特許 7627216 ムチン－１６に対する抗体およびそれを使用する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-01-28

(45)【発行日】2025-02-05

(54)【発明の名称】ムチン－１６に対する抗体およびそれを使用する方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/46 20060101AFI20250129BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20250129BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20250129BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20250129BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20250129BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20250129BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20250129BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20250129BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250129BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250129BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250129BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20250129BHJP

【ＦＩ】

C07K16/46

C07K16/28 ZNA

C07K16/30

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61P35/00

G01N33/53 V

【請求項の数】 24

(21)【出願番号】P 2021526571

(86)(22)【出願日】2019-11-14

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-07

(86)【国際出願番号】 US2019061503

(87)【国際公開番号】W WO2020102555

(87)【国際公開日】2020-05-22

【審査請求日】2022-11-09

(31)【優先権主張番号】62/768,730

(32)【優先日】2018-11-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】500213834

【氏名又は名称】メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター

(73)【特許権者】

【識別番号】511071522

【氏名又は名称】エウレカ セラピューティクス，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100123766

【弁理士】

【氏名又は名称】松田 七重

(74)【代理人】

【識別番号】100137626

【弁理士】

【氏名又は名称】田代 玄

(72)【発明者】

【氏名】スプリッグス デイヴィッド

(72)【発明者】

【氏名】モラレス ハビエル

(72)【発明者】

【氏名】ナカノ ヨウコ

(72)【発明者】

【氏名】リュ ホン

【審査官】田ノ上 拓自

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１８－５０９９０７（ＪＰ，Ａ）

【文献】ACS Chem. Biol.，2017年06月15日，Vol.12，pp.2085-2096，DOI: 10.1021/acschembio.7b00305

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ１２Ｎ １／１５

Ｃ１２Ｎ １／１９

Ｃ１２Ｎ １／２１

Ｃ１２Ｎ ５／１０

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

Ａ６１Ｐ ３５／００

Ｇ０１Ｎ ３３／５３

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ムチン１６（ＭＵＣ１６）ポリペプチドを免疫特異的に認識する第１の抗体部分およびＣＤ３抗原を免疫特異的に認識する第２の抗体部分を含む、二重特異性または多特異性抗ＭＵＣ１６構築物であって、第１の抗体部分は、
（ａ）（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖
または
（ｂ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに
（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖
を含み、ＶＨ鎖はヒトＶＨ鎖であり、ＶＬ鎖はヒトＶＬ鎖である、抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項2】

第１の抗体部分が、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項3】

第１の抗体部分が、モノクローナル抗体である、請求項１または２に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項4】

第１の抗体部分が、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび／もしくは配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項5】

第１の抗体部分が、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨおよび／もしくは配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項6】

第１の抗体部分が、ヒト由来重鎖および軽鎖定常領域を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項7】

第１の抗体部分が、２つの同一な重鎖および２つの同一な軽鎖を含む免疫グロブリンである、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項8】

免疫グロブリンがＩｇＧである、請求項７に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項9】

タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディー（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディー（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、Ｆ（ａｂ’）２、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドック・アンド・ロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロ多量体抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項10】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項11】

ペプチド剤、検出剤、イメージング剤、治療剤または細胞傷害性薬剤にさらにコンジュゲートされる、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物。

【請求項12】

請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。

【請求項13】

プロモーターに作動可能に連結した請求項１２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項14】

請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物、請求項１２に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１３に記載のベクターを含む細胞。

【請求項15】

請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物または請求項１３に記載のベクターの治療有効量および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。

【請求項16】

ＭＵＣ１６関連疾患または障害を処置するための、請求項１５に記載の医薬組成物。

【請求項17】

前記ＭＵＣ１６関連疾患または障害が、がんである、請求項１６に記載の医薬組成物。

【請求項18】

前記がんが、卵巣、肺、膵臓、乳房、子宮、卵管または一次腹膜のがんである、請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項19】

エフェクター細胞を産生する方法に用いるための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物をコードする１つまたは複数の核酸を含む組成物であって、前記方法は、前記抗ＭＵＣ１６構築物をコードする１つまたは複数の核酸を用いて細胞を遺伝子修飾することを含む、組成物。

【請求項20】

患者の処置方法に用いるための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物をコードする１つまたは複数の核酸を含む組成物であって、前記方法は、前記抗ＭＵＣ１６構築物をコードする１つまたは複数の核酸を、前記患者から単離された１つまたは複数の一次細胞中に導入すること、および前記１つまたは複数の核酸を含む細胞を前記患者に投与することを含む、組成物。

【請求項21】

一次細胞がＴ細胞である、請求項２０に記載の組成物。

【請求項22】

試料においてＭＵＣ１６を検出する方法に用いるための、請求項１～８または１１のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物を含む組成物であって、前記方法は、（ａ）試料を前記抗ＭＵＣ１６構築物と接触させること、および（ｂ）試料中の前記抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合を直接的または間接的に検出することを含む、組成物。

【請求項23】

ＭＵＣ１６関連疾患または障害を有すると疑われる個体を診断する方法に用いるための、請求項１～８または１１のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物を含む組成物であって、前記方法は、
（ａ）前記抗ＭＵＣ１６構築物の有効量を個体に投与すること、および個体において前記抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合のレベルを直接的または間接的に決定すること、ここで、閾値レベルを上回る結合のレベルが、個体がＭＵＣ１６関連疾患または障害を有することを示す、または
（ｂ）個体に由来する細胞を含む試料を、前記抗ＭＵＣ１６構築物と接触させること、および前記抗ＭＵＣ１６構築物に結合した試料中の細胞数を決定すること、ここで、閾値レベルを上回る前記抗ＭＵＣ１６構築物に結合した細胞数の値が、個体がＭＵＣ１６関連疾患または障害を有することを示す、
を含む、組成物。

【請求項24】

陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害の処置のための、陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害の処置のための医薬の製造における、または陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害の診断のための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗ＭＵＣ１６構築物、請求項１３に記載のベクターまたは請求項１４に記載の細胞を含む組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連特許出願の相互参照
本出願は、その開示内容がその全文で参照により本明細書に組み込まれる２０１８年１１月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／７６８，７３０号の利益および優先権を主張する。
政府の支援の声明
本発明は国立衛生研究所によって授与されたＣＡ１９０１７４の下で政府の支援を受けて行った。政府は、本発明において特定の権利を有する。

【背景技術】

【0002】

ムチンは、細胞ホメオスタシスおよび上皮表面の保護のための重要な生体分子である。がん、例えば、卵巣がんにおけるムチンの発現の変化は、診断、予後および処置のためのバイオマーカーとして有用である（Singh AP, et al., Lancet Oncol 2008; 9(11): 1076-85）。ＭＵＣ１６は、ほとんどの卵巣癌細胞で過剰発現されるムチンであり、卵巣がんの検出および進行の確立された代替血清マーカー（ＣＡ－１２５）である（Badgwell D, et al., Dis Markers 23(5-6):397410 (2007)、Bast RC, Jr, et al.、Int J Gynecol Cancer 15 Suppl 3:274-81 (2005)、Fritsche HA, et al., Clin Chem 44(7): 1379-80 (1998)およびKrivak TC et al., Gynecol Oncol 115(1):81-5 (2009)）。

【0003】

ＭＵＣ１６は、切断および放出される大きな細胞外ドメイン（ＣＡ－１２５）と、保持されるドメイン（ＭＵＣ－ＣＤ）（図１）から構成される高度にグリコシル化されたムチンである。ＭＵＣ－ＣＤは、切断部位の近位の非反復細胞外ドメイン（ＭＵＣ１６エクトドメイン）、膜貫通ドメインおよび潜在的リン酸化部位を有する細胞質テールを含む。切断部位の遠位の、放出される細胞外ドメイン（ＣＡ－１２５）は、１５６個のアミノ酸の１６～２０のタンデムリピートを含有し、各々、多数の潜在的グリコシル化部位を有する（O'Brien TJ, et al., Tumor Biol 22(6):348-66 (2001)）。ＭＵＣ１６抗原は、そうでなければ、子宮、子宮内膜、卵管、卵巣および腹腔および胸腔の漿膜の正常組織では低レベルでしか発現されないので、ＭＵＣ１６は、がんの標的化および処置を含む免疫ベース療法の魅力的な標的である可能性が高い。
ＭＵＣ１６の細胞外ドメインのかなりの部分は、切断され、分泌され（すなわち、ＣＡ－１２５）、これがＭＵＣ１６のこの部分が卵巣癌上の標的抗原として使用されるという有用性を制限する。多数の報告されたＭＵＣ１６モノクローナル抗体は、糖タンパク質の大きな分泌されるＣＡ－１２５画分上に存在するエピトープに結合し、残存するＭＵＣ１６エクトドメインには結合しない（Bellone S Am J Obstet Gynecol 200(1):75 el-10 (2009)、Berek JS. Expert Opin Biol Ther. 4(7): 1159-65 (2004); O'Brien TJ, et al., Int J Biol Markers 13(4): 188-95 (1998)）。したがって、診断および治療目的のために、減らされないＭＵＣ１６の領域に対する新規抗体の作製が必要である。

【発明の概要】

【0004】

ＭＵＣ１６媒介性障害、例えば、がんを管理または処置するための、ムチン１６（ＭＵＣ１６）に免疫特異的に結合し、ＭＵＣ１６の発現および／または活性をモジュレートする抗体部分（ｍｏｉｅｔｙ）を含む抗ムチン１６（ＭＵＣ１６）構築物の組成物、方法および使用が、本明細書において提供される。
ある特定の実施形態では、ムチン１６（ＭＵＣ１６）ポリペプチドを免疫特異的に認識する抗体部分を含む抗ムチン１６（ＭＵＣ１６）構築物（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）であって、抗体部分は、（ａ）（ｉ）配列番号２の重鎖可変ドメインの重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに（ｉｉ）配列番号３の軽鎖可変ドメインの軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖または（ｂ）（ｉ）配列番号１０の重鎖可変ドメインの重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに（ｉｉ）配列番号１１の軽鎖可変ドメインの軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖を含む、抗ムチン１６（ＭＵＣ１６）構築物が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒトＭＵＣ１６を免疫特異的に認識する。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６は、グリコシル化される。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６は、Ａｓｎｌ８００またはＡｓｎ１８０６でＮグリコシル化される。

【0005】

一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ムチン１６（ＭＵＣ１６）構築物の抗体部分は、（ａ）（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖または（ｂ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖を含む。

【0006】

一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ムチン１６（ＭＵＣ１６）構築物の抗体部分は、ＭＵＣ１６のエクトドメインに免疫特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体部分は、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。一部の実施形態では、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖は、ヒトＶＨ鎖およびＶＬ鎖である。一部の実施形態では、抗体部分は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＭＵＣ１６ ｃ１１４ポリペプチドに免疫特異的に結合する。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物は、Ｍａｔｒｉｇｅｌ浸潤アッセイにおいてＭＵＣ１６を発現する腫瘍細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ浸潤を阻害する。一部の実施形態では、腫瘍細胞は、卵巣腫瘍細胞である。

【0007】

一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ムチン１６（ＭＵＣ１６）構築物の抗体部分は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、ヒト由来重鎖および軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、重鎖定常領域は、ガンマ１、ガンマ２、ガンマ３およびガンマ４からなる群から選択されるアイソタイプを有する。一部の実施形態では、軽鎖定常領域は、カッパおよびラムダからなる群から選択されるアイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体部分は、２つの同一な重鎖および２つの同一な軽鎖を含む免疫グロブリンである。一部の実施形態では、免疫グロブリンは、ＩｇＧである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物は、単一特異性である。一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物は、多特異性である。一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物は、二重特異性である。一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディー（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディー（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、Ｆ（ａｂ’）２、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドック・アンド・ロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロ多量体抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である。一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物は、ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６を免疫特異的に認識する抗体部分は、第１の抗体部分であり、抗ＭＵＣ１６構築物は、第２の抗原を免疫特異的に認識する第２の抗体部分をさらに含む。一部の実施形態では、第２の抗原は、Ｔ細胞の表面上の抗原である。一部の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３である。一部の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３εおよびＣＤ３ζからなる群から選択される。一部の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３εである。

【0008】

一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、ＣＡＲは、共刺激性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ゼータ（ζ）鎖細胞質シグナル伝達ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物は、ペプチド剤、検出剤、イメージング剤、治療剤または細胞傷害性薬剤にさらにコンジュゲートされる。
また、ある特定の実施形態では、配列番号２～１７のうち１種もしくは複数のアミノ酸配列または本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物のアミノ酸を含むポリペプチドが、本明細書において提供される。
また、ある特定の実施形態では、配列番号２～１７のうち１種もしくは複数のアミノ酸配列または本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物のアミノ酸を含む１種または複数のポリペプチドをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドが本明細書において提供される。ある特定の実施形態では、プロモーターに作動可能に連結した本明細書において提供されるポリヌクレオチドを含むベクターが、本明細書において提供される。

【0009】

また、ある特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物、本明細書において提供されるポリペプチド、本明細書において提供されるポリヌクレオチドまたは本明細書において提供されるベクターを含む細胞が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、細胞は、免疫細胞である。一部の実施形態では、細胞は、リンパ球である、一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞である。
また、ある特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物、本明細書において提供されるポリペプチド、本明細書において提供されるポリヌクレオチドまたは本明細書において提供されるベクターの治療有効量および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が、本明細書において提供される。

【0010】

また、ある特定の実施形態では、それを必要とする患者において、ＭＵＣ１６関連疾患または障害を処置する方法であって、前記患者に、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物、本明細書において提供されるポリペプチド、本明細書において提供されるポリヌクレオチドまたは本明細書において提供されるベクターの治療有効量を含む医薬組成物を投与することを含む方法が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６関連疾患または障害は、がんである。一部の実施形態では、がんは、卵巣、肺、膵臓、乳房、子宮、卵管または一次腹膜のがんである。一部の実施形態では、がんは、転移性がんである。一部の実施形態では、医薬組成物は、患者において転移を阻害する。一部の実施形態では、患者は、ヒト患者である。
また、ある特定の実施形態では、エフェクター細胞を産生する方法であって、細胞を、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物をコードする１つまたは複数の核酸を用いて遺伝子修飾することを含む、方法が、本明細書において提供される。
また、ある特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物をコードする１つまたは複数の核酸を、患者から単離された１つまたは複数の一次細胞中に導入すること、および１つまたは複数の核酸を含む細胞を患者に投与することを含む、方法が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、方法は、細胞を拡大増殖すること、その後細胞を患者に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、一次細胞は、リンパ球である。一部の実施形態では、一次細胞は、Ｔ細胞である。

【0011】

一部の実施形態では、本明細書において提供される処置の方法は、さらなる治療剤の治療有効量を患者に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、治療剤は、抗がん剤である。一部の実施形態では、治療剤は、化学療法剤である。
また、ある特定の実施形態では、試料においてＭＵＣ１６を検出する方法であって、（ａ）試料を本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物と接触させること、および（ｂ）試料中に存在する抗ＭＵＣ１６構築物とＭＵＣ１６の間の結合を直接的または間接的に検出することを含む方法が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６構築物は、検出可能な標識にコンジュゲートされる。一部の実施形態では検出可能な標識は、発色剤、酵素剤、放射性同位体剤、同位体剤、蛍光剤、毒性薬剤、化学発光剤、核磁気共鳴造影剤である。一部の実施形態では、試料中の抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合は、検出可能な標識を検出することによって直接的に検出される。一部の実施形態では、試料中の抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合は、二次抗体を使用して間接的に検出される。

【0012】

また、ある特定の実施形態では、ＭＵＣ１６関連疾患または障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、ａ）本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物の有効量を個体に投与すること、およびｂ）個体において抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合のレベルを直接的または間接的に決定することを含み、閾値レベルを上回る結合のレベルが、個体がＭＵＣ１６関連疾患または障害を有することを示す方法が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６構築物は、検出可能な標識にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、検出可能な標識は、発色剤、酵素剤、放射性同位体剤、同位体剤、蛍光剤、毒性薬剤、化学発光剤、核磁気共鳴造影剤である。一部の実施形態では、試料中の抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合は、検出可能な標識を検出することによって直接的に検出される。一部の実施形態では、試料中の抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合は、二次抗体を使用して間接的に検出される。

【0013】

ＭＵＣ１６関連疾患または障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、ａ）個体に由来する細胞を含む試料を、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６構築物と接触させること、およびｂ）抗ＭＵＣ１６構築物に結合した試料中の細胞数を決定することを含み、閾値レベルを上回る抗ＭＵＣ１６構築物に結合した細胞数の値が、個体がＭＵＣ１６関連疾患または障害を有することを示す方法。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６構築物は、検出可能な標識にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、検出可能な標識は、発色剤、酵素剤、放射性同位体剤、同位体剤、蛍光剤、毒性薬剤、化学発光剤、核磁気共鳴造影剤である。一部の実施形態では、試料中の抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合は、検出可能な標識を検出することによって直接的に検出される。一部の実施形態では、試料中の抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合は、二次抗体を使用して間接的に検出される。
また、ある特定の実施形態では、ヒトＭＵＣ１６ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗ＭＵＣ１６構築物を作製する方法であって、ヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリー由来のヒトＭＵＣ１６に特異的なヒトｓｃＦｖを選択することを含む方法が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、ヒトＭＵＣ１６に特異的なヒトｓｃＦｖを選択することは、ヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリーを、組換えＭＵＣ１６ポリペプチドを発現する細胞と接触させることを含む。一部の実施形態では、組換えＭＵＣ１６ポリペプチドは、配列番号２５の配列を含む。

【0014】

また、ある特定の実施形態では、陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害の処置のための本明細書において提供される、抗ＭＵＣ１６構築物、抗ＭＵＣ１６ポリペプチド、抗ＭＵＣ１６構築物または抗ＭＵＣ１６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクターまたは任意のポリペプチドおよびそのポリヌクレオチドを含む細胞の使用が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害は、がんである。
また、ある特定の実施形態では、陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害の処置のための医薬の製造における、本明細書において提供される、抗ＭＵＣ１６構築物、抗ＭＵＣ１６ポリペプチド、抗ＭＵＣ１６構築物または抗ＭＵＣ１６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクターまたは任意のポリペプチドおよびそのポリヌクレオチドを含む細胞の使用が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害は、がんである。

【0015】

また、ある特定の実施形態では、陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害の診断のための、本明細書において提供される、抗ＭＵＣ１６構築物、抗ＭＵＣ１６ポリペプチド、抗ＭＵＣ１６構築物または抗ＭＵＣ１６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクターまたは任意のポリペプチドおよびそのポリヌクレオチドを含む細胞の使用が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害は、がんである。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】図１Ａは、ＭＵＣ１６の構造の概略図を示す図である。図１Ｂは、ＭＵＣ１６ ｃ１１４（配列番号２５）と呼ばれる、ＭＵＣ１６の切断型形態の概略およびアミノ酸配列を示し、５８個のアミノ酸のエクトドメイン、２５個のアミノ酸の膜貫通ドメインおよび３１個のアミノ酸の細胞質テールを含む。図中の番号付けは、Ｍｕｃ１６を同定する元の刊行物、Yin and Lloyd (2001) J Biol Chem 276: 27371-27375に基づいている。

【図2】図２は、野生型ＭＵＣ１６－Ｃ１１４（配列番号２５）およびＮ３０突然変異体ＭＵＣ１６－Ｃ１１４（配列番号３１）エクトドメインの間のアミノ酸アラインメントを示す図である。

【図3】図３は、野生型ＭＵＣ１６－Ｃ１１４を発現するＨＥＫ２９３安定細胞系（ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴ）またはＮ３０突然変異体ＭＵＣ１６－Ｃ１１４（ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｍｕｔ）におけるＧＦＰ発現の蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）分析を例示する図である。対照ＨＥＫ２９３細胞は、比較のために示されている。

【図4】図４は、３つの細胞系すべてについて、陰性ファージ対照とともに、ファージ対照なしでインキュベートされた、野生型ＭＵＣ１６－Ｃ１１４（ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴ）またはＮ３０突然変異体ＭＵＣ１６－Ｃ１１４（ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｍｕｔ）細胞のＦＡＣＳ分析の結果を例示する図である。

【図5】図５は、２種の例示的抗体ファージクローン、クローン８およびクローン１２とともにインキュベートされた野生型ＭＵＣ１６－Ｃ１１４（ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴ）またはＮ３０突然変異体ＭＵＣ１６－Ｃ１１４（ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｍｕｔ）細胞のＦＡＣＳ分析の結果を例示する図である。野生型ＭＵＣ１６－Ｃ１１４に結合し、Ｎ３０突然変異体ＭＵＣ１６－Ｃ１１４に結合しない抗体クローンが、シーケンシングおよびさらなる開発のために選択された。

【図6】図６は、Ｎ末端の抗ＭＵＣ１６ｓｃＦｖおよびＣ末端のマウスモノクローナル抗体の抗ヒトＣＤ３ε ｓｃＦｖを含むクローン８二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）が、ＭＵＣ１６＋ＯＶＣＡＲ３細胞系に結合するが、対照ＭＵＣ１６^-ＳＫＯＶ３細胞系に結合しないことを例示する図である。

【図7】図７は、ＭＵＣ１６^-ＳＫＯＶ３細胞系と比較される、ＭＵＣ１６＋ＯＶＣＡＲ３細胞系とともにインキュベートされた、抗ＭＵＣ１６クローン８ＢｓＡｂおよび抗ＭＵＣ１６クローン１２ＢｓＡｂを含む、選択された抗ＭＵＣ１６ＢｓＡｂを使用する細胞傷害性アッセイの例示的結果を例示する図である。クローン８およびクローン１２ＢｓＡｂは、ＭＵＣ１６^-ＳＫＯＶ３細胞系と比較されるように、ＭＵＣ１６＋ＯＶＣＡＲ３細胞系の標的特異的細胞溶解を誘導できた。

【図8】図８は、ＭＵＣ１６^-ＳＫＯＶ３細胞系と比較される、ＭＵＣ１６＋ＯＶＣＡＲ３細胞系、ＭＵＣ１６⁺ＳＫＯＶ８細胞系およびＭＵＣ１６⁺ＯＶＣＡ４３２細胞系とともにインキュベートされた、抗ＭＵＣ１６クローン８ＢｓＡｂおよび抗ＭＵＣ１６クローン１２ＢｓＡｂを含む、選択された抗ＭＵＣ１６ＢｓＡｂを使用する細胞傷害性アッセイの例示的結果を例示する図である。抗ＭＵＣ１６クローン８ＢｓＡｂは、ＭＵＣ１６＋ＯＶＣＡＲ３、ＳＫＯＶ８およびＯＶＣＡ４３２細胞系の標的特異的細胞溶解を誘導できた。抗ＭＵＣ１６クローン１２ＢｓＡｂもまた、ＭＵＣ１６＋の細胞溶解を、より少ない程度までではあるが誘導した。

【図9A】図９Ａは、腫瘍を確立するためのＭＵＣ１６を発現するＳＫＯＶ３－ＭＵＣ－ＣＤ修飾細胞の注射および処置のための抗ＭＵＣ１６クローン８ＢｓＡｂの注射を使用する卵巣の異種移植研究の例示的実験スキーマを例示する図である。

【図9B】図９Ｂは、例示的可視化データが腫瘍の確立および処置を示すことを例示する図である。

【図9C】図９Ｃは、異種移植実験の例示的生存曲線データを例示する図である。図９Ｄは、抗ＭＵＣ１６クローン８ＢｓＡｂを用いる腫瘍保有マウスの処置後のサイトカインＩＬ－２およびＩＦＮ－γの誘導を示す例示的データを例示する図である。

【図9D】図９Ｄは、抗ＭＵＣ１６クローン８ＢｓＡｂを用いる腫瘍保有マウスの処置後のサイトカインＩＬ－２およびＩＦＮ－γの誘導を示す例示的データを例示する図である。

【発明を実施するための形態】

【0017】

本出願は、一態様では、抗ＭＵＣ１６抗体剤、例えば、ＭＵＣ１６のエピトープ、例えば、ＭＵＣ１６の保持される細胞外ドメイン（ＭＵＣ１６エクトドメイン）のエピトープを特異的に認識する抗体部分を含む抗ＭＵＣ１６構築物を提供する。
ファージディスプレイ技術を使用して、ヒトＭＵＣ１６の保持される細胞外ドメインに特異的であるｓｃＦｖが同定された。フローサイトメトリーアッセイによって、これらの抗体がＭＵＣ１６発現性がん細胞系を認識することが実証された。したがって、本出願は、抗ＭＵＣ１６抗体剤、例えば、ＭＵＣ１６に免疫特異的に結合する抗体部分を含む抗ＭＵＣ１６構築物を提供する。抗ＭＵＣ１６抗体剤として、例えば、抗ＭＵＣ１６抗体、例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体およびその抗原結合性断片、抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ、抗ＭＵＣ１６抗体融合タンパク質（例えば、抗ＭＵＣ１６ Ｆｃ融合タンパク質およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ））、多特異性抗体、例えば、二重特異性抗体およびその抗ＭＵＣ１６抗体コンジュゲート（すなわち、抗ＭＵＣ１６イムノコンジュゲート）が挙げられる。

【0018】

別の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体剤、例えば、抗ＭＵＣ１６抗体、例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体およびその抗原結合性断片、抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ、抗ＭＵＣ１６抗体融合タンパク質（例えば、抗ＭＵＣ１６ Ｆｃ融合タンパク質およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ））、多特異性抗体、例えば、二重特異性抗体およびその抗ＭＵＣ１６抗体コンジュゲート（すなわち、抗ＭＵＣ１６イムノコンジュゲート）をコードする核酸が提供される。

【0019】

別の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体剤、例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体およびその抗原結合性断片、抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖ、抗ＭＵＣ１６抗体融合タンパク質（例えば、抗ＭＵＣ１６ Ｆｃ融合タンパク質およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ））、多特異性抗体、例えば、二重特異性抗体およびその抗ＭＵＣ１６抗体コンジュゲート（すなわち、抗ＭＵＣ１６イムノコンジュゲート）を含む組成物、例えば、医薬組成物が提供される。
また、がんを処置するためなどの抗ＭＵＣ１６抗体剤および抗体を作製および使用する方法ならびにこのような方法にとって有用なキットおよび製造品が提供される。

【0020】

定義
別に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野における当業者によって一般に理解される意味を有する。以下の参考文献は、スキルの１つに本発明において使用される用語の多くの一般的な定義を提供する：Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994)、The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988)、The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al., (eds.), Springer Verlag (1991)およびHale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991)。本明細書で使用される場合、以下の用語は、別に指定されない限り、以下のそれらに起因する意味を有する。本明細書において使用される技術用語は、単に特定の実施形態を説明する目的のためのものであり、本開示の制限であるように意図されるものではない。

【0021】

本明細書で使用される場合、「ＭＵＣ１６」または「ＭＵＣ１６ポリペプチド」または「ＭＵＣ１６ペプチド」という用語とは、Yin BW and Lloyd KO, 2001, J Biol Chem. 276(29):27371-5に記載されるようなＭＵＣ１６繋留ムチンタンパク質を指す。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＮＰ＿０７８９６６．２（配列番号１）は、例示的ヒトＭＵＣ１６核酸配列を提供する。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＮＰ０７８９６６．２（配列番号１）は、例示的ヒトＭＵＣ１６アミノ酸配列を提供する。天然ＭＵＣ１６は、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、推定切断部位の近位のエクトドメインおよび１２～２０リピート、各１５６個のアミノ酸長の大きな重度にグリコシル化された領域を含む（図１Ａ）。「未熟」ＭＵＣ１６とは、配列番号１を指し、これは、ＭＵＣ１６シグナル配列（配列番号１のアミノ酸残基１～６０）を含む。「成熟ＭＵＣ１６」とは、細胞表面に発現されるような、すなわち、細胞性プロセシングによってシグナル配列が除去されている天然ＭＵＣ１６、例えば、配列番号１の最初の６０個のアミノ酸残基が除去されている配列番号３２を指す（すなわち、配列番号１は、ＭＵＣ１６の「未熟」形態である）。

【0022】

配列番号２５のアミノ酸配列によって表されるポリペプチドは、本明細書において、ＭＵＣ１６ Ｃ１１４と呼ばれ、成熟ＭＵＣ１６のＣ末端の１１４個のアミノ酸残基からなる（配列番号３２は、成熟ＭＵＣ１６の配列である）。ＭＵＣ１６ Ｃ１１４は、５８個のアミノ酸のエクトドメイン、２５個のアミノ酸の膜貫通ドメインおよび３１個のアミノ酸の細胞質テールを含む（図１Ｂ）。ＭＵＣ１６ｃ１１４は、配列番号２５の１、２４および３０位（元のＭＵＣ１６刊行物Yin BW and Lloyd KO, 2001, J Biol Chem. 276(29):27371-5に従って、アミノ酸位置Ａｓｎｌ７７７、Ａｓｎｌ８００およびＡｓｎｌ８０６とも呼ばれる）のアスパラギンアミノ酸残基でＮグリコシル化されることが可能である。

【0023】

本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別に明確に示さない限り、複数形を同様に含むものとする。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、数値または数的範囲を修飾するために使用される場合、値または範囲の５％～１０％上および５％～１０％下の逸脱が、列挙される値または範囲の意図される意味内のままであることを示す。
本明細書で使用される場合、対象への薬剤の「投与」という用語は、その意図される機能を実施するために対象に薬剤を導入または送達する任意の経路を含む。投与は、それだけには限らないが、静脈内、筋肉内、腹膜内、皮下および本明細書において記載されるような他の適した経路を含む任意の適した経路によって実施され得る。投与は、自己投与および別のものによる投与を含む。

【0024】

「アミノ酸」という用語は、天然に存在するおよび天然に存在しないアミノ酸ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の方法で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸ミメティクスを指す。天然にコードされるアミノ酸は、２０種の一般的なアミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリン）およびピロリシン（ｐｙｒｏｌｙｓｉｎｅ）およびセレノシステインである。アミノ酸類似体とは、天然に存在するアミノ酸と同一の基本的化学構造、すなわち、水素に結合したα炭素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基を有する薬剤、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド主鎖を有するが、天然に存在するアミノ酸と同一の基本的化学構造を保持する。一部の実施形態では、ポリペプチドを形成するアミノ酸は、Ｄ型である。一部の実施形態では、ポリペプチドを形成するアミノ酸は、Ｌ型である。一部の実施形態では、ポリペプチドを形成する第１の複数のアミノ酸は、Ｄ型であり、第２の複数のものはＬ型である。

【0025】

アミノ酸は、その一般的に公知の３文字記号によって、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名委員会によって推奨される一文字記号のいずれかによって本明細書において参照される。ヌクレオチドは同様に、その一般的に許容される一文字コードによって参照される。
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において同義的に使用される。これらの用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーならびに１個または複数のアミノ酸残基が天然に存在しないアミノ酸、例えば、アミノ酸類似体であるアミノ酸ポリマーに当てはまる。これらの用語は、全長タンパク質を含む任意の長さのアミノ酸鎖を包含し、アミノ酸残基は、共有結合ペプチド結合によって連結される。
本明細書で使用される場合、「対照」は、比較目的の実験において使用される代替試料である。対照は、「陽性」または「陰性」であり得る。例えば、実験の目的が、特定の種類の疾患の処置のための治療剤の有効性の相関を決定することである場合、陽性対照（所望の治療効果を示すことが公知の組成物）および陰性対照（療法を受け取らない、またはプラセボを受け取る対象または試料）が通常使用される。

【0026】

本明細書で使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という用語は、所望の治療効果を達成するのに十分な薬剤の量を指す。治療適用との関連で、対象に投与される治療ペプチドの量は、感染の種類および重症度に、ならびに個体の特徴、例えば、全身の健康、年齢、性別、体重および薬物に対する耐性に応じて変わり得る。また、疾患の程度、重症度および種類に応じて変わり得る。当業者ならば、これらおよび他の因子に応じて適当な投与量を決定できるであろう。
本明細書で使用される場合、「発現」という用語は、ポリヌクレオチドがｍＲＮＡに転写されるプロセスおよび／または転写されたｍＲＮＡがその後ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質に翻訳されるプロセスを指す。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合には、発現は、真核細胞におけるｍＲＮＡのスプライシングを含み得る。遺伝子の発現レベルは、細胞または組織試料中のｍＲＮＡまたはタンパク質の量を測定することによって決定され得る。一態様では、ある試料からの遺伝子の発現レベルは、対照または参照試料からの遺伝子の発現レベルと直接比較され得る。別の態様では、ある試料からの遺伝子の発現レベルは、本明細書において開示される組成物の投与後の同一試料からの遺伝子の発現レベルと直接比較され得る。「発現」という用語はまた、以下の事象のうち１つまたは複数を指す：（１）細胞内でのＤＮＡ配列からの（例えば、転写による）ＲＮＡ鋳型の生成、（２）細胞内でのＲＮＡ転写物のプロセシング（例えばスプライシング、編集、５’キャップ形成、および／または３’末端形成による）、（３）細胞内でのＲＮＡ配列のポリペプチドまたはタンパク質への翻訳、（４）細胞内でのポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾、（５）細胞表面でのポリペプチドまたはタンパク質の提示および（６）細胞からのポリペプチドまたはタンパク質の分泌または提示または放出。
「リンカー」という用語は、２つの配列を接続または連結する、例えば、２つのポリペプチドドメインを連結する合成配列（例えば、アミノ酸配列）を指す。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０のアミノ酸配列を含有する。

【0027】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷の抗体分子だけでなく、免疫原結合能を保持する抗体分子の断片も意味する。このような断片はまた、当技術分野で周知であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ両方で定期的に使用される。したがって、本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷の免疫グロブリン分子だけでなく、周知の活性断片Ｆ（ａｂ’）₂およびＦａｂも意味する。無傷の抗体のＦｃ断片を欠くＦ（ａｂ’）₂およびＦａｂ断片は、循環からより迅速に排除され、無傷の抗体のより少ない非特異的組織結合を有し得る（Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983)）。本発明の抗体は、天然抗体全体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｓｅｄ）抗体、多特異性抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、一本鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディおよび単一ドメインラクダ類抗体）、Ｖ_NAR断片、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー抗体、ミニボディ、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、細胞内抗体、融合ポリペプチド、非従来抗体および上記のいずれかの抗原結合性断片を含む。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、抗原結合性部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであり得る。

【0028】

ある特定の実施形態では、抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶ_Hと略される）および重鎖定常（Ｃ_H）領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶ_Lと略される）および軽鎖定常Ｃ_L領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、Ｃ_Lから構成される。Ｖ_HおよびＶ_L領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する。各Ｖ_HおよびＶ_Lは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃｌ ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。本明細書で同義的に使用される場合、抗体の「抗原結合性部分」、「抗原結合性断片」または「抗原結合性領域」という用語は、抗原に結合し、抗体に抗原特異性を付与する抗体の領域または部分、抗原結合性タンパク質の断片を指し、例えば、抗体は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を含む（例えば、ペプチド／ＨＬＡ複合体）。抗体の抗原結合性機能は、全長抗体の断片によって実施され得ることが示されている。抗体の「抗体断片」という用語内に包含される抗原結合性部分の例として、Ｆａｂ断片、Ｖ_L、Ｖ_H、Ｃ_LおよびＣＨＩドメインからなる一価断片、Ｆ（ａｂ）₂断片、ヒンジ領域でジスルフィド橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、Ｖ_HおよびＣＨＩドメインからなるＦｄ断片、抗体の単一アームのＶ_LおよびＶ_HドメインからなるＦｖ断片、Ｖ_HドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al., Nature 341 : 544-546 (1989)）および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。

【0029】

抗体および抗体断片は、全体的にまたは部分的に、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ヤギ、モルモット、ハムスター、ウマ、マウス、ラット、ウサギおよびヒツジ）または非哺乳動物抗体産生動物（例えば、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、ヘビ、有尾両生類）に由来し得る。抗体および抗体断片は、動物において産生される場合も、動物の外側で、例えば、酵母またはファージから（例えば、単一抗体もしくは抗体断片として、または抗体ライブラリーの一部として）産生される場合もある。
さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、Ｖ_LおよびＶ_Hは、別々の遺伝子によってコードされるが、それらがＶ_LおよびＶ_H領域対が一価分子を形成する単一タンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって、組換え法を使用して、それらは接合され得る。これらは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知である、例えば、Bird et al., Science 242:423-426 (1988)およびHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 5879-5883 (1988)を参照されたい。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同一の方法で有用性についてスクリーニングされる。

【0030】

「単離された抗体」または「単離された抗原結合性タンパク質」は、その天然環境の成分から同定され、分離され、および／または回収されているものである。「合成抗体」または「組換え抗体」とは、一般に、当業者に公知の組換え技術を使用して、またはペプチド合成技術を使用して作製される。
本明細書で使用される場合、「一本鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、Ｖ_H：Ｖ_Lヘテロ二量体を形成するように共有結合によって連結された免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重（Ｖ_H）および軽鎖（Ｖ_L）の可変領域の融合タンパク質である。重（Ｖ_H）および軽鎖（Ｖ_L）は、直接的に接合されるか、またはＶ_HのＮ末端とＶ_LのＣ末端またはＶ_HのＣ末端とＶ_LのＮ末端を接続する、ペプチドをコードするリンカー（例えば、約１０、１５、２０、２５個のアミノ酸）によって接合される。リンカーは、普通、可動性のためにグリシンに富み、ならびに溶解性のためにセリンまたはトレオニンに富む。リンカーは、細胞外抗原結合性ドメインの重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結し得る。

【0031】

定常領域の除去およびリンカーの導入にもかかわらず、ｓｃＦｖタンパク質は、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。一本鎖Ｆｖポリペプチド抗体は、Huston, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA、85:5879-5883 (1988)）によって記載されるように、Ｖ_H－およびＶ_L－コード配列を含む核酸から発現され得る。米国特許第５，０９１，５１３号、同５，１３２，４０５号および同４，９５６，７７８号ならびに米国特許公開第２００５０１９６７５４号および同２００５０１９６７５４号も参照されたい。阻害活性を有するアンタゴニスト性ｓｃＦｖが記載されている（例えば、Zhao et al., Hybridoma (Larchmt) 27(6):455-51 (2008)、Peter et al., J Cachexia Sarcopenia Muscle (2012)、Shieh et al., J Imunol 183(4):2277-85 (2009)、Giomarelli et al., Thromb Haemost 97(6):955-63 (2007)、Fife et al., J Clin Invst 116(8):2252-61 (2006)、Brocks et al., Immunotechnology 3(3): 173-84 (1997)、Moosmayer et al., Ther Immunol 2(10):31- 40 (1995)を参照されたい。刺激活性を有するアゴニスト性ｓｃＦｖが記載されている（例えば、Peter et al., J Biol Chem 25278(38):36740-7 (2003)、Xie et al., Nat Biotech 15(8):768-71 (1997)、Ledbetter et al., Crit Rev Immunol 17(5-6):427-55 (1997)、Ho et al., Bio Chim Biophys Acta 1638(3):257-66 (2003)を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、「Ｆ（ａｂ）」とは、抗原に結合するが、一価であり、Ｆｃ部分を有さない抗体構造の断片を指し、例えば、酵素パパインによって消化された抗体は、２つのＦ（ａｂ）断片およびＦｃ断片（例えば、重（Ｈ）鎖定常領域；抗原に結合しないＦｃ領域）をもたらす。

【0032】

本明細書で使用される場合、「Ｆ（ａｂ’）₂」とは、ＩｇＧ抗体全体のペプシン消化によって生成した抗体断片を指し、この断片は、２つの抗原結合性（ａｂ’）（二価）領域を有し、各（ａｂ¹）領域は、２つの別々のアミノ酸鎖、抗原を結合するためのＳ－Ｓ結合によって連結されたＨ鎖および軽（Ｌ）鎖の一部を含み、残りのＨ鎖部分は、一緒に連結されている。「Ｆ（ａｂ’）₂」断片は、２つの個々のＦａｂ’断片に分けることができる。
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である抗体の相補性決定領域アミノ酸配列として定義される。例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th U. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)を参照されたい。一般に、抗体は、可変領域中に３つの重鎖および３つの軽鎖ＣＤＲまたはＣＤＲ領域を含む。ＣＤＲは、抗体の抗原またはエピトープへの結合のための接触残基の大部分を提供する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔシステムを使用して詳述される（Kabat, E. A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242(1991)）。

【0033】

本明細書で使用される場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、互換的であり、当技術分野で一般的なその意味を有する。定常領域は、抗体の抗原への結合に直接的に関与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体との相互作用を示すことができる抗体部分、例えば、軽および／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比較してより保存されたアミノ酸配列を有する。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当技術分野における用語であり、抗体が免疫特異的に結合できる抗原の局在化された領域を指すことができる。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続するアミノ酸（線状または連続エピトープ）である場合もあり、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（単数または複数）の２つもしくはそれより多い不連続領域から一緒になる場合もある（コンホメーション、非線状、非連続的または不連続エピトープ）。
本明細書で使用される場合、「リガンド」という用語は、受容体に結合する分子を指す。特に、リガンドは、別の細胞上の受容体に結合して、細胞対細胞認識および／または相互作用を可能にする。

【0034】

本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、結合力の尺度を意味する。理論に捉われようとは思わないが、親和性は、抗体結合部位と抗原決定基の間の立体化学的適合の近さに、それらの間の接触区域の大きさに、ならびに荷電基および疎水基の分布に応じて変わる。親和性はまた、可逆性複合体（例えば、一価または多価のいずれか）の形成後の抗原－抗体結合の力を指す「アビディティー」という用語を含む。抗原に対する抗体の親和性を算出する方法は、当技術分野で公知であり、親和性を算出するための結合実験の使用を含む。機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）における抗体活性も、抗体親和性を反映する。抗体および親和性は、表現型によって特性決定され、機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）を使用して比較され得る。本明細書において開示される対象において有用な核酸分子は、ポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子を含む。ある特定の実施形態では、本明細書において開示される対象において有用な核酸分子は、抗体またはその抗原結合性部分をコードする核酸分子を含む。このような核酸分子は、内因性核酸配列と１００％同一であることを必要としないが、通常、実質的な同一性を示す。内因性配列に対して「実質的な相同性」または「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは、通常、二本鎖核酸分子の少なくとも一方の鎖とハイブリダイズ可能である。「ハイブリダイズする」とは、ストリンジェンシーの種々の条件下で相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書において記載される遺伝子）またはその部分間で対形成して二本鎖分子を形成することを意味する（例えば、Wahl, G. M. and S. L. Berger, Methods Enzymol. 152:399 (1987); Kimmel, A. R., Methods Enzymol. 152:507 (1987)を参照されたい）。

【0035】

本明細書で使用される場合、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」および「特異的に認識する」という用語は、抗体との関連で類似の用語であり、当業者によって理解されるような抗原結合性部位を介して抗原（例えば、エピトープまたは免疫複合体）に結合する抗体およびその抗原結合性断片を指し、抗体または抗原結合性断片の他の抗原との交差反応性を排除しない。
「実質的に相同な」または「実質的に同一の」という用語は、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書において記載されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つ）または核酸配列（例えば、本明細書において記載される核酸配列のうちのいずれか１つ）に対して少なくとも５０％またはそれより大きい相同性または同一性を示すポリペプチドまたは核酸分子を意味する。例えば、このような配列は、比較のために使用される配列（例えば、野生型または天然配列）に対してアミノ酸レベルまたは核酸で、少なくとも約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％または約９９％相同または同一である。一部の実施形態では、実質的に相同なまたは実質的に同一のポリペプチドは、比較のために使用される配列に対して１つまたは複数のアミノ酸アミノ酸置換、挿入または欠失を含有する。一部の実施形態では、実質的に相同なまたは実質的に同一のポリペプチドは、相同配列を置き換えるために、Ｄ－アミノ酸およびレトロインベルソアミノ酸を含む１つまたは複数の非天然アミノ酸またはアミノ酸類似体を含有する。

【0036】

配列相同性または配列同一性は、通常、配列分析ソフトウェア（例えば、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ． ５３７０５の配列分析ソフトウェアパッケージ、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰまたはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用して測定される。このようなソフトウェアは、相同性の程度を種々の置換、欠失および／または他の修飾に割り当てることによって同一または類似配列をマッチさせる。同一性の程度を決定する例示的アプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムを使用してもよく、ｅ^-3と^e-100の間の確率スコアは密接に関連する配列を示す。
本明細書で使用される場合、「類似体」という用語は、参照ポリペプチドまたは核酸分子の機能を有する構造的に関連するポリペプチドまたは核酸分子を指す。

【0037】

本明細書で使用される場合、「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含む本明細書において開示される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片の結合特徴に大幅に影響を及ぼさない、または変更しないアミノ酸修飾を指す。保存的修飾は、アミノ酸置換、付加および欠失を含み得る。修飾は、当技術分野で公知の標準技術、例えば、位置指定突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発によって、本明細書において開示される抗ＭＵＣ１６抗体またはその抗原結合性断片のヒトｓｃＦｖ中に導入され得る。アミノ酸は、その物理化学的特性、例えば、電荷および極性に従って群に分類され得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同一群内のアミノ酸と置き換えられるものである。例えば、アミノ酸は、電荷によって分類され得る：正電荷を有するアミノ酸として、リシン、アルギニン、ヒスチジンが挙げられ、負電荷を有するアミノ酸として、アスパラギン酸、グルタミン酸が挙げられ、中性電荷を有するアミノ酸として、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが挙げられる。さらに、アミノ酸は、極性によって分類され得る：極性アミノ酸として、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リシン（塩基性極性）、セリン、トレオニンおよびチロシンが挙げられ、非極性アミノ酸として、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファンおよびバリンが挙げられる。したがって、ＣＤＲ領域内の１個または複数のアミノ酸残基は、同一群由来の他のアミノ酸残基と置き換えられてもよく、変更された抗体は、本明細書において記載される機能アッセイを使用して保持された機能（すなわち、上記の（ｃ）～（ｌ）に示された機能）について試験され得る。ある特定の実施形態では、指定の配列またはＣＤＲ領域内の１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下の残基が変更される。

【0038】

本明細書で使用される場合、「異種核酸分子またはポリペプチド」という用語は、細胞または細胞から得られた試料中に普通は存在しない核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子）またはポリペプチドを指す。この核酸は、別の生物に由来する場合も、例えば、細胞もしくは試料中で普通は発現されないｍＲＮＡ分子である場合もある。
本明細書で使用される場合、「モジュレートする」という用語は、正または負に変更することを指す。例示的モジュレーションとして、約１％、約２％、約５％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％または約１００％の変化が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「増大する」という用語は、それだけには限らないが、約５％まで、約１０％まで、約２５％まで、約３０％まで、約５０％まで、約７５％まで、または約１００％まで正に変更することを含めて、少なくとも約５％まで正に変更することを指す。

【0039】

本明細書で使用される場合、「低減する」という用語は、それだけには限らないが、約５％まで、約１０％まで、約２５％まで、約３０％まで、約５０％まで、約７５％まで、または約１００％まで負に変更することを含めて、少なくとも約５％まで負に変更することを指す。
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然供給源中に（例えば、マウスまたはヒト中に）存在する他の核酸分子から分離されているものである。さらに、「単離された」核酸分子、例えば、ｃＤＮＡ分子は、組換え技術によって生成される場合には他の細胞性材料もしくは培養培地を実質的に含まない、または化学合成される場合には化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まないものであり得る。例えば、「実質的に含まない」という言語は、約１５％、１０％、５％、２％）、１％）、０．５％）または０．１％）未満の他の材料、例えば、細胞性材料、培養培地、他の核酸分子、化学的前駆体および／または他の化学物質を有するポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製物を含む。

【0040】

本明細書で使用される場合、「単離された細胞」という用語は、細胞に天然に付随する分子性および／または細胞性構成成分から分離されている細胞を指す。
「有効量」（または「治療有効量」）とは、処置の際に有益なまたは所望の臨床結果に影響を及ぼすのに十分な量である。有効量は、対象に、１回または複数回用量で投与され得る。処置の観点からは、有効量とは、疾患（例えば、新生物）の進行を緩和する、改善する、安定化する、逆転させるまたは減速させる、またはそうでなければ、疾患（例えば、新生物）の病理学的結果を低減するのに十分である量である。有効量は、一般に、ケースバイケースで医師によって決定され、当業者の技術の範囲内である。有効量を達成する適当な投与量を決定する場合には、通常、いくつかの因子が考慮される。これらの因子として、対象の年齢、性別および体重、処置されている状態、状態の重症度ならびに投与される操作された免疫細胞の形態および有効濃度が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「新生物」という用語は、細胞または組織の病的増殖およびそのその後の遊走または他の組織もしくは臓器の浸潤を特徴とする疾患を指す。新生物成長は、通常、制御されないものであり、進行性であり、正常細胞の増殖を誘発しない、または正常細胞の増殖の休止を引き起こす条件下で生じる。新生物は、それだけには限らないが、膀胱、結腸、骨、脳、乳房、軟骨、膠細胞、食道、卵管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、胸膜、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、泌尿生殖器管、尿管、尿道、子宮および膣からなる群から選択される臓器またはその組織もしくは細胞種を含む、さまざまな細胞種、組織または臓器に影響を及ぼし得る。新生物は、がん、例えば、肉腫、癌腫または形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）を含む。

【0041】

本明細書で使用される場合、「処置」または「処置」という用語は、処置されている個体または細胞の疾患過程を変更しようとする臨床介入を指し、予防のため、または臨床病理の過程の間に実施され得る。処置の治療効果として、制限するものではないが、疾患の発生もしくは再発の防止、症状の軽減、疾患の任意の直接的もしくは間接的病理学的結果の減少、転移の防止、疾患進行の速度の低下、疾患状態の寛解または緩和および緩解または予後改善が挙げられる。疾患または障害の進行を防止することによって、処置は、罹患した、もしくは診断された対象または障害を有すると疑われる対象における障害による悪化を防ぐことができるだけなく、処置はまた、障害のリスクにある、または障害を有すると疑われる対象において障害もしくは障害の症状の発生を防ぐ場合もある。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、それだけには限らないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類など（例えば、特定の処置のレシピエントである予定である、またはそれから細胞が回収される）を含む、任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。

【0042】

抗ＭＵＣ１６抗体剤
ＭＵＣ１６に免疫特異的に結合する抗ＭＵＣ１６抗体剤が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６の保持される細胞外ドメインに免疫特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６に免疫特異的に結合する抗体部分を含む抗ＭＵＣ１６構築物である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、抗ＭＵＣ１６抗体（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体またはその抗原結合性断片）である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６発現性細胞（例えば、ＭＵＣ１６発現性がん細胞）に結合する。
抗ＭＵＣ１６抗体剤、例えば、抗ＭＵＣ１６抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え産生された抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体（二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖抗体重鎖対、細胞内抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体または一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディおよびジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、Ｆｃ融合タンパク質、イムノコンジュゲートまたはその断片を含み得る。このような抗体および抗原結合性断片は、当技術分野で公知の方法によって作製され得る。

【0043】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６に特異的に結合する全長抗体（例えば、全長ＩｇＧ）またはその抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、ＭＵＣ１６に免疫特異的に結合する抗体剤への言及は、抗体剤が、非標的のその結合親和性の少なくとも約１０倍である（例えば、少なくとも約１０、１０²、１０³、１０⁴、１０⁵、１０⁶または１０⁷倍のいずれかを含む）親和性でＭＵＣ１６に結合することを意味する。一部の実施形態では、非標的は、ＭＵＣ１６ではない抗原である。結合親和性は、当技術分野で公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）分析または放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）によって決定され得る。Ｋ_dは、当技術分野で公知の方法、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ機器を利用する、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイまたは例えば、Ｓａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する結合平衡除外法（ｋｉｎｅｔｉｃ ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）（ＫｉｎＥｘＡ）によって決定され得る。

【0044】

ヒト配列（例えば、ヒトＣＤＲ配列を含むヒト重鎖および軽鎖可変ドメイン配列）を含有する抗ＭＵＣ１６抗体剤が、本明細書において広く論じられているが、非ヒト抗ＭＵＣ１６抗体剤も企図される。一部の実施形態では、非ヒト抗ＭＵＣ１６抗体剤は、本明細書において記載されるような抗ＭＵＣ１６抗体剤に由来するヒトＣＤＲ配列および非ヒトフレームワーク配列を含む。非ヒトフレームワーク配列は、一部の実施形態では、例えば、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ（例えば、雌ウシ、雄ウシ、バッファロー）、シカ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、ネコ、イヌ、フェレット、霊長類（例えば、マーモセット、アカゲサル）などを含めて、本明細書において記載されるような１つまたは複数のヒトＣＤＲ配列を使用して合成重鎖および／または軽鎖可変ドメインを作製するために使用され得る任意の配列を含む。一部の実施形態では、非ヒト抗ＭＵＣ１６抗体剤は、本明細書において記載されるような１つまたは複数のヒトＣＤＲ配列を、非ヒトフレームワーク配列（例えば、マウスまたはニワトリフレームワーク配列）上にグラフトすることによって生成した抗ＭＵＣ１６抗体剤を含む。

【0045】

例示的ヒトＭＵＣ１６の完全アミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ヒトＭＵＣ１６内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ヒトＭＵＣ１６の保持される細胞外ドメイン内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６エクトドメインに免疫特異的に結合する（図１）。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ヒトＭＵＣ１６を発現する細胞に免疫特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤は、組換えＭＵＣ１６ポリペプチドを発現する細胞に免疫特異的に結合する。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６ポリペプチドは、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＭＵＣ１６－ｃ３４４である。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６ポリペプチドは、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＭＵＣ１６－ｃ１１４である。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ヒト以外の種に由来するＭＵＣ１６ポリペプチドと交差反応する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ヒトＭＵＣ１６に対して完全に特異的であり、種または他の種類の非ヒト交差反応性を示さない。

【0046】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、がん細胞（固形腫瘍など）の細胞表面上で発現されたＭＵＣ１６を特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、卵巣がん細胞、乳がん細胞、前立腺がん細胞、結腸がん細胞、肺がん細胞、脳がん細胞、膵臓がん細胞、腎臓がん細胞、卵管がん細胞、子宮（例えば、子宮内膜）がん細胞、一次腹膜がん細胞またはＭＵＣ１６を発現する任意の他の組織のがん細胞のうち１種または複数の細胞表面上で発現されたＭＵＣ１６を特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、がん細胞系、例えば、卵巣がん細胞系、例えば、ＯＶＣＡＲ３、ＯＶＣＡ－４３２、ＯＶＣＡ－４３３およびＣＡＯＶ３の細胞表面上で発現されたＭＵＣ１６を特異的に認識する。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６タンパク質の少なくとも１つの対立遺伝子バリアントまたはその断片と交差反応する。一部の実施形態では、対立遺伝子バリアントは、天然に存在するＭＵＣ１６またはその断片と比較した場合に、最大約３０、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５または３０のいずれかのアミノ酸置換、例えば、保存的アミノ酸置換を有する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６タンパク質の任意の対立遺伝子バリアントまたはその断片と交差反応しない。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６タンパク質の少なくとも１つの種間バリアントと交差反応する。一部の実施形態では、例えば、ＭＵＣ１６タンパク質またはその断片は、ヒトＭＵＣ１６およびＭＵＣ１６タンパク質の種間バリアントまたはその断片であり、そのマウスまたはラットバリアントである。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６タンパク質の任意の種間バリアントと交差反応しない。

【0047】

一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤のいずれかによれば、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６に特異的に結合する抗ＭＵＣ１６抗体部分を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域を含む。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ＩｇＧ３重鎖定常領域を含む。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、重鎖定常領域は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ４重鎖定常領域は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ラムダ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、軽鎖定常領域は、配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。

【0048】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、カッパ軽鎖定常領域を含む。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、抗体重鎖可変ドメインおよび抗体軽鎖可変ドメインを含む。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号２の１、２または３つのＨＣ－ＣＤＲを含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号２の重鎖可変ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、それぞれ、配列番号４、５および６に示されるＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号２を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号２に示される重鎖可変ドメインを含む。

【0049】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号３の１、２または３つのＬＣ－ＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号３の軽鎖可変ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、それぞれ、配列番号７、８および９に示されるＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号３に示される軽鎖可変ドメインを含む。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号２の重鎖可変ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインならびに配列番号３の軽鎖可変ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、それぞれ、配列番号４、５および６に示される を含む重鎖可変ドメインならびにそれぞれ、配列番号７、８および９に示されるＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号２を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号２に示される重鎖可変ドメインおよび配列番号３に示される軽鎖可変ドメインを含む。

【0050】

一部の実施形態では、抗体重鎖可変ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列または最大約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）のアミノ酸置換を含む、もしくは配列番号２に対して少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列または最大約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）のアミノ酸置換を含む、もしくは配列番号３に対して少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１０の１、２または３つのＨＣ－ＣＤＲを含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１０の重鎖可変ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、それぞれ、配列番号１２、１３および１４に示されるＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１０を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１０に示される重鎖可変ドメインを含む。

【0051】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１１の１、２または３つのＬＣ－ＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１１の軽鎖可変ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、それぞれ、配列番号１５、１６および１７に示されるＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１１を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１１に示される軽鎖可変ドメインを含む。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１０の重鎖可変ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインならびに配列番号１１の軽鎖可変ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、それぞれ、配列番号１２、１３および１４に示される を含む重鎖可変ドメインならびにそれぞれ、配列番号１５、１６および１７に示されるＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１０を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１１を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、配列番号１０に示される重鎖可変ドメインおよび配列番号１１に示される軽鎖可変ドメインを含む。

【0052】

一部の実施形態では、抗体重鎖可変ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列または最大約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）のアミノ酸置換を含む、もしくは配列番号１０に対して少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列または最大約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）のアミノ酸置換を含む、もしくは配列番号１１に対して少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
例示的抗体配列は以下の表に示されている。表２中の例示的ＣＤＲ配列は、ＩｇＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して予測される。例えば、その開示内容がその全文で参照により本明細書に組み込まれる、Ye J. et al., Nucleic Acids Research 41:W34-W40 (2013)を参照されたい。当業者ならば、抗体重鎖および軽鎖可変領域中のＣＤＲ位置を予測するための多数のアルゴリズムが公知であり、本明細書において記載される抗体に由来するＣＤＲを含むが、ＩｇＢＬＡＳＴ以外の予測アルゴリズムに基づく抗体剤は、本発明の範囲内であることは認識するであろう。

【0053】

例示的抗体重鎖および軽鎖可変領域配列は、国際免疫遺伝学情報システム（ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＭＭＵＮＯＧＥＮＥＴＩＣＳ ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ ＳＹＳＴＥＭ）（登録商標）（ＩＭＧＴ）に従って区切られる。例えば、その開示内容がその全文で参照により本明細書に組み込まれる、Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res., 43:D413-422 (2015)を参照されたい。当業者ならば、本明細書において記載される抗体に由来するＶ_HまたはＶ_L配列を含むが、ＩＭＧＴ以外のアルゴリズムに基づく抗体剤は、本発明の範囲内にあることは認識するであろう。

【0054】

【表1】

【0055】

【表2】

【0056】

全長抗ＭＵＣ１６抗体
抗ＭＵＣ１６抗体剤は、一部の実施形態では、全長抗ＭＵＣ１６抗体である。一部の実施形態では、全長抗ＭＵＣ１６抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭである。一部の実施形態では、全長抗ＭＵＣ１６抗体は、ＩｇＧ定常ドメイン、例えば、そのバリアントを含むＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４のいずれかの定常ドメインを含む。一部の実施形態では、全長抗ＭＵＣ１６抗体は、ラムダ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、全長抗ＭＵＣ１６抗体は、カッパ軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、全長抗ＭＵＣ１６抗体は、全長ヒト抗ＭＵＣ１６抗体である。一部の実施形態では、全長抗ＭＵＣ１６抗体は、マウス免疫グロブリンのＦｃ配列を含む。一部の実施形態では、全長抗ＭＵＣ１６抗体は、増強された抗体依存性細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）エフェクター機能を有するように変更されているか、またはそうでなければ変化しているＦｃ配列を含む。

【0057】

したがって、例えば、一部の実施形態では、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインを含む全長抗ＭＵＣ１６抗体が提供され、抗ＭＵＣ１６抗体は、腫瘍細胞上のＭＵＣ１６に特異的に結合する。一部の実施形態では、ＩｇＧ１は、ヒトＩｇＧ１である。一部の実施形態では、ＩｇＧ１は、ヒトＩｇＧ４である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６重鎖定常領域は、配列番号２８または２９のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６軽鎖定常領域は、配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６重鎖定常領域は、配列番号２８または２９のアミノ酸配列を含むか、またはからなり、抗ＭＵＣ１６軽鎖定常領域は、配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体の、ＭＵＣ１６発現性細胞（例えば、ＭＵＣ１６発現性がん細胞）への結合は、腫瘍成長もしくは腫瘍の転移を阻害し、または腫瘍の退縮を誘導する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体の、ＭＵＣ１６発現性細胞（例えば、ＭＵＣ１６発現性がん細胞）への結合は、ＭＵＣ１６発現性細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤を阻害する。

【0058】

一部の実施形態では、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインを含む全長抗ＭＵＣ１６抗体が提供され、抗ＭＵＣ１６抗体は、ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインならびにｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１は、ヒトＩｇＧ１である。一部の実施形態では、ＩｇＧ４は、ヒトＩｇＧ４である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６重鎖定常領域は、配列番号２８または２９のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６軽鎖定常領域は、配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。
一部の実施形態では、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインを含む全長抗ＭＵＣ１６抗体が提供され、抗ＭＵＣ１６抗体は、ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインならびにｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１は、ヒトＩｇＧ１である。一部の実施形態では、ＩｇＧ４は、ヒトＩｇＧ４である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６重鎖定常領域は、配列番号２８または２９のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６軽鎖定常領域は、配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、またはからなる。

【0059】

キメラ抗ＭＵＣ１６構築物
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６に特異的に結合する、抗ＭＵＣ１６キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはそのバリアントである。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、抗ＭＵＣ１６ＣＡＲである。ＣＡＲは、当技術分野で周知であり、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、本発明において使用するために、また本明細書における１つまたは複数の請求項に含める可能性があるために、その開示内容が明確に本明細書に組み込まれるSadelain et al., Nature 545: 423- 431 (2017)に記載されるような、当技術分野で公知の任意のＣＡＲに従うＣＡＲであり得る。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ＣＡＲは、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体部分のいずれかに従う抗ＭＵＣ１６抗体部分を含む。例えば、一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分を含む抗ＭＵＣ１６ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ＣＡＲの抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む抗体重鎖可変ドメインならびにｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。

【0060】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ＣＡＲの抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインならびにｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。

【0061】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）膜貫通ドメインを含む抗ＭＵＣ１６キメラ受容体である。例えば、一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、本発明において使用するために、また本明細書における１つまたは複数の請求項に含める可能性があるために、その開示内容が明確に本明細書に組み込まれるＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ２０１７０７０６０８に記載されるような抗体Ｔ細胞受容体（ａｂＴＣＲ）である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ａｂＴＣＲは、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体部分のいずれかに従う抗ＭＵＣ１６抗体部分を含む。例えば、一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分を含む抗ＭＵＣ１６ａｂＴＣＲが提供される。

【0062】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ａｂＴＣＲの抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む抗体重鎖可変ドメインならびにｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ａｂＴＣＲの重鎖可変ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ａｂＴＣＲの抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインならびにｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６ａｂＴＣＲの重鎖可変ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。

【0063】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ＭＵＣ１６に特異的に結合する抗ＭＵＣ１６抗体部分および共刺激性シグナル伝達ドメインを含むキメラ共刺激性受容体である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、ＭＵＣ１６に結合するとその表面でそれが機能的に発現される免疫細胞を刺激可能である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、機能的一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠く。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠く。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、抗ＭＵＣ１６抗体部分、膜貫通ドメインおよび共刺激性シグナル伝達ドメインを含む単一ポリペプチド鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖を含み、第１および第２のポリペプチド鎖は一緒に、抗ＭＵＣ１６抗体部分、膜貫通モジュールおよび共刺激性シグナル伝達ドメインを含む共刺激性シグナル伝達モジュールを形成する。一部の実施形態では、第１および第２のポリペプチド鎖は、別々のポリペプチド鎖であり、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、多量体、例えば、二量体である。一部の実施形態では、第１および第２のポリペプチド鎖は、共有結合によって、例えば、ペプチド結合によって、または別の化学的連結、例えば、ジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。

【0064】

本発明の抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体において使用するための共刺激性免疫細胞シグナル伝達ドメインの例として、キメラ受容体（例えば、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ）と協力して作用して、キメラ受容体会合後にシグナル伝達を開始することができるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体の細胞質配列ならびにこれらの配列の任意の誘導体またはバリアントおよび同一の機能的能力を有する任意の合成配列が挙げられる。
ＴＣＲ単独によって生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全活性化にとっては不十分であること、および二次的または共刺激性シグナルも必要であることは公知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個のクラスの細胞内シグナル伝達配列：ＴＣＲによって抗原依存性一次活性化を開始するもの（本明細書において「一次免疫細胞シグナル伝達配列」と呼ばれる）および抗原依存的に作用して、二次的または共刺激性シグナルを提供するもの（本明細書において「共刺激性免疫細胞シグナル伝達配列」と呼ばれる）によって媒介されると言われることがある。

【0065】

刺激性に作用する一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。ＩＴＡＭを含有する一次免疫細胞シグナル伝達配列の例として、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。「機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、適当な受容体に作動可能につなげられる場合に免疫細胞活性化シグナルを形質導入可能である配列である。一次免疫細胞シグナル伝達配列の断片またはバリアントを含み得る「非機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫細胞活性化シグナルを形質導入できない。本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、機能的一次免疫細胞シグナル伝達配列、例えば、ＩＴＡＭを含む機能的シグナル伝達配列を欠く。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠く。
共刺激性免疫細胞シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ （ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンドなどを含む、共刺激性分子の細胞内ドメインの部分であり得る。

【0066】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体の抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３ならびにｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体の抗ＭＵＣ１６抗体部分は、ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインならびにｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。

【0067】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、免疫細胞において発現される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体は、別のキメラ受容体を発現する免疫細胞において発現される。一部の実施形態では、他のキメラ受容体は、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲである。一部の実施形態では、他のキメラ受容体は、ＭＵＣ１６に結合する。一部の実施形態では、他のキメラ受容体は、ＭＵＣ１６に結合しない。一部の実施形態では、他のキメラ受容体は、ＭＵＣ１６の高発現および／または高い好気的解糖を特徴とするがんと関連する抗原に結合する。一部の実施形態では、他のキメラ受容体は、本明細書において記載されるがんのいずれか（例えば、腎臓がん、子宮頸がん、前立腺がん、乳がん、結腸がん、脳がんまたは膵臓がん）と関連する抗原に結合する。一部の実施形態では、他のキメラ受容体は、腎臓がんと関連する抗原に結合する。一部の実施形態では、腎臓がんは、腎細胞癌（ＲＣＣ）である。一部の実施形態では、ＲＣＣは、転移性ＲＣＣである。一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞における抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体の発現は誘導可能である。一部の実施形態では、免疫細胞における抗ＭＵＣ１６キメラ共刺激性受容体の発現は、他のキメラ受容体を介したシグナル伝達の際に誘導可能である。

【0068】

結合親和性
結合親和性は、Ｋ_d、Ｋ_off、Ｋ_onまたはＫ_aによって示され得る。「Ｋ_off」という用語は、本明細書で使用される場合、動態学的選択設定から決定されるような、抗体剤／抗原複合体からの抗体剤の解離の解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）定数を指すものとする。「Ｋ_on」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体剤／抗原複合体を形成する、抗体剤の抗原への会合の会合速度（ｏｎ－ｒａｔｅ）定数を指すものとする。平衡解離定数「Ｋ_d」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体剤－抗原相互作用の解離定数を指し、平衡の抗体剤分子の溶液中に存在する抗体結合性ドメインのすべての２分の１を占めるために必要な抗原の濃度を説明し、Ｋ_off／Ｋ_onに等しい。Ｋ_dの測定は、すべての結合剤が溶液中にあることを前提とする。抗体剤が細胞壁に繋留される場合には、例えば、酵母発現系において、対応する平衡速度定数は、ＥＣ５０として表され、これは、Ｋ_dの良好な近似をもたらす。親和性定数、Ｋ_aは、解離定数、Ｋ_dの逆数である。

【0069】

解離定数（Ｋ_d）は、抗原に対する抗体部分の親和性を示す指標として使用される。例えば、さまざまなマーカー剤を用いて印がつけられた抗体剤を使用するスキャッチャード法によって、ならびにＢｉａｃｏｒｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによって製造された）を使用する、ユーザーズマニュアルおよび付属のキットに従う表面プラズモン共鳴による生体分子相互作用の分析によって容易な分析が可能である。これらの方法を使用して導くことができるＫ_d値は、Ｍ（モル）の単位で表される。標的に特異的に結合する抗体剤は、例えば、≦１０^-7Ｍ、≦１０^-8Ｍ、≦１０^-9Ｍ、≦１０^-10Ｍ、≦１０^-11Ｍ、≦１０^-12Ｍまたは≦１０^-13ＭのＫ_dを有し得る。
抗体剤の結合特異性は、当技術分野で公知の方法によって実験的に決定され得る。このような方法として、それだけには限らないが、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、ＢＩＡｃｏｒｅ試験およびペプチドスキャンが挙げられる。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤の結合親和性は、表面にＭＵＣ１６を発現する細胞（例えば、ＨｅｐＧ２細胞）に対する抗ＭＵＣ１６抗体剤の結合親和性を試験することによって測定される。

【0070】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、標的ＭＵＣ１６（例えば、ｎＭＵＣ１６）に、約１０^-7Ｍ～約１０^-13Ｍ（例えば、約１０^-7Ｍ～約１０^-13Ｍ、約１０^-9Ｍ～約１０^-13Ｍまたは約１０^-10Ｍ～約１０^-12Ｍ）のＫ_dで特異的に結合する。したがって、一部の実施形態では、抗ｎＭＵＣ１６抗体剤とｎＭＵＣ１６の間の結合のＫ_d、抗ｓＭＵＣ１６抗体剤とｓＭＵＣ１６の間の結合のＫ_dまたは抗ＭＵＣ１６抗体剤とＭＵＣ１６（任意の形態）の間の結合のＫ_dは、約１０^-7Ｍ～約１０^-13Ｍ、約１×１０^-7Ｍ～約５×１０^-13Ｍ、約１０^-7Ｍ～約１０^-12Ｍ、約１０^-7Ｍ～約１０^-11Ｍ、約１０^-7Ｍ～約１０^-10Ｍ、約１０^-7Ｍ～約１０^-9Ｍ、約１０^-8Ｍ～約１０^-13Ｍ、約１×１０^-8Ｍ～約５×１０^-13Ｍ、約１０^-8Ｍ～約１０^-12Ｍ、約１０^-8Ｍ～約１０^-11Ｍ、約１０^-8Ｍ～約１０^-10Ｍ、約１０^-8Ｍ～約１０^-9Ｍ、約５×１０^-9Ｍ～約１×１０^-13Ｍ、約５×１０^-9Ｍ～約１×１０^-12Ｍ、約５×１０^-9Ｍ～約１×１０^-11Ｍ、約５×１０^-9Ｍ～約１×１０^-10Ｍ、約１０^-9Ｍ～約１０^-13Ｍ、約１０^-9Ｍ～約１０^-12Ｍ、約１０^-9Ｍ～約１０^-11Ｍ、約１０^-9Ｍ～約１０^-10Ｍ、約５×１０^-10Ｍ～約１×１０^-13Ｍ、約５×１０^-10Ｍ～約１×１０^-12Ｍ、約５×１０^-10Ｍ～約１×１０^-11Ｍ、約１０^-10Ｍ～約１０^-13Ｍ、約１×１０^-10Ｍ～約５×１０^-13Ｍ、約１×１０^-10Ｍ～約１×１０^-12Ｍ、約１×１０^-10Ｍ～約５×１０^-12Ｍ、約１×１０^-10Ｍ～約１×１０^-11Ｍ、約１０^-11Ｍ～約１０^-13Ｍ、約１×１０^-11Ｍ～約５×１０^-13Ｍ、約１０^-11Ｍ～約１０^-12Ｍまたは約１０^-12Ｍ～約１０^-13Ｍである。一部の実施形態では、抗ｎＭＵＣ１６抗体剤とｎＭＵＣ１６の間の結合のＫ_dは、約１０^-7Ｍ～約１０^-13Ｍである。

【0071】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤と非標的の間の結合のＫ_dは、抗ＭＵＣ１６抗体剤と標的の間の結合のＫ_dよりも大きく、一部の実施形態では、標的（例えば、細胞表面に結合したＭＵＣ１６）に対する抗ＭＵＣ１６抗体剤の結合親和性は、非標的に対するものよりも高いと本明細書において言及される。一部の実施形態では、非標的は、ＭＵＣ１６ではない抗原である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤（ｎＭＵＣ１６に対する）と非ＭＵＣ１６標的の間の結合のＫ_dは、抗ＭＵＣ１６抗体剤と標的ＭＵＣ１６の間の結合のＫ_dの少なくとも約１０倍、例えば、約１０～１００倍、約１００～１０００倍、約１０³～１０⁴倍、約１０⁴～１０⁵倍、約１０⁵～１０⁶倍、約１０⁶～１０⁷倍、約１０⁷～１０⁸倍、約１０⁸～１０⁹倍、約１０⁹～１０¹⁰倍、約１０¹⁰～１０¹¹倍または約１０¹¹～１０¹²倍であり得る。

【0072】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、約１０^-1Ｍ～約１０^-6Ｍ（例えば、約１０^-1Ｍ～約１０^-6Ｍ、約１０^-1Ｍ～約１０^-5Ｍまたは約１０^-2Ｍ～約１０^-4Ｍ）のＫ_dで非標的に結合する。一部の実施形態では、非標的は、ＭＵＣ１６ではない抗原である。したがって、一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤と非ＭＵＣ１６標的の間の結合のＫ_dは、約１０^-1Ｍ～約１０^-6Ｍ、約１×１０^-1Ｍ～約５×１０^-6Ｍ、約１０^-1Ｍ～約１０^-5Ｍ、約１×１０^-1Ｍ～約５×１０^-5Ｍ、約１０^-1Ｍ～約１０^-4Ｍ、約１×１０^-1Ｍ～約５×１０^-4Ｍ、約１０^-1Ｍ～約１０^-3Ｍ、約１×１０^-1Ｍ～約５×１０^-3Ｍ、約１０^-1Ｍ～約１０^-2Ｍ、約１０^-2Ｍ～約１０^-6Ｍ、約１×１０^-2Ｍ～約５×１０^-6Ｍ、約１０^-2Ｍ～約１０^-5Ｍ、約１×１０^-2Ｍ～約５×１０^-5Ｍ、約１０^-2Ｍ～約１０^-4Ｍ、約１×１０^-2Ｍ～約５×１０^-4Ｍ、約１０^-2Ｍ～約１０^-3Ｍ、約１０^-3Ｍ～約１０^-6Ｍ、約１×１０^-3Ｍ～約５×１０^-6Ｍ、約１０^-3Ｍ～約１０^-5Ｍ、約１×１０^-3Ｍ～約５×１０^-5Ｍ、約１０^-3Ｍ～約１０^-4Ｍ、約１０^-4Ｍ～約１０^-6Ｍ、約１×１０^-4Ｍ～約５×１０^-6Ｍ、約１０^-4Ｍ～約１０^-5Ｍまたは約１０^-5Ｍ～約１０^-6Ｍである。

【0073】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤が、標的ＭＵＣ１６（例えば、細胞表面に結合したＭＵＣ１６）を高結合親和性で特異的に認識し、非標的に低結合親和性で結合することを言及する場合には、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、標的ＭＵＣ１６（例えば、細胞表面に結合したＭＵＣ１６）に、約１０^-7Ｍ～約１０^-13Ｍ（例えば、約１０^-7Ｍ～約１０^-13Ｍ、約１０^-9Ｍ～約１０^-13Ｍまたは約１０^-10Ｍ～約１０^-12Ｍ）のＫ_dで結合するであろう、また非標的に、約１０^-1Ｍ～約１０^-6Ｍ（例えば、約１０^-1Ｍ～約１０^-6Ｍ、約１０^-1Ｍ～約１０^-5Ｍまたは約１０^-2Ｍ～約１０^-4Ｍ）のＫ_dで結合するであろう。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤が細胞表面に結合したＭＵＣ１６を特異的に認識することを言及する場合には、抗ＭＵＣ１６抗体剤の結合親和性は、対照抗ＭＵＣ１６抗体剤に対して比較される。一部の実施形態では、対照抗ＭＵＣ１６抗体剤と細胞表面に結合したＭＵＣ１６の間の結合のＫ_dは、本明細書において記載される抗ｎＭＵＣ１６抗体剤と細胞表面に結合したＭＵＣ１６の間の結合のＫ_dの少なくとも約２倍、例えば、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１０～１００倍、約１００～１０００倍、約１０³～１０⁴倍、約１０⁴～１０⁵倍、約１０⁵～１０⁶倍、約１０⁶～１０⁷倍、約１０⁷～１０⁸倍、約１０⁸～１０⁹倍、約１０⁹～１０¹⁰倍、約１０¹⁰～１０¹¹倍または約１０¹¹～１０¹²倍であり得る。

【0074】

抗ＭＵＣ１６抗体剤の機能的活性
ある特定の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、ＭＵＣ１６ポリペプチドを組換え発現する細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤を阻害する。一部の実施形態では、ＭＵＣ１６は、配列番号２５（ＭＵＣ１６ ｃ１１４）を含む。ある特定の実施形態では、グリコシル化されたＭＵＣ１６ ｃ１１４を組換え発現する細胞は、ＳＫＯＶ３細胞である。ある特定の実施形態では、ＭＵＣ１６ポリペプチドは、グリコシル化される。ある特定の実施形態では、ＭＵＣ１６ポリペプチドのグリコシル化形態は、アミノ酸残基Ａｓｎ３０（成熟ＭＵＣ１６（配列番号１）のＡｓｎｌ８０６に対応する）でＮグリコシル化である。ある特定の実施形態では、ＭＵＣ１６ポリペプチドは、アミノ酸残基Ａｓｎ２４およびＡｓｎ３０（成熟ＭＵＣ１６（配列番号１）のそれぞれＡｓｎｌ８００およびＡｓｎｌ８０６に対応する）でＮグリコシル化される。ある特定の実施形態では、ＭＵＣ１６ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸残基Ａｓｎ１、Ａｓｎ２４およびＡｓｎ３０（Yin and Lloyd (2001) J Biol Chem 276: 27371-27375では、それぞれＡｓｎ１７７７、Ａｓｎ１８００およびＡｓｎ１８０６とも呼ばれる）でＮグリコシル化される。ある特定の実施形態では、グリコシル化は、Ｎ結合型キトビオースを含む。ある特定の実施形態では、グリコシル化は、Ｎ結合型キトビオースからなる。ある特定の実施形態では、Ｍａｔｒｉｇｅｌ浸潤は、対照抗体（例えば、ＭＵＣ１６を標的としない抗体）を用いて処置された細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤と比較して、少なくとも１．２５、１．５、１．７５、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍阻害される。ある特定の実施形態では、Ｍａｔｒｉｇｅｌ浸潤は、対照抗体（例えば、ＭＵＣ１６を標的としない抗体）を用いて処置された細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでのＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤と比較して、約１．２５、１．５、１．７５、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍阻害される。

【0075】

Ｍａｔｒｉｇｅｌ浸潤のＭＵＣ１６抗ＭＵＣ１６抗体剤または抗原結合性断片によって媒介される阻害を決定するアッセイは、当業者に公知である。例えば、ＢＤ ＢｉｏＣｏａｔ（商標）Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）浸潤インサートまたはチャンバー（２４ウェルプレート中のカタログ番号３５４４８０）および対照インサート（２４ウェルプレート中のカタログ番号３５４５７８）は、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＭＡから購入できる。Ｍａｔｒｉｇｅｌ浸潤アッセイは、製造業者のプロトコールのとおりに実施され得る。手短には、２４ウェルプレート中のＭａｔｒｉｇｅｌチャンバー（－２０℃で保存された）および対照インサート（４℃で保存された）は、室温に戻される。両インサートは、インサートにおいて、ならびに２４ウェルプレートの外側のウェルにおいて、３７℃ ５％ ＣＯ₂加湿インキュベーターで２時間、０．５ｍＬの血清不含培地で再水和される。培養されたＳＫＯＶ３細胞は、トリプシン処理され、培養培地で洗浄される。１００万個の細胞が別の遠心管中に分けられ、血清不含培地で３回洗浄される。これらの細胞は、０．５ｍＬの血清不含培地中で５，０００個の細胞を与えるように後に調整される。再水和されたインサート中の培地が除去され、インサートは、ウェル中に０．７５ｍＬの、化学誘引物質として働く１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有培養培地を含有する新しい２４ウェルプレート中に移された。直ちに、血清不含培地中の０．５ｍＬの細胞（５，０００個細胞）がインサートに付加される。インサートおよび外側のウェル中に気泡が閉じ込められないことを確かめるために適切な注意が払われる。２４ウェルプレートは、３７℃ ５％ ＣＯ２加湿インキュベーター中で４８時間インキュベートされる。インキュベーション後、綿棒をＭａｔｒｉｇｅｌまたは対照インサート中に挿入し、綿棒の先端を膜表面上で動かしながら穏やかに圧力を加えることによって「こすり洗い」することにより、膜の上側表面から非浸潤細胞が除去される。培地で湿らせた第２の綿棒を用いてこすり洗いが反復される。次いで、インサートは、０．５ｍＬの蒸留水中の０．５％クリスタルバイオレット染色液を含有する新しい２４ウェルプレートにおいて３０分間染色される。染色後、インサートは、過剰の染色液を除去するために３ビーカーの蒸留水ですすがれる。インサートは、新しい２４ウェルプレート中で風乾される。浸潤した細胞は、２００×の倍率の倒立顕微鏡下で手作業でカウントされる。３連の膜のいくつかの視野がカウントされ、図中に記録された。

【0076】

ある特定の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、マウスモデル研究において転移を阻害または低減可能であり、腫瘍成長を阻害可能であり、または腫瘍退縮を誘導可能である。例えば、腫瘍細胞系を、胸腺欠損ヌードマウスに導入することができ、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片を１回または複数回胸腺欠損マウスに投与することができ、数週間および／または数か月の期間にわたって注射された腫瘍細胞の腫瘍進行をモニタリングすることができる。一部の場合には、胸腺欠損ヌードマウスへの抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片の投与は、腫瘍細胞系の導入の前に生じてもよい。ある特定の実施形態では、ＭＵＣ１６ ｃ１１４を発現するＳＫＯＶ３細胞は、本明細書において記載されるマウス異種移植モデルのために利用される。

【0077】

一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、偽処置マウスと比較して、本明細書において記載されるか、または当業者に公知の方法によって評価されるように、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％まで、マウスモデルにおいて腫瘍成長を阻害するか、または腫瘍退縮を誘導する。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、偽処置マウスと比較して、本明細書において記載されるか、または当業者に公知の方法によって評価されるように、少なくとも約２５％または３５％まで）、任意に約７５％まで、マウスモデルにおいて腫瘍成長を阻害するか、または腫瘍退縮を誘導する。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、偽処置マウスと比較して、本明細書において記載されるか、または当業者に公知の方法によって評価されるように、少なくとも約１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍または１００倍まで、マウスモデルにおいて腫瘍成長を阻害するか、または腫瘍退縮を誘導する。偽処置マウスは、例えば、リン酸緩衝生理食塩水または対照（例えば、抗ＩｇＧ抗体）で処置され得る。

【0078】

腫瘍成長阻害または腫瘍退縮を決定することは、例えば、一定期間にわたって腫瘍の大きさをモニタリングすることによって、例えば、触知可能な腫瘍の物理的測定または他の視覚的検出法によって評価され得る。例えば、腫瘍細胞系は、可視化剤、例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）またはルシフェラーゼを組換え発現するように作製されてもよく、次いで、顕微鏡検査によってＧＦＰのｉｎ ｖｉｖｏ可視化を実施してもよく、また異種移植マウスにルシフェラーゼ基質を投与すること、およびルシフェラーゼ基質をプロセシングするルシフェラーゼ酵素による発光を検出することによってルシフェラーゼのｉｎ ｖｉｖｏ可視化を実施してもよい。ＧＦＰまたはルシフェラーゼの検出の程度またはレベルは、異種移植マウスにおける腫瘍の大きさと相関する。

【0079】

ある特定の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、偽処置マウスと比較して腫瘍異種移植モデルにおける動物の生存を増大し得る。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、偽処置マウスと比較して、本明細書において記載されるか、または当業者に公知の方法によって評価されるように、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％まで、腫瘍異種移植モデルにおけるマウスの生存を増大する。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、腫瘍異種移植モデルにおいて偽処置マウスと比較して、本明細書において記載されるか、または当業者に公知の方法によって評価されるように、少なくとも約２５％または３５％まで、任意で、約７５％）まで、腫瘍異種移植モデルにおいてマウスの生存を増大する。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、腫瘍異種移植モデルにおいて偽処置マウスと比較して、本明細書において記載されるか、または当業者に公知の方法によって評価されるように、少なくとも約１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍または１００倍まで、腫瘍異種移植モデルにおいてマウスの生存を増大する。生存は、例えば、腫瘍細胞系注射後の時間（例えば、日または週）に対する生存マウス数の生存曲線をプロットすることによって決定され得る。偽処置マウスは、例えば、リン酸緩衝生理食塩水または対照（例えば、抗ＩｇＧ抗体）を用いて処置され得る。

【0080】

ある特定の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、細胞を、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片と接触させるとＭＵＣ１６ポリペプチドを発現する細胞中に内部移行される。「内部移行された」または「内部移行」とは、細胞によって内部移行される分子へ言及する場合には、細胞膜の細胞外表面と接触している分子の、細胞膜を通る細胞膜の細胞内表面への、および／または細胞の細胞質中への通過を指す。ある特定の実施形態では、グリコシル化されたＭＵＣ１６ ｃ１１４を組換え発現する細胞は、ＳＫＯＶ３細胞である。ある特定の実施形態では、ＭＵＣ１６ ｃ１１４のグリコシル化形態は、例えば、配列番号２５のＡｓｎ１、Ａｓｎ２４およびＡｓｎ３０（Yin and Lloyd (2001) J Biol Chem 276: 27371-27375における、それぞれＡｓｎ１７７７、Ａｓｎ１８００およびＡｓｎ１８０６とも呼ばれる）でＮグリコシル化される。ある特定の実施形態では、グリコシル化は、Ｎ結合型キトビオースを含む。ある特定の実施形態では、グリコシル化は、Ｎ結合型キトビオースからなる。

【0081】

例えば、放射標識された抗体を使用するといった、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片の、細胞への内部移行を決定するアッセイは、当業者に公知である。例えば、８９Ｚｒ標識された抗体の内部移行は、ＭＵＣ１６ ｃ１１４を発現するＳＫＯＶ３細胞で調査され得る。手短には、およそ１×１０⁵個細胞が１２ウェルプレートに播種され、３７℃ ５％ ＣＯ₂インキュベーターで一晩インキュベートされる。一定容量の放射標識されたタンパク質が各ウェルに付加され、３７℃および４℃で１、５、１２および２４時間プレートがインキュベートされる。各インキュベーション期間の後、培地が収集され、細胞が１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ですすがれる。細胞を４℃の１ｍＬの１００ｍＭ酢酸および１００ｍＭグリシン（１：１、ｐＨ３．５）で洗浄することによって表面に結合した活性が収集される。次いで、１ｍＬの１Ｍ ＮａＯＨを用いて接着細胞が溶解される。各洗浄物が収集され、活性についてカウントされる。洗浄物すべての総活性に対する最終洗浄物の活性の割合を使用して、内部移行％を決定する。ある特定の実施形態では、アッセイは、３７℃で実施される。ある特定の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片とともにインキュベートされた細胞の少なくとも１、２、３、５、６、７、８、９または１０パーセントにおいて内部移行される。ある特定の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片とともにインキュベートされた細胞の約１、２、３、５、６、７、８、９または１０パーセントにおいて内部移行される。ある特定の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、細胞の抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片との接触の１、２、３、４、８、１２、１６、２０または２４時間以内に内部移行される。

【0082】

核酸
抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片（例えば、抗ＭＵＣ１６抗体、例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）をコードする核酸分子も企図される。一部の実施形態では、本明細書において記載される全長抗ＭＵＣ１６抗体のいずれかまたはその抗原結合性断片を含む全長抗ＭＵＣ１６抗体をコードする核酸（または核酸のセット）が提供される。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤をコードする核酸（または核酸のセット）は、ペプチドタグ（例えば、タンパク質精製タグ、例えば、Ｈｉｓ－タグ、ＨＡタグ）をコードする核酸配列をさらに含み得る。
また、抗ＭＵＣ１６抗体剤を含む単離された宿主細胞、抗ＭＵＣ１６抗体剤のポリペプチド構成成分をコードする単離された核酸または本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤のポリペプチド構成成分をコードする核酸を含むベクターが、本明細書において企図される。
本出願はまた、これらの核酸配列のバリアントを含む。例えば、バリアントは、抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、抗ＭＵＣ１６抗体、例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）、その抗原結合性断片または本出願の抗ＭＵＣ１６抗体部分をコードする核酸配列と、少なくとも中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。

【0083】

本発明はまた、本発明の核酸が挿入されるベクターを提供する。
手短に要約すると、抗ＭＵＣ１６抗体剤をコードする天然または合成核酸による抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片の発現は、核酸が、例えば、プロモーター（例えば、リンパ球特異的プロモーター）および３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む５’および３’調節エレメントに作動可能に連結されるように、核酸を適当な発現ベクターに挿入することによって達成され得る。ベクターは、真核生物宿主細胞における複製および組込みにとって適したものであり得る。通常のクローニングおよび発現ベクターは、所望の核酸配列の発現の調節のために有用な転写および翻訳ターミネーター、開始配列およびプロモーターを含有する。
本発明の核酸はまた、標準遺伝子送達プロトコールを使用する核酸免疫処置および遺伝子療法のために使用され得る。遺伝子送達のための方法は、当技術分野で公知である。例えば、その全文で参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，３９９，３４６号、同５，５８０，８５９号、同５，５８９，４６６号を参照されたい。一部の実施形態では、本発明は、遺伝子療法ベクターを提供する。

【0084】

核酸は、いくつかの種類のベクター中にクローニングされ得る。例えば、核酸は、それだけには限らないが、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルスおよびコスミドを含むベクター中にクローニングされ得る。特に目的のベクターとして、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクターおよびシーケンシングベクターが挙げられる。
さらに、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は、当技術分野で周知であり、例えば、Green and Sambrook (2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)に、ならびに他のウイルス学および分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用であるウイルスとして、それだけには限らないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスが挙げられる。一般に、適したベクターは、少なくとも１種の生物において機能的である複製起点、プロモーター配列、好都合な制限エンドヌクレアーゼ部位および１種または複数の選択マーカーを含有する（例えば、ＷＯ０１／９６５８４、ＷＯ０１／２９０５８および米国特許第６，３２６，１９３号を参照されたい）。

【0085】

哺乳動物細胞への遺伝子導入のためにいくつかのウイルスベースの系が開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための好都合なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子は、当技術分野で公知の技術を使用してベクター中に挿入、レトロウイルス粒子にパッケージングされ得る。組換えウイルスは、次いで、単離され、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏのいずれかで対象の細胞に送達され得る。いくつかのレトロウイルス系が当技術分野で公知である。一部の実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。いくつかのアデノウイルスベクターは、当技術分野で公知である。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。レトロウイルス、例えば、レンチウイルスに由来するベクターは、それらが導入遺伝子の長期の安定な組込みおよび娘細胞におけるその増殖を可能にするので長期遺伝子導入を達成するための適したルーツである。レンチウイルスベクターは、それらが非増殖性細胞、例えば、肝細胞を形質導入できるという点でオンコレトロウイルス、例えば、マウス白血病ウイルス由来のベクターを上回る付加された利点を有する。それらはまた、低い免疫原性という付加された利点を有する。
さらなるプロモーターエレメント、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。通常、これらは、開始部位の３０～１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、いくつかのプロモーターは最近、同様の開始部位の下流に機能的エレメントを含有するとわかった。プロモーターエレメント間の間隔はしばしば柔軟であり、その結果、エレメントが互いに対して逆転されるか、または移動される場合にプロモーター機能が示される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、プロモーターエレメント間の間隔は、５０ｂｐ離れるところまで増大することができ、その後、活性が低下し始める。

【0086】

適したプロモーターの一例として、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列がある。このプロモーター配列は、それに作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動可能な強力な構成プロモーター配列である。適したプロモーターの別の例として、伸長増殖因子－１α（ＥＦ－１α）がある。しかし、それだけには限らないが、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳がんウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長い末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、鳥類白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン－バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーターならびにヒト遺伝子プロモーター、例えば、それだけには限らないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーターおよびクレアチンキナーゼプロモーターを含む他の構成プロモーター配列も使用され得る。さらに、本発明は、構成プロモーターの使用に制限されてはならない。誘導プロモーターも本発明の一部として企図される。誘導プロモーターの使用は、このような発現が望まれる場合に作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列の発現をオンにすることが可能な、または発現が望まれない場合に発現をオフにすることが可能な分子スイッチを提供する。誘導プロモーターの例として、それだけには限らないが、メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーターおよびテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤の発現は、誘導可能である。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤をコードする核酸配列は、本明細書において記載される任意の誘導プロモーターを含む誘導プロモーターに作動可能に連結される。

【0087】

誘導プロモーター
誘導プロモーターの使用は、このような発現が望まれる場合に作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列の発現をオンにすることが可能な、または発現が望まれない場合に発現をオフにすることが可能な分子スイッチを提供する。真核細胞において使用するための例示的誘導プロモーター系として、それだけには限らないが、ホルモン調節性エレメント（例えば、Mader, S. and White, J. H. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5603-5607 (1993)を参照されたい）、合成リガンド調節性エレメント（例えば、Spencer, D. M. et al 1993) Science 262: 1019-1024を参照されたい）および電離放射線調節性エレメント（例えば、Manome, Y. et al., Biochemistry 32: 10607-10613 (1993)、Datta, R. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 1014- 10153 (1992)）が挙げられる。ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで哺乳動物系において使用するためのさらなる例示的誘導プロモーター系は、Gingrich et al., Annual Rev. Neurosci 21:377-405 (1998)に概説されている。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤を発現させるために使用するための誘導プロモーター系として、Ｔｅｔ系がある。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤を発現させるために使用するための誘導プロモーター系として、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）に由来するｌａｃレプレッサー系がある。

【0088】

本発明において使用するための例示的誘導プロモーター系として、Ｔｅｔ系がある。このような系は、Gossen et al., (1993)によって記載されるＴｅｔ系に基づいている。例示的実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、１つまたは複数のＴｅｔオペレーター（ＴｅｔＯ）部位を含むプロモーターの制御下にある。不活性状態では、Ｔｅｔレプレッサー（ＴｅｔＲ）は、ＴｅｔＯ部位に結合し、プロモーターからの転写を抑制する。活性状態では、例えば、誘導剤、例えば、テトラサイクリン（Ｔｃ）、アンヒドロテトラサイクリン、ドキシサイクリン（Ｄｏｘ）またはその活性類似体の存在下では、誘導剤は、ＴｅｔＯからのＴｅｔＲの放出を引き起こし、それによって、転写が起こることが可能となる。ドキシサイクリンは、１－ジメチルアミノ－２，４ａ，５，７，１２－ペンタヒドロキシ－１１－メチル－４，６－ジオキソ－１，４ａ，１１，１１ａ，１２，１２ａ－ヘキサヒドロテトラセン－３－カルボキサミドの化学名を有する抗生物質のテトラサイクリンファミリーのメンバーである。

【0089】

一実施形態では、ＴｅｔＲは、哺乳動物細胞、例えば、マウスまたはヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている。ほとんどのアミノ酸は、遺伝暗号の縮重のために２つ以上のコドンによってコードされ、核酸によってコードされるアミノ酸配列の変更を全く伴わない、所与の核酸のヌクレオチド配列の相当な変動が可能となる。しかし、多数の生物は、「コドンバイアス」（すなわち、所与のアミノ酸の特定のコドンの使用についてのバイアス）としても公知のコドン使用の相違を示す。コドンバイアスは、特定のコドンのｔＲＮＡの優勢な種の存在と相関することが多く、これは、次いで、ｍＲＮＡ翻訳の効率を高める。したがって、特定の生物（例えば、原核生物）に由来するコード配列を、コドン最適化によって異なる生物（例えば、真核生物）における発現の改善のために調整することができる。

【0090】

Ｔｅｔ系の他の特定の変種には、以下の「Ｔｅｔ－Ｏｆｆ」および「Ｔｅｔ－Ｏｎ」系が含まれる。Ｔｅｔ－Ｏｆｆ系では、転写は、ＴｃまたはＤｏｘの存在下で不活性である。その系では、単純ヘルペスウイルスに由来するＶＰ１６の強力なトランス活性化ドメインに融合されたＴｅｔＲから構成されるテトラサイクリン制御性トランス活性化因子タンパク質（ｔＴＡ）は、テトラサイクリン応答性プロモーターエレメント（ＴＲＥ）の転写制御下にある標的核酸の発現を調節する。ＴＲＥは、プロモーター（一般に、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）最初期プロモーターに由来する最小プロモーター配列）に融合されたＴｅｔＯ配列コンカテマーで構成されている。ｔＴＡは、ＴｃまたはＤｏｘの不在下でＴＲＥに結合し、標的遺伝子の転写を活性化する。ｔＴＡは、ＴｃまたはＤｏｘの存在下でＴＲＥに結合できず、標的遺伝子からの発現は、不活性のままである。
逆に、Ｔｅｔ－Ｏｎ系では、転写は、ＴｃまたはＤｏｘの存在下で活性である。Ｔｅｔ－Ｏｎ系は、リバーステトラサイクリン制御性トランス活性化因子、ｒｔＴＡに基づいている。ｔＴＡ同様、ｒｔＴＡは、ＴｅｔＲレプレッサーおよびＶＰ１６トランス活性化ドメインから構成される融合タンパク質である。しかし、ＴｅｔＲ ＤＮＡ結合性部分における４つのアミノ酸変化がｒｔＴＡの結合特徴を変更し、その結果、Ｄｏｘの存在下で標的導入遺伝子のＴＲＥ中のｔｅｔＯ配列のみを認識できる。したがって、Ｔｅｔ－Ｏｎ系では、ＴＲＥ調節性標的遺伝子の転写が、Ｄｏｘの存在下でｒｔＴＡのみによって刺激される。

【0091】

別の誘導プロモーター系として、大腸菌由来のｌａｃレプレッサー系がある（Brown et al., Cell 49:603-612 (1987)を参照されたい）。ｌａｃレプレッサー系は、ｌａｃオペレーター（ｌａｃＯ）を含むプロモーターに作動可能に連結した目的のポリヌクレオチドの転写を調節することによって機能する。ｌａｃレプレッサー（ｌａｃＲ）は、ＬａｃＯに結合し、したがって、目的のポリヌクレオチドの転写を妨げる。目的のポリヌクレオチドの発現は、適した誘導剤、例えば、イソプロピル－β－Ｄ－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）によって誘導される。
ポリペプチドまたはその部分の発現を評価するために、細胞中に導入されるべき発現ベクターはまた、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染しているように求められる細胞の集団からの、発現している細胞の同定および選択を促進する選択マーカー遺伝子またはレポーター遺伝子のいずれか、または両方を含有する場合もある。他の態様では、選択マーカーは、ＤＮＡの別々の小片上に保持され、同時トランスフェクション手順で使用される場合もある。選択マーカーおよびレポーター遺伝子の両方とも、宿主細胞における発現を可能にするために適当な調節配列を隣接させることができる。有用な選択マーカーとして、例えば、抗生物質耐性遺伝子、例えば、ｎｅｏなどが挙げられる。

【0092】

レポーター遺伝子は、トランスフェクトされている可能性がある細胞を同定するために、また調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織によって存在しないか、または発現されない、また、その発現がいくつかの容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によって示されるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞中に導入された後、適した時間でアッセイされる。適したレポーター遺伝子には、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌されたアルカリホスファターゼまたは緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子が含まれ得る（例えば、Ui-Tel et al., 2000 FEBS Letters 479: 79-82）。適した発現系は周知であり、公知の技術を使用して調製するか、または商業的に入手できる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小の５’隣接領域を有する構築物は、プロモーターとして同定される。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され、プロモーター駆動性転写をモジュレートする能力について物質を評価するために使用され得る。

【0093】

一部の実施形態では、本明細書において記載される全長抗ＭＵＣ１６抗体のいずれかに従う全長抗ＭＵＣ１６抗体をコードする核酸が提供される。一部の実施形態では、核酸は、全長抗ＭＵＣ１６抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたは複数の核酸配列を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の核酸配列の各々は、別々のベクター中に含有される。一部の実施形態では、核酸配列の少なくとも一部は、同一ベクター中に含有される。一部の実施形態では、核酸配列のすべては、同一ベクター中に含有される。ベクターは、例えば、哺乳動物発現ベクターおよびウイルスベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスに由来するもの）からなる群から選択され得る。
細胞中に遺伝子を導入し、発現させる方法は、当技術分野で公知である。発現ベクターとの関連で、ベクターは、当技術分野における任意の方法によって宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母または昆虫細胞中に容易に導入され得る。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的または生物学的手段によって宿主細胞中に移され得る。

【0094】

宿主細胞中にポリヌクレオチドを導入するための物理的方法として、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、電気穿孔などが挙げられる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を生成する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Green and Sambrook (2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)を参照されたい。一部の実施形態では、宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入は、リン酸カルシウムトランスフェクションによって実施される。
宿主細胞へ目的のポリヌクレオチドを導入するための生物学的方法は、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクター、特に、レトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞中に遺伝子を挿入する最も広く使用される方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルス１、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来するものであり得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号および同５，５８５，３６２号を参照されたい。
宿主細胞中にポリヌクレオチドを導入するための化学的手段として、コロイド分散系、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズならびに水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質ベースの系が挙げられる。ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの送達媒体として使用するための例示的コロイド系として、リポソーム（例えば、人工膜小胞）がある。

【0095】

非ウイルス送達系が利用される場合には、例示的送達媒体は、リポソームである。宿主細胞中に核酸を導入する（ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ）ために脂質製剤の使用が企図される。別の態様では、核酸は、脂質と会合させてもよい。脂質と会合している核酸は、リポソームの水性内部に被包すること、リポソームの脂質二重層内に分散させること、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と会合している連結分子によってリポソームに付着すること、リポソーム中に捕捉すること、リポソームと複合体形成すること、脂質を含有する溶液中に分散させること、脂質と混合すること、脂質と組み合わせること、脂質中に懸濁液として含有すること、ミセルに含有するか、またはミセルと複合体形成すること、または別の方法で脂質と会合することができる。脂質、脂質／ＤＮＡまたは脂質／発現ベクターと会合している組成物は、溶液中で任意の特定の構造に制限されない。例えば、それらは、二層構造で、ミセルとして、または「崩壊した」構造を有して存在し得る。それらはまた、簡単に溶液中に分散させることができ、おそらくは、大きさまたは形状が均一ではない凝集体を形成する。脂質は、天然に存在する脂質または合成脂質であり得る脂肪性物質である。例えば、脂質には、細胞質中に天然に存在する脂肪滴ならびに長鎖脂肪族炭化水素およびその誘導体、例えば、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコールおよびアルデヒドを含有する化合物のクラスが含まれる。

【0096】

宿主細胞中に外因性核酸を導入するための、またはそうではなく、本発明の阻害剤に対して細胞を曝露するために使用される方法に関わらず、宿主細胞における組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、種々のアッセイが実施され得る。このようなアッセイとして、例えば、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、例えば、サザンおよびノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲおよびＰＣＲ、「生化学的」アッセイ、例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）によって、または本発明の範囲内に入る薬剤を同定するための本明細書において記載されるアッセイによって例えば、特定のペプチドの有無を検出することが挙げられる。

【0097】

抗ＭＵＣ１６抗体剤および抗ＭＵＣ１６抗体部分の調製
一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、モノクローナル抗体であるか、またはモノクローナル抗体に由来する。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、モノクローナル抗体に由来するＶ_HおよびＶ_Lドメインまたはそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、モノクローナル抗体に由来するＣ_H１およびＣ_Lドメインまたはそのバリアントをさらに含む。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ法を含む当技術分野で公知の方法を使用して、または組換えＤＮＡ法を使用して調製され得る。さらに、例示的ファージディスプレイ法は、本明細書において、および以下の実施例において記載されている。

【0098】

ハイブリドーマ法では、通常、ハムスター、マウスまたは他の適当な宿主動物が、免疫処置剤を用いて免疫処置されて、免疫処置剤に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生可能であるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫処置される場合もある。免疫処置剤として、目的のタンパク質のポリペプチドまたは融合タンパク質を挙げることができる。一般に、ヒト起源の細胞が望まれる場合には末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用され、または非ヒト哺乳動物供給源が望まれる場合には、脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、リンパ球は、適した融合剤、例えば、ポリエチレングリコールを使用して免疫処置された細胞系と融合されて、ハイブリドーマ細胞を形成する。免疫処置された細胞系は、普通、形質転換された哺乳動物細胞、特に、げっ歯類、ウシおよびヒト起源の骨髄腫細胞である。普通、ラットまたはマウス骨髄腫細胞系が使用される。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、融合されていない不死化された細胞の成長または生存を阻害する１種または複数の物質を含有する適した培養培地中で培養され得る。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合には、ハイブリドーマの培養培地は、通常、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン（「ＨＡＴ培地」）を含み、これは、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる。

【0099】

一部の実施形態では、不死化細胞系は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル発現を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に対して感受性である。一部の実施形態では、不死化細胞系は、マウス骨髄腫系であり、これは、例えば、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、カリフォルニア州、サンディエゴおよびＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、バージニア州、マナサスから入手できる。ヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞系もヒトモノクローナル抗体の生成のために記載されている。
ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、次いで、ポリペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイされ得る。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）によって決定され得る。このような技術およびアッセイは、当技術分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)のスキャッチャード解析法によって決定され得る。

【0100】

所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンは、制限希釈手順によってサブクローニングされ、標準方法によって増殖され得る。Goding、前掲。この目的のための適した培養培地として、例えば、「ダルベッコ改変イーグル培地」およびＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物において腹水としてｉｎ ｖｉｖｏで増殖され得る。
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば、プロテインＡ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティークロマトグラフィーなどによって培養培地からまたは腹水から単離または精製され得る。

【0101】

一部の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤のいずれかによれば、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、抗体ライブラリー（例えば、ｓｃＦｖまたはＦａｂ断片を提示するファージライブラリー）から選択されたクローンに由来する配列を含む。クローンは、所望の活性（単数または複数）を有する抗体断片についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって同定され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し、所望の結合特徴を有する抗体についてこのようなライブラリーをスクリーニングするためのさまざまな方法が当技術分野で公知である。このような方法は、例えば、Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, N.J., 2001)に概説されており、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991)、Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)、Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003)、Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)、Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)、Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)およびLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)にさらに記載されている。

【0102】

ある特定のファージディスプレイ方法では、Winter et al., Ann. Rev. Immunol.、12: 433-455 (1994)に記載されるように、Ｖ_HおよびＶ_L遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー中でランダムに組換えられ、これが、次いで、抗原結合性ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、通常、抗体断片をｓｃＦｖ断片として、またはＦａｂ断片のいずれかとしてディスプレイする。免疫処置された供給源から得られたライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なく免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)によって記載されるように、免疫処置を全く伴わずに広範囲の非自己および自己抗原に対する抗体の単一供給源を提供するナイーブレパートリーがクローニングされ得る（例えば、ヒトから）。最後に、ナイーブライブラリーはまた、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)によって記載されるように、幹細胞から再構成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再構成を達成することによって合成によって作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許刊行物として、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号および米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同２００５／０１１９４５５号、同２００５／０２６６０００号、同２００７／０１１７１２６号、同２００７／０１６０５９８号、同２００７／０２３７７６４号、同２００７／０２９２９３６号および同２００９／０００２３６０号が挙げられる。

【0103】

抗ＭＵＣ１６抗体剤は、ファージディスプレイを使用して、標的ＭＵＣ１６（例えば、ｎＭＵＣ１６）に対して特異的な抗ＭＵＣ１６抗体部分についてライブラリーをスクリーニングして調製され得る。ライブラリーは、少なくとも１×１０⁹（例えば、少なくとも約１×１０⁹、２．５×１０⁹、５×１０⁹、７．５×１０⁹、１×１０¹⁰、２．５×１０¹⁰、５×１０¹⁰、７．５×１０¹⁰または１×１０¹¹のいずれか）の固有のヒト抗体断片の多様性を有するヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーであり得る。一部の実施形態では、ライブラリーは、すべてのヒト重鎖および軽鎖サブファミリーを包含する、健常ドナーから得たヒトＰＭＢＣおよび脾臓から抽出されたＤＮＡから構築されたナイーブヒトライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、種々の疾患を有する患者、例えば、自己免疫疾患を有する患者、がん患者および感染性疾患を有する患者から単離されたＰＢＭＣから抽出されたＤＮＡから構築されたナイーブヒトライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、半合成ヒトライブラリーであり、重鎖ＣＤＲ３は、完全にランダム化されており、すべてのアミノ酸（システインを除く）は、任意の所与の位置に等しく存在する可能性が高い（例えば、Hoet, R.M. et al., Nat. Biotechnol. 23(3):344-348, 2005を参照されたい）。一部の実施形態では、半合成ヒトライブラリーの重鎖ＣＤＲ３は、約５～約２４（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４のいずれか）個のアミノ酸長を有する。一部の実施形態では、ライブラリーは、完全合成ファージディスプレイライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、非ヒトファージディスプレイライブラリーである。

【0104】

標的ＭＵＣ１６（例えば、ｎＭＵＣ１６）に高親和性で結合するファージクローンは、ファージの、固相支持体（例えば、溶液パニングのためのビーズまたは細胞パニングのための哺乳動物細胞など）結合した標的ＭＵＣ１６への反復性結合と、それに続く、結合していないファージの除去および特異的に結合したファージの溶出によって選択され得る。次いで、結合したファージクローンは溶出され、発現および精製のために適当な宿主細胞、例えば、大腸菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅに感染させるために使用される。細胞パニングの一例では、細胞表面でＭＵＣ１６を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞が、ファージライブラリーと混合され、その後、細胞が収集され、結合したクローンが溶出され、発現および精製のために適当な宿主細胞に感染させるために使用される（すべて実施例を参照されたい）。パニングは、標的ＭＵＣ１６に特異的に結合するファージクローンについて濃縮するために、溶液パニング、細胞パニングまたは両方の組合せを用いて複数（例えば、約２、３、４、５、６またはそれより多くのいずれか）ラウンドについて実施され得る。濃縮されたファージクローンは、例えば、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳを含む当技術分野で公知の任意の方法によって標的ＭＵＣ１６への特異的結合について試験され得る。

【0105】

モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ法、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されたものによって作製され得る。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、シーケンシングされ得る。上記のようなハイブリドーマ細胞または本発明のＭＵＣ１６特異的ファージクローンは、このようなＤＮＡの供給源として働き得る。一度単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター中に入れることができ、これは、次いで、そうでなければ、免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成が得られる。ＤＮＡはまた、例えば、相同非ヒト配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインおよび／もしくはフレームワーク領域のコード配列を置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison et al., 前掲）、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列のすべてもしくは一部を共有結合によって接合することによって修飾され得る。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体剤の定常ドメインと置換され得る、または、本発明の抗体剤の１つの抗原結合部位の可変ドメインと置換されて、キメラ二価抗体剤を作出できる。

【0106】

抗体は、一価抗体であり得る。一価抗体を調製する方法は、当技術分野で公知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖および修飾された重鎖の組換え発現を含む。重鎖は、重鎖架橋を防ぐために一般にＦｃ領域中の任意の点で末端切断される。あるいは、架橋を防ぐために、関連システイン残基が、別のアミノ酸残基と置換されるか、または欠失される。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ法も一価抗体を調製するのに適している。その断片、特に、Ｆａｂ断片を生成するための抗体の消化は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して達成され得る。
所望の結合特異性（抗体抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとである。一部の実施形態では、軽鎖結合にとって必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）は、融合物のうち少なくとも１つに存在する。免疫グロブリン重鎖融合物を、および必要に応じて免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクター中に挿入され、適した宿主生物中に同時トランスフェクされる。

【0107】

ヒトおよびヒト化抗体
抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片は、ヒト化抗体剤またはヒト抗体剤であり得る。非ヒト（例えば、マウス）抗体部分のヒト化形態は、通常、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、ｓｃＦｖまたは他の抗体の抗原結合性部分配列）である。ヒト化抗体部分は、レシピエントのＣＤＲに由来する残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラットまたはウサギのＣＤＲに由来する残基によって置き換えられている、ヒト免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（レシピエント抗体）を含む。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体部分はまた、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンのそれらに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のそれらである、少なくとも１つの、通常、２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み得る。

【0108】

一般に、ヒト化抗体剤は、非ヒトである供給源に由来する、それに導入された１個または複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「移入」残基と呼ばれることが多く、通常、「移入」可変ドメインから取られる。一部の実施形態によれば、ヒト化は、げっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列と置換することによって、本質的に、Winterおよび共同研究者の方法（Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986)、Riechmann et al., Nature、332: 323-327 (1988)、Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)）に従って実施され得る。したがって、このような「ヒト化」抗体部分は、実質的に無傷のヒト可変ドメイン未満が非ヒト種由来の対応する配列によって置換されている抗体部分である（米国特許第４，８１６，５６７号）。実際には、ヒト化抗体部分は、通常、一部のＣＤＲ残基およびおそらくは一部のＦＲ残基がげっ歯類抗体中の類似の部位に由来する残基によって置換されているヒト抗体部分である。

【0109】

ヒト化の代替法として、ヒト抗体部分が作製され得る。例えば、免疫処置の際に、内因性免疫グロブリン産生の不在下で、ヒト抗体の全レパートリーを産生可能であるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生成することが現在可能である。例えば、マウスにおけるキメラおよび生殖系列突然変異体中の抗体重鎖接合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失が、内因性抗体産生の完全阻害をもたらすということが記載されている。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの、このような生殖系列突然変異体マウスへの導入は、抗原曝露の際にヒト抗体の産生をもたらす。例えば、Jakobovits et al., PNAS USA, 90:2551 (1993)、Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993)、Bruggemann et al., Year in Immunol., 7:33 (1993)、米国特許第５，５４５，８０６号、同５，５６９，８２５号、同５，５９１，６６９号、同５，５４５，８０７号およびＷＯ９７／１７８５２を参照されたい。あるいは、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、トランスジェニック動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されているマウス中に導入することによって作製され得る。曝露すると、遺伝子再構成、アセンブリーおよび抗体レパートリーを含むあらゆる点でヒトにおいて見られるものと密接に似ているヒト抗体産生が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、同５，５４５，８０６号、同５，５６９，８２５号、同５，６２５，１２６号、同５，６３３，４２５号および同５，６６１，０１６号ならびにMarks et al., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)、Lonberg et al., Nature, 368: 856-859 (1994)、Morrison, Nature, 368: 812-813 (1994)、Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14: 845-851 (1996)、Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826 (1996)、Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93 (1995)に記載されている。

【0110】

ヒト抗体剤はまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏ活性化されたＢ細胞によって（米国特許第５，５６７，６１０号および同５，２２９，２７５号を参照されたい）またはファージディスプレイライブラリーを含む当技術分野で公知の種々の技術を使用することによって生成され得る。Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)、Marks et al.、J. Mol. Biol.、222:581 (1991)。Cole et al.およびBoerner et al.の技術も、ヒトモノクローナル抗体の調製のために利用可能である。Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) and Boerner et al., J. Immunol., 147(1): 86-95 (1991)。

【0111】

抗ＭＵＣ１６抗体剤バリアント
一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）のアミノ酸配列バリアントまたはその抗原結合性断片が企図される。例えば、抗体剤の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することは望ましいものであり得る。抗体剤のアミノ酸配列バリアントは、抗体剤をコードするヌクレオチド配列中に適当な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。このような修飾は、例えば、抗体剤のアミノ酸配列内の残基からの欠失および／またはそれへの挿入および／またはその置換を含む。最終構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合性を有するという条件で、最終構築物に到達するために欠失、挿入および置換の任意の組合せを行うことができる。

【0112】

一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗ＭＵＣ１６抗体剤バリアントが提供される。置換性突然変異誘発の目的の部位として、ＨＶＲおよびＦＲが挙げられる。アミノ酸置換は、目的の抗体剤中に導入され、生成物は、所望の活性、例えば、抗原結合性の保持／改善、免疫原性の低下またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善についてスクリーニングされ得る。

【0113】

保存的置換は、以下の表４に示されている。

【0114】

【表3】

アミノ酸は、共通の側鎖特性に従って異なるクラスにグループ化され得る：疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを、別のクラスと交換することを含む。
例示的置換性バリアントとして、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して好都合に生成され得る親和性成熟抗体剤がある。手短には、１個または複数のＣＤＲ残基が突然変異され、バリアント抗体部分が、ファージ上にディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲにおいて変更（例えば、置換）が行われてもよい。このような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセスの際に高頻度で突然変異を起こすコドンによってコードされる残基（例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照されたい）および／または特異性決定残基（ＳＤＲ）において行われる場合があり、得られたバリアントＶ_HまたはＶ_Lは、結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築すること、およびそれから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Hoogenboom et al., in Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001).)に記載されている。

【0115】

親和性成熟の一部の実施形態では、さまざまな方法のいずれか（例えば、エラー－プローンＰＣＲ、鎖シャッフリングまたはオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）によって成熟について選択された可変遺伝子中に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリーが作出される。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体剤バリアントを同定する。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）がランダム化されるＨＶＲ指定アプローチを含む。抗原結合性に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデリングを使用して特異的に同定され得る。ＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３は、特に標的化されることが多い。

【0116】

一部の実施形態では、置換、挿入または欠失は、このような変更が、抗体剤の、抗原に結合する能力を実質的に低減しない限り、１つまたは複数のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、ＨＶＲにおいて結合親和性を実質的に低減しない保存的変更（例えば、本明細書において提供されるような保存的置換）が行われてもよい。このような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側である場合もある。上記で提供されるバリアントＶＨおよびＶＬ配列の一部の実施形態では、各ＨＶＲは、変更されないか、または、１つ以下、２つ以下または３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
突然変異誘発のために標的化され得る抗体剤の残基または領域を同定する有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085に記載されるように「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基または標的残基の群（例えば、電荷を有する残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕ）が同定され、中性または負電荷を有するアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体剤の抗原との相互作用が影響を受けるか否かを決定する。最初の置換に対して機能的感受性を実証するアミノ酸位置に、さらなる置換が導入される場合もある。あるいは、またはさらに、抗体剤と抗原の間の接触点を同定するために、抗原－抗体剤複合体の結晶構造が決定され得る。このような接触残基および隣接する残基は、置換の候補として標的化または排除され得る。バリアントは、スクリーニングされて、それらが所望の特性を含有するか否かが決定され得る。

【0117】

アミノ酸配列挿入は、１個の残基～１００個またはそれより多い残基を含有するポリペプチドの長さの範囲のアミノ－および／またはカルボキシル－末端融合物ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体剤が挙げられる。抗体剤分子の他の挿入性バリアントとして、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの）または抗体剤の血清半減期を増大するポリペプチドへの、抗体剤のＮ－またはＣ－末端への融合が挙げられる。

【0118】

Ｆｃ領域バリアント
一部の実施形態では、本明細書において提供される抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体または抗ＭＵＣ１６Ｆｃ融合タンパク質）のＦｃ領域中に１つまたは複数のアミノ酸修飾が導入され、それによって、Ｆｃ領域バリアントが生成され得る。一部の実施形態では、Ｆｃ領域バリアントは、増強されたＡＤＣＣエフェクター機能を有し、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）への結合と関連することが多い。一部の実施形態では、Ｆｃ領域バリアントは、低下したＡＤＣＣエフェクター機能を有する。エフェクター機能を変更し得るＦｃ配列の変化または突然変異の多数の例がある。例えば、ＷＯ００／４２０７２およびShields et al., J Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)には、ＦｃＲへの結合が改善または減少された抗体バリアントが記載されている。それら刊行物の開示内容は、参照により本明細書に明確に組み込まれる。

【0119】

抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）は、腫瘍細胞に対する治療抗体の作用機序である。ＡＤＣＣは、免疫系のエフェクター細胞が、標的細胞（例えば、がん細胞）を活発に溶解し、その膜表面抗原が特異的抗体（例えば、抗ＭＵＣ１６抗体）によって結合している細胞媒介性免疫防御である。通常のＡＤＣＣは、抗体によるＮＫ細胞の活性化を含む。ＮＫ細胞は、Ｆｃ受容体であるＣＤ１６を発現する。この受容体は、標的細胞の表面に結合した抗体のＦｃ部分を認識し、結合する。ＮＫ細胞の表面上の最も一般的なＦｃ受容体は、ＣＤ１６またはＦｃγＲＩＩＩと呼ばれる。抗体のＦｃ領域へのＦｃ受容体の結合は、ＮＫ細胞活性化、細胞溶解性顆粒の放出および結果として標的細胞アポトーシスをもたらす。腫瘍細胞死滅へのＡＤＣＣの寄与は、高親和性ＦｃＲでトランスフェクトされているＮＫ－９２細胞を使用する特異的試験を用いて測定され得る。結果は、ＦｃＲを発現しない野生型ＮＫ－９２細胞に対して比較される。

【0120】

一部の実施形態では、本発明は、一部であるが、すべてではないエフェクター機能を有するＦｃ領域を含み、これによって、ｉｎ ｖｉｖｏで抗ＭＵＣ１６抗体剤の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば、ＣＤＣおよびＡＤＣＣ）は不要であるか、または有害である適用の望ましい候補になる抗ＭＵＣ１６抗体剤バリアント（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体バリアント）を企図する。ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害性アッセイが実施され得る。例えば、抗体剤がＦｃγＲ結合（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）を欠くが、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確実にするために、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイが実施され得る。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの限定されない例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照されたい）およびHellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)、米国特許第５，８２１，３３７号（Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射活性アッセイ法が使用され得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射活性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ． Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（商標）非放射活性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）を参照されたい。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞として、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Clynes et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)において開示されるものなどの動物モデルにおいて評価され得る。抗体剤がＣ１ｑに結合できず、したがって、ＣＤＣ活性を欠くことを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイもまた実施され得る。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合性ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイは、実施され得る（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)、Cragg, M. S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003)およびCragg, M. S. and M. J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照されたい）。当技術分野で公知の方法を使用してＦｃＲｎ結合性およびｉｎ ｖｉｖｏクリアランス／半減期決定も実施され得る（例えば、Petkova, S. B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照されたい）。

【0121】

エフェクター機能が低減された抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９のうち１個または複数の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ突然変異体には、残基２６５および２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７および３２７のうち２つまたはそれより多くに置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
ＦｃＲへの結合が改善または減少されたある特定の抗体剤バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２およびShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照されたい。）

【0122】

一部の実施形態では、ＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域を含む抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）バリアントが提供される。一部の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、置換がバリアントＦｃ領域の２９８、３３３、および／または３３４位においてである（残基のＥＵ番号付け）、ＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）バリアントは、そのバリアントＦｃ領域中に以下のアミノ酸置換：Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３ＡおよびＫ３３４Ａを含む。

【0123】

一部の実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２およびIdusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に記載されるように、変更された（すなわち、改善されたまたは減少されたのいずれか）Ｃ１ｑ結合性および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす変更は、Ｆｃ領域において行われる。
一部の実施形態では、半減期を増大し、および／または新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域を含む抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）バリアントが提供される。半減期が増大され、ＦｃＲｎへの結合が改善された抗体は、ＵＳ２００５／００１４９３４（Hinton et al.）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する、１つまたは複数の置換を中に有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃバリアントには、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４または４３４のうち１つまたは複数での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものが含まれる。
Ｆｃ領域バリアントの他の例に関するDuncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
本明細書において記載されたＦｃバリアントのいずれかまたはそれらの組合せを含む抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）が企図される。

【0124】

グリコシル化バリアント
一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片は、抗ＭＵＣ１６抗体剤がグリコシル化される程度を増大または減少するように変更される。抗ＭＵＣ１６抗体剤へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作出または除去されるように、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはそのポリペプチド部分のアミノ酸配列を変更することによって好都合に達成され得る。
抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片が、Ｆｃ領域を含む場合には、それに付着された炭水化物も変更され得る。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、通常、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合によって一般に付着される分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Wright et al., TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照されたい。オリゴ糖には、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸ならびに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」中のＧｌｃＮＡｃに付着されたフコースが含まれ得る。一部の実施形態では、ある特定の改善された特性を有する抗ＭＵＣ１６抗体剤バリアントを作出するために、本発明の抗ＭＵＣ１６抗体剤におけるオリゴ糖の修飾が行われる場合がある。

【0125】

ＦｃのＣＨ２ドメインに付着されたＮ－グリカンは、不均一である。ＣＨＯ細胞において生成された抗体またはＦｃ融合タンパク質は、フコシルトランスフェラーゼ活性によってフコシル化される。Shoji-Hosaka et al., J. Biochem. 140:777- 83 (2006)を参照されたい。普通、ヒト血清において少ないパーセンテージの天然に存在する無フコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）ＩｇＧが検出され得る。ＦｃのＮ－グリコシル化は、ＦｃγＲへの結合にとって重要であり、Ｎ－グリカンの無フコシル化は、ＦｃγＲＩＩＩａへのＦｃの結合能を増大する。増大されたＦｃγＲＩＩＩａ結合は、ＡＤＣＣを増強でき、これは、細胞傷害性が望ましいある特定の抗体剤治療適用において有利であり得る。

【0126】

一部の実施形態では、増強されたエフェクター機能は、Ｆｃ媒介性細胞傷害性が望ましくない場合有害であり得る。一部の実施形態では、Ｆｃ断片またはＣＨ２ドメインは、グリコシル化されない。一部の実施形態では、ＣＨ２ドメイン中のＮ－グリコシル化部位は、グリコシル化から防ぐために突然変異される。
一部の実施形態では、Ｆｃ領域に付着している炭水化物構造が、低減されたフコースを有するか、またはフコースを欠き、それがＡＤＣＣ機能を改善し得るＦｃ領域を含む抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）バリアントが提供される。具体的には、野生型ＣＨＯ細胞において産生された同一抗ＭＵＣ１６抗体剤上のフコースの量と比較して低減されたフコースを有する抗ＭＵＣ１６抗体剤が本明細書において企図される。すなわち、それらは、そうでなければ、天然ＣＨＯ細胞（例えば、天然グリコシル化パターンを産生するＣＨＯ細胞、例えば、天然ＦＵＴ８遺伝子を含有するＣＨＯ細胞）によって産生される場合に有するであろうものよりも低量のフコースを有することを特徴とする。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、その上のＮ結合型グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％または５％未満がフコースを含むものである。例えば、このような抗ＭＵＣ１６抗体剤中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％または２０％～４０％であり得る。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤は、その上のＮ結合型グリカンのうちフコースを含むものがない、すなわち、抗ＭＵＣ１６抗体剤が完全にフコースを伴わない、またはフコースを有さない、または無フコシル化されているものである。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるようなＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定されるような、Ａｓｎ２９７に付着しているすべての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を算出することによって決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域中の約２９７位に位置する（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）アスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における微量な配列変動のために、２９７位の上流または下流の約±３アミノ酸に、すなわち、２９４から３００位の間に位置する場合もある。このようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開番号ＵＳ２００３／０１５７１０８（Presta,L.）、ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．、Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体剤バリアントに関連する刊行物の例として、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Okazaki et al., J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)、Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生可能な細胞系の例として、タンパク質フコシル化を欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)、米国特許出願番号ＵＳ２００３／０１５７１０８、Presta, LおよびＷＯ２００４／０５６３１２、Adams et al.,特に実施例１１で）およびノックアウト細胞系、例えば、α－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)、Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)およびＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。

【0127】

抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）バリアントには、二分されたオリゴ糖がさらに提供され、例えば、抗ＭＵＣ１６抗体剤のＦｃ領域に付着している二分岐オリゴ糖は、ＧｌｃＮＡｃによって二分される。このような抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）バリアントは、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。このような抗体剤バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Jean-Mairet et al.）、米国特許第６，６０２，６８４号（Umana et al.）、ＵＳ２００５／０１２３５４６（Umana et al.）およびFerrara et al., Biotechnology and Bioengineering, 93(5): 851-861 (2006)に記載されている。Ｆｃ領域に付着しているオリゴ糖中に少なくとも１個のガラクトース残基を有する抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）バリアントも提供される。このような抗ＭＵＣ１６抗体剤バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体剤バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Patel et al.）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Raju、S.）およびＷＯ１９９９／２２７６４（Raju、S.）に記載されている。
一部の実施形態では、Ｆｃ領域を含む抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）バリアントは、ＦｃγＲＩＩＩに結合可能である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域を含む抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）バリアントは、ヒトエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の存在下で、ＡＤＣＣ活性を有するか、またはその他の点では同一の、ヒト野生型ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）と比較して、ヒトエフェクター細胞の存在下で増大されたＡＤＣＣ活性を有する。

【0128】

システイン操作されたバリアント
一部の実施形態では、１個または複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片を作出することが望ましいものであり得る。一部の実施形態では、置換される残基は、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片の到達可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基がそれによって抗ＭＵＣ１６抗体剤の到達可能な部位に配置され、抗ＭＵＣ１６抗体剤を、他の部分、例えば、薬物部分またはリンカー－薬物部分にコンジュゲートして、本明細書においてさらに記載されるような抗ＭＵＣ１６免疫複合体を作出するために使用され得る。システイン操作された抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、抗ＭＵＣ１６抗体、例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。

【0129】

誘導体
一部の実施形態では、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片は、当技術分野で公知の、容易に利用可能であるさらなる非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗ＭＵＣ１６抗体剤の誘導体化に適した部分として、それだけには限らないが、水溶性ポリマーが挙げられる。水溶性ポリマーの限定されない例として、それだけには限らないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコールおよびそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のために製造において利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってよく、また、分岐していても、分岐していなくてもよい。抗ＭＵＣ１６抗体剤に付着しているポリマーの数は、変わる場合があり、２つ以上のポリマーが付着している場合には、それらは、同一分子である場合も異なる分子である場合もある。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数および／または種類は、それだけには限らないが、改善されるべき抗ＭＵＣ１６抗体剤の特定の特性または機能を含む考慮に基づいて決定することができ、抗ＭＵＣ１６抗体剤誘導体は、定義された条件下などで療法において使用される。

【0130】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片と、放射線に対する曝露によって選択的に加熱され得る非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)）。放射線は、任意の波長のものであってよく、それだけには限らないが、普通の細胞を害さないが、非タンパク質性部分を、抗ＭＵＣ１６抗体剤－非タンパク質性部分に近接する細胞が死滅する温度に加熱する波長を含む。

【0131】

抗体コンジュゲート
ある特定の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片コンジュゲートが本明細書において提供され、前記抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、１種または複数の薬剤、例えば、イメージング剤または細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされる。また、二重特異性抗体コンジュゲートが本明細書において提供され、前記二重特異性抗体は、１種または複数の薬剤、例えば、イメージング剤または細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされる。また、抗体重鎖コンジュゲートが本明細書において提供され、前記抗体重鎖は、１種または複数の薬剤、例えば、イメージング剤または細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされる。また、抗体軽鎖コンジュゲートが本明細書において提供され、前記抗体軽鎖は、１種または複数の薬剤、例えば、イメージング剤または細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされる。また、融合タンパク質コンジュゲートが本明細書において提供され、前記融合タンパク質は、薬剤、例えば、イメージング剤または細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされる。ある特定の実施形態では、薬剤は、共有結合によって、または非共有結合によってコンジュゲートされる。

【0132】

ある特定の実施形態では、イメージング剤は、検出可能な標識、例えば、発色剤、酵素剤、放射性同位体剤、同位体剤、蛍光剤、毒性薬剤、化学発光剤、核磁気共鳴造影剤または他の標識である。
適した発色性標識の限定されない例として、ジアミノベンジジンおよび４－ヒドロキシアゾ－ベンゼン－２－カルボン酸が挙げられる。
適した酵素標識の限定されない例として、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌のヌクレアーゼ、デルタ－５－ステロイドイソメラーゼ、酵母－アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ－グリセロールホスフェートデヒドロゲナーゼ、トリオースホスフェートイソメラーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－６－ホスフェートデヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。

【0133】

適した放射性同位体は、当業者には周知であり、ベータ－エミッター、ガンマ－エミッター、ポジトロン－エミッターおよびＸ線エミッターが挙げられる。適した放射性同位体性標識の限定されない例として、³Ｈ、¹⁸Ｆ、¹¹¹Ｉｎ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、³²Ｐ、³³Ｐ、³⁵Ｓ、¹¹Ｃ、¹⁴Ｃ、⁵¹Ｃｒ、⁵⁷Ｔｏ、⁵⁸Ｃｏ、⁵⁹Ｆｅ、⁷⁵Ｓｅ、¹⁵²Ｅｕ、⁹⁰Ｙ、⁶⁷Ｃｕ、²¹⁷Ｃｉ、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｐｂ、⁴⁷Ｓｃ、²²³Ｒａ、²²³Ｒａ、⁸⁹Ｚｒ、¹⁷⁷Ｌｕおよび¹⁰⁹Ｐｄが挙げられる。ある特定の実施形態では、¹¹¹Ｉｎは、肝臓における¹²⁵Ｉまたは¹³¹Ｉ標識抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片の脱ハロゲン化の問題を避けるのでｉｎ ｖｉｖｏイメージングのための好ましい同位体である。さらに、¹¹¹Ｉｎは、イメージングのためのより都合のよいガンマ放出エネルギーを有する（Perkins et al, Eur. J. Nucl. Med. 70:296-301 (1985)、Carasquillo et ah, J. Nucl. Med. 25:281-287 (1987)）。例えば、１－（Ｐ－イソチオシアナトベンジル）－ＤＰＴＡを用いてモノクローナル抗体につなげられた¹¹¹Ｉｎは、非腫瘍性組織、特に、肝臓では、取り込みをほとんど示さず、したがって、腫瘍局在性の特異性を増強する（Esteban et al., J. Nucl. Med. 28:861-870 (1987)）。

【0134】

適した非放射性同位体標識の限定されない例として、１５７Ｇｄ、⁵⁵Ｍｎ、¹⁶²Ｄｙ、⁵²Ｔｒおよび⁵⁶Ｆｅが挙げられる。
適した蛍光標識の限定されない例として、¹⁵²Ｅｕ標識、フルオレセイン標識、イソチオシアネート標識、ローダミン標識、フィコエリトリン標識、フィコシアニン標識、アロフィコシアニン標識、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）標識、ｏ－フタルデヒド標識およびフルオレサミン標識が挙げられる。
化学発光性標識の限定されない例として、ルミノール標識、イソルミノール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジニウム塩標識、オキサレートエステル標識、ルシフェリン標識、ルシフェラーゼ標識およびエクオリン標識が挙げられる。

【0135】

核磁気共鳴造影剤の限定されない例として、重金属核、例えば、Ｇｄ、Ｍｎおよび鉄が挙げられる。
上記の標識を、前記抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖および融合タンパク質にコンジュゲートするための当業者に公知の技術は、例えば、Kennedy et at., Clin. CMm. Acta 70: 1-31 (1976)およびSchurs et al, Clin. CMm. Acta 81 : 1-40 (1977)に記載されている。後に記載されるカップリング技術として、グルタルアルデヒド法、過ヨウ素酸法、ジマレイミド法、ｍ－マレイミドベンジル－Ｎ－ヒドロキシ－スクシンイミドエステル法があり、それらの方法のすべては、参照により本明細書に組み込まれる。
細胞傷害性薬剤の限定されない例として、細胞分裂停止または細胞破壊剤、放射性金属イオン、例えば、アルファ－エミッターおよび毒素、例えば、シュードモナス外毒素、アブリン、コレラ毒素、リシンＡおよびジフテリア毒素が挙げられる。

【0136】

ある特定の実施形態では、薬剤は、診断剤である。診断剤は、抗原を含有する細胞を位置付けることによって疾患を診断または検出することにおいて有用な薬剤である。有用な診断剤として、それだけには限らないが、放射性同位体、色素（例えば、ビオチン－ストレプトアビジン複合体を用いる）、造影剤、蛍光化合物または分子および磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）のための増強剤（例えば、常磁性イオン）が挙げられる。米国特許第６，３３１，１７５号には、ＭＲＩ技術およびＭＲＩ増強剤にコンジュゲートされた抗体の調製が記載されており、参照によりその全文が組み込まれる。好ましくは、診断剤は、放射性同位体、磁気共鳴イメージングにおいて使用するための増強剤および蛍光化合物からなる群から選択される。抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片に、放射性金属または常磁性イオンを負荷するために、それを、イオンを結合するための多様なキレート化基が付着している長いテールを有する試薬と反応させることが必要であり得る。このようなテールは、ポリリシン、多糖などのポリマー、または例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビス－チオセミカルバゾン、ポリオキシムおよびこの目的のために有用であると公知の同様の基などのキレート化基が結合し得るペンダント基を有する他の誘導体化もしくは誘導可能な鎖であり得る。キレートは、標準化学を使用して抗体につなげられる。キレートは、普通、免疫反応性の最小の喪失および最小の凝集しか伴わずに、分子への結合の形成を可能にする基によって抗体に連結され、および／またはキレートを抗体にコンジュゲートするための内部架橋する他のより普通ではない方法および試薬は、１９８９年４月２５日に出願された「Antibody Conjugates」と題されたHawthorneの米国特許第４，８２４，６５９号に開示されており、その開示内容は、参照によりその全文で本明細書に組み込まれる。特に有用な金属－キレート組合せは、２－ベンジル－ＤＴＰＡおよびそのモノメチルおよびシクロヘキシル類似体を含み、ラジオイメージングのために診断用同位体とともに使用される。同一キレートは、非放射性金属、例えば、マンガン、鉄およびガドリニウムと複合体形成されると、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片とともに使用される場合に、ＭＲＩにとって有用である。

【0137】

大環状キレート、例えば、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡおよびＴＥＴＡは、さまざまな金属および放射性金属と、最も特には、それぞれ、ガリウム、イットリウムおよび銅の放射性核種と併用すると有益である。このような金属－キレート複合体は、環の大きさを目的の金属に合わせて調整することによって極めて安定にすることができる。ＲＡＩＴのための核種、例えば、²²³Ｒａを安定に結合するための他の環状キレート、例えば、目的の大環状ポリエーテルが本明細書に包含される。

【0138】

医薬組成物
また、抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片、抗体剤をコードする核酸、抗体剤をコードする核酸を含むベクターまたは核酸もしくはベクターを含む宿主細胞を含む組成物（例えば、医薬組成物、本明細書において製剤とも呼ばれる）が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤および任意で、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。

【0139】

抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、抗ＭＵＣ１６抗体、例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片の適した製剤は、所望の程度の純度を有する抗ＭＵＣ１６抗体剤を、任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤と混合することによって凍結乾燥製剤または水溶液の形態で得られる（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）。許容される担体、賦形剤または安定化剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントにとって非毒性であり、バッファー、例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化物質、保存料（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、ヘキサメトニウムクロリド、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール、アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノールおよびｍ－クレゾール）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン、親水性ポリマー、例えば、オリビニルピロリドン、アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシン、単糖、二糖およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物、キレート化剤、例えば、ＥＤＴＡ、糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール、塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。例示的製剤は、参照により本明細書に明確に組み込まれるＷＯ９８／５６４１８に記載されている。皮下投与に適応している凍結乾燥製剤は、ＷＯ９７／０４８０１に記載されている。このような凍結乾燥製剤は、適した希釈剤で高タンパク質濃度に再構成することができ、再構成された製剤を本明細書において処置されるべき個体に皮下に投与できる。リポフェクチンまたはリポソームを使用して、本発明の抗ＭＵＣ１６抗体剤を細胞中に送達できる。

【0140】

本明細書における製剤はまた、処置されている特定の適応症のために必要に応じて、抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片に加えて１種または複数の活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない補完的活性を有するものを含有し得る。例えば、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片に加えて、抗新生物剤、成長阻害剤、細胞傷害性薬剤または化学療法剤をさらに提供することが望ましい場合がある。このような分子は、意図される目的のために有効である量で組合せ中に適宜存在する。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗ＭＵＣ１６抗体剤の量、疾患または障害または処置の種類および上記で論じられた他の因子に応じて変わる。これらは、一般に、本明細書において記載されるものと同一の投与量で、および投与経路を用いて、または従来使用された投与量の約１～９９％で使用される。
抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、抗ＭＵＣ１６抗体、例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片はまた、それぞれ、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド性薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に捕捉され得る。

【0141】

抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、抗ＭＵＣ１６抗体、例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片の徐放性調製物を調製できる。徐放性調製物の適した例として、抗体剤（またはその断片）を含有する固体疎水性ポリマーの半透明マトリックスがあり、マトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例として、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸とエチル－Ｌ－グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマーおよび酢酸リュープロリドから構成される注射用ミクロスフェア）およびポリ－Ｄ（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。ポリマー、例えば、エチレン－酢酸ビニルおよび乳酸－グリコール酸は、１００日にわたる分子の放出を可能にするが、ある特定のヒドロゲルは、タンパク質をより短い期間の間放出する。被包された抗体剤が長期間身体中にとどまる場合、３７℃で水分に対する曝露の結果として、それらは変性または凝集する場合があり、結果として、生物活性が喪失し、免疫原性が変化する可能性がある。関与する機序に応じて抗ＭＵＣ１６抗体剤の安定化のために合理的な戦略を考案することができる。例えば、凝集機序が、チオ－ジスルフィド相互交換による分子間Ｓ－Ｓ結合形成であると発見される場合には、安定化は、スルフヒドリル残基を修飾すること、酸性溶液から凍結乾燥すること、水分含量を制御すること、適当な添加物を使用すること、および特定のポリマーマトリックス組成物を開発することによって達成され得る。

【0142】

一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）またはその抗原結合性断片は、クエン酸、ＮａＣｌ、酢酸、コハク酸、グリシン、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）または前記のものの任意の組合せを含むバッファー中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、約１００ｍＭ～約１５０ｍＭグリシンを含むバッファー中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ ＮａＣｌを含むバッファー中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ酢酸を含むバッファー中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、約１０ｍＭ～約５０ｍＭコハク酸を含むバッファー中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、約０．００５％～約０．０２％ポリソルベート８０を含むバッファー中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、約５．１～５．６の間のｐＨを有するバッファー中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、１０ｍＭクエン酸、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１００ｍＭグリシンおよび０．０１％ポリソルベート８０を含むバッファー中で製剤化され、製剤は、ｐＨ５．５である。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために使用されるべき製剤は、無菌でなくてはならない。これは、例えば、無菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。

【0143】

抗ＭＵＣ１６抗体剤を使用して処置する方法
ある特定の実施形態では、対象においてがんを、特に、対象においてＭＵＣ１６陽性がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与することを含む方法が本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、治療有効用量、例えば、本明細書において記載される用量で投与される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、本明細書において記載されるような方法に従って投与される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、１種または複数のさらなる薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与される。
特定の種の対象における抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片の使用のために、その特定の種のＭＵＣ１６に結合する抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片が使用される。例えば、ヒトを処置するために、ヒトＭＵＣ１６に結合する抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片が使用される。一部の実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、免疫グロブリンである。

【0144】

さらに、特定の種の対象における抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片の使用のために、抗ＭＵＣ１６抗体剤、好ましくは、抗ＭＵＣ１６抗体剤の定常領域またはその抗原結合性断片は、その特定の種に由来する。例えば、ヒトを処置するために、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、免疫グロブリンである抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片を含むことができ、免疫グロブリンは、ヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、対象はヒトである。
一部の実施形態では、ＭＵＣ１６陽性がんは、卵巣がん、肺がん、膵臓がん、乳がん、卵管がん、子宮（例えば、子宮内膜）がん、一次腹膜がんまたはＭＵＣ１６受容体を発現する任意の他の組織のがんである。

【0145】

一部の実施形態では、処置は、それだけには限らないが、検出可能または検出不能に関わらず、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の状態を安定化すること（すなわち、悪化させないこと）、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の寛解または緩和および緩解（部分または完全に関わらず）を含む有益な、または所望の臨床結果を達成することであり得る。特定の実施形態では、「処置」はまた、処置を受けていない場合に予測される生存と比較して、生存を延長することであり得る。一部の実施形態では、がん（例えば、卵巣がん、肺がん、膵臓がん、乳がん、卵管がん、子宮（例えば、子宮内膜）がんまたは一次腹膜がんまたはＭＵＣ１６受容体を発現する任意の他の組織のがん）を有する対象への、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤もしくはその抗原結合性断片または本明細書において記載される医薬組成物の投与は、以下の効果のうち少なくとも１つ、２つ、３つ、４つまたはそれより多くを達成する：（ｉ）がんの１つまたは複数の症状の重症度の低減または寛解、（ｉｉ）がんと関連する１つまたは複数の症状の期間の低減、（ｉｉｉ）がんと関連する症状の再発の防止、（ｉｖ）対象の入院の低減、（ｖ）入院の長さの低減、（ｖｉ）対象の生存の増大、（ｖｉｉ）別の療法の治療効果の増強または改善、（ｖｉｉｉ）がんと関連する１つまたは複数の症状の発生または発症の阻害、（ｉｘ）がんと関連する症状の数の低減、（ｘ）当技術分野で周知の方法によって評価されるような生活の質の改善、（ｘ）腫瘍の再発の阻害、（ｘｉ）腫瘍および／またはそれと関連する１つもしくは複数の症状の退縮、（ｘｉｉ）腫瘍および／またはそれと関連する１つもしくは複数の症状の進行の阻害、（ｘｉｉｉ）腫瘍の成長の低減、（ｘｉｖ）腫瘍の大きさ（例えば、体積または直径）の減少、（ｘｖ）新規に形成される腫瘍の形成の低減、（ｘｖｉ）原発性、局所性および／または転移性腫瘍の予防、根絶、除去または管理、（ｘｖｉｉ）転移の数または大きさの減少、（ｘｖｉｉｉ）死亡率の低減、（ｘｉｘ）無再発生存期間の増大、（ｘｘ）腫瘍の大きさが維持され、増大しないか、または当業者にとって利用可能な従来法、例えば、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、ダイナミックコントラスト強調ＭＲＩ（ＤＣＥ－ＭＲＩ）、Ｘ線およびコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンまたは陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）スキャンによって測定されるような標準療法の投与後の腫瘍の増大よりも少なく増大する、および／または（ｘｘｉ）患者における緩解の長さの増大。処置は、前記のうち１つまたは複数を達成することであり得る。

【0146】

診断的使用
ある特定の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、本明細書において記載される状態（例えば、ＭＵＣ１６陽性がん細胞が関与する状態）を検出、診断またはモニタリングする診断目的で使用され得る。ある特定の実施形態では、診断目的で使用するための抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、標識される。

【0147】

ある特定の実施形態では、本明細書において記載される状態を検出する方法であって、（ａ）本明細書において記載される１種または複数の抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片を使用して対象の細胞または組織試料においてＭＵＣ１６またはその断片の発現をアッセイすること、および（ｂ）ＭＵＣ１６またはその断片の発現のレベルを、対照レベル、例えば、正常組織試料（例えば、本明細書において記載される状態を有さない対象から得た、または状態の発症の前の同一患者から得た）におけるレベルと比較し、それによって、ＭＵＣ１６またはその断片の発現の対照レベルと比較された、ＭＵＣ１６またはその断片の発現のアッセイされたレベルの増大または減少が、本明細書において記載される状態を示すことを含む方法が、本明細書において提供される。

【0148】

本明細書において記載される抗体は、本明細書において記載されるような、または当業者に公知のような（例えば、Jalkanen et al., J. Cell. Biol. 101 :976-985 (1985)およびJalkanen et al., J. Cell . Biol. 105:3087-3096 (1987)を参照されたい）古典的免疫組織学的方法を使用して生体試料においてＭＵＣ１６またはその断片のレベルをアッセイするために使用され得る。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用な他の抗体ベース法として、イムノアッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が挙げられる。適した抗体アッセイ標識は、当技術分野で公知であり、酵素標識、例えば、グルコースオキシダーゼ、放射性同位体、例えば、ヨウ素（¹²⁵Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（¹⁴Ｃ）、硫黄（³⁵Ｓ）、トリチウム（³Ｈ）、インジウム（¹²¹Ｉｎ）およびテクネチウム（⁹⁹Ｔｃ）、発光標識、例えば、ルミノールおよび蛍光標識、例えば、フルオレセインおよびローダミンならびにビオチンを含む。一部の実施形態では、アッセイ標識は、直接検出のために本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、アッセイ標識は、本明細書において提供される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片に結合する二次抗体にコンジュゲートされる。二次抗体の種類は、一次抗体（例えば、ＩｇＧまたはＩｇＭ）のクラス、供給源宿主および好ましい標識の種類に従って選択される。一部の実施形態では、二次抗体は、クラスまたはアイソタイプ特異的抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＧ）である。一部の実施形態では、二次抗体は、サブクラス特異的抗体（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）である。一部の実施形態では、二次抗体は、抗体の１つまたは複数のクラスまたはサブクラスに結合する。一部の実施形態では、二次抗体は、一次抗体の重鎖に結合する。一部の実施形態では、二次抗体は、一次抗体の軽鎖に結合する。一部の実施形態では、二次抗体は、一次抗体のカッパ軽鎖に結合する。一部の実施形態では、二次抗体は、一次抗体のラムダ軽鎖に結合する。一部の実施形態では、二次抗体は、抗Ｆｃまたは抗Ｆ（ａｂ）または抗（Ｆａｂ’）２断片抗体である。一部の実施形態では、二次抗体は、ウサギ、マウス、ヤギ、ロバまたはニワトリ抗体である。

【0149】

ある特定の実施形態では、本明細書において記載される状態（例えば、ＭＵＣ１６陽性がん）のモニタリングは、最初の診断後一定期間、診断法を反復することによって実施される。
標識された分子の存在は、ｉｎ ｖｉｖｏスキャニングのための当技術分野で公知の方法を使用して対象において（すなわち、ｉｎ ｖｉｖｏで）検出され得る。当業者ならば、特定の標識を検出するのに適当な方法を決定できるであろう。本発明の診断方法において使用され得る方法およびデバイスとして、それだけには限らないが、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）、全身スキャン、例えば、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）および超音波検査が挙げられる。
本明細書において記載されるような抗ＭＵＣ１６抗体剤もしくはその抗原結合性断片または本明細書において記載される抗体もしくはその抗原結合性断片を含有する組成物またはそれを発現する細胞は、さまざまな経路によって対象に送達され得る。これらとして、それだけには限らないが、非経口、鼻腔内、気管内、経口、皮内、局所、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜および皮下経路が挙げられる。例えば、吸入器または噴霧器およびスプレーとして使用するためのエアロゾル化剤を有する製剤の使用によって、肺投与も使用され得る。一実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片または組成物は、対象に非経口的に投与される。一部の実施形態では、前記非経口投与は、静脈内、筋肉内または皮下である。

【0150】

状態の処置および／または予防において有効であるであろう、抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片または組成物の量は、疾患の性質に応じて変わり、標準臨床技術によって決定され得る。
組成物中に使用されるべき正確な用量はまた、投与経路およびがんの種類に応じて変わり、医師の判断および各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、有効用量はまた、投与の手段、標的部位、患者がヒトであるか、もしくは動物であるかに関わらず、患者の生理学的状態（年齢、体重および健康状態を含む）、処置が予防的であるか、もしくは治療的であるかに関わらず、投与される他の薬物適用に応じて変わり得る。処置投与量は、安全性および有効性を最適化するように最適に用量設定される。

【0151】

ある特定の実施形態では、最適投与量範囲を同定するのに役立つようにｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが使用される。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から導かれた用量応答曲線から推定され得る。
抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片について、投与量は、約０．０００１～１００ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、より普通は、０．０１～１５ｍｇ／患者の体重１ｋｇの範囲であり得る。例えば、投与量は、１ｍｇ／体重１ｋｇ、１０ｍｇ／体重１ｋｇまたは１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、または言い換えれば、７０ｋｇの患者に対して、それぞれ、７０ｍｇまたは７００ｍｇまたは７０～７００ｍｇの範囲内であり得る。一般に、ヒト抗体は、ヒト身体内で、外来ポリペプチドに対する免疫応答のために他の種に由来する抗体よりも長い半減期を有する。したがって、ヒト抗体のより少ない投与量およびより少ない頻度の投与が可能であることが多い。

【0152】

ある特定の実施形態では、例えば、抗体またはその抗原結合性断片またはＣＡＲを発現する操作された細胞の投与では、対象は、約１００万個～約１０００億個の細胞、例えば、１００万個～約５００億個の細胞（例えば、約５００万個の細胞、約２５００万個の細胞、約５億個の細胞、約１０億個の細胞、約５０億個の細胞、約２００億個の細胞、約３００億個の細胞、約４００億個の細胞または前記の値のうち任意の２つによって定義される範囲）など、約１０００万個～約１０００億個の細胞（例えば、約２０００万個の細胞、約３０００万個の細胞、約４０００万個の細胞、約６０００万個の細胞、約７０００万個の細胞、約８０００万個の細胞、約９０００万個の細胞、約１００億個の細胞、約２５０億個の細胞、約５００億個の細胞、約７５０億個の細胞、約９００億個の細胞または前記の値のうち任意の２つによって定義される範囲）など、一部の場合には、約１億個の細胞～約５００億個の細胞（例えば、約１億２０００万個の細胞、約２億５０００万個の細胞、約３億５０００万個の細胞、約４億５０００万個の細胞、約６億５０００万個の細胞、約８億個の細胞、約９億個の細胞、約３０億個の細胞、約３００億個の細胞、約４５０億個の細胞）またはこれらの範囲の間の任意の値の範囲で対象に投与される。一部の実施形態では、総細胞の用量および／または個々の小集団の細胞の用量は、１０⁴または約１０⁴～１０⁹または約１０⁹個細胞／１キログラム（ｋｇ）体重の間、例えば、１０⁵～１０⁶個細胞／体重１ｋｇの間の範囲内、例えば、１×１０⁵または約１×１０⁵個細胞／ｋｇ、１．５×１０⁵個細胞／ｋｇ、２×１０⁵個細胞／ｋｇまたは１×１０⁶個細胞／ｋｇ、２×１０⁶個細胞／ｋｇ、５×１０⁶個細胞／ｋｇまたは１０×１０⁶個細胞／体重１ｋｇである。例えば、一部の実施形態では、細胞は、１０⁴または約１０⁴～１０⁹または約１０⁹個のＴ細胞／体重１キログラム（ｋｇ）の間、例えば、１０⁵～１０⁷個のＴ細胞／体重１ｋｇの間で、またはその誤差のある特定の範囲内で投与される。
抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、複数の機会で投与され得る。単一投与量の間の間隔は、１週間、２週間、３週間、４週間、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、１年または２年であり得る。

【0153】

併用療法
一部の実施形態では、対象においてがん（例えば、卵巣がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵管がん、子宮（例えば、子宮内膜）がんまたは一次腹膜がん）を処置するための本明細書において提供される方法であって、それを必要とする対象に、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与することを含む方法は、対象に１種または複数のさらなる治療剤を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、さらなる治療剤は、対象においてがん（例えば、卵巣がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵管がん、子宮（例えば、子宮内膜）がんおよび一次腹膜がん）を処置するためのものである。一部の実施形態では、さらなる治療剤は、処置の任意の副作用を本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片を用いて処置するためのものである。

【0154】

一部の実施形態では、さらなる薬剤は、卵巣がんを処置するために使用される薬剤である。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、膵臓がんを処置するために使用される薬剤である。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、肺がんを処置するために使用される薬剤である。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、乳がんを処置するために使用される薬剤である。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、卵管がんを処置するために使用される薬剤である。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、子宮（例えば、子宮内膜）がんを処置するために使用される薬剤である。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、一次腹膜がんを処置するために使用される薬剤である。

【0155】

本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片は、さらなる治療剤とともに同時に、または逐次投与され得る（前および／または後）。抗体またはその抗原結合性断片およびさらなる治療剤は、同一または異なる組成物中で、同一または異なる投与経路によって投与され得る。第１の療法（本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片、またはさらなる治療剤である）は、第２の療法（本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片またはさらなる治療剤）の、がん（例えば、卵巣がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵管がん、子宮（例えば、子宮内膜）がんおよび一次腹膜がん）を有する対象への投与の前に（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間または１２週間前）、それと同時に、またはその後に（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間または１２週間後）投与され得る。ある特定の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片と組み合わせて対象に投与されるさらなる治療剤は、同一組成物（医薬組成物）中で投与される。他の実施形態では、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片と組み合わせて投与されるさらなる治療剤は、対象に、本明細書において記載される抗ＭＵＣ１６抗体剤またはその抗原結合性断片とは異なる組成物中で投与される（例えば、２種またはそれより多い医薬組成物が使用される）。

【0156】

例示的患者集団
本明細書において提供される方法に従って処置される対象は、任意の哺乳動物、例えば、げっ歯類、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、サル、霊長類またはヒトなどであり得る。一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象はイヌである。本明細書で使用される場合、「対象」および「患者」という用語は、同義的に使用される。
ある特定の実施形態では、本明細書において提供される方法に従って処置される対象は、それだけには限らないが、卵巣、肺、膵臓、乳房、子宮、卵管または一次腹膜がんまたはＭＵＣ１６を発現する任意の他の組織のがんを含むＭＵＣ１６陽性がんを有すると診断されている。

【0157】

製造品およびキット
本発明の一部の実施形態では、高ＭＵＣ１６発現および／または高い好気的解糖を特徴とするがん（例えば、腎臓がん、子宮頸がんまたは前立腺がん）の処置にとって、または抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）を、ＭＵＣ１６をその表面に発現する細胞に送達するのに有用な材料を含有する製造品が提供される。製造品は、容器および容器上のもしくは容器に付随するラベルまたは添付文書を含み得る。適した容器として、例えば、ビン、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、さまざまな材料、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成され得る。一般に、容器は、本明細書において記載される疾患または障害を処置するために有効である組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺可能な栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１種の活性薬剤は、本発明の抗ＭＵＣ１６抗体剤である。ラベルまたは添付文書は、組成物が特定の状態を処置するために使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、抗ＭＵＣ１６抗体剤組成物を患者に投与するための使用説明書をさらに含む。本明細書において記載されるコンビナトリアル療法を含む製造品およびキットも企図される。

【0158】

添付文書とは、このような治療製品の使用に関する適応症、用法、投与量、投与、禁忌症および／または警告についての情報を含有する治療製品の市販のパッケージ中に習慣的に含まれる使用説明書を指す。一部の実施形態では、添付文書は、組成物が、がん（例えば、ＨＣＣ、黒色腫、肺扁平上皮癌、卵巣癌、卵黄嚢腫瘍、絨毛癌、神経芽細胞腫、胆芽腫、ウィルムス腫瘍、精巣非セミノーマ生殖細胞腫瘍、胃癌または脂肪肉腫）を処置するために使用されることを示す。
さらに、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば、静菌性注射水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液を含む第２の容器をさらに含み得る。他のバッファー、希釈剤、フィルター、針およびシリンジを含む、商業的およびユーザー観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。

【0159】

種々の目的のために、例えば、高ＭＵＣ１６発現および／または高い好気的解糖を特徴とするがん（例えば、腎臓がん、子宮頸がんまたは前立腺がん）の処置のために、または抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）を、任意に製造品と組み合わせて、ＭＵＣ１６をその表面上に発現する細胞に送達するために有用であるキットもまた提供される。本発明のキットは、抗ＭＵＣ１６抗体剤組成物（または単位投与形および／または製造品）を含む１つまたは複数の容器を含み、一部の実施形態では、別の薬剤（例えば、本明細書において記載される薬剤）および／または本明細書において記載される方法のいずれかに従って使用するための使用説明書をさらに含む。キットは、処置に適した個体の選択の説明をさらに含み得る。本発明のキット中に供給される使用説明書は、通常、ラベルまたは添付文書上の書面の使用説明書（例えば、キット中に含まれる紙のシート）であるが、機械によって読み取り可能な使用説明書（例えば、磁気または光学保存ディスク上に保持される使用説明書）も許容される。

【0160】

例えば、一部の実施形態では、キットは、抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）を含む組成物を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＭＵＣ１６抗体剤を含む組成物およびｂ）有効量の少なくとも１種の他の薬剤であって、抗ＭＵＣ１６抗体剤の効果（例えば、処置効果、検出効果）を増強する他の薬剤を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＭＵＣ１６抗体剤を含む組成物ならびにｂ）高ＭＵＣ１６発現および／または高い好気的解糖を特徴とするがん（例えば、腎臓がん、子宮頸がんまたは前立腺がん）の処置のために、抗ＭＵＣ１６抗体剤組成物を個体に投与するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＭＵＣ１６抗体剤を含む組成物、ｂ）有効量の少なくとも１種の他の薬剤であって、抗ＭＵＣ１６抗体剤の効果（例えば、処置効果、検出効果）を増強する他の薬剤およびｃ）高ＭＵＣ１６発現および／または高い好気的解糖を特徴とするがん（例えば、腎臓がん、子宮頸がんまたは前立腺がん）の処置のために、抗ＭＵＣ１６抗体剤組成物および他の薬剤を個体に投与するための使用説明書を含む。抗ＭＵＣ１６抗体剤および他の薬剤は、別々の容器中に存在する場合も、単一容器中に存在する場合もある。例えば、キットは、１種の別個の組成物を含む場合もあり、１種の組成物が、抗ＭＵＣ１６抗体剤を含み、別の組成物が、別の薬剤を含む２種またはそれより多い組成物を含む場合もある。

【0161】

一部の実施形態では、キットは、抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）をコードする核酸（または核酸のセット）を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＭＵＣ１６抗体剤をコードする核酸（または核酸のセット）およびｂ）核酸（または核酸のセット）を発現するための宿主細胞を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＭＵＣ１６抗体剤をコードする核酸（または核酸のセット）およびｂ）ｉ）宿主細胞において抗ＭＵＣ１６抗体剤を発現させる、ｉｉ）抗ＭＵＣ１６抗体剤を含む組成物を調製する、およびｉｉｉ）高ＭＵＣ１６発現および／または高い好気的解糖を特徴とするがん（例えば、腎臓がん、子宮頸がんまたは前立腺がん）の処置のために、抗ＭＵＣ１６抗体剤を含む組成物を個体に投与するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＭＵＣ１６抗体剤をコードする核酸（または核酸のセット）、ｂ）核酸（または核酸のセット）を発現するための宿主細胞およびｃ）ｉ）宿主細胞において抗ＭＵＣ１６抗体剤を発現させる、ｉｉ）抗ＭＵＣ１６抗体剤を含む組成物を調製する、およびｉｉｉ）高ＭＵＣ１６発現および／または高い好気的解糖を特徴とするがん（例えば、腎臓がん、子宮頸がんまたは前立腺がん）の処置のために、抗ＭＵＣ１６抗体剤を含む組成物を個体に投与するための使用説明書を含む。

【0162】

本発明のキットは、適したパッケージング中にある。適したパッケージングとして、それだけには限らないが、バイアル、ビン、ジャー、柔軟なパッケージング（例えば、密閉されたＭｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。キットは、さらなる構成成分、例えば、バッファーおよび解釈情報を提供してもよい。本出願はまた、したがって、製造品を提供し、これとして、バイアル（例えば、密閉バイアル）、ビン、ジャー、柔軟なパッケージングなどが挙げられる。

【0163】

抗ＭＵＣ１６抗体剤組成物の使用に関する使用説明書は、一般に、意図される処置のための投与量、投薬スケジュールおよび投与経路についての情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回用量パッケージ）または部分単位用量であり得る。例えば、個体の有効処置を長期間、例えば、１週間、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３カ月、４カ月、５カ月、７カ月、８カ月、９カ月またはそれより長くのうちいずれかの間、提供するために、本明細書において開示されるような抗ＭＵＣ１６抗体剤（例えば、全長抗ＭＵＣ１６抗体）の十分な投与量を含有するキットが提供され得る。キットはまた、抗ＭＵＣ１６抗体剤および医薬組成物の複数回単位用量ならびに使用のための使用説明書ならびに薬局、例えば、病院薬局および調剤薬局において保管および使用するのに十分な量にパッケージングされたものを含み得る。
当業者ならば、本発明の範囲および趣旨内でいくつかの実施形態があり得るということは認識するであろう。本発明を、ここで、以下の限定されない例を参照することによってより詳細に説明する。以下の実施例は、本発明をさらに例示するが、もちろん、決して、その範囲を制限すると解釈されてはならない。

【実施例】

【0164】

本技術を以下の実施例によってさらに例示するが、これは、決して制限すると解釈されてはならない。以下の実施例は、本技術の例示的抗ＭＵＣ１６抗体の調製、特性決定および使用を実証する。以下の実施例は、本技術のヒトおよび二重特異性抗体の生成ならびにそれらの結合特異性およびｉｎ ｖｉｖｏ生物活性の特性決定を実証する。

【0165】

（実施例１）
ヒトＭＵＣ１６に特異的なｓｃＦｖの選択および特性決定
この実施例は、ヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリーの収集物からのヒトＭＵＣ１６（ｈＭＵＣ１６）に特異的なヒトｓｃＦｖの選択および特性決定を実証する。特に、この実施例は、その天然形態のｈＭＵＣ１６（ＭＵＣ１６－Ｃ１１４）のエクトドメイン（すなわち、細胞表面に結合したＭＵＣ１６）に特異的に結合するヒトｓｃＦｖの選択を実証する。この実施例はまた、転移および浸潤に対するＭＵＣ１６のグリコシル化依存性効果を阻害するために、ＭＵＣ１６エクトドメイン上の重大なＮ－グリコシル化部位（ｃ１１４中のＮ３０または全長成熟ＭＵＣ１６タンパク質中のＮ１８０６）を標的とするヒトｓｃＦｖのさらなる選択を実証する。天然ＭＵＣ１６および切断型ＭＵＣ１６－Ｃ１１４の構造表現およびそのアミノ酸配列が、図１に示されている。ｓｃＦｖを、細胞表面に結合したＭＵＣ１６－Ｃ１１４に対するパニングによってヒトＭＵＣ１６に対する高選択性に基づいて選択した。これらのヒト抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖは、種々の形態の抗ＭＵＣ１６抗体剤、例えば、全長ＩｇＧ、二重特異性抗ＭＵＣ１６抗体、多特異性抗ＭＵＣ１６抗体などの構築のための抗体構成成分の価値ある供給源を提供する。

【0166】

ＭＵＣ１６エクトドメイン上のＮ３０ Ｎ－グリコシル化を特異的に標的とするｓｃＦｖの選択および特性決定において使用するためのＭＵＣ１６の膜結合型発現のために、ＭＵＣ１６タンパク質を発現する２つのＨＥＫ２９３安定細胞系を生成した。野生型ＭＵＣ１６－Ｃ１１４－ＧＦＰ融合タンパク質（ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴ）を発現する１つの細胞系を生成し、Ｎ３０突然変異体ＭＵＣ１６－Ｃ１１４－ＧＦＰ融合タンパク質（ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｍｕｔ）を発現する１つの細胞系を生成した。野生型ＭＵＣ１６－Ｃ１１４とＮ３０突然変異体ＭＵＣ１６－Ｃ１１４エクトドメイン間のアラインメントは、図２に示されている。図２に示されるように、Ｎ３０突然変異体ＭＵＣ１６－Ｃ１１４は、Ｎ３０Ａ置換を有する。蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）によってＧＦＰ発現を測定することによって、ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴおよびＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｍｕｔ細胞のＭＵＣ１６発現が確認された。親のＨＥＫ２９３細胞系は、ＧＦＰシグナルを示さなかった。それに対して、ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴおよびＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｍｕｔ細胞系は、ＧＦＰ発現を示したが、ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴはＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｍｕｔ細胞系よりも強力なＧＦＰシグナルを有していた（図３）。ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴ細胞は、１７０×の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増大のＧＦＰシグナルを示し、一方、ＭＵＣ１６ｍｕｔ細胞は、２６×のＭＦＩ増大を示した。

【0167】

ｈＭＵＣ１６に特異的なヒトｓｃＦｖの選択のために、Ｅｕｒｅｋａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｅ－ＡＬＰＨＡ（登録商標）ファージライブラリーとして商標登録された）によって構築されたヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリーの収集物（１０×１０¹⁰を上回る多様性）を使用した。
陰性対照親ＨＥＫ２９３細胞およびＭＵＣ１６－Ｃ１１４－ＧＦＰ融合タンパク質発現性ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴ）との同時インキュベーションによって、Ｅ－ＡＬＰＨＡ（登録商標）ｓｃＦｖファージライブラリーをｈＭＵＣ１６に対してスクリーニング（パニング）した。ＰＢＳで長時間洗浄した後、ｓｃＦｖ抗体ファージが結合しているＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴ細胞を遠心沈殿させた。次いで、結合したクローンを溶出し、２～３回のさらなるラウンドのパニングのために使用して、ＭＵＣ１６に特異的に結合したｓｃＦｖファージクローンについて濃縮した。次いで、結合したクローンを溶出し、大腸菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ細胞に感染させた。次いで、細菌において発現されたファージクローンを精製した。

【0168】

次いで、細胞パニングから同定された５４０のファージクローンをＦＡＣＳ分析によってＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴ細胞への結合について試験した。手短には、２０万個の細胞（ＰＢＳ＋５％ ＦＢＳ＋０．０５％ ＮａＮ₃中）を、ＰＢＳ中、約１．０×１０¹¹ｐｆｕ／ｍＬのファージ（ｐａｇｅ）５０μｌとともに４℃で２時間インキュベートした。一次抗体マウス抗Ｍ１３ｍＡｂ（Ｔｈｅｒｍｏ番号ＭＡ１－１２９００）および二次抗体ＰＥ抗マウスＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂ番号ＥＩ－２００７）を使用してＦＡＣＳを実施した。５３のユニーククローンが同定され、４０クローンが、ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ ＷＴ細胞に対して特異的結合を実証した。

【0169】

４０のＭＵＣ１６特異的クローンを、ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴ、ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｍｕｔおよび親のＨＥＫ２９３細胞へのその結合について試験した。図４は、３種の細胞系すべてについて陰性ファージ対照を用いる、ファージ対照を用いないＦＡＣＳ分析の結果を示す。４０のクローン各々を用いるＦＡＣＳ分析は、４０のクローンすべてがＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ＷＴに対する結合を示し、一方でＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｍｕｔに対しては４０のクローンのうち１６のクローンが最小の結合を示すことを示した。したがって、これらのクローンは、Ｎ－グリコシル化部位（Ｎ３０）に対して特異的であった。図５は、２つの例示的クローン、クローン８およびクローン１２の結果を示す。
次いで、１６の中で上位９クローンを、ＭＵＣ１６⁺がん細胞系ＯＶＣＡＲ３、ＳＫＯＶ８およびＯＶＣＡ４３２への結合について試験した。抗ＭＵＣ１６クローン８および１２は、ＭＵＣ１６＋がん細胞系に最も特異的に結合したが、ＭＵＣ１６^-がん細胞系ＳＫＯＶ３には結合しなかった（図８）。いくつかの他のクローンが、ＭＵＣ１６＋がん細胞系に同様に、より低い特異性であるが特異的に結合した（図７）。

【0170】

（実施例２）
抗ＭＵＣ１６二重特異性抗体の生成
この実施例は、実施例１において同定された抗ＭＵＣ１６ｓｃＦｖからの抗ＭＵＣ１６二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）の生成を記載する。この実施例では、Ｎ末端に抗ＭＵＣ１６ｓｃＦｖを、Ｃ末端にマウスモノクローナル抗体の抗ヒトＣＤ３ε ｓｃＦｖを含む単鎖ＢｓＡｂを生成した。抗ＭＵＣ１６クローン８ ＢｓＡｂおよび抗ＭＵＣ１６クローン１２ ＢｓＡｂは、親クローンＬ２Ｋに由来する抗ＭＵＣ１６ ｓｃＦｖおよび抗ヒトＣＤ３ε ｓｃＦｖ抗体をコードするＤＮＡ断片を、標準ＤＮＡ技術を使用して発現ベクター中にクローニングすることによって生成した。抗体精製および検出のために、ヘキサヒスチジン（Ｈｉｓ）タグ（配列番号３３）をＣ末端に抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂの下流に挿入した。

【0171】

チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂ発現ベクターでトランスフェクトし、メチオニンスルホキシイミン（ＭＳＸ）、グルタミンシンセターゼ（ＧＳ）ベース法を用いる標準薬物選択によって安定な発現を達成した（Fan, et al., Biotechnology Bioengineering. 109 (4), 1007-1005 (2012)）。分泌された抗ＭＵＣ１６ＢｓＡｂ分子を含有するＣＨＯ細胞上清を収集した。抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂを、ＦＰＬＣ ＡＫＴＡ系によってＨｉｓＴｒａｐ ＨＰカラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製した。手短には、ＣＨＯ細胞培養物を清澄化し、低イミダゾール濃度（２０ｍＭ）を用いてカラムにロードし、次いで、イソクラティック高イミダゾール濃度溶出バッファー（５００ｍＭ）を使用して、結合した抗ＭＵＣ１６二重特異性抗体タンパク質を溶出した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってクローン８ ＢｓＡｂおよびクローン１２ ＢｓＡｂの主要なバンドが５０ｋＤａ付近に観察され、これは、ＢｓＡｂが成功裏に精製されたことを示す。

【0172】

（実施例３）
抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂ－ＭＵＣ１６＋細胞特異性
この実施例では、ＭＵＣ１６を発現するがん細胞への結合に対する抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂの結合の特異性を評価した。ある研究では、２つの標的細胞系、ＭＵＣ１６⁺ＯＶＣＡＲ３細胞系およびＭＵＣ１６^-ＳＫＯＶ３細胞系を使用した。ＯＶＣＡＲ３およびＳＫＯＶ３細胞系は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）によって入手し、ＡＴＣＣの文献に従って培養で維持した。２つの標的細胞系に結合する抗ＭＵＣ１６抗体のＦＡＣＳ分析を実施して、抗体結合がＭＵＣ１６＋ＯＶＣＡＲ３細胞系を用いた場合にのみ観察されることを確認した。ＳＫＯＶ３またはＯＶＣＡＲ３細胞系を、抗ＭＵＣ１６ Ａｂと、続いて、二次抗体とともに、または対照として二次抗体単独とともにインキュベートした。抗ＭＵＣ１６クローン８ ＢｓＡｂのデータが、図６に示されている。ＭＵＣ１６＋ＯＶＣＡＲ３細胞系は、対照細胞を上回る結合の約３００×ＭＦＩの増大を示したが、一方でＳＫＯＶ３は、最小シグナルしか示さなかった。

【0173】

（実施例４）
抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂによって指示される細胞傷害性
この実施例では、抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂの、ＭＵＣ１６特異的細胞傷害性を誘導する能力を評価した。抗ＭＵＣ１６クローン８ ＢｓＡｂおよび抗ＭＵＣ１６クローン１２ ＢｓＡｂを、０．２μｇ／ｍｌの濃度で、５：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比でＭＵＣ１６⁺ ＯＶＣＡＲ３標的細胞系またはＭＵＣ１６^-ＳＫＯＶ３標的細胞系のいずれか、およびヒト活性化Ｔ細胞を用いて１６時間インキュベートした。細胞傷害性は、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）放出アッセイによって測定された。図７に示されるように、クローン８およびクローン１２ ＢｓＡｂは、それぞれ、約９０％および６５％のレベルでＯＶＣＡＲ３細胞の細胞溶解を誘導できたが、一方、ＳＫＯＶ３の細胞溶解は最小であり、これは、Ｔ細胞活性化にはＭＵＣ１６⁺標的特異性が必要であるということを示した。したがって、クローン８ ＢｓＡｂおよびクローン１２ ＢｓＡｂの両方とも、ＭＵＣ１６⁺がん細胞系の強力なおよび特異的な死滅を誘導した。
別々の研究において、４種の標的細胞系、ＭＵＣ１６⁺ＯＶＣＡＲ３細胞系、ＭＵＣ１６^-ＳＫＯＶ３細胞系、ＭＵＣ１６⁺ＳＫＯＶ８細胞系およびＭＵＣ１６⁺ＯＶＣＡ４３２細胞系を使用した。抗ＭＵＣ１６クローン８ ＢｓＡｂおよび抗ＭＵＣ１６クローン１２ ＢｓＡｂを、０．２μｇ／ｍｌの濃度で、３：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で標的細胞系およびヒト活性化Ｔ細胞を用いて１６時間インキュベートした。細胞傷害性は、ＬＤＨ放出アッセイによって測定した。５：１のＥ：Ｔ比と比較して３：１のより低いＥ：Ｔ比で、ＭＵＣ１６＋細胞系についてより少ないパーセンテージの細胞溶解が観察された（図８）。ＭＵＣ１６^-ＳＫＯＶ３の細胞溶解は、この研究において同様に最小であり、Ｔ細胞活性化にはＢｓＡｂのＭＵＣ１６＋標的特異性が必要であるということをさらに支持する。

【0174】

（実施例５）
ＮＳＧマウスにおけるヒトＭＵＣ１６⁺転移性卵巣がんの療法
この実施例では、転移性卵巣がんのマウス異種移植モデルにおいて、抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂのｉｎ ｖｉｖｏ治療効力を評価した。６～８週齢の雌のＮＳＧマウスに、３×１０⁶個の、ＭＵＣ１６－Ｃ１１４およびＧＦＰ－ＬＵＣを発現するように修飾されているＳＫＯＶ３－ＭＵＣ－ＣＤ腫瘍細胞を用いて、０日目（Ｄ０）に腹膜内（ｉ．ｐ．）に注射した。次いで、これらのマウスを、７日目（Ｄ７）に１×１０⁷個のヒトＴ細胞を用いて静脈内（ｉ．ｖ．）に、５μｇの抗ＭＵＣ１６クローン８ ＢｓＡｂを用いてｉ．ｐ．処置した。合計６回のＢｓＡｂ処置のために、５μｇのＢｓＡｂを用いるさらなる処置をＤ９、Ｄ１１、Ｄ１４、Ｄ１６およびＤ１８にｉ．ｐ．投与した。動物をＤ１４、Ｄ２１、Ｄ２８およびＤ４２に画像化した。ＳＫＯＶ３－ＭＵＣ－ＣＤおよびＢｓＡｂ注射の実験スキーマが、図９Ａに示されている。

【0175】

抗ＭＵＣ１６クローン８ ＢｓＡｂを用いて処置された動物は、未処置マウスまたはＴ細胞単独を用いて処置されたマウスと比較して疾患進行の遅延を示した（図９Ｂ）。図９Ｃは、腫瘍保有マウスの生存曲線を示す。抗ＭＵＣ１６クローン８ ＢｓＡｂを用いる処置は、Ｔ細胞療法または処置なしと比較して腫瘍保有マウスにおいて生存を有意に延長した。Ｔ細胞および抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂを用いて処置された腫瘍保有マウスもまた、処置の７日後に有意に上昇したレベルの全身ＩＬ－２およびＩＦＮ－γを示し、これは、抗腫瘍免疫応答の誘導を示す（図９Ｄ）。これらの結果は、抗ＭＵＣ１６ ＢｓＡｂの投与が、ＭＵＣ１６＋転移性卵巣がんの異種モデルにおいて疾患進行を遅延し、生存を改善することを実証する。

【0176】

（実施例６）
全長ヒトＩｇＧ抗ＭＵＣ１６抗体の生成
選択されたファージクローンの全長ヒトＩｇＧ１は、記載されるように（Tomimatsu, K. et al., Biosci. Biotechnol. Biochem. 73(7):1465-1469, 2009）、例えば、ＨＥＫ２９３およびＣＨＯ細胞系において産生される。手短には、ファージクローンに由来する抗体可変領域を哺乳動物発現ベクター中にサブクローニングし、ヒトラムダ軽鎖定常領域（配列番号３１）およびヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号２８）配列（表５を参照されたい）を対応させる。電気泳動によって、精製された全長ＩｇＧ１抗体の分子量は、還元および非還元の両条件下で測定され得る。精製されたＩｇＧ１抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥを実施して、タンパク質純度を決定できる。

【表4】

【0177】

（実施例７）
全長ヒトＩｇＧ抗ＭＵＣ１６抗体の特性決定
抗ＭＵＣ１６ ＩｇＧ抗体を、フローサイトメトリーによってＭＵＣ１６発現細胞、例えば、ＨＥＫ２９３－ＭＵＣ１６ｗｔ細胞またはＭＵＣ１６⁺細胞系、例えば、ＯＶＣＡＲ３、ＳＫＯＶ８細胞系またはＯＶＣＡ４３２細胞系への結合について試験する。結合の用量依存が試験される。手短には、ＭＵＣ１６発現性細胞を種々の量の抗ヒトＭＵＣ１６ ＩｇＧ抗体とともに、例えば、１０、３．３、１．１、０．３７、０．１２、０．０４１、０．０１４または０μｇ／ｍｌで、氷上で１時間インキュベートする。抗ＭＵＣ１６ ＩｇＧ抗体を、用量依存曲線（ＭＦＩ対抗体濃度）のＥＣ５０によってＭＵＣ１６発現細胞に対するその親和性について評価する。さらに、ＥＣ５０値に基づいて見かけのＫ_Dを決定する。抗ＭＵＣ１６ ＩｇＧ抗体の結合親和性は、例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定できる。

【0178】

（実施例８）
全長ヒトＩｇＧ抗ＭＵＣ１６抗体の特性決定
抗ＭＵＣ１６クローン８および抗ＭＵＣ１６クローン１２の、Ｍａｔｒｉｇｅｌ浸潤を阻害する能力を評価する。４Ｈ１１、クローン８またはクローン１２の存在下または不在下で細胞をインキュベートすることによって、抗ＭＵＣ１６モノクローナル抗体４Ｈ１１を陰性対照として使用し、ｐｈｒＧＦＰまたはｐｈｒ－ＧＦＰ－ＭＵＣ１６－Ｃ１１４を発現するＳＫＯＶ３卵巣がん安定細胞系を用いてＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤アッセイを実施する。クローン８およびクローン１２は、ＭＵＣ１６－Ｃ１１４誘導性Ｍａｔｒｉｇｅｌ浸潤を阻害する。対照的に、モノクローナル抗ＭＵＣ１６抗体４Ｈ１１は、ＭＵＣ１６－Ｃ１１４誘導性Ｍａｔｒｉｇｅｌ浸潤を阻害しない。これらのデータは、モノクローナル抗体４Ｈ１１とは対照的に、クローン８およびクローン１２がＭａｔｒｉｇｅｌ浸潤を阻止することを実証する。

【0179】

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【表5-4】

【表5-5】

【表5-6】

【表5-7】

【表5-8】

【表5-9】

【表5-10】

【表5-11】

【表5-12】

【0180】

【表5-13】

本開示は、以下の限定されない実施形態の観点から記載され得る：
実施形態１：ムチン１６（ＭＵＣ１６）ポリペプチドを免疫特異的に認識する抗体部分を含む抗ムチン１６（ＭＵＣ１６）構築物であって、抗体部分は、（ａ）（ｉ）配列番号２の重鎖可変ドメインの重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに（ｉｉ）配列番号３の軽鎖可変ドメインの軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖または（ｂ）（ｉ）配列番号１０の重鎖可変ドメインの重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに（ｉｉ）配列番号１１の軽鎖可変ドメインの軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖を含む、抗ムチン１６（ＭＵＣ１６）構築物。

【0181】

実施形態２：抗体部分が、（ａ）（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖または（ｂ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変重（ＶＨ）鎖ならびに（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変軽（ＶＬ）鎖を含む、実施形態１の抗ムチン１６（ＭＵＣ１６）構築物。
実施形態３：抗体部分が、ＭＵＣ１６のエクトドメインに免疫特異的に結合する、実施形態１または実施形態２の抗ＭＵＣ１６構築物。

【0182】

実施形態４：抗体部分が、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、実施形態１～３のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態５：ＭＵＣ１６が、ヒトＭＵＣ１６である、実施形態１～４のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態６：ＶＨ鎖およびＶＬ鎖が、ヒトＶＨ鎖およびＶＬ鎖である、実施形態１～５のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態７：抗体部分が、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＭＵＣ１６ ｃ１１４ポリペプチドに免疫特異的に結合する、実施形態１～６のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態８：Ｍａｔｒｉｇｅｌ浸潤アッセイにおいてＭＵＣ１６を発現する腫瘍細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ浸潤を阻害する、実施形態１～６のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態９：腫瘍細胞が、卵巣腫瘍細胞である、実施形態８の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態１０：ＭＵＣ１６が、グリコシル化される、実施形態８または実施形態９の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態１１：ＭＵＣ１６が、配列番号２５に対してＮ２４またはＮ３０でＮグリコシル化される、実施形態１０の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態１２：抗体部分が、モノクローナル抗体である、実施形態１～１１のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。

【0183】

実施形態１３：抗体部分が、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、実施形態１～１２のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態１４：抗体部分が、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１～１３のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態１５：抗体部分が、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、実施形態１～１２のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態１６：抗体部分が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１～１２または１５のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態１７：抗体部分が、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１～１２のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態１８：抗体部分が、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１～１２のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態１９：抗体部分が、ヒト由来重鎖および軽鎖定常領域を含む、実施形態１～１８のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態２０：重鎖定常領域が、ガンマ１、ガンマ２、ガンマ３およびガンマ４からなる群から選択されるアイソタイプを有する、実施形態１９の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態２１：軽鎖定常領域が、カッパおよびラムダからなる群から選択されるアイソタイプを有する、実施形態１９または２０の抗ＭＵＣ１６構築物。

【0184】

実施形態２２：抗体部分が、２つの同一な重鎖および２つの同一な軽鎖を含む免疫グロブリンである、実施形態１～２１のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態２３：免疫グロブリンが、ＩｇＧである、実施形態２２の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態２４：単一特異性である、実施形態１～２２のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態２５：多特異性である、実施形態１～２２のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態２６：二重特異性である、実施形態１～２２のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態２７：タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディー（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディー（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、Ｆ（ａｂ’）２、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）抗体、ドック・アンド・ロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロ多量体抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である、実施形態１～２２のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態２８：ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである、実施形態２７の抗ＭＵＣ１６構築物。

【0185】

実施形態２９：ＭＵＣ１６を免疫特異的に認識する抗体部分が、第１の抗体部分であり、抗ＭＵＣ１６構築物が、第２の抗原を免疫特異的に認識する第２の抗体部分をさらに含む、実施形態２５～２８のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態３０：第２の抗原が、Ｔ細胞の表面上の抗原である、実施形態２９の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態３１：第２の抗原が、ＣＤ３である、実施形態３０の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態３２：第２の抗原が、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３εおよびＣＤ３ζからなる群から選択される、実施形態３１の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態３３：第２の抗原が、ＣＤ３εである、実施形態３２の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態３４：キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１～１９または２４～２６のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態３５：ＣＡＲが、共刺激性ドメインを含む、実施形態３４の抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態３６：ＣＡＲが、ＣＤ３ゼータ（ζ）鎖細胞質シグナル伝達ドメインを含む、実施形態３４または３５の抗ＭＵＣ１６構築物。

【0186】

実施形態３７：ペプチド剤、検出剤、イメージング剤、治療剤または細胞傷害性薬剤にさらにコンジュゲートされる、実施形態１～３６のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物。
実施形態３８：配列番号２～１７のうち１種もしくは複数のアミノ酸配列または実施形態１～３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物のアミノ酸を含むポリペプチド。
実施形態３９：実施形態３８の１つまたは複数のポリペプチドをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
実施形態４０：プロモーターに作動可能に連結した実施形態３９のポリヌクレオチドを含むベクター。
実施形態４１：実施形態１～３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物、実施形態３８のポリペプチド、実施形態３９のポリヌクレオチドまたは実施形態４０のベクターを含む細胞。
実施形態４２：哺乳動物細胞である、実施形態４１の細胞。
実施形態４３：免疫細胞である、実施形態４２の細胞。

【0187】

実施形態４４：リンパ球である、実施形態４３の細胞。
実施形態４５：Ｔ細胞またはＢ細胞である、実施形態４４の細胞。
実施形態４６：実施形態１～３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物、実施形態３９のポリヌクレオチド、実施形態４０のベクターまたは実施形態４１～４５のいずれか１つの細胞の治療有効量および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
実施形態４７：それを必要とする患者において、ＭＵＣ１６関連疾患または障害を処置する方法であって、前記患者に、実施形態４６の医薬組成物を投与することを含む方法。
実施形態４８：前記ＭＵＣ１６関連疾患または障害が、がんである、実施形態４７の方法。
実施形態４９：前記がんが、卵巣、肺、膵臓、乳房、子宮、卵管または一次腹膜のがんである、実施形態４７の方法。
実施形態５０：前記がんが、転移性がんである、実施形態４７または４８の方法。

【0188】

実施形態５１：医薬組成物が、患者において転移を阻害する、実施形態４７～４９のいずれか１つの方法。
実施形態５２：前記患者が、ヒト患者である、実施形態４７～５０のいずれか１つの方法。
実施形態５３：エフェクター細胞を産生する方法であって、実施形態１～３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物をコードする１つまたは複数の核酸を用いて細胞を遺伝子修飾することを含む方法。
実施形態５４：実施形態１～３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物をコードする１つまたは複数の核酸を、患者から単離された１つまたは複数の一次細胞中に導入すること、および１つまたは複数の核酸を含む細胞を患者に投与することを含む処置の方法。
実施形態５５：細胞を拡大増殖すること、その後細胞を患者に投与することをさらに含む、実施形態５２の方法。
実施形態５６：一次細胞がリンパ球である、実施形態５２または５３の方法。
実施形態５７：一次細胞がＴ細胞である、実施形態５４の方法。
実施形態５８：さらなる治療剤の治療有効量を患者に投与することをさらに含む、実施形態４７～５５のいずれか１つの方法。

【0189】

実施形態５９：抗ＭＵＣ１６構築物が、実施形態３４～３６のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物である、実施形態５３～５８のいずれか１つの方法。
実施形態６０：試料においてＭＵＣ１６を検出する方法であって、（ａ）試料を実施形態１～２４および３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物と接触させること、および（ｂ）試料中の抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合を直接的または間接的に検出することを含む方法。
実施形態６１：抗ＭＵＣ１６構築物が、検出可能な標識にコンジュゲートされる、実施形態６０の方法。
実施形態６２：検出可能な標識が、発色剤、酵素剤、放射性同位体剤、同位体剤、蛍光剤、毒性薬剤、化学発光剤、核磁気共鳴造影剤である、実施形態６１の方法。
実施形態６３：試料中の抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合が、検出可能な標識を検出することによって直接的に検出される、実施形態６１または６２の方法。
実施形態６４：試料中の抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合が、二次抗体を使用して間接的に検出される、実施形態６０の方法。
実施形態６５：ＭＵＣ１６関連疾患または障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、ａ）実施形態１～２４および３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物の有効量を個体に投与すること、およびｂ）個体において抗ＭＵＣ１６構築物と任意のＭＵＣ１６の間の結合のレベルを直接的または間接的に決定し、閾値レベルを上回る結合のレベルが、個体がＭＵＣ１６関連疾患または障害を有することを示すことを含む方法。

【0190】

実施形態６６：ＭＵＣ１６関連疾患または障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、ａ）個体に由来する細胞を含む試料を、実施形態１～２４および３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物と接触させること、およびｂ）抗ＭＵＣ１６構築物に結合した試料中の細胞数を決定し、閾値レベルを上回る抗ＭＵＣ１６構築物に結合した細胞数の値が、個体がＭＵＣ１６関連疾患または障害を有することを示すことを含む方法。
実施形態６７：陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害の処置のための、実施形態１～３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物、実施形態３９のポリヌクレオチド、実施形態４０のベクターまたは実施形態４１～４５のいずれか１つの細胞の使用。
実施形態６８：陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害の処置のための医薬の製造における、実施形態１～３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物、実施形態３９のポリヌクレオチド、実施形態４０のベクターまたは実施形態４１～４５のいずれか１つの細胞の使用。
実施形態６９：陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害の診断のための、実施形態１～３７のいずれか１つの抗ＭＵＣ１６構築物、実施形態３９のポリヌクレオチド、実施形態４０のベクターまたは実施形態４１～４５のいずれか１つの細胞の使用。

【0191】

実施形態７０：陽性ＭＵＣ１６発現と関連する疾患または障害が、がんである、実施形態６２～６４のいずれか１つの使用。
本開示は、本出願において記載される特定の実施形態に関して制限されるべきではなく、これらは、本開示の個々の態様の単一の例示として意図される。本開示の種々の実施形態のすべては、本明細書において記載されない。当業者には明らかであろうが、趣旨および範囲から逸脱することなく、本開示の多数の改変および変法を行うことができる。本明細書において列挙されたものに加えて、本開示の範囲内の機能的に同等の方法および装置は、前記の説明から当業者には明らかとなろう。このような改変および変法は、添付の特許請求の範囲の範囲内に入るものとする。本開示は、添付の特許請求の範囲の条項およびこのような特許請求の範囲が権利を与えられる等価物の全範囲によってのみ制限されるべきである。
本開示は、特定の使用、方法、試薬、化合物、組成物または生物学的系に制限されず、それらは当然変化する可能性があるということは理解されるべきである。また、本明細書において使用された技術用語は、単に特定の実施形態を説明する目的のものであって、限定するように意図されないということも理解されるべきである。

【0192】

さらに、本開示の特徴または態様がマーカッシュグループの観点で説明される場合、当業者は、それによって、本開示が同様に、マーカッシュグループの任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループの観点で記載されると認識するであろう。
当業者によって理解されるであろうが、ありとあらゆる目的のために、特に書面の説明を提供することに関して、本明細書において開示されるすべての範囲はまた、ありとあらゆるあり得る部分範囲およびその部分範囲の組合せも包含する。任意の列挙された範囲は、同範囲が少なくとも等しい半分、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに分割されると十分に記載され、それを可能にすると容易に認識され得る。限定されない例として、本明細書において論じられる各範囲は、下部３分の１、中央の３分の１および上部３分の１などに容易に分割され得る。同様に当業者に理解されるように、「最大」、「少なくとも」、「より多い」、「より少ない」などといったすべての言語は、列挙された数を含み、その後上記で論じられるような部分範囲に分割され得る範囲を指す。最後に、当業者に理解されるように、範囲は、各個々のメンバーを含む。したがって、例えば、１～３つのセルを有するグループは、１、２または３つのセルを有するグループを指す。同様に、１～５つのセルを有するグループは、１、２、３、４または５つのセルを有するグループなどを指す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【配列表】

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