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▶ ブリス バイオファーマシューティカル（ハンゾウ）カンパニー，リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-01-29
(45)【発行日】2025-02-06
(54)【発明の名称】抗ＣＤ７３抗体、抗体薬物複合体、及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20250130BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20250130BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20250130BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20250130BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20250130BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20250130BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
A61K39/395 T
A61K39/395 L
A61K47/68
A61P35/00
A61P35/02
C12N15/13
【請求項の数】
15
(21)【出願番号】P 2023528487
(86)(22)【出願日】2021-11-19
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-11-22
(86)【国際出願番号】 CN2021131791
(87)【国際公開番号】W WO2022105881
(87)【国際公開日】2022-05-27
【審査請求日】2023-05-10
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2020/130409
(32)【優先日】2020-11-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】523173379
【氏名又は名称】ブリス バイオファーマシューティカル（ハンゾウ）カンパニー，リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000338
【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ
(72)【発明者】
【氏名】シァ，ビン
(72)【発明者】
【氏名】フェン，クイ
(72)【発明者】
【氏名】グ，リシァ
(72)【発明者】
【氏名】リ，チェン
(72)【発明者】
【氏名】ゾウ，ユホン
(72)【発明者】
【氏名】ウェイ，ジピン
【審査官】吉門 沙央里
(56)【参考文献】
【文献】カナダ国特許出願公開第０３０９３３２７（ＣＡ，Ａ１）
【文献】特表２０１３－５３３２２２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１１－５０９６７５（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む単離された抗体又はその抗原結合部分であって、各重鎖は、
（ａ１）配列番号２５～２６、３２、３４～３６に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含有する重鎖ヒンジ領域；及び
（ａ２）配列番号１に示されるアミノ酸配列を含有する可変ドメインを含み、
各軽鎖は、
（ａ３）配列番号２に示されるアミノ酸配列を含有する可変ドメインを含み、かつ、
前記抗体がヒトＣＤ７３タンパク質に特異的に結合する、
単離された抗体又はその抗原結合部分。
【請求項2】
２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む単離された抗体又はその抗原結合部分であって、各重鎖は、
（ｂ１）配列番号２５～２６に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含有する重鎖ヒンジ領域；及び
（ｂ２）配列番号３に示されるアミノ酸配列を含有する可変ドメインを含み、
各軽鎖は、
（ｂ３）配列番号４に示されるアミノ酸配列を含有する可変ドメインを含み、かつ、
前記抗体がヒトＣＤ７３タンパク質に特異的に結合する、
単離された抗体又はその抗原結合部分。
【請求項3】
前記各重鎖は、ヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインをさらに含み、ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、前記ＣＨ１ドメインの第１４２位にシステインが含まれる、請求項１または２に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分。
【請求項4】
重鎖ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列が配列番号２５である、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合部分。
【請求項5】
重鎖ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列が配列番号２６である、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合部分。
【請求項6】
前記抗体のＣＨ１ドメインが、天然ヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラス抗体のＣＨ１ドメインと同じ配列を有する、請求項３～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分。
【請求項7】
前記抗体のＣＨ１ドメインが、天然ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ１ドメインの配列を有し、Ｓ１４２Ｃ突然変異を携帯している、請求項３～５のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合部分。
【請求項8】
前記各重鎖は、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４サブクラス抗体のＦｃドメインを含み、前記Ｆｃドメインは前記ヒンジ領域の下流に位置し、それに連結され、ここで、前記Ｆｃドメインに任意選択で１つ又は複数の置換が含まれる、請求項３～５のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合部分。
【請求項9】
（ａ）前記各重鎖は配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含み、前記各軽鎖は配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含み、或いは
（ｂ）前記各重鎖は配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含み、前記各軽鎖は配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合部分。
【請求項10】
前記各重鎖は配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、前記各軽鎖は配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体又はその抗原結合部分。
【請求項11】
請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗体が、化学リンカーによって細胞毒性薬にコンジュゲートされているものを含む、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）又はその薬学的に許容される塩。
【請求項12】
前記細胞毒性薬が、エリブリン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＦ、メイタンシンＤＭ１及びＤＭ４、メイタンシノール、サンドラマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、アントラサイクリン、カリケアマイシン、ドラスタチン１０、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、タイランスタチンＡ、ウンシアラマイシン、アマニチン、リシン、ジフテリア毒素、１３１Ｉ、インターロイキン、腫瘍壊死因子、ケモカイン、イリノテカン（ＳＮ３８）及びエキソテカンからなる群より選択される、請求項１１に記載のＡＤＣ又はその薬学的に許容される塩。
【請求項13】
前記化学リンカーが、６－マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ａｌａ－ｐｈｅ）、ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ｐ－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ、ＰＡＢ）、６－マレイミドカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ）、Ｍａｌ－ＰＥＧｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、Ｍａｌ－アミド－ＰＥＧｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、ＭＣ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＰＡＢ、Ａｌｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－（Ａｌｌｏｃ）Ｌｙｓ－ＰＡＢ－ＰＮＰ、及びパーフルオロフェニル３－（ピリジン－２－イルジスルファニル）プロパノエートからなる群より選択される、請求項１１又は１２に記載のＡＤＣ又はその薬学的に許容される塩。
【請求項14】
前記細胞毒性薬がＭＭＡＥである、請求項１１又は１２に記載のＡＤＣ又はその薬学的に許容される塩。
【請求項15】
請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分、或いは請求項１１～１４のいずれか１項に記載のＡＤＣ又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
関連出願の相互参照：
本出願は、２０２０年１１月２０日に提出された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／１３０４０９の優先権を主張し、その開示内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年１１月２０日に提出された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／１３０４０９の優先権を主張し、その開示内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
〔背景技術〕
ＣＤ７３はエクト－５’－ヌクレオチダーゼ（ｅｃｔｏ－５’－ＮＴ）であり、免疫細胞、間質細胞、上皮と内皮細胞、がん細胞、及びエクソソーム群によって発現されるグリコシルホスファチジルイノシトールアンカー型受容体である。このような酵素は、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）からアデノシンへの変換を触媒する。ＣＤ７３は、内皮の完全性を維持し［１］、制御性Ｂ及びＴリンパ球の抑制機能を媒介する役割を果たしている［２］と考えられている。
ＣＤ７３はエクト－５’－ヌクレオチダーゼ（ｅｃｔｏ－５’－ＮＴ）であり、免疫細胞、間質細胞、上皮と内皮細胞、がん細胞、及びエクソソーム群によって発現されるグリコシルホスファチジルイノシトールアンカー型受容体である。このような酵素は、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）からアデノシンへの変換を触媒する。ＣＤ７３は、内皮の完全性を維持し［１］、制御性Ｂ及びＴリンパ球の抑制機能を媒介する役割を果たしている［２］と考えられている。
【0003】
健康な組織の生物学における役割に加えて、ＣＤ７３とアデノシンはそれぞれ腫瘍生物学に影響を与える。細胞外アデノシンは腫瘍に蓄積し、細胞傷害性Ｔ細胞とナチュラルキラー細胞を阻害する［３］。Ａ２ＡＲは、エフェクターＴ細胞の炎症時にアップレギュレートされるアデノシン受容体の１つであり、その活性化は、エフェクターＴ細胞の増殖、細胞傷害活性、及びサイトカインの産生を阻害する［例えば、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）、インターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）］、インターロイキン－２（ＩＬ－２）］［４］。しかし、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞でのＡ２ＡＲ活性化は、Ｔｒｅｇの拡大と免疫阻害活性を促進し、腫瘍は細胞外アデノシンを利用してがん細胞を保護する。報告は、アデノシン受容体を欠損したノックアウトマウスは、正常マウスよりも容易に腫瘍を拒絶し、ＣＤ７３を欠損したノックアウトマウスは、正常マウスと比較して抗腫瘍免疫が増加し、発がん性が低下したことを示し［５－７］、これは、更に、腫瘍がＣＤ７３を使用してアデノシンを生成して、抗腫瘍免疫を阻害することを支持している。ＣＤ７３発現の上昇は、ヒトのがんで頻繁に発生し、肺、結腸直腸、乳房、卵巣、腎臓、膠芽腫の腫瘍で観察される予後不良と関連していることがよくある。臨床的に、乳がん、卵巣がん及び結腸直腸がん（ＣＲＣ）を含むいくつかのがんタイプの腫瘍組織におけるＣＤ７３レベルの上昇は、患者の生存率の低下に関連しており［８］、これは腫瘍の進行におけるＣＤ７３の重要な役割を強調している。
【0004】
近年、ＣＤ７３に対する抗体と低分子阻害剤は、抗腫瘍免疫を回復するための魅力的な標的として、前臨床試験と臨床試験に進んでいる［９］。多くの前臨床研究において、ＣＤ７３（及び／又はＡ２ＡＲ）を阻害すると抗腫瘍免疫を回復させることができ、併用はより優れた有効性を示している。予備的な安全性データでは、ＢＭＳ－９８６１７９（抗ＣＤ７３ヒト化モノクローナル抗体）、及びニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（抗ＰＤ－１療法）の併用は、患者の耐性が良好である（ＮＣＴ０２７５４１４１）ことが報告された［１０］。将来の消化管がんの研究は、アデノシンにより媒介される免疫療法に対する耐性が診断時に存在するか、又は治療に伴って進展するかを判断することに焦点を当て、これには、大きなメリットがある。ＢＭＳ－９８６１７９とニボルマブの併用の早期結果は有望であり、膵臓がんと前立腺がんの１人又は複数の患者における臨床的利益（部分的に緩和）が報告され［１０］、これらはどちらも免疫原性が低い腫瘍である。前臨床研究では、ＣＤ７３／アデノシン療法（例えば、Ａ２ＡＲの欠失）が、免疫原性の弱い肉腫に対してもＣＤ８＋Ｔ細胞の抗腫瘍活性を解放できることが示されている［１１］。ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｃ）の選択的阻害剤であるＡＭＧ５１０（ＮＣＴ０３６００８８３）は、前臨床モデルでＩＣＩ療法の感受性を高めるなど、有望な抗腫瘍効果を最近示している［１２］。それとＣＤ７３／アデノシン受容体遮断との組み合わせは、有望な将来のアプローチになる可能性がある。
【0005】
ＡＤＣは、細胞傷害剤と結合したモノクローナル抗体である。それらは、腫瘍細胞表面タンパク質の標的特異性を利用し、従来の化学療法では達成できなかった特異性と効力で毒性ペイロードを腫瘍に効率的に送達する。ＣＤ７３をターゲットとするＡＤＣは市場承認を受けていない。Ｙｕらは、最初の抗ＣＤ７３－ＡＤＣ（Ｈｕ００１－ＭＭＡＥ、ＤＡＲ４）を報告し、ＣＤ７３を高発現する腫瘍細胞に対するその強力な細胞毒性を実証した［１３］。ＣＤ７３－ＡＤＣは、また、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）とＲＡＳ突然変異を有する神経膠瘍を含む複数の体内腫瘍モデルで高い効力を示している。しかし、ヒト以外の霊長類における予備的な毒性／薬物動態研究では、これらのＤＡＲ４ ＡＤＣｓは、可能な限り最高の耐用量レベルに近い用量でも半減期が短いことが示された。
【0006】
改善されたＰＫプロファイルとより優れた腫瘍抑制活性を備えた抗ＣＤ７３ ＡＤＣが必要である。
【0007】
〔発明の概要〕
一つの方面で、本発明は単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。幾つか実施の態様において、前記抗体は２つの重鎖と２つの軽鎖を含み、各重鎖は、（ａ１）配列番号２５～３７に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含有する重鎖ヒンジ領域；及び（ａ２）それぞれ配列番号５、配列番号６、及び配列番号７に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み；各軽鎖は、（ａ３）それぞれ配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む。幾つか実施の態様において、前記抗体は２つの重鎖と２つの軽鎖を含み、各重鎖は、（ｂ１）配列番号２５～２６に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含有する重鎖ヒンジ領域；（ｂ２）それぞれ配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み、各軽鎖は、（ｂ３）それぞれ配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む。前記抗体はヒトＣＤ７３タンパク質に特異的に結合することができる。幾つかの実施の態様において、各重鎖は、ヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインをさらに含み、ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、前記ＣＨ１ドメインの第１４２位にシステインを含む。
一つの方面で、本発明は単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。幾つか実施の態様において、前記抗体は２つの重鎖と２つの軽鎖を含み、各重鎖は、（ａ１）配列番号２５～３７に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含有する重鎖ヒンジ領域；及び（ａ２）それぞれ配列番号５、配列番号６、及び配列番号７に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み；各軽鎖は、（ａ３）それぞれ配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む。幾つか実施の態様において、前記抗体は２つの重鎖と２つの軽鎖を含み、各重鎖は、（ｂ１）配列番号２５～２６に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含有する重鎖ヒンジ領域；（ｂ２）それぞれ配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み、各軽鎖は、（ｂ３）それぞれ配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む。前記抗体はヒトＣＤ７３タンパク質に特異的に結合することができる。幾つかの実施の態様において、各重鎖は、ヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインをさらに含み、ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、前記ＣＨ１ドメインの第１４２位にシステインを含む。
【0008】
別の実施の態様において、前記抗体は２つの重鎖を含み、各重鎖は、（ａ）アミノ酸配列：－（Ｘ１）－Ｃ－（Ｘ２）－ＣＰＰＣＰ－を含み、ここで、Ｘ１は、０～７個のアミノ酸残基を有するポリペプチドセグメントであり、各アミノ酸残基は独立してシステイン残基ではない任意のアミノ残基から選択され、Ｘ２は、２～７個のアミノ酸残基を有するポリペプチドセグメントであり、各アミノ酸残基は独立してシステイン残基ではない任意のアミノ残基から選択されるヒンジ領域；（ｂ）ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、第１４２位にシステインが含まれる、前記ヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインを含み、ここで、前記抗体はヒトＣＤ７３タンパク質に特異的に結合する。ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列は、例えば、配列番号２５又は配列番号２６等、配列番号２５～３７からなる群より選択されてもよい。前記抗体は、２つのκ軽鎖を含んでもよく、各軽鎖は１つの重鎖と対になっている。
【0009】
幾つかの実施の態様において、前記抗体のＣＨ１ドメインは、天然ヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラス抗体のＣＨ１ドメインと同じ配列を有してもよい。幾つかの実施の態様において、前記抗体のＣＨ１ドメインは天然ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ１ドメインの配列を有し、Ｓ１４２Ｃ突然変異を有する。幾つかの実施の態様において、各重鎖は、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４サブクラス抗体のＦｃドメインを更に含み、それはヒンジ領域の下流に位置し、それに連結され、ここで、Ｆｃドメインに任意選択で１つ又は複数の置換が含まれ、例えば、ＬＡＬＡ突然変異が含まれる。
【0010】
前記抗体の幾つかの実施の態様において、各重鎖は、配列番号１又は配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する可変ドメインを含み、ここで、各軽鎖は、配列番号２又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する可変ドメインを含む。
【0011】
前記抗体の幾つかの実施の態様において、各重鎖は、配列番号１７、配列番号１９８、及び配列番号２１に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含み、ここで、各前記重鎖は、配列番号１８、配列番号２０、及び配列番号２２に示されるいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【0012】
具体的な実施の態様において、各重鎖は配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖は配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む。
【0013】
具体的な実施の態様において、各重鎖は配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖は配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む。
【0014】
具体的な実施の態様において、各重鎖は配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖は配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
【0015】
もう一つの方面において、本発明は本発明に記載の抗体が、化学リンカーによって細胞毒性薬にコンジュゲートされているものを含む、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）又はその薬学的に許容される塩を提供する。前記細胞毒性薬は、エリブリン（ｅｒｉｂｕｌｉｎ）、モノメチルアウリスタチンＥ（ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｅ、ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｆ、ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＥ（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｅ）、アウリスタチンＦ（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ Ｆ）、メイタンシンＤＭ１（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ ＤＭ１）及びＤＭ４、メイタンシノール（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｌ）、サンドラマイシン（ｓａｎｄｒａｍｙｃｉｎ）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ）、ピロロベンゾジアゼピン二量体、アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ）、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ドラスタチン１０（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ １０）、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、タイランスタチンＡ（ｔｈａｉｌａｎｓｔａｔｉｎ Ａ）、ウンシアラマイシン（ｕｎｃｉａｌａｍｙｃｉｎ）、アマニチン（ａｍａｎｉｔｉｎｓ）、リシン（ｒｉｃｉｎ）、ジフテリア毒素（ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ ｔｏｘｉｎ）、１３１Ｉ、インターロイキン（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｓ）、腫瘍壊死因子、ケモカイン、イリノテカン（ＳＮ３８）、エクサテカン（ｅｘａｔｅｃａｎ）及びナノ粒子からなる群より選択される。前記化学リンカーは、６－マレイミドカプロイル（６－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ、ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｐｒｏｐｉｏｎｙｌ、ＭＰ）、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ａｌａ－ｐｈｅ）、ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ｐ－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ、ＰＡＢ）、６－マレイミドカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（６－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐ－ａｍｉｎｏｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ）、Ｍａｌ－ＰＥＧｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、Ｍａｌ－アミド－ＰＥＧｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、ＭＣ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＰＡＢ、Ａｌｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－（Ａｌｌｏｃ）Ｌｙｓ－ＰＡＢ－ＰＮＰ、及びパーフルオロフェニル３－（ピリジン－２－イルジスルファニル）プロパノエート（ｐｅｒｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ ３－（ｐｙｒｉｄｉｎｅ－２－ｙｌｄｉｓｕｌｆａｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｏａｔｅ）からなる群より選択される。幾つかの実施の態様において、ここで、前記細胞毒性薬はＭＭＡＥである。
【0016】
もう一つの方面において、本発明は本発明に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分、或いは本発明に記載のＡＤＣ又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。もう一つの方面において、本発明は有効量の本発明に記載の医薬組成物を投与することを含む、ヒト被験者のがんを治療する方法を提供する。前記がんは、膀胱がん、乳がん、子宮/子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、胃腸がん、膵臓がん、直腸結腸がん、結腸がん、腎臓がん、頭頸部がん、肺がん、胃がん、生殖細胞がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、中枢神経系腫瘍、神経膠腫、黒色腫、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、またはウイルス関連のがんからなる群より選択される。
【0017】
〔図面の簡単な説明〕
〔図１〕本発明で使用される抗体のアミノ酸ナンバリングスキームの概略図である。（ａ）ヒトＩｇＧ１（κ）のＩＭＧＴベースのアミノ酸ナンバリングスキーム。（ｂ）突然変異体（ＩｇＧ１ヒンジ領域に対する）のナンバリングスキーム。
〔図１〕本発明で使用される抗体のアミノ酸ナンバリングスキームの概略図である。（ａ）ヒトＩｇＧ１（κ）のＩＭＧＴベースのアミノ酸ナンバリングスキーム。（ｂ）突然変異体（ＩｇＧ１ヒンジ領域に対する）のナンバリングスキーム。
【0018】
〔図２〕本発明の実施形態による特定の抗体の生産及び物理化学的試験の結果である。還元性（Ｒ）及び非還元性（ＮＲ）抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析：Ｍ３５－１抗体（ａ）、Ｍ３５－２抗体（ｂ）及びＭ４５－１抗体（ｃ）；ＨＥＫ２９３細胞で産生された抗体の純度と収量（ｄ）精製抗体：Ｍ３５－１抗体（ｅ）、Ｍ３５－２抗体（ｆ）及びＭ４５－１抗体（ｇ）のＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析。
【0019】
〔図３〕Ｍ３５－１、Ｍ３５－２、及びＭ４５－１抗体で調製されたＡＤＣのＨＩＣスペクトルである。（ａ）Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ、（ｂ）Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ及び（ｃ）Ｍ４５－１－ＭＭＡＥ。
【0020】
〔図４〕抗ＣＤ７３裸抗体及びそれに対応するＡＤＣとＣＤ７３の結合曲線である。（ａ）Ｍ３５－１抗体及びＭ３５－１ ＭＭＡＥ；（ｂ）Ｍ３５－２抗体及びＭ３５－２－ＭＭＡＥ。
【0021】
〔図５〕ＣＤ７３発現がん細胞における抗ＣＤ７３裸抗体とそれに対応するＡＤＣの内在化である。ａ：ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞、ｂ：ＮＣＩ－Ｈ４１１細胞。
【0022】
〔図６〕ＣＤ７３発現がん細胞に対するＭ３５－１－ＭＭＡＥ、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ、Ｍ４５－１－ＭＭＡＥのＣＤ７３の細胞毒性曲線である。ａ：Ｕ８７ＭＧ細胞、ｂ：ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞、ｃ：ＮＣＩ－Ｎ８７細胞、ｄ：ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞。
【0023】
〔図７〕Ｕ８７神経膠腫、ＮＣＩ－Ｎ８７胃がん及びＮＣＩ－Ｈ４４１ ＮＳＣＬＣを異種移植した無胸腺ヌードマウスにおけるＭ３５－１－ＭＭＡＥ及びＭ３５－２－ＭＭＡＥの体内薬物効力である。
【0024】
〔発明を実施するための形態〕
本発明はＣＤ７３をターゲットとする抗体とＡＤＣ、及び抗腫瘍能力におけるそれらの使用を提供する。
本発明はＣＤ７３をターゲットとする抗体とＡＤＣ、及び抗腫瘍能力におけるそれらの使用を提供する。
【0025】
一つの方面において、本発明は抗ＣＤ７３抗体に基づく修飾された抗ＣＤ７３抗体、及びこれらの修飾された抗ＣＤ７３抗体に基づく２つの部位特異性コンジュゲート負荷を有するＡＤＣを提供し、即ち、各修飾された抗ＣＤ７３抗体分子は、２つの細胞傷害性薬剤ペイロードとコンジュゲートされ、薬物対抗体比（「ＤＡＲ」）は２である。以前に報告されたＤＡＲ４ ＡＤＣと比較して、本発明のＤＡＲ２ ＡＤＣは、より良好なＰＫ分布を提供し、より良好な腫瘍組織浸透性及び潜在的により良好な腫瘍阻害活性を提供することができる。
【0026】
一つの方面において、本発明は２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む単離された抗体又はその抗原結合部分であって、
各重鎖は、
（ａ１）配列番号２５～３７に示されるいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２５又は配列番号２６）を含有する重鎖ヒンジ領域；及び
（ａ２）それぞれ配列番号５、配列番号６、及び配列番号７に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み、
各軽鎖は、
（ａ３）それぞれ配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む、
単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
各重鎖は、
（ａ１）配列番号２５～３７に示されるいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２５又は配列番号２６）を含有する重鎖ヒンジ領域；及び
（ａ２）それぞれ配列番号５、配列番号６、及び配列番号７に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み、
各軽鎖は、
（ａ３）それぞれ配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む、
単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
【0027】
もう一つの方面において、本発明は２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む単離された抗体又はその抗原結合部分であって、
各重鎖は、
（ａ１）配列番号２５～２６に示されるいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２５又は配列番号２６）を含有する重鎖ヒンジ領域；及び
（ａ２）それぞれ配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み、
各軽鎖は、
（ａ３）それぞれ配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む、
単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
各重鎖は、
（ａ１）配列番号２５～２６に示されるいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２５又は配列番号２６）を含有する重鎖ヒンジ領域；及び
（ａ２）それぞれ配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変ドメインを含み、
各軽鎖は、
（ａ３）それぞれ配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６示されるアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１領域、ＣＤＲ２領域、及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインを含む、
単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
【0028】
前記抗体は、ヒトＣＤ７３タンパク質に特異的に結合できる。いくつかの実施の形態において、重鎖ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列は配列番号２５である。いくつかの実施の形態において、重鎖ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列は配列番号２６である。
【0029】
この形式の重鎖を含む抗体は、好ましくは、ＣＨ１ドメインのＣ１４２（又は、第１４２位近くのシステインであり、下記でさらに説明されるＩＭＧＴナンバリングスキームによる）と軽鎖の最後のシステイン残基との間でＨ－Ｌ鎖間ジスルフィド結合を形成する。天然ＣＰＰＣＰ配列の上流のヒンジ領域のシステイン残基は、３番目のＨ－Ｈ鎖間ジスルフィド結合を形成する。ＣＨ１ドメインのアミノ酸第１４２位又はその近くのシステインは、ＩｇＧ１サブタイプの単一アミノ酸の突然変異又は挿入によって導入されるか、又はＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブタイプからのＣＨ１ドメインの天然のシステインであってもよい。ＩｇＧ１の天然Ｈ－Ｌジスルフィド結合（ＩｇＧ１抗体重鎖のヒンジ領域のシステインと対になった軽鎖の末端の間に位置する）と比較して、この形式のＨ－Ｌジスルフィド結合はより安定しており、抗体への薬物結合中に還元状態で完全な状態をつことができる。これにより、軽鎖薬物複合体を含むＡＤＣを得る可能性を大幅に低下させる。
【0030】
免疫グロブリンスーパーファミリーのＩＭＧＴナンバリングスキームは、本明細書では、ナンバリングスキーム（図１のａの概略図）を簡略化するために使用され、ここで、ＶＨ又はＶＬ領域はそれぞれアミノ酸残基１～１２８を含む。従って、ＣＨ１ドメインのアミノ酸の番号はａａ １２９～２２６であり；κドメインはａａ １２９～２３５であり；ヒンジ領域はａａ ２２７～２４１（ＩｇＧ１による）であり；ＣＨ２はａａ ２４２～３５１であり、ＣＨ３はａａ ３５２～４５６である（図１のａを参照）。このナンバリングスキームに基づいて、野生型ＩｇＧ１（κ）におけるＨ－Ｌ鎖間ジスルフィド結合は、Ｈ（Ｃ２３１）～Ｌ（Ｃ２３５）の間で形成されるが、ＩｇＧ２（κ）（又はＩｇＧ３（κ）又はＩｇＧ４（κ））においては、Ｈ（Ｃ１４２）－Ｌ（Ｃ２３５）の間で形成される可能性がある。重鎖２３０位のセレインがシステインに変更されたＩｇＧ１突然変異体はＩｇＧ１（Ｓ２３０Ｃ）と命名され、Ｃ２３１が欠損したＩｇＧ１突然変異体はＩｇＧ１（Δ２３１）と命名される。Ｃ２３１後に一つのリジンが挿入されたＩｇＧ１突然変異体はＫ２３１．１と命名され、Ｃ２３１後に２つのアミノ酸ＫＬが挿入されたＩｇＧ１突然変異体はＫ２３１．１Ｌ２３１．２と命名される（ＩｇＧ１のヒンジ領域に導入された突然変異の象徴的な例をいくつか示す図１のｂを参照）。例えば、本発明の操作された抗体である抗体Ｍ３５－１及びＭ４５－１は、ＥＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２５）を含む修飾されたヒンジアミノ酸配列を含み、抗体Ｍ３５－２は、ＥＰＰＫＳＤＣＫＴＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２６）を含む刺修飾されたヒンジアミノ酸を含む。抗体Ｍ３５－１及びＭ４５－１にはＳ１４２Ｃ突然変異を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ１が含まれる一方、抗体Ｍ３５－２にはヒトＩｇＧ２ ＣＨ１が含まれていることに注意されたい。
【0031】
いくつかの実施の形態において、各重鎖は、ヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインをさらに含み、ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、前記ＣＨ１ドメインは第１４２位に位置するシステインを含む。
【0032】
もう一つの方面において、本発明は２つの重鎖を含む単離された抗体又はその抗原結合部分であって、各重鎖は、（ａ）アミノ酸配列：－（Ｘ１）－Ｃ－（Ｘ２）－ＣＰＰＣＰ－を含み、ここで、Ｘ１は、０～７個のアミノ酸残基を含むポリペプチドセグメントであり、各アミノ酸残基は独立してシステイン残基ではない任意のアミノ残基から選択され、Ｘ２は、２～７個のアミノ酸残基を含むポリペプチドセグメントであり、各アミノ酸残基は独立してシステイン残基ではない任意のアミノ残基から選択され；（ｂ）ＩＭＧＴナンバリングスキームによると、第１４２位にシステインが含まれるヒンジ領域の上流に位置し、それに連結されたヒトＣＨ１ドメインを含み、ここで、前記抗体はヒトＣＤ７３タンパク質に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
【0033】
いくつかの実施の形態において、前記ヒンジ領域に含まれるアミノ酸配列は、例えば、配列番号２５又は配列番号２６等の配列番号２５～３７からなる群から選択される。いくつかの実施の形態において、本明細書に記載の抗体は、２つのκ軽鎖を含むことができ、それぞれ軽鎖は１つの重鎖と対になっている。抗体における２つの重鎖は同一である可能性がある。抗体における２つの軽鎖は同一である可能性がある。
【0034】
いくつかの実施の形態において、抗体のＣＨ１ドメインは、天然ヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラス抗体のＣＨ１ドメインの配列と同じ配列を有するか、又はＳ１４２Ｃ突然変異を有する天然ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ１ドメインの配列と同じ配列を有する。
【0035】
いくつかの実施の形態において、各重鎖は、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４サブクラス抗体のＦｃドメインを含んでもよく、それは前記ヒンジ領域の下流に位置し、それに連結され、ここで、Ｆｃドメインには、例えばＬＡＬＡ突然変異などの任意選択で１つ又は複数の置換が含まれる。
【0036】
いくつかの実施の形態において、各重鎖は、可変ドメインを含み、前記可変ドメインに配列番号１又は配列番号３に示されるアミノ酸配列が含まれ、各軽鎖は、可変ドメインを含み、前記可変ドメインに配列番号２又は配列番号４に示されるアミノ酸配列が含まれる。
【0037】
いくつかの実施の形態において、各重鎖は、配列番号１７、配列番号１９、及び配列番号２１のいずれか一つに示されるアミノ酸配列を含み；各軽鎖は、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２のいずれか一つに示されるアミノ酸配列を含む。
【0038】
いくつかの実施の形態において、前記各重鎖は配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖は配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む。
【0039】
いくつかの実施の形態において、前記各重鎖は配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖は配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む。
【0040】
いくつかの実施の形態において、前記各重鎖は配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖は配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
【0041】
本明細書で使用される「単離された抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。抗原に特異的に結合する単離された抗体は、当該抗原に結合しない抗体を実質的に含まない。
【0042】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な分子組成の抗体分子群の製剤を指し、ここで、抗体分子群における個々抗体は、ごく少量存在可能性な自然に発生することができる突然変異を除いて同一である。
【0043】
「ヒトＣＤ７３に特異的に結合する」抗体又は分子は、ヒトＣＤ７３タンパク質に結合するが、非ヒトＣＤ７３タンパク質のタンパク質には実質的に結合しない抗体又はポリペプチド分子を指す。
【0044】
出発ポリペプチドのアミノ酸配列突然変異体をコードするＤＮＡは、当技術分野で知られている様々な方法によって調製することができる。これらの方法には、ポリペプチドをコードする以前に調製されたＤＮＡの部位特異的（又はオリゴヌクレオチドによって媒介される）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、およびカセット突然変異誘発による調製が含まれるが、これらに限定されない。組換え抗体の突然変異体は、制限断片操作、又は合成オリゴヌクレオチドを用いたオーバーラップ伸長ＰＣＲによっても構築され得る。変異原性プライマーは、システインコドン置換をコードする。標準的な突然変異誘発技術を用いて、そのような突然変異操作された抗体をコードするＤＮＡを生成させることができる。
【0045】
もう一つの方面において、本発明は、本明細書に記載の抗体又はいずれかの抗体の抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。核酸分子を含む発現ベクターを有する宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、リンパ球細胞、ヒト胎児腎細胞、又は大腸菌などの微生物及び酵母などの真菌）を本発明の抗体の生産に使用でき、好ましくは、モノクローナル抗体である。一つの実施形態において、本発明の部分的又は完全長抗体をコードするＤＮＡは、標準的な分子生物学技術によって得ることができ、遺伝子は、１つ又は複数の発現ベクターへの挿入によって、転写及び翻訳調節配列に作動可能に連結される。「作動可能に連結される（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」という用語は、ベクター内の転写及び翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写及び翻訳を調節するという意図された機能を果たすように、抗体遺伝子がベクターに連結されていることを示す。「調節配列（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」という用語は、抗体遺伝子の転写又は翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図している。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ．（１９９０））に記載された通りである。哺乳動物の宿主細胞発現のための好ましい調節配列には、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）から由来し、例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ）及びポリオーマプロモーター及び／又はエンハンサーなどのアデノウイルスが含まれる。或いは、ユビキチンプロモーター又はβグロビンプロモーターなどの非ウイルス調節配列を使用することができる。さらに、調節エレメントは、ＳＶ４０初期プロモーター及びヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の長い末端反復からの配列を含むＳＲαプロモーター系などの、異なる供給源からの配列で構成される（Ｔａｋｅｂｅ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ８：４６６－４７２）。発現ベクター及び発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。
【0046】
抗体をコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入することができる。組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。抗体をコードするＤＮＡは、シグナルペプチドがＤＮＡによってコードされる抗体のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（即ち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。
【0047】
もう一つの方面において、抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）又はその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの実施の形態において、ＡＤＣは、本発明に記載の化学リンカーによって細胞毒性薬にコンジュゲートされた本発明の抗体を含む。
【0048】
いくつかの実施の形態において、前記細胞毒性薬は、エリブリン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＦ、メイタンシンＤＭ１及びＤＭ４、メイタンシノール、サンドラマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、アントラサイクリン、カリケアマイシン、ドラスタチン１０、デュオカルマイシン、ドキソルビシン、タイランスタチンＡ、ウンシアラマイシン、アマニチン、リシン、ジフテリア毒素、１３１Ｉ、インターロイキン、腫瘍壊死因子、ケモカイン、イリノテカン（ＳＮ３８）、エキソテカン及びナノ粒子からなる群より選択される。他の実施の形態において、ＡＤＣ中の細胞毒性薬はＭＭＡＥである。
【0049】
抗体部分と細胞傷害性薬物を連結する化学リンカーは、切断可能又は切断不可能であり得る。いくつかの実施の形態において、リンカーは、ｎが１～２０（即ち、１から２０の反復単位（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）を有する）であるＰＥＧｎスペーサーを含む。いくつかの実施の形態において、前記化学リンカーは、ＰＥＧｎスペーサーに連結されたリンカーセグメントをさらに含む。いくつかの実施の形態において、前記化学リンカーはリンカーセグメントを含むが、ＰＥＧｎスペーサーは含まない。いくつかの実施の形態において、前記化学リンカーは、６－マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ａｌａ－ｐｈｅ）、ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、６－マレイミドカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ｐ－アミノベンゾキシルオキシカルボニル（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ）、Ｍａｌ－ＰＥＧｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、Ｍａｌ－アミド－ＰＥＧｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（ｎ＝１～２０）、ＭＣ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＰＡＢ、Ａｌｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－（Ａｌｌｏｃ）Ｌｙｓ－ＰＡＢ－ＰＮＰ、及びパーフルオロフェニル３－（ピリジン－２－イルジスルファニル）プロパノエート及びその組み合わせからなる群より選択されるフラグメントを含む。
【0050】
本発明において、ＡＤＣの薬学的に許容される塩には、無機酸、カルボン酸及びスルホン酸の酸付加塩が含まれ、例えば、下記の酸の塩：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸及び安息香酸が含まれる。
【0051】
本発明の抗体－薬物複合体の薬学的に許容される塩には、従来の塩基の塩がさらに含まれ、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩及びマグネシウム塩）とアンモニア又は１～１６個の炭素原子を含む有機アミンから誘導されるアンモニウム塩が含まれ、ここで、有機アミンは、例えば、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンズアミド、Ｎ－メチルピペリジン、Ｎ－メチルモルホリン、アルギニン、リジン、１，２－エチレンジアミンである。
【0052】
本明細書で使用されるＡＤＣは、薬物分子と抗体（又はその抗原結合部分）を含む分子を指し、ここで、薬物と抗体（又はその抗原結合部分）はリンカーによって共有結合されている。本明細書における「ＡＤＣ製剤」は、ＡＤＣ分子のコレクション又は群を指し、その構造は化学リンカーと抗体（又はその抗原結合部分）の異なる付着部位によって異なる場合がある。いくつかの実施の形態において、化学リンカーは主に又は大部分（例えば、≧８０％、≧８５％、≧９０％、≧９５％、又は≧９８％）で重鎖上のシステインと共役して、ＡＤＣ製剤が実質的に共役する軽鎖がない結果を引き起こす。いくつかの実施の形態において、化学リンカーは、主に抗体の重鎖のヒンジ領域のシステインを介して抗体と共役する。いくつかの実施の形態において、薬物対抗体比（ＤＡＲ）が２であるＡＤＣ分子は、ＡＤＣ分子の総量の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又は少なくとも９０％を占める。
【0053】
もう一つの方面において、本発明は本発明の１つ又は複数の抗体、ＡＤＣ、又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本発明に使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤が含まれる。これらには、生理学的に適合した溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、界面活性剤、増粘剤又は乳化剤、固体結合剤、分散剤又は懸濁助剤、可溶化剤、着色剤、調味剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、防腐剤、等張剤などが含まれるが、これらに限定されない。適切な担体の選択は、当業者の知識の範囲内にある。
【0054】
当該組成物は、別の抗体、薬物、例えば、細胞傷害剤又は抗腫瘍剤などの薬物の１つ又は複数の追加的な薬学的に活性成分を含んでもよい。本発明の医薬組成物は、例えば、別の抗がん剤、別の抗炎症剤などとの併用療法で投与することもできる。
【0055】
前記医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、表皮、及びその他の投与経路に適している。投与経路に応じて、活性成分を材料でコーティングするか、又は材料又は構造に充填して、酸及びそれを不活性化させる可能性のある他の自然条件から保護することができる。本発明で使用される「非経口投与」という語句は、通常は注射による経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入を含むが、これらに限定されない。或いは、本発明の組成物は、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸内、舌下又は局所などの局所、表皮又は粘膜投与経路などの非経口経路を介して投与することができる。
【0056】
もう一つの方面において、本発明は有効量の本明細書の医薬組成物を投与することを含む、ヒト被験者におけるがんを治療する方法を提供する。がんは、ヒトＣＤ７３タンパク質の過剰発現又はアップレギュレーションに関連するがんであり得る。例えば、がんは、膀胱がん、乳がん、子宮／子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、胃腸がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎臓がん、頭頸部がん、肺がん、胃がん、胚細胞がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、中枢神経系腫瘍、神経膠腫、黒色腫、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫、又はウイルス関連のがんからなる群より選択され得る。がんは、転移性がん、難治性がん、又は再発性がんであり得る。
【0057】
被験者に組成物を投与する時、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように投与量を調節することができる。被験者、治療する疾患などに応じて、単回ボーラス又は分割投与が可能である。本明細書で使用される投与量の単位形態は、治療される対象のための単位投与量として適した物理的に分離された単位を指す。各単位投与量には、必要な薬学的担体と関連して、所望の治療効果を生み出すように計算された所定の量の有効成分が含まれる。徐放性製剤を使用することができるが、その場合、より少ない頻度で投与する必要がある。
【0058】
本発明の抗体又はそのＡＤＣの薬学的に許容される塩の投与について、投与量の範囲は、被験者の体重に応じて、約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇであり得、より通常は０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。例えば、投薬量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、又は１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。適切な治療法案は、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回などであり得る。本発明の抗ＥＧＦＲ抗体の投与方案の実例には、１ｍｇ／ｋｇ体重又は３ｍｇ／ｋｇ体重の静脈内投与が含まれ得る。
【0059】
本発明の抗体又はＡＤＣ又はその薬学的許容可される塩の「治療有効量」又は「有効量」は、好ましくは、疾患症状の重症度の低下、疾患症状のない期間の頻度及び／又は持続期間の増加、或いは疾患による怪我又は障害可能性の予防又は軽減、或いは疾患の進行の阻害又は遅延である。例えば、腫瘍担持被験者の治療では、未治療の被験者と比較して、抗体組成物の「治療有効量」は、腫瘍増殖を少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは、少なくとも約８０％を阻害することができる。
【0060】
実施例
１．操作されたＭ３５－１、Ｍ４５－１、及びＭ３５－２抗体
高いＤＡＲ２比を持つＡＤＣを生成するための操作された抗体は、表１に示される仕様で設計された。
１．操作されたＭ３５－１、Ｍ４５－１、及びＭ３５－２抗体
高いＤＡＲ２比を持つＡＤＣを生成するための操作された抗体は、表１に示される仕様で設計された。
【0061】
【表1】
【0062】
２．Ｍ３５－１、Ｍ３５－２及びＭ４５－１抗体の発現と精製
Ｍ３５－１、Ｍ３５－２及びＭ４５－１抗体の発現では、ＨＥＫ２９３細胞での産生を改善するために、コドンの最適化と遺伝子合成を実行した。全長の重鎖と軽鎖のＤＮＡをそれぞれ個別のｐｃＤＮＡ３プラスミドにクローニングした。対になったプラスミドはＨＥＫ２９３細胞に一過性トランスフェクションされ、プロテインＡを１ステップの精製により、テストに十分な量のタンパク質を調製した。この形態で作製された抗体は、発見が良好で、収量で十分で、プロテインＡの１ステップ精製プロセスで高純度に精製することができた（図２）。
Ｍ３５－１、Ｍ３５－２及びＭ４５－１抗体の発現では、ＨＥＫ２９３細胞での産生を改善するために、コドンの最適化と遺伝子合成を実行した。全長の重鎖と軽鎖のＤＮＡをそれぞれ個別のｐｃＤＮＡ３プラスミドにクローニングした。対になったプラスミドはＨＥＫ２９３細胞に一過性トランスフェクションされ、プロテインＡを１ステップの精製により、テストに十分な量のタンパク質を調製した。この形態で作製された抗体は、発見が良好で、収量で十分で、プロテインＡの１ステップ精製プロセスで高純度に精製することができた（図２）。
【0063】
３．Ｍ３５－１、Ｍ３５－２及びＭ４５－１抗体の共役によるＡＤＣの生成
薬物コンジュゲートを生成させるために、中性のｐＨでＴＣＥＰを精製抗体を含むＰＢＳ溶液に加えた。穏やかな還元条件（ＴＣＥＰ：ｍＡｂ＝１．１～２．４、中性ｐＨ、室温で２４０分未満）では、抗体の鎖間ジスルフィド結合を部分的に還元した。ＤＭＡに薬物―リンカー（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）を加えて抗体と反応させて、所望の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を得た。ＡＤＣを特徴付けるために、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して、ＡＤＣにおける薬物分布及び薬物と抗体のモル比を評価し、代表的なＨＩＣクロマトグラムは図３に示された通りである。これらの穏やかな還元／共役条件下では、前記３つすべての操作された抗体（Ｍ３５－１、Ｍ３５－２、及びＭ４５－１）で調製されたＡＤＣは主にＤＡＲ２ ＡＤＣ種で構成され、マイナーピーク（ｍｉｎｏｒ ｐｅａｋ）は裸抗体（ＤＡＲ０）とＤＡＲ４ ＡＤＣ種であった（図３のａ、図３のｂ、図３のｃ）。
薬物コンジュゲートを生成させるために、中性のｐＨでＴＣＥＰを精製抗体を含むＰＢＳ溶液に加えた。穏やかな還元条件（ＴＣＥＰ：ｍＡｂ＝１．１～２．４、中性ｐＨ、室温で２４０分未満）では、抗体の鎖間ジスルフィド結合を部分的に還元した。ＤＭＡに薬物―リンカー（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）を加えて抗体と反応させて、所望の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を得た。ＡＤＣを特徴付けるために、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して、ＡＤＣにおける薬物分布及び薬物と抗体のモル比を評価し、代表的なＨＩＣクロマトグラムは図３に示された通りである。これらの穏やかな還元／共役条件下では、前記３つすべての操作された抗体（Ｍ３５－１、Ｍ３５－２、及びＭ４５－１）で調製されたＡＤＣは主にＤＡＲ２ ＡＤＣ種で構成され、マイナーピーク（ｍｉｎｏｒ ｐｅａｋ）は裸抗体（ＤＡＲ０）とＤＡＲ４ ＡＤＣ種であった（図３のａ、図３のｂ、図３のｃ）。
【0064】
４．抗体及びそれに対応するＡＤＣのＣＤ７３結合活性の測定
ＥＬＩＳＡ測定を使用して、抗体とＡＤＣのＣＤ７３結合能力を評価及び比較した。ヒトＣＤ７３タンパク質を９６ウェルプレートにコーティングし、プレートを４℃で一晩培養した。試料を勾配希釈し、合計８個の希釈液とした。次に、希釈した試料をＣＤ７３コーティングプレートに移し、室温で１．５時間培養した。ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（Ｓｉｇｍａ、Ａ０１７０）を検出試薬とし、ＴＭＢを使用して比色反応を実行した。マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ １９０）でプレートの４５０／６５０ｎｍにおける吸光度を読み取り、用量応答曲線形式の４パラメータロジスティックモデルを使用してデータ分析を実行した。
ＥＬＩＳＡ測定を使用して、抗体とＡＤＣのＣＤ７３結合能力を評価及び比較した。ヒトＣＤ７３タンパク質を９６ウェルプレートにコーティングし、プレートを４℃で一晩培養した。試料を勾配希釈し、合計８個の希釈液とした。次に、希釈した試料をＣＤ７３コーティングプレートに移し、室温で１．５時間培養した。ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（Ｓｉｇｍａ、Ａ０１７０）を検出試薬とし、ＴＭＢを使用して比色反応を実行した。マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ １９０）でプレートの４５０／６５０ｎｍにおける吸光度を読み取り、用量応答曲線形式の４パラメータロジスティックモデルを使用してデータ分析を実行した。
【0065】
図４及び表２の結果は、Ｍ３５－１抗体又はＭ３５－２抗体で調製されたＡＤＣ（Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ及びＭ３５－２－ＭＭＡＥ）は、対応する裸抗体と比較して、ＣＤ７３と同様の結合活性を有し、ペイロード結合がＡＤＣの標的結合能力に影響を与えないことを示唆した。
【0066】
【表2】
【0067】
５．ＣＤ７３発現細胞への抗体及びＡＤＣの結合の測定
ＦＡＣＳ測定を使用して、抗体及びＡＤＣのＣＤ７３発現細胞への結合能力を試験及び比較した。測定のために、標的細胞と試料を４℃で１時間培養した。０．５％のＢＳＡを含むＰＢＳで洗浄した後、試料と二次抗体（ヤギｐＡｂ抗ヒトＩｇＧ（ＦＩＴＣ）（Ａｂｃａｍ、ａｂ９７２２４））を４℃で０．５時間培養した。低サイトメーター（ＢＤ、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６ Ｐｌｕｓ）でＦＡＣＳを実行し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を記録した。複数のＣＤ７３発現細胞に対するＭ３５－１、Ｍ３５－２のＭＦＩは表３に示された通りである。ＣＤ７３高発現細胞及び低発現細胞を代表する４つの細胞株（ＮＣＩ－Ｈ１９７５、ＮＣＩ－Ｈ２９２、ＮＣＩ－Ｈ４４１及びＰＣ９）を使用して、異なる抗体構築物とＡＤＣの結合能力を比較した。Ｍ３５－１及びＭ３５－２抗体、並びにそれらに対応するＡＤＣ（Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ）は、試験したすべての細胞で同様のＭＦＩレベルを示し（表４）、ＣＤ７３結合活性が共役の影響を受けないことを示した。
ＦＡＣＳ測定を使用して、抗体及びＡＤＣのＣＤ７３発現細胞への結合能力を試験及び比較した。測定のために、標的細胞と試料を４℃で１時間培養した。０．５％のＢＳＡを含むＰＢＳで洗浄した後、試料と二次抗体（ヤギｐＡｂ抗ヒトＩｇＧ（ＦＩＴＣ）（Ａｂｃａｍ、ａｂ９７２２４））を４℃で０．５時間培養した。低サイトメーター（ＢＤ、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６ Ｐｌｕｓ）でＦＡＣＳを実行し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を記録した。複数のＣＤ７３発現細胞に対するＭ３５－１、Ｍ３５－２のＭＦＩは表３に示された通りである。ＣＤ７３高発現細胞及び低発現細胞を代表する４つの細胞株（ＮＣＩ－Ｈ１９７５、ＮＣＩ－Ｈ２９２、ＮＣＩ－Ｈ４４１及びＰＣ９）を使用して、異なる抗体構築物とＡＤＣの結合能力を比較した。Ｍ３５－１及びＭ３５－２抗体、並びにそれらに対応するＡＤＣ（Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ）は、試験したすべての細胞で同様のＭＦＩレベルを示し（表４）、ＣＤ７３結合活性が共役の影響を受けないことを示した。
【0068】
【表3】
【0069】
【表4】
【0070】
６．ＣＤ７３発現細胞への抗体及びＡＤＣの内在化
ＦＡＣＳベースの内在化アッセイを使用して、ＮＣＩ－Ｈ１９７５及びＮＣＩ－Ｈ４４１（それぞれＣＤ７３高発現細胞及び低発現細胞である）への裸抗体及びそれに対応するＡＤＣの内在化を検出し、比較した。当該検出は、抗体又はＡＤＣ（１００００ｎｇ／ｍＬ）と標的細胞を混合したチューブから開始し、４℃で１時間冷却させた後、チューブを３７℃に移した。抗体－標的又はＡＤＣ－標的複合体の内在化測定時間は、４時間であった。図５に示されるように、抗体とＡＤＣの両方がＮＣＩ－Ｈ１９７５とＮＣＩ－Ｈ４４１に効率的に内在化できた。
ＦＡＣＳベースの内在化アッセイを使用して、ＮＣＩ－Ｈ１９７５及びＮＣＩ－Ｈ４４１（それぞれＣＤ７３高発現細胞及び低発現細胞である）への裸抗体及びそれに対応するＡＤＣの内在化を検出し、比較した。当該検出は、抗体又はＡＤＣ（１００００ｎｇ／ｍＬ）と標的細胞を混合したチューブから開始し、４℃で１時間冷却させた後、チューブを３７℃に移した。抗体－標的又はＡＤＣ－標的複合体の内在化測定時間は、４時間であった。図５に示されるように、抗体とＡＤＣの両方がＮＣＩ－Ｈ１９７５とＮＣＩ－Ｈ４４１に効率的に内在化できた。
【0071】
７．ＣＤ７３発現細胞に対するＡＤＣの細胞毒性
ＡＤＣ（Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ又はＭ４５－１－ＭＭＡＥ）の細胞毒性を評価し、体外細胞毒性測定で、異なるＣＤ７３発現レベルの複数の細胞株と比較した。測定を実施するために、標的細胞を各細胞株の最適化細胞密度で９６ウェル平底組織培養プレートに播種し、３７℃、５％のＣＯ２で一晩（１６～２０時間）培養した。ＡＤＣ試料の勾配希釈液を細胞プレートに移し、測定プレートを定義された期間（細胞株に応じて３～７日）培養して、最適な殺傷を実現した。４パラメータロジスティックモデルの用量反応曲線を用いてデータ分析を実行した。図６に示されるように、Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ、及びＭ４５－１－ＭＭＡＥは、ＣＤ７３を高発現するＵ８７ＭＧ細胞に対して同様の細胞毒性を発揮したが、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥは、Ｍ３５－１－ＭＭＡＥよりもＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞に対して強力であるようであった。効力の差は、ＣＤ７３を低発現するＮＣＩ－Ｎ８７及びＮＣＩ－Ｈ２９２細胞ではより大きいようであった。
ＡＤＣ（Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ又はＭ４５－１－ＭＭＡＥ）の細胞毒性を評価し、体外細胞毒性測定で、異なるＣＤ７３発現レベルの複数の細胞株と比較した。測定を実施するために、標的細胞を各細胞株の最適化細胞密度で９６ウェル平底組織培養プレートに播種し、３７℃、５％のＣＯ２で一晩（１６～２０時間）培養した。ＡＤＣ試料の勾配希釈液を細胞プレートに移し、測定プレートを定義された期間（細胞株に応じて３～７日）培養して、最適な殺傷を実現した。４パラメータロジスティックモデルの用量反応曲線を用いてデータ分析を実行した。図６に示されるように、Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ、及びＭ４５－１－ＭＭＡＥは、ＣＤ７３を高発現するＵ８７ＭＧ細胞に対して同様の細胞毒性を発揮したが、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥは、Ｍ３５－１－ＭＭＡＥよりもＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞に対して強力であるようであった。効力の差は、ＣＤ７３を低発現するＮＣＩ－Ｎ８７及びＮＣＩ－Ｈ２９２細胞ではより大きいようであった。
【0072】
８．抗神経膠腫がん異種移植の無胸腺ヌードマウスにおけるＭ３５－１－ＭＭＡＥ及びＭ３５－２－ＭＭＡＥの体内有効性。
【0073】
Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ及びＭ３５－２－ＭＭＡＥの抗腫瘍の可能性は、ヌードマウスで構築されたヒトＵ８７神経膠腫、ＮＣＩ－Ｈ１９７５ＮＳＣＬＣ、及びＮＣＩ－Ｎ８７胃がん異種移植片モデルで評価された。がん細胞は、無胸腺ヌードマウスの背中に移植された。担がんマウスは、コントロール（ビヒクル）、Ｍ３５－１、又はＭ３５－２ ＡＤＣのいずれかの単回静脈内治療を受けた。治療後の様々な時点で腫瘍体積を測定した。図７に示される結果は、高ＤＡＲ２ ＡＤＣの抗ＣＤ７３による治療が、すべての試験モデルで腫瘍増殖を劇的に阻害できるだけではなく、ＣＤ７３高発現腫瘍モデル（Ｕ８７及びＮＣＩ－Ｈ１９７５モデル）で腫瘍拒絶を引き起こす可能性があることを示した。
【0074】
引用文献
［１］ Ｓａｚｅ Ｚ， Ｓｃｈｕｌｅｒ ＰＪ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ， ２０１３； １２２：９－１８
［２］ Ｊａｌｋａｎｅｎ Ｓ， Ｓａｌｍｉ Ｍ． Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ， ２００８； ２８：１８－２６
［３］ Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ＳＢ， Ｈｏ ＰＹ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ． ２０１８， ６：１１３６－１１４９
［４］ Ｌａｐｐａｓ ＣＭ， Ｒｉｅｇｅｒ ＪＭ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２００５， １７４：１０７３－８０
［５］ Ｏｈｔａ Ａ， Ｇｏｒｅｌｉｋ Ｅ， Ｐｒａｓａｄ ＳＪ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ． ２００６； １０３：１３１３２－１３１２７
［６］ Ｗａｉｃｋｍａｎ ＡＴ， Ａｌｍｅ Ａ， Ｓｅｎａｌｄｉ Ｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ． ２０１２； ６１：９１７－９２６
［７］ Ｓｔａｇｇ Ｊ， Ｂｅａｖｉｓ ＰＡ， Ｄｉｖｉｓｅｋｅｒａ Ｕ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１２； ７２：２１９０－２１９６
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［９］ Ｐｅｒｒｏｔ Ｉ， Ｍｉｃｈａｕｄ ＨＡ， Ｇｉｒａｕｄｏｎ－Ｐａｏｌｉ Ｍ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ． ２０１９， ２７：２４１１－２４２５
［１０］ Ｓｉｕ ＬＬ， Ｂｕｒｒｉｓ Ｈ， Ｌｅ ＤＴ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１８，７８
［１１］ Ｋｊａｅｒｇａａｒｄ Ｊ， Ｈａｔｆｉｅｌｄ Ｓ， Ｊｏｎｅｓ Ｇ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１８， ２０１：７８２－７９１
［１２］ Ｃａｎｏｎ Ｊ， Ｒｅｘ Ｋ， Ｓａｉｋｉ ＡＹ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ２０１９， ５７５：２１７－２２３．
［１３］ Ｊｉｎ Ｒ ， Ｌｉｕ Ｌ ， Ｘｉｎｇ Ｙ ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， ２０２０。
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［２］ Ｊａｌｋａｎｅｎ Ｓ， Ｓａｌｍｉ Ｍ． Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ， ２００８； ２８：１８－２６
［３］ Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ＳＢ， Ｈｏ ＰＹ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ． ２０１８， ６：１１３６－１１４９
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［８］ Ｂｅａｖｉｓ ＰＡ， Ｍｉｌｅｎｋｏｖｓｋｉ Ｎ， Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ ＭＡ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ． ２０１５； ３：５０６－５１７
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［１０］ Ｓｉｕ ＬＬ， Ｂｕｒｒｉｓ Ｈ， Ｌｅ ＤＴ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１８，７８
［１１］ Ｋｊａｅｒｇａａｒｄ Ｊ， Ｈａｔｆｉｅｌｄ Ｓ， Ｊｏｎｅｓ Ｇ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１８， ２０１：７８２－７９１
［１２］ Ｃａｎｏｎ Ｊ， Ｒｅｘ Ｋ， Ｓａｉｋｉ ＡＹ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ２０１９， ５７５：２１７－２２３．
［１３］ Ｊｉｎ Ｒ ， Ｌｉｕ Ｌ ， Ｘｉｎｇ Ｙ ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， ２０２０。
【0075】
本明細書に記載されたすべての特許文献及び非特許文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0076】
以上、本発明を１つまたは複数の実施形態と結合してして説明したが、本発明はこれらの実施形態に限定されるものではなく、この説明は、添付の特許請求の範囲の精神及び範囲内に含まれる可能性のあるすべての代替物、修正物、及び均等物を網羅することを意図していることを理解されたい。
【0077】
配列表
Ｍ３５－１とＭ３５－２のＶＨ：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＹＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＩＹＰＧＮＬＮＩＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＮＹＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）。
Ｍ３５－１とＭ３５－２のＶＨ：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＹＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＩＹＰＧＮＬＮＩＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＮＹＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）。
【0078】
Ｍ３５－１とＭ３５－２のＶＬ：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＮＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＨＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ （配列番号２）。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＮＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＨＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ （配列番号２）。
【0079】
Ｍ４５－１のＶＨ：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＬＴＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＥＩＮＰＳＱＧＲＳＮＹＮＥＫＦＫＳＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＶＳＧＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３）。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＬＴＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＥＩＮＰＳＱＧＲＳＮＹＮＥＫＦＫＳＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＶＳＧＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３）。
【0080】
Ｍ４５－１のＶＬ：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＴＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＳＬＩＹＲＳＮＩＬＶＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ （配列番号４）。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＴＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＳＬＩＹＲＳＮＩＬＶＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ （配列番号４）。
【0081】
Ｍ３５－１とＭ３５－２のＶＨのＣＤＲ１：
ＮＹＹＩＹ（配列番号５）。
ＮＹＹＩＹ（配列番号５）。
【0082】
Ｍ３５－１とＭ３５－２のＶＨのＣＤＲ２：
ＷＩＹＰＧＮＬＮＩＫＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号６）。
ＷＩＹＰＧＮＬＮＩＫＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号６）。
【0083】
Ｍ３５－１とＭ３５－２のＶＨのＣＤＲ３：
ＤＤＮＹＡＷＦＡＹ（配列番号７）。
ＤＤＮＹＡＷＦＡＹ（配列番号７）。
【0084】
Ｍ３５－１とＭ３５－２のＶＬのＣＤＲ１：
ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）。
ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号８）。
【0085】
Ｍ３５－１とＭ３５－２のＶＬのＣＤＲ２：
ＷＴＮＴＲＨＴ（配列番号９）。
ＷＴＮＴＲＨＴ（配列番号９）。
【0086】
Ｍ３５－１とＭ３５－２のＶＬのＣＤＲ３：
ＱＱＨＹＳＴＰＦＴ（配列番号１０）。
ＱＱＨＹＳＴＰＦＴ（配列番号１０）。
【0087】
Ｍ４５－１のＶＨのＣＤＲ１：
ＳＹＷＭＨ（配列番号１１）。
ＳＹＷＭＨ（配列番号１１）。
【0088】
Ｍ４５－１のＶＨのＣＤＲ２：
ＥＩＮＰＳＱＧＲＳＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号１２）。
ＥＩＮＰＳＱＧＲＳＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号１２）。
【0089】
Ｍ４５－１のＶＨのＣＤＲ３：
ＲＧＶＳＧＮＹＦＤＹ（配列番号１３）。
ＲＧＶＳＧＮＹＦＤＹ（配列番号１３）。
【0090】
Ｍ４５－１のＶＬのＣＤＲ１：
ＫＡＳＱＤＩＮＴＹＬＳ（配列番号１４）。
ＫＡＳＱＤＩＮＴＹＬＳ（配列番号１４）。
【0091】
Ｍ４５－１のＶＬのＣＤＲ２：
ＲＳＮＩＬＶＳＧ（配列番号１５）。
ＲＳＮＩＬＶＳＧ（配列番号１５）。
【0092】
Ｍ４５－１のＶＬのＣＤＲ３：
ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号１６）。
ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号１６）。
【0093】
Ｍ３５－１の重鎖：
【0094】
【数1】
【0095】
Ｍ３５－１の軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＮＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＨＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１８）。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＮＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＨＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１８）。
【0096】
Ｍ３５－２の重鎖：
【0097】
【数2】
【0098】
Ｍ３５－２の軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＮＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＨＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２０）。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＮＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＨＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２０）。
【0099】
Ｍ４５－１の重鎖：
【0100】
【数3】
【0101】
Ｍ４５－１の軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＴＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＳＬＩＹＲＳＮＩＬＶＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２２）。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＴＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＳＬＩＹＲＳＮＩＬＶＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２２）。
【0102】
Ｍ３５－１とＭ４５－１のＣＨ１（以ＩｇＧ１Ｓ１４２Ｃ格式）：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ（配列番号２３）。
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ（配列番号２３）。
【0103】
Ｍ３５－２のＣＨ１（以ＩｇＧ２格式）：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶ（配列番号２４）。
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶ（配列番号２４）。
【0104】
Ｍ３５－１とＭ４５－１の重鎖のヒンジ配列：
ＥＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２５）。
ＥＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２５）。
【0105】
Ｍ３５－２の重鎖のヒンジ配列：
ＥＰＰＫＳＤＣＫＴＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２６）。
ＥＰＰＫＳＤＣＫＴＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２６）。
【0106】
の重鎖のヒンジ配列の他の実例：
ＣＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号２７）
ＤＫＴＣＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号２８）
ＥＲＫＳＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２９）
ＥＰＫＳＤＣＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号３０）
ＥＰＫＳＤＫＣＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号３１）
ＥＰＫＳＤＣＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３２）
ＥＰＫＳＤＣＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３３）
ＥＰＫＳＤＫＣＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３４）
ＥＰＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３５）
ＥＰＰＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３６）
ＥＰＰＫＳＤＣＫＴＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３７）。
ＣＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号２７）
ＤＫＴＣＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号２８）
ＥＲＫＳＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号２９）
ＥＰＫＳＤＣＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号３０）
ＥＰＫＳＤＫＣＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号３１）
ＥＰＫＳＤＣＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３２）
ＥＰＫＳＤＣＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３３）
ＥＰＫＳＤＫＣＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３４）
ＥＰＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３５）
ＥＰＰＰＰＫＳＣＤＫＴＨＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３６）
ＥＰＰＫＳＤＣＫＴＫＴＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３７）。
【図面の簡単な説明】
【0107】
【図1】本発明で使用される抗体のアミノ酸ナンバリングスキームの概略図である。（ａ）ヒトＩｇＧ１（κ）のＩＭＧＴベースのアミノ酸ナンバリングスキーム。（ｂ）突然変異体（ＩｇＧ１ヒンジ領域に対する）のナンバリングスキーム。
【図2】本発明の実施形態による特定の抗体の生産及び物理化学的試験の結果である。還元性（Ｒ）及び非還元性（ＮＲ）抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析：Ｍ３５－１抗体（ａ）、Ｍ３５－２抗体（ｂ）及びＭ４５－１抗体（ｃ）；ＨＥＫ２９３細胞で産生された抗体の純度と収量（ｄ）精製抗体：Ｍ３５－１抗体（ｅ）、Ｍ３５－２抗体（ｆ）及びＭ４５－１抗体（ｇ）のＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析。
【図3】Ｍ３５－１、Ｍ３５－２、及びＭ４５－１抗体で調製されたＡＤＣのＨＩＣスペクトルである。（ａ）Ｍ３５－１－ＭＭＡＥ、（ｂ）Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ及び（ｃ）Ｍ４５－１－ＭＭＡＥ。
【図4】抗ＣＤ７３裸抗体及びそれに対応するＡＤＣとＣＤ７３の結合曲線である。（ａ）Ｍ３５－１抗体及びＭ３５－１ ＭＭＡＥ；（ｂ）Ｍ３５－２抗体及びＭ３５－２－ＭＭＡＥ。
【図5】ＣＤ７３発現がん細胞における抗ＣＤ７３裸抗体とそれに対応するＡＤＣの内在化である。ａ：ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞、ｂ：ＮＣＩ－Ｈ４１１細胞。
【図6】ＣＤ７３発現がん細胞に対するＭ３５－１－ＭＭＡＥ、Ｍ３５－２－ＭＭＡＥ、Ｍ４５－１－ＭＭＡＥのＣＤ７３の細胞毒性曲線である。ａ：Ｕ８７ＭＧ細胞、ｂ：ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞、ｃ：ＮＣＩ－Ｎ８７細胞、ｄ：ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞。
【図7】Ｕ８７神経膠腫、ＮＣＩ－Ｎ８７胃がん及びＮＣＩ－Ｈ４４１ ＮＳＣＬＣを異種移植した無胸腺ヌードマウスにおけるＭ３５－１－ＭＭＡＥ及びＭ３５－２－ＭＭＡＥの体内薬物効力である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【配列表】