－３－２に示した手法により、化合物２－７－４－１（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）を用いて化合物２－７－４－２（Ｈ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＨ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－４－２＊）８１．１％（ＵＶａｒｅａ）に加えてに加え、Ｎｓ保護のニトロ基に対して１－ドデカンチオールがイプソ置換したと推定される不純物（化合物２－７－４－２ａ＊）（１５．１％ ＵＶａｒｅａ）を検出した。

【0346】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３２８．３（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．２８分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0347】

【化2】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝６６８．６（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：１．２８分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0348】

実施例２－７－４－３．Ｈ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－４－２）に対する２－（トリフルオロメチル）－３－オキサ－１－アザスピロ［４．４］ノナ－１－エン－４－オン（化合物１－３－９）を用いたＴｆａ－ｃＬｅｕの伸長
実施例２－７－３－３に示した手法により、化合物２－７－４－２（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）を用いて化合物２－７－４－３（Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ｃＬｅｕ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－４－３＊）（５３．１％ ＵＶａｒｅａ）の生成を確認した他、ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏの過剰伸長体（化合物２－７－４－３ａ＊）（３１．０％ ＵＶａｒｅａ）、Ｎｓ保護のニトロ基に対して１－ドデカンチオールがイプソ置換したと推定される不純物（化合物２－７－４－２ａ＊）（１３．３％ ＵＶａｒｅａ）等を検出した。また、Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨがレジンに担持されたようなピークも検出した。

【0349】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５３５．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0350】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝８４４．８（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７７分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0351】

実施例２－７－４－４．Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ（ＯＴｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－４－３）のＴｆａアミド部位に対する求核置換反応によるＮ－メチル化
実施例２－７－３－４に示した手法により、化合物２－７－４－３（０．５５２ｍｍｏｌ／ｇ，６０ｍｇ）を用いて化合物２－７－４－４（Ｔｆａ－ＭｅｃＬｅｕ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ）を同様に合成した。得られたレジンを一部取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ溶液（１：１：０．０１５）にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析し、目的ペプチドＴｆａ－ＭｅｃＬｅｕ－ｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－７－４－４＊）（４６．１％ ＵＶａｒｅａ）に加えてｎＰｒＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏが過剰伸長した後にＭｅ化された化合物（化合物２－７－４－４ａ＊）（３８．３％ ＵＶａｒｅａ）、Ｎｓ保護のニトロ基に対して１－ドデカンチオールがイプソ置換したと推定される不純物（化合物２－７－４－２ａ＊）（１２．６％ ＵＶａｒｅａ）等を確認した。また、Ｔｆａ－ｃＬｅｕ－ＯＨがレジンに担持され、Ｍｅ化されたようなピークも検出した。

【0352】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５４９．５（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．７１分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0353】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝８５８．７（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．８３分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0354】

以上、実施例２－７の結果より、本発明の手法によって、固相合成において嵩高いＮ－アルキルアミノ酸に続き、Ｎ－メチル－α,α－ジアルキルアミノ酸の導入が実用的なレベルにて可能であることが示された。

【0355】

実施例３：本発明の手法にてＭｅＡｉｂを導入し、ペプチド合成を行った例
ＷＯ２０１３／１００１３２もしくはＷＯ２０１８／２２５８６４に記載のＦｍｏｃ法によるペプチド合成法に従い、下記の基本ルートでペプチドの伸長を行った。すなわち、
１）Ａｓｐ側鎖のカルボン酸もしくはペプチド主鎖カルボン酸を２－クロロトリチルレジンに担持させたものの、アミノ酸のＮ末からのＦｍｏｃ法によるペプチド伸長反応、
２）２－クロロトリチルレジンからのペプチドの切り出し過程、
３）切り出し過程によって２－クロロトリチルレジンから外れて生じたＡｓｐ側鎖のカルボン酸もしくはペプチド主鎖カルボン酸と、ペプチド鎖Ｎ末端（三角ユニット）のアミノ基との縮合によるアミド環化、
４）必要に応じたペプチド鎖に含む側鎖官能基の保護基の脱保護、
５）ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅＨＰＬＣによる化合物の精製、の５段階の工程である。本実施例において、特に記述がない限り、この基本ルートをもとにペプチド化合物の合成をおこなった。

【0356】

実施例３－１：（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１５Ｒ，１８Ｓ，２３ａＳ，２９Ｓ，３５Ｓ，３７ａＳ）－８，１１－ジ（（Ｓ）－ｓｅｃ－ブチル）－２９－（３－クロロ－４－（トリフルオロメチル）フェネチル）－３５－（シクロヘキシルメチル）－１８－イソプロピル－５，６，１２，１５，１６，１９，２１，２１，２２，３３，３６－ウンデカメチルテトラコサヒドロ－２Ｈ－アゼト［２，１－ｕ］ピロロ［２，１－ｉ］［１，４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１］ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン－４，７，１０，１３，１７，２０，２３，２８，３１，３４，３７（１４Ｈ）－ウンデカオン（化合物３－１）の合成

【0357】

化合物３－１の合成は、化合物１－２－４より以下のスキームに従って行った。

【0358】

（３Ｒ）－３－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］ブタン酸－２－クロロトリチルレジン（Ｆｍｏｃ－Ｄ－３－ＭｅＡｂｕ－Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）ｒｅｓｉｎ）（化合物１－２－４、１００ｍｇ，０．３４３ｍｍｏｌ／ｇ，０．０３４３ｍｍｏｌ）を原料として用い、フィルター付きの反応容器にて実施例１－２－２に記載したペプチド伸長法でＦｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－ＯＨの伸長に続き、実施例２－１－１と同様の操作にてＴｆａ－Ａｉｂ－ＯＨ（２－メチル－２－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）プロパン酸）（化合物１－３－１）の伸長を行い、化合物３－１－ａを得た。

【0359】

得られた化合物３－１－ａをＤＣＭ（１ｍＬ）で膨潤させたのちＤＭＦ（１ｍＬ）で４回洗浄した。ホスファゼン塩基Ｐ１－ｔＢｕ（３８μＬ，０．１５０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１８０μＬ）とヨウ化メチル（６２μＬ，１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１８０μＬ）を加え、密閉下４０℃で３０分振とうした。反応液を除いたのち、レジンをＤＭＦ（１ｍＬ）で４回洗浄し、さらにＤＣＭ（１ｍＬ）で４回洗浄し、化合物３－１－ｂを得た。得られたレジンの一部をＴＦＥ／ＤＣＭ（１／１（ｖ／ｖ））で切り出してＬＣＭＳで分析を行い、化合物３－１－ｂ＊の生成を確認した。

【0360】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４２４（Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．５７分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0361】

水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）（７５８ｍｇ，２０ｍｍｏｌ）をフラスコに入れポンプアップしたのち窒素雰囲気下とし、トリグリム（１０ｍＬ）に溶解して溶液Ａとした。上記で得られた化合物３－１－ｂをＤＣＭ（１ｍＬ）で膨潤させたのち、ＴＨＦ（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。レジンにＴＨＦ（０．５ｍＬ）、メタノール（０．２５ｍＬ）、溶液Ａ（０．２５ｍＬ）を加えて開放系にて室温にて４０分振とうした。反応液を除いたのち、メタノール（０．７ｍＬ）を加えて１分後に廃液する洗浄操作を４回繰り返し、さらにＤＣＭ（０．７ｍＬ）で同様に４回洗浄し、化合物３－１－ｃを得た。得られたレジンの一部をＴＦＥ／ＤＣＭ（１／１（ｖ／ｖ））で切り出してＬＣＭＳで分析を行い、化合物３－１－ｃ＊の生成を確認した。

【0362】

ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３３０（Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．３３分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0363】

化合物３－１－ｃを調製した後のペプチド伸長及び環化、精製の工程は以下の合成法に従っておこなった。

【0364】

実施例１－２－２同様に、化合物３－１－ｃ（１カラムあたり１００ｍｇ）と、各種Ｆｍｏｃ－アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｈｐｈ（４－ＣＦ３－３－Ｃｌ）－ＯＨ（化合物ＡＡ２－００１）、Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－ＭｅＣｈａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｚｅ（２）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－ＭｅＬｅｕ－ＯＨ）（０．３－０．６ｍｏｌ／Ｌ）とＨＯＡｔもしくはｏｘｙｍａもしくはＨＯＯＢｔ（０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液（溶液１）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（１０％ｖ／ｖ，溶液２）をペプチド合成機にセットした。

【0365】

溶液１と溶液２は合成機のmixing vialで混合した後にレジンに添加され、レジン上のアミノ基とＦｍｏｃアミノ酸の縮合反応を行った。

【0366】

Ｆｍｏｃ脱保護溶液としてジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２％ｖ／ｖ）を用いて合成を行った。レジンはＤＭＦにて洗浄した後、Ｆｍｏｃ脱保護に次いでＦｍｏｃアミノ酸の縮合反応を１サイクルとし、このサイクルを繰り返すことでレジン表面上にペプチドを伸長させた。ペプチド伸長完了後、レジンのＮ末端のＦｍｏｃ基の除去をペプチド合成機上にて行った後、レジンをＤＭＦにて洗浄した。

【0367】

得られた固相上に担持された鎖状ペプチドに対し、ＤＣＭを加えレジンを再膨潤させた後、レジンに２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）／ＤＣＭ（１／１（ｖ／ｖ），２ｍＬ）を加えて室温にて２時間振とうした。続いてチューブ内の溶液を合成用カラムでろ過することによりレジンを除き、残ったレジンをさらに２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）／ＤＣＭ（１／１（ｖ／ｖ），１ｍＬ）にて２回洗浄した。得られた全ての切り出し溶液を混合し、減圧下濃縮した。

【0368】

切り出し後に減圧下濃縮した残渣をＤＭＦ／ＤＣＭ（１／１（ｖ／ｖ），８ｍＬ）に溶解した。０．５ＭのＯ－（７－アザ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）／ＤＭＦ溶液（用いたレジン上のモル数（ローディング量（ｍｍｏｌ／ｇ）に使用したレジン量（通常は０．１０ｇ）をかけたもの）に対して１．５等量となる容量）と、ＤＩＰＥＡ（用いたレジン上のモル数に対して１．８等量）を加え、室温にて２時間振とうした。その後、減圧下溶媒を留去した。目的の環状ペプチドの生成はＬＣＭＳ測定によって確認した。

【0369】

その後、減圧下、溶媒を留去した後、ＤＭＦもしくはＤＭＳＯを加え、不溶物をフィルターろ過にて取り除いた後、preparative-HPLCで精製し、化合物３－１（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１５Ｒ，１８Ｓ，２３ａＳ，２９Ｓ，３５Ｓ，３７ａＳ）－８，１１－ジ（（Ｓ）－ｓｅｃ－ブチル）－２９－（３－クロロ－４－（トリフルオロメチル）フェネチル）－３５－（シクロヘキシルメチル）－１８－イソプロピル－５，６，１２，１５，１６，１９，２１，２１，２２，３３，３６－ウンデカメチルテトラコサヒドロ－２Ｈ－アゼト［２，１－ｕ］ピロロ［２，１－ｉ］［１，４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１］ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン－４，７，１０，１３，１７，２０，２３，２８，３１，３４，３７（１４Ｈ）－ウンデカオン）（４．１ｍｇ，９％）を得た。
ＬＣＭＳの分析結果は表１２に記載した。

【0370】

実施例３－２：実施例３－１と同様にペプチド合成を行った例
実施例３－１にて示した手法により、化合物３－２～化合物３－９についても同様に合成した。なお、化合物３－１～化合物３－９（構造式は表１３に記載）に記載の環状ペプチドを構成する各アミノ酸残基の正式名称、構造、および略称の関係は上述の表３～５および以下の表１１から把握される。
ＬＣＭＳの分析結果は表１２に記載した。

【0371】

【表11】

【0372】

【表12】

【0373】

【表13】

【0374】

比較例１：Ｔｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１）のＴｆａアミド部位に対する光延反応によるＮ－メチル化
本発明との比較例として、トリフルオロアセタミド部位での選択的なＮ－メチル化法として、光延反応を行う既知の手法（Org. Lett. 2013, 15, 5012-5015）を試みた。

【0375】

フィルター付きの反応容器に、実施例２－１－２にて調製したＴｆａ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２－１－２）（０．４７３ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）にジクロロメタン（１ｍＬ）を加えて室温にて１５分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＴＨＦ（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。

【0376】

得られたレジンに対し、トリフェニルホスフィン（６６．０ｍｇ）／ＴＨＦ（０．７ｍＬ）溶液、メタノール（２０μＬ）、ＤＩＡＤ（４９μＬ）を加え、４０度にて３０分間振とうした。液相をフィルターで除去した後、再度、トリフェニルホスフィン（６６．０ｍｇ）／ＴＨＦ（０．７ｍＬ）溶液、メタノール（２０μＬ）、ＤＩＡＤ（４９μＬ）を加え、４０度にて１時間振とうした。液相をフィルターで除去した後、レジンをＴＨＦ（０．７ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。

【0377】

得られたレジンをＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、目的ペプチドＴｆａ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－２＊）の生成に加え、Ｔｆａアミド部位のＯ－メチル化した生成物（化合物Ｃ１－１）、そこから加水分解が進行したＨ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ１－２）が検出された。ＬＣチャートは図２のとおりである。

【0378】

目的ペプチドＴｆａ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物２－２＊）

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ４９５．２６ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．５８分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0379】

Ｔｆａアミド部位にてＯ－メチル化した生成物（化合物Ｃ１－１）

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ４９５．２６ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．６４分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0380】

化合物Ｃ１－１から加水分解が進行したＨ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ１－２）

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ３８５．２６ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．３５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0381】

この結果より、文献（Org. Lett. 2013, 15, 5012-5015）とは異なり、Ｎ末端がα，α－ジアルキルアミノ酸の場合、Ｎ－メチル化に加えてＯ－メチル化も同時に大幅に進行してしまい、収率と純度の低下を招くことが確認された。この結果は、実施例２－２および実施例２－３で示されたＮ－選択的なメチル化の結果とは対照的である。

【0382】

比較例２：従来の固相合成法でのＮ－メチルアミノ酸に続くＦｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ伸長後、Ｆｍｏｃ保護からＮｓ保護への掛け替え、Ｎ末端のレジン上でのＮ－メチル化、および脱Ｎｓを行うことで、ＭｅＡｉｂの導入を試みた実験
本発明との比較例として、文献記載と同様の方法（Nature Protocols 2012, 7, 3, 432-444）にて、固相合成法でのＮ－メチルアミノ酸に続くＦｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ伸長後に、Ｆｍｏｃ保護からＮｓ保護への掛け替え、Ｎ末端のレジン上でのＮ－メチル化、および脱Ｎｓを行うことで、ＭｅＡｉｂの導入を試みた。

【0383】

比較例２－１：Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）に対する、Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨの固相での伸長反応
フィルター付きの反応容器に、実施例１－２－２にて調製したＦｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）（０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）にジクロロメタン（１ｍＬ）を加えて室温にて３０分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（１ｍＬ）で２回洗浄した。続いて、レジンに２％ＤＢＵ／ＤＭＦ溶液（脱Ｆｍｏｃ溶液：０．７ｍＬ）を加えて室温にて１０分間振とうし、脱Ｆｍｏｃをおこなった。脱Ｆｍｏｃ溶液を除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。

【0384】

得られたレジンに対し、Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨの伸長反応を実施した。
伸長反応は０．６Ｍ Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨ／０．３７５Ｍ ｏｘｙｍａ／ＮＭＰ溶液（０．３ｍＬ）と１０％ＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（０．３６ｍＬ）とを混合した溶液をレジンに加え、５０度にて１５時間振とうすることで実施した。
本伸長反応をさらに２回繰り返した。（２回目伸長条件：５０度２４時間、３回目伸長条件：５０度２０時間）

【0385】

伸長反応の液相をフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。

【0386】

伸長の進行を確認するため、得られたレジンの一部（～５ｍｇ）を取り出し、未反応点に対し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨにてキャッピングを行った。
キャッピングは、０．６Ｍ Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ／０．３７５Ｍ ＨＯＡｔ／ＮＭＰ溶液（０．３ｍＬ）と１０％ＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（０．３６ｍＬ）とを混合した溶液をレジンに加え、４０度にて４５分間振とうすることで実施した。
伸長反応の液相をフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．７ｍＬ）で４回洗浄した。

【0387】

ＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、目的ペプチドＦｍｏｃ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－１＊）が６０．４％生成していることが確認できた。

【0388】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ６０５．５２ （Ｍ－Ｈ）－
保持時間：２．１６分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５ｌｏｎｇ）

【0389】

なお、得られたレジンの未反応点は商業的供給業者から購入したＺ－Ｇｌｙ－ＯＨ（Ｎ－α－カルボベンゾキシグリシン、ＣＡＳ：１１３８－８０－３）にてキャッピングを行った。

【0390】

キャッピングは、０．６Ｍ Ｚ－Ｇｌｙ－ＯＨ／０．３７５Ｍ ＨＯＡｔ／ＮＭＰ溶液（０．３ｍＬ）と１０％ＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（０．３６ｍＬ）とを混合した溶液をレジンに加え、４０度にて２時間振とうすることで実施した。

【0391】

キャッピング反応の液相をフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．７ｍＬ）で４回洗浄し、化合物Ｃ２－１を得た。

【0392】

比較例２－２：Ｆｍｏｃ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－１）の、脱ＦｍｏｃおよびＮ末端のＮｓ化
フィルター付きの反応容器に、比較例２－１にて調製したＦｍｏｃ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－１）（０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）を入れ、ジクロロメタン（１ｍＬ）を加えて室温にて３０分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（１ｍＬ）で２回洗浄した。続いて、レジンに２％ＤＢＵ／ＤＭＦ溶液（脱Ｆｍｏｃ溶液：０．７ｍＬ）を加えて室温にて１０分間振とうし、脱Ｆｍｏｃをおこなった。脱Ｆｍｏｃ溶液を除去した後、レジンをＤＭＦ（１ｍＬ）で３回、続いてＴＨＦ（１ｍＬ）で４回洗浄した。

【0393】

得られたレジンに対し、２，４，６－トリメチルピリジン（０．０６２ｍＬ，０．４６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（０．３５ｍＬ）および２－ニトロベンゼンスルホニルクロリド（０．０４１ｇ，０．１８６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（０．３５ｍＬ）を加え、４０度にて２時間振とうした。

【0394】

液相をフィルターで除去した後、レジンをＴＨＦ（１ｍＬ）で３回、ジクロロメタン（１ｍＬ）で４回洗浄した。

【0395】

上記の２－ニトロベンゼンスルホニルクロリドによるＮｓ化をさらに２度繰り返した（２回目：４０度、１６時間振とう、３回目：４０度２１時間振とう）。

【0396】

伸長の進行を確認するため、得られたレジンの一部（～５ｍｇ）を取り出し、ＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、目的ペプチドＮｓ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－２＊）が６４．９％生成していることが確認された。

【0397】

得られたレジンの未反応点をＺ－Ｇｌｙ－ＯＨにてキャッピングを行った。
キャッピングは、０．６Ｍ Ｚ－Ｇｌｙ－ＯＨ／ＮＭＰ溶液（０．３ｍＬ）と１０％ＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（０．３６ｍＬ）とを混合した溶液をレジンに加え、４０度にて２時間振とうすることで実施した。

【0398】

伸長反応の液相をフィルターで除去した後、レジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．７ｍＬ）で４回洗浄し、Ｎｓ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－２）を得た。

【0399】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ５６８．４５ （Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．５９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0400】

比較例２－３：Ｎｓ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－２）のＮｓアミド部位に対する光延反応によるＮ－メチル化
フィルター付きの反応容器に、比較例２－２にて調製したＮｓ－Ａｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－２）（０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）にジクロロメタン（１ｍＬ）を加えて室温にて２０分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＴＨＦ（１ｍＬ）で４回洗浄した。

【0401】

得られたレジンに対し、トリフェニルホスフィン（６１．０ｍｇ，０．２３２ｍｍｏｌ）とメタノール（１９μＬ、０．４６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．７ｍＬ）溶液を加え、続いてＤＩＡＤ（４５μＬ、０．２３２ｍｍｏｌ）を加え、４０度にて３０分間振とうした。液相をフィルターで除去した後、レジンをＴＨＦ（１ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（１ｍＬ）で４回洗浄した。

【0402】

得られたレジンの一部（～５ｍｇ）をＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてペプチドからの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、目的ペプチドＮｓ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－３＊）の生成を確認した（化合物Ｃ２－２からの変換率は９６％）。残りのＮｓ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－３）は、次工程に使用した。

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ５８２．４７ （Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．６３分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0403】

比較例２－４：Ｎｓ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏレジン（化合物Ｃ２－３）の脱Ｎｓ化
フィルター付きの反応容器に、比較例２－３にて調製したＮｓ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－３）（０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ，５０ｍｇ）にジクロロメタン（０．５ｍＬ）を加えて室温にて２０分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＮＭＰ（０．５ｍＬ）で４回洗浄した。

【0404】

得られたレジンに対し、ＤＢＵ（１７μＬ、０．１１５ｍｍｏｌ）／ＮＭＰ溶液（０．３５ｍＬ）と２－メルカプトエタノール（１６μＬ、０．２３０ｍｍｏｌ）／ＮＭＰ溶液（０．３０ｍＬ）を加え、室温にて１時間振とうした。液相をフィルターで除去した後、レジンをＮＭＰ（０．５ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．５ｍＬ）で４回洗浄した。

【0405】

得られたレジンの一部（～５ｍｇ）をＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてレジンからの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、図３の通り、脱Ｎｓ化が進行した目的ペプチドＨ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－４＊）の生成を確認した。

【0406】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ３９９．２９ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．３４分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0407】

比較例２－５：Ｎｓ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＰｈｅ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏの脱Ｎｓ化

【0408】

フィルター付きの反応容器に、実施例１－２－３で調製した化合物１－２－３（１００ｍｇ）に対し、比較例２－１～比較例２－３と同様の操作にて調製したＮｓ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＰｈｅ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－５－１）（０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ，５０ｍｇ）にジクロロメタン（０．５ｍＬ）を加えて室温にて２０分間振とうし、レジンの膨潤をおこなった。ジクロロメタンをフィルターで除去した後、レジンをＮＭＰ（０．５ｍＬ）で４回洗浄した。

【0409】

得られたレジンに対し、ＤＢＵ（１７μＬ、０．１１５ｍｍｏｌ）／ＮＭＰ溶液（０．３５ｍＬ）と２－メルカプトエタノール（１６μＬ、０．２３０ｍｍｏｌ）／ＮＭＰ溶液（０．３０ｍＬ）を加え、室温にて１時間振とうした。液相をフィルターで除去した後、レジンをＮＭＰ（０．５ｍＬ）で４回、ジクロロメタン（０．５ｍＬ）で４回洗浄した。

【0410】

得られたレジンの一部（～５ｍｇ）をＴＦＥ／ＤＣＭ溶液（１／１（ｖ／ｖ））にてレジンからの切り出しを行い、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、図４の通り、脱Ｎｓ化が進行した目的ペプチドＨ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＰｈｅ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｃ２－５－２＊）の生成に加え、Ｎｓ保護のニトロ基に対して２－メルカプトエタノールがイプソ置換したと推定される不純物（化合物Ｃ２－５－３＊）が検出された。

【0411】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ４４７．３１ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．３９分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0412】

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ６６１．７４ （Ｍ－Ｈ）－
保持時間：０．６５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0413】

これら比較例２の結果から、嵩高いＮ－メチルアミノ酸のＮ末端に対して、嵩高いＮ－メチル－α，α－ジアルキルアミノ酸（この例では、ＭｅＡｉｂ）が導入できる一方、Ｆｍｏｃ－Ａｉｂの伸長、Ｎｓ基への保護基の掛け替えを含めた一連の工程を通して低純度、低収率となることが確認された。また、脱Ｎｓの段階でＮｓ保護基上での副反応により、純度低下を引き起こすことが判明した。文献記載の既知の条件では、嵩高いＮ－メチルアミノ酸のＮ末端に対して、嵩高いＮ－メチル－α，α－ジアルキルアミノ酸を高純度、高収率で導入することは困難であることが確認された。

【0414】

参照例：従来の固相合成法でのＮ－メチルアミノ酸に続くＦｍｏｃ－ＭｅＡｉｂ－ＯＨ伸長の試み
参照例１：Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）に対する、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｉｂ－ＯＨの固相での伸長反応

【0415】

フィルター付きの反応容器に、実施例１－２－２にて調製したＦｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－２）（０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）を入れ、比較例２－１と同様の操作にて、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｉｂ－ＯＨの伸長を試みた。

【0416】

伸長反応は０．６Ｍ Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｉｂ－ＯＨ／０．３７５Ｍ ｏｘｙｍａ／ＮＭＰ溶液（０．３ｍＬ）と１０％ＤＩＣ／ＤＭＦ溶液（０．３６ｍＬ）とを混合した溶液をレジンに加え、４０度にて２１時間振とうし、反応液を排出した後、同じ操作をもう一度繰り返した（４０度にて２１．５時間）。

【0417】

伸長反応後、比較例２－１と同様の操作にて、適宜レジンの洗浄、未反応点のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨでのキャッピング、レジンからのペプチドの切り出しをおこない、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したが、目的ペプチドＦｍｏｃ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｒ１＊）は検出されなかった。

【0418】

参照例２：Ｆｍｏｃ－ＭｅＰｈｅ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－３）に対する、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｉｂ－ＯＨの固相での伸長反応

【0419】

フィルター付きの反応容器に、実施例１－２－３にて調製したＦｍｏｃ－ＭｅＰｈｅ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１－２－３）（０．４６４ｍｍｏｌ／ｇ，１００ｍｇ）を入れ、参照例１と同様の操作にて、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｉｂの伸長を試みた。伸長反応は、４０度１５時間にて実施した。

【0420】

その後、参照例１と同様の操作にて、適宜レジンの洗浄、未反応点のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨでのキャッピング、レジンからのペプチドの切り出しをおこない、切り出した溶液をＬＣＭＳにて分析したところ、目的ペプチドＦｍｏｃ－ＭｅＡｉｂ－ＭｅＰｈｅ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物Ｒ２＊）の生成は３．１％に留まった。

ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ６６９．４３ （Ｍ＋Ｈ）＋
保持時間：０．８８分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）

【0421】

以上、参照例の結果より、従来の固相合成法（Ｆｍｏｃ法）でのＮ－メチルアミノ酸（すなわち、Ｎ－置換アミノ酸）に続くＦｍｏｃ－ＭｅＡｉｂ－ＯＨ（すなわち、Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸）の伸長は非常に難易度が高く、目的とするペプチドが得られないケースもあることが確認された。

【産業上の利用可能性】

【0422】

本発明により、固相法を用いたペプチド化合物の製造において、Ｎ－置換－α，αジ置換アミノ酸残基とＮ－置換アミノ酸残基とが連結したジペプチド残基を含む、ペプチド化合物を効率的に製造できることが見出された。本発明は、ペプチド合成の分野において有用である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】