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▶ ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエスの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-01-24
(45)【発行日】2025-02-03
(54)【発明の名称】ヌクレオチドＰ（Ｖ）モノマーを調製するための新規の方法
(51)【国際特許分類】
C07H 19/11 20060101AFI20250127BHJP
C07H 19/213 20060101ALI20250127BHJP
【ＦＩ】
C07H19/11
C07H19/213
【請求項の数】
14
(21)【出願番号】P 2021561622
(86)(22)【出願日】2020-04-14
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-06-21
(86)【国際出願番号】 EP2020060379
(87)【国際公開番号】W WO2020212301
(87)【国際公開日】2020-10-22
【審査請求日】2023-01-30
(31)【優先権主張番号】19169409.0
(32)【優先日】2019-04-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】515129320
【氏名又は名称】ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100188433
【弁理士】
【氏名又は名称】梅村 幸輔
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100214396
【弁理士】
【氏名又は名称】塩田 真紀
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(74)【代理人】
【識別番号】100221741
【弁理士】
【氏名又は名称】酒井 直子
(74)【代理人】
【識別番号】100114926
【弁理士】
【氏名又は名称】枝松 義恵
(72)【発明者】
【氏名】アルベク ナンナ
(72)【発明者】
【氏名】ファンダー エリック
(72)【発明者】
【氏名】カトケビカ ダース
(72)【発明者】
【氏名】カトケビッチ マルティンス
【審査官】早川 裕之
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１５－５２３３１６（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１８／１７７８２５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／０２３４５９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２０／１１４４９５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２０／１０３９２９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Science，2018年，361，1234-1238
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｈ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物を調製するための方法であって、式（Ｉ）の修飾ヌクレオシド：
Ｒ１はＨであり、Ｒ２は－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３であるか、または
Ｒ１およびＲ２は一緒に、－ＣＨ２－Ｏ－もしくは－ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ２を介して結合している］を、
式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）の化合物：
塩基として１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（ＤＢＵは、式（Ｉ）のヌクレオシドに対して０．８当量の量で使用される）を用いて反応させて、
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）のモノマー：
【請求項2】
式Ｉのヌクレオシドが、以下の式（Ｉａ）：【請求項3】
式Ｉのヌクレオシドが、以下の式（Ｉｂ）：【請求項4】
式Ｉのヌクレオシドが、以下の式（Ｉｃ）：【請求項5】
核酸塩基が、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、および５－メチルシトシンからなる群から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
核酸塩基が、Ａ、ＴおよびＧからなる群から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
Ａ、Ｇ、Ｃまたは５－メチルシトシンにおいて、環外のアミノ部位がアミノ保護基によって保護される、請求項５または６に記載の方法。
【請求項8】
アミノ保護基が、ＤＭＦおよびｉＢｕからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを調製するためのＰ（Ｖ）モノマーとして、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物をカップリングさせる工程をさらに含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
Ｒ１がＨであり、Ｒ２が－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
Ｒ１およびＲ２が一緒に、－ＣＨ２－Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ２を介して結合している、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
Ｒ１およびＲ２が一緒に、－ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ２を介して結合している、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
Ｒ３が、１～５個のＦによって置換されたフェニルである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
Ｒ４が、メチルまたはエチルである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ヌクレオチドＰ（Ｖ）モノマーを調製するための新規の方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ヌクレオチドモノマーは、オリゴヌクレオチドの合成におけるビルディングブロックである。ロックド核酸（ＬＮＡ）オリゴヌクレオチドは、治療用合成アンチセンスオリゴヌクレオチドとして特に有用な合成オリゴヌクレオチドである。治療剤としてのＬＮＡオリゴヌクレオチドの使用によって、最近の数十年にわたって、ＲＮａｓｅ Ｈを活性化するギャップマー、スプライススイッチングオリゴヌクレオチド、ｍｉｃｒｏＲＮＡ阻害剤、ｓｉＲＮＡまたはアプタマーを含む多様なメカニズムによって作用する分子の開発をもたらす顕著な進歩が確認されている（Ｓ．Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第２版 Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ 編：ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、２００８（非特許文献１））。この点では、少なくとも一部のヌクレオチド間連結が天然のホスホジエステル（phoshodiester）の代わりにホスホロチオエートであることを意味するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、特に薬理的に興味深いことを示している。
【0003】
リンの周囲にキラルに画定されていないヌクレオチドモノマーを使用することの結果の１つは、各ホスホロチオエート連結がＲ立体配置とＳ立体配置の両方として見出されることである（すなわち、ステレオランダムホスホロチオエート連結）。これは、特定のホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドが、同じ配列内に多くの異なるジアステレオ異性体を含有し得るという結果をもたらす。例えば、１６ヌクレオチド長の所与のセット配列のホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの場合には、最大２１５個の異なるジアステレオ異性体が存在する。これにより、同じ１６オリゴヌクレオチドのセット配列に関する３２，０００を超える潜在的に薬理的に別個の化合物がもたらされる。したがって、薬理的に最適な化合物または薬理的に最適な化合物のセットをこのような混合物から同定、合成および／または単離することが非常に望ましい。実際に、このような最適化合物が、標準的なステレオランダムホスホロチオエートオリゴヌクレオチドよりさらに高い治療可能性を有することになることが合理的に推定され得る。
【0004】
このようなホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを合成する際の重要な工程のうちの１つは、そのビルディングブロック、すなわちそのモノマーの調製である。この工程は、好適には、アンチセンスオリゴヌクレオチドの合成をジアステレオ異性体の好ましいセットまたはさらには単一のジアステレオ異性体へと指向させるように、立体選択的に実施され得る。
【0005】
従来、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドに関するモノマーの合成は、リン／［Ｐ（ＩＩＩ）］に基づく試薬系で実施されている。最近では、Ｂａｒａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１８、３６１、１２３４～１２３８頁（非特許文献２）は、「プログラム可能な、痕跡を残さない、ジアステレオ選択性リン－硫黄組込みに関するプラットフォーム（ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ，ｔｒａｃｅｌｅｓｓ，ｄｉａｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ－ｓｕｌｆｕｒ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）」という造語のリン／［Ｐ（Ｖ）］に基づく試薬系を使用する異なるアプローチを提示した。Ｂａｒａｎらは、「この試薬系の力が、効率的で、費用がかからず、かつ操作が簡単なプロトコールによる、ＡＳＯおよびＣＤＮを含む様々なヌクレオチド構造の強固かつ立体制御された合成によって実施される」ことをさらに提案している。
【0006】
残念ながら、Ｂａｒａｎらは、本発明者らに、目的のＬＮＡヌクレオチドＰ（Ｖ）モノマーの調製について説明することができず、ＤＮＡヌクレオチドＰ（Ｖ）モノマーの調製について説明するだけである。多くのパラメータ、試薬および方法の条件について徹底的に再調査した後、多くの他の推奨の中で、Ｂａｒａｎらは、最適条件として、塩基として１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）をヌクレオシドに対して１．３当量使用することを教示している。
【0007】
本発明者らは、驚くほど最適化された条件を有するＰ（Ｖ）試薬に基づく系によって、ＬＮＡヌクレオチドＰ（Ｖ）モノマーを調製するための新たな方法を見出し、当技術分野で説明されたよりも比較的高い収率を有する最も安価な方法をもたらした。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0008】
【文献】Ｓ．Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第２版 Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ 編：ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、２００８
【文献】Ｂａｒａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１８、３６１、１２３４～１２３８頁
【発明の概要】
【0009】
第一の態様では、本発明は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）のＰ（Ｖ）モノマー：
を、ヌクレオシドから出発し塩基として１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（ＤＢＵは、ヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される）を用いて調製するための方法に関する。
【0010】
第二の態様では、本発明は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物：
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、本明細書において定義されている]
に関する。
に関する。
【0011】
第三の態様では、本発明は、本発明の方法によって調製される、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物に関する。
【0012】
第四の態様では、本発明は、本発明の方法によって製造されるＬＮＡオリゴヌクレオチドに関する。
【0013】
[本発明１００１]
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物を調製するための方法であって、
式（Ｉ）の修飾ヌクレオシド：
［式中、ＰＧは、ヒドロキシル保護基であり、
Ｒ １ はＨであり、Ｒ ２ は－Ｏ（ＣＨ ２ ） ２ ＯＣＨ ３ であるか、または
Ｒ １ およびＲ ２ は一緒に、－ＣＨ ２ －Ｏ－もしくは－ＣＨ（ＣＨ ３ ）Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ ２ を介して結合している］を、
式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）の化合物：
［式中、Ｒ
３
は、ハロによって置換されたＣ
６
～Ｃ
１０
アリールであり、ハロは、Ｆ、ＣｌおよびＢｒから選択され、Ｒ
４
は、直鎖状または分枝状のＣ
１
～Ｃ
６
－アルキルである］と、
塩基として１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（ＤＢＵは、式（Ｉ）のヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される）を用いて反応させて、
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）のモノマー：
を生成する工程を含む、方法。
[本発明１００２]
式Ｉのヌクレオシドが、以下の式（Ｉａ）：
を有する、本発明１００１の方法。
[本発明１００３]
式Ｉのヌクレオシドが、以下の式（Ｉｂ）：
を有する、本発明１００１の方法。
[本発明１００４]
式Ｉのヌクレオシドが、以下の式（Ｉｃ）：
を有する、本発明１００１の方法。
[本発明１００５]
核酸塩基が、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、および５－メチルシトシンからなる群から選択される、本発明１００１から１００４のいずれかの方法。
[本発明１００６]
核酸塩基が、Ａ、ＴおよびＧからなる群から選択される、本発明１００１から１００４のいずれかの方法。
[本発明１００７]
Ａ、Ｇ、Ｃまたは５－メチルシトシンにおいて、環外のアミノ部位がアミノ保護基によって保護される、本発明１００５または１００６の方法。
[本発明１００８]
アミノ保護基が、ＤＭＦまたはｉＢｕからなる群から選択される、本発明１００７の方法。
[本発明１００９]
アンチセンスオリゴヌクレオチドを調製するためのＰ（Ｖ）モノマーとして、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物をカップリングさせる工程をさらに含む、本発明１００１から１００８のいずれかの方法。
[本発明１０１０]
Ｒ １ がＨであり、Ｒ ２ が－Ｏ（ＣＨ ２ ） ２ ＯＣＨ ３ である、本発明１００１から１００９のいずれかの方法。
[本発明１０１１]
Ｒ １ およびＲ ２ が一緒に、－ＣＨ ２ －Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ ２ を介して結合している、本発明１００１から１００９のいずれかの方法。
[本発明１０１２]
Ｒ １ およびＲ ２ が一緒に、－ＣＨ（ＣＨ ３ ）Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ ２ を介して結合している、本発明１００１から１００９のいずれかの方法。
[本発明１０１３]
Ｒ ３ が、１～５個のＦによって置換されたフェニルである、本発明１００１から１０１２のいずれかの方法。
[本発明１０１４]
Ｒ ４ が、メチルまたはエチルである、本発明１００１から１０１２のいずれかの方法。
[本発明１０１５]
本発明１００１から１０１４のいずれかの式（Ｉ）のヌクレオシドから出発する式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物の生成における、塩基としての１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）の使用であって、ＤＢＵが、該ヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される、使用。
[本発明１０１６]
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物：
［式中、Ｒ
１
、Ｒ
２
、Ｒ
３
およびＲ
４
は、本発明１００１から１０１４において定義される通りである］。
[本発明１０１７]
本発明１００１から１０１４のいずれかの方法によって調製された、本発明１０１６の式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物。
[本発明１０１８]
本発明１００１から１０１４のいずれかの方法によって製造された、オリゴヌクレオチド。
[本発明１０１９]
本明細書に記載された発明。
本発明の他の態様は、以下により詳細に記載される。
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物を調製するための方法であって、
式（Ｉ）の修飾ヌクレオシド：
Ｒ １ はＨであり、Ｒ ２ は－Ｏ（ＣＨ ２ ） ２ ＯＣＨ ３ であるか、または
Ｒ １ およびＲ ２ は一緒に、－ＣＨ ２ －Ｏ－もしくは－ＣＨ（ＣＨ ３ ）Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ ２ を介して結合している］を、
式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）の化合物：
塩基として１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（ＤＢＵは、式（Ｉ）のヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される）を用いて反応させて、
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）のモノマー：
[本発明１００２]
式Ｉのヌクレオシドが、以下の式（Ｉａ）：
[本発明１００３]
式Ｉのヌクレオシドが、以下の式（Ｉｂ）：
[本発明１００４]
式Ｉのヌクレオシドが、以下の式（Ｉｃ）：
[本発明１００５]
核酸塩基が、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、および５－メチルシトシンからなる群から選択される、本発明１００１から１００４のいずれかの方法。
[本発明１００６]
核酸塩基が、Ａ、ＴおよびＧからなる群から選択される、本発明１００１から１００４のいずれかの方法。
[本発明１００７]
Ａ、Ｇ、Ｃまたは５－メチルシトシンにおいて、環外のアミノ部位がアミノ保護基によって保護される、本発明１００５または１００６の方法。
[本発明１００８]
アミノ保護基が、ＤＭＦまたはｉＢｕからなる群から選択される、本発明１００７の方法。
[本発明１００９]
アンチセンスオリゴヌクレオチドを調製するためのＰ（Ｖ）モノマーとして、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物をカップリングさせる工程をさらに含む、本発明１００１から１００８のいずれかの方法。
[本発明１０１０]
Ｒ １ がＨであり、Ｒ ２ が－Ｏ（ＣＨ ２ ） ２ ＯＣＨ ３ である、本発明１００１から１００９のいずれかの方法。
[本発明１０１１]
Ｒ １ およびＲ ２ が一緒に、－ＣＨ ２ －Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ ２ を介して結合している、本発明１００１から１００９のいずれかの方法。
[本発明１０１２]
Ｒ １ およびＲ ２ が一緒に、－ＣＨ（ＣＨ ３ ）Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ ２ を介して結合している、本発明１００１から１００９のいずれかの方法。
[本発明１０１３]
Ｒ ３ が、１～５個のＦによって置換されたフェニルである、本発明１００１から１０１２のいずれかの方法。
[本発明１０１４]
Ｒ ４ が、メチルまたはエチルである、本発明１００１から１０１２のいずれかの方法。
[本発明１０１５]
本発明１００１から１０１４のいずれかの式（Ｉ）のヌクレオシドから出発する式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物の生成における、塩基としての１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）の使用であって、ＤＢＵが、該ヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される、使用。
[本発明１０１６]
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物：
[本発明１０１７]
本発明１００１から１０１４のいずれかの方法によって調製された、本発明１０１６の式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物。
[本発明１０１８]
本発明１００１から１０１４のいずれかの方法によって製造された、オリゴヌクレオチド。
[本発明１０１９]
本明細書に記載された発明。
本発明の他の態様は、以下により詳細に記載される。
【発明を実施するための形態】
【0014】
定義
「アルキル」という用語は、単独でまたは組み合わせて、１～８個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基、詳細には１～６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基、より詳細には１～４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基を表す。直鎖および分枝鎖のＣ１～Ｃ８アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、異性体ペンチル、異性体ヘキシル、異性体ヘプチルおよび異性体オクチル、詳細にはメチル、エチル、プロピル、ブチルおよびペンチルである。アルキルの特定の例は、メチル、エチルおよびプロピルである。
「アルキル」という用語は、単独でまたは組み合わせて、１～８個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基、詳細には１～６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基、より詳細には１～４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基を表す。直鎖および分枝鎖のＣ１～Ｃ８アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、異性体ペンチル、異性体ヘキシル、異性体ヘプチルおよび異性体オクチル、詳細にはメチル、エチル、プロピル、ブチルおよびペンチルである。アルキルの特定の例は、メチル、エチルおよびプロピルである。
【0015】
「アミノ」という用語は、単独でまたは組み合わせて、第一級アミノ基（－ＮＨ２）、第二級アミノ基（－ＮＨ－）、または第三級アミノ基（－Ｎ－）を表す。
【0016】
「アミノ保護基」という用語は、アミノ基の保護基を示す。アミンは、有機反応中に保護基を必要とすることが多い官能基である。ｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ、例えば、濃縮強酸（ＨＣｌまたはＣＦ３ＣＯＯＨなど）によって、または８０℃より高温に加熱することによって除去される）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ、例えば、水素化分解によって除去される）、または９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ、例えば、塩基、例えばピペリジンによって除去される）などのカルバメートは、通常使用されるアミン保護基である。異なる脱保護条件を有する保護基に関する追加の選択肢は、第一級、第二級、および複素環式のアミン：２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－イルオキシカルボニル（Ｔｅｍｐｏｃ）に関する有用な保護基を開発したＰｅｔｅｒ Ｗｉｐｆ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ、ＵＳＡ、およびその仲間によって記載されたように使用され得る。アセチル（Ａｃ）基は、シトシン核酸塩基におけるＮ４およびアデニン核酸塩基におけるＮ６の保護に関してオリゴヌクレオチド合成において一般的であり、塩基、最も高頻度には水性または気体のアンモニアまたはメチルアミンによる処理によって除去することができる。Ａｃは、安定性が高過ぎるため、脂肪族アミドから容易に除去することができない。ベンゾイル（Ｂｚ）基もまた、シトシン核酸塩基におけるＮ４およびアデニン核酸塩基におけるＮ６の保護に関してオリゴヌクレオチド合成において一般的であり、塩基、最も高頻度には水性または気体のアンモニアまたはメチルアミンによる処理によって除去することができる。Ｂｚは、安定性が高過ぎるため、脂肪族アミドから容易に除去することができない。一般的に使用される他の好適なアミノ保護基、例えばＤＭＦまたはｉＢｕについても当業者によって考慮され得る。
【0017】
「アリール」という用語は、単独でまたは組み合わせて、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニルオキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルおよびホルミルから独立して選択される１～３個の置換基で置換されていてもよい、６～１０個の炭素環原子を含む一価の芳香族炭素環式単環系または二環式環系を示す。アリールの例としては、フェニルおよびナフチル、特にフェニルが挙げられる。
【0018】
ＤＢＵについて言及する場合、表現「ヌクレオシドに対して約０．８当量の量で」は、ヌクレオシドに対して０．７～０．９当量の範囲を意味する。この文脈では、当量はモル当量を意味する。言い換えれば、これは、ＤＢＵ約０．７～０．９：ヌクレオシド１のモル比を示す。
【0019】
「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、単独でまたは組み合わせて、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素、詳細にはフッ素、塩素または臭素、より詳細にはフッ素を表す。「ハロ」という用語は、別の基と組み合わせて、少なくとも１つのハロゲンによる前記基の置換、詳細には１～５個のハロゲン、詳細には１～４個のハロゲン、すなわち１、２、３または４個のハロゲンで置換されたものを示す。
【0020】
「ヒドロキシル」および「ヒドロキシ」という用語は、単独でまたは組み合わせて、－ＯＨ基を表す。
【0021】
「ヒドロキシル保護基」は、ヒドロキシル基の保護基であり、チオール基を保護するためにも使用される。ヒドロキシル保護基の例は、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ベンジル（Ｂｎ）、β－メトキシエトキシメチルエーテル（ＭＥＭ）、ジメトキシトリチル（またはビス－（４－メトキシフェニル）フェニルメチル）（ＤＭＴ）、トリメトキシトリチル（またはトリス－（４－メトキシフェニル）フェニルメチル）（ＴＭＴ）、メトキシメチルエーテル（ＭＯＭ）、メトキシトリチル［（４－メトキシフェニル）ジフェニルメチル（ＭＭＴ）、ｐ－メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メチルチオメチルエーテル、ピバロイル（Ｐｉｖ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリチルまたはトリフェニルメチル（Ｔｒ）、シリルエーテル（例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリ－イソ－プロピルシリルオキシメチル（ＴＯＭ）およびトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）エーテル）、メチルエーテルおよびエトキシエチルエーテル（ＥＥ）である。ヒドロキシル保護基の特定の例は、ＤＭＴおよびＴＭＴ、特にＤＭＴである。
【0022】
「ＬＮＡモノマー」という用語は、ＬＮＡヌクレオチドを指し、ヌクレオシドが本明細書で定義されるＬＮＡヌクレオシドであるヌクレオチドを意味する。
【0023】
「薬学的に許容される塩」という用語は、生物学的にまたはその他の点で望ましくない訳ではない、遊離塩基または遊離酸の生物学的有効性および特性を保持するこれらの塩を指す。塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、詳細には塩酸などの無機酸、および酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ－アセチルシステインなどの有機酸により形成される。さらに、これらの塩は、遊離酸への無機塩基または有機塩基の付加から調製することができる。無機塩基に由来する塩としては、以下に限定されないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウムの塩が挙げられる。有機塩基に由来する塩としては、以下に限定されないが、第一級、第二級、および第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミンならびにイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リジン、アルギニン、Ｎ－エチルピペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂などの塩基性イオン交換樹脂が挙げられる。本発明のオリゴヌクレオチドは、双性イオンの形態でも存在し得る。本発明の特に好ましい薬学的に許容される塩は、ナトリウム、リチウム、カリウムおよびトリアルキルアンモニウム塩である。
【0024】
「保護基」という用語は、単独でまたは組み合わせて、化学反応が、別の保護されていない反応部位で選択的に実行され得るように、多官能化合物における反応部位を選択的にブロックする基を表す。保護基は除去されてもよい。例示的な保護基は、アミノ保護基、カルボキシ保護基またはヒドロキシ保護基である。
【0025】
「ホスフェート保護基」は、ホスフェート基の保護基である。ホスフェート保護基の例は、２－シアノエチルおよびメチルである。ホスフェート保護基の特定の例は、２－シアノエチルである。
【0026】
本発明の出発材料または化合物のうちの１つが、安定ではないかまたは１つもしくは複数の反応工程の反応条件下で反応性である１つまたは複数の官能基を含有する場合、適切な保護基（例えば、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、第３版、１９９９、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋによる「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」に記載される）は、当技術分野で周知の方法を適用する重要な工程の前に導入され得る。このような保護基は、この文献に記載された標準的方法を使用して、合成のより遅い段階で除去され得る。保護基の例は、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９－フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、２－トリメチルシリルエチルカルバメート（Ｔｅｏｃ）、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）およびｐ－メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）である。
【0027】
本明細書に記載の化合物は、いくつかの不斉中心を含有することができ、光学的に純粋な鏡像異性体、例えばラセミ体などの鏡像異性体の混合物、ジアステレオマーの混合物、ジアステレオ異性ラセミ体またはジアステレオ異性ラセミ体の混合物の形態で存在し得る。
【0028】
オリゴヌクレオチド
「オリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用される場合、２つ以上の共有結合により連結したヌクレオシドを含む分子として、これが、当業者によって一般的に理解されるように定義される。このような共有結合したヌクレオシドは、核酸分子またはオリゴマーとも称されてもよい。オリゴヌクレオチドは、通常、固相化学合成と、それに続く精製によって実験室内で作製される。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合、共有結合により連結したヌクレオチドまたはヌクレオシドの核酸塩基部分、またはその修飾物の配列または順序に対して言及される。本発明のオリゴヌクレオチドは、人工のものであり、化学的に合成され、かつ典型的には、精製または単離される。本発明のオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾されたヌクレオシドまたはヌクレオチドを含んでもよい。
「オリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用される場合、２つ以上の共有結合により連結したヌクレオシドを含む分子として、これが、当業者によって一般的に理解されるように定義される。このような共有結合したヌクレオシドは、核酸分子またはオリゴマーとも称されてもよい。オリゴヌクレオチドは、通常、固相化学合成と、それに続く精製によって実験室内で作製される。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合、共有結合により連結したヌクレオチドまたはヌクレオシドの核酸塩基部分、またはその修飾物の配列または順序に対して言及される。本発明のオリゴヌクレオチドは、人工のものであり、化学的に合成され、かつ典型的には、精製または単離される。本発明のオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾されたヌクレオシドまたはヌクレオチドを含んでもよい。
【0029】
アンチセンスオリゴヌクレオチド
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用される場合、標的核酸、特に標的核酸における連続配列とハイブリダイズすることによって、標的遺伝子の発現をモジュレートすることが可能なオリゴヌクレオチドとして定義される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、本質的には二本鎖ではなく、したがって、ｓｉＲＮＡでもｓｈＲＮＡでもない。好ましくは、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、一本鎖である。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドは、その内のまたはその間の自己相補性の程度がオリゴヌクレオチドの全長の５０％未満である限り、ヘアピンまたは分子間二重構造（同じオリゴヌクレオチドの二つの分子間で二重）を形成することができる。
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用される場合、標的核酸、特に標的核酸における連続配列とハイブリダイズすることによって、標的遺伝子の発現をモジュレートすることが可能なオリゴヌクレオチドとして定義される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、本質的には二本鎖ではなく、したがって、ｓｉＲＮＡでもｓｈＲＮＡでもない。好ましくは、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、一本鎖である。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドは、その内のまたはその間の自己相補性の程度がオリゴヌクレオチドの全長の５０％未満である限り、ヘアピンまたは分子間二重構造（同じオリゴヌクレオチドの二つの分子間で二重）を形成することができる。
【0030】
連続ヌクレオチド配列
「連続ヌクレオチド配列」という用語は、標的核酸に相補的であるオリゴヌクレオチドの領域を指す。この用語は、本明細書において、「連続核酸塩基配列」という用語および「オリゴヌクレオチドモチーフ配列」という用語と交換可能に使用される。一部の実施態様では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列を構成する。一部の実施態様では、オリゴヌクレオチドは、Ｆ－Ｇ－Ｆ’ギャップマー領域などの連続ヌクレオチド配列を含み、さらなるヌクレオチド、例えば、官能基を連続ヌクレオチド配列に結合させるために使用され得るヌクレオチドリンカー領域を必要に応じて含んでもよい。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に相補的であってもなくてもよい。
「連続ヌクレオチド配列」という用語は、標的核酸に相補的であるオリゴヌクレオチドの領域を指す。この用語は、本明細書において、「連続核酸塩基配列」という用語および「オリゴヌクレオチドモチーフ配列」という用語と交換可能に使用される。一部の実施態様では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列を構成する。一部の実施態様では、オリゴヌクレオチドは、Ｆ－Ｇ－Ｆ’ギャップマー領域などの連続ヌクレオチド配列を含み、さらなるヌクレオチド、例えば、官能基を連続ヌクレオチド配列に結合させるために使用され得るヌクレオチドリンカー領域を必要に応じて含んでもよい。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に相補的であってもなくてもよい。
【0031】
ヌクレオチド
ヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドのビルディングブロックであり、本発明の目的では、天然に存在するヌクレオチドと天然に存在しないヌクレオチドの両方を含む。本質的に、ＤＮＡおよびＲＮＡヌクレオチドなどのヌクレオチドは、リボース糖部分、核酸塩基部分および１つまたは複数のリン酸基（ヌクレオシドには存在しない）を含む。ヌクレオシドとヌクレオチドは、「ユニット」または「モノマー」と交換可能に称されてもよい。
ヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドのビルディングブロックであり、本発明の目的では、天然に存在するヌクレオチドと天然に存在しないヌクレオチドの両方を含む。本質的に、ＤＮＡおよびＲＮＡヌクレオチドなどのヌクレオチドは、リボース糖部分、核酸塩基部分および１つまたは複数のリン酸基（ヌクレオシドには存在しない）を含む。ヌクレオシドとヌクレオチドは、「ユニット」または「モノマー」と交換可能に称されてもよい。
【0032】
修飾ヌクレオシド
「修飾ヌクレオシド」または「ヌクレオシド修飾」という用語は、本明細書で使用される場合、糖部分または（核酸）塩基部分の１つまたは複数の修飾の導入によって、相当するＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドと比較して修飾されたヌクレオシドを指す。好ましい実施形態では、修飾ヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。修飾ヌクレオシドという用語は、「ヌクレオシド類似体」または修飾「ユニット」または修飾「モノマー」という用語と交換可能に使用されてもよい。修飾されていないＤＮＡまたはＲＮＡ糖部分を含むヌクレオシドは、本明細書においてＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドと称される。ＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドの塩基領域において修飾を含むヌクレオシドは、一般的に、これらがワトソンクリック塩基対合を可能にする場合、依然としてＤＮＡまたはＲＮＡと称される。
「修飾ヌクレオシド」または「ヌクレオシド修飾」という用語は、本明細書で使用される場合、糖部分または（核酸）塩基部分の１つまたは複数の修飾の導入によって、相当するＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドと比較して修飾されたヌクレオシドを指す。好ましい実施形態では、修飾ヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。修飾ヌクレオシドという用語は、「ヌクレオシド類似体」または修飾「ユニット」または修飾「モノマー」という用語と交換可能に使用されてもよい。修飾されていないＤＮＡまたはＲＮＡ糖部分を含むヌクレオシドは、本明細書においてＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドと称される。ＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドの塩基領域において修飾を含むヌクレオシドは、一般的に、これらがワトソンクリック塩基対合を可能にする場合、依然としてＤＮＡまたはＲＮＡと称される。
【0033】
核酸塩基
核酸塩基という用語は、核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成するヌクレオシドおよびヌクレオチドに存在するプリン（例えば、アデニンおよびグアニン）およびピリミジン（例えば、ウラシル、チミンおよびシトシン）部分を含む。本発明の文脈では、核酸塩基という用語は、天然に存在する核酸塩基とは異なってもよいが、核酸ハイブリダイゼーション中に機能的である修飾核酸塩基も包含する。この文脈では、「核酸塩基」は、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチンおよびヒポキサンチンなどの天然に存在する核酸塩基と、天然に存在しない変異体の両方を指す。このような変異体は、例えば、Ｈｉｒａｏら（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ 第４５巻 ２０５５頁およびＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１に記載されている。
核酸塩基という用語は、核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成するヌクレオシドおよびヌクレオチドに存在するプリン（例えば、アデニンおよびグアニン）およびピリミジン（例えば、ウラシル、チミンおよびシトシン）部分を含む。本発明の文脈では、核酸塩基という用語は、天然に存在する核酸塩基とは異なってもよいが、核酸ハイブリダイゼーション中に機能的である修飾核酸塩基も包含する。この文脈では、「核酸塩基」は、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチンおよびヒポキサンチンなどの天然に存在する核酸塩基と、天然に存在しない変異体の両方を指す。このような変異体は、例えば、Ｈｉｒａｏら（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ 第４５巻 ２０５５頁およびＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１に記載されている。
【0034】
一部の実施形態では、核酸塩基部分は、プリンまたはピリミジンを修飾されたプリンまたはピリミジン、例えば、置換されたプリンまたは置換されたピリミジンに変更することにより修飾されており、例えば、イソシトシン、シュードイソシトシン、５－メチル－シトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル ５－チアゾロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、２’チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリンおよび２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基である。
【0035】
核酸塩基部分は、対応する各核酸塩基についての文字コード、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、ＣまたはＵにより示されてもよく、ここで、各文字は、等価機能の修飾された核酸塩基を必要に応じて含んでもよい。例えば、例示されるオリゴヌクレオチドでは、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、および５－メチルシトシンから選択される。必要に応じて、ＬＮＡギャップマーでは、５－メチルシトシンＬＮＡヌクレオシドが使用されてもよい。
【0036】
修飾オリゴヌクレオチド
修飾オリゴヌクレオチドという用語は、１つまたは複数の糖修飾ヌクレオシドおよび／または修飾ヌクレオシド間連結を含むオリゴヌクレオチドについて説明する。キメラオリゴヌクレオチドという用語は、修飾ヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを説明するためにこの文献において使用された用語である。
修飾オリゴヌクレオチドという用語は、１つまたは複数の糖修飾ヌクレオシドおよび／または修飾ヌクレオシド間連結を含むオリゴヌクレオチドについて説明する。キメラオリゴヌクレオチドという用語は、修飾ヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを説明するためにこの文献において使用された用語である。
【0037】
立体定義されたオリゴヌクレオチド
立体定義されたオリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド間連結の少なくとも１つが立体定義されたヌクレオシド間連結であるオリゴヌクレオチドである。
立体定義されたオリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド間連結の少なくとも１つが立体定義されたヌクレオシド間連結であるオリゴヌクレオチドである。
【0038】
立体定義されたホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、ヌクレオシド間連結の少なくとも１つが立体定義されたホスホロチオエートヌクレオシド間連結であるオリゴヌクレオチドである。
【0039】
相補性
「相補性」という用語は、ヌクレオシド／ヌクレオチドのワトソンクリック塩基対合に関する能力について説明する。ワトソンクリック塩基対は、グアニン（Ｇ）－シトシン（Ｃ）およびアデニン（Ａ）－チミン（Ｔ）／ウラシル（Ｕ）である。オリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を有するヌクレオシドを含んでもよく、例えば５－メチルシトシンはシトシンの代わりに使用されることが多く、このため、相補性という用語は、修飾されていない核酸塩基と修飾された核酸塩基の間のワトソンクリック塩基対合を包含することが理解されよう（例えば、Ｈｉｒａｏら（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ 第４５巻 ２０５５頁およびＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１を参照されたい）。
「相補性」という用語は、ヌクレオシド／ヌクレオチドのワトソンクリック塩基対合に関する能力について説明する。ワトソンクリック塩基対は、グアニン（Ｇ）－シトシン（Ｃ）およびアデニン（Ａ）－チミン（Ｔ）／ウラシル（Ｕ）である。オリゴヌクレオチドは、修飾された核酸塩基を有するヌクレオシドを含んでもよく、例えば５－メチルシトシンはシトシンの代わりに使用されることが多く、このため、相補性という用語は、修飾されていない核酸塩基と修飾された核酸塩基の間のワトソンクリック塩基対合を包含することが理解されよう（例えば、Ｈｉｒａｏら（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ 第４５巻 ２０５５頁およびＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１を参照されたい）。
【0040】
「％相補的」という用語は、本明細書で使用される場合、核酸分子（例えばオリゴヌクレオチド）中の連続ヌクレオチド配列が、所与の位置で、別の核酸分子（例えば、標的核酸）の所与の位置で、連続ヌクレオチド配列に対して相補的である（すなわち、ワトソンクリック塩基対を形成する）該核酸分子中の連続ヌクレオチド配列におけるヌクレオチドの割合を指す。このパーセンテージは、２つの配列間で対を形成するアラインされた（標的配列５’－３’および３’－５’からのオリゴヌクレオチド配列とアラインされた場合）塩基の数を数え、オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることによって計算される。このような比較において、アラインされない（塩基対を形成しない）核酸塩基／ヌクレオチドをミスマッチと呼ぶ。好ましくは、挿入および欠失は、連続ヌクレオチド配列の％相補性の計算において許容されない。
【0041】
「完全に相補的」という用語は、１００％の相補性を指す。
【0042】
同一性
「同一性」という用語は、本明細書で使用される場合、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）中の連続ヌクレオチド配列が、所与の位置で、別の核酸分子（例えば、標的核酸）の所与の位置で、連続ヌクレオチド配列に対して同一である（すなわち、相補的ヌクレオシドとワトソンクリック塩基対を形成する能力がある）該核酸分子中の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの数をパーセントで表したものを指す。このパーセンテージは、その２つの配列間で同一であるアラインされた塩基の数を数え、オリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることによって計算される。パーセント同一性＝（一致した数×１００）／アラインされた領域の長さ。好ましくは、挿入および欠失は、連続ヌクレオチド配列の％相補性の計算において許容されない。
「同一性」という用語は、本明細書で使用される場合、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）中の連続ヌクレオチド配列が、所与の位置で、別の核酸分子（例えば、標的核酸）の所与の位置で、連続ヌクレオチド配列に対して同一である（すなわち、相補的ヌクレオシドとワトソンクリック塩基対を形成する能力がある）該核酸分子中の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの数をパーセントで表したものを指す。このパーセンテージは、その２つの配列間で同一であるアラインされた塩基の数を数え、オリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることによって計算される。パーセント同一性＝（一致した数×１００）／アラインされた領域の長さ。好ましくは、挿入および欠失は、連続ヌクレオチド配列の％相補性の計算において許容されない。
【0043】
ハイブリダイゼーション
「ハイブリダイズすること」または「ハイブリダイズする」という用語は、本明細書で使用される場合、対向する鎖上の塩基対の間に水素結合を形成することによって、二重鎖を形成する２本の核酸鎖（例えば、オリゴヌクレオチドと標的核酸）と理解されるべきである。２本の核酸鎖間の結合の親和性が、ハイブリダイゼーションの強さである。この強さは、オリゴヌクレオチドの半数が標的核酸と二重鎖を形成する温度として定義される融解温度（Ｔｍ）で記述されることが多い。生理的条件では、Ｔｍは、親和性と厳密に比例することはない（ＭｅｒｇｎｙおよびＬａｃｒｏｉｘ、２００３、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １３：５１５～５３７頁）。標準状態のギッブス自由エネルギーΔＧ°は、結合親和性のより正確な表現であり、ΔＧ°＝－ＲＴｌｎ（Ｋｄ）［式中、Ｒは気体定数であり、Ｔは絶対温度である］によって反応の解離定数（Ｋｄ）と関係している。したがって、オリゴヌクレオチドと標的核酸の間の反応の非常に小さいΔＧ°は、オリゴヌクレオチドと標的核酸の間の強いハイブリダイゼーションを反映している。ΔＧ°は、水溶液の濃度が１Ｍであり、ｐＨが７であり、温度が３７℃である反応に伴うエネルギーである。標的核酸へのオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、自発的な反応であり、自発的な反応ではΔＧ°がゼロよりも小さい。ΔＧ°は、例えば、Ｈａｎｓｅｎら、１９６５、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．３６～３８頁およびＨｏｌｄｇａｔｅら、２００５、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙに記載されている等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）法の使用によって実験的に測定することができる。ΔＧ°の測定には市販の装置を利用できることを当業者は知っているであろう。ΔＧ°は、ＳａｎｔａＬｕｃｉａ、１９９８、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９５：１４６０～１４６５頁に記載されている最近傍モデルを使用して、Ｓｕｇｉｍｏｔｏら、１９９５、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１１２１１～１１２１６頁およびＭｃＴｉｇｕｅら、２００４、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：５３８８～５４０５頁に記載されている大まかに導出した熱力学的パラメータを使用して、数値で評価することもできる。その意図される核酸標的をハイブリダイゼーションによってモジュレート可能にするため、本発明のオリゴヌクレオチドは、１０～３０ヌクレオチド長であるオリゴヌクレオチドでは－１０ｋｃａｌよりも小さい推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。一部の実施態様では、ハイブリダイゼーションの強さの程度は、標準状態のギッブス自由エネルギーΔＧ°によって測定される。オリゴヌクレオチドは、８～３０ヌクレオチド長であるオリゴヌクレオチドでは、－１０ｋｃａｌ未満、例えば、－１５ｋｃａｌ未満、例えば、－２０ｋｃａｌ未満および－２５ｋｃａｌ未満の範囲の推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズすることができる。一部の実施態様では、オリゴヌクレオチドは、－１０～－６０ｋｃａｌ、例えば、－１２～－４０ｋｃａｌ、例えば、－１５～－３０ｋｃａｌまたは－１６～－２７ｋｃａｌ、例えば、－１８～－２５ｋｃａｌの推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。
「ハイブリダイズすること」または「ハイブリダイズする」という用語は、本明細書で使用される場合、対向する鎖上の塩基対の間に水素結合を形成することによって、二重鎖を形成する２本の核酸鎖（例えば、オリゴヌクレオチドと標的核酸）と理解されるべきである。２本の核酸鎖間の結合の親和性が、ハイブリダイゼーションの強さである。この強さは、オリゴヌクレオチドの半数が標的核酸と二重鎖を形成する温度として定義される融解温度（Ｔｍ）で記述されることが多い。生理的条件では、Ｔｍは、親和性と厳密に比例することはない（ＭｅｒｇｎｙおよびＬａｃｒｏｉｘ、２００３、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １３：５１５～５３７頁）。標準状態のギッブス自由エネルギーΔＧ°は、結合親和性のより正確な表現であり、ΔＧ°＝－ＲＴｌｎ（Ｋｄ）［式中、Ｒは気体定数であり、Ｔは絶対温度である］によって反応の解離定数（Ｋｄ）と関係している。したがって、オリゴヌクレオチドと標的核酸の間の反応の非常に小さいΔＧ°は、オリゴヌクレオチドと標的核酸の間の強いハイブリダイゼーションを反映している。ΔＧ°は、水溶液の濃度が１Ｍであり、ｐＨが７であり、温度が３７℃である反応に伴うエネルギーである。標的核酸へのオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、自発的な反応であり、自発的な反応ではΔＧ°がゼロよりも小さい。ΔＧ°は、例えば、Ｈａｎｓｅｎら、１９６５、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．３６～３８頁およびＨｏｌｄｇａｔｅら、２００５、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙに記載されている等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）法の使用によって実験的に測定することができる。ΔＧ°の測定には市販の装置を利用できることを当業者は知っているであろう。ΔＧ°は、ＳａｎｔａＬｕｃｉａ、１９９８、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９５：１４６０～１４６５頁に記載されている最近傍モデルを使用して、Ｓｕｇｉｍｏｔｏら、１９９５、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１１２１１～１１２１６頁およびＭｃＴｉｇｕｅら、２００４、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：５３８８～５４０５頁に記載されている大まかに導出した熱力学的パラメータを使用して、数値で評価することもできる。その意図される核酸標的をハイブリダイゼーションによってモジュレート可能にするため、本発明のオリゴヌクレオチドは、１０～３０ヌクレオチド長であるオリゴヌクレオチドでは－１０ｋｃａｌよりも小さい推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。一部の実施態様では、ハイブリダイゼーションの強さの程度は、標準状態のギッブス自由エネルギーΔＧ°によって測定される。オリゴヌクレオチドは、８～３０ヌクレオチド長であるオリゴヌクレオチドでは、－１０ｋｃａｌ未満、例えば、－１５ｋｃａｌ未満、例えば、－２０ｋｃａｌ未満および－２５ｋｃａｌ未満の範囲の推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズすることができる。一部の実施態様では、オリゴヌクレオチドは、－１０～－６０ｋｃａｌ、例えば、－１２～－４０ｋｃａｌ、例えば、－１５～－３０ｋｃａｌまたは－１６～－２７ｋｃａｌ、例えば、－１８～－２５ｋｃａｌの推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。
【0044】
糖修飾
本発明のオリゴマーは、修飾糖部分、すなわち、ＤＮＡおよびＲＮＡにおいて見られるリボース糖部分と比較した場合の糖部分の修飾を有する１つまたは複数のヌクレオシドを含んでもよい。
本発明のオリゴマーは、修飾糖部分、すなわち、ＤＮＡおよびＲＮＡにおいて見られるリボース糖部分と比較した場合の糖部分の修飾を有する１つまたは複数のヌクレオシドを含んでもよい。
【0045】
リボース糖部分の修飾を有する多数のヌクレオシドは、主に、オリゴヌクレオチドのある特定の特性、例えば、親和性および／またはヌクレアーゼ耐性を改善する目的で作製されている。
【0046】
このような修飾には、例えば、ヘキソース環（ＨＮＡ）、または典型的には、リボース環上のＣ２炭素とＣ４炭素の間にビラジカル架橋を有する二環式の環（ＬＮＡ）、または典型的には、Ｃ２炭素とＣ３炭素の間の結合を欠いている非連結リボース環（例えば、ＵＮＡ）による置換によって、リボース環構造が修飾されているものが含まれる。他の糖修飾ヌクレオシドには、例えば、ビシクロヘキソース核酸（ＷＯ２０１１／０１７５２１）または三環式核酸（ＷＯ２０１３／１５４７９８）が含まれる。修飾ヌクレオシドには、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、またはモルホリノ核酸の場合に、糖部分が糖ではない部分で置換されているヌクレオシドも含まれる。
【0047】
糖修飾には、リボース環上の置換基を、ＤＮＡヌクレオシドおよびＲＮＡヌクレオシド中に天然に見出される水素、または２’－ＯＨ基以外の基に変更することによってなされる修飾も含まれる。置換基は、例えば、２’、３’、４’、または５’位に導入されてもよい。
【0048】
２’糖修飾ヌクレオシド
２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨまたは－ＯＨ以外の置換基を有するか（２’置換ヌクレオシド）、またはＬＮＡ（２’－４’ビラジカル架橋）ヌクレオシドのように、リボース環中の２’炭素と２番目の炭素の間に架橋を形成することが可能な２’連結ビラジカルを含む、ヌクレオシドである。
２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨまたは－ＯＨ以外の置換基を有するか（２’置換ヌクレオシド）、またはＬＮＡ（２’－４’ビラジカル架橋）ヌクレオシドのように、リボース環中の２’炭素と２番目の炭素の間に架橋を形成することが可能な２’連結ビラジカルを含む、ヌクレオシドである。
【0049】
実際に、２’修飾ヌクレオシドを開発することに多くの注目が集まり、多数の２’修飾ヌクレオシドが、オリゴヌクレオチド中に組み込まれた場合に有益な特性を有することが見出された。例えば、２’修飾糖は、オリゴヌクレオチドに、増強された結合親和性および／または増大されたヌクレアーゼ耐性を与え得る。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡヌクレオシド、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡヌクレオシド、２’－アルコキシ－ＲＮＡヌクレオシド、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）ヌクレオシド、２’－アミノ－ＤＮＡヌクレオシド、２’－フルオロ－ＲＮＡヌクレオシドおよび２’－Ｆ－ＡＮＡヌクレオシドである。さらなる例は、例えば、ＦｒｅｉｅｒおよびＡｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．、１９９７、２５、４４２９～４４４３頁およびＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２０００、３（２）、２９３～２１３頁、ならびにＤｅｌｅａｖｅｙおよびＤａｍｈａ、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２、１９、９３７頁において見出すことができる。以下は、いくつかの２’置換修飾ヌクレオシドの例である。
【0050】
本発明に関して、２’修飾は、ＬＮＡのような２’架橋分子を含まない。
【0051】
ロックド核酸ヌクレオシド（ＬＮＡヌクレオシド）
「ＬＮＡヌクレオシド」は、リボース環の立体構造を制限または固定する、前記ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’を連結するビラジカル（「２’－４’架橋」とも称される）を含む、２’修飾ヌクレオシドである。これらのヌクレオシドは、文献において、架橋核酸または二環式核酸（ＢＮＡ）とも称される。リボースの立体構造の固定は、ＬＮＡがオリゴヌクレオチド中に組み込まれた場合に相補的なＲＮＡまたはＤＮＡ分子に対するハイブリダイゼーションの親和性が増強されること（二重鎖安定化）に関連する。このことは、オリゴヌクレオチド／相補体二重鎖の融解温度を測定することによって、常套的に決定することができる。
「ＬＮＡヌクレオシド」は、リボース環の立体構造を制限または固定する、前記ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’を連結するビラジカル（「２’－４’架橋」とも称される）を含む、２’修飾ヌクレオシドである。これらのヌクレオシドは、文献において、架橋核酸または二環式核酸（ＢＮＡ）とも称される。リボースの立体構造の固定は、ＬＮＡがオリゴヌクレオチド中に組み込まれた場合に相補的なＲＮＡまたはＤＮＡ分子に対するハイブリダイゼーションの親和性が増強されること（二重鎖安定化）に関連する。このことは、オリゴヌクレオチド／相補体二重鎖の融解温度を測定することによって、常套的に決定することができる。
【0052】
非限定的な例示的ＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ９９／０１４２２６、ＷＯ００／６６６０４、ＷＯ９８／０３９３５２、ＷＯ２００４／０４６１６０、ＷＯ００／０４７５９９、ＷＯ２００７／１３４１８１、ＷＯ２０１０／０７７５７８、ＷＯ２０１０／０３６６９８、ＷＯ２００７／０９００７１、ＷＯ２００９／００６４７８、ＷＯ２０１１／１５６２０２、ＷＯ２００８／１５４４０１、ＷＯ２００９／０６７６４７、ＷＯ２００８／１５０７２９、Ｍｏｒｉｔａら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２、７３～７６頁、Ｓｅｔｈら Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０、第７５巻（５）１５６９～８１頁、およびＭｉｔｓｕｏｋａら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９、３７（４）、１２２５～１２３８頁において開示されている。
【0053】
２’－４’架橋は、２～４位を架橋する原子を含み、特に、式－Ｘ－Ｙ－（ＹはＣ４’に連結しており、ＸはＣ２’に連結している）：
［式中、
Ｘは、酸素、硫黄、－ＣＲａＲｂ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－、－Ｃ（＝ＣＲａＲｂ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｓｉ（Ｒａ）２－、－ＳＯ２－、－ＮＲａ－； －Ｏ－ＮＲａ－、－ＮＲａ－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｊ）－、Ｓｅ、－Ｏ－ＮＲａ－、－ＮＲａ－ＣＲａＲｂ－、－Ｎ（Ｒａ）－Ｏ－または－Ｏ－ＣＲａＲｂ－であり；
Ｙは、酸素、硫黄、－（ＣＲａＲｂ）ｎ－、－ＣＲａＲｂ－Ｏ－ＣＲａＲｂ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｓｉ（Ｒａ）２－、－ＳＯ２－、－ＮＲａ－、－Ｃ（＝Ｊ）－、Ｓｅ、－Ｏ－ＮＲａ－、－ＮＲａ－ＣＲａＲｂ－、－Ｎ（Ｒａ）－Ｏ－または－Ｏ－ＣＲａＲｂ－であり；
ただし、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－Ｏ－、Ｓｉ（Ｒａ）２－Ｓｉ（Ｒａ）２－、－ＳＯ２－ＳＯ２－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－または－Ｓｅ－Ｓｅ－のいずれでもないことを条件とし；
Ｊは、酸素、硫黄、＝ＣＨ２または＝Ｎ（Ｒａ）であり；
ＲａおよびＲｂは、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、チオヒドロキシル、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニルオキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、ヘテロシクリル、アミノ、アルキルアミノ、カルバモイル、アルキルアミノカルボニル、アミノアルキルアミノカルボニル、アルキルアミノアルキルアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、カルバミド、アルカノイルオキシ、スルホニル、アルキルスルホニルオキシ、ニトロ、アジド、チオヒドロキシルスルフィドアルキルスルファニル、アリールオキシカルボニル、アリールオキシ、アリールカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールカルボニル、－ＯＣ（＝Ｘａ）Ｒｃ、－ＯＣ（＝Ｘａ）ＮＲｃＲｄおよび－ＮＲｅＣ（＝Ｘａ）ＮＲｃＲｄから独立して選択されるか；
または
２個のジェミナルなＲａおよびＲｂは一緒に、置換されていてもよいメチレンを形成するか；
または
２個のジェミナルなＲａおよびＲｂは、それらが結合している炭素原子と一緒に、－Ｘ－Ｙ－の炭素原子を１つだけ有するシクロアルキルもしくはハロシクロアルキルを形成し；
ここで、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、置換アルコキシおよび置換メチレンは、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニルオキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ホルミル、ヘテロシリル、アリールおよびヘテロアリールから独立して選択される１～３個の置換基で置換されたアルキル、アルケニル、アルキニルおよびメチレンであり；
Ｘａは、酸素、硫黄または－ＮＲｃであり；
Ｒｃ、ＲｄおよびＲｅは、水素およびアルキルから独立して選択され；
ｎは、１、２または３である］
のものである。
［式中、
Ｘは、酸素、硫黄、－ＣＲａＲｂ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－、－Ｃ（＝ＣＲａＲｂ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｓｉ（Ｒａ）２－、－ＳＯ２－、－ＮＲａ－； －Ｏ－ＮＲａ－、－ＮＲａ－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｊ）－、Ｓｅ、－Ｏ－ＮＲａ－、－ＮＲａ－ＣＲａＲｂ－、－Ｎ（Ｒａ）－Ｏ－または－Ｏ－ＣＲａＲｂ－であり；
Ｙは、酸素、硫黄、－（ＣＲａＲｂ）ｎ－、－ＣＲａＲｂ－Ｏ－ＣＲａＲｂ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｓｉ（Ｒａ）２－、－ＳＯ２－、－ＮＲａ－、－Ｃ（＝Ｊ）－、Ｓｅ、－Ｏ－ＮＲａ－、－ＮＲａ－ＣＲａＲｂ－、－Ｎ（Ｒａ）－Ｏ－または－Ｏ－ＣＲａＲｂ－であり；
ただし、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－Ｏ－、Ｓｉ（Ｒａ）２－Ｓｉ（Ｒａ）２－、－ＳＯ２－ＳＯ２－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－または－Ｓｅ－Ｓｅ－のいずれでもないことを条件とし；
Ｊは、酸素、硫黄、＝ＣＨ２または＝Ｎ（Ｒａ）であり；
ＲａおよびＲｂは、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、チオヒドロキシル、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニルオキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、ヘテロシクリル、アミノ、アルキルアミノ、カルバモイル、アルキルアミノカルボニル、アミノアルキルアミノカルボニル、アルキルアミノアルキルアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、カルバミド、アルカノイルオキシ、スルホニル、アルキルスルホニルオキシ、ニトロ、アジド、チオヒドロキシルスルフィドアルキルスルファニル、アリールオキシカルボニル、アリールオキシ、アリールカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールカルボニル、－ＯＣ（＝Ｘａ）Ｒｃ、－ＯＣ（＝Ｘａ）ＮＲｃＲｄおよび－ＮＲｅＣ（＝Ｘａ）ＮＲｃＲｄから独立して選択されるか；
または
２個のジェミナルなＲａおよびＲｂは一緒に、置換されていてもよいメチレンを形成するか；
または
２個のジェミナルなＲａおよびＲｂは、それらが結合している炭素原子と一緒に、－Ｘ－Ｙ－の炭素原子を１つだけ有するシクロアルキルもしくはハロシクロアルキルを形成し；
ここで、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、置換アルコキシおよび置換メチレンは、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニルオキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ホルミル、ヘテロシリル、アリールおよびヘテロアリールから独立して選択される１～３個の置換基で置換されたアルキル、アルケニル、アルキニルおよびメチレンであり；
Ｘａは、酸素、硫黄または－ＮＲｃであり；
Ｒｃ、ＲｄおよびＲｅは、水素およびアルキルから独立して選択され；
ｎは、１、２または３である］
のものである。
【0054】
本発明のさらなる特定の実施形態では、Ｘは、酸素、硫黄、－ＮＲａ－、－ＣＲａＲｂ－または－Ｃ（＝ＣＲａＲｂ）－、詳細には酸素、硫黄、－ＮＨ－、－ＣＨ２－または－Ｃ（＝ＣＨ２）－、より詳細には酸素である。
【0055】
本発明の別の特定の実施形態では、Ｙは、－ＣＲａＲｂ－、－ＣＲａＲｂ－ＣＲａＲｂ－または－ＣＲａＲｂ－ＣＲａＲｂ－ＣＲａＲｂ－、詳細には－ＣＨ２－ＣＨＣＨ３－、－ＣＨＣＨ３－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－または－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－である。
【0056】
本発明の特定の実施形態では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－（ＣＲａＲｂ）ｎ－、－Ｓ－ＣＲａＲｂ－、－Ｎ（Ｒａ）ＣＲａＲｂ－、－ＣＲａＲｂ－ＣＲａＲｂ－、－Ｏ－ＣＲａＲｂ－Ｏ－ＣＲａＲｂ－、－ＣＲａＲｂ－Ｏ－ＣＲａＲｂ－、－Ｃ（＝ＣＲａＲｂ）－ＣＲａＲｂ－、－Ｎ（Ｒａ）ＣＲａＲｂ－、－Ｏ－Ｎ（Ｒａ）－ＣＲａＲｂ－または－Ｎ（Ｒａ）－Ｏ－ＣＲａＲｂ－である。
【0057】
本発明の特定の実施形態では、ＲａおよびＲｂは、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルおよびアルコキシアルキル、特に水素、ハロゲン、アルキルおよびアルコキシアルキルからなる群から独立して選択される。
【0058】
本発明の別の実施形態では、ＲａおよびＲｂは、水素、フルオロ、ヒドロキシル、メチルおよび－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、特に水素、フルオロ、メチルおよび－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３からなる群から独立して選択される。
【0059】
有利には、－Ｘ－Ｙ－のＲａおよびＲｂのうちの１つは上記に定義された通りであり、他ものはすべて、同時に水素である。
【0060】
本発明のさらに特定の実施形態では、Ｒａは、水素またはアルキル、特に水素またはメチルである。
【0061】
本発明の別の実施形態では、Ｒｂは、水素またはアルキル、特に水素またはメチルである。
【0062】
本発明の特定の実施形態では、ＲａおよびＲｂの一方または両方は、水素である。
【0063】
本発明の特定の実施形態では、ＲａおよびＲｂの一方のみは、水素である。
【0064】
本発明の特定の一実施形態では、ＲａおよびＲｂのうちの一方はメチルであり、他方のものは水素である。
【0065】
本発明の特定の実施形態では、ＲａおよびＲｂはいずれも同時にメチルである。
【0066】
本発明の特定の実施形態では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ２－、－Ｓ－ＣＨ２－、－Ｓ－ＣＨ（ＣＨ３）－、－ＮＨ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３）－、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）－、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ３）－、－Ｏ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、－Ｃ（＝ＣＨ２）ＣＨ２－、－Ｃ（＝ＣＨ２）ＣＨ（ＣＨ３）－、－Ｎ（ＯＣＨ３）ＣＨ２－または－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２－である；
【0067】
本発明の特定の実施形態では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＲａＲｂ－ であり、ここで、Ｒａ およびＲｂは、水素、アルキルおよびアルコキシアルキル、特に水素、メチルおよび－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３からなる群から独立して選択される。
【0068】
特定の実施形態では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ２－または－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ３）－、詳細には－Ｏ－ＣＨ２－である。
【0069】
２’－４’架橋は、式（Ａ）および式（Ｂ）にそれぞれ例示するように、リボース環の面より下（ベータ－Ｄ－配置）、または環の面より上（アルファ－Ｌ－配置）のいずれかに位置してもよい。
【0070】
指定されなければ、ＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄまたはアルファ－Ｌ立体アイソフォーム中に存在してもよいと理解されたい。
【0071】
本発明のＬＮＡヌクレオシドの特定の例は、スキーム１（ここで、Ｂは上記で定義された通りである）に表される。
スキーム１
スキーム１
【0072】
特定のＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ、（Ｓ）－６’－メチル－ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ（（Ｓ）－ｃＥＴ）などの６’ーメチル－ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡおよびＥＮＡである。
【0073】
ＲＮａｓｅ Ｈ活性および動員
アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅ Ｈ活性は、相補的ＲＮＡ分子を有する二重鎖における場合のＲＮａｓｅ Ｈを動員するその能力を指す。ＷＯ０１／２３６１３は、ＲＮａｓｅＨ活性を決定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法を提供し、これはＲＮａｓｅＨを動員する能力を決定するために使用することができる。典型的には、オリゴヌクレオチドは、相補的標的核酸配列が提供された場合、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定して、試験されている修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、オリゴヌクレオチドにおけるすべてのモノマー間にホスホロチオエート連結を有するＤＮＡモノマーのみを含有するオリゴヌクレオチドを使用し、ＷＯ０１／２３６１３の実施例９１～９５（参照により本明細書に組み込まれる）により提供される方法を使用する場合に決定される初期速度の少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％または２０％より高い割合の初期速度を有する場合、ＲＮａｓｅ Ｈを動員することが可能であると考えられる。ＲＨａｓｅ Ｈ活性を決定する際の使用については、組み換えヒトＲＮａｓｅ Ｈ１は、Ｌｕｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ、Ｌｕｃｅｒｎｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能である。
アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅ Ｈ活性は、相補的ＲＮＡ分子を有する二重鎖における場合のＲＮａｓｅ Ｈを動員するその能力を指す。ＷＯ０１／２３６１３は、ＲＮａｓｅＨ活性を決定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法を提供し、これはＲＮａｓｅＨを動員する能力を決定するために使用することができる。典型的には、オリゴヌクレオチドは、相補的標的核酸配列が提供された場合、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定して、試験されている修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、オリゴヌクレオチドにおけるすべてのモノマー間にホスホロチオエート連結を有するＤＮＡモノマーのみを含有するオリゴヌクレオチドを使用し、ＷＯ０１／２３６１３の実施例９１～９５（参照により本明細書に組み込まれる）により提供される方法を使用する場合に決定される初期速度の少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％または２０％より高い割合の初期速度を有する場合、ＲＮａｓｅ Ｈを動員することが可能であると考えられる。ＲＨａｓｅ Ｈ活性を決定する際の使用については、組み換えヒトＲＮａｓｅ Ｈ１は、Ｌｕｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ、Ｌｕｃｅｒｎｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能である。
【0074】
発明の詳細な説明
一態様では、本発明は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）のＰ（Ｖ）モノマーを調製するための方法であって、式（Ｉ）の修飾ヌクレオシド：
[式中、ＰＧは、ヒドロキシル保護基であり、
Ｒ１はＨであり、Ｒ２は－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３であるか、または
Ｒ１およびＲ２は一緒に、－ＣＨ２－Ｏ－または－ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ２を介して結合している]を、
式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）の化合物：
[式中、Ｒ３は、ハロによって置換されたＣ６～Ｃ１０アリールであり、ハロは、Ｆ、ＣｌおよびＢｒから選択され、Ｒ４は、直鎖状または分枝状のＣ１～Ｃ６－アルキルである）と、
塩基として１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（ＤＢＵは、式（Ｉ）のヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される]を用いて反応させて、
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）のモノマー：
を生成する工程を含む、方法に関する。
一態様では、本発明は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）のＰ（Ｖ）モノマーを調製するための方法であって、式（Ｉ）の修飾ヌクレオシド：
Ｒ１はＨであり、Ｒ２は－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３であるか、または
Ｒ１およびＲ２は一緒に、－ＣＨ２－Ｏ－または－ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ２を介して結合している]を、
式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）の化合物：
塩基として１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（ＤＢＵは、式（Ｉ）のヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される]を用いて反応させて、
式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）のモノマー：
【0075】
本発明の１つのまたはすべての実施形態では、式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）の化合物は：
である。
【0076】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、式Ｉのヌクレオシドは、以下の式（Ｉａ）：
を有する。
【0077】
本発明の１つのまたはすべての実施形態では、式Ｉのヌクレオシドは、以下の式（Ｉｂ）：
を有する。
【0078】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、式Ｉのヌクレオシドは、以下の式（Ｉｃ）：
を有する。
【0079】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、核酸塩基は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、および５－メチルシトシンからなる群から選択される。
【0080】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、核酸塩基は、Ａ、ＴおよびＧからなる群から選択される。
【0081】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、核酸塩基は、Ａ、Ｇ、Ｃまたは５－メチルシトシンであり、環外のアミノ部位はアミノ保護基によって保護される。アミノ保護基は、ＤＭＦおよびｉＢｕからなる群から選択され得る。
【0082】
１つまたはすべての実施形態では、本発明の方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを調製するためのＰ（Ｖ）モノマーとして、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物をカップリングさせる工程をさらに含む。これは、当技術分野で公知の方法によってなされ得る。
【0083】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、Ｒ１はＨであり、Ｒ２は－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３である。
【0084】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、Ｒ１およびＲ２は一緒に、－ＣＨ２－Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ２を介して結合している。
【0085】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、Ｒ１およびＲ２は一緒に、－ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ－から選択される２’－４’架橋を形成し、酸素は位置Ｒ２を介して結合している。
【0086】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、Ｒ３は１～５個のＦによって置換されたフェニル、例えば、１、２、３、４または５個のＦによって置換された、例えば、４または５個のＦによって置換された、例えば、５個のＦによって置換されたフェニルである。
【0087】
本発明の１つまたはすべての実施形態では、Ｒ４は、メチルまたはエチル、例えば、メチルである。
【0088】
本発明の一実施形態では、本発明の方法は、式（ＩＩＩａ１）または（ＩＩＩｂ１）の化合物を調製するための方法であって、式（Ｉ）の修飾ヌクレオシド：
［式中、ＰＧは、ヒドロキシル保護基である］を、
式（ＩＩａ１）または（ＩＩｂ１）の化合物：
と、
ＭｅＣＮ中の塩基として１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（ＤＢＵは、式（Ｉａ）のヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される）を用いて反応させて、
式（ＩＩＩａ１）または（ＩＩＩｂ１）のモノマー：
を生成する工程を含む、方法である。
式（ＩＩａ１）または（ＩＩｂ１）の化合物：
ＭｅＣＮ中の塩基として１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（ＤＢＵは、式（Ｉａ）のヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される）を用いて反応させて、
式（ＩＩＩａ１）または（ＩＩＩｂ１）のモノマー：
【0089】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載される式（Ｉ）のヌクレオシドから出発する式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物の生成における、塩基としての１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）の使用であって、ＤＢＵが、ヌクレオシドに対して約０．８当量の量で使用される、使用に関する。
【0090】
別の態様では、本発明は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物：
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、本明細書において定義される通りである］
に関する。
に関する。
【0091】
実施形態では、本発明による式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物は、式（ＩＩＩａ１）または（ＩＩＩｂ１）：
のものである。
【0092】
実施形態では、本発明による式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物は、以下の化合物：
からなる群から選択される。
【0093】
実施形態では、本発明による式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物は、以下の化合物：
である。
【0094】
実施形態では、本発明による式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物は、以下の化合物：
である。
【0095】
実施形態では、本発明による式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物は、以下の化合物：
である。
【0096】
実施形態では、本発明による式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物は、以下の化合物：
である。
【0097】
本発明の他の態様は、本発明の方法によって調製された式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物である。一実施形態では、これは、本発明の方法によって直接得られた式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩｂ）の化合物である。
【0098】
別の態様では、本発明は、本発明の方法によって製造されたオリゴヌクレオチドに関する。
【0099】
本発明の１つまたはすべての態様または実施形態では、ＤＢＵは、ＭｅＣＮの溶液中で反応させることができる。他の好適な溶媒が当業者によって企図されてもよい。
【0100】
本発明の１つまたはすべての態様または実施形態では、反応は、ＭｅＣＮの溶液中で行われてもよい。他の好適な溶媒が当業者によって企図されてもよい。
【0101】
実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
からなる群から選択される。
【0102】
本明細書の以下の表６から証明することができるように、本発明者らは、驚くほど最適化された条件を有するＰ（Ｖ）試薬に基づく系によって、ＬＮＡモノマーを調製するための新たな方法を見出し、最も安価であり、当技術分野で説明されたよりも高い収率の方法をもたらした。例えば、ＬＮＡ－Ｔ、ＬＮＡ－ＡおよびＬＮＡ－Ｇの調製において、０．８当量のＤＢＵが使用すると、単離された化合物ＩＩＩの収率は、先行技術において推奨されるように１．３当量のＤＢＵを使用する場合よりも、大幅に高い。ＬＮＡ－Ｃの調製では、０．８当量のＤＢＵを使用すると、１．３当量のＤＢＵを使用する場合と比較して、同じかまたはより良好な収率が得られる。このことは、必要とされるＤＢＵの当量が少ないため、本方法が大幅に安価であり得ることを意味する。
【実施例】
【0103】
（Ｓｐ－ＬＮＡ－Ａ）の一般的合成
（Ｒｐ－ＬＮＡ）の一般的合成
【0104】
０．８ｅｑのＤＢＵまたは１．３ｅｑのＤＢＵのいずれかを使用するＰ（Ｖ）ＬＮＡ Ａモノマーに関する一般的合成
ＭｅＣＮ（９ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－Ａ（５００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）および（＋）－１（４２３ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＭｅＣＮ（２ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（８７μＬ、０．５８ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）を室温で添加し、次いで、室温で４０分間撹拌した（ＴＬＣ－フル ｃｏｎｖ．）。反応混合物をシリカゲルプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）で濯いだ。濾液を水（１５ｍＬ）１０％のＮａ２ＨＰＯ４（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（５０％～７０％のヘキサン中ＥｔＯＡｃで溶出させる）によって精製した。
ＭｅＣＮ（９ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－Ａ（５００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）および（＋）－１（４２３ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＭｅＣＮ（２ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（８７μＬ、０．５８ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）を室温で添加し、次いで、室温で４０分間撹拌した（ＴＬＣ－フル ｃｏｎｖ．）。反応混合物をシリカゲルプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）で濯いだ。濾液を水（１５ｍＬ）１０％のＮａ２ＨＰＯ４（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（５０％～７０％のヘキサン中ＥｔＯＡｃで溶出させる）によって精製した。
【0105】
（表１）
【0106】
０．８ｅｑのＤＢＵまたは１．３ｅｑのＤＢＵのいずれかを使用するＰ（Ｖ）ＬＮＡ Ｔモノマーに関する一般的合成
ＭｅＣＮ（９ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－Ｔ（５００ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）および（－）－１（５０７ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＭｅＣＮ（２ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（１０４μＬ、０．５８ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）を室温で添加し、次いで、室温で４０分間撹拌した（ＴＬＣ－フル ｃｏｎｖ．）。反応混合物をシリカゲルプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）で濯いだ。濾液を１０％のＮａ２ＨＰＯ４（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＋１／１で溶出させる）によって精製した。
ＭｅＣＮ（９ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－Ｔ（５００ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）および（－）－１（５０７ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＭｅＣＮ（２ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（１０４μＬ、０．５８ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）を室温で添加し、次いで、室温で４０分間撹拌した（ＴＬＣ－フル ｃｏｎｖ．）。反応混合物をシリカゲルプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）で濯いだ。濾液を１０％のＮａ２ＨＰＯ４（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＋１／１で溶出させる）によって精製した。
【0107】
（表２）
【0108】
０．８ｅｑのＤＢＵまたは１．３ｅｑのＤＢＵのいずれかを使用するＰ（Ｖ）ＬＮＡ Ｃモノマーに関する一般的合成
ＭｅＣＮ（１１ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－Ｃ（５８８ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）および（＋）－１（５０５ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＭｅＣＮ（２ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（ＤＢＵ １０６μＬ、０．５８ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）を室温で添加し、次いで、室温で４０分間撹拌した（ＴＬＣ－フル ｃｏｎｖ．）。反応混合物をシリカゲルプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）で濯いだ。濾液を１０％のＮａ２ＨＰＯ４（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＋１／２、次いで１／１で溶出させる）によって精製した。
ＭｅＣＮ（１１ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－Ｃ（５８８ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）および（＋）－１（５０５ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＭｅＣＮ（２ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（ＤＢＵ １０６μＬ、０．５８ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）を室温で添加し、次いで、室温で４０分間撹拌した（ＴＬＣ－フル ｃｏｎｖ．）。反応混合物をシリカゲルプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）で濯いだ。濾液を１０％のＮａ２ＨＰＯ４（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＋１／２、次いで１／１で溶出させる）によって精製した。
【0109】
（表３）
【0110】
０．８ｅｑのＤＢＵまたは１．３ｅｑのＤＢＵのいずれかを使用するＰ（Ｖ）ＬＮＡ Ｇ－ｉＢｕモノマーに関する一般的合成
ＭｅＣＮ（１１ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－ＧｉＢｕ（５００ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）および（＋）－１（４３４ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＭｅＣＮ（１ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（９１．２μＬ、０．６０ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）を室温で添加し、次いで、室温で４０分間撹拌した（ＴＬＣ－フル ｃｏｎｖ．）。反応混合物をシリカゲルプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）で濯いだ。濾液を１０％のＮａ２ＨＰＯ４（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（５０％～７５％のヘキサン中ＥｔＯＡｃで溶出させる）によって精製した。
ＭｅＣＮ（１１ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－ＧｉＢｕ（５００ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）および（＋）－１（４３４ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＭｅＣＮ（１ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（９１．２μＬ、０．６０ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）を室温で添加し、次いで、室温で４０分間撹拌した（ＴＬＣ－フル ｃｏｎｖ．）。反応混合物をシリカゲルプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）で濯いだ。濾液を１０％のＮａ２ＨＰＯ４（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（５０％～７５％のヘキサン中ＥｔＯＡｃで溶出させる）によって精製した。
【0111】
（表４）
【0112】
０．８ｅｑのＤＢＵまたは１．３ｅｑのＤＢＵのいずれかを使用するＰ（Ｖ）ＬＮＡ Ｇ－ＤＭＦモノマーに関する一般的合成
ＭｅＣＮ（６ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－ＧＤＭＦ（５００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１３ｍＬ）の懸濁液に、ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中（＋）－１（４４４ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の溶液、続いて、ＭｅＣＮ（１ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（ＤＢＵ９１．５μＬ、０．６１ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）の溶液を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した（徐々にＬＮＡ－ＧＤＭＦを溶解させる）。反応混合物をシリカゲルプラグに通して濾過し、生成物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦ（１／２ ８０ｍＬ）、ＴＨＦ（５０ｍＬ）でプラグから洗い流した。濾液を１０％のＮａ２ＨＰＯ４（１００ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（１０％～３０％のＥｔＯＡｃ中ＴＨＦで溶出させる）によって精製した。
ＭｅＣＮ（６ｍＬ）中５’－ＯＤＭＴｒ－ＬＮＡ－ＧＤＭＦ（５００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１３ｍＬ）の懸濁液に、ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中（＋）－１（４４４ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の溶液、続いて、ＭｅＣＮ（１ｍｌ）中ＤＢＵの溶液（ＤＢＵ９１．５μＬ、０．６１ｍｍｏｌ、０．８ｅｑ）の溶液を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した（徐々にＬＮＡ－ＧＤＭＦを溶解させる）。反応混合物をシリカゲルプラグに通して濾過し、生成物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦ（１／２ ８０ｍＬ）、ＴＨＦ（５０ｍＬ）でプラグから洗い流した。濾液を１０％のＮａ２ＨＰＯ４（１００ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水してエバポレートした。残留物をカラムクロマトグラフィー（１０％～３０％のＥｔＯＡｃ中ＴＨＦで溶出させる）によって精製した。
【0113】
（表５）
【0114】
（表６）収率の概要
【0115】
１．１ 分析データ
1H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm): 8.71 (1H, s), 7.64 (1H, d, J= 1.2 Hz), 7.46-7.41 (2H, m), 7.36-7.26 (6H, m), 7.25-7.20 (1H, m) 6.87-7.60 (4H, m), 5.70 (1H, s), 5.16 (1H, d, J= 7.3 Hz), 4.95 (1H, s), 4.85 (1H, s), 4.66 (1H, s), 4.39 (1H, dt, J= 12.8 3.5 Hz), 3.81 (2H, s), 3.78 (6H, s), 3.47 (1H, d, J= 11.1 Hz), 3.42 (1H, d, J= 11.1 Hz), 2.60-2.52 (1H, m), 2.35-2.25 (1H, m), 2.09-1.62 (5H, m), 1.76 (3H, s), 1.67-1.64 (6H, m)
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm) 163.7, 158.8, 149.9, 145.0, 144.2, 135.3, 135.2, 134.2, 130.3, 128.3, 128.2, 127.2, 113.5, 111.8, 111.0, 87.7, 87.6, 87.2, 86.9, 85.6, 78.4, 74.3, 74.2, 72.4, 66.6, 57.7, 55.4, 39.0, 33.8, 27.7, 27.6, 23.6, 22.6, 22.0, 12.7.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm) 101.4.
[α]D 20 = -37.0 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 817.3 [M-H]-
1H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm): 8.8-8.6 (1H, br. s), 7.64 (1H, d, J= 1.0 Hz), 7.52-7.46 (2H, m), 7.40-7.33 (4H, m), 7.33-7.26 (2H. m), 7.26-7.19 (1H, m) 6.87-7.79 (4H, m), 5.69 (1H, s), 5.25 (1H, d, J= 11.0 Hz), 4.90-4.88 (1H, m), 4.57 (1H, s), 4.60 (1H, s), 4.29 (1H, dt, J= 12.6 3.1 Hz), 3.87 (1H, d, J= 8.3 Hz), 3.79-3.76 (1H, m), 3.78 (3H, s), 3.78 (3H, s), 3.59 (1H, d, J= 11.0 Hz), 3.42 (1H, d, J= 11.0 Hz), 2.57-2.48 (1H, m), 2.08-1.65 (6H, m), 1.65 (6H, s), 1.58 (3H, d, J= 1.0 Hz)
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm):163.7, 158.8, 149.9, 144.9, 144.2, 135.3, 135.2, 134.2, 130.5, 130.4, 128.5, 128.1, 127.2, 113.4, 113.4, 111.9, 111.1, 87.4, 87.1, 86.1, 78.3, 78.3, 74.6, 74.6, 72.2, 65.9, 57.9, 55.3, 39.0, 33.8, 33.7, 27.8, 27.6, 23.5, 22.7, 21.8, 12.6.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 100.9.
[α]D 20 = +94.9 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 817.25 [M-H]-
1H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm): 13.5-13.2 (1H, br. s), 8.35-8.28 (2H, m), 7.82 (1H, J= 1.0 Hz), 7.55-7.40 (5H, m), 7.39-7.28 (6H, m), 7.27-7.22 (1H, m), 6.86-6.83 (4H, m), 5.75 (1H, s), 5.19 (1H, d, J= 7.5 Hz), 4.95 (1H, s), 4.86 (1H, s), 4.71 (1H, s), 4.40 (1H, dt, J= 12.7, 3.5 Hz), 3.84-3.79 (7H, m), 3.50 (1H, d, J= 11.1 Hz), 3.44 (1H, d, J= 11.1 Hz), 2.62-2.52 (1H, m), 2.36-2.25 (1H, m), 2.09-1.66 (6H, m), 1.85 (3H, d, J= 1.0 Hz), 1.76 (3H, s), 1.65 (3H, s).
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 159.8, 158.8, 147.7, 145.0, 144.2, 137.3, 135.4, 135.3, 135.2, 132.6, 130.3, 130.3, 130.1, 128.3, 128.4, 127.2, 113.5, 112.2, 111.8, 87.9, 87.8, 87.5, 87.6, 85.6, 78.3, 74.1, 74.0, 72.4, 66.7, 57.7, 55.4, 39.0, 33.8, 33.7, 27.7, 27.6, 23.6, 22.7, 22.0, 13.8.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm) 101.4
[α]D 20 = +15.9 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): ): 922.81 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm): 13.5-13.3 (1H, br. s), 8.33-8.28 (2H, m), 7.82 (1H, d, J= 1.0 Hz), 7.55-7.48 (3H, m), 7.46-7.37 (6H, m), 7.35-7.29 (2H, m), 7.27-7.22 (1H, m), 6.89-6.81 (4H, m), 5.74 (1H, s), 5.28 (1H, d, J= 11.2 Hz), 4.92-4.88 (1H, m), 4.86 (1H, s), 4.65 (1H, s), 4.30 (1H, dt, J= 12.7, 3.2 Hz), 3.89 (1H, d, J= 8.2 Hz), 3.81-3.77 (1H, m), 3.79 (3H, s), 3.79 (3H, s), 3.62 (1H,. d, J= 11.0 Hz), 3.44 (1H, d, J= 11.0 Hz), 2.57-2.48 (1H, m), 2.08-1.62 (6H, m), 1.78 (3H, d, J= 1.0 Hz), 1.66 (3H, s), 1.65 (3H, s)
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm):159.8, 158.9, 158.8, 147.7, 144.9, 144.2, 137.2, 135.4, 135.3, 135.2, 132.6, 130.5, 130.1, 128.5, 128.3, 128.2, 127.2, 113.4, 113.4, 112.2, 111.9, 87.6, 87.5, 87.4, 87.1, 86.1, 78.2, 78.1, 74.5, 74.4, 72.3, 65.9, 57.9, 55.4, 38.9, 33.8, 33.7, 27.8, 27.6, 23.5, 22.7, 21.8, 13.7.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 100.9.
[α]D 20 = +152.3 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 922.79 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm): 9.04 (1H, s), 8.82 (1H, s), 8.38 (1H, s), 8.06-7.97 (2H, m), 7.63-7.55 (1H, m), 7.55-7.47 (2H, m), 7.46-7.39 (2H, m), 7.36-7.25 (1H, m), 7.24-7.17 (1H, m) 6.88-6.78 (4H, m), 6.22 (1H, s), 5.32 (1H, d, J= 6.75 Hz), 4.98 (1H, s,), 4.96 (1H, s), 4.88 (1H, s), 4.42 (1H, dt, J= 12.7 3.5 Hz), 4.05 (1H, d, J= 8.4 Hz), 3.96 (1H, d, J= 8.4 Hz), 3.78 (6H, s), 3.49 (2H, s), 2.62-2.53 (1H, m), 2.35-1.2.25 (1H, m), 2.11-1.64 (5H, m), 1.78 (3H, s), 1.63 (3H, s)
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 164.6, 158.7, 153.2, 151.2, 149.7, 145.0, 144.3, 140.2, 135.4, 135.3, 133.7, 132.9, 130.2, 129.0, 128.2, 128.1, 128.0, 127.1, 123.4, 113.4, 111.8, 87.5, 87.4, 86.7, 85.9, 85.6, 78.7, 75.7, 75.6, 73.0, 66.6, 58.5, 55.4, 39.0, 33.8, 33.7, 27.7, 27.6, 23.5, 22.6, 22.0.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm) 101.6.
[α]D 20 = -71.7 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 932.7 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm): 9.1-9.0 (1H, br, s), 8.80 (1H, s), 8.33 (1H, s), 8.04-7.98 (2H, m), 7.62-7.56 (1H, m) 7.54-7.43 (4H, m), 7.37-7.26 (6H, m), 7.24-7.18 (1H, m) 6.85-6.80 (4H, m), 6.20 (1H, s), 5.42 (1H, d, J= 10.4 Hz), 4.95 (1H, s,), 4.84 (1H, s), 4.66 (1H, s), 4.31 (1H, dt, J= 12.6 3.3 Hz), 4.14 (1H, d, J= 8.4 Hz), 3.95 (1H, d, J= 8.4 Hz), 3.77 (6H, s), 3.59 (1H, d, J= 11.0 Hz), 3.53 (1H, d, J= 11.0 Hz), 2.56-2.47 (1H, m), 2.10-1.60 (6H, m), 1.64-1.60 (6H, m).
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 164.6, 158.7, 153.0, 151.0, 149.6, 144.8, 144.2, 140.3, 135.4, 135.3, 133.6, 132.9, 130.2, 129.9, 128.2, 128.0, 127.9, 127.0, 123.4, 113.3, 111.8, 87.2, 87.1, 86.7, 86.1, 85.9, 78.6, 78.5, 76.0, 75.9, 72.8, 65.8, 58.9, 55.2, 38.0, 33.6, 33.6, 27.6, 27.5, 23.3, 22.5, 21.6.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 101.1.
[α]D 20 = +48.5 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 932.7 [M+H]+
1H NMR (400 MHz, CDCl3, ppm): 12.02 (1H, s), 8.97 (1H, s), 7.79 (1H, s), 7.44-7.38 (2H, m), 7.34-7.23 (6H, m), 7.22-7.17 (1H, m), 6.84-6.77 (4H, m), 5.99 (1H, d, J= 10.3 Hz), 5.83 (1H, s), 4.97 (1H, s), 4.91-4.88 (1H, m), 4.73 (1H, s), 4.40 (1H, dt, J= 12.6, 3.2 Hz), 4.15 (1H, d, J= 8.7 Hz), 3.95 (1H, d, J= 8.7 Hz), 3.78 (3H, s), 3.78 (3H, s), 3.55-3.49 (2H, m), 2.64 (1H, 七重線, J= 6.8 Hz), 2.60-2.53 (1H, m), 2.20-2.11 (1H, m), 2.10-1.65 (5H, m), 1.70 (3H, s), 1.69 (3H, s), 1.27 (3H, d, J= 6.8 Hz), 1.25 (3H, d, J= 6.8 Hz).
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 178.7, 158.7, 155.5, 147.5, 147.2, 144.8, 144.4, 138.6, 135.4, 130.3, 128.3, 128.0, 127.0, 122.3, 113.30, 111.9, 87.1, 87.0, 86.6, 86.5, 78.4, 73.0, 66.5, 59.3, 55.3, 38.9, 36.7, 33.9, 33.8, 27.8, 27.7, 23.5, 22.7, 21.8, 19.2, 19.0.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm):100.3.
[α]D 20 = +85.3 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 914.73 [M+H]+
1H NMR (400 MHz, CDCl3, ppm): 11.99 (1H, s), 8.89 (1H, s), 7.81 (1H, s) , 7.43-7.37 (2H, m), 7.33-7.23 (6H, m), 7.22-7.17 (1H, m), 6.84-6.78 (4H, m), 5.97 (1H, J= 7.7 Hz), 5.84 (1H, s),
5.01-4.87 (1H, m), 4.93-4.87 (2H, m), 4.51 (1H, dt, J= 12.7 3.5 Hz), 4.07 (1H, J= 8.5 Hz), 4.00 (1H, J= 68.5 Hz), 3.78 (6H, s), 3.48-3.41 (2H, m), 2.63-2.56 (1H, m), 2.57 (1H, 七重線, J= 6.9 Hz), 2.36-2.25 (1H, m), 2.14-1.64 (5H, m), 1.78 (3H, s), 1.68 (3H, s), 1.24 (3H, d, J= 6.9 Hz), 1.22 (3H, d, J= 6.9 Hz).
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 178.5, 158.7, 155.5, 147.5, 147.3, 144.8, 144.4, 138.5, 135.4, 130.2, 128.2, 128.0, 127.0, 122.2, 113.3, 111.9, 87.2, 87.1, 86.6, 86.5, 86.1, 79.2, 73.0, 66.6, 58.9, 55.3, 39.0, 36.6, 33.7, 33.6, 27.9, 27.8, 23.5, 22.7, 22.0, 19.1, 18.9.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 103.3.
[α]D 20 = -14.6 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 914.77 [M+H]+
1H NMR (400 MHz, CDCl3, ppm): 9.2-9.0 (1H, br. s), 8.59 (1H, s), 8.0-7.8 (1H, br. s), 7.44-7.39 (2H, m), 7.34-7.23 (6H, m), 7.22-7.16 (1H, m), 6.75-6.77 (4H, m), 5.97 (1H, s), 5.39 (1H, d, J= 6.5 Hz), 4.98-4.92 (2H, m), 4.88-4.85 (1H, m), 4.41 (1H, dt, J= 12.5 3.5 Hz), 4.03 (1H, d, J= 8.2 Hz), 3.93 (1H, d, J= 8.2 Hz), 3.77 (6H, s), 3.51 (1H, d, J= 10.9 Hz), 3.43 (1H, d, J= 10.9 Hz), 3.10 (3H, s), 3.05 (3H, s), 2.59-2.52 (1H, m), 2.32-2.22 (1H, m), 2.07-1.65 (5H, m), 1.76 (3H, s), 1.62 (3H, s).
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 158.7, 158.5, 157.1, 149.6, 145.1, 144.3, 135.5, 135.4, 130.2, 128.3, 128.1, 127.0, 113.4, 111.8, 87.1, 87.1, 86.6, 86.1, 85.7, 79.1, 75.9, 75.8, 73.0, 66.3, 58.8, 55.4, 41.4, 39.0, 35.3, 33.8, 33.7, 27.8, 27.6, 23.5, 22.7, 21.9, 21.3.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 100.6.
[α]D 20 = -37.4 (c .1, THF).
LCMS ESI (m/z): 899.71 [M+H]+
1H NMR (400 MHz, CDCl3, ppm): 9.2-9.0 (1H, br. s), 8.55 (1H, s), 8.0-7.8 (1H, br. s), 7.48-7.41 (2H, m), 7.37-7.34 (6H, m), 7.22-7.16 (1H, m), 6.84-6.74 (4H, m), 5.96 (1H, s), 5.39 (1H, d, J= 9.5 Hz), 4.96-4.75 (2H, m), 4.85-4.81 (1H, m), 4.27 (1H, dt, J= 12.7 3.1 Hz), 4.14 (1H, d, J= 8.3 Hz), 3.92 (1H, d, J= 8.3 Hz), 3.76 (6H, s), 3.64-3.50 (2H, m), 3.12 (3H, s), 3.06 (3H, s), 2.55-2.46 (1H, m), 2.09-1.58 (6H, m), 1.53 (3H, s), 1.61 (3H, s).
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm):158.7, 158.3, 157.0, 144.9, 144.4, 135.5, 135.4, 130.3, 130.2, 128.3, 128.1, 127.5, 127.1, 113.4, 113.4, 111.8, 87.0, 86.7, 86.2, 79.0, 76.3, 76.2, 73.0, 65.8, 59.4, 55.3, 41.5, 38.9, 35.3, 33.7, 33.7, 27.7, 27.5, 23.4, 22.6, 21.7.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm) :100.0.
[α]D 20 = +70.8 (c .1, THF).
LCMS ESI (m/z): 899.74 [M+H]+
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm) 163.7, 158.8, 149.9, 145.0, 144.2, 135.3, 135.2, 134.2, 130.3, 128.3, 128.2, 127.2, 113.5, 111.8, 111.0, 87.7, 87.6, 87.2, 86.9, 85.6, 78.4, 74.3, 74.2, 72.4, 66.6, 57.7, 55.4, 39.0, 33.8, 27.7, 27.6, 23.6, 22.6, 22.0, 12.7.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm) 101.4.
[α]D 20 = -37.0 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 817.3 [M-H]-
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm):163.7, 158.8, 149.9, 144.9, 144.2, 135.3, 135.2, 134.2, 130.5, 130.4, 128.5, 128.1, 127.2, 113.4, 113.4, 111.9, 111.1, 87.4, 87.1, 86.1, 78.3, 78.3, 74.6, 74.6, 72.2, 65.9, 57.9, 55.3, 39.0, 33.8, 33.7, 27.8, 27.6, 23.5, 22.7, 21.8, 12.6.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 100.9.
[α]D 20 = +94.9 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 817.25 [M-H]-
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 159.8, 158.8, 147.7, 145.0, 144.2, 137.3, 135.4, 135.3, 135.2, 132.6, 130.3, 130.3, 130.1, 128.3, 128.4, 127.2, 113.5, 112.2, 111.8, 87.9, 87.8, 87.5, 87.6, 85.6, 78.3, 74.1, 74.0, 72.4, 66.7, 57.7, 55.4, 39.0, 33.8, 33.7, 27.7, 27.6, 23.6, 22.7, 22.0, 13.8.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm) 101.4
[α]D 20 = +15.9 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): ): 922.81 [M+H]+
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm):159.8, 158.9, 158.8, 147.7, 144.9, 144.2, 137.2, 135.4, 135.3, 135.2, 132.6, 130.5, 130.1, 128.5, 128.3, 128.2, 127.2, 113.4, 113.4, 112.2, 111.9, 87.6, 87.5, 87.4, 87.1, 86.1, 78.2, 78.1, 74.5, 74.4, 72.3, 65.9, 57.9, 55.4, 38.9, 33.8, 33.7, 27.8, 27.6, 23.5, 22.7, 21.8, 13.7.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 100.9.
[α]D 20 = +152.3 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 922.79 [M+H]+
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 164.6, 158.7, 153.2, 151.2, 149.7, 145.0, 144.3, 140.2, 135.4, 135.3, 133.7, 132.9, 130.2, 129.0, 128.2, 128.1, 128.0, 127.1, 123.4, 113.4, 111.8, 87.5, 87.4, 86.7, 85.9, 85.6, 78.7, 75.7, 75.6, 73.0, 66.6, 58.5, 55.4, 39.0, 33.8, 33.7, 27.7, 27.6, 23.5, 22.6, 22.0.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm) 101.6.
[α]D 20 = -71.7 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 932.7 [M+H]+
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 164.6, 158.7, 153.0, 151.0, 149.6, 144.8, 144.2, 140.3, 135.4, 135.3, 133.6, 132.9, 130.2, 129.9, 128.2, 128.0, 127.9, 127.0, 123.4, 113.3, 111.8, 87.2, 87.1, 86.7, 86.1, 85.9, 78.6, 78.5, 76.0, 75.9, 72.8, 65.8, 58.9, 55.2, 38.0, 33.6, 33.6, 27.6, 27.5, 23.3, 22.5, 21.6.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 101.1.
[α]D 20 = +48.5 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 932.7 [M+H]+
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 178.7, 158.7, 155.5, 147.5, 147.2, 144.8, 144.4, 138.6, 135.4, 130.3, 128.3, 128.0, 127.0, 122.3, 113.30, 111.9, 87.1, 87.0, 86.6, 86.5, 78.4, 73.0, 66.5, 59.3, 55.3, 38.9, 36.7, 33.9, 33.8, 27.8, 27.7, 23.5, 22.7, 21.8, 19.2, 19.0.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm):100.3.
[α]D 20 = +85.3 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 914.73 [M+H]+
5.01-4.87 (1H, m), 4.93-4.87 (2H, m), 4.51 (1H, dt, J= 12.7 3.5 Hz), 4.07 (1H, J= 8.5 Hz), 4.00 (1H, J= 68.5 Hz), 3.78 (6H, s), 3.48-3.41 (2H, m), 2.63-2.56 (1H, m), 2.57 (1H, 七重線, J= 6.9 Hz), 2.36-2.25 (1H, m), 2.14-1.64 (5H, m), 1.78 (3H, s), 1.68 (3H, s), 1.24 (3H, d, J= 6.9 Hz), 1.22 (3H, d, J= 6.9 Hz).
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 178.5, 158.7, 155.5, 147.5, 147.3, 144.8, 144.4, 138.5, 135.4, 130.2, 128.2, 128.0, 127.0, 122.2, 113.3, 111.9, 87.2, 87.1, 86.6, 86.5, 86.1, 79.2, 73.0, 66.6, 58.9, 55.3, 39.0, 36.6, 33.7, 33.6, 27.9, 27.8, 23.5, 22.7, 22.0, 19.1, 18.9.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 103.3.
[α]D 20 = -14.6 (c .1, DCM).
LCMS ESI (m/z): 914.77 [M+H]+
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm): 158.7, 158.5, 157.1, 149.6, 145.1, 144.3, 135.5, 135.4, 130.2, 128.3, 128.1, 127.0, 113.4, 111.8, 87.1, 87.1, 86.6, 86.1, 85.7, 79.1, 75.9, 75.8, 73.0, 66.3, 58.8, 55.4, 41.4, 39.0, 35.3, 33.8, 33.7, 27.8, 27.6, 23.5, 22.7, 21.9, 21.3.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm): 100.6.
[α]D 20 = -37.4 (c .1, THF).
LCMS ESI (m/z): 899.71 [M+H]+
13C NMR (100 MHz, CDCl3, ppm):158.7, 158.3, 157.0, 144.9, 144.4, 135.5, 135.4, 130.3, 130.2, 128.3, 128.1, 127.5, 127.1, 113.4, 113.4, 111.8, 87.0, 86.7, 86.2, 79.0, 76.3, 76.2, 73.0, 65.8, 59.4, 55.3, 41.5, 38.9, 35.3, 33.7, 33.7, 27.7, 27.5, 23.4, 22.6, 21.7.
31P NMR (160 MHz, CDCl3, ppm) :100.0.
[α]D 20 = +70.8 (c .1, THF).
LCMS ESI (m/z): 899.74 [M+H]+