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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-01-29
(45)【発行日】2025-02-06
(54)【発明の名称】認知症又は脳機能の判定のためのキット及び方法
(51)【国際特許分類】
C12Q 1/6883 20180101AFI20250130BHJP
C12Q 1/48 20060101ALI20250130BHJP
C12Q 1/6813 20180101ALI20250130BHJP
C12Q 1/6844 20180101ALI20250130BHJP
C12Q 1/6876 20180101ALI20250130BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20250130BHJP
C07K 16/40 20060101ALI20250130BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20250130BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20250130BHJP
【ＦＩ】
C12Q1/6883 Z ZNA
C12Q1/48 Z
C12Q1/6813 Z
C12Q1/6844 Z
C12Q1/6876 Z
C07K16/28
C07K16/40
C07K16/18
G01N33/53 D
G01N33/53 M
【請求項の数】
11
(21)【出願番号】P 2022504476
(86)(22)【出願日】2021-03-05
(86)【国際出願番号】 JP2021008722
(87)【国際公開番号】W WO2021177447
(87)【国際公開日】2021-09-10
【審査請求日】2023-09-12
(31)【優先権主張番号】P 2020038991
(32)【優先日】2020-03-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】000000941
【氏名又は名称】株式会社カネカ
(73)【特許権者】
【識別番号】300061835
【氏名又は名称】公益財団法人神戸医療産業都市推進機構
(74)【代理人】
【識別番号】110002572
【氏名又は名称】弁理士法人平木国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】田口 明彦
(72)【発明者】
【氏名】竹内 由紀子
(72)【発明者】
【氏名】沖中 由佳
(72)【発明者】
【氏名】友野 潤
【審査官】白井 美香保
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２００８／１３５６３９（ＷＯ，Ａ２）
【文献】特表２００４－５０４３６６（ＪＰ，Ａ）
【文献】Altered energy metabolism pathways in the posterior cingulate in young adult apolipoprotein E ε4 carriers，Journal of Alzheimer’s Disease，2016年，Vol.53，p.95-106
【文献】Role of monocarboxylate transporter 4 in Alzheimer disease，Neurotoxicology，2019年11月16日，Vol.76，p.191-199
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｑ １／００－３／００
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡＰＬＵＳ／ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
認知症の判定又は脳機能の判定のためのキットであって、被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定するための試薬を含み、
前記１以上のタンパク質が、配列番号４で示すアミノ酸配列からなるヒトＧｌｕｔ１、配列番号８で示すアミノ酸配列からなるヒトＧｌｕｔ３、配列番号１２で示すアミノ酸配列からなるヒトＭＣＴ４、配列番号１６で示すアミノ酸配列からなるヒトＰＨＤ３、及び配列番号２０で示すアミノ酸配列からなるヒトＰＤＫ１から選択され、
前記試料が、末梢血試料であり、
前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定、又は認知症の重症度の判定であり、
前記脳機能の判定が、脳機能の低下の有無の判定、脳機能の低下の危険性の判定、又は脳機能の低下の程度の判定であり、
前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量のハウスキーピング遺伝子の発現量に対する相対的発現量が参照値と比較して高いことが、認知症に罹患していること、認知症を発症する危険性を有すること、若しくは認知症の重症度を示すか、又は脳機能の低下を有すること、脳機能の低下の危険性を有すること、若しくは脳機能の低下の程度を示す、キット。
【請求項2】
前記脳機能の低下が、記憶障害、運動障害、視覚の障害、平衡覚の障害、又はうつ病である、請求項１に記載のキット。
【請求項3】
前記試薬が、前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子を含む核酸の少なくとも一部を増幅するためのプライマー対、前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子を含む核酸とハイブリダイズするプローブ、又は、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体である、請求項１又は２に記載のキット。
【請求項4】
前記キットが、前記試料から単核細胞を分離するための試薬及び／又はカラムを更に含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項5】
前記参照値が、
正常検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量を、前記被検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量の測定と同様の条件で測定した場合の測定値のハウスキーピング遺伝子の発現量に対する相対的発現量、又は該相対的発現量から設定された基準値、又は
認知症を有すること又はその重症度が既知の患者に由来する試料中の前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量を、前記被検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量の測定と同様の条件で測定した場合の測定値のハウスキーピング遺伝子の発現量に対する相対的発現量、又は該相対的発現量から設定された基準値
である、請求項１～４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項6】
前記ハウスキーピング遺伝子が、配列番号２２に示す塩基配列からなるヒト１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子である、請求項１～５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項7】
被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得する方法であって、被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定することを含み、
前記１以上のタンパク質が、配列番号４で示すアミノ酸配列からなるヒトＧｌｕｔ１、配列番号８で示すアミノ酸配列からなるヒトＧｌｕｔ３、配列番号１２で示すアミノ酸配列からなるヒトＭＣＴ４、配列番号１６で示すアミノ酸配列からなるヒトＰＨＤ３、及び配列番号２０で示すアミノ酸配列からなるヒトＰＤＫ１から選択され、
前記試料が、末梢血試料であり、
前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定、又は認知症の重症度の判定であり、
前記脳機能の判定が、脳機能の低下の有無の判定、脳機能の低下の危険性の判定、又は脳機能の低下の程度の判定であり、
前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量のハウスキーピング遺伝子の発現量に対する相対的発現量が参照値と比較して高いことが、認知症に罹患していること、認知症を発症する危険性を有すること、若しくは認知症の重症度を示すか、又は脳機能の低下を有すること、脳機能の低下の危険性を有すること、若しくは脳機能の低下の程度を示す、方法。
【請求項8】
前記脳機能の低下が、記憶障害、運動障害、視覚の障害、平衡覚の障害、又はうつ病である、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記被検体由来の試料中の、前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定することが、以下に示す（ａ）及び（ｂ）を含む、請求項７又は８に記載の方法：（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定すること。
【請求項10】
前記参照値が、
正常検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量を、前記被検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量の測定と同様の条件で測定した場合の測定値のハウスキーピング遺伝子の発現量に対する相対的発現量、又は該相対的発現量から設定された基準値、又は
認知症を有すること又はその重症度が既知の患者に由来する試料中の前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量を、前記被検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質をコードする遺伝子の発現量の測定と同様の条件で測定した場合の測定値のハウスキーピング遺伝子の発現量に対する相対的発現量、又は該相対的発現量から設定された基準値
である、請求項７～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記ハウスキーピング遺伝子が、配列番号２２に示す塩基配列からなるヒト１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子である、請求項７～１０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得する方法に関する。
本発明はまた、認知症の判定又は脳機能の判定のためのキットに関する。
本発明はまた、被検体における老化現象の程度の判定のための指標を取得する方法に関する。
本発明はまた、老化現象の程度の判定のためのキットに関する。
本発明はまた、認知症の判定又は脳機能の判定のためのキットに関する。
本発明はまた、被検体における老化現象の程度の判定のための指標を取得する方法に関する。
本発明はまた、老化現象の程度の判定のためのキットに関する。
【背景技術】
【0002】
高齢化の進展に伴い認知症の発症数は増加しており、治療薬の研究開発が盛んにおこなわれている。認知症は、アルツハイマー型、血管性、レビー小体型、前頭側頭型に分類できる。このうちアルツハイマー型認知症が最も患者数が多く、全体の６割以上と報告されている。１９９９年にアルツハイマー型認知症に塩酸ドネペジル（商品名アリセプト等）（記憶障害や認知障害が改善されて病気の進行抑制）、２０１１年にガランタミン（同レミニール）、リバスチグミン（同イクセロンパッチ、リバスチグミンパッチ）、メマンチン（同メマリー）の３剤が発売されている。これらの医薬は認知症の進行を遅延するものである。しかし、認知症の治療薬は現在のところ提供されておらず、開発はなお困難である。そこで現在では早期発見と生活習慣改善により認知症を治療することも試みられている。
【0003】
認知症を診断するための画像検査法としてＰＥＴ（陽電子放出断層撮像法）及びＳＰＥＣＴ（単光子放出断層撮像法）が知られている。しかしこれらの画像検査法は高コストであることに加え、症状が進行している場合のみ判別が可能な方法であるため、認知症の早期判定には適していない。
【0004】
また、認知症を判別するための、長谷川式簡易知能評価スケール等の認知機能テストが知られているが、認知機能テストは患者本人が症状進行を認識した後に用いられるテストであり、発症初期での認知症、脳機能の判定には利用することができない。また認知機能テストは結果が曖昧であるという問題もある。
【0005】
そのほか脳脊髄液中のタンパク質検査により認知症を判定する方法も知られているが、侵襲性が高く、早期診断のために利用することができないという課題がある。
【0006】
認知症の発症予測のために、被検体の血中マイクロＲＮＡの網羅解析を行う方法も開発されている。被検試料の前処理として血中マイクロＲＮＡを回収する操作が煩雑であることや、高価な測定システムが必要であるという課題がある。
【0007】
また、高齢化の進展に伴い、高齢者の健康維持が喫緊の課題となっており、アンチエイジング医学に対する期待が高まっている。例えば、皮膚のシミやしわなどの種々の老化現象の程度の判定方法として、従来から外観の目視判定が行われてきた。しかし、目視判定は客観的且つ定量的な判定結果を得ることが困難であることから、老化現象の程度を適切に評価できる新規バイオマーカーの探索が進められている。
【0008】
特定のタンパク質の遺伝子発現レベル（バイオマーカー）に基づいて脳機能障害を判定する方法を開示する特許文献として特許文献１～３を例示することができる。
【0009】
特許文献１では、被験者由来の中枢神経系組織における、インスリン等の、インスリン／ＩＧＦシグナル伝達経路中の少なくとも１つの因子のレベル又は機能の低下をインビトロで検出することを含む、アルツハイマー病を検査する方法が記載されている。
【0010】
特許文献２では、被検体におけるＭＡＲＣＫＳ等の少なくとも１つの基質タンパク質のリン酸化を検出し、リン酸化の程度が正常検体よりも高い場合に、被検体はアルツハイマー病を罹患している又は発症する危険性を有していると判定する方法が記載されている。
【0011】
特許文献３では、認知機能障害疾患を検出するためのバイオマーカーが記載されている。特許文献３に記載のバイオマーカーは、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃ４、Ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃ３及びＧｅｌｓｏｌｉｎ等に依拠するタンパク質であると記載されている。
【0012】
また、特定のタンパク質の遺伝子発現レベル（バイオマーカー）に基づいて老化現象の程度を判定する方法を開示する特許文献として特許文献４～６を例示することができる。
【0013】
特許文献４では、皮膚細胞及び／又は皮膚組織における分泌タンパク質及び／又は細胞内タンパク質の発現及び／又はその遺伝子発現を測定することを含む、皮膚の老化度を判定する方法であって、前記分泌タンパク質及び／又は細胞内タンパク質は皮膚の老化度により発現が変化するものである前記方法が記載されている。特許文献４に記載のバイオマーカーは、Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ７、Ｋｅｒａｔｉｎ ７等であると記載されている。
【0014】
特許文献５では、生体試料におけるＧＲＥＭ１タンパク質及び／又はＧＲＥＭ２タンパク質、又は、ＧＲＥＭ１タンパク質をコードする遺伝子及び／又はＧＲＥＭ２タンパク質をコードする遺伝子の発現量を指標として、細胞及び／又は個体の老化度を評価する方法が記載されている。
【0015】
特許文献６では、生物学的試料中のＯＬＦＭＬ２Ａ及び／又はＣＲＬＦ１の遺伝子産物の発現量ｅを決定するステップを含むことを特徴とする、線維芽細胞の細胞老化状態の評価方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0016】
【文献】特表２００８－５２２１９９号公報
【文献】国際公開ＷＯ２０１５／０９９０９４
【文献】国際公開ＷＯ２０１９／０１２６７１
【文献】特開２０１２－１８９６０２号公報
【文献】特開２０１９－００７７５９号公報
【文献】特開２０１３－１１６０８８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0017】
本発明の一以上の実施形態は、簡便な操作により認知症を早期に判定することができる方法及びそのためのキット、簡便な操作により脳機能を判定することができる方法及びそのためのキットを提供することを目的とする。
本発明の別の一以上の実施形態は、簡便な操作により老化現象の程度を早期に判定することができる方法及びそのためのキットを提供することを目的とする。
本発明の別の一以上の実施形態は、簡便な操作により老化現象の程度を早期に判定することができる方法及びそのためのキットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0018】
本発明者らは鋭意検討した結果、以下の発明を完成するに至った。
（１）被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法。
（２）前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定又は認知症の重症度の判定である、（１）に記載の方法。
（３）前記試料が、体液試料又は骨髄試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも高い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（２）に記載の方法。
（４）前記参照値に対する前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値の比率が、１．１以上、５０．０以下である、（３）に記載の方法。
（５）前記試料が、中枢神経組織試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも低い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（２）に記載の方法。
（６）前記脳機能の判定が、脳機能の低下の有無の判定、脳機能の低下の危険性の判定、脳機能の低下の程度の判定、自律神経系の障害の有無の判定、自律神経系の障害の危険性の判定、自律神経系の障害の程度の判定、記憶障害の有無の判定、記憶障害の危険性の判定、記憶障害の程度の判定、運動障害の有無の判定、運動障害の危険性の判定、運動障害の程度の判定、協調運動の障害の有無の判定、協調運動の障害の危険性の判定、協調運動の障害の程度の判定、不随意運動の障害の有無の判定、不随意運動の障害の危険性の判定、不随意運動の障害の程度の判定、感覚障害の有無の判定、感覚障害の危険性の判定、感覚障害の程度の判定、視覚の障害の有無の判定、視覚の障害の危険性の判定、視覚の障害の程度の判定、嗅覚の障害の有無の判定、嗅覚の障害の危険性の判定、嗅覚の障害の程度の判定、聴覚の障害の有無の判定、聴覚の障害の危険性の判定、聴覚の障害の程度の判定、平衡覚の障害の有無の判定、平衡覚の障害の危険性の判定、平衡覚の障害の程度の判定、睡眠障害の有無の判定、睡眠障害の危険性の判定、睡眠障害の程度の判定、言語障害の有無の判定、言語障害の危険性の判定、言語障害の程度の判定、情動調節障害の有無の判定、情動調節障害の危険性の判定、情動調節障害の程度の判定、頭痛の有無の判定、頭痛の危険性の判定、頭痛の程度の判定、痙攣の有無の判定、痙攣の危険性の判定、痙攣の程度の判定、震えの有無の判定、震えの危険性の判定、震えの程度の判定、幻覚の有無の判定、幻覚の危険性の判定、幻覚の程度の判定、妄想の有無の判定、妄想の危険性の判定、妄想の程度の判定、錯覚の有無の判定、錯覚の危険性の判定、錯覚の程度の判定、異常行動の有無の判定、異常行動の危険性の判定、異常行動の程度の判定、うつ病の罹患の有無の判定、うつ病の発症の危険性の判定又はうつ病の重症度の判定である、（１）に記載の方法。
（７）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（１）～（６）のいずれか一に記載の方法。
（８）認知症の判定又は脳機能の判定のためのキットであって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬を含むキット。
（９）前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定又は認知症の重症度の判定である、（８）に記載のキット。
（１０）前記脳機能の判定が、脳機能の低下の有無の判定、脳機能の低下の危険性の判定、脳機能の低下の程度の判定、自律神経系の障害の有無の判定、自律神経系の障害の危険性の判定、自律神経系の障害の程度の判定、記憶障害の有無の判定、記憶障害の危険性の判定、記憶障害の程度の判定、運動障害の有無の判定、運動障害の危険性の判定、運動障害の程度の判定、協調運動の障害の有無の判定、協調運動の障害の危険性の判定、協調運動の障害の程度の判定、不随意運動の障害の有無の判定、不随意運動の障害の危険性の判定、不随意運動の障害の程度の判定、感覚障害の有無の判定、感覚障害の危険性の判定、感覚障害の程度の判定、視覚の障害の有無の判定、視覚の障害の危険性の判定、視覚の障害の程度の判定、嗅覚の障害の有無の判定、嗅覚の障害の危険性の判定、嗅覚の障害の程度の判定、聴覚の障害の有無の判定、聴覚の障害の危険性の判定、聴覚の障害の程度の判定、平衡覚の障害の有無の判定、平衡覚の障害の危険性の判定、平衡覚の障害の程度の判定、睡眠障害の有無の判定、睡眠障害の危険性の判定、睡眠障害の程度の判定、言語障害の有無の判定、言語障害の危険性の判定、言語障害の程度の判定、情動調節障害の有無の判定、情動調節障害の危険性の判定、情動調節障害の程度の判定、頭痛の有無の判定、頭痛の危険性の判定、頭痛の程度の判定、痙攣の有無の判定、痙攣の危険性の判定、痙攣の程度の判定、震えの有無の判定、震えの危険性の判定、震えの程度の判定、幻覚の有無の判定、幻覚の危険性の判定、幻覚の程度の判定、妄想の有無の判定、妄想の危険性の判定、妄想の程度の判定、錯覚の有無の判定、錯覚の危険性の判定、錯覚の程度の判定、異常行動の有無の判定、異常行動の危険性の判定、異常行動の程度の判定、うつ病の罹患の有無の判定、うつ病の発症の危険性の判定又はうつ病の重症度の判定である、（８）に記載のキット。
（１１）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（８）～（１０）のいずれか一に記載のキット。
（１２）前記試薬が、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸とハイブリダイズするプローブ、又は、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体である、（８）～（１１）のいずれか一に記載のキット。
（１３）被検体における老化現象の程度の判定のための指標を取得する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法。
（１４）前記老化現象の程度の判定が、齢の判定、脳組織の老化現象の程度の判定、末梢血の老化現象の程度の判定、又は骨髄細胞の老化現象の程度の判定である、（１３）に記載の方法。
（１５）前記試料が、体液試料、骨髄試料又は中枢神経組織試料である、（１３）又は（１４）に記載の方法。
（１６）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（１３）～（１５）のいずれか一に記載の方法。
（１７）被検体における老化現象の程度の判定のためのキットであって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬を含むキット。
（１８）前記老化現象の程度の判定が、齢の判定、脳組織の老化現象の程度の判定、末梢血の老化現象の程度の判定、又は骨髄細胞の老化現象の程度の判定である、（１７）に記載のキット。
（１９）前記試料が、体液試料、骨髄試料又は中枢神経組織試料である、（１７）又は（１８）に記載のキット。
（２０）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（１７）～（１９）のいずれか一に記載のキット。
（２１）前記試薬が、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸とハイブリダイズするプローブ、又は、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体である、（１７）～（２０）のいずれか一に記載のキット。
（１）被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法。
（２）前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定又は認知症の重症度の判定である、（１）に記載の方法。
（３）前記試料が、体液試料又は骨髄試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも高い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（２）に記載の方法。
（４）前記参照値に対する前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値の比率が、１．１以上、５０．０以下である、（３）に記載の方法。
（５）前記試料が、中枢神経組織試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも低い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（２）に記載の方法。
（６）前記脳機能の判定が、脳機能の低下の有無の判定、脳機能の低下の危険性の判定、脳機能の低下の程度の判定、自律神経系の障害の有無の判定、自律神経系の障害の危険性の判定、自律神経系の障害の程度の判定、記憶障害の有無の判定、記憶障害の危険性の判定、記憶障害の程度の判定、運動障害の有無の判定、運動障害の危険性の判定、運動障害の程度の判定、協調運動の障害の有無の判定、協調運動の障害の危険性の判定、協調運動の障害の程度の判定、不随意運動の障害の有無の判定、不随意運動の障害の危険性の判定、不随意運動の障害の程度の判定、感覚障害の有無の判定、感覚障害の危険性の判定、感覚障害の程度の判定、視覚の障害の有無の判定、視覚の障害の危険性の判定、視覚の障害の程度の判定、嗅覚の障害の有無の判定、嗅覚の障害の危険性の判定、嗅覚の障害の程度の判定、聴覚の障害の有無の判定、聴覚の障害の危険性の判定、聴覚の障害の程度の判定、平衡覚の障害の有無の判定、平衡覚の障害の危険性の判定、平衡覚の障害の程度の判定、睡眠障害の有無の判定、睡眠障害の危険性の判定、睡眠障害の程度の判定、言語障害の有無の判定、言語障害の危険性の判定、言語障害の程度の判定、情動調節障害の有無の判定、情動調節障害の危険性の判定、情動調節障害の程度の判定、頭痛の有無の判定、頭痛の危険性の判定、頭痛の程度の判定、痙攣の有無の判定、痙攣の危険性の判定、痙攣の程度の判定、震えの有無の判定、震えの危険性の判定、震えの程度の判定、幻覚の有無の判定、幻覚の危険性の判定、幻覚の程度の判定、妄想の有無の判定、妄想の危険性の判定、妄想の程度の判定、錯覚の有無の判定、錯覚の危険性の判定、錯覚の程度の判定、異常行動の有無の判定、異常行動の危険性の判定、異常行動の程度の判定、うつ病の罹患の有無の判定、うつ病の発症の危険性の判定又はうつ病の重症度の判定である、（１）に記載の方法。
（７）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（１）～（６）のいずれか一に記載の方法。
（８）認知症の判定又は脳機能の判定のためのキットであって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬を含むキット。
（９）前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定又は認知症の重症度の判定である、（８）に記載のキット。
（１０）前記脳機能の判定が、脳機能の低下の有無の判定、脳機能の低下の危険性の判定、脳機能の低下の程度の判定、自律神経系の障害の有無の判定、自律神経系の障害の危険性の判定、自律神経系の障害の程度の判定、記憶障害の有無の判定、記憶障害の危険性の判定、記憶障害の程度の判定、運動障害の有無の判定、運動障害の危険性の判定、運動障害の程度の判定、協調運動の障害の有無の判定、協調運動の障害の危険性の判定、協調運動の障害の程度の判定、不随意運動の障害の有無の判定、不随意運動の障害の危険性の判定、不随意運動の障害の程度の判定、感覚障害の有無の判定、感覚障害の危険性の判定、感覚障害の程度の判定、視覚の障害の有無の判定、視覚の障害の危険性の判定、視覚の障害の程度の判定、嗅覚の障害の有無の判定、嗅覚の障害の危険性の判定、嗅覚の障害の程度の判定、聴覚の障害の有無の判定、聴覚の障害の危険性の判定、聴覚の障害の程度の判定、平衡覚の障害の有無の判定、平衡覚の障害の危険性の判定、平衡覚の障害の程度の判定、睡眠障害の有無の判定、睡眠障害の危険性の判定、睡眠障害の程度の判定、言語障害の有無の判定、言語障害の危険性の判定、言語障害の程度の判定、情動調節障害の有無の判定、情動調節障害の危険性の判定、情動調節障害の程度の判定、頭痛の有無の判定、頭痛の危険性の判定、頭痛の程度の判定、痙攣の有無の判定、痙攣の危険性の判定、痙攣の程度の判定、震えの有無の判定、震えの危険性の判定、震えの程度の判定、幻覚の有無の判定、幻覚の危険性の判定、幻覚の程度の判定、妄想の有無の判定、妄想の危険性の判定、妄想の程度の判定、錯覚の有無の判定、錯覚の危険性の判定、錯覚の程度の判定、異常行動の有無の判定、異常行動の危険性の判定、異常行動の程度の判定、うつ病の罹患の有無の判定、うつ病の発症の危険性の判定又はうつ病の重症度の判定である、（８）に記載のキット。
（１１）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（８）～（１０）のいずれか一に記載のキット。
（１２）前記試薬が、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸とハイブリダイズするプローブ、又は、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体である、（８）～（１１）のいずれか一に記載のキット。
（１３）被検体における老化現象の程度の判定のための指標を取得する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法。
（１４）前記老化現象の程度の判定が、齢の判定、脳組織の老化現象の程度の判定、末梢血の老化現象の程度の判定、又は骨髄細胞の老化現象の程度の判定である、（１３）に記載の方法。
（１５）前記試料が、体液試料、骨髄試料又は中枢神経組織試料である、（１３）又は（１４）に記載の方法。
（１６）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（１３）～（１５）のいずれか一に記載の方法。
（１７）被検体における老化現象の程度の判定のためのキットであって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬を含むキット。
（１８）前記老化現象の程度の判定が、齢の判定、脳組織の老化現象の程度の判定、末梢血の老化現象の程度の判定、又は骨髄細胞の老化現象の程度の判定である、（１７）に記載のキット。
（１９）前記試料が、体液試料、骨髄試料又は中枢神経組織試料である、（１７）又は（１８）に記載のキット。
（２０）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（１７）～（１９）のいずれか一に記載のキット。
（２１）前記試薬が、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸とハイブリダイズするプローブ、又は、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体である、（１７）～（２０）のいずれか一に記載のキット。
【0019】
（２２）前記被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが、以下に示す（ａ）及び（ｂ）を含む、（１）～（７）、（１３）～（１６）のいずれか一に記載の方法：
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
（２３）前記キットが、前記試料から単核細胞を分離するための試薬及び／又はカラムを更に含む、（８）～（１２）、（１７）～（２１）のいずれか一に記載のキット。
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
（２３）前記キットが、前記試料から単核細胞を分離するための試薬及び／又はカラムを更に含む、（８）～（１２）、（１７）～（２１）のいずれか一に記載のキット。
【0020】
（２４）被検体における認知症又は脳機能を判定する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における認知症又は脳機能を判定すること
を含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物である。
ここで前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（２５）前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定又は認知症の重症度の判定である、（２４）に記載の方法。
（２６）前記試料が、体液試料又は骨髄試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも高い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（２５）に記載の方法。
（２７）前記参照値に対する前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値の比率が、１．１以上、５０．０以下である、（２６）に記載の方法。
（２８）前記試料が、中枢神経組織試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも低い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（２５）に記載の方法。
（２９）前記脳機能の判定が、（６）に記載の判定である、（２４）に記載の方法。
（３０）被検体における老化現象の程度を判定する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における老化現象の程度を判定すること
を含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物である。
ここで前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（３１）前記老化現象の程度の判定が、（１４）に記載の判定である、（３０）に記載の方法。
（３２）前記試料が、体液試料、骨髄試料又は中枢神経組織試料である、（３０）又は（３１）に記載の方法。
（３３）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（２４）～（３２）のいずれか一に記載の方法。
（３４）前記被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが、以下に示す（ａ）及び（ｂ）を含む、（２４）～（３３）のいずれか一に記載の方法：
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における認知症又は脳機能を判定すること
を含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物である。
ここで前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（２５）前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定又は認知症の重症度の判定である、（２４）に記載の方法。
（２６）前記試料が、体液試料又は骨髄試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも高い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（２５）に記載の方法。
（２７）前記参照値に対する前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値の比率が、１．１以上、５０．０以下である、（２６）に記載の方法。
（２８）前記試料が、中枢神経組織試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも低い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（２５）に記載の方法。
（２９）前記脳機能の判定が、（６）に記載の判定である、（２４）に記載の方法。
（３０）被検体における老化現象の程度を判定する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における老化現象の程度を判定すること
を含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物である。
ここで前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（３１）前記老化現象の程度の判定が、（１４）に記載の判定である、（３０）に記載の方法。
（３２）前記試料が、体液試料、骨髄試料又は中枢神経組織試料である、（３０）又は（３１）に記載の方法。
（３３）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（２４）～（３２）のいずれか一に記載の方法。
（３４）前記被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが、以下に示す（ａ）及び（ｂ）を含む、（２４）～（３３）のいずれか一に記載の方法：
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
【0021】
（３５）エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質、又は、前記１以上のタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む核酸を含む、認知症又は脳機能を判定するためのバイオマーカー。
（３６）エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質、又は、前記１以上のタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む核酸を含む、老化現象の程度を判定するためのバイオマーカー。
（３７）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（３５）又は（３６）に記載のバイオマーカー。
（３８）前記核酸がｍＲＮＡ又は前記ｍＲＮＡから調製されたｃＤＮＡである、（３５）～（３７）のいずれか一に記載のバイオマーカー。
（３６）エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質、又は、前記１以上のタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む核酸を含む、老化現象の程度を判定するためのバイオマーカー。
（３７）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（３５）又は（３６）に記載のバイオマーカー。
（３８）前記核酸がｍＲＮＡ又は前記ｍＲＮＡから調製されたｃＤＮＡである、（３５）～（３７）のいずれか一に記載のバイオマーカー。
【0022】
（３９）認知症の判定又は脳機能の判定のためのキットの製造における、
エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬の使用。
（４０）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（３９）に記載の使用。
（４１）前記試薬が、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸とハイブリダイズするプローブ、又は、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体である、（３９）又は（４０）に記載の使用。
（４２）前記キットが、（８）～（１２）、（２３）のいずれか一に記載のキットの特徴を備える、（３９）～（４１）のいずれか一に記載の使用。
エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬の使用。
（４０）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（３９）に記載の使用。
（４１）前記試薬が、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸とハイブリダイズするプローブ、又は、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体である、（３９）又は（４０）に記載の使用。
（４２）前記キットが、（８）～（１２）、（２３）のいずれか一に記載のキットの特徴を備える、（３９）～（４１）のいずれか一に記載の使用。
【0023】
（４３）老化現象の程度の判定のためのキットの製造における、
エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬の使用。
（４４）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（４３）に記載の使用。
（４５）前記試薬が、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸とハイブリダイズするプローブ、又は、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体である、（４３）又は（４４）に記載の使用。
（４６）前記キットが、（１７）～（２１）、（２３）のいずれか一に記載のキットの特徴を備える、（４３）～（４５）のいずれか一に記載の使用。
エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬の使用。
（４４）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（４３）に記載の使用。
（４５）前記試薬が、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸とハイブリダイズするプローブ、又は、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体である、（４３）又は（４４）に記載の使用。
（４６）前記キットが、（１７）～（２１）、（２３）のいずれか一に記載のキットの特徴を備える、（４３）～（４５）のいずれか一に記載の使用。
【0024】
（４７）被検体におけるエネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物であり、より好ましくはヒトである。
ここで前記被検体は、好ましくは、認知症が疑われる被検体、認知症に罹患した被検体、認知症の治療を受けた被検体、認知症の発症の危険性の判定を望む又は必要とする被検体、脳機能の低下が疑われる被検体、脳機能が低下した被検体、脳機能の低下を治療するための処置を受けた被検体、脳機能の判定を望む又は必要とする被検体、老化現象が疑われる被検体、老化現象を有する被検体、老化現象を回復するための処置を受けた被検体、又は、老化現象の程度の判定を望む又は必要とする被検体である。
前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（４８）前記試料が、体液試料、骨髄試料、又は、中枢神経組織試料である、（４７）に記載の方法。
（４９）前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含む、（４７）又は（４８）に記載の方法。
（５０）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（４７）～（４９）のいずれか一に記載の方法。
（５１）前記被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが、以下に示す（ａ）及び（ｂ）を含む、（４７）～（５０）のいずれか一に記載の方法：
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物であり、より好ましくはヒトである。
ここで前記被検体は、好ましくは、認知症が疑われる被検体、認知症に罹患した被検体、認知症の治療を受けた被検体、認知症の発症の危険性の判定を望む又は必要とする被検体、脳機能の低下が疑われる被検体、脳機能が低下した被検体、脳機能の低下を治療するための処置を受けた被検体、脳機能の判定を望む又は必要とする被検体、老化現象が疑われる被検体、老化現象を有する被検体、老化現象を回復するための処置を受けた被検体、又は、老化現象の程度の判定を望む又は必要とする被検体である。
前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（４８）前記試料が、体液試料、骨髄試料、又は、中枢神経組織試料である、（４７）に記載の方法。
（４９）前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含む、（４７）又は（４８）に記載の方法。
（５０）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（４７）～（４９）のいずれか一に記載の方法。
（５１）前記被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが、以下に示す（ａ）及び（ｂ）を含む、（４７）～（５０）のいずれか一に記載の方法：
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
【0025】
（５２）被検体における認知症又は脳機能を判定し、前記被検体における認知症又は脳機能を改善又は治療する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における認知症又は脳機能を判定すること、及び、
前記判定の結果が、認知症又は脳機能を改善又は治療することが必要であることを示す前記被検体に対して、認知症又は脳機能を改善又は治療する処置を施すこと
を含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物である。
ここで前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（５３）前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定又は認知症の重症度の判定である、（５２）に記載の方法。
（５４）前記試料が、体液試料又は骨髄試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも高い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（５３）に記載の方法。
（５５）前記参照値に対する前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値の比率が、１．１以上、５０．０以下である、（５４）に記載の方法。
（５６）前記試料が、中枢神経組織試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも低い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（５３）に記載の方法。
（５７）前記脳機能の判定が、（６）に記載の判定である、（５２）に記載の方法。
（５８）被検体における老化現象の程度を判定し、前記被検体における老化現象を改善又は治療する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における老化現象の程度を判定すること、及び、
前記判定の結果が、老化現象を改善又は治療することが必要であることを示す前記被検体に対して、老化現象を改善又は治療する処置を施すこと
を含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物である。
ここで前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（５９）前記老化現象の程度の判定が、（１４）に記載の判定である、（５８）に記載の方法。
（６０）前記試料が、体液試料、骨髄試料又は中枢神経組織試料である、（５８）又は（５９）に記載の方法。
（６１）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（５２）～（６０）のいずれか一に記載の方法。
（６２）前記被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが、以下に示す（ａ）及び（ｂ）を含む、（５２）～（６１）のいずれか一に記載の方法：
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における認知症又は脳機能を判定すること、及び、
前記判定の結果が、認知症又は脳機能を改善又は治療することが必要であることを示す前記被検体に対して、認知症又は脳機能を改善又は治療する処置を施すこと
を含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物である。
ここで前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（５３）前記認知症の判定が、認知症の罹患の有無の判定、認知症の発症の危険性の判定又は認知症の重症度の判定である、（５２）に記載の方法。
（５４）前記試料が、体液試料又は骨髄試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも高い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（５３）に記載の方法。
（５５）前記参照値に対する前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値の比率が、１．１以上、５０．０以下である、（５４）に記載の方法。
（５６）前記試料が、中枢神経組織試料であり、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することを更に含み、
前記参照値よりも低い、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、又は、前記被検体の認知症の重症度を示す、（５３）に記載の方法。
（５７）前記脳機能の判定が、（６）に記載の判定である、（５２）に記載の方法。
（５８）被検体における老化現象の程度を判定し、前記被検体における老化現象を改善又は治療する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における老化現象の程度を判定すること、及び、
前記判定の結果が、老化現象を改善又は治療することが必要であることを示す前記被検体に対して、老化現象を改善又は治療する処置を施すこと
を含む方法。
ここで前記被検体は、好ましくは、ヒト又は非ヒト動物である。
ここで前記試料は、好ましくは、前記被検体から単離された試料である。
（５９）前記老化現象の程度の判定が、（１４）に記載の判定である、（５８）に記載の方法。
（６０）前記試料が、体液試料、骨髄試料又は中枢神経組織試料である、（５８）又は（５９）に記載の方法。
（６１）前記１以上のタンパク質が、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上のタンパク質である、（５２）～（６０）のいずれか一に記載の方法。
（６２）前記被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが、以下に示す（ａ）及び（ｂ）を含む、（５２）～（６１）のいずれか一に記載の方法：
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
【0026】
本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号２０２０－０３８９９１号の開示内容を包含する。
【発明の効果】
【0027】
本発明の一以上の実施形態によれば、認知症を簡便な操作で判定することができる。認知症の早期判定が可能である。
本発明の一以上の実施形態によれば、脳機能を簡便な操作で判定することができる。
本発明の一以上の実施形態によれば、老化現象の程度を簡便な操作で判定することができる。
本発明の一以上の実施形態によれば、脳機能を簡便な操作で判定することができる。
本発明の一以上の実施形態によれば、老化現象の程度を簡便な操作で判定することができる。
【図面の簡単な説明】
【0028】
【図3】図３は、実施例２のマウスの体液試料中の各々の標的遺伝子の平均相対発現量とマウスの週齢との関係を示す。図３Ａは、実施例２のマウスの体液試料中のＧｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量とマウスの週齢との関係を示す。図３Ｂは、実施例２のマウスの体液試料中のＧｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量とマウスの週齢との関係を示す。図３Ｃは、実施例２のマウスの体液試料中のＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量とマウスの週齢との関係を示す。図３Ｄは、実施例２のマウスの体液試料中のＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量とマウスの週齢との関係を示す。図３Ｅは、実施例２のマウスの体液試料中のＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量とマウスの週齢との関係を示す。
【発明を実施するための形態】
【0029】
＜１．用語＞
＜１．１．被検体由来の試料＞
本明細書において「被検体」とは、認知症、脳機能又は老化現象の程度の判定の対象となるヒト又は非ヒト動物を指す。非ヒト動物としては、霊長類動物、ラット、マウス、スナネズミ、モルモット、ハムスター、フェレット、ウサギ、ウシ、ウマ、ブタ、ヤギ、イヌ、ネコ等の非ヒト哺乳動物を例示することができる。
＜１．１．被検体由来の試料＞
本明細書において「被検体」とは、認知症、脳機能又は老化現象の程度の判定の対象となるヒト又は非ヒト動物を指す。非ヒト動物としては、霊長類動物、ラット、マウス、スナネズミ、モルモット、ハムスター、フェレット、ウサギ、ウシ、ウマ、ブタ、ヤギ、イヌ、ネコ等の非ヒト哺乳動物を例示することができる。
【0030】
被検体に由来する試料としては、被検体の末梢血、唾液、尿、喀痰、汗、咽頭ぬぐい液、鼻腔ぬぐい液等の体液試料、骨髄試料、及び脳組織等の中枢神経組織試料を利用することができる。特に、試料採取時の非侵襲性の観点から、体液試料又は骨髄試料が好ましく、体液試料、特に末梢血試料、が最も好ましい。末梢血試料としては、血清、血漿、全血等の各種形態の末梢血試料を利用することができる。骨髄試料としては骨髄液試料を利用することができる。被検体に由来する試料は、好ましくは、被検体から単離された試料である。実施例に示す通り、後述するタンパク質の遺伝子発現量又は酵素活性は、認知症に罹患した被検体、認知症を将来的に発症する可能性のある被検体、脳機能が低下した被検体、或いは、脳機能が将来的に低下する可能性のある被検体では、正常検体と比較して、末梢血等の体液又は骨髄において高いことが確認されており、実施例には示していないが脳組織などの中枢神経組織において低いことが確認されている。また、実施例に示す通り、後述するタンパク質の遺伝子発現量又は酵素活性は、高齢の被検体では、若齢検体と比較して、末梢血等の体液又は骨髄において高いことが確認されており、実施例には示していないが脳組織などの中枢神経組織において低いことが確認されている。また、実施例に示す通り、後述するタンパク質の遺伝子発現量又は酵素活性は、脳組織の老化現象が認められる被検体、脳組織の老化現象が進行する可能性のある被検体、末梢血の老化現象が認められる被検体、末梢血の老化現象が進行する可能性のある被検体、骨髄細胞の老化現象が認められる被検体、或いは、骨髄細胞の老化現象が進行する可能性のある被検体では、正常検体と比較して、末梢血等の体液又は骨髄において高いことが確認されており、実施例には示していないが脳組織などの中枢神経組織において低いことが確認されている。
【0031】
また、被検体に由来する体液試料又は骨髄試料として、被検体の体液又は骨髄から分離された単核細胞（Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ Ｃｅｌｌｓ；ＭＮＣ）を含有する単核細胞含有試料を利用することができる。本明細書において「単核細胞」とは、リンパ球及び／又は単球を指す。また、本明細書において「白血球」とは、好中球、好塩基球、好酸球、リンパ球及び単球の総称を指す。
【0032】
＜１．２．認知症＞
本明細書において「認知症」とは、アルツハイマー型認知症、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症のいずれであってもよいが、特に好ましくはアルツハイマー型認知症である。
本明細書において「認知症」とは、アルツハイマー型認知症、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症のいずれであってもよいが、特に好ましくはアルツハイマー型認知症である。
【0033】
認知症を判定することには、被検体における認知症の罹患の有無を判定すること、被検体における認知症の発症の危険性を判定すること、被検体における認知症の重症度を判定すること等が包含される。
【0034】
＜１．３．脳機能＞
本明細書において「脳機能」とは、記憶、運動、感覚、睡眠、言語等に関与する脳組織の機能を指す。
本明細書において「脳機能」とは、記憶、運動、感覚、睡眠、言語等に関与する脳組織の機能を指す。
【0035】
脳機能を判定することには、被検体における脳機能の低下の有無を判定すること、被検体における脳機能の低下の危険性を判定すること、被検体における脳機能の低下の程度を判定すること、被検体における自律神経系の障害の有無を判定すること、被検体における自律神経系の障害の危険性を判定すること、被検体における自律神経系の障害の程度を判定すること、被検体における記憶障害の有無を判定すること、被検体における記憶障害の危険性を判定すること、被検体における記憶障害の程度を判定すること、被検体における運動障害の有無を判定すること、被検体における運動障害の危険性を判定すること、被検体における運動障害の程度を判定すること、被検体における協調運動の障害の有無を判定すること、被検体における協調運動の障害の危険性を判定すること、被検体における協調運動の障害の程度を判定すること、被検体における不随意運動の障害の有無を判定すること、被検体における不随意運動の障害の危険性を判定すること、被検体における不随意運動の障害の程度を判定すること、被検体における感覚障害の有無を判定すること、被検体における感覚障害の危険性を判定すること、被検体における感覚障害の程度を判定すること、被検体における視覚の障害の有無を判定すること、被検体における視覚の障害の危険性を判定すること、被検体における視覚の障害の程度を判定すること、被検体における嗅覚の障害の有無を判定すること、被検体における嗅覚の障害の危険性を判定すること、被検体における嗅覚の障害の程度を判定すること、被検体における聴覚の障害の有無を判定すること、被検体における聴覚の障害の危険性を判定すること、被検体における聴覚の障害の程度を判定すること、被検体における平衡覚の障害の有無を判定すること、被検体における平衡覚の障害の危険性を判定すること、被検体における平衡覚の障害の程度を判定すること、被検体における睡眠障害の有無を判定すること、被検体における睡眠障害の危険性を判定すること、被検体における睡眠障害の程度を判定すること、被検体における言語障害の有無を判定すること、被検体における言語障害の危険性を判定すること、被検体における言語障害の程度を判定すること、被検体における情動調節障害の有無を判定すること、被検体における情動調節障害の危険性を判定すること、被検体における情動調節障害の程度を判定すること、被検体における頭痛の有無を判定すること、被検体における頭痛の危険性を判定すること、被検体における頭痛の程度を判定すること、被検体における痙攣の有無を判定すること、被検体における痙攣の危険性を判定すること、被検体における痙攣の程度を判定すること、被検体における震えの有無を判定すること、被検体における震えの危険性を判定すること、被検体における震えの程度を判定すること、被検体における幻覚の有無を判定すること、被検体における幻覚の危険性を判定すること、被検体における幻覚の程度を判定すること、被検体における妄想の有無の判定、被検体における妄想の危険性の判定、被検体における妄想の程度を判定すること、被検体における錯覚の有無を判定すること、被検体における錯覚の危険性を判定すること、被検体における錯覚の程度を判定すること、被検体における異常行動の有無を判定すること、被検体における異常行動の危険性を判定すること、被検体における異常行動の程度を判定すること、被検体におけるうつ病の罹患の有無を判定すること、被検体におけるうつ病の発症の危険性を判定すること又は被検体におけるうつ病の重症度を判定すること等が包含される。
【0036】
＜１．４．老化現象＞
本明細書において「老化現象」とは、加齢に伴う身体的変化及び／又は生理的変化を指す。老化現象としては、例えば、シミ、しわ、たるみ、くすみ等の皮膚の変化、白髪、薄毛、脱毛等の毛髪の変化、脳の形態変化、脳の萎縮等の脳組織の変化、末梢血の変化、骨髄細胞の変化、骨の変化、筋肉の変化等を例示することができる。
本明細書において「老化現象」とは、加齢に伴う身体的変化及び／又は生理的変化を指す。老化現象としては、例えば、シミ、しわ、たるみ、くすみ等の皮膚の変化、白髪、薄毛、脱毛等の毛髪の変化、脳の形態変化、脳の萎縮等の脳組織の変化、末梢血の変化、骨髄細胞の変化、骨の変化、筋肉の変化等を例示することができる。
【0037】
本明細書において「老化現象の程度」とは、加齢に伴う身体的変化及び／又は生理的変化の程度を指す。本明細書において、「老化現象の程度」は「老化度」と記載されることがある。
【0038】
本明細書において「老化現象の程度の判定」とは、加齢に伴う身体的変化及び生理的変化の程度の判定を指す。老化現象の程度を判定することには、例えば、被検体における齢を判定すること、脳組織の老化現象の程度を判定すること、末梢血の老化現象の程度を判定すること、骨髄細胞の老化現象の程度を判定すること等が包含される。
【0039】
＜１．５．エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質＞
本明細書において、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質としては、グルコース輸送、乳酸輸送、エネルギー代謝制御、ミトコンドリア生合成、解糖系、ペントースリン酸経路、ＴＣＡ回路、電子伝達系、脂肪酸代謝、ギャップ結合、又はナトリウム・カリウムポンプに関与する１以上のタンパク質を例示することができる。
本明細書において、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質としては、グルコース輸送、乳酸輸送、エネルギー代謝制御、ミトコンドリア生合成、解糖系、ペントースリン酸経路、ＴＣＡ回路、電子伝達系、脂肪酸代謝、ギャップ結合、又はナトリウム・カリウムポンプに関与する１以上のタンパク質を例示することができる。
【0040】
グルコース輸送に関与するタンパク質としては、細胞でのエネルギー代謝に用いられるグルコースを細胞外から細胞内に輸送するグルコース輸送に関与する膜タンパク質（グルコース輸送体）を構成するタンパク質が例示でき、具体的には、Ｇｌｕｔ（ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）ファミリー（Ｇｌｕｔ１～１２）に属するタンパク質が挙げられる。Ｇｌｕｔファミリーに属するタンパク質の中でもＧｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ２、Ｇｌｕｔ３及びＧｌｕｔ４、特にＧｌｕｔ１及びＧｌｕｔ３の遺伝子発現又は酵素活性が好ましい。マウスのＧｌｕｔ１の塩基配列を配列番号１に、アミノ酸配列を配列番号２に示す。ヒトのＧｌｕｔ１の塩基配列を配列番号３に、アミノ酸配列を配列番号４に示す。マウスのＧｌｕｔ３の塩基配列を配列番号５に、アミノ酸配列を配列番号６に示す。ヒトのＧｌｕｔ３の塩基配列を配列番号７に、アミノ酸配列を配列番号８に示す。配列番号１、３、５及び７の塩基配列は、いずれも、タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列（ＣＤＳ）と、ＣＤＳの上流及び下流に位置する非翻訳領域（ＵＴＲ）の塩基配列とを含む。
【0041】
乳酸輸送に関与するタンパク質としては、細胞でのエネルギー代謝により生成される乳酸を細胞内から細胞外に輸送する乳酸輸送に関与する膜タンパク質（乳酸輸送体）を構成するタンパク質が例示でき、具体的には、ＭＣＴ（ｍｏｎｏｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）ファミリーに属するタンパク質が挙げられる。ＭＣＴファミリーに属するタンパク質の中でもＭＣＴ１、ＭＣＴ２、ＭＣＴ３及びＭＣＴ４、特にＭＣＴ４の遺伝子発現又は酵素活性が好ましい。マウスのＭＣＴ４の塩基配列を配列番号９に、アミノ酸配列を配列番号１０に示す。ヒトのＭＣＴ４の塩基配列を配列番号１１に、アミノ酸配列を配列番号１２に示す。配列番号９及び１１の塩基配列は、いずれも、タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列（ＣＤＳ）と、ＣＤＳの上流及び下流に位置する非翻訳領域（ＵＴＲ）の塩基配列とを含む。
【0042】
エネルギー代謝制御に関与するタンパク質としては、ＰＨＤ（ｐｒｏｌｙｌ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）ファミリーに属するタンパク質が挙げられる、ＰＨＤファミリーに属するタンパク質の中でもＰＨＤ２及びＰＨＤ３、特にＰＨＤ３の遺伝子発現又は酵素活性が好ましい。マウスのＰＨＤ３の塩基配列を配列番号１３に、アミノ酸配列を配列番号１４に示す。ヒトのＰＨＤ３の塩基配列を配列番号１５に、アミノ酸配列を配列番号１６に示す。配列番号１３及び１５の塩基配列は、いずれも、タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列（ＣＤＳ）と、ＣＤＳの上流及び下流に位置する非翻訳領域（ＵＴＲ）の塩基配列とを含む。また、エネルギー代謝制御に関与するタンパク質としては、ＨＩＦ１ａ（ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ １ ａｌｐｈａ）、Ｓｉｒｔ１（ｓｉｒｔｕｉｎ １）、ＰＰＡＲａ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｌｐｈａ）及びＥＲＲａ（ｅｓｔｒｏｇｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａ）も例示できる。
【0043】
ミトコンドリア生合成に関与するタンパク質としては、ＰＧＣ１ａ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｇａｎｍａ ｃｏ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ－１ ａｌｐｈａ）を例示することができる。
【0044】
解糖系に関与するタンパク質としては、ＬＤＨａ（ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ａ）、ＬＤＨｂ（ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ｂ）、ＨＫ１（ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ １）、ＰＦＫ（ｐｈｏｓｐｈｏｆｒｕｃｔｏｋｉｎａｓｅ）、ＰＫＲ（ｐｙｒｕｖａｔｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅ Ｒ）及びＰｋｍ１（ｐｙｒｕｖａｔｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅｓ Ｍ１）も例示できる。
【0045】
ペントースリン酸経路に関与するタンパク質としては、Ｇ６ＰＤ（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）、ＲＰＩ（ｒｉｂｏｓｅ－５－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｉｓｏｍｅｒａｓｅ）、ＲＰＥ（ｒｉｂｕｌｏｓｅ－５－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｅｐｉｍｅｒａｓｅ）、６ＰＧＬ（６－ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｏｌａｃｔｏｎａｓｅ）及びＴＡＬＤＯ（ｔｒａｎｓａｌｄｏｌａｓｅ）を例示することができる。
【0046】
ＴＣＡ回路に関与するタンパク質としては、ＰＤＫ（ｐｙｒｕｖａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｋｉｎａｓｅ）ファミリーに属するタンパク質が挙げられる、ＰＤＫファミリーに属するタンパク質の中でもＰＤＫ１、ＰＤＫ３及びＰＤＫ４、特にＰＤＫ１の遺伝子発現又は酵素活性が好ましい。マウスのＰＤＫ１の塩基配列を配列番号１７に、アミノ酸配列を配列番号１８に示す。ヒトのＰＤＫ１の塩基配列を配列番号１９に、アミノ酸配列を配列番号２０に示す。配列番号１７及び１９の塩基配列は、いずれも、タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列（ＣＤＳ）と、ＣＤＳの上流及び下流に位置する非翻訳領域（ＵＴＲ）の塩基配列とを含む。また、ＴＣＡ回路に関与するタンパク質としては、ＩＤＨ２（ｉｓｏｃｉｔｒａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ２）、ＯＧＤＨ（２－ｏｘｏｇｌｕｔａｒａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）及びＣＳ（ｃｉｔｒａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ）も例示できる。
【0047】
電子伝達系に関与するタンパク質としては、ＡＭＰＫ（ＡＭＰ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ）を例示することができる。
【0048】
脂肪酸代謝に関与するタンパク質としては、ＦＡＢＰ１（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １）、ＦＡＢＰ４（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ４）、ＣＤ３６（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｔｒａｎｓｌｏｃａｓｅ：ＦＡＴ）、ＣＰＴ１（ｃａｒｎｉｔｉｎｅ ｐａｌｍｉｔｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １）、ＯＸＣＴ１（３－ｏｘｏ ａｃｉｄ ＣｏＡ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １）及びＡＣＣ（ａｃｅｔｙｌ－ＣｏＡ ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ）を例示することができる。
【0049】
ギャップ結合に関与するタンパク質としては、Ｃｘ３７（ｃｏｎｎｅｘｉｎ ３７）及びＣｘ４３（ｃｏｎｎｅｘｉｎ ４３）を例示することができる。
【0050】
ナトリウム・カリウムポンプに関与するタンパク質としては、ＡＴＰ１Ａ１（ｓｏｄｉｕｍ／ｐｏｔａｓｓｉｕｍ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ＡＴＰａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ａｌｐｈａ－１）、ＡＴＰ１Ａ２（ｓｏｄｉｕｍ／ｐｏｔａｓｓｉｕｍ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ＡＴＰａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ａｌｐｈａ－２）及びＡＴＰ１Ａ３（ｓｏｄｉｕｍ／ｐｏｔａｓｓｉｕｍ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ＡＴＰａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ａｌｐｈａ－３）を例示することができる。
【0051】
＜２．被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得する方法＞
本発明の一以上の実施形態は、
被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法に関する。
本発明の一以上の実施形態は、
被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法に関する。
【0052】
本発明の一以上の実施形態は、
被検体における認知症又は脳機能を判定する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における認知症又は脳機能を判定すること
を含む方法に関する。
被検体における認知症又は脳機能を判定する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における認知症又は脳機能を判定すること
を含む方法に関する。
【0053】
より好ましくは、前記方法はそれぞれ、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較すること、
を更に含む。
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較すること、
を更に含む。
【0054】
本実施形態において「参照値」とは、正常検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を、被検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性と同様の条件で測定した場合の測定値又は該測定値から設定された基準値であってもよいし、認知症の有無又は重症度が既知の患者に由来する試料中の前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を、被検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性と同様の条件で測定した場合の測定値又は該測定値から設定された基準値であってもよい。
【0055】
本発明の一以上の実施形態は、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性は、認知症に罹患した被検体、認知症を将来的に発症する可能性のある被検体、脳機能が低下した被検体、或いは、脳機能が将来的に低下する可能性のある被検体では、正常検体と比較して、末梢血、尿、唾液等の体液又は骨髄において高く、脳組織等の中枢神経組織において低いという予想外の知見に基づいている。また、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性は、被検体の認知症の重症度が高いほど、末梢血、尿、唾液等の体液又は骨髄において高く、脳組織等の中枢神経組織において低い。また、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性は、被検体における脳機能が低いほど、末梢血、尿、唾液等の体液又は骨髄において高く、脳組織等の中枢神経組織において低い。このため、本発明の前記実施形態において、前記試料が体液試料又は骨髄試料、特に単核細胞含有試料、である場合に、前記参照値よりも前記測定値が高いことは、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、前記被検体の認知症の重症度がより高いこと、前記被検体の脳機能が低下していること、前記被検体の脳機能が低下する危険性を有すること、或いは、前記被検体の脳機能の低下の程度がより顕著であることを示す指標となる。また、本発明の前記実施形態において、前記試料が中枢神経組織試料である場合に、前記参照値よりも前記測定値が低いことは、前記被検体が認知症に罹患していること、前記被検体が認知症を発症する危険性を有すること、前記被検体の認知症の重症度がより高いこと、前記被検体の脳機能が低下していること、前記被検体の脳機能が低下する危険性を有すること、或いは、前記被検体の脳機能の低下の程度がより顕著であることを示す指標となる。
【0056】
本発明の一以上の実施形態において、前記試料が体液試料又は骨髄試料、特に単核細胞含有試料、である場合に、前記参照値に対する前記測定値の比率の下限は、１．１以上、１．２以上、１．３以上、１．４以上、１．５以上、１．６以上、１．７以上、１．８以上、１．９以上、２．０以上、２．１以上、２．２以上、２．３以上、２．４以上、２．５以上、２．６以上、２．７以上、２．８以上、２．９以上、３．０以上、３．２以上、３．４以上、３．６以上、３．８以上、４．０以上、４．２以上、４．４以上、４．６以上、４．８以上、５．０以上、５．２以上、５．４以上、５．６以上、５．８以上、又は６．０以上であることが好ましい。また、前記試料が体液試料又は骨髄試料、特に単核細胞含有試料、である場合に、前記参照値に対する前記測定値の比率の上限は、特に限定されないが、例えば５０．０以下、４５．０以下、４０．０以下、３５．０以下、３０．０以下、２５．０以下、２０．０以下、１５．０以下、１４．０以下、１３．０以下、１２．０以下、１１．０以下、１０．０以下、９．８以下、９．６以下、９．４以下、９．２以下、又は９．０以下とすることができる。これらの比率は、前記参照値が、正常検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を、被検体由来の試料中の前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性と同様の条件で測定した場合の測定値又は該測定値から設定された基準値である場合に特に好ましい。
【0057】
本発明の一以上の実施形態において、前記エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質として、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上、２以上、３以上、４以上又は全てのタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが好ましい。前記試料が体液試料又は骨髄試料、特に単核細胞含有試料、であり、前記５つのタンパク質のうち２以上５以下のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定する実施形態では、測定したタンパク質のうち半数以上（例えば１／２以上、２／３以上、２／４以上、３／５以上）の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、参照値と比較して高い場合に、前記被検体が認知症に罹患している、前記被検体が認知症を発症する危険性を有する、前記被検体の認知症の重症度がより高い、前記被検体の脳機能が低下している、前記被検体の脳機能が低下する危険性を有する、或いは、前記被検体の脳機能の低下の程度がより顕著である、と判定することが好ましい。
【0058】
本発明の前記実施形態では、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現及び酵素活性の一方のみを測定してもよいし、両方を測定してもよい。より好ましくは前記１以上のタンパク質の遺伝子発現を測定する。
【0059】
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現は、試料中における、前記１以上のタンパク質の遺伝子のｍＲＮＡ（コーディング領域及び非翻訳領域を含む）を検出することにより測定してもよいし、試料中における、前記１以上のタンパク質のタンパク質量を検出することにより測定してもよい。
【0060】
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現の測定値は、試料中における、１以上の内在性コントロールの遺伝子発現量に対する前記１以上のタンパク質の遺伝子発現の相対発現量であってもよい。内在性コントロールとしては、ＴＢＰ（ＴＡＴＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＧＡＰＤＨ（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）、β－アクチン、β２Ｍ（β２ ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅ）、ＨＰＲＴ１（ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １）、１８ＳリボソームＲＮＡ、特に１８ＳリボソームＲＮＡに代表されるハウスキーピング遺伝子を利用することができる。マウスの１８ＳリボソームＲＮＡの塩基配列を配列番号２１に示す。ヒトの１８ＳリボソームＲＮＡの塩基配列を配列番号２２に示す。
【0061】
前記１以上のタンパク質のアミノ酸配列をコードする遺伝子のｍＲＮＡの検出には、ノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ法、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法、ＤＮＡマイクロアレイ法（ＤＮＡチップを利用した方法）、ドットブロット法、ＲＮアーゼプロテクションアッセイ法等を利用することができる。これらの方法は公知の方法で行うことができる。
【0062】
前記１以上のタンパク質のタンパク質量の検出は、前記１以上のタンパク質を特異的に認識し結合する抗体を用いる免疫測定法により行うことができる。抗体は、公知の方法により作製することができる。免疫測定法としては、検出しようとする前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体を固定した固相担体を用いる方法や、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング等が挙げられる。固相担体を用いる方法として、例えば、固定化マイクロタイタープレートを用いる酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、固定化粒子を用いる凝集法（免疫沈降法）等が挙げられるが、これらには限定されず、公知の免疫学的測定法を採用して、試料中の前記１以上のタンパク質のタンパク質量を検出することができる。また、前記１以上のタンパク質のタンパク質量の検出は、抗体を用いないタンパク質質量分析技術であるＬＣ－ＭＳ／ＭＳ ＭＲＭ等を用いる方法により行うこともできる。これらの検出方法についても、常法のプロトコルによって実施することができる。
【0063】
試料中の前記１以上のタンパク質の酵素活性は、測定しようとするタンパク質の酵素活性に応じた方法で測定することが可能である。
【0064】
前記試料中の単核細胞の比率は、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上又は１００％であることが好ましい。本明細書において「試料中の単核細胞の比率」とは、試料に含まれる全ての白血球の数に対して単核細胞の数が占める割合を指す。試料中の単核細胞の比率は、例えば、血球分析装置、血球計算盤、フローサイトメトリー等により測定することができるが、これらに限定されない。
【0065】
本発明の一以上の実施形態において、前記被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが、以下に示す（ａ）及び（ｂ）を含むことが好ましい。
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
（ａ）前記試料から単核細胞を分離することにより単核細胞含有試料を得ること、
（ｂ）前記単核細胞含有試料中の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること。
【0066】
被検体由来の試料には、顆粒球が含まれていることがあり、前記試料中の顆粒球は、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値の測定精度を低下させる要因となることがある。よって、前記試料から単核細胞を分離する、或いは顆粒球を除去することにより単核細胞の比率を高めた単核細胞含有試料を取得し、得られた単核細胞含有試料を測定に供することによって、精度の高い測定値を得ることができる。
【0067】
前記単核細胞含有試料中の単核細胞の比率は、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上又は１００％であることが好ましい。また、前記単核細胞含有試料中の顆粒球の比率は、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満、２％未満又は０％であることが好ましい。本明細書において「単核細胞含有試料中の単核細胞又は顆粒球の比率」とは、単核細胞含有試料に含まれる全ての細胞の数に対して単核細胞又は顆粒球の数が占める割合を指す。単核細胞含有試料中の単核細胞又は顆粒球の比率は、例えば、血球分析装置、血球計算盤、フローサイトメトリー等により測定することができるが、これらに限定されない。
【0068】
被検体由来の試料から単核細胞含有試料を得る方法としては、単核細胞を分離するための試薬及び／又はカラムを用いる方法が好ましい。前記試薬及び／又はカラムとしては、例えば、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳ（ＧＥヘルスケア社製）、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ａｂｂｏｔｔ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）、Ｈｕｍａｎ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｋｉｔ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社製）、ＢＤ バキュテイナ（登録商標）ＣＰＴ 単核球分離用採血管（ベクトン・ディッキンソン社製）、ｐｌｕｒｉＭａｔｅ（ｐｌｕｒｉＳｅｌｅｃｔ社製）、ＳｅｐＭａｔｅ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）等を挙げることができる。前記試薬及び／又はカラムを用いることにより、前記試料中の単核細胞と顆粒球とを分離し、測定に供するための単核細胞含有試料を効率的に取得することができる。
【0069】
＜３．被検体における老化現象の程度の判定のための指標を取得する方法＞
本発明の一以上の実施形態は、
被検体における老化現象の程度の判定のための指標を取得する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法に関する。
本発明の一以上の実施形態は、
被検体における老化現象の程度の判定のための指標を取得する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することを含む方法に関する。
【0070】
本発明の一以上の実施形態は、
被検体における老化現象の程度を判定する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における老化現象の程度を判定すること
を含む方法に関する。
被検体における老化現象の程度を判定する方法であって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値に基づき、前記被検体における老化現象の程度を判定すること
を含む方法に関する。
【0071】
より好ましくは、前記方法はそれぞれ、
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較すること、
を更に含む。
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較すること、
を更に含む。
【0072】
本発明の一以上の実施形態は、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性は、高齢の被検体では、若齢検体と比較して、末梢血、尿、唾液等の体液又は骨髄において高く、脳組織等の中枢神経組織において低いという予想外の知見に基づいている。また、本発明の一以上の実施形態は、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性は、脳組織の老化現象が認められる被検体、脳組織の老化現象が進行する可能性のある被検体、末梢血の老化現象が認められる被検体、末梢血の老化現象が進行する可能性のある被検体、骨髄細胞の老化現象が認められる被検体、或いは、骨髄細胞の老化現象が進行する可能性のある被検体では、正常検体と比較して、末梢血、尿、唾液等の体液又は骨髄において高く、脳組織等の中枢神経組織において低い。また、本発明の一以上の実施形態は、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性は、脳組織の老化現象の程度が大きい被検体、末梢血の老化現象の程度が大きい被検体、或いは、骨髄細胞の老化現象の程度が大きい被検体では、正常検体と比較して、末梢血、尿、唾液等の体液又は骨髄において高く、脳組織等の中枢神経組織において低い。また、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性は、被検体の脳組織の老化現象の程度が大きいほど、末梢血、尿、唾液等の体液又は骨髄において高く、脳組織等の中枢神経組織において低い。また、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性は、被検体の末梢血の老化現象の程度が大きいほど、末梢血、尿、唾液等の体液又は骨髄において高く、脳組織等の中枢神経組織において低い。また、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性は、被検体の骨髄細胞の老化現象の程度が大きいほど、末梢血、尿、唾液等の体液又は骨髄において高く、脳組織等の中枢神経組織において低い。このため、本発明の前記実施形態において、前記試料が体液試料、骨髄試料又は中枢神経組織試料である場合に、前記測定値は、前記被検体の齢の判定、前記被検体の脳組織の老化現象が進行する可能性、前記被検体の脳組織の老化現象の程度、前記被検体の末梢血の老化現象が進行する可能性、前記被検体の末梢血の老化現象の程度、或いは、前記被検体の骨髄細胞の老化現象の程度を示す指標となる。
【0073】
本発明の一以上の実施形態において、前記エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質として、Ｇｌｕｔ１、Ｇｌｕｔ３、ＭＣＴ４、ＰＨＤ３及びＰＤＫ１から選択される１以上、２以上、３以上、４以上又は全てのタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することが好ましい。前記試料が体液試料又は骨髄試料、特に単核細胞含有試料、であり、前記５つのタンパク質のうち２以上５以下のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定する実施形態では、測定したタンパク質のうち半数以上（例えば１／２以上、２／３以上、２／４以上、３／５以上）の遺伝子発現又は酵素活性の測定値が、参照値と比較して高い場合に、前記被検体の老化現象がより進行している、と判定することが好ましい。
【0074】
本発明の前記実施形態では、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現及び酵素活性の一方のみを測定してもよいし、両方を測定してもよい。より好ましくは前記１以上のタンパク質の遺伝子発現を測定する。
【0075】
前記１以上のタンパク質の遺伝子発現は、試料中における、前記１以上のタンパク質の遺伝子のｍＲＮＡ（コーディング領域及び非翻訳領域を含む）を検出することにより測定してもよいし、試料中における、前記１以上のタンパク質のタンパク質量を検出することにより測定してもよい。
【0076】
前記１以上のタンパク質の遺伝子のｍＲＮＡの検出には、ノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ法、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法、ＤＮＡマイクロアレイ法（ＤＮＡチップを利用した方法）、ドットブロット法、ＲＮアーゼプロテクションアッセイ法等を利用することができる。これらの方法は公知の方法で行うことができる。
【0077】
前記１以上のタンパク質のタンパク質量の検出は、前記１以上のタンパク質を特異的に認識し結合する抗体を用いる免疫測定法により行うことができる。抗体は、公知の方法により作製することができる。免疫測定法としては、検出しようとする前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体を固定した固相担体を用いる方法や、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング等が挙げられる。固相担体を用いる方法として、例えば、固定化マイクロタイタープレートを用いる酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、固定化粒子を用いる凝集法（免疫沈降法）等が挙げられるが、これらには限定されず、公知の免疫学的測定法を採用して、試料中の前記１以上のタンパク質のタンパク質量を検出することができる。また、前記１以上のタンパク質のタンパク質量の検出は、抗体を用いないタンパク質質量分析技術であるＬＣ－ＭＳ／ＭＳ ＭＲＭ等を用いる方法により行うこともできる。これらの検出方法についても、常法のプロトコルによって実施することができる。
試料中の前記１以上のタンパク質の酵素活性は、測定しようとするタンパク質の酵素活性に応じた方法で測定することが可能である。
試料中の前記１以上のタンパク質の酵素活性は、測定しようとするタンパク質の酵素活性に応じた方法で測定することが可能である。
【0078】
＜４．認知症の判定又は脳機能の判定のためのキット＞
本発明の別の一以上の実施形態は、
認知症の判定又は脳機能の判定のためのキットであって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬を含むキットに関する。
前記試薬としては、上述の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定する方法に用いることができる試薬が好ましい。
本発明の別の一以上の実施形態は、
認知症の判定又は脳機能の判定のためのキットであって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬を含むキットに関する。
前記試薬としては、上述の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定する方法に用いることができる試薬が好ましい。
【0079】
具体的には、測定しようとする前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸（ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡに基づき調製されるｃＤＮＡ）を増幅するためのプライマー対、測定しようとする前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸（ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡに基づき調製されるｃＤＮＡ）とハイブリダイズするプローブ、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体、前記１以上のタンパク質の酵素活性を測定するための反応基質等を例示することができる。前記核酸は非翻訳領域、イントロン領域、シグナル配列領域等も含み得る。好ましくは、前記核酸は、ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡである。前記ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡは、前記１以上のタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列（ＣＤＳ）及びその上流及び下流に位置する非翻訳領域（ＵＴＲ）の塩基配列のうち少なくとも一部を含んでいればよい。前記プライマー対の一例は、ＣＤＳ及びＵＴＲの塩基配列のうち少なくとも一部の領域を増幅できるプライマー対である。前記プローブの一例は、ＣＤＳ及びＵＴＲの塩基配列のうち少なくとも一部の領域にハイブリダイズできるプローブである。
【0080】
前記プライマー対の一例として、Ｇｌｕｔ１遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対であって、以下の（Ａ１）～（Ａ４）に示されるいずれかの塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ａｆを３’末端に含むＧｌｕｔ１フォワードプライマーと、以下の（Ａ５）～（Ａ８）に示されるいずれかの塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ａｒを３’末端に含むＧｌｕｔ１リバースプライマーと、を含むＧｌｕｔ１プライマー対が例示できる。
（Ａ１）配列番号１の塩基配列のうち、第１０１位～第１８０位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ａ２）配列番号３の塩基配列のうち、配列番号３の塩基配列と配列番号１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ａ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ａ３）配列番号３の塩基配列のうち、第２５６位～第３３６位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ａ４）配列番号１の塩基配列のうち、配列番号１の塩基配列と配列番号３の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ａ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ａ５）配列番号１の塩基配列のうち、第２１３位～第２９２位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ａ６）配列番号３の塩基配列のうち、配列番号３の塩基配列と配列番号１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ａ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ａ７）配列番号３の塩基配列のうち、第３３９位～第４１８位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ａ８）配列番号１の塩基配列のうち、配列番号１の塩基配列と配列番号３の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ａ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
（Ａ１）配列番号１の塩基配列のうち、第１０１位～第１８０位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ａ２）配列番号３の塩基配列のうち、配列番号３の塩基配列と配列番号１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ａ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ａ３）配列番号３の塩基配列のうち、第２５６位～第３３６位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ａ４）配列番号１の塩基配列のうち、配列番号１の塩基配列と配列番号３の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ａ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ａ５）配列番号１の塩基配列のうち、第２１３位～第２９２位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ａ６）配列番号３の塩基配列のうち、配列番号３の塩基配列と配列番号１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ａ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ａ７）配列番号３の塩基配列のうち、第３３９位～第４１８位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ａ８）配列番号１の塩基配列のうち、配列番号１の塩基配列と配列番号３の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ａ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
【0081】
前記（Ａ１）において、「第１０１位～第１８０位の塩基配列」は、好ましくは「第１１１位～第１７０位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１２１位～第１６０位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１２１位～第１５５位の塩基配列」、より好ましくは「第１２６位～第１５０位の塩基配列」である。
【0082】
前記（Ａ３）において、「第２５６位～第３３６位の塩基配列」は、好ましくは「第２６６位～第３２６位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第２７６位～第３１６位の塩基配列」であり、より好ましくは「第２７６位～第３１１位の塩基配列」、より好ましくは「第２８１位～第３０６位の塩基配列」である。
【0083】
前記（Ａ１）及び（Ａ３）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ａ１）及び（Ａ３）において、「連続した」は、好ましくは「３’末端から連続した」を指す。
【0084】
前記塩基配列Ａｆは、前記（Ａ１）の塩基配列、（Ａ２）の塩基配列、（Ａ３）の塩基配列又は（Ａ４）の塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ａｆのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ａ１）の塩基配列、（Ａ２）の塩基配列、（Ａ３）の塩基配列又は（Ａ４）の塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ａｆの残部が前記（Ａ１）の塩基配列、（Ａ２）の塩基配列、（Ａ３）の塩基配列又は（Ａ４）の塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ａｆは、前記（Ａ１）の塩基配列、（Ａ２）の塩基配列、（Ａ３）の塩基配列又は（Ａ４）の塩基配列と同一である。
【0085】
Ｇｌｕｔ１フォワードプライマーは、前記塩基配列Ａｆを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ａｆの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。Ｇｌｕｔ１フォワードプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0086】
前記（Ａ１）の塩基配列の具体例としては配列番号２５の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ａｆの具体例としては配列番号２５の塩基配列が例示できる。
【0087】
前記（Ａ３）の塩基配列の具体例としては配列番号３７の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ａｆの具体例としては配列番号３７の塩基配列が例示できる。
【0088】
前記（Ａ５）において、「第２１３位～第２９２位の塩基配列」は、好ましくは「第２２３位～第２８２位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第２３３位～第２７２位の塩基配列」であり、より好ましくは「第２３８位～第２７２位の塩基配列」、より好ましくは「第２４３位～第２６７位の塩基配列」である。
【0089】
前記（Ａ７）において、「第３３９位～第４１８位の塩基配列」は、好ましくは「第３４９位～第４０８位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第３５９位～第３９８位の塩基配列」であり、より好ましくは「第３６４位～第３９８位の塩基配列」、より好ましくは「第３６９位～第３９３位の塩基配列」である。
【0090】
前記（Ａ５）及び（Ａ７）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ａ５）及び（Ａ７）において、「連続した」は、好ましくは「５’末端から連続した」を指す。
【0091】
前記塩基配列Ａｒは、前記（Ａ５）の塩基配列、（Ａ６）の塩基配列、（Ａ７）の塩基配列又は（Ａ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ａｒのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ａ５）の塩基配列、（Ａ６）の塩基配列、（Ａ７）の塩基配列又は（Ａ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ａｒの残部が前記（Ａ５）の塩基配列、（Ａ６）の塩基配列、（Ａ７）の塩基配列又は（Ａ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ａｒは、前記（Ａ５）の塩基配列、（Ａ６）の塩基配列、（Ａ７）の塩基配列又は（Ａ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一である。
【0092】
Ｇｌｕｔ１リバースプライマーは、前記塩基配列Ａｒを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ａｒの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。Ｇｌｕｔ１リバースプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0093】
前記（Ａ５）の塩基配列の具体例としては配列番号２６の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ａｒの具体例としては配列番号２６の塩基配列が例示できる。
【0094】
前記（Ａ７）の塩基配列の具体例としては配列番号３８の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ａｒの具体例としては配列番号３８の塩基配列が例示できる。
【0095】
前記プライマー対の一例として、Ｇｌｕｔ３遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対であって、以下の（Ｂ１）～（Ｂ４）に示されるいずれかの塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｂｆを３’末端に含むＧｌｕｔ３フォワードプライマーと、以下の（Ｂ５）～（Ｂ８）に示されるいずれかの塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｂｒを３’末端に含むＧｌｕｔ３リバースプライマーと、を含むＧｌｕｔ３プライマー対が例示できる。
（Ｂ１）配列番号５の塩基配列のうち、第２５０位～第３２９位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｂ２）配列番号７の塩基配列のうち、配列番号７の塩基配列と配列番号５の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｂ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｂ３）配列番号７の塩基配列のうち、第２２４位～第３０３位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｂ４）配列番号５の塩基配列のうち、配列番号５の塩基配列と配列番号７の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｂ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｂ５）配列番号５の塩基配列のうち、第３７５位～第４５４位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｂ６）配列番号７の塩基配列のうち、配列番号７の塩基配列と配列番号５の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｂ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｂ７）配列番号７の塩基配列のうち、第２８８位～第３６７位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｂ８）配列番号５の塩基配列のうち、配列番号５の塩基配列と配列番号７の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｂ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
（Ｂ１）配列番号５の塩基配列のうち、第２５０位～第３２９位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｂ２）配列番号７の塩基配列のうち、配列番号７の塩基配列と配列番号５の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｂ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｂ３）配列番号７の塩基配列のうち、第２２４位～第３０３位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｂ４）配列番号５の塩基配列のうち、配列番号５の塩基配列と配列番号７の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｂ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｂ５）配列番号５の塩基配列のうち、第３７５位～第４５４位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｂ６）配列番号７の塩基配列のうち、配列番号７の塩基配列と配列番号５の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｂ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｂ７）配列番号７の塩基配列のうち、第２８８位～第３６７位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｂ８）配列番号５の塩基配列のうち、配列番号５の塩基配列と配列番号７の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｂ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
【0096】
前記（Ｂ１）において、「第２５０位～第３２９位の塩基配列」は、好ましくは「第２６０位～第３１９位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第２７０位～第３０９位の塩基配列」であり、より好ましくは「第２７０位～第３０４位の塩基配列」、より好ましくは「第２７５位～第２９９位の塩基配列」である。
【0097】
前記（Ｂ３）において、「第２２４位～第３０３位の塩基配列」は、好ましくは「第２３４位～第２９３位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第２４４位～第２８３位の塩基配列」であり、より好ましくは「第２４４位～第２７８位の塩基配列」、より好ましくは「第２４９位～第２７３位の塩基配列」である。
【0098】
前記（Ｂ１）及び（Ｂ３）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｂ１）及び（Ｂ３）において、「連続した」は、好ましくは「３’末端から連続した」を指す。
【0099】
前記塩基配列Ｂｆは、前記（Ｂ１）の塩基配列、（Ｂ２）の塩基配列、（Ｂ３）の塩基配列又は（Ｂ４）の塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｂｆのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｂ１）の塩基配列、（Ｂ２）の塩基配列、（Ｂ３）の塩基配列又は（Ｂ４）の塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｂｆの残部が前記（Ｂ１）の塩基配列、（Ｂ２）の塩基配列、（Ｂ３）の塩基配列又は（Ｂ４）の塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｂｆは、前記（Ｂ１）の塩基配列、（Ｂ２）の塩基配列、（Ｂ３）の塩基配列又は（Ｂ４）の塩基配列と同一である。
【0100】
Ｇｌｕｔ３フォワードプライマーは、前記塩基配列Ｂｆを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｂｆの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。Ｇｌｕｔ３フォワードプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0101】
前記（Ｂ１）の塩基配列の具体例としては配列番号２７の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｂｆの具体例としては配列番号２７の塩基配列が例示できる。
【0102】
前記（Ｂ３）の塩基配列の具体例としては配列番号３９の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｂｆの具体例としては配列番号３９の塩基配列が例示できる。
【0103】
前記（Ｂ５）において、「第３７５位～第４５４位の塩基配列」は、好ましくは「第３８５位～第４４４位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第３９５位～第４３４位の塩基配列」であり、より好ましくは「第４００位～第４３４位の塩基配列」、より好ましくは「第４０５位～第４２９位の塩基配列」である。
【0104】
前記（Ｂ７）において、「第２８８位～第３６７位の塩基配列」は、好ましくは「第２９８位～第３５７位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第３０８位～第３４７位の塩基配列」であり、より好ましくは「第３１３位～第３４７位の塩基配列」、より好ましくは「第３１８位～第３４２位の塩基配列」である。
【0105】
前記（Ｂ５）及び（Ｂ７）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｂ５）及び（Ｂ７）において、「連続した」は、好ましくは「５’末端から連続した」を指す。
【0106】
前記塩基配列Ｂｒは、前記（Ｂ５）の塩基配列、（Ｂ６）の塩基配列、（Ｂ７）の塩基配列又は（Ｂ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｂｒのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｂ５）の塩基配列、（Ｂ６）の塩基配列、（Ｂ７）の塩基配列又は（Ｂ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｂｒの残部が前記（Ｂ５）の塩基配列、（Ｂ６）の塩基配列、（Ｂ７）の塩基配列又は（Ｂ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｂｒは、前記（Ｂ５）の塩基配列、（Ｂ６）の塩基配列、（Ｂ７）の塩基配列又は（Ｂ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一である。
【0107】
Ｇｌｕｔ３リバースプライマーは、前記塩基配列Ｂｒを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｂｒの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。Ｇｌｕｔ３リバースプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0108】
前記（Ｂ５）の塩基配列の具体例としては配列番号２８の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｂｒの具体例としては配列番号２８の塩基配列が例示できる。
【0109】
前記（Ｂ７）の塩基配列の具体例としては配列番号４０の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｂｒの具体例としては配列番号４０の塩基配列が例示できる。
【0110】
前記プライマー対の一例として、ＭＣＴ４遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対であって、以下の（Ｃ１）～（Ｃ４）に示されるいずれかの塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｃｆを３’末端に含むＭＣＴ４フォワードプライマーと、以下の（Ｃ５）～（Ｃ８）に示されるいずれかの塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｃｒを３’末端に含むＭＣＴ４リバースプライマーと、を含むＭＣＴ４プライマー対が例示できる。
（Ｃ１）配列番号９の塩基配列のうち、第４０位～第１１８位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｃ２）配列番号１１の塩基配列のうち、配列番号１１の塩基配列と配列番号９の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｃ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｃ３）配列番号１１の塩基配列のうち、第１４６位～第２２５位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｃ４）配列番号９の塩基配列のうち、配列番号９の塩基配列と配列番号１１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｃ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｃ５）配列番号９の塩基配列のうち、第１０７位～第１８６位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｃ６）配列番号１１の塩基配列のうち、配列番号１１の塩基配列と配列番号９の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｃ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｃ７）配列番号１１の塩基配列のうち、第２２５位～第３０４位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｃ８）配列番号９の塩基配列のうち、配列番号９の塩基配列と配列番号１１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｃ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
（Ｃ１）配列番号９の塩基配列のうち、第４０位～第１１８位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｃ２）配列番号１１の塩基配列のうち、配列番号１１の塩基配列と配列番号９の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｃ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｃ３）配列番号１１の塩基配列のうち、第１４６位～第２２５位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｃ４）配列番号９の塩基配列のうち、配列番号９の塩基配列と配列番号１１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｃ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｃ５）配列番号９の塩基配列のうち、第１０７位～第１８６位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｃ６）配列番号１１の塩基配列のうち、配列番号１１の塩基配列と配列番号９の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｃ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｃ７）配列番号１１の塩基配列のうち、第２２５位～第３０４位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｃ８）配列番号９の塩基配列のうち、配列番号９の塩基配列と配列番号１１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｃ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
【0111】
前記（Ｃ１）において、「第４０位～第１１８位の塩基配列」は、好ましくは「第５０位～第１０８位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第６０位～第９８位の塩基配列」であり、より好ましくは「第６０位～第９３位の塩基配列」、より好ましくは「第６５位～第８８位の塩基配列」である。
【0112】
前記（Ｃ３）において、「第１４６位～第２２５位の塩基配列」は、好ましくは「第１５６位～第２１５位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１６６位～第２０５位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１６６位～第２００位の塩基配列」、より好ましくは「第１７１位～第１９５位の塩基配列」である。
【0113】
前記（Ｃ１）及び（Ｃ３）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｃ１）及び（Ｃ３）において、「連続した」は、好ましくは「３’末端から連続した」を指す。
【0114】
前記塩基配列Ｃｆは、前記（Ｃ１）の塩基配列、（Ｃ２）の塩基配列、（Ｃ３）の塩基配列又は（Ｃ４）の塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｃｆのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｃ１）の塩基配列、（Ｃ２）の塩基配列、（Ｃ３）の塩基配列又は（Ｃ４）の塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｃｆの残部が前記（Ｃ１）の塩基配列、（Ｃ２）の塩基配列、（Ｃ３）の塩基配列又は（Ｃ４）の塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｃｆは、前記（Ｃ１）の塩基配列、（Ｃ２）の塩基配列、（Ｃ３）の塩基配列又は（Ｃ４）の塩基配列と同一である。
【0115】
ＭＣＴ４フォワードプライマーは、前記塩基配列Ｃｆを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｃｆの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。ＭＣＴ４フォワードプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0116】
前記（Ｃ１）の塩基配列の具体例としては配列番号２９の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｃｆの具体例としては配列番号２９の塩基配列が例示できる。
【0117】
前記（Ｃ３）の塩基配列の具体例としては配列番号４１の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｃｆの具体例としては配列番号４１の塩基配列が例示できる。
【0118】
前記（Ｃ５）において、「第１０７位～第１８６位の塩基配列」は、好ましくは「第１１７位～第１７６位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１２７位～第１６６位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１３２位～第１６６位の塩基配列」、より好ましくは「第１３７位～第１６１位の塩基配列」である。
【0119】
前記（Ｃ７）において、「第２２５位～第３０４位の塩基配列」は、好ましくは「第２３５位～第２９４位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第２４５位～第２８４位の塩基配列」であり、より好ましくは「第２５０位～第２８４位の塩基配列」、より好ましくは「第２５５位～第２７９位の塩基配列」である。
【0120】
前記（Ｃ５）及び（Ｃ７）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｃ５）及び（Ｃ７）において、「連続した」は、好ましくは「５’末端から連続した」を指す。
【0121】
前記塩基配列Ｃｒは、前記（Ｃ５）の塩基配列、（Ｃ６）の塩基配列、（Ｃ７）の塩基配列又は（Ｃ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｃｒのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｃ５）の塩基配列、（Ｃ６）の塩基配列、（Ｃ７）の塩基配列又は（Ｃ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｃｒの残部が前記（Ｃ５）の塩基配列、（Ｃ６）の塩基配列、（Ｃ７）の塩基配列又は（Ｃ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｃｒは、前記（Ｃ５）の塩基配列、（Ｃ６）の塩基配列、（Ｃ７）の塩基配列又は（Ｃ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一である。
【0122】
ＭＣＴ４リバースプライマーは、前記塩基配列Ｃｒを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｃｒの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。ＭＣＴ４リバースプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0123】
前記（Ｃ５）の塩基配列の具体例としては配列番号３０の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｃｒの具体例としては配列番号３０の塩基配列が例示できる。
【0124】
前記（Ｃ７）の塩基配列の具体例としては配列番号４２の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｃｒの具体例としては配列番号４２の塩基配列が例示できる。
【0125】
前記プライマー対の一例として、ＰＨＤ３遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対であって、以下の（Ｄ１）～（Ｄ４）に示されるいずれかの塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｄｆを３’末端に含むＰＨＤ３フォワードプライマーと、以下の（Ｄ５）～（Ｄ８）に示されるいずれかの塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｄｒを３’末端に含むＰＨＤ３リバースプライマーと、を含むＰＨＤ３プライマー対が例示できる。
（Ｄ１）配列番号１３の塩基配列のうち、第８６４位～第９４３位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｄ２）配列番号１５の塩基配列のうち、配列番号１５の塩基配列と配列番号１３の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｄ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｄ３）配列番号１５の塩基配列のうち、第８６３位～第９４２位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｄ４）配列番号１３の塩基配列のうち、配列番号１３の塩基配列と配列番号１５の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｄ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｄ５）配列番号１３の塩基配列のうち、第９９１位～第１０７２位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｄ６）配列番号１５の塩基配列のうち、配列番号１５の塩基配列と配列番号１３の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｄ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｄ７）配列番号１５の塩基配列のうち、第１００４位～第１０８３位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｄ８）配列番号１３の塩基配列のうち、配列番号１３の塩基配列と配列番号１５の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｄ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
（Ｄ１）配列番号１３の塩基配列のうち、第８６４位～第９４３位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｄ２）配列番号１５の塩基配列のうち、配列番号１５の塩基配列と配列番号１３の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｄ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｄ３）配列番号１５の塩基配列のうち、第８６３位～第９４２位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｄ４）配列番号１３の塩基配列のうち、配列番号１３の塩基配列と配列番号１５の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｄ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｄ５）配列番号１３の塩基配列のうち、第９９１位～第１０７２位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｄ６）配列番号１５の塩基配列のうち、配列番号１５の塩基配列と配列番号１３の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｄ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｄ７）配列番号１５の塩基配列のうち、第１００４位～第１０８３位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｄ８）配列番号１３の塩基配列のうち、配列番号１３の塩基配列と配列番号１５の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｄ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
【0126】
前記（Ｄ１）において、「第８６４位～第９４３位の塩基配列」は、好ましくは「第８７４位～第９３３位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第８８４位～第９２３位の塩基配列」であり、より好ましくは「第８８４位～第９１８位の塩基配列」、より好ましくは「第８８９位～第９１３位の塩基配列」である。
【0127】
前記（Ｄ３）において、「第８６３位～第９４２位の塩基配列」は、好ましくは「第８７３位～第９３２位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第８８３位～第９２２位の塩基配列」であり、より好ましくは「第８８３位～第９１７位の塩基配列」、より好ましくは「第８８８位～第９１２位の塩基配列」である。
【0128】
前記（Ｄ１）及び（Ｄ３）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｄ１）及び（Ｄ３）において、「連続した」は、好ましくは「３’末端から連続した」を指す。
【0129】
前記塩基配列Ｄｆは、前記（Ｄ１）の塩基配列、（Ｄ２）の塩基配列、（Ｄ３）の塩基配列又は（Ｄ４）の塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｄｆのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｄ１）の塩基配列、（Ｄ２）の塩基配列、（Ｄ３）の塩基配列又は（Ｄ４）の塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｄｆの残部が前記（Ｄ１）の塩基配列、（Ｄ２）の塩基配列、（Ｄ３）の塩基配列又は（Ｄ４）の塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｄｆは、前記（Ｄ１）の塩基配列、（Ｄ２）の塩基配列、（Ｄ３）の塩基配列又は（Ｄ４）の塩基配列と同一である。
【0130】
ＰＨＤ３フォワードプライマーは、前記塩基配列Ｄｆを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｄｆの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。ＰＨＤ３フォワードプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0131】
前記（Ｄ１）の塩基配列の具体例としては配列番号３１の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｄｆの具体例としては配列番号３１の塩基配列が例示できる。
【0132】
前記（Ｄ３）の塩基配列の具体例としては配列番号４３の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｄｆの具体例としては配列番号４３の塩基配列が例示できる。
【0133】
前記（Ｄ５）において、「第９９１位～第１０７２位の塩基配列」は、好ましくは「第１００１位～第１０６２位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１０１１位～第１０５２位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１０１６位～第１０４７位の塩基配列」、より好ましくは「第１０２１位～第１０４２位の塩基配列」である。
【0134】
前記（Ｄ７）において、「第１００４位～第１０８３位の塩基配列」は、好ましくは「第１０１４位～第１０７３位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１０２４位～第１０６３位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１０２９位～第１０６３位の塩基配列」、より好ましくは「第１０３４位～第１０５８位の塩基配列」である。
【0135】
前記（Ｄ５）及び（Ｄ７）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｄ５）及び（Ｄ７）において、「連続した」は、好ましくは「５’末端から連続した」を指す。
【0136】
前記塩基配列Ｄｒは、前記（Ｄ５）の塩基配列、（Ｄ６）の塩基配列、（Ｄ７）の塩基配列又は（Ｄ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｄｒのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｄ５）の塩基配列、（Ｄ６）の塩基配列、（Ｄ７）の塩基配列又は（Ｄ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｄｒの残部が前記（Ｄ５）の塩基配列、（Ｄ６）の塩基配列、（Ｄ７）の塩基配列又は（Ｄ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｄｒは、前記（Ｄ５）の塩基配列、（Ｄ６）の塩基配列、（Ｄ７）の塩基配列又は（Ｄ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一である。
【0137】
ＰＨＤ３リバースプライマーは、前記塩基配列Ｄｒを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｄｒの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。ＰＨＤ３リバースプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0138】
前記（Ｄ５）の塩基配列の具体例としては配列番号３２の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｄｒの具体例としては配列番号３２の塩基配列が例示できる。
【0139】
前記（Ｄ７）の塩基配列の具体例としては配列番号４４の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｄｒの具体例としては配列番号４４の塩基配列が例示できる。
【0140】
前記プライマー対の一例として、ＰＤＫ１遺伝子を含む核酸を増幅するためのプライマー対であって、以下の（Ｅ１）～（Ｅ４）に示されるいずれかの塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｅｆを３’末端に含むＰＤＫ１フォワードプライマーと、以下の（Ｅ５）～（Ｅ８）に示されるいずれかの塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｅｒを３’末端に含むＰＤＫ１リバースプライマーと、を含むＰＤＫ１プライマー対が例示できる。
（Ｅ１）配列番号１７の塩基配列のうち、第４４５位～第５２８位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｅ２）配列番号１９の塩基配列のうち、配列番号１９の塩基配列と配列番号１７の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｅ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｅ３）配列番号１９の塩基配列のうち、第９８１位～第１０６０位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｅ４）配列番号１７の塩基配列のうち、配列番号１７の塩基配列と配列番号１９の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｅ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｅ５）配列番号１７の塩基配列のうち、第５４５位～第６２４位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｅ６）配列番号１９の塩基配列のうち、配列番号１９の塩基配列と配列番号１７の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｅ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｅ７）配列番号１９の塩基配列のうち、第１０７８位～第１１５７位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｅ８）配列番号１７の塩基配列のうち、配列番号１７の塩基配列と配列番号１９の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｅ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
（Ｅ１）配列番号１７の塩基配列のうち、第４４５位～第５２８位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｅ２）配列番号１９の塩基配列のうち、配列番号１９の塩基配列と配列番号１７の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｅ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｅ３）配列番号１９の塩基配列のうち、第９８１位～第１０６０位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｅ４）配列番号１７の塩基配列のうち、配列番号１７の塩基配列と配列番号１９の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｅ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｅ５）配列番号１７の塩基配列のうち、第５４５位～第６２４位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｅ６）配列番号１９の塩基配列のうち、配列番号１９の塩基配列と配列番号１７の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｅ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｅ７）配列番号１９の塩基配列のうち、第１０７８位～第１１５７位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｅ８）配列番号１７の塩基配列のうち、配列番号１７の塩基配列と配列番号１９の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｅ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
【0141】
前記（Ｅ１）において、「第４４５位～第５２８位の塩基配列」は、好ましくは「第４５５位～第５１８位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第４６５位～第５０８位の塩基配列」であり、より好ましくは「第４６５位～第５０３位の塩基配列」、より好ましくは「第４７０位～第４９８位の塩基配列」である。
【0142】
前記（Ｅ３）において、「第９８１位～第１０６０位の塩基配列」は、好ましくは「第９９１位～第１０５０位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１００１位～第１０４０位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１００１位～第１０３５位の塩基配列」、より好ましくは「第１００６位～第１０３０位の塩基配列」である。
【0143】
前記（Ｅ１）及び（Ｅ３）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｅ１）及び（Ｅ３）において、「連続した」は、好ましくは「３’末端から連続した」を指す。
【0144】
前記塩基配列Ｅｆは、前記（Ｅ１）の塩基配列、（Ｅ２）の塩基配列、（Ｅ３）の塩基配列又は（Ｅ４）の塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｅｆのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｅ１）の塩基配列、（Ｅ２）の塩基配列、（Ｅ３）の塩基配列又は（Ｅ４）の塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｅｆの残部が前記（Ｅ１）の塩基配列、（Ｅ２）の塩基配列、（Ｅ３）の塩基配列又は（Ｅ４）の塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｅｆは、前記（Ｅ１）の塩基配列、（Ｅ２）の塩基配列、（Ｅ３）の塩基配列又は（Ｅ４）の塩基配列と同一である。
【0145】
ＰＤＫ１フォワードプライマーは、前記塩基配列Ｅｆを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｅｆの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。ＰＤＫ１フォワードプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0146】
前記（Ｅ１）の塩基配列の具体例としては配列番号３３の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｅｆの具体例としては配列番号３３の塩基配列が例示できる。
【0147】
前記（Ｅ３）の塩基配列の具体例としては配列番号４５の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｅｆの具体例としては配列番号４５の塩基配列が例示できる。
【0148】
前記（Ｅ５）において、「第５４５位～第６２４位の塩基配列」は、好ましくは「第５５５位～第６１４位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第５６５位～第６０４位の塩基配列」であり、より好ましくは「第５７０位～第６０４位の塩基配列」、より好ましくは「第５７５位～第５９９位の塩基配列」である。
【0149】
前記（Ｅ７）において、「第１０７８位～第１１５７位の塩基配列」は、好ましくは「第１０８８位～第１１４７位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１０９８位～第１１３７位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１１０３位～第１１３７位の塩基配列」、より好ましくは「第１１０８位～第１１３２位の塩基配列」である。
【0150】
前記（Ｅ５）及び（Ｅ７）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｅ５）及び（Ｅ７）において、「連続した」は、好ましくは「５’末端から連続した」を指す。
【0151】
前記塩基配列Ｅｒは、前記（Ｅ５）の塩基配列、（Ｅ６）の塩基配列、（Ｅ７）の塩基配列又は（Ｅ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｅｒのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｅ５）の塩基配列、（Ｅ６）の塩基配列、（Ｅ７）の塩基配列又は（Ｅ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｅｒの残部が前記（Ｅ５）の塩基配列、（Ｅ６）の塩基配列、（Ｅ７）の塩基配列又は（Ｅ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｅｒは、前記（Ｅ５）の塩基配列、（Ｅ６）の塩基配列、（Ｅ７）の塩基配列又は（Ｅ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一である。
【0152】
ＰＤＫ１リバースプライマーは、前記塩基配列Ｅｒを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｅｒの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。ＰＤＫ１リバースプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0153】
前記（Ｅ５）の塩基配列の具体例としては配列番号３４の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｅｒの具体例としては配列番号３４の塩基配列が例示できる。
【0154】
前記（Ｅ７）の塩基配列の具体例としては配列番号４６の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｅｒの具体例としては配列番号４６の塩基配列が例示できる。
【0155】
前記キットには、プライマー対として、内在性コントロール遺伝子の核酸を増幅するためのプライマー対を含むことができる。このようなプライマー対の一例として、１８ＳリボソームＲＮＡをコードする核酸を増幅するためのプライマー対であって、以下の（Ｆ１）～（Ｆ４）に示されるいずれかの塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｆｆを３’末端に含む１８ＳリボソームＲＮＡフォワードプライマーと、以下の（Ｆ５）～（Ｆ８）に示されるいずれかの塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同な塩基配列Ｆｒを３’末端に含む１８ＳリボソームＲＮＡリバースプライマーと、を含む１８ＳリボソームＲＮＡプライマー対が例示できる。
（Ｆ１）配列番号２１の塩基配列のうち、第１２１６位～第１２９７位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｆ２）配列番号２２の塩基配列のうち、配列番号２２の塩基配列と配列番号２１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｆ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｆ３）配列番号２２の塩基配列のうち、第１２１６位～第１２９７位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｆ４）配列番号２１の塩基配列のうち、配列番号２１の塩基配列と配列番号２２の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｆ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｆ５）配列番号２１の塩基配列のうち、第１３１７位～第１３９６位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｆ６）配列番号２２の塩基配列のうち、配列番号２２の塩基配列と配列番号２１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｆ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｆ７）配列番号２１の塩基配列のうち、第１３１７位～第１３９６位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｆ８）配列番号２１の塩基配列のうち、配列番号２１の塩基配列と配列番号２２の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｆ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
（Ｆ１）配列番号２１の塩基配列のうち、第１２１６位～第１２９７位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｆ２）配列番号２２の塩基配列のうち、配列番号２２の塩基配列と配列番号２１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｆ１）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｆ３）配列番号２２の塩基配列のうち、第１２１６位～第１２９７位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｆ４）配列番号２１の塩基配列のうち、配列番号２１の塩基配列と配列番号２２の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｆ３）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｆ５）配列番号２１の塩基配列のうち、第１３１７位～第１３９６位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｆ６）配列番号２２の塩基配列のうち、配列番号２２の塩基配列と配列番号２１の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｆ５）の塩基配列に対応する塩基配列
（Ｆ７）配列番号２１の塩基配列のうち、第１３１７位～第１３９６位の塩基配列に含まれる連続した１０塩基以上の塩基配列
（Ｆ８）配列番号２１の塩基配列のうち、配列番号２１の塩基配列と配列番号２２の塩基配列とをアライメントしたときに、前記（Ｆ７）の塩基配列に対応する塩基配列。
【0156】
前記（Ｆ１）において、「第１２１６位～第１２９７位の塩基配列」は、好ましくは「第１２２６位～第１２８７位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１２３６位～第１２７７位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１２４１位～第１２７２位の塩基配列」、より好ましくは「第１２４１位～第１２６７位の塩基配列」である。
【0157】
前記（Ｆ３）において、「第１２１６位～第１２９７位の塩基配列」は、好ましくは「第１２２６位～第１２８７位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１２３６位～第１２７７位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１２３６位～第１２７２位の塩基配列」、より好ましくは「第１２４１位～第１２６７位の塩基配列」である。
【0158】
前記（Ｆ１）及び（Ｆ３）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｆ１）及び（Ｆ３）において、「連続した」は、好ましくは「３’末端から連続した」を指す。
【0159】
前記塩基配列Ｆｆは、前記（Ｆ１）の塩基配列、（Ｆ２）の塩基配列、（Ｆ３）の塩基配列又は（Ｆ４）の塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｆｆのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｆ１）の塩基配列、（Ｆ２）の塩基配列、（Ｆ３）の塩基配列又は（Ｆ４）の塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｆｆの残部が前記（Ｆ１）の塩基配列、（Ｆ２）の塩基配列、（Ｆ３）の塩基配列又は（Ｆ４）の塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｆｆは、前記（Ｆ１）の塩基配列、（Ｆ２）の塩基配列、（Ｆ３）の塩基配列又は（Ｆ４）の塩基配列と同一である。
【0160】
１８ＳリボソームＲＮＡフォワードプライマーは、前記塩基配列Ｆｆを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｆｆの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。１８ＳリボソームＲＮＡフォワードプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0161】
前記（Ｆ１）の塩基配列の具体例としては配列番号２３の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｆｆの具体例としては配列番号２３の塩基配列が例示できる。
【0162】
前記（Ｆ３）の塩基配列の具体例としては配列番号３５の塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｆｆの具体例としては配列番号３５の塩基配列が例示できる。
【0163】
前記（Ｆ５）において、「第１３１７位～第１３９６位の塩基配列」は、好ましくは「第１３２７位～第１３８６位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１３３７位～第１３７６位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１３４２位～第１３７６位の塩基配列」、より好ましくは「第１３４７位～第１３７１位の塩基配列」である。
【0164】
前記（Ｆ７）において、「第１３１７位～第１３９６位の塩基配列」は、好ましくは「第１３２７位～第１３８６位の塩基配列」であり、より好ましくは、「第１３３７位～第１３７６位の塩基配列」であり、より好ましくは「第１３４２位～第１３７６位の塩基配列」、より好ましくは「第１３４７位～第１３７１位の塩基配列」である。
【0165】
前記（Ｆ５）及び（Ｆ７）において、「１０塩基以上」は、好ましくは「１５塩基以上」、より好ましくは「１７塩基以上」、より好ましくは「１９塩基以上」である。前記（Ｆ５）及び（Ｆ７）において、「連続した」は、好ましくは「５’末端から連続した」を指す。
【0166】
前記塩基配列Ｆｒは、前記（Ｆ５）の塩基配列、（Ｆ６）の塩基配列、（Ｆ７）の塩基配列又は（Ｆ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同であればよいが、前記塩基配列Ｆｒのうち、３’末端から、好ましくは２塩基以上、より好ましくは３塩基以上、より好ましくは５塩基以上、より好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは１９塩基以上の連続した塩基配列が、前記（Ｆ５）の塩基配列、（Ｆ６）の塩基配列、（Ｆ７）の塩基配列又は（Ｆ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一であり、前記塩基配列Ｆｒの残部が前記（Ｆ５）の塩基配列、（Ｆ６）の塩基配列、（Ｆ７）の塩基配列又は（Ｆ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一又は相同である。「相同」の範囲は後述する通りである。特に好ましくは、前記塩基配列Ｆｒは、前記（Ｆ５）の塩基配列、（Ｆ６）の塩基配列、（Ｆ７）の塩基配列又は（Ｆ８）の塩基配列の相補塩基配列と同一である。
【0167】
１８ＳリボソームＲＮＡリバースプライマーは、前記塩基配列Ｆｒを３’末端に含むポリヌクレオチドを含むものであればよく、前記塩基配列Ｆｒの５’末端側に更に他の塩基配列を含むものであってもよい。１８ＳリボソームＲＮＡリバースプライマーに含まれるポリヌクレオチドの塩基数は特に限定されないが、好ましくは５０塩基以下、より好ましくは４０塩基以下、より好ましくは３０塩基以下である。
【0168】
前記（Ｆ５）の塩基配列の具体例としては配列番号２４の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｆｒの具体例としては配列番号２４の塩基配列が例示できる。
【0169】
前記（Ｆ７）の塩基配列の具体例としては配列番号３６の塩基配列の相補塩基配列が例示できる。前記塩基配列Ｆｒの具体例としては配列番号３６の塩基配列が例示できる。
【0170】
本明細書において「塩基配列Ｘと相同な塩基配列Ｙ」、或いは、「塩基配列Ｘと塩基配列Ｙとが相同である」、というとき、塩基配列Ｘの相補配列からなるポリヌクレオチドと、塩基配列Ｙからなるポリヌクレオチドとが、核酸増幅反応のアニーリング条件においてハイブリダイズして安定な二本鎖を形成するのに十分な水素結合を形成することができる組み合わせである限り、塩基配列ＸとＹとが部分的に異なっていてもよい。例えば、塩基配列Ｘの相補配列からなるポリヌクレオチドと、塩基配列Ｙからなるポリヌクレオチドとが、１０ヌクレオチド中に１ミスマッチ、２０ヌクレオチド中に１ミスマッチ、または３０ヌクレオチド中に１ミスマッチなど、いくつかのミスマッチが存在していてもよい。典型的には、塩基配列Ｘと「相同な」塩基配列Ｙというとき、塩基配列ＸとＹとが以下の関係のいずれかを満たすことを指す。
【0171】
（Ａ）塩基配列Ｙが、塩基配列Ｘにおいて１若しくは数個の塩基が欠失、置換、付加及び／又は挿入された塩基配列である。
（Ｂ）塩基配列Ｙが、塩基配列Ｘと７０％以上の同一性を有する塩基配列である。
（Ｃ）塩基配列Ｙからなるポリヌクレオチドが、配列番号Ｘと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下においてハイブリダイズすることができる。
（Ｄ）塩基配列Ｘと塩基配列Ｙの一方における任意の位置のチミン（Ｔ）が、他方におけるウラシル（Ｕ）に置換されている。
（Ｂ）塩基配列Ｙが、塩基配列Ｘと７０％以上の同一性を有する塩基配列である。
（Ｃ）塩基配列Ｙからなるポリヌクレオチドが、配列番号Ｘと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下においてハイブリダイズすることができる。
（Ｄ）塩基配列Ｘと塩基配列Ｙの一方における任意の位置のチミン（Ｔ）が、他方におけるウラシル（Ｕ）に置換されている。
【0172】
前記（Ａ）において「１若しくは数個」とは好ましくは１～５個、より好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、特に好ましくは１個又は２個を指し、最も好ましくは１個である。前記（Ａ）において「１若しくは数個」とは、欠失、置換、付加及び／又は挿入された塩基の合計数を指す。
【0173】
前記（Ｂ）において、同一性の値は、複数の塩基配列間の同一性を演算するソフトウェア（例えば、ＦＡＳＴＡ、ＤＮＡＳＩＳ、及びＢＬＡＳＴ）を用いてデフォルトの設定で算出した値を示す。塩基配列の同一性の値は、一致度が最大となるように一対の塩基配列をアライメントした際に一致する塩基の数を算出し、当該一致する塩基の数の、比較した塩基配列の全塩基数に対する割合として算出される。ここで、ギャップがある場合、上記の全塩基数は、１つのギャップを１つの塩基として数えた塩基数である。同一性の決定方法の詳細については、例えばＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２５，３３８９－３４０２，１９７７及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０，１９９０を参照されたい。
【0174】
前記（Ｂ）において、同一性はより好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、より好ましくは９６％以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の同一性である。
【0175】
前記（Ｃ）において、「ストリンジェントな条件」とは、いわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件を意味し、例えばＧｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，４ｔｈ Ｅｄ （２０１２），Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照して適宜決定することができる。具体的には、サザンハイブリダイゼーションの際の温度や溶液に含まれる塩濃度、及びサザンハイブリダイゼーションの洗浄工程の際の温度や溶液に含まれる塩濃度によりストリンジェントな条件を設定することができる。より詳細には、ストリンジェントな条件としては、例えば、ハイブリダイゼーション工程では、ナトリウム濃度が２５～５００ｍＭ、好ましくは２５～３００ｍＭであり、温度が４０～６８℃、好ましくは４０～６５℃である。より具体的には、ハイブリダイゼーションは、１～７×ＳＳＣ、０．０２～３％ ＳＤＳ、温度４０℃～６０℃で行うことができる。また、ハイブリダイゼーションの後に洗浄工程を行っても良く、洗浄工程は、例えば０．１～２×ＳＳＣ、０．１～０．３％ ＳＤＳ、温度５０～６５℃で行うことができる。
前記の各プライマー対は一方又は両方が標識物質等の他の物質により修飾されていてもよい。
前記の各プライマー対は一方又は両方が標識物質等の他の物質により修飾されていてもよい。
【0176】
前記プローブは、前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸の塩基配列、例えば、Ｇｌｕｔ１遺伝子の配列番号１又は配列番号３の塩基配列（特に、配列番号１の塩基配列のうち第１３１位～第２６２位の塩基配列；配列番号３の塩基配列のうち、配列番号３の塩基配列と配列番号１の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号１の塩基配列のうち第１３１位～第２６２位の塩基配列に対応する塩基配列；配列番号３の塩基配列のうち第２８６位～第３８８位の塩基配列；或いは、配列番号１の塩基配列のうち、配列番号１の塩基配列と配列番号３の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号３の塩基配列のうち第２８６位～第３８８位の塩基配列に対応する塩基配列）、Ｇｌｕｔ３遺伝子の配列番号５又は配列番号７の塩基配列（特に、配列番号５の塩基配列のうち第２８０位～第４２４位の塩基配列；配列番号７の塩基配列のうち、配列番号７の塩基配列と配列番号５の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号５の塩基配列のうち第２８０位～第４２４位の塩基配列に対応する塩基配列；配列番号７の塩基配列のうち第２５４位～第３３７位の塩基配列；或いは、配列番号５の塩基配列のうち、配列番号５の塩基配列と配列番号７の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号７の塩基配列のうち第２５４位～第３３７位の塩基配列に対応する塩基配列）、ＭＣＴ４遺伝子の配列番号９又は配列番号１１の塩基配列（特に、配列番号９の塩基配列のうち第７０位～第１５６位の塩基配列；配列番号１１の塩基配列のうち、配列番号１１の塩基配列と配列番号９の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号９の塩基配列のうち第７０位～第１５６位の塩基配列に対応する塩基配列；配列番号１１の塩基配列のうち第１７６位～第２７４位の塩基配列；或いは、配列番号９の塩基配列のうち、配列番号９の塩基配列と配列番号１１の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号１１の塩基配列のうち第１７６位～第２７４位の塩基配列に対応する塩基配列）、ＰＨＤ３遺伝子の配列番号１３又は配列番号１５の塩基配列（特に、配列番号１３の塩基配列のうち第８９４位～第１０４２位の塩基配列；配列番号１５の塩基配列のうち、配列番号１５の塩基配列と配列番号１３の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号３の塩基配列のうち第８９４位～第１０４２位の塩基配列に対応する塩基配列；配列番号１５の塩基配列のうち第８９３位～第１０５３位の塩基配列；或いは、配列番号１３の塩基配列のうち、配列番号１３の塩基配列と配列番号１５の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号１５の塩基配列のうち第８９３位～第１０５３位の塩基配列に対応する塩基配列）、又はＰＤＫ１遺伝子の配列番号１７又は配列番号１９の塩基配列（特に、配列番号１７の塩基配列のうち第４７５位～第５９４位の塩基配列；配列番号１９の塩基配列のうち、配列番号１９の塩基配列と配列番号１７の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号１７の塩基配列のうち第４７５位～第５９４位の塩基配列に対応する塩基配列；配列番号１９の塩基配列のうち第１０１１位～第１１２７位の塩基配列；或いは、配列番号１７の塩基配列のうち、配列番号１７の塩基配列と配列番号１９の塩基配列とをアライメントしたときに、配列番号１９の塩基配列のうち第１０１１位～第１１２７位の塩基配列に対応する塩基配列）に含まれる１０塩基以上、好ましくは１５塩基以上、より好ましくは１７塩基以上、より好ましくは２０塩基以上の連続した部分塩基配列又はその相補塩基配列と相同な塩基配列を含む核酸断片を含むことができる。前記部分塩基配列の長さの上限は特に限定されないが例えば５０塩基以下、４０塩基以下又は３０塩基以下であることができる。前記プローブは、前記核酸断片が、標識物質等の他の物質により修飾されたものであってもよい。
【0177】
前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体は、抗体はポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい。また抗体は、測定しようとするタンパク質に特異的に結合し得る限り断片として使用することもできる。抗体の断片としては、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）等が挙げられる。前記抗体は、マイクロタイタープレート、粒子等の固相担体に固定化されていてもよい。
【0178】
前記１以上のタンパク質の酵素活性を測定するための反応基質は、測定しようとするタンパク質の活性に応じて適宜選択することができる。
【0179】
前記実施形態に係るキットは、更に、測定に必要な成分を含む希釈用又は反応用の緩衝液、洗浄液、発色試薬、反応容器等を含んでも良い。
【0180】
前記実施形態に係るキットは、前記試料から単核細胞を分離するための試薬及び／又はカラムを更に含むことが好ましい。前記試薬及び／又はカラムとしては、例えば、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳ（ＧＥヘルスケア社製）、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ａｂｂｏｔｔ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）、Ｈｕｍａｎ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｋｉｔ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社製）、ＢＤ バキュテイナ（登録商標）ＣＰＴ 単核球分離用採血管（ベクトン・ディッキンソン社製）、ｐｌｕｒｉＭａｔｅ（ｐｌｕｒｉＳｅｌｅｃｔ社製）、ＳｅｐＭａｔｅ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）等を挙げることができる。前記試料中の単核細胞と顆粒球とを分離し、測定に供するための単核細胞含有試料を効率的に取得することができる。
【0181】
＜５．被検体における老化現象の程度の判定のためのキット＞
本発明の別の一以上の実施形態は、
被検体における老化現象の程度の判定のためのキットであって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬を含むキットに関する。
本発明の別の一以上の実施形態は、
被検体における老化現象の程度の判定のためのキットであって、
被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定するための試薬を含むキットに関する。
【0182】
前記老化現象の程度の判定は、齢の判定、脳組織の老化現象の程度の判定、末梢血の老化現象の程度、又は骨髄細胞の老化現象の程度の判定であることが好ましい。
【0183】
前記骨髄細胞は、造血幹細胞、間葉系幹細胞、未成熟細胞であることが好ましい。
【0184】
前記試薬としては、上述の、前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定する方法に用いることができる試薬が好ましい。
【0185】
具体的には、測定しようとする前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸（ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡに基づき調製されるｃＤＮＡ）を増幅するためのプライマー対、測定しようとする前記１以上のタンパク質の遺伝子を含む核酸（ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡに基づき調製されるｃＤＮＡ）とハイブリダイズするプローブ、前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体、前記１以上のタンパク質の酵素活性を測定するための反応基質等を例示することができる。前記ゲノムＤＮＡは非翻訳領域、イントロン領域、シグナル配列領域等も含み得る。好ましくは、前記核酸は、ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡである。前記ｍＲＮＡ又はｃＤＮＡは、前記１以上のタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列（ＣＤＳ）及びその上流及び下流に位置する非翻訳領域（ＵＴＲ）の塩基配列のうち少なくとも一部を含んでいればよい。前記プライマー対の一例は、ＣＤＳ及びＵＴＲの塩基配列のうち少なくとも一部の領域を増幅できるプライマー対である。前記プローブの一例は、ＣＤＳ及びＵＴＲの塩基配列のうち少なくとも一部の領域にハイブリダイズできるプローブである。
【0186】
前記プライマー対は、上記の「４．認知症の判定又は脳機能の判定のためのキット」に関して記載したプライマー対の好適な例と同様の範囲から選択できる。
【0187】
プローブは、上記の「４．認知症の判定又は脳機能の判定のためのキット」に関して記載したブロー部の好適な例と同様の範囲から選択できる。
【0188】
前記１以上のタンパク質に特異的に結合する抗体は、抗体はポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい。また抗体は、測定しようとするタンパク質に特異的に結合し得る限り断片として使用することもできる。抗体の断片としては、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）等が挙げられる。前記抗体は、マイクロタイタープレート、粒子等の固相担体に固定化されていてもよい。
【0189】
前記１以上のタンパク質の酵素活性を測定するための反応基質は、測定しようとするタンパク質の活性に応じて適宜選択することができる。
【0190】
前記実施形態に係るキットは、更に、測定に必要な成分を含む希釈用又は反応用の緩衝液、洗浄液、発色試薬、反応容器等を含んでも良い。
【実施例】
【0191】
以下の実施例にて本発明を具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【0192】
後述される全ての動物実験は、公益財団法人神戸医療産業都市推進機構の動物実験審査委員会から承認を得て、文部科学省が定めた研究機関等における動物実験等の実施に関する基本指針に準拠して実施された。実験と結果は、英国３Ｒｓセンター（ＮＣ３Ｒｓ）が作成したＡＲＲＩＶＥガイドラインに従って報告される。
【0193】
１．比較例１
＜方法＞
比較例１では、健常なマウスに由来する体液試料を用いて、被検体における認知症及び脳機能を判定するための指標を検討した。
＜方法＞
比較例１では、健常なマウスに由来する体液試料を用いて、被検体における認知症及び脳機能を判定するための指標を検討した。
【0194】
１－１．実験動物の準備
５週齢以下の雄のＣＢ－１７系統マウス（オリエンタル酵母工業株式会社）を、以下の実験に供した。
５週齢以下の雄のＣＢ－１７系統マウス（オリエンタル酵母工業株式会社）を、以下の実験に供した。
【0195】
１－２．行動試験
マウスにおける認知症及び／又は脳機能を評価するために、５つの行動試験（オープンフィールド試験、ワイヤーハング試験、受動的回避試験、オープンスペース水泳試験及びロータロッド試験）を実施した。
マウスにおける認知症及び／又は脳機能を評価するために、５つの行動試験（オープンフィールド試験、ワイヤーハング試験、受動的回避試験、オープンスペース水泳試験及びロータロッド試験）を実施した。
【0196】
１－２－１．オープンフィールド試験
オープンフィールド試験（Ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ ｔｅｓｔ）は、明状態及び暗状態におけるマウスの平均移動回数（水平移動回数及び垂直移動回数の総和の平均値）を指標として、明暗の変化に対するマウスの反応性を評価する行動試験である。オープンフィールド試験は、以下の方法により実施された。
オープンフィールド試験（Ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ ｔｅｓｔ）は、明状態及び暗状態におけるマウスの平均移動回数（水平移動回数及び垂直移動回数の総和の平均値）を指標として、明暗の変化に対するマウスの反応性を評価する行動試験である。オープンフィールド試験は、以下の方法により実施された。
【0197】
透明なアクリルボックス（底面：縦３０ｃｍ×横３０ｃｍ）の中にマウスを入れた。白色照明を点灯させた状態（明状態）で、アクリルボックス内のマウスを３０分間自由に探索させた。次いで、照明を消し、３０分間暗状態を維持した。マウスの水平移動回数は、床から２ｃｍの高さにおいて縦軸及び横軸に沿って１０ｃｍ間隔で設けられた赤外線ビームをマウスが遮った回数を測定することにより評価した。また、マウスの垂直移動回数（立ち上がり回数）は、床から５ｃｍの高さにおいて縦軸に沿って３ｃｍ間隔で設けられた赤外線ビームをマウスが遮った回数を測定することにより評価した。試験を９回以上実施し、それらの平均移動回数を算出した。
【0198】
１－２－２．ワイヤーハング試験
ワイヤーハング試験（Ｗｉｒｅ ｈａｎｇ ｔｅｓｔ）は、金網から吊り下げられたマウスが落下するまでの時間の平均値（平均落下時間）を指標として、マウスの筋力を評価する行動試験である。ワイヤーハング試験は、以下の方法により実施された。
ワイヤーハング試験（Ｗｉｒｅ ｈａｎｇ ｔｅｓｔ）は、金網から吊り下げられたマウスが落下するまでの時間の平均値（平均落下時間）を指標として、マウスの筋力を評価する行動試験である。ワイヤーハング試験は、以下の方法により実施された。
【0199】
１２ｍｍ間隔の金網の上にマウスを置いた。次に、金網ごとマウスを裏返し、２０ｃｍの高さに吊り下げた。マウスが金網から落下するまでの時間（落下時間）を記録した。試験を８回以上実施し、それらの落下時間の平均値（平均落下時間）を算出した。
【0200】
１－２－３．受動的回避試験
受動的回避試験（Ｐａｓｓｉｖｅ ａｖｏｉｄａｎｃｅ ｔｅｓｔ）は、予め嫌悪刺激を経験させたマウスの、本試験時における反応潜時の平均値（平均反応潜時）を指標として、マウスの学習及び記憶の機能を評価する行動試験である。受動的回避試験は、以下の方法により実施された。
受動的回避試験（Ｐａｓｓｉｖｅ ａｖｏｉｄａｎｃｅ ｔｅｓｔ）は、予め嫌悪刺激を経験させたマウスの、本試験時における反応潜時の平均値（平均反応潜時）を指標として、マウスの学習及び記憶の機能を評価する行動試験である。受動的回避試験は、以下の方法により実施された。
【0201】
受動的回避試験は、マウスが通り抜けられる穴が開いた板によって仕切られた明室及び暗室から構成され、暗室の床に電気刺激装置が設置された箱を用いて実施された。事前段階として、白色照明が点灯した明室にマウスを入れ、箱内を自由に探索させた。マウスは暗所を好むため次第に暗室へ進入するが、暗室へ進入した時にマウスは軽い電気刺激を与えられた。マウスが明室に留まった時間（すなわち、暗室に進入するまでの時間）を測定し記録した。２４時間後、本試験として、再び明室にマウスを入れ、マウスが明室に留まった時間（すなわち、暗室に進入するまでの時間）を再度測定した。なお、明室に留まった時間（暗室に進入するまでの時間）の測定は最大１８０秒とした。反応潜時は、本試験における明室に留まった時間と事前段階における明室に留まった時間との差の絶対値として算出した。試験を５回以上実施し、それらの反応潜時の平均値を算出した。
【0202】
１－２－４．オープンスペース水泳試験
オープンスペース水泳試験（Ｏｐｅｎ ｓｐａｃｅ ｓｗｉｍｍｉｎｇ ｔｅｓｔ）は、水の入った大きなプールに入れられたマウスの遊泳距離の平均値（平均遊泳距離）を指標として、マウスの対処行動及びうつ傾向を評価する行動試験である。オープンスペース水泳試験は、以下の方法により実施された。
オープンスペース水泳試験（Ｏｐｅｎ ｓｐａｃｅ ｓｗｉｍｍｉｎｇ ｔｅｓｔ）は、水の入った大きなプールに入れられたマウスの遊泳距離の平均値（平均遊泳距離）を指標として、マウスの対処行動及びうつ傾向を評価する行動試験である。オープンスペース水泳試験は、以下の方法により実施された。
【0203】
直径１２０ｃｍのプール内にマウスを入れ、自由に遊泳させた。遊泳の様子をビデオカメラによって撮影し、画像解析ソフトを用いて６０秒間の遊泳距離を１０分間連続で解析した。
【0204】
１－２－５．ロータロッド試験
ロータロッド試験（Ｒｏｔａｒｏｄ ｔｅｓｔ）は、回転するロータロッドからマウスが落下するまでの時間の平均値（平均落下時間）を指標として、マウスの運動機能と平衡感覚を評価する行動試験である。ロータロッド試験は、以下の方法により実施された。
ロータロッド試験（Ｒｏｔａｒｏｄ ｔｅｓｔ）は、回転するロータロッドからマウスが落下するまでの時間の平均値（平均落下時間）を指標として、マウスの運動機能と平衡感覚を評価する行動試験である。ロータロッド試験は、以下の方法により実施された。
【0205】
１分間に２０回転するロータロッドのレーンにマウスを置き、回転するロータロッドからマウスが落下するまでの時間（落下時間）を測定した。試験を３回実施し、それらの落下時間の平均値（平均落下時間）を算出した。
【0206】
１－３．定量ＲＴ－ＰＣＲ
上記行動試験に供したマウスから約１ｍＬの末梢血を採取し、そのうち０．４ｍＬを分析対象の体液試料として以下の実験に供した。製造業者のプロトコルに従い、ＲＮＡ抽出キット（Ｍｏｕｓｅ ＲｉｂｏＰｕｒｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：ＡＭ１９５１））を用いて、上記体液試料からトータルＲＮＡを抽出した。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、製造業者のプロトコルに従い、ｃＤＮＡ合成キット（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社／型番：６２１０Ｂ（Ａ×４）））を用いて１μｇのトータルＲＮＡからｃＤＮＡを合成（逆転写）した。得られたｃＤＮＡを鋳型として、核酸増幅試薬（ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：Ａ２５７７７））を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行った。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を用いた。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとした。内在性コントロールとしてハウスキーピング遺伝子である１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を使用し、内在性コントロールに対する各標的遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析した。なお、Ｐｆａｆｆｌ法は、ハウスキーピング遺伝子と標的遺伝子のＰＣＲ増幅効率を加味する、比較Ｃｔ法の一種の相対的定量法であり、Ｐｆａｆｆｌ ＭＷ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００１；２９（９）：ｅ４５．に記載された方法を使用することができる。試験を５回以上実施し、それらの相対発現量の平均値（平均相対発現量）を算出した。表１に、各遺伝子に対するプライマーの塩基配列を示す。
上記行動試験に供したマウスから約１ｍＬの末梢血を採取し、そのうち０．４ｍＬを分析対象の体液試料として以下の実験に供した。製造業者のプロトコルに従い、ＲＮＡ抽出キット（Ｍｏｕｓｅ ＲｉｂｏＰｕｒｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：ＡＭ１９５１））を用いて、上記体液試料からトータルＲＮＡを抽出した。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、製造業者のプロトコルに従い、ｃＤＮＡ合成キット（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社／型番：６２１０Ｂ（Ａ×４）））を用いて１μｇのトータルＲＮＡからｃＤＮＡを合成（逆転写）した。得られたｃＤＮＡを鋳型として、核酸増幅試薬（ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：Ａ２５７７７））を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行った。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を用いた。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとした。内在性コントロールとしてハウスキーピング遺伝子である１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を使用し、内在性コントロールに対する各標的遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析した。なお、Ｐｆａｆｆｌ法は、ハウスキーピング遺伝子と標的遺伝子のＰＣＲ増幅効率を加味する、比較Ｃｔ法の一種の相対的定量法であり、Ｐｆａｆｆｌ ＭＷ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００１；２９（９）：ｅ４５．に記載された方法を使用することができる。試験を５回以上実施し、それらの相対発現量の平均値（平均相対発現量）を算出した。表１に、各遺伝子に対するプライマーの塩基配列を示す。
【0207】
【表1】
【0208】
表１中の「Ｆｗ」はフォワードプライマーを、「Ｒｖ」はリバースプライマーを示す。また、表１中の各塩基配列において、左端は５’末端を、右端は３’末端を示す。
【0209】
２．実施例１
＜方法＞
実施例１では、認知症を発症したマウスに由来する体液試料を用いて、被検体における認知症及び脳機能を判定するための指標を検討した。
＜方法＞
実施例１では、認知症を発症したマウスに由来する体液試料を用いて、被検体における認知症及び脳機能を判定するための指標を検討した。
【0210】
２－１．実験動物の準備
８０週齢以上の雄のＣＢ－１７系統マウス（オリエンタル酵母工業株式会社）を、以下の実験に供した。
８０週齢以上の雄のＣＢ－１７系統マウス（オリエンタル酵母工業株式会社）を、以下の実験に供した。
【0211】
２－２．行動試験
比較例１の「１－２．行動試験」と同様にして、５つの行動試験（オープンフィールド試験、ワイヤーハング試験、受動的回避試験、オープンスペース水泳試験及びロータロッド試験）を実施した。
比較例１の「１－２．行動試験」と同様にして、５つの行動試験（オープンフィールド試験、ワイヤーハング試験、受動的回避試験、オープンスペース水泳試験及びロータロッド試験）を実施した。
【0212】
２－３．定量ＲＴ－ＰＣＲ
比較例１の「１－３．定量ＲＴ－ＰＣＲ」と同様にして、マウスの体液試料中の各標的遺伝子の相対発現量を解析した。
比較例１の「１－３．定量ＲＴ－ＰＣＲ」と同様にして、マウスの体液試料中の各標的遺伝子の相対発現量を解析した。
【0213】
＜結果＞
実施例１及び比較例１の行動試験の結果について、以下に示す。
オープンフィールド試験において、比較例１のマウスの明状態における平均移動回数は５３７±１０６回、暗状態における平均移動回数は７４７±１６０回であった。一方、実施例１のマウスの明状態における平均移動回数は３５８±１８０回、暗状態における平均移動回数は２１７±１８８回であった。よって、明状態から暗状態へ変化させたとき、比較例１のマウスの平均移動回数は増加傾向を示したのに対し、実施例１のマウスの平均移動回数は減少傾向を示した。以上より、比較例１のマウスと比較して、実施例１のマウスの明暗の変化に対する反応性は低下していることが示唆された。
実施例１及び比較例１の行動試験の結果について、以下に示す。
オープンフィールド試験において、比較例１のマウスの明状態における平均移動回数は５３７±１０６回、暗状態における平均移動回数は７４７±１６０回であった。一方、実施例１のマウスの明状態における平均移動回数は３５８±１８０回、暗状態における平均移動回数は２１７±１８８回であった。よって、明状態から暗状態へ変化させたとき、比較例１のマウスの平均移動回数は増加傾向を示したのに対し、実施例１のマウスの平均移動回数は減少傾向を示した。以上より、比較例１のマウスと比較して、実施例１のマウスの明暗の変化に対する反応性は低下していることが示唆された。
【0214】
ワイヤーハング試験において、比較例１のマウスの平均落下時間は８４．９±４１．１秒であったのに対し、実施例１のマウスの平均落下時間は２５．６±２２．９秒であった。よって、比較例１のマウスと比較して、実施例１のマウスの筋力は低下していることが示唆された。
【0215】
受動的回避試験において、比較例１のマウスの事前段階における明室に留まった時間の平均値は３１．５±２２．９秒であったのに対し、実施例１のマウスの事前段階における明室に留まった時間の平均値は２０．０±１４．１秒であった。また、比較例１のマウスの本試験における明室に留まった時間の平均値は１８０．０±０．０秒であったのに対し、実施例１のマウスの事前段階における明室に留まった時間の平均値は４７．８±６７．４秒であった。よって、比較例１のマウスの平均反応潜時は１４８．５±２２．９秒と算出され、実施例１のマウスの平均反応潜時は３２．８±６３．５秒と算出された。以上より、比較例１のマウスは暗室への進入と嫌悪刺激の恐怖とを関連付けて学習及び記憶することができたのに対し、実施例１のマウスは学習及び記憶の機能が低下していることが示唆された。
【0216】
オープンスペース水泳試験において、比較例１のマウスの平均遊泳距離は７９４±１９２ｃｍであったのに対し、実施例１のマウスの平均遊泳距離は１１９３±１５４ｃｍであった。比較例１のマウスと比較して、実施例１のマウスは、不動の姿勢（すなわち、もがくことなく、水面から頭を出すために必要な最小限の動きのみを行って、水に浮いている状態）を示す時間の短縮傾向があり、必要以上に泳ぎ回る傾向があった。以上より、比較例１のマウスと比較して、実施例１のマウスの対処行動は減弱しており、うつ傾向を示すことが示唆された。
【0217】
ロータロッド試験において、比較例１のマウスの平均落下時間は４１．６±２５．２秒であったのに対し、実施例１のマウスの平均落下時間は６．８±４．５秒であった。よって、比較例１のマウスと比較して、実施例１のマウスの運動機能と平衡感覚は低下していることが示唆された。
【0218】
以上の行動試験の結果より、比較例１のマウスは、認知症を発症しておらず、脳機能も低下していないと判定されたのに対し、実施例１のマウスは、認知症を発症している、及び／又は脳機能が低下していると判定された。
比較例１及び実施例１の定量ＲＴ－ＰＣＲの結果について、以下に示す。
比較例１及び実施例１の定量ＲＴ－ＰＣＲの結果について、以下に示す。
【0219】
図１及び表２は、比較例１及び実施例１の各マウスの体液試料中における、Ｐｆａｆｆｌ法により算出された、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子の発現量に対する各標的遺伝子の相対発現量の平均値（平均相対発現量）を示している。
【0220】
【表2】
【0221】
図１及び表２に示すように、比較例１のマウスの体液試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量が０．５６、Ｇｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量が０．６７、ＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量が０．４５、ＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量が０．５８、ＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量が０．４３であった。一方、実施例１のマウスの体液試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量が３．３９、Ｇｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量が１．７０、ＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量が３．１７、ＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量が２．３３、ＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量が３．０３であった。比較例１のマウスと比較して、実施例１のマウスの体液試料中のＧｌｕｔ１遺伝子、Ｇｌｕｔ３遺伝子、ＭＣＴ４遺伝子、ＰＨＤ３遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の遺伝子発現は有意に増加していた。よって、認知症の発症及び／又は脳機能の低下に伴って発現量が顕著に変化する遺伝子として、グルコース輸送に関与するタンパク質の遺伝子（Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＧｌｕｔ３遺伝子）、乳酸輸送に関与するタンパク質の遺伝子（ＭＣＴ４遺伝子）、解糖系に関与するタンパク質の遺伝子（ＰＨＤ３遺伝子）、並びにＴＣＡ回路に関与するタンパク質の遺伝子（ＰＤＫ１遺伝子）が同定された。
【0222】
よって、被検体の認知症の発症及び／又は脳機能の低下の判定における指標としての、上記遺伝子及び／又は上記遺伝子によってコードされるタンパク質の使用の可能性が示された。また、被検体の認知症の発症及び／又は脳機能の低下の判定における指標としての、エネルギー代謝に関与するタンパク質の遺伝子、及び／又はエネルギー代謝に関与するタンパク質の使用の可能性が示された。
【0223】
また、実施例１のマウスの体液試料中の各々の標的遺伝子の平均相対発現量は、以下の（ａ）～（ｅ）に示される各々の基準値よりも高く、比較例１のマウスにおける各々の標的遺伝子の平均相対発現量は、以下の（ａ）～（ｅ）に示される各々の基準値よりも低いことが分かった。
（ａ）Ｇｌｕｔ１遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．３０
（ｂ）Ｇｌｕｔ３遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．３０
（ｃ）ＭＣＴ４遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．４０
（ｄ）ＰＨＤ３遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．２０
（ｅ）ＰＤＫ１遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．３０
（ａ）Ｇｌｕｔ１遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．３０
（ｂ）Ｇｌｕｔ３遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．３０
（ｃ）ＭＣＴ４遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．４０
（ｄ）ＰＨＤ３遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．２０
（ｅ）ＰＤＫ１遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．３０
【0224】
実施例１のマウスの体液試料中において、上記基準値に対するＧｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量の比率は２．６であった。実施例１のマウスの体液試料中において、上記基準値に対するＧｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量の比率は１．３であった。実施例１のマウスの体液試料中において、上記基準値に対するＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量の比率は２．３であった。実施例１のマウスの体液試料中において、上記基準値に対するＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量の比率は１．９であった。実施例１のマウスの体液試料中において、上記基準値に対するＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量の比率は２．３であった。
【0225】
よって、１以上の上記遺伝子の相対発現量が上記基準値よりも高いことを指標とすることにより、被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得することができる。すなわち、被検体由来の体液試料中の、１以上の上記遺伝子の相対発現量を測定し、前記相対発現量と上記基準値とを比較することによって、被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得することができる。
【0226】
また、被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することによって、被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得することができる。
【0227】
３．実施例２
＜方法＞
実施例２では、老化現象の程度が既知の複数のマウスに由来する体液試料を用いて、被検体における老化現象の程度を判定するための指標を検討した。
＜方法＞
実施例２では、老化現象の程度が既知の複数のマウスに由来する体液試料を用いて、被検体における老化現象の程度を判定するための指標を検討した。
【0228】
３－１．実験動物の準備
１、５、１０、５２、１０４週齢の雄のＣＢ－１７系統マウス（オリエンタル酵母工業株式会社）を、以下の実験に供した。
１、５、１０、５２、１０４週齢の雄のＣＢ－１７系統マウス（オリエンタル酵母工業株式会社）を、以下の実験に供した。
【0229】
３－２．定量ＲＴ－ＰＣＲ
上記マウスから約１ｍＬの末梢血を採取し、そのうち０．４ｍＬを分析対象の体液試料として以下の実験に供した。製造業者のプロトコルに従い、ＲＮＡ抽出キット（Ｍｏｕｓｅ ＲｉｂｏＰｕｒｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：ＡＭ１９５１））を用いて、上記体液試料からトータルＲＮＡを抽出した。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、製造業者のプロトコルに従い、ｃＤＮＡ合成キット（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社／型番：６２１０Ｂ（Ａ×４）））を用いて１μｇのトータルＲＮＡからｃＤＮＡを合成（逆転写）した。得られたｃＤＮＡを鋳型として、核酸増幅試薬（ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：Ａ２５７７７））を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行った。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を用いた。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとした。内在性コントロールとしてハウスキーピング遺伝子である１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を使用し、内在性コントロールに対する各標的遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析した。なお、Ｐｆａｆｆｌ法は、ハウスキーピング遺伝子と標的遺伝子のＰＣＲ増幅効率を加味する、比較Ｃｔ法の一種の相対的定量法であり、Ｐｆａｆｆｌ ＭＷ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００１；２９（９）：ｅ４５．に記載された方法を使用することができる。試験を５回以上実施し、それらの相対発現量の平均値（平均相対発現量）を算出した。表３に、各遺伝子に対するプライマーの塩基配列を示す。
上記マウスから約１ｍＬの末梢血を採取し、そのうち０．４ｍＬを分析対象の体液試料として以下の実験に供した。製造業者のプロトコルに従い、ＲＮＡ抽出キット（Ｍｏｕｓｅ ＲｉｂｏＰｕｒｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：ＡＭ１９５１））を用いて、上記体液試料からトータルＲＮＡを抽出した。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、製造業者のプロトコルに従い、ｃＤＮＡ合成キット（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社／型番：６２１０Ｂ（Ａ×４）））を用いて１μｇのトータルＲＮＡからｃＤＮＡを合成（逆転写）した。得られたｃＤＮＡを鋳型として、核酸増幅試薬（ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：Ａ２５７７７））を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行った。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を用いた。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとした。内在性コントロールとしてハウスキーピング遺伝子である１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を使用し、内在性コントロールに対する各標的遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析した。なお、Ｐｆａｆｆｌ法は、ハウスキーピング遺伝子と標的遺伝子のＰＣＲ増幅効率を加味する、比較Ｃｔ法の一種の相対的定量法であり、Ｐｆａｆｆｌ ＭＷ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００１；２９（９）：ｅ４５．に記載された方法を使用することができる。試験を５回以上実施し、それらの相対発現量の平均値（平均相対発現量）を算出した。表３に、各遺伝子に対するプライマーの塩基配列を示す。
【0230】
【表3】
【0231】
表３中の「Ｆｗ」はフォワードプライマーを、「Ｒｖ」はリバースプライマーを示す。また、表３中の各塩基配列において、左端は５’末端を、右端は３’末端を示す。
【0232】
＜結果＞
実施例２の定量ＲＴ－ＰＣＲの結果について、以下に示す。
実施例２の定量ＲＴ－ＰＣＲの結果について、以下に示す。
【0233】
図２及び表４は、実施例２の各マウスの体液試料中における、Ｐｆａｆｆｌ法により算出された、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子の発現量に対する各標的遺伝子の相対発現量の平均値（平均相対発現量）を示している。
【0234】
【表4】
【0235】
図２及び表４に示すように、１週齢のマウスの体液試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量が０．４２、Ｇｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量が０．２７、ＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量が０．２０、ＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量が０．３５、ＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量が０．２８であった。５週齢のマウスの体液試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量が０．６８、Ｇｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量が０．８１、ＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量が０．５４、ＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量が０．６２、ＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量が０．８３であった。１０週齢のマウスの体液試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量が１．１６、Ｇｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量が１．１８、ＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量が１．２２、ＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量が１．１２、ＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量が１．１７であった。５２週齢のマウスの体液試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量が１．４７、Ｇｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量が１．８３、ＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量が２．４７、ＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量が１．７４、ＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量が１．７１であった。１０４週齢のマウスの体液試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量が１．９９、Ｇｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量が１．９６、ＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量が２．８２、ＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量が２．３５、ＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量が１．９６であった。週齢の増加に伴い、マウスの体液試料中におけるＧｌｕｔ１遺伝子、Ｇｌｕｔ３遺伝子、ＭＣＴ４遺伝子、ＰＨＤ３遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の遺伝子発現は有意に増加していた。よって、老化現象の程度の増加に伴って発現量が顕著に変化する遺伝子として、グルコース輸送に関与するタンパク質の遺伝子（Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＧｌｕｔ３遺伝子）、乳酸輸送に関与するタンパク質の遺伝子（ＭＣＴ４遺伝子）解糖系に関与するタンパク質の遺伝子（ＰＨＤ３遺伝子）、並びにＴＣＡ回路に関与するタンパク質の遺伝子（ＰＤＫ１遺伝子）が同定された。
【0236】
よって、被検体における老化現象の程度の判定における指標としての、上記遺伝子及び／又は上記遺伝子によってコードされるタンパク質の使用の可能性が示された。また、被検体における老化現象の程度の判定における指標としての、エネルギー代謝に関与するタンパク質の遺伝子、及び／又はエネルギー代謝に関与するタンパク質の使用の可能性が示された。
【0237】
図３は、実施例２のマウスの体液試料中の各々の標的遺伝子の平均相対発現量とマウスの週齢との関係を示している。図３に示すように、実施例２のマウスの体液試料中の各々の標的遺伝子の平均相対発現量とマウスの週齢との関係式は、以下の関係式（Ａ）～（Ｅ）で表された。
（Ａ）Ｇｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．３２５７×ｌｎ（ｘ）＋０．３３１６
（Ｂ）Ｇｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．３７８８×ｌｎ（ｘ）＋０．２６５８
（Ｃ）ＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．６０７８×ｌｎ（ｘ）－０．０６６３
（Ｄ）ＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．４２８３×ｌｎ（ｘ）＋０．１６７７
（Ｅ）ＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．３６２６×ｌｎ（ｘ）＋０．２８４８
ここで、ｌｎは自然対数、ｘはマウスの週齢、ｙはマウスの体液試料中の各標的遺伝子の平均相対発現量を表す。
（Ａ）Ｇｌｕｔ１遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．３２５７×ｌｎ（ｘ）＋０．３３１６
（Ｂ）Ｇｌｕｔ３遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．３７８８×ｌｎ（ｘ）＋０．２６５８
（Ｃ）ＭＣＴ４遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．６０７８×ｌｎ（ｘ）－０．０６６３
（Ｄ）ＰＨＤ３遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．４２８３×ｌｎ（ｘ）＋０．１６７７
（Ｅ）ＰＤＫ１遺伝子の平均相対発現量と週齢との関係式：ｙ＝０．３６２６×ｌｎ（ｘ）＋０．２８４８
ここで、ｌｎは自然対数、ｘはマウスの週齢、ｙはマウスの体液試料中の各標的遺伝子の平均相対発現量を表す。
【0238】
よって、１以上の上記遺伝子の相対発現量を指標として、上記関係式に基づき被検体の週齢を判定することができる。すなわち、被検体由来の体液試料中の、１以上の上記遺伝子の相対発現量を測定し、前記相対発現量と上記関係式とを使用することによって、被検体における齢を判定することができる。
【0239】
また、被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定することによって、被検体における老化現象の程度の判定のための指標を取得することができる。
【0240】
４．実施例３
＜認知症／脳機能判定キットの製造＞
以下の手順により、認知症の判定又は脳機能の判定のためのキット（認知症／脳機能判定キット）を製造する。
＜認知症／脳機能判定キットの製造＞
以下の手順により、認知症の判定又は脳機能の判定のためのキット（認知症／脳機能判定キット）を製造する。
【0241】
表１に示すＧｌｕｔ１遺伝子を増幅するためのプライマー対をＴＥ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解し、終濃度にして１０μＭのＧｌｕｔ１遺伝子増幅用プライマー対溶液を調製する。表１に示す１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を増幅するためのプライマー対をＴＥ緩衝液に溶解し、終濃度にして１０μＭの１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液を調製する。前記Ｇｌｕｔ１遺伝子増幅用プライマー対溶液は、グルコース輸送に関与するタンパク質であるＧｌｕｔ１の遺伝子発現を測定するための試薬として使用される。さらに、前記Ｇｌｕｔ１遺伝子増幅用プライマー対溶液と、前記１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液と、ＲＮＡ抽出試薬（Ｍｏｕｓｅ ＲｉｂｏＰｕｒｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：ＡＭ１９５１））と、ｃＤＮＡ合成試薬（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社／型番：６２１０Ａ）と、核酸増幅試薬（ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：Ａ２５７７７））とを組み合わせて、認知症／脳機能判定キットを構成する。
【0242】
＜認知症／脳機能判定キットの使用＞
前記認知症／脳機能判定キットは、以下の手順により使用することができる。
前記認知症／脳機能判定キットは、以下の手順により使用することができる。
【0243】
被検体であるマウスから末梢血を採取し、その一部を分析対象の体液試料として使用する。前記認知症／脳機能判定キットを構成するＲＮＡ抽出試薬を用いて、前記体液試料からトータルＲＮＡを抽出する。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、前記認知症／脳機能判定キットを構成するｃＤＮＡ合成試薬を用いてｃＤＮＡを合成する。得られたｃＤＮＡを鋳型として、前記認知症／脳機能判定キットを構成するＧｌｕｔ１遺伝子増幅用プライマー対溶液、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液及び核酸増幅試薬を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行う。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を使用する。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとする。１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子に対するＧｌｕｔ１遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析する。１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子に対するＧｌｕｔ１遺伝子の相対発現量と、Ｇｌｕｔ１遺伝子の遺伝子発現の基準値である１．３０とを比較することにより、マウスにおける認知症の罹患の有無を判定することができる。
【0244】
５．実施例４
＜老化度判定キットの製造＞
以下の手順により、老化現象の程度の判定のためのキット（老化度判定キット）を製造する。
＜老化度判定キットの製造＞
以下の手順により、老化現象の程度の判定のためのキット（老化度判定キット）を製造する。
【0245】
表３に示すＧｌｕｔ３遺伝子を増幅するためのプライマー対をＴＥ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解し、終濃度にして１０μＭのＧｌｕｔ３遺伝子増幅用プライマー対溶液を調製する。表３に示す１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を増幅するためのプライマー対をＴＥ緩衝液に溶解し、終濃度にして１０μＭの１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液を調製する。前記Ｇｌｕｔ３遺伝子増幅用プライマー対溶液は、グルコース輸送に関与するタンパク質であるＧｌｕｔ３の遺伝子発現を測定するための試薬として使用される。さらに、前記Ｇｌｕｔ３遺伝子増幅用プライマー対溶液と、前記１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液と、ＲＮＡ抽出試薬（Ｍｏｕｓｅ ＲｉｂｏＰｕｒｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：ＡＭ１９５１））と、ｃＤＮＡ合成試薬（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社／型番：６２１０Ａ）と、核酸増幅試薬（ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：Ａ２５７７７））とを組み合わせて、老化度判定キットを構成する。
【0246】
＜老化度判定キットの使用＞
前記老化度判定キットは、以下の手順により使用することができる。
週齢が既知の複数のマウスから末梢血を入手し、それらの一部を標準作成用の体液試料として使用する。前記老化度判定キットを構成するＲＮＡ抽出試薬を用いて、前記分析試料からトータルＲＮＡを抽出する。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、前記老化度判定キットを構成するｃＤＮＡ合成試薬を用いてｃＤＮＡを合成する。得られたｃＤＮＡを鋳型として、前記老化度判定キットを構成するＧｌｕｔ３遺伝子増幅用プライマー対溶液、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液及び核酸増幅試薬を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行う。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を使用する。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとする。１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子に対するＧｌｕｔ３遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析する。得られた相対発現量と週齢との関係式を求める。
前記老化度判定キットは、以下の手順により使用することができる。
週齢が既知の複数のマウスから末梢血を入手し、それらの一部を標準作成用の体液試料として使用する。前記老化度判定キットを構成するＲＮＡ抽出試薬を用いて、前記分析試料からトータルＲＮＡを抽出する。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、前記老化度判定キットを構成するｃＤＮＡ合成試薬を用いてｃＤＮＡを合成する。得られたｃＤＮＡを鋳型として、前記老化度判定キットを構成するＧｌｕｔ３遺伝子増幅用プライマー対溶液、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液及び核酸増幅試薬を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行う。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を使用する。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとする。１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子に対するＧｌｕｔ３遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析する。得られた相対発現量と週齢との関係式を求める。
【0247】
次に、被検体であるマウスから末梢血を採取し、その一部を分析対象の体液試料として使用する。前記分析対象の体液試料を用いて、同様の方法により１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子に対するＧｌｕｔ３遺伝子の相対発現量を測定する。前記分析対象の体液試料中におけるＧｌｕｔ３遺伝子の相対発現量を指標として、上記関係式に基づき被検体の週齢を判定する。
【0248】
６．比較例２
＜方法＞
比較例２では、ヒト（ボランティアドナー）に由来する体液試料を用いて、被検体における認知症及び脳機能を判定するための指標を検討した。
＜方法＞
比較例２では、ヒト（ボランティアドナー）に由来する体液試料を用いて、被検体における認知症及び脳機能を判定するための指標を検討した。
【0249】
６－１．被検体の募集
５名のボランティアドナー（ボランティアドナーＡ～Ｅ）の協力を得て、以下の実験を行った。なお、ボランティアドナーＡ～Ｅの年齢は、それぞれ８５歳、５９歳、２８歳、２７歳及び２１歳であった。
５名のボランティアドナー（ボランティアドナーＡ～Ｅ）の協力を得て、以下の実験を行った。なお、ボランティアドナーＡ～Ｅの年齢は、それぞれ８５歳、５９歳、２８歳、２７歳及び２１歳であった。
【0250】
６－２．認知症スクリーニング検査
認知症及び／又は脳機能を評価するために、ボランティアドナーに対してミニメンタルステート検査（Ｍｉｎｉ－Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｅ Ｅｘａｍｉｎａｔｏｎ；ＭＭＳＥ）を実施した。ＭＭＳＥは、質問形式の計１１項目から構成される認知機能検査であり、時間の見当識、場所の見当識、即時想起、注意と計算能力、遅延再生（短期記憶）、言語的能力、図形的能力（空間認知）といった認知機能を評価することができる。ＭＭＳＥにおいて、ＭＭＳＥスコアの満点を３０点とし、２７点以下の場合を軽度認知障害（Ｍｉｌｄ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ；ＭＣＩ）疑い、２３点以下の場合を認知症疑いと判定した。
認知症及び／又は脳機能を評価するために、ボランティアドナーに対してミニメンタルステート検査（Ｍｉｎｉ－Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｅ Ｅｘａｍｉｎａｔｏｎ；ＭＭＳＥ）を実施した。ＭＭＳＥは、質問形式の計１１項目から構成される認知機能検査であり、時間の見当識、場所の見当識、即時想起、注意と計算能力、遅延再生（短期記憶）、言語的能力、図形的能力（空間認知）といった認知機能を評価することができる。ＭＭＳＥにおいて、ＭＭＳＥスコアの満点を３０点とし、２７点以下の場合を軽度認知障害（Ｍｉｌｄ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ；ＭＣＩ）疑い、２３点以下の場合を認知症疑いと判定した。
【0251】
６－３．血球分析
ボランティアドナーから末梢血を採取し、自動血球計数装置を用いて末梢血試料中の単核細胞の比率を測定した。
ボランティアドナーから末梢血を採取し、自動血球計数装置を用いて末梢血試料中の単核細胞の比率を測定した。
【0252】
６－４．定量ＲＴ－ＰＣＲ
ＲＮＡ単離用採血管（ＰＡＸｇｅｎｅ（登録商標）ＲＮＡ採血管）（ベクトン・ディッキンソン社製）を用いて、ボランティアドナーから末梢血を採取した。採血管を静かに転倒混和した後、室温で静置することにより、ボランティアドナーの末梢血（全血）に由来するトータルＲＮＡを得た。トータルＲＮＡを－２０～－８０℃で冷凍保存した。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、製造業者のプロトコルに従い、ｃＤＮＡ合成キット（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社／型番：６２１０Ａ））を用いて０．３μｇのトータルＲＮＡからｃＤＮＡを合成（逆転写）した。得られたｃＤＮＡを鋳型として、核酸増幅試薬（ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：Ａ２５７７７））を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行った。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を用いた。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとした。内在性コントロールとしてハウスキーピング遺伝子である１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を使用し、内在性コントロールに対する各標的遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析した。なお、Ｐｆａｆｆｌ法は、ハウスキーピング遺伝子と標的遺伝子のＰＣＲ増幅効率を加味する、比較Ｃｔ法の一種の相対的定量法であり、Ｐｆａｆｆｌ ＭＷ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００１；２９（９）：ｅ４５．に記載された方法を使用することができる。表５に、各遺伝子に対するプライマーの塩基配列を示す。
ＲＮＡ単離用採血管（ＰＡＸｇｅｎｅ（登録商標）ＲＮＡ採血管）（ベクトン・ディッキンソン社製）を用いて、ボランティアドナーから末梢血を採取した。採血管を静かに転倒混和した後、室温で静置することにより、ボランティアドナーの末梢血（全血）に由来するトータルＲＮＡを得た。トータルＲＮＡを－２０～－８０℃で冷凍保存した。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、製造業者のプロトコルに従い、ｃＤＮＡ合成キット（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社／型番：６２１０Ａ））を用いて０．３μｇのトータルＲＮＡからｃＤＮＡを合成（逆転写）した。得られたｃＤＮＡを鋳型として、核酸増幅試薬（ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：Ａ２５７７７））を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行った。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を用いた。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとした。内在性コントロールとしてハウスキーピング遺伝子である１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を使用し、内在性コントロールに対する各標的遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析した。なお、Ｐｆａｆｆｌ法は、ハウスキーピング遺伝子と標的遺伝子のＰＣＲ増幅効率を加味する、比較Ｃｔ法の一種の相対的定量法であり、Ｐｆａｆｆｌ ＭＷ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００１；２９（９）：ｅ４５．に記載された方法を使用することができる。表５に、各遺伝子に対するプライマーの塩基配列を示す。
【0253】
【表5】
【0254】
表５中の「Ｆｗ」はフォワードプライマーを、「Ｒｖ」はリバースプライマーを示す。また、表５中の各塩基配列において、左端は５’末端を、右端は３’末端を示す。
【0255】
７．実施例５
＜方法＞
実施例５では、ヒト（ボランティアドナー）に由来する体液試料を用いて、被検体における認知症及び脳機能を判定するための指標を検討した。
＜方法＞
実施例５では、ヒト（ボランティアドナー）に由来する体液試料を用いて、被検体における認知症及び脳機能を判定するための指標を検討した。
【0256】
７－１．被検体の募集
４名のボランティアドナー（ボランティアドナーＦ～Ｉ）の協力を得て、以下の実験を行った。なお、ボランティアドナーＦ～Ｉの年齢は、それぞれ８２歳、８１歳、５８歳、５１歳であった。
４名のボランティアドナー（ボランティアドナーＦ～Ｉ）の協力を得て、以下の実験を行った。なお、ボランティアドナーＦ～Ｉの年齢は、それぞれ８２歳、８１歳、５８歳、５１歳であった。
【0257】
７－２．認知症スクリーニング検査
比較例２の「６－２．認知症スクリーニング検査」と同様にして、ボランティアドナーに対するミニメンタルステート検査を実施した。
比較例２の「６－２．認知症スクリーニング検査」と同様にして、ボランティアドナーに対するミニメンタルステート検査を実施した。
【0258】
７－３．血球分析
比較例２の「６－３．血球分析」と同様にして、ボランティアドナーの末梢血試料中の単核細胞の比率を測定した。
比較例２の「６－３．血球分析」と同様にして、ボランティアドナーの末梢血試料中の単核細胞の比率を測定した。
【0259】
７－４．定量ＲＴ－ＰＣＲ
比較例２の「６－４．定量ＲＴ－ＰＣＲ」と同様にして、ボランティアドナーの末梢血試料中の各標的遺伝子の相対発現量を解析した。
比較例２の「６－４．定量ＲＴ－ＰＣＲ」と同様にして、ボランティアドナーの末梢血試料中の各標的遺伝子の相対発現量を解析した。
【0260】
＜結果＞
比較例２及び実施例５のミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）の結果について、以下に示す。
比較例２のボランティアドナーＡ～ＥのＭＭＳＥスコアは、２９点又は３０点であった。一方、実施例５のボランティアドナーＦ～ＩのＭＭＳＥスコアは、２５点又は２６点であった。以上より、比較例２のボランティアドナーＡ～Ｅは、認知症を発症しておらず、脳機能も低下していないと判定されたのに対し、実施例５のボランティアドナーＦ～Ｉは、軽度認知障害疑いと判定され、脳機能の低下が疑われた。
比較例２及び実施例５のミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）の結果について、以下に示す。
比較例２のボランティアドナーＡ～ＥのＭＭＳＥスコアは、２９点又は３０点であった。一方、実施例５のボランティアドナーＦ～ＩのＭＭＳＥスコアは、２５点又は２６点であった。以上より、比較例２のボランティアドナーＡ～Ｅは、認知症を発症しておらず、脳機能も低下していないと判定されたのに対し、実施例５のボランティアドナーＦ～Ｉは、軽度認知障害疑いと判定され、脳機能の低下が疑われた。
【0261】
比較例２及び実施例５の定量ＲＴ－ＰＣＲの結果について、以下に示す。
表６は、比較例２及び実施例５の各ボランティアドナーの末梢血試料中における、Ｐｆａｆｆｌ法により算出された、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子の発現量に対する各標的遺伝子の相対発現量を示している。
表６は、比較例２及び実施例５の各ボランティアドナーの末梢血試料中における、Ｐｆａｆｆｌ法により算出された、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子の発現量に対する各標的遺伝子の相対発現量を示している。
【0262】
【表6】
【0263】
表６中の「年齢」は各ボランティアドナーの年齢を、「単核細胞」は各ボランティアドナーの末梢血試料中の単核細胞の比率（末梢血試料に含まれる全ての白血球の数に対して単核細胞の数が占める割合）を、「ＭＭＳＥ」はＭＭＳＥスコアを示す。
【0264】
表６に示すように、ボランティアドナーＡの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の相対発現量が０．３３、Ｇｌｕｔ３遺伝子の相対発現量が０．２５、ＭＣＴ４遺伝子の相対発現量が０．０９、ＰＨＤ３遺伝子の相対発現量が０．５０、ＰＤＫ１遺伝子の相対発現量が０．７２であった。ボランティアドナーＢの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の相対発現量が０．４５、Ｇｌｕｔ３遺伝子の相対発現量が０．２６、ＭＣＴ４遺伝子の相対発現量が０．１９、ＰＨＤ３遺伝子の相対発現量が０．２４、ＰＤＫ１遺伝子の相対発現量が０．３５であった。ボランティアドナーＣの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の相対発現量が０．１２、Ｇｌｕｔ３遺伝子の相対発現量が０．１７、ＭＣＴ４遺伝子の相対発現量が０．７２、ＰＨＤ３遺伝子の相対発現量が０．２４、ＰＤＫ１遺伝子の相対発現量が０．７３であった。ボランティアドナーＤの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の相対発現量が０．５５、Ｇｌｕｔ３遺伝子の相対発現量が０．３２、ＭＣＴ４遺伝子の相対発現量が１．００、ＰＨＤ３遺伝子の相対発現量が０．４４、ＰＤＫ１遺伝子の相対発現量が０．５８であった。ボランティアドナーＥの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の相対発現量が０．９２、Ｇｌｕｔ３遺伝子の相対発現量が０．４１、ＭＣＴ４遺伝子の相対発現量が０．７５、ＰＨＤ３遺伝子の相対発現量が０．７６、ＰＤＫ１遺伝子の相対発現量が０．８８であった。
【0265】
表６に示すように、ボランティアドナーＦの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の相対発現量が１．１４、Ｇｌｕｔ３遺伝子の相対発現量が１．１５、ＭＣＴ４遺伝子の相対発現量が１．３５、ＰＨＤ３遺伝子の相対発現量が１．１１、ＰＤＫ１遺伝子の相対発現量が１．２６であった。ボランティアドナーＧの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の相対発現量が２．９６、Ｇｌｕｔ３遺伝子の相対発現量が０．９７、ＭＣＴ４遺伝子の相対発現量が１．４４、ＰＨＤ３遺伝子の相対発現量が２．６５、ＰＤＫ１遺伝子の相対発現量が２．２８であった。ボランティアドナーＨの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の相対発現量が１．５２、Ｇｌｕｔ３遺伝子の相対発現量が１．５６、ＭＣＴ４遺伝子の相対発現量が１．３８、ＰＨＤ３遺伝子の相対発現量が１．５９、ＰＤＫ１遺伝子の相対発現量が１．２７であった。ボランティアドナーＩの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子の相対発現量が１．７６、Ｇｌｕｔ３遺伝子の相対発現量が０．６２、ＭＣＴ４遺伝子の相対発現量が２．０８、ＰＨＤ３遺伝子の相対発現量が２．１８、ＰＤＫ１遺伝子の相対発現量が１．２８であった。
【0266】
表６に示すように、比較例２のボランティアドナーＡ～Ｅと比較して、実施例５のボランティアドナーＦ～Ｉの末梢血試料中のＧｌｕｔ１遺伝子、Ｇｌｕｔ３遺伝子、ＭＣＴ４遺伝子、ＰＨＤ３遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の遺伝子発現は有意に増加していた。よって、認知症の発症及び／又は脳機能の低下に伴って発現量が顕著に変化する遺伝子として、グルコース輸送に関与するタンパク質の遺伝子（Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＧｌｕｔ３遺伝子）、乳酸輸送に関与するタンパク質の遺伝子（ＭＣＴ４遺伝子）、解糖系に関与するタンパク質の遺伝子（ＰＨＤ３遺伝子）、並びにＴＣＡ回路に関与するタンパク質の遺伝子（ＰＤＫ１遺伝子）が同定された。
【0267】
よって、被検体の認知症の発症及び／又は脳機能の低下の判定における指標としての、上記遺伝子及び／又は上記遺伝子によってコードされるタンパク質の使用の可能性が示された。また、被検体の認知症の発症及び／又は脳機能の低下の判定における指標としての、エネルギー代謝に関与するタンパク質の遺伝子、及び／又はエネルギー代謝に関与するタンパク質の使用の可能性が示された。
【0268】
また、実施例５のボランティアドナーＦ～Ｉの末梢血試料中の各々の標的遺伝子の相対発現量は、以下の（ａ）～（ｅ）に示される各々の基準値よりも高く、比較例２のボランティアドナーＡ～Ｅにおける各々の標的遺伝子の相対発現量は、以下の（ａ）～（ｅ）に示される各々の基準値よりも低いことが分かった。
（ａ）Ｇｌｕｔ１遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．００
（ｂ）Ｇｌｕｔ３遺伝子の遺伝子発現の基準値：０．５０
（ｃ）ＭＣＴ４遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．１０
（ｄ）ＰＨＤ３遺伝子の遺伝子発現の基準値：０．９０
（ｅ）ＰＤＫ１遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．００
（ａ）Ｇｌｕｔ１遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．００
（ｂ）Ｇｌｕｔ３遺伝子の遺伝子発現の基準値：０．５０
（ｃ）ＭＣＴ４遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．１０
（ｄ）ＰＨＤ３遺伝子の遺伝子発現の基準値：０．９０
（ｅ）ＰＤＫ１遺伝子の遺伝子発現の基準値：１．００
【0269】
ボランティアドナーＦの末梢血試料中において、上記基準値に対するＧｌｕｔ１遺伝子、Ｇｌｕｔ３遺伝子、ＭＣＴ４遺伝子、ＰＨＤ３遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量の比率は、それぞれ１．１、２．３、１．２、１．２及び１．３であった。
【0270】
ボランティアドナーＧの末梢血試料中において、上記基準値に対するＧｌｕｔ１遺伝子、Ｇｌｕｔ３遺伝子、ＭＣＴ４遺伝子、ＰＨＤ３遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量の比率は、それぞれ３．０、１．９、１．３、２．９及び２．３であった。
【0271】
ボランティアドナーＨの末梢血試料中において、上記基準値に対するＧｌｕｔ１遺伝子、Ｇｌｕｔ３遺伝子、ＭＣＴ４遺伝子、ＰＨＤ３遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量の比率は、それぞれ１．５、３．１、１．３、１．８及び１．３であった。
【0272】
ボランティアドナーＩの末梢血試料中において、上記基準値に対するＧｌｕｔ１遺伝子、Ｇｌｕｔ３遺伝子、ＭＣＴ４遺伝子、ＰＨＤ３遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量の比率は、それぞれ１．８、１．２、１．９、２．４及び１．３であった。
【0273】
よって、１以上の上記遺伝子の相対発現量が上記基準値よりも高いことを指標とすることにより、被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得することができる。すなわち、被検体由来の体液試料中の、１以上の上記遺伝子の相対発現量を測定し、前記相対発現量と上記基準値とを比較することによって、被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得することができる。
【0274】
また、被検体由来の試料中の、エネルギー代謝反応に関与する１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性を測定すること、及び前記１以上のタンパク質の遺伝子発現又は酵素活性の測定値を参照値と比較することによって、被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得することができる。
【0275】
８．実施例６
＜方法＞
実施例６では、比較例２及び実施例５において得られた認知症及び脳機能を判定するための指標に基づき、ヒト（ボランティアドナー）に由来する体液試料から当該ヒトの認知症及び脳機能を判定した。なお、実施例６では、認知症及び脳機能を判定するための指標として、Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子を使用した。
＜方法＞
実施例６では、比較例２及び実施例５において得られた認知症及び脳機能を判定するための指標に基づき、ヒト（ボランティアドナー）に由来する体液試料から当該ヒトの認知症及び脳機能を判定した。なお、実施例６では、認知症及び脳機能を判定するための指標として、Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子を使用した。
【0276】
８－１．被検体の募集
９名のボランティアドナー（ボランティアドナーＪ～Ｒ）の協力を得て、以下の実験を行った。なお、ボランティアドナーＪ～Ｒの年齢は、それぞれ５２歳、８１歳、８８歳、８１歳、５３歳、５０歳、８４歳、５３歳及び２２歳であった。
９名のボランティアドナー（ボランティアドナーＪ～Ｒ）の協力を得て、以下の実験を行った。なお、ボランティアドナーＪ～Ｒの年齢は、それぞれ５２歳、８１歳、８８歳、８１歳、５３歳、５０歳、８４歳、５３歳及び２２歳であった。
【0277】
８－２．定量ＲＴ－ＰＣＲ
比較例２の「６－４．定量ＲＴ－ＰＣＲ」と同様にして、ボランティアドナーの末梢血試料中のＧｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量を解析した。
比較例２の「６－４．定量ＲＴ－ＰＣＲ」と同様にして、ボランティアドナーの末梢血試料中のＧｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量を解析した。
【0278】
８－３．認知症及び脳機能の判定
上記「８－２．定量ＲＴ－ＰＣＲ」にて得られたＧｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量と、Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の基準値（いずれも１．００）とを比較することにより、各ボランティアドナーにおける認知症の発症の危険性及び脳機能の低下の有無を判定した。
上記「８－２．定量ＲＴ－ＰＣＲ」にて得られたＧｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量と、Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の基準値（いずれも１．００）とを比較することにより、各ボランティアドナーにおける認知症の発症の危険性及び脳機能の低下の有無を判定した。
【0279】
８－４．認知症スクリーニング検査
比較例２の「６－２．認知症スクリーニング検査」と同様にして、ボランティアドナーに対するミニメンタルステート検査を実施した。
比較例２の「６－２．認知症スクリーニング検査」と同様にして、ボランティアドナーに対するミニメンタルステート検査を実施した。
【0280】
＜結果＞
実施例６の定量ＲＴ－ＰＣＲの結果について、以下に示す。
表７は、実施例６の各ボランティアドナーの末梢血試料中における、Ｐｆａｆｆｌ法により算出された、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子の発現量に対するＧｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量を示している。
実施例６の定量ＲＴ－ＰＣＲの結果について、以下に示す。
表７は、実施例６の各ボランティアドナーの末梢血試料中における、Ｐｆａｆｆｌ法により算出された、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子の発現量に対するＧｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量を示している。
【0281】
【表7】
【0282】
表７に示すように、ボランティアドナーＫ及びＭの末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量は、比較例２及び実施例５において得られたＧｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の基準値（いずれも１．００）よりも高かった。一方、他のボランティアドナー（Ｊ、Ｌ、Ｎ～Ｒ）の末梢血試料では、Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の相対発現量は、Ｇｌｕｔ１遺伝子及びＰＤＫ１遺伝子の基準値（いずれも１．００）よりも低かった。以上より、ボランティアドナーＫ及びＭは、認知症の発症の危険性を有し、脳機能の低下が疑われると判定された。
【0283】
実施例６のミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）の結果について、以下に示す。
ボランティアドナーＫのＭＭＳＥスコアは２２点、ボランティアドナーＭのＭＭＳＥスコアは２５点であった。また、他のボランティアドナー（Ｊ、Ｌ、Ｎ～Ｒ）のＭＭＳＥスコアは２８～３０点であった。以上より、ボランティアドナーＫは、認知症疑いと判定され、脳機能の低下が疑われた。また、ボランティアドナーＭは、軽度認知障害疑いと判定され、脳機能の低下が疑われた。また、他のボランティアドナー（Ｊ、Ｌ、Ｎ～Ｒ）は、認知症を発症しておらず、脳機能も低下していないと判定された。
ボランティアドナーＫのＭＭＳＥスコアは２２点、ボランティアドナーＭのＭＭＳＥスコアは２５点であった。また、他のボランティアドナー（Ｊ、Ｌ、Ｎ～Ｒ）のＭＭＳＥスコアは２８～３０点であった。以上より、ボランティアドナーＫは、認知症疑いと判定され、脳機能の低下が疑われた。また、ボランティアドナーＭは、軽度認知障害疑いと判定され、脳機能の低下が疑われた。また、他のボランティアドナー（Ｊ、Ｌ、Ｎ～Ｒ）は、認知症を発症しておらず、脳機能も低下していないと判定された。
【0284】
よって、１以上の上記遺伝子の相対発現量が上記基準値よりも高いことを指標とすることにより、被検体における認知症の判定又は脳機能の判定のための指標を取得することができた。
【0285】
９．実施例７
＜認知症／脳機能判定キットの製造＞
以下の手順により、認知症の判定又は脳機能の判定のためのキット（認知症／脳機能判定キット）を製造する。
＜認知症／脳機能判定キットの製造＞
以下の手順により、認知症の判定又は脳機能の判定のためのキット（認知症／脳機能判定キット）を製造する。
【0286】
表５に示すＰＤＫ１遺伝子を増幅するためのプライマー対をＴＥ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解し、終濃度にして１０μＭのＰＤＫ１遺伝子増幅用プライマー対溶液を調製する。表５に示す１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を増幅するためのプライマー対をＴＥ緩衝液に溶解し、終濃度にして１０μＭの１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液を調製する。前記ＰＤＫ１遺伝子増幅用プライマー対溶液は、ＴＣＡ回路に関与するタンパク質であるＰＤＫ１の遺伝子発現を測定するための試薬として使用される。さらに、前記ＰＤＫ１遺伝子増幅用プライマー対溶液と、前記１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液と、単核細胞分離試薬（Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳ（ＧＥヘルスケア社製／型番：１７１４４００２））と、ＲＮＡ抽出試薬（カネカ簡易ＲＮＡ抽出キット（ＲＴ－ＰＣＲ用）（株式会社カネカ／型番：ＫＮ－Ｔ１１０００４））と、ｃＤＮＡ合成試薬（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ １ｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社／型番：６２１０Ａ）と、核酸増幅試薬（ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社／型番：Ａ２５７７７））とを組み合わせて、認知症／脳機能判定キットを構成する。
【0287】
＜認知症／脳機能判定キットの使用＞
前記認知症／脳機能判定キットは、以下の手順により使用することができる。
前記認知症／脳機能判定キットは、以下の手順により使用することができる。
【0288】
被検体であるヒトから末梢血を採取する。前記認知症／脳機能判定キットを構成する単核細胞分離試薬を用いて、末梢血から単核細胞を分離し、得られた単核細胞の一部を分析対象の体液試料として使用する。前記認知症／脳機能判定キットを構成するＲＮＡ抽出試薬を用いて、前記体液試料からトータルＲＮＡを抽出する。得られたトータルＲＮＡを鋳型として、前記認知症／脳機能判定キットを構成するｃＤＮＡ合成試薬を用いてｃＤＮＡを合成する。得られたｃＤＮＡを鋳型として、前記認知症／脳機能判定キットを構成するＰＤＫ１遺伝子増幅用プライマー対溶液、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子増幅用プライマー対溶液及び核酸増幅試薬を用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行う。リアルタイムＰＣＲシステムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＡｒｉａＭｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を使用する。リアルタイムＰＣＲ反応条件は、５０℃３分を１サイクル、９５℃３分を１サイクル、９５℃５秒及び６０℃３０秒を４０サイクル、９５℃３０秒を１サイクル、６５℃３０秒を１サイクル、並びに９５℃３０秒を１サイクルとする。１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子に対するＰＤＫ１遺伝子の相対発現量をＰｆａｆｆｌ法により解析する。１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子の発現量に対するＰＤＫ１遺伝子の相対発現量と、ＰＤＫ１遺伝子の遺伝子発現の基準値とを比較することにより、ヒトにおける認知症の罹患の有無を判定することができる。
【0289】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。
【図1】
【図2】
【図3】
【配列表】